Floria Tosca, en kjent italiensk opera-sangerinne, mistenker at kjæresten hennes - Mario Cavaradossi - er utro mot henne. Hun følger derfor etter ham i hemmelighet til villaen hans, som ligger i utkanten av Roma. La Tosca blir lettet over å oppdage at Mario ikke er sammen med noen annen kvinne, men han møter Cesare Angelotti - som er mot det gjeldende politiske regimet i landet. Hennes lettelse blir imidlertid snart til fortvilelse når Baron Scarpia, Romas tyranniske politi-sjef, ankommer og krever at Mario skal overgi Cesare til myndighetene - under straff om tortur. Men Mario nekter å gå med på dette.