Исследование и диагностика вирусного гепатита Е

УДК 619:616:578.826.2-07

ИССЛЕДОВАНИЕ И ДИАГНОСТИКА ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА Е

Лапина Т.И., Токарев О. И.

Ставропольский государственный аграрный университет

Ключевые слова: вирусный гепатит Е, тромбоцит, лейкоцит.

Key words: hepatitis E, platelet, leukocyte.

В начале 80-х годов прошлого века на птицефабрике в Австралии среди кур-бройлеров взрослого стада обнаружено новое инфекционное заболевание с характерными симптомами, - увеличение печени и селезенки. У птиц отмечено снижение веса, уменьшение яйценоскости и высокий падеж. Исходя из основных проявлений, за болезнью закрепилось название «Big Liver and Spleen Disease (BLSD)». Проведенные исследования исключили этиологическую роль известных возбудителей заболеваний птиц в возникновении BLSD [J.H. Handlinger et al., 1999]. Часто болезнь «большие печень и селезенка» сопровождается желточным перитонитом и, как следствие, может быть выделен микроорганизм Escherichia coli.

В дальнейшем, заболевания кур с подобными симптомами зарегистрированы в Западной Канаде, Великобритании и США [P.Billam et al., 2005; S.J. Ritchie & C.Riddell, 1991; J.H. Handlinger et al., 1999]. В США заболевание, подобное BLSD, обозначено как «Hepatitis-splenomegaly (HS)» синдром. Экспериментальное моделирование позволило установить, что данная инфекция вирусной этиологии. Основное место репликации вируса - гепатоциты. Результаты сравнения вирусов, выделенных от больных BLSD и HS-синдром кур, позволили утверждать, что эти вирусы представляют собой изоляты одного и того же вируса. В Европе данный вирус имеет название «Гепатит» и относится к классу «Е».

Целью наших исследований являлось изучение гематологических, биохимических показателей сыворотки крови и патологоанатомических изменений у кур при гепатите Е.

Материалом для исследования служили 15 больных кур и 10 трупов кур породы РООС-308, павших от гепатита Е. Были проведены гематологические и биохимические исследования сыворотки крови от больных кур и вскрытие трупов павшей птицы. Для гематологических и биохимических исследований сыворотки крови при гепатите Е в хозяйстве, неблагополучном по данному заболеванию были отобраны пробы крови. Кровь для исследования брали утром, натощак, из подключичной вены. Контролем служила кровь здоровых кур из этого же хозяйства, но из

другого корпуса. Птицы опыта и контроля были одной породы, возраста и находились в одинаковых условиях кормления и содержания.

1. Гематологические показатели кур, больных вирусным гепатитом Е

п=15

Показатели здоровые больные разница %

Г емоглобин, г/л 207 181±46,8 -13

Г ематокрит, % 29,8 39±3,6 +31

12 Эритроциты, 10 л 3,11 4,1±1,2 +32

Средний объем эритроцитов, фл 95,8 124,2±1,5 +30

Среднее содержание гемоглобина в эритроците, пг 66,5 74±4,3 +11

Средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах, г/л 695 594,6±30,1 -14

Широта распределения популяции эритроцитов, % 11,6 11,06±0,5 -5

Тромбоциты, 109 л 49,4 41,4±16,1 -16

Тромбокрит, % 0,048 0,036±0,02 -25

Средний объем тромбоцитов, фл 9,84 8,38±0,39 -15

Широта распределения популяции тромбоцитов, фл 37,8 33,2±0,65 -12

Лейкоциты, 109 52,0 37,4±3,38 -28,1

Лимфоциты, 109 47 26,63±2,62 -43,3

Моноциты/ эозинофилы 1,17 0,14±0,02 -88

Г ранулоциты, 109 3,79 7,22±1,45 +91

% лимфоцитов 89 83,7±2,71 -6

% моноцитов/ эозинофилов 2,9 0,4±0,01 -86

% гранулоцитов 8,57 17,56±2,38 +105

Проведены общеклинические исследования крови на электронном анализаторе Abacus junior vet. В сыворотке крови определяли активность

ферментов (АлАТ, АсАТ, ЛДГ, щелочной фосфатазы), количество мочевины, мочевой кислоты, креатинина, содержание общего белка, альбумина, холестерина, билирубина, глюкозы, амилазы на электронном биохимическом анализаторе В10СНЕМ ВА с помощью реактивов фирмы Лахема, высчитывали коэффициент Ритиса. Контролем служила кровь здоровых кур из этого же хозяйства, но из другого корпуса. Результаты обработаны статистически с помощью программы ВЮБТАТ.

Результаты гематологических исследований занесены в таблицу 1. Из данных таблицы 1 видно, что количество эритроцитов у больных кур увеличилось на 32%, увеличился также средний объем эритроцитов и показатель гематокрита на 30 и 31 %, соответственно. В то же время, количество гемоглобина уменьшилось на 13% и средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах - на 14%, при увеличении среднего содержания гемоглобина в эритроците на 11%.

У больных кур выявлено снижение количества тромбоцитов на 15% и понижение тромбокрита на 25%. Средний объем тромбоцитов уменьшен на 15%, а широта распределения популяции тромбоцитов - на 12% от нормы.

Выявлено снижение количества лейкоцитов на 28 %, эозинофилов на 88% и лимфоцитов на 43 % при одновременном гранулоцитозе (увеличение нейтрофилов на 91 %).

Результаты биохимических исследований сыворотки крови птиц при гепатите Е отражены в таблице 2.

2. Биохимические показатели сыворотки крови кур клинически здоровых и больных гепатитом Е

п=15

Показатели Здоровые (М±м) Больные (М±м) Разница, %

АсАТ (Е/л) 172,76±11,89 217,3±7,64* +25,8

ЛДГ (Е/л) 201,72±51,13 449,04±17,8* в 2,2раза

Щелочная фосфатаза (МЕ/л) 79,38±17,05 208,62±42,7* в 2,6раз

Креатинин (Мг/дл) 52,86±7,59 7,7±1,64* в 6,8раз

Альбумин (Г/дл) 18±1,31 10,62±0,72* -69,5

Билирубин (Мг/дл) 25,62±4,75 6,42±1,81* в 4раза

Амилаза (Е/л) 366,52±27,99 490,76±3,15* +33,9

* - достоверная разница между здоровой и больной птицей

В результате исследований выявлено, что по ряду исследованных показателей сыворотки крови (АлАТ, коэффициент Ритиса, мочевина, мочевая кислота, общий белок, холестерин, глюкоза) результаты не имеют достоверно значимых различий между здоровой и больной птицей.

Достоверно повышена активность ряда ферментов,

характеризующих функциональное состояние печени, - АсАТ на 25,8%, ЛДГ более, чем в 2 раза, щелочной фосфатазы в 2,6 раза. Наблюдается увеличение количества амилазы на 34 %.

Наряду с этим, выявлено понижение содержания в крови альбумина на 69,5 % и билирубина в 4 раза. Почти в 7 раз снизился показатель креатинина.

При патологоанатомическом вскрытии трупов кур, павших от гепатита Е выявлено следующее.

Упитанность птицы выше средней. В подкожной клетчатке, в области клоаки имеет место наличие большого количества жира. Роговица помутневшая, розовая с синюшностью. Кожа розовая с синюшностью.

Скелетные мышцы развиты хорошо, цвет темно-красный с синюшным оттенком, консистенция упругая, рисунок строения выражен. В грудобрюшной полости желтки неправильной формы, диаметром до 2см в количестве до 5, хорошо пронизаны кровеносными сосудами. В грудобрюшной полости обнаружено до 180 мл мутной красной жидкости с серо-белыми хлопьями. Селезенка правильной округлой формы, увеличена в 4-5 раз, дряблой консистенции, зернистая, соскоб обильный кашицеобразный вишнево-красного цвета, края выбухают при разрезе. Легкие тестоватые, розовые, местами красные, на разрезе при надавливании выделяется пенистая жидкость, кусочек погружается в толщу воды.

Пищевод - слизистая влажная, набухшая, красного цвета, на поверхности имеется слизь серо-белого цвета. Слизистая двенадцатиперстной кишки неравномерно покрасневшая, набухшая, местами с точечными кровоизлияниями, покрыта серо-белой слизью. Печень увеличена в объеме в 3-5 раз (рис.), дряблой консистенции, неоднородно окрашена от темно-красного до песочно-желтого цвета. Рисунок строения сглажен. Почки дряблые, темно-красные, границы коркового и мозгового вещества не выражены. Капсула снимается хорошо. Яйцевод - слизистая покрасневшая, местами с точечными кровоизлияниями.

Анализируя полученные результаты при гепатите Е у кур, мы констатируем значительные изменения гематологических показателей. Обнаружены гиперхромная анемия, макроцитоз, что обусловлено хроническим течением данного заболевания. Снижение средней концентрации гемоглобина в эритроците, по нашему мнению, связано с нарушением синтеза гемоглобина в красном костном мозге, вызванным цитопатическим действием вируса.

1. Печень кур при гепатите Е.

Выявленные изменения показателей тромбоцитов указывают на тромбоцитопению, что встречается при анемиях. Снижение количества лейкоцитов, эозинофилов при одновременном гранулоцитозе указывает на интоксикацию организма птицы, вызванную инфекционным заболеванием вирусной природы. Наблюдается значительное увеличение гранулоцитов (нейтрофилов). По-видимому, в этот период болезни в организме птиц еще происходят процессы компенсации. Снижение лимфоцитов характеризует низкую иммунологическую реактивность организма больных кур.

Повышение уровня активности АсАТ, по данным Н.У.Тица (1986), происходит при повреждениях печеночных клеток любого происхождения, что свойственно гепатиту Е кур. Увеличение ЛДГ свидетельствует о тяжелом поражении печени, вплоть до некроза гепатоцитов, вследствие чего фермент в больших количествах попадает в кровь (В.М. Холодов, Г.Ф. Ермолаев, 1988). Увеличение активности щелочной фосфатазы, понижение содержания альбумина, креатинина и билирубина также свидетельствуют о поражении печени. Наблюдается увеличение количества амилазы на. Мы предполагаем, что это связано с низким синтезом АТФ в мышцах.

Изменения в сыворотке крови, свидетельствующие о значительном поражении печени, могут быть использованы как критериальные для прижизненной диагностики данного заболевания.

При патологоанатомическом вскрытии обнаружены ожирение, цианоз, дистрофия печени, септическая селезенка с кровоизлияниями, серозно-катаральный эзофагит, серозно-катаральный дуоденит, застойная гиперемия и белковая дистрофия почек, отек легких, фибринозногеморрагический перитонит.

Выводы: проведенные исследования позволяют говорить о том, что при вирусном гепатите Е в организме кур происходят гематологические

изменения, сопровождающиеся анемией, пониженным иммунологическим ответом, повышенной фагоцитарной реакцией. Биохимические исследования сыворотки крови выявляют глубокое поражение печени, и могут быть использованы в качестве диагностических тестов на гепатит Е кур. Патологоанатомические изменения указывают, что при вирусном гепатите Е наряду с поражением печени присутствуют изменения и в других органах, вплоть до септической картины.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Куриляк О.А. Клиническая интерпретация

некоторых показателей гематологических анализаторов. // О.А. Куриляк «Новости А/О Юнимед» 26.05.2009 год.

ИССЛЕДОВАНИЕ И ДИАГНОСТИКА ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА Е

Лапина Т.И., Токарев О. И.

Резюме

Проведены гематологические, биохимические исследования сыворотки крови и патологоанатомическое вскрытие, больных и павших от гепатита Е кур. Выявлены характерные для данного заболевания изменения.

INVESTIGATION AND DIAGNOSIS OF VIRUS HEPATITIS E

Lapina T.I., Tokarev O.I.

Summary

inducted hematological, biochemical studies of serum and patalogoanatomicheskoe autopsy, and patients who died from hepatitis E chickens. The characteristic for this disease changes.

УДК 636.2:616.98+620.117.111.3+616.15

КОРРЕЛЯЦИЯ СПОНТАННОЙ БИОХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И РЕЗУЛЬТАТОВ РИД У КОРОВ ПРИ ДИАГНОСТИКЕ ЛЕЙКОЗА

Лаптева Д.Д., Закотеев Ю.А., Адамушкин В.Е.

Московская государственная академия ветеринарной медицины и

биотехнологии

Ключевые слова: сыворотка крови, лейкоз, реакция иммунной диффузии.

Key words: serum, leukemia, immune reaction diffusion.