I 1946 ble det bestemt at det skulle etableres en dukketeatersamling i l'hotel de Gadagne, og i 1950 åpnet museet dørene for første gang. Lyons egen teaterdukke Guignol var helt fra starten sentral i museumssamlingen. I 1956 ble samlingen utvidet med et stort antall unike objekter som juristen Léopold Dor hadde samlet. Fra da av rommet museet i Gadagne-anlegget over 2000 teaterfigurer, kostymer, kulisser, teatermanuskripter, plakater og mobile dukketeaterscener fra hele verden.