ПРИМЕНЕНИЕ ОМЕГА-3 ЖИРНЫХ КИСЛОТ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ОСТЕОАРТРИТА У ПСОВЫХ
APPLICATION OF OMEGA-3 FATTY ACIDS IN TREATMENT OF OSTEORTHRITIS IN CANIDS

ПРЕДПОСЫЛКИ К СОЗДАНИЮ ИЗОБРЕТЕНИЯ
th
Остеоартрит представляет собой дегенеративное заболевание суставов, обычно встречающееся у людей и других крупных млекопитающих (Richardson et al., Vet. Clin. North Amer.Small Animal Practice 27:883-911, 1997; Curtis et al., Drug Disc. Today 9:165-172, 2004). Заболевание проявляется прогрессирующим изнашиванием суставного хряща с минимальным воспалением (Schoenherr et al. in Small Animal Clinical Nutrition 4 Ed., Hand et al. Eds., Walsworth Publishing Company, Marceline, MO, 2000, 907-921; Hedborn et al., Cell Mol.Life Sci 59: 45-53, 2002; Pool, Front Biosci 4: D662-70, 1999). Лечение остеоартрита может включать в себя фармакологическое лечение, хирургическое вмешательство, применение нутрицевтиков и диетотерапию. Однако существующие подходы к лечению направлены на облегчение симптомов заболевания и, например, они не были полностью успешными при лечении заболевания или лечении основной патологии. Следовательно, остается необходимость в новых подходах к лечению остеоартрита у человека и других крупных млекопитающих.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Соответственно, в этом документе авторы изобретения показали, что применение эффективного количества омега-3 жирных кислот, в частности эйкозапентаеновой кислоты (ЕРА), может обеспечить новый подход к лечению остеоартрита у собак. Способы являются эффективными при лечении остеоартрита у собак.
Таким образом, в различных вариантах осуществления настоящее изобретение может включать в себя способы восстановления функций сустава собаки, страдающей остеоартритом, почти до нормы. Способы могут включать в себя кормление собаки композицией, содержащей ЕРА в концентрации, по крайней мере, 0,2% по массе или, по крайней мере, 0,3% по массе.
Настоящее изобретение также может включать в себя способы снижения вероятности развития остеоартрита у собаки. Способы могут включать в себя кормление собаки композицией, содержащей ЕРА в концентрации, по крайней мере, 0,2% по массе или, по крайней мере, 0,3% по массе.
Способы по настоящему изобретению для восстановления функций сустава у собаки, страдающей остеоартритом, почти до нормы, могут также включать в себя кормление собаки композицией, основанной на композиции, включающей в себя жирно-кислотный компонент, содержащий достаточное для восстановления функции суставов количество ЕРА.
Способы по настоящему изобретению для снижения вероятности развития остеоартрита у собаки подобным образом могут включать в себя кормление собаки композицией, основанной на композиции, включающей в себя жирно-кислотный компонент, содержащий достаточное для восстановления функции суставов количество ЕРА.
Настоящее изобретение может также включать в себя способы снижения вероятности развития остеоартрита у собаки и способы восстановления функций сустава у собаки, страдающей остеоартритом, почти до нормы, включающие в себя введение в организм собаки композиции, содержащей количество ЕРА около 37,5 мг/кг массы тела, около 56,25 мг/кг массы тела, около 75 мг/кг массы тела или около 93,75 мг/кг массы тела. Такие композиции могут быть включены в состав композиции корма животного, лакомства или добавки к корму животного.
В различных вариантах осуществления, способы восстановления функций сустава у собаки, страдающей остеоартритом, почти до нормы, могут включать в себя лечение заболевания или ослабление симптомов заболевания у собаки и способы снижения вероятности развития остеоартрита у собаки могут включать в себя профилактику развития остеоартрита у собаки или профилактику или ослабление проявления симптомов заболевания у собаки.
Способы по настоящему изобретению дополнительно могут быть основаны на составах, которые дополнительно содержат омега-6 жирные кислоты, общее количество которых составляет не более 3 массовых %, и/или отношение омега-6 жирных кислот к омега-3 жирным кислотам составляет приблизительно 0,2 приблизительно к 1,1, и/или отношение омега-6 жирных кислот к ЕРА приблизительно 1,0 приблизительно к 12,5.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Настоящее изобретение может включать в себя введение омега-3 жирных кислот, в частности ЕРА при лечении остеоартрита и симптомов подобных заболеваний у млекопитающих, в частности у собак.
1
30
1
6
Омега-3 жирные кислоты, также известные как n-3 жирные кислоты, принадлежат к группе полиненасыщенных жирных карбоновых кислот. В большинстве случаев омега-3 жирные кислоты содержат 12-26 атомов углерода с двойной связью. Физиологически более важными являются омега-3 жирные кислоты, содержащие 18-22 атомов углерода с неразветвленной цепью. n-3 жирные кислоты содержат двойную связь между 3 и 4 атомами углерода от метилового конца молекулы. Эйкозопентаеновая кислота (ЕРА), докозагексаеновая кислота (DHA) и альфа-линоленовая кислота (ALA) являются n-3 жирными кислотами, имеющими большое значение при лечении остеоартрита у млекопитающих, и ЕРА в частности имеет большое значение при лечении остеоартрита у собак. Производные омега-3 жирных кислот также могут быть использованы при лечении остеоартрита. Специалисту в данной области хорошо известны многие виды производных омега-3 жирных кислот. Примерами подходящих производных являются зфиры, например разветвленные или неразветвленные и/или насыщенные или ненасыщенные C-С циклоалкиловые эфиры, в частности C-C алкиловые эфиры омега-3 жирных кислот, в особенности ЕРА.
Омега-3 жирные кислоты, и в частности ЕРА, могут быть введены в организм млекопитающего, в частности собаки, с помощью различных путей введения, например перорально, интраназально, внутривенно, подкожно и тому подобное. Особенно удобным является пероральный путь введения, и ЕРА может быть введена перорально в составе жидкого или сухого рациона питания, либо включена в композицию рациона, либо нанесена на поверхность любого компонента рациона, например путем распыления на поверхность, спекания, напыления или преципитацией на поверхность. ЕРА может быть представлена непосредственно в пищевом рационе или в составе легкой закуски, в пищевой добавке или лакомстве. ЕРА также может присутствовать в жидкостной части рациона, например в воде, или другой жидкости. ЕРА может быть применена в виде порошка, твердом виде или жидкой форме, включая гель. При желании, ЕРА может быть введена в организм перорально в форме нутрицевтика или фармацевтического препарата как, например, капсулы, таблетки, таблетки в форме капсулы, введена с помощью шприца и тому подобное. В составе лекарственной формы ЕРА может присутствовать в порошкообразном виде или жидком виде, например гелеобразном. Вместе с ЕРА может использоваться любой обычный нутрицевтический или фармацевтический наполнитель, например вода, глюкоза, сахароза и тому подобное.
В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение может включать в себя композиции ЕРА-рационов, по существу не содержащих DHA и/или ALA. Существенно свободная композиция от DНА или ALA или их смеси означает, что или ALA, или DHA, или обе кислоты вместе, в основном отсутствуют или они находятся только в малых незначительных количествах, например приблизительно менее 0,01%, приблизительно менее 0,03% или приблизительно менее 0,001%. В вариантах осуществления, в которых по существу отсутствуют DHA и/или ALA, любые количества DHA и/или ALA представлены в достаточно низких концентрациях, не вызывающих существенных воздействий на течение болезни у собак, страдающих остеоартритом, на прогрессирование остеоартрита или симптомов этого заболевания.
Омега-3 жирные кислоты и, в частности, ЕРА являются эффективными при различных формах остеоартрита, так же как других формах артрита, включая ревматоидный артрит.
Омега-3 жирная кислота ЕРА действует профилактически в отношении развития дегенеративного процесса в суставном хряще или снижает дегенеративный процесс и таким образом улучшает состояние сустава у собак, страдающих остеоартритом, или у собак, у которых иначе мог бы развиться остеоартрит. Этот эффект является дополнительным к противовоспалительному действию омега-3 жирных кислот, который может быть менее значимым при остеоартрите собак из-за ограниченного вовлечения воспаления в развитие остеоартрита.
Применение in vitro процедуры выращивания эксплантата, включающего в себя хрящ коленного сустава, как показано далее в примерах, демонстрирует, что ЕРА является единственной омега-3 жирной кислотой, которая существенно снижает индуцированную секрецию гликозаминогликана (GAG) из хряща. Относительно профилактики повреждения суставов остеоартритом конкретная целевая группа домашних животных, особенно собаки, является группой, которая особенно нуждается в такой профилактике в отличие от популяции в целом. Например, домашние животные, в частности собаки крупных пород, таких как лабрадор-ретривер, ротвейлер, немецкая овчарка и тому подобное, являются наиболее подверженными остеоартриту, что демонстрируется большой частотой распространения заболевания среди этих домашних животных. Кроме того, остеоартрит значительно распространен у домашних животных старше шести (6) лет, особенно у собак. ЕРА можно дополнительно использовать при лечении остеоартрита у собак и кошек. Также вместе с ЕРА могут присутствовать другие омега-3 жирные кислоты, такие как DHA и ALA, а также омега-6 жирные кислоты, все они обнаруживаются в относительно больших количествах в таком источнике, как рыбий жир.
Количество используемой ЕРА может существенно варьировать. Как показано далее в примерах, соблюден фактический эффект дозы - чем больше количество ЕРА, тем больше противоартрический эффект. Как правило, минимум, по крайней мере, около 0,2% по массе, исходя из количества питательных веществ в рационе, удовлетворяет обычным ежедневным потребностям собаки или кошки. Например, определенное количество может присутствовать в обычном ежедневном пищевом рационе, или то же самое количество может быть обеспечено животному в составе лакомства или добавки к корму. Дополнительно, комбинация таких способов или любых других способов дозировки может применяться, пока обеспечивается эффективное количество ЕРА. Диапазон количества ЕРА охватывает по крайней мере примерно от 0,2%, по крайней мере примерно от 0,25%, по крайней мере примерно от 0,30%, по крайней мере примерно от 0,4%, по крайней мере примерно от 0,5%, по крайней мере примерно от 0,6% приблизительно до 2%, приблизительно до 2,25%, приблизительно до 2,5%, приблизительно до 3%, приблизительно до 4% или приблизительно до 5% по массе. Следует указать, что все проценты по массе рассчитываются исходя из массы сухого вещества (DMB). ЕРА является омега-3 жирной кислотой. В большинстве случаев, отношение ЕРА или омега-3 жирной кислоты к омега-6 жирной кислоте может значительно варьировать. В ряде вариантов осуществления, отношение омега-6:омега-3 может быть в пределах приблизительно от 1,10 до 0,2 омега-6 к 1,0 омега-3 или приблизительно от 1,08 до 0,42 омега-6 к 1,0 омега-3, и конкретнее, приблизительно 0,2, приблизительно 0,25, приблизительно 0,3, приблизительно 0,4, приблизительно 0,5, приблизительно 0,6, приблизительно 0,8, приблизительно 1,0 или более. В различных вариантах осуществления, отношение омега-6 к ЕРА может быть примерно от 12,5 до 1,0 омега-6 к 1,0 ЕРА, или приблизительно от 12,4 до 1,12 омега-6 к 1,0 ЕРА и конкретнее, приблизительно 0,2, приблизительно 0,25, приблизительно 0,3, приблизительно 0,4, приблизительно 0,5, приблизительно 0,6, приблизительно 0,8, приблизительно 1,0, приблизительно 1,5, приблизительно 2,0, приблизительно 2,5, приблизительно 3, приблизительно 4, приблизительно 5, приблизительно 6, приблизительно 7,5, приблизительно 10, приблизительно 12,5 или более. Отношение арахидоновой кислоты, АА, (омега-6) к ЕРА может быть приблизительно от 0,28 до приблизительно 0,01 АА к 1,0 ЕРА, приблизительно от 0,28 до 0,08 АА к 1,0 ЕРА, и конкретнее, приблизительно 0,01, приблизительно 0,02, приблизительно 0,04, приблизительно 0,06, приблизительно 0,08, приблизительно 1,0, приблизительно 1,5, приблизительно 2,8 или более.
Омега-3 жирную кислоту, в частности ЕРА, можно применять в количестве, рассчитанном как мг/кг массы тела. Так, например, собаке с массой тела 20 кг желательно потреблять 275 г рациона. Содержание ЕРА в рационе приблизительно 0,2%, приблизительно 0,3%, приблизительно 0,4%, приблизительно 0,5% или приблизительно 0,6% по массе достигалось бы введением в организм собаки приблизительно 27,5 мг/кг массы тела, приблизительно 41,25 мг/кг массы тела, приблизительно 55 мг/кг массы тела, приблизительно 68,75 мг/кг массы тела или приблизительно 82,5 мг/кг массы тела соответственно. Конкретнее, ЕРА может быть введена в организм в количестве приблизительно 20 мг/кг массы тела, приблизительно 28 мг/кг массы тела, приблизительно 30 мг/кг массы тела, приблизительно 40 мг/кг массы тела, приблизительно 41 мг/кг массы тела, приблизительно 50 мг/кг массы тела, приблизительно 55 мг/кг массы тела, приблизительно 60 мг/кг массы тела, приблизительно 69 мг/кг массы тела, приблизительно 70 мг/кг массы тела, приблизительно 80 мг/кг массы тела, приблизительно 82 мг/кг массы тела, приблизительно 90 мг/кг массы тела, приблизительно 100 мг/кг массы тела, приблизительно 120 мг/кг массы тела, приблизительно 150 мг/кг массы тела или более.
Как отмечено выше, ЕРА может входить в состав корма, предусмотренного для домашнего животного. Примерами такого корма являются обычные рационы, обеспечивающие все нутриенты, необходимые животному, лакомства, добавки к корму и тому подобное. ЕРА может быть представлена в жидкой форме или в составе фармацевтических форм, таких как капсулы, таблетки, пилюли, жидкости или даже формах, вводимых в организм парентерально, например с помощью шприца. Самым важным аспектом является обеспечение домашнего животного эффективным количеством ЕРА для профилактики или лечения остеоартрита. В различных вариантах осуществления, путь введения может быть пероральным и ЕРА может входить в состав корма. В индустрии кормов для животных корма обычно классифицируются как «консервированные в заливке» и «сухие». Консервированный корм содержит довольно большое количество воды и обычно помещен в банку или контейнер, в котором существенно или полностью исключено содержание воздуха. Примерами такого корма являются «кусочек в соусе», отдельные твердые частицы в присутствии жидкого соуса или хлебоподобного продукта, который обычно принимает форму контейнера. Сухой корм представляет собой высушенный при нагревании или предпочтительно прессованный продукт, позднее нарезанный на индивидуальные порционные кусочки, обычно известные как крупные гранулы. ЕРА без труда можно ввести в состав консервированного корма с помощью удобных способов. Можно применять герметичную упаковку для предотвращения окисления ЕРА в составе сухого корма воздухом. Дополнительно, можно применять антиоксиданты и удалять азот из упаковки. Это представлено в патенте США №4895725, в котором особое внимание уделено микрокапсулированию рыбьего жира определенных видов рыб. К рыбам, чей жир содержит высокий уровень омега-3 жирных кислот, относятся менхаден (американская сельдь), лосось, треска и тому подобное.
Настоящее изобретение в различных вариантах осуществления также включает в себя способы, предусматривающие введение композиции, содержащей ЕРА, для уменьшения тяжести и частоты клинических проявлений остеоартрита и боли, связанной с этим заболеванием, без существенных побочных патологических реакций и побочных эффектов. Дополнительно, в различных вариантах осуществления, настоящее изобретение обеспечивает способ снижения клинического прогрессирования остеоартрита у животных. Также, в различных вариантах осуществления, предлагается способ, который существенно улучшает в целом течение остеоартрита у животного, это благоприятное воздействие может быть объективно оценено по увеличению весовой нагрузки на пораженные остеартритом конечности. Настоящее изобретение также обеспечивает способы, предусматривающие введение в организм ЕРА в комбинации с другими методами лечения остеоартрита, включающими в себя применение различных медикаментов и/или обеспечение животному рациона питания, оптимизирующего вес, оба метода известны в области применения изобретения.
ПРИМЕР 1
Этот пример иллюстрирует выделение гликозаминогликанов, вызванное омега-3 жирными кислотами в культуре хрящевой ткани собаки.
-6
Суставной хрящ получали из левого и правого коленных суставов (и бедренного сочленения, и верхней суставной поверхности большеберцовой кости) собак. Хрящевые эксплантаты, культивированные в течение 3 дней в среде, содержащей 10% эмбриональную бычью сыворотку, затем трижды отмывали средой, не содержащей сыворотку. Затем эксплантаты культивировали в течение 6 дней в среде без сыворотки, содержащей 0,100 или 300 мкг/мл n-3 жирную кислоту (ЕРА, ALA или DHA). После стадии культивирования в среде, содержащей жирную кислоту, все эксплантаты отмывали три раза в среде, свободной от жирной кислоты и сыворотки. Затем эксплантаты культивировали отдельно в течение 4 дней в 1 мл среды, свободной от жирной кислоты и сыворотки, без добавок (С), 10 М ретиноевой кислоты или 50 нг/мл онкостатина М (OSM). Необходимо заметить, что не все виды обработки были возможны для всех собак из-за доступности хряща. Высвобождение протеогликана в среде (мкг/мг сырого веса) измеряли в конце культивирования. В нижеприведенных таблицах представлены средние и стандартные отклонения высвобождения гликозаминогликана после тройного культивирования для каждой из четырех собак. Кроме того, представлены средние концентрации лактата (мкг/мг сырого веса) для каждой обработки.
ТАБЛИЦА 1.*
Собака 1,лечебная схема
GAC,среднее
GAC,стандартное отклонение
n
GAC, минимум
GAC, максимум
Лактат, среднее
Лактат,стандартное отклонение
С
1,363
0,497
3
0,849
1,84
26,07
33,7
С + носитель
1,630
0,306
3
1,31
1,92
21,95
22,6
С + 100 ЕРА
1,590
0,291
3
1,29
1,87
23,85
25,4
С + 300 ЕРА
1,036
0,528
3
0,57
1,61
NA**
RA
10,497
1,837
3
8,89
12,5
36
39,3
RA + носитель
7,15
4,527
3
2
10,5
33,067
45,4
RA + 100 EPA
8,677
1,999
3
6,61
10,6
29,367
34,8
RA + 300 EPA
1,593
1, 696
3
0,436
3,54
26,4
39,1
OSM
13,6
1,562
3
12,6
15,4
25,367
30,8
OSM + носитель
14,25
6,44
3
7,35
20,1
27,4
33,8
OSM + 100 EPA
6,293
2,301
3
4,34
8,8
33,567
52,5
OSM + 300 EPA
2,167
1,93
3
0,93
4,39
20,05
23,8
*GAG = гликозаминогликан; С = среда, свободная от сыворотки без добавок, ЕРА = эйкозапентаеновая кислота; RA = ретиноевая кислота; OSM = онкостатин М.
**не анализировали
Как показано в Таблице 1, существенное снижение высвобождения GAG происходило в присутствии 100 мкг/мл ЕРА в культурах, обработанных OSM, и в присутствии 300 мкг/мл ЕРА в культурах, обработанных OSM и RA. Не было отмечено существенного снижения средних концентраций лактата в присутствии любых доз ЕРА.
ТАБЛИЦА 2.*
Собака 2,лечебная схема
GAG, среднее
GAG,стандартное отклонение
n
GAG, минимум
GAG, максимум
Лактат, среднее
Лактат, стандартное отклонение
С + носитель
0,503
0,422
3
0,127
0,96
22,8
NA
С + 100 ЕРА
0,340
0,333
3
0,1
0,72
39,523
24,568
С + 300 ЕРА
0,573
0,46
3
0,250
1,1
39,2
13,865
OSM + носитель
11,7
5,11
3
7,1
17,2
26,9
4,766
OSM + 100 EPA
5,25
3,002
3
2,19
8,19
21,7
9,838
OSM + 300 EPA
2,83
0,229
3
2,66
3,09
16,233
3,602
С + носитель
0,973
0,222
3
0,84
1,23
17,4
NA
C + 100 DHA
0,640
0,312
3
0,45
1
21
6,265
C + 300 DHA
0,843
0,361
3
0,43
1,1
36,2
NA
OSM + носитель
8,73
0,777
3
8,1
9,6
25,333
7,106
OSM + 100 DHA
8,567
4,219
3
3,7
11,2
28,133
2,715
OSM + 300 DHA
6,073
4,029
3
3,18
10,7
24,8
1,947
С + носитель
0,821
0,684
3
0,193
1,55
15,567
1,955
C + 100 ALA
1,12
0,0,89
3
1,05
1,22
28,4
13,718
C + 300 ALA
0,993
1,104
3
0,14
2,24
41,667
14,958
OSM + носитель
7,81
7,471
3
0,26
15,2
51,7
28,488
OSM + 100 ALA
8,497
4,356
3
4,09
12,8
28,8
4,957
OSM + 300 ALA
6, 72
2,730
3
3,44
8,8
55,233
30,305
*GAG = гликозаминогликан; С = среда, свободная от сыворотки без добавок, ЕРА = эйкозапентаеновая кислота; RA = ретиноевая кислота; OSM = онкостатин М.
Как показано в Таблице 2, ЕРА, а не ALA или DHA, существенно снижала высвобождение GAG в культурах, обработанных OSM. Не отмечено существенного влияния на среднюю концентрацию лактата любой жирной кислоты в любой дозировке.
ТАБЛИЦА 3.*
Собака 3,лечебная схема
GAG,среднее
GAG,стандартное отклонение
n
GAG, минимум
GAG, максимум
Лактат, среднее
Лактат, стандартное отклонение
С + носитель
2,727
0,867
3
2,01
3,69
26,33
4,366
C + 100 ALA
2,117
0,428
3
1,81
2,61
24,4
3,995
C + 100 DHA
1,903
0,826
3
1,28
2,84
29,35
5,728
С + 100 ЕРА
1,673
0,409
3
1,3
2,11
36,1
NA
C + 300 ALA
2,447
0,321
3
2,14
2,18
20,75
7
C + 300 DHA
1,55
0,73
3
0,73
2,13
28,4
0,566
С + 300 ЕРА
1,567
0,387
3
1,3
2,01
10,525
10,854
RA + носитель
20,823
0,653
3
20,1
21,37
38,467
4,782
RA ++ 100 ALA
20,44
0,903
3
19,4
21,02
43,233
2,281
RA + 100 DHA
21,093
6,881
3
13,38
26,6
45,667
8
RA + 100 EPA
16,223
6,654
3
8,61
20,93
41,533
2,515
RA + 300 ALA
24,467
2,987
3
21,1
26,8
44,733
4,821
RA + 300 DHA
19,457
2,389
3
17,28
22
47,967
9,139
RA + 100 EPA
1,537
0,618
3
1,08
2,24
NA
NA
OSM + носитель
12,773
5,845
3
6,36
17,8
37,867
11,547
OSM - 100 ALA
22,033
4,596
3
18,4
27,2
32,767
1,815
OSM - 100 DHA
11,667
6,007
3
5,5
17,5
32,267
11,467
OSM - 100 EPA
17,85
2,051
3
16,4
19,3
39,05
11,526
OSM - 300 ALA
23,467
3,102
3
20,3
26,5
34,033
1,38
OSM - 300 DHA
11,630
5,069
3
6,79
16,9
30,0
5,963
OSM - 300 EPA
8,1
6,767
3
3,79
15,9
21,467
1,93
*GAG = гликозаминогликан; С = среда, свободная от сыворотки без добавок, ЕРА = эйкозапентаеновая кислота; RA = ретиноевая кислота; OSM = онкостатин М.
Как показано в Таблице 3, ни одна из жирных кислот существенно не влияет на высвобождение GAG из RA- или OSM-стимулированных хрящей у этих конкретных животных. Не выявлено никаких изменений среднего лактата в связи с любой дозировкой любой жирной кислоты.
ТАБЛИЦА 4.*
Собака 4,лечебная схема
GAC,среднее
GAC, стандартное отклонение
n
GAC, минимум
GAC, максимум
Лактат, среднее
Лактат, стандартное отклонение
С + носитель
1,96
0,533
3
1,51
2,55
22,933
4,75
C + 100 ALA
2,103
0,107
3
1,98
2,17
20,533
3,478
C + 100 DHA
2,343
0,331
3
2
2,66
19,1
2,352
С + 100 ЕРА
2,687
0,996
3
1,72
3,71
23
6,183
С + 300 ALA
1,533
1,244
3
0,13
2,5
29,167
22,074
C + 300 DHA
2,307
0,361
3
1,93
2,65
24,933
3,4
С + 300 ЕРА
2,1
0,455
3
1,64
2,55
24,767
13,004
RA + носитель
14,113
3,89
3
9,64
16,7
34,533
12,368
RA + 100 ALA
12,547
6,348
3
5,94
18,6
39,933
11,594
RA + 100 DHA
11,28
7,123
3
4,79
18,9
25,6
11,766
RA + 100 EPA
14,393
2,9
3
11,23
16,93
32,967
4,219
RA + 300 ALA
14,093
6,138
3
8,98
20,9
59,367
31,166
RA + 300 DHA
11,3
6,815
3
3,5
16,1
25,333
11,684
RA + 300 EPA
9,093
1,316
3
8,26
10,61
25,1
4,67
OSM + носитель
16,083
3,544
3
12,05
18,7
31,2
5,991
OSM + 100 ALA
11,7
2,19
3
9,43
13,8
26,333
9,25
OSM + 100 DHA
24,967
3,262
3
21,2
26,9
36,833
5,066
OSM + 100 EPA
15,883
4,316
3
11,95
20,5
27,237
6,34
OSM + 300 ALA
19,557
3,909
3
15,5
23,3
26,667
6,099
OSM + 300 DHA
16,4
6,27
3
9,4
21,5
36,233
20,342
OSM + 300 EPA
13,493
5,752
3
7,54
19,02
27,8
2,722
*GAG = гликозаминогликан; С = среда, свободная от сыворотки без добавок, ЕРА = эйкозапентаеновая кислота; RA = ретиноевая кислота; OSM = онкостатин М.
Как показано в Таблице 4, 300 мкг/мл ЕРА, а никакая другая жирная кислота в какой-либо дозировке, существенно снижает высвобождение GAG из культур, обработанных RA. Не выявлено существенного снижения средней концентрации лактата в контроле. Культуры, обработанные RA и OSM, предварительно обрабатывали 300 мкг/мл ЕРА OSM.
ПРИМЕР 2
В этом примере продемонстрировано включение n-3 жирных кислот в мембраны хондроцитов собаки.
Большинство из представленных экспериментов были выполнены с использованием однослойных культур, однако, в одном эксперименте было проанализировано включение жирных кислот в культуры хрящевых эксплантатов собаки.
Однослойные культуры.
Более 24 или 48 часов не отмечали включения 18 : 3 n-3 жирной кислоты ALA в мембраны хондроцитов двух собак. Процентное содержание 18 : 3 n-3 в хондроцитах, инкубированных в среде без добавок, было < 1 из 5 (диапазон 0,3-0,9%) и после 24 или 48 часов инкубации с добавлением 100 или 300 мкг/мл ALA, это процентное содержание существенно не изменилось (диапазон 0,3-2,5%).
Более чем через 48 часов было отмечено существенное включение 20 : 5 n-З жирной кислоты ЕРА в мембраны хондроцитов одной собаки. Процентное содержание 20:5 n-3 повысилось от < 1% (диапазон 0,2-0,6%) приблизительно до 7% (диапазон 5,6-8%) после обработки культур 100 или 300 мкг/мл ЕРА в течение 48 часов. Не было выявлено различий во включении ЕРА в мембраны хондроцитов при культивировании в присутствии или отсутствии 5% FCS.
Более чем через 48 часов было отмечено существенное включение 20 : 5 n-3 жирной кислоты ЕРА, но не 18 : 3 n-3 жирной кислоты ALA в мембраны хондроцитов одной собаки (дозировки 300 мкг/мл для каждой жирной кислоты). Процентное содержание 20:5 n-3 повысилось от < 1% приблизительно до 15%.
Более чем через 3 или 6 дней инкубации было отмечено существенное включение 20 : 5 n-3 жирной кислоты ЕРА мембраны хондроцитов одной собаки (дозировка 300 мкг/мл ЕРА). Процентное содержание 20 : 5 n-3 повысилось от < 1% до 16-18% без различия между 3 и 6 днями инкубации.
Культура эксплантата
Через 6 дней было отмечено несомненное включение 20:5 n-3 жирной кислоты ЕРА, но не 18:3 n-3 DHA или n-6 жирной кислоты АА (арахидоновая кислота) в хрящевые эксплантаты одной собаки (дозировки 300 мкг/мл для каждой жирной кислоты). Процентное содержание n-3 20 : 5 повысилось от 0% (неопределяемое) приблизительно до 2%.
Эти данные указывают на то, что ЕРА, но не другая n-3 жирная кислота, включалась в мембрану хондроцитов собаки или в однослойных культурах, или в культурах эксплантатов.
ПРИМЕР 3
В этом примере продемонстрировано действие n-2 жирных кислот на метаболизм хондроцитов собаки.
35
35
35
35
35
35
4
4
Для оценки потенциального действия n-3 жирных кислот на метаболизм белка и протеогликанов в хрящевой ткани собаки, были созданы культуры, как описано в Примере 1, за исключением последних 4 дней культивирования, не добавляли никакого стимулятора катаболизма (то есть все «контрольные» культуры). В течение последних 24 часов культивирования, в культуральную среду для радиометки вновь синтезированных протеогликанов и белков, добавляли (1)SO, или (ii) S-метионин и S-цистеин соответственно. Включение радиометки в хрящевую основу измеряли по окончании культивирования. Не было предпринято попытки провести количественный анализ потери радиомеченного материала в хряще сверх 24-часового периода после введения метки. Среднее и стандартное отклонение включения SO ("PG") или S-метионина, или S-цистеина ("PROT"), выраженные как DPM/мг сырого веса, представлены в Таблице 5 ниже.
ТАБЛИЦА 5.*
Лечебная схема
PG,среднее
PG,стандартное отклонение
N
PROT,среднее
PROT,стандартное отклонение
Носитель
292,667
53,144
3
574,333
198,336
100 ALA
246,333
100,779
3
503,667
184,218
100 DHA
156,0
82,529
3
503,667
81,365
100 ЕРА
537,333
161,81
3
442,0
72,746
300 ALA
443,0
205,385
3
393,667
34,962
300 DHA
123,333
38,24
3
564,333
220,048
300 ЕРА
275,667
161,661
3
504,0
44,542
*PG = включение <sup>35</sup>SO<sub>4</sub>, выраженное в DPM/мг сырого веса; PROT = включение <sup>35</sup>S-цистеина, выраженные как DPM/мг сырого веса; ЕРА = эйкозапентаеновая кислота; DHA = докозагексаеновая кислота; ALA = альфа-линоленовая кислота.
Как показано в Таблице 5, не было выявлено существенного влияния любой n-3 жирной кислоты на синтез белка и включение в хрящевую основу. ЕРА в дозировке 100 мкг/мл существенно повышала синтез и включение протеоглиганов. Никакие другие дозировки или жирные кислоты существенно не изменяли синтез протеогликанов и включение в хрящевую основу.
Для измерения уровней экспрессии мРНК протеиназ матрикса (аггреканазы-1 и аггреканазы-2), циклооксигеназы-1 и 2, липоксигеназы-5 и 12 и потенциальных аутокринных цитокинов и их рецепторов (например, IL-1, IL-6 и TNF) использовали метод ПЦР с обратной транскрипцией.
Результаты этого исследования показали, что мРНК аггреканазы-1 и аггреканазы-2 экспрессировались в «нормальной» хрящевой ткани собаки. Кроме того, у некоторых собак экспрессировалась мРНК циклооксигеназы-2 (СОХ-2), хотя у этих собак не было признаков патологии суставов. Это позволило контролировать эффекты добавления n-3 и n-6 жирных кислот на экспрессию мРНК аггреканаз и СОХ-2 в не стимулированных эксплатнтатах суставных хрящей собак. ЕРА была единственной жирной кислотой, способной снижать синтез мРНК ферментов деструкции, аггреканазы-1 и аггреканазы-2, в суставном хряще собаки. Это служит доказательством способности ЕРА «выключать» гены, ответственные за деградацию хряща.
ПРИМЕР 4
Это исследование демонстрирует эффекты омега-3 жирных кислот в клинических испытаниях остеоартрита собак.
Три клинических испытания проводили у собак с клиническим диагнозом остеоартрит. Ветеринары-терапевты и ветеринары-ортопеды регистрировали владельцев, чьи собаки удовлетворяли определенным критериям. Для всех пациентов было необходимо иметь радиографичекие признаки остеоартрита с заметными клиническими проявлениями заболевания, основанными на описаниях владельцев собак и объективных обследованиях ветеринарами; в остальном быть здоровыми и не страдать конкурирующими заболеваниями, что должно быть подтверждено объективным обследованием, общим анализом крови, биохимическим анализом крови и анализом мочи; поддерживать режим лечения при получении медикаментов или пищевых добавок, прописанных для лечения остеоартрита, в течение 30 дней до зачисления в список клинического исследования.
Были проведены следующие измерения.
3
Профиль жирной кислоты в сыворотке крови определяли методом газовой хромотографии, включая экстракцию жирных кислот с помощью фенольно-метанольной смеси (2:1), метилирование с использованием трехфтористого бор-метилового реагента (BF:MeOH) с последующим использованием плазменно-ионизационного детекора (FID). Метиловые эфиры жирных кислот определяли путем сравнения времен удержания с таковым известных стандартов и количественного анализа с использованием внутреннего стандарта.
Ветеринарная клиническая оценка: ветеринары проводили и физикальную оценку, и клиническую оценку собак с остеоартритом на протяжении скрининговой фазы и в заключение каждого периода кормления на протяжении курса клинического испытания. Ветеринары оценивали тяжесть пяти параметров остеоартрита: хромота, нежелание оказывать весовую нагрузку на поврежденную конечность, уменьшение диапазона движения, нежелание удерживать на весу контралатеральную конечность, и боль при пальпации сустава. Изменения в шкале тяжести для этих отдельных параметров измеряли на протяжении периода кормления. Всесторонняя ветеринарная клиническая оценка эффективности диетического воздействия на состояние остеоартрита у пациентов была получена путем объединения показателей тяжести всех пяти отдельных параметров.
Субъективная оценка владельцем домашнего животного: владельцам домашних животных было необходимо заполнить регистрационную анкету перед участием в исследовании и ответить на дополнительные вопросы по завершении каждого периода кормления на протяжении курса клинического испытания.
Регистрационный опросный лист - владельцы домашних животных оценивали наблюдаемую частоту и тяжесть наиболее общих проявлений остеоартрита у собак, включая затруднение при подъеме после отдыха, прихрамывание, неподвижность, болезненность при ощупывании, отставание во время прогулок, взвизгивание или скуление от боли, агрессивное поведение, затруднение при беге, затруднение при ходьбе, затруднение при преодолении подъема, затруднение при прыганиях, затруднение при игре, снижение подвижности и общего уровня активности. Кроме того, владельцы оценивали состояние остеоартрита в целом у своих домашних животных.
Опросный лист во время периодов кормления - владельцы домашних животных оценивали и частоту, и изменение тяжести проявлений остеоартрита у собак, оцененные при регистрации. Кроме того, владельцы оценивали у своих животных интенсивность боли, связанной с остеоартритом.
2
Анализ ходьбы по плите распределения нагрузки: собак тестировали в соответствующих институтах с использованием компьютеризированной биомеханической плиты распределения нагрузки в день 0, на 6 неделе и на 12 неделе. Плита была установлена по центру и вровень с поверхностью длиной пробега 10 метров. Проводчик пробегал с собаками через плиту распределения нагрузки, а наблюдатель оценивал каждое прохождение через плиту для подтверждения опоры на лапы и походки. Испытание считалось действительным, если были отличимые опоры на переднюю и заднюю конечности, расположенные на одной стороне, во время пробегания собакой через плиту распределения нагрузки со скоростью 1,7-2,0 м/сек, с изменением ускорения от -0,5 до 0,5 мс. В течение каждого испытания с использованием миллисекундометра и двух фотоэлектрических выключателей измеряли поступательную скорость собаки. Каждое испытание было записано на видеокассету для просмотра и подтверждения полноценных опираний на лапы. Такая мера предосторожности была предпринята для того, чтобы быть уверенным, что собака начала движение, таймер и согласованная скорость (воспринятая проводчиком и наблюдателем) поддерживались на протяжении каждого испытания.
Для каждой поврежденной конечности и каждой ипсолатеральной конечности каждой собаки были проведены пять полноценных испытаний для каждого периода тестирования. С помощью специализированной компьютерной программы были измерены и зарегистрированы ортогональное воздействие на грунт максимальной вертикальной силы, вертикальное усилие, максимальные сила торможения и толкающая сила, импульсы толчка и торможения (Acquire, Sharon Software, DeWitt, MI). Все силы были стандартизированы относительно массы тела в килограммах. Результаты полноценных испытаний для каждой конечности были усреднены для получения среднего значения для каждой силы или импульса в каждый временной период.
Данные воздействия на грунт сравнивали между экспериментальной группой и группой, получающей плацебо, как процентную разницу между поврежденной и ипсолатеральной конечностями в каждый период времени. Относительное изменение воздействия на грунт поврежденной конечности, выраженное в процентах, сравнивали в начале и по окончании периода кормления.
ИССЛЕДОВАНИЕ 1
Исследование собак проводили для того, чтобы оценить диетический эффект высоких дозировок n-3 жирных кислот у собак с диагнозом остеоартрит. Восемнадцать ветеринаров-терапевтов были временно наняты для регистрации пациентов в этом исследовании. Собаки общей численностью 131 особь случайным образом были распределены на две группы режима питания и продолжительностью кормления 180 дней. Экспериментальный и контрольный рационы имели схожее содержание макронутриентов, но имели существенное различие по составу жирных кислот (Таблица 6). Экспериментальный рацион содержал высокие уровни ALA, EPA и DHA и был составлен с низким отношением n-6 : n-3. Контрольный рацион представлял собой наиболее продаваемый коммерчески доступный корм для собак, с типичными уровнями n-3 жирных кислот и отношением n-6 : n-3, характерными для промышленности.
ТАБЛИЦА 6.*
Питательный состав рациона
Контрольный рацион (%)
Экспериментальный рацион (%)
Белок
23,2
19,9
Жир (общий)
13,9
13,6
CHO<sub>2</sub> (NFE)
54,7
53,3
С18 : 3 n-3 (ALA)
0,12
2,8
С20 : 4 n-6 (АА)
0,03
0,06
С20 : 5 n-3 (ЕРА)
< 0,01
0,38
С22 : 6 n-3 (DHA)
< 0,01
0,31
Sum n-6
1,99
2,53
Sum n-3
0,09
3,48
Отношение n-6 : n-3
22,8
0,7
*NFE = содержание растворимого углевода как экстракт, не содержащий азот; ALA = альфа-линоленовая кислота; АА = арахидоновая кислота; ЕРА = эйкозапентаеновая кислота; DHA = докозагексаеновая кислота
Определение содержания жирных кислот в сыворотке крови и оценка владельцами состояния домашних животных регистрировали в день 0, на 4 5, на 90 и на 180 день. Профили жирных кислот в сыворотке крови существенно изменились во время потребления экспериментального корма. Экспериментальная группа имела существенно более высокие концентрации n-3 жирных кислот (Р < 0,01), особенно ЕРА, DHA, a-ALA, существенно более низкие концентрации АА (Р < 0,01) и существенно более низкое отношение n-6 : n-3 (Р < 0,01) по сравнению с контрольной группой по окончании каждого периода кормления (Таблица 7). Экспериментальная группа показывала существенную положительную динамику при вставании после отдыха, при беге и игре на 45 день и при прогулке на 90 и 180 дни по сравнению с контрольной группой, как замечали хозяева домашних животных (Р < 0,05), даже при наличии существенного эффекта плацебо (Таблица 8).
ТАБЛИЦА 7.*
Среднее значение уровней содержания жирных кислит в сыворотке крови собак (мг/дл)
Группа
День 0
День 45
День 90
День 180
С18 : 3 n-3(α-ALA)
Control
1,10
0,89
0,52
0,53
Test
1,05
5,61
6,51
7,13
С20 : 4 n-6(АА)
Control
71,35
66,34
68,03
68,21
Test
64,32
45,90
46,13
42,65
С20 : 5 n-3(ЕРА)
Control
1,14
0,90
0,67
0,93
Test
1,28
16,28
18,64
19,94
С22 : 6 n-3(DHA)
Control
2,67
2,03
1,70
1,98
Test
2,93
11,31
12,24
12,17
Sum n-6
Control
141,08
138,72
137,85
140,28
Test
130,85
118,87
128,71
123,99
Sum n-3
Control
4,95
3,84
2,93
3,51
Test
5,36
33,20
37,39
39,24
Отношение n-6:n-3
Control
33,33
37,95
51,59
51,39
Test
33,90
7,47
8,63
6,92
*ALA = альфа-линоленовая кислота; АА = арахидоновая кислота; ЕРА = эйкозапентаеновая кислота; DHA = докозагексаеновая кислота
ТАБЛИЦА 8.*
Изменения тяжести проявления остеоартрита, наблюдаемые владельцами домашних животных
День 0-45
День 45-90
День 45-90
Клиническое проявление остеоартрита
группа
среднее
ЗначениеP
среднее
ЗначениеР
среднее
ЗначениеР
Подъем после отдыха
Control
1,77
0,41
1,77
nsd**
1,93
nsd**
Test
1,56
1,84
1,91
Бег
Control
1,81
0,37
1,83
nsd**
1,94
nsd**
Test
1,56
1,71
1,91
Ходьба
Control
1,71
nsd**
2,00
0,018
2,19
0,002
Test
1,69
1,71
1,75
Игра
Control
1,83
0,008
1,90
nsd**
2,06
nsd**
Test
1,50
1,78
1,97
*Шкала оценки тяжести остеоартрита: 1 = улучшение, 2 = без изменений, 3 = ухудшение
**nsd = без существенного различия
ИССЛЕДОВАНИЕ 2
Исследование собак проводили для оценки диетического эффекта при кормлении собак, страдающих остеоартритом, кормом, содержащим высокие уровни n-3 жирных кислот. Два ветеринара-ортопеда были временно наняты для регистрации пациентов в этом исследовании. Собаки общей численностью 38 особей случайным образом были распределены на две группы режима питания и продолжительностью кормления 90 дней. Экспериментальный и контрольный рационы были изготовлены из того же набора пищевых ингредиентов, как описано выше (Таблица 6).
Определение содержания жирных кислот в сыворотке крови, анализ ходьбы по плите распределения нагрузки и ветеринарные клинические оценки регистрировали в день 0, на 45 и на 90 день. Профили жирных кислот в сыворотке крови существенно изменились во время потребления экспериментального корма. Экспериментальная группа в сыворотке имела существенно более высокие концентрации n-3 жирных кислот (Р < 0,01), особенно ЕРА, DHA, ALA, существенно более низкие концентрации АА на 90 день(Р < 0,01) и существенно более низкое отношение n-6 : n-3 (Р < 0,01) по сравнению с контрольной группой по окончании каждого периода кормления (Таблица 9).
ТАБЛИЦА 9.*
Уровни содержания жирных кислот в сыворотке крови собак (мг/дл)
День О
День 45
День 90.
Жирные кислоты
группа
среднее
ЗначениеP
среднее
ЗначениеР
среднее
ЗначениеР
С18 : 3 n3(α-ALA)
Control
0,89
0,7764
0,34
< 0,0001
0,27
< 0,0001
Test
0,98
4,45
5,04
С20 : 4 n-6(АА)
Control
55,55
0,6880
50,78
0,0736
55,95
0,0001
Test
57,13
41,94
38,01
С20 : 5 n-3(ЕРА)
Control
1,19
0,7000
0,34
< 0,0001
0,20
< 0,0001
Test
1,54
11,52
11,89
С22 : 6 n-3(DHA)
Control
4,30
0,4323
1,82
< 0,0001
1,32
< 0,0001
Test
3,37
11,15
11,21
Sum n-6
Control
122,85
0,2508
112,46
0,0148
114,60
0,0036
Test
113,61
91,72
89,85
Sum n-3
Control
6,36
0,8335
2,57
< 0,0001
1,79
< 0,0001
Test
5,90
27,14
28,13
Отношение n-6 : n-3
Control
32,54
0,2521
66,66
< 0,0001
75,90
< 0,0001
Test
45,90
8,48
3,59
*ALA = альфа-линоленовая кислота; AA = арахидоновая кислота; ЕРА = эйкозапентаеновая кислота; DHA = докозагексаеновая кислота
Биомеханическая оценка наиболее серьезно поврежденной остеоартритом конечности собаки была проведена с помощью анализа ходьбы по плите распределения нагрузки (Таблица 10). Максимальная вертикальная сила является ключевым параметром, измеряемым для определения весовой нагрузки поврежденной конечности. Не было выявлено существенного изменения средней максимальной вертикальной силы на протяжении 90 дней кормления в контрольной группе (Р=0,91), в то время как было выявлено существенное увеличение средней максимальной вертикальной силы с течением времени в экспериментальной группе (Р=0,01). Процент среднего изменения максимальной вертикальной силы также существенно различался между группами (Р < 0,05), свидетельствуя о том, что в экспериментальной группе повысилась весовая нагрузка на поврежденную конечность, в то время как контрольная группа не продемонстрировала изменения весовой нагрузки на протяжении всего курса исследования. Возможность весовой нагрузки на конечность также может быть изображена как частота распределения процентного изменения вертикального пика для каждой группы режима питания. Только 31% животных из контрольной группы показали положительную динамику весовой нагрузки на конечность после 90 дней кормления, в то время как у 81% собак из экспериментальной группы увеличилась весовая нагрузка на конечность на протяжении курса исследования.
ТАБЛИЦА 10
Максимальная вертикальная сила
День 0
День 90
Изменение (день 0-90)
Группа
Среднее
ЗначениеР
Среднее
ЗначениеР
Среднее изменение
Среднее =0Pr > ltl
Среднее изменение
Pr > ltl
Control
72,80
0,5981
72,63
0,9323
-0,17
0,9144
-0,58
0,0443
Test
69,51
73,21
3,71
0,0103
5,35
Субъективные клинические оценки ветеринаров-ортопедов-хирургов обеспечили дополнительную поддержку эффективности экспериментального рациона. На основании всесторонней ветеринарной клинической оценки был выявлен существенно более высокий процент клинического улучшения у собак, получавших экспериментальный рацион по сравнению с собаками из контрольной группы (Р < 0,05). Также ветеринары наблюдали более высокий процент собак в экспериментальной группе, демонстрирующих уменьшение боли при пальпации сустава, по сравнению с контрольной группой (Р=0,05).
ИССЛЕДОВАНИЕ 3
Исследование собак проводили для оценки эффекта дозы при кормлении собак, страдающих остеоартритом, кормом, содержащим высокие уровни n-3 жирных кислот. Двадцать восемь ветеринаров-терапевтов были временно наняты для регистрации пациентов в этом исследовании. Группа собак общей численностью 177 особей случайным образом были распределены на три группы режима питания и продолжительностью кормления 90 дней. Приблизительно две трети собак, принимавших участие в исследовании, получали медикаментозное лечение и/или добавки к корму, предписанные для лечения остеоартрита, в дополнение к исследуемым потребляемым лечебным рационам питания. Три экспериментальных рациона были схожи по макронутриентному составу, но отличались по композиции ЕРА и DНА, рацион А содержал самые низкие уровни, а рацион С содержал самые высокие уровни этих жирных кислот (Таблица 11).
ТАБЛИЦА 11.*
Тест на вариабельность %
Питательный состав рациона
А
В
С
Белок
19,97
19,51
19,37
Жир (общий)
13,78
15,34
19,55
CHO<sub>2</sub> (NFE)
53,92
52,34
47,66
С18 : 3 n-3 (ALA)
2,65
1,18
1,10
С20 : 4 n-6 (АА)
0,11
0,18
0,24
С20 : 5 n-3 (ЕРА)
0,50
1,18
1,69
С22 : 6 n-3 (DHA)
0,34
0,80
1,15
Sum n-6
2,70
2,45
2,14
Sum n-3
3,54
3,53
4,52
Отношение n-6 : n-3
0,76
0,7
0,47
*NFE = содержание растворимого углевода как экстракт, не содержащий азот; ALA = альфа-линоленовая кислота; АА = арахидоновая кислота; ЕРА = эйкозапентаеновая кислота; DHA = докозагексаеновая кислота
Определение содержания жирных кислот в сыворотке крови, оценку владельцев домашних животных и ветеринарную клиническую оценку регистрировали в день 0, на 21, на 4 5 и на 90 день. Профили жирных кислот в сыворотке крови существенно изменились во время потребления всех вариантов рациона. По окончании каждого периода кормления собаки, потреблявшие экспериментальные рационы, вариант В и С, имели существенно более высокие концентрации n-3 жирных кислот в сыворотке крови (Р < 0,01), особенно ЕРА, DHA, ALA, существенно более низкие концентрации n-6 жирных кислот, особенно АА (Р < 0,01), и существенно более низкое отношение n-6 : n-3 (Р < 0,01) по сравнению с собаками, получавшими экспериментальный рацион варианта А (Таблица 12).
ТАБЛИЦА 12*
Уровни содержания жирных кислот в сыворотке крови собак (мг/дл)
День 0
День 21
День 45
День 90
Жирные кислоты
Группа
Среднее
Среднее
Среднее
Среднее
С18 : 3 n-3 (α-ALA)
А
1,34
5,65
5,29
5,63
В
1,29
3,36
3, 99
3,82
С
1,25
2,92
3,32
3,29
С20 : 4 n-6 (АА)
А
76,37
51,10
47,54
47,77
В
73,15
41,55
38,94
37,0
С
70,05
37,35
36,86
34,73
С20 : 5 n-3 (ЕРА)
А
1,32
18,74
18,51
19,26
В
1,54
26,14
29,87
30,03
С
1,85
34,42
35,71
39,04
С22 : 6 n-3 (DHA)
А
3,50
13,75
13,84
13,88
В
4,72
18,47
19,98
20,16
С
3,91
21,01
21,47
22,49
Sum n-6
А
150,38
114,38
110,12
112,70
В
143,93
93,83
95,87
92,10
С
139,97
79,71
82,65
80,74
Sum n-3
А
6,16
38,14
37,65
38,77
В
7,55
47,96
53,84
54,01
С
7,01
58,35
60,50
68,83
Отношение n-6:n-3
А
29,99
5,65
3,48
3,75
В
28,09
3,36
1,92
1,79
С
32,30
2,92
2,02
1,73
*ALA = альфа-линоленовая кислота; АА = арахидоновая кислота; ЕРА = эйкозапентаеновая кислота; DHA = докозагексаеновая кислота
Владельцы домашних животных отмечали положительную динамику 13 из 14 отдельных клинических проявлений остеоартрита у собак, получавших любой из вариантов экспериментального рациона на протяжении 21 дней (Таблица 13). Кроме того, владельцы домашних животных отмечали уменьшение тяжести 13 из 14 отдельных клинических проявлений у собак, получавших любой из вариантов экспериментального рациона на протяжении 90 дней (Таблица 14). Также, владельцы домашних животных отмечали существенное уменьшение частоты заметных клинических проявлений остеоартрита, после того как собаки получали любой из вариантов экспериментального рациона на протяжении 90 дней (Таблица 15).
ТАБЛИЦА 13
Положительная динамика клинических проявлений остеоартрита, наблюдаемая владельцами домашних животных (день 0-21)
Клиническое проявление остеоартрита
Рацион
Среднее
Среднее = 0 Pr>ltl
Клиническое проявление остеоартрита
Рацион
Среднее
Среднее = 0 Pr>ltl
Подъем после отдыха
А
-0,439
0,0002
Бег
А
-0,524
0,0004
В
-0,738
< 0,0001
В
-0,682
< 0,0001
С
-0,763
< 0,0001
С
-0,674
< 0,0001
Прихрамывание
А
-0,720
< 0,0001
Хотьба
А
-0,553
0,0007
В
-0,731
< 0,0001
В
-0,750
< 0,0001
С
-0,837
< 0,0001
С
-0,667
< 0,0001
Неподвижность
А
-0,537
< 0,0001
Подъем по лестнице
А
-0,449
0,0012
В
-0,783
< 0,0001
В
-0,667
< 0,0О01
С
-0,627
< 0,0001
С
-0,723
< 0,0001
Болезненность
А
-0,750
0,0005
Прыгание
А
-0,362
0,0049
В
-0,800
0,0002
В
-0,600
< 0,0001
С
-0,379
0,0451
С
-0,542
< 0,0001
Отстаивание во время прогулки
А
-0,564
0,0004
Игра
А
-0,622
< 0,0001
В
-0,909
< 0,0001
В
-0,763
< 0,0001
С
-0,531
0,0022
С
-0,487
0,0014
Боль
А
-0,476
0,0245
Снижение подвижности
А
-0,528
0,0005
В
-0,478
0,0184
В
-0,700
< 0,0001
С
-0,889
0,0002
С
-0,564
0,0001
Агрессивность
А
0,000
1,0000
Уровень активности
А
-0,745
< 0,0001
В
-0,313
0,1050
В
-0,857
< 0,0001
С
-0,429
0,1401
С
-0,865
< 0,0О01
Вышеприведенные значения «р» относятся к среднему изменению со дня 0 по 21 день.
ТАБЛИЦА 14
Различия в оценке тяжести владельцами домашних животных (день 0-90)
Клиническое проявление остеоартрита
Группа
Среднее
Pr > t
Клиническое проявление остеоартрита
Рацион
Среднее
Pr > t
Подъем после отдыха
А
-0,463
< 0,0001
Бег
А
-0,579
< 0,0001
В
-0,633
< 0,0001
В
-0,558
< 0,0001
С
-0,518
< 0,0001
С
-0,605
< 0,0001
Прихрамывание
А
-0,489
0,0003
Хотьба
А
-0,294
0,0358
В
-0,588
< 0,0001
В
-0,643
< 0,0001
С
-0,681
< 0,0001
С
-0,595
< 0,0001
Неподвижность
А
-0,255
0,0420
Подъем по лестнице
А
-0,419
0,0024
В
-0,483
< 0,0001
В
-0,489
0,0002
С
-0,589
< 0,0001
С
-0,689
< 0,0001
Болезнен
А
-0,810
< 0,0001
Прыгание
А
-0,571
0,0003
В
-0,920
< 0,0001
В
-0,479
0,0011
С
-0,926
< 0,0001
С
-0,773
< 0,0001
Отстаивание во время прогулки
А
-0,657
< 0,0001
Игра
А
-0,606
0,0002
В
-0,531
0,0014
В
-0,571
0,0003
С
-0,448
0,0094
С
-0,694
< 0,0001
Боль
А
-0,684
0,0002
Прихрамывание
А
-0,484
0,0045
В
-0,571
0,0009
В
-0,778
< 0,0001
С
-0,667
0,0010
С
-0,667
< 0,0001
Агрессивность
А
-0,750
0,0234
Уровень активности
А
-0,409
0,0009
В
-1,000
0,0025
В
-0,704
< 0,0001
С
-1,000
0,0751
С
-0,551
< 0,0001
Вышеприведенные значения «р» относятся к среднему изменению со дня 0 по 90 день.
На основании ветеринарных клинических осмотров у собак, получавших n-3 жирные кислоты в более высоких дозировках, отмечалась более существенная положительная динамика остеоартрита и более существенное снижение прогрессирования остеоартрита по сравнению с собаками, получавшими малые дозы n-3 жирных кислот (Таблица 16). Не было выявлено существенного отличия в положительной динамике остеоартрита или снижения прогрессирования остеоартрита между группой, получавшей медикаментозное лечение и/или добавки к корму и группой, не получавшей медикаментозное лечение (Таблица 17). Это указывает на то, что лечебные диеты работают синергично с другими видами лечения или, по крайней мере, не противопоставлены другим видам лечения, обеспечивая дополнительную пользу собакам, страдающим остеоартритом.
Была отмечена чрезвычайно низкая частота возникновения неблагоприятных патологических реакций или побочных эффектов у собак, принимавших участие в этом исследовании. Только у 5 собак из 215 животных, употреблявших рационы, были отмечены диарея и тошнота, что, возможно, объясняется приемом одной из составляющих рационов. Схожие частоты возникновения неблагоприятных реакций и побочных эффектов были отмечены у собак, получавших лечебные рационы питания, которые были обсуждены в предыдущих двух исследованиях (1/88 и 1/26 для примеров 1 и 2 соответственно).
ТАБЛИЦА 15
Различия в оценке частоты владельцами домашних животных (день 0-90)
Клиническое проявление остеоартрита
Группа
Среднее
Pr > t
Клиническое проявление остеоартрита
Рацион
Среднее
Pr > t
Подъем после
А
-0,370
< 0,0001
Прихрамывание
А
-0,239
< 0,0165
отдыха
В
-0,467
< 0,0001
В
-0,365
< 0,0001
С
-0,509
< 0,0001
С
-0,396
< 0,0001
Неподвижность
А
-0,098
0,2929
Отставание во время прогулки
А
-0,571
< 0,0001
В
-0,373
< 0,0001
В
-0,643
< 0,0001
С
-0,421
< 0,0001
С
-0,500
0,0004
Болезненность
А
-0,381
0,0146
Агрессивность
А
-0,417
0,0536
В
-0,680
< 0,0001
В
-0,467
0,0175
С
-0,821
< 0,0001
С
-0,167
0,5741
Бег
А
-0,447
0,0004
Хотьба
А
-0,206
0,0911
В
-0,395
0,0009
В
-0,558
< 0,0001
С
-0,477
< 0,0001
С
-0,447
0,0002
Прыгание
А
-0,357
0,0027
Подъем по лестнице
А
-0,302
0,0069
В
-0,354
0,0015
В
-0,348
0,0014
С
-0,467
< 0,0001
С
-0,457
< 0,0001
Игра
А
-0,455
0,0013
Снижение подвижности
А
-0,250
0,0643
В
-0,297
0,0238
В
-0,436
0,0005
С
-0,667
0,0010
С
-0,667
< 0,0001
Таблица 16
Положительная динамика остеоартрита
Общее изменение в состоянии остеоартрита
Рацион
N
Среднее
Р
Рацион
N
Среднее
Р
А
55
2,327
0,2891
A vs B
А
54
3,148
0,1675
A vs B
В
62
2,177
0,1619
B vs C
В
62
2,871
0,0787
B vs C
С
59
1,983
0,0168
A vs C
С
59
2,525
0,0024
A vs C
Таблица 17
Положительная динамика остеоартрюта
Общее изменение в состоянии остеоартрита
Рацион
Применение лекарственного средства
N
Среднее
Р
Рацион
Применение лекарственного средства
N
Среднее
Р
А
Нет
22
2,273
А
Нет
21
3,143
0,6665
0,9770
А
Да
33
2,364
А
Да
33
3,152
В
Нет
23
2,130
В
Нет
23
2,696
0,7109
03247
В
Да
39
2,205
В
Да
39
2,974
С
Нет
28
2,071
С
Нет
28
2,750
0,4003
0,1285
С
Да
31
1,903
С
Да
31
2323
Все документы, цитируемые в данном описании, включены здесь в качестве ссылки. Любое обсуждение цитируемых документов здесь предназначено только для обобщения объема притязаний, сделанных авторами изобретения, и не сделано никаких предположений, что какая-нибудь ссылка или ее часть составляет релевантный предшествующий уровень техники. Заявители оставляют за собой право оспаривать точность и уместность цитируемых ссылок.
Описание изобретения по своему характеру является лишь иллюстративным, и, таким образом, варианты, которые не отклоняются от сущности изобретения, входят в объем данного изобретения. Такие варианты не должны рассматриваться как отклонение от сущности и объема данного изобретения.