СПОСОБ ДВУХФАЗНОГО ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ ПРИ ИЗГОТОВЛЕНИИ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ РЕАГЕНТОВ

1. Способ двухфазного получения липосом, в ходе которого неполярная органическая фаза, содержащая смесь природных и синтетических фосфолипидов, и не смешивающаяся с ней полярная водная (буферная) фаза смешиваются, и получается липосомная эмульсия с размером частиц 50-100 нм, отличающийся тем, что липосомную эмульсию получают с помощью способа(ов) простого механического смешивания, причем структуру однослойной или двухслойной липосомной мембраны, полностью включающей в себя органическую фазу, создают с использованием индивидуальной смеси липидных молекул, растворенных в неполярной органической фазе и представляющих положительную или нулевую кривизну, как, например, фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин, лизофосфатидная кислота, лизофосфатидилхолин и меньшего количества других фосфолипидов природного происхождения с концентрацией в диапазоне 0,5-1,5 г/мл, при этом мембранная поверхность липосомной эмульсии индивидуальной структуры, полученная таким образом, пригодна для прикрепления активного(ых) компонента(ов).
3
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве неполярной органической фазы используют смесь хлороформ-метанол в пропорции 2:1, где pH=2, кроме того, в полярной водной фазе буферный эффект обеспечивают органическими соединениями, предпочтительно 0,025 М трицина, значение pH полярной водной (буферной) фазы устанавливают в диапазоне между pH=6 и pH=7, предпочтительно рН=6,6, с помощью 5М NaOH, и к ней добавляют антибактериальный NaN консервант в концентрации 0,05 М, где неполярную органическую фазу меньшего объема добавляют к полярной водной (буферной) фазе большего объема, которая в 5-50 раз больше, наиболее предпочтительно в двадцать раз больше.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что фазы, а именно неполярную органическую фазу, расположенную слоями под полярной водной (буферной) фазой, просто встряхивают вместе при комнатной температуре.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что фазу большего объема приводят в вихревое движение при комнатной температуре, затем в вихрь впрыскивают, распыляют или наиболее предпочтительно вводят каплями фазу меньшего объема.
2
3
5. Способ получения диагностического реагента для определения протромбинового времени (РТ) для коагуляции in vitro, одним из компонентов которого является липосома, полученная способом двухфазного приготовления, в ходе которого неполярная органическая фаза, содержащая смесь природных и синтетических фосфолипидов, и не смешивающаяся с ней полярная водная (буферная) фаза смешиваются, и получается липосомная эмульсия с размером частиц 50-100 нм, отличающийся тем, что липосомную эмульсию получают с использованием способа(ов) простого механического смешивания, причем структура однослойной или двухслойной липосомной мембраны, полностью включающей в себя органическую фазу, создают с использованием индивидуальной смеси липидных молекул, растворенных в неполярной органической фазе и представляющих положительную или нулевую кривизну, как, например, фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин, лизофосфатидная кислота, лизофосфатидилхолин и меньшего количества других фосфолипидов природного происхождения с концентрацией в диапазоне 0,5-1,5 г/мл, при этом мембранная поверхность липосомной эмульсии индивидуальной структуры, полученная таким образом, пригодна для прикрепления тканевого фактора активного компонента белкового типа без применения детергентов; тканевой фактор, выделенный из природного источника или рекомбинантный тканевой фактор, полученный ферментацией, и предпочтительно природный или рекомбинантный тканевой фактор (активный компонент) используют в концентрации 0,5-1,0 µМ; при этом раствор, содержащий липосомную эмульсию индивидуальной структуры и природный или рекомбинантный тканевой фактор (активный компонент) смешивают в пропорции 2:1 и оставляют в покое предпочтительно в течение десяти минут, конечные характеристики свертывания крови устанавливают за счет его разбавления буфером соответствующего состава, предпочтительно раствором, содержащим 0,025 М трицина, 0,25 М глицина, 0,11 М NaCl, 0,02 М CaCl, 0,025 M NaN, 16 г/л ПЭГ 4000 и 0,0024 М Полибрена, значение pH буфера соответствующего состава устанавливают в диапазоне между pH=7,0 и pH=7,8, предпочтительно pH=7,4, с использованием 5М NaOH, при этом пропорция смешивания продукта, оставленного в состоянии покоя предпочтительно на десять минут, и буфера соответствующего состава составляет 3:1.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что перед этапом дополнительной стабилизации (лиофилизация) к диагностическому реагенту in vitro добавляется образующая матрицу добавка, при этом в качестве образующей матрицу добавки используется сывороточный альбумин (BSA), предпочтительно в концентрации 0,1 мМ, и/или маннит, предпочтительно в концентрации 1-3%, и/или сахароза, предпочтительно в концентрации 1-3%, и полученный диагностический реагент стабилизируют сушкой при температуре ниже нуля градусов (лиофилизация).
2
7. Способ получения диагностического реагента для определения активированного частичного тромбопластинового времени (АРТТ) коагуляции in vitro, одним из компонентов которого является липосома, полученная способом двухфазного приготовления, в ходе которого неполярная органическая фаза, содержащая смесь природных и синтетических фосфолипидов, и не смешивающаяся с ней полярная водная (буферная) фаза смешиваются, и получается липосомная эмульсия с размером частиц 50-100 нм, отличающийся тем, что липосомную эмульсию получают с использованием способов простого механического смешивания, причем структуру однослойной или двухслойной липосомной мембраны, полностью включающей в себя органическую фазу, создают с помощью индивидуальной смеси липидных молекул, растворенных в неполярной органической фазе и представляющих положительную или нулевую кривизну, как, например, фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин, лизофосфатидная кислота, лизофосфатидилхолин, и меньшего количества других фосфолипидов природного происхождения с концентрацией в диапазоне 0,5-1,5 г/мл, при этом мембранная поверхность липосомной эмульсии индивидуальной структуры, полученная таким образом, пригодна для прикрепления активного(ых) компонента(ов), при этом в ходе получения реагента для определения активированного частичного тромбопластинового времени (АРТТ) к липосомной эмульсии индивидуальной структуры добавляют активные компоненты небелкового типа, предпочтительно органическая(ие) кислота(ы), неорганическое(ие) соединение(ия), при этом активным компонентом является эллаговая кислота в концентрации 0,5-1 мМ, или SiO: 2-4 г/л, или дубильная кислота в концентрации 1-2%, и липосомную эмульсию индивидуальной структуры смешивают с активным компонентом в пропорции 1:1.
4
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что смесь оставляют в состоянии покоя предпочтительно на десять минут, и конечные характеристики свертывания крови устанавливают за счет разбавления ее буфером соответствующего состава, предпочтительно раствором, содержащим 0,25 М глицина, 0,01 М хепеса, 0,001 М NiSO, 0,2 мМ тимеросала, значение pH буфера соответствующего состава устанавливают в диапазоне между рН=6,8 и рН=7,8, предпочтительно pH=7,0, с использованием 5М NaOH, и пропорция смешивания полученной смеси, оставленной в состоянии покоя, и буфера составляет 3:1.