Hans er kanskje hans beundringsverdige oversettelse av Montaignes essayer: . Den ble utgitt i folio i 1603 i tre bøker, hver bok dedikert til to adelige fruer. En andre utgave i 1613 var dedikert til dronningen. Av særlig interesse har første utgave ettersom en kopi som i dag bli oppbevart i British Library har signaturen til Shakespeare, lenge antatt å ha vært ekte, men i dag mistenkt for å være gjort langt senere på 1700-tallet. En annen kopi har signaturen til dramatikeren Ben Jonson. Det har blitt antydet av William Warburton at Shakespeare drev satire på Florio i figuren Holofernes, den pompøse pedanten i (, 1594–95), et av dramatikerens tidligste lystspill, men det er mer sannsynlig, særlig etter som han var jarlen av Southamptons protesjér, at han var blant de personlige vennene av Shakespeare som kan ha fått sin kunnskap i fransk og italiensk litteratur fra Florio.