СПОСОБ, УСТРОЙСТВО И СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ПРИГОДНЫХ ДЛЯ ОБРАБОТКИ КЛЕТОК

1. Способ определения количественного значения, указывающего на количество культивируемых микробных клеток в исследуемом образце, включающий:
(i) приведение во взаимодействие исследуемого образца, который может содержать культивируемые микробные клетки, с по меньшей мере одним сигнальным агентом, способным связываться с мембраной микробной клетки, причем указанное приведение во взаимодействие проводят в течение предварительно заданного первого периода времени (T1), достаточного для интернализации сигнального агента в микробную клетку до такого уровня, при котором сигнал, испускаемый образцом, по существу достигает плато;
(ii) удаление из указанного исследуемого образца неинтернализованного сигнального агента;
(iii) в течение второго периода времени (T2), следующего за указанным первым периодом времени (T1), на протяжении которого указанный сигнал по существу сохраняется на уровне указанного плато, обнаружение среди сигнальных объектов в указанном образце сигнальных культивируемых клеток, при этом указанное обнаружение основано на параметрах отбора, предварительно заданных для указанных культивируемых клеток; и
(iv) определение на основании указанных отобранных сигнальных объектов, количественного значения, указывающего на количество культивируемых клеток в исследуемом образце.
2. Способ по п.1, включающий удаление по меньшей мере части жидкости из указанного исследуемого образца перед окрашиванием образца указанным сигнальным агентом.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что удаление жидкости осуществляют путем одной или нескольких фильтраций или центрифугирований.
4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанный образец включает один или несколько типов микробных клеток.
5. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что сигнальный агент представляет собой люминесцентный агент или светоизлучающий агент.
6. Способ по любому из пп.1-3, включающий приведение во взаимодействие указанного образца с по меньшей мере одним дополнительным сигнальным агентом, который обладает специфичностью к выбранной микробной клетке, наличие которой предполагают в указанном образце.
7. Способ по п.6, включающий обнаружение сигнала, испускаемого каждым сигнальным агентом в указанном образце, и определение на основании данного сигнала количественного значения, указывающего на количество определенных культивируемых микробных клеток в образце.
8. Способ по п.6 для определения множества количественных значений, в котором каждое значение указывает на количество определенных микробных клеток или микробных клеток определенной группы в образце.
9. Способ по любому из пп.1-3 или 8, отличающийся тем, что указанные параметры отбора включают два или несколько параметров, выбранных из интенсивности сигнала, испускаемого сигнальным объектом, размера сигнального объекта, морфологии сигнального объекта.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что определяют только сигнальные объекты, обладающие по меньшей мере интенсивностью сигнала ниже предварительно заданного верхнего порога, и размером в рамках диапазона размеров объекта.
11. Способ по п.9, отличающийся тем, что определяют только сигнальные объекты, обладающие по меньшей мере интенсивностью сигнала в рамках предварительно заданного диапазона интенсивности и размером объекта в рамках определенного диапазона.
12. Способ по п.9, включающий вычисление для указанных выбранных объектов указанного количественного значения.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что указанное количественное значение включает среднеквадратическое значение интенсивности указанных выбранных объектов.
14. Способ по п.12 или 13, отличающийся тем, что указанное количественное значение нормируют в соответствии с колониеобразующими единицами (КОЕ), причем указанное нормированное количественное значение представляет собой эквивалент КОЕ.
15. Способ по п.14, отличающийся тем, что нормирование включает умножение указанного количественного значения на предварительно определенный для конкретной клетки коэффициент нормировки с получением указанного эквивалента КОЕ.
16. Набор для определения количественного значения, эквивалентного количеству культивируемых микробных клеток в исследуемом образце, включающий:
(i) по меньшей мере один сигнальный агент, способный связываться с мембраной микробной клетки,
(ii) инструкции для приведения во взаимодействие указанного по меньшей мере одного сигнального агента с образцом в течение первого периода времени (Т1), достаточного для интернализации сигнального агента в микробную клетку до такого уровня, при котором сигнал, испускаемый образцом, по существу достигает плато;
(iii) инструкции для удаления из указанного образца не связанного сигнального агента;
(iv) инструкции для обнаружения и отбора из сигнальных объектов в указанном образце сигнальных культивируемых клеток, основанное на параметрах отбора, предварительно определенных для указанных культивируемых клеток, указанное обнаружение и отбор осуществляют в течение второго периода времени (T2), следующего за указанным Т1, на протяжении которого указанный сигнал по существу сохраняется на уровне указанного плато;
(v) инструкции для применения указанных отобранных сигнальных объектов для определения с их помощью количества культивируемых клеток в исследуемом образце.
17. Набор по п.16, включающий инструкции для удаления из указанного образца по меньшей мере части жидкости перед окрашиванием образца указанным сигнальным агентом.
18. Набор по п.16 или 17, включающий более одного сигнального агента.
19. Набор по любому из пп.16 или 17, отличающийся тем, что указанный сигнальный агент представляет собой люминесцентный агент или светоизлучающий агент.
20. Набор по п.19, отличающийся тем, что указанный сигнальный агент представляет собой флуоресцентный краситель.
21. Набор по любому из пп.16, 17 или 20, включающий параметры отбора и инструкции для использования по меньшей мере двух указанных параметров для выбора из сигнальных объектов в указанном образце сигнальных культивируемых микробных клеток.
22. Набор по п.21, отличающийся тем, что указанные параметры отбора включают предварительно определенный верхний порог интенсивности сигнала, диапазон интенсивности сигнала, размер сигнального объекта в рамках предварительно определенного диапазона размеров сигнального объекта, и сигнальную морфологию.
23. Набор по п.22, включающий инструкции для использования по меньшей мере двух указанных параметров отбора для выбора только сигнальных объектов с интенсивностью сигнала ниже предварительно определенного верхнего порога или в рамках диапазона размеров объекта, и имеющих размер в рамках предварительно определенного диапазона.
24. Набор по любому из пп.16, 20, 22 или 23, включающий инструкции для вычисления для указанных отобранных объектов указанного количественного значения.
25. Набор по п.24, отличающийся тем, что указанные инструкции включают вычисление среднеквадратического значения интенсивности для указанных выбранных объектов для получения затем указанного количественного значения.
26. Набор по любому из пп.16, 17, 20, 22, 23 или 25, включающий инструкции для нормирования указанного количественного значения на нормировочный множитель для получения экивалентного значения в колониеобразующих единицах (КОЕ).
27. Набор по п.26, включающий один или несколько предварительно определенных коэффициентов нормировки и инструкции для применения указанных предварительно определенных коэффициентов нормировки, для вычисления по измеренному количественному значению указанного эквивалента КОЕ.
28. Система для определения количественного значения, указывающего на количество культивируемых микробных клеток в исследуемом образце, включающая:
(i) носитель для удерживания указанного образца, позволяющий приведение во взаимодействие образца с одним или несколькими сигнальными агентами;
(ii) детектор для обнаружения сигнальных объектов в образце и выведения результатов, соответствующих им;
(iii) запоминающее устройство, включающее базу данных с предварительно определенными параметрами отбора и множеством предварительно определенных коэффициентов нормировки, при этом каждый параметр отбора и каждый коэффициент нормировки специфичен для микробной клетки или для группы микробных клеток;
(iv) устройство обработки данных для получения выходных результатов с детектора, одного или нескольких указанных параметров и указанного коэффициента нормировки с указанного запоминающего устройства и обработки указанных выходных результатов с указанными параметрами и указанным коэффициентом нормировки для определения указанного количественного значения, указывающего на количество указанных культивируемых микробных клеток в указанном образце.
29. Система по п.28, отличающаяся тем, что указанный носитель включает фильтр для отфильтровывания по меньшей мере части жидкости из указанного образца.
30. Система по п.28, отличающаяся тем, что указанный детектор включает камеру для получения изображения сигнальных объектов в указанном исследуемом образце.
31. Система по п.30, отличающаяся тем, что указанное устройство обработки данных сконфигурировано таким образом, что оно определяет по результатам, полученным с указанного детектора, для каждого обнаруженного сигнального объекта интенсивность сигнала размер сигнального объекта, морфологию сигнального объекта.
32. Система по любому из пп.28 по 31, отличающаяся тем, что указанное устройство обработки данных сконфигурировано таким образом, что оно отбирает сигнальные объекты, обладающие интенсивностью сигнала ниже предварительно определенного порога интенсивности и размером в рамках предварительно определенного диапазона.
33. Система по любому из пп.28-31, отличающаяся тем, что указанное устройство обработки данных сконфигурировано таким образом, что оно отбирает сигнальные объекты, обладающие интенсивностью сигнала в рамках предварительно определенного диапазона интенсивности и размером в рамках предварительно определенного диапазона.
34. Система по п.32, отличающаяся тем, что указанное устройство обработки данных сконфигурировано таким образом, что оно выводит количественное значение на основании среднеквадратического значения интенсивности, испускаемой отобранными сигнальными объектами.
35. Система по любому из пп.28-31, отличающаяся тем, что указанное устройство обработки данных сконфигурировано таким образом, что оно нормализует количественное значение на коэффициент нормировки, извлеченный из указанной базы данных.
36. Система по любому из пп.28-31, включающая кассету одного или нескольких сигнальных агентов, при этом указанная система заранее запрограммирована таким образом, что она позволяет указанной кассете высвобождать указанный один или несколько сигнальных агентов в указанный носитель и позволяет осуществлять контактирование указанного одного или нескольких сигнальных агентов с исследуемым образцом в указанном носителе.
37. Система по любому из пп.28-31, включающая совокупность кассет, каждая из которых содержит сигнальный агент, при этом указанная система заранее запрограммирована таким образом, что она позволяет высвобождение в носитель одного или нескольких сигнальных агентов из указанной совокупности кассет.
38. Запоминающее устройство для хранения программ, считываемых компьютером, практически реализующее программу инструкций, выполняемую компьютером, для осуществления способа определения количественного значения, указывающего на количество культивируемых микробных клеток в исследуемом образце, включающий:
(i) приведение во взаимодействие указанного исследуемого образца, который может содержать культивируемые микробные клетки, с по меньшей мере одним сигнальным агентом, способным связываться с мембраной микробной клетки, указанное приведение во взаимодействие производится в течение предварительно определенного первого периода времени (Т1), достаточного для интернализации сигнального агента в микробную клетку до такого уровня, при котором сигнал, испускаемый образцом, по существу достигает плато;
(ii) удаление из указанного исследуемого образца неинтернализованного сигнального агента;
(iii) в течение второго периода времени (T2), следующего за указанным первым периодом времени (Т1), на протяжении которого указанный сигнал по существу сохраняется на уровне указанного плато, обнаружение и отбор из сигнальных объектов в указанном образце сигнальных культивируемых клеток, основанное на параметрах отбора, предварительно определенных для указанных культивируемых клеток; и
(iv) определение на основании указанных выбранных сигнальных объектов количественного значения, указывающего на количество культивируемых клеток в исследуемом образце.
39. Запоминающее устройство для хранения программ по п.38, исполняемых указанным компьютером, для осуществления способа по любому из пп.1-15.
40. Компьютерная программа, включающая средства программного кода для выполнения всех этапов по любому из пп.1-15 при запуске указанной программы на компьютере, при этом указанная компьютерная программа находится в запоминающем устройстве для хранения программ.