СПОСОБЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПОЛОКСАМЕРА ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ СРЕДЕ

1. Способ получения полоксамера для применения в клеточной культуральной среде, включающий следующие стадии:
(a) нагревание твердого полоксамера по меньшей мере до около 60°C с образованием жидкого полоксамера; и
(б) охлаждение жидкого полоксамера до температуры ниже около 50°C с образованием твердого термообработанного полоксамера, причем охлаждение не проводят в устройстве для приллирования или измельчения, и где полоксамер содержит сополимер оксида этилена и оксида пропилена.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что жизнеспособность клеток в клеточной культуральной среде, содержащей термообработанный полоксамер, повышалась по сравнению с жизнеспособностью клеток в клеточной культуральной среде, содержащей полоксамер до стадии (а).
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что полоксамер на стадии (а) нагревали в диапазоне от около 60°C до около 185°C.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что полоксамер на стадии (а) нагревали в диапазоне от около 157°C до около 185°C.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что полоксамер нагревали в диапазоне от 157°C до около 185°C в течение по меньшей мере 1 минуты.
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что полоксамер нагревали в диапазоне от около 157°C до около 185°C в течение от 1 минуты до около 250 минут.
7. Способ по п. 3, отличающийся тем, что полоксамер на стадии (а) нагревали в диапазоне от около 134°C до около 157°C.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что полоксамер нагревали в диапазоне от около 134°C до около 157°C в течение по меньшей мере 1 минуты.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что полоксамер нагревали в диапазоне от около 134°C до около 157°C в течение от 1 минуты до около 250 минут.
10. Способ по п. 3, отличающийся тем, что полоксамер на стадии (а) нагревали в диапазоне от около 120°C до около 134°C.
11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что полоксамер нагревали в диапазоне от около 120°C до около 134°C в течение по меньшей мере около 62 минут.
12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что полоксамер нагревали в диапазоне от около 120°C до около 134°C в течение от около 62 минут до около 250 минут.
13. Способ по п. 3, отличающийся тем, что полоксамер на стадии (а) нагревали в диапазоне от около 100°C до около 120°C.
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что полоксамер нагревали в диапазоне от около 100°C до около 120°C в течение по меньшей мере около 98 минут.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что полоксамер нагревали в диапазоне от около 100°C до около 120°C в течение от около 98 минут до около 250 минут.
16. Способ по п. 3, отличающийся тем, что полоксамер на стадии (а) нагревали в диапазоне от около 80°C до около 100°C.
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что полоксамер нагревали в диапазоне от около 80°C до около 100°C в течение по меньшей мере около 122 минут.
18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что полоксамер нагревали в диапазоне около 80°C до около 100°C в течение от около 122 минут до около 250 минут.
19. Способ по п. 3, отличающийся тем, что полоксамер на стадии (а) нагревали в диапазоне от около 60°C до около 80°C.
20. Способ по п. 16, отличающийся тем, что полоксамер нагревали в диапазоне от около 60°C до около 80°C в течение по меньшей мере около 143 минут.
21. Способ по п. 17, отличающийся тем, что полоксамер нагревали в диапазоне от около 60°C до около 80°C в течении от около 143 минут до около 250 минут.
22. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что жизнеспособность клеток в клеточной культуральной среде, содержащей термообработанный полоксамер, повышалась по меньшей мере на 10% по сравнению с жизнеспособностью клеток в клеточной культуральной среде, содержащей полоксамер до стадии (а).
23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что жизнеспособность клеток повышалась по меньшей мере на около 20%.
24. Способ по п. 22, отличающийся тем, что жизнеспособность клеток повышалась по меньшей мере на около 30%.
25. Способ по любому из пп. 1-24, отличающийся тем, что жизнеспособность клеток в клеточной культуральной среде, содержащей полоксамер до стадии (а), была ниже около 80% после 3 часов культивирования клеток.
26. Способ по любому из пп. 1-25, отличающийся тем, что жидкий полоксамер в стадии (б) охлаждали при температуре окружающей среды в диапазоне от около 2°С до около 8°C или ниже 0°С.
27. Способ по любому из пп. 1-26, отличающийся тем, что полоксамер нагревали в условиях вакуума.
28. Способ по любому из пп. 1-27, отличающийся тем, что жидкий полоксамер охлаждали в течение по меньшей мере около 20 минут.
29. Способ по любому из пп. 1-28, отличающийся тем, что термообработанный полоксамер, полученный на стадии (б), добавляли в клеточную культуральную среду.
30. Способ по любому из пп. 1-29, отличающийся тем, что стадии (а) и (б) повторяли по меньшей мере один раз перед добавлением термообработанного полоксамера в клеточную культуральную среду.
31. Способ по любому из пп. 1-30, отличающийся тем, что полоксамер приллировали перед стадией (а).
2
4
n
3
6
m
2
4
n
32. Способ по любому из пп. 1-31, отличающийся тем, что полоксамер имеет формулу HO(CHO)(CHO)(CHO)H, где n равняется от около 60 до около 150, а m равняется от около 25 до около 60.
33. Способ по любому из пп. 1-32, отличающийся тем, что полоксамер имеет температуру плавления около 55°C.
34. Способ по любому из пп. 1-33, отличающийся тем, что полоксамер имеет среднюю молекулярную массу от около 6000 до около 18000 дальтон.
2
4
n
3
6
m
2
4
n
35. Способ по любому из пп. 1-33, отличающийся тем, что полоксамер содержит сополимер, имеющий формулу HO(CHO)(CHO)(CHO)H, с n, имеющим значение около 80, с m, имеющим значение около 27, и полоксамер имеет среднюю молекулярную массу от около 7680 до около 9510 г/моль.
36. Способ по любому из пп. 1-33, отличающийся тем, что полоксамер представляет собой полоксамер 188.
37. Способ по любому из пп. 1-36, отличающийся тем, что клетка представляет собой клетку млекопитающего.
38. Способ по п. 37, отличающийся тем, что клетка представляет собой клетку яичника китайского хомячка (СНО).
39. Способ по любому из пп. 1-38, отличающийся тем, что клетка представляет собой клетку насекомого.
40. Способ по любому из пп. 1-39, отличающийся тем, что клетка продуцирует полипептид.
41. Полоксамер, полученный способом по любому из пп. 1-40.
42. Клеточная культуральная среда, содержащая полоксамер по п. 41.
43. Клеточная культуральная среда по п. 42, отличающаяся тем, что содержит термообработанный полоксамер в концентрации от около 0,1 до около 10 г/л.
44. Клеточная культуральная среда по п. 43, отличающаяся тем, что содержит термообработанный полоксамер в концентрации от около 0,1 до около 3 г/л.
45. Клеточная культуральная среда по п. 43, отличающаяся тем, что содержит термообработанный полоксамер в концентрации от около 3 до около 10 г/л.
46. Способ получения полипептида в культуре клеток, включающий стадию культивирования клетки, которая продуцирует полипептид в клеточной культуральной среде в условиях подходящих для продуцирования полипептида, причем клеточная культуральная среда содержит полоксамер по п. 41.
47. Способ по п. 46, отличающийся тем, что клетка представляет собой клетку млекопитающего.
48. Способ по п. 46, отличающийся тем, что клетка представляет собой клетку яичника китайского хомячка (СНО).
49. Способ по п. 46, отличающийся тем, что клетка представляет собой клетку насекомого.
50. Способ по любому из пп. 46-49, отличающийся тем, что клеточная культуральная среда содержит термообработанный полоксамер в концентрации от около 0,1 до около 10 г/л.
51. Способ по п. 50, отличающийся тем, что клеточная культуральная среда содержит термообработанный полоксамер в концентрации от около 0,1 до около 3 г/л.
52. Способ по п. 50, отличающийся тем, что клеточная культуральная среда содержит термообработанный полоксамер в концентрации от около 3 до около 10 г/л.
53. Способ по любому из пп. 46-52, отличающийся тем, что полипептид представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
54. Способ получения полоксамера для применения в клеточной культуральной среде, включающий следующие стадии:
(a) нагревание полоксамера в диапазоне от около 80°C до около 100°C с образованием жидкого полоксамера; и
(б) охлаждение жидкого полоксамера до температуры ниже около 50°C с образованием твердого термообработанного полоксамера, причем охлаждение не проводят в устройстве приллирования или охлаждения;
где полоксамер содержит сополимер оксида этилена и оксида пропилена.