СТРУКТУРЫ МИРНК С ВЫСОКОЙ АКТИВНОСТЬЮ И СНИЖЕННЫМ ВОЗДЕЙСТВИЕМ ВНЕ МИШЕНИ
MIRNA STRUCTURES WITH HIGH ACTIVITY AND REDUCED EXPOSURE OUTSIDE THE TARGET

ТЕХНИЧЕСКАЯ ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0001] Данное изобретение относится к области биофармацевтических и терапевтических средств, состоящих из молекул на основе нуклеиновых кислот. Более конкретно, данное изобретение относится к структурам соединений, использующих РНК-интерференцию (RNAi) для модулирования экспрессия генов, и к их использованию.
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[0002] Данная заявка содержит список последовательностей, поданный в электронной форме в виде ASCII файла, созданного 18 апреля 2018 года, с названием Списки последовательностей.txt, который имеет размер 183581 байт и включен, таким образом, посредством ссылки в полном объеме.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0003] РНК-интерференцию (RNAi) использовали у животных для посттранскрипционного сайленсинга генов со специфической последовательностью, опосредованного малыми интерферирующими РНК (миРНК). См., например, Zamore et al., Cell, 2000, том 101, стр. 25-33; Fire et al., Nature, 1998, том 391, стр. 806811; Sharp, Genes & Development, 1999, том 13, стр. 139-141.
[0004] Ответ RNAi в клетках можно запускать с помощью двухцепочечной РНК (дцРНК), несмотря на то, что механизм еще не понят полностью. В целом, миРНК может составлять приблизительно от 21 приблизительно до 23 нуклеотидов в длину и содержать область дуплекса из пар оснований приблизительно 19 нуклеотидов в длину.
[0005] В RNAi вовлечен эндонуклеазный комплекс, известный как РНК-индуцированный комплекс сайленсинга (RISC). миРНК имеет антисмысловую или направляющую цепь, которая попадает в RISC комплекс и опосредует расщепление одноцепочечной РНК мишени, имеющей последовательность, комплементарную антисмысловой цепи миРНК дуплекса. Другая цепь миРНК представляет собой сопровождающую цепь. Расщепление РНК мишени происходит в середине области, комплементарной антисмысловой цепи миРНК дуплекса. См., например, Elbashir et al., Genes & Development, 2001, том 15, стр. 188-200.
[0006] Чтобы усовершенствовать свойства миРНК соединений для применения в качестве лекарственных средств, структуру миРНК соединений модифицировали различными способами для усовершенствования стабильности и снижения эффектов вне мишени. Активность миРНК вне мишени включает модуляцию клеточных нуклеиновых кислот, отличных от целевой РНК, которая может происходить через различные механизмы.
[0007] Модификации миРНК соединений включают структурные вариации их основания, сахара и/или остова любых из нуклеотидов. Один путь модификации миРНК нуклеотидов состоит в замене определенных рибонуклеотидов в миРНК на дезоксинуклеотиды. В частности, дезоксинуклеотиды часто используют в липких концах или концевых нуклеотидах миРНК структуры.
[0008] Однако недостаток использования дезоксинуклеотидов в миРНК структуре состоит в том, что дезоксинуклеотиды нельзя использовать в области затравки миРНК. Это обусловлено тем, что такая модификация миРНК не является благоприятной по причине снижения активности сайленсинга генов.
[0009] Существует острая необходимость в RNAi структурах для модулирования экспрессия генов, которые снижают действие вне мишени без потери активности.
[0010] В частности, для терапевтических средств на основе RNAi супрессии онкогенов и генов, связанных со злокачественными опухолями, необходимые высоко активные и стабильные последовательности и структуры миРНК.
[0011] Необходимы соединения миРНК с высоко активной структурой для модулирования экспрессии гена.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ
[0012] Данное изобретение относится к соединениям, композициям и способам модулирования экспрессии генов-мишеней с использованием РНК-интерференции. миРНК соединения и структуры по данному раскрытию могут быть высоко активны при модулировании экспрессии гена.
[0013] RNAi структуры по данному изобретению можно использовать для модулирования экспрессии генов с удивительно высокими уровнями активности и сниженным действием вне мишени.
[0014] В некоторых вариантах осуществления данное изобретение предусматривает молекулы для сайленсинга генов посредством РНК-интерференции, которые снижают действие вне мишени, без потери активности.
[0015] В дополнительных вариантах осуществления данное изобретение предусматривает молекулы для сайленсинга генов посредством РНК-интерференции, которые снижают действие вне мишени, с неожиданно высокой активностью сайленсинга генов.
[0016] RNAi молекулы по данному изобретению могут предусматривать высоко активные и стабильные миРНК структуры, которые можно использовать для терапевтических средств на основе RNAi супрессии генов.
[0017] В дополнительных вариантах осуществления структуры, молекулы и композиции по данному изобретению можно использовать в способах предотвращения или лечения заболеваний или улучшения симптомов состояний или нарушений, связанных с одним или более генами.
[0018] Варианты осуществления данного изобретения включают следующее:
[0019] Молекула нуклеиновой кислоты, где:
a) молекула имеет полинуклеотидную смысловую цепь и полинуклеотидную антисмысловую цепь;
b) каждая цепь молекулы составляет от 15 до 30 нуклеотидов в длину;
c) непрерывная область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи комплементарна последовательности мРНК;
d) по меньшей мере часть смысловой цепи комплементарна по меньшей мере части антисмысловой цепи, и молекула имеет область дуплекса от 15 до 30 нуклеотидов в длину, где один или более нуклеотидов в области дуплекса в положениях с 3 до 8 от 5'-конца антисмысловой цепи представляют собой дезоксинуклеотиды. мРНК может представлять собой мРНК человека.
[0020] В некоторых вариантах осуществления антисмысловая цепь молекулы нуклеиновой кислоты может иметь дезоксинуклеотиды во множестве положений, множество положений представляет собой одно из следующего:
каждое из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи;
каждое из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи;
каждое из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи;
каждое из положений 3-8 от 5'-конца антисмысловой цепи; и
каждое из положений 5-8 от 5'-конца антисмысловой цепи.
[0021] Молекулы нуклеиновой кислоты могут представлять собой RNAi молекулы, которые активны при модулировании экспрессии мРНК.
[0022] В определенных вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты могут быть активны при ингибировании экспрессии гена, выбранного из кодирующих белок генов, протоонкогенов, онкогенов, генов-супрессоров опухолей и генов клеточной сигнализации.
[0023] В дополнительных вариантах осуществления мРНК может представлять собой мРНК человека, экспрессирующую любой элемент или подэлемент семейства белков человека, включая SRY, β-глобин, RAS, цитозольную GST, митохондриальную GST, MAPEG GST, GST-π, p16, p21, p53, сывороточный альбумин, коллаген VII типа, C3 комплемента, аполипопротеин B, фенилаланингидроксилазу, фактор VIII, гентингтин, белок ретинобластомы RB1, CFTR, титин, атрофин и дистрофин.
50
[0024] Молекулы нуклеиновой кислоты могут иметь IC для нокдауна мРНК меньше 100 пМ, или меньше 50 пМ, или меньше 10 пМ. В определенных вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты могут ингибировать мРНК по меньшей мере на 25% in vivo после одного введения молекул.
[0025] В некоторых вариантах осуществления каждая цепь молекулы составляет от 18 до 22 нуклеотидов в длину. Область дуплекса может составлять 19 нуклеотидов в длину. В определенных вариантах осуществления полинуклеотидную смысловую цепь и полинуклеотидную антисмысловую цепь можно соединять в виде одной цепи и формировать область дуплекса, соединенную на одном конце с помощью петли.
[0026] Молекулы нуклеиновой кислоты могут иметь тупой конец. В определенных вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты могут иметь один или более 3' липких концов.
[0027] Варианты осуществления данного изобретения включают молекулы нуклеиновой кислоты, имеющие один или более нуклеотидов в области дуплекса, которые модифицированы или химически модифицированы. Модифицированные или химически модифицированные нуклеотиды могут представлять собой 2′-O-алкилзамещенные нуклеотиды, 2′-дезокси-2′-фторзамещенные нуклеотиды, фосфотиоатные нуклеотиды, замкнутые нуклеотиды или любое их сочетание.
[0028] Это изобретение, кроме того, предусматривает фармацевтические композиции, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты и фармацевтически приемлемый носитель. Носитель может представлять собой липидную молекулу или липосому.
[0029] Варианты осуществления данного изобретения, кроме того, включают вектор или клетку, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты.
[0030] Это изобретение также предусматривает способы предотвращения, лечения или улучшения заболевания у субъекта, нуждающегося в сайленсинге генов, посредством введения субъекту композиции, содержащей молекулы нуклеиновой кислоты. Заболевание может представлять собой злокачественную опухоль, саркому или карциному.
[0031] Варианты осуществления данного изобретения включают использование композиции молекул нуклеиновой кислоты для предотвращения, улучшения или лечения заболевания или состояния у субъекта, нуждающегося в этом.
[0032] В определенных вариантах осуществления композиция по данному изобретению может быть для использования в медицинской терапии.
[0033] В дополнительных вариантах осуществления композиция по данному изобретению может быть для использования в лечении организма человека или животного.
[0034] В дополнительных вариантах осуществления композиция по данному изобретению может быть для получения или изготовления лекарственного средства для предотвращения, улучшения или лечения заболевания или состояния у субъекта, нуждающегося в этом.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
[0035] Фиг. 1: на фиг. 1 показано выраженное снижение ортотопических опухолей из злокачественной опухоли легких in vivo с помощью миРНК по данному изобретению, направленных на GST-π. GST-π миРНК вводили в липосомном составе в дозе 2 мг/кг бестимусным голым мышам, несущим ортотопические опухоли из злокачественной опухоли легких A549. Конечные массы первичной опухоли измеряли при вскрытии для группы лечения и группы контроля носителем. GST-π миРНК демонстрировала значительный эффект ингибирования опухолей из злокачественной опухоли легких в этом 6-недельном исследовании. Как показано на фиг. 1, после 43 суток, GST-π миРНК демонстрировала заметно благоприятное ингибирование опухоли, со значительно уменьшенными конечными усредненными массами первичных опухолей в 2,8 раза по сравнению с контролем.
[0036] Фиг. 2: на фиг. 2 представлен эффект ингибирования опухоли in vivo для GST-π миРНК. Модель ксенотрансплантата злокачественной опухоли с использованием клеток A549 использовали при относительно низкой дозе миРНК 0,75 мг/кг. GST-π миРНК демонстрировала благоприятное ингибирование опухоли в пределах нескольких суток. После 36 суток GST-π миРНК демонстрировала заметно благоприятное ингибирование опухоли, со значительно сниженными конечными усредненными объемами опухоли приблизительно в 2 раза по сравнению с контролем.
[0037] Фиг. 3: на фиг. 3 представлен эффект ингибирования опухоли in vivo для GST-π миРНК в конечной точке на фиг. 2. GST-π миРНК демонстрировала благоприятное ингибирование опухоли при сниженных усредненных массах опухоли больше чем в 2 раз.
[0038] Фиг. 4: на фиг. 4 показано, что GST-π миРНК по данному изобретению значительно увеличивала гибель клеток злокачественной опухоли посредством апоптоза in vitro. GST-π миРНК вызывала повышающую регуляцию PUMA, биологического маркера апоптоза, который связан с потерей жизнеспособности клетками. На фиг. 4 экспрессия PUMA значительно увеличена со 2-6 суток после трансфекции GST-π миРНК.
[0039] Фиг. 5: на фиг. 5 показано, что GST-π миРНК по данному изобретению обеспечивала эффект нокдауна для ксенотрансплантатных опухолей A549 in vivo. Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали у самок бестимусных голых (nu/nu) мышей (Charles River) при использовании миРНК, направленной на GST-π. Как показано на фиг. 5, при дозе 4 мг/кг обнаруживали значительное снижение GST-π мРНК приблизительно на 40% через 24 часа после инъекции.
[0040] Фиг. 6: на фиг. 6 показано, что GST-π миРНК по данному изобретению ингибировала ксенотрансплантатные опухоли из злокачественной опухоли поджелудочной железы in vivo. GST-π миРНК обеспечивала активность сайленсинга генов in vivo при введении в липосомном составе в ксенотрансплантатные опухоли из злокачественной опухоли поджелудочной железы у самок бестимусных голых мышей в возрасте от 6 до 8 недель. Как показано на фиг. 6, эффекта дозы достигали при использовании доз в диапазоне от 0,375 мг/кг до 3 мг/кг миРНК, направленной на GST-π. GST-π миРНК демонстрировала благоприятное ингибирование опухоли в пределах нескольких суток после введения, в конечной точке происходило уменьшение объема опухоли приблизительно в 2 раза.
1/2
[0041] Фиг. 7: на фиг. 7 показано, что GST-π миРНК по данному изобретению демонстрировала повышенную стабильность в сыворотке. Как показано на фиг. 7, время полужизни (t) в сыворотке как для смысловой цепи, (фиг. 7, сверху), так и для антисмысловой цепи (фиг. 7, внизу) GST-π миРНК составляло приблизительно 100 минут.
1/2
[0042] Фиг. 8: на фиг. 8 показано, что GST-π миРНК по данному изобретению демонстрировала увеличенную стабильность в составе в плазме. На фиг. 8 представлена инкубация липосомного состава GST-π миРНК в 50% сыворотке человека в PBS и обнаружение остающейся миРНК в различные моменты времени. Как показано на фиг. 8, время полужизни (t) состава GST-π миРНК в плазме значительно превышало 100 часов.
[0043] Фиг. 9: на фиг. 9 представлен нокдаун in vitro для направляющей цепи GST-π миРНК. Как показано на фиг. 9, нокдаун направляющей цепи GST-π миРНК был приблизительно экспоненциальным по сравнению с контролем с перемешанной последовательностью, которая не демонстрировала эффекта.
[0044] Фиг. 10: на фиг. 10 представлен нокдаун in vitro для сопровождающей цепи GST-π миРНК с фиг. 9. Как показано на фиг. 10, нокдаун сопровождающей цепи вне мишени для GST-π миРНК значительно снижен и по существу не оказывает эффекта.
[0045] Фиг. 11: на фиг. 11 представлен нокдаун in vitro для направляющих цепей нескольких высоко активных GST-π миРНК. Как показано на фиг. 11, активности нокдауна направляющих цепей GST-π миРНК были приблизительно экспоненциальными.
[0046] Фиг. 12: на фиг. 12 представлен in vitro нокдаун для сопровождающей цепи из GST-π миРНК с фиг. 11. Как показано на фиг. 12, активности нокдауна сопровождающей цепи вне мишени для GST-π миРНК значительно снижены, ниже приблизительно 500 пМ.
[0047] Фиг. 13: на фиг. 13 представлен нокдаун in vitro для направляющей цепи высоко активной GST-π миРНК. Как показано на фиг. 13, активность нокдауна направляющей цепи из GST-π миРНК была приблизительно экспоненциальной.
[0048] Фиг. 14: на фиг. 14 представлен нокдаун in vitro для сопровождающей цепи из GST-π миРНК с фиг. 13. Как показано на фиг. 14, активность нокдауна сопровождающей цепи вне мишени для GST-π миРНК значительно снижена.
[0049] Фиг. 15: на фиг. 15 представлен эффект ингибирования опухоли in vivo для p21 миРНК. Модель ксенотрансплантата злокачественной опухоли с использованием клеток A549 использовали при относительно низкой дозе миРНК 0,75 мг/кг. p21 миРНК демонстрировала благоприятное ингибирование опухоли в пределах нескольких суток. После 30 суток GST-π миРНК демонстрировала заметно благоприятное ингибирование опухоли при значительно уменьшенных конечных усредненных объемах опухоли больше чем в 2 раза по сравнению с контролем.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0050] Данное изобретение относится к соединениям, композициям и способам для терапевтических средств на основе нуклеиновых кислот для модулирования экспрессии гена.
[0051] В некоторых вариантах осуществления данное изобретение предусматривает молекулы, активные при РНК-интерференции, а также структуры и композиции, которые могут обеспечивать сайленсинг экспрессии гена.
[0052] Структуры и композиции по данному раскрытию можно использовать при предотвращении или лечении различных заболеваний.
[0053] В дополнительных вариантах осуществления данное изобретение предусматривает композиции для доставки и захвата одной или более терапевтических RNAi молекул по данному изобретению, а также способы их использования. Композиции на основе РНК по данному изобретению можно использовать в способах предотвращения или лечения злокачественных опухолей, таких как злокачественные новообразования.
[0054] Терапевтические композиции по данному изобретению включают молекулы нуклеиновой кислоты, которые активны при РНК-интерференции. Терапевтические молекулы нуклеиновой кислоты могут быть направлены на различные гены для сайленсинга генов.
[0055] В различных вариантах осуществления данное изобретение предусматривает ряд молекул, которые могут быть активными в качестве малой интерферирующей РНК (миРНК) и могут регулировать или обеспечивать сайленсинг экспрессии гена.
[0056] Варианты осуществления данного изобретения дополнительно предусматривают носитель, состав или состав липидных наночастиц для доставки патентоспособной миРНК субъектам, нуждающимся в предотвращении или лечении заболевания. Это изобретение, кроме того, предусматривает способы введения миРНК в качестве терапевтических средств млекопитающим.
[0057] Терапевтические молекулы и композиции по данному изобретению можно использовать для РНК-интерференции, направленной на предотвращение или лечение заболевания, посредством введения соединения или композиции субъекту, нуждающемуся в этом.
[0058] Данное изобретение предусматривает ряд RNAi молекул, где каждая молекула имеет полинуклеотидную смысловую цепь и полинуклеотидную антисмысловую цепь; каждая цепь молекулы составляет от 15 до 30 нуклеотидов в длину; непрерывная область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи по меньшей мере частично комплементарна последовательности мРНК; и по меньшей мере часть смысловой цепи комплементарна по меньшей мере части антисмысловой цепи, и молекула имеет область дуплекса от 15 до 30 нуклеотидов в длину.
[0059] RNAi молекула по данному изобретению может иметь непрерывную область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи, комплементарную последовательности мРНК человека, которая расположена в области дуплекса молекулы.
[0060] В некоторых вариантах осуществления RNAi молекула может иметь непрерывную область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи, которая комплементарна последовательности мРНК человека.
[0061] Варианты осуществления данного изобретения дополнительно могут предусматривать способы предотвращения, лечения или улучшения одного или более симптомов заболевания или состояния или уменьшения риска развития заболевания или состояния или задержки начала заболевания или состояния у млекопитающего, нуждающегося в этом.
[0062] RNAi структуры для универсального геномного сайленсинга
[0063] Варианты осуществления данного изобретения могут предусматривать RNAi молекулы, направленные на любой ген, которые проявляют высокую активность сайленсинга экспрессии гена.
[0064] RNAi молекулы по данному раскрытию могут проявлять к удивлению высокую активность сайленсинга экспрессии гена, при этом обеспечивая сниженные эффекты вне мишени.
[0065] В некоторых вариантах осуществления RNAi молекула по данному изобретению содержит один или более 2′-дезоксинуклеотидов. В этих вариантах осуществления один или более 2′-дезоксинуклеотидов можно располагать в области затравки в миРНК.
[0066] Один или более 2′-дезоксинуклеотидов могут представлять собой моно-дезоксинуклеотиды.
[0067] Как используют в настоящем описании, дезоксинуклеотид относится к моно-2′-дезоксинуклеотиду.
[0068] 2′-дезоксинуклеотид можно замещать в 2'-положении галогеном.
[0069] В определенных вариантах осуществления RNAi молекула по данному изобретению содержит один или более 2′-дезоксинуклеотидов в антисмысловой или направляющей цепи миРНК. Более конкретно, один или более дезоксинуклеотидов можно располагать в положениях с 1 до 8 от 5'-конца антисмысловой цепи миРНК. В определенных вариантах осуществления один или более дезоксинуклеотидов можно располагать в положениях со 2 до 8 от 5'-конца антисмысловой цепи миРНК. В дополнительных вариантах осуществления один или более дезоксинуклеотидов можно располагать в положениях с 3 до 8 от 5'-конца антисмысловой цепи миРНК.
[0070] Это изобретение предусматривает миРНК структуры, которые могут иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды во множестве положений.
[0071] В некоторых вариантах осуществления миРНК структура может иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды в каждом из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи.
[0072] В дополнительных вариантах осуществления миРНК структура может иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды в каждом из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи.
[0073] В дополнительных вариантах осуществления миРНК структура может иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды в каждом из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи.
[0074] В определенных вариантах осуществления миРНК структура может иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды в каждом из положений с 3 до 8 от 5'-конца антисмысловой цепи.
[0075] В некоторых вариантах осуществления миРНК структура может иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды в каждом из положений с 5 до 8 от 5'-конца антисмысловой цепи.
[0076] Любые из этих структур можно комбинировать с одним или более модифицированными или химически модифицированными нуклеотидами в других положениях.
50
50
[0077] RNAi молекулы по данному изобретению могут ингибировать экспрессию мРНК гена с благоприятной IC меньше приблизительно 200 пМ. В определенных вариантах осуществления RNAi молекулы по данному изобретению могут ингибировать экспрессию мРНК гена с благоприятной IC меньше приблизительно 100 пМ, или меньше приблизительно 50 пМ, или меньше приблизительно 30 пМ, или меньше приблизительно 20 пМ, или меньше приблизительно 10 пМ, или меньше приблизительно 5 пМ, или меньше приблизительно 1 пМ.
[0078] В дополнительных вариантах осуществления RNAi молекулы по данному изобретению могут ингибировать экспрессию мРНК гена на определенном уровне, по меньшей мере на 25% in vivo, после одного введения.
[0079] миРНК по данному изобретению можно направлять на любой ген.
[0080] Примеры генов, на которые можно направлять миРНК по данному изобретению, включают гены, перечисленные в Gene Families Index из HUGO Gene Nomenclature Committee.
[0081] Примеры генов, на которые можно направлять миРНК по данному изобретению, включают ядерные гены, митохондриальные гены, кодирующие белок гены, протоонкогены, онкогены, гены-супрессоры опухолей и гены клеточной сигнализации.
[0082] Примеры генов, на которые можно направлять миРНК по данному изобретению, включают гены, экспрессирующие любой элемент или подэлемент семейства белков человека, включая SRY, β-глобин, RAS, цитозольную GST, митохондриальную GST, MAPEG GST, GST-π, p16, p21, p53, сывороточный альбумин, коллаген VII типа, C3 комплемента, аполипопротеин B, фенилаланингидроксилазу, фактор VIII, гентингтин, белок ретинобластомы RB1, CFTR, титин, атрофин и дистрофин.
[0083] Модифицированная и химически модифицированная миРНК
[0084] Варианты осуществления данного изобретения охватывают миРНК молекулы, которые модифицированы или химически модифицированы для обеспечения усиленных свойств для терапевтического использования, таких как увеличенная активность сайленсинга генов. Данное изобретение предусматривает модифицированные или химически модифицированные миРНК молекулы, которые могут обладать повышенной стабильностью в сыворотке, а также сниженными эффектами вне мишени, без потери активности миРНК молекул при модуляции генов и сайленсинге генов. В некоторых аспектах данное изобретение предусматривает миРНК, которая имеет модификации или химические модификации в различных комбинациях, которые увеличивают стабильность и эффект миРНК.
[0085] Как используют в настоящем описании, термины модифицированный и химически модифицированный относятся к изменениям, выполненным в структуре встречающегося в природе нуклеотида или структуре нуклеиновой кислоты в миРНК, которые охватывают миРНК, имеющие один или более нуклеотидных аналогов, измененных нуклеотидов, не стандартных нуклеотидов, не встречающихся в природе нуклеотидов и их сочетания.
[0086] В некоторых вариантах осуществления число модифицированных или химически модифицированных структур в миРНК может включать все структурные компоненты и/или все нуклеотиды миРНК молекулы.
[0087] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую модификацию сахарной группы нуклеотида, модификацию нуклеинового основания нуклеотида, модификацию остова или связи в нуклеиновой кислоте, модификацию структуры нуклеотида или нуклеотидов на конце цепи миРНК и их сочетания.
[0088] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую модификацию заместителя на 2'-углероде сахара.
[0089] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую модификацию на 5'-конце, 3'-конце или на обоих концах цепи.
[0090] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую модификации, которые создают несовпадения комплементарности между цепями.
[0091] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую 5'-пропиламинную концевую, 5'-фосфорилированную концевую, 3'-пуромициновую концевую или 3'-биотинновую концевую группу.
[0092] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую 2'-фторзамещенный рибонуклеотид, 2'-OMe-замещенный рибонуклеотид, 2'-дезоксирибонуклеотид, 2'-аминозамещенный рибонуклеотид, 2'-тиозамещенный рибонуклеотид.
[0093] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую один или более 5-галогеноуридинов, 5-галогеноцитидинов, 5-метилцитидинов, риботимидинов, 2-аминопуринов, 2,6-диаминопуринов, 4-тиоуридинов или 5-аминоаллилуридинов.
[0094] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую одну или более фосфотиоатных групп.
[0095] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую один или более 2'-фторзамещенных рибонуклеотидов, 2'-фторуридинов, 2'-фторцитидинов, 2'-дезоксирибонуклеотидов, 2'-дезоксиаденозинов или 2'-дезоксигуанозинов.
[0096] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую одну или более фосфотиоатных связей.
[0097] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую одну или более алкилендиоловых связей, оксиалкилтио-связей или оксикарбонилокси-связей.
[0098] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую одну или более дезоксиабазических групп, инозинов, N3-метилуридинов, N6,N6-диметиладенозинов, псевдоуридинов, пуриновых рибонуклеозидов и рибавиринов.
[0099] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую одну или более 3'- или 5'-инвертированных концевых групп.
[00100] Примеры модифицированной и химически модифицированной миРНК включают миРНК, имеющую один или более 5-(2-амино)пропилуридинов, 5-бромуридинов, аденозинов, 8-бромгуанозинов, 7-деазааденозинов или N6-метиладенозин.
[00101] GST-π и RNAi молекулы
[00102] Обнаружено, что различные ткани злокачественных опухолей человека коррелируют с возникновением мутантного гена KRAS. В некоторых случаях в тканях также присутствует повышенный уровень экспрессии глутатион-S-трансферазы пи (GST-π). (Miyanishi et al., Gastroenterology, 2001, том 121:865-874, реферат) Например, повышенные уровни GST-π в сыворотке наблюдали у пациентов с различными желудочно-кишечными злокачественными новообразованиями. (Niitsu et al., Cancer, 1989, том 63, № 2, стр. 317-323, реферат)
[00103] GST-π является членом семейства ферментов GST, которые играют роль в детоксикации посредством катализа конъюгации гидрофобных и электрофильных соединений с восстановленным глутатионом. Экспрессию GST-π можно снижать in vitro с использованием миРНК. (Niitsu et al., US 2014/0315975 A1). Однако существует множество недостатков существующих миРНК средств, таких как недостаточная активность, эффекты вне мишени, недостаток стабильности в сыворотке и недостаток активности или эффекта in vivo.
[00104] Последовательность нуклеиновой кислоты образцовой целевой мРНК глутатион-S-трансферазы пи человека (GST-π человека) раскрыт под номером доступа Genbank NM_000852.3 (hGSTP1) и составляет 986 нуклеотиды в длину.
[00105] Специалист в данной области поймет, что приведенная последовательность может меняться с течением времени, и включит любые необходимые изменения в молекулы нуклеиновой кислоты в настоящем описании соответствующим образом.
[00106] Варианты осуществления данного изобретения могут предусматривать композиции и способы для сайленсинга экспрессии генов GST-π с использованием небольших молекул нуклеиновой кислоты. Примеры молекул нуклеиновой кислоты включают молекулы, активные при РНК-интерференции (RNAi молекулы), молекулы малой интерферирующей РНК (миРНК), двухцепочечной РНК (дцРНК), микроРНК (мкРНК) и короткой шпилечной РНК (shRNA), а также РНК, направляемую с помощью ДНК (ddRNA), РНК, взаимодействующую с Piwi (piRNA), и ассоциированную с повторами миРНК (rasiRNA). Такие молекулы способны опосредовать РНК-интерференцию против экспрессии гена GST-π.
[00107] Композицию и способы, раскрытые в настоящем описании, также можно использовать при лечении злокачественных опухолей различных типов у субъекта.
[00108] Молекулы нуклеиновой кислоты и способы по данному изобретению можно использовать для понижающей регуляции экспрессии генов, которые кодируют GST-π.
[00109] Композиции и способы по данному изобретению могут включать одну или более молекул нуклеиновой кислоты, которые, независимо или в комбинации, могут модулировать или регулировать экспрессию белка GST-π и/или генов, кодирующих белки GST-π, белков и/или генов, кодирующих GST-π, которые связаны с поддержанием и/или развитием заболеваний, состояний или нарушений, связанных с GST-π, таких как злокачественная опухоль.
[00110] Композиции и способы по данному изобретению описаны со ссылкой на образцовые последовательности GST-π. Специалист в данной области поймет, что различные аспекты и варианты осуществления изобретения направлены на любые связанные гены, последовательности или варианты GST-π, такие как гомологичные гены и транскрипционные варианты, а также полиморфизмы, в том числе однонуклеотидный полиморфизм (SNP), связанный с любыми генами GST-π.
[00111] В некоторых вариантах осуществления композиции и способы по данному изобретению могут предусматривать двухцепочечную молекулу малой интерферирующей нуклеиновой кислоты (миРНК), которая осуществляет понижающую регуляцию экспрессии гена GST-π, например, GST-π человека.
[00112] RNAi молекулу по данному изобретению можно направлять на GST-π и любые гомологичные последовательности, например, с использованием комплементарных последовательностей или посредством встраивания неканонических пар оснований, например, несовпадений и/или неоднозначно совпадающих пар оснований, которые могут предусматривать дополнительные последовательности-мишени.
[00113] В случаях, когда идентифицируют несовпадения, неканонические пары оснований, например, несовпадения и/или неоднозначно совпадающие основания можно использовать для того, чтобы создавать молекулы нуклеиновой кислоты, которые направлены больше чем на одну последовательность гена.
[00114] Например, неканонические пары оснований, такие как пары оснований UU и CC, можно использовать для того, чтобы создавать молекулы нуклеиновой кислоты, которые способны направленно воздействовать на последовательности для различных мишеней GST-π, которые обладают гомологией последовательностей. Таким образом, RNAi молекулу можно направлять на нуклеотидную последовательность, которая консервативна между гомологичными генами, и одну RNAi молекулу можно использовать для того, чтобы ингибировать экспрессию больше чем одного гена.
[00115] В некоторых аспектах композиции и способы по данному изобретению включают RNAi молекулы, которые активны против GST-π мРНК, где RNAi молекула содержит последовательность, комплементарную любой мРНК, кодирующей последовательность GST-π.
[00116] В некоторых вариантах осуществления RNAi молекула по данному раскрытию может обладать активностью против GST-π РНК, где RNAi молекула содержит последовательность, комплементарную РНК, имеющей вариант последовательности, кодирующей GST-π, например, мутантного гена GST-π, который, как известно в данной области, связан со злокачественной опухолью.
[00117] В дополнительных вариантах осуществления RNAi молекула по данному изобретению может содержать нуклеотидную последовательность, которая может взаимодействовать с нуклеотидной последовательностью гена GST-π и опосредовать сайленсинг экспрессии гена GST-π.
[00118] Молекулы нуклеиновой кислоты для ингибирования экспрессии GST-π могут иметь смысловую цепь и антисмысловую цепь, в которой цепи образуют область дуплекса. Молекулы нуклеиновой кислоты могут иметь один или более нуклеотидов в области дуплекса, которые модифицированы или химически модифицированы, в том числе такие модификации, как известно в данной области. Любой нуклеотид в липком конце миРНК также может быть модифицированным или химически модифицированным.
[00119] В некоторых вариантах осуществления предпочтительные модифицированные или химически модифицированные нуклеотиды представляют собой 2′-дезоксинуклеотиды. В дополнительных вариантах осуществления модифицированные или химически модифицированные нуклеотиды могут включать 2′-O-алкилзамещенные нуклеотиды, 2′-дезокси-2′-фторзамещенные нуклеотиды, фосфотиоатные нуклеотиды, замкнутые нуклеотиды или любое их сочетание.
[00120] В определенных вариантах осуществления предпочтительная структура может иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды во множестве положений, множество положений представляет собой одно из следующего: каждое из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3-8 от 5'-конца антисмысловой цепи; и каждое из положений 5-8 от 5'-конца антисмысловой цепи. Любые из этих структур можно комбинировать с одним или более 2′-дезокси-2′-фторзамещенными нуклеотидами в области дуплекса.
50
[00121] Молекулы нуклеиновой кислоты по данному изобретению могут ингибировать экспрессию GST-π мРНК с благоприятной IC меньше приблизительно 200 пМ. Кроме того, молекулы нуклеиновой кислоты могут ингибировать экспрессию мРНК GST-π на определенных уровнях, по меньшей мере на 25% in vivo, после одного введения.
[00122] В данном изобретении предусмотрены фармацевтические композиции, которые могут содержать одну или более миРНК, как раскрыто в настоящем описании, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. Любой подходящий носитель можно использовать, в том числе те, которые известны в данной области, а также липидные молекулы, наночастицы или липосомы, любые из которых могут инкапсулировать миРНК молекулы.
[00123] В данном изобретении раскрыты способы лечения заболевания, связанного с экспрессией GST-π, эти способы включают введение субъекту, нуждающемуся в этом, композиции, содержащей одну или более миРНК. Заболевания, подлежащие лечению, могут включать злокачественную опухоль, злокачественное новообразование, злокачественное новообразование, обусловленное клетками, экспрессирующими мутантный KRAS, саркому и карциному, среди прочих.
[00124] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на GST-π мРНК, представлены в таблице 1.
Таблица 1: последовательности RNAi молекул для GST-π
ID
Эталонн. полож-е
SEQ ID №
СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 1 до 65
SEQ ID №
АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 66 до 130
A1
652
1
UCCCAGAACCAGGGAGGCAtt
66
UGCCUCCCUGGUUCUGGGAca
A10
635
2
CUUUUGAGACCCUGCUGUCtt
67
GACAGCAGGGUCUCAAAAGgc
A11
649
3
CUGUCCCAGAACCAGGGAGtt
68
CUCCCUGGUUCUGGGACAGca
A12
650
4
UGUCCCAGAACCAGGGAGGtt
69
CCUCCCUGGUUCUGGGACAgc
A13
631
5
AAGCCUUUUGAGACCCUGCtt
70
GCAGGGUCUCAAAAGGCUUca
A14
638
6
UUGAGACCCUGCUGUCCCAtt
71
UGGGACAGCAGGGUCUCAAaa
A15
636
7
UUUUGAGACCCUGCUGUCCtt
72
GGACAGCAGGGUCUCAAAAgg
A16
640
8
GAGACCCUGCUGUCCCAGAtt
73
UCUGGGACAGCAGGGUCUCaa
A17
332
9
GCUGGAAGGAGGAGGUGGUtt
74
ACCACCUCCUCCUUCCAGCtc
A18
333
10
CUGGAAGGAGGAGGUGGUGtt
75
CACCACCUCCUCCUUCCAGct
A19
321
11
UCAGGGCCAGAGCUGGAAGtt
76
CUUCCAGCUCUGGCCCUGAtc
A2
639
12
UGAGACCCUGCUGUCCCAGtt
77
CUGGGACAGCAGGGUCUCAaa
A20
323
13
AGGGCCAGAGCUGGAAGGAtt
78
UCCUUCCAGCUCUGGCCCUga
A21
331
14
AGCUGGAAGGAGGAGGUGGtt
79
CCACCUCCUCCUUCCAGCUct
A22
641
15
AGACCCUGCUGUCCCAGAAtt
80
UUCUGGGACAGCAGGGUCUca
A23
330
16
GAGCUGGAAGGAGGAGGUGtt
81
CACCUCCUCCUUCCAGCUCtg
A25
647
17
UGCUGUCCCAGAACCAGGGtt
82
CCCUGGUUCUGGGACAGCAgg
A26
653
18
CCCAGAACCAGGGAGGCAAtt
83
UUGCCUCCCUGGUUCUGGGac
A3
654
19
CCAGAACCAGGGAGGCAAGtt
84
CUUGCCUCCCUGGUUCUGGga
A4
637
20
UUUGAGACCCUGCUGUCCCtt
85
GGGACAGCAGGGUCUCAAAag
A5
642
21
GACCCUGCUGUCCCAGAACtt
86
GUUCUGGGACAGCAGGGUCtc
A6
319
22
GAUCAGGGCCAGAGCUGGAtt
87
UCCAGCUCUGGCCCUGAUCtg
A7
632
23
AGCCUUUUGAGACCCUGCUtt
88
AGCAGGGUCUCAAAAGGCUtc
A8
633
24
GCCUUUUGAGACCCUGCUGtt
89
CAGCAGGGUCUCAAAAGGCtt
A9
634
25
CCUUUUGAGACCCUGCUGUtt
90
ACAGCAGGGUCUCAAAAGGct
AG7
632
26
CGCCUUUUGAGACCCUGCAtt
91
UGCAGGGUCUCAAAAGGCGtc
AK1
257
27
CCUACACCGUGGUCUAUUUtt
92
AAAUAGACCACGGUGUAGGgc
AK10
681
28
UGUGGGAGACCAGAUCUCCtt
93
GGAGAUCUGGUCUCCCACAat
AK11
901
29
GCGGGAGGCAGAGUUUGCCtt
94
GGCAAACUCUGCCUCCCGCtc
AK12
922
30
CCUUUCUCCAGGACCAAUAtt
95
UAUUGGUCCUGGAGAAAGGaa
AK13/A24
643
31
ACCCUGCUGUCCCAGAACCtt
96
GGUUCUGGGACAGCAGGGUct
AK2
267
32
GGUCUAUUUCCCAGUUCGAtt
97
UCGAACUGGGAAAUAGACCac
AK3
512
33
CCCUGGUGGACAUGGUGAAtt
98
UUCACCAUGUCCACCAGGGct
AK4
560
34
ACAUCUCCCUCAUCUACACtt
99
GUGUAGAUGAGGGAGAUGUat
AK5
593
35
GCAAGGAUGACUAUGUGAAtt
100
UUCACAUAGUCAUCCUUGCcc
AK6
698
36
CCUUCGCUGACUACAACCUtt
101
AGGUUGUAGUCAGCGAAGGag
AK7
313
37
CUGGCAGAUCAGGGCCAGAtt
102
UCUGGCCCUGAUCUGCCAGca
AK8
421
38
GACGGAGACCUCACCCUGUtt
103
ACAGGGUGAGGUCUCCGUCct
AK9
590
39
CGGGCAAGGAUGACUAUGUtt
104
ACAUAGUCAUCCUUGCCCGcc
AU10
635
40
CUUUUGAGACCCUGCUGUAtt
105
UACAGCAGGGUCUCAAAAGgc
AU23
330
41
GAGCUGGAAGGAGGAGGUAtt
106
UACCUCCUCCUUCCAGCUCtg
AU24
643
42
ACCCUGCUGUCCCAGAACAtt
107
UGUUCUGGGACAGCAGGGUct
AU25
648
43
UGCUGUCCCAGAACCAGGAtt
108
UCCUGGUUCUGGGACAGCAgg
AU7
632
44
AGCCUUUUGAGACCCUGCAtt
109
UGCAGGGUCUCAAAAGGCUtc
AU9
634
45
CCUUUUGAGACCCUGCUGAtt
110
UCAGCAGGGUCUCAAAAGGct
B1
629
46
UGAAGCCUUUUGAGACCCUtt
111
AGGGUCUCAAAAGGCUUCAgt
B10
627
47
ACUGAAGCCUUUUGAGACCtt
112
GGUCUCAAAAGGCUUCAGUtg
B11
596
48
AGGAUGACUAUGUGAAGGCtt
113
GCCUUCACAUAGUCAUCCUtg
B12
597
49
GGAUGACUAUGUGAAGGCAtt
114
UGCCUUCACAUAGUCAUCCtt
B13
598
50
GAUGACUAUGUGAAGGCACtt
115
GUGCCUUCACAUAGUCAUCct
B14
564
51
CUCCCUCAUCUACACCAACtt
116
GUUGGUGUAGAUGAGGGAGat
B2
630
52
GAAGCCUUUUGAGACCCUGtt
117
CAGGGUCUCAAAAGGCUUCag
B3
563
53
UCUCCCUCAUCUACACCAAtt
118
UUGGUGUAGAUGAGGGAGAtg
B4
567
54
CCUCAUCUACACCAACUAUtt
119
AUAGUUGGUGUAGAUGAGGga
B5
566
55
CCCUCAUCUACACCAACUAtt
120
UAGUUGGUGUAGAUGAGGGag
B6
625
56
CAACUGAAGCCUUUUGAGAtt
121
UCUCAAAAGGCUUCAGUUGcc
B7
626
57
AACUGAAGCCUUUUGAGACtt
122
GUCUCAAAAGGCUUCAGUUgc
B8
628
58
CUGAAGCCUUUUGAGACCCtt
123
GGGUCUCAAAAGGCUUCAGtt
B9
565
59
UCCCUCAUCUACACCAACUtt
124
AGUUGGUGUAGAUGAGGGAga
BG3
563
60
GCUCCCUCAUCUACACCAAtt
125
UUGGUGUAGAUGAGGGAGCtg
BU2
630
61
GAAGCCUUUUGAGACCCUAtt
126
UAGGGUCUCAAAAGGCUUCag
BU10
627
62
ACUGAAGCCUUUUGAGACAtt
127
UGUCUCAAAAGGCUUCAGUtg
BU14
565
63
CUCCCUCAUCUACACCAAAtt
128
UUUGGUGUAGAUGAGGGAGat
BU4
567
64
CCUCAUCUACACCAACUAAtt
129
UUAGUUGGUGUAGAUGAGGga
C1-934
934
65
ACCAAUAAAAUUUCUAAGAtt
130
UCUUAGAAAUUUUAUUGGUcc
[00125] Ключ к таблице 1: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, u, g, c, t относятся к 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-U, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C и дезокситимидину, соответственно.
[00126] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на GST-π мРНК, представлены в таблице 2.
Таблица 2: последовательности RNAi молекул для GST-π
ID
SEQ ID №
СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 131 до 156
SEQ ID №
АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 157 до 182
BU2'
131
GAAGCCUUUUGAGACCCUANN
157
UAGGGUCUCAAAAGGCUUCNN
14
132
GAAGCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
158
UAGGGUCUCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
15
133
GAAGCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
159
uagggucuCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
16
134
GAAGCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
160
UagggucuCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
17
135
GAAGCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
161
UAgggucuCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
18
136
GAAGCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
162
UAGggucuCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
19
137
GAAGCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
163
UAGGgucuCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
20
138
GAAGCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
164
uAgGgUcUCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
21
139
GAAGCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
165
UAgGgUcUCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
22
140
GAAGCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
166
UaGgGuCuCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
23
141
GAAGCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
167
UAGgGuCuCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
24
142
GAAGCCUUUUGAGACCCUAtt
168
UagggucuCAAAA<u>G</u>G<u>C</u>U<u>U</u>C<u>UU</u>
25
143
GAAGCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
169
<u>U</u>AGGGUCUCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
26
144
GAAGCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
170
fUAGGGUCUCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
27
145
GAAGCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
171
uAGGGUCUCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
28
146
GAAGCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
172
UsAGGGUCUCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
29
147
GAAGCCUUUUGAGACCCUfA<u>UU</u>
173
fUAGGGUCUfCAAAAGGCfUUC<u>UU</u>
30
148
GAAGCCUUUUGAGfACCCUfA<u>UU</u>
174
fUAGGGUCUfCAfAfAAGGCfUUC<u>UU</u>
31
149
GAAGCCUUUUGAGACCCU<u>AUU</u>
175
<u>U</u>AGGGUCU<u>C</u>AAAAGGC<u>U</u>UC<u>UU</u>
31'
150
GAAGCCUUUUGAGACCCU<u>AUU</u>
176
fUAGGGUCU<u>C</u>AAAAGGC<u>U</u>UC<u>UU</u>
32
151
<u>GAA</u>GCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
177
UAGGGUCUCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
39
152
<u>GAA</u>GCCU<u>U</u>U<u>U</u>GAGACCC<u>U</u>A<u>UU</u>
178
UAGgGuCuCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
45
153
<u>GAA</u>GCCUUUUGAGACCCUA<u>UU</u>
179
<u>U</u>AGgGuCu<u>C</u>A<u>AA</u>AGGCU<u>U</u>C<u>UU</u>
46
154
<u>GAA</u>GCCU<u>U</u>U<u>U</u>GAGACCC<u>U</u>A<u>UU</u>
180
<u>U</u>AGgGuCu<u>C</u>A<u>AA</u>AGGCU<u>U</u>C<u>UU</u>
47
155
<u>GAA</u>GCCU<u>U</u>U<u>U</u>GAGACCC<u>UAUU</u>
181
<u>U</u>AGgGuCu<u>C</u>A<u>AA</u>AGGC<u>UU</u>C<u>UU</u>
48
156
<u>GAA</u>GCCU<u>U</u>U<u>U</u>GAGACCC<u>UAUU</u>
182
fUAGgGuCu<u>C</u>A<u>AA</u>AGGC<u>UU</u>C<u>UU</u>
U
U
[00127] Ключ к таблице 2: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, u, g, c, t относятся к 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-U, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C, и дезокситимидин (dT=T=t), соответственно. Подчеркивание относится к 2'-OMe-замещенному, например, . Буква в нижнем регистре f относится к 2'-дезокси-2'-фторзамещению, например, fU представляет собой 2'-дезокси-2'-фтор-U. N представляет собой A, C, G, U, , a, c, g, u, t или модифицированный, инвертированный или химически модифицированный нуклеотид.
[00128] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на GST-π мРНК, представлены в таблице 3.
Таблица 3: последовательности RNAi молекул для GST-π
ID
SEQ ID №
СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 183 до 194
SEQ ID №
АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 195 до 206
A9'
183
CCUUUUGAGACCCUGCUGUNN
195
ACAGCAGGGUCUCAAAAGGNN
1
184
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
196
AUAGUUGGUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
2
185
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
197
auaguuggUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
3
186
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
198
AuaguuggUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
4
187
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
199
AUaguuggUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
5
188
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
200
AUAguuggUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
6
189
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
201
AUAGuuggUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
7
190
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
202
aUaGuUgGUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
8
191
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
203
AUaGuUgGUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
9
192
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
204
AuAgUuGgUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
10
193
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
205
AUAgUuGgUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
11
194
<u>C</u>C<u>U</u>C<u>A</u>U<u>C</u>U<u>A</u>CACCAACUAU<u>UU</u>
206
AuaguuggUGUAG<u>A</u>U<u>G</u>A<u>G</u>G<u>UU</u>
U
U
[00129] Ключ к таблице 3: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, u, g, c, t относятся к 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-U, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C и дезокситимидину (dT=T=t), соответственно. Подчеркивание относится к 2'-OMe-замещенному, например, . Буква в нижнем регистре f относится к 2'-дезокси-2'-фторзамещению, например, fU представляет собой 2'-дезокси-2'-фтор-U. N представляет собой A, C, G, U, , a, c, g, u, t или модифицированный, инвертированный или химически модифицированный нуклеотид.
[00130] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на GST-π мРНК, представлены в таблице 4.
Таблица 4: последовательности RNAi молекул для GST-π
ID
SEQ ID №
СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 207 до 221
SEQ ID №
АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 222 до 236
B13'
207
GAUGACUAUGUGAAGGCACNN
222
GUGCCUUCACAUAGUCAUCNN
4
208
GGAUGACUAUGUGAAGGCA<u>UU</u>
223
UGCCUUCACAUAGUCAUCC<u>UU</u>
5
209
GGAUGACUAUGUGAAGGCA<u>UU</u>
224
ugccuucaCAUAGUCAUCC<u>UU</u>
6
210
GGAUGACUAUGUGAAGGCA<u>UU</u>
225
UgccuucaCAUAGUCAUCC<u>UU</u>
7
211
GGAUGACUAUGUGAAGGCA<u>UU</u>
226
UGccuucaCAUAGUCAUCC<u>UU</u>
8
212
GGAUGACUAUGUGAAGGCA<u>UU</u>
227
UGCcuucaCAUAGUCAUCC<u>UU</u>
9
213
GGAUGACUAUGUGAAGGCA<u>UU</u>
228
UGCCuucaCAUAGUCAUCC<u>UU</u>
10
214
GGAUGACUAUGUGAAGGCA<u>UU</u>
229
uGcCuUcACAUAGUCAUCC<u>UU</u>
11
215
GGAUGACUAUGUGAAGGCA<u>UU</u>
230
UGcCuUcACAUAGUCAUCC<u>UU</u>
12
216
GGAUGACUAUGUGAAGGCA<u>UU</u>
231
UgCcUuCaCAUAGUCAUCC<u>UU</u>
13
217
GGAUGACUAUGUGAAGGCA<u>UU</u>
232
UGCcUuCaCAUAGUCAUCC<u>UU</u>
14
218
<u>G</u>G<u>A</u>U<u>G</u>A<u>C</u>UAUGUGAAGGCA<u>UU</u>
233
UgccuucaCAUAG<u>U</u>C<u>A</u>U<u>C</u>C<u>UU</u>
15
219
GGAUGACUAUfGUfGAAGGCA<u>UU</u>
234
UGCfCUUCACAUAGUCAUCC<u>UU</u>
17
220
<u>GG</u>AUGACUAUGUGAAGGCA<u>UU</u>
235
UGCCUUCA<u>C</u>A<u>U</u>A<u>G</u>U<u>C</u>A<u>U</u>C<u>CUU</u>
18
221
<u>GG</u>AUGACUAUGUGAAGGCA<u>UU</u>
236
UGCCUUCACA<u>U</u>A<u>G</u>U<u>C</u>A<u>U</u>C<u>CUU</u>
U
U
[00131] Ключ к таблице 4: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, u, g, c, t относятся к 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-U, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C и дезокситимидину (dT=T=t), соответственно. Подчеркивание относится к 2'-OMe-замещенному, например, . Буква в нижнем регистре f относится к 2'-дезокси-2'-фторзамещению, например, fU представляет собой 2'-дезокси-2'-фтор-U. N представляет собой A, C, G, U, , a, c, g, u, t или модифицированный, инвертированный или химически модифицированный нуклеотид.
[00132] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на GST-π мРНК, представлены в таблице 5.
Таблица 5: последовательности RNAi молекул для GST-π
ID
SEQ ID №
СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 237 до 248
SEQ ID №
АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 249 до 260
B2'
237
GAAGCCUUUUGAGACCCUGNN
249
CAGGGUCUCAAAAGGCUUCNN
1
238
GAAGCCUUUUGAGACCCUG<u>UU</u>
250
CAGGGUCUCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
2
239
GAAGCCUUUUGAGACCCUG<u>UU</u>
251
cagggucuCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
3
240
GAAGCCUUUUGAGACCCUG<u>UU</u>
252
CagggucuCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
4
241
GAAGCCUUUUGAGACCCUG<u>UU</u>
253
CAgggucuCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
5
242
GAAGCCUUUUGAGACCCUG<u>UU</u>
254
CAGggucuCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
6
243
GAAGCCUUUUGAGACCCUG<u>UU</u>
255
CAGGgucuCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
7
244
GAAGCCUUUUGAGACCCUG<u>UU</u>
256
cAgGgUcUCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
8
245
GAAGCCUUUUGAGACCCUG<u>UU</u>
257
CAgGgUcUCAAAAGGCUUCUU
9
246
GAAGCCUUUUGAGACCCUG<u>UU</u>
258
CaGgGuCuCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
10
247
GAAGCCUUUUGAGACCCUG<u>UU</u>
259
CAGgGuCuCAAAAGGCUUC<u>UU</u>
11
248
<u>G</u>A<u>A</u>G<u>C</u>C<u>U</u>U<u>U</u>UGAGACCCUG<u>UU</u>
260
CagggucuCAAAA<u>G</u>G<u>C</u>U<u>U</u>C<u>UU</u>
U
U
[00133] Ключ к таблице 5: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, u, g, c, t относятся к 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-U, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C и дезокситимидину (dT=T=t), соответственно. Подчеркивание относится к 2'-OMe-замещенному, например, . Буква в нижнем регистре f относится к 2'-дезокси-2'-фторзамещению, например, fU представляет собой 2'-дезокси-2'-фтор-U. N представляет собой A, C, G, U, , a, c, g, u, t или модифицированный, инвертированный или химически модифицированный нуклеотид.
[00134] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на GST-π мРНК, представлены в таблице 6.
Таблица 6: последовательности RNAi молекул для GST-π
ID
SEQ ID №
СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 261 до 272
SEQ ID №
АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 273 до 284
B4'
261
CCUCAUCUACACCAACUAUNN
273
AUAGUUGGUGUAGAUGAGGNN
1
262
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
274
AUAGUUGGUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
2
263
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
275
auaguuggUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
3
264
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
276
AuaguuggUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
4
265
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
277
AUaguuggUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
5
266
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
278
AUAguuggUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
6
267
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
279
AUAGuuggUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
7
268
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
280
aUaGuUgGUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
8
269
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
281
AUaGuUgGUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
9
270
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
282
AuAgUuGgUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
10
271
CCUCAUCUACACCAACUAU<u>UU</u>
283
AUAgUuGgUGUAGAUGAGG<u>UU</u>
11
272
<u>C</u>C<u>U</u>C<u>A</u>U<u>C</u>U<u>A</u>CACCAACUAU<u>UU</u>
284
AuaguuggUGUAG<u>A</u>U<u>G</u>A<u>G</u>G<u>UU</u>
U
U
[00135] Ключ к таблице 6: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, u, g, c, t относятся к 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-U, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C и дезокситимидину (dT=T=t), соответственно. Подчеркивание относится к 2'-OMe-замещенному, например, . Буква в нижнем регистре f относится к 2'-дезокси-2'-фторзамещению, например, fU представляет собой 2'-дезокси-2'-фтор-U. N представляет собой A, C, G, U, , a, c, g, u, t или модифицированный, инвертированный или химически модифицированный нуклеотид.
[00136] В некоторых вариантах осуществления данное изобретение предусматривает ряд молекул нуклеиновой кислоты, в которых: a) молекула имеет полинуклеотидную смысловую цепь и полинуклеотидную антисмысловую цепь; b) каждая цепь молекулы составляет от 15 до 30 нуклеотидов в длину; c) непрерывная область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи комплементарна последовательности мРНК, кодирующей GST-π; d) по меньшей мере часть смысловой цепи комплементарна по меньшей мере части антисмысловой цепи и молекула имеет область дуплекса от 15 до 30 нуклеотидов в длину.
[00137] В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь непрерывную область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи, которая комплементарна последовательности мРНК, кодирующей GST-π, расположена в области дуплекса молекулы.
[00138] В дополнительных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь непрерывную область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи, которая комплементарна последовательности мРНК, кодирующей GST-π.
[00139] В определенных вариантах осуществления каждая цепь молекулы нуклеиновой кислоты может составлять от 18 до 22 нуклеотидов в длину. Область дуплекса молекулы нуклеиновой кислоты может составлять 19 нуклеотидов в длину.
[00140] В альтернативных формах молекула нуклеиновой кислоты может иметь полинуклеотидную смысловую цепь и полинуклеотидную антисмысловую цепь, которые соединяют в виде одной цепи, и формировать область дуплекса, соединенную на одном конце с помощью петли.
[00141] Некоторые варианты осуществления молекулы нуклеиновой кислоты по данному раскрытию могут иметь тупой конец. В определенных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь один или более нуклеотидов 3' липкого конца.
[00142] Данное изобретение предусматривает ряд молекул нуклеиновой кислоты, которые являются RNAi молекулами, активными для сайленсинга генов. Патентоспособные молекулы нуклеиновой кислоты могут представлять собой дцРНК, миРНК, микроРНК или shRNA, активные для сайленсинга генов, а также РНК, направляемую с помощью ДНК (ddRNA), РНК, взаимодействующую с Piwi, (piRNA) или ассоциированную с повторами миРНК (rasiRNA). Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть активны для ингибирования экспрессии GST-π.
50
[00143] Варианты осуществления данного изобретения дополнительно предусматривают молекулы нуклеиновой кислоты, имеющие IC для нокдауна GST-π меньше 100 пМ.
50
[00144] Дополнительные варианты осуществления данного изобретения предусматривают молекулы нуклеиновой кислоты, имеющие IC для нокдауна GST-π меньше 50 пМ.
[00145] Это изобретение дополнительно предусматривает композиции, содержащие одну или более патентоспособных молекул нуклеиновой кислоты, наряду с фармацевтически приемлемым носителем. В определенных вариантах осуществления носитель может представлять собой липидную молекулу или липосому.
[00146] Соединения и композиции по данному изобретению можно использовать в способах предотвращения или лечения заболевания, ассоциированного с GST-π, посредством введения соединения или композиции субъекту, нуждающемуся в этом.
[00147] Способы по данному изобретению позволяют использовать патентоспособные соединения для предотвращения или лечения злокачественной опухоли. Злокачественная опухоль может быть представлена в различных заболеваниях, например, злокачественных опухолях, связанных с экспрессией GST-π, злокачественных опухолях, обусловленных клетками, экспрессирующими мутантный KRAS, саркомах, фибросаркоме, озлокачествленной фиброзной гистиоцитоме, липосаркоме, рабдомиосаркоме, лейомиосаркоме, ангиосаркоме, саркоме Капоши, лимфангиосаркоме, синовиальной саркоме, хондросаркоме, остеосаркоме, карциномах, опухоли головного мозга, злокачественной опухоли головы и шеи, злокачественной опухоли молочной железы, злокачественной опухоли легких, злокачественной опухоли пищевода, злокачественной опухоли желудка, злокачественной опухоли двенадцатиперстной кишки, злокачественной опухоли аппендикса, злокачественной опухоли толстой кишки, злокачественной опухоли прямой кишки, злокачественной опухоли печени, злокачественной опухоли поджелудочной железы, злокачественной опухоли желчного пузыря, злокачественной опухоли желчных протоков, злокачественной опухоли ануса, злокачественной опухоли почки, злокачественной опухоли уретры, злокачественной опухоли мочевого пузыря, злокачественной опухоли предстательной железы, злокачественной опухоли яичек, злокачественной опухоли матки, злокачественной опухоли яичника, злокачественной опухоли кожи, лейкозе, злокачественной лимфоме, злокачественных эпителиальных опухолях и злокачественных неэпителиальных опухолях.
[00148] P21 и RNAi молекулы
[00149] p21 представляет собой белок регуляции клеточного цикла, кодируемый геном CDKN1A и относящийся к семейству CIP/KIP. Этот белок обладает функцией ингибирования прохождения клеточного цикла в фазе G1 и фазе G2/M посредством ингибирования эффекта комплекса циклин-CDK через связывание с этим комплексом. В частности, ген p21 подвергается активации с помощью p53, одного из генов-супрессоров опухолей. Сообщалось о том, что при активации p53 из-за повреждения ДНК или тому подобного, p53 активирует p21 так, что происходит задержание клеточного цикла в фазе G1 и фазе G2/M.
[00150] p21 сверхэкспрессирован в различных злокачественных опухолях человека, в том числе предстательной железы, шейки матки, молочной железы и плоскоклеточных карциномах, и, во многих случаях, повышающая регуляция p21 положительно коррелирует со степенью дифференцировки опухоли, инвазивностью и агрессивностью. См., например, Chang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, том 97, № 8, стр. 4291-96. Также сообщалось, что повышающая регуляция p21 связана с онкогенностью и неблагоприятным прогнозом при многих формах злокачественных опухолей, в том числе злокачественных опухолях головного мозга, предстательной железы, яичников, молочной железы и клеток пищевода. См., например, Winters et al., Breast Cancer Research, 2003, том 5, № 6, стр. R242-R249. Также заболевание может представлять собой возрастные заболевания, в том числе атеросклероз, болезнь Альцгеймера, амилоидоз и артрит. См., например, Chang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, том 97, № 8, стр. 4291-96.
[00151] p21 присутствует у различных животных, включая человека. Информацию о последовательности CDKN1A человека (p21) можно найти по: NM_000389.4, NM_078467.2, NM_001291549.1, NM_001220778.1, NM_001220777.1 (NP_001207707.1, NP_001278478.1, NP_001207706.1, NP_510867.1, NP_000380.1).
[00152] Целевая p21 мРНК человека раскрыта под номером доступа Genbank NM_000389.4 (CDKN1A) и составляет 2175 пар оснований в длину.
[00153] Специалист в данной области поймет, что приведена последовательность может меняться с течением времени, и включит любые необходимые изменения в молекулы нуклеиновой кислоты в настоящем описании соответствующим образом.
[00154] Варианты осуществления данного изобретения могут предусматривать композиции и способы для сайленсинга экспрессии гена p21 с использованием небольших молекул нуклеиновой кислоты. Примеры молекул нуклеиновой кислоты включают молекулы, активные при РНК-интерференции (RNAi молекулы), молекулы малой интерферирующей РНК (миРНК), микроРНК (мкРНК) и короткой шпилечной РНК (shRNA), а также РНК, направляемую с помощью ДНК (ddRNA), РНК, взаимодействующую с Piwi (piRNA), и ассоциированную с повторами миРНК (rasiRNA). Такие молекулы способны опосредовать РНК-интерференцию против экспрессии гена p21.
[00155] Композиция и способы, раскрытые в настоящем описании, также можно использовать при лечении злокачественных опухолей различных типов у субъекта.
[00156] Молекулы нуклеиновой кислоты и способы по данному изобретению можно использовать для понижающей регуляции экспрессии генов, которые кодируют p21.
[00157] Композиции и способы по данному изобретению могут содержать одну или более молекул нуклеиновой кислоты, которые, независимо или в комбинации, могут модулировать или регулировать экспрессию белка p21 и/или генов, кодирующих белки p21, белки и/или гены, кодирующие p21, связанные с поддержанием и/или развитием заболеваний, состояний или нарушений, связанных с p21, таких как злокачественная опухоль.
[00158] Композиции и способы по данному изобретению описаны со ссылкой на образцовые последовательности p21. Специалист в данной области поймет, что различные аспекты и варианты осуществления изобретения направлены на любые родственные гены, последовательности или варианты p21, такие как гомологичные гены и транскрипционные варианты и полиморфизмы, в том числе однонуклеотидный полиморфизм (SNP), связанный с любыми генами p21.
[00159] В некоторых вариантах осуществления композиции и способы по данному изобретению могут предусматривать двухцепочечную молекулу малой интерферирующей нуклеиновой кислоты (миРНК), которая осуществляет понижающую регуляцию экспрессии гена p21, например, CDKN1A человека.
[00160] RNAi молекулу по данному изобретению можно направлять на p21 и любые гомологичные последовательности, например, с использованием комплементарных последовательностей или посредством встраивания неканонических пар оснований, например, несовпадений и/или неоднозначно совпадающих пар оснований, которые могут предусматривать дополнительные последовательности-мишени.
[00161] В случаях, когда идентифицируют несовпадения, неканонические пары оснований, например, несовпадения и/или неоднозначно совпадающие основания, можно использовать для того, чтобы создавать молекулы нуклеиновой кислоты, которые направлены больше чем на одну последовательность гена.
[00162] Например, неканонические пары оснований, такие как пары оснований UU и CC, можно использовать для того, чтобы создавать молекулы нуклеиновой кислоты, которые способны направленно воздействовать на последовательности для различных мишеней p21, которые обладают гомологией последовательностей. Таким образом, RNAi молекулу можно направлять на нуклеотидную последовательность, которая является консервативной между гомологичными генами, и одну RNAi молекулу можно использовать для того, чтобы ингибировать экспрессию больше чем одного гена.
[00163] В некоторых аспектах композиции и способы по данному изобретению включают RNAi молекулы, которые активны против p21 мРНК, где RNAi молекула содержит последовательность, комплементарную любой мРНК, кодирующей последовательность p21.
[00164] В некоторых вариантах осуществления RNAi молекула по данному раскрытию может обладать активностью против p21 РНК, где RNAi молекула содержит последовательность, комплементарную РНК, имеющей вариант последовательности, кодирующей p21, например, мутантного гена p21, который, как известно в данной области, связан со злокачественной опухолью.
[00165] В дополнительных вариантах осуществления RNAi молекула по данному изобретению может содержать нуклеотидную последовательность, которая может взаимодействовать с нуклеотидной последовательностью гена p21 и опосредовать сайленсинг экспрессии гена p21.
[00166] Молекулы нуклеиновой кислоты для ингибирования экспрессии p21 могут иметь смысловую цепь и антисмысловую цепь, в которой цепи образуют область дуплекса. Молекулы нуклеиновой кислоты могут в области дуплекса иметь один или более нуклеотидов, модифицированных или химически модифицированных, в том числе такие модификации, как известно в данной области. Любой нуклеотид в липком конце миРНК также может быть модифицированным или химически модифицированным.
[00167] В некоторых вариантах осуществления предпочтительные модифицированные или химически модифицированные нуклеотиды представляют собой 2′-дезоксинуклеотиды. В дополнительных вариантах осуществления модифицированные или химически модифицированные нуклеотиды могут включать 2′-O-алкилзамещенные нуклеотиды, 2′-дезокси-2′-фторзамещенные нуклеотиды, фосфотиоатные нуклеотиды, замкнутые нуклеотиды или любое их сочетание.
[00168] В определенных вариантах осуществления предпочтительная структура может иметь антисмысловую цепь, содержащую дезоксинуклеотиды во множестве положений, множество положений представляет собой одно из следующего: каждое из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3-8 от 5'-конца антисмысловой цепи; и каждое из положений 5-8 от 5'-конца антисмысловой цепи. Любые из этих структур можно комбинировать с одним или более 2′-дезокси-2′-фторзамещенными нуклеотидами в области дуплекса.
50
[00169] Молекулы нуклеиновой кислоты по данному изобретению могут ингибировать экспрессию p21 мРНК с благоприятной IC меньше приблизительно 200 пМ. Кроме того, молекулы нуклеиновой кислоты могут ингибировать экспрессию p21 мРНК на определенных уровнях, по меньшей мере на 25% in vivo, после одного введения.
[00170] В данном изобретении предусмотрены фармацевтические композиции, которые могут содержать одну или более миРНК, как раскрыто в настоящем описании, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. Можно использовать любой подходящий носитель, в том числе тот, который известен в данной области, а также липидные молекулы, наночастицы или липосомы, любые из которых могут инкапсулировать молекулы миРНК.
[00171] В данном изобретении раскрыты способы лечения заболевания, которое может быть связано с экспрессией p21, эти способы включают введение субъекту, нуждающемуся в этом, композиции, содержащей одну или более миРНК. Заболевания, подлежащие лечению, могут включать злокачественную опухоль, злокачественную опухоль, обусловленную клетками, экспрессирующими мутантный KRAS, саркому и карциному, среди прочих.
[00172] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на p21 мРНК, представлены в таблице 7.
Таблица 7: последовательности RNAi молекул для p21
Эталонн. полож-е
SEQ ID №
СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 285 до 312
SEQ ID №
АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 313 до 340
2085
285
CUUAGUGACUUUACUUGUAmUmU
313
UACAAGUAAAGUCACUAAGmUmU
500
286
CAGACCAGCAUGACAGAUUmUmU
314
AAUCUGUCAUGCUGGUCUGmUmU
540
287
UGAUCUUCUCCAAGAGGAAmUmU
315
UUCCUCUUGGAGAAGAUCAmUmU
1706
288
GUUCAUUGCACUUUGAUUAmUmU
316
UAAUCAAAGUGCAAUGAACmUmU
1709
289
CAUUGCACUUUGAUUAGCAmUmU
317
UGCUAAUCAAAGUGCAAUGmUmU
210
290
AGCGAUGGAACUUCGACUUmUmU
318
AAGUCGAAGUUCCAUCGCUmUmU
211
291
GCGAUGGAACUUCGACUUUmUmU
319
AAAGUCGAAGUUCCAUCGCmUmU
1473
292
GGGAAGGGACACACAAGAAmUmU
320
UUCUUGUGUGUCCCUUCCCmUmU
1507
293
UCUACCUCAGGCAGCUCAAmUmU
321
UUGAGCUGCCUGAGGUAGAmUmU
2067
294
GGUGCUCAAUAAAUGAUUCmUmU
322
GAAUCAUUUAUUGAGCACCmUmU
1063
295
CAUCAUCAAAAACUUUGGAmUmU
323
UCCAAAGUUUUUGAUGAUGmUmU
1735
296
AAGGAGUCAGACAUUUUAAmUmU
324
UUAAAAUGUCUGACUCCUUmUmU
783
297
GUGCUGGGCAUUUUUAUUUmUmU
325
AAAUAAAAAUGCCCAGCACmUmU
869
298
GCCGGCUUCAUGCCAGCUAmUmU
326
UAGCUGGCAUGAAGCCGGCmUmU
1060
299
GGGCAUCAUCAAAAACUUUmUmU
327
AAAGUUUUUGAUGAUGCCCmUmU
1492
300
GAAGGGCACCCUAGUUCUAmUmU
328
UAGAACUAGGGUGCCCUUCmUmU
1704
301
CAGUUCAUUGCACUUUGAUmUmU
329
AUCAAAGUGCAAUGAACUGmUmU
1733
302
ACAAGGAGUCAGACAUUUUmUmU
330
AAAAUGUCUGACUCCUUGUmUmU
1847
303
UGGAGGCACUGAAGUGCUUmUmU
331
AAGCACUUCAGUGCCUCCAmUmU
2000
304
GCAGGGACCACACCCUGUAmUmU
332
UACAGGGUGUGGUCCCUGCmUmU
2014
305
CUGUACUGUUCUGUGUCUUmUmU
333
AAGACACAGAACAGUACAGmUmU
677
306
UUAAACACCUCCUCAUGUAmUmU
334
UACAUGAGGAGGUGUUUAAmUmU
475
307
AGACUCUCAGGGUCGAAAAmUmU
335
UUUUCGACCCUGAGAGUCUmUmU
508
308
CAUGACAGAUUUCUACCACmUmU
336
GUGGUAGAAAUCUGUCAUGmUmU
514
309
AGAUUUCUACCACUCCAAAmUmU
337
UUUGGAGUGGUAGAAAUCUmUmU
549
310
CCAAGAGGAAGCCCUAAUCmUmU
338
GAUUAGGGCUUCCUCUUGGmUmU
382
311
GACAGCAGAGGAAGACCAUmUmU
339
AUGGUCUUCCUCUGCUGUCmUmU
2042
312
CUCCCACAAUGCUGAAUAUmUmU
340
AUAUUCAGCAUUGUGGGAGmUmU
[00173] Ключ к таблице 7: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, g, c, t представляют 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C и тимидин, соответственно. mU представляет собой 2'-метокси-U.
[00174] Примеры RNAi молекул по данному изобретению, направленных на p21 мРНК, представлены в таблице 8.
Таблица 8: последовательности RNAi молекул для p21
Эталонн. полож-е
SEQ ID №
СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 341 до 354
SEQ ID №
АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 355 до 368
1735'
341
AAGGAGUCAGACAUUUUAANN
355
UUAAAAUGUCUGACUCCUUNN
1
342
<u>AAG</u>GAGU<u>C</u>AGA<u>C</u>AUUU<u>U</u>AA<u>UU</u>
356
U<u>U</u>AaAa<u>U</u>gUC<u>U</u>GACUCCUU<u>UU</u>
2
343
<u>AAG</u>GAGU<u>C</u>AGA<u>C</u>A<u>UU</u>U<u>U</u>AA<u>UU</u>
357
U<u>U</u>AaAa<u>U</u>gUC<u>U</u>GACUCCUU<u>UU</u>
3
344
<u>AAG</u>GAGU<u>C</u>AGA<u>C</u>A<u>UU</u>U<u>U</u>AA<u>UU</u>
358
U<u>U</u>AaAaUgUCUGACUCCUU<u>UU</u>
4
345
<u>AAG</u>GAGU<u>C</u>AGA<u>C</u>AUUU<u>U</u>AA<u>UU</u>
359
U<u>U</u>AaAaUgUCUGACUCCUU<u>UU</u>
5
346
AAGGAGUCAGACAUUUUAA<u>UU</u>
360
UUaaaaugUCUGACUCCUU<u>UU</u>
6
347
AAGGAGUCAGACAUUUUAA<u>UU</u>
361
UUAAaaugUCUGACUCCUU<u>UU</u>
7
348
AAGGAGUCAGACAUUUUAA<u>UU</u>
362
uUaAaAuGUCUGACUCCUU<u>UU</u>
8
349
AAGGAGUCAGACAUUUUAA<u>UU</u>
363
UUaAaAuGUCUGACUCCUU<u>UU</u>
9
350
AAGGAGUCAGACAUUUUAA<u>UU</u>
364
UUAaAaUgUCUGACUCCUU<u>UU</u>
10
351
AAGGAGUCAGACAUUUUAA<u>UU</u>
365
U<u>U</u>AAAA<u>U</u>GUC<u>U</u>GACUCCUU<u>UU</u>
11
AAGGAGU<u>C</u>AGA<u>C</u>AUUU<u>U</u>AA<u>UU</u>
366
UUAAAAUGUCUGACUCCUU<u>UU</u>
12
353
<u>AAG</u>GAGUCAGACAUUUUAA<u>UU</u>
367
UUAAAAUGUCUGACUCCUU<u>UU</u>
13
354
<u>AAG</u>GAGU<u>C</u>AGA<u>C</u>AUUU<u>U</u>AA<u>UU</u>
368
UUAAAAUGUCUGACUCCUU<u>UU</u>
U
U
[00175] Ключ к таблице 8: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. Буквы в нижнем регистре a, u, g, c, t относятся к 2'-дезокси-A, 2'-дезокси-U, 2'-дезокси-G, 2'-дезокси-C и дезокситимидину (dT=T=t), соответственно. Подчеркивание относится к 2'-OMe-замещенному, например, . N представляет собой A, C, G, U, , a, c, g, u, t или модифицированный, инвертированный или химически модифицированный нуклеотид.
[00176] Варианты осуществления данного изобретения охватывают миРНК молекулы из таблиц 1-8, которые модифицированы или химически модифицированы в соответствии с примерами, приведенными выше.
[00177] В некоторых вариантах осуществления данное изобретение предусматривает ряд молекул нуклеиновой кислоты, где a) молекула имеет полинуклеотидную смысловую цепь и полинуклеотидную антисмысловую цепь; b) каждая цепь молекулы составляет от 15 до 30 нуклеотидов в длину; c) непрерывная область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи комплементарна последовательности мРНК, кодирующей p21; и d) по меньшей мере часть смысловой цепи комплементарна по меньшей мере части антисмысловой цепи и молекула имеет область дуплекса от 15 до 30 нуклеотидов в длину.
[00178] В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь непрерывную область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи, которая комплементарна последовательности мРНК, кодирующей p21, и расположена в области дуплекса молекулы.
[00179] В дополнительных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь непрерывную область от 15 до 30 нуклеотидов антисмысловой цепи, которая комплементарна последовательности мРНК, кодирующей p21.
[00180] В дополнительных аспектах молекула нуклеиновой кислоты по данному изобретению может иметь каждую цепь молекулы, составляющую от 18 до 22 нуклеотидов в длину. Молекула нуклеиновой кислоты может иметь область дуплекса 19 нуклеотидов в длину.
[00181] В определенных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь полинуклеотидную смысловую цепь и полинуклеотидную антисмысловую цепь, которые соединены в виде одной цепи и образуют область дуплекса, соединенную на одном конце с помощью петли.
[00182] Молекулы нуклеиновой кислоты по данному изобретению могут иметь тупой конец, и могут иметь один или более липких 3'-концов.
[00183] Молекулы нуклеиновой кислоты по данному изобретению могут представлять собой RNAi молекулы, которые активны для сайленсинга генов, например, дцРНК, которая активна для сайленсинга генов, миРНК, микроРНК или shRNA, активную для сайленсинга генов, а также РНК, направляемую с помощью ДНК (ddRNA), РНК, взаимодействующую с Piwi (piRNA), и ассоциированную с повторами миРНК (rasiRNA).
50
[00184] Данное изобретение предусматривает ряд молекул нуклеиновой кислоты, которые активны для ингибирования экспрессии p21. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь IC для нокдауна p21 меньше 100 пМ.
50
[00185] В дополнительных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может иметь IC для нокдауна p21 меньше 50 пМ.
[00186] Это изобретение дополнительно предусматривает композиции, содержащие одну или более патентоспособных молекул нуклеиновой кислоты и фармацевтически приемлемый носитель. Носителем может быть липидная молекула или липосома.
[00187] Соединения и композиции по данному изобретению можно использовать в способах предотвращения или лечения заболевания, ассоциированного с p21, посредством введения соединения или композиции субъекту, нуждающемуся в этом.
[00188] В дополнительных аспектах данное изобретение включает способы лечения заболевания, связанного с экспрессией p21, посредством введения субъекту, нуждающемуся в этом, композиции, содержащей одну или более патентоспособных молекул нуклеиновой кислоты. Заболевание может представлять собой злокачественную опухоль, которая может присутствовать при заболевании, таком как злокачественные опухоли, связанные с экспрессией p21, среди прочих.
[00189] Способы по данному изобретению позволяют использовать патентоспособные соединения для предотвращения или лечения злокачественной опухоли. Злокачественная опухоль может быть представлена в различных заболеваниях, например, злокачественных опухолях, связанных с экспрессией p21, злокачественных опухолях, обусловленных клетками, экспрессирующими мутантный KRAS, саркомах, фибросаркоме, озлокачествленной фиброзной гистиоцитоме, липосаркоме, рабдомиосаркоме, лейомиосаркоме, ангиосаркоме, саркоме Капоши, лимфангиосаркоме, синовиальной саркоме, хондросаркоме, остеосаркоме, карциномах, опухоли головного мозга, злокачественной опухоли головы и шеи, злокачественной опухоли молочной железы, злокачественной опухоли легких, злокачественной опухоли пищевода, злокачественной опухоли желудка, злокачественной опухоли двенадцатиперстной кишки, злокачественной опухоли аппендикса, злокачественной опухоли толстой кишки, злокачественной опухоли прямой кишки, злокачественной опухоли печени, злокачественной опухоли поджелудочной железы, злокачественной опухоли желчного пузыря, злокачественной опухоли желчных протоков, злокачественной опухоли почки, злокачественной опухоли уретры, злокачественной опухоли мочевого пузыря, злокачественной опухоли предстательной железы, злокачественной опухоли яичек, злокачественной опухоли матки, злокачественной опухоли яичника, злокачественной опухоли кожи, лейкозе, злокачественной лимфоме, эпителиальных злокачественных опухолях и неэпителиальных злокачественных опухолях.
[00190] Варианты осуществления данного изобретения могут предусматривать RNAi молекулы, которые можно использовать для понижающей регуляции или ингибирования экспрессии гена и/или белка.
[00191] RNAi молекулы по данному раскрытию можно использовать индивидуально или в комбинации с другими миРНК для модулирования экспрессии одного или более генов.
[00192] RNAi молекулы по данному раскрытию можно использовать индивидуально или в комбинации или в сочетании с другими известными лекарственными средствами для предотвращения или лечения заболеваний или улучшения симптомов состояний или нарушений.
[00193] RNAi молекулы по данному изобретению можно использовать для того, чтобы модулировать или ингибировать экспрессию гена со специфичной последовательностью.
[00194] RNAi молекулы по данному раскрытию могут включать направляющая цепь, для которой ряд смежных нуклеотидов по меньшей мере частично комплементарен мРНК человека.
[00195] Варианты осуществления данного изобретения могут включать способы предотвращения, лечения или улучшения симптомов заболевания или состояния у нуждающегося в этом субъекта.
[00196] В некоторых вариантах осуществления способы предотвращения, лечения или улучшения симптомов злокачественной опухоли у субъекта могут включать введение субъекту RNAi молекулы по данному изобретению для того, чтобы модулировать экспрессию гена у субъекта или в организме.
[00197] В некоторых вариантах осуществления это изобретение предусматривает способы понижающей регуляции экспрессии гена в клетке или организме, посредством приведения клетки или организма в контакт с RNAi молекулой по данному изобретению.
[00198] RNAi молекулы, направленные на Hsp47
[00199] В некоторых вариантах осуществления данное изобретение может предусматривать ряд RNAi молекул и композиций для модулирования экспрессии белка теплового шока 47 (Hsp47), коллаген-специфического молекулярного шаперона для внутриклеточного транспорта и созревания.
[00200] Некоторые примеры миРНК для Hsp47 приведены в US 8,710,209, который, таким образом, включен посредством ссылки в полном объеме для всех целей.
[00201] Hsp47 или гомологичная ему генная последовательность раскрыты, например, под номером доступа GenBank AB010273 (человек), X60676 (мышь) или M69246 (крыса, gp46).
[00202] Средства для супрессии Hsp47 раскрыты для ингибирования фиброза. См., например, US 8,173,170 B2, который, таким образом, включен посредством ссылки в полном объеме для всех целей. Однако существует ограниченная информация, касающаяся эффекта ингибирования Hsp47 при развитии, прогрессировании и росте злокачественных опухолей.
[00203] В некоторых вариантах осуществления каждая цепь миРНК молекулы по данному изобретению может составлять от 15 до 60 нуклеотидов в длину или от 15 до 40 нуклеотидов в длину или от 19 до 25 нуклеотидов в длину.
[00204] В определенных вариантах осуществления данное изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую RNAi молекулы для лечения злокачественной опухоли, которые представляют собой RNAi молекулы, направленные на Hsp47.
[00205] Примеры RNAi молекул по данному раскрытию, направленных на Hsp47 мРНК, представлены в таблице 9.
Таблица 9: последовательности RNAi молекул для Hsp47
SEQ ID №
СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 369 до 389
SEQ ID №
АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 390 до 410
мышь
369
CGAGAACAGUUUGUACAAGUU
390
CUUGUACAAACUGUUCUCGUU
370
CAGGCCUCUACAACUACUATT
391
UAGUAGUUGUAGAGGCCUGTT
371
GAGCACUCCAAGAUCAACUUCCGCG
392
CGCGGAAGUUGAUCUUGGAGUGCUCUU
372
GGACAGGCCUCUACAACUATT
393
UAGUUGUAGAGGCCUGUCCTT
373
GAGCACUCCAAGAUCAACUTT
394
AGUUGAUCUUGGAGUGCUCTT
374
GAACACUCCAAGAUCAACUTT
395
AGUUGAUCUUGGAGUGUUCTT
375
CAGGCCUCUACAACUACUACGACGA
396
UCGUCGUAGUAGUUGUAGAGGCCUGUU
376
GAACACUCCAAGAUCAACUUCCGAG
397
CUCGGAAGUUGAUCUUGGAGUGUUCUU
377
GGACAGGCCUCUACAACUACUACGA
398
UCGUAGUAGUUGUAGAGGCCUGUCCUU
378
CAGGCCUCUACAACUACUAdTdTdAdAdAdAdA
399
UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
379
CAGGCCUCUACAACUACUA
400
UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
380
CAGGCCUCUACAACUACUAdTdTdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdA
401
UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
381
dAdAdAdAdACAGGCCUCUACAACUACUAdTdT
402
UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
382
CAGGCCUCUACAACUACUAdTdTdAdAdAdAdAdAdAdA
403
UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
383
dAdAdAdAdAdAdAdACAGGCCUCUACAACUACUAdTdT
404
UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
384
CAGGCCUCUACAACUACUAdTdTdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdA
405
UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
385
dAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdACAGGCCUCUACAACUACUAdTdT
406
UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
386
CAGGCCUCUACAACUACUAdTdTdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdAdA
407
UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
387
CAGGCCUCUACAACUACUAdTdT
408
UAGUAGUUGUAGAGGCCUGdTdT
мышь
388
GGACAGGCCUGUACAACUAdTdT
409
UAGUUGUACAGGCCUGUCCdTdT
человек
389
GGACAGGCCUCUACAACUAdTdT
410
UAGUUGUAGAGGCCUGUCCdTdT
[00206] Ключ к таблице 9: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. d в нижнем регистре обозначает «дезокси».
[00207] В таблице 9 антисмысловая цепь любой из RNAi молекул, направленных на Hsp47, может альтернативно иметь дезоксинуклеотиды во множестве положений, множество положений представляет собой одно из следующего: каждое из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3-8 от 5'-конца антисмысловой цепи; и каждое из положений 5-8 от 5'-конца антисмысловой цепи.
[00208] Дополнительные примеры RNAi молекул по данному раскрытию, направленных на Hsp47 мРНК, представлены в таблице 10.
Таблица 10: последовательности RNAi молекул и контроль для Hsp47
SEQ ID №
Последовательность
Название
411
3'-C3-25rU-25rC-25rC-25rU-25rU-rC-rA-rA-rC-rU-rA-rG-rA-rA-rC-rC-rU-rC-rA-idAB-5'
Смысловая «A»
412
3'-C3-C3-mU-rG-mA-rG-mG-rU-mU-rC-mU-rA-rG-mU-25rU-mG-rA-mA-rG-mG-rA-5'
Антисмысловая «A»
413
3'-C3-rA-rG-mU-rG-rG-rG-mU-rA-mC-rA-25rC-rA-rG-rA-rG-mU-rC-rC-rU-idAB-5'
Смысловая «B»
414
3'-C3-C3-rA-rG-rG-rA-mC-rU-rC-rU-mG-rU-rG-mU-rA-25rC-rC-mC-rA-rC-mU-5'
Антисмысловая «B»
415
5'-idAB-rG-rA-rG-rA-rC-rA-rC-rA-rU-rG-rG-rG-rU-rG-25rC-25rU-25rA-25rU-25rA-C3-P-3'
Смысловая «C»
416
5'-mU-rA-mU-rA-mG-rC-25rA-rC-mC-rC-mA-rU-mG-rU-mG-rU-mC-rU-mC-C3-C3-3'
Антисмысловая «C»
417
5'-idAB-rC-mU-mU-rA-mC-rG-mC-mU-25rG-rA-rG-mU-rA-mC-mU-rU-mC-rG-rU-C3-3'
Смысловая «D»,Отрицательный контроль
418
5'-rA-mC-rG-rA-rA-25rG-mU-rA-rC-rU-mC-rA-rG-rC-rG-mU-rA-rA-rG-C3-C3-3'
Антисмысловая «D»,Отрицательный контроль
[00209] Ключ к таблице 10: обозначения: rX представляет рибонуклеотиды, mX представляет 2'-O-Метил рибонуклеотиды, 25rX представляет рибонуклеотиды с 2'-5' связями, C3 представляет 1,3-пропандиоловый спейсер, idAB представляет инвертированную 1,2-дидезокси-D-рибозу, P представляет фосфатную группу 3'-конца.
[00210] В таблице 10 антисмысловая цепь любой из RNAi молекул, направленных на Hsp47, может альтернативно иметь дезоксинуклеотиды во множестве положений, множество положений представляет собой одно из следующего: каждое из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3-8 от 5'-конца антисмысловой цепи; и каждое из положений 5-8 от 5'-конца антисмысловой цепи.
[00211] RNAi молекулы, направленные на MCL1
[00212] В некоторых вариантах осуществления данное изобретение может предусматривать ряд RNAi молекул и композиций для модулирования экспрессии мРНК транскрипционного варианта 2 гена лейкоза миелоидных клеток 1 (MCL1) Homo sapiens.
[00213] MCL1 раскрыт, например, под № доступа NM_182763.2 (человек).
[00214] Примеры RNAi молекул по данному раскрытию, направленных на MCL1 мРНК, представлены в таблице 11.
Таблица 11: последовательности RNAi молекул для MCL1
SEQ ID №
СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 419 до 426
SEQ ID №
АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 427 до 434
419
GCCUUCCAAGGAUGGGUUUGU
427
AAACCCAUCCUUGGAAGGCCG
420
GGAGUUCUUCCAUGUAGAGGA
428
CUCUACAUGGAAGAACUCCAC
421
CCAUGUAGAGGACCUAGAAGG
429
UUCUAGGUCCUCUACAUGGAA
422
GCCUUCCAAGGAUGGGUUUGU
430
AAAcCcAuCCUUGGAAGGCCG
423
GCCUUCCAAGGAUGGGUUUGU
431
AAaCcCaUCCUUGGAAGGCCG
424
GCCUUCCAAGGAUGGGUUUGU
432
aAaCcCaUCCUUGGAAGGCCG
425
GCCUUCCAAGGAUGGGUUUGU
433
AAacccauCCUUGGAAGGCCG
426
GCCUUCCAAGGAUGGGUUUGU
434
AAACccauCCUUGGAAGGCCG
[00215] Ключ к таблице 11: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. d в нижнем регистре представляет «дезокси».
[00216] В таблице 11 антисмысловая цепь любой из RNAi молекул, направленных на MCL1, может альтернативно иметь дезоксинуклеотиды во множестве положений, множество положений представляет собой одно из следующего: каждое из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3-8 от 5'-конца антисмысловой цепи; и каждое из положений 5-8 от 5'-конца антисмысловой цепи.
[00217] RNAi молекулы, направленные на ARAF
[00218] В некоторых вариантах осуществления данное изобретение может предусматривать ряд RNAi молекул и композиций для модулирования экспрессии мРНК транскрипционного варианта 1 гена протоонкогена серин/треониновой киназы A-Raf (ARAF) Homo sapiens.
[00219] ARAF раскрыта, например, под № доступа NM_001654.4 (человек).
[00220] Примеры RNAi молекул по данному раскрытию, направленных на ARAF мРНК, представлены в таблице 12.
Таблица 12: последовательности RNAi молекул для ARAF
SEQ ID №
СМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 435 до 442
SEQ ID №
АНТИСМЫСЛОВАЯ ЦЕПЬ(5'-->3')SEQ ID №№ с 443 до 450
435
GCUCAUUGUCGAGGUCCUUGA
443
AAGGACCUCGACAAUGAGCUC
436
GCCAAACCUGUGGCUACAAGU
444
UUGUAGCCACAGGUUUGGCAA
437
GGAAGACGCGACAUGUCAACA
445
UUGACAUGUCGCGUCUUCCUG
438
GCUCAUUGUCGAGGUCCUUGA
446
AAGgAcCuCGACAAUGAGCUC
439
GCUCAUUGUCGAGGUCCUUGA
447
AAgGaCcUCGACAAUGAGCUC
440
GCUCAUUGUCGAGGUCCUUGA
448
aAgGaCcUCGACAAUGAGCUC
441
GCUCAUUGUCGAGGUCCUUGA
449
AAggaccuCGACAAUGAGCUC
442
GCUCAUUGUCGAGGUCCUUGA
450
AAGGaccuCGACAAUGAGCUC
[00221] Ключ к таблице 12: A, G, C и U в верхнем регистре относятся к рибо-A, рибо-G, рибо-C и рибо-U, соответственно. d в нижнем регистре представляет «дезокси».
[00222] В таблице 12 антисмысловая цепь любой из RNAi молекул, направленных на ARAF, может альтернативно иметь дезоксинуклеотиды во множестве положений, множество положений представляет собой одно из следующего: каждое из положений 4, 6 и 8 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 1, 3, 5 и 7 от 5'-конца антисмысловой цепи; каждое из положений 3-8 от 5'-конца антисмысловой цепи; и каждое из положений 5-8 от 5'-конца антисмысловой цепи.
[00223] РНК-интерференция
[00224] В целом, миРНК может составлять приблизительно от 21 приблизительно до 23 нуклеотидов в длину и содержать область дуплекса из пар оснований приблизительно 19 нуклеотидов в длину.
[00225] В RNAi вовлечен эндонуклеазный комплекс, известный как РНК-индуцированный комплекс сайленсинга (RISC). миРНК имеет антисмысловую или направляющую цепь, которая попадает в RISC комплекс и опосредует расщепление одноцепочечной РНК мишени, имеющей последовательность, комплементарную антисмысловой цепи миРНК дуплекса. Другой цепью миРНК является сопровождающая цепь. Расщепление РНК мишени происходит в середине области, комплементарной антисмысловой цепи миРНК дуплекса. См., например, Elbashir et al., Genes & Development, 2001, том 15, стр. 188-200.
[00226] Как используют в настоящем описании, термин «смысловая цепь» относится к нуклеотидной последовательности миРНК молекулы, которая частично или полностью комплементарна по меньшей мере части соответствующей антисмысловой цепи миРНК молекулы. Смысловая цепь миРНК молекулы может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, обладающую гомологией с последовательностью-мишенью нуклеиновой кислоты.
[00227] Как используют в настоящем описании, термин «антисмысловая цепь» относится к нуклеотидной последовательности миРНК молекулы, которая частично или полностью комплементарна по меньшей мере части последовательности-мишени нуклеиновой кислоты. Антисмысловая цепь миРНК молекулы может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна по меньшей мере части соответствующей смысловой цепи миРНК молекулы.
[00228] RNAi молекулы могут осуществлять понижающую регуляцию или нокдаун экспрессии гена через опосредование РНК-интерференции со специфичностью к последовательности. См., например, Zamore et al., Cell, 2000, том 101, стр. 25-33; Elbashir et al., Nature, 2001, том 411, стр. 494-498; Kreutzer et al., WO2000/044895; Zernicka-Goetz et al., WO2001/36646; Fire et al., WO1999/032619; Plaetinck et al., WO2000/01846; Mello et al., WO2001/029058.
[00229] Как используют в настоящем описании, термины «ингибировать», «осуществлять понижающую регуляцию» или «снижать» в отношении экспрессии гена обозначают, что происходит снижение экспрессии гена или уровня молекул мРНК, кодирующих один или более белков, или активности одного или более кодируемых белков ниже того, что наблюдают в отсутствие RNAi молекулы или миРНК по данному изобретению. Например, уровень экспрессии, уровень мРНК или уровень активности кодируемого белка можно снижать по меньшей мере на 1%, или по меньшей мере на 10%, или по меньшей мере на 20%, или по меньшей мере на 50%, или по меньшей мере на 90% или больше относительно того, что наблюдают в отсутствие RNAi молекулы или миРНК по данному изобретению.
[00230] RNAi молекулы также можно использовать для нокдауна экспрессии вирусного гена и, следовательно, влиять на репликацию вируса.
[00231] RNAi молекулы можно выполнять из отдельных полинуклеотидных цепей: смысловой цепи или сопровождающей цепи и антисмысловой цепи или направляющей цепи. Направляющая и сопровождающая цепи по меньшей мере частично комплементарны. Направляющая цепь и сопровождающая цепь могут формировать область дуплекса, имеющую приблизительно от 15 приблизительно до 49 пар оснований.
[00232] В некоторых вариантах осуществления область дуплекса миРНК может иметь 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или 49 пар оснований.
[00233] В определенных вариантах осуществления RNAi молекула может быть активна в RISC комплексе, причем отрезок области дуплекса активен для RISC.
[00234] В дополнительных вариантах осуществления RNAi молекула может быть активна в качестве субстрата дайсера для превращения в RNAi молекулу, которая может быть активна в RISC комплексе.
[00235] В некоторых аспектах RNAi молекула может иметь комплементарные части направляющей и сопровождающей последовательностей на противоположных концах длинной молекулы с тем, чтобы молекула могла формировать область дуплекса из комплементарных частей последовательностей, а цепи соединены на одном конце области дуплекса с помощью нуклеотидных или не нуклеотидных линкеров. Например, структура шпильки или структура из стебля и петли. Взаимодействия линкера с цепями могут представлять собой ковалентные связи или нековалентные взаимодействия.
[00236] RNAi молекула по данному раскрытию может содержать нуклеотидный, не нуклеотидный или смешанный нуклеотидный/не нуклеотидный линкер, которые соединяет смысловую область нуклеиновой кислоты с антисмысловой областью нуклеиновой кислоты. Нуклеотидный линкер может представлять собой линкер≥2 нуклеотида в длину, например, приблизительно 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 нуклеотидов в длину. Нуклеотидный линкер может представлять собой аптамер нуклеиновой кислоты. Под «аптамером» или «аптамером нуклеиновой кислоты», как используют в настоящем описании, понимают молекулу нуклеиновой кислоты, которая связывается специфично с молекулой-мишенью, где молекула нуклеиновой кислоты имеет последовательность, которая содержит последовательность, распознаваемую молекулой-мишенью в ее природном окружении. С другой стороны, аптамером может быть молекула нуклеиновой кислоты, которая связывается с молекулой-мишенью, где молекула-мишень не связывается с нуклеиновой кислотой естественным путем. Например, аптамер можно использовать для связывания с лиганд-связывающим доменом белка, тем самым предотвращая взаимодействие встречающегося в природе лиганда с белком. См., например, Gold et al., Annu Rev Biochem, 1995, том 64, стр. 763-797; Brody et al., J. Biotechnol., 2000, том 74, стр. 5-13; Hermann et al., Science, 2000, том 287, стр. 820-825.
[00237] Примеры не нуклеотидного линкера включают абазический нуклеотид, простой полиэфир, полиамин, полиамид, пептид, углевод, липид, полиуглеводород или другие полимерные соединения, например, полиэтиленгликоли, такие как те, которые имеют от 2 до 100 звеньев этиленгликоля. Некоторые примеры описаны в Seela et al., Nucleic Acids Research, 1987, том 15, стр. 3113-3129; Cload et al., J. Am. Chem. Soc., 1991, том 113, стр. 6324-6326; Jaeschke et al., Tetrahedron Lett., 1993, том 34, стр. 301; Arnold et al., WO1989/002439; Usman et al., WO1995/006731; Dudycz et al., WO1995/011910 и Ferentz et al., J. Am. Chem. Soc., 1991, том 113, стр. 4000-4002.
[00238] RNAi молекула может иметь один или более липких концов от области дуплекса. Липкие концы, которые представляют собой одноцепочечные области неспаренных оснований, могут составлять от одного до восьми нуклеотидов в длину или длиннее. Липкий конец может представлять собой 3′-концевой липкий конец, где 3′-конец цепи одноцепочечную область от одного до восьми нуклеотидов. Липкий конец может представлять собой 5′-концевой липкий конец, где 5′-конец цепи имеет одноцепочечную область от одного до восьми нуклеотидов.
[00239] Липкие концы RNAi молекулы могут иметь одну и ту же длину или могут быть различной длины.
[00240] RNAi молекула может иметь один или более нуклеотидов тупого конца, где область дуплекса не заканчивается липким концом, и основания цепей спарены до конца области дуплекса.
[00241] RNAi молекула по данному раскрытию может иметь один или более тупых концов или может иметь один или более липких концов или может иметь комбинацию тупого конца и липкого конца.
[00242] 5′-конец цепи RNAi молекулы может быть в тупом конце или может быть в липком конце. 3′-конец цепи RNAi молекулы может быть в тупом конце или может быть в липком конце.
[00243] 5′-конец цепи RNAi молекулы может быть в тупом конце, тогда как 3′-конец находится в липком конце. 3′-конец цепи RNAi молекулы может быть в тупом конце, тогда как 5′-конец находится в липком конце.
[00244] В некоторых вариантах осуществления оба конца RNAi молекула представляют собой тупые концы.
[00245] В дополнительных вариантах осуществления оба конца RNAi молекулы имеют липкий конец.
[00246] Липкие концы на 5′- и 3′-концах могут быть различной длины.
[00247] В определенных вариантах осуществления RNAi молекула может иметь тупой конец, где 5′-конец антисмысловой цепи и 3′-конец смысловой цепи не имеют какие-либо нуклеотиды липкого конца.
[00248] В дополнительных вариантах осуществления RNAi молекула может иметь тупой конец, где 3′-конец антисмысловой цепи и 5′-конец смысловой цепи не имеют какие-либо нуклеотиды липкого конца.
[00249] RNAi молекула может иметь несовпадения в образовании пар оснований в области дуплекса.
[00250] Любой нуклеотид в липком конце RNAi молекулы может представлять собой дезоксирибонуклеотид или рибонуклеотид.
[00251] Один или более дезоксирибонуклеотидов могут находиться на 5′-конце, где 3′-конец другой цепи RNAi молекулы может не иметь липкий конец или может не иметь дезоксирибонуклеотидный липкий конец.
[00252] Один или более дезоксирибонуклеотидов могут находиться на 3′-конце, где 5′-конец другой цепи RNAi молекулы может не иметь липкий конец или может не иметь дезоксирибонуклеотидный липкий конец.
[00253] В некоторых вариантах осуществления один или более или все нуклеотиды липкого конца RNAi молекулы могут представлять собой 2′-дезоксирибонуклеотиды.
[00254] RNAi молекулы субстрата дайсера
[00255] В некоторых аспектах RNAi молекула может иметь длину, подходящую в качестве субстрата дайсера, который может быть процессирован для получения RISC активной RNAi молекулы. См., например, Rossi et al., US2005/0244858.
[00256] Двухцепочечная РНК (дцРНК), которая является субстратом дайсера, может иметь такую достаточную длину, что ее процессирует дайсер для получения активной RNAi молекулы, и дополнительно может иметь одно или более из следующих свойств: (i) дцРНК субстрата дайсера может быть асимметричным, например, имеющим липкий 3′-конец на антисмысловой цепи, и (ii) дцРНК субстрата дайсера может иметь модифицированный 3′-конец на смысловой цепи для того, чтобы определять ориентацию дайсера, связывающего и процессирующуего дцРНК в активную RNAi молекулу.
[00257] В определенных вариантах осуществления самая длинная цепь в дцРНК субстрата дайсера может составлять 24-30 нуклеотидов в длину.
[00258] дцРНК субстрата дайсера может быть симметричной или асимметричной.
[00259] В некоторых вариантах осуществления дцРНК субстрата дайсера может иметь смысловую цепь 22-28 нуклеотидов и антисмысловая цепь 24-30 нуклеотидов.
[00260] В определенных вариантах осуществления дцРНК субстрата дайсера может иметь липкий конец на 3′-конце антисмысловой цепи.
[00261] В дополнительных вариантах осуществления дцРНК субстрата дайсера может иметь смысловую цепь 25 нуклеотидов в длину и антисмысловая цепь 27 нуклеотидов в длину, с липким 3′-концом из 2 оснований. Липкий конец может составлять 1, 2 или 3 нуклеотида в длину. Смысловая цепь также может иметь 5′-фосфат.
[00262] Асимметричная дцРНК субстрата дайсера может иметь два дезоксирибонуклеотида на 3′-конце смысловой цепи вместо двух рибонуклеотидов.
[00263] Смысловая цепь дцРНК субстрата дайсера может составлять приблизительно от 22 приблизительно до 30, или приблизительно от 22 приблизительно до 28; или приблизительно от 24 приблизительно до 30; или приблизительно от 25 приблизительно до 30; или приблизительно от 26 приблизительно до 30; или приблизительно от 26 и 29; или приблизительно от 27 приблизительно до 28 нуклеотидов в длину.
[00264] Смысловая цепь дцРНК субстрата дайсера может составлять 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 нуклеотидов в длину.
[00265] В определенных вариантах осуществления дцРНК субстрата дайсера может иметь смысловую и антисмысловую цепи, которые составляют по меньшей мере приблизительно 25 нуклеотидов в длину и не более приблизительно 30 нуклеотидов в длину.
[00266] В определенных вариантах осуществления дцРНК субстрата дайсера может иметь смысловую и антисмысловую цепи, которые составляют от 26 до 29 нуклеотидов в длину.
[00267] В определенных вариантах осуществления дцРНК субстрата дайсера может иметь смысловую и антисмысловую цепи, которые составляют 27 нуклеотидов в длину.
[00268] Смысловая и антисмысловая цепи дцРНК субстрата дайсера могут иметь одну и ту же длину, как при тупых концах, или различные длины, как при липких концах, или могут иметь тупой конец и липкий конец.
[00269] дцРНК субстрата дайсера может иметь область дуплекса 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 нуклеотидов в длину.
[00270] Антисмысловая цепь дцРНК субстрата дайсера может иметь любую последовательность, которая отжигается с по меньшей мере частью последовательности смысловой цепи при биологических условиях, таких как в цитоплазме эукариотической клетки.
[00271] Субстрат дайсера со смысловой и антисмысловой цепью можно соединять с помощью третьей структуры, такой как линкерная группа или линкерный олигонуклеотид. Линкер соединяет две цепи в дцРНК, например, с тем, чтобы формировать шпильку при отжиге.
[00272] Смысловая и антисмысловая цепи субстрата дайсера в целом комплементарны, но могут иметь несовпадения в образовании пар оснований.
[00273] В некоторых вариантах осуществления дцРНК субстрата дайсера может быть асимметричной, так что смысловая цепь имеет 22-28 нуклеотидов и антисмысловая цепь имеет 24-30 нуклеотидов.
[00274] Область одной из цепей, в частности, антисмысловой цепи, дцРНК субстрата дайсера может иметь отрезок последовательности по меньшей мере в 19 нуклеотидов, где эти нуклеотиды находятся в области из 21 нуклеотида, смежной с 3′-концом антисмысловой цепи, и достаточно комплементарны нуклеотидной последовательности РНК, полученной с гена-мишени.
[00275] Антисмысловая цепь дцРНК субстрата дайсера может иметь от 1 до 9 рибонуклеотидов на 5′-конце, чтобы давать длину 22-28 нуклеотидов. Когда антисмысловая цепь имеет длину 21 нуклеотид, тогда 1-7 рибонуклеотидов, или 2-5 рибонуклеотидов, или 4 рибонуклеотида можно добавлять на 3′-конце. Добавленные рибонуклеотиды могут иметь любую последовательность.
[00276] Смысловая цепь дцРНК субстрата дайсера может иметь 24-30 нуклеотидов. Смысловая цепь может быть по существу комплементарной антисмысловой цепи для отжига с антисмысловой цепью при биологических условиях.
[00277] Способы использования RNAi молекул
[00278] Молекулы нуклеиновой кислоты и RNAi молекулы по данному изобретению можно доставлять в клетку или ткань посредством прямого внесения молекулы или с использованием молекул в комбинации с носителем или разбавителем.
[00279] Молекулы нуклеиновой кислоты и RNAi молекулы по данному изобретению можно доставлять или вводить в клетку, ткань, орган или субъекту посредством прямого внесения молекул с носителем или разбавителем или любым другим носителем для доставки, который действует для поддержки, усиления или облегчения попадания в клетку, например, вирусными последовательностями, вирусным веществом или липидными или липосомными составами.
[00280] Молекулы нуклеиновой кислоты и RNAi молекулы по данному изобретению могут образовывать комплексы с катионными липидами, могут быть упакованы в липосомы или могут быть иным образом доставлены в клетки или ткани мишени. Нуклеиновую кислоту или комплексы нуклеиновой кислоты можно локально вводить в релевантные ткани ex vivo или in vivo через прямое нанесение на кожу, трансдермальное применение или инъекцию.
[00281] Системы доставки могут включать, например, водные и неводные гели, кремы, эмульсии, микроэмульсии, липосомы, мази, водные и неводные растворы, лосьоны, аэрозоли, углеводородные основы и порошки и могут содержать эксципиенты, такие как солюбилизаторы и усилители проникновения.
[00282] Композиции и способы по данному раскрытию могут включать экспрессирующий вектор, который содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну RNAi молекулу по данному изобретению, таким образом, который допускает экспрессию молекулы нуклеиновой кислоты.
[00283] Молекулы нуклеиновой кислоты и RNAi молекулы по данному изобретению можно экспрессировать с транскрипционных единиц, вставленных в ДНК или РНК векторы. Рекомбинантные векторы могут представлять собой ДНК плазмиды или вирусные векторы. Можно использовать вирусные векторы, которые обеспечивают временную экспрессию молекул нуклеиновой кислоты.
[00284] Например, вектор может содержать последовательности, кодирующие обе цепи RNAi молекулы дуплекса или одну молекулу нуклеиновой кислоты, которая является самокомплементарной и, таким образом, образует RNAi молекулу. Экспрессирующий вектор может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую две или больше молекул нуклеиновой кислоты.
[00285] Молекулу нуклеиновой кислоты можно экспрессировать в клетках с эукариотических промоторов. Специалисты в данной области понимают, что с подходящего ДНК/РНК вектора в эукариотических клетках можно экспрессировать любую нуклеиновую кислоту.
[00286] В некоторых аспектах вирусную конструкцию можно использовать для введения экспрессионной конструкции в клетку для транскрипции конструкции дцРНК, кодируемой экспрессионной конструкцией.
[00287] Липидные составы можно вводить животным посредством внутривенной, внутримышечной или интраперитонеальной инъекции или перорально или посредством ингаляции или другими способами, как известно в данной области.
[00288] Известны фармацевтически приемлемые составы для введения олигонуклеотидов, которые можно использовать.
[00289] Способы лечения заболевания
[00290] Примеры заболеваний включают злокачественную опухоль, саркомы, фибросаркому, озлокачествленную фиброзную гистиоцитому, липосаркому, рабдомиосаркому, лейомиосаркому, ангиосаркому, саркому Капоши, лимфангиосаркому, синовиальную саркому, хондросаркому, остеосаркому и карциномы.
[00291] В определенных аспектах в способах по данному изобретению можно использовать патентоспособные соединения для предотвращения или лечения злокачественных опухолей и злокачественных новообразований в любом органе или ткани, в том числе, например, опухоли головного мозга, злокачественной опухоли головы и шеи, злокачественной опухоли молочной железы, злокачественной опухоли легких, злокачественной опухоли пищевода, злокачественной опухоли желудка, злокачественной опухоли двенадцатиперстной кишки, злокачественной опухоли толстой кишки, злокачественной опухоли печени, злокачественной опухоли поджелудочной железы, злокачественной опухоли желчного пузыря, злокачественной опухоли желчных протоков, злокачественной опухоли почки, злокачественной опухоли уретры, злокачественной опухоли мочевого пузыря, злокачественной опухоли предстательной железы, злокачественной опухоли яичек, злокачественной опухоли матки, злокачественной опухоли яичника, злокачественной опухоли кожи, лейкоза, злокачественной лимфомы, эпителиальных злокачественных опухолей и неэпителиальных злокачественных опухолей.
[00292] Пример протокола нокдауна in vitro
3
2
2
[00293] За одни сутки до трансфекции клетки высевали в 96-луночный планшет по 2×10 клеток на лунку с 100 мкл DMEM (HyClone № по каталогу SH30243.01), содержащей 10% FBS, и культивировали в 37°C инкубаторе, содержащем увлажненную атмосферу из 5% CO в воздухе. Перед трансфекцией среду заменяли на 90 мкл Opti-MEM I Reduced Serum Medium (Life Technologies, № по каталогу 31985-070), содержащей 2% FBS. Затем 0,2 мкл липофектамина RNAiMax (Life Technologies, № по каталогу 13778-100) смешивали с 4,8 мкл Opti-MEM I в течение 5 минут при комнатной температуре. Затем 1 мкл миРНК смешивали с 4 мкл Opti-MEM I и объединяли с раствором LF2000 и аккуратно перемешивали, без завихрений. После 5 минут при комнатной температуре смесь инкубировали в течение дополнительных 10 минут при комнатной температуре для того, чтобы сделать возможным образование комплексов РНК-RNAiMax. Кроме того, в лунку добавляли 10 мкл комплексов РНК-RNAiMax и планшет аккуратно встряхивали руками. Клетки инкубировали в 37°C инкубаторе, содержащем увлажненную атмосферу 5% CO в воздухе в течение 2 часов. Среду меняли на свежую Opti-MEM I Reduced Serum Medium, содержащую 2% FBS. Через 24 часа после трансфекции клетки промывали в ледяном PBS один раз. Клетки лизировали с использованием 50 мкл Cell-to-Ct Lysis Buffer (Life Technologies, № по каталогу 4391851 C) в течение 5-30 минут при комнатной температуре. Добавляли 5 мкл Stop Solution и инкубировали в течение 2 минут при комнатной температуре. Незамедлительно измеряли уровень мРНК с помощью RT-qPCR с TAQMAN. Образцы могли быть заморожены при -80°C и проанализированы в дальнейшем.
[00294] Образцовый протокол для стабильности в сыворотке
2
[00295] 0,2 мг/мл миРНК инкубировали с 10% сывороткой человека при 37°C. В определенные моменты времени (0, 5, 15 и 30 мин) брали аликвоту образца 200 мкл и экстрагировали ее с использованием 200 мкл растворителя для экстрагирования (хлороформ:фенол:изоамиловый спирт=24:25:1). Образец энергично перемешивали и центрифугировали на 13000 об/мин в течение 10 мин при RT, затем раствор верхнего слоя переносили и фильтровали его через 0,45 мкм фильтр. Фильтрат переносили в 300 мкл флакон для ВЭЖХ впрыска. Для LCMS подвижная фаза представляла собой MPA: 100 мМ HFIP+7 мМ TEA в HO, MPB: 50% метанол+50% ацетонитрил. Колонка: Waters Acquity OST 2,1×50 мм, 1,7 мкм.
[00296] ПРИМЕРЫ
50
[00297] Пример 1: обнаружено, что миРНК по данному изобретению, направленная на GST-π, активна для сайленсинга генов in vitro. Обнаружено, что дозозависимые активности GST-π миРНК для нокдауна генов проявляются при IC ниже приблизительно 250 пикомолей (пМ) и равной всего лишь 1 пМ.
[00298] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна миРНК. Дозозависимый нокдаун для GST-π мРНК наблюдали при использовании миРНК из таблицы 1, как показано в таблице 13.
Таблица 13: дозозависимый нокдаун для GST-π мРНК в клеточной линии A549
Структура миРНК
IC<sub>50</sub> (пМ)
A9 (SEQ ID №№ 25 и 90)
24
B2 (SEQ ID №№ 52 и 117)
121
B3 (SEQ ID №№ 53 и 118)
235
B4 (SEQ ID №№ 54 и 119)
229
B13 (SEQ ID №№ 50 и 115)
17
BU2 (SEQ ID №№ 61 и 126)
31
[00299] Как показано в таблице 13, активности GST-π миРНК из таблицы 1 находились в диапазоне 17-235 пМ, который подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.
[00300] Пример 2: структура GST-π миРНК по данному изобретению, имеющая дезоксинуклеотиды, расположенные в области затравки антисмысловой цепи миРНК, обеспечивала неожиданно и благоприятно увеличенную активность нокдауна генов in vitro.
[00301] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для GST-π миРНК на основе структуры BU2' (SEQ ID №№ 131 и 157). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали при использовании GST-π миРНК на основе структуры BU2', как показано в таблице 14.
Таблица 14: дозозависимый нокдаун GST-π мРНК в клеточной линии A549 для GST-π миРНК на основе структуры BU2'
Структура GST-π миРНК
IC<sub>50</sub> (пМ)
BU2 без дезоксинуклеотидов в области дуплекса (SEQ ID №№ 61 и 126)
31
BU2 с дезоксинуклеотидами в положениях 3, 5 и 7 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 139 и 165)
5
BU2 с дезоксинуклеотидами в положениях 4, 6 и 8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 141 и 167)
8
BU2 с дезоксинуклеотидами в положениях 4, 6 и 8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 156 и 182)
5
[00302] Как показано в таблице 14, активности GST-π миРНК на основе структуры BU2', имеющих три дезоксинуклеотида в области затравки антисмысловой цепи, к удивлению и неожиданно увеличены вплоть до 6 раз по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.
[00303] Эти данные показывают, что GST-π миРНК, имеющая структуру с тремя дезоксинуклеотидами, расположенными в положениях 3, 5 и 7 или в положениях 4, 6 и 8 в области затравки антисмысловой цепи, обеспечивала к удивлению увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.
[00304] Активности, представленные в таблице 14 для GST-π миРНК, имеющих три дезоксинуклеотида в области затравки антисмысловой цепи, находились в диапазоне от 5 до 8 пМ, который исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.
[00305] Пример 3: структура GST-π миРНК по данному изобретению, имеющая дезоксинуклеотиды, расположенные в области затравки антисмысловой цепи миРНК, обеспечивала неожиданно и благоприятно увеличенную активность нокдауна генов in vitro.
[00306] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для GST-π миРНК на основе структуры A9' (SEQ ID №№ 183 и 195). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали при использовании GST-π миРНК на основе структуры A9', как показано в таблице 15.
Таблица 15: дозозависимый нокдаун GST-π мРНК в клеточной линии A549 для GST-π миРНК на основе структуры структур* A9'
Структура GST-π миРНК
IC<sub>50</sub> (пМ)
A9 без дезоксинуклеотидов в области дуплекса (SEQ ID №№ 25 и 90)
24
A9 с дезоксинуклеотидами в положениях 4, 6 и 8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 193 и 205)
1
A9 с дезоксинуклеотидами в положениях 1, 3, 5 и 7 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 190 и 202)
5
A9 с дезоксинуклеотидами в положениях 3-8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 187 и 199)
6
A9 с дезоксинуклеотидами в положениях 5-8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 189 и 201)
7
A9 с дезоксинуклеотидами в положениях 3, 5 и 7 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 191 и 203)
15
[00307] Как показано в таблице 15, активности GST-π миРНК на основе структуры A9', имеющих от трех до шести дезоксинуклеотидов в области затравки антисмысловой цепи, к удивлению увеличены вплоть до 24 раз по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.
[00308] Эти данные показывают, что GST-π миРНК, имеющая структуру с 3-6 дезоксинуклеотидами, расположенными в положениях 4, 6 и 8, или в положениях 1, 3, 5 и 7, или в положениях 3-8, или в положениях 5-8, или в положениях 3, 5 и 7 в области затравки антисмысловой цепи, обеспечивала неожиданно увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.
[00309] Активность, представленная в таблице 15 для GST-π миРНК, имеющей от трех до шести дезоксинуклеотидов в области затравки антисмысловой цепи, находилась в диапазоне от 1 до 15 пМ, который исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.
[00310] Пример 4: структура GST-π миРНК, имеющая дезоксинуклеотиды, расположенные в области затравки антисмысловой цепи миРНК, обеспечивала неожиданно и благоприятно увеличенную активность нокдауна генов in vitro.
[00311] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для GST-π миРНК на основе структуры B13' (SEQ ID №№ 207 и 222). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали при использовании GST-π миРНК на основе структуры B13', как показано в таблице 16.
Таблица 16: дозозависимый нокдаун GST-π мРНК в клеточной линии A549 для GST-π миРНК на основе структуры B13'
Структура GST-π миРНК
IC<sub>50</sub> (пМ)
B13 без дезоксинуклеотидов в области дуплекса (SEQ ID №№ 50 и 115)
17
B13 с дезоксинуклеотидами в положениях 4, 6 и 8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 217 и 232)
11
[00312] Как показано в таблице 16, активность GST-π миРНК на основе структуры B13', имеющей три дезоксинуклеотида в области затравки антисмысловой цепи, неожиданно увеличена по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.
[00313] Эти данные показывают, что GST-π миРНК, имеющая структуру с тремя дезоксинуклеотидами, расположенными в положениях 4, 6 и 8 в области затравки антисмысловой цепи, обеспечивала неожиданно увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.
[00314] Активность, представленная в таблице 16 для GST-π миРНК, имеющей три дезоксинуклеотида в области затравки антисмысловой цепи, находилась в пикомолярном диапазоне и составляла 11 пМ, что исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.
[00315] Пример 5: структура GST-π миРНК, имеющая дезоксинуклеотиды, расположенные в области затравки антисмысловой цепи миРНК, обеспечивала неожиданно и благоприятно увеличенную активность нокдауна генов in vitro.
[00316] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для GST-π миРНК на основе структуры B4' (SEQ ID №№ 261 и 273). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали при использовании GST-π миРНК на основе структуры B4', как показано в таблице 17.
Таблица 17: дозозависимый нокдаун GST-π мРНК в клеточной линии A549 для GST-π миРНК на основе структуры B4'
Структура GST-π миРНК
IC<sub>50</sub> (пМ)
B4 без дезоксинуклеотидов в области дуплекса (SEQ ID №№ 54 и 119)
229
B4 с дезоксинуклеотидами в положениях 3-8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 265 и 277)
113
[00317] Как показано в таблице 17, активности GST-π миРНК на основе структуры B4', имеющей шесть дезоксинуклеотидов в области затравки антисмысловой цепи, неожиданно увеличена больше чем в 2 раза по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.
[00318] Эти данные показывают, что GST-π миРНК, имеющая структуру с шестью дезоксинуклеотидами, расположенными в положениях 3-8 в области затравки антисмысловой цепи, обеспечивала к удивлению увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.
[00319] Активность, представленная в таблице 17 для GST-π миРНК, имеющей шесть дезоксинуклеотидов в области затравки антисмысловой цепи, находилась в пикомолярном диапазоне и составляла 113 пМ, что исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.
[00320] Пример 6: структура GST-π миРНК, имеющая дезоксинуклеотиды, расположенные в области затравки антисмысловой цепи миРНК, обеспечивала неожиданно и благоприятно увеличенную активность нокдауна генов in vitro.
[00321] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для GST-π миРНК на основе структуры B2' (SEQ ID №№ 237 и 249). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали при использовании GST-π миРНК на основе структуры B2', как показано в таблице 18.
Таблица 18: дозозависимый нокдаун GST-π мРНК в клеточной линии A549 для GST-π миРНК на основе структуры B2'
Структура GST-π миРНК
IC<sub>50</sub> (пМ)
B2 без дезоксинуклеотидов в области дуплекса (SEQ ID №№ 52 и 117)
121
B2 с дезоксинуклеотидами в положениях 5-8 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 243 и 255)
30
B2 с дезоксинуклеотидами в положениях 1, 3, 5 и 7 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 244 и 256)
50
B2 с дезоксинуклеотидами в положениях 3, 5 и 7 области затравки антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 245 и 257)
100
[00322] Как показано в таблице 18, активности GST-π миРНК на основе структуры B2', имеющей от трех до четырех дезоксинуклеотидов в области затравки антисмысловой цепи, к удивлению увеличены вплоть до 4 раз по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.
[00323] Эти данные показывают, что GST-π миРНК, имеющая структуру с 3-4 дезоксинуклеотидами, расположенными в положениях 5-8, или в положениях 1, 3, 5 и 7, или в положениях 3, 5 и 7 в области затравки антисмысловой цепи, обеспечивала неожиданно увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с GST-π миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.
[00324] Активности, представленные в таблице 18 для GST-π миРНК, имеющей от трех до четырех дезоксинуклеотидов в области затравки антисмысловой цепи, находились в диапазоне 30-100 пМ, который исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.
[00325] Пример 7: структура GST-π миРНК, содержащая один или более 2'-дезокси-2'-фторзамещенных нуклеотидов, обеспечивала неожиданно увеличенную активность нокдауна генов in vitro.
[00326] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для GST-π миРНК на основе структуры BU2' (SEQ ID №№ 131 и 157). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали при использовании GST-π миРНК на основе структуры BU2', как показано в таблице 19.
Таблица 19: дозозависимый нокдаун GST-π мРНК в клеточной линии A549 для GST-π миРНК на основе структуры BU2'
Структура GST-π миРНК
IC<sub>50</sub> (пМ)
BU2 без 2'-F-дезоксинуклеотидов(SEQ ID №№ 61 и 126)
31
BU2 с семью 2'-F-дезоксинуклеотидами, один в положении 1 на 3'-конце антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 148 и 174)
3
BU2 с четырьмя 2'-F-дезоксинуклеотидами, один в положении 1 на 3'-конце антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 147 и 173)
11
BU2 с одним 2'-F-дезоксинуклеотидом в положении 1 на 3'-конце антисмысловой цепи (SEQ ID №№ 144 и 170)
13
[00327] Как показано в таблице 19, активности GST-π миРНК на основе структуры BU2', имеющей один или более 2'-F-дезоксинуклеотидов, к удивлению, увеличена вплоть 10 раз по сравнению с GST-π миРНК без 2'-F-дезоксинуклеотидов.
[00328] Эти данные показывают, что GST-π миРНК, имеющая структуру с одним или более 2'-F-дезоксинуклеотидами, обеспечивала неожиданно увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с GST-π миРНК без 2'-F-дезоксинуклеотида.
[00329] Активности, представленные в таблице 19 для GST-π миРНК, имеющей один или более 2'-F-дезоксинуклеотидов, находились в диапазоне от 3 до 13 пМ, который исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.
[00330] Пример 8: структура GST-π миРНК, содержащая один или более 2'-дезокси-2'-фторзамещенных нуклеотидов, обеспечивала неожиданно увеличенную активность нокдауна генов in vitro.
[00331] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для GST-π миРНК на основе структуры B13' (SEQ ID №№ 207 и 222). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали при использовании GST-π миРНК на основе структуры B13', как показано в таблице 20.
Таблица 20: дозозависимый нокдаун GST-π мРНК в клеточной линии A549 для GST-π миРНК на основе структуры B13'
Структура GST-π миРНК
IC<sub>50</sub> (пМ)
B13 без 2'-F-дезоксинуклеотидов(SEQ ID №№ 50 и 115)
17
B13 с тремя 2'-F-дезоксинуклеотидами, расположенными в положениях вне липких концов (SEQ ID №№ 219 и 234)
6
[00332] Как показано в таблице 20, активность GST-π миРНК на основе структуры B13', имеющей три 2'-F-дезоксинуклеотида, расположенных в положениях вне липких концов, к удивлению увеличена приблизительно в 3 раза по сравнению с GST-π миРНК без 2'-F-дезоксинуклеотидов.
[00333] Эти данные показывают, что GST-π миРНК, имеющая структуру с одним или более 2'-F-дезоксинуклеотидами, обеспечивала неожиданно увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с GST-π миРНК без 2'-F-дезоксинуклеотида.
[00334] Активность, представленная в таблице 20 для GST-π миРНК, имеющей один или более 2'-F-дезоксинуклеотидов, находилась в пикомолярном диапазоне и составляла 6 пМ, что исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.
[00335] Пример 9: модель ортотопической злокачественной опухоли легких A549 на мышах. GST-π миРНК по данному изобретению может проявлять выраженное снижение ортотопических опухолей из злокачественной опухоли легких in vivo. В этом примере, GST-π миРНК обеспечивала активность нокдауна генов in vivo при введении в липосомном составе в ортотопические опухоли из злокачественной опухоли легких у бестимусных голых мышей.
[00336] В целом, модель ортотопической опухоли может проявлять непосредственную клиническую релевантность для эффекта и активности лекарственного средства, также как и усовершенствованная предсказательная способность. В модели ортотопической опухоли, опухолевые клетки имплантируют непосредственно в орган определенного типа, из которого происходят клетки.
[00337] Противоопухолевый эффект миРНК состава против злокачественной опухоли легких человека A549 оценивали посредством сравнения конечной массы первичных опухолей, измеряемой при вскрытии, для группы лечения и группы контроля носителем.
[00338] На фиг. 1 представлено ингибирование ортотопической опухоли из злокачественной опухоли легких in vivo для GST-π миРНК на основе структуры BU2 (SEQ ID №№ 61 и 126). Модель ортотопической A549 злокачественной опухоли легких на мышах использовали при относительно низкой дозе 2 мг/кг миРНК, направленной на GST-π.
[00339] GST-π миРНК демонстрировала значительный и неожиданно благоприятный эффект ингибирования опухоли легких в этом 6-недельном исследовании. Как показано на фиг. 1, после 43 суток GST-π миРНК демонстрировала заметно благоприятный эффект ингибирования опухоли при значительном снижении конечных усредненных масс опухолей в 2,8 раза по сравнению с контролем.
[00340] Для этого исследования использовали самцов мышей NCr nu/nu в возрасте 5-6 недель. Экспериментальных животных содержали в среде с HEPA-фильтрацией в течение экспериментального периода. Перед использованием миРНК составы хранили при 4°C и нагревали до комнатной температуры за 10 минут до инъекции мыши.
3
3
[00341] Для этой ортотопической модели злокачественной опухоли легких человека A549 в сутки хирургической ортотопической имплантации (SOI) стоковые опухоли собирали из подкожной локализации животных, несущих ксенотрансплантат опухоли A549, и помещали в среду RPMI-1640. Некротизированные ткани удаляли и жизнеспособные ткани резали на куски 1,5-2 мм. Животных анестезировали ингаляцией изофлурана и хирургическое поле стерилизовали йодом и спиртом. В левой стенке грудной клетки мыши выполняли поперечный разрез приблизительно 1,5 см в длину с использованием пары хирургических ножниц. Межреберный разрез выполняли между третьим и четвертым ребрами и оставляли легкое обнаженным. Один фрагмент опухоли A549 трансплантировали на поверхность легкого с использованием 8-0 хирургической нити (нейлон). Грудную клетку закрывали с использованием 6-0 хирургической нити (шелк). Легкое снова надували посредством интраторакального прокола с использованием 3 см шприца с иглой 25 G × 1 1/2 для того, чтобы откачивать воздух, остающийся в полости грудной клетки. Стенку грудной клетки закрывали 6-0 хирургической шелковой нитью. Все процедуры операции, описанной выше, осуществляли под микроскопом с 7× увеличением в ламинарном шкафу с HEPA-фильтрацией.
[00342] Через трое суток после имплантации опухоли модельных мышей-опухоленосителей случайным образом делили на группы по 10 мышей на группу. Для группы, представляющей интерес, лечение 10 мышей начинали через 3 суток после имплантации опухоли.
[00343] Для группы, представляющей интерес, состав представлял собой (ионизируемый липид:холестерин:DOPE:DOPC:DPPE-PEG-2K:DSPE-PEG-2K), липосомную композицию. Липосомы инкапсулировали GST-π миРНК.
[00344] В конечной точке исследования экспериментальных мышей умерщвляли через 42 суток после начала лечения. Первичные опухоли иссекали и взвешивали на электронных весах для последующего анализа.
[00345] Для оценки токсичности соединения, средняя масса тела мышей в группах лечения и контроля сохранялась в нормальном диапазоне в течение всего экспериментального периода. Другие симптомы токсичности у мышей не наблюдали.
[00346] Пример 10: GST-π миРНК по данному изобретению демонстрировала выраженное уменьшение ксенотрансплантатных злокачественных опухолей in vivo. GST-π миРНК обеспечивала активность нокдауна генов in vivo при введении в липосомном составе в ксенотрансплантатные злокачественные опухоли.
[00347] На фиг. 2 представлен эффект ингибирования опухоли для GST-π миРНК (SEQ ID №№ 156 и 182). Модель ксенотрансплантата злокачественной опухоли использовали при относительно низкой дозе 0,75 мг/кг миРНК, направленной на GST-π.
[00348] GST-π миРНК демонстрировала значительный и неожиданно благоприятный эффект ингибирования опухоли в пределах нескольких суток после введения. После 36 суток GST-π миРНК демонстрировала заметно благоприятный эффект ингибирования опухоли при уменьшении объема опухоли в 2 раза по сравнению с контролем.
[00349] Как показано на фиг. 3, GST-π миРНК демонстрировала значительный и неожиданно благоприятный эффект ингибирования опухоли в сутки конечной точки. В частности, происходило уменьшение массы опухоли больше чем в 2 раза.
[00350] GST-π миРНК вводили двумя инъекциями (сутки 1 и 15) липосомного состава, имеющего композицию (ионизируемый липид:холестерин:DOPE:DOPC:DPPE-PEG-2K) (25:30:20:20:5).
7
[00351] Для модели ксенотрансплантата злокачественной опухоли клеточную линию A549 получали из ATCC. Клетки поддерживали в культуральной среде с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Клетки разделяли за 48 ч до инокуляции с тем, чтобы клетки находились в логарифмической фазе роста при сборе. Клетки слегка трипсинизировали с использованием трипсина-EDTA и собирали из тканевой культуры. Число жизнеспособных клеток считали и определяли в гемоцитометре в присутствии трипанового синего (считали только жизнеспособные клетки). Клетки ресуспендировали до концентрации 5×10/мл в средах без сыворотки. Затем клеточную суспензию смешивали с ледяным оттаявшим BD Matrigel в соотношении 1:1 для инъекции.
[00352] Мыши - самки бестимусных голых мышей (nu/nu) из Charles River Laboratory, иммунодефицитные, возраст 6-8 недель, 7-8 мышей на группу.
6
[00353] Для получения модели опухоли, каждой мыши инокулировали подкожно в правый бок 0,1 мл инокулята 2,5×10 клеток A549 с использованием иглы 25 G и шприца, один инокулят на мышь. Для инокуляции мышей анестезировали.
2
3
3
[00354] Для измерения объема опухолей и рандомизации, размер опухоли измеряли до ближайшей 0,1 мм. Объем опухолей вычисляли с использованием формулы: объем опухоли=длина × ширина/2. Когда развившиеся опухоли достигали приблизительно 120-175 мм, усредненный объем опухоли составлял приблизительно 150 мм, мышей относили к различным группам контроля носителем и лечения так, что средние объемы опухоли в группах лечения находились в пределах 10% от среднего объема опухоли в группе контроля носителем, в идеале, CV% объема опухоли составлял меньше 25%. В те же сутки тестовые изделия и контрольный носитель вводили в соответствии со схемой дозирования. Мониторинг объемов опухолей осуществляли три раза в течение недели 1, два раза в течение остальных недель, в том числе в сутки завершения исследования.
[00355] Для введения дозы в сутки дозирования тестовые изделия доставали из холодильника на -80°C и оттаивали на льду. Перед переносом в шприцы, бутылку, содержащую состав, переворачивали руками несколько раз. Все тестовые изделия дозировали по 0,75 мг/кг внутривенно, q2w × 2, по 10 мл/кг.
[00356] Для массы тела, мышей взвешивали до ближайшей 0,1 г. Мониторинг массы тела осуществляли, и ее регистрировали ежедневно в течение 7 суток после дозирования первой дозы. Мониторинг массы тела осуществляли, и ее регистрировали два раза в течение недель, в течение остальных недель, в том числе в сутки завершения исследования.
[00357] При сборе опухолей, на 28 сутки после первого дозирования измеряли объем опухоли, опухоль иссекали для измерения массы и хранили для PD исследования биологических маркеров. Регистрировали массу опухоли.
[00358] Пример 11: GST-π миРНК по данному изобретению демонстрировала увеличенную гибель клеток злокачественной опухоли посредством апоптоза клеток злокачественной опухоли in vitro. GST-π миРНК обеспечивала нокдаун GST-π, который вел к повышающей регуляции PUMA, биологического маркера апоптоза, и который связан с утратой жизнеспособности клеток.
[00359] GST-π миРНК SEQ ID №№ 156 и 182, которые содержали комбинацию дезоксинуклеотидов в области затравки, 2'-F-замещенный дезоксинуклеотид и 2'-OMe-замещенные рибонуклеотиды, обеспечивали неожиданно увеличенный апоптоз клеток злокачественной опухоли.
[00360] Уровень экспрессии PUMA для GST-π миРНК SEQ ID №№ 156 и 182 измеряли, как показано на фиг. 4. На фиг. 4 экспрессия PUMA значительно снижена со 2-4 суток после трансфекции GST-π миРНК.
[00361] Эти данные показывают, что структура GST-π миРНК, содержащей комбинацию дезоксинуклеотидов в области затравки, 2'-F-замещенный дезоксинуклеотид и 2'-OMe-замещенные рибонуклеотиды, обеспечивала неожиданно увеличенный апоптоз клеток злокачественной опухоли.
3
2
[00362] Протокол для биологического маркера PUMA представлял собой следующее. За одни сутки до трансфекции клетки высевали в 96-луночный планшет по 2×10 клеток на лунку со 100 мкл DMEM (HyClone, № по каталогу SH30243.01), содержащей 10% FBS, и культивировали в 37°C инкубаторе, содержащем увлажненную атмосферу 5% CO в воздухе. В следующие сутки, перед трансфекцией, среду заменяли на 90 мкл Opti-MEM I Reduced Serum Medium (Life Technologies, № по каталогу 31985-070), содержащей 2% FBS. Затем 0,2 мкл липофектамина RNAiMAX (Life Technologies, № по каталогу 13778-100) смешивали с 4,8 мкл Opti-MEM I в течение 5 минут при комнатной температуре. 1 мкл GST-π миРНК (стоков. конц. 1 мкМ) смешивали с 4 мкл Opti-MEM I и объединяли с раствором RNAiMAX и затем аккуратно перемешивали. Смесь инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре для того, чтобы сделать возможным формирование комплексов РНК-RNAiMAX. 10 мкл комплексов РНК-RNAiMAX добавляли в каждую лунку, до конечной концентрации миРНК 10 нМ. Клетки инкубировали в течение 2 часов и среду меняли на свежую Opti-MEM I Reduced Serum Medium, содержащую 2% FBS. В 1, 2, 3, 4 и 6 сутки после трансфекции клетки промывали ледяным PBS один раз, и затем лизировали с использованием 50 мкл Cell-to-Ct Lysis Buffer (Life Technologies, № по каталогу 4391851 C) в течение 5-30 минут при комнатной температуре. Добавляли 5 мкл Stop Solution и инкубировали в течение 2 минут при комнатной температуре. Уровни мРНК PUMA (BBC3, № по каталогу Hs00248075, Life Technologies) измеряли посредством qPCR с использованием TAQMAN.
[00363] Пример 12: GST-π миРНК по данному изобретению может демонстрировать выраженное уменьшение ксенотрансплантатных злокачественных опухолей in vivo. GST-π миРНК может обеспечивать активность нокдауна генов in vivo при введении в липосомном составе в ксенотрансплантатные злокачественные опухоли.
[00364] На фиг. 5 представлен эффект ингибирования опухоли для GST-π миРНК (SEQ ID №№ 61 и 126). Дозозависимый нокдаун GST-π мРНК наблюдали in vivo с использованием миРНК, направленной на GST-π. Модель ксенотрансплантата злокачественной опухоли использовали при относительно низкой дозе 0,75 мг/кг миРНК, направленной на GST-π.
[00365] GST-π миРНК демонстрировала значительный и неожиданно благоприятный эффект ингибирования опухоли в пределах нескольких суток после введения. Как показано на фиг. 5, лечение с использованием GST-π миРНК вело к значительному снижению экспрессии GST-π мРНК на 4 сутки после инъекции в липидном составе. При более высокой дозе 4 мг/кг значительное снижение приблизительно на 40% обнаруживали через 24 часа после инъекции.
[00366] GST-π миРНК вводили одной инъекцией 10 мл/кг липосомного состава, имеющего композицию (ионизируемый липид:холестерин:DOPE:DOPC:DPPE-PEG-2K) (25:30:20:20:5).
7
[00367] Для модели ксенотрансплантата злокачественной опухоли клеточную линию A549 получали из ATCC. Клетки поддерживали в RPMI-1640 с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Клетки разделяли за 48 ч до инокуляции с тем, чтобы клетки находились в логарифмической фазе роста при сборе. Клетки слегка трипсинизировали с использованием трипсиан-EDTA и собирали из тканевой культуры. Число жизнеспособных клеток подсчитывали и определяли в гемоцитометре в присутствии трипанового синего (считали только жизнеспособные клетки). Клетки ресуспендировали до концентрации 4×10/мл в средах RPMI без сыворотки. Затем клеточную суспензию хорошо перемешивали с ледяным оттаявшим BD Matrigel в соотношении 1:1 для инъекции.
[00368] Мыши - самки бестимусных голых мышей (nu/nu) из Charles River Laboratory, иммунодефицитные, возраст 6-8 недель, 3 мыши на группу.
6
[00369] Для получения модели опухоли, каждой мыши инокулировали подкожно в правый бок 0,1 мл инокулята 2×10 клеток A549 с использованием иглы 25 G и шприца, один инокулят на мышь. Для инокуляции мышей анестезировали.
2
3
[00370] Для измерения объема опухолей и рандомизации, размер опухоли измеряли до ближайшей 0,1 мм. Объем опухолей вычисляли с использованием формулы: объем опухоли=длина × ширина/2. Мониторинг объема опухоли осуществляли два раза в неделю. Когда развившиеся опухоли достигали приблизительно 350-600 мм, мышей относили к группам с различными моментами времени. В те же сутки тестовые изделия вводили в соответствии со схемой дозирования.
3
[00371] Для введения дозы, в сутки, когда развившиеся опухоли достигали приблизительно 350-600 мм, тестовые изделия брали из холодильника на 4°C. Перед переносом в шприцы, бутылку, содержащую состав, переворачивали руками несколько раз для получения гомогенного раствора.
[00372] Для массы тела, мышей взвешивали до ближайшей 0,1 г. Мониторинг массы тела осуществляли, и ее регистрировали два раза в течение недель, в течение остальных недель, в том числе в сутки завершения исследования.
2
[00373] При сборе опухолей, животных умерщвляли посредством передозировки CO и иссекали опухоли через 0, 24, 48, 72, 96 (необязательно) и 168 часов после дозирования. Сначала определяли влажную массу опухолей, и затем делили их на три части для анализа KD, распределения и биологических маркеров. Образцы быстро замораживали в жидком азоте и хранили при -80°C до готовности для обработки.
[00374] Пример 13: GST-π миРНК по данному изобретению ингибировала ксенотрансплантатные опухоли из злокачественной опухоли поджелудочной железы in vivo. GST-π миРНК обеспечивала активность нокдауна генов in vivo при введении в липосомном составе в ксенотрансплантатные опухоли из злокачественной опухоли поджелудочной железы.
6
3
3
[00375] В этой ксенотрансплантатной модели, каждой мыши инокулировали подкожно в правый бок 0,1 мл инокулята 2,5×10 клеток PANC-1. Использовали самок бестимусных голых мышей, 6-8 недель, Charles River. Размер опухоли измеряли до ближайшей 0,1 мм. Когда развившиеся опухоли достигали приблизительно 150-250 мм (усредненный объем опухоли приблизительно 200 мм), мышей относили к различным группам контроля носителем и лечения так, что средние объемы опухоли в группах лечения находились в пределах 10% от среднего объема опухоли в группе контроля носителем. В те же сутки тестовые изделия и контрольный носитель вводили в соответствии со схемой дозирования. Мониторинг объемов опухолей осуществляли три раза в течение недели 1, два раза в течение остальных недель, в том числе в сутки завершения исследования.
[00376] На фиг. 6 представлен эффект ингибирования опухоли для GST-π миРНК (SEQ ID №№ 61 и 126). Как показано на фиг. 6, эффект дозы получали при дозах в диапазоне от 0,375 мг/кг до 3 мг/кг миРНК, направленной на GST-π. GST-π миРНК демонстрировала значительный и неожиданно благоприятный эффект ингибирования опухоли в пределах нескольких суток после введения. Таким образом, GST-π миРНК демонстрировала значительный и неожиданно благоприятный эффект ингибирования опухоли в конечной точке.
[00377] GST-π миРНК вводили в липосомном составе, имеющем композицию (ионизируемый липид:холестерин:DOPE:DOPC:DPPE-PEG-2K) (25:30:20:20:5).
[00378] Пример 14: GST-π миРНК по данному изобретению демонстрировала повышенную стабильность в сыворотке.
1/2
[00379] На фиг. 7 представлена инкубация в сыворотке человека и обнаружение остающейся миРНК в различные моменты времени посредством HPLS/LCMS. Как показано на фиг. 7, время полужизни (t) в сыворотке как для смысловой цепи (фиг. 7, вверху), так и антисмысловой цепи (фиг. 7, внизу) GST-π миРНК (SEQ ID №№ 61 и 126) составляло приблизительно 100 минут.
[00380] Пример 15: GST-π миРНК по данному изобретению демонстрировала увеличенную стабильность в составе в плазме.
1/2
[00381] На фиг. 8 представлена инкубация состава в плазме и обнаружение остающейся миРНК в различные моменты времени. Как показано на фиг. 8, время полужизни (t) в плазме состава GST-π миРНК (SEQ ID №№ 61 и 126) составляло значительно больше 100 часов.
[00382] GST-π миРНК получали в липосомном составе, имеющем композицию (ионизируемый липид:холестерин:DOPE:DOPC:DPPE-PEG-2K) (25:30:20:20:5). Z-усредненный размер липосомных наночастиц составлял 40,0 нм и миРНК была инкапсулирована на 91%.
[00383] Состав инкубировали в 50% сыворотке человека в PBS в течение 40 мин, 1,5 ч, 3 ч, 24 ч и 96 ч. Количество GST-π миРНК определяли с помощью анализа на основе ELISA.
[00384] Пример 16: GST-π миРНК по данному изобретению с помощью сопровождающей цепи демонстрировала сниженные эффекты вне мишени.
50
[00385] Для GST-π миРНК (SEQ ID №№ 156 и 182) на фиг. 9 показано, что нокдаун для направляющей цепи in vitro был приблизительно экспоненциальным по сравнению с контролем с использованием перемешанной последовательности, который не демонстрировала эффект. IC этой миРНК измеряли равной 5 пМ. На фиг. 10 представлен in vitro нокдаун для сопровождающей цепи той же GST-π миРНК. Как показано на фиг. 10, нокдаун сопровождающей цепи вне мишени для GST-π миРНК значительно снижен, больше чем в 100 раз.
50
[00386] Для GST-π миРНК (SEQ ID №№ 187 и 199), (SEQ ID №№ 189 и 201) и (SEQ ID №№ 190 и 202) на фиг. 11 показано, что нокдауны in vitro для направляющих цепей были приблизительно экспоненциальными. IC этих миРНК измеряли равными 6, 7 и 5 пМ, соответственно. Как показано на фиг. 12, нокдауны in vitro для сопровождающих цепей этих GST-π миРНК были значительно снижены по меньшей мере в 10 раз. Все эти GST-π миРНК имели дезоксинуклеотиды в области затравки области дуплекса, без других модификаций в области дуплекса.
50
[00387] Для GST-π миРНК (SEQ ID №№ 217 и 232) на фиг. 13 показано, что нокдаун in vitro для направляющей цепи этой высоко активной GST-π миРНК был приблизительно экспоненциальным. IC этой миРНК измеряли равной 11 пМ. Как показано на фиг. 14, нокдаун in vitro для сопровождающей цепи этой GST-π миРНК был значительно снижен больше чем в 100 раз. Эта GST-π миРНК имела дезоксинуклеотиды в области затравки области дуплекса, без других модификаций в области дуплекса.
3
[00388] Эффекты вне мишени определяли с использованием плазмиды репортера экспрессии psiCHECK-2, которая кодирует ген люциферазы Renilla. (Dual-Luciferase Reporter Assay System, Promega, № по каталогу: E1960). Концентрация миРНК обычно составляла 50 пМ. Протокол: сутки 1, высевали клетки HeLa по 5-7,5×10/100 мкл/лунка. Сутки 2, совместная трансфекция при конфлюентность клеток приблизительно 80%. Сутки 3, клетки собирали для измерения активности люциферазы. Активность люциферазы измеряли с использованием Promega's Luciferase Assay System (E4550), в соответствии с протоколом производителя.
[00389] Вектор psiCHECK-2 позволял осуществлять мониторинг изменений экспрессии гена-мишени, слитого с репортерным геном люциферазы Renilla. миРНК конструкции клонировали в сайт множественного клонирования и вектор совместно трансфицировали с миРНК в клетки HeLa. Если специфичная миРНК связывается с мРНК-мишенью и инициирует процесс RNAi, происходит расщепление и впоследствии разрушение слитой конструкции из люциферазы Renilla и мРНК, что снижает сигнал люциферазы Renilla.
[00390] Например, вставки плазмид для миРНК со структурой BU2' представляли собой следующее:
[00391] Вставка плазмиды psiCHECK-2 (F):
SEQ ID №: 451
ctcgag gggcaacTGAAGCCTTTTGAGACCCTGcTgTcccag gcggccgc
[00392] Вставка плазмиды psiCHECK-2 (R):
SEQ ID №: 452
ctcgag cTgggacagCAGGGTCTCAAAAGGCTTCagTTgccc gcggccgc
[00393] Пример 17: GST-π миРНК по данному изобретению демонстрировали благоприятно сниженные мкРНК-подобные эффекты вне мишени, которые представляют собой зависящий от затравки непредусмотренный сайленсинг генов вне мишени.
[00394] Для GST-π миРНК (SEQ ID №№ 156 и 182), (SEQ ID №№ 187 и 199), (SEQ ID №№ 189 и 201), (SEQ ID №№ 190 и 202) и (SEQ ID №№ 217 и 232) обнаружено, что активность имитирующей мкРНК вне мишени по существу несущественна. Зависящий от затравки непредусмотренный сайленсинг генов вне мишени для этих GST-π миРНК был по меньшей мере в 10-100 раз меньше, чем активность направляющей цепи на мишени.
[00395] Для тестирования мкРНК-зависимых эффектов вне мишени, от одного до четырех повторов подходящих по затравке последовательностей-мишеней, комплементарных всей области, содержащей затравку, положения 1-8 от 5'-конца антисмысловой цепи, но не остальную область вне затравки, положения 9-21, вводили в область, соответствующую 3'UTR мРНК люциферазы, чтобы определять эффективность зависящих от затравки непредусмотренных эффектов вне мишени. Вставки плазмид использовали для имитации мкРНК с полным совпадением в области затравки и несовпадениями (петлями) вне области затравки.
[00396] Например, вставки плазмид для миРНК со структурой BU2' представляли собой следующее:
[00397] Вставка плазмиды psiCHECK-2 (Fmi1):
SEQ ID №: 453
ctcgag gggcaacTCTACGCAAAACAGACCCTGcTgTcccag gcggccgc
[00398] Вставка плазмиды psiCHECK-2 (Fmi2):
SEQ ID №: 454
ctcgag gggcaacTCTACGCAAAACAGACCCTGcT CTACGCAAAACAGACCCTGcT gTcccag gcggccgc
[00399] Вставка плазмиды psiCHECK-2 (Fmi3):
SEQ ID №: 455
ctcgag gggcaacTCTACGCAAAACAGACCCTGcT CTACGCAAAACAGACCCTGcT CTACGCAAAACAGACCCTGcT gTcccag gcggccgc
[00400] Вставка плазмиды psiCHECK-2 (Fmi4):
SEQ ID №: 456
ctcgag gggcaacTCTACGCAAAACAGACCCTGcT CTACGCAAAACAGACCCTGcT CTACGCAAAACAGACCCTGcT CTACGCAAAACAGACCCTGcT gTcccag gcggccgc
[00401] Варианты осуществления, описанные в настоящем описании, не являются ограничивающими, и специалист в данной области без труда примет во внимание, что конкретные комбинации модификаций, описанных в настоящем описании, можно тестировать без излишних экспериментов в направлении идентификации молекулы нуклеиновой кислоты с усовершенствованной RNAi активностью.
50
[00402] Пример 18: обнаружено, что миРНК по данному изобретению, направленные на p21, активны для сайленсинга генов in vitro. Обнаружено, что дозозависимые активности p21 миРНК для нокдауна гена демонстрируют IC ниже приблизительно 3 пикомолей (пМ) и всего лишь 1 пМ.
[00403] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549, чтобы определять миРНК эффект нокдауна. Дозозависимый нокдаун для p21 мРНК наблюдали при использовании миРНК из таблицы 7, как показано в таблице 21.
Таблица 21: дозозависимый нокдаун p21 мРНК в клеточной линии A549
Структура p21 миРНК
IC<sub>50</sub> (пМ)
1735 (SEQ ID №№ 296 и 324)
0,3
2042 (SEQ ID №№ 312 и 340)
10
[00404] Как показано в таблице 21, активности p21 миРНК из таблицы 7 находились в диапазоне 0,3-10 пМ, который подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.
[00405] Пример 19: структура p21 миРНК по данному изобретению, имеющей дезоксинуклеотиды, расположенные в области затравки антисмысловой цепи миРНК, обеспечивала неожиданно и благоприятно увеличенную активность нокдауна генов.
[00406] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять эффект нокдауна для p21 миРНК на основе структуры 1735' (SEQ ID №№ 341 и 355). Дозозависимый нокдаун p21 мРНК наблюдали при использовании p21 миРНК на основе структуры 1735', как показано в таблице 22.
Таблица 22: дозозависимый нокдаун p21 мРНК в клеточной линии A549 для p21 миРНК на основе структуры 1735'
Структура P21 миРНК
IC<sub>50</sub> (пМ)
1735 без дезоксинуклеотидов в области дуплекса (SEQ ID №№ 296 и 324)
0,3
1735 с дезоксинуклеотидами в положениях 4, 6 и 8 области затравки антисмысловой цепи и дополнительными 2'-Ome-нуклеотидами (SEQ ID №№ 342 и 356)
0,05
1735 с дезоксинуклеотидами в положениях 4, 6 и 8 области затравки антисмысловой цепи и дополнительными 2'-Ome-нуклеотидами (SEQ ID №№ 343 и 357)
0,001
1735 с дезоксинуклеотидами в положениях 4, 6 и 8 области затравки антисмысловой цепи и дополнительными 2'-Ome-нуклеотидами (SEQ ID №№ 344 и 358)
0,1
[00407] Как показано в таблице 22, активности p21 миРНК на основе структуры 1735', имеющей три дезоксинуклеотида в области затравки антисмысловой цепи, к удивлению и неожиданно увеличены вплоть до 300 раз по сравнению с p21 миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.
[00408] Эти данные показывают, что p21 миРНК, имеющая структуру с дезоксинуклеотидами в области затравки антисмысловой цепи, обеспечивала к удивлению увеличенную активность нокдауна генов по сравнению с p21 миРНК без дезоксинуклеотидов в области дуплекса.
[00409] Активности, представленные в таблице 22, для p21 миРНК, имеющей три дезоксинуклеотида в области затравки антисмысловой цепи, находились в диапазоне от 0,001 до 0,1 пМ, который исключительно подходит для многих использований, в том числе в качестве лекарственного средства, подлежащего использованию in vivo.
[00410] Пример 20: p21 миРНК по данному изобретению может демонстрировать выраженное уменьшение ксенотрансплантатных злокачественных опухолей in vivo. p21 миРНК может обеспечивать активность нокдауна генов in vivo при введении в липосомном составе в ксенотрансплантатные злокачественные опухоли.
[00411] На фиг. 15 представлен эффект ингибирования опухоли для p21 миРНК (SEQ ID №№ 341 и 355, где N=U). Модель ксенотрансплантата злокачественной опухоли использовали при относительно низкой дозе 0,75 мг/кг миРНК, направленной на p21.
[00412] p21 миРНК демонстрировала значительный и неожиданно благоприятный эффект ингибирования опухоли в пределах нескольких суток после введения. После 30 суток p21 миРНК демонстрировала заметно благоприятный эффект ингибирования опухоли при уменьшении объема опухоли больше чем в 2 раза по сравнению с контролем.
[00413] p21 миРНК вводили в дозе 0,75 мг/кг четырьмя инъекциями 10 мл/кг (сутки 1, 8, 15 и 22) липосомного состава, имеющего композицию (ионизируемый липид:холестерин:DOPE:DOPC:DPPE-PEG-2K) (25:30:20:20:5).
7
[00414] Для модели ксенотрансплантата злокачественной опухоли клеточную линию A549 получали из ATCC. Клетки поддерживали в культуральной среде с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Клетки разделяли за 48 ч до инокуляции с тем, чтобы клетки находились в логарифмической фазе роста при сборе. Клетки слегка трипсинизировали с использованием трипсиан-EDTA и собирали из тканевой культуры. Число жизнеспособных клеток подсчитывали и определяли в гемоцитометре в присутствии трипанового синего (считали только жизнеспособные клетки). Клетки ресуспендировали до концентрации 5×10/мл в средах без сыворотки. Затем клеточную суспензию тщательно перемешивали с ледяным оттаявшим BD Matrigel в соотношении 1:1 для инъекции.
[00415] Мыши - самки бестимусных голых мышей (nu/nu) из Charles River Laboratory, иммунодефицитные, возраст 6-8 недель, 7-8 мышей на группу.
6
[00416] Для получения модели опухоли, каждой мыши инокулировали подкожно в правый бок 0,1 мл инокулята 2,5×10 клеток A549 с использованием иглы 25 G и шприца, один инокулят на мышь. Для инокуляции мышей анестезировали.
2
3
3
[00417] Для измерения объема опухолей и рандомизации, размер опухоли измеряли до ближайшей 0,1 мм. Объем опухолей вычисляли с использованием формулы: объем опухоли=длина × ширина/2. Когда развившиеся опухоли достигали приблизительно 120-175 мм, усредненный объем опухоли составлял приблизительно 150 мм, мышей относили к различным группам контроля носителем и лечения так, что средние объемы опухоли в группах лечения находились в пределах 10% от среднего объема опухоли в группе контроля носителем, в идеале, CV% объема опухоли составлял меньше 25%. В те же сутки тестовые изделия и контрольный носитель вводили в соответствии со схемой дозирования. Мониторинг объемов опухолей осуществляли три раза в течение недели 1, два раза в течение остальных недель, в том числе в сутки завершения исследования.
[00418] Для введения дозы в сутки дозирования тестовые изделия доставали из холодильника на -80°C и оттаивали на льду. Перед переносом в шприцы, бутылку, содержащую состав, переворачивали руками несколько раз. Все тестовые изделия дозировали по 0,75 мг/кг внутривенно.
[00419] Для массы тела, мышей взвешивали до ближайшей 0,1 г. Мониторинг массы тела осуществляли, и ее регистрировали ежедневно в течение 7 суток после дозирования первой дозы. Мониторинг массы тела осуществляли, и ее регистрировали два раза в течение недель, в течение остальных недель, в том числе в сутки завершения исследования.
[00420] При сборе опухолей, на 28 сутки после первого дозирования измеряли объем опухоли, опухоль иссекали для измерения массы и хранили для PD исследования биологических маркеров. Регистрировали массу опухоли.
[00421] Варианты осуществления, описанные в настоящем описании, не являются ограничивающими, и специалист в данной области без труда примет во внимание, что конкретные комбинации модификаций, описанных в настоящем описании, можно тестировать без излишних экспериментов в направлении идентификации молекулы нуклеиновой кислоты с усовершенствованной RNAi активностью.
50
[00422] Пример 21: получали миРНК по данному изобретению, направленные MCL1, и обнаружено, что они активны для сайленсинга генов in vitro. Обнаружено, что дозозависимые активности MCL1 миРНК для нокдауна генов демонстрируют IC ниже приблизительно 100 пикомолей (пМ).
[00423] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять миРНК эффект нокдауна. Дозозависимый нокдаун для MCL1 мРНК наблюдали с использованием миРНК из таблицы 11.
50
[00424] Пример 22: получали миРНК по данному изобретению, направленные ARAF, и обнаружено, что они активны для сайленсинга генов in vitro. Обнаружено, что дозозависимые активности ARAF миРНК для нокдауна генов демонстрируют IC ниже приблизительно 100 пикомолей (пМ).
[00425] Трансфекцию in vitro осуществляли в клеточной линии A549 для того, чтобы определять миРНК эффект нокдауна. Дозозависимый нокдаун для ARAF мРНК наблюдали с использованием миРНК из таблицы 12.
[00426] Все публикации, патенты и литературные источники, конкретно указанные в настоящем описании, включены в данное описание посредством ссылки в полном объеме для всех целей.
[00427] Понятно, что данное изобретение не ограничено конкретными описанными способами, протоколами, материалами и реактивами, поскольку они могут варьировать. Также следует понимать, что терминология, используемая в настоящем описании, служит лишь цели описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для того, чтобы ограничивать объем настоящего изобретения. Специалист в данной области без труда поймет, что различные замещения и модификации можно выполнять в описании, раскрытом в настоящем документе, не отступая от сущности и объема описания, и что эти варианты осуществления входят в объем этого описания и приложенной формулы изобретения.
[00428] Следует отметить, что как используют в настоящем описании и в приложенной формуле изобретения, формы единственного числа включают множественное число до тех пор, пока контекст явно не диктует иное. Также формы единственного числа и термины «один или более» и «по меньшей мере один» можно использовать взаимозаменяемо в настоящем описании. Также следует отметить, что термины «содержит», «содержащий», «включающий» и «имеющий» можно использовать взаимозаменяемо, и они подлежат открытому прочтению и без ограничения.
[00429] Перечисление диапазонов значений в настоящем описании лишь предназначено в качестве способа сокращения для индивидуального указания каждого отдельного значения, попадающего в диапазон, если не указано иное в настоящем описании, и каждое отдельное значение включено в описание, как если бы оно было индивидуально указано в настоящем описании. Для групп Маркуша, специалистам в данной области понятно, что это описание включает индивидуальные элементы, а также подгруппы элементов из группы Маркуша.
[00430] Без дополнительной проработки полагают, что специалист в данной области может, на основе вышеприведенного описания, использовать настоящее изобретение в его самой полной мере. Следовательно, следующие конкретные варианты осуществления следует толковать лишь в качестве иллюстративных и не ограничивающих остальное раскрытие каким-либо образом вообще.
[00431] Все признаки, раскрытые в этом описании можно комбинировать в любой комбинации. Каждый признак, раскрытый в этом описании можно заменить на альтернативный признак, служащий той же, эквивалентной или схожей цели.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> NITTO DENKO CORPORATION
<120> СТРУКТУРЫ МИРНК С ВЫСОКОЙ АКТИВНОСТЬЮ И СНИЖЕННЫМ ВОЗДЕЙСТВИЕМ
ВНЕ МИШЕНИ
<130> ND6122770WO
<140>
<141>
<150> 62/266,675
<151> 2015-12-13
<160> 456
<170> PatentIn версии 3.5
<210> 1
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 1
ucccagaacc agggaggcat t                                                 21
<210> 2
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 2
cuuuugagac ccugcuguct t                                                 21
<210> 3
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 3
cugucccaga accagggagt t                                                 21
<210> 4
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 4
ugucccagaa ccagggaggt t                                                 21
<210> 5
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 5
aagccuuuug agacccugct t                                                 21
<210> 6
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 6
uugagacccu gcugucccat t                                                 21
<210> 7
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 7
uuuugagacc cugcugucct t                                                 21
<210> 8
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 8
gagacccugc ugucccagat t                                                 21
<210> 9
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 9
gcuggaagga ggagguggut t                                                 21
<210> 10
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 10
cuggaaggag gagguggugt t                                                 21
<210> 11
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 11
ucagggccag agcuggaagt t                                                 21
<210> 12
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 12
ugagacccug cugucccagt t                                                 21
<210> 13
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 13
agggccagag cuggaaggat t                                                 21
<210> 14
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 14
agcuggaagg aggagguggt t                                                 21
<210> 15
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 15
agacccugcu gucccagaat t                                                 21
<210> 16
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 16
gagcuggaag gaggaggugt t                                                 21
<210> 17
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 17
ugcuguccca gaaccagggt t                                                 21
<210> 18
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 18
cccagaacca gggaggcaat t                                                 21
<210> 19
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 19
ccagaaccag ggaggcaagt t                                                 21
<210> 20
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 20
uuugagaccc ugcuguccct t                                                 21
<210> 21
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 21
gacccugcug ucccagaact t                                                 21
<210> 22
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 22
gaucagggcc agagcuggat t                                                 21
<210> 23
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 23
agccuuuuga gacccugcut t                                                 21
<210> 24
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 24
gccuuuugag acccugcugt t                                                 21
<210> 25
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 25
ccuuuugaga cccugcugut t                                                 21
<210> 26
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 26
cgccuuuuga gacccugcat t                                                 21
<210> 27
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 27
ccuacaccgu ggucuauuut t                                                 21
<210> 28
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 28
ugugggagac cagaucucct t                                                 21
<210> 29
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 29
gcgggaggca gaguuugcct t                                                 21
<210> 30
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 30
ccuuucucca ggaccaauat t                                                 21
<210> 31
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 31
acccugcugu cccagaacct t                                                 21
<210> 32
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 32
ggucuauuuc ccaguucgat t                                                 21
<210> 33
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 33
cccuggugga cauggugaat t                                                 21
<210> 34
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 34
acaucucccu caucuacact t                                                 21
<210> 35
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 35
gcaaggauga cuaugugaat t                                                 21
<210> 36
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 36
ccuucgcuga cuacaaccut t                                                 21
<210> 37
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 37
cuggcagauc agggccagat t                                                 21
<210> 38
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 38
gacggagacc ucacccugut t                                                 21
<210> 39
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 39
cgggcaagga ugacuaugut t                                                 21
<210> 40
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 40
cuuuugagac ccugcuguat t                                                 21
<210> 41
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 41
gagcuggaag gaggagguat t                                                 21
<210> 42
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 42
acccugcugu cccagaacat t                                                 21
<210> 43
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 43
ugcuguccca gaaccaggat t                                                 21
<210> 44
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 44
agccuuuuga gacccugcat t                                                 21
<210> 45
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 45
ccuuuugaga cccugcugat t                                                 21
<210> 46
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 46
ugaagccuuu ugagacccut t                                                 21
<210> 47
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 47
acugaagccu uuugagacct t                                                 21
<210> 48
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 48
aggaugacua ugugaaggct t                                                 21
<210> 49
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 49
ggaugacuau gugaaggcat t                                                 21
<210> 50
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 50
gaugacuaug ugaaggcact t                                                 21
<210> 51
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 51
cucccucauc uacaccaact t                                                 21
<210> 52
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 52
gaagccuuuu gagacccugt t                                                 21
<210> 53
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 53
ucucccucau cuacaccaat t                                                 21
<210> 54
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 54
ccucaucuac accaacuaut t                                                 21
<210> 55
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 55
cccucaucua caccaacuat t                                                 21
<210> 56
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 56
caacugaagc cuuuugagat t                                                 21
<210> 57
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 57
aacugaagcc uuuugagact t                                                 21
<210> 58
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 58
cugaagccuu uugagaccct t                                                 21
<210> 59
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 59
ucccucaucu acaccaacut t                                                 21
<210> 60
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 60
gcucccucau cuacaccaat t                                                 21
<210> 61
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 61
gaagccuuuu gagacccuat t                                                 21
<210> 62
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 62
acugaagccu uuugagacat t                                                 21
<210> 63
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 63
cucccucauc uacaccaaat t                                                 21
<210> 64
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 64
ccucaucuac accaacuaat t                                                 21
<210> 65
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 65
accaauaaaa uuucuaagat t                                                 21
<210> 66
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 66
ugccucccug guucugggac a                                                 21
<210> 67
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 67
gacagcaggg ucucaaaagg c                                                 21
<210> 68
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 68
cucccugguu cugggacagc a                                                 21
<210> 69
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 69
ccucccuggu ucugggacag c                                                 21
<210> 70
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 70
gcagggucuc aaaaggcuuc a                                                 21
<210> 71
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 71
ugggacagca gggucucaaa a                                                 21
<210> 72
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 72
ggacagcagg gucucaaaag g                                                 21
<210> 73
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 73
ucugggacag cagggucuca a                                                 21
<210> 74
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 74
accaccuccu ccuuccagct c                                                 21
<210> 75
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 75
caccaccucc uccuuccagc t                                                 21
<210> 76
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 76
cuuccagcuc uggcccugat c                                                 21
<210> 77
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 77
cugggacagc agggucucaa a                                                 21
<210> 78
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 78
uccuuccagc ucuggcccug a                                                 21
<210> 79
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 79
ccaccuccuc cuuccagcuc t                                                 21
<210> 80
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 80
uucugggaca gcagggucuc a                                                 21
<210> 81
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 81
caccuccucc uuccagcuct g                                                 21
<210> 82
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 82
cccugguucu gggacagcag g                                                 21
<210> 83
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 83
uugccucccu gguucuggga c                                                 21
<210> 84
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 84
cuugccuccc ugguucuggg a                                                 21
<210> 85
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 85
gggacagcag ggucucaaaa g                                                 21
<210> 86
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 86
guucugggac agcaggguct c                                                 21
<210> 87
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 87
uccagcucug gcccugauct g                                                 21
<210> 88
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 88
agcagggucu caaaaggcut c                                                 21
<210> 89
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 89
cagcaggguc ucaaaaggct t                                                 21
<210> 90
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 90
acagcagggu cucaaaaggc t                                                 21
<210> 91
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 91
ugcagggucu caaaaggcgt c                                                 21
<210> 92
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 92
aaauagacca cgguguaggg c                                                 21
<210> 93
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 93
ggagaucugg ucucccacaa t                                                 21
<210> 94
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 94
ggcaaacucu gccucccgct c                                                 21
<210> 95
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 95
uauugguccu ggagaaagga a                                                 21
<210> 96
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 96
gguucuggga cagcaggguc t                                                 21
<210> 97
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 97
ucgaacuggg aaauagacca c                                                 21
<210> 98
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 98
uucaccaugu ccaccagggc t                                                 21
<210> 99
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 99
guguagauga gggagaugua t                                                 21
<210> 100
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 100
uucacauagu cauccuugcc c                                                 21
<210> 101
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 101
agguuguagu cagcgaagga g                                                 21
<210> 102
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 102
ucuggcccug aucugccagc a                                                 21
<210> 103
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 103
acagggugag gucuccgucc t                                                 21
<210> 104
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 104
acauagucau ccuugcccgc c                                                 21
<210> 105
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 105
uacagcaggg ucucaaaagg c                                                 21
<210> 106
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 106
uaccuccucc uuccagcuct g                                                 21
<210> 107
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 107
uguucuggga cagcaggguc t                                                 21
<210> 108
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 108
uccugguucu gggacagcag g                                                 21
<210> 109
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 109
ugcagggucu caaaaggcut c                                                 21
<210> 110
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 110
ucagcagggu cucaaaaggc t                                                 21
<210> 111
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 111
agggucucaa aaggcuucag t                                                 21
<210> 112
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 112
ggucucaaaa ggcuucagut g                                                 21
<210> 113
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 113
gccuucacau agucauccut g                                                 21
<210> 114
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 114
ugccuucaca uagucaucct t                                                 21
<210> 115
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 115
gugccuucac auagucaucc t                                                 21
<210> 116
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 116
guugguguag augagggaga t                                                 21
<210> 117
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 117
cagggucuca aaaggcuuca g                                                 21
<210> 118
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 118
uugguguaga ugagggagat g                                                 21
<210> 119
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 119
auaguuggug uagaugaggg a                                                 21
<210> 120
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 120
uaguuggugu agaugaggga g                                                 21
<210> 121
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 121
ucucaaaagg cuucaguugc c                                                 21
<210> 122
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 122
gucucaaaag gcuucaguug c                                                 21
<210> 123
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 123
gggucucaaa aggcuucagt t                                                 21
<210> 124
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 124
aguuggugua gaugagggag a                                                 21
<210> 125
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 125
uugguguaga ugagggagct g                                                 21
<210> 126
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 126
uagggucuca aaaggcuuca g                                                 21
<210> 127
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 127
ugucucaaaa ggcuucagut g                                                 21
<210> 128
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 128
uuugguguag augagggaga t                                                 21
<210> 129
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 129
uuaguuggug uagaugaggg a                                                 21
<210> 130
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 130
ucuuagaaau uuuauugguc c                                                 21
<210> 131
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое
<400> 131
gaagccuuuu gagacccuan n                                                 21
<210> 132
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 132
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 133
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 133
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 134
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 134
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 135
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 135
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 136
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 136
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 137
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 137
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 138
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 138
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 139
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 139
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 140
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 140
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 141
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 141
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 142
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 142
gaagccuuuu gagacccuat t                                                 21
<210> 143
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 143
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 144
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 144
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 145
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 145
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 146
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 146
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 147
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (19)..(19)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 147
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 148
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (14)..(14)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (19)..(19)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 148
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 149
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (19)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 149
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 150
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (19)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 150
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 151
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 151
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 152
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (10)..(10)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (18)..(18)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 152
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 153
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 153
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 154
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (10)..(10)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (18)..(18)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 154
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 155
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (10)..(10)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (18)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 155
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 156
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (10)..(10)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (18)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 156
gaagccuuuu gagacccuau u                                                 21
<210> 157
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое
<400> 157
uagggucuca aaaggcuucn n                                                 21
<210> 158
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 158
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 159
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 159
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 160
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 160
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 161
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 161
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 162
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 162
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 163
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 163
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 164
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 164
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 165
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 165
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 166
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 166
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 167
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 167
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 168
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (14)..(14)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (16)..(16)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (18)..(18)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 168
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 169
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 169
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 170
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 170
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 171
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 171
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 172
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(2)
<223> Фосфотиоатная связь
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 172
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 173
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (9)..(9)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 173
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 174
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (9)..(9)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(12)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 174
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 175
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (9)..(9)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 175
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 176
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (9)..(9)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 176
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 177
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 177
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 178
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 178
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 179
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (9)..(9)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(12)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (18)..(18)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 179
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 180
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (9)..(9)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(12)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (18)..(18)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 180
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 181
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (9)..(9)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(12)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(18)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 181
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 182
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (9)..(9)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(12)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(18)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 182
uagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 183
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое
<400> 183
ccuuuugaga cccugcugun n                                                 21
<210> 184
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 184
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 185
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 185
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 186
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 186
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 187
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 187
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 188
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 188
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 189
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 189
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 190
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 190
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 191
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 191
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 192
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 192
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 193
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 193
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 194
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (3)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(5)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (7)..(7)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (9)..(9)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 194
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 195
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое
<400> 195
acagcagggu cucaaaaggn n                                                 21
<210> 196
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 196
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 197
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(2)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 197
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 198
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(2)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 198
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 199
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 199
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 200
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 200
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 201
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 201
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 202
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(5)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 202
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 203
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(5)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 203
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 204
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(2)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 204
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 205
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 205
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 206
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(2)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (14)..(14)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (16)..(16)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (18)..(18)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 206
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 207
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое
<400> 207
gaugacuaug ugaaggcacn n                                                 21
<210> 208
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 208
ggaugacuau gugaaggcau u                                                 21
<210> 209
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 209
ggaugacuau gugaaggcau u                                                 21
<210> 210
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 210
ggaugacuau gugaaggcau u                                                 21
<210> 211
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 211
ggaugacuau gugaaggcau u                                                 21
<210> 212
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 212
ggaugacuau gugaaggcau u                                                 21
<210> 213
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 213
ggaugacuau gugaaggcau u                                                 21
<210> 214
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 214
ggaugacuau gugaaggcau u                                                 21
<210> 215
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 215
ggaugacuau gugaaggcau u                                                 21
<210> 216
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 216
ggaugacuau gugaaggcau u                                                 21
<210> 217
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 217
ggaugacuau gugaaggcau u                                                 21
<210> 218
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (3)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(5)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (7)..(7)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 218
ggaugacuau gugaaggcau u                                                 21
<210> 219
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(11)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (13)..(13)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 219
ggaugacuau gugaaggcau u                                                 21
<210> 220
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(2)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 220
ggaugacuau gugaaggcau u                                                 21
<210> 221
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(2)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 221
ggaugacuau gugaaggcau u                                                 21
<210> 222
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое
<400> 222
gugccuucac auagucaucn n                                                 21
<210> 223
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 223
ugccuucaca uagucauccu u                                                 21
<210> 224
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 224
ugccuucaca uagucauccu u                                                 21
<210> 225
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 225
ugccuucaca uagucauccu u                                                 21
<210> 226
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 226
ugccuucaca uagucauccu u                                                 21
<210> 227
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 227
ugccuucaca uagucauccu u                                                 21
<210> 228
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 228
ugccuucaca uagucauccu u                                                 21
<210> 229
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(5)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 229
ugccuucaca uagucauccu u                                                 21
<210> 230
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(5)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 230
ugccuucaca uagucauccu u                                                 21
<210> 231
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 231
ugccuucaca uagucauccu u                                                 21
<210> 232
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 232
ugccuucaca uagucauccu u                                                 21
<210> 233
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (14)..(14)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (16)..(16)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (18)..(18)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 233
ugccuucaca uagucauccu u                                                 21
<210> 234
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (4)..(4)
<223> 2’-дезокси-2’-фторнуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 234
ugccuucaca uagucauccu u                                                 21
<210> 235
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (9)..(9)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(11)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (13)..(13)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (15)..(15)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (19)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 235
ugccuucaca uagucauccu u                                                 21
<210> 236
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(11)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (13)..(13)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (15)..(15)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (19)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 236
ugccuucaca uagucauccu u                                                 21
<210> 237
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое
<400> 237
gaagccuuuu gagacccugn n                                                 21
<210> 238
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 238
gaagccuuuu gagacccugu u                                                 21
<210> 239
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 239
gaagccuuuu gagacccugu u                                                 21
<210> 240
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 240
gaagccuuuu gagacccugu u                                                 21
<210> 241
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 241
gaagccuuuu gagacccugu u                                                 21
<210> 242
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 242
gaagccuuuu gagacccugu u                                                 21
<210> 243
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 243
gaagccuuuu gagacccugu u                                                 21
<210> 244
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 244
gaagccuuuu gagacccugu u                                                 21
<210> 245
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 245
gaagccuuuu gagacccugu u                                                 21
<210> 246
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 246
gaagccuuuu gagacccugu u                                                 21
<210> 247
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 247
gaagccuuuu gagacccugu u                                                 21
<210> 248
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (3)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(5)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (7)..(7)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (9)..(9)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 248
gaagccuuuu gagacccugu u                                                 21
<210> 249
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое
<400> 249
cagggucuca aaaggcuucn n                                                 21
<210> 250
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 250
cagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 251
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 251
cagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 252
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 252
cagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 253
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 253
cagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 254
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 254
cagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 255
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 255
cagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 256
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 256
cagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 257
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 257
cagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 258
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 258
cagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 259
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 259
cagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 260
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (14)..(14)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (16)..(16)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (18)..(18)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 260
cagggucuca aaaggcuucu u                                                 21
<210> 261
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое
<400> 261
ccucaucuac accaacuaun n                                                 21
<210> 262
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 262
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 263
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 263
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 264
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 264
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 265
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 265
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 266
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 266
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 267
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 267
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 268
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 268
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 269
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 269
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 270
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 270
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 271
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 271
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 272
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (3)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(5)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (7)..(7)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (9)..(9)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 272
ccucaucuac accaacuauu u                                                 21
<210> 273
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое
<400> 273
auaguuggug uagaugaggn n                                                 21
<210> 274
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 274
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 275
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(2)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 275
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 276
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(2)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 276
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 277
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 277
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 278
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 278
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 279
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 279
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 280
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(5)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 280
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 281
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(5)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 281
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 282
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(2)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 282
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 283
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 283
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 284
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(2)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(6)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (14)..(14)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (16)..(16)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (18)..(18)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 284
auaguuggug uagaugaggu u                                                 21
<210> 285
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 285
cuuagugacu uuacuuguau u                                                 21
<210> 286
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 286
cagaccagca ugacagauuu u                                                 21
<210> 287
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 287
ugaucuucuc caagaggaau u                                                 21
<210> 288
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 288
guucauugca cuuugauuau u                                                 21
<210> 289
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 289
cauugcacuu ugauuagcau u                                                 21
<210> 290
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 290
agcgauggaa cuucgacuuu u                                                 21
<210> 291
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 291
gcgauggaac uucgacuuuu u                                                 21
<210> 292
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 292
gggaagggac acacaagaau u                                                 21
<210> 293
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 293
ucuaccucag gcagcucaau u                                                 21
<210> 294
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 294
ggugcucaau aaaugauucu u                                                 21
<210> 295
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 295
caucaucaaa aacuuuggau u                                                 21
<210> 296
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 296
aaggagucag acauuuuaau u                                                 21
<210> 297
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 297
gugcugggca uuuuuauuuu u                                                 21
<210> 298
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 298
gccggcuuca ugccagcuau u                                                 21
<210> 299
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 299
gggcaucauc aaaaacuuuu u                                                 21
<210> 300
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 300
gaagggcacc cuaguucuau u                                                 21
<210> 301
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 301
caguucauug cacuuugauu u                                                 21
<210> 302
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 302
acaaggaguc agacauuuuu u                                                 21
<210> 303
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 303
uggaggcacu gaagugcuuu u                                                 21
<210> 304
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 304
gcagggacca cacccuguau u                                                 21
<210> 305
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 305
cuguacuguu cugugucuuu u                                                 21
<210> 306
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 306
uuaaacaccu ccucauguau u                                                 21
<210> 307
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 307
agacucucag ggucgaaaau u                                                 21
<210> 308
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 308
caugacagau uucuaccacu u                                                 21
<210> 309
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 309
agauuucuac cacuccaaau u                                                 21
<210> 310
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 310
ccaagaggaa gcccuaaucu u                                                 21
<210> 311
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 311
gacagcagag gaagaccauu u                                                 21
<210> 312
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 312
cucccacaau gcugaauauu u                                                 21
<210> 313
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 313
uacaaguaaa gucacuaagu u                                                 21
<210> 314
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 314
aaucugucau gcuggucugu u                                                 21
<210> 315
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 315
uuccucuugg agaagaucau u                                                 21
<210> 316
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 316
uaaucaaagu gcaaugaacu u                                                 21
<210> 317
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 317
ugcuaaucaa agugcaaugu u                                                 21
<210> 318
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 318
aagucgaagu uccaucgcuu u                                                 21
<210> 319
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 319
aaagucgaag uuccaucgcu u                                                 21
<210> 320
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 320
uucuugugug ucccuucccu u                                                 21
<210> 321
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 321
uugagcugcc ugagguagau u                                                 21
<210> 322
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 322
gaaucauuua uugagcaccu u                                                 21
<210> 323
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 323
uccaaaguuu uugaugaugu u                                                 21
<210> 324
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 324
uuaaaauguc ugacuccuuu u                                                 21
<210> 325
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 325
aaauaaaaau gcccagcacu u                                                 21
<210> 326
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 326
uagcuggcau gaagccggcu u                                                 21
<210> 327
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 327
aaaguuuuug augaugcccu u                                                 21
<210> 328
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 328
uagaacuagg gugcccuucu u                                                 21
<210> 329
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 329
aucaaagugc aaugaacugu u                                                 21
<210> 330
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 330
aaaaugucug acuccuuguu u                                                 21
<210> 331
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 331
aagcacuuca gugccuccau u                                                 21
<210> 332
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 332
uacagggugu ggucccugcu u                                                 21
<210> 333
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 333
aagacacaga acaguacagu u                                                 21
<210> 334
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 334
uacaugagga gguguuuaau u                                                 21
<210> 335
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 335
uuuucgaccc ugagagucuu u                                                 21
<210> 336
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 336
gugguagaaa ucugucaugu u                                                 21
<210> 337
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 337
uuuggagugg uagaaaucuu u                                                 21
<210> 338
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 338
gauuagggcu uccucuuggu u                                                 21
<210> 339
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 339
auggucuucc ucugcugucu u                                                 21
<210> 340
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-метоксинуклеотид
<400> 340
auauucagca uugugggagu u                                                 21
<210> 341
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое
<400> 341
aaggagucag acauuuuaan n                                                 21
<210> 342
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (12)..(12)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 342
aaggagucag acauuuuaau u                                                 21
<210> 343
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (12)..(12)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (14)..(15)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 343
aaggagucag acauuuuaau u                                                 21
<210> 344
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (12)..(12)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (14)..(15)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 344
aaggagucag acauuuuaau u                                                 21
<210> 345
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (12)..(12)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 345
aaggagucag acauuuuaau u                                                 21
<210> 346
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 346
aaggagucag acauuuuaau u                                                 21
<210> 347
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 347
aaggagucag acauuuuaau u                                                 21
<210> 348
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 348
aaggagucag acauuuuaau u                                                 21
<210> 349
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 349
aaggagucag acauuuuaau u                                                 21
<210> 350
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 350
aaggagucag acauuuuaau u                                                 21
<210> 351
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 351
aaggagucag acauuuuaau u                                                 21
<210> 352
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (12)..(12)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 352
aaggagucag acauuuuaau u                                                 21
<210> 353
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 353
aaggagucag acauuuuaau u                                                 21
<210> 354
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(3)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (12)..(12)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 354
aaggagucag acauuuuaau u                                                 21
<210> 355
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> a, c, t, g, u, неизвестное или другое
<400> 355
uuaaaauguc ugacuccuun n                                                 21
<210> 356
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(2)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (7)..(7)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(11)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 356
uuaaaauguc ugacuccuuu u                                                 21
<210> 357
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(2)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (7)..(7)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(11)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 357
uuaaaauguc ugacuccuuu u                                                 21
<210> 358
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(2)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 358
uuaaaauguc ugacuccuuu u                                                 21
<210> 359
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(2)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 359
uuaaaauguc ugacuccuuu u                                                 21
<210> 360
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (7)..(7)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 360
uuaaaauguc ugacuccuuu u                                                 21
<210> 361
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (7)..(7)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 361
uuaaaauguc ugacuccuuu u                                                 21
<210> 362
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (7)..(7)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 362
uuaaaauguc ugacuccuuu u                                                 21
<210> 363
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (7)..(7)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 363
uuaaaauguc ugacuccuuu u                                                 21
<210> 364
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 364
uuaaaauguc ugacuccuuu u                                                 21
<210> 365
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(2)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (7)..(7)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(11)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 365
uuaaaauguc ugacuccuuu u                                                 21
<210> 366
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 366
uuaaaauguc ugacuccuuu u                                                 21
<210> 367
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 367
uuaaaauguc ugacuccuuu u                                                 21
<210> 368
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (20)..(21)
<223> 2’-OMe-нуклеотид
<400> 368
uuaaaauguc ugacuccuuu u                                                 21
<210> 369
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 369
cgagaacagu uuguacaagu u                                                 21
<210> 370
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 370
caggccucua caacuacuat t                                                 21
<210> 371
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 371
gagcacucca agaucaacuu ccgcg                                             25
<210> 372
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 372
ggacaggccu cuacaacuat t                                                 21
<210> 373
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 373
gagcacucca agaucaacut t                                                 21
<210> 374
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 374
gaacacucca agaucaacut t                                                 21
<210> 375
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 375
caggccucua caacuacuac gacga                                             25
<210> 376
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 376
gaacacucca agaucaacuu ccgag                                             25
<210> 377
<211> 25
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 377
ggacaggccu cuacaacuac uacga                                             25
<210> 378
<211> 26
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 378
caggccucua caacuacuat taaaaa                                            26
<210> 379
<211> 19
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 379
caggccucua caacuacua                                                    19
<210> 380
<211> 33
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 380
caggccucua caacuacuat taaaaaaaaa aaa                                    33
<210> 381
<211> 26
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 381
aaaaacaggc cucuacaacu acuatt                                            26
<210> 382
<211> 29
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 382
caggccucua caacuacuat taaaaaaaa                                         29
<210> 383
<211> 29
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 383
aaaaaaaaca ggccucuaca acuacuatt                                         29
<210> 384
<211> 33
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 384
caggccucua caacuacuat taaaaaaaaa aaa                                    33
<210> 385
<211> 37
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 385
aaaaaaaaaa aaaaaacagg ccucuacaac uacuatt                                37
<210> 386
<211> 37
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 386
caggccucua caacuacuat taaaaaaaaa aaaaaaa                                37
<210> 387
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 387
caggccucua caacuacuat t                                                 21
<210> 388
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 388
ggacaggccu guacaacuat t                                                 21
<210> 389
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 389
ggacaggccu cuacaacuat t                                                 21
<210> 390
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 390
cuuguacaaa cuguucucgu u                                                 21
<210> 391
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 391
uaguaguugu agaggccugt t                                                 21
<210> 392
<211> 27
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 392
cgcggaaguu gaucuuggag ugcucuu                                           27
<210> 393
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 393
uaguuguaga ggccugucct t                                                 21
<210> 394
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 394
aguugaucuu ggagugcuct t                                                 21
<210> 395
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 395
aguugaucuu ggaguguuct t                                                 21
<210> 396
<211> 27
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 396
ucgucguagu aguuguagag gccuguu                                           27
<210> 397
<211> 27
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 397
cucggaaguu gaucuuggag uguucuu                                           27
<210> 398
<211> 27
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 398
ucguaguagu uguagaggcc uguccuu                                           27
<210> 399
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 399
uaguaguugu agaggccugt t                                                 21
<210> 400
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 400
uaguaguugu agaggccugt t                                                 21
<210> 401
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 401
uaguaguugu agaggccugt t                                                 21
<210> 402
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 402
uaguaguugu agaggccugt t                                                 21
<210> 403
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 403
uaguaguugu agaggccugt t                                                 21
<210> 404
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 404
uaguaguugu agaggccugt t                                                 21
<210> 405
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 405
uaguaguugu agaggccugt t                                                 21
<210> 406
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 406
uaguaguugu agaggccugt t                                                 21
<210> 407
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 407
uaguaguugu agaggccugt t                                                 21
<210> 408
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 408
uaguaguugu agaggccugt t                                                 21
<210> 409
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 409
uaguuguaca ggccugucct t                                                 21
<210> 410
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 410
uaguuguaga ggccugucct t                                                 21
<210> 411
<211> 19
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> 5’-инвертированная 1,2-дидезокси-D-рибоза
<220>
<221> смешанные признаки
<222> (15)..(19)
<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами
<220>
<223> 3’-C3 спейсер
<400> 411
acuccaagau caacuuccu                                                    19
<210> 412
<211> 19
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(2)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (4)..(4)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (6)..(6)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> смешанные признаки
<222> (7)..(8)
<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(11)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (13)..(13)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (15)..(15)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (19)..(19)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<223> 3’-C3-C3 спейсер
<400> 412
aggaaguuga ucuuggagu                                                    19
<210> 413
<211> 19
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> 5’-инвертированная 1,2-дидезокси-D-рибоза
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (4)..(4)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> смешанные признаки
<222> (9)..(10)
<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(11)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (13)..(13)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<223> 3’-C3 спейсер
<400> 413
uccugagaca cauggguga                                                    19
<210> 414
<211> 19
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (4)..(4)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> смешанные признаки
<222> (6)..(7)
<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(11)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (15)..(15)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<223> 3’-C3-C3 спейсер
<400> 414
ucacccaugu gucucagga                                                    19
<210> 415
<211> 19
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> 5’-инвертированная 1,2-дидезокси-D-рибоза
<220>
<221> смешанные признаки
<222> (15)..(19)
<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами
<220>
<223> 3’-C3-спейсер-фосфат
<400> 415
gagacacaug ggugcuaua                                                    19
<210> 416
<211> 19
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (1)..(1)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (3)..(3)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(5)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> смешанные признаки
<222> (7)..(8)
<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (9)..(9)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(11)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (13)..(13)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (15)..(15)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (19)..(19)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<223> 3’-C3-C3-спейсер
<400> 416
uauagcaccc augugucuc                                                    19
<210> 417
<211> 19
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> 5’-инвертированная 1,2-дидезокси-D-рибоза
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(3)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (5)..(5)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (7)..(8)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> смешанные признаки
<222> (9)..(10)
<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (12)..(12)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (14)..(15)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (17)..(17)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<223> 3’-C3-спейсер
<400> 417
cuuacgcuga guacuucgu                                                    19
<210> 418
<211> 19
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (2)..(2)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> смешанные признаки
<222> (6)..(7)
<223> 2’-5’ связь между нуклеотидами
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (7)..(7)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (11)..(11)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (16)..(16)
<223> 2’-O-метилрибонуклеотид
<220>
<223> 3’-C3-C3-спейсер
<400> 418
acgaaguacu cagcguaag                                                    19
<210> 419
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 419
gccuuccaag gauggguuug u                                                 21
<210> 420
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 420
ggaguucuuc cauguagagg a                                                 21
<210> 421
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 421
ccauguagag gaccuagaag g                                                 21
<210> 422
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 422
gccuuccaag gauggguuug u                                                 21
<210> 423
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 423
gccuuccaag gauggguuug u                                                 21
<210> 424
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 424
gccuuccaag gauggguuug u                                                 21
<210> 425
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 425
gccuuccaag gauggguuug u                                                 21
<210> 426
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 426
gccuuccaag gauggguuug u                                                 21
<210> 427
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 427
aaacccaucc uuggaaggcc g                                                 21
<210> 428
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 428
cucuacaugg aagaacucca c                                                 21
<210> 429
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 429
uucuaggucc ucuacaugga a                                                 21
<210> 430
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<400> 430
aaacccaucc uuggaaggcc g                                                 21
<210> 431
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 431
aaacccaucc uuggaaggcc g                                                 21
<210> 432
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 432
aaacccaucc uuggaaggcc g                                                 21
<210> 433
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<400> 433
aaacccaucc uuggaaggcc g                                                 21
<210> 434
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<400> 434
aaacccaucc uuggaaggcc g                                                 21
<210> 435
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 435
gcucauuguc gagguccuug a                                                 21
<210> 436
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 436
gccaaaccug uggcuacaag u                                                 21
<210> 437
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 437
ggaagacgcg acaugucaac a                                                 21
<210> 438
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 438
gcucauuguc gagguccuug a                                                 21
<210> 439
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 439
gcucauuguc gagguccuug a                                                 21
<210> 440
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 440
gcucauuguc gagguccuug a                                                 21
<210> 441
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 441
gcucauuguc gagguccuug a                                                 21
<210> 442
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 442
gcucauuguc gagguccuug a                                                 21
<210> 443
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 443
aaggaccucg acaaugagcu c                                                 21
<210> 444
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 444
uuguagccac agguuuggca a                                                 21
<210> 445
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<400> 445
uugacauguc gcgucuuccu g                                                 21
<210> 446
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<400> 446
aaggaccucg acaaugagcu c                                                 21
<210> 447
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 447
aaggaccucg acaaugagcu c                                                 21
<210> 448
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 448
aaggaccucg acaaugagcu c                                                 21
<210> 449
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<400> 449
aaggaccucg acaaugagcu c                                                 21
<210> 450
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (8)..(8)
<223> 2’-дезоксинуклеотид
<400> 450
aaggaccucg acaaugagcu c                                                 21
<210> 451
<211> 50
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 451
ctcgaggggc aactgaagcc ttttgagacc ctgctgtccc aggcggccgc                  50
<210> 452
<211> 50
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 452
ctcgagctgg gacagcaggg tctcaaaagg cttcagttgc ccgcggccgc                  50
<210> 453
<211> 50
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 453
ctcgaggggc aactctacgc aaaacagacc ctgctgtccc aggcggccgc                  50
<210> 454
<211> 71
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 454
ctcgaggggc aactctacgc aaaacagacc ctgctctacg caaaacagac cctgctgtcc       60
caggcggccg c                                                            71
<210> 455
<211> 92
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 455
ctcgaggggc aactctacgc aaaacagacc ctgctctacg caaaacagac cctgctctac       60
gcaaaacaga ccctgctgtc ccaggcggcc gc                                     92
<210> 456
<211> 113
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
олигонуклеотид
<220>
<223> Описание комбинированной молекулы ДНК/РНК: синтетический
олигонуклеотид
<400> 456
ctcgaggggc aactctacgc aaaacagacc ctgctctacg caaaacagac cctgctctac       60
gcaaaacaga ccctgctcta cgcaaaacag accctgctgt cccaggcggc cgc             113
<---