Utvidelsen av murene ble ledet av stormester Antonio Fluvian de Riviere som tillot at middelalderbyen Rhodos nådde det nåværende arealet på rundt 42 hektar. Den ytre muren ble ferdig mellom 1457 og 1465. De bysantinske befestningene ble revet og etterlot kun en andel av den gamle festningen som på denne tiden var kjent som Kollakhion (gresk: Κολλάκιον). Allerede i 1440 forsøkte mamelukksultanen av Egypt å erobre byen ved en beleiring som varte i førti dager før han ga opp.