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Cette grande chauve-souris aimant les climats chauds est plutôt présente en plaine dans les paysages agricoles traditionnels. La Sérotine commune chasse principalement le long des haies et des lisières, souvent à proximité de pâturages ou prairies extensives. Elle peut cependant également chasser dans des trouées forestières ou sous des lampadaires à proximité de parcs urbains. Elle se nourrit d’insectes de grande taille tels que les hannetons.
Ses gîtes se situent uniquement en bâtiments, avec une préférence pour l’entretoit, voire les combles qu’elle peut aussi coloniser. Elle fréquente cependant aussi les cheminées.
Trois colonies de mise-bas sont connues dans le canton de Neuchâtel. La plus grande se situe à St-Sulpice avec une soixantaine de femelles. Une autre grande colonie d’une cinquantaine d’individus était connue à Perreux, mais a disparu suite à la réfection de la toiture du bâtiment. D’autres petites colonies sont disséminées le long du littoral, entre Bevaix et Le Landeron.