Регламентация контрольных параметров бальзама "Грааль"

Регламентация контрольных параметров бальзама «Грааль»

Т.З. Цкипуришвили

Кутаисский государственный политехнический университет Р.Г. Мелкадзе

Кутаисский научный центр АН Грузии,

В рамках транснациональной программы «Чернобыль-помощь» (1987 г.) создано лечебно-профилактическое средство в виде бальзама под названием «Грааль» [1,2]. Бальзам включает водно-спиртовые извлечения из более 20 лекарственных растений, а также пищевые добавки (мед, красное вино, плодово-ягодный сок и др.).

Технология бальзама предусматривает приготовления «сложной настойки» и «сбора лекарственного растительного сырья», которые далее используются в купаже готовой продукции. Ясно, что от контроля составных частей во многом зависит качество продукта.

В данной статье приводятся результаты по установлению и регламентации контрольных параметров частей бальзама «Грааль» — «сложной настойки» и «сбора лекарственного растительного сырья».

Препарат «сложная настойка» состоит из цветков лимона и маслины душистой, листьев алоэ, пантов пятнистого оленя, мумия, цветочной пыльцы, прополиса и водно-спиртовой смеси.

Для характеристики качества препарата предусмотрено проведение основных тестов для настоек (по ГФ СССР, изд. 1): «Описание», «Подлинность», «Спирт», «Сухой остаток», «Тяжелые металлы», «Микробиологическая чистота», «Количественное определение».

Описание. Препарат представляет собой прозрачную жидкость светло-ко-

ричневого цвета, ароматного бальзамического запаха. При хранении допускаются появление опалесценции и выпадение осадка. Эти свойства настойки обусловлены составом применяемых ингредиентов и способом получения препарата, который изготовляется методом мацерации смеси лекарственного растительного сырья.

Подлинность. Для установления подлинности препарата предусмотрено качественное определение следующих основных групп веществ, являющихся компонентами используемого лекарственного сырья, применяемого для приготовления бальзама.

Фенольные соединения. Определение проводится методом УФ-спект-рофотометрии: в спектре поглощения раствора препарата, приготовленного для количественного определения, должна наблюдаться полоса поглощения с максимумом в области длин волн около 290 нм. Как видно на рис. 1, самое заметное поглощение в спектре раствора препарата находится в области 290 нм.

Аминокислоты. Для этого анализа используется «нингидриновая» реакция. Образующееся темно-фиолетовое окрашивание при нагревании смеси 2%-ного раствора нингидрина с равным объемом настойки свидетельствует о наличии аминокислот.

Оксикумарины. Обнаружение основано на способности данных веществ к флуоресценции. При просмот-

ре в УФ-свете с длиной волны 366 нм разведенного в 100 раз и фильтрованного раствора препарата должна наблюдаться голубая флуоресценция.

Оксиантрахиноны. Определение основано на обработке разбавленной настойки концентрированным раствором аммиака. Развивающееся коричневое окрашивание свидетельствует о наличии оксиантрахинонов.

Фенольные соединения определяют методом тонкослойной хроматографии. Для проведения испытания препарат упаривают до половины объема для удаления спирта, разводят водой, экстрагируют фенольные соединения этилацетатом и хроматографируют 40 мкл извлечения восходящим способом в системе растворителей бензол — спирт метиловый — ацетон (40:15:4) на пластинке с закрепленным слоем силикагеля типа Merk 60 F254 (материал подложки — металлическая фольга). После прохождения фронтом растворителей расстояния 12 см пластинку вынимают из камеры, выдерживают на воздухе до удаления запаха растворителей, опрыскивают 3%-ным раствором алюминия хлорида в 96%-ном спирте, выдерживают 1 мин в сушильном шкафу при температуре 100...105 °С и просматривают в УФ-свете с длиной волны 366 нм. Наличие на хромато-грамме не менее шести пятен голубого и желтого цветов с величинами Rf около 0,26, около 0,43, около 0,51, около 0,56, около 0,62 и около 0,69 свидетельствует о наличие фенольных соединений прополиса, алоэ, цветков лимона и маслины душистой.

Определение содержания спирта в настойке проводится по методике ГФ XI, вып. 1, с. 26. Величина данного показателя должна находиться в пределах не менее 37 %.

Препарат выдерживает испытание по содержанию солей тяжелых металлов, которых должно быть не более 0,001 %. Для этого определения к 1 мл настойки прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты, смесь осторожно сжигают, прокаливают и поступают далее, как описано в ГФ XI, вып. 2, с. 148.

Сухой остаток. Как показали исследования на различных промышленных сериях препарата, нормированное количество его по данному показателю должно быть на уровне не менее 1,5%, так как в изученных нами образцах настойки величина этого показателя колеблется от 1,6 до 2,2 %.

Микробиологическая чистота. Как показали испытания, «Настойка сложная «Грааль» при проведении исследований в асептических условиях с использованием методов и питательных сред, рекомендованных для оцен-

0,8 -

0,7 -

0,6 -

0,5 -

0,4-

0,3 -

0,2 -

0,1 -

0

250 300 350 400 450

Длина волны,нм

Рис.1. УФ-спектр спиртового раствора препарата, полученный в условиях количественного определения

ПИ

шшитсиу 5 •

2004

ЛРС Биологически активные вещества Действие

Основные Сопутствующие

Листья грецкого ореха Оксинафтохинон юглон, 4-5 % танинов Флавоноиды, терпеноиды, инозит Противовоспалительное

Листья ежевики 5-14 % танинов, флавоноиды Органические кислоты, витамин С Противовоспалительное, вяжущее

Листья рододендрона Фенолы, в том числе арбутин, катехины, флавоноиды Дитерпеноиды, стероиды, витамин С Р-витаминное, кардиотоническое, диуретическое

Листья хурмы Дубильные в-ва 1,5-4,3 %, алифатические полиены, комплекс полифенолов Тритерпеноиды, органические кислоты Антимикробное

Листья инжира Кумарины, эфирное масло, флавоноиды, в том числе рутин Тритерпеноиды, дубильные в-ва до 2 % Противовоспалительное, отхаркивающее

Листья ортосифона тычиночного Тритерпеновые сапонины Органические кислоты, стероиды, дубильные в-ва 5-6 % Мочегонное

Трава эрвы шерстистой Флавоноиды — производные кемпферола Полисахариды, кислоты Мочегонное, гипоазотемическое, литолитическое

Чай зеленый Дубильные в-ва до 28 %, катехины, кофеин до 5 % Эфирное масло, витамин С, никотиновая и другие кислоты Тонизирующее, Р-витаминное, вяжущее

Кора дуба Дубильные в-ва 10-29 % Флавоноиды, тритерпеноиды, стероиды Вяжущее, противовоспалительное

Корни женьшеня Тритерпеновые сапонины Углеводы,стерины, витамины Тонизирующее, стресспротекторное

Корневища элеутерококка Стероиды, лигнины Изокумарины, эфирное масло, кислоты То же

Плоды фейхоа Органически связанный йод Пектины, эфирные масла, органические кислоты Нормализующее обмен веществ

ки уровня микробиологической контаминации нестерильных лекарственных средств, применяемых внутрь, обладает антимикробной активностью. При посеве на питательные среды используют следующие разведения препарата: среда № 1 — 1:100; среда №2 — 1:10; среда № 3 — 1:20; среда № 8 — 1:100.

В 1 г препарата допускается наличие не более 1000 бактерий и 100 дрожжевых и плесневых грибов (суммарно).

Не допускается наличие бактерий семейства Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa и Stafilococcus aureus.

Количественное определение. Для количественной стандартизации препарата по основной содержащейся в нем группе природных веществ — фе-нольным соединениям — выбран спек-трофотометрический метод определения. Для проведения анализа 1 мл препарата разбавляют до объема 25 мл 96%-ным спиртом, дают отстояться, полученный раствор фильтруют, 1 мл фильтрата еще раз разбавляют до объема 25 мл тем же спиртом и измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 290 нм. Расчет содержания суммы фенольных соединений в настойке проводят по формуле, где в качестве удельного показателя поглощения E^^ используют величину 510— так называемый коэффициент пропорциональности оптической плотности раствора и концентрации суммы фенольных соединений прополиса при длине волны 290 нм. Как показали результаты измерений различных серий препарата, содержание в них суммы фенольных соединений колеблется от 0,23 до 0,55 %, поэтому регламентацию «Настойки сложной «Грааль» по данному показателю предлагается установить на уровне не менее 0,2 %».

Наблюдаемый срок хранения настойки в стеклянной таре в прохладном, защищенном от света месте составляет 3 года и 3 мес, в полимерной и металлической — не более 1 года [3].

Сбор бальзама «Грааль» предназначен для приготовления спиртового экстракта, который является полупродуктом в технологическом процессе получения бальзама. Ингредиенты сбора представлены в табл. 1.

Раздел «Внешние признаки» описан на основании исследований морфологических признаков лекарственного растительного сырья.

В разделе дано описание внешнего вида специфических кусочков корневищ радиолы, корней женьшеня, элеутерококка, листьев рододендрона, травы эрвы шерстистой и плодов фейхоа, которые легко идентифицировать в сборе при ситовом анализе. Остальные

компоненты сбора (измельченные листья ореха, листья ежевики, листья хурмы, листья чая) не имеют выраженных особенностей морфологического строения и могут быть идентифицированы только микроскопическим анализом, поэтому их описание в разделе опущено.

Раздел «Микроскопия» изложен подробно для всех компонентов сбора; рисунки диагностических признаков растительного сырья, входящего в состав анализируемого сбора, приведены в ФС [4].

В раздел «Качественные реакции» включены общие качественные реакции обнаружения фенольных соединений, флавоноидов, (цианидино-вая проба), арбутина. Флавоноиды (кверцетин, кемпферол), кумарины (псорален), фенолоспирты (розавин) и сапонины (панаксозиды) идентифицированы хроматографически. Выбор качественных реакций обусловлен химическим составом ингредиентов сбора, данные о котором приведены в табл. 1.

Выбор систем растворителей для хроматографического анализа проводили на основании литературных данных.

Как следует из представленных данных, основной группой фармакологических активных веществ является комплекс фенольных соединений: флавоноиды, арбутин, салидрозид, кума-рины,лигнины,дубильные вещества и тритерпеновые сапонины, способствующие их растворению и стабилизации.

Таблица 1

Раздел «Числовые показатели»

скорректирован на основании товароведческого анализа пяти средних проб от промышленных партий продукции. Результаты приведены в табл. 2. Значения числовых показателей сырья определены как средние статистические пяти опытных серий в соответствии с требованиями ГФ XI, вып. 1. Несмотря на то, что в анализируемый сбор входит измельченное сырье, нами предложено увеличить величину средней пробы до 400 г из-за неоднородности и многокомпонентности состава. С этим связано увеличение и массы навесок, и пропорционально этому объема экстрагента для количественного определения по сравнению с литературными данными.

Влажность исследованных образцов сбора колебалась в пределах от 8, 4 до 12,0 % (см. табл. 2). По данным результатам анализов этот показатель установлен на уровне не более 13 %.

Содержание золы общей в исследованных пробах сбора колебалось в пределах 10, 7-12,8 %, поэтому в проект ФС включен показатель на уровне не более 13 %. Содержание золы, нерастворимой в хлористо-водородной кислоте, установлено на уровне не более 4 %.

Данные ситового анализа анализированных проб позволили установить пределы содержания максимальных и минимальных по размерам частиц в сборе, а также минеральной примеси. Нор-

Таблица 2

Показатели

Номер Дата Содержание, %, не менее %, не более

серии анализа Флавоноиды, в пересчете на рутин Арбутин Экстрактивные вещества Влажность Зола общая Зола, нерастворимая в HCl Срок годности, мес

Требования по ФС 0,5 0,1 28 13 13 4 30

10995 11.12.95 0,58 0,24 29,7 8,4 11,5 3,4

10.06.96 0,56 0,24 29,3 8,6 11,4 3,2 6

9.12.96 0,56 0,20 30,1 8,55 11,4 3,4 12

9.06.97 0,60 0,22 29,9 8,6 11,4 3,4, 18

8.12.97 0,54 0,20 29,5 8,5 11,5 3,5 24

8.06.98 0,55 0,27 29,7 8,8 11,5 3,4 30

8.12.98 0,58 0,21 30,4 9,1 11,2 3,1 36

20995 11.12.95 0,87 0.17 28,55 10,8 11,3 3,0

10.06.96 0,84 0,21 28,9 10,0 12,3 3,2 6

9.12.96 0,88 0,19 28,8 10,2 12,3 3,1 12

9.06.97 0,85 0,22 29,2 10,0 12,3 3,1 18

8.12.97 0,83 0,18 29,4 9,6 12,4 3,1 24

8.06.98 0,88 0,20 28,9 9,4 12,3 3,1 30

8.12.98 0,84 0,18 28,7 10,1 11,8 3,0 36

30995 11.12.95 0,66 0,22 30,3 12,0 12,8 2,3

10.06.96 0,68 0,24 30,1 10,4 12,7 2,5 6

9.12.96 0,65 0,23 30,0 10,2 12,8 2,2 12

9.06.97 0,63 0,25 29,7 10,4 12,8 2,4 18

8.12.97 0,63 0,24 30,2 10,0 12,7 2,3 24

8.06.98 0,64 0,23 29,55 9,8 12,8 2,2 30

8.12.98 0,62 0,19 29,8 10,2 12,5 2,4 36

41095 11.12.95 0,85 0,25 28,3 9,8 10,8 3,7

10.06.96 0,84 0,24 29,8 9,8 10,8 3,8 6

9.12.96 0,79 0,25 28,9 9,4 10,7 3,6 12

9.06.97 0,78 0,25 29,2 9,6 10,7 3,8 18

8.12.97 0,83 0,24 29,0 9,3 10,8 3,7 24

8.06.98 0,81 0,25 29,6 9,0 10,7 3,9 30

8.12.98 0,82 0,23 28,9 10,1 11,0 3,6 36

51095 11.12.95 0,70 0,17 31,6 11,0 12,7 2,4

10.06.96 0,64 0,18 31,5 10,8 12,8 2,4 6

9.12.96 0,71 0,20 30,9 11,2 12,8 2,6 12

9.06.97 0,67 0,19 30,4 10,7 12.6 2,4 18

8.12.97 0,65 0,18 31,6 10,5 12,8 2,5 24

8.06.98 0,68 0,17 30,8 10,7 12,8 2,4 30

8.12.98 0,66 0,17 29,6 10,4 12,3 2,6 36

60

30

20

54 50 46 42 38 34 30 26 22 18

Рис. 2. УФ-спектры сбора

для бальзама «Грааль»:

1 — сбор + AlCl3; 2 — рутин + AlCl3

мированное количество частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, не более 15 % и частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 0,18 мм, не более 10 %, минеральной примеси — не более 1 %.

В технологическом процессе лекарственное растительное сырье экстрагируют 45%-ным этанолом, поэтому нами проведено определение экстрактивных веществ в сборе спиртом данной крепости. Этот показатель находился в пределах от 28,8 до 31,6 %. В раздел «Числовые показатели» включен минимальный предел экстрактивных веществ, экстрагируемых 45%-ным спиртом, не менее 28 %.

Содержание флавоноидов в сборе для бальзама «Грааль» подтверждено качественными реакциями и хроматографи-чески. Поэтому количественную стандартизацию проводили по содержанию суммы флавоноидов (рис. 2). Как видно из УФ-спектров (рис. 2), спиртовой экстракт сбора «Грааль» с добавлением алюминия хлорида [1] и аналогичный спектр

раствора рутина [2] имеют максимумы поглощения в близких областях.

Наличие в спектре 1 плеча при длине волны 405-417 нм, лежащего вблизи максимума поглощения окрашенного комплекса рутина с алюминием, позволяет включить в проект ФС методику количественного определения суммы флавоноидов после реакции комплексообразования с хлористым алюминием в пересчете на рутин.

Методика широко используется, описана в ГФ XI для травы зверобоя. По полученным данным в условиях проведения анализа, содержание суммы фла-воноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье составляло от 0,54 до 0,88 %. Исходя из полученных данных в ФС включен предел не менее 0,5 %.

Метрологические характеристики методики приведены в табл. 3.

Количественное содержание арбутина в растительном сырье и лекарственных формах определяют химическими и физико-химическими методами. К химическим методам можно отнести

2004

%

0

Таблица 3

№ опыта |Данные, %| f 1 X 1 s 1 Р 1 t(p,f) л £

1 0,93 0

2 0,87 1 0,89 0,02915 95 2,57 0,0335 3,764

3 0,87 2

4 0,90 3

5 0,86 4

Таблица 4

Метод X X s p, % t(p,f) Дх £

0,19

0,20

ГФ XI изд. 1, йодометрический 0,18 0,19 0,01323 95 2,57 0,00705 3,7

0,17

0,20

Спектрофотометрический 0,18 0,17 0,16 0,16 0,19 0,17 0,01118 95 2,57 0,00581 3,4

метод йодометрического титрования арбутина после его кислотного гидролиза. Метод нашел отражение в ГФ XI, изд.1. Однако этот метод довольно громоздкий и длительный. На одно определение затрачивается более 4 ч. Описана методика количественного определения арбутина, в основе которой лежит реакция арбутина с 4-аминоантипири-ном в щелочной среде в присутствии окислителя — феррицианида калия. Окрашенный комплекс экстрагируют

хлороформом и определяют оптическую плотность. Метод специфичен, требует ограниченного времени, однако связан с большими объемами токсичных органических растворителей.

Для определения количественного содержания арбутина в сборе для бальзама «Грааль» нами использован спек-трофотометрический метод, в основе которого лежит реакция азосочетания арбутина с сульфацилом натрия и нитритом натрия в щелочной среде [5]. Ок-

раска комплекса устойчива в течение нескольких часов. Методика характеризуется экспрессивностью и по точности несколько превосходит метод ГФ XI, изд.1. В табл.4 приведены сравнительные результаты статистической обработки данных количественного определения арбутина двумя методами.

В проект документа введен раздел «Микробиологическая чистота», который регламентирует в сырье максимально допустимое количество бактерий, грибов и Escherichia coli.

Срок годности сырья установлен на пяти опытных партиях. Сырье подвергали анализу каждые 6 мес. На основании положительных товароведческих анализов, результаты которых представлены в табл. 2, определен срок годности сырья — 3 года.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бальзам «Грааль». ВФС 42У-118-235-96 — 1996.

2. Бальзам «Грааль». ВФС 42Б-57-97—1997.

3. Tinctura composita pro balsamo «Graal» ФС490/00 Грузии — 2000.

4. Species pro balsami «Graal». ФС489/00 Грузии — 2000.

5. Браиловская В.А., Лукьянчикова Г.И. Фотоколориметрическое определение арбутина в листьях толокнянки//Фармация. 1972. Т. 21. С. 31-34.

А УРАЛЬСКИЙ ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКИЙ

фильтрующие элементы и фильтры

Очистка воздуха, С(Ь и других газов в производство:

- ПИВА

- БЕЗАЛКОГОЛЬНЫХ НАПИТКОВ

- МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ -

- БИОЛОГИЧЕСКИХ КУЛЬТУР

- ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

- КОСМЕТИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ

изготавливаются в различных исполнениях по эффективности очистки и производительности

адаптированы длн установки в корпуса фильтров зарубежного производства

обеспечивают стерилизующую очистку газов

Россия, 624130, г. Новоуральск, Свердловская обл., ул. Дзержинского, 2 тел.(34370) 8 31 19, 9 59 54, тел./факс:(34370) 5 70 48,9 59 54 e-mail: kso@oeip.ru, Internet: www.ueip.ru