СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ПОВЫШЕННОЙ КЛЕТОЧНО-ОПОСРЕДОВАННОЙ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ У ЛЮДЕЙ В УСЛОВИЯХ АРКТИКИ
METHOD FOR IDENTIFYING INCREASED CELL-MEDIATED CYTOTOXICITY OF LYMPHOCYTES IN PEOPLE IN ARCTIC CONDITIONS

Изобретение относится к области физиологии, иммунологии, лабораторной диагностики и касается способа быстрого выявления повышенной клеточно-опосредованной цитотоксичности лимфоцитов у людей в условиях Арктики.
+
+
+
+
За последние годы развитие российской Арктики приобрело на государственном уровне статус крупного национального мегапроекта, призванного обеспечить долгосрочные геоэкономические и геополитические интересы развития России. Устойчивое развитие российских арктических территорий возможно лишь в том случае, если наряду с политическими и экономическими вопросами будет обеспечен значительный прогресс в условиях жизни и состоянии здоровья населения. Климатические изменения выступают в качестве фактора риска социально-экономического развития Арктики [Ревич Б.А., Харькова Т.Л., Подольная М.А. Динамика смертности и ожидаемой продолжительности жизни населения арктического / приарктического региона России в 1999-2014 годах // Экология человека. - 2017. - №9. - С. 48-58]. Иммунологическая реактивность жителей Арктики характеризуется повышенным уровнем иммуносупрессии, что выражается в увеличении содержания в крови лимфоцитов CD8 в среднем у 22,73% взрослых практически здоровых людей (у детей 8,01%). Высокие уровни регистрации повышенной активности цитотоксических лимфоцитов были выявлены у жителей НАО, в городах Архангельск, Новодвинск и Северодвинск [Айвазова М.С. Физиологический статус иммунной системы у местных и иногородних студентов старших курсов вузов г. Архангельска: автореф. дис. … канд. биол. наук. - Архангельск, 2011. - 16 с.; Добродеева Л.К. Иммунологическое районирование. - Сыктывкар, 2001. - С.57; Щеголева Л.С. Резервные возможности иммунного гомеостаза у человека на Севере: автореф. дис. докт. биол. наук. - Архангельск, 2005. - 38 с.]. У коренных малочисленных народов Севера увеличение числа лимфоцитов CD8+ отмечается у 62,5% лиц, ведущих кочевой образ жизни, и у 45,3% оседлых жителей, у 67,3% лиц до 40 лет и у 59,0% лиц старше 40 лет [Иммунный гомеостаз у кочующего и оседлого населения европейского севера России: [+16] / Л.С. Щеголева, Т.Б. Сергеева, Е.Ю. Шашкова, О.Е. Филиппова; Федер. гос. бюджет. Учреждение науки Ин-т физиологии природ. Адаптаций Урал. Отд-ния Рос. Акад. наук. - Архангельск, 2016. - 102 с.: табл., ил. - ISBN 978-5-7536-0448-4.https://elibrary.ru/item.asp?id=381616241. Похожая картина наблюдается и относительно содержания в крови натуральных киллеров (NK): уровень клеток CD16 сверх нормативных пределов выявлен у 45,8% людей, ведущих кочевой образ жизни, и у 40,0% оседлых жителей, у 53,8% лиц до 40 лет и у 44,3% лиц старше 40 лет [Сергеева Т.Б. Физиологическая значимость содержания цитотоксических лимфоцитов (CD8, CD16) в периферической крови у человека на Севере: автореф. дис.…канд. биол. наук. - Архангельск, 2015. - 18 с.; Добродеева Л.К., Филиппова О.Е., Балашова С.Н. Соотношение содержания иммунокомпетентных клеток в регуляции иммунного статуса человека, проживающего на Севере // Вестн. Урал. мед. академ. науки. 2014. №2(48). С. 132-134; Филиппова О.Е. Соотношение фенотипов лимфоцитов периферической крови у людей в процессе физиологической регуляции иммунного ответа: автореф. дис. … канд. биол. наук. Архангельск, 2015. 18 с.].
+
9
9
9
+
+
В ситуации патологических отклонений в состоянии здоровья жителей Арктики указанный дефект иммунологической реактивности значительно усугубляется. Так, усиление цитотоксической активности лимфоцитов CD16 происходит у 73,2% людей с патологией системы кровообращения (среднее содержание клеток 0,52±0,05×10кл/л), у 65,3% лиц с болезнями органов дыхания (0,89±0,08×10кл/л), у 75,2% людей с заболеваниями органов пищеварения (0,57±0,09×10кл/л) [Добродеева Л.К., Жилина Л.П. Иммунологическая реактивность, состояние здоровья населения Архангельской области. - Екатеринбург: УрО РАН, 2004. - С. 113]. Можно предположить, что увеличение клеточно-опосредованной цитотоксичности лимфоцитов обусловлено воздействием на человека комплекса экстремальных климато-географических факторов Арктического региона. Данный комплекс включает сочетанное влияние низкого радиационного баланса, арктического воздуха с близкими к 0°С средними летними температурами при отрицательной среднегодовой температуре, сменяющие друг друга периоды полярного дня и полярной ночи [Проявление адаптации и дизадаптации у жителей Крайнего Севера / А.П. Авцын, А.Г. Марачев // Физиол. человека. - 1975. - №4. - С. 3-14; Агаджанян Н.А., Александров С.И., Аптикаева О.И. и др. Экология человека в изменяющемся мире / Под ред. В.А. Черепшева. - Екатеринбург: УрО РАН, 2006. - 562 с.]. Как следствие гиперфункции супрессорного звена иммунитета начинают появляться и нарастать концентрации ЦИК, иммуноглобулинов и аутоантител, формируется недостаточность фагоцитарной активности нейтрофилов и дефицит зрелых функционально активных CD3+ лимфоцитов [Добродеева Л.К. Влияние среды обитания на иммунологическую реактивность, медико-демографические показатели и заболеваемость населения Архангельской области / Л.К. Добродеева, Л.П. Жилина. - Архангельск, 2003. - С. 250; Щеголева Л.С. Содержание клеток CD8 и CD16 у жителей разных возрастных групп, проживающих в Арктической зоне / Л.С. Щеголева, Сергеева Т.Б. // Вестник Северного (Арктического) федерального университета. - 2015. - №1. - С. 76-83].
Из уровня техники известны способы получения цитотоксических клеток с активностью против клеток немелкоклеточного рака легкого [Патент РФ №2639514, опубл. 21.12.2017; Патент РФ №2577992, опубл. 20.03.2016]. Данные изобретения относятся к сфере биотехнологии и включают получение дендритных клеток из моноцитов периферической крови больного с последующим их культивированием совместно с фракцией мононуклеарных клеток. Описываемые аналоги изобретения ставят своей целью в условиях in vitro генерировать клоны цитотоксических лимфоцитов против опухолевых клеток определенной этиологии с последовательным применением комплекса различных цитокинов (GM-CSF, IL-1β, IL-4, L-12, IL-18, TNF-α).
+
+
9
+
+
+
+
В области терапии опухолевых заболеваний также известны способы прогнозирования неблагоприятного течения увеальной меланомы [Патент РФ №2698797, опубл. 30.08.2019] и прогрессирования рака пищевода [Патент РФ №2640954, опубл. 12.01.2018], в которых методом проточной лазерной цитофлуориметрии в качестве существенного признака изобретения определяют содержание цитотоксических лимфоцитов CD3CD8. В случае увеальной меланомы при содержании цитотоксических лимфоцитов в крови более 0,4×10/л и относительном содержании более 22% прогнозируют неблагоприятное течение заболевания. У больных раком пищевода прогностическое заключение делается на основании математических коэффициентов (K1, K2 и K3), для чего помимо клеток CD3CD8 в образцах ткани опухоли исследуется уровень лимфоцитов Tregs (CD4CD25CD127dim).
В хирургии, при прогнозе исхода черепно-мозговых травм различной степени тяжести применяется метод определения фенотипов иммунокомпетентных клеток по типу «Высушенная капля», отличающийся тем, что суждение о дефиците активности иммунокомпетентных клеток и прогноз развития посттравматических осложнений осуществляют у пострадавших в первые сутки с момента получения черепно-мозговой травмы, в сыворотке периферической венозной крови у пострадавших лиц с высокой цитотоксической активностью определяют содержание цитокина интерлейкин-2 (ИЛ 2) и концентрацию иммуноглобулина IgE, при содержании ИЛ 2 более 50,00 пк/мл и IgE более 100,00 МЕ/мл прогнозируют высокую вероятность риска развития осложнения [Патент РФ 2685552 https://elibrary.ru/item.asp?id=41021248. Опубл. 22.04.2019]. Заявленный способ осуществляется следующим образом. Кровь для исследования берется из локтевой вены в минимальном объеме 1-3 мл до 10 часов утра, натощак. Для количественного определения ИЛ 2 и иммуноглобулина Е используется сыворотка или плазма крови, анализируемая иммуноферментным методом с применением диагностического набора для ИФА. Результаты реакции определяются по оптической плотности ячеек микропланшета согласно инструкции производителя.
Таким образом, в указанных изобретениях активизация цитотоксических лимфоцитов в ассоциации с цитокинами изучается строго в динамике патологического процесса с целью прогнозирования его неблагоприятных последствий.
Предложенное нами изобретение включает определение повышенной клеточно-опосредованной цитотоксичности лимфоцитов у практически здоровых людей, проживающих и осуществляющих свою трудовую деятельность в экстремальных климато-географических условиях Арктики. Способ позволяет выявить людей, имеющих риск патологии, связанной с вторичным экологически зависимым иммунодефицитом, склонностью к хронизации заболеваний бактериального и вирусного генеза.
+
+
+
9
+
+
9
Известен способ раннего прогнозирования у практически здоровых мужчин, работающих вахтовым методом в Арктическом регионе возможной сердечно-сосудистой патологии [Патент РФ 2687067, опубл. 7.05.2019https://elibrary.ru/item.asp?id=381464551. включающий забор крови из вены у практически здоровых моряков-вахтовиков, определение фенотипов лимфоцитов периферической крови, определение иммунологического показателя и прогнозирование течения болезни, отличающийся тем, что выявляют риск формирования сердечно-сосудистой патологии у лиц со стажем работы в экстремальных профессиональных и климатических условиях Арктики более 5 лет, в периферической венозной крови определяют содержание цитотоксических лимфоцитов (CD8), лимфоцитов с рецепторами к трансферрину (CD71) и антигенам гистосовместимости II класса (HLA-DR), при содержании CD8 более 0,40⋅10кл/л, CD71 и HLA-DR менее 0,50⋅10кл/л прогнозируют раннюю высокую вероятность развития сердечно-сосудистой патологии.
9
9
Следует отметить, что известен способ быстрого выявления риска Т-хелперного дефицита у взрослых практически здоровых лиц различного социально-профессионального статуса (кочевые, оседлые) в условиях Арктики [Патент 2614702. Опубл. 27. 03.2017 https://elibrary,ru/item.asp?id=38261527]. Заявленный способ позволяет выявить людей, имеющих риск патологии, связанной с иммунодефицитом Т-хелперного звена иммунитета при профотборе для работы в экстремальных условиях Приарктического региона, а также с целью профилактики лиц, ведущих кочевой образ жизни, включающий забор крови из вены, определение соотношения отдельных фенотипов иммунокомпетентных клеток периферической крови, определение их активности и суждение о иммунодефиците, отличающийся тем, что определяют общее количество лимфоцитов, малых лимфоцитов в лимфоцитограмме и содержание зрелых функционально активных Т-клеток CD3, при содержании общего количества лимфоцитов меньше 1,5⋅10 кл/л и клеток CD3 меньше 1,5⋅10 кл/л судят о риске формирования Т-хелперного дефицита.
Известен способ оценки риска невынашивания беременности у женщин с привычным невынашиванием [Патент РФ №2657433, опубл. 13.06.2018], отличающийся тем, что у пациентки определяют цитотоксическую активность NK-клеток периферической крови в секреторной фазе менструального цикла в отношении клеток трофобласта линии Jeg-3 с применением 3 математических формул. Если значение цитотоксической активности NK-клеток у данных женщин превышает предварительно определенное значение цитотоксической активности NK-клеток у здоровых фертильных женщин в секреторной фазе менструального цикла (36%), оценивают высокий риск невынашивания беременности. Нужно отметить, что в ходе реализации указанного способа применяют современные и точные методы исследования, однако достаточно трудоемкие и долговременные по выполнению. Так, измерение цитотоксической активности NK-клеток для каждого пациента нужно проводить не менее чем в 4 повторах, а порядок лабораторной работы включает 40 пунктов пробоподготовки перед итоговым анализом на проточном цитофлюориметре. Помимо указанного прибора в перечне оборудования также необходимо иметь ламинарно-потоковый шкаф, набор механических дозаторов, центрифугу, термостат, вортекс, холодильник и СO2 инкубатор. Кроме того, использование данного способа ограничено только случаями невынашивания беременности у женщин с привычным невынашиванием. Предложенное нами изобретение можно осуществить в течение 2 часов рабочего времени одного лаборанта-исследователя с применением лишь стандартного гематологического анализатора и микроскопа. Это позволяет экономить производственные ресурсы диагностических медицинских учреждений, а также дает возможность определить повышенную клеточно-опосредованную цитотоксичность лимфоцитов у практически здоровых людей независимо от половой принадлежности.
+
+
Известен способ прогнозирования частой заболеваемости у детей раннего возраста с перинатальными поражениями ЦНС [Патент РФ №2338196, опубл. 10.11.2008], включающий определение относительного содержания CD16 лимфоцитов в периферической венозной крови у ребенка после 1 года. При значении CD16, равном 10,1% или более, прогнозируют частую заболеваемость ОРВИ у детей до 3-х лет. Данный способ учитывает прогнозирование частой заболеваемости только у детей раннего возраста с перинатальными поражениями ЦНС и не рассматривает вероятность повышения клеточно-опосредованной цитотоксичности лимфоцитов у практически здоровых людей трудоспособного возраста, проживающих и работающих в условиях Арктики.
Наиболее близким по достигаемому техническому результату можно считать способ оценки цитотоксической активности лимфоцитов натуральных киллеров (НК) [Патент РФ №2514019, опубл. 27.04.2014]. При этом рассматриваемый способ включает иное техническое решение поставленной задачи, нежели предложенное нами изобретение. Так, в ходе реализации прототипа из периферической крови обследуемых людей в градиенте плотности фиколл-верографина выделяют взвесь мононуклеарных клеток с последующей постановкой цитотоксического теста. Тест основан на инкубации НК-лимфоцитов и клеток-мишеней К-562 с дальнейшим подсчетом числа оставшихся, не деградированных клеток-мишеней. Учет производится на автоматическом анализаторе, настроенном на выявление клеток диаметром от 15 до 40 мкм, после чего по формуле рассчитывают индекс цитотоксичности. То есть фактически в прототипе осуществляется постановка клеточной реакции in vitro и на основании инструментального анализа ее результатов фиксируется относительный уровень цитотоксической активности НК-лимфоцитов.
Предложенный нами способ не предполагает подобных действий, происходит лишь регистрация уже существующего in vivo уровня содержания лимфоцитов с последующим суждением о наличии либо отсутствии повышенной клеточно-опосредованной цитотоксичности. Изобретение позволяет в обычных условиях гематологической лаборатории без дополнительных затрат на приобретение моноклональных сывороток, аппаратуры и материалов выявить повышенную клеточно-опосредованную цитотоксичность.
+
+
Выявлено, что активность иммунных реакций у обследуемых практически здоровых добровольцев (увеличение нормальных киллеров (CD16), повышения концентраций цитотоксических лимфоцитов (CD8) зависят от стажа работы и проживания в экстремальных климатических и профессиональных условиях [[Щеголева Л.С., Сергеева Т.Б., Шашкова Е.Ю., Филиппова О.Е. Иммунный гомеостаз у кочующего и оседлого населения Европейского Севера России. - Федер. гос. бюджет, учреждение науки Ин-т физиологии природ, адаптаций Урал, отд-ния Рос. акад. наук. - Архангельск, 2016. - 102 с.; Сергеева Т.Б. Адаптивный иммунный ответ у жителей Архангельской области и НАО старше 40 лет // Проблемы сохранения здоровья и обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения в Арктике: материалы II международной научно - практической конференции / под ред. С.А. Горбанева, Н.М. Фроловой - СПб.: Издательско-полиграфическая компания «Коста», 2019. - С. 182-185; Физиологические реакции лимфоидных клеток у жителей Арктического региона / О.С. Морозова, Е.В. Поповская, Т.Б. Сергеева и др. // Проблемы обеспечения экологической безопасности и устойчивое развитие арктических территорий: сб. материалов Всероссийской конф. с международным участием II Юдахинские чтения, (24-28 июня 2019). Архангельск: «ОМ-медиа», 2019. С.659-661. 1элекрон. опт. диск (CD-R). Загл. с вкладыша контейнера. Текст (визуальный): электронный. https://elibrary.ru/item.asp?id=41151327.
Однако, необходимость сопровождения данного способа сопряжена с многочисленными исследованиями, что в значительной степени повышает трудоемкость, временной период и экономические затраты описываемого аналога изобретения. Кроме того, указанный способ не содержит конкретного соотношения различных фенотипов иммунокомпетентных клеток с содержанием малых, средних и средних лимфоцитов размером 8-12 мкм периферической крови для суждения о риске развития высокой цитотоксической активности.
Задачей настоящего изобретения является разработка способа, позволяющего определить минимальное число иммунологических параметров, позволяющих выявить людей, имеющих риск повышенной клеточно-опосредованной цитотоксичности в экстремальных условиях Арктического региона, а также с целью профилактики развития вторичных экологически зависимых иммунодефицитов и их манифестных форм.
Технический результат состоит в том, что способ позволяет проводить скрининговую диагностику, сократить время и упростить методику прогнозирования риска формирования повышенной клеточно-опосредованной цитотоксичности, чреватой нарушением адаптивного иммунного ответа, проявляющегося не только ранним развитием вторичных экологически зависимых иммунодефицитов, склонности к хроническому течению заболеваний.
+
+
Технический результат достигается тем, что способ прогнозирования формирования повышенной клеточно-опосредованной цитотоксичности, включающий забор крови из вены, согласно изобретению, позволяет определить лимфоцитограмму и по ней судить о содержании и активности супрессоров CD8 и нормальных киллеров CD16, о снижении эффективности защиты в экстремальных условиях Арктики.
9
9
Поставленная цель достигается тем, что в крови практически здоровых людей, проживающих в условиях Арктики, определяют общее число лимфоцитов и содержание средних лимфоцитов размером 8-12 мкм в составе лимфоцитограммы в периферической венозной крови обследуемых лиц определяют общее число лимфоцитов и содержание средних лимфоцитов размером 8-12 мкм в составе лимфоцитограммы. При содержании общего числа лимфоцитов более 2,5×10 кл/л и средних лимфоцитов размером 8-12 мкм в лимфоцитограмме более 0,35×10 кл/л судят о повышенной клеточно-опосредованной цитотоксичности лимфоцитов.
Заявленный нами способ осуществляется следующим образом. Кровь для исследования берется из локтевой вены в объеме 3 мл до 10 часов утра, натощак, в вакуумные пробирки Vacuette с антикоагулянтом K3EDTA. Общее содержание лимфоцитов выявляется на стандартном гематологическом анализаторе. В мазках крови, окрашенных по Романовскому - Гимзе, определяют лимфоцитограмму с выделением малых (диаметр клетки до 8 мкм), средних (8-12 мкм) и больших (более 12 мкм) лимфоцитов (по методу Алексеева Г.А., 1962). Учет лимфоцитограммы осуществляется при помощи микроскопа с иммерсионным увеличением объектива ×100 и окуляра ×10, с подсчетом 100 клеток на клавишных лабораторных счетчиках.
Предлагаемым способом были обследованы 178 человек в возрасте от 19 до 60 лет, практически здоровых на момент исследования в рамках НИР в период с 2009 по 2015 гг.: №01.2.00 101811; №01.20.0 601941 и Госрегистрации №01201354637. Обследование проводилось в условиях экспедиций в субъекты Арктической зоны РФ: п. Несь, НАО (2009 и 2011 гг.), 121 человек и г. Надым, ЯНАО (2015 г.), 57 человек с учетом образа жизни (кочевые, оседлые) и с письменного согласия респондентов. При этом соблюдались нормы биомедицинской этики в соответствии с документом «Этические принципы проведения медицинских исследований с участием людей в качестве субъектов исследования» (Хельсинская декларация Всемирной медицинской ассоциации 1964 г. (с изменениями и дополнениями 2013 г.). Комплекс лабораторных исследований включал определение в периферической крови абсолютного содержания лимфоцитов и их фенотипов. Содержание фенотипов лимфоцитов изучали с помощью непрямой иммунопероксидазной реакции с использованием моноклональных антител на препаратах лимфоцитов типа «высушенной капли» производства НПЦ МедБиоСпектр г. Москва. Результаты обработаны с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6.0» («StatSoft», США). Тип исследования ретроспективный, выборки случайные, одномоментные. Генеральная совокупность - жители севера Европейской территории России. Достоверность различий между группами оценивали с помощью параметрического t-критерия Стьюдента для независимых выборок и непараметрического критерия U-Манна-Уитни. Статистическая достоверность присваивалась при значении р<0,05. Корреляционный анализ проводился с выявлением коэффициента линейной корреляции Пирсона (г) и оценкой его достоверности р<0,05.
+
9
+
9
+
9
+
9
+
9
9
9
9
9
+
+
+
+
Проведенные исследования показали, что нормальное содержание CD8 (0,2-0,4×10 кл/л) и CD16 (0,03-0,5×10 кл/л) встречается у 35,65 и 43,85% обследуемых лиц соответственно, а повышенное содержание CD8 (более 0,6×10 кл/л) и CD16 (более 0,5×10 кл/л) встречается у 57,33 и 43,79% соответственно. Среднее содержание клеток CD8 соответственно составило: 0,40±0,02 и 0,60±0,02×10 кл/л, р<0,001. Среднее содержание натуральных киллеров в группах составило: 0,30±0,01 и 0,53±0,02×10 кл/л, р<0,001. Выявлено, что у лиц с избытком концентрации цитотоксических клеток повышается общее содержание лейкоцитов, лимфоцитов и средних лимфоцитов размером 8-12 мкм в структуре лимфоцитограммы (в сравнении с людьми с нормальным уровнем цитотоксических клеток): соответственно с 5,8±0,23 до 7,8±0,48×10 кл/л; с 1,8±0,07 до 3,2±0,17±10 кл/л; с 0,21±0,02 до 0,45±0,04×10 кл/л (р<0,01). Анализ корреляционных зависимостей в группе лиц с избытком содержания цитотоксических лимфоцитов показал статистически значимую взаимосвязь между показателями CD8 и общим содержанием лимфоцитов (r=0,78; р<0,05), CD8 и средними лимфоцитами размером 8-12 мкм (r=0,67; р<0,05), CD16 и общим содержанием лимфоцитов (r=0,76; р<0,05), CD16 и средними лимфоцитами размером 8-12 мкм (r=0,65; р<0,05). Таким образом, увеличение в крови концентрации цитотоксических клеток у практически здоровых жителей Арктики ассоциировано с повышенными значениями общего содержания лимфоцитов и их средних форм размером 8-12 мкм в составе лимфоцитограммы.
+
Из литературы известно, что цитотоксические Т-лимфоциты, экспрессирующие рецептор CD8, а также натуральные киллеры, осуществляют защиту организма от патогенных микроорганизмов и трансформированных опухолевых клеток путем непосредственного контакта с клеткой-мишенью. В случае отсутствия на мембране клетки-мишени «своих», присущих данному организму, молекул МНС I класса запускается механизм цитолиза. Данный механизм включает образование в месте контактного взаимодействия отграниченной синаптической зоны, куда клетки-эффекторы высвобождают гранулы с перфорином. Перфорин в присутствии Са2+ полимеризуется и делает в мембране клетки-мишени поры, через которые внутрь цитоплазмы поступает белок гранзим. Именно гранзим вызывает ферментативный клеточный лизис мишени путем активизации распада ее ДНК на фрагменты [Lieberman J. Cell death and immunity: the ABCs of granule-mediated cytotoxicity. New weapons in the arsenal / J. Lieberman // Nat. Rev. Immunol. - 2003. - Vol.3. - P. 361-370].
+
+
+
γ
Следует отметить, что наряду с общим механизмом поражающего действия у цитотоксических клеток есть и свои отличия. Так, натуральные киллеры относятся к клеткам врожденного иммунитета и в их развитии в отличие от Т-лимфоцитов не требуется участие тимуса (лишь микроокружение костного мозга). Вместо антигенраспознающего Т-клеточного рецептора на поверхностной мембране NK клеток локализуются молекулы CD16 и CD56. Последняя представляет собой гомофильную адгезивную молекулу из семейства молекул адгезии клеток нервной системы (N-CAM) суперсемейства иммуноглобулинов. Рецептор CD16 (FcIIIR) в свою очередь выполняет функцию низкоафинного рецептора для Fc-фрагмента IgG.
+
Цитотоксические Т-лимфоциты распознают клетки-мишени за счет молекулы CD8 (LT8, ICO-31), имеющей принадлежность к суперсемейству иммуноглобулинов. Распознавание осуществляется строго специфически, то есть под действием цитотоксических лимфоцитов гибнут только клетки, несущие определенный антиген. Для этого Т-лимфоцитам приходится увеличивать свою популяцию путем пролиферации и последующей дифференцировки. Для NK клеток цитолитическая активность неспецифична и может реализовываться в отношении различных антигенов [Ярилин А.А. Основы иммунологии: учебник. - М.: Медицина, 1999. - С. 357-360; Пинегин Б.В. NK-клетки: свойства и функции / Б.В. Пинегин, С.В. Дамбаева // Иммунология. - 2007. - №2. - С. 105-113].
Нами приведены частные примеры использования заявленного способа.
2
9
9
+
9
+
9
Пример 1. Доброволец С.Г.Х., 41 год, пол женский. Оседлый образ жизни. Место проживания ЯНАО, г. Надым. Вес 72 кг, рост 1,55 м, индекс массы тела 29,87 кг/м. Обследование проводилось в 2015 г. При комплексном лабораторном обследовании периферической крови определено, что общее содержание лимфоцитов составляет 3,42×10 кл/л, средних лимфоцитов размером 8-12 мкм в составе лимфоцитограммы - 0,30×10 кл/л. На основании полученных данных сделан вывод о наличии повышенной клеточно-опосредованной цитотоксичности лимфоцитов. При контрольном параллельном исследовании фенотипической структуры лимфоцитов выявлено выраженное увеличение концентрации Т-лимфоцитов CD8 0,75×10 кл/л и CD16 0,54×10 кл/л. (относительно нормативных значений). Установленная закономерность подтверждена с использованием пакета прикладных программ «Statistica 10.0».
2
9
9
+
9
+
9
Пример 2. Доброволец Б.А.В., 44 года, пол женский. Оседлый образ жизни. Место проживания ЯНАО, г. Надым. Вес 85 кг, рост 1,76 м, индекс массы тела 27,50 кг/м. При прохождении комплексного иммунологического обследования периферической крови в 2015 г. концентрация общего количества лимфоцитов 2,01×10 кл/л, средних лимфоцитов размером 8-12 мкм в составе лимфоцитограммы - 0,29×10 кл/л. При контрольном параллельном исследовании фенотипической структуры лимфоцитов выявлено выраженное увеличение концентрации Т-лимфоцитов CD8 0,46×10 кл/л и концентрации CD16 0,80×10 кл/л. (относительно нормативных значений). Сделан вывод о наличии повышенной клеточно-опосредованной цитотоксичности лимфоцитов. Установленная закономерность подтверждена с использованием пакета прикладных программ «Statistica 10.0».
2
9
9
+
9
+
9
Пример 3. Доброволец К.О.А., 43 года, пол женский. Оседлый образ жизни. Место проживания ЯНАО, г. Надым. Вес 77 кг, рост 1,70 м, индекс массы тела 26,64 кг/м. При комплексном лабораторном обследовании периферической крови в 2015 г. определено, что общее содержание лимфоцитов составляет 3,42×10 кл/л, средних лимфоцитов размером 8-12 мкм в составе лимфоцитограммы - 0,37×10 кл/л. При исследовании фенотипической структуры лимфоцитов выявлено выраженное увеличение концентрации Т-лимфоцитов CD8 0,61×10 кл/л, CD16 1,19×10 кл/л. (относительно нормативных значений). Сделан вывод о наличии повышенной клеточно-опосредованной цитотоксичности лимфоцитов. Установленная закономерность подтверждена с использованием «Statistica 10.0».
2
9
9
+
9
+
9
Пример 4. Доброволец С.Л.К., 40 лет, пол женский. Оседлый образ жизни. Место проживания ЯНАО, г. Надым. Вес 110 кг, рост 1,65 м, индекс массы тела 40,44 кг/м. Обследование проводилось в 2015 г. При лабораторном изучении периферической крови определено, что общее содержание лимфоцитов составляет 2,65×10 кл/л, средних лимфоцитов размером 8-12 мкм в составе лимфоцитограммы - 0,34×10 кл/л. Сделан вывод о наличии повышенной клеточно-опосредованной цитотоксичности лимфоцитов: при исследовании фенотипической структуры лимфоцитов выявлено выраженное увеличение концентрации Т-лимфоцитов CD8 0,58×10 кл/л, и CD16 0,55×10 кл/л. (относительно нормативных значений). Установленная закономерность подтверждена с использованием «Statistica 10.0».
9
9
+
9
+
9
Пример 5. Доброволец Л., 45 лет, пол мужской. Кочевой образ жизни. Место проживания НАО, п. Несь. При комплексном лабораторном обследовании периферической венозной крови в 2009 г., выявлено общее содержание лимфоцитов 3,28⋅10 кл/л, средних лимфоцитов размером 8-12 мкм в составе лимфоцитограммы - 0,28×10 кл/л. При контрольном параллельном исследовании фенотипической структуры лимфоцитов определено выраженное увеличение концентраций Т-лимфоцитов CD8 0,88⋅10 кл/л и NK клеток CD16 0,52⋅10 кл/л (относительно нормативных значений). Сделан вывод о наличии повышенной клеточно-опосредованной цитотоксичности лимфоцитов. Установленная закономерность подтверждена статистически (Statistica 10.0).
9
9
+
9
+
9
Пример 6. Доброволец В., 42 лет, пол мужской. Кочевой образ жизни. Место проживания НАО, п. Несь. При комплексном лабораторном обследовании периферической венозной крови в 2009 г., определено общее содержание лимфоцитов 1,76⋅10 кл/л., средних лимфоцитов размером 8-12 мкм в составе лимфоцитограммы - 0,35×10 кл/л. При контрольном параллельном исследовании фенотипической структуры лимфоцитов определено выраженное увеличение концентраций Т-лимфоцитов CD8 0,45⋅10 кл/л и NK клеток CD16 0,48⋅10 кл/л (относительно нормативных значений). Сделан вывод о наличии повышенной клеточно-опосредованной цитотоксичности лимфоцитов. Установленная закономерность подтверждена статистически (Statistica 10.0).
9
9
+
9
+
9
Пример 7. Доброволец В., 35 лет, пол мужской. Кочевой образ жизни. Место проживания НАО, п. Несь. При комплексном лабораторном обследовании периферической венозной крови в 2011 г., определено общее содержание лимфоцитов 4,69⋅10 кл/, средних лимфоцитов размером 8-12 мкм в составе лимфоцитограммы - 0,40×10 кл/л. При контрольном параллельном исследовании фенотипической структуры лимфоцитов определено выраженное увеличение концентраций Т-лимфоцитов CD8 0,89⋅10 кл/л и NK клеток CD16 0,66⋅10 кл/л (относительно нормативных значений). Сделан вывод о наличии повышенной клеточно-опосредованной цитотоксичности лимфоцитов. Установленная закономерность подтверждена статистически (Statistica 10.0).
9
9
+
9
+
9
Пример 8. Доброволец В., 31 год, пол мужской. Кочевой образ жизни. Место проживания НАО, п. Несь. При комплексном лабораторном обследовании периферической венозной крови в 2011 г., определено общее содержание лимфоцитов 1,98⋅10 кл/л., средних лимфоцитов размером 8-12 мкм в составе лимфоцитограммы - 0,28×10 кл/л. При контрольном параллельном исследовании фенотипической структуры лимфоцитов выявлено выраженное увеличение концентраций Т-лимфоцитов CD8 0,96⋅10 кл/л и NK клеток CD16 1,20⋅10 кл/л (относительно нормативных значений). Установленная закономерность подтверждена статистически (Statistica 10.0).