Концентрация сывороточных противомиокардиальных и противоклапанных аутоантител у собак при эндокардиозе митрального клапана

КАРДИОЛОГИЯ

Для цитирования: Руденко, А.А. Концентрация сывороточных противомиокардиальных и противоклапанных аутоантител у собак при УДК 619: 619.12-007.61: 616.34-008.6: 636.7

эндокардиозе митрального клапана / А.А. Руденко // Российский ветеринарный журнал. — 2017. — № 8. — С. 9-12.

For citation: Rudenko A.A., Serum Antimiocardial and Antivalvular Autoantibodies Concentration in Dogs with Endocardiosis of Mitral Valve, Rossijskij

veterinarnyj zhurnal (Russian veterinary journal), 2017, No. 8, pp. 9-12.

Концентрация сывороточных противомиокардиальных и противоклапанных аутоантител у собак при эндокардиозе митрального клапана

А.А. Руденко, доктор ветеринарных наук, доцент (vetrudek@yandex.ru).

Ветеринарный центр «В мире с животными» (142203, Московская область, г. Серпухов, ул. Ворошилова, д. 133/16).

Цель исследования. Установить наличие аутоантител к тканям миокарда и клапанного аппарата сердца у собак с эндокардиозом митрального клапана, в зависимости от степени тяжести синдрома хронической сердечной недостаточности.

Материалы и методы. Исследованием охвачено 42 собаки с эндокардиозом митрального клапана и 18 клинически здоровых животных аналогичного возраста и массы тела. Изготовление тканевых аутоантигенов, получение гипериммунных сывороток, постановку реакции связывания комплемента, статистическую обработку цифрового материала проводили по общепризнанным методикам.

Результаты. В сыворотке крови собак с эндокардиозом митрального клапана сердца установлено наличие аутоантител к тканям миокарда и клапанного аппарата сердца. Степень аутоиммунного процесса гуморального типа у собак с эндокардиозом митрального клапана выше при развитии осложнений в виде отека легких, ремоделирования левого предсердия и кардиогенной кахексии, и положительно коррелирует с функциональным классом синдрома хронической сердечной недостаточности.

Заключение. В патогенезе эндокардиоза митрального клапана у собак важную роль играет продукция противомиокардиальных и противоклапанных аутоантител.

Ключевые слова: эндокардиоз собак, аутоиммунный процесс, противомиокардиальные аутоантитела, противоклапанные аутоантитела Сокращения: ЗСН — застойная сердечная недостаточность, МК — митральный клапан, РСК — реакция связывания комплемента, ХСН — хроническая сердечная недостаточность, ACVIM — American College of Veterinary Internal Medicine (Американский колледж ветеринарной интернальной медицины), NYHA — New York Heart Association

Введение

Эндокардиоз служит наиболее частой причиной ЗСН у собак мелких и карликовых пород [1, 2] и характеризуется прогрессирующей миксоматозной дегенерацией створок атриовентрикулярных клапанов [3]. Митральная регургитация представляет собой наиболее важный патогенетический механизм, который вызывает объемную перегрузку как в левом предсердии, так и левом желудочке, что обусловливает формирование синдрома левожелудочковой СН [4]. Причины эндокардиоза МК у собак пока не выяснены окончательно, однако процессы старения организма и генетическая детерминация ассоциируются с высоким риском возникновения данной патологии [5...8].

Эндокардиоз чаще встречается у собак карликовых и мелких пород, преимущественно в пожилом возрасте. Более высокая распространенность эндокардиоза МК была установлена у собак породы кавалер кинг чарльз спаниель и такса [9, 10]. У собак этих пород эн-докардиоз сердечных клапанов встречается в более молодом возрасте и прогрессирует значительно быстрее. Так, эндокардиоз атриовентрикулярных клапанов ре-

гистрируется у 50 % собак породы кавалер кинг чарльз спаниель в возрасте старше 6 лет и у 50 % собак породы такса в возрасте старше 10 лет. Результаты указанных двух исследований доказывают генетическую этиологию эндокардиоза МК у собак, хотя в другом исследовании процессы старения интерпретируются как основные причины данного заболевания [11].

Список пород собак, имеющих высокий риск возникновения эндокардиоза МК, чрезвычайно разнообразен: чихуахуа, мальтезе, йоркширский терьер, пудель, па-пийон, пекинес, шпиц, такса, ши-тцу, керн-терьер, цверг-шнауцер, бишон фризе, вест-хайленд-уайт терьер, фокстерьер, бостон-терьер, уиппет, американский кокер-спаниель, гончие, немецкая овчарка и дог [12]. Следует отметить, что почти у 25 % популяции собак старше 10 лет наблюдаются дегенеративные изменения МК. У собак крупных пород эндокардиоз клапанов протекает скрыто и не приводит к развитию СН.

У самцов эндокардиоз встречается в 1,5 раза чаще, чем у самок [3]. В одном исследовании установлено, что изолированное поражение МК встречается в 60 % случаев эндокардиоза, а изолированное поражение трикуспидаль-ного клапана — в 10 % случаев, в то время как комбинированное поражение атриовентрикулярных клапанов (двустворчатого и трехстворчатого) — в 30 % случаев [16].

В патогенезе многих болезней мелких домашних животных в последние годы, как правило, выделяют аутоиммунные процессы, которые участвуют в развитии той или иной патологии. Считается, что поражение кар-диомиоцитов может происходить вследствие аутоиммунных реакций. Специфические аутоантитела могут образовываться к а- и р-тяжелым цепям миозина, мио-кардиальному адениннуклеотидному транслокатору

[17]. Роль процессов аутоиммунизации в патогенезе формирования и развития эндокардиоза атриовентрикуляр-ных клапанов у собак до сих пор не изучена.

В современной медицинской и ветеринарной кардиологии особое значение придается изучению воспалительного синдрома и кардиогенной кахексии у больных с СН, а иммунная теория патогенеза сердечной патологии привлекает все большее число сторонников [17, 18]. Согласно этой концепции, неспецифическая активация макрофагов и моноцитов в плазме и межтканевой жидкости, реализуемая при тяжелых расстройствах микроциркуляции, индуцирует синтез провоспалительных цитокинов, определяющих эволюцию дисфункции левого желудочка. Процессы аутоиммунизации у пациентов с заболеваниями сердечно-сосудистой системы также могут негативно влиять на систолическую и диастолическую функцию миокарда левого желудочка и ускорять прогрессирование синдрома ХСН.

Цель исследования

Установить наличие аутоантител к тканям миокарда и клапанного аппарата сердца у собак с эндокардиозом МК, в зависимости от степени тяжести синдрома СН.

Материалы и методы

Объектом исследования служили собаки с эндокар-диозом и клинически здоровые аналогичного возраста и массы тела. Предмет исследования — наличие и концентрация противоклапанных и противомиокардиальных аутоантител в сыворотке крови собак с установленным эндокардиозом, а также патогенетическая и диагностическая значимость указанных антител.

Использовали клинико-анамнестические, эхокардио-графические и рентгенографические критерии диагностики эндокардиоза собак по M. J. Mattin, A Boswood, D. B. Church et al. (2015) [5]. Стадии эндокардиоза определяли согласно классификации ACVIM.

Согласно указанной классификации, эндокардиоз у собак имеет ряд стадий: А — пациенты группы риска, клинически здоровые, но имеющие генетическую детерминированность (например, такса, пекинес, карликовый пудель и т. д.); В — пациенты в доклинической (преморбидной) стадии (выделяют две подстадии: В1 — эндокардиоз без признаков ремоделирования левых камер сердца и В2 — заболевание с дилатацией левого предсердия и эксцентрической гипертрофией левого желудочка); С — пациенты, имеющие кардиаль-ные симптомы заболевания; D — пациенты с развитием СН, рефрактерной к терапии.

Функциональный класс ХСН у больных собак оценивали по критериям NYHA [16].

Для определения аутоиммунных процессов в организме собак с эндокардиозом готовили миокардиаль-ные и клапанные аутоантигены. Для этого использовали ткани миокарда, а также митрального и трикус-пидального клапана, полученные от клинически здоровой собаки, внезапно погибшей в результате политравмы.

Ткани миокарда и атриовентрикулярных клапанов сердца освобождали от соединительной ткани, измельчали с помощью гомогенизатора. Антиген получали путем водно-солевой экстракции (1:4) и десятикратного

замораживания-размораживания. Суспензию измельченных тканей центрифугировали в течение 30 минут при 10000 мин-1, а надосадочную жидкость консервировали натрия мертиолятом (1:10000) и использовали как аутоантигены.

Полученными аутоантигенами гипериммунизировали кроликов для получения положительных сывороток. Далее титровали комплемент и антигены. Аутоан-тигены контролировали на комплементарность и анти-комплементарность.

РСК ставили в объеме 2,5 мл по общепризнанной методике с использованием эритроцитов барана (2,5 %), гемолизина (четырехкратный титр), комплемента в рабочем разведении, исследуемых сывороток, антигенов в рабочем разведении (трехкратный предельный титр).

При первичной статистической обработке предварительно оценивали нормальность распределения полученных цифровых данных с помощью теста Ша-пиро-Уилка. При сравнении нескольких групп с ненормальным распределением исследуемых признаков использовали непараметрический критерий Круска-ла-Уоллиса, который представляет собой ранговый анализ вариаций. При сравнении двух групп, цифровые показатели которых не соответствовали нормальному распределению признаков, применяли непараметрический U-критерий Манна-Уитни. При нормальном распределении количественных переменных для сравнения двух групп применяли t-тест Стьюдента для независимых выборок. Разницу между показателями животных опытных групп считали достоверной при р<0,05. Все расчеты выполняли на персональном компьютере с помощью статистической программы STATISTICA 7.0 (StatSoft, USA) [19].

Результаты и обсуждение

В исследование включили 42 собаки с эндокардио-зом атриовентрикулярных клапанов сердца на разных стадиях развития патологии и 18 клинически здоровых собак. Следует отметить, что согласно классификации ACVIM, 18 собак были отнесены к стадии А, 12 — к стадии В1, 9 — к стадии В2, 13 — к стадии С и 8 — к стадии D.

Интенсивность аутоиммунных процессов относительно тканей миокарда и клапанного аппарата сердца были исследованы у каждой из 42 собак с эндокарди-озом атриовентрикулярных клапанов сердца. В качестве группы сравнения использовали 18 клинически здоровых собак восприимчивых к эндокардиозу пород, аналогичного возраста и массы тела, что соответствовало стадии А по классификации ACVIM.

В сыворотке крови у 4 клинически здоровых собак

выявлено наличие аутоантител (титр 1:5___1:10) к ткани

здорового миокарда, что составило 22,2 % (табл. 1).

1. Титры противомиокардиальных и противоклапанных аутоантител в сыворотке крови собак клинически здоровых и с эндокардиозом атриовентрикулярных клапанов сердца 1. Indexes of anti-myocardial and antivalvular autoantibodies in the serum of clinically healthy dogs and dogs with endocardiosis of atrioventricular heart valves

Собаки Противомиокардиальные аутоантитела*, log2 Противоклапанные аутоантитела*,log2

M±m Lim M±m Lim

Клинически здоровые (n=18) 0,31+0,219 0...3,32 0 0

С эндокардиозом (n=42) 1,38+0,291 0...5,32 0,62+0,188 0.3,32

Примечание. * Достоверность разницы р<0,05

А.А. Руденко

При математическом анализе полученных данных установлено, что уровень противомиокардиальных ау-тоантител в сыворотке крови у клинически здоровых собак в среднем составлял 0,31±0,219 У собак с эн-докардиозом сывороточные антимиокардиальные ауто-антитела выявлялись в диагностически значимых титрах (1:10...1:40) с частотой 33,3 % (у 14 собак). При этом уровень противомиокардиальных аутоантител в сыворотке крови собак с эндокардиозом был достоверно выше в 4,5 раза (р<0,05) в сравнении с клинически здоровыми животными.

Следует также добавить, что в сыворотке крови у клинически здоровых собак противоклапанные ауто-антитела не выявлялись, а у больных эндокардиозом их уровень был достоверно (р<0,05) выше и в среднем составлял 0,62±0,188 1сй2.

В сыворотке крови клинически здоровых собак и собак с эндокардиозом, осложненным ХСН L-.IV функциональных классов, уровень противомиокардиальных антител в среднем составил 0,31; 0,66; 1,33; 1,39 и 2,40 1сg2, соответственно (табл. 2).

2. Аутоиммунные процессы в организме больных эндокардиозом собак в зависимости от функционального класса синдрома хронической сердечной недостаточности 2. Autoimmune processes in the body of dogs with endocardiosis, depending on the functional class of the syndrome of chronic heart failure

Собаки Противомиокардиальные аутоантитела,log2 Противоклапанные аутоантитела,log2

Клинически здоровые (n=18) 0,31+0,219 0

Больные с функциональным классом ХСН (n=42): I, n=12 II, n=10 III, n=11 IV, n=9 0,66+0,354 1,33+0,562 1,39+0,589 2,40+0,812* 0 0,46+0,309 0,60+0,405 1,62+0,529*

Примечание: * Достоверная разница по сравнению с клинически здоровыми собаками.

Также была установлена корреляционная связь между интенсивностью аутоиммунного процесса и функциональным классом ХСН (г=0,37; р<0,05).

Очевидно, что продукция аутоантител к тканям миокарда в сыворотке крови собак с эндокардиозом является фоновой и возникает из-за вторичного поражения кардиомиоцитов. Данное утверждение базируется на том факте, что на ранних стадиях болезни аутоиммунный процесс гуморального типа не выражен. О тесной связи аутоиммунного процесса с синдромом цитолиза кардиомиоцитов также косвенно свидетельствует наличие достоверной корреляции (г=0,27; р<0,05) между уровнем антимиокардиальных аутоантител с активностью аспарагиновой аминотрасферазы в сыворотке крови у собак с эндокардиозом атриовентрикуляр-ных клапанов сердца.

Аутоантитела к клапанам сердца в сыворотке у клинически здоровых собак не выявлялись. В сыворотке крови 8 собак с эндокардиозом были определены клапанные аутоантитела в титрах 1:5.1:10. Установлена достоверная положительная корреляция (г=0,47; р<0,001) уровня противоклапанных аутоантител с функциональным классом ХСН.

Исследовано также наличие и интенсивность аутоиммунных процессов в зависимости от наличия отека легких (табл. 3). У 14 собак (33,3 %) с эндокардиозом патология была осложнена отеком легких. Из данных, приведенных в таблице 3, видно, что в сыворотке кро-

3. Титры противомиокардиальных и противоклапанных аутоантител в сыворотке крови собак с эндокардиозом в зависимости от наличия отека легких 3. Indexes of anti-myocardial and antivalvular autoantibodies in the serum of dogs with endocardiosis with or without pulmonary edema

Собаки с эндокардиозом Противомиокардиальные аутоантитела,log2 Противоклапанные аутоантитела,log2

Без отека легких, n=28 0,69+0,167 0,44+0,209

С отеком легких, n=14 2,78+0,593* 0,97+0,371

Примечание: * Достоверная разница по сравнению с группой собак, без отека легких.

ви у собак с эндокардиозом и отеком легких, по сравнению с группой больных животных без данного осложнения, концентрация противомиокардиальных аутоантител была достоверно выше в 4,0 раза (р<0,001). Осложнение отеком легких эндокардиоза у собак не сопровождалось достоверным изменением уровня про-тивоклапанных аутоантител.

В дальнейшем изучена степень аутоиммунных процессов у собак с эндокардиозом МК в зависимости от наличия расширения левого предсердия (табл. 4).

4. Аутоиммунные процессы в организме собак с эндокардиозом зависимости от наличия дилатации левого предсердия 4. Autoimmune processes in dogs with endocardiosis with or without dilatation of the left atrium

Собаки с эндокардиозом атриовентрикулярных клапанов сердца Противомиокардиальные аутоантитела,log2 Противоклапанные аутоантитела, log2

Без расширения левого предсердия, n=12 0,66+0,353 0

С дилатацией левого предсердия, n=30 1,67+0,373 0,86+0,250*

Примечание: * Достоверная разница по сравнению с группой собак без дилатации левого предсердия.

Наличие дилатации левого предсердия у собак с эн-докардиозом не ассоциировалось с достоверным изменением уровня противомиокардиальных аутоанти-тел. Напротив, средняя концентрация противоклапан-ных аутоантител в сыворотке крови собак с эндокарди-озом была достоверно выше в группе пациентов с расширенным левым предсердием.

Также изучен уровень антимиокардиальных и антиклапанных аутоантител в сыворотке крови собак с эндокардиозом МК в зависимости от наличия синдрома кардиогенной кахексии (рис.).

Примечание:

£Цбез кахексии

[ГЦ с кахексией

* - достоверная разница Противймнокардгальные Прошвокпашиные

Рис. Титры противомиокардиальных и противоклапанных аутоантител в сыворотке крови собак с эндокардиозом в зависимости от наличия синдрома кардиогенной кахексии

Fig. Indexes of antimyocardial and antivalvular autoantibodies in the serum of dogs with endocardiosis with or without cardiogenic cachexia syndrome

У 11 собак (26,2 %) эндокардиоз атриовентрикулярных клапанов сердца ассоциировался с развитием синдрома сердечной кахексии. В том числе у 6 собак регистрировали стадию D патологии по классификации ACVIM, а у 5 собак — стадию С.

Из данных, приведенных на рисунке, видно, что в сыворотке крови собак с эндокардиозом и синдромом кар-диогенного истощения, по сравнению с группой больных животных без указанного осложнения, концентрация противоклапанных аутоантител была достоверно выше (в 3,7 раза; р<0,05), а уровень противомиокарди-альных аутоантител имел близкую к достоверности тенденцию к повышению (в 2,1 раза; р<0,09).

Суммируя полученные результаты экспериментальных исследований, можно сказать, что аутоиммунные процессы гуморального типа в организме собак с эндокардиозом атриовентрикулярных клапанов сердца значительно осложняют течение болезни, но не играют ключевой роли в механизме ее возникновения и развития. Очевидно, что в результате цитолиза кар-диомиоцитов и клеток соединительной ткани клапанов сердца происходит индукция синтеза специфических аутоантител с образованием циркулирующего аутоиммунного комплекса антиген-антитело. Выявление ан-тимиокардиальных и антиклапанных аутоантител у собак с эндокардиозом МК не обладает существенной диагностической значимостью. Кроме этого, существует вероятность того, что низкий процент выявления ауто-антител к тканям сердца у больных собак связан с фаз-ностью аутоиммунного процесса, недостаточной чувствительностью РСК, а также с фиксацией антител в тканях организма. Эти аспекты требуют дальнейшего изучения.

Выводы

1. В сыворотке крови собак с эндокардиозом атрио-вентрикулярных клапанов сердца установлено наличие аутоантител к тканям миокарда и клапанного аппарата сердца.

2. Степень аутоиммунного процесса у собак с эндокардиозом была выше при развитии осложнений в виде отека легких, ремоделирования левого предсердия и кардиогенной кахексии, а также положительно коррелирует с функциональным классом синдрома ХСН.

Библиографию см. на сайте издательства http://logospress.ru/mdg

Abstract

A.A. Rudenko.

Veterinary Center «V Mire s Zhivotnimi» (133/16, Voroshilov St., Serpukhov, Moscow region, 142203).

Serum Antimiocardial and Antivalvular Autoantibodies Concentration in Dogs with Endocardiosis of Mitral Valve. Objective: To show the presence of autoantibodies to myocardial tissue and valvular heart apparatus in dogs with mitral valve endocardiosis, depending on the severity of the syndrome of chronic heart failure.

Materials and methods: In the study we had 42 dogs with mitral valve endocardiosis and 18 clinically healthy animals of similar age and body weight. Production of tissue autoantigens and hyperimmune sera, realization of complement binding reaction, statistical processing of digital material were realized according to generally accepted procedures. Results. In the serum of dogs suffering from endocardiosis of the mitral valve of the heart there are autoantibodies to myocardial tissues and valve apparatus of the heart. The degree of autoimmune process of humoral type in dogs with mitral valve endocardiosis is higher in the case of complications, such as pulmonary edema, left atrial remodeling and cardiogenic cachexia, and also positively correlates with the functional class of chronic heart failure syndrome. Conclusion. In the pathogenesis of mitral valve endocardiosis in dogs the production of antimyocardial and antivalvular autoantibodies plays an important role. Keywords: endocardiosis of dogs, autoimmune process, antimyocardial autoantibodies, antivalvular autoantibodies.

Veterinary Dermatology / Российское издание

Отечественная версия официального издания Европейского общества ветеринарной дерматологии, Американской академии ветеринарной дерматологии, Всемирной ассоциации ветеринарной дерматологии. Оригинальное издание выходит в свет с 1990 г

Главный редактор российского издания: Николаева Л.В. Ветеринарный врач — дерматолог резидент Европейского колледжа ветеринарной дерматологии

Периодичность издания — ежеквартально.

Подписка на журналы осуществляется через редакцию http://logospress.ru/, e-mail: info@logospress.ru Телефон: +7 (495) 689-85-16

JSAP / Российское издание

отечественная версия официального издания Британской и Всемирной ассоциаций ветеринарии мелких домашних животных (BSAVA и WSAVA) -Journal of Small Animal Practice.

Главный редактор российского издания — Е.В. Скаченко, кандидат ветеринарных наук (ведущий врач-анестезиолог сети клиник «Белый клык»).

Оригинальное издание выходит в свет с 1957 г и сочетает в себе лучшие традиции классической европейской ветеринарной школы и инновационные подходы к лечению мировой ветеринарной науки

Подписка на журналы осуществляется через редакцию http://logospress.ru/, e-mail: info@logospress.ru Телефон: +7 (495) 689-85-16