Perlintasan satwa liar
Jalan raya dan fragmentasi habitat

Fragmentasi habitat terjadi ketika penghalang buatan manusia seperti jalan raya, rel kereta api, kanal, saluran listrik, dan jaringan pipa menembus dan membagi habitat satwa liar.  Dari jumlah tersebut, jalan mempunyai dampak yang paling luas dan merugikan.  Para ilmuwan memperkirakan bahwa sistem jalan raya di Amerika Serikat mempengaruhi ekologi setidaknya seperlima luas daratan negara tersebut.  Selama bertahun-tahun ahli ekologi dan konservasi telah mendokumentasikan hubungan buruk antara jalan raya dan satwa liar,  dan mengidentifikasi empat dampak buruk jalan raya dan lalu lintas terhadap populasi satwa liar: (1) menurunkan jumlah dan kualitas habitat, (2) meningkatkan angka kematian akibat tabrakan antara satwa liar dan kendaraan (road kill), (3) menghambat akses terhadap sumber daya di seberang jalan, dan (4) membagi populasi satwa liar menjadi sub-populasi yang lebih kecil dan lebih rentan (fragmentasi). Fragmentasi habitat dapat menyebabkan kepunahan atau pemusnahan jika kumpulan gen suatu populasi dibatasi.
Tiga dampak pertama (hilangnya habitat, kematian di jalan, dan isolasi dari sumber daya) memberikan tekanan pada berbagai populasi hewan dengan mengurangi sumber daya yang tersedia dan secara langsung membunuh individu dalam suatu populasi. Misalnya saja,  menemukan bahwa tabrak mati hewan liar tidak menimbulkan ancaman signifikan terhadap populasi sehat namun dapat berdampak buruk pada populasi kecil, menyusut, atau terancam. Tabrak mati telah berdampak signifikan terhadap sejumlah spesies terkemuka di Amerika Serikat, termasuk rusa berekor putih (Odocoileus virginianus), macan kumbang Florida (Puma concolor coryi), dan beruang hitam (Ursus americanus).  Selain itu, hilangnya habitat bisa terjadi secara langsung, jika habitat dirusak untuk dijadikan jalan, atau tidak langsung, jika kualitas habitat di dekat jalan terganggu karena emisi dari jalan (misalnya kebisingan, cahaya, limpasan air, polusi, dll).  Terakhir, spesies yang tidak dapat bermigrasi melintasi jalan raya untuk mendapatkan sumber daya seperti makanan, tempat berlindung, dan pasangannya akan mengalami penurunan tingkat reproduksi dan kelangsungan hidup, yang dapat membahayakan kelangsungan hidup populasi.
Selain tiga faktor pertama, sejumlah penelitian menunjukkan bahwa pembangunan dan penggunaan jalan merupakan sumber langsung fragmentasi habitat.  Seperti disebutkan di atas, populasi yang dikelilingi jalan raya cenderung tidak menerima imigran dari habitat lain dan akibatnya, mereka menderita karena kurangnya keanekaragaman genetik. Populasi kecil ini sangat rentan terhadap kepunahan akibat stokastisitas demografi, genetik, dan lingkungan karena mereka tidak memiliki cukup alel untuk beradaptasi terhadap tekanan selektif baru seperti perubahan suhu, habitat, dan ketersediaan pangan.
Hubungan antara jalan raya dan fragmentasi habitat telah terdokumentasi dengan baik. Sebuah studi menemukan bahwa jalan berkontribusi lebih besar terhadap fragmentasi habitat hutan dibandingkan penebangan habis.  Studi lain menyimpulkan bahwa fragmentasi jalan di hutan yang dulunya berdekatan di bagian timur Amerika Utara merupakan penyebab utama berkurangnya spesies burung hutan dan juga secara signifikan merugikan mamalia kecil, serangga, dan reptil di Amerika Serikat.  Setelah melakukan penelitian selama bertahun-tahun, para ahli biologi sepakat bahwa jalan raya dan lalu lintas menyebabkan fragmentasi habitat, isolasi, dan kematian di jalan, yang semuanya secara signifikan membahayakan kelangsungan populasi satwa liar di seluruh dunia.[butuh rujukan]