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La fondation du Musée de l’Hôtel-Dieu remonte à 1949, suite à l’acquisition par la municipalité de la collection de gravures de Gustave Amweg. Dans les années 1960, le musée déménage de la villa Merguin à l'Hôtel-Dieu, hôpital bourgeois désaffecté en 1956. Dans les sous-sols se trouvent les réserves avec d'importantes collections représentant mille facettes du patrimoine jurassien : tableaux, estampes anciennes et modernes, fonds photographiques, anciens objets de culte de la communauté juive de Porrentruy, affiches anciennes, etc. Outre sa présentation permanente, le musée réalise trois expositions temporaires par année, en lien avec la société, l'histoire et l'art jurassien.