Соединения и способы для ингибирования JAK
COMPOUNDS AND METHODS FOR INHIBITING JAK

Предшествующий уровень техники
Семейство JAK (Янус-ассоциированная киназа) состоит из четырех нерецепторных тирозинкиназ, JAK1, JAK2, JAK3 и Tyk2, которые играют решающую роль в трансдукции опосредованного цитокинами и факторами роста сигнала (Schindler C, and Darnell JE Jr., Annu. Rev. Biochem. 1995; 64; 621-651). Связывание цитокинов и факторов роста с рецепторами клеточной поверхности способствует активации рецептор-ассоциированных JAK-киназ посредством аутофосфорилирования. Активированные JAK напрямую фосфорилируют члены семейства факторов транскрипции STAT (переносчики сигнала и активаторы транскрипции) (STAT1, 2, 3, 4, 5a, 5b и 6), промотируя их транслокацию в ядро и транскрипционную активацию целевых генов.
Конститутивная активация (т.е. фосфорилирование тирозина) членов семейства STAT, в частности STAT3, была документально подтверждена при самых разных видах рака и гиперпролиферативных расстройствах и ассоциирована с плохим прогнозом при нескольких видах рака (Yu H, Jove R., Nat. Rev. Cancer 2004; 4:97-105). Было показано, что персистентно активированный STAT3 является онкогенным (Bromberg JF, et al. Cell 1999; 98:295-303) и запускает экспрессию клеточных белков, способствующих центральным процессам прогрессирования рака (выживание, пролиферация, инвазия, ангиогенез) (Yu and Jove, 2004, см. выше). Одним общим механизмом активации STAT3 в раковых клетках является аутокринная или паракринная стимуляция цитокинами сигнального пути JAK/STAT3, типично членами семейства цитокинов интерлейкина-6 (IL-6) (Grivennikov, S. and Karin, M. Рак Cell 2008;13;7-9; Bromberg J. and Wang TC. Cancer Cell 2009; 15; 79-80). Этот механизм первично опосредован JAK1, ключевой JAK-киназой, ответственной за активацию STAT3 (Guschin et al., Embo J 1995; 14; 1421-1429., Kim SM, et al., Mol. Cancer Ther. 2012; 11; 2254-2264; Song et. al., Mol. Cancer Ther. 2011; 10; 481-494). Было также показано, что инактивация белков отрицательной регуляции, таких как SOCS (супрессоры цитокинового сигнального пути) или PIAS (белковый ингибитор активированных STAT) влияет на статус активации сигнального пути JAK/STAT при раке (Mottok et al., Blood 2007; 110; 3387-90; Ogata et al., Gastroenterology 2006; 131; 179-193; Lee et al., Mol. Cancer Ther. 2006; 5; 8-19, Brantley et al., Clin. Cancer Res. 2008; 14; 4694-4704).
Помимо базальной активации сигнального пути JAK1/STAT3 при множественных опухолях человека, было также показано, что этот путь активируется по механизму резистентности, функционирующему по принципу обратной связи, в ответ на ингибирование драйверных онкогенных путей в раковых клетках, таких как мутировавший рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) при немелкоклеточном раке легкого (NSCLC), или MAPK (митоген-активируемая протеинкиназа)-путь при опухолях с мутациями в гене KRAS (Lee et al., Cancer Cell 2014; 26; 207-221; VanSchaeybroeck et al., Cell reports 2014; 7; 1940-1955). Таким образом, ингибирование JAK1 может обеспечивать потенцирование терапевтической пользы многих различных терапий, нацеленных на рак.
Кроме того, раковая кахексия вносит значительный вклад в увеличение смертности и плохую ответную реакцию на химиотерапию у пациентов с запущенным раком. Было показано, что повышенные уровни воспалительных цитокинов, таких как IL-6, которые передают сигнал через JAK/STAT путь, играют нерегулярную роль, что свидетельствует о потенциальной пользе ингибирования JAK1 для ослабления раковой кахексии.
Принимая во внимание решающую роль JAK1 в сигнальной трансдукции, опосредованной цитокиновыми рецепторами класса II, рецепторной субъединицей γc, субъединицей gp130 и G-CSF, а также доминирование в стимулировании активности иммуннорелевантных γc цитокинов, ингибирование JAK1 может быть полезным в лечении целого ряда иммунных расстройств, таких как костномозговые расстройства, ревматоидный артрит, псориаз, болезнь Крона, волчанка и рассеянный склероз.
Сущность изобретения
В совокупности, наблюдения решающей роли JAK в пролиферативных и иммунных расстройствах выдвигают на первый план широкий потенциал для ингибирования JAK в качестве терапевтического метода при целом ряде заболеваний и расстройств. Соответственно, раскрыты соединения, которые являются ингибиторами JAK.
В одном воплощении раскрыты соединения формулы (I):
(I),
где
1
R представляет собой метил или этил;
2
R выбран из метила, этила, метокси и этокси;
3
R выбран из водорода, хлора, фтора, брома и метила;
4
2
3
R выбран из метила, этила и -CHOCH;
5
6
каждый из R и R индивидуально представляет собой метил или водород; и
7
2
2
2
2
3
R выбран из метила, этила, -(CH)OH и -(CH)OCH;
или их фармацевтически приемлемые соли.
В одном воплощении раскрыты фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или твердую форму и фармацевтически приемлемый разбавитель, эксципиент или носитель.
В другом воплощении раскрыты способы лечения связанного с JAK расстройства у нуждающегося в этом субъекта, включающие введение этому субъекту эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы.
В другом воплощении раскрыто соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль или твердая форма для применения в лечении связанного с JAK расстройства.
В другом воплощении, раскрыты фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или твердую форму, для применения в лечении связанного с JAK расстройства.
В другом воплощении раскрыто применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы в изготовлении лекарственного средства для лечения связанного с JAK расстройства.
В другом воплощении раскрыты способы лечения рака у нуждающегося в этом субъекта, включающие введение этому субъекту эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы в комбинации с противораковым терапевтическим агентом или его фармацевтически приемлемой солью.
В другом воплощении раскрыто соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль или твердая форма в комбинации с противораковым терапевтическим агентом или его фармацевтически приемлемой солью для применения в лечении рака.
В другом воплощении раскрыты фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или твердую форму в комбинации с противораковым терапевтическим агентом или его фармацевтически приемлемой солью, для применения в лечении рака.
В другом воплощении раскрыто применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы в комбинации с противораковым терапевтическим агентом или его фармацевтически приемлемой солью в изготовлении лекарственного средства для лечения рака.
В другом воплощении раскрыты способы лечения раковой кахексии у нуждающегося в этом субъекта, включающие введение этому субъекту эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы.
В другом воплощении, раскрыто соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль или твердая форма для применения в лечении раковой кахексии.
В другом воплощении раскрыты фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или твердую форму, для применения в лечении раковой кахексии.
В другом воплощении раскрыто применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы в изготовлении лекарственного средства для лечения раковой кахексии.
В другом воплощении раскрыты способы лечения иммунного расстройства у нуждающегося в этом субъекта, включающие введение этому субъекту эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы.
В другом воплощении раскрыто соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль или твердая форма для применения в лечении иммунного расстройства.
В другом воплощении раскрыты фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или твердую форму, для применения в лечении иммунного расстройства.
В другом воплощении раскрыто применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы в изготовлении лекарственного средства для лечения иммунного расстройства.
В другом воплощении раскрыты способы ингибирования JAK у нуждающегося в этом субъекта, включающие введение этому субъекту эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы.
В другом воплощении раскрыто соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль или твердая форма для применения в ингибировании JAK.
В другом воплощении раскрыты фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или твердую форму, для применения в ингибировании JAK.
В другом воплощении, раскрыто применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы в изготовлении лекарственного средства для ингибирования JAK.
Краткое описание графических материалов
Фиг.1 иллюстрирует графическое изображение дифракции рентгеновских лучей на порошке (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме A.
Фиг.2 иллюстрирует кривые дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) и термогравиметрического анализа (TGA) (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме A.
Фиг.3 иллюстрирует графическое изображение дифракции рентгеновских лучей на порошке (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме B.
Фиг.4 иллюстрирует кривые дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) и термогравиметрического анализа (TGA) (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме B.
Фиг.5 иллюстрирует графическое изображение дифракции рентгеновских лучей на порошке (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме C.
Фиг.6 иллюстрирует кривые дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) и термогравиметрического анализа (TGA) (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме C.
Фиг.7 иллюстрирует графическое изображение дифракции рентгеновских лучей на порошке (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме D.
Фиг.8 иллюстрирует кривые дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) и термогравиметрического анализа (TGA) (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме D.
Фиг.9 иллюстрирует графическое изображение дифракции рентгеновских лучей на порошке сахариновой соли (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме A.
Фиг.10 иллюстрирует кривые дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) и термогравиметрического анализа (TGA) сахариновой соли (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме A.
Фиг.11 иллюстрирует графическое изображение дифракции рентгеновских лучей на порошке сахариновой соли (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме B.
Фиг.12 иллюстрирует кривые дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) и термогравиметрического анализа (TGA) сахариновой соли (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме B.
Фиг.13 иллюстрирует графическое изображение дифракции рентгеновских лучей на порошке сахариновой соли (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме C.
Фиг.14 иллюстрирует графическое изображение дифракции рентгеновских лучей на порошке сахариновой соли (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме D.
Фиг.15 иллюстрирует графическое изображение дифракции рентгеновских лучей на порошке сахариновой соли (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме E.
Фиг.16 иллюстрирует графическое изображение дифракции рентгеновских лучей на порошке гидрохлоридной сахариновой соли (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида.
Фиг.17 иллюстрирует графическое изображение дифракции рентгеновских лучей на порошке нападизиловой соли (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида.
Фиг.18 иллюстрирует графическое изображение дифракции рентгеновских лучей на порошке тримезиновой соли (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида.
Фиг.19 иллюстрирует объемы опухолей NCI-H1975 после лечения носителем, осимертинибом (2,5 мг/кг QD (четыре раза в день)), который вводили в виде единственного агента, соединением Примера 32 (12,5 мг/кг BID (два раза в день), 25 мг/кг BID или 50 мг/кг BID) в виде единственного агента и осимертинибом (2,5 мг/кг QD) в комбинации с соединением Примера 32 (12,5 мг/кг BID, 25 мг/кг BID или 50 мг/кг BID).  означает носитель;  означает осимертиниб, который вводили в виде единственного агента;  означает 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в виде единственного агента;  означает 25 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в виде единственного агента;  означает 12,5 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в виде единственного агента;  означает осимертиниб, который вводили в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32;  означает осимертиниб, который вводили в комбинации с 25 мг/кг BID соединения Примера 32; и  означает осимертиниб, который вводили в комбинации с 12,5 мг/кг BID соединения Примера 32.
Фиг.20 иллюстрирует массы тел после лечения носителем, осимертинибом (2,5 мг/кг QD) в виде единственного агента, соединением Примера 32 (12,5 мг/кг BID, 25 мг/кг BID или 50 мг/кг BID) в виде единственного агента и осимертинибом (2,5 мг/кг QD) в комбинации с соединением Примера 32 (12,5 мг/кг BID, 25 мг/кг BID или 50 мг/кг BID).  означает носитель;  означает осимертиниб, который вводили в виде единственного агента;  означает 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в виде единственного агента;  означает 25 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в виде единственного агента;  означает 12,5 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в виде единственного агента;  означает 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в комбинации с осимертинибом;  означает 25 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в комбинации с осимертинибом; и  означает 12,5 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в комбинации с осимертинибом.
Фиг.21 иллюстрирует нокдаун pSTAT3 в опухолях NCI-H1975 после лечения носителем, AZD1480 в виде единственного агента, осимертинибом (2,5 мг/кг QD) в виде единственного агента, соединением Примера 32 (12,5 мг/кг BID, 25 мг/кг BID или 50 мг/кг BID) в виде единственного агента и осимертинибом (2,5 мг/кг QD), который вводили в комбинации с соединением Примера 32 (12,5 мг/кг BID, 25 мг/кг BID или 50 мг/кг BID). ♦ означает pSTAT3, и столбики отображают уровни соединения Примера 32 в плазме крови.
Фиг.22 иллюстрирует объемы опухолей PC-9 после лечения носителем, гефитинибом (IRESSA, 6,25 мг/кг QD), который вводили в виде единственного агента, и гефитинибом (IRESSA, 6,25 мг/кг QD), который вводили в комбинации с соединением Примера 32 (12,5 мг/кг BID, 50 мг/кг BID и 50 мг/кг BID по схеме: введение 2 дня/перерыв 5 дней/неделя).  означает носитель;  означает гефитиниб (IRESSA), который вводили в виде единственного агента;  означает гефитиниб (IRESSA), который вводили в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32;  означает гефитиниб (IRESSA), который вводили в комбинации с 12,5 мг/кг BID соединения Примера 32; и  означает гефитиниб (IRESSA), который вводили в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32 по схеме: введение 2 дня/перерыв 5 дней/неделя.
Фиг.23 иллюстрирует массы тел после лечения носителем, гефитинибом (IRESSA, 6,25 мг/кг QD), который вводили в виде единственного агента, и гефитинибом (IRESSA, 6,25 мг/кг QD), который вводили в комбинации с соединением Примера 32 (12,5 мг/кг BID, 50 мг/кг BID и 50 мг/кг по схеме: введение 2 дня/перерыв 5 дней/неделя).  означает носитель;  означает гефитиниб (IRESSA), который вводили в виде единственного агента;  означает гефитиниб (IRESSA), который вводили в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32;  означает гефитиниб (IRESSA), который вводили в комбинации с 12,5 мг/кг BID соединения Примера 32; и  означает гефитиниб (IRESSA), который вводили в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32 по схеме: введение 2 дня/перерыв 5 дней/неделя.
Фиг.24 иллюстрирует нокдаун pSTAT3 в опухолях PC-9 после лечения носителем, гефитинибом (IRESSA, 6,25 мг/кг QD), который вводили в виде единственного агента, и гефитинибом (IRESSA, 6,25 мг/кг QD), который вводили в комбинации с соединением Примера 32 (12,5 мг/кг BID и 50 мг/кг BID).
Фиг.25 иллюстрирует объемы опухолей NCI-H1650 после лечения носителем, гефитинибом (IRESSA, 6,25 мг/кг QD), который вводили в виде единственного агента, соединением Примера 32 (25 мг/кг BID или 50 мг/кг BID), которое вводили в виде единственного агента, и гефитинибом (IRESSA, 6,25 мг/кг QD), который вводили в комбинации с соединением Примера 32 (25 мг/кг BID или 50 мг/кг BID).  означает носитель;  означает гефитиниб (IRESSA), который вводили в виде единственного агента;  означает 25 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в виде единственного агента;  означает 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в виде единственного агента;  означает гефитиниб (IRESSA), который вводили в комбинации с 25 мг/кг BID соединения Примера 32; и  означает гефитиниб (IRESSA), который вводили в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32.
Фиг.26 иллюстрирует массы тел после лечения носителем, гефитинибом (IRESSA, 6,25 мг/кг QD), который вводили в виде единственного агента, соединением Примера 32 (25 мг/кг BID или 50 мг/кг BID), которое вводили в виде единственного агента, и гефитинибом (IRESSA, 6,25 мг/кг QD), который вводили в комбинации с соединением Примера 32 (25 мг/кг BID или 50 мг/кг BID).  означает носитель;  означает гефитиниб (IRESSA), который вводили в виде единственного агента;  означает 25 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в виде единственного агента;  означает 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в виде единственного агента;  означает гефитиниб (IRESSA), который вводили в комбинации с 25 мг/кг BID соединения Примера 32; и  означает гефитиниб (IRESSA), который вводили в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32.
Фиг.27 иллюстрирует нокдаун pSTAT3 в опухолях NCI-H1650 после лечения носителем, AZD1408, который вводили в виде единственного агента, гефитинибом (IRESSA, 6,25 мг/кг QD), который вводили в виде единственного агента, соединением Примера 32 (25 мг/кг BID или 50 мг/кг BID), которое вводили в виде единственного агента, и гефитинибом (IRESSA, 6,25 мг/кг QD), который вводили в комбинации с соединением Примера 32 (25 мг/кг BID или 50 мг/кг BID). ♦ означает pSTAT, и столбики отображают уровни соединения Примера 32 в плазме крови.
Фиг.28 иллюстрирует объемы опухолей LG1049 после лечения носителем (); осимертинибом (25 мг/кг QD), который вводили в виде единственного агента в течение 28 дней (); соединением Примера 32 (25 мг/кг BID), которое вводили в виде единственного агента в течение 18 дней (), осимертинибом (25 мг/кг QD), который вводили в комбинации с соединением Примера 32 (25 мг/кг BID) 7 дней, затем по схеме: введение 3 дня/перерыв 4 дня/неделя до 28 дней (). означает мыши, которых лечили комбинацией в течение 28 дней, затем только соединением Примера 32 (25 мг/кг BID) по схеме: введение 3 дня/перерыв 4 дня/неделя до конца исследования.
Фиг.29 иллюстрирует массы тел после лечения объемы опухолей LG1049 после лечения носителем (), осимертинибом (25 мг/кг QD), который вводили в виде единственного агента в течение 28 дней (), соединением Примера 32 (25 мг/кг BID), которое вводили в виде единственного агента (), осимертинибом (25 мг/кг QD), который вводили в комбинации с соединением Примера 32 (25 мг/кг BID) 7 дней, затем по схеме: введение 3 дня/перерыв 4 дня до дня 28 (). означает мыши, которых лечили комбинацией в течение 28 дней, затем только соединением Примера 32 (25 мг/кг BID) по схеме: введение 3 дня/перерыв 4 дня/неделя до конца исследования.
Фиг.30 иллюстрирует нокдаун pSTAT3 и pEGFR в опухолях LG1049 после пяти дней лечения носителем, осимертинибом (25 мг/кг QD), который вводили в виде единственного агента, соединением Примера 32 (25 мг/кг BID), которое вводили в виде единственного агента, и осимертинибом (25 мг/кг QD), который вводили в комбинации с соединением Примера 32 (25 мг/кг BID).
Фиг.31 иллюстрирует объемы опухолей NCI-H1975 после лечения носителем, соединением Примера 32, которое вводили в виде единственного агента, осимертинибом, который вводили в виде единственного агента, и соединением Примера 32, которое вводили в комбинации с осимертинибом. Фиг.31A иллюстрирует объем опухоли с течением времени после непрерывного введения носителя в течение 19 дней (); 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в виде единственного агента в течение 19 дней (); 2,5 мг/кг QD осимертинибом, который вводили в виде единственного агента в течение 26 дней (); 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в комбинации с 12,5 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в течение 26 дней (); и 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в течение 26 дней (). Фиг.31B иллюстрирует объем опухоли с течением времени после введения носителя () в течение 19 дней; 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в виде единственного агента в течение 19 дней (); 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в виде единственного агента в течение 26 дней (); 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 26 дней в комбинации с 25 мг/кг BID соединением Примера 32, которое вводили в течение 7 дней (); и 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 26 дней в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в течение 7 дней (). Фиг.31C иллюстрирует объем опухоли с течением времени после введения носителя в течение 19 дней (); 50 мг/кг BID соединения Пример 32 в виде единственного агента в течение 19 дней (); 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в виде единственного агента в течение 26 дней (); 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 29 дней в комбинации с 25 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили по схеме: введение 7 дней/перерыв 7 дней/2 недели (); и 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 29 дней в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили по схеме: введение 7 дней/перерыв 7 дней/2 недели (). Фиг.31D иллюстрирует объем опухоли с течением времени после введения носителя в течение 19 дней (); 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в виде единственного агента в течение 19 дней (); 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в виде единственного агента в течение 26 дней (); 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 29 дней в комбинации с 25 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили по схеме: введение 4 дня/перерыв 3 дня/неделя (); и 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 29 дней в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили по схеме: введение 4 дня/перерыв 3 дня/неделя (). Фиг.31E иллюстрирует объем опухоли с течением времени после введения носителя в течение 19 дней (); 50 мг/кг BID соединения Примера 32 в течение 19 дней (); 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 26 дней (); 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 29 дней в комбинации с 25 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили по схеме: введение 2 дня/перерыв 5 дней/неделя (); и 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 29 дней в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили по схеме введение 2 дня/перерыв 5 дней/неделя ().
Фиг.32 иллюстрирует массу тела с течением времени после лечения носителем, соединением Примера 32 в виде единственного агента, осимертинибом в виде единственного агента и соединением Примера 32 в комбинации с осимертинибом.  означает носитель, который вводили в течение 19 дней;  означает 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 26 дней;  означает 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в течение 19 дней;  означает 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в комбинации с 12,5 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в течение 26 дней;  означает 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в течение 26 дней;  означает 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 26 дней в комбинации с 25 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в течение 7 дней;  означает 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 26 дней в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в течение 7 дней;  означает 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 29 дней в комбинации с 50 мг/кг BID соединением Примера 32, которое вводили по схеме: введение 7 дней/перерыв 7 дней в течение одной недели;  означает 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 29 дней в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в течение 7 дней/перерыв 7 дней в течение 2 недель;  означает 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 29 дней в комбинации с 25 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в течение 4 дня/перерыв 3 дня в течение одной недели;  означает 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 29 дней в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в течение 4 дня/перерыв 3 дня в течение одной недели; означает 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 29 дней в комбинации с 25 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в течение 2 дней/перерыв 5 дней в течение одной недели; и  означает 2,5 мг/кг QD осимертиниба, который вводили в течение 29 дней в комбинации с 50 мг/кг BID соединения Примера 32, которое вводили в течение 2 дней/перерыв 5 дней в течение одной недели.
Подробное описание изобретения
Соединения
В одном воплощении раскрыты соединения формулы (I):
(I),
где
1
R представляет собой метил или этил;
2
R выбран из метила, этила, метокси и этокси;
3
R выбран из водорода, хлора, фтора, брома и метила;
4
2
3
R выбран из метила, этила и -CHOCH;
5
6
каждый из R и R индивидуально представляет собой метил или водород; и
7
2
2
2
2
3
R выбран из метила, этила, -(CH)OH и -(CH)OCH;
или их фармацевтически приемлемые соли.
1
2
3
4
5
6
7
2
3
2
2
3
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси, этокси, метил или этил; R представляет собой водород, фтор метил, хлор или бром; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой водород или метил; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой метил, -(CH)OCH, этил или -(CH)OH.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой этил; R представляет собой метокси или этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
2
1
3
4
5
6
7
2
3
2
2
3
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой метокси; R представляет собой метил или этил; R представляет собой водород, фтор, метил, хлор или бром; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой водород или метил; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой метил, этил, -(CH)OCH или -(CH)OH.
2
1
3
4
5
6
7
2
3
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой этокси; R представляет собой метил или этил; R представляет собой фтор, метил или хлор; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой метил или водород; R представляет собой метил или водород; и R представляет собой этил, метил или -(CH)OCH.
2
1
3
4
5
6
7
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород, метил или фтор; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
2
1
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой этил; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
3
1
2
4
5
6
7
2
3
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой метокси или метил; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой метил или водород; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой метил, -(CH)OCH или этил.
3
1
2
4
5
6
7
2
3
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой метокси или этокси; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой водород или метил; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой метил, этил или -(CH)OCH.
3
1
2
4
5
6
7
2
3
2
2
3
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил или этил; R представляет собой метокси, этокси, метил или этил; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой водород или метил; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой метил, этил, -(CH)OCH или -(CH)OH.
3
1
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой хлор; R представляет собой метил; R2 представляет собой метокси или этокси; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород и R представляет собой метил.
3
1
2
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой бром; R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
4
1
2
3
5
6
7
2
2
3
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил или этил; R представляет собой метокси, этокси, метил или этил; R представляет собой водород, фтор, метил, хлор или бром; R представляет собой водород или метил; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой метил, этил, -(CH)OCH или -(CH)OH.
4
1
2
3
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой этил; R представляет собой метил; R представляет собой метокси, метил или этокси; R представляет собой метил, водород или фтор; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
4
1
2
3
5
6
7
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой -CHOCH; R представляет собой метил; R представляет собой метокси, метил или этокси; R представляет собой метил, фтор или водород; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
5
1
2
3
4
6
7
2
3
2
2
3
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой водород; R представляет собой метил или этил; R представляет собой метокси, этокси, метил или этил; R представляет собой водород, фтор, метил, хлор или бром; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой метил, этил, -(CH)OCH или -(CH)OH.
5
1
2
3
4
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой метокси или этокси; R представляет собой водород, фтор или метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
6
1
2
3
4
5
7
2
3
2
2
3
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой водород; R представляет собой метил или этил; R представляет собой метокси, этокси, метил или этил; R представляет собой водород, фтор, метил, хлор или бром; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой водород или метил и R представляет собой метил, этил, -(CH)OCH или -(CH)OH.
6
1
2
3
4
5
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой метокси или этокси; R представляет собой фтор, метил или водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
7
1
2
3
4
5
6
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил или этил; R представляет собой метил, этил, метокси или этокси; R представляет собой водород, хлор, фтор, бром или метил; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой водород или метил.
7
1
2
3
4
5
6
В некоторых воплощениях R представляет собой этил; R представляет собой метил; R представляет собой метокси или этокси; R представляет собой фтор, метил или водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой водород.
7
1
2
3
4
5
6
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой -(CH)OCH; R представляет собой метил; R представляет собой метокси или этокси; R представляет собой фтор, метил или водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой водород.
7
1
2
3
4
5
6
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой -(CH)OH; R представляет собой метил, R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой водород.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород и R представляет собой -(CH)OCH.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой этил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой этил.
1
2
3
4
5
6
7
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой -(CH)OCH.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой -(CH)OH.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой этил.
1
2
3
4
5
6
7
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой -(CH)OCH.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой этил.
1
2
3
4
5
6
7
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой -(CH)OCH.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой -(CH)OCH.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород и R представляет собой этил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой хлор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой бром; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой хлор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой этил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой -CHOCH; R представляет собой водород; R представляет собой водород и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой этил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой фтор; R представляет собой этил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой фтор; R представляет собой этил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой фтор; R представляет собой -CHOCH; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этил; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой этил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой этил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой -CHOCH; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой этил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1
2
3
4
5
6
7
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой -CHOCH; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
В одном воплощении соединения формулы (I) представляют собой соединения формулы (Ia):
(Ia),
где
1a
R представляет собой метил или этил;
2a
R выбран из метила, этила, метокси и этокси;
3a
R выбран из водорода, хлора, фтора, брома и метила;
4a
2
3
R выбран из метила, этила и -CHOCH;
5a
6a
каждый из R и R индивидуально представляет собой метил или водород; и
7a
2
2
2
2
3
R выбран из метила, этила, -(CH)OH и -(CH)OCH;
или их фармацевтически приемлемые соли.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
2
3
2
2
3
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси, этокси, метил или этил; R представляет собой водород, фтор метил, хлор или бром; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой водород или метил; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой метил, -(CH)OCH, этил или -(CH)OH.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой этил; R представляет собой метокси или этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
2a
1a
3a
4a
5a
6a
7a
2
3
2
2
3
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой метокси; R представляет собой метил или этил; R представляет собой водород, фтор, метил, хлор или бром; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой водород или метил; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой метил, этил, -(CH)OCH или -(CH)OH.
2a
1a
3a
4a
5a
6a
7a
2
3
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой этокси; R представляет собой метил или этил; R представляет собой фтор, метил или хлор; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой метил или водород; R представляет собой метил или водород; и R представляет собой этил, метил или -(CH)OCH.
2a
1a
3a
4a
5a
6a
7a
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород, метил или фтор; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
2a
1a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой этил; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
3a
1a
2a
4a
5a
6a
7a
2
3
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой метокси или метил; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой метил или водород; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой метил, -(CH)OCH или этил.
3a
1a
2a
4a
5a
6a
7a
2
3
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой метокси или этокси; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой водород или метил; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой метил, этил или -(CH)OCH.
3a
1a
2a
4a
5a
6a
7a
2
3
2
2
3
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил или этил; R представляет собой метокси, этокси, метил или этил; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой водород или метил; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой метил, этил, -(CH)OCH или -(CH)OH.
3a
1a
2a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой хлор; R представляет собой метил; R представляет собой метокси или этокси; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
3a
1a
2a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой бром; R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
4a
1a
2a
3a
5a
6a
7a
2
2
3
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил или этил; R представляет собой метокси, этокси, метил или этил; R представляет собой водород, фтор, метил, хлор или бром; R представляет собой водород или метил; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой метил, этил, -(CH)OCH или -(CH)OH.
4a
1a
2a
3a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой этил; R представляет собой метил; R представляет собой метокси, метил или этокси; R представляет собой метил, водород или фтор; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
4a
1a
2a
3a
5a
6a
7a
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой -CHOCH; R представляет собой метил; R представляет собой метокси, метил или этокси; R представляет собой метил, фтор или водород; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
5a
1a
2a
3a
4a
6a
7a
2
3
2
2
3
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой водород; R представляет собой метил или этил; R представляет собой метокси, этокси, метил или этил; R представляет собой водород, фтор, метил, хлор или бром; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой метил, этил, -(CH)OCH или -(CH)OH.
5a
1a
2a
3a
4a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой метокси или этокси; R представляет собой водород, фтор или метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
6a
1a
2a
3a
4a
7a
2
3
2
2
3
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой водород; R представляет собой метил или этил; R представляет собой метокси, этокси, метил или этил; R представляет собой водород, фтор, метил, хлор или бром; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R5s представляет собой водород или метил и R представляет собой метил, этил, -(CH)OCH или -(CH)OH.
6a
1a
2a
3a
4a
5a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой метокси или этокси; R представляет собой фтор, метил или водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
7a
1a
2a
3a
4a
5a
6a
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил или этил; R представляет собой метил, этил, метокси или этокси; R представляет собой водород, хлор, фтор, бром или метил; R представляет собой метил, этил или -CHOCH; R представляет собой водород или метил; и R представляет собой водород или метил.
7a
1a
2a
3a
4a
5a
6a
В некоторых воплощениях R представляет собой этил; R представляет собой метил; R представляет собой метокси или этокси; R представляет собой фтор, метил или водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой водород.
7a
1a
2a
3a
4a
5a
6a
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой -(CH)OCH; R представляет собой метил; R представляет собой метокси или этокси; R представляет собой фтор, метил или водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой водород.
7a
1a
2a
3a
4a
5a
6a
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой -(CH)OH; R представляет собой метил, R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой водород.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой -(CH)OCH.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой этил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой этил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой -(CH)OCH.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой -(CH)OH.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой этил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой -(CH)OCH.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой этил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой -(CH)OCH.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой -(CH)OCH.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород и R представляет собой этил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой хлор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой бром; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой хлор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой этил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой -CHOCH; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой этил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой фтор; R представляет собой этил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой фтор; R представляет собой этил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой фтор; R представляет собой -CHOCH; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этил; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой фтор; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой этил; R представляет собой метокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой этил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой метил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси; R представляет собой водород; R представляет собой -CHOCH; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой этил; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой этокси; R представляет собой метил; R представляет собой -CHOCH; R представляет собой водород; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
В одном воплощении соединения формулы (I) представляют собой соединения формулы (Ib):
(Ib),
где
2b
R выбран из метила, этила, метокси и этокси;
3b
R выбран из водорода, хлора, фтора, брома и метила; и
7b
2
2
2
2
3
R выбран из метила, этила, -(CH)OH и -(CH)OCH;
или их фармацевтически приемлемые соли.
2b
3b
7b
2
2
3
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой метокси; R представляет собой водород, фтор, метил, хлор или бром; и R представляет собой метил, этил, -(CH)OCH или -(CH)OH.
2b
3b
7b
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой этокси; R представляет собой фтор, метил или хлор; и R представляет собой этил, метил или -(CH)OCH.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой водород, метил или фтор; и R представляет собой метил.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой этил; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
3b
2b
7b
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой водород; R представляет собой метокси или метил; и R представляет собой метил, -(CH)OCH или этил.
3b
2b
7b
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой фтор; R представляет собой метокси или этокси; R представляет собой метил, этил или -(CH)OCH.
3b
2b
7b
2
2
3
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метокси, этокси, метил или этил; и R представляет собой метил, этил, -(CH)OCH или -(CH)OH.
3b
2b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой хлор; R представляет собой метокси или этокси; и R представляет собой метил.
3b
2b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой бром; R представляет собой метокси; и R представляет собой метил.
7b
2b
3b
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой метил, этил, метокси или этокси; и R представляет собой водород, хлор, фтор, бром или метил.
7b
2b
3b
В некоторых воплощениях R представляет собой этил; R представляет собой метокси или этокси; и R представляет собой фтор, метил или водород.
7b
2b
3b
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой -(CH)OCH; R представляет собой метокси или этокси; и R представляет собой фтор, метил или водород.
7b
2b
3a
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой -(CH)OH; R представляет собой метокси; и R представляет собой метил.
2b
3b
7b
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метокси; R представляет собой фтор; и R представляет собой -(CH)OCH.
2b
3b
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой метокси; R представляет собой фтор; и R представляет собой этил.
2b
3b
7a
В некоторых воплощениях R представляет собой этокси; R представляет собой фтор; и R представляет собой этил.
2b
3b
7b
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой этокси; R представляет собой фтор; и R представляет собой -(CH)OCH.
2b
3b
7b
2
2
В некоторых воплощениях R представляет собой метокси; R представляет собой метил; и R представляет собой -(CH)OH.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой метокси; R представляет собой метил; и R представляет собой этил.
2b
3b
7b
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метокси; R представляет собой метил; и R представляет собой -(CH)OCH.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой этокси; R представляет собой метил; и R представляет собой этил.
2b
3b
7b
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой этокси; R представляет собой метил; и R представляет собой -(CH)OCH.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой метокси; R представляет собой фтор; и R представляет собой метил.
2b
3b
7b
2
2
3
В некоторых воплощениях R представляет собой метокси; R представляет собой водород; и R представляет собой -(CH)OCH.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой метокси; R представляет собой водород; и R представляет собой этил.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой метокси; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой метокси; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой этокси; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой метокси; R представляет собой хлор; и R представляет собой метил.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой метокси; R представляет собой бром; и R представляет собой метил.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой этокси; R представляет собой фтор; и R представляет собой метил.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой этокси; R представляет собой хлор; и R представляет собой метил.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой этил; R представляет собой метил; и R представляет собой метил.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой фтор; и R представляет собой метил.
2b
3b
7b
В некоторых воплощениях R представляет собой метил; R представляет собой водород; и R представляет собой метил.
В некоторых воплощениях раскрыты соединения, указанные в Таблице 1, или их фармацевтически приемлемые соли:
Таблица 1
Пример №
Химическая структура
Название
Пример 1
<img file="00000025.jpg" he="34" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(2S)-2,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 2
<img file="00000026.jpg" he="34" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(3R)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{5-фтор-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 3
<img file="00000027.jpg" he="39" wi="117" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{5-фтор-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-[4-(2-метоксиэтил)пиперазин-1-ил]пропанамид
Пример 4
<img file="00000028.jpg" he="43" wi="108" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-(4-этилпиперазин-1-ил)-N-(3-{5-фтор-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 5
<img file="00000029.jpg" he="46" wi="104" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(3S)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{5-фтор-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 6
<img file="00000030.jpg" he="44" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(2R)-2,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{5-фтор-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 7a
<img file="00000031.jpg" he="42" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(2S)-2,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{5-фтор-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 7b
<img file="00000032.jpg" he="39" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2S)-2-[(2S)-2,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{5-фтор-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 8
<img file="00000033.jpg" he="41" wi="109" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-этилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 9
<img file="00000034.jpg" he="45" wi="118" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-[4-(2-метоксиэтил)пиперазин-1-ил]пропанамид
Пример 10a
<img file="00000035.jpg" he="43" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(2S)-2,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 10b
<img file="00000036.jpg" he="46" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2S)-2-[(2S)-2,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 11a
<img file="00000037.jpg" he="44" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(3S)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 11b
<img file="00000038.jpg" he="38" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2S)-2-[(3S)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 12
<img file="00000039.jpg" he="45" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(2R)-2,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 13
<img file="00000040.jpg" he="46" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(3R)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 14
<img file="00000041.jpg" he="40" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(3S)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 15
<img file="00000042.jpg" he="50" wi="119" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 16
<img file="00000043.jpg" he="42" wi="109" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-(4-этилпиперазин-1-ил)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 17
<img file="00000044.jpg" he="42" wi="118" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[4-(2-метоксиэтил)пиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 18
<img file="00000045.jpg" he="42" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(3R)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 19
<img file="00000046.jpg" he="42" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(2S)-2,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 20
<img file="00000047.jpg" he="46" wi="109" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-этилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 21
<img file="00000048.jpg" he="50" wi="118" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-[4-(2-метоксиэтил)пиперазин-1-ил]пропанамид
Пример 22
<img file="00000049.jpg" he="47" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(2S)-2,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 23
<img file="00000050.jpg" he="47" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(2R)-2,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 24
<img file="00000051.jpg" he="46" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(3R)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 25
<img file="00000052.jpg" he="41" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{5-Фтор-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 26
<img file="00000053.jpg" he="41" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(3S)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 27
<img file="00000054.jpg" he="43" wi="118" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[4-(2-метоксиэтил)пиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 28
<img file="00000055.jpg" he="47" wi="107" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-(4-этилпиперазин-1-ил)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 29
<img file="00000056.jpg" he="40" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(2R)-2,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 30
<img file="00000057.jpg" he="47" wi="104" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(3R)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 31a
<img file="00000058.jpg" he="46" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(3S)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 31b
<img file="00000059.jpg" he="47" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2S)-2-[(3S)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 32
<img file="00000060.jpg" he="40" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 33
<img file="00000061.jpg" he="43" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2S)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 34
<img file="00000062.jpg" he="42" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(3-Метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 35
<img file="00000063.jpg" he="41" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 36
<img file="00000064.jpg" he="42" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{5-хлор-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 37
<img file="00000065.jpg" he="40" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{5-бром-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 38
<img file="00000066.jpg" he="39" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-2-[(2R)-2,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
Пример 39
<img file="00000067.jpg" he="45" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 40
<img file="00000068.jpg" he="45" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{5-хлор-2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 41
<img file="00000069.jpg" he="33" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 42
<img file="00000070.jpg" he="35" wi="105" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2S)-N-(3-{2-[(1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 43
<img file="00000071.jpg" he="63" wi="91" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2S)-N-(3-{2-[(3-Метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид
Пример 44
<img file="00000072.jpg" he="61" wi="92" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(3-Метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид
Пример 45
<img file="00000073.jpg" he="57" wi="95" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-3-метокси-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 46
<img file="00000074.jpg" he="48" wi="95" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2S)-3-метокси-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 47
<img file="00000075.jpg" he="55" wi="94" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(3-Метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид
Пример 48
<img file="00000076.jpg" he="58" wi="93" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2S)-N-(3-{2-[(3-Метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид
Пример 49
<img file="00000077.jpg" he="52" wi="93" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид
Пример 50
<img file="00000078.jpg" he="50" wi="94" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2S)-N-(3-{2-[(1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид
Пример 51
<img file="00000079.jpg" he="59" wi="93" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{5-фтор-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид
Пример 52
<img file="00000080.jpg" he="51" wi="94" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2S)-N-(3-{5-фтор-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид
Пример 53
<img file="00000081.jpg" he="57" wi="96" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-3-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 54
<img file="00000082.jpg" he="57" wi="95" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2S)-N-(3-{2-[(1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-3-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 55
<img file="00000083.jpg" he="36" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(3-этил-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 56
<img file="00000084.jpg" he="32" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 57
<img file="00000085.jpg" he="34" wi="106" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 58
<img file="00000086.jpg" he="43" wi="109" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(1-этил-3-метокси-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 59
<img file="00000087.jpg" he="46" wi="109" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(3-этокси-1-этил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 60
<img file="00000088.jpg" he="64" wi="94" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-3-Метокси-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 61
<img file="00000089.jpg" he="59" wi="95" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2S)-3-Метокси-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 62
<img file="00000090.jpg" he="59" wi="94" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид
Пример 63
<img file="00000091.jpg" he="60" wi="94" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2S)-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид
Пример 64
<img file="00000092.jpg" he="63" wi="95" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2R)-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-3-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
Пример 65
<img file="00000093.jpg" he="63" wi="95" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(2S)-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-3-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
В одном аспекте раскрытые соединения могут быть получены любым способом, описанным в Примерах. В одном воплощении раскрыты промежуточные соединения, описанные в Примерах.
Выражение “фармацевтически приемлемая соль” охватывает соли присоединения кислоты или основания, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства соединений формулы (I), (Ia), (Ib) и соединений из Таблицы 1, и которые обычно не являются биологически или в ином отношении нежелательными. Во многих случаях соединения формулы (I), (Ia), (Ib) и Таблицы 1 способны образовывать соли присоединения кислоты и/или основания благодаря тому, что они имеют амино и/или карбоксильные группы или группы, подобные им.
Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты могут быть образованы с неорганическими кислотами и органическими кислотами, например соли ацетат, аспартат, бензоат, безилат, бромид/гидробромид, бикарбонат/карбонат, бисульфат/сульфат, камфорсульфонат, хлорид/гидрохлорид, хлортеофиллонат, цитрат, этандисульфонат, фумарат, глуцептат, глюконат, глюкуронат, гипуррат, гидройодид/йодид, изетионат, лактат, лактобионат, лаурилсульфат, малат, малеат, малонат, манделат, мезилат, метилсульфат, нападизилат, нафтоат, напсилат, никотинат, нитрат, октадеканоат, одеат, оксалат, пальмитат, пальмоат, фосфат/гидрофосфат/дигидрофосфат, полигалактуронат, пропионат, стеарат, сукцинат, надсалицилат, тартрат, тозилат, тримесат и трифторацетат.Неорганические кислоты, из которых могут быть получены соли, включают, например, соляную кислоту, бромоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и т.п.Органические кислоты, из которых могут быть получены соли, включают, например, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, гликолевую кислоту, оксалиновую кислоту, малеиновую кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, тримезиновую кислоту, лимонную кислоту, бензойную кислоту, миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, нападизиловую кислоту, этансульфоновую кислоту, толуолсульфоновую кислоту, трифторуксусную кислоту, сульфосалициловую кислоту и т.п.
Фармацевтически приемлемые соли присоединения основания могут быть образованы с неорганическими и органическими основаниями. Неорганические основания, из которых могут быть получены соли, включают, например, аммониевые соли и соли металлов из Групп I-XII Периодической таблицы. В некоторых воплощениях соли представляют собой соли натрия, калия, аммония, кальция, магния, железа, серебра, цинка и меди. Особенно подходящие соли включают соли аммония, калия, натрия, кальция и магния. Органические основания, из которых могут быть получены соли, включают, например, первичные, вторичные и третичные амины, замещенные амины, включающие встречающиеся в природе замещенные амины, циклические амины, основные ионообменные смолы и т.п.Некоторые органические амины включают изопропиламин, бензатин, холинат, диэтаноламин, диэтиламин, лизин, меглумин, пиперазин и трометамин.
+
2+
2+
+
Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I), (Ia), (Ib) и Таблицы 1 могут быть синтезированы из основных или кислотных молекул стандартными химическими способами. Обычно такие соли могу быть получены в результате взаимодействия этих соединений в форме свободной кислоты со стехиометрическим количеством подходящего основания (такого как гидроксид, карбонат, бикарбонат Na, Ca, Mgили Kили т.п.) или в результате взаимодействия этих соединений в форме свободного основания со стехиометрическим количеством подходящей кислоты. Такие взаимодействия обычно проводят в воде или в органическом растворителе, или в их смеси. Как правило, использование неводных сред, таких как диэтиловый эфир, этилацетат, этанол, изопропанол, или ацетонитрил является желательным, если это практически осуществимо. Перечни дополнительных подходящих солей можно найти, например, в “Remington's Pharmaceutical Sciences,” 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); и в “Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use” by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002).
2
3
11
13
14
15
16
31
32
35
36
125
2
3
13
14
Любая формула, приведенная в данном документе, означает немеченые формы, а также меченные изотопом формы соединений формулы (I), (Ia), (Ib) и Таблицы 1. Меченные изотопом соединения имеют структуры, изображенные формулами, приведенными в данном документе, за исключением того, что один или более атомов заменены атомом, имеющим выбранную атомную массу или массовое число. Примеры изотопов, которые могут быть введены в соединения формулы (I), (Ia), (Ib) и Таблицы 1, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, такие как H, H, C, C, C, N, F, P, P, S, Cl и I. Соединения формулы (I), (Ia), (Ib) и Таблицы 1 могут включать различные меченные изотопом соединения, в которых присутствуют радиоактивные изотопы, такие как H, H, C и C. Меченные изотопом соединения формулы (I), (Ia) и (Ib) обычно могут быть получены общепринятыми способами, известными специалистам в данной области техники, или способами, аналогичными способам, описанным в приведенных Примерах, с использованием подходящих меченных изотопом реагентов вместо немеченых реагентов, использованных ранее.
Соединения формулы (I), (Ia), (Ib) и Таблицы 1 могут иметь разные изомерные формы. Выражение “оптический изомер” или “стереоизомер” относится к любой из различных стереоизомерных конфигураций, которые могут существовать у данного соединения формулы (I), (Ia), (Ib) и Таблицы 1. Понятно, что заместитель может быть присоединен по хиральному центру атома углерода и, следовательно, раскрытые соединения включают энантиомеры, диастереомеры и рацематы. Термин “энантиомер” охватывает пары стереоизомеров, которые представляют собой зеркальные отражения друг друга, не накладывающиеся друг на друга. Смесь 1:1 пары энантиомеров является рацемической смесью. Этот термин используется для обозначения рацемической смеси, если это необходимо. Термины “диастереомеры” или “диастереоизомеры” охватывают стереоизомеры, которые имеют по меньшей мере два асимметрических атома, но которые не являются зеркальными отражениями друг друга. Абсолютную стереохимию конкретно указывают согласно R-S системе Кана-Ингольда-Прелога. Когда соединение представляет собой чистый энантиомер, тогда стереохимия по каждому хиральному центру может быть конкретно указана либо символом R, либо S. Разделенные соединения, чья абсолютная конфигурация неизвестна, могут быть обозначены символом (+) или (-) в зависимости от направления (право- или левовращающий), в котором они вращают плоскость поляризации света при длине волны D-линии натрия. Некоторые соединения формулы (I), (Ia), (Ib) и Таблицы 1 содержат один или более асимметрических центров или осей и поэтому могут давать энантиомеры, диастереомеры или другие стереоизомерные формы, которые могут быть обозначены, в терминах абсолютной стереохимии, как (R)- или (S)-. Настоящее изобретение охватывает все такие возможные изомеры, включая рацемические смеси, оптически чистые формы и промежуточные смеси. Оптически активные (R)- и (S)-изомеры могут быть получены с использованием хиральных синтонов или хиральных реагентов, или могут быть разделены общепринятыми методами, известными в данной области техники, такими как хиральная HPLC (высокоэффективная жидкостная хроматография).
Твердые формы
В некоторых воплощениях раскрыты твердые формы соединений формулы (I), (Ia) и (Ib) или их фармацевтически приемлемых солей. Термин “твердая форма” включает в себя полиморфы, кристаллические соли, сольваты, гидраты и аморфные формы соединений формулы (I), (Ia) и (Ib). В некоторых воплощениях раскрыты твердые формы (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида или его фармацевтически приемлемой соли. Термин “полиморф” включает в себя кристаллические вещества, которые имеют одинаковый состав, но разную молекулярную упаковку. Термин “кристаллическая соль” включает в себя кристаллические структуры одних и тех же химических веществ, но с включенными в молекулярную упаковку кристаллической структуры солями присоединения кислоты или основания. Термин “сольват” включает в себя кристаллические структуры одного и того же химического вещества, но с включенными в молекулярную упаковку кристаллической структуры молекулами растворителя. Термин “гидраты” включает в себя кристаллические структуры одного и того же химического вещества, но с включенными в молекулярную упаковку кристаллической структуры молекулами воды. Термин “аморфная форма” включает в себя соединения одного и того же молекулярного вещества, но без молекулярного порядка кристаллической структуры (например, полиморфа, кристаллической соли, сольвата или гидрата) одного и того молекулярного вещества.
Общеизвестно, что твердые вещества могут быть охарактеризованы стандартными методами, такими как дифракция рентгеновских лучей на порошке (XRPD), дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC), термогравиметрический анализ (TGA), ИК-спектроскопия диффузного отражения с Фурье-преобразованием (DRIFT), спектроскопия в ближней инфракрасной области (NIR), спектроскопия ядерного магнитного резонанса в растворе и/или твердом состоянии. Содержание воды в таких твердых веществах может быть определено анализом по Карлу Фишеру.
Твердые формы, описанные в данном документе, обеспечивают картины XRPD, по существу такие же, как картины XRPD, представленные в графических материалах, и имеют различные значения 2-тета (2θ), которые указаны в Таблицах, приведенных в данном описании. Специалисту в данной области техники будет понятно, что может быть получена картина XRPD или дифрактограмма, которая имеет одну или более погрешностей измерения в зависимости от условий регистрации, таких как использованные приборы или оборудование. Аналогично, общеизвестно, что интенсивности в картинах XRPD могут варьировать в зависимости от условий измерений или подготовки образцов в результате предпочтительной ориентации. Специалисты в области XRPD поймут также, что на относительную интенсивность пиков могут влиять также, например, частицы размером свыше 30 мкм и соотношения неунитарных аспектов. Специалист понимает, что на положение отражений может оказывать влияние точная высота, на которой установлен образец в дифрактометре, и также калибровка нуля дифрактометра. Планарность поверхности образца также может оказывать небольшое влияние.
С учетом этих соображений, представленные на картинах дифракции данные не следует воспринимать как абсолютные значения (Jenkins, R & Snyder, R.L. ‘Introduction to X-Ray Powder Diffractometry’ John Wiley & Sons 1996; Bunn, C.W. (1948), ‘Chemical Crystallography’, Clarendon Press, London; Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), ‘X-Ray Diffraction Procedures’). Следует также иметь в виду, что твердые формы, воплощенные здесь, не ограничиваются теми формами, которые дают картины XRPD, которые идентичны картине XRPD, представленной в графических материалах, и любые твердые формы, дающие картины XRPD, по существу такие же, как представленные в графических материалах, входят в объем соответствующего воплощения. Специалист в области XRPD способен оценить существенную идентичность картин XRPD. Как правило, погрешность измерений угла дифракции при XRPD составляет приблизительно 2θ(±0,2°), и такую степень погрешности измерения необходимо принимать во внимание при рассмотрении картины дифракции рентгеновских лучей на порошке в графических материалах и при толковании данных, содержащихся в Таблицах, приведенных в данном описании.
Специалист в данной области техники также понимает, что значение или диапазон значений, наблюдаемых на конкретной DSC-термограмме соединения, будет варьировать между партиями, имеющими разную чистоту. Следовательно, в то время как для одного соединения диапазон может быть небольшим, для других диапазон может быть достаточно большим. Как правило, погрешность измерения угла дифракции при термических событиях DSC составляет приблизительно плюс или минус 5°C, и такую степень погрешности измерения необходимо принимать во внимание при рассмотрении данных DSC, приведенных в данном документе. Термограммы TGA демонстрируют аналогичные варьирования, так что специалист в данной области техники поймет, что погрешности измерений необходимо принимать во внимание при оценке существенной идентичности термограмм TGA.
В некоторых воплощениях раскрыта твердая форма (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида или его фармацевтически приемлемой соли.
В некоторых воплощениях раскрыта аморфная форма (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида или его фармацевтически приемлемой соли.
Форма A
В некоторых воплощениях раскрыт (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме A.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме A имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков, перечисленных в Таблице 17.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме A имеет картину XRPD, по существу аналогичную Фиг.1.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме A имеет термограмму DSC, содержащую эндотерму с началом десольватации при примерно 110°C и пиком при примерно 113°C.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме A имеет термограмму DSC, по существу аналогичную Фиг.2.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме A имеет термограмму TGA, демонстрирующую потерю массы примерно 7,8% после нагревания от примерно 25°C до примерно 150°C.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме A имеет термограмму TGA, по существу аналогичную Фиг.2.
Форма B
В некоторых воплощениях раскрыт (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме B.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме B имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков, перечисленных в Таблице 18.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме B имеет картину XRPD, по существу аналогичную Фиг.3.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме B имеет термограмму DSC, содержащую эндотерму с началом десольватации при примерно 112°C и пиком при примерно 117°C.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме B имеет термограмму DSC, по существу аналогичную Фиг.4.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме B имеет термограмму TGA, демонстрирующую потерю массы примерно 10,0% после нагревания от примерно 25°C до примерно 200°C.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме B имеет термограмму TGA, по существу аналогичную Фиг.4.
Форма C
В некоторых воплощениях раскрыт (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме C.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме C имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков, перечисленных в Таблице 19.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме C имеет картину XRPD, по существу аналогичную Фиг.5.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме C имеет термограмму DSC, содержащую эндотерму с началом десольватации при примерно 112°C и пиком при примерно 114°C.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме C имеет термограмму DSC, по существу аналогичную Фиг.6.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме C имеет термограмму TGA, демонстрирующую потерю массы примерно 9,2% после нагревания от примерно 25°C до примерно 175°C.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме C имеет термограмму TGA, по существу аналогичную Фиг.6.
Форма D
В некоторых воплощениях раскрыт (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в виде 2θ(±0,2°), при примерно 21,8°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в виде 2θ(±0,2°), при примерно 6,4°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в виде 2θ(±0,2°), при примерно 16,6°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в виде 2θ(±0,2°), при примерно 8,9°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в виде 2θ(±0,2°), при примерно 8,1°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 21,8(и 6,4°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 21,8(и 16,6°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 21,8(и 8,9°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 21,8(и 8,1°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 6,4(и 16,6°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 6,4(и 8,9°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 6,4(и 8,1°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 16,6(и 8,9°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 16,6(и 8,1°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 8,1(и 8,9°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 21,8°, 6,4(и 16,6°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 21,8°, 6,4(и 8,9°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 21,8°, 6,4(и 8,1°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 21,8°, 16,6(и 8,9°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 21,8°, 16,6(и 8,1°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 21,8°, 8,9(и 8,1°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 16,6°, 8,9(и 8,1°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 21,8°, 6,4°, 16,6(и 8,9°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 21,8°, 6,4°, 16,6(и 8,1°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 6,4°, 16,6°, 8,9(и 8,1°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков при примерно 21,8°, 6,4°, 16,6°, 8,9(и 8,1°.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков, перечисленных в Таблице 20.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет картину XRPD, по существу аналогичную Фиг.7.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет термограмму DSC, содержащую эндотерму с началом десольватации при примерно 116°C и пиком при примерно 119°C.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет термограмму DSC, по существу аналогичную Фиг.8.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет термограмму TGA, демонстрирующую потерю массы примерно 8,0% после нагревания от примерно 25°C до примерно 200°C.
В некоторых воплощениях (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D имеет термограмму TGA, по существу аналогичную Фиг.8.
Форма A - сахариновая соль
В некоторых воплощениях раскрыта сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме A.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме A имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков, перечисленных в Таблице 21.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме A имеет картину XRPD, по существу аналогичную Фиг.9.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме A имеет термограмму DSC, содержащую эндотерму с началом точки плавления при примерно 163°C и пиком при примерно 169 °C.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме A имеет термограмму DSC, по существу аналогичную Фиг.10.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме A имеет термограмму TGA, демонстрирующую потерю массы примерно 3,1% после нагревания от примерно 25°C до примерно 150°C.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме A имеет термограмму TGA, по существу аналогичную Фиг.10.
Форма B - сахариновая соль
В некоторых воплощениях раскрыта сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме B.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме B имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков, перечисленных в Таблице 22.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме B имеет картину XRPD, по существу аналогичную Фиг.11.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме B имеет термограмму DSC, содержащую эндотерму с широким пиком десольватации при примерно 53°C и два эндотермических события с началом при примерно 153°C и пиком при 162°C и с началом при примерно 176°C и пиком при примерно 182°C.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме B имеет термограмму DSC, по существу аналогичную Фиг.12.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме B имеет термограмму TGA, демонстрирующую потерю массы примерно 2,7% после нагревания от примерно 25°C до примерно 100°C.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме B имеет термограмму TGA, по существу аналогичную Фиг.12.
Форма C-сахариновая соль
В некоторых воплощениях раскрыта сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме C.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме C имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков, перечисленных в Таблице 23.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме C имеет картину XRPD, по существу аналогичную Фиг.13.
Форма D - сахариновая соль
В некоторых воплощениях раскрыта сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме D.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме D имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков, перечисленных в Таблице 24.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме D имеет картину XRPD, по существу аналогичную Фиг.14.
Форма E - сахариновая соль
В некоторых воплощениях раскрыта сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме E.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме E имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков, перечисленных в Таблице 25.
В некоторых воплощениях сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме E имеет картину XRPD, по существу аналогичную Фиг.15.
Гидрохлоридная сахариновая соль
В некоторых воплощениях раскрыта гидрохлоридная сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида.
В некоторых воплощениях гидрохлоридная сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков, перечисленных в Таблице 26.
В некоторых воплощениях гидрохлоридная сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида имеет картину XRPD, по существу аналогичную Фиг.16.
Нападизиловая соль
В некоторых воплощениях раскрыта нападизиловая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида.
В некоторых воплощениях гидрохлоридная нападизиловая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков, перечисленных в Таблице 27.
В некоторых воплощениях нападизиловая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида имеет картину XRPD, по существу аналогичную Фиг.17.
Тримезиновая соль
В некоторых воплощениях раскрыта тримезиновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида.
В некоторых воплощениях гидрохлоридная тримезиновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида имеет картину XRPD, содержащую по меньшей мере один пик, выраженный в 2θ(±0,2°), выбранный из пиков, перечисленных в Таблице 28.
В некоторых воплощениях тримезиновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида имеет картину XRPD, по существу аналогичную Фиг.18.
Фармацевтические композиции
В некоторых воплощениях раскрыты фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 и фармацевтически приемлемый эксципиент, носитель или разбавитель.
Выражение “фармацевтически приемлемый эксципиент, носитель или разбавитель” охватывает соединения, вещества, композиции и/или дозировочные формы, которые в рамках здравого медицинского суждения являются подходящими для применения в контакте с тканями людей и животных и не вызывающими излишнего токсического действия, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, выявленных специалистом в данной области.
Раскрытые композиции могут находиться в форме, подходящей для перорального применения (например, в виде таблеток, пастилок, твердых и мягких капсул, водных или масляных суспензий, эмульсий, диспергируемых порошков или гранул, сиропов или эликсиров), для местного применения (например, в виде кремов, мазей, гелей или водных или масляных растворов или суспензий), для введения ингаляцией (например, в виде тонкодисперсного порошка или жидкого аэрозоля), для введения инсуффляцией (например, в виде тонкодисперсного порошка) или для парентерального введения (например, в виде стерильного водного или масляного раствора для внутривенного, подкожного или внутримышечного введения или в виде суппозитория для ректального введения).
Раскрытые композиции могут быть получены по стандартным методикам с использованием традиционных фармацевтических эксципиентов, известных в данной области. Так, композиции, предназначенные для перорального применения, могут содержать, например, один или более красителей, подсластителей, корригентов и/или консервантов.
Подходящие фармацевтически приемлемые эксципиенты для изготовления таблеток включают, например, инертные разбавители, такие как лактоза, карбонат натрия, фосфат кальция или карбонат кальция; гранулирующие и разрыхляющие агенты, такие как кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связывающие агенты, такие как крахмал; смазывающие агенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк; консерванты, такие как этил- или пропил-пара-гидроксибензоат; и антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота. Композиции в форме таблеток могут не иметь покрытия или могут быть покрыты оболочкой, либо для модификации их разрыхления и последующего всасывания активного ингредиента в желудочно-кишечном тракте, либо для улучшения их стабильности и/или внешнего вида, с использованием традиционных покровных агентов и методов, известных в данной области.
Композиции для перорального применения могут быть в форме твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем, например карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, или в форме мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с водой или маслом, таким как арахисовое масло, вазелиновое масло или оливковое масло.
Водные суспензии обычно содержат активный ингредиент в тонкодисперсной порошковой форме или в форме наночастиц или микронизированных частиц вместе с одним или более суспендирующими агентами, такими как натрий-карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и аравийская камедь; диспергирующими или увлажняющими агентами, такими как лецитин или продукты конденсации алкиленоксида с жирными кислотами (например, полиоксиэтиленстеарат), или продукты конденсации этиленоксида с длинноцепочечными алифатическими спиртами, например гептадекаэтиленоксицетанол, или продукты конденсации этиленоксида с частичными сложными эфирами, получаемыми из жирных кислот и гексита, такие как полиоксиэтиленсорбита моноолеат, или продукты конденсации этиленоксида с длинноцепочечными алифатическими спиртами, например гептадекаэтиленоксицетанол, или продукты конденсации этиленоксида с частичными сложными эфирами, получаемыми из жирных кислот и гексита, такие как полиоксиэтиленсорбита моноолеат, или продукты конденсации этиленоксида с частичными сложными эфирами, получаемыми из жирных кислот и ангидридов гексита, такие как ангидриды полиоксиэтиленсорбита моноолеата, например полиэтиленсорбитана моноолеат.Водные суспензии могут также содержать один или более консервантов, таких как этил- или пропил-пара-гидроксибензоат; антиоксидантами, такими как аскорбиновая кислота; красителями; корригентами; и/или подсластителями, такими как сахар, сахарин или аспартам.
Масляные суспензии могут быть приготовлены путем суспендирования активного ингредиента в растительном масле, таком как арахисовое масло, оливковое масло, кунжутное масло, или в минеральном масле, таком как вазелиновое масло. Масляные суспензии могут также содержать загуститель, такой как пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт.Подсластители, такие как те, которые указаны выше, и корригенты могут быть добавлены для создания вкусного перорального препарата. Эти композиции можно сохранять путем добавления антиоксиданота, такого как аскорбиновая кислота.
Диспергируемые порошки и гранулы, подходящие для получения водной суспензии путем добавления воды, обычно содержат активный ингредиент вместе с диспергирующим или смачивающим агентом, суспендирующим агентом и одним или более консервантами. Примеры подходящих диспергирующих или смачивающих агентов уже упомянуты выше. Дополнительные эксципиенты, такие как подсластители, корригенты и красители, также могут присутствовать.
Фармацевтические композиции могут быть также в форме эмульсий масло-в-воде. Масляная фаза может представлять собой растительное масло, такое как оливковое масло или арахисовое масло, или минеральное масло, такое как, например, вазелиновое масло, или смесь любых их них. Подходящими эмульгирующими агентами могут быть, например, природные камеди, такие как аравийская камедь или трагакантовая камедь, природные фосфатиды, такие как фосфатиды из соевых бобов, лецитин, сложные эфиры или частичные сложные эфиры, получаемые из жирных кислот и ангидридов гексита (например сорбитана моноолеат), и продукты конденсации указанных частичных сложных эфиров с этиленоксидом, такие как полиоксиэтиленсорбитана моноолеат.Эмульсии также могут содержать подсластители, корригенты и консерванты.
Сиропы и эликсиры могут быть приготовлены с подсластителями, такими как глицерин, пропиленгликоль, сорбит, аспартам или сахароза, и могут также содержать мягчительное средство, консервант, корригент и/или краситель.
Фармацевтические композиции могут быть также в форме стерильной инъекционной водной или масляной суспензии, которая может быть приготовлена по известным методикам с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов, которые упомянуты выше. Стерильный инъекционный препарат может также представлять собой стерильный инъекционный раствор или суспензию в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например раствор в 1,3-бутандиоле.
Композиции для введения ингаляцией могут быть в форме традиционного аэрозоля под давлением, устроенного таким образом, чтобы дозировать активный ингредиент либо в виде аэрозоля, содержащего тонкодисперсное твердое вещество или жидкие капли. Могут быть использованы традиционные аэрозольные пропелленты, такие как летучие фторированные углеводороды или углеводороды, и аэрозольное устройство обычно устроено так, чтобы дозировать отмеренное количество активного ингредиента. Дополнительную информацию по приготовлению фармацевтических композиций можно найти в Главе 25.2 в Томе 5 монографии Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.
Количество активного ингредиента, которое объединяют с одним или более эксципиентами для изготовления стандартной лекарственной формы, обязательно будет варьировать в зависимости от хозяина, которого лечат, и конкретного пути введения. Дополнительную информацию по путям введения и режимам дозировки можно найти в Главе 25.3 в Томе 5 монографии Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.
Соединения формулы (I), (Ia), (Ib) и Таблицы 1 можно вводить один, два, три раза в день или много раз за период времени 24 часа, когда это необходимо с медицинской точки зрения. Специалист в данной области без труда сможет определить количество каждой индивидуальной дозы в расчете на субъекта. В некоторых воплощениях соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 вводят в одной дозировочной форме. В некоторых воплощениях соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 вводят в множественных дозировочных формах.
Способы
В одном из аспектов раскрыты способы лечения связанного с JAK расстройства у нуждающегося в этом субъекта, включающие введение этому субъекту эффективного количества соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы.
В одном из аспектов раскрыто соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемая соль или твердая форма для применения в лечении связанного с JAK расстройства.
В одном из аспектов раскрыто применение соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы в изготовлении лекарственного средства для лечения связанного с JAK расстройства.
В одном из аспектов раскрыты фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемую соль или твердую форму, для применения в лечении связанного с JAK расстройства.
Выражение “связанного с JAK расстройства” охватывает рак, раковую кахексию и иммунные расстройства.
Термин “рак” включает в себя виды рака с (1) EGFR-связанной этиологией, такие как немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), рак в области головы и шеи, плоскоклеточный рак (HNSCC), и колоректальный рак; (2) и активирующими семейство RAS мутациями, такие как NSCLC, рак поджелудочной железы, колоректальный рак, рак предстательной железы, меланома, рак щитовидной железы, холангиокарцинома и лейкоз; (3) амплификацией или мутацией HER2, такие как рак молочной железы, рак желудка, рак легкого; (4) активацией гена ALK (киназа анапластической лимфомы), такие как рак легкого, рак молочной железы, колоректальный рак, диффузная крупно-B-клеточная лимфома, анапластическая крупноклеточная лимфома; (5) амплификацией или мутацией MET, такие как NSCLC, рак желудка, колоректальный рак, папиллярная почечноклеточная карцинома; и (6) FGFR (рецептор фактора роста фибробластов)-связанной этиологией, такие как рак молочной железы, рак желудка, рак эндометрия, рак легкого. В некоторых воплощениях рак представляет собой рак поджелудочной железы, гастроинтестинальный рак, рак молочной железы, гинекологический рак (например, рак яичника или рак шейки матки), рак мочевого пузыря, SCHN, немелкоклеточный рак легкого или мелкоклеточный рак легкого. В некоторых воплощениях рак метастазирован.
В одном из аспектов раскрыты способы лечения рака у нуждающегося в этом субъекта, включающие введение этому субъекту эффективного количества соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы в комбинации с противораковым терапевтическим агентом или его фармацевтически приемлемой солью.
В одном из аспектов раскрыто соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемая соль или твердая форма в комбинации с противораковым терапевтическим агентом или его фармацевтически приемлемой солью для применения в лечении рака.
В одном из аспектов раскрыто применение соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы в комбинации с противораковым терапевтическим агентом или его фармацевтически приемлемой солью в изготовлении лекарственного средства для лечения рака.
В одном из аспектов раскрыты фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемую соль или твердую форму в комбинации с противораковым терапевтическим агентом или его фармацевтически приемлемой солью, для применения в лечении рака.
Выражение “в комбинации с” охватывает введение соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемой соли и противоракового терапевтического агента или его фармацевтически приемлемой соли последовательно, раздельно или одновременно. В некоторых аспектах соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемую соль и противораковый терапевтический агент или его фармацевтически приемлемую соль вводят в одной и той же композиции, например в композиции в форме с фиксированными дозами. В некоторых воплощениях соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемую соль и противораковый терапевтический агент или его фармацевтически приемлемую соль вводят в отдельных композициях и вводят по существу в одно и то же время, последовательно или по отдельности. В некоторых воплощениях соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемую соль вводят в течение одного дня, двух дней, трех дней, четырех дней, пяти дней, шести дней, семи дней, восьми дней, девяти дней, десяти дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, трех недель или одного месяца подряд. В некоторых воплощениях соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемую соль вводят с перерывами, например вводят в течение 7 дней с последующим перерывом 7 дней (например, введение 7 дней/перерыв 7 дней), в течение 1 дня с последующим перерывом 6 дней (например, введение 1 день/перерыв 6 дней), в течение 2 дней с последующим перерывом 5 дней (введение 2 дня/перерыв 5 дней), в течение 3 дней с последующим перерывом 4 дня (например, введение 3 дня/перерыв 4 дня), в течение 4 дней с последующим перерывом 3 дня (например, введение 4 дня/перерыв 3 дня), в течение 5 дней с последующим перерывом 2 дня (введение 5 дней/перерыв 2 дня) или в течение 6 дней с последующим перерывом 1 день (введение 6 дней/перерыв 1 день).
Выражение “противораковый терапевтический агент” охватывает, например, ингибиторы EGFR, ингибиторы MAPK-пути, ингибиторы Raf, ингибиторы HER2, ингибиторы FGFR, антиметаболиты, алкилирующие агенты и антимитотические агенты и их фармацевтически приемлемые соли.
В некоторых воплощениях соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 вводят в комбинации с одним или более ингибиторам EGFR. Примеры ингибиторов EGFR включают антитела к EGFR, ABX-EGF, анти-EGFR-иммунолипосомы, EGF-вакцину, EMD-7200, ERBITUX (цетуксимаб), HR3, IgA антитела, IRESSA (гефитиниб), TARCEVA (эрлотиниб или OSI-774), TP-38, EGFR белок слияния, TYKERB (лапатиниб), TAGRISSO™ (осимертиниб или AZD9291), GILOTRIF (афатиниб), CO-1686, WZ4002, PD153035, PF 00299804 и т.п.В некоторых воплощениях соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 вводят в комбинации с осимертинибом. В некоторых воплощениях соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 вводят в комбинации с гефитинибом.
В некоторых воплощениях соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 вводят в комбинации с одним или более ингибиторами MAPK-пути. Ингибиторы MAPK-пути включают ингибиторы MEK, такие как селуметиниб, Mekinist  (траметминиб), кобиметиниб, PD0325901, пимасертиб, MEK162, рефамитиниб и т.п.; с ингибиторами Raf и B-Raf, которые включают вемурафениб, дарбрафениб, энкорафениб (LGX818) и т.п.
В некоторых воплощениях соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 вводят в комбинации с одним или более ингибиторами HER2. Ингибиторы HER2 включают CP-724-714, CI-1033 (канертиниб), HERCEPTIN (трастузумаб), TYKERB (лапатиниб), OMNITARG (2C4, петузумаб), TAK-165, GW-572016 (ионафарниб), GW-282974, EKB-569, PI-166, dHER2 (HER2 вакцина), APC-8024 (HER-2 вакцина), анти-HER/2neu биспецифическое антитело, B7.her2IgG3, AS HER2 бифункциональные биспецифические антитела, mAB AR-209, mAB 2B-1 и т.п.
В некоторых воплощениях соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 вводят в комбинации с одним или более ингибиторами ALK. Ингибиторы ALK включают кризотиниб, церитиниб и т.п.
В некоторых воплощениях соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 вводят в комбинации с одним или более ингибиторами FGFR. Ингибиторы FGFR включают AZD4547, BJG398, довитиниб, луцитаниб, MGFR1877S, FP-1039 и т.п.
В некоторых воплощениях соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 вводят в комбинации с одним или более ингибиторами MET. Ингибиторы MET включают саволитиниб, онартузумаб, рилотумумаб, кабозантиниб, тивантиниб, LY2875358, фиклатузумаб, форетиниб, кризотиниб, INC280, AMG337, MSC2156119J и т.п.
В некоторых воплощениях соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 вводят в комбинации с одним или более антиметаболитами. Антиметаболиты включают ALIMTA (пеметрексед динатрий, LY231514, MTA), 5-азацитидин, XELODA (капецитабин), кармофур, LEUSTAT (кладрибин), клофарабин, цитарабин, цитарабина окфосфат, цитозина арабинозид, децитабин, дефероксамин, доксифлуридин, эфлорнитин, EICAR (5-этинил-1-β-D-рибофуранозидимидазол-4-карбоксамид), эноцитабин, этнилцитидин, флударабин, 5-фторурацил, один или в комбинации с лейковорином, GEMZAR (гемцитабин), гидроксимочевину, ALKERAN (мелфалан), меркаптопурин, 6-меркаптопурина рибозид, метотрексат, микофеноловую кислоту, неларабин, нолатрексед, октофосфат, пелитрексол, пентостатин, пемекстред, ралтитрексед, рибавирин, триапин, триметрексат, S-1, тиазофурин, тегафур, TS-1, видарабин, UFT и т.п.
В некоторых воплощениях соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 вводят в комбинации с одним или более алкилирующими агентами. Алкилирующие агенты включают алтретамин, AMD-473, AP-5280, апазиквон, бендамустин, бросталлицин, бусульфан, цисплатин, карбоплатин, карбоквон, кармустин (BCNU), хлорамбуцил, CLORETAZINE (ларомустин, VNP 40101M), циклофосфамид, декарбазин, эстрамустин, фотемустин, глуфосфамид, ифосфамид, KW-2170, ломустин (CCNU), мафосфамид, мелфалан, митобронитод, митолактол, нимустин, азотистого аналога иприта N-оксид, нитрозомочевины, оксалиплатин, ранимустин, темозоломид, тиотепа, TREANDA (бендамустин), треосульфан, рофосфамид и т.д.
В некоторых воплощениях соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 вводят в комбинации с одним или более антимитотическими агентами. Антимитотические агенты включают батабулин, эпотилон D (KOS-862), N-(2-((4-гидроксифенил)амино)пиридин-3-ил)-4-метоксибензолсульфонамид, иксабепилон (BMS 247550), паклитаксел, TAXOTERE (доцетаксел), PNU100940 (109881), патупилон, XRP-9881 (ларотаксел), винфлунин, ZK-EPO (синтетический эпотилон) и т.п.
Выражение “раковая кахексия” охватывает синдром с симптомами, которые включают истощение тканей хозяина, анорексию, астению и аномальный промежуточный метаболизм хозяина. В некоторых воплощениях субъект, страдающий раковой кахексией, имеет рак поджелудочной железы или рак верхних отделов желудочно-кишечного тракта, например рак пищевода, рак желудка, желудочный рак, рак печени, рак желчного пузыря, нейроэндокринный рак или пищевод Барретта. В некоторых воплощениях субъект, страдающий раковой кахексией, имеет терминальный рак.
В одном из аспектов раскрыты способы лечения раковой кахексии у нуждающегося в этом субъекта, включающие введение этому субъекту эффективного количества соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы.
В одном из аспектов раскрыто соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемая соль или твердая форма для применения в лечении раковой кахексии.
В одном из аспектов раскрыто применение соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы в изготовлении лекарственного средства для лечения раковой кахексии.
В одном из аспектов раскрыты фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемую соль или твердую форму, для применения в лечении раковой кахексии.
Выражение “иммунное расстройство” охватывает, например, расстройства костного мозга (например, миелофиброз и истинная полицетемия), ревматоидный артрит, псориаз, синдром раздраженного кишечника (IBD), болезнь Крона, волчанку, рассеянный склероз, астму, аутоиммунные тиреоидные расстройства (например, тиреоидит Хашимото, базедова болезнь или послеродовой тиреоидит), неспецифический язвенный колит, гнездную алопецию, витилиго и миозит.
В одном из аспектов раскрыты способы лечения иммунного расстройства у нуждающегося в этом субъекта, включающие введение этому субъекту эффективного количества соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы.
В одном из аспектов раскрыто соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемая соль или твердая форма для применения в лечении иммунного расстройства.
В одном из аспектов раскрыто применение соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы в изготовлении лекарственного средства для лечения иммунного расстройства.
В одном из аспектов раскрыты фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемую соль или твердую форму, для применения в лечении иммунного расстройства.
В одном из аспектов раскрыты способы ингибирования JAK у нуждающегося в этом субъекта, включающие введение этому субъекту эффективного количества соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы.
В одном из аспектов раскрыто соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемая соль или твердая форма для применения в ингибировании JAK.
В одном из аспектов раскрыто применение соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемой соли или твердой формы в изготовлении лекарственного средства для ингибирования JAK.
В одном из аспектов раскрыты фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 или его фармацевтически приемлемую соль или твердую форму, для применения в ингибировании JAK.
50
Термин “JAK” включает в себя семейство Янус-киназ, которые являются внутримолекулярными, нерецепторными тирозинкиназами, которые передают цитокин-опосредованные сигналы через JAK-STAT путь. Термин JAK включает в себя JAK1, JAK2 и JAK3. В некоторых воплощениях соединения формулы (I), (Ia) и (Ib) являются избирательными ингибиторами JAK1, JAK2 и/или JAK3. Выражение “избирательный ингибитор” охватывает соединения, которые имеют более сильный ингибирующий эффект (который продемонстрирован, например, более низкими значениями IC) в отношении одного или двух членов семейства JAK по сравнению с другими членами семейства JAK. Например, JAK1-избирательный ингибитор оказывает более сильное ингибирующее воздействие на JAK1 относительно JAK2 и JAK3; JAK2-избирательный ингибитор оказывает более сильное ингибирующее воздействие на JAK2 относительно JAK1 и JAK3; JAK3-избирательный ингибитор оказывает более сильное ингибирующее воздействие на JAK3 относительно JAK1 и JAK2; JAK1/2-избирательный ингибитор оказывает более сильное ингибирующее воздействие на JAK1 и JAK2 относительно JAK3; JAK1/3-избирательный ингибитор оказывает более сильное ингибирующее воздействие на JAK1 и JAK3 относительно JAK2; и JAK2/3-избирательный ингибитор оказывает более сильное ингибирующее воздействие на JAK2 и JAK3 относительно JAK1. В некоторых воплощениях соединения формулы (I), (Ia) и (Ib) являются JAK1-избирательными ингибиторами. В некоторых воплощениях соединения формулы (I), (Ia) и (Ib) являются JAK1/2-избирательными ингибиторами.
Выражение “эффективное количество” охватывает количество соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1, которое будет вызывать биологический или медицинский ответ у субъекта, например снижение или ингибирование активности фермента или белка, связанной с JAK, раком или иммунным расстройством; ослабление симптомов рака или иммунного расстройства; или замедление или задержку прогрессирования рака или иммунного расстройства. В некоторых воплощениях выражение “эффективное количество” охватывает количество соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1, которое при введении субъекту является настолько эффективным, чтобы по меньшей мере частично облегчать, ингибировать и/или ослаблять рак или иммунное расстройство или ингибировать JAK, и/или сокращать или ингибировать рост опухоли или пролиферацию раковых клеток у субъекта.
Термин “субъект” включает в себя теплокровных млекопитающих, например приматов, собак, кошек, кроликов, крыс и мышей. В некоторых воплощениях субъектом является примат, например человек. В некоторых воплощениях субъект страдает раком или иммунным расстройством. В некоторых воплощениях субъект нуждается в лечении (например, субъекту может быть полезным лечение с биологической или медицинской точки зрения). В некоторых воплощениях субъект страдает раковой кахексией. В некоторых воплощениях субъект страдает раком. В некоторых воплощениях субъект страдает раковой кахексией. В некоторых воплощениях субъект страдает иммунным расстройством. В некоторых воплощениях субъект может иметь повышенные уровни воспалительных биомаркеров, например сывороточного системного C-реактивного белка (CRP), IL-6, TNFa, IL-1, прокальцитонина и IL-8. В некоторых воплощениях субъект может иметь в высокой степени STAT3-положительную опухоль. В некоторых воплощениях субъект страдает EGFR-M-положительным раком (например, немелкоклеточным раком легкого). В некоторых воплощениях EGFR-M-положительный рак имеет преимущественно T790M-положительную мутацию. В некоторых воплощениях EGFR-M-положительный рак имеет преимущественно T790M-отрицательную мутацию. В некоторых воплощениях субъект страдает KRAS-мутантным раком (например, KRAS-мутантным немелкоклеточным раком легкого). В некоторых воплощениях субъект страдает метастатическим раком поджелудочной железы, метастатическим раком желудочно-кишечного тракта, метастатическим раком молочной железы, метастатическим гинекологическим раком (например, метастатическим раком яичника или метастатическим раком шейки матки), метастатическим раком мочевого пузыря, метастатическим плоскоклеточным раком в области головы и шеи (SCHN), метастатическим немелкоклеточным раком легкого, метастатическими гематологическими видами рака (например, лимфомой Ходжкина) или метастатическим мелкоклеточным раком легкого. В некоторых воплощениях субъект, страдающий раковым заболеванием, может иметь признаки иммунного воспаления, в том числе, например, присутствие PDL1, интерферона гамма, опухоль-инфильтрующих лейкоцитов и признаки экспрессии гена, указывающие на увеличение передачи сигналов интерферона типа I или типа II, аномальные уровни клеток-супрессоров опухоли, таких как регуляторные T-лимфоциты или клетки миелоидного происхождения, аномальные уровни гранулоцитов или белков, свидетельствующих о присутствии гранулоцитов.
Выражение “ингибировать”, “ингибирование” или “ингибирующий” охватывает снижение исходной активности биологической активности или процесса. В некоторых воплощениях соединения формулы (I), (Ia), (Ib) или Таблицы 1 ингибируют JAK.
Выражения “лечить”, “осуществлять лечение” и “лечение” охватывают снижение или ингибирование активности фермента или белка, связанной с JAK, раком или иммунным расстройством у субъекта, ослабление одного или более симптомов рака или иммунного расстройства у субъекта или замедление или задержку прогрессирования рака или иммунного расстройства у субъекта. Выражения “лечить”, “осуществлять лечение” и “лечение” также охватывают снижение или ингибирование роста опухоли или пролиферации раковых клеток у субъекта.
Примеры
Аспекты настоящего изобретения дополнительно могут быть определены посредством приведенных ниже не ограничивающих примеров, в которых подробно описано получение некоторых соединений и промежуточных соединений по настоящему изобретению и способы использования соединений по настоящему изобретению. Для специалистов в данной области будет очевидным то, что многие модификации как веществ, так и способов могут быть осуществлены на практике, не выходя за рамки объема настоящего изобретения.
Если не указано иное, то:
1) все синтезы проводили при температуре окружающей среды, т.е. в диапазоне от 17 до 25°C и в атмосфере инертного газа, такого как азот, если не указано иное;
2) выпаривание проводили на роторном испарителе или с использованием оборудования Genevac или испарителя Biotage v10 в вакууме, и процедуры обработки проводили после удаления остаточного твердого вещества фильтрованием;
3) очистку флэш-хроматографией осуществляли на автоматическом Teledyne Isco CombiFlash Rf или Teledyne Isco CombiFlash Companion(с использованием упакованных силикагелевых колонок RediSep Rf Gold™ (20-40 мкм, сферические частицы), картриджей GraceResolv™ (Davisil (диоксид кремния) или картриджей Silicycle (40-63 мкм);
4) препаративную хроматографию осуществляли на приборе Gilson prep HPLC с УФ-сбором; альтернативно, препаративную хроматографию осуществляли на приборе Waters AutoPurification HPLC-MS с МС- и УФ-синхронизированным сбором;
5) хиральную препаративную хроматографию осуществляли на приборе Gilson с УФ-сбором (233 инжектор/коллектор фракций, 333 & 334 насосы, 155 УФ-детектор) или на приборе Varian Prep Star (2×SD1 насосы, 325 UV детектор, 701 коллектор фракций) насос, работающий с инжекцией Gilson 305; альтернативно, хиральную препаративную хроматографию осуществляли на приборе Waters Prep 100 SFC-MS с МС- и УФ-синхронизированным сбором или на приборе Thar MultiGram III SFC с УФ-сбором;
6) выходы, если они указаны, необязательно являются максимально достижимыми;
7) как правило, структуры конечных продуктов формулы I подтверждали спектроскопией ядерного магнитного резонанса (ЯМР); ЯМР-значения химических сдвигов измеряли по дельта-шкале [спектры протонного магнитного резонанса определяли на приборе Bruker Avance 500 (500 МГц), Bruker Avance 400 (400 МГц), Bruker Avance 300 (300 МГц) или Bruker DRX (300 МГц)]; измерения делали при температуре окружающей среды, если конкретно не указано иное; были использованы следующие сокращения: s, синглет; d, дублет; t, триплет; q, квартет; m, мультиплет; dd, дублет дублетов; ddd, дублет дублета дублетов; dt, дублет триплетов; bs, уширенный сигнал;
8) как правило, конечные продукты формулы I также характеризовали масс-спектроскопией в сочетании с жидкостной хроматографией (LCMS (жидкостная хроматография/масс-спектрометрия) или UPLC (ультраэффективная жидкостная хроматография)); UPLC проводили на Waters UPLC в комплекте с масс-спектрометром Waters SQ (температура колонки 40°C, УФ=220-300 нм или 190-400 нм, масс-спектр.=ESI (электрораспылительная ионизация) с попеременной регистрацией положительных/отрицательных ионов) при скорости потока 1 мл/мин с использованием системы растворителей от 97% A+3% B до 3% A+97% B за 1,50 мин (суммарное время прогона с уравновешиванием назад до начальных условий и т.д. 1,70 мин), где A=0,1% муравьиной кислоты или 0,05% трифторуксусной кислоты в воде (для кислотной работы) или 0,1% гидроксида аммония в воде (для оснóвной работы), и B=ацетонитрил. Для кислотного анализа использовали колонку Waters Acquity HSS T3 (1,8 мкм, 2,1×50 мм), Waters Acquity BEH C18 (1,7 мкм, 2,1×50 мм). Альтернативно, UPLC проводили с использованием Waters UPLC в комплекте с масс-спектрометром Waters SQ (температура колонки 30°C, УФ=210-400 нм, масс-спектрометрия=ESI с попеременной регистрацией положительных/отрицательных ионов) при скорости потока 1 мл/мин, используя градиент растворителей от 2 до 98% B за 1,5 мин (суммарное время прогона с уравновешиванием назад до начальных условий 2 мин), где A=0,1% муравьиной кислоты в воде, и B=0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле (для кислотной работы), или A=0,1% гидроксид аммония в воде, и B=ацетонитрил (для оснóвной работы). Для кислотного анализа использовали колонку Waters Acquity HSS T3 (1,8 мкм, 2,1×30 мм), для оснóвного анализа использовали колонку Waters Acquity BEH C18 (1,7 мкм, 2,1×30 мм); LCMS проводили с использованием Waters Alliance HT (2795) в комплекте с масс-спектрометром Waters ZQ ESCi и Phenomenex Gemini-NX C18 (колонка 5 мкм, 110A, 2,1×50 мм при скорости потока 1,1 мл/мин от 95% A до 95% B за 4 мин с выдержкой в течение 0,5 мин, где A=0,1% муравьиная кислота, и B=0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле (для кислотной работы), или A=0,1% гидроксида аммония в воде, и B=ацетонитрил (для оснóвной работы). Дополнительно, LCMS проводили с использованием Shimadzu UFLC в комплекте с масс-спектрометром Shimadzu LCMS-2020 и с колонкой Waters HSS C18 (1,8 мкм, 2,1×50 мм) или Shim-pack XR-ODS (2,2 мкм, 3,0×50 мм) или Phenomenex Gemini-NX C18 (3 мкм, 3,0×50 мм) при скорости потока 0,7 мл/мин (для колонки Waters HSS C18), 1,0 мл/мин (для колонки Shim-pack XR-ODS) или 1,2 мл/мин (для колонки Phenomenex Gemini-NX C18), от 95% A до 95% B за 2,2 мин с выдержкой в течение 0,6 мин, где A=0,1% муравьиной кислоты или 0,05% трифторуксусной кислоты в воде (для кислотной работы) или 0,1% гидроксида аммония или 6,5 мМ карбоната аммония в воде (для оснóвной работы), и B=ацетонитрил. Регистрируемый молекулярный ион соответствует [M+H]+, если конкретно не указано иное; для молекул с множественными изотопными паттернами (Br, Cl и т.д.) регистрируемым значением является значение, полученное для изотопа самой низкой массы, если конкретно не указано иное;
9)ионообменную очистку обычно осуществляли с использованием картриджа SCX-2 (Biotage);
10) промежуточную чистоту оценивали тонкослойной хроматографией, масс-спектроскопией, LCMS, UPLC/MS, HPLC и/или ЯМР-анализом;
11) были использованы следующие сокращения:
ACN
ацетонитрил
BID
два раза в день
BSA
бычий сывороточный альбумин
DCM
дихлорметан
DMF
N,N-диметилформамид
DMSO
диметилсульфоксид
dppf
1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен
EA
этилацетат
ee
энантиомерный избыток
экв.
эквиваленты
e.r.
энантиомерное соотношение
EtOH
этанол
HATU
(1-[бис(диметиламино)метилен]-1H-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридининия 3-оксида гексафторфосфат)
HCl
соляная кислота
HPMC
гидроксипропилметилцеллюлоза
IPA
изопропанол
NaOH
гидроксид натрия
NSCLC
немелкоклеточный рак легкого
QD
четыре раза в день
TBME
трет-бутилметиловый эфир
TEA
триэтиламин
TFA
трифторуксусная кислота
THF
тетрагидрофуран
Tos
пара-толуолсульфонил
Xantphos
4,5-бис(дифенилфосфино)-9,9-диметилксантен
Промежуточное соединение 1: 1-[(4-Метилфенил)сульфонил]-7-нитро-1H-индол
2
3
2
4
1
Раствор NaOH (599 г, 14986,55 ммоль) в воде (1500 мл) добавляли в перемешиваемую смесь 7-нитро-1H-индола (243 г, 1498,65 ммоль) и гидросульфата тетрабутиламмония (50,9 г, 149,87 ммоль) в DCM (3000 мл) при 25°C в течение периода времени 5 минут на воздухе. Полученную смесь перемешивали при 25°C в течение 20 минут.Добавляли 4-метилфенилсульфонилхлорид (371 г, 1948,25 ммоль) на воздухе, и полученную смесь перемешивали при 25°C в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавляли DCM (2 л) и промывали последовательно водой (500 мл×2), 10% водным KCO (500 мл×2) и 1M HCl (500 мл×2) и насыщенным NaCl (500 мл×2). Органический слой сушили над NaSO, фильтровали и упаривали. Когда осталось приблизительно 200 мл DCM, добавляли 500 мл EA. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Когда осталось приблизительно 200 мл EA, добавляли 1000 мл TBME. Осадок собирали фильтрованием, промывали TBME (1 л) и сушили в вакууме с получением 1-[(4-метилфенил)сульфонил]-7-нитро-1H-индола (402 г, 85%, Промежуточное соединение 1) в виде белого твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки; H ЯМР δ (DMSO-d6, 300 МГц) 2.39 (3H, s), 7.09 (1H, d), 7.40-7.55 (3H, m), 7.75-7.85 (3H, m), 7.95-8.00 (1H, m), 8.06 (1H, d); m/z (ES+(электрораспылительная ионизация с регистрацией положительных ионов)), [M+H]+=317.
Промежуточное соединение 2: 3-Бром-1-[(4-метилфенил)сульфонил]-7-нитро-1H-индол
4
1
Бром (81 мл, 1580 ммоль) добавляли по каплям к 1-[(4-метилфенил)сульфонил]-7-нитро-1H-индолу (50 г, 158 ммоль, Промежуточное соединение 1) в CCl (1000 мл) при 80°C. Полученный раствор перемешивали при 80°C в течение 6 часов. Смесь охлаждали до комнатной температуры, концентрировали, и остаток промывали этилацетатом с получением 3-бром-1-[(4-метилфенил)сульфонил]-7-нитро-1H-индола (53 г, 85%, Промежуточное соединение 2) в виде коричневого твердого вещества; H ЯМР δ (DMSO-d6, 300 МГц) 2.41 (3H, s), 7.55-7.62 (2H, m), 7.57 (1H, t), 7.85-7.92 (3H, m), 7.96 (1H, d), 8.49 (1H, s); m/z (ES- (электрораспылительная ионизация с регистрацией отрицательных ионов)), [M-H]-=393.
Промежуточное соединение 3: 1-[(4-Метилфенил)сульфонил]-7-нитро-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индол
2
1
Раствор 3-бром-1-[(4-метилфенил)сульфонил]-7-нитро-1H-индола (200 г, 506 ммоль, Промежуточное соединение 2), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолана) (193 г, 759 ммоль), ацетата калия (99 г, 1012 ммоль) и PdCl(dppf) (18,5 г, 25,3 ммоль) в 1,4-диоксане (1500 мл) дегазировали азотом три раза, затем реакционную смесь перемешивали при 90°C в течение 8 часов. Смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали. Твердое вещество обрабатывали водой и фильтровали. После промывки метанолом и сушки в вакууме получили 1-[(4-метилфенил)сульфонил]-7-нитро-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индол (150 г, 67%, Промежуточное соединение 3) в виде серого твердого вещества; H ЯМР δ (Хлороформ-d, 400 МГц) 1.41 (12H, s), 2.47 (3H, s), 7.38-7.43 (3H, m), 7.66 (1H, d), 7.87 (2H, d), 8.24 (1H, s), 8.29-8.32 (1H, d); m/z (ES+), [M+H]+=443.
Промежуточное соединение 4: 3-(2-Хлор-4-пиримидинил)-1-[(4-метилфенил)сульфонил]-7-нитро-1H-индол
2
1
1-[(4-Метилфенил)сульфонил]-7-нитро-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индол (15 г, 33,9 ммоль, Промежуточное соединение 3), 2,4-дихлорпиримидин (6,6 г, 44,1 ммоль), карбонат калия (14,1 г, 101,7 ммоль) и PdCl(dppf) (2,5 г, 3,4 ммоль) в диоксане (200 мл) и воде (40 мл) перемешивали в атмосфере азота при 80°C в течение 12 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Водный слой экстрагировали THF (4×100 мл) и концентрировали с получением 3-(2-хлор-4-пиримидинил)-1-[(4-метилфенил)сульфонил]-7-нитро-1H-индола (12 г, 83%, Промежуточное соединение 4) в виде коричневого твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки; H ЯМР δ (DMSO-d6, 300 МГц) 2.42 (3H, s), 7.52 (2H, d), 7.68 (1H, t), 7.98 (3H, m), 8.31 (1H, d), 8.85-8.90 (2H, m), 9.30 (1H, s); m/z (ES+), [M+H]+=429.
Методику, описанную выше, повторяли, используя указанный дихлорпиримидин, с получением Промежуточных соединений 5-8, описанных в Таблице 2:
Таблица 2
Промежуточное соединение
Дихлорпиримидин
ЯМР δ (300 МГц)
m/z [M+H]+
Выход %
53-(2-хлор-5-фтор-4-пиримидинил)-1-[(4-метилфенил)сульфонил]-7-нитро-1H-индол
<img file="00000098.jpg" he="26" wi="31" img-content="undefined" img-format="jpg" />
DMSO-d6 2.43 (3H, s), 7.52 (2H, d), 7.70 (1H, t), 8.00 (3H, m), 8.76 (1H, s), 8.82 (1H, d), 9.04 (1H, d)
447
76
63-(2-хлор-5-метил-4-пиримидинил)-1-[(4-метилфенил)сульфонил]-7-нитро-1H-индол
<img file="00000099.jpg" he="26" wi="29" img-content="undefined" img-format="jpg" />
DMSO-d6 2.47 (3H, s), 2.50 (3H, s), 7.56 (2H, d), 7.68 (1H, dd), 7.97 (2H, d), 8.04 (1H, d), 8.47 (1H, d), 8.68 (1H, s), 8.85 (1H, s)
443
83
73-(2,5-дихлор-4-пиримидинил)-1-[(4-метилфенил)сульфонил]-7-нитро-1H-индол
<img file="00000100.jpg" he="26" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
DMSO-d6 2.40 (3H, s), 7.52 (2H, d), 7.65 (1H, d), 7.91 (2H, d), 8.00 (1H, d), 8.50 (1H, d), 8.88 (1H, s), 9.06 (1H, s)
463
82
83-(5-бром-2-хлор-4-пиримидинил)-1-[(4-метилфенил)сульфонил]-7-нитро-1H-индол
<img file="00000101.jpg" he="26" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
DMSO-d6 2.38 (3H, s), 7.46 (2H, d), 7.62 (1H, t), 7.88 (2H, d), 7.95 (1H, d), 8.35 (1H, d), 8.88 (1H, s), 9.16 (1H, s)
509
51
Промежуточное соединение 9: 3-(2-Хлор-4-пиримидинил)-7-нитро-1H-индол
1
3-(2-Хлор-4-пиримидинил)-1-[(4-метилфенил)сульфонил]-7-нитро-1H-индол (1 г, 2,3 ммоль, Промежуточное соединение 4) и гидроксид натрия (1,86 г, 46,6 ммоль) в THF (10 мл) и воде (5 мл) перемешивали при 50°C в течение 2 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле, градиент элюирования от 0 до 10% метанола в этилацетате. Чистые фракции упаривали досуха с получением 3-(2-хлор-4-пиримидинил)-7-нитро-1H-индола (0,52 г, 81%, Промежуточное соединение 9) в виде желтого твердого вещества; H ЯМР δ (DMSO-d6, 300 МГц) 7.45 (1H, t), 8.10 (1H, s), 8.19 (1H, d), 8.60 (1H, d), 8.66 (1H, s), 8.94 (1H, d), 12.70 (1H, s); m/z (ES+), [M+H]+=275.
Методику, описанную выше, повторяли, используя указанное исходное промежуточное соединение, с получением Промежуточных соединений 10-13, описанных в Таблице 3:
Таблица 3
Промежуточное соединение
Исходноепромежу-точное соединение
ЯМР δ (300 МГц)
m/z [M+H]+
Выход %
103-(2-хлор-5-фтор-4-пиримидинил)-7-нитро-1H-индол
5
DMSO-d6 7.42 (1H, t), 8.14 (1H, d), 8.33 (1H, d), 8.69 (1H, d), 8.92 (1H, d) 12.72 (1H, s)
293
89
113-(2-хлор-5-метил-4-пиримидинил)-7-нитро-1H-индол
6
DMSO-d6 2.52 (3H, s), 7.46 (1H, t), 8.20 (1H, s), 8.24 (1H, d), 8.62 (1H, s), 8.89 (1H, d), 12.65 (1H, s)
289
77
123-(2,5-дихлор-4-пиримидинил)-7-нитро-1H-индол
7
DMSO-d6 7.50 (1H, t), 8.24 (1H, d), 8.65 (1H, m), 8.89 (1H, s), 8.92 (1H,d), 12.78 (1H, s)
309
70
133-(5-бром-2-хлор-4-пиримидинил)-7-нитро-1H-индол
8
DMSO-d6 7.48 (1H, t), 8.25 (1H, d), 8.75 (1H, s), 8.83 (1H, d), 8.97 (1H, d), 12.77 (1H, s)
355
80
Промежуточное соединение 14: N-(3-Метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)-4-(7-нитро-1H-индол-3-ил)пиримидин-2-амин
1
3-(2-Хлор-4-пиримидинил)-7-нитро-1H-индол (300 мг, 1,1 ммоль, Промежуточное соединение 9), 3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-амина дигидрохлорид (328 мг, 1,64 ммоль) и 4-метилбензолсульфоновой кислоты моногидрат (623 мг, 3,28 ммоль) растворяли в изопропаноле (16 мл) и герметично закрывали в микроволновой пробирке. Реакционную смесь нагревали при 130°C в течение 2 часов в микроволновом реакторе и охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и затем фильтровали с получением N-(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)-4-(7-нитро-1H-индол-3-ил)пиримидин-2-амина (300 мг, 75%, Промежуточное соединение 14) в виде желтого твердого вещества и использовали на следующей стадии напрямую без дополнительной очистки; H ЯМР δ (DMSO-d6, 300 МГц) 3.77 (3H, s), 3.83 (3H, s), 7.39-7.49 (1H, m), 7.70 (1H, d), 7.83 (1H, s), 825-8.43 (2H, m), 8.71 (1H, d), 9.33 (1H, br s), 10.26 (1H, br s), 12.91 (1H, s); m/z (ES+), [M+H]+=366.
Методику, описанную выше, повторяли, используя указанное исходное промежуточное соединение, с получением Промежуточных соединений 15-22, описанных в Таблице 4:
Таблица 4
Промежуточное соединение
Исходное промежу-точное соединение
Аминопиразол
ЯМР δ(300 МГц)
m/z [M+H]+
Выход %
155-фтор-N-(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)-4-(7-нитро-1H-индол-3-ил)пиримидин-2-амин
10
<img file="00000104.jpg" he="20" wi="31" img-content="undefined" img-format="jpg" />
DMSO-d6 3.71 (3H, s), 3.78 (3H, s), 7.32 (1H, t), 7.68 (1H, s), 8.13 (1H, d), 8.17-8.27 (1H, m), 8.37 (1H, d), 8.55 (1H, s), 12.52 (1H, s)
384
84
16N-(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)-5-метил-4-(7-нитро-1H-индол-3-ил)-2-пиримидинамин
11
<img file="00000105.jpg" he="20" wi="31" img-content="undefined" img-format="jpg" />
DMSO-d6 2.36 (3H, s), 3.68 (3H, s), 3.80 (3H, s7.26 (1H, t), 7.65 (1H, s), 8.01 (1H, s), 8.15-8.23 (2H, m)), 8.93 (1H, br s), 12.35 (1H, br s)
380
95
175-хлор-N-(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)-4-(7-нитро-1H-индол-3-ил)пиримидин-2-амин
12
<img file="00000106.jpg" he="20" wi="31" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Неполучали
400
55
185-бром-N-(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)-4-(7-нитро-1H-индол-3-ил)пиримидин-2-амин
13
<img file="00000107.jpg" he="20" wi="31" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Неполучали
444
80
19N-(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)-5-фтор-4-(7-нитро-1H-индол-3-ил)пиримидин-2-амин
10
<img file="00000108.jpg" he="20" wi="37" img-content="undefined" img-format="jpg" />
DMSO-d6 1.25 (3H, t), 3.73 (3H, s), 4.18 (2H, q), 7.20-7.53 (1H, m), 7.68 (1H, s), 8.11-8.30 (2H, m), 8.35 (1H, d), 8.43 (1H, s), 9.04 (1H, s)
398
74
20N-(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)-5-метил-4-(7-нитро-1H-индол-3-ил)пиримидин-2-амин
11
<img file="00000108.jpg" he="20" wi="37" img-content="undefined" img-format="jpg" />
DMSO-d6 1.25 (3H, t), 2.36 (3H, s), 3.68 (3H, s), 4.16 (2H, q), 7.27 (1H, t), 7.64 (1H, s), 7.95-8.15 (2H, m), 8.20 (2H, m), 8.94 (1H, br s), 12.35 (1H, s)
394
74
21N-(1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил)-5-метил-4-(7-нитро-1H-индол-3-ил)пиримидин-2-амин
11
<img file="00000109.jpg" he="20" wi="31" img-content="undefined" img-format="jpg" />
DMSO-d6 2.09 (3H, s), 2.47 (3H, s), 3.81 (3H, s), 7.38 (1H, s), 7.87 (1H, s), 8.19-8.33 (3H, m), 9.66 (1H, s), 12.79 (1H, s)
364
62
225-хлор-N-(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)-4-(7-нитро-1H-индол-3-ил)пиримидин-2-амин
12
<img file="00000110.jpg" he="20" wi="37" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Неполучено
414
100
Промежуточное соединение 23: 3-{2-[(3-Метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-амин
1
Железо (0,46 г, 8,2 ммоль) добавляли к N-(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)-4-(7-нитро-1H-индол-3-ил)пиримидин-2-амину (0,6 г, 1,6 ммоль, Промежуточное соединение 14) и хлориду аммония (0,88 г, 16,4 ммоль) в THF (100 мл) и воде (50 мл) при 25°C в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 2 часов. Реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на диоксиде кремния C18, градиент элюирования от 30 до 80% метанола в воде. Чистые фракции упаривали досуха с получением 3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-амина (0,41 г, 74%, Промежуточное соединение 23) в виде желтого твердого вещества; H ЯМР δ (DMSO-d6, 400 МГц) 3.68 (3H, s), 3.72 (3H, s), 5.10 (2H, s), 6.40 (1H, d), 6.82 (1H, t), 7.05 (1H, d), 7.60-7.73 (2H, m), 8.05 (1H, s), 8.10-8.21 (2H, m), 11.29 (1H, s); m/z (ES+), [M+H]+=336.
Методику, описанную выше, повторяли, используя указанное исходное промежуточное соединение, с получением Промежуточных соединений 24-31, описанных в Таблице 5:
Таблица 5
Промежуточное соединение
Исходное промежу-точное соединение
ЯМР δ (300 МГц)
m/z [M+H]+
Выход %
243-{5-фтор-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-амин
15
DMSO-d6 3.71 (3H, s), 3.79 (3H, s), 5.17 (2H, s), 6.44 (1H, d), 6.83 (1H, t), 7.67 (1H, s), 7.79 (1H, s), 8.04-8.10 (1H, m), 8.19-8.26 (2H, m), 11.48 (1H, s)
354
79
253-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-амин
16
DMSO-d6 2.32 (3H, s), 3.66 (3H, s), 3.79 (3H, s), 5.10 (2H, br s), 6.40 (1H, dd), 6.79 (1H, t), 7.68 (2H, s), 7.81-7.92 (2H, m), 8.11 (1H, s), 11.23 (1H, s)
350
61
263-{5-хлор-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-амин
17
DMSO-d6 3.77 (3H, s), 3.81 (3H, s), 5.12 (2H, s), 6.40 (1H, d), 6.79 (1H, d), 6.88 (1H, s), 7.55 - 7.60 (1H, m), 8.26 (1H, s), 8.35 (2H, s), 11.41 (1H, s)
370
67
273-{5-бром-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-амин
18
DMSO-d6 3.63 (3H, s), 3.78 (3H, s), 5.12 (2H, s), 6.40 (1H, d), 6.90 (1H, t), 7.60-7.65 (2H, m), 8.37 (2H, s), 8.43 (1H, d), 11.37 (1H, s)
414
92
283-{2-[(1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-амин
21
Неполучали
334
70
293-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-амин
19
DMSO-d6 1.25 (3H, t), 3.68 (3H, s), 4.14 (2H, q), 5.15 (2H, s), 6.43 (1H, d), 6.82 (1H, t), 7.64 (1H, s), 7.78 (1H, s), 8.01-8.17 (2H, m), 8.22 (1H, d), 11.46 (1H, s)
368
67
303-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-амин
20
Метанол-d4 1.38 (3H, t), 2.39 (3H, s), 3.72 (3H, s), 4.26 (2H, q), 6.64 (1H, d), 6.96 (1H, t), 7.74 (3H, m), 8.14 (1H, s) - четыре обмениваемых протона не наблюдались
364
93
313-{5-хлор-2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-амин
22
Неполучали
384
56
Промежуточное соединение 32: (2S)-2-Бром-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
1
Циклический ангидрид 1-пропанфосфоновой кислоты (25,6 г, 40,3 ммоль) добавляли по каплям к 3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-амину (4,5 г, 13,4 ммоль, Промежуточное соединение 23), (S)-2-бромпропановой кислоте (4,1 г, 26,8 ммоль) и пиридину (3,3 мл, 40,3 ммоль) в этилацетате (100 мл) при -50°C в течение периода времени 30 минут в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивали при -50°C в течение 1 часа. Реакционную смесь оставляли нагреваться до -15°C и перемешивали в течение 16 часов. Реакционную смесь гасили ледяной водой (100 мл), экстрагировали этилацетатом (3×200 мл), органический слой сушили, фильтровали и упаривали с получением желто-коричневого твердого вещества. Этот неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле, градиент элюирования от 100 до 0% петролейного эфира в этилацетате. Чистые фракции упаривали досуха с получением (2S)-2-бром-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамида (4,9 г, 78%, Промежуточное соединение 32) в виде желтого твердого вещества; H ЯМР δ (DMSO-d6, 400 МГц) 1.76 (3H, d), 3.60 (1H, m), 3.62 (3H, s), 3.71 (3H, s), 4.83 (1H, q), 7.01-7.16 (2H, m), 7.41 (1H, d), 7.71 (1H, s), 8.20 (1H, d), 8.26 (1H, d), 8.27 (1H, s), 10.12 (1H, s), 11.26 (1H, s); m/z (ES+), [M+H]+=470.
Методику, описанную выше, повторяли, используя указанное исходное промежуточное соединение, с получением Промежуточных соединений 33-36, описанных в Таблице 6:
Таблица 6
Промежуточное соединение
Исходное промежу-точное соединение
ЯМР δ (300 МГц)
m/z [M+H]+
Выход %
33(2S)-2-бром-N-(3-{5-фтор-2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
24
DMSO-d6 1.85 (3H, d), 3.72 (3H, s), 3.79 (3H, s), 4.81 (1H, q), 7.09 (1H, t), 7.50 (1H, d), 7.67 (1H, s), 8.19 (1H, t), 8.29 (1H, d), 8.39 (2H, d), 10.22 (1H, s), 11.43 (1H, s)
490
94
34(2S)-2-бром-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
25
DMSO-d6 1.84 (3H, d), 2.33 (3H, s), 3.68 (3H, s), 3.78 (3H, s), 4.80 (1H, q), 7.03 (1H, t), 7.45 (1H, d), 7.66 (1H, s), 7.99 (1H, s), 8.00 (1H, s), 8.15 (1H, s), 8.26 (1H, s), 10.14 (1H, s), 11.22 (1H, s)
484
66
35(2S)-2-бром-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-фторпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
29
DMSO-d6 1.24 (3H, t), 1.84 (3H, d), 3.70 (3H, s), 4.14 (2H, q), 4.80 (1H, q), 7.07 (1H, t), 7.49 (1H, d), 7.65 (1H, s), 8.18 (1H, t), 8.28 (3H, d), 10.21 (1H, s), 11.27-11.63 (1H, m)
502
86
36(2S)-2-бром-N-(3-{2-[(3-этокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
30
DMSO-d6 1.30 (3H, t), 1.86 (3H, d), 2.35 (3H, s), 3.60-3.65 (1H, m), 3.68 (3H, s), 4.11 (2H, q), 4.84 (1H, q), 7.03 (1H, t), 7.47 (1H, d), 7.66 (1H, s), 7.95 (1H, s), 8.17 (1H, s), 8.28 (1H, s), 10.15 (1H, s), 11.23 (1H, s)
500 (значение изотопа Br)
62
Промежуточное соединение 37: (R)-2-(4-Метилпиперазин-1-ил)пропановой кислоты дигидрохлорид
1
Трифторметансульфоновый ангидрид (53,6 мл, 317 ммоль) добавляли по каплям к (S)-метил-2-гидроксипропаноату (30 г, 288 ммоль) и 2,6-лутидину (37 мл, 317 ммоль) в DCM (500 мл) при -78°C в течение периода времени 1 час.Полученный раствор перемешивали при -78°C в течение 0,5 часов. Раствор затем нагревали до комнатной температуры в течение 1 часа. Органическую фазу промывали 1 н. HCl (водн.) (2×100 мл) и сушили над сульфатом натрия, затем фильтровали и упаривали. Остаток растворяли в DCM (500 мл), охлаждали до 0°C, затем медленно добавляли 1-метилпиперазин (65 г, 646 ммоль). Добавляли по каплям карбонат калия (212 г, 1537 ммоль) в воде (700 мл) при 0°C. Раствор перемешивали при 25°C в течение ночи, затем промывали рассолом, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и упаривали с получением желтого масла. Добавляли одной порцией 6 н. (водн.) HCl (270 мл, 1625 ммоль) при 25°C, и полученную смесь перемешивали при 110°C в течение 18 часов. Раствор упаривали, и продукт промывали ацетонитрилом (200 мл) с получением не совсем белого твердого вещества. Это твердое вещество суспендировали в изопропаноле (1000 мл) и перемешивали в течение 3 часов при 100°C и затем перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Осадок собирали фильтрованием, промывали изопропанолом (150 мл) и сушили в вакууме с получением (2R)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропановой кислоты дигидрохлорида (15 г, 48%, Промежуточное соединение 37) в виде белого твердого вещества; H ЯМР δ (D2O, 400 МГц) 1.51 (3H, d), 2.94 (3H, s), 3.48-4.13 (9H, m); m/z (ES+), [M+H]+=173.
Методику, описанную выше, повторяли, используя указанный 2-гидроксипропаноат, с получением Промежуточных соединений 38 и 39, описанных в Таблице 7:
Таблица 7
Промежуточное соединение
Пиперазин
Гидрокси-пропаноат
ЯМР δ (300 МГц)
m/z [M+H]+
Выход %
38(2S)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропановой кислоты дигидрохлорид
<img file="00000114.jpg" he="28" wi="14" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(R)-метил-2-гидрокси-пропаноат
DMSO-d6 1.54 (3H, d), 2.83 (3H, s), 3.69 (8H, d), 4.30 (1H, s), 11.84 (1H, s)
173
100
39(2R)-2-[(2R)-2,4-диметил-пиперазин-1-ил]пропановой кислоты дигидрохлорид
<img file="00000115.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
(S)-метил-2-гидрокси-пропаноат
Метанол-d4 1.26 (3H, d), 1.43 (3H, d), 2.90 (4H, s), 3.05-3.21 (2H, m), 3.34-3.40 (2H, m), 3.42-3.49 (1H, m), 3.53 (1H, br s), 4.07 (1H, q)
187
95
Промежуточное соединение 40: 3-(2-Хлор-5-метил-4-пиримидинил)-7-нитро-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индол
3
1
Гидрид натрия (60%-ная дисперсия в минеральном масле) (1,3 г, 33 ммоль) добавляли постепенно в перемешиваемую суспензию 3-(2-хлор-5-метил-4-пиримидинил)-7-нитро-1H-индола (6,4 г, 22 ммоль, Промежуточное соединение 11) в безводном THF (150 мл) при 0°C. После перемешивания в течение 25 минут быстро по каплям добавляли (2-(хлорметокси)этил)триметилсилан (4,1 мл, 23 ммоль). После охлаждения в течение 5 минут охлаждающую баню убирали, и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1,5 часов. Дополнительно добавляли гидрид натрия (60%-ная дисперсия в минеральном масле) (130 мг, 3,3 ммоль) и (2-(хлорметокси)этил)триметилсилан (0,4 мл, 2,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение еще 40 минут, затем гасили насыщенным водным раствором NaHCO, и бледно-желтую смесь разбавляли диэтиловым эфиром. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенный органический слой промывали рассолом, сушили над сульфатом магния, фильтровали и упаривали. Остаток растворяли в хлороформе и подвергали хроматографии на силикагеле, используя смесь 5-45% этилацетата-гексан в качестве элюента, с получением 3-(2-хлор-5-метил-4-пиримидинил)-7-нитро-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индола (9,2 г, 100%, Промежуточное соединение 40) в виде желтого твердого вещества; H ЯМР δ (DMSO-d6, 400 МГц) -0.16 (9H, s), 0.60-0.73 (2H, m), 2.51-2.52 (3H, m), 3.11-3.22 (2H, m), 5.72 (2H, s), 7.48 (1H, t), 7.94 (1H, dd), 8.57 (1H, s), 8.64 (1H, s), 8.84 (1H, dd); m/z (ES+), [M+H]+=419.
Промежуточное соединение 41: N-(3-Метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)-5-метил-4-(7-нитро-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индол-3-ил)пиримидин-2-амин
1
Смесь диоксана и воды (10:1, 44 мл) добавляли в смесь 3-(2-хлор-5-метил-4-пиримидинил)-7-нитро-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индола (1,59 г, 3,8 ммоль, Промежуточное соединение 40), 3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-амина дигидрохлорида (1,7 г, 10,4 ммоль), ацетата палладия(II) (0,085 г, 0,4 ммоль), Xantphos (0,22 г, 0,4 ммоль) и карбоната цезия (4,95 г, 15,2 ммоль) в атмосфере азота. Смесь затем нагревали при 110°C в течение 3,5 часов в атмосфере азота. Смесь оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды, разбавляли этилацетатом, фильтровали через диатомитовую землю и концентрировали. Полученную смолу подвергали хроматографии на силикагеле, используя смесь 30-100% этилацетата-гексан в качестве элюента, с получением N-(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)-5-метил-4-(7-нитро-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индол-3-ил)пиримидин-2-амина (1,3 г, 67%, Промежуточное соединение 41) в виде бледно-желтого твердого вещества; H ЯМР δ (DMSO-d6, 400 МГц) -0.17 (9H, s), 0.60-0.74 (2H, m), 2.35 (3H, s), 3.05-3.20 (2H, m), 3.68 (3H, s), 3.79 (3H, s), 5.69 (2H, s), 7.23-7.36 (1H, m), 7.65 (1H, s), 7.86 (1H, d), 8.19 (1H, br s), 8.23 (1H, s), 8.35 (1H, s), 8.67-9.02 (1H, m); m/z (ES+), [M+H]+=510.
Промежуточное соединение 42: 3-{2-[(3-Метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индол-7-амин
1
Смесь N-(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)-5-метил-4-(7-нитро-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индол-3-ил)пиримидин-2-амина (1,26 г, 2,5 ммоль, Промежуточное соединение 41) в смеси метанол-этилацетат (1:1, 20 мл) подвергали гидрированию при атмосферном давлении в присутствии 10%-ного палладия на углероде (масс./масс.) (0,26 г, 0,25 ммоль) при температуре окружающей среды в течение 23 часов. Суспензию разбавляли этилацетатом и фильтровали через диатомитовую землю, затем концентрировали с получением 3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индол-7-амина (1,1 г, 93%, Промежуточное соединение 42) в виде бледно-желтого твердого вещества; H ЯМР δ (DMSO-d6, 400 МГц) -0.05 (9H, s), 0.86-0.96 (2H, m), 2.30 (3H, s), 3.51-3.62 (2H, m), 3.65 (3H, s), 3.79 (3H, s), 4.97-5.05 (2H, m), 5.72 (2H, s), 6.53 (1H, d), 6.83 (1H, t), 7.65 (1H, s), 7.70 (1H, br s), 7.90 (1H, s), 7.95 (1H, s), 8.13 (1H, s); m/z (ES+), [M+H]+=480.
Промежуточное соединение 43: 2-(4-Метилпиперазин-1-ил)бутановая кислота
1
Этил-2-бромбутаноат (30 г, 154 ммоль) добавляли по каплям к 1-метилпиперазину (61,6 г, 615 ммоль) в THF (500 мл) при 0°C в течение периода времени 30 минут в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивали при 25°C в течение 12 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Смесь подщелачивали насыщенным водным раствором карбоната калия и экстрагировали этилацетатом (3×150 мл). Объединенные органические слои упаривали с получением желтого масла, которое добавляли по каплям в 6 н. (водн.) HCl (200 мл, 1200 ммоль) при 0°C в течение периода времени 10 минут на воздухе. Полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 16 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, после чего промывали этилацетатом (100 мл). Воду удаляли при пониженном давлении с получением 2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутановой кислоты гидрохлорида (35 г, 96%, Промежуточное соединение 43) в виде белого твердого вещества, которое использовали на следующей стадии напрямую без дополнительной очистки; H ЯМР δ (DMSO-d6, 300 МГц) 0.93 (3H, t), 1.76-2.09 (2H, m), 2.80 (3H, s), 3.29-3.69 (8H, m), 3.99 (1H, br s), 11.84 (1H, s); m/z (ES+), [M+H]+=187.
Промежуточное соединение 44: Метил-3-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропаноат
1
Карбонат калия (1,38 г, 10,1 ммоль) добавляли в перемешиваемый раствор 1-метилпиперазина (0,93 мл, 8,3 ммоль) и метил-2-бром-3-метоксипропаноата (1,7 г, 8,6 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) в атмосфере азота. Бледно-желтую смесь затем нагревали до 60°C в течение 21 часов. Реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды, разбавляли этилацетатом и фильтровали. После концентрирования получили метил-3-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропаноат (1,69 г, 94%) в виде оранжевого масла, которое использовали без дополнительной очистки; H ЯМР δ (DMSO-d6, 400 МГц) 2.12 (3H, s), 2.20-2.36 (4H, m), 2.48-2.56 (5H, m), 3.21-3.25 (3H, s), 3.39 (1H, dd), 3.48-3.53 (1H, m), 3.63 (3H, s); m/z (ES+), [M+H]+=217.
Промежуточное соединение 45: 3-Метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропаноат лития
Раствор гидроксида лития (52 мг, 2,2 ммоль) в воде (3 мл) добавляли в перемешиваемый раствор метил-3-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропаноата (0,47 г, 2,2 ммоль, Промежуточное соединение 44) в THF (3 мл) при температуре окружающей среды. После перемешивания в течение 21 часов реакционную смесь нагревали до 40°C в течение 22 часов. Добавляли несколько капель метанола, осветляя бледно-желтый раствор и продолжая нагревание. Через 2 часа дополнительно добавляли гидроксид лития (16 мг, 0,7 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение 4 дня. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и водный раствор лиофилизировали с получением 3-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропаноата лития (0,45 г, 98%) в виде не совсем белого твердого вещества; 1H ЯМР δ (DMSO-d6, 400 МГц) 2.10 (3H, s), 2.27 (4H, br s), 2.51-2.60 (4H, m), 2.87 (1H, t), 3.19 (3H, s), 3.50-3.60 (2H, m); m/z (ES+), [M+H]+=203.
Методику, описанную в Примере 32, повторяли, используя указанные исходные промежуточные соединения, с получением Промежуточных соединений 46 и 47, описанных в Таблице 8:
Таблица 8
Промежуточное соединение
Исходные промежу-точные соединения
ЯМР δ (400 МГц)
m/z [M+H]+
Выход %
46N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1-{2-[2-(триметилсилил)этокси]-этил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид
42 и 43
DMSO-d6 -0.07 (9H, s), 0.86 (2H, dd), 0.98 (3H, t), 1.68-1.84 (2H, m), 2.33 (4H, s), 2.80 (2H, br s), 3.07 (3H, m), 3.17 (4H, s), 3.40-3.52 (4H, m), 3.67 (3H, s), 3.79 (3H, s), 5.66-5.75 (2H, m), 7.10 (1H, t), 7.34 (1H, d), 7.65 (1H, s), 8.05 (1H, br s), 8.11 (1H, s), 8.18 (1H, s), 9.33 (1H, br s), 9.72 (1H, s)
648
81
473-метокси-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1-{[2-(триметилсилил)этокси]-метил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
42 и 45
DMSO-d6 -0.08 (9H, s), 0.83-0.94 (2H, m), 2.33 (3H, s), 2.58-3.14 (11H, m), 3.41-3.51 (3H, m), 3.67 (3H, s), 3.70-3.86 (6H, m), 5.64-5.86 (3H, m), 7.09 (1H, t), 7.30 (1H, d), 7.64 (1H, s), 8.05 (1H, s), 8.10 (1H, s), 8.18 (1H, s), 8.30 (1H, br s), 9.36 (1H, br s), 9.84 (1H, s)
664
82
Промежуточное соединение 48: 3-(2-Хлорпиримидин-4-ил)-1H-индол-7-амин
1
Хлорид аммония (7,8 г, 146 ммоль) добавляли к 3-(2-хлор-4-пиримидинил)-7-нитро-1H-индолу (4 г, 14,6 ммоль, Промежуточное соединение 9) и железу (4,1 г, 72 ммоль) в THF (200 мл) и воде (100 мл) при 25°C в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 12 часов. Реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю. Органическую фазу отделяли, и водную фазу экстрагировали THF (2×100 мл). Органические фазы объединяли и концентрировали с получением 3-(2-хлорпиримидин-4-ил)-1H-индол-7-амина (3 г, 84%, Промежуточное соединение 48) в виде зеленого твердого вещества; H ЯМР δ (DMSO-d6, 400 МГц) 5.42 (2H, s), 6.44 (1H, d), 6.91 (1H, m), 7.60 (1H, d), 7.78-7.91 (1H, m), 8.36 (1H, s), 8.45 (1H, d)-NH протон скрыт; m/z (ES+), [M+MeCN]+=286.
Методику, описанную выше для получения Промежуточного соединения 48, повторяли, используя указанное исходные промежуточное соединение, с получением Промежуточных соединений 49 и 50, описанных в Таблице 9:
Таблица 9
Промежуточное соединение
Исходное промежу-точное соединение
ЯМР δ (400 МГц)
m/z [M+H]+
Выход %
493-(2-хлор-5-метилпиримидин-4-ил)-1H-индол-7-амин
11
DMSO-d6 2.50 (3H, s), 5.26 (2H, s), 6.47 (1H, dd), 6.92 (1H, t), 7.76 (1H, d), 8.12 (1H, d), 8.45 (1H, s), 11.71 (1H, d)
259
80
503-(2-хлор-5-фторпиримидин-4-ил)-1H-индол-7-амин
10
Метанол-d4 6.68 (1H, dd), 7.06 (1H, t), 8.04 (1H, dd), 8.18 (1H, d), 8.39 (1H, d)-три обмениваемых протона не наблюдались
263
79
Промежуточное соединение 51: N-[3-(2-Хлорпиримидин-4-ил)-1H-индол-7-ил]-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид
1
Циклический ангидрид 1-пропанфосфоновой кислоты (7,8 г, 12,3 ммоль) добавляли по каплям к 3-(2-хлорпиримидин-4-ил)-1H-индол-7-амину (1 г, 4,1 ммоль, Промежуточное соединение 48), 2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутановой кислоты дигидрохлориду (1,3 г, 4,9 ммоль, Промежуточное соединение 43) и пиридину (2 мл, 25 ммоль) в DMF (100 мл) при 0°C в течение периода времени 10 минут в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивали при 25°C в течение 2 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и неочищенный продукт очищали обращенно-фазовой хроматографией на силикагеле (C18), используя 0-100% метанола в воде, с получением N-[3-(2-хлорпиримидин-4-ил)-1H-индол-7-ил]-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамида (0,24 г, 14%, Промежуточное соединение 51) в виде желтого твердого вещества; H ЯМР δ (Метанол-d4, 300 МГц) 1.08 (3H, t), 1.79-2.02 (2H, m), 2.32 (3H, s), 2.58 (4H, s), 2.84 (4H, m), 3.10-3.27 (1H, m), 7.25 (2H, m), 7.77 (1H, d), 8.27 (1H, s), 8.37 (1H, dd), 8.44 (1H, d)-два обмениваемых протона не наблюдались; m/z (ES+), [M+H]+=413.
Методику, описанную выше для получения Промежуточного соединения 51, повторяли, используя указанные исходные промежуточные соединения, с получением Промежуточных соединений 52-55, описанных в Таблице 10:
Таблица 10
Промежуточное соединение
Исходные промежу-точные соединения
ЯМР δ (300 МГц)
m/z [M+H]+
Выход %
52N-[3-(2-хлор-5-фторпиримидин-4-ил)-1H-индол-7-ил]-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид
50 и 43
Данные не получали
431
89
53N-[3-(2-хлор-5-фторпиримидин-4-ил)-1H-индол-7-ил]-3-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
50 и 45
DMSO-d6 2.27 (3H, s), 2.41 (4H, br s), 2.64 (2H, m), 2.77 (2H, m), 3.29 (3H, s), 3.50-3.73 (2H, m), 3.79 (1H, dd), 7.23 (1H, t), 7.59 (1H, dd), 8.29-8.44 (2H, m), 8.71 (1H, d), 9.97 (1H, s), 11.85 (1H, s)
447
47
54<sup>1,2</sup>(R)-N-[3-(2-хлор-5-метилпиримидин-4-ил)-1H-индол-7-ил]-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
49 и 37
DMSO-d6 1.28 (3H, d), 2.24 (3H, s), 2.51-2.71 (11H, m), 3.39 (1H, m), 7.18 (1H, t), 7.50 (1H, d), 8.19 (1H, s), 8.31 (1H, d), 8.52 (1H, s), 9.76 (1H, s), 11.69 (1H, s)
413
81
55<sup>3</sup>(R)-N-[3-(2-хлор-5-фторпиримидин-4-ил)-1H-индол-7-ил]-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
50 и 37
DMSO-d6 1.27 (3H, d), 2.27 (3H, s), 2.35-2.68 (8H, m), 3.39 (1H, q), 7.24 (1H, t), 7.53 (1H, d), 8.34-8.37 (2H, m), 8.72 (1H, d), 9.83 (1H, s), 11.90 (1H, s)
417
79
1
1H ЯМР анализ осуществляли с использованием спектрометра Bruker Avance 400 (400 МГц).
2
Указанную аминокислоту (1,5 экв.) и 7-амино-индольные промежуточные соединения подвергали взаимодействию в присутствии HATU (2 экв.) и диизопропилэтиламина (4 экв.) в DMF при комнатной температуре.
3
Указанную аминокислоту (1,3 экв.) и 7-амино-индольные промежуточные соединения подвергали взаимодействию в присутствии HATU (1,5 экв.) и диизопропилэтиламина (5 экв.) в DMF при комнатной температуре.
Промежуточное соединение 56: 3-(2-Хлорпиримидин-4-ил)-7-нитро-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индол
1
3-(2-Хлорпиримидин-4-ил)-7-нитро-1H-индол (4,4 г, 16 ммоль, Промежуточное соединение 9) растворяли в THF (60 мл) и охлаждали до 0°C. Затем добавляли гидрид натрия (1,2 г, 29 ммоль), и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры. Затем медленно добавляли (2-(хлорметокси)этил)триметилсилан (4,3 мл, 24 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение 1,5 часов. Реакционную смесь гасили водным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали этилацетатом. Органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением неочищенного продукта в виде красного масла, которое очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя смесь 0-40% этилацетата-гексаны в качестве элюента, с получением 3-(2-хлорпиримидин-4-ил)-7-нитро-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индола (5,7 г, 88%, Промежуточное соединение 56) в виде желтого твердого вещества; H ЯМР δ (DMSO-d6, 300 МГц) -0.16 (9H, s), 0.67 (2H, t), 3.19 (2H, t), 5.66 (2H, s), 7.51 (1H, s), 7.88-8.01 (2H, m), 8.71 (1H, d), 8.88 (1H, s), 8.91 (1H, s); m/z (ES+), [M+H]+=405.
Промежуточное соединение 57: 3-(2-Хлорпиримидин-4-ил)-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индол-7-амин
1
3-(2-Хлорпиримидин-4-ил)-7-нитро-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индол (5,7 г, 14,1 ммоль, Промежуточное соединение 56) растворяли в метаноле (47 мл), THF (47 мл) и воде (47 мл). Раствор затем нагревали до 60°C и добавляли хлорид аммония (32,8 г, 612 ммоль), затем железо (34,4 г, 617 ммоль). Раствор затем перемешивали в течение 2 часов при 60°C. Реакционную смесь распределяли между водой и диэтиловым эфиром. Органические слом экстрагировали и объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением 3-(2-хлорпиримидин-4-ил)-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индол-7-амина (5,2 г, 98%, Промежуточное соединение 57) в виде желтого масла; H ЯМР δ (DMSO-d6, 300 МГц) -0.04 (9H, m), 0.92 (2H, t), 3.60 (2H, t), 5.15 (2H, s), 5.71 (2H, s), 6.59-6.62 (1H, m), 7.00 (1H, t), 7.70 (1H, dd), 7.80 (1H, d), 8.50 (1H, s), 8.55 (1H, d); m/z (ES+), [M+H]+=375.
Промежуточное соединение 58: (2R)-N-[3-(2-Хлорпиримидин-4-ил)-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индол-7-ил]-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
1
(R)-2-(4-Метилпиперазин-1-ил)пропановой кислоты дигидрохлорид (2,45 г, 10 ммоль, Промежуточное соединение 37) растворяли в DMF (15 мл) и добавляли ди(1H-имидазол-1-ил)метанон (1,3 г, 8 ммоль). Выделялся газ, и реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре до тех пор, пока реакционная смесь не стала гомогенной. Затем добавляли 3-(2-хлорпиримидин-4-ил)-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индол-7-амин (1,5 г, 4 ммоль, Промежуточное соединение 57) в DMSO (11 мл), и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь гасили 10% раствором карбоната калия и экстрагировали этилацетатом. Органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя 100%-ный этилацетат, затем смесь 0-20% метанола-DCM в качестве элюента, с получением (2R)-N-[3-(2-хлорпиримидин-4-ил)-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индол-7-ил]-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида (0,92 г, 43%, Промежуточное соединение 58) в виде желтого твердого вещества; H ЯМР δ (Хлороформ-d, 300 МГц) -0.10 (9H, s), 0.96-1.08 (2H, m), 1.40 (3H, d), 2.36 (3H, m), 2.47-2.92 (8H, m), 3.27 (1H, q), 3.51-3.64 (2H, m), 5.54-5.79 (2H, m), 7.36 (1H, t), 7.58 (1H, d), 7.79 (1H, d), 7.96 (1H, s), 8.12 (1H, d), 8.54 (1H, d), 9.72 (1H, br s); m/z (ES+), [M+H]+=529.
Промежуточное соединение 59: (2R)-N-[3-(2-Хлорпиримидин-4-ил)-1H-индол-7-ил]-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
1
(2R)-N-[3-(2-Хлорпиримидин-4-ил)-1-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-1H-индол-7-ил]-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид (0,38 г, 0,7 ммоль, Промежуточное соединение 58) растворяли в DMSO (7 мл) и добавляли фторид цезия (0,32 г, 2,1 ммоль). Реакционную смесь затем нагревали при 100°C и перемешивали в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и водой. Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали этилацетатом. Органические слои объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением (2R)-N-[3-(2-хлорпиримидин-4-ил)-1H-индол-7-ил]-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида (0,17 г, 59%) в виде желтого твердого вещества; H ЯМР δ (Хлороформ-d, 300 МГц) 1.43 (3H, d), 2.32-3.02 (11H, m), 3.39 (1H, m), 6.84 (1H, m), 7.22-7.25 (1H, m), 7.52 (1H, d), 8.03 (1H, d), 8.34 (1H, d), 8.47 (1H, d), 9.81 (1H, br. s), 11.58 (1H, br s); m/z (ES+), [M+H]+=399.
Пример 1: (2R)-2-[(2S)-2,4-Диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамид
1
(S)-1,3-Диметилпиперазина дигидрохлорид (0,16 г, 0,85 ммоль) добавляли одной порцией к (2S)-2-бром-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамиду (0,2 г, 0,43 ммоль, Промежуточное соединение 32) и карбонату калия (0,24 г, 1,7 ммоль) в DMF (2 мл) при 0°C. Полученный раствор перемешивали при 25°C в течение 16 часов. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC (X Bridge C18, 5 мкм, 19×150 мм; подвижная фаза A: вода/0,05% TFA, подвижная фаза B: ацетонитрил; скорость потока: 20 мл/мин; градиент: от 20% B до 70% B за 10 мин; 254 нм) с получением (2R)-2-[(2S)-2,4-диметилпиперазин-1-ил]-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)пропанамида (49 мг, 23%, Пример 1) в виде белого твердого вещества; H ЯМР δ (Метанол-d4, 400 МГц) 1.15 (3H, d), 1.43 (3H, d), 2.06 (1H, t), 2.32 (3H, s), 2.41 (1H, m), 2.75-2.92 (3H, m), 3.01 (2H, m), 3.79-3.83 (4H, m), 3.94 (3H, s), 7.12-7.19 (3H, dt), 7.73 (1H, s), 8.09 (1H, s), 8.19 (1H, d), 8.27 (1H, s); m/z (ES+), [M+H]+=504; хиральная HPLC (ChiralPak ADH, 5 мкм, 0,46×10 см, подвижная фаза: смесь 1:1 гексанов (модифицированных 0,1% TEA) и этанола при 1,0 мл/мин) показывает e.r. 99:1, время удерживания=9,24 мин.
Методику, описанную выше в Примере 1, повторяли, используя указанные пиперазин и исходное промежуточное соединение, с получением соединений, описанных в Таблице 11:
Таблица 11
Пример
Исходное промежу-точное соединение
Пиперазин
ЯМР δ (300 МГц)
m/z [M+H]+
Выход %
2
33
<img file="00000128.jpg" he="29" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.14 (3H, d), 1.42 (3H, d), 2.26-2.38 (5H, m), 2.52 (2H, m), 2.86-3.01 (3H, m), 3.39 (1H, m), 3.79 (3H, s), 3.92 (3H, s), 7.10-7.22 (2H, m), 7.68 (1H, s), 8.14 (2H, dd), 8.42 (1H, s)
522
47
3<sup>1</sup>
33
<img file="00000129.jpg" he="32" wi="21" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.42 (3H, d), 2.61-2.84 (10H, m), 3.36 (4H, s), 3.58 (2H, t), 3.79 (3H, s), 3.91 (3H, s), 7.10-7.22 (2H, m), 7.68 (1H, s), 8.14 (2H, dd), 8.42 (1H, s)
552
70
4<sup>1</sup>
33
<img file="00000130.jpg" he="32" wi="14" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.15 (3H, t), 1.43 (3H, d), 2.51 (2H, q), 2.56-2.90 (8H, m), 3.34-3.45 (1H, m), 3.79 (3H, s), 3.92 (3H, s), 7.10-7.22 (2H, m), 7.68 (1H, s), 8.14 (2H, dd), 8.42 (1H, s)
522
62
5
33
<img file="00000131.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.14 (3H, d), 1.42 (3H, dd), 2.18 (1H, t), 2.36 (4H, s), 2.50 (1H, m), 2.61-2.72 (1H, m), 2.86-3.00 (3H, m), 3.33-3.44 (1H, m), 3.79 (3H, s), 3.92 (3H, s), 7.10-7.22 (2H, m), 7.68 (1H, s), 8.14 (2H, dd), 8.42 (1H, s)
522
60
6
33
<img file="00000132.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.23 (3H, d), 1.30 (3H, d), 2.20 (1H, m), 2.35 (3H, s), 2.42 (1H, m), 2.68 (1H, m), 2.79 (1H, m), 2.85 (3H, m), 3.80 (3H, s), 3.92 (3H, s), 4.06 (1H, m), 7.07-7.20 (2H, m), 7.68 (1H, s), 8.14 (2H, dd), 8.43 (1H, s)
522
22
7a<sup>2</sup>
33
<img file="00000133.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.17 (3H, d), 1.45 (3H, d), 2.10 (1H, t), 2.33 (3H, s), 2.41 (1H, s), 2.72-2.96 (3H, m), 3.02 (2H, m), 3.73-3.87 (4H, m), 3.92 (3H, s), 7.16 (2H, d), 7.69 (1H, s), 8.15 (2H, dd), 8.43 (1H, s)
522
35
7b<sup>2</sup>
33
<img file="00000133.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.23 (3H, d), 1.31 (3H, d), 2.17 (1H, m), 2.34 (4H, m), 2.60-2.94 (5H, m), 3.80 (3H, s), 3.92 (3H, s), 4.07 (1H, d), 7.13 (2H, m), 7.69 (1H, s), 8.15 (2H, dd), 8.44 (1H, s)
522
15
8<sup>1</sup>
35
<img file="00000134.jpg" he="32" wi="14" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.13 (3H, t), 1.32 (3H, t), 1.42 (3H, d), 2.49 (2H, d), 2.55-2.94 (8H, m), 3.40 (1H, m), 3.77 (3H, s), 4.23 (2H, q), 7.08-7.21 (2H, m), 7.66 (1H, s), 8.13 (2H, dd), 8.41 (1H, d)
536
62
9<sup>1</sup>
35
<img file="00000135.jpg" he="32" wi="21" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.32 (3H, t), 1.41 (3H, d), 2.52-2.95 (10H, m), 3.33-3.44 (4H, m), 3.56 (2H, t), 3.77 (3H, s), 4.23 (2H, q), 7.04-7.26 (2H, m), 7.66 (1H, s), 8.12 (2H, dd), 8.41 (1H, m)
566
57
10a<sup>3</sup>
35
<img file="00000136.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.19 (3H, d), 1.34 (3H, t), 1.46 (3H, d), 2.25 (1H, t), 2.44 (3H, s), 2.58 (1H, m), 2.85-3.02 (3H, m), 3.03-3.13 (2H, m), 3.80 (3H, s), 3.82-3.90 (1H, m), 4.25 (2H, q), 7.09-7.20 (2H, m), 7.69 (1H, s), 8.15 (2H, dd), 8.43 (1H, s)
536
51
10b<sup>3</sup>
35
<img file="00000136.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.19-1.40 (9H, m), 2.17 (1H, t), 2.34 (4H, s), 2.60-2.91 (5H, m), 3.79 (3H, s), 4.06 (1H, m), 4.25 (2H, q), 7.06-7.22 (2H, m), 7.69 (1H, s), 8.14 (2H, dd), 8.44 (1H, d)
536
12
11a<sup>4</sup>
35
<img file="00000137.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.13 (3H, d), 1.32 (3H, t), 1.41 (3H, d), 2.16 (1H, t), 2.33 (4H, s), 2.47 (1H, td), 2.65 (1H, td), 2.81-2.99 (3H, m), 3.32-3.43 (1H, m), 3.77 (3H, s), 4.23 (2H, q), 7.07-7.22 (2H, m), 7.67 (1H, s), 8.13 (2H, dd), 8.41 (1H, d)
536
84
11b<sup>4</sup>
35
<img file="00000137.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.11 (3H, d), 1.32 (3H, t), 1.40 (3H, d), 2.22-2.37 (5H, m), 2.42-2.59 (2H, m), 2.84-3.02 (3H, m), 3.31-3.44 (1H, m), 3.77 (3H, s), 4.23 (2H, q), 7.07-7.22 (2H, m), 7.67 (1H, s), 8.13 (2H, dd), 8.41 (1H, s)
536
12
12
35
<img file="00000138.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.21 (3H, d), 1.26-1.38 (6H, m), 2.16 (1H, t), 2.33 (4H, s), 2.57-2.95 (5H, m), 3.77 (3H, s), 4.04 (1H, q), 4.23 (2H, q), 6.91-7.22 (2H, m), 7.67 (1H, s), 8.12 (2H, dd), 8.42 (1H, d)
536
33
13
35
<img file="00000139.jpg" he="29" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.11 (3H, d), 1.32 (3H, t), 1.40 (3H, d), 2.22-2.40 (5H, m), 2.42-2.59 (2H, m), 2.90 (3H, dd), 3.35-3.42 (1H, m), 3.77 (3H, s), 4.23 (2H, q), 7.06-7.21 (2H, m), 7.67 (1H, s), 8.13 (2H, dd), 8.42 (1H, br s)
536
88
14<sup>5</sup>
34
<img file="00000140.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.13 (3H, d), 1.41 (3H, d), 2.16 (1H, t), 2.36 (6H, d), 2.54-2.41 (1H, m), 2.66 (1H, t), 2.91 (3H, q), 3.72 (3H, s), 3.92 (3H, s), 7.21-7.04 (2H, m), 7.70 (1H, s), 7.87 (1H, s), 8.14 (1H, s), 8.20 (1H, d)
518
19
15
34
<img file="00000141.jpg" he="32" wi="25" img-content="undefined" img-format="jpg" />
DMSO-d6 1.26 (3H, d), 2.33 (3H, s), 2.35-2.78 (10H, m), 3.33-3.35 (1H, m), 3.42-3.65 (2H, m), 3.67 (3H, s), 3.79 (3H, s), 4.36 (1H, s), 7.00 (1H, t), 7.41 (1H, d), 7.66 (1H, s), 7.95 (1H, s), 7.97 (1H, s), 8.14 (1H, s), 8.16 (1H, br s), 9.65 (1H, s), 11.28 (1H, s)
534
39
16
34
<img file="00000142.jpg" he="32" wi="14" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Хлороформ-d 1.17 (3H, t), 1.40 (3H, d), 2.35 (3H, s), 2.39-3.02 (10H, m), 3.37 (1H, d), 3.70 (3H, s), 3.98 (3H, s), 6.52 (1H, s), 6.81 (1H, d), 7.12 (1H, t), 7.66 (1H, d), 7.82 (1H, s), 8.14-8.30 (2H, m), 9.78 (1H, s), 11.17 (1H, s)
518
75
17
34
<img file="00000143.jpg" he="32" wi="21" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.40 (3H, d), 2.35 (3H, s), 2.75 (10H, m), 3.37 (4H, s), 3.57 (2H, t), 3.70 (3H, s), 3.98 (3H, s), 6.54 (1H, s), 6.81 (1H, d), 7.12 (1H, t), 7.66 (1H, d), 7.81 (1H, s), 8.17-8.32 (2H, m), 9.80 (1H, s), 11.17 (1H, s)
548
78
18
34
<img file="00000144.jpg" he="29" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.25 (3H, s), 1.39 (3H, d), 2.35 (3H, s), 2.48 (4H, d), 2.62 (3H, s), 2.94 (3H, d), 3.45 (1H, s), 3.70 (3H, s), 3.98 (3H, s), 6.53 (1H, s), 6.82-7.19 (2H, m), 7.64 (1H, d), 7.81 (1H, s), 8.13-8.37 (2H, m), 9.68 (1H, s), 11.19 (1H, s)
518
22
19
34
<img file="00000145.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.11 (3H, d), 1.39 (3H, d), 1.95-2.11 (1H, m), 2.31 (7H, d), 2.61-2.89 (3H, m), 2.92-3.07 (2H, m), 3.68 (4H, s), 3.88 (3H, s), 6.98-7.17 (2H, m), 7.66 (1H, s), 7.82 (1H, s), 8.09 (2H, s)
518
6
20
36
<img file="00000146.jpg" he="32" wi="14" img-content="undefined" img-format="jpg" />
DMSO-d6 0.98 (3H, t), 1.20-1.31 (6H, m), 2.31-2.78 (13H, m), 3.31 (1H, s), 3.65 (3H, s), 4.15 (2H, q), 7.00 (1H, t), 7.41 (1H, d), 7.64 (1H, s), 7.86-7.98 (2H, m), 8.14 (1H, s), 8.22 (1H, s), 9.66 (1H, s), 11.30 (1H, s)
532
44
21
36
<img file="00000147.jpg" he="32" wi="21" img-content="undefined" img-format="jpg" />
DMSO-d6 1.20-1.31 (6H, m), 2.33 (3H, s), 2.45-2.70 (10 H, m), 3.21 (3H, s), 3.26-3.30 (1H, m), 3.41 (2H, t), 3.65 (3H, s), 4.15 (2H, q), 7.00 (1H, t), 7.41 (1H, d), 7.64 (1H, s), 7.86-7.99 (2H, m), 8.14 (1H, s), 8.22 (1H, s), 9.65 (1H, s), 11.29 (1H, s)
562
62
22
36
<img file="00000148.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Хлороформ-d 1.13 (3H, d), 1.44-1.62 (6H, m), 2.13-2.24 (1H, m), 2.25-2.63 (6H, m), 2.64-2.68 (2H, m), 2.71-2.83 (1H, m), 2.84-2.98 (3H, m), 3.53 (1H, s), 3.72 (3H, s), 4.32 (2H, q), 6.63 (1H, s), 6.83 (1H, s), 7.17 (1H, t), 7.34 (1H, s), 7.68 (1H, d), 7.87 (1H, s), 8.25 (2H, t), 11.18 (1H, s)
532
28
23
36
<img file="00000149.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.20-1.43 (9H, m), 2.19 (1H, t), 2.38 (7H, d), 2.66-2.90 (5H, m), 3.73 (3H, s), 4.02-4.14 (1H, m), 4.26 (2H, q), 7.12 (2H, d), 7.73 (1H, s), 7.88 (1H, s), 8.13-8.27 (2H, m)
532
12
24
36
<img file="00000150.jpg" he="29" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.14 (3H, d), 1.29-1.47 (6H, m), 2.28-2.45 (8H, m), 2.52 (2H, t), 2.86-3.04 (3H, m), 3.40 (1H, d), 3.73 (3H, d), 4.26 (2H, q), 7.15 (2H, dt), 7.73 (1H, d), 7.89 (1H, s), 8.13-8.27 (2H, m)
532
46
25
33
<img file="00000151.jpg" he="28" wi="14" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.42 (3H, d), 2.34 (3H, s), 2.48-2.89 (8H, m), 3.40 (1H, m), 3.79 (3H, s), 3.91 (3H, s), 7.10-7.22 (2H, m), 7.68 (1H, s), 8.14 (2H, dd), 8.42 (1H,br s)
508
72
26
32
<img file="00000152.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.14 (3H, d), 1.41 (3H, d), 2.15-2.18 (1H, m), 2.36 (4H, m), 2.50-2.53 (1H, m), 2.64-2.71 (1H, m), 2.88-2.94 (3H, m), 3.40 (1H, m), 3.79 (3H, s), 3.94 (3H, s), 7.12-7.17 (3H, m), 7.73 (1H, s), 8.09 (1H, s), 8.19 (1H, d), 8.29 (1H, br s)
504
56
27<sup>1</sup>
32
<img file="00000153.jpg" he="32" wi="21" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.38 (3H, d), 2.59-2.78 (10H, m), 3.33 (3H, s), 3.38 (1H, m), 3.52 (2H, m), 3.75 (3H, s), 3.90 (3H, s), 7.09-7.13 (3H, m), 7.69 (1H, s), 8.05 (1H, s), 8.15 (1H, d), 8.25 (1H, br s)
534
45
28
32
<img file="00000154.jpg" he="32" wi="14" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.08 (3H, t), 1.38 (3H, d), 2.43-2.51 (1H, q), 2.61-2.77 (8H, m), 3.37 (1H, m), 3.75 (3H, s), 3.90 (3H, s), 7.08-7.13 (3H, m), 7.68 (1H, s), 8.04 (1H, s), 8.14 (1H, d), 8.24 (1H, br s)
504
54
29
32
<img file="00000155.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.14 (3H, d), 1.19 (3H, d), 2.08-2.15 (1H, m), 2.29-2.41(4H, m), 2.60-2.83 (5H, m), 3.75 (3H, s), 3.90 (3H, s), 4.02 (1H, m), 7.08-7.14 (3H, m), 7.68 (1H, s), 8.04 (1H, s), 8.14 (1H, d), 8.24 (1H, d)
504
43
30<sup>6</sup>
32
<img file="00000156.jpg" he="29" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.12 (3H, d), 1.40 (3H, d), 2.27-2.48 (5H, m), 2.51- 2.57 (2H, m), 2.88-2.99 (3H, m), 3.40 (2H, m), 3.79 (3H, s), 3.94 (3H, s), 7.12-7.17 (3H, m), 7.73 (1H, s), 8.09 (1H, s), 8.19 (1H, d), 8.29 (1H, s) - два обмениваемых протона не наблюдались
504
42
31a<sup>7</sup>
36
<img file="00000157.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.15 (3H, d), 1.31-1.48 (6H, m), 2.16-2.24 (1H, m), 2.38 (6H, d),), 2.52-2.56 (1H, m), 2.65-2.69 (1H, m), 2.92-2.99 (3H, m), 3.33 (2H, m), 3.73 (3H, s), 4.86 (2H, q), 7.17 (2H, m),), 7.73 (1H, s), 7.89 (1H, s), 8.16 (1H, s), 8.21 (1H, d)-) - два обмениваемых протона не наблюдались
532
22
31b<sup>7</sup>
36
<img file="00000157.jpg" he="28" wi="20" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.14 (d, 3H), 1.30-1.50 (m, 6H), 2.25-2.38 (m, 4H), 2.41(s, 3H), 2.45-2.60 (m, 2H), 2.85-3.10 (m, 3H), 3.35-3.46 (m, 2H), 3.73 (s, 3H), 4.25 (q, 2H), 7.05-7.25 (m, 2H), 7.73 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.25 (d, 1H)
532
33
1
Соответствующий пиперазин и промежуточное соединение 2-бром-ацетамид объединяли в DMF согласно методике Примера 1. Карбонат калия не использовали.
2
Указанный пиперазин и промежуточный 2-бром-ацетамид подвергали взаимодействию в условиях, описанных в Примере 1. После хиральной очистки методом препаративной хиральной HPLC с использованием колонки Lux Cellulose-4 (изократическое элюирование 50%-ным EtOH в изогексане, модифицированном 0,2% IPA) получили соединение Примера 7a (выделенное в виде второго пика элюирования, время удерживания=9,45 мин) и соединение Примера 7b (выделенного в виде первого пика элюирования, время удерживания=7,54 мин). Стереохимическое соотнесение энантиомеров было сделано на основе образования основного продукта реакции и подтверждено биологической активностью против JAK1 в исследования ингибирования ферментов, как показано в Примере 66.
3
Указанный пиперазин и промежуточный 2-бром-ацетамид подвергали взаимодействию в условиях, описанных в Примере 1. Неочищенный продукт очищали методом препаративной хиральной HPLC на колонке Lux Cellulose-4, изократическое элюирование 25%-ным EtOH в изогексане (модифицированном 0,2% IPA), с получением соединения Примера 10a (первый пик элюирования, время удерживания=5,02 мин) и соединения Примера 10b (второй пик элюирования, время удерживания=6,68 мин). Стереохимическое соотнесение энантиомеров было сделано на основе образования основного продукта реакции и подтверждено биологической активностью против JAK1 в исследования ингибирования ферментов, как показано в Примере 66.
4
Указанный пиперазин и промежуточный 2-бром-ацетамид подвергали взаимодействию в условиях, описанных в Примере 1. Неочищенный продукт очищали методом препаративной хиральной HPLC (колонка ADH, изократическое элюирование 50%-ным EtOH в изогексане (модифицированном 0,2% IPA) в качестве элюента), с получением соединения Примера 11a (первый пик элюирования, время удерживания=3,61 мин) и соединения Примера 11b (второй пик элюирования, время удерживания=4,60 мин). Стереохимическое соотнесение энантиомеров было сделано на основе образования основного продукта реакции и подтверждено биологической активностью против JAK1 в исследования ингибирования ферментов, как показано в Примере 66.
5
Соответствующий пиперазин (2 экв.) и рацемический промежуточный 2-бром-ацетамид (1 экв.) объединяли в 1,4-диоксане в присутствии оксида серебра (4 экв.). Разделение методом хиральной HPLC (колонка ChiralPak IA, изократическое элюирование 50%-ным EtOH в н-гексане (модифицированном 0,1% диэтиламина) в качестве элюента) осуществляли с получением соединения Примера 14 (время удерживания=3,99 мин). Стереохимическое соотнесение энантиомеров было сделано на основе образования основного продукта реакции и подтверждено биологической активностью против JAK1 в исследования ингибирования ферментов, как показано в Примере 66.
6
Соотношение e.r., равное 94:6, было определено анализом методом хиральной HPLC (колонка ChiralPak IA-3, 3 мкм, 0,46×5 см, подвижная фаза: 50% этанола в гексанах (модифицированных 0,2% IPA) при 1,0 мл/мин), время удерживания=2,99 мин.
7
Указанный пиперазин и рацемический промежуточный 2-бром-ацетамид подвергали взаимодействию в присутствии оксида серебра (8,0 эквивалентов) в 1,4-диоксане при комнатной температуре в течение 2 часов. Неочищенный продукт очищали препаративной хиральной HPLC (колонка Chiralpak IB, изократическое элюирование с использованием 50% гексанов в EtOH (модифицированном 0,1% TEA) в качестве элюента) с получением соединения Примера 31a (аналитическая хиральная HPLC: колонка Chiralpak IA, диоксид кремния 5 мкм, 0,46×25 см, гексаны (0,1% TEA):EtOH (60:40) при 1,0 мл/мин в качестве элюента, время удерживания=8,18 мин), выделенного в виде первого пика элюирования, и соединения Примера 31b (аналитическая хиральная HPLC: колонка Chiralpak IA, диоксид кремния 5 мкм, 0,46×25 см, гексаны (0,1% TEA):EtOH (60:40) при 1,0 мл/мин в качестве элюента, время удерживания=9,55 мин), выделенного в виде второго пика элюирования. Стереохимическое соотнесение энантиомеров было сделано на основе биологической активности против JAK1 в исследования ингибирования ферментов, как показано в Примере 66.
Пример 32: (2R)-N-(3-{2-[(3-Метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
2
3
1
3-{2-[(3-Метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-амин (180 мг, 0,54 ммоль, Промежуточное соединение 23), (R)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропановой кислоты дигидрохлорид (158 мг, 0,64 ммоль, Промежуточное соединение 37) и HATU (408 мг, 1,1 ммоль) в THF (5 мл) перемешивали вместе с получением оранжевого раствора. Добавляли диизопропилэтиламин (0,38 мл, 2,2 ммоль) при 25°C. Полученную суспензию перемешивали при 25°C в течение 3 часов. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (100 мл) и промывали насыщенным водным раствором NaCO (50 мл), водой (50 мл) и рассолом (50 мл). Органический слой сушили, фильтровали и упаривали с получением неочищенного продукта. Этот неочищенный продукт очищали препаративной HPLC (колонка XSelect CSH Prep C18 OBD, 5 мкм, 19×150 мм), используя градиент 30-70% ацетонитрила в 0,03%-ном водном растворе аммиака в качестве элюентов. Фракции, содержащие целевое соединение, упаривали досуха с получением (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида (125 мг, 48%, Пример 32) в виде белого твердого вещества; H ЯМР δ (DMSO, 400 МГц) 1.26 (3H, d), 2.16 (3H, s), 2.25 -2.45 (4H, m), 2.51-2.70 (4H, m), 3.71 (3H, s), 3.80 (3H, s), 7.05 (1H, t), 7.13 (1H, d), 7.38 (1H, d), 7.70 (1H, s), 8.16-8.31 (4H, m), 9.62 (1H, s), 11.35 (1H, s)-α-протон к амиду маскируется пиком остаточной воды; m/z (ES+), [M+H]+=490.
Методику, описанную выше в Примере 32, повторяли, используя указанные промежуточные соединения, с получением соединений Примеров 33-42, описанных в Таблице 12:
Таблица 12
Пример
Исходные промежу-точные соединения
ЯМР δ (400 МГц)
m/z [M+H]+
Выход %
33
25 и 38
DMSO-d6 с D<sub>2</sub>O 1.28 (3H, d), 2.27 (3H, s), 2.73 (3H, s), 2.85-3.34 (8H, m), 3.44 (1H, q), 3.63 (3H, s), 374 (3H, s), 7.04 (1H, t), 7.19 (1H, d), 7.55 (1H, s), 7.91 (1H, s), 8.08 (2H, s), 8.26 (1H, s) - два обмениваемых протона не наблюдались
504
13
34
25 и 37
DMSO-d6 1.26 (3H, d), 2.16 (3H, s), 2.33 (3H, s), 2.38 (4H, s), 2.57-2.62 (4H, m), 3.33 (1H, q), 3.67 (3H, s), 3.79 (3H, s), 7.00 (1H, t), 7.41 (1H, d), 7.66 (1H, s), 7.96 (2H, t), 8.14 (1H, s), 8.22 (1H, s), 9.65 (1H, s), 11.28 (1H, s)
504
72
35
30 и 37
Метанол-d4 1.34 (3H, t), 1.40 (3H, d), 2.32 (3H, s), 2.37 (3H, s), 2.50-2.80 (8H, m), 3.38 (1H, q), 3.69 (3H, s), 4.34 (2H, q), 7.05-7.20 (2H, m), 7.69 (1H, s), 7.85 (1H, s), 8.23 (1H, s), 8.17 (1H, d) - три обмениваемых протона не наблюдались
518
16
36
26 и 37
DMSO-d6 1.26 (3H, d), 2.27 (3H, s), 2.24-2.52 (4H, m), 2.53-2.70 (4H, m), 3.30-3.36 (1H, m), 3.69 (3H, s), 3.78 (3H, s), 7.02 (1H, s), 7.40 (1H, d), 7.65 (1H, s), 8.32 (1H, s), 8.48 (1H, s), 9.69 (1H, s), 11.42 (1H, s)
524
48
37
27 и 37
DMSO-d6 1.26 (3H, d), 2.17 (3H, s), 2.23-2.45 (4H, m), 2.46-2.71 (4H, m), 3.30-3.32 (1H, m), 3.68 (3H, s), 3.78 (3H, s), 7.01 (1H, s), 7.37 (1H, d), 7.64 (1H, s), 8.42 (1H, s), 8.45-8.56 (2H, m), 9.70 (1H, s), 11.36 (1H, s)
568
49
38
25 и 39
Хлороформ-d 1.19 (3H, d), 1.35 (3H, d), 2.10 (1H, m), 2.26 (1H, m), 2.38 (6H, m), 2.69 (2H, t), 2.89 (3H, m), 3.72 (3H, s), 3.91 (1H, q), 4.00 (3H, s), 6.57 (1H, s), 6.80 (1H, d), 7.15 (1H, t), 7.68 (1H, d), 7.84 (1H, s), 8.06-8.36 (2H, m), 9.88 (1H, s), 11.15 (1H, s)
518
19
39
29 и 37
Метанол-d4 1.34 (3H, t), 1.43 (3H, d), 2.35 (3H, s), 2.50-2.85 (8H, m), 3.41 (1H, q), 3.79 (3H, s), 4.24 (2H, q), 7.10-7.22 (2H, m), 7.68 (1H, s), 8.13 (1H, d), 8.16 (1H, d), 8.43 (1H, s) - три обмениваемых протона не наблюдались
522
25
40
31 и 37
Метанол-d4 1.33 (3H, t), 1.42 (3H, d), 2.35 (3H, s), 2.63-2.71 (4H, m), 2.77-2.81 (4H, m), 3.42 (1H, q), 3.76 (3H, s), 4.26 (2H, q), 7.10-7.20 (2H, m), 7.70 (1H, s), 8.28 (2H, m), 8.48 (1H, m) - три обмениваемых протона не наблюдались
538
22
41
28 и 37
Хлороформ-d 1.41 (3H, d), 2.29 (3H, s), 2.36 (3H, s), 2.42 (3H, s), 2.67-2.80 (8H, m), 3.38 (1H, q), 3.80 (3H, s), 6.42 (1H, s), 6.82 (1H, d), 7.12 (1H, t), 7.69 (1H, d), 7.88 (1H, s), 8.21 (2H, m), 9.74 (1H, s), 11.18 (1H, s)
488
36
42
28 и 38
DMSO-d6 1.27 (3H, d), 2.12 (3H, s), 2.17 (3H, s), 2.35 (3H, s), 2.40 (4H, s), 2.57-2.63 (4H, m), 3.72 (3H, s), 7.03 (1H, t), 7.43 (1H, d), 7.81 (1H, s), 7.97 (1H, d), 8.19 (2H, m), 8.37 (1H, s), 9.68 (1H, s), 11.33 (1H, s)
488
4
Примеры 43 и 44: (2S)-N-(3-{2-[(3-Метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид и (2R)-N-(3-{2-[(3-Метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид
1
1
Фторид цезия (143 мг, 0,94 ммоль) добавляли в перемешиваемый раствор N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1-{2-[2-(триметилсилил)этокси]этил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамида (203 мг, 0,31 ммоль, Промежуточное соединение 46) в безводном DMSO (3 мл). Смесь нагревали при 80°C в атмосфере азота в течение 4 часов, затем оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом, затем водой, и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом, затем объединенную органическую фазу промывали рассолом, сушили над сульфатом магния и концентрировали. Полученный остаток подвергали хроматографии на силикагеле, используя смесь 5-20% метанола-DCM в качестве элюента, с получением бледного желто-коричневого твердого вещества (101 мг). Хиральное разделение осуществляли методом хиральной HPLC: колонка Chiralpak ID, 4,6×50 мм, 3, 50% гексана 50% 1:1 метанол-этанол (модифицированной 0,1% диэтиламина) с получением (2S)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамида (17 мг, 11%, Пример 43); хиральная HPLC: e.r.>99:1, время удерживания=2,34 мин; H ЯМР δ (Дихлорметан-d2, 400 МГц) 1.09 (3H, t), 1.84-1.93 (2H, m), 2.29 (3H, s), 2.36 (3H, s), 2.51 (4H, br s), 2.67 (2H, br s), 2.75 (2H, m), 3.03 (1H, t), 3.67 (3H, s), 3.93 (3H, s), 6.49 (1H, s), 6.82 (1H, d), 7.12 (1H, t), 7.72 (1H, d), 7.79 (1H, s), 8.20 (1H, s), 8.24 (1H, d), 9.62 (1H, s), 11.06 (1H, br s); m/z (ES+) [M+H]+=518; с последующим получением (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]-5-метилпиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамида (18 мг, 11%, Пример 44); хиральная HPLC: e.r. ~99:5, время удерживания=2,78 мин; H ЯМР δ (Дихлорметан-d2, 400 МГц) 1.09 (3H, t), 1.84-1.93 (2H, m), 2.29 (3H, s), 2.36 (3H, s), 2.51 (4H, br s), 2.67 (2H, br s), 2.75 (2H, m), 3.03 (1H, t), 3.67 (3H, s), 3.93 (3H, s), 6.49 (1H, s), 6.82 (1H, d), 7.12 (1H, t), 7.72 (1H, d), 7.79 (1H, s), 8.20 (1H, s), 8.24 (1H, d), 9.62 (1H, s), 11.06 (1H, br s); m/z (ES+), [M+H]+=518. Стереохимическое соотнесение энантиомеров было сделано на основе биологической активности против JAK1 в исследования ингибирования ферментов, как показано в Примере 66.
Методику, описанную выше в Примерах 43 и 44, повторяли, используя указанные исходные промежуточные соединения, с получением соединений Примеров 45 и 46, описанных в Таблице 13:
Таблица 13
Пример
Исходное промежу-точное соединение
ЯМР δ (400 МГц)
m/z [M+H]+
Выход %
45<sup>1</sup>
47
Метанол-d4 2.31 (3H, s), 2.37 (3H, s), 2.58 (4H, br s), 2.81 (2H, br s), 2.86-2.99 (2H, m), 3.41 (3H, s), 3.49 (1H, t), 3.70 (3H, s), 3.79-3.87 (1H, m), 3.88-3.96 (4H, m), 7.06-7.12 (1H, m), 7.13-7.18 (1H, m), 7.69 (1H, s), 7.86 (1H, s), 8.12 (1H, s), 8.19 (1H, d) - три обмениваемых протона не наблюдались
534
26
46<sup>1</sup>
47
Метанол-d4 2.31 (3H, s), 2.37 (3H, s), 2.58 (4H, br s), 2.81 (2H, br s), 2.86-2.99 (2H, m), 3.41 (3H, s), 3.49 (1H, t), 3.70 (3H, s), 3.79-3.87 (1H, m), 3.88-3.96 (4H, m), 7.06-7.12 (1H, m), 7.13-7.18 (1H, m), 7.69 (1H, s), 7.86 (1H, s), 8.12 (1H, s), 8.19 (1H, d) - три обмениваемых протона не наблюдались
534
28
1
Хиральное разделение осуществляли препаративной хиральной SFC (сверхкритическая флюидная хроматография) (Chiralcel OD, 5 мкм, 4,6×100 мм) с использованием 35% MeOH (модифицированного 0,1% диметилэтиламина) в качестве элюента при 5 мл/мин при 40°C с получением соединения Примера 46 (первый пик элюирования, время удерживания=2,54 мин) и соединения Примера 45 (второй пик элюирования, время удерживания=3,10 мин). Стереохимическое соотнесение энантиомеров было сделано на основе биологической активности против JAK1 в исследования ингибирования ферментов, как показано в Примере 66.
Примеры 47 и 48: (2R)-N-(3-{2-[(3-Метокси-1-метил-1H-пиразол-4-
ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид и (2S)-N-(3-{2-[(3-Метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид
1
1
N-[3-(2-Хлорпиримидин-4-ил)-1H-индол-7-ил]-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамид (0,22 г, 0,53 ммоль, Промежуточное соединение 51), 3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-амина дигидрохлорид (0,16 г, 0,8 ммоль) и 4-метилбензолсульфоновой кислоты моногидрат (0,2 г, 1,1 ммоль) растворяли в изопропаноле (6 мл) и герметично закрывали в микроволновой пробирке. Реакционную смесь нагревали при 120°C в течение 2 часов в микроволновом реакторе и охлаждали до комнатной температуры. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC (колонка XBridge Prep C18 OBD, диоксид кремния 5 мкм, 19×150 мм), используя имеющие снижающуюся полярность смеси воды (содержащей 0,2% муравьиной кислоты) и ацетонитрила в качестве элюентов. Фракции, содержащие целевое соединение, упаривали досуха с получением рацемического N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамида (90 мг, 34%) в виде белого твердого вещества; m/z (ES+), [M+H]+=504. Продукт очищали препаративной хиральной HPLC на колонке IC-3, изократическое элюирование 30% этанолом в изогексане (модифицированном 0,2% изопропанола) в качестве элюента. Фракции, содержащие целевое соединение, упаривали досуха с получением сначала (2S)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамида (32 мг, 35%, Пример 48) в виде белого твердого вещества; H ЯМР δ (Метанол-d4, 300 МГц) 1.08 (3H, t), 1.89 (2H, dt), 2.33 (3H, s), 2.59 (4H, br s), 2.83 (4H, br s), 3.21 (1H, dd), 3.80 (3H, s), 3.94 (3H, s), 7.10-7.27 (3H, m), 7.74 (1H, s), 8.11 (1H, s), 8.21 (1H, d), 8.30 (1H, s)-три обмениваемых протона не наблюдались; m/z (ES+), [M+H]+=504; хиральная HPLC: 100% ee, время удерживания=4,48 мин; затем (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)бутанамида (32 мг, 35%, Пример 47) в виде белого твердого вещества; H ЯМР δ (Метанол-d4, 300 МГц) 1.08 (3H, t), 1.89 (2H, dt), 2.33 (3H, s), 2.59 (4H, br s), 2.83 (4H, br s), 3.21 (1H, dd), 3.80 (3H, s), 3.94 (3H, s), 7.10-7.27 (3H, m), 7.74 (1H, s), 8.11 (1H, s), 8.21 (1H, d), 8.30 (1H, s)-три обмениваемых протона не наблюдались; m/z (ES+), [M+H]+=504; хиральная HPLC: 100% ee, время удерживания=5,69 мин. Стереохимическое соотнесение энантиомеров было сделано на основе биологической активности против JAK1 в исследования ингибирования ферментов, как показано в Примере 66.
Методику, описанную выше в Примере 47 и 48, повторяли, используя указанные исходные промежуточные соединения и аминопиразол, с получением соединений Примеров 49-59, описанных в Таблице 14:
Таблица 14
Пример
Исходное промежу-точное соединение
Аминопиразол
ЯМР δ (400 МГц)
m/z [M+H]+
Выход %
49<sup>1</sup>
52
<img file="00000161.jpg" he="18" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.07 (3H, t), 1.89 (2H, m), 2.21 (3H, s), 2.33 (3H, d), 2.59 (4H, s), 2.83 (4H, d), 3.20 (1H, dd), 3.88 (3H, s), 7.12 (1H, t), 7.21 (1H, d), 7.74 (1H, s), 8.16 (2H, d), 8.37 (1H, s) - три обмениваемых протона не наблюдались
506
38
50<sup>1</sup>
52
<img file="00000162.jpg" he="18" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.07 (3H, t), 1.89 (2H, m), 2.21 (3H, s), 2.33 (3H, d), 2.59 (4H, s), 2.83 (4H, d), 3.20 (1H, dd), 3.88 (3H, s), 7.12 (1H, t), 7.21 (1H, d), 7.74 (1H, s), 8.16 (2H, d), 8.37 (1H, s) - три обмениваемых протона не наблюдались
506
38
51<sup>2,3</sup>
52
<img file="00000163.jpg" he="20" wi="31" img-content="undefined" img-format="jpg" />
DMSO-d6 0.92 (3H, t), 1.65-1.82 (2H, m), 2.14 (3H, s), 2.34 (4H, m), 2.65 (4H, m), 3.16 (1H, t), 3.71 (3H, s), 3.78 (3H, s), 7.05 (1H, t), 7.54 (1H, d), 7.66 (1H, s), 8.16 (1H, t), 8.23-8.35 (3H, m), 9.75 (1H, s), 11.36 (1H, s)
522
48
52<sup>2,3</sup>
52
<img file="00000164.jpg" he="20" wi="31" img-content="undefined" img-format="jpg" />
DMSO-d6 0.92 (3H, t), 1.65-1.82 (2H, m), 2.14 (3H, s), 2.34 (4H, m), 2.65 (4H, m), 3.16 (1H, t), 3.71 (3H, s), 3.78 (3H, s), 7.05 (1H, t), 7.54 (1H, d), 7.66 (1H, s), 8.16 (1H, t), 8.23-8.35 (3H, m), 9.75 (1H, s), 11.36 (1H, s)
522
47
53<sup>4</sup>
53
<img file="00000165.jpg" he="18" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 2.21 (3H, s), 2.34 (3H, s), 2.61 (4H, m), 2.83 (2H, s), 2.93 (2H, s), 3.43 (3H, s), 3.51 (1H, t), 3.80-3.92 (4H, m), 3.95 (1H, m), 7.08-7.21 (2H, m), 7.74 (1H, s), 8.15 (2H, t), 8.38 (1H, s) - три обмениваемых протона не наблюдались
522
26
54<sup>4</sup>
53
<img file="00000166.jpg" he="18" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 2.21 (3H, s), 2.34 (3H, s), 2.61 (4H, m), 2.83 (2H, s), 2.93 (2H, s), 3.43 (3H, s), 3.51 (1H, t), 3.80-3.92 (4H, m), 3.95 (1H, m), 7.08-7.21 (2H, m), 7.74 (1H, s), 8.15 (2H, t), 8.38 (1H, s) - три обмениваемых протона не наблюдались
522
26
55<sup>3,5</sup>
54
<img file="00000167.jpg" he="18" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.31 (3H, t), 1.42 (3H, d), 2.26 (3H, s), 2.35 (3H, s), 2.52 -2.70 (6H, m), 2.73-2.88 (4H, m), 3.40-3.42 (1H, m), 3.85 (3H, s), 7.06-7.18 (2H, m), 7.77 (1H, s), 7.91 (1H, s), 8.14-8.19 (2H, m) - три обмениваемых протона не наблюдались
502
19
56<sup>5</sup>
55
<img file="00000168.jpg" he="18" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Метанол-d4 1.43 (3H, d), 2.21 (3H, s), 2.34 (3H, s), 2.51-2.91 (8H, m), 3.41 (1H, q), 3.88 (3H, s), 7.07-7.21 (2H, m), 7.74 (1H, s), 8.15 (2H, dd), 8.37 (1H, s) - три обмениваемых протона не наблюдались
492
17
57<sup>5</sup>
59
<img file="00000169.jpg" he="18" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
DMSO-d6 1.27 (3H, d), 2.14 (3H, s), 2.18 (3H, s), 2.26-2.75 (8H, m), 3.25-3.41 (1H, m), 3.77 (3H, s), 7.07 (1H, t), 7.14 (1H, d), 7.40 (1H, d), 7.83 (1H, s), 8.08-8.36 (3H, m), 8.47 (1H, s), 9.63 (1H, s), 11.36 (1H, br s)
474
60
58<sup>5</sup>
54
<img file="00000170.jpg" he="20" wi="36" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Дихлорметан-d2 1.17-1.44 (6H, m), 2.36 (3H, s), 2.39 (3H, s), 2.57-2.90 (8H, m), 3.37 (1H, q), 3.80-4.08 (5H, m), 6.65 (1H, s), 6.86 (1H, d), 7.18 (1H, t), 7.75 (1H, d), 7.87 (1H, s), 8.24 (1H, s), 8.32 (1H, d), 9.62 (1H, s), 11.23 (1H, s)
518
50
59<sup>5</sup>
54
<img file="00000171.jpg" he="20" wi="41" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Хлороформ-d 1.36-1.50 (9H, m), 2.36 (3H, s), 2.39 (3H, s), 2.55-2.90 (8H, m), 3.36 (1H, m), 3.95 (2H, q), 4.32 (2H, q), 6.73 (1H, s), 6.84 (1H, d), 7.13 (1H, t), 7.67 (1H, d), 7.90 (1H, s), 8.13-8.40 (2H, m), 9.78 (1H, s), 11.17 (1H, br s)
532
82
1
Хиральное разделение осуществляли хиральной HPLC (колонка Chiralcel OD-H, изократическое элюирование 10% IPA в гексанах) с получением соединения Примера 50 (аналитическая хиральная HPLC: колонка Chiralpak OD-H, диоксид кремния 5 мкм, 0,46×10 см, смесь гексаны (модифицированные 0,2% IPA):EtOH (90:10) в качестве элюента при 1,0 мл/мин, время удерживания=9,02 мин), выделенного в виде первого пика элюирования, и соединения Примера 49 (аналитическая хиральная HPLC: колонка Chiralpak OD-H, диоксид кремния 5 мкм, 0,46×10 см, смесь гексаны (модифицированные 0,2% IPA):EtOH (90:10) в качестве элюента при 1,0 мл/мин, время удерживания=11,35 мин), выделенного в виде второго пика элюирования. Стереохимическое соотнесение энантиомеров было сделано на основе биологической активности против JAK1 в исследования ингибирования ферментов, как показано в Примере 66.
2
Хиральное разделение осуществляли препаративной хиральной HPLC (колонка Chiralcel OD-H, 20×250 мм, изократическое элюирование 10%-ным этанолом в гексанах (модифицированным 0,2% диэтиламина) при 20 мл/мин в качестве элюента) с получением соединения Примера 52 (первый пик элюирования, время удерживания=15,87 мин) и соединения Примера 51 (второй пик элюирования, время удерживания=21,29 мин). Стереохимическое соотнесение энантиомеров было сделано на основе биологической активности против JAK1 в исследования ингибирования ферментов, как показано в Примере 66.
3
1H ЯМР анализ осуществляли с использованием спектрометра Bruker Avance 300 (300 МГц).
4
Хиральное разделение осуществляли препаративной хиральной HPLC (колонка Chiralcel IC, изократическое элюирование с использованием 40% этанола в гексанах в качестве элюента) с получением соединения Примера 54 (аналитическая хиральная HPLC: колонка Lux Cellulose-4 диоксид кремния 3 мкм, 0,46×5 см, смесь гексаны (модифицированные 0,1% TEA):EtOH (60:40) в качестве элюента при 1,0 мл/мин, время удерживания=2,69 мин), выделенного в виде первого пика элюирования, и соединения Примера 53 (аналитическая хиральная HPLC: колонка Lux Cellulose-4, диоксид кремния 3 мкм, 0,46×5 см, смесь гексаны (модифицированные 0,1% TEA):EtOH (60:40) в качестве элюента при 1,0 мл/мин, время удерживания=3,62 мин), выделенного в виде второго пика элюирования. Стереохимическое соотнесение энантиомеров было сделано на основе биологической активности против JAK1 в исследования ингибирования ферментов, как показано в Примере 66.
5
Использовали энантиочистое исходное вещество - конечный продукт не подвергали очистки методом хиральной HPLC.
Примеры 60 и 61: (2R)-3-Метокси-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид и (2S)-3-метокси-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид
1
1
t
t
Диизопропилэтиламин (1,25 мл, 7,2 ммоль) добавляли к 3-(2-((3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино)пиримидин-4-ил)-1H-индол-7-амину (0,4 г, 1,2 ммоль, Промежуточное соединение 23), 3-метокси-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропаноату лития (0,72 г, 3,6 ммоль, Промежуточное соединение 45) и HATU (1,4 г, 3,6 ммоль) в DMF (18 мл) при 25°C в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивали при 25°C в течение 1 часа. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC (колонка XBridge Prep C18 OBD, диоксид кремния 5 мкм, диаметр 19 мм, длина 150 мм), используя имеющие снижающуюся полярность смеси воды (содержащей 0,2% аммиака) и ацетонитрила в качестве элюентов. Фракции, содержащие целевое соединение, упаривали досуха с получением рацемического 3-метокси-N-(3-(2-((3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино)пиримидин-4-ил)-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида (0,15 г, 24%) в виде белого твердого вещества; m/z (ES+), [M+H]+=520. Этот неочищенный продукт очищали препаративной хиральной HPLC на колонке Lux Cellulose-4, элюируя изократически 50% этанолом в изогексане (модифицированном 0,1% триэтиламина) в качестве элюента. Фракции, содержащие целевое соединение, упаривали досуха с получением в первую очередь (2S)-3-метокси-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида (53 мг, 35%, Пример 61) в виде белого твердого вещества; H ЯМР δ (Метанол-d4, 300 МГц) 2.33 (3H, s), 2.60 (4H, s), 2.78-2.99 (4H, m), 3.43 (3H, s), 3.51 (1H, t), 3.76-4.00 (8H, m), 7.08-7.22 (3H, m), 7.72 (1H, s), 8.09 (1H, s), 8.19 (1H, d), 8.30 (1H, s)-три обмениваемых протона не наблюдались; m/z (ES+), [M+H]+=520; хиральная HPLC: 100% ee, R=4,072 мин; с последующим получением (2R)-3-метокси-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида (57 мг, 36%, Пример 60) в виде белого твердого вещества; H ЯМР δ (Метанол-d4, 300 МГц) 2.30 (3H, s), 2.57 (4H, s), 2.87-2.80 (4H, m), 3.39 (3H, s), 3.47 (1H, t), 3.75-3.98 (8H, m), 7.04-7.18 (3H, m), 7.68 (1H, s), 8.05 (1H, s), 8.15 (1H, d), 8.26 (1H, s)-три обмениваемых протона не наблюдались; m/z (ES+), [M+H]+=520; хиральная HPLC: 99,2% ee, R=5,376 мин. Стереохимическое соотнесение энантиомеров было сделано на основе биологической активности против JAK1 в исследования ингибирования ферментов, как показано в Примере 66.
Методику, описанную выше в Примерах 60 и 61, повторяли, используя указанные исходные промежуточные соединения, с получением соединений, описанных в Таблице 15:
Таблица 15
Пример
Исходные промежу-точные соединения
ЯМР δ (300 МГц)
m/z [M+H]+
Выход %
62<sup>1</sup>
30 и 43
DMSO-d6 0.86 (3H, t), 1.20 (3H, t), 1.38-1.88 (2H, m), 2.07 (3H, s), 2.26 (7H, m), 2.45-2.74 (4H, m), 3.12 (1H, t), 3.59 (3H, s), 4.09 (2H, q), 6.93 (1H, t), 7.47 (1H, d), 7.58 (1H, s), 7.77 (1H, s), 7.92 (1H, s), 8.08 (1H, s), 8.18 (1H, br s), 9.58 (1H, s), 11.13 (1H, s)
532
24
63<sup>1</sup>
30 и 43
DMSO-d6 0.86 (3H, t), 1.20 (3H, t), 1.45-1.76 (2H, m), 2.07 (3H, s), 2.26 (7H, s) 2.54-2.73 (4H, m), 3.10 (1H, t), 3.59 (3H, s), 4.09 (2H, q), 6.94 (1H, s), 7.45 (1H, d), 7.58 (1H, s), 7.78 (1H, s), 7.91 (1H, s), 8.08 (1H, s), 8.18 (1H, br s) 9.55 (1H, s), 11.10 (1H, s)
532
16
64<sup>2</sup>
30 и 45
DMSO-d6 1.19 (3H, t), 2.10 (3H, s), 2.33-2.38 (7H, m), 2.56-2.72 (4H, m), 3.34 (3H, s), 3.64 (1H, t), 3.69 - 3.73 (5H, m), 4.09 (2H, q), 6.94 (1H, t), 7.39 (1H, d), 7.58 (1H, s), 7.80 (1H, s), 7.91(1H, d), 8.08 (1H, s), 8.18 (1H, br s), 9.69 (1H, s), 11.08 (1H, br s)
548
32
65<sup>2</sup>
30 и 45
DMSO-d6 1.27 (3H, t), 2.15 (3H, s), 2.34-2.38 (7H, m), 2.60-2.76 (4H, m), 3.33 (3H, s), 3.69 (1H, t), 3.68-3.73 (5H, m), 4.16 (2H, q), 6.96 (1H, t), 7.45 (1H, d), 7.60 (1H, s), 7.83 (1H, s), 7.90 (1H, s), 8.10 (1H, s), 8.18 (1H, br s), 9.71 (1H, br s), 11.10 (1H, br s)
548
30
1
Хиральное разделение осуществляли препаративной хиральной SFC (Chiralcel OD, 5 мкм, 21×250 мм), элюируя изократически 20% MeOH (модифицированным 0,1% диметилэтиламина) при 75 мл/мин при 40°C, с получением соединения Примера 63 (первый пик элюирования, время удерживания=7,89 мин) и соединения Примера 62 (второй пик элюирования, время удерживания=8,81 мин). Стереохимическое соотнесение энантиомеров было сделано на основе биологической активности против JAK1 в исследования ингибирования ферментов, как показано в Примере 66.
2
Хиральное разделение осуществляли препаративной хиральной SFC (Chiralcel OD, 5 мкм, 21×250 мм), элюируя изократически 25% MeOH (модифицированным 0,1% диметилэтиламина) при 75 мл/мин при 40°C, с получением соединения Примера 65 (первый пик элюирования, время удерживания=4,84 мин) и соединения Примера 64 (второй пик элюирования, время удерживания=5,95 мин). Стереохимическое соотнесение энантиомеров было сделано на основе биологической активности против JAK1 в исследования ингибирования ферментов, как показано в Примере 66.
Пример 66: Исследования ингибирования ферментов
2
2
2
2
Исследования ингибирования ферментов осуществляли с использованием рекомбинантной JAK1 (аминокислоты 866-1154, Life Technologies, #PV4774, Carlsbad, CA), JAK2 (аминокислоты 831-1132) или JAK3 (аминокислоты 781-1124) в условиях буфера 50 мМ HEPES pH 7,3, 1 мМ DTT (дитиотрейтол), 0,01% Tween(20, 50 мкг/мл BSA и 10 мМ MgCl. Фермент JAK экспрессировали в виде N-концевого GST (глутатион-S-трансфераза)-слияния в клетках насекомых и очищали методами глютатион-аффинной хроматографии и эксклюзионной хроматографии. Ферменты анализировали как в отношении их соответствующей ATP Km (JAK1: 55 мкМ, JAK2: 15 мкМ, JAK3: 3 мкМ), так и аппроксимированного верхнего предела физиологической концентрации ATP 5 мМ в присутствии ингибитора, дозированного в конечных тестируемых концентрациях 30, 3, 0,3, 0,03, 0,003 и 0 мкМ. Для JAK1 6 нМ фермента (для анализа Km ATP) или 4 нМ фермента (для анализа верхнего предела ATP (аденозинтрифосфат)) инкубировали с 1,5 мкМ пептидного субстрата (FITC-C6-KKHTDDGYMPMSPGVA-NH (SEQ ID NO:1), Intonation, Boston, MA). Для JAK2 0,8 нМ фермента (для анализа Km ATP) или 0,3 нМ фермента (для анализа верхнего предела ATP) инкубировали с 1,5 мкМ пептидного субстрата (5FAM-GEEPLYWSFPAKKK-NH (SEQ ID NO:2), Intonation, Boston, MA). Для JAK3 0,2 нМ фермента (для анализа Km ATP) или 0,1 нМ фермента (для анализа верхнего предела ATP) инкубировали с 1,5 мкМ пептидного субстрата (5FAM-GEEPLYWSFPAKKK-NH (SEQ ID NO:2), Intonation, Boston, MA). Фосфорилированные и нефосфорилированные пептиды разделяли и количественно определяли с помощью системы Caliper LC3000 (Caliper Life Sciences, MA) для вычисления процента ингибирования. Результаты этого анализа представлены в Таблице 16, и они свидетельствуют о том, что соединения формулы (I), (Ia), (Ib) и Таблицы 1 проявляют преимущественное ингибирование JAK1 по сравнению с JAK2 (во многих случаях демонстрируя более чем 100-кратную избирательность ингибирования JAK1 относительно JAK2).
Пример 67: Клеточный анализ pSTAT3
2
Клети NCI-H1975 высевали на обработанные 96- или 384-луночные планшеты для культуры ткани Costar #3701 в количестве 5000 клеток на лунку в 30 мкл среды (RPMI, 10% FBS (фетальная бычья сыворотка), дополнена L-глутамином) и инкубировали в течение ночи при 37°C в 5% CO. Сигнал Phospho STAT3 количественно определяли с использованием набора пары антител Cell Signaling Technology #7146B Pathscan 97hosphor STAT3, следуя инструкциям производителя.
2
50
К клеткам добавляли соединение и инкубировали их при 37°C в 5% CO в течение 2 часов, после чего среду и соединение аспирировали, и клетки лизировали 35 мкл холодного 1x Cell Signaling Lysis буфера и охлаждали при 4°C в течение 1-2 часов. Лизат инкубировали на планшетах для регистрации STAT3 при 4°C в течение ночи, промывали 3x физиологическим раствором, забуференным буфером Tris с 0,05% Tween(20 (TBST), затем 98 phosphor STAT3 детекторное антитело наносили на 2 часа. После промывки TBST (3x), HRP-вторичное антитело наносили на 2 часа. После дополнительной промывки сигнал детектировали с использованием ™B и стоп-раствора, и показатели регистрировали при 450 нм, используя Tecan Infinite M100. Значения IC (концентрация, которая вызывает 50%-ное ингибирование) рассчитывали путем построения кривой процента ингибирования фосфор-сигнала относительно необработанного образца (максимальный сигнал) и обработанного образца, являющегося положительным контролем (максимальное ингибирование/минимальный сигнал), используя Xlfit4, версия 4.2.2 для Microsoft Excel. Результаты этого анализа, представленные в Таблице 16, демонстрируют хорошую корреляцию между клеточным ингибированием фосфорилирования STAT3 в клетках NCI-H1975 и ингибированием фермента JAK1.
Таблица 16
Пример
JAK1 (IC<sub>50</sub>, мкМ)
JAK2(IC<sub>50</sub>, мкМ)
JAK3(IC<sub>50</sub>, мкМ)
NCI-H1975 pSTAT3 (IC<sub>50</sub>, мкМ)
1
0,847
>30
>30
0,643
2
0,085
12,8
>30
0,227
3
0,191
26,8
>30
0,302
4
0,043
6,57
>30
0,0986
5
0,024
10,4
>30
0,0872
6
0,030
9,62
>30
0,111
7a
0,359
>30
>30
0,509
7b
3,60
>30
>30
>3
8
0,110
23,6
>30
0,191
9
0,426
>30
>30
0,594
10a
0,846
>30
>30
0,531
10b
7,60
>30
>30
>3
11a
0,040
>30
>30
0,209
11b
1,85
>30
>30
2,28
12
0,068
22,6
>30
0,246
13
0,166
>30
>30
0,222
14
0,009
6,39
>30
0,0703
15
0,007
2,53
>30
0,131
16
0,019
6,24
>30
0,105
17
0,107
18,1
>30
0,229
18
0,057
17,3
>30
0,175
19
0,296
>30
>30
0,470
20
0,051
17,2
>30
0,184
21
0,184
>30
>30
0,703
22
0,490
>30
>30
0,550
23
0,029
25,7
>30
0,410
24
0,113
>30
>30
0,370
25
0,019
6,62
>30
0,115
26
0,069
16,7
>30
0,256
27
0,575
>30
>30
0,609
28
0,106
11,8
>30
0,100
29
0,097
20,4
>30
0,227
30
0,304
>30
>30
0,359
31a
0,015
19,8
>30
0,153
31b
0,454
>30
>30
0,330
32
0,073
>14,7
>30
0,161
33
0,272
>30
>30
0,308
34
0,010
5,37
>30
0,128
35
0,020
17,0
>30
0,153
36
0,007
1,76
19,1
0,0579
37
0,008
1,58
15,4
0,0942
38
0,013
6,48
>30
0,108
39
0,055
25,5
>30
0,191
40
0,024
8,93
>30
0,160
41
<0,005
2,58
>30
0,0923
42
0,106
21,1
>30
0,172
43
0,079
21,1
>30
0,176
44
<0,004
1,95
>30
0,0577
45
<0,003
0,790
>30
0,0603
46
0,986
>30
>30
1,28
47
0,013
6,95
>30
0,136
48
1,21
>30
>30
0,863
49
<0,004
1,77
>30
0,0751
50
0,265
24,1
>30
0,999
51
<0,003
3,19
>30
0,111
52
0,296
>30
>30
0,548
53
<0,003
0,322
>30
0,0566
54
1,67
>30
>30
>3
55
0,027
4,22
>30
0,116
56
0,028
5,15
>30
0,126
57
0,069
9,26
>30
0,155
58
0,017
8,85
>30
0,106
59
0,069
>30
>30
0,245
60
0,004
1,53
>30
0,0973
61
2,90
>30
>30
1,27
62
<0,006
5,01
>30
0,104
63
0,192
>30
>30
0,433
64
<0,005
2,04
>30
0,112
65
2,53
>30
>30
1,03
Пример 68: Твердые формы (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида
Способы
Анализ методом дифракции рентгеновских лучей на порошке (XRPD)
Анализ методом XRPD осуществляли, используя дифрактометр Bruker D4 (или D8), который коммерчески доступен от Bruker AXS Inc™ (Madison, Wisconsin). Спектры XRPD получали путем размещения образца (приблизительно 20 мг) вещества для анализа на пластинке монокристалла кремния (например, кремниевый держатель образца для дифракции рентгеновских лучей с нулевым фоном Bruker) и распределения образца в тонкий слой с помощью предметного стекла. Образец вращали со скоростью 30 оборотов в минуту (для улучшения статистики при подсчете) и облучали рентгеновскими лучами, испускаемыми медной длиннофокусной трубкой, работающей при 40 кВ и 40 мА с длиной волны 1,5406 Ангстрем (т.е. примерно 1,54 Ангстрем). Образец подвергали воздействию в течение 1 секунды с шагом 0,02 градуса 2-тета (непрерывный режим сканирования) в диапазоне от 5 градусов (или 2 градусов) до 40 градусов 2-тета в режиме тета-тета. Время прогона составляло ~17 минут для D4 и ~15 минут для D8.
Значения 2θ в XRPD-анализе могут варьировать в зависимости от допустимого разумного диапазона, например в диапазоне ±0,2°, и значения интенсивности в XRPD-анализе могут варьировать при измерении по существу для одной и той же кристаллической формы по ряду причин, в том числе, например, по причине предпочтительной ориентации. Принципы XRPD описаны в публикациях, таких как, например, Giacovazzo, C. et al. (1995), Fundamentals of Crystallography, Oxford University Press; Jenkins, R. and Snyder, R. L. (1996), Introduction to X-Ray Powder Diffractometry, John Wiley & Sons, New York; и Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-ray Diffraction Procedures, John Wiley and Sons, New York.
Анализ методом DSC
Анализ методом DSC осуществляли на образцах, приготовленных согласно стандартным методам, с использованием калориметра Q SERIES™ Q1000 DSC, доступного от TA INSTRUMENTS (New Castle, Delaware). Образец (приблизительно 2 мг) отвешивали в алюминиевую кювету для образца и переносили в DSC. Прибор продували азотом при 50 мл/мин, и данные собирали при температуре от 22°C до 300°C, используя динамическое нагревание со скоростью 10°C в минуту. Термические данные анализировали с использованием стандартного программного обеспечения, например Universal v.4.5A от TA INSTRUMENTS.
Термогравиметрический анализ (TGA)
TGA осуществляли на образцах, приготовленных согласно стандартным методам, с использованием термогравиметрического анализатора Q SERIES™ Q5000, доступного от TA Instruments INSTRUMENTS (New Castle, Delaware). Образец (приблизительно 5 мг) помещали в алюминиевую кювету для образца и переносили в печь для TGA. Прибор продували азотом при 50 мл/мин, и данные собирали при температуре от 25°C до 300°C, используя динамическое нагревание со скоростью 10°C/минута. Термические данные анализировали с использованием стандартного программного обеспечения, например Universal v.4.5A от TA INSTRUMENTS.
Пример 68A: (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме A
Способ 1: 50 мг не совсем белого аморфного (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида растворяли в 0,4 мл TBME в виале вместимостью 4 мл. Твердое вещество выпадало в осадок из раствора через 30 минут.Суспензию перемешивали в условиях окружающей среды в течение ночи. Полученное белое твердое вещество было идентифицировано анализом XRPD как Форма A.
Способ 2: 500 мг аморфного (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида и приблизительно 50 мг затравочных кристаллов, полученных Способом 1, смешивали в виале вместимостью 20 мл. В эту смесь добавляли 5 мл TBME до образования суспензии. Суспензию перемешивали в условиях окружающей среды в течение ночи, и образовалась гомогенная суспензия. Суспензию фильтровали, и полученное твердое вещество промывали TBME и сушили на воздухе. Было получено 498 мг белого кристаллического твердого вещества, и оно было идентифицированное анализом XRPD как Форма A.
Форму A (Способ 2) анализировали методом XRPD, и результаты приведены в таблице ниже (Таблица 17) и представлены на Фиг.1.
Таблица 17
Угол (2и±0,2°)
Интенсивность (%)
21,6
100,0
6,4
74,9
16,4
56,5
8,7
54,2
20,4
45,8
7,9
42,8
22,2
36,2
18,8
34,6
16,8
29,6
9,3
29,2
20,1
26,3
16,1
24,5
19,8
23,2
26,5
22,1
13,8
20,9
19,2
20,8
13,2
19,5
12,0
17,2
23,8
16,9
21,1
15,4
25,4
14,3
28,5
14,3
12,9
13,7
8,3
12,7
10,9
11,7
25,9
11,7
24,4
11,5
22,7
11,4
32,0
10,9
15,7
10,7
14,8
10,1
25,0
9,2
27,0
8,7
9,9
8,2
11,6
8,2
29,2
7,7
29,9
7,6
17,4
7,4
17,8
7,4
27,8
7,2
30,2
6,8
32,6
6,2
31,1
5,5
Форму A (Способ 2) анализировали термическими методами. DSC-анализ показал, что Форма A имеет эндотермическое событие десольватации с началом при 110°C и пиком при 113°C. TGA показал, что Форма A демонстрирует потерю массы примерно 7,8% после нагревания от примерно 25°C до примерно 150 °C. Репрезентативная DSC/TGA-термограмма Формы A представлена на Фиг.2.
Пример 68B: (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме B
Приблизительно 100 мг светло-желтого аморфного (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида суспендировали в 0,5 мл толуола с затравочными кристаллами Формы B. Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Суспензию упаривали и сушили в условиях окружающей среды. Было получено белое кристаллическое твердое вещество, и оно было идентифицировано методом XRPD как Форма B.
Форму B анализировали методом XRPD, и результаты приведены ниже в таблице (Таблица 18) и представлены на Фиг.3.
Таблица 18
Угол (2и±0,2°)
Интенсивность (%)
21,6
100,0
6,3
93,7
8,8
72,2
19,0
53,5
8,0
53,1
16,3
47,3
9,5
43,4
22,4
41,2
20,4
34,8
19,7
30,2
13,9
27,1
26,4
26,7
28,6
25,2
16,7
24,7
15,9
19,5
10,8
19,0
11,9
18,5
13,4
18,4
23,9
17,6
31,8
15,8
24,4
14,7
25,5
14,6
25,1
14,3
28,1
13,5
32,7
12,9
14,6
12,6
29,8
11,9
37,5
11,7
29,3
10,6
15,0
10,4
3
Монокристаллы Формы B были получены в результате медленного выпаривания толуольного раствора. Анализ монокристаллической структуры подтвердил, что Форма B представляет собой полусольватную форму с толуолом. Кристаллографические данные: пространственная группа триклинная P1, размеры элементарной ячейки: a=14,1919(8) Å, b=14,2964(8) Å, c=14,7632(8) Å, α=82,283(1)°, β=77,596(1)°, γ=85,567(1)°, V=2895,3(3) Å.
Форму B анализировали термическими методами. DSC-анализ показал, что Форма B имеет эндотермальное событие с началом при 112°C и пиком при 117°C. TGA показал, что Форма B демонстрирует потерю массы примерно 10,0% после нагревания от примерно 25°C до примерно 200°C. Репрезентативная DSC/TGA-термограмма Формы B представлена на Фиг.4.
Пример 68C: (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме C
Приблизительно 100 мг аморфного (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида растворяли в 1 мл изопропилацетата до образования прозрачного раствора. Этот раствор помещали в морозильную камеру на ночь, и твердое вещество выпадало в осадок. Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов с получением белого твердого вещества в суспензии. Суспензию упаривали и сушили в условиях окружающей среды. Было получено белое кристаллическое твердое вещество, и оно было идентифицировано методом XRPD как Форма C.
Форму C анализировали методом XRPD, и результаты приведены ниже в таблице (Таблица 19) и представлены на Фиг.5.
Таблица 19
Угол (2и±0,2°)
Интенсивность (%)
8,7
100,0
21,5
68,0
6,3
58,6
16,3
53,8
22,2
31,5
18,9
30,3
7,9
28,3
20,4
26,3
13,8
22,0
19,7
21,5
26,4
19,3
9,3
18,1
16,6
12,6
23,6
12,1
19,9
11,8
11,9
11,3
13,2
11,1
28,4
11,1
25,3
10,7
16,0
9,3
18,4
8,9
31,8
8,1
26,0
8,0
24,2
7,9
10,7
6,8
17,5
6,8
20,9
6,6
12,8
6,3
29,8
6,0
15,7
5,8
26,9
5,8
14,7
5,5
Форму C анализировали термическими методами. DSC-анализ показал, что Форма C имеет эндотермическое событие десольватации с началом при 112°C и пиком при 114°C. TGA показал, что Форма C демонстрирует потерю массы примерно 9,2% после нагревания от примерно 25°C до примерно 175°C. Репрезентативная DSC/TGA-термограмма Формы C представлена на Фиг.6.
Пример 68D: (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме D
Способ 1: Приблизительно 100 мг светло-желтого аморфного (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида растворяли в 1 мл EtOAC с получением прозрачного раствора. Этот раствор помещали в морозильную камеру на ночь, и твердое вещество выпадало в осадок. Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов с получением белого твердого вещества в суспензии. Суспензию упаривали и сушили в условиях окружающей среды. Было получено не совсем белое твердое вещество, и оно было идентифицировано анализом XRPD как Форма D.
Способ 2: 5,01 г светло-коричневого аморфного (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида растворяли в 10 мл EtOAC с получением светло-коричневого раствора и коричневого геля. Добавляли 0,10 г затравочных кристаллов Формы D (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида, полученной Способом 1, и раствор превращался в мокрый комок в пределах 5 минут.Добавляли 10 мл EtOAc с образованием суспензии. Суспензию перемешивали в условиях окружающей среды в течение ночи. Коричневый гель исчезал, и получили суспензию не совсем белого твердого вещества с коричневым раствором. Суспензию фильтровали, и твердое вещество промывали дважды EtOAc. Это не совсем белое твердое вещество сушили в условиях окружающей среды. Было получено 4,78 г не совсем белого кристаллического твердого вещества, и оно было идентифицировано анализом XRPD как Форма D.
Форму D (Способ 2) анализировали методом XRPD, и результаты приведены ниже в таблице (Таблица 20) и представлены на Фиг.7.
Таблица 20
Угол (2и±0,2°)
Интенсивность (%)
21,8
100,0
6,4
74,8
16,6
59,2
8,9
50,1
22,5
48,3
8,1
43,0
19,1
40,4
19,9
40,0
20,6
36,8
26,6
30,2
9,5
26,6
16,0
24,8
14,0
20,9
24,1
19,8
28,9
19,2
18,6
19,0
13,4
18.8
25,8
17,1
25,4
15,4
26,3
14,8
32,1
13,5
10,9
12,6
12,1
12,2
14,8
12,2
28,4
11,9
30,0
11,4
33,0
11,4
38,9
10,2
36,5
10,1
15,2
9,3
3
Монокристаллы Формы D были получены в результате медленного выпаривания EtOAc-раствора. Анализ структуры монокристалла подтвердил, что Форма D представляет собой форму полусольвата с EtOAc. Кристаллографические данные: пространственная группа триклинная P1, параметры элементарной ячейки: a=14,051(2) Å, b=14,289(2) Å, c=14,756(2) Å, α=81,174(5)°, β=77,476(5)°, γ=85,331(6)°, V=2854,5(8) Å.
Форму D анализировали термическими методами. DSC-анализ показал, что Форма D имеет эндотермическое событие десольватации с началом при 116°C и пиком при 119°C. TGA показал, что Форма D демонстрирует потерю массы примерно 8,0% после нагревания от примерно 25°C до примерно 200°C. Репрезентативная DSC/TGA-термограмма Формы D представлена на Фиг.8.
Пример 68E: сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме A
25,1 мг (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида (0,05 ммоль) растворяли в 1 мл MeOH и добавляли 2,0 мл (0,10 ммоль) 0,05M раствора сахарина в MeOH с получением светло-желтого раствора. В этот раствор добавляли 1 мл ACN, и полученный раствор упаривали в условиях окружающей среды. Было получено частичное желтое кристаллическое вещество. Приблизительно 10 мг полученного вещества растворяли в 2 мл ACN, и полученный желтый раствор медленно упаривали с получением желтых игольчатых кристаллов, идентифицированных анализом XRPD как сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме A.
Форму A сахариновой соли анализировали методом XRPD, и результаты приведены ниже в таблице (Таблица 21) и представлены на Фиг.9.
Таблица 21
Угол (2и±0,2°)
Интенсивность (%)
14,4
100,0
10,7
52,0
7,1
48,1
21,4
44,3
10,1
42,1
8,5
38,9
8,2
36,5
17,3
36,5
16,3
27,3
9,4
26,0
11,6
25,2
17,8
23,0
20,8
22,5
20,1
18,2
18,5
16,8
18,8
16,7
25,4
16,3
24,9
15,9
21,8
15,6
27,4
15,2
27,8
15,2
26,7
13,9
24,4
13,6
23,4
13,4
15,4
13,3
28,9
13,1
30,4
12,2
35,3
11,9
31,1
11,2
12,5
11,1
19,4
10,5
Форму A сахариновой соли анализировали термическими методами. DSC-анализ показал, что Форма A имеет эндотермическое событие точки плавления с началом при 163°C и пиком при 169°C. TGA показал, что Форма A демонстрирует потерю массы примерно 3,1% после нагревания от примерно 25°C до примерно 150°C. Репрезентативная DSC/TGA-термограмма Формы D представлена на Фиг.10.
Пример 68F: сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме B
246 мг светло-желтого (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида (0,5 ммоль) и 184 мг (1,0 ммоль) сахарина растворяли в 3 мл ацетонитрила и 1 мл MeOH с получением прозрачного желтого раствора. Этот раствор упаривали, чтобы иметь примерно 1,0 мл растворителя, и желтое кристаллическое вещество выпадало в осадок. Суспензию перемешивали в течение 30 минут и фильтровали. Твердое вещество сушили в условиях окружающей среды. Было получено желтое кристаллическое вещество, и оно было идентифицировано методом XRPD как сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамид в Форме B.
Форму B сахариновой соли анализировали методом XRPD, и результаты приведены ниже в таблице (Таблица 22) и представлены на Фиг.11.
Таблица 22
Угол (2и±0,2°)
Интенсивность (%)
6,6
100,0
13,4
99,8
25,3
85,8
18,1
82,7
8,0
76,8
17,2
71,0
9,1
65,3
21,8
64,2
9,9
64,0
26,0
58,9
16,4
58,7
26,4
57,9
21,3
57,3
20,2
54,5
27,9
48,6
14,7
48,1
16,2
47,6
24,1
46,8
20,4
45,0
23,0
45,0
24,7
43,3
18,7
42,4
11,0
39,9
15,2
39,2
15,7
35,1
29,7
34,4
Форму B сахариновой соли анализировали термическими методами. DSC-анализ показал, что Форма B имеет широкое эндотермическое событие десольватации с пиком при 53°C с последующими двумя эндотермическими событиями, один с началом при 153°C и пиком при 162°C, и другой с началом при 176°C и пиком при 182°C. TGA показал, что Форма B демонстрирует потерю массы примерно 2,7% после нагревания от примерно 25°C до примерно 100°C. Репрезентативная DSC/TGA-термограмма Формы B представлена на Фиг.12.
Пример 68G: сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме C
Приблизительно 200 мг сахариновой соли (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме B суспендировали в ацетоне в течение 3 дня, и полученную суспензию упаривали в условиях окружающей среды. Было получено желтое кристаллическое вещество, и оно было идентифицировано анализом XRPD как сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме C.
Форму C сахариновой соли анализировали методом XRPD, и результаты приведены ниже в таблице (Таблица 23) и представлены на Фиг.13.
Таблица 23
Угол (2и±0,2°)
Интенсивность (%)
5,5
100,0
17,0
82,5
26,3
82,0
8,2
80,3
14,9
76,9
24,9
73,4
16,0
72,9
14,4
70,6
18,1
57,6
12,4
55,8
9,4
53,0
20,7
52,4
28,0
46,8
19,2
46,6
19,8
45,3
21,5
43,0
23,8
40,2
15,4
36,7
13,4
33,1
22,8
32,6
29,8
28,0
Пример 68H: сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме D
Приблизительно 15 мг Формы B или Формы C сахариновой соли (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида суспендировали в 0,5 мл воды. Полученную суспензию сушили в держателе образца и измеряли анализом XRPD, и была идентифицирована сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме D.
Форму D сахариновой соли анализировали методом XRPD, и результаты приведены ниже в таблице (Таблица 24) и представлены на Фиг.14.
Таблица 24
Угол (2и±0,2°)
Интенсивность (%)
19,2
100,0
5,4
96,7
20,1
95,7
6,8
93,7
15,4
83,0
7,7
74,1
20,8
72,1
13,8
66,8
17,3
61,4
13,4
58,5
23,1
58,3
10,4
43,4
9,3
42,5
14,3
33,4
16,9
30,9
11,5
27,2
27,2
22,8
26,2
21,1
Пример 68I: сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме E
Примерно 15 мг сахариновой соли (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме C перемешивали в 0,5 мл EtOH. Полученную в результате суспензию упаривали в условиях окружающей среды. Был получен желтый порошок, и он был идентифицирован анализом XRPD как сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида в Форме E.
Форму E сахариновой соли анализировали методом XRPD, и результаты приведены ниже в таблице (Таблица 25) и представлены на Фиг.15.
Таблица 25
Угол (2и±0,2°)
Интенсивность (%)
15,4
100,0
19,3
96,9
5,5
86,4
14,7
78,5
23,2
76,8
6,7
73,3
20,1
71,0
7,8
66,8
26,3
58,4
17,7
53,3
25,2
53,0
18.2
52,5
24,6
52,0
24,0
50,3
13,5
50,1
27,3
49,4
9,3
45,7
17,1
44,5
21,4
42,1
16,4
37,2
29,2
33,9
11,8
33,5
Пример 68J: гидрохлоридная сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида
249 мг (0,50 ммоль) (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида растворяли в 4 мл MeOH с получением светло-коричневого раствора. Добавляли 0,5 мл 1 н. водного раствора HCl (0,50 ммоль), и цвет раствора становился желтым. В этот желтый раствор добавляли 0,5 ммоль сахарина, и сахарин постепенно растворялся в растворе с образованием желтого раствора. Этот раствор упаривали в условиях окружающей среды досуха. Поученное в результате твердое вещество перемешивали в 4 мл ацетона в течение ночи, затем фильтровали и промывали ацетоном. Желтое твердое вещество сушили на воздухе, и оно было идентифицировано анализом XRPD как гидрохлоридная сахариновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида.
Эту гидрохлоридную сахариновую соль анализировали методом XRPD, и результаты приведены ниже в таблице (Таблица 26) и представлены на Фиг.16.
Таблица 26
Угол (2и±0,2°)
Интенсивность (%)
13,7
100,0
20,2
84,0
26,0
82,7
17,3
80,8
8,4
59,9
25,4
57,4
20,6
54,8
27,6
53,9
10,6
52,1
26,6
49,4
18,4
48,5
20,9
47,1
24,3
44,8
15,0
43,9
15,7
42,3
12,9
39,7
25,1
39,3
18,8
39,2
12,5
37,7
22,6
36,2
16,1
33,1
29,4
33,1
23,3
32,9
27,2
32,9
28,9
32,3
21,7
31,0
21,2
27,1
32,0
26,3
22,2
22,9
32,8
21,5
33,6
21,1
29,9
19,7
30,5
19,6
31,2
18,8
Пример 68K: нападизиловая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида
35,8 мг не совсем белого аморфного (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида растворяли в 0,8 мл смеси EtOH:вода (70:30), и 29,02 мг тетрагидрата нападизиловой кислоты растворяли в 0,5 мл такого же растворителя. Раствор противоиона добавляли по каплям в раствор (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида, и был получен желтый осадок. Суспензию перемешивали в условиях окружающей среды в течение ночи. Суспензию фильтровали с получением кристаллического вещества.
Эту соль нападизиловой кислоты анализировали методом XRPD, и результаты приведены ниже в таблице (Таблица 27) и представлены на Фиг.17.
Таблица 27
Угол (2и±0,2°)
Интенсивность (%)
5,2
100,0
10,4
78,5
7,8
74,0
18,3
68,1
17,3
64,1
15,0
59,3
22,1
58,7
25,6
58,7
20,9
58,2
15,6
57,4
20,3
56,3
16,9
52,9
16,1
51,1
26,5
46,9
24,2
46,6
21,2
46,6
24,0
44,2
27,5
42,7
23,2
42,5
19,9
41,6
14,2
39,0
7,2
38,4
12,1
32,2
13,5
32,2
11,3
31,0
30,6
24,3
31,2
23,8
Пример 68L: тримезиновая соль (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида
30 мг не совсем белого аморфного (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида растворяли в 0,5 мл смеси EtOH:вода (70:30), и 14,16 мг тримезиновой кислоты растворяли в 0,6 мл такого же растворителя. Раствор противоиона добавляли по каплям в раствор (2R)-N-(3-{2-[(3-метокси-1-метил-1H-пиразол-4-ил)амино]пиримидин-4-ил}-1H-индол-7-ил)-2-(4-метилпиперазин-1-ил)пропанамида. Полученный раствор подвергали медленному выпариванию и выделяли центрифугированием.
Соль тримезиновой кислоты анализировали методом XRPD, и результаты приведены ниже в таблице (Таблица 28) и представлены на Фиг.18.
Таблица 28
Угол (2и±0,2°)
Интенсивность (%)
4,2
100,0
12,4
66,3
7,8
63,0
25,1
27,8
24,9
27,3
2,1
20,6
27,5
19,1
12,1
16,3
15,7
16,2
10,6
14,4
26,1
13,8
16,5
13,2
15,9
12,8
8,3
12,6
19,8
11,8
20,7
11,8
25,7
11,4
29,1
11,0
8,7
10,7
22,1
10,4
17,5
10,0
23,0
9,9
19,2
9,0
13,9
9,0
23,5
8,9
23,8
8,9
28,1
8,2
26,9
8,1
21,2
7,6
14,3
7.4
18,2
7,4
22,7
7,4
15,2
7,3
17,0
6,9
37,7
6,5
18,6
6,3
33,2
6,1
34,3
6,1
39,3
5,6
39,3
5,4
30,6
5,3
11,3
5,0
31,2
4,9
Пример 69: Соединение Примера 32 в комбинации с осимертинибом - эффективность in vivo и фармакодинамика в модели ксенотрансплантата H1975
3
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ: Ксенотрансплантаты опухоли NCI-H1975 выращивали подкожно у самок бестимусных мышей. Мышей лечили пероральным введением носителя, соединения Примера 32, ингибитора EGFR осимертиниба (AZD9291, TAGRISSO™), необратимого ингибитора T790M-мутантного EGFR или комбинаций соединения Примера 32 и осимертиниба. Средний размер опухолей в начале лечения (через 10 дней после имплантации) составлял 189 мм. Объем опухолей измеряли дважды в неделю. Дополнительных мышей лечили теми же дозами соединения Примера 32 и осимертиниба, и опухоли и плазму крови собирали после одного дня лечения для анализа уровней pSTAT3 (Y705) в опухолях и уровней лекарственного средства в плазме крови.
Комбинация соединения Примера 32 с осимертинибом вызывала усиление противоопухолевой активности по сравнению с лечением только осимертинибом. Значительная противоопухолевая активность после лечения одним только соединением Примера 32 не наблюдалась. Усиление противоопухолевой активности коррелировалось с нокдауном pSTAT3 соединением Примера 32, что согласуется с ролью для сигнального пути JAK/STAT в ускользании от ингибирования pEGFR.
Осимертиниб, необратимый ингибитор T790M-мутантного EGFR, преодолевает T790M-опосредованную резистентность к ингибиторам EGFR, таким как гефитиниб и эрлотиниб при раке легкого. Это исследование проводили, чтобы оценить способность соединения Примера 32 усиливать противоопухолевый ответ на осимертиниб у мышей, несущих на себе подкожный ксенотрансплантат опухоли NCI-H1975. Ген EGFR в опухолях NCI-H1975 мутирован при L858R и также содержит мутацию резистентности T790M.
6
3
3
2
ВЕЩЕСТВА И МЕТОДЫ: Клетки опухоли NCI-H1975 (линия клеток NSCLC человека с мутациями L858R и T790M в гене EGFR) имплантировали подкожно самкам бестимусных мышей NCr (Taconic Laboratories), 3×10 клеток на мышь. Через десять дней после имплантации клеток мышей рандомизировали в 10 групп (6-8 мышей на группу, средний объем опухоли 189 мм, диапазон 152-250 мм), и мышам перорально вводили либо носитель (20% каптизол), соединение Примера 32 в виде единственного агента (12,5 мг/кг, 25 мг/кг, 50 мг/кг), осимертиниб в виде единственного агента (2,5 мг/кг), либо комбинации соединения Примера 32 и осимертиниба (осимертиниб в дозе 2,5 мг/кг и соединение Примера 32 в дозе 12,5 мг/кг, 25 мг/кг и 50 мг/кг) в течение 18 дней. Некоторых мышей с имплантатами опухоли, которые не были рандомизированы в эти группы, лечили в течение одного дня этими соединениями для фармакокинетического и фармакодинамического анализа (опухоль и плазму крови собирали для анализа уровней лекарственного средства в плазме крови и уровней pSTAT3 (Y705) в лизатах опухолей; образцы собирали через 2, 8 и 24 часа после введения AM дозы). Длину и ширину опухоли измеряли циркулем, и объем опухоли вычисляли с использованием формулы: объем=(длина×ширина)*π/6. Соединение Примера 32 было приготовлено в виде композиции в воде, доведенной до pH 2 метансульфоновой кислотой. Осимертиниб был приготовлен в виде композиции в 0,5% HPMC в воде. Все композиции вводили посредством перорального желудочного зонда в объеме 5 мл/кг.Осимертиниб вводили QD (AM), соединение Примера 32 вводили BID (AM и PM, с интервалом 8 часов). В группах, которым вводили осимертиниб в комбинации с соединением Примера 32, AM введение осимертиниба происходило за 3 часа до введения соединения Примера 32, чтобы минимизировать воздействие взаимодействий. AZD1480 (5-хлор-N2-[(1S)-1-(5-фтор-2-пиримидинил)этил]-N4-(5-метил-1H-пиразол-3-ил)-2,4-пиримидиндиамин, см. публикацию патентной заявки США №US20080287475), ингибитор JAK1/2 и положительный контроль для 100% нокдауна pSTAT3, в фармакокинетическом/фармакодинамическом эксперименте был приготовлен в виде композиции в 0,5% HPMC/0,1% Tween(80 в воде, и его вводили посредством перорального желудочного зонда в объеме 5 мл/кг.Уровни Y705 фосфорилированного STAT3 (pSTAT3) измеряли в лизатах опухолей, используя сэндвич-ELISA (твердофазный иммуноферментный анализ) (PathScan Phospho-STAT3 Sandwich ELISA Kit, CST #7146B). Уровни лекарственных средств в плазме крови измеряли методом LC/MS, используя LC/MS/MS масс-спектрометр с линейной ионной ловушкой (Linear Ion Trap Quadrupole LC/MS/MS Mass Spectrometer) (QTRAP 5500 модель 1024945-BB, AB Sciex Instruments), с разделением на колонке Waters Xbridge C18.
РЕЗУЛЬТАТЫ: Добавление соединения Примера 32 усиливало противоопухолевую активность осимертиниба по сравнению с лечением только одним осимертинибом. Соединение Примера 32, которое вводили в виде единственного агента, имело лишь слабую противоопухолевую активность относительно контрольного лечения носителем (Фиг.19). Усиление противоопухолевой активности увеличивалось с увеличением дозы соединения Примера 32 (с 12,5 мг/кг вплоть до 50 мг/кг). В последний день лечения ингибирование роста опухолей всеми комбинациями было статистически значимым (p<0,05) по сравнению с единственным агентом осимертинибом (Таблица 29). Все лечения были хорошо переносимыми без значительной потери массы тела (Фиг.20) или других внешних признаков, наблюдаемых в ходе лечения. Дозозависимое увеличение нокдауна pSTAT3 наблюдалось с увеличением дозы соединения Примера 32 (Фиг.21), что коррелируется с увеличением уровня соединения Примера 32 в плазме крови.
Таблица 29. Значения p для противоопухолевой активности комбинаций осимертиниба и соединения Примера 32 после 18 дней лечения
Лечение
Относительно осимертиниба в виде единственного агента<sup>а</sup>
Относительно контроля-носителя<sup>b</sup>
осимертиниб, 2,5 мг/кг QD
---
0,0002
осимертиниб, 2,5 мг/кг QD+Пример 32, 12,5 мг/кг BID
0,0027
<0,0001
осимертиниб, 2,5 мг/кг QD+Пример 32, 25 мг/кг BID
<0,0001
<0,0001
осимертиниб, 2,5 мг/кг QD+Пример 32, 50 мг/кг BID
<0,0001
<0,0001
a
двухсторонний критерий
b
односторонний критерий
ВЫВОД: Повышенная противоопухолевая активность осимертиниба в комбинации с соединением Примера 32 по сравнению с осимертинибом в виде единственного агента и корреляция с нокдауном pSTAT3 соединением Примера 32 согласуется с ролью сигнального пути STAT3 в избегании ингибирования EGFR или резистентности к ингибированию EGFR в этой модели немелкоклеточного рака легкого. Этот вывод подкреплен также корреляцией повышенного нокдауна pSTAT3 с повышенной противоопухолевой активностью комбинации относительно диапазона доз соединения Примера 32. Результаты подтверждают гипотезу, что ингибирование сигнального пути STAT3 может усиливать противоопухолевую активность ингибитора EGFR в T790M EGFR мутантных NSCLC.
Пример 70: Соединение Примера 32 в комбинации с гефитинибом - эффективность in vivo и фармакодинамика в модели ксенотрансплантата PC-9
3
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ: Ксенотрансплантаты опухоли PC9 выращивали подкожно у самок бестимусных мышей. Мышей лечили пероральным введением носителя, соединения Примера 32, ингибитора EGFR гефитиниба или комбинаций соединения Примера 32 и гефитиниба. Средний размер опухоли в начале лечения составлял 240 мм. Объем опухоли измеряли дважды в неделю. По окончании лечения (21 день) опухоли собирали для анализа уровней pSTAT3 (Y705).
Комбинация соединения Примера 32 и гефитиниба вызывала усиленную противоопухолевую активность по сравнению с лечением только одним гефитинибом. Усиленная противоопухолевая активность комбинации коррелировалась с нокдауном pSTAT3 соединением Примера 32, что согласуется с ролью для сигнального пути JAK/STAT в избегании ингибирования pEGFR.
Гефитиниб является ингибитором мутантного EGFR с активностью у пациентов с немелкоклеточным раком легкого, несущим мутации del19 и L858R в EGFR. Это исследование проводили, чтобы оценить способность соединения Примера 32 усиливать противоопухолевый ответ на гефитиниб у мышей, несущих подкожные ксенотрансплантаты опухоли PC-9. Ген EGFR в опухолях PC-9 содержит мутацию del19.
6
3
3
2
Вещества и методы: Клетки PC-9 (линия клеток NSCLC человека с мутацией del19 EGFR) имплантировали подкожно самкам мышей CB17-SCID (Charles River Laboratories), 2×10 клеток на мышь. Через двадцать два дня после имплантации клеток мышей рандомизировали в 5 групп (7 мышей на группу, средний объем опухоли 240 мм, диапазон 204-298 мм). Мышам перорально вводили либо носитель (1% Tween(80, QD), гефитиниб в виде единственного агента, либо комбинации гефитиниба и соединения Примера 32 в течение 21 дня в дозах и по схемам, указанным на Фиг.22 и Фиг.23. В последний день лечения опухоли собирали (через 2, 8 и 24 часа после AM дозы) для анализа уровней pSTAT3 (Y705) в лизатах опухолей. Длину опухоли и ширину опухоли измеряли циркулем, и объем опухоли вычисляли, используя формулу: объем=(длина×ширина)*π/6. Соединение Примера 32 было приготовлено в виде композиции в воде, доведенной до pH 2 метансульфоновой кислотой. Гефитиниб был приготовлен в виде комбинации в 1% Tween(80 в воде. Все композиции вводили посредством перорального желудочного зонда в объеме 5 мл/кг.Гефитиниб вводили QD (AM), Соединение Примера 32 вводили BID (AM и PM, с интервалом 8 часов). В группах, которым вводили гефитиниб в комбинации с соединением Примера 32, AM введение гефитиниба осуществляли до введения соединения Примера 32 (меньше 10 минут между двумя введениями). Уровни Y705 фосфорилированного STAT3 (pSTAT3) измеряли в лизатах опухолей (собранных через 2, 8 и 24 часа после AM дозы) вестерн-блоттингом (4-12% tris-gly PAGE гели и полусухой перенос на PVDF (поливинилиденфторидную) мембрану; иммуноблоттинг для pSTAT3 с использованием Cell Signaling Technologies (CST)) #9145 первичного антитела и CST #7074 козьего анти-кроличьего HRP-связанного вторичного антитела; иммуноблоттинг для бета-актина с CST #3700 первичным антителом и CST #7076 козьим антимышиным HRP-связанным вторичным антителом), с электрохемилюминесценцией, регистрируемой с использованием ImageQuant LAS 4000 и анализом с использованием программного обеспечения ImageQuant TL.
РЕЗУЛЬТАТЫ: Добавление соединения Примера 32 усиливало противоопухолевую активность гефитиниба (iressa) по сравнению с лечением гефитинибом (Фиг.22). Что касается лечения гефитинибом в комбинации с соединением Примера 32, усиление противоопухолевой активности увеличивалось с увеличением дозы соединения Примера 32 с 12,5 мг/кг до 50 мг/кг.Когда соединение Примера 32 вводили с недельным циклом введение 2 дня/перерыв 5 дней в комбинации с ежесуточным гефитинибом, противоопухолевая активность была аналогичной противоопухолевой активности соединения Примера 32 в дозе 12,5 мг/кг, которую вводили 7 дней в неделю в комбинации с гефитинибом. В последний день лечения ингибирование роста опухоли гефитинибом в комбинации с 50 мг/кг соединения Примера 32 было статистически значимым (p<0,05) по сравнению с гефитинибом в виде единственного агента (Таблица 30). Гефитиниб в комбинации с 12,5 мг/кг соединения Примера 32 ежедневно и с 50 мг/кг соединения Пример 32, который вводили по схеме введение 2 дня/перерыв 5 дней, имел более высокую активность, чем гефитиниб в виде единственного агента, но не полностью достигалась статистическая значимость. Все лечения были хорошо переносимыми без значительной потери массы тела (Фиг.23) или других внешних признаков, наблюдаемых в ходе лечения. Дозозависимое увеличение продолжительности нокдауна pSTAT3 наблюдалось с увеличением дозы соединения Примера 32 (Фиг.24).
Таблица 30. Значения p для противоопухолевой активности гефитиниба в комбинации с соединением Примера 32 после 36 дней лечения
Лечение
относительно гефитиниба в виде единственного агента<sup>а</sup>
относительно контроля-носителя<sup>b</sup>
гефитиниб, 6,25 мг/кг QD
---
<0,0001
гефитиниб, 6,25 мг/кг QD+Пример 32, 12,5 мг/кг BID
0,1263
<0,0001
гефитиниб, 6,25 мг/кг QD+Пример 32, 50 мг/кг BID
0,0006
<0,0001
гефитиниб, 6,25 мг/кг QD+Пример 32, 50 мг/кг BID, введение 2 дня/перерыв 5 дней/неделя
0,0685
<0,0001
a
Двухсторонний критерий
b
Односторонний критерий
ВЫВОД: Повышенная противоопухолевая активность соединения Примера 32 в комбинации с гефитинибом по сравнению с гефитинибом в виде единственного агента и корреляция с нокдауном pSTAT3 соединением Примера 32 согласуется с ролью сигнального пути STAT3 в избегании ингибирования EGFR или резистентности к ингибированию EGFR в этой модели немелкоклеточного рака легкого. Этот вывод дополнительно подкрепляется корреляцией повышенного нокдауна pSTAT3 с повышенной противоопухолевой активностью комбинации относительно диапазона доз соединения Примера 32 (от 12,5 до 50 мг/кг). Результаты подтверждают гипотезу, что ингибирование сигнального пути STAT3 может усиливать противоопухолевую активность ингибитора EGFR в опухолях NSCLC, несущих делецию экзона 19 в гене EGFR.
Пример 71: Комбинация соединения Примера 32 плюс гефитиниб - эффективность in vivo и фармакодинамика в модели ксенотрансплантата H1650
3
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ: Ксенотрансплантаты опухоли NCI-H1650 выращивали подкожно у самок бестимусных мышей. Мышей лечили пероральным введением носителя, соединения Примера 32, ингибитора EGFR гефитиниба (AZD9291, TAGRISSO™), необратимого ингибитора T790M-мутантного EGFR или комбинаций соединения Примера 32 и гефитиниба. Средний размер опухоли в начале лечения (через 10 дней после имплантации) составлял 257 мм. Объем опухоли измеряли дважды в неделю. Дополнительных мышей лечили такими же дозами соединения Примера 32 и гефитиниба, и опухоли и плазму крови собирали после одного дня лечения для анализа уровней pSTAT3 (Y705) в опухолях и уровней лекарственного средства в плазме крови.
Комбинация соединения Примера 32 плюс гефитиниб вызывала усиление противоопухолевой активности по сравнению с лечением только одним гефитинибом. Усиленная противоопухолевая активность комбинации коррелировалась с pSTAT3 нокдауном соединением Примера 32, что согласуется с ролью для сигнального пути JAK/STAT в избегании ингибирования pEGFR.
Гефитиниб является ингибитором мутантного EGFR с активностью у пациентов с немелкоклеточным раком легкого, несущими мутации del19 и L858R в EGFR. Это исследование проводили, чтобы оценить способность соединения Примера 32 усиливать противоопухолевый ответ на гефитиниб у мышей, несущих подкожные ксенотрансплантаты опухоли NCI-H1650. Ген EGFR в опухолях NCI-H1650 содержит мутацию del19.
6
3
3
2
Вещества и методы: Клетки NCI-H1650 (линия клеток NSCLC человека с мутацией del19 EGFR) имплантировали подкожно самкам мышей CB17-SCID (Charles River Laboratories), 5×10 клеток на мышь. Через двадцать три дня после имплантации клеток мышей рандомизировали в 6 групп (по 9 мышей на группу, средний объем опухоли 257 мм, диапазон 205-303 мм). Мышам перорально вводили либо носитель (1% Tween(80, QD), гефитиниб в виде единственного агента, соединение Примера 32 в виде единственного агента, либо комбинации гефитиниба плюс соединение Примера 32 в дозах и по схемам, указанным на Фиг.25 и Фиг.26 в течение 21 дня. Длину опухоли и ширину опухоли измеряли циркулем, и объем опухоли вычисляли, используя формулу: объем=(длина×ширина)*π/6. Соединение Примера 32 было приготовлено в виде композиции в воде, доведенной до pH 2 метансульфоновой кислотой. Гефитиниб был приготовлен в виде композиции в 1% Tween(80 в воде. Все композиции вводили посредством перорального желудочного зонда в объеме 5 мл/кг.Гефитиниб вводили QD (AM), Соединение Примера 32 вводили BID (AM и PM, с интервалом 8 часов). В группах, которым вводили гефитиниб в комбинации с соединением Примера 32, AM введение гефитиниба происходило до введения соединения Примера 32 (менее 10 минут между двумя введениями). Дополнительных мышей, несущих опухоли, лечили такими же дозами соединения Примера 32 и гефитиниба, и опухоли и плазму крови собирали после одного дня лечения для анализа уровней pSTAT3 в опухолях и уровней лекарственных средств в плазме крови. AZD1480 (5-хлор-N2-[(1S)-1-(5-фтор-2-пиримидинил)этил]-N4-(5-метил-1H-пиразол-3-ил)-2,4-пиримидиндиамин, см. публикацию патентной заявки США №US20080287475), ингибитор JAK1/2 и положительный контроль для 100% нокдауна pSTAT3 в фармакокинетическом/фармакодинамическом эксперименте был приготовлен в виде композиции в 0,5% HPMC/0,1% Tween(80 в воде, и его вводили посредством перорального желудочного зонда в объеме 5 мл/кг.Уровни Y705 фосфорилированного STAT3 (pSTAT3) измеряли в лизатах опухолей (собранных через 2, 8 и 24 часа после AM дозы) вестерн-блоттингом (4-12% tris-gly PAGE гели и полусухой перенос на PVDF мембрану; иммуноблоттинг для pSTAT3 с использованием Cell Signaling Technologies (CST) #9145 первичного антитела и CST #7074 козьего анти-кроличьего HRP-связанного вторичного антитела; иммуноблоттинг для GAPDH с CST #2118 первичным антителом и CST #7074 козьим анти-кроличьим HRP-связанным вторичным антителом), с регистрацией электрохемилюминесценции с использованием ImageQuant LAS 4000 и анализом с использованием программного обеспечения ImageQuant TL. Уровни лекарственных средств в плазме крови измеряли методом LC/MS, используя квадрупольный LC/MS/MS масс-спектрометр с линейной ионной ловушкой (QTRAP 5500 model 1024945-BB, AB Sciex Instruments), с разделением на колонке Waters Xbridge C18.
РЕЗУЛЬТАТЫ: Добавление соединения Примера 32 усиливало противоопухолевую активность гефитиниба по сравнению с гефитинибом в виде единственного агента (Фиг.25). Соединение Примера 32, которое вводили в виде единственного агента, имело лишь скромную противоопухолевую активность. Что касается лечения гефитинибом в комбинации с соединением Примера 32, усиление противоопухолевой активности увеличивалось с увеличением дозы соединения Примера 32 с 25 мг/кг до 50 мг/кг.В последний день лечения ингибирование роста опухоли гефитинибом в комбинации с 25 или 50 мг/кг соединения Примера 32 было статистически значимым (p<0,05) по сравнению с гефитинибом в виде единственного агента (Таблица 31). Все лечения были хорошо переносимыми без значительной потери массы тела (Фиг.26) или других внешних признаков, наблюдаемых в ходе лечения. Нокдаун pSTAT3 наблюдался с соединением Примера 32 в виде единственного агента и в комбинации (Фиг.27) при измерении после одного дня лечения.
Таблица 31. Значения p для противоопухолевой активности комбинации гефитиниба плюс соединение Примера 32 после 21 дня лечения
Лечение
относительно гефитиниба в виде единственного агента<sup>а</sup>
Относительно контроля-носителя<sup>b</sup>
гефитиниб, 6,25 мг/кг QD
---
<0,0001
Пример 32, 25 мг/кг BID
0,0314
0,0002
Пример 32, 50 мг/кг BID
0,282
<0,0001
гефитиниб, 6,25 мг/кг QD+Пример 32, 25 мг/кг BID
<0,0001
<0,0001
гефитиниб, 6,25 мг/кг QD+Пример 32, 50 мг/кг BID
<0,0001
<0,0001
a
Двухсторонний критерий
b
Односторонний критерий
ВЫВОДЫ: Повышенная противоопухолевая активность соединения Примера 32 в комбинации с гефитинибом по сравнению с гефитинибом в виде единственного агента и корреляция с нокдауном pSTAT3 соединением Примера 32 согласуется с ролью сигнального пути STAT3 передачи сигналов в избегании ингибирования EGFR в этой модели немелкоклеточного рака легкого. Результаты подтверждают гипотезу, что ингибирование сигнального пути STAT3 может усиливать противоопухолевую активность ингибитора EGFR в опухолях NSCLC, несущих мутацию del19 в гене EGFR.
Пример 72: Соединение Примера 32 в комбинации с осимертинибом - эффективность in vivo и фармакодинамика в модели PDX ксенотрансплантата LG1049
3
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ: PDX ксенотрансплантаты опухоли LG1049 немелкоклеточного рака легкого выращивали подкожно у самок мышей NSG. Мышей лечили пероральным введением носителя, соединения Примера 32, ингибитора EGFR осимертиниба (необратимого ингибитора T790M-мутантного EGFR) в виде единственного агента или комбинаций соединения Примера 32 с осимертинибом. Средний размер опухоли в начале лечения (через 10 дней после имплантации) составлял 189 мм. Объем опухоли измеряли дважды в неделю. Отдельную группу мышей, несущих опухоли LG1049, лечили в течение 5 дней, и опухоли собирали для анализа уровней pSTAT3 (Y705) и pEGFR.
Комбинация соединения Примера 32 с осимертинибом вызывала усиление регрессии опухоли по сравнению с лечением только одним осимертинибом. Значительная противоопухолевая активность не наблюдалась после лечения только одним соединением Примера 32. Когда через 28 дней лечение было остановлено, опухоли снова быстро росли у мышей, которых лечили осимертинибом в виде единственного агента или осимертинибом в комбинации с соединением Примера 32. Когда лечение соединением Примера 32 продолжали, опухоли также снова росли, но медленнее. Анализ опухолей, взятых у мышей, которых лечили в течение 5 дней, подтвердил сильный нокдаун pSTAT3 и pEGFR соединением Примера 32 и осимертинибом соответственно.
Осимертиниб, необратимый ингибитор T790M мутантного EGFR, преодолевает T790M-опосредованную резистентность к ингибиторам EGFR, таким как гефитиниб и эрлотиниб, при раке легкого. Это исследование проводили, чтобы оценить способность соединения Примера усиливать противоопухолевый ответ на осимертиниб у мышей, несущих подкожные ксенотрансплантаты опухоли LG1049. LG1049 является моделью первичного ксенотрансплантата опухоли (PDX) немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), в которой ген EGFR содержит мутацию резистентности T790M.
3
3
3
2
Вещества и методы: Фрагменты опухоли LG1049 имплантировали подкожно самкам мышей NSG (JAX Stock No. 005557). Как только объем опухолей достигал ~125-275 мм, мышей рандомизировали в 5 групп (по 10 мышей на группу, средний объем опухоли 189 мм, диапазон 138-253 мм). Мышам перорально вводили либо носитель, соединение Примера 32 в виде единственного агента, осимертиниб в виде единственного агента, либо комбинации соединения Примера 32 с осимертинибом в дозах и по схемам, указанным на Фиг.28 и Фиг.29, в течение 28 дней (18 дней для соединения Примера 32 в виде единственного агента). В одной из двух групп, которые получали соединение Примера 32 в комбинации с осимертинибом, лечение соединением Примера 32 продолжали в течение дополнительных 14 дней. Отдельную группу мышей, несущих опухоли, лечили носителем, соединением Примера 32 в виде единственного агента, осимертинибом в виде единственного агента или комбинацией соединения Примера 32 и осимертиниба в течение 5 дней, и опухоли собирали для анализа уровней pSTAT3 (Y705) и уровней pEGFR в лизатах опухолей. Длину опухоли и ширину опухоли измеряли циркулем, и объем опухоли вычисляли, используя формулу: объем=(длина×ширина)*π/6. Соединение Примера 32 было приготовлено в виде композиции в воде, доведенной до pH 2 метансульфоновой кислотой. Осимертиниб был приготовлен в виде композиции в 0,5% HPMC в воде. Все композиции вводили посредством перорального желудочного зонда в объеме 5 мл/кг.Осимертиниб вводили QD (AM), соединение Примера 32 вводили BID (AM и PM, с интервалом 8 часов). В группах, которым вводили соединение Примера 32 в комбинации с осимертинибом, AM введение осимертиниба осуществляли до введения соединения Примера 32 (менее 10 минут между двумя введениями). Уровни фосфорилированного STAT3 и фосфорилированного EGFR измеряли в лизатах опухолей вестерн-блоттингом (4-12% tris-gly PAGE гели и полусухой перенос на PVDF мембрану; иммуноблоттинг для pSTAT3 с Cell Signaling Technologies (CST) #9145 первичным антителом и CST #7074 козьим анти-кроличьим HRP-связанным вторичным антителом; иммуноблоттинг для pEGFR pY1173 с Epitomics #1124 первичным антителом и CST #7074 козьим анти-кроличьим HRP-связанным вторичным антителом; иммуноблоттинг для GAPDH с CST #2118 первичным антителом и CST #7074 козьим анти-кроличьим HRP-связанным вторичным антителом), с регистрацией электрохемилюминесценции с использованием ImageQuant LAS 4000 и анализом с использованием программного обеспечения ImageQuant TL.
РЕЗУЛЬТАТЫ: Добавление соединения Примера 32 усиливало регрессию опухолей, индуцированную осимертинибом, по сравнению с лечением только одним осимертинибом. Соединение Примера 32, которое вводили в виде единственного агента, не проявляло значительную активность относительно лечения контролем-носителем (Фиг.28). Когда лечение останавливали после 28 дней введения доз (группы осимертиниба и соединения Примера 32 в комбинации с осимертинибом), опухоли снова росли. Когда лечение осимертинибом продолжали в течение дополнительных 14 дней (одна из групп комбинации), опухоли также снова росли, но медленнее. У мышей, которых лечили носителем или только одним соединением Примера 32, наблюдалась значительная потеря массы тела (Фиг.29), что свидетельствует о том, что потеря массы тела была результатом роста опухоли. Эксперимент с группой соединения Примера 32 в виде единственного агента прекращали раньше из-за чрезмерной потери массы тела. Зависимая от опухоли потеря массы тела наблюдалась в других экспериментах с использованием этой модели. Отсутствие значительной потери массы тела в группах лечения, в которых опухоли регрессировали (осимертиниб в виде единственного агента и соединение Примера 32 в комбинации с осимертинибом) согласуется с потерей массы тела, зависящей от роста опухоли.
Дозы и схемы введения соединения Примера 32 и осимертиниба, использованные в этом эксперименте, вызывали сильный нокдаун pSTAT3 и pEGFR после 5 дней лечения, измеренный при 4H после последней дозы (Фиг.30).
ВЫВОД: Повышенная противоопухолевая активность соединения Примера 32 в комбинации с осимертинибом по сравнению с осимертинибом в виде единственного агента и корреляция с нокдауном pSTAT3 соединением Примера 32 согласуется с ролью сигнального пути STAT3 в избегании ингибирования EGFR или резистентности к ингибированию EGFR в этой модели EGFR T790M мутантного немелкоклеточного рака легкого. Результаты подтверждают гипотезу, что ингибирование сигнального пути STAT3 может усиливать противоопухолевую активность ингибитора EGFR в T790M EGFR мутантных NSCLC.
Пример 73: Соединение Примера 32 в комбинации с осимертинибом - эффективность in vivo схем прерывистого введения доз соединения Примера 32 в модели ксенотрансплантата H1975
3
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ: Ксенотрансплантаты опухоли NCI-H1975 выращивали подкожно у самок бестимусных мышей. Мышей лечили пероральным введением носителя, соединения Примера 32, ингибитора EGFR осимертиниба (необратимого ингибитора T790M-мутантного EGFR) в виде единственного агента или комбинаций соединения Примера 32 и осимертиниба по схемам с разными интервалами введения доз. Средний размер опухоли в начале лечения (через 10 дней после имплантации) составлял 185 мм. Объем опухоли измеряли дважды в неделю.
По сравнению с лечением только одним осимертинибом комбинация соединения Примера 32 и осимертиниба вызывала усиление противоопухолевой активности по всем схемам тестируемого лечения. Имела место тенденция к снижению эффективности при использовании схем интенсивного введения доз. Усиленная противоопухолевая активность комбинации и корреляция более высокой эффективности со схемами более интенсивного введения доз соединения Примера 32 согласуется с ролью для сигнального пути JAK/STAT в избегании ингибирования pEGFR.
Это исследование проводили, чтобы оценить способность соединения Примера 32 усиливать противоопухолевый ответ на осимертиниб у мышей, несущих подкожные ксенотрансплантаты опухоли NCI-H1975, и чтобы исследовать частоту целевого охвата соединением Примера 32, которая требуется для сохранения активности комбинации. Ген EGFR в опухолях NCI-H1975 имеет мутацию L858R, а также содержит мутацию резистентности T790M.
6
3
3
2
Вещества и методы: Клетки NCI-H1975 (линия клеток NSCLC человека с мутациями L858R и T790M в гене EGFR) имплантировали подкожно самкам бестимусных мышей NCr (Taconic Laboratories), 3×10 клеток на мышь. Через девять дней после имплантации клеток мышей рандомизировали в 13 групп (по 8 мышей на группу, средний объем опухоли 185 мм, диапазон 127-327 мм), и им перорально вводили либо носитель, соединение Примера 32 в виде единственного агента, осимертиниб в виде единственного агента, либо соединение Примера 32 в комбинации с осимертинибом в дозах и по схемам для соединения Примера 32, указанных на Фиг.31A-31E, в течение 19-29 дней (группам, реагирующим лучше, дозы вводили дольше). Длину опухоли и ширину опухоли измеряли циркулем, и объем опухоли вычисляли, используя формулу: объем=(длина×ширина)*π/6. Соединение Примера 32 было приготовлено в виде композиции в воде, доведенной до pH 2 метансульфоновой кислотой. Осимертиниб был приготовлен в виде композиции в 0,5% HPMC в воде. Все композиции вводили посредством перорального желудочного зонда в объеме 5 мл/кг.Осимертиниб вводили QD (AM), и соединение Примера 32 вводили BID (AM и PM, с интервалом 8 часов). В группах, которым вводили соединение Примера 32 в комбинации с осимертинибом, AM дозу осимертиниба вводили за 3 часа до введения соединения Примера 32, чтобы минимизировать воздействие взаимодействий.
РЕЗУЛЬТАТЫ: Добавление соединения Примера 32 усиливало противоопухолевую активность осимертиниба по сравнению с лечением только одним осимертинибом. Соединение Примера 32, которое вводили в виде единственного агента, не проявляло значительную активность относительно лечения контролем-носителем (Фиг.31A-31E). Что касается лечения комбинацией соединения Примера 32 и осимертиниба, усиление противоопухолевой активности было сильнее при более высокой дозе соединения Примера 32 (50 мг/кг BID по сравнению с 25 мг/кг BID). Хотя усиление активности осимертиниба снижалось с уменьшением интенсивности введения соединения Примера 32 (ежедневно>введение 4 дня/перерыв 3 дня>введение 7 дней/перерыв 7 дней>введение 2 дня/перерыв 5 дней>введение только в течение первых 7 дней), различие было статистически значимым после 26 дней лечения при всех схемах введения соединения Примера 32, за исключением групп, в которых соединение Примера 32 вводили только в течение первых 7 дней (Таблица 32). Все лечения были хорошо переносимыми без значительной потери массы тела (Фиг.32) или других внешних признаках, наблюдаемых в ходе лечения.
Таблица 32. Значения p для противоопухолевой активности комбинаций AZD9291 плюс ингибитор JAK1 после 26 дней лечения
Лечение
относительно осимертиниба в виде единственного агента<sup>а</sup>
осимертиниб, 2,5 мг/кг QD
---
осимертиниб, 2,5 мг/кг QD+Пример 32, 12,5 мг/кг BID, ежедневно
0,0156
осимертиниб, 2,5 мг/кг QD+Пример 32, 50 мг/кг BID, ежедневно
<0,0001
осимертиниб, 2,5 мг/кг QD+Пример 32, 25 мг/кг BID, введение 4 дня/перерыв 3 дня
0,0002
осимертиниб, 2,5 мг/кг QD+Пример 32, 50 мг/кг BID, введение 4 дня/перерыв 3 дня
<0,0001
осимертиниб, 2,5 мг/кг QD+Пример 32, 25 мг/кг BID, введение 7 дней/перерыв 7 дней
0,0079
осимертиниб, 2,5 мг/кг QD+Пример 32, 50 мг/кг BID, введение 7 дней/перерыв 7 дней
0,0002
осимертиниб, 2,5 мг/кг QD+Пример 32, 25 мг/кг BID, введение 2 дня/перерыв 5 дней
0,0391
осимертиниб, 2,5 мг/кг QD+Пример 32, 50 мг/кг BID, введение 2 дня/перерыв 5 дней
0,0010
осимертиниб, 2,5 мг/кг QD+Пример 32, 25 мг/кг BID, введение только в течение первых 7 дней
0,4744
осимертиниб, 2,5 мг/кг QD+Пример 32, 50 мг/кг BID, введение только в течение первых 7 дней
0,4101
а
Двухсторонний критерий
ВЫВОД: Повышенная противоопухолевая активность соединения Примера 32 в комбинации с осимертинибом по сравнению с соединением Примера 32 в виде единственного агента и корреляция с нокдауном pSTAT3 соединением Примера 32 согласуется с ролью сигнального пути STAT3 в избегании ингибирования EGFR или резистентности к ингибированию EGFR в этой модели немелкоклеточного рака легкого. Результаты подтверждают гипотезу, что ингибирование сигнального пути STAT3 может усиливать противоопухолевую активность ингибитора EGFR в T790M EGFR мутантных NSCLC. Значительная активность комбинации, наблюдаемая, даже когда соединение Примера 32 вводили так редко, как по схеме введение 2 дня/перерыв 5 дней (т.е. только в дни 1 и 2 недельного цикла), свидетельствует о том, что усиление активности осимертиниба может достигаться только при прерывистом ингибировании сигнального пути pSTAT3.