Portekizli Isabella
Nişan ve evlilik

I. Manuel'in en büyük kızı olan Isabella, evlilik için oldukça çekici bir adaydı. Koca olarak ideal aday, Maria'nın kız kardeşi Kastilyalı I. Joanna ve kocası Burgonya dükü Felipe'nin oğlu olan ilk kuzeni Karl idi. Evlilikleri, büyükanne ve büyükbabaları Kastilya kraliçesi I. Isabella ve Aragon kralı II. Fernando'nun istekleri doğrultusunda İspanya ve Portekiz arasında güçlü bir ittifak getirecekti. Ayrıca Portekiz, İspanya'nın Atlantik Okyanusu'ndaki üstünlüğüne meydan okuyabilecek tek deniz gücü olduğu için, çatışmalara yol açmadan okyanusların keşfedilmeye devam edilmesini kolaylaştıracaktı. Ayrıca V. Karl birden fazla krallığın hükümdarı olduğu için, Hristiyan âleminin en zengin krallığı olan Portekiz'in; Kastilya Veraset Savaşı'nda Fransa Krallığı'nın değil, Habsburg İspanyası'nın yörüngesine girmesi gerekiyordu. Dahası Burgonya'da büyüdüğü için İspanyol soyluları ve tebaasının İber Yarımadası'ndan bir prensesle evlenmesi konusunda ısrar ettikleri bildirildi.
1518'de 18 yaşında olan Karl, evlenmek için acele etmedi ve bunun yerine kız kardeşi Eleanor'u 1518'de Isabella'nın dul babasıyla evlenmeye gönderdi. Karl'ın Flaman danışmanları, özellikle William de Croÿ, daha sonra onu Portekiz ittifakını arka plana atmaya ve onun yerine İngiltere ile bir ittifak kurmaya ikna etti. 1521'de Karl, VIII. Henry ile Aragonlu Catherine'nin kızı, diğer birinci derece kuzeni, kendisinden 16 yaş küçük ve daha 5 yaşında bir çocuk olan Mary Tudor ile nişanlandı. Bu anlaşma, hırslı Kardinal Thomas Wolsey tarafından dile getirilen İngiltere ve Fransa arasındaki bir ittifakı bozmaya çalıştı. Portekiz'deki pek çok kişi, Infanta'nın reddini bir suç olarak kabul etti, ancak Isabella, güçlü kuzeniyle evlenmeye ya da bir manastıra girmeye kararlıydı. 1525'e gelindiğinde, Karl artık İngiltere ile bir ittifakla ilgilenmiyordu ve meşru çocuklara sahip olmaya kararlı olduğu için Mary'nin yaş almasını bekleyemezdi. Nişanı iptal edildi, İngiltere ile ittifak terk edildi ve sonunda Isabella ile evlenmeye çalıştı. Daha pek çok avantajı vardı - yaşça ona daha yakındı, sadece 3 yaş küçüktü; Akıcı İspanyolca biliyordu ve İtalyan Savaşı'nın getirdiği birçok mali sorununu çözmek için fazlasıyla yeterli olan 900.000 Portekiz cruzados çeyiz teklif etti.
Karl, ilk kuzenleri için bir papalık muafiyeti sağlamak için zaman kaybetmedi ve Portekiz ile bir ittifak için evlilik sözleşmesi yapıldı - Isabella onunla evlenecek ve kardeşi Portekiz Kralı III. João, Karl'ın en küçük kız kardeşi Avusturyalı Catherine ile evlenecekti. Karl, oradaki siyasi ve dini sıkıntılarla uğraşmak için Orta Avrupa'ya giderken, İspanya'yı yönetmesi için müstakbel karısı ile evlenmeyi ve ardından naip olarak bırakmayı planladı. Ocak 1526'da Isabella İspanya'ya gitti. Varışında, İspanya-Portekiz sınırında Calabria Dükü, Toledo Başpiskoposu ve Béjar Dükü ile buluştu. Karl'ı bir hafta bekleyeceği Sevilla'ya kadar eşlik ettiler. Sonunda, düğünleri ertesi gün 11 Mart gece yarısından hemen sonra Alcázar, Sevilla Sarayı'nda gerçekleşti.
Evlilikleri politik bir anlaşma olmasına rağmen, Isabella, onunla beklenenden daha uzun süre kalan Karl'ı büyüledi. Birkaç ay boyunca Granada'daki El Hamra Sarayı'nda balayına çıktılar ve burada İspanya'da daha önce hiç görülmemiş bir İran çiçeğinin tohumlarını sipariş ettiler. Tohumlar sonunda onu sevindiren kırmızı karanfil haline geldi. Karl daha sonra onuruna binlercesinin daha dikilmesini emretti ve kırmızı karanfilin İspanya'nın çiçek amblemi olmasını sağladı. Çiftin paylaştığı karşılıklı sevgiye rağmen, evlilikleri kolay olmadı. İlk yokluğu 1529'dan Nisan 1533'e kadar sürdü. İspanya'da 2 yıl kaldı, ancak Aralık 1536'da tekrar yola çıktı. 1538'de kısa bir süre geri dönmesine rağmen, neredeyse hemen ayrıldı ve Kasım 1539'da geri döndü. Soylular tarafından kararlaştırıldığı gibi, çocukları İspanya'da büyüdü. Eğitimlerini denetledi ve onlara Portekizce öğretti. Kocasına düzenli olarak yazdı, ancak çoğu zaman aylarını mektup almadan geçirdi.