stanford-oval/wikipedia huggingface dataset:
إم بي كي إنترتينمنت

إم بي كي إنترتينمنت
| 0 | 1 |
| --- | --- |
البلد:   كوريا الجنوبية 
التأسيس:  2006 
النوع:  شركة تسجيلات — وكالة مواهب 
الشكل القانوني:  شركة مساهمة 
المقر الرئيسي:  Yeoksam-dong (en)  
حلت محل:  Core Contents Media (mul)  
موقع الويب:  mbk-ent.co.kr 
| 0 | 1 |
| --- | --- |
الشركة الأم:  سي جاي إي ان إم إنترتينمنت ديفيشن 
المنتجات:  ألبوم 
التسجيلات الموسيقية:  MBK Entertainment catalog (en)  
تعديل - تعديل مصدري - تعديل ويكي بيانات
إم بي كي إنترتينمنت (هانغل: MBK 엔터테인먼트) هي شركة تسجيلات كورية جنوبية، تأسست في 2006، يقع مقرها في Yeoksam-dong ‏.
مراجع

↑  "[김광수 인터뷰⑤]"수십억 적자 속 '더유닛' 우승팀 전폭지원, 약속 지키기 위해"". entertain.naver.com. 17 مايو 2018. مؤرشف من الأصل في 2019-12-10. اطلع عليه بتاريخ 2018-05-17.
↑  "Core Contents Media to relaunch as MBK Entertainment". Allkpop.com. 1 أكتوبر 2014. مؤرشف من الأصل في 2019-05-13. اطلع عليه بتاريخ 2014-10-01.
↑  "MBK ENTERTAINMENT CEO GO GEON HEE, "T-ARA WILL BE THE FUTURE OF HALLYU IN CHINA."". tiaradiadem. 21 يناير 2015. مؤرشف من الأصل في 2016-10-07. اطلع عليه بتاريخ 2016-02-10.
| 0 | 1 |
| --- | --- |
ضبط استنادي :  موسوعة ميوزيك برينز (MBL) 
بوابة شركات
بوابة كوريا الجنوبية
بوابة موسيقى
منزل عباس (بعدان)

| قرية منزل عباس>  - قرية -  .تقسيم إداري  | قرية منزل عباس>  - قرية -  .تقسيم إداري  |
| --- | --- |
البلد:  اليمن
المحافظة: محافظة إب
المديرية: مديرية بعدان
 العزلة: عزلة الحيث
السكان : السكان 
التعداد السكاني 2004 : التعداد السكاني 2004 
السكان: 195
  • الذكور: 86
  • الإناث: 109
  • عدد الأسر: 29
  • عدد المساكن: 30
معلومات أخرى : معلومات أخرى 
التوقيت: توقيت اليمن (+3 غرينيتش)
تعديل مصدري - تعديل  : تعديل مصدري - تعديل  
منزل عباس هي إحدى قرى عزلة الحيث بمديرية بعدان التابعة لمحافظة إب، بلغ تعداد سكانها 195 نسمة حسب تعداد اليمن لعام 2004.
مراجع

↑  "الدليل الشامل - محافظة إب - مديرية بعدان - عزلة الحيث". www.yemenna.com. مؤرشف من الأصل في 2019-11-21. اطلع عليه بتاريخ 2019-11-21.
↑  "الجهاز المركزي للإحصاء بالجمهورية اليمنية". الجهاز المركزي للإحصاء. مؤرشف من الأصل في 2017-01-29. اطلع عليه بتاريخ 2014-08-12.
المركز الوطني للمعلومات باليمن
| ع ن قرى مديرية بعدان / محافظة إب | ع ن قرى مديرية بعدان / محافظة إب | ع ن قرى مديرية بعدان / محافظة إب |
| --- | --- | --- |
| ا |  ارفاد البقل  ارفاد القمل  اعدان النوب  اكمة اللصم  الاضبار  الاعدان  الاكام  الاكمة  الاكمة  الاكمة  الاكمة  الاكمه الحمراء  الاكمه العليا  الاواسي  الاواسي  الباسق  البطن  البياضة  البياضة  الجبل  الجبل  الجبوب  الجبيل  الجدادي  الجران  الجردة  الجردة  الجرف  الجرفة  الجرين الاسفل  الجرين الاعلى  الجعشاء  الجودله والجميم  الحافة  الحبيل  الحجرالسوداء  الحجفة  الحدب  الحرف  الخرابة  الخرابة  الخربة  الخربة  الخضراء  الخور  الدمانيه السفلى  الدمانيه العليا  الذراع  الذنبة  الرباط  الردة  الركبة  الريشة  الزاعقة  الزربية  الزعلاء  الزهر  الساكن  السحري  السدرة  الشعاب  الشعوب  الشعيب  الشناسي  الشيشة  الصافية  الصردف  الضيعة  الطبل  الظهرة  الظهرة  العتمي  العدن  العرش  العرشة  العريم  العفيف  العكد  الغرباب  القابل  القابل  القابل  القاعة  القراعي  القرزاع  القشبة  القصبات  القطاع  الكبسة  الكراب  اللباة  الماورة  المبارك  المتاور  المجارين  المجعارة  المجن  المحدادة  المحراق  المحراق  المدبرة  المدق  المساجيد  المشاقير  المشعب  المشقرة  المشهوث  المصلى  المضاريب  المعافد  المعدنة  المعزبة  المعزوب  المقلدين  المكسورة  المنبع  المنزل السفلى  المنظر  الموفج  الميدان  الميزاب  النايف  النصل  النقيل  النمئة  الهينانة  الوجار  الوطئة  الوطئة  الولي  |  |
| ب - ذ |  برعات  بهامي  بيت الشامي  بيت العريف  بيت العميسى  بيت المترس  بيت هاشم  جرن العدن  جرن العدنين  جمانه السفلى  جمانه العليا  حال شاتة  حباجر  حبيل الجعرير  حبيل الشوقين  حبيل المناخ  حيفة العمير  خرابه شامة  خوالة  دار الخدرة  دار بركات  دار علوان  دارهوبة  ذي الكمين  ذي الملك  ذي مكباب  ذي منوخ  |  |
| ر - غ |  راس الجبل  راس الضبير  راس النقيل  سوق الاحد  سوقلة  شحرة  شراء الدابة  شراف  شرم  شعبة الدار  صلبة العسكري  طلاح  ظهر  عتمة  عدن الزوم  عرض الجبل  عرض الدار  عرض الشعبة  عرض النوبة  عرض مشاهرة  عريب  عقبة الفجاحي  عقرة  عماري  غوز الدورة  |  |
| ق - ي |  قاع الكريف  قبالة  محضرة  مضى  معزبة اغرب  مقبرة ريفان  منزل جمل  مير  نجد الضباب  نجد عدانة  نجد منيح  نقيل السيد  نقيل عازب  نيعان  واعر  ودي المسنافة  |  |
| ع ن قرى عزلة الحيث | ع ن قرى عزلة الحيث |
| --- | --- |
 المدهف  منزل عباس  المعقاب  الحجؤ  الحيث  السبل  شعابة  حيفة السويدي  نبل  عرهان  القحزة  الصافية  حصن الحداد  الدمنة  هيجة فارع  المظرة  بيت أمير الدين  منزل داعر :  المدهف  منزل عباس  المعقاب  الحجؤ  الحيث  السبل  شعابة  حيفة السويدي  نبل  عرهان  القحزة  الصافية  حصن الحداد  الدمنة  هيجة فارع  المظرة  بيت أمير الدين  منزل داعر 
بوابة تجمعات سكانية
بوابة اليمن
بوابة جغرافيا
حروب مسعى التنين

حروب مسعى التنين (ドラゴンクエスト ウォーズ، دوراغون كويستو وزو؟) هي لعبة فيديو من نوع استراتيجية تناوب الأدوار طورتها إنتيليجنت سيستمز ونشرتها سكوير إنكس لمنصة نينتندو دي إس آي. اللعبة جزء من سلسلة مسعى التنين وتبرز الوحوش من السلسلة. اللعبة تدعم حتى 4 لاعبين في النمط الجماعي للشبكات المحلية والعالمية. أُعلن عن اللعبة في 18 مايو 2009 وأُصدرت في اليابان في 24 يونيو 2009 وفي أمريكا الشمالية في 28 سبتمبر 2009 وفي مناطق البال في 9 أكتوبر 2009.
وصلات خارجية

الموقع الرسمي
بوابة ألعاب فيديو
بوابة اليابان
بوابة خيال علمي
بوابة عقد 2000
ألين بيرغن

| ألين بيرغن | ألين بيرغن |
| --- | --- |
 :  
 معلومات شخصية :  معلومات شخصية 
الميلاد: 4 أغسطس 1934     سبوكين  
تاريخ الوفاة: 15 فبراير 2024 (89 سنة)      
مواطنة:  الولايات المتحدة  
 الحياة العملية  :  الحياة العملية  
المدرسة الأم: جامعة ويسكونسن-ماديسون جامعة ستانفورد معهد ماساتشوستس للتقانة كلية ريد  ‏ جامعة بريغام يونغ  
المهنة: قسيس،  وعالم نفس،  ومعالج نفسي  
اللغات: الإنجليزية  
مجال العمل: علم النفس السريري،  وعلاج نفسي  
موظف في: جامعة بريغام يونغ،  وجامعة كولومبيا  
الجوائز : الجوائز 
جائزة أوسكار بفيستر  ‏ (1998)  : جائزة أوسكار بفيستر  ‏ (1998)  
تعديل مصدري - تعديل  : تعديل مصدري - تعديل  
ألين بيرغن (بالإنجليزية: Allen Bergin)‏ هو قسيس وعالم نفس أمريكي، ولد في 4 أغسطس 1934 في سبوكين في الولايات المتحدة.
مراجع

↑   https://www.walkersanderson.com/obituaries/Allen-E-Bergin?obId=30748193. اطلع عليه بتاريخ 2024-11-22. {{استشهاد ويب}}: |url= بحاجة لعنوان (مساعدة) والوسيط |title= غير موجود أو فارغ (من ويكي بيانات) (مساعدة)
↑  Bergin, A. E. (1980). Psychotherapy and religious values. Journal of Consulting and Clinical Psychology, 48, 95-105
↑  Ken Shelton, "Allen Bergin: 'The Gospel is a Continuing Revolution against the Standards of the World'", Ensign, September 1983, p. 34. "نسخة مؤرشفة". مؤرشف من الأصل في 2015-10-21. اطلع عليه بتاريخ 2019-06-28.{{استشهاد ويب}}:  صيانة الاستشهاد: BOT: original URL status unknown (link)
↑  Slife, B.D. & Whoolery, M. (2003). Understanding disciplinary significance: The story of Allen Bergin's 1980 article on values. In R. Sternberg (Ed.) The anatomy of impact: What has made the great works of psychology great? Washington, D.C.: American Psychological Association.
وصلات خارجية

| ضبط استنادي  | ضبط استنادي  |
| --- | --- |
دولية:  المُعرِّف مُتعدِّد الأوجه (FAST)  الاسم المعياري الدولي (ISNI)  ملف الضبط الاستنادي الافتراضي الدَّولي (VIAF)  مركز المكتبة الرقمية على الإنترنت (WC Entities) 
وطنية:  نظام الضبط الاستنادي النرويجي (BIBSYS)  المكتبة الوطنية الفرنسية (BnF)  الملف الاستنادي المتكامِل (GND)  المكتبة القومية الإسرائيلية (J9U)  مكتبة الكونغرس (LCNAF)  المكتبة الوطنية السويدية (Libris-URI)  قاعدة البيانات الوطنية التشيكية (NLCR AUT)  المَكنز الوطني للمؤلِّفين (NTA)  المكتبة القومية في بولندا (NLP) 
أخرى:  الشبكات الاجتماعية ونظام المحتوى المؤرشف (SNAC Ark)  النظام الجامعي للتوثيق (IdRef) 
في كومنز مواد ذات صلة بـ ألين بيرغن.
بوابة أعلام
بوابة القرن 21
بوابة الولايات المتحدة
تتابع الحمض النووي الريبي RNA

ملخص RNA-Seq. داخل الكائن الحي ، يتم نسخ الجينات وتقسيمها (في كائن حقيقي النواة) لإنتاج نسخ مرنا ناضجة (أحمر). يتم استخراج مرنا من الكائن الحي، مجزأة ونسخها إلى مستقر [كدنا] (الأزرق). والتسلسل وس-كدنا] باستخدام الإنتاجية العالية، وأساليب التسلسل قصيرة المقروءة. يمكن بعد ذلك محاذاة هذه التسلسلات إلى تسلسل الجينوم المرجعي لإعادة بناء مناطق الجينوم التي تم نسخها. يمكن استخدام هذه البيانات لتوضيح مكان وجود الجينات المعبر عنها ومستويات التعبير النسبي وأي متغيرات لصق بديلة.
يستخدم RNA-Seq تسلسل الجيل التالي (NGS) للكشف عن وجود وكمية من الحمض النووي الريبي في عينة بيولوجية في لحظة معينة، وتحليل المتغير الخلوي المستمر.
على وجه التحديد، يسهل RNA-Seq القدرة على النظر إلى الجينات البديلة المقسمة، والتعديلات بعد النسخ، والانصهار الجيني، والطفرات / SNPs والتغيرات في التعبير الجيني مع مرور الوقت، أو الاختلافات في التعبير الجيني في مجموعات أو علاجات مختلفة. بالإضافة إلى نسخ mRNA، يمكن أن ينظر RNA-Seq إلى مجموعات مختلفة من الحمض النووي الريبي (RNA) لتشمل إجمالي الحمض النووي الريبي (RNA)، والحمض النووي الريبي (RNA) الصغير، مثل miRNA، الحمض الريبي النووي النقال (tRNA)، وتحديد ملامح الريبوسوم. يمكن أيضًا استخدام RNA-Seq لتحديد حدود exon / intron والتحقق من أو تعديل حدود الجين الموضحة مسبقًا 5 و3. تشمل التطورات الحديثة في RNA-Seq سلسلة الخلية الواحدة وتسلسل الأنسجة الثابتة في الموقع.
قبل RNA-Seq، أجريت دراسات التعبير الجيني مع المصفوفات الدقيقة القائمة على التهجين. تشمل مشاكل المصفوفات الدقيقة القطع الجينية المتقاطعة، التهميش السيئ للجينات منخفضة الوزن وعالية التعبير، والحاجة إلى معرفة التسلسل المسبق. بسبب هذه المشكلات الفنية، انتقلت النصوص إلى الأساليب القائمة على التسلسل. لقد تطورت هذه من تسلسل Sanger في مكتبات Expressed Sequence Tag، إلى الأساليب القائمة على العلامات الكيميائية (على سبيل المثال، التحليل التسلسلي للتعبير الجيني)، وأخيراً إلى التكنولوجيا الحالية، تسلسل الجيل القادم من cDNA (خاصة RNA-Seq).
الأساليب > إعداد متسلسل

الخطوات العامة لإعداد متسلسل DNA (cDNA) التكميلية للتسلسل موضحة أسفل، ولكن غالبًا ما تختلف بين المنصات.
عزل الحمض النووي الريبي (RNA): يتم عزل الحمض النووي الريبي (RNA) من الأنسجة ويخلط مع (DNase) DNase يقلل من كمية الحمض النووي الجيني. يتم ضبط الكمية المفككة من الحمض النووي الريبي مع هلام والخلاصة التحليل الكهربي لمحتوى الشعيرات الدموية ويستخدم لتعيين عدد سلامة الحمض النووي الريبي للعينة. تؤخذ جودة الحمض النووي الريبي (RNA) والمبلغ الإجمالي لبدء الحمض النووي الريبي (RNA) في الاعتبار أثناء خطوات إعداد وتسلسل وتحليل المكتبة اللاحقة.
اختيار / نضوب الحمض النووي الريبي: لتحليل إشارات الاهتمام، يمكن إما الاحتفاظ بالحمض النووي الريبي المعزول كما هو، مع ترشيح الحمض النووي الريبي مع ذيول متعددة الأقطاب (3) متعددة (poly (A) لتشمل فقط rRNA، المستخلص من الحمض النووي (rRNA)، و / أو تمت تصفيته من أجل الحمض النووي الريبي (RNA) الذي يربط تسلسلات محددة (جدول اختيار ونضج الحمض النووي الريبي، أسفل). الحمض النووي الريبي مع ذيول 3 '(بولي) الناضجة، والمعالجة، والتابعة لتسلسل الترميز. يتم اختيار (Poly A) عن طريق مزج الحمض النووي الريبي (RNA) مع قلة قليلة من القسيمات (T) المرتبطة تساهميًا بالركيزة، الخرز المغناطيسي عادة.  يتجاهل اختيار (Poly A) الحمض النووي الريبي غير المشفر ويقدم تحيزًا 3 '،  والذي يتم تجنبه باستراتيجية نضوب الريبوسوم. تتم إزالة rRNA لأنه يمثل أكثر من 90 ٪ من الحمض النووي الريبي في الخلية، والتي إذا تم الاحتفاظ بها سوف تتخلص من البيانات الأخرى.
تخليق cDNA: يتم نسخ RNA إلى cDNA لأن الحمض النووي أكثر استقرارًا ويسمح بالتضخيم (عن طريق polymerases الحمض النووي) وتقنية تسلسل الحمض النووي أكثر نضجًا. يؤدي التضخيم اللاحق للنسخ العكسي إلى فقد السبل، والتي يمكن تجنبها بالوسم الكيميائي أو تسلسل جزيء واحد. يتم تنفيذ تجزئة واختيار الحجم لتنقية التسلسلات التي هي الطول المناسب لآلة التسلسل. الحمض النووي الريبيrRNA، cDNA, أو كليهما مجزأ مع الإنزيمات، صوتنه، أو البخاخات. يعمل تجزئة الحمض النووي الريبي على تقليل انحياز 5 'من النسخ العكسي العشوائي وتأثير مواقع الربط التمهيدي، مع الجانب الذي ينتهي به الطرفان 5 و3 إلى الحمض النووي أقل كفاءة. يتبع التجزؤ اختيار الحجم، حيث تتم إزالة تسلسلات صغيرة أو تحديد نطاق ضيق من أطوال التسلسل. بسبب ضياع rRNA الصغيرة مثل miRNAs، يتم تحليلها بشكل مستقل. يمكن فهرسة cDNA لكل تجربة مع الباركود hexamer أو octamer، بحيث يمكن تجميع هذه التجارب في مسار واحد لتسلسل متعدد الإرسال.
| إستراتيجية | نوع الحمض النووي rRNA | محتوى الحمض النووي rRNA | محتوى الحمض النووي rRNA غير المعالج | محتوى الحمض النووي الجيني | طريقة عزل المحتوى |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| مجموع الحمض النووي rRNA | الكل | عالي | عالي | عالي | لا شيء |
| اختيار PolyA | مرموز | منخفض | منخفض | منخفض | تهجين مع oligomers بولي (dT) |
| نضوب rRNA | مرموز، غير مرموز | منخفض | عالي | عالي | زالة ال oligomers المكملة ل rRNA  |
| الحصول على rRNA | مستهدف | منخفض | متوسط | منخفض | التهجين مع اجزاء مكملة للتابعات المطلوبة  |
الأساليب > RNA صغير / غير مرموز لتسلسل RNA

عند إجراء تسلسل RNA غير miRNA، يتم تعديل إعداد التسلسل. يتم تحديد الحمض النووي الريبي على أساس نطاق الحجم المطلوب. لأهداف الحمض النووي الريبي الصغيرة، مثل miRNA، يتم عزل الحمض النووي الريبي من خلال اختيار الحجم. يمكن إجراء ذلك باستخدام هلام استبعاد الحجم، من خلال حبات مغناطيسية لاختيار الحجم، أو باستخدام مجموعة تم تطويرها تجاريًا. بمجرد عزلها، تتم إضافة الروابط إلى النهاية 3 'و5' ثم تنقيتها. والخطوة الأخيرة هي الجيل cDNA من خلال النسخ العكسي.
الأساليب > تسلسل الحمض النووي الريبي rRNA المباشر

نظرًا لأن تحويل الحمض النووي الريبي إلى الحمض النووي الريبي النووي (cDNA)، فقد ثبت أن عمليات الربط، والتضخيم، والتلاعب بالعينات الأخرى تقدم تحيزات وأدوات أثرية قد تتداخل مع كل من التوصيف الصحيح والتابعات الصحيحة للنصوص الجينية،  تم استكشاف تسلسل الحمض النووي الريبي المباشر للجزيء المفرد [13] ، بما في ذلك Helicos (المفلسة)، أوكسفورد نانوبور تكنولوجيز،  وغيرها. هذه التكنولوجيا تسلسل جزيئات الحمض النووي الريبي مباشرة بطريقة موازية على نطاق واسع.
الأساليب > تسلسل RNA أحادي الخلية (scRNA-Seq)

الطرق القياسية مثل المصفوفات الدقيقة وتحليل المعيار RNA-Seq يحلل تعبير ال rRNA من مجموعات كبيرة من الخلايا. في مجموعات الخلايا المختلطة، قد تحجب هذه القياسات الفروق الحرجة بين الخلايا الفردية داخل هذه المجموعات.
يوفر تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية (scRNA-Seq) ملفات تعريف للخلايا الفردية. على الرغم من أنه لا يمكن الحصول على معلومات كاملة عن كل RNA الذي يعبر عن كل خلية، نظرًا للكمية الضئيلة من المواد المتاحة، يمكن التعرف على أنماط التعبير الجيني من خلال تحليلات تجميع الجينات. هذا يمكن أن يكشف عن وجود أنواع خلايا نادرة داخل مجتمع الخلية والتي ربما لم يسبق رؤيتها من قبل. على سبيل المثال، تم تحديد خلايا متخصصة نادرة في الرئة تدعى الخلايا الأيونية الرئوية التي تعبر عن منظم توصيل غشاء التليف الكيسي في 2018 من قبل مجموعتين تؤديان ال rRna ساق على ظهارة مجرى الرئة.
الأساليب > تسلسل RNA أحادي الخلية (scRNA-Seq) > الإجراءات التجريبية

تتضمن بروتوكولات scRNA-Seq الحالية الخطوات التالية: عزل خلية واحدة وRNA، النسخ العكسي (RT)، والتضخيم، وتوليد التسلسل، والتسلسل. طرق مبكرة فصل الخلايا الفردية إلى آبار منفصلة. طرق أكثر حداثة تغلف الخلايا الفردية في قطرات في جهاز ميكروفلويديك، حيث يحدث رد فعل النسخ العكسي، وتحويل الحمض النووي الريبي إلى cDNAكل قطرة تحمل «الباركود» DNA الذي يسمي بشكل فريدcDNA المستمدة من خلية واحدة. بمجرد اكتمال النسخ العكسي، يمكن خلط cDNAمن العديد من الخلايا معًا للتسلسل؛ يتم التعرف على النصوص من خلية معينة بواسطة الرمز الشريطي الفريد.
تشمل تحديات scRNA-Seq الحفاظ على الوفرة النسبية الأولية للـ mRNA في الخلية وتحديد النصوص النادرة. تعتبر خطوة النسخ العكسي أمرًا بالغ الأهمية نظرًا لأن كفاءة رد فعل RT تحدد مقدار تحليل الحمض النووي الريبي للخلية الذي سيتم تحليله في نهاية الأمر بواسطة جهاز التسلسل. قد تؤثر قابلية النسخ العكسي واستراتيجيات التحضير المستخدمة على إنتاج cDNA كامل الطول وتوليد مكتبات منحازة نحو نهاية 3 أو 5 'من الجينات.
في خطوة التضخيم، يتم الآن استخدام PCR أو في النسخ المختبرية (IVT) لتضخيم cDNA واحدة من مزايا الأساليب القائمة على PCR هي القدرة على توليد cDNA كامل الطول. ومع ذلك، قد يتم تضخيم كفاءة PCR مختلفة على تسلسلات معينة على سبيل المثال، محتوى GC وهيكل snapback بشكل كبير، مما ينتج مكتبات ذات تغطية غير متساوية. من ناحية أخرى، في حين أن التسلسلات التي تم إنشاؤها بواسطة IVT يمكنها تجنب تحيز التسلسل الناتج عن PCR، فقد يتم نسخ تسلسلات محددة بطريقة غير فعالة، مما يسبب تسلسل المتسلسل أو توليد تسلسلات غير مكتملة.  تم نشر العديد من بروتوكولات scRNA-Seq: Tang et al. STRT. STRT ،  SMART-seq ،  CEL-seq ،  RAGE-seq ،  ، Quartz-seq. و C1-CAGE. من حيث استراتيجيات النسخ العكسي، وتوليف cDNA والتضخيم، وإمكانية استيعاب الباركود الخاصة بالتسلسل مثل UMIs أو القدرة على معالجة العينات المجمعة.
في عام 2017، تم تقديم طريقتين لقياس في وقت واحد مرنا وحيد الخلية وتعبير البروتين من خلال الأجسام المضادة المسمى أليغنوكليوتيد المعروفة باسم REAP-seq ،  و CITE-seq.
الأساليب > تسلسل RNA أحادي الخلية (scRNA-Seq) > تطبيقات

أصبح scRNA-Seq يستخدم على نطاق واسع عبر التخصصات البيولوجية بما في ذلك التنمية، وعلم الأعصاب،  علم الأورام،    مرض المناعة الذاتية،  والأمراض المعدية.
قدمت scRNA-Seq نظرة ثاقبة كبيرة في تطور الأجنة والكائنات الحية، بما في ذلك دودة Caenorhabditis elegans ،  والمستوصف الشمسي التجديدي المتوسطي .   كانت أول الحيوانات الفقارية التي تم تعيينها بهذه الطريقة هي الزرد   و Xenopus laevis. في كل حالة، تمت دراسة مراحل متعددة من الجنين، مما يسمح برسم عملية التنمية بأكملها على أساس كل خلية على حدة.  لقد أدرك العلم أن هذه التطورات هي " اختراق العام 2018 ".
الأساليب > الاعتبارات التجريبية

يتم مراعاة مجموعة متنوعة من المعلمات عند تصميم وإجراء تجارب RNA-Seq:
نوعية الأنسجة: يختلف التعبير الجيني داخل الأنسجة وفيما بينها، ويقيس RNA-Seq هذا المزيج من أنواع الخلايا. هذا قد يجعل من الصعب عزل الآلية البيولوجية للاهتمام. يمكن استخدام تسلسل خلية واحدة لدراسة كل خلية على حدة، وتخفيف هذه المشكلة.
الاعتماد على الوقت: يتغير تعبير الجينات بمرور الوقت، ولا يأخذ RNA-Seq سوى لقطة. يمكن إجراء تجارب الدورة الزمنية لمراقبة التغييرات في النص الجيني.
التغطية (المعروف أيضًا باسم العمق): يحتوي الحمض النووي الريبي على نفس الطفرات التي لوحظت في الحمض النووي، ويتطلب الكشف تغطية أعمق. مع تغطية عالية بما فيه الكفاية، يمكن استخدام RNA-Seq لتقدير التعبير عن كل أليل. قد يوفر هذا نظرة ثاقبة الظواهر مثل التأثيرات أو التأثيرات التنظيمية. يمكن استقراء عمق التسلسل المطلوب لتطبيقات محددة من تجربة تجريبية.
قطع لتوليد البيانات (تُعرف أيضًا باسم التباين التقني): يمكن أن تؤدي الكواشف (على سبيل المثال، مجموعة إعداد التسلسل) والموظفين المعنيين ونوع جهاز التسلسل على سبيل المثال، Illumina وPacific Biosciences إلى آثار فنية قد يساء تفسيرها على أنها نتائج ذات معنى. كما هو الحال مع أي تجربة علمية، من الحكمة إجراء RNA-Seq في بيئة جيدة التحكم. إذا لم يكن ذلك ممكنًا أو كانت الدراسة عبارة عن تحليل تلوي، فإن الحل الآخر هو اكتشاف القطع الفنية عن طريق استنتاج المتغيرات الكامنة (عادة تحليل المكون الرئيسي أو تحليل العوامل) والتصحيح لاحقًا لهذه المتغيرات.
إدارة البيانات: عادة ما تكون تجربة RNA-Seq في البشر في حدود 1 غيغابايت. هذا الحجم الكبير من البيانات يمكن أن يطرح مشاكل التخزين. أحد الحلول هو ضغط البيانات باستخدام مخططات حسابية متعددة الأغراض (على سبيل المثال، gzip أو مخططات خاصة بالجينوم. هذا الأخير يمكن أن يكون على أساس تسلسل مرجعي أو دي نوفو. الحل الآخر هو إجراء تجارب ميكروأري، والتي قد تكون كافية لإجراء الدراسات التي تعتمد على الفرضيات أو تكرارها على عكس البحوث الاستكشافية.
التحليل > التجمع النسخي

يتم استخدام طريقتين لتعيين تسلسلات القراءة الأولية للميزات الجينومية (أي تجميع النص الجيني):
دي نوفو: هذا النهج لا يحتاج إلى جينوم مرجعي لإعادة بناء النص، ويستخدم عادة إذا كان الجينوم غير معروف، غير مكتمل، أو تم تغييره بشكل كبير مقارنة بالمرجع. تتضمن التحديات عند استخدام عمليات القراءة القصيرة لتجميع de novo 1)) تحديد القراءات التي يجب ضمها معًا في تسلسلات متجاورة contigs)، 2) متانة أخطاء التسلسل وغيرها من الأعمال الفنية، و3 الكفاءة الحسابية. تم نقل الخوارزمية الأساسية المستخدمة لتجميع de novo من الرسوم البيانية المتداخلة، والتي تحدد جميع التداخلات بين الزوجين إلى القراءات، إلى الرسوم البيانية لـ Bru Brunn، والتي تقسم القراءة إلى تسلسلات طولها k وتنهار كل k-mers في جدول تجزئة. تم استخدام الرسوم البيانية المتداخلة مع تسلسل Sanger، لكن لا يتم القياس جيدًا إلى ملايين القراءات التي تم إنشاؤها باستخدام RNA-Seq. أمثلة على المجمعات التي تستخدم الرسوم البيانية دي Bruijn هي Velvet ،  Trinity ، Oases ،  و Bridger. يمكن للنهاية المزدوجة وتسلسل القراءة الطويلة من نفس العينة أن يخففا من العجز في تسلسل القراءة القصيرة من خلال العمل كقالب أو هيكل عظمي. تشتمل مقاييس تقييم جودة مجموعة de novo على متوسط طول contig وعدد contigs و N50.
دليل الجينوم: تعتمد هذه الطريقة على نفس الأساليب المستخدمة لمحاذاة الحمض النووي، مع التعقيد الإضافي المتمثل في محاذاة القراءات التي تغطي أجزاء غير مستمرة من الجينوم المرجعي. هذه القراءات غير المستمرة هي نتيجة لتسلسل النصوص المقسمة (انظر الشكل). عادة، تحتوي خوارزميات المحاذاة على خطوتين: 1) محاذاة أجزاء قصيرة من القراءة (أي، بداية الجينوم)، و 2) استخدام البرمجة الديناميكية لإيجاد محاذاة مثالية، وأحيانًا بالاقتران مع تعليقات توضيحية معروفة. تشمل أدوات البرمجيات التي تستخدم المحاذاة الموجهة للجينوم Bowtie ،  TopHat (الذي يبني على نتائج BowTie لمحاذاة الوصلات الفاصلة)،   Subread ،  STAR ، HISAT2 ،  Sailfish ،  كاليستو،  و GMAP. يمكن قياس جودة التجميع الموجه للجينوم بمقاييس التجميع 1) de novo (على سبيل المثال، N50) و 2) مقارنات بالتسلسلات المعروفة، تقاطع الوصلات، الجينوم، والبروتين باستخدام الدقة ، الاستعادة، أو توليفها (على سبيل المثال، النتيجة F1).  بالإضافة إلى ذلك، يمكن إجراء تقييم السيليكو باستخدام قراءات محاكية.
ملاحظة على جودة التجميع: الإجماع الحالي هو أن 1) يمكن أن تختلف جودة التجميع تبعًا للمقياس المستخدم، 2) التجميعات التي سجلت جيدًا في أحد الأنواع لا تؤدي بالضرورة أداءً جيدًا في الأنواع الأخرى، و3) قد يؤدي الجمع بين الطرق المختلفة إلى كن الأكثر موثوقية.
التحليل > التعبير الجيني الكمي

يتم التعبير عن التعبير الكمي لدراسة التغيرات الخلوية استجابةً للمنبهات الخارجية، الاختلافات بين الحالات الصحية والمرضية، وغيرها من الأسئلة البحثية. غالبًا ما يستخدم تعبير الجين كبديل لوفرة البروتين، لكن غالبًا ما تكون هذه العناصر غير متكافئة بسبب أحداث ما بعد النسخ مثل تدخل الحمض النووي الريبي وانحلال بوساطة الهراء.
يتم تحديد التعبير عن طريق حساب عدد القراءات التي تم تعيينها لكل موقع في خطوة التجميع transcriptome. يمكن قياس التعبير عن الإكسونات أو الجينات باستخدام contigs أو التعليقات التوضيحية المرجعية.  تم التحقق من صحة تعدادات RNA-Seq التي تمت ملاحظتها بقوة ضد التقنيات القديمة، بما في ذلك المصفوفات الدقيقة التعبير وqPCR .   من الأمثلة على الأدوات التي تحدد التعدادات HTSeq ،  FeatureCounts ،  Rcount ،  maxcounts ،  FIXSEQ ،  و Cuffquant. ثم يتم تحويل عدد القراءة إلى مقاييس مناسبة لاختبار الفرضيات والانحدارات والتحليلات الأخرى. المعلمات لهذا التحويل هي:
العمق / التغطية المتسلسلة: على الرغم من أن العمق محدد مسبقًا عند إجراء تجارب RNA-Seq متعددة، إلا أنه سيظل متباينًا على نطاق واسع بين التجارب. لذلك، عادةً ما يتم تطبيع إجمالي عدد القراءات التي تم إنشاؤها في تجربة واحدة عن طريق تحويل التعدادات إلى أجزاء أو قراءات أو تعدادات لكل مليون قراءة معيّنة FPM أو RPM أو CPM يشار إلى عمق التسلسل أحيانًا بحجم المكتبة، وعدد جزيئات cDNA الوسيطة في التجربة.
طول الجينات: سيكون للجينات الأطول شظايا / قراءات / تعدادات أكثر من الجينات الأقصر إذا كان تعبير النص الجيني هو نفسه. يتم ضبط هذا عن طريق تقسيم FPM على طول الجين، مما يؤدي إلى شظايا متري لكل كيلوبايت من النص لكل مليون قراءة المعينة (FPKM). عند النظر إلى مجموعات من الجينات عبر العينات، يتم تحويل FPKM إلى نصوص لكل مليون (TPM) عن طريق تقسيم كل FPKM على مجموع FPKMs داخل عينة.
مجموع عينة الحمض النووي الريبي: لأن نفس كمية الحمض النووي الريبي المستخرجة من كل عينة، فإن العينات ذات الحمض النووي الريبي الإجمالي أكثر سيكون لها عدد أقل من الحمض النووي الريبي لكل جين. يبدو أن هذه الجينات قد قللت من التعبير، مما أدى إلى إيجابيات كاذبة في التحليلات النهائية.
تباين تعبير كل جين: يتم تصميمه ليتم حسابه على خطأ أخذ العينات (مهم للجينات ذات التعداد المنخفض للقراءة)، ويزيد الطاقة، ويقلل من الإيجابيات الخاطئة. يمكن تقدير التباين كتوزيع طبيعي، أو بواسون، أو سلبي ذو حدين    وغالبًا ما يتحلل إلى تباين تقني وبيولوجي.
التحليل > التعبير الجيني الكمي > الكم المطلق

الكم المطلق للتعبير الجيني غير ممكن في معظم تجارب RNA-Seq، والتي تقيس التعبير بالنسبة لجميع النصوص الجينية. من الممكن عن طريق إجراء RNA-Seq مع spike-ins، عينات من RNA بتركيزات معروفة. بعد التسلسل، يتم استخدام التعدادات المقروءة لتسلسلات الزيادة في تحديد العلاقة بين تعدادات القراءة لكل جين والكميات المطلقة من الأجزاء البيولوجية.   في أحد الأمثلة، تم استخدام هذه التقنية في أجنة Xenopus المدارية لتحديد حركية النسخ.