Guia de Laboratório - Microscopia de Luz
Autor: Bases Biológicas em Medicina Veterinária I | Publicado: 2010-10-24T12:35:00-07:00

Guia prático para utilização do microscópio de luz.
1- O Microscópio de Luz
1.1- Generalidades
Um microscópio é um sistema óptico que transforma objeto pequeno em uma imagem bastante ampliada. Para se explicar como isto pode ser feito no microscópio de luz, basta lembrar que os princípios envolvidos neste processo são os mesmos desenvolvidos nos últimos 400 anos para a óptica de luz.
1.2- Normas Básicas de Microscopia de Luz
1.2.1- Nunca levante a platina do microscópio olhando pela ocular. Olhe por fora, para não se arriscar a quebrar a lâmina e estragar a objetiva.
1.2.2- Nunca toque com os dedos ou com os cílios na ocular, para não sujá-la.
1.2.3- Nunca levante o microscópio da mesa segurando pelo canhão (ou tubo). Transporte-o com uma das mãos, segurando pelo suporte (ou pelo braço) do microscópio, e a outra, na base, para não o deixar cair.
1.2.4- Transporte o microscópio sempre em posição vertical, para a ocular (as vezes solta) não cair.
1.2.5- Nunca substitua uma objetiva por outra de maior aumento, sem observar, por fora, se a objetiva trocada tocará na lâmina. Se esse for o caso, abaixe a platina.
1.2.6- Cuidado para não usar a objetiva de imersão pensando que é outra. Esta tem um anel preto para distingui-la.
1.2.7- Nunca deixe o tubo (canhão) do microscópio sem a ocular, para não penetrar poeira.
1.2.8- Não se retire do laboratório antes de engatilhar a objetiva de pequeno aumento e abaixar a platina completamente, bem como observar a limpeza da objetiva de imersão, se esta foi usada.
1.2.9- Manipule o microscópio com delicadeza, nunca brinque com suas partes sem necessidade, nem mexa nelas. Conserve-o limpo. Um microscópio tem um valor quantitativo alto.
Observação: Caso encontre algum defeito no seu microscópio, não tente consertá-lo. Chame o professor e mostre-lhe o defeito constatado.
1.3- Rotina com o Microscópio
1.3.1- Levante (ou afaste) a presilha e fixe a lâmina sobre a platina (mesa), de maneira que a peça a ser observada coincida com o orifício da mesma.
1.3.2- Verifique se o diafragma (do condensador) está aberto. O grau de abertura é controlado por uma pequena alavanca (ou botão circular) no corpo do condensador.
1.3.3- Ao iniciar o trabalho, engatilhe a objetiva de menor aumento na posição de observação.
1.3.4- Levante a platina com o dispositivo (parafuso) macrométrico, até quase encostar na lâmina.
Não mais se utilize deste dispositivo (parafuso) para movimentar a platina (mesa).
1.3.5- Caso use óculos, guarde-os, pois o microscópio corrige o seu defeito de visão.
1.3.6- Com os olhos na ocular, baixe a platina (mesa) com o dispositivo (parafuso) macrométrico até se esboçar a imagem.
1.3.7- Utilizando-se, agora, do dispositivo (parafuso) micrométrico, obtenha maior nitidez.
1.3.8- Repita o procedimento com outros aumentos e procure esquematizar (“desenhar”) o observado (preparo biológico).
1.3.9- Para trocar as objetivas, em alguns tipos de microscópio é possível fazê-lo diretamente girando o revólver, e utilizando-se do dispositivo (parafuso) micrométrico, para obtenção de nitidez. Em outros, porém, é necessário reiniciar o trabalho.
1.3.10- Para calcular a ampliação que está sendo utilizada, basta multiplicar os números gravados nas lentes: ocular e objetivas. Por exemplo:
Objetiva de 4 X e ocular de 10 X a ampliação será de 40 X
Objetiva de 10 X e ocular de 10 X a ampliação será de 100 X
Objetiva de 40 X e ocular de 10 X a ampliação será de 400 X
Objetiva de 100 X* e ocular de 10 X a ampliação será de 1000 X**
* Objetiva de imersão. **Aumento máximo útil

1.4- Introdução
Os cientistas, utilizando o microscópio de luz, perceberam que muitos dos seres vivos são de tamanhos inferiores à capacidade visual humana (em torno de 0,1 mm a 0,2 mm).
Para estudar estruturas menores que 0,2 mm, você deverá aprender a usar corretamente o microscópio bem como conhecer seu funcionamento e ainda suas limitações.
A principal finalidade do microscópio é permitir observação individualizada de pontos que estejam situados bem próximos uns dos outros (poder de resolução), pois se o microscópio não tiver capacidade de separar pontos, de nada adiantarão aumentos maiores, pois você só obterá manchas maiores (ampliadas). Normalmente, o poder de resolução dos microscópios de luz é de 0,2 mm.
Por ser um aparelho que visa fornecer aumento, ele é constituído por três tipos de conjuntos de lentes: a ocular, que fica próxima do observador, a objetiva, que fica próxima ao objeto a ser observado, e o condensador, que é um cone de luz sobre o objeto. A objetiva projeta uma imagem aumentada do objeto em direção à ocular, que amplia novamente a imagem e a projeta na retina ou numa chapa fotográfica. A ampliação total é igual ao aumento da objetiva multiplicado pelo aumento da ocular. O condensador não amplia a imagem mas influi na sua nitidez. Os microscópios podem ter apenas uma ocular (monocular) ou duas oculares (binocular) e 2, 3 ou 4 objetivas.
O aumento fornecido por cada peça destas vem marcado na própria peça. Assim, podemos ter na ocular um valor de 10x. Logo, estaremos usando um aumento de 400x.
Uma das objetivas pode ter uma tarja preta (100x). Esta é a objetiva de imersão, que mais tarde você aprenderá a usar. As objetivas ficam no revólver, encaixadas na parte de um tubo chamado canhão. No braço do aparelho existem dois parafusos. O maior é chamado macrométrico, para grandes movimentos de platina (onde está o objeto para ser observado). E o menor é chamado micrométrico, muito útil na focalização delicada dos objetos, pois realiza pequenos movimentos. Na platina, onde se coloca o material a ser observado, às vezes existem presilhas para prender a lâmina.
Em alguns microscópios, existe uma peça chamada chariot cujos parafusos movimentam o material a ser observado. Ainda na platina, existe um orifício abaixo do qual está situado o diafragma, que controla a intensidade da luz.
Alguns microscópios têm uma lâmpada embutida na base do aparelho, enquanto outros têm um espelho que deve ser movimentado, até conseguirmos que ele reflita a luz em direção ao orifício da platina.
1.5- Objetivos
Ao finalizar a prática de laboratório, e após a execução dos exercícios, você deverá ser capaz de:
a) identificar e manusear corretamente as peças do microscópio de luz;
b) determinar o aumento fornecido pelos diferentes jogos: objetiva-ocular;
c) iluminar adequadamente diferentes preparações;
d) fazer escalas relativas aos campos observáveis;
e) fazer esquemas relativos às estruturas observadas;
f) comprovar pessoalmente como funciona o microscópio.
1.6- Material
1.6.1- Fornecido pela instituição:
a) microscópio de luz;
b) fonte de luz;
c) lâmina preparada (qualquer que possa eventualmente ser descartada);
d) régua plástica transparente;
e) lâmina e lamínula virgens.
1.6.2- Adquirido pelos estudantes (grupo):
a) Apostila para Laboratório de Bases em Medicina Veterinária I
b) Uma (01) folha de Jornal para recortar a Letra “e” (Jornal);
c) Uma folha de papel milimetrado (para recortar 1 cm2 de papel milimetrado);
d) Uma (01) Tesoura;
e) Lápis de cor;
f) Apostila para Laboratório de Bases em Medicina Veterinária I;
g) Uma (01) caixa de lâmina (porta objeto);
h) Uma (01) caixa de lamínula (cobre objeto).
1.7- Cuidados:
- Antes de usar o microscópio observe se todas as partes estão limpas e em bom estado;
- Posicione-se corretamente, siga as normas básicas de microscopia de luz e a rotina com o
microscópio e trabalhe comodamente.
1.8- Procedimento:
Para que esta aula prática resulte mais eficiente, o trabalho pode ser dividido entre os integrantes de cada grupo. O trabalho pode ser simultâneo, o que permitirá a cada grupo ter a disposição as diferentes preparações e conseqüentemente cada estudante poderá, comparar os poderes do microscópio (resolução, amplificação, profundidade, inversão de imagens e de definição).
1.8.1- Profundidade de campo
Monte a letra “e” obtida de um jornal com o lado direito da letra para arriba sobre uma lâmina oferecida pelo seu professor. Adicione uma gota de água sobre o papel e coloque a lamínula sobre o material a ser observado, focalize-a com objetiva de 4X e 10X, com a lamínula voltada para platina.
A seguir, com objetiva de 40X. Neste caso, você conseguiu focalizar? Vire agora a lamínula para a objetiva. Agora, focalizou?.
Verifique, assim, que quanto maior a resolução da objetiva, menor é a profundidade de campo. Por outro lado, a abertura numérica é menor que as anteriores. Basta olhar diretamente a objetiva.
a- Observe as diferentes partes do microscópio e descreva a sua função;
b- Como é o campo de observação das objetivas 4X e 10X? Maior ou menor? Que conclusão pode deduzir sobre o poder do microscópio?
1.8.2- Medidas ao Microscópio de Luz
Você poderá determinar o tamanho aproximado dos objetos vistos ao microscópio, calculando o diâmetro e a área dos campos ao microscópio, observando com as diferentes objetivas.
a) Coloque a objetiva de menor aumento em foco.
b) Coloque 1 cm2 de papel milimetrado sobre uma lâmina. Adicione uma gota de água sobre o papel e coloque a lamínula sobre o material a ser observado. Determine o diâmetro do campo em milímetros. Transforme em micrômetros. Lembre-se que um micrômetro equivale à milésima parte do milímetro.
(1 μm = 0,001 mm)
c) Para determinar a área do campo, você terá que usar a fórmula:
A = pr2
Onde: p = 3,1416 e
r = raio
d) Para calcular o diâmetro de campo com a objetiva de aumento médio, é necessário verificar o número que indica a ampliação de cada objetiva.
e) Divida, então, o número que aparece na objetiva de aumento médio pelo número que aparece na objetiva de menor aumento. Você obterá um fator que indica quantas vezes é menor o campo para a objetiva de médio aumento.
f) Vejamos um exemplo:
Se a objetiva de menor aumento tem uma resolução de 4X, e a de médio aumento é de 40X, divida então 40 por 4. Você terá um fator igual a 10.
Assim, se o diâmetro do campo da objetiva de menor aumento for de 1,5 mm (1500 μm), então o diâmetro de campo com objetiva de médio aumento será de 1,5, dividido por 10, ou seja, 0,15 mm., isto é: 1500/10 = 150 μm
1.8.3- Localização de campo
De posse da lâmina oferecida pelo seu professor determine o campo das estruturas microscópicas que devem ser localizadas. Observe a estrutura com as diferentes objetivas, calcule a ampliação que está sendo utilizada e faça um desenho da estrutura que observou.
1.8.4- Apresentação do Relatório:
a- Faça uma introdução do relatório com base numa consulta bibliográfica;
b- O corpo do relatório deve possuir: material e métodos, procedimento, resultados e discussão.
- Descreva o procedimento e os resultados no relato;
- Discussão: Ao finalizar os procedimentos, com base numa revisão de literatura, faça uma descrição comparativa das estruturas que observou através do microscópio.
c- Faça os desenhos correspondentes às suas observações com lápis;
d- Consultando os desenhos que você fez, ou re-observando as suas preparações, e principalmente, raciocinando sobre o trabalho realizado, faça as suas conclusões.
Na correção serão considerados: (1) a redação do texto, que deve ser escrita no relato, citando as fontes bibliográficas, e visando comparar os resultados obtidos com os dados publicados pelos diversos autores que foram utilizados para redigir a discussão; (2) a quantidade e qualidade de fontes bibliográficas pesquisadas; (3) a clareza e relevância temática; (4) a apresentação ortográfica e gramatical; e (5) o questionário respondido.
Observação: cada aluno deve apresentar um relatório datilografado (maquina ou microcomputador).
O aluno que não assistiu à aula prática não poderá apresentar o relatório respectivo.