Florio var en venn av den italienske filosofen Giordano Bruno mens han arbeidet som lærer i hjemmet for den franske ambassadøren, og var samtidig spion for dronning Elisabeths statsmann og leder av etterretningen, Francis Walsingham. Frances A. Yates har fortalt om et livlig middagsselskap i Whitehall Palace hvor Florio oversatte for det sammensatte selskapet, som omfattet blant annet en rekke professorer fra Oxford og Philip Sidney, Giordano Brunos teorier om muligheten for liv på andre planeter. Han oppholdt seg for en tid på University of Oxford hvor han møtte blant annet poeten Samuel Daniel og han kom senere til å gifte seg med dennes søster. En gang rundt 1576 ble han lærer for sønnen til Richard Barnes, biskop av Durham, før han selv studerte videre ved Magdalen College ved Oxford, dog uten å ta noen grad, men ble selv lærer i fransk og italiensk ved universitet.