Hans far, Isaac Cody, ble født 5. september 1811 i Toronto Township i Upper Canada, nå del av Mississauga i Ontario, rett vest for Toronto. Mary Ann Bonsell Laycock, Bills mor, ble født rundt 1817 i New Jersey, nær Philadelphia. Hun flyttet til Cincinnati i Ohio for å undervise ved en skole, og der møtte hun og giftet seg med Isaac. Hun nedstammet fra Josiah Bunting, en kveker som hadde slått seg til i Pennsylvania. Det er ikke noe kjent belegg for at Buffalo Bill ble oppdratt som kveker. I 1847 flyttet paret til Ontario og døpte i 1847 sin sønn William i Dixie Union Chapel i Peel County (nå Peel Region, som Mississauga ligger i), ikke langt fra farens families gård. De bodde i Ontario i flere år.