PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL 70% TEH PUTIH (Camellia sinensis L.) TERHADAP PENURUNAN KADAR GLUKOSA DARAH MENCIT YANG DIINDUKSI ALOKSAN KARYA TULIS ILMIAH Diajukan sebagai salah satu syarat menyelesaikan Program Diploma III Jurusan Farmasi Disusun oleh : ARIWIDIANINGSIH NURKHASANAH NIM. P17335113023 POLTEKKES KEMENKES BANDUNG JURUSAN FARMASI 2016 i
KATA PENGANTAR Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan yang Maha Esa, karena atas berkat dan rahmat-Nya, Penulis dapat menyelesaikan Karya Tulis Ilmiah ini. Penulisan KTI ini dilakukan dalam rangka memenuhi salah satu syarat untuk mencapai gelar Ahli Madya Farmasi pada Jurusan Farmasi Poltekkes Kemenkes Bandung. Penulis menyadari bahwa, tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak, dari masa perkuliahan sampai pada penyusunan KTI, sangatlah sulit bagi penulis untuk menyelesaikan Karya Tulis ini. Oleh karena itu, Penulis mengucapkan terima kasih kepada : (1) Dra. Mimin Kusmiyati, M.Si., selaku Ketua Jurusan Farmasi Poltekkes Kemenkes Bandung dan Dosen Pembimbing Akademik, yang telah memberi arahan bagi kami untuk menyelesaikan Karya Tulis; (2) Lully Hanni Endarini, M.Farm., Apt., selaku Dosen Pembimbing yang telah menyediakan waktu, tenaga, pikiran untuk membimbing penulis dalam penusunan Karya Tulis Ilmiah. (3) Seluruh staf pengajar, laboran dan karyawan Jurusan Farmasi Poltekkes Kemenkes Bandung yang telah membantu kelancaran dalam penelitian dan penyusunan Karya Tulis Ilmiah ini. Penulis menyadari bahwa dalam penyusunan Karya Tulis Ilmiah ini masih terdapat kekurangan, oleh karena itu penulis sangat mengharapkan adanya kritik dan saran yang membangun. Akhir kata, penulis berharap Tuhan Yang Maha Esa membalas segala kebaikan semua pihak yang telah membantu. Semoga hasil penelitian ini dapat bermanfaat baik bagi kalangan akademis, khususnya bagi mahasiswa farmasi, bagi masyarakat pada umumnya dan bagi pengembangan ilmu pengetahuan. Bandung, Juni 2016 Penulis v
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL 70% TEH PUTIH (Camellia sinensis L.) TERHADAP PENURUNAN KADAR GLUKOSA DARAH MENCIT YANG DIINDUKSI ALOKSAN Ariwidianingsih Nurkhasanah - P17335113023 ABSTRAK Di sejumlah negara, teh telah dikonsumsi untuk mencegah beberapa penyakit, termasuk Diabetes Mellitus. Kandungan polifenol dalam teh putih diduga dapat menurunkan glukosa darah. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol 70% teh putih terhadap kadar glukosa darah mencit yang diinduksi aloksan 150 mg/Kg BB secara intraperitoneal. Penelitian ini dilakukan dengan pretest posttest with control grup design. Hewan uji yang digunakan sebanyak 30 ekor mencit putih jantan galur Swiss webster yang dikelompokan menjadi 6 kelompok perlakuan. Kelompok I (kontrol normal), kelompok II (kontrol positif diabetes), kelompok III, IV dan V sebagai kelompok eksperimen yang diberikan suspensi ekstrak etanol 70% teh putih dengan konsentrasi 2,8 mg/20g BB (dosis I), 8,4 mg/20g BB (dosis 2), 14 mg/20g BB (dosis 3), kelompok VI sebagai kelompok pembanding (kontrol glibenklamid) yang diberi suspensi glibenklamid (0,013 mg/ Kg BB), dimana masing-masing diberikan selama 14 hari secara oral. Pengukuran kadar glukosa darah dilakukan sebelum dan sesudah pemberian ekstrak etanol 70% teh putih pada hari ke 7 dan 14. Data pengukuran glukosa darah dianalisis dengan uji Reapeted ANOVA dilanjutkan dengan uji Post Hoc dengan taraf kepercayaan 95% (p < 0,05). Hasil penelitian menunjukan bahwa pemberian ekstrak etanol 70% teh putih 2,8 mg; 8,4 mg; and 14 mg/20 g BB dapat menurunkan kadar glukosa darah mencit yang diindulsi aloksan. Kata Kunci : Aloksan Monohidrat, Ekstrak, Teh Putih (Camellia sinensis L.) vii
THE IMPACT OF ETHANOL 70% EXTRACT OF WHITE TEA (Camellia sinensis L.) IN LOWERING BLOOD GLUCOSE LEVELS ON MICE INDUCED BY ALOKSAN Ariwidianingsih Nurkhasanah - P17335113023 ABSTRACT In a number of countries, tea has been consumed to prevent various diseases, such as Diabetes Mellitus. The content of Polyphenols in white tea indicated to be able to lower or decrease blood glucose level. The purpose of this study was to know the impact of the ethanol extract of white tea (Camellia sinensis L.) in lowering blood glucose levels mice which were induced by alloxan 150 mg/Kg BW intraperitoneally. The study was conducted with pretest post test with control group design. This study used 30 male mice Swiss webster strain, whice were divided into 6 groups. Group I (normal control), group II (diabetic control) were given 2% CMC Na solution 0,5 ml/20 g BW of mice, group III, IV, and V were given suspension ethanol white tea extract 2,8 mg/ 20 g BW (dosage I); 8,4 mg/ 20 g BW (dosage II); and 14 mg/20 g BW (dosage III) respectively, group VI as comparison group (glibenklamid control) was given glibenclamid suspension 0,013 mg/Kg BW of mice, each of them were administrated for 14 day orally. Measurements of blood glucose levels were taken before and after administration of the ethanol white tea extract on days 7 and 14, blood glucose levels tested repeated Anova test followed by post hoc test at confidence level of 95%. The result showed ethanol extract of white tea dose of 2,8 mg; 8,4 mg; and 14 mg/20 g BW could decrease blood glucoce levels on mice induced by aloksan. Keywords : Alloxan Monohidrate, Extract, White tea (Camellia sinensis L.) viii
LEMBAR PERSEMBAHAN Bismillahirrohmanirrohim Alhamdulilahirobbil alamin puji dan syukur kehadirat Allah SWT atas karunia dan kemudahan yang Engkau berikan, akhirnya Karya Tulis Ilmiah ini dapat terselesaikan. Sholawat serta salam selalu terlimpahkan kepada Rasulullah Muhammad SAW. Kupersembakan Karya Tulis Ilmiah ini kepada kedua Orang Tua ku sebagai tanda terima kasih yang tiada terhingga untuk segala doa, dukungan dan kasih sayang yang tidak mungkin kubalas hanya dengan selembar kertas bertuliskan kata cinta dan persembahan ini. Untuk Adik ku tersayang yang juga banyak memberi dukungan. Untuk Dosen Pembimbing KTI, Bu Lully Hanni Endarini, M.Farm., Apt. terima kasih bu, telah banyak membantu dan menasehati. Untuk teman- teman KBI Bahan Alam dan Farmakologi, tempat berbagi suka, cita, keluh, kesah, terima kasih untuk dukungan semangat dan bantuan kalian. Untuk sahabat dan teman-teman seperjuangan yang telah memberi dukungan do'a, motivasi dan berbagi keceriaan baik selama masa perkulihan maupun selama penelitian berlangsung. ix
DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL... i HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS... ii HALAMAN PERSETUJUAN... iii LEMBAR PENGESAHAN ... iv KATA PENGANTAR ... v HALAMAN PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KTI UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ... vi ABSTRAK ... vii LEMBAR PERSEMBAHAN ... ix DAFTAR ISI... x DAFTAR TABEL... xiii DAFTAR GAMBAR ... xiv DAFTAR SINGKATAN ... xv DAFTAR LAMPIRAN... xvi 1. PENDAHULUAN... 1 1.1. Latar Belakang ... 1 1.2. Rumusan Masalah ... 3 1.3. Tujuan Penelitian ... 3 1.4. Manfaat Penelitian ... 3 2. TINJAUAN PUSTAKA ... 5 2.1. Tinjauan tentang Teh Putih ... 5 2.1.1. Klasifikasi ... 5 2.1.2. Morfologi ... 5 2.1.3. Habitat ... 6 2.1.4. Kandungan Kimia ... 6 2.1.5. Khasiat... 7 2.2. Tinjauan tentang Diabetes Mellitus ... 9 2.2.1. Pengertian Diabetes Mellitus ... 9 x
2.2.2. Epidemiologi Diabetes Mellitus... 10 2.2.3. Klasifikasi Diabetes Mellitus ... 10 2.2.4. Patofisiologi Diabetes Mellitus ... 11 2.2.5. Diagnosis Diabetes Mellitus ... 12 2.2.6. Antidiabetika Oral... 12 2.2.7. Glibenklamid... 12 2.3. Tinjauan tentang Ekstrak... 13 2.3.1. Pengertian Ekstrak dan Ekstraksi... 13 2.3.2. Metode Ekstraksi... 14 2.3.3. Pembuatan Ekstrak... 15 2.4. Tinjauan tentang Aloksan ... 16 2.4.1. Nama Kimia ... 16 2.4.2. Struktur Kimia... 16 2.4.3. Sifat Kimia ... 16 2.4.4. Reaktivitas Kimia... 16 2.4.5. Mekanisme Kerja ... 16 2.5. Kerangka Konsep ... 17 3. METODE PENELITIAN ... 18 3.1. Jenis Penelitian... 18 3.2. Populasi dan Sampel ... 18 3.3.Tempat dan Waktu Penelitian ... 19 3.4. Bahan dan Alat... 19 3.4.1. Bahan... 19 3.4.2. Bahan Kimia dan Bahan Lain ... 19 3.4.3. Alat... 19 3.4.4. Hewan Uji ... 20 3.5. Prosedur Kerja dan Pengumpulan Data ... 20 3.5.1. Aklimatisasi Hewan Percobaan... 20 3.5.2. Pembuatan Ekstrak Etanol 70% Teh Putih ... 20 3.5.3. Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol 70% Teh Putih... 21 xi
3.5.4. Penentuan Dosis dan Pembuatan Larutan Uji... 22 3.5.5. Penginduksian Aloksan... 23 3.5.6. Pengujian Pengaruh Ekstrak Etanol 70% Teh Putih ... 24 3.6. Analisis Data ... 25 4. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN ... 26 5. KESIMPULAN DAN SARAN ... 41 5.1. Kesimpulan ... 41 5.2. Saran... 41 DAFTAR PUSTAKA ... 42 LAMPIRAN... 45 xii
DAFTAR TABEL Tabel 1.3 Pembagian Kelompok Hewan Uji ... 24 Tabel 1.4 Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Teh Putih... 29 Tabel 2.4 Nilai Rerata dan Standar Deviasi Kadar Glukosa Darah Mencit... 32 Tabel 3.4 Persentase Penurunan Kadar Glukosa Darah pada Mencit... 34 xiii
DAFTAR GAMBAR Gambar 1.2 Tanaman Teh (Camellia sinensis L.) ... 6 Gambar 2.2 Struktur Kimia Katekin dan turunannya ... 7 Gambar 3.2 Struktur Kimia Aloksan ... 16 Gambar 4.2 Kerangka Konsep ... 17 Gambar 1.4 Diagram Skematik Respon Glukosa Darah Metode Induksi Aloksan ... 31 Gambar 2.4 Grafik Rata-Rata Penurunan Kadar Glukosa Darah Mencit ... 33 Gambar 3.4 Grafik Berat Badan Mencit Kelompok Kontrol Normal... 36 Gambar 4.4 Grafik Berat Badan Mencit Kelompok Kontrol Diabetes... 36 Gambar 5.4 Grafik Berat Badan Mencit Kelompok Dosis 1 ... 37 Gambar 6.4 Grafik Berat Badan Mencit Kelompok Dosis 2 ... 37 Gambar 7.4 Grafik Berat Badan Mencit Kelompok Dosis 3 ... 38 Gambar 8.4 Grafik Berat Badan Mencit Kelompok Glibenklamid ... 38 xiv
SINGKATAN dpl i.p mg/dL mg/ Kg BB DM EGCG GDM IDDM NIDDM OS RONS ROS WHO DAFTAR SINGKATAN NAMA Diatas permukaan laut Intra peritoneal miligram per desiliter Miligram per Kilogram Berat Badan Diabetes Mellitus Epigallocatechin gallate Gestasional Diabetes Mellitus Insulin Dependent Diabetes Mellitus Non Insulin Dependent Diabetes Mellitus Oxidative Stress Reactive Oxygen and Nitrogen Species Reactive Oxygen Species World Health Organization xv Pemakaian pertama kali pada halaman 6 20 7 3 1 3 11 11 11 3 9 14 1
DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1 Surat Keterangan Simplisia Teh Putih... 45 Lampiran 2 Bahan dan Alat yang digunakan dalam Penelitian ... 46 Lampiran 3 Tabel Perhitungan Konversi Dosis ... 48 Lampiran 4 Proses Kegiatan Penelitian ... 49 Lampiran 5 Alur Proses Pembuatan Ekstrak Etanol 70% Teh Putih ... 50 Lampiran 6 Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol 70% Teh Putih... 51 Lampiran 7 Perhitungan Dosis Ekstrak Etanol 70% Teh Putih ... 52 Lampiran 8 Perhitungan Dosis Glibenklamid... 53 Lampiran 9 Skema Kerja Pengujian Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol 70% Teh Putih terhadap Mencit yang diinduksi Aloksan... 54 Lampiran 10 Data Pengamatan Berat Badan Mencit selama Penelitian... 55 Lampiran 11 Data Pengukuran Kadar Glukosa Darah Mencit ... 56 Lampiran 12 Hasil Uji Normalitas Shapiro-Wilk ... 57 Lampiran 13 Hasil Uji Repeated Anova... 58 Lampiran 14 Hasil Uji Post Hoc... 59 xvi
BAB I PENDAHULUAN 1.1. Latar Belakang Diabetes Mellitus adalah salah satu penyakit tidak menular yang memiliki risiko tinggi. Berdasarkan data Global Status Report on NCD yang dirilis World Health Organization (WHO) pada 2010 disebutkan, Diabetes Mellitus menduduki peringkat keenam sebagai penyebab kematian pada kategori penyakit menular. Rentang usia penderita Diabetes Mellitus pun bervariasi. Secara epidemiologi, diperkirakan bahwa pada tahun 2030 prevalensi Diabetes Mellitus di Indonesia mencapai 21,3 juta orang (World Health Organization, 2010). Diabetes Mellitus (DM) atau disebut Diabetes saja merupakan penyakit gangguan metabolik menahun akibat pankreas tidak memproduksi cukup insulin atau tubuh tidak dapat menggunakan insulin yang diproduksi secara efektif (Departemen Kesehatan RI, 2014). Ada dua tipe utama Diabetes Mellitus, yaitu tipe I dan tipe II. Dalam beberapa kelompok usia, orang dengan Diabetes Mellitus memiliki dua kali lipat peningkatan risiko stroke. Diabetes Mellitus merupakan penyebab utama gagal ginjal pada sebagian besar populasi di negara maju dan berkembang. Selain itu, risiko tuberkulosis tiga kali lebih tinggi untuk orang dengan Diabetes Mellitus dan kelainan yang terjadi pada pembuluh darah retina yang bisa berakhir dengan kebutaan bagi penderitanya (World Health Organization, 2010). Pada individu dengan Diabetes Mellitus tipe II, urutan umum terapi Diabetes Mellitus dimulai dari melakukan diet, olahraga lalu diikuti dengan konsumsi antihiperglikemik oral. Antihiperglikemik oral digunakan saat terapi diet dan olahraga gagal memenuhi target penurunan gula darah. Semakin meningkatnya jumlah penderita Diabetes Mellitus tersebut maka meningkat pula penggunaan antihiperglikemik oral yang saat ini telah banyak dikembangkan ke arah tanaman obat. Secara tradisional tanaman juga digunakan untuk pengobatan Diabetes Mellitus di seluruh dunia. Oleh karena itu, masyarakat berusaha untuk mencari alternatif dalam mencegah maupun mengobati penyakit dengan menggunakan produk alami. Disamping itu, tanaman obat sudah banyak tersedia 1 tidak
di alam dan relatif tidak mahal. Maka banyak masyarakat memanfaatkan tanaman obat yang memiliki efek samping yang lebih kecil dibandingkan dengan obat sintetis, sehingga pencarian tanaman obat dengan mekanisme antihiperglikemik oral pun meningkat. Diperkirakan bahwa sekitar 80-85% dari populasi baik di negara maju dan berkembang bergantung pada obat tradisional terutama untuk kebutuhan pencegahan, peningkatan dan pemeliharaan kesehatan juga diasumsikan bahwa bagian utama dari pengobatan tradisional melibatkan penggunaan ekstrak tanaman. Seperti kita ketahui Indonesia kaya akan sumber tanaman obat atau obat herbal, yang telah dimanfaatkan oleh manyarakat di Indonesia secara turun temurun. Ada beberapa tanaman obat yang dipercaya dapat menurunkan kadar gula darah, salah satunya adalah tanaman teh (Camellia sinensis L.). Indonesia merupakan salah satu penghasil teh terbesar di dunia, namun konsumsi teh di Indonesia masih sangat rendah, diduga hal ini karena masyarakat belum banyak tahu tentang khasiat teh bagi kesehatan (Anistyani, 2008). Teh diproduksi dari pucuk daun muda tanaman teh (Camellia sinensis L.) yang berdasarkan penanganan pasca panennya produk teh diklasifikasikan menjadi empat jenis, yaitu : teh hijau (teh yang diperoleh tanpa proses fermentasi); teh hitam (teh yang diperoleh melalui proses fermentasi); teh oolong (teh yang diproses secara semi fermentasi); dan teh putih (yang merupakan jenis teh yang tidak mengalami proses fermentasi sama sekali) (Towaha, 2012). Dewasa ini, teh putih (white tea) mulai dikenal dan diminati sebagai minuman kesehatan. teh putih berasal dari daun teh termuda yang masih menggulung di bagian pucuk pohon teh. Teh putih dihasilkan tanpa banyak melibatkan tangan manusia dan paling alamiah. Daun teh muda ini biasanya diselimuti oleh bulu-bulu halus yang akan berubah warna menjadi putih keperakan setelah daun dikeringkan. Warna putih inilah yang menjadi asal nama teh putih. (Somantri, 2011). Di Indonesia, teh putih hadir pada tahun 1878 dan kemudian dikembangkan 2
di Gamboeng, Jawa Barat, lokasi tempat Pusat Penelitian Teh dan Kina (PPTK) kini berdiri. Teh mengandung beberapa senyawa bioaktif yang diyakini memiliki berbagai sifat fisiologis, termasuk menjadi agen antidiabetes dalam beberapa penelitian. Secara in vivo, ekstrak air teh hijau (100 mg/kg) dapat menurunkan kadar glukosa darah pada mencit yang dibuat hiperglikemia dengan induksi aloksan (Ramadan et al, 2009), kadar glukosa darah mencit menurun secara signifikan dari 4 sampai 8 minggu (Miura & Koike, 2005). Epigallocatechin (EGCC), senyawa katekin lain dalam teh, dan theaflavin yang merupakan senyawa bioaktif dari teh memiliki efek penurunan kadar glukosa darah dengan mekanisme meningkatkan efektivitas insulin dan dengan mencegah kerusakan sel-sel β pulau Langerhans oleh komponen ekstrak daun teh (Anderson, 2002), kandungan EGCC dalam ekstrak teh putih diduga memiliki aktivitas antihiperglikemia dengan mekanisme mengurangi Oxidative stress (Islam, 2011). Berdasarkan latar belakang diatas, peneliti tertarik untuk melakukan pengujian pengaruh pemberian ekstrak etanol 70% teh putih (Camellia sinensis L.) terhadap penurunan kadar glukosa darah mencit yang diinduksi aloksan. 1.2. Rumusan Masalah Adakah pengaruh pemberian ekstrak etanol 70% teh putih (Camellia sinensis L.) terhadap penurunan kadar glukosa darah mencit yang diinduksi aloksan? 1.3. Tujuan Penelitian Menentukan adanya pengaruh pemberian ekstrak etanol 70% teh putih (Camellia sinensis L.) terhadap penurunan kadar glukosa darah mencit yang diinduksi aloksan. 3
1.4. Manfaat Penelitian 1.4.1. Manfaat untuk Peneliti Penelitian ini diharapkan dapat memberikan pengetahuan bagi peneliti mengenai pengaruh pemberian ekstrak etanol 70% teh putih (Camellia sinensis L.) terhadap penurunan kadar glukosa darah mencit yang diinduksi aloksan. 1.4.2. Manfaat untuk Institusi Dalam rangka pengembangan ilmu pengetahuan untuk penelitian selanjutnya, hasil penelitian ini diharapkan memberi sumbangan pengetahuan mengenai pengaruh pemberian ekstrak etanol 70% teh putih (Camellia sinensis L.) terhadap penurunan kadar glukosa darah mencit yang diinduksi aloksan. 1.4.3. Manfaat untuk Masyarakat Penelitian ini diharapkan dapat dimanfaatkan oleh masyarakat sebagai acuan untuk mengembangkan teh putih (Camellia sinensis L.) menjadi sediaan obat dari bahan alam Indonesia yang digunakan sebagai antihiperglikemia. 4
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA 2.1. Tinjauan tentang Teh Putih 2.1.1. Klasifikasi Kingdom : Plantae Ordo : Ericales Famili : Theaceae Genus : Camellia Spesies : C. sinensis Nama Ilmiah : Camellia sinensis (L.) Kuntze Sumber : Namita, Mukesh, & Vijay, 2012 2.1.2. Morfologi Teh merupakan tanaman perdu atau pohon kecil, batang tegak atau sedikit bengkok dengan tinggi sampai 10 meter. Helaian daun tunggal, terletak spiralis, berseling, atau kadang tersebar, bentuk helaian daun elips sampai memanjang, runcing di bagian pangkal, tepi bergerigi, dan lebih keras dibanding bagian daun lainnya, daun-daun di ujung berbulu halus, ukuran helai daun panjang 6-18 cm, lebar 2-6 cm, warna hijau permukaan hijau mengkilap. Daun yang lebih tua warna hijaunya lebih gelap. Bunga diketiak daun, tunggal atau beberapa bunga bergabung menjadi satu, berkelamin dua, garis tengah 3-4 cm, warnanya putih cerah dengan banyak benang sari berwarna kuning, harum. Usia daun yang berbeda menghasilkan kualitas yang berbeda karena komposisi kandungan kimianya berbeda. Buahnya berbentuk kotak, berdinding tebal, bagian dalam buah terpecah menjadi beberapa ruang, saat masih muda berwarna hijau setelah tua menjadi coklat kehitaman (Namita et al., 2012); (Sulkani, 2013). 5
Gambar 1.2 Tanaman Teh (Camellia sinensis L.) Sumber : Thomas Schopke, 2004 2.1.3. Habitat Teh berasal dari kawasan India bagian utara dan Cina Selatan. Ada dua kelompok varietas teh yang terkenal, yaitu varietas assamica yang berasal dari Assam dan varietas sinensis yang berasal dari Cina. Teh tumbuh pada berbagai jenis tanah mulai dari tanah berbatu sampai tanah dengan curah hujan tinggi. Tanah untuk budidaya teh tidak boleh kering, kedalaman penanaman dua meter, pH antara 4,5 sampai 5,6 tekstur berpasir hingga lempur dan mampu menahan air. Hasil panen yang tinggi dan teh berkualitas baik dapat diperoleh di negara- negara tropis pada tanah yang subur, terutama ketinggian 1200-1800m dpl. Tanaman teh memerlukan kelembapan tinggi dengan temperatur 13-29,5ºC (Soraya, 2007); (BPOM RI, 2012). 2.1.4. Kandungan Kimia Alkaloid purin (metil xantin): kafein, teobromin, teofilin; Saponin triterpen: aglikon baringtogenol C, RI-baringenol; Katekin: epikatekin, epigalokatekin, epigalokatekin galat, teaflavin, tearubigen; Flavonoid: kumarin, kaemferol, mirisetin; Derivat asam kafeat: asam klorogenat dan teogalin; Minyak atsiri: linalool, 2-metil-hepta-2-en-6-on, a-ionon dan p-ionon (BPOM RI, 2012). 6
Gambar 2.2 Struktur Kimia Katekin dan turunannya Sumber : (Dias et al., 2013) 2.1.5. Khasiat a. Teh Putih Sebagai Antioksidan Kerusakan oksidatif yang diinduksi Reactive Oxygen and Nitrogen Spesies (RONS) telah berhubungan dengan perkembangan beberapa penyakit pada manusia seperti penyakit jantung, Diabetes Mellitus, peradangan kronis, dan jenis kanker tertentu, pengurangan kerusakan oksidatif akibat RONS tersebut memiliki efek menguntungkan bagi kesehatan masyarakat. Polifenol dalam teh, terutama derivat katekin, dianggap sebagai agen antioksidan kuat, dengan peran yang sangat penting dalam melindungi organ atau jaringan tubuh terhadap penyakit akibat Paparan RONS. Dalam penelitian terbaru Koutelidakis et. al, 2015, melaporkan bahwa pemberian ekstrak teh putih selama lima hari berturut-turut tidak hanya meningkatkan kapasitas antioksidan plasma tetapi juga pada organ yang berbeda pada tikus, seperti jantung dan paru-paru. Derivat katekin khususnya EGCG, theaflavin dan glikosida flavonol lebih bertindak sebagai agen antioksidan di dalam teh. Efektivitas antioksidan dalam teh tergantung pada jenis teh dan yang terpenting adalah kandungan EGCG dalam Teh tersebut (Dias et al., 2013); (Koutelidakis et al, 2015). 7
8 b. Efek Cardioprotective dalam Teh Putih Antioksidan alami, seperti senyawa polifenol dalam teh, dapat menghambat oksidasi lipid dan melemahkan tingkat aterosklerosis dan trombosis. Sebuah studi epidemiologi menunjukkan bahwa populasi masyarakat di Eropa yang memiliki konsentrasi antioksidan alami yang tinggi, memiliki potensi lebih rendah terhadap penyakit jantung koroner. Mekanisme yang mendasari efek kardioprotektif pada teh tidak hanya mencakup sifatnya sebagai agen antioksidan, tetapi juga sebagai agen yang bertindak memperbaiki kecepatan aliran dalam koroner. Komponen teh lainnya, terutama quercetin dan L-theanine, mengurangi tekanan darah pada hewan Uji dan manusia, dengan demikian menyebabkan menurunnya risiko perkembangan penyakit kardiovaskular (Dias et al., 2013). c. Teh Putih sebagai Antidiabetes Berbagai penelitian telah melaporkan bahwa terjadinya Diabetes Mellitus dikaitkan dengan peningkatan pembentukan RONS dan penurunan potensi antioksidan. Peningkatan Oxidative Stress (OS) telah dilaporkan menjadi salah satu penyebab utama pemicu hiperglikemia dengan komplikasi. ekstrak teh putih dapat menunjukkan efek antidiabetes dengan mengurangi Oxidative Stress dan hiperlipidemia diikuti oleh resistensi insulin. Sejak kasus Diabetes Mellitus dengan komplikasi meningkat di seluruh dunia, merupakan tanggung jawab besar dalam menemukan terapi yang efektif dan teh putih tampaknya menjadi alternatif yang baik (Dias et al., 2013). d. Aktivitas Antikarsinogenik dalam Teh Putih Banyak penelitian telah menunjukkan bahwa teh dan kandungannya, terutama EGCG, bertindak menghambat agen karsinogenik dengan mengurangi kerusakan oksidatif akibat RONS sebelum merusak DNA. Katekin dalam teh juga melindungi membran sel
terhadap oksidasi dengan menghambat RONS masuk ke dalam membran sel yang diperlukan untuk pertumbuhan sel kanker. Sejauh ini, ada beberapa studi mengenai potensi antikanker dari teh putih yang baru-baru telah menunjukkan bahwa teh putih memiliki sifat kemopreventif dan efek antineoplastik pada sel kanker paru-paru dan dapat melindungi kulit manusia dari rangsangan sinar ultraviolet matahari (Dias et al., 2013). e. Sifat Antimikroba Teh Putih Efek antimikroba juga dipengaruhi oleh jenis teh, aktivitas antimikroba dari teh yang tidak melalui fermentasi lebih tinggi dari teh yang melalui proses semi- fermentasi atau fermentasi sempurna. Selain itu, aktivitas antimikroba tertinggi terjadi pada sampel teh dengan konsentrasi total polifenol dan aktivitas antioksidan tertinggi. Oleh karena itu, teh putih memiliki aktivitas antimikroba yang lebih tinggi daripada jenis teh lainnya. Komponen utama yang bertanggung jawab atas aktivitas antimikroba yaitu EGCG dan EGC. Pemberian EGCG dengan konsentrasi 10-100 µM telah menunjukkan aktivitas antimikroba dengan berkurangnya pertumbuhan Escherichia coli sekitar 50% (Dias et al., 2013). 2.2. Tinjauan tentang Diabetes Mellitus 2.2.1. Pengertian Diabetes Mellitus Diabetes Mellitus (DM) atau disebut Diabetes saja merupakan penyakit gangguan metabolik menahun akibat pankreas tidak memproduksi cukup insulin atau tubuh tidak dapat menggunakan insulin yang diproduksi secara efektif (Departemen Kesehatan RI, 2014). 2.2.2. Epidemiologi Diabetes Mellitus Berbagai penelitian epidemiologi menunjukan adanya kecenderungan peningkatan angka insidensi dan prevalensi Diabetes Mellitus tipe 2 di berbagai penjuru dunia. World Health Organization (WHO) memprediksikan kenaikan jumlah penyandang Diabetes Mellitus di Indonesia dari 8,4 juta pada tahun 2000 9
menjadi 21,3 juta pada tahun 2030. Senada dengan WHO, International Diabetes Federation (IDF) pada tahun 2009, memprediksikan kenaikan jumlah penyandang Diabetes Mellitus dari 7,0 juta pada 2009 menjadi 12,0 pada tahun 2030. Meskipun terdapat perbedaan angka prevalensi, laporan keduanya menunjukan adanya peningkatan jumlah penyandang Diabetes Mellitus sebanyak 2-3 kali lipat pada tahun 2011 (PERKENI, 2011). 2.2.3. Klasifikasi Diabetes Mellitus Menurut American Diabetes Association (ADA) 2015 dalam jurnal Diabetes Care, Diabetes dapat diklasifikasikan ke dalam kategori umum berikut : a. Diabetes Mellitus tipe 1 Hasil dari kehancuran sel β pankreas, biasanya menyebabkan defisiensi insulin yang absolut. b. Diabetes Mellitus tipe 2 Hasil dari gangguan sekresi insulin yang progesif yang menjadi latar belakang terjadinya resistensi insulin c. Gestational Diabetes Mellitus Diabetes yang tidak terlihat secara jelas, biasanya terjadi pada trisemester kedua atau ketiga masa kehamilan. d. Diabetes tipe spesifik lain Misalnya, sindrom Diabetes monogenik (seperti Diabetes Neonatal dan Maturity-Onset Diabetes of youth), penyakit eksokrin pankreas (seperti Cystic fibrosis), dan yang dipicu oleh obat-obat atau bahan kimia (seperti dalam pengobatan HIV/AIDS atau setelah transplantasi organ) (American Diabetes Association, 2015). 2.2.4. Patofisiologi Diabetes Mellitus a. Diabetes Mellitus Tipe 1 Bentuk ini sebelumnya disebut Insulin Dependent Diabetes Mellitus (IDDM) atau juvenile-onset diabetes. Yang terhitung hanya 5- 10% dari seluruh penderita Diabetes Mellitus yang diakibatkan oleh 10
11 kerusakan sel β pankreas yang diperantarai sel autoimun (American Diabetes Association, 2015). Ini merupakan gangguan katabolik dimana insulin hampir tidak ada, glukagon plasma meningkat dan sel β pankreas gagal untuk merespon semua rangsangan insulinogenik. Terapi insulin diperlukan untuk mengembalikan keadaan katabolik, mencegah ketosis, mengurangi hiperglukagonemia, dan mengurangi gula darah (American Diabetes Association, 2012). b. Diabetes Mellitus Tipe 2 Bentuk ini, sebelumnya disebut sebagai Non Insulin Dependent Diabetes Mellitus (NIDDM) atau adult onset diabetes. Yang terhitung 90- 95% dari seluruh penderita Diabetes Mellitus. Diabetes Melitus tipe 2 meliputi individu yang memiliki resistensi insulin dan biasanya defisiensi insulin relatif (bukan yang absolut) (American Diabetes Association, 2012). Mulanya Diabetes Mellitus tipe 2 sangat berangsur-angsur dengan keluhan ringan yang sering sekali tidak dikenali. Penyebabnya, akibat proses penuaan, banyak penderita jenis ini mengalami penyusutan sel-sel β yang progesif serta penumpukan amiloid di sekitarnya. Sel-sel β yang tersisa umumnya masih aktif, tetapi sekresi insulinnya semakin berkurang. Selain itu kepekaan reseptornya juga menurun. Hipofungsi sel β bersama resistensi insulin yang meningkat mengakibatkan gula darah meningkat (hiperglikemia) (Tjay, 2013). c. Diabetes Gestasional Diabetes Mellitus Gestasional (GDM = Gestational Diabetes Mellitus) adalah keadaan Diabetes atau intoleransi glukosa yang timbul selama masa kehamilan, dan biasanya berlangsung hanya sementara atau temporer. Sekitar 4-5% wanita hamil diketahui menderita GDM, dan umumnya terdeteksi pada atau setelah trisemester kedua (Departemen Kesehatan RI, 2005).
12 2.2.5. Diagnosis Diabetes Mellitus Menurut American Diabetes Association (ADA) 2013, Kriteria diagnostik untuk Diabetes Mellitus sebagai berikut : a. Pasien dengan gejala Diabetes hiperglikemia klasik atau hiperglikemia krisis, kadar glukosa darah random 11,1 mmol/L (200 mg/dL), atau b. Kadar glukosa darah puasa atau didefinisikan tidak ada asupan kalori selama minimal 8 jam, kadar glukosa darahnya 126 mg/dL (7,0 mmol/L), atau c. Kadar glukosa darah dua jam pasca prandial yaitu 11,1 mmol/L (200 mg/dL) atau selama tes toleransi glukosa (American Diabetes Association, 2013). 2.2.6. Antidiabetika Oral Obat antidiabetika oral digunakan untuk pengobatan Diabetes Mellitus tipe 2. Obat-obat ini hanya digunakan jika pasien gagal memberikan respon terhadap setidaknya 3 bulan diet rendah karbohidrat dan energi disertai aktivitas fisik yang dianjurkan, dimana apabila setelah upaya perubahan pola hidup, kadar gula darah tetap diatas 200 mg/dL (Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2010). Antidiabetika oral kini dapat dibagi dalam enam kelompok besar yaitu sulfonilurea, calsium channel bloker, biguanida, glukosidase-inhibitor, thiazolidindion, dan DPP-4 bloker (Tjay, 2013). 2.2.7. Glibenklamid Glibenklamid termasuk antidiabetik oral golongan Sulfonilurea. Dikenal 2 generasi sulfonilurea, generasi I terdiri dari tolbutamid, tolazamid, asetoheksimid dan klorpropamid. Generasi II yang potensi hipoglikemik lebih besar antara lain glibenklamid, glipizid, gliklazid, dan glimepiride. Sulfonilurea generasi II, umumnya potensi hipoglikemiknya hampir 100x lebih besar dari generasi I. Meski masa paruhnya pendek, hanya sekitar 3-5 jam, efek hipoglikemiknya berlangsung 12-24 jam, sering cukup diberikan 1x sehari. Glibenklamid
potensinya 200x lebih kuat dari tolbutamid, masa paruhnya sekitar 4 jam. Metabolismenya di hepar, pada pemberian dosis tunggal hanya 25% metabolitnya diekskresi melalui urin dan sisanya melalui empedu (Dept. Farmakologi dan Terapeutik FKUI, 2007). Glibenklamid sering kali ampuh dimana obat-obat lain tidak efektif (lagi). Resiko "hipo" juga lebih besar dan lebih sering terjadi. Pola kerjanya berlainan dengan sulfonilurea lain, yaitu dengan single dose pagi hari yang mampu menstrimulir ekskresi insulin pada setiap pemasukan glukosa (sewaktu makan). Dengan demikian selama 24 jam tercapai regulasi gula darah optimal yang mirip pola normal. Dosis permulaan glibenklamid diberikan 1x sehari 2,5-5mg, bila perlu dinaikan setiap minggu sampai maksimal 2x sehari 10mg (Tjay, 2013). 2.3. Tinjauan tentang Ekstrak 2.3.1. Pengertian Ekstrak dan Ekstraksi Ekstraksi merupakan proses pemisahan bahan dari campurannya dengan menggunakan pelarut. Dengan demikian ekstrak adalah sediaan yang diperoleh dengan cara ekstraksi tanaman obat dengan ukuran partikel tertentu dan menggunakan medium pengekstraksi yang tertentu pula (Agoes, G, 2007). Tujuan utama dari ekstraksi adalah mendapatkan atau memisahkan sebanyak mungkin zat-zat yang memiliki khasiat pengobatan dari zat-zat yang tidak berfaedah, agar lebih mudah digunakan dan disimpan dibandingkan simplisia asli, dan tujuan pengobatannya lebih terjamin, karena pada umumnya zat-zat berkhasiat dalam simplisia terdapat dalam keadaan tercampur, diperlukan cara penarikan dan cairan penarik tertentuyang kelak dapat menghasilkan bermacam-macam preparat galenik sesuai dengan pengolahannya, misalnya infusa, decocta, maserat, tingtur, resin dan lain-lain (Syamsuni. H.A, 2007). 2.3.2. Metode Ekstraksi 1. Ekstraksi Cara Dingin a. Maserasi Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau 13
pengadukan pada temperatur ruangan (kamar). Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan yang kontinu (terus-menerus). Remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserasi pertama dan seterusnya. b. Perkolasi Perkolasi adalah ekstraksi dengan perlarut yang selalu baru sampai sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada temperatur ruangan. Proses terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetasan/penampungan ekstrak), terus menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) yang jumlahnya 1-5 kali bahan. 2. Ekstraksi Cara Panas a. Refluks Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin yang balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna. b. Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik. c. Digesti Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan (kamar), yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40-50ºC. 14
d. Infus Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air (bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur (96-98ºC) selama waktu tertentu (15-20 menit). e. Dekok Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama (>30ºC) dan temperatur sampai titik didih air (Depkes RI, 2000). 2.3.3. Pembuatan Ekstrak Buat ekstrak dari serbuk kering simplisia dengan cara maserasi menggunakan pelarut yang sesuai. Gunakan pelarut yang dapat menyari sebagian besar metabolit sekunder yang terkandung dalam serbuk simplisia. Jika tidak dinyakan lain gunakan etanol 70% . Masukkan satu bagian serbuk kering simplisia ke dalam maserator, tambahkan 10 bagian pelarut. Rendam selama 6 jam pertama sambil sekali-sekali diaduk, kemudian diamkan selama 18 jam. Pisahkan maserat dengan cara pengendapan, sentrifugasi, dekantasi, atau filtrasi. Ulangi proses penyari sekurang-kurangnya dua kali dengan jenis dan jumlah pelarut yang sama. Kumpulkan semua maserat, kemudian uapkan dengan penguapan vakum atau penguapan tekanan rendah hingga diperoleh ekstrak kental. Hitung rendemen yang diperoleh yaitu persentase bobot (b/b) antara rendemen dengan bobot serbuk simpisia yang digunakan dengan penimbangan. Rendemen harus mencapai angka sekurang-kurangnya sebagaimana ditetapkan pada masing-masing monografi ekstrak (Departemen Kesehatan RI, 2008). 15
2.4. Tinjauan tentang Aloksan 2.4.1. Nama Kimia 2,4,5,6-Tetraoxypyrimidine (Alloxan) (Lenzen, 2008). 2.4.2. Struktur Kimia Gambar 3.2 Struktur Kimia Alloxan Sumber : Lenzen, 2008 2.4.3. Sifat Kimia Sangat hidrofilik, analog glukosa sel-β -toksik, merupakan asam lemah, Bahan kimia yang tidak stabil (waktu paruh 1,5 menit pada pH minimal 7,4 dan suhu 37ºC, terdekomposisi menjadi alloxanic acid), stabil pada pH asam (Lenzen, 2008). 2.4.4. Reaktivitas Kimia Sebuah protoksik; metabolisme intraselular xenobiotik ini menghasilkan ROS toksik dari siklus redoks dangan asam dialurik selama periode waktu yang lama ( > 1 jam) (Lenzen 2008). 2.4.5. Mekanisme Kerja Aloksan memiliki dua efek patologis yang berbeda, pertama yaitu menghambat sekresi glukosa yang diinduksi insulin melalui penghambatan spesifik glukokinase dan yang kedua menghambat sensor glukosa dari sel β dan hal itu menyebabkan keadaan diabetes tergantung insulin melalui kemampuannya untuk mendorong pembentukan ROS yang mengakibatkan nekrosis sel β pankreas (Lenzen, 2008). 16
2.5. Kerangka Konsep Pemberian ekstrak etanol 70% teh putih (Camellia sinensis L.) dalam 3 konsentrasi. Kadar glukosa darah mencit (Mus musculus) yang diinduksi aloksan. Gambar 4.2 Kerangka Konsep 17
BAB 3 METODE PENELITIAN 3.1. Jenis Penelitian Penelitian ini merupakan penelitian true eksperimen yang menggunakan hewan coba yaitu mencit (Mus muculus) jantan galur BALC/B sebagai objek penelitiannya. Rancangan Penelitian yang digunakan adalah Pretest Posttest with Control group design, dimana pengukuran dilakukan sebelum dan sesudah diberi perlakuan. 3.2. Populasi dan Sampel Populasi pada penelitian ini adalah simplisia teh putih yang beredar di masyarakat. Sampel pada penelitian ini adalah simplisia teh putih yang diperoleh dari Pusat Penelitian Teh dan Kina Gamboeng Kabupaten Bandung yang akan diproses menjadi ekstrak. Besar sampel pada penelitian ini didapatkan berdasarkan perhitungan jumlah replikasi/ pengulangan yang dibutuhkan dalam satu kelompok eksperimen dengan rumus Ferderer, yaitu : (t-1)(n-1) > 15 ... (3.1) Dimana t adalah jumlah perlakuan (jumlah kelompok), sedangkan n adalah ulangan/replikasi (jumlah sampel tiap kelompok). Jumlah sampel ditentukan dengan perhitungan sebagai berikut : (t-1) (n-1) > 15 (6-1) (n-1) > 15 (5)(n - 1) > 15 (n-1) > 3 n > 4 18
Pada penelitian ini dibuat 6 kelompok perlakuan, berdasarkan perhitungan tersebut, maka didapatkan hasil perhitungan n > 4 yang artinya jumlah pengulangan per kelompok minimal 4 pengulangan. Sehingga dipilih jumlah pengulangan per kelompok adalah 5 (5 ekor mencit). 3.3. Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian dilakukan di Laboratorium Fitokimia Jurusan Farmasi Politeknik Kesehatan Bandung. Waktu pelaksanaan dilakukan pada bulan April hingga Mei 2016. 3.4. 3.4.1. Bahan Teh Putih Bahan dan Alat Pada penelitian ini digunakan simplisia teh putih yang diambil dari pucuk tanaman teh (Camellia sinensis L.) yang diperoleh dari Pusat Penelitian Teh dan Kina Gamboeng Kabupaten Bandung, adapun surat keterangannya tertera pada Lampiran 1. 3.4.2. Bahan Kimia dan Bahan Lain Tablet Glibenklamid Generik (PT. Indofarma), Alloxan Monohydrate (Sigma-Aldrich Company®), Aquadest, CMC Na (PT. Quadrant), Larutan CMC Na 2%, Larutan glukosa 20%, Alkohol 70%, Kapas, Pakan Mencit. Sebagian gambar bahan dan alat yang digunakan tertera pada Lampiran 2. 3.4.3. Alat Glukometer Kit (Easy Touch®), Tes Strip Glukosa Darah (Easy Touch®), Sonde Oral, Gelas Kimia 50 ml (IWAKI®), Batang Pengaduk, Neraca Analitik (OHAUS®), Dissposible Syringe with needle 1 cc (One Med®), Needle 26G (OneMed®), Mortir dan Stamper, Pipet Tetes, Gelas Ukur 10 ml & 100 ml (IWAKI®), Rotary Evaporator (IKA®). 3.4.4. Hewan Uji Hewan uji yang digunakan pada penelitian ini adalah mencit (Mus musculus) yang diberi makan pakan mencit ad libitum dan diperoleh dari kandang 19
hewan mencit milik Jurusan Farmasi Poltekkes Bandung, dengan kriteria sebagai berikut : a. Berjenis kelamin jantan b. Berasal dari satu galur BALC/B c. Berumur 2-3 bulan d. Berat badan ± 20 - 35 gram e. Berada dalam keadaan sehat dan normal 3.5. Prosedur Kerja dan Pengumpulan Data 3.5.1. Aklimatisasi Hewan Percobaan Sebelum mendapat perlakuan, semua mencit diadaptasikan terlebih dahulu selama 1 minggu untuk penyesuaian lingkungan, mengontrol kesehatan, berat badan serta menyeragamkan makanannya. Diberikan makan dan minum secara ad libitum. 3.5.2. Pembuatan Ekstrak Etanol 70% Teh Putih Sejumlah simplisia teh putih yang telah ditimbang digerus menggunakan mortir dan stamper hingga menjadi serbuk simplisia teh putih, selanjutnya serbuk simplisia ditimbang sebanyak 500 gram, lalu dimasukkan ke maserator dan ditambahkan etanol 70% hingga seluruh bagian serbuk simplisia terendam, didiamkan selama 6 jam pertama sambil sekali-sekali diaduk, kemudian diamkan selama 18 jam. Pisahkan maserat dengan cara pengendapan, pindahkan maserat ke wadah yang berbeda. Ulangi proses penyarian sekurang-kurangnya dua kali dengan jenis dan jumlah pelarut (etanol 70%) yang sama. Kumpulkan semua maserat, kemudian uapkan dengan menggunakan rotary evaporator sehingga didapat ekstrak dengan viskositas yang sesuai. Selanjutnya ekstrak digunakan untuk perlakuan percobaan. 20
3.5.3. Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol 70% Teh Putih a. Pemeriksaan Alkaloid Pemeriksaan dengan Pereaksi Dragendroff dan Wagner Ekstrak etanol 70% teh putih sebanyak 0,3 gram ditambah dengan 5 ml larutan HCl 2N, kemudian dibagi kedalam 3 tabung reaksi (A, B dan C). Tabung A digunakan sebagai blanko, tabung B ditambahkan 3 tetes pereaksi Dragendroff, dan tabung C ditambahkan 3 tetes pereaksi wagner. Jika terbentuk endapan jingga pada tabung B dan endapan hitam pada tabung C menunjukan adanya alkaloid (Jones & Kinghorn 2006). b. Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid (Liebermann-Burchard Test) Ekstrak etanol 70% teh putih sebanyak 0,5 gram ditambahkan dengan 2 ml Kloroform kemudian dimaserasi selama 2 jam, lalu disaring. Filtrat yang didapat ditambahkan 1 ml asam asetat anhidridat. Selanjutnya campuran ini ditetesi dengan 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung. Jika terbentuk warna hijau kebiruan menunjukan adanya steroid, bila cincin merah kecoklatan atau violet menunjukan adanya triterpenoid. c. Pemeriksaan Saponin Ekstrak etanol 70% teh putih sebanyak 0,3 gram ditambahkan dengan 10 ml aquadest, dikocok kuat-kuat selama kira-kira 30 detik. Larutan yang mengandung saponin akan terbuih stabil selama 15 menit atau lebih dengan tinggi buih 1-10 cm (Jones & Kinghorn 2006). d. Pemeriksaan Flavonoid Ekstrak etanol 70% teh putih sebanyak 0,3 gram diencerkan dengan etanol sebanyak 2 ml, kemudian ditambahkan serbuk magnesium, lalu ditambah 1 ml butanol, larutan tersebut kemudian ditetesi beberapa tetes larutan HCl pekat. Jika terbentuk larutan warna warna merah jingga menunjukkan adanya flavon, merah pucat menunjukkan adanya flavonol, merah tua menunjukkan adanya flavanon (Jones & Kinghorn 2006). 21
e. Pemeriksaan Polifenol dan Tanin (Ferric chloride Test) Ekstrak etanol 70% teh putih sebanyak 0,3 gram ditambahkan dengan 1 ml larutan Fe3+ 10 %. Jika terbentuk warna biru tua, biru kehtaman atau hitam kehijauan menunjukan adanya senyawa polfenol dan tanin (Jones & Kinghorn 2006). 3.5.4. Penentuan Dosis dan Pembuatan Larutan Uji a. Dosis Glibenklamid dan Pembuatan Suspensi Glibenklamid Dosis glibenklamid untuk manusia memiliki dosis awal sekali sehari 2,5-5 mg, bila perlu dinaikan setiap minggu sampai maksimal dua kali sehari 10 mg (Tan Hoan & Kirana, 2013). Untuk maintenance dose digunakan dosis 5 mg sekali sehari. Sedangkan, untuk konversi perhitungan dosis dari manusia (70 Kg) ke mencit (20g) adalah sebesar 0,0026 berasal dari Tabel Konversi Perhitungan Dosis (Laurence & Bacharach, 1964) yang dapat dilihat pada Lampiran 3. Jadi dosis glibenklamid untuk mencit adalah 0,013mg/20g BB mencit. Pembuatan suspensi glibenklamid dilakukan dengan langkah sebagai berikut : Sejumlah tablet glibenklamid digerus terlebih dahulu hingga menjadi serbuk menggunakan mortir dan stamper, Sejumlah CMC Na ditimbang menggunakan neraca analitik, Dimasukkan sebagian aquadest ke dalam mortir, sedikit demi sedikit CMC Na dimasukkan, dibasahi semua bagian CMC Na dengan aquadest yang tersedia. Setelah semua bagian CMC Na terbasahi, digerus hingga homogen, Dimasukkan sejumlah serbuk tablet glibenklamid yang telah ditimbang ke dalam mortir lalu digerus hingga homogen dan dimasukkan ke botol. 22
b. Dosis Ekstrak Etanol 70% Teh Putih dan Pembuatan Suspensi ekstrak etanol 70% Teh Putih Dari penelitian yang dilakukan Ramadan et al, 2009 pemberian ekstrak air Teh hijau pada dosis 100 mg/Kg BB selama 4 minggu berturut- turut dapat menurunkan kadar glukosa darah pada tikus Diabetes yang diinduksi aloksan. Dosis tersebut dijadikan sebagai acuan dosis terkecil yang diuji pada penelitian ini. Sehingga untuk dosis tikus (200 g) adalah 0,02 g / 200 g BB tikus. Kemudian dikonversi dari tikus (200 g) ke mencit (20 g) dengan dikali 0,14 (Laurence & Bacharach, 1964); sehingga dosis untuk satu ekor mencit adalah 0,0028 g / 20 g atau 2,8 mg/ 20g BB mencit (Dosis 1). Dalam penelitian ini dibuat 3 kosentrasi dosis ekstrak etanol 70% teh putih dengan range 1 : 3 : 5. Sehingga didapat 8,4 mg/ 20g BB mencit (Dosis 2) dan 14 mg/ 20g BB mencit (Dosis 3). Pembuatan Suspensi ekstrak etanol 70% teh putih dilakukan dengan langkah sebagai berikut : Ditimbang sejumlah CMC Na menggunakan neraca analitik, Dimasukkan sebagian aquadest ke dalam mortir, dimasukkan sedikit demi sedikit CMC Na, dibasahi semua bagian CMC Na dengan aquadest yang tersedia. Setelah semua bagian CMC Na terbasahi, digerus hingga homogen, Dimasukkan sedikit demi sedikit sejumlah ekstrak etanol 70% teh putih yang telah ditimbang ke dalam mortir lalu digerus hingga homogen. 3.5.5. Penginduksian Aloksan Untuk menginduksi keadaan Diabetes Mellitus pada hewan uji mencit menggunakan aloksan monohidrat dengan dosis 150mg/kg BB, yang diberikan melalui intraperitonial. Namun sebelum penyuntikan aloksan, mencit dipuasakan terlebih dahulu selama 18 jam (hanya disediakan air). Setelah 30 menit pemberian aloksan, mencit diberi larutan glukosa 20% (Fernandes & et al., 2007) untuk menghindari syok hipoglikemia. Pemberian makan dan minum pun dilakukan 23
24 setelah 30 menit pemberian aloksan (E.U., 2010). Glukosa darah mencit dievaluasi pada hari ke-2 dan ke-3 untuk mengetahui mencit mana yang telah terdiagnosis Diabetes Mellitus. Mencit dengan kadar gula darah diatas 200mg/dL yang terukur dengan Glukometer Kit Easy Touch adalah yang digunakan pada penelitian. 3.5.6. Pengujian Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol 70% Teh Putih 1. Disiapkan mencit yang akan dijadikan hewan uji 2. Mencit dikelompokan secara acak kedalam 6 kelompok, masing-masing terdiri dari 5 mencit, setiap mencit diberi tanda di ekornya menggunakan spidol/ marker permanen agar tidak tertukar. Ada pun pembagian kelompok sebagai berikut : Tabel 1.3. Pembagian Kelompok Hewan Uji Kelompok Kontrol Perlakuan Aquadest Induksi Aloksan 150 mg/kg BB - Normal Kontrol Larutan Na CMC 2% 0,5 ml/20g BB √ Diabetes Dosis 1 Suspensi ekstrak etanol 70% teh putih √ 0,14 ml/20g BB Dosis 2 Suspensi ekstrak etanol 70% teh putih √ 0,42 ml/20g BB Dosis 3 Suspensi ekstrak etanol 70% teh putih √ 0,7 ml/ 20g BB Kelompok Suspensi tablet glibenklamid √ Glibenklamid 0,13 ml/20g BB (Pembanding) Keterangan : (-) = tidak diinduksi aloksan, (√ ) = diinduksi aloksan
3. Pada hari ke 4 setelah penginduksian aloksan, dilakukan pengukuran kadar glukosa darah pada semua mencit untuk mengevaluasi keberhasilan metode induksi, pengukuran ini dijadikan pegukuran hari ke 0 (Pretest) 4. Setelah diketahui semua mencit (kecuali kontrol normal) positif terdiagnosis Diabetes Mellitus, hari berikutnya selama 14 hari, semua mencit diberikan perlakuan sesuai dengan kelompok perlakuannya 5. Pengambilan dan pengukuran kadar glukosa darah mencit dilakukan dengan langkah sebagai berikut : Pengambilan sampel darah mencit dilakukan pada hari ke 0 (Pretest), hari ke-7 dan hari ke-14, Sampel darah diambil dari bagian pangkal ekor, sebelumnya ekor dipijat terlebih, lalu dibasahi menggunakan kapas dengan sedikit alkohol 70% untuk melihat vena pada pangkal ekor kemudian pangkal ekor dilukai dengan needle ukuran 26G steril, Dikumpulkan sampel darah minimal 4 µL dan teteskan pada tes strip yang telah dipasang pada glukometer Easy Touch yang telah disiapkan, kemudian tunggu 10 detik, hasil yang tertera pada display glukometer dicatat. 6. Data ditulis sebagai mean ± SD. 7. Persentase penurunan kadar gula dalam darah dihitung dengan rumus: ... (3.2) 8. Data yang diperoleh dianalisis statistik untuk pengambilan hipotesis. % penurunan = × 100% 3.6. Analisis Data Data yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan program SPSS versi 20. Data tersebut dianalisis dengan uji Shapiro-Wilk untuk melihat distribusi data, lalu diuji dengan uji repeated ANOVA dan dilanjutkan dengan uji Post Hoc untuk melihat adakah perbedaan bermakna antara masing-masing kelompok dengan tingkat kepercayaan 95% (α = 0,05). 25
BAB 4 HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh pemberian ekstrak etanol 70% teh putih (Camellia sinensis L.) terhadap penurunan kadar glukosa darah mencit dengan metode penginduksian aloksan. Pemilihan tanaman dan jenis sediaan (ekstrak) berdasarkan pada penelitian yang dilakukan Ramadan et al, 2009 pemberian ekstrak air Teh hijau pada dosis 100 mg/Kg BB selama 4 minggu berturut-turut dapat menurunkan kadar glukosa darah pada tikus Diabetes yang diinduksi aloksan.. Pada penelitian ini bahan uji yang digunakan yakni simplisia teh putih yang berasal dari Pusat Penelitian Teh dan Kina Gamboeng dan diujikan pada hewan coba yaitu mencit jantan galur Swiss- webster yang diinduksi aloksan monohidrat. Berdasarkan penelitian Ramadan et al tersebut, maka dalam penelitian ini diambilah dosis ekstrak etanol 70% teh putih yang diberikan pada hewan coba yakni 100 mg/Kg BB dan dibuat 3 konsentrasi yang berbeda dengan range dosis 1 : 3 : 5 untuk melihat perbedaan pengaruh pemberian masing-masing dosis ekstrak etanol 70% teh putih terhadap penurunan kadar glukosa darah hewan coba, serta dapat ditentukan dosis mana yang menghasilkan persentase penurunan kadar glukosa darah paling besar terhadap hewan coba. Adapun perhitungan dosis ekstrak etanol 70% teh putih tertera pada Lampiran 7. Penelitian ini menggunakan rancangan penelitian Pretest Posttest with control group design, dimana pengukuran dilakukan sebelum dan sesudah diberi perlakuan sesuai dengan masing-masing kelompok. Adapun yang dimaksud dengan pretest (pengukuran hari ke 0) yakni pengukuran yang dilakukan pasca penginduksian aloksan, dimana hewan coba dinyatakan positif terdiagnosis Diabetes Mellitus atau glukosa darah yang terukur > 200 mg/dL kecuali untuk kelompok kontrol normal yang tidak diinduksi aloksan. Dalam penelitian ini, kontrol normal dibuat dengan tujuan agar dapat terlihat perbedaan kadar glukosa darah mencit yang terinduksi aloksan dengan kadar glukosa darah kelompok yang tidak diinduksi aloksan pada saat dilakukan evaluasi pada hari ke 3 dan 4 pasca 26
penginduksian untuk mengetahui mencit mana yang telah terdiagnosis Diabetes Mellitus. Kelompok obat pembanding dalam penelitian ini adalah glibenklamid, diperlukan untuk melihat pengaruh obat antidiabetes oral yang telah terbukti khasiatnya untuk menurunkan kadar glukosa darah dan karena dapat merangsang sekresi insulin pankreas. Dosis glibenklamid yang diberikan adalah 0,013mg/kg BB. Dosis tersebut berdasarkan dosis efektif oral pada manusia, yaitu 5 mg/hari yang kemudian dikonversi ke dosis mencit. Adapun perhitungan dosis glibenklamid tertera pada Lampiran 8. Pada tahap awal penelitian dilakukan aklimatisasi hewan percobaan, dengan tujuan semua mencit diadaptasikan terlebih dahulu selama 1 minggu untuk penyesuaian lingkungan, mengontrol kesehatan, berat badan serta menyeragamkan makanannya. Proses pemilihan hewan uji pun harus sesuai dengan kriteria untuk memperkecil variasi biologis, maka dilakukan pengendalian terhadap beberapa variabel pada saat pemilihan hewan coba. Pengendalian tersebut dilakukan dengan cara menggunakan hewan percobaan yang kurang lebih sama variasi biologisnya yaitu antara lain dipilih mencit berusia 2-3 bulan, dalam keadaan sehat dan normal serta bergerak aktif. Kesulitan dalam penelitian ini yaitu mendapatkan mencit dengan berat badan yang sesuai kriteria inklusi dikarenakan keterbatasan jumlah populasi mencit yang didapat peneliti dan keterbatasan waktu penelitian sehingga ada beberapa mencit yang belum sesuai dengan kriteria berat badan. Hewan percobaan yang digunakan pada penelitian ini adalah mencit putih jantan galur Swiss webster. Pemilihan jenis kelamin jantan lebih didasarkan pada pertimbangan bahwa kondisi hormonal pada jantan lebih stabil jika dibandingkan dengan mencit betina, karena pada mencit betina mengalami perubahan kondisi hormonal pada masa-masa tertentu. Mencit yang disiapkan sebanyak 36 ekor, namun yang digunakan saat penelitian sebanyak 30 ekor. Hal ini dimaksudkan agar pada saat penelitian tidak mengalami kekurangan hewan percobaan karena sakit atau mati pada proses aklimatisasi. Pada penelitian ini simplisia teh putih yang selanjutnya diolah menjadi ekstrak menggunakan metode maserasi, adapun alasan metode maserasi digunakan untuk menjaga senyawa metabolit sekunder yang tidak tahan panas 27
ekstrim agar tidak rusak, juga proses pengerjaan dan alat yang digunakan sederhana dan mudah diusahakan. Prinsip maserasi adalah ekstraksi dengan cara merendam serbuk simplisia dalam pelarut yang sesuai selama beberapa hari pada temperatur kamar. Pelarut akan masuk ke dalam sel tanaman melewati dinding sel, dimana isi sel akan tertarik karena perbedaan konsentrasi didalam sel dengan diluar sel, maka isi sel yang konsentrasinya tinggi akan terdesak keluar dan digantikan dengan pelarut dengan konsentrasi rendah (proses difusi). Proses tersebut akan berulang (remaserasi) sampai terjadi keseimbangan antara konsentrasi larutan didalam sel dengan diluar sel. Pelarut yang digunakan dalam proses maserasi ini adalah etanol 70%. Pemilihan tersebut berdasarkan sebagian besar senyawa metabolit dalam teh putih merupakan senyawa yang larut dalam pelarut polar, sehingga dipilih etanol 70% yang lebih polar dibandingkan etanol 96%. Hasil maserasi kemudian dipekatkan dengan rotary evaporator, dimana prinsip kerja dari alat ini berdasarkan pada penguapan pelarut karena adanya pemanasan (55-60ºC) dan penguapan pelarut ini dipercepat oleh putaran dari labu alas bulat dibantu dengan penurunan tekanan. Dengan bantuan pompa vakum, uap pelarut akan naik ke kondensor dan mengalami kondensasi menjadi molekul- molekul cairan pelarut yang ditampung pada labu alas bulat penampung (Ahyari, 2009). Hasil proses ekstraksi dari sebanyak 500 gram serbuk simplisia teh putih dimaserasi menggunakan etanol 70% dengan total volume maserat ± 6500 ml. Bobot ekstrak etanol 70% teh putih yang didapat setelah dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator adalah 85,853 gram dengan rendemen ekstrak yang diperoleh adalah 17,17%. Adapun alur pembuatan ekstrak etanol 70% teh putih tertera pada Lampiran 5. Dari hasil ekstraksi diperoleh ekstrak kental yang kemudian dilanjutkan dengan proses skrining fitokimia dari ekstrak etanol 70% teh putih yang di dapat, adapun tujuan dari skrining fitokimia ini untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder dalam ekstrak etanol 70% teh putih secara kualitatif. Skrining fitokimia dilakukan terhadap senyawa golongan alkaloid, steroid/triterpenoid, saponin, flavonoid, dan tanin/polifenol. Hasil uji skrining fitokimia dapat dilihat pada tabel 1.4. Dari hasil skrining diketahui bahwa ekstrak etanol 70% teh putih 28
mengandung alkaloid, triterpenoid, saponin, flavonoid, tanin dan polifenol. Adapun gambar dari hasil skrining fitokimia ekstrak etanol 70% teh putih yang telah dilakukan tertera pada Lampiran 6. Tabel 1.4. Hasil Skrining Fitokimia Golongan Senyawa Metode/Pereaksi Hasil Alkaloid Dragendroff dan Wagner + Steroid/Triterpenoid Liebermann-Burchard + Test Saponin Uji Buih + Flavonoid Smith and Metcalf + Tanin / Polifenol Ferric Chloride Test + Keterangan : (+) = memberikan reaksi positif Adapun pemberian ekstrak etanol 70% teh putih dan Glibenklamid yang diberikan ke hewan coba dalam sediaan suspensi dengan Na. CMC 2% sebagai zat pensuspensi karena ekstrak etanol 70% teh putih agak sukar larut dalam air dan glibenklamid diambil dari sediaan tablet generik glibenklamid yang memungkinkan adanya zat tambahan tablet yang agak sukar larut dalam air. Proses selanjutnya yaitu penginduksian hewan percobaan, pemilihan aloksan sebagai induktor diabetogen dibandingkan dengan zat diabetogenik lain seperti streptozotocin yaitu karena aloksan memiliki lebih dari satu efek patologis yang berbeda dalam mengganggu fungsi fisiologis pankreas. Pertama, mekanisme aloksan yaitu selektif menghambat sekresi insulin glukosa melalui penghambatan glukokinase, sensor glukosa dari sel beta yang menyebabkan keadaan insulin- dependent Diabetes Mellitus, dimana keadaan ini dapat menginduksi terbentuknya Reactive Oxygen Species (ROS) yang mengakibatkan nekrosis sel beta pankreas (Lenzen, 2008). Jenis Diabetes ini memiliki karakteristik yang serupa dengan Diabetes Mellitus tipe 1 pada manusia, sehingga menghasilkan kondisi Diabetes eksperimental (efek diabetogenik) pada hewan percobaan mengakibatkan hiperglikemia. Hal tersebut berhubungan dengan di beberapa penelitian ekstrak 29
teh putih yang dapat menunjukkan efek antidiabetes dengan mengurangi Oxidative Stress. Efek patologis kedua dari aloksan yaitu aloksan mempunyai karakter yang mirip dengan glukosa dalam hal hidrofilik sehingga aloksan tidak berpenetrasi melalui lipid bilayer dari membran plasma pankreas melainkan melalui protein pore sehingga aloksan dapat masuk ke dalam sel beta pankreas secara tidak terbatas dan aloksan pun akan terakumulasi dalam sel beta (Lenzen, 2008). Maka dari itu alasan dipilihnya aloksan selain mekanisme terbentuknya kondisi hiperglikemik lebih cepat, hasil induksi menggunakan aloksan pun didapatkan kadar glukosa darah yang lebih tinggi dibandingkan dengan diinduksi menggunakan Streptozotocin. Dosis aloksan yang diberikan pada penelitian ini adalah 150 mg/Kg BB, dosis tersebut dipilih, karena diharapkan sel-sel beta pankreas masih dapat berproduksi. Pada prosedur menginduksian secara intraperitoneal, aloksan monohidrat dilarutkan di larutan dingin (suhu 2-8ºC) NaCl 0,9% (Lenzen, 2008) dan dan penyimpanannya tetap dijaga pada suhu dingin (2-8ºC) baik yang dalam keadaan masih serbuk maupun sudah dalam keadaan terlarut. Maka dari ini proses penginduksian dengan aloksan ini harus selalu tersedia ice box yang berisi batu es sebagai tempat menyimpan aloksan, sehingga dalam setiap kegiatan yang menyangkut aloksan seperti proses menimbang aloksan yang akan dilarutkan, proses melarutkan aloksan dan hingga memasukan larutan aloksan ke dalam syiringe, ice box selalu digunakan agar terjaga suhunya pada suhu dingin dan harus dilakukan dengan cepat dan tepat . Begitu pula setelah aloksan terlarut harus segera disuntikan karena aloksan memiliki waktu paruh 1,5 menit pada pH minimal 7,4 dan suhu 37ºC, jika tidak cepat aloksan akan terdekomposisi menjadi alloxanic acid yang tidak lagi bertindak sebagai zat diabetogenik (Lenzen, 2008). Kadar glukosa darah pretest (Hari ke 0) mencit diukur untuk mengetahui mana mencit yang telah positif dan belum positif terdiagnosis Diabetes Mellitus (kadar glukosa darah > 200 mg/dL) pada hari ke 3 dan ke 4 setelah penginduksian aloksan. Pengukuran pretest dilakukan pada hari ke 3 dan hari ke 4 setelah menginduksian aloksan dikarenakan menurut diagram skematik respon glukosa darah metode induksi aloksan (Gambar 1.4), fase hiperglikemik diabetik 30
permanen dari penginduksian aloksan ini, didapatkan pada 12 sampai 48 jam setelah penginduksian aloksan (Lenzen, 2008), namun berbeda responnya pada masing-masing individu, untuk mendapatkan hasil yang maksimal maka dipilih hari ke 3 dan ke 4 setelah induksi aloksan. Gambar 1.4. Diagram skematik respon glukosa darah metode induksi aloksan (Lenzen, 2008) Pada penelitian ini proses pengumpulan data salah satunya didapatkan dari data pengukuran kadar sampel glukosa darah mencit. Proses pengambilan sampel darah mencit diambil dari bagian ekor yang dilukai dengan needle 26 G, mencit terlebih dahulu dimasukan ke dalam animal restrained, lalu agar mempermudah visualisasi dari vena ekor mencit, bagian ekor yang akan dijadikan tempat pengambilan sampel darah diusap menggunakan kapas yang dibasahi alkohol 70%. Setelah itu dipastikan darah yang terkumpul sudah lebih dari 4 µL (batas minimum sampel terdeteksi), lalu ditempelkan test strip glukosa yang telah dipasangkan ke glukometer, biarkan beberapa saat hingga darah terserap ke test strip, lalu glukometer akan mengukur kadar sampel glukosa darah mencit yang dan hasil kadarnya akan muncul pada display glukometer dalam waktu 10 detik. Prinsip kerja pengukuran kadar glukosa darah menggunakan glukometer yaitu glukosa dalam sampel darah akan bereaksi dengan glukosa oksidase dan kalium ferisianida yang ada dalam test strip glukosa dan dihasilkan kalium ferosianid. Kalium ferosianida yang dihasilkan sebanding dengan konsentrasi glukosa darah yang ada di dalam sampel darah. adapun skema kerja pengujian pengaruh 31
pemberian ekstrak etanol 70% teh putih terhadap kadar glukosa darah mencit yang diinduksi aloksan tertera pada Lampiran 9. Penilaian pengaruh pemberian ekstrak etanol 70% teh putih (Camellia sinensis L.) dilakukan berdasarkan kemampuan ekstrak etanol 70% teh putih menurunkan kadar glukosa darah mencit yang diinduksi aloksan monohidrat yang ditunjukan dengan adanya perbedaan jumlah penurunan kadar glukosa darah bila dibandingkan dengan kelompok kontrol diabetes pada pengukuran di hari ke 7 dan 14, selain itu dihitung pula persentase penurunan kadar glukosa darah kelompok dosis 1, dosis 2, dosis 3 dan kelompok pembanding (glibenklamid). Pada tabel 2.4. memperlihatkan nilai rata-rata dari kontrol, kelompok eksperimen dosis 1,2, 3 dan kelompok pembanding (Glibenklamid). Tabel 2.4. Nilai Rerata dan Standar Deviasi Kadar Glukosa Darah Mencit Waktu Pengukuran Hari ke 0 (Pretest) Hari ke 7 Hari ke 14 Kontrol Normal 104± 11,22 69,5± 7,55 73,75± 8,18 Kadar glukosa darah rata-rata (mg/dL) ± SD Kontrol Diabetes 306± 80,251 258,5± 74,90 227,25± 71,21 Dosis 1 Dosis 541± 53,72 451,75± 50,23 414,5± 46,72 2 541± 53,72 383± 80,59 276,5± 79,37 Dosis 3 449,5± 52,08 271± 34,51 176,75± 42,62 Kelompok Glibenklamid 482,25± 56,58 284± 70,52 191± 76,80 Tabel diatas menunjukan nilai rata-rata dari kelompok kontrol normal, kontrol diabetes, kelompok dosis 1, dosis 2, dosis 3 dan kelompok glibenklamid pada waktu pengukuran hari ke 0 (pretest), hari ke 7 dan hari ke 14 yang disajikan dalam data rata-rata (mean) ± Standar deviasi (SD). 32
Grafik Rata-rata Penurunan Kadar Glukosa Darah ) L d / g m ( h a r a D a s o k u G r a d a K l 600 500 400 300 200 100 0 Hari ke 0 Hari ke 7 Hari ke 14 Kontrol Normal Kontrol Diabetes Dosis 1 (2,8mg/20g BB) Dosis 2 (8,4mg/20g BB) Dosis 3 (14mg/20g BB) Glibenklamid (0,013mg/20g BB) Waktu Pengukuran Gambar 2.4. Grafik Rata-Rata Penurunan Kadar Glukosa Darah Mencit Grafik diatas menunjukan rata-rata penurunan kadar glukosa darah pada masing-masing kelompok dari pengukuran hari ke 0, kemudian hari ke 7 dan hari ke 14. Pada gambar 2.4 terlihat bahwa pengukuran kadar glukosa darah pada hari ke 0 (pretest) menunjukan semua hewan coba terdiagnosis positif Diabetes Mellitus (kadar glukosa darah > 200mg/dL) di semua kelompok kecuali kelompok kontrol normal. Hal ini membuktikan penginduksian aloksan 150 mg/Kg BB berhasil menginduksi hewan mencit menjadi hiperglikemia. Dari grafik tersebut, terlihat kelompok kontrol diabetes, kelompok dosis 1, dosis 2, dosis 3 dan kelompok glibenklamid pada pengukuran glukosa darah hari ke 7 dan 14 mengalami penurunan kadar glukosa darah. Pada grafik tersebut menunjukan penurunan kadar glukosa darah dari kelompok glibenklamid dengan kelompok dosis 3 yang grafik penurunannya terlihat berhimpit dan hampir menunjukan penurunan kadar glukosa darah yang sama besar, lalu penurunan kadar glukosa darah pun dialami oleh kelompok dosis 2 yang penurunannya lebih besar dari kelompok dosis 1 dan kelompok kontrol diabetes yang ternyata mengalami penurunan kadar glukosa darah pula, namun menjadi yang paling kecil dibandingkan dengan kelompok lain. Dari hasil rata-rata penurunan kadar glukosa darah pada hari ke 7 dan 14, dapat terlihat bahwa kelompok uji yang diberikan ekstrak etanol 70% teh putih dosis 1, 2 dan 3 mengalami penurunan kadar glukosa darah jika dibandingkan dengan kontrol diabetes. Selain diketahui rata-rata 33
penurunan kadar glukosa darah mencit perkelompok perlakuan, dihitung pula persentase penurunan kadar glukosa darah mencit disetiap kelompok pada pengukuran hari ke 7 dan hari ke 14. Tabel 3.4. Persentase Penurunan Kadar Glukosa Darah Kelompok perlakuan Waku pengukuran (Hari) Hari ke 7 Hari ke 14 Kontrol Diabetes 15,52% 25,73% Dosis 1 16,50% 23,38% Dosis 2 36,60% 48,90% Dosis 3 39,71% 60,68% Kelompok Glibenklamid 41,10% 60,39% Pada tabel 3.4. memperlihatkan persentase penurunan kadar glukosa darah dari kelompok kontrol normal, kontrol diabetes, kelompok dosis 1, dosis 2, dosis 3 dan kelompok glibenklamid pada pengukuran hari ke 7 dan hari ke 14. Dari tabel tersebut, persentase penurunan kadar glukosa yang paling besar pada pengukuran glukosa darah hari ke 3 dan hari ke 7 adalah kelompok pembanding, dimana masing-masing persentasenya 19,54% dan 41,10%, sementara pada pengukuran glukosa darah hari ke 14, persentase penurunan yang terbesar terjadi pada kelompok dosis 3 yaitu sebesar 60,68% sedangkan kelompok pembandingnya (Glibenklamid) 60,39%. Dalam hal tersebut ada beberapa faktor salah satunya pengaruh stress sebagai akibat dari pengobatan pada hewan uji kelompok Glibenklamid atau dapat pula dipengaruhi dari suspensi tablet Glibenklamid yang diberikan kualitasnya sudah tidak bagus karena faktor stabilitas. Dalam penelitian ini berat badan mencit merupakan salah satu faktor yang diamati, seperti yang kita ketahui salah satu ciri-ciri penderita Diabetes Mellitus tipe 1 yang dalam penelitian ini yaitu mencit yang diinduksi aloksan yaitu penurunan berat badan. Selain itu teh dikenal dimasyarakat sebagai produk minuman pelangsing, sehingga tujuan dari berat badan mencit juga ikut diamati 34
yakni untuk melihat pengaruh pemberian ekstrak etanol 70% teh putih terhadap berat badan mencit yang terdiagnosis Diabetes Mellitus dengan metode induksi aloksan. ) m a r g ( t i c n e M n a d a B t a r e B 35 30 25 20 15 10 5 0 Kelompok Kontrol Normal 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Hari ke- Mencit 1 Mencit 2 Mencit 3 Mencit 4 Mencit 5 Gambar 3.4. Grafik Barat Badan Mencit kelompok Kontrol Normal Grafik diatas menunjukan berat badan semua mencit pada kelompok kontrol normal selama penelitian dengan pemberian perlakuan aquadest 0,5 ml/ kg BB mencit dan tanpa diinduksi aloksan. ) m a r g ( t i c n e M n a d a B t a r e B 35 30 25 20 15 10 5 0 Kelompok Kontrol Diabetes 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Hari ke- Mencit 1 Mencit 2 Mencit 3 Mencit 4 Mencit 5 Gambar 4.4. Grafik Barat Badan Mencit kelompok Kontrol Diabetes Grafik diatas menunjukan berat badan semua mencit pada kelompok kontrol diabetes selama penelitian dengan pemberian perlakuan Lar. Na CMC 2% 0,5 ml/ 20 g BB mencit dan diberi induksi aloksan 150 mg/ kg BB mencit 35
) m a r g ( t i c n e M n a d a B t a r a B 30 25 20 15 10 5 0 Kelompok Dosis 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Hari ke- Mencit 1 Mencit 2 Mencit 3 Mencit 4 Mencit 5 Gambar 5.4. Grafik Barat Badan Mencit Kelompok Dosis 1 Grafik diatas menunjukan berat badan semua mencit pada kelompok eksperimen dosis 1 selama penelitian dengan pemberian perlakuan suspensi ekstrak etanol 70% teh putih 0,14 ml/20g BB mencit dan diberi induksi aloksan 150 mg/ kg BB mencit. ) m a r g ( t i c n e M n a d a B t a r e B 25 20 15 10 5 0 Kelompok Dosis 2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Hari ke- Mencit 1 Mencit 2 Mencit 3 Mencit 4 Mencit 5 Gambar 6.4. Grafik Barat Badan Mencit Kelompok Dosis 2 Grafik diatas menunjukan berat badan semua mencit pada kelompok eksperimen dosis 2 selama penelitian dengan pemberian perlakuan suspensi ekstrak etanol 70% teh putih 0,42 ml/20g BB mencit dan diberi induksi aloksan 150 mg/ kg BB mencit. 36
) m a r g ( t i c n e M n a d a B t a r e B 30 25 20 15 10 5 0 Kelompok Dosis 3 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Hari ke- Mencit 1 Mencit 2 Mencit 3 Mencit 4 Mencit 5 Gambar 7.4. Grafik Barat Badan Mencit Kelompok Dosis 3 Grafik diatas menunjukan berat badan semua mencit pada kelompok eksperimen dosis 3 selama penelitian dengan pemberian perlakuan suspensi ekstrak etanol 70% teh putih 0,7 ml/20g BB mencit dan diberi induksi aloksan 150 mg/ kg BB mencit. Kelompok Glibenklamid ) m a r g ( t i c n e M n a d a B 40 30 20 10 Mencit 1 Mencit 2 Mencit 3 Mencit 4 t a r e B 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Hari ke- Mencit 5 Gambar 8.4. Grafik Barat Badan Mencit Kelompok Glibenklamid Grafik diatas menunjukan berat badan semua mencit pada kelompok pembanding (glibenklamid) selama penelitian dengan pemberian perlakuan suspensi glibenklamid 0,2 ml/20g BB mencit dan diberi induksi aloksan 150 mg/ kg BB mencit. Dari grafik pengamatan berat badan mencit selama penelitian yang ditunjukan pada Gambar 3.4 sampai Gambar 8.4 menunjukan bahwa berat badan 37
mencit kelompok kontrol diabetes, dosis 1, dosis 2, dosis 3 dan kelompok glibenklamid tidak mengalami penaikan maupun penurunan berat badan selama 14 hari perlakuan dalam penelitian jika dibandingkan dengan kelompok kontrol normal yang terlihat adanya penaikan berat badan, sedangkan semua kelompok selalu diberi makan dan minum ad libitum. Dengan demikian, pemberian ekstrak etanol 70% teh putih pada mencit, dapat berefek menjaga berat badan mencit tanpa penurunan dan penaikan yang signifikan. Adapun data pengamatan berat badan mencit selama penelitian tertera pada Lampiran 10. Hasil pengukuran kadar glukosa darah dianalisis secara statistik menggunakan program SPSS versi 20. Adapun data pengukuran kadar glukosa darah mencit tertera pada Lampiran 11. Uji awal yang dilakukan yakni uji normalitas data dengan menggunakan uji Shapiro-Wilk karena jumlah sampel < 50. Dari tabel uji normalitas didapatkan distribusi data semua kelompok hewan percobaan terdistribusi normal (p>0,05). Distribusi data yang normal merupakan salah satu syarat yang diperlukan untuk melanjutkan uji statistik selanjutnya yakni uji Repeated ANOVA untuk melihat perbedaan yang bermakna dari masing- masing kelompok dan didapatkan angka yang signifikan dalam mempengaruhi kadar glukosa darah pada mencit yang Diabetes Mellitus dengan kepercayaan 95% (α = 0,05) karena penelitian yang akan dilakukan berhubungan dengan keselamatan manusia sehingga diperlukan signifikansi yang lebih ketat. Adapun hasil uji normalitas data Shapiro-Wilk tertera pada Lampiran 12. Proses analisis data dalam penelitian ini tidak dilakukan analisis homogenitas data dikarenakan syarat uji Repeated ANOVA, data hanya harus terdistribusi normal dan merupakan jenis data berpasangan, tidak harus merupakan data yang homogen karena data-data tersebut merupakan data berpasangan. Dari Hasil Uji Repeated ANOVA menunjukan bahwa Nilai signifikansi < 0,05 pada Multivariate Tests dan Pairwise Comparisons maka Ho diterima, "Data penurunan kadar glukosa darah Mencit berbeda secara bermakna" dan berdasarkan perbandingan pengukuran pertama dengan kedua, kedua dengan ketiga dan pertama dengan ketiga pada Pairwise Comparisons menunjukan "Perbedaan didapatkan pada semua pengukuran". Adapun hasil uji Repeated 38 taraf
ANOVA tertera pada Lampiran 13. Setelah dianalisis dengan Repeated ANOVA, dilanjutkan dengan uji Post Hoc untuk melihat kelompok mana yang memiliki kadar glukosa darah berbeda secara bermakna. Dan hasil dari uji LSD (Post Hoc) menunjukan bahwa kelompok kontrol normal memiliki perbedaan secara bermakna pada semua kelompok di masing-masing waktu pengukuran (nilai signifikansi < 0,05) . Perbedaan dari waktu pengukuran hari ke 7 dan hari ke 14 terlihat dari dosis 1 yang memiliki perbedaan bermakna pada semua kelompok kecuali kelompok kontrol diabetes (nilai signifikansi < 0,05) yang artinya penurunan kadar glukosa darah kelompok dosis 1 berbeda secara bermakna dari kelompok yang lain (dosis 2, dosis 3 dan kelompok glibenklamid) sebagai dosis dengan penurunan kadar glukosa darahnya terkecil. Perbedaan pun terlihat pada kelompok dosis 2 pada hari ke 14, dimana yang semula kelompok dosis 2 tidak berbeda bermakna dari kelompok 1, pada hari ke 14 menjadi berbeda secara bermakna dari kelompok dosis 1 (nilai signifikansi < 0,05). Adapun hasil uji Post Hoc tertera pada Lampiran 14. Dari seluruh data diatas memperlihatkan bahwa pemberian ekstrak etanol 70% teh putih (Camelia sinensis L.) memberikan pengaruh terhadap penurunan kadar glukosa darah mencit yang diinduksi aloksan. Beberapa penelitian sebelumnya menunjukan bahwa kandungan EGCG dan kandungan katekin lainnya membantu mencegah hiperglikemia dengan meningkatkan aktivitas insulin dan mencegah kerusakan sel beta pankreas (Anderson dan Polansky, 2002). Mekanisme potensi antidiabetes lainnya, menunjukan bahwa kandungan polifenol dalam teh tidak meningkatkan sekresi insulin tetapi menurunkan resistensi insulin dan meningkatkan sensitivitas insulin (Islam, 2011). Dari hasil penelitian menunjukan ekstrak etanol 70% teh putih yang memiliki efek penurunan kadar glukosa darah terbesar hingga terkecil berturut - turut yaitu dosis 3 (14 mg/ 20g BB mencit), kemudian dosis 2 (8,4 mg/ 20g BB mencit) dan dosis 1 (2,8 mg/ 20g BB mencit). Diharapkan penelitian ini dapat digunakan sebagai acuan pengembangan obat dari bahan alam ekstrak teh putih, maupun dapat dikonsumsi langsung dari simplisia teh putihnya yang belakangan ini sudah banyak beredar di masyarakat. Dosis 1, 2 dan 3 ekstrak etanol 70% teh putih pada 39
penelitian ini dengan rendemen ekstrak sebesar 17,17% jika dikonversikan kedalam bobot simplisia dan dihitung dosis untuk manusia dengan mengkonversi dosis mencit ke manusia yaitu dikalikan 387,9 (Laurence & Bacharach, 1964). Sehingga bobot simplisia yang telah dikonversi dan dapat dikonsumsi untuk menurunkan kadar glukosa darah sesuai dengan dosis 1, 2 dan 3 pada penelitian ini secara berturut-turut adalah 6,323 gram, 18,968 gram dan 31,614 gram . 40
BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN 5.1. Kesimpulan Dari hasil penelitian yang telah dilakukan dapat diambil kesimpulan bahwa pemberian ekstrak etanol 70% teh putih (Camellia sinensis L.) dengan dosis 2,8 mg/20g BB, 8,4 mg/20g BB, dan 14 mg/20g BB dapat menurunkan kadar glukosa darah mencit yang telah diinduksi aloksan. 5.2. Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dalam menguji efek antihiperglikemik dari sediaan isolasi ekstrak teh putih (Camellia sinensis L.) dan efek lainnya dari ekstrak etanol 70% teh putih (Camellia sinensis L.) terhadap hewan coba. Diharapkan kedepannya digunakan kriteria inklusi yang sesuai sehingga mendapatkan hasil yang lebih baik. 41
DAFTAR PUSTAKA American Diabetes Association 2012. Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus. Diabetes Care, page 35. American Diabetes Association. 2015. Standar of Medical Care In Diabetes, Diabetes Care, 38(January 2015), page 1-94. American Diabetes Association. 2013. Standards of Medical Care in Diabetes, Diabetes Care, 36(October 2012). Anderson, R A. And M.M Polonsky. 2002. Tea enhances insulin activity. J.Agric. Food Chem. 50: 7182-7186. Anistyani, D., 2008. Uji Aktivitas Hipoglikemik Ekstrak Etanol Daun Teh (Camellia sinensis L .) pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar, hal.108-113. Badan Pengawasan Obat dam Makanan RI. 2010. Antidiabetika oral. infoPOM, edisi XI. BALITTRI. Data komoditas Teh / Tanaman Teh. Diakses pada januari, 2016. tanaman-teh BPOM RI. 2012. Acuan Sediaan Herbal vol.VII. edisi 1. Jakarta: Badan Pengawas Obat dan Makanan RI. Departemen Kesehatan RI. 2008. Farmakope Herbal Indonesia. edisi 1. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Departemen Kesehatan RI. 2014. Infodatin-Diabetes. Jakarta. Departemen Kesehatan RI. 2005. Pharmaceutical care untuk Penyakit Diabetes Mellitus. Jakarta. Dept. Farmakologi dan Terapeutik FKUI, 2007. Farmakologi dan Terapi V. edisi 5. Jakarta: Balai Penerbit FKUI. Dias, T.R. et al., 2013. White tea (Camellia sinensis (L.)): Antioxidant Properties and Beneficial Health Effects. International Journal of Food Science, Nutrition and Dietetics, page.19-26. E.U. 2010. Animals Models for Studying Diabetes Mellitus. Agriculture and Biology Journal of North America. 42
Goeswin, A. 2007. Teknologi Bahan Alam. edisi 1. Bandung: Penerbit ITB. Hilal, Y. & Engelhardt, U. 2007. Characterisation of White tea - Comparison to Green and Black Tea. Journal of Consumer Protection and Food Safety. page.414-421. Hsu. Y.-H. & et al. 2002. Different Strains of Hypertensive Rats. Chinese Medical Journal, 65(February 2002). Islam, S. 2011. Phytomedicine Effects of the Aqueous Extract of White Tea (Camellia sinensis L.) in a Streptozotocin-Induced Diabetes Model of Rats. European Journal of Integrative Medicine, 19(1), page.25-31. Jones, W.P. & Kinghorn, A.D .2006. Extraction of Plant Secondary Metabolites. Natural Product Isolation. New Jersey: Humana Press, page. 323-352. Koutelidakis, A.E., Serafini, M. & Proestos, C., 2015. Green tea , white tea , and Pelargonium purpureum increase the antioxidant capacity of plasma and some organs in mice. Nutrition Journal (Basic Nutritional Investigation), (APRIL 2009). Laurence,D.R., and A.L., Bacharach. 1964. Evaluation of Drug Activities: Pharmacometrics. Academic Press. London. Lenzen, S., 2008. The Mechanisms of Alloxan and Streptozotocin-Induced Diabetes. page.216-226. Medeiros, Y.S. 2008. Animal Models to Test Drugs with Potential Antidiabetic Activity. 115, page.173-183. Miura, T. & Koike, T. 2005. Antidiabetic Activity of Green Tea ( Thea sinensis L.) in Genetically Type 2. 51(6), page.708-710. Namita, P., Mukesh, R. & Vijay, K.J. 2012. Camellia Sinensis ( Green Tea ): A Review. 6(2), page.52-59. PERKENI. 2011. Konsensus Pencegahan dan Pengendalian Penyakit Diabetes Mellitus Tipe 2. hal.1-3 Ramadan, G., et al. 2009. Modulatory effect of black tea vs green tea aquous extract on hyperglicemia, hyperlipidemia and liver dysfunction in diabetic and obese rat models. British Journal of Nutrition. 102, 1611-1619. Somantri, R. dan T.K. 2011. Kisah dan Khasiat Teh, Jakarta: Gramedia Pustaka Utama. 43
Soraya, N. 2007. Sehat & Cantik berkat Teh Hijau, Jakarta: Penebar Plus. Sulkani, 2013. Artikel Tanaman Kemukus, Teh dan Kopi. Diakess pada Januari, 2016. teh-kopi-.html. Tjay, T.H.& K.R. 2013. Obat-obat Penting. edisi 6. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo. Towaha, J. (29 November 2012). Mengenal 4 Macam Jenis Teh. Puslitbang Diakses pada Desember, 2015. Pertanian. Kementerian Pertanian RI. World Health Organization. 2010. Global Status Report on Noncommunicable Diseases. Italy. 44
Lampiran 1 Surat Keterangan Simplisia Teh Putih 45
Lampiran 2 Bahan dan Alat yang digunakan dalam Penelitian Simplisia Teh Putih (Camellia sinensis L.) Aloksan Monohidrat Suspensi Glibenklamid, Larutan Na. CMC 2%, Larutan Glukosa 20% Suspensi Ekstrak Etanol Teh Putih Kandang dan Tempat Minum Mencit Pakan Mencit 46
(Lanjutan) Lampiran 2 Bahan dan Alat yang digunakan dalam Penelitian Alkohol 70% Kapas Glukometer Easy Touch® Test Strip Glukosa Easy Touch® Sonde Oral with Syringe Dissposable syringe 1 cc with needle Needle OneMed® 26 G Neraca Analitik Rotary Evaporator IKA® Gelas Ukur 10ml, Beaker glass 50ml Pipet tetes, Batang Pengaduk Mortir dan Stemper 47
Lampiran 3 Tabel Perhitungan Konversi Dosis Tabel Perhitungan Konversi Dosis (Laurence & Bacharach, 1964) 48
Lampiran 4 Proses Kegiatan Penelitian Proses Penimbangan Mencit Proses Pembuatan Ekstrak Proses Pengambilan Sampel Darah Proses Penginduksian Aloksan Proses Pemberian Larutan Uji secara oral Proses Pengukuran Sampel Darah 49
Lampiran 5 Alur Proses Pembuatan Ekstrak Etanol 70% Teh Putih Sejumlah Simplisia Teh Putih dihaluskan dengan mortir dan Stemper hingga menjadi serbuk 500 gram serbuk simplisia Teh Putih ditimbang dan dimasukan ke dalam Bejana Maserator Ditambahkan Pelarut (Etanol 70%) hingga seluruh serbuk terendam Didiamkan 6 jam awal, sesekali diaduk. Didiamkan selama 18 jam Disaring, dan dipisahkan filtrat ke wadah lain. Maserat ditambahkan pelarut hingga semua maserat terendam Proses penyarian diulangi sekurang-kurangnya dua kali dengan jumlah & jenis pelarut yang sama Filtrat dikumpulkan lalu dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator Ekstrak Kental 50
Lampiran 6 Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol 70% Teh Putih Hasil Uji Alkaloid (+) dengan Pereaksi Wagner Hasil Steroid/Triterpenoid (+) dengan Pereaksi Liebermann-Burchard Hasil Uji Saponin dengan Uji buih Hasil Uji Flavonoid dengan Pereaksi Smith dan Metcalf Hasil Uji Tanin/Fenol (+) dengan Metode Uji Ferric Chloride 51
Lampiran 7 Perhitungan Dosis Ekstrak Etanol 70% Teh Putih a. Perhitugan Dosis Ekstrak Etanol Teh Putih o Dosis 100 mg/ kg BB Tikus dijadikan sebagai acuan Dosis 1 Dosis 1 Sehingga untuk dosis tikus (200 g) : (100÷1000) × 0,2 = 0,02 g / 200 g BB tikus Konversi dosis tikus (200 g) ke dosis mencit (20 g) dikali 0,14 Sehingga Dosis 1 untuk mencit : 0,02 g × 0,14 = 0,0028 g / 20 g atau 2,8 mg/ 20 g BB mencit Dalam penelitian dibuat range dosis 1 : 3 : 5 o Dosis 2 Sehingga untuk dosis tikus (200 g) : (300÷1000) × 0,2 = 0,6 g / 200 g BB tikus Konversi dosis tikus (200 g) ke dosis mencit (20 g) dikali 0,14 Sehingga Dosis 1 untuk mencit : 0,6 g × 0,14 = 0,0084 g / 20 g atau 8,4 mg/ 20 g BB mencit o Dosis 3 Sehingga untuk dosis tikus (200 g) : (500÷1000)× 0,2 = 0,1 g / 200 g BB tikus Konversi dosis tikus (200 g) ke dosis mencit (20 g) dikali 0,14 Sehingga Dosis 1 untuk mencit : 0,1 g × 0,14 = 0,014 g / 20 g atau 14 mg/ 20 g BB mencit b. Pembuatan Larutan Uji Suspensi Ekstrak Etanol Teh Putih Konsentrasi Sediaan yang akan dibuat : 20 mg/ml Dosis 1 (2,8 mg/ 20 g BB) 2,8mg / 20mg x 1 ml = 0,14 ml/20 g BB Dosis 2 (8,4 mg/ 20 g BB) 8,4mg / 20mg x 1 ml = 0,42 ml/20 g BB Dosis 3 (14 mg/ 20 g BB) 14 mg / 20 mg x 1 ml = 0,7 ml/ 20 g BB Dibuat Larutan Stok selama penelitian 150 ml Sehingga Ekstrak yang ditimbang = 20 mg x 150 ml = 3000 mg/ 3 g Selanjutnya ekstrak dibuat suspensi dengan Na CMC 2% sebagai suspending agent 52
Lampiran 8 Perhitungan Dosis Glibenklamid a. Perhitungan Dosis Glibenklamid Dosis Glibenklamid pada manusia 5 mg sekali dalam sehari Konversi dari dosis manusia (70 kg) ke dosis mencit (20 g) dikali dengan faktor konversi 0,0026 Sehingga, Dosis glibenklamid untuk mencit : 0,0026 x 5mg = 0,013mg/20g BB mencit b. Perbuatan Larutan Sediaan Suspensi Glibenklamid Konsentrasi sediaan yang akan dibuat : 0,1 mg/ ml Glibenklamid (0,013mg/20gBB)= 0,013mg/0,1mgx 1ml = 0,13ml/20gBB Dibuat Larutan Stok selama penelitian 25 ml Sehingga glibenklamid yang ditimbang = 0,1mg x 25 ml = 2,5 mg Sediaan dibuat dari tablet glibenklamid 5mg dengan bobot tablet 200 mg, sehingga bobot tablet yang ditimbang = 2,5mg/5mg x 200mg = 100 mg Selanjutnya tablet yang sudah diserbukan dibuat suspensi dengan Na CMC 2% sebagai suspending agent 53
Lampiran 9 Skema Kerja Pengujian Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol 70% Teh Putih terhadap Mencit yang diinduksi Aloksan Hewan Uji Mencit yang memenuhi kriteria Dipuasakan 18 jam sebelum perlakuan Hewan Uji diberikan induksi aloksan Kadar glukosa dalam darah mencit diamati pada hari ke-3 & ke-4 Mencit dengan kadar Glukosa darah mencit diatas 200 mg/dL adalah yang digunakan dalam penelitian dan diberi perlakuan sesuai masing-masing kelompok selama 14 hari Kelompok Kontrol Normal Kontrol Diabetes Dosis 1 Dosis 2 Dosis 3 Kelompok Glibenklamid (Pembanding) Perlakuan Aquadest Larutan Na CMC 2% 0,5 ml/20g BB Suspensi ekstrak etanol Teh Putih 0,28 ml/20g BB Suspensi ekstrak etanol Teh Putih 0,42 ml/20g BB Suspensi ekstrak etanol Teh Putih 0,5 ml/ 20g BB Suspensi tablet glibenklamid 0,2 ml/20g BB Induksi Aloksan 150 mg/kg BB - √ √ √ √ √ Pengambilan sampel kadar glukosa dalam darah pada hari ke-7 dan ke-14 Analisis Data Kesimpulan 54
Lampiran 10 Data Pengamatan Berat Badan Mencit Selama Penelitian (dalam satuan gram) 55
Lampiran 11 Data Pengukuran Kadar Glukosa Darah Mencit l o r t n o K l o r t n o K 1 s i s o D 2 s i s o D 3 s i s o D d i m a k n e b l a m r o N s e t e b a i D Mencit ke- 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 Hari ke 0 Pretest (mg/dL) 97 106 94 119 99 427 267 262 271 580 551 566 584 463 437 537 597 417 588 271 504 408 484 402 597 412 461 524 532 438 Hari ke 7 (mg/dL) 64 76 62 76 79 367 218 201 248 547 463 488 478 378 367 362 461 278 427 125 317 246 278 243 417 212 235 342 347 251 Hari ke 14 (mg/dL) 66 74 70 85 94 333 187 183 206 508 433 424 454 347 304 285 384 202 235 61 235 136 179 157 347 131 119 247 267 139 i l G 56
Lampiran 12 Hasil Uji Normalitas Shapiro-Wilk a. Digunakan Uji Normalitas Shapiro-Wilk (besar sampel < 50) b. Tujuan : Untuk melihat kenormalan distribusi data pengukuran kadar glukosa darah mencit pada masing-masing kelompok pada hari ke7 dan 14 Hipotesis Ho Ha : Data pengukuran kadar glukosa darah Mencit terdistribusi normal : Data pengukuran kadar glukosa darah Mencit tidak terdistribusi normal Kesimpulan : Nilai signifikansi > 0,05 pada masing-masing kelompok maka Ho diterima, artinya data pengukuran kadar glukosa darah mencit terdistribusi normal 57
Lampiran 13 Hasil Uji Repeated ANOVA Tujuan : untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan secara bermakna pada kadar glukosa darah mencit Hipotesis Ho : Data penurunan kadar glukosa darah Mencit tidak berbeda secara bermakna : Data penurunan kadar glukosa darah Mencit berbeda secara bermakna Ha Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi > 0,05 maka Ho diterima Jika nilai signifikansi < 0,05 maka Ho ditolak Kesimpulan : Nilai signifikansi < 0,05 pada Multivariate Tests dan Pairwise Comparisons maka Ho diterima, dengan demikian dapat ditarik kesimpulan "Data penurunan kadar glukosa darah Mencit berbeda secara bermakna" dan berdasarkan perbandingan pengukuran pertama dengan kedua, kedua dengan ketiga dan pertama dengan ketiga (Pairwise Comparisons) dapat ditarik kesimpulan "Perbedaan didapatkan pada semua pengukuran". 58
Lampiran 14 Hasil Uji Post Hoc (ANOVA) Tujuan : Untuk mengetahui kelompok mana yang memiliki kadar glukosa darah berbeda secara bermakna Hipotesis Ho : Data penurunan kadar glukosa darah Mencit tidak berbeda secara bermakna : Data penurunan kadar glukosa darah Mencit berbeda secara bermakna Ha Pengambilan keputusan : Jika nilai signifikansi > 0,05 maka Ho diterima Jika nilai signifikansi < 0,05 maka Ho ditolak 59
Interpretasi Hasil : Pengukuran Hari ke 0 Pada Pengukuran hari ke 0, hasil pengukuran menunjukan semua nilai signifikansi > 0,05. Maka, data penurunan kadar glukosa darah Mencit semua kelompok yang dibandingkan dengan semua variabel kelompok tidak berbeda secara bermakna. Pengukuran Hari ke 7 Pada pengukuran hari ke 7, hasil pengukuran dari kelompok kontrol normal menunjukan nilai signifikansi < 0,05 pada semua variabel kelompok. Maka, data penurunan kadar glukosa darah Mencit pada kelompok kontrol normal berbeda secara bermakna dengan semua kelompok. Pengukuran Hari ke 14 Pada pengukuran hari ke 14, hasil pengukuran yang memiliki berbedaan bermakna dengan nilai signifikansi < 0,05 hanya perbandingan antara kelompol kontrol normal dengan kontrol diabetes dan kelompok kontrol normal dengan kelompok dosis 1. Maka, data penurunan kadar glukosa darah Mencit pada kelompok kontrol normal berbeda secara bermakna dengan kelompok kontrol diabetes dan kelompok dosis 1. Kesimpulan : Pada hasil Uji Post Hoc (LSD) diatas menunjukan bahwa kelompok kontrol normal memiliki perbedaan secara bermakna pada semua kelompok di masing-masing waktu pengukuran. Perbedaan dari waktu pengukuran hari ke 7 dan hari ke 14 terlihat dari dosis 1 yang memiliki perbedaan bermakna pada semua kelompok kecuali kelompok Diabetes yang artinya penurunan kadar glukosa darah kelompok dosis 1 berbeda secara bermakna dari kelompok yang lain (dosis 2, dosis 3 dan kelompok glibenklamid) sebagai dosis dengan penurunan kadar glukosa darahnya terkecil. Perbedaan pun terlihat pada kelompok dosis 2 pada hari ke 14, dimana yang semula kelompok dosis 2 tidak berbeda bermakna dari kelompok 1, pada hari ke 14 menjadi berbeda secara bermakna dari kelompok dosis 1. 61