Оценка пригодности ВЭЖХ методики для анализа таблеток "Амоксициллин"

ОЦЕНКА ПРИГОДНОСТИ ВЭЖХ МЕТОДИКИ ДЛЯ АНАЛИЗА ТАБЛЕТОК «АМОКСИЦИЛЛИН»

Алтайский государственный медицинский университет, г. Барнаул Жаворонко И. Ю., Кудрикова Л. Е.

В статье представлено описание результатов оценки пригодности ВЭЖХ системы и валидации методики количественного определения амоксициллина в препарате Амоксициллин таблетки 0,25 и 0,5 г методикой проверки пригодности хроматографической системы для количественного определения амоксициллина и валидации методики количественного определения амоксициллина в препарате по характеристикам: специфичность, линейность, диапазон, правильность и прецизионность. Ключевые слова: амоксциллин, хроматография

The article describes the results of assessing the suitability of the HPLC system and the validation of the procedure for the quantitative determination of amoxicillin in the preparation Amoxicillin tablets 0.25 and 0.5 g by testing the suitability of the chromatographic system for the quantitative determination of amoxicillin and validating the procedure for quantifying amoxicillin in the preparation according to the characteristics: specificity, linearity , range, accuracy and precision.

Key words: amoxicillin, chromatography

Все лекарственные средства должны подвергаться контролю качества, т.е. установлению соответствия требованиям нормативной документации. Как на лекарственную субстанцию, так и на лекарственный препарат разрабатываются различные методики контроля качества (6). По современным требованиям все методики анализа веществ перед регистрацией лекарственного препарата должны быть валидированы, т.е. должна быть проведена оценка пригодности методики анализа для получения правильных и надежных результатов. Перед проведением валидации ВЭЖХ методики требуется провести проверку пригодности хроматографической системы.

Тест пригодности хроматографической системы позволяет установить, что разрешение и воспроизводимость хроматографической системы адекватны для выполнения анализа. При этом предполагается, что оборудование, электроника, аналитические операции и анализируемые образцы составляют единую систему, которую можно исследовать как целое. Пригодность хроматографичеческой системы характеризуется показателями: критерий разделяющей способности хроматографической системы (коэффициент разделения пиков), коэффициент асимметрии пика, критерий

воспроизводимости результатов измерений (сходимость инжекций), эффективность хроматографической колонки (4, 5).

Коэффициент разделения пиков в большей степени используется при анализе многокомпонентных лекарственных форм и при определении примесей, чтобы показать, что исследуемое вещество надежно отделяется от других компонентов. Если же анализируются однокомпонентные лекарственные формы, то важной характеристикой пригодности хроматографической системы является время удерживания. Основная цель определения времени удерживания - идентификация определяемых веществ на хроматограммах испытуемых растворов.

Коэффициент асимметрии пика необходим для методик количественного определения, особенно при наличии хвоста у пиков определяемых веществ. Если значения коэффициента асимметрии пика выходят за пределы допустимого диапазона, то практически невозможно надежно определить границы пиков и правильно измерить их площадь.

Эффективность колонки (количество теоретических тарелок) характеризуется шириной пиков на хроматограмме. Узкие пики позволяют надежно определять основное вещество в присутствии примесей и вспомогательных веществ.

Критерий воспроизводимости результатов характеризует ошибку при измерении площадей пиков, выражается величиной относительного стандартного отклонения.

Цель работы

Проверка пригодности ВЭЖХ системы и валидация методики количественного определения амоксициллина в препарате Амоксициллин таблетки 0,25 и 0,5 г. Оценка пригодности хроматографической системы для количественного определения амоксициллина, проведение валидации методики количественного определения амоксициллина в препарате Амоксициллин таблетки 0,25 и 0,5 г по характеристикам: специфичность, линейность, диапазон, правильность и прецизионность.

Материалы и методы

В качестве объекта исследования использовали препарат Амоксициллин таблетки 0,25 г и 0,5 г, стандарт амоксициллина, модельные смеси препарата и «плацебо». Исследования проводили на микроколоночном жидкостном хроматографе «Милихром» с УФ-детектором. Использовали колонку длиной 75 мм и диаметром 2 мм. В качестве адсорбента применяли ProntoSil-120-5-L18Aq. Условия хроматографирования: подвижная фаза фосфатный буферный раствор рН 5 - ацетонитрил (96:4), объем пробы 5 мкл, скорость потока 100 мкл/мин, температура 35 °С, аналитическая длина волны 230 нм, которая соответствует максимуму поглощения лекарственного препарата. Результаты обрабатывали с помощью программы «МультиХром».

Проверку пригодности хроматографической системы проводили на стандартном образце амоксициллина, проверяли соответствие полученных результатов требованиям (4, 5). Методика: навеску стандартного образца амоксициллина массой 0,03 г (т. н.) поместили в мерную колбу на 25 мл. Прибавили около 15 мл буферного раствора, тщательно перемешали до растворения порошка, довели буферным раствором до метки (3). Далее раствор центрифугировали. После этого полученный раствор хроматографировали, делая 6 параллельных определений.

Результаты и обсуждение

В результате исследования установили: колебания времени удерживания составляют 2,8%, относительное стандартное отклонение (RSD) при определении сходимости составляет 0,602%, коэффициент асимметрии пика, определенный с помощью обрабатывающей программы «МультиХром», равен 1,52, эффективность хроматографической колонки составила 3240. Полученные характеристики и критерии их приемки представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1

Определение пригодности хроматографической системы по показателю сходимость инжекции и время удерживания

№ Сходимость инжекций Параметры удерживания

Площад Результат Рекомендуем Время Результат Рекомендуем

ь пика ые значения удерживани я, мин ые значения

1 3,81

132,240 Хсреднее 130,9 ЯББ < 2,0% Хсреднее 3,9 ЯББ не более

2 130,470 71 3,86 7 10%

3 131,388 ББ=0,7886 4,01 8Б=0,1126

4 131,195 Я8Б=0,602% 4,00 Я8Б=2,8%

5 130,144 4,05

6 130,389 4,10

Таблица 2

Оценка пригодности хроматографической системы

Действующее вещество Время удерживания Коэффициент асимметрии пика, Т Сходимость инжекций Эффективность хроматографической колонки, N

Амоксициллин 2,8% 1,52 0,602% 3240

Рекомендуемые значения ЯББ не более 10% 0,75 - 2,5 ЯББ < 2,0% N > 2000

На основании полученных данных можно сделать заключение, что данная хроматографическая система может быть использована для количественного определения амоксициллина в таблетках «Амоксициллин».

Далее провели валидацию методики по показателям специфичность, линейность, диапазон, правильность, прецизионность (1). Полученные результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3

Валидационное заключение

Параметры Критерии приемлемости Результаты определения

Амоксициллин 0,25 Амоксициллин 0,5

Специфичность На хроматограмме раствора «плацебо» не должно быть пика, время удерживания которого совпадает с временем удерживания пика стандарта амоксициллина На хроматограмме раствора «плацебо» отсутствует пик, время удерживания которого совпадает с временем удерживания пика стандарта амоксициллина.

Линейность в диапазоне от 80 до 120%, коэффициент корреляции г >0,990 г =0, 9996 г =0, 9996

Правильность, доверительный интервал, % 98,0 - 102,0 % 98,50 - 99,19 100,26 - 101,33

Внутрилабораторная прецизионность, RSD% RSD < 2 % 0,779 0,603

Результаты всех валидируемых параметров соответствуют критериям приемлемости. Таким образом, методика может быть использована для количественного определения содержания амоксициллина в препарате Амоксициллин таблетки 0,25 и 0,5 г.

Выводы

1. Установлено, что предложенная хроматографическая система пригодна для анализа амоксициллина.

2. Проведена валидация методики количественного определения по характеристикам: специфичность, линейность, диапазон, правильность и прецизионность. Характеристики соответствуют критериям приемлемости.

Список литературы:

1. 0ФС.1.1.0012.15. Валидация аналитических методик. - С. 13

2. Приказ МЗ РФ № 771 от 29.10.2015 г. «Об утверждении общих фармакопейных статей и фармакопейных статей».

14

3. Проект ФС предприятия 42-0627-7488-06. Амоксициллин таблетки 0,25 и 0,5. - 9 с.

4. Эпштейн Н.А. Оценка пригодности (валидация) ВЭЖХ методик в фармацевтическом анализе // Химико-фармацевтический журнал. - 2004. -№4. - С. 40-55.

5. Эпштейн Н.А., Емшанова С.В. О требованиях к пригодности хроматографической системы при контроле качества лекарственных субстанций и препаратов методом ВЭЖХ// Химико-фармацевтический журнал. - 2008. -№ 11. - С. 34-40.

6. Кукес В.Г., Стародубцев А.К., Блинков И.Л., Сидоренкова Н.Б. и др. Клиническая фармакология и фармакотерапия: учебник для вузов / Москва, 2003.