Морфология эритроцитов при дерматитах паразитарной этиологии у собак

2016, том 18 [4]

—--—

УДК 574/577

МОРФОЛОГИЯ ЭРИТРОЦИТОВ

ПРИ ДЕРМАТИТАХ ПАРАЗИТАРНОЙ ЭТИОЛОГИИ

У СОБАК

О.А. Шаповалова, И.Г. Гламаздин

ФГБОУ ВО «Московский государственный университет пищевых производств» Москва, Россия, 125080

Ю.А. Ватников

ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов» Министерства образования и науки РФ Москва, Россия, 117198

Аннотация. Заболевания кожи у собак, протекающие в форме дерматитов, в настоящее время регистрируется у 50—70% животных от всего пула незаразной патологии. Одной из самых распространенных кожных болезней является дерматит, не сопровождающийся образованием сыпи, возникающий чаще всего в возрасте 1—5 лет независимо от пола и породы собак. Цель — изучить морфологические изменения эритроцитов крови собак при блошином дерматите различной степени тяжести. В работе приведены результаты исследований морфологии эритроцитов при блошином дерматите собак с различной степенью тяжести протекания патологического процесса. Болезни кожи у собак различного генеза, протекающие в форме дерматитов, по результатам наших исследований, регистрировались до 50— 70% собак, поступавших в ветеринарную клинику. Паразитирование блох на коже собак оказалось главной причиной развития дерматита, который по механизму своего развития являлся воспалительной реакцией с аллергическим компонентом или гипериммунной реакцией. Клетки крови активно реагировали на патологический процесс, поэтому изменение их соотношения и структуры имеют важное клинико-диагностическое значение для определения тяжести протекания дерматита.

Ключевые слова: собаки, блохи, патологический процесс, дерматит, морфология, эритроциты, микроскопия.

Заболевания кожи у собак, протекающие в форме дерматитов, в настоящее время регистрируется у 50—70% животных от всего

пула незаразной патологии. Одной из самых распространенных кожных болезней является дерматит, не сопровождающийся образова-

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

—--—

нием сыпи, возникающий чаще всего в возрасте 1—5 лет независимо от пола и породы собак [1]. В этиологии дерматитов у собак одной из наиболее частых причин является паразитирование блох. Питаясь кровью животного, блоха выделяет в дерму слюну, которая препятствует свертыванию крови. Эта слюна содержит не менее 15 биологически активных веществ, которые могут оказывать раздражающее или аллергизирующее действие. До 80% всех аллергических дерматитов у собак, как установлено, связано с блохами. Паразитируя на животных, блохи наносят болезненные укусы, в результате образуются папулы, развивается дерматит, часто сопровождающийся секундарной инфекцией [2]. При этом специфические клинические признаки заболевания отсутствуют.

Клетки крови, будучи важнейшими компонентами внутренней среды организма, чутко реагируют на различные физиологические и патологические процессы в организме, что позволяет использовать их в качестве дифференциально-диагностического теста при самых разнообразных нозологических формах [3; 4]. Ни в одной другой ткани состояние клеточной поверхности не ответственно в такой степени за развертывание ряда явлений, происходящих в организме, как в норме, так и при патологических состояниях [5]. Механизм возникновения нарушений морфологии эритроцитов при дерматитах паразитарной этиологии у собак изучен недостаточно и раскрытие его имеет существенное значение для целенаправленной патогенетической терапии больных животных.

Цель исследований: изучить морфологические изменения эритроцитов крови собак при блошином дерматите различной степени тяжести.

Материалы и методы исследования.

В работе было исследовано 97 собак разных

возрастных групп и пород с кожной патологией, владельцы которых обратились с жалобами на состояние животных. Всем животным проводили общепринятые клинические исследования. Особое внимание уделяли наличию признаков зуда, его интенсивности, времени появления и характеру экссудатов, наличия местной температуры. При наличии кожных манифестаций проводили микроскопическое исследование кожи методом глубоких соскобов и приготовления мазков отпечатков. Глубокие соскобы с площади около 4 см2 брали с 5 участков тела каждого животного до появления сочащейся из капилляров крови. С пораженных участков кожи брали 2—3 мазка-отпечатка, которые затем окрашивали азуром и эозином.

Оценку мазка проводили путем подсчитывания количества поверхностных клеток эпителия, глубоких клеток эпителия, нейтро-филов, а также наличия бактерий и грибов в 10 полях зрения с последующим их подсчетом по полям зрения. Исследования проводили под иммерсией светового микроскопа (объектив х90, окуляр х10). Окончательный диагноз ставили по результатам исследования соскобов и мазков отпечатков. При изучении структуры эритроцитов, использовали методику исследования крови и оценку показателей по методу В.В. Долгова, С. А. Луговской с соавт. (2001); М. Уиллард, Г. Тведтен с со-авт. (2004) [6; 7]. Наряду с этим исследования эритроцитов проводили методом фазово-контрастной микроскопии на микроскопе Leica DM 1000.

Статистическую обработку результатов выполняли с помощью программы MedCalc для Windows.

Результаты исследования и их обсуждение. В большинстве случаев у обследованных собак блошиный дерматит проявлялся

—--—

,—> 2 ~—'

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

—---

покраснением участков кожи, образованием узелков, кожным зудом, корками, алопеция-ми. При этом специфические клинические признаки болезни отсутствовали. При отсутствии терапии на пораженных участках кожи иногда развивалась вторичная микрофлора с формированием локального, гнойного дерматита или реже — генерализованной пиодермии. Поэтому сбор анамнеза жизни и болезни, а также простое физикальное обследование животного, недостаточны для диагностики дерматитов.

Исследование клеток гемопоэза представляет интерес, поскольку ни в одной другой ткани состояние клеточной поверхности не ответственно в такой степени за развертывание ряда явлений, происходящих в организме, как в норме, так и при патологических состояниях. Исследования, проведенные различными авторами позволили установить, что топография поверхности претерпевает существенные изменения при различных состояниях клетки, например при нахождении ее в различных фазах клеточного цикла или при трансформации клеток, при воздействии различных химических агентов и т.д. Эритроциты в силу своей эластичности способны принимать самую разнообразную конфигурацию, приспосабливаясь к форме сосуда или изменяясь под действием текущей плазмы. В связи с этим главными свойствами эритроцита являются способность к деформации и к образованию агрегатов [8]. Исследования в работе проводили методом световой микроскопии, который позволял не подвергать клетки крови жестоким воздействиям и выявлял патологию эритроцитов в более короткие сроки.

Механизм возникновения гематологических нарушений при аллергическом блошином дерматите изучен. Клетки крови, будучи важнейшими компонентами внутренней сре-

ды организма, чутко реагируют на различные физиологические и патологические процессы в организме, что позволяет использовать изменения крови в качестве дифференциально-диагностического теста при самых разнообразных нозологических формах [4; 8]. Поэтому исследование количественного состава крови и морфологии эритроцитов является одним из условий изучения воздействия на организм различных токсинов и имеет значение для патогенетической терапии больных животных.

В норме большинство эритроцитов в периферической крови представлено дискоци-тами (нормоцитами) (рис. 1) и любые изменения их морфологии может иметь диагностическое значение и нести дополнительную информацию о патогенезе заболевания [9].

Изменения морфологии эритроцитов проявляются уменьшением размеров, изменением формы эритроцитов, интенсивности и характера их окрашивания, появлением патологических включений. Важнейшим признаком патологического состояния эритроцитов является пойкилоцитоз — изменения формы эритроцитов различной степени выраженности, проявляющиеся образованием эхиноцитов, овалоцитов, шизоцитов, сферо-цитов и др. [10].

Трансформация эритроцита (дискоцита) в эхиноцит начинается с нарушения контура двояковогнутой структуры эритроцита с последующим появлением грубых выростов сначала по окружности диска, а затем по всей поверхности клетки, после чего эритроцит принимает в основном сферическую форму. Выросты постепенно становятся тоньше и равномерно распределяются по клеточной поверхности в количестве от 30 до 50 на одну клетку. В конечной стадии при снижении метаболизма клетка теряет часть выростов, что фактически представляет собой потерю частей мембраны эритроцита [10].

—--—

~ 3 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

—--—

Рис. 1. Морфологическая картина нативного препарата крови собаки

Трансформация эхиноцита обратима до стадии потери мембранного вещества и не зависит от объема. Прогрессирующее снижение способности эхиноцитов к деформации происходит параллельно с уменьшением АТФ, накоплением кальция и изменением формы эхиноцита и превращением его в стоматоцит.

Стоматоцит представляет собой чашеобразный эритроцит. Процесс начинается со сглаженности контура дискоцита с одной стороны, с другой — клетка остается вогнутой. В области углубления формируется везикулярное образование, разделяющее периферическую и оставшуюся слегка вогнутой центральную часть до тех пор, пока клетка не становится сферической формы. Ямки, наблюдаемые на электронной микрофотографии, при срезе представляют собой везикулярные образования. Трансформация диско-цит-стоматоцит обратима до стадии потери мембранного вещества.

Изучение морфологии форменных элементов в окрашенных мазках крови имеет большое диагностическое значение. Эти исследования позволяют определить соотношение многочисленных клеточных элементов,

оценить степень их морфологической зрелости, определить патологию. Качественный анализ необходим в первую очередь в тех случаях, когда имеют место изменения числа эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов крови. Определенную диагностическую значимость эти исследования приобретают и при нормальных количественных показателях крови.

Из 97 обследованных собак нами было отобрано 19 (19,58%) собак пород французский бульдог, боксер, шарпей, мопс, такса, ротвейлер в возрасте 2—4 года. При клиническом осмотре отмечали выпадение шерсти, зуд у основания хвоста, в области поясницы и спины. Отмечалось шелушение кожи, образование ранок в результате расчесов и покрытых тонкими, легко отторгающимися корочками-чешуйками. У 7 собак в области шеи, нижних областях живота отмечали картину эрозивно-язвенного дерматита, развивающегося при механическом травмировании эпидермиса. Собаки были свободными от гельминтозной инвазии, не имели признаков инфекционных заболеваний, а также патологии дыхательной системы. Температура тела имела предельные колебания и состав-

—--—

— 4 —

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

—--—

ляла 37,5—38,5 0С, что находится на верхней границе физиологической нормы для данного вида животных. Частота пульса составила 80—100 ударов в минуту, частота дыхания — 15—23 дыханий в 1 минуту. Видимые слизистые оболочки бледно-розовые. Лимфатические узлы не увеличены. При микроскопии глубоких соскобов кожи клещи рода Бе-шоёех обнаружены не были.

Исследование мазков отпечатков с поверхностных пораженных участков кожи выявило у 7 собак в возрасте 3—4 лет наличие перивазальных эозинофильных клеточных инфильтратов, которые в отдельных случаях образовывали довольно крупные очаги. Клеточный инфильтрат включал также значительное количество тканевых базофилов, большинство из которых имели нечеткие контуры. Появление эозинофилов, маркеров аллергических реакций, в мазках с поверхности кожи собаки подтверждает аллергическую природу блошиного дерматита.

Возникающая в ответ на микробное вторжение воспалительная реакция с гибелью многочисленных нейтрофильных лейкоцитов в результате незавершенного фагоцитоза со-

Рис. 2. Нативный препарат крови. Стоматоцит. Фазово-контрастная микроскопия

провождалась разрушением эпидермиса про-теолитическими ферментами, выделяющимися на поверхность кожи из распадающихся нейтрофилов. Блошиный дерматит, проявлялся первоначально лишь как папулезное поражение, затем появлялись корочки на папулах, постепенным появлением на коже гнойничков, которые, сливаясь друг с другом, образовывали различные по форме и величине участки эрозии, лишенные эпидермиса. Аналогичные результаты были получены в работах В. В. Ти-ханина и Н.Л. Карпецкой в 2001 году [1].

При проведении световой микроскопии нативных мазков собак с популезной формой блошиного дерматита установлено, что большинство эритроцитов имеет форму дискоци-тов. Такая форма эритроцитов обеспечивает наиболее адекватное обеспечение тканей кислородом и во многом определяет эффективность протекания физиологических процессов [9]. Доля деформированных эритроцитов в форме эхиноцитов составила (10 полей зрения в каждой пробе, %) в среднем 3,09 ± ± 0,05%, стоматоцитов — 2,75 ± 0,01, кодо-цитов — 3,73 ± 0,02% (рис. 2—4).

Рис. 3. Эхиноциты в нативном мазке крови собаки в возрасте 3 лет с аллергическим блошиным дерматитом. Световая микроскопия.

— 5 —

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

—--—

Рис. 4. Кодоциты в нативном мазке крови собаки в возрасте 3 лет с аллергическим блошиным дерматитом.

Световая микроскопия

При блошином дерматите, сопровождающемся эрозивно-язвенными поражениями кожи в области спины, изменения в морфологической картине эритроцитов проявлялись четко выраженным пойкилоцитозом. Доля эхиноцитов составила (10 полей зрения в препарате) в среднем 15,0 ± 0,49%, стоматоци-тов — 13,81 ± 0,03%, кодоцитов — 20,00 ± ± 1,24%. Появление кодоцитов в крови животных связано с нарушениями функции печени, вызванных интоксикациями организма [10].

У собак с незначительными кожными манифестациями содержание эхиноцитов составило 3,09 ± 0,01%, стоматоцитов — 2,75 ± ± 0,01, кодоцитов — 3,73 ± 0,02%.

Изменение формы эритроцитов (пойки-лоцитоз) может быть результатом нарушения внутриклеточного обмена или возникать вследствие внешних физико-химических и иммунологических воздействий, то есть клетки могут подвергаться различным обратимым и необратимым трансформациям [5; 9]. Нарушение структуры эритроцитов приводило к снижению обменных процессов и ацидозу. Увеличение доли измененных эритроци-

тов указывало о процессе интоксикации в организме собак и нарушении функции печени.

Выводы. Результаты наших исследований позволили установить, что при блошином дерматите наблюдаются изменения морфологии эритроцитов, характеризующиеся появлением деформированных форм в зависимости от тяжести патологического процесса. Пойкилоцитоз при этом можно рассматривать как универсальные биохимические и морфологические изменения в составе крови при эндо- и экзогенных интоксикациях.

Таким образом, обнаруженные изменения морфологии эритроцитов существенно дополняют клиническую картину, позволяют косвенно судить о характере патологического процесса при дерматитах паразитарной этиологии и могут служить дополнительным методом оценки состояния организма и разработки этиопатогенетической терапии. Методы исследования, позволяющие оценить изменения клеток крови при дерматитах паразитарной этиологии, следует использовать в качестве диагностического теста.

ЛИТЕРАТУРА

1. Тиханин В.В., Карпецкая Н.Л. Патогенетические механизмы эрозивно-язвенных поражений кожи у собак // Ветеринарная клиника д-ра Тиханина. СПб., 2001.

2. Патерсон Сью. Кожные болезни собак. М.: Аквариум ЛТД, 2000. С. 5—8.

3. Ватников Ю.А. Сравнительный анализ структурных изменений эритроцитов у лабораторных животных под воздействием травм // Российский ветеринарный журнал (мелкие домашние животные). 2012. № 3. С. 20—22.

4. Медведев И.Н., Беспарточный Б.Д., Го-ряинова И.А. Способ профилактики тромбоци-тарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией. Патент на изобретение RUS 2323731 27.11.2006.

—--—

~ 6 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

5. Смирнова О.О. Изменение морфологических и биохимических показателей эритроцитов при интоксикации // Международный вестник ветеринарии. 2010. Т. 137. Вып. 3. С. 31—35.

6. Долгов В.В., Луговская С.А., Морозова В.Т., Почтарь М.Е. Лабораторная диагностика анемий. Пособие для врачей. Тверь: Губернская медицина, 2001.

7. Уиллард М.Д., Тведтен Г., Торнвальд Г. Лабораторная диагностика в клинике мелких домашних животных / под ред. В. В. Макарова; пер. с англ. Л.И. Евелевой, Г.Н. Пимочкиной, Е.В. Свиридовой. М.: ООО «АКВАРИУМ БУК», 2004.

8. Завалишина С.Ю., Белова Т.А., Медведев И.Н., Кутафина Н.В. Физиология крови и кровообращения. СПб., 2015.

9. Новодержкина Ю.К., Шишканова З.Г., Козинец Г.И. Конфигурация и поверхность клеток крови в норме и патологии. М.: Триада-фарм, 2004.

10. Крюковская Г.М., Крюковский Р. А., Лу-цай В.И., Боюнчан Н.Р. Фазово-контрастная микроскопия для оценки эритроцитов в посттравматическом периоде у животных после кровопотерь // Сборник материалов конференций в 15 ч. / под общ. ред. Т.А. Стахи. М.: ИК МГУПП, 2015. С. 53—57.

THE MORPHOLOGY OF ERYTHROCYTES AT PARASITIC DERMATITIS ETIOLOGY OF THE DOGS

O.A. Shapovalova, I.G. Glamazdin

Moscow State University of Food Production Moscow, Russia, 125080

Y.A. Vatnikov

Peoples' Friendship University of Russia Moscow, Russia, 117198

Annotation. Canine skin diseases which occur in the form of dermatitis, currently registered in 50—70% of animals against non-contagious disease of the entire pool. One of the most dis-gation of skin disease dermatitis is not accompanied by the formation of rash that occurs most often between the ages of 1—5 years, regardless of sex and breed of dog. The goal — to study morphological changes in red blood cells of dogs with flea dermatitis of varying severity. Skin diseases of dogs of various origins, occurring in the form of dermatitis, register at 30—70 % of dogs admitted to a veterinary clinic in the opinion of many authors. The parasitic fleas on the skin of dogs is one of the reason for the development of flea dermatitis, the mechanism of its development is the immunological reaction. Blood cells actively respond to various physiological and pathological processes in the body, so the change in their morphology has diagnostic significance to determine the severity of course of disease process

Key words: dogs, flea, pathological processes, dermatitis, morphology, erythrocytes, microscopy.

REFERENCES

1. Tihanin V.V., Karpetskaya N.L. Pathogenic mechanisms of erosive and ulcerative lesions in dogs.

Veterinarnaja klinika doktora Tihanina. St. Petersburg, 2001 (in Russian).

2. Paterson Sue. Skin diseases of dogs. Moscow, Aquarium LTD, 2000, рp. 5—8 (in Russian).

3. Vatnikov Yu.A. Comparative analysis of structural changes in red blood cells in laboratory animals exposed to trauma. Rossijskij veterinarnyj

—--—

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

zhurnal (melkie domashnie zhivotnye). 2012. № 3. pp. 20—22 (in Russian).

4. Medvedev I.N., Bespartochnyj B.D., Gorja-inova I.A. A method for preventing platelet disorders in newborn calves with dyspepsia. A patent for an invention RUS 2323731 27.11.2006 (in Russian).

5. Smirnov O.O. Changing the morphological and biochemical indices of red blood cells during intoxication. Mezhdunarodnyj vestnik veterinarii. 2010. 137(3). pp. 31—35 (in Russian).

6. Dolgov V.V., Lugovskaya S.A., Morozo-va V.T., Pochtar M.E. Laboratory diagnosis of anemia. Posobie dlja vrachej. Tver', Gubernskaja medicina, 2001. 88 p. (in Russian).

7. Willard M.D., Twedt G., Tornvald G. Laboratory diagnosis in the clinic of small animals. Ed. V.V. Makarova; perevod s anglijskogo L.I. Evelevoj,

G.N. Pimochkinoj, E.V. Sviridovoj. Moscow, OOO «AKVARIUM BUK», 2004 (in Russian).

8. Zavalishina S.Yu., Belova T.A., Medvedev I.N., Kutafina N.V. Physiology of the blood and circulation. St. Petersburg, 2015. 176 p. (in Russian).

9. Novoderzhkina J.K., Shishkanova Z.G., Kozinets G.I. The configuration and the surface of blood cells in health and disease. Moscow, Triada-farm, 2004, 151 p. (in Russian).

10. Kryukovskaya G.M., Kryukovsky R.A., Lutz V.I., Boyunchan N.R. Phase-contrast microscopy to assess the red blood cells in the posttraumatic period in animals after blood loss. Sbornik materi-alov konferencij v 15 chastjah. Ed. T.A. Stahi. Moscow: IR MGUPP, 2015. pp. 53—57 (in Russian).