Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan Vol. 7, No.4, 148-155, Desember 2018 ISSN : 2527-8010 (ejournal) UJI FITOKIMIA EKSTRAK BUNGA LAWANG (Illicium verum Hook.f) DAN DAYA HAMBATNYA TERHADAP Staphylococcus aureus Phytochemical Test Of The Extract Star Anise (Illicium Verum Hook.F) And Inhibitory Power Against Staphylococcus Areus Ave Regina Rosari1) , Agus Selamet Duniaji2), Komang Ayu Nocianitri2) 1)Mahasiswa Program Studi Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Unud 2)Dosen Program Studi Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Unud Kampus Bukit Jimbaran, Badung-Bali ABSTRACT This study aims to determine the levels of tannin and flavonoid compounds, as well as to determine the concentration of the extract of star anise (Illicium verum Hook.f) was most appropriate by used aquades solvent against the growth of Staphylococcus aureus. This research used experimental method with 5 kind of concentration which are 20%, 40%, 60%, 80% and 100%, each treatment was repeated 3 times to obtain 15 experimental units. The observed variables were quantitative testing of flavonoid and tannin compounds and create an inhibition zone produced by antimicrobial activity of the extract of star anise on Staphylococcus aureus. The data of this research are presented in the form of tables, figures and analyzed descriptively. The results showed that the extract contained flavonoid compounds of 0.106% and tannins of 1.018%. The extract of star anise can inhibit Staphylococcus aureus at a concentration of 40% with an average 7.03 mm inhibition zone. Keywords:Star anise, Staphylococcus aureus, antibacterial. PENDAHULUAN Rempah adalah bagian tumbuhan yang memiliki aroma atau rasa kuat yang digunakan dalam jumlah kecil dalam makanan sebagai pengawet atau perisa dalam masakan. Rempah merupakan bagian terpenting dari masakan karena jika rempah tidak dimasukkan maka citarasa dan aroma dari masakan tersebut berkurang (Muchtadi, et al., 2010). Bunga lawang merupakan salah satu jenis tanaman populer di Indonesia yang biasa digunakan sebagai bumbu rempah. Di Indonesia, bunga lawang digunakan oleh beberapa daerah yang memiliki ciri khas masakan berbumbu tajam, contohnya gulai Aceh, Rendang Minang, masakan Jawa, dan Bali (Anonim, 2017). Bagian utama bunga lawang yang sering dijadikan sebagai bumbu rempah adalah bagian buahnya yang berbentuk bintang, terdapat biji yang karena pada buahnya resin dan atsiri mengandung minyak (Parthsaratthy, 2008). Buah dari bunga lawang mengandung minyak atsiri (anethole 85-90%), resin, lemak, tanin, pektin, terpen, limoeonene, estradol, flavonoid, glukosida, saponin (Ali, et al., 2010). safrol, timokuinon, Staphylococcus aureus merupakan salah satu mikroba yang bersifat patogen Gram positif yang sering terdapat dalam makanan (Octaviantris, 2007). Bahan makanan sumber pencemaran Staphylococcus aureus yang menimbulkan wabah adalah daging babi, produk roti, daging sapi, kalkun, ayam dan telur (Nugroho, 2004). Keracunan makanan kontaminasi dapat disebabkan oleh Korespondensi Penulis: Email: 148
Rosari, dkk. enterotoksin dari Staphylococcus aureus. karena Waktu Staphylococcus aureus biasanya cepat dan akut, tergantung pada daya tahan tubuh dan termakan. Gejala banyaknya keracunan Staphylococcus aureus ditandai oleh rasa mual, muntah-muntah, dan diare yang hebat tanpa disertai demam (Ryan et al., 1994). gejala dari keracunan toksin yang (2006) melaporkan bahwa tumbuhan yang berpotensi sebagai antibakteri umumnya memiliki metabolit sekunder seperti senyawa golongan jenis flavon, flavonol, flavononon, tanin, alkanoid dan lawang memiliki kandungan zat saponin, tanin dan flavonoid yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri. Senyawa yang ada pada bunga lawang bisa didapatkan dengan cara ekstraksi. Hasil dari ekstraksi bunga lawang kemudian diuji kandungan fitokimia secara kuantitatif untuk mengetahui sebarapa banyak senyawa aktif yang dimiliki oleh bunga lawang dan menguji daya bakteri Staphylococcus aureus. Abdillah, flavonoid yaitu saponin. Bunga hambatnya terhadap METODE PENELITIAN Bahan dan Alat Bahan utama yang digunakan adalah bunga lawang yang sudah kering yang berasal dari Pasar Badung, Bali. Bahan kimia yang digunakan adalah aquades, almunium foil, etanol 96%, kertas saring, kertas whatman no.1, isolate bakteri Staphylococcus aureus yang Laboratorium Mikrobiologi Pangan Program Studi Ilmu dan Teknologi Pangan FTP, Nutrien Broth (NB), Nutrien Agar (NA), Lactose broth (LB), AlCl3 2% (Merck), Safranin, Kristal violet, lugol, Na2CO3 (5%), standar kuarsetin, alkohol 95%, tissue, spirtus, kertas label dan plastik. diperoleh dari Alat-alat yang digunakan dalam penelitian jarum ose,batang bengkok, (Herma), incubator ini timbangan analitik, erlenmeyer (IKA), mikropipet adalah freezer, 149 Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan (Memmert), rotary vacuum evaporator (IKA), spektofotometer Uv-Vis, labu takar, autoclave, tip, bunsen, korek api, rak tabung, tabung reaksi, gelas beker, gelas ukur, jangka sorong, cawan petri, botol hot plate, vortex, penyemprot alkohol, pipet tetes, talenan, pisau. Rancangan Percobaan ini menggunakan metode eksperimental dengan perlakuan konsentrasi ekstrak bunga lawang (Illicium verum Hook.f), yaitu konsentrasi 20%, 40%, 60%, 80% dan 100%. Penelitian dilakukan dengan tiga kali ulangan sehingga diperoleh 15 unit percobaan. Data yang diperoleh dianalisis menggunakan analisis deskriptif. Penelitian Pelaksanaan Penelitian Pembuatan ekstrak bunga lawang Bunga lawang kering diblender kemudian diayak dengan ayakan 60 mesh. Setelah itu bunga lawang ditimbang sebanyak 760 gram dan dilarutkan dengan aquades sebanyak 4560 ml (1:6), kemudian dimaserasi selama 24 jam. Ekstrak disaring untuk memisahkan ampas dan filtratnya. Selanjutnya filtrat dievaporasi pada suhu 40o C sehingga didapatkan ekstrak bunga lawang. Ekstrak bunga lawang yang diperoleh disimpan sebelum digunakan. Uji Kuantitatif Flavonoid Ekstrak bunga lawang ditimbang sebanyak 0,1 g kemudian ditambahkan dengan etanol 50% sebanyak 5 ml, setelah itu dihomogenkan dan disentrifus 3000 rpm selama 15 menit. Supernatan kemudian disaring, dan filtrat yang didapatkan dipipet sebanyak 0,5 ml dan ditambahkan dengan aquades 0,5 ml lalu ditempatkan pada tabung reaksi. Ditambahkan 1,0 ml Almunium klorida 2%. Diinkubasi pada selama 30 menit. Diukur suhu kamar absorbansinya pada panjang gelombang 415 nm. Pembuatan standar kuersetin. Ditimbang 0,1 g standar kuersetin, kemudian diencerkan menjadi 100 ml (100mg/L) dengan etanol
Vol.7, No.4, Desember 2018. 50%. Dibuat serangkaian larutan kuersetin dalam dalam etanol dengan konsentrasi 0, 10, 20, 30, 40, 50 mg/L. lalu dibuat seri pengenceran sebanyak masing-masing 5 ml dan dipipet masingmasing standar 1,0 ml. Masing-masing larutan ditambahkan 1,0 ml Almunium klorida 2%. Diinkubasi pada suhu kamar selama 30 menit. Diukur absorbansinya pada panjang gelombang 415 nm. Uji Kuantitatif Tanin Ekstrak bunga lawang ditimbang sebanyak 0,01 gram, kemudian dilarutkan dalam 10 ml aquades panas setelah itu dihomogenkan dan disentrifugasi 3000 rpm selama 15 menit. dipipet Supernatan sebanyak 0,25 ml dan ditambahkan dengan 0,25 ml follin dennis dan divortex. Setelah itu ditambahkan 2 ml Na2CO3 (5%). Diinkubasi nilai selama absorbansinya pada panjang gelombang 725 nm. disaring kemudian 30 menit dan dibaca Pembuatan standar tannin yaitu, dibuat serangkaian standar tannin yakni ditimbang asam tanat 0,01 g dan diencerkan menjadi 100 ml (100mg/L) dengan aquades. Dibuat konsentrasi 0, 10, 20, 40, 60, 80, 100 mg/L. Dipipet masing-masing konsentrasi sebanyak 0,25 ml ke dalam reaksi dan ditambahkan 0,25 ml follin-denis dan 2 ml Na2CO3 pada masing-masing konsentrasi. Diinkubasi pada suhu kamar selama 30 menit. Diukur panjang gelombang 725 nm. tabung absorbansinya pada Penyegaran Bakteri Staphylococcus aureus Bakteri Staphylococcus aureus dari media Nutrient Agar diinokulasikan sebanyak 1 ose ke dalam 7 ml medium Nutrient Broth steril. Setelah inokulum diinkubasi dalam inkubator selama 24 jam pada suhu 37oC. itu Uji Konfirmasi Staphylococcus aureus telah disegarkan diratakan pada kaca objek yang sudah Isolat bakteri yang 150 Uji Fitokimia Ekstrak Bunga Lawang ... dibersihkan dan diviksasi diatas Bunsen. Preparat ditetesi dengan Kristal violet dan didiamkan selama 1 menit, kemudian dibilas dengan air mengalir dengan posisi preparat dimiringkan. Preparat yang sudah dibilas dengan air kemudian ditetesi larutan lugol dan didiamkan selama 1 menit, kemudian dicuci lagi dengan air mengalir. Hilangkan warna yang masih melekat pada preparat dengan menambahkan larutan aseton alkohol selama 1 menit dan bilas dengan air mengalir. Warnai kembali menggunakan saftranin, diamkan 30 detik, kemudian bilas lagi dengan air mengalir. Preparat yang sudah dibilas dengan air dikeringkan dengan kertas saring kemudian larutan campurkan 1 ose biakan dengan nigrosin dan gelas preparat direkatkan. Preparat yang dibuat diamati pada mikroskop. Stok Kultur Staphylococcus aureus Bakteri yang telah disegarkan diambil menggunakan jarum ose, lalu ditanamkan pada media Nutrien Agar miring dengan cara menggores, setelah itu diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37o C selama 24 jam (Silaban, 2009). Uji Daya Hambat Staphylococcus aureus Kultur bakteri disegarkan ke dalam media Lactose Broth sebayak 1 ose kemudian diinkubasi pada suhu 37o selama 24 jam. Lactose Broth ditumbuhi yang Staphylococcus aureus diambil sebanyak 100 μL dan disebar ke dalam cawan petri yang berisi media Nutrien Agar yang sudah disterilkan dan memadat dengan menggunakan batang bengkok lalu media tersebut didiamkan ± 15 menit (Surjoardojo, et al., 2015). Tabung durham yang sudah disterilkan kemudian ditusukan ke cawan petri yang berisikan Nutrien Agar supaya berlubang sebanyak 3 bagian. Setelah itu ekstrak bunga lawang yang sudah dibuat dalam konsentrasi 20%, 40%, 60%, 80% dan 100% diinjeksikan ke dalam lubang yang telah dibuat sebanyak 0,20 μg dan telah
Rosari, dkk. kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37oC. Variabel yang Diamati Variabel yang diamati adalah kadar flavonoid (Rahman et al., 2006), kadar tanin (Suhardi,1997), dan daya hambat terhadap Staphylococcus cara aureus (Khusnul, menggunakan metode sumuran 2016). dengan HASIL DAN PEMBAHASAN Pengujian Fitokimia (Kuantitatif) fitokimia ekstrak bunga lawang dilakukan secara kuantitatif. Kandungan senyawa fitokimia ekstrak bunga lawang dapat dilihat pada Tabel 1. Pengujian senyawa Tabel 1. Kandungan Senyawa Fitokimia Ekstrak Bunga Lawang Senyawa Fitokimia Flavonoid Tanin Jumlah 0,106% 1,018% Berdasarkan Tabel 1. ekstrak bunga lawang memiliki kadar flavonoid sebesar0,106% dan kadar tanin sebesar 1,018%. Total flavonoid yang diperoleh pada penelitian ini berbeda jumlahnya dengan penelitian yang dilakukan oleh Yang et al., (2012) dimana pada penelitian tersebut menghasilkan flavonoid sebesar 6,63% dari ekstrak bunga lawang dengan pelarut etanol. Kandungan tanin pada ekstrakbunga lawang sebesar 1,018% (Tabel 1). Tanin merupakan senyawa makromolekul dari golongan polifenol yang berisifat polar sehinga larut dalam pelarut polar (Fengel dan Wegener, 1995). Bermawie et al., (2008) menyatakan bahwa perbedaan hasil jumlah kandungan zat yang terbentuk pada tanaman dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor diantaranya seperti faktor lingkungan dan geografis. Faktor lingkungan banyak yang tidak bisa dikontrol seperti iklim, polusi, hama dan penyakit tumbuhan yang 151 Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan dapat mempengaruhi kandungan senyawa dalam tumbuhan. Faktor geografis (kondisi lahan atau tanah, ketinggian tempat tumbuh, intensitas cahaya, kandungan nutrisi pada jumlah juga berpengaruh dalam tanah) kandungan dalam ada tumbuhan. Perbedaan hasil jumlah kandungan zat ini juga dapat terjadi karena jenis pelarut yang digunakan berbeda. Pelarut yang digunakan pada penelitian ini adalah aquades, sementara pada penelitian Yang et al pelarut yang digunakan adalah etanol. Menurut Riyani et al., (2015) flavonoid larut pada pelarut aquades, etanol dan metanol. Air dan etanol yang bersifat polar, namun kadar flavonoid tinggi dengan dibandingkan dengan kadar flavonoid dengan tingkat aquades. Kemungkinan pelarut kepolaran tingkat sama dengan dimana menurut kepolaran Sudarmadji et al., (1997). Efektivitas ekstraksi dipengaruhi oleh tingkat kelarutan bahan dengan pelarut. Suatu senyawa akan larut pada pelarut dengan tingkat kepolaran yang sama. Tingkat kepolaran suatu pelarut dinyatakan dengan besarnya konstanta dielektrium. Konstanta dielektrium dinyatakan sebagai gaya tolak menolak antara dua partikel yang bermuatan listrik dalam satu molekul. Semakin tinggi konstanta dielektriumnya maka pelarut akan semakin bersifat polar. senyawa yang pelarut lebih etanol etanol flavonoid Uji Konfirmasi Staphylococcus aureus terhadap Staphylococcus aureus meliputi bentuk dan warna koloni, pewarnaan Gram, dan bentuk sel. bakteri Staphylococcus aureus dapat dilihat pada Tabel 2. Tabel Pengujian konfirmasi Hasil uji konfirmasi Uji 2. Konfirmasi bakteri Staphylococcus aureus Hasil Parameter Yang Diamati Bentuk koloni Warna koloni Pewarnaan Gram Bentuk sel Bulat Kuning keemasan Gram positif Bulat
Vol.7, No.4, Desember 2018. Berdasarkan Tabel 2 dapat dilihat bahwa Staphylococcus aureus memiliki bentuk koloni bulat, warna koloni kuning, termauk bakteri Gram positif dan memiliki bentuk sel bulat. Hasil pengamatan terhadap bentuk koloni dengan aureus Staphylococcus (1996) yang pernyataan Jawetz et al., menyebutkan aureus merupakan bakteri Gram positif berbentuk bulat dan berdiamter 0,7-1,2 μm, tersusun dalam kelompok-kelompok yang tidak teratur seperti buang anggur, fakultatif anaerob, tidak membentuk spora, dan tidak bergerak. Bahkan disebutkan bakteri ini tumbuh pada suhu optimum 37o C, tetapi membentuk pigmen paling baik pada suhu kamar 20-25 oC. sesuai Staphylococcus koloni Staphylococcus aureus pada media Nutrient Agar dihasilkan koloni berbentuk bulat berwarna kuning keemasan. Jumlah koloni dalam satu cawan adalah sebanyak 8,6 x 10- 15. Penelitian lain tentang Staphyloccocus aureus juga menyatakan pada pembenihan padat koloni bakteri ini berwarna abu-abu sampai kuning keemasan, berbentuk bundar, halus, menonjol, dan berkilau (Jawetz et al., 1996). Pengamatan bentuk dan warna koloni dapat dilihat pada Gambar 3. Pengamatan terhadap warna Gambar 3. Pengamatan bentuk dan warna koloni Staphylococcus aureus Hasil dari pengamatan secara mikroskopik menunjukkan bahwa Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif. Pewarnaan Gram sangat berpengaruh untuk mengetahui 152 Uji Fitokimia Ekstrak Bunga Lawang ... perbedaan golongan besar antara bakteri Gram positif dan negatif. Hal ini dibuktikan dengan terbentuknya warna ungu pada isolat bakteri Staphyloccocus aureus pada kaca preparat yang sudah ditetesi dengan safranin. Safranin yang berwarna merah tidak mempengaruhi Staphylococcus aureus yang sudah ditetesi dengan dahulu. violet Penambahan safranin tidak berpengaruh pada bakteri Gram positif, sedangkan bakteri Gram negatif akan menyerap zat warna sehingga mempertegas warna merah pada bakteri Gram negatif (Fardiaz, 1989). Perubahan warna ini disebabkan karena bakteri Gram positif 90% dari lapisan peptidoglikan dan lapisanlainnya adalah asam teikoat, sedangkan bakteri Gram negatif hanya memiliki 5-20% peptidoglikan dan lapisan lainnya terdiri dari protein, lipoposakarida danlipoprotein. Perbedaan ketebalan lapisan peptidoglikan bakteri Gram positif danbakteri Gram negatif mempengaruhi dari pewarnaan Gram karena bakteri Gram positif saat proses pencucian dengan alkohol setelah penambahan kristal violet dan lugol akan tetap berwarna ungu, sedangkan bakteri Gram negatif akan berubah warna menjadi merah karena tidak cukup tebal memiliki peptidoglikan yang keluar dari dinding sel akibat pencucian oleh alkohol. Hasil pengamatan bakteri dengan mikroskop pada pembesaran 1000x dapat dilihat pada Gambar 4. kristal terlebih dindingnya terdiri dari Gambar 4. Pengamatan bakteri Staphylococcus mikroskop aureus padapembesaran 1000x dengan
Rosari, dkk. Daya Hambat Ekstrak Bunga Lawang Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus Penelitian ini menguji aktivitas antibakteri ekstrak bunga lawang (Illicium verum Hook.f) terhadap Staphylococcus aureus dengan melihat terbentuk atau tidaknya diameter zona hambat. Diameter zona hambat terhadap berbagai dalam Staphylococcus konsentrasi ekstrak bunga lawang diuji dengan metode sumuran. Metode ini umum digunakan dalam uji aktivitas antibakteri karena lebih efektif untuk menghambat pertumbuhan bakteri dan zat aktif dapat berdifusi langsung tanpa penghalang kertas cakram (seperti pada metode Kirby Bauer, 1976). Selain itu, dengan metode ini dapat diketahui luas zona hambat. Diameter zona hambat merupakan petunjuk aktivitas bakteri uji, semakin besar zona hambat maka aktivitas antibakteri semakin besar pula (Panagan dan Syarif, 2009). aureus Hasil dari pengujian daya hambat ekstrak terhadappertumbuhan bunga Staphylococcus aureus dapat dilihat pada Tabel 3 dan Gambar 5. lawang Tabel 3. Diameter penghambatan ekstrak lawang dengan pelarut pertumbuhan bunga aquades Staphylococcus aureus terhadap Perlakuan (Konsentrasi) 20% 40% 60% 80% 100% Diameter Penghambatan (mm) 5,76 ± 0,23 7,03 ± 0,05 7,13 ± 0,55 8,36 ± 0,11 10,36 ± 1,58 Kategori Daya Hambat Sedang Kuat Kuat Kuat Kuat Keterangan ± : Standar deviasi 153 Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan Gambar 5. Pembentukan zona bening oleh ekstrak bunga terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus lawang diameter Tabel penghambatan Staphylococcus aureusberkisar antara 5,76 mm sampai 10,36 mm. Diameter penghambatanStaphylococcus aureus terbesar diperoleh pada perlakuan ekstrak bunga lawangdengan konsentrasi 100% yaitu sebesar 10,36 mm. Sedangkan diameter penghambatan Staphylococcus aureus terkecil diperoleh pada perlakukan ekstrak bunga lawang 20% yaitu sebesar 5,76mm. Berdasarkan 3, Peningkatan konsentrasi ekstrak bunga akan diikuti oleh peningkatan lawang konsentrasi zat bioaktif, sehingga aktivitas antibakteri akan semakin ini ditandai dengan bertambahnya diameter zona hambat di sekitar sumuran. Pan et al., (2009) menyebutkan kategori daya hambat pada diameter dikelompokan menjadi tiga kategori yaitu pertama termasuk kategori diameter penghambatan 0 mm - 3 mm, kedua termasuk kategori diameter penghambatan adalah 3 mm - 6 mm dan ketiga termasuk kategori kuatdengan diameter penghambatan >6 mm. Suatu bahan dikatakan apabila mempunyai diameter hambatan yang terbentuk lebih besar atau sama dengan 6 mm. (Suciati et al., 2012). Perlakuan konsentrasi 20% termasuk dalam kategori daya hambat yang sedang dan konsentrasi 40% sampai dengan konsentrasi 100% termasuk dalam kategori daya hambat kuat. tinggi. Hal penghambatan lemah dengan sedang dengan aktivitas antibakteri
Vol.7, No.4, Desember 2018. terjadinya 3. menunjukan peningkatan diameter penghambatan terhadap Staphylococcus aureus yang berbanding lurus dengan perlakuan konsentrasi yaitu semakin lawang tinggi konsentrasi ekstrak bunga semakin tinggi juga daya hambat terhadap pertumbuhan aureus. Kemampuan daya hambat ekstrak bunga lawang terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus pada Tabel 3 tidak terlepas dari peran senyawa aktif yang terdapat pada ekstrak bunga lawang. Hasil uji kuantitatif fitokimia ekstrak bunga lawang (Tabel 1) menyatakan bahwa bunga lawang mengandung senyawa antibakteri yaitu flavonoid sebanyak 0,106% dan tanin sebanyak 1,018%. Flavonoid bersifat dengan desinfektan dapat caramendenaturasi menyebabkan sel bakteri berhenti (Wibowo, 2012), sedangkan tanin mempunyai daya antibakteri yaitu melalui reaksi dengan membran sel dimana tanin menyerang polipeptida dinding sel sehingga pembentukan dinding sel menjadi kurang sempurna menyebabkan sel bakteri lisis karena tekanan osmotik sehingga sel bakeri akan mati (Sari, 2011), inaktivasi enzim dan inaktivasi fungsi materi genetik dimana tanin menghambat enzim reverse traskriptase sehingga dan topoisomerase tidak dapat sel bakteri mengakibatkan terbentuk (Nuria et al., 2009). Tabel Staphylococcus yang bekerja protein yang aktivitas metabolisme DNA SIMPULAN DAN SARAN Simpulan 1. Kadar flavonoid yang dihasilkan dari lawang dengan pelarut ekstrak bunga aquades sebesar 0,106% dan kadar tanin yang dihasilkan sebesar 1,018%. 2. Ekstrak bunga lawang dapat menghambat pertumbuhan aureus dengan kategori diameter penghambatan kuat pada konsentrasi 40% yaitu sebesar 7,03 mm. Staphylococcus 154 Uji Fitokimia Ekstrak Bunga Lawang ... Saran 1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut ekstrak mengenai daya bungalawang terhadap bakteri lain. hambat 2. Perlu dilakukan pengujian kuantitatif yang lawang terhadap saponin senyawa terdapatdalam ekstrak bunga dengan pelarut aquades. DAFTAR PUSTAKA Abdillah, A. 2006. Aktivitas Antiproliferasi Ekstrak Air Daun Sisik Naga (Pyrrosianummularifolia (Sw.) Ching) terhadap Sel Lestari Tumor HeLa secara In Vitro Institut Pertanian Bogor. [Skripsi]. Bogor. Ali, R.M., A.S, Zainon., M.M, Nik., and H, Norhar. 2010. ASEAN Herbal and Medicinal Plants. Jakarta: ASEAN Secretariat. Halaman 325-326. Anonimus. 2017. nga_lawang.Diakses pada April 2018. tanggal 12 Bunga Bermawie, N., Purwiyanti, dan S., Mardiana. 2008. Keragaman Sifat Morfologi hasil dan Mutu Plasma Nutfah Pegagan (Centella asiatica(L.)urban). Bul.Littro. 19(1):1-17. Fardiaz, S. 1989. Mikrobiologi Pangan. Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi. Fateta IPB. Bogor. Fengel, D. and G. Wegener. 1995. Kayu: Kimia Ultrastruktur Reaksi-Reaksi. Press, Gadjah Mada University Yogyakarta. Jawetz, E., J.L. Melnick, and E.A. Adelberg. 1996. Mikrobiologi Kedokteran. Edisi
Rosari, dkk. 20, Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC; 228-231. Muchtadi, R. 2010. Ilmu Pengetahuan Pangan. Bandung: AlfaBeta. Nugroho, W.S. 2004. Aspek Kesehatan Masyarakat Veteriner Staphylococcus, Bakteri Jahat yang Sering Disepelekan. Artikel {terhubung c.id/wpcontent/staphylococcus- padadaging.pdf. Diakses pada 12 April 2018. Nuria, maulita., Faizaitun, Arvin,. dan Sumantri. Aktivitas 2009. Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Jarak Pagar (Jatropha Curcas L) Terhadap BakteriStaphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 1408. Mediagro 5(2):26-37. Uji Octaviantris, F. A. 2007. Deteksi Bakteri Staphylococcus aureus pada Susu Bubuk Skim Impor. (Skim Milk Powder) Skripsi. Institut Pertanian Bogor. Bogor. Panagan, A. T., Syarif, Nirwan. 2009. Uji Daya Hambat Asap Cair Hasil Pirolisis abavata) Kayu Pelawan terhadap Bakteri Escherichia coli. JPSMIPAUNSRI. (C) 09:12-06. (Tristania Parthasarathy, V.A., C. T. Thageerathy., and A. John. 2008. Chemistry of Spices. India: Spi. Pondicherry. Halaman 319- 330. Riyani, A dan R. Adawiah. 2015. Ekstraksi Flavonoid metode Soxhletasi dari batang pohon pisang ambon (Musa paradisiaca var. sapientum) dengan berbagai jenis pelarut. Prosiding Simposium Nasional Inovasi dan Pembelajaran Sains 2015 (SNIPS 2015). ISBN: 978-602-19655-8- 0:625-628. 155 Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan Ryan, K.J., J.J. Champoux, S. Falkow, J.J. Plonde, W.L. Drew, F.C. Neidhardt, and C.G. Roy. 1994. Medical Microbiology An Introduction to Infectious Diseases. 3rd ed. Connecticut: Appleton & Lange. P.254. Sari, F.P. dan S. M. Sari. 2011. Ekstraksi Zat dari Tanaman Aktif Antimikroba (Jatropha multifida Linn) Yodium sebagai Baku Alternatif Bahan Antibiotik Alami. Semarang: Fakultas Teknik Universitas Diponogoro. Suciati, A. 2012. Efektivitas ekstrak daun dalam Rhizopora bakteri menghambat Aeromonas salmonicida dan Vibrio harveyi. Jurnal rekayasa dan teknologi budidaya perairan. Unila. mueronata pertumbuhan Wibowo, S. 2012. Daya Hambat Biji Buah Mahoni mahagoni) Bakteri terhadapPertumbuhan Salmonella tpyhi. Skripsi. Unimus Press, Semarang. (Swietenia Yang, C. Hong, C.F. Rong, C.H. Wei, W.H. Ming, H.M. Che and C.L.Yeh. 2012. Investigation of the antioxidant activity of Illicium verum extracts. Journal of Medicinal Plants Research Vol. 6(2), pp. 314-324.