Statsminister David Cameron oppfordret velgerne til å stemme for at Storbritannia skulle forbli i EU, men regjeringspartiet De konservative bestemte seg for å være nøytralt. Partiet var splittet i saken. Ved utgangen av februar 2016 sa 134 av partiets parlamentsmedlemmer at de ville drive valgkamp for at landet skulle forbli i EU, mens 119 parlamentsmedlemmer ville drive valgkamp for at Storbritannia skulle forlate EU. Boris Johnson, ordfører i London, var blant konservative politikere som markerte standpunkt for å forlate EU.