СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ТЕРАПИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ КЛЕТОК ГЛАЗА

1. Модифицированная лимбальная стволовая клетка, которая характеризуется сниженной или устраненной экспрессией бета-2-микроглобулина (B2M) по сравнению с немодифицированной лимбальной стволовой клеткой, где экспрессия B2M снижена или устранена с помощью системы CRISPR, содержащей молекулу gRNA, содержащую нацеливающий домен, комплементарный целевой последовательности в гене B2M.
2. Модифицированная лимбальная стволовая клетка, которая характеризуется сниженной или устраненной экспрессией бета-2-микроглобулина (B2M) по сравнению с немодифицированной лимбальной стволовой клеткой, где экспрессия B2M снижена или устранена с помощью системы CRISPR, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулу gRNA, содержащую нацеливающий домен, комплементарный целевой последовательности в гене B2M.
3. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 1 или 2, где модифицированная лимбальная стволовая клетка культивировалась в среде, содержащей ингибитор киназы-супрессора крупных опухолей ("LATS"), где необязательно ингибитор LATS представляет собой соединение формулы A1,
A1
,
или его соль, где
1
2
каждый из X и X независимо представляет собой CH или N;
кольцо A представляет собой
(a) 5- или 6-членный моноциклический гетероарил, который связан с остальной частью молекулы посредством члена углеродного кольца и содержит в качестве членов кольца 1-4 гетероатома, которые независимо выбраны из N, O и S, при условии, что по меньшей мере один член гетероатомного кольца представляет собой незамещенный азот (-N=), расположенный в 3- или 4-положении относительно связывающего члена углеродного кольца 5-членного гетероарила или в пара-положении кольца 6-членного гетероарила; или
(b) 9-членный конденсированный бициклический гетероарил, который выбран из
,  ,  ,  и  ,
где "*" представляет собой точку присоединения кольца A к остальной части молекулы;
1-6
1-6
2
1-6
1-6
3-6
где кольцо А не замещено или замещено 1-2 заместителями, независимо выбранными из галогена, циано, Cалкила, Cгалогеналкила, -NH, Cалкиламино, ди-(Cалкил)амино, Cциклоалкила и фенилсульфонила;
0
1-6
R представляет собой гидроксил или Cалкокси;
1
1-6
R представляет собой водород или Cалкил;
2
R выбран из
1-8
(a) Cалкила, который не замещен или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из
(xvi) галогена;
(xvii) циано;
(xviii) оксо;
2
(xix) Cалкенила;
2
(xx) Cалкинила;
1-6
(xxi) Cгалогеналкила;
6
6
0
0
1-6
(xxii) -OR, где R выбран из водорода, Cалкила, который не замещен или замещен R или -C(O)R;
7a
7b
7a
7b
0
0
1-6
1-6
(xxiii) -NRR, где R представляет собой водород или Cалкил, и R выбран из водорода, -C(O)R, Cалкила, который не замещен или замещен -C(O)R;
8
8
0
0
1-6
(xxiv) -C(O)R, где R представляет собой R или -NH-Cалкил-C(O)R;
2
1-6
(xxv) -S(O)Cалкила;
3-6
7-10
1-6
1-6
1-6
2
1-6
1-6
0
(xxvi) моноциклического Cциклоалкила или полициклического Cциклоалкила, каждый из которых не замещен или замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из галогена, Cалкила, гидроксиCалкила, Cгалогеналкила, R, -NH, Cалкиламино и ди-(Cалкил)амино;
1-6
1-6
1-6
(xxvii) 6-членного гетероциклоалкила, содержащего в качестве членов кольца 1-2 гетероатома, независимо выбранных из N, O и S, и который не замещен или замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из гидроксила, галогена, Cалкила, Cалкиламино и ди-(Cалкил)амино;
(xxviii) фенила, который не замещен или замещен галогеном;
(xxix) 5- или 6-членного моноциклического гетероарила, содержащего в качестве членов кольца 1-4 гетероатома, независимо выбранных из N и O; и
(xxx) 9- или 10-членного конденсированного бициклического гетероарила, содержащего в качестве членов кольца 1-2 гетероатома, независимо выбранных из N и O;
2
1-6
(b) -S(O)Cалкила;
1-6
0
(c) фенила, который не замещен или замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из галогена, Cалкила и R;
3-6
1-6
1-6
1-6
1-6
0
0
0
0
(d) Cциклоалкила, который не замещен или замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из Cгалогеналкила, R, Cалкиламино, ди-(Cалкил)амино, -C(O)R и Cалкила, который не замещен или замещен R или -C(O)R; и
1-6
1-6
1-6
1-6
0
0
0
0
(e) 4-членного гетероциклоалкила, содержащего в качестве членов кольца 1-2 гетероатома, выбранных из N, O и S, и который не замещен или замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из Cгалогеналкила, R, Cалкиламино, ди-(Cалкил)амино, -C(O)R и Cалкила, который не замещен или замещен R или -C(O)R;
1
2
1
2
0
1-6
1-6
или R и R могут быть взяты вместе с атомом азота, с которым они оба связаны, с образованием 4-6-членного гетероциклоалкила, который может содержать в качестве членов кольца 1-2 дополнительных гетероатома, независимо выбранных из N, O и S, где 4-6-членный гетероциклоалкил, образованный за счет R и R, взятых вместе с атомом азота, с которым они оба связаны, не замещен или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из галогена, Cалкила, Cгалогеналкила и R;
3
1-6
R выбран из водорода, галогена и Cалкила; и
5
0
3-8
R выбран из водорода, галогена и -NH-(3-8-членный гетероалкил), где 3-8-членный гетероCалкил в -NH-(3-8-членный гетероалкил) содержит 1-2 атома кислорода в качестве членов цепи и не замещен или замещен R.
-
4. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 3, где соединение выбрано из: N-метил-2-(пиридин-4-ил)-N-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 2-метил-1-(2-метил-2-{[2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино}пропокси)пропан-2-ола; 2,4-диметил-4-{[2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино}пентан-2-ола; N-трет-бутил-2-(пиримидин-4-ил)-1,7-нафтиридин-4-амина; 2-(пиридин-4-ил)-N-[1-(трифторметил)циклобутил]пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; N-пропил-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; N-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 3-(пиридин-4-ил)-N-(1-(трифторметил)циклопропил)-2,6-нафтиридин-1-амина; 2-(3-метил-1H-пиразол-4-ил)-N-(1-метилциклопропил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 2-метил-2-{[2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино}пропан-1-ола; 2-(пиридин-4-ил)-4-(3-(трифторметил)пиперазин-1-ил)пиридо[3,4-d]пиримидина; N-циклопентил-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; Nпропил-2-(3-(трифторметил)-1H-пиразол-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; N-(2-метилциклопентил)-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 2-(3-хлорпиридин-4-ил)-N-(1,1,1-трифтор-2-метилпропан-2-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 2-(2-метил-2-{[2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино}пропокси)этан-1-ола; N-(1-метилциклопропил)-7-(пиридин-4-ил)изохинолин-5-амина; (1S,2S)-2-{[2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино}циклопентан-1-ола; N-метил-2-(пиридин-4-ил)-N-[(2S)-1,1,1-трифторпропан-2-ил]пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; N-метил-N-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; N-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 3-(пиридин-4-ил)-N-(1-(трифторметил)циклопропил)-2,6-нафтиридин-1-амина и N-метил-2-(пиридин-4-ил)-N-[(2R)-1,1,1-трифторпропан-2-ил]пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина.
5. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 3, где соединение выбрано из: 3-(пиридин-4-ил)-N-(1-(трифторметил)циклопропил)-2,6-нафтиридин-1-амина; N-(1-метилциклопропил)-7-(пиридин-4-ил)изохинолин-5-амина; 2-(пиридин-4-ил)-4-(3-(трифторметил)пиперазин-1-ил)пиридо[3,4-d]пиримидина; N-(трет-бутил)-2-(пиридин-4-ил)-1,7-нафтиридин-4-амина и N-метил-2-(пиридин-4-ил)-N-[(2S)-1,1,1-трифторпропан-2-ил]пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина.
6. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 3, где соединение выбрано из: 3-(пиридин-4-ил)-N-(1-(трифторметил)циклопропил)-2,6-нафтиридин-1-амина; N-(1-метилциклопропил)-7-(пиридин-4-ил)изохинолин-5-амина и 2-(пиридин-4-ил)-4-(3-(трифторметил)пиперазин-1-ил)пиридо[3,4-d]пиримидина.
7. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 3, где соединение выбрано из: N-(трет-бутил)-2-(пиридин-4-ил)-1,7-нафтиридин-4-амина и N-метил-2-(пиридин-4-ил)-N-[(2S)-1,1,1-трифторпропан-2-ил]пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина.
8. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 3, где соединение представляет собой N-(трет-бутил)-2-(пиридин-4-ил)-1,7-нафтиридин-4-амин.
9. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по любому из пп. 3-8, где соединение присутствует в концентрации, составляющей 3-10 микромоль/литр.
10. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по любому из пп. 1-9, где нацеливающий домен молекулы gRNA комплементарен последовательности в пределах геномной области, выбранной из: chr15:44711469-44711494, chr15:44711472-44711497, chr15:44711483-44711508, chr15:44711486-44711511, chr15:44711487-44711512, chr15:44711512-44711537, chr15:44711513-44711538, chr15:44711534-44711559, chr15:44711568-44711593, chr15:44711573-44711598, chr15:44711576-44711601, chr15:44711466-44711491, chr15:44711522-44711547, chr15:44711544-44711569, chr15:44711559-44711584, chr15:44711565-44711590, chr15:44711599-44711624, chr15:44711611-44711636, chr15:44715412-44715437, chr15:44715440-44715465, chr15:44715473-44715498, chr15:44715474-44715499, chr15:44715515-44715540, chr15:44715535-44715560, chr15:44715562-44715587, chr15:44715567-44715592, chr15:44715672-44715697, chr15:44715673-44715698, chr15:44715674-44715699, chr15:44715410-44715435, chr15:44715411-44715436, chr15:44715419-44715444, chr15:44715430-44715455, chr15:44715457-44715482, chr15:44715483-44715508, chr15:44715511-44715536, chr15:44715515-44715540, chr15:44715629-44715654, chr15:44715630-44715655, chr15:44715631-44715656, chr15:44715632-44715657, chr15:44715653-44715678, chr15:44715657-44715682, chr15:44715666-44715691, chr15:44715685-44715710, chr15:44715686-44715711, chr15:44716326-44716351, chr15:44716329-44716354, chr15:44716313-44716338, chr15:44717599-44717624, chr15:44717604-44717629, chr15:44717681-44717706, chr15:44717682-44717707, chr15:44717702-44717727, chr15:44717764-44717789, chr15:44717776-44717801, chr15:44717786-44717811, chr15:44717789-44717814, chr15:44717790-44717815, chr15:44717794-44717819, chr15:44717805-44717830, chr15:44717808-44717833, chr15:44717809-44717834, chr15:44717810-44717835, chr15:44717846-44717871, chr15:44717945-44717970, chr15:44717946-44717971, chr15:44717947-44717972, chr15:44717948-44717973, chr15:44717973-44717998, chr15:44717981-44718006, chr15:44718056-44718081, chr15:44718061-44718086, chr15:44718067-44718092, chr15:44718076-44718101, chr15:44717589-44717614, chr15:44717620-44717645, chr15:44717642-44717667, chr15:44717771-44717796, chr15:44717800-44717825, chr15:44717859-44717884, chr15:44717947-44717972, chr15:44718119-44718144, chr15:44711563-44711585, chr15:44715428-44715450, chr15:44715509-44715531, chr15:44715513-44715535, chr15:44715417-44715439, chr15:44711540-44711562, chr15:44711574-44711596, chr15:44711597-44711619, chr15:44715446-44715468, chr15:44715651-44715673, chr15:44713812-44713834, chr15:44711579-44711601, chr15:44711542-44711564, chr15:44711557-44711579, chr15:44711609-44711631, chr15:44715678-44715700, chr15:44715683-44715705, chr15:44715684-44715706, chr15:44715480-44715502.
11. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 10, где нацеливающий домен молекулы gRNA комплементарен последовательности в пределах геномной области, выбранной из: chr15:44715513-44715535, chr15:44711542-44711564, chr15:44711563-44711585, chr15:44715683-44715705, chr15:44711597-44711619, или chr15:44715446-44715468.
12. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 10, где нацеливающий домен молекулы gRNA комплементарен последовательности в пределах геномной области chr15:44711563-44711585.
13. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по любому из пп. 1-9, где нацеливающий домен молекулы gRNA, обеспечивающий нацеливание на B2M, предусматривает нацеливающий домен, содержащий последовательность под любым из SEQ ID NO: 23-105, или 108-119, или 134-140.
14. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 13, где нацеливающий домен молекулы gRNA, обеспечивающий нацеливание на B2M, предусматривает нацеливающий домен, содержащий последовательность под любым из SEQ ID NO: 108, 111, 115, 116, 134 или 138.
15. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 13, где нацеливающий домен молекулы gRNA, обеспечивающий нацеливание на B2M, предусматривает нацеливающий домен, содержащий последовательность под SEQ ID NO: 108.
16. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 13, где нацеливающий домен молекулы gRNA, обеспечивающий нацеливание на B2M, предусматривает нацеливающий домен, содержащий последовательность под SEQ ID NO: 115.
17. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 13, где нацеливающий домен молекулы gRNA, обеспечивающий нацеливание на B2M, предусматривает нацеливающий домен, содержащий последовательность под SEQ ID NO: 116.
18. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по любому из пп. 1-9, где gRNA содержит последовательность под любым из SEQ ID NO: 120, 160-177.
19. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 18, где gRNA содержит последовательность под любым из SEQ ID NO: 120, 162, 166, 167, 171 и 175.
20. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 18, где gRNA содержит последовательность под SEQ ID NO: 120.
21. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 18, где gRNA содержит последовательность под SEQ ID NO: 166.
22. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 18, где gRNA содержит последовательность под SEQ ID NO: 167.
23. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по пп. 1-22, где система CRISPR представляет собой систему CRISPR с Cas9 из S. pyogenes.
24. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 23, где система CRISPR содержит молекулу Cas9, содержащую SEQ ID NO: 106, или 107, или любую из SEQ ID NO: 124-134.
25. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 23, где система CRISPR содержит молекулу Cas9, содержащую SEQ ID NO: 106 или 107.
26. Модифицированная лимбальная стволовая клетка, содержащая геном, в котором ген микроглобулина b2 (B2M) на хромосоме 15 был отредактирован
(а) с удалением непрерывного участка геномной ДНК, содержащего последовательность под любым из SEQ ID NO: 141-159, с устранением таким образом поверхностной экспрессии молекул MHC класса I в клетке, или
(b) с образованием вставки/делеции в целевой последовательности, комплементарной нацеливающему домену молекулы gRNA, содержащей последовательность под любым из SEQ ID NO: 23-105 или 108-119, или 134-140, или рядом с ней, с устранением таким образом поверхностной экспрессии молекул MHC класса I в клетке.
27. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 26, содержащая геном, в котором ген микроглобулина b2 (B2M) на хромосоме 15 был отредактирован:
(а) с удалением непрерывного участка геномной ДНК, содержащего последовательность под любым из SEQ ID NO: 141, 148 или 149, с устранением таким образом поверхностной экспрессии молекул MHC класса I в клетке, или
(b) с образованием вставки/делеции в целевой последовательности, комплементарной нацеливающему домену, относящемуся к домену молекулы gRNA, содержащему последовательность под любым из SEQ ID NO: 108, 111, 115, 116, 134 или 138, или рядом с ней, с устранением таким образом поверхностной экспрессии молекул MHC класса I в клетке.
28. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 26, содержащая геном, в котором ген микроглобулина b2 (B2M) на хромосоме 15 был:
(а) отредактирован с удалением непрерывного участка геномной ДНК, содержащего последовательность под SEQ ID NO: 141, с устранением таким образом поверхностной экспрессии молекул MHC класса I в клетке, или
(b) отредактирован с образованием вставки/делеции в целевой последовательности, комплементарной нацеливающему домену, относящемуся к домену молекулы gRNA, содержащему последовательность под любым из SEQ ID NO: 108, или рядом с ней, с устранением таким образом поверхностной экспрессии молекул MHC класса I в клетке.
29. Модифицированная лимбальная стволовая клетка, содержащая геном, в котором ген микроглобулина b2 (B2M) на хромосоме 15 был отредактирован:
(а) с удалением непрерывного участка области геномной ДНК, выбранной из любой из chr15:44711469-44711494, chr15:44711472-44711497, chr15:44711483-44711508, chr15:44711486-44711511, chr15:44711487-44711512, chr15:44711512-44711537, chr15:44711513-44711538, chr15:44711534-44711559, chr15:44711568-44711593, chr15:44711573-44711598, chr15:44711576-44711601, chr15:44711466-44711491, chr15:44711522-44711547, chr15:44711544-44711569, chr15:44711559-44711584, chr15:44711565-44711590, chr15:44711599-44711624, chr15:44711611-44711636, chr15:44715412-44715437, chr15:44715440-44715465, chr15:44715473-44715498, chr15:44715474-44715499, chr15:44715515-44715540, chr15:44715535-44715560, chr15:44715562-44715587, chr15:44715567-44715592, chr15:44715672-44715697, chr15:44715673-44715698, chr15:44715674-44715699, chr15:44715410-44715435, chr15:44715411-44715436, chr15:44715419-44715444, chr15:44715430-44715455, chr15:44715457-44715482, chr15:44715483-44715508, chr15:44715511-44715536, chr15:44715515-44715540, chr15:44715629-44715654, chr15:44715630-44715655, chr15:44715631-44715656, chr15:44715632-44715657, chr15:44715653-44715678, chr15:44715657-44715682, chr15:44715666-44715691, chr15:44715685-44715710, chr15:44715686-44715711, chr15:44716326-44716351, chr15:44716329-44716354, chr15:44716313-44716338, chr15:44717599-44717624, chr15:44717604-44717629, chr15:44717681-44717706, chr15:44717682-44717707, chr15:44717702-44717727, chr15:44717764-44717789, chr15:44717776-44717801, chr15:44717786-44717811, chr15:44717789-44717814, chr15:44717790-44717815, chr15:44717794-44717819, chr15:44717805-44717830, chr15:44717808-44717833, chr15:44717809-44717834, chr15:44717810-44717835, chr15:44717846-44717871, chr15:44717945-44717970, chr15:44717946-44717971, chr15:44717947-44717972, chr15:44717948-44717973, chr15:44717973-44717998, chr15:44717981-44718006, chr15:44718056-44718081, chr15:44718061-44718086, chr15:44718067-44718092, chr15:44718076-44718101, chr15:44717589-44717614, chr15:44717620-44717645, chr15:44717642-44717667, chr15:44717771-44717796, chr15:44717800-44717825, chr15:44717859-44717884, chr15:44717947-44717972, chr15:44718119-44718144, chr15:44711563-44711585, chr15:44715428-44715450, chr15:44715509-44715531, chr15:44715513-44715535, chr15:44715417-44715439, chr15:44711540-44711562, chr15:44711574-44711596, chr15:44711597-44711619, chr15:44715446-44715468, chr15:44715651-44715673, chr15:44713812-44713834, chr15:44711579-44711601, chr15:44711542-44711564, chr15:44711557-44711579, chr15:44711609-44711631, chr15:44715678-44715700, chr15:44715683-44715705, chr15:44715684-44715706, chr15:44715480-44715502,, с устранением таким образом поверхностной экспрессии молекул MHC класса I в клетке, или
(b) с образованием вставки/делеции в области геномной ДНК, выбранной из любой из chr15:44711469-44711494, chr15:44711472-44711497, chr15:44711483-44711508, chr15:44711486-44711511, chr15:44711487-44711512, chr15:44711512-44711537, chr15:44711513-44711538, chr15:44711534-44711559, chr15:44711568-44711593, chr15:44711573-44711598, chr15:44711576-44711601, chr15:44711466-44711491, chr15:44711522-44711547, chr15:44711544-44711569, chr15:44711559-44711584, chr15:44711565-44711590, chr15:44711599-44711624, chr15:44711611-44711636, chr15:44715412-44715437, chr15:44715440-44715465, chr15:44715473-44715498, chr15:44715474-44715499, chr15:44715515-44715540, chr15:44715535-44715560, chr15:44715562-44715587, chr15:44715567-44715592, chr15:44715672-44715697, chr15:44715673-44715698, chr15:44715674-44715699, chr15:44715410-44715435, chr15:44715411-44715436, chr15:44715419-44715444, chr15:44715430-44715455, chr15:44715457-44715482, chr15:44715483-44715508, chr15:44715511-44715536, chr15:44715515-44715540, chr15:44715629-44715654, chr15:44715630-44715655, chr15:44715631-44715656, chr15:44715632-44715657, chr15:44715653-44715678, chr15:44715657-44715682, chr15:44715666-44715691, chr15:44715685-44715710, chr15:44715686-44715711, chr15:44716326-44716351, chr15:44716329-44716354, chr15:44716313-44716338, chr15:44717599-44717624, chr15:44717604-44717629, chr15:44717681-44717706, chr15:44717682-44717707, chr15:44717702-44717727, chr15:44717764-44717789, chr15:44717776-44717801, chr15:44717786-44717811, chr15:44717789-44717814, chr15:44717790-44717815, chr15:44717794-44717819, chr15:44717805-44717830, chr15:44717808-44717833, chr15:44717809-44717834, chr15:44717810-44717835, chr15:44717846-44717871, chr15:44717945-44717970, chr15:44717946-44717971, chr15:44717947-44717972, chr15:44717948-44717973, chr15:44717973-44717998, chr15:44717981-44718006, chr15:44718056-44718081, chr15:44718061-44718086, chr15:44718067-44718092, chr15:44718076-44718101, chr15:44717589-44717614, chr15:44717620-44717645, chr15:44717642-44717667, chr15:44717771-44717796, chr15:44717800-44717825, chr15:44717859-44717884, chr15:44717947-44717972, chr15:44718119-44718144, chr15:44711563-44711585, chr15:44715428-44715450, chr15:44715509-44715531, chr15:44715513-44715535, chr15:44715417-44715439, chr15:44711540-44711562, chr15:44711574-44711596, chr15:44711597-44711619, chr15:44715446-44715468, chr15:44715651-44715673, chr15:44713812-44713834, chr15:44711579-44711601, chr15:44711542-44711564, chr15:44711557-44711579, chr15:44711609-44711631, chr15:44715678-44715700, chr15:44715683-44715705, chr15:44715684-44715706, chr15:44715480-44715502,, или рядом с ней, с устранением таким образом поверхностной экспрессии молекул MHC класса I в клетке.
30. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 29, содержащая геном, в котором ген микроглобулина b2 (B2M) на хромосоме 15 был отредактирован:
(a) с удалением непрерывного участка области геномной ДНК, выбранной из chr15:44715513-44715535, chr15:44711542-44711564, chr15:44711563-44711585, chr15:44715683-44715705, chr15:44711597-44711619 или chr15:44715446-44715468, или
(b) с образованием вставки/делеции в области геномной ДНК, выбранной из любой из chr15:44715513-44715535, chr15:44711542-44711564, chr15:44711563-44711585, chr15:44715683-44715705, chr15:44711597-44711619 или chr15:44715446-44715468, или рядом с ней.
31. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 28, содержащая геном, в котором ген микроглобулина b2 (B2M) на хромосоме 15 был отредактирован:
(а) с удалением непрерывного участка области геномной ДНК chr15:44711563-44711585, с устранением таким образом поверхностной экспрессии молекул MHC класса I в клетке, или:
(b) с образованием вставки/делеции в области геномной ДНК или рядом с ней, с устранением таким образом поверхностной экспрессии молекул MHC класса I в клетке.
32. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по любому из предыдущих пунктов, где модифицированная лимбальная стволовая клетка содержит вставку/делецию, образованную в целевой последовательности, комплементарной нацеливающему домену молекулы gRNA, или рядом с ней.
33. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по любому из пп. 26(b), 27(b), 28(b), 29(b), 30(b) и 31(b) или 32, где вставка/делеция включает делецию 10 или более 10 нуклеотидов, необязательно 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 или 35 нуклеотидов.
34. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по любому из пп. 26-33, где модифицированная лимбальная стволовая клетка культивировалась в среде, содержащей ингибитор киназы-супрессора крупных опухолей ("LATS"), где необязательно ингибитор LATS представляет собой соединение формулы A1,
A1
,
или его соль, где
1
2
каждый из X и X независимо представляет собой CH или N;
кольцо A представляет собой
(a) 5- или 6-членный моноциклический гетероарил, который связан с остальной частью молекулы посредством члена углеродного кольца и содержит в качестве членов кольца 1-4 гетероатома, которые независимо выбраны из N, O и S, при условии, что по меньшей мере один член гетероатомного кольца представляет собой незамещенный азот (-N=), расположенный в 3- или 4-положении относительно связывающего члена углеродного кольца 5-членного гетероарила или в пара-положении кольца 6-членного гетероарила; или
(b) 9-членный конденсированный бициклический гетероарил, который выбран из
,  ,  ,  и  ,
где "*" представляет собой точку присоединения кольца A к остальной части молекулы;
1-6
1-6
2
1-6
1-6
3-6
где кольцо А не замещено или замещено 1-2 заместителями, независимо выбранными из галогена, циано, Cалкила, Cгалогеналкила, -NH, Cалкиламино, ди-(Cалкил)амино, Cциклоалкила и фенилсульфонила;
0
1-6
R представляет собой гидроксил или Cалкокси;
1
1-6
R представляет собой водород или Cалкил;
2
R выбран из
1-8
(a) Cалкила, который не замещен или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из
(xvi) галогена;
(xvii) циано;
(xviii) оксо;
2
(xix) Cалкенила;
2
(xx) Cалкинила;
1-6
(xxi) Cгалогеналкила;
6
6
0
0
1-6
(xxii) -OR, где R выбран из водорода, Cалкила, который не замещен или замещен R или -C(O)R;
7a
7b
7a
7b
0
0
1-6
1-6
(xxiii) -NRR, где R представляет собой водород или Cалкил, и R выбран из водорода, -C(O)R, Cалкила, который не замещен или замещен -C(O)R;
8
8
0
0
1-6
(xxiv) -C(O)R, где R представляет собой R или -NH-Cалкил-C(O)R;
2
1-6
(xxv) -S(O)Cалкила;
3-6
7-10
1-6
1-6
1-6
2
1-6
1-6
0
(xxvi) моноциклического Cциклоалкила или полициклического Cциклоалкила, каждый из которых не замещен или замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из галогена, Cалкила, гидроксиCалкила, Cгалогеналкила, R, -NH, Cалкиламино и ди-(Cалкил)амино;
1-6
1-6
1-6
(xxvii) 6-членного гетероциклоалкила, содержащего в качестве членов кольца 1-2 гетероатома, независимо выбранных из N, O и S, и который не замещен или замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из гидроксила, галогена, Cалкила, Cалкиламино и ди-(Cалкил)амино;
(xxviii) фенила, который не замещен или замещен галогеном;
(xxix) 5- или 6-членного моноциклического гетероарила, содержащего в качестве членов кольца 1-4 гетероатома, независимо выбранных из N и O; и
(xxx) 9- или 10-членного конденсированного бициклического гетероарила, содержащего в качестве членов кольца 1-2 гетероатома, независимо выбранных из N и O;
2
1-6
(b) -S(O)Cалкила;
1-6
0
(c) фенила, который не замещен или замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из галогена, Cалкила и R;
3-6
1-6
1-6
1-6
1-6
0
0
0
0
(d) Cциклоалкила, который не замещен или замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из Cгалогеналкила, R, Cалкиламино, ди-(Cалкил)амино, -C(O)R и Cалкила, который не замещен или замещен R или -C(O)R; и
1-6
1-6
1-6
1-6
0
0
0
0
(e) 4-членного гетероциклоалкила, содержащего в качестве членов кольца 1-2 гетероатома, выбранных из N, O и S, и который не замещен или замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из Cгалогеналкила, R, Cалкиламино, ди-(Cалкил)амино, -C(O)R и Cалкила, который не замещен или замещен R или -C(O)R;
1
2
1
2
0
1-6
1-6
или R и R могут быть взяты вместе с атомом азота, с которым они оба связаны, с образованием 4-6-членного гетероциклоалкила, который может содержать в качестве членов кольца 1-2 дополнительных гетероатома, независимо выбранных из N, O и S, где 4-6-членный гетероциклоалкил, образованный за счет R и R, взятых вместе с атомом азота, с которым они оба связаны, не замещен или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из галогена, Cалкила, Cгалогеналкила и R;
3
1-6
R выбран из водорода, галогена и Cалкила; и
5
0
3-8
R выбран из водорода, галогена и -NH-(3-8-членный гетероалкил), где 3-8-членный гетероCалкил в -NH-(3-8-членный гетероалкил) содержит 1-2 атома кислорода в качестве членов цепи и не замещен или замещен R.
-
35. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 34, где соединение выбрано из: N-метил-2-(пиридин-4-ил)-N-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 2-метил-1-(2-метил-2-{[2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино}пропокси)пропан-2-ола; 2,4-диметил-4-{[2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино}пентан-2-ола; N-трет-бутил-2-(пиримидин-4-ил)-1,7-нафтиридин-4-амина; 2-(пиридин-4-ил)-N-[1-(трифторметил)циклобутил]пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; N-пропил-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; N-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 3-(пиридин-4-ил)-N-(1-(трифторметил)циклопропил)-2,6-нафтиридин-1-амина; 2-(3-метил-1H-пиразол-4-ил)-N-(1-метилциклопропил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 2-метил-2-{[2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино}пропан-1-ола; 2-(пиридин-4-ил)-4-(3-(трифторметил)пиперазин-1-ил)пиридо[3,4-d]пиримидина; N-циклопентил-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; Nпропил-2-(3-(трифторметил)-1H-пиразол-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; N-(2-метилциклопентил)-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 2-(3-хлорпиридин-4-ил)-N-(1,1,1-трифтор-2-метилпропан-2-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 2-(2-метил-2-{[2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино}пропокси)этан-1-ола; N-(1-метилциклопропил)-7-(пиридин-4-ил)изохинолин-5-амина; (1S,2S)-2-{[2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино}циклопентан-1-ола; N-метил-2-(пиридин-4-ил)-N-[(2S)-1,1,1-трифторпропан-2-ил]пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; N-метил-N-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; N-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 3-(пиридин-4-ил)-N-(1-(трифторметил)циклопропил)-2,6-нафтиридин-1-амина и N-метил-2-(пиридин-4-ил)-N-[(2R)-1,1,1-трифторпропан-2-ил]пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина.
36. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 34, где соединение выбрано из: 3-(пиридин-4-ил)-N-(1-(трифторметил)циклопропил)-2,6-нафтиридин-1-амина; N-(1-метилциклопропил)-7-(пиридин-4-ил)изохинолин-5-амина; 2-(пиридин-4-ил)-4-(3-(трифторметил)пиперазин-1-ил)пиридо[3,4-d]пиримидина; N-(трет-бутил)-2-(пиридин-4-ил)-1,7-нафтиридин-4-амина и N-метил-2-(пиридин-4-ил)-N-[(2S)-1,1,1-трифторпропан-2-ил]пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина.
37. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 34, где соединение выбрано из: 3-(пиридин-4-ил)-N-(1-(трифторметил)циклопропил)-2,6-нафтиридин-1-амина; N-(1-метилциклопропил)-7-(пиридин-4-ил)изохинолин-5-амина и 2-(пиридин-4-ил)-4-(3-(трифторметил)пиперазин-1-ил)пиридо[3,4-d]пиримидина.
38. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 34, где соединение выбрано из: N-(трет-бутил)-2-(пиридин-4-ил)-1,7-нафтиридин-4-амина и N-метил-2-(пиридин-4-ил)-N-[(2S)-1,1,1-трифторпропан-2-ил]пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина.
39. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по п. 34, где соединение представляет собой N-(трет-бутил)-2-(пиридин-4-ил)-1,7-нафтиридин-4-амин.
40. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по любому из пп. 34-39, где соединение присутствует в концентрации, составляющей 3-10 микромоль/литр.
41. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по любому из пп. 1-40, где клетка является аутологичной по отношению к пациенту, которому будет вводиться указанная клетка.
42. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по любому из пп. 1-40, где клетка является аллогенной по отношению к пациенту, которому будет вводиться указанная клетка.
43. Способ получения модифицированной лимбальной стволовой клетки или популяции модифицированных лимбальных стволовых клеток для терапии с применением клеток глаза, включающий:
а) модификацию лимбальной стволовой клетки или популяции лимбальных стволовых клеток посредством снижения или устранения экспрессии B2M, предусматривающую введение в лимбальную стволовую клетку или популяцию лимбальных стволовых клеток системы CRISPR, содержащей молекулу gRNA с нацеливающим доменом,
(i) содержащим последовательность под любым из SEQ ID NO: 23-105, или 108-119, или 134-140, или
(ii) комплементарным последовательности в пределах геномной области, выбранной из chr15:44711469-44711494, chr15:44711472-44711497, chr15:44711483-44711508, chr15:44711486-44711511, chr15:44711487-44711512, chr15:44711512-44711537, chr15:44711513-44711538, chr15:44711534-44711559, chr15:44711568-44711593, chr15:44711573-44711598, chr15:44711576-44711601, chr15:44711466-44711491, chr15:44711522-44711547, chr15:44711544-44711569, chr15:44711559-44711584, chr15:44711565-44711590, chr15:44711599-44711624, chr15:44711611-44711636, chr15:44715412-44715437, chr15:44715440-44715465, chr15:44715473-44715498, chr15:44715474-44715499, chr15:44715515-44715540, chr15:44715535-44715560, chr15:44715562-44715587, chr15:44715567-44715592, chr15:44715672-44715697, chr15:44715673-44715698, chr15:44715674-44715699, chr15:44715410-44715435, chr15:44715411-44715436, chr15:44715419-44715444, chr15:44715430-44715455, chr15:44715457-44715482, chr15:44715483-44715508, chr15:44715511-44715536, chr15:44715515-44715540, chr15:44715629-44715654, chr15:44715630-44715655, chr15:44715631-44715656, chr15:44715632-44715657, chr15:44715653-44715678, chr15:44715657-44715682, chr15:44715666-44715691, chr15:44715685-44715710, chr15:44715686-44715711, chr15:44716326-44716351, chr15:44716329-44716354, chr15:44716313-44716338, chr15:44717599-44717624, chr15:44717604-44717629, chr15:44717681-44717706, chr15:44717682-44717707, chr15:44717702-44717727, chr15:44717764-44717789, chr15:44717776-44717801, chr15:44717786-44717811, chr15:44717789-44717814, chr15:44717790-44717815, chr15:44717794-44717819, chr15:44717805-44717830, chr15:44717808-44717833, chr15:44717809-44717834, chr15:44717810-44717835, chr15:44717846-44717871, chr15:44717945-44717970, chr15:44717946-44717971, chr15:44717947-44717972, chr15:44717948-44717973, chr15:44717973-44717998, chr15:44717981-44718006, chr15:44718056-44718081, chr15:44718061-44718086, chr15:44718067-44718092, chr15:44718076-44718101, chr15:44717589-44717614, chr15:44717620-44717645, chr15:44717642-44717667, chr15:44717771-44717796, chr15:44717800-44717825, chr15:44717859-44717884, chr15:44717947-44717972, chr15:44718119-44718144, chr15:44711563-44711585, chr15:44715428-44715450, chr15:44715509-44715531, chr15:44715513-44715535, chr15:44715417-44715439, chr15:44711540-44711562, chr15:44711574-44711596, chr15:44711597-44711619, chr15:44715446-44715468, chr15:44715651-44715673, chr15:44713812-44713834, chr15:44711579-44711601, chr15:44711542-44711564, chr15:44711557-44711579, chr15:44711609-44711631, chr15:44715678-44715700, chr15:44715683-44715705, chr15:44715684-44715706, chr15:44715480-44715502,
где лимбальную стволовую клетку или популяцию лимбальных стволовых клеток необязательно культивировали в присутствии ингибитора LATS; и
b) дополнительное размножение модифицированной лимбальной стволовой клетки или популяции модифицированных лимбальных стволовых клеток в среде для культивирования клеток, содержащей ингибитор LATS; и
c) необязательно обогащение популяции лимбальных стволовых клеток лимбальными стволовыми клетками, характеризующимися сниженной или устраненной экспрессией B2M, посредством сортировки клеток с активированной флуоресценцией (FACS) или магнитно-активированной сортировки клеток (MACS).
44. Способ по п. 43, где ингибитор LATS представляет собой соединение формулы A1,
A1
,
или его соль, где
1
2
каждый из X и X независимо представляет собой CH или N;
кольцо A представляет собой
(a) 5- или 6-членный моноциклический гетероарил, который связан с остальной частью молекулы посредством члена углеродного кольца и содержит в качестве членов кольца 1-4 гетероатома, которые независимо выбраны из N, O и S, при условии, что по меньшей мере один член гетероатомного кольца представляет собой незамещенный азот (-N=), расположенный в 3- или 4-положении относительно связывающего члена углеродного кольца 5-членного гетероарила или в пара-положении кольца 6-членного гетероарила; или
(b) 9-членный конденсированный бициклический гетероарил, который выбран из
,  ,  ,  и  ,
где "*" представляет собой точку присоединения кольца A к остальной части молекулы;
1-6
1-6
2
1-6
1-6
3-6
где кольцо А не замещено или замещено 1-2 заместителями, независимо выбранными из галогена, циано, Cалкила, Cгалогеналкила, -NH, Cалкиламино, ди-(Cалкил)амино, Cциклоалкила и фенилсульфонила;
0
1-6
R представляет собой гидроксил или Cалкокси;
1
1-6
R представляет собой водород или Cалкил;
2
R выбран из
1-8
(a) Cалкила, который не замещен или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из
(xvi) галогена;
(xvii) циано;
(xviii) оксо;
2
(xix) Cалкенила;
2
(xx) Cалкинила;
1-6
(xxi) Cгалогеналкила;
6
6
0
0
1-6
(xxii) -OR, где R выбран из водорода, Cалкила, который не замещен или замещен R или -C(O)R;
7a
7b
7a
7b
0
0
1-6
1-6
(xxiii) -NRR, где R представляет собой водород или Cалкил, и R выбран из водорода, -C(O)R, Cалкила, который не замещен или замещен -C(O)R;
8
8
0
0
1-6
(xxiv) -C(O)R, где R представляет собой R или -NH-Cалкил-C(O)R;
2
1-6
(xxv) -S(O)Cалкила;
3-6
7-10
1-6
1-6
1-6
2
1-6
1-6
0
(xxvi) моноциклического Cциклоалкила или полициклического Cциклоалкила, каждый из которых не замещен или замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из галогена, Cалкила, гидроксиCалкила, Cгалогеналкила, R, -NH, Cалкиламино и ди-(Cалкил)амино;
1-6
1-6
1-6
(xxvii) 6-членного гетероциклоалкила, содержащего в качестве членов кольца 1-2 гетероатома, независимо выбранных из N, O и S, и который не замещен или замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из гидроксила, галогена, Cалкила, Cалкиламино и ди-(Cалкил)амино;
(xxviii) фенила, который не замещен или замещен галогеном;
(xxix) 5- или 6-членного моноциклического гетероарила, содержащего в качестве членов кольца 1-4 гетероатома, независимо выбранных из N и O; и
(xxx) 9- или 10-членного конденсированного бициклического гетероарила, содержащего в качестве членов кольца 1-2 гетероатома, независимо выбранных из N и O;
2
1-6
(b) -S(O)Cалкила;
1-6
0
(c) фенила, который не замещен или замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из галогена, Cалкила и R;
3-6
1-6
1-6
1-6
1-6
0
0
0
0
(d) Cциклоалкила, который не замещен или замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из Cгалогеналкила, R, Cалкиламино, ди-(Cалкил)амино, -C(O)R и Cалкила, который не замещен или замещен R или -C(O)R; и
1-6
1-6
1-6
1-6
0
0
0
0
(e) 4-членного гетероциклоалкила, содержащего в качестве членов кольца 1-2 гетероатома, выбранных из N, O и S, и который не замещен или замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из Cгалогеналкила, R, Cалкиламино, ди-(Cалкил)амино, -C(O)R и Cалкила, который не замещен или замещен R или -C(O)R;
1
2
1
2
0
1-6
1-6
или R и R могут быть взяты вместе с атомом азота, с которым они оба связаны, с образованием 4-6-членного гетероциклоалкила, который может содержать в качестве членов кольца 1-2 дополнительных гетероатома, независимо выбранных из N, O и S, где 4-6-членный гетероциклоалкил, образованный за счет R и R, взятых вместе с атомом азота, с которым они оба связаны, не замещен или замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из галогена, Cалкила, Cгалогеналкила и R;
3
1-6
R выбран из водорода, галогена и Cалкила; и
5
0
3-8
R выбран из водорода, галогена и -NH-(3-8-членный гетероалкил), где 3-8-членный гетероCалкил в -NH-(3-8-членный гетероалкил) содержит 1-2 атома кислорода в качестве членов цепи и не замещен или замещен R.
-
45. Способ по п. 44, где соединение выбрано из: N-метил-2-(пиридин-4-ил)-N-(1,1,1-трифторпропан-2-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 2-метил-1-(2-метил-2-{[2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино}пропокси)пропан-2-ола; 2,4-диметил-4-{[2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино}пентан-2-ола; N-трет-бутил-2-(пиримидин-4-ил)-1,7-нафтиридин-4-амина; 2-(пиридин-4-ил)-N-[1-(трифторметил)циклобутил]пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; N-пропил-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; N-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 3-(пиридин-4-ил)-N-(1-(трифторметил)циклопропил)-2,6-нафтиридин-1-амина; 2-(3-метил-1H-пиразол-4-ил)-N-(1-метилциклопропил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 2-метил-2-{[2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино}пропан-1-ола; 2-(пиридин-4-ил)-4-(3-(трифторметил)пиперазин-1-ил)пиридо[3,4-d]пиримидина; N-циклопентил-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; Nпропил-2-(3-(трифторметил)-1H-пиразол-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; N-(2-метилциклопентил)-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 2-(3-хлорпиридин-4-ил)-N-(1,1,1-трифтор-2-метилпропан-2-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 2-(2-метил-2-{[2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино}пропокси)этан-1-ола; N-(1-метилциклопропил)-7-(пиридин-4-ил)изохинолин-5-амина; (1S,2S)-2-{[2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-ил]амино}циклопентан-1-ола; N-метил-2-(пиридин-4-ил)-N-[(2S)-1,1,1-трифторпропан-2-ил]пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; N-метил-N-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; N-(пропан-2-ил)-2-(пиридин-4-ил)пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина; 3-(пиридин-4-ил)-N-(1-(трифторметил)циклопропил)-2,6-нафтиридин-1-амина и N-метил-2-(пиридин-4-ил)-N-[(2R)-1,1,1-трифторпропан-2-ил]пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина.
46. Способ по п. 44, где соединение выбрано из 3-(пиридин-4-ил)-N-(1-(трифторметил)циклопропил)-2,6-нафтиридин-1-амина; N-(1-метилциклопропил)-7-(пиридин-4-ил)изохинолин-5-амина; 2-(пиридин-4-ил)-4-(3-(трифторметил)пиперазин-1-ил)пиридо[3,4-d]пиримидина; N-(трет-бутил)-2-(пиридин-4-ил)-1,7-нафтиридин-4-амина и N-метил-2-(пиридин-4-ил)-N-[(2S)-1,1,1-трифторпропан-2-ил]пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина.
47. Способ по п. 44, где соединение выбрано из 3-(пиридин-4-ил)-N-(1-(трифторметил)циклопропил)-2,6-нафтиридин-1-амина; N-(1-метилциклопропил)-7-(пиридин-4-ил)изохинолин-5-амина и 2-(пиридин-4-ил)-4-(3-(трифторметил)пиперазин-1-ил)пиридо[3,4-d]пиримидина.
48. Способ по п. 44, где соединение выбрано из: N-(трет-бутил)-2-(пиридин-4-ил)-1,7-нафтиридин-4-амина и N-метил-2-(пиридин-4-ил)-N-[(2S)-1,1,1-трифторпропан-2-ил]пиридо[3,4-d]пиримидин-4-амина.
49. Способ по п. 44, где соединение представляет собой N-(трет-бутил)-2-(пиридин-4-ил)-1,7-нафтиридин-4-амин.
50. Способ по любому из пп. 44-49, где соединение присутствует в концентрации, составляющей 3-10 микромоль/литр.
51. Способ по любому из пп. 43-50, где система CRISPR представляет собой систему CRISPR с Cas9 из S. pyogenes.
52. Способ по п. 51, где система CRISPR содержит молекулу Cas9, содержащую SEQ ID NO: 106 или 107 или любую из SEQ ID NO: 124-134.
53. Способ по п. 51, где система CRISPR содержит молекулу Cas9, содержащую SEQ ID NO: 106 или 107.
54. Популяция клеток, содержащая модифицированную лимбальную стволовую клетку по любому из пп. 1-42 или модифицированную лимбальную стволовую клетку, полученную посредством способа по любому из пп. 43-53.
55. Популяция клеток по п. 54, где модифицированная лимбальная стволовая клетка содержит вставку/делецию, образованную в целевой последовательности, комплементарной нацеливающему домену, относящемуся к домену молекулы gRNA, или рядом с ней.
56. Популяция клеток по п. 55, где вставка/делеция включает делецию 10 или более 10 нуклеотидов, необязательно 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 или 35 нуклеотидов.
57. Популяция клеток по п. 55 или 56, где вставка/делеция образована в по меньшей мере приблизительно 40%, например, по меньшей мере приблизительно 50%, например, по меньшей мере приблизительно 60%, например, по меньшей мере приблизительно 70%, например, по меньшей мере приблизительно 80%, например, по меньшей мере приблизительно 90%, например, по меньшей мере приблизительно 95%, например, по меньшей мере приблизительно 96%, например, по меньшей мере приблизительно 97%, например, по меньшей мере приблизительно 98%, например, по меньшей мере приблизительно 99% клеток из популяции клеток, например, как определено посредством секвенирования нового поколения и/или анализа вставки нуклеотидов.
58. Популяция клеток по любому из пп. 55-57, где нецелевая вставка/делеция выявляется у не более чем приблизительно 5%, например, не более чем приблизительно 1%, например, не более чем приблизительно 0,1%, например, не более чем приблизительно 0,01% клеток из популяции клеток, например, как определено посредством секвенирования нового поколения и/или анализа вставки нуклеотидов.
59. Композиция, содержащая модифицированную лимбальную стволовую клетку по любому из пп. 1-42, или модифицированную лимбальную стволовую клетку, полученную посредством способа по любому из пп. 43-53, или популяцию клеток по любому из пп. 54-58, или популяцию модифицированных лимбальных стволовых клеток, полученных посредством способа по любому из пп. 43-53.
60. Композиция по п. 54, где модифицированная лимбальная стволовая клетка содержит вставку/делецию, образованную в целевой последовательности, комплементарной нацеливающему домену, относящемуся к домену молекулы gRNA, или рядом с ней.
61. Композиция по п. 55, где вставка/делеция включает делецию 10 или более 10 нуклеотидов, необязательно 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 или 35 нуклеотидов.
62. Композиция по п. 55 или 56, где вставка/делеция образована в по меньшей мере приблизительно 40%, например, по меньшей мере приблизительно 50%, например, по меньшей мере приблизительно 60%, например, по меньшей мере приблизительно 70%, например, по меньшей мере приблизительно 80%, например, по меньшей мере приблизительно 90%, например, по меньшей мере приблизительно 95%, например, по меньшей мере приблизительно 96%, например, по меньшей мере приблизительно 97%, например, по меньшей мере приблизительно 98%, например, по меньшей мере приблизительно 99% клеток популяции.
63. Композиция по любому из пп. 55-57, где нецелевая вставка/делеция выявляется у не более чем приблизительно 5%, например, не более чем приблизительно 1%, например, не более чем приблизительно 0,1%, например, не более чем приблизительно 0,01% клеток из популяции клеток, например, как определено посредством секвенирования нового поколения и/или анализа вставки нуклеотидов.
64. Модифицированная лимбальная стволовая клетка по любому из пп. 1-42, или популяция клеток по любому из пп. 54-58, или композиция по любому из пп. 59-63 для применения для лечения глазного заболевания.
65. Модифицированная лимбальная стволовая клетка, или популяция клеток, или композиция для применения по п. 64, где глазное заболевание представляет собой дефицит лимбальных стволовых клеток.
66. Модифицированная лимбальная стволовая клетка, или популяция клеток, или композиция для применения по п. 65, где глазное заболевание представляет собой односторонний дефицит лимбальных стволовых клеток.
67. Модифицированная лимбальная стволовая клетка, или популяция клеток, или композиция для применения по п. 65, где глазное заболевание представляет собой двухсторонний дефицит лимбальных стволовых клеток.
68. Модифицированная лимбальная стволовая клетка, или популяция клеток, или композиция для применения по любому из пп. 59-62, где клетка является аутологичной по отношению к пациенту, которому будет вводиться указанная клетка.
69. Модифицированная лимбальная стволовая клетка, или популяция клеток, или композиция для применения по любому из пп. 59-62, где клетка является аллогенной по отношению к пациенту, которому будет вводиться указанная клетка.
70. Способ лечения пациента, страдающего глазным заболеванием, включающий стадию введения пациенту, нуждающемуся в этом, модифицированной лимбальной стволовой клетки по любому из пп. 1-42, или популяции клеток по любому из пп. 54-58, или композиции по любому из пп. 59-63.
71. Способ по п. 70, где глазное заболевание представляет собой дефицит лимбальных стволовых клеток.
72. Способ по п. 71, где глазное заболевание представляет собой односторонний дефицит лимбальных стволовых клеток.
73. Способ по п. 71, где глазное заболевание представляет собой двухсторонний дефицит лимбальных стволовых клеток.
74. Способ по любому из пп. 71-73, где клетка является аутологичной по отношению к пациенту, которому будет вводиться указанная клетка.
75. Способ по любому из пп. 71-73, где клетка является аллогенной по отношению к пациенту, которому будет вводиться указанная клетка.
76. Применение модифицированной лимбальной стволовой клетки по любому из пп. 1-42, или популяции клеток по любому из пп. 54-58, или композиции по любому из пп. 59-63 для лечения глазного заболевания.
77. Применение по п. 76, где глазное заболевание представляет собой дефицит лимбальных стволовых клеток.