Han scenedebuterte i 1941 i stykket I starten av 1970-årene opptrådte han på Broadway i en utgave av og i midten av 80-årene hadde han hovedrollen i på West End i London. venstre|miniatyr|261x261pk|Patrick Macnee og fra en scene i (1968) Han tv-debuterte i en mindre rolle den britiske tv-filmen (1946). Han hadde siden faste roller i serier som kanadiske (1952–1953) og amerikanske (1959–1961). I 1961 fikk han hovedrollen som agent John Steed i den britiske spionserien . Han hadde rollen frem til seriens slutt i 1969, men gjentok den i serien (1976–1977) og filmversjonen (1998) (kun stemme). Han hadde siden faste roller i kortlivede serier som (1982–1983), (1984), (1985–1986) og (1994). Han spilte også i drøyt 40 tv-filmer, samt noen miniserier og fjernsynsteaterstykker. Det kan nevnes at han spilte rollen som Dr. Watson tre ganger; i tv-filmene (1976) (med Roger Moore som Sherlock), (1991) (med Christopher Lee som Sherlock) og (1992) (med Christopher Lee som Sherlock). Han spilte rollen som Sherlock Holmes i tv-filmen (1993). Macnee hadde utover dette gjesteopptredener i en lang rekke serier som blant annet (2 episoder, 1959), (3 episoder, 1960–1966), (1970), (1975), (5 episoder, 1978–1979), (1984), (1984), (1988) og (2001).