КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ СУЛЬФОРАФАН ИЛИ ПРЕДШЕСТВЕННИК СУЛЬФОРАФАНА И ГРИБНОЙ ЭКСТРАКТ ИЛИ ПОРОШОК
COMPOSITIONS CONTAINING SULFORAPHANE OR PRECURSOR OF SULFORAPHANE AND MUSHROOM EXTRACT OR POWDER

По настоящей заявке испрашивается приоритет на основании следующих заявок, каждая из которых включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме: предварительная заявка на патент США №61/668,328, поданная 5 июля 2012 г.; предварительная заявка на патент США №61/668,342, поданная 5 июля 2012 г.; предварительная заявка на патент США №61/668,386, поданная 5 июля 2012 г.; предварительная заявка на патент США №61/668,396, поданная 5 июля 2012 г.; предварительная заявка на патент США №61/668,364, поданная 5 июля 2012 г.; предварительная заявка на патент США №61/668,374, поданная 5 июля 2012 г.и предварительная заявка на патент США №61/794,417, поданная 15 марта 2013 г.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к комбинации предшественника сульфорафана, фермента, способного превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан, потенциатора фермента, и грибных экстрактов или порошков (предпочтительно грибов - грифолы курчавой, шиитаке или трутовика лакированного). Настоящее изобретение также относится к комбинации сульфорафана или его производного и грибного экстракта или порошка (предпочтительно грибов - грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный). Настоящее изобретение также относится к комбинации экстракта или порошка брокколи и грибного экстракта или порошка (предпочтительно грибов - грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный). Настоящее изобретение предоставляет композиции и способы, относящиеся к этим комбинациям.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Употребление натуральных продуктов приобретает возрастающую популярность у людей и домашних животных. Некоторые из этих натуральных продуктов включают в состав биологически активных добавок к пище и продуктов лечебного питания. В данной области имеется потребность в добавках, полезных в качестве агентов - хемопротекторов и/или антиоксидантов. Кроме того, имеется потребность в данной области в фармацевтических композициях и биологически активных пищевых добавках, полезных при состояниях и нарушениях, связанных с молочной железой.
Хемопротекция путем употребления натуральных продуктов развивается в качестве эффективного, недорогого, доступного и практичного средства для профилактики или уменьшения частоты многих состояний, влияющих на человека и домашних животных. Известно, что канцерогены, способные повреждать клетки на молекулярном уровне часто поглощаются и вдыхаются в виде нетоксичных предшественников. Эти нетоксичные предшественники могут впоследствии превращаться в организме в канцерогенные вещества. Хемопротективные агенты, такие как натуральные вещества, способные активировать детоксифицирующие ферменты или их кофакторы, могут нейтрализовать и обеспечивать удаление или усиливать другие существующие в природе защитные механизмы, такие как иммунная система.
Некоторые природные продукты обладают антиоксидантной активностью. Окислительный стресс играет основную роль в старении, развитии нейродегенеративных заболеваний, равно как, при физиологической травме, такой как ишемия. Антиоксиданты могут уменьшать или ингибировать окисление необходимых биомолекул и могут играть роль в лечении, профилактике или уменьшении частоты рака, коронарной болезни сердца, инсульта и нейродегенеративных заболеваний, болезни Альцгеймера, деменции и инсульта, являющихся примерами состояний, вызываемых
окислительным стрессом.
Как общепринято считать, онкологические заболевания являются следствием экологических проблем - либо внутренних (например, гормонов - эстроген, прогестерон) либо внешних (например, бисфенол А (ВРА) из пластмасс) - и хронического воспаления. К счастью, повреждение, вызванное экологическими проблемами можно устранить посредством комплексной системы хемопротекторных ферментов фазы II, найденных во многих типах клеток нашего организма. Хорошо известно, что эстрогены и их метаболиты могут приводить к пролиферации ткани молочной железы и опухолям. Хуже того, хиноновые метаболиты эстрогенов, обладают способностью внедряться в ткань молочной железы и перемещаться в ядра дуктальных и гландулярных эпителиальных клеток. В них они связываются с ДНК, образуя аддукты эстроген-хинона с ДНК, что приводит к последующим мутациям. Полагают, что эти мутации отвечают за само зарождение опухоли: инициацию рака.
К счастью, конкретный фермент фазы II, NAD(Р)Н: хинон оксидоредуктаза (NQ01) в состоянии брать на себя опасные и высоко реакционноспособные эстроген-хиноны и превращать их в инертные химические соединения, которые могут быть легко удалены из организма. Таким образом, основным механизмом уменьшения заболеваемости раком является стимулирование защитных ферментов фазы II, включая NQ01. Повышенное содержание NQ01 может быть эффективным при лечении, профилактике, излечении, уменьшении частоты возникновения, уменьшении симптомов, связанных с любыми состояниями, возникающими при высоких содержаниях эстроген-хинонов. Примеры эстроген-хинонов включают в себя, не ограничиваясь, катехол-эстроген-хиноны. Эстроген-хиноны описаны в следующих источниках, каждый из которых включен в настоящий документ путем ссылки в полном объеме: Nutter et al. Chem Res Toxicol, 1994, 7:23-28; Cavalieri et al. Ann N Y Acad Sci, 2006; 1089:286-301; Bolton et al. Chem Res Toxicol, 2008, 21 (1):93-101 и Cavalieri et al., Biochimica et Biophysica Acta, 2006, 1766:63-78.
Примером натурального продукта, обладающего, как полагают, свойствами хемопротектора и антиоксиданта, является сульфорафан. Сульфорафан представляет собой сераорганическое соединение, также известное как 1-изотиоцианат-4-метилсульфинилбутан. Предшественник сульфорафана, глюкорафанин, может быть получен из овощей семейства Brassicaceae, таких как брокколи, брюссельская капуста и кочанная капуста. Однако, для того чтобы получить из овощей количества, достаточные для хемопротекции, необходимо потратить их в больших объемах. Глюкорафанин превращается в сульфорафан под действием тиоглюкозидазного фермента, называемого мирозиназа, доступного из разнообразных экзогенных ресурсов, таких как овощи Brassicaceae и эндогенно из микрофлоры кишечника. Однако, после поглощения глюкорафанина, не все животные способны осуществлять его превращение в сульфорафан, скорее всего из-за вариаций микрофлоры популяций и общего состояния здоровья. Кроме того, в кислой среде, такой как в желудке, глюкорафанин может превращаться в инертные метаболиты. Активный метаболит, сульфорафан возбуждает ядерный эритроид-2-связанный фактор (Nrf2), в свою очередь увеличивающий образование детоксифицирующих ферментов фазы II и цитопротекторных ферментов, таких как, глутатион-Б-трансфераза, NAD(Р)Н:хинон оксидоредуктаза (NQO1) и гем-оксигеназа-1 (НО-1). Полагают, что сульфорафан стимулирует выработку этих ферментов, не влияя при этом значительно на синтез р-450 цитохромных ферментов. Увеличение выработки ферментов фазы II, как полагают, играет роль во множестве биологических процессов, включая защиту головного мозга от цитотоксичности, защиту печени от токсического эффекта накопления жира и детоксификацию многих других тканей.
Сульфорафан и его предшественник глюкорафанин интенсивно изучались. Shapiro et al. (Nutrition and Cancer, (2006), Vol. 55(1), pp.53-62) обсуждают клиническое исследование фазы I, определяющее безопасность, переносимость и метаболизм глюкозинолятов и изотиоцианатов ростков брокколи. Shapiro et al. Обсуждают рандомизированное двойное слепое клиническое исследование с плацебо-контролем экстрактов ростков, содержащих, либо глюкозиноляты, такие как глюкорафанин, либо изоцианаты, такие как сульфорафан у здоровых испытуемых. Исследование показало, что введение этих веществ не привело к систематическим, клинически значимым побочным эффектам. Ye et al., (Clinica Chimica Acta, 200, 316:43-53) обсуждают фармакокинетику изотиоцианатов из ростков брокколи у людей.
Большое количество грибов использовалось или изучалось из-за их лекарственного действия. Эти "лекарственные грибы", как полагают, обладают лечебными свойствами, такими как противовирусная, антимикробная, противораковая,
антигипергликемическая и/или противовоспалительная активность. Примеры лекарственных грибов включают в себя: грифолу курчавую, шиитаке, трутовик лакированный, шампиньон кремини, шампиньон миндальный, каштановый гриб, аурикулярию уховидную, аурикулярию густоволосистую, белый гриб, чернильный гриб, гриб ярца гунбу, гриб энокитаке, гриб шимеджи, гриб тигровое молоко, сморчок, бамбуковый гриб, вешенку рожковидную, вешенку розовую, вешенку королевскую, вешенку обыкновенную, Sparassis crispa (Sparassis кудрявый), дрожалку фукусовидную, дрожалку оранжевую, трихолому матсутаке, мексиканский трюфель и волвариеллу съедобную.
Грибы грифола курчавая (Grifola frondosa), представляющие собой съедобный гриб, широко употребляют в пищу и применяют в традиционной медицине для повышения иммунной функции и в лечении рака. Грибы грифола курчавая, содержащие глюканы, как полагают, обладают лечебными свойствами, такими как способность проявлять противоопухолевый и иммуномодуляторный эффекты. Имеются стандартизованные экстракты гриба грифола курчавая, содержащие в качестве действующих ингредиентов глюканы, такие как бета-глюканы, связанные с белком. Бета-1,б-глюкан, полисахарид, связанный с белком, идентифицировали в качестве активного компонента грибов грифола курчавая. Грибы грифола курчавая, как было показано, проявляют противоопухолевые эффекты, ингибируя метастазы опухолей in vitro. В одном исследовании у половины субъектов, применявших экстракты грифолы курчавой, наблюдалась регрессия опухоли или значительное улучшение симптомов. В исследовании пациентов с раком молочной железы в постменопаузе пероральное введение экстракта грифолы курчавой, как было показано, обусловило иммуномодулирующие эффекты.
Грибы шиитаке (Lentinula edodes) являются съедобными грибами, родиной которых является восточная Азия. Грибы шиитаке содержат химические соединения, которые, как постулировано, обладают противовирусным, антибиотическим,
противовоспалительным, антигипертензивным и антиканцерогенным эффектами. Полагают, что это в значительной степени обусловлено глюканами, как альфа-, так и бета-глюканами. В некоторых экстрактах грибов шиитаке содержание альфа-глюкана превышает 40%. Кроме того, был хорошо изучен лентинан (1,3-бета-Б-глюкан), полисахарид, выделенный из шиитаке, который, как полагают, играет роль в лечебных эффектах шиитаке. Было показано наличие противораковых эффектов на раковых клетках толстой кишки, что может быть связано с его способностью подавлять ферменты цитохрома Р450 1А которые превращают проканцерогены в их активные формы. Лентин, белковый компонент, обладает сильными противогрибковыми свойствами и, как было обнаружено, ингибирует пролиферацию лейкозных клеток и подавляет активность обратной транскриптазы вируса-1 иммунодефицита человека.
Грибы трутовик лакированный (Ganoderma lucidum), также известные под названием грибы линчжи, являются съедобными грибами, найденными в восточной Азии. Грибы трутовик лакированный, как полагают, проявляют противоопухолевые, противораковые, иммуномодулирующие и иммунотерапевтические эффекты. Грибы трутовик лакированный имеют в своем составе ряд компонентов, которые, как считают, вносят вклад в его активность, включая глюкан, такой как бета-глюкан, кантаксантин, стеролы, кумарин, 7,15-дигидрокси-4,4,10,13,14-пентаметил-3,11-диокси-2,5,б,7,12,15,16,17-октагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-17-ил-2-метил-4-оксогептановая кислота и маннитол.
Пекарские дрожжи (Saccaromyces cerevisiae) могут являться источников глюканов, в особенности, бета-глюканов. Активные компоненты пекарских дрожжей можно выделить несколькими путями, такими как способы, описанные в Bacon et al. Biochem J, 196 9, 1 14(3): 557-567, патенте США №7,803,605; патенте США №5,702,719 и патенте США №8,323,644, каждый из которых включен в настоящий документ в полном объеме путем ссылки.
Глюканы описаны в следующих источниках, каждый из которых включен в настоящий документ в полном объеме путем ссылки: Vetvicka et al. Endocr Metab Immun Disord Drug Targets, 20 09, 9(l):67-75, и Vetvicka et al. J Med Food, 2008: 11 (4): 615-622.
Zhang et al. (Proc. Natl. Acad. Sci., (994), Vol. 91, pp. 3147-3150) описывают исследование на крысах Sprague-Dawley для определения антиканцерогенной активности сульфорафана и его структурных аналогов, синтетических норборнил изотиоцианатов. Исследование показало, что введение сульфорафана было эффективно в блокировании образования опухоли молочной железы.
Cormnblatt et al. (Carcinogenesis, (2007), Vol. 38(7): pp. 1485-1490) описывают исследование на крысах Sprague-Dawley для определения эффекта сульфорафана в хемопротекции молочной железы. Исследование показало, что пероральное введение любого сульфорафана приводило к трехкратному увеличению ферментативной активности NAD(Р)Н:хинон оксидоредуктазы (NQ01) и четырехкратному увеличению иммунного окрашивания фермента гем-оксигеназы-1 (НО-1) в эпителии молочной железы.
Munday et al. (Cancer Res, (2008), Vol. 68(5): pp. 1593-1600) описывают исследование, касающееся влияния лиофилизированных водных экстрактов ростков брокколи на прогрессирование рака мочевого пузыря у крыс. Исследование показало, что введение экстрактов ростков брокколи приводило к значительной индукции в мочевом пузыре глутатион-S-трансферазы и NAD(Р)Н:хиноноксидоредуктазы 1, ферментов, обладающих защитной активностью против оксидантов и канцерогенов.
Fang et al. (J Mem Complem Med, (2006), Vol. 12(2): pp. 125-132) описывают исследование по определению антипролиферативного эффекта этилацетатной фракции грибов шиитаке на линии клеток карциномы молочной железы человека (MDA-MB-453 и MCF-7), незлокачественную линию клеток эпителия молочной железы (MCF-10F) и две линии клеток миеломы (RPMI08226 и IM-9). Исследование показало, что ингибирование роста клеток опухолей компонентами грибов шиитаке может быть результатом индукции апоптоза.
Kim et al. (J Med Food, (2007), Vol. 10(1): pp. 25-31) раскрывают исследование, изучающее активацию клеток естественного киллера (NK) и противораковые эффекты экзобиополимера из отрубей риса, культивированного из Lentinus edodes. Исследование показало, что экзобиополимер может быть эффективным в профилактике и/или лечении рака благодаря активации клеток естественного киллера.
Louie et al. {BJUI, (2009), Vol. 153(9): pp. 1215-1221) описывают синергический эффект комбинации интерферона-а и D-фракции (PDF) биоактивного экстракта гриба грифола курчавая на противораковую активность интерферона-α против клеток рака мочевого пузыря Т24 in vitro.
Masuda et al. (Biol. Pharm. Bull. (2008), Vol. 31 (6): pp. 1104-1108) описывают исследование антиметастатической активности фракции грибов грифола курчавая на модели клеток метастазов легкого мышей. Исследование показало, что фракция ингибировала метастазы опухолей путем активации клеток естественного киллера и клеток (APCs), содержащих антиген, и подавления адгезии молекул, таких как ICAM-1, что приводит к ингибированию адгезии клеток опухоли к васкулярным эндотелиальным клеткам.
Заявка на Европейский патент №2213280 раскрывает композиции, содержащие глюкозинолаты, такие как глюкорафанин и мирозиназа, причем композиция заключена в оболочку или покрыта оболочкой.
Все приведенные в настоящем документе источники включены в настоящий документ в полном объеме путем ссылки.
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение предлагает композицию содержащую: (i) предшественник сульфорафана, предпочтительно глюкорафанин; (ii) фермент, способный превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан, предпочтительно фермент глюкозидазу, более предпочтительно фермент тиоглюкозидазу, и наиболее предпочтительно мирозиназу; (iii) потенциатор фермента, предпочтительно аскорбиновую кислоту и (iv) экстракт или порошок гриба (предпочтительно, гриб - грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный). Настоящее изобретение также предлагает способ лечения, профилактики, уменьшения частоты, уменьшения симптомов и/или уменьшения повторных рецидивов рака, в особенности рака молочной железы, рака простаты, рака толстой кишки, рака легкого и рака мочевого пузыря у субъекта, содержащий введение субъекту: (i) предшественника сульфорафана, (ii) фермента, способного превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан, (iii) потенциатора фермента и (iv) экстракта или порошка гриба (предпочтительно гриб - грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный). Настоящее изобретение также предлагает способ увеличения содержания или увеличения экспрессии гена NAD(Р)Н:хинон оксидоредуктазы 1 (NQO-1) у субъекта, содержащий, введение субъекту: (i) предшественника сульфорафана, (ii) фермента, способного превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан, (iii) потенциатора фермента и (iv) экстракта или порошка гриба (предпочтительно гриб - грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный). Настоящее изобретение также предлагает способ лечения, профилактики, уменьшения частоты, уменьшения симптомов и/или уменьшения повторных рецидивов заболевания или состояния, связанного с повышенным содержанием эстроген-хинона у субъекта, содержащий введение субъекту: (i) предшественника сульфорафана, (ii) фермента, способного превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан, (iii) потенциатора фермента и (iv) экстракта или порошка гриба (предпочтительно, гриб - грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный).
Настоящее изобретение предлагает композицию содержащую: (i) сульфорафан или его производное и (ii) экстракт или порошок гриба (предпочтительно гриб - грифола курчавая, шиитаке, или трутовик лакированный). Настоящее изобретение также предлагает способ лечения, профилактики, уменьшения частоты, уменьшения симптомов и/или уменьшения повторных рецидивов рака, в особенности, рака молочной железы, рака простаты, рака толстой кишки, рака легкого и рака мочевого пузыря у субъекта, содержащий введение субъекту: (i) сульфорафан или его производное и (ii) экстракт или порошок гриба (предпочтительно, гриб - грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный). Настоящее изобретение также предлагает способ увеличения содержания или увеличения экспрессии гена NAD(Р)Н:хинон оксидоредуктазы 1 (NQ0-1) у субъекта, содержащий введение субъекту: (i) сульфорафана или его производного и (ii) экстракта или порошка гриба (предпочтительно гриб - грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный). Настоящее изобретение также предлагает способ лечения, профилактики, уменьшения частоты, уменьшения симптомов и/или уменьшения повторных рецидивов заболевания, связанного с повышенным содержанием эстроген-хинона, содержащий введение субъекту: (i) сульфорафана или его производного и (ii) экстракта или порошка гриба (предпочтительно гриб - грифола курчавая, шиитаке, или трутовик лакированный.
Настоящее изобретение предлагает композицию, содержащую: (i) экстракт или порошок брокколи и (ii) экстракт или порошок гриба (предпочтительно гриб - грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный). Настоящее изобретение также предлагает способ лечения, профилактики, уменьшения частоты, уменьшения симптомов и/или уменьшения повторных рецидивов рака, в особенности, рака молочной железы, рака простаты, рака толстой кишки, рака легкого и рака мочевого пузыря у субъекта, содержащий введение субъекту: (i) экстракта или порошка брокколи и (ii) экстракта или порошка гриба (предпочтительно гриб - грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный). Настоящее изобретение также предлагает способ увеличения содержания или увеличения экспрессии гена NAD(Р)Н:хинон оксидоредуктазы 1 (NQ0-1) у субъекта, содержащий введение субъекту: (i) экстракта или порошка брокколи и (ii) экстракта или порошка гриба (предпочтительно гриб - грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный). Настоящее изобретение также предлагает способ лечения, профилактики, уменьшения частоты, уменьшения симптомов и/или уменьшения повторных рецидивов заболевания, связанного с повышенным содержанием эстроген-хинона, содержащий введение субъекту (i) экстракта или порошка брокколи и (ii)) экстракта или порошка гриба (предпочтительно гриб - грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный).
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
ФИГ. 1 представляет собой схему, на которой показано превращение глюкорафанина при 38°C без аскорбиновой кислоты, как описано в Примере 4.
ФИГ. 2 представляет собой схему, описывающую превращение в течение около 10 минут при 38°C в зависимости от концентрации аскорбиновой кислоты, как описано в Примере 4.
ФИГ. 3 представляет собой график, описывающий превращение сульфорафана в течение 30 минут при 38°C и 1 мМ аскорбиновой кислоты, как описано в Примере 4.
ФИГ. 4 представляет собой схему, описывающую превращение глюкорафанина в сульфорафан в жидкости, имитирующей кишечный сок, как описано в Примере 5.
ФИГ. 5 представляет собой схему, описывающую результаты эксперимента, описанного в Примере 6.
ФИГ. 6 представляет собой схему, описывающую результаты эксперимента, описанного в Примере 7.
ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к комбинации предшественника сульфорафана, фермента способного превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан, потенциатора фермента и экстракта или порошка гриба (такого как гриб грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный). Настоящее изобретение также относится к комбинации сульфорафана или его производного и экстракта или порошка гриба (такого как гриб грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный. Настоящее изобретение также относится к комбинации экстракта или порошка брокколи и экстракта или порошка гриба грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный. Настоящее изобретение также относится к применению экстракта или порошка гриба со смесью одного или более из следующего: предшественника сульфорафана, сульфорафана или его производного и экстракта брокколи. Настоящее изобретение предлагает композиции, относящиеся к этим сочетаниям.
Настоящее изобретение также предлагает способы, содержащие введение этих комбинаций. В некоторых вариантах выполнения изобретения комбинацию можно вводить для лечения, профилактики, уменьшения частоты, уменьшения симптомов, и/или уменьшения повторных рецидивов рака, в особенности, рака молочной железы, рака простаты, рака толстой кишки, рака легкого и рака мочевого пузыря у субъекта. В некоторых вариантах выполнения изобретения комбинацию можно вводить для увеличения содержания или увеличения экспрессии гена NAD(Р)Н:хинон оксидоредуктазы 1 (NQO-1) у субъекта. В некоторых вариантах выполнения изобретения комбинацию можно вводить для лечения, профилактики, уменьшения частоты, уменьшения симптомов и/или уменьшения повторных рецидивов заболевания или состояния, связанного с повышенным содержанием эстроген-хинона.
Сульфорафан также известен как 1-изотиоцианат-4-метилсульфинилбутан. Производные сульфорафана включают в себя, не ограничиваясь, сульфокситиокарбаматные аналоги сульфорафана, 6-метилсульфинилгексилизотиоцианат (6-HITC) и соединения, содержащие сульфорафановую структуру с различными боковыми цепями и/или разнообразными длинами спейсеров между изотиоцианатной и сульфоксидными группами. Примеры производных сульфорафана включают производные, описанные в следующих источниках, каждый из которых включен в настоящий документ путем ссылки: Ни et al., Eur J Med Chem, 2 013, 64:529-539; Ahn et al., Proc Natl Acad Sci USA, 2010, 107 (21): 9590-9595 и Morimistu et al., J. Biol. Chem. 2002, 277:3456-3463 и Baird et al., Arch Toxicol, 201 1, 85(4):241 -272.
В некоторых вариантах выполнения изобретения композиция содержит сульфорафан или его производное, предпочтительно, сульфорафан в количестве от около 1 мкг до около 10 г, предпочтительно, около 3 мкг до около 5 г, предпочтительно, около 5 мкг до около 1000 мг, предпочтительно, около 7 мкг до около 750 мг, более предпочтительно, около 10 мкг до около 500 мг и наиболее предпочтительно, около 100 мкг до около 100 мг. В некоторых вариантах выполнения изобретения композиции, пригодные для применения у человека содержат от около 1 мг до около 20 мг.
В некоторых вариантах выполнения изобретения способы по настоящему изобретению содержат введение сульфорафана или его производного субъекту, предпочтительно сульфорафана, в количестве от около 1 мкг до около 10 г, предпочтительно, от около 3 мкг до около 5 г, предпочтительно, от около 5 мкг до около 1000 мг, предпочтительно, от около 7 мкг до около 750 мг, более предпочтительно, от около 10 мкг до около 500 мг и, наиболее предпочтительно, от около 100 мкг до около 100 мг. В некоторых вариантах выполнения изобретения, в которых субъектом является человек, способ содержит введение от около 1 мг до около 2 0 мг. В некоторых вариантах выполнения изобретения способы по настоящему изобретению содержат введение сульфорафана или его производного субъекту, предпочтительно сульфорафана, в количестве от около 0,01 мкг/кг до около 0,2 г/кг, предпочтительно, около 0,05 мкг/кг до около 0,07 г/кг, более предпочтительно, около 0,07 мкг/кг до около 15 мг/кг, более предпочтительно около 0,1 мкг/кг до около 11 мг/кг и наиболее предпочтительно около 0,2 мкг/кг до около 7 мг/кг. В некоторых вариантах выполнения изобретения, в которых субъектом является человек, способ содержит введение от около 2 мкг/кг до около 2 мг/кг и более предпочтительно около 0,01 мг/кг до около 0,3 мг/кг. Вышеприведенные количества могут относиться к единичной дозе или общей суточной дозировке. Под общей суточной дозировкой подразумевают общее количество соединения или ингредиента, которое вводят субъекту за двадцать четыре часа.
В некоторых вариантах выполнения изобретения способ содержит введение более чем одного сульфорафана или его производного. В некоторых вариантах выполнения изобретения, композиции содержат более чем один сульфорафан или его производное. Например, способы или композиция могут содержать как сульфорафан, так и одно или более его производных или два или более его производных. В некоторых вариантах выполнения изобретения, в которых способ или композиция содержат более чем один сульфорафан или его производное, вышеописанные количества могут относиться к количеству сульфорафана или его производного или общему количеству более чем одного сульфорафана или его производного.
Термин «предшественник сульфорафана» относится к любому соединению, веществу или материалу, которое можно использовать для получения сульфорафана. В предпочтительных вариантах выполнения изобретения предшественник сульфорафана содержит соединение, которое можно превратить или, предпочтительно, ферментативно метаболизировать в сульфорафан. В некоторых предпочтительных вариантах выполнения изобретения предшественник сульфорафана содержит глюкорафанин. Глюкорафанин представляет собой глюкозинолат, также известный под названием 4-метилсульфинилбутилглюкозинолат и 1-S-[(1Е)-5-(метилсульфинил)-N-(сульфанатоокси) пентанимидоил]-1-тио-β-D-глюкопираноза.
В некоторых вариантах выполнения изобретения, композиция содержит около 1 мкг до около 10 г, предпочтительно около 2 50 мкг до около 5 г, более предпочтительно около 500 мкг до около 2000 мг, еще более предпочтительно около 1 мг до около 750 мг, еще более предпочтительно около 1,5 мг до около 250 мг, еще более предпочтительно около 2 мг до около 100 мг и наиболее предпочтительно около 3 мг до около 75 мг предшественника сульфорафана, предпочтительно глюкорафанина. В некоторых вариантах выполнения изобретения, композиции пригодные для применения у человека содержат около 3,5 мг до около 50 мг предшественника сульфорафана, предпочтительно глюкорафанина.
В некоторых вариантах выполнения изобретения, способ содержит введение субъекту предшественника сульфорафана, предпочтительно глюкорафанина в количестве от около 1 мкг до около 10 г, предпочтительно около 250 мкг до около 5 г, более предпочтительно около 500 мкг до около 2000 мг, еще более предпочтительно около 1 мг до около 750 мг, еще более предпочтительно около 1,5 мг до около 250 мг, еще более предпочтительно около 2 мг до около 100 мг и наиболее предпочтительно около 3 мг до около 75 мг. В некоторых вариантах выполнения изобретения, в которых субъектом является человек, способ содержит введение от около 3,5 мг до около 50 мг. В некоторых вариантах выполнения изобретения способ содержит введение субъекту предшественника сульфорафана в количестве от около 1 мкг/кг до около 1000 мг/кг, предпочтительно около 5 мкг/кг до около 500 мг/кг, более предпочтительно около 7,5 мкг/кг до около 100 мг/кг, еще более предпочтительно около 10 мкг/кг до около 25 мг/кг, и наиболее предпочтительно около 25 мкг/кг до около 10 мг/кг. В некоторых вариантах выполнения изобретения, в которых субъектом является человек, способ содержит введение от около 50 мкг/кг до около 800 мкг/кг. Вышеприведенные количества могут относиться к единичной дозе или общей суточной дозировке.
В некоторых вариантах выполнения изобретения, способ содержит введение более чем одного предшественника сульфорафана. В некоторых вариантах выполнения изобретения, композиция содержит более чем один предшественник сульфорафана. В некоторых вариантах выполнения изобретения, в которых способ или композиция содержат более чем один предшественник сульфорафана, вышеуказанные количества могут относиться к количеству предшественника сульфорафана или общего количества предшественника сульфорафана.
Предшественник сульфорафана может превращаться или метаболизироваться до сульфорафана. В некоторых вариантах выполнения изобретения предшественник сульфорафана превращают в сульфорафан ферментативно. В некоторых вариантах выполнения изобретения, фермент, способный превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан содержит глюкозидазный фермент, предпочтительно тиоглюкозидазный фермент, а более предпочтительно мирозиназу. Мирозиназа также известна как тиоглюкозид глюкогидролаза.
В некоторых вариантах выполнения изобретения композиция содержит фермент в количестве от около 1 пг до около 1 мкг, предпочтительно около 50 пг до около 500 нг, и наиболее предпочтительно около 1 нг до около 150 нг. В некоторых вариантах выполнения изобретения композиции, пригодные для применения у человека, содержат около 5 нг до около 75 нг фермента.
В некоторых вариантах выполнения изобретения способ содержит введение фермента, предпочтительно мирозиназы, в количестве от около 1 пг до около 1 мкг, предпочтительно около 50 пг до около 500 нг и наиболее предпочтительно около 1 нг до около 150 нг. В некоторых вариантах выполнения изобретения, в которых субъектом является человек, способ содержит введение от около 5 нг до около 7 5 нг фермента. В некоторых вариантах выполнения изобретения способ содержит введение субъекту фермента в количестве от около 0,02 пг/кг до около 0,02 мкг/кг, предпочтительно около 0,7 пг/кг до около 7 нг/кг и наиболее предпочтительно около 0,02 нг/кг до около 2 нг/кг. В некоторых предпочтительных вариантах выполнения изобретения, в которых субъектом является человек, способ содержит введение от около 0,1 нг/кг до около 1 нг/кг.Вышеуказанные количества могут относиться к единичной дозе или общей суточной дозировке.
В некоторых вариантах выполнения изобретения способ содержит введение более чем одного фермента, способного превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан. В некоторых вариантах выполнения изобретения, композиция содержит более чем один фермент, способный превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан. В некоторых вариантах выполнения изобретения, в которых способы или композиции содержат более чем один фермент, вышеуказанные количества могут относиться к количеству каждого фермента или общему количеству ферментов.
Настоящее изобретение также предлагает применение экстракта и/или порошка брокколи, включая, но не ограничиваясь, семена, экстракты и порошки ростков брокколи. Настоящее изобретение предлагает способы введения экстракта и/или порошка брокколи и композиции, содержащие экстракт и/или порошок брокколи. В некоторых вариантах выполнения изобретения экстракт или порошок брокколи стандартизован до содержания от около 1 вес. % до около 75 вес. %., более предпочтительно около 2,5 вес. % до около 50 вес. %, еще более предпочтительно около 5 вес. % до около 25 вес. % и наиболее предпочтительно около 10 вес. % до около 20 вес. % предшественника сульфорафана, предпочтительно глюкорафанина. Примеры экстрактов и порошков брокколи включают в себя, не ограничиваясь, примеры, описанные в Патентах США №№5,411,98 6; 5,725,895; 5,968,505; 5,968,567; 6,177,122; 6,242,018; 6,521,818; 7,303,770 и 8,124,135, каждый из которых включен в настоящий документ в полном объеме путем ссылки. Порошки брокколи можно получать, например, посредством воздушной сушки, лиофильной сушки, сушки в сушильном барабане, сушки распылением, термической сушки и/или сушки в низком вакууме брокколи, предпочтительно ростков брокколи. В некоторых вариантах выполнения изобретения, композиции и способы содержат применение от около 1 мкг до около 10 г, более предпочтительно около 250 мкг до около 5 г, еще более предпочтительно около 500 мкг до около 1 г, предпочтительно около 600 мкг до около 500 мг, более предпочтительно около 750 мкг до около 400 мг и наиболее предпочтительно около 1 мг до около 3 00 мг экстракта брокколи. В некоторых вариантах выполнения изобретения экстракт или порошок брокколи присутствует в композиции или вводится субъекту в количествах достаточных для обеспечения предшественником сульфорафана или сульфорафаном в вышеописанных количествах. В некоторых вариантах выполнения изобретения, композиция может дополнительно содержать потенциатор фермента, предпочтительно аскорбиновую кислоту. В некоторых вариантах выполнения изобретения способ может дополнительно содержать введение потенциатора фермента предпочтительно аскорбиновой кислоты.
Сульфорафан или его производное, предшественник сульфорафана, и/или фермент, способный превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан могут быть получены из любого источника, включая, но не ограничиваясь, перечисленные одно или более растений из семейства Brassicaceae (также известного как Cruciferae). Примеры растений из семейства Brassicaceae включают в себя, не ограничиваясь, следующие: брокколи, брюссельскую капусту, спарассис кудрявый (Sparassis crispa), кочанную капусту, хрен обыкновенный, пастернак, редис, японский хрен, горчицу полевую и белую горчицу. В некоторых предпочтительных вариантах выполнения изобретения предшественник сульфорафана, предпочтительно глюкорафанин, и фермент, предпочтительно мирозиназу, получают из брокколи, ростков брокколи, семян брокколи. Предшественник сульфорафана и фермент может быть получен из одних и тех же или различных источников. В некоторых вариантах выполнения изобретения предшественник сульфорафана и фермент могут быть получены из экстракта или порошка из этих растений, предпочтительно экстракта или порошка семян или ростков брокколи.
Настоящее изобретение предлагает применение потенциатора фермента. Потенциаторы ферментов могут применяться для увеличения активности фермента, что способствует превращению предшественника сульфорафана в сульфорафан. В некоторых вариантах выполнения изобретения потенциатор фермента содержит кофактор фермента, предпочтительно аскорбиновую кислоту. Аскорбиновая кислота, также известная как аскорбат или витамин С, может потенцировать активность мирозиназы. В некоторых вариантах выполнения изобретения без потенциатора фермента, такого как аскорбиновая кислота, реакция превращения в сульфорафан может протекать слишком медленно, для локализации, необходимой для максимальной абсорбции. Потенциатор фермента может быть получен из натурального источника или его можно получить синтетически.
В некоторых вариантах выполнения изобретения композиции могут содержать от около 1 мг до около 50 0 мг, предпочтительно около 1 мг до около 250 мг и наиболее предпочтительно около 1 мг до около 12 5 мг потенциатора фермента. В некоторых вариантах выполнения изобретения композиции пригодные для применения человеком содержат от около 1 мг до около 50 мг потенциатора фермента.
В некоторых вариантах выполнения изобретения способ по настоящему изобретению содержит введение потенциатора фермента, предпочтительно аскорбиновой кислоты, в количестве от около 1 мг до около 500 мг, предпочтительно 1 мг до около 250 мг и наиболее предпочтительно около 1 мг до около 125 мг. В некоторых вариантах выполнения изобретения, в которых субъектом является человек, способ содержит введение от около 1 мг до около 50 мг. В некоторых вариантах выполнения изобретения способ по настоящему изобретению содержит введение, предпочтительно аскорбиновой кислоты, в количестве от около 0,01 мг/кг до около 3 мг/кг и, наиболее предпочтительно около 0,02 мг/кг до около 2 мг/кг. В некоторых вариантах выполнения изобретения, в которых субъектом является человек, способ содержит введение от около 0,02 мг/кг до около 0,7 мг/кг потенциатора фермента. Вышеуказанные количества могут относиться к единичной дозе или к общей суточной дозировке.
В некоторых вариантах выполнения изобретения способ содержит введение более чем одного потенциатора фермента. В некоторых вариантах выполнения изобретения композиция содержит более чем один потенциатор фермента. В некоторых вариантах выполнения изобретения, в которых способ или композиция содержат более чем один потенциатор фермента, вышеуказанные количества могут относиться к количеству каждого потенциатора фермента или к общему количеству потенциаторов фермента.
Настоящее изобретение предлагает применение экстракта или порошка грибов. В некоторых вариантах выполнения изобретения грибы могут содержать «лекарственные грибы» включая, но не ограничиваясь, грифолу курчавую, шиитаке, трутовик лакированный, шампиньон кремини, шампиньон миндальный, каштановый гриб, аурикулярию уховидную, аурикулярию густоволосистую, белый гриб, чернильный гриб, гриб ярца гунбу, гриб энокитаке, гриб шемеджи, гриб тигровое молоко, сморчок, бамбуковый гриб, вешенку рожковидную, вешенку розовую, вешенку королевскую, вешенку обыкновенную, Sparassis crispa (Sparassis кудрявый), дрожалку фукусовидную, дрожалку оранжевую, трихолому матсутаке, мексиканский трюфель и волвариеллу съедобную. В предпочтительных вариантах выполнения изобретения гриб означает гриб грифола курчавая, гриб шиитаке, гриб трутовик лакированный и/или смесь одного или более из них. Гриб грифола курчавая принадлежит к виду Grifola frondosa. Гриб грифола курчавая может содержать ряд фракций, проявляющих биологическую активность. Примеры компонентов, найденных в грибе грифола курчавая, включают в себя, не ограничиваясь перечисленным: глюканы (такие как альфа-глюканы и бета-глюканы); липиды (такие как октадекановая и октадекадиеновые кислоты); фосфолипиды (такие как фосфатидилэтаноламин, фосфатидилхолин, фосфатидилинозитол, фосфатидилсерии и фосфатидная кислота).
Гриб шиитаке принадлежит к виду Lentinula edodes. Гриб шиитаке может содержать ряд фракций, проявляющих биологическую активность. Примеры компонентов, найденных в грибах шиитаке, включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, глюканы (такие как альфа-глюканы и бета-глюканы), протеины (такие как лентин); липиды (такие как линолевая кислота) и лигнины.
Грибы трутовик лакированный принадлежат к виду Ganoderma lucidum. Грибы трутовик лакированный могут содержать ряд фракций, проявляющих биологическую активность. Примеры компонентов, найденных в грибе трутовик лакированный, включают в себя, не ограничиваясь перечисленным: глюканы (такие как альфа-глюканы и бета-глюканы), кантаксантин, стеролы, кумарин, ганодеровую кислоту и маннитол.
В некоторых предпочтительных вариантах выполнения изобретения, экстракт или порошок гриба содержит один или более глюкан. Глюкан представляет собой полисахарид мономера D-глюкозы, связанного гликозидными связями и может находиться в альфа- или бета- форме. В некоторых вариантах выполнения изобретения, глюкан содержит один или более альфа-глюканов и/или бета-глюканов. Альфа-глюканы включают в себя, не ограничиваясь перечисленными, 1,4-α-глюканы и 1,6-а-глюканы, а бета-глюканы включают в себя, не ограничиваясь перечисленными, 1, 3-β-глюканы, 1,4-β-глюканы и 1,6-β-глюканыэ. Глюканы могут быть представлены в разнообразных конфигурациях полимерной молекулы. В предпочтительных вариантах выполнения изобретения экстракт или порошок гриба грифола курчавая содержит 1,3-β-глюканы и/или 1,6-β-глюканы. В предпочтительных вариантах выполнения изобретения экстракт или порошок гриба шиитаке содержит 1,4-α-глюканы. В предпочтительных вариантах выполнения изобретения экстракт или порошок гриба трутовик лакированный содержит 1,3-β-глюканы и/или 1,6-β-глюканы. В некоторых вариантах выполнения изобретения композиции и способы по настоящему изобретению могут содержать, вместо грибных экстрактов или порошков, применение глюканов в очищенной форме или синтетически изготовленных глюканов.
В некоторых вариантах выполнения изобретения может применяться экстракт или порошок гриба грифола курчавая. В некоторых вариантах выполнения изобретения экстракт или порошок гриба грифола курчавая стандартизуют до содержания около 1% до около 75%, более предпочтительно, около 5% до около 50%, еще более предпочтительно около 10% до около 30% и наиболее предпочтительно около 15% до около 20% по одного или более глюканов, предпочтительно бета-глюканов и более предпочтительно 1,3-бета-глюканов и/или 1,6-бета-глюканов. Примеры экстрактов и порошков гриба грифола курчавая включают в себя, не ограничиваясь, описанные в патенте США №5,8 54,4 04; заявке WO 2007142130, Европейском патенте №0893449; заявках WO 2009063885; WO 2006107208; WO 2007024496 и WO 2001054673, каждый из которых включен в настоящий документ в полном объеме путем ссылки. Порошки гриба грифола курчавая могут быть получены, например, посредством воздушной сушки, лиофильной сушки, сушки в сушильном барабане, сушки распылением, термической сушки и/или сушки в низком вакууме грибов грифола курчавая. В некоторых вариантах выполнения изобретения композиция содержит около 2 50 мкг до около 100 мг, предпочтительно около 500 мкг до около 75 мг и наиболее предпочтительно около 750 мкг до около 50 мг. В некоторых вариантах выполнения изобретения композиции, пригодные для применения у человека, содержат около 1 мг до около 20 мг экстракта гриба грифола курчавая. В некоторых вариантах выполнения изобретения способ содержит введение от около 250 мкг до около 100 мг, предпочтительно около 500 мкг до около 75 мг и наиболее предпочтительно около 750 мкг до около 50 мг. В некоторых вариантах выполнения изобретения, в которых субъектом является человек, способ содержит введение от около 1 мг до около 20 мг экстракта гриба грифола курчавая. Вышеуказанные количества могут относиться к единичной дозе или общей суточной дозировке.
В некоторых вариантах выполнения изобретения может применяться экстракт или порошок гриба шиитаке. В некоторых вариантах выполнения изобретения экстракт или порошок гриба шиитаке стандартизуют до содержания около 1% до около 75%, предпочтительно около 10% до около 60%, даже более предпочтительно около 25% до около 50% и наиболее предпочтительно около 30% до около 40% одного или более глюканов, предпочтительно альфа-глюканов, и более
предпочтительно 1,4-альфа-глюкана. Примеры экстрактов гриба шиитаке включают в себя, не ограничиваясь, описанные в патенте США №5,780,097; патенте США №6,582,723; заявках WO 2005107496, WO 2007024496 и WO 2000033069, каждый из которых включен в настоящий документ в полном объеме путем ссылки. Порошки гриба грифола курчавая можно получить, например, посредством воздушной сушки, лиофильной сушки, сушки в сушильном барабане, сушки распылением, термической сушки и/или сушки в низком вакууме грибов грифола курчавая.
В некоторых вариантах выполнения изобретения композиция содержит около 1 мг до около 1 г, предпочтительно около 10 мг до около 500 мг и наиболее предпочтительно около 25 мг до около 300 мг. В некоторых вариантах выполнения изобретения композиции пригодные для человека содержат около 50 мг до около 250 мг экстракта или порошка гриба шиитаке. В некоторых вариантах выполнения изобретения способ содержит введение от около 1 мг до около 1 г, предпочтительно около 10 мг до около 500 мг и наиболее предпочтительно около 25 мг до около 300 мг. В некоторых предпочтительных вариантах выполнения изобретения, в которых субъектом является человек, способ содержит введение субъекту от около 50 мг до около 250 мг экстракта или порошка гриба шиитаке. Вышеуказанные количества относятся к единичной дозе или общей суточной дозировке. Вышеуказанные количества относятся к единичной дозе или общей суточной дозировке.
В некоторых вариантах выполнения изобретения может применяться экстракт или порошок гриба трутовик лакированный. В некоторых вариантах выполнения изобретения экстракт гриба трутовик лакированный содержит около 1% до около 75%, более предпочтительно около 5% до около 50%, еще более предпочтительно около 10% до около 30%, и наиболее предпочтительно около 15% до около 20% одного или более глюканов, предпочтительно бета-глюканов и более предпочтительно 1,3-бета-глюкана и/или 1,6-бета-глюкана. Порошки гриба грифола курчавая могут быть получены, например, посредством воздушной сушки, лиофильной сушки, сушки в сушильном барабане, сушки распылением,
термической сушки и/или сушки в низком вакууме грибов грифола курчавая.
В некоторых вариантах выполнения изобретения композиция и/или способ содержат применение экстракта или порошка одного типа гриба, такого как экстракт или порошок гриба грифола курчавая, экстракт или порошок гриба шиитаке или экстракт или порошок гриба трутовик лакированный. В некоторых вариантах выполнения изобретения композиция и/или способ содержит применение смеси экстракта или порошка одного или более типов грибов. В некоторых вариантах выполнения изобретения композиция и/или способ содержат применение смеси одного или более из следующего: экстракт или порошок гриба грифола курчавая, экстракт или порошок гриба шиитаке и экстракт или порошок гриба трутовик лакированный. Композиция и способ могут содержать применение экстракта или порошка или смеси экстрактов и порошков.
Настоящее изобретение также предлагает применение любого компонента богатого глюканами вместо, или дополнительно к экстракту или порошку гриба. Примером компонента богатого глюканами являются пекарские дрожжи. В некоторых вариантах выполнения изобретения могут применяться препараты дрожжей. В некоторых вариантах выполнения изобретения препарат дрожжей содержит около 0,1% до около 50%, предпочтительно около 0,5% до около 25% и наиболее предпочтительно около 0,5% до около 10% одного или более глюканов. Примеры препаратов дрожжей включают в себя примеры, описанные в патенте США №5,223,491 и патенте США №5,576,015, каждый из которых включен в настоящий документ в полном объеме путем ссылки.
Способы по настоящему изобретению могут дополнительно содержать введение одного или более дополнительных компонентов. Композиции по настоящему изобретению также могут содержать один или более дополнительный компонент. Дополнительные компоненты могут включать в себя активные фармацевтические ингредиенты, пищевые добавки и пищевые экстракты. Примеры дополнительных компонентов включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, урсоловую кислоту, кверцетин или его производное, аминоуглевод, такой как глюкозамин, гликозаминогликан такой как хондроитин, неомыляемые вещества на основе авокадо и соевых бобов, витамины, такие как витамин K2, плоды кофейного дерева, магний, урсоловую кислоту, проантоцианидины, альфа- и бета-глюканы, куркумин, фитостеролы, фитостанолы, и S-аденозилметионин (SAMe). Эти дополнительные компоненты могут находиться в экстракте расторопши пятнистой (Silybum marianum) (силимарин), экстракте клюквы (Vaccinium macrocarpon) (проантоцианидины, кверцетин и урсоловая кислота), куркуме длинной (Curcuma longa).
В некоторых вариантах выполнения изобретения соотношение бета-глюкана к сульфорафану или производному (бета-глюкан:сульфорафан или его производное) составляет около 50:1 до около 1:50, предпочтительно около 25:1 до около 1:25, более предпочтительно около 10:1 до около 1:20, более предпочтительно около 5:1 до около 1:10, еще более предпочтительно около 1:1 до около 1:8 и наиболее предпочтительно около 1:3 до около 1:5. В некоторых вариантах выполнения изобретения, соотношение альфа-глюкана к сульфорафану или его производному (альфа-глюкан:сульфорафан или его производное) составляет около 1:50 до около 50:1, предпочтительно около 1:10 до около 25:1, более предпочтительно около 1:5 до около 20:1, более предпочтительно около 1:1 до около 15:1, еще более предпочтительно около 2:1 до около 10:1 и наиболее предпочтительно около 3:1 до около 8:1. В некоторых вариантах выполнения изобретения, отношение бета-глюкана к предшественнику сульфорафана (бета-глюкан:предшественник сульфорафана) составляет около 50:1 до около 1:50, предпочтительно около 30:1 до около 1:35, более предпочтительно около 20:1 до около 1:25, более предпочтительно около 10:1 до около 1:20, еще более предпочтительно около 5:1 до около 1:15 и наиболее предпочтительно около 1:1 до около 1:10. В некоторых вариантах выполнения изобретения отношение альфа-глюкана к предшественнику (альфа-глюкан:предшественник) составляет около 1:50 до около 100:1, предпочтительно около 1:25 до около 75:1, более предпочтительно около 1:10 до около 50:1, более предпочтительно около 1:5 до около 40:1, еще более предпочтительно около 1:1 до около 30:1 и наиболее предпочтительно около 2:1 до около 20:1
В некоторых вариантах выполнения изобретения композиция содержит единичную лекарственную форму, включая, но не ограничиваясь перечисленным, фармацевтические лекарственные формы, пригодные для перорального, ректального, внутривенного, подкожного, внутримышечного, чрескожного, чресслизистого и местного введения. В некоторых предпочтительных вариантах выполнения изобретения композиция содержит лекарственную форму для перорального или ректального введения. Примеры лекарственной формы, вводимой перорально, включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, таблетку, капсулу, порошок, диспергируемый в напитке, жидкость такую как раствор, суспензию или эмульсию, мягкую жевательную капсулу с гелем, жевательную пастилку или другую удобную лекарственную форму, известную в данной области техники. В предпочтительных вариантах выполнения изобретения композиция содержит таблетку, капсулу или мягкое жевательное угощение. Лекарственные формы, вводимые перорально, могут быть приготовлены для немедленного высвобождения, отсроченного высвобождения или замедленного высвобождения.
В некоторых вариантах выполнения изобретения, по меньшей мере, предшественник сульфорафана, фермент и потенциатор фермента предлагают в лекарственной форме, позволяющей высвобождение в области желудочно-кишечного тракта, имеющей значение pH по меньшей мере 4 и предпочтительно по меньшей мере 5, такой как тонкий кишечник, предпочтительно двенадцатиперстной кишке. В некоторых вариантах выполнения изобретения, по меньшей мере сульфорафан или его производное и/или экстракт или порошок брокколи предлагают в лекарственной форме, позволяющей высвобождение в области желудочно-кишечного тракта, имеющей pH по меньшей мере 4 и предпочтительно по меньшей мере 5, такой как тонкий кишечник, предпочтительно двенадцатиперстной кишке. В некоторых вариантах выполнения изобретения экстракт или порошок гриба и/или любые факультативные дополнительные компоненты также высвобождаются в области желудочно-кишечного тракта, имеющей значение pH по меньшей мере 4 и предпочтительно по меньшей мере 5, такой как тонкий кишечник, предпочтительно двенадцатиперстной кишке. Тонкий кишечник включает в себя двенадцатиперстную кишку, тощую кишку и подвздошную кишку.
В некоторых вариантах выполнения изобретения каждый из этих компонентов (то есть, предшественник сульфорафана, фермент, потенциатор фермента, сульфорафан или его производное, экстракт или порошок брокколи, экстракт или порошок гриба, и/или дополнительные компоненты) высвобождаются одновременно или сопутствуя один другому (то есть, в течение короткого периода времени один за другим). Это предоставляет преимущества по сравнению с глюкорафанин-содержащими композициями, рецептура которых составлена так, чтобы они высвобождали глюкорафанин в области желудочно-кишечного тракта со значениями pH ниже 4, такой как желудок. В среде с низкими значениями pH такими как в желудке кислая среда может способствовать превращению предшественника сульфорафана в другие физиологически неактивные конечные продукты, такие как сульфорафан нитрил и эпитионитрил.
В некоторых вариантах выполнения изобретения композиции могут включать в себя композиции, вводимые перорально, содержащие энтеросолюбильные лекарственные формы или любые лекарственные формы, устойчивые к распаду в области желудочно-кишечного тракта со значениями pH ниже 4, такой как желудок. Например, композиция, вводимая перорально, может содержать таблетку или капсулу, содержащую энтеросолюбильное покрытие. Энтеросолюбильное покрытие может содержать материалы, включая, но не ограничиваясь перечисленным, ацетатфталат целлюлозы, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, поливинилацетатфталат, сополимер метакриловой кислоты, сополимер метакриловая кислота:акриловый эфир, ацетатсукцинат гидроксипропилметилцеллюлозы, тримеллитат гидроксипропилметилцеллюлозы, шеллак, ацетаттримеллитат целлюлозы, карбоксиметилэтилцеллюлозу и их смеси.
Энтеросолюбильное покрытие может содержать любые подходящие энтеросолюбильные полимеры известные в данной области техники. В некоторых вариантах выполнения изобретения один или более компонентов в композиции может быть внедрен в матрицу энтеросолюбильных полимеров. В некоторых вариантах выполнения изобретения композиции, вводимые перорально, содержат капсулу, медленно растворимую в кислоте желудочного сока, и продвигающуюся в тонкий кишечник, такую как кислотостойкие капсулы DRCAPS™, продаваемые под наименованием CAPSUGEL или любые другие кислотостойкие капсулы.
В наиболее предпочтительной форме композиция, вводимая перорально, окружена покрытием, нерастворимым до тех пор, пока значение pH окружающей среды не превысит, по меньшей мере 4, а более предпочтительно по меньшей мере 5. Иначе говоря, можно применять покрытие с контролируемым во времени высвобождением, как противодействие pH, со скоростью, отрегулированной таким образом, чтобы компоненты не высвобождались до тех пор, пока значение pH желудочно-кишечного тракта не поднимается до, по меньшей мере 4 и более предпочтительно по меньшей мере 5. Так, с целью защиты предшественника сульфорафана, фермента способного превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан и потенциатора фермента или сульфорафана может применяться лекарственная форма с замедленным высвобождением. Слой(и) покрытия можно наносить на композицию, вводимую перорально, применяя стандартные технологии нанесения. Материалы для энтеросолюбильного покрытия можно растворить или диспергировать в органических или водных растворах. Значение pH, при котором происходит растворение энтеросолюбильного покрытия, может контролироваться посредством выбора полимера или комбинации полимеров и/или соотношением боковых групп. Например, параметры растворимости полимерной пленки могут изменяться отношением свободных карбоксильных групп к сложноэфирным группам. Слои энтеросолюбильного покрытия также содержат фармацевтически приемлемые пластификаторы, такие как триэтилцитрат, дибутилфталат, триацетин, полиэтиленгликоли, полисорбаты или другие пластификаторы.
Также могут быть включены добавки, такие как диспергаторы, красители, антиадгезионные агенты и антивспенивающие агенты.
Композиции могут содержать один или более неактивных фармацевтических ингредиентов (также часто известных под названием «вспомогательные вещества»). Неактивные ингредиенты, например, служат для солюбилизации, суспендирования, сгущения, разбавления, эмульгирования, стабилизации, консервирования, защиты, окрашивания, ароматизации и придания формы активным ингредиентам в пригодном для применения и эффективном препарате с целью безопасности и удобства, иными словами пригодности для применения. Вспомогательные вещества предпочтительно представляют собой фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества. Примеры классов фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ включают в себя смазывающие вещества, буферные агенты, стабилизаторы, вспенивающие агенты, пигменты, красители, ароматизаторы, присадки, наполнители, ароматизаторы, модификаторы высвобождения, адъюванты, пластификаторы, ускорители потока, антиадгезионные агенты, полиолы, гранулирующие агенты, разбавители, связующие вещества, буферы, абсорбенты, скользящие вещества, адгезивы, агенты, препятствующие слипанию, подкислители, умягчители, смолы, успокоительные, растворители, поверхностно-активные вещества, эмульгаторы, эластомеры и их смеси.
В некоторых вариантах выполнения изобретения комбинация (i) предшественника сульфорафана, предпочтительно глюкорафанина, (ii) фермента, способного превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан, предпочтительно фермента глюкозидаза, более предпочтительно фермента тиоглюкозидаза и наиболее предпочтительно фермента мирозиназа, (iii) потенциатора фермента, предпочтительно кофактора, более предпочтительно аскорбиновой кислоты и (iv) экстракта или порошка гриба (содержащего глюканы), демонстрирует синергический эффект. В некоторых вариантах выполнения изобретения комбинация сульфорафана (или его производного) и экстракта или порошка гриба (содержащего глюканы) демонстрирует синергический эффект. Синергия означает эффект, в котором комбинация двух или более компонентов обуславливает результат, превосходящий сумму эффектов, которые произвели бы компоненты при их раздельном применении. В предпочтительных вариантах выполнения изобретения синергический эффект превосходит аддитивный эффект. В некоторых вариантах выполнения изобретения комбинация предшественника сульфорафана, фермента, способного превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан, потенциатора фермента и экстракта или порошка гриба грифола курчавая, шиитаке или трутовик лакированный обладают статистически значимым эффектом, превосходящий эффект по сравнению с: (i) каждым компонентом, применяемым отдельно, (ii)) комбинацией предшественника сульфорафана и фермента, и/или (iii) комбинацией фермента предшественника сульфорафана и потенциатора фермента.
В предпочтительных вариантах выполнения изобретения комбинация предшественника сульфорафана, фермента, потенциатора фермента и экстракта или порошка гриба (содержащего глюканы) демонстрирует синергию, обладая эффектом статистически значимым и/или превосходящим аддитивный эффект по сравнению с предшественником сульфорафана, применяемым отдельно и экстрактом или порошком гриба, применяемыми отдельно. В некоторых вариантах выполнения изобретения комбинация глюкорафанина, мирозиназы, аскорбиновой кислоты и экстракта или порошка гриба обладает синергическим эффектом по сравнению с комбинацией глюкорафанина, мирозиназы, аскорбиновой кислоты, или по сравнению с глюканами, применяемыми отдельно.
В некоторых вариантах выполнения изобретения комбинация сульфорафана (или его производного) и экстракта или порошка гриба обладает эффектом статистически значимым и/или превосходящим аддитивный эффект по сравнению с: (i) сульфорафаном (или его производным) отдельно и/или (ii) экстрактом или порошком отдельно. В некоторых вариантах выполнения изобретения комбинация сульфорафана и глюкана обладает синергическим эффектом по сравнению с сульфорафаном и глюканом отдельно.
В некоторых вариантах выполнения изобретения комбинация экстракта или порошка брокколи и экстракта или порошка гриба обладает статистически значимым и/или превосходящим эффектом по сравнению с: (i) экстрактом или порошком брокколи отдельно и/или (ii) экстрактом или порошком гриба отдельно. В некоторых вариантах выполнения изобретения комбинация экстракта или порошка брокколи и глюкана обладает синергическим эффектом по сравнению с экстрактом или порошком брокколи и глюканом отдельно.
Настоящее изобретение предлагает способы применения, включая способы введения субъекту, нуждающемуся во введении. В некоторых вариантах выполнения изобретения способ содержит введение комбинации предшественника сульфорафана, фермента, способного превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан, потенциатора фермента и экстракта или порошка гриба. В некоторых вариантах выполнения изобретения способ содержит введение комбинации сульфорафана или его производного и экстракта или порошка гриба. В некоторых вариантах выполнения изобретения способ содержит введение комбинации экстракта или порошка брокколи и экстракта или порошка гриба.
В некоторых вариантах выполнения изобретения способ относится к лечению, профилактике, уменьшению ассоциированных симптомов и/или уменьшению повторных рецидивов рака, в особенности, рака молочной железы, рака простаты, рака толстой кишки, рака легких, рака печени и рака мочевого пузыря у субъекта. Способы могут быть полезными в уменьшении повреждения или замедлении повреждения тканей и органов, таких как молочная железа, простата, толстая кишка, легкое, печень и мочевой пузырь. Настоящее изобретение предлагает способы лечения, профилактики, уменьшения симптомов и/или уменьшения повторных рецидивов заболеваний и состояний, связанных с репродуктивной системой (включая, но не ограничиваясь перечисленным, молочную железу и простату, толстую кишку, печень, мочевой пузырь, почки, центральную нервную систему, сердечно-сосудистую систему, легочную систему, мочеполовую систему, кроветворную систему и суставы). Настоящее изобретение также предлагает способы лечения, профилактики, уменьшения симптомов и/или уменьшения повторных рецидивов кист, таких как доброкачественные кисты.
В некоторых вариантах выполнения изобретения способ относится к увеличению содержания или увеличению экспрессии гена NAD(Р)Н:хинон оксиредуктазы 1 (NQO-1) у субъекта. Способ может также быть полезным в лечении, профилактике, уменьшении симптомов, и/или уменьшении повторных рецидивов заболеваний и состояний, для которых увеличение экспрессии гена или содержания NQO-1 может быть полезно. Примеры таких заболеваний и состояний включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, рак, миелодиспластический синдром, кардиоваскулярное заболевание и позднюю дискинезию.
В некоторых вариантах выполнения изобретения способ относится к лечению, профилактике, уменьшению симптомов и/или уменьшению повторных рецидивов заболевания или состояния, связанного с повышенным содержанием эстроген-хинона. Примеры таких заболеваний или состояний включают в себя, но не ограничиваясь перечисленным, рак, миелодиспластический синдром, кардиоваскулярную болезнь и позднюю дискинезию.
В некоторых вариантах выполнения изобретения способы относятся к обеспечению положительного результата на биомаркерах и лечению, профилактике, уменьшению симптомов, связанных с аномальным содержанием этих биомаркеров. Примеры таких биомаркеров включают в себя, но не ограничиваются перечисленным, NADPH-зависимые ферменты, тиоредоксин (TXN), тиоредоксин редуктазу-1 (Txnrd-1), субъединицу глутамат-цистеин лигазы (GCLC), сульфотрансферазу 1А1 (SULT1A1), гемоксигеназу-1 (НМ0Х1), глутатионпероксидазу-3 (GPx-3), глутатион-S-трансферазу тэта 2 (GSTT2), микросомальную глутатион-S-трансферазу 1 (MGST1), альдегидоксидазу (AOX1), альдокеторедуктазу 1 В8 (Akrl b8), флавинсодерржащую монооксидазу 2 (FM02), рецептор III (Fcgr3) рецепторного региона Fc, триптазу бета 1 (TPSB1), протеазу-6 (Mcpt6) мастоцита, нейрексин-1-альфа (NRXN-1), транскрипционный фактор (MITF), ассоциируемый с микофталамией, иодтирониндеиодиназу (DIO2) типа II, ангиопоэтин-14 (Angptl4), кластер дифференцировки (CD36) и Ntel. Заболевания и состояния, связанные с повышенными или аномальным содержанием этих биомаркеров включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, рак, туберкулез легких и центральной нервной системы, рассеянный склероз, гранулематоз, атеросклероз, остеоартрит, астму, инсульт, эмфизему, диабетическую нефропатию, хронический гистиоцитарный интервиллозит плаценты, гипертензию, аневризму брюшной аорты, воспалительную болезнь кишечника, хронический риносинусит, коронарную болезнь сердца и заболевание почек.
В некоторых вариантах выполнения изобретения способ содержит введение субъекту, нуждающемуся в лечении, комбинации сульфорафана и экстракта или порошка гриба, содержащего глюкан. В некоторых вариантах выполнения изобретения способ содержит введение субъекту, нуждающемуся в лечении, комбинации экстракта или порошка брокколи и экстракта или порошка гриба, содержащего глюкан. В некоторых предпочтительных вариантах выполнения изобретения способ содержит введение субъекту комбинации глюкорафанина, мирозиназы, аскорбиновой кислоты и экстракта или порошка гриба, содержащего глюкан. В предпочтительных вариантах выполнения изобретения в способах по настоящему изобретению комбинации демонстрируют синергический эффект.
В предпочтительных вариантах выполнения изобретения один или более компонент комбинаций (например, предшественник сульфорафана, фермент, способный превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан, потенциатор фермента, экстракт или порошок гриба или сульфорафан или его производное и экстракт или порошок гриба или экстракт или порошок брокколи и экстракт или порошок гриба) вводят совместно в одной композиции или лекарственной форме, или раздельно, предпочтительно в пределах периода, в течение которого перекрываются их терапевтические свойства. В некоторых вариантах выполнения изобретения компоненты комбинаций могут вводиться в двух или более композициях или лекарственных формах, вводимых перорально. Например, в некоторых вариантах выполнения изобретения предшественник сульфорафана, фермент, способный превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан и потенциатор фермента вводят в лекарственной форме, вводимой перорально, в то время как экстракт или порошок гриба вводят в одной или более раздельной или дополнительной лекарственной форме(ах). В предпочтительных вариантах выполнения изобретения компоненты комбинации вводят в одной лекарственной форме.
В некоторых вариантах выполнения изобретения комбинацию можно вводить ежедневно с частотой от 1 до 10 раз, предпочтительно ежедневно 1 до 5 раз, более предпочтительно ежедневно 1 до 3 раз и наиболее предпочтительно 1 раз.
Лекарственные формы, раскрываемые в этой заявке, относятся предпочтительно к лекарственным формам, пригодным для человека. Расчеты лекарственных форм могут определяться специалистами в данной области техники посредством оценки массы тела, площади поверхности, скорости метаболизма и межвидовых различий.
Термин «субъект» относится к любому животному, включая млекопитающих или птиц. Млекопитающие включают в себя, не ограничиваясь, человека, собаку, кошку, лошадь, корову, верблюда, слона, льва, тигра, медведя, тюленя и кролика. В предпочтительных вариантах выполнения изобретения субъекты являются млекопитающими, которых не употребляют в пищу, таких как человек, кошка и собака.
ПРИМЕРЫ
Пример 1 (Рецептуры)
Нижеследующее представляет собой примеры рецептур по настоящему изобретению:
РЕЦЕПТУРА А
Экстракт семян брокколи, содержащий глюкорафанин (около 12 вес Л), 50 мг до 5 г
Лиофилизированный порошок ростков брокколи, содержащий мирозиназу, 2 5 мг до 50 0 мг
Аскорбиновая кислота, 1 мг до 50 мг
Экстракт гриба шиитаке, содержащего альфа-глюкан (около 40 вес. %), 1 мг до 250 мг
РЕЦЕПТУРА В
Экстракт семян брокколи, содержащий глюкорафанин (около 12 вес. %), 50 мг до 5 г
Лиофилизированный порошок ростков брокколи, содержащий мирозиназу, 25 мг до 500 мг
Аскорбиновая кислота, 1 мг до 50 мг
Экстракт гриба грифола курчавая, содержащего бета-глюкан (около 20 вес. %), 1 до 100 мг
РЕЦЕПТУРА С
Композиция, вводимая перорально, содержащая:
Экстракт семян брокколи
Экстракт ростков брокколи
Экстракт гриба грифола курчавая
Аскорбиновую кислоту
Гидроксипропилметилцеллюлозу
Микрокристаллическую целлюлозу
Кукурузный крахмал
Этилцеллюлозу
Кроскармеллозу натрия
Натрия гликолят крахмала
Кросповидон
Диоксид кремния
Альгинат натрия
Среднецепочечные триглицериды
Мальтодекстрин
Олеиновую кислоту
Стеарат магния
Стеариновую кислоту
Пример 2
Разработан метод хроматографии гидрофобных взаимодействий (HILIC), отвечающий нижеследующим условиям:
Колонка: Waters ВЕН Amide, размер частиц 1,7 мкм, 2,1 мм × 100 мм
Подвижная фаза: 20% 10 мМ ацетата аммония, pH 5,0; 8 0% ацетонитрил;
Способ разделения: изократический
Температура колонки: 70°C
Скорость потока: 0,7 мл/мин
Вышеуказанные условия обеспечивают разделение пяти типичных глюкозинолатов Brassicaceae, включая предшественник
сульфорафана, глюкорафанин.
Пример 3.
Расходование глюкорафанина как функция концентрации аскорбиновой кислоты.
Около 250 мг экстракта семян брокколи, содержащего около 12 вес. % глюкорафанина подвергнуты гидролизу при фиксированной концентрации мирозиназы из ростков брокколи в присутствии аскорбиновой кислоты, имеющей концентрацию, варьирующуюся в диапазоне от 0 до 600 мкмоль/л. Реакционные смеси термостатировали при 38°C; аликвоты отбирали каждые 15 минут в течение 60 минут и хроматографически определяли концентрацию глюкорафанина. Скорость расходования глюкорафанина интерпретировали как скорость его превращения в сульфорафан. Графическое изображение уменьшения содержания глюкорафанина в зависимости от увеличения концентрации аскорбиновой кислоты представлено в виде серии линейных кривых,- тангенсы угла наклона линий линейной регрессии отражают скорость расходования глюкорафанина в мкмоль/минуту. Видно, что в присутствии аскорбиновой кислоты с концентрацией 600 мкмоль/литр, скорость реакции увеличивается в 13 раз, по сравнению с тем, как если она бы протекала без модулирующего эффекта аскорбиновой кислоты
Пример 4
Эквимолярное превращение глюкорафанина в сульфорафан.
Для выяснения роли аскорбиновой кислоты в модулировании активности мирозиназы проводили эксперимент, состоящий из двух частей. Все растворы готовили в 20 мМ физиологическом растворе, забуференном Трис (трис-гидроксиметиламинометан) при значении рН 7,5, которое как было ранее показано, является оптимальным для активности мирозиназы; в каждую тестовую пробирку помещали в качестве источника мирозиназы точную навеску 100 мг лиофилизированного порошка брокколи. Эксперимент проводили при 38°C в течение 2 часов, с 30-минутными интервалами отбирали аликвоты образца и с помощью HPLC определяли содержание как глюкорафанина, так и сульфорафана. С целью мгновенного ингибирования дальнейшей активности мирозиназы в отобранных аликвотах применяли сильнокислотный «стоп»-раствор. Контрольный образец не содержал аскорбиновую кислоту, и ферментативное превращение протекало без участия кофактора.
ЧАСТЬ 1. В присутствии аскорбиновой кислоты постоянной концентрации, 1 ммоль/литр, добавляли экстракт семян брокколи (около 12 вес. % глюкорафанина), увеличивая его количество от 250 мг до 500 мг.
ЧАСТЬ 2. При фиксированном количестве экстракта семян брокколи равном 250 мг варьировали концентрацию аскорбиновой кислоты от 0,4 ммоль/литр до 3,8 ммоль/литр.
В таблице ниже приведены концентрации глюкорафанина и сульфорафана, выраженные в микромолях. Видно, что в течение первых 3 0 минут почти во всех реакционных смесях глюкорафанин полностью превратился в сульфорафан. Однако, тщательное изучение ферментативного превращения в контрольном образце, без стимулирующих эффектов аскорбиновой кислоты, выявляет эквимолярное превращение глюкорафанина в сульфорафан, то есть количество израсходованного глюкорафанина эквивалентноколичеству получаемого сульфорафана.
В части 2 эксперимента изучали модуляторный эффект увеличения концентрации аскорбиновой кислоты на активность мирозиназы. Первоначальный, по-видимому, линейный, рост конверсии глюкофаранина в сульфорафан, стимулируемой мирозиназой, наблюдался до достижения концентрации аскорбиновой кислоты равной 2 ммоль/л, и впоследствии сменялся значительным выравниванием.
В заключение, изучение выхода сульфорафана после 3 0 минут эксперимента в рамках Части 1 показывает, что в присутствии 1 ммоль/литр аскорбиновой кислоты, фиксированное количество мирозиназы, содержащееся в 100 мг лиофилизированного порошка ростков брокколи, согласно предсказуемому линейному закону, способно сгенерировать по меньшей мере 200 мкмоль сульфорафана. ФИГ. 1, 2, 3 и 4 иллюстрируют результаты этого исследования.
Пример 5
Превращение глюкофаранина в сульфорафан в присутствии жидкости, имитирующей кишечный сок.
Применяли порошок жидкости, имитирующей кишечный сок (SIF), коммерчески доступный концентрат, близкий по составу, pH и ионной силе раствора содержимому кишечника человека. В эксперименте применяли USP аппарат 2 для растворения (лопастной), куда в шесть сосудов для растворения помещали 500 мл жидкости, имитирующей кишечный сок, совместно с 150 мг лиофилизированного порошка ростков брокколи в качестве источника мирозиназы. В сосудах 1-4 концентрация аскорбиновой кислоты варьировалась от 0,25 до 1,00 ммоль/л; в сосуд 5, дополнительно к 1 ммоль/л аскорбиновой кислоты суспендировали 3,12 5 г панкреатина (8xUSP); в сосуд 6 дополнительно к 1 ммоль/л аскорбиновой кислоты и 3,125 г панкреатина (8xUSP), добавляли удвоенное количество лиофилизированного порошка ростков брокколи (300 мг). После доведения температуры сосудов до 38°C в каждый сосуд добавляли 250 мг экстракта семян брокколи, богатых глюкорафанином (12 вес. %), и полученные суспензии перемешивали при 75 оборотах в минуту в течение 2 часов. Каждые 15 минут отбирали аликвоты и анализировали на сульфорафан. ФИГ. 4 показывает прямую зависимость между увеличением выхода сульфорафана и повышением концентраций аскорбиновой кислоты, особенно на ранних этапах эксперимента.
Пример 6
Следующее исследование проводили для определения влияния комбинации сульфорафана и экстракта гриба грифола курчавая, содержащего 2 0% b-глюканов, на экспрессию гена Nad(Р)Н:хинон оксиредуктазы 1 (NQO-1). NQO-1 кодирует белок, способный метаболизировать эстроген-хиноны, предотвращая образование их аддуктов с ДНК, вызывающих мутации и, в конечном счете, канцерогенез. Увеличение экспрессии NQO-1 благоприятно для здоровья молочной железы, толстой кишки, печени, легкого, кожи и простаты.
В исследовании клеточную линию макрофагов RAW 264,7 в течение 2 4 часов обрабатывали ДМСО (контроль растворителем), сульфорафаном (SFN), экстрактом гриба грифола курчавая, содержащим около 20% бета-глюкана (Грифола курчавая), или комбинацией сульфорафана и экстракта гриба грифола курчавая. Конкретно, клетки обрабатывали одним из следующего: (i) ДМСО (контроль растворителем), (ii) 0,5 мкмоль SFN, (iii) 250 мкг/мл грифолы курчавой, (iv) 500 мкг/мл грифолы курчавой, (v) 750 мкг/мл грифолы курчавой, (vi) 0,5 мкмоль SFN и 250 мг/мл грифолы курчавой, (vii) 0,5 мкмоль SFN и 500 мкг/мл грифолы курчавой и (viii) 0,5 мкмоль SFN и 750 мкг/мл грифолы курчавой. Экспрессию гена NQO-1 анализировали при помощи количественного анализа RT-PCR (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией). Результаты, показанные на ФИГ. 5, демонстрируют следующее:
Результаты показывают, что комбинация сульфорафана и экстракта гриба грифола курчавая имела синергический эффект, в сравнении с каждым компонентом, взятым отдельно. Было обнаружено, что этот эффект является более чем просто аддитивным.
Пример 7
Следующее исследование проводили для определения влияния комбинации сульфорафана и экстракта гриба шиитаке, содержащего 40% альфа-глюканов, на экспрессию гена Nad(Р)Н:хинон оксиредуктазы 1 (NQO-1).
В исследовании клеточную линию макрофагов RAW 264,7 в течение 24 часов обрабатывали ДМСО (контроль растворителем), сульфорафаном (SFN), экстрактом гриба шиитаке, содержащим, по меньшей мере, 20% альфа-глюкана или комбинацией сульфорафана и экстракта гриба шиитаке. Конкретно, клетки обрабатывали одним из следующего: (i) ДМСО (контроль растворителем), (ii) 0,5 мкмоль SFN, (iii) 100 мкг/мл шиитаке, (iv) 250 мкг/мл шиитаке, (v) 500 мкг/мл шиитаке, (vi) 0,5 мкмоль SFN и 100 мкг/мл шиитаке, (vii) 0,5 мкмоль SFN и 250 мкг/мл шиитаке и (viii) 0,5 мкмоль SFN и 500 мкг/мл шиитаке. Экспрессию гена NQO-1 анализировали при помощи количественного анализа RT-PCR. Результаты, показанные на ФИГ. 6, демонстрируют следующее:
Результаты показывают, что комбинация сульфорафана и экстракта гриба шиитаке имела синергический эффект, в сравнении с любым компонентом, взятым в отдельности. Было обнаружено, что этот эффект является более чем просто аддитивным.
Пример 8
У субъекта диагностирован рак молочной железы, и субъект имеет симптомы, включающие в себя повреждение молочной железы и боль в молочной железе. Она принимала таблетку, содержащую глюкорафанин, мирозиназу, аскорбиновую кислоту и экстракт гриба грифола курчавая. Таблетка представляет собой энтеросолюбильную лекарственную форму, которая обеспечивает высвобождение содержимого в тонком кишечнике. После одного месяца ежедневного приема таблетки субъект испытывает модулирование суррогатных биомаркеров, включая NQO-1, что коррелирует с улучшением симптомов.
Пример 9
У субъекта диагностирован рак молочной железы, и субъект имеет симптомы, включающие в себя повреждение молочной железы и боль в молочной железе. Она принимала таблетку, содержащую глюкорафанин, мирозиназу, аскорбиновую кислоту и экстракт гриба шиитаке. Таблетка представляет собой энтеросолюбильную лекарственную форму, которая обеспечивает высвобождение содержимого в тонком кишечнике. После одного месяца ежедневного приема таблетки субъект испытывает модулирование суррогатных биомаркеров, включая NQO-1, что коррелирует с улучшением симптомов.