To år senere, den 28. september 1769 giftet hun seg i Københavns slottskirke med hoffmarskalk og grand maître de garderobe Frederik Vilhelm Conrad Holck til Eckhof, både kongen og dronningen var til stede. Holck hadde arvet en god medgift etter sitt ekteskap med Christiane de Stockfleth (1751–1768), men hadde behov for økonomisk tilførsel til sin ekstravagante livsstil, og Juliane Sophie var i den sammenheng et godt parti. På bryllupsdagen ble Holck utnevnt til gehejmekonferensråd, og kongen og dronningen viste paret gunst ved å delta i søndagskonsertene hos det nygifte paret på Blågård utenfor Nørreport.