Количественное определение амфетамина, метамфетамина, МДА, МДМА, мдеа, мбдб в биожидкостях методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Судебно-химические и химико-токсикологические исследования биологических объектов живых лиц (кровь, моча, рвотные массы, промывные воды желудка, слюна, волосы, ногти) на наличие потенциально токсичных веществ по направлениям врачей медицинских учреждений Московской области и сотрудников правоохранительных учреждений Московской области осуществляются в судебно-химическом отделе и районных судебно-хи-мических отделениях ГБУЗ МО «Бюро СМЭ. В 2014 году в ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» зарегистрировано и проведено 31514 судебно-химических исследований (экспертиз) биообъектов живых лиц.

Предлагаемые правила регламентируют забор, упаковку, направление, хранение, доставку из медицинских организаций Московской области биологического материала от живых лиц для проведения в ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» судебно-химических и химико-токсикологических исследований с целью обнаружения алкоголя, летучих и технических жидкостей, наркотических средств, лекарственных, психотропных и других токсических веществ.

Разработаны требования по отбору и инструкции по технике взятия крови, мочи, промывных вод желудка, слюны, волос, ногтей.

Предложены формы направлений для проведения СХИ. Изложены требования по маркировке и упаковке, хранению и доставке биологических объектов для проведения СХ и ХТИ и СХЭ.

ВЫВОДЫ

В целях организации работы по забору, упаковке, направлению, хранению, доставке из медицинских организаций Московской области биологического материала от живых лиц для проведения в ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» судебно-химических и химико-токсикологических исследований с целью обнаружения алкоголя, летучих и технических жидкостей, лекарственных, наркотических, психотропных и других токсических веществ подготовлен проект приказа Министерства здравоохранения Московской области.

I Количественное определение амфетамина, метамфетамина, МОА, МАМА, МОЕА, МБОБ в биожидкостях методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором

• Н. А. Крупина, М. В. Марченко, Р. Р. Краснова ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» МЗ МО (нач.— д.м.н., проф. В. А. Клевно) Аннотация: Доклад посвящен хромато-масс-спектрометрическому методу определения амфетамина, метамфетамина, 3,4- метилендиоксиамфетамина (МДА), 3,4- метилендиоксиметамфетамина (МДМА), 3,4-метилендиоксиэтиламфетамина (МДЕА), 1-(1,3-бензодиоксол-5-ил)-^метилбутан-2-ами-на (МБДБ) в моче с использованием в качестве калибраторов поверочных контролей мочи с целевыми значениями каждого из соединений; амфетамина и МДМА в крови с использованием в качестве калибраторов - стандартных растворов амфетамина и МДМА. Ключевые слова: амфетамин, метамфет-амин, МДА, МДМА, МДЕА, МБДБ, газовая хроматография с масс-селективным детектором, жидкость - жидкостная экстракция

Quantitative determination of amphetamine, metamfetamine, MDA, MDMA, MDEA, MBDB in biological fluids by gas chromatography / mass-spectrometry

• N. A. Krupina, M. V. Marchenko, R. R. Krasnova Abstract: The report focuses on GC/MS method for the determination of amphetamine, methamphetamine, MDA, MDMA, MDEA, MBDB in urine using as calibrators - urine calibration controls with target values of each + 25% and -25% from cut-off values (MEDICHEM); amphetamine and MDMA in the blood using as calibrators - standard solutions of amphetamine and MDMA (GosNIIOKHT). Keywords: amphetamine, methamphetamine, MDA, MDMA, MDEA, MBDB, GC / MS, liquid -liquid extraction

ВВЕДЕНИЕ

На протяжении последних десятилетий проведение исследований объектов биологического происхождения на соединения класса амфетаминов не теряет своей актуальности. Надежным и наиболее распространенным методом идентификации и определения таких соединений является газовая хроматография с масс-селективным детектором с применением процедуры жидкость-жидкостной экстракции.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

По отчетным данным судебно-химического отдела ГБУЗ МО Бюро СМЭ за 2014 год количество случаев обнаружения различных соединений класса амфетаминов при аналитической диагностики наркотического опьянения у живых лиц составляет 1630 случаев, что составляет 18% от общего числа обнаруженных наркотических средств и занимает 3 место после наркотических веществ группы опия и каннабиноидов. По сравнению с 2004 годом количество обнаружений соединений класса амфетаминов у живых лиц выросло в 13 раз. Количество случаев их обнаружения за 2014 год в трупном материале составляет 162 случая, что составляет 6% от общего числа обнаруженных наркотических средств и занимает также 3 место после наркотических веществ группы опия и каннабинои-дов.

Процедура подготовки биологических жидкостей основана на жидкость - жидкостной экстракции с последующим проведением дериватизации с использованием пентафторпропионового ангидрида (ПФПА). ПФПА производные амфетамина, метамфетамина, МДА, МДМА, МДЕА, МБДБ идентифицируют и определяют методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором в режиме сканирования индивидуальных ионов (SIM) по масс-спектрам электронного удара методом внутреннего стандарта. Для количественного определения амфетамина, метамфетамина, МДА, МДМА, МДЕА, МБДБ в моче используют в качестве калибраторов поверочные контроли мочи с целевыми значениями каждого из производных фенилалакиламина (Drug U-Confirmation фирмы MEDICHEM) в двухуровневой концентрации (концентрация добавленных веществ лежат в диапазоне -25% и +25% от пороговых значений (величины Cut-off). Для количественного определения амфетамина и МДМА в крови используют в качестве калибраторов стандартные растворы амфетамина и МДМА (ФГУП ГосНИИОХТ).

Методика подготовки биологических жидкостей: по 1 мл мочи / крови вносят в пробирки, добавляют по 1 мл дистиллированной воды, пробирки герметично закрывают и выдержали на УЗ-бане 30 минут при комнатной температуре. К гидролизатам добавляют по 50 мкл р-ра 3-фе-

нил-1-пропиламина 20 мкг/мл (внутренний стандарт), встряхивают и добавляют по 0,3 мл трис-буфера (1М) до рН 11. Экстрагируют 2 мл хлористого метилена, интенсивно встряхивая 20 минут на встряхивателе горизонтального типа встряхивания (300 колеб./мин). Центрифугируют 5 минут при 4500 об/мин. Водные слои удаляют с помощью водоструйного насоса. Органические фазы фильтруют в виалу через фильтр для разделения фаз. Добавляют по 100 мкл раствора винной кислоты в этилацетате (1мг/ мл). Экстракты выпаривают при комнатной температуре на вакуумном концентраторе экстрактов досуха. К сухим остаткам в виале добавляют по 50 мкл этилацетата и по 50 мкл пентафторпропионового ангидрида (ПФПА), герметично закрывают, тщательно перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 20 минут. Открывают виалы, выпаривают при комнатной температуре на вакуумном концентраторе экстрактов досуха. Сухие остатки тщательно растворяют в 100 мкл этилацетата, интенсивно встряхивая на вортексе, переносят во вставки в виалки, которые герметично закрывают и по 1 мкл вводят в испаритель хроматографа.

Исследование проводят на газовом хроматографе Маэстро АТ 7820 А с масс-селективным детектором AT 5975 в режиме селективного мониторинга индивидуальных ионов (с 5.0 мин по 6,00 мин: 118, 190, 91; с 6,00 мин по 6,32 мин 204, 160, 118; с 6,32 мин по 6,50 мин: 117, 177, 281; с 6,50 мин по 7,40 мин: 135, 162, 190; с 7,40 мин по 7,71 мин: 204, 162,135; с 7,71 мин по 7,82 мин: 218,190,162; с 7,82 мин по 8,00 мин: 218, 176, 135). Колонка капиллярная Agilent 19091S-433 HP-5MS 0.25мм*30м*0,25мкм. Начальная температура колонки-700 С. Время выдержки при начальной температуре - 2 минуты. Подъем температуры в диапазоне 70-2900 С-200 С/мин. Время выдержки при 2900 С - 20 мин. Скорость газа носителя (гелий) - 1 мл/мин. Температуры инжектора, масс-селективного источника и квадру-поля -2900С, 2300 С и 1500С соответственно.

Время удерживания ПФПА производного амфетамина - 5,7 мин, ПФПА производного метамфетамина - 6,2 мин, ПФПА производного МДА - 7.2 мин, ПФПА производного МДМА - 7,64 мин, ПФПА производного МДЕА -7,78 мин, ПФПА производного МБДБ - 7,85 мин.

ВЫВОДЫ

• Использование винной кислоты и соблюдение температурного режима исключает потери соединений класса амфетаминов на стадии подготовки биожидкостей.

• Вследствие схожести в химических структурах, одинаковых условий экстракции и дериватизации, в качестве внутреннего стандарта был выбран 3-фенил-1- пропил-амин.

• Комбинация предложенного метода подготовки биожидкостей и условий проведения хромато-масс-спек-трометрического исследования на современном оборудовании, которое используется в практической работе судебно-химического отдела, позволяет использовать пробы малой размерности.

• В связи с ограниченностью возможностей лабораторий использовать аналитические стандарты широкого спектра наркотических веществ, их метаболитов, для внедрения в практику методик количественного определения в качестве калибраторов для оценки подтверждающего метода исследования выбраны доступные для закупки поверочные контроли мочи с целевыми значениями каждого из соединений (Drug U-Confirmation фирмы MEDICHEM) и стандартные растворы амфетамина и МДМА (ФГУП ГосНИИОХТ).

• Метод определения охарактеризован пределами обнаружения и определения наркотических средств и отра-

ботан в лаборатории на той же биологической матрице, что и исследуемые пробы.

• Внедренная технология позволяет надежно идентифицировать и определять в биологических жидкостях амфетамин, метамфетамин, МДА, МДМА, МДЕА, МБДБ -соединения одного из основных классов наркотических средств.

Обнаружение a-PVP и его метаболитов в биологических образцах методом газовой хроматографии / масс-спектрометрии

• к.ф.н. Э. Г. Николаева, М. В. Марченко, И. Б. Бантыш, Н. А. Крупина

ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» МЗ МО (нач.— д.м.н., проф. В. А. Клевно) Аннотация: Доклад посвящен вопросу обнаружения нового дизайнерского наркотика a-пирролидиновалерофенона (a-PVP, PVP) и его метаболитов в биологических жидкостях (крови и моче) и трупном материале (печень, почка) с использованием в качестве метода пробоподготовки - жидкость-жидкостной экстракции (ЖЖЭ). Обнаружение а-пирролидино-валерофенона (1-фенил-2-(пирролидин-1-ил) пентан-1-он) проводили методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором (ГХ/МС).

Ключевые слова: а-пирролидиновалерофе-нон, PVP, ГХ/MC

Detection of a-PVP and its metabolites in biological samples using gas chromatographic / mass spectrometric techniques

• E. G. Nikolaeva, M. V. Marchenko, I. B. Bantish, N. A. Krupina

Abstract: Report focuses on the issue of discovering a new "designer drug" - а-pirrolidinovalerophenone (а-PVP, PVP) and its metabolites in biological fluids (blood and urine) and biological tissues (liver, kidney) using as sample preparation technique - liquid-liquid extraction. Detection of а-pirrolidinovalerophenone and its main metabolites was performed by gas chromatography with a mass selective detector (GC/ MS).

Keywords: a-pirrolidinovalerophenone, PVP, GC/ MS

ВВЕДЕНИЕ

В последние годы стремительно растет популярность синтетических наркотических средств, так называемых «дизайнерских наркотиков». В связи с этим введение в скрининговые процедуры, используемые в практической работе методики ГХ/МС определения наркотических средств синтетического происхождения, является одной из актуальных задач судебно-химической практики. PVP - мощный стимулятор центральной нервной и сердечно-сосудистой систем класса фенилалкиламинов. Действует как ингибитор обратного захвата дофамина, нор-адреналина и серотонина. Используется в рекреационных целях в качестве стимулятора, эйфоритика и энтактогена (в повышенных дозах).

На этом основании и в соответствии с постановлением Правительства Российской Федерации от 19 ноября 2012 г. N 1178 г. Москва «О внесении изменения в перечень наркотических средств, психотропных веществ и их прекурсоров, подлежащих контролю в Российской Феде-