تشخيص الملاريا
الطرق الجزيئية

على الرغم من أن الاختبارات المجهرية والاختبارات التشخيصية السريعة (RDTs) هما الخيارين الأساسيين لتشخيص الملاريا، ولكن لا يمكن لأي من الطريقتين اكتشاف عدوى الملاريا منخفضة الكثافة، الشائعة في كل من البيئات منخفضة وعالية الانتقال.
تمكن الطرق الجزيئية في بعض المختبرات السريرية، على سبيل المثال اختبارات تضخيم الأحماض النووية (NAATs) من الكشف الحساس عن عدوى الملاريا منخفضة الكثافة (أقل من 1 طفيلي/ميكرولتر).
يمكن تقسيم استخدام اختبارات تضخيم الأحماض النووية (NAATs) على نطاق واسع إلى 4 أدوار:
الكشف النوعي أو الكمي عن الطفيليات،
تحديد تعددية الإصابة،
التنميط الجيني للتمييز بين معاودة المرض (الانتكاسة) والإصابة مرة ثانية،
اكتشاف طفرات مقاومة الأدوية.
حاليًا، توصي منظمة الصحة العالمية بأن يتم النظر في استخدام اختبارات تضخيم الأحماض النووية (NAATs) لأغراض البحث فقط حتى يتوفر المزيد من الأدلة حول التأثير الصحي العام لاكتشاف وعلاج العدوى منخفضة الكثافة.
أنواع اختبارات تضخيم الأحماض النووية:
إن تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) – بما في ذلك تفاعل البوليمراز المتسلسل العشي(n) أو تفاعل البوليمراز المتسلسل بالزمن الحقيقي (RT-PCR)يسمى أيضاً تفاعل البوليمراز المتسلسل الكمي (qPCR)، أو تفاعل البوليمراز المتسلسل للنسخ العكسي (RT-PCR)ميز عن البوليمراز المتسلسل بالزمن الحقيقي (RT-PCR)أو التضخيم المتساوي الحرارة بواسطة مشرع دائري (LAMP) أو التضخيم القائم على تسلسل الأحماض النووية الكمي (QT-NASBA) – من بين اختبارات تضخيم الأحماض النووية الرئيسية التي تم تطويرها للكشف عن الملاريا. يمكن أن تقدم اختبارات تضخيم الأحماض النووية نتائج كمية ونوعية، كما تم تطوير العديد من الاختبارات لتمكين الكشف المحدد عن الطفيليات في المرحلتين الجنسية واللاجنسي. يحتوي جين الحمض النووي الريبي الريبوزومي 18S على تسلسلات فريدة تمكن من تحديد جميع الأنواع الخمسة من الملاريا التي تصيب البشر – المتصورة المنجلية، والمتصورة النشيطة، والمتصورة البيضاوية، والمتصورة الملارية، والمتصورة النولسية – وبالتالي فهي مستهدفة بشكل شائع للتضخيم.
قد تختلف اختبارات NAAT وفقًا للمعدات والبنية الأساسية المطلوبة، ومعالجة العينات قبل التضخيم، ودرجة حرارة التفاعل، والوقت اللازم للحصول على النتيجة، وسهولة الاستخدام، وحد الكشف، أو التكلفة. ومع ذلك، تتضمن جميع الاختبارات نفس الخطوات بشكل عام لاستخدامها. تتطلب معظمها خطوة استخلاص الحمض النووي تليها عملية التضخيم، والتي قد تحدث عند درجة حرارة واحدة أو عن طريق التبديل عبر درجات حرارة مختلفة. اعتمادًا على الطريقة المختارة، يمكن تحديد الكشف أو التحديد الكمي بأي من الطرق التالية:
بصريًا على هلام الأجار المضاء تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية،
من خلال فحص أنابيب التفاعل في مقياس العكارة، أو
من خلال دمج العلامات الفلورية في التفاعل، مما يسمح بمراقبة مستمرة في الوقت الفعلي لإنتاج المنتج أثناء التضخيم، يليه المقارنة مع عناصر التحكم المعاير المعروفة.
تفاعل البوليميراز المتسلسل (والطرق الجزيئية الأخرى) أكثر دقة من المجهر. ومع ذلك، فهي مكلفة وتتطلب مختبرًا متخصصًا. علاوة على ذلك، فإن مستويات الطفيليات في الدم لا ترتبط بالضرورة بتطور المرض، وخاصة عندما يكون الطفيلي قادرًا على الالتصاق بجدران الأوعية الدموية. لذلك، هناك حاجة إلى تطوير أدوات تشخيص أكثر حساسية ومنخفضة التقنية من أجل الكشف عن مستويات منخفضة من الطفيليات في المجال.
هناك نهج آخر يتمثل في الكشف عن المنتج الثانوي لبلورات الحديد للهيموجلوبين الموجود في طفيليات الملاريا التي تتغذى على خلايا الدم الحمراء، ولكنها لا توجد في خلايا الدم الطبيعية. يمكن أن تكون أسرع وأبسط وأكثر دقة من أي طريقة أخرى. نشر باحثون في جامعة رايس دراسة ما قبل السريرية لتقنيتهم الجديدة التي يمكنها اكتشاف خلية واحدة مصابة بالملاريا بين مليون خلية طبيعية.يزعمون أنه يمكن تشغيلها بواسطة أفراد غير طبيين، ولا تنتج قراءات إيجابية كاذبة، ولا تحتاج إلى إبرة أو أي ضرر.