Ena Ayase er den yngste av de tre søstrene i Ayase-familien. Hun er rundt ti år gammel og går på en lokal barneskole. Siden hun er yngst i familien og nærmest Yotsuba i alder, leker hun og vennen hennes Miura oftest med Yotsuba. Ena er generelt godt likt og en av seriens mest oppriktig snille figurer. Hun prøver å være miljøvennlig ved å fortelle folk om global oppvarming, begrense bruk av klimaanlegget i huset, i tillegg til å fortelle Yostuba om resirkulering. Hun er takknemlig, sindig og smart, og fungerer som en slags storesøster for Yotsuba. Dessverre ender hun opp med å fortelle Yotsuba hvite løgner for å ikke såre henne, blant annet når Yotsuba viser henne tegningene sine eller når hun får Yotsuba til å tro at vennen hennes Miura i et pappkostyme var en robot kalt Danbo. I fritiden sin tegner hun, siden hun er ganske flink til å tegne, i tillegg til at hun leker med bamsene sine. Hun er ivrig og er ikke redd for å prøve nye ting. For eksempel var hun entusiastisk da Yotsuba viste henne en stor frosk og da hun skulle sløye en levende fisk. Yotsuba kalte henne for «den lille» en gang.