Perang Italia 1521–26

François melancarkan serangan kedua ke Milan pada tahun 1525. Dalam Pertempuran Pavia, Perancis mengalami kekalahan besar; François sendiri ditangkap dan banyak bangsawan yang terbunuh. Sementara François dipenjara di Spanyol, berbagai manuver diplomatik dilancarkan agar ia dilepaskan, termasuk misi khusus Perancis yang dikirim oleh ibu François Louise dari Savoie ke istana Suleiman I yang membuat Utsmaniyah melancarkan ultimatum kepada Karl. Suleiman menggunakan kesempatan ini untuk melancarkan serangan ke Hongaria pada musim panas 1526 dan mengalahkan sekutu-sekutu Karl dalam Pertempuran Mohács. Sementara itu, François tetap harus menandatangani Traktat Madrid yang mengharuskannya melepaskan klaim terhadap Italia, Flandria, dan Bourgogne. Namun, setelah ia dilepas, ia menolak traktat ini dan melancarkan Perang Liga Cognac. Meskipun peperangan Italia tetap berkecamuk selama tiga dasawarsa berikutnya, Perancis tetap gagal memperoleh wilayah di Italia.