ИММУНОГЕННЫЙ ЭПИТОП ВИРУСА ГРИППА

1. Кассета экспрессии, содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую домен НА1 гемагглютинина (НА) вируса гриппа, причем указанный домен НА1 полностью или частично лишен N-связанного гликозилирования, оперативно связанную с регуляторной областью, обладающей активностью в несиалирующих клетках организма хозяина.
2. Кассета экспрессии по п.1, в которой указанная регуляторная область представлена одной из следующих групп: регуляторная область пластоцианина; промотор напина; промотор круциферина; регуляторная область, полученная из рибулоза-1,5-бифосфат-карбоксилазы/оксигеназы (RuBisCO), a/b-связывающий хлорофилл белок, ST-LS, промотор полигедрона и промотор gp64.
3. Кассета экспрессии по п.2, в которой указанная регуляторная область пластоцианина получена из люцерны (Medicago sativa).
4. Кассета экспрессии по любому из пп.1-3, в которой нуклеиновая кислота соответствует последовательности SEQ ID NO. 17, в которой один или несколько остатков, кодирующих аминокислоты, выбранные из 154, 165 и 286 кодируют не аспарагин.
5. Кассета экспрессии по п.4, в которой один или несколько остатков, кодирующих аминокислоты из группы: 154, 165 и 286 кодируют аланин.
7. Кассета экспрессии по любому из пп.1-3, в которой нуклеиновая кислота соответствует последовательности SEQ ID NO. 17, в которой один или несколько остатков, кодирующих аминокислоты, из следующей группы: 154+2, 165+2 и 286+2 кодируют не серин и не треонин.
8. Кассета экспрессии по п.7, в которой один или несколько остатков, кодирующих аминокислоты из следующей группы: 154+2, 165+2 и 286+2, кодируют аланин.
9. Кассета экспрессии по п.8, в которой нуклеиновая кислота на 90% идентична нуклеиновой кислоте, определенной в п.7 или 8, и остаток, кодирующий аминокислоты 154+2, 165+2 и 286+2 определен в п.7 или 8.
10. Кассета экспрессии по п.8 или 9, в которой нуклеиновая кислота соответствует SEQ ID NO. 29.
11. Кассета экспрессии по п.10, в которой нуклеиновая кислота на 90% идентична с последовательностью SEQ ID NO. 29, и остатки, кодирующие аимнокислоты 154, 165 и 268 идентичны остаткам из SEQ ID NO 29.
12. Способ получения вирусоподобных частиц (ВПЧ) гриппа в несиалилирующих клетках организма хозяина, включающий:
а) введение кассеты экспрессии по любому из пп.1-11, и
б) инкубацию организма хозяина или его части в условиях, которые позволяют реализоваться экспрессии нуклеиновой кислоты, следовательно, образованию ВПЧ.
13. Способ по п.12, в котором на этапе введения нуклеиновая кислота может экспрессироваться в клетке-хозяине временно или постоянно.
14. Способ по п.12 или 13, в котором указанный несиалирующий хозяин представляет собой организм из следующей группы: растение, насекомое, дрожжевой гриб.
15. Способ по п.14, в котором растение представляет собой растение из следующей группы: растительная клетка, целое растение или его часть.
16. Способ по п.15, при котором указанная растительная клетка получена от растения N.benthiamina.
17. Способ по п.12, который дополнительно включает этап: с) сбор хозяина и очищение ВПЧ.
18. Вирусоподобная частица (ВПЧ), включающая молекулу гемагглютинина гриппа с доменом НА1, в которой один или несколько сайтов N-связанного гликозилирования в указанном субдомене НА1 отсутствуют.
19. Вирусоподобная частица (ВПЧ), включающие домен НА1 гемагглютинина вируса гриппа, полностью или частично лишенный N-связанного гликозилирования, и один или несколько липидов хозяина, причем хозяин представляет собой несиалирующий организм.
20. Вирусоподобная частица по п.19, в которой указанный липид хозяина является растительным липидом.
21. Вирусоподобная частица по п.19, которая включают НА вируса гриппа, несущую специфичные для растения N-гликаны, или модифицированные N-гликаны.
22. Вирусоподобная частица по п.21, в которой один или несколько сайтов N-связанного гликозилирования в домене НА отсутствуют, тогда как это сайты гликозилирования присутствуют в иммуногенной глобулярной головке нативного белка.
23. Вирусоподобная частица по п.22, в которой отсутствующие сайты гликозилирования находятся в пределах рецептор-связывающего субдомена иммуногенной глобулярной головки, по соседству с ним, в пределах субдомена F′2 домена НА1 или по соседству с ним.
24. Вирусоподобная частица по п.22, в которой указанный сайт гликозилирования состоит из отличительной триады гликозилирования N-X-S/T, где N - это аспарагин, Х - это любая аминокислота, за исключением пролина, S - это серин, а Т - это треонин.
25. Вирусоподобная частица по п.24, в которой один или несколько аспарагиновых остатков, входящих в состав отличительной триады гликозилирования N-X-S/T, замещены неаспарагиновой аминокислотой.
26. Вирусоподобная частица по п.25, в которой указанный аспарагиновый остаток замещен на какую-либо аминокислоту из следующей группы: Leu, He, Val, Thr, Ser и Ala.
27. Вирусоподобная частица по п.26, в которой указанный аспарагиновый остаток замещен на аланин.
28. Вирусоподобная частица по п.22, в которой один или несколько сериновых или треониновых остатков, входящих в состав отличительной триады гликозилирования N-X-S/T, замещены несериновой и нетреониновой аминокислотой.
29. Вирусоподобная частица по п.28, в которой один или несколько сериновых или треониновых остатков, входящих в состав отличительной триады гликозилирования N-X-S/T, замещены какой-либо аминокислотой из следующей группы: Ala, Val, He и Leu.
30. Вирусоподобная частица по п.29, в которой указанные сериновый или треониновый остаток замещен на аланин.
31. Вирусоподобная частица по п.22, в которой указанный сайт гликозилирования располагается в позиции, соответствующей позиции любой триады между аминокислотами 39 и 332 (нумерация соответствует нумерации аминокислот штамма А/Вьетнам/1194/04, а отсутствие указанного сайта N-гликозилирования делает молекулу более антигенной для антител, специфичных к нативной молекуле НА.
32. Вирусоподобная частица по п.31, в которой указанный сайт гликозилирования расположен в одной из следующих позиций 154, 165 и 286.
33. Вирусоподобная частица по п.32, в которой отсутствует один сайт гликозилирования.
34. Вирусоподобная частица по п.33, в которой отсутствуют два сайта гликозилирования.
35. Вирусоподобная частица по п.34, в которой отсутствуют три сайта гликозилирования
36. Вирусоподобная частица по п.22, в котором вирус гриппа представлен вирусом гриппа А и вирусом гриппа В.
37. Вирусоподобная частица по п.36, в котором вирус гриппа представлен вирусом гриппа В.
38. Вирусоподобная частица по п.36, в котором указанный НА представлен НА одного или нескольких подтипов вируса гриппа A; H1, Н2, Н3, Н4, Н5, Н6, Н7, Н8, Н9, Н10, H11, Н12, Н13, Н14, Н15 или Н16.
39. Вирусоподобная частица по п.38, в котором указанный НА представлен НА одного или нескольких подтипов из следующей группы: H1, Н2, Н3, Н5, Н7, Н9 и Н10.
40. Вирусоподобная частица по п.39, в котором указанный НА представлен НА одного или нескольких подтипов из следующей группы: HI, Н3, Н5 и Н7.
41. Вирусоподобная частица по п.36, в котором гемагглютинин вируса гриппа представлен НА вируса гриппа В или НА подтипа Н3 вируса гриппа А.
42. Вирусоподобная частица по п.40, где белок НА вируса гриппа представляет собой белок Н5 штамма Индонезия.
43. Вирусоподобная частица по п.18, которая является иммуногенной.
44. Вирусоподобная частица (ВПЧ), кодируемая кассетой экспрессии по любому из пп.1-11.
45. Вирусоподобная частица по любому из пп.18-44 в качестве вакцины, применяющейся для предотвращения или лечения вирусной инфекции у субъекта.
46. Вирусоподобная частица по п.45, при которой указанный субъект выбирается из следующей группы: человек, птицы.
47. Вирусоподобная частица по любому из пп.18-44 для предотвращения или лечения инфекции, вызванной вирусом гриппа, у субъекта.
48. Вирусоподобная частица по п.47, при которой указанный субъект выбирается из следующей группы: человек, птицы.
49. Композиция, включающая эффективное количество ВПЧ по любому из пп.18-44, а также фармацевтически приемлемый носитель.
50. Композиция по п.49, в которой фармацевтически приемлемый носитель может быть предназначен для перорального, внутрикожного, интраназального, внутримышечного, внутрибрюшинного, внутривенного или подкожного введения.
51. Композиция для иммунизации индивида, подверженного риску развития гриппа, которая содержит ВПЧ по любому из пп.18-44, а также фармацевтически приемлемый носитель.
52. Композиция по п.51, являющаяся жидкостью, суспензией, твердым вещество или порошком.
53. Композиция по п.52, которая может применяться перорально, внутрикожно, интраназально, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно или подкожно.
54. Вакцина, содержащая эффективное количество ВПЧ по любому из пп.18-44, фармацевтически приемлемый носитель с или без адъюванта.
55. Вакцина по п.54, в которой фармацевтически приемлемый носитель может быть предназначен для перорального, внутрикожного, интраназального, внутримышечного, внутрибрюшинного, внутривенного или подкожного введения.
56. Вакцина по п.55, которая не содержит адъювантов.
57. Вирусная вакцина, которая содержит ВПЧ по любому из пп.18-44, а также физиологически приемлемое формообразующее вещество или адъювант.
58. Вакцина по п.57, предназначения для применения у человека или у птиц.
59. Вакцина по п.58, пригодная для проведения профилактики еще до появления симптомов болезни, или для лечения инфекции после развития симптомов.
60. Способ индукции иммунитета против вируса гриппа у субъекта, включающий введение субъекту вирусоподобных частиц, кодируемых кассетой экспрессии по любому из пп.1-11, и фармацевтически приемлемый носитель.
61. Способ по п.60, в котором указанные вирусоподобные частицы назначаются субъекту перорально, внутрикожно, интраназально, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно или подкожно.
62. Способ индукции иммунитета против вируса гриппа у субъекта, который заключается в назначении эффективной дозы композиции по п.49, или вакцины по п.54.
63. Способ индукции иммунитета против вируса гриппа у субъекта, который заключается в назначении вирусоподобных частиц по любому из пп.18-44.
64. Способ по п.63, в котором указанные вирусоподобные частицы назначаются субъекту перорально, внутрикожно, интраназально, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно или подкожно.
65. Способ по любому из пп.60-64, при котором указанный субъект выбирается из следующей группы: человек, примат, лошадь, свинья, птица, водоплавающая птица, перелетная птица, перепел, утка, гусь, домашняя птица, курица, верблюд, представитель семейства псовых, собака, кошка, тигр, леопард, циветта, куница, каменная куница, хорек, домашнее животное, крупный рогатый скот, мышь, крыса, тюлень, кит или другое животное.
66. Способ по п.65, в котором субъект выбирается из следующей группы: человек, птицы.
67. Способ по п.66, в котором субъектом является человек.
68. Контейнер, в котором находится вакцина по п.54.
69. Контейнер по п.68, содержащий одну единицу дозирования.
70. Контейнер по п.68, содержащий много единиц дозирования.
71. Контейнер по любому из пп.68-70, являющийся шприцем.
72. Шприц, предварительно заполненный вакциной по п.54.
73. Набор, включающий контейнер по любому из пп.68-71, и инструкции по правилам применения контейнера и указанной вакцины
74. Растительная клетка, трансформированная кассетой экспрессии по любому из пп.1-11.
75. Растительная клетка по п.74, трансформированная временно или постоянно.
76. Часть растения, трансформированная кассетой экспрессии по любому из пп.1-11.
77. Часть растения по п.76, трансформированная временно или постоянно.
78. Растение, трансформированное кассетой экспрессии по любому из пп.1-11.
79. Растение по п.78, трансформированное временно или постоянно.
80. Клетка Agrobacterium, трансфицированная с кассетой экспрессии по любому из пп.1-11.