Rusalkas lengsel kommer til uttrykk i «Rusalkas sang til månen», operaens mest kjente arie. Sjøen blir kaldere etterhvert som månen forsvinner og heksa kommer til syne. Rusalka ber fortvilt om å bli omskapt til et menneske. Ježibaba gjør som hun ber om og lager to bein av Rusalkas fiskehale, men krever at hun er stum når hun er blant menneskene og truer med at om hun ikke klarer å holde på sin elskede, vil prinsen dø og hun selv bli til en ond ånd som iblant kommer opp av sjøen for å lokke menn i døden. Heksa spår at hun vil vende tilbake, men Rusalka er overbevist om at kjærligheten vil overvinne all trolldomsmakt.