60
Гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена C, ресвератрола и бетаина гидрохлорида
60
HEPATOPROTECTIVE AND ANTIOXIDANT DRUG FOR ANIMALS BASED ON AQUEOUS SOLUTION OF FULLERENE C, RESVERATROL AND BETAINE HYDROCHLORIDE

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к ветеринарной фармации, в частности к препаратам для профилактики и лечения заболеваний печени, свободнорадикальной патологии у животных и может быть использовано в ветеринарной медицине.
Уровень техники
60
60
60
Известно соединение водного раствора фуллерена enC. Установлено, что водный раствор фуллерена dnC проявляет выраженную вирулицидную, профилактическую и терапевтическую активность. Терапевтический эффект in vivo тестировали на модели кожной герпетической инфекции мышей. В результате лечения животных водным раствором фуллерена dnC наблюдали статистически значимое снижение клинических проявлений герпетической инфекции. Полученные результаты позволяют заключить, что водный раствор проявляет выраженную терапевтическую активность против ВПГ-1-инфекции, при этом его лечебный эффект сопоставим с референс-препаратом АЦВ, при использовании в 500 раз меньшей концентрации (См. пат. № RU 2694754 С1, опубл. 16.07.2019).
60
Недостатком соединения водного раствора фуллерена dnC является отсутствие гепатопротекторного и антиоксидантного эффектов. Не применяется в ветеринарной фармакологии.
60
60
Известен способ получения вакцины, содержащей фуллерен С-сер в качестве адъюванта. При этом обеспечено существенное (адъювантное) иммуностимулирующее действие фуллерена по отношению к антигенным экстрактам из биомассы бактерий. Способ предусматривает обработку антигенного экстракта из биомассы микроба периодатом натрия при его концентрации 0,5-1,5 мг/мл по содержанию общего белка и концентрации периодата натрия 20-120 мМ/мл в реагентной смеси при рН среды 5,0-6,0. В качестве адъюванта используют фуллерен С-сер. (См. пат. RU 2184566 С1, опубл. 10.07.2002 г.).
60
Недостатком способа получения вакцины, содержащей фуллерен С-сер, в качестве адъюванта в качестве препарата является отсутствие гепатопротекторного и антиоксидантного эффектов. Не применяется в ветеринарной фармакологии.
Известно применение водорастворимых производных фуллерена в качестве лекарственных препаратов нейропротекторного и противоопухолевого действия (См. пат. № RU 2704483 С2, опубл. 29.10.2019 г.).
Недостатком водорастворимых производных соединений фуллерена в качестве лекарственных препаратов нейропротекторного и противоопухолевого действия является отсутствие гепатопротекторного и антиоксидантного эффектов. Не применяется в ветеринарной фармакологии.
2
Известно фуллереновое производное гликопептида формулы I: Glc Nac-Mur Nac-Ala-DiGln[Lys-ε-CO(CH)5NHC60-H], обладающие адъювантной активностью. Получено путем синтеза фуллеренового производного аминокапроновой кислоты и последующего его присоединения к лизиновому производному гликопептида. Эксперименты, проведенные на группе мышей (самки линии Balb/c), показали, что при низких дозах 1-10 нм/животное синтезированное соединение обладает высокими адъювантными свойствами (См. пат. № RU 2124022 С1, опубл. 27.12.1998 г.).
2
Недостатком фуллереновое производное гликопептида формулы I: Glc Nac-Mur Nac-Ala-DiGln[Lys-ε-CO(CH)5NHC60-H], является отсутствие гепатопротекторного и антиоксидантного эффектов. Не применяется в ветеринарной фармакологии.
Раскрытие изобретения
60
Задачей изобретения является разработка высокоэффективного препарата на основе водного раствора фуллерена С, обладающего выраженными гепатопротекторным и антиоксидантным, иммуностимулирующим действием, низкой токсичностью, высокой эффективностью в профилактике и лечении патологий печени, свободнорадикальной патологии у животных, удобством введения и дозировки.
Технический результат, который может быть, достигнут с помощью предлагаемого изобретения, сводится к стимулированию защитных функций печени и антиоксидантному эффекту, ингибированию свободнорадикальных процессов в организме животных, повышению стрессоустойчивости организма, снижению токсичности, повышению удобства применения и дозирования.
60
60
Технический результат достигается с помощью гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, включающего водный раствор Фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мас. мг:
60
Водный раствор фуллерена С, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу.
Ресвератрол - 25 мг.
Бетоина гидрохлорид - 10 мг.
60
Заявляемый гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представляет собой прозрачный раствор темно-коричневого цвета, без запаха, обладающий выраженным гепатопротекторным, антиоксидантным, антигипоксическим эффектом, является ингибитором свободнорадикальных процессов, повышает стрессоустойчивость организма, низкотоксичен и удобен в введении и дозировании.
Печень как жизненно важный орган выполняет широкий спектр функций в организме, включая детоксикацию, синтез белков плазмы и хранение гликогена. Окислительный стресс рассматривается как дисбаланс между производством активных форм кислорода (АФК) и механизмом антиоксидантной защиты. Это основная причина развития заболеваний печени (Ксейко Д.А. Антиоксидантная белковая система в печени при острой кровопотере / Ульяновский медико-биологический журнал. - 2012. - №1. - С. 64-67). Различные типы заболеваний печени характеризуются циррозом, желтухой, опухолями, метаболическими и дегенеративными поражениями, некрозом клеток печени и т.д. Лечение заболеваний печени по-прежнему остается проблемой для современной ветеринарной медицины (Решетняк В.И., Маев И.В., Решетняк Т.М., Журавель С.В., Писарев В.М. Заболевания печени и гемостаз (обзор) часть 1. нехолестатические заболевания печени и гемостаз - Общая реаниматология. 2019. - Т. 15. - №5. - С. 74-87.).
Окислительный стресс представляет собой один из наиболее распространенных факторов токсичности. Все типы агентов (химические, физические и биологические) могут вызывать окислительно-опосредованный стресс в тканях и клетках. Более того, окислительно-опосредованные реакции участвуют во многих фундаментальных аспектах жизненных процессов, таких как клеточное дыхание (митохондрии), синтез липидов, метаболизм металлов, лизосомы, иммунитет и ксенобиотическая биотрансформация органических соединений (Скрипниченко Е.В. Влияние физической нагрузки на окислиельно востановительные процессы в организме спортсмена: «Физическое воспитание и спорт в высших учебных заведениях», сборник статей XVI Междунар. науч. конф. - Белгород, 2020. - С. 139-144.).
Печень также поражается из-за повреждающего действия свободных радикалов и приводит к жировым изменениям в печени. Хорошо известно, что нормальная функция печени необходима для поддержания здоровья ЦНС. Измененные продукты метаболизма, накопленные из-за дисфункции гепатоцитов, могут вызывать нарушения в головном мозге и способствовать повреждению центральной нервной системы (ЦНС). Важно отметить, что печеночная недостаточность, вызванная различными факторами, вызывает значительные изменения в поддерживающих нейронах клетках, называемых астроцитами. Астроциты являются наиболее распространенным типом клеток, представленных в ЦНС. Они обеспечивают метаболическую и трофическую поддержку нервных клеток, поддерживают гематоэнцефалический барьер, модулируют синаптическую активность и защищают нейроны от повреждений (Арутюнян А.В., Милютина Ю.П., Залозняя И.В., Щербицкая А.Д., Керкешко Г.О. Роль нейротрофических факторов плаценты в развитии мозга плода при гипергомоцистеинемии - Молекулярная медицина. - 2019. - Т. 17. - №3. - С. 3-7.
Высвобождение активных форм кислорода во время этих процессов нейтрализуется набором антиоксидантных соединений в попытке защитить целостность клеток или тканей.
Хрупкий баланс между антиоксидантами и производством активных форм кислорода может быть нарушен воздействием токсичных веществ.
Антиоксидантным свойствам фуллеренов посвящено множество обзоров.
Фуллерены являются относительно новой группой соединений и представляют собой класс сферических молекул, полностью состоящих из атомов углерода.
60
60
60
60
Фуллерен обладает двумя основными свойствами, за которые его можно назвать двуликим Янусом - это способность нейтрализовать свободные радикалы, выступая в роли антиоксиданта, и способность генерировать активные формы кислорода при облучении (Пиотровский Л.Б., Литасова Е.В., Думпис М.А. Зачем нам сегодня нужны фуллерены? - 2019. - Т. 17. - №2. - С. 5-15. https://doi.org/10.7816/RCF1725-15, Пиотровский Л.Б., Киселев О.И. Фуллерены в биологии. - СПб.: Росток, 2006. - 334 с.). Именно способность нейтрализовать свободные радикалы, выступать в виде ловушки, то есть проявлять свойства антиоксиданта, и является основным свойством фуллерена, определяющим его востребованность в различных областях народного хозяйства. Впервые способность улавливать свободные радикалы, то есть антиоксидантное действие фуллерена, обнаружил Krusic et al. (Krusic PJ, Wasserman E, Keizer PN, et al. Radical reaction of С. Science. 1991;254:1183-1185. https://doi.org/10.1126/science.254.5035.1183). Они даже назвали фуллерен С «губкой для радикалов» (radical sponge) из-за того, что он улавливал 34 метальных или 15 бензильных радикалов. Присоединение радикалов к фуллерену С происходит по двойной связи С=С с образованием соответствующих аддуктов (McEwen CN, McKay RG, Larsen BS. C as a radical sponge. J Am Chem Soc. 1992;114(11):4412-4414. https://doi.org/10.1021/ja00037a064), что и составляет химическую основу способности фуллеренов проявлять в биологических системах свойства антиоксидантов и цитопротекторов (Yin JJ, Lao F, Fu PP, et al. The scavenging of reactive oxygen species and the potential for cell protection by functionalized fullerene materials. Biomaterials. 2009;30(4):611-621. https://doi.org/10.1016/j.biomaterials.2008.09.061).
60
Сущность полученного гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мас. мг:
60
Водный раствор фуллерена С, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу.
Ресвератрол - 25 мг.
Бетоина гидрохлорид - 10 мг.
Раствор смешивают в асептических условиях и упаковывают.
Осуществление изобретения
60
Примеры конкретного выполнения получения и испытания с помощью гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида.
Пример 1.
60
Гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мас. мг:
60
Водный раствор фуллерена С, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу.
Ресвератрол - 25 мг.
Бетоина гидрохлорид - 10 мг.
Полученный раствор оказал существенное воздействие на процессы перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной системы. Концентрация диеновых коньюгатов в сыворотке крови снизилась на 49,8% (Фиг. 1).
Концентрация малонового диальдегида (МДА) понизилась в сыворотке крови - на 38,8%, в ткани головного мозга - на 39,4%, в легких - на 18,2%, почках - на 18,1%, печени - на 24,8%, сердце - на 14,9%, скелетных мышцах - на 12,4%, в желудке - на 17,6% в тонком отделе кишечника - на 19,5% и толстом отделе кишечника - на 20,4% (Табл. 1).
60
Активность каталазы после введения препарата на основе водного раствора фуллерена С достоверно повысилась в сыворотке крови на 7,5%, в ткани головного мозга на 10,4%, в легочной ткани - на 9,7%, в ткани желудка - на 11,8% и ткани тонкого отдела кишечника - на 7,6%. В остальных тканях активность фермента находилась в пределах физиологической нормы (Табл. 1).
Пример 2.
60
Гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мас. мг:
60
Водный раствор фуллерена С, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу.
Ресвератрол - 25 мг.
Бетоина гидрохлорид - 10 мг.
Полученный раствор оказал существенное воздействие на состояние белково-азотистого обмена и мочевинообразовательной функции печени, которую оценивали по динамике в крови общего белка, ферментов трансаминирования, а также метаболитов орнитинового цикла и системы глутаминовая кислота-глутамин (табл. 2). Препарат вводили подкожно белым крысам.
Установлено, что после введения изучаемого соединения содержание общего белка, мочевины, аммиака и орнитина повышается на 8,6%, 10,0%, 10,0%) и 11,7% соответственно, по сравнению со здоровыми (табл. 2). Достоверных различий в содержании глутамина в сыворотке крови до и после введения изучаемого соединения не выявлено.
Мочевина и глутамин играют важную роль в кислотно-щелочном регулировании. Почечная продукция аммиака из глутамина является хорошо известной реакцией на метаболический ацидоз. Так как наряду с экскрецией аммония с мочой, синтез глутамина является вторым основным механизмом, с помощью которого млекопитающие может усваивать избыток аммиака.
60
После введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида повышается и активность ферментов трансаминирования (фиг. 2, 3).
Транаминазы обычно высвобождаются с постоянной скоростью, при этом их обычные уровни у здоровых животных представляют собой равновесие между нормальным оборотом гепатоцитов в результате запрограммированной гибели клеток (апоптоз) и выведения ферментов из плазмы.
Аланинаминотрансфераза (АЛТ) присутствует только в цитоплазме гепатоцитов, тогда как аспартатаминотрансфераза (ACT) присутствует как в цитоплазме гепатоцитов, так и в митохондриях. Функции обеих этих трансаминаз представляют важные метаболические связи между углеводным и белковым обменом. АЛТ участвует в «глюкозо-аланиновом цикле» и обменивает аланин и пируват и может регенерировать глюкозу, потребляемую мышцами, так же, как лактатдегидрогеназа обменивает лактат и пируват в «цикле Кори» для регенерации глюкозы из лактата в анаэробном метаболизме.
Весьма существенно, что у животных содержание орнитина в крови после введения изучаемого соединения повысилось на 11,7%. Так как орнитин помогает выводить из организма два вредных газа, аммиак и углекислый газ. Аммиак очень токсичен для центральной нервной системы и должен быть выведен из организма. Этапы этого цикла происходят в митохондриях и цитоплазме.
60
Полученные нами результаты свидетельствует о том, что после введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида активность аргиназы повышается на 20,7% по сравнению с контрольными животными (фиг. 4).
60
Что же касается активности лактатдегидрогеназы (фиг. 5), то после введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, она достоверно не изменилась.
60
Установлено, что концентрация общего белка после введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида повысилась на 8,6% по отношению к контрольным животным (табл. 3). Другие исследованные показатели белкового обмена, изменялись по-разному. Так, содержание в крови альбуминов повысилось на 11,5%. В то же время концентрация α-глобулинов после введения изучаемого соединения достоверно не изменилось, β-глобулинов повысилось на 10,7% и γ-глобулинов - на 16,7% относительно контроля.
60
60
Таким образом, гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена C, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мас. мг: водный раствор фуллерена С, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, бетоина гидрохлорид - 10 мг, оказывает выраженный гепатопротектроный эффект.
Пример 3.
60
Острую токсичность гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида (24 животных) и белых крысах (24 животных).
Белым крысам препарат вводили подкожно в дозах 550, 825, 1100, 2500, 5000 мг/кг по действующему веществу, белым мышам - внутрижелудочно в тех же дозах. За животными наблюдали в течение 14 суток после введения препарата. Объем вводимого раствора составлял белым крысам до 1,0 мл, белым мышам до 0,5 мл. Результаты исследований приведены в таблицах 4 и 5.
60
Клиника токсического действия при подкожном введении гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида у белых крыс, сопровождалась следующими симптомами (Табл. 6).
60
Животные, получавшие гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида в изучаемых дозах течение всего периода наблюдения (14 суток) активно передвигались по клеткам, по пищевому и питьевому поведению мало отличались от крыс контрольной группы, адекватная реакция на внешние раздражители (звук, свет) была на уровне контроля.
При внутрижелудочном введении препарата в дозе 2500 мг/кг белые мыши в течение первых суток были угнетены, малоподвижны, отказывались от корма. Реакция на внешние раздражители была понижена. На вторые сутки после введения препарата восстанавливалось пищевое и питьевое поведение, реакции на внешние раздражители (Табл. 7).
50
60
В течение 14 суток исследований падежа опытных животных не отмечено. В связи с этим установить LD не представилось возможным. Это позволяет считать гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, нетоксичным в испытанном диапазоне и варьировать его дозами в широких пределах.
Пример 3.
60
Оценку раздражающего действия гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида проводили на морских свинках и кроликах на основании результатов постановки метода накожных аппликаций и конъюнктивальных проб.
60
60
Для постановки метода накожных проб гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида в несколько серий использовались морские свинки и кролики. Раздражающее действие гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида оценивали на морских свинках в количестве 10 животных, разделенных на 2 группы.
60
60
Морским свинкам 1 опытной группы применяли гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мас. мг: водный раствор фуллерена С, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, бетоина гидрохлорид - 10 мг.
60
60
Морским свинкам 2 опытной группы вводили гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида. Раствор готовят путем смешивания в 1 мл водного раствора Фуллерена С 1 мл, 1 мг по действующему веществу, 2500 мг ресвератрола, 1000 мг - бетоина гидрохлорида.
60
60
Гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида применяли накожно. Местом введения являлась правая боковая поверхность середины туловища. На левую боковую поверхность туловища в качестве контроля наносили дистиллированную воду. Предварительно участок тела размером 2 см × 2 см коротко выстригали. Растворы препарата на основе водного раствора фуллерена С для профилактики и лечения свободнорадикальной патологии у животных и дистиллированную воду наносили по 3 капли один раз в день в течение 14 суток. Для исключения развития контактного дерматита механическое воздействие на опытный участок кожи свели к минимуму (Фиг. 6, 7).
60
60
Реакцию кожи морских свинок при накожном применении водных растворов фуллерена С оценивали по Шкале оценки аппликационных кожных тестов по Паттерсону (Табл. 8). После нанесения препарата вели непрерывное наблюдение за животными в течение 20 минут. Затем тестируемые показатели снимали через каждые 24 часа. В ходе опытов установлено, что гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида не вызывает раздражающего действия на кожу опытных морских свинок.
60
Раздражающее действие гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида изучали во 2 серии опытов. Для этого использовали морских свинок в количестве 10 голов, разделенных на 2 группы.
60
60
Морским свинкам 1 опытной группы применяли гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мае. мг: водный раствор фуллерена С, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, бетоина гидрохлорид - 10 мг (Табл. 9).
60
60
Морским свинкам 2 опытной группы вводили гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида. Раствор готовят путем смешивания в 1 мл водного раствора Фуллерена С - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, 2500 мг ресвератрола, 1000 мг - бетоина гидрохлорида.
На поверхность спины с правой стороны наносили дистиллированную воду для снятия контрольных данных.
Ежедневно наблюдая за состоянием кожи в местах нанесения препарата установлено, что изучаемый препарат в 1 и 2 виде водных растворов не вызывает стойких морфологических изменений в различных слоях кожи у морских свинок за весь период наблюдений.
60
Аналогичные опыты на кроликах проведены с гепатопротекторным и антиоксидантным препаратом для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида. С этой целью подобрано 2 группы кроликов по 6 голов в каждой.
60
60
Кроликам 1 опытной группы применяли гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мас. мг: водный раствор фуллерена С, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, бетоина гидрохлорид - 10 мг (Табл. 10).
60
60
Кроликам 2 опытной группы вводили гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида. Раствор готовят путем смешивания в 1 мл водного раствора Фуллерена С - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, 2500 мг ресвератрола, 1000 мг - бетоина гидрохлорида.
Установлено, что нанесение на кожу 1 и 2 раствора не оказывало патологического воздействия на кожу кроликов как на 7, так и 14 сутки опытов.
60
60
Проведенные исследования по оценке раздражающего действия на кожу животных гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида позволяют сделать вывод о том, что препарат на основе водного раствора фуллерена С для профилактики и лечения свободнорадикальной патологии у животных не вызывает выраженных морфологических изменений в различных слоях кожи опытных животных.
60
60
Для постановки конъюнктивальной пробы были использованы морские свинки. Морским свинкам 1 опытной группы применяли гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мае. мг: водный раствор фуллерена С, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, бетоина гидрохлорид - 10 мг.
60
60
Морским свинкам 2 опытной группы вводили гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида. Раствор готовят путем смешивания в 1 мл водного раствора Фуллерена С - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, 2500 мг ресвератрола, 1000 мг - бетоина гидрохлорида.
Готовые растворы по 1 капле вводили глазной пипеткой под верхнее веко правого глаза, а левый глаз служил контролем, и вводили дистиллированную воду. Для оценки аллергизирующего эффекта каждого препарата использовали 10 голов морских свинок по 5 животных в группах.
Гиперчувствительность немедленного типа оценивали через 15 минут после введения препаратов. Гиперчувствительность замедленного типа оценивали через 24-48 ч. Результаты исследований (Табл. 8) оценивали по следующей шкале:
1 - легкое покраснение слезного протока;
2 - покраснение слезного протока и склеры в направлении к роговице;
3 - покраснение всей конъюнктивы и склеры. Реакция сопровождается зудом и при расчесывании лапками возможно развитие гнойного офтальмита.
В течение 6 ч непрерывного наблюдения за животными изменений в клиническом состоянии организма морских свинок после нанесения препарата на конъюнктиву зарегистрировано не было (Фиг. 9). Согласно методике, после 24 часового и 48 часового периода наблюдения, в состоянии морских свинок также не было зарегистрировано изменений.
Краткое описание чертежей и иных материалов
60
Графическое изображение содержание диеновых коньюгатов в сыворотке крови белых крыс после подкожного введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представлено на фиг. 1.
Концентрация продуктов перекисного окисления в крови животных и активность антиоксидантных ферментов в крови животных представлены в таблице 1.
Показатели белково-азотистого обмена в крови белых крыс представлены в таблице 2.
60
Графическое изображение активности аспартатаминотрансферазы, (ед/л), в сыворотке крови белых крыс после подкожного введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представлены на фигуре 2.
60
Графическое изображение активности аланинаминотрансферазы, (ед/л), в сыворотке крови белых крыс после подкожного введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представлены на фигуре 3.
60
Графическое изображение активности аргиназы, (мкмоль/мочевины/г сырой ткани), в сыворотке крови белых крыс после подкожного введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представлены на фигуре 4.
60
Графическое изображение активности лактатдегидрогеназы, (ммоль/г), в сыворотке крови белых крыс после подкожного введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представлены на фигуре 5.
Показатели белкового обмена в крови белых крыс представлены в таблице 3.
60
Острая токсичность для белых крыс гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представлена в таблице 4.
60
Острая токсичность для белых мышей гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представлена в таблице 5.
60
Состояние физиологических параметров белых крыс при однократном подкожном введении гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида в дозе 2500 мг/кг по действующему веществу представлено в таблице 6.
60
Состояние физиологических параметров белых мышей при однократном внутрижелудочном введении гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида в дозе 2500 мг/кг по действующему веществу представлено в таблице 7.
60
На фиг. 6, 7 - иллюстрации кожно-резорбтивной реакции для морских свинок гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида.
Шкала оценки аппликационных кожных тестов представлена в таблице 8.
60
Оценка раздражающего действия гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида для морских свинок и кроликов представлена в таблице 9.
60
Результаты конъюнктивальных проб гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида для кроликов представлены в таблице 10.
60
На фиг. 8 представлены иллюстрации аллергической реакции для морских свинок на введение гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С, ресвератрола и бетаина гидрохлорида.