Spillet basert på Super Mario Bros.. Spill-verdenen ligger i et geografisk mangfoldig land, som inkluderer fjell, skog og vann. Hver region har forskjellige egenskaper og innbyggere. Mushroom Kingdom er bebodd av Toads. Moleville er bebodd av føflekker. Monstro Town er befolket av reformerte monstre. Yo'ster Isle er bosatt av Yoshi og hans eponyme arter. Nimbus Land er et område bebodd av sky-folk. Bowser's Castle er et annet fremtredende område i spillet, og holder portalen til hoved-antagonistens hjemverden.