СПОСОБ БЕЗДЕТЕРГЕНТНОГО ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЗИКУЛ НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНОЙ БАКТЕРИИ

1. Способ бездетергентного получения бактериальных везикул наружной мембраны (OMV) для использования в вакцинах, включающий стадии:
a) культивирования популяции грамотрицательных бактерий до фазы стационарного роста;
b) в момент времени по меньшей мере примерно через 1 ч после начала фазы стационарного роста инкубацию бактерий, полученных на стадии a), в среде с доведенным или имеющимся значением pH выше 8,0 и имеющей концентрацию металл хелатирующего агента, предпочтительно ЭДТА, от примерно 1 до 100 мМ, для экстракции OMV; и,
c) извлечения OMV, экстрагированных на стадии b), где извлечение включает по меньшей мере удаление бактерий из OMV.
2. Способ по п.1, в котором грамотрицательная бактерия имеет генетическую модификацию, благодаря которой эта бактерия продуцирует ЛПС с пониженной токсичностью, но этот ЛПС сохраняет по меньшей мере часть своей адъювантной активности; предпочтительно, указанная генетическая модификация представляет собой модификацию, которая снижают или полностью подавляют экспрессию одного или нескольких генов, выбранных из генов lpxL1 и lpxL2 или их гомологов и гена lpxK или его гомологов и/или представляет собой модификацию, которая оказывает влияние на экспрессию одного или нескольких генов lpxE и/или pagL.
3. Способ по п.1, в котором момент времени после начала фазы стационарного роста, в течение которого бактерии инкубируются в среде на стадии b), составляет примерно от 1 до 9 ч, более предпочтительно, примерно от 2 до 5 ч.
4. Способ по п.1, в котором OMV стерилизуют, предпочтительно путем стерилизации фильтрованием, предпочтительно с использованием фильтра с размером пор менее чем примерно 0,3 мкм.
5. Способ по п.1, в котором концентрация металл хелатирующего агента, предпочтительно ЭДТА, на стадии b) составляет от примерно 5 до 15 мМ, и/или в котором значение pH составляет от примерно 7,5 до 9,5, предпочтительно, от примерно 8,0 до 9,0, более предпочтительно, от примерно 8,2 до 8,8, более предпочтительно, от примерно 8,4 до 8,7.
6. Способ по п.1, в котором объем культуры на стадии a) и/или объем среды на стадии b) составляет по меньшей мере примерно 10 л, более предпочтительно по меньшей мере примерно 20 л, 40 л, 60 л, 80 л, 100 л, 200 л, 300 л, 400 л, 500 л, 800 л, 1500 л, 5000 л, 10000 л, 20000 л или 40000 л.
7. Способ по п.1, в котором грамотрицательная бактерия является видом рода Neisseria или Bordetella, предпочтительно, Neisseria meningitidis или Bordetella pertussis.
8. Способ по п.1, в котором грамотрицательная бактерия имеет одну или несколько мутаций, которые снижают или полностью подавляют экспрессию генного продукта, предпочтительно, генный продукт выбран из группы, состоящей из cps, генных продуктов биосинтеза липида A, включая lpxL1, rmpM, porA, porB и opA.
9. Способ по п.1, в котором грамотрицательная бактерия экспрессирует несколько субтипов PorA.
10. Способ по п.1, в котором популяция включает более одного штамма грамотрицательной бактерии и в котором каждый штамм экспрессирует различные субтипы PorA.
11. Способ по п.1, в котором грамотрицательная бактерия экспрессирует антиген, который является чужеродным для указанной грамотрицательной бактерии.
12. Способ по п.1, дополнительно включающий в стадию объединения OMV с фармацевтически приемлемым эксципиентом.
13. OMV, которые могут быть получены способом по любому из пп.1-12.
14. Фармацевтическая композиция, содержащая OMV по п.13 и фармацевтически приемлемый эксципиент.
15. OMV по п.13 для применения в качестве лекарственного средства, предпочтительно, в лечении менингита.
16. Фармацевтическая композиция по п.14 для применения в качестве лекарственного средства, предпочтительно, в лечении менингита.
17. Способ индуцирования у пациента иммунной реакции, предпочтительно, против Neisseria meningitidis, включающий введение указанному пациенту OMV по п.13 или фармацевтической композиции по п.14.
18. Применение OMV по п.13 для индуцирования у пациента иммунной реакции, предпочтительно, против Neisseria meningitidis, включающее введение указанному пациенту OMV по п.13.
19. Применение фармацевтической композиции по п.14 для индуцирования у пациента иммунной реакции, предпочтительно, против Neisseria meningitidis, включающее введение указанному пациенту или фармацевтической композиции по п.14.