Fra 1865 var Dvořák førstebratsjist i Operaorkesteret som holdt til i det nyåpnede . Dette var det første teateret hvor nasjonalt pregede tsjekkiske operaer og skuespill kunne oppføres. Bedřich Smetana spilte en viktig rolle i dette miljøet, og fikk i 1866 oppført sine operaer («Brandenburgerne i Böhmen») og («Den solgte brud») på Interimsteateret.