Bruken av ayahuasca har dype røtter i Amazonas-regionen, og det antas at den har vært benyttet av urfolk i flere tusen år. Arkeologiske funn tyder på at praksisen med å bruke ayahuasca kan dateres tilbake til minst 1000 f.Kr. Tradisjonelt har ayahuasca blitt brukt av sjamaner og healere (kalt ) i Amazonas for å helbrede, spå og kommunisere med åndeverdenen.