ГЕННАЯ ТЕРАПИЯ ДЛЯ РЕЦЕССИВНОГО ДИСТРОФИЧЕСКОГО БУЛЛЕЗНОГО ЭПИДЕРМОЛИЗА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГЕНЕТИЧЕСКИ КОРРЕКТИРОВАННЫХ АУТОЛОГИЧНЫХ КЕРАТИНОЦИТОВ

1. Способ лечения буллезного эпидермолиза (БЭ) у субъекта, включающий:
получение от субъекта популяции клеток кожи;
корректирование клеток кожи ex vivo путем интеграции генетической конструкции, кодирующей полноразмерный белок человеческого коллагена VII (COL7A1) дикого типа;
культивирование генетически корректированных клеток с образованием слоя кератиноцитов; и
пересадку трансплантата слоя кератиноцитов на раневую поверхность кожи;
при этом клетки кожи корректируются путем трансдукции вирусом, содержащим генетическую конструкцию; при этом число копий провирусного генома (PGCN) трансдуцированной клетки кожи составляет не более 3 и, опционально, менее чем 2, 1,5, 1 или 0,5.
2. Применение популяции клеток кожи для лечения буллезного эпидермолиза (БЭ) у субъекта, при этом популяция клеток кожи корректируется путем трансдукции вирусом, содержащим генетическую конструкцию, кодирующую полноразмерный белок человеческого коллагена VII (COL7A1) дикого типа, для получения популяции трансдуцированных клеток кожи, имеющих число копий провирусного генома (PGCN), и при этом PGCN трансдуцированной популяции клеток кожи составляет не более 3 и, опционально, менее чем 2, 1,5, 1 или 0,5.
3. Способ по п. 1 или применение по п. 2, отличающиеся тем, что вирус включает ретровирус, AAV (аденоассоциированный вирус) или лентивирус.
4. Способ или применение по п. 3, отличающиеся тем, что ретровирус представляет собой LZRSE-вирус.
5. Способ или применение как указано в п. 3, отличающиеся тем, что ретровирус псевдотипирован GalV.
6. Способ или применение по любому из пп. 1-5, отличающиеся тем, что трансдуцированные таким образом клетки кожи отвечают критериям до высвобождения по эффективности вирусной трансдукции (VTE)> 50%.
7. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что рана свободна от некорректированных кератиноцитов раневой поверхности.
8. Способ по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что рану обрабатывают для удаления некорректированных кератиноцитов раневой поверхности.
9. Способ или применение по одному из пп. 1-8, отличающиеся тем, что субъект страдает рецессивным дистрофическим буллезным эпидермолизом (РДБЭ).
10. Способ или применение по любому из пп. 1-8, отличающиеся тем, что субъект является человеком.
11. Способ по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что слой кератиноцитов подвергают одному или нескольким тестам, выбранным из группы, состоящей из теста VTE, теста PGCN, теста на стерильность, теста на эндотоксин, теста на микоплазму, теста на стерильность окрашиванием по Граму, теста на жизнеспособность LEAES, теста после высвобождения, теста RCR, анализа Т-клеточной цитотоксичности, характеристики анти-C7 LH24 мкАТ, электронной микроскопии, иммуноэлектронной микроскопии, иммунофлуоресцентного окрашивания, экспрессии C7 и анализ ЯФ.
12. Способ или применение по п. 11, отличающиеся тем, что иммунофлуоресцентное окрашивание включает прямое или непрямое иммунофлуоресцентное окрашивание.
13. Способ или применение по любому из пп. 1-12, отличающиеся тем, что слой кератиноцитов помещают на бесклеточный матрикс, коллагеновый матрикс или биосовместимый волокнистый материал.
14. Способ или применение по п. 13, отличающиеся тем, что биосовместимый волокнистый материал изготавливают из термопластичной смолы, полиэтилена, полиэтилена с ультравысокой молекулярной массой, полиолефина с высокой молекулярной массой, непокрытого моноволокна полипропилена, полиэфирэфиркетона, полиэтилентерефталата, политетрафторэтилена, вспененного политетрафторэтилена, нейлона, силикона или любой их комбинации.
15. Способ или применение по любому из пп. 1-14, отличающиеся тем, что клетки кожи содержат кератиноциты.
16. Способ или применение по любому из пп. 1-15, отличающиеся тем, что клетки кожи содержат стволовые клетки.
17. Способ или применение по любому из пп. 1-16, дополнительно включающие дифференцировку стволовых клеток в кератиноциты.
18. Способ лечения эрозии роговицы у субъекта, включающий:
получение от субъекта популяции клеток роговицы;
корректирование клеток роговицы ex vivo путем интеграции генетической конструкции, кодирующей полноразмерный человеческий белок коллагена VII (COL7A1) дикого типа;
культивирование генетически корректированных клеток с образованием слоя клеток роговицы; и
пересадку трансплантата слоя клеток роговицы на поверхность роговицы.
19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что клетки роговицы содержат эпителиальные клетки роговицы.
20. Способ по п. 18 или  19, отличающийся тем, что клетки роговицы содержат стволовые клетки.
21. Способ по любому из пп. 18-20, дополнительно включающий дифференцировку стволовых клеток в эпителиальные клетки роговицы.
22. Способ по любому из пп. 18-21, отличающийся тем, что клетки роговицы корректируют путем трансдукции вирусом, содержащим генетическую конструкцию, при этом вирус включает ретровирус, лентивирус или AAV.
23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что ретровирус представляет собой LZRSE-вирус.
24. Способ по п. 22, отличающийся тем, что ретровирус псевдотипирован GalV.
25. Способ по любому из пп. 18-24, отличающийся тем, что трансдуцированные таким образом клетки роговицы, отвечают критериям до высвобождения по эффективности вирусной трансдукции (VTE)> 50% и числу копий провирусного генома (PGCN) ≤ 3 и, опционально, менее чем 2; 1,5; 1 или 0,5.
26. Способ по любому из пп. 18-25, отличающийся тем, что субъект страдает рецессивным дистрофическим буллезным эпидермолизом (РДБЭ).
27. Способ по любому из пп. 18-26, отличающийся тем, что субъект является человеком.
28. Способ по любому из пп. 18-27, отличающийся тем, что слой клеток роговицы подвергают одному или нескольким тестам, выбранным из группы, состоящей из теста VTE, теста PGCN, теста на стерильность, теста на эндотоксин, теста на микоплазму, теста на стерильность окрашиванием по Граму, теста на жизнеспособность LEAES, теста после высвобождения, теста RCR, анализа Т-клеточной цитотоксичности, характеристики анти-C7 LH24 мкАТ, электронной микроскопии, иммуноэлектронной микроскопии, иммунофлуоресцентного окрашивания, экспрессии C7 и анализ ЯФ.
29. Способ по п. 28, отличающийся тем, что иммунофлуоресцентное окрашивание включает прямое или непрямое иммунофлуоресцентное окрашивание.
30. Способ по любому из пп. 18-29, отличающийся тем, что слой клеток роговицы помещают на бесклеточный матрикс, коллагеновый матрикс или биосовместимый волокнистый материал.
31. Способ по п. 30, отличающийся тем, что биосовместимый волокнистый материал изготовлен из термопластичной смолы, полиэтилена, полиэтилена с ультравысокой молекулярной массой, полиолефина с высокой молекулярной массой, непокрытого моноволокна полипропилена, полиэфирэфиркетона, полиэтилентерефталата, политетрафторэтилена, вспененного политетрафторэтилена, нейлона, силикона или любой их комбинации.
32. Композиция, содержащая слой кератиноцитов, при этом слой кератиноцитов получают способом, включающим этапы:
получения популяции клеток кожи субъекта;
корректирования клеток кожи ex vivo путем интеграции генетической конструкции, кодирующей полноразмерный человеческий белок коллагена VII (COL7A1) дикого типа; и
культивирование генетически корректированных клеток с образованием слоя кератиноцитов;
при этом клетки кожи корректируются путем трансдукции вирусом, содержащим генетическую конструкцию; при этом PGCN трансдуцированной клетки кожи составляет не более 3.
33. Композиция по п. 32, отличающаяся тем, что вирус включает ретровирус, лентивирус или AAV.
34. Композиция по п. 33, отличающаяся тем, что ретровирус представляет собой LZRSE-вирус.
35. Композиция по любому из пп. 33-34, отличающаяся тем, что ретровирус псевдотипирован GalV.
36. Композиция по любому из пп. 32-35, отличающаяся тем, что трансдуцированные таким образом клетки кожи отвечают критериям до высвобождения по эффективности трансдукции вируса (VTE)> 50%.
37. Композиция по любому из пп. 32-36, отличающаяся тем, что субъект страдает рецессивным дистрофическим буллезным эпидермолизом (РДБЭ).
38. Композиция по любому из пп. 32-37, отличающаяся тем, что слой кератиноцитов подвергают одному или нескольким тестам, выбранным из группы, состоящей из теста VTE, теста PGCN, теста на стерильность, теста на эндотоксин, теста на микоплазму, теста на стерильность окрашиванием по Граму, теста на жизнеспособность LEAES, теста после высвобождения, теста RCR, анализа Т-клеточной цитотоксичности, характеристики анти-C7 LH24 мкАТ, электронной микроскопии, иммуноэлектронной микроскопии, иммунофлуоресцентного окрашивания, экспрессии C7 и анализ ЯФ.
39. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что иммунофлуоресцентное окрашивание включает прямое или непрямое иммунофлуоресцентное окрашивание.
40. Композиция по любому из пп. 32-39, отличающаяся тем, что клетки кожи содержат кератиноциты.
41. Композиция по любому из пп. 32-40, отличающаяся тем, что клетки кожи содержат стволовые клетки.
42. Композиция по п. 41, отличающаяся тем, что стволовые клетки дифференцируются в кератиноциты.
43. Фармацевтическая композиция, содержащая слой кератиноцитов, указанный слой кератиноцитов, содержащий клетки кожи, интегрированные ex vivo с генетической конструкцией, кодирующим функциональный белок COL7A1.
44. Фармацевтическая композиция по п. 43, отличающаяся тем, что клетки кожи дифференцируются из стволовых клеток, интегрированных ex vivo с генетической конструкцией, кодирующим функциональный белок COL7A1.
45. Фармацевтическая композиция по п. 43-44, отличающаяся тем, что клетки кожи получают от субъекта.
46. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 43-44, отличающаяся тем, что субъект страдает от РДБЭ.
47. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 43-46, отличающаяся тем, что субъект является человеком.
48. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 43-47, отличающаяся тем, что функциональный белок COL7A1 представляет собой полноразмерный белок человека COL7A1 дикого типа.
49. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 43-48, отличающаяся тем, что функциональный белок COL7A1 содержит генетическую модификацию изполноразмерного белка человека COL7A1 дикого типа.
50. Фармацевтическая композиция по п. 49, отличающаяся тем, что генетическая модификация включает вставку, делецию и/или мутацию.
51. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 43-50, отличающаяся тем, что клетки кожи или стволовые клетки трансдуцированы вирусом, содержащим генетическую конструкцию, при этом вирус включает ретровирус, лентивирус или AAV.
52. Фармацевтическая композиция по п. 51, отличающаяся тем, что ретровирус представляет собой LZRSE-вирус.
53. Фармацевтическая композиция по п. 51, отличающаяся тем, что ретровирус псевдотипирован GalV.
54. Фармацевтическая композиция по п. 51, отличающаяся тем, что трансдуцированные клетки кожи отвечают критериям до высвобождения по эффективности трансдукции вируса (VTE)> 50% и числу копий провирусного генома (PGCN) ≤3.
55. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 43-54, отличающаяся тем, что слой кератиноцитов подвергают одному или нескольким тестам, выбранным из группы, состоящей из теста VTE, теста PGCN, теста на стерильность, теста на эндотоксин, теста на микоплазму, теста на стерильность окрашиванием по Граму, теста на жизнеспособность LEAES, теста после высвобождения, теста RCR, анализа Т-клеточной цитотоксичности, характеристики анти-C7 LH24 мкАТ, электронной микроскопии, иммуноэлектронной микроскопии, иммунофлуоресцентного окрашивания, экспрессии C7 и анализ ЯФ.
56. Фармацевтическая композиция по п. 55, отличающаяся тем, что иммунофлуоресцентное окрашивание включает прямое или непрямое иммунофлуоресцентное окрашивание.
57. Фармацевтическая композиция, содержащая слой клеток роговицы, указанные клетки роговицы, содержащие клетки роговицы, интегрированные ex vivo с генетической конструкцией, кодирующим функциональный белок COL7A1.
58. Фармацевтическая композиция по п. 57, отличающаяся тем, что клетки роговицы дифференцируются из стволовых клеток, интегрированных ex vivo с генетической конструкцией, кодирующим функциональный белок COL7A1.
59. Фармацевтическая композиция по п. 57 или 58, отличающаяся тем, что клетки роговицы получают от субъекта.
60. Фармацевтическая композиция по п. 59, отличающаяся тем, что субъект страдает от РДБЭ.
61. Фармацевтическая композиция по п. 59, отличающаяся тем, что субъект является человеком.
62. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 57-61, отличающаяся тем, что функциональный белок COL7A1 представляет собой полноразмерный белок человека COL7A1 дикого типа.
63. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 57-62, отличающаяся тем, что клетки роговицы или стволовые клетки трансдуцированы вирусом, содержащим генетическую конструкцию, при этом вирус включает ретровирус, лентивирус или AAV.
64. Фармацевтическая композиция по п. 63, отличающаяся тем, что ретровирус представляет собой LZRSE-вирус.
65. Фармацевтическая композиция по п. 63, отличающаяся тем, что ретровирус псевдотипирован GalV.
66. Фармацевтическая композиция по п. 63, отличающаяся тем, что трансдуцированные клетки отвечают критериям до высвобождения по эффективности трансдукции вируса (VTE))> 50% и числу копий провирусного генома (PGCN) ≤3.
67. Фармацевтическая композиция по п. 66, отличающаяся тем, что PGCN составляет менее 2.