Secuencia de recoñecemento no ADN do encima EcoRV. O encima corta en todos os puntos onde apareza esta secuencia. O punto de corte está sinalado cunha liña verde.
O encima EcoRV clivando o ADN. A proteína únese pouco firmemente ao ADN e escanéao buscando a súa secuencia de recoñecemento. Unha vez que a encontra, EcoRV retorce o ADN nun ángulo de 50° e corta a secuencia.

**EcoRV** (lido "eco erre cinco"), tamén chamado Eco32I, é un encima da clase das endonucleases de restrición de tipo II que foi illada de certas cepas da bacteria *Escherichia coli*. Corta o ADN cando atopa unha determinada secuencia de nucleótidos que recoñece.

Este encima de restrición ten un uso frecuente en bioloxía molecular. Ten a característica que crea no ADN cortado extremos romos (outros encimas de restrición crean extremos cohesivos). O encima recoñece a secuencia de ADN palindrómica de 6 bases 5'-GAT|ATC-3' e fai un corte vertical nela. A secuencia complementaria é, pois, 3'-CTA|TAG-5'. Os extremos romos poden ser ligados a un sitio de clonación tamén romo doadamente, aínda que con menor eficiencia que os extremos cohesivos.

Estrutura
---------

Resolveuse por cristalografía de raios X a estrutura deste encima, e a de varios mutantes, en complexo co ADN ao que corta.

A parte central (*core*) do encima consta dunha folla β mixta de cinco cadeas flanqueada por hélices α. Esta parte central está conservada en todos os demais encimas de restrición de tipo II. Tamén ten un subdominio de dimerización N-terminal formado por unha curta hélice α, unha folla de dúas cadeas antiparalelas, e unha longa hélice α. Este subdominio atópase só nos encimas EcoRV e PvuII.

Modo de acción
--------------

Igual que EcoRI, EcoRV forma un homodímero en solución antes de unirse e actuar sobre a súa secuencia de recoñecemento. Inicialmente, o encima únese feblemente a un sitio non específico do ADN. Desprázase aleatoriamente ao longo da molécula de ADN ata que atopa o seu sitio de recoñecemento. EcoRV ten unha alta especificidade pola súa secuencia diana no ADN.

A unión do encima induce un cambio conformacional no ADN, que se curva uns 50°. A curvatura do ADN dá lugar a que as bases non queden ben situadas unhas enriba das outras, amplía o suco menor, e comprime o suco maior. Isto fai que o enlace fosfodiéster que vai ser cortado polo encima quede máis próximo ao centro activo do encima. A clivaxe ou corte ocorre dentro da secuencia de recoñecemento, e non require a hidrólise de ATP.

EcoRV é a única endonuiclease de restrición de tipo II que se coñece que causa un cambio conformacional importante no ADN.

Usos
----

EcoRV utilízase frecuentemente para cortar e abrir plásmidos que se van usar como vectores para inserir xenes durante a clonación de xenes. O encima subminístrano moitos fabricantes e require seroalbumina bovina para funcionar axeitadamente.

Notas
-----

1. 1 2 3 4  Pingoud A, Jeltsch A (2001). "Structure and function of type II restriction endonucleases". *Nucleic Acids Research* **29** (18): 3705–3727. PMC 55916. PMID 11557805. doi:10.1093/nar/29.18.3705.
2. ↑  Bitinaite J, Wah D A, Aggarwal A K, Schildkraut I (1998). "FokI dimerization is required for DNA cleavage". *Proc Natl Acad Sci USA* **95** (18): 10570–10575. PMC 27935. PMID 9724744. doi:10.1073/pnas.95.18.10570.
3. 1 2  Zahran, M. Daidone, I. Smith, J. C. & Imhof, P. (2010). Mechanism of DNA recognition by the restriction enzyme EcoRV. Journal of molecular biology, 401(3), 415-432.

Véxase tamén
------------

### Outros artigos

* EcoRI, outra nuclease de *E. coli*.
* EcoRII, outra nuclease de *E. coli*.

|  |  |
| --- | --- |
| Control de autoridades | 
* Wd: Q589032
* MAG: 2776777567

 |