UJI ANTIINFLAMASI KOMBINASI EKSTRAK ETANOL DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum Ruiz & Pav) DAN DAUN SEMBUKAN (Paederia foetida L) PADA TIKUS JANTAN GALUR WISTAR YANG DIINDUKSI KARAGENIN Oleh: ARIANTO 19133806A HALAMAN JUDUL FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SETIA BUDI SURAKARTA 2017
HALAMAN PENGESAHAN Berjudul UJI ANTIINFLAMASI KOMBINASI EKSTRAK ETANOL DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum Ruiz & Pav) DAN DAUN SEMBUKAN (Paederia foetida L) PADA TIKUS JANTAN GALUR WISTAR YANG DIINDUKSI KARAGENIN Oleh: ARIANTO 19133806A Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi Pada Tanggal : 20 Juli 2017 Mengetahui, FakultasFarmasi UniversitasSetia Budi Dekan, Prof. Dr. R.A. Oetari, SU., MM., M.Sc., Apt. Pembimbing Utama Mamik Ponco Rahayu, M.Si., Apt. Pembimbing Pendamping Meta Kartika Untari, M.Sc, Apt. Penguji : 1. Dra. Kisrini, M.Si., Apt. 1. ... ... ... 2. Yane Dila Keswara, M.Sc., Apt. 2. ... . 3. Iswandi, M.Farm., Apt. 3. ... ... 4. Mamik Ponco Rahayu, M.Si., Apt. 4. ... ... ii
PERSEMBAHAN Hari takkan indah tanpa mentari dan rembulan begitu juga hidup takkan indah tanpa tujuan, harapan dan tantangan.Meski terasa berat, namun manisnya hidup justru akan terasa. Untuk ribuan tujuan yang harus dicapai, untuk jutaan mimpi yang akan dikejar dan untuk sebuah pengharapan. Ku persembahkan karya kecil ini, untuk cahaya hidup, yang senantiasa ada saat suka maupun duka, selalu setia mendampingi, saat kulemah tak berdaya (Bapak dan Mamak tercinta) yang selalu memanjatkan doa disetiap sujudmu. Terimakasih untuk semuanya. Seandainya semua pohon dibumi dijadikan pena, dan lautan dijadikan tinta, maka belum akan habis kalimat-kalimat Alloh yang akan dituliskan, sesungguhnya Alloh maha perkasa dan maha bijaksana. Kupersembahkan Skripsi ini untuk : Allah SWT. Terima Kasih Ya Allah, telah memberi hamba kesehatan dan ridho-Mu untuk menyelesaikan kuliah dengan ditutup karya skripsi ini. My beloved family, Bapak dan mamaku tercinta yang senantiasa mendidik, memberikan dorongan, semangat, doa, perhatian serta kasih sayangnya yang tiada tara hingga anakmu ini bisa lulus. Dan Adik-adiku yang membuatku mengerti mengapa aku ada disini. Dosen pembimbingku ibu mamik dan bu meta. Terima kasih sudah membimbing dan meluangkan waktu untuk membagikan ilmunya. Spesial thanks for (Mantanku) yang telah menemaniku selama 4 tahun terakir ini, telah banyak membantu dan memberikan semangat dan motivasinya. Teman seperjuanganku yang saling membantu dan memberi semanga setiap hari. For everyone who have supported me, Thanks All. Almamater Kebanggaanku Fakultas Farmasi USB 2013. Agama, Bangsa dan Negara ku Indonesia. iii
PERNYATAAN Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi ini adalah hasil pekerjaan saya sendiri dan tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan Tinggi dan sepanjang pengetahuan saya tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka. Apabila skripsi ini merupakan jiplakan dari penelitian/karya ilmiah/skripsi orang lain, maka saya siap menerima sanksi baik secara akademis maupun hukum. Surakarta, 20 Juli 2017 Arianto iv
KATA PENGANTAR Assalammu'alaikum Wr.Wb Puji syukur kehadirat Allah SWT, karena atas segala rahmat dan hidayahNya, Penulis dapat menyelesaikan Skripsi guna memenuhi persyaratan untuk mencapai derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) di Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi Surakarta. Alhamdulillahirobbil"alamin, akhirnya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul "UJI ANTIINFLAMASI KOMBINASI EKSTRAK ETANOL DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum Ruiz & Pav) DAN DAUN SEMBUKAN (Paederia foetida L) PADA TIKUS JANTAN GALUR WISTAR YANG DIINDUKSI KARAGENIN" diharapkan dapat memberikan sumbangan bagi ilmu pengetahuan dalam bidang teknologi farmasi. Penyusunan Skripsi ini tidak bisa lepas dari bantuan banyak pihak baik secara langsung maupun tidak langsung, oleh karena itu Penulis mengucapkan terima kasih kepada : 1. Allah SWT yang senantiasa memberikan anugerah, nikmat serta petunjuk disetiap langkah hidupku. 2. Dr. Ir. Djoni Tarigan, MBA., selaku Rektor Universitas Setia Budi Surakarta. 3. Prof. Dr. R.A. Oetari, SU., MM., M.Sc., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi Surakarta. 4. Mamik Ponco Rahayu, M.Si., Apt. selaku Dosen Pembimbing yang telah banyak memberikan ilmu, masukan, pengarahan dan bimbingan selama penyusunan Skripsi ini. 5. Meta Kartika Untari, M.Sc, Apt. selaku Dosen Pembimbing yang telah banyak memberikan ilmu, masukan, pengarahan dan bimbingan selama penyusunan Skripsi ini. 6. Dra. Kisrini, M.Si., Apt. selaku Dosen Penguji yang telah meluangkan waktu untuk menguji dan memberikan masukan untuk Skripsi ini. 7. Yane Dila, M.Sc., Apt.. selaku Dosen Penguji yang telah meluangkan waktu untuk menguji dan memberikan masukan untuk Skripsi ini. v ingin
8. Iswandi, M.Farm., Apt. selaku Dosen Penguji yang telah meluangkan waktu untuk menguji dan memberikan masukan untuk Skripsi ini. 9. Segenap dosen, instruktur laboratorium, yang banyak memberikan bantuan dan kerjasama selama penyusunan penelitian Skripsi ini. 10. B2P2TOOT yang telah berkenan memberikan kesempatan kepada penulis untuk memperoleh tanaman sirih merah dan sembukan yang berguna untuk penelitian Skripsi ini. 11. Orang tuaku tercinta, adikku, semua saudara dan teman yang telah membantu, mendukung, dan memberi semangat serta doa. Tak ada gading yang tak retak, begitu pula dengan penyusunan Skripsi ini. Penulis menyadari banyak kekurangan dan masih jauh dari sempurna. Oleh karena itu Penulis mengharap segala saran dan kritik dari pembaca untuk menyempurnakan Skripsi ini. Semoga Skripsi ini bisa berguna bagi siapa saja yang membacanya. Wallaikumsalam Wr.Wb Surakarta, 20 Juli 2017 Arianto vi
DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL ... i HALAMAN PENGESAHAN ... ii PERSEMBAHAN ... iii PERNYATAAN ... iv KATA PENGANTAR ... v DAFTAR ISI ... vii DAFTAR GAMBAR ... xi DAFTAR TABEL... xii DAFTAR LAMPIRAN ... xiii INTISARI... xv ABSTRACT ... xvi BAB I PENDAHULUAN ... 1 A. Latar Belakang ... 1 B. Perumusah masalah ... 3 C. Tujuan Penelitian ... 3 D. Kegunaan Penelitian ... 4 BAB II TINJAUAN PUSTAKA ... 5 A. Sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) ... 5 1. Klasifikasi tanaman ... 5 2. Deskripsi tanaman ... 5 3. Habitat dan Penyebaran ... 6 4. Kandungan kimia tanaman ... 6 4.2 Flavonoid ... 7 4.3. Saponin ... 7 4.5. Minyak atsiri ... 7 5. Kegunaan tanaman ... 7 B. Sembukan (Paederia foetida L.) ... 8 1. Klasifikasi tanaman ... 8 2. Deskripsi tanaman ... 8 3. Ekologi dan Penyebaran ... 9 4. Kandungan kimia ... 9 4.1 Minyak atsiri ... 9 4.2. Asam eloanolik ... 9 vii
4.3. Flavonoid ... 10 4.4. Tanin ... 10 4.6. Alkaloid ... 10 C. Simplisa ... 11 1. Pengumpulan bahan baku ... 11 2. Sortasi basah ... 11 3. Pencucian... 11 4. Perajangan ... 12 5. Pengeringan simplisia ... 12 5.1. Pengeringan alami ... 12 5.2. Pengeringan buatan ... 12 6. Sortasi kering ... 12 7. Pengepakan dan penyimpanan ... 12 D. Ekstrak, Ekstraksi dan Maserasi ... 13 2. Ekstraksi ... 13 8. Pelarut... 14 E. Inflamasi ... 14 1. Pengertian ... 14 2. Tanda klasik inflamsi ... 16 2.1. Rubor (Kemerahan) ... 16 2.2. Kalor (Panas) ... 16 2.3. Dolor (Rasa sakit) ... 17 2.4. Tumor (Pembengkakan)... 17 2.5. Funsio lansea (Gangguan fungsi) ... 17 3. Mekanisme terjadinya inflamasi ... 17 F. Obat antiinflamasi ... 17 1. Obat Antiinflamasi Non Steroid (AINS) ... 18 2. Obat golongan steroid ... 18 G. Interaksi Obat ... 19 Interaksi Farmasetik/Inkompatibilitas ... 19 Interaksi Farmakokinetik ... 19 Interaksi Farmakodinamik ... 19 Interaksi aditif atau sinergis ... 20 Interaksi antagonis atau berlawanan ... 20 H. Karagenin ... 20 I. Metode Uji Antiinflamasi ... 21 1. Metode pembuatan edema buatan ... 21 2. Metode pembentukan eritema ... 21 3. Metode pembentukan kantong granuloma ... 22 4. Metode penghambatan adhesi leukosit ... 22 5. Metode iritasi dengan panas ... 23 6. Metode penumpukan krystal synovitis... 23 J. Hewan uji ... 23 1. Sistematika hewan uji ... 23 2. Karakteristik hewan uji ... 24 K. Landasan Teori ... 24 L. Hipotesis ... 26 1. 2. 3. 4. 5. BAB III METODE PENELITIAN ... 27 A. Popualasi dan Sampel... 27 viii
B. Variabel penelitian ... 27 Identifikasi variabel utama ... 27 1. 2. Klasifikasi variabel utama ... 27 3. Definisi operasional variabel utama ... 28 C. Alat dan bahan ... 28 1. Alat ... 28 1.1. Alat pembuatan ekstrak ... 28 1.2. Alat uji kualitatif ... 29 1.3. Alat uji antiinflamasi ... 29 2. Bahan ... 29 2.1.Bahan sampel ... 29 2.2. Bahan penyari ... 29 2.3. Hewan uji... 29 D. Jalanya Penelitian ... 29 1. Determinasi simplisia ... 29 2. Pengambilan bahan ... 29 3. Penyiapan simplisia daun sirih merah dan daun sembukan ... 30 4. Pembuatan serbuk daun sirih merah dan daun sembukan ... 30 5. Penetapan susut pengeringan serbuk daun sirih merah dan daun sembukan ... 30 5.1.Pemeriksaan organoleptik ... 30 5.2. Penetapan kadar air serbuk ... 30 6. Pembuatan ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan... 30 7. Identifikasi kandungan kimia daun sirih merah dan daun sembukan . 31 8. Pembuatan larutan uji ... 32 8.1. Pembuatan suspensi karagenin 1% ... 32 8.2. Pembuatan larutan CMC Na 1% ... 32 8.3. Pembuatan suspensi Fenilbutazon... 32 8.4. Pembuatan bahan uji tunggal ... 32 8.5. Pembuatan bahan uji kombinasi... 33 9. Uji antiinflamasi ... 33 9.1. Penetapan dosis fenilbutazon ... 33 9.2. Penetapan dosis bahan uji ... 33 9.3. Dosis karagenin 1% ... 33 9.4. Perlakuan terhadap hewan uji ... 33 E. Analisis Data ... 35 BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN ... 37 A. Hasil Determinasi Tanaman ... 37 1. Determinasi tanaman sirih merah ... 37 2. Determinasi tanaman sembukan ... 37 B. Persiapan Bahan ... 37 1. Hasil pengumpulan bahan ... 37 2. Hasil pengeringan daun sirih merah dan daun sembukan ... 38 3. Hasil pembuatan serbuk daun sirih merah dan daun sembukan... 39 4. Hasil penetapan kadar air serbuk daun sirih merah dan daun sembukan... 39 5. Hasil Identifikasi kandungan kimia serbuk daun sirih merah dan daun sembukan ... 40 ix
6. Hasil pembuatan ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan ... 41 7. Pemeriksaan organoleptis ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan... 42 8. Hasil tes bebas etanol ekstrak daun sirih merah dan sembukan ... 42 9. Hasil penetapan kadar air ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan menggunakan metode sterling bidwel... 43 10. Hasil Identifikasi kandungan kimia ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan ... 43 11. Hasil Uji Aktivitas Antiinflamasi ... 44 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 52 A. Kesimpulan ... 52 B. Saran ... 52 DAFTAR PUSTAKA ... 53 LAMPIRAN ... 61 x
DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 1. Bagan skema terjadinya inflamasi (Katzung 2002)... 16 Gambar 2. Skema alur uji antiinflmasi... 36 Gambar 3. Rata-rata volume kaki tikus... 45 xi
DAFTAR TABEL Halaman Tabel 1. Rendemen daun sirih merah dan daun sembukan kering terhadap daun sirih merah dan daun sembukan basah... 38 Tabel 2. Rendemen serbuk daun sirih merah dan daun sembukan terhadap daun sirih merah dan daun sembukan kering ... 39 Tabel 3. Hasil penetapan kadar air serbuk (sterling bidwel) ... 39 Tabel 4. Identifikasi kandungan kimia serbuk ... 40 Tabel 5. Rendemen ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan ... 41 Tabel 6. Pengamatan organoleptis ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan ... 42 Tabel 7. Hasil tes bebas etanol ekstrak ... 42 Tabel 8. Hasil penetapan kadar air ekstrak daun sirih merah ... 43 Tabel 9. Identifikasi kandungan kimia ekstrak ... 44 Tabel 10. Rata-rata volume edema tiap perlakuan ... 45 Tabel 11. Rata-rata AUC dan rata-rata DAI(%) ... 48 xii
DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Determinasi Tanaman Sirih Merah... 62 Lampiran 2. Determinasi Tanaman Sembukan... 63 Lampiran 3. Surat Pengambilan Bahan Baku Phenylbutazon ... 64 Lampiran 4. Surat Pengambilan Hewan Uji... 65 Lampiran 5. Data proses pembuatan ekstrak dan uji aktivitas antiinflamasi kombinasi daun sirih merah dan daun sembukan (Foto)... 66 Lampiran 6. Proses uji antiinflamasi ... 68 Lampiran 7. Hasil perhitungan rendemen berat daun kering terhadap berat daun sirih merah dan daun sembukam basah... 69 Lampiran 8. Hasil perhitungan rendemen berat daun kering terhadap berat serbuk daun sirih merah dan daun sembukam ... 71 Lampiran 9. Hasil penetapan kadar air serbuk daun sirih merah dan daun sembukan ... 72 Lampiran 10. Identifikasi kandungan kimia serbuk daun sirih merah dan daun sembukan melalui uji biokimia (uji tabung)... 73 Lampiran 11. Perhitungan rendemen serbuk daun sirih merah dan daun sembukan terhadap berat ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan... 75 Lampiran 12. Hasil penetapan kadar air ekstrak daun sirih merah dan ekstrak daun sembukan ... 76 Lampiran 13. Identifikasi kandungan kimia ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan melalui uji biokimia (uji tabung)... 77 Lampiran 14. Uji Pendahuluan ... 79 Lampiran 15. Perhitungan dosis dan penimbangan larutan stok... 80 Lampiran 16. Data volume telapak kaki tikus sebelum dikurangi Vo ... 85 Lampiran 17. Data volume udema kaki tikus (Vt - Vo)... 87 Lampiran 18. Data AUC dan DAI (%) ... 89 xiii
Lampiran 19. Perhitungan AUC... 92 Lampiran 20. Perhitungan DAI (%)... 92 Lampiran 21. Data hasil uji statistik area under curve... 96 xiv
INTISARI ARIANTO, 2017, UJI ANTIINFLAMASI KOMBINASI EKSTRAK ETANOL DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum Ruiz & Pav) DAN DAUN SEMBUKAN (Paederia foetida L.) PADA TIKUS JANTAN GALUR WISTAR YANG DIINDUKSI KARAGENIN, SKRIPSI, FAKULTAS FARMASI, UNIVERSITAS SETIA BUDI, SURAKARTA. Inflamasi adalah respon tubuh untuk menginaktivasi organisme yang menyerang, menghilangkan zat iritan, dan mengatur perbaikan jaringan. Tanaman sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) dan sembukan (Paederia foetida L) adalah tanaman tradisional yang berkhasiat sebagai obat antiinflamasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek antiinflamasi kombinasi ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan serta mengetahui kombinasi dosis yang dapat memberikan efek paling optimal. Uji aktivitas antiinflamasi dilakukan pada 7 kelompok tikus. Kelompok ke-1 (CMC Na 1%), ke-2 (Fenilbutazon 3,6 mg/200 g BB), ke-3 (ekstrak etanol daun sirih merah 10 mg/200 g BB), ke-4 (ekstrak etanol daun sembukan 4 mg/200 g BB), ke-5 kombinasi sirih merah dan sembukan 25% DE:75% DE (2,5 mg:3 mg)/200 g BB, ke-6 kombinasi 75% DE:25% DE (7,5 mg:1 mg)/200 g BB, dan ke-7 kombinasi sirih merah dan sembukan 50% DE:50% DE (5 mg:2 mg)/200 g BB. Setiap kelompok diinduksi karagenin 1%, kemudian diukur volume edema pada t0, t0.5, t1, t2, t3, t4, t5, dan t6. Aktivitas antiinflamasi ditunjukkan dalam penghambatan edema akibat induksi lambda karagenin. Untuk mengetahui perbedaan pada setiap perlakuan dilakukan uji ANOVA. Hasil penelitian menunjukkan kombinasi ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan mempunyai aktifitas antiinflamasi yang efektif dan sinergis dalam menghambat volume edema dibandingkan sediaan uji tunggal. Dosis yang memberikan efek paling optimal adalah kombinasi dosis masing-masing 50% DE (5 mg:2 mg)/ 200 g BB. Kata kunci :Antiinflamsi, sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.), sembukan (Paederia foetida L.) xv
ABSTRACT ARIANTO, 2017, ANTIINFLAMATION TEST KOMBINATION OF ETHANOL EXTRACT RED BETEL LEAVES (Piper crocatum Ruiz & Pav) AND SEMBUKAN LEAVES (Paederia foetida L.) IN RATS OF WISTAR GALUR TRAINS CARAGENIN INDICATED, SKRIPSI, FACULTY OF PHARMACHY, UNIVERSITY SETIA BUDI, SURAKARTA. Inflammation is the body's response to inactivate organisms that attack, remove irritant substances, and regulate tissue repair. Red betel (Piper crocatum Ruiz & Pav) and sembukan (Paederia foetida L.) is a traditional crop are efficacious as antiinflammatory drugs. This study aims to determine the effect of anti-inflammatory combination of ethanol extract of red betel leaf and leaves pepper and know the combination of doses that can provide the most optimal effect. Antiinflammatory activity test was performed on 7 groups of mice. The 1st group (CMC Na 1%), the 2nd group (Fenilbutazon 3,6 mg / 200 g BW), the 3rd group (red betel ectract 10 mg / 200 g BW), the 4th group (sembukan ectract 4 mg / 200 g BW), the 5th group is a combination of red betel and sembukan ectracts 25%: 75% (2,5 mg: 3 mg) / 200 g BW, the 6th group is a combination of red betel and sembukan ectracts 75%: 25% (7,5 mg: 1 mg) / 200 g BW, and the 7th group is a combination of red betel and sembukan ectracts 50%: 50% (5 mg: 2 mg)/ 200 g BW. Each group induced 1% carragenine, then measured edema volume at t0, t1, t2, t3, t4, t5, and t6. Antiinflammatory activity is demonstrated by its ability to inhibit edema induced by lambda carragenine induction. To know the difference in each treatment conducted ANOVA test. The results showed that the combination of red and red betel leaf ethanol extracts had effective and synergistic antiinflammatory activity in inhibiting edema volume compared to single test preparation. The dose that gives the most optimum effect is the dose combination of 50% DE (5 mg: 2 mg)/ 200 g BW. Keywords: Antiinflammation, red betel (Piper crocatum Ruiz & Pav.), Sembukan (Paederia foetida L.) xvi
BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Radang atau inflamasi merupakan respon protektif setempat yang ditimbulkan oleh cedera atau kerusakan pada jaringan yang berfungsi untuk menghancurkan, mengurangi, atau melokalisasi (sekuster) baik agen pencedera maupun jaringan yang cedera itu. Tanda-tanda pokok peradangan akut mencakup pembengkakan/edema, kemerahan, panas, nyeri, dan perubahan fungsi. Hal-hal yang terjadi pada proses radang akut sebagian besar dimungkinkan oleh pelepasan berbagai macam mediator kimia, antara lain amina vasoaktif, protease plasma, metabolit asam arakhidonat dan produk leukosit (Erlina et a.,l 2007). Inflamasi yang terjadi pada penderita tentu sangat mengganggu aktivitas, sehingga memerlukan pengobatan. Antiinflamasi didefinisikan sebagai golongan obat yang memiliki aktivitas menekan atau mengurangi peradangan. Berdasarkan mekanisme kerja obat-obat antiinflamasi terbagi dalam dua golongan, yaitu obat antiinflamasi golongan steroid dan obat Antiinflamasi Non Steroid (AINS). Mekanisme kerja obat antiinflamasi golongan steroid dan non-steroid terutama bekerja menghambat pelepasan prostaglandin ke jaringan yang mengalami cedera (Gunawan, 2007). Obat-obat tersebut selain memiliki aktivitas atiinflamasi tentu mempunyai efek samping, pada golongan steroid terdapat efek samping osteoporosis, meningkatkan tekanan intra okuler serta bersifat diabetik. Pada golongan nonsteroid dapat menyebabkan tukak lambung hingga pendarahan, gangguan ginjal dan anemia (Anonim 2005). Untuk memperkecil atau menghilangkan efek samping tersebut, bisa digantikan dengan obat tradisional atau alami. Di Indonesia terdapat kurang lebih 30.000 jenis tumbuh-tumbuhan lebih kurang 7.500 jenis diantaranya termasuk tanaman berkhasiat obat (kontranas dalam BPOM 2006). Salah satunya yang digunakan sebagai obat - obat tradisional adalah daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) dan daun sembukan (Paederia foetida L.) 1
2 Umumnya masyarakat mengenal tanaman sirih berdaun hijau, tetapi belakangan jenis sirih lain yaitu sirih merah selain sebagai tanaman hias yang tumbuh merambat dipagar atau dipohon sirih merah juga bermanfaat sebagai tanaman obat. Sirih merah berdasarkan kekerabatanya masih satu genus dengan sirih hijau (Piper betle, Linn). Menurut Solikhah 2006, secara empiris sirih merah digunakan sebagai obat kencing manis, ambeien, meredakan peradangan, kanker, asam urat, darah tinggi, hepatitis, kelelahan dan sakit maag. Senyawa yang terkandung dalam daun sirih merah yang diduga mempunyai daya antiinflamasi yaitu flavonoid dan tanin. Aktifitas antiinflamasi flavonoid ditunjukan dengan penghambatan COX dan lipooksigenase (Nijveld 2001). Tanin menghambat penanda inflamasi melalui oksidasi tanin dan pengurangan ROS termasuk radikal bebas, PGG juga telah terbukti dapat menghambat prostaglandin E2 (PGE2) (Melanie Diane Jeffers, 2006). Penelitian Atik et al. (2011) daun sirih merah memiliki daya antiinflamasi dengan dosis yang cukup kecil yaitu 50 mg/Kg BB dengan persen inhibisi sebesar 85,60%, sedangkan pada penelitian Alfi et al. (2010) sirih hijau dengan dosis 108 mg/kg BB dengan persen inhibisi 118,18%. Sembukan adalah tanaman yang mungkin sudah banyak didengar tetapi belum dimanfaatkan secara optimal. Daun sembukan berfungsi sebagai antirematik, analgesik, peluruh kentut (karminatif), peluruh dahak (mukolitik), peluruh kencing, penambah nafsu makan (stomakik), antibiotik, antiradang, dan pereda kejang (Utami 2008). Senyawa yang terkandung dalam daun ini adalah alkaloid, paederin, metilmerkaptan, iroid glikosida, paederosida, metilpaederosidat, arbutin, dan sapromosida (Xu. et al 2006). Iridoid glikosida memiliki fungsi beragam, yaitu sebagai antihepatotoksik, hipoglikemik, antispasmodik, antiinflamasi, antitumor, antivirus, imunomodulator, dan aktivitas purgatif. Kandungan daun sembukan yang diduga berperan dalam aktivitas antiinflamasi adalah asperulosida dan arbutin (El-Moaty, 2010). Arbutin menekan produksi LPS-induced NO dan ekspresi iNOS dan COX-2, pada dosis tertentu tanpa menyebabkan toksisitas seluler (Hyo-Jong Lee, 2012). Dari penelitian
sebelumnya yang telah dilakukan oleh Evy. et al 2011, hasil yang paling efektif yaitu dosis 20 mg/Kg BB dengan persen inhibisi 79,84%. Metode penyarian pada penelitian ini yang digunakan adalah maserasi. Digunakan pelarut etanol karena kebanyakan golongan senyawa seperti flavonoid, fenol - fenol, terpenoid dan minyak astsiri dapat larut dengan pelarut etanol. Etanol juga memiliki kelebihan, karena lebih selektif dan tidak dapat ditumbuhi kapang dan mikroorganisme (Voight. 1994). Berdasarkan kajian diatas kedua tanaman tersebut akan dikombinasikan dan diuji khasiatnya sebagai obat antiinflamasi dalam bentuk sediaan oral, diharapkan kombinasi dari daun sirih merah dan daun sembukan dengan dosis kecil menghasikan efek yang sinergis sebagai suatu sediaan obat herbal yang mampu mengurangi peradangan/inflamasi dengan menghasilkan persen inhibisi yang besar. B. Perumusah masalah Pertama, apakah kombinasi ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan mempunyai aktivitas antiinflamasi? Kedua, apakah kombinasi ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan memiliki efek antiinflamasi yang lebih efektif dibandingkan dengan ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan dalam sediaan tunggal ? Ketiga, pada kombinasi dosis berapa ekstrak etanol sisrih merah dan daun sembukan memiliki efek antiinflamasi paling efektif ? C. Tujuan Penelitian Pertama, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah kombinasi ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan memiliki efek antiinflamasi. Kedua, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah kombinasi ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan memiliki efek antiinflamasi yang lebih efektif dibanding sediaan tunggal. 3
Ketiga, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kombinasi dosis ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan yang memiliki efek antiinflamasi paling efektif. D. Kegunaan Penelitian Manfaat dari penelitian ini adalah untuk pengembangan potensi pendayagunaan tanaman obat berkhasiat yang ada di Indonesia, dan diharapkan dapat juga memberikan informasi kepada dunia kesehatan dan masyarakat mengenai manfaat kombinasi dari daun sirih merah dan daun sembukan sebagai tanaman obat khususya sebagai antiinflamasi. 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA A. Sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) 1. Klasifikasi tanaman Sirih merah termasuk salah satu tanaman asli indonesia yang banyak manfaatnya sehingga banyak di manfaatkan oleh masyarakat sebagai bahan obat tradisonal. Beberarapa sinonim dan nama lain dari famillia ini adalah Piper betle, Linn Var rubrum =Piper crocatum =Piper decumanum L. Tanaman ini juga memiliki beberapa nama daerah antara lain, sirih talan (Maluku), jahe suntil (Jawa) (Hariana 2007). Klasifikasi sirih merah menurut botani Sudewo (2010). Kingdom : Plantae Divisi : Tracheophyta Sub divisi : Angiospermae Kelas : Magnoliopsida Sub kelas : Magnolilidae Ordo : Piperales Famili : Piperaceae Genus : Piper Spesies : Piper crocatum Ruiz & Pav 2. Deskripsi tanaman Sirih merah termasuk dalam famili Piperaceae yang merupakan tanaman merambat dan sosoknya mirip tanaman lada. Tinggi tanaman ini biasanya mencapai 10 m, tergantung pertumbuhan dan tempat merambatnya. Batang sirih berkayu lunak, beruas-ruas, beralur dan berwarna hijau keabu-abuan. Daun tunggal berbentuk seperti jantung hati, permukaan licin, bagian tepi rata dan pertulangannya menyirip (Syariefa, 2006). Perbedaan sirih merah dengan sirih hijau adalah selain daunya berwarna merah, bila daun disobek maka akan berlendir serta baunya lebih wangi (Sastroamidjojo 1997). Sirih merah yang tumbuh di tempat teduh daunya akan 5
melebar dan batangnya tumbuh gemuk. Sirih merah yang terkena banyak sinar matahari, batang akan cepat mengering. Sirih merah yang terlalu banyak kena air, batang akan membusuk (Sudewo 2005). Tanaman sirih merah siap panen minimal berumur 4 bulan. Daun sirih merah yang telah memenuhi syarat untuk dipanen adalah daun yang sudah berumur lebih dari 1 bulan. Jika umurnya kurang dari 1 bulan, daunya masih tipis, cepat layu, aromanya belum kuat dan kandungan zat kimianya pun belum maksimal. Waktu yang tepat untuk memanen daun sebaiknya di lakukan pada pagi hari sampai dengan jam 11.00 siang, bila dipetik sore hari akan mengganggu proses pengeringan (Sudewo 2005). 3. Habitat dan Penyebaran Sirih merah tidak dapat tumbuh subur di daerah panas tetapi dapat tumbuh subur pada daerah yang teduh, dingin dan tidak terlalu banyak terkena sinar matahari dengan ketinggian 300-1000 m. Tanaman sirih merah sangat baik pertumbuhanya apa bila mendapat sinar matahari sekitar 60-70% (Sudewo et al. 2010; Amalia et al. 2002). Penyebaran tanaman sirih merah belum dapat di pastikan, namun dapat di pastikan di indonesia tersebar di daerah Sulawesi, Papua, Kalimantan dan beberapa daerah lainya (Sudewo et al. 2010; Amalia et al. 2002) 4. Kandungan kimia tanaman Tanaman sirih merah mengandung senyawa seperti alkaloid, flavonoid, tanin, minyak atsiri, saponin (Indri W, 2008). 4.1. Alkaloid. Alkaloid merupakan senyawa yang bersifat basa yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen dan biasanya berupa sistem siklis. Alkaloid mengandung atom karbon, hidrogen, nitrogen dan pada umumnya mengandung oksigen. Senyawa alkaloid banyak terkandung dalam akar, biji, kayu maupun daun dari tumbuhan dan juga dari hewan. Senyawa alkaloid merupakan hasil metabolisme dari tumbuh-tumbuhan dan digunakan sebagai cadangan bagi sintesis protein. Kegunaan alkaloid bagi tumbuhan adalah sebagai pelindung dari serangan hama, penguat tumbuhan dan pengatur kerja hormon. Alkaloid mempunyai efek fisiologis. Sumber alkaloid adalah tanaman berbunga, 6
angiospermae, hewan, serangga, organisme laut dan mikroorganisme. Famili tanaman yang mengandung alkaloid adalah Liliaceae, solanaceae, rubiaceae, dan papaveraceae (Tobing, 1989). 4.2 Flavonoid. Semyawa flavonoid adalah senyawa-senyawa polifenol. Senyawa flavonoid sebenarnya terdapat di semua bagian tumbuhan termasuk daun, akar, kayu, kulit, tepung sari, bunga, buah, dan biji (Sudewo 2010). Berdasarkan beberapa studi dan diskusi pada 1st International Conference on Polyphenols and Health disimpulkan bahwa polifenol seperti flavonoid memiliki efek buruk bagi kesehatan yaitu dapat menginhibisi tiroid peroksida dan mengganggu biosintesis hormone tiroid (Mennen 2005). 4.3. Saponin. Saponin adalah glikosida triterpena dan sterol dan telah terdeteksi dalam lebih dari 90 suku tanaman. Saponin adalah senyawa aktif permukaan yang kaut menimbulkan busa jika dikocok dengan air dan pada konsentrasi yang rendah sering menyebabkan hemolisis sel darah merah pada tikus (Harbone 1987). 4.4. Tanin. Tanin merupakan zat organik yang sangat kompleks dan terdiri dari senyawa Fenolik (Anonim, 2009). Tanin merupakan senyawa polyphenol dengan bobot molekul tinggi yang mengandung gugus hidroksil dan gugus lainnya (misalnya karboksil) untuk membentuk komplek yang kuat dengan protein dan molekul lain seperti karbohidrat, membran sel bakteri, dan enzim pencernaan (Cannas, 2008; Norton, 1998) 4.5. Minyak atsiri. Minyak atsiri di kenal sebagai minyak eteris, minyak esensial, minyak terbang serta minyak aromatis yang khas sebagaian besar merupakan fraksi menguap pada destilasi, senyawa ini bertanggung jawab terhadap rasa, bau dan aroma berbagai tanaman (Sirait 2007). 5. Kegunaan tanaman Secara empiris sirih merah dapat di gunakan untuk menyembuhkan berbagai penyakit seperti diabetes melitus, batu ginjal, kolesterol, hepaptitis, mencegah stroke, asam urat, hipertensi, radang liver, radang prostat, radang mata, keputihan, magg, kelelahan, nyeri sendi, memperhalus kulit, mencegah ejakluasi dini, anti kejang, antiseptik, analgesik, anti ketombe, hepatoprotektor, anti diare, 7
radang paru, radang gusi, radang payudara, mimisan dan batuk berdahak (Manoi 2007; Sudewo 2010). B. Sembukan (Paederia foetida L.) 1. Klasifikasi tanaman Di Indonesia tumbuhan sembukan dikenal dengan nama yang berbeda- beda di masing-masing daerah seperti Sumatera menyebutnya daun kentut, Sunda dinamakan kahitutan, atau kasembukan oleh orang Jawa. Nama daerah lainnya adalah bintaos (Madura), gumisiki (Ternate), jishiteng (China), dan di perdagangkan dengan nama Chinese fevervine herb (Heyne, 1987). Dalam sistematik botani Sudewo (2010), tanaman sembukan dapat diklasifikasikan sebagai berikut : Super Divisi : Spermatophyta Divisi : Magnoliophyta Kelas : Magnoliopsida Sub Kelas : Asteridae Bangsa : Rubiales Suku : Paederia Jenis : Paederia foetida L. 2. Deskripsi tanaman Sembukan tumbuh membelit, dengan panjang dapat mencapai 10 m. Batangnya pejal, sering beralur, masih muda halus setelah tua kasar, diameter 5 - L0 mm. Daun tanaman sembukan termasuk daun tunggal, berhadapan, membundar telur, dengan panjang 5-9 cm, tepi daun rata, ujung daun meruncing, pangkal berlekuk, berambut, petulangan menyirip, tangkai daun menyilinder, berbulu, panjang 3-5 cm, dengan diameter sekitar 2 mm, warna daun hijau. Bunga majemuk, bentuk mulai, dengan panjang 5-9 mm kelopak bunga segitiga, benang sari melekat pada tabung bakal buah dua ruang, bakal biji satu, kepala putik dua, bentuk benang, sering membelit, tabung mahkota bagian dalam berambut, bentuk kait, gundul, putih, mahkota panjang 10-12 mm, berbulu halus, dan warna bunga 8
halus, dan warna bunga ungu. Buah pada sembukan batu, bentuk bulat, berkilat, diameter 4-6 mm, dan warna buah kuning (Liu and Pemberton, 2008). 3. Ekologi dan Penyebaran Tumbuhan ini sering tumbuh di semak-semak dan tanah yang penuh dengan pepohonan. Tetapi juga dapat tumbuh di tepi hutan. Tumbuhan ini dapat tumbuh di pegunungan dengan ketinggian sampai 3000 m di atas permukaan laut, selain itu di lereng hutan yang curam atau di pantai laut berpasir atau berbatu. Tumbuhan ini ditemukan di Asia utara-timur yaitu dari India ke Cina kemudian Jepang, selanjutnya menyebar ke Asia selatan yaitu Thailand, Malaysia, Indonesia dan Philipina. Hingga menyebar ke daerah utara Amerika (Carolina utara,Texas, Louisiana), dan Hawai sebagai hiasan (Aguilar, 2001:399). 4. Kandungan kimia Kandungan yang terdapat dalam tumbuhan sembukan cukup banyak antara lain pada daun dan batangnya mengandung asperulosida, deasetilas-perulosida, 6β -Osinapoylscandoside methyl ester, tiga dimer iridoid glikosida, paederosida, metil ester asam paederosida, gama-sitosteron, arbutin, asam oleanolik, dan minyak atsiri. Selain itu daun sembukan juga mengandung alkaloid, paederin, metilmerkaptan alkaloid, flavonoida dan tanin (Silokin, 2007). Ekstrak etanol dari batang sembukan mengandung iridoid glikosida, paederosida, asam paederosida, metilpaederosidate, dan saprosmo-sida (Xu et al., 2006). Iridoid glikosida memiliki fungsi beragam, yaitu sebagai antihepatotoksik, hipoglikemik, antispasmodik, antiinflamasi, antitumor, antivirus, antidiare, imunomodulator, dan aktivitas purgatif (El-Moaty, 2010). 4.1 Minyak atsiri. Minyak atsiri di kenal sebagai minyak eteris, minyak esensial, minyak terbang serta minyak aromatis yang khas sebagaian besar merupakan fraksi menguap pada destilasi, senyawa ini bertanggung jawab terhadap rasa, bau dan aroma berbagai tanaman (Sirait 2007). 4.2. Asam eloanolik. Asam oleanolik merupakan golongan triterpenoid yang merupakan antioksidan pada tanaman. Mekanisme perlindungan oleh asam oleanolik adalah dengan mencegah masuknya racun kedalam sel dan meningkatkan sistem pertahanan sel (Liu J, 1995 ;Yin et al., 2007). 9
10 4.3. Flavonoid. Flavonoid merupakan salah satu senyawa golongan fenol alam yang terbesar (Harbone, 1987:47). Flavonoid terdapat dalam semua tumbuhan hijau sehingga pasti ditemukan pada setiap ekstrak tumbuhan (Markham, 1988:1). 4.4. Tanin. Tanin merupakan zat organik yang sangat kompleks dan terdiri dari senyawa Fenolik (Anonim, 2009). Tanin merupakan senyawa polyphenol dengan bobot molekul tinggi yang mengandung gugus hidroksil dan gugus lainnya (misalnya karboksil) untuk membentuk komplek yang kuat dengan protein dan molekul lain seperti karbohidrat, membran sel bakteri, dan enzim pencernaan (Cannas, 2008; Norton, 1998) 4.5. Steroid. Steroid adalah sebuah kelas tanaman metabolit sekunder. Steroid merupakan senyawa organik lemak sterol tidak terhidrolisis yang merupakan hasil reaksi dari turunan terpena atau skualena (Hanani et al., 2005). 4.6. Alkaloid. Alkaloid merupakan senyawa yang bersifat basa yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen dan biasanya berupa sistem siklis. Alkaloid mengandung atom karbon, hidrogen, nitrogen dan pada umumnya mengandung oksigen. Senyawa alkaloid banyak terkandung dalam akar, biji, kayu maupun daun dari tumbuhan dan juga dari hewan. Senyawa alkaloid merupakan hasil metabolisme dari tumbuh-tumbuhan dan digunakan sebagai cadangan bagi sintesis protein. Kegunaan alkaloid bagi tumbuhan adalah sebagai pelindung dari serangan hama, penguat tumbuhan dan pengatur kerja hormon. Alkaloid mempunyai efek fisiologis. Sumber alkaloid adalah tanaman berbunga, angiospermae, hewan, serangga, organisme laut dan mikroorganisme. Famili tanaman yang mengandung alkaloid adalah Liliaceae, solanaceae, rubiaceae, dan papaveraceae (Tobing, 1989). 5. Kegunaan tanaman Tanaman ini dapat berfungsi sebagai antirematik, penghilang rasa sakit atau analgesik, peluruh kentut (karminatif), peluruh kencing, peluruh dahak (mukolitik), penambah nafsu makan (stomakik), antibiotik, antiradang, obat batuk, dan pereda kejang. Selain itu juga dapat berperan sebagai obat radang usus (enteritis), bronkitis, tulang patah, keseleo, perut kembung, hepatitis, disentri, luka
benturan, dan obat cacing (Utami, 2008), mengatasi demam, masuk angin, rematik, herpes, disentri (Solikin, 2007). C. Simplisa Simplisia adalah bahan alamiah yang dipergunakan sebagai obat yang belum mengalami pegolahan apapun juga dan kecuali dinyatakan lain, berupa bahan yang telah dikeringkan. Simplisia nabati adalah simplisia yang berupa tamaman utuh, bagian tanaman atau eksudat tanaman dengan tingkat kehalusan tertentu. Simplisa hewani adalah simplisia yang berupa hewan utuh atau zat-zat berguna yang dihasilkan oleh hewan dan berupa bahan kimia murni. Simplisia pelican (mineral) adalah simplisia yang berupa tanaman pelican (mineral) yang belum mengalami proses pengolahan atau telah diolah dengan cara sederhana dan berupa bahan kimia murni (Gunawan dan Mulyani 2004). Untuk menjamin keseragaman senyawa aktif, keamanan dan kegunaannya, simplisia harus memenuhi persyaratan minimal sebagai berikut : 1. Pengumpulan bahan baku Kadar senyawa aktif dalam suatu simplisia berbeda-beda, antara lain tergantung pada bagian tanaman yang digunakan, umur tanaman atau bagian tanaman saat panen, waktu panen, dan lingkungan tempat tumbuh (Suharmiati & Maryani 2003). 2. Sortasi basah Kegiatan sortasi perlu dilakukan untuk membuang bahan lain yang tidak berguna atau berbahaya, seperti adanya rumput, kotoran binatang, bahan-bahan yang busuk, dan benda lain yang bisa mempengaruhi kualitas simplisia (Suharmiati & Maryani 2003). 3. Pencucian Agar bahan baku bebas dari tanah atau kotoran yang melekat dan bersih, harus dilakukan pencucian. Pencucian bisa dilakukan dengan menggunakan air PDAM, air sumur, atau air sumber yang bersih. Bahan simplisia yang mengandung zat yang mudah larut dalam air sebaiknya dicuci sesingkat mungkin (Suharmiati & Maryani 2003). 11
4. Perajangan Perajangan bahan simplisia di lakukan untuk mempermudah proses pengeringan, pengepakan dan penggilingan. Perajangan dapat dilakukan dengan pisau, dengan alat mesin perajangan khusus sehigga di peroleh irisan tipis atau potongan dengan ukuran yang di kehendaki (Anonim 1985). 5. Pengeringan simplisia Pengeringan simplisia bertujuan untuk menurunkan kadar air sehingga bahan tersebut tidak mudah di tumbuhi kapang dan bakteri, menghilangkan aktivitas enzim yang bisa menguraikan lebih lanjut kandungan zat aktif dan memudahkan dalam hal pengolahan proses selanjutnya (Gunawan & Mulyani 2007). Pengeringan dibagi menjadi dua yaitu pengeringan alami dan pengeringan buatan. 5.1. Pengeringan alami. Pengeringan dibawah sinar matahari, kelemahan pengeringan ini adalah cuaca (alam) dan panas atau suhu yang tidak terkontrol serta ada beberapa kandungan zat aktif yang rusak karena sinar Ultra Violet. 5.2. Pengeringan buatan. Pengeringan dengan menggunakan alat seperti oven, kelebihanya adalah suhu dapat diatur dan tanpa pengaruh sinar Ultra Violet. Pada umumnya suhu pengeringan antara 40-600C. Untuk penetapan kadar air menggunakan sterling bidwell. 6. Sortasi kering Sortasi setelah pengeringan merupakan tahap akhir pembuatan simplisia. Tujuan sortasi adalah untuk memisahkan benda-benda asing, seperti bagian bagian yang tidak diinginkan dan pengotoran lain masih ada dan tinggal (Suharmiati & Maryani 2003). 7. Pengepakan dan penyimpanan Tujuan pengepakan dan penyimpanan adalah untuk melindungi agar simplisia tidak rusak atau berubah mutunya karena beberapa factor, baik dari dalam maupun dari luar. Jika perlu dilakukan penyimpanan, sebaiknya simplisia disimpan di tempat yang kering, tidak lembap, dan terhindar dari sinar matahari langsung (Suharmiati & Maryani 2003). 12
D. Ekstrak, Ekstraksi dan Maserasi 1. Ekstrak Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Depkes RI, 2000). 2. Ekstraksi Ekstraksi adalah suatu proses pemisahan kandungan senyawa kimia dari jaringan tumbuhan maupun hewan. Sebelum dilakukan ekstraksi biasanya bahan- bahan di keringkan terlebih dahulu di haluskan pada derajat kehalusan tertentu (Harborne 1987). Banyak pilihan metode ekstraksi yang bisa digunakan untuk penarikan kandungan kimia. Adapun metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut, terdiri dari cara panas (refluks, sokletasi, digesti, infus, dekok) dan cara dingin (maserasi dan perlokasi) (Anonim 1986). 3. Maserasi Maserasi atau steady-state extraction adalah proses menempatkan simplisia kasar dalam wadah tertutup dan merendamnya dengan menggunakan pelarut yang sesuai. Pelarut bekerja dengan cara berdifusi melalui dinding sel tanaman utuk melarutkan konstituen dalam sel dan menarik senyawa didalam sel untuk berdifusi keluar. Pengadukan membantu proses difusi dan memastikan penyebaran pelarut terakumulasi di sekitar pemukaan partikel. Pengulangan proses maserasi (remaserasi) lebih efisien dari pada proses maserasi tunggal, hal ini terjadi karena terdapat kemungkinan sejumlah senyawa aktif yang masih tertinggal pada saat maserasi pertama. Pengulangan maserasi digunakan ketika senyawa aktif sagat sedikit dan tanaman mengandung minyak atsiri (Hananda. 2008). Ekstraksi untuk penelitian ini di lakukan dengan metode maserasi. Alasan menggunakan metode maserasi pada penelitian ini karena pelarut dalam metode maserasi tidak mengalami pemanasan sama sekali, sehingga metode maserasi 13
merupakan teknik ekstraksi yang dapat digunakan untuk senyawa yang tidak tahan panas, maka senyawa aktif pada daun sirih merah dan daun sembukan tidak akan terdestruksi atau rusak. 8. Pelarut Pelarut adalah zat yang digunakan untuk melarutkan suatu zat dan biasanya jumlahnya lebih besar dari pada zat terlarut. Hal-hal yang perlu dipertimbangkan dalam pemilihan pelarut adalah selektivitas, kapasitas, kemudahan untuk diuapkan dan harga pelarut tersebut. Prinsip kelarutan yaitu: pelarut polar akan melarutkan senyawa polar demikian juga sebaliknya pelarut non-polar akan melarutkan senyawa non-polar, dan pelarut organik akan melarutkan senyawa organik (Yunita 2004). Maserasi dalam penelitian ini di lakukan dengan menggunakan pelarut etanol 96% karena sifatnya yang mampu melarutkan hampir semua zat, baik yang bersifat polar, semi polar dan non polar serta kemampuanya untuk mengendapkan protein dan menghambat kerja enzim sehingga dapat terhindar dari proses hidrolisis dan oksidasi (Harborne 1987; Voigh 1994). E. Inflamasi 1. Pengertian Inflamasi merupakan suatu respon protektif normal terhadap luka jaringan yang disebabkan oleh trauma fisik, zat kimia yang merusak, atau zat mikrobiologi. Inflamasi adalah usaha tubuh untuk menginaktivasi organisme yang menyerang, menghilangkan zat iritan, da mengatur perbaikan jaringan (Mycek dkk. 2001). Tubuh mendapat manfaat dari inflamasi ini yaitu dengan memperbarui jaringan, melakukan pembersihan dan perbaikan, sehingga menyebabkan peningkatan aliran darah dan pembangunan jaringan baru (Aslid & Schuld. 2001). Inflamasi biasanya terbagi dalam 3 fase yaitu: inflamasi akut, respon imun dan inflamasi kronis. Inflamasi akut merupakan respon awal terhadap cedera jaringan, hal tersebut terjadi melalui media rilisnya autacoid yang terlibat antara lain histamin, serotonin, bradikinin, prostaglandin dan leukotrien. Respon imun terjadi bila sejumlah sel yang mampu menimbulkan kekebalan diaktifkan untuk 14
merespon organisme asing atau substansi antigenik yang terlepas selama respon terhadap inflamasi akut serta kronis. Akibat respon imun bagi tuan rumah mungkin menguntungkan, misalnya menyebabkan organisme penyerang difagositosis atau dinetralisir. Sebaliknya akibat tersebut juga dapat bersifat merusak bila menjurus pada inflamasi kronis tanpa penguraian dari proses cedera yang mendasarinya. Inflamasi kronis menyebabkan keluarnya sejumlah mediator yang tidak menonjol dalam respon akut. Salah satu kondisi yang paling penting yang melibatkan mediator ini adalah artritis rheumatoid, dimana inflamasi kronis menyebabkan sakit dan kerusakan pada tulang dan tulang rawan yang bisa menjurus pada ketidakmampuan untuk bergerak (Katzung, 2002). Bila membran sel mengalami kerusakan oleh suatu rangsang kimiawi, fisik, atau mekanis, maka enzim fosfolipase diaktifkan untuk mengubah fosfolipida yang terdapat di situ menjadi asam arachidonat, kemudian untuk sebagian diubah oleh enzim cyclo-oxygenase menjadi asam endoperoksida dan seterusnya menjadi zat zat prostaglandin. Bagian lain dari asam arachidonat diubah oleh enzym lipooksigenase menjadi zat leukotrien. Baik prostaglandin maupun leukotrien bertanggungjawab bagi sebagian besar dari gejala peradangan. Cyclo-oxygenase terdiri dari 2 isoenzym yakni COX-1 dan COX-2. COX-1 terdapat di kebanyakan jaringan, antara lain di pelat-pelat darah, ginjal, dan saluran cerna. Zat ini berperan pada pemeliharaan perfusi ginjal, homeostase vaskuler, dan melindungi lambung dengan jalan membentuk bikarbonat dan lendir serta menghambat produksi asam. COX-2 dalam keadaan normal tidak terdapat di jaringan, tetapi dibentuk selama proses peradangan oleh sel-sel radang dan kadarnya dalam sel meningkat sampai 80 kali (Tjay dan Raharja, 2002). 15
Gambar 1. Bagan skema terjadinya inflamasi (Katzung 2002). 2. Tanda klasik inflamsi 2.1. Rubor (Kemerahan). terjadi pada tahap pertama dari proses inflamasi yang terjadi karena darah terkumpul di daerah jaringan yang cedera akibat dari pelepasan mediator kimia tubuh (kinin,prostaglandin,histamine). Ketika reaksi radang timbul maka pembuluh darah melebar (vasodilatasi pembuluh darah) sehingga lebih banyak darah yang mengalir ke dalam jaringan yang cedera. 2.2. Kalor (Panas). Berjalan sejajar dengan kemerahan karena disebabkan oleh bertambahnya pengumpulan darah (banyaknya darah yang disalurkan), atau mungkin karena pirogen yang menggangu pusat pengaturan panas pada hipotalamus. 16
2.3. Dolor (Rasa sakit). Disebabkan banyak cara, perubahan lokal ion-ion tertentu dapat merangsang ujung saraf, timbulnya keadaan hiperalgesia akibat pengeluaran zat kimia tertentu seperti histamin atau zat kimia bioaktif lainnya dapat merangsang saraf, pembengkakan jaringan yang meradang mengakibatkan peningkatan tekanan lokal juga dapat merangsang saraf. 2.4. Tumor (Pembengkakan). Gejala yang paling menyolok dari peradangan akut adalah tumor atau pembengkakan yang ditandai adanya aliran plasma ke daerah jaringan yang cedera. 2.5. Funsio lansea (Gangguan fungsi). kenyataan adanya perubahan, gangguan, kegagalan fungsi telah diketahui, pada daerah yang bengkak dan sakit disertai adanya sirkulasi yang abnormal akibat penumpukan dan aliran darah yang meningkat juga menghasilkan lingkungan lokal yang abnormal sehingga tentu saja jaringan yang terinflamasi tersebut tidak berfungsi secara normal (Price & Wilson. 2005). 3. Mekanisme terjadinya inflamasi Proses inflamasi dimulai dari stimulus yang akan mengakibatkan kerusakan sel, sebagai reaksi terhadap kerusakan sel maka sel tersebut akan mengaktifkan enzim fosfolipase untuk mengubah fosfolipid menjadi asam arakidonat. Setelah asam arakidonat tersebut bebas maka akan diaktifkan oleh beberapa enzim, diantaranya siklooksigenase dan lipooksigenase. Enzim tersebut merubah asam arakidonat kedalam bentuk yang tidak stabil (hidroperoksid dam emdoperoksid) yang selanjutnya di metabolisme menjadi protaglandin, prostasiklin, tromboksan dan leukotrien. Bagian prostaglandin dan leukotrien bertanggung jawab terhadap gejala peradangan dan nyeri (Katzung, 2006). F. Obat antiinflamasi Obat antiinflamasi adalah sebutan untuk agen/obat yang bekerja melawan atau menekan proses peradangan (Dorlan, 2002). Terdapat tiga mekanisme yang digunakan untuk menekan peradangan yaitu pertama penghambatan enzim siklooksigenase. Siklooksigenase mengkatalisa sintetis pembawa pesan kimia yang poten yang disebut prostaglandin, yang mengatur peradangan, suhu tubuh, 17
18 analgesia, agregasi trombosit dan sejumlah proses lain. Mekanisme kedua untuk mengurangi keradangan melibatkan penghambatan fungsi-fungsi imun. Dalam proses peradangan, peran prostaglandin adalah untuk memanggil sistem imun. Infiltrasi jaringan lokal oleh sel imun dan pelepasan mediator kimia oleh sel-sel seperti itu menyebabkan gejala peradangan (panas, kemerahan, nyeri). Mekanisme ketiga untuk mengobati peradangan adalah mengantagonis efek kimia yang dilepaskan oleh sel-sel imun. Histamin, yang dilepaskan oleh sel mast dan basofil sebagai respon terhadap antigen, menyebabkan peradangan dan konstriksi bronkus dengan mengikat respon histamin pada sel-sel bronkus (Olson, 2003). Sampai beberapa tahun yang lalu, ada dua jalan untuk mengurangi peradangan secara farmakologi. Pendekatan yang pertama adalah kortikosteroid, dan yang kedua adalah penggunaan obat antiinflamasi non steroid (AINS) (Olson, 2003). 1. Obat Antiinflamasi Non Steroid (AINS) Obat antiinflamasi nonsteroid (AINS) merupakan suatu grup obat yang secara kimiawi tidak sama dan berbeda aktivitas antiinflmasinya. Obat-obat ini bekerja dengan menghambat enzim siklooksigenase tetapi tidak menghambat enzim lipooksigenase (Mycek, dkk. 2001). Mekanisme kerja golongan obat ini denga menghambat enzim siklooksigenase sehingga konversi asam arakidonat menjadi PGG2/PGH (Endoperoksid) terganggu. Setiap obat menghambat sikooksigenase dengan kekuatan dan selektivitas yang berbeda (Wilman & Sulistia, 2007). Termasuk golongan obat ini adalah : ibuprofen, indometasin, diklofenak, fenilbutazon, dan pirosikam (Gunawan, 2008). 2. Obat golongan steroid Efek antiradang Antiinflamasi Steroid berhubungan dengan kemampuannya untuk merangsang biosintesis protein lipomodulin yang dapat menghambat kerja enzimatik fosfolipase sehingga mencegah pelepasan mediator nyeri yaitu asam arakidonat dan metabolitnya, seperti prostaglandin, leukotrien, tromboksan dan prostasiklin. Obat ini dapat memblok jalur siklooksigenase dan lipooksigenase sedangkan Antiinflamasi Non Steroid (AINS) hanya memblok siklooksigenase. Oleh karena itu efeknya lebih baik dibanding AINS, namun efek
19 sampingnya lebih berbahaya pada dosis tinggi dan penggunaan lama (Tjay & Rahardja, 2007). G. Interaksi Obat Interaksi obat merupakan satu dari delapan kategori masalah terkait obat (drug-related problem) yang diidentifikasi sebagai kejadian atau keadaan terapi obat yang dapat mempengaruhi outcome klinis pasien. Sebuah interaksi obat terjadi ketika farmakokinetika atau farmakodinamika obat dalam tubuh diubah oleh kehadiran satu atau lebih zat yang berinteraksi (Piscitelli, 2005). Suatu interaksi terjadi ketika efek suatu obat diubah oleh kehadiran obat lain, obat herbal, makanan, minuman atau agen kimia lainnya dalam lingkungannya. Definisi yang lebih relevan kepada pasien adalah ketika obat bersaing satu dengan yang lainnya, atau apa yang terjadi ketika obat hadir bersama satu dengan yang lainnya (Stockley, 2008). Macam-macam interaksi obat : 1. Interaksi Farmasetik/Inkompatibilitas Interaksi ini terjadi diluar tubuh (sebelum obat diberikan) antara obat yang tidak dapat campur (inkompatibel). Pencampuran obat tersebut menyebabkan terjadinya reaksi langsung secara fisik atau kimiawi, yang hasilnya mungkin terlihat sebagai pembentukan endapan, perubahan warna dan mungkin juga tidak terlihat secara visual. Interaksi ini biasanya berakibat inaktivasi obat (Setiawati 2007). 2. Interaksi Farmakokinetik Interaksi farmakokinetik adalah interaksi yang terjadi bila satu obat mengubah tingkat absorpsi, distribusi, metabolisme atau ekskresi obat lain. Hal ini paling sering diukur dengan perubahan dalam satu atau lebih parameter kinetik, seperti konsentrasi serum puncak, area di bawah kurva, konsentrasi Waktu paruh, jumlah total obat diekskresikan dalam urin (Tatro, 2009). 3. Interaksi Farmakodinamik Interaksi farmakodinamik adalah interaksi yang terjadi antara obat yang memiliki efek farmakologis, antagonis atau efek samping yang hampir sama.
Interaksi ini dapat terjadi karena kompetisi pada reseptor atau terjadi antara obat- obat yang bekerja pada sistem fisiologis yang sama. Interaksi ini biasanya dapat diprediksi dari pengetahuan tentang farmakologi obat-obat yang berinteraksi (BNF 58, 2009). 4. Interaksi aditif atau sinergis Jika dua obat yang memiliki efek farmakologis yang sama diberikan bersamaan efeknya bisa bersifat aditif. Sebagai contoh, alkohol menekan SSP, jika diberikan dalam jumlah sedang dosis terapi normal sejumlah besar obat (misalnya ansiolitik, hipnotik, dan lain-lain), dapat menyebabkan mengantuk berlebihan. Kadang-kadang efek aditif menyebabkan toksik (misalnya aditif ototoksisitas, nefrotoksisitas, depresi sumsum tulang dan perpanjangan interval QT) (Stockley, 2008). 5. Interaksi antagonis atau berlawanan Berbeda dengan interaksi aditif, ada beberapa pasang obat dengan kegiatan yang bertentangan satu sama lain, Misalnya Kumarin dapat memperpanjang waktu pembekuan darah kompetitif menghambat efek vitamin K. Jika asupan vitamin K bertambah, Efek dari antikoagulan oral dihambat dan waktu protrombin dapat kembali normal ,sehingga menggagalkan manfaat terapi pengobatanan tikoagulan (Stockley, 2008). H. Karagenin Karagenin merupakan polisakarida sulfat yang berasal dari tanaman Chondrus crispus (Wattimena dan Widianto, 1993). Karagenin merupakan suatu polisakarida sulfat bermolekul besar sebagai induktor inflamasi (Corsini dkk., 2005). Penggunaan karagenin sebagai penginduksi radang memiliki beberapa keuntungan antara lain tidak meninggalkan bekas, tidak menimbulkan kerusakan jaringan dan memberikan respon yang lebih peka terhadap obat antiinflamasi dibanding senyawa iritan lainnya (Siswanto dan Nurulita, 2005). Pada proses pembentukan edema, karagenin akan menginduksi cedera sel dengan dilepaskannya mediator yang mengawali proses inflamasi. Edema yang 20
disebabkan induksi karagenin dapat bertahan selama 6 jam dan berangsur -angsur berkurang dalam waktu 24 jam. Edema yang disebabkan oleh injeksi karagenin diperkuat oleh mediator inflamasi terutama PGE1 dan PGE2 dengan cara menurunkan permeabilitas vaskuler. Apabila permeabilitas vaskuler turun maka 18 protein-protein plasma dapat menuju ke jaringan yang luka sehingga terjadi edema (Corsini dkk, 2005). Karagenin terbagi atas 3 fraksi, yaitu kappa karagenin, iota karagenin, dan lambda karagenin. Karagenin di beri nama berdasarkan persentase kandungan ester sulfatnya, yaitu kappa karagenin mengandung 25-30%, iota karagenin 28- 35% dan lambda karagenin mengandung 32-39%. Karagenin larut dalam air panas, air dingin, susu dan dalam larutan gula sehingga sering digunakan untuk bahan pengental dan pensetabil pada bahan makanan dan minuman (Lumbanraja, 2009). I. Metode Uji Antiinflamasi 1. Metode pembuatan edema buatan Metode udema kaki termasuk metode yang banyak digunakan untuk pengujian antiinflamasi suatu zat uji. Metode ini berdasar atas kemampuan zat uji untuk menghambat udema yang terbentuk akibat iritan yang diinjeksikan secara intraplantar pada kaki belakang tikus. Volume udema diukur sebelum dan sesudah pemberian iritan. Iritan yang bisa dipakai sebagai penginduksi antara lain formalin, karagenin, ragi, dan dekstran. Iritan yang memiliki kepekaan tinggi dan sering digunakan ialah karagenin. Efektivitas zat uji ditentukan dengan lebih sedikitnya volume udem yang terbentuk. Pada metode ini dapat ditentukan durasi efek antiinflamasi dari zat uji (Vogel 2002). 2. Metode pembentukan eritema Metode ini berdasarkan pengamatan secara visual terhadap eritema pada kulit hewan yang telah dicukur bulunya. Eritema dibentuk akibat iritasi sinar UV selama 20 detik, sehingga terjadi vasodilatasi yang diikuti dengan meningkatnya 21
permeabilitas pembuluh darah dan leukositosis lokal. Dua jam kemudian eritema yang terbentuk diamati (Vogel 2002). Metode ini dapat menggunakan hewan uji babi, pengamatan visual pada kulit hewan yang telah dicukur bulunya (Patel et al. 2012). Eritema yang terbentuk diamati 2 jam dan 4 jam setelah paparan sinar UV. Intensitas eritema ditentukan dengan skor 0-4 oleh dua peneliti yang berbeda. Faktor subyeksitas sulit dihilangkan pada penentuan skor intensitas eritema karena penilaian masing-masing peneliti bisa berbeda-beda (Vogel 2002). 3. Metode pembentukan kantong granuloma Metode ini berdasarkan pengukuran volume eksudat yang terbentuk di dalam kantong granuloma. Mula-mula benda berbentuk pelet yang terbuat dari kapas yang ditanam di bawah kulit abdomen tikus menembus lapisan linia alba. Respon yang terjadi berupa gejala iritasi, migrasi leukosit dan makrofag ke tempat radang yang mengakibatkan kerusakan jaringan dan timbullah granuloma (Vogel 2002). Teknik ini dilakukan dengan cara memberikan senyawa secara subkutan pada hewan percobaan. Granulasi jaringan mulai membelah dan akan terus membelah sampai menutupi bagian kantong granuloma. Jaringan ini terdiri dari fibrolas, sel-sel endotel, leukosit polimorfonuklear dan infiltrasi makrofag. Salah satu keuntungan dari teknik ini adalah kemungkinan untuk membawa senyawa uji untuk kontak langsung dengan sel target dengan menginjeksikannya pada kantong granuloma, senyawa dapat diberikan secara peroral atau injeksi parenteral (Patel et al. 2012). 4. Metode penghambatan adhesi leukosit Adhesi leukosit pada membran endothelium bisa terjadi pada proses peradangan. Leukosit pada sirkulasi darah mempunyai kecenderungan melekat pada dinding pembuluh darah dan kecenderungan ini makin meningkat saat terjadi inflamasi pada metode ini. Adhesi leukosit tersebut ditiru fMet-Leu-Phe (FMLP) yang sekaligus bertindak sebagai penginduksi radang (Vogel 2002). 22
5. Metode iritasi dengan panas Metode ini berdasarkan pengukuran luas radang dan berat edema yang terbentuk setelah diiritasi dengan panas. Mula-mula hewan diberi zat warna tripan biru yang disuntik secara iv, dimana zat ini akan berikatan dengan albumin plasma. Kemudian pada daerah penyuntikan tersebut dirangsang dengan panas yang cukup tinggi. Panas menyebabkan pembebasan histamin endogen sehingga timbul inflamasi. Zat warna akan keluar dari pembuluh darah yang mengalami dilatasi bersama-sama dengan albumin plasma sehingga jaringan yang meradang kelihatan berwarna. Penilaian derajat inflamasi diketahui dengan mengukur luas radang akibat pembesaran zat ke jaringan yang meradang. Pengukuran juga dapat dilakukan dengan menimbang edema yang terbentuk, dimana jaringan yang meradang dipotong kemudian ditimbang (Vogel 2002). 6. Metode penumpukan krystal synovitis Pada percobaan ini telapak kaki tikus disuntik dengan suspensi ragi brewer dalam larutan metil selulosa secara subkutan. Akibat penyuntikan menyebabkan peningkatan suhu rektal. Pada waktu 18 jam setelah penyuntikan diberikan obat secara oral dan suhu rektal diukur dalam selang waktu 30 menit (Vogel 2002). J. Hewan uji 1. Sistematika hewan uji Sistematika tikus putih menurut Sugiyanto (1995) adalah sebagai berikut: Filum : Chordata Sub filum : Vertebrata Classis : Mamalia Sub classis : Placentalia Ordo : Podentia Familia : Muridae Genus : Rattus Spesies : Ratuss norvegicus 23 ini
2. Karakteristik hewan uji Tikus merupakan satwa liar yang sering bersosialisasi dengan kehidupan manusia. Mempunyai ciri morfologi berbulu halus dan lembut, bentuk hidung berkerucut dan bentuk badan bersilinders. Di Asia habitatnya dihutan dan didaerah bersemak, juga bisa diternakan untuk digunakan dalam penelitian (Priyambodo 2003). Tikus relatif resisten terhadap infeksi dan tikus merupakan hewan yang cerdas. Tikus putih umumnya tenang dan mudah di tangani. Tikus tersebut bersifat fotofobik seperti halnya mencit dan cenderung untuk berkumpul dengan sesama tidak begitu besar, suhu tubuh normal 37,50C, apabila di perlakukan secara kasar akan menjadi kasar dan biasanya akan menyerang pemegangnya (Sugiyanto 1995). Tikus putih memiliki tiga galur yang umum dikenal yaitu galur Sprague- Dawley, galur Wistar dan galur Long-Evans. Galur Sprague-Dawley yang umum digunakan untuk penelitian mempuyai ciri berwarna putih albino, berkepala kecil dan ekornya lebih pajang dari badannya (Malole et al 1989). Tikus galur wistar (Ratuss norvegicius) adalah salah satu dari kebanyakan binatang - binatang yang di pelajari dalam ilmu pengetahuan (Mayres, P., 2004). Pada penelitian ini biasanya digunakan tikus berumur 2 -3 bulan dengan berat badan 180 - 200 gram (Priyambodo 2003). K. Landasan Teori Radang atau inflamasi merupakan respon protektif setempat yang ditimbulkan oleh cedera atau kerusakan pada jaringan yang berfungsi untuk menghancurkan, mengurangi, atau melokalisasi (sekuster) baik agen pencedera maupun jaringan yang cedera itu. Tanda-tanda pokok peradangan akut mencakup pembengkakan/edema, kemerahan, panas, nyeri, dan perubahan fungsi. Hal-hal yang terjadi pada proses radang akut sebagian besar dimungkinkan oleh pelepasan berbagai macam mediator kimia, antara lain amina vasoaktif, protease plasma, metabolit asam arakhidonat dan produk leukosit (Erlina et al 2007). 24
Obat antiinflamasi adalah obat yang memiliki aktivitas menekan atau mengurangi peradangan. Penggunaan obat modern seperti menggunakan AINS dan kortikosteroid menyebabkan efek samping. Efek samping penggunaan obat AINS yaitu menyebabkan tukak lambung sedangkan efek samping yang ditimbulkan akibat penggunaan kortikosteroid adalah osteoporosis. Adanya efek samping pada penggunaan obat modern ini dapat mengurangi keefektifan dari terapi, sehingga penggunaan obat tradisional dapat menjadi pilihan untuk menghilangkan efek samping. Salah satu tanaman di Indonesia yang dapat dimanfaatkan sebagai obat antiinflamasi adalah daun sirih merah dan daun sembuakan. Berdasarkan penelitian Atik et al, (2011) ekstrak daun sirih merah sebagai anti inflamasi dapat menghibisi radang. Berbagai zat kimia yang ada pada tanaman sirih merah mengandung senyawa seperti alkaloid, flavonoid, tanin, minyak atsiri, saponin (Sudewo 2010) Aktifitas dari daun sirih merah diduga mengandung senyawa flavonoid dan tanin. Aktifitas antiinflamasi flavonoid ditunjukan dengan penghambatan COX dan lipooksigenase (Nijveld 2001). Tanin menghambat penanda inflamasi melalui oksidasi tanin dan pengurangan ROS termasuk radikal bebas, PGG juga telah terbukti dapat menghambat prostaglandin E2 (PGE2) (Melanie Diane Jeffers, 2006). Dari hasil penelitian sebelumnya yang telah dilakukan oleh Atik et al, (2011), diketahui bahwa ekstrak metanol daun sirih merah dengan dosis 25 mg/kg BB, 50 mg/kg BB, 100 mg/kg BB telah teruji menghasilkan efek antiinflamasi ditinjau dari penurunan volume edema telapak kaki tikus putih jantan yang diinduksi oleh karagenin dan dosis yang paling efektif pada dosis 50 mg/kg BB dapat menekan edema sebesar 85,60%. Mekanisme tersebut juga didukung dengan aktivitas dari daun sembukan. Berdasarkan penelitian Evy et al, (2011), ekstrak etanol daun sembukan mempunyai efek antiinflamasi. Ekstrak etanol dari daun sembukan mengandung tiroid glukosida, paederosida, asperulosida asam paederosida, metilpaederosidate, dan saprosmosida Xu et al, (2006). Iroid glukosida memiliki fungsi beragam, yaitu sebagai anti hepatotoksik, hipoglikemik, antipasmodik, antiinflamasi, antitumor, antivirus, imunomodulator, dan aktivitas purgatif (El-Moaty, 2010). 25
Glukosida lainya yang terkandung dalam sembukan adalah arbutin (Aronson, 2009). Kandungan daun sembukan yang diduga berperan dalam aktivitas antiinflamasi adalah asperulosida dan arbutin. Arbutin menekan produksi LPS- induced NO dan ekspresi iNOS dan COX-2, pada dosis tertentu tanpa menyebabkan toksisitas seluler (Hyo-Jong Lee, 2012). Dari hasil penelitian sebelumnya yang telah dilakukan oleh Evy et al, (2011), diketahui bahwa ekstrak etanol daun sembukan dengan dosis 10 mg/kg BB, 20 mg/kg BB, 30 mg/kg BB, 40 mg/kg BB dan 50 mg/kg BB telah diuji dan mampu menurunkan volume edema pada kaki tikus yang di induksi karagenin dan dosis yang paling efektif yaitu pada dosis 20 mg/kg BB sebesar 79,84%. Di tinjau dari data praklinis tentang khasiat dari masing-masing tanaman, diketahui bahwa kedua tanaman tersebut dapat menghasilkan efek antiinflamasi, dan berdasarkan mekanisme kerja tanaman sirih merah dan daun sembukan, masing-masing bekerja sebagai antiinflamasi dengan cara menghambat produksi prostaglandin dan leukotrien (Anonim 2000; Sudjarwo 2004). Sehingga sirih merah dan daun sembukan dapat dikombiasikan untuk menghasikan efek yang di harapkan sinergis sebagai suatu sediaan obat herbal. Berdasarkan dosis dari referensi, kemudian dilakukan variasi dosis dari masing-masing tanaman untuk mengetahui kombinasi dosis yang paling efektif sebagai antiinflamasi. L. Hipotesis Berdasarkan permasalahan dan ditinjau dari landasan teori, dapat disusun hipotesis sebagai berikut: Pertama, kombinasi ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan memiliki efek antiinflamasi. Kedua, kombinasi ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan memiliki efek antiinflamasi yang lebih efektif dibandingkan dengan ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan dalam sediaan tunggal. Ketiga, pada kombinasi dosis masing-masing 50% DE dari ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan diduga memiliki efek antiinflamasi paling optimal. 26
BAB III METODE PENELITIAN A. Popualasi dan Sampel Populasi yang digunakan dalam penelitian ini adalah tanaman sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) dan sembukan (Paederia foetida L.). Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun tanaman sirih merah dan sembukan yang tua bebas dari hama yang diperoleh pada bulan Januari 2017 dari daerah Tawangmangu, Karanganyar, Jawa Tengah. B. Variabel penelitian 1. Identifikasi variabel utama Variabel utama pertama dalam penelitian ini adalah ekstrak kental daun sirih merah dan daun sembukan yang diperoleh dengan metode maserasi dengan pelarut etanol 96%. Variabel utama kedua adalah aktivitas antiinflamasi kombinasi ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan pada tikus jantan galur wistar. 2. Klasifikasi variabel utama Variabel utama yang telah diidentifikasi terlebih dahulu dapat diidentifikasi kedalam berbagai macam variabel yaitu variabel bebas, variabel terkendali dan variabel tergantung. Variabel bebas adalah variabel yang sengaja diubah-ubah untuk dipelajari pengaruhnya terhadap variabel tergantung. Variabel bebas yang di maksutkan dalam penelitian ini adalah kombinasi ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan yang diperoleh dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Variabel tergantung merupakan variabel akibat dari variabel utama. Variabel tergantung yang dimaksut pada penelitian ini adalah efek antiinflamasi kombinasi ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan dengan berbagai konsetrasi pada volume udem telapak kaki tikus. Variabel terkendali adalah variabel yang mempengaruhi variabel tergantung sehingga perlu dinetralisir atau ditetapkan kualifikasinya agar hasil 27
yang didapatkan tidak tersebar dan dapat diulangi peneliti lain secara tepat. Variabel terkendali yang dimaksut dalam penelitian ini adalah kondisi fisik hewan uji meliputi berat badan, usia, lingkungan, galur dan jenis kelamin, kondisi laboraturium, metode uji dan alat yang digunakan, serta kondisi peneliti. 3. Definisi operasional variabel utama Pertama, daun sirih merah dan daun sembukan adalah daun segar yang diperoleh pada bulan januari 2017 dari daerah Tawangmangu, Karanganyar, Jawa Tengah. Kedua, serbuk daun sirih merah dan daun sembukan adalah simplisia yang sudah mengalami pengeringan, dan diblender kemudian diayak dengan derajat halus nomor 40. Ketiga, etanol 96% adalah pelarut yang digunakan sebagai penyarian dalam metode maserasi yang berfungsi sebagai penyari bahan aktif daun sirih merah dan daun sembukan. Keempat, ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan adalah ekstrak kental daun sirih merah dan daun sembukan yang dihasilkan dari metode maserasi dengan pelarut etanol 96% v/v selama 5 hari yang kemudian dipekatkan dengan vaccum rotary evaporator. Kelima, hewan uji adalah tikus jantan jenis galur wistar, berumur 2-3 bulan, sehat dan berat badan berkisar 180 - 200 gram, yang diperoleh dari Laboratorium Universitas Setia Budi. Keenam, karagenin masuk kedalam tubuh tikus akan merangsang pelepasan mediator radang sehingga menimbulkan radang akibat antibodi tubuh beraeaksi terhadap antigen tersebut untuk melawan pengaruhnya. Ketuju, efek antiinflamasi adalah persentase kemampuan bahan uji untuk menurunkan edema pada kaki tikus yang diinduksi oleh karagenin dan diukur dengan plestismometer. C. Alat dan bahan 1. Alat 1.1. Alat pembuatan ekstrak. Alat yang digunakan untuk pembuatan ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan yaitu blender, ayakan no. 40, 28
oven, timbangan analitik, gelas ukur, beaker glass, botol maserasi, erlenmeyer, corong kaca, kain flanel, kertas saring dan vaccum rotary evaporator. 1.2. Alat uji kualitatif. Alat yang digunakan untuk uji kualitatif ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan adalah tabung reaksi. 1.3. Alat uji antiinflamasi. Alat yang digunakan untuk uji antiinflamasi meliputi kandang tikus lengkap dengan tempat makan dan minum, canule untuk pemberian secara oral, spuit injeksi untuk pemberian perlakuan secara injeksi, gelas ukur untuk mengukur volume larutan yang akan diberikan kepada hewan uji, stopwatch, dan pletismometer air raksa. 2. Bahan 2.1.Bahan sampel. Bahan sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun sirih merah dan daun sembukan yang diambil pada bulan Januari 2017 dari daerah Tawangmangu, Karanganyar, Jawa Tengah. 2.2. Bahan penyari. Bahan penyari yang digunakan untuk mendapatkan ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan adalah etanol 96%. Bahan untuk uji kualitatif adalah aquades, etanol, metanol, HCl, asam asetat anhidrat, kloroform, asam sulfat pekat, larutan Mayer, larutan Dragendorf, Fenil butazon sebagai pembanding positif, CMC 1% sebagai pembanding negatif, karagenin 1% sebagai pembuat edema dan larutan NaCl 0,9% sebagai pelarutnya. 2.3. Hewan uji. Tikus putih (Rattus norvegicus L.) jantan galur Wistar sebanyak 35 tikus dengan umur 2-3 bulan dan berat badan 200-250 gram. D. Jalanya Penelitian 1. Determinasi simplisia Determinasi tanaman bertujuan untuk menetapkan kebenaran yang berkaitan dengan ciri-ciri organoleptis dan morfologi daun sirih merah dan daun sembukan. Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sebelas Maret Surakarta. 2. Pengambilan bahan Daun sirih merah dan daun sembukan yang di ambil pada bulan Januari 2017 dari daerah Tawangmangu, Karanganyar, Jawa Tengah. Pengambilan daun 29
sirih merah dan daun sembukan dilakukan saat daun sudah tua. Daun yang dipanen kemudian dilakukan pembersihan dengan dicuci untuk menghilangkan kotoran pada daun, kemudian daun ditiriskan dan dikeringkan. 3. Penyiapan simplisia daun sirih merah dan daun sembukan Sampel dicuci dengan air mengalir sampai bersih, selanjutnya dirajang. Sampel yang telah di rajang lalu dikeringkan di bawah sinar matahari sebelum jam 9 pagi. Simplisia kemudian di oven pada suhu 40-50oC lalu di serbukan. 4. Pembuatan serbuk daun sirih merah dan daun sembukan Sampel dikeringkan dengan oven pada suhu 40-50oC. Pengeringan bertujuan untuk mengurangi kadar air, sehingga mencegah terjadinya perubahan kimiawi dan reaksi enzimatik yang menurunkan mutu, menghindari pertumbuhan jamur dan bakteri, memudahkan dalam proses penyerbukan (Harbone 1987). Sampel yang sudah di oven sampai kering lalu diserbukan dengan blender dan disaring dengan ayakan nomor 40. 5. Penetapan susut pengeringan serbuk daun sirih merah dan daun sembukan 5.1.Pemeriksaan organoleptik. Pemeriksaan ini meliputi bentuk, warna, bau dan rasa dari serbuk daun sirih merah dan daun sembukan 5.2. Penetapan kadar air serbuk. Penetapan kadar air serbuk dilakukan menggunakan alat sterling bidwell. yaitu ditimbang sejumlah bahan yang sudah dihaluskan dalam becker glass kemudian masukkan kedalam labu destilasi larutkan dalam pelarut organik (toluena, xylol) masukkan pada labu destilasi atur pemanasan, lanjutkan destilasi sampai semua air (lapisan bawah) menguap dan air dalam penampung tidak bertambah lagi, lalu baca volume air dan hitung % kadar dari berat sampel. 6. Pembuatan ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan. Penyarian dilakukan dengan cara menimbang 500 gram serbuk, kemudian ditempatkan pada botol kaca berwarna gelap (coklat) kedalamnya dimasukan pelarut etanol 96% sebanyak 7,5 kali bobot serbuk. Kemudian didiamkan selama 5 hari terlindung dari cahaya sambil digojok, penggojogan dilakukanan 1-3 kali sehari. Setelah 5 hari maserat disaring dengan kain flannel. Hasil maserasi yang 30
didapat dipekatkan dengan alat evaporator pada suhu 400C sampai pekat dan bebas etanol. 7. Identifikasi kandungan kimia daun sirih merah dan daun sembukan Identifikasi kandungan kimia ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan dilakukan untuk mengetahui kandungan senyawa flavonoid, saponin, alkaloid, tanin, steroid dan minyak atsiri. 7.1. Identifikasi alkaloid. Ambil ± 10 ml sari dari serbuk simplisia diuapkan, sisa dilarutkan dalam 1,5 ml larutan HCl 2%, ditambahkan larutan Mayer terbentuk endapan menggumpal berwarna putih atau kekuningan atau dengan larutan Dragendorf terbentuk endapan berwarna jingga atau coklat sampai kehitaman (Robinson 1995). 7.2. Identifikasi flavonoid. Ambil ± 3 ml sari dari serbuk simplisia diuapkan, sisa dilarutkan dalam 1-2 ml metanol 50% dengan bantuan pemanasan, tambahkan 0,1 g serbuk Mg, 4-5 tetes HCl pekat. Adanya flavonoid ditunjukkan dengan adanya warna merah atau jingga (Robinson 1995). 7.3. Identifikasi steroid. Ambil ± 10 ml sari dari serbuk simplisia diuapkan sampai kering, sisa dilarutkan dalam 0,5 ml asam asetat anhidrat, 0,5 ml kloroform, dan melalui dinding tabung reaksi tambahkan 1-2 ml H2SO4 pekat (Lieberman Buchard), pada batas larutan kedua, terbentuk cincin merah kecoklatan atau ungu, sedangkan larutan bagian atas menjadi hijau atau ungu, hal ini menunjukkan adanya steroid dan terpenoid (Robinson 1995). 7.4. Identifikasi saponin. Ambil ± 2 ml sari dari serbuk simplisia diuapkan sampai separuhnya, tambahkan air dengan volume yang sama, digojok kuat selama 15 detik kemudian akan terbentuk buih atau busa yang stabil setinggi kurang lebih 3 cm yang stabil dan ditambahkan dengan HCl 2N sebanyak 1 tetes, positif bila tetap terbentuk buih atau busa (Robinson 1995). 7.5. Identifikasi tanin. Dengan menambahkan larutan besi(III) klorida FeCl31% sebanyak 3 tetes dalam air atau etanol pada sampel, menimbulkan warna hijau, merah, ungu, biru atau hitam (Harborne, 1987) 7.6. Identifikasi minyak atsiri. Uji ini dilakukan dengan memberikan satu tetes asam sulfat pekat kepada ± 2 ml sari dari serbuk simplisia, positif bila menunjukkan warna ungu (Gunawan & Mulyani 2004). 31
32 8. Pembuatan larutan uji 8.1. Pembuatan suspensi karagenin 1%. Terlebih dahulu membuat pelarut untuk larutan karagenin 1% digunakan larutan garam fisiologis konsentrasi 0,9% dibuat dengan cara 0,9 g NaCl dilarutkan dengan aquades hingga volume 100 ml. Setelah itu barulah membuat larutan uji pembuat edema dengan cara timbang sejumlah 1 g karagenin lalu dilarutkan dalam 100 ml natrium klorida 0,9% di dalam Beaker glass (Bule 2014). Volume injeksi secara intraplantar pada kaki kiri belakang setiap tikus sebanyak 0,1 ml sudah dapat menimbulkan edema yang dapat teramati secara jelas (Rakhmawati 1997). 8.2. Pembuatan larutan CMC Na 1%. 200 mg serbuk CMC dimasukkan ke cawan penguap kemudian ditambah sedikit aquadest dan dipanaskan sampai mengembang. Setelah mengembang, CMC dimasukkan ke mortir lalu digerus dengan menambahkan sedikit aquadest, setelah itu dituang ke beaker glass dan tambahkan air suling sampai dengan 20 ml. 8.3. Pembuatan suspensi Fenilbutazon. Timbang 500 mg CMC-Na kemudian masukkan kedalam cawan penguap, tambahkan air suling sambil digerus sampai homogen. Larutan stock ini dibuat dengan mensuspensikan fenil butazon kedalam CMC-Na. 36 mg fenil butazon, masukkan ke dalam mortir yang berisi suspense CMC-Na, gerus sambil ditambahkan air suling 20 ml, sehingga diperoleh konsentrasi 3,6 mg/2 ml. 8.4. Pembuatan bahan uji tunggal. Pada penelitian ini ada 2 bahan uji tunggal yaitu dari ekstrak etanol daun daun sirih merah dan daun sembukan. Dosis yang digunakan disamakan dengan penelitian terdahulu yaitu untuk daun sirih merah 50 mg/kg BB dan daun sembukan 20 mg/kg BB kemudian dosis tersebut dikonversikan berdasarkan BB hewan uji, menjadi daun sirih merah 10 mg/200 g BB tikus dan daun sembukan 4 mg/200 g BB tikus. Pada penelitian ini pemberian ekstrak dilakukan secara peroral, dengan volume maksimum larutan yang diberikan pada tikus sebesar 5,0 ml (Harmita & Radji 2005). Volume oral untuk masing - masing ekstrak dibuat 2 ml/200 g BB tikus, dengan demikian masing - masing ekstrak disuspensikan dengan larutan CMC 1% terlebih dahulu.
8.5. Pembuatan bahan uji kombinasi. Volume oral kombinasi yang diberikan pada penelitian ini adalah 2 ml/200 g BB. 9. Uji antiinflamasi 9.1. Penetapan dosis fenilbutazon. Dosis fenil butazon yang digunakan pada manusia adalah 200 mg/70Kg BB manusia. Apabila dikonversikan ke dosis untuk pemberian kepada tikus memiliki faktor konversi sebesar 0,018. Bila dosis pada manusia adalah 200 mg/70kg BB maka dosis untuk tikus adalah 200 mg x 0,018 = 3,6 mg/200 gram tikus. 9.2. Penetapan dosis bahan uji. Berdasarkan penelitian terdahulu dosis ekstrak daun sirih merah 50 mg/kg BB secara oral efektif digunakan sebagai antiinflamasi (Atik et al, 2011). Dosis tersebut dikonversikan menjadi 10 mg/200 g BB tikus dan dibuat variasi dosis. Dosis ekstrak etanol daun sembukan berdasarkan penelitian terdahulu adalah 20 mg/kg BB (Evy et al, 2011), kemudian dosis tersebut dikonversikan menjadi 4 mg/200 g BB tikus dan dibuat variasi dosis. Pada penelitian ini dibuat kombinasi dosis yang bervariasi antara ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan dengan perbandingan dosis ( sirih merah : sembukan) 25%:75%, 50%:50%, dan 75%:25% berdasarkan dosis efektif. Pada penelitian ini CMC Na 1% 3 ml/200 g BB sebagai kontrol negatif dan sebagai kontrol positif yaitu Fenil butazon 3,6 mg/200 g BB. 9.3. Dosis karagenin 1%. Dosis karagenin 1% sebagai penginduksi yaitu 0,1 ml/ekor tikus. 9.4. Perlakuan terhadap hewan uji. Pada penelitian ini hewan uji yang digunakan adalah tikus putih jantan galur wistar berumur 2 - 3 bulan dengan bobot 150 g - 200 g. kelompok percobaan dibagi menjadi 5 kelompok, hewan uji dipuasakan 10 jam sebelum pengujian, namun air minum tetap diberikan. Pertama tikus ditimbang kemudian dikelompokkan secara acak. Ada 35 ekor tikus yang dibagi menjadi 7 kelompok. Pada kaki kiri belakang diberi tanda pada mata kaki untuk diinduksi, kemudian diukur volumenya terlebih dahulu dengan cara memasukkan telapak kaki tikus ke dalam plestismometer hingga tanda batas. Setiap tikus diberi perlakuan sesuai kelompoknya sebagai berikut : 33
Kelompok I : Sebagai kontrol negatif CMC Na 1% 3 ml/200 g BB tikus. Kelompok II : Sebagai kontrol positif Fenil butazon 3,6 mg/200 g BB tikus dalam larutan CMC Na 1% Kelompok III : Ekstrak etanol daun sirih merah 10 mg/200 g BB tikus dalam larutan CMC Na 1%. Kelompok IV : Ekstrak etanol daun sembukan 4 mg/200 g BB tikus dalam larutan CMC Na 1%. Kelompok V : Ekstrak etanol daun sirih merah 2,5mg/200 g BB tikus + ekstrak etanol daun sembukan 3mg/200 g BB tikus dalam larutan CMC Na 1% (25% : 75%). Kelompok VI : Ekstrak etanol daun sirih merah 5 mg/200 g BB tikus + ekstrak etanol daun sembukan 2mg/200 g BB tikus dalam larutan CMC Na 1% (50% : 50%). Kelompok VII : Ekstrak etanol daun sirih merah 7,5mg/200 g BB tikus + ekstrak etanol daun sembukan 1mg/200 g BB tikus dalam larutan CMC Na 1% (75% : 25%) Volume telapak kaki tikus diukur pada jam ke 0,0.5, 1, 2, 3, 4, 5, dan 6, dengan cara memasukkan telapak kaki tikus ke dalam alat pletismometer hingga batas tanda, menghitung AUC volume edema, dan menghitung % daya antiiflmasinya. Perhitungan Daya Antiinflamasi : 1. Volume udema dihitung dari selisih volume telapak kaki tikus sesudah dan sebelum pengindukasian karagenin 1%. Rumus menghitung volume udema: Vu = Vt - Vo Keterangan : Vu : volume edema kaki tikus tiap waktu t Vt :volume edema kaki tikus setelah diinduksi karagenan 1% pada waktu (t) Vo : volume edema kaki tikus sebelum dikaragenan 1% 34
35 2. Setelah diperoleh nilai volume udema kaki tikus, ditentukan nilai Area Under Curve dengan rumus: n1-n AUC = 1nnn1-ntt2VtVt Keterangan : 1-nVt : volume edema rata-rata pada 1nt nVt : volume rata-rata pada nt 3. Persentase daya antiinflamasi dihitung dengan rumus: DAI = 100% x AUCAUCAUCkpk Keterangan : AUCk :AUC kurva volume edema kontrol negatif AUCp :AUC kurva volume edema kelompok perlakuan tiap individu. Selanjutnya data yang diperoleh dianalisis secara statistik. E. Analisis Data Analisa data yang digunakan pada penelitian ini akan dipilih berdasarkan hasil data yang diperoleh. Uji distribusi normal (Kolmogorov-Smirnov) akan digunakan untuk menguji apakah data terdistribusi normal atau tidak. Jika data tidak terdistribusi normal (p < 0,05), maka dilanjutkan dengan uji non parametrik. Jika data terdistribusi normal (p > 0,05), maka dilanjutkan dengan uji parametrik (ANAVA). Bila ANAVA menunjukkan beda nyata dilihat dari test of homogeneity of variances untuk mengetahui variasinya sama atau tidak sama. Kriteria test of homogeneity of variances adalah bila signifikasinya > 0,05 maka varian sama, sebaliknya bila nilai signifikasinya < 0,05 maka varian tidak sama. Jika varian tidak sama maka uji dilanjutkan dengan tes Post Hoc untuk melihat apakah terdapat perbedaan diantara masing-masing kelompok perlakuan, yaitu uji tukey HSD (Honestly Significant Difference) dengan kepercayaan 95% atau uji SNK atau uji LSD, sedangkan jika variannya sama dapat dilanjutkan dengan uji Dunnett"s T3 (Besral 2010).
Tikus jantan galur wistar 35 ekor Kelompok I Kontrol inflamasi CMC Na 1% 3 ml/200 g Kelompok II Kontrol pembandin g obat Fenil butazon 3,6 mg/200 g Kelompok III Ekstrak etanol daun Sirih merah tunggal 10 mg/200 g Kelompok IV Ekstrak etanol daun Sembukan tunggal 4 mg/200 g Kelompok V Ekstrak etanol daun Sirih merah 2,5 mg/200 g + sembukan 3 mg/200 g Kelompok VI Ekstrak etanol daun Sirih merah 5 mg/200 g + sembukan 2 mg/200 g Di lakukan induksi karagenin 1% 0,1 ml pada kaki belakang tikus secara intraplanar Pengukuran volume edema pada jam ke : 0, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, dan 6 dengan alat plestismometer Analisa data Gambar 2. Skema alur uji antiinflmasi. 36 Kelompok VII Ekstrak etanol daun Sirih merah 7,5 mg/200 g + sembukan 1 mg/200 g
BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN A. Hasil Determinasi Tanaman 1. Determinasi tanaman sirih merah Determinasi tanaman sirih merah dilakukan di Laboratorium Biologi Fakultas MIPA Universitas Sebelas Maret Surakarta. Hasil determinasi tanaman sirih merah sebagai berikut: 23. Piperaceae. 1b-2b-3b. 3. Piper. 1. Piper crocatum Ruiz & Pav. Hasil determinasi dapat dilihat pada lampiran 1. 2. Determinasi tanaman sembukan Determinasi tanaman sembukan dilakukan di Laboratorium Biologi Fakultas MIPA Universitas Sebelas Maret Surakarta. Hasil determinasi tanaman sembukan sebagai berikut: 418a-419a. 162. Rubiaceae. 21a-22a-23b-24b-25b. 59. Paederia. 1a. Paederia foetida L. Hasil determinasi dapat dilihat pada lampiran 2. B. Persiapan Bahan 1. Hasil pengumpulan bahan Daun sirih merah dan daun sembukan di ambil pada bulan Januari 2017 dari daerah Tawangmangu, Karanganyar, Jawa Tengah. Pengambilan daun sirih merah dan daun sembukan dilakukan saat daun sudah tua. Bagian dari tanaman ini yang digunakan adalah daunnya, karena pada bagian tersebut diduga lebih banyak mengandung senyawa aktif yang berkhasiat sebagai antiinflamasi. 37
2. Hasil pengeringan daun sirih merah dan daun sembukan Daun dipanen kemudian masing-masing dibersihkan dari kotoran dan debu yang menempel dengan cara dicuci dengan air berulang-ulang sampai bersih bebas dari kotoran dan debu lalu daun ditiriskan dan diangin-anginkan, kemudian daun di oven pada suhu 500C selama 5 hari sampai kering. Hasil rendemen pengeringan daun sirih merah dan daun sembukan dapat dilihat pada tabel 2. Dan hasil perhitungan dapat dilihat pada lampiran 3. Tabel 1. Rendemen daun sirih merah dan daun sembukan kering terhadap daun sirih merah dan daun sembukan basah. Keterangan Sirih merah Sembukan Berat basah (g) 6000 6000 Berat kering (g) 1500 1200 Rendemen (%)b/b 25% 20% LOD (%) 75% 80% Daun sirih merah sebanyak 6000 g kondisi basah dikeringkan pada suhu 50oC kemudian diperoleh 1500 g daun sirih merah kering (rendemen 25%). Daun sembukan sebanyak 6000 g kondisi basah dikeringkan pada suhu 50oC dan diperoleh daun sembukan kering sebanyak 1200 g (rendemen 20%). Nilai rendemen yang dimaksud adalah perbandingan kandungan air daun kering terhadap daun basah, sedangkan LOD (Loss of Drying ) adalah kandungan atau zat yang yang hilang saat proses pengeringan. Pengeringan harus dijaga pada suhu konstan 50oC dalam oven, karena bila suhunya terlalu tinggi maka dapat terjadi kerusakan senyawa aktif dan bila suhu terlalu rendah maka pengeringan menjadi tidak sempurna, akibatnya terjadi proses pembusukan. Pengeringan bertujuan untuk mencegah terjadinya kerusakan kandungan zat aktif yang ada dalam tanaman. Selain itu pengeringan juga dapat dilakukan untuk mengurangi kadar air, mencegah pertumbuhan jamur karna air adalah media paling bagus untuk berkembangbiaknya mikroba, dan memperpanjang waktu pemakaian sehingga dapat disimpan dalam jangka waktu yang lama. Jika tidak dilakukan pengeringan maka akan terjadi kerusakan akibat peruraian zat aktif secara enzimatis seperti hidrolisis, oksidasi dan polimerisasi. Setelah dirajang, sebaiknya langsung segera dikeringkan untuk menghindari naiknya aktivitas 38
39 enzim dengan adanya air dalam simplisia. Setelah kering lalu daun diserbuk untuk memudahkan dalam penyarian senyawa aktif didalamnya. 3. Hasil pembuatan serbuk daun sirih merah dan daun sembukan. Daun sirih merah dan daun sembukan yang telah dikeringkan kemudian digiling dan dihaluskan lagi menggunakan blender dan diayak menggunakan ayakan no.40. Tujuan dari pengayakan ini agar partikel yang dihasilkan menjadi seragam sehingga pengekstraksian dapat berlangsung efektif. Nilai rendemen serbuk dipengaruhi oleh faktor penggilngan serta pengayakan karena tidak semua pertikel serbuk dapat tersaring dan kecepatan pengayakan juga mempengaruhinya. Hasil rendemen berat serbuk daun sirih merah dan daun sembukan terhadap berat daun kering dapat dilihat pada tabel 2. Data perhitungan dapat dilihat pada lampiran 8. Tabel 2. Rendemen serbuk daun sirih merah dan daun sembukan terhadap daun sirih merah dan daun sembukan kering Keterangan Sirih merah Sembukan Berat daun kering (g) 1500 1200 Berat serbuk (g) 1000 1000 Rendemen (%)b/b 66,67% 83,33% 4. Hasil penetapan kadar air serbuk daun sirih merah dan daun sembukan. Kelembaban yang terlalu tinggi pada serbuk akan memudahkan pertumbuhan jamur dan bakteri serta perubahan kimiawi yang dapat merusak serbuk. Hasil penetapan kandungan air serbuk daun sirih merah dan daun sembukan dapat dilihat pada tabel 3. Data perhitungan dapat dilihat pada lampiran 9. Tabel 3. Hasil penetapan kadar air serbuk (sterling bidwel) Tanaman Sirih Merah Sembukan Replikasi 1 2 3 1 2 3 Berat serbuk (g) 20 g 20 g 20 g Rata-Rata 20 g 20 g 20 g Rata-Rata Volume terukur (ml) 1,4 ml 1,4 ml 1,3 ml 1,5 ml 1 ml 1 ml Rendemen ( % ) 7,00% 7,00% 6,50% 6,83%±0,003 7,50% 5,00% 5,00% 5,83%±0,014
40 Kadar air rata-rata yang diperoleh dari serbuk daun sirih merah sebesar 6,83%. Dan kadar air rata-rata yang diperoleh dari serbuk daun sembukan sebesar 5,83 %. Kandungan air pada kedua sampel tersebut masih dibawah 10%. Perolehan kadar air tersebut menunjukkan bahwa serbuk daun sirih merah dan daun sembukan dapat disimpan dalam waktu yang cukup lama untuk digunakan lebih lanjut. Kadar air yang terkandung dalam suatu bahan kurang dari 10% maka kestabilan optimum bahan akan tercapai dan pertumbuhan mikroba dapat dikurangi (Depkes 1979). 5. Hasil Identifikasi kandungan kimia serbuk daun sirih merah dan daun sembukan Pemeriksaan kandungan kimia serbuk bertujuan untuk membuktikan kandungan kimia yang ada dalam serbuk daun sirih merah dan serbuk daun sembukan. Hasil identifikasi dapat dilihat ditabel 4. Tabel 4. Identifikasi kandungan kimia serbuk Senyawa Pereaksi Sirih Merah Hasil Sembukan Pustaka Interprestasi hasil Sirih merah Sembukan Alkaloid Dragendorf Endapan coklat kehitaman Endapan coklat kehitaman Endapan coklat kehitaman (Robinson 1995) Positif Positif Flavonoid Asam klorida warna jingga warna jingga warna merah atau jingga (Harborne, 1987). Positif Positif Steroid Lieberman buchard Tidak ada peubahan Cincin coklat, lar. Atas hijau Cincin merah coklat, lar. Bag. Atas hijau (Robinson 1995) Negatif Positif Saponin Minyak atsiri Tanin HCl 2 N Asam sulfat pekat FeCI3 Terbentuk buih Terbentuk buih Warna ungu Warna ungu Terbentuk warna hijau Terbentuk warna hijau kehitaman Terbentuk buih (Robinson 1995) Warrna ungu (Robinson 1995) warna hijau, merah, ungu, biru atau hitam (Harborne, 1987). Positif Positif Positif Positif Positif Positif Hasil identifikasi kandungan kimia serbuk secara uji biokimia menunjukkan bahwa pada daun sirih merah mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, tanin dan minyak atsiri. Hasil ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Atik et al. (2011) dan Irmanida et al. (2011). Pada hasil
identifikasi kandungan kimia serbuk daun sembukan mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, steroid, saponin, tanin dan minyak atsiri. Hasil identifikasi sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Rajesh et al. (2013) dan Evy et al. (2011). Data uji senyawa kimia serbuk dapat dilihat dilampiran 10. 6. Hasil pembuatan ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan Serbuk daun sirih merah dan daun sembukan digunakan untuk pembuatan ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan. Untuk mendapatkan suatu ekstrak harus dilakukan dengan proses ekstrasi. Ekstraksi bahan alam digunakan untuk menarik komponen kimia yang terdapat pada bahan alam. Proses ekstraksi bisa menggunakan berbagai macam metode, dan dalam penelitian ini digunakan metode maserasi, karena mengunakan peralatan yang sederhana, mudah dilakukan, sampel mudah larut dalam pelarut dan untuk menghindari kerusakan senyawa aktif yang tidak tahan terhadap pemanasan. Pemilihan metode maserasi juga digunakan pada penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Atik et al.(2011) untuk daun sirih merah dan Evy et al.(2011) untuk daun sembukan. Pelarut yang digunakan harus selektif. Pelarut yang digunakan adalah etanol 96%, karena etanol merupakan pelarut universal, sehingga dapat menarik sebagian besar senyawa aktif yang ada pada simplisia tersebut. Wadah maserasi yang digunakan botol kaca gelap untuk menghindarkan dari sinar matahari secara langsung. Proses maserasi dilakukan dalam keadaan tertutup agar etanol tidak menguap pada suhu kamar. Proses penguapan dilakukan dengan Rotary evaporator, keuntungannya adalah dapat mencegah terurai atau rusaknya senyawa aktif yang tidak stabil terhadap suhu tinggi. Data rendemen ekstrak dapat dilihat pada tabel 5. Data perhitungan dapat dilihat pada lampiran 11. Tabel 5. Rendemen ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan Keterangan Bobot serbuk (g) Ekstrak kental (g) Rendemen (%) Sirih merah Sembukan 500 500 106,6 125,7 21,32% 25,15% 41
42 Hasil rendemen berat serbuk daun sirih merah kering terhadap berat ekstrak daun sirih merah yakni dari sebuk daun sirih merah kering 500 gram diperoleh berat ekstrak daun sirih merah 106,6 gram sehingga rendemennya 21,32%. Hasil rendemen berat serbuk daun sembukan terhadap berat ekstrak daun sembukan kering yakni dari serbuk daun sembukan kering 500 gram diperoleh berat ekstrak daun sembukan 125,7 gram sehingga rendemennya 25,15%. 7. Pemeriksaan organoleptis ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan. Permeriksaan organoleptis ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan meliputi bau, bentuk, warna dan rasa. Data pemeriksaan organoleptis dapat dilihat pada tabel 6. Tabel 6. Pengamatan organoleptis ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan Ekstrak Bau Bentuk Warna Rasa Sirih merah Sembukan Bau pedas sirih Bau busuk Kental Kental Coklat kehitaman Hijau kehitaman Pahit getar Sepat dilidah 8. Hasil tes bebas etanol ekstrak daun sirih merah dan sembukan Tes bebas etanol ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan dilakukan dengan cara esterifikasi etanol. Data tes bebas etanol dapat dilihat pada tabel 7. Tabel 7. Hasil tes bebas etanol ekstrak Tanaman Sirih merah Sembukan Prosedur Ekstrak daun sirih asam merah + sulfat pekat asam asetat, dipanaskan Ekstrak daun sembukan + asam sulfat pekat asam asetat, dipanaskan Hasil pengamatan Tidak tercium bau ester yang etil khas dari asetat (bebas etanol) Tidak bau khas dari asetat etanol) tercium esteryang etil (bebas Pustaka (Praeparandi 1979) Tidak tercium bau ester yang khas dari etil asetat Tidak tercium bau ester yang khas dari etil asetat
43 Hasil tes bebas etanol menunjukkan bahwa ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan sudah bebas dari etanol, hal ini ditunjukan dengan tidak adanya bau ester yang khas dari etil asetat. 9. Hasil penetapan kadar air ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan menggunakan metode sterling bidwel. Dibawah ini merupakan data hasil penetapan kadar air ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan. Data penetapan kadar air ekstrak dapat dilihat di tabel 8. Tabel 8. Hasil penetapan kadar air ekstrak daun sirih merah Tanaman Sirih merah Sembukan Replikasi Berat ekstrak (g) 1 2 3 1 2 3 10 g 10 g 10 g Rata-Rata 10 g 10 g 10 g Rata-Rata Volume terukur ( ml ) 0,8 ml 0,7 ml 0,8 ml 0,6 ml 0,7 ml 0,6 m Rendemen (%) 8,00 % 7,00 % 8,00 % 7,67 %±0,577 6,00 % 7,00 % 6,00 % 6,33%±0,577 Dari kedua tabel diatas dapat dilihat bahwa kadar air ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan memenuhi syarat yaitu 7,67% dan 6,33%. Ada beberapa jenis ekstrak yakni: ekstrak cair, ekstrak kental dan ekstrak kering. Ekstrak cair jika hasil ekstraksi masih bisa dituang, biasanya kadar air lebih dari 30%. Ekstrak kental jika memiiki kadar air antara 5-30%. Ekstrak kering jika mengandung kadar air kurang dari 5% (Voigt 1994). Data perhitungan dapat dilihat pada lampiran 12. 10. Hasil Identifikasi kandungan kimia ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan Pemeriksaan kandungan kimia ekstrak daun sirih erah dan serbuk daun sembukan bertujuan untuk membuktikan kandungan kimia yang ada dalam ekstrak daun sirih merah dan serbuk daun sembukan. Hasil identifikasi ini juga
44 digunakan sebagai acuan terhadap mekanisme antiinflamasi tiap jenis senyawa dari kandungan kimia tanaman sirih merah dan sembukan. Hasil identifikasi dapat dilihat ditabel 9. Tabel 9. Identifikasi kandungan kimia ekstrak Senyawa Pereaksi Sirih Merah Hasil Sembukan Pustaka Interprestasi hasil Sirih merah Sembukan Alkaloid Flavonoid Steroid Saponin Minyak atsiri Tanin Dragendorf Asam klorida Lieberman buchard HCl 2 N Asam sulfat pekat FeCI3 Endapan kehitaman Endapan kehitaman warna jingga warna jingga Tidak ada peubahan Cincin coklat, lar. Atas hijau Terbentuk buih Terbentuk buih Warna ungu Warna ungu Terbentuk warna hijau kehitaman Terbentuk warna hijau kehitaman Endapan coklat kehitaman (Robinson 1995) warna merah atau jingga (Harborne, 1987). Cincin merah coklat, lar. Bag. Atas hijau (Robinson 1995) Terbentuk buih (Robinson 1995) Warrna ungu (Robinson 1995) warna hijau, merah, ungu, biru atau hitam (Harborne, 1987). Positif Positif Negatif Positif Positif Positif Positif Positif Positif Positif Positif Positif Hasil identifikasi kandungan kimia serbuk secara uji biokimia menunjukkan bahwa pada daun sirih merah mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, tanin dan minyak atsiri. Hasil ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Atik et al. (2011) dan Irmanida et al. (2011). Pada hasil identifikasi kandungan kimia serbuk daun sembukan mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, steroid, saponin, tanin dan minyak atsiri. Hasil identifikasi sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Rajesh et al. (2013) dan Evy et al. (2011). Data uji senyawa kimia serbuk dapat dilihat dilampiran 13. 11. Hasil Uji Aktivitas Antiinflamasi Pengujian aktivitas antiinflamasi dilakukan terhadap hewan uji tikus putih jantan galur wistar yang berumur 2-3 bulan dengan berat badan 220-250 g. Pengujian ini dimaksudkan untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi kombinasi ekstrak etanol sirih merah dan sembukan. Data yang diperoleh dari hasil pengamatan uji aktivitas antiinflamasi adalah volume telapak kaki tikus. Volume
telapak kaki tikus diukur pada menit ke 0, 30, 60, 120, 180, 240, dan 360. Di bawah ini merupakan tabel rata-rata telapak kaki tikus tiap perlakuan: Tabel 10. Rata-rata volume telapak kaki tikus tiap perlakuan Kelompok Perlakuan K1 K2 K3 K4 K5 K6 K7 0 0,38 0,35 0,35 0,41 0,37 0,34 0,40 Volume telapak kaki tikus (ml) pada menit ke 30 0,57 0,47 0,49 0,56 0,51 0,48 0,52 60 0,64 0,49 0,53 0,59 0,55 0,51 0,55 120 0,67 0,50 0,55 0,62 0,57 0,52 0,56 180 0,76 0,52 0,58 0,66 0,60 0,56 0,58 240 0,79 0,53 0,59 0,67 0,61 0,57 0,58 300 0,82 0,53 0,59 0,68 0,62 0,57 0,58 Dari tabel hasil rata-rata volume telapak kaki tikus digambarkan dalam grafik, selengkapnya disajikan pada gambar 3. Rata-rata volume telapak kaki tikus ) l m ( s u k i t i k a k k a p a l e t e m u l o V 0 30 60 120 180 240 300 360 Waktu (menit) Gambar 3. Rata-rata volume telapak kaki tikus Keterangan : K1 : CMC-Na 1%. (Kontrol Negatif) K2 : Fenilbutazon 200 mg/70KgBB manusia ( 3,6 mg/200gBB tikus). (Kontrol Positif) K3 : Ekstrak Daun Sirih Merah dosis 10 mg/200gBB tikus. K4 : Ekstrak Daun Sembukan 4mg/200gBB tikus. K5 : Kombinasi Daun Sirih Merah 2,5mg/200gBB + Daun Sembukan 3mg/200gBB (25%:75%). K6 : Kombinasi Daun Sirih Merah 7,5 mg/200gBB + Daun Sembukan 1 mg/200gBB (75%:25%). K7 : Kombinasi Daun Sirih Merah 5 mg/200gBB + Daun Sembukan 2 mg/200gBB (50% : 50%). 45 360 0,83 0,51 0,58 0,67 0,62 0,56 0,58 K1 K2 K3 K4 K5 K6 K7
46 Dari grafik di atas terlihat bahwa volume telapak kaki tikus pada keseluruhan kelompok meningkat 30 menit setelah pemberian karagenin dan bertahan sampai menit ke 360. Pada kelompok kontrol negatif CMC-Na yang diinduksi karagenin volume telapak kaki tikus meningkat tanpa mengalami penurunan karena CMC-Na merupakan suspending agent yang tidak memiliki aktivitas antiinflamasi. Hasil penelitian ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Morris (2003) bahwa pada kelompok perlakuan kontrol negatif CMC-Na yang diinduksi lambda karagenin dapat menyebabkan edema melalui tiga fase, yang pertama adalah pelepasan histamin dan serotonin berlangsung selama 90 menit, fase kedua adalah pelepasan bradikinin yang terjadi pada 1,5 jam hingga 2,5 jam setelah diinduksi dan fase terakhir pada 3 jam setelah induksi terjadi pelepasan prostaglandin lalu volume edema maksimal dan bertahan 5 jam setelah induksi lambda karagenan. Selain itu lambda karagenin merupakan penginduksi yang sering digunakan karena penggunaannya tidak menimbulkan bekas dan tidak merusak jaringan. Pada kelompok kontrol positif yang diberi fenilbutazon dengan dosis 3,6 mg/ 200 gBB volume telapak kaki tikus meningkat pada menit ke 30, volume telapak kaki tertinggi terjadi pada menit ke 180, lalu volume tersebut stabil hingga menit ke 300 dan menurun pada menit ke 360. Hal ini menunjukkan bahwa fenilbutazon memberikan efek terapi yang baik berupa hambatan edema yang terjadi pada menit 180. Fenilbutazon memberikan efek terapi penghambatan edema yang dimulai pada menit ke 30. Fenilbutazon merupakan obat golongan AINS dengan mekanisme kerja menghambat enzim siklooksigenase sehingga konversi asam arakidonat menjadi PGG2/PGH (Endoperoksid) terganggu. Absorbsi fenilbutazon akan cepat dan sempurna jika diberikan secara per oral. Bioavailabilitas fenilbutazon secara per oral mencapai 54 sampai 69 %, dengan konsentrasi tertinggi dicapai dalam waktu 2 jam. 98% fenilbutazon dalam plasma terikat pada protein plasma. Masa paruh fenilbutazon lama, yaitu 50-100 jam (Kee dan Hayes, 1996). Pada kelompok ekstrak daun sirih merah dosis 10 mg/200gBB tikus, peningkatan volume udema dimulai dari menit ke 30, kemudian diikuti dengan
peningkatan volume secara lambat sampai menit ke 180, dan relatif stabil sampai menit ke 360. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak daun sirih merah dapat menghambat udema dari menit ke 180. Hasil ini berbeda dengan penelitian Atik et al. (2011), ekstrak daun sirih merah dengan dosis 50 mg/Kg BB memberikan gambaran peningkatan presentase volume radang hanya terjadi pada menit ke 30 sampai menit ke 90 kemudian setelah menit 90 mengalami penurunan. Pada kelompok ekstrak daun sembukan 4 mg/200gBB tikus, peningkatan volume udema dimulai dari menit ke 30, kemudian diikuti dengan peningkatan volume secara cepat sampai menit ke 180, dan relatif stabil sampai menit ke 360. Hasil ini sesuai dengan penelitian Evy et al. (2011), ekstrak daun sembukan dengan dosis 20 mg/Kg BB memberikan gambaran volume udema terbesar pada menit ke 120 dan mengalami penurunan pada menit ke 180. Pada kelompok kombinasi ekstrak sirih merah dan ekstrak sembukan dengan kombinasi 25%:75%, 75%:25%, dan 50%:50%, peningkatan volume udema telapak kaki tikus dimulai pada menit ke 30 sampai menit ke 180 kemudian rata-rata stabil sampai menit ke 360 dengan peningkatan volume udema secara lambat. Hasil ini diduga kombinasi ekstrak sirih merah dan sembukan memiliki aktivitas antiinflamasi yang sinergis. Pengukuran volume telapak kaki tikus dengan pletismometer dipengaruhi oleh beberapa faktor, diantaranya sulitnya mengkondisikan hewan uji dan kejelasan pada saat pembacaan skala. Hal ini dapat dikurangi dengan menenangkan hewan uji pada saat memasukkan kakinya ke dalam alat pletismometer, pemberian tanda batas yang jelas dengan pemberian secara permanen yang tidak mudah hilang atau terlihat samar maka tanda dipertebal ulang sehingga pengukuran lebih baik, serta melakukan pengukuran secara diulang 3x untuk setiap pembacaan skala. Setelah mengetahui volume edema yang terjadi, dilakukan pembuatan kurva hubungan antara waktu terhadap volume edema. Dari kurva tersebut akan dihitung luas AUC (Area Under Curve). Nilai AUC dapat menunjukkan perbedaan antara kontrol dan perlakuan. Dengan adanya nilai AUC dapat dihitung daya antiinflamasi dari masing-masing perlakuan. Daya antiinflamasi (DAI) yang 47
dimaksud adalah kemampuan bahan uji untuk mengurangi pembengkakan pada kaki tikus akibat adanya edema dari induksi karagenin. Semakin kecil nilai AUC, maka semakin besar nilai DAI. Sehingga dapat disimpulkan bahwa semakin kecil nilai AUC akan semakin poten bahan uji tersebut. Berikut adalah rata-rata nilai AUC dan DAI (%) tiap perlakuan. Data perhitungan dapat dilihat pada lampiran 19 dan 20. Tabel 11. Rata-rata AUC dan rata-rata DAI(%) Kelompok Perlakuan Rata-rata AUC±SD 0,289±0,003 0,134±0,013 0,178±0,020* 0,186±0,016* 0,178±0,014* 0,167±0,015* 0,140±0,010 CMC-Na Fenilbutazon Sirih Merah 20 mg/200gBB Sembukan 4 mg/200gBB Kombinasi SM25%:SE75% Kombinasi SM75%:SE25% Kombinasi SM50%:SE50% Ket : * SM Se : berbeda makna dengan kontrol positif : Sirih merah : Sembukan Rata-Rata DAI(%)±SD - 53,782±4,578 38,437±6,851* 35,423±5,426* 38,489±5,066* 42,301±5,572* 51,488±3,957 Harga AUC yang terbesar sampai terkecil yaitu kontrol negatif CMC Na, ekstrak sembukan dosis 4 mg/ 200 gram BB, ekstrak sirih merah dosis 20 mg/ 200 gram BB, Kombinasi SM25%:SE75%, Kombinasi SM75%:SE25%, Kombinasi SM50%:SE50%, dan kontrol positif fenilbutazon. Hasil Uji Statistik menunjukkan data AUC dan DAI terdistribusi normal dengan signifikasi AUC(0,093 > 0,05) dan DAI(0,093> 0,05) dan homogen dengan nilai signifikasi AUC(0,264 > 0,05) dan DAI(0,111 > 0,05). Hasil yang diperoleh dari uji One Way ANOVA untuk AUC dan DAI menunjukkan terdapat perbedaan bermakna antar kelompok perlakuan dengan nilai signifikasi (0,000 < 0,005). Pada uji LSD diketahui terdapat perbedaan bermakna, nilai AUC dan DAI kelompok ekstrak sirih merah, ekstrak sembukan, serta kelompok kombinasi ekstrak sirih merah dan ekstrak sembukan dengan kelompok kontrol negatif. Hal ini membuktikan bahwa kelompok ekstrak dan kelompok kombinasi dapat menghambat inflamasi akibat induksi karagenin. Selain itu hasil statistika menunjukkan bahwa kombinasi ekstrak sirih merah 10 mg/200gBB (50%) dengan ekstrak sembukan 2 mg/200gBB (50%) tidak berbeda makna dengan kelompok 48
kontrol positif fenilbutazon. Hal ini menunjukkan bahwa kombinasi ekstrak sirih merah 10 mg/200gBB (50%) dengan ekstrak sembukan 2 mg/200gBB (50%) mempunyai efek antiinflamasi yang sebanding dengan kelompok kontrol positif fenilbutazon. Efek antiinflamasi yang paling besar ditunjukkan pada kombinasi dosis ekstrak sirih merah dan sembukan 50%:50%, kemungkinan pada dosis tersebut adalah kombinasi dosis yang ideal sehingga menghasilkan efek yang maksimal dan sinergis. Kombinasi dosis 75%:25% menghambat inflamasi lebih kecil dibandingkan kombinasi dosis 50%:50%, hal ini kemungkinan disebabkan oleh kandungan dari sirih merah yaitu flavonoid, saponin dan tanin dimana mekanisme antiinflamasinya sebagian besar menghambat enzim siklooksigenase dan steroid pada tanaman sembukan bekerja sebagai antiinflamasi dengan menghambat enzim lipooksigenase. Jika kombinasi sirih merah terlalu besar kemungkinan kandungan flavonoid, saponin dan tanin dapat berefek lain selain sebagai antiinflamasi dan steroid dalam sembukan kurang efektif untuk menghambat enzim lipooksigenase karena kombinasi yang diberikan terlalu sedikit. Kombinasi dosis 25%:75% menghasilkan efek antiinflamasi lebih kecil dibandingkan kombinasi dosis 75%:25%, hal ini kemungkinan disebabkan oleh kombinasi sembukan dengan kandungan steroid yang terlalu besar dalam menghambat lipooksigenase dan kombinasi terlalu sedikit pada sirih merah sehingga pada kombinasi 25%:75% ini kemungkinan hanya bekerja dalam menghambat lipooksigenase saja dan pada penghambatan enzim siklooksigenase kurang efektif dikarenakan kombinasi sirih merah yang diberikan terlalu sedikit dan flavonoid, saponin, dan tanin dalam kandungannya diduga juga dapat berefek lain. Pada pemberian tunggal ekstrak sirih merah dan sembukan, keduanya menghasilkan efek antiinflamasi yang lebih kecil dibandingkan dengan pemberian secara kombinasi maupun pembanding fenilbutazon, sehingga dapat dinyatakan bahwa kombinasi ekstrak sirih merah dan sembukan menghasilkan efek yang sinergis. Hasil uji antiinflamasi untuk sediaan tunggal ekstrak sirih merah dengan dosis 10 mg/200gBB menunjukkan hasil DAI sebesar 38,437% dan pada sediaan tunggal ekstrak sembukan dengan dosis 4 mg/200gBB menunjukkan hasil DAI 49
sebesar 35,423%. Hasil ini berbeda dengan penelitian Atik et al. (2011), ekstrak daun sirih merah dengan dosis 50 mg/Kg BB memiliki daya antiinflamasi dengan persen inhibisi sebesar 85,60% dan penelitian Evy. et al (2011), ekstrak sembukan dengan dosis 20 mg/Kg BB memiliki daya antiinflamasi sebesar 79,84%. Hasil yang berbeda kemungkinan dipengaruhi oleh metode pembuatan ekstrak, penggunaan pelarut, dan tempat tumbuh tanaman. Sehingga akan mempengaruhi kandungan senyawa kimia dalam ekstrak. Berdasarkan hasil identifikasi senyawa kimia, ekstrak daun sirih merah mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, dan minyak atsiri. Hasil ini sesuai dengan penelitian Sitiimroatul et al. (2016), daun sirih merah mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, saponin dan tanin. Aktivitas antiinflamasi ekstrak daun sirih merah diperkirakan karena adanya senyawa golongan flavonoid, saponin dan tannin. Mekanisme flavonoid dalam menghambat proses terjadinya inflamasi melalui dua cara, yaitu dengan menghambat permeabilitas kapiler dan menghambat metabolisme asam arakidonat dan sekresi enzim lisosom dari sel neutrofil dan sel endothelial (Kurniawati, 2005). Beberapa flavonoid dapat menghambat antiinflamasi dengan memblok histamin maupun mediator inflamasi lain dan dapat menginhibisi nuclear factor dan signal tranducer and activator of transcription 1 (STAT 1) (Xie et al. 1994). Selain itu, saponin dalam sirih merah diduga diduga mampu berinteraksi dengan membran lipid, seperti fosfolipid yang merupakan prekursor prostaglandin dan mediator-mediator lainnya, saponin diduga juga mampu menghambat pembentukan eksudat dan menghambat kenaikan permeabilitas vaskuler (Pinheiro et al. 2013). Sedangkan tanin merupakan kompleks senyawa fenolik dalam daun sirih merah yang mendukung aksinya sebagai antiinflamasi melalui aktivitas sebagai antioksidan (Hernani & Raharjo 2005). Antioksidan terlibat dalam perbaikan sel. Menurut penelitian Sitiimroatul et al. (2016), aktivitas antioksidan (IC50) diperoleh dari dosis ekstrak daun sirih merah sebesar 0,4 mg/ml. Mekanisme tersebut juga didukung dengan aktivitas dari ekstrak daun sembukan. Ekstrak etanol dari daun sembukan mengandung tiroid glukosida, paederosida, asperulosida asam paederosida, metilpaederosidate, 50 dan
saprosmosida (Xu et al. 2006). Iroid glukosida memiliki fungsi beragam, yaitu sebagai anti hepatotoksik, hipoglikemik, antipasmodik, antiinflamasi, antitumor, antivirus, imunomodulator, dan aktivitas purgatif (El-Moaty, 2010). Glukosida lainya yang terkandung dalam sembukan adalah arbutin (Aronson, 2009). Kandungan daun sembukan yang diduga berperan dalam aktivitas antiinflamasi adalah asperulosida dan arbutin. Arbutin menekan produksi LPS-induced NO dan ekspresi iNOS dan COX-2, pada dosis tertentu tanpa menyebabkan toksisitas seluler (Hyo-Jong Lee, 2012). Arbutin telah diketahui memiliki kemampuan menurunkan konsentrasi sitokin proinflamasi IL-6. Pengurangan konsentrasi radikal yang terjadi diperkirakan karena kemampuan antioksidan (Janinova et al. 2007). Hasil identifikasi kandungan kimia ekstrak daun sembukan mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, steroid, saponin, dan minyak atsiri. Jenis steroid dalam daun sembukan adalah stigmasterol (Kumar et al. 2009). Steroid ini mampu menginhibisi nitrit oksida sintase dan sitokin proinflamasi seperti TNF-α, IL-1, IL-4, IL-8 dan IL-12, steroid juga berpotensi menginhibisi aktivasi faktor transkrpsi seperti nuclear factor (NF-κʙ) yang merupakan pengatur inflamasi dan respon imun (Rungeler et al. 1999). Sedangkan saponin dalam ekstrak sembukan diduga bekerja dengan menghambat dehidrogenase prostaglandin, sehingga peradangan dapat dikurangi (Jung et al 2005) Kandungan zat aktif pada ekstrak sirih merah dan sembukan yang diperlukan sebagai antiinflamasi diduga saling mendukung dimana pada sirih merah bekerja dalam menghambat siklooksigenase dan pada sembukan efektif dalam menghambat lipooksigenase, sehingga menghasilkan efek antiinflamasi yang sinergis dan bekerja lebih optimal dibandingkan dengan pemberian dalam sediaan tunggal. 51
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan Kesimpulan yang dapat diperoleh dari penelitian ini adalah sebagai berikut: Pertama, kombinasi ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan memiliki aktivitas antiinflamasi dalam menghambat edema telapak kaki tikus yang diinduksi karagenin. Kedua, kombinasi ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan memiliki aktivitas antiinflamasi yang lebih efektif dibandingkan dengan ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan yang diberikan dalam sediaan tunggal. Ketiga, kombinasi ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan 50%:50% (5 mg : 2 mg) / 200 gBB memiliki aktivitas antiinflamasi paling efektif dan sebanding dengan kontrol positif fenilbutazon. B. Saran Saran pada penelitian ini adalah : Pertama, perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang senyawa aktif apa saja pada daun sirih merah dan daun sembukan yang mempunyai aktivitas sebagai antiinflamasi. Kedua, perlu dilakukan uji toksisitas akut dan kronis untuk mengetahui kemungkinan adanya efek toksik dari pemberian kombinasi ekstrak etanol daun sirih merah dan daun sembukan pada penggunaan jangka panjang. 52
DAFTAR PUSTAKA Aaslid, E., and Schuld, K. A. P. T, 2001, Healing Muscle Paint: Tool, techniques and tips to bring your muscle back to health, John Wiley & Son Inc, Canada. Aguilar, F. X., 2001. How to Install A Polyethylene Biogas Plant, Integrated Bio- system Network. International Organization of Biotechnology and Bioengineering, Earth University, Costa Rica, pp. 1 - 26. Alfi, 2010. Uji Efek Analgetik Dan Antiinflamasi Ekstrak Etanol 70% Daun Sirih (Piper betle, Linn) Secara In vivo, Fakultas Kedokteran Dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta. Amalia, Erna, dan Fitriani Normasari, SP. 2002. Tata Cara Praktis Budidaya Tanaman Obat dan Pembuata Obat Tradisional (Sebuah Persembahan dari PJ Sekar Kedhaton). PJ Sekar Kedhaton: Yogyakarta Anonim, 1993, Penapisan Farmakologi, Pengujian Fitokimia Dan Pengujian Klinik, Phitomedica, Jakarta. Anonim, 2005, British National Formulary, Edisi 50, 104-108, British Medical Association, Royal Pharmaceutical Society of Great Britain. Anonim, 2009, Khasiat Daun Jati Belanda Untuk Melangsingkan Tubuh, (online), diakses 23 Februari 2011). Anonim. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Edisi ke-1. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Anonim. 1985. Cara Pembuatan Simplisia. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Hlm 108-120. Anonim. 1986. Sediaan galenik. Jilid II. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia Ansel HC. 1989. Penghantar Bentuk Sediaan Farmasi, edisi IV, UI Press, Jakarta. Anugerah P, penerjemah. Jakarta : EGC. Terjemahan dari :Pharmacology :A Bursing Process Approach. Hlm 142;30;310 Atik dkk, Majalah Obat Tradisional 2011. Uji Antiinflamasi Ekstrak Metanol Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav )Pada Tikus Putih, Fakultas Farmasi Universitas Jember. 53
Balai Penelitian Tanaman Obat. Fakultas Farmasi, UGM. Yogyakarta. (25 april 2011). P1-3 Besral, 2010, Pengolahan dan Analisa Data-1 Menggunakan SPSS, 23-30, 58-64, Departemen Biostatistika Fakultas Kesehatan Masyarakat UI, Depok. BNF. 2009. British National Formulary 58. London: BMJ Group and RPS Publishing. hlm 720. Cannas, A. 2008. Tannins: Fascinating but Sometimes Dangerous Molecules, USA: Department of Animal Science - Cornell University. Consumer Behavior and Marketing Strategy: Peter & Olson, McGraw Hill 2003) (Marketing Management Philip Kotler Pearson Education International, 2003). Corsini, Raymond J., 2005, The Dictionary of Psychology, Brunner-Routledge, United States of America. Daniel. 2010. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Flavonoid pada Fraksi Etil Asetat dari Daun Tumbuhan Sirih Merah (Piper Crocatum Ruiz & Pav). Mulawarman Scientife 9: 17-26 Departemen Kesehatan RI. 2000. Parameter Standard Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta: Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan. 1-17 Depkes RI. 1979. Farmakope Indonesia. Ed ke-3. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat Dan Makanan. hlm 12. Djatmiko, W. 2003. Efek Antiinflamasi Perasan Kering Buah Morinda Citrifolia Linn Secara Peroral Pada Tikus Putih. Berk Penel. Hayati 9: 53-55 Dorlan. (2002). Kamus Kedokteran. Jakarta: EGC. El-Moaty, H.I.A., 2010, Essential Oil and Iridoid Glycoside of Nepeta septemcrenata Erenb. Journal of Natural Products, 3,103-11. Erlina, R.,A. Indah dan Yanwirasti. 2007. Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Kunyit (Curcuma domestica Val) Pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar, J. Sains dan Teknologi Farmasi, 12 : 2, 112 - 115 Evy dkk, Majalah Obat Tradisional 2011. Efek Antiinflamasi Ekstrak Daun Sembukan (Paederia scandes) Pada Tikus Tikus Wistar, Program Studi Kedokteran Gigi Universitas Gajah Mada Yogyakarta. Fitriyani A, Winarti L, Muslichah S, & Nuri. 2012. Uji Antiinflamasi Ekstrak Metanol Daun Sirih Merah (Piper Crocatum Ruiz & Pav) pada Tikus Putih. Majalah Obat Tradisional 16; 34-42 54
Freddy, 1995. Farmakologi dan Terapi Edisi 4. Fakultas kedokteran UI, Jakarta. Gunawan D. Dan Mulyani S. 2007. Ilmu Obat Alam (Farmakognosi). Jilid Pertama Jakarta: Penebar Swadaya. Hlm 13, 87-89 Gunawan, D, Mulyani S. 2004. Ilmu Obat Alam (Farmakognosi). Penebar Swadaya. Jakarta. Gunawan, dkk. 2008. Farmakologi dan Terapi Edisi 5. Jakarta: Departemen Farmakologi dan Terapeutik Fakultas Kedokteran UI. 231. Gunawan, Sulistia. 2007. Analgesik-Antipiretik Analgesik Anti-Inflamasi Nonsteroid. Dalam: Gunawan, Sulistia, Editor. Farmakologi dan Terapi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Edisi 5. Jakarta. Gaya Baru, 230-246. Hanani E, Mun"im A, Sekarini R. 2005. Identifikasi senyawa antioksidan dalam spons Callyspongia sp. dari Kepulauan Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian 2(3):127-133. Harbone, J.B (1987). Metode Fitokimia, Penuntun cara Modern Mengaalisa Tumbuhan. Terjemahan K. Padmawinata. Edisi II. Bandung: ITB Pres. Hal. 6,71,76,84,-85,94-97 Hariana, A. 2007. Tumbuhan Obat dan Khasiatnya. Seri 2. Jakarta: Penebar Swadaya. Harmita, Radji. M. (2006). Buku Ajar Analisis Hayati edisi ketiga. Jakarta: Buku Kedokteran EGC. Halaman 58-59, 63. Hayati EK, & Halimah N. 2010. Phitochemical Test and Shrimp Lethality Test Against Artemia salina Leach of Anting-Anting (Axalypha indica Linn.) Plant Extact. Alchemy 1: 53-103 Helmi A et al. 2006. Standarisasi Ekstrak Etanol Daun Eugnia Cumini Merr. Padang: Jurusan Farmasi Fakultas MIPA Hernani, Raharjo M. 2005. Tanaman Berkhasiat Antioksidan. Jakarta: Penebar Swadaya. Heyne, K., 1987. Tumbuhan Berguna Indonesia Cetakan I. Badan Litbang Kehutanan, Jakarta. 55
Hyo-Jong Lee and Kyu-Won Kim, 2016. Anti-Inflammatory Effects Of Arbutin In Inflammation Lipopolysaccharide-Stimulated BV2 Microglial Cells. Research. College of Pharmacy Inje University Gimhae South Korea. Indri, WW., Anthoni, MSS dan Setyorini, W. 2008, Sirih Merah, Balai Kajian Teknologi Pertanian Yogyakarta: Yogyakarta. Hal 1-4. Joyce L dan Evelyn R. 1996. Farmakologi Pendekatan Proses Keperawatan. Cetakan I. Jakarta: EGC,1994. Hlm 310. Jung HJ et al. 2005. Isolation of Saponins with The Inhibitory Effect on Nitric Oxide, Prostaglandin E2 and Tumor Necrosis Factor Production from Pleurospermum kamtschaticum. Biol Pharm Bull 28: 1668-1671. Katno Pramono S. 2005. Tingkat Manfaaat dan Keamanan Tanaman Obat dan Obat Tradisional Tawangmangu Katzung BG. 2006. Basic & Clinical Pharmacology. 10th ed. New York : McGraw-Hill Companies. Katzung, B. G. 2002. Farmakologi Dasar Dan Klinik edisi II. Jakarta: Salemba Medika. Katzung, Bertram G. 1996. Farmakologi Dasar Dan Klinik. Jakarta : EGC. 573 Keji, Hayes ER. 1996. Farmakologi :Pendekatan Proses Keperawatan. Asih Y, editor. Khanbabaee, K dan Ree, T. V. 2001. Tannins Classification and Definition. Nat Prod Rep, 18: 641-649. Kotranas 2006. Ramuan Pusaka Nusantara Kekayaan Bangsa yang Harus Dipelihara. Kumar V, Pankajkumar YS, Singh UP, Baht HR, Zaman K, 2009. Pharmacognostical and Phytochemical study on the Leaves of Paederia foetida Linn. International Joirnal of Pharmatech Research. Kumar, V., Abbas, A.K., Fausto, N. Dan Mitchel R.N., 2007, Robbins Basic Pathology, Philadelia, Saundes Elsevier, 37-41, 53-5 Kurniawati, A. 2005. Uji Aktivitas Anti Inflamasi Ekstrak Metanol Graptophyllum griff Pada Tikus Putih. Majalah Kedokteran Gigi Edisi Khusus Temu Ilmiah Nasional IV, 11-13 Agustus 2005: 167-170 Lee, K.I., Kim, Y.J., and Lee, C.H., 2003, Cocoa Has Mora Phenolic Phytochemical and Higher Antioksidant Capacity than Teas and Red Wine, J.Agric. Food Chem., 51, 7292-7295. 56
Liu H and R.W. Pemberton. 2008. Differential Soil Seed Bank Longevity of Paederia foetida 1., Anlnvasive Woody Vine, Across Three Habitats in Florida. Botanical Society L35(4):491-496. Lumbanraja LB. 2009. Skrining Fitokimia dan Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Tempuyung (Sonchus arvenis L.) terhadap Radang pada df [20 Januari 2015] Malole, M.B.M., Pramono C.S.U., 1989. Penggunaan Hewan-hewan Percobaan di Laboratorium. Bogor : PAU Pangan dan Gizi, IPB. Malole. Sri Utani Pramono. C 1989. Penggunaa Hewan-hewan percobaan di Laboraturium. Jawa Barat: Institut Pertanian Bogor. Hal: 104-112 Manoi, F., 2007, Sirih Merah sebagai Tanaman Multifungsi, Warta Puslitbangbun Vol.13 (2). Mansjoer, S.1997. Efek Antiradang Minyak Atsiri Temu Putih (Curcuma zeodaria Rosch). Media Farmasi Indonesia 8(1): p 35-36 Markham, K.R. 1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoida. Terjemahan Kosasi Padmawinata. Bandung: ITB Press. Melanie Diane Jeffers, 2006. Tanins As Anti-Inflammatory Agents. In Partial Fulfillment Of The Requirements For The Degree Of Masters of Science Department of Chemistry and Biochemistry, Faculty of Miami University. Mennen LI, Walker R, Pelissero CB, Scalbert A. 2005. Risk and safety of polyphenol consumption. Am J Clin Nutr 81 (suppl): 326S-329S Morris, C.J., 2003, Carragenin Induced Paw Edema in The Rat and MouseInflammation Protocols, Methods in Moleculer Biology, 2, 115- 122. Mutschler. Ernest. 1991. Dinamika Obat. Edisi V. Di terjemahkan oleh Widianto, B dan A.S. Ranti, Institut Teknologi Bandung. Bandung Mycek, M. J. dkk. 2001. Farmakologi: Uasan Bergambar. Penerjemah: Agoes, A. Edisi II. Jakarta. Penerbit Widya Medika. Hal. 276-279, 404-416 Myers, P. dan Armitage D., 2004, Rattus norvegicus, Animal Diversity Web, icus. html yang diakses pada tanggal 21 April 2014 57
Nijveldt RJ et al. 2001. Flavonoids: a Review of Probable Mechanisme of Action and Potential Aplications. American Journal of Clinical and Nutrition 74: 422. Norton, B.W. 1998. Anti-Nutritive and Toxic Factors in Forage Tree Legumes, In: Forage Tree Legumes in Tropical Agriculture, The Tropical Grass land Society of Australia Inc. Queensland. Nurmeilis Musiar, Ahmad Inayati, Alfi 2010, Uji Efek Analgetik Dan Antiinflamasi Ekstrak Etanol 70% Daun Sirih (Piper betle, Linn) Secara In Vivo. [SKRIPSI]. Fakultas Kedokteran & Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah: Jakarta Olson DM. 2003. The Rule of Prostaglandins in The Initiation of Parturition. University of Alberta. Edmonton, Canada. Pinheiro, PF, Queiroz, VT, Rondelli, VM Costa, AV, Marcelino, TP & Pratissoli, D 2013, "Insecticidal activity of citronella grass essensial oil on Frankliniella schultzei and Myzus persicae', Cienc. Agrotec., Lavras, vol. 37, no. 2, pp. 138-44. Piscitelli, S. C., and Rodvold, K. A. (2005). Drug Interaction in Infection Disease. Second Edition. New Jersey : Humana Press. Halaman 1-9. Praeparandi, A. 1979. Card System dan Analisa Kimia Farmasi Kualitatif. Bandung. Seksi Diktat Stenhl. Hlm 9 Price SA, Wilson LM. 1995. Farmakologi dan Terapi analgesik-antipiretik, Analgesik anti-inflamasi Non steroid dan Obat Piral. Ed ke-4. Jakarta: Bagian farmakologi Fakultas Kedokteran, Universitas Indonesia. hlm 207- 222. Price, S.A., dan Wilson, L.M. (1994). Patofisiologi: Konsep Klinis Proses-proses Penyakit. Edisi Keempat. Jakarta: Buku Kedokteran EGC. Hal. 371-372, 376-378, 389-409. Priyambodo S. 2003. Pengendlian Hama Tikus Terpadu. Ed Ke-3. Jakarta: Penebar Swadaya Rakhmawati, D. 1997. Efek Antiinflamasi Lempuyang Emprit pada Tikus Putih Jantan. [Skripsi]. Yogyakarta: Fakultas Robinson T. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Ed ke-VI. Bandung: ITB. Hlm 191-196. Rungeler P et al. 1999. Inhibition of Transcription Factor NF-kappa B by Sesquiterpene Lactones: a Proposed Molecular Mechanism of Action. Bioorg Med Chem 7: 2343-2352. 58
Sastroamidjojo, S. 1997. Obat Asli Indonesia. Dian Rakyat, Jakarta. Setiawati, A., 2007, Interaksi Obat dalam Gunawan, S.G, 2007, Farmakologi dan Setiawati, A., Suyatna, F.D., dan Gan, Sulistia. 2007. Farmakologi Dan Terapi. Jakarta:Departemen Farmakologi dan Terapeutik FKUI. Sholikhah, A., 2006, Sirih Merah Penurunan Glukosa Darah, Koran Tempo, 7 Juli merahpenurun-glukosa darah.html 2006. Sirait, M. (2007). Penuntun Fitokimia dalam Farmasi. Bandung: Penerbit ITB Bandung. Halaman 5, 103, 168-170. stroamidjojo, S. 1997. Obat Asli Indonesia. Dian Rakyat, Jakarta. Siswanto, A. dan Nurulita, N.A. 2005. Daya Antiinflamasi Infus Daun Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa Scheff. Boerl) pada Tikus Putih (Rattus norvegicus) Jantan. Prossiding Seminar Nasional TOI XXVII, 177-181, Batu 15-16 Maret 2005. Sitiimoratul M, Lestari SR, Wulandari n. 2016. Active Compound of Red betel (Piper Crocatum) Extract for Safe Antioxidant as Cytoxicity Test Reveled. International Journal of Chem Tech Research. 9: 513: 520 Solokin, 2007, Potensi Jenis-jenis Herba Liar di Kebun Raya Purwodadi sebagai Obat, 1182,pdf 4 Mei 2009. Stockley, I.H. (2008). Stockley's Drug Interaction. Eight Edition. Great Britain: Pharmaceutical Press. Halaman 1-9. Sudewo, B. (2005). Basmi Penyakit Dengan Sirih Merah. Cetakan Pertama. Jakarta: Agro Media Pustaka. Halaman 35-37, 72. Sudewo, Bambang. 2010. Basmi Penyakit Dengan Sirih Merah. Jakarta: Agromedia Pustaka. Manoi, Feri. 2007. "Sirih Merah Sebagai Tanaman Multi Fungsi". Warta Penelitian Dan Pengembangan Tanaman Industri. Volume 13 Nomor 2. Agustus 2007. Sudjarwo, S, A.(2004) The signal tranduction of curcumin as anti infalamatory agent in cultured fibroblast. Jurnal kedokteran yarsi. Vol 12, Sugiyanto. 1995. Methodology Research. Surakarta: UNS Press Suharmiati dan Maryani, H, 2003, Khasiat dan Manfaaat Jati Belanda, si Pelangsing dan Peluruh Kolesterol, Agro Media Pustaka, Jakarta. Supriyatna, Maya F, Dewanto, Indra W, Ferry F. 2015. Fitoterapi Sistem Organ: 59
Pandangan Dunia Barat terhadap Obat Herbal. Edisi 1. Cetakan 2. Yogyakarta: Deepublish. Hlm 223-225. Syariefa, E. 2006. Resep sirih Wulung untuk Putih Merona Hingga Kanker Ganas, dalam Majalah Trubus No.434, tahun XXXVII Januari 2006, hlm 88. Tatro, D.S., 2009. Drug Interaction Facts: The Authority on Drug Interaction. Wolter Kluwer Health, Inc Terapi, Edisi 5, hal 862-873, Bagian Farmakologi dan Terapeutik Fakultas Kedokteran UI, Jakarta. Tjay, Tan Hoan dan Raharja, Kirana. (2002), Obat-Obat Penting: Khasiat Penggunaan dan Efek-Efek Sampingnya, Edisi Kelima, Cetakan Kedua, Penerbit PT. Alex Media Komputindo, Jakarta. Tobing, Rangke. 1989. Kimia Bahan Alam. Jakarta : Departemen Pendidikan dan Kebudayaan. Direktorat Jendral Pendidikan Tinggi. Proyek Pengembangan Lembaga Pendidikan Tenaga kependidikan. Utami, E.T. 2011. "Efek Antiinflamasi Ekstrak Daun Sembukan (Paederia scandens) pada Tikus Wistar". Majalah Obat Tradisional. 2, 5. Voigt, R. 1994. Pelajaran Teknologi Farmasi. Terjemahan oleh Soendari Noetomo. Edisi V. Yogyakarta: Universitas Gajah Mada Press. Hlm 160- 162, 566-567, 572-573. Wattimena, J. R., Nelly C. Sugiarso, Mathilda B. Widianto, Elin Y. Sukandar, Andreanus A. Soemardji, Anna R. Setiadi, 1991, Farmakodiamik dan Terapi Antibiotik, Gadjah Mada University Press, Yogyakarta, 19-23 Wilman, P.F. (2007). Analgesik-Antipiretik, Analgesik Anti-inflamasi Nonsteroid dan Obat Pirai. Dalam: Farmakologi dan Terapi. Editor: Sulistia Gan Gunawan. Edisi Keempat. Jakarta: Bagian Farmakologi FKUI. Halaman 243, 244. Xu, Zu., P., L., Bingru, B dan Lisheng, D., 2006, Sulfur-containing iroid glucosides from Paederia scandes. Fitoterapia, 77(5), 374-7. Yulia, K.S. 2010. Efek Antiinflamasi Ekstrak etanol Kulit Kacang Tanah (Arachis hipognea L) pada Tikus Putih Jantan Galur Wiatar yang Di indduksi Karagenin (skripsi. Surakarta Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta. 60
LAMPIRAN 61
Lampiran 1. Determinasi Tanaman Sirih Merah. 62
Lampiran 2. Determinasi Tanaman Sembukan. 63
Lampiran 3. Surat Pengambilan Bahan Baku Phenylbutazon 64
Lampiran 4. Surat Pengambilan Hewan Uji. 65
Lampiran 5. Data proses pembuatan ekstrak dan uji aktivitas antiinflamasi kombinasi daun sirih merah dan daun sembukan (Foto). Daun Sirih Merah Daun Sembukan Simplisia daun sembukan Simplisia daun sirih merah 66
Penetapan kadar air (sterling bidwell) Proses Maserasi Serbuk Sirih Merah Dan Sembukan Penimbangan Bahan Rotary Evaporator Ekstrak Kental sirih 67
Lampiran 6. Proses uji antiinflamasi Proses Uji Aktivitas Antiinflamasi Pletismometer Perlakuan Zat Uji Penginduksian Karagenin Pengukuran Udema Telapak Kaki Tikus Proses praktikum uji antiinflamsi 68
Lampiran 7. Hasil perhitungan rendemen berat daun kering terhadap berat daun sirih merah dan daun sembukam basah. Keterangan Sirih merah Sembukan Berat basah (g) 6000 6000 Berat kering (g) 1500 1200 Rendemen (%)b/b 25% 20% LOD (%) 75% 80% 1. Sirih merah Perhitungan rendemen : Rendemen (%b/b) = x 100% Rendemen (%b/b) = x 100% Rendemen (%b/b) = b/b Perhitungan LOD (Lost On Drying) : LOD (%) = berat basah g -berat kering g) berat basah g x 100% LOD (%) = - g g x 100% LOD (%) = 75% 2. Sembukan Perhitungan rendemen Rendemen (%b/b) = x 100% Rendemen (%b/b) = x 100% Rendemen (%b/b) = b/b 69
Perhitungan LOD (Lost On Drying) : LOD (%) = berat basah g -berat kering g) berat basah g LOD (%) = - g g x 100% LOD (%) = 80% x 100% 70
Lampiran 8. Hasil perhitungan rendemen berat daun kering terhadap berat serbuk daun sirih merah dan daun sembukam Keterangan Sirih merah Sembukan Berat daun kering (g) 1500 1200 Berat serbuk (g) 1000 1000 Rendemen (%)b/b 66,67% 83,33% Perhitungan rendemen : 1. Sirih Merah Rendemen (%b/b) = x 100% Rendemen (%b/b) = x 100% Rendemen (%b/b) = b/b 2. Sembukan Rendemen (%b/b) = x 100% Rendemen (%b/b) = x 100% Rendemen (%b/b) = b/b 71
Lampiran 9. Hasil penetapan kadar air serbuk daun sirih merah dan daun sembukan Hasil penetapan kadar air serbuk daun sirih merah (sterling bidwel) Replikasi 1 2 3 Berat serbuk (g) 20 g 20 g 20 g Rata-Rata Volume terukur (ml) 1,4 ml 1,4 ml 1,3 ml Rendemen ( % ) 7,00% 7,00% 6,50% 6,83%±0,003% Hasil penetapan kadar air serbuk daun sembukan (sterling bidwel) Replikasi 1 2 3 Berat serbuk (g) 20 g 20 g 20 g Rata-Rata Volume terukur (ml) 1,5 ml 1 ml 1 ml Rendemen ( % ) 7,50% 5,00% 5,00% 5,83%±0,014% Rumus perhitungan : x 100 % 1. Daun Sirih Merah 2. Daun Sembukan Kadar air (1): x 100 % = 7 % Kadar air (1): x 100 % = 7,5 % Kadar air (2): x 100 % = 7 % Kadar air (2): x 100 % = 5 % Kadar air (3): x 100 % = 6,5 % Kadar air (3): x 100 % = 5 % Perhitungan rata-rata kadar air: Perhitungan rata-rata kadar air: = 6,83 % = 5,83 % 72
Lampiran 10. Identifikasi kandungan kimia serbuk daun sirih merah dan daun sembukan melalui uji biokimia (uji tabung). Identifikasi Serbuk Daun Sirih Merah Serbuk Daun Sembukan Alkaloid Flavonoid Steroid 73
Saponin Minyak Atsiri Tannin
Lampiran 11. Perhitungan rendemen serbuk daun sirih merah dan daun sembukan terhadap berat ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan. Keterangan Bobot serbuk (g) Ekstrak kental (g) Rendemen (%) Sirih merah 500 106,6 21,32% Sembukan 500 125,79 25,15% Rumus perhitungan : x 100% 1. Sirih Merah Rendemen (%b/b) = x 100% Rendemen (%b/b) = b/b 2. Sembukan Rendemen (%b/b) = x 100% Rendemen (%b/b) = b/b 75
Lampiran 12. Hasil penetapan kadar air ekstrak daun sirih merah dan ekstrak daun sembukan Hasil penetapan kadar air ekstrak daun sirih merah (sterling bidwel) Replikasi Berat ekstrak (g) Volume terukur ( ml ) Rendemen (%) 1 2 3 10 g 10 g 10 g Rata-Rata 0,8 ml 0,7 ml 0,8 ml 8,00 % 7,00 % 8,00 % 7,67 %±0,577 Hasil penetapan kadar air ekstrak daun sembukan (sterling bidwel) Replikasi Berat ekstrak (g) 1 2 3 10 g 10 g 10 g Rata-Rata Volume air (ml) 0,6 ml 0,7 ml 0,6 m Rendemen (%) 6,00 % 7,00 % 6,00 % 6,33%±0,577 Rumus perhitungan : x 100 % 1. Daun Sirih Merah 2. Daun Sembukan Kadar air (1): x 100 % = 8 % Kadar air (1): x 100 % = 6 % Kadar air (2): x 100 % = 7 % Kadar air (2): x 100 % = 7 % Kadar air (3): x 100 % = 8 % Kadar air (3): x 100 % = 6 % Perhitungan rata-rata kadar air: Perhitungan rata-rata kadar air: = 7,67% = 6,33 % 76
Lampiran 13. Identifikasi kandungan kimia ekstrak daun sirih merah dan daun sembukan melalui uji biokimia (uji tabung). Identifika si Ekstrak Daun Sirih Merah Ekstrak Daun Sembukan Alkaloid Flavonoid Steroid 77
Saponin Minyak Atsiri Tannin
79 Lampiran 14. Uji Pendahuluan Perlakuan V0 V0,5 V1 V2 V3 V4 V5 V6 Rata Volume Kontrol (-) CMC-Na 1% 1 0,23 0,44 0,5 0,56 0,67 0,73 0,77 0,76 0,5825 2 0,24 0,45 0,53 0,57 0,69 0,74 0,79 0,79 0,6 Kontrol (+) Fenilbutazon 200 mg/70KgBB manusia ( 3,6 mg/200gBB tikus) 1 0,24 0,37 0,4 0,41 0,44 0,45 0,46 0,44 0,40125 2 0,26 0,4 0,42 0,42 0,46 0,46 0,46 0,43 0,41375 Ekstrak Daun Sirih Merah 1 (5 mg/200gBB tikus) 1 0,26 0,43 0,46 0,48 0,54 0,56 0,59 0,58 0,4875 2 0,25 0,41 0,44 0,47 0,55 0,57 0,61 0,6 0,4875 Ekstrak Daun Sirih Merah 2 ( 10 mg/200gBB tikus) 1 0,24 0,38 0,41 0,41 0,45 0,46 0,48 0,47 0,4125 2 0,26 0,4 0,42 0,43 0,47 0,48 0,49 0,47 0,4275 Ekstrak Daun Sembukan 1 ( 2 mg/200gBB tikus) 1 0,26 0,43 0,47 0,49 0,55 0,58 0,62 0,61 0,50125 2 0,28 0,45 0,48 0,51 0,57 0,6 0,63 0,61 0,51625 Esktrak Daun Sembukan 2 ( 4 mg/200gBB tikus) 1 0,25 0,4 0,42 0,43 0,48 0,49 0,51 0,48 0,4325 2 0,27 0,41 0,44 0,46 0,5 0,51 0,51 0,5 0,45 Berdasarkan dosis uji pendahuluan, makan penetapan dosis efektif untuk : 1. Ekstak sirih merah adalah 10 mg/200gBB tikus, didapat volume rata-rata pengukuran udema kaki tikus yang mendekati kontrol positif fenilbutazon. 2. Ekstak sembukan adalah 4 mg/200gBB tikus, didapat volume rata-rata pengukuran udema kaki tikus yang mendekati kontrol positif fenilbutazon.
Lampiran 15. Perhitungan dosis dan penimbangan larutan stok. Kelompok 1 Kontrol negatif CMC-Na 1 % Pembuatan larutan stok CMC-Na 1 % = 1000 mg/ 100 ml = 200 mg/ 20 ml. Dengan menimbang 200 mg CMC-Na disuspensikan dengan air suling sampai volume 20 ml. Diberikan volume pemberian 3 ml. Kelompok 2 Dosis ekstrak sirih merah 10 mg/200gBB tikus. Pembuatan larutan stok : ekstrak sirih merah 10 mg/2 ml ( pembuatan 250 mg/50 ml).... stok 1. Menimbang 250 mg ekstrak sirih merah disuspensikan dengan CMC-Na sampai volume 50 ml. Volume Pemberian = x 50 ml = 2 ml/200gBB tikus. Volume pemberian ekstrak etanol daun sirih merah sesuai berat badan tikus : 1. x 2 ml = 2,30 ml 2. x 2 ml = 2,40 ml 3. x 2 ml = 2,30 ml 4. x 2 ml = 2,50 ml 5. x 2 ml = 2,50 ml 80
Kelompok 3 Dosis ekstrak sembukan 4 mg/200gBB tikus. Pembuatan larutan stok : ekstrak sembukan 4 mg/2 ml ( pembuatan 100 mg/50 ml).... stok 2. Menimbang 100 mg ekstrak sembukan disuspensikan dengan CMC-Na sampai volume 50 ml. Volume Pemberian = x 50 ml = 2 ml/200gBB tikus. Volume pemberian ekstrak etanol daun sembukan sesuai berat badan tikus : 1. x 2 ml = 2,50 ml 2. x 2 ml = 2,40 ml 3. x 2 ml = 2,50 ml 4. x 2 ml = 2,20 ml 5. x 2 ml = 2,50 ml Kelompok 4 Dosis Kombinasi ekstrak sirih merah 25%dan ekstrak sembukan 75 % Larutan stok ekstrak sirih merah 10 mg/2 ml per 200 gBB tikus (pembuatan 250 mg/50 ml).... stok 1 Larutan stok ekstrak sembukan 4 mg/2 ml per 200 g BB tikus (pembuatan 100 mg/50 ml).... stok 2 Volume pemberian ekstrak sirih merah 25%dan ekstrak sembukan 75 % sesuai berat badan tikus : 81
1. x 2 ml = 2,20 ml (sirih merah 0,55 ml + sembukan 1,65 ml) 2. x 2 ml = 2,30 ml (sirih merah 0,6 ml + sembukan 1,7 ml) 3. x 2 ml = 2,50 ml (sirih merah 0,6 ml + sembukan 1,9 ml) 4. x 2 ml = 2,30 ml (sirih merah 0,6 ml + sembukan 1,7 ml) 5. x 2 ml = 2,40 ml (sirih merah 0,6 ml + sembukan 1,8 ml) Kelompok 5 Dosis Kombinasi ekstrak sirih merah 50%dan ekstrak sembukan 50 % Larutan stok ekstrak sirih merah 10 mg/2 ml per 200 gBB tikus (pembuatan 250 mg/50 ml).... stok 1 Larutan stok ekstrak sembukan 4 mg/2 ml per 200 g BB tikus (pembuatan 100 mg/50 ml).... stok 2. Volume pemberian ekstrak sirih merah 50%dan ekstrak sembukan 50 % sesuai berat badan tikus : 1. x 2 ml = 2,40 ml (sirih merah 1,2 ml + sembukan 1,2 ml) 2. x 2 ml = 2,50 ml (sirih merah 1,25 ml + sembukan 1,25 ml) 3. x 2 ml = 2,20 ml (sirih merah 1,1 ml + sembukan 1,1 ml) 4. x 2 ml = 2,30 ml (sirih merah 1,15 ml + sembukan 1,15 ml) 5. x 2 ml = 2,50 ml (sirih merah 1,25 ml + sembukan 1,25 ml) 82
Kelompok 6 Dosis Kombinasi ekstrak sirih merah 75%dan ekstrak sembukan 25 % Larutan stok ekstrak sirih merah 10 mg/2 ml per 200 gBB tikus (pembuatan 250 mg/50 ml).... stok 1. Larutan stok ekstrak sembukan 4 mg/2 ml per 200 g BB tikus (pembuatan 100 mg/50 ml).... stok 2. Volume pemberian ekstrak sirih merah 75%dan ekstrak sembukan 25 % sesuai berat badan tikus : 1. x 2 ml = 2,40 ml (sirih merah 1,8 ml + sembukan 0,6 ml) 2. x 2 ml = 2,40 ml (sirih merah 1,8 ml + sembukan 0,6 ml) 3. x 2 ml = 2,50 ml (sirih merah 1,9 ml + sembukan 0,6 ml) 4. x 2 ml = 2,50 ml (sirih merah 1,9 ml + sembukan 0, 6 ml) 5. x 2 ml = 2,20 ml (sirih merah 1,65 ml + sembukan 0,55 ml) Kelompok 7 (Kontrol Positif) Dosis lazim fenilbutazon adalah 200 mg/70KgBB manusia, dengan faktor konversi dari manusia ke tikus adalah 0,018, maka : Dosis fenilbutazon = 0,018 x 200 mg/70KgBB = 3,6 mg/200gBB tikus. Larutan stok = 3,6 mg/2 ml ( pembuatan 36 mg/20 ml ) Ditimbang 36 mg fenilbutazon disuspensikan ditambah dengan CMC-Na ditambah air suling sampai 20 ml. Volume pemberian/200gBB tikus = x 20 ml = 2 ml/200gBB tikus. Volume pemberian fenilbutazon sesuai berat badan tikus : 83
1. x 2 ml = 2,30 ml 2. x 2 ml = 2,40 ml 3. x 2 ml = 2,20 ml 4. x 2 ml = 2,40 ml 5. x 2 ml = 2,30 ml Pembuatan larutan stok lambda karagenin Lambda karagenin dosis 1 % = 1000 mg/ 100 ml = 10 mg/ 1ml 1 x pemberian = 0,1 x 35 tikus ( 7 perlakuan x 5 tikus) = 3,5 ml Larutan stok = 3,5 ml x 10 mg = 35 mg/ 3,5 ml Menimbang lamba karagenan 35 mg di larutkan dengan NaCl 0,9 % sampai 3,5 ml, kemudian diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam. Volume pemberian 0,1ml tiap tikus. 84
Lampiran 16. Data volume telapak kaki tikus sebelum dikurangi Vo Perlakuan Replikasi V0 V0,5 V1 V2 V3 V4 V5 1 2 3 4 5 Rata-rata 0,41 0,45 0,4 0,34 0,31 0,38 Kontrol Negatif CMC-Na 1% 0,6 0,63 0,58 0,52 0,5 0,57 0,67 0,71 0,66 0,59 0,57 0,64 0,7 0,74 0,7 0,63 0,6 0,67 0,78 0,83 0,78 0,71 0,69 0,76 0,82 0,86 0,82 0,75 0,72 0,79 0,85 0,88 0,84 0,77 0,75 0,82 Kontrol Positif Fenilbutazon 200 mg/70KgBB manusia ( 3,6 mg/200gBB tikus) 1 2 3 4 5 Rata-rata 0,39 0,34 0,32 0,33 0,36 0,35 0,51 0,47 0,43 0,45 0,47 0,47 0,53 0,49 0,47 0,47 0,5 0,49 0,53 0,51 0,47 0,48 0,5 0,50 0,55 0,54 0,5 0,5 0,52 0,52 0,55 0,55 0,51 0,51 0,52 0,53 0,54 0,55 0,52 0,51 0,53 0,53 Ekstrak Daun Sirih Merah dosis 10 mg/200gBB tikus 1 2 3 4 5 Rata-rata 0,32 0,36 0,36 0,35 0,36 0,35 0,47nm 0,51 0,49 0,49 0,51 0,49 0,5 0,55 0,53 0,53 0,56 0,53 0,52 0,56 0,54 0,53 0,59 0,55 0,55 0,6 0,57 0,56 0,64 0,58 0,56 0,61 0,58 0,57 0,65 0,59 0,56 0,61 0,58 0,56 0,66 0,59 Esktrak Daun Sembukan dosis 4 mg/200gBB tikus 0,71 0,69 0,63 0,65 0,68 0,67 Rata-rata Kombinasi ekstrak daun sirih merah 2,5mg/200 g BB tikus + ekstrak etanol daun sembukan 3mg/200 g BB tikus (25% : 75%) 1 2 3 4 5 0,46 0,43 0,39 0,4 0,39 0,41 0,6 0,58 0,53 0,53 0,54 0,56 0,63 0,61 0,57 0,56 0,58 0,59 0,67 0,65 0,58 0,56 0,62 0,62 0,71 0,69 0,61 0,63 0,67 0,66 0,72 0,69 0,62 0,65 0,69 0,67 0,72 0,7 0,63 0,66 0,69 0,68 1 2 3 4 5 Rata-rata 0,4 0,39 0,35 0,34 0,38 0,37 0,55 0,52 0,49 0,49 0,51 0,51 0,58 0,56 0,53 0,53 0,55 0,55 0,59 0,58 0,54 0,57 0,56 0,57 0,64 0,6 0,58 0,59 0,6 0,60 0,65 0,61 0,6 0,6 0,61 0,61 0,67 0,61 0,61 0,61 0,61 0,62 V6 0,86 0,89 0,86 0,78 0,76 0,83 0,52 0,54 0,5 0,5 0,51 0,51 0,54 0,6 0,57 0,56 0,65 0,58 0,67 0,6 0,6 0,63 0,6 0,62 85
Kombinasi ekstrak daun sirih merah 7,5 mg/200 g BB tikus + ekstrak etanol daun sembukan 1 mg/200 g BB tikus (75% : 25%) 1 2 3 4 5 Rata-rata 0,3 0,32 0,3 0,4 0,39 0,34 0,45 0,46 0,43 0,55 0,52 0,48 0,47 0,49 0,46 0,58 0,53 0,51 0,49 0,5 0,48 0,6 0,55 0,52 0,54 0,54 0,51 0,64 0,58 0,56 0,55 0,55 0,52 0,65 0,59 0,57 0,55 0,56 0,52 0,65 0,59 0,57 Kombinasi ekstrak daun sirih merah 5 mg/200 g BB tikus + ekstrak etanol daun sembukan 2 mg/200 g BB tikus (50% : 50%) 1 2 3 4 5 Rata-rata 0,4 0,39 0,42 0,37 0,41 0,40 0,52 0,52 0,53 0,51 0,52 0,52 0,54 0,55 0,57 0,54 0,55 0,55 0,55 0,56 0,58 0,55 0,56 0,56 0,58 0,59 0,59 0,56 0,59 0,58 0,59 0,59 0,59 0,56 0,59 0,58 0,6 0,6 0,58 0,56 0,58 0,58 0,54 0,55 0,51 0,64 0,58 0,56 0,6 0,59 0,57 0,55 0,57 0,58 86
87 Lampiran 17. Data volume udema kaki tikus (Vt - Vo). Replikasi V0 V1 V2 Kontrol Negatif CMC-Na 1% 0,29 0,26 0,29 0,26 0,3 0,26 0,29 0,25 0,29 0,26 0,292 0,258 0,0 04472 Kontrol Positif Fenilbutazon 200 mg/70KgBB manusia ( 3,6 mg/200gBB tikus) 0,14 0,17 0,15 0,15 0,14 0,15 V0,5 V3 V6 V5 V4 0 0 0 0 0 0 0 0,19 0,18 0,18 0,18 0,19 0,184 0,41 0,41 0,42 0,41 0,41 0,412 0,44 0,43 0,44 0,43 0,44 0,436 0,45 0,44 0,46 0,44 0,45 0,448 1 2 3 4 5 Rata-rata 0,37 0,38 0,38 0,37 0,38 0,376 0,005477 0,004472 0,005477 0,008367 0,005477 0,004472 SD 0,16 0,21 0,19 0,18 0,16 0,18 0,012247 0,016733 0,021213 0,023875 0,027019 0 0 0 0 0 0 0 1 2 3 4 5 Rata-rata SD 0,14 0,15 0,15 0,14 0,14 0,144 0,005477 0,12 0,13 0,11 0,12 0,11 0,118 0,008367 0,16 0,2 0,18 0,17 0,16 0,174 0,15 0,21 0,2 0,18 0,17 0,182 0,13 0,2 0,18 0,17 0,15 0,166 1 2 3 4 5 Rata-rata SD 1 2 3 4 5 Rata-rata SD 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Ekstrak Daun Sirih Merah dosis 10 mg/200gBB tikus 0,24 0,2 0,15 0,25 0,2 0,15 0,22 0,18 0,13 0,22 0,18 0,14 0,29 0,23 0,15 0,244 0,198 0,144 0,02881 0,020494 0,008944 Esktrak Daun Sembukan dosis 4 mg/200gBB tikus 0,21 0,14 0,22 0,15 0,19 0,14 0,16 0,13 0,23 0,15 0,202 0,142 0,008367 0,18 0,19 0,17 0,18 0,2 0,184 0,011402 0,24 0,25 0,22 0,21 0,3 0,244 0,23 0,24 0,21 0,21 0,28 0,234 0,02881 0,22 0,24 0,21 0,21 0,29 0,234 0,035071 0,033615 0,26 0,26 0,23 0,25 0,3 0,26 0,027749 0,023875 0,025495 0,021909 0,019235 0,17 0,18 0,18 0,16 0,19 0,176 0,011402 0,25 0,26 0,22 0,23 0,28 0,248 0,26 0,27 0,24 0,26 0,3 0,266 0,25 0,26 0,24 0,25 0,29 0,258 Kombinasi sirih merah 2,5mg/200gBB + daun sembukan 3mg/200gBB (25% : 75%) 0,19 1 0,19 2 0,19 3 0,23 4 0,18 5 0,196 Rata-rata SD 0,25 0,22 0,25 0,26 0,23 0,242 0,019494 0,015811 0,016432 0,023452 0,033466 Kombinasi ekstrak daun sirih merah 7,5 mg/200 g BB tikus + ekstrak etanol daun sembukan 1 mg/200 g BB tikus (75% : 25%) 0,19 0,18 0 0 0 0 0 0 0 0,18 0,17 0,18 0,19 0,17 0,178 0,008367 0,15 0,13 0,14 0,15 0,13 0,14 0,01 0,24 0,21 0,23 0,25 0,22 0,23 0,27 0,22 0,26 0,27 0,23 0,25 1 2 0 0 0,15 0,14 0,24 0,22 0,17 0,17 0,25 0,23 0,25 0,24 0,27 0,21 0,25 0,29 0,22 0,248 0,24 0,23
88 Replikasi V0 0 0 0 0 0 V4 0,22 0,25 0,2 0,23 0,014832 0,021213 0,021213 0,021679 0,021679 Kombinasi ekstrak daun sirih merah 5 mg/200 g BB tikus + ekstrak etanol daun sembukan 2 mg/200 g BB tikus (50% : 50%) 0,15 0,17 0,16 0,18 0,15 0,162 V0,5 0,13 0,15 0,13 0,14 0,01 V1 0,16 0,18 0,14 0,164 0,015166 V3 0,21 0,24 0,19 0,22 V5 0,22 0,25 0,2 0,232 V6 0,21 0,24 0,19 0,222 V2 0,18 0,2 0,16 0,182 3 4 5 Rata-rata SD 0 0 0 0 0 0 0 1 2 3 4 5 Rata-rata SD 0,12 0,13 0,11 0,14 0,11 0,122 0,013038 0,18 0,2 0,17 0,19 0,18 0,184 0,19 0,2 0,17 0,19 0,18 0,186 0,013038 0,011402 0,011402 0,020736 0,022804 0,14 0,16 0,15 0,17 0,14 0,152 0,013038 0,2 0,21 0,16 0,19 0,17 0,186 0,2 0,2 0,15 0,18 0,16 0,178
Lampiran 18. Data AUC dan DAI (%) Perlakuan Replikasi AUC0 AUC0,5 AUC1 AUC2 AUC3 AUC4 AUC5 AUC6 Kontrol Negatif CMC-Na 1% Kontrol Positif Fenilbutazon Ekstrak Daun Sirih Merah dosis 10 mg/200gBB tikus 1 2 3 4 5 Rata-rata SD 1 2 3 4 5 Rata-rata SD 1 2 3 4 5 - - - - - - - - - - - - 0,0475 0,0450 0,0450 0,0450 0,0475 0,0460 0,0014 0,0300 0,0325 0,0275 0,0300 0,0275 0,0295 0,0021 0,0375 0,0375 0,0325 0,0350 0,0375 0,0360 0,0022 0,1125 0,1100 0,1100 0,1075 0,1125 0,1105 0,0021 0,0650 0,0700 0,0650 0,0650 0,0625 0,0655 0,0027 0,0825 0,0850 0,0750 0,0800 0,0875 0,0820 0,0048 0,2750 0,2750 0,2800 0,2700 0,2750 0,2750 0,0035 0,1400 0,1600 0,1500 0,1450 0,1400 0,1470 0,0084 0,1900 0,1950 0,1750 0,1800 0,2150 0,1910 0,0156 0,3300 0,3350 0,3400 0,3300 0,3350 0,3340 0,0042 0,1500 0,1850 0,1650 0,1600 0,1500 0,1620 0,0144 0,2150 0,2200 0,1950 0,1950 0,2550 0,2160 0,0246 0,3900 0,3950 0,4000 0,3900 0,3950 0,3940 0,0042 0,1600 0,2050 0,1850 0,1750 0,1600 0,1770 0,0189 0,2350 0,2450 0,2150 0,2150 0,2850 0,2390 0,0288 0,4250 0,4200 0,4300 0,4200 0,4250 0,4240 0,0042 0,1550 0,2100 0,1950 0,1800 0,1650 0,1810 0,0222 0,2400 0,2500 0,2200 0,2150 0,2950 0,2440 0,0319 Rata-rata SD 0,4450 0,4350 0,4500 0,4350 0,4450 0,4420 0,0067 0,1400 0,2050 0,1900 0,1750 0,1600 0,1740 0,0253 0,2300 0,2450 0,2150 0,2100 0,2950 0,2390 0,0342 rata AUC 0,2893 0,2879 0,2936 0,2854 0,2907 0,2894 0,0031 0,1200 0,1525 0,1396 0,1329 0,1236 0,1337 0,0130 0,1757 0,1825 0,1611 0,1614 0,2100 0,1781 0,0201 DAI - - - - - - 58,5185 47,0223 52,4331 53,4418 57,4939 53,7819 4,5782 39,2593 36,6005 45,1338 43,4293 27,7641 38,4374 6,8507 8 9
Esktrak Daun Sembukan dosis 4 mg/200gBB tikus Kombinasi sirih merah : sembukan (25:75) Kombinasi sirih merah : sembukan (75:25) 1 2 3 4 5 Rata-rata SD 1 2 3 4 5 Rata-rata SD 1 2 3 4 5 Rata-rata SD - - - - - - - - - - - - 0,0350 0,0375 0,0350 0,0325 0,0375 0,0355 0,0021 0,0375 0,0325 0,0350 0,0375 0,0325 0,0350 0,0025 0,0375 0,0350 0,0325 0,0375 0,0325 0,0350 0,0025 0,0775 0,0825 0,0800 0,0725 0,0850 0,0795 0,0048 0,0825 0,0750 0,0800 0,0850 0,0750 0,0795 0,0045 0,0800 0,0775 0,0725 0,0825 0,0675 0,0760 0,0060 0,1900 0,2000 0,1850 0,1600 0,2100 0,1890 0,0188 0,1850 0,1800 0,1850 0,2100 0,1750 0,1870 0,0135 0,1800 0,1750 0,1700 0,1900 0,1500 0,1730 0,0148 0,2300 0,2400 0,2050 0,1950 0,2550 0,2250 0,0247 0,2150 0,2000 0,2100 0,2400 0,2000 0,2130 0,0164 0,2150 0,2000 0,1950 0,2200 0,1750 0,2010 0,0178 0,2550 0,2600 0,2250 0,2400 0,2900 0,2540 0,0243 0,2450 0,2150 0,2400 0,2550 0,2250 0,2360 0,0160 0,2450 0,2250 0,2150 0,2450 0,1950 0,2250 0,0212 0,2600 0,2650 0,2350 0,2550 0,3000 0,2630 0,0236 0,2600 0,2200 0,2550 0,2650 0,2300 0,2460 0,0198 0,2500 0,2350 0,2200 0,2500 0,2000 0,2310 0,0213 0,2550 0,2650 0,2400 0,2550 0,2950 0,2620 0,0205 0,2700 0,2150 0,2550 0,2800 0,2250 0,2490 0,0282 0,2450 0,2350 0,2150 0,2450 0,1950 0,2270 0,0217 0,1861 0,1929 0,1721 0,1729 0,2104 0,1869 0,0158 0,1850 0,1625 0,1800 0,1961 0,1661 0,1779 0,0138 0,1789 0,1689 0,1600 0,1814 0,1450 0,1669 0,0149 35,6790 33,0025 41,3625 39,4243 27,6413 35,4219 5,4260 36,0494 43,5484 38,6861 31,2891 42,8747 38,4895 5,0661 38,1481 41,3151 45,4988 36,4205 50,1229 42,3011 5,5724 9 0
Kombinasi sirih merah : sembukan (50:50) 1 2 3 4 5 Rata-rata SD - - - - 0,0300 0,0325 0,0275 0,0350 0,0275 0,0305 0,0033 0,0650 0,0725 0,0650 0,0775 0,0625 0,0685 0,0063 0,1450 0,1650 0,1550 0,1750 0,1450 0,1570 0,0130 0,1650 0,1850 0,1650 0,1850 0,1650 0,1730 0,0110 0,1850 0,2000 0,1700 0,1900 0,1800 0,1850 0,0112 0,1950 0,2050 0,1650 0,1900 0,1750 0,1860 0,0160 0,2000 0,2050 0,1550 0,1850 0,1650 0,1820 0,0217 0,1407 0,1521 0,1289 0,1482 0,1314 0,1403 0,0101 51,3580 47,1464 56,0827 48,0601 54,7912 51,4877 3,9573 9 1
92 Lampiran 19. Perhitungan AUC. n1-n AUC = 1nnn1-ntt2VtVt Kontrol negatif CMC-Na Kontrol positif Fenilbutazon 0,50 AUC = 05,0219,00 = 0,0475 0,50 AUC = 05,0212,00 = 0,0300 10,5 AUC = 5,01226,00,19 = 0,1125 10,5 AUC = 5,01214,012,0 = 0,0650 21 AUC = 12229,026,0 = 0,2750 21 AUC = 12214,014,0 = 0,1400 32 AUC = 23237,029,0 = 0,3300 32 AUC = 23216,014,0 = 0,1500 43 AUC = 34241,037,0 = 0,3900 43 AUC = 34216,016,0 = 0,1600 54 AUC = 45244,041,0 = 0,4250 54 AUC = 45215,016,0 = 0,1550 65 AUC = 56245,044,0 = 0,4450 65 AUC = 56213,015,0 = 0,1400 Rata-rata AUC= 0,2893 Rata-rata AUC= 0,1200 Kelompok esktrak sirih merah Kelompok ekstrak sembukan 0,50 AUC = 05,0215,00 = 0,0375 0,50 AUC = 05,0214,00 = 0,0350 10,5 AUC = 5,01218,00,15 = 0,0825 10,5 AUC = 5,01217,014,0 = 0,0775 21 AUC = 12220,018,0 = 0,1900 21 AUC = 12221,017,0 = 0,1900 32 AUC = 23223,020,0 = 0,2150 32 AUC = 23225,021,0 = 0,2300 43 AUC = 34224,023,0 = 0,2350 43 AUC = 34226,025,0 = 0,2550 54 AUC = 45224,024,0 = 0,2400 54 AUC = 45226,026,0 = 0,2600 65 AUC = 56222,024,0 = 0,2300 65 AUC = 56225,026,0 = 0,2550 Rata-rata AUC= 0,1757 Rata-rata AUC= 0,1861
Kelompok kombinasi 25%:75% 0,50 AUC = 05,0215,00 = 0,0375 10,5 AUC = 5,01218,00,15 = 0,0825 21 AUC = 12219,018,0 = 0,1850 32 AUC = 23224,019,0 = 0,2150 43 AUC = 34225,024,0 = 0,2450 54 AUC = 45227,025,0 = 0,2600 65 AUC = 56227,027,0 = 0,2700 Rata-rata AUC= 0,1850 Kelompok kombinasi 50%:50% 0,50 AUC = 05,0212,00 = 0,0300 10,5 AUC = 5,01214,00,12 = 0,0650 21 AUC = 12215,014,0 = 0,1450 32 AUC = 23218,015,0 = 0,1650 43 AUC = 34219,018,0 = 0,1850 54 AUC = 45220,019,0 = 0,1950 65 AUC = 56220,020,0 = 0,2000 Rata-rata AUC= 0,1407 93 Kelompok kombinasi 75%:25% 0,50 AUC = 05,0215,00 = 0,0375 10,5 AUC = 5,01217,015,0 = 0,0800 21 AUC = 12219,017,0 = 0,1800 32 AUC = 23224,019,0 = 0,2150 43 AUC = 34225,024,0 = 0,2450 54 AUC = 45225,025,0 = 0,2500 65 AUC = 56224,025,0 = 0,2450 Rata-rata AUC= 0,1789
Lampiran 20. Perhitungan DAI (%). DAI = 100% x AUCAUCAUCkpk Kelompok kontrol Fenilbutazon Kelompok Ekstrak Sirih Merah DAI 1 = x 100% DAI 1 = x 100% = 58,5185% = 39,2593% DAI 2 = x 100% DAI 2 = x 100% = 47,0223% = 36,6005% DAI 3 = x 100% DAI 3 = x 100% = 52,4331% = 45,1338% DAI 4 = x 100% DAI 4 = x 100% = 53,4418% = 43,4293% DAI 5 = x 100% DAI 5 = x 100% = 57,4939% = 27,7641% Rata-rata %DAI = 53,7819% Rata-rata %DAI = 38,4374% Kelompok Ekstrak Sembukan DAI 1 = x 100% = 35,6790% DAI 2 = x 100%= 33,0025% DAI 3 = x 100%= 41,3625% DAI 4 = x 100% = 39,4243% DAI 5 = x 100% = 27,6413% Rata-rata %DAI = 35,4219% 94
Kelompok Kombinasi 25:75 Kelompok Kombinasi 75:25 DAI 1 = x 100% DAI 1 = x 100% = 36,0494% = 38,1481% DAI 2 = x 100% DAI 2 = x 100% = 43,5484% = 41,3151% DAI 3 = x 100% DAI 3 = x 100% = 38,6861% = 45,4988% DAI 4 = x 100% DAI 4 = x 100% = 31,2891% = 36,4205% DAI 5 = x 100% DAI 5 = x 100% = 42,8747% = 50,1229% Rata-rata %DAI = 38,4895% Rata-rata %DAI = 42,3011% Kelompok Kombinasi 50:50 DAI 1 = x 100% = 51,3580% DAI 2 = x 100%= 47,1464% DAI 3 = x 100%= 56,0827% DAI 4 = x 100% = 48,0601% DAI 5 = x 100% = 54,7912% Rata-rata %DAI = 51,4877% 95
Lampiran 21. Data hasil uji statistik area under curve. Uji Kol1mogorov Smirnov Tujuan : mengetahui kenormalan data sebagai syarat uji ANOVA Kriteria uji : Sig.< 0,05 berarti Ho ditolak Sig. > 0,05 berarti Ho diterima Hasil : One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test AUC N Normal Parametersa,b Most Extreme Differences Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed) Mean Std. Deviation Absolute Positive Negative 35 ,1818774 ,04994070 ,209 ,209 -,124 1,239 ,093 a. Test distribution is Normal. b. Calculated from data. Kesimpulan : Sig. > 0,05 maka data AUC terdistribusi normal. Uji Levene Tujuan :Untuk mengetahui homogenitas data. Kriteria uji : Sig.< 0,05 berarti Ho ditolak Hasil Sig. > 0,05 berarti Ho diterima : Test of Homogeneity of Variances AUC Levene Statistic 1,361 df1 6 df2 28 Sig. ,264 Kesimpulan : Sig. > 0,05 (Ho diterima) maka area under curve homogen. Uji One Way ANOVA Tujuan under curve dari setiap kelompok perlakuan. : untuk mengetahui adanya perbedaan yang bermakna dari area Kriteria uji : Sig.< 0,05 berarti Ho ditolak Hasil Sig. > 0,05 berarti Ho diterima : 96
LSD 97 AUC ANOVA Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups Within Groups Total ,079 ,005 ,085 6 28 34 ,013 ,000 68,755 ,000 Kesimpulan : Sig. < 0,05 (Ho ditolak) maka terdapat perbedaan yang bermakna area under curve dari tiap perlakuan. Uji Post Hoc (LSD) Tujuan under curve yang bermakna. : untuk mengetahui pada kelompok mana terdapat perbedaan area Kriteria uji : Sig.< 0,05 berarti Ho ditolak Sig. > 0,05 berarti Ho diterima Hasil : Multiple Comparisons Dependent Variable: AUC (J) Perlakuan (I) Perlakuan CMC-NA Fenilbutazo n ekstrak sirih merah ekstrak sembukan Fenilbutazon ekstrak sirih merah ekstrak sembukan kombinasi 25:75 kombinasi 50:50 kombinasi 75:25 CMC-NA ekstrak sirih merah ekstrak sembukan kombinasi 25:75 kombinasi 50:50 kombinasi 75:25 CMC-NA Fenilbutazon ekstrak sembukan kombinasi 25:75 kombinasi 50:50 kombinasi 75:25 CMC-NA Fenilbutazon ekstrak sirih merah kombinasi 25:75 kombinasi 50:50 kombinasi 75:25 Mean Difference (I-J) Std. Error Sig. ,15564400* ,00877480 ,11121600* ,00877480 ,10250000* ,00877480 ,11143000* ,00877480 ,14907400* ,00877480 ,12250000* ,00877480 -,15564400* ,00877480 -,04442800* ,00877480 -,05314400* ,00877480 -,04421400* ,00877480 -,00657000 ,00877480 -,03314400* ,00877480 -,11121600* ,00877480 ,04442800* ,00877480 -,00871600 ,00877480 ,00021400 ,00877480 ,03785800* ,00877480 ,01128400 ,00877480 -,10250000* ,00877480 ,05314400* ,00877480 ,00871600 ,00877480 ,00893000 ,00877480 ,04657400* ,00877480 ,02000000* ,00877480 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,460 ,001 ,000 ,000 ,329 ,981 ,000 ,209 ,000 ,000 ,329 ,318 ,000 ,030 95% Confidence Interval Lower Bound ,1376696 ,0932416 ,0845256 ,0934556 ,1310996 ,1045256 -,1736184 -,0624024 -,0711184 -,0621884 -,0245444 -,0511184 -,1291904 ,0264536 -,0266904 -,0177604 ,0198836 -,0066904 -,1204744 ,0351696 -,0092584 -,0090444 ,0285996 ,0020256 Upper Bound ,1736184 ,1291904 ,1204744 ,1294044 ,1670484 ,1404744 -,1376696 -,0264536 -,0351696 -,0262396 ,0114044 -,0151696 -,0932416 ,0624024 ,0092584 ,0181884 ,0558324 ,0292584 -,0845256 ,0711184 ,0266904 ,0269044 ,0645484 ,0379744
98 kombinasi 25:75 kombinasi 50:50 kombinasi 75:25 CMC-NA Fenilbutazon ekstrak sirih merah ekstrak sembukan kombinasi 50:50 kombinasi 75:25 CMC-NA Fenilbutazon ekstrak sirih merah ekstrak sembukan kombinasi 25:75 kombinasi 75:25 CMC-NA Fenilbutazon ekstrak sirih merah ekstrak sembukan kombinasi 25:75 kombinasi 50:50 ,11143000* ,00877480 ,04421400* ,00877480 -,00021400 ,00877480 -,00893000 ,00877480 ,03764400* ,00877480 ,01107000 ,00877480 -,14907400* ,00877480 ,00657000 ,00877480 -,03785800* ,00877480 -,04657400* ,00877480 -,03764400* ,00877480 -,02657400* ,00877480 -,12250000* ,00877480 ,03314400* ,00877480 -,01128400 ,00877480 -,02000000* ,00877480 -,01107000 ,00877480 ,02657400* ,00877480 ,000 ,000 ,981 ,318 ,000 ,218 ,000 ,460 ,000 ,000 ,000 ,005 ,000 ,001 ,209 ,030 ,218 ,005 ,1294044 ,0262396 -,0181884 -,0269044 ,0196696 -,0069044 -,1670484 -,0114044 -,0558324 -,0645484 -,0556184 -,0445484 -,1404744 ,0151696 -,0292584 -,0379744 -,0290444 ,0085996 ,0934556 ,0621884 ,0177604 ,0090444 ,0556184 ,0290444 -,1310996 ,0245444 -,0198836 -,0285996 -,0196696 -,0085996 -,1045256 ,0511184 ,0066904 -,0020256 ,0069044 ,0445484 . The mean difference is significant at the 0.05 level. Homogeneous Subsets AUC Perlakuan N Subset for alpha = 0.05 2 1 3 Fenilbutazon kombinasi 50:50 5 5 ,1337140 ,1402840 Student-Newman- Keulsa kombinasi 75:25 kombinasi 25:75 ekstrak sirih merah ekstrak sembukan CMC-NA 5 5 5 5 5 ,1668580 ,1779280 ,1781420 ,1868580 ,2893580 Sig. ,460 ,127 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5,000. Kesimpulan : dari hasil data diatas menunjukan bahwa kontrol negatif berbeda bermakna dengan kontrol positif fenilbutazon, ekstrak sirih merah, dan kelompok kombinasi. Kelompok kontrol positif berbeda makna dengan kelompok kontrol negatif, ekstak sirih merah, ekstrak sembukan, kombinasi 25:75, kombinas75:25,
hal ini menunjukkan bahwa kelompok kombinasi 50:50 memiliki AUC sebanding dengan kontrol positif fenilbutazon. Semakin kecil AUC perlakuan uji maka semakin baik DAI dari perlakuan uji. 99
Lampiran 22. Data hasil uji statistik persen daya antiinflamasi. Uji Kolmogorov Smirnov Tujuan : mengetahui kenormalan data sebagai syarat uji ANOVA Kriteria uji : Sig.< 0,05 berarti Ho ditolak Sig. > 0,05 berarti Ho diterima Hasil : One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test DAI N Normal Parametersa,b Most Extreme Differences Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed) Mean Std. Deviation Absolute Positive Negative 35 37,1314 17,28247 ,209 ,127 -,209 1,239 ,093 a. Test distribution is Normal. b. Calculated from data. Kesimpulan : Sig. > 0,05 maka data persen daya antiinflamasi terdistribusi normal Uji Levene Tujuan :Untuk mengetahui homogenitas data. Kriteria uji : Sig.< 0,05 berarti Ho ditolak Hasil Sig. > 0,05 berarti Ho diterima : Test of Homogeneity of Variances DAI Levene Statistic 1,930 df1 6 df2 28 Sig. ,111 Kesimpulan : Sig. > 0,05 (Ho diterima) maka persen daya antiinflamasi homogen. 100
101 Uji One Way ANOVA Tujuan daya antiinflamasi dari setiap kelompok perlakuan. : untuk mengetahui adanya perbedaan yang bermakna dari persen Kriteria uji : Sig.< 0,05 berarti Ho ditolak Hasil Sig. > 0,05 berarti Ho diterima : DAI ANOVA Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups Within Groups Total 9476,408 678,843 10155,251 6 28 34 1579,401 24,244 65,145 ,000 Kesimpulan : Sig. < 0,05 (Ho ditolak) maka terdapat perbedaan yang bermakna persen daya antiinflamasi dari tiap perlakuan. Uji Post Hoc (LSD) Tujuan antiinflamasi yang bermakna. : untuk mengetahui pada kelompok mana terdapat perbedaan daya Kriteria uji : Sig.< 0,05 berarti Ho ditolak Hasil Sig. > 0,05 berarti Ho diterima : Multiple Comparisons LSD Dependent Variable: DAI (J) Perlakuan (I) Perlakuan CMC-Na Fenilbutazo n Fenilbutazon Ekstrak sirih merah Ekstrak sembukan Kombinasi sirih merah:sembukan (25:75) Kombinasi sirih merah:sembukan (75:25) Kombinasi sirih merah:sembukan (50:50) CMC-Na Ekstrak sirih merah Ekstrak sembukan Kombinasi sirih merah:sembukan (25:75) Kombinasi sirih merah:sembukan (75:25) Kombinasi sirih merah:sembukan (50:50) Mean Difference (I-J) Std. Error 53,78192* 3,11412 -38,43740* 3,11412 -35,42192* 3,11412 -38,48954* 3,11412 42,30109* 3,11412 51,48768* 3,11412 53,78192* 3,11412 15,34452* 3,11412 18,36000* 3,11412 15,29238* 3,11412 11,48083* 3,11412 Sig. 95% Confidence Interval ,000 ,000 ,000 ,000 Lower Bound -60,1609 -44,8164 -41,8009 -44,8685 Upper Bound -47,4029 -32,0584 -29,0429 -32,1105 ,000 48,6801 35,9221 ,000 57,8667 45,1087 ,000 ,000 ,000 ,000 47,4029 8,9655 11,9810 8,9134 60,1609 21,7235 24,7390 21,6714 ,001 5,1018 17,8598 2,29424 3,11412 ,467 4,0847 8,6732
Ekstrak sirih merah Ekstrak sembukan Kombinasi sirih merah:sem bukan (25:75) Kombinasi sirih merah:sem bukan (75:25) Kombinasi sirih merah:sem bukan (50:50) CMC-Na Fenilbutazon Ekstrak sembukan Kombinasi sirih merah:sembukan (25:75) Kombinasi sirih merah:sembukan (75:25) Kombinasi sirih merah:sembukan (50:50) CMC-Na Fenilbutazon Ekstrak sirih merah Kombinasi sirih merah:sembukan (25:75) Kombinasi sirih merah:sembukan (75:25) Kombinasi sirih merah:sembukan (50:50) CMC-Na Fenilbutazon Ekstrak sirih merah Ekstrak sembukan Kombinasi sirih merah:sembukan (75:25) Kombinasi sirih merah:sembukan (50:50) CMC-Na Fenilbutazon Ekstrak sirih merah Ekstrak sembukan Kombinasi sirih merah:sembukan (25:75) Kombinasi sirih merah:sembukan (50:50) CMC-Na Fenilbutazon Ekstrak sirih merah Ekstrak sembukan Kombinasi sirih merah:sembukan (25:75) Kombinasi sirih merah:sembukan (75:25) . The mean difference is significant at the 0.05 level. 38,43740* 3,11412 -15,34452* 3,11412 3,01548 3,11412 -,05214 3,11412 3,86369 3,11412 13,05028* 3,11412 35,42192* 3,11412 -18,36000* 3,11412 -3,01548 3,11412 -3,06762 3,11412 6,87917* 3,11412 16,06576* 3,11412 38,48954* 3,11412 -15,29238* 3,11412 ,05214 3,11412 3,06762 3,11412 -3,81155 3,11412 12,99814* 3,11412 42,30109* 3,11412 -11,48083* 3,11412 3,86369 3,11412 6,87917* 3,11412 3,81155 3,11412 9,18659* 3,11412 51,48768* 3,11412 -2,29424 3,11412 13,05028* 3,11412 16,06576* 3,11412 12,99814* 3,11412 9,18659* 3,11412 ,000 ,000 ,341 ,987 ,225 ,000 ,000 ,000 ,341 ,333 ,036 ,000 ,000 ,000 ,987 ,333 ,231 ,000 ,000 ,001 ,225 ,036 ,231 ,006 ,000 ,467 ,000 ,000 ,000 ,006 32,0584 -21,7235 -3,3635 -6,4311 10,2427 19,4293 29,0429 -24,7390 -9,3945 -9,4466 13,2582 22,4448 32,1105 -21,6714 -6,3268 -3,3114 -10,1905 19,3771 35,9221 -17,8598 -2,5153 ,5002 -2,5674 15,5656 45,1087 -8,6732 6,6713 9,6868 6,6191 2,8076 102 44,8164 -8,9655 9,3945 6,3268 2,5153 6,6713 41,8009 -11,9810 3,3635 3,3114 ,5002 9,6868 44,8685 -8,9134 6,4311 9,4466 2,5674 6,6191 48,6801 -5,1018 10,2427 13,2582 10,1905 2,8076 57,8667 4,0847 19,4293 22,4448 19,3771 15,5656
103 Homogeneous Subsets DAI Perlakuan CMC-Na N 5 Subset for alpha = 0.05 1 ,0000 2 3 Student-Newman-Keulsa Ekstrak sembukan Ekstrak sirih merah Kombinasi sirih merah:sembukan (25:75) Kombinasi sirih merah:sembukan (75:25) Kombinasi sirih merah:sembukan (50:50) 5 5 5 5 5 35,4219 38,4374 38,4895 42,3011 51,4877 Fenilbutazon 5 53,7819 Sig. 1,000 ,145 ,467 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5,000. Kesimpulan : dari hasil data diatas menunjukan bahwa kontrol negatif berbeda bermakna dengan kontrol positif fenilbutazon, ekstrak sirih merah, ekstrak sembukan dan kelompok kombinasi. Kelompok positif berbeda makna dengan kelompok kontrol negatif, kelompok ekstrak sirih merah, ekstrak sembukan, kombinasi 25:75 dan kombinasi 75:25, hal ini menunjukkan bahwa kelompok kombinasi 50:50 memiliki DAI sebanding dengan kontrol positif fenilbutazon.