СПОСОБ ИЗВЛЕЧЕНИЯ КУРИНОГО ЭМБРИОНА ИЗ ЯЙЦА ДЛЯ ДАЛЬНЕЙШЕГО ПОЛУЧЕНИЯ КЛЕТОЧНЫХ ТРАНСПЛАНТАТОВ ИЗ ФЕТАЛЬНЫХ ТКАНЕЙ
METHOD FOR SEPARATING CHICKEN EMBRYO FROM EGG FOR PURPOSES OF PRODUCING CELL TRANSPLANTS FROM FOETAL TISSUES

Техническое решение относится к области медицины, биологии и биомедицинских технологий, в частности к способу извлечения куриного эмбриона из яйца для дальнейшего получения клеточных трансплантатов из его фетальных тканей и может быть использовано для изготовления биопрепаратов, предназначенных для лечения широкого круга заболеваний.
Известен «Способ приготовления клеточного трансплантата фетальных тканей» [1]. В нем клеточный трансплантат получают из фетальных тканей абортивного плода человека 17-21 недели внутриутробного развития.
Недостатками данного способа являются моральные, религиозные, юридические противоречия, существующие в Российской Федерации, технические сложности непосредственного забора клеточного трансплантата из фетальных тканей абортивного плода человека, а также высокая себестоимость данной процедуры, что безусловно тормозит развитие отечественной трансплантологии. Выходом из сложившейся ситуации может стать получение клеточных трансплантатов путем их извлечения из фетальных тканей куриного эмбриона. Но, при помощи выше упомянутого способа это сделать нереально, так как куриный эмбрион окружен яичной скорлупой и без ее щадящей трепанации извлечь фетальные ткани куриного эмбриона технически невозможно.
Известен способ приготовления клеточного трансплантата фетальных тканей куриных эмбрионов [2]. В нем для извлечения куриного эмбриона из яйца острым концом ножниц (или иглой-пробойником) делают прокол скорлупы в области пуги, затем срезают по кругу часть скорлупы над воздушной камерой, стараясь не задеть хориоаллантоисную оболочку.
Недостатком данного способа является высокая вероятность травматизации эмбриона при извлечении его из яйца.
Задачей технического решения является совершенствование способа извлечения куриного эмбриона из яйца для дальнейшего получения клеточных трансплантатов из его фетальных тканей, направленного на снижение вероятности его травматизации.
Поставленная задача решается благодаря тому, что разработана методика извлечения куриного эмбриона из яйца, снижающая вероятность его травматизации.
В предлагаемом способе извлечения куриного эмбриона из яйца предусмотрены следующие отличие от существующих, а именно:
1. Отказ от прокола скорлупы иглой или ножницами и последующего выстригания ее сегмента ножницами.
2. Нарушение целостности яичной скорлупы путем просверливания в ней 6 перфорирующих отверстий с последующим поочередным пропиливанием изнутри промежутков яичной скорлупы между отверстиями, с последующим извлечения полученного сегмента яичной скорлупы.
Между совокупностью существенных признаков заявляемого объекта и достигаемым техническим результатом существует причинно-следственная связь, которую можно продемонстрировать на примере 1.
Пример 1.
Нами был проведен эксперимент. 60 куриных эмбрионов 7-10 дня развития, были разделены на две экспериментальные группы по 30 в каждой. В первой группе извлечение эмбрионов проводилось по способу Подчерняевой Р.Я. с соавт., 2008, а во второй предлагаемым нами способом. В первой экспериментальной группе было повреждено при извлечении из скорлупы 9 (29,9%), а во второй 1 (3,3%) эмбрионов.
Предлагаемый нами способ «Способ извлечения куриного эмбриона из яйца для дальнейшего получения клеточных трансплантатов из его фетальных тканей» позволяет увеличить процент извлечения из яйца неповрежденных куриных эмбрионов почти в 9 раз по сравнению с применяемым сегодня способом.
Нами предлагается следующий способ извлечения куриного эмбриона из яйца для дальнейшего получения клеточных трансплантатов из его фетальных тканей:
1. Берется куриный эмбрион 7-10 дня развития.
2. Яичная скорлупа обрабатывается раствором антисептика.
3. Осуществляется щадящая трепанация яичной скорлупы:
- Просверливание в области тупого конца яйца 6 перфорирующих отверстий яичной скорлупы.
- Проведение при помощи жесткого проводника между двумя ближайшими перфорирующими отверстиями эластичной пилки.
- Аккуратное пропиливание эластичной пилкой изнутри промежутка яичной скорлупы между парой ближайших перфорирующих отверстий.
- Выполняем такие же манипуляции поочередно и с остальными промежутками яичной скорлупы между перфорационными отверстиями.
- Удаление пинцетом полученного сверлением и выпиливанием шестиугольного сегмента яичной скорлупы.
- Извлекаем эмбрион.
4. Выделяем клетки различных органов.
5. Суспензируем выделенные клетки различных органов.
6. Отбираем суспензии с повышенным содержанием региональных стволовых клеток.
7. Методом проточной цитометрии определяем количество стволовых клеток в отобранной суспензии.
8. Подвергаем отобранные суспензии криоконсервации.
Технико-экономическая эффективность предлагаемого способа извлечения куриного эмбриона из яйца для дальнейшего получения клеточных трансплантатов из его фетальных тканей обусловлена увеличением почти в 9 раз процента извлечения из яйца неповрежденных куриных эмбрионов, что безусловно существенно снизит себестоимость получаемого клеточного трансплантата и увеличит его количество.
Источники информации
1. Сухих Г.Т. «Способ приготовления клеточного трансплантата фетальных тканей» Патент на изобретение RU (11) 2160112 (13) С1 Федеральной службы по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам, от 10 декабря 2000 г.
2. Подчерняева Р.Я. с соавт. Методические рекомендации по работе с клеточными культурами // Москва, 2008, пункт 7 (Интернет: http://cells.virology.ru/home/93.html).