СПОСОБЫ И МАТЕРИАЛЫ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ АПОПТОЗА

1. Способ детектирования апоптоза в клетке млекопитающего, предусматривающий:
(а) контактирование клетки с антителом, которое связывается с фрагментом белка, образующегося в процессе апоптоза, где указанное антитело связывается с фрагментом белка AP2-α (SEQ ID NO: 1), тяжелой цепи клатрина (SEQ ID NO: 2), AP1/2β (SEQ ID NO: 3) или динамина (SEQ ID NO: 4);
(b) определение количества антитела, которое связывается с фрагментом белка, образующимся в процессе апоптоза; и
(с) сравнение количества связанного антитела на стадии (b) с количеством антитела, которое связывается с фрагментом белка в клетках млекопитающих, не подвергающихся апоптозу, где апоптоз детектируется в том случае, если указанное количество на стадии (b) превышает количество, присутствующее в клетках, не подвергающихся апоптозу.
2. Способ по п.1, где апоптоз в указанной клетке инициирован рецептором «гибели» 4 (SEQ ID NO:5), рецептором «гибели» 5 (SEQ ID NO:6) или Fas (SEQ ID NO:8).
3. Способ по п.2, где апоптоз в указанной клетке инициирован контактированием клетки с Apo2L/TRAIL (SEQ ID NO:7), FasL (SEQ ID NO:9), с анти-Fas-антителом-агонистом, анти-DR4-антителом-агонистом или с анти-DR5-антителом-агонистом.
4. Способ по п.3, дополнительно предусматривающий стадию детектирования апоптоза для получения информации об эффективности терапии, включающую в себя введение Apo2L/TRAIL (SEQ ID NO: 7), FasL (SEQ ID NO:9), анти-Fas-антитела-агониста, анти-DR4-антитела-агониста или анти-DR5-антитела-агониста.
5. Способ по п.1, где указанное антитело связывается с фрагментом белка AP2α (SEQ ID NO: 1), и где указанный фрагмент белка AP2α, связанный с антителом, имеет массу 64 или 33 кДа.
6. Способ по п.1, где указанный фрагмент белка, связанный с антителом, включает в себя DVFD SEQ ID NO: 1 или GPAA SEQ ID NO: 1.
7. Способ по п.1, где указанной клеткой является человеческая раковая клетка толстой кишки, ободочной кишки, легких, молочной железы, предстательной железы, мочевого пузыря, почек, яичника, головного мозга, меланомы, лейкоза или миеломы.
8. Способ по п.1, где указанный фрагмент белка AP2-α (SEQ ID NO: 1), тяжелой цепи клатрина (SEQ ID NO: 2), AP1/2β (SEQ ID NO: 3) или динамина (SEQ ID NO: 4) обнаруживают с помощью иммуноблоттинга, твердофазного иммуноферментного анализа или иммуногистохимического анализа.
9. Способ по п.1, дополнительно предусматривающий оценку уровня экспрессии по меньшей мере одной мРНК в клетке млекопитающего.
10. Способ по п.1, который, перед контактированием указанной клетки с антителом, дополнительно предусматривает обработку клетки млекопитающего одним или несколькими тест-агентами, так, чтобы детектирование апоптоза в клетке млекопитающего позволяло идентифицировать один или несколько тест-агентов в качестве индукторов апоптоза в клетках млекопитающих.
11. Способ идентификации человеческой раковой клетки, которая предположительно отвечает на действие или которая восприимчива к действию терапевтического средства, индуцирующего апоптоз в человеческих раковых клетках, где указанный способ включает в себя
обработку человеческих раковых клеток указанным терапевтическим средством;
анализ человеческих раковых клеток, обработанных терапевтическим средством, на предмет наличия фрагмента белка AP2-α (SEQ ID NO: 1), тяжелой цепи клатрина (SEQ ID NO: 2), AP1/2β (SEQ ID NO: 3) или динамина (SEQ ID NO: 4);
сравнение количества фрагмента белка в человеческих раковых клетках с количеством фрагмента белка в контрольных человеческих раковых клетках, не обработанных указанным лигандом;
где апоптоз наблюдается в том случае, если количество фрагмента белка, присутствующего в человеческих раковых клетках, обработанных указанным терапевтическим средством, превышает количество фрагмента белка, присутствующего в контрольных человеческих раковых клетках, не обработанных указанным терапевтическим средством; и
где обнаружение апоптоза в человеческих раковых клетках позволяет идентифицировать человеческие раковые клетки как клетки, которые предположительно отвечают на действие или которые восприимчивы к действию указанного терапевтического средства.
12. Способ по п.11, где терапевтическое средство индуцирует передачу сигнала рецептора «гибели» 4 (SEQ ID NO:5), рецептора «гибели» 5 (SEQ ID NO:6) или Fas (SEQ ID NO:8).
13. Способ по п.11, где фрагмент белка AP2-α (SEQ ID NO: 1), тяжелой цепи клатрина (SEQ ID NO: 2), AP1/2β (SEQ ID NO: 3) или динамина (SEQ ID NO: 4) обнаруживают с помощью иммуноблоттинга, твердофазного иммуноферментного анализа или иммуногистохимического анализа.
14. Способ по п.11, дополнительно предусматривающий оценку уровня экспрессии по меньшей мере одной мРНК в человеческих раковых клетках.
15. Способ по п.11, дополнительно предусматривающий оценку уровня экспрессии по меньшей мере двух различных мРНК в человеческих раковых клетках.
16. Способ по п.11, где человеческой раковой клеткой является человеческая раковая клетка толстой кишки, ободочной кишки, легких, молочной железы, предстательной железы, мочевого пузыря, почек, яичника, головного мозга, меланомы, лейкоза или миеломы.
17. Способ по п.11, где апоптоз в человеческой раковой клетке инициирован контактированием клетки с Apo2L/TRAIL (SEQ ID NO:7), FasL (SEQ ID NO:9), анти-Fas-антителом-агонистом, анти-DR4-антителом-агонистом или с анти-DR5-антителом-агонистом.
18. Способ по п.11, где человеческие раковые клетки получают путем биопсии и культивируют в культуре in vitro в течение менее чем одного месяца.
19. Способ по п.11, где фрагментом белка является фрагмент белка AP2-α, включающий в себя DVFD SEQ ID NO: 1 или GPAA SEQ ID NO: 1.
20. Набор для обнаружения апоптоза в клетках млекопитающих, включающий в себя:
(а) «первое» антитело, которое связывается с фрагментом белка AP2-α (SEQ ID NO: 1), тяжелой цепи клатрина (SEQ ID NO: 2), AP1/2β (SEQ ID NO: 3) или динамина (SEQ ID NO: 4);
(b) «второе» антитело, которое связывается с фрагментом белка AP2-α (SEQ ID NO: 1), тяжелой цепи клатрина (SEQ ID NO: 2), AP1/2β (SEQ ID NO: 3) или динамина (SEQ ID NO: 4), где указанные «первое» и «второе» антитела не связываются с одним и тем же белком;
(с) контейнер для (a) и (b); и
(d) инструкции по применению антитела в указанном наборе для обнаружения апоптоза в клетках млекопитающих.