Larry Daley er en skilt far som har problemer med å holde på jobbene han forsøker seg på. Han er desperat for at sønnen Nick skal respektere ham, da Nick er i ferd med å knytte bånd med sin mer suksessrike stefar. Etter å ha fått sparken fra nok et arbeidssted, søker han på jobb ved American Museum of Natural History, og får stilling som nattevakt.