Tiamin absorberes i tynntarmen i en aktiv bærer-mediert absorpsjon hvor tiaminet fosforyleres. Ved stort inntak blir det også absorbert ved hjelp av passiv absorpsjon. Ved et daglig inntak lavere enn 1–2 mg vil kroppen kunne absorbere ca. 95 % av tiamin fra kostholdet. Selv om det er uvisst i hvilken grad dette kan taes opp, kan tiamin fås også fra mikrofloraen i tykktarmen. Ved inntak over 5 mg/dag, tilpasser kroppen seg og absorpsjonen av tiamin faller raskt. I leveren konverteres tiamin til sin aktive form tiamin pyrofosfat, og store deler av tiaminet i kroppen lagres i musklene og leveren.