ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ВЫДЕЛЕНИЕ ПРЕДШЕСТВЕННИКОВ СЛУХОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА

1. Способ идентификации предшественников слуховых клеток человека в смешанной популяции клеток, включающий определение того, содержит ли клетка по меньшей мере два поверхностных клеточных маркера, выбранных из SSEA1, GD3, TRA-2-49, SSEA4, GD2 и CD141.
2. Способ по п. 1, в котором клеточные маркеры SSEA1, GD3, TRA-2-49, SSEA4, и GD2 являются положительными клеточными маркерами.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором клеточный маркер CD141 является отрицательным клеточным маркером.
4. Способ по п. 2 или 3, в котором по меньшей мере два положительных клеточных маркера применяют в комбинации для идентификации предшественников слуховых клеток человека.
5. Способ по п. 2 или 3, в котором по меньшей мере три, четыре или пять положительных клеточных маркеров применяют в комбинации для идентификации предшественников слуховых клеток человека.
6. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором положительный клеточный маркер, или по меньшей мере два положительных клеточных маркера применяют в комбинации с отрицательным клеточным маркером CD141.
in vitro
7. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором смешанную популяцию клеток получают из протокола или во время протокола дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток , таких как эмбриональные стволовые клетки человека (ЧЭСК) или индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК); или
где смешанную популяцию клеток получают из способов или во время способов де-дифференцировки, транс-дифференцировки или прямого перепрограммирования в человеческие клеточные линии слуховых клеток; или
где смешанную популяцию клеток получают из ткани, такой как ткань внутреннего уха развивающегося плода, и образцы преддверия и улитки, полученные при хирургических вмешательствах, из внутреннего уха взрослых людей.
in vivo
8. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором идентификация предшественников слуховых клеток человека происходит .
9. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором смешанная популяци клеток контактирует с одним или несколькими связывающими элементами, выполненными с возможностью связывания с клеточными маркерами.
10. Способ по п. 9, в котором связывающий элемент содержит антитело, фрагмент антитела, или его миметик.
11. Способ по любому из предшествующих пунктов, включающий этап детекции, где клеточные маркеры детектируются как присутствующие или отсутствующие на клетке или группе клеток.
12. Способ по любому из пп. 9–11, где связывающий элемент содержит метку для идентификации.
13. Способ по п. 12, в котором метка содержит флуорофор.
14. Способ по любому из пп. 11–13, в котором детекция включает использование FACS и/или использование MACS.
15. Способ идентификации предшественников слуховых клеток человека в смешанной популяции клеток с использованием по меньшей мере двух поверхностных клеточных маркеров, выбранных из SSEA1, GD3, TRA-2-49, SSEA4, GD2 и CD141, включающий:
- обеспечение связывающих элементов, специфичных по меньшей мере для двух различных клеточных маркеров;
- контакт смешанной популяции клеток со связывающими элементами; и
- выявление связывания или отсутствия связывания связывающих элементов с клетками в смешанной популяции клеток.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что дополнительно включает определение того, что клетка является предшественником слуховых клеток человека, если:
a) связывающие элементы, выполненные с возможностью связывания с положительными клеточными маркерами, связываются по меньшей мере с двумя различными положительными клеточными маркерами на клетке; или
b) связывающий элемент, выполненный с возможностью связывания с одним из положительных клеточных маркеров, связывается по меньшей мере с одним из положительных клеточных маркеров на клетке, и связывающий маркер, выполненный с возможностью связывания с отрицательным клеточным маркером CD141, не связывается с клеткой.
17. Способ по п. 15, отличающийся тем, что дополнительно включает определение того, что клетка является предшественником слуховых клеток человека, если:
a) связывающие элементы, выполненные с возможностью связывания с положительными клеточными маркерами, связываются по меньшей мере с тремя различными положительными клеточными маркерами на клетке; или
b) связывающие элементы, выполненные с возможностью связывания по меньшей мере с двумя различными положительными клеточными маркерами, связываются по меньшей мере с двумя различными положительными клеточными маркерами на клетке, и связывающий маркер, выполненный с возможностью связывания с отрицательным клеточным маркером CD141, не связывается с клеткой.
18. Способ обогащения предшественников слуховых клеток человека из смешанной популяции клеток, включающий:
- идентификацию предшественников слуховых клеток человека в соответствии со способом по любому из пп. 1–17; и
- сортировку клеток таким образом, что предшественники слуховых клеток человека отделены от предшественников не-слуховых клеток, и, таким образом, обогащение популяции предшественниками слуховых клеток человека
19. Способ по п. 18, в котором сортировка включает FACS и/или включает MACS.
20. Способ получения популяции предшественников слуховых клеток человека, включающий:
- дифференцировку предшественников не-слуховых клеток в предшественники слуховых клеток человека, при этом некоторые предшественники не-слуховых клеток остаются в популяции, формируя смешанную популяцию клеток; и
- обогащение предшественников слуховых клеток человека из смешанной популяции клеток в соответствии со способом по п. 18 или 19.
21. Набор, содержащий по меньшей мере два различных связывающих элемента, где связывающие элементы выполненны с возможностью связывания с различными клеточными маркерами, выбранными из SSEA1, GD3, TRA-2-49, SSEA4, GD2 и CD141.
22. Набор по п. 21, отличающийся тем, что содержит по меньшей мере три различных связывающих элемента, где связывающие элементы выполненны с возможностью связывания с различными клеточными маркерами, выбранными из SSEA1, GD3, TRA-2-49, SSEA4, GD2 и CD141.
23. Набор по п. 21 или 22, отличающийся тем, что содержит панель связывающих элементов, где панель связывающих элементов содержит связывающий элемент, специфический для каждого из клеточных маркеров SSEA1, GD3, TRA-2-49, SSEA4, GD2 и CD141.
24. Набор по любому из пп. 21-23, в котором связывающие элементы представляют собой антитела, и необязательно, при этом антитела являются мечеными.
25. Применение CD141 в качестве отрицательного клеточного маркера для идентификации предшественников не-слуховых клеток в смешанной популяции клеток.