I 1480 ble Rhodos beleiret av troppene til den islamske herskeren Mehmet II, men den mektige hæren på 100 000 soldater og 170 skip ble slått tilbake av johanitterridderne og de sterke forsvarsverkene sto imot tallrike angrep. I 1481 ble øya rammet av et heftig jordskjelv som førte til stor skader på hus og festningsverker, foruten opp til kanskje 30 000 døde. Byen kunne ikke stå imot en ny osmansk beleiring, og ridderne benyttet seg av sine store finansielle ressurser og på kort tid ble de viktigste palassene i byen og forsvarsverkene gjenoppbygd. I påfølgende årene beordret stormestrene Pierre d'Aubusson, Emery d'Amboise, Fabrizio del Carretto og Philippe Villiers de l’Isle Adam stadige ombygninger av festningsverkene for å stå imot beskytning fra kanoner. For dette ble det tilkalt de beste italienske arkitekter. Blant dem var Matteo Gioeni, Basilio della Scuola, Gerolamo Bartolucci og Gabriele Tadino da Martinengo. De siste to var fortsatt tilstede på Rhodos under den siste beleiringen i 1522.