Matobo nasjonalpark har et rikt dyreliv. Det er registrert 175 fuglearter, 88 pattedyrarter, 39 slangearter og 16 fiskearter her. Parken har også definert de vestligste 100 km² som en spesiell beskyttelsessone for spissneshorn og stumpneshorn. I 2015 var arbeidet med å gjerde inn beskyttelsessonen ferdig. Stumpneshornene ble innført i 1962 fra bestander i KwaZulu-Natal i Sør-Afrika, mens spissneshornene ble hentet fra Zambezidalen på 1990-tallet. Andre pattedyr i parken inkluderer gnu, sebra, sjiraff, sabelantilope, kudu, eland, impala, vortesvin, flodhest, duiker-antilope, ellipsevannbukk, bavian og vervetape (grønnmarekatt). Av rovdyr finnes geparder, leoparder og hyener.