Matusadona nasjonalpark har et rikt dyreliv. Mange av dyrene som ble fortrengt da Karibasjøen ble fylt opp, ble omplassert i Matusadona. Av pattedyr finnes elefanter, bøfler, kudu, impala, flodhester, spissneshorn, sebraer, vortesvin, sabelantiloper, eland og roanantiloper. I 1994 ble gepard gjeninnført i parken, og bestanden har siden vokst. Andre rovdyr i parken inkluderer løver, leoparder, sjakaler, hyener, afrikasivett, afrikansk fingeroter og nilkrokodiller.