МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО, СПОСОБНОЕ СВЯЗЫВАТЬСЯ СО СПЕЦИФИЧЕСКИМ ПРЕРЫВИСТЫМ ЭПИТОПОМ, РАСПОЛОЖЕННЫМ В ОБЛАСТИ AD1 ГЛИКОПРОТЕИНА gB ЦИТОМЕГАЛОВИРУСА ЧЕЛОВЕКА, И ЕГО АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ФРАГМЕНТ

1. Моноклональное антитело, которое специфически связывается с областью AD1 гликопротеина gB цитомегаловируса человека (HCMV), и которое способно нейтрализовать его биологическую активность, где
(i) вариабельная область тяжелой цепи включает:
(a) аминокислотную последовательность CDR1 тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:13 и аминокислотной последовательности, содержащей консервативные аминокислотные замены для одного-четырех аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID NO:13;
(b) аминокислотную последовательность CDR2 тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:14 и аминокислотной последовательности, содержащей консервативные аминокислотные замены для одного-четырех аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID NO:14, и
(c) аминокислотную последовательность CDR3 тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:15 и аминокислотной последовательности, представленной аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:22 и содержащей замены для одного-четырех аминокислотных остатков по сравнению с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:15, и
(ii) вариабельная область легкой цепи включает:
(а) аминокислотную последовательность CDR1 легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:16 и аминокислотной последовательности, содержащей консервативные аминокислотные замены для одного-четырех аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID NO:16;
(b) аминокислотную последовательность CDR2 легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:17 и аминокислотной последовательности, содержащей консервативные аминокислотные замены для одного-четырех аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID NO:17, и
(c) аминокислотную последовательность CDR3 легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:18 и аминокислотной последовательности, содержащей консервативные аминокислотные замены для одного-четырех аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID NO:18,
или его антигенсвязывающий фрагмент.
2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где
(i) вариабельная область тяжелой цепи включает:
(a) аминокислотную последовательность CDR1 тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:13 и аминокислотной последовательности, содержащей консервативные аминокислотные замены для одного-двух аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID NO:13;
(b) аминокислотную последовательность CDR2 тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:14 и аминокислотной последовательности, содержащей консервативные аминокислотные замены для одного-двух аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID NO:14, и
(с) аминокислотную последовательность CDR3 тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:15 и аминокислотной последовательности, представленной аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:22 и содержащей замены для одного-двух аминокислотных остатков по сравнению с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:15, и
(ii) вариабельная область легкой цепи включает:
(a) аминокислотную последовательность CDR1 легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:16 и аминокислотной последовательности, содержащей консервативные аминокислотные замены для одного-двух аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID NO:16;
(b) аминокислотную последовательность CDR2 легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:17 и аминокислотной последовательности, содержащей консервативные аминокислотные замены для одного-двух аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID NO:17, и
(c) аминокислотную последовательность CDR3 легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:18 и аминокислотной последовательности, содержащей консервативные аминокислотные замены для одного-двух аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID NO:18,
или его антигенсвязывающий фрагмент.
3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.2, где
(i) вариабельная область тяжелой цепи включает:
(a) аминокислотную последовательность CDR1 тяжелой цепи, которая включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13;
(b) аминокислотную последовательность CDR2 тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:14 и аминокислотной последовательности, содержащей консервативную аминокислотную замену для одного аминокислотного остатка в аминокислотной последовательности SEQ ID NO:14, и
(c) аминокислотную последовательность CDR3 тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:15 и аминокислотной последовательности, представленной аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:22 и содержащей замены для одного-двух аминокислотных остатков по сравнению с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:15, и
(ii) вариабельная область легкой цепи включает:
(a) аминокислотную последовательность CDR1 легкой цепи, которая включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:16;
(b) аминокислотную последовательность CDR2 легкой цепи, которая включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO; 17, и
(c) аминокислотную последовательность CDR3 легкой цепи, которая включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:18,
или его антигенсвязывающий фрагмент.
4. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.3, где антитело включает:
(i)
(a) аминокислотную последовательность CDR1 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13;
(b) аминокислотную последовательность CDR2 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14, и
(с) аминокислотную последовательность CDR3 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:15, или аминокислотную последовательность CDR3 тяжелой цепи, включенную в аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:28-31, 33, 38-47, 49, 50, 54, 55, 57, 60, 61, 63 и 82-107, и
(ii)
(a) аминокислотную последовательность CDR1 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:16;
(b) аминокислотную последовательность CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:17, и
(c) аминокислотную последовательность CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:18.
5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.4, где антитело включает:
(i)
(a) аминокислотную последовательность CDR1 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13;
(b) аминокислотную последовательность CDR2 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14, и
(c) аминокислотную последовательность CDR3 тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:15, и
(ii)
(a) аминокислотную последовательность CDR1 легкой цепи,
включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:16;
(b) аминокислотную последовательность CDR2 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:17, и
(c) аминокислотную последовательность CDR3 легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:18.
6. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, включающие:
(a) вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:10 или аминокислотной последовательности, на 95% или более идентичной аминокислотной последовательности SEQ ID NO:10, и
(b) вариабельную область легкой цепи (LCVR), состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:12 или аминокислотной последовательности, на 95% или более идентичной аминокислотной последовательности SEQ ID NO:12.
7. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.6, включающие:
(a) вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10, и
(b) вариабельную область легкой цепи (LCVR), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:12.
8. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, включающие:
(a) тяжелую цепь (Н-цепь), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 или 6 или аминокислотную последовательность, на 98% или более идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:2 или 6, и
(b) легкую цепь (L-цепь), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 или 8 или аминокислотную последовательность, на 98% или более идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:4 или 8.
9. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.8, включающие:
(a) тяжелую цепь (Н-цепь), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 или 6, и
(b) легкую цепь (L-цепь), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 или 8.
10. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.3-9, где антитело представляет собой моноклональное антитело человека.
11. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.3-9, где антитело принадлежит к классу (подклассу) IgG1 (λ).
12. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.3-9, концентрация которых при 50% ингибировании образования бляшек составляет 0,05 мкг/мл (приблизительно 0,3 нМ) или менее для лабораторного штамма HCMV (AD169) в присутствии фибробластов человека.
13. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.3-9, которые обладают способностью блокировать передачу инфекции от клетки к клетке на 50% или более при 0,2 мкг/мл (приблизительно 1,3 нМ) или менее в клеточной линии (MRC-5) фибробластов человека, инфицированных лабораторным штаммом HCMV (AD169).
14. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения заболевания, связанного с цитомегаловирусом человека (HCMV), содержащая антитело или антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.3-9 и фармацевтически приемлемый носитель.
15. Фармацевтическая композиция по п.14, где заболевание, связанное с HCMV, представляет собой (а) интерстициальную пневмонию, ретинит, гастроэнтерит или энцефалит, вызываемые реактивацией HCMV при состоянии иммунодефицита, (b) врожденную CMV инфекцию, обусловленную передачей инфекции HCMV от беременной женщины плоду, (с) невынашивание беременности, мертворождение или смерть вскоре после рождения, обусловленные указанной врожденной CMV инфекцией, (d) низкую массу при рождении, гепатоспленомегалию, желтуху, тромбоцитопеническую пурпуру, микроцефалию, нарушение умственного развития, задержку интеллектуального развития, хориоретинит или нарушение слуха в случае выживания при указанной врожденной CMV инфекции; или (е) патологию функции печени, интерстициальную пневмонию или мононуклеоз, который вызван HCMV инфекцией при рождении или в младенчестве.
16. Нуклеиновая кислота, кодирующая моноклональное антитело против HCMV или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связываются с областью AD1 гликопротеина gB HCMV и которые способны нейтрализовать его биологическую активность, где выделенная нуклеиновая кислота выбрана из нуклеиновых кислот, кодирующих аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 13-18, 28-31, 33, 38-47, 49, 50, 54, 55, 57, 60, 61, 63, 82-107 и 110, и нуклеиновых кислот, которые гибридизуются с ними в очень жестких условиях.
17. Вектор, включающий нуклеиновую кислоту по п.16.
18. Клетка-хозяина, включающая вектор по п.17.
19. Способ получения антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.3-9, включающий стадию культивирования клетки-хозяина по п.18.
20. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.6, включающие:
(а) вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10, или аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (HCVR), включенную в аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:28-31, 33, 38-47, 49, 50, 54, 55, 57, 60, 61, 63, 82-107 и 110, и
(b) вариабельную область легкой цепи (LCVR), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:12.
21. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.8, включающие:
(a) тяжелую цепь (Н-цепь), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 или 6, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28-31, 33, 38-47, 49, 50, 54, 55, 57, 60, 61, 63, 82-107, 110 или любую из указанных последовательностей без сигнальной последовательности, и
(b) легкую цепь (L-цепь), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 или 8.
22. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.3-9, 20 и 21, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связываются с эпитопом, который включает две или более прерывистых последовательностей, находящихся в области аминокислотной последовательности, состоящей из непрерывных аминокислотных остатков с 549-го по 580-й (т.е. SEQ ID NO:23), и аминокислотной последовательности, состоящей из непрерывных аминокислотных остатков с 596-го по 640-й (т.е. SEQ ID NO:24) гликопротеина gB HCMV.
23. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.3-9, 20 и 21, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент распознают в качестве эпитопа прерывистую последовательность, которая находится в области AD1 гликопротеина gB HCMV и включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:25, аминокислотную последовательность SEQ ID NO:26 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO:27.