Marcello Semeraro studerte katolsk teologi og filosofi ved Lecces presteseminar og regionalseminaret i Molfetta. Den 8. september 1971 ble han presteviet for bispedømmet Lecce. Så ble han viserektor ved regionaseminaret i Molfetta. Dessuten var han biskopsvikar fot legfolket og for bispedømmesynoden. I 1980 tok han teologisk doktorgrad ved Lateranuniversitetet i Roma. Han ble dosent ved forskjellige teologiske fakulteter og institutter og ble til sist kalt til lærestolen for ekklesiologi ved det pavelige Lateranuniversitet.