СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫМИ СТРОМАЛЬНЫМИ КЛЕТКАМИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ КИШЕЧНИКА
METHOD FOR EVALUATING CLINICAL EFFECTIVENESS OF MESENCHYMAL STROMAL CELLS FOR INFLAMMATORY INTESTINAL DISEASES

Изобретение относится к медицине, а может быть применено в качестве способа оценки эффективности лечения воспалительных заболеваний кишечника.
Известен способ оценки эффективности лечения воспалительных заболеваний кишечника преднизолоном (1-P.Korrea et al. J.Natl. Cancer Inst. 2000, 92, 1881-1888). Способ принят в качестве аналога.
Известен способ оценки эффективности лечения воспалительных заболеваний кишечника с помощью иммунологических исследований (Новиков К.Д., Новикова В.И. Оценка иммунного статуса. Москва - Витебск, 1996. - 281 с.). Данный способ принят за прототип.
Однако в известном способе точность оценки эффективности лечения при использовании МСК ограничена.
Целью настоящего изобретения является повышение точности оценки эффективности лечения воспалительных заболеваний кишечника с помощью МСК.
9
9
9
Технический результат достигается тем, что исследуют динамику субпопуляций Т- и В-лимфоцитов до и после трансплантации мезенхимальных стромальных клеток и при содержании в периферической крови аутореактивного клона В1 лимфоцитов 0,013-0,027×10/л, при значении иммуно-регуляторного индекса 1,43-1,35, при уровне в периферической крови CD3+CD4+CD38+0,12-0,22×10/л, при уровне в периферической крови CD3+CD8+CD38+0,057-0,073×10/л оценивают эффективность лечения воспалительных заболеваний кишечника как удовлетворительную.
Способ реализуется следующим образом.
У больного с воспалительным заболеванием кишечника выясняют наличие примеси крови в стуле в виде отдельных мазков и сгустков, учащение стула до 3-6 раз в сутки, наличие схваткообразных болей в левой или правой половине живота. В клиническом анализе крови отмечается выраженная железодефицитная анемия и увеличение СОЭ, умеренная диспротеинемия. Эндоскопически отмечают гиперемию и отек слизистой оболочки толстой кишки, контактную кровоточивость, эрозии и небольшие поверхностные язвы слизистой оболочки. При рентгенологическом исследовании больных с воспалительными заболеваниями кишечника обнаруживают деформацию гаустр, зазубренность контуров; в некоторых случаях - уменьшение просвета и укорочение толстой кишки со сглаженностью ее физиологических изгибов вплоть до развития стриктур.
Больные с болезнью Крона наряду с кишечным синдромом страдают синдромом эндотоксемии, обусловленным острым воспалением, синдромом мальабсорбции и внекишечными проявлениями, например, обструкцией бронхов, нарушением функции сердца. Диарейный симптом наиболее часто встречается при поражении тонкой и левосторонней локализации процесса в толстой кишке и при терминальном илеите.
У больных с болезнью Крона при ректороманоскопии слизистая оболочка отечна, гиперемирована, с неровными выбуханиями. У одних больных язвы отсутствуют, у других - обнаруживаются глубокие язвы с подрытыми краями. Характерна асимметричность поражения стенок кишки.
Рентгенологически при болезни Крона отмечается одновременное поражение подвздошной и толстой кишки. Пораженные сегменты выглядят суженными вследствие псевдообструкции и ригидными.
+
+
9
+
+
+
9
+
+
При иммунологическом исследовании, проведенном до трансплантации МСК, у больных воспалительными заболеваниями кишечника в период обострения заболевания абсолютное содержание аутореактивного клона В-1 клеток (СD19СD5) составляет 0,03-0,05×10/л. До трансплантации МСК у больных воспалительными заболеваниями кишечника в период обострения заболевания абсолютное содержание CD3CD4 CD38 составило 0,2-0,4 10/л. Субпопуляция СВ3CD8 CD38+ составила 0,1-0,16×10%. Иммунологический индекс до лечения составил 1,53-1,61.
11
Лечение проводили аллогенными мезенхимальными стволовыми клетками костного мозга человека в дозе 1,5-2,0·10 клеток, разведенными в 200 мл физиологического раствора, вводимыми внутривенно в течение 3-4 часов.
9
+
+
+
9
+
+
+
9
После трансплантации МСК абсолютное содержание В-1 лимфоцитов составило 0,013-0,027×10/л. После трансплантации МСК абсолютное содержание CD3CD4CD38 составило 0,12-0,22×10/л. Субпопуляция СD3CD8CD38 после трансплантации уменьшилась до 0,057-0,073×10/л. Иммунологический индекс уменьшился после лечения до 1,35-1,43.
Таким образом, трансплантация МСК у больных воспалительными заболеваниями кишечника снижает интенсивность аутоиммунных реакций, что позволяет оценить эффективность лечения воспалительных заболеваний кишечника как удовлетворительную.
Способ далее поясняют примеры его реализации.
Пример 1
Больной Ш., 1978 г.р., поступил с диагнозом - болезнь Крона толстой кишки, осложненная стриктурой сигмовидной кишки, непрерывное рецидивирующее течение, высокая активность, гормонорезистентная форма. Латентный дефицит железа.
Жалобы: на кашицеобразный стул до 3-4 раз в сутки, без примеси крови и слизи, периодически схваткообразные боли в животе.
Считает себя больным с 2000 года, когда появились боли в животе, стал беспокоить жидкий стул. В 2003 году обследовался; по данным колоноскопии поставлен диагноз - язвенный колит, левостороннее поражение, получал салофальк 4 г в сутки с незначительным эффектом. Заболевание приобрело непрерывный характер. До 2009 г. наблюдался амбулаторно; дважды проводилась гормональная терапия преднизолоном 60 мг в сутки с неустойчивым эффектом, буденофальком - без эффекта. Неоднократно принимал участие в исследованиях по эффективности препаратов 5-АСК (азакол) с неустойчивым эффектом. Последнее обследование в марте-апреле 2009 г.; при ирригоскопии было выявлено сужение сигмовидной кишки и расширение просвета вышележащих отделов до 13 см, расцененное как мегаколон. Для дальнейшего обследования и выбора лечебной тактики больной госпитализирован. Учитывая наличие стриктуры сигмовидной кишки, больному показано плановое оперативное лечение при снижении дозы преднизолона. Клинический диагноз: болезнь Крона толстой кишки с поражением левых отделов, осложненная стриктурой сигмовидной кишки без признаков нарушения кишечной проходимости. В анализах крови от 22.09.09 г. Нв - 133г/л, Л-17,4 10%, СОЭ 6 мм/час, сыворот. железо 6 мкмоль/л. В связи с вышеуказанными жалобами госпитализирован для решения вопроса об антицитокиновой терапии. Проведено обследование:
ЭКГ от 29.09.09 г. Полувертикальное положение ЭОС влево. Ритм синусовый, правильный. ЧСС 93.
2
УЗИ органов брюшной полости: печень: правая доля 12,7 см. Левая 6,8 см. Эхоструктура однородная. Эхогенность не изменена. Сосудистый рисунок сохранен. Объемных образований не выявлено. Воротная вена не расширена 9,0 мм. Желчные протоки не расширены. Холедох 3 мм. Желчный пузырь: длинник - 6,9 см, поперечник 2,0 см. Стенки не утолщены 1,9 мм, эхогенность средняя. Содержимое однородное. Конкрементов нет. Паравезикальная область не изменена. Поджелудочная железа: контуры ровные, четкие. Головка 29 мм, тело 13 мм, хвост 19 мм. Эхоструктура однородная. Эхогенность не изменена. Вирсугов проток не расширен. Дополнительные образования не выявлены. Селезенка - контуры ровные, четкие, 86×43 мм, площадь 34,5 см. Почки: ЧЛС не расширена, размеры не увеличены. Заключение: эхографических признаков патологии печени, желчевыводящих путей, селезенки и поджелудочной железы не выявлено.
R-грамма органов грудной клетки - очаговых и инфильтративных изменений не обнаружено. Легочный рисунок обычный, корни структурны, не расширены. Сердце и аорта без особенностей.
Ректороманоскопия - при наружном осмотре, пальцевом исследовании, аноскопии -внутренние геморроидальные узлы, умеренно выраженные, без признаков воспаления и тромбоза. Тубус ректоскопа удалось ввести на 12 см. На всем протяжении слизистая гиперемирована, отечна. Сосудистый рисунок прослеживается. На расстоянии 7 см от ануса визуализируется полип на ножке до 0,4 см в диаметре.
Консультация пульмонолога. Вентиляционная функция легких в пределах нормы. Консультация фтизиатра. Данных об активном туберкулезе легких в настоящий момент нет.
ЭГДС от 2.10.09 г. Пищевод свободно проходим, слизистая бледно-розовая. Кардия сомкнута. В просвете желудка умеренное количество жидкости и слизи. Складки средней высоты, эластичные. Слизистая бледно-розовая, отечная, местами незначительно гиперемирована. Угол не изменен. Привратник округлой формы, проходим. Луковица ДПК средней величины, не деформирована. Слизистая ее бледно-розовая, складки тонкие, эластичные. Заключение: Хронический гастрит.
Исследование электромоторной активности (ЭМА) желудочно-кишечного тракта - гипермоторная дискинезия желудка, нисходящего отдела толстой кишки.
АНАЛИЗ МОЧИ при пост.: цвет - светло-желтый, прозр. - неполная, отн. плотность - 1019, р-я - кислая, белок, сахар - abs, лейкоциты - еl - З в п/з.
RW-отриц., HBsAg, AT к ВИЧ, HCV - не обнаружен, IgG-2600 mg/%, IgM - 140 mg/%, IgA - 240 mg/%.
Проведена системная трансплантация аллогенных мезенхимальных стромальных (стволовых) клеток (МССК) костного мозга человека (1-50 млн. в/в капельно на 200 мл физ. р-ра). Посттрансфузионных осложнений не отмечалось.
На фоне проведенной терапии состояние не улучшилось - стул до 5 раза в сутки, кашицеобразный. Температура нормальная. В легких дыхание везикулярное, хрипов нет.
Тоны сердца ясные, ритм правильный. ЧСС 64 уд. в мин. АД 120/80 мм рт.ст. Живот мягкий, болезненный в левой подвздошной области. Печень не пальпируется. По Курлову 9-8-7.
+
+
9
+
+
+
9
+
+
+
9
При иммунологическом исследовании, проведенном до трансплантации МСК у больных воспалительными заболеваниями кишечника в период обострения заболевания абсолютное содержание аутореактивного клона В-1 клеток (CD19CD5) составляет 0,05×10/л. До трансплантации МСК у больных воспалительными заболеваниями кишечника в период обострения заболевания абсолютное содержание CD3CD4CD38 cocтaвилo 0,4·10/л. Субпопуляция CD3CD8CD38 составила 0,16×10/л. Иммунологический индекс до лечения составил 1,61.
11
Лечение проводили аллогенными мезенхимальными стволовыми клетками костного мозга человека в дозе 2,0·10 клеток, разведенными в 200 мл физиологического раствора, вводимыми внутривенно в течение 4 часов.
ЛАБОРАТОРНЫЕ ДАННЫЕ
Показатель
При выписке
Норма
Показатель
При выписке
Норма
Гемоглобин
149 г/л
120-160
Общий белок
72,1 г/л
66-87
Эритроциты
5,86 10<sup>12</sup>/л
3.9-4,7
Альбумин
40,5 г/л
35-52
Гематокрит
42,7
35-47
Холестерин
3,92 мм/л
1,4-5,2
Тромбоциты
428·10<sup>9</sup>/л
150-400
Глюкоза
4,79 мм/л
4,1-5,9
Лейкоциты
13,2·10<sup>9</sup>/л
4,0-9,0
Мочевина
4 мм/л
1,7-8,3
П/я нейтрофилы
21%
1-6
STFe
<b>19%</b>
<b>20-50</b>
С/я нейтрофилы
58%
47-72
Билирубин общий
20,6 мкм/л
3,4-21,0
Эозинофилы
1%
0,5-5
АЛТ
19,4 Е/л
5-34
Лимфоциты
12%
19-37
ACT
12Е/л
5-31
Моноциты
8%
3-11
ЩФ
89,6 Е/л
30-120
СОЭ
5 мм/час
3-20
ГГТП
26,9 Е/л
7-24
Калий
3,48 мм/л
3,5-5,1
Натрий
143,7 мм/л
136-146
9
+
+
+
9
+
+
+
9
После трансплантации МСК абсолютное содержание В-1 лимфоцитов составило 0,027×10/л. После трансплантации МСК абсолютное содержание CD3CD4 CD38 cocтaвилo 0,22×10/л. Субпопуляция CD3CD8 CD38 после трансплантации уменьшилась до 0,073×10/л. Иммунологический индекс уменьшился после лечения до 1,43.
Пример 2
Больной Т., 21 год, поступил с диагнозом: язвенный колит, который выражается примесью крови в стуле в виде отдельных сгустков и учащением стула до 6 раз в сутки, наличие схваткообразных болей в правой подвздошной области. В клиническом анализе крови: гемоглобин 39 ед, СОЭ 42 мм/ч.
Колоноскопическое исследование выявляет отек слизистой оболочки прямой кишки, контактную кровоточивость.
При рентгенологическом исследовании: укорочение толстой кишки; изгибы кишки сглажены.
У больного Т. выясняют наличие примеси крови в стуле в виде отдельных мазков и сгустков, учащение стула до 5-6 раз в сутки, наличие схваткообразных болей в правой половине живота. В клиническом анализе крови отмечается выраженная анемия со снижением гемоглобина и увеличением СОЭ до 41 мм/ч, умеренная диспротеинемия. Эндоскопически отмечают гиперемию и отек слизистой оболочки толстой кишки, контактную кровоточивость, единичные эрозии. Из внекишечных проявлений отмечается обструкция бронхов.
При ректороманоскопии - слизистая оболочка отечна, гиперемирована, с неровными выбуханиями, язвы отсутствуют. Отмечается асимметричность поражения стенки кишки.
+
+
9
+
+
+
9
+
+
+
9
При иммунологическом исследовании, проведенном до трансплантации МСК у больных воспалительными заболеваниями кишечника в период обострения заболевания, абсолютное содержание аутореактивного клона В-1 клеток (CD19CD5) составляет 0,03×10/л. До трансплантации МСК у больных воспалительными заболеваниями кишечника в период обострения заболевания абсолютное содержание CD3CD4 CD38 составило 0,2 10/л. Субпопуляция CD3CD8 CD38 составила 0,1×10/л. Иммунологический индекс до лечения составил 1,53.
11
Лечение проводили аллогенными мезенхимальными стволовыми клетками костного мозга человека в дозе 1,5·10 клеток, разведенными в 200 мл физиологического раствора, вводимыми внутривенно в течение 3 часов.
9
+
+
+
9
+
+
+
9
После трансплантация МСК абсолютное содержание В-1 лимфоцитов составило 0,013×10/л. После трансплантации МСК абсолютное содержание CD3CD4CD38 составило 0,12×10/л. Субпопуляция СD3CD8 CD38 после трансплантации уменьшилась до 0,057×10/л. Иммунологический индекс уменьшился после лечения до 1,35.
Таким образом, у больного интенсивность аутоиммунных реакций снижена, что позволяет оценить эффективность лечения воспалительного заболевания кишечника как удовлетворительную.
Пример 3
Больной И., 37 лет, поступил с диагнозом - язвенный колит. При поступлении жалуется на слабость, снижение аппетита и работоспособности, боли в левой половине живота. В клиническом анализе крови отмечается выраженная анемия со снижением гемоглобина до 55 ед, увеличение СОЭ до 40 мм/ч.
При эндоскопическом исследовании слизистая оболочка толстой кишки отечная, гиперемированная.
+
+
9
+
+
+
9
+
+
+
9
При иммунологическом исследовании, проведенном до трансплантации МСК у больных воспалительными заболеваниями кишечника в период обострения заболевания абсолютное содержание аутореактивного клона В-1 клеток (CD19CD5) составляет 0,04×10/л. До трансплантации МСК у больных воспалительными заболеваниями кишечника в период обострения заболевания абсолютное содержание CD3CD4 CD38 составило 0,3×10/л. Субпопуляция СD3CD8 CD38 составила 0,13×10/л. Иммунологический индекс до лечения составил 1,57.
11
Лечение проводили аллогенными мезенхимальными стволовыми клетками костного мозга человека в дозе 1,7·10 клеток, разведенными в 200 мл физиологического раствора, вводимыми внутривенно в течение 3 часов.
9
+
+
+
9
+
+
+
9
После трансплантация МСК абсолютное содержание В-1 лимфоцитов составило 0,020×10/л. После трансплантации МСК абсолютное содержание CD3CD4CD38 составило 0,17×10/л. Субпопуляция СD3CD8 CD38 после трансплантации уменьшилась до 0,066×10/л. Иммунологический индекс уменьшился после лечения до 1,39.
Таким образом, трансплантация МСК у больных воспалительными заболеваниями кишечника снижает интенсивность аутоиммунных реакций, что позволяет оценить эффективность лечения воспалительных заболеваний кишечника как удовлетворительную.
Проведена оценка эффективности лечения мезенхимальными стромальными клетками по заявляемому способу 41 больного с воспалительными заболеваниями кишечника. Результаты показали достижение цели изобретения - повышение точности оценки эффективности лечения мезенхимальными стромальными клетками.