Эпигенетические модификации генов контроля клеточного цикла RB1, CDKN2B, P14ARF в тканях молочной железы при развитии опухолевого процесса

филактики и лечения осложнений учитывался характер нарушений в лимфатической системе, а также её транспортные, гомеостатические, детоксикационные, биотрансформационные функции и тесная связь с иммунной системой организма. Мы считаем, что применение лимфо-тропной методики у данной категории больных позволяет достигнуть лучших результатов лече-

ния, что проявляется положительной динамикой клинических и лабораторных показателей, формированием адекватной адаптационной реакции, улучшением течения послеоперационного периода, сокращением сроков лимфореи, уменьшением времени пребывания пациентки в стационаре.

ЭПИГЕНЕТИЧЕСКИЕ МОДИФИКАЦИИ ГЕНОВ КОНТРОЛЯ КЛЕТОЧНОГО ЦИКЛА RB1, CDKN2B, P14ARF В ТКАНЯх молочной железы при развитии опухолевого ПРОЦЕССА

Е.Н. ТОЛМАЧЁВА1, О.В. ВАСИЛьЕВА1, И.Н. ЛЕБЕДЕВ1, Н.В. ЧЕРДЫНЦЕВА2, Е.М. СЛОНИМСКАЯ2, В.М. ПЕРЕЛьМУТЕР2

Гу «НИИ медицинской генетики Томского научного центра СО РАЫН»

Гу «НИИ онкологии Томского научного центра СО РАЫН»

В последнее десятилетие установлено, что в многостадийном процессе образования опухолей нарушение функций клеточных генов может происходить не только в результате генетических мутаций (точечные мутации, де-леции, амплификации), но и в результате эпигенетических изменений, в том числе локального гиперметилирования ДНК. В настоящее время ведется активное изучение характера метилирования промоторных и регуляторных областей ряда генов, которые играют важную роль в нарушении контроля за нормальным делением и пролиферацией клеток при спорадическом раке молочной железы (РМЖ). Разработаны методы идентификации гиперметилированных районов ДНК, позволяющие выявить дифференциальный статус метилирования CpG-островков в нормальных и опухолевых клетках. С их помощью были идентифицированы гены, инактивируемые в опухолях путем аберрантного метилирования ассоциированных с ними CpG-островков. Среди них обнаружены как новые гены, утрата функций которых оказалась существенной для развития опухолей, так и ранее известные гены, подавление экспрессии которых в опухолях уже было продемонстрировано ранее. Число генов, для которых обнаружен эпигенетический меха-

низм инактивации в опухолях, постоянно растет, что свидетельствует о широком распространении этого явления в процессе канцерогенеза. Выявление генов - потенциальных маркеров аберрантного метилирования кардинальным образом расширяет список генов, вовлеченных в канцерогенез, что, в свою очередь, обеспечивает новые возможности для молекулярных подходов к диагностике, мониторингу и прогнозированию течения заболевания. Целью настоящего исследования явилось изучение эпигенетических модификаций генов контроля клеточного цикла - RB1, CDKN2B и p14ARF в тканях молочной железы при развитии опухолевого процесса.

Материал и методы. Объектом исследования являлись образцы опухолевой ткани, полученные от 43 женщин со спорадическим РМЖ, при этом в 8 случаях в группе были доступны ткани молочной железы с фиброзно-кистозными изменениями (ФКИ), а также лимфатических узлов с метастазами. ДНК была выделена из тканей с использованием набора «GenEluteTM Mammalian Genomic DNA» («Sigma», США). Бисульфитную модификацию ДНК осуществляли в течение 1 ч при 95°С. Модифицированную ДНК очищали с помощью набора «Wizard DNA Clean-up System» («Promega», США). Метилспе-

цифическую ПЦР проводили с использованием праймеров на промоторные регионы генов (Xing et al., 1999; Roncalli et al., 2002; Gonzalez-Gomez et al., 2003). Фрагменты ДНК фракционировали с помощью гель-электрофореза в 2,5% агарозном геле и визуализировали в проходящем свете с использованием системы анализа изображений «GelDoc» («Bio-Rad», США).

Результаты. Анализ статуса метилирования гена р14АЯР в опухолевых тканях показал, что 26 из 43 образцов (61 %) имели как метилированный, так и неметилированный аллели. Еще в 4 случаях (9 %) наблюдали только метилированный аллель. В целом аберрантное метилирование гена было обнаружено в 70 % опухолей. При обследовании тканей с фибрознокистозными изменениями 7 из 8 исследуемых образцов (88 %) имели как метилированный, так и неметилированный аллели, а 1 образец (12 %) имел только метилированный аллель. В лимфоузлах с метастазами во всех 8 случаях были выявлены как метилированные, так и не-метилированные аллели. У шести женщин ген р14АКР был метилирован во всех обследованных тканях, а в двух случаях только в тканях с ФКИ и в метастазах, поскольку ткани первичной опухоли исследованы не были. Частота метилирования гена CDKN2B в опухолях составила 7 % (3 из 43 исследуемых образцов, причём все они

имели как метилированный, так и неметилиро-ванный аллели). Аберрантного метилирования гена CDKN2B в тканях с фиброзно-кистозными изменениями и в лимфоузлах с метастазами выявлено не было. Метилирование RB1 также отсутствовало во всех обследованных образцах тканей.

Выводы. Полученные данные свидетельствуют о высокой частоте метилирования гена р14АКР в тканях молочной железы при развитии злокачественной опухоли. При этом метилирование выявляется не только в опухолевых клетках, но и в тканях с фиброзно-кистозными изменениями, а также в метастатических лимфоузлах. Ядерный белок р14 обладает способностью стабилизировать и активировать р53 - «хранитель генома», за счет инактивации белка MDM2, который вызывает деградацию р53. Аберрантное метилирование промотора р14АЯР, приводящее к инактивации экспрессии гена, способно нарушить механизм регуляции функций р53 в клетке. Гиперметилирование промоторной области гена р14АЯР обнаруживается также при раке пищевода (15 %) (Xing E. et al., 1999), легкого (8 %) (Zochbauer-Muller S. et al., 2001) и толстой кишки (28 %) (Esteller M., 2001). Полученные результаты свидетельствуют о возможной роли метилирования гена р14АЯР в развитии рака молочной железы.

ЭПИДЕМИОЛОГИЯ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ В ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ ЗА ПЕРИОД С 2001 ПО 2004 Г.

И.В. УДОВИЧЕНКО, А.В. ВАЖЕНИН, С.А. МАЛБЦЕВА, Л.П. КУКЛЕНКО, Т.В. КУКЛЕНКО, Д.Н. БУЛЫНСКИЙ

Челябинский областной онкологический диспансер - Уральская клиническая база ФГУ «Российский научный центррентгенорадиологии» Росздрава Проблемная научно-исследовательская лаборатория «Радиационная онкология и ангиология» ЮУНЦРАМН

Рост заболеваемости женского населения РМЖ отмечен во многих странах мира. За последние 20 лет более чем в 2 раза выросли уровни в США, Мали, Японии. В США, по крайней мере, до 1987 г. этот рост носил прогрессирующий характер. Если в начале столетия прирост заболеваемости составлял 1 %, то к концу указанного периода он уже был равен 32 % (ОагйПке! L. et а1.,

1994). В разные периоды времени отмечен рост заболеваемости женщин РМЖ в Европе (Ferrero J.M., Nater M.L., 1994), Италии (Patavino V.M. et al., 1995), Исландии (Waard F., 1978), Англии (Montoro A.F., 1990) и других странах.

Целью исследования явилось изучение заболеваемости РМЖ на территории Челябинской области.