Определение генетических полиморфизмов ccr5-δ32 и ccr2-64i у доноров и ВИЧ-1-инфицированных больных

Приложение 1

сравнению с нормальными значениями. Клинически манифестный гемолиз с изменением цвета кожи и мочи, билиру-бинемией различной степени выраженности и постоянным превышением нормального уровня ЛДГ сыворотки крови в 5-6 раз и более отмечался при размерах ПНГ-клона, превышающих 80%. Изучение динамики ПНГ-клона у 28 больных показало, что у У больных (п = 7) наблюдалось постепенное увеличение ПНГ-клона. В том числе нарастание размеров клона на 10% и более отмечено у 3 (10,7%) всех обследованных. У 1 больной за 2,5 года наблюдения клон вырос почти в 3 раза по сравнению с исходным уровнем

(с 30,3 до 82,4%) без существенного влияния на клиническое течение заболевания, несмотря на постепенно нарастающие признаки скрытого гемолиза. У 3 больных отмечено снижение содержания клеток с ПНГ-фенотипом, вплоть до исчезновения (у 1 больного с исходным клоном 1,3%). В этой подгруппе тенденция к уменьшению уровня патологических клеток наблюдалась у 1 больной с первично определенным клоном 80,7%. Что касается большей части больных АА/ПНГ - 13 (46,4%) в подгруппе и 5 больных с отсутствием патологического клона, то данные проточной цитометрии у них оставались стабильными.

Определение генетических полиморфизмов CCR5-A32 и CCR2-64I у доноров и ВИЧ-1-инфицированных

больных

Глинщикова О.А., Февралева И.С., Макарик Т.В., Пивник А.В., Судариков А.Б. ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва; Московский клинический научно-практический центр департамента

здравоохранения Москвы

Введение. Полиморфизмы генов, кодирующих хемо-киновые рецепторы CCR5 и CCR2, которые являются ко-рецепторами для вируса ВИЧ-1, могут влиять на вероятность заражения и течение ВИЧ-инфекции. Гомозиготная мутация CCR5-Д32, при которой на поверхности клеток отсутствует функциональный белок CCR5, полностью препятствует проникновению вируса в клетки хозяина. По сравнению с носителями нормального генотипа у больных с гетерозиготной мутацией CCR5-Д32 медленнее развиваются симптомы СПИДа, меньше вирусная нагрузка, медленнее снижается количество CD4+T-клеток. В отношении других полиморфизмов генов (CCR5-59029, CCR2-64I, SDF1-3'A и др.), связанных с проникновением ВИЧ-1 в клетки, данные литературы не так однозначны. Кроме того, было показано, что распространенность этих мутаций отличается у разных этнических групп. Так, частота мутации CCR5-Д32 у представителей европеоидной расы значительно выше, чем у африканцев и азиатов. Для русских и украинцев частота гетерозиготной мутации CCR5-Д32 составляет в среднем 21%.

Цель работы. Определение частоты генотипов CCR5-Д32 и CCR2-64I у доноров и ВИЧ-1-инфицированных больных (ВИЧ+).

Материалы и методы. Исследовано 59 образцов ДНК ВИЧ+-больных и 77 образцов ДНК доноров. Мультиплексную ПЦР в режиме реального времени для определения полиморфизмов CCR5-A32 и CCR2-64I проводили с праймерами, разработанными с помощью программы Primer 3.0, с наборами реагентов фирмы "Синтол" в соответствии с инструкцией.

Результаты и обсуждение. Гетерозиготная мутация CCR5-A32 выявлена у 20,8% доноров и 13,6% ВИЧ+-больных. Гомозиготная мутация CCR5-A32 - у 2,6% доноров и не обнаружена у ВИЧ+-больных. Гетерозиготная мутация CCR2-64I выявлена у 22,1% доноров и 23,7% ВИЧ+-больных. Гомозиготная мутация CCR2-64I выявлена у 2,6% доноров и не обнаружена у ВИЧ+-больных.

Заключение. Выявленные нами частоты распространения мутаций CCR5-A32 и CCR2-64I совпадают с данными литературы. Получены статистически значимые различия по частоте встречаемости генотипов CCR5-A32 в группах доноров и ВИЧ-инфицированных. По результатам частотного анализа в группе ВИЧ-инфицированных данная мутация встречается в гетерозиготном состоянии в 1,5 раза реже (p < 0,05), чем у доноров, а в гомозиготном не встречается вообще. Полученные результаты говорят в пользу гипотезы о протективных свойствах мутантного аллеля CCR5-A32.

Рестрикция гуморального иммунного ответа на антигены тромбоцитов систем НРА и ИЬД

у гематологических больных

Головкина Л.Л., Атрощенко Г.В., Пушкина Т.Д., Васильева М.Н., Михайлова Е.А. ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва

Введение. Аллоиммунизация гематологических больных к антигенам систем НРА (Human Platelet Antigens) и HLA (Human Leukocyte Antigens) класса I является одним из основных иммунологических осложнений трансфузионной терапии тромбоцитами. В инициации гуморального иммунного ответа важную роль играют молекулы HLA класса II: аминокислотный состав пептидсвязывающих сайтов имму-нокомпетентных клеток влияет на презентацию чужеродных белков рецепторам Т-лимфоцитов. Полиморфизм антигенов систем НРА и HLA, определяемый заменами аминокислот, влияет на презентацию иммуногенных олигопептидов вследствие изменения их пространственной конфигурации. HLA-рестриктированные механизмы аллоиммунизации на антигены систем HLA и НРА в трансфузиологии изучены недостаточно.

Цель работы. Изучение влияния НРА- и HLA-генотипа больного на антителообразование при трансфузиях тромбоцитов.

Материалы и методы. Обследованы 29 больных апла-стической анемией (АА), 18 - острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), 20 - острым миелобластным лейкозом (ОМЛ), 300 доноров. Тканевое типирование локусов НЬА-ЭКВ1, -DQB1 (низкое и высокое разрешение) выполняли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с секвенс-специфи-ческими праймерами, генотипирование локусов НРА-1, -2, -3, -4, -5, -6, -15 - методом ПЦР с аллель-специфическими праймерами. Сопоставление результатов иммуноферментно-го анализа с нативными и лишенными НЬА тромбоцитами, микролимфоцитотоксического теста применяли для выявления и определения направленности антител, тромбоциты доноров с известным НРА-генотипом применяли для изучения специфичности анти-НРА-антител.

Результаты и обсуждение. Способность к антитело-образованию у больных зависела от нозологической формы заболеваний, которые по частоте аллоиммунизации можно представить в следующем порядке: АА - ОМЛ - ОЛЛ. Опре-