I 1535 deltok «Santa Anna» i angrepet på Tunis i Nord-Afrika sammen med en krigsflåte satt sammen av 62 galeier og 150 større seilskip som fraktet 25 000 kristne soldater over havet til byen. Byen falt etter at «Santa Anna» med sin bestykning skjøt en bresje gjennom murene i La Golette-festningen, en grufull massakre som kostet 30 000 muslimske innbyggere livet. Opptil 2 000 kristne slaver ble befridd.