КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К CD38 И ЛЕНАЛИДОМИД
COMPOSITIONS CONTAINING ANTIBODIES TO CD38 AND LENALIDOMIDE

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
Настоящая заявка испрашивает преимущества предварительной заявки США №61/734524, поданной 7 декабря 2012 года, предварительной заявки США №61/769247, поданной 26 февраля 2013 года и предварительной заявки США №61/808372, поданной 4 апреля 2 013 года, содержание которых включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей своей полноте.
ССЫЛКА НА ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ, ПОЛУЧЕННЫХ ЧЕРЕЗ EFS-WEB
Содержание текстового файла ASCII перечня последовательностей под названием "20130404_034543_001P3_seq", размер которого 56,7 КБ, созданного 4 апреля 2013 года (технически изменен в четверг, 4 Апреля 2013 года, в 11:12:48, и создан в пятницу, 26 июля 2013 года, в 12:23:47) и представленного в электронном виде с помощью EFS-Web, включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей своей полноте.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Область настоящего изобретения относится к антителам к CD38, Леналидомиду и лечению злокачественного новообразования.
2. ОПИСАНИЕ ПРЕДШЕСТВУЮЩЕГО УРОВНЯ ТЕХНИКИ
Множественная миелома (ММ) представляет собой В-клеточное злокачественное новообразование. При ММ аномальные клетки плазмы накапливаются в костном мозге, где они препятствуют производству нормальных клеток. Современная терапия ММ включает введение ингибиторов протеасом, таких как Бортезомиб, иммуномодулирующих препаратов, таких как Леналидомид и Талидомид и химиотерапию такую как Мелфалан и Преднизолон. В то время как эти агенты имеют улучшенную выживаемость при множественной миеломе, неизменно резистентность становится проблематичной, и пациенты погибают от своей болезни. Множественная миелома, таким образом, остается, в конечном счете, фатальной, с медианой выживаемости только около 3 до 5 лет.
+
CD38 экспрессируется на злокачественных клетках плазмы. CD38 представляет собой трансмембранный гликопротеин II типа массой 45 кДа с длинным С-концевым внеклеточным доменом и коротким N-концевым цитоплазматическим доменом. Белок CD38 представляет собой бифункциональный эктофермент, который может катализировать превращение НАД в циклическую АДФ-рибозу (cADPR), а также гидролизовать cADPR в АДФ-рибозу. CD38 активируется и влечет за собой многие гематопоэтические злокачественные новообразования.
Таким образом, некоторые предложенные способы лечения ММ включают введение антител к CD38. См., например, WO 2012/041800; de Weers et al. (2011) J Immunol 186: 1840-1848; и Van der Veer et al. (2011) Haematologica 96(2): 284-290. К сожалению, подобно различным препаратам и химиотерапиям, не все антитела одинаковы, и не все антитела в отношении одного и того же антигена проявляют аналогичные активности.
Существует, таким образом, потребность в новых и эффективных способах лечения для продления выживаемости и улучшения результатов лечения множественной миеломы, а в более общем смысле - рака крови.
ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Как предшествующее общее описание, так и последующее подробное описание являются только иллюстративными и пояснительными и предназначены для обеспечения дополнительного объяснения заявленного изобретения. Прилагаемые чертежи включены для обеспечения дополнительного понимания изобретения и включены в состав, и составляют часть данного описания, иллюстрируют несколько вариантов осуществления настоящего изобретения, и вместе с описанием служат для объяснения принципов настоящего изобретения.
Настоящее изобретение далее истолковывается посредством ссылки на чертежи, где:
Фиг. 1А демонстрирует скорость роста новообразования в моделях ксенотрансплантата, имплантированного при помощи клеток Н929 (модели Н929).
Фиг. 1В демонстрирует скорость роста новообразования в моделях ксенотрансплантата, имплантированного при помощи клеток RPMI8226 (модели RPMI8226).
Фиг. 2А демонстрирует объем опухоли новообразований в моделях RPMI8226 после лечения указанной дозой hu38SB19 в указанные моменты времени (стрелки).
Фиг. 2В демонстрирует вес тела моделей RPMI8226 после лечения указанной дозой hu38SB19 в указанное время (стрелки).
Фиг. 3А демонстрирует объем опухоли новообразований в моделях RPMI8226 после лечения указанной дозой Леналидомида в указанные моменты времени (стрелки).
Фиг. 3В демонстрирует вес тела моделей RPMI822 6 после лечения указанной дозой Леналидомида в указанные моменты времени (стрелки).
Фиг. 4А демонстрирует объем опухоли новообразований в моделях RPMI8226 после лечения указанной дозой hu38SB19 в указанные моменты времени (верхние стрелки) и указанной дозой Леналидомида в указанные моменты времени (нижние стрелки).
Фиг. 4В демонстрирует вес тела моделей RPMI8226 после лечения указанной дозой hu38SB19 в указанные моменты времени (верхние стрелки) и указанной дозой Леналидомида в указанные моменты времени (нижние стрелки).
Фиг. 5А демонстрирует объем опухоли новообразований в моделях Н929 после лечения указанной дозой hu38SB19 в указанные моменты времени (стрелки).
Фиг. 5В демонстрирует вес тела моделей Н929 после лечения указанной дозой hu38SB19 в указанные моменты времени (стрелки).
Фиг. 6А демонстрирует объем опухоли новообразований в моделях Н929 после лечения указанной дозой hu38SB19 в указанные моменты времени (стрелки).
Фиг. 6В демонстрирует вес тела моделей Н929 после лечения указанной дозой hu38SB19 в указанные моменты времени (стрелки).
Фиг. 7А демонстрирует объем опухоли новообразований в моделях Н929 после лечения указанной дозой hu38SB19 в указанные моменты времени (стрелки).
Фиг. 7В демонстрирует вес тела моделей Н929 после лечения указанной дозой hu38SB19 в указанные моменты времени (стрелки).
Фиг. 8А демонстрирует объем опухоли новообразований в моделях Н929 после лечения указанной дозой Леналидомида в указанные моменты времени (стрелки).
Фиг. 8В демонстрирует вес тела моделей Н929 после лечения указанной дозой Леналидомида в указанные моменты времени (стрелки).
Фиг. 9А представляет собой график, демонстрирующий средние влажные веса новообразования моделей RPMI8226, после указанного лечения Леналидомидом и/или hu38SB19 (mAb).
Фиг. 9В представляет собой график, демонстрирующий срединные влажные веса новообразования моделей RPMI8226, после указанного лечения Леналидомидом и/или hu38SB19 (mAb).
Фиг. 10А демонстрирует объем опухоли новообразований в моделях Н929 после лечения указанной дозой hu38SB19 в указанные моменты времени (верхние стрелки) и указанной дозой Леналидомида в указанные моменты времени (нижние стрелки).
Фиг. 10В демонстрирует вес тела моделей Н929 после лечения указанной дозой hu38SB19 в указанные моменты времени (верхние стрелки) и указанной дозой Леналидомида в указанные моменты времени (нижние стрелки).
Фиг. 11А представляет собой график, демонстрирующий средние влажные веса новообразования моделей Н929 после указанного лечения Леналидомидом и/или hu38SB19 (mAb).
Фиг. 11В представляет собой график, демонстрирующий срединные влажные веса новообразования Н929 моделей после указанного лечения Леналидомидом и/или hu38SB19 (mAb).
Фиг. 12 представляет собой график, демонстрирующий плотность клеточной поверхности CD38 в клеточных линях множественной миеломы.
Фиг. 13 представляет собой график, демонстрирующий, что hu38SB19 ингибирует рост опухоли RPMI-8226 в монотерапии, т.е. в качестве единственного активного ингредиента.
Фиг. 14 представляет собой график, демонстрирующий, что лечение как hu38SB19, так и Леналидомидом ингибирует рост опухолей RPMI-8226.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
+
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения злокачественного новообразования у субъекта, который включает введение одного или нескольких антител к CD38 и одного или нескольких соединений Леналидомида субъекту. В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой гематологическое злокачественное новообразование. В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой множественную миелому. В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой рецидив множественной миеломы или не поддающуюся лечению множественную миелому. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько соединений Леналидомида представляют собой Леналидомид. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38 вводят в эффективном количестве, предпочтительно в синергическом количестве. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38 и/или одно или несколько соединений Леналидомида вводят в терапевтически эффективном количестве. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно из одного или нескольких антител к CD38 способно убивать клетки CD38 путем апоптоза, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC). В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой hu38SB19. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно из одного или нескольких антител к CD38 содержит один или несколько определяющих комплементарность областей, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 13, 14, 81, 15, 16, 17, 18, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 и 36. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно из одного или нескольких антител к CD38 выбирают из группы, состоящей из: а) антитела, содержащего тяжелую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, состоящие из SEQ ID NO: 13, 15 и либо SEQ ID NO: 14, либо SEQ ID NO: 81, и легкую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, состоящие из SEQ ID NO: 16, 17 и 18; b) антитела, содержащего тяжелую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, состоящие из SEQ ID NO: 25, 26 и 27, и легкую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, состоящие из SEQ ID NO: 28, 29 и 30; с) антитела, содержащего тяжелую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, состоящие из SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и легкую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, состоящие из SEQ ID NO: 4, 5 и 6; d) антитела, содержащего тяжелую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, состоящие из SEQ ID NO: 7, 8 и 9, и легкую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, состоящие из SEQ ID NO: 10, 11 и 12; е) антитела, содержащего тяжелую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, состоящие из SEQ ID NO: 19, 20 и 21, и легкую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, состоящие из SEQ ID NO: 22, 23 и 24; и f) антитела, содержащего тяжелую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, состоящие из SEQ ID NO: 31, 32 и 33, и легкую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, состоящие из SEQ ID NO: 34, 35 и 36. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую вариабельную область VH, представленную SEQ ID NO: 66, и легкую цепь, имеющую вариабельную область VL, представленную либо SEQ ID NO: 62, либо SEQ ID NO: 64. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь, имеющую вариабельную область VH, представленную SEQ ID NO: 72, и легкую цепь, имеющую вариабельную область VL, представленную либо SEQ ID NO: 68, либо SEQ ID NO: 70. В некоторых вариантах осуществления, одно или несколько антител к CD38 вводят внутривенно. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько соединений Леналидомида вводят перорально. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38 и одно или несколько соединений Леналидомида вводят последовательно. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает введение соединения Дексаметазона, предпочтительно Дексаметазона субъекту. В некоторых вариантах осуществления, соединение Дексаметазона вводят перорально. В некоторых вариантах осуществления, соединение Дексаметазона вводят в малых дозах. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38, одно или несколько соединений Леналидомида и соединение Дексаметазона вводят последовательно. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает введение анти-коагулирующих агентов субъекту. В некоторых вариантах осуществления, анти-коагулирующий агент выбирают из группы, состоящей из Аспирина, Варфарина, и низкомолекулярного Гепарина. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38, одно или несколько соединений Леналидомида и анти-коагулирующий агент вводят последовательно.
+
+
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к композиции, содержащей, а) по меньшей мере, одно антитело к CD38, предпочтительно антитело способное убивать клетки CD38 путем апоптоза, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC); и, b) по меньшей мере, одно соединение Леналидомида, предпочтительно Леналидомид; и, необязательно с) соединение Дексаметазона, предпочтительно Дексаметазон; и, необязательно, d) анти-коагулирующий агент. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к композиции, содержащей антитело а) по меньшей мере, одно антитело к CD38; и, b) по меньшей мере, одно соединение Леналидомида; и, необязательно i) соединение Дексаметазона; и/или ii) анти-коагулирующий агент. В некоторых вариантах осуществления антитело способно убивать клетки CD38 путем апоптоза, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC). В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой hu38SB19. В некоторых вариантах осуществления соединение Леналидомида представляет собой Леналидомид. В некоторых вариантах осуществления соединение Дексаметазона представляет собой Дексаметазон.
+
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к набору, содержащему а) первую композицию, содержащую по меньшей мере одно антитело к CD38, предпочтительно антитело способное убивать клетки CD38 путем апоптоза, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC); и b) вторую композицию, содержащую по меньшей мере одно соединение Леналидомида, предпочтительно Леналидомид. В некоторых вариантах осуществления композиции в наборе упакованы для последовательного введения субъекту. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой hu38SB19. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения набор дополнительно содержит соединение Дексаметазона, предпочтительно Дексаметазон, и/или анти-коагулирующий агент. В некоторых вариантах осуществления соединение Дексаметазона и/или анти-коагулирующий агент упакованы для последовательного введения субъекту.
+
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к набору, содержащему по меньшей мере одно антитело к CD38, способное убивать клетки CD38 путем апоптоза, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC), упакованные вместе с этикеткой, имеющей одно или несколько сообщений о том, что по меньшей мере одно антитело к CD38 должно быть введено в комбинации с Леналидомидом, и, необязательно, с Дексаметазоном и/или анти-коагулирующим агентом. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой hu38SB19. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения набор дополнительно содержит соединение Дексаметазона, предпочтительно Дексаметазон и/или анти-коагулирующий агент. В некоторых вариантах осуществления соединение Дексаметазона и/или анти-коагулирующий агент упакованы для последовательного введения субъекту.
+
+
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к комбинации: (i) по меньшей мере, одного антитела к CD38, предпочтительно антитела способного убивать клетки CD38путем апоптоза, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC); и, (ii) по меньшей мере, одного соединения Леналидомида, предпочтительно Леналидомида; и, необязательно, (iii) соединения Дексаметазона, предпочтительно Дексаметазона; и, необязательно, (iv) анти-коагулирующего агента. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к комбинации, содержащей, а) по меньшей мере, одно антитело к CD38; и b) по меньшей мере, одно соединение Леналидомида; и, необязательно i) соединение Дексаметазона; и/или ii) анти-коагулирующий агент. В некоторых вариантах осуществления антитело способно убивать клетки CD38 путем апоптоза, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC). В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой hu38SB19. В некоторых вариантах осуществления соединение Леналидомида представляет собой Леналидомид. В некоторых вариантах осуществления соединение Дексаметазона представляет собой Дексаметазон. В некоторых вариантах осуществления комбинация предназначена для последовательного применения в лечении гематологического злокачественного новообразования, предпочтительно множественной миеломы.
+
+
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение направлено на использование, (i) по меньшей мере, одного антитела к CD38, предпочтительно антитела способного убивать клетки CD38 путем апоптоза, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC), и комплементзависимой цитотоксичности (CDC); и, (ii) по меньшей мере, одного соединения Леналидомида, предпочтительно Леналидомида; и, необязательно, (iii) соединения Дексаметазона, предпочтительно Дексаметазона; и, необязательно, (iv) анти-коагулирующего агента для лечения гематологического злокачественного новообразования, предпочтительно множественной миеломы. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению, а) по меньшей мере, одного антитела к CD38; и, b) по меньшей мере, одного соединения Леналидомида; и, необязательно i) соединения Дексаметазона; и/или ii) анти-коагулирующего агента для лечения гематологического злокачественного новообразования, предпочтительно множественной миеломы. В некоторых вариантах осуществления антитело способно убивать клетки CD38 путем апоптоза, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC). В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой hu38SB19. В некоторых вариантах осуществления соединение Леналидомида представляет собой Леналидомид. В некоторых вариантах осуществления соединение Дексаметазона представляет собой Дексаметазон.
В некоторых из различных вариантов осуществления настоящего изобретения субъект, подлежащий лечению, представляет собой млекопитающее. В некоторых из различных вариантов осуществления настоящего изобретения, субъект, подлежащий лечению, представляет собой подопытное животное, такое как мышь. В некоторых из различных вариантов осуществления настоящего изобретения субъект, подлежащий лечению, представляет собой человека.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
+
+
Настоящее изобретение относится к способам лечения злокачественного новообразования у субъекта, которые включают введение одного или нескольких антител к CD38 и одного или нескольких соединений Леналидомида субъекту. В контексте настоящей заявки "лечить" или "лечение" означает облегчение симптомов, устранение этиологии симптомов временно, либо на постоянной основе, или предотвращение, или замедление появления симптомов указанного расстройства или состояния. В контексте настоящего раскрытия эффективность соединения Леналидомида значительно улучшается при введении в сочетании с одним или несколькими антителами к CD38 в соответствии с настоящим изобретением. На самом деле, введение одного или нескольких антител к CD38, которые проявляют (а) способность убивать клетки CD38 путем апоптоза, (b) антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC), и (с) комплементзависимой цитотоксичности (CDC), как полагают, значительно повышает эффективность соединений Леналидомида для лечения гематологических злокачественных новообразований, в том числе ММ, до степени, неожиданно большей, чем у других антител к CD38, которые не обладают всеми тремя (а)-(с) активностями. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38 способны (а) убивать клетки CD38 путем апоптоза, (b) антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC), и (с) комплементзависимой цитотоксичности (CDC). В некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38 и/или одно или несколько соединений Леналидомида вводят в терапевтически эффективном количестве. В контексте настоящей заявки "терапевтически эффективное количество" вещества относится к количеству этого вещества, что приводит к облегчению одного или нескольких симптомов, устранению этиологии симптомов временно, либо на постоянной основе, и/или предотвращению или уменьшению появления симптомов указанного расстройства или состояния у большинства субъектов, страдающих и подвергающихся аналогичному лечению от указанного заболевания или нарушения.
В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой рак, в котором CD38 экспрессируется клетками злокачественного новообразования. В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой гематологическое злокачественное новообразование крови, костного мозга, и/или лимфатических узлов. В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой рак крови. Рак крови включает миелому, лимфому и лейкемию. Рак крови может, например, быть выбран из группы, состоящей из множественной миеломы, неходжкинской лимфомы, лимфомы Ходжкина, лейкоза ворсистых клеток, хронического лимфоцитарного лейкоза, хронического миелоидного лейкоза, острого миелоидного лейкоза и острого лимфобластного лейкоза. В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой множественную миелому (ММ). В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой рецидивирующую ММ или не поддающуюся лечению ММ. В контексте настоящей заявки, рецидивирующая ММ относится к клинически активным ММ после периода ремиссии, и не поддающаяся лечению ММ относится к прогрессирующему или стабильному заболеванию в процессе лечения или прогрессирующему заболеванию в течение 3 последних месяцев с предшествующего лечения. См. Dimopouljs et al (2010) Eur J Haematology 88: 1-15.
В некоторых вариантах осуществления субъект представляет собой млекопитающее, предпочтительно человека. В некоторых вариантах осуществления субъект представляет собой взрослого человека, например по меньшей мере 18-летнего. В некоторых вариантах осуществления субъект нуждается в лечении злокачественного новообразования. В некоторых вариантах осуществления субъекту был диагностирован рак. В некоторых вариантах осуществления рак находится в частичной или полной ремиссии, однако, одно или несколько соединений Леналидомида и одно или несколько антител к CD38 вводят субъекту, чтобы уменьшить вероятность рецидива. В некоторых вариантах субъект имеет индекс состояния по Карнофскому равный или превышающий 60%. Индекс Карнофского изменяется от 100 до 0, где 100 представляет собой "идеальное" здоровье и 0 представляет собой смерть (Karnofsky and Burchenal, 1949, "The Clinical Evaluation of Chemotherapeutic Agents in Cancer." In: MacLeod CM (Ed), Evaluation of Chemotherapeutic Agents. Columbia Univ Press). В некоторых вариантах осуществления субъекты подвергнутые по меньшей мере одному или двум предшествующим терапиям множественной миеломы, индукционная терапия рассматривается как одна предшествующая терапия. В некоторых вариантах осуществления субъект представлял доказательство того, что либо рак прогрессировал, в то время как субъект подвергался предшествующей терапии, либо, что субъект был невосприимчив к предшествующей терапии.
+
В некоторых вариантах осуществления антитела к CD38 специфически связывают CD38. В некоторых вариантах осуществления антитела к CD38 выступают против CD38 или его эпитопа. В некоторых вариантах осуществления антитела к CD38 представляют собой моноклональные антитела. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38 в соответствии с настоящим изобретением представляют собой моноклональные антитела, описанные в заявке WO 2008/047242, которая включена в настоящую заявку посредством ссылки во всей своей полноте. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38 представляют собой моноклональные антитела 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 и 38SB39, описанные в заявке WO 2008/047242, которая включена в настоящую заявку посредством ссылки во всей своей полноте. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38 способны убивать клетки CD38 путем трех различных цитотоксических механизмов, индукции апоптоза, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC).
Термин "антитело" в контексте настоящей заявки используется в самом широком смысле и включает в себя моноклональные антитела (включая полноразмерные моноклональные антитела) любого изотипа, такие как IgG, IgM, IgA, IgD и IgE, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела, химерные антитела, и фрагменты антител. В контексте настоящей заявки, приставка "анти" в сочетании с антигеном, указывает, что данное антитело реагирует с заданным антигеном. Антитела, реагирующие с конкретными антигенами, могут быть получены синтетическими и/или рекомбинантными способами, такими как селекция библиотек рекомбинантных антител в фаговых или подобных векторах или путем иммунизации животного антигеном или антиген-кодирующей нуклеиновой кислотой.
H
2
L
2
Типичные IgG антитела состоят из двух идентичных тяжелых цепей и двух идентичных легких цепей, которые соединены дисульфидными связями. Каждая тяжелая и легкая цепь содержит константную область и вариабельную область. Каждая вариабельная область содержит три сегмента, называемых "области, определяющие комплементарность" ("CDR") или "гипервариабельные области", которые в первую очередь отвечают за связывание эпитопа антигена. Они обычно упоминается как CDR1, CDR2 и CDR3, нумеруются последовательно от N-конца. Более высококонсервативные части вариабельных областей за пределами CDR, называются "каркасные области". В контексте настоящей заявки, "V" или "VH" относится к вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина антитела, в том числе тяжелой цепи Fv, ScFv, dsFv, Fab, Fab' или F(ab')-фрагмента. Ссылка на "V" или "VL" относится к вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина антитела, в том числе легкой цепи Fv, ScFv, dsFv, Fab, Fab' или F(ab')-фрагмента.
Антитела согласно настоящему изобретению могут быть, например, мышиными, химерными и/или гуманизированными антителами. В контексте настоящей заявки, "химерное антитело" представляет собой антитело, в котором константная область или ее часть изменена, заменена или обменена так, что вариабельная область связана с константной областью другого вида или принадлежащей к другому классу или подклассу антител. "Химерное антитело" также относится к антителу, в котором вариабельная область или ее часть изменена, заменена или обменена так, что константная область связана с вариабельной областью другого вида или принадлежащей к другому классу или подклассу антител. Способы получения химерных антител известны в данной области техники. См., например, Morrison, 1985, Science, 229: 1202; Oi et al, 1986, BioTechniques, 4: 214; Gillies et al, 1989, J. Immunol. Methods, 125: 191-202; Патенты США. №5807715;, 4816567; и 4816397, которые включены в настоящую заявку посредством ссылки во всей своей полноте. Термин "гуманизированное антитело" в контексте настоящей заявки относится к химерному антителу, которое содержит минимальную последовательность, полученную из нечеловеческого иммуноглобулина. Целью гуманизации является снижение иммуногенности ксеногенного антитела, такого как мышиное антитело, для введения в организм человека, при сохранении полной связывающей способности антигена и специфичности антитела. Гуманизированные антитела, или антитела, предназначенные для неотторжения другими млекопитающими, могут быть получены с использованием нескольких технологий, таких как изменение поверхности и трансплантация CDR. В контексте настоящей заявки, технология изменения поверхности использует комбинацию молекулярного моделирования, статистического анализа и мутагенеза для изменения не CDR поверхностей вариабельных областей антитела, чтобы они походили на поверхности известных антител целевого хозяина. Технология трансплантации CDR включает замены гипервариабельных участков, например, мышиных антител, на человеческие каркасные области, например, см. WO 92/22653. Гуманизированные химерные антитела предпочтительно имеют константные области и вариабельные области, отличные от определяющих комплементарность областей (CDR), полученных в основном или исключительно из соответствующих областей антитела человека и CDR, полученных в основном или исключительно из млекопитающих, отличных от человека.
Стратегии и способы изменения поверхности антител и другие способы снижения иммуногенности антител в другом хозяине, раскрыты в патенте США. №5639641, который включен в настоящую заявку посредством ссылки во всей своей полноте. Антитела могут быть гуманизированы с использованием различных других способов, включая CDR-трансплантацию (ЕР 0239400, WO 91/09967; патенты США №5530101; И 5585089), облицовку или шлифовку (ЕР 0592106; ЕР 0519596; Padlan Е.А., 1991, Molecular Immunology 28 (4/5): 489-498; Studnicka G.M. et al., 1994, Protein Engineering, 7 (6): 805-814; Roguska M.A. et al., 1994, PNAS, 91: 969-973), перестановку цепей (патент США. №5565332), и идентификацию гибких остатков (PCT/US 2008/074381). Человеческие антитела могут быть получены с помощью различных способов, известных в данной области, в том числе фаговых дисплейных способов. См. также патенты США №4444887, 4716111, 5545806, 5814318 и номера публикаций международных патентных заявок WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 и WO 91/10741 (указанные ссылки включены посредством ссылки во всей своей полноте).
+
+
В некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38 в соответствии с настоящим изобретением способны убивать клетки CD38 путем апоптоза, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC). В некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38 согласно настоящему изобретению способны убивать указанные клетки CD38 путем апоптоза даже при отсутствии клеток стромы или стромальных цитокинов. Эти активности могут быть оценены согласно описанному в заявке WO 2008/047242, которая включена в настоящую заявку посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления согласно изобретению, одно или несколько антител к CD38, выбирают из группы, состоящей из 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31, 38SB39 и антител, перекрестно конкурирующих с 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 или 38SB39. Гибридомные клеточные линии, продуцирующие 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 и 38SB39 мышиные антитела к CD38 были депонированы в Американской коллекции типовых культур (10801 University Bld, Manassas, VA 20110-2209, USA) 21 июня 2006 года под депозитными номерами РТА-7667, РТА-7669, РТА-7670, РТА-7666, РТА-7668, и РТА-7671 соответственно (согласно описанному в заявке WO 2008/047242, которая включена в настоящую заявку посредством ссылки во всей своей полноте).
H
L
В контексте настоящей заявки ссылка на SEQ ID NO относится к последовательностям, изложенным в перечне последовательностей, представленном в настоящей заявке, а также к изложенному в заявке WO 2008/047242, которая включена в настоящую заявку посредством ссылки во всей своей полноте. В некоторых вариантах осуществления антитела к CD38 в соответствии с настоящим изобретением могут, например, содержать тяжелую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и легкую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности представленные SEQ ID NO: 4, 5 и 6. Примером такого антитела является антитело 38СВ13, которое содержит тяжелую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную SEQ ID NO: 50, и легкую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную SEQ ID NO: 38.
H
L
В некоторых вариантах осуществления антитела к CD38 в соответствии с настоящим изобретением могут, например, содержать тяжелую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные SEQ ID NO: 7, 8 и 9, и легкую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные SEQ ID NO: 10, 11 и 12. Примером такого антитела является антитело 38СВ18, которое содержит тяжелую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную SEQ ID NO: 52, и легкую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную SEQ ID NO: 40.
H
L
H
L
В некоторых вариантах осуществления антитела к CD38 в соответствии с настоящим изобретением могут, например, содержать тяжелую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15 и либо SEQ ID NO: 14, либо SEQ ID NO: 81, и легкую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные SEQ ID NO: 16, 17, и 18. Примером такого антитела является антитело 38СВ19, которое содержит тяжелую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную SEQ ID NO: 54, и легкую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную SEQ ID NO: 42. Конкретные примеры гуманизированных версий 38СВ19 (hu38SB19) включают антитела, содержащие тяжелую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную SEQ ID NO: 66, и легкую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную либо SEQ ID NO: 62, либо SEQ ID NO: 64. hu38SB19 представляет собой гуманизированное антител к CD38, которое в настоящее время проходит клинические испытания на CD38-положительных гематологических злокачественных новообразованиях, в том числе на множественной миеломе. Предыдущие и текущие исследования показывают, что активность в отношении миеломы, связанная с этим агентом вовлекает механизмы ADCC, и CDC, а также новую, прямую апоптотическую и анти-АДФ-рибозильную циклазную активность. См. Marie-Cecile Wetzel, Celine Nicolazzi, Francois Vallee et al. hu38SB19: characterization of a potent phase I humanized anti-CD38 antibody for the treatment of multiple myeloma and other hematologic malignancies. AACR Annual meeting 2013, Abstract # 4735.
H
L
В некоторых вариантах осуществления антитела к CD38 в соответствии с настоящим изобретением могут, например, содержать тяжелую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные SEQ ID NO: 19, 20, и 21, и легкую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные SEQ ID NO: 22, 23, и 24. Примером такого антитела является антитело 38SB30, которое содержит тяжелую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную SEQ ID NO: 56 и легкую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную SEQ ID NO: 44.
H
L
H
L
В некоторых вариантах осуществления антитела к CD38 в соответствии с настоящим изобретением могут, например, содержать тяжелую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные SEQ ID NO: 25, 26, и 27, и легкую цепь, содержащую три последовательных. CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные SEQ ID NO: 28, 29, и 30. Примером такого антитела является антитело 38SB31, которое содержит тяжелую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную SEQ ID NO: 58 и легкую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную SEQ ID NO: 46. Конкретные примеры гуманизированных версий 38SB31 (hu38SB31) включают антитела, содержащие тяжелую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную SEQ ID NO: 72, и легкую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную либо SEQ ID NO: 68, либо SEQ ID NO: 70.
H
L
В некоторых вариантах осуществления антитела к CD38 в соответствии с настоящим изобретением могут, например, содержать тяжелую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные SEQ ID NO: 31, 32 и 33, и легкую цепь, содержащую три последовательных CDR, имеющих аминокислотные последовательности, представленные SEQ ID NO: 34, 35, и 36. Примером такого антитела является антитело 38SB39, которое содержит тяжелую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную SEQ ID NO: 60, и легкую цепь, имеющую вариабельную область V, представленную SEQ ID NO: 48.
В некоторых вариантах осуществления антитела к CD38 в соответствии с настоящим изобретением являются гуманизированными антителами, состоящими из двух идентичных тяжелых цепей и двух идентичных легких цепей, причем каждая цепь состоит из одной константной области и одной вариабельной области.
В контексте настоящей заявки "соединение Леналидомида" относится к Леналидомиду ((RS)-3-(4-амино-оксо-3H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диону) и производным Леналидомида. В контексте настоящей заявки "производные Леналидомида" относится к соединениям, которые имеют 4-амино-1-оксо-3H-2-изоиндолил, т.е.
который может или не может быть замещенным, как часть своей структурной формулы. Например, "производные Леналидомида" включают производные, которые имеют следующую формулу:
где R1-R8 каждый независимо представляет собой Н, галоген, алкил, алкокси, амино, или алкиламин, где R5 может дополнительно быть соединенным двойной связью кислородом. В некоторых вариантах осуществления R5 представляет собой Н. В некоторых вариантах осуществления R8 представляет собой Н. В некоторых вариантах осуществления и R5, и R8 представляют собой Н.
В некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38 вводят в эффективном количестве. В контексте настоящей заявки эффективное количество одного или нескольких антител к CD38 представляет собой количество, которое приводит к дополнительным или синергетическим эффектам с одним или несколькими соединениями Леналидомида. В контексте настоящей заявки "синергический количество" это количество, которое приводит к синергетическому эффекту. В контексте настоящей заявки "синергический эффект" относится к эффекту комбинации одного или нескольких антител к CD38 и одного или нескольких соединений Леналидомида, который больше, чем их ожидаемый суммарный эффект. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38 вводят до, во время и/или после введения одного или нескольких соединений Леналидомида. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38 и одно или несколько соединений Леналидомида вводят совместно в виде одной композиции, например, в виде смеси.
+
Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к композициям, содержащим смесь по меньшей мере одного антитела к CD38 и по меньшей мере одного соединения Леналидомида. В некоторых вариантах осуществления, смесь содержит по меньшей мере одно антитело к CD38 в количестве, которое приводит к дополнительному или синергический эффекту с по меньшей мере одним соединением Леналидомида у субъекта при введении обоих. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно антитело к CD38 в смеси представляет собой антитело, которое способно убивать клетки CD38 путем апоптоза, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC); и по меньшей мере одно соединение Леналидомида.
+
Для целей настоящего изобретения, способы и композиции по настоящему изобретению не ограничиваются исключительно теми, которые получают путем физической ассоциации антител к CD38 и соединений Леналидомида, но также и те, которые допускают раздельное введение, которое может быть одновременным или разнесено на определенный период времени. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к первой композиции, содержащей одно или несколько антител к CD38, и второй композиции, содержащей одно или несколько соединений Леналидомида. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно антитело к CD38 представляет собой антитело, которое способно убивать клетки CD38 путем апоптоза, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC); и по меньшей мере одно соединение Леналидомида. В некоторых вариантах осуществления количество одного или нескольких антител к CD38, предоставленное первой композицией представляет собой количество, которое приводит к дополнительному или синергическому эффекту с по меньшей мере одним соединением Леналидомида во второй композиции у субъекта при введении обоих.
+
В некоторых вариантах осуществления первая и вторая композиции могут быть упакованы в виде набора. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к наборам, содержащим первую композицию, содержащую одно или несколько антител к CD38, и вторую композицию, содержащую одно или несколько соединений Леналидомида. В некоторых вариантах осуществления первая и вторая композиции могут быть смешаны вместе до введения субъекту. В некоторых вариантах осуществления первая и вторая композиции могут быть введены одновременно или последовательно (т.е. разнесены на определенный период времени) так, чтобы получить максимальную эффективность, аддитивность, синергизм, или их комбинацию в композиции. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к наборам, содержащим по меньшей мере одно антитело к CD38 упакованное вместе с этикеткой, имеющей одно или несколько сообщений о том, что антитела к CD38 должны или могут быть введены в комбинации с Леналидомидом и, необязательно, с Дексаметазоном и/или анти-коагулирующим агентом. Наборы по настоящему изобретению могут дополнительно содержать одно или несколько сообщений, что антитело должно или может быть введено субъекту, страдающему от рака крови, такому как множественная миелома (например, рецидивирующая или не поддающаяся лечению множественная миелома). В некоторых вариантах осуществления одно или несколько антител к CD38 в наборах по настоящему изобретению представляют собой антитела, которые способны убивать клетки CD38 путем апоптоза, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC).
В некоторых вариантах осуществления композиции по настоящему изобретению представляют собой фармацевтические композиции. В контексте настоящей заявки термин "фармацевтическая композиция" относится к композиции, содержащей по меньшей мере один активный компонент (например, антител к CD38 или соединение Леналидомида) и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтически приемлемые носители хорошо известны специалистам в данной области, и, как правило, зависят от выбранного пути введения. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть предоставлены в любой форме или композиции, которые подходят для выбранного способа введения, такие как, например, раствор в случае внутривенного способа введения, например, капсулы, пилюли или таблетки, в случае перорального введения и т.д.
Схема лечения активными компонентами и фармацевтической композицией, описанными в контексте настоящей заявки, может быть выбрана лечащими врачами на основе своих знаний в данной области, в том числе информации, опубликованной регулирующими органами. Например, Леналидомид обычно вводят перорально. По данным Европейского агентства по лекарственным средствам (ЕМА), рекомендуемая доза Леналидомида составляет 25 мг перорально один раз в день на 1-21 дни повторных 28-дневных циклов. Поскольку, однако, совместное введение одного или нескольких антител к CD38 и одного или нескольких соединений Леналидомида приводит к дополнительным или синергетическим эффектам, дозирование соединения Леналидомида может быть соответствующим образом скорректировано, например, доза изменена и/или схема лечения изменена. Конечно, лечащие врачи могут пересмотреть какую дозу и схему использовать в зависимости от состояния и статуса заболевания пациента и на основе клинических и лабораторных данных.
Леналидомид одобрен для лечения ММ в сочетании с Дексаметазоном, способы и композиции по настоящему изобретению могут дополнительно содержать Дексаметазон, который является членом глюкокортикоидного класса стероидных препаратов, и действует как противовоспалительное средство и иммуносупрессант. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления способы лечения по настоящему изобретению дополнительно включают введение соединения Дексаметазона субъекту, которого лечат при помощи одного или нескольких антител к CD38 и одного или нескольких соединений Леналидомида. Аналогично, композиции и наборы по настоящему изобретению, которые содержат одно или несколько антител к CD38 и/или одно или несколько соединений Леналидомида могут дополнительно содержать соединение Дексаметазона. В контексте настоящей заявки "соединение Дексаметазона" относится к Дексаметазону ((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-фтор-11,17-дигидрокси-17-(2-гидроксиацетил)-10,13,16-триметил-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-3H-циклопента[а]фенантрен-3-ону) и производным Дексаметазона. В контексте настоящей заявки "производное Дексаметазона" относится к соединению, имеющему следующую структурную формулу:
где R1-R17, каждый независимо представляет собой Н, галоген, алкил, алкокси, амино, или алкиламин. В некоторых предпочтительных вариантах R1-R3 представляют собой Н. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления R4-R6 представляют собой метил. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления R7 представляет собой галоген, предпочтительно фтор. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления R8 представляет собой Н. В некоторых предпочтительных вариантах R1-R3 представляют собой Н, R4-R6 представляют собой метил, R7 представляет собой галоген, предпочтительно фтор, a R8 представляет собой Н.
В некоторых вариантах осуществления, соединение Дексаметазона может быть введено перорально. Согласно ЕМА, в сочетании с Леналидомидом, рекомендуемая доза Дексаметазона составляет 40 мг перорально один раз в день в 1-4, 9-12 и 17-20 дни каждого 28-дневного цикла в течение первых 4 циклов терапии, а затем 40 мг один раз в день в 1-4 дни каждые 28 дней. Лечащие врачи могут также повторно оценить, какие дозы Дексаметазона использовать на основании клинических и лабораторных данных.
Однако, в некоторых вариантах осуществления, соединение Дексаметазона можно вводить в более низкой дозе, чем доза, рекомендуемая для Дексаметазона ЕМА. Действительно, недавние исследования показывают, что Леналидомид плюс низкая доза Дексаметазона связаны с лучшей краткосрочной общей выживаемостью и более низкой токсичностью, чем Леналидомид плюс высокие дозы Дексаметазона у пациентов с впервые диагностированной миеломой (Rajkumar et al (2010) Lancet Onco. 11: 29-37). Таким образом, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, соединение Дексаметазона вводят в низких дозах. Термин "низкая доза" в данном контексте относится к любой дозе по меньшей мере на 20, 30 или 40% ниже, чем доза Дексаметазона рекомендованная ЕМА на дату первого маркетингового одобрения комбинации Леналидомид плюс Дексаметазон. Например, введение 40 мг Дексаметазона на 1, 8, 15, и 22 дни 28-дневного цикла рассматривается как низкая доза Дексаметазона.
В некоторых вариантах осуществления способы и композиции по настоящему изобретению могут дополнительно включать анти-коагулирующий агент, такой как, например, Аспирин, Варфарин, низкомолекулярный Гепарин или эквивалентное количество антитромбоцитарного терапевтического средства. Например, в некоторых вариантах осуществления способы лечения по настоящему изобретению дополнительно включают введение анти-коагулирующего агента субъекту, которого лечат при помощи одного или нескольких антител к CD38 и одного или нескольких соединений Леналидомида. Аналогично, композиции и наборы по настоящему изобретению, которые содержат одно или несколько антител к CD38 и/или одно или несколько соединений Леналидомида, могут дополнительно содержать анти-коагулирующий агент.
Композиции по настоящему изобретению могут быть использованы в качестве лекарственного средства и/или для применения в производстве лекарственного средства. В некоторых вариантах осуществления композиции по настоящему изобретению могут быть использованы в качестве лекарственного средства и/или для применения в производстве лекарственного средства, для применения в лечении злокачественного новообразования, такого как гематологическое злокачественное новообразование крови, костного мозга, и/или лимфатических узлов, предпочтительно рака крови.
Несколько документов приводятся в тексте настоящего описания. Каждый из документов в контексте настоящей заявки (в том числе любая статья в журнале или тезис доклада, опубликованные или неопубликованные в патентной заявке, выданном патенте, спецификации производителя, инструкции и т.д.) включен в настоящую заявку посредством ссылки. Тем не менее, не признается действительным, что любой документ, цитируемый в настоящей заявке, действительно представляет собой предшествующий уровень техники в отношении настоящего изобретения.
Следующие примеры предназначены для иллюстрации, но не ограничивают настоящее изобретение.
ПРИМЕРЫ
hu38SB19 получали в растворе 5 мг/мл, хранили при 4°С. Его разводили в стерильном физиологическом растворе при подготовке к дозированному введению, хранили при 4°С и использовали в течение 10 дней после разведения.
Леналидомид приобретали у компании АК Scientific Inc. (Mountain View, CA) и готовили в виде суспензии (вес/объем) в 1% карбоксиметилцеллюлозе (Sigma). Подготовку делали с помощью ступки и пестика для образования густой суспензии в среде, разбавленной до соответствующей концентрации, и использовали для дозированного введения через желудочный зонд.
Пример 1: Влияние одновременного введения антитела к CD38 и Леналидомида в мышиной модели ММ
Данные исследования согласно данному примеру проводили с одобрения UCSF IACUC.
Подкожный ксенотрансплантат множественной миеломы (ММ) мышиных моделей устанавливали с применением клеточных линий Н929 и RPMI8226. В частности, 5-6 недельные самки мышей BALB/C Scid приобретали у Jackson Lab. Мышей содержали в течение 7-10 дней перед имплантацией. Мышей содержали в специальной комнате в изолированной лаборатории для животных UCSF Mt Zion. Клетки NCI-Н929 и RPMI-8226 приобретены из Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур, DSMZ, (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen) и выращивали в стерильной суспензионной культуре в колбах Т225 следующим образом: NCI-Н929: RPMI1640 + 20% FBS, + 4 мМ L-глутамина + 1 мМ натрия пирувата + 50 мкМ меркаптоэтанола. RPMI-8226: RPMI1640 + 10% FBS + 4 мМ L-глутамина.
8
7
3
Во время имплантации, мышам брили правый бок и область плеча и анестезировали с помощью внутрибрюшного введения Авертина. Клетки ММ, суспендированные в бессывороточной среде RPMI 1640, разбавляли 1:1 Матригелем (BD) до концентрации 1×10 клеток на мл, вводили подкожно в правый бок в объеме 100 мкл (1×10 клеток) с помощью 1 мл шприца и 25 г иглы. Мышей наблюдали два раза в неделю в течение появления опухоли и один раз в неделю, когда опухоль была видна, данные измерений собирали два раза в неделю для веса тела и объема новообразования. Использовали электронные весы и калиперы, данные собирали непосредственно в программу управления исследованием (руководитель исследования). Когда средний объем опухоли достигал 150-200 мм, мышей разделяли на группы для лечения по 8-10 мышей на группу и начинали лечение дозами лекарства.
Схема приема hu38SB19 составлял 2 раза в неделю × 2 недели (IV латеральная хвостовая вена) и Леналидомида составлял раз в день × 7 дней в неделю × 3 недели (ПО) (перорально, одна доза в день, 7 дней в неделю, в течение 21 дня). Уровни доз для использования в комбинационном исследовании представляют собой следующие:
Данные собирали с помощью электронных весов и калиперов, используя приложение управления исследованием под названием StudyLog (директор исследования). Графики взяты непосредственно из приложения.. Экспериментальные результаты представлены на фиг. 1А-11В.
На основании результатов монотерапии hu38SB19 и Леналидомида в модели ксенотрансплантата множественной миеломы RPMI-8226 и NCI-H929, NCI-H929 оказалась более чувствительной моделью к обоим агентам, в то время как RPMI-8226, оказалась более устойчивой к лечению даже при самых высоких дозировках (фиг. 1-3, 5-8). Поэтому в комбинированных исследованиях, близкую к оптимальной дозу для каждого агента выбирали таким образом, чтобы оценить действие комбинированного лечения (Леналидомид + hu38SB19) в модели NCI-H929, а более высокую дозу Леналидомида и hu38SB19 тестировали в модели RPMI-8226.
Противоопухолевую активность определяли в соответствии со стандартами NCI на основании соотношения срединного изменения объема опухоли, подвергающейся лечению/к срединному изменению объема опухоли контроля × 100 (%ΔТ/ΔС). Низкие численные значения для ΔТ/ΔС описывают сильную противоопухолевую активность. Противоопухолевая активность определяется как ΔТ/ΔС ≤ 40% при минимальной активности. ΔТ/ΔС < 10% считается высокой противоопухолевой активностью.
В модели RPMI-8226, в монотерапии hu38SB19 при 15 мг/кг/инъекция (два раза в неделю в течение 2 недель) оказался неактивным с %ΔТ/ΔС 44%. В монотерапии Леналидомид при 15 мг/кг/день (лечили дозами ежедневно в течение трех недель) оказался неактивным (61% ΔТ/ΔС). Комбинационное лечение hu38SB19 (15 мг/кг/инъекция) с Леналидомидом (15 мг/кг/день) имело более высокую активность с %ΔТ/ΔС 13% (фиг. 4). Результаты суммированы в таблице 1.
В модели NCI-H929, в монотерапии hu38SB19 при 0,5 мг/кг/инъекция (дважды в неделю в течение 2 недель) оказался активным с %ΔТ/ΔС 10%. В монотерапии Леналидомид при 1 мг/кг/день (лечили дозами ежедневно в течение трех недель) оказался активным (21% ΔТ/ΔС). Комбинационное лечение hu38SB19 (0,5 мг/кг/инъекция) с Леналидомидом (1 мг/кг/день) имело более высокую активность (регресс опухоли) с %ΔТ/ΔС -8% (фиг. 10). Результаты суммированы в таблице 2.
В обеих моделях, комбинированное лечение ингибирует рост опухоли в гораздо большей степени, чем при монотерапии, что указывает на то, что комбинирование лечение hu38SB19 и Леналидомидом блокирует рост опухолевых клеток путем потенциальных синергических механизмов. Хотя молекулярные механизмы действия Леналидомида до сих пор неизвестны, как правило, считается, что Леналидомид повышает естественную активность клеток-киллеров, что важно для антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) и непосредственно индуцирует апоптоз в опухолевых клетках. Hu38SB19 продемонстрировало мощную ADCC и активность индуктора направленного апоптоза на опухолевых клетках, и эти действия усиливаются благодаря Леналидомиду, о чем свидетельствуют эксперименты по настоящей заявке.
Сообщалось, что некоторые CD38 антитела, такие как Даратумумаб способны индуцировать апоптоз только после сшивки с вторичным антителом без особого направленного действия самого по себе. Тем не менее, в доклинических исследованиях hu38SB19 продемонстрировал сильную направленную проапоптотическую активность на опухолевых клетках без сшивки. Таким образом, это уникальное свойство hu38SB19 может также привести к большей гибели опухолевых клеток в комбинации с Леналидомидом по сравнению с другими антителами CD38 в сочетании с Леналидомидом.
Пример 2: Влияние одновременного введения антитела к CD38 и Леналидомида человеку
Исследование фазы 1b для оценки эффекта лечения hu38SB19 в сочетании с Леналидомидом и низкой дозой Дексаметазона у пациентов с рецидивирующей или резистентной множественной миеломой выполняли, как описано ниже.
Основные цели исследования фазы 1b включают в себя:
- Определить эффективность и максимально переносимую дозу;
- Оценить безопасность, в том числе иммуногенность hu38SB19 в сочетании с Леналидомидом в рецидивирующей или резистентной множественной миеломе. Оценить степень тяжести, частоту и уровень всех токсических эффектов;
- Оценить фармакокинетику (PK) hu38SB19 при введении в комбинации с Леналидомидом и PK Леналидомида в сочетании с hu38SB19 и Дексаметазоном.
- Оценить взаимосвязь между клиническим (побочный эффект и/или реакция опухоли) эффектом и фармакологическими параметрами (PK/фармакодинамика), и/или биологическими (коррелятивная лаборатория) результатами;
- Оценить активность (скорость реагирования) с применением определенных международной рабочей группой по миеломе критериев реагирования hu38SB19 плюс Леналидомид и Дексаметазон; и
- Описать общую выживаемость, выживаемость без прогрессирования (PFS) и время до прогрессирования заболевания у пациентов, получавших эту комбинацию.
Приблизительно от 20 до 40 пациентов могут быть выбраны на основе следующих критериев: пациенты мужского или женского пола, но должны быть с диагностированной множественной миеломой и быть в возрасте по меньшей мере 18 лет. Для каждого пациента существует документация по меньшей мере о 2 предшествующих терапиях (индукционная терапия считается одной предшествующей терапией). Не существует максимального количества предшествующих курсов лечения, и предварительная трансплантация костного мозга является приемлемой. Существуют подтвержденные признаки прогрессирования заболевания после непосредственно предшествующей терапии ММ или резистентности к непосредственно предшествующей терапии. Пациенты могут получать предварительные иммуномодулирующие препараты (IMiDs) (например, Леналидомид или Талидомид). Пациенты с поддающимся измерению заболеванием. Пациенты с индексом Карнофского ≥60%. Женщины детородного возраста включены, если они имеют отрицательный тест сыворотки крови или мочи на беременность с чувствительностью не менее 50 мМЕ/мл не позднее 10 до 4 дней, и вторично не позднее 24 часов до назначения Леналидомида для цикла 1 (предписания должны быть заполнены не позднее 7 дней в соответствии с требованиями RevAssist) и должны либо принять на себя обязательство продолжительного воздержания от гетеросексуальных контактов, либо начать применять два приемлемых способа контроля над рождаемостью, один очень эффективный способ и один дополнительный эффективный способ в это же время по меньшей мере 28 дней, прежде чем она начинает принимать Леналидомид. Женщины детородного возраста должны также согласиться на постоянное тестирование на беременность. Способность понимать цель и риски исследования и предоставить подписанное и датированное информированное согласие, и разрешение на использование защищенной информации о здоровье (в соответствии с правилами национального и муниципального положения о конфиденциальности). Пациент должен быть способен принимать Аспирин ежедневно в качестве профилактической анти-коагулирующей терапии (пациент с непереносимостью аспирина может использовать варфарин, низкомолекулярный гепарин или эквивалентное количество антитромбоцитарного терапевтического средства).
Кроме того, пациенты, отвечающие по меньшей мере одному из следующих критериев, исключаются:
- диагноз или лечение другого злокачественного новообразования в течение 3 лет до набора, за исключением полной резекции базально-клеточной карциномы или плоскоклеточного рака кожи на месте злокачественного новообразования, или низкого риска рака простаты после радикального лечения;
- Предшествующая противораковая терапия (химиотерапия, направленные агенты, лучевая терапия и иммунотерапия) в течение 21 дней за исключением алкилирующих агентов (например, Мелфалан), где потребуется 28 дней, или принимал участие в другом клиническом исследовании в течение последних 30 дней;
- История выраженного сердечно-сосудистого заболевания в течение последних 6 месяцев, за исключением случаев, когда болезнь хорошо управляема. Выраженные сердечные заболевания включают в себя вторую/третью степень блокады сердца; выраженную ишемическую болезнь сердца (например, стенокардия); Интервал QTc >450 мс от изолинии (читается местным кардиологом); плохо контролируемая гипертония; застойная сердечная недостаточность класса II согласно классификации Нью-Йоркской ассоциации сердца (NYHA) (незначительное ограничение физической активности; удобно в покое, но и обычные результаты физической активности дают усталость, сердцебиение или одышку) или более того; фракция выброса левого желудочка (ФВЛЖ) <50%;
- Перед трансплантацией периферических стволовых клеток в течение 12 недель после первой дозы исследуемого лечения;
- Суточная потребность в кортикостероидах (>10 мг/кг раз в день преднизона) (за исключением ингаляционных кортикостероидов);
- Свидетельства слизистого или внутреннего кровотечения;
- Перед лучевой терапией или хирургической процедурой в течение 4 недель после первой дозы исследуемого лечения;
- Зафиксирована активная инфекция, требующая парентерального или перорального лечения антибиотиками;
- Серьезные психические заболевания, активный алкоголизм или наркомания, которые могут препятствовать или помешать последующей оценке;
- Любые заболевания, которые, по мнению исследователя, накладывали бы чрезмерный риск на пациента. Примеры таких заболеваний включают любые существовавшие ранее заболевания почек (острые или хронические, не считая почечную недостаточность, которая воспринимается как вторичная по отношению к ММ, гипертензия, эпилепсия в активной форме или легочные заболевания, что накладывает чрезмерный риск на пациента;
- Гиперчувствительность к любому из компонентов исследуемой терапии, иными словами не восприимчивость к премедикации с применением стероидов и Н2-блокаторов;
- Зафиксирован вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) или активная вирусная инфекция гепатита В или С;
- Нейропатия ≥3 степени или болезненная невропатия ≥2 степени (Общая Терминология Критериев Побочных Эффектов Национального Института Рака [NCI СТСАЕ] v 4.0);
- Желудочно-кишечные аномалии, в том числе кишечная непроходимость, невозможность приема препаратов внутрь, необходимость во внутривенной (IV) алиментации, язвенная болезнь или предшествующие хирургические процедуры или резекция кишечника, ухудшающая всасывание; и
- Беременность.
Пациентов лечили hu38SB19 в сочетании с Леналидомидом и Дексаметазоном. hu38SB19 вводили внутривенно в виде раствора.
Леналидомид вводили перорально в виде капсул. Дексаметазон вводили перорально в виде таблеток. Продолжительность исследования для каждого пациента включает в себя период скрининга, включающий до 21 дня, и по меньшей мере 4 недели лечения при отсутствии тяжелой побочной реакции, ограничивающей дозу токсичности или прогрессирования заболевания плюс до 60 дней после лечения последующего врачебного наблюдения. Общая продолжительность исследования может составлять до одного года.
Следующие параметры измеряли во время и/или в конце исследования:
- Количество пациентов с побочными эффектами при лечении hu38SB19 в сочетании с Леналидомидом.
- Оценка частичной реакции, полной реакции, выживаемости без прогрессирования, и выживаемости;
- Оценка следующих параметров PK: площадь под кривой (AUC), максимальная концентрация (Cmax) и период полураспада плазмы крови (Т1/2)
- Количество CD38 рецепторов, занятых hu38SB19; и
- Количество анти-SAR антител в ответ на hu38SB19.
Пример 3: Эффективность антител к CD38 in vivo в моделях опухоли множественной миеломы в монотерапии или в комбинации с Леналидомидом у человека со стандартным лечением иммуномодулирующим средством направленного действия Леналидомидом.
А. Материалы и способы
Плотность CD38: плотность CD38 определяли с помощью анти к CD38-PE Quantibrite (BD Biosciences; Cat. 342371) в соответствии с рекомендованными протоколами изготовителя.
Реагенты и соединения: hu38SB19 предоставляли Sanofi Oncology в растворе 5 мг/мл и хранили при 4°С. hu38SB19 разводили стерильным физиологическим раствором при подготовке к дозированному введению и использовали в течение 10 дней после разведения. hu38SB19 вводили два раза в неделю × 2 недели IV. Леналидомид (ТС27682) приобретали у компании АК Scientific Inc. (Mountain View, CA) и готовили в виде суспензии (вес/объем) в 1% карбоксиметилцеллюлозе (Sigma). Подготовку делали с помощью ступки и пестика для образования густой суспензии в среде, разбавленной до соответствующей концентрации, и использовали для дозированного введения через желудочный зонд. Леналидомид вводили раз в раз в день × 7 дней в неделю × 3 недели перорально.
Подопытные животные: 5-6 недельные самки мышей BALB/C Scid приобретали у Jackson Lab. Мышей содержали в течение 7-10 дней перед имплантацией клеточных линий множественной миеломы (ММ). Мышей содержали в специальной комнате в изолированной лаборатории для животных UCSF Mt Zion.
Клеточная культура: клетки RPMI-8226 приобретены из Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур, DSMZ, (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen) и выращивали в стерильной суспензионной культуре в колбах Т225. RPMI-8226 культивировали в RPMI1640 + 10% FBS + 4 мМ L-глутамина.
8
7
3
Модель ксенотрансплантата: Во время имплантации, мышам брили правый бок и область плеча. Клетки ММ, суспендированные в бессывороточной среде RPMI 1640, разбавляли 1:1 Матригелем (BD) до концентрации 1×10 клеток на мл, вводили подкожно в правый бок в объеме 100 мкл (1×10 клеток) с помощью 1 мл шприца и 25 г иглы. Мышей наблюдали два раза в неделю в течение появления опухоли и один раз в неделю, когда опухоль была видна, данные измерений собирали два раза в неделю для веса тела и объема новообразования. Использовали электронные весы и калиперы, данные собирали непосредственно в программу управления исследованием (руководитель исследования). Когда средний объем опухоли достигал 150-200 мм, мышей разделяли на группы для лечения по 8-10 мышей на группу и начинали лечение дозами лекарства.
В. Краткое изложение и выводы.
hu38SB19 представляет собой гуманизированное антитело к CD38, анти-миеломный эффект которого включает механизмы ADCC, CDC, и прямой апоптоз. На фиг. 21 показана плотность клеточной поверхности CD38 в клеточных линиях множественной миеломы. См. Kim D, Park CY, Medeiros ВС, Weissman IL. Низкий уровень CD19-С045/-высокий уровень CD38/CD138 + клетки плазмы обогащают онкогенные клетки миеломы человека. Leukemia. 2012 Dec, 26 (12): 2530-7. CD38-положительные клетки плазмы множественной миеломы демонстрируют переменные плотности клеточной поверхности CD38. Как сообщалось, все клеточные линии, за исключением XG-6, являются CD38-положительными. См. Bataille R, Jego G, Robillard N, et al. The phenotype of normal, reactive and malignant plasma cells. Identification of "many and multiple myelomas" and of new targets for myeloma therapy. Haematologica. 2006 Sept, 91 (9): 1234-40. Связывание hu38SB19 с CD38 также воздействует на ADPRC-ферментативную активность CD38. In vivo hu38SB19 демонстрирует мощный противоопухолевый эффект в ксенотрансплантатах множественной миеломы, болезнь в основном характеризуется экспрессией опухолевых плазматических клеток CD38. Фиг. 13 показывает, что моновведение hu38SB19 приводит к дозозависимому ингибированию роста опухоли в заднебоковых моделях RPMI-8226. Величина и значение ингибирования роста опухоли в конце исследования возрастает с увеличением дозы hu38SB19. Фиг. 14 показывает, что режим комбинированной схемы лечения hu38SB19 и Леналидомидом приводит к значительному ингибированию роста опухоли в модели ксенотрансплантата RPMI-8226, которая не чувствительна к монотерапии Леналидомидом. Эти данные демонстрируют, что монотерапия hu38SB19 ингибирует рост RPMI-8226 и сочетается с суб-эффективными дозами Леналидомида, что вызывает значительное ингибирование роста опухоли. Взятые вместе, эти данные способствуют дальнейшему анализу hu38SB19, как в монотерапии, так и в комбинации со стандартной схемой лечения оказания медицинской помощи, в качестве потенциальной терапии для лечения множественной миеломы.
В объеме необходимом, чтобы понять или завершить раскрытие настоящего изобретения, все публикации, патенты и патентные заявки, упомянутые в данном описании, специально включены в виде ссылки на них в том же объеме, как если бы каждая таким образом была в отдельности включена.
Таким образом, описанные примерные варианты осуществления настоящего изобретения, это следует отметить для специалистов в данной области, в пределах раскрытия являются только примерами и что различные другие варианты, адаптации и модификации могут быть сделаны в пределах объема настоящего изобретения. Таким образом, настоящее изобретение не ограничивается конкретными вариантами осуществления, как показано в настоящем документе, но ограничивается только следующей формулой изобретения.