De sedative virkningene av flunitrazepam begynner å vise seg om lag 15-20 minutter etter at stoffet er inntatt. Virkningene varer typisk fra fire til seks timer etter inntak av stoffet, men i noen tilfeller er det rapportert at virkningen vedvarte 12 timer eller mer. Nyhetsoppslag har avdekket at forskere nå kan registrere flunitrazepam og beslektede forbindelser i urinen minst 5 dager etter inntak av en enkelt dose og opptil en måned i hår.