Gaddafi er utdannet jurist, og hun er advokat av yrke. I 2000, etter internasjonale sanksjoner ble innført mot Irak, reiste Gaddafi til Bagdad sammen med en delegasjon på 69 tjenestemenn. Kort tid før den amerikanske invasjonen av Irak i 2003, møtte hun diktator Saddam Hussein. I juli 2004 ble hun utnenvnt til en del av det juridiske forsvaret av Iraks tidligere president og diktator Saddam Hussein. Hun giftet seg med en fetter av hennes far i 2006. Aisha al-Gaddafi ble underlagt reiseforbud 26. februar 2011, etter en resolusjon fra FNs sikkerhetsråd.