ВЫДЕЛЕНИЕ НЕРАСТВОРИМОГО ФЕРМЕНТА ИЗ ФЕРМЕНТНОГО БУЛЬОНА И СОСТАВЛЕНИЕ НЕРАСТВОРИМОГО ФЕРМЕНТА

1. Способ выделения нерастворимого фермента из микробного бульона, содержащего микробные клетки и/или клеточный дебрис, полученный из микробных клеток, включающий выделение нерастворимого фермента из микробного бульона без удаления микробных клеток и/или клеточного дебриса, приводящее, таким образом, к образованию композиции, содержащей выделенный нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис, в которой по меньшей мере часть фермента нерастворима в микробном бульоне.
2. Способ по п.1, в котором указанный микробный бульон получается посредствам способа, выбираемого из:
составления смеси фермента с содержащим микробные клетки и/или клеточный дебрис микробным бульоном, в котором микробные клетки не продуцируют фермент и в котором фермент является нерастворимым или растворимым и в том случае способ далее включает перевод по крайней мере части фермента в нерастворимую форму путем добавления преципитирующего агента;
добавления преципитирующего агента к микробному бульону, содержащему растворимый фермент, экспрессируемый микробными клетками, вызывающего, таким образом, переход по меньшей мере части фермента в нерастворимую форму; и
экспрессии микробными клетками фермента в микробном бульоне, в котором по меньшей мере часть фермента является нерастворимой.
3. Способ по п.1, в котором указанный процесс выделения включает по меньшей мере одну процедуру выделения, выбираемую из подготовки бульона; клеточного лизиса; гомогенизации; диафильтрации; и разделения твердой и жидкой фаз,
в котором указанный процесс выделения включает выполнение двух или более указанных процедур выделения, указанные процедуры выделения могут быть осуществлены в любом порядке.
4. Способ по п.1, в котором указанный процесс выделения включает удаление по меньшей мере части жидкой фазы из микробного бульона.
5. Способ по п.4, в котором удаление по меньшей мере части жидкой фазы микробного бульона включает концентрирование микробного бульона.
6. Способ по п.5, в котором концентрирование микробного бульона включает процесс мембранной фильтрации, выбираемый из ультрафильтрации, микрофильтрации, обратного осмоса и нанофильтрации.
7. Способ по п.4, в котором удаление по меньшей мере части жидкой фазы микробного бульона включает процесс, выбираемый из фильтрации при помощи вакуумного фильтра с вращающимся барабаном, плиточно-рамного фильтрпресса, ленточного фильтра, центрифугирования, разделения при помощи циклонного сепаратора, декантирования, выпаривания.
8. Способ по п.1, в котором указанный нерастворимый фермент получается путем добавления к микробному бульону, содержащему растворимый фермент, преципитирующего агента, переводящего по меньшей мере часть фермента в нерастворимую в микробном бульоне форму, в котором преципитирующий агент выбирается из изменения рН, изменения температуры, добавления соли, добавления кислоты, добавления основания, добавления по меньшей мере одного другого белка, добавления буфера, добавления полиэлектролита или их комбинации.
9. Способ по п.1, в котором композиция включает выделенный нерастворимый фермент, включающий интактные микробные клетки.
10. Способ по п.9, в котором интактные микробные клетки представлены живыми клетками.
11. Способ по п.9, в котором интактные микробные клетки представлены мертвыми клетками.
12. Способ по п.1, в котором указанный микробный бульон включает микробные клетки и/или клеточный дебрис, включающий микробный клеточный лизат, в котором указанный микробный клеточный лизат получается путем разрушения микробных клеточных мембран.
13. Способ по п.9, в котором данный способ также включает разрушение микробных клеточных мембран интактных микробных клеток с целью получения микробного клеточного лизата, содержащего выделенный нерастворимый фермент.
14. Способ по п.12 или 13, в котором разрушение микробных клеточных мембран включает взаимодействие микробных клеток с ферментом, пригодным для осуществления лизиса микробных клеток.
15. Способ по п.14, в котором пригодный для клеточного лизиса фермент представляет собой лизоцим.
16. Способ по п.13, в котором разрушение микробных клеточных мембран включает процесс механической деформации, выбираемой, например, из гомогенизации; смешивания с большим сдвиговым усилием; прессования под давлением; перекачивания с большим сдвиговым усилием.
17. Способ по п.13, также включающий гомогенизацию микробного клеточного лизата с целью получения гомогенизированного микробного клеточного лизата.
18. Способ по п.17, дополнительно включающий диафильтрацию микробиального клеточного лизата.
19. Способ по п.1, в котором микробные клетки представляют собой бактериальные клетки.
20. Способ по п.19, в котором бактериальные клетки представляют собой клетки Bacillus.
21. Способ по п.20, в котором клетки Bacillus представляют собой клетки Bacillus subtilis пли Bacillus licheniformis.
22. Способ по п.1, в котором микробные клетки представляют собой грибные клетки.
23. Способ по п.22, в котором грибные клетки представляют собой клетки Trichoderma.
24. Способ по п.23, в котором клетки Trichoderma представляют собой клетки Trichoderma reesei.
25. Способ по п.1, в котором по меньшей мере 10% фермента нерастворимо в микробном бульоне.
26. Способ по п.1, в котором чистота нерастворимого фермента возрастает по меньшей мере на 10% по сравнению с чистотой нерастворимого фермента до указанного процесса выделения.
27. Композиция, получаемая согласно способу по п.1, причем указанная композиция включает нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис.
28. Композиция по п.27, дополнительно включающая по меньшей мере один рецептурный ингредиент.
29. Способ получения очищенного жидкого раствора фермента, включающий
(а) получение композиции, содержащей нерастворимый фермент и микробные клетки или клеточный дебрис;
(б) растворение по меньшей мере части нерастворимого фермента путем добавления одной или более субстанции, растворяющей фермент и/или изменяющей физические параметры таким образом, что по меньшей мере часть фермента становится растворимой, и приводя, таким образом, к образованию раствора растворенного фермента; и
(с) удаление твердых компонентов из раствора, приготовленного на стадии (б), приводящее, таким образом, к образованию очищенного жидкого раствора фермента.
30. Способ получения ферментсодержащего гранулированного состава, включающий получение ферментсодержащих гранул, содержащих композицию, включающую нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис.
31. Спсоб по п.30, в котором указанная композиция включает нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис, получаемые посредством способа, включающего выделение нерастворимого фермента из микробного бульона, содержащего микробные клетки и/или клеточный дебрис, без удаления микробных клеток и/или клеточного дебриса, приводящее, таким образом, к образованию композиции, включающей выделенный нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис, в которой по меньшей мере часть фермента нерастворима в микробном бульоне.
32. Способ по п.30, в котором ферментсодержащие гранулы получены путем процесса гранулирования, выбираемого из гранулирования при помощи гранулятора с псевдоожиженным слоем, наносящего покрытие сверху, гранулятора, наносящего покрытие снизу и барабанного гранулятора (например гранулятора с высоким усилием сдвига).
33. Способ по п.30, включающий нанесение ферментсодержащего слоя, включающего указанный нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис, поверх ядра в грануляторе с псевдоожиженным слоем, наносящем покрытие сверху, в котором указанный способ факультативно включает нанесение солевого слоя между указанным ядром и указанным ферментсодержащим слоем.
34. Способ по п.33, дополнительно включающий нанесение слоя, включающего барьерные соли, поверх указанного ферментсодержащего слоя.
35. Способ по п.34, дополнительно включающий нанесение внешнего покровного слоя, содержащего полимер и/или пигмент, поверх указанного слоя барьерных солей.
36. Способ по п.30, котором указанные ферментсодержащие гранулы получают посредством нанесения слоя барьерных солей и/или одного или более покровного слоя поверх ферментсодержащего ядра, включающего указанный нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис.
37. Способ по п.36, в котором указанное ферментсодержащее ядро получают посредством гранулятора с псевдоожиженным слоем, наносящего покрытие сверху.
38. Способ по п.36, в котором указанное ферментсодержащее ядро получают посредством гранулятора с высоким усилием сдвига.
39. Ферментсодержащая гранула, включающая:
ядро;
факультативно, солевой слой, нанесенный поверх ядра; и
ферментсодержащий слой, нанесенный поверх ядра или солевого слоя, в котором указанный ферментсодержащий слой содержит композицию, включающую нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис.
40. Ферментсодержащая гранула по п.39, в которой указанная композиция включает нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис, получаемые посредством способа, включающего выделение нерастворимого фермента из микробного бульона, содержащего микробные клетки и/или клеточный дебрис, без удаления микробных клеток и/или клеточного дебриса, приводящее, таким образом, к образованию композиции, включающей выделенный нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис, в которой по меньшей мере часть фермента нерастворима в микробном бульоне.
41. Ферментсодержащая гранула по п.39, также включающая слой барьерной соли, нанесенный поверх указанного ферментсодержащего слоя.
42. Ферментсодержащая гранула по п.39, также включающая внешний покровный слой, нанесенный поверх указанного слоя барьерной соли, в которой внешний покровный слой включает полимер и/или пигмент.
43. Ферментсодержащая гранула, включающая ферменсодержащее ядро и слой барьерной соли и/или один или более покровные слои, окружающие ядро, в которой указанное ядро содержит композицию, включающую нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис.
44. Ферментсодержащая гранула по п.43, в которой указанная композиция включает нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис, получаемые посредством способа, включающего выделение нерастворимого фермента из микробного бульона, содержащего микробные клетки и/или клеточный дебрис, без удаления микробных клеток и/или клеточного дебриса, приводящее, таким образом, к образованию композиции, включающей выделенный нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис, в которой по меньшей мере часть фермента нерастворима в микробном бульоне.
45. Ферментсодержащая гранула по п.43, в которой указанное ферментсодержащее ядро получается посредством гранулятора с псевдоожиженным слоем, наносящего покрытие сверху.
46. Ферментсодержащая гранула по п.43, в которой указанное ферментсодержащее ядро получается посредством гранулятора с высоким усилием сдвига.
47. Детергентная композиция, включающая ферментсодержащие гранулы по любому из пп.39-46.
48. Текстиль обрабатывающая композиция, включающая ферментсодержащие гранулы по любому из пп.39-46.
49. Композиция корма для животных, включающая ферментсодержащие гранулы по любому из пп.39-46.
50. Пищевая композиция, включающая ферментсодержащие гранулы по любому из пп.39-46.
51. Ферментсодержащий жидкий состав, содержащий композицию, включающую нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис.
52. Жидкий состав по п.51, в котором указанная композиция включает нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис, получаемые посредством способа, включающего выделение нерастворимого фермента из микробного бульона, содержащего микробные клетки и/или клеточный дебрис, без удаления микробных клеток и/или клеточного дебриса, приводящее, таким образом, к образованию композиции, включающей выделенный нерастворимый фермент и микробные клетки и/или клеточный дебрис, в которой по меньшей мере часть фермента нерастворима в микробном бульоне.
53. Жидкий состав по п.51, дополнительно включающий один или более рецептурный ингредиент, выбираемый из полиола; соли; консерванта; сурфактанта; и антиоксиданта.