**Teknologi ALECSAT** (Autologous Lymphoid Effector Cells Specific Against Tumor) adalah kaedah baru imunoterapi kanser epigenetik yang digunakan oleh syarikat CytoVac. Ia menggunakan sistem imunisasi tubuh pesakit sendiri untuk menargetkan sel-sel tumor pada kanser prostat, glioblastoma, dan barah pankreas yang berpotensi. Penyelidikan ALECSAT, yang diarahkan oleh Alexei Kirken dan Karine Dzhandzhugazyan, telah membawa kepada beberapa ujian klinikal.

Kaedah
------

Sampel darah yang mengandungi prekursor yang diperlukan untuk CD4 + sel T penolong, CD8 + sel T sitotoksik, dan sel pemusnah semula jadi (NK) diekstrak dari pesakit dan diaktifkan sebelum diberikan semula kepada pesakit untuk mendorong aktiviti anti-tumor. Sel-sel ini diaktifkan dalam proses yang disebut "in vitro imunisasi", yang memungkinkan untuk pemilihan dan pengembangan sel-T dengan kekhususan yang berbeza-beza dan telah divalidasi pada pesakit dengan kanser kulit melanoma lanjut.

Bagi memastikan pembasmian sel-sel kanser dapat dilakukan dengan berkesan, sel-sel sistem imunisasi tubuh seharusnya dapat berkumpul di organ limfoid sekunder untuk kesan jangka panjang dan menyasarkan pelbagai jenis sel tumor berbanding dengan satu sel barah yang spesifik. Dalam kaedah ALECSAT, beberapa sel yang berbeza diaktifkan untuk mencapainya. Limfosit T sitotoksik (CTL) diaktifkan untuk menyasarkan sel-sel yang menunjukkan ciri protein sel tumor Sebilangan sel tumor, bagaimanapun, tidak menunjukkan antigen kerana kekurangan histokompatibiliti utama kompleks (MHC) dan oleh itu tidak dapat dikenali oleh CTL. Sel-sel yang tidak mempunyai antigen disasarkan oleh sel NK yang diaktifkan, meninggalkan sedikit peluang untuk sel-sel kanser melarikan diri. Sel CTL dan NK adalah sel efektor sehingga sel T penolong (Th) juga disiapkan untuk membuat sel memori untuk ketahanan jangka panjang terhadap sel tumor. Sel T penolong 1 (TH1), ketika disuntik dengan antigen tumor yang terlalu banyak dinyatakan, telah terbukti meningkatkan penghijrahan sel-sel penyajian antigen (APC) ke kelenjar getah bening pada tikus, meningkatkan lagi tindak balas imun melalui pengaktifan CTL.

Antigen tumor biasanya adalah antigen kanser/testis. Pengaruh antigen ini secara kimia dalam sel-T dengan demetilasi DNA membolehkan sistem imun mengenali pelbagai jenis tumor. Kaedah pengaktifan ini dapat digunakan untuk penyediaan vaksin antitumor atau untuk pengaktifan ex-vivo sel-sel sitotoksik yang kemudian dapat diikuti dengan pengembangan sel-T melalui sel-sel dendritik yang normal dan matang. Kaedah yang terakhir digunakan untuk ALECSAT untuk merawat kanser dengan imunoterapi sel T.

Proses
------

Rujuk rajah bersebelahan untuk gambaran protokol imunisasi ALECSAT yang berlaku dalam tempoh 26 hari:

Langkah pertama ialah pengasingan darah menjadi limfosit dan monosit. Limfosit dibekukan dan monosit dibezakan menjadi sel dendritik. Selepas 6 hari, limfosit dicampurkan dengan sel dendritik dan diinkubasi selama lapan hari. Proses ini menghasilkan limfosit yang diperkaya CD4+. Selepas ini, limfosit dirawat selama tiga hari untuk mendorong ekspresi antigen CGL. Seterusnya, satu lagi limfosit beku dicampurkan dengan antigen CGL yang mengekspresikan CD4+ dan diinkubasi selama 11 hari. Selepas itu, sel dendritik ditambahkan ke limfosit untuk mendorong berlakunya percambahan limfosit. Terakhir, setelah tujuh hari kultur, sel-sel tersebut disiapkan untuk suntikan. Keseluruhan proses ini memakan masa selama 26 hari.

Protokol ALECSAT

Penyelidikan
------------

Penyelidikan mengenai pemindahan angkat pada pesakit melanoma menjadi landasan bagi syarikat yang memfokuskan pada penyelidikan pemindahan angkat pada jenis kanser lain. Penyelidikan yang dilakukan di Jabatan Biologi Sel Tumor di Copenhagen telah menunjukkan bahawa klon CTL yang menargetkan antigen yang berkaitan dengan tumor melanoma tertentu (gp100 dan MART-1) dapat berjaya berkembang biak jika garis sel melanoma dipilih dengan teliti. Di jabatan yang sama, model tetikus SCID ditunjukkan sebagai "sistem model yang sangat baik" untuk mengkaji interaksi antara tumor dan CTL. Dengan menggunakan model ini, pembasmian tumor melanoma manusia dengan menghasilkan klon CTL in vitro telah dicapai. Dalam sebuah kajian yang dijalankan di University de la Sante, pemindahan angkat sel T yang diklon dalam "imunisasi in vitro" menyebabkan peningkatan frekuensi sel T yang melawan kanser pada 18 dari 35 pesakit melanoma.

Rujukan
-------

1. ↑  "About Us". CytoVac. Diarkibkan daripada yang asal pada 8 June 2010. Dicapai pada 4 April 2013.
2. ↑  "Welcome". CytoVac. Dicapai pada 4 April 2013.
3. ↑  "Technology". CytoVac. Diarkibkan daripada yang asal pada 8 June 2010. Dicapai pada 4 April 2013.
4. ↑  .Crommelin, D. J. A; Sindelar, R. D.; Meibohm, B. (2008). *Pharmaceutical Biotechnology* (ed. 3). New York, NY: informa healthcare. m/s. 423–424.
5. ↑  Chamoto, K.; Wakita D.; Narita Y.; Zhang Y.; Noguchi D.; Ohnishi H.; Iguchi T.; Sakai T.; Ikeda H.; Nishimura T. (February 2006). "An essential role of antigen-presenting cell/T-helper type 1 cell-cell interactions in draining lymph node during complete eradication of class II-negative tumor tissue by T-helper type 1 cell therapy". *Cancer Res*. **66** (3): 1809–1817. doi:10.1158/0008-5472.CAN-05-2246. PMID 16452242.
6. ↑  DK patent 20100092498, Alexei Kirkin, Karine Dzhandzhugazyan, "Anti-Tumour Vaccine Derived from Normal Chemically Modified Cells", published 2010-04-15,  assigned to Cytovac A/S
7. ↑  Kirken, Alexei. "A new epigenetic approach to immunotherapy and its use for treatment of late stage glioblastoma and prostate cancer patients" CytoVac, Hørsholm, DK (April 10, 2013).
8. ↑  Kirken, A.F.; Thor Straten, P.; Hansen, M.R.; Barfod, A.; Dzhandzhugazyan, K.N.; Zeuthen, J. (1999). "Establishment of gp100 and MART-1/Melan-A-specific CTL clones using in vitro immunization against a preselected highly immunogenic melanoma cell clone". *Cancer Immunol*. **48** (5): 239–246. doi:10.1007/s002620050571.
9. ↑  Stenholm, A.C.O.; Kirkin, A.F.; Zeuthen, J (1998). "In vivo eradication of an established human melanoma by an in vitro generated autologous cytotoxic T cell clone: a SCID mouse model". *Int. J. Cancer*. **77** (3): 476–480. doi:10.1002/(SICI)1097-0215(19980729)77:3<476::AID-IJC27>3.0.CO;2-4. PMID 9663614.
10. ↑  Vignard, V.; Lemercier, B.; Lim, A.; Pandolfino, M.C.; Guilloux, Y.; Khammari, A.; Rabu, C.; Echasserieau, K.; Lang, F. (October 2005). "Adoptive transfer of tumor-reactive Melan-A-specific CTL clones in melanoma patients is followed by increased frequencies of additional Melan-A-specific T cells". *The Journal of Immunology*: 4797–4805.