Holmes avsluttet college ett år tidlig og ble plukket opp i første runde (#25) av NFLs draft i 2006 av da regjerende Super Bowl XL-mestere Pittsburgh Steelers. Det var første gang siden Plaxico Burress at Steelers valgte en receiver i første runde av draftet. Steelers byttet opp med New York Giants fra #31 for å plukke opp Holmes. Holmes, som hadde brukt #4 ved Ohio State (et nummer som ikke kunne brukes av wide receivers i NFL før i 2021) ble tildelt #10, tidligere brukt av Pittsburghs kicker Roy Gerela og quarterback Kordell Stewart.