Universitetsområdet var opprinnelig i sentrum av Rochester i bygningen United States Hotel som lå i Buffalo Street i nærheten av Elizabeth Street som i dag er West Main Street i nærheten av overgangen I-490. I 1853 ble universitetsområdet flyttet østover til det som da var et forstadsområde og som i dag kalles University Avenue. Forretningsmannen og kongressmedlemmet Azariah Boody donerte 32 000 kvadratmeter land til det nye universitetsområdet, og universitet kjøpte ytterligere 69 000 kvadratmeter fra ham. Universitet ble på dette stedet fram til det nåværende River Campus ble bygget i 1930, og universitet eier fortsatt en liten del av universitetsområdet ved University Avenue hvor dagens universitseide kunstgalleri, Memorial Art Gallery, ligger.