Som innfødt i Toscana studerte Polidori juss ved Universitetet i Pisa. Han ble sekretær for tragedieforfatteren Vittorio Alfieri i 1785 og ble hos ham i fire år. Han kom til England fra Paris i 1790 etter å ha avsluttet sin stilling hos Alfieri. Han bosatte seg i London og arbeidet som lærer i italiensk språk.