TÉCNICA PARA COLORAÇÃO DE GRAM
Autor: BioSaude | Publicado: 2011-12-06T22:57:00-02:00


A técnica de coloração de Gram é uma técnica de coloração diferencial que permite distinguir os dois principais grupos de bactérias por microscopia óptica.&nbsp;Foi descoberta pelo físico dinamarquês Hans Christian Gram em 1884. Este cientista obteve&nbsp; com a coloração realizada uma melhor visualização das bactérias em amostras de material&nbsp; infectado. Verificou, no entanto, que nem todas as bactérias coravam com este método o que o levou a sugerir a possibilidade de ser usado um contrastante. Gram morreu em 1935 sem ter conseguido que fosse&nbsp; reconhecida a devida importância ao seu método de coloração. Actualmente, esta técnica é fundamental para a taxonomia e identificação das bactérias, sendo utilizada como técnica de rotina em laboratórios de bacteriologia.


A técnica de coloração de Gram consiste em expor as células bacterianas à seguinte sequência:
Corante primário&nbsp;–&nbsp;violeta de cristal: cora o citoplasma de púrpura, independentemente do tipo de célula.Mordente&nbsp;–&nbsp;solução de iodo: aumenta a afinidade entre o violeta de cristal e a célula e forma com o corante um complexo insolúvel dentro da célula.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;Agente descolorante&nbsp;–&nbsp;álcool, acetona ou ambos: solvente lipídico.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;Contrastante&nbsp;–&nbsp;safranina ou fucsina básica: cora o citoplasma de vermelho.&nbsp;&nbsp;


&nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;O que se verifica, quando se observam as diferentes bactérias sujeitas a esta coloração ao microscópio, é que estas têm um comportamento diferente face à coloração de Gram, o que permite classificá-las em:
&nbsp;&nbsp;Bactérias Gram-positivo&nbsp;&nbsp;&nbsp;(apresentam cor púrpura)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;Bactérias Gram-negativo&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; (apresentam cor vermelha)&nbsp;

&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; Estudos de microscopia electrónica e análises bioquímicas permitiram concluir que a&nbsp;parede &nbsp;celular bacteriana&nbsp;é a estrutura responsável pelo diferente comportamento das bactérias à coloração de Gram.
&nbsp;As&nbsp;bactérias Gram-positivoapresentam uma parede espessa, homogénea, geralmente não estratificada e predominantemente constituída por peptidoglicano. Deste modo, o precipitado insolúvel que se forma por acção do mordente,&nbsp;fica retido no interior da célula pela camada espessa de peptidoglicano, logo, estas células não são descoradas permanecendo com a coloração conferida pelo corante primário (púrpura).


As&nbsp;bactérias Gram-negativo&nbsp;apresentam uma parede estratificada constituída por uma membrana externa e por uma camada mais interna que contém peptidoglicano e que é mais fina que a das Gram-positivo. Deste modo, o precipitado insolúvel, que se forma por acção do mordente, é removido (camada de peptidoglicano é mais fina que a das Gram-positivo e a membrana externa é parcial ou totalmente solubilizada pelo agente descolorante), pelo que as células ficam descoloradas, corando de vermelho pelo contrastante.

&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; Desta forma, a diferente estrutura da parede bacteriana e, em particular a&nbsp;espessura da camada de peptidoglicano, é a responsável pelo diferente comportamento das bactérias face à coloração de Gram.

O&nbsp;peptidoglicano&nbsp;é um heteropolímero rígido e insolúvel na água, constituído por cadeias lineares de dois açúcares aminados – NAG (ácido n-acetilglucosamina) e NAM (ácido n-acetilmurâmico) – ligados entre si por ligações glicosídicas. As cadeias lineares ligam-se entre si através de cadeias de quatro aminoácidos