ПРЕДВАРИТЕЛЬНО ЗАПОЛНЕННЫЙ ПЛАСТИКОВЫЙ ШПРИЦ, СОДЕРЖАЩИЙ АНТАГОНИСТ VEGF
PRE-FILLED PLASTIC SYRINGE CONTAINING VEGF ANTAGONIST

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к предварительно заполненному шприцу, содержащему антагонист VEGF и имеющему пластиковый корпус, свободный от силикона, наборам, включающим такой шприц, и использованию такого шприца для введения антагониста VEGF при лечении заболеваний глаз.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Заболевания глаз, такие как возрастная дегенерация желтого пятна и диабетический отек желтого пятна, возникают вследствие неконтролируемого роста кровеносных сосудов в глазу. Вследствие этого, одним из способов лечения этих и аналогичных заболеваний является ингибирование ангиогенеза в глазу. Поскольку VEGF является ключевым фактором в стимуляции ангиогенеза, он представляет собой перспективную мишень для подавления ангиогенеза.

Афлиберцепт, продаваемый под названием эйлеа, представляет собой рекомбинантный слитый белок, состоящий из VEGF-связывающих областей внеклеточных доменов человеческих рецепторов VEGF 1 и 2, которые слиты с Fc-областью иммуноглобулина IgG1 человека. Он одобрен для лечения влажной дегенерации желтого пятна. Ранибизумаб, продаваемый под названием луцентис, представляет собой Fab-фрагмент гуманизированного мышиного моноклонального антитела, направленного против VEGF, и был одобрен для лечения заболеваний глаз, таких как возрастная дегенерация желтого пятна и диабетический отек желтого пятна. Кроме того, для лечения заболеваний глаз обычным является не предусмотренное инструкцией использование полноразмерного антитела бевацизумаба (авастин), которое также направлено против VEGF. Ранибизумаб и бевацизумаб, по-видимому, имеют схожие характеристики эффективности при лечении неоваскулярной возрастной дегенерации желтого пятна, хотя немногочисленные побочные эффекты, судя по всему, чаще имеют место при использовании бевацизумаба (Johnson and Sharma (2013) Curr. Opin. Ophthalmol.: 24(3): 205-12).
et al.
et al.
et al.
И бевацизумаб, и ранибизумаб предоставляют в стеклянных флаконах, из которых их, как правило, отбирают шприцем незадолго до инъекции в глаз. Для того, чтобы полностью использовать содержимое продажных флаконов с этими антителами, некоторые компании заново упаковывают их в готовые к употреблению пластиковые шприцы в стерильных условиях, что позволяет набирать более одного шприца из одного стеклянного флакона. Однако в новой упаковке - шприцах были замечены микрокапли силиконового масла и белковые агрегаты (Liu (2011) Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52(2): 1023-1034). Такие примеси силиконового масла и белковые агрегаты могут являться причиной повышения внутриглазного давления, наблюдаемого у пациентов, получающих лечение бевацизумабом или ранибизумабом (Kahook (2009) Ophthalmic Surg. Lasers Imaging 40: 293-295; Good (2011) Br. J. Ophthalmol. 95(8): 1111-1114).
В документе AU 2012101677 A4 описаны предварительно заполненные шприцы, содержащие антагонист VEGF, при этом шприцы имеют низкое содержание силикона. Все содержание данного документа сфокусировано на использовании стеклянных шприцев и, таким образом, идея заключается в том, что небольшое количество силикона должно присутствовать в шприце.
et al.
et al.
м
Кроме того, предварительно заполненный ранибизумабом шприц недавно был одобрен для лечебных целей Европейским агентством по лекарственным средствам (EMA). Корпус шприца состоит из боросиликатного стекла, на которое распылением нанесено покрытие из эмульсии силиконового масла в воде и затем зафиксировано нагреванием (так называемый «запеченный силикон») (постерная презентация Clunas  на 5 Всемирном конгрессе по противоречиям в офтальмологии, 20-23 марта 2014 г.; постерная презентация Michaud  на Ежегодном собрании ARVO 2014 г.).
Предварительно заполненные шприцы имеют множество преимуществ по сравнению с флаконом и отдельно предоставляемым шприцем, например, повышенное удобство, доступность, точность, стерильность и безопасность. Использование предварительно заполненных шприцев приводит к большей точности дозы, уменьшению вероятности травмы от укола иглой, что может происходить при отборе лекарственного средства из флаконов, отмеренные дозы уменьшают ошибки при дозировании из-за необходимости разведения и/или отбора лекарственного средства из флакона в шприц, а также уменьшение переполненности шприца помогает сокращать затраты за счет сведения к минимуму непродуктивного расхода лекарственного средства.
Однако стеклянные шприцы, такие как одобренный для использования предварительно заполненный ранибизумабом шприц, легко ломаются и имеют относительно больший вес в сравнении с пластиковыми шприцами.
Кроме того, их необходимо обрабатывать силиконом, чтобы обеспечить надлежащее движение уплотнителя в стеклянном корпусе и, следовательно, эффективную и точную доставку лекарственного средства. Показано, что капли силиконового масла присутствуют в полости стекловидного тела после интравитреального введения антагонистов VEGF, и было высказано предположение о том, что силиконовое масло поступает из игл и шприцев, используемых для инъекций (Bakri and Ekdawi (2008) Retina 28: 996-1001).
Кроме того, клей, необходимый для прикрепления несъемной иглы к стеклянному шприцу, может приводить к загрязнениям или повышенному окислению белка (презентация Adler на конференции PDA Europe The Universe of Pre-Filled Syringes и Injection Devices, Базель, 7-11 ноября 2011 г.; презентация Markovic на семинаре PDA Single Use Systems Workshop, Бетесда, 22-23 июня 2011 г.).
et al.
et al.
И наконец, при производстве стеклянных предварительно заполняемых шприцев, как правило, используют вольфрамовые спицы. Показано, что растворимый вольфрам, обнаруживаемый в предварительно заполненных шприцах, приводит к агрегации белка и окислению белка (Liu (2010) PDA J. Pharm. Sci. Technol. 64(1): 11-19; Seidl (2012) Pharm. Res. 29: 1454-1467).
Проблемы, связанные со стеклянными предварительно заполненными шприцами, в прошлом несколько раз приводили к отзыву готовой продукции из обращения.
Описано несколько предварительно заполненных шприцев, выполненных не из стекла. В WO 2011/117878 A1 описан поликарбонатный шприц, однако неясно, покрыт ли корпус шприца силиконом и подходит ли шприц для внутриглазного введения. В WO 2009/099641 A2 описано, что в шприцах из полимерных циклических олефинов без смазывающего вещества образуется меньше видимых частиц, чем в стеклянном шприце, покрытом силиконом. Однако остается неясным, можно ли использовать такой шприц в офтальмологических процедурах.
Таким образом, по-прежнему существует потребность в выполненных не из стекла шприцах, которые способны безопасно доставлять лекарственное средство в глаза и которые лишены вышеуказанных недостатков, связанных с использованием стеклянных шприцев, но в которых лекарственное средство остается стабильным в период хранения.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что раствор анти-VEGF антитела является стабильным, то есть, антитело существенно не изменяется и существенно не агрегирует во время хранения, если оно находится в предварительно заполненном шприце, имеющем пластиковый корпус без силикона, хотя принято считать, что пластиковый шприц более проницаем, чем стеклянный шприц, для газов, таких как кислород, что может приводить к изменению белков (смотри, например, Dierick and Yoshino (2015) OnDrugDelivery No. 55: 10-16). Таким образом, отсутствует необходимость в упаковке шприца с поглотителем кислорода. Кроме того, предварительно заполненный шприц по настоящему изобретению не содержит значительное количество частиц. И наконец, силы, необходимые для инъекции раствора из предварительно заполненного шприца по настоящему изобретению, сопоставимы с силами, необходимыми для инъекции из стеклянного шприца.
Таким образом, предварительно заполненный шприц по настоящему изобретению преодолевает недостатки стеклянных шприцев, описанные выше, и может быть использован для введения антагонистов VEGF в глаза.
Соответственно, настоящее изобретение относится к предварительно заполненному шприцу, содержащему жидкий препарат антагониста VEGF и имеющему корпус шприца, выполненный из пластика, без силикона.
В предпочтительном варианте осуществления антагонист VEGF представляет собой анти-VEGF антитело или антигенсвязывающий фрагмент такого антитела, или слитый белок растворимого рецептора VEGF, и более предпочтительно, антагонист VEGF представляет собой ранибизумаб или афлиберцепт.
Предпочтительно, концентрация антагониста составляет от 1 до 100 мг/мл.
В одном аспекте изобретения предварительно заполненный шприц содержит менее 50 частиц, имеющих диаметр 10 мкм или более, на мл жидкого препарата.
В другом аспекте изобретения предварительно заполненный шприц содержит менее 5 частиц, имеющих диаметр 25 мкм или более, на мл жидкого препарата.
В другом аспекте изобретения предварительно заполненный шприц имеет силу трения скольжения, меньшую или равную 10 Н.
В предпочтительном варианте осуществления предварительно заполненный шприц дополнительно включает уплотнитель без силикона.
Предпочтительно, корпус шприца выполнен из циклоолефинового полимера или циклоолефинового сополимера.
В предпочтительном варианте осуществления корпус шприца имеет внутреннее покрытие, отличное от силиконового покрытия.
Также предпочтительно, предварительно заполненный шприц имеет несъемную иглу.
Настоящее изобретение также относится к набору, включающему один или более предварительно заполненных шприцев по настоящему изобретению. Предпочтительно, набор представляет собой блистерную упаковку.
Предварительно заполненный шприц можно использовать для введения антагониста VEGF пациенту, имеющему заболевание глаз, предпочтительно имеющему заболевание глаз, выбранное из группы, состоящей из возрастной дегенерации желтого пятна (AMD), нарушения зрения вследствие диабетического отека желтого пятна (DME), нарушения зрения вследствие вторичного диабетического отека желтого пятна при окклюзии вен сетчатки (окклюзии ветвей центральной ВС или окклюзии центральной ВС), диабетической ретинопатии у пациентов с диабетическим отеком желтого пятна или нарушения зрения вследствие вторичной хориоидальной неоваскуляризации (CNV) при патологической миопии.
Предпочтительно, пациенту вводят жидкий препарат в объеме 30-100 мкл.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фигура 1: Число частиц с диаметром 10 мкм или более после переворачивания с перемещением содержимого от иглы до уплотнителя в течение 5 минут (a), 2 недель (b), 4 недель (c), а также после пяти циклов замораживания/размораживания (d) в шприцах, указанных в таблице 1; шприц 10 не использовали в анализе через 5 минут и 2 недели.
Фигура 2: Число частиц с диаметром 25 мкм или более после переворачивания с перемещением содержимого от иглы до уплотнителя в течение 5 минут (a), 2 недель (b), 4 недель (c), а также после пяти циклов замораживания/размораживания (d) в шприцах, указанных в таблице 1; шприц 10 не использовали в анализе через 5 минут и 2 недели.
Фигура 3: Процентная доля гидрофильных молекул, измеренная в ОФ-ВЭЖХ анализе содержимого шприцев, указанных в таблице 1, после переворачивания с перемещением содержимого от иглы до уплотнителя в течение 5 минут (a), 2 недель (b), 4 недель (c), а также после пяти циклов замораживания/размораживания (d) в шприцах, указанных в таблице 1; шприц 10 не использовали в анализе через 5 минут и 2 недели.
Фигура 4: Процентная доля гидрофобных молекул, измеренная в ОФ-ВЭЖХ анализе содержимого шприцев, указанных в таблице 1, после переворачивания с перемещением содержимого от иглы до уплотнителя в течение 5 минут (a), 2 недель (b), 4 недель (c), а также после пяти циклов замораживания/размораживания (d) в шприцах, указанных в таблице 1; шприц 10 не использовали в анализе через 5 минут и 2 недели.
Фигура 5: Процентная доля кислых вариантов, измеренная при катионообменной хроматографии содержимого шприцев, указанных в таблице 1, после переворачивания с перемещением содержимого от иглы до уплотнителя в течение 5 минут (a), 2 недель (b), 4 недель (c), а также после пяти циклов замораживания/размораживания (d) в шприцах, указанных в таблице 1; шприц 10 не использовали в анализе через 5 минут и 2 недели.
Фигура 6: Процентная доля щелочных вариантов, измеренная при катионообменной хроматографии содержимого шприцев, указанных в таблице 1, после переворачивания с перемещением содержимого от иглы до уплотнителя в течение 5 минут (a), 2 недель (b), 4 недель (c), а также после пяти циклов замораживания/размораживания (d) в шприцах, указанных в таблице 1; шприц 10 не использовали в анализе через 5 минут и 2 недели.
Фигура 7: Анализ агрегации белков методом эксклюзионной хроматографии после переворачивания с перемещением содержимого от иглы до уплотнителя в течение 5 минут (a), 2 недель (b), 4 недель (c), а также после пяти циклов замораживания/размораживания (d) в шприцах, указанных в таблице 1; шприц 10 не использовали в анализе через 5 минут и 2 недели.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение, иллюстративно описанное далее, можно соответствующим образом использовать на практике в отсутствие какого-либо элемента или элементов, ограничения или ограничений, не раскрытых специально в настоящем документе.
Настоящее изобретение будет описано со ссылкой на конкретные варианты осуществления, однако изобретение не ограничивается ими, а ограничивается лишь формулой изобретения.
Используемый в настоящем описании и формуле изобретения термин «включающий» не подразумевает исключение других элементов. Для целей настоящего изобретения термин «состоящий из» считается предпочтительным вариантом термина «включающий». Если далее в настоящем документе группу определяют, как включающую по меньшей мере определенное количество вариантов осуществления, это также следует понимать, как описание группы, которая предпочтительно состоит только из данных вариантов осуществления.
Для целей настоящего изобретения термин «полученный» считается предпочтительным вариантом термина «получаемый».
Используемая форма единственного числа существительного подразумевает и форму множественного числа данного существительного, если специально не указано иначе.
«Предварительно заполненный шприц» представляет собой шприц, предоставляемый производителем в заполненном состоянии, то есть, отмеренная доза лекарственного средства, которую предстоит вводить, уже находится в шприце при его приобретении и готова для введения. В частности, фармацевтическую композицию, содержащую лекарственное средство, не нужно отбирать из флакона, содержащего композицию, при помощи пустого шприца. Термин «предварительно заполненный шприц», используемый в контексте настоящего изобретения, не относится к шприцам, содержимое которых было отобрано из флакона в процессе перенесения в другую упаковку.
Лекарственное средство, содержащееся в предварительно заполненном шприце по настоящему изобретению, то есть, антагонист VEGF, предпочтительно анти-VEGF антитело, является стабильным при температуре 2-8°C в течение по меньшей мере шести месяцев, предпочтительно в течение по меньшей мере 9 месяцев, более предпочтительно в течение по меньшей мере одного года, особенно предпочтительно в течение по меньшей мере 18 месяцев и наиболее предпочтительно в течение примерно двух лет. Лекарственное средство, содержащееся в предварительно заполненном шприце по настоящему изобретению, то есть, антагонист VEGF, предпочтительно анти-VEGF антитело или слитый белок рецептора VEGF и более предпочтительно ранибизумаб или афлиберцепт, является стабильным при комнатной температуре, то есть, температуре от 20°C до 25°C, в течение по меньшей мере 24 часов, предпочтительно в течение по меньшей мере трех дней или одной недели, более предпочтительно в течение по меньшей мере двух или трех недель и наиболее предпочтительно в течение примерно 4 недель. Лекарственное средство, содержащееся в предварительно заполненном шприце по настоящему изобретению, то есть, антагонист VEGF, предпочтительно анти-VEGF антитело или слитый белок рецептора VEGF и более предпочтительно ранибизумаб или афлиберцепт, является стабильным при температуре примерно 40°C в течение по меньшей мере 1 часа или 2 часов, предпочтительно в течение по меньшей мере четырех или шести часов, более предпочтительно в течение по меньшей мере 10 или 12 часов и наиболее предпочтительно в течение по меньшей мере 18 или 24 часов.
Стабильность лекарственного средства в шприце можно, например, определять методом ионообменной хроматографии, с помощью которого можно обнаруживать изменения лекарственного средства, такие как окисленные и дезамидированные молекулы, или методом эксклюзионной хроматографии, с помощью которого можно обнаруживать агрегаты лекарственных средств. Описание такого анализа приведено в разделе «Примеры».
Лекарственное средство, то есть, антагонист VEGF, предпочтительно анти-VEGF антитело, считают стабильным, если сумма всех примесей, включающих агрегаты и химически измененные молекулы, составляет менее 2%, предпочтительно менее 1,5%, более предпочтительно менее 1,2% и наиболее предпочтительно менее 1% по сравнению с количеством неизмененного, не агрегированного лекарственного средства.
Лекарственное средство, содержащееся в предварительно заполненном шприце по настоящему изобретению, то есть, антагонист VEGF, предпочтительно анти-VEGF антитело или слитый белок рецептора VEGF и более предпочтительно ранибизумаб или афлиберцепт, сохраняет свою биологическую активность при хранении в условиях температуры 2-8°C в течение по меньшей мере шести месяцев, предпочтительно в течение по меньшей мере 9 месяцев, более предпочтительно в течение по меньшей мере одного года, особенно предпочтительно в течение по меньшей мере 18 месяцев и наиболее предпочтительно в течение примерно двух лет. Лекарственное средство содержащееся в предварительно заполненном шприце по настоящему изобретению, то есть, антагонист VEGF, предпочтительно анти-VEGF антитело или слитый белок рецептора VEGF и более предпочтительно ранибизумаб или афлиберцепт, сохраняет свою биологическую активность при хранении в условиях комнатной температуры, то есть, температуры от 20°C до 25°C, и относительной влажности 60% в течение по меньшей мере одного дня, предпочтительно трех дней или одной недели, более предпочтительно двух недель или трех недель и наиболее предпочтительно одного месяца. Лекарственное средство, содержащееся в предварительно заполненном шприце по настоящему изобретению, то есть, антагонист VEGF, предпочтительно анти-VEGF антитело или слитый белок рецептора VEGF и более предпочтительно ранибизумаб или афлиберцепт, сохраняет свою биологическую активность при хранении в условиях температуры примерно 40°C и относительной влажности 75% в течение по меньшей мере 1 часа или 2 часов, предпочтительно в течение по меньшей мере четырех или шести часов, более предпочтительно в течение по меньшей мере 10 или 12 часов и наиболее предпочтительно в течение по меньшей мере 18 или 24 часов.

Биологическую активность антагониста VEGF, предпочтительно анти-VEGF антитела или слитого белка рецептора VEGF и более предпочтительно ранибизумаба или афлиберцепта, можно определять путем инкубации антагониста в разных разведениях, который хранился в условиях, описанных выше, с эндотелиальными клетками пупочной вены человека (HUVEC) и VEGF и измерения индуцируемой VEGF пролиферации клеток в присутствии антагониста, то есть, используя набор для анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Blue Cell Viability Assay от компании Promega, по сравнению с клетками, не инкубированными с антагонистом. Поскольку антагонист VEGF ингибирует индуцируемую VEGF трансдукцию сигнала, индуцируемая VEGF пролиферация будет снижена, если биологически активный антагонист VEGF присутствует в образце.
Антагонист VEGF, предпочтительно анти-VEGF антитело или слитый белок рецептора VEGF и более предпочтительно ранибизумаб или афлиберцепт, сохраняет свою биологическую активность после хранения в предварительно заполненном шприце, так что индуцируемая VEGF пролиферация HUVEC ингибируется.
Компоненты предварительно заполненного шприца известны специалисту в данной области и в основном включают корпус шприца и поршень.
TM
Корпус шприца содержит определенный объем жидкой композиции, которая может выходить из корпуса через выходное отверстие, расположенное на одном конце корпуса, когда поршень под нажимом входит в корпус и движется в нем. Корпус шприца, как правило, имеет практически цилиндрическую форму. Выходное отверстие может содержать выступ, в который продолжается канал, имеющий меньший диаметр, чем остальной корпус шприца. На выходном отверстии может находиться адаптер, например, с насадкой Люэра, для соединения с иглой или другое вспомогательное устройство, такое как герметизирующее приспособление, которое способно герметизировать корпус, и его можно удалять, чтобы соединять иглу со шприцем. Такую герметизацию можно осуществлять, используя известные герметизирующие приспособления, такие как система OVS от компании Vetter Pharma International GmbH.
В предварительно заполненном шприце по настоящему изобретению выходное отверстие шприца прочно соединено с иглой, так что предварительно заполненный шприц предоставляется вместе с несъемной иглой и не нуждается в сборке перед использованием. В этом случае уменьшается риск травмирования иглой при сборке шприца перед инъекцией. Несъемная игла может быть соединена с предварительно заполненным пластиковым шприцем по настоящему изобретению без использования клея, поскольку она может быть впрессована в шприц. Напротив, для соединения иглы со стеклянным шприцем необходим клей, что может приводить к загрязнению или возрастанию окисления белков (презентация Adler на конференции PDA Europe The Universe of Pre-Filled Syringes и Injection Devices, Базель, 7-11 ноября 2011 г.; презентация Markovic на семинаре PDA Single Use Systems Workshop, Бетесда, 22-23 июня 2011 г.).
Для интравитреального введения, как правило, используют иглу 30 калибра, хотя также можно использовать иглы 31, 32, 33 и 34 калибра. Предварительно заполненный шприц может быть снабжен пассивным предохранительным приспособлением для дополнительной защиты от укола иглой после инъекции.
Предварительно заполненный шприц по настоящему изобретению включает корпус шприца, который выполнен из пластика. Предпочтительно, пластик выбирают из циклоолефинового полимера и циклоолефинового сополимера.
Циклоолефиновые сополимеры могут быть получены путем цепной сополимеризации циклических мономеров, например, 8,9,10-тринорборн-2-ена или 1,2,3,4,4a,5,8,8a-окстагидро-1,4:5,8-диметанoнафталина с этаном. Подходящими сополимерами являются сополимеры типа Topas™, которые доступны в различных категориях.
Циклоолефиновые полимеры могут быть получены, например, путем обменной полимеризации с раскрытием кольца различных циклических мономеров, с последующей гидрогенизацией. Соответствующие коммерчески доступные контейнеры, выполненные из циклоолефинового полимерного материала, включают контейнеры, произведенные из смолы CZ™, Zeonor™ и Zeonex™.
В соответствии с настоящим изобретением корпус шприца свободен от силикона, это означает, что внутренняя поверхность корпуса шприца не была обработана силиконовым маслом. Таким образом, силиконовое масло не может быть обнаружено в предварительно заполненном шприце по настоящему изобретению.

Наличие и толщину силиконовых слоев можно определять известными методами, например, с помощью Layer Explorer от компании rap.ID, что также можно использовать для измерения количества силиконового масла в корпусе шприца. Количество силиконового масла в корпусе шприца также можно измерять методами дифференциального взвешивания и путем количественного определения с помощью инфракрасной спектроскопии масла, разведенного в соответствующем растворителе.
Предпочтительно, предварительно заполненный шприц не имеет покрытия, то есть, циклоолефиновый полимерный или сополимерный материал находится в непосредственном контакте с жидкой композицией, содержащейся в шприце, и корпус шприца не содержит никакого другого материала, кроме пластика, из которого изготовлен шприц.

2
Альтернативно, предварительно заполненный шприц может иметь внутреннее покрытие, отличное от силиконового покрытия. Термин «внутреннее покрытие» означает покрытие на внутренней стороне корпуса шприца, которое находится в контакте с раствором лекарственного средства. Примеры такого внутреннего покрытия включают фторуглеродную пленку, выполненную из модифицированного сополимера этилена с тетрафторэтиленом (также называемую пленкой Flurotec, которая производится компанией West Pharmaceutical Services), и перфторполиэфирную пленку, сшитую методом Atmospheric Plasma Immobilization™ (также называемую TriboGlide, которая производится компанией TriboFilm Research и описана в WO 2005/094214 A2). Другим примером внутреннего покрытия является барьерное покрытие на основе оксида кремния, нанесенное на поверхность пластика. На слой оксида кремния могут быть нанесены дополнительные слои покрытия, в результате чего получается многослойное покрытие. Такие пластиковые шприцы, имеющие барьерное покрытие из оксида кремния и, необязательно, дополнительные слои покрытия, производятся компанией SiO и описаны в ONdrug Delivery Magazine, выпуск 45, октябрь 2013 г. и выпуск 47, февраль 2014 г., а также в WO 2014/059012 A1.
Предварительно заполненный шприц также может иметь слой в пластиковом корпусе шприца, так что шприц имеет от внешней до внутренней поверхности три слоя: внешний слой пластика, находящийся в контакте с окружающей средой, промежуточный слой, выполненный из материала, который отличается от внешнего и внутреннего слоев пластика, и внутренний слой пластика, выполненный из такого же или иного материала, чем у внешнего слоя, который находится в контакте с раствором лекарственного средства. Промежуточный слой может быть выполнен из поглощающей кислород смолы, так что шприц может иметь от внешней до внутренней поверхности следующие три слоя: циклоолефиновый сополимер - поглощающая кислород смола - циклоолефиновый сополимер. Такие шприцы продаются под названием Oxy-Capt™ компанией Mitsubishi Gas Chemical Company и описаны, например, в WO 2014/136914 A1.
Альтернативно, шприц также может иметь покрытие на внешней поверхности шприца, которая находится в контакте с окружающей средой, например, покрытие, создающее барьер для кислорода.
Корпус шприца также не содержит вольфрам, то есть, он не содержит никаких следов вольфрама, поскольку отсутствует необходимость в использовании вольфрама при производстве шприца. Таким образом, отсутствует риск вызываемой вольфрамом агрегации белков.
В одном варианте осуществления корпус шприца имеет отметку, такую как линия, нанесенная на корпус шприца, которая позволяет человеку, выполняющему инъекцию жидкой композиции, выравнивать определенную часть уплотнителя (такую как кончик передней поверхности) или поршня с отметкой. Таким образом, любой избыток жидкой композиции и возможные воздушные пузыри удаляются из корпуса шприца, что позволяет безопасно вводить точно отмеренную дозу пациенту.
Поршень возвратно-поступательно перемещается внутри корпуса шприца, позволяя выталкивать жидкий препарат через выходное отверстие шприца.
На том конце поршня, который находится в контакте с жидким препаратом, расположен уплотнитель. Уплотнительная часть, как правило, выполнена из высокоэластичного материала, такого как природный или синтетический каучук, который плотно прилегает к внутренней поверхности корпуса шприца, создавая затвор, облегчающий выталкивание жидкого препарата из шприца при надавливании на поршень.

Уплотнитель может быть покрыт фторполимерной пленкой, такой как барьерная пленка FluroTec, или пленкой из политетрафторэтилена, например, уплотнитель Omniflex. Покрытие такого типа служит в качестве эффективного барьера между лекарственным средством и эластичным материалом, снижая вероятность экстрагирования или выщелачивания, которые присущи всем материалам. Кроме того, покрытие снижает вероятность обратного процесса, когда препарат лекарственного средства может адсорбироваться или абсорбироваться в поршень. Предпочтительно, уплотнитель свободен от силикона, то есть, по меньшей мере поверхность уплотнителя, которая соприкасается с раствором лекарственного средства, и более предпочтительно весь уплотнитель не покрыт силиконовым маслом.
Шприц имеет номинальный максимальный объем заполнения, то есть, максимальный объем, который может быть набран в шприц, от 0,3 мл до 1,5 мл, предпочтительно от 0,5 мл до 1,0 мл, наиболее предпочтительно 0,5 мл или 1,0 мл. Объем жидкой композиции, набранной в шприц, составляет от примерно 0,05 мл до примерно 1 мл, предпочтительно от примерно 0,1 мл до примерно 0,5 мл, более предпочтительно от 0,14 мл до 0,3 мл и наиболее предпочтительно от 0,15 мл до 0,2 мл.
Квалифицированному специалисту известно, что в шприц, как правило, набирают объем, превышающий объем, фактически вводимый пациенту, принимая во внимание любое «мертвое пространство» внутри шприца и иглы, а также потери, связанные с подготовкой шприца для инъекции. Таким образом, объем, который фактически вводят пациенту, составляет от 0,01 мл до 1 мл, предпочтительно от 0,02 до 0,5 мл, более предпочтительно от 0,025 до 0,5 мл, еще более предпочтительно от 0,03 мл до 0,05 мл и наиболее предпочтительно объем, который фактически вводят пациенту, составляет 0,05 мл.
Ранибизумаб, как правило, вводят в объеме 0,05 мл с концентрацией ранибизумаба 6 или 10 мг/мл или в объеме 0,03 мл или 0,05 мл с концентрацией ранибизумаба 10 мг/мл, что соответствует доставляемому количеству 0,3 или 0,5 мг. Для афлиберцепта вводимый объем, как правило, составляет 0,05 мл с концентрацией афлиберцепта 40 мг/мл, что соответствует доставляемому количеству 2 мг. Как описано выше, бевацизумаб используют для лечения заболевания глаз не в соответствии с инструкцией. В этом случае, вводимый объем бевацизумаба составляет 0,05 мл с концентрацией бевацизумаба 25 мг/мл, что соответствует доставляемому количеству 1,25 мг.
Таким образом, в одном варианте осуществления шприц заполняют жидкой композицией в объеме от 0,15 мл до 0,2 мл и от 0,03 мл до 0,05 мл жидкой композиции вводят пациенту.
Термин «антагонист VEGF» означает молекулу, которая специфически взаимодействует с VEGF и ингибирует один или более видов его биологической активности, например, его митогенную, ангиогенную и/или повышающую проницаемость сосудов активность. Предусмотрено, что термин включает как анти-VEGF антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, так и не являющиеся антителами антагонисты VEGF.

et al.
Не являющиеся антителами антагонисты VEGF включают афлиберцепт, пегаптаниб и миметики антител. Предпочтительно, не являющийся антителом антагонист VEGF представляет собой афлиберцепт. Афлиберцепт, который в настоящее время продается под названием эйлеа и который также известен как ловушка VEGF, представляет собой рекомбинантный слитый белок человеческого растворимого рецептора VEGF, в котором части внеклеточных доменов рецепторов VEGF 1 и 2 человека слиты с Fc-областью IgG1 человека (Holash  (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99(17): 11393-11398; WO 00/75319 A1). Он получил разрешение на медицинское применение для лечения возрастной влажной дегенерации желтого пятна, нарушения зрения вследствие диабетического отека желтого пятна (DME) и диабетической ретинопатии у пациентов с диабетическим отеком желтого пятна. Современный коммерческий препарат афлиберцепт содержит фосфат натрия, хлорид натрия, полисорбат 20, сахарозу и воду для инъекций и предоставляется в концентрации 40 мг/мл.

et al.
Пегаптаниб, который в настоящее время продается под названием макуген, представляет собой пегилированный аптамер, направленный против фактора роста эпителия сосудов (VEGF) (Bell (1999) In Vitro Cell Dev Biol Anim. 35(9): 533-42). Миметики антител, которые являются антагонистами VEGF, включают связывающиеся белки, содержащие анкириновый повторяющийся домен, который связывает VEGF и ингибирует его связывание с рецептором, например, DARPin MP0112 (смотри также WO 2010/060748 и WO 2011/135067).
et al.
Термин «анти-VEGF антитело» означает антитело или фрагмент антитела, такой как Fab или scFV фрагмент, который специфически связывается с VEGF и ингибирует один или более видов его биологической активности, например, его митогенную, ангиогенную и/или повышающую проницаемость сосудов активность. Анти-VEGF антитела действуют, например, препятствуя связыванию VEGF с клеточным рецептором, препятствуя активации эндотелиальных клеток сосудов после связывания VEGF с клеточным рецептором или уничтожая клетки, активированные VEGF. Анти-VEGF антитела включают, например, антитела A4.6.1, бевацизумаб, ранибизумаб, G6, B20, 2C3, а также другие, описанные, например, в WO 98/45331, US 2003/0190317, US 6582959, US 6703020, WO 98/45332, WO 96/30046, WO 94/10202, WO 2005/044853, EP 0 666 868 B1, WO 2009/155724 и статье Popkov  (2004) J. Immunol. Meth. 288: 149-64. Предпочтительно, анти-VEGF антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент, присутствующее в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, представляет собой ранибизумаб или бевацизумаб. Наиболее предпочтительно, оно представляет собой ранибизумаб или его антигенсвязывающий фрагмент.
et al.
Escherichia coli
«Ранибизумаб» представляет собой Fab-фрагмент гуманизированного моноклонального антитела против VEGF-A, содержащий последовательности вариабельных доменов легкой и тяжелой цепей Y0317, соответствующие SEQ ID Nos. 115 и 116, которые приведены в WO 98/45331 и статье Chen  (1999) J. Mol. Biol. 293: 865-81. CAS номер ранибизумаба 347396-82-1. Ранибизумаб ингибирует пролиферацию эндотелиальных клеток и неоваскуляризацию и был одобрен для лечения неоваскулярной (влажной) возрастной дегенерации желтого пятна (AMD), лечения нарушения зрения вследствие диабетического отека желтого пятна (DME), лечения нарушения зрения вследствие вторичного диабетического отека желтого пятна при окклюзии вен сетчатки (окклюзии ветвей центральной ВС или окклюзии центральной ВС) или лечения нарушения зрения вследствие вторичной хориоидальной неоваскуляризации (CNV) при патологической миопии. Ранибизумаб является родственным препаратом для бевацизумаба и происходит из того же родительского мышиного антитела, что и бевацизумаб, однако имеет гораздо меньший размер, чем родительская молекула, и был подвергнут созреванию аффинности для более сильного связывания с VEGF-A. Ранибизумаб получают рекомбинантными методами в , например, как описано в WO 98/45331 A2. Современный коммерческий препарат ранибизумаба содержит α,α-трегалозы дигидрат, гистидина гидрохлорид моногидрат, гистидин, полисорбат 20 и воду для инъекций и предоставляется в концентрации 10 мг/мл.
«Бевацизумаб» представляет собой полноразмерное, гуманизированное мышиное моноклональные антитело, которое узнает все изоформы VEGF и которое является родительским антителом для ранибизумаба. CAS номер бевацизумаба 216974-75-3. Бевацизумаб ингибирует ангиогенез и в настоящее время одобрен для лечения различных форм рака. Однако его также используют не в соответствии с инструкцией при офтальмологических заболеваниях, таких как возрастная дегенерация желтого пятна. Современный коммерческий препарат бевацизумаба содержит α,α-трегалозы дигидрат, фосфат натрия, полисорбат 20 и воду для инъекций и предоставляется в концентрации 25 мг/мл.
Концентрация антитела в предварительно заполненных шприцах по настоящему изобретению, как правило, составляет 1-100 мг/мл, предпочтительно 2-75 мг/мл, более предпочтительно 3-50 мг/мл, еще более предпочтительно 5-30 мг/мл и наиболее предпочтительно 6 или 10 мг/мл. Если в предварительно заполненном шприце по настоящему изобретению содержится ранибизумаб, концентрация ранибизумаба составляет 10 мг/мл.
Жидкая композиция в предварительно заполненном шприце по настоящему изобретению имеет низкое содержание частиц. В частности, она содержит менее 50 частиц, имеющих размер более 10 мкм, после переворачивания шприца при температуре 40°C в течение пяти минут, двух недель или четырех недель, или после трех циклов замораживания-размораживания от +5°C до -20°C со скоростью 1°C в минуту, или после хранения шприца при 5°C или 25°C и относительной влажности 60% в течение трех месяцев. Альтернативно или дополнительно, она содержит менее 5 частиц, имеющих размер более 25 мкм, после переворачивания шприца при температуре 40°C в течение пяти минут, двух недель или четырех недель, или после трех циклов замораживания-размораживания от +5°C до -20°C со скоростью 1°C в минуту, или после хранения шприца при 5°C или 25°C/относительной влажности 60% в течение трех месяцев. Таким образом, предварительно заполненный шприц соответствует требованиям Фармакопеи США <789> для офтальмических растворов в отношении частиц таких размеров.
Кроме того, предварительно заполненный шприц по настоящему изобретению имеет превосходные характеристики трения скольжения. В частности, сила, необходимая для начала движения, то есть, сила, необходимая для начала движения поршня, составляет менее 10 Н или 9 Н, предпочтительно менее 8 Н или 7 Н, более предпочтительно менее 6 Н и наиболее предпочтительно менее 5 Н. Сила, необходимая для начала движения, не меняется существенно, то есть, более чем на 10%, при хранении шприца в течение продолжительного периода времени, например, восьми недель. Напротив, в шприце, содержащем силикон, сила, необходимая для начала движения, при хранении возрастает по меньшей мере в два раза.
Кроме того, сила трения скольжения, то есть, сила, необходимая для продолжения движения поршня в корпусе шприца для выталкивания жидкой композиции, составляет менее 10 Н, предпочтительно менее 9 Н, более предпочтительно менее 8 Н и наиболее предпочтительно менее 7 Н. В особенно предпочтительном варианте осуществления отсутствует существенная разница между силой, необходимой для начала движения, и силой трения скольжения.
Настоящее изобретение также относится к набору, включающему один или более предварительно заполненных шприцев по настоящему изобретению. Предпочтительно, набор представляет собой блистерную упаковку. «Блистерная упаковка» имеет полость или карман, который, как правило, выполнен из термоформованного пластика, и подложку из картона или покровную пластину из алюминиевой фольги или пластика. Блистерная упаковка может быть асептически стерильной до того, как стерильный шприц упаковывают в нее в асептических условиях. Таким образом, никакой стерилизации не требуется после упаковки. Набор может дополнительно включать иглу, если у предварительно заполненного шприца отсутствует несъемная игла. Набор может дополнительно включать инструкции по применению.
Предпочтительно, набор не включает поглотитель кислорода, который, как правило, используют для снижения уровня кислорода в упаковке, такой как блистерная упаковка. Поглотители кислорода, как правило, содержат такое вещество, как карбонат или аскорбат железа, которое вступает в реакцию с кислородом, находящимся в упаковке, с высоким сродством, тем самым снижая содержание кислорода в упаковке.
«Неоваскулярное заболевание глаз» представляет собой заболевание, характеризующееся неоваскуляризацией глаз. Примеры неоваскулярных заболеваний глаз включают, например, пролиферативные ретинопатии, хориоидальную неоваскуляризацию (CNV), возрастную дегенерацию желтого пятна (AMD), диабетическую и другие связанные с ишемией ретинопатии, диабетический отек желтого пятна, диабетическую ретинопатию у пациентов с диабетическим отеком желтого пятна, патологическую миопию, болезнь Гиппеля-Линдау, гистоплазмоз глаз, окклюзию центральной вены сетчатки (CRVO), окклюзию ветвей центральной вены сетчатки (BRVO), неоваскуляризацию роговицы и неоваскуляризацию сетчатки. Термин «возрастная дегенерация желтого пятна» означает медицинское состояние, от которого обычно страдают пожилые люди, и которое приводит к потере зрения в центре поля зрения (желтом пятне) вследствие повреждения сетчатки.
Предпочтительно, предварительно заполненный шприц предназначен для выполнения интравитреальной инъекции антагониста VEGF, определенного в настоящем документе.
Термин «интравитреальная инъекция» означает введение фармацевтической композиции, при котором вещество инъецируют непосредственно в глаз. Более конкретно, вещество инъецируют в жидкость стекловидного тела (также называемую стекловидным телом глаза или просто стекловидным телом), представляющую собой прозрачный гель, заполняющий пространство между хрусталиком и сетчаткой глазного яблока у людей и других позвоночных.
Хотя изобретение проиллюстрировано и описано подробно в чертежах и приведенном выше описании, такую иллюстрацию и описание следует воспринимать лишь как иллюстративные и примерные, но не ограничительные. Изобретение не ограничено раскрытыми вариантами осуществления. Другие версии раскрытых вариантов осуществления могут быть поняты и осуществлены специалистами в данной области при применении на практике заявленного изобретения, на основании изучения чертежей, описания и соответствующей формулы изобретения.
Подробное описание является всего лишь иллюстративным по своему характеру и не предназначено для ограничения области применения и вариантов использования. Следующие далее примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение, однако объем изобретения не ограничен ими. Различные изменения и модификации могут быть осуществлены специалистами в данной области на основании описания изобретения, и такие изменения и модификации также включены в настоящее изобретение.
ПРИМЕРЫ
1. Определение частиц различных размеров в разных пластиковых и стеклянных шприцах, содержащих ранибизумаб и подвергнутых воздействию различных условий
400 мкл раствора анти-VEGF антитела ранибизумаба, содержащего 1 мг/мл антитела и гистидиновый буфер, трегалозы дигидрат, полисорбат 20, pH 5,5, набирали в следующие шприцы:
Таблица 1:
<b>No.</b>
<b>Размер шприца</b>
<b>Корпус шприца</b>
<b>Тип шприца</b>
<b>Уровень силикона [мг]</b>
<b>Клей и вольфрам</b>
<b>1</b>
1,0 мл
циклоолефиновый полимер
несъемная игла
без силикона
нет
<b>2</b>
1,0 мл
боросиликатное стекло
насадка Люэра
запеченный силикон
нет
<b>3</b>
1,0 мл
боросиликатное стекло
насадка Люэра
0,6
нет
<b>4</b>
0,5 мл
циклоолефиновый полимер
насадка Люэра
0,6
нет
<b>5</b>
0,5 мл
боросиликатное стекло
несъемная игла
0,6
да
<b>6</b>
0,5 мл
боросиликатное стекло
несъемная игла
0,6
да
<b>7</b>
1,0 мл
поликарбонат
насадка Люэра
1,0
нет
<b>8</b>
1,0 мл
циклоолефиновый полимер
несъемная игла
без силикона
нет
<b>9</b>
1,0 мл
боросиликатное стекло
несъемная игла
<0,2
да
<b>10</b>
1,0 мл
боросиликатное стекло
несъемная игла
0,4-0,6
да
Шприцы из таблицы 1 переворачивали, перемещая содержимое от иглы до уплотнителя, со скоростью 1 цикл/10 секунд при температуре 40°C в течение пяти минут, двух недель и четырех недель или подвергали пяти циклам замораживания/размораживания (от +5 до -20°C со скоростью 1°C/мин). После этого определяли количество частиц методом светорассеяния с помощью настольной системы FlowCam PV (Fluid Imaging Technologies Inc., Maine, USA), используя программу системы (VisualSpreadsheet software, version 3.4.8) и следующие параметры:
Режим
AutoImage
Метод заливки
автоматическая заливка
Скорость потока
0,040 мл/мин
Повторные калибровки
0
Причина остановки
Объем образца обработан
Объем образца, аспирированный
0,2900 мл
Объем образца, обработанный
0,2893 мл
Объем жидкости, визуализированный
0,1822 мл
Эффективность
63,0%
Частота смены кадров
22,00 к/с
Увеличение
10X
Калибровочный коэффициент
0,6979
Размер шприца
1,00 мл
Результаты анализа представлены на фигурах 1 и 2. Предварительно заполненные шприцы 1 и 8 из циклоолефинового полимера без силикона имели низкое содержание частиц во всех протестированных условиях.
Кроме того, были протестированы шприцы, указанные в таблице 2:
Таблица 2:
<b>No.</b>
<b>Размер шприца</b>
<b>Корпус шприца</b>
<b>Тип шприца</b>
<b>Уровень силикона [мг]</b>
<b>Клей и вольфрам</b>
<b>2</b>
1,0 мл
боросиликатное стекло
насадка Люэра
запеченный силикон
нет
<b>11</b>
1,0 мл
циклоолефиновый полимер
насадка Люэра
без силикона
нет
<b>12</b>
1,0 мл
циклоолефиновый полимер
насадка Люэра
1,5
нет
<b>13</b>
1,0 мл
боросиликатное стекло
несъемная игла
0,7
да
<b>14</b>
1,0 мл
боросиликатное стекло
несъемная игла
0,25 ± 0,2
да
Шприц № 11 имеет такой же корпус, как и шприц 1 из таблицы 1, однако он снабжен насадкой Люэра вместо несъемной иглы.
Шприцы из таблицы 2 инкубировали при температуре 5°C в течение трех, шести и двенадцати месяцев, при температуре 25°C/относительной влажности 60% в течение двух недель, одного месяца и трех месяцев, и при температуре 40°C/относительной влажности 75% без переворачивания, а затем анализировали, как описано выше для шприцев из таблицы 1.
Предварительно заполненный шприц 11 из циклоолефинового полимера без силикона имел низкое содержание частиц во всех протестированных условиях.
2. Определение стабильности ранибизумаба в разных пластиковых и стеклянных шприцах, подвергнутых стрессовым условиям
Шприцы, указанные выше в таблице 1, подвергали стрессовым условиям, описанным в примере 1 для шприцев из таблицы 1. Кроме того, шприцы, указанные выше в таблице 2, подвергали условиям, описанным в примере 1 для шприцев из таблицы 2.
Затем образцы анализировали методом ОФ-ВЭЖХ на наличие гидрофильных и гидрофобных молекул, методом катионообменной хроматографии на наличие кислых и щелочных вариантов антитела и методом эксклюзионной хроматографии на наличие агрегатов.
a) ОФ-ВЭЖХ анализ
Образцы белка из шприцев наносили на колонку ZORBAX 300SB-C18, 4,6×100 мм, 3,5 мкм, для обнаружения гидрофильных и гидрофобных примесей.
Белок элюировали градиентом элюэнта A (0,1% трифторуксусная кислота в воде) и элюента B (0,1% трифторуксусная кислота в смеси 70% ацетонитрила, 20% 1-пропанола и 10% воды), как указано в следующей таблице 3:
Время [мин]
Поток [мл/мин]
Состав растворителя Элюент A [%]
Состав растворителя Элюент B [%]
0
1,0
100
0
7
1,0
62,5
37,5
10
1,0
62,5
37,5
26
1,0
58,5
41,5
31
1,0
58,5
41,5
33
1,0
0
100
35
1,0
0
100
37
1,0
100
0
45
1,0
100
0
Элюированные молекулы определяли и строили для них график, показывающий зависимость концентрации элюированных молекул от времени. Профиль элюции имел основной пик, соответствующий не модифицированному белку, и несколько дополнительных пиков, элюированных до и после основного пика, соответствующих гидрофильным и гидрофобным вариантам белка, соответственно. Определяли общую площадь всех пиков, а также площадь отдельных пиков. Фигуры 3 и 4 демонстрируют процентную долю площади пиков для гидрофильных молекул и гидрофобных молекул, соответственно, относительно общей площади пиков элюированных молекул для шприцев из таблицы 1.
b) Анализ методом катионного обмена
Образцы белка из шприцев наносили на колонку Dionex, BioLCProPac WCX-10, 4,0×250 мм, 10 мкм, для обнаружения кислых и щелочных вариантов белка.
Белок элюировали градиентом подвижной фазы A (20 мМ калий-фосфатный буфер, pH 6,0) и подвижной фазы B (250 мМ KCl, 20 мМ калий-фосфатный буфер, pH 6,0), как указано в следующей таблице 4:
Время [мин]
Состав растворителя [%-B]
Состав растворителя [мМ KCl]
0
0
0
3
0
0
33
50
125
35
50
125
36
0
0
40
0
0
Элюированные молекулы определяли и строили для них график, показывающий зависимость концентрации элюированных молекул от времени. Профиль элюции имел основной пик, соответствующий не модифицированному белку, и несколько дополнительных пиков, элюированных до и после основного пика, соответствующих кислым и щелочным вариантам белка, соответственно. Определяли общую площадь всех пиков, а также площадь отдельных пиков. Фигуры 5 и 6 демонстрируют процентную долю площади пиков для кислых вариантов и щелочных вариантов, соответственно, относительно общей площади пиков элюированных молекул для шприцев из таблицы 1.
c) Эксклюзионная хроматография
Образцы белка из шприцев наносили на колонку YMC-Pack Diol-200, 5 мкм, 20 нм (8,0×300 мм) для обнаружения агрегатов белка.
Белок элюировали методом изократической элюции с использованием 0,1 M фосфата калия и 0,2 M хлорида натрия. Элюированные молекулы определяли и строили для них график, показывающий зависимость концентрации элюированных молекул от времени. Профиль элюции имел основной пик, соответствующий не агрегированному белку, и несколько дополнительных пиков белка, соответствующих агрегированным формам белка. Определяли площадь всех пиков. Фигура 7 демонстрируют процентную долю площади пиков для агрегатов относительно общей площади пиков элюированных молекул для шприцев из таблицы 1.
Из результатов, представленных на фигурах 3-7, видно, что в протестированных условиях стабильность ранибизумаба является сопоставимой в предварительно заполненных пластиковых шприцах по настоящему изобретению (шприцы 1 и 8) и стеклянных шприцах.
3. Определение сил трения скольжения в разных пластиковых и стеклянных шприцах, содержащих ранибизумаб
Шприцы 1, 2, 7, 8 и 9, указанные выше в таблице 1, тестировали на силы, прилагаемые для движения в них уплотнителя, то есть, силу, необходимую для начала движения, и силу трения скольжения. Для этого 0,165 мл раствора, содержащего анти-VEGF антитело ранибизумаб в концентрации 10 мг/мл, а также 10 мМ гистидиновый буфер, 10% (масс/об) трегалозы дигидрата, 0,01% (масс/об) полисорбата 20, pH 5,5, набирали в вышеуказанные шприцы. Перед тестированием 30 G x 0,5" иглы закрепляли на шприцах с насадкой Люэра. Тестирование проводили при скорости движения уплотнителя 190 мм/мин на расстоянии 10,9 мм в динамометре (TH2730, Thümler).
Результаты теста приведены в таблице 5, ниже.
Таблица 5:
№ 1
№ 2
№ 7
№ 8
№ 10
Сила, необходимая для начала движения
Среднее для 5 шприцев
3,4 Н
3,4 Н
0,4 Н
3,5 Н
3,5 Н
Максимальное индивидуальное значение
3,8 Н
3,6 Н
0,8 Н
4,1 Н
3,8 Н
Сила трения скольжения
Среднее для 5 шприцев
3,0 Н
10,4 Н
1,9 Н
6,1 Н
4,7Н
Максимальное индивидуальное значение
4,0 Н
11,2 Н
2,3 Н
6,5 Н
5,1 Н
Предварительно заполненные шприцы 1 и 8 из циклоолефинового полимера без силикона, то есть, шприцы по настоящему изобретению, имели показатели скольжения, которые были сопоставимы или даже превосходили таковые у шприцев 2 и 10, которые были покрыты силиконовым маслом.
Кроме того, шприцы, перечисленные выше в таблице 2, тестировали на силы, прилагаемые для движения в них уплотнителя, то есть, силу, необходимую для начала движения, и силу трения скольжения. Для этого 0,165 мл раствора, содержащего 10 мМ гистидиновый буфер, pH 5,5, 10% (масс/об) трегалозы дигидрата, 0,01% полисорбата 20, набирали в вышеуказанные шприцы. Перед тестированием 30 G x 0,5" иглы закрепляли на шприцах с насадкой Люэра. Тестирование проводили при скорости движения уплотнителя 190 мм/мин на расстоянии 10,9 мм в динамометре (TH2730, Thümler).
Предварительно заполненный шприц 11 из циклоолефинового полимера без силикона, то есть, шприц по настоящему изобретению, имел показатели скольжения, которые были сопоставимы или даже превосходили таковые у шприцев, которые были покрыты силиконовым маслом.
4. Определение частиц различных размеров в разных пластиковых и стеклянных шприцах, содержащих афлиберцепт и подвергнутых воздействию различных условий
400 мкл раствора слитого белка рецептора VEGF афлиберцепта, содержащего 1 мг/мл антитела и 10 мМ натрий-фосфатный буфер, 40 мМ хлорид натрия, 5% (масс/об) сахарозы, 0,03% (масс/об) полисорбата 20, pH 6,2, набирали в следующие шприцы:
Таблица 6:
<b>No.</b>
<b>Размер шприца</b>
<b>Корпус шприца</b>
<b>Тип шприца</b>
<b>Уровень силикона [мг]</b>
<b>Клей и вольфрам</b>
<b>2</b>
1,0 мл
боросиликатное стекло
насадка Люэра
запеченный силикон
нет
<b>11</b>
1,0 мл
циклоолефиновый полимер
насадка Люэра
без силикона
нет
<b>12</b>
1,0 мл
циклоолефиновый полимер
насадка Люэра
1,5
нет
<b>13</b>
1,0 мл
боросиликатное стекло
несъемная игла
0,7
да
<b>14</b>
1,0 мл
боросиликатное стекло
несъемная игла
0,25 ± 0,2
да
Шприцы из таблицы 6 переворачивали, перемещая содержимое от иглы до уплотнителя, со скоростью 1 цикл/10 секунд при температуре 40°C в течение пяти минут, двух недель и четырех недель или подвергали пяти циклам замораживания/размораживания (от +5 до -20°C со скоростью 1°C/мин). Шприцы также инкубировали при температуре 5°C в течение трех, шести и двенадцати месяцев, при температуре 25°C/относительной влажности 60% в течение двух недель, одного месяца и трех месяцев, и при температуре 40°C/относительной влажности 75% без переворачивания, а затем анализировали, как описано выше для шприцев из таблицы 1.
5. Определение сил трения скольжения в разных пластиковых и стеклянных шприцах, содержащих афлиберцепт
Шприцы, указанные выше в таблице 6, тестировали на силы, прилагаемые для движения в них уплотнителя, то есть, силу, необходимую для начала движения, и силу трения скольжения. Для этого 0,165 мл раствора, содержащего слитый белок рецептора VEGF афлиберцепт в концентрации 40 мг/мл и 10 мМ натрий-фосфатный буфер, 40 мМ хлорид натрия, 5% (масс/об) сахарозы, 0,03% (масс/об) полисорбата 20, pH 6,2, набирали в вышеуказанные шприцы. Перед тестированием 30 G x 0,5" иглы закрепляли на шприцах с насадкой Люэра. Тестирование проводили при скорости движения уплотнителя 190 мм/мин на расстоянии 10,9 мм в динамометре (TH2730, Thümler).