**Izopropyl β-D-1-tiogalaktopyranozid** (**IPTG**) je reagent využívaný v molekulárnej biológii. Svojou štruktúrou pripomína alolaktózu, čo je laktózový metabolit spúšťajúci transkripciu *lac* operónu. Preto sa využíva na indukciu expresie proteínov, ktoré sú pod riadením lac operátoru.

Mechanizmus pôsobenia
---------------------

Podobne ako alolaktóza, IPTG sa viaže na lac represor a alostericky uvoľňuje tetramérny represor z lac operátoru, čím umožňuje transkripciu génov v lac operóne, ako je gén kódujúci beta-galaktozidázu, hydrolyzačný enzým katalyzujúci hydrolýzu β-galaktozidov na monosacharidy. Narozdiel od alolaktózy však atóm síry v IPTG tvorí väzbu, ktorú bunka nevie hydrolyzovať, takže sa tento induktor nemetabolizuje. Jeho koncentrácia je teda počas experimentu konštantná.

Príjem IPTG bunkami *E. coli* môže byť nezávislý na pôsobení laktózapermeázy, keďže zahŕňa i iné dráhy. V nízkych koncentráciách vstupuje IPTG do bunky vďaka laktózapermeáze, ale pri vyšších koncentráciách (typických pre indukciu proteínov) môže IPTG vstúpiť do bunky nezávisle na laktózapermeáze.

Využitie v laboratóriu
----------------------

Ak sa IPTG skladuje ako prášok pri teplote 4 °C alebo nižšej, je stabilný po dobu 5 rokov. V roztoku je omnoho menej stabilný - Sigma-Aldrich neodporúča skladovanie dlhšie ako mesiac pri izbovej teplote. IPTG je efektívnym induktorom proteínovej expresie pri koncentráciách 100 μM až 3,0 mM.[chýba zdroj] Typicky sa pridáva sterilný filtrovaný roztok IPTG s koncentráciou 1 M v pomere 1:1000 k exponenciálne rastúcej bakteriálnej kultúre, čím sa dosiahne koncentrácia 1 mM. Použitá koncentrácia závisí na požadovanej sile indukcie a rovnako na genotype použitých buniek či plazmidov. Ak je prítomný *lacIq* mutant, ktorý produkuje nadmerné množstvo lac represoru, môže byť nutné použiť vyššie koncentrácie IPTG.

IPTG sa používa v modrobielom teste spolu s farbivom X-gal. Tento test umožňuje identifikáciu transformovaných kolónií s rekombinantným plazmidom počas klonovacích experimentov oproti kolóniám, ktoré rekombinantný plazmid nemajú.[chýba zdroj]

Referencie
----------

1. ↑   The effect of the lacY gene on the induction of IPTG inducible promoters, studied in *Escherichia coli* and *Pseudomonas fluorescens*. *Curr. Microbiol.*, June 1998, s. 341–7. Dostupné online. DOI: 10.1007/s002849900320. PMID 9608745.
2. ↑   lac operon induction in Escherichia coli: Systematic comparison of IPTG and TMG induction and influence of the transacetylase LacA. *Journal of Biotechnology*, 2012, s. 82–8. DOI: 10.1016/j.jbiotec.2011.10.009. PMID 22079752.
3. ↑
4. ↑   *BL21(DE3) Competent Cells, BL21 (DE3)pLysS Competent Cells, and BL21 Competent Cells Instruction Manual*. Revision #066004e. vyd. La Jolla, CA : Stratagene, 2006. S. 7.

Zdroj
-----

*Tento článok je čiastočný alebo úplný preklad článku Isopropyl\_β-D-1-thiogalactopyranoside na anglickej Wikipédii.*

| * z
* d
* u
Syntéza proteínov |
| --- |
| Expresia génu | 
* aktivátor
* enhancer
* exón
* gén
* induktor
* intrón
* operón
* represor
* silencer

 |
| Nukleové kyseliny | 
* DNA
* RNA
* pre-mRNA
* mRNA
* snRNA
* tRNA
* RNAi
* rRNA

 |
| Transkripcia | 
* adenozíntrifosfát
* fosfodiesterová väzba
* komplementarita
* operátor
* palindróm
* posttranskripčná úprava
* primárny transkript
* promótor
* RNA polymeráza
* sigma faktor
* stimulačný proteín transkripcie
* spliceozóm
* TATA box
* transkripčná jednotka
* transkripcia mimochromozómovej DNA
* transkripčný faktor

 |
| Translácia | 
* aminoacyl tRNA syntetáza
* aminokyselina
* antikodón
* elongačný faktor
* endoplazmatické retikulum
* genetický kód
* guanozíntrifosfát
* iniciačný faktor
* kodón
* kotranslačná úprava
* proteosyntetický faktor
* PYLIS sekvencia
* ribozóm
* peptid
* peptidová väzba
* peptidyltransferáza
* posttranslačná úprava
* SECIS element
* stop kodón
* štart kodón
* translácia mimochromozómovej DNA
* uvoľňovací faktor

 |