СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВАЦИИ ПЛАЗМИНОГЕНА У БАКТЕРИЙ В УСЛОВИЯХ IN VITRO

9
Способ определения активации плазминогена из бактерий в условиях in vitro, включающий реакцию взаимодействия плазмина с пептидным субстратом, отличающийся тем, что в качестве субстрата используют протамин сульфат, который вносят в количестве 100 мкЛ в подготовленный супернатант, последний готовят в виде смеси: 0,49 мл 0,2М фосфатного буфера, рН 8.0, добавляют 0,5 мл суспензии бактерий в физиологическом растворе (5×10 кл/мл) и 15 мкг человеческого плазминогена в конечном объеме 1 мл, затем полученную смесь инкубируют в течение одного часа при 37°С и клетки осаждают центрифугированием при 11000 об/мин, в течение 5 мин, после этого пробы инкубируют 2 часа при 37°С, белок в пробах осаждают добавлением 1 мл 20% ТХУ, помещают в ледяную баню, активацию плазминогена бактериями регистрируют по количеству отщепившегося аргинина, содержание которого определяют методом Сакагуши по окрашиванию проб в красный цвет, чем ярче окраска в связи с большим количеством свободного аргинина, тем выше активность исследуемого штамма.