Ørnhoft gikk ett år på Tegne- og Maleskolen ved Folkeuniversitetet i Oslo, fra 1997 til 1998, og fra 1998 til 2003 var hun elev av Jan Valentin Sæther. Ørnhoft arbeider innenfor en klassisk tradisjon og driver Senter for Frie Kunster sammen med Christopher Rådlund og Håkan Sandell. Fra 2015 har hun i sitt kunstneriske virke konsentrert seg om motiver fra det gamle Kristiania i tillegg til portrett- og utsmykningsoppdrag på kommisjon, deriblant et veggmaleri på restauranten i Oslo. Lene Ørnhoft har også fungert som gallerist for Galleri Frie Kunster siden 2004.