НОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ 2-ГИДРОКСИТЕТРАГИДРОФУРАНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
NOVEL DERIVATIVES OF 2-HYROXYTETRAHYDROFURANE AND THEIR APPLICATION AS MEDICATIONS

Настоящее изобретение относится к новым производным 2-гидрокситетрагидрофурана, имеющим способность ингибировать калпаины и/или способность улавливать активные формы кислорода (сокращенно ROS от "reactive oxygen species"). Изобретение относится также к способам их получения, к содержащим их фармацевтическим композициям и к их применению в терапевтических целях, в частности, в качестве ингибиторов калпаинов и ловушек активных форм кислорода, селективным или неселективным образом.
Учитывая потенциальную роль калпаинов и ROS в физиопатологии, новые производные согласно изобретению могут оказывать выгодные или благоприятные эффекты при лечении патологий, в которые вовлечены эти ферменты и/или эти радикальные частицы, и в частности:
- воспалительные и иммунологические заболевания, такие как, например, ревматоидный артрит, панкреатиты, рассеянный склероз, воспаления желудочно-кишечной системы (язвенный или неязвенный колит, болезнь Крона),
- сердечно-сосудистые и церебрально-васкулярные заболевания, включающие, например, повышенное кровяное давление, септический шок, сердечный или мозговой инфаркты ишемического или геморрагического происхождения, ишемии, а также расстройства, связанные с агрегацией тромбоцитов,
- расстройства центральной или периферической нервной системы, такие как, например, нейродегенеративные заболевания, из которых можно, в частности, назвать мозговые или спинномозговые травмы, субарахноидальные кровоизлияния, эпилепсию, старение, старческие деменции, в том числе болезнь Альцгеймера, хорею Хантингтона, болезнь Паркинсона, периферические невропатии,
- потеря слуха,
- остеопороз,
- мышечные дистрофии,
- пролиферативные заболевания, такие как, например, атеросклероз или рестеноз,
- катаракта,
- трансплантация органов,
- аутоиммунные и вирусные заболевания, такие как, например, волчанка, СПИД, паразитарные и вирусные инфекции, диабет и его осложнения, рассеянный склероз,
- рак,
- все патологии, отличающиеся избыточной продукцией ROS и/или активацией калпаинов.
Существуют экспериментальные доказательства, демонстрирующие участие ROS во всех этих патологиях (Free Radic. Biol. Med. (1996) 20, 675-705; Antioxid. Health. Dis. (1997) 4 (Handbook of Synthetic Antioxidants), 1-52), а также участие калпаинов (Trends Pharmacol. Sci. (1994) 15, 412419; Drug News Perspect (1999) 12, 73-82). К примеру, повреждение мозга, связанное с инфарктом мозга или экспериментальной травмой черепа, уменьшалось под действием антиоксидантов (Acta. Physiol. Scand. (1994) 152, 349-350; J. Cereb. Blood Flow Metabol. (1995) 15, 948-952; J. Pharmacol. Exp. Ther. (1997) 2, 895-904), а также под действием ингибиторов калпаинов (Proc Natl Acad Sci USA (1996) 93,3428-33; Stroke, (1998) 29, 152-158; Stroke (1994) 25, 2265-2270).
Заявитель уже описывал в заявке на патент PCT WO 01/32654 гетероциклические соединения, проявляющие одновременно активность ингибирования калпаинов и активность ловушек активных форм кислорода.
Указанные гетероциклические соединения в указанной патентной заявке отвечают общей формуле (A1)
,
в которой
1
3
3
R означает атом водорода, радикал -OR, -SR, оксо или циклический ацеталь,
3
в котором R означает атом водорода, алкильный, арилалкильный, гетероциклоалкилкарбонильный, алкилкарбонильный, арилкарбонильный или аралкилкарбонильный радикал,
4
5
причем алкильный, арильный или гетероциклоалкильный радикалы при необходимости замещены одним или несколькими одинаковыми или разными заместителями, выбранными из алкила, OH, алкокси, нитро, циано, галогена или -NRR;
4
5
4
5
R и R независимо означают атом водорода или алкильный радикал, или R и R вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют гетероцикл, при необходимости замещенный,
2
6
7
8
R означает атом водорода, алкильный, арильный или аралкильный радикал, причем арильная группа незамещена или замещена одним или более одинаковыми или разными радикалами, выбранными из: -OR, -NRR, галогена, циано, нитро или алкила,
6
7
8
в которых R, R и R означают независимо атом водорода, алкил, арил, аралкил, алкилкарбонильный, арилкарбонильный или аралкилкарбонильный радикал;
A означает, в частности, фенотиазинильный радикал, при необходимости замещенный;
2
n
2
2
n
2
n
2
n
2
n
2
n
45
45
45
45
45
46
47
45
46
47
45
46
47
X означает -(CH)-, -(CH)-CO-, -N(R)-CO-(CH)-CO-, -N(R)-CO-D-CO-, -CO-N(R)-D-CO-, -CO-D-CO-, -CH=CH-(CH)-CO-, -N(R)-(CH)-CO-, -N(R)-CO-C(RR)-CO-, -О-(CH)-CO-, -N(R)-CO-NH-C(RR)-CO-, -CO-N(R)-C(RR)-CO-, -S-(CH)-CO- или -Z-CO-;
D означает фенильный радикал, при необходимости замещенный;
Z означает гетероцикл,
45
R означает атом водорода или алкильный радикал,
46
47
R и R независимо означают атом водорода, алкильный, арильный или аралкильный радикал, алкильная и арильная группы которого при необходимости замещены;
48
49
50
48
49
R и R независимо означают атом водорода, алкильный радикал или группу -COR, или также R и R вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют гетероцикл, при необходимости замещенный,
50
51
52
R означает атом водорода, алкильный, алкоксильный радикал или радикал -NRR,
51
52
51
52
R и R независимо означают атом водорода или алкильный радикал, или R и R вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют гетероцикл, при необходимости замещенный;
причем n равно целому числу от 0 до 6;
2
p
2
p
53
54
53
54
Y означает -(CH)-, -C(RR)-(CH)-, -C(RR)-CO-;
53
54
55
56
R и R независимо означают атом водорода, алкильный радикал, арилалкильный радикал, арильная группа которого при необходимости замещена одним или несколькими одинаковыми или разными заместителями, выбранными из: группы OH, галогена, нитро, алкила, алкокси, -NRR,
55
56
57
55
56
R и R независимо означают атом водорода, алкильный радикал или группу -COR, или также R и R вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют гетероцикл, при необходимости замещенный,
57
58
59
R означает атом водорода, алкильный радикал, алкокси или -NRR,
58
59
58
59
R и R независимо означают атом водорода или алкильный радикал, или также R и R вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют гетероцикл, при необходимости замещенный;
причем p является целым числом от 0 до 6;
Het означает гетероцикл,
а также аддитивные соли указанных соединений общей формулы (A1) с неорганическими и органическими кислотами или с неорганическими и органическими основаниями,
1
3
3
2
45
46
47
45
46
2
p
за исключением соединений формулы (A1), в которой, когда Het является тетрагидрофураном или тетрагидропираном, R радикалом OR с R, являющимся атомом водорода, алкильным, арилалкильным радикалом, гетероциклоалкилкарбонилом, гетероциклоалкильный радикал которого разветвлен по атому углерода, алкилкарбонилом, арилкарбонилом или аралкилкарбонилом, R является водородом и Y является радикалом -(CH)- с p = 0, то X не является -CO-N(R)-C(RR)-CO- с R = R = H.
В настоящее время Заявитель неожиданно установил, что описанные ниже соединения общей формулы (I) имеют одновременно способность ингибировать калпаины и способность захватывать активные формы кислорода, обладая одновременно улучшенными свойствами в отношении клеточной проницаемости.
Таким образом, объектом настоящего изобретения являются соединения общей формулы (I)
,
в которой:
A означает радикал
,
в котором
1
2
4
5
6
7
8
R, R, R, R и R независимо означают атом водорода, атом галогена, группу OH, алкильный радикал, алкокси, циано, нитро или NRR,
7
8
9
R и R независимо означают атом водорода, алкильный радикал или группу -COR,
9
R означает атом водорода, алкильный радикал или алкокси,
3
10
R означает атом водорода, алкильный радикал или группу -COR,
10
R означает атом водорода или алкильный или алкоксильный радикал, и
2
2
11
11
W означает связь или радикал -CH-CH-, -CH=CH-, -O-, -S- или -NR-, где R означает атом водорода или алкильный радикал;
12
X означает -CO-, -Y-CO-, -O-Y-CO- или -NR-Y-CO-,
Y означает алкиленовый или галогеналкиленовый радикал,
12
13
R означает атом водорода, алкильный радикал или группу -COR,
13
R означает атом водорода, алкильный радикал, галогеналкил или алкокси,
14
15
16
14
15
16
2
p
AA означает, всякий раз, когда встречается, природную аминокислоту, природную аминокислоту, у которой боковая цепь, несущая реакционно способную функциональную группу (такую как карбоновая кислота, амин, спирт или тиол), защищена в форме сложного алкильного или аралкильного эфира (для кислотных групп), алкил- или аралкилкарбамата, или также алкил- или аралкилкарбоксамида (для аминогрупп), в форме простого алкильного или аралкильного эфира или алкильного или аралкильного тиоэфира, а также в форме сложного алкильного или аралкильного эфира (для спиртовой и тиольной групп) или, наконец, аминокислоту общей формулы -NR-(CH)-CRR-CO-, в которой p означает 0 или 1, R означает атом водорода или алкильный радикал, R означает атом водорода или алкильный радикал и R - атом водорода, алкильный, галогеналкильный, фенильный, циклоалкильный, циклоалкилалкильный или алкенильный радикал,
15
16
или R и R вместе с атомом углерода, с которым они соединены, образуют насыщенный карбоцикл с 3-7 атомами углерода (предпочтительно с 3-6 атомами углерода),
2
2
3
17
18
17
18
причем группа -(AA)- может также означать карбапептид общей формулы -NR-(CH)-CH(R)-CO-, в которой R означает атом водорода или алкильный радикал, а R означает атом водорода или алкильный радикал;
n означает 2 или 3; и, наконец,
19
19
R означает атом водорода или алкильный радикал, или -CO-R, где R означает алкильный радикал (в частности, метил);
или соли таких соединений.
Под алкилом или алкиленом, если не указано более точно, понимается линейный или разветвленный алкильный или алкиленовый радикал, содержащий от 1 до 12 атомов углерода, предпочтительно от 1 до 6 атомов углерода. Под галогеналкилом или галогеналкиленом понимается алкильный или алкиленовый радикал, у которого по меньшей мере один из атомов водорода замещен атомом галогена. Под алкенилом, если не указано более точно, понимается линейный или разветвленный алкенильный радикал, содержащий от 2 до 12 атомов углерода, предпочтительно от 2 до 6 атомов углерода. Под циклоалкилом, если не указано более точно, понимается циклоалкильный радикал, содержащий от 3 до 7 атомов углерода. Под алкокси, если не указано более точно, понимается алкоксильный радикал, углеродная цепь которого линейна или разветвлена и содержит от 1 до 6 атомов углерода. Под арилом, если не указано более точно, понимается карбоциклический арильный радикал. Под карбоциклическим арилом понимается карбоциклический арильный радикал, содержащий от 1 до 3 конденсированных циклов. Наконец, под атомом галогена понимается атом, выбранный из атомов фтора, хлора, брома и йода.
Под аралкильным и циклоалкилалкильным радикалами понимается соответственно аралкильный и циклоалкилалкильный радикалы, где составляющие их алкильный, арильный и циклоалкильный радикалы имеют указанные ранее значения.
Под природной аминокислотой понимается валин (Val), лейцин (Leu), изолейцин (Ile), метионин (Met), фенилаланин (Phe), аспарагин (Asn), глутаминовая кислота (Glu), глутамин (Gln), гистидин (His), лизин (Lys), аргинин (Arg), аспарагиновая кислота (Asp), глицин (Gly), аланин (Ala), серин (Ser), треонин (Thr), тирозин (Tyr), триптофан (Trp), цистеин (Cys) или пролин (Pro).
3
2
Под линейным или разветвленным алкилом, имеющим 1-6 атомов углерода, понимают, в частности, метильный, этильный, пропильный, изопропильный, бутильный, изобутильный, втор-бутильный и трет-бутильный, пентильный, неопентильный, изопентильный, гексильный, изогексильный радикалы. Под циклоалкилом, содержащим от 3 до 7 атомов углерода, понимают, в частности, циклогексильный радикалы. Под карбоциклическим арилом понимают, в частности, фенильный, нафтильный и фенантрильный радикалы, предпочтительно фенильный и нафтильный радикалы и, более предпочтительно, фенильный радикал. Под галогеналкилом понимают, в частности, радикал -CF. Наконец, под галогеналкиленом понимают, в частности, радикал -CF-.
Примеры защищенных групп, которые находятся на боковых цепях природных аминокислот, включают, в частности:
- кислотные функциональные группы, защищенные в форме сложного метилового, этилового, трет-бутилового или бензилового эфира;
- функциональные аминогруппы, защищенные в форме карбамата трет-бутила или бензила, ацетамида;
- спиртовые функциональные группы, защищенные в форме простого трет-бутилового, бензилового или пиранового эфира, а также в форме ацетила; и
- тиоловые функциональные группы, защищенные в форме простых метиловых тиоэфиров или в форме сложных метиловых тиоэфиров.
Предпочтительно, соединениями согласно изобретению являются такие соединения, которые обладают по меньшей мере одной из следующих характеристик:
1
2
4
5
6
7
8
- R, R, R, R и R независимо означают атом водорода, атом галогена или алкильный, алкоксильный радикал или NRR;
3
9
9
- R означает атом водорода, метильный радикал или радикал -COR, в котором R означает метильный радикал или трет-бутокси;
2
2
- W означает связь или радикал -CH-CH-, -CH=CH-, -O- или -S-;
- X означает -CO-, -Y-CO- или -O-Y-CO-;
n
-(AA)- содержит аминокислоты, выбранные независимо из группы, состоящей из природных аминокислот, 3-метилвалина, норвалина, фенилглицина, винилглицина и 2-аминомасляной кислоты;
- n означает 2;
- R означает атом водорода или метильный радикал.
Более предпочтительно, соединениями согласно изобретению являются такие соединения, которые обладают по меньшей мере одной из следующих характеристик:
1
2
4
5
6
1
2
4
5
6
- R, R, R, R и R независимо означают атом водорода или алкильный радикал или алкокси (и, еще более предпочтительно, R, R, R, R и R все являются атомами водорода);
3
- R означает атом водорода или метильный радикал (и, еще более предпочтительно, атом водорода);
- W означает -S-;
- X означает -Y-CO- или -O-Y-CO-;
n
2
1
1
2
2
1
1
2
-(AA)- означает группу (АА)-(АА)-, такую что АА означает Leu, а AA означает аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из природных аминокислот, 3-метилвалина, норвалина, фенилглицина, винилглицина и 2-аминомасляной кислоты (и, еще более предпочтительно, такую группу (АА)-(АА)-, где АА означает Leu, а АА означает аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Leu, Lys, Val, 3-метилвалина, норвалина, фенилглицина, винилглицина и 2-аминомасляной кислоты;
- R означает атом водорода.
В частности, изобретение относится к соединению общей формулы (I), выбранному из следующих соединений:
1
- N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)-L-лейцил-L-лейцил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)-L-лейцил-L-лейцил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)глицил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)лейцил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
6
2
1
- N-[(бензилокси)карбонил]-N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)лизил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- 1-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)-L-пролил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)глицил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)лейцил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
6
2
1
- N-[(бензилокси)карбонил]-N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)лизил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- 1-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)-L-пролил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)лейцил-N-[(3S)-2-(ацетилокси)-тетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
2
1
- N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)лизил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-(10H-фенотиазин-2-илацетил)-L-лейцил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- O-(трет-бутил)-N-(10H-фенотиазин-2-илацетил)-L-серил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-(10H-фенотиазин-2-илацетил)-L-аланил-3-циклогексил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-аланинамид;
1
- N-(10H-фенотиазин-2-илацетил)-L-лейцил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- O-(трет-бутил)-N-(10H-фенотиазин-2-илацетил)-L-серил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-(10H-фенотиазин-2-илацетил)-L-аланил-3-циклогексил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-аланинамид;
1
- N-[3-(10H-фенотиазин-2-ил)пропаноил]-L-лейцил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[3-(10H-фенотиазин-2-ил)пропаноил]-L-лейцил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-лейцил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-аланил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-валил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-β-аланил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-метил-N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-D-валил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- 3-метил-N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-валил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
2
- N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-N-((2S)-2-{[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]амино}бутаноил)-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-норвалил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-серил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-треонил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
2
- N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-N-((2S)-2-{[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]амино}-2-фенилэтаноил)-L-лейцинамид;
1
2
- N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-N-((2S)-2-{[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]амино}бут-3-еноил)-L-лейцинамид;
1
- 2-метил-N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]аланил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-валинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-3-циклогексил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-аланинамид;
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-фенилаланинамид;
2
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N-изобутил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]глицинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-лейцил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-аланил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-валил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-β-аланил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-метил-N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-D-валил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
- 3-метил-N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-валил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
2
- N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-N-((2S)-2-{[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]амино}бутаноил)-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-норвалил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-серил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-треонил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
2
- N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-N-((2S)-2-{[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]амино}-2-фенилэтаноил)-L-лейцинамид;
1
2
- N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-N-((2S)-2-{[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]амино}бут-3-еноил)-L-лейцинамид;
1
- 2-метил-N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]аланил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-валинамид;
1
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-3-циклогексил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-аланинамид;
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-фенилаланинамид;
1
2
- N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-N-изобутилглицинамид;
1
- N-[2-метил-2-(10H-фенотиазин-2-илокси)пропаноил]глицил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[2-метил-2-(10H-фенотиазин-2-илокси)пропаноил]глицил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-(10,11-дигидро-5H-дибензо[b,f]азепин-3-илкарбонил)-L-лейцил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-(10,11-дигидро-5H-дибензо[b,f]азепин-3-илкарбонил)-L-лейцил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- N-[(5-ацетил-10,11-дигидро-5H-дибензо[b,f]азепин-3-ил)карбонил]-L-лейцил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
1
- 2-метил-N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]аланил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид;
или к соли этих соединений.
Объектом настоящего изобретения являются также соединения общей формулы (I), такие как определено выше, а также фармацевтически приемлемые соли таких соединений в качестве лекарств.
Под фармацевтически приемлемой солью понимают, в частности, аддитивные соли неорганических кислот, такие как хлоргидрат, бромгидрат, йодгидрат, сульфат, фосфат, дифосфат и нитрат, или органических кислот, такие как ацетат, малеат, фумарат, тартрат, сукцинат, цитрат, лактат, метансульфонат, п-толуолсульфонат, пальмоат и стеарат. Объем настоящего изобретения охватывает также соли (когда они могут быть применимы), образованные из таких оснований, как гидроксид натрия или калия. В качестве других примеров фармацевтически приемлемых солей можно обратиться к "Salt selection for basic drugs", Int. J. Pharm. (1986), 33, 201-217.
Изобретение относится также к фармацевтическим композициям, содержащим в качестве действующего вещества соединение общей формулы (I), такое как определенное выше, или фармацевтически приемлемую соль такого соединения, с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым эксципиентом.
Фармацевтические композиции, содержащие соединение по изобретению, могут находиться в виде твердой субстанции, например, порошки, гранулы, таблетки, желатиновые капсулы, липосомы, суппозитории или пластыри. Соответствующими твердыми носителями могут быть, например, фосфат кальция, стеарат магния, тальк, сахара, лактоза, декстрин, крахмал, желатин, целлюлоза, метилцеллюлоза, натрийкарбоксилметилцеллюлоза, поливинилпирролидон и воск.
Фармацевтические композиции, содержащие соединение по изобретению, могут также находиться в жидком виде, например, в виде растворов, эмульсий, суспензий или сиропов. Соответствующими жидкими носителями могут быть, например, вода, органические растворители, такие как глицерин или гликоли, а также их смеси, в различных пропорциях, в воде.
Кроме того, изобретение относится к применению соединения общей формулы (I), такого как определено ранее, или фармацевтически приемлемой соли такого соединения, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения всех патологий, отличающихся избыточной продукцией ROS и/или активацией калпаинов и, в частности, заболеваний и расстройств, выбранных из группы, образованной воспалительными и иммунологическими сердечно-сосудистыми и церебрально-васкулярными заболеваниями, расстройствами центральной или периферической нервной системы, остеопорозом, мышечными дистрофиями, пролиферативными заболеваниями, катарактой, реакциями отторжения, сопровождающими пересадку органов, и аутоиммунными и вирусными заболеваниями.
Введение лекарственного средства согласно изобретению может быть местным или производиться пероральным путем, парентеральным путем, путем внутримышечной инъекции, подкожной инъекции, внутривенной инъекции и т.д.
Доза продукта согласно настоящему изобретению, предусмотренная для лечения указанных выше заболеваний и расстройств, варьирует в зависимости от способа приема, возраста и массы тела больного, а также состояния последнего, и, в конечном счете, она определяется лечащим врачом или ветеринаром. Такое количество, определяемое лечащим врачом или ветеринаром, называется здесь "терапевтически эффективным количеством".
Для сведения, назначаемая доза, предусмотренная для лекарственного средства согласно изобретению, составляет от 0,1 мг до 10 г в зависимости от типа применяемого активного соединения.
Согласно изобретению соединения общей формулы (I) можно получить способами, описанными ниже.
Получение соединений общей формулы (I)
1
2
3
19
Соединения формулы (I) согласно изобретению могут быть получены по способу синтеза, показанному ниже на схеме 1 (причем в дальнейшем изложении соединения общей формулы (I), в которой R означает алкильный радикал Alk, называются соединениями общей формулы (I), соединения общей формулы (I), в которой R означает атом водорода, называются соединениями общей формулы (I) и соединения общей формулы (I), в которой R означает -COR, называются соединениями общей формулы (I)):
Схема 1
1
2
1
1
2
2
3
19
Соединения общих формул (I) и (I), в которых A, X, AA, n и R такие, как описано ранее, получают (схема 1) путем конденсации кислот общей формулы (II) с аминами общей формулы (III), в классических условиях пептидного синтеза (M. Bodanszky, A. Bodanszky, The Practice of Peptide Synthesis, 145 (Springer-Verlag, 1984)) в ТГФ, дихлорметане или ДМФА в присутствии конденсирующего агента, такого как дициклогексилкарбодиимид (DCC), 1,1'-карбонилдиимидазол (CDI) (J. Med. Chem. (1992), 35 (23), 4464-4472) или хлоргидрата 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (EDC или WSCI) (John Jones, The chemical synthesis of peptides, 54 (Clarendon Press, Oxford, 1991)), и основания, такого, например, как триэтиламин или N,N-диизопропилэтиламин, для превращения в соединения общей формулы (I). Защита полуацетальной функциональной группы соединений общей формулы (I) может затем быть удалена с помощью примерно 2н. водного раствора неорганической кислоты, такой, например, как HCl или HBr, с применением в качестве сорастворителя ацетона. Полученные таким образом производные лактолы общей формулы (I) могут при необходимости быть ацилированы посредством, в частности, ангидрида кислоты (RCO)O (например, уксусного ангидрида) в присутствии агента ацилирования, такого как N,N-диметил-4-пиридинамин, для преобразования в соединения общей формулы (I).
Получение промежуточных соединений общей формулы (II)
1
2
3
4
5
6
Отсутствующие в продаже карбоновые кислоты общей формулы (II), в которых A, W, X, Y, R, R, R, R, R и R такие, как описано выше, могут быть получены различными способами синтеза, подробно описанными ниже.
Когда X = -O-Y-CO-:
В этом случае может применяться такой способ синтеза, как показанный ниже на схеме 2.
Схема 2
2
3
2
3
Согласно этому способу синтеза кислоты общей формулы (II), в которых X означает -O-Y-CO- (схема 2), могут быть получены, например, из гидроксифенотиазинов (J. Med. Chem. (1992), 35 (4), 716-24) или гидроксикарбазолов (J. Chem. Soc (1955), 3475-3477; J. Med. Chem. (1964), 7,158-161) общей формулы (II.1). Конденсация с доступными для приобретения галогенсодержащими сложными эфирами общей формулы (II.2) проводится в присутствии основания, такого, например, как KCO или CsCO, при нагревании в полярном растворителе, таким как, например, ТГФ или ДМФ, в течение, по меньшей мере, 5 часов. У сложных эфиров общей формулы (II.3), полученных как промежуточные соединения, затем удаляют защиту (в кислой среде в случае сложных трет-бутиловых эфиров, а также путем омыления сложных метиловых/этиловых эфиров) для превращения в кислоты общей формулы (II), в которой X означает группу -O-Y-CO-.
Когда X = -CO-:
В этом случае, при необходимости могут применяться такие способы синтеза, как представленные ниже на схемах 3 или 4.
i) X означает -CO- и W означает -S-, -O- или связь
Когда X означает -CO-, а W означает -S-, -O- или связь (схема 3), кислотные производные фенотиазина или карбазола общей формулы (II) могут быть получены из 2-ацетилфенотиазинов (например, Pharmazie (1984), 39(1), 22-3; Bull. Soc. Chim. (1968), (7), 2832-42, Pharmazie (1966), 21(11), 645-9) или 2-ацетилкарбазолов (например, Heterocycles (1994), 39 (2), 833-45; J. Indian Chem. Soc. (1985), 62 (7), 534-6; J. Chem. Soc. Chem. Comm. (1985), (2), 86-7) общей формулы (II.4), которые N-ацетилированы с помощью ацетилхлорида, путем кипячения с обратным холодильником в толуоле, для превращения в промежуточные соединения (II.5) (J. Med. Chem. (1998), 41 (2), 148-156). Полученные таким образом промежуточные соединения (II.5) обрабатывают последовательно смесью йода и пиридина (J. Amer. Chem. Soc. (1944), 66, 894-895) и водным раствором углекислого калия, при 100°C, для превращения в карбоновые кислоты общей формулы (II).
Схема 3
ii) X означает -CO-, и W означает -CH
-CH
- или -CH=CH-
2
2
Схема 4
2
2
Ac
Ac
3
Когда X означает -CO-, а W означает -CH-CH- или -CH=CH- (схема 4), кислоты общей формулы (II) или (II) могут быть получены исходя из диацетилированных производных общей формулы (II.6) (например, J. Chem. Soc. (1973), 859-863). Как и в случае фенотиазинов (схема 3), окисление ацетила проводится с помощью йода и пиридина с последующим гидролизом в водном растворе углекислого калия при нагревании. Полученные таким путем соединения общей формулы (II) (которые являются соединениями общей формулы (II), где R означает ацетильную группу) могут при необходимости подвергаться дополнительной обработке в присутствии водного раствора углекислого калия, при кипячении с обратным холодильником, в течение времени, составляющем, предпочтительно, от 15 до 36 часов, для превращения в карбоновые кислоты общей формулы (II).
Когда X = -Y-CO-:
В случае X = -Y-CO- два пути синтеза, показанные ниже на схеме 5, позволяют получить карбоновые кислоты общей формулы (II), в зависимости от наличия исходных реагентов.
Схема 5
В случае описанных ранее 2-ацетилфенотиазинов (W = -S-) или 2-ацетилкарбазолов (W означает связь) общей формулы (II.4), превращение в карбоновую кислоту общей формулы (II) осуществляется (левая часть схемы 5) по реакции гомологизации типа реакции Вильгельродта-Киндлера (Synthesis (1975), 358-375). Нагревание промежуточных соединений общей формулы (II.4) в присутствии серы и морфолина приводит к образованию тиокарбоксамидов общей формулы (II.7) (немецкие заявки на патент DE 2702714 и DE 1910291), которые путем гидролиза превращаются в карбоновые кислоты общей формулы (II).
2
2
2
Альтернативно (правая часть схемы 5), когда W означает -S- или связь и m есть целое число более 1 или также когда W означает -CH-CH- или -CH=CH- и m есть целое число больше или равное 1, синтез карбоновых кислот общей формулы (II) начинается ацилированием ароматического ядра промежуточных соединений общей формулы (II.8) алканоилхлоридом в CS, в соответствии с условиями реакции Фриделя-Крафтса (J. Amer. Chem. Soc. (1946), 68, 2673-78; J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 (1973), 859-861). Затем ацилированные промежуточные соединения общей формулы (II.9) превращают в производные тиокарбоксамидов общей формулы (II.10), по реакции Вильгельродта-Киндлера, и, наконец, в карбоновые кислоты общей формулы (II) в соответствии с химической последовательностью, описанной ранее.
Получение промежуточных соединений общей формулы (III)
2
3
Производные аминолактолов общей формулы (III), в которых AA, R и n такие, как описано выше, можно получить, используя способ получения, показанный ниже на схеме 6. Этот способ позволяет получить соединения общей формулы (III), в которой n = 2 (далее соединения общей формулы (III)), и соединения общей формулы (III), в которых n = 3 (далее соединения общей формулы (III)).
Схема 6
1
2
2
2
3
Производные аминобутиролактона общей формулы (III.2) получают путем конденсации защищенных аминокислот общей формулы (III.1), в которой AA означает радикал аминокислоты AA, такой как определенный ранее в общей формуле (I), а Gp означает защитную группу, такую, например, как бензилкарбамат или трет-бутилкарбамат, с (S)-α-аминобутиролактоном в классических условиях пептидного синтеза, для преобразования в промежуточные карбоксамиды общей формулы (III.2). Затем лактон восстанавливают в лактол с помощью восстановителя, такого, например, как гидрид диизобутилалюминия (DIAL), в инертном растворителе, таком, например, как ТГФ или CHCl, при температуре предпочтительно ниже -50°C, например, при примерно -78°C. Затем полуацетальную функциональную группу производных лактолов общей формулы (III.3) защищают в спиртовой среде, например в метаноле, с помощью сильной кислоты, такой, например, как трифторуксусная кислота, чтобы превратить в ацетали общей формулы (III.4). Затем защиту функциональной аминогруппы производных аминоацеталей общей формулы (III.4) удаляют способами, описанными в литературе (T.W. Greene, P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Second edition (Wiley-Interscience, 1991)). Затем промежуточные соединения общей формулы (III.5) подвергают одному или двум последовательным циклам удлинения-удаления защиты пептидной цепи, как описано ранее, чтобы получить ди- (n=2) или три-пептидные (n=3) производные общей формулы (III) и (III), соответственно.
2
1
3
2
17
18
2
1
3
2
2
3
2
3
В частном случае, когда группа (AA-AA) или группа (AA-AA) заменена на карбапептид общей формулы -NR-(CH)-CH(R)-CO-, производные общей формулы (III) и (III) могут быть получены в соответствии со стратегией пептидного синтеза, аналогичной описанной ранее и представленной ниже на схеме 7 (в которой показана только ситуация, когда группа (AA-AA) заменена на карбапептид; аналогичный способ получения может применяться для случая, когда группа (AA-AA) заменена на карбапептид).
Схема 7
Что касается карбапептидов общей формулы (III.6), они могут быть получены по способам, описанным в литературе (например, Int. J. Peptide Protein Res. (1992), 39, 273-277).
Если не определено другое, все используемые здесь технические и научные термины имеют значение, которое обычно понятно простому специалисту в области, к которой относится данное изобретение. Кроме того, все публикации, заявки на патент, все патенты и все другие упомянутые здесь ссылки включены в данное описание посредством ссылки.
Следующие примеры даны для иллюстрации вышеуказанных способов и никоим образом не должны рассматриваться как ограничивающие объем изобретения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)-L-лейцил-L-лейцил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
N
-[(бензилокси)карбонил]-N
-[(3S)-2-оксотетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
2
1
1.1)
3
В 60 мл безводного ДМФА растворяют 3,51 г (13,25 ммоль) Cbz-L-лейцина, 2,41 г (1 экв.) бромгидрата (S)-2-амино-4-бутиролактона, 1,97 г HOBT (1,1 экв.) и 5,59 г (2,2 экв.) хлоргидрата 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (EDC), затем добавляют 7,64 мл (3,3 экв.) N,N-диизопропилэтиламина. Реакционную смесь перемешивают в течение 15 часов при 20°C, прежде чем влить в 200 мл смеси этилацетат/вода 1/1. После перемешивания и отстаивания органический раствор промывают последовательно 100 мл насыщенного раствора NaHCO, 50 мл воды, 100 мл 1M раствора лимонной кислоты и, наконец, 100 мл солевого раствора. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют досуха в вакууме. Полученное масло промывают изопентаном и затем кристаллизуют из смеси дихлорметан/изопентан. Получают белую твердую субстанцию с выходом 68%. Температура плавления: 130-131°C.
N
-[(бензилокси)карбонил]-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
2
1
1.2)
В атмосфере аргона в трехгорлой колбе, содержащей 60 мл безводного дихлорметана, растворяют 1,24 г (3,56 ммоль) промежуточного соединения 1.1. Всю систему охлаждают до -60°C, прежде чем по каплям добавить 10,7 мл (3 экв.) 1M раствора DIBAL в дихлорметане. В конце добавления охлаждающую баню убирают и продолжают перемешивать еще 15 минут. Затем реакционную среду осторожно выливают в 100 мл 20%-ного раствора сегнетовой соли. Через 2 часа интенсивного перемешивания добавляют 100 мл дихлорметана и все выливают в делительную воронку. Органическую фазу выделяют и промывают 50 мл воды и 50 мл солевого раствора. После сушки над сульфатом натрия и фильтрации органический раствор концентрируют досуха в вакууме. Остаток после выпаривания очищают на колонке с силикагелем (элюент: этилацетат/гептан в отношении от 1/1 до 8/2). Получают белую твердую субстанцию с выходом 72%. Температура плавления: 48-49°C.
N
-[(бензилокси)карбонил]-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
2
1
1.3)
3
При 20°C к раствору 0,82 г (2,34 ммоль) промежуточного соединения 1.2 в 50 мл метанола по каплям добавляют в избытке трифторуксусную кислоту (5 мл). Продолжают перемешивать 15 часов при 20°C. Затем реакционную смесь частично концентрируют в вакууме и вводят в 50 мл дихлорметана. Органический раствор промывают последовательно 50 мл насыщенного раствора NaHCO, 50 мл воды и 50 мл солевого раствора. После сушки над сульфатом натрия, фильтрации и концентрации в вакууме остаток от выпаривания очищают на колонке с силикагелем (элюент: этилацетат/гептан в отношении от 1/1 до 7/3). Получают белую твердую субстанцию с выходом 80%. Температура плавления: 112-113°C.
N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
1.4)
В реактор из нержавеющей стали, содержащий 60 мл метанола, вводят 2 г (5,5 ммоль) промежуточного соединения 1.3 и 600 мг Pd/C в концентрации 10%. Смесь перемешивают в течение 1 часа при давлении водорода 2 атм. После отфильтровывания катализатора метанол выпаривают в вакууме. Полученный маслянистый остаток (1,20 г; 94%) применяют как есть на следующей стадии.
N-[(бензилокси)карбонил]-L-лейцил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
1.5)
Применяется тот же порядок проведения эксперимента, что и описанный для синтеза промежуточного соединения 1.1, с заменой бромгидрата (S)-2-амино-4-бутиролактона промежуточным соединением 1.4. Продукт реакции очищают на колонке с силикагелем (элюент: этилацетат/гептан 7/3). Получают 1,04 г белой твердой субстанции с выходом 69%. Температура плавления: 76-77°C.
L-лейцил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
1.6)
Применяется тот же порядок проведения эксперимента, что и описанный для синтеза промежуточного соединения 1.4, с заменой промежуточного соединения 1.3 промежуточным соединением 1.5. Продукт реакции применяется без дополнительной очистки. Получают 0,74 г бесцветной пены с выходом 96%.
N-[(бензилокси)карбонил]-L-лейцил-L-лейцил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
1.7)
Применяется тот же порядок проведения эксперимента, что и описанный для синтеза промежуточного соединения 1.1, с заменой бромгидрата (S)-2-амино-4-бутиролактона промежуточным соединением 1.6. Продукт реакции кристаллизуют из смеси этилацетат/изопентан. Получают 0,96 г белой твердой субстанции с выходом 77%. Температура плавления: 210-212°C.
L-лейцил-L-лейцил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
1.8)
Применяется тот же порядок проведения эксперимента, что и описанный для синтеза промежуточного соединения 1.4, с заменой промежуточного соединения 1.3 промежуточным соединением 1.7. Получают 0,74 г белой твердой субстанции с количественным выходом. Температура плавления: 187-188°C.
1-(10-ацетил-10H-фенотиазин-2-ил)этанон
1.9)
В 500 мл колбу, содержащую 150 мл толуола, вводят 30 г (0,118 моль) 2-ацетилфенотиазина и 9,28 г (1 экв.) ацетилхлорида. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 45 минут перед введением новой порции 4,6 г (0,5 экв.) ацетилхлорида. Продолжают дополнительно перемешивать в течение 2 часов при кипячении с обратным холодильником. Затем реакционную среду выливают на примерно 200 г льда. После перемешивания органическую фазу отстаивают и промывают последовательно 100 мл воды и 100 мл солевого раствора. Органический раствор сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют досуха с помощью роторного испарителя. Получают желтую твердую субстанцию (33 г; 100%), которую используют на следующей стадии без дополнительной очистки.
10H-фенотиазин-2-карбоновая кислота
1.10)
24 г (0,084 моль) промежуточного соединения 1.9 растворяют в 55 мл пиридина. После добавления 20,32 г (1 экв.) йода реакционную смесь нагревают до 100°C в течение 15 минут. Затем продолжают перемешивать еще 20 часов при 20°C перед концентрированием досуха с помощью роторного испарителя. В полученный таким путем остаток от выпаривания добавляют 100 мл воды, затем 15 г (4,46 экв.) NaOH в таблетках. Затем эту смесь нагревают до 100°C в течение 1 часа. После охлаждения на ледяной бане реакционную смесь промывают 100 мл этилацетата. Затем водный раствор подкисляют 50 мл 12 н. водного раствора HCl, появляется обильный осадок. Его отфильтровывают на воронке Бюхнера, промывают этанолом и сушат в вакууме при 75°C.
Добавочную порцию ожидаемого продукта можно извлечь из кислого фильтрата. Его дважды экстрагируют 100 мл этилацетата. Затем органическую фазу промывают 50 мл воды, затем 50 мл солевого раствора. После сушки над сульфатом натрия органический раствор концентрируют досуха в вакууме. Полное собранное количество составляет 16,8 г в виде желтой твердой субстанции с суммарным выходом 82%. Температура плавления: >235°C.
N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)-L-лейцил-L-лейцил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
1.11)
1
Порядок проведения этой пептидной конденсации такой же, как описанный для синтеза промежуточного соединения 1.1, с использованием в этом случае 10H-фенотиазин-2-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 1.10) и L-лейцил-L-лейцил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамида (промежуточное соединение 1.8). Продукт реакции очищают путем хроматографии на силикагеле (элюент: этилацетат/гептан в отношении от 7/3 до 1/1). Получают 228 мг желтой твердой субстанции с выходом 21%. Температура плавления: 164-165°C.
Пример 2: N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)-L-лейцил-L-лейцил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
В колбе, содержащей 12 мл ацетона, растворяют 228 мг (0,33 ммоль) соединения примера 1. Затем при 20°C по каплям добавляют 2 мл 2н. водного раствора HCl. Продолжают перемешивать в течение 6 ч 30 мин. Затем реакционную среду концентрируют досуха и остаток после выпаривания очищают путем хроматографии на колонке с силикагелем (элюент: этилацетат/гептан 9/1). Получают 49 мг желтой твердой субстанции с выходом 22%. Температура плавления: 174-176°C.
Соединения примеров с 3 по 6 были получены в соответствии с той же стратегией синтеза, которая описана для соединения примера 1, исходя из промежуточных соединений 1.4, 1.6 и 1.10 и доступных для приобретения соответствующих защищенных аминокислот.
Пример 3: N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)глицил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Желтая твердая субстанция.
Пример 4: N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)лейцил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Желтая твердая субстанция. Температура плавления: 180-180,5°C.
Пример 5: N
-[(бензилокси)карбонил]-N
-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)лизил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
6
2
1
Желтая твердая субстанция. Температура плавления: 102-103°C.
Пример 6: 1-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)-L-пролил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Желтая твердая субстанция. Температура плавления: 243-243,5°C.
Соединения примеров 7, 8, 9 и 10 были получены в соответствии с порядком проведения эксперимента, описанном для соединения примера 2, исходя из соединений примеров 3, 4, 5 и 6, соответственно.
Пример 7: N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)глицил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Желтая твердая субстанция. Температура плавления: 126-126,5°C.
Пример 8: N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)лейцил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Желто-зеленая твердая субстанция. Температура плавления: 144-144,5°C.
Пример 9: N
-[(бензилокси)карбонил]-N
-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)лизил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
6
2
1
Желтая твердая субстанция. Температура плавления: 109-109,5°C.
Пример 10: 1-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)-L-пролил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Бледно-желтая твердая субстанция. Температура плавления: 144,5-145°C.
Пример 11: N-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)лейцил-N
-[(3S)-2-(ацетилокси)тетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
3
К раствору 366 мг (0,66 ммоль) соединения примера 8 в 6 мл дихлорметана добавляют 0,62 мл (10 экв.) уксусного ангидрида и 40 мг (0,5 экв.) 4-диметиламинопиридина. Смесь перемешивают в течение 4 часов при 20°C. Затем раствор разбавляют 20 мл дихлорметана и 20 мл насыщенного раствора NaHCO. После перемешивания и отстаивания органическую фазу промывают 20 мл солевого раствора. Затем органический раствор сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют досуха в вакууме. Остаток после выпаривания очищают на колонке с силикагелем (элюент: гептан/AcOEt: от 4/6 до 0/1). Чистые фракции собирают и концентрируют в вакууме. Продукт кристаллизуют в смеси дихлорметан/изопентан. Кристаллы фильтруют, промывают изопентаном и сушат. Получают 180 мг бледно-желтой твердой субстанции с выходом 56%. Температура плавления: 121-122°C.
Пример 12: трифторацетат N
-(10H-фенотиазин-2-илкарбонил)лизил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамида
2
1
2
0,5 г (0,7 ммоль) Соединения примера 9 растворяют в 5 мл уксусной кислоты. После охлаждения на ледяной бане по каплям добавляют 5 мл 33%-ного водного раствора HBr. После 4 часов перемешивания при 20°C реакционную смесь концентрируют досуха и остаток после выпаривания очищают посредством препаративной ВЭЖХ, используя колонку C18, 5 мкм (элюент: ТГФ/HО/ТФА: 40/60/0,02). После лиофилизации получают 100 мг бежевой твердой субстанции с выходом 21%.
Пример 13: 10H-фенотиазин-2-илацетил)-L-лейцил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-1-лейцинамид
1
2-(2-морфолин-4-ил-2-тиоксоэтил)-10H-фенотиазин
13.1) :
Порядок проведения эксперимента для получения этого промежуточного соединения был подсказан синтезом, описанным в немецкой заявке на патент DE 2702714. В трехгорлую колбу, снабженную термометром, холодильником и выходом для газа, погружаемым последовательно в ловушку из 2н. раствора соды и ловушку из концентрированного раствора перманганата калия, вводят 24,13 г (0,1 моль) 2-ацетилфенотиазина, 5,13 г (1,6 экв.) серы и 39 мл (4,5 экв.) морфолина. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником (внутренняя температура = 119°C) в течение 15 часов. После охлаждения этот коричневый раствор вливают при перемешивании в 300 мл абсолютированного этанола. Смесь выдерживают 1 час при 4°C, чтобы инициировать кристаллизацию, и затем в течение ночи при -18°C. Затем полученную твердую субстанцию фильтруют и промывают холодным этанолом и гептаном. После сушки получают 27 г оранжевой субстанции с выходом 79%.
10H-фенотиазин-2-илуксусная кислота
13.2)
В трехгорлую колбу, оборудованную как описано выше, вводят 31,23 г (91,2 ммоль) промежуточного соединения 13.1, 36 г (6 экв.) 85%-ного углекислого калия и 350 мл абсолютированного этанола. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 15 часов. После охлаждения эту смесь концентрируют до половины в вакууме и затем вливают в 650 мл воды. При перемешивании добавляют концентрированную серную кислоту до достижения pH 1 и затем всю смесь доводят до 80°C. После 2 часов нагревания смесь охлаждают, осадок отфильтровывают и 4 раза промывают 40 мл воды. Полученную таким образом твердую субстанцию растворяют в ацетоне и фильтруют, чтобы удалить нерастворимую фракцию. Затем фильтрат концентрируют досуха в вакууме, чтобы получить бледно-желтый порошок (15,67 г) с выходом 67%. Температура плавления: 201,5-202°C.
N-(10H-фенотиазин-2-илацетил)-L-лейцил-N
-((3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
13.3)
Применяется тот же порядок проведения эксперимента, что и описанный для стадии 1.11 примера 1, исходя из промежуточных соединений 1.6 и 13.2. Бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 216-216,5°C.
Пример 14: O-(трет-бутил)-N-(10H-фенотиазин-2-илацетил)-L-серил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
O-(трет-бутил)-L-серил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
14.1)
Это промежуточное соединение было получено в 2 стадии в соответствии с порядком проведения эксперимента, описанным для синтеза промежуточных соединений 1.5 и 1.6, исходя из промежуточного соединения 1.4 и доступного для приобретения Cbz-1-серин(tBu). Получают бесцветное масло.
O-(трет-бутил)-N-(10H-фенотиазин-2-илацетил)-L-серил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
14.2)
Применяется тот же порядок проведения эксперимента, что и описанный для стадии 1.11 примера 1, исходя из промежуточных соединений 14.1 и 13.2. Белая твердая субстанция. Температура плавления: 179-180°C.
Пример 15: N-(10H-фенотиазин-2-илацетил)-L-аланил-3-циклогексил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-аланинамид
1
3-циклогексил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-аланинамид
1
15.1)
Это промежуточное соединение было получено в 4 стадии согласно порядкам проведения эксперимента, описанным для стадий с 1.1 по 1.4 примера 1, исходя из доступных для приобретения бромгидрата (S)-2-амино-4-бутиролактона и Cbz-3-циклогексил-1-аланина. Получают бесцветное масло.
15.2) L-аланил-3-циклогексил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-аланинамид
1
Это промежуточное соединение было получено в 2 стадии в соответствии с порядком проведения эксперимента, описанным для синтеза промежуточных соединений 1.5 и 1.6, исходя из промежуточного соединения 15.1 и Cbz-L-аланина.
N-(10H-фенотиазин-2-илацетил)-L-аланил-3-циклогексил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-аланинамид
1
15.3)
Применяется тот же порядок проведения эксперимента, что и описанный для стадии 1.11 примера 1, исходя из промежуточных соединений 15.2 и 13.2. Получают бежевую твердую субстанцию. Температура плавления: 225-226°C.
Соединения примеров 16, 17 и 18 были получены в соответствии с порядком проведения эксперимента, описанным для соединения примера 2, исходя из соединений примеров 13, 14 и 15, соответственно.
Пример 16: N-(10H-фенотиазин-2-илацетил)-L-лейцил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 168-168,5°C.
Пример 17: O-(трет-бутил)-N-(10H-фенотиазин-2-илацетил)-L-серил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Светло-бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 135-136°C.
Пример 18: N-(10H-фенотиазин-2-илацетил)-L-аланил-3-циклогексил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-аланинамид
1
Белая твердая субстанция. Температура плавления: 215-217°C.
Пример 19: N-[3-(10H-фенотиазин-2-ил)пропаноил]-L-лейцил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
10-ацетил-10H-фенотиазин
19.1)
В 500-мл колбу, содержащую 200 мл толуола, добавляют 20 г (0,1 моль) фенотиазина, затем 14,3 мл (2 экв.) ацетилхлорида. Гетерогенную реакционную смесь перемешивают в течение 1 часа при 50°C. После концентрирования досуха осадок объединяют с минимальным количеством изопентана и фильтруют. После сушки получают 24 г бежевой твердой субстанции с количественным выходом. Температура плавления: 210-211°C.
1-(10-ацетил-10H-фенотиазин-2-ил)пропан-1-он
19.2)
2
3
2
2
В многогорлую колбу, снабженную механической мешалкой, подводом аргона, холодильником и колбой для добавок, вводят 150 мл CS, затем 24 г промежуточного соединения 19.1. В эту суспензию, интенсивно перемешиваемую, по каплям добавляют 10,4 мл (1,2 экв.) пропионилхлорида, затем одной порцией 50 г (4 экв.) AlCl, с помощью воронки для твердой фазы. Воронку немедленно ополаскивают 50 мл добавочного CS. Продолжая интенсивно перемешивать, смесь нагревают до 55°C в течение 2 часов. Затем смесь охлаждают на ледяной бане и CS удаляют с помощью канюли. Гидролиз реакционной смеси начинают постепенным добавлением маленьких кусочков льда, а когда реакция становится менее интенсивной, гидролиз завершают с помощью холодной воды. Наконец всю систему разбавляют 300 мл этилацетата и переносят в делительную воронку. Органический раствор отстаивают, дважды промывают 100 мл воды и 100 мл солевого раствора. После сушки над сульфатом натрия, фильтрации и концентрации досуха в вакууме полученный осадок растирают в изопентане. Затем твердую фазу фильтруют и промывают минимальным количеством изопентана. Получают 13,2 г белой твердой субстанции с выходом 45%. Температура плавления: 146,5-147°C.
3-(10H-фенотиазин-2-ил)пропановая кислота
19.3)
Использованный порядок проведения эксперимента тот же, что описанный для синтеза промежуточных соединений 13.1 и 13.2. Из 6 г промежуточного соединения 19.2 получено 2 г коричневой твердой субстанции с общим выходом (2 стадии) 33%. Это соединение (чистота 80%) применяют на следующей стадии как есть.
N-(3-(10H-фенотиазин-2-ил)пропаноил]-L-лейцил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
19.4)
Этот пример получают в соответствии с той же стратегией синтеза, какая описана для стадии 1.11 примера 1, исходя из промежуточных соединений 1.6 и 19.3. Желтая твердая субстанция. Температура плавления: 215-216°C.
Пример 20: N-[3-(10H-фенотиазин-2-ил)пропаноил]-L-лейцил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Использованный порядок проведения эксперимента такой же, как описанный для соединения примера 2, исходя из соединения примера 19. Светло-бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 212-213°C.
Пример 21: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-лейцил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
10H-фенотиазин-2-ол
21.1)
Смесь 25 г (109 ммоль) 2-метоксифенотиазина и 60 г (4,8 экв.) пиридинийхлорида нагревают до 170°C в течение 15 часов. После охлаждения до температуры примерно 80°C полученный коричневый раствор разбавляют 200 мл этилацетата. Продолжают перемешивать 30 минут до выливания реакционной смеси в 200 мл воды. После перемешивания и декантации органическую фазу сушат над сульфатом натрия и концентрируют досуха в вакууме. Полученную зеленоватую твердую субстанцию перекристаллизовывают в 700 мл кипящего толуола. Нерастворимую фракцию удаляют фильтрацией, фильтрат самопроизвольно кристаллизуется в течение ночи. Кристаллы собирают фильтрацией и промывают изопентаном. После сушки получают 12,43 г серой твердой субстанции с выходом 53%. Температура плавления: 207-208°C.
трет-Бутил-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетат]
21.2)
2
3
В 100-мл колбе растворяют 1 г (4,6 ммоль) промежуточного соединения 21.1 и 1,40 мл (2 экв.) трет-бутилбромоацетата в 25 мл ТГФ. К этому раствору добавляют 1,93 г (3 экв.) KCO и реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 15 часов. После охлаждения добавляют 50 мл воды и 50 мл дихлорметана. Органическую фазу декантируют, промывают 50 мл воды и 50 мл солевого раствора. После сушки над сульфатом натрия, фильтрации и концентрации в вакууме полученный остаток очищают на колонке с силикагелем, с элюентом этилацетат/гептан (2/8). Получают 940 мг кремовой твердой субстанции с выходом 70%.
(10H-фенотиазин-2-илокси)уксусная кислота
21.3)
Растворяют 935 мг (2,8 ммоль) промежуточного соединения 21.2 в 9 мл дихлорметана. Смесь охлаждают до 0°C перед добавлением по каплям 2,19 мл (10 экв.) трифторуксусной кислоты. В конце добавления температура повышается до 20°C и перемешивание продолжают в течение 3 часов. Затем реакционную смесь концентрируют досуха в вакууме и остаток снова разбавляют 50 мл этилацетата. Органический раствор 2 раза промывают 25 мл воды, затем 25 мл солевого раствора. После сушки над сульфатом натрия, фильтрации и концентрирования на роторном испарителе получают 540 мг розоватой твердой субстанции с выходом 69%. Температура плавления: 180-181°C.
N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-лейцил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
21.4)
Этот пример осуществляют в соответствии с той же стратегией синтеза, какая описана для стадии 1.11 примера 1, исходя из промежуточных соединений 1.6 и 21.3. Бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 211,5-212°C.
Соединения примеров 22-35 были получены в соответствии с той же стратегией синтеза, какая описана для соединения примера 1, исходя из промежуточных соединений 1.4, 21.3 и соответствующих, доступных для приобретения защищенных аминокислот.
Пример 22 N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 181-182°C.
Пример 23: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-аланил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Белая твердая субстанция. Температура плавления: 195-196°C.
Пример 24: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-валил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Белая твердая субстанция. Температура плавления: 240-241°C.
Пример 25: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-β-аланил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Коричневая твердая субстанция. Температура плавления: 155-157°C.
Пример 26: N-метил-N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Бледно-розовая твердая субстанция. Температура плавления: 92-95°C.
Пример 27: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-D-валил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Светло-бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 204-206°C.
Пример 28: 3-метил-N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-валил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 152-153°C.
Пример 29: N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-N
-((2S)-2-{[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]амино}бутаноил)-L-лейцинамид
1
2
Бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 164-165°C.
Пример 30: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-норвалил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 225-226°C.
Пример 31: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-серил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Серая твердая субстанция.
Пример 32: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-треонил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Бледно-желтая твердая субстанция. Температура плавления: 92-93°C.
Пример 33: N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-N
-((2S)-2-{[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]амино}-2-фенилэтаноил)-L-лейцинамид
1
2
Бледно-желтая твердая субстанция. Температура плавления: 215-217°C.
Пример 34: N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-N
-((2S)-2-{[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]амино}бут-3-еноил)-L-лейцинамид
1
2
Бледно-розовая твердая субстанция.
Пример 35: 2-метил-N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]аланил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Бледно-розовая твердая субстанция. Температура плавления: 119-120°C.
Пример 36: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-валинамид
1
N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-валинамид
1
36.1)
Это промежуточное соединение получают в 4 стадии в соответствии с порядком проведения эксперимента, описанным для стадий с 1.1 по 1.4 примера 1, используя бромгидрат (S)-2-амино-4-бутиролактона и Cbz-L-валин. Получают бесцветное масло.
N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N
-(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-валинамид
1
36.2)
Это соединение получают в 3 стадии в соответствии с порядком проведения эксперимента, описанным для стадий 1.5, 1.6 и 1.11 примера 1, используя Cbz-глицин и промежуточные соединения 36.1 и 21.3. Получают бежевую твердую субстанцию.
Пример 37: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-3-циклогексил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-аланинамид
1
Применяется та же стратегия синтеза, что и описанная для стадии 36.2 примера 36, с использованием Cbz-глицина и промежуточных соединений 15.1 и 21.3. Получают бледно-розовую твердую субстанцию. Температура плавления: 179-180°C.
Пример 38: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-1-фенилаланинамид
N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-1-фенилаланинамид
38.1)
Это промежуточное соединение получают в 4 стадии в соответствии с порядком проведения эксперимента, описанным для стадий с 1.1 по 1.4 примера 1, используя бромгидрат (S)-2-амино-4-бутиролактона и Cbz-L-фенилаланин. Получают желтое масло.
N-(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-фенилаланинамид
38.2)
Применяется та же стратегия синтеза, что и описанная для стадии 36.2 примера 36, с использованием Cbz-глицина и промежуточных соединений 38.1 и 21.3. Получают бежевую твердую субстанцию. Температура плавления: 203-204°C.
Пример 39: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N
-изобутил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]глицинамид
2
1
N
-изобутил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]глицинамид
2
1
39.1)
Это промежуточное соединение было получено в 4 стадии в соответствии с порядком проведения эксперимента, описанным для стадий с 1.1 по 1.4 примера 1, используя бромгидрат (S)-2-амино-4-бутиролактона и Boc-N-изобутилглицин (J. Med. Chem. (2000), 43 (15), 2805-2813). Получают бесцветное масло.
N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N
-изобутил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]глицинамид
2
l
39.2)
Применяется та же стратегия синтеза, что и описанная для стадии 36.2 примера 36, с использованием Cbz-глицина и промежуточных соединений 39.1 и 21.3. Получают бежевую твердую субстанцию. Температура плавления: 162-164°C.
Соединения примеров 40-58 были получены в соответствии с порядком проведения эксперимента, описанным для соединения примера 2, исходя из соединений примеров 21-39, соответственно.
Пример 40: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-лейцил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Светло-бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 141,5-142°C.
Пример 41: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Бледно-розовая твердая субстанция. Температура плавления: 184-186°C.
Пример 42: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-аланил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 144-146°C.
Пример 43: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-валил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Белая твердая субстанция. Температура плавления: 205-206°C.
Пример 44: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-β-аланил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Бледно-розовая твердая субстанция. Температура плавления: 161-162°C.
Пример 45: N-метил-N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Светло-бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 137-138°C.
Пример 46: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-D-валил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Белая твердая субстанция. Температура плавления: 145-146°C.
Пример 47: 3-метил-N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-валил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Белая твердая субстанция. Температура плавления: 157-159°C.
Пример 48: N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-N
-((2S)-2-{[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]амино}бутаноил)-L-лейцинамид
1
2
Бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 160-161°C.
Пример 49: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-норвалил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид:
1
Бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 195-196°C.
Пример 50: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-серил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Серая твердая субстанция. Температура плавления: 128-130°C.
Пример 51: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]-L-треонил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Белая твердая субстанция. Температура плавления: 195-196°C.
Пример 52: N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-N
-((2S)-2-{[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]амино}-2-фенилэтаноил)-L-лейцинамид
1
2
Белая твердая субстанция. Температура плавления: 137-138°C.
Пример 53: N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-N
-((2S)-2-{[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]амино}бут-3-еноил)-L-лейцинамид
1
2
Бледно-розовая твердая субстанция. Температура плавления: 159-161°C.
Пример 54: 2-метил-N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]аланил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 138-140°C.
Пример 55: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-валинамид
1
Светло-бежевая твердая субстанция. Температура плавления: 200-201°C.
Пример 56: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-3-циклогексил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-аланинамид
1
Бледно-розовая твердая субстанция. Температура плавления: 212-215°C.
Пример 57: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-фенилаланинамид
Бледно-желтая твердая субстанция. Температура плавления: 207-208°C.
Пример 58: N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]глицил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-N
-изобутилглицинамид
1
2
Розоватая твердая субстанция. Температура плавления: 122-124°C.
Пример 59: N-[2-метил-2-(10H-фенотиазин-2-илокси)пропаноил]глицил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
трет-бутил-[2-метил-2-(10H-фенотиазин-2-илокси)пропаноат]
59.1)
2
3
К раствору 1 г (4,6 ммоль) промежуточного соединения 21.1 в 10 мл ДМФА добавляют 1,93 г (3 экв.) KCO. Реакционную смесь нагревают до 60°C перед добавлением 1,73 мл (2 экв.) трет-бутил-[2-бромизобутирата]. Затем всю смесь доводят до 110°C и продолжают перемешивать при этой температуре в течение 6 часов. После возвращения к 20°C смесь вливают в 100 мл воды и продукт дважды экстрагируют 100 мл этилацетата. Наконец органический раствор промывают 100 мл солевого раствора, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют досуха в вакууме. Остаток после выпаривания очищают на колонке с силикагелем с элюентом этилацетат/гептан (1/9). Получают 450 мг бледно-розовой твердой субстанции с выходом 28%. Температура плавления: 138-140°C.
2-метил-2-(10H-фенотиазин-2-илокси)пропановая кислота
59.2) :
Применяют тот же порядок проведения эксперимента, что и описанный для промежуточного соединения 21.3, с заменой промежуточного соединения 21.2 на промежуточное соединение 59.1. Получают 254 мг фиолетовой твердой субстанции с выходом 67%. Температура плавления: 177-180°C.
N-[2-метил-2-(10H-фенотиазин-2-илокси)пропаноил]глицил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
59.3)
1
Применяется та же стратегия синтеза, что и описанная для синтеза соединения примера 22, с использованием глицил-N-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамида (полученный способом, аналогичным способу для промежуточного соединения 1.6) и промежуточного соединения 59.2. Бледно-желтая твердая субстанция. Температура плавления: 100-104°C.
Пример 60: N-[2-метил-2-(10H-фенотиазин-2-илокси)пропаноил]глицил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Порядок проведения эксперимента аналогичен описанному для соединения примера 2, с исходным соединением примера 59 вместо соединения примера 1. Получают бежевую твердую субстанцию. Температура плавления: 127-128°C.
Пример 61: N-(10,11-дигидро-5H-дибензо[b,f]азепин-3-илкарбонил)-L-лейцил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
5-ацетил-10,11-дигидро-5H-дибензо[b,f]азепин-3-карбоновая кислота
61.1)
Применяется тот же порядок проведения эксперимента, что и описанный для синтеза промежуточного соединения 1.10, с использованием в качестве исходного продукта 1-(5-ацетил-10,11-дигидро-5H-дибензо[b,f]азепин-3-ил)этанона (J. Chem. Soc. 1973, 859-863). Получают бледно-желтую твердую субстанцию с выходом 62%. Температура плавления: 189-189,5°C.
10,11-дигидро-5H-дибензо[b,f]азепин-3-карбоновая кислота
61.2)
Смесь 3,06 г (10,88 ммоль) промежуточного соединения 61.1 и 3 г (45 ммоль) KOH в 35 мл этанола кипятят с обратным холодильником в течение 15 часов. После охлаждения до 0°C реакционную среду подкисляют с помощью 2н. HCl до pH 1. Затем смесь экстрагируют этилацетатом, затем органический раствор промывают водой, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и, наконец, концентрируют досуха. Получают коричневое масло. Масс-спектрометрия свидетельствует о 20% ожидаемого соединения и 70% продукта ацетилирования (промежуточное соединение 61.1). Смесь применяют на следующей стадии как есть.
N-(10,11-дигидро-5H-дибензо[b,f]азепин-3-илкарбонил)-L-лейцил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
61.3)
Это соединение получают в соответствии с той же стратегией синтеза, какая описана для соединения примера 1, с использованием в качестве исходных продуктов промежуточные соединения 1.6 и 61.2.
Пример 62: N-(10,11-дигидро-5H-дибензо[b,f]азепин-3-илкарбонил)-L-лейцил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Порядок проведения эксперимента тот же, что и описанный для соединения примера 2, с использованием в качестве исходного продукта соединение примера 61. Получают светло-бежевую твердую субстанцию. Температура плавления: 142-143°C.
Пример 63: N-[(5-ацетил-10,11-дигидро-5H-дибензо[b,f]азепин-3-ил)карбонил]-L-лейцил-N
-[(3S)-2-метокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Это соединение получают в соответствии с той же стратегией синтеза, какая описана для соединения примера 1, с использованием в качестве исходных продуктов промежуточные соединения 1.6 и 61.1.
Пример 64: 2-метил-N-[(10H-фенотиазин-2-илокси)ацетил]аланил-N
-[(3S)-2-гидрокситетрагидрофуран-3-ил]-L-лейцинамид
1
Порядок проведения эксперимента тот же, что и описанный для примера 2, причем соединение примера 1 заменяется на соединение примера 63. Получают белую твердую субстанцию. Температура плавления: 166-167°C.
Фармакологическое исследование соединений согласно изобретению:
Исследование влияния на калпаин I человека
Тест состоит в измерении активности фермента (очищенный фермент из человеческих эритроцитов), который инкубируют в буфере в присутствии пептидного субстрата, соединенного с фторхромом (аминометилкумарин, AMC), и кальция. Фермент, активированный кальцием, расщепляет субстрат и высвобождает фрагмент AMC. Выделенный AMC флуоресцирует при 460 нм при возбуждении волной с длиной 380 нм. Таким образом, активность фермента пропорциональна количеству флуоресценции, то есть свободного фрагмента AMC. Флуоресценцию (380/460 нм) измеряют с помощью многоканального флуориметра (Victor 2, Wallac).
2
2
2
Дозировку производят в 96-луночные микропланшеты с прозрачным дном и черными стенками, в которых распределено по 10 мкл на лунку испытываемого вещества в 10%-ном DMSO, 45 мкл реакционной смеси, содержащей человеческий калпаин I при 2,2 Ед/мл (Calbiochem, номер: 208713), субстрат Suc Leu Tyr-AMC (Bachem, номер I-1355) концентрации 1,1 мМ в буфере (Tris-HCl 110 мМ; NaCl 110 мМ; EDTA 2,2 мМ; EGTA 2,2 мМ; меркаптоэтанол 1,1 мМ). Реакция инициируется добавлением 45 мкл 22 мМ CaCl. Для определения фонового шума в планшет добавляли контрольные лунки без кальция (10 мкл 10%-ного ДМСО + 45 мкл буфера с ферментом и субстратом + 45 мкл HО). Для определения полной активности фермента в планшет добавляют контрольные лунки без продукта (101 л 10%-ного ДМСО + 45 мкл буфера с ферментом и субстратом + 45 мкл CaCl, 22 мМ). Каждую концентрацию продуктов (от 0,1 нМ до 10 мкМ) проверяют дважды. Планшеты встряхивают и выдерживают в темноте в течение одного часа при 25°C. Флуоресценцию при 380/460 нм считывают с помощью флуориметра.
50
Соединения примеров 2, 7-12, 16-18, 20, 40-53, 55-57, 60, 62 и 64 имеют в этом тесте CI меньше или равное 5 мкМ.
Исследование влияния in situ на активность калпаинов в глиальных клетках крыс (C6)
2
Глиальные клетки крыс C6 высевали по 25000 клеток на лунку 96-луночных планшетов в DMEM 10% FBS. На следующий день прилипшие клетки 3 раза промывали средой DMEM без сыворотки и 40 мМ Hepes. В лунки вводили сто микролитров ингибитора калпаинов. Через час инкубирования при 37°C в атмосфере 5% CO добавляли 10 мкл, содержащих флуоресцентный субстрат калпаина (Suc-Leu-Tyr-AMC) и майтотоксина (Sigma, номер: M-9159), чтобы получить конечную концентрацию в лунках 100 мкМ и 1 нМ, соответственно.
Для определения полной активности клеточного фермента в планшет добавляли лунки без продукта (100 мкл ДМСО сотового плюс 10 мкл MTX и субстрат). Фоновый шум определяли, добавляя контрольные лунки без MTX. Каждую концентрацию ингибитора (от 0,01 мкМ до 100 мкМ) тестировали трижды. Планшеты встряхивали, регистрировали флуоресценцию при 380/460 нм с помощью флуориметра Victor при T нуль. Инкубирование клеток С6 проводилось в течение полутора часов при 30°C в темноте.
50
Соединения примеров 8, 9, 11, 16, 20, 40, 43 и 47-53 имели в этом тесте CI меньше или равное 10 мкМ.
Исследование влияния на пероксидирование липидов коры головного мозга крыс
2
Ингибирующую активность продуктов по изобретению определяли путем измерения их влияния на степень пероксидирования липидов, определяемого по концентрации малонового диальдегида (MDA). MDA, образующийся при пероксидировании жирных ненасыщенных кислот, является хорошим показателем пероксидирования липидов (H. Esterbauer, KH Cheeseman, Meth. Enzymol. (1990), 186, 407-421). У самцов крыс Sprague Dawley весом 200-250 г (Charles River) были отрезаны головы. Кору головного мозга выделяли, затем гомогенезировали на гомогенизаторе Thomas в буфере Tris-HCl 20 мМ, pH 7,4. Гомогенат центрифугировали два раза при 50000 g в течение 10 минут при 4°C. Осадок выдерживали при -80°C. В день проведения эксперимента осадок вводили в суспензию при концентрации 1 г/15 мл и центрифугировали при 515 g в течение 10 минут при 4°C. Супернатант использовали сразу для определения пероксидирования липидов. Гомогенат коры головного мозга крыс (500 мкл) инкубировали при 37°C в течение 15 минут в присутствии тестируемого соединения или растворителя (10 мкл). Реакцию пероксидирования липидов инициировали добавлением 50 мкл 1 мМ FeCl, 1 мМ EDTA и 4 мМ аскорбиновой кислоты. После 30 минут выдерживания при 37°C реакцию останавливали добавлением 50 мкл раствора ди(трет-бутил)гидрокситолуола (BHT, 0,2%). Количество MDA определяли с помощью колориметрического теста, вводя в реакцию хромогенный реагент (R), N-метил-2-фенилиндол (650 мкл) с 200 мкл гомогената в течение 1 часа при 45°C. Конденсация одной молекулы MDA с двумя молекулами реагента R дает стабильный хромофор, у которого максимальная длина волны поглощения была равна 586 нм (Caldwell et all., European J. Pharmacol. (1995), 285, 203-206).
50
Соединения примеров 2, 7-9, 11, 12, 16, 17, 20, 40-45, 56, 57, 60 и 62 в этом тесте имеют IC меньше или равное 5 мкМ.