BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN Pada penelitian kali ini peneliti menggunakan dua metode yaitu metode perasan dan maserasi. Metode perasan di pilih karena alat yang digunakan sederhana, waktunya cepat, dan kandungan bahan kimia masih baik karena bahan yang digunakan masih keadaan segar, sedangkan pada maserasi dipilih karena alat yang digunakan sederhana dan kandungan bahan kimia yang terikat lebih banyak. penelitian ini menggunakan satu konsentrasi yaitu 75% karena peneliti hanya membandingkan dua metode yang paling efektif pada daya analgetik. Bagian tanaman sambiloto yang digunakan dalam penelitian ini adalah bagian daun sambiloto yang segar. Pada proses pembuatan perasan daun sambiloto yang diambil sebanyak 500 gram daun sambiloto dicuci bersih dengan air mengalir yang bertujuan untuk menghilangkan debu dan kotoran yang melekat pada daun tersebut. Setelah dicuci daun sambiloto dipotong menjadi kecil yang bertujuan untuk mempermudah proses pembuatan perasan. kemudian dihaluskan dengan cara diblender dan diambil perasannya menggunakan kain flanel. Metode selanjutnya yaitu proses pembuatan ekstrak maserasi, daun sambiloto dikeringkan terlebih dahulu, ditutup kain hitam dan menaruh dibawah sinar matahari langsung bertujuan untuk mengurangi kadar air dalam simplisia. dari hasil pengeringan daun sambiloto untuk proses maserasi dari berat awal bahan sebanyak 2800 gram di peroleh berat kering sebanyak 258 gram atau prosentase bobot kering terhadap bobot basah sebesar 9,2% hal ini sesuai 26
parameter penimbangan karena hasil prosentase bobot kering terhadap bobot basah kurang dari 10% setelah dihitung dari bobot konstan karena pada penimbangan tersebut diatas tidak melebihi 0,5 mg pada penimbangan dengan timbangan analitik (Depkes RI, 2009). Selanjutnya hasil identifikasi daun sambiloto secara makroskopik diperoleh dengan hasil sebagai berikut : Tabel 1. Hasil Uji Makroskopik pada daun sambiloto Uji Makroskopik Hasil Pustaka (Widyawati, 2007) Keterangan Bentuk - Bau Serbuk Khas Sambiloto Khas Sambiloto Serbuk + + Rasa - Warna Pahit Hijau Tua Rasa Pahit Hijau Tua + + Keterangan : + : Menandakan hasil uji sesuai dengan pustaka Identifikasi serbuk daun sambiloto secara makroskopik berbentuk serbuk, bau khas sambiloto, rasa pahit, warna hijau tua. Ekstrak dari daun sambiloto diperoleh dengan metode maserasi dengan perbandingan serbuk simplisia terhadap pelarut 1 : 7,5 langkah pertama yang dilakukan adalah menimbang sampel berupa serbuk daun sambiloto sebanyak 160 gram sampel yang telah ditimbang kemudian dimaserasi selama 7 hari dengan menggunakan pelarut etanol 70% sebanyak 1200 ml digunakannya pelarut berupa etanol 70% karena merupakan pelarut yang lebih selektif, kapang maupun kuman sulit tumbuh, absorbsinya baik, tidak menyebabkan pembengkakan pada membran sel, dan memperbaiki stabilitas bahan obat terlarut, sifatnya yang mampu menghambat 27
28 kerja enzim dan sangat efektif dalam menghasilkan jumlah ekstrak yang optimal. pada proses maserasi setiap hari perlu dilakukukan pengadukan dengan maksud agar keseimbangan konsentrasi bahan efektif lebih cepat didalam cairan setelah 7 hari kemudian disaring dengan kain flannel. Dari proses maserasi, diperoleh ekstrak cair kemudian dipekatkan dengan cara pemanasan langsung yang bertujuan untuk menguapkan pelarut yang digunakan yaitu etanol untuk pembuktian bahwa ekstrak tersebut telah benar - benar terbebas dari etanol maka perlu dilakukan uji bebas etanol dengan menggunakan pereaksi H2SO4 pekat dan asam asetat kemudian mengamati bau yang terjadi pada sampel. Apabila masih berbau etil asetat (ester) maka ekstrak tersebut belum terbebas dari etanol, ciri bau ester yaitu aromanya sedap seperti bau balon namun jika berbau khas ekstrak berarti ekstrak tersebut sudah terbebas dari etanol. Tabel 2. Uji bebas etanol Pustaka Pengamatan Hasil (Warditiani, dkk., Keterangan 2009). 2 tetes eksrak + 2 tetes Tidak berbau Tidak berbau etanol H2SO4 pekat + 2 tetes etanol bau bau khas ekstrak buah + asam asetat,dipanasi khas ekstrak belimbing manis kemudian amati bau daun sambiloto Keterangan : + : Menandakan hasil uji sesuai dengan pustaka
Uji bebas etanol pada ekstrak cair daun sambiloto tidak berbau etanol, bau khas ekstrak daun sambiloto. ekstrak kental yang di dapat setelah melalui uji bebas etanol yaitu sebesar 90,12 gram dan rendemen 56,32 %. Selanjutnya pada masing - masing perasan dan ekstrak maserasi daun sambiloto dilakukan uji identifikasi flavonoid : Tabel 3. Data Uji Identifikasi Flavonoid dari perasan daun sambiloto Pustaka Keterangan No Reaksi Hasil (Asih, 2009) NaOH 10% 2 ml sampel + 2 - 4 Kuning 1 Kuning Muda + tetes larutan NaOH Muda 10% H2SO4 (pekat) 2 ml sampel + 2 - 4 2 Merah Tua Merah Tua + tetes larutan H2SO4 (pekat) Keterangan : + : Menandakan hasil uji sesuai dengan pustaka Dari data hasil uji flavonoid dari perasan daun sambiloto setelah ekstrak perasan di tambahkan 2 - 4 tetes larutan NaOH 10% ekstrak perasan positif mengandung flavonoid karena mengalami perubahan warna menjadi kuning 29
muda, dan apabila di tambahkan 2 - 4 tetes H2SO4 ekstrak positif mengandung flavonoid karena mengalami perubahan warna menjadi merah tua. Tabel 4.Data Uji Identifikasi Flavonoid dari ekstrak maserasi daun sambiloto Pustaka Keterangan No Reaksi Hasil (Asih, 2009) NaOH 10% Kuning 1 2 ml sampel + 2 - 4 tetes Kuning Muda Muda + larutan NaOH 10% H2SO4 (pekat) Merah 2 2 ml sampel + 2 - 4 tetes Merah Tua Tua + larutan H2SO4 (pekat) Keterangan : + : Menandakan hasil uji sesuai dengan pustaka Dari data hasil uji flavonoid dari ekstrak maserasi daun sambiloto setelah ekstrak perasan di tambahkan 2- 4 tetes larutan NaOH 10% ekstrak perasan positif mengandung flavonoid karena mengalami perubahan warna menjadi kuning muda, dan apabila di tambahkan 2 - 4 tetes H2SO4 ekstrak positif mengandung flavonoid karena mengalami perubahan warna menjadi merah tua. Uji daya analgetik perasan dan ekstrak maserasi daun sambiloto dilakukan pada mencit putih jantan dengan konsentrsi 75%, pengggunaan asetaminofen / 30
parasetamol l% sebagai kontrol positif dengan pertimbangan bahwa asetaminofen / parasetamol 1% adalah analgesik perifer yang digunakan secara luas dan efek sampingnya sangat kecil dibandingkan analgetik lainnya, pemilihan konsentrasi satu persen karena dalam larutan stok konsentrasi minimal harus satu persen tidak boleh kurang dari satu persen, aquades digunakan sebagai kontrol negatif dengan pertimbangan bahwa aquades bersifat netral dan tidak menimbulkan analgetik. asam asetat digunakan untuk memberikan stimulus nyeri yang ditujukan dengan respon karakteristik seperti menggeliat (perut kejang dan kaki ditarik kebelakang). Percobaan menggunakan metode rangsang kimia yang ditujukan untuk melihat respon mencit terhadap asam asetat yang dapat menimbulkan respon menggeliat dari mencit ketika menahan nyeri pada perut langkah pertama yang dilakukan adalah pemberian aquadest, pemberian parasetamol, perasan konsentrasi 75% dan ekstrak maserasi konsentrasi 75% secara oral pada tiap mencit yang sudah dikelompokan. setelah 30 menit kemudian disuntik secara intraperitonial dengan larutan induksi asam asetat 3% pemberian dilakukan secara intraperitonial karena untuk mencegah penguraian asam asetat saat melewati jaringan fisiologis pada organ tertentu dan larutan asam asetat dikhawatirkan dapat merusak jaringan tubuh jika diberikan melalui rute lain, misalnya per oral, karena sifat kerongkongan cenderung bersifat tidak tahan terhadap pengaruh asam, Larutan asam asetat diberikan setelah 30 menit karena diketahui bahwa obat yang telah diberikan sebelumnya sudah mengalami fase absorbsi untuk meredakan rasa nyeri selama beberapa menit kemudian, setelah diberi larutan 31
asam asetat 3% mencit menggeliat dengan ditandai perut kejang dan kaki ditarik ke belakang kemudian untuk mengetahui daya analgetik dengan cara mengamati jumlah geliat dengan interval waktu lima menit selama tiga puluh menit pengamatan dari kelompok kontrol negatif, kelompok kontrol positif, kelompok pada perasan dan ekstrak maserasi dengan konsentrasi 75%. Hasil percobaan yang telah diamati ternyata perasan dan ekstrak maserasi daun sambiloto pada konsentrasi 75% berpengaruh sebagai analgetik terhadap mencit putih jantan (Mus musculus) untuk lebih jelasnya dapat dilihat pada tabel dibawah ini : Tabel 5. Data Rata - rata Jumlah Geliat Kelompok interval waktu (menit) Kelompok kontrol (-) Mencit Kelompok kontrol (+) Mencit Kelompok perasan 75% v/v Mencit Kelompok maserasi 75% b/v Mencit I II III I II III I II III I II III 0-5' 14 12 12 4 2 2 7 5 4 5 3 2 6-10' 13 14 12 2 3 2 5 5 4 3 3 2 11-15' 12 13 13 3 4 3 5 4 4 3 2 2 16-20' 12 14 13 3 2 2 6 4 6 4 2 4 21-25' 13 13 13 2 2 3 5 6 7 3 4 5 26-30' ∑Geliat m∑ Rata2 15 79 2 2 1 1 4 14 14 80 77 16 15 13 32 30 28 20 18 16 6 3 2 4 236/3 = 78,66 44/3 = 14,6 90/3 = 30 54/3 = 18 Berdasarkan tabel diatas selama selang waktu 30 menit untuk kontrol negatif ( aquades ) didapatkan rata - rata jumlah geliat untuk kontrol negatif 78,66, untuk kontrol positif ( asetaminofen / parasetamol 1 %) didapatkan rata - rata jumlah geliat 14,6, sedangkan untuk kontrol perlakuan perasan daun 32
sambiloto 75% rata - rata jumlah geliat 30,00, untuk ekstrak maserasi daun sambiloto 75% rata - rata jumlah geliat 18,00. Dari tabel diatas dapat digunakan untuk mencari nilai persentase daya analgetik dari masing - masing kelompok perlakuan yaitu diperlihatkan pada tabel dibawah ini : Tabel 6. Data Persentase Daya Analgetik PERLAKUAN RATA RATA JUMLAH GELIAT SELAMA 30 MENIT DAYA ANALGETIK (%) Aquades 78,66
Asetaminofen 14,66 81,37 % Perasan 75% 30 61,87 % Maserasi 75% 18 77,12 % Dari data prosentase daya analgetik pada kontrol negatif (aquadest) didapatkan geliat sebesar 78,66 karena telah diinduksikan dengan larutan asam asetat, tetapi tidak terdapat prosentase daya analgetik dikarenakan pada kontrol negatif bersifat netral dan tidak mendapatkan perlakuan menggunakan obat analgetik. Sehingga tidak ada prosentase untuk daya analgetiknya. Untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh perasan dan maserasi pada daun sambiloto pada mencit putih jantan, maka selanjutnya dilakukan dengan Uji One- Sample T Test yang dapat dilihat pada tabel dibawah ini : 33
Tabel 7. Data Statistik Deskriptif One-Sample T Test Descriptive Statistics kontrolnegatif perasandaunsambiloto ekstrakmaserasidauns ambiloto Valid N (listwise) N 3 3 3 3 Minimum Maximum 80.00 32.00 77.00 28.00 16.00 20.00 Mean 78.6667 30.0000 18.0000 Std. Deviation 1.52753 2.00000 2.00000 Dari data hasil dekskriptif diatas dapat dibandingkan dua metode yang telah dilakukan. Pada kontrol negatif menunjukan nilai rata- rata 78,66 dan metode perasan daun sambiloto (Andrographis paniculata) menunjukan nilai rata - rata jumlah geliat 30,00 dan metode maserasi daun sambiloto (Andrographis paniculata) menunjukan rata - rata jumlah geliat 18,00. Sehingga dapat disimpulkan bahwa ekstrak maserasi daun sambiloto 75% mempunyai daya analgetik pada mencit putih jantan yang mendekati dengan asetaminofen (parasetamol) 1%. Pengujian dengan menggunakan uji dua sisi dengan taraf kepercayaan 95%, maka tingkat signifikasi α = 5%. Namun sebelumnya menentukan kriteria pengujian sebagai berikut : 1) Jika T hitung > T tabel, maka Ho ditolak dan Ha diterima 2) Jika T hitung < T tabel, maka Ho diterima dan Ha ditolak (Priyatno, 2010). 34
Tabel 8. Data Statistik Dengan Uji One-Sample T Test One-Sample Test Test Value = 0 kontrolnegatif perasandaunsambiloto ekstrakmaserasidauns ambiloto t 89.200 25.981 15.588 df 2 2 2 Sig. (2-tailed) .000 .001 .004 Mean Difference 78.66667 30.00000 18.00000 95% Confidence Interval of the Difference Lower 74.8721 25.0317 Upper 82.4612 34.9683 13.0317 22.9683 One-Sample Statistics kontrolnegatif perasandaunsambiloto ekstrakmaserasidauns ambiloto N 3 3 3 Mean 78.6667 30.0000 18.0000 Std. Deviation 1.52753 2.00000 2.00000 Std. Error Mean .88192 1.15470 1.15470 Dari tabel diatas didapatkan untuk untuk metode perasan nilai T hitung adalah 25,981 sehingga didapatkan T hitung > T tabel (25,981 > 4,303), untuk metode maserasi nilai T hitung 15,588 sehingga didapatkan T hitung > T tabel (15,588 > 4,303) maka Ho ditolak, sehingga Ha diterima karena ada pengaruh analgetik perasan dan maserasi daun sambiloto pada mencit putih jantan dengan tingkat kesalahan yang diajukan yaitu 5%. Artinya terdapat perbedaan yang bermakna jumlah geliat antara perlakuan (kontrol negatif, kontrol positif, perasan 75% dan maserasi 75%). Secara statistik dalam hal ini menunjukkan bahwa pemberian bahan uji menghasilkan efek analgetik yang berbeda nyata hal ini membuktikan bahwa semua dosis bahan uji mempunyai efek analgetik. pada kelompok perasan tidak mendekati dengan kelompok asetaminofen / paracetamol hal ini berarti efek analgetiknya kurang di karenakan pada proses perasan masih terdapat zat lain 35
seperti air dan senyawa lainnya, pada kelompok ekstrak maserasi lebih mendekati dengan kelompok asetaminofen / paracetamol hal ini di karenakan pada proses maserasi, zat aktif yang terserap lebih banyak karena flavonoid dapat larut dengan etanol, sedangkan proses maserasi sendiri menggunakan pelarut etanol. 36