Opprinnelig skulle 43 land delta i konkurransen, noe som var jevnbyrdig med rekorden satt i 2008 og 2011. Deltakertallet sank imidlertid til 42, da Romania ble diskvalifisert 22. april 2016 som følge av rumensk fjernsyns utestående gjeld til EBU. Portugal trakk seg også fra konkurransen, mens Australia fikk delta igjen. Dette året måtte imidlertid Australia kvalifisere seg gjennom semifinalene, på lik linje med de andre deltakerne.