I denne teknikk lar man først prøven med det antistoff man vil bestemme reagere med antigenet, som er bundet på mikrotiterplatens overflate. I neste steg setter man til en . Denne er av nøyaktig samme type av antistoff, rettat mot nøyaktig samme antigen som det i prøven, men med enzym konjugert, det vil si bundet til seg. Jo mer antistoff det fantes i prøveløsningen, desto mindre plass er det nå for tracer-antistoffet å binde til antigenet på mikrotitrerplaten. Her kommer altså et større gehalt antistoffer i prøven å gi opphav til en lavere signal.