Ferrando II d'Aragón

Isabel membuat wasiatnya pada tanggal 12 Oktober 1504, sebelum kematiannya pada tanggal 26 November 1504. Di dalamnya ia mengeja suksesi takhta Kastila, menyerahkannya pada Juana dan kemudian kepada putra Juana, Karl. Isabel meragukan kemampuan Juana untuk berkuasa dan tidak yakin dengan suami Juana, Adipati Agung Philipp. Ferrando bergerak cepat setelah kematian istrinya untuk melanjutkan perannya di Kastila. "Pada hari kematian istrinya, Ferrando dengan resmi meninggalkan gelarnya sebagai raja Kastila, yang ia pegang sejak tahun 1474, dan malah menjadi gubernur ("gobernador") kerajaan," sebagai cara untuk menjadi wali penguasa. Philipp menganggap istrinya waras dan cocok untuk memimpin. Kompromi diadakan di antara Philipp dan Ferrando, yang memberi Ferrando melanjutkan perannya di Kastila. Ferrando II telah menjabat sebagai wali penguasa yang terakhir selama ketidakhadirannya di Belanda, dipimpin oleh suaminya, Adipati Agung Philipp. Ferrando berusaha untuk mempertahankan kepemimpinan secara permanen, tetapi ditolak oleh bangsawan Kastila dan digantikan dengan suami Juana, yang menjadi Philipp I dari Kastilia.