Kromatografi afinitas

Kromatografi afinitas ion logam imobilisasi (En: "Immobilized metal ion affinity chromatography, IMAC") berdasarkan pada ikatan kovalen koordinasi spesifik dari asam amino, terutama histidin, terhadap logam. Cara kerja teknik ini adalah membiarkan protein berafinitas dengan ion logam yang akan diretensi dalam kolom yang mengandung ion logam imobilisasi, seperti kobal, nikel, tembaga, untuk memurnikan protein atau peptida yang mengandung histidin, besi, seng atau galium untuk pemurnian protein atau peptida terfosforilasi. Sebagian besar protein alami tidak mempunyai afinitas dengan ion logam, oleh karenanya teknologi DNA rekombinan dapat digunakan untuk mengintrodusir label protein semacam ini ke dalam gen yang sesuai. Metode yang digunakan untuk mengelusi protein yang diinginkan meliputi perubahan pH, atau penambahan molekul kompetitor, misalnya imidazola.
Penggunaan paling umum kromatografi afinitas saat ini adalah pemurnian protein rekombinan. Protein dengan afinitas yang diketahui ditandai, untuk membantu pemurniannya. Protein mungkin sudah mengalami modifikasi genetik untuk memungkinkan memiliki ikatan afinitas. Ini disebut dengan protein fusi. Penanda meliputi glutathion-S-transferase (GST), heksahistidin (His), dan maltosa terikat protein (En: "maltose binding protein", MBP). Penanda histidin mempunyai afinitas terhadap ion nikel atau kobalt yang telah diimobilisasi dengan pembentukan ikatan kovalen koordinasi dengan zat pengkhelat pada fasa diam. Untuk elusi, digunakan pelarut yang mampu membentuk senyawa dengan ligan logam, misalnya imidazola, dengan volume berlebih. GST memiliki afinitas terhadap glutation yang secara komersial tersedia sebagai glutation agarosa. Selama elusi, kelebihan glutation digunakan untuk menggantikan protein yang diberi tanda.