Методы индукции толерогенных дендритных клеток у животных и человека

118. Ma D.Y., Clark E.A. The role of CD40 and CD40L in dendritic cells. Semin. Immunol. 2009; 21(5): 265—72.

119. Wong B.R., Josien R., Lee S.Y., Sauter B., Li H., Steinman R.M., Choi Y. TRANCE (Tumor Necrosis Factor [TNF]-related Activation-induced Cytokine), a new TNF family member predominantly expressed in T cells, is a dendritic cell — specific survival factor. J. Exp. Med. 1997; 186(12): 2075—80.

120. Ouaaz F., Arron J., Zheng Y., Choi Y., Beg A.A. Dendritic cell development and survival require distinct NF-kappaB subunits. Immunity. 2002; 16: 257—70.

121. Amir R., Haecker H., Karin M., Ciechanover A. Mechanism of processing of the NF-kappa B2 p100 precursor: identification of the specific polyubiquitin chain-anchoring lysine residue and analysis of the role of NEDD8-modification on the SCF(beta-TrCP) ubiquitin ligase. Oncogene. 2004; 23(14): 2540—7.

122. Lind E.F., Ahonen C.L., Wasiuk A., Kosaka Y., Becher B., Bennett K.A., Noelle R.J. Dendritic cells require the NF-kappaB2 pathway for cross-presentation of soluble antigens. J. Immunol. 2008; 181: 354—63.

123. Yoneyama M., Fujita T. RlG-I family RNA helicases: cytoplasmic sensor for antiviral innate immunity. Cytokine Growth Factor Rev. 2007; 18(5-6): 545—51.

124. Kawai T., Akira S. Toll-like receptor and RIG-I-like receptor signaling. Ann. N.Y. Acad. Sci. 2008; 1143: 1—20.

125. Su H., Bidere N., Zheng L., Cubre A., Sakai K., Dale J. et al. Requirement for caspase-8 in NF-kappaB activation by antigen receptor. Science. 2005; 307(5714): 1465—8.

126. West A.P., Shadel G.S., Ghosh S. Mitochondria in innate immune responses. Nat. Rev. Immunol. 2011; 11: 389—402.

127. Maelfait J., Beyaert R. Emerging role of ubiquitination in antiviral RIG-I signaling. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2012; 76(1): 33—45.

128. Thompson A.J., Locarnini S.A. Toll-like receptors, RIG-I-like RNA helicases and the antiviral innate immune response. Immunol. Cell Biol. 2007; 85(6): 435—45.

129. Zhang Q., Xu X., Yuan Y., Gong X., Chen Z., Xu X. IPS-1 plays a dual function to directly induce apoptosis in murine melanoma cells by inactivated Sendai virus. Int. J. Cancer. 2014; 134(1): 224—34.

130. Duewell P., Steger A., Lohr H., Bourhis H., Hoelz H., Kirchleitner S.V. et al. RIG-I-like helicases induce immunogenic cell death of pancreatic cancer cells and sensitize tumors toward killing by CD8(+) T cells. Cell Death Differ. 2014; 21(12): 1825—37.

REVIEWS

131. Thome M., Schneider P., Hofmann K., Fickenscher H., Meinl E., Neipel F. et al. Viral FLICE-inhibitory proteins (FLIPs) prevent apoptosis induced by death receptors. Nature. 1997; 386: 517—21.

132. Sarid R., Sato T., Bohenzky R.A., Russo J.J., Chang Y. Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus encodes a functional Bcl-2 homologue. Nat. Med. 1997; 3: 293—8.

133. Wang H.W., Sharp T.V., Koumi A., Koentges G., Boshoff C. Characterization of an anti-apoptotic glycoprotein encoded by Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus which resembles a spliced variant of human survivin. EMBO J. 2002; 21: 2602—15.

134. Cohen J.I. The biology of Epstein-Barr virus: lessons learned from the virus and the host. Curr. Opin. Immunol. 1999; 11: 365—70.

135. Kofod-Olsen E., Ross-Hansen K., Schleimann M.H., Jensen D.K., Moller J.M. et al. U20 is responsible for human herpesvirus 6B inhibition of tumor necrosis factor receptor-dependent signaling and apoptosis. J. Virol. 2012; 86: 11483—92.

136. Utkin O.V., Novikov V.V. Death receptors in modulation of apoptosis. Us-pekhi sovremennoy biologii. 2012; 132

137. Jerome K.R., Fox R., Chen Z., Sears A.E., Lee H., Corey L. Herpes simplex virus inhibits apoptosis through the action of two genes, Us5 and Us3. J. Virol. 1999; 73(11): 8950—7.

138. Medici M.A., Sciortino M.T., Perri D., Amici C., Avitabile E., Ciotti M. et al. Protection by herpes simplex virus glycoprotein D against Fas-mediated apoptosis: role of nuclear factor kappaB. J. Biol. Chem. 2003; 19: 36059—67.

139. Novak N., Peng W.M. Dancing with the enemy: the interplay of herpes simplex virus with dendritic cells. Clin. Exp. Immunol. 2005; 142(3): 405—10.

140. Jones C.A., Fernandez M., Herc K., Bosnjak L., Miranda-Saksena M., Boad-le R.A., Cunningham A. Herpes simplex virus type 2 induces rapid cell death and functional impairment of murine dendritic cells in vitro. J. Virol. 2003; 77: 11139—49.

141. Salio M., Cella M., Suter M., Lanzavecchia A. Inhibition of dendritic cell maturation by herpes simplex virus. Eur. J. Immunol. 1999; 29: 3245—53.

Поступила 20.05.16 Принята в печать 07.06.16

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2016 УДК 612.014.3-018.83

Сенников С.В., Облеухова И.А.

МЕТОДЫ ИНДУКЦИИ ТОЛЕРОГЕННЫХ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК У ЖИВОТНЫХ И ЧЕЛОВЕКА

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии», 630099, г Новосибирск, Россия

В настоящем обзоре изложены сведения о применяемых подходах получения дендритных клеток (ДК), обладающих толерогенными свойствами, у человека и животных. Дана характеристика толерогенных дендритных клеток (толДК) согласно современным представлениям о субпопуляциях ДК мыши и человека. Все наиболее часто используемые стратегии, направленные на получение толДК, разделены по трем группам: 1. Применение иммуноре-гуляторных препаратов и биологических агентов; 2. Генетические модификации; 3. Сокультивирование с апоптоти-ческими клетками. По всем группам методов проведен анализ основных результатов, полученных при генерации толДК и использовании их в дальнейшем для развития иммуносупрессии либо иммунологической толерантности. Сделан акцент на том, что в подавляющем большинстве работ исследователями были получены признаки общей иммуносупрессии, и только в небольшом количестве публикаций приведены доказательства получения антиген-специфической толерантности, вызванной толДК. Такие исследования вызывают наибольший интерес, объясняющийся широкой перспективой применения используемых подходов для внедрения в клиническую практику при терапевтическом воздействии на организм пациента. Результаты анализа литературы свидетельствуют о целесообразности использования только тех методов генерации толДК, которые способны привести к развитию антиген-специфической иммунологической толерантности. Эти данные позволяют расширить понимание регуля-торных свойств толДК в контексте их терапевтического потенциала при аутоиммунных заболеваниях и при трансплантационных иммунологических осложнениях.

Ключевые слова: толерогенные дендритные клетки; иммунологическая толерантность; антиген-специфический иммунный ответ; иммуносупрессия; регуляторные Т-клетки. Для цитирования: Сенников С.В., Облеухова И.А. Методы индукции толерогенных дендритных клеток у животных и человека. Иммунология. 2016; 37(5): 291-296. DOI: 10.18821/0206-4952-2016-37-5-291-296

Для корреспонденции: Сенников Сергей Витальевич, д-р мед. наук, проф., зав. лаб. молекулярной иммунологии ФГБНУ «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии», E-mail: sennikov_sv@mail.ru

ОБЗОРЫ

Sennikov S.V., Obleukhova I.A.

METHODS OF INDUCTION TOLEROGENIC DENDRITIC CELLS IN ANIMALS AND HUMANS

Federal State Budgetary Scientific Institution «Research Institute of Fundamental and Clinical Immunology», 630099, Novosibirsk, Russian Federation

This review provided the information on the applied approaches for producing dendritic cells (DC) with tolerogenic properties in human and animals. The characteristic of tolerogenic dendritic cells (tolDC) according to modern classification concepts of DC subsets in mouse and human was provided. The most commonly used strategies to obtain tolerogenic DC were divided into three groups: 1. Using of immunoregulatory drugs and biological agents; 2. Genetic modification; 3. Culturing in the presence of apoptotic cells. For all methods the analysis of the key results of tolDC generation and their use in the future for the development of immunosuppression or immune tolerance was conducted. The fact that the vast majority of research works receive only signs of general immune suppression and only a small number of publications presented evidences of obtaining antigen-specific tolerance induced tolDC was accentuated. Such studies are of most interest to explain the application broad prospect for implementation in clinical practice for the therapeutic effects. The results of the literature analysis indicate the feasibility of using only those methods generate tolerogenic dendritic cells, which can lead to the development of antigen-specific immune tolerance. These data allow us to expand the understanding of regulatory properties of tolDK in the context of their therapeutic potential in autoimmune diseases and transplant immunological complications.

Keywords: tolerogenic dendritic cells; immunological tolerance; antigen-specific immune response; immunosuppression; regulatory T cells.

For citation: Sennikov S.V., Obleukhova I.A. Methods of induction tolerogenic dendritic cells in animals and humans. Immunologiya. 2016; 37(5): 291-296. DOI: 10.18821/0206-4952-2016-37-5-291-296

For corespondence: Sennikov Sergey Vitalievitch, Dr. Sci. Med, PhD, MD, Prof., Head of the Laboratory of Molecular Immunology of the "Research Institute of Fundamental and Clinical Immunology", E-mail: sennikov_sv@mail.ru

conflict of interest. The authors declare no conflict of interest. Funding. The work was supported by the RSF. Agreement No. 16-15-00086from 11.01.2016.

Received 06.06.16 Accepted 07.06.16

введение

Способность дендритных клеток (ДК) инициировать и определять тип антиген-специфического иммунного ответа (клеточный, гуморальный, анергия/толерантность) позволяет рассматривать ДК в качестве объектов и мишеней в разработке иммунотерапевти-ческих подходов лечения. ДК представляют собой гетерогенную группу клеток костномозгового происхождения. Встречаются как в тимусе, так и во вторичных лимфоидных органах, циркулируют в периферических тканях, таких как кожа, слизистые оболочки, кишечник, легкие, печень. Как антиген-презентирующие клетки они специализируются на захвате антигена, его процессинге и представлении; при активации (как это происходит и после трансплантации органов) они проявляют повышенную способность мигрировать с периферии через афферентную лимфу или кровь в региональные лимфоидные ткани, где взаимодействуют с Т-клетками и регулируют их функции [1]. В организме человека выделяют две основные и принципиально различные по функциям и по экспрессии маркеров клеточной поверхности субпопуляции ДК: миелоидные ДК (мДК) и плазмоцитоидные ДК (пДК) [2, 3]. В результате многочисленных работ зарегистрировано получение толерогенных свойств как у мДК, так и у пДК (мыши и человека), включая способность мДК человека индуцировать антиген-специфическую толерантность in vivo у условно здоровых доноров [4, 5]. Установлено, что толерогенные ДК могут индуцировать различные популяции Т-регуляторных клеток (Т-рег), в зависимости от условий культивирования и фактора толероген-ной дифференцировки ДК [6]. Например, использование витамина D3 для индукции ДК из предшественников моноцитов приводит к получению полузрелых ДК, характеризующихся низким уровнем экспрессии костимуляторных молекул, но повышенным уровнем IDO, IL-10,Trail, PDL-1, что оказывается критичным для индукции IL-10, экспрессирующих Т-рег. Экспозиция витамина D3 с разными субпопуляциями ДК приводит к получению разных Т-рег. Так, сокультивирование витамина D3 и клеток Лангерганса приведет к получению CD25+Foxp3+ Т-рег [77], тогда как культивирование витамина D3 с ДК кожи влечет индукцию Foxp3-Т-рег1 клеток [8]. Иммуносупрессивные агенты, такие как кортикостероиды, также часто применяются для индукции толДК: дексаметазон-индуцированные ДК характеризуются низкой экспрессией МНС II класса и костимуляторных молекул и повышенным уровнем ILT2, ILT3, экспрессией и секрецией IL-10, а также имеют способ-

ность индуцировать контакт-зависимые Т-рег, которые супресси-руют Т-клеточный ответ антиген-зависимым способом [9]. Показано, что снижение активации транскрипционного фактора NF-kB в ДК приводит к индукции толерогенного фенотипа. Обработка ДК BAY-11-7082 ведет к способности индуцировать Т-рег [10]. ДК, культивируемые в присутствии HGF (фактор роста гепатоци-тов), экспрессируют толерогенный фенотип, характеризующийся высоким соотношением IL-10/IL-12 и способностью индуцировать Foxp3 Т-рег [11, 12]. Таким образом, существующие подходы генерации ДК с толерогенными свойствами отличаются разнообразием и принципиальной направленностью воздействий на процессы дифференцировки ДК, что доказывает необходимость детального изучения возможности получения толДК, а также их экспериментальной и клинической апробации для изменения типа иммунного реагирования (индукция толерантности) при аутоиммунных заболеваниях и трансплантационных осложнениях.

Характеристика толерогенных ДК у человека и мышей

Как правило, ДК периферических тканей человека все экс-прессируют молекулы MHC II класса (HLA-DR+). Циркулирующие ДК линейно-негативные (Lin-) и экспрессируют BDCA антигены; а именно мДК, являются Lin-/MHC II+/CD11c+/ CD123-(IL-3Ra)/BDCA-1+, пДК представляют собой Lin-/MHC II+/CD11c-/CD123+/BDCA-2+ и Ig-like transcript 7+. У мышей мДК можно описать как CD11c+CD11b+NK1.1-, в то время как пДК — B220+CD11cloCD11b-Gr-1+, экспрессирующие мышиные Ag-1/ BM стромальных клеток Ag (BST)-2/CD317. Другим маркером пДК мыши служат Siglec-H и хемокиновый рецептор CCR9. Основываясь на фенотипической и функциональной характеристиках, ДК идентифицируются по различным стадиям зрелости: от незрелого, полузрелого до зрелого состояния. Незрелые ДК обладают высокой способностью к эндо- и фагозитозу, низким уровнем экспрессии MHC II и костимуляторных молекул (CD40, CD80 и CD86) и низким Т-стимуляторным потенциалом в отличие от зрелых ДК, экспрессирующих высокие уровни МНС II, CD80 и CD86, имеющих мощный миграционный потенциал, связанный с повышенной экспрессией CCR7, и секретирующих IL-12. Также зарегистрировано, что зрелые ДК оказывают сти-муляторный эффект на генерацию эффекторных Т-клеток. В то же время опубликованы данные, в которых показано, что in vitro зрелые ДК в присутствии IL-2 способствуют развитию Т-рег из

REVIEWS

наивных Т-клеток у мышей и повышают их супрессорную активность [13], содействуя подавлению аутоиммунных реакций [14]. Тем не менее большинство авторов связывают незрелые ДК с индукцией Т-клеточной анергии и генерацией T-рег. Незрелые мДК считаются прототипом толерогенных ДК из-за низкого сти-муляторного потенциала в отношении Т-клеток. Первые работы, посвященные толерогенному потенциалу незрелых ДК (CD205+, MHC II+, CD40dim CD80dim и CD86dim), выполнены в 1996 г. на мышиных моделях по гетеротипической трансплантации сердца с оценкой периода выживания аллотрансплантата [15, 16]. В этом исследовании незрелые ДК, полученные из костного мозга донора, культивированные в присутствии rmGM-CSF и введенные за 7 сут до проведения трансплантации, приводят к значительному увеличению периода выживаемости трансплантата либо по отдельности, либо в сочетании с блокадой костимуляторных факторов. Аналогичные результаты получены и другими исследователями, доказавшими, что введенные за 7 сут до трансплантации незрелые мДК, устойчивые к созреванию, могут продлить период выживания гаплотип-специфичного аллотрансплантата сердца на неопределенный срок (более 100 сут) [17]. ДК мышей, генерируемые в присутствии TNF-a, IL-10, TGF-P, дексамета-зона, приобретают фенотип полузрелых ДК (semi-mature ДК) со средним уровнем экспрессии MHc II, cD40, cD80 и cD86 [18—20]. Хотя, по последним данным, применение TNF-a приводит к снижению иммуномодулирующих свойств мышиных мезенхимальных стволовых клеток (МСК) на клетки иммунной системы посредством повышения экспрессии костимуляторных молекул, таких как ICOSL и HLA-DR, снижение PDL-1 и PDL-2 экспрессии и уменьшения секреции TGF-P и IL-10 ДК, а также ингибирования поляризации Т-клеток в Th2 и T-рег в отличие от IFN-y, который приводит к усилению иммуносупрессивного влияния МСК на иммунную систему посредством индукции то-лерогенных ДК с повышенным уровнем экспрессии IDO и увеличения популяции T-рег [21].

Методы генерации толерогенных ДК у мышей и человека

Все наиболее часто используемые стратегии, направленные на получение толерогенных ДК, можно разделить на три группы:

1. Применение иммунорегуляторных препаратов и биологических агентов.

2. Генетические модификации.

3. Сокультивирование с апоптотическими клетками.

Источник: гемопоэтические предшественники (CD34 + клетки костного мозга и периферические моноциты).

Методы, основанные на применении биологических агентов и препаратов

Иммунорегуляторными препаратами и биологическими агентами, способными индуцировать вызывающий иммунологическую толерантность ДК, можно считать IL-10, TGF-P, G-CSF, PGE2, гистамин, витамин D3 и его аналоги, глюкозамин, HLA-G, и протопорфирин кобальта, который индуцирует экспрессию гемоксигеназы-1 (HO-1). Кроме того, разные иммуносупрессив-ные препараты, такие как кортикостероиды, циклоспорин, такро-лимус, рапамицин, аспирин, деоксипергуалин, и микофенолат мофетил, были использованы для модуляции дифференциации и функциональной активности толерогенных ДК [22]. Как правило, эти молекулы способны предотвратить процесс созревания ДК и/или их активации, а также снижают продукцию IL-12 дендритными клетками. Применение малых доз GM-CSF при генерации ДК может быть причиной толерогенных свойств ДК. Еще в работе 1996 г. показано, что генерированные за 5—6 сут в присутствии малых доз GM-CSF (4 нг/мл) из костного мозга мышей-доноров незрелые ДК и введенные в количестве 2 млн клеток за 7 дней до аллогенной гетеротопической трансплантации сердца мышам повышают медиану периода выживаемости аллотрансплантата у реципиентов с 9,5 до 22 сут. Причиной этого авторы считают дефицит экспрессии костимуляторных молекул (cD 80, cD86) ДК. [15]. TNF-a (ФНО-a) служит еще одной мишенью, поскольку

при анти-ФНО-а-терапии в лечении пациентов с ревматоидным артритом снижается способность к созреванию ДК, а также продукция провоспалительных цитокинов и хемокинов.

Для создания толДК может быть использован прием индукции или повышение регуляции других молекул. Показано, что PD-L1 оказывает негативную регуляцию на Т-клеточный ответ и формирует толерогенный фенотип у ДК [23]. Воздействие витамина D3 на моноцитарные ДК приводит к индукции полузрелых ДК, характеризующихся низкой экспрессией костимуляторных молекул, но повышенным уровнем IDO, IL-10, TRAIL и PDL-1, которые оказываются критическими для индукции IL-10, экс-прессирующих T-рег. В работе, где использовали и виамин D3, и дексаметазон для получения толерогенных ДК из моноцитов человека, установлено, что ^Ю3-толДК обладают повышенной эксперссией PDL-1 по сравнению с Dex-ДК [9]. В этой же работе установлено, что и ЖЭ3-ДК, и Dex-ДК характеризуются низкой экспрессией MHc II и костимуляторных молекул, повышенным уровнем экспрессии ILT2, ILT3 и IL-10 секреции, приобретают способность индуцировать контакт-зависимые 1рег, супрессиру-ющие Т-клеточный ответ по антиген-зависимому образу (определение супрессорной активности в культуре CD4+CD25-Т-клеток и аллогенных Dex- или ЖЭ3-ДК). Используется также рапамицин, который подавляет генерацию и созревание ДК из моноцитов человека, а также продукцию ДК IL-12 наряду с IL-10, секреция которого также была снижена, что подтверждало больший иммуно-супрессивный эффект рапамицина на продукцию цитокинов ДК, чем на модуляцию толерогенного профиля [24]. Напротив, результаты, полученные на мышиных моделях, где ДК, полученные из костного мозга и обработанные рапамицином, не оказывают стимулирующий эффект на Т-клетки, и введение in vivo таких клеток приводит к значительному увеличению периода выживаемости аллотрансплантата путем индукции алло-специфических FOXP3+ Т-регуляторных клеток [24, 25].

Другое важное соединение для генерации толерогенных ДК — IL-10. В работе использованы два протокола, которые приводят к дифференциации различных типов толДК в зависимости от того, когда добавляется IL-10: в начале культивирования или в конце. Обнаружено, что при добавлении IL-10 в конце культивирования генерируемые ДК имеют незрелый фенотип и обладают устойчивостью к созревающим стимулам. Эти ДК способны индуцировать состояние анергии у CD4+ T-клеток и CD8+ Т-клеток на специфический антиген [26—29].

Некоторые из применяемых для генерации толДК соединений препятствуют ядерной транслокации белков членов семейства NF-kB. Показано, что наличие RelB белка из семейства NF-kB критично для созревания ДК in vivo [30]. В соответствии с вышеупомянутой ролью NF-kB в индукции толерантности в 2007 г. опубликована работа, где установлено, что применение BAY-11-7082-обработанных ДК индуцирует антиген-специфическую им-муносупрессию при лечении экспериментального ревматоидного артрита у мышей. Отмечено подавление воспаления и эрозивных проявлений после применения антиген-специфичных ДК (mBSA-BAY-H-7082-обработанных ДК), причем такого эффекта не было получено, когда применялись антиген-неспецифичные ДК (KLH-BAY-H-7082-обработанные ДК). Установленная иммуносупрессия отменялась посредством внутрисуставного введения IL-1P и возобновлялась посредством второго введения антиген-специфичных ДК (mBSA-BAY-11-7082-обработанных ДК) [10]. В другом исследовании проводили сравнение четырех различных протоколов для генерации толДК: 1) с применением противодиабетического препарата троглитазона (TGZ-ДК); 2) с ингибитором NF-kB BAY-11-7082 (BAY-ДК); 3) с метаболитом простагландина D2-15d-PGJ2 (PGJ-ДК); 4) с сочетанием дексаметазона и витамина D3 (DexVD3-ДК) — по установлению фенотипических характеристик, генерированных из моноцитов человека толДК, продукции цитокинов, а также по способности к стимуляции Т-клеток. Фенотип TGZ-ДК и BAY-ДК был сравним с фенотипом незрелых ДК, в то время как DexVD3-ДК казались более похожими на макрофагальный фенотип. Анализ продукции цитокинов показал, что у DexvyD^fl^ были более эффективными продуцентами IL-10 и обладали сниженной продукцией провоспалительных цитокинов. Также DexVD3-^^

ОБЗОРЫ

снижали пролиферативную активность Т-клеток, и дальнейший анализ этих Т-клеток показал, что индуцированы были Т-рег1, а не FoxP3+ T-рег. Кроме того, обнаружена способность DexVD3-,3K к индукции регуляторных В-клеток [31].

Эпигенетические процессы, такие как метилирование ДНК, гистоновые модификации (ацетилирование, метилирование, фосфорилирование и убиквитинирование) и появление неко-дирующих РНК, имеют большое значение для регуляции экспрессии генов. Гистоновое ацетилирование и деацетилирование опосредуются соответственно гистон-ацетилтрансферазами и гистон-деацетилазами (HDAC), которые играют существенную роль в регуляции экспрессии генов. Роль гистон-деацетилазы (HDACs) заключается в переключении между активацией ДК и толерантностью. В клинической практике используют два ингибитора HDAC: вальпроат натрия и MS-275, которые могут привести к индуцированию толерогенных ДК, сопровождающемуся снижением экспрессии CD1a, костимулирующих молекул и молекул адгезии (CD40, CD80 и CD83), продукцией провоспали-тельных цитокинов (TNF-a, IL-6 и IL-12) и нарушением способности стимулировать аллогенную пролиферацию лимфоцитов. Геномный анализ подтвердил регуляторное воздействие ингибиторов HDAC [32, 33]. Тем не менее при исследовании влияния ингибиторов в одиночку получены противоречивые результаты. В исследовании на модели рассеянного склероза у животных, по священном применению ингибитора HDAC (субероиланилида гидроксамовой кислоты (SAHA) для генерации ДК со стабильным толерогенным фенотипом, удалось получить подавление аутоиммунных реакций. Показано, что вызванная способность к иммунологической толерантности ДК может быть увеличена путем непрерывной обработки во время дифференцировки ДК in vitro по сравнению со стандартным 24 ч добавлением к уже терминально-дифференцированным ДК. Показано, что in vitro обработка SAHA уменьшает генерацию новых CDllc+ДК из костного мозга мыши. SAHA-генерируемые ДК обладают минимальной антиген-презентирующей функцией, о чем свидетельствует снижение эндоцитоза миелина, снижение экспрессии МНС II и отсутствие увеличения экспрессии костимулирующих молекул на стимуляцию LPS. Кроме того, у SAHA-генерируемых ДК снижена продукция провоспалительных цитокинов и молекул, участвующих в апоптозе, индукции воспалительного ответа, миграции и сигнализации TLR, и они обладают сниженной иммуностимулирующей способностью по сравнению с необработанными ДК. Установлено, что основной механизм включает в себя снижение STATl-фосфорилирования и не зависит от активации STAT6. Хотя результаты in vitro были многообещающими, применение SAHA-генерируемых ДК не оказало клинического улучшения при развитии экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита у мышей. In vitro эксперименты показали, что толерогенный фенотип SAHA-генерируемых ДК обратим [34].

Методы, основанные на генетических манипуляциях

Генетические манипуляции ДК позволяют добиться сверхэкспрессии ДК большого числа иммуносупрессивных трансгенных продуктов, таких как IL-10, IL-4, TGF-ß CTLA4, которые инги-бируют процесс представления антигена, IDO и Foxp3, которые ингибируют пролиферацию Т-клеток, PDL1, SOCS1, которые поддерживают анергию T-клеток или сниженный ответ, CD95L, TRAIL, FasL, способствующие апоптозу T-клеток, или могут привести к сайлесингу иммуностимуляторных молекул (CD40, CD80, CD86) и к подавлению провоспалительных цитокинов, таких как IL-12 [35]. В последнее время исследуют терапевтический потенциал ДК при аутоиммунных заболеваниях, для усиления то-лерогенных свойств ДК применяют трансфекцию экзогенной ДНК. Полученные путем трансфекции ДНК, кодирующей FasL или TRAIL, ДК приводят к индукции Т-клеточного апоптоза и предотвращают отторжение трансплантатов сердца в мышиных моделях [36, 37]. Гиперэкспрессия ингибирующих молекул, IL-10, TGF-ß, CTLA-4 и SOCS1, позволяют толДК более эффективно индуцировать T-рег. В качестве альтернативного подхода для создания толДК применяется нокаут или подавление экспрессии (сайлесинг) генов провоспалительных молекул или цитокинов,

например IL-12 и NF-кВ, что приводит к увеличению периода выживания аллотрансплантатов сердца у мышей [38]. При использовании интерферирующей РНК, направленной на IL-12p35, для генерации из костного мозга ДК с подавленной экспрессией гена IL-12 удалось достигнуть периода длительного выживания кишечных аллотрансплантатов у крыс [39]. На основании успешных доклинических исследований [40] в 2011 г. проведено рандомизированное двойное слепое клиническое испытание I фазы по применению иммуносупрессивных ДК, генерированных из периферической крови больных сахарным диабетом 1-го типа при помощи лейкафереза с обработкой смесью антисмысловых оли-гонуклеотидов, направленных на первичные транскрипты CD40, CD80, CD86 [41].

Методы, основанные на применении апоптотических клеток

Апоптотические клетки индуцируют толерогенные свойства у клеток врожденного иммунитета, включая ДК, которые затем распознают и фагоцитируют апоптотические клетки. После захвата апоптотических клеток ДК продуцируют IL-10 и индуцируют Т-клеточную толерантность посредством иммуносупрессивных цитокинов [42]. Получены толерогенные ДК in vitro путем предварительного культивирования апоптотических ауто-логичных клеток с незрелым ДК [43]. Недавно обнаружено, что культивирование апоптотических ДК с незрелыми ДК приводит к захвату их незрелыми ДК, которые впоследствии становятся толДК [44]. В исследованиях на мышиных моделях in vivo также продемонстрировано, что апоптические ДК могут быть захвачены нормальными ДК, что приводит к подавлению способности ДК к созреванию и к последующей миграции в лимфатические узлы [45].

В 2013 г. опубликован обзор, в котором авторами проведен анализ 546 исследований, выполненных в период с 1999 по 2011 гг. Целью анализа было сделать систематический обзор исследований по адоптивной трансфузии толДК, генерированных различными способами, для увеличения периода выживания алло-трансплантата кожного лоскута у мышей. После тщательного отбора выделен 21 эксперимент, где толДК получали с помощью 4 групп методов (использование препаратов, цитокинов, генетические манипуляции и прочих источников получения ДК). В результате самым эффективным оказалось применение толДК, генерированных с помощью различных препаратов, период выживания аллотрансплантата кожного лоскута у мышей составил до 63,08 ± 42,92 дня; в цитокин-индуцированной группе — до 26,17 ± 16,20 дня; генетические модификации — до 14,65 ± 17,89 дня; прочее — до 9,63 ± 24,38 дня. Возможными механизмами, лежащими в основе пролонгирования периода выживания, стали: индукция донор-специфического Т-клеточного снижения иммунного ответа, снижение цитотоксичности против аллотрансплантатов, преобладание Th2-реакций и пролиферация T-рег. Трансфузия толДК в сочетании с иммунодепрессантами или блокадой костимулирующих факторов способствовали более длительной пролонгации [46].

Результатом проанализированных методов, направленных на получение толДК, стала помимо достижения устойчивого к созревающим стимулам толерогенного фенотипа ДК индукция с помощью генерированных толДК антиген-специфической толерантности. Хотя об антиген-специфичности можно говорить только по результатам нескольких работ, а которых авторы доказывают появление специфической толерантности на используемый ими антиген. Такие исследования вызывают наибольший интерес, объясняющийся широкой перспективой применения используемых подходов для внедрения в клиническую практику при терапевтическом воздействии на организм пациента.

Детекция и оценка антиген-специфичности при применении толерогенных дендритных клеток

Одними из первых работ, посвященных достижению антиген-специфической толерантности, стали исследования начала 2000-х годов, в одном из которых показано [29], что IL-10-обработанные ДК индуцируют аллоантиген- или пептид-специфическую анергию среди cD4, а также cD8 популяций Т-клеток человека.

Проанализирована способность популяций анергичных Т-клеток регулировать антиген-специфический иммунный ответ. При экспериментах сокультивирования установлено, что аллоантиген-специфические анергические cD4 и cD8 Т-клетки, полученные с помощью IL-10-ДК, нагруженных либо пептидом MART1, либо специфичным петидом, тирозиназы подавляют пролиферацию сингенных Т-клеток дозозависимым образом. Тот же самый эффект наблюдался, когда гемагглютинин-специфичные cD4 Т-клеточные клоны HA1.7 или тирозиназ-специфические CD8 Т-клетки культивировали совместно с анергическими Т-клетками той же специфичности. Установлено, что супрессия зависела от контакта клетки с клеткой между анергичными и отвечающими Т-клетками, а также требовала активацию антиген-нагруженными-IL-10-ДК и не опосредовалась добавлением супернатантов анер-гичных Т-клеток. Кроме того, у анергичных Т-клеток наблюдали увеличение внеклеточной и внутриклеточной экспрессии CTLA-4, а блокирование CTLA-4-пути приводило к восстановлению пролиферации Т-клеток до 70%, что указывало на значимую роль молекулы cTLA-4 в супрессорной активности анергических Т-клеток. По окончании исследования авторами сделан вывод, что анергичные Т-клетки, индуцированные IL-10-ДК, способны подавлять активацию и функции Т-клеток антиген-специфическим образом. Еще в 90-е годы xx в. велись исследования, где основным показателем получения эффективных ДК с толерогенными свойствами было достижение увеличения периода выживания аллотрансплантата сердца на мышиных моделях [15, 47]. Хотя фактов, доказывающих индукцию с помощью толДК антиген-специфической толерантности у реципиента, не было представлено. В исследовании [20], опубликованном в 2006 г., на мышиной модели генерировали из костномозговых предшественников линий мышей BALB/c (H2d) миелоидные дендритные клетки с помощью IL-10 и TGF-P, а после подвергали стимуляции LPS. Авторы дали название полученным клеткам: «альтернативно активированные дендритные клетки» (ААДК), экспрессирующие более низкий уровень транскриптов TLR4, чем LPS-стимулированные ДК, а также показывающие более высокую устойчивость к созреванию, экспрессирующие сравнительно низкий уровень молекул MHc II класса, cD40, cD80, cD86 и PD-L2, cD273, в то время как экспрессия PD-L1 и CD274 не изменялась. В дополнение к характеристике генерированных ААДК обнаружено повышение уровня секреции ими IL-10 и снижение IL-12p70 по сравнению с контрольной группой активированных ДК. Установлены эффекты от ААДК, выраженные в слабой стимулирующей активности аллогенных (линия мышей C57BL/10; B10) Т-клеток и в способности вызывать аллоантиген-специфическую пролиферацию слабо отвечающих Т-клеток, причем обнаруженные эффекты не были связаны с повышенным уровнем апоптоза Т-клеток. ААДК-стимулированные-CD4+CD25+ аллогенные T-клетки показали повышенную супрессорную активность в отношении пролиферации Т-клеток по сравнению с ex vivo изолированными регуляторными Т-клетками. Основным результатом данной работы стал тот факт, что при однократной инфузии ААДК-BALB/с в организм реципиента — мыши линии B10 — индуцировалась аллоантиген-специфическая пролиферация слабоотвечающих Т-клеток, и как итог наблюдалось длительное последующее выживание аллотрансплантата сердца. При получении аллореактив-ных CD4+CD25+Foxp3+ рег Т-клеток с помощью ДК, генерированных из селезенки мыши в присутствии TGF-P и ретиноевой кислоты, наблюдалось подавление РТПХ на длительный период до 6 мес. Также получены результаты, показывающие, что индуцированные Foxp3+ рег Т-клетки после пролиферации и диф-ференцировки в антиген-специфические супрессорные Т-клетки могут длительно персистировать, подавляя воспалительные реакции [48, 49]. Еще одной работой, доказывающей достижение антиген-специфической толерантности, стало исследование, в котором установлено, что применение BAY-H-7082-обработанных ДК индуцирует антиген-специфическую иммуносупрессию при лечении ревматоидного артрита в модели воспалительного артрита у мышей. Отмечено подавление воспаления и эрозивных проявлений после применения антиген-специфичных ДК (mBSA-BAY-H-7082-обработанных ДК), причем такого эффекта не

REVIEWS

было получено, когда применялись антиген-неспецифичные ДК (KLH-BAY-n-7082-обработанные ДК). Клиническое улучшение также зависело от IL-10 и было связано с реакцией ГЗТ и переключением антител к mBSA изотипа IgG2b на IgG1 и IgA. Причем введение sTNFR не приводило к прекращению супрессивного эффекта на реакцию ГЗТ или к проявлениям воспалительного артрита. Хотя супрессия отменялась посредством внутрисуставного введения IL-1P и возобновлялась посредством второго введения антиген-специфичных ДК (mBSA-BAY-n-7082-обработанных ДК) [10]. Исследования, посвященные теме получения антиген-специфической толерантности с помощью толДК, заслуживают пристального внимания и в последнее время стали все чаще появляться среди научных публикаций, относящихся к данной теме. Полученные данные позволяют расширить понимание регулятор-ных свойств толДК в контексте их терапевтического потенциала при аутоиммунных заболеваниях и при трансплантационных иммунологических осложнениях.

Заключение

Таким образом, существующие подходы генерации ДК с толерогенными свойствами отличаются разнообразием и принципиальной направленностью воздействий на процессы диффе-ренцировки ДК. Наиболее чаще встречающиеся методы можно объединить по трем группам: 1. Применение иммунорегулятор-ных препаратов и биологических агентов. 2. Генетические модификации. 3. Сокультивирование с апоптотическими клетками. После проведенного анализа методов, направленных на генерацию толерогенных дендритных клеток, на основании результатов, полученных при использовании толДК в дальнейшем для развития иммуносупрессии либо иммунологической толерантности, сделан вывод о том, что в подавляющем большинстве работ исследователями были получены признаки общей им-муносупрессии, и только в небольшом количестве публикаций приведены доказательства получения антиген-специфической толерантности, вызванной толерогенными дендритными клетками. Эти данные позволяют расширить понимание регулятор-ных свойств толДК в контексте их терапевтического потенциала при аутоиммунных заболеваниях и при трансплантационных иммунологических осложнениях. Результаты обзора свидетельствуют о целесообразности использования тех методов генерации толДК, которые способны привести к развитию антиген-специфической иммунологической толерантности. Такие исследования вызывают наибольший интерес, объясняющийся широкой перспективой применения используемых подходов для внедрения в клиническую практику при терапевтическом воздействии на организм пациента.

Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Финансирование: Работа поддержана РНФ. Соглашение № 16-15-00086 от 11.01.2016.

COAEP^AHHE

1. Shortman K., Liu Y.J. Mouse and human dendritic cell subtypes. Nat. Rev. Immunol. 2002; 2: 151—61.

2. Liu Y-J. IPC: Professional Type 1 interferon-producing cells and plasma-cytoid dendritic cell precursors. Annu. Rev. Immunol. 2005; 23: 275— 306.

3. Shortman K., Naik S.H. Steady-state and inflammatory dendritic-cell development. Nat. Rev. Immunol. 2007; 7: 19—30.

4. Dhodapkar M.V., Steinman R.M., Krasovsky J., Munz C., Bhardwaj N. Antigen-specific inhibition of effector T cell function in humans after injection of immature dendritic cells. J. Exp. Med. 2001; 193: 233—8.

5. Dhodapkar M.V., Steinman R.M. Antigen-bearing immature dendritic cells induce peptide-specific CD8(+) regulatory T cells in vivo in humans. Blood. 2002; 100: 174—7.

6. Raker V.K., Domogalla M.P., Steinbrink K. Tolerogenic Dendritic Cells for Regulatory T Cell Induction in Man. Review Front Immunol. 2015; 6: 569.

7. Chu C.-C., Ali N., Karagiannis P., Di Meglio P., Skowera A., Napolitano L. et al. Resident CD141 (BDCA3)+ dendritic cells in human skin produce IL-10 and induce regulatory T cells that suppress skin inflammation. J. Exp. Med. 2012; 209: 935—45.

8. Van der Aar A.M.G., Sibiryak D.S., Bakdash G., van Capel T.M.M., van

ОБЗОРЫ

der Kleij H.P.M, Opstelten D-J.E. et al. Vitamin D3 targets epidermal and dermal dendritic cells for induction of distinct regulatory T cells. J. Allergy Clin. Immunol. 2011; 127: 1532—40.

9. Unger W.W.J., Laban S., Kleijwegt F.S., van der Slik A.R., Roep B.O. Induction of Treg by monocyte-derived DC modulated by vitamin D3 or dexamethasone: differential role for PD-L1. Eur. J. Immunol. 2009; 39: 3147—59.

10. Martin E., Capini C., Duggan E., Lutzky V.P., Stumbles P., Pettit A.R. et al. Antigen-specific suppression of established arthritis in mice by dendritic cells deficient in NF-kappaB. Arthritis Rheum. 2007; 56(7): 2255—66.

11. Rutella S., Bonanno G., Procoli A., Mariotti A., de Ritis D.G., Curti A. et al. Hepatocyte growth factor favors monocyte differentiation into regulatory interleukin (IL)-10++IL-12low/neg accessory cells with dendritic-cell features. Blood. 2006; 108: 218—27.

12. Gordon J.R., Ma Y., Churchman L., Gordon S.A., Dawicki W. Regulatory dendritic cells for immunotherapy in immunologic diseases. Front. Immunol. 2014; 5: 7.

13. Yamazaki S., Patel M., Harper A., Bonito A., Fukuyama H., Pack M., et al. Effective expansion of alloantigen-specific Foxp3+ CD25+ CD4+ regulatory T cells by dendritic cells during the mixed leukocyte reaction. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 2006; 103: 2758—63.

14. Tarbell K.V., Yamazaki S., Olson K., Toy P., Steinman R.M. CD25+ CD4+ T cells, expanded with dendritic cells presenting a single autoan-tigenic peptide, suppress autoimmune diabetes. J. Exp. Med. 2004; 199: 1467—77.

15. Fu F., Li Y., Qian S., Lu L., Chambers F., Starzl T.E., et al. Costimulatory molecule-deficient dendritic cell progenitors (MHC class II+, CD80dim, CD86-) prolong cardiac allograft survival in nonimmunosuppressed recipients. Transplantation. 1996; 62: 659—65.

16. Lu L., Li W., Fu F., Chambers F.G., Qian S., Fung J.J. et al. Blockade of the CD40-CD40 ligand pathway potentiates the capacity of donor-derived dendritic cell progenitors to induce long-term cardiac allograft survival. Transplantation. 1997; 64: 1808—15.

17. Lutz M.B., Suri R.M., Niimi M., Ogilvie A.L., Kukutsch N.A., Rossner S. et al. Immature dendritic cells generated with low doses of GM-CSF in the absence of IL-4 are maturation resistant and prolong allograft survival in vivo. Eur. J. Immunol. 2000; 30: 1813—22.

18. Sato K., Yamashita N., Yamashita N., Baba M., Matsuyama T. Regulatory dendritic cells protect mice from murine acute graft-versus-host disease and leukemia relapse. Immunity. 2003; 18: 367—79.

19. Mirenda V., Berton I., Read J., Cook T., Smith J., Dorling A. et al. Modified dendritic cells coexpressing self and allogeneic major histocompat-ibility complex molecules: an efficient way to induce indirect pathway regulation. J. Am. Soc. Nephrol. 2004; 15: 987—97.

20. Lan Y.Y., Wang Z., Raimondi G., Wu W., Colvin B.L., de Creus A. et al. «Alternatively activated» dendritic cells preferentially secrete IL-10, expand Foxp3+CD4+ T cells, and induce long-term organ allograft survival in combination with CTLA4-Ig. J. Immunol. 2006; 177(9): 5868—87.

21. Mohammadpour H., Pourfathollah A.A., Zarif M.N., Tahoori M.T. TNF-a modulates the immunosuppressive effects of MSCs on dendritic cells and T cells. Int. Immunopharmacol. 2015; 28(2): 1009—17.

22. Morelli A.E., Thomson A.W. Tolerogenic dendritic cells and the quest for transplant tolerance. Nat. Rev. 2007; 7: 610—21.

23. Keir M.E., Francisco L.M., Sharpe A.H. PD-1 and its ligands in T-cell immunity. Curr. Opin Immunol. 2007; 19: 309—14.

24. Turnquist H.R., Raimondi G., Zahorchak A.F., Fischer R.T., Wang Z., Thomson A.W. Rapamycin-conditioned dendritic cells are poor stimulators of allogeneic CD4+ T cells, but enrich for antigen-specific Foxp3+ T regulatory cells and promote organ transplant tolerance. J. Immunol. 2007; 178(11): 7018—3.

25. Thomson A.W., Turnquist H.R., Raimondi G. Immunoregulatory functions of mTOR inhibition. Nat. Rev. 2009; 9: 324—37.

26. Buelens C., Willems F., Delvaux A., Pierard G., Delville J.P., Velu T. et al. Interleukin-10 differentially regulates B7-1 (CD80) and B7-2 (CD86) expression on human peripheral blood dendritic cells. Eur. J. Immunol. 1995; 25(9): 2668—72.

27. Buelens C., Verhasselt V., De Groote D., Thielemans K., Goldman M., Willems F. Human dendritic cell responses to lipopolysaccharide and CD40 ligation are differentially regulated by interleukin-10. Eur. J. Immunol. 1997; 27(8): 1848—52.

28. Steinbrink K., Jonuleit H., Muller G., Schuler G., Knop J., Enk A.H. Interleukin-10-treated human dendritic cells induce a melanoma-antigen-specific anergy in CD8(+) T cells resulting in a failure to lyse tumor cells. Blood. 1999; 93(5): 1634—42.

29. Steinbrink K., Graulich E., Kubsch S., Knop J., Enk A.H. CD4(+) and CD8(+) anergic T cells induced by interleukin-10-treated human dendritic cells display antigen-specific suppressor activity. Blood. 2002; 99(7): 2468—76.

30. Zanetti M., Castiglioni P., Schoenberger S., Gerloni M. The role of relB in regulating the adaptive immune response. Ann N Y Acad Sci. 2003; 987: 249—57.

31. Volchenkov R., Karlsen M., Jonsson R., Appel S. Type 1 regulatory T cells and regulatory B cells induced by tolerogenic dendritic cells. Scand. J. Immunol. 2013; 77(4): 246—54.

32. Nencioni A., Beck J., Werth D., Gmnebach F., Patrone F., Ballestrero A. et al., Histone deacetylase inhibitors affect dendritic cell differentiation and immunogenicity. Clin. Cancer Res. 2007; 13 (13): 3933—42.

33. Roger T., Lugrin J., Le Roy D., Goy G., Mombelli M., Koessler T. et al. Histone deacetylase inhibitors impair innate immune responses to Toll-like receptor agonists and to infection. Blood. 2011; 117: 1205—17; doi:10.1182/blood-2010-05-284711.

34. Thewissen K., Broux B., Hendriks J.J., Vanhees M., Stinissen P., Slaets H., et al. Tolerogenic dendritic cells generated by in vitro treatment with SAHA are not stable in vivo. Cell Transplant. 2016; 25(6): 1207—18.

35. Morelli A.E., Thomson A.W. Dendritic cells: regulators of alloimmu-nity and opportunities for tolerance induction. Immunol. Rev. 2003; 196: 125—46.

36. Min W.P., Gorczynski R., Huang X.Y., Kushida M., Kim P., Obataki M., et al. Dendritic cells genetically engineered to express Fas ligand induce donor-specific hyporesponsiveness and prolong allograft survival. J. Immunol. 2000; 164(1): 161—7.

37. Fu H., Song S., Liu F., Ni Z., Tang Y., Shen X. et al. Dendritic cells transduced with SOCS1 gene exhibit regulatory DC properties and prolong allograft survival. Cell. Mol. Immunol. 2009; 6: 87—95.

38. Li M., Zhang X., Zheng X., Lian D., Zhang Z.X., Ge W. et al. Immune modulation and tolerance induction by RelB-silenced dendritic cells through RNAinterference. J. Immunol. 2007; 178: 5480—87.

39. Xu H., Chen T., Wang H.Q., Ji M.J., Zhu X., Wu W.X. Prolongation of rat intestinal allograft survival by administration of donor interleukin-12 p35-silenced bone marrow-derived dendritic cells. Transplant. Proc. 2006; 38: 1561—63.

40. Machen J., Harnaha J., Lakomy R., Styche A., Trucco M., Giannoukakis N. Antisense oligonucleotides down-regulating costimulation confer diabetes-preventive properties to nonobese diabetic mouse dendritic cells. J. Immunol. 2004; 173: 4331—41.

41. Giannoukakis N., Phillips B., Finegold D., Harnaha J., Trucco M. Phase I (safety) study of autologous tolerogenic dendritic cells in type 1 diabetic patients. Diabetes Care. 2011; 34(9): 2026—32.

42. Ip W.K., Lau Y.L. Distinct maturation of, but not migration between, human monocyte-derived dendritic cells upon ingestion of apoptotic cells of early or late phases. J. Immunol. 2004; 173(1): 189—96.

43. Skoberne M., Beignon A.S., Larsson M., Bhardwaj N. Apoptotic cells at the crossroads of tolerance and immunity. Curr. Top. Microbiol. 2005; 289: 259—92.

44. Kushwah R., Wu J., Oliver J.R., Jiang G., Zhang J.Y., Siminovitch K.A. et al. Uptake of apoptotic DC converts immature DC into tolerogenic DC that induce differentiation of Foxp3+Treg. Eur. J. Immunol. 2010; 40(4): 1022—35.

45. Kushwah R., Oliver J.R., Zhang J.Y., Siminovitch K.A., Hu J. Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigenspecific regulatory T cells. J. Immunol. 2009; 183(11): 7104—18.

46. ZhouY., Shan J., Li Y., Guo Y., Sun G., Yang T. et al. Adoptive transfusion of tolerance dendritic cells prolongs the survival of skin allografts in mice: a systematic review. J. Evid. Based. Med. 2013; 6(2): 90— 103.

47. Turka L.A., Linsley P.S., Lin H., Brady W., Leiden J.M., Wei R.Q. et al. T-cell activation by the CD28 ligand B7 is required for cardiac allograft rejection in vivo. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992; 89(22): 11102—5.

48. Yamazaki S., Dudziak D., Heidkamp G.F., Fiorese C., Bonito A.J., Inaba K. et al. CD8+ CD205+ splenic dendritic cells are specialized to induce Foxp3+ regulatory T cells. J. Immunol. 2008; 181(10): 6923—33.

49. Sela U., Olds P., Parkc A., Schlesinger S.J., Steinman R.M. Dendritic cells induce antigen-specific regulatory T cells that prevent graft versus host disease and persist in mice. J. Exp. Med. 2011; 208(12): 2489—96.

Поступила 06.06.16 Принята в печать 07.06.16