Термотолерантные актиномицеты как агенты ремедиации нефтезагрязненных грунтов и вод в условиях жаркого аридного климата

Известия Тульского государственного университета Естественные науки. 2015. Вып. 4. С. 248-258 Биология

УДК 579.69

Термотолерантные актиномицеты как агенты ремедиации нефтезагрязненных грунтов и вод в условиях жаркого аридного

климата *

Я. А. Делеган, А. А. Ветрова, М. И. Чернявская, М. А. Титок,

А. Е. Филонов

Аннотация. Выделены, охарактеризованы и идентифицированы термотолерантные бактерии родов Са^ати и Rhodococcus, способные окислять нефть и нефтепродукты как при умеренных (не ниже 18 °С), так и при повышенных (до 50 °С) температурах. Эффективность деструкции нефти исследуемыми актиномицетами продемонстрирована как в жидкой минеральной среде, так и в грунте. Отобраны штаммы, перспективные для использования в составе консорциума для очистки нефтезагрязненных грунтов и вод в регионах с жарким аридным климатом.

Ключевые слова: биоремедиация, биодеградация, нефть, углеводороды, термотолерантные бактерии, жаркий климат, актиномице-ты, СоЫота, Rhodococcus.

В настоящее время уровень и общая площадь загрязнения грунтов и вод нефтью и нефтепродуктами непрерывно растет. Особому риску подвержены территории и акватории в регионах, где располагаются месторождения и ведется добыча нефти. Для очистки нефтезагрязненных экосистем используют методы, классифицируемые как механические, термические, физико-химические и др. Однако эти подходы не эффективны при концентрации нефти в среде менее 5 %, в таких случаях применяют биоремедиацию - технологию, основанную на использовании микроорганизмов-нефтедеструкторов.

Для очистки грунтов и вод в умеренных климатических условиях возможно применение подходов, основанных на стимуляции аборигенной микрофлоры обрабатываемого участка. Однако в зонах с экстремальными условиями, где развитие микроорганизмов подавляется стрессовыми факторами среды (высокими или, наоборот, низкими температурами, закислени-

* Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (проект № 16-54-00200) и гранта УМНИК (договор № 2162ГУ1/2014 (0003151)).

ем/защелачиванием грунта, высокой осмолярностью), необходимо внесение биопрепаратов, в состав которых входят культуры, способные к росту и утилизации углеводородов в таких условиях.

Температура является ключевым фактором, определяющим тип ремеди-ационной стратегии. Для очистки грунтов и вод при пониженных температурах разработаны и используются различные микробные препараты [1, 2]. Однако особенности биоремедиации в регионах с жарким климатом в настоящее время изучены слабо. Одной из главных проблем ремедиации территорий в условиях жаркого климата является тот факт, что высокие температуры снижают вязкость нефти и, таким образом, ускоряют ее диффузию вглубь грунта. К тому же испарение легких фракций нефти при повышенных температурах приводит к загрязнению воздуха токсичными продуктами, в то время как оставшиеся нелетучие компоненты с высокой молекулярной массой формируют пленки, плохо подвергающиеся биодеструкции. В то же время повышенные среднесуточные температуры являются причиной быстрого испарения воды из грунта и с поверхности водоемов, что приводит к их засолению. Поэтому перспективными агентами ремедиации нефтезагрязнен-ных участков в высокотемпературных регионах являются микроорганизмы, устойчивые к недостатку воды в грунте и повышенному содержанию соли на обрабатываемом участке.

Учитывая сложность нефти как комплексного субстрата, для достижения наибольшей эффективности биологической очистки применяют консорциумы штаммов-деструкторов. Основными условиями при составлении таких консорциумов являются отсутствие взаимного антагонизма между бактериями и участие всех штаммов консорциума в процессе деструкции. Для эффективной очистки грунтов и вод в условиях жаркого климата целесообразно применять термотолерантные бактерии-нефтедеструкторы. Особенностью таких бактерий является способность утилизировать нефть в диапазоне температур 18-50 °С.

Целью данной работы являлся скрининг и характеристика термотолерантных штаммов-нефтедеструкторов, отбор наиболее эффективных штаммов, перспективных для использования в составе биопрепарата для очистки грунтов и вод от нефтяных загрязнений как при умеренных (не ниже 18°С), так и при повышенных (до 50 °С) температурах, а также при солености среды до 5 % и в условиях низкой влажности.

Материалы и методы

Реагенты

Углеводороды (нафталин, фенантрен, антрацен, флуорен, гексан, гептан, октан, нонан, декан, гексадекан, гептаметилнонан) использованные для культивирования бактерий, были высокой степени чистоты (не менее 98 %, Sigma-Aldrich, Merck, Fluka).

Свойства нефти, используемой микроорганизмами в качестве источника углерода и энергии, представлены в табл. 1.

Таблица 1

Свойства нефти

Плотность нефти, г/см3 Содержание воды, % Содержание солей, мг/мл Механические примеси, % Содержание серы, % Фракционный состав, %

Гексановая Бензольная Спирто-бензольная

0.868 0.06 45 0.008 1.42 62.29 13.49 11.21

Taq полимераза (5 ед/мкл) получена из ЗАО «Силекс», Россия. Микроорганизмы, среды и условия культивирования В качестве минеральных сред использовали среду Эванса [3] и среду М9 [4]; в качестве полноценных сред - среду Лурия-Бертани (ЛБ) [5], среду 5/5 (ИБФМ РАН), содержащую (г, мл/л): аминопептид 60 мл, гидролизат казеина 5 г, дрожжевой экстракт 1 г, соевый экстракт 30 мл.

Бактерии выделяли из образцов путем накопительного культивирования в жидкой минеральной среде с нефтью (2 %) в течение трех недель при 24 °С. После завершения культивирования проводили высевы при температуре 24 °С на агаризованную среду Эванса, содержащую в качестве источника углерода и энергии нафталин или дизельное топливо.

Отдельные морфологически различные колонии, выросшие на среде Эванса, высевали на агаризованную среду ЛБ для подтверждения чистоты культур. Отбор термотолерантных штаммов вели путем культивирования выделенных микроорганизмов в жидкой среде Эванса с нефтью или дизельным топливом при температуре 45 °С.

Филогенетический анализ генов 16S рРНК, gyrB и alkB ДНК бактерий выделяли по методике [6] в нашей модификации: за 3 ч до окончания культивирования в среду добавляли 10 % раствор глицина в воде до конечной концентрации 1% (масс./об.) для облегчения последующего лизиса. ПЦР проводили на амплификаторе GeneAmp PCR System 2400 («Perkin-Elmer», США) с использованием Taq-DNA полимеразы. Для амплификации генов использовали праймеры, представленные в табл. 2.

Очистку ПЦР-продуктов выполняли по протоколу QIAquick PCR purification Kit Protocol (QIAquick Spin handbook, 2008). Секвенирование проводили в лаборатории молекулярной генетики Института вирусологии им. Д.И. Ивановского Минздрава РФ на секвенаторе Applied Biosystems 3130x1 с использованием набора для секвенирования BigDye v.3.1.

Поиск гомологичных нуклеотидных последовательностей к анализируемым фрагментам генов выполняли с помощью программы BLAST [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST]. Филогенетический анализ и по-

Таблица 2

Праймеры, использованные в работе

Ген Праймер Нуклеотидная последовательность (Б' > 3') Темпер. отжига, °С Размер продукта, пн Источник

16S rRN A 63f CAG GCC TAA CAC ATG CAA GTC 55 1300 Marchesi et al., 1998

1387r GGG CGG WGT GTA CAA GGC

gyrB UP1 GAA GTC ATC ATG ACC GTT CTG CAY GCN GGN GGN AAR TTY GA 60 1100 Yamamoto, Harayama, 1995

UP2-r AGC AGG GTA CGG ATG TGC GAG CCR TCN ACR TCN GCR TCN GTC AT

alkB alkBF ATC AAY RCV GCV CAY GAR YTV GGB CAC AAG 66 558 Shen et al., 2010

alkBR SGG RTT CGC RTG RTG RTC RCT GTG NSG YTG

строение филогенетических деревьев проводили с использованием пакета программ MEGA 6 Software.

Определение спектра утилизируемых субстратов изучаемых штаммов. Микроорганизмы культивировали в жидкой среде Эванса с добавлением следующих углеводородов: дизельного топлива; полициклических ароматических углеводородов (нафталин, фенантрен, антрацен, флуорен); алифатических углеводородов нормального и разветвленного строения (гексан, октан, декан, нонан, гексадекан, гептаметилнонан). Инокулят вносили до конечной концентрации клеток 105 КОЕ/мл. Жидкие углеводороды вносили в пробирки в концентрации 2 % по объему, твердые - в виде пудры (1 г/л). Наличие роста культур определяли визуально по помутнению среды в пробирках.

Изучение способности штаммов к росту и деградации дизельного топлива в присутствии различных концентраций хлорида натрия. Штаммы культивировали в жидкой среде Эванса, содержащей 3, 5, 7 и 10 % NaCl и 2 % дизельного топлива. Инокулят вносили до конечной концентрации клеток 105 КОЕ/мл. Культивирование проводили в течение 7 дней при температурах 45 °С и 24 °С. Способность к росту оценивали визуально по степени помутнения культуральной жидкости в пробирках.

Определение нефтеокисляющей активности микроорганизмов. Для определения нефтеокисляющей активности штаммы термотолерантных бактерий культивировали в колбах с 50 мл жидкой среды Эванса с добавлением 2% нефти при температурах 24 °С и 45 °С в течение двух недель.

По окончании культивирования остаточную нефть экстрагировали из образцов четыреххлористым углеродом (1:1), интенсивно перемешивали, после чего проводили измерение содержания углеводородов в экстракте с помощью анализатора нефтепродуктов АН-2 (Россия) в соответствии с РД 52.24.476-2007 «Массовая концентрация нефтепродуктов в водах. Методика выполнения измерений ИК-фотометрическим методом». Анализ систем проводили относительно стерильной контрольной системы без микроорганизмов.

Изучение совместимости термотолерантных штаммов

Для проверки возможного антагонизма штаммы высевали на чашку Петри с полноценной средой 5/5-ИБФМ перпендикулярными друг к другу штрихами. Появление зон задержки роста и/или лизиса свидетельствовало бы о подавлении роста одного из штаммов веществами, продуцируемыми другим штаммом.

Для проверки стабильности смешанной культуры бактерии культивировали в жидкой минеральной среде с нефтью и в полноценной среде 5/5. Инокулят каждого штамма вносили в колбу в концентрации 105 КОЕ/мл. Культивирование вели 3 суток на богатой среде и 14 суток на минеральной среде с нефтью при температурах как 24 °С, так и 45 °С. В процессе культивирования пробы отбирали каждые сутки, выполняли серию стандартных разведений и высевали на чашки для подсчета численности клеток.

Результаты и обсуждение

Скрининг и характеристика термотолерантных нефтеокисляющих бактерий

Нефтеокисляющие бактерии выделяли из образцов грунта, воды и неф-тешлама, отобранных на территориях России, Беларуси и Казахстана. Среди 86 выделенных культур отбирали термотолерантные путем селекции по способности к росту на нефти при повышенной (45 °С) температуре. Была создана коллекция, состоящая из 13 термотолерантных штаммов, и проанализированы основные физиологические характеристики штаммов (способность к росту при различных температурах, рН и концентрациях соли в среде культивирования) при росте на минеральной среде с нефтью в качестве единственного источника углерода и энергии (табл. 3).

Таким образом, все штаммы коллекции, отобранные в различных регионах (в Беларуси, Казахстане и России), обладали способностью утилизировать нефть при температурах до 45-50 °С. В то же время нижняя граница их температурного диапазона роста находилась около 20 °С. Штаммы, способ-

Таблица 3

Основные физиологические характеристики исследуемых термотолерантных бактерий

Штамм Источник выделения Температурный рН- Способность

диапазон диапазон к росту в

роста, °С роста присутствии соли в среде, %

1В Почва из шламо-накопителя, Москва 20-48 6-8 До 10 %

1Б Почва из шламо-накопителя, Москва 20-50 6-8 До 10 %

1С Почва из шламо-накопителя, Москва 18-48 6-8 До 10 %

4Б Почва с берега озера Байкал 20-45 5-8 До 5%

5А Вода из озера Байкал 20-45 5-8 До 5%

6Е Вода из озера Байкал 20-48 6-8 До 5%

Раг5 Почва с территории нефтеразлива, Казахстан 18-45 6-9 До 5 %

Рагб Нефтешлам с полигона, Казахстан 18-45 6-8 До 7%

Раг7 Почва с территории нефтеразлива, Казахстан 18-50 6-9 До 5 %

Раг10 Почва с территории нефтеразлива, Казахстан 20-50 6-8 До 3 %

Раг14 Почва с берега озера Байкал 18-45 6-8 До 5%

Раг18 Нефтешлам с полигона, Казахстан 20-50 6-8 До 5%

Ь5А- вяи Нефтезагрязненная почва, Минск, Беларусь 18-50 5-9 До 7%

ные расти как при умеренных, так и при повышенных температурах, могут эффективно утилизировать нефть в условиях больших суточных перепадов, к тому же имеют преимущество перед термофильными штаммами, которым для метаболизма необходимы только высокие положительные температуры. Это делает термотолерантные микроорганизмы перспективными агентами ремедиации грунтов в регионах с резко континентальным климатом, например, в Казахстане и южных областях России. Интересно отметить, что термотолерантные штаммы были выделены из образцов, отобранных не только в условиях жаркого климата (грунт и буровой раствор с месторождений в

Казахстане), но и из образцов с территорий с умеренным климатом (Московская область, Россия; Минская обл., Беларусь).

Высокие скорости испарения воды в регионах с жарким климатом приводят к засолению грунтов и водных экосистем. При разработке способа микробной ремедиации нефтезагрязненных участков в таких условиях следует учитывать, что галотолерантность бактерий, используемых для очистки, предотвратит снижение эффективности микробного препарата. В ходе работы показано, что при содержании соли в среде до 5 % рост большинства исследуемых штаммов не подавляется ни при 24 °С, ни при 45 °С, бактерии сохраняют способность эффективно утилизировать нефть, а также более простые субстраты: дизельное топливо и индивидуальные алканы. У штаммов 1В, 1Б и Ю, выделенных из пробы грунта с территории нефтеперерабатывающего завода (Москва), наблюдали слабый рост в минеральной среде с 10 % соли. Таким образом, у большинства исследованных термотолерантных бактерий отмечена способность к росту в засоленных (до 5 %) средах.

Идентификация термотолерантных культур

Для идентификации штаммов проводили анализ нуклеотидных последовательностей генов, достаточно консервативных, чтобы служить филогенетическими маркерами. В качестве таких маркеров использовали гены 16Б рРНК, дут В и а1к В. Согласно результатам анализа нуклеотидных последовательностей фрагментов генов 16Б рРНК, термотолерантные штаммы, исследуемые в работе, принадлежат к актиномицетам родов Сотйота (штаммы 1В, 1Б и Ю) и ЯНойососсиз (Раг5, Рагб, Раг7, Раг10, Раг14, Раг18, 5А, 4Б, 6Е, Ь5Л-В8и). Для установления видового статуса культур фрагменты генов а1к В (480-510 п.н.) и дуг В (900-1100 п.н.) были отсеквенированы и проанализированы. Ранее [7] было показано, что вариабельность последовательностей гена а1кВ позволяет использовать его в качестве филогенетического маркера для видовой дифференциации штаммов Сотйоига.

Штаммы 1В, 1Б и Ю выделены из одного образца (почва из шламона-копителя, г. Москва), но анализ гена а1кВ, а также обнаруженные отличия в физиологии штаммов свидетельствуют, что они не являются субклонами. Профили окисляемых субстратов у трех гордоний неодинаковые, также штаммы с различной эффективностью окисляют нефть. Штамм 1В входит в один кластер с типовым штаммом Сотйота ашъсаИз, а штаммы Сотйота 8р. 1Б и Сотйопла 8р. Ю достоверно находятся в другом кластере (рис. 1). Это позволяет идентифицировать штамм 1В как Сотйота ашСаИв. Что касается Сотйота 8р. 1Б и Сотйота 8р. Ю, два этих штамма могут являться представителями нового вида в составе рода Сотйота.

Анализ последовательности гена дут В также подтверждает отдельный видовой статус штамма Сотйота эр. 1Б (рис. 2). Наибольший процент сходства гиразы 1Б и гираз типовых штаммов различных видов Сотйота получен с С. amicalis - 94 %. Тем не менее, этого значения недостаточно для однозначной видовой идентификации штамма 1Б как Сотйота атса^.

Рис. 1. Филогенетическое дерево на основе анализа нуклеотидных последовательностей гена а1кБ, показывающее положение штаммов 1Б, Ш и Ю среди близкородственных штаммов рода Согйота

В ходе анализа последовательностей гираз термотолерантных родококков было установлено, что наиболее родственными им являются представители кластера Я. erythropolis (от 94.0 до 99.7%). Учитывая близкое родство видов Я. вгу^горо^, Я. qingshengii и Я. jialingiae в пределах кластера erythropolis, авторы принимают уровни сходства штаммов ниже 98% как межвидовые. Таким образом, среди исследуемых термотолерантных штаммов только Раг10 и Раг7 были отнесены к виду Я. erythropolis.

Анализ способности бактерий утилизировать нефть при различных температурах в модельных грунтовых и водных системах

100 г

-(ЭоШотаъ р. 10

С

1 вогсЮтаэр. СС-[ии-19

-вогаоШа ЬюпсШаИв

-Оогбота атагае

-0>е1яакигяатеп&а ^438561)

Рис. 2. Филогенетическое дерево на основе анализа нуклеотидных последовательностей гена дуг Б, показывающее положение штамма Согйота эр. Ш среди близкородственных штаммов рода Согйота

При первичном скрининге 13 штаммов с целью отбора наиболее эффективных рост культур в жидкой минеральной среде с нефтью в качестве единственного источника углерода и энергии оценивали как визуально, так и путем подсчета численности колоний при высеве проб на чашки со средой ЬБ. По результатам экспериментов в жидкой минеральной среде с нефтью было отобрано 6 штаммов, способных к наиболее активному росту на нефти как при 24 °С, так и при 45 °С: Gordonia 8р. 1Б, Gordonia 8р. Ю, Я^^^сс^ 8р.

Раг5, ЯКоСососсив 8р. Рагб, Я. втуЬКтороИв Раг7, Я. рутЛСтЛоотаив ЬБЛ-БВи. Отобранные б штаммов культивировали в жидкой минеральной среде с нефтью 14 суток при температурах 24°С и 45 °С. По окончании эксперимента измеряли остаточную концентрацию нефти в среде культивирования и оценивали степень бактериальной деструкции нефти. Наиболее активно процесс деструкции нефти осуществлялся штаммами СотСоила 8р. 1Б (59 % и 24 % нефти при 24°С и 45 °С соответственно), Я. рутЛСЛиЛоотаив Ь5Л-Б8И (21% и 30% нефти при 24 °С и 45 °С) и Я. етуШтороИв Раг7 (29% и 20% нефти при 24°С и 45 °С) за вычетом абиотической убыли. Абиотические потери нефти при 24 °С и 45 °С составили б % и 11 %, соответственно.

Эффективность деструкции нефти этими тремя штаммами была также оценена в модельных экспериментах с грунтом при концентрации нефти 2%, морской соли 3%, влажности 10%. Показано (рис. 3), что за 21 сутки эксперимента при 24°С и 45°С штамм СотСоила эр. 1Б утилизировал 51 % и 41% нефти, штамм Я. рупйтлоотаив Ь5Л-Б8И — 37% и 45% нефти, штамм ЯКоСососсив етуЬЬтороИз Раг7 - 35 % и 30 % нефти за вычетом абиотической убыли. Абиотические потери нефти при 24 °С и 45°С составили 21 % и 33 %, соответственно. Таким образом, штаммы могут быть перспективны при создании консорциума для ремедиации нефтезагрязненных засоленных вод и грунтов с низкой влажностью в регионах с жарким климатом.

Рис. 3. Степень деструкции нефти термотолерантными штаммами в грунтовых модельных системах при температурах 24 °С и 45 ° С после 21 суток культивирования

Исследуемые 3 штамма способны к росту на нефти и дизельном топливе при температуре до 50 °С. Однако дальнейшее повышение температуры приводило к резкому ухудшению роста штаммов. Таким образом, использование этих термотолерантных бактерий для очистки нефтезагрязненных экосистем в условиях жаркого климата эффективно при температурах воды или грунта до 50 °С.

При составлении консорциумов следует учитывать возможность негативного взаимодействия между микроорганизмами. Термотолерантные штам-

мы, перспективные для использования в составе биопрепаратов, должны быть совместимы, то есть не ингибировать рост друг друга при совместном культивировании. Поэтому исследуемые 3 штамма (Gordonia sp. 1D, R. pyridinivorans L5A-BSU и Rhodococcus erythropolis Par7) были проверены на возможность антагонизма методом перекрестного штриха на агаризованной среде 5/5. Зон лизиса или подавления роста культур отмечено не было. Отсутствие антагонизма между тремя культурами было также подтверждено при совместном культивировании в жидкой минеральной среде с нефтью и в полноценной среде 5/5-ИБФМ. Было показано, что соотношение штаммов в смешанной культуре на протяжении всего эксперимента (14 суток для минеральной среды с нефтью, 3 суток для полноценной среды 5/5) остается постоянным. Таким образом, термотолерантные штаммы Gordonia sp. 1D, Rhodococcus erythropolis Par7 и R. pyridinivorans L5A-BSU являются перспективными агентами ремедиации нефтезагрязненных засоленных грунтов и вод в регионах с жарким аридным климатом.

Список литературы

1. Препарат для очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов / А.М. Ше-стопалов, В.А. Забелин, А.Ю. Алексеев. Пат. РФ 2337069. 2007.

2. Препарат для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов / В.М. Кондра-шенко, В.П. Холоденко, И.А. Дунайцев, Э.М. Ермоленко, В.А. Чугунов, И.И. Мартовецкая, Р.И. Миронова, Н.А. Жиркова. Пат. РФ № 2191753. 2002.

3. Evans C.G.T., Herbet D., Tempest D.W. The continuous culture of microorganisms 2. Construction of a chemostat // In: Methods in microbiology. 1970. V. 2. P. 277-327.

4. Miller J.H. Experiments in Molecular Biology. Cold Spring Harbor Laboratory. 1972. P. 431-433.

5. Bertani G. Studies on lysogenesis. I. The mode of phage liberation by lysogenic Escherichia coli // J. Bacteriol. 1951. V. 62. P. 293-300.

6. Current protocols in Molecular biology /F.M. Ausubel [et al]. 2003.

7. Molecular detection and phylogenetic analysis of the alkane1-monooxygenase gene from Gordonia spp. / F.T. Shen, L.S. Young, M.F. Hsieh, S.Y. Lin, C.C. Young // Systematic and Applied Microbiology. 2010. V. 33. P. 53-59.

Делеган Янина Адальбертовна (mewgia@ya.ru), аспирант, лаборатория биологии плазмид, Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН, Пущино.

Ветрова Анна Андрияновна (phdvetrova@gmail.com), к.б.н., научный сотрудник, лаборатория биологии плазмид, Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН, Пущино.

Чернявская Мария Ивановна (mm-cher@tut.by), аспирант, кафедра микробиологии, биологический факультет, Белорусский государственный университет, Минск, Беларусь.

Титок Марина Алексеевна (m_titok@yahoo.com), д.б.н., профессор, кафедра микробиологии, биологический факультет, Белорусский государственный университет, Минск, Беларусь.

Филонов Андрей Евгеньевич (filonov.andrey@rambler.ru), к.б.н., доцент, старший научный сотрудник, лаборатория биологии плазмид, Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН, Пущино.

Thermotolerant actinomycetes as agents for remediation of oil-contaminated soils and water in hot arid climate

Y. A. Delegan, A. A. Vetrova, M.I. Charniauskaya, M. A. Titok, A.E. Filonov

Abstract. Thermotolerant oil-destructing bacteria were isolated, characterized and identified as belonging to the genera of Gordonia and Rhodococcus. The bacteria were capable of petroleum and petroleum products degradation at moderate (about place18 °C) and elevated (up to place50 °C) temperatures. The effectivity of oil degradation process was demonstrated both in liquid mineral medium and soil. The strains promising for the consortium for petroleum-polluted soils and water remediation in hot arid climate were selected.

Keywords: bioremediation, biodegradation, petroleum, hydrocarbons, thermotolerant bacteria, hot climate, actinomycetes, Gordonia, Rhodococcus.

Delegan Yanina (mewgia@ya.ru), postgraduate student, laboratory of plasmid biology, Skryabin Institute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms of RAS, Pushchino.

Vetrova Anna (phdvetrova@gmail.com), candidate of biological sciences, researcher, laboratory of plasmid biology, Skryabin Institute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms of RAS, Pushchino.

Charniauskaya Maria (mm-cher@tut.by), postgraduate student, department of microbiology, faculty of biology, Belarusian State University, Minsk, Belarus.

Titok Marina (m_titok@yahoo.com), doctor of biological sciences, professor, department of microbiology, faculty of biology, Belarusian State University, Minsk, Belarus.

Filonov Andrey (filonov.andrey@rambler.ru), candidate of biological sciences, associate professor, senior researcher, laboratory of plasmid biology, Skryabin Institute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms of RAS, Pushchino.

Поступила 02.10.2015