I Super Bowl XLIII var Holmes med på å sikret en NFL-rekord for Steelers med lagets sjette Super Bowl-seier etter å ha tatt imot en 6-yard touchdownpasning fra Roethlisberger med 35 sekunder igjen av kampen. Holmes tok imot totalt ni pasninger for 131 yards og en touchdown, inkludert fire for 73 yards på Steelers' kampvinnende drive. Han ble utpekt til Super Bowl MVP, den sjette wide receiveren til å vinne tittelen og den tredje receiveren fra Pittsburgh til å vinne den, etter Lynn Swann i Super Bowl X og Hines Ward i Super Bowl XL.