অ্যাগ্রোব্যাকটেরিয়াম-মিডিয়াটেড ট্রান্সফরমেশন পদ্ধতি

নন-অ্যাগ্রোব্যাকটেরিয়াম স্ট্রেইনগুলিও টিউমার ইন্ডিউসিটিভ প্লাজমিডকে আশ্রয় করতে পারে। কিছু পরিবেশগত অ্যাগ্রোব্যাক্টেরিয়াম স্ট্রেইনে Ti এবং Ri প্লাজমিড উভয়েরই অভাব রয়েছে। এই স্ট্রেইনগুলি নন-প্যাথোজেনিক হয়।
অ্যাগ্রোব্যাক্টেরিয়াম-মধ্যস্থিত জিন স্থানান্তর, যা জেনেটিক রূপান্তর নামেও পরিচিত, একটি পদ্ধতি যা উদ্ভিদের ডিএনএ-তে নতুন জিন প্রবর্তন করতে ব্যবহৃত হয়। এই কৌশলটিতে অ্যাগ্রোব্যাক্টেরিয়াম টিউমেফেসিয়েন্স নামক একটি প্রাকৃতিকভাবে সৃষ্ট মৃত্তিকা ব্যাকটেরিয়া ব্যবহার করা জড়িত, যার নিজস্ব ডিএনএ, টি-ডিএনএ নামক একটি অংশকে হোস্ট প্ল্যান্টের জিনোমে স্থানান্তর করার ক্ষমতা রয়েছে।
অ্যাগ্রোব্যাকটেরিয়াম-মধ্যস্থ জিন স্থানান্তরের প্রক্রিয়াটি প্লাজমিড ভেক্টরে পছন্দসই জিন(গুলি) ঢোকানোর মাধ্যমে শুরু হয়, যা ডিএনএর একটি ছোট বৃত্তাকার অংশ যা হোস্ট জিনোমের স্বাধীনভাবে প্রতিলিপি করতে পারে। প্লাজমিড ভেক্টরে ঢোকানো জিন(গুলি) এর অভিব্যক্তি নিয়ন্ত্রণ করার জন্য প্রয়োজনীয় নিয়ন্ত্রক ক্রমও রয়েছে।
এরপরে, প্লাজমিড ভেক্টরটি রূপান্তর নামক একটি প্রক্রিয়ার মাধ্যমে এগ্রোব্যাকটেরিয়াম টিউমেফেসিয়েন্সে প্রবর্তিত হয়। একবার ব্যাকটেরিয়ামের ভিতরে, প্লাজমিড ভেক্টর ব্যাকটেরিয়ামের প্রাকৃতিক স্থানান্তর যন্ত্রপাতি দ্বারা স্বীকৃত হয়, যা টি-ডিএনএ প্যাকেজ করে এবং হোস্ট উদ্ভিদের জিনোমে সরবরাহ করে।
টি-ডিএনএ হোস্ট প্ল্যান্টের ডিএনএ-তে একত্রিত হয়, যার ফলে কাঙ্খিত জিন (গুলি) উদ্ভিদের জিনোমে স্থানান্তরিত হয়। রূপান্তরিত উদ্ভিদ কোষগুলিকে তারপরে টিস্যু কালচার কৌশল ব্যবহার করে বাছাই করা যায় এবং পুরো উদ্ভিদে পুনরুৎপাদন করা যায়।
এগ্রোব্যাকটেরিয়াম-মধ্যস্থিত জিন স্থানান্তর উদ্ভিদ জেনেটিক প্রকৌশলের জন্য একটি শক্তিশালী হাতিয়ার, কারণ এটি উদ্ভিদের জিনোমে নতুন জিনগুলির সুনির্দিষ্ট এবং লক্ষ্যযুক্ত প্রবর্তনের অনুমতি দেয়। রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা, ভেষজনাশক সহনশীলতা এবং ফলন বৃদ্ধির মতো উন্নত বৈশিষ্ট্য সহ ফসলের বিকাশে এই কৌশলটি ব্যবহার করা হয়েছে।
অ্যাগ্রোব্যাকটেরিয়াম-মধ্যস্থিত জিন স্থানান্তর হল উদ্ভিদের মধ্যে বিদেশী ডিএনএ প্রবর্তনের জন্য একটি বহুল ব্যবহৃত কৌশল। যাইহোক, সফল জিন স্থানান্তর বিভিন্ন কারণের উপর নির্ভর করে, যার মধ্যে রয়েছে:
বন্য ধরনের টিউমার ইন্ডিউসিটিভ-প্লাজমিড জিন ভেক্টর হওয়ার জন্য অনুপযুক্ত কারণ টিউমার ইন্ডিউসিটিভ-ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিক অ্যাসিডতে অনকোজিন রয়েছে যা হোস্ট কোষে টিউমার বৃদ্ধির কারণ হয়। নির্মাণ টিউমার ইন্ডিউসিটিভ প্লাজমিডকে অনকোজিন মুছে ফেলার মাধ্যমে নিরস্ত্র করে, এবং অপাইন বায়োসিন্থেটিক কোডিং জিন প্লাজমিডকে নন-অনকোজেনিক করে তোলে, প্রতিটি পুনরাবৃত্তি সীমানা অনুক্রমের ২৫ (bp:-base pair:-বেস পেয়ার)অবশিষ্ট থাকে। AMT-এর প্রতিশ্রুতি যেকোন বিদেশী DNA ক্রম দ্বারা টিউমার ইন্ডিউসিটিভ-ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিক অ্যাসিডের প্রতিস্থাপনের উপর নির্ভর করে যাতে Agrobacterium tumefaciens একটি "বাহন" হতে পারে আগ্রহের সন্নিবেশ জিন(গুলি) যা বংশধরদের কাছে প্রেরণযোগ্য। পরীক্ষামূলক ট্রান্সজিনের সাথে পরিবর্তিত কোষগুলিকে সাধারণ কোষ থেকে আলাদা করার জন্য নির্বাচনযোগ্য মার্কার জিনগুলিকে টিউমার ইন্ডিউসিটিভ-ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিক অ্যাসিডতে ঢোকানো হয়। কিছু হার্বিসাইড রেজিস্ট্যান্স মার্কার যা সাধারণত ব্যবহৃত হয় তা হল ফস্ফিনোথ্রিসিন:-(C₁₀H₁₇N₂O₆PS), ক্লোরসালফুরন:-(C₄H₄Cl₂O₂S), সাল্ফোনামাইড এবং গ্লাইফোসেট:-(C₃H₈NO₅P)। ব্যাক্টেরিয়া নির্বাচনযোগ্য মার্কার, যেমন ট্রাইমেথোপ্রিম:-(C₁₄H₁₈N₄O₃), স্ট্রেপ্টোমাইসিন, স্পেকটিনোমাইসিন, সালফোনামাইডস, ব্লোমাইসিন:-(C₂₃H₄₆N₆O₁₃), হাইগ্রোমাইসিন:-(C₂₀H₃₈N₄O₁₀), ক্যানামাইসিন:-(C₂₂H₂₇N₄O₉), নিওমাইসিন:-(C₂₃H₄₆N₆O₁₃), বা জেন্টামাইসিনের সন্নিবেশ ব্যাক্টেরিয়া কোষে প্লাজমিড গ্রহণের প্রকৌশল মূল্যায়ন করে।
নিরস্ত্র টিউমার ইন্ডিউসিটিভ প্লাজমিডের বড় আকারের কারণে ভিট্রোতে ম্যানিপুলেট করা কঠিন। যেহেতু ভাইরুলেন্স জিনগুলি একই কোষের টিউমার ইন্ডিউসিটিভ-ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিক অ্যাসিড সিকোয়েন্সে ট্রান্সে কাজ করতে পারে, তাই এটি ছোট স্বাধীনভাবে প্লাজমিডে স্থানান্তরিত হয়েছিল যেটি অ্যাগ্রোব্যাক্টেরিয়ামের প্রতিলিপির উৎস রয়েছে, যাকে "হেল্পার ভেক্টর" বলা হয়। উপরন্তু, ভাইরুলেন্স জিন নির্মূল করার ফলে টিউমার ইন্ডিউসিটিভ প্লাজমিড দীর্ঘতর ট্রান্সজিনকে মিটমাট করে। তদ্ব্যতীত, বিজ্ঞানী বাইনারি ভেক্টর তৈরি করেন, যাকে বলা হয় কারণ এটি একাধিক হোস্টে (Escherichia coli এবং Agrobacterium tumefaciens) প্রতিলিপি করার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে। বাইনারি ভেক্টর বাম এবং ডান সীমানা, একাধিক হোস্টের জন্য প্রতিলিপির উৎস, নির্বাচনযোগ্য মার্কার জিন এবং আগ্রহের জিন(গুলি) নিয়ে গঠিত। এই ইঞ্জিনিয়ারড প্লাজমিড এখন উদ্ভিদের জেনেটিক রূপান্তরে ব্যবহৃত হয়।
অ্যাগ্রোব্যাক্টেরিয়াম-মধ্যস্থিত জিন স্থানান্তর বিভিন্ন কারণে গাছপালা রূপান্তরের জন্য একটি পছন্দের পদ্ধতি:
সামগ্রিকভাবে, অ্যাগ্রোব্যাক্টেরিয়াম-মধ্যস্থিত জিন স্থানান্তর হল উদ্ভিদের জিনোমে নতুন জিন প্রবর্তনের জন্য একটি নির্ভরযোগ্য এবং কার্যকর পদ্ধতি, যা উন্নত বৈশিষ্ট্য এবং বর্ধিত ফলন সহ জিনগতভাবে পরিবর্তিত ফসলের বিকাশের দিকে পরিচালিত করেছে।
টিউমার ইন্ডিউসিটিভ-ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিক অ্যাসিড স্থানান্তরের প্রক্রিয়াটি টিউমার ইন্ডিউসিটিভ প্লাজমিড বার্নে অবস্থিত ভাইরাসের জিনের একটি সেট দ্বারা অতিসহজতর হয় [আনুমানিক ৩৫টি ভাইরুলেন্স জিন অন্তত ৮টি অপারন, VIrA, virB, virC, virD, virE, virF, virG, এবং virH, তে গোষ্ঠীবদ্ধ। এনকোডিং VirA, VirB, VirC, VirD, VirE, VirF, VirG, এবং VirH প্রোটিন, যথাক্রমে ], টিউমার ইন্ডিউসিটিভ-ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিক অ্যাসিড ছাড়াও, অন্যরা ক্রোমোসোমে (ক্রোমোসোমাল ভাইরুলেন্ট জিন—chv)।
অ্যাগ্রোব্যাক্টেরিয়াম-মিডিয়াটেড ট্রান্সফর্মেশন পদ্ধতির ধাপসমূহ নিম্নবর্ণিত:-
(১)প্রথমত,অ্যাগ্ৰোব্যাক্টেরিয়ামের আদিকোষের কোষঝিল্লিতে থাকা কোমোরিসেপ্টর (Chemoreceptor) নামক কোমোট্যাক্সিস সিগন্যালিং/কোমোট্যাক্টিক চলন সহায়ক সক্ষম রিসেপ্টশনাল অঙ্গ রয়েছে।কোমোট্যাক্সিস/কোমোট্যাক্টিক চলন ফেনোলিক যৌগ বা কোমোসেন্সর(Chemosensor) (আণবিক সেন্সর) দ্বারা আকৃষ্ট ও আকর্ষিত হয় যা উদ্ভিদের তাজা ক্ষত স্থান থেকে নির্গত হয়, যেমনঃ অ্যাসিটোসাইরিঙ্গোন এবং এ-হাইড্রোক্সিঅ্যাসিটোসাইরিঙ্গোন। প্রাথমিকভাবে, ব্যাকটেরিয়া উদ্ভিদ কোষের পৃষ্ঠের সাথে বিপরীতভাবে জড়িত থাকে, আনুগত্য উৎপাদনকে উদ্দীপিত করে যা ইউনিপোলার পলিস্যাকারাইড (UPP:-Unipollar Polysaccharide)-নির্ভর পোলার সংযুক্তি এবং ইউপিপি-অনির্ভর সংযুক্তির মাধ্যমে আনুগত্য সৃষ্টি করে। এই অপরিবর্তনীয় পৃষ্ঠ সংযুক্তি বহুকোষী বায়োফিল্ম গঠন, ম্যাট্রিক্স বিস্তার, কোষ বিভাজন, বায়োফিল্ম পরিপক্কতা এবং "বন্ধু কন্যা" কোষ বিচ্ছুরণের জন্য একটি সাইট স্থাপন করে।
(২)দ্বিতীয়ত, হোস্ট সিগন্যাল যৌগগুলি ব্যাকটেরিয়া কোষের পেরিপ্লাজমিক স্পেসে ট্রান্সমেম্ব্রেন প্রোটিন রিসেপ্টর (TPR:-Transmembrane Protein Receptor) দ্বারাও স্বীকৃত হয় যা ইতিবাচক নিয়ন্ত্রক প্রোটিন VirG ভাইরুলেন্স জিনের ফসফোরাইলেশন ট্রিগার করে।
(৩)তৃতীয়ত, ক্রোমোসোমাল ভাইরুলেন্স জিন দ্বারা এনকোড করা প্রোটিন ChvG/Chvl চিনি থেকে অম্লতা উপলব্ধি করে যা virG-এর বেসাল অভিব্যক্তিকেও সক্রিয় করে। ফসফোরাইলেটেড VirG আরেকটি ভাইরুলেন্স জিন সক্রিয় করার দিকে পরিচালিত করে। মনোস্যাকারাইডগুলি ChvE এর সাথে আবদ্ধ হয়ে সিগন্যালিং প্রক্রিয়াকে উন্নত করে তারপর VirA এর সাথে সমন্বয় করে।ক্ষতবিক্ষত হোস্ট উদ্ভিদ কোষগুলি সাধারণ অ্যান্টিমাইক্রোবিয়াল অ্যাজেন্টগুলিকে নির্গমন করে, যেমনঃ একটি সংবেদনশীল হোস্ট দ্বারা প্রকাশিত হোস্ট উদ্ভিদ ফোনোলিক সিগন্যালিং (জেনোগ্নোসিন এ:CHO,ফেনোলিক্স:-CHOH, অ্যাসিডিক পিএইচ, রাইকাডোসিন এবং মনোস্যাকারাইড,অ্যাসিটোসাইরিঙ্গোন,স্যালিসাইলিক অ্যাসিড:-CHO,অ্যাসপিরিন:-CHO,অ্যাপিজেনিন:-CHO, জ্যাসমোনিক অ্যাসিড:-CHO,জ্যাস্মোনোইল কোএনজাইম এ:-(C₁₀H₁₆N₅O₇P₃S),), যার অ্যাগ্রোব্যাকটেরিয়ামের অতিদ্রুততে বংশবিস্তার ও এ পদ্ধতি সক্রিয় প্রভাব ফেলে কিন্তু হোস্ট উদ্ভিদের দেহকোষের উপর মারাত্মক বিষাক্ত প্রভাব অধিকতর বেশি।HDMBOA এর স্থির অবস্থা অঞ্চল সক্রিয়ভাবে ভুট্টার মূল থেকে নির্গত।অ্যান্টিমাইক্রোবিয়াল অ্যাজেন্টগুলি VirA জিনের সেন্সর,কাইনেজ,লিঙ্কার ও রিসিভার জেনেটিক ডোমেইনের সাথে সংযুক্ত হয়,কাইনেজ নামক জেনেটিক ডোমেইনের অঞ্চলে সংযুক্ত থাকা ফসফোট্রান্সফর্মেশন(Phosphotransformation process) পদ্ধতির দ্বারা দুটি (P) ফসফরাসের ক্যাটায়নের অণু অ্যাগ্রোব্যাকটেরিয়াম টিউমেফেসিয়েন্স(Agrobacterium tumefaciens) নামক ব্যাক্টেরিয়ার আদিকোষে টিউমার ইন্ডিউসিটিভ প্ল্যাসমিড ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিক অ্যাসিডের VirG নামক ভাইরুলেন্সাল জিনের অপারেটর অঞ্চলে সংযুক্ত হয়ে যায় এবং টিউমার ইন্ডিউসিটিভ প্ল্যাসমিড ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিক অ্যাসিডের সাইটোকাইনিন,অক্সিন ও অপাইন জিনসহ ভাইরুলেন্স জিনের ট্রান্সক্রিপশনাল অ্যাক্টিভেশন-রিপ্রেশন(Transcriptional Activation-Repression process) পদ্ধতির মাধ্যমে টিউমার ইন্ডিউসিটিভ প্ল্যাসমিড ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিক অ্যাসিড প্রক্রিয়াকৃত এবং উদ্ভিদ কোষের নিউক্লিয়াসকে লক্ষ্য বা টার্গেট করে;
জিনসমূহ CheY কোমোট্যাক্সিস জিন বিচ্ছিন্ন হয়ে সরাসরি ফ্ল্যাজেলামের সাথে বন্ধনাবদ্ধ হওয়ার জন্য কোমোট্যাক্সিস সিগন্যালিং অতিদ্রুততে পাঠানো হয় কোমোট্যাক্টিক চলনের জন্য;
হোস্ট কোষের জিনোমকে প্রোটেনোসোমাল
বায়োডিগ্ৰেডেশন পদ্ধতিতে ভেঙ্গে বা অবক্ষয় হয় ও অবক্ষয়কৃত জিনোমে টিউমার ইন্ডিউসিটিভ প্ল্যাসমিড-ডিএনএর ইন্টিগ্ৰেজ(Integrase)ইন্টিগ্ৰেশন প্রক্রিয়ার মাধ্যমে ঢোকানো হয়,ইন্টিগ্ৰেটেড টিউমার ইন্ডিউসিটিভ প্ল্যাসমিড টিউমার ইন্ডিউসিটিভ-ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিক অ্যাসিড থেকে হোস্ট উদ্ভিদের দেহকোষের সাইটোপ্লাজমে পর্যায়ক্রমে ও ধারাবাহিকভাবে অক্সিন সংশ্লেষণ, সাইটোকাইনিন সংশ্লেষণ ও অপাইন সংশ্লেষণ ঘটতে থাকে এবং সংশ্লেষিত বিষাক্ত পদার্থ হোস্ট উদ্ভিদে টিউমার ক্রাউন গেইল রোগসৃষ্টি করে। অপাইন সংশ্লেষিত হওয়ার পর অপাইন অ্যাগ্রোব্যাকটেরিয়াম টিউমেফেসিয়েন্স নামক অ্যাগ্ৰোব্যাক্টেরিয়ামের অপাইন প্রাইমেজ(Opine Permease) নামক ইফ্ল্যাক্স পাম্পের ও এবিসি অ্যাগ্ৰোব্যাক্টেরিয়াম অপাইন ইম্পোর্টার(ABC Agrobacterium Opine importer)নামক এবিসি ট্রান্সপোর্টারের মাধ্যমে টিউমার ইন্ডিউসিটিভ প্ল্যাসমিড ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিক অ্যাসিডের অপাইন ক্যাটাবোলিসিম (Opine Catabolism) নামক ভাইরুলেন্স ক্লাস্টারে অপাইন সংশ্লেষক জিনসমূহ(OcsA,OcsB,OcsC,AccA,AccB,AccC,{AccR:-AccR1&AccR2},NosA,NosB,NosC,NosD,NosO,{NosR:-NosR1&NosR2},NosZ,tms1 (iaaH, auxA),tms2 (iaaM, auxB),tmr (ipt, cyt),tml,frs,mas,ags, এনকোডিং ফলে সৃষ্ট অপাইন সংশ্লেষক এনজাইম ও মিউটেশন টিউমারের আকারের প্রভাবে ফ্রুক্টোপাইনেজ,ম্যানোপাইনেজ,অ্যাগ্ৰোপাইনেজ,অক্টোপাইনেজ ও নোপালিনেজ সাইটোপ্লাজমে ভাসমান অবস্থায় থাকা অপাইন,অক্সিন ও সাইটোকাইনিনকে সংশ্লেষিত হওয়ার পর টিউমার ইন্ডিউসিটিভ প্ল্যাসমিড ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিক অ্যাসিডের কাছে এসে অপাইন ইউটিলাইজেশন (Opine Utilization) পদ্ধতিতে সংযুক্ত হয়ে যায়।ঐ ধরনের এবিসি অ্যাগ্ৰোব্যাক্টেরিয়াম অপাইন ইম্পোর্টার দ্বারা অ্যাগ্ৰোব্যাক্টেরিয়াম নিজের পুষ্টি ও খাদ্য উপাদান শোষণ করে সরাসরি প্রোক্যারিওটিক ট্রাইকার্বোক্সিলিক অ্যাসিড চক্র(Prokaryotic Tricarboxylic acid cycle) সাথে সংযুক্ত হয়ে থাকে এবং অবাঞ্ছিত ও কোষের জন্য এবং উদ্ভিদের বিষাক্ত উপাদান এবিসি অ্যাক্সপোর্টার (ABC Exporter) নামক এবিসি ট্রান্সপোর্টারের মাধ্যমে দ্বারা বাহিরে নিঃসরিত ও নিক্ষেপিত করে দেয়।এভাবে পদ্ধতি পুনরাবৃত্তি ঘটে।অ্যাগ্ৰোব্যাক্টেরিয়াম টিউমেফেসিয়েন্স chvB মিউট্যান্ট, বিটা-1,2-গ্লুকানের অভাব, একটি প্লিওট্রপিক ফেনোটাইপ প্রদর্শন করে, যার মধ্যে নন-মোটিলিটি, সংযুক্তির ঘাটতি এবং অ্যাভিরুলেন্স রয়েছে। এখানে আমরা রিপোর্ট করছি যে 7 মিমি CaCl2 এবং 100 mM NaCl এর সাথে সম্পূরক ট্রিপ্টোন-ইস্ট এক্সট্র্যাক্ট মাঝারিতে chvB মিউট্যান্ট কোষের বৃদ্ধির ফলে, মিউট্যান্ট কোষগুলি গতিশীল হয়ে ওঠে, মটরের মূলের চুলের ডগায় সংযুক্ত হয় এবং কালাঞ্চো পাতার উপর ক্ষত সৃষ্টি করে। অধিকন্তু, যেখানে 7 মিমি CaCl2 ধারক ট্রিপ্টোন-ইস্ট এক্সট্র্যাক্ট মাঝারিতে জন্মানো chvB মিউট্যান্টগুলি সক্রিয় রাইকাডেসিন তৈরি করে না, এই মাধ্যমে 100 মিমি NaCl যোগ করার ফলে রাইকাডেসিন কার্যকলাপ পুনরুদ্ধার হয়। CaCl2 এর উপস্থিতি রাইকাডোসিনের সংযুক্তি, ভাইরুলেন্স এবং কার্যকলাপের জন্য প্রয়োজনীয় বলে মনে হয়েছে।অ্যাগ্ৰোব্যাক্টেরিয়াম টিউমেফেসিয়েন্স chvB মিউট্যান্টের রাইকাডোসিন-মধ্যস্থ সংযুক্তি ও ভাইরুলেন্স উচ্চ অসমোটিক মাধ্যমে বৃদ্ধি দ্বারা পুনরুদ্ধার করা যেতে পারে।
অক্সিন সংশ্লেষণ ():-
সাইটোকাইনিন সংশ্লেষণ ():-
অপাইন সংশ্লেষণ ():-টি-প্ল্যাসমিডের ধরন তাদের অপাইন উৎপাদনের ধরন দ্বারা নির্ধারিত হয়।
(AMT:-Aminomethyltransferase{অ্যামাইনোনোমিথাইলট্রান্সফারেজ}) হল একটি জেনেটিক ইঞ্জিনিয়ারিং কৌশল যা জেনেটিকভাবে অসংখ্য উদ্ভিদ প্রজাতির পরিবর্তন করে। কারণ এটি উদ্ভিদ জিনোমে স্থিতিশীল, অ-পুনর্বিন্যাস, একক-কপি ক্রমগুলির দক্ষ সন্নিবেশকে সহজতর করে। প্রাপ্তবয়স্ক বীজের স্কুটেলা থেকে উৎপন্ন সক্রিয়ভাবে প্রসারিত ভ্রূণের কলাস কোষের ব্যবহার শুরুর উপাদান হিসাবে এবং একটি ফেনোলিক রাসায়নিক, অ্যাসিটোসাইরিঙ্গোন, যোগ করাকে কার্যকরী রূপান্তরের জন্য গুরুত্বপূর্ণ হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল। উপরন্তু, চেং এট আল। প্রকাশ করেছে যে অপরিণত ভ্রূণ, প্রাক-সংস্কৃতি ভ্রূণ এবং ভ্রূণজনিত কলাসের রূপান্তর দক্ষতা উল্লেখযোগ্যভাবে আলাদা নয়।
Monocotyledoneae বা Dicotyledoneae উদ্ভিদের মধ্যে AMT-এর বিভিন্ন প্রোটোকল নথিভুক্ত করা হয়েছে। সাধারণত, ট্রান্সজেনিক উদ্ভিদ তৈরি করতে অ্যাগ্ৰোব্যাক্টেরিয়াম-ভিত্তিক কৌশলগুলি ব্যবহার করা হয়েছিল। পদ্ধতিটি সাতটি ধাপ নিয়ে গঠিত, যা শীঘ্রই নীচে সংক্ষিপ্ত করা হয়েছে।
 *(V) T0 এর আনুষঙ্গিকতা এবং আণবিক সনাক্তকরণ;
এগ্রোব্যাকটেরিয়াম-মধ্যস্থিত জিন স্থানান্তর হল উদ্ভিদ জৈবপ্রযুক্তিতে বিভিন্ন অ্যাপ্লিকেশন সহ একটি বহুল ব্যবহৃত কৌশল। কিছু সাধারণ অ্যাপ্লিকেশনের মধ্যে রয়েছে:
অ্যাগ্রোব্যাকটেরিয়াম-মধ্যস্থিত জিন স্থানান্তর সমস্ত উদ্ভিদ প্রজাতিতে কার্যকর নয়। কিছু উদ্ভিদ প্রজাতি অ্যাগ্রোব্যাকটেরিয়াম সংক্রমণের জন্য সহজাতভাবে প্রতিরোধী, এবং তাদের জন্য রূপান্তর প্রোটোকল বিকাশ করা চ্যালেঞ্জিং হতে পারে।স্থানান্তরিত ডিএনএ উদ্ভিদের জিনোমে একত্রিত হওয়ার স্থান পরিবর্তনশীল এবং অনির্দেশ্য। এটি জিনের অভিব্যক্তি, জিন সাইলেন্সিং এবং অন্যান্য অনিচ্ছাকৃত প্রভাবগুলির উপর অবস্থানগত প্রভাবের দিকে নিয়ে যেতে পারে।এগ্রোব্যাকটেরিয়াম-মধ্যস্থিত জিন স্থানান্তরের প্রক্রিয়ার জন্য প্রায়ই টিস্যু কালচারের প্রয়োজন হয়, যা প্রযুক্তিগতভাবে চ্যাস্থানান্তরিত ডিএনএ কখনও কখনও লেঞ্জিং, সময়সাপেক্ষ এবং ব্যয়বহুল হতে পারে।এপিজেনেটিক পরিবর্তনগুলি প্ররোচিত করতে পারে, যেমন ডিএনএ মিথিলেশন, যা অন্তঃসত্ত্বা জিনের প্রকাশ এবং ট্রান্সজিনের স্থায়িত্বকে প্রভাবিত করতে পারে।উদ্ভিদের মধ্যে বিদেশী ডিএনএর প্রবর্তন কখনও কখনও অনিচ্ছাকৃত প্রভাব ফেলতে পারে, যেমন উদ্ভিদের বিকাশকে প্রভাবিত করা বা বিপাকীয় পথ পরিবর্তন করা।কৃষিতে এগ্রোব্যাকটেরিয়াম-মধ্যস্থ জিন স্থানান্তরের ব্যবহার অনেক দেশে নিয়ন্ত্রক অনুমোদন সাপেক্ষে। এটি জেনেটিকালি পরিবর্তিত উদ্ভিদের বাণিজ্যিকীকরণ করা কঠিন এবং ব্যয়বহুল করে তুলতে পারে।
অ্যাগ্রোব্যাকটেরিয়াম-মধ্যস্থিত জিন স্থানান্তর উচ্চ রূপান্তর দক্ষতা অর্জন করতে পারে, একটি একক রূপান্তর পরীক্ষা থেকে উৎপাদিত অনেক রূপান্তরিত উদ্ভিদের সাথে।স্থানান্তরিত ডিএনএ একটি সুনির্দিষ্ট অবস্থানে উদ্ভিদের জিনোমে একীভূত হয়, যা অন্তঃসত্ত্বা জিন বা নিয়ন্ত্রক উপাদানগুলিকে ব্যাহত করার সম্ভাবনা কমাতে পারে।এগ্রোব্যাকটেরিয়াম-মধ্যস্থিত জিন স্থানান্তরের মাধ্যমে প্রবর্তিত ট্রান্সজিনগুলি প্রায়শই স্থিরভাবে উত্তরাধিকারসূত্রে প্রাপ্ত হয় এবং পরবর্তী প্রজন্মগুলিতে প্রেরণ করা যেতে পারে।Agrobacterium tumefaciens, অ্যাগ্ৰোব্যাক্টেরিয়াম-মিডিয়াটেড জিন ট্রান্সফারে ব্যবহৃত অ্যাগ্ৰোব্যাক্টেরিয়াম, সাধারণত নিরাপদ বলে বিবেচিত হয় এবং এর প্যাথোজেনিসিটির ঝুঁকি অনেক কম থাকে।কৌশলটি ব্যবহার করা তুলনামূলকভাবে সহজ এবং অত্যাধুনিক সরঞ্জাম বা দক্ষতার প্রয়োজন নেই।পুরো জিন এবং জিন ক্লাস্টার সহ বৃহৎ ডিএনএ খন্ডগুলি অ্যাগ্রোব্যাক্টেরিয়াম-মধ্যস্থিত জিন স্থানান্তর ব্যবহার করে স্থানান্তর করা যেতে পারে।
জেলভিন এসবি। এগ্রোব্যাকটেরিয়াম-মধ্যস্থিত উদ্ভিদ রূপান্তর: "জিন-জকি" টুলের পিছনে জীববিজ্ঞান। Microbiol Mol Biol Rev. 2003 Mar;67(1):16-37, বিষয়বস্তুর সারণী। doi: 10.1128/MMBR.67.1.16-37.2003. PMID: 12626681; PMCID: PMC150518।
Hensel, G., Kastner, C., Oleszczuk, S., Riechen, J., & Kumlehn, J. (2009)। খাদ্যশস্যের উদ্ভিদে এগ্রোব্যাকটেরিয়াম-মধ্যস্থ জিন স্থানান্তর: বার্লি, গম, ট্রিটিকেল এবং ভুট্টার জন্য বর্তমান প্রোটোকল। প্ল্যান্ট জিনোমিক্সের আন্তর্জাতিক জার্নাল, 2009, 1-9। doi:10.1155/2009/835608