Serial Experiments Lain
Karakter

Lain Iwakura (岩倉 玲音, Iwakura Rein)  Disuarakan oleh: Kaori Shimizu (Jepang); Bridget Hoffman (Inggris)  Karakter utama dalam seri ini. Lain adalah gadis berusia 14 tahun yang perlahan menemukan jati dirinya sepanjang cerita. Awalnya, ia digambarkan sebagai siswi SMP yang pemalu dan memiliki sedikit teman. Seiring waktu, ia mengembangkan berbagai kepribadian yang lebih berani, baik di dunia nyata maupun di Wired. Pada akhirnya, Lain menyadari bahwa ia hanyalah program komputer otonom yang memiliki kesadaran sendiri dalam wujud manusia, diciptakan untuk menghapus batas antara Wired dan dunia nyata.
Masami Eiri (英利 政美, Eiri Masami)  Disuarakan oleh: Shō Hayami (Jepang); Kirk Thornton (Inggris)  Perancang utama Protocol Seven. Saat bekerja di Tachibana General Laboratories, ia menyisipkan kode tersembunyi yang memungkinkannya mengendalikan seluruh protokol. Ia juga memasukkan kesadarannya sendiri ke dalam protokol ketujuh. Setelah dipecat dari perusahaannya, ia ditemukan tewas. Ia percaya bahwa manusia harus melepaskan batasan fisik mereka dan hidup selamanya sebagai entitas virtual di Wired.
Yasuo Iwakura (岩倉 康男, Iwakura Yasuo)  Disuarakan oleh: Ryūsuke Ōbayashi (Jepang); Barry Stigler (Inggris)  Ayah Lain dan Mika, yang bekerja dengan Masami Eiri di Tachibana General Laboratories. Ia sangat antusias dengan komputer dan komunikasi elektronik. Ia secara halus mendorong Lain untuk terhubung ke Wired dan mengawasi perkembangannya. Meskipun akhirnya ia meninggalkan Lain, ia mengaku benar-benar mencintai dan peduli padanya sebagai seorang ayah.
Miho Iwakura (岩倉 美穂, Iwakura Miho)  Disuarakan oleh: Rei Igarashi (Jepang); Dari Lallou Mackenzie (Inggris)  Ibu Lain dan Mika. Ia menyayangi suaminya tetapi bersikap dingin terhadap anak-anaknya. Ia menunjukkan sedikit emosi dan akhirnya meninggalkan Lain, sama seperti suaminya. Ia adalah seorang ilmuwan komputer.
Alice Mizuki (瑞城 ありす, Mizuki Arisu)  Disuarakan oleh: Yōko Asada (Jepang); Emily Brown (Inggris)  Teman sekelas dan satu-satunya sahabat sejati Lain sepanjang seri. Ia tulus dan tidak memiliki keanehan seperti karakter lainnya. Ia adalah orang pertama yang mencoba membantu Lain bersosialisasi, bahkan mengajaknya ke klub malam. Ia berusaha keras untuk menjaga Lain.
Mika Iwakura (岩倉 美香, Iwakura Mika)  Disuarakan oleh: Ayako Kawasumi (Jepang); Patricia Ja Lee (Inggris)  Kakak perempuan Lain yang berusia 16 tahun. Ia sering mengejek perilaku dan minat Lain. Mika dianggap sebagai satu-satunya anggota keluarga Lain yang "normal", tetapi pada satu titik, ia mengalami trauma berat akibat halusinasi yang kejam dan tak henti-hentinya.
Taro (タロウ, Tarō)  Disuarakan oleh: Keito Takimoto (Jepang); Brianne Siddall (Inggris)  Seorang anak laki-laki seumuran Lain yang terkadang bekerja untuk Knights untuk menyebarkan "satu kebenaran". Meskipun sering bergaul dengan mereka, ia belum menjadi anggota penuh dan tidak mengetahui tujuan asli mereka. Ia sangat menyukai permainan realitas virtual dan sering nongkrong di Cyberia bersama teman-temannya, Myu-Myu dan Masayuki.
Office Worker  Disuarakan oleh: Eiichirō Suzuki  Seorang eksekutif tinggi dari Tachibana General Laboratories yang memiliki agenda pribadi. Ia bekerja sama dengan Men in Black dan bertanggung jawab atas pembunuhan massal anggota Knights.
Men in Black
Karl Haushoffer (カール・ハウスホッファ, Kāru Hausuhoffa) – Disuarakan oleh: Jouji Nakata (Jepang); Jamieson Price (Inggris)
Lin Suixi (林随錫, Lín Suíxī) – Disuarakan oleh: Takumi Yamazaki (Jepang); Bob Buchholz (Inggris)  Mereka bekerja untuk Office Worker dengan tugas melacak dan membunuh semua anggota Knights. Mereka tidak percaya pada keberadaan Tuhan di Wired, termasuk Lain.
Chisa Yomoda (四方田 千砂, Yomoda Chisa)  Disuarakan oleh: Sumi Mutoh (Jepang); Lia Sargent (Inggris)  Seorang gadis remaja yang bunuh diri di awal seri. Setelah kematiannya, ia mengirim email kepada Lain dan teman-temannya, mengklaim bahwa ia masih hidup di Wired. Insiden ini memicu hampir semua peristiwa dalam anime.
Reika Yamamoto (山本 麗華, Yamamoto Reika)  Disuarakan oleh: Chiharu Tezuka (Jepang); Lenore Zann (Inggris)  Salah satu teman Alice yang sering mengganggu Lain. Ia lebih serius dibandingkan Julie, tetapi juga lebih kejam.
Julie Kato (加藤 樹莉, Katō Juri)  Disuarakan oleh: Manabi Mizuno (Jepang); Gracie Moore (Inggris)  Teman Alice lainnya yang juga mengganggu Lain, meskipun tidak sekejam Reika.
Masayuki (マサユキ)  Disuarakan oleh: Sora Fujima (Jepang); Dorothy Elias-Fahn (Inggris)  Sahabat Taro yang sering terlihat bersamanya di Cyberia.
Myu-Myu (ミューミュウ, Myūmyuu)  Disuarakan oleh: Yuki Yamamoto (Jepang); Sandy Fox (Inggris)  Seorang gadis yang juga sering berada di Cyberia bersama Taro dan Masayuki. Ia menyukai Taro dan cemburu ketika ia menggoda Lain.
Narator  Disuarakan oleh: Takashi Taniguchi (Jepang); Paul St. Peter (Inggris)