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Mise en évidence des polysaccharides sur coupes paraffine par la réaction PAS (Periodic Acid Schiff)
Deux microphotographies sont présentées ci - dessous pour illustrer le résultat de cette coloration réalisée dans des conditions contrôlées.
Protocole de coloration
Les coupes sont successivement :
. Déparafinées et réhydratées (voir coloration hématoxyline)
. Traitées à l’acide périodique 0.5 % 15 minutes à t° labo, excepté une lame témoin maintenue dans l’eau.
. Lavées 10 min l'eau courante puis à l'eau distillée.
. Plongées dans le colorant " réactif de Schiff " à l’abri de la lumière et de l’oxygène. La durée de la coloration varie en fonction du tissu et du fixateur. A titre d’indication elle est de 15 minutes pour des coupes d’embryons de maïs fixés au FAA et un colorant neuf.
. Passées éventuellement dans de l'eau sulfureuse (travailler sous chapelle) pour enlever l'excès de colorant.
. Rincées à l'eau courante 5 à 10 minutes et de nouveau à l'eau distillée.
. Monter classiquement entre lame et lamelle dans l'Eukitt
Principe de la coloration
Le pré-traitement des coupes avant leur coloration par l'acide périodique a pour effet de convertir les groupes hydroxyles de polysaccharides en groupes aldéhydiques. Ces derniers vont ensuite réagir avec le réactif de Schiff (para-rosaniline ou leucofuchsine) qui se transforme en sa forme colorée. Le terme de PAS est une abréviation de Periodic - Acid - Schiff. L’acide périodique restant dans la coupe après l'oxydation peut être réduit par passage dans un bain de thiosulfate de sodium -iodure de potassium. On parle alors de réaction de PARS (Periodic Acid Reducing Schiff).
Les polysaccharides qui restent dans les coupes sont plutôt les polymères du glucose insoluble comme le glycogène, l’amidon et la cellulose. L’acide périodique est un agent oxydant qui rompt les liaisons C - C entre deux groupes hydroxyles adjacents. Le groupe 1,2-diol du glucose est converti en dialdéhyde et les groupes carbonyls sont convertis en acides carboxyliques. L’avantage de l’acide périodique réside dans la spécificité de son oxydation. Il forme des aldéhydes dans la molécule de polysaccharide mais ne continue pas l’oxydation des polymères en formes solubles dans l’eau, de faible poids moléculaire. Ainsi le glycogène, l’amidon et la cellulose contiennent des groupes aldéhydes après le traitement à l'acide périodique et restent dans la cellule sous une forme insoluble qui peut ensuite être traitée par le réactif de Schiff pour donner un produit coloré quand il réagit avec les aldéhydes.
Portion de coupe transversale dans un embryon de Zea mays
Les grains d'amidon (a, flèche) et les parois sont colorées en rose pourpre. Les noyaux (n) et le cytoplasme ne sont pas colorés
Portion de coupe paraffine transversale dans un pétiole de céleri
Les parois des différents tissus sont toutes colorées. La coloration est particulièrement intense au niveau du collenchyme en raison de l'épaississement cellulosique de la paroi de ce tissu de soutien (col) angulaire. Flèche bleue : épiderme avec sa cuticule (flèche rose).