Lotto gikk formodentlig i lære hos Alvise Vivarini i Venezia, selv om hans virksomme liv stort sett ble utspilt i steder utenfor Venezia, blant annet i Roma, Bergamo og Loreto. Til tross for at han i ulike perioder tok sterke inntrykk av Giovanni Bellini, Tizian og Palma Vecchio, forble Lotto en sterkt individualistisk maler.