Ron DeSantis er sønn av Karen (født Rogers) og Ronald Daniel DeSantis. Han er av italiensk avstamning med tippoldemor og tippoldefar fra Italia. Tippoldefar Salvatore Storti immigrerte til USA i 1904 og bosatte seg i Pennsylvania. Tippoldemor Luigia Colucci flyttet til USA for å være sammen med sin mann i 1917. DeSantis' mor var sykepleier, og hans far installerte måleutstyr for Nielsen ratings. Hans familie flyttet til Orlando i Florida og så til Dunedin da han var seks år gammel. Hans søster Christina Marie DeSantis ble født den 5. mai 1985 i Orlando og døde pluselig i 2015 i London. Han var del av Little League-laget (baseball) fra Dunedin National, som spilte seg til 1991 Little League World Series i Williamsport i Pennsylvania.