ARTIGO DO TCC - Faculdade São Lucas - Biologia - Cléia Alves Ferreira
Autor: Antonio Prata | Publicado: 2014-07-22T10:51:00-07:00






Metabólitos secundários no extrato etanólico das folhas de Solanum monachophyllum Dunal e seu
potencial fungicida sobre Candida albicans in vitro

Secondary metabolites
in the ethanol extract of leaves of Solanum monachophyllum Dunal and its potential fungicidal against Candida albicans in vitro

Valdicléia
Alves Ferreira1, Renato Abreu Lima2*

1Graduação em Ciências Biológicas,
Faculdade São Lucas, Porto Velho, RO, Brasil; 2Departamento de
Ciências Biológicas, Faculdade São Lucas, Porto Velho, RO, Brasil. 

*E-mail: renatoabreu07@hotmail.com

RESUMO

Este
trabalho teve como objetivo identificar os metabólitos
secundários do extrato etanólico das folhas de Solanum monachophyllum Dunal e avaliar sua atividade fungicida
sobre C. albicans in vitro, uma planta pouco estudada. A coleta das folhas foi
realizada na área urbana, região central, em Porto Velho-RO. Após a coleta foi
pesado fresco e ficou na estufa por três dias na temperatura de 50ºC. O material
passou pelo processo de destilação e obtenção do extrato bruto vegetal. A partir do extrato bruto das folhas, foram
realizados testes fitoquímicos e microbiológico. A avaliação
consistiu em medir o diâmetro das colônias iniciadas após 24 horas de
incubação. Sendo que a partir das 72horas, o extrato da planta apresentou ação
de inibição em relação as os outros tratamentos. E os dados obtidos com os
testes microbiológicos passaram por análise de variância e as médias comparadas
pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Observou-se que esta planta
apresentou os seguintes metabólitos secundários: alcaloides,
cumarinas, flavonoides, saponinas e derivados antracênicos livres. Verificou-se
que o extrato etanólico das folhas de S.
monachophyllum apresentou inibição de
crescimento sobre C. albicans,
notando-se que no final de cinco dias, a média de inibição das colônias dos
fungos utilizando o extrato vegetal foi de 2,08mm; no controle positivo,
utilizando a água destilada estéril, a média foi de 4,72mm, enquanto que no
controle negativo, utilizando o produto químico, a inibição média foi de
2,93mm. Porém, outras metodologias devem ser testadas para verificar a
potencialidade fungicida no extrato etanólico de S. monachophyllum. 

PALAVRAS-CHAVE:
Solanaceae,
Jurubebinha, Amazônia, Ação Candidacida.

ABSTRACT
This study aimed to identify the secondary metabolites of ethanol extract of
leaves of Solanum monachophyllum
Dunal and evaluate their fungicidal activity against C. albicans in vitro, a plant understudied. The collection of
leaves was carried out in the urban area, central region, in Porto Velho-RO.
After the collection was weighed fresh and stayed in the oven for three days at
50 º C. The material passed through the distillation plant and obtaining the
crude extract process. From the crude extract of the leaves, phytochemicals and
microbiological tests were performed. The evaluation consisted of measuring the
diameter of the colonies commenced after 24 hours of incubation. Being that as
of 72 hours, the plant extract showed inhibitory action in relation to the
other treatments. And data obtained with microbiological tests passed by
analysis of variance and means were compared by Tukey test at 5% probability.
It was observed that this plant showed the following secondary metabolites:
alkaloids, coumarins, flavonoids, saponins and free antracênicos derivatives.
It was found that the ethanolic extract of S.
monachophyllum showed growth inhibition of C. albicans, noting that at the end of five days, the average
inhibition of fungal colonies using the plant extract was 2.08 mm; the positive
control, using sterile distilled water, the mean was 4.72 mm, while the
negative control using the chemical, the average inhibition was 2.93 mm. However,
other methods must be tested to verify the capability fungicide in ethanol
extract of S. monachophyllum.

KEYWORDS:
Solanaceae Jurubebinha, Amazon, candidacidal action.



INTRODUÇÃO

As plantas utilizadas na medicina
tradicional estão sendo cada vez mais estudadas por serem possíveis fontes de
substâncias com atividades antimicrobianas frente a microrganismos prejudiciais
a saúde do homem (MENDES et al.,
2011). A identificação de novos compostos químicos a partir de plantas nativas ou
medicinais possibilita a obtenção de substâncias capazes de inibir o
desenvolvimento dos fitopatógenos (SILVA et
al., 2009).&nbsp; 

A comercialização de fitoterápicos é responsável por
uma significativa parcela monetária do mercado mundial de medicamentos (WHO,
2011). Quanto aos produtos, os serviços disponibilizam plantas medicinais em
uma ou mais das seguintes formas: planta medicinal in natura, planta medicinal seca, ﬁtoterápico manipulado e
ﬁtoterápico industrializado (RODRIGUES; SANTOS; DE SIMONI, 2010). 

A família Solanaceae é uma das maiores entre as
Angiospermas existentes, sua distribuição geográfica está concentrada
principalmente na América do Sul. No Brasil, ela apresenta grande diversidade e
endemismo tendo sua ocorrência desde a Amazônia ao Sul do país, além de possuir
várias espécies com atribuições ornamentais, medicinais e nutricionais (SOARES et al., 2007). 

O gênero
Solanum é composto por aproximadamente 1.000 a 3.700 espécies.
Apresentam-se como plantas invasoras, ocupando os mais diversos tipos de
ambientes, desde lavouras e terrenos baldios (CORDEIRO, 2008).&nbsp; 

A característica morfológica do Solanum monachophyllum Dunal, é conhecida popularmente como jurubebinha.
Suas folhas possuem propriedades contra inflamação do baço e anemia, sendo um
subarbusto com cerca de 3m de altura, caule ereto, folhas simples, pecioladas
estrelados, base oblíquosa, face adaxial verde escuro e face abaxial verde
claro, ambas pubescentes, nervura peninérveas do tipo cimosas ou dicásio. Flor
penduculada com tricomas estrelados, cor branca, diclamídeas, hermafroditas,
estames amarelo ou radial, anteras livres, gineceu unicarpelar, dialipétala,
dialissépala. Fruto do tipo baga, carnoso, imaturos cor verde e quando maduros de
cor alaranjado (VIDAL, 2003). 

Candidíases são infecções nas quais as lesões podem
ser brandas, agudas ou crônicas, superficiais ou profundas, o principal agente
das Candidíases é a C. albicans (AGUIAR,
2007; BARBEDO; SGARBI, 2010). 

&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; Candida
são considerados microorganismos oportunistas presentes na microbiota normal da
cavidade oral e dos tratos gastrointestinal e urogenital de seres humanos (MATOS
et al., 2009; SUZUKI, 2009). O
tratamento da candidíase não tem se mostrado abrangente em sua totalidade pelo
surgimento de constantes barreiras ocasionadas (resistência), e o crescente
aumento de espécimes resistentes aos antifúngicos (KHAN et al., 2012; KIRAZ; YASEMIN, 2011).

Diante da utilização excessiva de medicamentos antifúngicos
sintéticos, várias alternativas estão sendo efetuadas para o controle de
doenças causadas por Candida, e uma
dessas alternativas é a busca de produtos naturais que apresentem ação
antifúngica eficiente frente a microrganismos resistentes (KHAN et al., 2009).

O presente trabalho tem como
objetivo identificar os metabólitos secundários no extrato etanólico das
folhas de S. monachophyllum e avaliar
sua atividade fungicida sobre C. albicans
in vitro.

MATERIAL E MÉTODOS

COLETA DA PLANTA

As folhas de S. monachophyllum foram coletadas na área urbana em Porto Velho-RO,
com as coordenadas: Latitude: 8°46'32.01"S - Longitude: 63°53'56.93” O. A identificação botânica foi
realizada pela pesquisadora Maria de Fátima Agra e foi realizado o envio de uma
exsicata ao Herbário Dr. Ary Tupinambá Penna Pinheiro da Faculdade São Lucas - FSL,
Rondônia, encontrando-se registrada sob o Nº de 005180. 

PREPARAÇÃO DO EXTRATO
VEGETAL

Após a coleta, o material foi levado para
o Laboratório de Fitoquímica da Faculdade São Lucas, onde iniciou o processo de
limpeza e separação das folhas. Em seguida, foram pesadas frescas, e o material
foi colocado para secar em estufa a 50°C
por três dias. Após estarem totalmente secas foram pesadas,
trituradas e colocadas em Erlenmeyer em uma quantidade contendo 2L de etanol,
por sete dias em três repetições. Em seqüência, o extrato etanólico foi
filtrado e submetido ao processo de destilação simples em evaporador rotatório,
ficando somente o extrato bruto. 

A partir do extrato bruto das folhas de S. monachophyllum foram realizados
testes fitoquímicos, baseados em precipitação e coloração dos extratos diluídos
em solução e reativos específicos para cada teste conforme metodologia proposta
por (RADI; TERRONES, 2007). 

No Laboratório de Microbiologia da
Faculdade São Lucas, discos de 5 mm de diâmetro de culturas do fungo C. albicans (ATCC 10.231), foram colocados no centro de placas de
Petri contendo meio Batata Dextrose Agar (BDA), sendo que, na área periférica
das placas, foram dispostos simetricamente quatro discos de papel-filtro, que
foram embebidos em 1mg/mL de extrato vegetal durante 1 minuto, obtendo-se aproximadamente
0,12mL de extrato para cada disco. Como controle positivo, utilizou-se discos
embebidos em água destilada e controle negativo, o produto químico Kasumin®.

Após esse processo, as placas foram
incubadas a 25°C durante cinco dias. A avaliação consistiu em medir o diâmetro
das colônias (média de duas medidas diametralmente opostas, unidade mm)
iniciadas após 24 horas de incubação, perdurando os cincos dias, ou seja, até o
momento em que as colônias fúngicas do tratamento em observância, atingiram
toda a superfície da placa. Os dados obtidos com os testes microbiológicos passaram
por análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de
probabilidade. 

RESULTADOS E DISCUSSÃO

O rendimento do peso fresco
das folhas de S. monachophyllum foi
de aproximadamente 2.889,23 gramas; sendo reduzido para 785,82 gramas. O
material submetido à destilação forneceu uma quantidade de 40,76 ml. Para
os testes realizados de reconhecimento de metabólitos secundários, verificou-se
a presença de alcaloides, cumarinas, flavonoides,
saponinas e derivados antracênicos livres (Tabela 1). 

Tabela 1.
Reconhecimento de metabólitos secundários no extrato etanólico das folhas de S.
monachophyllum.



 

  
  
Metabólitos Secundários

  
  
Presença (+)

/ Ausência (-)

  
  
Coloração/Precipitação

 

  
  
Alcaloides

  
  
+

  
  
Marrom 

 

  
  
Glicosídeos
  Cardiotônicos

  
  
-

  
  
Verde escuro

 

  
  
Cumarinas voláteis

  
  
+

  
  
Florescência verde 

 

  
  
Flavonoides

Taninos &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;

  
  
     

      <!--[endif]-->
      
      
-

<!--[if !mso]-->
     



   
   
  
   
    <!--[if !mso]-->
    
    <!--[endif]-->
  +

  
  
Verde

Marrom 

 

  
  
Saponinas

  
  
+

  
  
Formação de espuma

 

  
  
Triterpenos e/ou Esteroides

  
  
-

  
  
Verde

 

  
  
Derivados Antracênicos Livres

  
  
+

  
  
Verde

 





Conforme Lopes (2005) as plantas do gênero Solanum são conhecidas por possuírem em
sua composição química alcaloides esteroidais, além de uma grande variedade de
saponinas. Resultados dos testes metabólitos secundários, pode ser comparado a
tais resultados, mostra que as saponinas são compostos que apresentam
propriedades detergentes e surfactantes. Dentre seus efeitos no organismo
humano destacam-se os antioxidantes, e possuem ação citotóxica atuando contra
células tumorais (SCHENKEL; GOSMANN; ATHAYDE, 2007). 

&nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp;Anselmo
e Lima (2014), também afirmam que ao realizar os mesmos estudos fitoquímicos verificaram
que o extrato etanólico das folhas de S. jamaicense
apresentou metabólitos secundários tais como alcaloides, glicosídeos
cardiotônicos, cumarinas, taninos, saponinas, triterpenos e derivados
antracênicos livres.

De acordo com Freitas et al. (2004) a produção de metabólitos secundários pela planta
ocorre em função da interação planta versus ambiente em resposta a fatores
químicos e biológicos. Este fato pode explicar resultados divergentes de
extratos da mesma espécie, mas coletado em locais e períodos diferentes.

Verificou-se que o
extrato etanólico das folhas de S. monachophyllum apresentou inibição de
crescimento sobre C. albicans, notando-se
que no final de cinco dias, a média de inibição das colônias dos fungos
utilizando o extrato vegetal foi de 2,08mm; no controle positivo, utilizando a
água destilada estéril, a média foi de 4,72mm, enquanto que no controle
negativo, utilizando o produto químico, a inibição média foi de 2,93mm (Tabela
2).

Tabela
2. Média (mm) de inibição de
crescimento do fungo C. albicans submetidos à exposição do
extrato etanólico das folhas de S. monachophyllum Dunal in vitro durante cinco dias.

 

  
  
Tratamentos

  
  
Horas

  
  


 

  
  


  
  
24

  
  
48

  
  
72

  
  
96

  
  
120

  
  
  
Médias*

 

  
  
Extrato
  vegetal

  
  
1,1a

  
  
2,0a

  
  
2,2a

  
  
2,55ª

  
  
2,6a

  
  
  
2,08a

 

  
  
Produto
  químico

  
  
1,45a

  
  
2,5a

  
  
3,3b

  
  
3,5b

  
  
3,9b

  
  
  
2,93b

 

  
  
Água
  destilada

  
  
1,5a

  
  
2,2a

  
  
3,9b

  
  
8,0C

  
  
8,0C

  
  
  
4,72b

 

  
  
  
  
  
  
  
  
 


*Médias
seguidas de mesma letra maiúscula, na coluna, e mesma letra minúscula, na
linha, não diferem entre si pelo teste de Tukey (p ≤ 0,05).&nbsp; **(p<0001 estat="" excel.="" o:p="" o="" programa="" stico="" utilizou-se="">



Por meio dos testes microbiológicos, os resultados
foram positivos quando utilizado extrato vegetal do gênero Solanum contra C. albicans,
devido à presença da combinação de vários metabólitos secundários. Tais
resultados assemelham-se com o estudo de (COSTA, 2012). Ao testar o extrato
alcaloídico, de solasonina e solamargina, que apresentou atividade antifúngica
contra os fungos dermatófitos e espécies do gênero Candida.

Testes semelhantes realizados por Rodrigues e Lima (2014),
com a espécie do gênero Solanum grandiflorum Ruiz, afirma que a espécie
pertencente ao mesmo gênero de Solanum demonstrou
atividade contra o fungo C. albicans.
Figueiredo e Lima (2014) em estudo com o extrato etanólico de folhas de S. crinitum apresentaram ação fungicida
sobre F. oxysporum, demonstrando
significativo potencial em relação ao produto químico no controle negativo nas
médias finais no percurso experimental, esse comparado com água destilada no
controle positivo apresentando desempenho semelhante ao produto químico em
análise.

Santos e Lima (2013), em estudo com o extrato
etanólico das folhas de S. acanthodes, verificaram que a planta
apresentou efeito de inibição sobre C.
albicans, apresentando maior índice de inibição utilizando o extrato
vegetal foi de 2,4mm em comparação ao produto químico que foi de 3,4mm. O mesmo
evidencia-se ao estudo comparado ao de Neto e Lima (2014) ao verificar que o
extrato etanólico dos frutos de Solanum
grandiflorum, apresentou potencial fungicida sobre Rhizoctonia solani, notando-se que no final do experimento, a média
de inibição das colônias dos fungos utilizando o extrato vegetal foi de 4,4mm;
no controle positivo, utilizando a água destilada estéril, a média foi de 5,6mm,
enquanto que no controle negativo, utilizando o produto químico, a inibição
média foi de 4,5mm.

Estudos realizados por Anselmo e Lima (2014) também
foi
positivo
quando utilizado extrato vegetal do gênero Solanum contra C. albicans,
possivelmente devido à presença de um ou combinação de vários metabólitos
secundários. Além disso, Nascimento et
al., (2006) relataram a atividade antimicrobiana in vitro de
extratos vegetais de S. paniculatum Lam., sobre o crescimento da
bactéria Ralstonia solanacearum.

&nbsp;Portanto,
todos estes trabalhos realizados com espécies do gênero Solanum, trazem contribuição para a continuidade do estudo específico
in vivo sobre seu potencial fungicida
usado no combate ao tratamento antifúngico em C. albicans.

CONCLUSÕES

Com base nos
resultados obtidos do extrato etanólico das folhas de S. monachophyllum, conclui-se que esta planta apresentou metabólitos
secundários de grande importância para a área de produtos naturais com enfoque
na fitoquímica, etnofarmacologia e farmacologia.
Além disso, o extrato etanólico da planta utilizada apresentou efeito de
inibição sobre C. albicans.
No entanto, outras metodologias e concentrações devem ser testadas para
verificar a potencialidade fungicida do extrato etanólico de S. monachophyllum in vivo. 

AGRADECIMENTOS

Ao Laboratório de Fitoquímica da Faculdade São Lucas pelo auxílio na produção dos
extratos ao Laboratório de Microbiologia pela cultura dos fungos e ao
Laboratório de pesquisa da Universidade Federal de Rondônia, na utilização da
destilação do material. 

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