Booth is op 10 Mei 1838 in Bel Air, Harford County in Maryland gebore. Hy was die negende van die tien kinders van die Engelse akteur Junius Brutus Booth, wat in 1821 na die Verenigde State geëmigreer het. Hy maak sy toneeldebuut op 17-jarige ouderdom ten tyde van die Amerikaanse Burgeroorlog (1861–1865). Booth was 'n gevierde akteur en is deur resensente vir sy talent geloof. As gevolg van sy voorkoms het hy talle vroulike bewonderaars gehad.
Booth is deur soldate van die Verenigde State van Amerika gejag. Hy is ondanks 'n gebreekte been eers twaalf dae later op 'n plaas in Virginië opgespoor, waar hy in 'n tabakskuur geskuil het. Hy het geweier om oor te gee waarna die skuur aan die brand gesteek is. Sersant Boston Corbett van die kavallerie was bang dat Booth vanuit die brandende skuur op die soldate kon vuur en het Booth deur 'n skrefie geskiet. Die dodelik gewonde Booth is daarna uit die skuur gehaal en sterf enkele ure later. Die mense wat hom gehelp vlug het is ter dood veroordeel en gehang.