Взаимосвязь уровня свободно циркулирующей митохондриальной ДНК крови с активностью маркеров цитолиза при экспериментальной острой мелкоочаговой ишемии миокарда

человек. В том числе у 1 (1,2%) пациента в 1 группе была выполнена панкреато-дуоденальная резекция.

Наличие сахарного диабета, как утяжеляющего фактора, в 1 группе выявлено у 13 (15,7%), во 2-й группе — у 14 (20,6%) человек. Кроме этого, в 1 группе у 2 (2,4%) человек было определено нарушение гликемии натощак.

Гиперхолестеринемия выявлена у 46 (55,4%) пациентов 1 группы, и у 30 (44,1%) 2-ой группы. Гипертригли-церидемия выявлена у 70 (84,3%) и у 54 (79,4%) человек, соответственно. Повышение уровня ЛПНП у пациентов 1 группы выявлено у 34 (41,0%), у пациентов 2 группы — у 23 (33,82 %) человек.

Гиперкальциемия выявлена у 10 (12,04%) пациентов 1 группы, и у 11 (16,18%) — 2 группы.

Интенсивная абдоминальная боль наблюдалась у 58 (69,9%) пациентов 1 группы и у 41 (69,1%) — 2 группы.

Связь тяжести течения с вирусной этиологией ХП в

1 группе была установлена у 6 (7,2%), во 2 группе — у 1 (1,5%) человек.

Среди производственных факторов работа в контакте с химическими веществами наблюдалась у 4 (4,8%) пациентов 1 группы и у 5 (7,4%) — во 2 группе.

Обструкция протоков поджелудочной железы наблюдалась у 5 (6,02 %) пациентов 1 группы и 1 (1,47 %) пациента 2 группы.

По всем представленным факторам была проведена оценка риска (табл. 1), которая позволила установить, что наибольшее значение в развитии рецидива ХП имеет предшествующий острый панкреатит (ОБ=4,5, ЛБ=35,5%, ^2=20,838, Р<0,001), регулярное употребление жирной пищи в удвоенных количествах (ОБ=3,3, ЛИ=10,1%, х2=3,168, Р<0,038), наследственная отя-гощённость по заболеваниям органов пищеварения (ОЯ=1,5, ЛЯ=21,2%, х2=3,947, Р<0,019).

Другие факторы риска существенно не проявили себя при оценке риска развития рецидивов панкреатита.

Вероятно, другие общеизвестные факторы риска, в частности — приём алкоголя, курение и др., играют роль в поддержании течения заболевания.

Таким образом, наибольшее значение в развитии рецидива ХП имеет предшествующий острый, регулярное употребление жирной пищи в удвоенных количествах, наследственная отягощённость по заболеваниям органов пищеварения.

ЛИТЕРАТУРА

1. Винокурова Л.В. Проблемы диагностики хронического панкреатита на ранних стадиях заболевания. // Труды XVII Российского национального конгресса «Человек и лекарство», Москва, 12-16 апреля 2011 г. / Под ред. А.Г Чучалина, Ю.Б. Белоусова. — Т. 2. — М., 2011. — С. 354-363.

2. Губергриц Н.Б., Казюлин А.Н. Метаболическая панкреа-тология. — Донецк: Лебедь, 2011. — 464 с.

3. Калягин А.Н. Подходы к антисекреторной терапии хронического панкреатита. // Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологии. — 2004. — №18. — С. 149-151.

4. Калягин А.Н. Современный взгляд на применения ква-матела при панкреатитах. // Consilium medicum. Гастроэнтерология. — 2004. — Вып. 1. — С.17-19.

5. Калягин А.Н., Решина И.В. Современные аспекты ведения больных хроническими панкреатитами. // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). — 2011. — Т. 103. №4. — С. 143-145.

6. Маев И.В., Казюлин А.Н., Кучерявый Ю.А. Хронический панкреатит. — М.: Медицина, 2005. — 504 с.

7. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. — М.: МедиаСфера, 2002. — 312 с.

8. Решина И.В., Калягин А.Н. Факторы риска прогрессирования хронического панкреатита. // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). — 2007. — Т.68. №1. — С. 9-12.

9. Циммерман Я.С. Клиническая гастроэнтерология. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. — 416 с.

10. Циммерман Я.С. Лабораторная и инструментальная диагностика заболеваний поджелудочной железы. // Вестник клуба панкреатологов. — 2013. — №1. — С. 8-14.

11. DiMagno M.J., DiMagno E.R. Chronic pancreatitis. // Current Opinion in Gastroenterology. — 2010. — Vol. 26. — P. 490-498.

Информация об авторах: Решина Ирина Витальевна — аспирант кафедры, e-mail: rechina@yandex.ru.

© СУДАКОВ Н.П., ПОПКОВА Т.П., НОВИКОВА М.А., КАТЫШЕВ А.И., НИКИФОРОВ С.Б., ПУШКАРЕВ Б.Г., ГОЛЬДБЕРГ О.А., КЛИМЕНКОВ И.В.,

ЛЕПЕХОВА С.А., АПАРЦИН К.А., ЕЖИКЕЕВА С.Д., ТЕН М.Н., КОНСТАНТИНОВ Ю.М. — 2013

УДК

ВЗАИМОСВЯЗЬ УРОВНЯ СВОБОДНО ЦИРКУЛИРУЮЩЕЙ МИТОХОНДРИАЛЬНОЙ ДНК КРОВИ С АКТИВНОСТЬЮ МАРКЕРОВ ЦИТОЛИЗА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ОСТРОЙ МЕЛКООЧАГОВОЙ ИШЕМИИ МИОКАРДА

Николай Петрович Судаков1’3’4’5, Татьяна Павловна Попкова3, Маргарита Анатольевна Новикова1, Александр Игоревич Катышев2, Сергей Борисович Никифоров1, Борис Георгиевич Пушкарев1, Олег Аронович Гольдберг1, Игорь Викторович Клименков4,5, Светлана Александровна Лепехова1,6, Константин Анатольевич Апарцин1,6, Светлана Дмитриевна Ежикеева3, Мария Николаевна Тен3, Юрий Михайлович Константинов2,5. ('Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии СО РАМН, директор — д.м.н., проф., чл.-корр. РАМН Е.Г. Григорьев;

2Сибирский институт физиологии и биохимии растений СО РАН, директор — д.б.н., проф. В.К. Войников; 3Областная ордена «Знак Почета» клиническая больница, гл. врач — к.м.н. Дудин П.Е.; 4Лимнологический институт СО РАН, директор — акад. РАН М.А. Грачев; 5Иркутский государственный университет, ректор — д.ф.-м. наук А.В. Аргучинцев;

6Иркутский научный центр СО РАН, председатель — акад. РАН И.В. Бычков)

Резюме. Цель исследования: анализ динамики уровня свободно циркулирующей мтДНК крови при экспериментальной мелкоочаговой ишемии миокарда, индуцируемой подкожными инъекциями адреналина. Установлено, что уровень мтДНК плазмы крови в течение первых часов после введения адреналина проявлял тенденцию к снижению, а через 72 часа увеличился в 2,5 раза в сравнении с контролем. Определена отрицательная корреляционная связь между динамикой уровня мтДНК и активностью биомаркеров цитолиза миокарда. Полученные данные определяют перспективу для дальнейших исследований, способствующих развитию новых технологий диагностики и прогнозирования острых повреждений миокарда.

Ключевые слова: мелкоочаговая ишемия миокарда, уровень мтДНК, биомаркеры цитолиза кардиомиоцитов, ПЦР в реальном времени.

INTERRELATION BETWEEN THE LEVEL OF FREE CIRCULATING MT DNA OF BLOOD WITH THE ACTIVITY OF CYTOLYSIS MARKERS IN THE EXPERIMENTAL ACUTE SMALL-FOCAL MYOCARDIAL ISCHEMIA

N.P. Sudakov1,3,4,5, T.P. Popkova3, M.A. Novikova1, A.I. Katyshev2, S.B. Nikiforov1, B.G. Pushkarev1, O.A. Goldberg1,

I.V. Klimenkov4,5, S.A. Lepekhova1,6, K.A. Apartsin1,6, S.D. Ezhikeeva3, M.N. Ten3, Y.M. Konstantinov2,5 ^Scientific Center of Reconstructive and Restorative Surgery SB RAMS; 2 Siberian Institute of Plant Physiology and Biochemistry SB RAS; 3 Irkutsk Regional Clinical Hospital; 4 Limnological Institute SB RAS;

5 Irkutsk State University; 6 Irkutsk Scientific Center SB RAS)

Summary. The aim of the study was to analyze the dynamics of level of free circulating mtDNA in blood in the experimental small-focal myocardial ischemia induced by subcutaneous injections of adrenaline. The level of mtDNA of blood plasma tended to decrease during first hours after adrenaline injection and it increased 2.5 times in 72 hours as compared to control subjects. A negative correlation was found between the dynamics of mtDNA level and activity of cytolysis biomarkers of the myocardium. These data open the opportunity for further research that will favor to the creation of new techniques for diagnostics and prognosis of acute myocardial injuries.

Key words: small-focal myocardial ischemia, mtDNA level, biomarkers of cardiomyocite cytolysis, real time RCR.

Несмотря на существующий широкий спектр кардиомаркеров, оценка состояния пациента, определяющая выбор тактики лечения инфаркта миокарда, не всегда бывает однозначной [6]. Это определяет актуальность поиска новых биомаркеров повреждений кардиомио-цитов [7]. Перспективным маркером цитолитических процессов является уровень свободно циркулирующей митохондриальной ДНК (мтДНК) плазмы крови. Данный показатель является критерием прогноза развития осложнений и смертности при различных патологических процессах (злокачественные опухоли, бактериальный менингит) [3, 4, 5, 9]. Ранее нами показано возрастание свободно циркулирующей мтДНК крови у крыс на 3 сутки после подкожного введения адреналина [2]. В этой связи, целью настоящего исследования явилось изучение динамики уровня свободно циркулирующей

мтДНК крови в течение 3 суток экспериментальной мелкоочаговой ишемии миокарда, а также оценка взаимосвязи данного показателя с активностью биомаркеров повреждений кардиомиоцитов.

Материалы и методы

В качестве экспериментальных животных использовали крыс линии «Вистар», изучались группы: №1, контроль (n=6, подкожное введение физ. раствора); №2, экспериментальный миокардит (n=24, подкожное введение 0,2 мг адреналингидрохлорида на 100 г. массы животного). Животные группы №2 выводились из эксперимента для взятия крови и аутопсии на 2 (n=6), 4 (n=6), 16 (n=6) и 72 часа (n=6) наблюдения [1]. Активность биомаркеров цитолиза в крови (общей креатинфосфокиназы, креатинфосфокиназы МВ, лактатдегидрогиназы, аспартатамино-трансферазы) оценивали на биохимическом анализаторе Beckman synhron 4 (Beckman coulter, США). Из плазмы крови,свободной от тромбоцитов, выделяли ДНК с помощью набора реагентов «проба-НК» (ДНК-технология, Россия) [3]. Количественный анализ мтДНК осуществляли методом ПЦР в реальном времени, используя амплификатор iCycler IQ4 (Bio-Rad, США). Амплифициро-вали фрагмент гена 16S рРНК (прямой праймер: 5’-TGCAGAAGCTATTAATGGTTCG-3’, обратный —

5’-TTGGCTCTGCCACCCTAATA-3’) [4].

Для ПЦР в реальном времени использовали реакционную смесь, содержащую SYBR Green (Maxima™ SYBR Green/ROx qPCR MasterMix — Thermo Fisher Scientific Inc., США). Морфологические изменения миокарда оценивали световой микроскопией гистологических препаратов, окрашенных гематоксилин-эозином. Все манипуляции с экспериментальными животными осуществлялись согласно положениям «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приказ Минздрава СССР №755 от 12.08.1977 г.).

Межгрупповые различия оценивали критериями Манна-Уитни и Краскела-Уоллиса. Анализ взаимосвязей показателей осуществляли ранговым методом Спирмена. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез р=0,05.

Результаты и обсуждение

Данные эксперимента показали, что через

2 часа после инъекции адреналина в крови животных возрастала активность биомаркеров цитолиза (р<0,05) (рис. 1). Значения данных показателей по истечении 4 часов на-

Рис. 1. Динамика активности ферментов-биомаркеров цитолиза кардиомиоци-тов в крови экспериментальных животных после инъекций адреналина. а — активность креатинфосфокиназы; б — активность креатинфосфокиназы МВ; в — активность лактаддегидрогеназы; г —активность аспартатаминотрансферазы; •р<0,05 в сравнении с группой контроля.

блюдения продолжали нарастать, что свидетельствует о развитии повреждений кардиомиоцитов на данных сроках эксперимента. При этом, уровень свободно циркулирующей мтДНК плазмы на 2 и 4 часа после введения адреналина проявлял тенденцию к незначительному снижению в сравнении с контролем (рис. 2).

На 72 часа после введения адреналина, активность биомаркеров цитолиза снизилась и практически не отличалась от показателей контроля. Вмиокардеэкспе-риментальных животных наблюдали множественные очаги лизиса мышечных волокон, инфильтрируемых макрофагами. Очаги воспаления располагались как в центральной части миокарда, так и в непосредственной близости к эндокарду и перикарду. В некоторых случаях инфильтрация миокарда макрофагами имела диффузный характер. На фоне наблюдаемых биохимических изменений крови и морфологических нарушений в сердечной мышце, уровень свободной мтДНК плазмы экспериментальных животных увеличился в 2,5 раза в сравнении с группой контроля (р=0,16).

Данные корреляционного анализа взаимосвязей уровня мтДНК с изменениями активности ферментов-маркеров цитолиза в динамике экспериментального наблюдения приведены в табл. 1. Установлена отрицательная корреляционная связь между динамикой уровня мтДНК и активностью анализируемых биомаркеров цитолиза миокарда. Показано, что наибольшей статистической значимостью обладает отрицательная взаимосвязь между уровнем мтДНК и общей активностью креатинфосфокиназы.

Таблица 1

Корреляционная связь динамики мтДНК с активностью ферментов — биомаркеров цитолиза

Анализируемая взаимосвязь Коэффициент корреляции Спирмена, R Вероятность, p

KK и мтДНК -0,700000 0,035770

KKMB и мтДНК -0,566667 0,111633

АЛТ и мтДНК -0,493728 0,176760

ACT и мтДНК -0,483333 0,187470

ЛДГ и мтДНК -0,366667 0,331740

Выявленная отрицательная корреляция уровня мтДНК и активности маркеров цитолиза миокарда может косвенно свидетельствовать о возможном возрастании нуклеазной активности крови, способствующем уменьшению концентрации свободно циркулирующей

копий/мл 6 ООО ООО

5 ООО ООО

4 ООО ООО

3 ООО ООО

2 ООО ООО

1 ООО ООО

О

Рис. 2. Динамика концентрации свободно циркулирующей мтДНК крови экспериментальных животных после введения адреналина. •р=0,16 в сравнении с группой контроля.

мтДНК крови. Интересным фактом является возрастание данного показателя лишь на 72 часа после инъекции адреналина, на фоне снижения активности маркеров цитолиза и развития острого воспалительного процесса в миокарде. Возможным объяснением наблюдаемого повышения уровня мтДНК, является высвобождение мтДНК полиморфноядерными фагоцитами при активации процессов воспаления в поврежденном миокарде [8]. Это может представлять перспективу для создания технологий диагностического мониторинга воспалительных процессов после острых ишемических повреждений миокарда и требует дальнейших исследований. Безусловно, охарактеризованные временные интервалы развития адреналинового миокардита являются недостаточными для получения объективной картины возможных изменений уровня мтДНК.

В целом, вышеизложенное определяет необходимость детальных исследований динамики данного показателя при острых повреждениях и восстановительных процессах в миокарде в эксперименте и клинике, что в дальнейшем может способствовать развитию новых технологий диагностики и прогнозирования острых повреждений миокарда.

Работа выполнена при финансовой поддержке программы фундаментальных исследований Президиума РАН “Фундаментальные науки — медицине” (проект ФНМ-15-2012).

ЛИТЕРАТУРА

1. Непомнящих Л.М. Альтернативная недостаточность мышечных клеток сердца при метаболических и ишемических повреждениях. — М., 1998. — 56 с.

2. Судаков Н.П., Попкова Т.П., Катышев А.И. и др. Уровень свободно циркулирующей митохондриальной ДНК крови при дислипопротеидемии и адреналиновом миокардите (экспериментальное исследование) // Известия ИГУ Серия «Биология. Экология». — 2011. — Т. 4, № 4. — С. 136-142.

3. Chiu R.W., Chan L.Y., Lam N.Y. et al. Quantitative analysis of circulating mitochondrial DNA in plasma // Clin. Chem. — 2003. — Vol. 49. — P. 719-726.

4. Ellinger J., Müller S.C., Wernert N. et al. Mitochondrial DNA in serum of patients with prostate cancer: a predictor of biochemical recurrence after prostatectomy // BJU Int. — 2008. — Vol. 102. — P. 628-632.

5. Patrushev M., Kasymov V., Patrusheva V. et al. Mitochondrial

permeability transition triggers the release of mtDNA fragments // Cell Mol. Life Sci. — 2004. — Vol. 61. — P. 3100-3103.

6. Ricci F., De Caterina R. Isolatedcreatine kinase-MB rise with normal cardiac troponins: a strange occurrence with difficult interpretation // J. Cardiovasc. Med. (Hagerstown). — 2011. — Vol.

12. — P. 736-740.

7. Searle J., Danne O., Müller C. et al. Biomarkers in acute coronary syndrome and percutaneous coronary intervention // Minerva Cardioangiol. — 2011. — Vol. 59. — P. 203-223.

8. Yousefi S., Mihalache C., Kozlowski E. et al. Viable neutrophils release mitochondrial DNA to form neutrophil extracellular traps // Cell Death Differ. — 2009.—Vol. 16. — P. 1438-1444.

9. Zachariah R.R., Schmid S., Buerki N. et al. Levels of circulating cell-free nuclear and mitochondrial DNA in benign and malignant ovarian tumors // Obstet. Gynecol.- 2008. — Vol. 112. — P. 843-850.

Информация об авторах: Судаков Николай Петрович — к.б.н., доцент, научный сотрудник, 664003 г. Иркутск, ул. Борцов Революции, 1, тел. (3952) 29-03-39, e-mail: npsudakov@rambler.ru; Попкова Татьяна Павловна — биолог, 664049, г. Иркутск, м-н Юбилейный, 100; Новикова Маргарита Анатольевна — младший научный сотрудник, e-mail: m.a.novikova@mail.ru; Катышев Александр Игоревич — старший научный сотрудник, 664033, г. Иркутск, ул. Лермонтова, 132; Никифоров Сергей Борисович — д.м.н., старший научный сотрудник, e-mail telomer@mail.ru; Пушкарев Борис Георгиевич — д.м.н., профессор, старший научный сотрудник;

Гольдберг Олег Аронович — к.м.н., ведущий научный сотрудник; Клименков Игорь Викторович — старший

научный сотрудник, 664033, г. Иркутск, ул. Улан-Баторская, 3, e-mail: iklimen@mail.ru; Лепехова Светлана Александровна — д.б.н., заведующая научным отделом, 664003 г. Иркутск, ул. Борцов Революции, 1; Апарцин Константин Анатольевич — д.м.н., профессор, заместитель директора по научной и лечебной работе;

Ежикеева Светлана Дмитриевна — врач клинической лабораторной диагностики; Тен Мария Николаевна — врач клинической лабораторной диагностики; Константинов Юрий Михайлович — заведующий лабораторией, 664033, г. Иркутск, ул. Лермонтова, 132, e-mail: yukon@sifibr.irk.ru.

© БОЧАРОВ С.Н., ЛЕБЕДЬ М.Л., КИРПИЧЕНКО М.Г., ГУМАНЕНКО В.В. — 2013 УДК: 617.3+616-089.23+616-001+616.15

НАРУШЕНИЕ ВЫДЕЛИТЕЛЬНОЙ ФУНКЦИИ ПОЧЕК ПОСЛЕ МНОЖЕСТВЕННОЙ СКЕЛЕТНОЙ ТРАВМЫ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

Сергей Николаевич Бочаров1,2, Максим Леонидович Лебедь1,

Михаил Геннадьевич Кирпиченко1, Виталий Викторович Гуманенко2 (1Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии СО РАМН; директор — д.м.н., проф., член-корр. РАМН Е.Г. Григорьев; 2Иркутский государственный медицинский университет,

ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов)

Резюме. В эксперименте, воспроизводившем перелом костей предплечья и голени со стабилизацией отломков в аппаратах внешней фиксации у 22 кроликов породы Шиншилла, в подгруппе умерших в течение 7 суток после травмы животных с первых суток наблюдения зарегистрировано прогрессирующее нарушение выделительной функции почек. При анализе данных экспериментальной группы в послеоперационном периоде выявлена значимая отрицательная корреляция концентрации креатинина в крови и показателей, характеризующих активность метаболизма. На основании полученных данных сделан вывод о том, что острая почечная недостаточность стала ведущей причиной неблагоприятного исхода множественной скелетной травмы у кроликов породы Шиншилла. В патогенезе прогрессирующего нарушения выделительной функции почек в условиях множественной скелетной травмы важную роль сыграло снижение активности метаболизма. Депрессия показателей, характеризующих интенсивность обменных процессов, ниже критических величин позволяет прогнозировать развитие острой почечной недостаточности и неблагоприятный исход у кроликов в условиях множественной скелетной травмы.

Ключевые слова: множественная скелетная травма, острая почечная недостаточность, активность метаболизма.

DISORDER OF SECRETORY FUNCTION OF KIDNEYS AFTER MULTIPLE SKELETAL TRAUMA IN EXPERIMENT

S.N. Bocharov1,2, M.L. Lebed1, M.G. Kirpichenko1, V.V. Gumanenko2

Summary. Progressive disorder of secretory function of kidneys was registered from the first day of observation in subgroup of deceased during 7 days after the trauma in experiment that reproduced fracture of forearm and shin bones with stabilization of fragments in external fixation devices in 22 Chinchilla rabbits. In the analysis of data of experimental group in postoperative period significant negative correlation of concentration of creatinine in blood and indices of metabolism activity was revealed. On the basis of the data obtained we concluded that acute kidney insufficiency became the main reason of unfavorable outcome of multiple skeletal trauma in Chinchilla rabbits. Decrease of metabolism activity played an important role in pathogenesis of progressive disorder of secretory function of kidneys. Depression of indices characterizing intensity of metabolism processes lower than critical values allows to predict development of acute kidney insufficiency and unfavorable outcome in rabbits in conditions of multiple skeletal trauma.

Key words: multiple skeletal trauma, acute kidney insufficiency, metabolism activity.

Согласно литературным данным, травматическая болезнь у пациентов с множественными переломами костей сопровождается выраженными нарушениями функции почек [6]. В случае выбора оперативного метода лечения переломов преобладают преренальные механизмы почечных нарушений [6]. Частота повреждения почек у больных с тяжелой травматической болезнью достигает 47%, при этом изменения функции почек у этих пациентов возникают с первых часов после получения травмы [1]. Более того, определение степени нарушения функции почек позволяет корректно прогнозировать исход заболевания у пациентов с тяжелой травмой [5].

В проведённом нами эксперименте, воспроизводившем у 22 кроликов породы Шиншилла модель множественной скелетной травмы со стабилизацией отломков в аппаратах внешней фиксации, морфологическое исследование почек обнаружило полнокровие и парциальный некроз эпителия проксимальных канальцев [3]. Сравнение морфометрических данных, полученных в подгруппах выживших и умерших животных, выявило у последних более выраженную гиперемию и более распространённый некроз почечного эпителия [3]. В этом же эксперименте у лабораторных животных в условиях

множественной скелетной травмы было зарегистрировано значимое снижение показателей, характеризующих активность метаболизма, причём в подгруппе умерших животных выявлены признаки более глубокого гипобиоза [4].

Как структурные изменения почечной ткани, так и метаболические сдвиги на уровне всего организма могли оказать влияние на выделительную функцию почек. Поэтому целью настоящего исследования стала оценка функции почек у лабораторных животных в условиях множественной скелетной травмы, а также изучение возможной связи между выделительной функцией почек и показателями активности метаболизма.

Материалы и методы

Объектом исследования были лабораторные животные — кролики породы Шиншилла. Все манипуляции с животными производились на базе научного отдела экспериментальной хирургии с виварием ФГЮУ «НЦРВХ» СО РАМН, были одобрены этическим комитетом НЦРВХ СО РАМН и соответствовали «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных» и «Европейской конвенции о защите