ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ

1. Способ количественного определения нескольких антиген-специфических иммуноглобулинов в анализируемом образце, включающий следующие стадии:
(i) анализ связывания серии образцов, содержащих иммуноглобулин известной антигенной реактивности, с несколькими антигенными компонентами или их фрагментами, иммобилизованными на первой твердой подложке,
(ii) сравнение уровня связывания на стадии (i) с известной реактивностью для получения кривой зависимости "доза-эффект" для каждого антигенного компонента или его фрагмента,
(iii) анализ связывания серийных разведений образца стандартного препарата иммуноглобулина того же подтипа иммуноглобулина, который используется на стадии (i), с известным общим количеством иммуноглобулина, с серийными разведениями анти-иммуноглобулиновых антител, их фрагментов или производных, иммобилизованных на первой или второй твердой подложке,
(iv) сравнение уровня связывания на стадии (iii) с известным общим количеством стандартного препарата иммуноглобулина для получения кривой зависимости, описывающей связывающую способность для каждого разведения антииммуноглобулинового антитела, фрагмента или производного,
(v) сравнение кривых зависимостей "доза-ответ", полученных на стадии (ii), с кривыми зависимостей, описывающих связывающую способность, полученными на стадии (iv), выявление кривой зависимости, описывающей связывающую способность, которая в наибольшей степени соответствует кривой зависимости "доза-ответ" для каждого антигена или его фрагмента, и приписывание кривой зависимости, описывающей связывающую способность, каждому антигену или его фрагменту на данной основе,
(vi) анализ связывания антиген-специфического иммуноглобулина в анализируемом образце с антигенными компонентами или их фрагментами, иммобилизованными на первой, второй или третьей твердой подложке, и
(vii) сравнение уровня связывания на стадии (vi), в отношении каждого отдельного антигена или его фрагмента, с кривой зависимости, описывающей связывающую способность, установленной для данного антигена или его фрагмента на стадии (v), и количественное определение уровня антиген-специфического иммуноглобулина, присутствующего в анализируемом образце.
2. Способ по п. 1, в котором кривые зависимостей, описывающих связывающую способность, полученные на стадии (iv), объединены в группы репрезентативных кривых зависимостей, описывающих связывающую способность для представления различных уровней связывающей способности, например, очень сильное связывание, сильное связывание, среднее связывание и слабое связывание, и в котором сравнение на стадии (v) осуществляют по отношению к кривым зависимостей "доза-ответ", полученным на стадии (ii), и к репрезентативным кривым зависимостей, описывающих связывающую способность, а не по отношению к кривым зависимостей, описывающих связывающую способность, полученным на стадии (iv).
3. Способ калибровки устройства, подходящий для анализа связывания нескольких антиген-специфических иммуноглобулинов с несколькими антигенами или их фрагментами, иммобилизованными на твердой подложке, включающий следующие стадии:
(i) анализ связывания серии образцов, содержащих иммуноглобулин известной антигенной реактивности, с несколькими антигенными компонентами или их фрагментами, иммобилизованными на первой твердой подложке,
(ii) сравнение уровня связывания на стадии (i) с известной реактивностью для получения кривой зависимости "доза-эффект" для каждого антигенного компонента или его фрагмента,
(iii) анализ связывания серийных разведений образца стандартного препарата иммуноглобулина того же подтипа иммуноглобулина, который используется на стадии (i), с известным общим количеством иммуноглобулина серийных разведений антииммуноглобулиновых антител, их фрагментов или производных, иммобилизованных на первой или второй твердой подложке,
(iv) сравнение уровня связывания на стадии (iii) с известным общим количеством стандартного препарата иммуноглобулина для получения кривой зависимости, описывающей связывающую способность, для каждого разведения антииммуноглобулинового антитела, фрагмента или производного,
(v) сравнение кривых зависимостей "доза-ответ", полученных на стадии (ii), с кривыми зависимостей, описывающих связывающую способность, полученными на стадии (iv), выявление кривой зависимости, описывающей связывающую способность, которая в наибольшей степени соответствует кривой зависимости "доза-ответ" для каждого антигена или его фрагмента, и приписывание кривой зависимости, описывающей связывающую способность, каждому антигену или его фрагменту на данной основе,
(vi) ввод кривых зависимостей, описывающих связывающую способность, полученных на стадии (v), в устройство таким образом, что кривые зависимостей, описывающих связывающую способность для каждого антигена, могут быть интерполированы с сигналами, полученными от образцов, содержащих неизвестные количества иммуноглобулина, который специфически связывает данный антиген.
4. Способ по п. 3, в котором кривые зависимостей, описывающих связывающую способность, полученные на стадии (iv), объединены в группы репрезентативных кривых зависимостей, описывающих связывающую способность для представления различных уровней связывающей способности, например, очень сильное связывание, сильное связывание, среднее связывание и слабое связывание, и в котором сравнение на стадии (v) осуществляют по отношению к кривым зависимостей "доза-ответ", полученным на стадии (ii), и к репрезентативным кривым зависимостей, описывающих связывающую способность, а не по отношению к кривым зависимостей, описывающих связывающую способность, полученным на стадии (iv).
5. Способ по п. 1, в котором антигены являются рекомбинантными или получены из натурального экстракта, или являются их комбинацией и необязательно, в котором антигены являются очищенными.
6. Способ по п. 2, в котором антигены являются рекомбинантными или получены из натурального экстракта, или являются их комбинацией и необязательно, в котором антигены являются очищенными.
7. Способ по п. 3, в котором антигены являются рекомбинантными или получены из натурального экстракта, или являются их комбинацией и необязательно, в котором антигены являются очищенными.
8. Способ по п. 4, в котором антигены являются рекомбинантными или получены из натурального экстракта, или являются их комбинацией и необязательно, в котором антигены являются очищенными.
9. Способ по п. 1, в котором антигены представляют собой аллергены, иммуноглобулин представляет собой IgE и антииммуноглобулиновые антитела представляют собой анти-IgE-антитела.
10. Способ по п. 2, в котором антигены представляют собой аллергены, иммуноглобулин представляет собой IgE и антииммуноглобулиновые антитела представляют собой анти-IgE-антитела.
11. Способ по п. 3, в котором антигены представляют собой аллергены, иммуноглобулин представляет собой IgE и антииммуноглобулиновые антитела представляют собой анти-IgE-антитела.
12. Способ по п. 4, в котором антигены представляют собой аллергены, иммуноглобулин представляет собой IgE и антииммуноглобулиновые антитела представляют собой анти-IgE-антитела.
13. Способ по п. 5, в котором антигены представляют собой аллергены, иммуноглобулин представляет собой IgE и антииммуноглобулиновые антитела представляют собой анти-IgE-антитела.
14. Способ по п. 6, в котором антигены представляют собой аллергены, иммуноглобулин представляет собой IgE и антииммуноглобулиновые антитела представляют собой анти-IgE-антитела.
15. Способ по п. 7, в котором антигены представляют собой аллергены, иммуноглобулин представляет собой IgE и антииммуноглобулиновые антитела представляют собой анти-IgE-антитела.
16. Способ по п. 8, в котором антигены представляют собой аллергены, иммуноглобулин представляет собой IgE и антииммуноглобулиновые антитела представляют собой анти-IgE-антитела.
17. Набор, состоящий из частей, содержащий:
a) тест-систему для определения нескольких аллергенов, содержащую серийные разведения анти-IgE-антител, их фрагментов или производных, иммобилизованных на твердой подложке, и необязательно дополнительно содержащий аллергенные компоненты или их фрагменты, иммобилизованные на первой или второй твердой подложке; и
b) одно или более из следующего:
i) образец стандартного препарата IgE;
ii) первый препарат антител, содержащий первые антитела, которые связываются с IgE;
iii) второй препарат антител, содержащий вторые антитела, которые специфически связываются с первыми антителами;
iv) третий препарат антител, содержащий третьи антитела, которые специфически связываются со вторыми антителами; и
в котором или вторые антитела или третьи антитела конъюгированы с детектируемым маркером.
18. Набор по п. 17, в котором антигены являются рекомбинантными или получены из натурального экстракта или являются их комбинацией и необязательно, в котором антигены являются очищенными.
19. Набор по любому из пп. 17 или 18, в котором детектируемый маркер представляет собой фермент, например пероксидазу хрена (HRP).
20. Набор по любому из пп. 17 или 18, в котором детектируемый маркер представляет собой хемилюминесцентный остаток, радиоактивный остаток или флуоресцентный остаток.
21. Способ по любому из пп. 1 или 2, в котором твердая подложка представляет собой микроматричный чип.
22. Способ по любому из пп. 3-16, в котором твердая подложка представляет собой микроматричный чип.
23. Набор по любому из пп. 17 или 18, в котором твердая подложка представляет собой микроматричный чип.