ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНОЕ КОМПОЗИЦИОННОЕ СРЕДСТВО
ANTITUBERCULOUS COMPOSITE MEDICATION

Изобретение относится к фармацевтической химии и медицине, а именно к фтизиатрии, к композиционным средствам на основе изониазида и природных соединений.
Существует большое количество антитуберкулезных препаратов, которые, отличаясь по активности и токсичности, делятся на препараты I группы (изониазид, этамбутол, пиразинамид, стрептомицин, рифампицин), имеющие высокий уровень эффективности при относительно невысокой токсичности, и препараты II группы (циклосерин, капреомицин, канамицин), являющиеся более токсичными [Вартанян Р.С. Синтез основных лекарственных средств. М., 2005. - 845 с.; Богадельникова И.В., Перельман М.И. Антибактериальная терапия туберкулеза легких. М., 1997. - 80 с.]. Среди всех перечисленных препаратов изониазид
50
представляющий собой гидразид изоникотиновой кислоты, признан лучшим по многим показателям и входит в состав практически всех схем профилактики и лечения туберкулеза [Визель А.А. Лечение туберкулеза органов дыхания. Казань: ГПВЭО «Саламат», 1998. - 119 с.: Машковский М.Д. Лекарственные средства, т.2. Харьков: Торгсин, 1998. - С.332]. Однако изониазид токсичен - ЛД=178 мг/кг, и при его длительном применении нарушается гемопоэз, функции печени, почек, желудочно-кишечного тракта, наблюдается побочное действие на нервную систему [Булавин С.П. Фармакологическая характеристика тубазида. // Бюл. ВИ-ЭВ. М., 1982. Вып.48, с.61-62. Фармакология и токсикология. 1987. Т.50. Вып.4. С.87]. Поэтому актуальной задачей является разработка способов понижения токсичности изониазида без снижения его эффективности.
50
50
50
50
К таковым можно отнести создание композиций изониазида с 5-фтор урацилом (ЛД=268 мг/кг) [Пат. RU 2211035 С1, опубл. 27.08.2003] или с натриевыми солями ДНК из молок рыб (ЛД=926 мг/кг) [Пат. RU 2190417 С2, опубл. 10.10.2002]. Применение вместо изониазида его соли с бис(оксиметил)фосфиновой кислотой приводит к снижению токсичности препарата в несколько раз (ЛД=668 мг/кг) [Пат. RU 2281939 С1, опубл. 20.08.2006]. Известно, что использование изониазида в виде композиций с природными полисахаридами различного строения (крахмал, декстран, пектин) снижает его токсичность. Эти композиции пролонгированного действия позволяют уменьшать терапевтические дозы изониазида [Пат. RU 2332216, опубл. 27.01.2008; Пат. RU 2146130, опубл. 10.03.2000; Пат. RU 2221565, опубл. 20.01.2004; Пат. RU 2087146, опубл. 20.08.1997; Пат. RU 2185166 С2, опубл. 20.07.2002]. Максимальное снижение острой токсичности (ЛД=773 мг/кг) в этом ряду противотуберкулезных средств было обнаружено для композиции изониазида с пектином [Пат. RU 2332216, опубл. 27.01.2008, прототип]. Однако все вышеприведенные средства не позволяют кардинально решить проблему токсичности изониазида, так как речь идет о снижении токсичности лишь в 2-4 раза.
Цель изобретения - нетоксичные и эффективные новые противотуберкулезные композиционные средства на основе изониазида.
Технический результат предлагаемого изобретения заключается в снижении токсичности противотуберкулезного лекарственного средства изониазид в 2-100 раз и достигается использованием изониазида в виде композиции с гликозидом растения Stevia rebaudiana, а именно стевиозидом и стевиолбиозидом, или со смесью гликозидов указанного растения (подсластителем).
Следует отметить, что в литературе подсластителем на основе гликозидов растения Stevia rebaudiana часто называют два разных вещества: во-первых, индивидуальный гликозид стевиозид [Pat. Application US 20070082103, publ. 12.04.2007; Pat Application US 20060134292, publ. 22.06.2006], и, во-вторых, им называют продукт, представляющий собой смесь гликозидов растения Stevia rebaudiana [Пат. RU 2250041, опубл. 20.04.2005; пат. RU 2248708, опубл. 27.03.2005; пат. RU РФ 2243661, опубл. 10.01.2005]. Натуральный пищевой подсластитель, производимый фирмой Stevian Biotechnology Corp.(Малайзия) под названием SWETA (СВИТА), разрешен НИИ Питания РАМН РФ к применению в пищевой промышленности при производстве хлебобулочных, кондитерских изделий, в молочной промышленности; при производстве безалкогольных, слабоалкогольных, алкогольных напитков; пищевых концентратов, фруктовых наполнителей, соусов, кетчупов, компотов, фруктовых и овощефруктовых напитков, нектаров, а также детского питания.
Из литературы известно, что композиции (клатраты) гликозидов растения Stevia rebaudiana, а именно стевиозида и ребаудиозида, с фармаконами кардиотропного и психотропного действия проявляют как более сильную активность, так и новые фармакологические свойства [Толстикова Т.Г. и др. Вестн. РАН. 2007. Т.77. №10. С.867-874; Толстикова Т.Г. и др. ДАН. 2005. Т.403. №2. С.1-3]. Известны стевиозидосодержащие фармацевтические композиции [Пат. РФ 2297234, опубл. 20.04.2007; Заявка РФ 2004109153, опубл. 20.04.2005], где подсластитель добавлен в незначительном количестве для улучшения вкуса. Однако сведения об использовании гликозидов Stevia rebaudiana или подсластителей на их основе при лечении туберкулеза в литературе отсутствуют.
Заявляемые новые противотуберкулезные средства представляют собой композиции изониазида как с индивидуальным гликозидом растения Stevia rebaudiana, а именно стевиозидом и стевиолбиозидом, так и с пищевым подсластителем, представляющим собой смесь гликозидов указанного растения при следующем соотношении компонентов, мас.%:
изониазид - 2-98,
гликозид или смесь гликозидов - остальное.
Стевиозид и стевиолбиозид являются природными соединениями формулы
1
2
2
где: R=β-Glc, R=β-Glc-β-Glc стевиозид,
1
2
2
R=H, R=β-Glc-β-Glc стевиолбиозид
[J.Natural Products. 1987. - V.50. №6. - Р.1019].
Индивидуальные гликозиды - стевиозид и стевиолбиозид, а также подсластитель SWETA (СВИТА) использованы, производства Stevian Biotechnology Corp. (Малайзия).
Заявляемые противотуберкулезные средства получают перемешиванием изониазида и гликозида (или подсластителя) в определенном весовом соотношении при 50°С в водном этаноле до полного их растворения, удалением растворителя в вакууме и высушиванием остатка до постоянного веса. Продукты представляет собой порошки от светло-желтого до кремового цвета.
37
V
Исследование противотуберкулезной активности стевиозида, стевиолбиозида, подсластителя SWETA и их композиций с изониазидом в опытах in vitro проводили бактериологически, методом вертикальной диффузии на плотной питательной среде «Новая» [Василев В.Н. Микобактериозы и микозы легких, Медицина и физкультура, София (1971), с.377-379]. Культуру лабораторного штамма (HR или M.Avium) взвешивали на торсионных весах, навеску в количестве 10 мг помещали в фарфоровую ступку, тщательно растирали и готовили суспензию культуры по бактериальному стандарту мутности 100 млн микробных тел в миллилитре (10 единиц). Полученную взвесь в количестве 0.2 мл засевали в пробирки с питательной средой, в которые закапывали 0.3 мл препаратов, приготовленных методом серийных разведений. Пробирки помещали в термостат в вертикальном положении и инкубировали при 37°С в течение 10-12 суток. Изучение действия веществ на микобактерию туберкулеза проводили параллельно в 3-х пробирках на каждую концентрацию.
Исследование острой токсичности стевиозида, стевиолбиозида, подсластителя и их композиций с изониазидом проводили на беспородных белых мышах обоего пола массой 19.0±2.0 г, содержащихся на стандартном рационе питания в условиях природного режима освещения помещения при комнатной температуре. В экспериментальную группу животных отбирали по методу случайных выборок. Водные растворы препаратов вводили зондом в желудок (per os), каждый препарат исследовался в интервале от 4 до 7 доз. На каждую дозу использовалось 10 мышей.
Содержание стевиозида, стевиолбиозида или пищевого подсластителя в композициях с изониазидом варьировали от 2 до 98 мас.%. Данные о противотуберкулезной активности и острой токсичности представлены в таблице.
50
37
V
В указанном диапазоне концентраций у композиций изониазида со стевиозидом токсичность (ЛД) изменялась от 260 до 7600 мг/кг, антитуберкулезная активность (минимальная ингибирующая концентрация, МИК) в отношении штамма HR изменялась от 0.64 до 6.19 мкг/мл, а в отношении штамма M.Avium изменялась от 0.6 до 10.3 мкг/мл.
50
37
V
У композиций изониазида со стевиолбиозидом в указанном диапазоне концентраций токсичность (ЛД) изменялась от 243 до 7700 мг/кг, антитуберкулезная активность (МИК) в отношении штамма HR изменялась от 0.6 до 3.4 мкг/мл, а в отношении штамма M.Avium изменялась от 0.6 до 11.3 мкг/мл.
50
37
V
У композиций изониазида с пищевым подсластителем в указанном диапазоне концентраций токсичность (ЛД) изменялась от 353 до 18250 мг/кг, антитуберкулезная активность (МИК) в отношении штамма HR изменялась от 0.2 до 3.1 мкг/мл.
Выявлено, что даже незначительное количество гликозида в заявляемых композициях приводит к существенному снижению токсичности изониазида. Кроме того, впервые установлено, что стевиозид, стевиолбиозид, а также пищевой подсластитель и сами по себе проявляют достаточно высокую противотуберкулезную активность (таблица).
Таким образом, композиции изониазида как с индивидуальными гликозидами растения Stevia rebaudiana, а именно стевиозидом или стевиолбиозидом, так и со смесью гликозидов указанного растения (подсластителем), проявляя высокую противотуберкулезную активность, являются, в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности», малоопасными веществами и могут использоваться для создания новых противотуберкулезных лекарственных средств.
Таблица
Данные по противотуберкулезной активности и острой токсичности
Вещество, композиция
Концентрация гликозида (подсластителя), %
МИК, мкг/мл
ЛД<sub>50</sub>, мг/кг
H<sub>37</sub>R<sub>V</sub>
M.Avium
изониазид
-
0.15
0.10
178
стевиозид
100
7.50
12.50
8000
стевиолбиозид
100
3.75
12.50
8000
подсластитель
100
3.12
3.12
20000
изониазид - стевиозид
2
0.64
0.60
260
25
6.30
6.30
1170
98
6.19
10.30
7600
изониазид - стевиолбиозид
2
0.60
0.60
243
70
4.40
4.30
3930
98
3.40
11.30
7700
изониазид - подсластитель
2
0.20
-
353
50
1.25
-
2020
98
3.10
-
18250