ВНЕКЛЕТОЧНЫЕ МАТРИКСНЫЕ КОМПОНЕНТЫ ДЛЯ ЭКСПАНСИИ И ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ГЕПАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК-ПРЕДШЕСТВЕННИКОВ

1. Способ размножения гепатических предшественников in vitro включающий:
(a) обеспечение выделенных гепатических предшественников и
(b) культивирование выделенных гепатических предшественников на одном или больше внеклеточном матриксном компоненте, обнаруженном в компартменте стволовых клеток печени.
2. Способ по п.1, в котором внеклеточный матриксный компонент, найденный в компартменте стволовых клеток печени, выбран из группы, состоящей из коллагена III типа, коллагена IV типа, ламинина, гиалуронана или их комбинаций.
3. Способ по п.2, в котором внеклеточный матриксный компонент, найденный в компартменте стволовых клеток печени, представляет собой коллаген III типа или коллаген IV типа или комбинацию этого.
4. Способ по п.2, в котором гепатические предшественники дополнительно культивируют на внеклеточном матриксном компоненте, выбранном из группы, состоящей из коллагена III типа, основной молекулы адгезии, протеогликана (PG), гликозаминогликан гепарансульфата, эластина или комбинации этого.
5. Способ по п.4, в котором основная молекула адгезии представляет собой фибронектин.
6. Способ по п.4, в котором PG представляет собой гепарансульфат-PG, хондроитинсульфат PG или комбинацию этого.
7. Способ по п.4, в котором гликозаминогликан представляет собой гепарансульфат, гепарин, хондроитинсульфат, дерматансульфат, гиалуронаны или комбинацию этого.
8. Способ по п.2, в котором внеклеточные матриксные компоненты представляют собой коллаген III типа и ламинин.
9. Способ по п.1, в котором выделенные гепатические предшественники представляют собой гепатические стволовые клетки, выделенные гепатобласты, коммитированные гепатические предшественники или комбинацию этого.
10. Способ по п.9, в котором выделенные гепатические предшественники представляют собой выделенные гепатические стволовые клетки.
11. Способ по п.1, в котором гепатические предшественники затем культивируют в присутствии фидерных клеток.
12. Способ по п.11, в котором фидерные клетки являются эмбриональными или фетальными.
13. Способ по п.12, в котором фидерные клетки являются ангиобластами или гепатическими звездообразными клетками-предшественниками.
14. Способ по п.11, в котором фидерные клетки получают из любой ткани млекопитающих.
15. Способ по п.11, в котором фидерные клетки получают из тех же самых видов как гепатические предшественники.
16. Способ по п.1, в котором фидерные клетки являются мышиными.
17. Способ по п.16, в котором фидерные клетки являются фидерными клетками STO.
18. Способ по п.1, более того включающий бессывороточную культуральную среду.
19. Способ по п.1, в котором гепатические предшественники получены из взрослой печени.
20. Способ по п.19, в котором взрослая печень представляет собой печень взрослого человека.
2
21. Способ по п.2, в котором ламинин присутствует в концентрации от около 0,1 до около 10 мкг/см.
2
22. Способ по п.21, в котором ламинин присутствует в концентрации от около 0,5 до около 5 мкг/см.
2
23. Способ по п.22, в котором ламинин присутствует в концентрации около 0,5 мкг/см.
24. Способ по п.22, в котором ламинин присутствует в концентрации около
2
1 мкг/см.
2
25. Способ по п.2, в котором коллагены III или IV типа по отдельности присутствуют в концентрации от около 0,1 до около 15 мкг/см.
2
26. Способ по п.25, в котором коллагены III или IV типа по отдельности присутствуют в концентрации от около 0,5 до около 8 мкг/см.
2
27. Способ по п.25, в котором коллагены III или IV типа присутствуют в концентрации от около 1 до около 7 мкг/см.
28. Способ размножения гепатических предшественников, включающий:
(a) обеспечение первого слоя, содержащего первый внеклеточный матриксный компонент, обнаруженный в компартменте стволовых клеток печени;
(b) обеспечение второго слоя, содержащего второй внеклеточный матриксный компонент, обнаруженный в компартменте стволовых клеток печени; и
(c) культивирование выделенных гепатических предшественников между первым и вторым слоями.
29. Устройство для размножения гепатических предшественников, включающий:
(a) контейнер, и
(b) нерастворимый материал, содержащий, по меньшей мере, один внеклеточный матриксный компонент, обнаруженный в компартменте стволовых клеток печени;
в котором нерастворимый материал в основном покрывает, по меньшей мере, одну поверхность контейнера.
30. Контейнер по п.29, представляющий собой чашку для культуры ткани, биореактор, лабораторную клетку или лабораторный чип.