Поликетидсинтазы III типа и их применение

1. Применение поликетидсинтазы III типа, аминокислотная последовательность которой представляет собой:
(а) аминокислотную последовательность, выбранную из группы SEQ ID Nos: 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139; или
(б) аминокислотную последовательность, которая имеет не менее 40% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID Nos: 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139;
в системах in vitro или in vivo для получения гиспидина.
2. Применение по п. 1, где аминокислотная последовательность поликетидсинтазы III типа имеет не менее 45%, или по крайней мере на 50%, или по крайней мере на 55%, или по крайней мере на 60%, по крайней мере на 65%, или по крайней мере на 70%, или по крайней мере на 80%, или по крайней мере на 85%, или по крайней мере на 90%, или по крайней мере на 91%, или по крайней мере на 92%, или по крайней мере на 93%, или по крайней мере на 94%, или по крайней мере на 95%, или по крайней мере на 96%, или по крайней мере на 97%, или по крайней мере на 98%, или по крайней мере на 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID Nos: 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139.
3. Способ получения гиспидина в системах in vitro или in vivo, включающий объединение в физиологических условиях по крайней мере одной молекулы поликетидсинтазы III типа, аминокислотная последовательность которой представляет собой:
(а) аминокислотную последовательность, выбранную из группы SEQ ID Nos: 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139; или
(б) аминокислотную последовательность, которая имеет не менее 40% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID Nos: 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139;
с по крайней мере двумя молекулами малонил-КоА и по крайней мере одной молекулой кофеил-КоА; или
с по крайней мере двумя молекулами малонил-КоА и одной молекулой кофейной кислоты, по крайней мере одной молекулы кофермента А, по крайней мере одной молекулой кумарат-КоА-лигазы и по крайней мере одной молекулой АТФ.
4. Способ по п. 3, где аминокислотная последовательность поликетидсинтазы III типа имеет не менее 45%, или по крайней мере на 50%, или по крайней мере на 55%, или по крайней мере на 60%, по крайней мере на 65%, или по крайней мере на 70%, или по крайней мере на 80%, или по крайней мере на 85%, или по крайней мере на 90%, или по крайней мере на 91%, или по крайней мере на 92%, или по крайней мере на 93%, или по крайней мере на 94%, или по крайней мере на 95%, или по крайней мере на 96%, или по крайней мере на 97%, или по крайней мере на 98%, или по крайней мере на 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID Nos: 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139.
5. Способ по п. 3, где реакция осуществляется в клетке или организме, включающий введение в клетку кассеты экспрессии, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую поликетидсинтазу III типа по п. 1, причем клетка-хозяин не является эмбриональной клеткой человека.
6. Способ по п. 3, где кумарат-КоА-лигаза имеет аминокислотную последовательность SEQ ID No:141, или по крайней мере на 40%, или по крайней мере на 45%, или по крайней мере на 50%, или по крайней мере на 55%, или по крайней мере на 60%, по крайней мере на 65%, или по крайней мере на 70%, или по крайней мере на 80%, или по крайней мере на 85%, или по крайней мере на 90%, или по крайней мере на 91%, или по крайней мере на 92%, или по крайней мере на 93%, или по крайней мере на 94%, или по крайней мере на 95%, или по крайней мере на 96%, или по крайней мере на 97%, или по крайней мере на 98%, или по крайней мере на 99% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID No:141.
7. Способ по п. 5, включающий введение в клетку или организм нуклеиновых кислот, кодирующих ферменты биосинтеза кофейной кислоты.
8. Способ по 7, где ферменты биосинтеза кофейной кислоты выбраны из группы:
(а) тирозин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность которой представляет собой SEQ ID No: 107 или по крайней мере на 40% идентична последовательности SEQ ID No: 107; компоненты HpaB и HpaC 4-гидроксифенилацетат 3-монооксигеназы-редуктазы, аминокислотные последовательности которых представляют собой SEQ ID Nos: 109 и 111 или по крайней мере на 40% идентичны последовательностям SEQ ID Nos: 109 и 111;
(б) фенилаланин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность которой представляет собой SEQ ID Nos:117 или по крайней мере на 40% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID Nos:117.
9. Набор для получения гиспидина, включающий поликетидсинтазу, аминокислотная последовательность которой представляет собой:
(а) аминокислотную последовательность, выбранную из группы SEQ ID Nos: 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139; или
(б) аминокислотную последовательность, которая имеет не менее 40% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID Nos: 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139;
и кумарат-КоА-лигазу или кодирующие их нуклеиновые кислоты.