I de fleste episodene består N-lagets motstandere av en gruppe videospill-skurker, vanligvis ledet av den støyende og høylytte Mother Brain som blir ledsaget av hennes nærmeste undersåtter Aubergine Wizard. En rekke andre karakterer gjør også forskjellige opptredener, inkludert Donkey Kong, The Count fra Castlevania, og Dr. Light fra Mega Man. Karakterer fra tegneserien The Legend of Zelda gjentar også deres respektive roller, flere ganger i løpet av serien.