Principais Técnicas de Coloração para Lâminas Hematológicas
Autor: Hisalzer | Publicado: 2010-08-15T19:09:00-03:00


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INTRODUÇÃO



Este trabalho tem
como objetivo principal mostrar as principais técnicas de coloração, em
laboratório, para lâminas hematológicas, visando o estudo histológico dos
constituintes celulares do sangue.

Para
que isso ocorra, são necessários que haja o conhecimento de diversos métodos e
tratamentos existentes e a definição de cada um deles antes de preparar as
lâminas para observação no microscópio.



1 - Preparo das Lâminas



Em
primeiro lugar, será descrito o método mais comumente usado em histologia, que
permite a obtenção de preparados histológicos permanentes (lâminas) para estudo
ao microscópio óptico. Nesse instrumento, os objetos são examinados por
transparência, e como órgãos muitos delgados são raros, a maioria precisa ser
reduzida a cortes finos, suficientemente transparentes para serem examinados ao
microscópio. Estes cortes são feitos com um instrumento denominado micrótomo.

Obviamente,
o que se deseja é levar ao microscópio um preparado no qual os tecidos estejam
perfeitamente preservados, apresentando a mesma estrutura e composição química
que possuíam quando vivos.

Mas,
apesar dos cuidados tomados, esse ideal não é alcançado, observando-se em todos
os preparados histológicos certos artefatos consequentes ao processamento que
sofreram.

Para
vencer esta limitação, são empregados corantes, que coram os componentes celulares
com certa especificidade. No entanto, como a maioria dos corantes é tóxica, as
células vivas não conseguem resistir a eles.

Por
este motivo, antes de serem corados, os tecidos são: 1)
fixados, isto é, mortos através de procedimentos que produzem a menor distorção
possível da célula e da matriz extracelular; 2)
incluídos em materiais dotados de certa consistência; e 3) cortados em fatias muito delgadas, capazes de serem
atravessadas pela luz.

A
maioria das preparações histológicas que o estudante observa com o microscópio
óptico corresponde a tecidos fixados com formol a 10% incluídos em parafina,
cortados em fatias muito finas e corados com hematoxilina e eosina.



2 - Fixação



A
fim de evitar a destruição das células por suas próprias enzimas (autólise), ou
por bactérias, os tecidos removidos do corpo de um animal devem ser
adequadamente tratados imediatamente após a sua retirada. Esse tratamento é
denominado fixação.
A principal função dos fixadores é insolubilizar as proteínas dos tecidos.

Essa
insolubilização é essencial na fixação, pois as proteínas são as principais
responsáveis pela estrutura das células e dos tecidos. Um dos melhores
fixadores para trabalhos de rotina com o microscópio óptico é o formaldeído a
4% em solução tamponada (pH 7,5 aproximadamente).



3 - Inclusão



Para
que o material possa ser cortado em fatias muito delgadas, deve ser incluído
num material que lhe confira certa consistência. Se o tecido vier a ser corado
com métodos convencionais (por exemplo, com hematoxilina e eosina), pode-se
incluí-lo em parafina, que é sólida à temperatura ambiente, porém se funde entre
50 e 60 ºC.

Como
a parafina é insolúvel em água, o tecido deve ser desidratado previamente,
através de sua submersão, em banhos de etanol, de graduações crescentes.

Sendo
a parafina também insolúvel em álcool, costuma-se empregar o xilol entre a
desidratação e a inclusão.

Por
último, a peça é submersa em um pequeno ambiente cúbico com parafina líquida -
fundida a cerca de 55 ºC - que, ao esfriar, converte-se em um bloco sólido com
o tecido incluído em seu interior.



4 - Corte do material



O
micrótomo corta o bloco e permite obter cortes de 2 a 5 mm
de espessura, suficientemente delgados para que a luz possa atravessá-los.

Cada
corte é montado sobre uma lâmina e despojado de parafina mediante banhos de
xilol. Como os corantes empregados são hidrossolúveis, o xilol deve ser
eliminado mediante banhos de etanol de graduações decrescentes, terminando com
um banho de água pura.



5 - Coloração



A
maioria dos tecidos é incolor, o que torna difícil sua observação ao
microscópio óptico. Devido a isso, foram introduzidos métodos para a coloração
dos tecidos, de modo a tornar seus componentes visíveis e destacados uns dos
outros.

A
maioria dos corantes usados em histologia comporta-se como ácidos ou bases e
tendem a formar ligações salinas com radicais ionizáveis presentes nos tecidos.

Os
componentes dos tecidos que se coram com corantes básicos são chamados
basófilos, sendo chamados de acidófilos os que se ligam a corantes ácidos.

O
azul-de-toluidina e o azul-de-metileno são exemplos de corantes básicos.

A
hematoxilina comporta-se como um corante básico, ligando-se às estruturas
basófilas dos tecidos. Os núcleos celulares, por serem ricos em DNA, coram-se
pelos corantes básicos. Os corantes ácidos, tais como o orange G, a eosina e a fucsina
ácida, coram principalmente
as proteínas citoplasmáticas.



A
hematoxilina cora em azul os núcleos celulares e outras estruturas de natureza
ácida (basófilas), como as regiões do citoplasma ricas em RNA. Em contraste, a
eosina cora o citoplasma e o colágeno do material extracelular em diversas
tonalidades do vermelho.



CONCLUSÃO



Embora
se tenha o máximo de cuidado para a realização do preparo das lâminas para
observação ao microscópio, de nada adiantará a observação, pois alguns
componentes celulares são transparentes e, para enxergá-los, é necessária a
aplicação de certos tipos de corantes para ampliar a nitidez dos componentes a
serem pesquisados.



REFERÊNCIAS



JUNQUEIRA, L.C.; CARNEIRO,
José. Histologia Básica. 9 ed. Rio de
Janeiro: Guanabara Koogan, 1999.



DI FIORE,
Mariano S.H. et al. Histologia: texto
e atlas. s.
ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2003.