PENGARUH PERBEDAAN PELARUT TERHADAP KADAR TOTAL FENOL CABAI RAWIT (Capsicum frutescens L.) KARYA TULIS ILMIAH Oleh : Rizki Nur Widarjati 1608E041 PROGRAM STUDI DIII FARMASI POLITEKNIK HARAPAN BERSAMA TEGAL 2019 i
HALAMAN PERSETUJUAN PENGARUH PERBEDAAN PELARUT TERHADAP KADAR TOTAL FENOL CABE RAWIT (Capsicum frutescens L.) KARYA TULIS ILMIAH Oleh : RIZKI NUR WIDARJATI 1608E041 DIPERIKSA DAN DISETUJUI OLEH: PEMBIMBING I PEMBIMBING II KUSNADI, M.Pd NIDN : 0616038701 RIZKI FEBRIYANTI, M.Farm.,Apt NIDN : 0627028302 ii
HALAMAN PENGESAHAN Karya tulis ilmiah ini diajukan oleh : NAMA : Rizki Nur Widarjati NIM : 1608E041 Jurusan / Program Studi : Farmasi Judul Karya Tulis Ilmiah : Pengaruh Perbedaan Pelarut Terhadap Kadar Total Fenol Cabai Rawit (Capsicum frutescens L). Telah berhasil dipertahankan dihadapan Tim Penguji dan diterima sebagai bagian persyaratan yang diperlukan untuk memperoleh gelar Ahli Madya Farmasi pada Jurusan / Program Studi DIII Farmasi, Politeknik Harapan Bersama Tegal. TIM PENGUJI Penguji 1 : Wilda Amananti, S.Pd, M.Si ( ) Penguji 2 : Kusnadi, M.Pd ( ) Penguji 3 : Rizki Febriyanti, M.Farm., Apt ( ) Tegal, 26 Februari 2017 Program Studi DIII Farmasi Ketua Program Studi Heru Nurcahyo, S.Farm.,M.Sc.,Apt NIPY.010.007.038 iii
HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS Karya Tulis Ilmiah ini adalah hasil karya sendiri, Dan semua sumber baik yang dikutip maupun dirujuk Telah nyatakan dengan benar. NAMA NIM Tanda Tangan : Rizki Nur Widarjati : 1608E041 : Tanggal : 26 Februari 2019 iv
HALAMAN PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA TULIS ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS Sebagai sivitas akademika Politeknik Harapan Bersama Tegal, saya yang bertanda tangan di bawah ini : Nama NIM Jurusan / Program Studi Jenis Karya : Rizki Nur Widarjati : 1608E041 : Farmasi : Karya Tulis Ilmiah Demi pengembangan ilmu pengetahuan, menyetujui untuk memberikan kepada Politeknik Harapan Bersama Tegal Hak Bebas Royalti Nonekslusif (None exclusive Royalty Free Right) atas karya ilmiah saya yang berjudul : Pengaruh Perbedaan Pelarut Terhadap Kadar Total Fenol Cabai Rawit (Capsicum frutescens L) Beserta perangkat yang ada (jika diperlukan). Dengan Hak Bebas Royalti/Nonekslusif ini Politeknik Harapan Bersama Tegal berhak menyimpan, mengalih media/formatkan, mengelola dalam bentuk pangkalan data (database), merawat dan mempublikasikan karya ilmiah saya selama tetap mencantumkan nama saya sebagai penulis/pencipta dan pemilik hak cipta. Demikian pernyataan ini saya buat dengan sebenarnya. Dibuat di : Tegal Pada Tanggal : 26 Februari 2019 Yang Menyatakan (Rizki Nur Widarjati) v
MOTTO "Pendidikan bukan hanya untuk yang muda tapi untuk segala umur." "Jadilah seperti karang di lautan yang kuat dihantam ombak dan kerjakanlah hal yang bermanfaat untuk diri sendiri dan orang lain, karena hidup hanyalah sekali. Ingat hanya pada Allah apapun dan di manapun kita berada kepada Dia-lah tempat meminta dan memohon." "Memulai dengan penuh keyakinan, Menjalankan dengan penuh keikhlasan, Menyelesaikan dengan penuh kebahagiaan" "Jangan ingat lelahnya belajar tapi ingat buah manis yang akan dipetik kelak ketika sukses!" vi
PERSEMBAHAN Kupersembahkan buat : Bapak Alm. Dulkarim tercinta, mama Rodiah tercinta, Terima kasih atas doa, kasih sayang, dan dukungannya selama ini. Doa yang kupanjatkan tak pernah berhenti untuk alm.Bapak dan Mama. Semoga aku bisa menjadi anak yang membanggakan, membuat alm.Bapak dan mama senang dan tersenyum dengan keberhasilanku ini. Kakakku mba Wiwin dan Mas Toni,Terima kasih atas doa, bantuan, dan dukungannya. Tunanganku Robi A Maulana, Terima kasih atas doa, bantuan, dan semangatnya. Terima kasih sudah banyak membantuku sehingga aku bisa menyelesaikan Karya Tulis Ilmiah ini dengan baik. Keluarga besar Apotik Duta Sehat, Terima kasih banyak doa, bantuan dan dukungannya selama ini. Teman-teman angkatanku kelas H, Terima kasih untuk kebersamaannya semoga bisa kompak terus, dan terima kasih untuk teman terbaikku iza, tiara yang sudah banyak membantu terima kasih buat kebersamaannya. satu Terima kasih kepada Keluarga kecil Prodi DIII Farmasi yang sudah membantu proses Karya Tulis Ilmiah ini. vii
PRAKATA Puji syukur saya panjatkan kehadirat allah SWT yang telah melimpahkan rahmat, hidayah dan karuniaNya, sehingga saya dapat menyelesaikan Karya Tulis Ilmiah saya yang berjudul "Pengaruh Perbedaan Pelarut Terhadap Kadar Total Fenol Cabai Rawit (Capsicum frutescens L)" tepat pada waktunya . Penulisan Karya Tulis ilmiah ini dilakukan dalam rangka melengkapi salah satu syarat menyelesaikan studi III program studi Farmasi di Politeknik Harapan Bersama Tegal. Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari beberapa pihak akan sulit untuk menyelesaikan Karya Tulis ilmiah ini. Oleh karena itu, penulis ingin mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada : 1. Allah SWT atas perlindungan, kemudahan, kelancaran,dan pertolongannya yang diberikan kepada penulis sehingga Karya Tulis Ilmiah ini dapat terselesaikan. 2. Ir.Mc.Chambali, B.eng M.Kom selaku Direktur Politeknik Harapan Bersama Tegal. 3. Heru Nurcahyo, S.Farm.,M.Sc,Apt selaku Ka.Prodi DIII Farmasi Politeknik Harapan Bersama Tegal. 4. Kusnadi,M.Pd dan Rizki Febriyanti,M.Farm.,Apt selaku dosen pembimbing yang dengan ikhlas dan sabar meluangkan waktunya dalam membimbing dan memberikan petunjuk, arahan dan bimbingannya yang sangat berarti bagi penulis sehingga Karya Tulis Ilmiah ini dapat terselesaikan dengan baik. viii
5. Alm.Bapak, Ibu, Kakak, dan adikku tercinta yang telah memberikan dukungan moral dan materil serta doa dan semangat sehingga penulis mampu menyelesaikan Karya Tulis Ilmiah ini. 6. Robi A Maulana yang selalu memberikan semangat, bantuan, doa dan dukungannya. 7. Teman-temanku tersayang Iza, Tiara Dan Keluarga besar Apotik Duta Sehat yang sudah memberikan doa, motivasi dan dukungannya. 8. Teman-temanku kelas H dan satu angkatan 9. Laboran Farmasi yang telah membantu dalam proses penelitian. 10. Semua pihak yang tidak dapat disebutka satu persatu yang turut membantu pembuatan Karya Tulis Ilmiah ini. Penulis menyadari Karya Tulis Ilmiah ini masih jauh dari sempurna. Untuk itu segala kritik dan saran yang bersifat membangun sangat penulis harapkan agar Karya Tulis Ilmiah ini menjadi lebih baik. Semoga Karya Tulis Ilmiah ini bermanfaat bagi pembacanya. Tegal, Januari 2019 Penyusun ix
INTISARI Widarjati, Rizki Nur. Kusnadi., Febriyanti, Rizki. 2019. PENGARUH PERBEDAAN PELARUT TERHADAP KADAR TOTAL FENOL CABAI RAWIT (Capsicum frutescens L.). Cabai rawit (Capsicum frutescens L) merupakan komoditas sayuran penting di indonesia, terutama dalam industri kuliner nasional. Rasa pedas pada buah cabai disebabkan oleh kandungan capsaicinoid yang ada pada buah cabe tersebut. Buah Cabai memiliki kandungan senyawa fenol yang didominasi oleh kelompok senyawa capsaicinoid dan flavonoid serta beberapa asam ferulat,asam kumarat dan asam cinamat. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan kadar total fenol pada cabai rawit (Capsicum frutescens L.) dengan metode Folin-ciocalteau. Sampel yang akan digunakan pada penelitian adalah cabai rawit yang diambil dari Desa Kepandean, Kecamatan Dukuhturi dan teknik pengambilan sampel dilakukan secara random. Sampel yang digunakan diisolasi dengan menggunakan metode maserasi selama 24 jam dengan menggunakan pelarut etanol 96%, etil asetat, dan n-heksana menghasilkan ekstrak cair kemudian penguapan bebas dan menghasilkan ekstrak kental. Sampel di uji kualitatif dengan identifikasi reaksi warna menggunakan FeCl3 1% sebanyak 3 tetes menghasilkan warna hijau kehitaman. Berdasarkan hasil penelitian cabai rawit (Capsicum frutescens L) terdapat kandungan senyawa fenol pada masing-masing pelarut, yaitu etanol 96%, etil asetat, dan n-heksana . Hasil penelitian menunjukan bahwa panjang gelombang maksimum fenol yang diperoleh adalah 750 nm dengan persamaan kurva baku y= 0,0132x + 0,1988(r2= 0,9649). Berdasarkan uji analisis data diketahui bahwa kadar total fenol ekstrak cabai rawit tertinggi terdapat pada pelarut Etil Asetat yaitu sebesar 12,17%. Kata kunci : Cabai rawit, Kadar Fenol, Perbedaan Pelarut, Folin-Ciocalteau x
ABSTRACT Widarjati, Rizki Nur. Kusnadi., Febriyanti, Rizki. 2019. The Effect Of Soluent Differences On Total Level Of Cayenne Pepper (Capsicum frutescens L). Cayenne pepper (Capsicum frutescens L) is an important vegetable commodity in Indonesia, especially in the national culinary industry. The spicy taste of is Cayenne pepper caused by the capsaicinoid content in the Cayenne pepper. Cayenne pepper contains phenolic compounds which are dominated by groups of capsaicinoid compounds and flavonoids and some ferulic acids, kumarat acid and cinnamic acid. This study aimed to determine the total phenol content of cayenne pepper (Capsicum frutescens L.) by the Folin-ciocalteau method. The samples to be used in the study were cayenne pepper taken from Kepandean Village, Dukuhturi District and the sampling technique was done randomly. The sample used was isolated using maceration method for 24 hours using 96% ethanol, ethyl acetate, and n-hexane to produce liquid extracts and then free evaporation and produce thick extracts. The sample in the qualitative test by identifying the color reaction using FeCl3 1% as much as 3 drops resulted in a blackish green color. Based on the results of research on cayenne pepper (Capsicum frutescens L) there is a content of phenol in each solvent, namely 96% ethanol, ethyl acetate, and n-hexane. The results show that the maximum wavelength of phenol obtained was 750 nm with the standard curve equation y = 0.0132x + 0.1988 (r2 = 0.9649). Based on the data analysis test, it is found that the highest total phenol level of cayenne pepper extract is found in ethyl acetate solvents which is 12.17%. Keywords: Cayenne pepper, Phenol Levels, Solvent Difference, Folin- Ciocalteau xi
DAFTAR ISI Halaman Halaman Judul ... Halaman Persetujuan ... Halaman Pengesahan ... Halaman Pernyataan ... Halaman Pernyataan Persetujuan ... Halaman Moto ... vi Halaman Persembahan ... vii PRAKATA ... viii INTISARI ... ABSTRAK ... xi DAFTAR ISI ... xii DAFTAR GAMBAR ... xiv DAFTAR TABEL ... xv DAFTAR LAMPIRAN ... xvi BAB I PENDAHULUAN ... 1.1 Latar Belakang ... 1.2 Rumusan Masalah ... 1.3 Batasan Masalah... 1.4 Tujuan Penelitian ... 1.5 Manfaat Penelitian ... 1.6 Keaslian Penelitian ... BAB II TINJAUAN PUSTAKA ... 2.1 Tinjauan Pustaka ... 2.1.1 Cabai Rawit ... 1. Morfologi Tumbuhan Cabai Rawit ... 8 1. Morfologi Tumbuhan Cabai Rawit ... 8 2. Kandungan Tumbuhan Cabai Rawit ... 10 3. Manfaat Tumbuhan Cabai Rawit ... 10 xii i ii iii iv v x 1 1 4 4 5 5 6 7 7
2.1.2 Simplisia ... 11 1. Susut Pengeringan ... 12 2. Rendemen ... 13 3. Proses Pembuatan Simplisia ... 13 2.1.3 Pelarut ... 14 2.1.4 Ekstraksi ... 19 2.1.5 Maserasi ... 20 2.1.6 Pemekatan ... 21 2.1.7 Penapisan Fitokimia ... 22 2.1.8 Senyawa Fenol ... 22 2.1.9 Kromatografi Lapis Tipis ... 24 2.1.10 Spektrofotometri UV-Vis ... 26 2.2 Hipotesis ... 29 BAB III METODE PENELITIAN ... 30 3.1 Objek Penelitian... 30 3.2 Sampel dan Teknik Sampling ... 30 3.3 Variabel Penelitian... 30 3.4 Teknik Pengumpulan Data ... 31 3.4.1 Cara Pengumpulan Data ... 31 3.4.2 Alat dan Bahan ... 31 3.4.3 Cara Kerja ... 32 3.5 Analisis Hasil ... 44 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN... 45 BAB V SIMPULAN DAN SARAN... 58 5.1 Simpulan... 58 5.2 Saran... 58 DAFTAR PUSTAKA ... 59 LAMPIRAN ... 63 xiii
DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 2.1. Tanaman Cabe Rawit ... 7 Gambar 3.1. Skema Pembuatan Serbuk Simplisia ... 32 Gambar 3.2. Skema Susut Pengeringan ... 33 Gambar 3.3. Skema Uji Mikroskopik Buah Cabe Rawit ... 34 Gambar 3.4. Skema Pembuatan Ekstraksi Cabe Rawit ... 35 Gambar 3.5. Skema Uji Bebas Etanol 96 ... 36 Gambar 3.6.Skema Uji Bebas Etil Asetat ... 37 Gambar 3.7. Skema Uji Bebas N-Heksana ... 37 Gambar 3.8. Skema Uji Kualitatif Pada Fenol Ekstrak Buah Cabe Rawit... 38 Gambar 3.9. Skema Kromatografi Lapis Tipis ... 40 Gambar 3.10. Skema Pembuatan Larutan Induk Asam Galat ... 41 Gambar 3.11. Skema Pembuatan Larutan Na2CO3 20% ... 41 Gambar 3.12. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum... 42 Gambar 3.12. Skema Pembuatan Kurva Kalibrasi... 43 Gambar 4.1. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum ... 54 Gambar 4.2.Kurva Kalibrasi Asam Galat ... 56 xiv
DAFTAR TABEL Halaman Tabel 1.1 Keaslian Penelitian ... 6 Tabel 4.1 Hasil Uji Susut Pengeringan ... 46 Tabel 4.2 Hasil Identifikasi Makroskopis ... 46 Tabel 4.3 Hasil Identifikasi Mikroskopis ... 47 Tabel 4.4 Hasil Identifikasi Uji Bebas Pelarut ... 50 Tabel 4.5 Hasil Rendemen Ekstrak ... 50 Tabel 4.6 Identifikasi Senyawa Fenol ... 51 Tabel 4.7 Data Rf Hasil KLT ... 53 Tabel 4.8 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum ... 54 Tabel 4.9 Nilai Absorbansi Asam Galat ... 55 Tabel 4.10 Kandungan Total Fenol Dalam Ekstrak Cabai Rawit ... 56 xv
DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Prosentase (%) Berat Basah dan Berat Kering... 63 Lampiran 2. Perhitungan Susut Pengeringan ... 64 Lampiran 3. Perhitungan Rendemen Ekstrak ... 66 Lampiran 4. Perhitungan Nilai Rf sampel dan Rf standar ... 69 Lampiran 5. Perhitungan Kadar Total Fenol ... 70 Lampiran 6. Gambar Penelitian ... 79 xvi Halaman
BAB I PENDAHULUAN 1.1. Latar Belakang Cabai merupakan komoditas sayuran penting di Indonesia terutama dalam industri kuliner nasional. Hal ini dapat tergambar dari ragam kuliner yang memiliki cita rasa pedas yang diminati oleh masyarakat Indonesia. Pada beberapa jenis cabais yang dikonsumsi masyarakat Indonesia, cabai rawit (Capsicum frutescens L) memiliki tingkat kepedasan yang lebih tinggi dibanding dengan jenis cabe besar (Capsicum annuum) (Dedi dkk,2017). Rasa pedas pada buah cabai disebabkan oleh kandungan capsaicinoid yang ada pada buah cabe tersebut. Buah cabai memiliki kandungan nutrisi yang cukup lengkap seperti vitamin dan mineral. Selain itu buah cabe memiliki kandungan senyawa fenol yang didominasi oleh kelompok senyawa capsaicinoid dan flavonoid serta beberapa asam ferulat, asam kumarat, dan asam cinamat (Dedi dkk,2017) Buah cabai rawit berkhasiat mengobati rematik, sariawan, sakit gigi, flu, penambah nafsu makan, dan mencegah penyakit kanker (Sutomo dkk,2017). Senyawa fenol seperti flavonoid merupakan metabolit sekunder yang tersebar terutama pada famili Leguminosae, Liliaceae, Polygonaceae, Schropulariceae dapat ditemukan pada semua bagian tumbuhan, seperti daun, buah, biji, akar, dan kulit batang (Ikalinus et al,2015). Fenol adalah senyawa yang mempunyai sebuah cincin aromatik dengan satu atau lebih gugus hidroksil. Senyawa fenol pada bahan makanan dapat 1 dan
dikelompokkan menjadi fenol sederhana dan asam folat (Oktaviana, 2010).Standar yang digunakan pada analisis kandungan fenolik adalah asam galat, hal ini karena asam galat bersifat stabil, memiliki sensivitas yang tinggi, dan harganya cukup terjangkau. Kandungan fenolik dari standar asam galat ditentukan dengan metode Folin-Coicalteau (Rahmawati, 2015). Beberapa faktor dalam proses ekstraksi yang mempengaruhi hasil ekstraksi diantaranya jenis pelarut, rasio berat bahan dengan volume pelarut, suhu, pengadukan, waktu ekstraksi, dan ukuran sampel. Salah satu metode ekstraksi yang umum digunakan yaitu metode maserasi. Metode maserasi memiliki kelebihan seperti cara pengerjaan dan unit alat yang digunakan sederhana,biaya operasional relatif rendah, serta dapat menghindari rusaknya senyawa-senyawa yang bersifat termolabil (Mukhriani, 2014). Penelitian ini menggunakan metode maserasi satu tahap dengan pelarut organik dengan tingkat kepolaran yang berbeda yaitu etanol 96% (polar), etil asetat (semi polar) dan n-heksana (non polar). Metode maserasi dipilih karena dapat mengekstraksi senyawa aktif dengan baik melalui perendaman tanpa pemanasan sehingga dapat menghindari kerusakan komponen senyawa yang labil dan tidak tahan panas. Adanya sistem perendaman ini maka pelarut akan menembus dinding sel dan masuk kedalam sel yang mengandung zat aktif. Maka zat aktif yang terdapat dalam sel akan larut dalam pelarut (Khoiriyah,2014). Pemakaian etanol sebagai bahan pelarut karena etanol dapat larut dalam air dan dapat juga larut pada bahan organik lainnya sehingga dapat memudarkan proses ekstraksi pada cabai ini. Etanol adalah bahan pelarut organik yang mudah 2
3 menguap sehingga dapat memudahkan proses ekstraksi. Etanol 96% ini digunakan karena merupakan pelarut pengekstraksi yang terbaik untuk hampir semua senyawa dengan berat molekul rendah seperti saponin dan flavonoid. Etil asetat merupakan pelarut yang bersifat semi polar sehingga dapat menarik senyawa yang bersifat polar maupun nonpolar, memiliki titik didih yang rendah yaitu 770C , berwujud cairan yang tidak beracun, tidak berwarna, memiliki aroma khas, dan mudah diuapkan sehingga dapat digunakan untuk ekstraksi buah cabai rawit (Susanti, 2012). N-Heksana merupakan pelarut organik yang bersifat inert karena non polarnya, banyak dipakai untuk ekstraksi minyak dari biji. Heksana biasa juga dikenal dengan sebutan nama n-heksan yang termasuk dalam golongan pelarut non-polar Pelarut heksana juga merupakan hidrokarbon aromatik yang sangat mudah menguap. Pelarut heksana memiliki sifat-sifat dan karakteristik yang tidak mudah larut dalam air, sangat larut dengan etanol, dan dapat larut dalam dietil eter dan klorofom (Maulid, 2010). Tujuan melakukan perlakuan perbedaan jenis pelarut adalah untuk mengetahui pengaruh jenis pelarut terhadap karakteristik ekstrak cabe rawit (Capsicum frutescens L.) dan menentukan jenis pelarut terbaik untuk menghasilkan ekstrak cabe rawit (Capsicum frutescens L.). Pelarut yang dipilih pada penelitian ini adalah etanol, etil asetat, dan n-heksana. Berdasarkan beberapa tersebut hal diatas, maka mendorong peneliti untuk melakukan penelitian yang berjudul "PENGARUH PERBEDAAN PELARUT TERHADAP KADAR TOTAL FENOL CABAI RAWIT (Capsicum frutescens L.)".
1.2.Rumusan Masalah Berdasarkan latar belakang masalah diatas. Maka dapat dirumuskan permasalahan, yaitu: 1) Apakah ada kandungan senyawa fenol dari ekstrak cabai rawit (Capsicum frutescens L.) dengan menggunakan pelarut etanol 96%, etil asetat, dan n- heksana? 2) Manakah kadar total fenol tertinggi dari hasil ekstraksi maserasi cabai rawit (Capsicum frutescens L.) dari pelarut etanol 96%, etil asetat, dan n- heksana ? 1.3.Batasan Masalah Batasan masalah dalam penelitian ini adalah : 1) Sampel yang digunakan dalam penelitian adalah buah cabai rawit (Capsicum frutescens L) diperoleh dari Desa Kepandean, Kecamatan Dukuhturi, Tegal 2) Identifikasi serbuk cabai rawit dilakukan secara makroskopik dan mikroskopik. 3) Metode ekstraksi yang digunakan adalah metode maserasi dengan pelarut etanol, etil asetat, dan n-heksana dengan perbandingan 1:10. 4) Identifikasi uji fenol dilakukan dengan uji pewarnaan, Kromatografi Lapis Tipis, dan spektrofotometer UV-Vis. 4
1.4.Tujuan Penelitian Tujuan penelitian ini adalah : 1) Mengetahui kandungan senyawa fenol pada buah cabai rawit (Capsicum frutescens L.) dengan pelarut etanol 96%, etil asetat, n-heksana. 2) Mengetahui hasil total fenol tertinggi pada buah cabai rawit (Capsicum frutescens L.) dengan pelarut etanol 96%, etil asetat, dan n-heksana. 1.5. Manfaat Penelitian Manfaat yang diperoleh dari penelitian ini adalah : 1) Dapat menambah pengetahuan khususnya bagi para pembaca tentang senyawa kimia yang terkandung dalam buah cabai rawit (Capsicum frutescens L.). 2) Mengetahui jumlah kadar total fenolik yang terkandung dalam masing- masing pelarut, yaitu etanol 96%, etil asetat, dan n-heksana, pada buah cabai rawit (Capsicum frutescens L.). 5
1.6. Keaslian Penelitian Tabel 1.1. Keaslian Penelitian No 1. Pembeda Judul Penelitian Penulis I Dwi Marga Lestari dkk, 2018 Aktivitas Antioksidan Ekstrak Fenol Daun Gayam (Inocarpus fagiferus Fosb) 2. Tempat Penelitian Laboratorium Kimia Universitas Muhammadiyah Malang Jl.Tlogo Mas No. 246 Malang (uji kadar total fenol dan aktivitas antioksidan) 3. Sampel Ekstrak Daun Gayam (Inocarpusfagiferus Fosb) 4. Metode Analisis Metode Folin- ciocalteaudan penangkal radikal bebas DPPH Penulis II Irena Safitri dkk, 2017 Pengaruh Jenis Pelarut Pada Metode Maserasi Terhadap Karakteristik Ekstrak Sargassum polycystum Laboratorium Pengolahan Pangan, dan Laboratorium Analisis Pangan, Fakultas Teknologi, Pertanian Universitas Udayana Ekstrak Rumput Laut (Sargassum polycystum) Metode Maserasi Rizki Nur widarjati, 2018 Pengaruh Perbedaan Pelarut Terhadap Kadar Total Fenol Cabai Rawit (Capsicum frutescens L.) Laboratorium Politeknik Harapan Bersama Kota Tegal Ekstrak Buah Cabai Rawit (Capsicum frutescens L.) Metode Folin -ciocalteau 6
BAB II TINJAUAN PUSTAKA DAN HIPOTESIS 2.1. Tinjauan Pustaka 2.1.1. Cabai Rawit (Capsicum frutescens L.) Gambar 2.1. Tanaman Cabe Rawit (Sumber : Umah, 2012) Cabai rawit (Capsicum frutescens L.) memiliki beberapa nama lombok, japlak, mengkreng, cengis, ceplik, atau cempling. Dalam bahasa Sunda cabai rawit disebut cengek. Sementara orang-orang di Nias dan Gayo menyebutnya dengan nama lada imi dan pentek. Secara internasional, cabe rawit dikenal dengan nama thai pepper (Tjandra, 2011). Klasifikasi cabai rawit adalah sebagai berikut : Kingdom : Plantae Division : Magnoliophyta Class : Magnoliopsida Order : Solanales Family : Solanaceae 7
Genus : Capsicum Species : Capsicum frutescens L. (Umah, 2012) 1. Morfologi Tumbuhan Cabai Rawit Cabai rawit adalah tanaman perdu yang tingginya hanya sekitar 50- 135 cm, tanaman ini tumbuh tegak lurus ke atas.Bagian-bagian utama tanaman cabe meliputi akar, batang, cabang, daun, bunga, serta buah dan biji. a. Akar Akar tanaman cabai merupakan akar tunggang yang sangat kuat., terdiri atas akar utama (primer) dan lateral (sekunder). Akar tersier merupakan serabut-serabut akar yang keluar dari akar lateral. Panjang akar primer sekitar 35-50 cm dan akar lateral sekitar 35-45 cm (Umah, 2012). b. Batang Batang cabai umumnya berwarna hijau tua dan berkayu. Panjang batang berkisar 30-37,5 cm dan berdiameter 1,5- 3 cm. Jumlah cabangnya, yakni antara 7-15 per tanaman. Panjang cabangnya sekitar 5-7 cm dengan diameter 0,5-1 cm. Di daerah percabangan terdapat tangkai daun dan daun. Tangkai daun berfungsi untuk menopang daun. Ukuran tangkai daun sangat pendek, yakni hanya 2- 5 cm (Umah, 2012). 8
c. Daun Daun cabai adalah daun tunggal. Daun muncul di tunas-tunas samping yang berurutan di batang utama yang tersusun spiral. Umumnya berwarna hijau dan hijau tua. Bentuk daun ada yang deltoid, ovate (oval), dan lanceolate (lanset) (Umah, 2012). d. Bunga Bunga cabai bersifat tunggal dan muncul di ujung ruas tunas. Mahkotanya berwarna putih, kuning muda, kuning, ungu dengan dasar putih, putih dengan dasar ungu, atau ungu tergantung varietas. Alat kelamin jantan dan betina terletak di satu bunga sehingga termasuk bunga sempurna. Setiap bunga cabai mempunyai satu putik. Kepala putik berbentuk bulat. Putik bunga berukuran panjang 0,5 cm, berwarna putih dengan kepala berwarna hijau. Jumlah benang sari antara 5-8 helai dan berbentuk lonjong. Posisi bunga cabai ada yang menggantung, horizontal, dan tegak (Umah, 2012). e. Buah Buah cabai memiliki rongga dengan jumlah berbeda-beda sesuai dengan varietasnya. Di dalam buahnya terdapat plasenta sebagai tempat biji melekat. Daging buah cabai umumnya renyah dan kadang-kadang lunak. Buah cabai ukurannya beragam, mulai dari pendek sampai panjang dengan ujung runcing atau tumpul. Pada dasarnya bentuk buah cabai di bedakan menjadi panjang, bulat, 9
10 segitiga, campanulate dan blocky. Bentuk pangkal buah, tepi buah, dan ujung buah cabe pun juga beragam (Umah, 2012). f. Biji Biji cabai terdapat di dalam buah dan menempel di sepanjang plasenta. Warnanya juga beragam, mulai dari putih hingga kuning jerami. Bagian terluarnya terdapat lapisan keras. Biji inilah yang berperan untuk menghasilkan bibit tanaman yang baru (Umah, 2012). 2.Kandungan Tumbuhan Cabai Rawits Genus Capsicum merupakan sumber utama senyawa fenol. Tanaman cabai sendiri banyak mengandung flavonoid, yang belakangan ini banyak diteliti aktivitas antioksidannya. Senyawa kimia yang terdapat banyak dalam buah cabai rawit adalah vitamin C, vitamin E, beta karoten dan pigmen karetenoid. Karetenoid seperti kapsantin, kapsorubin, dan kriptokapsin secara khusus terdapat dalam genus ini, mempengaruhi terbentuknya warna merah pada buah dan telah diketahui memiliki kemampuan peredaman radikal bebas yang efektif. Kapsaisinoid adalah alkaloid yang ditemukan banyak dalam buah Capsicum dengan kandungan utama kapsaisin dan dihidrokapsaisin (Yunita, 2012). 3. Manfaat Tumbuhan Cabai Rawit Cabai rawit selain untuk sayuran, cabai rawit mempunyai kegunaan yang lain, Dengan beberapa keunggulan tersebut, cabai rawit
11 dianggap penting untuk bahan ramuan industri makanan, minuman maupun farmasi. Malahan dengan kandungan vitamin A yang tinggi. Selain bermanfaat untuk kesehatan mata, cabai rawit juga cukup manjur untuk menyembuhkan sakit tenggorokan, karena rasanya yang pedas (mengandung capsicol semacam minyak atsiri yang tinggi) (Setiadi,2006). Cabai bisa menggantikan fungsi minyak gosok untuk mengurangi pegal-pegal, rematik, sesak nafas, dan gatal-gatal. Dengan ketajaman aromanya, cabai juga digunakan untuk menyembuhkan radang tenggorokan akibat udara dingin serta mengatasi polio. Menurut hasil penelitian Departemen Kesehatan cabai cukup manjur untuk mengobati sakit perut, bisul, iritasi kulit dan sekaligus untuk stimulan (perangsang) misalnya merangsang nafsu makan (Setiadi,2006). 2.1.2.Simplisia Simplisia adalah bahan alamiah yang dipergunakan sebagai obat yang belum mengalami pengolahan apapun juga dan kecuali dinyatakan lain, berupa bahan yang telah dikeringkan (DepKes RI, 1979 : 3). Penggolongan simplisia dibedakan menjadi tiga golongan yaitu : a. Simplisia Nabati adalah simplisia yang berupa tanaman utuh, bagian tanaman atau eksudat tanaman. Yang dimaksud eksudat tanaman ialah isi sel yang secara spontan keluar dari tanaman atau yang dengan cara tertentu dikeluarkan dari selnya, atau zat-zat nabati lainnya yang dengan cara tertentu atau
12 dipisahkan dari tanamannya dengan cara tertentu yang masih berupa zat kimia murni (DepKes RI, 1995). b. Simplisia Hewani adalah simplisia yang berupa hewan utuh, bagian dari hewan atau zat-zat berguna yang dihasilkan oleh hewan dan belum berupa zat kimia murni (DepKes RI, 1995). c. Simplisia Pelikan atau Mineral adalah simplisia yang berupa bahan pelikan atau mineral yang belum diolah atau telah diolah dengan cara sederhana dan belum berupa zat kimia murni. (DepKes RI, 1979: 28). 1. Susut Pengeringan Susut pengeringan adalah kadar bagian yang menguap suatu zat. Kecuali dinyatakan lain, suhu penetapan adalah 105oC , keringkan pada suhu penetapan hingga bobot tetap. Jika suhu lebur zat lebih rendah dari suhu penetapan, pengeringan dilakukan pada suhu antara 5oC dan 10oC dibawah suhu leburnya selama 1 jam sampai 2 jam, kemudian pada suhu penetapan selama waktu yang ditentukan atau hingga bobot tetap.Untuk simplisia yang tidak mengandung minyak atsiri dan sisa pelarut organik menguap, susut pengeringan diidentikkan dengan kadar air, yaitu kandungan air karena simplisia berada di atmoster dan ligkungan terbuka sehingga dipengaruhi oleh kelembaban lingkungan penyimpanan. Dengan pernyataan bobot tetap yang tertera
pada penetapan susut pengeringan dimaksudkan bahwa dua kali penimbangan berturut-turut berbeda tidak lebih dari 0,5 mg tiap gram sisa yang ditimbang. Penimbangan dilakukan setelah zat dikeringkan lagi selama 1 jam (DepKes RI,1979 : XXXIII). Rumus susut pengeringan : %	Susut	pengeringan Bobot	awal − bobot	akhir Bobot	awal x	100% 2. Rendemen Rendemen adalah perbandingan jumlah (kuantitas) minyak yang dihasilkan dari ekstraksi tanaman aromatik. Rendemen menggunakan satuan persen (%). Semakin tinggi nilai rendemen yang dihasilkan menandakan nilai minyak atsiri yang dihasilkan semakin banyak. %	Rendemen	= Berat	ekstrak	kental	Berat	sampel x	100% 3. Proses Pembuatan Simplisia Proses awal ekstraksi adalah tahapan pembuatan simplisia kering. Dari simplisia dibuat serbuk simplisia dengan peralatan tertentu sampai derajat kehalusan tertentu. Semakin halus serbuk simplisia, maka proses ekstraksi makin efektif dan efisien, akan tetapi semakin rumit untuk tahapan filtrasi (Depkes RI,2000). 13
Sebelum dilakukan pembuatan serbuk, simplisia diidentifikasi berdasarkan makroskopik dan mikroskopik: a. Pemeriksaan Makroskopik Pemeriksaan ini bertujuan untuk menemukan ciri khas simplisia dengan melihat bentuk permukaan luar dan organoleptis seperti bau, rasa, warna, tekstur, dan ukuran simplisia. Ukuran simplisia hanya ditetapkan pada simplisia utuh seperti buah dan tidak digunakan untuk simplisia bentuk serbuk atau sari simplisia. b. Pemeriksaan Mikroskopik Pemeriksaan ini bertujuan untuk menemukan fragmen pengenal spesifik dari simplisia yang diuji. Dari pemeriksaan mikroskopik ini dicari fragmen jaringan anatomi yang khas dari serbuk simplisia (epidermis,tulang daun,rambut penutup,dan lain-lain). 2.1.3. Pelarut Cairan pelarut dalam proses pembuatan ekstrak harus baik (optimal) untuk mendapatkan senyawa yang berkhasiat atau yang aktif, dengan demikian dapat memisahkan senyawa tersebut dari bahan dan dari senyawa lainnya, serta ekstrak hanya mengandung sebagian besar senyawa yang diinginkan. Dalam hal ekstrak total, maka cairan pelarut yang dipilih yang melarutkan hampir semua metabolit sekunder yang terkandung (DepKes RI, 2000 : 8). 14
Berkaitan dengan polaritas dari pelarut, terdapat tiga golongan pelarut yaitu: 1. Pelarut Polar Pelarut polar memiliki tungkat kepolaran yang tinggi, cocok untuk mengekstrak senyawa-senyawa yang polar dari tanaman. Pelarut polar cenderung universal digunakan karena biasanya walaupun polar, tetap dapat menyari senyawa-senyawa dengan tingkat kepolaran lebih rendah. Salah satu contoh pelarut polar adalah: air, metanol, etanol, asam asetat. 2. Pelarut Semi Polar Pelarut semi polar memiliki tingkat kepolaran yang lebih rendah dibandingkan dengan pelarut polar. Pelarut ini baik untuk mendapatkan senyawa-senyawa semi polar dari tumbuhan. Contoh pelarut ini adalah: aseton, etil asetat, kloroform. 3. Pelarut Non Polar Pelarut nonpolar, hampir sama sekali tidak polar. Pelarut ini baik untuk mengekstrak senyawa-senyawa yang sama sekali tidak larut dalam pelarut polar. Senyawa ini baik untuk mengekstrak berbagai jenis minyak. Contoh: heksana, eter. Pemilihan pelarut merupakan faktor yang menentukan dalam ekstraksi. Pelarut pengekstrak yang digunakan dalam proses pembuatan ekstrak adalah pelarut yang optimal untuk menarik 15
16 senyawa yang terdapat dalam simplisia. Menurut (Susanti, et.al., 2012 :10), pemilihan pelarut pada umumnya dipengaruhi oleh faktor-faktor antara lain : 1. Selektivitas Pelarut dapat melarutkan semua zat yang akan diekstrak dengan cepat dan sempurna. 2. Titik didih pelarut Pelarut harus mempunyai titik didih yang cukup rendah sehingga pelarut mudah diuapkan tanpa menggunakan suhu tinggi pada proses pemurnian dan jika diuapkan tidak tertinggal dalam minyak. 3. Pelarut tidak larut dalam air. 4. Pelarut bersifat inert sehingga tidak bereaksi dengan kemponen lain. 5. Harga pelarut semurah mungkin. 6. Pelarut mudah terbakar. Pemilihan pelarut organik yang akan digunakan dalam ekstraksi komponen aktif merupakan faktor penting dan menentukan untuk mencapai tujuan dan sasaran ekstraksi komponen. Kepolaran suatu pelarut dapat ditentukan oleh besar konstanta dielektriknya. Konstanta dielektrikum dinyatakan sebagai gaya tolak menolak antara dua partikel yang bermuatan listrik dalam suatu molekul. Semakin tinggi nilai konstanta
17 dielektrikum, titik didih dan kelarutan dalam air, maka pelarut akan bersifat semakin polar (Latifah, 2015). Pelarut yang digunakan dalam penelitian ini yaitu pelarut polar (etanol 96%), pelarut semi polar (etil asetat), dan pelarut non polar (n-heksana). Penggunaan pelarut yang berbeda kepolaritasannya diharapkan akan diperoleh pelarut yang optimum dalam mengekstraksi cabai rawit. Etanol disebut juga etil alkohol, alkohol murni, alkohol absolut, atau alkohol saja, adalah suatu cairan bening tidak berwarna, mudah menguap, berbau merangsang dan mudah larut dalam air (Depkes RI, 1979 : 66). Etanol termasuk kedalam alkohol rantai tunggal, dengan rumus kimia C2H5OH dan rumus empiris C2H6O. Etanol utamanya dipengaruhi oleh keberadaan gugus hidroksil dan pendeknya rantai karbon etanol. Gugus hidroksil dapat berpartisipasi kedalam ikatan hidrogen, sehingga membuatnya cair dan lebih sulit menguap dari pada senyawa organik lainnya dengan masa molekul yang sama (Wikipedia, 2017). Etanol memiliki titik didih 78,3oC sehingga mudah terbakar dan mudah menguap serta memiliki nilai konstanta dielektikum yang tinggi sehingga etanol termasuk pelarut yang bersifat polar. Etanol merupakan pelarut yang sering digunakan dalam laboratorium karena mempunyai kelarutan yang relatif tinggi dan bersifat inert sehingga tidak bereaksi dengan
komponen lainnya (Susanti dkk, 2012 : 10). Etanol 96% merupakan pelarut yang bersifat inert, tidak beracun, mudah diuapkan, mmudah terbakar, aman dan harganya relatif murah serta mudah diperoleh. Etil asetat adalah senyawa organik yang dengan rumus kimia CH3CH2OC(O)CH3 merupakan ester dari etanol dan asam asetat. Senyawa ini berwujud cairan tak berwarna, memiliki aroma khas. Etil asetat adalah pelarut polar menengah yang volatil, tidak beracun, dan tidak higroskopis. Etil asetat dapat melarutkan air hingga 3%, dan larut dalam air hingga kelarutan 8% pada suhu kamar. Kelarutannya meningkat pada suhu yang lebih tinggi. Namun, senyawa ini tidak stabil dalam air yang mengandung basa atau asam. Etil asetat merupakan pelarut yang bersifat semi polar sehingga dapat menarik senyawa yang` bersifat polar maupun nonpolar, memiliki toksisitas rendah, dan mudah diuapkan karena memiliki titik didih 77,1oC sehingga memudahkan pemisahan senyawa dari pelarutnya (Deasywati, 2011). N-heksana adalah sebuah senyawa hidrokarbon alkana dengan rumus kimia C6H14 (isomer utama N-heksana memiliki rumus CH3(CH2)4CH3). N-heksana merupakan jenis pelarut organik. Fungsi dari heksana adalah untuk mengekstraksi lemak atau untuk melarutkan lemak, sehingga merubah warna dari 18
kuning menjadi jernih. Dalam keadaan standar senyawa ini merupakan cairan tak berwarna yang tidak larut dalam air (Safaatul, 2010 : 75). N-heksana merupakan pelarut yang paling ringan dengan titik didih 69oC (Deasywati, 2011). N-heksana adalah jenis pelarut non polar yang murah, relative aman, secara umum tidak reaktif, dan mudah diuapkan. 2.1.4. Ekstraksi Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dengan pelarut cair. Simplisia yang diekstrak mengandung senyawa aktif yang dapat larut dan senyawa yang tidak dapat larut seperti serat, karbohidrat, protein dan lain-lain. Senyawa aktif yang terdapat dalam berbagai simplisia dapat dapat digolongkan kedalam golongan minyak atsiri, alkaloid, flavonoid dan lain-lain. Struktur kimia yang berbeda-beda akan mempengaruhi kelarutan serta stabilitas senyawa-senyawa tersebut terhadap pemanasan, udara, cahaya, logam berat, dan derajat keasaman. Dengan diketahuinya senyawa aktif yang dikandung simplisia akan mempermudah pemilihan pelarut dan cara ekstraksi yang tepat (DepKes RI, 2000). Ekstrak adalah sediaan kental yang di peroleh dengan mengekstraksi senyawa aktif dari simplisa nabati atau simplisa hewani menggunakan pelarut yang sesuai (Depkes RI, 2000). 19
20 Ekstrak dikelompokan atas dasar sifatnya, yaitu (Voight, 1994) : 1) Ekstrak encer adalah sediaan yang memiliki konsistensi semacam madu dan dapat dituang. 2) Ekstrak kental adalah sediaan yang liat dalam keadaan dingin dan tidak dapat dituang. Kandungan airnya berjumlah sampai 30%. Tingginya kandungan airnya menyebabkan ketidakstabilan sediaan obat karena cemaran bakteri. 3) Ekstrak kering adalah sediaan yang memiliki konsistensi dan mudah dituang. Sebaiknya memiliki kandungan lembab tidak lebih dari 5%. 4) Ekstrak cair, ektrak yang dibuat sedemikian sehingga 1 bagian simplisa sesuai dengan 2 bagian ekstrak cair. 2.1.5. Maserasi Maserasi (macerase = mengairi, melunakkan) merupakan cara penyarian sedarhana yang dilakukan dengan cara merendam, serbuk simplisia dalam cairan penyari selama beberapa hari pada suhu kamar dan terlindung dari cahaya. Prinsip maserasi adalah serbuk simplisia direndam dalam cairan penyari yang sesuai selama beberapa hari pada suhu kamar dan terlindung dari cahaya. Cairan penyari akan masuk kedalam sel melewati dinding sel, isi sel akan larut karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan didalam sel dengan diluar sel. Larutan yang konsentrasi tinggi akan terdesak
21 keluar dan diganti oleh cairan penyari dengan konsentrasi rendah (proses difusi). Peristiwa tersebut berulang sampai terjadi keseimbangan konsentrasi larutan diluar sel dan didalam sel setiap hari. Endapan yang diperoleh dipisahkan dan filtratnya dipekatkan (Voight,1995 : 566). Keuntungan dari metode maserasi adalah peralatannya sederhana sedangkan kerugiannya waktu yang diperlukan untuk mengekstraksi sampel cukup lama, cairan penyari yang digunakan untuk bahan-bahan yang mempunyai tekstur keras (Depkes RI,1986). Waktu maserasi berbeda-beda, masing-masing farmakope mencantumkan 4-10 hari. Keadaan diam selama maserasi menyebabkan turunnya perpindahan zat aktif semakin besar,tahap cairan ekstraksi akan semakin baik hasil yang diperoleh jika perbandingan simplisia dan pelarut semakin besar (Voight, 1995 : 566). 2.1.6. Pemekatan Proses pemekatan menggunakan suhu 500C sehingga komponen senyawa metabolit sekunder tidak mengalami kerusakan (Khunaifi,2010). Pemekatan dengan menggunakan bantuan rotary evaporator akan menurunkan tekanan uap pelarut,sehingga pelarut akan menguap dibawah titik didih normalnya. Tujuannya adalah agar komponen fitokimia yang terdapat dalam ekstrak tidak mengalami kerusakan akibat pemanasan yang berlebihan. Adanya
tekanan yang diberikan oleh pompa vakum mengakibatkan pelarut menguap dari campuran kemudian terkondensasi dan masuk dalam labu penampung (Khunaifi,2010). 2.1.7. Penapisan Fitokimia Penapisan fitokimia adalah pemeriksaan atau identifikasi kandungan kimia untuk mengetahui golongan senyawa yang terkandung dalam suatu tumbuhan.Setelah golongan ditentukan, kemudian ditentukan jenis senyawa dalam golongan tersebut (Harborne, 1987). Golongan senyawa yang diperiksa adalah senyawa metabolit sekunder , seperti alkaloid, flavonoid, terpen ,tanin, saponin, glikosida, kuinon ,dan antrakuinon. 2.1.8. Senyawa Fenol Fenol adalah senyawa yang mempunyai sebuah cincin aromatik dengan satu atau lebih gugus hidroksil. Senyawa fenol cenderung mudah larut dalam air karena umumnya mereka sering kali berikatan dengan gula sebagai glikosida. Fenol merupakan metabolit sekunder yang tersebar dalam tumbuhan. Senyawa fenol dalam tumbuhan dapat berupa fenol sederhana, antarquinon, asam fenolat, flavonoid, lignin, tanin (Harbone, 1987). Cara klasik untuk mendeteksi senyawa fenol sederhana adalah dengan menambahkan larutan besi (III) klorida 1% dalam air atau etanol kepada larutan cuplikan, yang menimbulkan warna hijau, merah, ungu, biru, atau hitam yang kuat. Cara ini, yang 22
23 dimodifikasi dengan menggunakan campuran segar larutan besi (III) klorida 1%, masih tetap digunakan sebagai cara umum untuk mendeteksi senyawa fenol pada kromatogram kertas (Harbone, 1987). 1. Sifat dan fungsi senyawa fenol Fungsi fenol sederhana pada tumbuhan antara lain sebagai transport elektron pada fotosintesis dan pengaturan enzim tertentu. Selain itu juga berfungsi memacu perkecambahan biji (Robinson, 1995). 2. Fenol sebagai senyawa antioksidan Senyawa fenol merupakan kelas utama antioksidan yang berada dalam tumbuh-tumbuhan. Kandungan senyawa fenol banyak diketahui sebagai terminator radikal bebas, pada umumnya kandungan senyawa fenol berkolerasi positif terhadap aktivitas antiradikal. Salah satu antioksidan alami yaitu asam galat. Asam galat termasuk dalam senyawa fenol dan memiliki aktivitas antioksidan yang kuat. Estimasi kandungan fenol total dapat dilakukan dengan menggunakan pereaksi Follin-Ciocalteau. Metode ini berdasarkan kekuatan mereduksi dari gugus hidroksi fenol. Semua senyawa fenol termasuk fenol sederhana dapat bereaksi dengan Follin-Ciocalteau. Kandungan fenol total dalam tumbuhan dinyatakan dalam GAE (galluc acid
equivalent) yaitu jumlah kesetarannya miligram asam galat dalam 100 gram sampel (Wachidah,2013). 2.1.9. Kromatografi Lapis Tipis Kromatografi Lapis Tipis Yaitu kromatografi yang menggunakan lempeng gelas atau alumunium yang dilapisi dengan lapisan tipis alumina, silika gel, atau bahan serbuk lainnya. Kromatografi lapis tipis pada umumnya dijadikan metode pilihan pertama pada pemisahan dengan kromatografi. Kromatografi lapis tipis digunakan untuk pemisahan senyawa secara cepat, dengan menggunakan zat penjerap berupa serbuk halus yang dipaliskan serta rata pada lempeng kaca. Lempeng yang dilapis, dapat dianggap sebagai "kolom kromatografi terbuka" dan pemisahan dapat didasarkan pada penyerapan, pembagian atau gabungannya, tergantung dari jenis zat penyerap dan cara pembuatan lapisan zat penyerap dan jenis pelarut. Kromatografi lapis tipis dengan penyerap penukar ion dapat digunakan untuk pemisahan senyawa polar. Harga Rf yang diperoleh pada kromatografi lapis tipis tidak tetap, jika dibandingkan dengan yang diperoleh pada kromatografi kertas. Oleh karena itu ,pada lempeng yang sama di samping kromatogram zat yang diuji perlu dibuat kromatogram zat pembanding kimia, lebih baik dengan kadar yang berbeda-beda (Depkes RI, 1979). Pemisahan dengan Kromatografi 24
Lapis Tipis (KLT) digunakan untuk mencari fase gerak yang terbaik yang akan digunakan dalam kromatografi kolom. Fase diam yang digunakan pada KLT adalah silika gel GF dan sebagai fase gerak digunakan kloroform, metanol, dan asam asetat. Bejana kromatografi sebelum digunakan untuk elusi, terlebih dahulu dijenuhkan dengan fase geraknya. Sedikit fraksi positif flavonoid yaitu fraksi n-heksana dilarutkan dengan pelarutnya (eluen yang akan dipakai) kemudian ditotolkan pada plat kromatografi lapis tipis dengan menggunakan pipa kapiler. Setelah kering lalu dimasukkan dalam bejana. Bila fase gerak telah mencapai batas yang ditentukan, plat diangkat,dan dikeringkan di udara terbuka. Sebagai penampak noda digunakan asam sulfat. Noda yang terbentuk diamati dengan lampu UV 254 nm dan 366 nm kemudian dihitung Rf-nya (Asih, 2009). Suatu perhitungan tertentu untuk memastikan Jarak antara jalannya pelarut bersifat relatif. Oleh karena itu, diperlukan spot yang terbentuk memiliki jarak yang sama walaupun ukuran jarak plat berbeda. Nilai perhitungan tersebut adalah nilai Rf, nilai ini nya digunakan sebagai nilai perbandingan relatif antar sampel. Nilai Rf juga menyatakan derajat retensi suatu komponen dalam fase diam sehingga nilai Rf sering juga disebut faktor retensi. Nilai Rf dapat dihitung dengan rumus berikut: 25
%	Rf	= Jarak	yang	ditempuh	substansi Jarak	yang	ditempuh	oleh	pelarut Semakin besar nilai Rf dari sampel maka semakin besar pula jarak bergeraknya senyawa tersebut pada plat kromatografi lapis tipis. Saat membandingkan dua sampel yang berbeda di bawah kondisi kromatografi yang sama, nilai Rf akan besar bila senyawa tersebut kurang polar dan berinteraksi dengan adsorbent polar dari plat kromatografi lapis tipis. 2.1.10. Spektrofotometri UV-Vis. Spektrofotometri sesuai dengan namanya adalah alat yang terdiri dari spektrometer dan fotometer. Spektrofotometer menghasilkan sinar dari spectrum dengan panjang gelombang tertentu dan fotometer adalah alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau diabsorbsi. Jadi spektrofotometer digunakan untuk mengukur energy relatif jika energy tersebut ditransmisikan, direfleksikan atau diemisikan sebagai fungsi panjang gelombang. Kelebihan spektrofotometer dengan fotometer adalah panjang gelombang dari sinar putih dapat lebih di deteksi dan cara ini diperoleh dengan alat pengurai seperti prisma, grating atau celah optis. Pada fotometer filter dari berbagai warna yang mempunyai spesifikasi melewatkan trayek pada panjang gelombang tertentu (Gandjar,2007). 26
Spektrum elektromagnetik dibagi dalam beberapa daerah cahaya. Suatu daerah akan diabsorbsi oleh atom atau molekul dan panjang gelombang cahaya yang diabsorbsi dapat menunjukan struktur senyawa yang diteliti. Spektrum elektromagnetik meliputi suatu daerah panjang gelombang yang luas dari sinar gamma gelombang pendek berenergi tinggi sampai pada panjang gelombang mikro (Marzuki, 2012) Spektrum absorbsi dalam daerah-daerah ultra ungu dan sinar tampak umumnya terdiri dari satu atau beberapa pita absorbsi yang lebar, semua molekul dapat menyerap radiasi dalam daerah UV- tampak. Oleh karena itu mereka mengandung electron, baik yang dipakai bersama atau tidak, yang dapat dieksitasi ke tingkat yang lebih tinggi. Panjang gelombang pada waktu absorbsi terjadi tergantung pada bagaimana erat elektron terikat di dalam molekul. Elektron dalam satu ikatan kovalen tunggal erat ikatannya dan radiasi dengan energy tinggi, atau panjang gelombang pendek, diperlukan eksitasinya (Wunas,2011) Keuntungan utama metode spektrofotometri adalah bahwa metode ini memberikan cara sederhana untuk menetapkan kuantitas zat yang sangat kecil. Selain itu, hasil yang diperoleh cukup akurat, dimana angka yang terbaca langsung dicatat oleh detector dan tercetak dalam bentuk angka digital ataupun grafik yang sudah 27
28 diregresikan (Yahya S,2013). Secara sederhana instrument spektrofotometeri yang disebut spektrofotometer terdiri dari : 1. Sumber sinar polikromatis berfungsi sebagai sumber sinar polikromatis dengan berbagai macam rentang panjang gelombang. 2. Monokromator berfungsi sebagai penyeleksi panjang gelombang yaitu mengubah cahaya yang berasal dari sumber sinar polikromatis menjadi cahaya monokromatis. Sel sampel berfungsi sebagai tempat meletakan sampel UV, VIS dan UV- VIS menggunakan kuvet sebagai tempat sampel. Kuvet biasanya terbuat dari kuarsa atau gelas, namun kuvet dari kuarsa yang terbuat dari silika memiliki kualitas yang lebih baik. Hal ini disebabkan yang terbuat dari 6 kaca dan plastik dapat menyerap UV sehingga penggunaannya hanya pada spektrofotometer sinar tampak (VIS). Kuvet biasanya berbentuk persegi panjang dengan lebar 1 cm. 3. Detektor berfungsi menangkap cahaya yang diteruskan dari sampel dan mengubahnya menjadi arus listrik. Macam-macam detector yaitu Detektor foto (Photo detector), Photocell, misalnya CdS, Phototube, Hantaran foto, Dioda foto, Detektor panas. 4. Read out merupakan suatu sistem baca yang menangkap besarnya isyarat listrik yang berasal dari detector.
Adapun hal-hal yang harus diperhatikan dalam spektrofotometri adalah : a. Pada saat pengenceran alat alat pengenceran harus betul-betul bersih tanpa adanya zat pengotor b. Dalam penggunaan alat-alat harus betul-betul steril c. Jumlah zat yang dipakai harus sesuai dengan yang telah sditentukan d. Dalam penggunaan spektrofotometri uv, sampel harus jernih dan tidak keruh e. Dalam penggunaan spektrofotometri uv-vis, sampel harus berwarna.Serapan dapat terjadi jika foton/radiasi yang mengenai cuplikan memiliki energi yang sama dengan energi yang dibutuhkan untuk menyebabkan terjadinya perubahan tenaga. 2.2. Hipotesis Hipotesis dalam penelitian ini adalah : 1. Terdapat kandungan senyawa fenol pada pelarut etanol 96%, etil asetat, dan n-heksana dari ekstrak buah cabai rawit (Capsicum frutescens L). 2. Adanya kadar total fenol tertinggi pada pelarut dari hasil ekstraksi maserasi cabai rawit (Capsicum frutescens L). 29
BAB III METODE PENELITIAN 3.1 Objek Penelitian Objek yang akan diteliti dalam penelitian ini adalah pengaruh perbedaan pelarut terhadap kadar total fenol pada cabe rawit. Dalam hal ini penentuan kadar fenol total akan menggunakan metode Folin-ciocalteau. 3.2 Sampel dan Teknik Sampling Sampel dalam penelitian ini adalah cabe rawit yang diperoleh dari Desa Kepandean, Kecamatan Dukuhturi, Kabupaten Tegal. Teknik sampling yang digunakan adalah random. 3.3 Variabel Penelitian Pada penelitian ini terdapat beberapa variabel antara lain : 1. Variabel Bebas merupakan variabel stimulus atau variabel yang mempengaruhi variabel lain. Variabel bebas dari penelitian ini adalah pelarut etanol 96%, etil asetat, dan n-heksana. 2. Variabel terikat merupakan variabel yang memberikan reaksi / respon jika dihubungkan dengan variabel bebas. Variabel terikat dari penelitian ini adalah kadar fenol total ekstrak cabai rawit dari masing-masing pelarut. 30
3. Variabel terkontrol merupakan variabel yang keberadaannya dikontrol oleh peneliti untuk menetralisasi pengaruhnya . Variabel terkontrol dari penelitian ini adalah metode ekstraksi secara maserasi, metode spektrofotometri UV-Vis. 3.4 Teknik Pengumpulan Data 3.4.1. Cara Pengumpulan Data 1) Jenis data yang digunakan bersifat kuantitatif dan kualitatif. 2) Metode pengumpulan data menggunakan eksperimen di laboratorium Politeknik Harapan Bersama Tegal. 3.4.2. Alat dan Bahan 1. Alat Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah timbangan analitik, oven, beaker glass, toples hitam untuk maserasi, batang pengaduk, kain flanel, corong kaca, cawan uap, tabung reaksi, labu ukur, pipet volume, blender, rotavapor, mikroskop, gelas ukur, mikro pipet, kuvet, spektrofotometri UV-Vis . 2. Bahan Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah ekstrak buah cabai rawit (Capsicum frutescens L), etanol 96%, etil asetat ,n- heksana, metanol, reagen Folin-Ciocalteau, aquadest, asam galat, Lar. Na2CO3 20%, FeCl3. 31
3.5. Cara Kerja 1. Pembuatan serbuk simplisia Buah cabai rawit dikumpulkan dan dibersihkan dari kotoran, kemudian dicuci dengan air mengalir hingga bersih, untuk selanjutnya keringkan kedalam oven pada suhu 60oC. Setelah simplisia kering kemudian dihaluskan dan diayak dengan ukuran 60 mesh hingga didapat serbuk simplisia yang halus. Serbuk simplisia yang diperoleh disimpan dalam wadah bersih,kering dan tertutup rapat. Mengumpulkan sejumlah cabai rawit dan membersihkan dari kotoran dengan cara dicuci dengan air mengalir Mengeringkan dalam oven pada suhu 60oC Menghaluskan simplisia dan mengayaknya dengan ukuran 60 mesh Menyimpan serbuk simplisia yang diperoleh dalam wadah bersih, kering dan tertutup rapat. Gambar 3.1. Skema Pembuatan Serbuk Simplisia 2. Susut pengeringan Buah cabai rawit yang telah dikeringkan serta dihaluskan selanjutnya melakukan uji susut pengeringan, dengan menimbang botol kosong kemudian masukan simplisia yang telah dihaluskan sebanyak 1 sampai 2 32
33 g kedalam botol yang telah ditimbang, masukan kedalam oven dengan suhu 105oC, setelah selesai hitung susut pengeringannya (Depkes RI, 2008) Menimbang botol kosong Memasukkan simplisia yang telah dihaluskan kedalam botol sebanyak 1-2 g. Mengoven pada suhu 105oC Menghitung prosentase susut pengeringan berdasarkan rumus susut pengeringan Gambar3.2. Skema Susut pengeringan 3. Identifikasi Serbuk Simplisia a. Makroskopis Mengidentifikasi serbuk simplisia buah cabai rawit (Capsicum frutescens L) meliputi bentuk, warna, bau dan rasa. b. Mikroskopis Identifikasi serbuk simplisia buah cabai rawit (Capsicum frutescens L), Letakkan serbuk buah cabai rawit (Capsicum frutescens L) diatas objek glass secukupnya kemudian ditetesi dengan air secukupnya (1-2 tetes). Kemudian ditutup dengan menggunakan deg glass dan diamati pada mikroskop.
Menyiapkan mikroskop dan mengatur focus cahaya mikroskop Meletakkan serbuk buah cabai rawit secukupnya pada objek glass Menetesi serbuk buah cabai rawit dengan air secukupnya (1-2 tetes) kemudian ditutup dengan deg glass Mengamati bentuk fragmennya dengan mikroskop Gambar3.3. Skema Uji Cabai Rawit Mikroskopik Buah Cabai 4. Pembuatan Ekstraksi Buah Cabai Rawit dengan Metode Maserasi dengan Pelarut Etanol 96%, Etil Asetat dan N-heksana Ekstraksi buah cabai rawit (Capsicum frutescens L) dilakukan dengan metode maserasi dengan suhu ruang (25-30oC) menggunakan tiga pelarut yang berbeda, yaitu etanol 96%, etil asetat, dan n-heksana. Proses maserasi yang digunakan yaitu perbandingan rasio pelarut 1 : 10 (b/v). Serbuk buah cabai rawit masing-masing ditimbang sebanyak 60 gram kemudian memasukkan kedalam masing-masing wadah atau bejana kemudian tambahkan pelarut (etanol 96%, etil asetat dan n-heksana) masing-masing sebanyak 600 ml. Wadah atau bejana ditutup rapat dan rendam selama 1x24 jam pada tempat yang terhindar dari cahaya dengan pengadukan setiap 6 jam sekali, selama 5 menit. Setelah 1x24 jam kemudian saring menggunakan kain 34
flanel, memasukkan ekstrak kedalam beaker glass dan diuapkan dengan menggunakan waterbath pada suhu 60oC hingga diperoleh ekstrak kental yang bebas dari pelarut. Menguji ekstrak dengan uji bebas etanol 96%, etil asetat dan n-heksana. Menimbang dan menghitung rendemen dari tiap ekstrak cabai rawit. Menimbang serbuk cabai rawit masing-masing sebanyak 60 gram Memasukkan kedalam masing-masing wadah atau bejana dan ekstraksi dengan masing-masing pelarut 1 : 10 (b/v) 600 ml etanol 96% 600 ml etil asetat 600 ml n-heksana Menutup wadah atau bejana dengan rapat dan rendam selama 1x24 jam pada suhu ruang dan ditempat yang terhindar dari cahaya dengan pengadukan setiap hari 6 jam sekali selama 5 menit Menyaring ekstrak dengan kain flanel Memasukan maserat kedalam beaker gelas dan diuapkan dengan menggunakan waterbath suhu 600C hingga diperoleh ekstrak kental yang bebas dari pelarut Melakukan uji bebas etanol 96%, etil asetat, dan n-heksana Menimbang dan menghitung rendemen tiap ekstrak cabai rawit 35
Gambar 3.4 Skema Pembuatan Ekstraksi Cabai Rawit a. Uji Bebas Etanol Uji bebas etanol dilakukan dengan menggunakan pereaksi H2SO4pekat dan asam asetat dengan cara 2 tetes ekstrak dimasukkan kedalam tabung reaksi, kemudian menambahkan 2 tetes H2SO4pekat dan 2 tetes asam asetat lalu dipanaskan. Mengamati perubahan bau yaitu jika tidak berbau ester maka ekstrak sudah terbebas dari etanol dan jika masih berbau ester maka ekstrak belum terbebas dari etanol (Fessenden, 1982) Memasukkan 2 tetes ekstrak ke dalam tabung reaksi Menambahkan 2 tetes H2SO4 pekat + 2 tetes asam asetat lalu dipanaskan Mengamati perubahan bau yaitu jika tidak berbau ester maka ekstrak sudah terbebas dari etanol dan jika masih berbau ester maka ekstrakbelum terbebas dari etanol dan perlu diuapkan kembali Gambar 3.5 Skema Uji bebas etanol 96% b. Uji Bebas Etil Asetat Uji bebas etil asetat dilakukan dengan menggunakan pereaksi NaOH, asam asetat,dan H2SO4 dengan cara 2 tetes ekstrak dimasukkan kedalam tabung reaksi, kemudian menambahkan 2 ml NaOH, 2 ml 36
asam asetat, dan 2 ml H2SO4. Mengamati perubahan bau yaitu jika tidak berbau etil asetat maka ekstrak sudah terbebas dari etil asetat dan jika masih berbau etil asetat maka ekstrak belum terbebas dari etil asetat dan perlu diuapkan kembali (Wulansari, 2013). Memasukkan 2 tetes ekstrak ke tabung reaksi Menambahkan 2 ml NaOH, 2 ml asam asetat, dan 2 ml H2SO4 Mengamati perubahan bau yaitu jika tidak berbau ester maka ekstrak sudah terbebas dari etil asetat dan jika masih berbau ester maka ekstrak belum terbebas dari etil asetat dan perlu diuapkan kembali Gambar 3.6 Skema Uji bebas etil asetat c. Uji Bebas N-Heksana Uji bebas N-Heksana dilakukan dengan cara 2 tetes ekstrak dimasukkan kedalam tabung lalu di bakar. Mengamati api dan asap yang terbentuk yaitu jika tidak menghasilkan api dan asap maka ekstrak sudah terbebas dari n-heksana dan jika menghasilkan api dan asap maka ekstrak belum terbebas dari n-heksana dan perlu diuapkan kembali (Fessenden, 1982 : 107). 37
Memasukkan 2 tetes ekstrak Membakar ekstrak Mengamati api dan asap yang terbentuk yaitu jika tidak menghasilkan api dan asap maka ekstrak sudah terbebas dari n- heksana dan jika menghasilkan api dan asap maka ekstrak belum terbebas dari n-heksana dan perlu diuapkan kembali Gambar 3.7 Skema Uji bebas n-heksana 5. Uji Kualitatif Fenol Pada Ekstrak Buah Cabai Rawit (Capsicum frutescens L) Uji kualitatif fenol pada ekstrak buah Cabai Rawit (Capsicum frutescens L) yaitu pertama mengambil ekstrak buah cabai rawit (Capsicum frutescens L) secukupnya lalu ditetesi sebanyak 3 tetes dengan FeCl3 1% yang sudah dilarutkan dengan air atau etanol. Hasil yang positif akan menimbulkan warna hijau kehitaman. Mengambil ekstrak buah cabai rawit secukupnya Menetesi sebanyak 3 tetes dengan FeCl3 1% Akan menghasilkan warna hijau kehitaman Gambar 3.8. Skema Uji Kualitatif Fenol Pada Ekstrak Buah Cabai Rawit 38
6. Kromatografi Lapis Tipis Setelah mendapatkan rendemen, kemudian dilakukan uji senyawa fenolat dengan metode KLT. Menyiapkan alat dan bahan . plat KLT lapis silika gel yang akan digunakan dioven terlebih dahulu selama 3 menit pada suhu 45oC untuk mengurangi kadar air dalam plat KLT. Selanjutnya plat KLT yang sudah dioven diberi garis batas atas dan batas bawah masing-masing 1 cm untuk mempermudah penotolan dan mengetahui jarak pelarut yang ditempuh sehingga mempermudah dalam perhitungan Rf. Kemudian membuat fase gerak dengan menggunakan kloroform : metanol : asam asetat (95 : 1 : 5) di masukkan kedalam chamber dan di jenuhkan dengan kertas saring sebagai tanda fase gerak yang dibuat sudah jenuh atau belum. Selanjutnya ekstrak yang sudah diperoleh ditotolkan pada garis batas bawah plat KLT lapis silica gel menggunakan pipa kapiler, kemudian plat KLT dimasukkan ke dalam chamberyang berisi fase gerak yang sudah dijenuhkan. Menunggu hingga eluen naik sampai garis batas atas plat KLT. Mengangkat plat KLT dan dikering anginkan. Melihat bercak yang tampak dibawah lampu sinar UV pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm. Menganalisa nilai Rf dan hRf standar teoritis. 39
40 Menyiapkan alat dan bahan Mengaktifkan plat KLT dengan dioven selama 3 menit pada suhu 45oC Membuat fase gerak Membuat garis batas atas dan batas bawah pada plat KLT 1 cm Memasukkan kloroform : metanol : asam asetat (95 : 1 : 5) kedalam chamber Menotolkan sampel pada garis batas bawah plat KLT menggunakan pipa kapiler Menjenuhkan dengan kertas saring sebagai indikatornya Menunggu hingga kering plat KLT siap digunakan Menunggu jenuh dan fase gerak siap digunakan Memasukkan plat KLT kedalam chamber yang sudah dijenuhkan Menunggu hingga eluen naik sampai batas atas palt KLT dan dikering anginkan Melihat bercak yang nampak dibawah sinar UV dengan panjang gelombang 254 dan 366 nm Menganalisa Rf dan membandingkan dengan nilai Rf standar teoritis Gambar 3.9 Skema Kromatografi Lapis Tipis
7. Penetapan Kadar Fenol Total a. Pembuatan Pereaksi 1) Pembuatan larutan induk asam galat Ditimbang sebanyak 10 mg asam galat, larutkan dalam 10 ml Metanol (1000 /mL). 10 mg asam galat 10 mL Metanol Didapatkan konsentrasi larutan asam galat 1000 ppm Gambar 3.10 Skema Pembuatan Larutan Induk Asam Galat 2) Pembuatan Larutan Na2CO3 20% Ditimbang sebanyak 20 gram Na2CO3 kemudian dilarutkan dalam 100 mL aquades. 20 gram Na2CO3 100 mL aquades Didapatkan konsentrasi Na2CO3 20% Gambar 3.11 Skema Pembuatan Larutan Na2CO3 20% b. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Larutan standar asam galat 100 ppm diukur serapannya pada panjang gelombang 600-800 nm dengan interval tertentu. Hasil yang diperoleh dibuat dalam bentuk kurva, sebagai sumbu y adalah 41
absorbansi dan panjang gelombang cahaya sebagai sumbu x. Dari kurva tersebut dapat ditentukan panjang gelombang yang memberikan serapan maksimum (Sari dkk,2017). Larutan standar asam galat 100 ppm Diukur serapannya pada panjang gelombang 600- 800 nm. Hasil yang diperoleh dibuat dalam bentuk kurva, sumbu y adalah absorbansi dan panjang gelombang cahaya sebagai sumbu x Dari kurva tersebut dapat ditentukan panjang gelombang yang memberikan serapan maksimum terdapat pada gelombang 750 nm. Gambar 3.12 Skema Penentuan Panjang Gelombang Maksimum. c. Penentuan Senyawa Fenol Total 1) Pembuatan kurva kalibrasi asam galat dengan reagen Folin- Ciocalteau. Larutan induk asam galat (1000 ppm) dipipet sebanyak 10, 25, 50, 100, dan 200 µl ke dalam tabung reaksi . Pada masing- masing tabung ditambahkan 3,5 ml aquades dan 250 µl Folin- Ciocalteau dan di kocok. Didiamkan selama 8 menit ,kemudian ditambahkan 750 µl Na2CO3 20% kocok sampai homogen, tambahkan volume akhir menjadi 5 ml dengan aquades. Masing- 42
masing larutan diinkubasi selama 2 jam pada suhu kamar. Serapan diukur pada panjang gelombang 750 nm. Memipet larutan induk asam galat (1000 ppm) sebanyak 25, 50, 100, dan 200 µl kedalam tabung reaksi Menambahkan masing-masing tabung 3,5 ml aquades dan 250 µl Folin-Ciocalteau dan di kocok dan didiamkan selama 8 Menambahkan 750 µl Na2CO3 20% kocok sampai homogen,tambahkan volume akhir menjadi 5 ml dengan Menginkubasi masing-masing larutan pada suhu kamar selama ±2 jam Mengukur serapan pada panjang gelombang 750 nm. Gambar 3.13 Skema Pembuatan Kurva Kalibrasi 2) Penentuan Kandungan Fenol Total Dengan Metode Folin- Ciocalteau Ditimbang 100 mg sampel ekstrak kemudian dilarutkan dalam 50 ml dengan metanol (2000 µg/ml). Dipipet sebanyak 0,5 ml larutan ekstrak sampel dan ditambahkan 3,5 ml aquades dan 0,25 ml Folin-Ciocalteau dan dikocok. Didiamkan selama 8 menit , kemudian ditambahkan 0,75 ml Na2CO3 20 % kocok sampai homogen. Larutan didiamkan selama 2 jam pada suhu kamar. Serapan diukur pada panjang gelombang yang akan ditentukan. 43
Pengukuran dilakukan 3 kali pengulangan sehingga kadar fenol yang diperoleh hasilnya didapat sebagai mg ekuivalen asam galat/100 gram sampel. 3.5 Analisis Hasil Analisis hasil dilakukan dengan menggunakan pendekatan teoritis yaitu untuk mikroskopis dan analisis deskriptif yaitu untuk mengetahui perbedaan pelarut terhadap kadar total yang akan di uji. 44
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN Penelitian ini bertujuan meneliti pengaruh perbedaan pelarut terhadap kadar total fenol ekstrak cabai rawit (Capsicum frutescens L) dengan metode maserasi menggunakan pelarut Etanol 96% (polar), Etil Asetat (Semi Polar), dan N-Heksana (Non Polar). Sampel yang digunakan adalah cabai rawit (Capsicum frutescens L). Pengambilan sampel buah cabai rawit (Capsicum frutescens L) menggunakan teknik random. Buah cabai rawit ini didapatkan di Desa Kepandean Kec.dukuhturi Kab.Tegal. Langkah awal yang digunakan yaitu menimbang sampel buah cabai rawit (Capsicum frutescens L) sebanyak 1043 g. Setelah itu dicuci hingga bersih dengan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang menempel. Selanjutnya merajang kecil-kecil simplisia tersebut, bertujuan untuk mempercepat proses pengeringan dan mempermudah proses penghalusan. Proses pengeringan dilakukan dengan cara dikeringkan menggunakan oven pada suhu 60oC. Dari proses pengeringan diperoleh berat kering sebanyak 443 g. Selanjutnya simplisia cabai rawit (Capsicum frutescens L) dihaluskan menggunakan blender kemudian diayak menggunakan ayakan 60 mesh, bertujuan agar mempercepat proses ekstraksi. Kemudian timbang 60 g serbuk cabai rawit yang sudah diayak untuk masing-masing pelarut. Selanjutnya melakukan uji susut pengeringan, uji susut pengeringan ini bertujuan untuk memahami cara penetapan susut pengeringan dan menetapkan besarnya susut pengeringan pada simplisia 45
Tabel 4.1 Hasil Uji Susut Pengeringan Pada Buah Cabe Rawit No. 1. Perlakuan Replikasi I Hasil Susut Pengeringan 5% Rata-rata Susut Pengeringan 2. Replikasi II 4% 5,3% 3. Replikasi III 7% Tujuan dari susut pengeringan adalah untuk memberikan batas maksimal (rentang) besarnya senyawa yang hilang selama proses pengeringan. Nilai atau rentang yang diperbolehkan terkait dengan kemurnian dan kontaminasi. Susut pengeringan yang dipersyaratkan adalah kurang dari 10% (Agoes, 2007). Hasil uji susut pengeringan yang diperoleh pada buah cabe rawit ini adalah 5,3%, sehingga uji susut persyaratan pada cabe rawit ini sesuai yaitu kurang dari 10%. Setelah mendapatkan serbuk selanjutnya melakukan uji makroskopik bertujuan untuk mengetahui bentuk, bau, warna, dan rasa. uji makroskopik bertujuan agar mengetahui fragmen yang ada pada simplisia buah cabai rawit (Capsicum frutescens L). Tabel 4.2 Hasil Identifikasi Makroskopis Pada Buah Cabai Rawit No. Organoleptis Sampel Pustaka (MMI jilid III, 1979) 1. Bentuk 2. Warna 3. 4. Bau Rasa Bulat panjang Merah kekuningan Merangsang Sangat pedas Bulat panjang, bengkok, ujung meruncing. Merah sampai merah tua Bau merangsang Sangat pedas lurus atau kekuningan,merah (Sumber : Data Primer Penelitian) 46
47 Hasil pengamatan uji makroskopik pada buah cabai rawit (Capsicum frutescens L) menunjukkan bahwa cabai rawit (Capsicum frutescens L) yang digunakan dalam penelitian ini sesuai dengan karakteristik karena pada buah cabai rawit (Capsicum frutescens L) memiliki bentuk bulat panjang, lurus atau bengkok dan ujung meruncing, berwarna merah kekuningan dan mempunyai rasa yang sangat pedas serta bau yang khas cabai rawit . Setelah melakukan uji makroskopik, selanjutnya melakukan uji mikroskopik. Bertujuan untuk mengetahui fragmen yang terdapat pada Buah cabai rawit (Capsicum frutescens L) tersebut. Tabel 4.3 Hasil Identifikasi Mikroskopis Serbuk Simplisia Cabai Rawit No. Hasil Pengamatan Literatur (MMI jilid III, 1979) 1. Epikarp 2. Sel endokarp berdinding tebal 3. Pembuluh kayu bernoktah
Lanjutan tabel 4.3 Hasil Identifikasi Mikroskopis Serbuk Simplisia Cabai Rawit 4. Hipodermis 5. Serabut sklerenkim (Sumber : Data Primer Penelitian) Hasil pengamatan uji mikroskopik pada buah cabe rawit menunjukkan bahwa cabe rawit yang digunakan dalam penelitian ini sesuai dengan karakteristik karena pada cabe rawit memiliki fragmen epikarp, fragmen sel endokarp berdinding tebal, fragmen pembuluh kayu bernoktah, fragmen hipodermis, dan fragmen serabut sklerenkim. Metode ekstraksi yang digunakan pada penelitian ini yaitu maserasi. Metode maserasi memiliki kelebihan seperti cara pengerjaan dan unit alat yang digunakan sederhana, biaya operasional relatif rendah, serta dapat menghindari rusaknya senyawa-senyawa yang bersifat termolabil (Mukhriani, 2014). Ekstraksi tergantung pada tekstur dan kandungan bahan dalam tumbuhan. Senyawa / kandungan dalam tumbuhan memiliki kelarutan yang berbeda-beda dalam pelarut yang berbeda. Pelarut-pelarut yang biasa digunakan antara lain kloroform, eter, alkohol, methanol, etanol, dan etil asetat. Ekstraksi biasanya dilakukan secara bertahap dimulai dengan pelarut yang non polar (kloroform atau n-heksana), semi polar (etil asetat atau dietil eter), dan pelarut polar (methanol dan etanol) 48
(Harbone, 1996). Pelarut yang digunakan pada penelitian ini yaitu etanol 96%, etil asetat dan n-heksana. Pemakaian etanol sebagai bahan pelarut karena etanol dapat larut dalam air dan dapat juga larut pada bahan organik lainnya sehingga dapat memudarkan proses ekstraksi pada cabe ini. Etanol juga adalah bahan pelarut organik yang mudah menguap sehingga dapat memudahkan proses ekstraksi. Etil asetat merupakan pelarut yang bersifat semi polar sehingga dapat menarik senyawa yang bersifat polar maupun nonpolar, memiliki toksisitas rendah, dan mudah diuapkan sehingga dapat digunakan untuk ekstraksi buah cabai rawit. N-Heksana merupakan pelarut organik yang bersifat inert karena non polarnya, banyak dipakai untuk ekstraksi minyak dari biji. Setelah dilakukan pengamatan serbuk cabe rawit (Capsicum frutescens L) secara mikroskopik kemudian dilanjutkan dengan proses ekstraksi cabai rawit (Capsicum Frutescens L) dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 96%, etil asetat dan n-heksana masing-masing sebanyak 600 ml. Dengan perbandingan sampel pelarut adalah 1 : 10, Proses maserasi dilakukan selama 24 jam dan 6 jam sesekali diaduk kemudian diamkan selama 18 jam. Pengadukan bertujuan untuk mempercepat proses ekstraksi sehingga senyawa dapat terekstrak dengan sempurna (Depkes RI, 2008). Setelah itu memasukkan ekstrak cair dari pelarut polar, non polar, dan semi polar dalam cawan porselin setelah itu menimbang kemudian diuapkan sampai menjadi kental di atas waterbath yang bertujuan untuk menghasilkan ekstrak kental yang bebas dari pelarut polar, non polar, semi polar. 49
Hasil ekstrak kental yang di dapatkan kemudian di uji bebas pelarut (etanol 96%, etil asetat, dan n-heksana). Hal ini bertujuan untuk menghilangkan pelarut(etanol 96%, etil asetat, dan n-heksana) yang tercampur pada ekstrak. Hasil dari uji bebas pelarut sebagai berikut : Tabel 4.4 Hasil identifikasi uji bebas Etanol, Etil Asetat, dan N-heksana No 1. Perlakuan (Etanol ) Masukkan ekstrak cabai rawit ke tabung reaksi + 2ml asam asetat dan 2ml asam sulfat dipanaskan. 2ml Hasil Tidak berbau Ester Pustaka (Fessenden 1982 :) Tidak berbau Ester 2. (Etil Asetat) Masukkan ekstrak cabai rawit dalam tabung reaksi + 2ml NaOH,asam asetat dan H2SO4, amati bau yang dihasilkan berwarna coklat Tidak berbau eter (Fessenden 1982 : 107) Tidak berbau eter 3. (N-Heksana) 2ml Masukkan cabai rawit ke reaksi,lalu bakar bau n-heksana hilang ekstrak tabung sampai Tidak berbau n- heksana (Wulandari 2013) Tidak berbau N- heksana Setelah diperoleh ekstrak kental yang diperoleh langkah selanjutnya, menghitung rendemen yang didapat. Hasil perhitungan rendemen ekstrak cabai rawit dapat dilihat pada tabel sebagai berikut : Tabel 4.5 Hasil rendemen ekstrak tiap pelarut No. 1. 2. 3. Pelarut Etanol 96% Etil Asetat N- Heksana Rendemen ekstrak 48,17% 57,23% 36,38% 50
Hasil rendemen yang didapat dengan metode maserasi adalah, bahwa Etil Asetat menghasilkan rendemen yang paling tinggi yaitu sebesar 57,23% karena etil asetat merupakan pelarut yang bersifat semi polar sehingga dapat menarik senyawa yang bersifat polar maupun non polar, memiliki toksisitas rendah,dan mudah diuapkan sehingga memudahkan pemisahan senyawa dari pelarutnya (Deasywati, 2011 : 53). Dibandingkan pelarut N-heksana yaitu 36,38% dan Etanol 48,17%. Uji kualitatif fenol pada serbuk simplisia buah cabe rawit menggunakan uji warna ekstrak buah cabe rawit sebanyak 2 ml dengan penambahan FeCl3 sebanyak 5 tetes direaksikan dan memperoleh hasil sebagai berikut: Tabel 4.6 Identifikasi Senyawa Fenol Hasil penelitian Uji identifikasi Pustaka (Harbone,1987) Etanol Etil Asetat 2 ml sampel +5 tetes FeCl3 Menghasilkan warna biru atau hijau kehitaman N-heksana (Sumber : Data Primer Penelitian) 51
52 Hasil kualitatif ini bertujuan untuk memastikan bahwa ekstrak buah cabai rawit mengandung senyawa fenol dengan reaksi : C6H5OH + FeCl3 Fe (C6H5O)3 + HCL Berdasarkan hasil diatas yang menunjukkan bahwa ekstrak cabai rawit pada masing-masing pelarut menghasilkan warna hijau kehitaman artinya positif mengandung senyawa fenol. Uji warna identifikasi ini bertujuan untuk memastikan senyawa fenol yang terkandung dalam buah cabai rawit yang sudah diekstraksi. Ekstrak cabai rawit juga diidentifikasi kandungan senyawa fenol dengan kromatografi lapis. Pada kromatografi lapis tipis, fase gerak yang digunakan yaitu kloroform - metanol- asam asetat, dengan perbandingan pelarut ( 95: 1 :5 ) dan fase diamnya adalah plat silika gel (MMI jilid III, 1979). Sebelum digunakan plat KLT dikeringkan terlebih dahulu dalam oven pada suhu 45oC selama ± 3 menit. Tujuannya adalah untuk mengeringkan silica gel supaya plat KLT tidak lembab sehingga penyerapan dapat berlangsung dengan cepat. Selanjutnya dilakukan penotolan larutan sampel ekstrak buah cabe rawit pada masing-masing pelarut. Kemudian plat KLT dimasukkan kedalam bejana KLT atau chamber yang telah berisi fase gerak. Fase gerak dibiarkan naik sampai tanda batas atas plat KLT. Setelah mencapai tanda batas plat KLT, plat diangkat lalu dibiarkan hingga kering. Hal ini bertujuan untuk menguapkan sisa pelarut yang masih menempel pada plat agar spot jelas terlihat pada saat pengamatan dibawah sinar UV, panjang gelombang sinar UV yang digunakan 254 nm dapat mendeteksi alkaloid, flavonoid, dan triterpenoid sedangkan UV 366 nm dapat mendeteksi alkaloid,
flavonoid, dan lignan dengan warna yang berbeda-beda menghasilkan bercak berwarna kuning (Fernand, 2003). Tabel 4.7 Data Rf Hasil Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Cabe Rawit No. Pelarut Nilai Standar (MMI jilid III, 1979) Rf hRf Rf hRf 1. 2. 3. Etanol 96% Etil Asetat N-Heksana 0,37 0,38 0,43 37 38 43 0,43-0,48 43-48 Berdasarkan hasil diatas Rf isolat yang didapat pada pelarut Etanol 96% Rf isolat yang didapat 0,37 dan hRf 37, pelarut Etil asetat Rf isolat yang didapat 0,38 dan hRf 38, dan untuk pelarut N-heksana Rf isolat yang didapat 0,43 dan hRf 43. Dari ketiga pelarut tersebut hasil Rf yang memenuhi standar adalah pelarut N- heksana sebesar 0,43, sedangkan untuk Rf isolat pelarut Etanol 96% yaitu 0,37 dan Rf isolat pelarut Etil Asetat 0,38, Dari hasil yang diperoleh bila Rf isolat dibandingkan dengan Rf standar , menunjukan hasilnya mendekati artinya bahwa ekstrak buah cabe rawit mengandung senyawa fenol. Sehingga hasil KLT pada masing- masing pelarut ekstrak buah cabe rawit mengandung senyawa fenol. Uji selanjutnya yaitu menentukan panjang gelombang maksimum terlebih dahulu bertujuan untuk memudahkan penyerapan absorbansi agar mendapatkan absorbansi yang terbaik. Larutan standar asam galat 1000 ppm diukur serapannya pada panjang gelombang 600-800 nm. 53
Tabel 4.8 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum No. Panjang gelombang Absorbansi 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 700 710 720 730 740 750 760 770 780 790 800 0,269 0,273 0,281 0,283 0,287 0,289 0,287 0,287 0,286 0,28 0,274 ƛ max A b s o r b a n s i 0.29 0.288 0.286 0.284 0.282 0.28 0.278 0.276 0.274 0.272 absorbansi 700 720 780 760 740 panjang gelombang 800 820 Gambar 4.1. penentuan panjang gelombang maksimum Kurva tersebut dapat diketahui bahwa gelombang maksimum berada pada puncak gelombang 750 nm. Langkah selanjutnya yaitu melakukan uji kuantitatif penetapan kandungan total fenol. Fenol adalah senyawa yang mempunyai sebuah cincin aromatik dengan satu atau lebih gugus hidroksil. Total fenol ekstrak cabe rawit pada penelitian diukur dengan menggunakan prinsip Folin-Ciocalteau digunakan karena senyawa fenolik dapat bereaksi dengan folin membentuk 54
larutan berwarna yang dapat diukur absorbansinya. Prinsip pengukuran kandungan total fenol dengan reagen Folin-Ciocalteau adalah terbentuknya senyawa kompleks berwarna biru yang dapat diukur dengan panjang gelombang 750 nm. Senyawa fenolik bereaksi dengan reagen Folin-Ciocalteau hanya dalam suasana basa agar terjadi disosiasi proton pada senyawa fenolik menjadi ion fenolat. Untuk menciptakan kondisi basa digunakan Na2Co3 20% warna biru yang terbentuk akan semakin pekat, setara dengan konsentrasi ion fenolat yang terbentuk, artinya semakin besar konsentrasi senyawa fenolik maka semakin besar konsentrasi senyawa fenolik maka semakin banyak ion fenolat yang akan mereduksi asam heteropoli menjadi kompleks sehingga warna biru yang dihasilkan semakin pekat (Wachidah, 2013). Standar fenol yang digunakan yaitu asam galat sebagai standar dikarenakan senyawa tersebut sangat efektif untuk membentuk senyawa kompleks dengan Reagen Folin-Ciocalteau. Sebelum pemeriksaan kadar fenol total dalam sampel, terlebih dahulu dibuat kurva baku larutan standar asam galat terhadap absorbansi. Berikut hasil dari absorbansi asam galat bisa dilihat dibawah ini. Tabel 4.9 Nilai Absorbansi Asam Galat No. 1. 2. 3. 4. 5. Konsentrasi (µg/ml) 0 25 50 100 200 I 0 0,471 1,026 1,773 2,685 Absorbansi II 0 0,471 1,026 1,773 2,685 III 0 0,471 1,026 1,773 2,685 Absorbansi Rata - rata 0 0,471 1,026 1,773 2,685 55
Nilai absorbansi dari buah cabe rawit diplotkan terhadap kurva standar asam galat dan dihitung kandungan senyawa fenolnya, dapat dilihat pada grafik dibawah ini : Absorbansi 3 i s n a b r o s b a 2.5 2 1.5 1 y = 0.0132x + 0.1988 R² = 0.9649 Series1 0.5 Linear (Series1) 0 0 100 200 300 Konsentrasi Gambar 4.2 Kurva Kalibrasi Asam Galat Kandungan senyawa total fenol dalam tumbuhan dapat ditentukan secara spektrofotometri dengan reagen Folin-Ciocalteau. Tabel dibawah ini menunjukan adanya kadar total fenol yang terdapat pada buah cabe rawit dari masing-masing pelarut,yaitu pelarut etanol 96%, etil asetat, dan n-heksana. Tabel 4.10 Kandungan Total Fenol Dalam Ekstrak Cabe Rawit No. Pelarut Replikasi Absorbansi % Total Fenol 10,91% I 0,487 Rata - rata % Total Fenol 1. Etanol II 0,481 10,68% 10,74% 2. 3. Etil asetat N-Heksana III I II III I II III 0,480 0,520 0,520 0,521 0,399 0,400 0,400 10,65% 12,16% 12,16% 12,20% 7,58% 7,62% 7,62% 12,17% 7,60% 56
Berdasarkan tabel diatas hasil dari penentuan kandungan senyawa fenolat pada ekstrak buah cabe rawit menunjukan bahwa kandungan senyawa fenol pada pelarut etanol sebanyak 10,74%, etil asetat sebanyak 12,17%, dan n-heksana 7,60%. Dari pelarut etanol, eti asetat dan n-heksana yang mempunyai kadar total fenol tertinggi dihasilkan oleh pelarut etil asetat sebanyak 12,17%. Karena pelarut etil asetat sifatnya polar menengah atau semi polar pada dinding sel seperti aglikon flavonoid . Etil asetat tidak beracun dan tidak higroskopis . Disamping itu etil asetat digunakan sebagai pelarut karena etil asetat dapat menyari senyawa- senyawa yang memberikan aktivitas bakteri, diantaranya flavonoid polihidroksi dan fenol lain (Wardhani dan Nanik,2012). 57
BAB V SIMPULAN DAN SARAN 5.1 Simpulan Berdasarkan hasil yang diperoleh dari penelitian yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa : 1. Dari hasil penelitian yang dilakukan terdapat kandungan total fenol pada masing-masing pelarut, yaitu etanol 96%, N-heksana, dan etil asetat pada ekstrak buah cabe rawit . 2. Dari hasil penelitian kadar total fenol tertinggi dari ekstraksi maserasi cabe rawit dihasilkan oleh pelarut etil asetat sebesar 12,17%. 5.2 Saran Saran yang dapat diberikan untuk penelitian selanjutnya adalah : 1. Mengidentifikasi total fenol pada bagian lain dari buah cabai rawit 2. Perlu dilakukan uji aktivitas antioksidan dari ekstrak buah cabai rawit,agar dapat mengetahui kadar total antioksidan pada ekstrak buah cabai rawit. 58
DAFTAR PUSTAKA Agoes G, Teknologi Bahan Alam, ITB Press Bandung. Asih, 2009. "Isolasi dan Identifikasi Senyawa Isoflavon Dari Kacang Kedelai (Glacine Max)". Jurnal Kimia 3 (1), Januari 2009 : 33-40. Universitas Udayana,Bukit Jimbaran. Deasywati, 2011. "Aktifitas Antimikroba dan Identifikasi Komponen Aktif Rimpang Tsemulawak (Curcuma xanthorhiza Roxb)." Depok : Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Program Studi Biologi Program Pasca Sarjana. Dedi.K, Kusnadi Joni, dan Yunianta, 2017. "Ekstraksi Senyawa Fenol Dan Aktifitas Antioksidan Dari Buah Cabe Rawit Dengan Metode Microwave Assited Extraction." Malang : Universitas Brawijaya. Departemen Kesehatan Republik Indonesia 1979. "Farmakope Indonesia Edisi III." Jakarta : Depkes RI. Departemen Kesehatan Republik Indonesia 1979. "Materia Medika Indonesia.Jilid III. Jakarta : Direktorat Jenderal Pengawasan Obat Dan Makanan. Departemen Kesehatan Republik Indonesia 1995. "Farmakope Indonesia Edisi IV." Jakarta : Depkes RI. Departemen Kesehatan Republik Indonesia 2008. "Farmakope Herbal Indonesia." Jakarta : Depkes RI. Departemen Kesehatan Republik Indonesia 2000. "Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat." Cetakan 1. Jakarta : Depkes RI. Departemen Kesehatan Republik Indonesia 1986. "Sediaan Galenik". Jakarta : Depkes RI Fessenden R.J dan J.S Fessenden, 1982. Kimia Organik Jilid 2. Erlangga : Jakarta 59
Gandjar, I.B. & Abdul, R. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta : Pustaka Pelajar. Harborne, J.B. 1987. "Metode Fitokimia , Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan" Bandung : ITB. Hidayah. N , Aisyah Khoirotun N, Ahmad Solikhin, Irawati, dan Dewi Mustikaningtyas. 2016. "Uji Efektivitas Ekstrak Sargassum muticum Sebagai Alternatif Obat Bisul Akibat Aktivitas Staphylococcus aureus". Semarang : Universitas Negeri Semarang. Ikalinus, Widyastuti, Setiasih, 2015. "Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Kulit Batang Kelor (Moringa oleifera)." Indonesian Medicius Veterinus, 4(1), 71-79. Khoiriyah S, Hanapi A, dan Fasya, A.G, 2014. "Uji Fitokimia Dan Aktivitas Antibakteri Fraksi Etil Asetat, Kloroform, dan Petroleum Eter Ekstrak Metanol Alga Coklat (Sargassum vulgare) Dari Pantai Kapong Pamekasan Madura." ALCHEMY: Journal of Chemistry,3(2):133-144 Khunaifi, M . 2010. "Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) (Stenenis) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa." UIN Maulana Malik Ibrahim : Malang Latifah. 2015. "Identifikasi Golongan Senyawa Flavonoid Dan Uji Aktivitas Antioksidan Pada Ekstrak Rimpang Kencur (Kaempferia galanga L.)dengan Metode DPPH : UIN Marzuki, A. 2012. Kimia Analisis Farmasi. Makassar : Dua Satu Press. Maulid. D Z dan Naufal. 2010. Ekstraksi Antioksidan (Likopen) dari Buah Tomat dengan Menggunakan Solven Campuran n-heksan, Aseon, dan Etanol. : Undip. Mukhriani. 2014. Ekstraksi, Pemisahan Senyawa, dan Identifikasi Senyawa Aktif. Jurnal kesehatan. Volume VII No.2 Rahmawati. Nur Dyah, 2015. "Aktivitas Antioksidan Dan Total Fenol Teh Herbal Daun Pacar air (Impatiens balsamina) Dengan Variasi Lama Fermentasi Dan Metode Pengeringan." Surakarta : Universitas Muhammadiyah. 60
61 Oktaviana, dan Prima Riska. 2010. "Kajian Kurkumoid, Total Fenol, dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Temulawak Pada Berbagai Teknik Pengeringan dan Proporsi Pelarut." Fakultas Pertanian UNS. Robinson ,T. 1995. "Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi." Bandung : ITB. Safaatul,M dan Prima,A.H.2010. "Ekstraksi Minyak Daun Jeruk Purut (Citrus hystrik D.C) dengan Pelaut Etanol dan N-Heksana." Semarang : Universitas Negeri Semarang. Sari. Anna K, dan Noverda A. "Penetapan Kadar Fenolik Total Dan Flavonoid Total Ekstrak Beras Hitam (Oryza sativa L) Dari Kalimantan Selatan." Banjarmasin : Akademi Farmasi ISFI. Setiadi. 2006. Cabai Rawit Jenis dan Budaya. Jakarta : Penebar Swadaya. Susanti,A.D, Dwi,A, Gita, G.P., dan Yosephin, B.G.2012. "Polaritas Pelarut Sebagai Pertimbangan Dalam PemilihanPelarut Untuk Ekstraksi Minyak Bekatul Dari Bekatul Varietas Ketan (Oryza sativa glatinosa)". Simposium Nasional, ISSN 1412-9612. Surakarta. Universitas Sebelas Maret. Hal : 10. Sutomo, Aulea R, dan Muhammad Ikhwan Rizki. 2017. "Standarisasi Buah Cabai Rawit Hiyung (Capsicum frutescens L) Asal Tapin Kalimantan Selatan." Kalimantan Selatan : ULM. Tjandra E,.2011. Panen Cabai Rawit di Polybag. Cahaya Atma Pustaka. Umah. Fita Khoirul, 2012."Pengaruh Pemberian Pupuk Hayati (BIOFERTILIZER) Dan Media Tanam Yang Berbeda Pada Pertumbuhan Dan Produktivitas Tanaman Cabai Rawit (Capsicum frutescens L) di POLYBAG : Universitas Airlangga. Voight. 1994. Buku Pembelajaran Teknologi Farmasi Edisi 5. Yogyakarta : UGM Press. Voight. 1995. Buku Pembelajaran Teknologi Farmasi. Yogyakarta : UGM Press. Wachidah , L.N. 2013. "Uji Aktivitas Antioksidan Serta Penentuan Kandungan Fenolat Total Dari Buah Parijoto (Mednilla Spectosa Blume)." Jakarta : UIN
Wardhani L.K. dan Nanik S.2012. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong (Anredera Scandes L.) Terhadap Shigella flexneri beserta Profil Kromatografi Lapis Tipis. Jurnal Ilmu Kefarmasian. Wulansari, Ratih 2013. Wunas. 2011."Analisis Kimia Farmasi Kuantitatif (revisi kedua)." Makassar : Fakultas Farmasi UNHAS. Yahya, S. 2013. Bio-template Synthesis of SilikaRuthenium Catalyst of Benzylation of Toluene. Journal of Physical Science. Vol. 24. No. 1. Pp. 29-35. Yunita, 2012. "Uji Aktivitas Antioksidan Estrak Dan Fraksi Ekstrak Daun Cabai Rawit (Capsicum frutescens L)Dan Identifikasi Golongan Senyawa Dari Fraksi Teraktif." Depok : UI. 62 Ester
LAMPIRAN 1 Prosentase (%) Berat Basah Dan Kering Berat Basah Cabe Rawit = 1.043 g Berat Kering Cabe Rawit = 443 g Prosentase (%) = !"#$%	&"#'() !"#$%	!$*$+ ,	100% = --.	) /.1-.	) ,	100% = 42,47 % 63
LAMPIRAN 2 Susut Pengeringan Pada Oven 105o C Replikasi I Bobot Awal = 1 gram Bobot Akhir = 0,95 gram % Prosentase = !2!2%	$3$45!2!2%	$&+'# !2!2%	$3$4 x 100 % = /	)#$651,89	)#$6 /	)#$6 x 100 % = 5 % Replikasi II Bobot Awal = 1 gram Bobot Akhir = 0,96 gram % Prosentase = !2!2%	$3$45!2!2%	$&+'# !2!2%	$3$4 x 100 % = /	)#$651,8:	)#$6 /	)#$6 x 100 % = 4 % Replikasi III Bobot Awal = 1 gram Bobot Akhir = 0,95 gram % Prosentase = !2!2%	$3$45!2!2%	$&+'# !2!2%	$3$4 x 100 % = /	)#$651,8.	)#$6 /	)#$6 x 100 % = 7 % 64
Rata - rata susut pengeringan = #";4'&$*'	<=#";4'&$*'	<<=#";4'&$*'	<<< . = 9%=-%=>% . = 5,3% 65
LAMPIRAN 3 Rendemen Ekstrak Maserasi Perhitungan Rendemen Etanol 96% Berat beaker glass = 155,61 g Berat Beaker glass + isi = 215,6 g Berat beaker glass + sisa = 155,21 g Berat sampel = b-c = 215,6 g - 155,21 g = 59,99 g Banyak larutan etanol 96% = 600 ml Berat cawan kosong = 55,84 g Berat cawan + isi = 84,71 g Berat cawan + sisa = 55,81 g Berat ekstrak kental = b - c = 84,71 g - 55,81 g = 28,9 g Rendemen = !"#$%	"&*%#$&	&"(%$4 !"#$%	*$6;"4 ,	100% 66
Etil Asetat Berat beaker glass Berat Beaker glass + isi Berat beaker glass + sisa Berat sampel Banyak larutan etil asetat Berat cawan kosong Berat cawan + isi Berat cawan + sisa Berat ekstrak kental Rendemen N-Heksana Berat beaker glass Berat Beaker glass + isi Berat beaker glass + sisa = ? @ x 100% = AB,8	) 98,88	) x 100% = 48,17 % = 155,65 g = 215,65 g = 156,05 g = b-c = 215,65 g - 156,05 g = 59,6 g = 600 ml = 55,62 = 89,43 = 55,32 = b-c = 89,43 - 55,32 = 34,11 g = !"#$%	"&*%#$&	&"(%$4 !"#$%	*$6;"4 ? = x 100% @ .-,//	) = x 100% 98,:	) = 57,23 % = 150,60 g = 210,01 g = 150,5 g ,	100% 67
Berat sampel = b-c = 210,01 g-150,01 g = 60 g Banyak larutan n-heksana = 600 ml Berat cawan kosong Berat cawan + isi Berat cawan + sisa Berat ekstrak kental = 56,17 g = 77,70 g = 55,87 g = b-c = 77,70 g - 55,87 g = 21,83 g = A/,B.	) :1) x 100% = 36,38 % 68
LAMPIRAN 4 Perhitungan Rf Kromatografi Lapis Tipis Fase gerak : Kloroform : Metanol : Asam Asetat (95 : 1 : 5) Fase Diam : Plat Silika Gel Diketahui : Perhitungan fase gerak 1. Kloroform = 89 /1/ x 101 ml = 9,4 ml 2. Metanol = / /1/ x 101 ml = 0,1 ml 3. Asam Asetat = /1/ 3. Asam Asetat = /1/ x 101 ml = 0,5 ml Perhitungan Rf dan hRf : Rf = C$#$&	%"6;D+	*$6;"4 C$#$&	%"6;D+	;"4$#D% hRf = Rf x 100 1. Etanol 96% = . = 0,37 B = 0,37 x 100 = 37,5 2. Etil Asetat = .,B B = 0,38 = 0,38 x 100 = 38 3. Heksana = .,9 B = 0,43 = 0,43 x 100 = 43,75 69
LAMPIRAN 5 Perhitungan Total Fenol Diketahui : ETANOL 96 % Replikasi I Konsentrasi awal : 2000 ppm / 2000µg/ml Volume yang diambil : 0,5 ml / 500 µl Volume akhir : 5ml / 5000 µl Persamaan Regresi Linier : y = 0,0132x + 0,1988 a = 0,0132 b = 0,1988 Konsentrasi akhir = &2(*"(%#$*'	$3$4	@	E24D6"	?$()	F'$6!'4 E24D6"	$&+'# = A111	@	911 9111 = 200 Faktor pengenceran = &2(*"(%#$*'	$3$4 &2(*"(%#$*'	$&+'# = A111 A1 = 10x Kadar Total Fenol $!*2#!$(*'	*$6;"4	(5!) $ x FP x 100% Konsentrasi awal 1,-B>(51,/8BB) 1,1/.A x 10 x 100 2000 70
= 10,91% Replikasi II Konsentrasi awal : 2000 ppm / 2000µg/ml Volume yang diambil : 0,5 ml / 500 µl Volume akhir : 5ml / 5000 µl Persamaan Regresi Linier : y = 0,0132x + 0,1988 a = 0,0132 b = 0,1988 Konsentrasi akhir = &2(*"(%#$*'	$3$4	@	E24D6"	?$()	F'$6!'4 E24D6"	$&+'# = A111	@911 9111 = 200 Faktor pengenceran = &2(*"(%#$*'	$3$4 &2(*"(%#$*'	$&+'# = A111 A1 = 10x Kadar Total Fenol $!*2#!$(*'	*$6;"4	(5!) $ x FP x 100% Konsentrasi awal 1,-B/(51,/8BB) 1,1/.A x 10 x 100 2000 = 10,68% Replikasi III Konsentrasi awal : 2000 ppm / 2000µg/ml Volume yang diambil : 0,5 ml / 500 µl 71
Volume akhir : 5ml / 5000 µl Persamaan Regresi Linier : y = 0,0132x + 0,1988 a = 0,0132 b = 0,1988 Konsentrasi akhir = &2(*"(%#$*'	$3$4	@	E24D6"	?$()	F'$6!'4 E24D6"	$&+'# = A111	@	911 9111 = 200 Faktor pengenceran = &2(*"(%#$*'	$3$4 &2(*"(%#$*'	$&+'# = A111 A1 = 10x Kadar Total Fenol $!*2#!$(*'	*$6;"4	(5!) $ x FP x 100% Konsentrasi awal 1,-B1(51,/8BB) 1,1/.A x 10 x 100 2000 = 10,65% Rata - rata % Fenol = #";4'&$*'	<=#";4'&$*'	<<=#";4'&$*'	<<< . = /1,8/%=/1,:B%=/1,:9% . = 10,74% ETIL ASETAT Replikasi I Konsentrasi awal : 2000 ppm / 2000µg/ml 72
Volume yang diambil : 0,5 ml / 500 µl Volume akhir : 5ml / 5000 µl Persamaan Regresi Linier : y = 0,0132x + 0,1988 a = 0,0132 b = 0,1988 Konsentrasi akhir = &2(*"(%#$*'	$3$4	@	E24D6"	?$()	F'$6!'4 E24D6"	$&+'# = A111	5911 9111 = 200 Faktor pengenceran = &2(*"(%#$*'	$3$4 &2(*"(%#$*'	$&+'# = A111 A1 = 10x Kadar Total Fenol $!*2#!$(*'	*$6;"4	(5!) $ x FP x 100% Konsentrasi awal 1,9A1(51,/8BB) 1,1/.A x 10 x 100 2000 = 12,16% Replikasi II Konsentrasi awal : 2000 ppm / 2000µg/ml Volume yang diambil : 0,5 ml / 500 µl Volume akhir : 5ml / 5000 µl Persamaan Regresi Linier : y = 0,0132x + 0,1988 a = 0,0132 73
b = 0,1988 Konsentrasi akhir = &2(*"(%#$*'	$3$4	@	E24D6"	?$()	F'$6!'4 E24D6"	$&+'# = A111	@	911 9111 = 200 Faktor pengenceran = &2(*"(%#$*'	$3$4 &2(*"(%#$*'	$&+'# = A111 A1 = 10x Kadar Total Fenol $!*2#!$(*'	*$6;"4	(5!) $ x FP x 100% Konsentrasi awal 1,9A1(51,/8BB) 1,1/.A x 10 x 100 2000 = 12,16% Replikasi III Konsentrasi awal : 2000 ppm / 2000µg/ml Volume yang diambil : 0,5 ml / 500 µl Volume akhir : 5ml / 5000 µl Persamaan Regresi Linier : y = 0,0132x + 0,1988 a = 0,0132 b = 0,1988 Konsentrasi akhir = &2(*"(%#$*'	$3$4	@	E24D6"	?$()	F'$6!'4 E24D6"	$&+'# = A111	@	911 9111 74
= 200 Faktor pengenceran = &2(*"(%#$*'	$3$4 &2(*"(%#$*'	$&+'# = A111 A1 = 10x Kadar Total Fenol $!*2#!$(*'	*$6;"4	(5!) $ x FP x 100% Konsentrasi awal 1,9A/(51,/8BB) 1,1/.A x 10 x 100 2000 = 12,20% Rata - rata % Fenol = #";4'&$*'	<=#";4'&$*'	<<=#";4'&$*'	<<< . = /A,/:%=/A,/:%=/A,A1% . = 12,17% N-HEKSANA Replikasi I Konsentrasi awal : 2000 ppm / 2000µg/ml Volume yang diambil : 0,5 ml / 500 µl Volume akhir : 5ml / 5000 µl Persamaan Regresi Linier : y = 0,0132x + 0,1988 a = 0,0132 b = 0,1988 75
Konsentrasi akhir = &2(*"(%#$*'	$3$4	@	E24D6"	?$()	F'$6!'4 E24D6"	$&+'# = A111	@	911 9111 = 200 Faktor pengenceran = &2(*"(%#$*'	$3$4 &2(*"(%#$*'	$&+'# = A111 A1 = 10x Kadar Total Fenol $!*2#!$(*'	*$6;"4	(5!) $ x FP x 100% Konsentrasi awal 1,.88(51,/8BB) 1,1/.A x 10 x 100 2000 = 7,58% Replikasi II Konsentrasi awal : 2000 ppm / 2000µg/ml Volume yang diambil : 0,5 ml / 500 µl Volume akhir : 5ml / 5000 µl Persamaan Regresi Linier : y = 0,0132x + 0,1988 a = 0,0132 b = 0,1988 Konsentrasi akhir = &2(*"(%#$*'	$3$4	@	E24D6"	?$()	F'$6!'4 E24D6"	$&+'# = A111	@	911 9111 = 200 76
Faktor pengenceran = &2(*"(%#$*'	$3$4 &2(*"(%#$*'	$&+'# = A111 A1 = 10x Kadar Total Fenol $!*2#!$(*'	*$6;"4	(5!) $ x FP x 100% Konsentrasi awal 1,-11(51,/8BB) 1,1/.A x 10 x 100 2000 = 7,62% Replikasi III Konsentrasi awal : 2000 ppm / 2000µg/ml Volume yang diambil : 0,5 ml / 500 µl Volume akhir : 5ml / 5000 µl Persamaan Regresi Linier : y = 0,0132x + 0,1988 a = 0,0132 b = 0,1988 Konsentrasi akhir = &2(*"(%#$*'	$3$4	@	E24D6"	?$()	F'$6!'4 E24D6"	$&+'# = A111	@	911 9111 = 200 Faktor pengenceran = &2(*"(%#$*'	$3$4 &2(*"(%#$*'	$&+'# = A111 A1 = 10x 77
Kadar Total Fenol $!*2#!$(*'	*$6;"4	(5!) $ x FP x 100% Konsentrasi awal 1,-11(51,/8BB) 1,1/.A x 10 x 100 2000 = 7,62% Rata - rata % Fenol = #";4'&$*'	<=#";4'&$*'	<<=#";4'&$*'	<<< . = >,9B%=>,:A%=>,:A% . =7,60% 78
No. 1. 2. 3. Gambar LAMPIRAN 6 GAMBAR PENELITIAN Keterangan Buah Cabe Rawit (Capsicum frutescens L) Simplisia Buah Cabe Rawit (Capsicum frutescens L) Serbuk Simplisia Buah Cabe Rawit (Capsicum frutescens L) 79
No. 4. 5. 6. Gambar Keterangan Maserasi Penguapan Hasil Maserasi Hasil Ekstrak Kental Pelarut (Etanol 96%, Etil Asetat, dan N-Heksana) 80
No. 7. 8. 9. Gambar Keterangan Identifikasi Senyawa Fenol Etanol 96% Identifikasi Senyawa Fenol Etil Asetat Identifikasi Senyawa Fenol N- Heksana 81
No. 10. 11. 12. Gambar Keterangan KLT (Kromatografi Lapis Tipis) ekstrak cabe rawit Hasil KLT ekstrak cabe rawit Larutan Asam Galat 82
No. 13. 14. 15. Gambar Keterangan Larutan Na2Co3 20% Reagen follin-ciocalteau Larutan penentuan senyawa Fenol 83
No. 16. 17. Gambar Keterangan Larutan ekstrak cabe rawit Inkubasi larutan ekstrak cabe rawit selama 2 jam 84
Nama Tempat, Tanggal Lahir Alamat Email Nomer Hp Pendidikan SD SMP SMK DIII Judul KTI Nama Orang Tua Ayah Ibu Pekerjaan Orang Tua Ayah Ibu Alamat Orang Tua Ayah Ibu CURICULUM VITAE : Rizki Nur Widarjati : Jakarta, 19 Juni 1993 : Jl.Remaja, Desa Kepandean Rt.03/Rw.03 Kec.Dukuhturi, Kab.Tegal. : : 085642719281 : SD Negeri 03 Kepandean : SMP Negeri 19 Tegal : SMK Al-Ikhlash Tegal : Farmasi Politeknik Harapan Bersama Tegal : Pengaruh Perbedaan Pelarut Terhadap Kadar Total Fenol Cabe Rawit (Capsicum frutescens L) : Alm. Dulkarim : Rodiyah : - : Pedagang : Jl.Remaja, Desa Kepandean Rt.03/Rw.03 Kec.Dukuhturi, Kab.Tegal. : Jl.Remaja, Desa Kepandean Rt.03/Rw.03 Kec.Dukuhturi, Kab.Tegal. 85