For å kunne delta i Eurovision Song Contest, må et land ha en allmennkringkaster med et aktivt medlemskap i Den europeiske kringkastingsunion. Et land kan også få delta gjennom en spesialinvitasjon, slik tilfellet er med Australia. I tillegg til de 42 deltakerlandene, var flere andre land inne i bildet med tanke på en deltakelse i 2016. : Den andorranske kringkasteren RTVA droppet deltakelse i 2016 grunnet økonomiske årsaker. : Den luxembourgske kringskasteren RTL Télé Lëtzebuerg valgte ikke å delta i 2016. : Landet har deltatt én gang, i 1980, og har flere ganger vurdert en ny deltakelse. 26. november 2015 ble den offisielle deltakerlisten offentliggjort, og Marokko var ikke blant deltakerne. : Den monegaskiske kringkasteren TMC informerte 21. juli 2015 at de ikke kom til å delta i 2016. : 7. oktober 2015 kunngjorde den portugisiske kringkasteren RTP at de kom til å delta i 2016. I stedet ville RTP ta ett års pause og gjennomgå hele sin utvelgelsesprosess. Portugal kom tilbake i 2017 – og vant hele konkurransen for første gang. : 22. april 2016 – bare et par uker før konkurransen – besluttet EBU å diskvalifisere Romania som følge av ubetalt gjeld gjennom flere år. Romania hadde fått tildelt startnummer 12 i den andre semifinalen og skulle ha deltatt med Ovidiu Anton og sangen «Moment of Silence». : Den slovakiske kringkasteren RTVS kunngjorde 28. september 2015 at Slovakia ikke kom til å delta i 2016. : Tyrkias allmennkringkaster Türkiye Radyo Televizyon Kurumu (TRT) kunngjorde 3. november 2015 at Tyrkia ikke kom til å delta i 2016. Tyrkia har ikke deltatt siden 2012 i protest mot det nåværende avstemningssystemet og ordningen med de fem store.