ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ И ЛЕЧЕНИЯ ЭНТОМОЗОВ И ГЕЛЬМИНТОЗОВ У ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ
PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR ANTHRAX PREVENTION AND MYIASIS AND HELMINTHIASES TREATMENT IN RUMINANTS

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к применению биологических препаратов для одновременной специфической профилактики сибирской язвы и профилактики либо терапии оводовых болезней, гельминтозов и клещевых инвазий.
В настоящее время известна вакцина против сибирской язвы, представляющая собой суспензию живых спор бескапсульного авирулентного вакцинного сибиреязвенного штамма «55-ВНИИВВиМ» [1], и препараты широкого спектра действия Иверсект и Новомек, убивающие нематод, клещей, насекомых, личинок оводов, действующим началом которых является ивермектин [2, 3]. Вакцина и противопаразитарные препараты используются независимо друг от друга и, как правило, не одномоментно, причем перед вакцинацией рекомендуется проведение обработки животных против гельминтов. Совпадение сроков иммунизации против сибирской язвы, ранней и поздней фармакотерапии эдемагеноза (сентябрь-ноябрь и март-май соответственно) свидетельствует о целесообразности создания фармацевтической композиции для комплексной лечебно-профилактической обработки животных. Использование этих препаратов в отдельности требует удвоенного количества трудозатрат (особенно в оленеводстве) и оказывает двойное стрессовое воздействие на организм животных. Борьба с гельминтозами может проводиться в разное время года, однако в настоящее время противогельминтозные мероприятия практически не проводятся.
В литературе описаны результаты исследований по разработке ассоциированных препаратов на основе вакцины против сибирской язвы с использованием антигенов бактериальной и вирусной природы: против сибирской язвы и оспы овец [4, 5]; против сибирской язвы и ящура [6]; сибирской язвы и некробактериоза [7]; сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота [8]. Известны также комплексные препараты против гельминтов и оводовых личинок, в состав которых входят одновременно два вещества, например ивермектин и клозантел [9]. Материалов по созданию комплексного препарата или использованию фармацевтической композиции против сибирской язвы, энтомозов и гельминтозов, обладающих высокой иммуногенной активностью (против сибирской язвы) и терапевтической эффективностью (против личинок овода, клещей, нематод), ареактогенностью, безвредностью в доступной литературе не обнаружено.
Применение предлагаемой фармацевтической композиции в животноводстве позволит избежать указанных недостатков раздельного применения противосибиреязвенных и противопаразитарных препаратов.
Целью изобретения является создание фармацевтической композиции для одновременной лечебно-профилактической обработки жвачных животных против сибирской язвы, энтомозов и гельминтозов, обладающей высокой иммуногенностью, ларвоцидной и противогельминтной эффективностью, ареактогенностью, безвредностью, индуцирующей формирование напряженного иммунитета, обеспечивающего защиту животных от заражения культурой вирулентного штамма возбудителя сибирской язвы, вызывающей гибель гельминтов, клещей и личинок подкожных оводов.
Указанная цель достигается фармацевтической композицией для профилактики сибирской язвы и лечения энтомозов и гельминтозов у жвачных животных, содержащей противопаразитарный препарат Иверсект или Новомек с концентрацией инвермектина 1% и суспензию спор вакцинного сибиреязвенного штамма 55-ВНИИВВиМ при следующем соотношении этих компонентов в композиции, об.%:
суспензия спор вакцинного сибиреязвенного
штамма 55-ВНИИВВиМ
0,5 -3,4
препарат Иверсект или Новомек
с концентрацией инвермектина 1%
остальное
3
3
Биологическая активность приготовленной таким образом фармацевтической композиции составляет: по сибиреязвенному компоненту 10,0-25,0 млн спор/см, по противопаразитарному компоненту 9,66-9,95 мг/см.
В результате проведенных экспериментов установлено, что предлагаемая фармацевтическая композиция создает иммунитет у однократно привитых северных оленей через 10-14 дней против сибирской язвы длительностью не менее 12 месяцев, вызывает гибель личинок подкожного овода и гельминтов. При этом по иммуногенности она не уступает моновакцине против сибирской язвы животных.
Эффективность лечебно-профилактического действия предлагаемой фармацевтической композиции проверена в производственных испытаниях в период проведения массовых обработок оленей против личинок подкожного овода на группе северных оленей (115 голов в возрасте около 1 года) в ООО «Северный» и ПСК «Оленевод» (г.Воркута). Пораженность не обрабатываемого противопаразитарными препаратами поголовья оленей для эдемагеноза и гельминтозов составляет 100% и 85% соответственно, при этом только зараженность эхинококкозом и цистицеркозом, при которых пораженные паренхиматозные органы приходится выбраковывать, достигает 25-30% общего поголовья. Обработанные фармацевтической композицией животные оставались клинически здоровыми, поствакцинальных осложнений не наблюдалось. Через 14 дней и 12 месяцев после вакцинации выборочно у 10 животных были взяты пробы крови для исследования сывороток на наличие специфических антител. Результаты определения противосибиреязвенных антител показали, что у всех животных в крови присутствуют специфические антитела в титрах 1:160-1:640, уровень которых обеспечивает защиту животных от заражения сибирской язвой. Среди привитых животных случаев заболевания сибирской язвой не наблюдалось.
Применение предлагаемой фармацевтической композиции в животноводстве позволит существенно снизить трудозатраты ветеринарных специалистов, уменьшить стрессовое воздействие на организм животных при проведении прививок, снизить пораженность поголовья эдемагенозом, цефеномиозом и гельминтозами, увеличить резистентность к другим болезням, повысить привесы и качество продукции.
Примеры конкретного выполнения:
Пример 1
3
3
3
3
3
3
К 96,6 см препарата Иверсект с концентрацией ивермектина 10 мг/смдобавляют 3,4 см суспензии спор вакцинного сибиреязвенного штамма «55 ВНИИВВиМ» с концентрацией 662 млн спор/см. Смесь тщательно перемешивают и используют для введения животным. 1 мл приготовленной таким образом фармацевтической композиции содержит 22,5 млн спор/см вакцинного сибиреязвенного штамма «55 ВНИИВВиМ» и 9,66 мг/см ивермектина.
Фармацевтическая композиция имеет вид прозрачной, слегка опалесцирующей жидкости.
Результаты испытаний совместимости и сохраняемости приготовленной таким образом фармацевтической композиции приведены в таблицах 1 и 2.
Оценку споростатического и спороцидного действия препарата Иверсект на В. anthracis, проводили в соответствии с «Методическими указаниями по отбору, испытаниям и оценке антивирусных и антибактериальных химиопрепаратов среди соединений различных химических классов», разработанными во ВНИИВВиМ и рассмотренными и одобренными на Ученом совете ВНИИВВиМ и секции Инфекционной патологии животных Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии в 2002 г. [10]. Как видно из данных таблицы 1, препарат Иверсект не обладает споростатическим и спороцидным действием.
Таблица 1Антиспоровая активность противопаразитарного препарата Иверсект (n=3)
Активность
Экспозиция
Разведение препарата
цельн.
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
1:64
1:128
Споростатическая
1
+
+
+
+
+
+
+
+
Спороцидная
5
+
+
+
+
+
+
+
+
Примечание: +наличие роста В.anthracis при посеве смеси спор с препаратом Иверсект на МПА.
Изучена сохраняемость фармацевтической композиции при температурах 4±2°С (рекомендуемая температура хранения), 18±2°С и 37±2°С.
Таблица 2Сохраняемость спорового компонента фармацевтической композиции и рабочего разведения сибиреязвенной моновакцины при различных температурных режимах
Препарат
Температура хранения, °С
Количество жизнеспособных спор (млн/мл)
исходное
1 сут.
7 сут
14 сут
Фармацевтическая композиция
4±2
22,5
22,3
22,2
21,2
18±2
22,5
21,5
17,8
13,3
37±2
22,5
20,2
2,7
1,0
Сибиреязвенная моновакцина
4±2
22,5
22,5
22,4
22,1
18±2
22,5
22,4
21,0
14,8
37±2
22,5
21,1
12,5
11,1
Как видно из данных таблицы, при рекомендуемой температуре хранения (4±2°С) активность спорового компонента сохраняется на исходном уровне в течение не менее 2-х недель, как в фармацевтической композиции, так и в рабочем разведении моновакцины.
Пример 2
В экспериментах на морских свинках и северных оленях показано, что фармацевтическая композиция, приготовленная как описано в примере 1, не уступает по иммуногенности моновакцине против сибирской язвы животных.
Результаты сравнительной проверки иммуногенности фармацевтической композиции и сибиреязвенной моновакцины на морских свинках приведены в таблице 3.
Таблица 3Оценка напряженности иммунитета к сибирской язве у морских свинок, привитых моновакциной против сибирской язвы и предлагаемой фармацевтической композицией
Препарат
Кол-во животных, способ введения препарата
Пало/всего
% защиты
после вакцинации
после контрольного заражения
Фармацевтическая композиция
5 подкожно
0/5
0/5
100
5 внутримышечно
0/5
0/5
100
Сибиреязвенная моновакцина
5 подкожно
0/5
0/5
100
Биологический контроль (интактные животные)
5 препараты не вводились
-
5/5
0
Как видно из представленных данных, процент защиты морских свинок, зараженных референс-заражающей культурой возбудителя сибирской язвы, штамм М-71 2-й вакцины Ценковского, через 10-12 суток после вакцинации, составил 100%. Все контрольные (интактные) животные после заражения культурой штамма М-71 погибли. Таким образом, при введении морским свинкам фармацевтической композиции у животных формируется полноценный противосибиреязвенный иммунитет, не отличающийся от такового при использовании противосибиреязвенной вакцины.
После введения фармацевтической композиции северным оленям (n=5) местных реакций и осложнений не наблюдалось. Отклонения в клиническом состоянии животных в течение всего срока наблюдения отсутствовали. Данные динамики клинических показателей представлены в таблице 4.
Таблица 4Показатели температуры тела, пульса и дыхания оленей после применения фармацевтической композиции (п=5)
Дни наблюдения
Температура, °С
Пульс, кол-во/мин
Дыхание, кол-во/мин
До введения препарата
38,3; 38,9; 39,0; 38,7; 38,8
57, 59, 58, 57, 59
26, 24, 28, 29,24
1
38,5; 39,0; 38,7; 38,5; 39,0
58, 60, 58, 57, 59
27, 25, 28, 29, 25
2
38,6; 38,9; 38,6; 38,7; 38,9
57, 59, 58, 57, 59
26, 28, 29, 26, 27
3
38,7; 38,9; 38,6; 39,0; 37,9
56, 58, 58, 57, 59
25, 27, 26, 28, 29
4
38,6; 38,0; 38,8; 37,6; 37,8
54, 58, 58,57, 59
26, 24, 27, 29, 27
5
39,0; 38,4; 38,6; 38,5; 37,7
59, 56, 58, 57, 59
25, 26, 29, 28, 25
6
38,6; 38,7; 39,0; 38,5; 38,7
57, 59, 58, 57, 59
27, 25, 27, 29, 26
7
38,9; 37,8; 37,9; 39,0; 38,6
58, 60, 58, 57, 59
26, 29, 29, 28, 25
8
38,7; 38,9; 38,9; 37,4; 38,6
57, 56, 58, 57, 59
27, 29, 26, 25, 29
9
39,0; 38,5; 38,6; 38,7; 38,8
59, 57, 58, 57, 59
27, 28, 26, 29, 26
10
38,9; 39,0; 38,6; 38,8; 38,7
57, 59, 58, 57, 59
26, 29, 25, 24, 27
Через 10 дней у всех подопытных оленей брали пробы сыворотки крови для исследования на наличие противосибиреязвенных антител в реакции непрямой гемагглютинации (РИГА). Титры противосибиреязвенных антител колебались в пределах 1:160-1:640, что соответствует титрам антител после применения сибиреязвенной моновакцины. При неполном гельминтологическом вскрытии по К.И.Скрябину в легких и желудочно-кишечном тракте оленей, обработанных фармацевтической композицией, жизнеспособные гельминты не обнаружены. При вскрытии оленей, привитых моновакциной против сибирской язвы и не обработанных противопаразитарными препаратами, в 80% случаев обнаружены гельминты в желудочно-кишечном тракте и в 50% случаев в легких.
Пример 3
3
3
3
3
3
3
К 99,5 см препарата Новомек с концентрацией ивермектина 10 мг/смдобавляют 0,5 см суспензии спор вакцинного сибиреязвенного штамма «55 ВНИИВВиМ» с концентрацией 2,46 млрд спор/см. Смесь тщательно перемешивают и используют для введения животным. 1 мл приготовленной таким образом фармацевтической композиции содержит 12,3 млн спор/смвакцинного сибиреязвенного штамма «55 ВНИИВВиМ» и 9,95 мг/смивермектина.
Фармацевтическая композиция имеет вид прозрачной, слегка опалесцнрующей жидкости.
Таблица 5Сохраняемость спорового компонента фармацевтической композиции и рабочего разведения сибиреязвенной моновакцины при различных температурных режимах
Препарат
Температура хранения, °С
Количество жизнеспособных спор (млн/мл)
Исходи.
1 сут.
7 сут
14 сут
21 сут
Фармацевтическая композиция
4±2
12,3
12,4
13,2
12,9
12,1
18±2
12,3
12,0
9,8
6,1
0,5
37±2
12,3
10,1
3,4
0,6
0,05
Сибиреязвенная моновакцина
4±2
12,3
12,5
12,0
11,5
12,0
18±2
12,3
12,4
11,4
7,4
6,2
37±2
12,3
11,5
6,3
1,5
0,5
Из представленных в таблице данных видно, что концентрация спор вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ В. anthracis при совместном хранении с препаратом Новомек в течение трех недель при 4°С не изменяется.
В экспериментах на морских свинках, телятах и овцах показано, что фармацевтическая композиция не уступает по иммуногенности моновакцине против сибирской язвы.
Результаты проверки иммуногенности фармацевтической композиции приведены в таблице 6.
Процент защиты морских свинок, зараженных референс-заражающей культурой возбудителя сибирской язвы штамм М-71, через 10-12 суток после вакцинации составил для фармацевтической композиции 100%, а для сибиреязвенной моновакцины 86,7%. Через 21 сутки после введения вакцины у телят титр противосибиреязвенных антител в РНГА составил 1:160-1:320, у овец-1:80-1:320.
Таблица 6Оценка напряженности иммунитета к сибирской язве у морских свинок и телят, привитых моновакциной против сибирской язвы и предлагаемой фармацевтической композицией
Препарат
Вид животного
Кол-во животных (голов)
Титры антител после вакцинации
Результаты контрольного заражения
14 сут.
21 сут.
Голов
% защиты
Выжило
Пало
Фармацевтическая композиция
морские свинки
9
Н.о.
Н.о.
9
0
100
телята
2
1:80-1:160
1:160-1:320
Н.о.
Н.о.
Н.о.
овцы
3
1:80-1:160
1:160-1:320
3
0
100
Сибиреязвенная моновакцина
морские свинки
30
Н.о.
Н.о.
26
4
86,7
телята
2
1:80-1:160
1:160-1:320
Н.о.
Н.о.
Н.о.
овцы
3
1:80-1-160
1:160-1:320
3
0
100
Биологический контроль (интактные животные)
морские свинки
10
Н.о.
Н.о.
0
10
0
Примечание: н.о. - показатель не определяется
В результате проведенных экспериментов установлено, что предлагаемая фармацевтическая композиция создает у однократно привитого крупного рогатого скота напряженный иммунитет к сибирской язве продолжительностью не менее 12 месяцев и не уступает выпускаемой в настоящее время моновакцине против этой болезни. При вскрытии опытных животных (крупный рогатый скот, овцы), убитых через 14 и 21 сутки после обработки фармацевтической композицией, в желудочно-кишечном тракте и легких жизнеспособные гельминты не обнаружены.
Пример 4
В период массовых обработок северных оленей против личинок подкожного овода (ранняя химиотерапия) изучена переносимость, безвредность и лечебно-профилактическая эффективность фармацевтической композиции в опытах на группе оленей в количестве 110 голов. Титры противосибиреязвенных антител в сыворотках крови случайно выбранных из этой группы животных составили 1:160-1:320. Через год после обработки в ноябре - декабре 11 оленей из опытной группы было убито, шкуры и туши оленей обследованы на предмет пораженности личинками подкожного овода. Эффективность фармацевтической композиции против носоглоточного и подкожного овода составила 98,8-100%.
Таким образом, предлагаемая фармацевтическая композиция создает у однократно привитых животных напряженный иммунитет против сибирской язвы и обладает терапевтическим эффектом против энтомозов и гельминтозов.
Источники информации
1. Патент РФ №2095409. Способ изготовления вакцины против сибирской язвы животных. / Бакулов И.А., Гаврилов В.А., Селиверстов В.В. и др. (РФ). 1997.
2. Taylor, M.A. Efficacy of ivermectin against benzimidazole-resistant nematodes of sheep. / M.A.Taylor, K.R.Hunt, C.A.Wilson, D.G.Baggott // Veterinary Record. - 1990. - V.127. - 12. - P.302-303.
3. Викторов, А.В. Ивермектин, развитие резистентности. / А.В.Викторов // Ветеринария. - 2002. - 4. - С.50-54.
4. Лихачев Н.В., Колесов С.Г., Борисович Ю.Ф., Преснов И.И. "Ассоциированная вакцинация овец против сибирской язвы и оспы". Тр. ГНКИ ветпрепаратов, 1967. - Т.14. - С.35-44.
5. Патент РФ 2181296, МПК А61К 39/295, А61К 39/07, 39/275. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и оспы овец. / В.М.Балышев, Ю.О.Селянинов, И.А.Бакулов, А.Н.Никулин, Н.С.Косяченко, Т.Ф.Горшкова, В.И.Жестерев, Е.Н.Глухарева, Ф.А.Бадаев (РФ). - №2000118418; заявлено 13.07.2000; опубл. 20.04.2002, Бюл. №11.
6. Патент РФ №2056861, 1996, Бакулов И.А., Гаврилов В.А., Собакин А.С. и др. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и ящура и способ профилактики сибирской язвы и ящура.
7. Патент РФ 2286174, МПК А61К 39/116, А61Р 31/04. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза животных. / Ю.О.Селянинов, О.И.Соломаха, А.В.Коваленко, Л.В.Кириллов, Е.Г.Лавченко, В.М.Котляров, Е.С.Казановский, Т.Е.Фирсова, И.Д.Гнездилов (РФ). - №2002127716, заявлено 16.10.2002; опубл. 27.10.2006, Бюл. №30.
8. Патент РФ 2286173, МПК А61К 39/07, А61К 39/187, А61Р 31/00. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота. /Ю.О.Селянинов, Н.В.Грехова, Т.Ф.Горшкова, Н.С.Косяченко, Е.Н.Глухарева, И.Ю.Егорова, В.И.Жестерев (РФ). - №2005108294; заявлено 24.03.2005; опубл. 27.10.2006, Бюл. №30.
9. Сафиуллин P.P. Фармако-токсикологическая характеристика и терапевтическая эффективность комплексного препарата на основе ивермектина и клозантела при паразитарных болезнях крупного рогатого скота. Автореферат дисс.…канд. биол. наук. М., 2003.
10. Методические указания по отбору, испытаниям и оценке антивирусных и антибактериальных химиопрепаратов среди соединений различных химических классов. Покров, 2002.