Kjersti Holmen vokste opp på Nøtterøy fra hun var fem-seks år gammel. Hun debuterte i på Oslo Nye Teater i 1980. Hun var tilknyttet Nationaltheatret fra 1981, og fast ansatt fra 1992. Hun spilte over 20 større roller på Nationaltheatret. Holmen spilte i en rekke filmer og TV-serier. Hun gjorde seg også bemerket som komiker, blant annet i revyforestillinger sammen med Hege Schøyen. Hun er også kjent for sin rolle som Emma Klinke i fra 1990.