London Company gjorde landgang den 26. april 1607 ved den sørlige enden av munningen av bukten Chesapeake Bay og som de døpte Cape Henry, nær dagens Virginia Beach. De besluttet å flytte leiren og den 4. mai 1607 etablerte de bosetningen Jamestown ved elven James rundt 64 km oppstrøms fra munningen av Chesapeake Bay. Senere i 1607 etablerte Plymouth Company sin Popham-koloni i dagens Maine, men den ble oppgitt etter rundt et år. Ved 1609 hadde Plymouth Company blitt oppløst. Som et resultat av avviklingen ble charteret for London Company endret med en ny kongelig bevilgning som strakte seg fra «hav-til-hav» av det tidligere delte området mellom 38. og 40. breddegrad. Det ble forbedret i 1612 til også å omfatte det nye territoriet av Somers Isles, det vil si dagens Bermuda.