ЗАМЕЩЕННЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ПИРИДИН АЗОЛОПИРИМИДИН-5-(6Н)-ОНА
SUBSTITUTED COMPOUNDS OF PYRIDINE AZOLOPYRIMIDINE-5-(6H)-ONE

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки на патент США 61/661091, поданной 18 июня 2012 г., содержание которой включено в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к некоторым замещенным соединением пиридин-конденсированного азолопиримидин-5-(6Н)-она и производным таких соединений; фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, способам их получения, а также их применению в различных способах, включая ингибирование ферментов PDE1; и лечению одного или более нарушений, в том числе неврологических нарушений, сердечно-сосудистых нарушений, почечных нарушений и других состояний и заболеваний, связанных с PDE1 или передачей сигнала циклическими нуклеотидами.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Циклические нуклеотиды 5'-3'циклический аденозинмонофосфат (цАМФ) и 5'-3' циклический гуанозинмонофосфат (цГМФ) являются молекулами-вторичными мессенджерами, передающими сигналы от рецепторов на поверхности клетки целевым молекулам внутри клетки. Циклические нуклеотидные фосфодиэстеразы (PDE) представляют собой группу ферментов (которые могут быть локализованы в различных клеточных компартментах), которые гидролизуют фосфодиэфирную связь циклических нуклеотидов и тем самым инактивируют их функции. Поэтому PDE могут играть важную роль в передаче сигнала путем модуляции локализации, интенсивности и продолжительности передачи сигнала циклическими нуклеотидами внутри клетки.
PDE включают по меньшей мере одиннадцать семейств: PDE1-PDE11, где каждое семейство сгруппировано в соответствии с отличительными молекулярными, кинетическими, регуляторными и ингибирующими свойствами. Представители семейства PDE дифференцированно экспрессируются в различных тканях и могут находится в различных субклеточных доменах. Это разнообразие позволяет PDE модулировать локальные внутриклеточные градиенты цАМФ и цГМФ в ответ на определенные внешние раздражители (Conti and Beavo, Annu. Rev. Biochem. 2007, 76, 481-511).
2+
2+
Среди семейств PDE, PDE1 является уникальным вследствие необходимости полной активации кальцием (Са) и кальмодулином (СаМ). Кальций проникает в клетку и образует комплекс с СаМ. Связывание комплексов Са/СаМ с множественными доменами в области N-конца PDE1 может приводить к достижению полной активности фосфодиэстеразы. Таким образом, PDE1 является точкой конвергенции и интеграции для множества сигнальных путей, которые регулируют многочисленные последующие мишени и клеточные события (Sharma et al., Int. J. Mol. Med. 2006, 18, 95-105).
Семейство PDE1 содержит три гена (pde1a, pde1b, и pde1c) и каждый из них кодирует множество изоформ через альтернативный сплайсинг и дифференциальную транскрипцию. Полагают, что все ферменты PDE1 гидролизуют как цАМФ, так и цГМФ, хотя они могут различаться относительной степенью сродства к ним (Bender и Beavo, Pharmacol. Rev. 2006, 58, 488-520).
PDE1 экспрессируется во множестве тканей, что свидетельствует о его роли во многих физиологических процессах. Области экспрессии PDE включают, но не ограничиваются ими, сердце, легкие, вены и артерии, гладкую мускулатуру, скелетную мускулатуру, кожу, надпочечную железу, щитовидную железу, поджелудочную железу, пищевод, желудок, тонкий кишечник, толстый кишечник, печень, лейкоциты, семенники, яичники, мочевой пузырь, почки и нервную систему. В головном мозгу изоформы PDE1 экспрессируются в коре головного мозга, лобной доли, гиппокампе, мозжечке и миндалинах, областях, участвующих в формировании памяти и других когнитивных процессов. В частности, экспрессия PDE1b тесно коррелирует с областями мозга, демонстрирующими высокие значения дофаминергической иннервации. По-видимому, в сердечно-сосудистой системе PDE1 играет главную роль в организации микродоменов цАМФ и опосредовании гормональной специфичности в сердечных клетках (Maurice et al., Mol. Pharm. 2003, 64, 533-546). В самом деле, человеческий PDE1B экспрессируется на высоком уровне во многих сердечно-сосудистых областях, в том числе перикарде, предсердие (левом), верхушке сердца, волокнах Пуркинье и легочном клапане.
В целом, сигнальные пути циклических нуклеотидов, включая пути, в которых задействован PDE1, вовлечены в многочисленные патологические процессы (Keravis and Lugnier, Br. J. Pharmacol. 2012, 165, 1288-1305). Например, изменения в указанных путях встречались при различных нарушениях головного мозга, в том числе депрессии, шизофрении и когнитивных нарушениях. Ингибирование активности PDE1 в нервной системе может, например, привести к повышению уровней цАМФ или cGMP и, как следствие, вызвать экспрессию генов, связанных с нейрональной пластичностью, нейротрофических факторов и нейропротекторных молекул. Принимая во внимание данные свойства, ингибиторы PDE1 являются перспективными терапевтическими кандидатами для лечения многих заболеваний ЦНС и связанных с ними когнитивных нарушений. Кроме того, ферменты PDE1 и циклические нуклеотиды являются ключевыми медиаторами патологических процессов, лежащих в основе многих сосудистых нарушений, в том числе гипертензии, инфаркта миокарда и сердечной недостаточности (Miller et al., Basic Res. Cardiol. 2011, 106, 1023-1039 и Miller et al., Circ. Res. 2009, 105, 956-964). Кроме того, PDE1 участвует в развитии и прогрессировании заболевания почек, где цАМФ и цГМФ регулируют различные сигнальные пути, в том числе те, которые модулируют митогенез, воспаление и синтез внеклеточного матрикса (Wang et al., Kidney Int. 2010, 77. 129-140; Cheng et al., Soc. Exp. Biol. Med. 2007, 232, 38-51 и Dousa, Kidney Int. 1999, 55, 29-62).
Следовательно, существует потребность в разработке лекарственных средств для ЦНС и других нарушений, а также нарушений, которые возникают вследствие, по меньшей мере частично, аберрации или дисрегуляции внутриклеточного сигнального пути, регулируемого PDE1.
Сообщалось о различных низкомолекулярных ингибиторах ферментов PDE1, например, имидазопиразолопиримидинонах (Intra-Cellular Therapeutics, публикация международной заявки WO 2012171016, 13 декабря 2012 г.), пирролопиримидинонах (Intra-Cellular Therapeutics, публикация международной заявки WO 2011153138, 8 декабря 2011 г.; публикация международной заявки WO 2011153136, 8 декабря 2011 г.; публикация международной заявки WO 2011153135, 8 декабря 2011 г.; публикация международной заявки WO 2011153129, 8 декабря 2011 г.), имидазопуриноне (Intra-Cellular Therapeutics, публикация международной заявки WO 2010132127, 18 ноября 2010 г.), пиразолопиримидиндионе (Intra-Cellular Therapeutics, публикация международной заявки WO 2010098839, 2 сентября 2010 г.), пиразолопиримидиноне (Intra-Cellular Therapeutics, публикация международной заявки WO 2010065153, 10 июня 2010 г.; WO 2010065149, 10 июня 2010 г.; публикация международной заявки WO 2009075784, 18 июня 2009 г).
Тем не менее сохраняется потребность в активных ингибиторах PDE1 с требуемыми фармацевтическими свойствами. Следовательно, требуется разработка улучшенных ингибиторов PDE1, имеющих более высокую активность, более высокую специфичность и лучший профиль побочных эффектов. В настоящем изобретении указанные и другие задачи данной области техники решаются с помощью замещенных соединений пиридин-конденсированного и азолопиримидин-5-(6h)-она в качестве активных и хорошо переносимых ингибиторов PDE1.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В изобретении предложен химический объект формулы (I):
где
1
3
4
R, R, R, Y, Z и М имеют любое значение, описанное в настоящем документе.
В одном аспекте химический объект выбран из группы, состоящей из соединений формулы (I), фармацевтически приемлемых солей соединений формулы (I), фармацевтически приемлемых пролекарств соединений формулы (I) и фармацевтически приемлемых метаболитов соединений формулы (I). В конкретном аспекте химический объект представляет собой соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль.
Химические объекты и соединения формулы (I) подходят для применения в широком диапазоне способов. Меченые изотопами соединения и пролекарства могут быть использованы в исследованиях кинетики метаболизма и реакций, способах обнаружения и обработки изображений, а также радиоактивной обработке. Химические варианты реализации настоящего изобретения могут быть использованы для ингибирования PDE1 и, в частности, PDE1b; для лечения нарушения, опосредованного PDE1 и, в частности, PDE1b; для повышения нейрональной пластичности; для лечения неврологических нарушений, в том числе нейродегенеративных нарушений, когнитивных нарушений и когнитивных дефицитов, связанных с нарушениями ЦНС; для обеспечения нейропротекции; а также лечения периферических нарушений, включая ожирение, диабет, кардиометаболические нарушения и связанных с ними сопутствующих заболеваний. Химические варианты реализации настоящего изобретения могут быть также использованы в качестве улучшающих агентов для повышения эффективности когнитивного и двигательного обучения, для облегчения восстановления нервной системы и нейрореабилитации, а также для увеличения эффективности протоколов обучения животных, отличных от человека. Кроме того, изобретение направлено на общие и конкретные варианты реализации, определенные соответственно, независимыми и зависимыми пунктами формулы изобретения, приложенной к настоящему описанию, которые включены в настоящее описание посредством ссылки.
Кроме того, изобретение относится к применению соединения, химического объекта или композиции согласно настоящему изобретению в способе лечения нарушений, при которых встречается аберрантный или дисрегулированный сигнальный путь, опосредованный PDE1 и, в частности, PDE1b. Такие связанные с PDE1 сигнальные пути, предпочтительно в нервной системе, включают, но не ограничиваются ими, пути, задействующие оксид азота, натрийуретические пептиды, допамин, норадреналин, нейротензин, холецистокинин, вазоактивный кишечный пептид, серотонин, глутамат, ГАМК, ацетилхолин, аденозин, каннабиноиды, натрийуретические пептиды и эндорфины. В конкретном аспекте соединения и композиции подходят для лечения нарушений, характеризующихся изменениями сигнального пути дофамина.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На Фиг. 1 представлена гистограмма, демонстрирующая эффект миРНК-опосредованного нокдауна PDE1b в гиппокампальной ткани мыши на однодневную память в анализе контекстуального условно-рефлекторного замирания.
На Фиг. 2 представлена гистограмма, демонстрирующая эффект миРНК-опосредованного нокдауна PDE1b в гиппокампальной ткани мыши на однодневную память в анализе следового условного рефлекторного замирания (со следовым раздражителем).
На Фиг. 3 представлена гистограмма, демонстрирующая эффект на рост нейритов (А) ролипрам-опосредованного ингибирования PDE4 и (В) миРНК-опосредованного ингибирования Pde4d или Pde1b. Столбцы представляют собой среднее ± СКО длины и разветвленности нейрита по меньшей мере 100 клеток NS1; n=8 лунок/столбец.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение может быть более полно понято со ссылкой на нижеследующее описание, включая примеры. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в данной области техники. Хотя способы и материалы, аналогичные или эквивалентные тем, которые описаны в настоящем документе, могут быть использованы при реализации или тестировании настоящего изобретения, в настоящем документе описаны подходящие способы и материалы. Кроме того, материалы, способы и примеры являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения.
В целях краткости изложения, все публикации, в том числе заявки на патент, патенты и другие источники, указанные в настоящем документе, включены во всей их полноте посредством ссылки. Тем не менее цитирование любой такой публикации не должно истолковываться как допущение, что он является прототипом настоящему изобретению.
Сокращения
Описание содержит многочисленные сокращения, значения которых приведены в следующей таблице:
ТЕРМИНЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Подзаголовки, такие как «Общие», «Химия», «Композиции» и «Составы» и т.д., в данном разделе, а также в других разделах настоящей заявки, предназначены исключительно для удобства и не предназначены для ограничения.
Общие
В настоящем описании термин «примерно» или «приблизительно» означает приемлемый диапазон для конкретного значения, определяемый специалистом в данной области техники, и может зависеть отчасти от того, как значение измеряется или определяется, например, от ограничений измерительной системы или методики. Например, «приблизительно» может означать диапазон до 20%, до 10%, до 5% или до 1% или меньше по обе стороны от заданного значения. Альтернативно, по отношению к биологическим системам или процессам термин «примерно» может означать диапазон порядка величины, в диапазоне 5 раз или 2 раз по обе стороны от значения. Численные величины, приведенные в настоящем документе, являются приблизительными, если не указано иное, что означает, что использование терминов «примерно» или «приблизительно» подразумевается, даже когда прямо они прямо не указаны.
Для обеспечения более краткого и точного описания, некоторые количественные выражения, приведенные в настоящем документе, не охарактеризованы термином «примерно». Следует понимать, что независимо от того использован ли термин «примерно» явным образом или нет, каждое количественное значение, приведенное в настоящем описании, предназначено для описания фактического заданного значения, и это также относится к приближению такого заданного значения, которые могут быть определены на основе общих знаний в данной области техники, включая эквиваленты и приближения, возникающие вследствие экспериментальных условий и/или условий измерения такой заданной величины. Каждый раз, когда выход приведен в процентах, такой выход относится к массе объекта, для которого выход приведен относительно максимального количества того же объекта, который может быть получен в конкретных стехиометрических условиях. Концентрации, которые приведены в процентах, относятся к массовым соотношениям, если не указано иное.
Следует понимать, что в настоящем описании термины единственного числа охватывают формы как единственного, так и множественного числа, если не явно указано иное. Таким образом, термины единственного числа (и их грамматические варианты в соответствующих случаях) относятся к одному или более.
Когда группа элементов связана союзом «и», это не следует понимать как требование того, что каждый из указанных элементов будет присутствовать в группировке, а следует понимать как «и/или», если явно указано иное. Кроме того, если группа элементов связана союзом «или», это не следует понимать как требование взаимной исключительности среди этой группы, а следует понимать как «и/или», если явно указано иное. Кроме того, хотя элементы, части или компоненты изобретения могут быть описаны или заявлены в единственном числе, в их объем включены форму множественного числа, если ограничение единственным числом не указано явно.
Термины «содержащий» и «включающий» используются настоящем документе в их открытом, неограничивающем смысле. Другие термины и фразы, используемые в настоящем документе, а также их варианты, если не указано иное, следует толковать как открытые, а не ограничивающие. В качестве примеров вышесказанного: термин «пример» используется для описания примерных вариантов предмета дискуссии, и не исчерпывает или ограничивает их список; прилагательные, такие как «обычный», «традиционный», «нормальный», «нормативный», «известный», а также термины с аналогичным значением, не следует толковать как ограничивающие описанный предмет до данного периода времени или до предмета, доступного в данное временя, но следует толковать как охватывающие обычные, традиционные, нормальные или нормативные методики, которые могут быть доступны или известны в настоящее время или в любое время в будущем. Также, когда настоящий документ ссылается на технологии, которые были бы очевидны и известны специалисту в данной области техники, такие технологии включают технологии, очевидные или известные специалисту в данной области техники в настоящее время или в любое время в будущем.
Присутствие расширяющих слов и фраз, таких как «один или более», «по меньшей мере», «но не ограничиваются ими» или других подобных фраз в некоторых случаях не следует понимать, как то, что в случае отсутствия таких расширяющих и фраз, предполагается или имеется в виду более узкий случай. Как станет очевидно для специалиста в данной области техники после прочтения настоящего документа, проиллюстрированные варианты реализации и их различные альтернативы могут быть осуществлены, не придерживаясь проиллюстрированных примеров.
Химия
Термин «алкил» относится к полностью насыщенной алифатической углеводородной группе. Алкильный фрагмент может представлять собой линейную или разветвленную алкильную группу, содержащую от 1 до 12 атомов углерода в цепи. Примеры алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, метил (Me, который также может быть структурно изображен символом «»), этил (Et), н-пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил (tBU), пентил, изопентил, трет-пентил, гексил, изогексил и группы, которые с учетом знаний в данной области техники, а также сведений, представленных в настоящем документе, будут считаться эквивалентными любому из перечисленных выше примеров. Алкильные группы могут быть необязательно замещены одним или более заместителями, включая, но не ограничиваясь ими, гидроксил, алкокси, тиоалкокси, амино и аминоалкил.
Термин «алкенил» относится к необязательно замещенным ненасыщенным алифатическим фрагментам, содержащим по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь, и в том числе Е и Z изомеры указанного алкенильного фрагмента. Примеры алкенильных радикалов включают этенил, пропенил, бутенил, 1,4-бутадиенил, циклопентенил, циклогексенил и т.п.
Термин «алкинил» относится к необязательно замещенным ненасыщенным алифатическим фрагментам, содержащим по меньшей мере одну углерод-углеродную тройную связь, и включает линейные и разветвленные алкинильные группы. Примеры алкинильных радикалов включают этинил, пропинил, бутинил и т.п.
3
2
2
2
3
2
2
2
2
2
2
2
2
3
Термин «галогеналкил» относится к прямой или разветвленной алкильной группе, содержащей от 1 до 12 атомов углерода в цепи с атомами водорода, необязательно замещенными галогенами. Примеры галогеналкильных групп включают, но не ограничиваются ими, -CF, -CHF, -CHF, -CHCF, -CHCHF, -CHCHF, -CHCHCl, -CHCFCF и другие группы, которые с учетом знаний в данной области техники, а также сведений, представленных в настоящем документе, будут считаться эквивалентными любому из перечисленных выше примеров.
2
Термин «алкокси» включает линейную или разветвленную алкильную группу с атомом кислорода, соединяющим алкильную группу с остальной частью молекулы. Алкокси включает метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси, трет-бутокси, пентокси и так далее. «Аминоалкил», «тиоалкил» и «сульфонилалкил» аналогичны алкокси, в которой концевой атом кислорода алкоксигруппы заменен, соответственно, NH (или NR), S и SO.
3
2
3
2
2
2
2
2
2
3
Термин «галогеналкокси» относится к алкоксигруппами с атомами водорода, необязательно замещенными галогенами. Примеры галогеналкоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -OCF, -OCHCF, -OCHCHF, -OCHCHCl, -OCHCFCF и другие группы, которые с учетом знаний в данной области техники, а также сведений, представленных в настоящем документе, будут считаться эквивалентными любому из перечисленных выше примеров.
2
Термин «амино» относится к группе -NH.
3
3
2
3
2
3
3
Термин «алкиламино» относится к группе -NRR', где R и R' независимо выбраны из водорода (однако, R и R' не могут одновременно представлять собой водород), алкильных и арильных групп; или R и R', взятые вместе, могут образовывать циклическую кольцевую систему. Примеры аминогрупп включают, но не ограничиваются ими, -NH(CH), -N(CH), -Nфенил(СН), -NHфенил, -N(CHCH)(CH) и т.п.
Термин «циано» относится к группе -CN.
Термин «арил» относится к моноциклическому или конденсированному, или спирополициклическому ароматическому карбоциклу (кольцевая структура, в которой все кольцевые атомы представляют собой атомы углерода), содержащему от 3 до 12 кольцевых атомов в каждом кольце. (Атомы углерода в арильных группах имеют гибридизацию sp2.) Иллюстративные примеры арильных групп включают следующие фрагменты:
и т.п.
Термин «арилокси» относится к группе, имеющей формулу, -O-R, где R представляет собой арильную группу.
Термин «циклоалкил» относится к насыщенному или частично насыщенному карбоциклу, такому как моноциклический, конденсированный полициклический, мостиковый моноциклический, мостиковый полициклический, спироциклический или спирополициклический карбоцикл, содержащий от 3 до 12 атомов в кольце на карбоцикл. Когда термин циклоалкил сопровождается конкретной характеристикой, такой как моноциклический, конденсированный полициклический, мостиковый моноциклический, спироциклический и спирополициклический, то указанный термин циклоалкил относится только к карбоциклу, охарактеризованному таким образом. Иллюстративные примеры циклоалкильных групп включают следующие единицы в виде правильно связанных фрагментов:
«Гетероциклоалкил» относится к моноциклической или конденсированной, мостиковой или спирополициклической кольцевой структуре, которая является насыщенной или частично насыщенной и содержит от 3 до 12 атомов в кольце на кольцевую структуру, выбранных из атомов углерода и до трех гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы. Кольцевая структура может содержать до двух оксогрупп на углероде или сере кольца. Иллюстративные примеры в виде правильно связанных фрагментов включают:
Термин «гетероарил» относится к моноциклическому, конденсированному бициклическому или конденсированному полициклическому ароматическому гетероциклу (кольцевая структура, содержащая кольцевые атомы, выбранные из атомов углерода и до четырех гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы), содержащему от 3 до 12 атомов в кольце на гетероцикл. Иллюстративные примеры гетероарильных групп включают следующие единицы в виде правильно связанных фрагментов:
Специалистам в данной области техники будет понятно, что список представителей циклоалкильных, гетероциклоалкильных и гетероарильных групп, перечисленных или показанных выше, не является исчерпывающим, и что могут быть выбраны дополнительные представители в рамках объема указанных определений терминов.
Термин «галоген» обозначает хлор, фтор, бром или йод. Термин «гало» обозначает хлор, фтор, бром или йод.
Термин «гетероатом», используемый в настоящем документе, относится к, например, О (кислород), S (сера) или N (азот).
2
2
2
2
2
1-6
1-6
3
Термин «замещенный» означает, что указанная группа или фрагмент содержит один или более заместителей. В случае, когда термин «замещенный» используется для описания структурной системы, если не указано иное, полагают, что замещение происходит в любом положении системы, разрешенном по валентности. Термин «незамещенный» означает, что охарактеризованная группа не содержит заместителей. Термин «необязательно замещенный» означает, что охарактеризованная группа не замещена или замещена одним или более дополнительными заместителями, индивидуально и независимо выбранными из группы, включающей: циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклоалкил, -CN, -ОН, -NO, -SONH, -CONH, -СОН, -СОН, амино, -(C алкил)амино, ди-(С алкил)амино, -N, цианат, изоцианат, тиоцианат, изотиоцианат, арилокси и арилтио. В тех случаях, когда явно не указано, что охарактеризованный фрагмент или группа необязательно замещены или замещены заданным заместителем, следует понимать, что такой фрагмент или группа является незамещенной.
Формулы
Любая формула, приведенная в настоящем описании, характеризует соединения, имеющие структуры, представленные структурной формулой, а также некоторые варианты или формы. В частности, соединения любой формулы, приведенной в настоящем описании, могут содержать асимметричные центры и, как следствие, существовать в различных энантиомерных формах. Все оптические изомеры и стереоизомеры соединений общей формулы, а также их смеси входят в объем формулы изобретения. Таким образом, любая формула, приведенная в настоящем описании, характеризует рацемат, одну или более энантиомерных форм, одну или более диастереомерных форм, одну или более атропизомерных форм и их смеси. Кроме того, некоторые структуры могут существовать в виде геометрических изомеров (т.е. цис- и транс-изомеров), в виде таутомеров или атропоизомеров.
Символы  и  используются для обозначения одного и того пространственного расположения в химических структурах, показанных в настоящем описании. Аналогично, символы  и  используются для обозначения одного и того пространственного расположения в химических структурах, показанных в настоящем описании.
Соединения
В настоящем документе «соединение» относится к любому из: (b) непосредственно заявленной форме такого соединения; и (b) любой из форм такого соединения в среде, в которой рассматривается названное соединение. Например, в настоящем документе ссылка на соединение, такое как R-COOH, охватывает ссылку на любой из, например, R-СООН, (тв.), R-COOH (раст.) и R-COO (раст.). В этом примере R-COOH (тв.) относится к твердому соединению, каким оно может быть, например, в виде таблетки или какой-либо другой твердой фармацевтической композиции или препарате; R-COOH (раст.) относится к недиссоциированной форме соединения в растворителе; и R-COO (раст.) относится к диссоциированной форме соединения в растворителе, такой как диссоциированная форма соединения в водной среде, если такая диссоциированная форма получена из R-COOH, его соли или из любой другой единицы, которая приводит образованию R-COO в результате диссоциации в среде.
В настоящем документе термин «химический объект» обобщенно относится к соединению, а также производным соединения, включая соли, хелаты, сольваты, конформеры, нековалентные комплексы, метаболиты и пролекарства.
В одном аспекте химический объект выбран из группы, состоящей из соединений формулы (I), фармацевтически приемлемых солей соединений формулы (I), фармацевтически приемлемых пролекарств соединений формулы (I) и фармацевтически приемлемых метаболитов соединений формулы (I). В конкретном аспекте химический объект представляет собой соединение формулы (I) или фармацевтически приемлемую соль.
В другом примере, выражение, «воздействие на объект соединением формулы R-СООН» означает воздействие на указанный объект формой или формами соединения R-СООН, которое существует или которые существуют в среде, в которой происходит такое воздействие. В еще одном примере, выражение «взаимодействие объекта с соединением формулы R-СООН» означает взаимодействие (а) такого объекта в химически соответствующей форме или формах объекта, которая существует или которые существуют в среде, в которой происходит такое взаимодействие, с (b) химически соответствующей формой или формами соединения R-СООН, которое существует или которые существуют в среде в среде, в которой такое взаимодействие происходит. В связи с этим, если такой объект находится, например, в водной среде, следует понимать, что соединение R-СООН находится в такой же среде и, следовательно, объект подвергается воздействию веществ, таких как R-COOH(вод.) и/или R-COO(вод.), где индекс «(вод.)» означает «водный» в соответствии с его традиционным значением в области химии и биохимии. В указанных примерах номенклатуры была выбрана функциональная группа карбоновой кислоты; однако этот выбор является не ограничивающим, а только иллюстративным. Следует понимать, что аналогичные примеры могут быть представлены для других функциональных групп, в том числе, но не ограничиваясь ими, гидроксила, основных азотосодержащих частей, например, в аминах, а также любых других групп, которые взаимодействует или преобразуются известным образом в среде, содержащей соединение. Такие взаимодействия и преобразования включают, но не ограничиваются ими, диссоциацию, ассоциацию, таутомерию, сольволиз, включая гидролиз, сольватацию, включая гидратацию, протонирование и депротонирование. Для указанных взаимодействий и преобразований в среде в настоящем документе не представлено никаких дополнительных примеров, поскольку они известны любому специалисту в данной области техники.
2
2
3
2
В другом примере в настоящем документе «цвиттер-ионное» соединение охватывает соединение, которое образуют цвиттер-ион, даже если цвиттер-ионная форма явно не названа. Такие термины, как цвиттер-ион, цвиттер-ионы и синонимы цвиттер-ионного соединения(ий) являются стандартными одобренными IUPAC названиями, которые хорошо известны и являются частью стандартного перечня научных названий. В связи с этим, названию цвиттер-ион присвоено идентификационного название CHEBI:27369 в словаре молекулярных объектов биологического интереса (Chemical Entities of Biological Interest (ChEBI)). Как в целом хорошо известно, цвиттер-ион или цвиттер-ионное соединение является нейтральным соединением, которое имеет формальные единичные заряды противоположного знака. Иногда эти соединения называют термином «внутримолекулярные соли». В других источниках указанные соединений относят к «биполярным ионам», хотя последний термин в других источниках рассматривается как неправильный. В качестве конкретного примера, аминоэтановая кислота (аминокислота глицин) имеет формулу HNCHCOOH и существует в некоторых средах (в данном случае в нейтральной среде) в виде цвиттер-иона +HNCHCOO-. Цвиттер-ионы, цвиттер-ионные соединения, внутримолекулярные соли и биполярные ионы входят в объем настоящего изобретения в известных и общепринятых значениях указанных терминов, как в любом случае будет понятно специалистам в данной области техники. Поскольку нет необходимости назвать каждый вариант реализации, понятный для специалиста в данной области техники, в настоящем описании не приведены структуры цвиттер-ионных соединений, связанных с соединениями настоящего изобретения. Однако они являются частью настоящего изобретения. В настоящем документе не представлено никаких дополнительных примеров для указных соединений, поскольку взаимодействия и преобразования в среде, позволяющие получить различные формы заданного соединения, известны любому специалисту в данной области техники.
2
3
11
13
14
15
18
17
31
32
35
18
36
125
Изотопы могут присутствовать в описанных соединениях. Каждый химический элемент, присутствующий в соединении либо конкретно, либо в общем, описанном в настоящем документе, может включать любой изотоп указанного элемента. Любая формула, приведенная в настоящем документе, также охватывает меченые изотопами формы соединений. Меченые изотопами соединения имеют структуры, изображенные в формулах, приведенных в настоящем документе, за исключением того, что один или более атомов заменены атомами, имеющими выбранную атомную массу или массовое число. Примеры изотопов, которые могут быть включены в соединения согласно изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, серы, фтора, хлора и йода, такие как Н, Н, C, С, С, N, O, O, Р, Р, S, F, Cl и I.
При обращении к любой формуле, приведенной в настоящем описании, выбор конкретного фрагмента из списка возможных представителей для уточняемой переменной не означает, что тот же выбор представителя для переменной справедлив в другом месте. Другими словами, когда переменная встречается более одного раза, выбор представителя из конкретного списка не зависит от выбора представителя для той же переменной в других местах в формуле, если не указано иное.
1
2
1
2
1
2
1
2
1
2
1
2
1
3
4
10
11
12
13
пример
1
2
пример
3
4
пример
1
пример
3
пример
1
пример
4
пример
2
пример
3
пример
2
пример
4
пример
1
2
пример
3
4
В качестве первого примера терминологии заместителей, если заместитель S представляет собой один из S и S, и заместитель S представляет собой один из S и S, тогда указанные присвоенные значения относятся к вариантам реализации настоящего изобретения с альтернативами S представляет собой S и S представляет собой S; S пример представляет собой S и S представляет собой S; S представляет собой S и S представляет собой S; S представляет собой S и S представляет собой S; и эквивалентам каждой из таких альтернатив. Более краткая терминология "S представляет собой один из S и S" и "S представляет собой один из S и S", соответственно используется в настоящем документе с целью придания краткости, а не с целью ограничения. Приведенный выше первый пример терминологии заместителей, который описан в общих терминах, иллюстрирует различные присвоенные значения заместителей, описанные в настоящем документе. Указанное выше условное обозначение, приведенное для заместителей, распространяется в подходящих случаях на заместители, такие как R, R, R, R, R, R, R, М, Y и Z и любой другой символ общего заместителя, используемый в настоящем документе.
пример
1
2
3
пример
1
пример
2
пример
3
пример
1
2
пример
1
3
пример
2
3
пример
1
2
3
пример
пример
1
2
3
1
3
4
10
11
12
13
Кроме того, когда более одного значения присвоено любому элементу или заместителю, варианты реализации настоящего изобретения включают различные группировки, которые могут быть составлены из перечисленных присвоенных значений, взятых независимо, и их эквивалентов. В качестве второго примера терминологии заместителей, если в настоящем документе описано, что заместитель S представляет собой один из S, S и S, указанное перечисление относится к вариантам реализации настоящего изобретения, в которых S представляет собой S; S представляет собой S; S представляет собой S; S представляет собой один из S и S; S представляет собой один из S и S; S представляет собой один из S и S; S представляет собой один из S, S и S; и S представляет собой любой эквивалент каждой из таких альтернатив. Более краткая терминология "S представляет собой один из S, S и S" используется в настоящем документе с целью придания краткости, а не с целью ограничения. Приведенный выше второй пример терминологии заместителей, который описан в общих терминах, иллюстрирует различные присвоенные значения заместителей, описанные в настоящем документе. Указанное выше условное обозначение, приведенное для заместителей, распространяется в подходящих случаях на заместители, такие как R, R, R, R, R, R, R, М, Y и Z и любой другой символ общего заместителя, используемый в настоящем документе.
i-j
1-3
1
2
3
Номенклатура «C», где j>i, в случае, когда применяется настоящем документе к классу заместителей, относится к вариантам реализации настоящего изобретения, в которых независимо реализуется каждое количество элементов углерода от i до j, включая i и j. В качестве примера термин С независимо относится к вариантам реализации, которые содержат один элемент углерода (С), вариантам реализации, которые содержат два элемента углерода (С), и вариантам реализации, которые содержат три элемента углерода (С).
n-m
Термин "Cалкил" относится к алифатической цепи, прямой или разветвленной, с общим количеством (N) элементов углерода в цепи, которая удовлетворяет n≤N≤m, где m>n.
Любой дизаместитель в настоящем документе охватывает различные варианты присоединения, если допускается более одного такого варианта. Например, в настоящем документе дизаместитель -А-В-, где А≠В, относится к такому дизаместителю, в котором А присоединен к первому замещенному элементу и В присоединен ко второму замещенному элементу, а также относится к таким дизаместителям, в которых А присоединен ко второму замещенному элементу и В присоединен к первому замещенному элементу.
В соответствии с указанными выше интерпретационными рассуждениями в отношении присвоенных значений и номенклатуры, следует понимать, что явная ссылка в настоящем документе на ряд вариантов, подразумевает, где это химически оправдано и если не указано иное, независимую ссылку на варианты реализации такого ряда вариантов, а также ссылку на каждый из возможных вариантов реализации подмножеств ряда, явно указанных.
Термин «пролекарство» обозначает предшественник обозначенного соединения, который после введения субъекту, приводит к образованию соединения in vivo посредством химического или физиологического процесса, например, сольволиза или ферментативного расщепления, или в физиологических условиях (например, пролекарство под воздействием физиологического pH превращается в соединение формулы (I)).
«Фармацевтически приемлемое пролекарство» представляет собой пролекарство, которое предпочтительно является нетоксичным, биологически переносимым и в иных случаях биологически подходящим для введения субъекту. Иллюстративные способы выбора и получения подходящих производных пролекарств описаны, например, в «Design of Prodrugs», ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985.
«Метаболит» означает фармакологически активный продукт метаболизма в организме соединения формулы (I) или его соли. Предпочтительно, метаболит находится в изолированной форме вне организма.
Композиции
Термин «композиция», как в фармацевтической композиции, охватывает продукт, содержащий активный ингредиент(ы) и инертный ингредиент(ы) (фармацевтически приемлемые наполнители), которые составляют носитель, а также любой продукт, который получается, прямо или косвенно, в результате комбинации, комплексообразования или агрегации любых двух или более ингредиентов, или в результате диссоциации одного или более ингредиентов, или результате других типов реакций или взаимодействий одного или более ингредиентов. Соответственно, фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению включают любую композицию, полученную путем смешивания соединения формулы (I) и фармацевтически приемлемого наполнителя.
Термин «фармацевтически приемлемый», используемый в контексте композиций согласно настоящему изобретению, относится к молекулярным объектам и другим ингредиентам таких композиций, которые являются физиологически переносимыми и обычно не вызывают нежелательных реакций при введении в организм животного (например, человека). Термин «фармацевтически приемлемый» может также означать одобренный регулирующим ведомством федерального правительства или правительства штата или перечисленный в фармакопее США или другой общепризнанной фармакопеи для применения на животных (например, млекопитающих), и в частности на людях.
st
«Фармацевтически приемлемый наполнитель» относится к веществу, которое, является нетоксичным, биологически переносимым и в иных случаях биологически подходящим для введения субъекту, например в качестве инертного вещества, добавленного к фармацевтической композиции или иным образом используемого в качестве наполнителя, носителя или разбавителей, для облегчения введения агента, и которое с ним совместимо. Примеры наполнителей включают карбонат кальция, фосфат кальция, различные сахара и виды крахмала, производные целлюлозы, желатин, растительные масла и полиэтиленгликоли. Подходящие фармацевтические носители включают описанные в Remington: The Science и Practice of Pharmacy, 21 Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005).
«Фармацевтически приемлемая соль» означает соль свободной кислоты или основания соединения, представленного формулой (I), которая является нетоксичной, биологически переносимой и в иных случаях биологически подходящей для введения субъекту. См., в общем, G.S. Paulekuhn et al., Trends in Active Pharmaceutical Ingredient Salt Selection based on Analysis of the Orange Book Database, J. Med. Chem. 2007, 50, 6665-6672; Berge et al., Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19; Stahl и Wermuth (eds), Pharmaceutical Salts; Properties, Selection, и Use: 2nd Revised Edition, Wiley-VCS, Zurich, Switzerland (2011). Примеры фармацевтически приемлемых солей являются соли, которые фармакологически эффективны и подходят для контакта с тканями пациентов без возникновения чрезмерной токсичности, раздражения или аллергической реакций. Соединение формулы (I) может содержать достаточно кислотную группу, достаточно основную группу или оба типа функциональных групп, и, соответственно, взаимодействовать с рядом неорганических или органических оснований и неорганических и органических кислот с образованием фармацевтически приемлемой соли оснований, и неорганических и органических кислот с образованием фармацевтически приемлемой соли.
st
Термин «носитель» относится к адъюванту, разбавителю или наполнителям, с которыми вводят соединение. В предпочтительных вариантах реализации настоящего изобретения, носитель представляет собой твердый носитель. Подходящие фармацевтические носители включают носители, описанные в Remington: The Science и Practice of Pharmacy, 21 Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005).
Термин «лекарственная форма», используемый в настоящем документе, представляет собой форму, в которой доза должна быть введена субъекту или пациенту. Лекарственное средство обычно вводят в виде части состава, который включает немедицинские агенты. Лекарственная форма имеет уникальные физические и фармацевтические свойства. Лекарственные формы, например, могут быть твердыми, жидкими или газообразными. «Лекарственные формы» могут включать, например, капсулу, таблетку, таблетку в форме капсулы, гелевую таблетку в форме капсулы (желатиновая капсула), сироп, жидкий состав, порошок, концентрированный порошок, концентрированного порошок, смешанный с жидкостью, жевательную форму, форму для глотания, растворимую форму, шипучку, гранулированную форму и пероральный жидкий раствор. В конкретном варианте реализации лекарственная форма представляет собой твердую лекарственную форму и, более конкретно, включает таблетку или капсулу.
В настоящем описании термин «инертный» относится к любому неактивному ингредиенту описанной композиции. Определение «неактивный ингредиент», используемое в настоящем документе, соответствует определению, предложенному Управлением по контролю пищевых продуктов и лекарственных средств США в 21 C.F.R. 201,3(b)(8), и представляет собой любой компонент лекарственного средства, кроме активного ингредиента.
Способы и применения
В настоящем описании, термин «нарушение» используют взаимозаменяемо с терминами «заболевание» или «состояние». Например, нарушение ЦНС также означает заболевание ЦНС или состояние ЦНС.
В настоящем описании, термин «когнитивное нарушение» используют взаимозаменяемо с терминами «когнитивная дисфункция» или «когнитивный дефицит», все из которых охватывают те же терапевтические показания.
Термин «лечить», используемый в настоящем документе, является взаимозаменяемым с термином «лечение» и «лечащий» и включает:
(i) предотвращение заболевания, нарушения или состояния, т.е. снижения заболеваемости и/или ослабления эффекта и/или продолжительности заболевания, нарушения или состояния у субъектов, которые могут получить, подвергаться воздействию и/или являются предрасположенными к заболеванию, нарушению или состоянию, но у которых еще не диагностировано его наличие; или диагностировано наличие заболевания, нарушения или состояния; или которые находятся в группе риска для такого заболевания, нарушения или состояния;
(ii) подавление заболевания, нарушения или состояния, т.е. предотвращение или сдерживание начала болезни, нарушения или состояния; предотвращение дальнейшего развития или прогрессирования заболевания, нарушения или состояния у субъекта, уже страдающего от или имеющего один или более симптомов заболевания, нарушения или состояния; или снижения риска ухудшения заболевания, нарушения или состояния;
(iii) облегчение болезни, нарушения или состояния, т.е. ослабление, снятие, обращение или устранение заболевания, нарушения или состояния, или одного или более его симптомов.
В настоящем описании термин «эффективное количество» является взаимозаменяемым с термином «терапевтически эффективное количество» и обозначает количество или дозу соединения или композиции, эффективное для лечения конкретного заболевания, состояния или нарушения, описанного в настоящем документе, и, таким образом, «лечение» включает обеспечение требуемого профилактического, подавляющего, снимающего или облегчающего эффекта. В способах лечения согласно изобретению «эффективное количество» по меньшей мере одного соединения согласно настоящему изобретению вводят субъекту (например, млекопитающему).
Термин «животное» является взаимозаменяемым с термином «субъект» и может представлять собой позвоночное, в частности млекопитающее, и в частности человека, и включает лабораторных животных в контексте клинических испытаний или скрининга или эксперимента по активности. Таким образом, как может быть легко понятно специалисту в данной области техники, композиции и способы согласно настоящему изобретению особенно подходят для введения любому позвоночному, в частности млекопитающему и, в частности, человеку.
В настоящем описании «контрольное животное» или «нормальное животное» представляет собой животное, которое принадлежит к тому же виду и иным образом соответствует (например, имеет тот же возраст, пол) животному, которое обучается в условиях, достаточных, чтобы вызвать зависимого от транскрипции формирования памяти у указанного животного.
Под «улучшить», «улучшающий» или «улучшение» понимают способности усиливать, увеличивать, улучшать или сделать больше и лучше биохимическое или физиологическое действие или эффект, по сравнению с нормальным. Например, улучшение формирования долговременной памяти относится к способности усиливать или улучшать формирование долговременной памяти у животного по сравнению с нормальным формированием долговременной памяти животного. В результате, приобретение долговременной памяти становится быстрее или лучше сохраняется. Повышение производительности в когнитивной задаче относится к способности усиливать или улучшать производительность выполнения определенной когнитивной задачи животным по сравнению с нормальной производительностью выполнения когнитивной задачи животным.
В настоящем описании, термин «протокол обучения» или «обучение» относится либо к «когнитивному обучению», либо к «моторному обучению». Фраза «в сочетании» означает, что соединение или композиция согласно настоящему изобретению усиливает функцию пути CREB в ходе когнитивного или моторного обучения.
Далее будут рассмотрены варианты реализации настоящего изобретения, примеры которых проиллюстрированы и описаны в сочетании с прилагаемыми чертежами и примерами. В то время как в настоящем документе описаны некоторые варианты реализации, следует понимать, что описанные варианты реализации не ограничивают объем изобретения. Напротив, настоящее изобретение охватывает альтернативы, модификации и эквиваленты, которые могут быть включены в объем изобретения, как определено в прилагаемой формуле изобретения.
СОЕДИНЕНИЯ
Согласно многим вариантам реализации изобретение относится к химическим объектам формулы (I):
где:
каждый из Y и Z независимо представляет собой -СН- или -N-, при условии, что по меньшей мере один фрагмент Y или Z представляет собой -N-;
М представляет собой 0-5;
1
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
2
1-6
каждый из R независимо выбран из Н, галогена, -CN, -Cалкила, -Cалкинила -Cгалогеналкила, -Cтиоалкила, -Стиогалогеналкила, -Cалкокси, -Cгалогеналкокси, -SOCалкила, арила, гетероарила и гетероциклоалкила; или
1
1-6
1-6
1
6
два фрагмента R находятся на соседних атомах углерода и взятые вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, образуют 5-6-членную насыщенную или ненасыщенную моноциклическую кольцевую систему, содержащую один или более атомов кислорода или азота, где указанная кольцевая система необязательно замещена одним или более группами, выбранными из галогена, -Cалкила, -Cалкоксиа и -C-Сгалогеналкокси;
3
4
10
11
12
13
1-6
1-6
1-6
2
1-6
1-6
3
3
0-3
3
3
каждый из R и R независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, -CN, -ОН, -Cалкила, -Сгалогеналкила, -Салкенила, -СНО-арила, -Cалкокси, -Сгалогеналкокси, -С(O)СН, -CH(OH)(CF), -(CRR)NRR, арила, гетероарила, гетероциклоалкила, где каждый арил, гетероарил и гетероциклоалкил необязательно не замещены или замещены фрагментом, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из -СН и -ОСН;
10
11
1-6
1-6
каждый из R и R независимо выбран из группы, состоящей из: -Н, галогена, -Салкила, -Cгалогеналкила и -ОН;
12
13
1-6
2
1-6
1-6
3-6
каждый из R и R независимо выбран из группы, состоящей из -Н, -Cалкила, -СО-бензила, -Салкил(арила), -Салкил(гетероциклоалкила), необязательно незамещенного или замещенного арила, -Сциклоалкила, гетероарила и гетероциклоалкила;
12
13
или R и R, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют необязательно замещенный гетероциклоалкил.
Согласно некоторым вариантам реализации указанный химический объект выбран из группы, состоящей из соединений формулы (I), фармацевтически приемлемых солей соединений формулы (I), фармацевтически приемлемых пролекарств соединений формулы (I); и фармацевтически активных метаболитов соединений формулы (I). В конкретном аспекте указанный химический объект представляет собой соединение или его фармацевтически приемлемую соль формулы (I).
Согласно конкретным вариантам реализации формулы (I) Y представляет собой -N-.
Согласно конкретным вариантам реализации формулы (I) Z представляет собой -N-.
Согласно конкретным вариантам реализации формулы (I) Y и Z представляют собой -N-.
Некоторые варианты реализации относятся к соединениям формулы (I), где М представляет собой 1, 2, 3, 4 или 5.
Некоторые варианты реализации относятся к соединениям формулы (I), где М представляет собой 1, 2, 3 или 4.
Некоторые варианты реализации относятся к соединениям формулы (I), где М представляет собой 1, 2 или 3.
1
1-6
1-6
3
3
2
1-6
3
2
3
Согласно конкретным вариантам реализации формулы (I) М представляет собой 1, 2, 3, 4 или 5 и каждый R независимо представляет собой Н, -Br, -Cl, -F, -I, -CN, -Cалкил, -Cалкинил, -SCH, -OCF, -OCFH, -Салкокси, -SCF, -SOCH или 2-оксопирролидин или пиразол.
1
Согласно конкретным вариантам реализации формулы (I) два фрагмента Rнаходятся на соседних атомах углерода и взятые вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, образуют конденсированное 5-членное кольцо, выбранное из 1-метил-1H-пиразола или диоксолана.
1
1-6
Согласно указанным вариантам реализации М представляет собой 1, 2, 3, 4 и каждый R независимо представляет собой Н, -Cl, -F или -Cалкокси.
3
10
11
12
13
10
11
12
13
3
2
2
1-3
1-6
Некоторые варианты реализации относятся к соединениям формулы (I), где Y представляет собой -N-, R выбран из -Н, -СН(ОСН), -СНО-фенила или -(CRR)NRR, где каждый из R и R представляет собой Н, R представляет собой Н или -Cалкил, R выбран из фенила, бензила, (3-метилоксетан-3-ил)метила, (тетрагидрофуран-3-ил)метила или циклопропил(метила).
4
3
10
11
12
13
3
1-3
Согласно указанным вариантам реализации R представляет собой Н или -СН и R представляет собой -(CRR)NRR.
3
10
11
12
13
10
11
12
13
3
Некоторые варианты реализации относятся к соединениям формулы (I), где R представляет собой -(CRR)NRR, каждый из R и R независимо представляет собой Н, -ОН или -СН, и R и R, взятые вместе с атомом азота, к которым они присоединены, образуют гетероциклоалкильное кольцо, выбранное из морфолина, (2S,6R)-2,6-диметилморфолина, 4-(метилсульфонил)пиперазин-1-илп или изоиндолин-2-ила.
3
10
11
12
13
10
11
12
13
1-2
3
Согласно указанным вариантам реализации R представляет собой -(CRR)NRR, каждый из R и R независимо представляет собой Н, -ОН или -СН, и R и R, взятые вместе с атомом азота, к которым они присоединены, образуют гетероциклоалкильное кольцо, выбранное из морфолина, (2S,6R)-2,6-диметилморфолина или 4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ила.
3
4
10
11
12
13
3
1-3
Согласно конкретным вариантам реализации формулы (I) R представляет собой Н или -СН и R представляет собой -(CRR)NRR.
3
4
10
11
12
13
10
11
12
13
3
1-6
1-6
3
3
2
2
3
1-3
3
1-6
2
3
Согласно конкретным вариантам реализации формулы (I) R представляет собой -Н, -СН, R представляет собой Н, -Br, -Cалкил, -Салкенил, -С(O)СН, -CH(OH)CF, -СНОСНОСН, необязательно замещенный фенил, необязательно замещенный пиридил и -(CRR)NRR, каждый из R и R независимо представляет собой Н, -СН или -ОН, и каждый из R и R независимо представляет собой -Н, -Cалкил, -СО-бензил, -СН(СН)фенил, необязательно замещенный циклоалкил и необязательно замещенный гетероциклоалкил.
3
4
10
11
12
13
10
11
12
13
3
1-3
3
3
Согласно указанным вариантам реализации R представляет собой -Н, -СН, R представляет собой -(CRR)NRR, каждый из R и R независимо представляет собой -Н, -F, -СН, -CF или -ОН, и R и R, взятые вместе с атомом азота, к которым они присоединены, образуют гетероциклоалкильное кольцо, выбранное из (2R,5R)-2,5-диметилморфолина, (2R,6S)-2,6-диметилморфолина, (2S,5S)-2,5-диметилморфолина, (2S,6R)-2,6-диметилморфолина, (3S,5R)-2-метоксиэтил)пиперазина, (4-((тетрагидрофуран-3-ил)метил)пиперазина), 1,4-оксазепана, 1-метил-8-окса-1,2-диазаспиро[4,5]декана, 2,2-диметилморфолина, 2,5-диметилморфолина, 2-этилморфолина, 2-метилморфолина, 2-окса-5-азабицикло[2,2.1]гептана, 3-(диметиламино)пирролидина, 3,3-диметилморфолина, 3,5-диметилпиперазина, 3-гидроксиазетидина, 3-метил-6-оксопиридазин-1(6Н)-ила, 3-метилморфолина, 4-(2,2,2-трифторацетил)пиперазина, 4-(метилсульфонил)пиперазина, 4-(пропан-2-ил)пиперазина, 4-(тетрагидрофуран-3-карбонил)пиперазина, 4-ацетил-1,4-диазепана, 4-циклопропилпиперазина, 4-метоксипиперидина, 4-метил-1,4-диазепана, 4-метилпиперазина, 8-окса-3-азабицикло[3,2.1]октана, изоиндолина, морфолина, N,N-диметилпиперазин-1-сульфонамида, пиперазина, пиперидина, тетрагидро-1Н-оксазоло[3,4-а]пиразин-3(5Н)-она и тиоморфолина.
4
3
3
Согласно указанным вариантам реализации R представляет собой морфолинометил, (3-метилморфолино)метил, (2,6-диметилморфолино)метил, ((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил, ((2R,6S)-2,6-диметилморфолин-4-ил)метил, (4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил, 1-гидрокси-2-морфолиноэтил, 2-((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)-1-гидроксиэтил, и R представляет собой Н или -СН.
В дополнительных вариантах реализации предложены фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I), фармацевтически приемлемые пролекарства соединений формулы (I) и фармацевтически активные метаболиты соединений формулы (I).
Согласно конкретным вариантам реализации соединение или его фармацевтически приемлемая соль формулы (I), выбрано из группы, состоящей из:
Меченые изотопами соединения
11
13
14
36
18
2
3
123
125
13
15
15
17
18
31
32
35
99m
Настоящее изобретение также включает меченые изотопами соединения, которые идентичны соединениям, описанных формулой I, но в которых один или более атомов заменены атомом, имеющим атомную массу или массовое число, отличные от атомной массы или массового числа, обычно встречающихся в природе. Примеры изотопов, которые могут быть включены в соединения согласно изобретению, включают изотопы углерода, хлора, фтора, водорода, йода, азота, кислорода, фосфора, серы и технеция, включая С, С, С, Cl, F, H, Н, I, I, N, N, O, O, O, Р, Р, S и Tc.
Соединения согласно настоящему изобретению (и производные таких соединений, такие как фармацевтически приемлемые соли и пролекарства), которые содержат указанные выше изотопы или другие изотопы других атомов, включены в объем настоящего изобретения. Меченые изотопами соединения согласно настоящему изобретению могут быть использованы в анализах распределения лекарственного средства и субстрата в тканях, а также анализах занятости мишени. Например, меченые изотопами соединения особенно подходят для SPECT (однофотонной эмиссионной компьютерной томографии) и ПЭТ (позитронно-эмиссионной томографии), как описано далее в настоящем документе.
Производные
В настоящем изобретении также предложены производные химического объекта формулы (I), которые включают, но не ограничиваются ими, соль, сольват, конформер или кристаллическую форму/полиморф. В конкретном аспекте производное химического объекта представляет собой фармацевтически приемлемую соль соединения формулы (I).
Соли
Соответственно, согласно одному из вариантов реализации настоящее изобретение включает фармацевтически приемлемые соли соединений, представленных формулой (I), и способы применения таких солей.
Примеры фармацевтически приемлемых солей включают сульфаты, пиросульфаты, бисульфаты, сульфиты, бисульфиты, фосфаты, гидроортофосфаты, дигидрофосфаты, метафосфаты, пирофосфаты, хлориды, бромиды, йодиды, ацетаты, бораты, нитраты, пропионаты, деканоаты, каприлаты, акрилаты, формиаты, изобутираты, капроаты, гептаноаты, пропиолаты, оксалаты, малонаты, сукцинаты, субераты, себацинаты, фумараты, малеаты, бутин-1,4-диоаты, гексин-1,6-диоаты, бензоаты, хлорбензоаты, метилбензоаты, динитробензоаты, гидроксибензоаты, метоксибензоаты, фталаты, сульфонаты, ксилолсульфонаты, фенилацетаты, фенилпропионаты, фенилбутираты, цитраты, лактаты, у-гидроксибутираты, гликоляты, тартраты, метансульфонаты, пропансульфонаты, нафталин-1-сульфонаты, нафталин-2-сульфонаты, безилаты, мезилаты и манделаты.
Если соединение формулы (I) содержит основной азот, требуемая фармацевтически приемлемая соль может быть получена любым подходящим способом, доступным в данной области, например, путем обработки свободного основания неорганической кислотой, такой как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, сульфаминовая кислота, азотная кислота, борная кислота, фосфорная кислота и т.п., или органической кислотой, такой как уксусная кислота, фенилуксусная кислота, пропионовая кислота, стеариновая кислота, молочная кислота, аскорбиновая кислота, малеиновая кислота, гидроксималеиновая кислота, изетионовая кислота, янтарная кислота, валериановая кислота, фумаровая кислота, малоновая кислота, пировиноградная кислота; щавелевая кислота, гликолевая кислота, салициловая кислота, олеиновая кислота; пальмитиновая кислота, лауриновая кислота, пиранозидиловая кислота, например глюкуроновая кислота или галактуроновая кислотя, альфа-гидрокси кислота, например миндальная кислота, лимоння кислота или винная кислота, аминокислота, например аспарагиновая кислота, глутаровая кислота или глутаминовая кислота, ароматическая кислота, например бензойная кислота, 2-ацетоксибензойная кислота, нафтойная кислота или коричная кислота, сульфоновая кислота, например лаурилсульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, любой совместимой смесью кислот, приведенных в качестве примеров в настоящем описании, а также любой другой кислотой и их смесью, которые считаются эквивалентами или приемлемыми заменителями в свете обычного уровня знаний в данной области техники.
Если соединение формулы (I) представляет собой кислоту, такую как карбоновая кислота или сульфоновая кислота, требуемая фармацевтически приемлемая соль может быть получена любым подходящим способом, например, путем обработки свободной кислоты неорганическим или органическим основанием, таким как амин (первичный, вторичный или третичный), гидроксид щелочного металла, гидроксид щелочноземельного металла, любой совместимой смесью оснований, приведенных в качестве примеров в настоящем описании, а также любым другим основанием и их смесью, которые считаются эквивалентами или приемлемыми заменителями в свете обычного уровня знаний в данной области техники. Иллюстративные примеры подходящих солей включают органические соли, полученные из аминокислот, таких как N-метил-О-глюкамин, лизин, холин, глицин и аргинин, аммиака, карбонатов, бикарбонатов, первичных, вторичных и третичных аминов, и циклических аминов, таких, как трометамин, бензиламины, пирролидины, пиперидин, морфолин и пиперазин, а также неорганические соли, полученные из натрия, кальция, калия, магния, марганца, железа, меди, цинка, алюминия и лития.
Сольваты
Согласно другим вариантам реализации в изобретении предложен сольват соединения формулы (I), а также применение таких сольватов в способах согласно настоящему изобретению. Некоторые соединения формулы (I) или фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I) могут быть получены в виде сольватов. Согласно некоторым вариантам реализации растворитель представляет собой воду и сольваты представляют собой гидраты.
В частности, сольваты включают сольваты, образованные в результате взаимодействия или из комплексов соединений согласно изобретению с одним или более растворителями, либо в растворе, либо в виде твердого вещества или в кристаллической форме. Такие молекулы растворителя представляют собой молекулы, которые широко используются в фармацевтической области и являются безвредными для реципиента, например, воду, этанол, этиленгликоль и т.п.. Другие растворители могут быть использованы в качестве промежуточных сольватов для получения более желательных сольватов, например МеОН, метил-трет-бутиловый эфир, EtOAc, (S)-пропиленгликоль, (R)-пропиленгликоль, 1,4-бутиндиол и т.п. Гидраты включают соединения, образованные с помощью включения одной или более молекул воды.
Конформеры и кристаллические формы/полиморфы
Согласно другим вариантам реализации в настоящем изобретении предложены конформер и кристаллические формы соединения формулы (I), а также применение указанных производных в способах согласно настоящему изобретению. Конформер представляет собой структуру, которая является конформационным изомером. Конформационная изомерия представляет собой феномен молекул с одной и той же структурной формулой, но с разными конформациями (конформерами) атомов относительно вращающейся связи.
Полиморф представляет собой композицию, имеющую такую же химическую формулу, но отличающуюся твердой или кристаллической структурой. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения соединения формулы (I) были получены в кристаллической форме. Кроме того, некоторые кристаллические формы соединений формулы (I) или его фармацевтически приемлемых солей соединений формулы (I) могут быть получены в качестве со-кристаллов. Согласно другим вариантам реализации соединения формулы (I) могут быть получены одним из нескольких полиморфных форм, в виде смеси кристаллических форм, как полиморфной форме, или в виде аморфного вещества.
Пролекарства
Изобретение также относится к пролекарствам соединений формулы (I), а также применению таких фармацевтически приемлемых пролекарств в способах согласно настоящему изобретению, в частности, терапевтических способах. Примеры пролекарств включают соединения, содержащие аминокислотный остаток или полипептидную цепь из двух или более (например, двух, трех или четырех) аминокислотных остатков, ковалентно соединенных через амидную или сложноэфирную связь со свободной амино, гидроксигруппой или группой карбоновой кислоты соединения формулы (I). Примеры аминокислотных остатков, включают двадцать природных аминокислот, традиционно обозначаемых трехбуквенными символами, а также 4-гидроксипролин, гидроксилизин, десмозин, изидесмозин, 3-метилгистидин, норвалин, бета-аланин, гамма-аминомасляная кислота, цитруллин гомоцистеина, гомосерин, орнитин и метионинсульфон.
1-6
1-6
1-3
1-2
1-6
1-6
1-6
Дополнительные типы пролекарств могут быть получены, например, путем дериватизации свободной карбоксильной группы структур формулы (I) в виде амидов или сложных алкиловых эфиров. Примеры амидов включают соли, полученные из аммиака, первичных С алкиламинов и вторичных ди(Салкил)аминов. Вторичные амины включают 5- или 6-членные гетероциклоалкильные или гетероарильные кольцевые фрагменты. Примеры амидов включают амиды, полученные из аммиака, первичных аминов Cалкиламинов, и ди(Салкил)аминов. Примеры сложных эфиров согласно изобретению включают С алкильные, С циклоалкильные, фенильные и фенил(С алкильные) сложные эфиры. Предпочтительные сложные эфиры включают метиловые эфиры. Пролекарства могут быть также получены путем дериватизации свободных гидроксильных групп с применением групп, включающих гемисукцинаты, фосфатные эфиры, диметиламиноацетаты и фосфорилоксиметилоксикарбонилы, с проведением последующих процедур, изложенных в Fleisher et al., Adv. Drug Delivery Rev. 1996, 19, 115-130.
Карбаматные производные гидрокси и аминогрупп могут также приводить к получению пролекарств. Карбонатные производные, сульфонатные эфиры и сульфатные эфиры гидроксигрупп могут также приводить к получению пролекарств. Получение производных гидроксигрупп, таких как (ацилокси)метил и (ацилокси)этиловые эфиры, где ацильная группа может представлять собой алкиловый простой эфир, необязательно замещенный одой или более функциональными группами эфиров, аминов или карбоновых кислот, или где ацильная группа может представлять собой сложный эфир аминокислоты, как описано выше, также может приводить к получению пролекарств. Пролекарства данного типа могут быть получены, как описано в Robinson et al., J. Med. Chem. 1996, 39, 10-18. Свободные амины также могут быть дериватизированы в виде амидов, сульфонамидов или фосфонамидов. Все указанные фрагменты пролекарства могут включать группы, содержащие функциональные группы простого эфира, амина т карбоновой кислоты.
Пролекарства могут быть определены с помощью рутинных способов, известных или доступных в данной области техники (например, Bundgard (ed.), 1985, Design of prodrugs, Elsevier; Krogsgaard-Larsen et al., (eds.), 1991, Design and Application of Prodrugs, Harwood Academic Publishers).
Метаболиты
Настоящее изобретение также относится к метаболиту соединения формулы (I), определенному в настоящем документе, и его соли. Настоящее изобретение также относится к применению таких метаболитов, а также их солей, в способах согласно настоящему изобретению, в том числе в терапевтических способах.
Метаболиты соединения могут быть определены с помощью рутинных методик, известных или доступных в данной области техники. Например, выделенные метаболиты можно получать ферментативным и синтетическим способом (например, Bertolini et al., J. Med. Chem. 1997, 40, 2011-2016; Shan et al., J. Pharm. Sci. 1997, 86, 765-767; Bagshawe, Drug Dev. Res. 1995, 34, 220-230; и Bodor, Adv Drug Res. 1984, 13, 224-231).
КОМПОЗИЦИИ
Согласно некоторым вариантам реализации соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли применяют по отдельности или в комбинации с одним или более дополнительными активными ингредиентами для получения фармацевтических композиций. Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит: (а) эффективное количество по меньшей мере одного активного агента в соответствии с настоящим изобретением; и (b) фармацевтически приемлемый наполнитель.
Составы и введение
Доступны многочисленные стандартные источники, описывающие процедуры получения различных составов, подходящих для введения соединений согласно настоящему изобретению. Примеры возможных составов и препаратов содержатся, например, в Handbook of Pharmaceutical Excipients, American Pharmaceutical Association (последнее издание); Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets (Lieberman, Lachman и Schwartz, editors) последнее издание, опубликованное Marcel Dekker, Inc., а также Remington's Pharmaceutical Sciences (Osol, ed.), 1980, 1553-1593.
Любой подходящий способ введения может быть использован для обеспечения животного, особенно человека, эффективной дозой соединения согласно настоящему изобретению. Например, можно использовать пероральный, ректальный, местный, парентеральный, глазной, легочный, назальный и тому подобные способы введения. Лекарственные формы включают таблетки, пастилки, дисперсии, суспензии, растворы, капсулы, кремы, мази, аэрозоли и т.п.
Подходящие носители, разбавители и наполнители хорошо известны специалистам в данной области техники и включают материалы, такие как углеводы, воски, водорастворимые и/или набухающие полимеры, гидрофильные или гидрофобные материалы, желатин, масла, растворители, воду и т.п. Использование конкретного носителя, разбавителя или наполнителя будет зависеть от средств и цели, для которой будут применять соединение согласно настоящему изобретению. Растворители обычно выбирают на основе растворителей, признанных специалистами в этой области техники как безопасные (GRAS) для введения животному. В целом, безопасные растворители представляют собой нетоксичные водные растворители, такие как вода и другие нетоксичные растворители, которые растворимы или смешиваются с водой. Подходящие водные растворители включают воду, этанол, пропиленгликоль, полиэтиленгликоли (например, ПЭГ 400, ПЭГ 300), и т.д. и их смеси. Составы могут также включать один или более буферов, стабилизирующих агентов, поверхностно-активных веществ, смачивающих агентов, смазывающих агентов, эмульгаторов, суспендирующих агентов, консервантов, антиоксидантов, окрашивающих агентов, скользящих агентов, технологических добавок, красителей, подсластителей, ароматизирующих агентов, вкусовых агентов и других известных добавок, для обеспечения превосходного вида лекарственного средства (то есть, соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтической композиции) или для облегчения производства фармацевтического продукта (т.е. лекарственного средства).
Составы могут быть получены с применением традиционных процедур растворения и смешивания. Например, объемную массу вещества лекарственного средства (т.е. соединение согласно настоящему изобретению или стабилизированную форму соединения (например, комплекс с производным циклодекстрина или другим известным комплексообразующим агентом)) растворяют в подходящем растворителе в присутствии одного или более из наполнителей, описанных выше. Соединение согласно настоящему изобретению, как правило, получают в виде фармацевтических лекарственных форм для обеспечения легко контролируемого и соответствующего дозирования лекарственного средства.
Фармацевтическая композиция (или состав) для применения может быть упакован различными методами в зависимости от способа, используемого для введения лекарственного средства. Как правило, изделие для отпуска включает контейнер, содержащий фармацевтический состав в соответствующей форме. Подходящие контейнеры хорошо известны специалистам в данной области техники и включают такие материалы, как бутылки (пластик и стекло), саше, ампулы, пластиковые мешки, металлические цилиндры и т.п. Контейнер может также включать защитную часть для предотвращения непреднамеренного доступа к содержимому упаковки. Кроме того, контейнер содержит нанесенную на него этикетку, на которой описано содержимое контейнера. Этикетка может также перечислять соответствующие предупреждения.
Соединения согласно настоящему изобретению могут вводить системно, например, перорально, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, таким как инертный разбавитель или усваиваемый съедобный носитель. Они могут быть заключены в твердые или мягкие желатиновые капсулы, могут быть спрессованы в таблетки, или могут быть введены непосредственно в пищу диеты пациента. Для перорального терапевтического введения активное соединение может быть объединено с одним или более наполнителями и использовано в виде таблеток для приема внутрь, буккальных таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, вафель и тому подобного. Такие композиции и препараты должны содержать по меньшей мере 0,1% активного соединения. Процентное содержание композиций и препаратов, конечно, может варьироваться и традиционно составляет от примерно 2 до примерно 60% по массе данной единичной лекарственной формы. Количество активного соединения в таких терапевтически подходящих композициях таково, чтобы обеспечить эффективный уровень дозировки.
Таблетки, пастилки, пилюли, капсулы и т.п. могут также содержать следующее: связующие, такие как трагакантовая камедь, гуммиарабик, кукурузный крахмал или желатин; наполнители, такие как дикальцийфосфат; дезинтегрирующий агент, такой как кукурузный крахмал, картофельный крахмал, альгиновая кислота и т.п.; смазывающее вещество, такое как стеарат магния; и подслащивающий агент, такой как сахароза, фруктоза, лактоза или аспартам, или может быть добавлен вкусовой агент, такой как мята перечная, масло грушанки, вишневый ароматизатор. Если единичная лекарственная форма представляет собой капсулу, она может содержать, в дополнение к материалам указанного выше типа, жидкий носитель, такой как растительное масло или полиэтиленгликоль. Различные другие материалы могут присутствовать в качестве покрытий или для модификации физической формы твердой единичной лекарственной формы. Например, таблетки, пилюли или капсулы могут быть покрыты желатином, воском, шеллаком или сахаром и т.п. Сироп или эликсир может содержать активное соединение, сахарозу или фруктозу в качестве подслащивающего агента, метил- и пропилпарабены в качестве консервантов, краситель и ароматизатор, например вишневый или апельсиновый. Конечно, любой материал, используемый для получения любой единичной лекарственной формы, должен быть фармацевтически приемлемым и по существу нетоксичным в используемых количествах. Кроме того, активное соединение может быть включено в препараты и устройства с замедленным высвобождением.
Активное соединение можно также вводить внутривенно или внутрибрюшинно путем инфузии или инъекции. Растворы активного соединения или его соли могут быть получены в воде, возможно, в смеси с нетоксичным поверхностно-активным веществом. Дисперсии могут быть также получены в глицерине, жидких полиэтиленгликолях, триацетине и их смеси, и в маслах. При обычных условиях хранения и использования указанные препараты содержат консервант для предотвращения роста микроорганизмов.
Фармацевтические лекарственные формы, подходящие для инъекции или инфузии, могут включать стерильные водные растворы или дисперсии или стерильные порошки, содержащие активный ингредиент, которые подходят для немедленного получения растворов стерильных инъекций или инфузий или дисперсий, необязательно заключенные в липосомы. Во всех случаях, конечная лекарственная форма должна быть стерильной, жидкой и стабильной в условиях производства и хранения. Жидкий носитель или наполнитель может представлять собой растворитель или жидкую дисперсионную среду, содержащую, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкие полиэтиленгликоли и т.п.), растительные масла, нетоксичные сложные эфиры глицерина и их подходящие смеси. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, путем образования липосом, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсий или путем использования поверхностно-активных веществ. Предотвращение действия микроорганизмов может быть достигнуто с помощью различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тимеросала и тому подобного. Во многих случаях, будет предпочтительно включать изотонические агенты, например сахара, буферы или хлорид натрия. Пролонгированное всасывание инъекционных композиций может быть осуществлено путем использования в композициях агентов, задерживающих абсорбцию, например, моностеарат алюминия и желатин.
Стерильные инъекционные растворы обычно получают путем введения активного соединения в требуемом количестве в соответствующий растворитель с различными другими ингредиентами, перечисленными выше, если необходимо, с последующей стерилизацией фильтрованием. В случае стерильных порошков для получения стерильных инъекционных растворов, традиционными способами получения являются вакуумная сушка и методы сушки вымораживанием, которые позволяют получить порошок активного ингредиента плюс любой дополнительный желательный ингредиент, присутствующий в растворе, обработанном стерилизующем фильтрованием.
Для местного введения соединения согласно настоящему изобретению могут быть применены в чистом виде, то есть, когда они представляют собой жидкости. Тем не менее, как правило, будет желательно вводить их на кожу в виде композиций или составов в комбинации с дерматологически приемлемым носителем, который может быть твердым или жидким.
Подходящие твердые носители включают тонко измельченные твердые вещества, такие как тальк, глина, микрокристаллическая целлюлоза, диоксид кремния, оксид алюминия и т.п. Подходящие жидкие носители включают воду, спирты или гликоли или водно-спиртовые/гликольные смеси, в которых соединения согласно настоящему изобретению могут быть растворены или диспергированы в эффективных количествах, при необходимости с помощью нетоксичных поверхностно-активных веществ. Адьюванты, такие как ароматизаторы и дополнительные противомикробные агенты, могут быть добавлены для оптимизации свойств для заданного применения. Полученные жидкие композиции могут быть нанесены из абсорбирующих прокладок, используемых для пропитки бинтов и других повязок, или их распыляют на пораженный участок с помощью распылителей насосного типа или аэрозольного типа.
Загустители, такие как синтетические полимеры, жирные кислоты, соли жирных кислот и сложных эфиров, жирных спиртов, модифицированные целлюлозы или модифицированные минеральные материалы также могут быть использованы с жидкими носителями для получения намазывающихся паст, гелей, мазей, мыла и т.п., для применения непосредственно коже пользователя.
Дозировки
Подходящие дозировки соединений формулы (I) могут быть определены путем сравнения их активности in vitro и активности in vivo на животных моделях. Методы экстраполяции эффективных дозировок у мышей и других животных на организм человека известны в данной области техники. Подходящие дозировки соединений формулы I могут быть определены путем сравнения их активности in vitro и активности in vivo на животных моделях. Методы экстраполяции эффективных дозировок у мышей и других животных на организм человека известны в данной области (например, патент США №4938949).
Оптимальные дозы для введения в терапевтических способах согласно настоящему изобретению могут быть определены специалистом в данной области техники и будут зависеть от множества факторов, в том числе от конкретной используемой композиции, устойчивости препарата, способа и времени введения, и прогрессировала заболевания или состояния. Дополнительные факторы могут включать характеристики субъекта, которого лечат, такие как возраст, вес, пол и диета.
В целом, однако, подходящая доза будет составлять от примерно 0,01 до примерно 100 мг/кг, более предпочтительно от примерно 0,1 до примерно 100 мг/кг, например от 10 до примерно 75 мг/кг массы тела в сутки, от 3 до 50 мг на килограмм массы тела реципиента в сутки, от 0,5 до 90 мг/кг/сутки, или от 1 до 60 мг/кг/сутки (или любое другое значение или диапазон значений в нем). Соединение удобно вводить в виде единичной лекарственной формы; например, содержащей от 1 до 1000 мг, в частности примерно от 10 до 750 мг, и более конкретно, от примерно 50 до 500 мг активного ингредиента на единичную лекарственную форму.
Предпочтительно, активный ингредиент должен быть введен с достижением пика концентрации в плазме активного соединения от примерно 0,5 до примерно 75 мкМ, предпочтительно, приблизительно от 1 до 50 мкМ, и более предпочтительно, от примерно 2 до примерно 30 мкМ. Он может быть достигнут, например, путем внутривенной инъекции 0,05 до 5% раствора активного ингредиента, необязательно в физиологическом растворе, или при пероральном введении в виде болюса, содержащего примерно от 1 до 100 мг активного ингредиента. Требуемые содержания в крови можно поддерживать с помощью непрерывной инфузии с обеспечением примерно от 0,01 до 5,0 мг/кг/ч или путем периодической инфузии, содержащей от примерно 0,4 до 15 мг/кг активного ингредиента (ов).
Требуемая доза может быть удобным образом получена в виде разовой дозы или в виде разделенных доз, вводимых через соответствующие интервалы, например в виде, двух, трех, четырех или более суб-доз в сутки. Сама суб-доза может быть разделена, например, на несколько раздельных по времени введений, используемых в соответствии с композициями и способами согласно настоящему изобретению.
Эффективные количества или дозы активных агентов согласно настоящему изобретению могут быть установлены с помощью рутинных методов, таких как моделирование, исследование с эскалацией дозы или клинических испытаний, а также с учетом обычных факторов, например, способа и пути введения или доставки лекарственного средства, фармакокинетики агента, тяжести и течения заболевания, нарушения или состояния, предыдущей или текущей терапии субъекта, состояния здоровья субъекта и ответа на лекарственные средства, а также лечащего врача. Такие композиции и препараты должны содержать по меньшей мере 0,1% активного соединения. Процентное содержание композиций и препаратов, конечно, может варьироваться и традиционно составляет от примерно 2 до примерно 60% по массе данной единичной лекарственной формы. Количество активного соединения в таких терапевтически подходящих композициях таково, чтобы обеспечить эффективный уровень дозировки. Примерная дозировка составляет от примерно 0,001 до примерно 200 мг активного вещества на кг массы тела субъекта в сутки, предпочтительно от примерно 0,05 до 100 мг/кг/сутки, или примерно от 1 до 35 мг/кг/сутки, или примерно от 0,1 до 10 мг/кг/сутки в разовой или разделенной дозировке (например, BID, TID, QID). Для 70-килограммового человека примерный диапазон подходящей дозировки составляет от 1 до 200 мг/сутки или примерно от 5 до 50 мг/сутки.
Способы и применения
Применение меченых изотопами соединений
14
2
3
В одном аспекте настоящее изобретение относится к способу применения меченых изотопами соединений и пролекарств согласно настоящему изобретению в: (I) исследованиях метаболизма (предпочтительно с С), исследованиях кинетики реакции (например, с Н или Н); (II) обнаружения или визуализации методик [таких, как позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ) или однофотонная эмиссионная компьютерная томография (ОФЭКТ)], включая анализы распределения лекарственного средства или субстрата в тканях; или (III) в радиационного лечения пациентов.
18
11
123
2
Меченые изотопами соединения и пролекарства согласно изобретению, в целом, могут быть получены путем проведения процедур, описанных на схемах и в примерах и примерах получения, описанных ниже путем замены немеченого изотопом реагента легкодоступным меченым изотопом реагентом. Меченое F или С соединение может быть особенно предпочтительным для ПЭТ и меченое I соединение может быть особенно предпочтительным для исследований ОФЭКТ. Дополнительное замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий (т.е. Н) позволяет получить определенные терапевтические преимущества в результате более высокой метаболической стабильности, например увеличенный полураспад in vivo или сниженные потребности в дозе.
Терапевтические способы
Общие
Настоящее изобретение относится к способам лечения заболевания, состояния или нарушения у животного путем ингибирования PDE1 и, в частности, PDE1B. Способы в целом включают стадию введения терапевтически эффективного количества соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически соли пациенту, нуждающемуся в этом, для лечения нарушения или заболевания. Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение относится к применению соединения, описанного в настоящем документе, для получения лекарственного средства для лечения заболевания, состояния или нарушения путем ингибирования PDE1 и, в частности, PDE1B.
Связанные с PDE1 показания, которые можно лечить с помощью соединений и композиций согласно настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются ими, нарушения нервной системы, сердечно-сосудистые нарушения, метаболические заболевания, заболевания желудочно-кишечного тракта и печени, раковые заболевания, гематологические нарушения, легочные и сосудистые заболевания, неврологические нарушения и урологические нарушения.
Связанные с PDE1 показания также охватывают заболевания (например, болезнь Паркинсона или кокаиновую зависимость), при которых встречаются аберрантные или дисрегулированные сигнальные пути, опосредованные PDE1 (например, болезнь Паркинсона или кокаиновая зависимость), и в частности PDE1B. Такие связанные с PDE1 сигнальные пути, предпочтительно в нервной системе, включают, но не ограничиваются ими, те, в которых задействованы оксид азота, натрийуретические пептиды (например, ANP, BNP, CNP), допамин, норадреналин, нейротензин, холецистокинин (CCK), вазоактивный кишечный пептид (VIP), серотонин, глутамат (например, рецептор NMDA, рецептор АМРА), ГАМК, ацетилхолин, аденозин (например, рецептор А2А), каннабиноиды, натрийуретические пептиды (например, ANP, BNP, CNP) и эндорфины. Соответственно, соединения согласно настоящему изобретению могут быть использованы для лечения нарушений, при которых встречаются аберрантные или дисрегулированные сигнальные пути, опосредованные PDE1 и, в частности, PDE1B. В конкретном аспекте они подходят для лечения нарушений, характеризующихся изменениями сигнального пути дофамина. См., например, Nishi and Snyder, 2010, J Pharmacol. Sci. 114, 6-16.
Нарушения ЦНС
Настоящее изобретение включает применение соединения или композиции, описанных в настоящем документе, в способе лечения нарушения ЦНС, включающем введение эффективного количества соединения или композиции пациенту, нуждающемуся в этом. В частности, соединение или композиция согласно настоящему изобретению может быть использована в способе лечения когнитивного нарушения, связанного с нарушением ЦНС.
Нарушения ЦНС, входящие в объем настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются ими, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, синдром дефицита внимания (ADD), синдром дефицита внимания с гиперактивностью (СДВГ), нейродегенеративные расстройства, синдром Туретта, тиковые расстройства, болезнь Леша-Ньян, боль, дистонии, злоупотребление веществами или лекарственными средствами, фетальный алкогольный синдром, шизофрению, шизоаффективное расстройство, депрессию, аффективное расстройство, маниакально-депрессивное расстройство, обсессивно-компульсивное расстройство, расстройство пищевого поведения, паническое расстройство, тревожное расстройство, мигрень, миоклонус, предменструальный синдром, синдром посттравматического стресса, карцинондный синдром, инсульт, эпилепсию, нарушение сна или циркадного ритма, сексуальное расстройство, стрессовое расстройство, гипертония и раковые заболевания нервней системы.
В конкретных вариантах реализации нарушение ЦНС представляет собой болезнь Хантингтона, шизофрению, болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, шизофрению, умеренные когнитивные нарушения и СДВГ.
В других вариантах реализации нарушение ЦНС представляет собой злоупотребление веществами или лекарственными средствами или фетальный алкогольный синдром.
2+
В одном аспекте соединения согласно настоящему изобретению подходят для улучшения нейрональной пластичности - неотъемлемого свойства мозга, которое встречается при многочисленных нарушениях ЦНС. При ингибировании активности PDE1 соединения согласно настоящему изобретению могут повысить уровень Саи цАМФ/цГМФ, запуская сигнальный каскад, который, в конечном счете, активирует факторы транскрипции, в том числе цАМФ-ответный элемент активирующего белка (CREB). Активация CREB может затем повысить экспрессию генов, связанных нейрональной пластичностью, нейротрофических факторов и нейропротекторных молекул, что в свою очередь может способствовать функциональным и морфологическим изменениям, необходимым для возникновения нейрональной пластичности (см., например, Tully et al., 2003, Nat. Rev. Drag. Discov. 2, 267-277; Alberini, 2009, Physiol. Rev. 89, 121-145.
В целом, сигнальные пути циклического нуклеотида, включая пути, в которых задействован PDE1, являются критическими регуляторами нейронной функции и пластичности, и изменения в указанных путях были вовлечены в различные нарушения головного мозга. Например, при болезни Альцгеймера, существуют доказательства того, что накопление белка амилоида-β снижает фосфорилирование CREB, что приводит к когнитивным дефицитам. Vitolo et al., 2002, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 13217-13221. Действительно, фармакологические методы повышения уровня цАМФ могут восстановить нейрональную пластичность и LTP в моделях болезни Альцгеймера. Vitolo et al., 2002, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 13217-13221. Кроме того, известно, что внутриклеточная передача сигнала дофамина D1 и различные серотониновые рецепторы; которые передают сигнал через циклические нуклеотиды, являются дефектными при различных нарушениях, в том числе депрессии, шизофрении и когнитивных нарушениях. Кроме того, измененные уровни цАМФ/цГМФ связаны с болезнью Паркинсона, и активность PDE1B увеличена в модели болезни Паркинсона. Sancesario et al., 2004, Eur. J. Neurosci. 20, 989-1000). Кроме того, хроническое повышение уровней кальция (которой связан с клеточной смертью) участвует в болезни Альцгеймера, а также других нейродегенеративных заболеваниях, таких как болезнь Паркинсона и болезнь Хантингтона. Поскольку передача сигналов кальция может регулировать функцию PDE1, ингибиторы согласно настоящему изобретению подходят для лечения таких заболеваний.
Когнитивные нарушения
Согласно конкретным вариантам реализации соединения и композиции согласно настоящему изобретению применяют в способах лечения когнитивных нарушений, связанных с неврологическим нарушением. Для целей настоящего изобретение термин в данной заявке «когнитивное нарушение» используют взаимозаменяемо с терминами «когнитивное нарушение», «когнитивная дисфункция», «когнитивный дефицит» или «когнитивное расстройство», все из которых охватывают те же терапевтические показания.
Согласно конкретным вариантам реализации в настоящем изобретении предложены различные способы, основанные на применении соединений и композиций согласно настоящему изобретению для лечения когнитивного дефицита, связанного с нарушением ЦНС, таких как когнитивное нарушение, влияющее на формирование памяти. В другом аспекте соединение или композицию согласно настоящему изобретению вводят совместно с процедурой когнитивного обучения для лечения когнитивных расстройств. В конкретном аспекте когнитивный дефицит связан с нарушением ЦНС, выбранным из одного или более из группы, включающей деменции и нейродегенеративные нарушения, прогрессирующие заболевания ЦНС, психические расстройства, нарушения развития и генетические нарушения, возрастное ухудшение памяти и обучаемости.
Когнитивные нарушения могут значительно ухудшить социальную и профессиональную деятельность, что отрицательно сказывается на автономности и качестве жизни страдающего лица. По оценкам от 4 до 5 миллионов американцев (примерно 2% от всех возрастов и 15% тех, кто старше 65 лет) имеют некоторую форму и степень когнитивных нарушений. Abrams et al., Merck Manual of Geriatrics, Whitehouse Station (NJ), Medical Services (1995).
Когнитивные нарушения отражают проблемы в когнитивной деятельности, т.е. общих процессов, посредством которых приобретается, сохраняется и используется знание. Соответственно, когнитивные нарушения могут охватывать нарушения когнитивных функций, таких как концентрация, восприятие, внимание, обработка информации, обучение, память и/или язык. Когнитивные нарушения также могут охватывать нарушения психомоторного обучения, которые включают физические навыки, такие как движение и координация; нарушения мелкой моторики, такой как возможность использования точных приборов или инструментов; и нарушения общей моторики, такой как моторика, которая влияет на танцевальные, музыкальные или спортивные результаты.
Когнитивные нарушения могут также включать нарушения исполнительных функций, которые включают способности, лежащие в основе планирования и выполнения целенаправленного поведения. Такие способности включают гибкость, то есть способность быстро переключаться в соответствующий режим мышления; ожидание и прогноз, основанный на распознавании паттернов; рассуждение и решение задачи; принятие решений; работу памяти, то есть, способность удерживать и манипулировать информацией, полученной изнутри (или извне) в режиме реального времени; эмоциональную саморегуляцию, в том числе способность распознавать и управлять свои эмоциями для хорошей производительности; секвенирование, например способность расчленения сложных действий в управляемые единицы и ранжирование в правильном порядке; и самоторможение, т.е. способность выдерживать отвлекающий раздражитель и внутренние побуждения.
Когнитивные нарушения обычно возникают в связи с нарушениями ЦНС (также называемых состояниями ЦНС или заболеваниями ЦНС). Такие нарушения ЦНС включают, но не ограничиваются ими, следующие категории (которые не являются взаимоисключающими):
(1) деменции, такие как деменции, связанные с болезнью Альцгеймера, болезнью Паркинсона; болезнью Хантингтона, болезнью Пика, болезнью Крейтцфельдта-Якоба, ALS, деменцией при СПИД и другими нейродегенеративными нарушениями; а также когнитивные нарушения, связанные с прогрессирующими заболеваниями, вовлекающими нервную систему, такие как рассеянный склероз.
(2) психические нарушения, в том числе аффективные нарушения (нарушения настроения), такие как депрессия и биполярное расстройство; психотические нарушения, такие как шизофрения и бредовое расстройство; и невротические и тревожные нарушения, такие как фобии, панические нарушения, обсессивно-компульсивное расстройство, генерализованное тревожное расстройство, нарушения пищевого поведения и посттравматические стрессовые нарушения;
(3) нарушения развития и генетические нарушения, влияющие на когнитивные функции, такие как нарушения аутистического спектра; расстройства фетального алкогольного спектра (FASD); синдром Рубинштейна-Тейби, синдром Дауна и другие формы умственной отсталости; и прогрессирующие нарушения, вовлекающие нервную систему, такие как рассеянный склероз;
(4) травма-зависимые потери когнитивных функций, такие как нарушения памяти, языка или моторных навыков в результате травмы головного мозга; черепно-мозговой травмы; цереброваскулярные нарушения, такие как инсульт, ишемия, гипоксия и вирусная инфекция (например, энцефалит); эксайтотоксичность; судороги; и злоупотребление алкоголем;
(5) возрастные нарушения памяти, в том числе затрагивающие пациентов на ранних стадиях когнитивного снижения, как в случае умеренных когнитивных нарушений (MCI); и
(6) нарушения обучаемости, такие как проблемы восприятия, дислексия и нарушения дефицита внимания.
В некоторых случаях когнитивные нарушения могут являться прямым результатом нарушения ЦНС. Например, нарушение в речи и языка может быть прямым следствием инсульта или травмы головы, которые повреждают области мозга, контролирующие речь и язык, как при афазии.
В других случаях, когнитивные нарушения могут быть связаны с комплексным расстройством развития, нарушением ЦНС или генетическим нарушением. Например, такие нарушения включают когнитивные дефициты, связанные с шизофренией или болезнью Паркинсона, или дефицит исполнительного контроля, которые сопровождают аутизм или умственную отсталость.
В других случаях такие нарушения могут возникнуть в результате прогрессирующих заболеваний, которые влияют на функции ЦНС, таких как рассеянный склероз (MS). Примерно половина пациентов с MS будут испытывать проблемы с когнитивной функцией, такие как замедление мышления, снижение концентрации внимания и ухудшение памяти. Такие проблемы обычно возникают позднее по мере протекания МС, хотя в некоторых случаях они возникают гораздо раньше, если не в начале болезни.
Расширенное когнитивное обучение
Согласно некоторым вариантам реализации соединения и композиции согласно настоящему изобретению вводят в сочетании с когнитивным обучением с целью повышения эффективности такого обучения. Фраза «в сочетании» означает, что соединение или композиция согласно настоящему изобретению улучшает функцию пути CREB в ходе когнитивного обучения. В настоящем документе термин «когнитивное обучение» является взаимозаменяемым с терминами «протокол обучения», «обучение» и «протокол когнитивного обучения».
Протокол обучения
Протоколы когнитивного обучения и основополагающие принципы хорошо известны в данной области техники. См., например, патент США №7868015 (и ссылки, указанные в нем); Klingberg et al., 2005, J. Am. Acad. Child. Adolesc. Psychiatry 44, 177-186; Belleville et al., 2006, Dement. Geriatr. Cogn. Disord. 22, 486-499; Jaeggi et al., 2008, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105, 6829-6833; Lustig et al., 2009, Neuropsychol. Rev. 19, 504-522; Park и Reuter-Lorenz, 2009, Ann. Rev. Psych. 60, 173-196; Chein et al., 2010, Psychon. Bull. Rev. 17, 193-199; Klingberg, 2010, Trends Cogn. Sci. 14, 317-324; Owen et al., 2010, Nature, 465, 775-778; Jaeggi et al., 2011, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 108, 10081-10086.
Протоколы когнитивного обучения направлены на многочисленные когнитивные аспекты, включая память, концентрацию и внимание, восприятие, обучение, планирование, секвенирование и суждение. Один или более протоколов (или модулей) лежащих в основе программы когнитивного обучения могут быть предоставлены субъекту.
Согласно некоторым вариантам реализации протоколы могут быть использованы для лечения или реабилитации когнитивных нарушений у пораженных субъектов. Такие протоколы могут быть восстановительными или исправительными, предназначенными для восстановления прежних навыков и когнитивных функций, или они могут быть направлены на задержку или замедление снижения когнитивных функций вследствие неврологических заболеваний. Другие протоколы могут быть компенсационными, обеспечивая средства для адаптации к когнитивной недостаточности с помощью усиления функции связанных и незадействованных когнитивных доменов. Согласно другим вариантам реализации протоколы могут быть использованы для улучшения конкретных навыков и когнитивных функций у здоровых лиц. Например, программа когнитивного обучения может включать модули, сосредоточенные на задержке или предотвращении снижения когнитивных функций, которое обычно сопровождает старение; в данном случае программа предназначена для поддержания или улучшения когнитивного здоровья.
В целом, протокол когнитивного обучения (или модуль) включает набор различных упражнений, которые могут быть основаны на процессе или на навыках:
Обучение, основанное на процессе, направлено на улучшение конкретной, когнитивного домена, такого как внимание, память, язык или исполнительные функции. В данном случае задачей когнитивного обучения является достижение общего улучшения, которое переносится от натренированного упражнения на нетренированные упражнения, связанные с той же когнитивной функцией или доменом. Например, протокол слухового когнитивного обучения может быть использован для лечения студента с нарушениями слухового внимания. В конце обучения, студент должен показать общее улучшение слуховой внимания, о чем свидетельствует увеличение способности поддерживать внимание и сосредоточиваться на вербальной информации, представленной в классе и, следовательно, запомнить записать и выполнить домашнее задание. Кроме того, протокол когнитивного обучения может быть направлен на нарушенную исполнительную функцию акустического субъекта, не позволяющую субъекту выполнить инструкции для завершения работы, такой как приготовление пищи, уборка комнаты или подготовка к школе в первой половине дня. Когнитивное обучение позволяет субъекту сосредоточить свое внимание и концентрацию и, как следствие, завершить последовательность задач, необходимых для такой деятельности.
Обучение, основанное на навыках, направлено на повышение эффективности конкретной активности или способности. Здесь задачей когнитивного обучения является получение общего улучшения навыков или способностей. Например, протокол обучения может быть направлен на изучение нового языка, игру на музыкальном инструменте или улучшение памяти. Различные упражнения, составляющие такой протокол, будет сосредоточены на основных компонентах, лежащих в основе навыка. Модули для увеличения памяти, например, могут включать задачи, направленные на распознавание и использование фактов, а также приобретение и понимание явных правил познания.
Некоторые когнитивные реабилитационные программы могут основываться на одной стратегии (например, компьютеризированное когнитивное обучение), направленной либо на определенную когнитивную функцию, либо на множество функций одновременно. Например, метод тестирования CogState включает настраиваемый диапазон компьютеризированных познавательных задач, позволяющих измерить исходный уровень и изменения когнитивных доменов, лежащих в основе внимания, памяти, исполнительных функций, а также языка и социально-эмоционального познания. Смотри, например, Yoshida et al., 2011, PloS ONE 6, e20469; Frederickson et al., 2010, Neuroepidemiology 34, 65-75. Другие когнитивные реабилитационные программы могут использовать комплексный или междисциплинарный подход. Программы когнитивного обучения могут включать компьютерные игры, портативные игровые устройства, интерактивные упражнения и могут использовать обратную связь и адаптивные модели.
Усиливающие агенты
Когнитивное обучение обычно требует нескольких сеансов обучения для достижения желаемых результатов. Оно может быть дорогостоящим и трудоемким, ограниченным соблюдением условий субъектом и осознанием реальных преимуществ, проявление которых требует длительного времени.
Эффективность когнитивного обучения может быть улучшена путем введения некоторых агентов (известных как усиливающие агенты) в сочетании с когнитивным обучением. Такие усиливающие агенты способны усиливать функцию пути CREB. В частности, данный способ (известный как расширенное когнитивное обучение или ACT) позволяет уменьшить количество учебных сеансов, необходимых для повышения улучшения свойств когнитивной функции по отношению к улучшению, наблюдаемому при проведении только когнитивного обучения. См., например, патент США №7868015; патент США №7947731; заявку на патент США №2008/0051437.
В конкретном варианте реализации способ включает этапы: (а) проведение когнитивного обучения субъекта, нуждающегося в лечении когнитивного дефицита с условиями, достаточными для достижения улучшения характеристики когнитивной функции указанным животным, нарушение которой связано с указанным когнитивным дефицитом; (b) введение соединения или композиции согласно настоящему изобретению животному в сочетании с указанным когнитивным обучением; повторение стадий (а) и (b) один или более раз; и (с) сокращение количества учебных сеансов, достаточных для достижения улучшения характеристики, по отношению к улучшению характеристики, наблюдаемому при проведении только когнитивного обучения.
В целом, соединения и композиции согласно настоящему изобретению могут быть использованы в сочетании с любым психотерапевтическим подходом, который предназначен для модулирования когнитивной функции в мозге, тем самым повышая эффективность такой терапии путем уменьшения количества сеансов - и, следовательно, времени, необходимого для достижения преимуществ.
В конкретном аспекте, когнитивный дефицит, который лечат с помощью указанных способов, представляет собой или включает ухудшение памяти и, более конкретно, нарушение долговременной памяти. Долговременная память (LTM) обычно включает два основных биологических свойства. Во-первых, для формирования долговременной памяти требуется синтез новых белков. Во-вторых, она включает цАМФ-зависимую транскрипцию и опосредуется факторами транскрипции семейства цАМФ-ответного элемента активирующего белка (CREB). Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации соединения согласно настоящему изобретению могут быть использованы для улучшения формирования памяти у животного и, в частности, зависимой от транскрипции памяти.
Анализы поведения
Многочисленные анализы поведения доступны для оценки способности соединения-кандидата в отношении улучшения формировании памяти, в том числе контекстуальная выработка условного рефлекса, временная выработка условного рефлекса и анализы распознавания объектов (см. Биологические примеры). Другие, неограничивающие примеры подходящих протоколов для оценки памяти, включают те, которые включают или относятся к множественным сеансам обучения, обучению с интервалами между сеансами, контекстуальному условно-рефлекторному замиранию с одним или несколькими испытаниями, следовому условному рефлекторному замиранию (со следовым раздражителем) с одним или несколькими испытаниями, контекстуальной памяти в целом, временной памяти, пространственной памяти, эпизодической памяти, памяти пассивного избегания, памяти активного избегания, памяти предпочтений в пище, условно-рефлекторному отвращению к пище и памяти социальной ориентации.
Протоколы обучения также могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, как будет понятно специалистам в данной области техники. Указанные учебные протоколы могут быть направлены на оценку, без ограничения, формирования памяти, зависимого от гиппокампа, коры и/или миндалины, или когнитивных способностей.
Сердечно-сосудистые нарушения
2+
Ферменты PDE1 и циклические нуклеотиды являются ключевыми медиаторами патологических процессов, которые лежат в основе многих сосудистых нарушений, включая гипертензию и инфаркт миокарда. Например, PDE1 играет роль в регулировании гипертрофии кардиомиоцитов посредством механизма с участием перекрестной передачи сигнала между Саи циклическим нуклеотидом. Смотри, например, Miller et al., 2011, Basic Res. Cardiol. 106, 1023-1039; Miller et al., 2009, Circ. Res. 105, 956-964. Кроме того, ферменты PDE1 составляют большую часть гидролитической активности цАМФ и цГМФ в миокарде человека, вовлекая их в регулирование сигнальных путей, участвующих в сердечной недостаточности.
Соответственно, настоящее изобретение включает применение соединения или композиции, описанных в настоящем документе, в способе лечения сердечно-сосудистого нарушения, включающем введение эффективного количества соединения или композиции пациенту, нуждающемуся в этом.
Сердечно-сосудистые заболевания в рамках объема настоящего изобретения включают, но не ограничиваются ими, стенокардию, болезнь коронарных артерий, гипертензию, застойную сердечную недостаточность, инфаркт миокарда, ишемическую болезнь сердца, аритмии предсердия и желудочков, гипертонические сосудистые заболевания, заболевания периферических сосудов и атеросклероз.
Согласно некоторым вариантам реализации способы лечения сердечно-сосудистого нарушения в соответствии с настоящим изобретением включают увеличение концентрации цГМФ, концентрации цАМФ или того и другого в любой части сердечной мышцы субъекта, причем способ включает введение субъекту соединения или композиции, описанной в настоящем документе.
Согласно некоторым вариантам реализации соединения согласно настоящему изобретению могут подходить для снижения частоты сокращений сердца или кровяного давления у животного.
Почечные нарушения
Ингибиторы PDE1 являются перспективными терапевтическими агентами для прогрессирующего заболевания почек. Смотри, например, Cheng et al., 2007, Soc. Exp. Biol. Med. 232, 38-51. В соответствии с этими выводами, недавние исследования показали, что цАМФ и цГМФ регулируют множество сигнальных путей, участвующих в развитии и прогрессировании заболевания почек, в том числе путей, которые модулируют митогенез, воспаление и синтез внеклеточного матрикса. См., например, Wang et al., 2010, Kidney Int. 77. 129-140.
Таким образом, в настоящем изобретении предложено соединение или композиции для способов лечения почечного нарушения, включающих введение эффективного количества соединения или композиции пациенту, нуждающемуся в этом. В конкретном аспекте, почечное нарушение выбрано из одного или более из группы, включающей стеноз почечной артерии, пиелонефрит, гломерулонефрит, опухоли почек, поликистоз почек, травмы почек и повреждения в результате облучения почки.
Гематологические нарушения
PDE1B экспрессируется на высоком уровне в гематологической системе, в том числе лейкоцитах (периферической крови), стромальных клетках костного мозга, клетках костного мозга CD33+, клетках пуповинной крови CD34+, нейтрофилах пуповинной крови, нейтрофилах периферической крови, селезенке, при циррозе печени с увеличенной селезенкой. Соответственно, настоящее изобретение включает способы лечения гематологических нарушений, включающие введение соединения или композиции, описанных в настоящем документе, пациенту, нуждающемуся в этом. Гематологические заболевания в рамках объема настоящего изобретения включают, но не ограничиваются ими, нарушения крови и всех ее составляющих, в том числе, анемии, миелопролиферативные нарушения, геморрагические нарушения, лейкопению, эозинофильные нарушения, лейкемии, лимфомы, плазмоклеточную дегенерацию, а также нарушения селезенки.
Желудочно-кишечные заболевания и заболевания печени
PDE1B неодинаково экспрессируется в больной (например, раковой) и здоровой ткани желудка, больной (например, раковой) и здоровой подвздошной ткани, больной (с циррозом) и здоровой печени. Соответственно, настоящее изобретение включает способны лечения желудочно-кишечного нарушения, включающие введение соединения или композиции, описанных в настоящем документе, пациенту, нуждающемуся в этом. Желудочно-кишечные заболевания в рамках объема настоящего изобретения включают, но не ограничиваются ими, нарушения пищевода, желудка, двенадцатиперстной кишки, поджелудочной железы, кишечника и печени.
Раковые нарушения
PDE1B экспрессируется на высоком уровне в различных раковых тканях, в том числе опухолях желудка, подвздошной кишки, яичников, молочной железы и почки, а также неодинаково экспрессируется в раковом и здоровом желудке, подвздошной кишке, легких, яичниках, молочной железе и почке. Соответственно, настоящее изобретение включает способы лечения ракового нарушения, включающие введение соединения или композиции, описанных в настоящем документе, пациенту, нуждающемуся в этом. Раковые нарушения в рамках объема настоящего изобретения включают, но не ограничиваются ими, новообразования, дисплазии, гиперплазии и новообразования, включая раковые заболевания желудка, подвздошной кишки, яичников, молочной железы и почки.
Нейродегенеративные нарушения
В настоящем изобретении предложен способ лечения последствий травм или заболеваний, которые приводят к нейрональной дегенерации, или способ стимулирования нейрогенеза или роста нейритов. Указанные способы включают введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения или композиции согласно настоящему изобретению. Было обнаружено, что ингибиторы PDE1 согласно настоящему изобретению способствуют росту нейритов и нейрогенезу.
Альтернативно, по меньшей мере одно соединение согласно настоящему изобретению используют для обработки стволовых клеток или клеток-предшественников нейронов до введения клеток пациенту путем имплантации в месте нейрональной дегенерации. Согласно некоторым вариантам реализации способы, описанные в настоящем документе, включают модулирование нейрогенеза или роста нейритов ex vivo с помощью соединения, таким образом, что композицию, содержащую нервные стволовые клетки, нервные клетки-предшественники и/или дифференцированные нервные клетки, можно затем вводить индивидууму для лечения заболевания или состояния. Согласно некоторым вариантам реализации способ лечения включает стадии приведения в контакт нервной стволовой клетки или нервной клетки-предшественника с одним или более соединениями согласно изобретению для модуляции роста нейритов и трансплантации указанных клеток пациенту, нуждающемуся в лечении. Способы трансплантации стволовых клеток и клеток-предшественников известны в данной области техники. Согласно некоторым вариантам реализации, описанные в настоящем документе способы позволяют лечить заболевания или состояния путем непосредственной замены или восполнения поврежденных или дисфункциональных нейронов.
Способ согласно настоящему изобретению, который способствует нейрогенезу, применяют для восстановления клеток центральной нервной системы (ЦНС) и включает все типы клеток ЦНС.
Согласно одному из вариантов реализации способы согласно настоящему изобретению используют для лечения первичного повреждения нервной системы, например, закрытых черепно-мозговых травм и тупой травмы, таких как травмы, вызванные участием в опасных видах спорта, проникающей травмы, такой как огнестрельное ранение, геморрагического инсульта, ишемического инсульта, глаукомы, ишемии головного мозга, или повреждений, вызванных хирургическим вмешательством, таким как удаление опухоли, или они даже могут способствовать восстановлению нервов для повышения или ускорения заживление таких повреждений или нейродегенеративных заболеваний, таких как те, которые обсуждаются ниже. Кроме того, способ может быть использован для лечения заболевания или нарушения, возникшего в результате дегенеративного процесса.
Согласно другому варианту реализации способы согласно настоящему изобретению используют для ингибирования вторичной дегенерации, которая в противном случае может последовать за первичным повреждением нервной системы.
Соединения по изобретению могут быть использованы для лечения различных заболеваний или нарушений центральной или периферической нервной системы, в том числе диабетической невропатии, бокового амиотрофического склероза (ALS). Повреждения периферических нервов и периферические или локализованные невропатии, включая, но не ограничиваясь ими, порфирию, острую сенсорную нейропатию, хроническую атаксическую нейропатию, осложнения различных препаратов и токсинов, амилоидые полинейропатии, адреномиелоневропатию, нейропатию гигантских аксонов, можно лечить с помощью указанного способа.
Кроме того, соединения могут быть использованы для послеоперационных процедур, таких как для удаления опухоли из ЦНС и других форм операций на ЦНС. Соединения также могут быть использованы для лечения травмы спинного мозга.
ПРИМЕРЫ
Настоящее изобретение будет далее проиллюстрировано с помощью следующих неограничивающих примеров. Указанные примеры следует понимать только в качестве иллюстративных примеров и их не следует истолковывать, как ограничивающие объем изобретения, описанного в настоящем документе, и как оно определено в прилагаемой формуле изобретения.
ПРИМЕРЫ ПОЛУЧЕНИЯ
Примеры соединений, используемых в способах согласно настоящему изобретению, будет описаны со ссылкой на иллюстративные схемы синтеза описания общего метода получения ниже и последующие конкретные примеры.
Схемы синтеза
Специалисту в данной области техники будет понятно, что для получения различных соединений, описанных в настоящем документе, исходные вещества могут быть подобраны таким образом, чтобы целевые требуемые заместители были сохранены в ходе проведения схемы реакций с или без подходящей защиты, с получением требуемого продукта. С другой стороны, может быть необходимо или желательно использовать вместо целевого требуемого заместителя, подходящую группу, которую можно сохранить по ходу проведения схемы реакции и при необходимости заменить требуемым заместителем. Если не указано иное, то переменные имеют значения, указанные выше со ссылкой на формулу (I). Реакции могут быть проведены при температуре от -78°С до температуры кипения растворителя. Реакционные смеси можно нагревать с применением традиционного нагрева или микроволнового нагрева. Реакции также могут быть проведены в герметичных сосудах под давлением при температуре выше нормальней температуры кипения растворителя.
15
15
3
2
3
Согласно Схеме 1, коммерчески доступные или синтетически доступные соединения формулы (IV) алкоксиформилируют с помощью реагента, такого как хлорформиат формулы ROC(O)Cl, где R представляет собой -СН или -СНСН, и т.п., основания, такого как пиридин, карбонат натрия, бис(триметилсилил)амид лития и т.п., в растворителе, таком как ТГФ, ДХМ, ДХЭ, или их смеси, при температурах от -78°С до комнатной температуры в течение от 12 до 24 ч, с получением карбаматов формулы (V). В результате нагревания карбаматов формулы (V) с формилгидразином, основанием, таким как три-н-пропиламин, в растворителе, таком как 2-метоксиэтанол, 1-метилпирролидинон и т.п. при температурах от комнатной температуры до 130°С в течение от 12 до 30 ч, получают триазолопиримидиноновые соединения формулы (VI).
4
10
11
12
13
1-3
Соединения формулы (IV), где R представляет собой -(CRR)NRR получают путем взаимодействия коммерчески доступного 2-амино-5-бромникотинонитрила и синтетически доступных аминометил(трифторборатов).
5
3
4
2
3
2
3
2
3
3
4
2
3
2
3
2
3
4
Согласно Схеме 2, бромсодержащие соединения формулы (VIII) подвергают взаимодействию в условиях реакции сочетания с использованием катализа палладием или медью, например, в условиях реакции сочетания Сузуки, путем взаимодействия бромсодержащих соединений формулы (VIII) коммерчески доступными или синтетически доступными бороновыми кислотами или сложными эфирами формулы (IX), где R представляет собой арил или гетероарил, и М представляет собой бор, в растворителе, таком как ДМЭ, ACN, толуол, EtOH, НО или их смеси, в присутствии основания, такого как NaHCO, NaCO, KCO, KPO, CsCO и т.п., и на катализаторе из металлоорганических соединений переходных металлов, таких как Pd(dba), Pd(dppf), Pd(PPh) и т.п., с использованием традиционного или микроволнового нагревания, при температурах от 80 до 120°С с получением соединений формулы (I), где R или R представляет собой арил или гетероарил.
3
4
2
2
2
3
2
2
3
3
4
Бромсодержащие соединения формулы (VIII) подвергают взаимодействию в условиях реакции Стилле, путем взаимодействия с алкил или алкинил металлоорганическими реагентами, такими как трибутил(винил)станнан и т.п., палладиевого катализатора, такого как Pd(PPh), в растворителе, таком как толуол, диоксан и т.п., при температурах от 80 до 120°С в течение 16 с получением виниловых соединений формулы (I), где R или R представляет собой -СН=СН, -СНОСНОСН, и -С(СН)(ОСНСН). Другими примерами винилметаллоорганических реагентов, которые можно использовать, являются трифтор(винил)бораты калия, цинкорганические и магнийорганические реагенты.
Помимо условий Сузуки и Стилле можно использовать другие реакции сочетания, известные в данной области техники, например, реакцию с цинкорганическими, магнийорганическими реагентами и т.п.
2
3
3
4
Бромсодержащие соединения формулы (VIII) подвергают взаимодействию в условиях реакции сочетания с медью, например, путем взаимодействия гетероарила, такого как, но не ограничиваясь им, 6-метилпиридазин-3(2Н)-он, CuI, добавки, такой как транс-1,2-диаминоциклогексан, основания, такого как CsCO и т.п., в растворителе, таком как диоксан, с использованием традиционного или микроволнового нагревания при температурах от 80 до 120°С в течение 10-16 ч с получением соединений формулы (I), где R или R представляет собой гетероарил.
12
13
2
2
3
Альтернативно, бромсодержащие соединения формулы (VIII) подвергает взаимодействию в условиях реакции сочетания с палладием, например, путем взаимодействия с амином формулы -NHRR, Pd(OAc), лигандом, таким как BINAP, основания, такого как CsCO, и т.п., в растворителе, таком как толуол с использованием традиционного или микроволнового нагревания при температурах от 80 до 120°С в течение 10 до 18 ч с получением соединений формулы (I).
12
13
2
3
2
3
4
2
2
3
2
3
3
4
В результате дополнительных реакций кросс-сочетания бромсодержащих соединений формулы (VIII) с аминометил(трифторборатами) формулы RRNCHBFK, катализатором, таким как PdCl(dppf)-ДХМ, Pd(PPh), 2-дициклогексилфосфино-2,4,6-триизопропилбифенил, Pd(OAc), и т.п., основания, такого как CsCO, KCO, t-BuOK, KPO, в растворителе, таком как толуол, 1,4-диоксане, ДМФА, DMA, при температурах от 80 до 120°С в течение 10-16 ч получают соединения формулы (I).
Аналогично, превращения, показанные на Схеме 2, можно осуществить с использованием промежуточных соединений (IV), (V) или (VI) со Схемы 1, если они замещены бромом, и получаемых продуктов, образующихся согласно показанной последовательности.
12
13
3
4
12
13
3
4
3
2
Согласно Схеме 3, виниловые соединения формулы (XI) окисляют до альдегидов формулы (XIII) с использованием подходящего способа окислительного расщепления, например, с помощью оксида осмия(VIII), перйодата натрия в воде-ТГФ, при температурах от 40 до 60°С в течение от 2 до 4 ч. Альдегиды формулы (XIII) также получают из ацеталей формулы (XII) путем нагревания с подходящей кислотой, такой как, вод. HCl, при температурах от комнатной температуры до 100°С в течение от 4 до 24 ч. В результате прямого нагревания бромсодержащего соединения формулы (VIII) с монооксидом углерода, палладиевым катализатором под давлением можно получить альдегидные соединения формулы (XIII). В результате восстановительного аминирования альдегидных соединений формулы (XIII) с использованием способов, известных специалистам в данной области техники, например, путем взаимодействия соединений формулы (XIII) с подходящим амином формулы HNRR в присутствии восстанавливающего агента, такого как NaBH(ОАс), NaBH или NaCNBH, в растворителе, таком как DCE, ДХМ, метанол или их смеси, с необязательными добавками, такими как уксусная кислота подходящей кислоты Льюиса, получают соединения формулы (I), где R или R представляет собой -CHNRR.
13
12
3
4
10
11
12
13
10
11
3
4
10
11
12
13
10
11
3
4
10
11
12
13
10
11
2
2
2
Виниловые соединения формулы (XI) подвергают взаимодействию в условиях образования эпоксида, известных специалистам в данной области техники, например, известных специалистам в данной области техники с м-СРВА, в растворителе, таком как ДХМ, при температурах от 10 до 30°С в течение от 12 до 18 ч. В результате раскрытия кольца с азотсодержащими нуклеофилами формулы RRNH в растворителе, таком как МеОН, получают β-амино-спирты соединений формулы (I) где R или R представляет собой -(CRR)NRR, где или R, или R представляет собой -ОН или Н. В результате обработки спиртов формулы (I), где R или R представляет собой -(CRR)NRR, где или R, или R представляет собой -ОН или Н, с фторирующим агентом, таким как DAST, получают соединения формулы (I), где R или R представляет собой -(CRR)NRR, где или R, или R представляет собой -F или Н.
3
4
10
11
12
13
10
11
3
Согласно Схеме 5, винилэфирные соединения формулы (XIV) гидролизуют с кислотой, такой как вод. HCl, в растворителе, таком как диоксан, в течение от 2 до 8 ч с получением ацетильных соединений формулы (XV). В результате восстановительного аминирования ацетильных соединений формулы (XV) с использованием способов, известных специалистам в данной области техники, как было описано ранее, получают соединения формулы (I), где R или R представляет собой -CRRNRR, где или R, или R представляет собой -CH.
2
2
На Схемах выше, если соединения формулы (I) содержат защитную группу, такую как эфиры трет-бутоксикарбонил (ВОС), метоксиметил (MOM), или бензильную группу. Защитную группу удаляют с помощью условий для снятия защиты, известных специалистам в данной области техники. Например, группу трет-бутоксикарбонила удаляют с использованием органической кислоты, такой как ТФУ (чистой или в растворителе, таком как CHCl) или неорганической кислоты, такой как HCl (в растворителе, таком как 1,4-диоксан, простой эфир, метанол, изопропанол или муравьиная кислота или их смеси) при температурах от комнатной температуры до 60°С.
2
Соединений формулы (I) можно превратить в их соответствующие соли с использованием способов, известных специалистам в данной области техники. Например, соединения формулы (I) можно обработать ТФУ, HCl, малеиновой кислоты или лимонной кислоты в растворителе, таком как EtO, ДХМ, ТГФ или МеОН, с получением соответствующей солевой форму.
Соединения, полученные в соответствии со схемами, описанными выше, могут быть получены в виде индивидуальных энантиомеров, диастереомеров или региоизомеров путем энантио-, диастерео- или региоспецифического синтеза, или путем разделения. В случае если соединения согласно настоящему изобретению содержат по меньшей мере один хиральный центр, они могут соответственно существовать в виде энантиомеров. В случае если соединения содержат два или более хиральных центров, они могут дополнительно существовать в виде диастереомеров. Следует понимать, что все такие изомеры и их смеси включены в объем настоящего изобретения. Соединения, получаемые в соответствии с указанными выше схемами, могут быть альтернативно получены в виде рацемической (1:1) или нерацемической (не 1:1) смеси смесей диастереомеров или региоизомеров. Если получают рацемические и нерацемические смеси энантиомеров, отдельные энантиомеры могут быть выделены при использовании традиционных способов разделения, известных специалистам в данной области техники, таких как хиральная хроматография, перекристаллизация, образование диастереомерной соли, дериватизация в диастереомерные аддукты, биотрансформация или ферментативное превращение. Если получают региоизомерныхе или диастереомерные смеси, индивидуальные изомеры могут быть разделены с использованием традиционных способов, таких как хроматография или кристаллизация.
Следующие примеры предназначены для дополнительной иллюстрации изобретения и различных предпочтительных вариантов реализации изобретения.
ПРИМЕРЫ
Химия:
Для получения соединений, описанных в примерах ниже, а также соответствующих аналитических данных следовали следующим экспериментальным и аналитическим протоколам, если не указано иное.
2
4
4
Если не указано иное, реакционные смеси перемешивали с помощью магнитной мешалки при комнатной температуре (rt) в атмосфере азота. Если растворы «высушивали», их в целом высушивали с помощью высушивающего агента, такого как NaSO или MgSO. Если смеси, растворы и экстракты «концентрировали», их обычно концентрировали на ротационном испарителе при пониженном давлении.
Реакции в условиях микроволнового излучения проводили с помощью СЕМ Discover-SP с установкой, обеспечивающей микроволновое излучение, Activent, номер модели 909150, или Biotage Initiator, номер модели 355302.
2
Колоночную флеш-хроматографию с нормальными фазами (FCC) проводили на силикагеле (SiO) с использованием упакованных или предварительно упакованных картриджей, элюируя указанными растворителями.
ЖХ/МС получали на установке выделения Waters 2695, 2487 Dual Absorbance Detector, Micromass ZQ, оборудованной зондом ESI, или Waters Acquity™ Ultra performance LC (UPLC) с детекторами PDA eλ и SQ.
Спектр ядерного магнитного резонанса (ЯМР) получали с помощью ЯМР спектрометров Varian 400 МГц или Bruker 400 МГц.
18
Препаративную ВЭЖХ проводили на системе Shimadzu SIL-10AP с использованием Сколонки Waters SunFire OBD 30 мм × 100 мм × 2,5 мкм (размер частиц) с 15-минутным градиентом 10-100% ацетонитрила в воде и 0,05% трифторуксусной кислоты, добавленной в качестве модификатора к обеим фазам. Профили элюирования контролировали с помощью УФ при 254 и 220 нм.
3
2
3
4
3
6
6
3
3
6
1
1
1
1
1
Спектр ядерного магнитного резонанса (ЯМР) получали с помощью ЯМР Varian 400 МГц или Bruker 400 МГц. Образцы анализировали в дейтерированном ацетоне ((CD)CO)), хлоформе (CDCl), метаноле-d (CDOD) или диметилсульфоксиде-d (ДМСО-d). Для образцов CDCl остаточный центральный резонансный пик при 7,26 для Н использовали для определения химического сдвига для спектра Н ЯМР. Для CDOD остаточный центральный резонансный пик при 3,31 для Н использовали для определения химического сдвига и для ДМСО-d остаточный центральный резонансный пик при 2,50 ppm для Н использовали для определения химического сдвига. Формат данных Н ЯМР, представленных ниже, представляет собой: химический сдвиг в ppm в слабом поле тетраметилсиланового эталона (мультиплетность, постоянная взаимодействия J в Гц, интеграция).
Химические названия были получены с использованием ChemDraw Ultra 12,0 (CambridgeSoft Corp., Cambridge, MA) или ChemAxon.
Пример 1. 9-Бром-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
2
4
3
1
Стадия А. Метил-5-бром-3-цианопиридин-2-илкарбамат. Бис(триметилсилил)амид лития в ТГФ (1,0 N, 22 мл, 22 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору 2-амино-5-бромпиридин-3-карбонитрила (2,0 г, 10 ммоль) в ТГФ (30 мл) при -78°С. Смесь перемешивали при -78°С в течение 30 минут. Добавляли метилхлорформиат (1,06 г, 11,1 ммоль) и смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали на ледяной бане и гасили насыщенным водным хлоридом аммония (50 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (3×50 мл) и объединенные органические слои промывали солевым раствором (2×50 мл), сушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. В результате очистки (ЖХ, 10% EtOAc в петролейном эфире) получали титульное соединение (1,43 г, 63%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,85 (s, 3Н), 7,45 (br s, 1Н), 8,05 (s, 1Н), 8,65 (s, 1Н). [М-Н]=254,0.
1
6
Стадия В: 9-Бромпиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. Формилгидразин (60 мг, 1,0 ммоль) добавляли к раствору метил-5-бром-3-цианопиридин-2-илкарбамата (255 мг, 1,0 ммоль) в 1-метилпирролидиноне (5 мл). Полученную смесь перемешивали при 120°С в течение 3 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали в смесь лед-вода (20 мл). Полученное твердое вещество разделяли посредством фильтрования, промывали водой и гексанами и сушили под вакуумом с получением титульного соединения (160 мг, 60%). Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,60 (s, 1H), 8,70 (s, 1Н), 8,80 (s, 1Н), 13,00 (br s, 1Н). [М+Н]=266,3.
1
3
Стадия С. 9-Бром-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. 1-(Хлорметил)-4-метоксибензол (3,10 мл, 22,9 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору 9-бромпиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-она (3,02 г, 11,35 ммоль) и карбоната калия (4,71 г, 34,1 ммоль) в 1-метилпирролидиноне (60 мл). Смесь нагревали при 40°С в течение 14 h. Смесь фильтровали и полученное твердое вещество обильно промывали ДХМ. Объединенные органические слои концентрировали под вакуумом и остаток растирали EtOAc (40 мл) с получением титульного соединения (3,07 г, 70%) в виде коричневого порошка. Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,77 (s, 3Н), 5,72 (s, 2Н), 6,83 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,58 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 8,37 (s, 1Н), 8,76 (d, J=2,38 Гц, 1Н), 8,82 (d, J=2,38 Гц, 1H). [М+Н]=386,1.
Пример 2. 8-Бром-6-(4-метоксибензил)пиридо[2,3-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,80 (br s, 3Н), 5,52 (br s, 2H), 6,91 (d, J=8,16 Гц, 2H), 7,27-7,30 (m, 2H), 7,95 (br s, 1H), 8,50 (br s, 1H), 8,77 (br s, 1H). [M+H]=386.
Пример 3. 8-(Диметоксиметил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-c]пиримидин-5 (6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,46 (s, 6Н), 3,76 (s, 3Н), 5,50 (s, 1Н), 5,76 (s, 2H), 6,78-6,88 (m, 2H), 7,68 (d, J=2,01 Гц, 3Н), 8,35 (s, 1H), 8,66 (d, J=8,03 Гц, 1H). [M+H]=382,2.
Пример 4. 9-Бром-6-(4-метоксибензил)-[1,2,4]триазоло[1,5-с]птеридин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,77 (s, 3Н), 5,68 (s, 2Н), 6,83 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 7,54 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 8,50 (s, 1Н), 8,81 (s, 1H). [M+H]=387.
Пример 5. 9-(3,4-Диметоксифенил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
2
3
3
1
9-(3,4-Диметоксифенил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. 9-Бром-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он (Пример 1, 75 мг, 0,19 ммоль), 3,4-диметоксифенилбороновую кислоту (75 мг, 0,41 ммоль), фосфат калия (104 мг, 0,49 ммоль) и ДМЭ (3 мл) объединяли и барботировали азотом в течение 10 минут. Добавляли Pd(dba) (13 мг, 0,01 ммоль) и смесь нагревали в течение 2 ч при 120°С в микроволновой печи. В результате очистки (ВЭЖХ, 10-80% ACN-вода) получали титульное соединение (6 мг, 7%) в виде белого твердого вещества. Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,76 (s, 3Н), 3,96 (s, 3Н), 3,99 (s, 3Н), 5,78 (s, 2Н), 6,83-6,84 (m, 2Н), 7,02 (d, J=6,7 Гц, 1Н), 7,15 (d, J=1,6 Гц, 1H), 7,24 (dd, J=6,7, 1,5 Гц, 1H), 7,62-7,64 (m, 2H), 8,37 (s, 1H), 8,76 (d, J=1,9 Гц, 1H), 8,99 (d, J=1,9 Гц, 1H). [M+H]=444,2.
Примеры 6 и 7 выполняли по методике, аналогичной Примеру 5, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 6. 6-(4-Метоксибензил)-9-(6-метоксипиридин-3-ил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 3,70 (s, 3Н), 3,92 (s, 3Н), 5,63 (s, 2Н), 6,86 (d, J=7,0 Гц, 2Н), 6,98 (d, J=7,0 Гц, 1Н), 7,38 (d, J=7,0 Гц, 2Н), 8,26 (dd, J=7,0, 2,1 Гц, 1Н), 8,65 (s, 1Н), 8,70 (d, J=1,9 Гц, 1Н), 8,87 (d, J=1,9 Гц, 1Н), 9,14 (d, J=1,9 Гц, 1Н). [М+Н]=415,1.
Пример 7. 6-(4-Метоксибензил)-9-(2-метоксипиридин-3-ил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 3,71 (s, 3Н), 3,94 (s, 3Н), 5,62 (s, 2Н), 6,86 (d, J=7,0 Гц, 2Н), 7,18 (dd, J=5,9, 4,0 Гц, 1Н), 7,39 (d, J=7,0 Гц, 2Н), 8,02 (dd, J=5,9, 1,5 Гц, 1Н), 8,28 (dd, J=4,0, 1,5 Гц, 1Н), 8,62 (s, 1Н), 8,82 (d, J=1,8 Гц, 1H), 8,99 (d, J=1,9 Гц, 1Н). [М+Н]=415,1.
Пример 8. 6-(4-Метоксибензил)-9-(3-метил-6-оксопиридазин-1(6Н)-ил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
2
3
3
1
6-(4-Метоксибензил)-9-(3-метил-6-оксопиридазин-1(6Н)-ил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. 9-Бром-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он (Пример 1, 75 мг, 0,19 ммоль), 6-метилпиридазин-3(2Н)-он (43 мг, 0,39 ммоль), йодид меди(1) (44 мг, 0,23 ммоль), диоксан (3 мл), транс-1,2-диаминоциклогексан (0,030 мл, 0,25 ммоль) и CsCO (152 мг, 0,47 ммоль) объединяли и нагревали при 120°С в течение 12 ч в микроволновой печи. Смесь фильтровали и очищали (ВЭЖХ, 10-80% ACN-вода) с получением титульного соединения (9 мг, 11%) в виде белого твердого вещества. Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2,44 (s, 3Н), 3,76 (s, 3Н), 5,77 (s, 2Н), 6,81-6,83 (m, 2Н), 7,03 (d, J=7,7 Гц, 1Н), 7,60-7,61 (m, 2Н), 8,36 (s, 1Н), 8,99 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 9,25 (d, J=2,1 Гц, 1Н). [М+Н]=416,1.
Пример 9. 9-(4-циклопропилпиперазин-1-ил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
2
3
2
3
1
9-(4-Циклопропилпиперазин-1-ил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. 9-Бром-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он (Пример 1, 63 мг, 0,16 ммоль) и 1-циклопропилпиперазин (103 мг, 0,82 ммоль) растворяли в толуоле (2 мл) и смесь барботировали азотом при добавлении BINAP (41 мг, 0,07 ммоль), CsCO (159 мг, 0,49 ммоль) и Pd(OAc) (7 мг, 0,03 ммоль). Смесь нагревали при 100°С в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрировали в потоке азота и остаток смешивали с ДМФА и фильтровали. В результате очистки (препаративная ВЭЖХ, 10-70% ACN в воде) получали титульное соединение (25 мг, 27%) в виде желтого твердого вещества. Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 0,84-1,00 (m, 2Н), 1,38 (d, J=3,01 Гц, 2Н), 2,01 (s, 2Н), 2,35-2,51 (m, 1H), 3,50 (s, 4H), 3,61 (br s, 4H), 3,76 (s, 3H), 5,70 (s, 2H), 6,82 (d, J=8,53 Гц, 2H), 7,57 (d, J=8,41 Гц, 2H), 8,07 (d, J=2,89 Гц, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,47 (d, J=2,89 Гц, 1H). [M+H]=432,2.
Примеры 10-19 выполняли по методике, аналогичной Примеру 9, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 10. 9-(((1S,2S)-2-Аминоциклогексил)амино)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,20-1,45 (m, 4Н), 1,68-1,77 (m, 2Н), 1,98-2,06 (m, 2Н), 2,93-2,97 (m, 2Н), 3,70 (s, 3Н), 5,53 (s, 2Н), 6,15 (d, J=8,1 Гц, 1H), 6,83-6,86 (m, 2H), 7,31-7,34 (m, 2H), 7,82 (d, J=2,3 Гц, 1H), 7,88 (br s, 3H), 8,29 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,57 (s, 1H). [M+H]=420,2.
Пример 11. 6-(4-Метоксибензил)-9-(метил(1-метилпиперидин-4-ил)амино)-[1,2,4]триазоло[1,5-с]птеридин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,92 (d, J=13,30 Гц, 2Н), 2,40-2,58 (m, 2Н), 2,84 (s, 3Н), 3,03 (br s, 2Н), 3,11 (s, 3Н), 3,67 (d, J=11,80 Гц, 2H), 3,77 (s, 3Н), 5,18 (tt, J=12,25, 3,75 Гц, 1H), 5,66 (s, 2H), 6,83 (d, J=8,78 Гц, 2H), 7,56 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,27 (s, 1H), 8,43 (s, 1H). [M+H]=435,3.
Пример 12. 9-((2-(Диметиламино)этил)(метил)амино)-6-(4-метоксибензил)-[1,2,4]триазоло[1,5-с]птеридин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,02 (s, 6Н), 3,29 (s, 3Н), 3,40 (t, J=6,15 Гц, 2Н), 3,76 (s, 3Н), 4,18 (t, J=6,15 Гц, 2Н), 5,65 (s, 2Н), 6,83 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,56 (d,J=8,66 Гц, 2Н), 8,27 (s, 1H), 8,37 (s, 1Н), 12,76 (br s, 1H). [М+Н]=409,2.
Пример 13. 6-(4-Метоксибензил)-9-(4-(2-метоксиэтил)пиперазин-1-ил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl-d) δ 3,29-3,35 (m, 2Н), 3,40 (s, 3Н), 3,64 (br s, 8Н), 3,77 (s, 3Н), 3,81-3,87 (m, 2Н), 5,71 (s, 2Н), 6,83 (d, J=8,53 Гц, 2H), 7,57 (d, J=8,41 Гц, 2H), 8,08 (d, J=2,89 Гц, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,49 (d, J=2,76 Гц, 1H). [M+H]=450,3.
Пример 14. 9-(3-(Диметиламино)пирролидин-1-ил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl-d) δ 2,58 (d, J=8,03 Гц, 2Н), 2,91 (s, 6Н), 3,45-3,59 (m, 3Н), 3,76 (s, 3Н), 3,78-3,95 (m, 3Н), 5,71 (s, 2Н), 6,82 (d, J=8,41 Гц, 2Н), 7,58 (d, J=8,78 Гц, 2Н), 7,70 (d, J=3,01 Гц, 1Н), 8,22 (d, J=2,63 Гц, 1H), 8,33 (s, 1H). [M+H]=420,2.
Пример 15. 9-(4-(Диметиламино)пиперидин-1-ил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,90-2,08 (m, 2Н), 2,27 (d, J=9,91 Гц, 2Н), 2,85 (s, 6Н), 2,96 (t, J=12,11 Гц, 2Н), 3,25-3,38 (m, 1Н), 3,77 (s, 3Н), 3,94 (d, J=11,92 Гц, 2H), 5,71 (s, 2H), 6,83 (d, J=8,53 Гц, 2H), 7,58 (d, J=8,53 Гц, 2H), 8,05 (d, J=2,89 Гц, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,51 (d, J=2,89 Гц, 1H). [M+H]=434,3.
Пример 16. 6-(4-Метоксибензил)-9-(метил(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)амино)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,54 (d, J=11,67 Гц, 2Н), 1,64-1,81 (m, 2Н), 2,80 (s, 3Н), 3,40-3,48 (m, 2Н), 3,63 (s, 3Н), 3,86 (dd, J=11,04, 4,02 Гц, 2Н), 4,03 (t, J=11,42 Гц, 1Н), 5,47 (s, 2Н), 6,78 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,27 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 7,78 (d, J=3,01 Гц, 1HJ), 8,47 (d, J=3,14 Гц, 1Н), 8,50 (s, 1Н). [М+Н]=421,1.
Пример 17. 9-((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,11 (d, J=6,15 Гц, 6Н), 2,33 (t, J=10,98 Гц, 2Н), 3,63 (s, 3Н), 3,64-3,69 (m, 2Н), 3,73 (d, J=11,80 Гц, 2Н), 5,48 (s, 2Н), 6,77 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 7,27 (d, J=8,41 Гц, 2Н), 7,93 (d, J=2,76 Гц, 1Р), 8,51 (s, 1Н), 8,54 (d, J=2,76 Гц, 1Н). [M+H]=421,1.
Пример 18. 9-((3-(Диметиламино)пропил)(метил)амино)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло [1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,93 (dt, J=15,12, 7,37 Гц, 2Н), 2,79 (d, J=4,14 Гц, 6Н), 3,05 (s, 3Н), 3,10-3,19 (m, 2Н), 3,51-3,56 (m, 2Н), 3,71 (s, 3Н), 5,56 (s, 2Н), 6,86 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 7,34 (d, J=8,41 Гц, 2Н), 7,78 (d, J=2,89 Гц, 1Н), 8,44 (d, J=2,89 Гц, 1Н), 8,59 (s, 1H), 9,43 (br s, 1Н). [М+Н]=422,2.
Пример 19. 6-(4-Метоксибензил)-9-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 2,88 (s, 3Н), 3,23 (d, J=5,27 Гц, 4Н), 3,34-3,43 (m, 4Н), 3,63 (s, 3Н), 5,48 (s, 2Н), 6,78 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 7,27 (d, J=8,41 Гц, 2Н), 8,00 (d, J=2,89 Гц, 1Н), 8,52 (s, 1Н), 8,57 (d, J=2,89 Гц, 1Н). [М+Н]=470,1.
Пример 20. Бензил-(2-(6-(4-метоксибензил)-5-оксо-5,6-дигидропиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-9-ил)этил)карбамат.
2
3
2
6
1
Бензил-2-(6-(4-метоксибензил)-5-оксо-5,6-дигидропиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-9-ил)этилкарбамат. 9-Бром-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он (Пример 1, 30 мг, 0,078 моль), (2-(бензилоксикарбониламино)этил)трифторборат калия (30 мг, 0,11 моль), CsCO (122 мг, 0,38 ммоль), PdCl(dppf)-ДХМ (5 мг, 0,01 моль), толуол (0,75 мл) и дегазированную воду (0,25 мл) добавляли по очереди. Смесь нагревали при 80°С в течение 16 ч, концентрировали в потоке азота. Неочищенный остаток смешивали с ДМФА (1,5 мл), фильтровали и очищали (ВЭЖХ, 0-85% ACN в воде) с получением титульного соединения (6 мг, 12%) в виде белого твердого вещества. Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 2,92 (t, J=5,4 Гц, 2Н), 3,35-3,36 (m, 2Н), 3,69 (s, 3Н), 4,94 (s, 2Н), 5,58 (s, 2Н), 6,83-6,85 (m, 2Н), 7,24-7,26 (m, 2Н), 7,35-7,37 (m, 2Н), 7,40 (dd, J=4,4,4,4 Гц, 1H), 8,51 (d, J=1,5 Гц, 1H), 8,61 (s, 1H), 8,65 (d, J=1,6 Гц, 1Н). [М+Н]=485,2.
Примеры 21-26 выполняли по методике, аналогичной Примеру 9, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 21. 6-(4-Метоксибензил)-8-(морфолинометил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (ДМСО-d) δ 3,62-3,20 (m, 6Н), 3,71 (s, 3Н), 4,05-3,90 (m, 2Н), 4,56 (s, 2Н), 5,60 (s, 2Н), 6,87-6,84 (m, 2Н), 7,38 (d, J=7,0 Гц, 2Н), 8,67 (s, 1Н), 8,86-8,40 (m, 2Н), 10,15 (br s, 1H). [М+Н]=407,2.
Пример 22. 6-(4-Метоксибензил)-9-(пиперидин-1-илметил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,98 (br s, 6Н), 2,57-2,93 (m, 2Н), 3,56-3,72 (m, 2Н), 3,78 (s, 3Н), 4,38 (s, 2Н), 5,76 (s, 2Н), 6,85 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,60 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 8,37 (s, 1Н), 8,73 (s, 1H), 8,97 (s, 1H). [M+H]=405,3.
Пример 23. 6-(4-Метоксибензил)-9-(тиоморфолинометил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,03 (br s, 4Н), 3,47 (br s, 4Н), 3,78 (s, 3Н), 4,38 (s, 2Н), 5,75 (s, 2Н), 6,84 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,59 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,37 (s, 1Н), 8,74 (d, J=2,01 Гц, 1H), 8,93 (d, J=2,13 Гц, 1H). [M+H]=423,2.
Пример 24. 6-(4-Хлорбензил)-9-(морфолинометил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,54 (br s, 3Н), 4,04 (t, J=4,45 Гц, 4Н), 4,41 (s, 2Н), 5,78 (s, 2Н), 7,30 (d, J=8,78 Гц, 5Н), 7,54-7,68 (m, 2Н), 8,43 (s, 1H), 8,82 (s, 1Н), 8,97 (s, 1H). [M+H]=411,1.
Пример 25. 6-(4-Хлорбензил)-9-(пиперидин-1-илметил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,96 (br s, 3Н), 2,01-2,24 (m, 2Н), 2,75 (t, J=11,73 Гц, 2H), 3,55 (br s, 3Н), 3,68 (d, J=11,04 Гц, 3Н), 4,38 (s, 2H), 5,78 (s, 2H), 7,31 (d, J=8,41 Гц, 2H), 7,60 (d, J=8,41 Гц, 2H), 8,42 (s, 1H), 8,82 (d, J=1,88 Гц, 1H), 9,04 (d, J=1,76 Гц, 1H). [M+H]=409,1.
Пример 26. 6-(4-Хлорбензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,26 (d, J=6,27 Гц, 6Н), 2,50 (t, J=11,11 Гц, 2Н), 3,48 (d, J=11,29 Гц, 2Н), 4,14 (dd, J=10,16, 5,90 Гц, 2Н), 4,36 (s, 2Н), 5,78 (s, 2Н), 7,31 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 7,60 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 8,44 (s, 1Н), 8,83 (d, J=1,63 Гц, 1Н), 9,04 (s, 1Н). [М+Н]=439,2.
Пример 27. 9-(2-Аминоэтил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5 (6Н)-он.
Стадия А. трет-бутил-2-(6-(4-метоксибензил)-5-оксо-5,6-дигидропиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-9-ил)этилкарбамат. Титульное соединение получали по методике, аналогичной Примеру 20, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
1
6
Стадия В. 9-(2-Аминоэтил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. трет-бутил-2-(6-(4-метоксибензил)-5-оксо-5,6-дигидропиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-9-ил)этилкарбамат (6 мг, 0,011 ммоль) обрабатывали ДХМ (2 мл) и 2,2,2-трифторуксусной кислотой (2 мл), перемешивали в течение 1 ч и концентрировали под вакуумом. Остаток суспендировали в хлороформе (3 мл) и концентрировали, и растворяли в метаноле (3 мл), и концентрировали снова с получением 4 мг (12%) ТФУ соли титульного соединения в виде белого твердого вещества. Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 3,05 (t, J=6,0 Гц, 2Н), 3,21 (t, J=5,9 Гц, 2Н), 3,70 (s, 3Н), 5,59 (s, 2Н), 6,84-6,87 (m, 2Н), 7,35-7,37 (m, 2Н), 7,83-7,86 (m, 3Н), 8,62 (d, J=1,8 Гц, 1Н), 8,63 (s, 1Н), 8,71 (d, J=1,9 Гц, 1Н). [М+Н]=351,2.
Пример 28. 6-(4-Метоксибензил)-9-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)амино)этил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
6-(4-Метоксибензил)-9-(2-(тетрагидро-2Н-пиран-4-иламино)этил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. 9-(2-Аминоэтил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он (Пример 27, 38 мг, 0,11 ммоль), ДХМ (1 мл), метанол (0,5 мл), тетрагидро-4Н-пиран-4-он (65 мг, 0,65 ммоль) и TEA (18 μl, 0,13 ммоль) объединяли и перемешивали в течение 20 минут. Добавляли цианоборогидрид натрия (24 мг, 0,38 ммоль) и смесь перемешивали в течение 18 ч. Добавляли воду (0,1 мл), смесь перемешивали в течение 1 ч, и затем концентрировали в потоке азота. Остаток смешивали с ДМФА, фильтровали и очищали с помощью ВЭЖХ с получением соли трифторуксусной кислоты титульное соединение (24 мг, 40%) в виде белого твердого вещества. Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,54 (qd, J=9,8, 6,1 Гц, 2Н), 1,97 (dd, J=9,9, 3,5 Гц, 2Н), 3,13-3,10 (m, 2Н), 3,39-3,29 (m, 5Н), 3,70 (s, 3Н), 3,92 (dd, J=9,1, 3,2 Гц, 2Н), 5,59 (s, 2Н), 6,85 (d, J=7,0 Гц, 2Н), 7,36 (d, J=7,0 Гц, 2Н), 8,64 (s, 1Н), 8,67 (d, J=1,9 Гц, 1Н), 8,71 (br s, 2Н), 8,73 (d, J=1,8 Гц, 1H). [М+Н]=435,3.
Пример 29 получали по методике, аналогичной Примеру 28, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 29. 6-(4-Метоксибензил)-9-(2-((1-фенилэтил)амино)этил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,58 (d, J=5,5 Гц, 3Н), 3,31-3,06 (m, 4Н), 3,70 (s, 3Н), 4,43 (q, J=5,1 Гц, 1H), 5,57 (s, 2Н), 6,85 (d, J=7,0 Гц, 2Н), 7,35 (d, J=7,0 Гц, 2Н), 7,51-7,40 (m, 5Н), 8,59 (d, J=1,8 Гц, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,66 (d, J=1,8 Гц, 1Н), 8,97 (br s, 1H), 9,11 (br s, 1H). [M+H]=455,2.
Пример 30. 6-(4-Метоксибензил)-9-винилпиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Способ А. 6-(4-Метоксибензил)-9-винилпиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. 9-Бром-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он (Пример 1, 500 мг, 1,29 ммоль), трибутил(винил)станнан (0,45 мл, 1,6 ммоль), толуол (5 мл) и тетракис(трифенилфосфоранил)-палладий (33 мг, 0,03 ммоль) объединяли и нагревали при 100°С в течение 16 ч. Смесь фильтровали через ЦЕЛИТ с промыванием ДХМ, концентрировали при пониженном давлении. В результате очистки (FCC, 10-100% EtOAC/гексаны) получали титульное соединение (398 мг, 92%) в виде белого твердого вещества. Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,76 (s, 3Н), 5,52 (d, J=11,04 Гц, 1Н), 5,75 (s, 2H), 5,98 (d, J=17,69 Гц, 1H), 6,77-6,86 (m, 3H), 7,56-7,67 (m, 2H), 8,36 (s, 1H), 8,66 (d, J=2,38 Гц, 1H), 8,79 (d, J=2,38 Гц, 1H). [M+H]=334,1.
4
3
1
Способ В. 6-(4-Метоксибензил)-9-винилпиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. 9-Бром-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он (Пример 1, 2,00 г, 5,18 ммоль), трифтор(винил)борат калия (1,51 г, 11,3 ммоль), бутан-1-ол (20 мл), TEA (1,05 мл, 7,53 ммоль) и комплекс [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроце]дихлорпалладий(II)-ДХМ (0,31 г, 0,38 ммоль) объединяли и нагревали при 100°С в течение 20 ч. Смесь охлаждали, концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в ДХМ (120 мл), промывали водой (50 мл) и солевым раствором (50 мл), сушили (MgSO) и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный остаток растирали с EtOAc (15 мл), фильтровали, промывали холодным EtOAc и сушили отсосом с получением титульного соединения (1,09 г, 63%) в виде желтого порошка. Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,76 (s, 3Н), 5,52 (d, J=10,92 Гц, 1H), 5,75 (s, 2Н), 5,98 (d, J=17,57 Гц, 1Н), 6,75-6,88 (m, 3Н), 7,60 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,36 (s, 1H), 8,66 (d, J=2,13 Гц, 1H), 8,79 (d, J=2,26 Гц, 1H). [M+H]=334,1.
Примеры 31 и 32 выполняли по методике, аналогичной Примеру 30, Способу А, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 31. 6-(4-Метоксибензил)-9-((метоксиметокси)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,45 (s, 3Н), 3,76 (s, 3Н), 4,75 (s, 2Н), 4,78 (s, 2Н), 5,76 (s, 2Н), 6,78-6,87 (m, 2Н), 7,57-7,67 (m, 2Н), 8,36 (s, 1H), 8,65 (d, J=2,26 Гц, 1Н), 8,78 (d, J=2,26 Гц, 1H). [М+Н]=382,1.
Пример 32. 9-(1-Этоксивинил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,48 (t, J=6,96 Гц, 3Н), 3,77 (s, 3Н), 4,00 (q, J=6,94 Гц, 2Н), 4,41 (d, J=3,14 Гц, 1Н), 4,84 (d, J=3,14 Гц, 1Н), 5,76 (s, 2Н), 6,83 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 7,60 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 8,36 (s, 1Н), 8,83 (d, J=2,13 Гц, 1Н), 9,04 (d, J=2,01 Гц, 1H). [М+Н]=378,2.
Пример 33. 9-(Гидроксиметил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
9-(Гидроксиметил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. Суспензию 6-(4-метоксибензил)-9-((метоксиметокси)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-она (Пример 31, 40 мг, 0,10 ммоль), метанола (0,80 мл) и 5 N соляной кислоты (0,40 мл) перемешивали при 50°С в течение 16 ч. Смесь экстрагировали ДХМ (1 мл), подщелачивали до pH 14 с помощью 15% водного гидроксида натрия и экстрагировали ДХМ (2 мл). Объединенные ДХМ экстракты концентрировали при пониженном давлении. В результате очистки (ВЭЖХ, 10-90% ACN-вода) получали титульное соединение (21 мг, 59%) в виде белого порошка. Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 3,69 (s, 3Н), 4,69 (d, J=4,6 Гц, 2Н), 5,54 (t, J=4,6 Гц, 1Н), 5,59 (s, 2Н), 6,84 (d, J=6,9 Гц, 2Н), 7,36 (d, J=6,9 Гц, 2Н), 8,58 (d, J=1,6 Гц, 1Н), 8,60 (s, 1H), 8,72 (d, J=1,6 Гц, 1Н). [М+Н]=338,1.
Пример 34. 9-(2-окса-5-азабицикло[2,2.1]гептан-5-илметил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
4
3
1
Стадия А: 6-(4-Метоксибензил)-5-оксо-5,6-дигидропиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-9-карбальдегид. 6-(4-Метоксибензил)-9-винилпиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он (Пример 30, 3,96 г, 11,9 ммоль) суспендировали в ТГФ (80 мл) и нагревали с помощью термофена для достижения растворения. Аналогично, перйодат натрия (5,84 г, 27,3 ммоль) нагревали в воде (40 мл) для достижения растворения. Указанные выше растворы объединяли при интенсивном перемешивании. Пока температура перемешиваемой смеси составляла 40°С, добавляли оксид осмия(VIII) в трет-бутаноле (2,90 мл, 2,5%, 0,30 ммоль) и смесь интенсивно перемешивали в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водой (300 мл) и экстрагировали EtOAc (3×150 мл) и ДХМ (3×150 мл). Объединенные органические слои сушили (MgSO) и концентрировали с получением титульного соединения (4,13 г, 99%) в виде черного твердого вещества, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,77 (s, 3Н), 5,80 (s, 2Н), 6,83 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,61 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 8,41 (s, 1Н), 9,10 (d, J=2,13 Гц, 1H), 9,26 (d, J=2,13 Гц, 1H), 10,21 (s, 1H). [M+H]=336,2.
1
3
Стадия В: 9-(2-окса-5-азабицикло[2,2.1]гептан-5-илметил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. 6-(4-Метоксибензил)-5-оксо-5,6-дигидропиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-9-карбальдегид (49 мг, 0,15 ммоль), 2-окса-5-азабицикло[2,2.1]гептан (49 мг, 0,36 ммоль), ACN (1 мл), TEA (0,051 мл, 0,37 ммоль) и уксусную кислоту (0,040 мл, 0,69 ммоль) объединяли и перемешивали в течение 10 минут. Добавляли натрия цианоборогидрид (18 мг, 0,29 ммоль) и смесь перемешивали в течение 18 ч при комнатной температуре. Смесь разбавляли метанолом, фильтровали и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением титульного соединения (35 мг, 45%) в виде соли трифторуксусной кислоты в виде белого твердого вещества. Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2,25 (d, J=11,42 Гц, 1Н), 2,43 (br s, 1H), 3,44-3,63 (m, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,91 (d, J=10,42 Гц, 1H), 4,37-4,53 (m, 3H), 4,56-4,65 (m, 1H), 4,73 (s, 1H), 5,74 (s, 2H), 6,76-6,91 (m, 2H), 7,60 (d, J=8,78 Гц, 2H), 8,38 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 9,08 (s, 1H). [M+H]=419,2.
Примеры 35-64 выполняли по методике, аналогичной Примеру 34, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 35. 9-((Диметиламино)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
H ЯМР (ДМСО-d) δ 2,80 (s, 6Н), 3,70 (s, 3Н), 4,50 (s, 2Н), 5,60 (s, 2Н), 6,86 (d, J=7,0 Гц, 2Н), 7,38 (d, J=7,0 Гц, 2Н), 8,66 (s, 1H), 8,84 (d, J=1,8 Гц, 1H), 8,89 (d, J=1,8 Гц, 1H), 9,89 (br s, 1H). [M+H]=365,2.
Пример 36. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,23 (d, J=6,27 Гц, 6Н), 2,39-2,52 (m, 2Н), 3,35 (d, J=11,42 Гц, 2Н), 3,77 (s, 3Н), 4,31 (br s, 2Н), 4,34-4,45 (m, 2Н), 5,74 (s, 2Н), 6,83 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 7,62 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 8,38 (s, 1Н), 8,90 (d, J=2,26 Гц, 1Н), 9,34 (d, J=2,13 Гц, 1H), 13,90 (br s, 1Н). [М+Н]=435,3.
Пример 37. 6-(4-Метоксибензил)-9-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2,89 (s, 2Н), 3,11 (br s, 3Н), 3,40 (br s, 2Н), 3,78 (s, 2Н), 3,95 (s, 1Н), 5,76 (s, 1Н), 6,85 (d, J=8,53 Гц, 1Н), 7,60 (d, J=8,41 Гц, 1Н), 8,38 (s, 1Н), 8,72 (s, 1H), 8,76 (s, 1H). [М+Н]=420,2.
Пример 38. 9-((3,3-Диметилморфолино)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,65 (s, 6Н), 3,12 (br s, 2Н), 3,23-3,73 (m, 4Н), 3,76 (s, 3Н), 4,00 (br s, 2H), 5,73 (s, 2H), 6,75-6,90 (m, 2H), 7,59 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,37 (s, 1H), 8,81 (d, J=1,88 Гц, 1H), 9,03 (d, J=2,01 Гц, 1H). [M+H]=435,3.
Пример 39. 9-((2,2-Диметилморфолино)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,40 (br s, 6Н), 3,22-3,68 (m, 4Н), 3,77 (s, 3Н), 3,93-4,18 (m, 2Н), 4,41 (br s, 2H), 5,74 (s, 2H), 6,74-6,91 (m, 2H), 7,61 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,39 (s, 1H), 8,79 (d, J=2,13 Гц, 1H), 9,05 (d, J=2,01 Гц, 1H). [M+H]=435,2.
Пример 40. 9-((2-Этилморфолино)метал)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 0,97 (t, J=7,47 Гц, 3Н), 1,42-1,63 (m, 2Н), 2,58 (t, J=11,17 Гц, 1Н), 2,80-3,02 (m, 1H), 3,50 (dd, J=19,95, 11,04 Гц, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,81-3,95 (m, 1H), 3,99-4,16 (m, 2H), 4,37 (s, 2H), 5,74 (s, 2H), 6,76-6,91 (m, 2H), 7,51-7,68 (m, 2H), 8,39 (s, 1H), 8,80 (d, J=2,26 Гц, 1H), 9,05 (d, J=2,26 Гц, 1H). [M+H]=435,2.
Пример 41. 9-((2,5-Диметилморфолино)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,25 (d, J=6,27 Гц, 3Н), 1,55 (d, J=6,65 Гц, 3Н), 2,80 (t, J=10,98 Гц, 1Н), 3,26 (d, J=12,05 Гц, 1H), 3,59 (d, J=6,40 Гц, 1H), 3,78 (d, J=14,56 Гц, 1H), 3,74-3,83 (m, 4Н), 4,05-4,18 (m, 1Н), 4,23-4,36 (m, 2Н), 5,74 (s, 2Н), 6,78-6,92 (m, 2Н), 7,55-7,70 (m, 2Н), 8,32-8,46 (m, 1H), 8,85 (d, J=2,13 Гц, 1Н), 9,13 (d, J=2,01 Гц, 1Н). [М+Н]=435,2.
Пример 42. 6-(4-Метоксибензил)-9-((2,2,6,6-тетрафторморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,08 (t, J=8,16 Гц, 4Н), 3,77 (s, 3Н), 3,95 (s, 2Н), 5,76 (s, 2Н), 6,79-6,89 (m, 2Н), 7,57-7,67 (m, 2Н), 8,38 (s, 1H), 8,62 (d, J=2,26 Гц, 1H), 8,78 (d, J=2,26 Гц, 1Н). [М+Н]=479,1.
Пример 43. 9-(8-окса-3-азабицикло[3,2.1]октан-3-илметил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е] [1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2,07-2,14 (m, 2Н), 2,34-2,39 (m, 2Н), 3,09 (dd, J=11,98, 2,70 Гц, 2Н), 3,48 (d, J=11,67 Гц, 2Н), 3,77 (s, 3Н), 4,37 (s, 2Н), 4,53 (br s, 2Н), 5,74 (s, 2Н), 6,83 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,60 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,39 (s, 1Н), 8,78 (d, J=2,13 Гц, 1H), 9,01 (s, 1H). [M+H]=433,3.
Пример 44. 6-(4-Метоксибензил)-9-((1-метил-8-окса-1,2-диазаспиро[4,5]декан-2-ил)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,93 (br s, 2Н), 2,06 (td, J=12,36, 4,89 Гц, 2H), 2,39 (t, J=7,34 Гц, 2H), 3,00 (s, 3Н), 3,34 (t, J=7,47 Гц, 2H), 3,42-3,53 (m, 2Н), 3,77 (s, 3Н), 4,10 (dd, J=11,61, 4,71 Гц, 2H), 4,60 (s, 2Н), 5,75 (s, 2Н), 6,76-6,90 (m, 2Н), 7,61 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,39 (s, 1H), 8,68 (d, J=2,13 Гц, 1H), 8,81 (d, J=2,13 Гц, 1H). [M+H]=476,3.
Пример 45. 6-(4-Метоксибензил)-9-((2-метилморфолино)метил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,24 (d, J=6,27 Гц, 3Н), 2,55 (t, J=11,11 Гц, 1H), 2,90 (td, J=11,26, 4,58 Гц, 1H), 3,41-3,57 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,97-4,14 (m, 3H), 4,28-4,44 (m, 2H), 5,74 (s, 2H), 6,83 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,60 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,39 (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 9,01 (s, 1H). [M+H]=421,2.
Пример 46. 6-(4-Метоксибензил)-9-((3-метилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,63 (d, J=6,53 Гц, 3Н), 3,28 (d, J=11,80 Гц, 2Н), 3,77 (s, 3Н), 3,82-4,20 (m, 6Н), 5,74 (s, 2Н), 6,83 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,60 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 8,39 (s, 1H), 8,81 (d, J=1,76 Гц, 1Н), 9,03 (s, 1H). [M+H]=421,3.
Пример 47. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-метоксибензил)-[1,2,4]триазоло[1,5-с]птеридин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,24 (d, J=6,15 Гц, 6Н), 2,68 (t, J=10,98 Гц, 2Н), 3,57 (d, J=11,42 Гц, 2Н), 3,75 (s, 3Н), 4,00 (dd, J=9,85, 6,09 Гц, 2Н), 4,53 (br s, 2Н), 5,69 (s, 2Н), 6,81 (d, J=8,41 Гц, 2Н), 7,57 (d, J=8,41 Гц, 2Н), 8,50 (s, 1Н), 9,11 (s, 1H). [M+H]=436,2.
Пример 48. 6-(4-Метоксибензил)-9-((4-метил-1,4-диазепан-1-ил)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,92-2,20 (m, 2Н), 2,85 (s, 3Н), 2,85-3,75 (m, 11H), 4,11-4,46 (m, 2Н), 5,61 (s, 2Н), 6,87 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,40 (d, J=8,41 Гц, 2Н), 8,66 (s, 1Н), 8,72-8,88 (m, 2Н). [М+Н]=434,2.
Пример 49. 9-((1,4-Оксазепан-4-ил)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 2,02-2,19 (m, 2Н), 3,21-3,49 (m, 4Н), 3,51-3,79 (m, 13Н), 4,58-4,72 (m, 2Н), 5,61 (s, 2Н), 6,88 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,40 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 8,68 (s, 1H), 8,89 (s, 1H), 8,94 (s, 1H). [М+Н]=421,2.
Пример 50. 9-((4-Ацетил-1,4-диазепан-1-ил)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 2,00-2,22 (m, 5Н), 3,05-3,67 (m, 8Н), 3,72 (s, 3Н), 4,53-4,72 (m, 2Н), 5,61 (s, 2Н), 6,88 (d, J=8,41 Гц, 2Н), 7,41 (d, J=8,41 Гц, 2Н), 8,68 (s, 1Н), 8,87 (s, 1H), 8,91 (s, 1Н). [М+Н]=462,3.
Пример 51. 9-((Циклогексил(метил)амино)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,10-1,72 (m, 6Н), 1,81-1,96 (m, 2Н), 1,99-2,21 (m, 2Н), 2,61-2,67 (m, 3Н), 3,33-3,41 (m, 1Н), 3,72 (s, 3Н), 4,38-4,73 (m, 2Н), 5,62 (s, 2Н), 6,87 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,40 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 8,68 (s, 1Н), 8,90 (s, 1Н), 8,94 (s, 1Н). [М+Н]=433,3.
Пример 52. 6-(4-Метоксибензил)-9-((4-метоксипиперидин-1-ил)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,42-1,59 (m, 1Н), 1,72-1,86 (m, 1Н), 1,98-2,09 (m, 1H), 2,15-2,25 (m, 1H), 2,99-3,21 (m, 2Н), 3,23-3,30 (m, 3Н), 3,35-3,52 (m, 2Н), 3,53-3,61 (m, 1Н), 3,72 (s, 3Н), 4,50-4,61 (m, 2Н), 5,61 (s, 2Н), 6,87 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 7,40 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 8,68 (s, 1H), 8,83-8,92 (m, 2Н). [М+Н]=435,2.
Пример 53. 6-(4-Метоксибензил)-9-((метил(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)амино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,74-1,92 (m, 2Н), 1,98-2,12 (m, 2Н), 2,64-2,71 (m, 3Н), 3,32-3,44 (m, 2Н), 3,59-3,81 (m, 4Н), 3,99-4,10 (m, 2Н), 4,37-4,49 (m, 1Н), 4,69-4,79 (m, 1Н), 5,62 (s, 2Н), 6,87 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,40 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 8,68 (s, 1Н), 8,90 (s, 1H), 8,95 (s, 1H). [М+Н]=435,2.
Пример 54. 6-(4-Метоксибензил)-9-((4-(2-метоксиэтил)пиперазин-1-ил)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 2,54-2,75 (m, 2Н), 2,86-3,21 (m, 4Н), 3,26-3,33 (m, 5H), 3,35-3,55 (m, 2Н), 3,65 (t, J=4,71 Гц, 2Н), 3,72 (s, 3Н), 3,85-3,94 (m, 2Н), 5,60 (s, 2Н), 6,87 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 7,39 (d, J=8,41 Гц, 2Н), 8,64 (s, 1Н), 8,64-8,67 (m, 1Н), 8,75-8,78 (m, 1Н). [М+Н]=464,3.
Пример 55. 9-((Изопропил(2-метоксиэтил)амино)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е] [1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,27-1,47 (m, 6Н), 3,14-3,20 (m, 1H), 3,22 (s, 3Н), 3,41-3,56 (m, 4Н), 3,72 (s, 4Н), 4,48-4,67 (m, 2Н), 5,61 (s, 2Н), 6,87 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 7,40 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 8,68 (s, 1H), 8,91 (s, 1H), 8,97 (s, 1Н). [М+Н]=437,2.
Пример 56. 6-(4-Метоксибензил)-8-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)пиридо[2,3-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 2,79 (s, 5Н), 2,93 (br s, 3Н), 3,55 (d, J=10,29 Гц, 30Н), 3,75 (s, 6Н), 3,78 (s, 5Н), 3,99 (s, 2Н), 5,55 (s, 2Н), 6,92 (d, J=8,78 Гц, 2Н), 7,37 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,92 (s, 1Н), 8,64 (s, 1H). [M+H]=420,2.
Пример 57. 6-(4-Метоксибензил)-8-(морфолинометил)пиридо[2,3-е][1,2,4]триазоло[1,5-c]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 2,99 (br s, 4Н), 3,74 (s, 4Н), 3,76-4,06 (m, 12Н), 4,41 (br s, 2H), 5,57 (s, 2H), 6,90 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,39 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,22 (br s, 1H), 8,68 (s, 1H), 8,77 (s, 1H). [M+H]=407,2.
Пример 58. 6-(4-Метоксибензил)-8-(пиперидин-1-илметил)пиридо[2,3-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,91 (br s, 2H), 2,14 (br s, 2H), 2,65 (br s, 2H), 2,77-3,00 (m, 2H), 3,50 (br s, 2H), 3,79 (s, 3H), 4,28 (s, 2H), 5,73 (s, 2H), 6,89 (d, J=8,53 Гц, 2H), 7,47 (d, J=8,16 Гц, 2H), 8,55 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,80 (br s, 1H). [M+H]=405,2.
Пример 59. 6-(4-Метоксибензил)-8-(тиоморфолинометил)пиридо[2,3-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2,91 (br s, 4Н), 3,20 (br s, 4H), 3,67 (s, 3Н), 4,21 (s, 2H), 5,57 (s, 2H), 6,77 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,27 (d, J=8,53 Гц, 2H), 8,41 (br s, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,52 (s, 1H). [M+H]=423,2.
Пример 60. 8-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[2,3-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,10 (d, J=6,27 Гц, 6Н), 2,28 (t, J=11,23 Гц, 2Н), 3,16 (d, J=11,42 Гц, 2Н), 3,67 (s, 3Н), 3,85-4,02 (m, 2Н), 4,20 (s, 2Н), 5,51 (s, 2Н), 6,76 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,25 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 8,31 (s, 1Н), 8,42 (s, 1H), 8,53 (s, 1H). [M+H]=435,3.
Пример 61. 6-(4-Метоксибензил)-9-(((2-метоксиэтал)(метил)амино)метил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 2,79 (s, 3Н), 3,33 (s, 5Н), 3,72 (s, 5Н), 4,44-4,71 (m, 2Н), 5,61 (s, 2Н), 6,87 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,40 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 8,68 (s, 1Н), 8,85-8,90 (m, 1H), 8,91-8,96 (m, 1H). [М+Н]=409,2.
Пример 62. 7-((6-(4-Метоксибензил)-5-оксо-5,6-дигидропиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-9-ил)метил)тетрагидро-1Н-оксазоло[3,4-а]пиразин-3(5Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 2,90-3,44 (m, 4Н), 3,65-3,82 (m, 5Н), 3,91-4,49 (m, 5Н), 5,61 (s, 2Н), 6,87 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,40 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 8,66 (s, 1Н), 8,70-8,88 (m, 2Н). [М+Н]=462,2.
Пример 63. 9-(((2S,5S)-2,5-Диметилморфолино)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5 (6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,16 (m, 6Н), 2,36 (br s, 2Н), 2,84 (br s, 1H), 3,61-3,74 (m, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,82 (br s, 1H), 5,75 (s, 2H), 6,83 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,62 (d, J=8,53 Гц, 2H), 8,36 (s, 1H), 8,63 (br s, 1H), 8,75 (br s, 1H). [M+H]=435,3.
Пример 64. 9-(((2R,5R)-2,5-Диметилморфолино)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,15 (m, 6Н), 2,36 (br s, 2Н), 2,83 (br s, 1Н), 3,60-3,74 (m, 3Н), 3,77 (s, 4H), 3,83 (d, J=9,41 Гц, 1H), 5,75 (s, 2H), 6,83 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,62 (d, J=8,53 Гц, 2H), 8,36 (s, 1H), 8,63 (br s, 1H), 8,74 (br s, 1H). [M+H]=435,3.
Пример 65. 6-(4-Метоксибензил)-9-(пиперазин-1-илметил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
2
2
3
2
Стадия А. трет-Бутил-4-((6-(4-метоксибензил)-5-оксо-5,6-дигидропиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-9-ил)метил)пиперазин-1-карбоксилат. 9-Бром-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он (Пример 1, 562,00 мг; 1,46 ммоль), ((4-(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-1-ил)метил)трифторборат калия (568,00 мг; 1,86 ммоль), дициклогексил(2',4',6'-триизопропилбифенил-2-ил)фосфин (60,00 мг; 0,13 ммоль;), Pd(OAc) (30,00 мг; 0,13 ммоль), CsCO (1,76 г; 5,40 ммоль) и дегазированную смесь диоксан-вода (9:1; 10 мл) объединяли в указанном порядке и нагревали при 80°С в течение 4 дней. Смесь концентрировали при пониженном давлении. В результате очистки (FCC, SiO, 20-100% EtOAc/гексаны) получали титульное соединение (216 мг, 29%).
1
3
6
Стадия В. 6-(4-метоксибензил)-9-(пиперазин-1-илметил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. трет-бутил-4-((6-(4-метоксибензил)-5-оксо-5,6-дигидропиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-9-ил)метил)пиперазин-1-карбоксилат (216 мг, 427 ммоль) перемешивали в ДХМ (3,00 мл) и 2,2,2-трифторуксусной кислоте (3,00 мл) в течение 1 ч и концентрировали под вакуумом с получением титульного соединения (227,00 мг; 30,03%). Часть указанного материала (35 мг) очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (10-70% ACN/вода) с получением титульного соединения (19,00 мг; 2,51%) в виде белого порошка. Н ЯМР (400 МГц, CDCl и ДМСО-d) δ 2,74 (br s, 4Н), 3,11 (br s, 4H), 3,65 (d, J=2,01 Гц, 3Н), 3,96 (br s, 2H), 5,62 (s, 2H), 6,71 (dd, J=8,72, 1,95 Гц, 2H), 7,47 (dd, J=8,66, 1,88 Гц, 2H), 8,25 (d, J=2,01 Гц, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,58-8,71 (m, 1H), 9,84 (br s, 1H). [M+H]=406,2.
Пример 66 получали по методике, аналогичной Примеру 65, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 66. 9-(((3S,5R)-3,5-Диметилпиперазин-1-ил)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,18 (d, J=6,53 Гц, 6Н), 2,12 (t, J=11,80 Гц, 2Н), 3,03 (d, J=10,29 Гц, 2Н), 3,34 (br s, 2Н), 3,72 (s, 3Н), 3,81 (br s, 2Н), 5,60 (s, 2Н), 6,87 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,39 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,21 (d, J=8,53 Гц, 1H), 8,62 (d, J=2,13 Гц, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,76 (d, J=2,13 Гц, 1H), 8,95 (br s, 1H). [M+H]=434,2.
Пример 67. 6-(4-Метоксибензил)-9-((4-((ТГФ-3-ил)метил)пиперазин-1-ил)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
Титульное соединение получали по методике, аналогичной Примеру 34, Стадия В.
1
3
6
Н ЯМР (400 МГц, CDCl и ДМСО-d) δ 1,68 (dd, J=12,49, 6,96 Гц, 1Н), 2,13 (d, J=6,02 Гц, 1Н), 2,69 (d, J=6,27 Гц, 1Н), 2,80-3,07 (m, 6Н), 3,19-3,52 (m, 2Н), 3,57-3,73 (m, 3Н), 3,59-3,70 (m, 2Н), 3,70-3,82 (m, 2Н), 3,88 (t, J=7,47 Гц, 1H), 3,99-4,67 (m, 7Н), 5,63 (s, 2Н), 6,72 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,48 (d, J=8,41 Гц, 2Н), 8,15-8,31 (m, 1H), 8,55 (br s, 1Н), 8,63 (br s, 1H). [M+H]=490,3.
Пример 68. 6-(4-Метоксибензил)-9-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
18
6-(4-Метоксибензил)-9-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. 6-(4-Метоксибензил)-9-(пиперазин-1-илметил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он (Пример 65, 34 мг, 0,09 ммоль), ACN (1 мл), TEA (75 мл, 0,53 ммоль), и метансульфонилхлорид (50 мг, 0,44 ммоль) объединяли и смесь перемешивали в течение 4 ч. Реакционную смесь фильтровали через пробку из С. В результате очистки (ВЭЖХ, 10-70% ACN в воде) получали титульное соединение (17 мг, 33%) в виде белого твердого вещества.
1
3
6
H ЯМР (400 МГц, CDCl и ДМСО-d) δ 2,48 (d, J=1,63 Гц, 2Н), 2,76 (d, J=2,26 Гц, 3Н), 3,09 (br s, 4Н), 3,54 (br s, 4Н), 3,65 (d, J=2,51 Гц, 3Н), 4,21 (br s, 2H), 5,63 (d, J=1,76 Гц, 2H), 6,72 (dd, J=8,78, 2,26 Гц, 2H), 7,47 (dd, J=8,66, 2,38 Гц, 2H), 8,26 (d, J=2,38 Гц, 1H), 8,85 (br s, 1H), 9,00 (br s, 1H). [M+H]=484,2.
Примеры 69-71 выполняли по методике, аналогичной Примеру 68, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 69. 4-((6-(4-Метоксибензил)-5-оксо-5,6-дигидропиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-9-ил)метил)-N,N-диметилпиперазин-1-сульфонамид.
1
3
6
Н ЯМР (400 МГц, CDCl и ДМСО-d) δ 2,70 (d, J=2,64 Гц, 6Н), 3,13 (br s, 4Н), 3,40-3,59 (m, 4Н), 3,63 (d, J=2,76 Гц, 3Н), 4,32 (br s, 2Н), 5,60 (s, 2Н), 6,69 (dd, J=8,72, 2,45 Гц, 2Н), 7,39-7,59 (m, 2Н), 8,24 (d, J=2,89 Гц, 1Н), 8,93 (br s, 1H), 9,08 (br s, 1H). [M+H]=513,2.
Пример 70. 6-(4-Метоксибензил)-9-((4-(2,2,2-трифторацетил)пиперазин-1-ил)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
6
Н ЯМР (400 МГц, CDCl и ДМСО-d) δ 2,94 (br s, 4Н), 3,64 (s, 3Н), 3,80 (br s, 4Н), 4,07 (br s, 2H), 5,61 (s, 2H), 6,61-6,78 (m, 2H), 7,45 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,24 (s, 1H), 8,76 (br s, 1H), 8,90 (br s, 1H). [M+H]=502,2.
Пример 71. 6-(4-Метоксибензил)-9-((4-(ТГФ-3-карбонил)пиперазин-1-ил)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
6
Н ЯМР (400 МГц, CDCl и ДМСО-d) δ 1,89-2,20 (m, 2Н), 2,88-3,25 (m, 5Н), 3,36-3,64 (m, 4Н), 3,68 (d, J=0,88 Гц, 3Н), 3,72-3,95 (m, 4Н), 4,26 (br s, 2Н), 5,65 (br s, 2Н), 6,74 (d, J=7,78 Гц, 2H), 7,50 (d,=7,65 Гц, 2Н), 8,28 (d, J=1,00 Гц, 1Н), 8,88 (br s, 1Н), 9,09 (br s, 1H). [M+H]=504,3.
Пример 72. 6-(4-Метоксибензил)-9-(морфолинометил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
4
Стадия А: 6-(4-Метоксибензил)-5-оксо-5,6-дигидропиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-8-карбальдегид. 8-(Диметоксиметил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он (Пример 3, 682 мг, 1,79 ммоль), ТГФ (20 мл), воду (5 мл) и 12 N соляную кислоту (3 мл) объединяли и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Смесь медленно нейтрализовывали с помощью измельченного в порошок бикарбоната натрия до рН 8. Смесь разбавляли водой (20 мл) и экстрагировали EtOAc (3×20 мл). Объединенные экстракты сушили (MgSO) и концентрировали с получением титульного соединения (516 мг, 77%) в виде желтой пены, которую использовали без дополнительной очистки.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,73-3,81 (m, 3Н), 5,83, (s, 2Н), 6,85 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,64 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 8,03 (d, J=7,78 Гц, 1H), 8,42 (s, 1H), 8,83 (d, J=7,91 Гц, 1H), 10,22 (s, 1H). [M+H]=336,1.
1
3
Стадия В: 6-(4-Метоксибензил)-8-(морфолинометил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. Титульное соединение получали, как описано в Примере 34, Стадия В. Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,47 (br s, 2Н), 3,76 (s, 3Н), 3,79-3,82 (m, 2H), 3,87 (br s, 4H), 4,41 (s, 2H), 5,78 (s, 2H), 6,82 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,30 (d, J=9,29 Гц, 2H), 7,72 (d, J=7,91 Гц, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,76 (d, J=7,91 Гц, 1H). [M+H]=407,2.
Примеры 73-80 выполняли по методике, аналогичной Примеру 72, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 73. 8-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,12 (d, J=6,27 Гц, 6Н), 2,43 (t, J=11,04 Гц, 2Н), 3,38 (d, J=11,67 Гц, 2Н), 3,75 (s, 3Н), 4,02 (dd, J=10,23, 6,34 Гц, 2Н), 4,44 (s, 2Н), 5,76 (s, 2Н), 6,83 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,36 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,70 (d, J=7,78 Гц, 1Н), 8,43 (s, 1Н), 8,76 (d, J=7,91 Гц, 1H). [М+Н]=435,3.
Пример 74. 6-(4-Метоксибензил)-8-((((3-метилоксетан-3-ил)метил)амино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,31 (s, 3Н), 3,11 (s, 2H), 3,74 (s, 3Н), 4,32-4,40 (m, 4H), 4,56 (s, 3Н), 5,81 (s, 2H), 6,80 (d, J=8,53 Гц, 2H), 7,30 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,60 (d, J=7,91 Гц, 1H), 8,42 (s, 1H), 8,76 (d, J=7,91 Гц, 1H). [M+H]=421,2.
Пример 75. 6-(4-Метоксибензил)-8-((метил((ТГФ-3-ил)метил)амино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,54-1,69 (m, 1Н), 2,06-2,30 (m, 2H), 2,69 (dt, J=14,09, 6,95 Гц, 2H), 2,80 (s, 3Н), 3,10 (br s, 2H), 3,39 (dd, J=8,91, 6,15 Гц, 1H), 3,70-3,75 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,81-3,87 (m, 1H), 3,90 (dd, J=8,85, 7,22 Гц, 1H), 4,51 (s, 2H), 5,76 (s, 2H), 6,83 (d, J=8,53 Гц, 2H), 7,32 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,76 (d, J=7,91 Гц, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,79 (d, J=7,91 Гц, 1H). [M+H]=435,3.
Пример 76. 8-((Циклопропил(метил)амино)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 0,67 (d, J=6,53 Гц, 2H), 1,23 (d, J=3,01 Гц, 2H), 2,42 (tt, J=7,29, 3,75 Гц, 1H), 2,84 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 4,55 (s, 2H), 5,74 (s, 2H), 6,81 (d, J=8,53 Гц, 2H), 7,36 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,74 (d, J=7,78 Гц, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,76 (d, J=7,91 Гц, 1H). [M+H]=391,2.
Пример 77. 6-(4-Метоксибензил)-8-((4-(метилсульфонил)пиперазин-1-ил)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2,87 (s, 3Н), 3,15 (br s, 4Н), 3,53 (br s, 4H), 3,78 (s, 3Н), 4,37 (s, 2H), 5,76 (s, 2H), 6,85 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,30 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,70 (d, J=8,03 Гц, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,77 (d, J=7,91 Гц, 1H). [M+H]=484,2.
Пример 78. 8-((Бензиламино)метил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,62 (s, 3Н), 4,03 (s, 2Н), 4,26 (s, 2Н), 5,71 (s, 2Н), 6,67 (d, J=8,53 Гц, 2H), 7,19-7,38 (m, 10Н), 8,24-8,35 (m, 1Н), 8,57-8,65 (m, 1H). [M+H]=427,3.
Пример 79. 6-(4-Метоксибензил)-8-((фениламино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,67 (s, 3Н), 4,60 (s, 2Н), 5,67 (s, 2Н), 6,63 (d, J=8,03 Гц, 2H), 6,73 (d, J=8,53 Гц, 3Н), 6,75-6,82 (m, 1H), 7,12 (s, 2H), 7,33-7,40 (m, 1H), 7,41-7,48 (m, 2H), 8,22-8,34 (m, 1H), 8,45-8,57 (m, 1H). [M+H]=413,2.
Пример 80. 8-(Изоиндолин-2-илметил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,68 (s, 3Н), 4,46 (br s, 3Н), 4,64 (s, 2H), 5,69 (s, 2H), 6,73 (d, J=8,53 Гц, 2H), 7,03-7,13 (m, 2H), 7,18 (s, 4H), 7,24-7,33 (m, 2H), 7,47-7,56 (m, 1H), 8,28-8,41 (m, 1H), 8,60-8,71 (m, 1H). [M+H]=439,2.
Пример 81. 9-Ацетил-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
4
9-Ацетил-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. 9-(1-Этоксивинил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он (Пример 32, 147 мг, 0,39 ммоль) суспендировали в диоксане (6 мл) и 6 N соляной кислоте (3 мл) и перемешивали в течение 4 ч. Смесь подщелачивали до рН 11 с помощью 1 N гидроксида натрия и экстрагировали ДХМ (3×15 мл). Объединенные экстракты сушили (MgSO) и концентрировали с получением 122 мг (90%) титульного соединения в виде желтого твердого вещества.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2,73 (s, 3Н), 3,76 (s, 3Н), 5,79 (s, 2Н), 6,78-6,89 (m, 2Н), 7,56-7,66 (m, 2Н), 8,39 (s, 1Н), 9,13 (d, J=2,26 Гц, 1H), 9,35 (d, J=2,26 Гц, 1H). [M+H]=350,2.
Пример 82. 9-(1-((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)этил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
9-(1-((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)этил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. 9-Ацетил-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он (Пример 81, 67 мг, 0,19 ммоль), (2S,6R)-2,6-диметилморфолин (0,060 мл, 0,49 ммоль), ACN (1 мл) и уксусную кислоту (0,020 мл, 0,35 ммоль) объединяли и перемешивали в течение 10 минут. Добавляли цианоборогидрид натрия (18 мг, 0,29 ммоль) и смесь перемешивали в течение 3 дней при 50°С. Смесь фильтровали. В результате очистки (ВЭЖХ, 10-65% ACN в воде) получали титульное соединение (26 мг, 23%) в виде белого твердого вещества. Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,19 (d, J=6,27 Гц, 3Н), 1,23 (d, J=6,27 Гц, 3Н), 1,92 (d, J=7,03 Гц, 3Н), 2,34 (td, J=11,01, 2,32 Гц, 2Н), 3,32 (d, J=11,42 Гц, 1Н), 3,57 (d, J=11,42 Гц, 1H), 3,77 (s, 3H), 4,12 (d, J=7,03 Гц, 2H), 4,54 (q, J=6,86 Гц, 1H), 5,75 (s, 2H), 6,85 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,62 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,40 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 8,95 (s, 1H). [M+H]=449,3.
Пример 83. 9-(1-Гидрокси-2-морфолиноэтил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
4
Стадия А. 6-(4-Метоксибензил)-9-(оксиран-2-ил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. 3-хлорпербензойную кислоту (139 мг, 0,62 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору 6-(4-метоксибензил)-9-винилпиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-она (Пример 30, 138 мг, 0,41 ммоль) в ДХМ (1,3 мл) и смесь перемешивали в течение 18 ч. Насыщенный бикарбонат натрия (3 мл) добавляли к реакционной смеси и смесь перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли ДХМ (5 мл), и органический слой разделяли, сушили (MgSO) и концентрировали под вакуумом с получением титульного соединения (118 мг, 82%) в виде желтого полутвердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки на следующей стадии.
9-(1-Гидрокси-2-морфолиноэтил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. 6-(4-Метоксибензил)-9-(оксиран-2-ил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он (118 мг, 0,337 ммоль) обрабатывали морфолином (0,50 мл) и перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Смесь концентрировали под вакуумом, повторно растворяли в ДМСО и фильтровали. В результате очистки (ВЭЖХ, элюируя 20-80% ацетонитрилом в воде) получали титульное соединение (63 мг, 26%) в виде ТФУ соли в виде белого порошка.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,11 (br s, 4Н), 3,26 (dd, J=13,30, 2,89 Гц, 1Н), 3,35 (dd, J=13,30, 10,67 Гц, 1H), 3,76 (s, 3H), 4,12 (br s, 4H), 5,65-5,71 (m, 1H), 5,73 (s, 2H), 6,82 (d, J=8,78 Гц, 2H), 7,58 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,35 (s, 1H), 8,69 (d, J=2,26 Гц, 1H), 8,90 (d, J=2,26 Гц, 1H). [M+H]=437,2.
Пример 84 получали по методике, аналогичной Примеру 83, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 84. 9-(2-((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)-1-гидроксиэтил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,29 (d, J=6,40 Гц, 2Н), 1,31 (d, J=6,27 Гц, 2Н), 2,57 (d, J=11,92 Гц, 2Н), 3,21 (d, J=13,30 Гц, 2Н), 3,25-3,39 (m, 2Н), 3,66 (d, J=11,29 Гц, 1H), 3,76 (s, 3Н), 3,80-3,89 (m, 1H), 4,19 (d, J=16,06 Гц, 2H), 5,60 (d, J=10,16 Гц, 1H), 5,74 (s, 2H), 6,78-6,87 (m, 2H), 7,59 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,36 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,90 (s, 1H). [M+H]=465,3.
Пример 85. 9-(1-Фтор-2-морфолиноэтил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
2
9-(1-Фтор-2-морфолиноэтил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. Трифторид (диметиламино)серы (0,010 мл, 0,18 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору 9-(1-гидрокси-2-морфолиноэтил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-она (Пример 83, 49 мг, 0,090 ммоль) в ACN (1 мл). Через 4 ч добавляли дополнительное количество трифторида (диметиламино)серы (0,035 мл, 0,36 ммоль) и смесь перемешивали при 60°С в течение 20 ч и охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляли водным бикарбонатом натрия (3 мл) и экстрагировали ДХМ (2×3 мл). Объединенные органические слои концентрировали в потоке азота и остаток смешивали с метанолом и фильтровали. В результате очистки (ВЭЖХ, 10-75% ACN в воде) получали титульное соединение, но с остатками примесей. Продукт разбавляли водным бикарбонатом натрия (3 мл) и экстрагировали ДХМ (2×3 мл). Объединенные органические слои концентрировали в потоке азота. В результате очистки (FCC, SiO, от 0 до 40%, IPA/EtOAc) получали титульное соединение (9 мг, 21%) в виде белого порошка.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2,58-2,72 (m, 4Н), 2,82 (ddd, J=27,98, 13,93, 3,39 Гц, 1Н), 3,01 (ddd, J=18,85, 14,15, 7,53 Гц, 1H), 3,72-3,76 (m, 4H), 3,76 (s, 3H), 5,75 (s, 2H), 5,84 (d, J=47,93 Гц, 1H), 6,76-6,88 (m, 2H), 7,60 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,36 (s, 1H), 8,64 (d, J=1,88 Гц, 1H), 8,80 (s, 1H). [M+H]=439,1.
Пример 86 получали по методике, аналогичной Примеру 85, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 86. 9-(2-((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)-1-фторэтил)-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,28 (d, J=6,27 Гц, 3Н), 1,33 (d, J=6,40 Гц, 3Н), 2,46-2,70 (m, 2Н), 3,35 (d, J=8,41 Гц, 1Н), 3,44 (d, J=11,80 Гц, 1H), 3,56-3,73 (m, 2H), 3,77 (s, 2H), 3,80-3,90 (m, 1H), 4,12-4,28 (m, 2H), 5,75 (s, 2H), 6,61 (dd, J=48,19, 9,41 Гц, 1H), 6,83 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,60 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,39 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,88 (s, 1H). [M+H]=467,3.
Пример 87. 6-(4-Метоксибензил)-9-(2,2,2-трифтор-1-гидроксиэтил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
2
6-(4-Метоксибензил)-9-(2,2,2-трифтор-1-гидроксиэтил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. 9-Ацетил-6-(4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он (Пример 81, 254 мг, 0,76 ммоль), ТГФ (1,3 мл) и 2 М триметил(трифторметил)силан в ТГФ (0,45 мл, 0,91 ммоль) объединяли и перемешивали в течение 10 минут. Добавляли 2 М раствор фторида тетраметиламмония в ТГФ (75 мкл, 0,08 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 3 дней. Добавляли дополнительное количество триметил(трифторметил)силана (0,45 мл, 0,91 ммоль) и фторида тетраметиламмония (75 мкл, 0,08 ммоль) и смесь перемешивали в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водным бикарбонатом натрия (5 мл) и экстрагировали EtOAc (2×10 мл). Объединенные экстракты концентрировали под вакуумом. В результате очистки (FCC, SiO, от 10 до 100%, EtOAc/гексаны) получали титульное соединение (154 мг, 48%) в виде белого порошка.
1
3
6
Н ЯМР (400 МГц, CDCl + ДМСО-d) δ 3,27 (s, 3Н), 4,80 (q, J=6,90 Гц, 1Н), 5,24 (s, 2Н), 6,33 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 7,05 (d, J=833 Гц, 2Н), 7,91 (s, 1Н), 8,32 (s, 1Н), 8,39 (s, 1H). [М+Н]=406,1.
Пример 88. 6-(4-Метоксибензил)-9-(2,2,2-трифтор-1-морфолиноэтил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
4
Стадия А. 2,2,2-Трифтор-1-(6-(4-метоксибензил)-5-оксо-5,6-дигидропиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-9-ил)этил метансульфонат. Метансульфонилхлорид (49 мкл, 0,63 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору 6-(4-метоксибензил)-9-(2,2,2-трифтор-1-гидроксиэтил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-она (Пример 87, 127 мг, 0,31 ммоль) и TEA (131 мкл, 0,94 ммоль) в ДХМ (1,3 мл) и смесь перемешивали в течение 2 часов. Ее разбавляли ДХМ (10 мл), промывали водным бикарбонатом натрия (5 мл), сушили (MgSO) и концентрировали под вакуумом с получением титульного соединения в виде коричневой смолы, которую использовали неочищенной без дополнительной очистки.
Стадия В. 6-(4-Метоксибензил)-9-(2,2,2-трифтор-1-морфолиноэтил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. К раствору метансульфоната 2,2,2-трифтор-1-(6-(4-метоксибензил)-5-оксо-5,6-дигидропиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-9-ил)этила (со Стадии А) в ДМФА (1 мл) добавляли морфолин (0,10 мл, 1,06 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 70°С в течение 20 ч. Добавляли дополнительное количество морфолина (0,10 мл, 1,06 ммоль) и нагревание продолжали в течение 3 дней. Смесь концентрировали в потоке азота. Остаток смешивали с ДМФА и фильтровали. В результате очистки (ВЭЖХ, 10-80% ACN в воде) получали титульное соединение (39 мг, 20%) в виде белого порошка.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 2,72 (br s, 4Н), 3,74 (q, J=4,02 Гц, 4H), 3,78 (s, 3Н), 4,23 (q, J=8,03 Гц, 1H), 5,76 (s, 2H), 6,85 (d, J=8,66 Гц, 2H), 7,62 (d, J=8,66 Гц, 2H), 8,40 (s, 1H), 8,72 (d, J=2,26 Гц, 1H), 8,82 (d, J=2,26 Гц, 1H). [M+H]=475,2.
Пример 89. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-(трифторметокси)бензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
Стадия А. (((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)-трифторборат калия. К чистому раствору 2,6-диметилморфолина (28,67 г, 0,25 моль) добавляли бромметилен-трифторборат калия- (25 г, 0,125 моль). Полученную суспензию нагревали до 100°С в течение 3 ч и затем охлаждали до 50°С. Добавляли IPA (2×50 мл) и неочищенную смесь охлаждали до 10°С. Медленно добавляли МТВЕ (4×100 мл), через 1 ч отфильтровывали белое твердое вещества, промывали МТВЕ (4×50 мл) и сушили с получением титульного соединения (33,5 г, 85%), которое использовали без дополнительной очистки.
2
3
Стадия В: 2-Амино-5-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)никотинонитрил. Суспензию 2-амино-5-бромникотинонитрил (50 мг, 0,25 ммоль), (((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)-трифторборат калия (219 мг, 0,51 ммоль), CsCO (247 мг, 0,76 ммоль), дициклогексил(2',4',6'-триизопропилбифенил-2-ил)фосфин (36 мг, 0,076 ммоль) и ацетат палладия(II) (8,5 мг, 0,038 ммоль) в диоксане (1 мл) и воду (0,1 мл) продували азотом в течение 10 минут, затем герметизировали и нагревали при 80°С в течение 15 часов. Реакционную смесь фильтровали через ЦЕЛИТ, пока она оставалась горячей, охлаждали до комнатной температуры, и разбавляли водой (10 мл). Полученный осадок фильтровали, промывали водой (10 мл) и гексанами (10 мл) и сушили под вакуумом с получением титульного соединения в виде твердого вещества (57 мг, 92%).
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,03 (d, J=6,3 Гц, 6Н), 1,61 (t, J=10,7 Гц, 2Н), 2,64 (d, J=10,7 Гц, 2Н), 3,45-3,61 (m, 2Н), 6,83 (s, 2Н), 7,74 (d, J=2,3 Гц, 1Н), 8,03-8,19 (m, 1Н).
2
4
2
4
2
Стадия С: Этил-3-циано-5-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридин-2-илкарбамат. Гидрид натрия в минеральном масле (60%, 25 мг, 0,61 ммоль) добавляли к 2-амино-5-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)никотинонитрилу (100 мг, 0,41 ммоль) в ТГФ (2 мл) и смесь перемешивали в течение 5 минут. Добавляли этилхлорформиат (0,05 мл, 0,48 ммоль) с последующим добавлением дополнительного количества гидрида натрия (16 мг, 0,41 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь выливали в насыщенный раствор бикарбоната натрия (10 мл), экстрагировали EtOAc (3×5 мл), сушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток смешивали с метанолом (10 мл) и перемешивали с карбонатом калия (170 мг) в течение 10 минут, затем выливали в насыщенный раствор бикарбоната натрия (10 мл) и экстрагировали EtOAc (3×5 мл). Объединенные органические слои сушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. В результате очистки (FCC, SiO, 0-100%, EtOAc/гексаны) получали титульное соединение в виде белого порошка (104 мг, 80%).
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,04 (d, J=6,27 Гц, 6Н), 1,26 (t, J=7,03 Гц, 3Н), 1,69 (t, J=10,60 Гц, 2Н), 2,67 (d, J=10,67 Гц, 2Н), 3,51 (s, 2Н), 3,54-3,62 (m, 2Н), 4,17 (q, J=7,11 Гц, 2Н), 8,12-8,24 (m, 1H), 8,56 (d, J=2,01 Гц, 1Н), 10,37 (s, 1Н).
Стадия D: 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. Этил-3-циано-5-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридин-2-илкарбамат (35 мг, 0,11 ммоль), формилгидразин (8 мг, 0,13 ммоль) и N-этил N-изопропилпропан-2-амин (0,01 мл, 0,055 ммоль) нагревали в DMA (1 мл) при 125°С в течение 15 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и непосредственно очищали (ВЭЖХ, 10-70% ACN-вода) с получением титульного соединения в виде твердого вещества (29 мг, 84%).
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,04 (d, J=6,15 Гц, 6Н), 1,73 (t, J=10,67 Гц, 2Н), 2,72 (d, J=10,79 Гц, 2Н), 3,53-3,66 (m, 4Н), 8,45 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 12,82 (br s, 1H).
Стадия E: 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-(трифторметокси)бензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он. К смеси 9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-она (50 мг, 0,16 ммоль) и 4-(трифторметокси)бензил бромида (49 мг, 0,19 ммоль) в ДМФА (2 мл) добавляли карбонат калия (44 мг, 0,32 ммоль). Полученную смесь нагревали при 55°С в течение ночи. Неочищенную смесь фильтровали затем непосредственно очищали (ВЭЖХ, 10-70% ACN-вода) с получением титульного соединения (58 мг, 61%) в виде белого твердого вещества.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,14 (d, J=6,15 Гц, 6Н), 2,63-2,85 (m, 2Н), 3,26-3,45 (m, 2Н), 3,72-3,86 (m, 2Н), 4,40-4,62 (m, 2Н), 5,70 (s, 2Н), 7,32 (d, J=8,28 Гц, 2Н), 7,59 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 8,69 (s, 1H), 8,84 (s, 1Н), 8,89 (br s, 1Н). [М+Н]=489,2.
Примеры 90-120 выполняли по методике, аналогичной Примеру 89, Стадии В-Е, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 90. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-фтор-3-метилбензил)пиридо [3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5 (6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,13 (d, J=6,02 Гц, 6Н), 2,19 (s, 3Н), 2,59-2,85 (m, 2Н), 3,16-3,51 (m, 2Н), 3,71-3,85 (m, 2Н), 4,38-4,68 (m, 2Н), 5,62 (s, 2Н), 7,07 (t, J=9,16 Гц, 1Н), 7,26-7,32 (m, 1Н), 7,34-7,40 (m, 1Н), 8,69 (s, 1H), 8,77-8,92 (m, 2Н). [М+Н]=437,2.
Пример 91. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-фторбензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,14 (d, J=6,27 Гц, 6Н), 2,65-2,86 (m, 2Н), 3,29-3,47 (m, 2Н), 3,72-3,86 (m, 2Н), 4,47-4,63 (m, 2Н), 5,66 (s, 2Н), 7,15 (t, J=8,85 Гц, 2Н), 7,51 (dd, J=8,47, 5,58 Гц, 2Н), 8,69 (s, 1Н), 8,81-8,86 (m, 1Н), 8,87-8,92 (m, 1Н). [М+Н]=423,2.
Пример 92. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(3-фтор-4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,14 (d, J=6,27 Гц, 6Н), 2,68-2,83 (m, 2Н), 3,31-3,43 (m, 2Н), 3,74-3,84 (m, 5Н), 4,49-4,61 (m, 2Н), 5,61 (s, 2Н), 7,11 (t, J=8,72 Гц, 1Н), 7,21-7,36 (m, 2Н), 8,69 (s, 1H), 8,83-8,86 (m, 1Н), 8,87-8,91 (m, 1H). [М+Н]=453,2.
Пример 93. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(2-фтор-4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 1,14 (d, J=6,27 Гц, 6Н), 2,67-2,84 (m, 2Н), 3,30-3,43 (m, 2Н), 3,75 (s, 3Н), 3,76-3,84 (m, 2Н), 4,47-4,59 (m, 2Н), 5,64 (s, 2Н), 6,65 (dd, J=8,66, 2,38 Гц, 1Н), 6,88 (dd, J=12,36, 2,45 Гц, 1H), 7,23 (t, J=8,91 Гц, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,80-8,85 (m, 1H), 8,87-8,93 (m, 1H). [M+H]=453,2.
Пример 94. 6-(3-Бром-4-фторбензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,89 (d, J=1,63 Гц, 1Н), 8,72 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,86 (d, J=6,40 Гц, 1H), 7,54-7,65 (m, 1H), 7,06 (t, J=8,41 Гц, 1H), 5,73 (s, 2H), 4,33 (s, 2H), 3,91-4,08 (m, 2H), 3,47 (d, J=11,54 Гц, 2H), 2,46 (t, J=11,11 Гц, 2H), 1,24 (d, J=6,27 Гц, 6H). [M+H]=501,10.
Пример 95. 4-((9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-5-оксопиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-6(5Н)-ил)метил)бензонитрил.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,90 (d, J=2,38 Гц, 1H), 8,73 (d, J=2,26 Гц, 1H), 8,44 (s, 1Н), 7,71-7,77 (m, 2Н), 7,61-7,67 (m, 2Н), 5,85 (s, 2Н), 4,32 (s, 2Н), 3,96-4,08 (m, 2Н), 3,47 (d, J=11,17 Гц, 2H), 2,47 (t, J=11,17 Гц, 2Н), 1,26 (d, J=6,27 Гц, 6Н), [М+Н]=430,20.
Пример 96. 6-(4-(трет-бутил)бензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,89 (d, J=2,26 Гц, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,68 (d, J=2,26 Гц, 1Н), 7,57 (d, J=8,41 Гц, 2H), 7,31-7,39 (m, 2H), 5,78 (s, 2H), 4,31 (s, 2H), 3,94-4,08 (m, 2H), 3,44 (d, J=11,04 Гц, 2H), 2,43 (t, J=11,11 Гц, 3Н), 1,28 (s, 9H), 1,24 (d, J=6,40 Гц, 6H). [M+H]=461,30.
Пример 97. 3-((9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-5-оксопиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-6(5Н)-ил)метил)бензонитрил.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,25 (d, J=6,27 Гц, 6H), 2,52 (t, J=11,23 Гц, 2H), 3,54 (d, J=11,42 Гц, 2H), 3,93-4,04 (m, 2H), 4,38 (s, 2H), 4,77 (s, 1H), 5,31 (s, 1H), 7,43-7,50 (m, 1H), 7,57-7,61 (m, 2H), 7,89 (d, J=1,38 Гц, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,79 (d, J=2,38 Гц, 1H), 8,87 (d, J=2,38 Гц, 1H). [M+H]=430,17.
Пример 98. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-(метилсульфонил)бензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,26 (d, J=6,40 Гц, 6H), 2,50 (t, J=11,17 Гц, 2Н), 3,04 (s, 3Н), 3,51 (d, J=11,04 Гц, 2Н), 3,96-4,07 (m, 2Н), 4,35 (s, 2Н), 5,88 (s, 2Н), 7,80 (d, J=8,41 Гц, 2Н), 7,91 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 8,44 (s, 1Н), 8,76 (d, J=2,38 Гц, 1Н), 8,88 (d, J=2,38 Гц, 1Н). [М+Н]=483,20.
Пример 99. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(2-метилбензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,15 (d, J=6,40 Гц, 6Н), 1,84 (t, J=10,67 Гц, 2Н), 2,60 (s, 3Н), 2,69 (d, J=10,29 Гц, 2Н), 3,60 (s, 2Н) 3,65-3,74 (m, 2Н), 5,80 (s, 2Н), 6,93 (d, J=7,65 Гц, 1Н), 7,04 (t, J=7,59 Гц, 1H), 7,13-7,18 (m, 1H), 7,20-7,24 (m, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,64 (dd, J=10,35, 2,20 Гц, 2H). [M+H]=419,81.
Пример 100. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(3-йодбензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,86 (d, J=2,4 Гц, 1H), 8,75 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,95 (t, J=1,6 Гц, 1H), 7,64-7,55 (m, 2H), 7,05 (t, J=7,8 Гц, 1H), 5,73 (s, 2H), 4,37 (s, 2H), 4,04-3,93 (m, 2H), 3,52 (d, J=11,2 Гц, 2H), 2,48 (t, J=11,2 Гц, 2H), 1,25 (d, J=6,4 Гц,6Н). [M+H]=531,01.
Пример 101. 6-(3,5-Дифторбензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,27 (d, J=6,40 Гц, 6H), 2,48 (t, J=11,23 Гц, 2H), 3,49 (d, J=11,04 Гц, 2H), 3,97-4,09 (m, 2Н), 4,35 (s, 2Н), 5,77 (s, 2Н), 6,71-6,81 (m, 1Н), 7,09-7,18 (m, 2H), 8,44 (s, 1H), 8,76 (d, J=2,38 Гц, 1H), 8,88 (d, J=2,26 Гц, 1H). [M+H]=441,20.
Пример 102. 6-(2-Бром-4-метоксибензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,25 (d, J=6,27 Гц, 6Н), 2,42 (t, J=11,11 Гц, 2Н), 3,42 (d, J=11,04 Гц, 2Н), 3,79 (s, 3Н), 3,99-4,08 (m, 2Н), 4,28 (s, 2Н), 5,84 (s, 2Н), 6,70-6,77 (m, 1H), 6,89 (d, J=8,66 Гц, 1Н), 7,20 (d, J=2,51 Гц, 1H), 8,46 (s, 1H), 8,74-8,81 (m, 2H). [M+H]=514,10.
Пример 103. 6-(2,6-Дифтор-4-метоксибензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,24 (d, J=6,27 Гц, 6Н), 2,39 (t, J=11,11 Гц, 2Н), 3,07-3,15 (m, 1H), 3,36 (d, J=11,29 Гц, 2H), 3,52 (s, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,90 (s, 1H), 3,95-4,07 (m, 2H), 4,24 (s, 2H), 5,84 (s, 2H), 6,36-6,47 (m, 2H), 6,62-6,70 (m, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,71 (d, J=2,26 Гц, 1H), 8,79 (d, J=2,26 Гц, 1H). [M+H]=471,20.
Пример 104. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-((1-метил-1Н-индазол-6-ил)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,93 (d, J=2,4 Гц, 1H), 8,68 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,94 (d, J=0,8 Гц, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,66 (d, J=8,8 Гц, 1H), 7,45 (dd, J=1,3, 8,4 Гц, 1H), 5.95 (s, 2H), 4,30 (s, 2H), 4,07 (s, 3H), 4,01 (dd, J=6,4, 8,9 Гц, 2H), 3,43 (d, J=11,3 Гц, 2H), 2,42 (t, J=11,2 Гц, 2H), 1,23 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=459,20.
Пример 105. 6-(4-(1Н-Пиразол-1-ил)бензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,92 (d, J=2,4 Гц, 1H), 8,72 (d, J=2,4 Гц, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,91 (d, J=2,3 Гц, 1H), 7,78-7,74 (m, 2H), 7,73 (d, J=1,5 Гц, 1H), 7,68-7,60 (m, 2H), 6,50-6,44 (m, 1H), 5,84 (s, 2H), 4,33 (s, 2H), 4,13-3,92 (m, 2H), 3,46 (d, J=11,0 Гц, 3Н), 2,45 (t, J=11,2 Гц, 3Н), 1,25 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=471,20.
Пример 106. 6-(4-(Дифторметокси)-2-фторбензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,68 (d, J=2,1 Гц, 1H), 8,63 (d, J=2,0 Гц, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,24 (t, J=8,4 Гц, 1H), 6,83-6,71 (m, 2H), 6,60-6,18 (m, 1H), 5,75 (s, 2H), 3,99 (br s, 2H), 3,83 (dd, J=6,5, 8,7 Гц, 2H), 3,10 (d, J=10,4 Гц, 2H), 2,16 (t, J=10,7 Гц, 2H), 1,12 (d, J=6,4 Гц, 6Н). [M+H]=489,16.
Пример 107. 6-(3,5-Дифтор-4-метоксибензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,81 (d, J=1,8 Гц, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,24-7,15 (m, 2H), 5,69 (s, 2H), 3,99 (br s, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,93-3,83 (m, 2H), 3,71 (s, 1H), 2,23-2,13 (m, 1H), 1,44 (s, 1H), 1,20 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=471,11.
Пример 108. 6-(2,3-Дифтор-4-метоксибензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDOD) δ 1,20 (d, J=6,27 Гц, 6H), 2,25-2,54 (m, 2H), 3,10-3,22 (m, 2H), 3,74-3,83 (m, 2H), 3,86 (s, 3Н), 4,05-4,30 (m, 2H), 5,83 (s, 2H), 6,77-6,86 (m, 1H), 7,03-7,12 (m, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,82 (s, 2H). [M+H]=471,20.
Пример 109. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(2-((трифторметил)тио)бензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,56 (d, J=2,1 Гц, 1H), 8,52 (d, J=2,1 Гц, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,69 (d, J=7,3 Гц, 1H), 7,30-7,21 (m, 2H), 7,14 (dd, J=1,6, 7,5 Гц, 1H), 6,03 (s, 2H), 3,67-3,55 (m, 2H), 3,50 (s, 2H), 2,59 (d, J=10,4 Гц, 2H), 1,75 (t, J=10,7 Гц, 2H), 1,06 (d, J=6,3 Гц, 6Н). [M+H]=505,10.
Пример 110. 6-(3-Хлор-4-фторбензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,64 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,56 (d, J=2,1 Гц, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,63 (dd, J=2,1, 7,0 Гц, 1H), 7,47 (ddd, J=2,3, 4,6, 8,5 Гц, 1H), 6,99 (t, J=8,7 Гц, 1H), 5,65 (s, 2H), 3,66-3,57 (m, 2H), 3,54 (s, 2H), 2,61 (d, J=10,3 Гц, 2H), 1,78 (t, J=10,7 Гц, 2H), 1,07 (d, J=6,3 Гц, 6Н). [M+H]=457,09.
Пример 111. 6-(3,4-Дихлорбензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,63 (d, J=2,1 Гц, 1H), 8,56 (d, J=2,1 Гц, 1H), 8,30 (s, 1H), 7,64 (d, J=2,0 Гц, 1H), 7,41 (dd, J=2,0, 8,3 Гц, 1H), 7,30 (d, J=8,3 Гц, 1H), 5,65 (s, 2H), 3,66-3,57 (m, 2H), 3,54 (s, 2H), 2,61 (d, J=10,4 Гц, 2H), 1,78 (t, J=10,6 Гц, 2H), 1,07 (d, J=6,3 Гц, 6Н). [M+H]=473,04.
Пример 112. 6-(2-Хлор-4-метоксибензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,26 (d, J=6,27 Гц, 6H), 2,45 (t, J=11,23 Гц, 2H), 3,47 (d, J=11,17 Гц, 2H), 3,79 (s, 3Н), 4,00-4,08 (m, 2Н), 4,32 (s, 2Н), 5,86 (s, 2Н), 6,70 (dd, J=8,72, 2,57 Гц, 1H), 6,95-7,01 (m, 2H), 8,45 (s, 1H), 8,77 (d, J=1,63 Гц, 2H). [M+H]=469,20.
Пример 113. 6-(2-(Дифторметокси)бензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,59-8,52 (m, 2Н), 8,30 (s, 1Н), 7,21 (s, 1H), 7,09 (d, J=7,9 Гц, 2H), 7,03-6,97 (m, 1H), 6,82-6,39 (m, 1H), 5,80 (s, 2H), 3,64-3,56 (m, 2H), 3,52 (s, 2H), 2,60 (d, J=10,5 Гц, 2H), 1,76 (t, J=10,7 Гц, 2H), 1,06 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=471,16.
Пример 114. 6-(4-Хлор-3-фторбензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,72 (d, J=2,3 Гц, 1Н), 8,65 (d, J=2,1 Гц, 1H), 8,38 (s, 1H), 7,46 - 7,31 (m, 3H), 5,76 (s, 2H), 3,76-3,67 (m, 2H), 3,63 (s, 2H), 2,70 (d, J=10,3 Гц, 2H), 1,87 (t, J=10,7 Гц, 2H), 1,15 (d, J=6,4 Гц, 6H). [M+H]=457,11.
Пример 115. 6-(3-Хлор-5-фторбензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,72 (d, J=2,3 Гц, 1Н), 8,66 (d, J=2,1 Гц, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,26-7,21 (m, 1H), 7,04-6,99 (m, 1H), 5,75 (s, 2H), 3,75-3,67 (m, 2H), 3,64 (s, 2H), 2,71 (d, J=10,4 Гц, 2H), 1,87 (t, J=10,7 Гц, 2H), 1,16 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=457,10.
Пример 116. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-(2-оксопирролидин-1-ил)бензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,86 (d, J=2,1 Гц, 1H), 8,72 (d, J=2,1 Гц, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,61 (d, J=8,7 Гц, 2H), 7,50 (d, J=8,8 Гц, 2H), 5,75 (s, 2H), 4,35 (s, 2H), 3,99 (dd, J=6,3, 9,2 Гц, 2H), 3,83 (t, J=7,1 Гц, 2H), 3,47 (d, J=11,3 Гц, 2H), 2,60 (t, J=8,1 Гц, 2H), 2,49 (t, J=11,2 Гц, 2H), 2,15 (quin, J=7,6 Гц, 2H), 1,23 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=488,17.
Пример 117. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-этоксибензил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,90 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,67 (d, J=2,4 Гц, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,59 (d, J=8,7 Гц, 2H), 6,87-6,77 (m, 2H), 5,73 (s, 2H), 4,28 (s, 2H), 4,06-3,93 (m, 4H), 3,40 (d, J=11,2 Гц, 2H), 2,40 (t, J=11,2 Гц, 2H), 1,37 (t, J=7,0 Гц, 3Н), 1,23 (d, J=6,4 Гц, 6H). [M+H]=449,20.
Пример 118. 6-(3,4-Дифторбензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5 (6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,79 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,54-7,45 (m, 1H), 7,41 (d, J=6,3 Гц, 1H), 7,14-7,05 (m, 1H), 5,74 (s, 2H), 3,93-3,77 (m, 4H), 2,99 (d, J=8,9 Гц, 2H), 2,15-2,03 (m, 2H), 1,19 (d, J=6,1 Гц, 6H). [M+H]=441,14.
Пример 119. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-(метилтио)бензил)пиридо [3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,72 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,57 (d, J=8,0 Гц, 2H), 7,19 (d, J=8,0 Гц, 2H), 5,76 (s, 2H), 3,75-3,67 (m, 2H), 3,63 (s, 2H), 2,71 (d, J=10,9 Гц, 2H), 2,44 (s, 3H), 1,87 (t, J=10,5 Гц, 2H), 1,15 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=451,13.
Пример 120. 6-(2-Хлор-4-(метилсульфонил)бензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,25 (d, J=6,15 Гц, 6Н), 2,46 (t, J=11,17 Гц, 2Н), 3,06 (s, 3Н), 3,44-3,49 (m, 2Н), 3,93-4,05 (m, 3Н), 4,30 (s, 2Н), 5,94 (s, 2Н), 7,14 (d, J=8,28 Гц, 1Н), 7,70 (d, J=8,16 Гц, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,82 (s, 1H). [M+H]=517,10.
Пример 121 получали по методике, аналогичной Примеру 1, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 121. 6-(4-Метоксибензил)-8-(феноксиметил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 3,69 (s, 3Н) 5,28 (s, 2Н), 5,67 (s, 2Н), 6,75 (d, J=8,53 Гц, 2Н), 6,93 (d, J=8,53 Гц, 3Н), 7,24 (s, 2Н), 7,53 (d, J=8,78 Гц, 3Н), 8,27 (s, 1Н), 8,51-8,61 (m, 1H). [M+H]=308,1.
Примеры 122 через 123 выполняли по методике, аналогичной Примеру 72, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 122. 6-(2,3-Дифтор-4-метоксибензил)-9-((4-изопропилпиперазин-1-ил)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,70 (s, 2Н), 8,45-8,31 (m, 1Н), 7,13-6,99 (m, 1H), 6,71-6,55 (m, 1H), 5,81 (s, 2H), 3,95 (s, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,61-3,41 (m, 3H), 3,16 (s, 6H), 1,45-1,31 (m, 6H). [M+H]=484,35.
Пример 123. 6-(2,3-Дифтор-4-метоксибензил)-9-(пиперидин-1-илметил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,90-8,72 (m, J=2,3, 18,7 Гц, 2Н), 8,38 (s, 1H), 7,15-7,02 (m, 1H), 6,70-6,59 (m, 1H), 5,80 (s, 2H), 4,37 (s, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,73-3,60 (m, 2H), 2,73 (br s, 2H), 2,10-1,81 (m, 5H), 1,43 (br s, 1H). [M+H]=441,28.
Примеры 124 через 161 выполняли по методике, аналогичной Примеру 89, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 124. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(2,4,5-трифторбензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,79 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,74 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,18 (ddd, J=6,8, 8,6, 10,3 Гц, 1H), 6,95 (dt, J=6,5, 9,7 Гц, 1H), 5,79 (s, 2H), 4,20 (s, 2H), 4,03-3,91 (m, 2H), 3,31 (d, J=11,3 Гц, 2H), 2,34 (t, J=11,1 Гц, 2H), 1,22 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=459,14.
Пример 125. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-изопропилбензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,85 (d, J=1,9 Гц, 1H), 8,66 (d, J=1,9 Гц, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,56 (d, J=8,2 Гц, 2H), 7,17 (d, J=8,2Hz, 2H), 5,78 (s, 2H), 4,10 (br s, 2H), 3,93 (dd, J=6,5, 8,9 Гц, 2H), 3,21 (d, J=10,9 Гц, 2H), 2,86 (quin, J=6,9 Гц, 1H), 2,32-2,18 (m, 2H), 1,23-1,17 (m, 12H). [M+H]=447,2.
Пример 126. 6-(4-(Дифторметокси)бензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,87 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,68 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,38 (s, 1Н), 7,69-7,62 (m, 2Н), 7,05 (d, J=8,7 Гц, 2Н), 6,68-6,26 (m, 1Н), 5,77 (s, 2H), 4,20 (s, 2H), 4,02-3,91 (m, 2H), 3,32 (d, J=11,3 Гц, 2H), 2,35 (t, J=11,0 Гц, 2H), 1,22 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=471,16.
Пример 127. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-этокси-3,5-дифторбензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,85 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,72 (d, J=2,3 Гц, 1Н), 8,39 (s, 1H), 7,23-7,14 (m, 2Н), 5,68 (s, 2Н), 4,23-4,12 (m, 4Н), 4,02-3,91 (m, 2Н), 3,31 (d, J=11,2 Гц, 2Н), 2,35 (t, J=11,0 Гц, 2Н), 1,35 (t, J=7,0 Гц, 3Н), 1,22 (d, J=6,3 Гц, 6Н). [М+Н]=485,19.
Пример 128. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-этинилбензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,70 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 8,63 (d, J=2,3 Гц, 1Н), 8,38 (s, 1H), 7,57 (d, J=8,3 Гц, 2Н), 7,43 (d, J=8,3, Гц, 2Н), 5,79 (s, 2Н), 3,75-3,65 (m, 3Н), 3,62 (s, 2Н), 2,69 (d, J=10,3 Гц, 2Н), 1,85 (t, J=10,7 Гц, 2Н), 1,15 (d, J=6,3 Гц, 6Н). [М+Н]=429,17.
Пример 129. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-йодбензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,87 (d, J=2,4 Гц, 1H), 8,71 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,67-7,62 (m, 2H), 7,37 (d, J=8,4 Гц, 2H), 5,73 (s, 2H), 4,33 (s, 2H), 4,06-3,95 (m, 2H), 3,47 (d, J=11,2 Гц, 2H), 2,46 (t, J=11,2 Гц, 2H), 1,24 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=531,07.
Пример 130. 6-(3,4-Диметоксибензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,93 (d, J=2,3 Гц, 1Н), 8,70 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,29 (d, J=1,9 Гц, 1H), 7,25 (dd, J=1,9, 8,2 Гц, 1H), 6,79 (d, J=8,3 Гц, 1H), 5,75 (s, 2H), 5,32 (s, 1H), 4,36 (s, 2H), 4,07-3,96 (m, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,84 (s, 3H), 3,50 (d, J=11,4 Гц, 2H), 2,48 (t, J=11,2 Гц, 2H), 1,25 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=465,2.
Пример 131. 6-(3-Хлор-5-фтор-4-метоксибензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,87 (d, J=2,3 Гц, 1Н), 8,75 (d, J=2,1 Гц, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,43 (t, J=1,8 Гц, 1H), 7,31 (dd, J=2,1, 11,3 Гц, 1H), 5,68 (s, 2H), 4,35 (s, 2H), 4,04-3,95 (m, 2H), 3,92 (d, J=1,5 Гц, 3Н), 3,50 (d, J=11,3 Гц, 2H), 2,48 (t, J=11,2 Гц, 2H), 1,25 (d, J=6,3 Гц, 6Н). [M+H]=487,13.
Пример 132. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-метокси-3-метилбензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,90 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,69 (d, J=2,3 Гц, 1Н), 8,39 (s, 1H), 7,50-7,41 (m, 2H), 6,74 (d, J=8,4 Гц, 1H), 5,71 (s, 2H), 4,34 (s, 2H), 4,06-3,96 (m, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,48 (d, J=11,4 Гц, 2H), 2,46 (t, J=11,2 Гц, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,24 (d, J=6,4 Гц, 6H). [M+H]=449,2.
Пример 133. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(3-метоксибензил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,24 (d, J=6,27 Гц, 6Н), 2,43 (t, J=11,17 Гц, 2Н), 3,44 (d, J=11,29 Гц, 2Н), 3,80 (s, 3Н), 3,97-4,08 (m, 2Н), 4,31 (s, 2Н), 5,79 (s, 2Н), 6,81-6,86 (m, 1H), 7,16-7,27 (m, 3Н), 8,41 (s, 1H), 8,70 (d, J=2,38 Гц, 1H), 8,88 (d, J=2,26 Гц, 1H). [M+H]=435,1.
Пример 134. 6-(2,5-Дифторбензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,24 (d, J=6,40 Гц, 6Н), 2,43 (t, J=11,17 Гц, 2Н), 3,43 (d, J=11,17 Гц, 2Н), 3,98-4,07 (m, 2Н), 4,30 (s, 2Н), 5,85 (s, 2Н), 6,92-6,99 (m, 2Н), 7,02-7,10 (m, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,76 (s, 1H), 8,80 (s, 1H). [M+H]=441,1.
Пример 135. 6-(2,4-Дифторбензил)-9-(((2R,6S)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,24 (d, J=6,27 Гц, 6Н), 2,43 (t, J=11,17 Гц, 2Н), 3,43 (d, J=11,29 Гц, 2Н), 3,96-4,08 (m, 2Н), 4,29 (s, 2Н), 5,84 (s, 2Н), 6,78-6,88 (m, 2Н), 7,32-7,41 (m, 1Н), 8,43 (s, 1Н), 8,74 (s, 1Н), 8,81 (s, 1H). [М+Н]=441,1.
Пример 136. 9-(((2R,6S)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-(трифторметил)бензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,24 (d, J=6,27 Гц, 6Н), 2,44 (t, J=11,17 Гц, 2Н), 3,44 (d, J=11,17 Гц, 2Н), 3,97-4,08 (m, 2Н), 4,30 (s, 2Н), 5,85 (s, 2Н), 7,59 (d,J=8,16 Гц, 2Н), 7,74 (d, J=8,16 Гц, 2Н), 8,42 (s, 1H), 8,70-8,73 (m, 1Н), 8,88-8,90 (m, 1Н). [М+Н]=473,1.
Пример 137. 9-(((2R,6S)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-фтор-3-метоксибензил)пиридо [3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,89 (d, J=2,4 Гц, 1H), 8,68 (d, J=2,4 Гц, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,36 (dd, J=2,0, 8,2 Гц, 1H), 7,20 (ddd, J=2,1, 4,3, 8,3 Гц, 1H), 6,98 (dd, J=8,3, 11,1 Гц, 1H), 5,74 (s, 2H), 4,21 (s, 2H), 4,01-3,91 (m, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,32 (d, J=11,2 Гц, 2H), 2,35 (t, J=11,1 Гц, 2H), 1,22 (d, J=6,4 Гц, 6H). [M+H]=453,14.
Пример 138. 9-(((2R,6S)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(2-фтор-4-метилбензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,65 (dd, J=2,2, 10,6 Гц, 2Н), 8,39 (s, 1H), 7,13 (t, J=7,9 Гц, 1Н), 6,92-6,81 (m, 2H), 5,84 (s, 2H), 3,75-3,65 (m, 2H), 3,61 (s, 2H), 2,70 (d, J=10,5 Гц, 2H), 2,30 (s, 3Н), 1,85 (t, J=10,7 Гц, 2H), 1,15 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=437,15.
Пример 139. 6-(2-Хлор-4,5-дифторбензил)-9-(((2R,6S)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,69 (d, J=2,1 Гц, 1H), 8,63 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,30 (dd, J=7,2, 9,7 Гц, 1H), 6,80 (dd, J=8,1, 10,7 Гц, 1H), 5,82 (s, 2H), 3,75-3,65 (m, 2H), 3,62 (s, 2H), 2,70 (d, J=10,4 Гц, 2H), 1,86 (t, J=10,7 Гц, 2H), 1,15 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=475,12.
Пример 140. 6-(3-Хлор-2,4-дифторбензил)-9-(((2R,6S)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,69-8,64 (m, 2Н), 8,39 (s, 1Н), 7,23 (dt, J=6,0, 8,3 Гц, 1H), 6,88 (dt, J=1,9, 8,5 Гц, 1H), 5,85 (s, 2H), 3,75-3,65 (m, 2H), 3,62 (s, 2H), 2,69 (d, J=10,3 Гц, 2H), 1,86 (t, J=10,7 Гц, 2H), 1,15 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=475,09.
Пример 141. 9-(((2R,6S)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(3,4,5-триметоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,74 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 8,63 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,37 (s, 1H), 6,99 (s, 2H), 5,73 (s, 2H), 3,84 (s, 6H), 3,80 (s, 3H), 3,75-3,67 (m, 2H), 3,64 (s, 2H), 2,70 (d, J=10,7 Гц, 2H), 1,86 (t, J=10,7 Гц, 2H), 1,15 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=495,2.
Пример 142. 6-(2,4-дихлорбензил)-9-(((2R,6S)-2,6-Диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,80 (d, J=1,9 Гц, 1H), 8,73 (d, J=2,0 Гц, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,46 (d, J=2,1 Гц, 1H), 7,11 (dd, J=2,1, 8,4 Гц, 1H), 6,91 (d, J=8,4 Гц, 1H), 5,84 (s, 2H), 4,34 (s, 2H), 4,04-3,94 (m, 2H), 3,50 (d, J=11,2 Гц, 2H), 2,47 (t, J=11,2 Гц, 2H), 1,24 (d, J=6,3 Гц, 6Н). [M+H]=473,13.
Пример 143. 6-(2,4-Дихлор-5-фторбензил)-9-(((2R,6S)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,69 (d, J=2,3 Гц, 1Н), 8,62 (d, J=2,1 Гц, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,51 (d, J=6,5 Гц, 1H), 6,74 (d, J=9,4 Гц, 1H), 5,82 (s, 2H), 3,75-3,66 (m, 2H), 3,63 (s, 2H), 2,71 (d, J=10,8 Гц, 2H), 1,87 (t, J=10,6 Гц, 2H), 1,15 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=491,13.
Пример 144. 6-(2-Хлор-4-фторбензил)-9-(((2R,6S)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,67 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 8,63 (d, J=2,1 Гц, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,19 (dd, J=2,6, 8,3 Гц, 1H), 6,95 (dd, J=5,8, 8,7 Гц, 1H), 6,87-6,80 (m, 1H), 5,86 (s, 2H), 3,75-3,65 (m, 2H), 3,62 (s, 2H), 2,69 (d, J=10,5 Гц, 2H), 1,86 (t, J=10,7 Гц, 2H), 1,15 (d, J=6,4 Гц, 6Н). [M+H]=457,1.
Пример 145. 6-(4-Хлор-2-фторбензил)-9-(((2R,6S)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,66 (q, J=2,1 Гц, 2Н), 8,40 (s, 1H), 7,22 (t, J=8,2 Гц, 1H), 7,11 (dd, J=2,0, 9,8 Гц, 1H), 7,03 (dd, J=1,4, 8,3 Гц, 1H), 5,83 (s, 2H), 3,79-3,66 (m, 4H), 2,78 (d, J=10,4 Гц, 2H), 1,92 (t, J=10,4 Гц, 2H), 1,16 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=457,15.
Пример 146. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(2,3,5,6-тетрафтор-4-метоксибензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,69 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 8,61 (s, 1H), 8,55 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 5,75 (s, 2Н), 4,02 (s, 3Н), 3,65 (s, 2Н), 3,62-3,52 (m, 2Н), 2,71 (d, J=10,5 Гц, 2Н), 1,73 (t, J=10,7 Гц, 2Н), 1,02 (d, J=6,3 Гц, 6Н). [М+Н]=507,17.
Пример 147. 6-(4-Хлор-2,6-дифторбензил)-9-(((2S,6R)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,60 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 8,55 (s, 1Н), 8,47 (d, J=2,3 Гц, 1Н), 7,28-7,21 (m, 2Н), 5,64 (s, 2Н), 3,57 (s, 2Н), 3,55-3,45 (m, 2Н), 2,63 (d, J=10,2 Гц, 2Н), 1,66 (t, J=10,7 Гц, 2Н), 0,95 (d, J=6,3 Гц, 6Н). [М+Н]=475,14.
Пример 148. 9-(((2R,6S)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-фтор-3,5-диметилбензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,89 (d, J=2,3 Гц, 1Н), 8,70 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,29-7,24 (m, 2H), 5,68 (s, 2H), 4,33 (s, 2H), 4,06-3,96 (m, 2H), 3,47 (d, J=11,2 Гц, 2H), 2,46 (t, J=11,2 Гц, 2H), 2,20 (d, J=2,0 Гц, 6H), 1,24 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=451,22.
Пример 149. 9-(((2R,6S)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(2,3,4-трифторбензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,17 (d,J=6,27 Гц, 6Н), 1,88 (t, J=10,67 Гц, 2Н), 2,71 (d, J=10,42 Гц, 2Н), 3,65 (s, 2Н), 3,68-3,77 (m, 2Н), 5,72 (s, 2Н), 7,29-7,36 (m, 2Н), 8,40 (s, 1H), 8,67 (d, J=2,26 Гц, 1H), 8,73 (d, J=2,13 Гц, 1Н). [М+Н]=459,2.
Пример 150. 6-(2,3-дихлорбензил)-9-(((2R,6S)-2,6-Диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,15 (d, J=6,40 Гц, 6Н), 1,86 (t, J=10,67 Гц, 2Н), 2,69 (d, J=10,29 Гц, 2Н), 3,62 (s, 2Н), 3,66-3,75 (m, 2Н), 5,91 (s, 2Н), 6,79 (d, J=7,78 Гц, 1H), 7,06 (t, J=7,97 Гц, 1Н), 7,40 (dd, J=7,97, 1,19 Гц, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,62 (d, J=2,13 Гц, 1H), 8,68 (d, J=2,26 Гц, 1H). [M+H]=474,2.
Пример 151. 6-(2,3-Дифтор-4-метилбензил)-9-(((2R,6S)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,16 (d, J=6,27 Гц, 6Н), 1,86 (t, J=10,67 Гц, 2Н), 2,27 (s, 3Н), 2,70 (d, J=10,29 Гц, 2Н), 3,62 (s, 2Н), 3,66-3,76 (m, 2Н), 5,87 (s, 2Н), 6,78-6,85 (m, 1H), 6,89-6,96 (m, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,66 (d, J=6,65 Гц, 2H). [M+H]=455,2.
Пример 152. 6-(4-Хлор-3-(трифторметокси)бензил)-9-(((2R,6S)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 1,16 (d, J=6,40 Гц, 6Н), 1,86 (t, J=10,67 Гц, 2Н), 2,69 (d, J=10,29 Гц, 2Н), 3,64 (s, 2Н), 3,67-3,76 (m, 2Н), 5,78 (s, 2Н), 7,41 (d, J=8,28 Гц, 1Н), 7,57 (dd, J=8,28, 1,88 Гц, 1Н), 7,72 (s, 1Н), 8,39 (s, 1Н), 8,65 (d, J=2,26 Гц, 1H), 8,72 (d, J=2,13 Гц, 1H). [М+Н]=523,2.
Пример 153. 6-(3,5-Диметоксибензил)-9-(((2R,6S)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,86 (d, J=2,4 Гц, 1Н), 8,74 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,39 (s, 1H), 6,72 (d, J=2,3 Гц, 2H), 6,36 (t, J=2,3 Гц, 1H), 5,72 (s, 2H), 4,37 (s, 2H), 4,04-3,95 (m, 2H), 3,75 (s, 6H), 3,50 (d, J=11,2 Гц, 2H), 2,48 (t, J=11,2 Гц, 2H), 1,24 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=465,21.
Пример 154. 6-(3-Хлор-4-этокси-5-фторбензил)-9-(((2R,6S)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,88 (d, J=2,4 Гц, 1Н), 8,75 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,42 (t, J=1,8 Гц, 1H), 7,30 (dd, J=2,1, 11,1 Гц, 1H), 5,68 (s, 2H), 4,34 (s, 2H), 4,17-4,08 (m, 2H), 4,05-3,96 (m, 2H), 3,47 (d, J=11,3 Гц, 2H), 2,47 (t, J=11,2 Гц, 2H), 1,37 (t, J=7,0 Гц, 3Н), 1,24 (d, J=6,4 Гц, 6H). [M+H]=501,16.
Пример 155. 9-(((2R,6S)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(4-этокси-2,3-дифторбензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,81 (d, J=2,4 Гц, 1H), 8,77 (d, J=2,4 Гц, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,09-7,02 (m, 1H), 6,67-6,60 (m, 1H), 5,81 (s, 2H), 4,35 (s, 2H), 4,07 (q, J=7,0 Гц, 2H), 4,03-3,95 (m, 2H), 3,50 (d, J=11,2 Гц, 2H), 2,49 (t, J=11,2 Гц, 2H), 1,42 (t, J=7,0 Гц, 3Н), 1,24 (d, J=6,3 Гц, 6Н). [M+H]=485,16.
Пример 156. 9-(((2R,6S)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(3,4,5-трифторбензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,88 (d, J=2,4 Гц, 1Н), 8,78 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,30-7,25 (m, 2H), 5,69 (s, 2H), 4,38 (s, 2H), 4,03-3,94 (m, 2H), 3,50 (d, J=11,2 Гц, 2H), 2,51 (t, J=11,2 Гц, 2H), 1,24 (d, J=6,4 Гц, 6H). [M+H]=459,18.
Пример 157. 6-Бензил-9-(((2R,6S)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,88 (d, J=2,4 Гц, 1Н), 8,75 (d, J=2,3 Гц, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,60 (dd, J=1,4, 7,8 Гц, 2H), 7,33-7,27 (m, 3H), 5,79 (s, 2H), 4,38 (s, 2H), 4,04-3,94 (m, 2H), 3,51 (d, J=11,3 Гц, 2H), 2,50 (t, J=11,2 Гц, 2H), 1,24 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=405,2.
Пример 158. 6-(3,4-Диметилбензил)-9-(((2R,6S)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,88 (d, J=2,3 Гц, 1Н), 8,72 (d, J=2,4 Гц, 1H), 8,38 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,33 (d, J=7,8 Гц, 1H), 7,06 (d, J=7,7 Гц, 1H), 5,73 (s, 2H), 4,36 (s, 2H), 4,07-3,96 (m, 2H), 3,48 (d, J=11,2 Гц, 2H), 2,48 (t, J=11,2 Гц, 2H), 2,21 (d, J=3,9 Гц, 6H), 1,23 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=433,28.
Пример 159. 6-(2,4-Диметилбензил)-9-(((2R,6S)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,77 (q, J=2,3 Гц, 2Н), 8,42 (s, 1H), 7,04 (s, 1Н), 6,84 (d, J=0,9 Гц, 2H), 5,74 (s, 2H), 4,34 (s, 2H), 4,04-3,94 (m, 2H), 3,49 (d, J=11,4 Гц, 2H), 2,54 (s, 3Н), 2,47 (t, J=11,2 Гц, 2H), 2,26 (s, 3Н), 1,23 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=433,26.
Пример 160. 9-(((2S,6R)-2,6-Диметилморфолино)метил)-6-(2,3,5,6-тетрафтор-4-метилбензил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-опе
1
6
Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,68 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 8,62 (s, 1Н), 8,55 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 5,77 (s, 2Н), 3,64 (s, 2Н), 3,61-3,53 (m, 2Н), 2,73-2,67 (m, 2Н), 2,22 (s, 3Н), 1,73 (t, J=10,7 Гц, 2Н), 1,02 (d, J=6,3 Гц, 6Н). [М+Н]=491,21.
Пример 161. 6-(Бензо[d][1,3]диоксол-5-илметил)-9-(((2R,6S)-2,6-диметилморфолино)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,89 (s, 1H), 8,71 (br s, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,19-7,12 (m, 2H), 6,74 (d, J=8,4 Гц, 1H), 5,91 (s, 2H), 5,70 (s, 2H), 4,32 (s, 2H), 4,08-3,96 (m, 2H), 3,71 (s, 2H), 2,44 (t, J=11,2 Гц, 2H), 1,24 (d, J=6,3 Гц, 6H). [M+H]=449,21.
Примеры 162 через 169 выполняли по методике, аналогичной Примеру 72, с соответствующим исходным веществом и замещениями реагентов.
Пример 162. 6-(4-Метоксибензил)-9-(морфолинометил)-[1,2,4]триазоло[1,5-с]птеридин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDOD) δ 8,93 (s, 1Н), 8,66 (s, 1H), 7,52 (d, J=8,78 Гц, 2Н), 6,82-6,88 (m, 2Н), 5,70 (s, 2Н), 4,72 (s, 2Н), 3,96 (br s, 4Н), 3,74 (s, 3Н), 3,37-3,50 (m, 4Н). [М+Н]=408,21.
Пример 163. 6-(4-Метоксибензил)-9-((2-метилморфолино)метил)-[1,2,4]триазоло[1,5-с]птеридин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDOD) δ 8,94 (s, 1Н), 8,65 (s, 1H), 7,51 (d, J=8,78 Гц, 2Н), 6,79-6,89 (m, 2Н), 5,69 (s, 2Н), 4,74 (s, 2Н), 4,10 (dd, J=3,45, 13,36 Гц, 1H), 3,83-3,97 (m, 2Н), 3,73 (s, 3Н), 3,57 (d, J=12,30 Гц, 2Н), 3,21-3,28 (m, 1H), 2,98 (t, J=11,67 Гц, 1Н), 1,23 (d, J=6,27 Гц, 3Н). [М+Н]=422,23.
Пример 164. 6-(4-Метоксибензил)-9-(пиперидин-1-илметил)-[1,2,4]триазоло[1,5-с] птеридин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDOD) δ 8,93 (s, 1Н), 8,65 (s, 1Н), 7,50 (d, J=8,66 Гц, 2Н), 6,84 (d, J=8,78 Гц, 2Н), 5,60-5,74 (m, 2Н), 4,70 (s, 2Н), 3,73 (s, 3Н), 3,66 (d, J=10,29 Гц, 2Н), 3,15 (d, J=11,17 Гц, 2Н), 1,77-2,04 (m, 5Н), 1,59 (br s, 1Н). [М+Н]=406,27.
Пример 165. 6-(4-Метоксибензил)-9-((4-метоксипиперидин-1-ил)метил)-[1,2,4]триазоло[1,5-с]птеридин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDOD) δ 8,92 (s, 1Н), 8,66 (s, 1Н), 7,48-7,55 (m, 2Н), 6,82-6,88 (m, 2Н), 5,70 (s, 2Н), 4,73 (s, 2Н), 3,74 (s, 3Н), 3,62-3,69 (m, 1Н), 3,48 (dd, J=1,63, 3,26 Гц, 3Н), 3,38 (s, 3Н), 2,24-2,38 (m, 1Н), 1,94-2,22 (m, 3Н), 1,77 (br s, 1H). [М+Н]=436,3.
Пример 166. 9-((4-Ацетилпиперазин-1-ил)метил)-6-(4-метоксибензил)-[1,2,4]триазоло[1,5-с]птеридин-5 (6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDOD) δ 8,94 (s, 1Н), 8,66 (s, 1H), 7,52 (d, J=8,78 Гц, 2H), 6,82-6,88 (m, 2H), 5,70 (s, 2H), 4,69 (s, 2H), 3,78-3,95 (m, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,34-3,50 (m, 3H), 2,79 (br s, 2H), 2,16 (s, 3H). [M+H]=449,29.
Пример 167. 9-((l,4-Оксазепан-4-ил)метил)-6-(2,3-дифтор-4-метоксибензил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,84 (dd, J=2,3, 13,2 Гц, 2H), 8,38 (s, 1Н), 7,13-7,04 (m, 1H), 6,70-6,59 (m, 1H), 5,80 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 3,95 (t, J=4,3 Гц, 2H), 3,91-3,78 (m, 5H), 3,58-3,29 (m, 4H), 2,32 (br s, 2H). [M+H]=457,24.
Пример 168. 6-(2,3-Дифтор-4-метоксибензил)-9-((3-метилморфолино)метил)пиридо[3,2-e][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,83 (dd, J=2,3, 15,9 Гц, 2Н), 8,38 (s, 1Н), 7,14-7,03 (m, 1H), 6,71-6,58 (m, 1H), 5,80 (s, 2H), 4,91-4,61 (m, 1H), 4,15 (d, J=11,0 Гц, 1H), 4,07-3,73 (m, 7H), 3,32 (d, J=11,7 Гц, 2H), 3,16-2,90 (m, 1H), 1,61 (d, J=6,5 Гц, 3Н). [M+H]=457,26.
Пример 169. 6-(2,3-Дифтор-4-метоксибензил)-9-((3-гидроксиазетидин-1-ил)метил)пиридо[3,2-е][1,2,4]триазоло[1,5-с]пиримидин-5(6Н)-он.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDOD) δ 8,87-8,80 (m, 2Н), 8,53 (s, 1H), 7,09-7,00 (m, 1H), 6,81-6,72 (m, 1Н), 5,78 (s, 2Н), 4,73-4,60 (m, 3Н), 4,42 (dd, J=6,7, 11,5 Гц, 2Н), 4,06 (dd, J=5,4, 11,3 Гц, 2Н), 3,82 (s, 3Н). [М+Н]=429,26.
Анализ ингибирования PDE1b
Условия анализа
Ингибирование PDE1b определяли с использованием анализа IMAP TR-FRET. Анализ PDE IMAP TR-FRET оптимизировали с учетом концентрации фермента, кальмодулина, субстрата цАМФ или цГМФ, устойчивости ДМСО и времени инкубирования.
2
В каждую лунку твердого белого 1536-луночного планшета (Corning) помещали 250 пг полноразмерного рекомбинантного NH-концевого GST-меченого человеческого фермента PDE1b (BPS Bioscience Cat # 60011, San Diego, CA) в 2,5 мкл реакционного буфера IMAP с BSA (Molecular Devices, Sunnyvale, CA), содержащего 10 ед/мл кальмодулина и 2,5 мМ CaCl (Sigma Aldrich.) После непродолжительного центрифугирования добавляли 30 нл соединения путем переноса из 1 мМ исходного раствора в ДМСО с использованием инструмента Kalypsys 1536 Pintool. Планшеты инкубировали в течение 5 минут при комнатной температуре до помещения 1,5 мкл 533 нМ 5-карбоксифлюоресцеин (FАМ)-меченного цАМФ (Molecular Devices, Sunnyvale, СА) до конечной концентрации 200 нМ. После непродолжительного центрифугирования планшеты инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре. Анализ завершали путем добавления 5 мкл комплекса связывающего агента IMAP/Tb (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) в каждую лунку.
Планшеты инкубировали 1 час при комнатной температуре и считывали на мультимодальном планшет-ридере Viewlux (Perkin Elmer). Прибор настраивали на возбуждение с использованием фильтра DUG11 и измерение с использованием фильтров 490/10 нм и 520/10 нм. Затем вычисляли отношение акцептора и донора.
Анализ данных
50
50
50
Затем, для вычисления ЕС значения % эффективности в зависимости от концентраций ряда соединений наносили на график с использованием анализа нелинейной регрессии сигмоидальных кривых доза-ответ, полученных из уравнения Y=B+(T-B)/1+10((LogEC-X) × наклон Хилла), где Y = процент активности, В = минимальная эффективность в процентах, Т = максимальная эффективность в процентах, X = логарифм (концентрации) соединения и наклон Хилла = коэффициент наклона или коэффициент Хилла. Значение ЕС определяли как концентрацию, вызывающую полумаксимальную процентную эффективность.
Результаты
50
Следующая таблица иллюстрирует отрицательный логарифм полумаксимальной молярной ингибирующей концентрации (pEC) по отношению к активности PDE1b для соединений формулы (I).
Селективность соединений в отношении PDE1
Условия анализа
Селективность соединений согласно настоящему изобретению определяли с использованием набора рекомбинантных человеческих PDE и ферментного анализа in vitro (BPS Bioscience). Серию разведений каждого исследуемого соединения получали с помощью 10% ДМСО в буфере для анализа и 5 мкл разведение добавляли к 50 мкл реакционной смеси с получением конечной концентрации ДМСО в 1% во всех реакционных смесях.
Ферментативные реакции проводили при комнатной температуре в течение 60 минут в 50 мкл смеси, содержащей буфер для анализа PDE, 100 нМ FAM-цАМФ или 100 нМ FAM-цГМФ, рекомбинантный фермент PDE и исследуемое соединение.
После ферментативной реакции 100 мкл связывающего раствора (разведение 1:100 связывающего раствора и разбавителя связывающего агента) добавляли к каждой реакционной смеси и реакцию проводили при комнатной температуре в течение 60 минут.
Интенсивность флуоресценции измеряли при возбуждении на 485 нм и эмиссии на 528 нм с использованием планшет-ридера Tecan Infinite M1000.
Анализ данных
Анализы активности PDE проводили в двух повторностях в каждой концентрации. Интенсивность флуоресценции преобразовывали в поляризацию флуоресценции с использованием программного обеспечения Tecan Magellan6. Данные поляризации флуоресценции анализировали с использованием программного обеспечения Graphpad Prism. Поляризацию флуоресценции (FPt) при отсутствии соединения в каждом объеме данных определяли как 100% активность. При отсутствии PDE и соединения значение поляризации флуоресценции (FPb) в каждом объеме данных определяли как активность 0%. Процент активности в присутствии соединения рассчитывали согласно следующему уравнению: % активности = (FP-FPb)/(FPt-FPb) × 100%, где FP = поляризация флуоресценции в присутствии соединения.
50
50
50
Затем, для вычисления ЕС значения % активности в зависимости от концентраций ряда соединений наносили на график с использованием анализа нелинейной регрессии сигмоидальных кривых доза-ответ, полученных из уравнения Y=B+(T-B)/1+10((LogEC-X) × наклон Хилла), где Y = процент активности, В = минимальная эффективность в процентах, Т = максимальная эффективность в процентах, X = логарифм (концентрации) соединения и наклон Хилла = коэффициент наклона или коэффициент Хилла. Значение ЕС определяли как концентрацию, вызывающую полумаксимальную процентную эффективность.
Результаты
Типичные соединения согласно настоящему изобретению демонстрировали селективность к ферментам PDE1 по сравнению с изоформами множества, если не всех, других семейств PDE. Кроме того, типичные соединения демонстрировали большую специфичность в отношении PDE1b по сравнению с PDE1a и PDE1c.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИМЕРЫ
Настоящее изобретение будет дополнительно проиллюстрировано с помощью следующих биологических примеров. Указанные примеры следует понимать только как иллюстративные, а не ограничивающие объем изобретения, раскрытого в настоящем документе.
Биологический пример 1
Эффект опосредованного миРНК нокдауна PDE1B на формирование памяти
Роль pde1b в формировании памяти у животных оценивали с помощью РНК-интерференции. См., например, Peters et al., 2009, Genes Brain Behav. 8, 320-329. Результаты показали, что миРНК-опосредованное ингибирование pde1b у животных улучшало некоторые формы долговременной памяти, включая контекстуальную ей временную (следовую) память.
Процедуры
миРНК
Сначала, несколько немодифицированных миРНК исследовали в отношении нокдауна pdel1a и pde1b in vitro с использованием клеток Neuro 2а. Указанные миРНК были специфичны к изоформам Pde1, что было определено с помощью поиска в BLAST. Несколько миРНК продемонстрировали эффективность в понижении уровней pde1b мРНК и были выбраны для дальнейшего исследования in vivo. В поведенческих исследованиях использовали миРНК siSTABLE класса in vivo, которая была химически модифицирована для улучшения стабильности (Dharmacon Inc., Lafayette, USA). Последовательность кодирующей нити pde1b-6 миРНК представляла собой: 5'-GCUACAUGGUGAAGCAGUU-3'. Последовательность кодирующей нити не нацеленной контрольной миРНК представляла собой: 5'-UAGCGACUAAACACAUCAAUU-3'.
Субъекты
Молодых (возраст 12-16 недель) мышей мужского пола линии C57BL/6Jax (Jackson Laboratories) использовали для анализа формирования контекстуального условного рефлекса и мышей линии C57Bl/6NTac (Taconic Farms) для анализа следового условно-рефлекторного замирания. По прибытии мышей определяли в группы (5 мышей) в стандартные лабораторные клетки и поддерживали цикл свет-темнота 12 через 12 часов. Эксперименты всегда проводили в течение световой фазы указанного цикла.
После хирургической операции катетеризации гиппокампа мышей помещали в отдельные клетки на весь период эксперимента. Мыши получали пищу и воду ad libitum, за исключением периода обучения или тестирования. Их содержали и разводили в стандартных условиях, соответствующих руководству Национального института здоровья (NIH) и одобренных Комитетом по содержанию и использованию лабораторных животных.
Операции на животных
Как для формирования как контекстуального, так и следового условного рефлекса, мышам в гиппокамп вводили ненацеленные или Pde1b миРНК. Для инъекции миРНК мышей анестезировали с помощью 20 мг/кг Avertin и имплантировали направляющую канюлю 33-го калибра с двух сторон в тыльную часть гиппокампа (координаты: А=-1,8 мм, L=+/-l,5 мм на глубину 1,2 мм) или в миндалины (координаты: А=-1,58 мм, L=+/-2,8 мм на глубину 4,0 мм) (Franklin and Paxinos, The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. Academic Press, San Diego 2003). По истечении пяти из девяти дней восстановления после операции животным инъецировали миРНК, разведенную до 0,5 мкг/мкл в 5% глюкозе и смешанную с 6 эквивалентами 22 кDa линейного полиэтиленимина (Fermentas). После 10 минут инкубации при комнатной температура мкл инъецировали в каждый гиппокамп через инфузионную канюлю, которая была присоединена к микрошприцу с помощью полиэтиленовой трубки. С животными обращали аккуратно для минимизации стресса.
В течение 3-дневного периода были проведены в общей сложности 3 инфузии миРНК (1 мкг миРНК на гиппокамп в день). Мышей обучали через 3 дня после последней инъекции миРНК и тестировали через 24 часа после этого. Поведенческие исследования начинали спустя 3 дня. Указанная схема была выбрана на основании предварительных экспериментов нокдауна миРНК в гиппокампе, и поскольку предыдущие исследования показали, что развитие в ЦНС нокдауна гена с помощью дуплексов миРНК занимает несколько дней. См., например, Salahpour et al., 2007, Biol. Psychiatry 61, 65-69; Tan et al., 2005, Gene Therapy 12, 59-66; Thakker et al., 2004, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101, 17270-17275.
Условно-рефлекторное замирание
Обоснование
Контекстуальное рефлекторное замирание представляет собой форму ассоциативного обучения, в котором животные обучаются распознавать среду обучения (условный стимул, CS), который был предварительно связан аверсивным стимулом, таким как электроболевое раздражение лап (безусловный стимул, US). При помещении в тот же контекст в более позднее время, животные, у которых была выработана условно-рефлекторная реакция, демонстрировали разнообразные реакции условно-рефлекторные реакции, связанные с чувством страха, включая замирание. См., например, Fanselow, 1984, Behav. Neurosci. 98, 269-277; Fanselow, 1984, Behav. Neurosci. 98, 79-95; Phillips and LeDoux, 1992, Behav. Neurosci. 106, 274-285.
Выработка контекстуального условного рефлекса использовалась для изучения нервных субстратов, опосредующих обучение, мотивированное переживанием чувства страха. См., например, Phillips and LeDoux, 1992, Behav. Neurosci. 106, 274-285; Kim et al., 1993, Behav. Neurosci. 107, 1093-1098. Последние исследования на мышах и крысах доказали, что существует функциональная взаимосвязь между гиппокампальными и негиппокампальными системами в ходе контекстуального условно-рефлекторного обучения. См., например, Maren et al., 1997, Behav. Brain Res. 88, 261-274; Maren et al., 1997, Neurobiol. Learn. Mem. 67, 142-149; Frankland et al., 1998, Behav. Neurosci. 112, 863-874. В частности, повреждения гиппокампа после обучения (но не повреждения до обучения) значительно снижали условно-рефлекторный страх, что означает, что: 1) гиппокамп важен для контекстуальной памяти, но не для контекстуального обучения как такового и 2) в отсутствие гиппокампа в ходе обучения, негиппокампальные системы могут поддерживать контекстуальную выработку условного рефлекса.
Выработка контекстуального условного рефлекса широко использовалась для изучения влияния различных мутаций на гиппокамп-зависимое обучение и память и линейные различия у мышей. См., например, Bourtchouladze et al., 1994, Cell 79, 59-68; Bourtchouladze et al., 1998, Learn Mem. 5, 365-374; Kogan et al., 1997, Current Biology 7, 1-11; Silva et al., 1996, Current Biology 6, 1509-1518; Abel et al., 1997, Cell 88, 615-626; Giese et al., 1998, Science 279, 870-873; Logue et al., 1997, Neuroscience 80, 1075-1086; Chen et al., 1996, Behav. Neurosci. 110, 1177-1180; Nguyen et al., 2000, Learn Mem. 7, 170-179.
Поскольку устойчивое обучение может быть вызвано несколькими минутами сеанса обучения, выработка контекстуального условного рефлекса особенно подходит для изучения биологии различных по времени процессов кратко- и долговременной памяти. См., например, Kim et al., 1993, Behav. Neurosci. 107, 1093-1098; Abel et al., 1997, Cell 88, 615-626; Bourtchouladze et al., 1994, Cell 79, 59-68; Bourtchouladze et al., 1998, Learn. Mem. 5, 365-374. Таким образом, выработка контекстуального условного рефлекса представляет собой отличную модель для оценки роли различных новых генов в формировании гиппокамп-зависимой памяти.
Протокол
В результате предыдущих исследований было установлено, что обучение с 1× или 2× парами CS-US индуцирует субмаксимальную (слабую) память у мышей дикого типа. См., например, U.S.2009/0053140; Tully et al., 2003, Nat. Rev. Drug Discov. 2, 267-77; Bourtchouladze et al. 1998, Learn. Mem. 5, 365-374. Соответственно, контекстуальную выработку условного рефлекса в данном исследовании выполняли, как описано и в Bourtchouladze et al., 1994, Cell 79, 59-68.
Для выработки контекстуального условного рефлекса использовали автоматизированную систему условно-рефлекторного замирания (Colburn Instruments) и для следового условно-рефлекторного замирания использовали ручные операции (Med Associates). Мышей помещали в камеру обучения условно-рефлекторному замиранию и оставляли обследовать камеру в течение 2 мин. В общей сложности проводили два удара током на лапы (0,6 мА, продолжительностью 2 с) с промежуточным интервалом 1 мин. Замирание оценивали в течение 30 с после последнего удара током лап (немедленное замирание). Затем мышей возвращали в их домашние клетки. Память тестировали через 24 ч (LTM). Для оценки контекстуальной памяти поведение замирания оценивали в течение 3 мин интервалов по 1 с в камере, в которой проходило обучение мыши.
Следовое условно-рефлекторное обучение
Обоснование
Следовое условно-рефлекторное замирание представляет собой форму павловскиого условного рефлекса, в котором между завершением CS и началом UCS проходит некоторый интервал времени. Таким образом, CS и US разделены во времени следовым интервалом, и для формирования памяти указанной временной взаимосвязи требуется гиппокамп и префронтальная кора. См. Knight et al., 2004, J. Neurosci. 24, 218-228.
Выработка следового условного рефлекса усложняется с увеличением интервала времени между CS и US. Например, мыши линии C57BL/6 демонстрируют плохую память, если следовой интервал между CS и US составляет 60 секунд или более. См., например, U.S.2009/0053140. Кроме того, в более ранних исследованиях было показано, что указанное нарушение памяти могло быть преодолено, если мышей обрабатывали миРНК по отношению к РР1, отрицательному регулятору пластичности в гиппокампе. Peters et al., 2009, Genes Brain Behav. 8, 320-329. Следовательно, анализ следового условного рефлекса является способом тестирования способности соединения облегчать формирование гиппокамп-зависимой памяти.
Протокол
Облегчение формирования временной памяти в данном исследовании оценивали с использованием одной пары CS-US с 60 секундным следовым интервалом. Для данного исследования использовали стандартизированное оборудование для оценки контекстуального условно-рефлекторного замирания у мышей (Med Associates, Inc., VA; Bourtchouladze et al., 1994, Cell 79, 59-68; (Bourtchouladze et al., 1998 Learn Mem. 5, 365-374). В день обучения мышь помещали в камеру обучения условно-рефлекторному замиранию за 2 минуты до начала условного стимула (CS), звукового сигнала 2800 Гц, который продолжался в течение 20 секунд при 75 дБ. Через шестьдесят секунд после окончания звукового сигнала, животное получало удар током 0,5 мА, который представлял собой безусловный стимул (US) в течение двух секунд. После дополнительных 30 с в камере мышей возвращали в домашнюю клетку.
Мышей тестировали через 24 ч после обучения в новой камере, расположенной в другой лабораторной комнате для предотвращения эффектов смешивания при формировании контекстуального условного рефлекса. Внутренние камеры условно-рефлекторного обучения удаляли и заменяли клетками для мышей. Чтобы отличить одну клетку от другой, на заднюю сторону каждой клетки помещали различные цветные ленты. Для снижения риска загрязнения запахом одного субъекта другого субъекта использовали три различные клетки. Для обеспечения разности освещения при обучении и тестировании внутрь камеры помещали 30-ваттную лампу. Клетки чистили с использованием мыльного раствора.
Каждый тест начинали с двух минутного воздействия только светом (пре-CS), затем 20 секунд звукового сигнала (CS), с последующим воздействием только светом в течение дополнительных 30 секунд (пост-CS). Аналогичным образом как во время обучения, мышей оценивали без перерыва в каждый момент времени в отношении «замирания» с пятисекундными интервалами, также как и в отношении выработки контекстуального условного рефлекса, описанного выше. Ход проведения каждого эксперимента снимали. Отношение реакции замирания, специфичной по отношению к слуховой памяти определяли путем вычитания преCS замирания (не специфического) из CS замирания (CS - преCS).
Статистический анализ
Все поведенческие эксперименты были разработаны и проведены в сбалансированном режиме: Во-первых, для каждого условия эксперимента (например, специфического эффекта дозы) было использовано равное количество экспериментальных и контрольных мышей. Во-вторых, каждое условие эксперимента воспроизводили несколько раз, и повторные дни были добавлены для получения конечного количества субъектов. В-третьих, каждый сеанс был записан на видео и экспериментатор был неосведомленным (слепым) в отношении обработки субъектов в ходе обучения и тестирования.
Данные анализировали с помощью ANOVA с использованием программного обеспечения JMP. Если не указано иное, все значения в тексте и на чертежах представлены как среднее + СКО.
Результаты
Контекстуальная память
При тестировании в ходе контекстуального условно рефлекторного замирания с 2 парами CS-US для возникновения слабой (субмаксимальной) контекстуальной памяти, pde1b миРНК-инъецированные мыши демонстрировали значительно улучшенное замирание через 24 после обучения, по сравнению с мышами, инъецированными ненацеленной миРНК (Фиг. 1).
Следования память
Аналогично, при тестировании в ходе следового условно-рефлекторного замирания с одной парой CS/US и 60-с следовым интервалом, pde1b миРНК-инъецированные мыши демонстрировали улучшенную следовую память (Фиг. 2). Повторные измерения ANOVA выявили значимое взаимодействие обработка-испытание (treatment-by-trial interaction) (р<0,05). Анализ контрастов выявил, что pde1b миРНК и контрольные мыши замирают через равные промежутки времени в ответ на звуковой сигнал (CS: р=0,13, преCS: р=0,54); Однако только у pde1b миРНК-обработанных мышей формировалась память на CS, в то время как у мышей, обработанных контрольной иРНК, память не формировалась (эффект звукового сигнала CS: р<0,05 и р=0,62 для pde1b и контрольной миРНК, соответственно). Кроме того, pde1b-обработанные мыши демонстрировали значительно более высокое замирание, в случае если неспецифическое замирание в альтернативном тестовом контексте вычиталось из ответа на звуковой сигнал CS (CS - преCS: р<0,05). Таким образом, миРНК-опосредованный нокдаун гиппокампального pde1b позволял улучшить формирование памяти в результате следового условно-рефлекторного замирания, что наблюдалось и для контекстуального условно-рефлекторного замирания.
В совокупности, указанные результаты показывают, что Pde1b является отрицательным регулятором формирования памяти в гиппокампе, структуре височной доли, которая имеет важнейшее значение для формирования памяти у мышей, а также у людей. Важно отметить, что Pde1b миРНК вызывали «усиление функции» (то есть усиление формирования контекстуальной и временной памяти). Следовательно, указанные результаты демонстрируют, что Pde1b является действительной мишенью для повышения когнитивной способности и, в частности, памяти.
Биологический пример 2
Эффект опосредованного миРНК нокдауна PDE1 на рост нейритов
У мышей pde1b экспрессируется на высоком уровне в зубчатой извилине и обонятельной луковице, двух областях, в которых происходит нейрогенез во взрослой нервной системе. Нейрогенез представляет собой процесс, посредством которого новые нейроны рождаются и подвергаются дендритной и синаптической дифференцировке с интеграцией в функциональную систему. Нейрогенез в гиппокампе вовлечен в формирование памяти. См., например, Shors et al., 2001, Nature 410, 372-376; Shors et al., 2004, Trends Neurosci. 27, 250-256. В исследованиях оценили эффект ингибирования pde1b на рост нейритов в PC12 субклон NS1 (Cellomics). Рост нейритов (NOG) в клетках PC12 (и первичных нейронов) происходит после активации сигнальных путей, которые проходят через CREB. См., например, Greene и Tischler, 1976, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 73, 2424-2428; Cheng et al., 2002, J. Biol. Chem. 277, 33930-33942.
В данном исследовании оценивали эффект на рост нейритов (NOG) лекарственных средств, которые усиливают цАМФ-опосредованную активацию CREB, т.е. ингибитора PDE4 ролипрама - и сравнивали указанные эффекты с эффектами, вызванными миРНК-опосредованным ингибированием pde1b.
Способы
Клеточная культура
Клетки Neuroscreen 1 (NS1) (Cellomics Inc.) культивировали в 75 см2 пластиковых колбах, покрытых коллагеном I типа (Biocoat, Becton Dickinson) во влажном инкубаторе при 37°С в 5% CO2. Клетки культивировали в RPMI полной клеточной культуральной среде (Cambrex), дополненной 10% термоинактивированной лошадиной сывороткой (Invitrogen), 5% термоинактивированной фетальнаой бычьей сывороткой (Cellgro) и 2 мМ L-глутамина (Cambrex). Для расширения клетки обрабатывали трипсином и разделяли при достижении конфлюента 80%. Клеточную культуральную среду меняли каждые 2-3 дня.
Клетки NS1 собирали и подсчитывали с использованием устройства для подсчета клеток Coulter (Becton Dickinson Coulter Z1). Клетки высеивали в 96-луночные планшеты, покрытые коллагеном I при плотности 2000 клеток на лунку в объеме 200 мкл. Среду RPMI дополняли 200 нг/мл фактора роста нервов (NGF, Sigma). Клетки NS1 инкубировали в течение 72 часов для достижения дифференциации в нейрональный фенотип. Затем NGF разбавляли до 50 нг/мл и клетки обрабатывали миРНК или соединением в дозах, указанных на Фигуре 2А.
Анализ роста нейритов
Анализы роста нейритов (NOG) проводили с использованием HCS сканера Cellomics Arrayscan II Vti. Клетки окрашивали с использованием набора реагентов HCS HitKit™ (Cellomics) в соответствии с инструкциями производителя (которые были предварительно проверены на способность специфично помечать как нейриты, так и нейрональные клеточные тела. Кратко, клетки фиксировали в 3,7% формальдегиде и окрашивали красителем Хехст для маркировки ядра. Затем клетки промывали в буфере для роста нейритов, инкубировали в течение одного часа с первичным антителом для роста нейритов (антитубулин III), снова промывали и инкубировали с раствором флуоресцентно меченного вторичного антитела в течение 1 часа.
96-луночные планшеты с окрашенными антителами выдерживали при 4°С в темноте до сканирования. Планшеты сканировали с использованием HCS сканера Cellomics ArrayScan II Vti. Анализ роста нейритов основан на сканировании двух каналов: (1) Канал 1, который детектирует краситель Хехст и используется программным обеспечением для идентификации клеток и для автоматической фокусировки; и (2) Канал 2, который детектирует флуоресценцию FITC вторичного антитела и используется программным обеспечением для расчета всех данных, полученных в отношении нейритов.
Введение миРНК и лекарственного средства
pde1b-специфичные миРНК были такими же, как миРНК, описанные в Биологическом примере 1. Стимулятор аденилатциклазы форсколин и низкомолекулярный селективный ингибитор PDE4 ролипрам вводили в дозах, указанных на Фиг. 3А.
Результаты
Как показано на Фиг. 3А, длина и разветвление нейритов в клетках NS1 были увеличены дозозависимым образом посредством кратковременной обработки ролипрамом и форсколином - но на них не оказывала влияние обработка только ролипрамом. Аналогично, на Фиг. 3В показано, что рост нейритов в клетках NS1 увеличивался с помощью миРНК-опосредованного нокдауна pde4d (мишени ролипрама) или pde1b в комбинации с форсколином. В отличие от ролипрама (который скорее всего ингибирует только PDE4 на несколько часов), введение каждой из pde4d и pde1b миРНК (>48 ч) имело небольшое влияние на NOG без добавления форсколина.
Указанные результаты демонстрируют, что ингибирование Pde1b приводит к функциональному улучшению роста нейритов в клетках NS 1. Соответственно, анализ NOG также представляет собой подходящий вторичный анализ (клетка/фенотип) для тестирования ингибиторов Pde1b, идентифицированных по результатам высокоскоростного скрининга.
Биологический пример 3
Эффект типичного соединения на память
В данных исследованиях оценивали эффект типичного соединения согласно настоящему изобретению на память и на каталепсию, вызванную галоперидолом у мышей и крыс.
Способы
Субъекты
Трехмесячных гибридных мышей мужского пола линии B6129F1/J (Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME) использовали для исследования контекстуального условно-рефлекторного замирания и распознавания новых объектов и мышей мужского пола линии C57BL/6J (Jackson Laboratories) использовали для исследования каталепсии. Нелинейных крыс Long Evans (средняя масса 200 г, Harlan) использовали для исследования распознавания объектов у крыс и условно-рефлекторного замирания. По прибытии, мышей размещали по группам (4 мыши/клетка) на полках Inovive IVC и поддерживали цикл свет-темнота 12 через 12 часов. Крыс помещали в стандартные клетки в группы по двое. Эксперименты всегда проводили в течение световой фазы указанного цикла. Животные получали пищу и воду ad libitum, за исключением периода обучения или тестирования. Все процедуры соответствовали руководству Национального института здоровья (NIH) и одобренных Комитетом DNS/Helicon по содержанию и использованию лабораторных животных.
Введение лекарственного средства
Ингибиторы Pde1 и положительные контроли дозировали в носителе, содержащем 10% ДМСО, 30% PEG (MW400) и 60% PBS, если не указано иное. Для подкожного введения (s.c.), все лекарственные средства вводили в объеме 10 мл на кг за 30 мин до поведенческого обучения, если не указано иное. Для перорального введения (р.о.) животным давали дозу в указанном количестве за 30 мин до обучения.
Выработка контекстуального условного рефлекса
Протокол
Формирования контекстуального условного рефлекса по существу проводили так же, как описано в Биологическом примере 1. Для формирования контекстуального условного рефлекса использовали автоматизированную систему условно-рефлекторного замирания (Colburn Instruments) и для следового условно-рефлекторного замирания использовали ручные операции (Med Associates). Мышей помещали в камеру обучения условно-рефлекторному замиранию и оставляли обследовать камеру в течение 2 мин. В общей сложности проводили два удара током на лапы (0,6 мА, продолжительностью 2 с), с промежуточным интервалом 1 мин. Как отмечалось ранее, при использовании указанных условий обучения у контрольных мышей формировалась субмаксимальная, или слабая, память, что позволяло оценить способность соединения Pde1b согласно настоящему изобретению усиливать формирование памяти.
Замирание оценивали в течение 30 с после последнего удара током лап (немедленное замирание). Затем мышей возвращали в их домашние клетки. Память тестировали через 24 ч (LTM) в течение 3 мин путем оценивания поведения замирания с интервалами по 1 с в камере, в которой проходило обучение мыши.
Память распознавания объекта
Обоснование
Распознавание нового объекта (NOR) представляет собой анализ обучения распознавания и извлечения памяти, в котором использовано добровольное желание грызунов исследовать новый объект по сравнению со знакомым.
Тест NOR широко использовали для оценки потенциальных свойств когнитивного усиления новых соединений, полученных в результате высокоскоростного скрининга. Распознавание объекта представляет собой этологически релевантную задачу, которая не является результатом отрицательного подкрепления (удара током на лапы). Данное задание основывается на естественном любопытстве грызунов изучать новые объекты в их среде с большим интересом, чем знакомые. Очевидно, что в отношении «знакомого» объекта внимание животного должно быть привлечено к нему ранее и животное запомнило этот опыт. Следовательно, животные с лучшей памятью будут уделять внимание и исследовать новый объект с большим интересом, чем знакомый им объект. В хоте тестирования животному представляли объект для обучения и второй, новый объект. Память на объект для обучения делает его знакомым животному, и оно затем тратит больше времени на изучение нового объекта, по сравнению со знакомым. См. Bourtchouladze et. al., 2003, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100, 10518-10522).
Исследования показывают, что в процедуре NOR участвуют несколько областей мозга, включая кору и гиппокамп. Последние исследования по нейровизуализации у людей показали, что память при распознавании объекта зависит от префронтальной коры (PFC). См. Delbert et al., 1999, Neurology 52, 1413-1417. В соответствии с этими выводами, крысы с повреждениями PFC имеют плохую кратковременную память, когда им требуется различить знакомый и новые объекты. См. Mitchell, 1998, Behav. Brain Res. 97, 107-113. Другие исследования на обезьянах и грызунах позволяют предположить, что гиппокамп имеет важное значение для распознавания новых объектов. См., например, Teng et al., 2000, J. Neurosci 20, 3853-3863; Mumby, 2001, Brain Res. 127, 159-181. Таким образом, распознавание объектов является отличной поведенческой моделью для оценки лекарство-зависимых эффектов на когнитивные задачи, связанные с функцией гиппокампа и коры.
Протокол
Задание по распознаванию нового объекта проводили, как описано в Bevins and Besheer, 2006 (Nat. Protocol. 1, 1306-1311) с использованием стандартной системы распознавания нового объекта для крыс (Stoelting). Объекты помещали в центр коробки, тестирование проводили при слабом освещении и время изучения объектов оценивали с помощью программного обеспечения Ethovision. Все видео присматривались обученными наблюдателями.
N
F
N
F
Два дня подряд крыс проучивали к камере в течение 5 мин с 5 мин держанием на руках сразу после помещения в установку. На следующий день крысам, обработанным 10% ДМСО, 30% PEG400, 60% физиологическим раствором или соединением за 30 мин до обучения, представляли два белых блока или два серых шарика (~4 см шириной/диаметром) в течение 3 мин. Контрольную группу обрабатывали носителем и представляли объект в течение 15 мин. Приблизительно через 24 ч после обучения крысам представляли один знакомый объект и один новый объект (серый шарик заменяли белым блоком, и наоборот) и измеряли время изучения каждого. Память оценивали путем вычисления индекса различения ((T-T)/(T+T))*100; в сравнении между группами) и путем сравнения времени изучения нового и знакомого объектов в день тестирования (в сравнении между группами).
Статистический анализ
Все поведенческие эксперименты были разработаны и проведены в сбалансированном режиме: (i) для каждого условия эксперимента (например, специфического эффекта дозы) было использовано равное количество экспериментальных и контрольных мышей; (ii) каждое условие эксперимента воспроизводили несколько раз, и повторные дни были добавлены для получения конечного количества субъектов. Проведение каждого сеанса снимали на видео; (iii) экспериментатор был неосведомленным (слепым) в отношении обработки субъектов в ходе обучения и тестирования. Данные анализировали с помощью ANOVA с использованием программного обеспечения JMP, с последующим анализом контрастов.
Данные были преобразованы с помощью преобразования Бокса-Кокса и были показаны результаты анализа контрастов, сравнивающего экспериментальные группы по отношению к носителю (предел среднего - критерий Стьюдента t). Если не указано иное, все значения в тексте и фигурах выражены в виде Среднее ± СКОМ.
Результаты
Было обнаружено, что типовые соединения формулы I значительно улучшают 24 ч память, и как было протестировано, улучшают 48 часовую память, в анализе распознавания объекта. Контрольные эксперименты показали, что введение соединения существенно не влияло на общий пройденный путь или количество времени, потраченного на изучение правой и левой половины коробки. Значительные эффекты наблюдались при некоторых концентрациях, в зависимости от соединения, включая концентрации 0,1 мг/кг и 1 мг/кг.
Было обнаружено, что типичные соединения также улучшают контекстуальную память в анализе условно-рефлекторного замирания. Значительные эффекты наблюдались при некоторых концентрациях, в зависимости от соединения, включая концентрации 0,01 мг/кг, 0,03 мг/кг и 1,0 мг/кг.
Биологический пример 4
Эффект типичного соединения на сердечную функцию
Типичные соединения согласно настоящему изобретения также оценивали в нескольких моделях сердечно-сосудистой функции у морских свинок и телеметизированных крыс мужского пола. Каждое тестовое соединение (или носитель) принудительно вводили перорально, и животных оценивали после каждой дозы на наличие аномальных клинических симптомов. Системное артериальное давление (систолическое, диастолическое и среднее артериальное давление), HR и пульсовое кровяное давление записывали после дозирования.
Результаты показали отсутствие заметных эффектов введения носителя на системное артериальное давление, частоты сокращений сердца или давление артериального пульса в указанных исследованиях. Все параметры находились в пределах ожидаемого диапазона в ходе всего периода наблюдения. Напротив, введение некоторых тестовых соединений приводило к снижению кровяного давления и в некоторых случаях к продлению интервалов QT.
Специалисту в данной области техники будет понятно, что описанные в настоящем документе варианты реализации не ограничивают объем изобретения. Описание, в том числе в примеры, предназначены только в качестве иллюстрации, и специалистам в данной области техники будет понятно, что могут быть внесены различные модификации и вариации в настоящем изобретении без выхода за рамки объема или сущности изобретения, определенного прилагаемой формулой изобретения.
Кроме того, в то время как некоторые подробности в настоящем описании приведены для обеспечения более полного понимания изобретения, определенного прилагаемой формулой изобретения, специалистам в данной области техники будет понятно, что некоторые варианты реализации могут быть осуществлены без указанных подробностей. Кроме того, в некоторых случаях хорошо известные способы, процедуры или другие конкретные подробности не были описаны, чтобы избежать излишней путаницы с аспектами изобретения, определенного в прилагаемой формуле изобретения.