СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ
MEDICATION, WHICH POSSESES IMMUNOSTIMULATING ACTIVITY

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается средств, влияющих на иммунную систему.
Современная иммунофармакология решает ряд актуальных для биологии и медицины проблем, так как значительное число врожденных и приобретенных заболеваний человека сопровождается нарушением функционирования системы иммунитета. Актуальность проблемы особенно возрастает в связи с необходимостью восстановления иммунной резистентности и репаративных процессов в организме после воздействия повреждающих факторов (облучение, травмы, инфекции, интоксикации) [1]. Несмотря на значительные успехи в области химии синтетических лекарственных средств, широкое применение такого рода иммунотропных препаратов невозможно ввиду наличия у них большого числа побочных эффектов [2]. Вещества природного происхождения более полно отвечают требованиям современной медицины. Они оказывают мягкое сбалансированное действие, участвуют в качестве естественных агентов в обмене веществ, не вызывают привыкания и могут применяться у лиц с сочетанными патологиями [3].
Из растительных препаратов, стимулирующих реакции иммунитета, наиболее известны препараты на основе эхинацеи пурпурной (иммунал, иммунорм, доктор Тайсс настойка эхинацеи) [4, 5]. Препараты иммунал и иммунорм содержат сок, полученный из свежесобранной травы цветущей эхинацеи пурпурной, Доктор Тайсс - настойку листьев эхинацеи. Использование лекарственных растений представляется перспективным направлением дальнейшего развития, совершенствования методов иммунореабилитации, так как препараты природного происхождения не обладают токсическими действиями, характерными для синтетических лекарственных средств, и не вызывают дисбаланса системы иммунитета.
Целью изобретения является расширение арсенала иммуностимулирующих средств природного происхождения.
Поставленная цель достигается использованием в качестве иммуностимулирующего средства жидкого экстракта череды трехраздельной, полученного методом реперколяции с помощью 40% этанола, в соотношении 1:1. Стандартизацию экстракта проводили по сухому остатку [6]. Основными биологически активными веществами череды являются каротиноиды, полисахариды, флавоноиды (сульфуретин, бутеин, лютеолин). В современной медицинской практике череда трехраздельная применяется в качестве противовоспалительного, кровоостанавливающего, мочегонного, потогонного средства и при аллергиях различного происхождения [7].
Новым в предлагаемом изобретении является то, что экстракт череды трехраздельной, полученный методом реперколяции с помощью 40% этанола, в соотношении 1:1, впервые предложен для использования в качестве иммуностимулирующего средства.
Использование экстракта череды трехраздельной, полученного методом реперколяции с помощью 40% этанола, в соотношении 1:1, в качестве иммуностимулирующего средства в литературе не описано. Применение его стало возможным благодаря обнаружению новых свойств, а именно стимуляции гуморального иммунного ответа (повышение общей клеточности лимфоидного органа, относительного и абсолютного количества антителообразующих клеток и титра специфических гемагглютининов М и G), неспецифической резистентности (возрастании уровня фагоцитоза нейтрофилов периферической крови), коррекции иммунодефицитного состояния, вызванного введением цитостатика (увеличение общего числа спленоцитов и абсолютного количества антителообразующих клеток и повышение титра гемагглютининов IgM, а также восстановление фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови). Данные свойства явным образом не очевидны для специалиста из уровня техники. Экстракт череды трехраздельной, полученный методом реперколяции с помощью 40% этанола в соотношении 1:1, можно использовать у больных с иммунной недостаточностью, ассоциированной с острыми и хроническими инфекционными заболеваниями, на фоне лучевой терапии и лечения цитостатиками.
Таким образом, данное техническое решение соответствует условиям патентоспособности изобретения: "новизна", "изобретательский уровень", "промышленная применимость".
Новые свойства экстракта череды трехраздельной, полученного методом реперколяции с помощью 40% этанола в соотношении 1:1, были обнаружены благодаря экспериментальным исследованиям.
Для установления иммуностимулирующих свойств экстракта череды трехраздельной было изучено его влияние на гуморальный иммунный ответ и неспецифическую резистентность организма. В качестве препарата сравнения использовали настойку эхинацеи пурпурной («ГаленоФарм», г.Санкт-Петербург, разрешена к применению на территории России, рег. №000167.01-2000). Экспериментальные исследования выполняли на мышах линии CBA/CaLac в возрасте 2-2,5 месяца, массой 18-20 г. Все животные 1 категории (конвенциональные линейные мыши), получены из коллекционного фонда лаборатории экспериментального биологического моделирования НИИ фармакологии СО РАМН. Все работы проведены в осенне-зимний период. Животных содержали в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986). Животных содержали в стандартных условиях вивария на обычном рационе кормления при свободном доступе к пище и воде. Умерщвление животных осуществляли передозировкой эфирного наркоза.
Жидкий экстракт череды трехраздельной получали методом реперколяции с помощью 40% этанола в соотношении 1:1. Стандартизацию экстракта проводили по сухому остатку [6]. В качестве препарата сравнения использовали настойку эхинацеи пурпурной («ГаленоФарм», г.Санкт-Петербург, разрешена к применению на территории России, рег. №000167.01-2000).
8
6
Эксперименты по изучению влияния экстракта череды трехраздельной (ЭЧ) на гуморальный иммунный ответ были проведены на 60 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 18-20 г. Животные были разделены на 3 группы: 20 мышам вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (контроль); 20 мышей получали деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП), которую вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 1) - прототип; 20 мышей получали деалкоголизированный экстракт череды трехраздельной (ЭЧ), который вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 2) - предлагаемое средство. При изучении гуморального иммунного ответа мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) - 6×10/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл) в конце 5-дневного курса введения ЭЧ, ЭП или дистиллированной воды. На 4-е и 7-е сутки после иммунизации определяли общепринятыми методами общую клеточность селезенки (ОКС), а также относительное (%) и абсолютное (×10) количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей по методу Cunningham [10] и титр антител IgM и IgG в сыворотке крови с помощью стандартной реакции гемагглютинации (РГА) [9].
Эксперименты по изучению влияния экстракта череды трехраздельной (ЭЧ) на неспецифическую резистентность организма были проведены на 18 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 18-20 г. Животные были разделены на 3 группы: 6 мышам вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (контроль); 6 мышей получали деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП), который вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 1) - прототип; 6 мышей получали деалкоголизированный экстракт череды трехраздельной (ЭЧ), который вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 2) - предлагаемое средство. Оценку неспецифической резистентности проводили путем изучения фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови в тесте поглощения частиц латекса [8].
8
6
В целях углубленного изучения иммуностимулирующей активности экстракта череды трехраздельной были проведены исследования на модели экспериментального иммунодефицитного состояния, которое индуцировали путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг). Исследования влияния экстракта череды трехраздельной (ЭЧ) на гуморальный иммунный ответ в условиях иммуносупрессии были проведены на 40 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 18-20 г. Животные были разделены на 4 группы: 10 мышей - контроль 1; 10 - контроль 2, получали в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно; 10 - опыт 1, получали деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП), которую вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно - прототип; 10 - опыт 2, получали деалкоголизированный экстракт череды трехраздельной (ЭЧ), который вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно - предлагаемое средство. У животных 2 контрольной и обеих опытных групп моделировали экспериментальное иммунодефицитное состояние путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг). Для изучения гуморального иммунного ответа мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) - 6×10/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл) в конце 5-дневного курса введения ЭЧ, ЭП или дистиллированной воды. На 4-е сутки после иммунизации (что соответствует 8 сут после введения цитостатика) определяли общепринятыми методами общую клеточность селезенки (ОКС), а также относительное (%) и абсолютное (×10) количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей по методу Cunningham [10] и титр антител IgM и IgG в сыворотке крови с помощью стандартной реакции гемагглютинации (РГА) [9].
8
Эксперименты по изучению влияния экстракта череды трехраздельной на неспецифическую резистентность организма в условиях иммуносупрессии были проведены на 40 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 18-20 г. Животные были разделены на 4 группы: 10 мышей - контроль 1; 10 - контроль 2, получали в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно; 10 - опыт 1, получали деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП), которую вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно - прототип; 10 - опыт 2, получали деалкоголизированный экстракт череды трехраздельной (ЭЧ), который вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно - предлагаемое средство. У животных 2 контрольной и обеих опытных групп моделировали экспериментальное иммунодефицитное состояние путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг) в первый день введения препаратов. Оценку неспецифической резистентности проводили на фоне развития иммунного ответа. Для этого мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) - 6×10/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл) в конце 5-дневного курса введения ЭЧ, ЭП или дистиллированной воды. Оценку неспецифической резистентности проводили путем изучения фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови в тесте поглощения частиц латекса [8].
Статистическая обработка результатов осуществлялась с применением пакета статистических программ Statistica for Windows (версия 5.0) с предварительной оценкой нормальности распределения и использованием t-критерия Стьюдента.
Результаты, подтверждающие иммуностимулирующие свойства экстракта череды трехраздельной, полученного методом реперколяции с помощью 40% этанола в соотношении 1:1
8
6
Пример 1. Контрольным мышам вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 1-й опытной группы вводили деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП) в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 2-й опытной группы вводили деалкоголизированный экстракт череды трехраздельной (ЭЧ) в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Затем мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана - 6×10/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл). На 4-е и 7-е сутки после иммунизации определяли общее количество спленоцитов (ОКС), а также относительное (%) и абсолютное (×10) количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей и титр антител IgM и IgG в сыворотке крови. Курсовое введение настойки эхинацеи пурпурной приводило к достоверному увеличению относительного количества антителообразующих клеток на 4 и 7 сут после иммунизации и абсолютного числа антителопродуцентов на 4 сут эксперимента по сравнению с контролем (табл.1). Кроме того, отмечалось повышение титра иммуноглобулинов класса G на 4 сут.
Таблица 1
Влияние экстракта череды трехраздельной (ЭЧ) и настойки эхинацеи пурпурной (ЭП) на гуморальный иммунный ответ мышей линии СВА/CaLac, (X±m)
Группа мышей
Показатели
Сроки исследования
4 сут
7 сут
Контроль (ЭБ)
ОКС, 10<sup>6</sup>/орган
159,20±16,50
149,8±7,71
АОК, %
7,36±0,10
7±0,21
АОК, 10<sup>6</sup>/орган
11,72±1,23
10,47±0,57
IgM, log<sub>2</sub>T
2,0±0,32
2,2±0,32
IgG, log<sub>2</sub>T
8,4±0,75
7,30±0,50
Опыт 1 (ЭП+ЭБ)
ОКС, 10<sup>6</sup>/орган
190,0±22,67
163,0±10,85
АОК, %
11,44±0,49*
5,64±0,19*
АОК, 10<sup>6</sup>/орган
21,89±3,20*
9,22±0,77
IgM, log<sub>2</sub>T
2,0±0,32
1,2±0,49
IgG, log<sub>2</sub>T
10,4±0,25*
10±0,32*
Опыт 2 (ЭЧ+ЭБ)
ОКС, 10<sup>6</sup>/орган
239,8±18,36*
187±14,04*
АОК, %
15,28±0,69*#
12,64±0,42*#
АОК, 10<sup>6</sup>/орган
36,19±1,55*#
23,98±3,72*#
IgM, log<sub>2</sub>T
4,8±0,37*#
3,2±0,49
IgG, log<sub>2</sub>T
10,6±0,25*
10,6±0,6
Пример 1. Примечания: здесь и в табл.2:* - различия с соответствующими значениями контроля достоверны;# - различия с соответствующими значениями группы «опыт 1» достоверны.
Анализ результатов, представленных в табл.1, показывает, что курсовое 5-дневное введение экстракта череды трехраздельной приводило к увеличению уровня всех исследуемых показателей гуморального иммунного ответа у животных контрольной группы на 4 сут эксперимента. К 7 сут исследования наблюдалось увеличение общей клеточности лимфоидного органа, а также относительного и абсолютного количества антителопродуцентов. По сравнению с мышами, получавшими настойку эхинацеи, отмечался более высокий уровень IgM на 4 сут и относительное и абсолютное число АОК на 4 и 7 сут эксперимента.
Пример 2. Контрольным мышам вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 1-й опытной группы вводили деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП) в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 2-й опытной группы вводили деалкоголизированный экстракт череды трехраздельной (ЭЧ) в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Через 24 ч оценивали фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови мышей всех групп по способности этих клеток поглощать частицы латекса (концентрация взвеси частиц - 60 млн/мл); учитывали процент нейтрофилов, поглотивших частицы (фагоцитарный индекс - ФИ) и среднее число частиц, поглощенное одной клеткой (фагоцитарное число - ФЧ) (табл.2).
Таблица 2
Влияние экстракта череды трехраздельной (ЭЧ) и настойки эхинацеи пурпурной (ЭП) на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови мышей линии СВА/CaLac (X±m)
Группа мышей
4 сут
7 сут
ФИ (%)
ФЧ
ФИ (%)
ФЧ
Контроль
22,0±1,22
2,06±0,23
17,25±1,80
3,79±0,62
Опыт 1 (ЭП)
32±3,91*
4,72±0,45*
23,8±2,13
4,52±0,23
Опыт 2 (ЭЧ)
17,75±0,75*#
6,18±0,35*#
11,8±1,32*#
5,89±0,57*
Анализ результатов, приведенных в табл.2, показывает, что, несмотря на снижение процента активных нейтрофилов после введения экстракта череды трехраздельной, их поглотительная активность существенно возросла и превосходила показатели, полученные в 1-й опытной группе.
8
6
Пример 3. У животных 2-й контрольной и обеих опытных групп моделировали экспериментальное иммунодефицитное состояние путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг). Далее животным 2-й контрольной группы вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 1-й опытной группы вводили деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП) в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 2-й опытной группы вводили деалкоголизированный экстракт череды трехраздельной (ЭЧ), в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Затем мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана - 6×10/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл). На 4-е сутки после иммунизации определяли общее количество спленоцитов (ОКС), а также относительное (%) и абсолютное (×10) количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей и титр антител IgM и IgG в сыворотке крови
Введение линейным животным циклофосфана в дозе 250 мг/кг приводило к подавлению гуморального иммунного ответа, проявляющемуся в снижении общей клеточности селезенки и функциональной активности клеток-антителопродуцентов, что выражалось в уменьшении титра специфических иммунноглобулинов в сыворотке крови по сравнению с 1-й контрольной группой (табл.3). У мышей опытных групп наблюдалось увеличение общего числа спленоцитов и абсолютного количества антителообразующих клеток относительно группы контроля 2. При этом введение животным настойки эхинацеи пурпурной способствовало восстановлению титра гемагглютининов IgG, а экстракта череды-трехраздельной IgM.
Таблица 3
Влияние экстракта череды трехраздельной (ЭЧ) и настойки эхинацеи пурпурной (ЭП) на гуморальный иммунный ответ мышей линии СВА/CaLac на фоне введения циклофосфана, (Х±m)
Группа мышей
Показатели
4 сут
Контроль 1 (ЭБ)
ОКС, 10<sup>6</sup>/орган
159,20±16,50
АОК, %
7,36±0,10
АОК, 10<sup>6</sup>/орган
11,72±1,23
IgM, log<sub>2</sub>T
2±0,32
IgG, log<sub>2</sub>T
8,4±0,75
Контроль 2 (ЦФ+ЭБ)
ОКС, 10<sup>6</sup>/орган
94,6±16,44
АОК, %
10,16±0,70
АОК, 10<sup>6</sup>/орган
9,67±1,75
IgM, log<sub>2</sub>T
0,0±0,0
IgG, log<sub>2</sub>T
3,0±0,0
Опыт 1 (ЦФ+ЭП+ЭБ)
ОКС, 10<sup>6</sup>/орган
154,0±19,71*
АОК, %
8,8±0,32
АОК, 10<sup>6</sup>/орган
13,63±1,84*
IgM, log<sub>2</sub>T
1,02±0,56
IgG, log<sub>2</sub>T
5,2±1,12*
Опыт 2 (ЦФ+ЭЧ+ЭБ)
ОКС, 10<sup>6</sup>/орган
130±5,48*
АОК, %
9,4±0,34
АОК, 10<sup>6</sup>/орган
12,2±0,50*
IgM, log<sub>2</sub>T
2,75±0,48#*
IgG, log<sub>2</sub>T
2,75±0,25#
Примечания: здесь и в табл.4:* - различия с соответствующими значениями контроля 2 достоверны;# - различия с соответствующими значениями группы «опыт 1» достоверны.
8
Пример 4. У животных 2-й контрольной и обеих опытных групп моделировали экспериментальное иммунодефицитное состояние путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг). Далее животным 2-й контрольной группы вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 1-й опытной группы вводили деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП) в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 2-й опытной группы вводили деалкоголизированный экстракт череды трехраздельной (ЭЧ) в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Затем мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана - 6×10/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл). На 4-е сутки после иммунизации оценивали фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови мышей всех групп по способности этих клеток поглощать частицы латекса (концентрация взвеси частиц - 60 млн/мл); учитывали процент фагоцитов, поглотивших латекс (фагоцитарный индекс - ФИ) и среднее число частиц, поглощенное одной клеткой (фагоцитарное число - ФЧ) (табл.4).
Таблица 4
Влияние экстракта череды трехраздельной (ЭЧ) и настойки эхинацеи пурпурной (ЭП) на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови мышей линии СВА/CaLac (X±m) на фоне введения циклофосфана
Группа мышей
4 сут
ФИ (%)
ФЧ
Контроль 1 (ЭБ)
22,0±1,22
2,06±0,23
Контроль 2 (ЭБ+ЦФ)
3,00±0,32
1,30±0,18
Опыт 1 (ЭБ+ЦФ+ЭП)
11,8±1,56*
4,36±0,69*
Опыт 2 (ЭБ+ЦФ+ЭЧ)
14,60±3,32*
3,42±0,56*
Анализ результатов, представленных в табл.4, показывает, что инъекция животным цитостатика вызывала угнетение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови по сравнению с только иммунизированными мышами. Введение животным экстракта череды трехраздельной существенно стимулировало поглотительную активность нейтрофилов периферической крови (по сравнению с 2-й контрольной группой) на 4 сут эксперимента как за счет повышения доли нейтрофилов, способных поглощать латекс (ФИ), так и за счет увеличения количества поглощенных каждой клеткой частиц (ФЧ), при этом выявленный уровень стимуляции фагоцитоза сопоставим по выраженности с действием фармакопейной настойки эхинацеи пурпурной.
Таким образом, экстракт череды трехраздельной, полученный методом реперколяции с помощью 40% этанола в соотношении 1:1, проявляет иммуностимулирующие свойства, что выражается в усилении гуморального иммунного ответа (повышение общей клеточности лимфоидного органа, относительного, абсолютного количества антителообразующих клеток и титра специфических гемагглютининов М и G), возрастании уровня фагоцитоза нейтрофилов периферической крови, коррекции иммунодефицитного состояния, вызванного введением цитостатика (увеличение общего числа спленоцитов и абсолютного количества антителообразующих клеток и повышение титра гемагглютининов IgM, a также восстановление фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови), сравнимые по выраженности, а по отдельным показателям превосходящие, настойку эхинацеи пурпурной.
Литература
1. Хаитов Р.М. Иммунология. М.: Изд-во Гзотар-Медиа, 2006. - С.21-23.
2. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 15-изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2006. - С.736-743.
3. Вершинина С.Ф., Потявина Е.В. Применение природных биорегуляторов в онкологии // Вопросы онкологии. - 2003. - Т.49. - №2. - С.145-151.
4. Самородов В.Н., Поспелов С.В., Моисеева Г.Ф. и др. Фитохимический состав представителей рода эхинацеа (Echinacea Moench.) и его фармакологические свойства (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. - 1996. - №4. - С.32-37.
5. Percival S.S. Use of echinacea in medicine // Biochem. Pharmacol. - 2000. - Vol.60. - №2. - P.155-158.
6. Государственная фармакопея СССР. Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11 изд., доп. - М., 1989. - С.160.
7. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 15-изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2006. - С.318.
8. Иммунология: Практикум / Е.У.Пастер, В.В.Овод, В.К.Позур, Н.Е.Вихоть. - К.: Выща шк. Изд-во при Киев. ун-те, 1989. - С.270-271.
9. Иммунологические методы / Под ред. Г.Фримеля. - М.: Медицина, 1987. - С.211-218.
10. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells // Nature. - 1965. - V.207, №5001. - P.1106-1107.