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Que signifie qu'une phase stationnaire est entièrement mouillable? Prenons comme exemple la colonne HALO® AQ-C18. Cette phase peut être utilisée dans des conditions 100 % aqueuses sans perte de temps de rétention, si la pompe est redémarrée après l'arrêt.
Etant donné que la phase stationnaire se trouve principalement dans les pores des particules, la plupart des interactions, qui contribuent à la rétention, ont lieu ici. Une petite taille des pores et une phase stationnaire très hydrophobe, comme la C18, font qu'il est difficile pour les phases mobiles 100 % aqueuses de pénétrer dans les pores.
Lorsque la pompe est arrêtée et en conséquence la colonne n'est plus sous pression, la phase mobile 100 % aqueuse se retire des pores. Si la pompe est ensuite de nouveau redémarrée, la phase mobile n'est plus capable de mouiller les pores et la rétention des analytes est ainsi réduite.
Pour remouiller les pores, il est conseillé d'utiliser une combinaison d'eau et de phase mobile organique. Ainsi, on obtient une rétention identique à celle qui existait avant que la phase mobile 100 % aqueuse ait sortie des pores.
Si une phase stationnaire n'est pas complètement mouillable, la reproductibilité des temps de rétention pour les composés à élution précoce peut en souffrir si le gradient ne contient pas ou peu de composants organiques.
Avec une phase mouillable à 100 %, comme c'est le cas avec la HALO® AQ-C18, le problème de perte de rétention n'existe pas. Ceci est un grand avantage lorsque des échantillons tels que des métabolites, qui contiennent des analytes polaires, sont analysés, car le gradient de départ peut être 100 % aqueux.
La phase HALO® AQ-C18 est idéale pour l'utilisation avec des phases mobiles très aqueuses en chromatographie en phase inverse. Ceci est notamment le cas par rapport à la phase hydrophobe HALO® C18, qui est déshymidifiée lors de l'utilisation d'une phase mobile 100 % aqueuse.
Un environnement aqueux peut offrir de nombreux avantages en matière de séparation, en particulier pour les composés hautement polaires. La colonne HALO® AQ-C18 est par exemple idéale lorsque des acides organiques comme l'acide ascorbique, l'acide citrique et l'acide lactique sont analysés. Etant donné que ces composés sont très polaires, il est nécessaire de travailler avec une phase mobile très aqueuse.