БЫСТРЫЙ И ТОЧНЫЙ АНАЛИЗ СИАЛИРОВАНИЯ БЕЛКОВ

1. Способ определения содержания сиалированного белка, включающий:
(a) подготовку белка к анализу;
(b) ферментативную обработку подготовленного белка, включающую:
разделение подготовленного белка на множество образцов белка, включающих
(i) как минимум один образец белка в качестве образца среды (Реакция А);
(ii) добавление как минимум β-галактозидазы к как минимум одному образцу белка (Реакция В);
(iii) добавление как минимум β-галактозидазы и α-сиалидазы к как минимум еще одному образцу белка (Реакция С); и
инкубацию множества образцов белка; и
(c) анализ множества образцов белка с применением HPAEC-PAD-хроматографии;
(d) определение содержания углеводов для множества образцов белка.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что также включает:
(f) анализ множества положительных и отрицательных контрольных образцов с применением HPAEC-PAD-хроматографии;
(g) анализ множества стандартных образцов с применением HPAEC-PAD-хроматографии; и
(h) сравнение множества образцов белка с множеством стандартных и контрольных образцов.
3. Применение HPAEC-PAD-хроматографии для определения содержания сиалированного белка, включающее:
(a) подготовку белка к анализу;
(b) ферментативную обработку подготовленного белка, включающую:
разделение подготовленного белка на множество образцов белка, включающих
(i) как минимум один образец белка в качестве образца среды (Реакция А);
(ii) добавление как минимум β-галактозидазы к как минимум одному образцу белка (Реакция В);
(iii) добавление как минимум β-галактозидазы и α-сиалидазы к как минимум еще одному образцу белка (Реакция С); и
инкубацию множества образцов белка; и
(c) анализ множества образцов белка с применением HPAEC-PAD-хроматографии;
(d) определение содержания углеводов для множества образцов белка; и
(e) расчет процента сиалирования для белка.
4. Применение по п.3, отличающееся тем, что также включает:
(f) анализ множества положительных и отрицательных контрольных образцов с применением HPAEC-PAD-хроматографии;
(g) анализ множества стандартных образцов с применением HPAEC-PAD-хроматографии; и
(h) сравнение множества образцов белка с множеством стандартных и контрольных образцов.
5. Комплект, определяющий содержание любого сиалированного белка, включающий:
как минимум одно вместилище, включающее множество вместилищ, включающих предварительно отмеренное количество галактозидазы и сиалидазы;
вместилища необязательно содержат как минимум одну буферную композицию, положительный контрольный образец, отрицательный контрольный образец и стандартные углеводные образцы, и
инструкции, в которых описывается способ определения содержания сиалированного белка, включая описания:
(a) подготовки белка к анализу;
(b) ферментативной обработки подготовленного белка, включающую: разделение подготовленного белка на множество образцов белка, включающих
(i) как минимум один образец белка в качестве образца среды (Реакция А);
(ii) добавление как минимум β-галактозидазы к как минимум одному образцу белка (Реакция В);
(iii) добавление как минимум β-галактозидазы и α-сиалидазы к как минимум еще одному образцу белка (Реакция С); и
инкубацию множества образцов белка; и
(c) анализа множества образцов белка с применением HPAEC-PAD-хроматографии;
(d) определения содержания углеводов для множества образцов белка; и
(e) расчета процента сиалирования для белка.
6. Комплект по п.5, отличающийся тем, что также включает:
(f) анализ положительного и отрицательного контрольных образцов с применением HPAEC-PAD-хроматографии;
(g) анализ множества стандартных образцов с применением HPAEC-PAD-хроматографии; и
(h) сравнение результатов множества образцов белка с результатами множества стандартных образцов.