stanford-oval/wikipedia huggingface dataset:
DNA metilasyonu
DNA metiltransferazlar

Memeli hücrelerde, DNA metilasyonu başlıca CpG dinükleotitlerinin sitozinin C5 pozisyonunda gerçekleşir. Bu kimyasal değişime neden olan enzim etkinlikleri iki sınıfa ayrılır: sürdürme metilasyonu ve baştan metilasyon (İng. maintenance methylation ve de novo methylation)
Sürdürme metilasyonu, her DNA ikileşme döngüsünün ardından DNA metilasyon durumunu korumak için gereklidir. DNA metiltransferaz (DNMT) olmazsa, ikilenme mekanizmasının oluşturacağı yavru iplikler metillenmemiş olur ve zaman içinde bu, pasif demetilasyona yol açar. DNMT1, DNA ikilenmesi sırasında DNA metilasyon örüntüsünün yavru DNA ipliklerine kopyalanmasından sorumlu olan sürdürücü metiltransferaz enzimidir. Gelişimde DNMT'ye gereksinim vardır, farelerde DNMT1'in her iki kopyası da silindiği zaman, gelişimin 9. gününde embriyo ölür.
DNMT3a ve DNMT3b enzimlerinin gelişim sırasında DNA metilasyon örüntülerini oluşturan de novo (yeni baştan) metiltransferazlar olduğu düşünülmektedir. DNMT3L, diğer DNMT3 enzimlerine homolog olan ama katalitik etkinliği olmayan bir proteindir. Bunun yerine, DNMT3L de novo metiltransferazların DNA'ya bağlanma yeteneğini artırarak ve onların aktivitesini güçlendirerek onlara yardım eder. Ayrıca, DNMT2 (TTRDMT1) bir DNA metiltransferaz homoloğu (benzeri) olarak teşhis edilmiştir, çünkü tüm DNA metiltransferazlarda ortak olan 10 dizi motifine sahiptir; ancak DNMT2 (TRDMT1) DNA'yı metillemek yerine aspartik asit tRNA'sının antikodon ilmiğindeki sitozin-38'i metillendirir.
Karsinogenez sırasında çoğu tümör baskılayıcı gen DNA metilasyonu ile susturulduğu için bu genlerin tekrar etkinleştirilmesi için DNMT'leri inhibe edilmesi denenmiştir. 5-aza-2'-deoksisitidin (desitabin) bir nükleozit analoğudur, katalizdeki bir β-eliminasyon adımını engelleyerek DNMT'leri DNA ile bir kovalent kompleks olarak kilitler ve onları çalışmaz hale getirir; bunun sonucu bu enzimler yıkıma uğrar. Ancak, desitabin'in etkin olabilmesi için onun hücre genomuna dahil edilmesi gerekmektedir. Bunun sonucu mutasyonlar meydana gelir. Üstelik desitabin kemik iliği için toksiktir, bu yüzden tedavi amaçlı kullanımını sınırlıdır. Bu sorunlar yüzünden DNMT'leri hadefleyen anti-anlam terapilerilerinin geliştirilmesine yönelinmiştir, bu yöntemle mRNA yıkımı ve dolayısıyla protein üretiminin engellenmesi amaçlanmıştır. Ancak, DNMT1'in tek başına hedeflenmesinin, DNA metilasyonu ile susturulmuş olan tümör baskılayıcı genleri tekrar etkinleştirmeye yeterli olduğu halen kesinleşmemiştir.
Hastalıkları

Rett sendromu: Metilasyon bağımlı DNA bağlayıcı proteinleri kodlayan b'r gen olan MECP2'nin mutasyonuyla meydana gelir.
ICF sendromu: Kromozom 1, 9 ve 16'nın satellit bölgelerinin hipometilasyonuyla karakterize edilmesi ve kromozom kararsızlığı sonucu oluşur. Son zamanlarda, de novo DNA metiltransferaz geni DNMT3B'deki mutasyonların bu sendromla bağlantısı olduğu bulunmuştur.
X-bağımlı Alfa Talasemi / Zeka Geriliği Sendromu: ATRX geni alfa talasemi, çeşitli zeka gerilikleri, fasiyal dimorfizm ve üregenital anomalileri içeren bir hastalıkla ilişkilidir. ATRX'deki mutasyonlar, rDNA dizileri ve subtelomerik tekrarlar gibi fazla miktarda tekrarlanan dizilerin metilasyon örüntülerinde değişikliklere neden olur. Bu nedenle ATRX'in görevini kaybetmesi gen ifadesinin düzenlenmesinin de kaybını içerebilir.
Bitkilerde

Bitkilerde, özellikle model organizma Arabidopsis thaliana 'da, DNA metilasyonunun anlaşılmasında önemli ilerleme kaydedilmiştir. Memelilerde metilasyonun CpG dizilerindeki sitozinde metillenmesine karşın, bitkilerde sitozin CpG, CpNpG ve CpNpN dizilerinde de metillenir (burada N, guanin dışında her nükleotit anlamına gelir).
Arabidopsis 'teki esas DNA metiltransferaz enzimleri DRM2, MET1 ve CMT3'dür. DRM2 ve MET1 proteinleri, memeli metiltransferazları olan, sırasıyla, DNMT3 ve DNMT1 ile önemli derecede homoloji gösterirler, CMT3 ise bitki âlemine hastır. DNA metiltransferazların iki sınıfı vardır: 1) de novo sınıfı, yani DNA'da yeni metil grupları ekleyen enzimler ve 2) sürdürücü (ing. maintenance) sınıfı, DNA ikilenmesi sırasında ana moleküldeki metil gruplarını tanıyıp yavru ipliklerde aynı konumlarda metil grupları ekleyen enzimler. DRM2, de novo DNA metiltransferaz olduğu gösterilmiş tek enzimdir. DRM2 ayrıca, MET1 ve CMT3 ile birlikte, DNA ikilenmesi sırasında metilasyonun korunmasını sağladığı da gösterilmiştir. Bitkilerde başka DNA metiltransferazlar da ifade edilmektedir ama işlevleri bilinmemektedir (bkz Kromatin Veritabanı).
Halen de novo metilasyon yerlerinin nasıl belirlendiği bilinmemektedir. Çoğu (ama her değil) konumda RNA yönlendirmeli DNA metilasyonu (İng. RNA-directed DNA methylation; RdDM) olduğuna dair bulgular vardır. RdDM'de, spesifik RNA transkriptleri çift iplikli yapılar oluştururlar. İki iplikli RNA'lar, ya küçük enterferans RNA (siRNA) ya da mikroRNA (miRNA) yolakları aracılığıyla, RNA'yı üreten orijinal genom bölgesi için de novo DNA metilasyonunu yönlendirirler. Bu mekanizmanın RNA virüslerine ve/veya transpozonlara karşı hücresel savunmada önemli olduğu düşünülmektedir, çünkü bunların her ikisi de konak genomda mutasyonlara yol açabilecek çift iplikli RNA oluştururlar. Henüz iyi anlaşılmayan bir mekanizmayla bu zararlı bölgelerin metillenmesi sonucu, bunların ifadesi sonlandırılır ve mutagenik etkilerinden korunulmuş olur.
Mantarlarda

Çoğu mantarda düşük düzeyde (% 0,1 ila 0,5 arası) sitozin metillenmesi olmasına karşın, bazı mantarların genomları %5 oranında metillenir. Bu oran, hem türler arasında hem de aynı türün farklı izolatları arasında, çeşitlilik gösterir. Mantarlarda belli fizyolojik şartlarda gen ifadesinin kontrolünde de DNA metilasyonun rol oynadığına dair belirtiler vardır.
Ekmek mayası (Saccharomyces cerevisiae) ve fisyon mayasında (Schizosaccharomyces pombe) çok az DNA metilasyonu olsa da, ipliksi mantar Neurospora crassa'nın iyi karakterize edilmiş bir metilasyon sistemi vardır. Neurospora'da metilasyonu kontrol eden birkaç gen vardır ve DNA metiltransferaz dim-2 'nin mutasyonu Nörospora'da tüm DNA metilasyonu yok eder ama büyüme veya üremeye etki etmez. Neurospora genomunda çok az tekrarlıyan DNA'bulunmasına karşın, metilasyonun yarısı tekrar eden DNA dizilerinde (transpozon kalıntıları ve sentromer DNA'sı dahil olmak üzere) gürülür. DNA metilasyonunun olmadığı bir genetik geriplanda (İng. genetic background) diğer önemli süreçlerin değerlendirilebilmesinin mümkün olması Neurospora'yı DNA metilasyonun araştırılması için değerli bir sistem kılar.
Bakterilerde

Adenin ve sitozin metilasyonu çoğu bakteride restriksiyon modifikasyon sisteminin parçasıdır. Bu sistemde çalışan bir metilaz belli bir DNA dizisini tanır ve bu dizi içinde veya yakınındaki bir bazı metiller. Bu şekilde metillenmemiş olan yabancı DNA'lar hücre içine girdiklerinde diziye spesifik restriksiyon enzimleri tarafından parçalanır. Bakterinin kendi DNA'sı metillenmiş olduğu için bu restriksiyon enzimleri tarafından tanınmaz. İçsel DNA'nın metilasyonu ilkel bir bağışıklık sistemi olarak çalışır, onun sayesinde bakteriler bakteriyofaj enfeksiyonundan kendilerini korurlar.
E. coli DNA adenin metiltransferaz (Dam), yaklaşık 32 kDa büyüklüğünde bir enzimdir ve bir restriksiyon/modifikasyon sistemine ait değildir. E. coli Dam'ın hedef dizisi GATC'dir. Bu dizinin iki yanındaki üçer baz çifti de DNA-Dam bağlanmasına etki eder. Dam, çeşitli süreçlerde rol oynar, bunlar arasından yanlış eşleşme tamiri, DNA ikileşmesinin zamanlaması ve gen ifadesi vardır. DNA ikilenmesinden evvel GATC konumlarındaki iki ipliğin her biri adenin bazında metillenmişken, ikileşmenin ardından bunlardan sadece biri metillenmiş durumda kalır. Bunun nedeni, yeni ipliğe dahil olan adenin bazının metillenmemiş olmasıdır. Tekrar metillenme, ikileşmeden 2-4 saniye sonra olur, bu arada ikileşme sırasında yeni iplikteki meydana gelen dizi hataları onarılır. DNA ipliklerinden birinin metillenmemiş olması, hücrenin tamir sisteminin o ipliği yeni sentezlenmiş iplik olarak tanımasını sağlar. Bakterilerde Dam sistemin bozulması, kendiliğinden olan (spontan) mutasyon oranının artmasına neden olur. Başka DNA tamir enzimleri de olmayan dam mutantlarında yaşayabilirliğin tehlikeye düşmesi, Dam sisteminin hayatiyetini gösterir.
Bakteri kromozomundaki ikileşme orijininde çok sayıda GATC konumu olduğu için orası ikileşme sonrası yarı-metillenmiş durumunu daha uzun süre korur. DNA ikileşmesinin zamanlamasında bunun merkezî bir önemi vardır. SeqA proteini ikilenme orijinine bağlanarak onu tecrit eder ve metillenmesini engeller. Yarı metillenmiş ikilenme orijinleri inaktif olduklarından bu mekanizma hücre döngüsü sırasında DNA ikileşmesinin tek bir kere olmasını sağlar.
Bazı genlerin ifadesi, örneğin E. coli 'de pilus proteinlerini kodlayanların ifadesi, gen operonunun promotör bölgesindeki GATC konumlarının metillenmesi ile düzenlenir. DNA ikileşmesinin hemen sonrasındaki çevresel şartlar, bu promotör bölgesinin yakınındaki ve uzağındaki iki bölgeden birinin metilasyonu bloke edebilir. Metilasyon şekli oluştuktan sonra pilus gen transkripsiyonu DNA tekrar ikilenene kadar ya etkin ya da inhibe durumda kitli kalır. E. coli 'de pilus operonlarının idrar yolu enfeksiyonlarındaki virülansı belirlemekte önemli bir rol oynar. Bu yüzden Dam inhibitörlerinin antibiyotik olarak çalışabileceği önerilmiştir.
DNA metilasyonunu saptamakta kullanılan ölçüm testleri

DNA metilasyonu bilimsel araştırmalarda aşağıdaki yöntemlerle saptanabilir:
Metilasyon spesifik PCR, sodyum bisülfitin DNA ile kimyasal tepkimesi sonucu metillenmemiş sitozinin urasile dönüşmesi reaksiyonu ve bunun ardından geleneksel PCR yapılması esasına dayalıdır. Metillenmiş sitozinler bu tepkimede urasile dönüşmezler, durumu merak edilen CpG konumu ile örtüşen primerler kullanılarak orasının metillenip metillenmediği anlaşılır.
HELP testi, restriksiyon enzimlerinin metilenmiş ve metillenmemiş konumlar için farklı olan tanıma ve kesme yeteneğini dayalıdır.
Çip üzerine kromatin immün çöktürme yöntemi, metillenmiş DNA'ya spesifik proteinlere (MCP2 gibi) bağlanan antikorlarlar kullanılarak çökeltilen DNA'nın DNA dizilimlerine bağlanması esasına dayalıdır.
Restriksiyon tespit noktası genom taraması Karmaşık olmasından dolayı artık ender kullanılan bir testtir, restriksiyon enzimlerinin metillenmiş ve metilenmemiş CpG konumlarını farklı derecede tanıyıp kesme esasına dayaslı olması bakımından, HELP testine benzer.
Metillenmiş DNA immün çöktürmesi (İng. Methylated DNA immunoprecipitation; MeDIP), kromatin immün çöktürmesine benzer, metillenmiş DNA parçaları immün çöktürme ile saflaştırılır, ardından DNA mikrodizilim veya DNA dizilemesi gibi DNA saptama yöntemlerine girdi olarak kullanılır.
Gackt

| Gackt |
| --- | --- |

Genel bilgiler
Doğum: Gakuto Kamui 4 Temmuz 1973 (51 yaşında) Okinawa, Japonya
Tarzlar: Rock, Visual Kei
Meslekler: Müzisyen, Söz Yazarı, Besteci, Yapımcı, Aktör, Yazar, Oyun Yazarı, Yönetmen, Tasarımcı
Çalgılar: Vokal, Piyano, Keman, Gitar, Bas Gitar, Şamisen, Bateri, Çello
Etkin yıllar: 1994–günümüz
İlişkili hareketler: Cains:Feel, Malice Mizer, S.K.I.N.Yellow Fried Chickenz

Gackt Camui (神威 楽斗, Kamui Gakuto, doğum tarihi 4 Temmuz, 1973), Gackt olarak tanınan Japon müzisyen, besteci, şarkı sözü yazarı, yapımcı, yazar ve aktördür. 1994 yılında kurulan bağımsız ve kısa ömürlü Cains:Feel grubu ile müzik kariyerine adım attı. Ardından 2001 yılında dağılan, visual kei akımına bağlı bir rock grubu olan Malice Mizer ile çalıştıktan sonra, 1999 yılında solo kariyerine başladı.
Birçok video oyunu karakterine model olarak seçilen ve birçoğuna seslendirme sanatçısı olarak katkıda bulunan Gackt'nun müziği, aralarında Dirge of Cerberus: Final Fantasy VII, New Fist of the North Star ve Bujingai'nin de bulunduğu çeşitli anime ve video oyunlarında kullanıldı. Senaryosuna katkıda bulunduğu 2003 çıkışlı Japon yapımı Moon Child adlı filmde başkarakter Sho, Fūrin Kazan adlı tarihi dizide efsanevi samuray Uesugi Kenshin ve 2010 yılında Josh Hartnett ile başrollerini paylaştığı Bunraku adlı filmde, Yoshi rolünde oynadı. Bunun yanında 2009 yılında Nemuri Kyoshiro (眠 狂四郎), 2012 yılında ise kendi yazdığı Moon Saga: Yoshitsune no Hiden (MOON SAGA ～義経秘伝～舞台宣伝) adlı tiyatro oyunlarını sergiledi.
Japoncanın yanı sıra, İngilizce, Mandarin, Korece ve Kantonca dillerinde de performans sergileyen Gackt, 2007 yılının Ekim ayında, müzik katalogu iTunes'da yayınlanan ilk Japon sanatçı oldu. Solo kariyeri boyunca, 9 albüm, 6 derleme albüm ve 42 single yayınlayan Gackt, Japon müzik tarihinde resmi listelerin ilk 10'una en fazla girmiş erkek sanatçı rekortmenidir. Ayrıca birçok savunma sanatı dalında eğitim almış olan sanatçı, karate ve tekvando dallarında siyah kuşak sahibidir.
Çocukluğu

Gackt 4 Temmuz 1973 tarihinde Okinawa, Japonya'da Ryukyu yerlisi bir ailenin  üç çocuğundan ikincisi olarak dünyaya geldi. Babası trompet üzerinde uzmanlaşmış bir müzik öğretmeni, annesi ise ilkokul öğretmeniydi. Bir abla ile kendisinden küçük bir erkek kardeşe sahip olan Gackt, çocukluğu boyunca babasının işi nedeniyle doğum yeri olan Okinawa dışında beş ayrı bölgede ikamet etmek durumunda kaldı. Gackt'nun müzik eğitimi, ailesinin klasik piyano eğitimi alması konusundaki ısrarı üzerine üç yaşında başladı. Yedi yaşında ilkokula başladığında, ailesinin sürekli taşınmasından dolayı sıklıkla öğretmen değişikliği yapmak zorunda kalan Gackt piyanodan sıkılmaya başladı, fakat ailesi piyano eğitimine ara vermesine ancak dört yıl sonra izin verdi. Babası trompet çaldığından bakır nefesli çalgılar hakkında da bilgisi bulunmaktadır. Gackt ünlü piyanist ve bestekâr Frédéric Chopin'i kendisine "müziğin güzelliğini, derinliğini, neşesini, kederini, inceliğini öğreten; müziğin inanlara nasıl da cesaret aşılaması gerektiğini ve kulağa ulaşan ses katmanlarını birbirinden ayırt etmeyi öğreten kişi" olarak nitelemiş ve Chopin'in kendi yaptığı müziğin temeli olduğunu vurgulamıştır. Gençlik yıllarına dek klasik müzik ve enka dinleyerek büyüdü ve yetişkinliğin ilk yıllarında rock müzik ile tanıştı. İlk olarak Led Zeppelin'in Stairway to Heaven adlı parçasından özellikle etkilendiğini belirten Gackt, lise yıllarının sonlarına doğru modern perküsyon ve elektro gitar çalmaya başladı.
Jihaku adlı otobiyografisine göre oldukça haşarı bir çocuk olan Gackt, birçok kez ölümle burun buruna geldi ve yedi yaşında Okinawa'da yüzerken bir boğulma tehlikesi geçirdi. Bu olayda bir yakın ölüm deneyimi yaşadı ve otobiyografisinde yazdığına göre bunun sonucunda metafizik varlıklar ile paranormal bir iletişim kurmaya başladı. On yaşına geldiğinde akıl hastanesine yatırıldı ve uzun bir süre boyunca gözetim altında tutuldu. Ağır hasta olan arkadaşlarından birçoğunun vefat etmesinden oldukça etkilenen Gackt, doktorları onların davranışlarını taklit ederek sağlıklı olduğuna inandırdıktan sonra taburcu olabildiğini belirtmiştir.
Kariyeri > 1994–1998: İlk Müzik Çalışmaları ve Malice Mizer

1990'ların başında bateri çalmayı bırakan Gackt, bir süreliğine stüdyo müzisyenliğine ara verdi ve kendini ses teknisyenliği dahil birçok işte aynı anda çalışırken buldu. Yirmili yaşlarının başlarında bir bar programında, gelecekte solo grubunun bir üyesi olacak You Kurosaki adlı bir gitaristle tanıştı ve Kurosaki ile birlikte (Habil ve Kabil'in hikâyesinden etkilenerek adlandırdıkları) Cains:Feel grubunu kurdu. Birkaç aksilik ve tesadüften sonra bateri çalmayı bırakarak grubun vokalistliğini üstlendi ve grup ile bir demo kaydetti.
Ertesi yıl vokalistlerinin gruptan ayrılması sebebiyle çalışmalarına ara veren visual kei grubu Malice Mizer ile tanıştı. Gackt Tokyo'ya taşınarak 1995 yılının Ekim ayında gruba katıldı. Grubun vokalist, piyanist ve söz yazarlığını üstlenen Gackt, kısa süre sonra tamamı kendisine ait olan "Regret" ve "Le Ciel" adlı iki parça yazdı ve bunlar grubun en çok bilinen, kült parçaları haline geldi. Daha önceleri kendi haline bir grup olan Malice Mizer, Gackt'dan sonra büyük bir çıkış yakaladı ve Gackt, popülaritesinin zirvesine ulaşmış olan grupla birlikte geçirdiği dört yılda iki tane stüdyo albümü yayınladıktan sonra, 1999 yılının Ocak ayında gruptan ayrıldığını açıkladı. Otobiyografisinde üyeler arasındaki kişisel farklılıklar, saplantılar ve grup ile plak şirketine aniden gelen paranın kendisini gruptan soyutlamasına neden olduğunu ve bütün bunların gruptan ayrılmasına sebebiyet verdiğini belirtti.
Kariyeri > 1999–2001: Solo çıkışı, Mizérable, Mars ve Rebirth

Gackt 1 Ocak 1999 tarihinde solo kariyerine başladı. Kayıtlarını tamamladıktan sonra solo müzisyen olarak gösterdiği ilk performansı, Japonya'da 12 farklı mekanda gerçekleşen 99 Gackt Resurrection turnesi oldu. Bu turneyi 12 Mayıs'ta yayınlanan Mizérable adlı extended play izledi'. Albüm listelerde iki numaraya yerleşti ve 250,000 kopyadan daha fazla satarak RIAJ tarafından Altın Plak Ödülü'ne layık görüldü. Albümün içerdiği aynı adlı parça listelerde üçüncü sıraya kadar yükseldi. Gackt, Temmuz ayında Osaka ve Tokyo'da düzenlenen Shock Wave Illusion'da sahne aldı. 11 Ağustos tarihinde yayınlanan ikinci single'ı "Vanilla" listelerde dört numaraya yükselerek ülke çapında hatrı sayılır bir başarı elde etti.
2000 yılının Şubat ayından Mart ayına kadar üç single daha yayınlayan Gackt bunun ardından 26 Nisan tarihinde ilk stüdyo albümü Mars'ı yayınladı. Albüm listelerde üç numaraya yükseldi ve 200,00 kopyanın üzerinde bir satış rakamı yakaladı. Hemen ardından ülke çapında Mars Sora Kara no Homonsha -Kaisō- adlı bir turneye çıktı. Günümüzde hala gitarist ve yardımcı prodüktörlüğünü yürüten Chachamaru'nun grubuna katılmasından sonra Caparison gitarları ile iş birliği yaparak canlı performanslarında sıklıkla kullandığı “Merkür” ve “Venüs” adlı iki tane gitar tasarladı. Gackt yılın sonuna kadar, iki tanesi gelecek albümde yer alan üç single daha yayınladı.
14 Mart 2001 tarihinde listelerde en uzun süre boyunca kalan yedinci single'ı "Kimi no Tame ni Dekiru Koto" yayınlandı. 25 Nisan'da Gackt'nun ikinci stüdyo ve ilk konsept albümü Rebirth piyasaya sürüldü. Albüm listelerde üçüncü sıraya yerleşti ve RIAJ tarafından verilen Altın Plak Ödülü'nün sahibi oldu. Albümü hemen ardından gelen Requiem et Reminiscence turnesi izledi. Gackt New York'ta yaşanan 11 Eylül Saldırıları'ndan sonra dünya barışı içerikli bir parça yazdı. "Jūnigatsu no Love Song" adlı parça Aralık ayında bir single olarak piyasaya sürüldü. 2001 ve 2004 yılları arasında Japonca, İngilizce, Korece ve Çince olarak tekrar kaydedilen parçanın farklı versiyonları her yılın Noel öncesinde, sırasıyla Aralık aylarında yayınlandı.
Kariyeri > 2002–2003: Moon ve Crescent Albümleri

Gackt 2001 ve 2002 yılları arasında en çok satan single'ı "Another World"'ün yayınlanması ile birlikte konsept bir proje olan "Moon" üzerinde çalışmaya başladı. 16 Haziran'da yayınlanacak olan üçüncü stüdyo albümü Moon öncesinde yapılan bir bar turnesi ve Şablon:Nihongo3 adlı bir arena turnesi olmak üzere ülke çapında bu yeni konsepti ifade eden iki farklı turneye çıktı. Albüm listelerde ikinci sıraya yerleşti ve RIAJ tarafından Altın Plak Ödülü'ne layık görüldü. Gackt 22 Eylül'de Çin'de “Japonya-Çin Diplomatik İlişkilerinin Normalleştirilmesinin 30. Yıl Dönümü” etkinliğinin bir parçası olarak düzenlenen "China-Japan: Holding Hands, Moving Together" adlı etkinlikte ülkesini temsil eden birkaç kişi arasında yer almak üzere Çin'e davet edildi.
Gackt 2003 yılında Moon Child adlı bir film yayınlayacağını açıkladı. Senaryoyo kendi yazdı ve Taiwan'da çekilen aksiyon sahnelerinin tümünü dublör kullanmadan kendi başına üstlendi. Filmde başrolleri paylaştığı müzisyen Hyde ile birlikte filmin kapanış müziği olan "Orange no Taiyō" (オレンジの太陽, Orenji no Taiyō, "The Orange Sun")’u seslendirdi. Film Japony’da 19 Nisan’da yayınlandı ve aynı sene 13 Mayıs tarihinde Cannes Film Festivali, 12 Nisan 2004 tarihinde ise Philadelphia Film Festivali’nde sergilendi. 5 Mayıs tarihinde konsept olarak bir önceki turnenin devamı niteliğindeki Şablon:Nihongo3 adlı turneye başlamadan önce, 13 Mayıs tarihinde, aynı albümden çıkan ve listelerde ikinci sıraya yükselen dört single’ından ikincisi "Kimi ga Oikaketa Yume"’yi yayınladı.
27 Eylül tarihinde özel konuk olarak TV Asahi kanalının düzenlediği "Kingdom Rock Show" 45. yıl dönümü programına katıldı. 2 Ekim tarihinde Yoko Ono tarafından Saitama Super Arena’da düzenlenen "Dream Power: John Lennon Super Live" konserinde, Lennon'a ait olan "Love" adlı parçayı seslendirdi. Kasım ve Aralık aylarında onaltıncı single'ı olan "Last Song"’u ve dördüncü stüdyo albümü olan Crescent’I yayınladı. Albüm satışları RIAJ tarafından Platinum olarak derecelendirildi. Gackt Moon Saga projesi için yayınladığı film ve müzikler dışında, aynı yıl içinde Moon Child Requiem adlı bir roman, ve ardından Jihaku adlı bir otobiyorgrafi yayınladı. Aynı sene Yılbaşı Arifesi’nde ise, Japonya’nın 54. geleneksel müzik programı Kōhaku Uta Gassen’deki ilk performansını sergiledi.
Kariyeri > 2004–2005: The Sixth Day, The Seventh Night, Love Letter ve Diabolos

2004 yılında, daha önce yayınlanmış ve bazıları yeniden kaydedilmiş single’larından oluşan ilk toplama albümü The Sixth Day: Single Collection’ı yayınladı. Bu albümün çıkışını ise, daha önceden yayınlanan parçaların yeniden düzenlenerek seslendirilmiş akustik verisyonlarının bulunduğu The Seventh Night: Unplugged izledi. Albümler listelere üç ve beş numaralardan giriş yaparak, satışları RIAJ tarafından Altın ve Platinum olarak derecelendirildi.. Albümlerin çıkış tarihleri arasında The Sixth Day & Seventh Night adlı bir turne düzenledi. 27 Ekim tarihinde, sanatçının en büyük liste başarılarından birini yakalayan onsekizinci single’ı "Kimi ni Aitakute"’yi yayınladı. Gackt, bununla birlikte yakaladığı akustik tarzı sürdürerek, bir sonraki yılın Sevgililer Günü’nde beşinci albümü Love Letter’ı yayınladı. Albüm satışları RIAJ tarafından Altın olarak derecelendirildi. Aynı album, 16 Temmuz 2005 tarihinde Korece kaydedilerek Kore’li dinleyicilere sunuldu. 4 Aralık tarihinde ise Kore’de yapılan M.net/Km Music Video Festival’e katılarak "En İyi Asyalı Rock Sanatçısı" ödülünü aldı.
Gackt 27 Nisan 2005 tarihinde yayınladığı yirmi birinci single'ı "Black Stone" ile birlikte, biraz daha alternative rock tarzına doğru yönelmeye başladı. Bunun ardından Mayıs ve Ağustos ayları içinde Mobile Suit Zeta Gundam filmlerinden biri için kullanılan ve oldukça büyük başarı yakalayan"Metamorphoze" ile "Todokanai Ai to Shitteita no ni Osaekirezu ni Aishitsuzuketa..." adlı iki single yayınladı . Single’ların üçünün satışları da RIAJ tarafından Altın olarak derecelendirildi. 21 Eylül tarihinde altıncı stüdyo albümü Diabolos’u yayınladı. Bu album konsept olarak daha önceki ‘Moon’ albümlerine bir giriş niteliği taşır. Albüm listelere dördüncü sıradan girdi ve RIAJ tarafından Altın olarak derecelendirildi. Gackt albümün yayınlanmasının ardından Diabolos ~Aien no Shi~ isimli, Japonya genelinde 36 konser ile birlikte kariyerindeki en uzun turnesine çıktı. Turne 40.000 kişiden fazla seyirci kapasiteli Tokyo Dome arenasında yapılan, Yılbaşı Arifesi konseri ile son buldu.