Влияние острого эмоционально-болевого стресса на состояние пародонта крыс разного возраста

(р!<0,001), а Кспс - на 16 % (р1=0,02) по сравнению с аналогичными данными контрольных групп (табл. 4).

Заключение. Под действием генотоксиканта фторурацила и алиментарной недостаточности ПФ в продолжении 70 дней в слизистой оболочке полости рта наблюдались выраженные нарушения клеточного деления и дифференцировки эпителиоцитов, а также состояния сосудов МЦР. Так, в базальном слое эпителия патогенное воздействие проявилось резким снижением числа митозов, в шиповатом слое - уменьшением объема ядер и ядрышек, появлением очагов дискера-тоза, папилломатоза и акантоза или утолщения слоя шиповатых клеток.

Препарат ПФ пшеницы - ПФ1, вводимый на фоне фторурацила и рациона, лишенного алиментарных ПФ, оказывал умеренный стимулирующий эффект на компенсаторно -восстановительные процессы - в эпителии уменьшались признаки воспаления и деструкции клеток, количество эрозий и афт, выраженность отека структур и собственной пластинки СОЩ.

Кверцетин в тех же условиях оказал более значительное снижение воспалительно-деструктивных явлений в СОЩ, чем препарат ПФ1. Существенно возрастало количество полиплоидных клеток, что следует рассматривать как проявления компенсаторного роста и регенерации ткани слизистой, направленных на улучшение структурно-функционального состояния

эпителия слизистой оболочки полости рта. Квер-цетин восстанавливал микроциркуляцию, оказывал выраженное протекторное действие на эпи-телиоциты и существенно ослаблял генотоксиче-ские эффекты фторурацила.

Проведенные исследования раскрывают неоспоримую роль растительных полифенолов в обеспечении физиологического оптимума про-лиферативной активности эпителия слизистой оболочки полости рта и его резистентности к патогенным агентам.

Список литературы

1. Чарушин В.Н. Химия в борьбе с инфекционными заболеваниями / В.Н. Чарушин // Соросовский образовательный журнал. - Т. 6. - 2000. - №3. - С. 6472.

2. Estiarte M. Free-air CO2 enrichment of wheat: leaf flavonoid concentration throughout the growth cycle / M. Estiarte, J. Penuelas, B.A. Kimball // Physiologia Plantarum. - 1999. - Vol. 105. - P. 423-433.

3. Прохончуков А.А.Руководство по терапевтической стоматологии. / Под ред. А.И. Евдокимова. -М.: Медицина, 1967 - 572с.

4. Меркулов Г.А. Курс патологической техники / Меркулов Г.А. - Л., 1969. - 423 с.

5. Пирс Э. Гистохимия / Пирс Э. - М., ИЛ., 1962. - 962 с.

Поступила 24.11.17

УДК 612.822.5+616.314-008.1.08:599.323.4

В. Н. Горохивский, д.мед.н., С.А. Шнайдер, д. мед. н., А. В. Скиба, д. мед. н., Е. К. Ткаченко, к. биол. н.

Государственное учреждение «Институт стоматологии и челюстно-лицевой хирургии Национальной академии медицинских наук Украины»

ВЛИЯНИЕ ОСТРОГО ЭМОЦИОНАЛЬНО-БОЛЕВОГО СТРЕССА НА СОСТОЯНИЕ ПАРОДОНТА КРЫС РАЗНОГО ВОЗРАСТА

Цель исследования. Изучение влияния острого эмоционально-болевого стресса на состояние пародонта, а также на процессы перекисного окисления липидов в крови и тканях крыс разного возраста.

Материалы и методы. Эксперимент проведен на 37 белых крысах-самках 3-мес. и 31-мес. возраста, распределенных в группы: 1-я группа (интактная) - 6 крыс 31 -мес.возраста; 2-я группа (контрольная) - 7 крыс 31-мес. возраста; 3-я группа (интактная) - 11 крыс 3-мес.возраста; 4-я группа (контрольная) - 13 крыс 3-мес. возраста. Крыс 2-й и 4-й групп подвергали острому эмоционально-болевому стрессу в течении 6 часов. До стрессирования крысы 48 часов голодали при доступе к воде, после чего их помещали на 6 часов в клетку и подвергали эмоционально-болевому стрессу. Через 2 часа после стресса крыс умерщвляли.

Результаты и заключение. Проведенные исследования выявили разную степень влияния стресса на процессы ПОЛ в крови и тканях крыс разного возраста. Установлено, что слизистая оболочка желудка и ткани пародонта молодых крыс, более активно реагировавших на стрессовое воздействие, в большей степени подвергались его повреждающим эффектам.

© Горохивский В. Н., Шнайдер С. А., Скиба А. В., Ткаченко Е. К. 2017.

По данным гистоморфометрии пародонта острый стресс у молодых животных, в отличии от старых, вызвал значительные патологические изменения в мягких и твердых тканях пародонта.

Ключевые слова: острый эмоционально-болевой стресс, перекисное окисление липидов, пародонт, слизистая оболочка желудка, молодые и старые крысы.

В. Н. Горох1вський, С.А. Шнайдер, О. В. Скиба, €. К. Ткаченко

Державна установа «1нститут стоматологи та щелепно-лицево! xipyprii' Нацюнально! академп медичних наук Укра!ни»

ВПЛИВ ГОСТРОГО ЕМОЦШНО-БОЛЬОВОГО СТРЕСУ НА СТАН ПАРОДОНТУ ЩУР1В Р1ЗНОГО В1КУ

Мета дослгдження. Вивчення впливу гострого емоцшно-больового стресу на стан пародонту, а також на процеси перекисного окислення лгпгдгв у кров1 i тканинах щур1в разного в1ку.

Матер1али та методи. Експеримент проведено на 37 бтих щурах-самках 3-мс i 31-мс вжу, розподше-них в групи: 1-а група (ттактна) - 6 щурiв 31-мiс.вiку; 2-а група (контроль) - 7 щурiв 31-мс вку; 3-тя група (ттактна) - 11 щурiв 3- мiс.вiку; 4-я група (контроль) - 13 щурiв 3-мс вi-ку. Щурiв 2-й i 4-i груп тддавали гос-трому емоцтно-больовому стресу протягом 6 годин. До цього щури 48 годин голодували при доступi до води, тсля чого 1х на 6 годин помщали до клтки i пiддавали емоцшно-больовому стресу. Через 2 години тсля стресу щурiв забивали.

Результати i висновок. Проведет дослiдження виявили ргзну ступть впливу стресу на процеси ПОЛ в кровi i тканинах щурiв р1зного вжу. Встановлено, що слизова оболонка шлунка i тканини пародонту молодих щурiв, бшьш активно реагували на стресовий вплив, бшьшою мiрою пiддавалися його ушкоджувальним ефек-там. За даними гктоморфометри пародонту гострий стрес у молодих тварин, на вiдмiну вiд старих, викли-кав значнi патологiчнi змти в м'яких i твердих тканинах пародонту.

Ключовi слова: гострий емоцшно-больовий стрес, перекисне окислення лiпiдiв, пародонт, слизова оболонка шлунка, молодi та старi щури.

V. N. Gorokhivsky, S. A. Schneider, A. V. Skyba, E. K. Tkachenko

State Establishment "The Institute of Stomatology and Maxillo-Facial Surgery National Academy of

Medical Science of Ukraine"

THE EFFECT OF ACUTE EMOTIONAL AND PAIN STRESS ON THE PERIODONTAL CONDITION OF RATS OF DIFFERENT AGES

ABSTRACT

The aim of the study was to study the effect of acute emotional and pain stress on periodontal conditions, as well as on the processes of lipid peroxidation in the blood and tissues of rats of different ages.

Materials and methods. The experiment was performed on 37 white female rats for 3 months. and 31 months. age, divided into groups: 1st group (intact) - 6 rats of 31-month-old age; 2nd group (control) - 7 rats 31 months. age; 3rd group (intact) - 11 rats of 3 months old age; 4 th group (control) - 13 rats 3 months. age. The rats of the 2nd and 4th groups were subjected to acute emotional and painful stress within 6 hours. Before ratting, the rat was fasted for 48 hours while accessing water, after which they were placed in a cage for 6 hours and subjected to emotional and painful stress. Two hours after the stress, the rats were sacrificed.

Results and conclusion. The conducted studies revealed a different degree of influence of stress on the processes of LPO in the blood and tissues of rats of different ages. It was found that the mucous membrane of the stomach and periodontal tissue of young rats, which reacted more actively to stress, were more exposed to its damaging effects. According to the histomorphometry of periodontium, acute stress in young animals, in contrast to the old ones, caused significant pathological changes in the soft and hard periodontal tissues.

Key words: acute emotional-painful stress, lipid peroxidation, periodontal disease, gastric mucosa, young and old

rats.

Важнейшим патогенетическим механизмом при стрессе является активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ). Несмотря на довольно обширные исследования по проблеме стресса [1,2,3], его патогенное влияние на ткани пародонта исследовано недостаточно. Пародонт

характеризуется высокой чувствительностью к стрессу, что проявляется деструкцией десны, нарушением гемоциркуляции, усилением резорбции кости альвеолярного отростка [3].

Пародонтит принято относить к болезням старения, однако в последнее время наблюдается

отчетливая тенденция к росту заболеваний паро-донта у лиц молодого возраста.

Цель настоящего исследования. Изучение влияния острого эмоционально-болевого стресса на состояние пародонта, а также на процессы пе-рекисного окисления липидов в крови и тканях крыс разного возраста.

Материалы и методы. В эксперименте использовали 37 белых крыс-самок линии Вистар стадного разведения 3-месячного и 31-месячного возраста, распределенных в следующих сериях эксперимента: 1-я группа (интактная) - 6 крыс 31-месячного возраста; 2-я группа (контрольная) - 7 крыс 31-месячного возраста подвергали острому эмоциально-болевому стрессу (ЭБС) по Desiderato й а1. [4]; 3-я группа (интактная) - 11 крыс 3-месячного возраста; 4-я группа (контрольная) - 13 крыс 3-месячного возраста подвергали ЭБС. Крыс 2-й и 4-й групп (всего 20 крыс) подвергали острому ЭБС в течении 6 часов. Использовалась специально сконструированная клетка, пол которой изготовлен из гети-накса и является токопроводящим. На поверхности пола помещается малая платформа также изготовленная из гетинакса. Поочередно на пол клетки или на платформу случайным образом подавали постоянный ток 4мА, Чередование болевых раздражителей с пола или с платформы создавало у крыс состояние тревожного ожидания. До стрессирования крысы 48 часов голодали при доступе к воде, после чего их помещали на 6 часов в клетку и подвергали ЭБС. Через 2 часа после стресса крыс умерщвляли под тио-пенталовым наркозом (40 мг/кг).

Морфометрическими показателями реакции организма на стресс служила масса тест-органов: использовали массу надпочечников и селезенки (г) в пересчете на 100 г массы тела. Степень поражения слизистой оболочки желудка (СОЖ) оценивали в условных единицах. Наличие язв размером до 1 мм оценивали в 1 балл; 1-2,9 мм -2 балла; 3-4,9 мм - 3 балла; 5 мм и более - 4 балла. Оценивали множественность поражений СОЖ. По отношению числа крыс с язвами к общему числу животных в группе оценивали частоту поражений СОЖ.

Макропрепараты свежевыделенных

челюстей крыс обрабатывали по общепринятой гистологической методике. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином и изучали линейные размеры с дистальной стороны нижнего правого второго моляра. Гистоморфометрические измерения проводили согласно рекомендациям М. Киндловой с соавт. [5]. На микропрепаратах определяли три основных размера, точкой отсчета для которых служил уровень цементно-эмалевой границы: 1) до верхнего края десневого

сосочка; 2) до верхнего края эпителиального прикрепления; 3) до гребня межальвеолярной перегородки. Первый размер выражал степень гипертрофии либо ретракции десны. Второй -глубину зубо-десневой бороздки. Третий размер - интенсивность деструкции межальвеолярной перегородки.

Объектами биохимических исследований служили цельная кровь, сыворотка крови, печень и кость альвеолярного отростка крыс. Уровень ПОЛ оценивали по перекисному гемолизу эритроцитов (ПГЭ) в крови [6]; содержанию суммарной фракции липопротеидов (ЛП) и ацилгидроперекисей (АГП) [6] в сыворотке крови, а также по кинетике накопления малонового диальдегида (МДА) в печени и кости альвеолярного отростка при инкубации их гомогенатов. Определение активности антиоксидантного фермента глутатион-редуктазы (ГР) [7] проводили в печени.

Данные обрабатывали статистически с использованием ^критериев достоверности различий по Стьюденту.

Результаты и их обсуждение. О высоком уровне эмоционального напряжения, возникшего при воспроизведении острого ЭБС, свидетельствовали выраженные вегетативные реакции крыс: двигательное возбуждение, повышенная агрессивность, вокализация. Пороговые болевые раздражения вызывали активную двигательную реакцию у молодых крыс, их частое перемещение с одной платформы на другую. Исследования показали, что старые крысы слабо реагировали на удары током -реакции их были замедленными, нередко они прекращали перемещения в экспериментальной клетке.

В табл. 1 представлены морфометрические проявления стресса. Так, под влиянием острого ЭБС у старых крыс наблюдалось достоверное снижение массы надпочечников. Частота поражений СОЖ у этих крыс составила 85,7 %. Под влиянием острого ЭБС ульцерогенный эффект в большей степени проявился крыс 3-месячного возраста. У молодых крыс выявлена 100 % частота поражений СОЖ. Множественность и тяжесть поражений СОЖ язвами увеличивалась по сравнению с интактными группами. У молодых крыс интактной группы частота поражений СОЖ составляла 10 %. Масса тест-органов у крыс 3-месячного возраста достоверно не изменялась (табл. 1).

Гистоморфометрическое исследование паро-донта показало, что острый ЭБС у старых крыс существенно не изменял показатели состояния десны и кости альвеолярного отростка. Не было выявлено достоверных отличий в высоте десне-

Таблица 1

Морфологические проявления стресса и гистоморфометрия пародонта молодых и старых крыс, подвергшихся

острому ЭБС

Группы живот- Масса, г Ульцерогенный эффект Гистоморфометрия пародонта

ных надпочечников селезенки частота, тяжесть, множест- высота верхний край гребень кости

% усл. ед. венность десневого сосочка эпителиального прикрепления альвеолярного отростка

Старые крысы

Интактная 23,0±1,2 234±10,8 0 0 0 -0,388±0,215 -0,775±0,027 -1,270±0,443

ЭБС 19,3±1,4 р=0,06 265±23,7 85,7 2,7 3,3 -0,570±0,355 -0,405±0,320 -1,420±0,240

Молодые крысы

Интактные 30,1±1,6 260±3,3 10 0,4 0,9 +0,045±0,012 -0,208±0,060 -0,623±0,065

(молодые кры- р2<0,001

сы)

ЭБС 31,5±2,1 243 ±20,0 100 3,0 3,3 +0,220±0,085 р1=0,05 -0,435±0,080 р1=0,03 -1,215±0,23 р1=0,02

Примечание. В табл. 1 показатель достоверности р рассчитан по сравнению интактной группой старых крыс; р[ - по сравнению с интактной группой молодых крыс (ЭБС); р2 - при сравнении двух интактных групп крыс разного возраста.

вого сосочка и гребня кости пародонта у старых животных (31-мес.) по сравнению с данными ин-тактных групп аналогичного возраста (табл. 1).

При гистоморфометрии пародонта молодых крыс наблюдалась иная картина. Высота десне-вого сосочка у нижнего правого второго моляра под действием острого ЭБС повышалась на 0,18 мм (р1=0,05) по сравнению с данными интактной группы, что вероятно, свидетельствует о гиперемии десны под влиянием воспроизведенного стресса. В группе стрессированных молодых крыс значительно снижалась величина верхнего края эпителиального прикрепления (на 0,23 мм; р:=0,03). Снижение величины гребня кости альвеолярного отростка составило у этих животных 0,59 мм (р1=0,02) по сравнению с данными ин-тактной группы (табл. 1).

У молодых и старых интактных крыс высота десневого сосочка и гребень костной ткани па-родонта несколько отличались в размерах. Существенно отличались размеры показателей верхнего края эпителиального прикрепления

десны молодых крыс по сравнению со старыми (р2<0,001; табл. 1).

Острый ЭБС у крыс разного возраста вызвал изменения процессов ПОЛ в крови, печени и костных структурах пародонта. Так, в крови старых крыс наблюдалась тенденция увеличения пере-кисного гемолиза эритроцитов (р=0,07; табл. 2). Увеличение содержания суммарной фракции ли-попротеидов сыворотки крови также имело тенденцию к увеличению, уровень ацилгидропере-кисей сыворотки крови этих животных существенно не изменялся. В то же время в гомогенатах печени старых крыс наблюдалось усиление пе-рекисных процессов. Так, за 1 час инкубации го-могенатов печени кинетика накопления МДА увеличивалась на 44 % (р=0,02); за 2 часа - на 37 % (р=0,05). В костной ткани пародонта этих крыс кинетика накопления МДА при разных сроках инкубации гомогенатов кости альвеолярного отростка не отличалась от данных интакт-ных групп (табл. 2).

Таблица 2

Влияние острого ЭБС на показатели ПОЛ в крови и тканях старых крыс

Исследуемый показатель Группы животных

Интактная | ЭБС

Кровь

ПГЭ (%) 9,7±0,5 15,9±3,1 р=0,07

ЛП сыворотки крови (мг/л) 858±105 1374±326

АГП сыворотки крови (Е/мл) 1,7±0,5 2,1±0,6

Печень

Кинетика накопления МДА (%) - 1 час инкубации - 2 часа инкубации 144±10 181±19 207±20 р=0,02 248±22 р=0,05

Кость альвеолярного отростка

Кинетика накопления МДА (%) - 1 час инкубации - 2 часа инкубации 144±24,1 275±61,1 116±5,3 241 ±81,5

Примечание . В табл. 2 и 3 показатель достоверности р рассчитан по сравнению с интактной группой.

Иная картина изменений показателей в изученных объектах исследования наблюдалась у молодых крыс. Так, острый ЭБС вызвал существенное (в 1,8 раза; р<0,001) увеличение перекис-ного гемолиза эритроцитов (табл. 3), что одновременно свидетельствует как об усилении процессов ПОЛ в крови, так и о снижении насыщенности мембран эритроцитов липидным антиок-сидантом токоферолом [6]. Выявлено увеличение содержания первичных продуктов ПОЛ -суммарной фракции липопротеидов сыворотки крови в 1,5 раза (р=0,004) и содержания ацил-

гидроперекисей сыворотки крови в 1,4 раза (р=0,004) по сравнению с данными интактных групп молодых крыс. В отличие от старых животных, кинетика накопления вторичных продуктов ПОЛ - МДА в гомогенатах печени молодых стрессированных крыс существенно не изменялась. В печени этих животных выявлено значительное (в 1,8 раза; р=0,05) снижение активности фермента антиоксидантной защиты -глутатион-редуктазы, что свидетельствует о недостаточной антиоксидантной защите в системе внутриклеточного метаболита глутатиона. В ко-

стной ткани пародонта молодых крыс значитель- час инкубации ее гомогенатов на 3 %; за 2 часа -ных изменений уровня ПОЛ не наблюдалось - на 8 % (данные недостоверны; табл. 3). кинетика накопления МДА увеличивалась за 1

Таблица 3

Влияние острого эмоционально-болевого стресса на показатели ПОЛ в крови и тканях молодых крыс

Исследуемый показатель Группы животных

Интактная | ЭБС

Кровь

ПГЭ (%) 8,0±0,9 14,4±0,7 р<0,001

ЛП сыворотки крови (мг/л) 816±60 1231±100 р=0,004

АГП сыворотки крови(Е/мл) 1,2±0,1 1,7±0,09 р=0,004

Печень

Кинетика накопления МДА (%) - 1 час инкубации - 2 часа инкубации 181±16 205±19 198±15,2 225±17,5

Активность ГР (нмоль/с/г) 1,09±0,22 0,59±0,09 р=0,05

Кость альвеолярного отростка

Кинетика накопления МДА (%) - 1 час инкубации - 2 часа инкубации 138±9,2 166±19,7 142±9,0 179±10,4

Таким образом, проведенные исследования выявили разную степень влияния острого ЭБС на процессы ПОЛ в крови и тканях крыс разного возраста. Так, если в печени старых крыс пере-кисные продукты накапливались быстрее, чем у молодых, то в крови молодых животных наблюдалась более значительная активация первичных продуктов ПОЛ. Несмотря на то, что под влиянием стресса в кости альвеолярного отростка крыс разного возраста существенного усиления процессов ПОЛ выявлено не было, по данным гистоморфометрии острый ЭБС у молодых животных, в отличии от старых, вызвал значительные патологические изменения в мягких и твердых тканях пародонта.

В результате проведенного стрессового воздействия ткани пародонта и СОЖ молодых крыс, более активно реагировавших на стресс, оказались к нему более чувствительны. На параллелизм метаболических и структурных изменений в слизистой оболочке желудка и тканях пародон-та при стрессе указывали Л. М. Тарасенко с со-авт [6]. Взаимозависимость этих двух отделов пищеварительного тракта, вероятно, обусловлена единством нейрогуморальных влияний, а также их высокой чувствительностью к патогенным факторам внешней среды.

Список литературы

1. Зависимость реакций соединительной ткани на стресс от типологических свойств организма / Л.М.

Тарасенко, К.С. Непорада, И.Н. Скрыпник [и др.] // Патолог. физиология и эксперим. терапия. - 2000. - № 2. - С. 17-19.

2. Параллелизм метаболических нарушений в тканях желудка и пародонта при стрессорных воздействиях/ Л.М. Тарасенко, И.Н. Скрыпник, К.С. Непорада // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2000. - Т. 130. - №7. - С. 31-34.

3. Петрушанко Т.А. Адаптация тканей пародонта к стрессовым влияниям (клинико-экспериментальное исследование): Авто-реф.дис...канд. мед.наук. / Т. А. Петрушанко - М., 1992. - 16 с.

4. Desiderato O. Development of gastric ulcers in rats following stress termination / O. Desiderato, J. MacKinnon, H. Hissom // J. Comp.Physiol. Phychol. -1974/ - V. 87. - P. 208-214.

5. Kindlova M. Age-dependent changes in the rat periodontium / M. Kindlova, L. Mrklas, Z. Maricova, Z. Broukal // J. of Periodont. Res. - 1981. - №16. - Р. 497503.

6. Методы диагностики метаболических нарушений при атеросклерозе и дифференцированном применении противоатеросклеротических средств (метод. рекоменд.) / Под. ред. О.Н. Воскресенского. - Полтава, 1982. - 28 с.

7. Путилина Е. Ф. Определения активности глу-татион-редуктазы / Е. Путилина // Методы биохими-ческитй исследований. - М.: Ин. Лит. - 1982. - С.181-183.

Поступила 09.11.17