Влияние профилактического введения производных бетулоновой кислоты на активность процессов липопероксидации гомогената печени при экспериментальной полихимиотерапии

Воспаление модулируется нейроэндокринной и иммунной системами. В печени крыс с экспериментальной пневмонией на фоне гормонального дисбаланса, на 2 сутки после введения сефадекса А-25 наблюдали баллонную дистрофию гепатоцитов с очагами микронекрозов, сопровождающуюся отёком портальных трактов с их инфильтрацией лимфоцитами и макрофагами. На 10 сутки после введения сефадекса А-25 гепатоциты оставались в состоянии от мелко- до крупновакуольной дистрофии, местами баллонной, портальные тракты плотно инфильтрированы макрофагами. На 20-е сутки в группе с гормональным дисбалансом балочное строение печени и гиперплазия синусоидальных клеток сохранены, портальные тракты отёчны. Повреждения печени при пневмонии и гормональном дисбалансе сопровождались ростом активности аминотрансфераз в сыворотке крови (табл.1), уровни которых были достоверно выше в этой группе животных. На 20 сутки с момента введения сефадекса А-25 активность АЛТ выросла в 1,35 раз (р<0,05), АСТ - в 3,73 раза (р<0,05). Уровень общего белка крови достоверно ниже в группе с пневмонией на фоне гормонального дисбаланса, а показатели общего билирубина, отражающего обезвреживающую функцию печени, в этой группе были достоверно выше на 10-е и 20-е сутки опыта.

Пневмония вследствие интратрахеального введения сефа-декса А-25 и на фоне гормонального дисбаланса приобретает острый характер, в отличие от пневмонии на фоне нормального уровня гормонов, и сопровождается деструктивными и воспалительными процессами в печени.

Литература

1. ГриппиМ.А. // Патофизиология лёгких.- М.; Спб.; 1999.

2. Маянский Д.Н и др./ Новые рубежи гепатологии.-Новосибирск, 1992.

3. Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники. М., 1969.

4. Панин Л.Е. и др. // Пробл. эндокрин.- 1982/- №1.- С.70.

5. Сладкопевцев А. С. и др. // Бюллетень экспериментальной б иологии и медицины.- 2001.- №5. - С.517-559.

6. Duan Z.P. et al. // Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi.- 2003.-Vol.11.- P.493-496.

7. HilderbrandF. et al.//Am J Pathol.- 2006.- Vol.169.- P.784.

8. Tong Y.W. et al. // Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi.- 2003.-Vol.11.- P.418-420.

9. Pietersma A. et al. // Mol. And Cell Biochem.- 1992.-Vol.116.- P.197-202.

УДК 616.36-085.227.3/.322-092.9

ВЛИЯНИЕ ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ВВЕДЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ БЕТУЛОНОВОЙ КИСЛОТЫ НА АКТИВНОСТЬ ПРОЦЕССОВ ЛИПО-ПЕРОКСИДАЦИИ ГОМОГЕНАТА ПЕЧЕНИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ПОЛИХИМИОТЕРАПИИ

Т.В. КИМ, О.Р. ГРЕК, Ю.В. НАЧАРОВ, Т.Г. ТОЛСТИКОВА,

И.В.ШАРАПОВ, В.И. ШАРАПОВ, Н.В. ШИНКАРЕВА*

Практически у каждого цитостатического препарата выявляются побочные действия токсического характера. Использование комбинации нескольких цитостатических препаратов значительно повышает эффективность лечения, но одновременно с этим повышает риск развития осложнений. Токсические проявления могут быть различного генеза и тяжести и крайне важно предупредить их. Одним из способов снижения токсичности цитостатиков является повышение функциональной активности печени [1]. Эффективность лекарственных средств, применяемых в настоящее время в качестве гепатопротекторов, оцениваются по-разному, но в целом, довольно невысоко, хотя перспективы оптимизации их эффекта постоянно исследуются [2-4]. В последнее время особое внимание уделяется бетулину и его производным, являющимися тритерпеновыми соединениями лупаново-го ряда и отличающиеся доступностью и высокой разнообразной биологической активностью. В опытах in vitro и in vivo установлена иммуностимулирующая, противоопухолевая, антиоксидантная, гепатопротективная и нефропротективная активности этих соединений в разной степени выраженности [5-8]. Однако дозозависимое проявление этих свойств остается неизученным.

* Новосибирский ГМУ 630091, Новосибирск, Красный пр., 52

Цель исследования — изучить дозозависимый эффект бе-тулоновой кислоты и ее производных на антиокислительную активность и процессы пероксидации липидов печени при ее ишемическом повреждении на фоне полихимиотерапии (ПХТ).

Материалы и методы. Опыты выполнены на крысах-самцах Вистар массой 170-200 г. Животные содержались на стандартной лабораторной диете при естественном световом режиме, свободном доступе к воде, пище и голодании в течение суток перед забором материала. Соединения: бетулоновая кислота (БК), 2а-аланинбетулоновая кислота (БК-2а), 2а-

аланинметиловый эфир бетулоновой кислоты (ЭБК-2а) получены в Новосибирском институте органической химии им.

Н.Н. Ворожцова СО РАН. Препараты вводили интрагастрально в дозах 50 и 100 мг/кг за 6 час. до внутрибрюшинного введения средств, имеющих цитостатическую активность в дозах, равных 1/5 ЛД50, рассчитанных методом пробит-анализа: циклофосфан («Биохимик», Саранск) - 21 мг/кг, доксорубицин («ЛЭНС»-Фарм, Москва) - 2,1 мг/кг, винкристин («Гедеон Рихтер», Венгрия) -

0,04 мг/кг, преднизолон («Гедеон Рихтер», Венгрия) - 2,1 мг/кг массы тела. Животных декапитировали на 7 и 14 сутки под легким эфирным наркозом. Исследуемым материалом служил гомогенат печени. Печень отмывали 0,9% раствором натрия хлорида и гомогенизировали в 40 мМ трис НСЬ-буфере (pH 7,4). Полученный гомогенат инкубировали при 37°С и встряхивании (модель тепловой ишемии). Пробы исследовали до начала инкубации (нулевое время), через 60' и120' инкубации. Уровень белка определяли по методу Лоури [9], расчет вели на 1 г сырой массы печени. Активность системы перекисного окисления липидов (ПОЛ) определяли по объему малонового диальдегида (МДА) [10], антиоксидантный потенциал - по изменению антиокисли-тельной активности (АОА) [11]. Итоги обрабатывали статистически по ^критерию Стьюдента. Различия считались достоверно значимыми при р<0,05.

Результаты. Показатели изменения уровня ПОЛ и АОА представлены в табл. 1 и 2. Анализ полученных данных показал, что однократное введение цитостатиков приводило на 7-е и 14-е сутки к увеличению концентрации МДА в гомогенате соответственно на 54% и 92% (нулевая точка), через 60' инкубации к ее увеличению в 1,3 раза в те же сроки, а на 120' ишемии уровень МДА достоверно не отличался от интактного контроля.

Значительная инициация процессов ПОЛ на фоне ПХТ и гипоксии ткани печени объясняет ослабление АОА на 7-е и 14-е сутки в 0', 60' и 120' на 39% и 47%, 37% и 50%, 24% и 34% соответственно по сравнению с интактным контролем (р<0,05). Значительное ингибирование накопления МДА наблюдалось при профилактическом введении БК в дозе 100 мг/кг на 7-е сутки и ЭБК-2а в дозе 50 мг/кг на 14-е сутки, при чем результаты были достоверно ниже значений интактного контроля в нулевой точке (на 31% и 46% соответственно) (р<0,05), что подтверждается и высокой АОА при введении этих соединений 106% и 103%. ЭБК-2а в дозе 100 мг/кг на 7-е сутки продемонстрировал достоверное отсутствие антиоксидантного действия, высокий уровень ПОЛ, прирост которого в точках 0' и 60' составил 46%, 25% соответственно от интактного контроля, на 120' ишемии не отличался от интактного контроля, в отличие от других соединений, значения МДА которых были достоверно ниже значений интактного контроля в тех же точках (р<0,05). Об этом говорит и самая низкая АОА в исходной точке и на 60' ишемии 72% и 75% соответственно. В остальных группах содержание МДА в исходной точке на 7-е сутки либо было незначительно снижено (БК-50 мг/кг на 15%, ЭБК-2а-50 мг/кг на 23%) по сравнению с интактным контролем, либо достоверно не отличалось от такового (БК-2а-100 мг/кг 7-е сутки, БК-50 мг/кг 14-е сутки), либо было несколько выше ин-тактного контроля (БК-2а-50 мг/кг 7-е сутки на 15%, БК-2а-50 мг/кг 14-е сутки на 23%), но ниже значений ПХТ контроля (р<0,05). АОА в этих группах колебалась от 82% до 97%. При инкубации через 60' профилактическое введение БК, БК-2а, ЭБК-2а в дозе 50 мг/кг на 7-е сутки приводило к снижению скорости реакций ПОЛ на 50%, 29%, 25% при этом АОА составляла 98%, 91%, 91%, а через 120' ишемии - на 58%, 60%, 39% АОА - 126%, 123%, 112% соответственно по сравнению с интактным контролем (р<0,05). Ингибирующий эффект БК и БК-2а, введенных в дозе 100 мг/кг на 7-е сутки через 60' ишемии, аналогичен таковым в дозе 50 мг/кг, АОА достоверно высокая - 115% и 91%, на 120' инкубации уровень МДА и АОА не отличались от интактно-го контроля.

Активность спонтанного ПОЛ в печени при профилактическом введении БК, БК-2а, ЭБК-2а в дозах 50 мг/кг на 14-е сутки через 60' и 120' инкубации снижалась на 33% и 56%, 46% и 50%, 50% и 65% соответственно по сравнению с интактным контролем (р<0,05). По мере снижения интенсивности процессов ПОЛ возрастала АОА и составляла при введении БК, БК-2а, ЭБК-2а в дозе 50 мг/кг на 14-е сутки через 60' и 120' инкубации 88% и 126%, 91% и 117%, 105% и 132% соответственно по сравнению с интактным контролем (р<0,05).

Таблица 1

Влияние бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных на активностьПОЛ в печени

Условия эксперимента Время спонтанной индукции ПОЛ, мин

МДА, нмоль/л 0' МДА, нмоль/л 60, МДА, нмоль/л 120,

Контроль (интактные животные) 0,13±0,007 0,24±0,02 0,48±0,09

ПХТ контроль, 7 сут. 0,2±0,007а 0,29±0,01а 0,39±0,05

БК+ПХТ, 7 сут. (50 мг/кг) 0,11 ±0,008ab 0,12±0,01аЬ 0,2±0,02аЬ

2a-БК+ПХТ, 7 сут. (50 мг/кг) 0,15±0,006*b 0,17±0,01аЬ 0,19±0,01аЬ

2a-ЭБК+ПХТ, 7 сут. (50 мг/кг) 0,1±0,005ab 0,18±0,007аЬ 0,29±0,02аЬ

БК+ПХТ, 7 сут. (100 мг/кг) 0,09±0,007аЬ 0,12±0,01аЬ 0,32±0,07

2a-БК+ПХТ, 7 сут. (100 мг/кг) 0,14±0,01b 0,16±0,01аЬ 0,4±0,02

2a-ЭБК+ПХТ, 7 сут. (100 мг/кг) 0,19±0,01а 0,3±0,02а 0,55±0,01b

ПХТ контроль, 14 сут. 0,25±0,02а 0,32±0,01а 0,45±0,01

БК+ПХТ, 14 сут. (50 мг/кг) 0,14±0,006b 0,16±0,01аЬ 0,21±0,01аЬ

2a-БК+ПХТ, 14 сут. (50 мг/кг) 0,16±0,009*b 0,13±0,001аЬ 0,24±0,004аЬ

2a-ЭБК+ПХТ, 14сут. (50 мг/кг) 0,07±0,001ab 0,12±0,007аЬ 0,17±0,02аЬ

ра - достоверность различий с интактным контролем, а -

Таблица 2

Влияние бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных на АОА ткани печени

Условия эксперимента Время спонтанной индукции ПОЛ, мин

АОА, отн.ед. 0' АОА, отн.ед. 60, АОА, отн.ед. 12.0’

Контроль (интактные животные) 71,9±1,11 56,2±1,73 40,0±4,98

ПХТ контроль, 7 сут. 44,1±1,8a 35,5±1,8а 30,3±2,1а

БК+ПХТ, 7 сут. (50 мг/кг) 68,9±2,2b 55,0±2,3b 50,5±1,5аЬ

2a-БК+ПХТ, 7 сут. (50 мг/кг) 60,9±3,5аь 51^1,2^ 49,1±1,3а'b

2a-ЭБК+ПХТ, 7 сут. (50 мг/кг) 69,6±1,1b 50^1,2^ 44,6±1,6b

БК+ПХТ, 7 сут. (100 мг/кг) 76,2±1,3аь 64,4±1,9аь 51,9±2,2ab

2a-БК+ПХТ, 7 сут. (100 мг/кг) 59,1±2,4ab 51,2±2,2аЬ 40,9±1,9b

2a-ЭБК+ПХТ, 7 сут. (100 мг/кг) 51,7±2,6аЬ 42,3±1,6аЬ 37,5±2,2b

ПХТ контроль, 14 сут. 38,1±2,6а 28,1±1,6а 26,2±1,7a

БК+ПХТ, 14 сут. (50 мг/кг) 60,2±3,4ab 49,3±1,5,-b 50,4±2,2,-b

2a-БК+ПХТ, 14 сут. (50 мг/кг) 58,7±2,8аь 51,1±2,1 э,ь 46,9±2,0b

2a-ЭБК+ПХТ, 14сут. (50 мг/кг) 74,01±1,6b 59,1±1,5b 52,6±2,2аЬ

ра - достоверность различий с интактным контролем, а - (р<0,05) рь - достоверность различий с ПХТ контролем

В большей степени ингибируют процессы пероксидации липидов и поддерживают высокую АОА производные бетулоно-вой кислоты: БК, БК-2^ ЭБК-2^ введенные профилактически однократно в дозе 50 мг/кг на фоне ПХТ и при ишемическом повреждении печени, при чем лидирующая позиция по выраженности проявления антиоксидантного эффекта и его удержанию отмечены у БК на 7-е сутки и на 14-е сутки и у ЭБК-2^

При введении БК, БК-2a в дозе 100 мг/кг выраженность антиоксидантного эффекта, хотя и была в ранние сроки спонтанной индукции ПОЛ аналогична таковым, введенным в меньшей дозе, но при увеличении времени спонтанной индукции ПОЛ их анти-оксидантный потенциал ниже.

При этом антиоксидантный эффект отсутствовал у ЭБК-2^ введенного в дозе 100 мг/кг. Выраженность антиоксидантного действия у БК и ее производных обусловливает эффективную защиту и позволяет применять их для коррекции токсических поражений печени.

Литература

1. Сафонова С.А., Гершанович М.Л. // Вопросы онкологии.- 2005.- Т.51, № 5.- С. 599-600.

2. Саратиков А.С. и др. // Экспер. и клин. фармакол.-2002.- Т.65, № 2.- С. 31-33.

3. Моисеев С.В.Н Клин. фарм. и тер.- 2005.- № 1.- С. 10.

4. Катикова О.Ю. и др. // Экспер. и клин. фармакол.-2002.- Т.65, № 1.- С. 41-43.

5. Ильичева Т.Н. и др. // Ж. микробиол. и эпидемиол.-

2001.- № 2.- С. 53-56.

6. Ле Банг Шон и др. // Вопр. биол. мед. и фарм. химии.-

2002.- № 4.- С. 31-34.

7. Zuco V. et al. // Cancer Lett.- 2002.- № 1.- P. 17-25.

8. HataK. et al. // Toxic. Lett.- 2003.- Vol.143.- P. 1-7.

9. Lowry O.H. et al. // J. Biol. Chem.- 1951.- Vol.193, № 1.-P. 265-275.

10. Мартынюк В.Б. и др. // Лаб. дело.- 1991.- №3.- С.19.

11. Клебанов Г.И. и др. // Лаб. дело.- 1988.- № 5.- С. 59.

УДК 616.127

ТЕРАГЕРЦЕВОЕ ИЗЛУЧЕНИЕ НА ЧАСТОТЕ ОКСИДА АЗОТА 240 ГГЦ И АГРЕГАЦИОННАЯ АКТИВНОСТЬ ТРОМБОЦИТОВ БЕЛЫХ КРЫС В СОСТОЯНИИ ОКСИДАТИВНОГО СТРЕССА НА ФОНЕ ВВЕДЕНИЯ БЛОКАТОРА ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ЫО-СИНТАЗЫ

Е.В. АНДРОНОВ*

Одним из основных патогенетических факторов ишемической болезни сердца, в частности, нестабильной стенокардии, является нарушения сосудисто-тромбоцитарного звена системы гемостаза [10]. Ключевую роль в развитии микроциркуляторных нарушений и патологических изменений, возникающих в крупных сосудах, играет дисфункция эндотелия [8], в результате чего происходит нарушение баланса продукции вазоконстрикторных, проагрегантных, вазодилататорных и антиагрегантных веществ. У больных нестабильной стенокардией сдвиг в балансе происходит в сторону повышения агрегационной активности кровяных пластинок [10], что определяет прогрессирование заболеваний и развитие осложнений. Одним из биоактивных веществ, продуцируемых эндотелием, является оксид азота (N0), который обладает антиагрегантным эффектом и регулирует продукцию эндотелием факторов, принимающих участие в регуляции агрегацион-ной активности тромбоцитов, в частности простациклина. Ключевым моментом патогенеза эндотелиальной дисфункции является угнетение синтеза N0. Недостаточная продукция или ускоренный распад N0 ведет к развитию сердечно-сосудистых заболеваний, связанных с нарушением функции эндотелия, патологическим повышением сосудистого тонуса и агрегационной активности тромбоцитов [3]. Лечение этих состояний требует компенсации недостаточной продукции эндотелиального N0 [4]. Фармакологические средства коррекции дефицита N0 имеет свои отрицательные стороны. Применение донаторов N0 может усугублять эндотелиальную дисфункцию, что сопровождается развитием феномена толерантности к нитратам и перекрестной толерантности [9]. Эффект нитровазодилататоров оказывается коротким, а их применение может вызвать ускоренный атероге-нез и усугубить эндотелиальную дисфункциюи [1].

Для коррекции повышенной агрегационной активности тромбоцитов при разных формах кардиологической патологии -нестабильной и стабильной стенокардии применяют терагерце-вые электромагнитные волны на частотах молекулярного спектра излучения и поглощения (МСИП) N0 150,176-150,664 и 240 ГГц [5-7], так как N0 является вазодилататором, мощным фактором гемостаза и ингибитором агрегации тромбоцитов.

Цель - анализ влияния терагерцевых электромагнитных волн на частоте МСИП N0 240 ГГц на функциональную активность тромбоцитов крыс в состоянии оксидативного стресса и выявление роли эндотелиальной N0-синтазы в реализации влияния терагерцевого излучения на нарушенные агрегационные свойства тромбоцитов.

Материалы и методы. Опыты велись на беспородных белых крысах-самцах массой 180-240 г. Для моделирования окси-дативного стресса применяли доксорубицин в дозе 7.5 мг/кг,

* Саратовский ГМУ, каф. нормальной физиологии, 8(845-2) 66-97-57