Pembentukan spontan
Pendekatan eksperimental > Pasteur dan Tyndall

Eksperimen Louis Pasteur pada tahun 1859 secara luas dianggap sebagai pukulan akhir bagi teori generasi spontan. Dalam eksperimennya, ia menggunakan labu berleher angsa yang memungkinkan udara masuk tetapi mencegah partikel jatuh langsung ke dalam kaldu daging yang telah direbus. Hasilnya, kaldu tetap steril selama periode yang lama, tetapi ketika labu dimiringkan sehingga partikel dapat masuk, kaldu dengan cepat menjadi keruh, menunjukkan adanya pertumbuhan mikroba. Meskipun eksperimen ini memberikan bukti kuat, masih ada minoritas ilmuwan yang mempertanyakan hasilnya, terutama karena kesulitan eksperimental yang lebih kompleks daripada yang sering digambarkan dalam catatan populer.
John Tyndall, seorang dokter dan fisikawan Irlandia yang mengagumi Pasteur, melakukan investigasi lebih lanjut dan memberikan bukti tambahan yang membantah generasi spontan. Namun, ia menghadapi tantangan dalam memahami spora bakteri, yang dapat bertahan dalam kondisi mendidih. John Tyndall menghadapi kesulitan dalam mensterilkan kultur mikroba karena keberadaan spora bakteri, yang pada masanya belum sepenuhnya dipahami. Seperti Pasteur, ia mencoba mensterilkan sampelnya dengan cara merebusnya. Namun, beberapa jenis spora bakteri mampu bertahan meskipun sudah direbus, menyebabkan pertumbuhan mikroba tetap terjadi dalam beberapa percobaannya. Masalah ini kemudian mendorong pengembangan teknik sterilisasi yang lebih efektif, termasuk penggunaan autoklaf. Autoklaf menggunakan uap bertekanan tinggi untuk membunuh mikroorganisme, termasuk spora bakteri yang resisten terhadap panas. Metode ini akhirnya menjadi standar dalam praktik medis dan mikrobiologi untuk mensterilkan peralatan dan media kultur.
Pada tahun 1862, Akademi Ilmu Pengetahuan Prancis memberikan perhatian khusus pada isu ini dengan menetapkan hadiah bagi “siapa saja yang dapat memberikan pencerahan baru mengenai pertanyaan tentang generasi spontan” melalui eksperimen yang dilakukan dengan baik. Mereka juga membentuk komisi untuk menilai pemenangnya.
Dalam perdebatan ini, Louis Pasteur dan ilmuwan lainnya menggunakan istilah biogenesis sebagai lawan dari generasi spontan, yang berarti bahwa kehidupan hanya berasal dari kehidupan lain. Konsep ini sejalan dengan doktrin Omnis cellula e cellula (“semua sel berasal dari sel lain”) yang dikemukakan oleh dokter Jerman Rudolf Virchow, yang pada gilirannya didasarkan pada penelitian Robert Remak. Setelah eksperimen Pasteur pada tahun 1859, istilah generasi spontan mulai ditinggalkan. Para eksperimental menggunakan berbagai istilah untuk mengkaji asal-usul kehidupan dari bahan tak hidup. Heterogenesis digunakan untuk menggambarkan pembentukan makhluk hidup dari materi organik yang sebelumnya hidup, seperti kaldu yang telah direbus.  Ahli fisiologi Inggris, Henry Charlton Bastian, mengusulkan istilah archebiosis untuk merujuk pada kehidupan yang muncul dari bahan tak hidup.
Pada tahun 1870, Henry Charlton Bastian menciptakan istilah biogenesis untuk merujuk pada pembentukan kehidupan dari materi tak hidup, karena ia tidak menyukai unsur ketidakteraturan yang tersirat dalam istilah generasi spontan. Namun, tak lama kemudian, ahli biologi Inggris Thomas Henry Huxley mengusulkan istilah abiogenesis untuk proses tersebut dan menggunakan biogenesis secara khusus untuk merujuk pada pembentukan kehidupan dari kehidupan yang sudah ada. Sejak saat itu, istilah abiogenesis menjadi istilah utama dalam kajian ilmiah mengenai asal-usul kehidupan, sementara biogenesis digunakan untuk menegaskan prinsip bahwa kehidupan hanya muncul dari kehidupan sebelumnya.
Ilustrasi percobaan Redi tahun 1668 untuk membantah generasi spontan
Eksperimen Louis Pasteur pada 1859 menunjukkan bahwa kaldu nutrisi yang telah direbus tidak secara spontan menghasilkan kehidupan baru. Namun, jika diberi akses langsung ke udara, kaldu membusuk, menunjukkan bahwa organisme kecil (dalam istilah modern, spora mikroba) jatuh ke dalamnya dan mulai berkembang.