I populærmusikken er Mona Lisa blitt brukt i et utall sanger, som for eksempel: , en ballade sunget av Nat King Cole i 1950. Sangen ble skrevet av Jay Livingston og Ray Evans til filmen , og ble belønnet med en Oscar. Den ble seinere brukt i filmen fra 1986. av Elton John, på albumet fra 1972. av Willie Nelson, på albumet fra 1981. av hiphop-artisten Slick Rick, på albumet fra 1988. av den tyske elektronikagruppa Unheilig, der det antydes at smilet skyldes sangerens hånd under skjørtet hennes. av Panic! At The Disco, på albumet fra 2011.