عد دموي شامل
عملية إجراء الفحص > الفحص الآلي

على جهاز التحليل، تُحرَّك العينة لتوزيع الخلايا بالتساوي، ثم تُخفف وتُقسم إلى قناتين على الأقل، تُستخدم إحداهما لعد خلايا الدم الحمراء والصفائح الدموية، والأخرى لعد خلايا الدم البيضاء وتحديد تركيز الهيموجلوبين. تقيس بعض الأدوات الهيموجلوبين في قناة منفصلة، ويمكن استخدام قنوات إضافية لتعداد خلايا الدم البيضاء التفريقي، وتعداد الخلايا الشبكية والقياسات المتخصصة للصفائح الدموية. تُعلّق الخلايا في تيار مائع وتُقاس خصائصها أثناء تدفقها عبر أجهزة الاستشعار في تقنية تعرف باسم قياس التدفق الخلوي. ملاحظة 3 التركيز الهيدروديناميكي يُمَكِّن استخدامها لعزل الخلايا الفردية بحيث يمكن الحصول على نتائج أكثر دقة: تُحقن العينة المخففة في تيار من سائل منخفض الضغط، مما يؤدي إلى اصطفاف خلايا العينة في ملف واحد من خلال الجريان الصفيحي.
لقياس تركيز الهيموجلوبين، يضاف كاشف كيميائي للعينة لتدمير خلايا الدم الحمراء في قناة منفصلة عن تلك المستخدمة في عد خلايا الدم الحمراء. بالنسبة لأجهزة التحليل التي تقوم بعد خلايا الدم البيضاء في نفس القناة التي يُقاس فيها الهيموغلوبين، فإن هذا يسمح بحساب عدد خلايا الدم البيضاء بسهولة أكبر. محللو أمراض الدم يقومون بقياس الهيموغلوبين باستخدام قياس الضوء الطيفي (spectrophotometry) ويعتمدون على العلاقة الخطية بين امتصاص الضوء وكمية الهيموجلوبين الموجودة. وتستخدم المواد الكيميائية لتحويل أشكال مختلفة من الهيموغلوبين، مثل الأوكسي هيموغلوبين وكربوكسي هيموغلوبين، إلى شكل ثابت واحد، عادة «السيانميثيموغلوبين»، وذلك يُحدث تغييراً دائماً في اللون. إنّ امتصاص اللون الناتج، عند قياسه بطول موجي محدد -عادةً 540 نانومتر- يتناسب طرديًا مع تركيز الهيموجلوبين.
أجهزة الاستشعار تقوم بِعَدّ وتحديد الخلايا في العينة باستخدام مبدأين أساسيين: معاوقة وتشتت الضوء. يعمل تعداد الخلايا المعتمد على الممانعة على مبدأ كولتر: حيث تُعلّق الخلايا في سائل يحمل تيارًا كهربائيًا، وعندما تمر الخلايا عبر فتحة صغيرة، فإنها تسبب انخفاضًا في التيار بسبب ضعف توصيلها الكهربائي. وتتناسب السعة من نبض الجهد التي ولدت عند عبور الخلية من الفتحة مع حجم السائل المُزاح من الخلية؛ أي من حجم الخلية نفسها، بينما يرتبط إجمالي عدد النبضات بعدد الخلايا في العينة. يُرسم توزيع أحجام الخلايا على الرسم البياني، ومن خلال تعيين عتبات الحجم بناءً على الأحجام النموذجية لكل نوع من الخلايا، يمكن تحديد مجموعات الخلايا المختلفة وحسابها.
في تقنيات تشتت الضوء، يُوَجَّه الضوء من الليزر أو مصباح هالوجين-تنجستن إلى تيار الخلايا لجمع معلومات حول حجمها وبنيتها. تُشَتِّتُ الخلايا الضوء بزوايا مختلفة أثناء مرورها عبر الحزمة، والتي تُكتَشَف باستخدام أجهزة قياس الضوء. التشتت الأمامي، الذي يشير إلى كمية الضوء المنتشر على طول محور الحزمة، ناتج أساسًا عن حيود الضوء ويرتبط بالحجم الخلوي، بينما يحدث التشتت الجانبي (الضوء المنتشر بزاوية 90 درجة) بسبب الانعكاس والانكسار ويوفر معلومات حول التعقيد الخلوي.
يمكن استخدام الأساليب القائمة على الترددات الراديوية مع المعاوقة. تعمل هذه التقنيات على نفس مبدأ قياس الانقطاع في التيار حيث تمر الخلايا عبر فتحة، ولكن بما أن تيار التردد الراديوي عالي التردد ويخترق الخلايا، فإن اتساع النبضة الناتجة يتعلق بعوامل مثل الحجم النسبي للنواة، بنية النواة، وكمية الحبيبات (granules) في السيتوبلازم. قد تتداخل الخلايا الحمراء الصغيرة والحطام الخلوي؛ اللذان هما متماثلان مع الصفائح الدموية في الحجم، مع عدد الصفائح الدموية، وقد يؤدي ذلك إلى عدم حساب الصفائح الدموية الكبيرة بدقة، لذلك يستخدم بعض المحللين تقنيات إضافية لقياس الصفائح الدموية، مثل الصبغ بمادة فلورية، تشتت الضوء متعدد الزوايا ووضع علامات على الأجسام المضادة أحادية النسيلة.
يقيس معظم المحللين بشكل مباشر متوسط حجم خلايا الدم الحمراء، وهو ما يسمى الحجم الكروي المتوسط (MCV)، ويحسبون الهيماتوكريت بضرب عدد خلايا الدم الحمراء في الحجم الكروي المتوسط (MCV). يقيس البعض نسبة الهيماتوكريت من خلال مقارنة الحجم الكلي لخلايا الدم الحمراء بحجم الدم المأخوذ منه، ويحسبون الحجم الكروي المتوسط من الهيماتوكريت وعدد خلايا الدم الحمراء. يُستخدم تركيز الهيموجلوبين، وعدد خلايا الدم الحمراء والهيماتوكريت لحساب متوسط كمية الهيموجلوبين داخل كل خلية دم حمراء، وهيموجلوبين الجسم المتوسط (MCH). وتركيزه؛ والذي هو متوسط تركيز الهيموجلوبين في الجسم (MCHC). حساب آخر هوعرض توزيع خلايا الدم الحمراء (RDW)، مشتق من الانحراف المعياري لمتوسط حجم الخلية ويعكس التباين في الحجم الخلوي.
بعد العلاج بالكواشف، تشكل خلايا الدم البيضاء ثلاث قمم مميزة عندما تُرسم أحجامها على الرسم البياني. تتوافق هذه القمم تقريبًا مع مجموعات الخلايا المحببة والخلايا الليمفاوية والخلايا أحادية النواة الأخرى، مما يسمح بإجراء فحص تفريقي ثلاثي الأجزاء بناءً على حجم الخلية وحده. تستخدم أجهزة التحليل الأكثر تقدمًا تقنيات إضافية لتوفير فحص تفريقي مكون من خمسة إلى سبعة أجزاء، مثل تشتت الضوء أو تحليل الترددات الراديوية، أو استخدام الأصباغ لصباغة مواد كيميائية معينة داخل الخلايا؛ على سبيل المثال: الأحماض النووية، التي توجد بتركيزات أعلى في الخلايا غير الناضجة، أو الميلوبيروكسيديز (البيروكسيديز النخاعي) والذي هوإنزيم موجود في خلايا السلالة النخاعية. قد تحسب الخلايا القاعدية (basophils) في قناة منفصلة حيث يقوم كاشف بتدمير الخلايا البيضاء الأخرى ويترك المستقعدات سليمة. تُحلل البيانات التي جُمعت من هذه القياسات وتُرسم على مخطط تشتت، حيث تشكل مجموعات مرتبطة بكل نوع من خلايا الدم البيضاء. ثمة نهج آخر لأتمتة فرق العد هو استخدام برمجيات المجهر الرقمي، والذي يستخدم الذكاء الاصطناعي لتصنيف خلايا الدم البيضاء من الصور المجهرية من مسحة الدم. ومن ثَمَّ تُعرض صور الخلية لمحلل بشري، والذي يمكنه إعادة تصنيف الخلايا يدويًا إذا لزم الأمر.
تستغرق معظم أجهزة التحليل أقل من دقيقة لإجراء جميع الاختبارات في العد الدموي الشامل. نظرًا لأن المحللين يأخذون العديد من الخلايا الفردية ويعدونها، فإن النتائج تكون دقيقة للغاية. ومع ذلك، قد لا تُشخّص بعض الخلايا غير الطبيعية بشكل صحيح، مما يتطلب مراجعة يدوية لنتائج الأداة والتعرف بوسائل أخرى على الخلايا غير الطبيعية التي لا تستطيع الأداة تصنيفها.