Способ оценки нарушения имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией, путем определения циклооксигеназы-2 в гомогенате ворсинчатого хориона
METHOD FOR ASSESSING EMBRYO IMPLANTATION DISORDER IN PREGNANCY COMPLICATED BY CYTOMEGALOVIRUS INFECTION BY DETERMINING CYCLOOXYGENASE-2 IN CHORIONIC VILLOUS HOMOGENATE

Область применения: изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, а также к области научных исследований -патологической физиологии, и предназначено для оценки нарушения имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией.
Уровень техники
Нарушение процесса имплантации является одним из основных факторов развития ранних репродуктивных потерь. Вопросам этиологии, патогенеза, терапии и профилактики невынашивания беременности посвящено большое количество работ, тем не менее, продолжается изучение патогенетических механизмов этой патологии с целью разработки наиболее эффективных мер профилактики ранних репродуктивных потерь [4, 5]. По данным многих авторов, частота невынашивания беременности, не имеет тенденцию к снижению и составляет 10-25% от всех беременностей [6].
Показано, что в современных условиях одним из ведущих факторов нарушения имплантации эмбриона во время беременности является урогенитальная инфекция, в развитии которой особая роль отводится хламидиям, микоплазмам, уреаплазмам, цитомегаловирусу и вирусу простого герпеса [1]. Инфекция может оказывать прямое цитотоксическое действие на эмбрион за счет активации цитокинов и свободных радикалов на фоне повышенной продукции токсических веществ, вырабатываемых при разрушении микроорганизмов, и приводить к гибели эмбриона на любых стадиях гестации [7]. Нарушение развития эмбриона может вести к прерыванию беременности не только за счет прямого специфического воздействия инфекционных агентов, но и быть обусловленным персистенцией микроорганизмов и вирусов в эндометрии и плаценте.
Неблагоприятное влияние цитомегаловирусной инфекции на плаценту реализуется за счет активации медиаторов воспаления, что ведет к гибели клеток трофобласта, развитию плацентарной недостаточности и, как следствие, угрозы невынашивания беременности [11].
При наличии цитомегаловирусной инфекции возможно развитие бессимптомной инфекции без последствий для беременности. Однако в некоторых случаях наличие цитомегаловирусной инфекции повышает риск нарушения эмбриогенеза, внутриутробного поражения плода, спонтанного аборта и плацентарной недостаточности [2, 3].
Вышеизложенные данные о частоте невынашивания беременности и значении инфекционного фактора определяют необходимость разработки способов оценки нарушения имплантации эмбриона с целью определения факторов риска угрожающего течения беременности и ее прерывания на ранних сроках.
2
Изучение содержания циклооксигеназы 2 (СОХ-2) с целью диагностики осложнений беременности широко представлено в материалах исследований зарубежных авторов. При этом показано, что липидные медиаторы играют решающую роль в процессе родоразрешения, а липолитические ферменты фосфолипаза А и СОХ-2 являются ключевыми регуляторами синтеза данных соединений [9, 12].
Известны работы, в которых для прогноза плацентарных нарушений, используются уровни экспрессии СОХ-2 в плаценте и влияние на активность данного фермента липоевой кислоты [9], экспрессии СОХ-2, TNFα и индуцибельной NO-синтазы в плаценте при осложнении беременности преэклампсией [13], а также ядерного фактора NFkB, белков Р50, Р65 и СОХ-2 [18].
Вышеперечисленные факторы как изолировано, так и в сочетании друг с другом могут свидетельствовать о нарушении процессов формирования фетоплацентарного комплекса. В связи с этим, наибольшую диагностическую ценность имеют способы, позволяющие проводить оценку угрожающих состояний беременности, связанных с нарушением процесса имплантации эмбриона, в том числе инфекционного генеза.
Аналогами данного изобретения являются приведенные выше способы, основными недостатками которых является трудоемкость [18] и неспецифичность [9, 13], невозможность оценить риск нарушения имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией [16].
Указанные факторы могут быть устранены в заявленном способе.
Техническим результатом, достигаемым при осуществлении предлагаемого изобретения, является оценка нарушения имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией.
Заявляемый технический результат достигается тем, что у беременных женщин с выявленной цитомегаловирусной инфекцией и состоявшимся выкидышем на первом триместре беременности, определяют в гомогенате ворсинчатого хориона содержание СОХ-2 и при значении СОХ-2 более 16,85 нг/мл  делают заключение о нарушении имплантации эмбриона.
Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается проводить оценку нарушения имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией, по уровню СОХ-2 в гомогенате ворсинчатого хориона. Ранее совокупность указанных признаков в оценке нарушения имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией, не использовалась.
2
Как показывают исследования, персистенция цитомегаловирусной инфекции в период беременности обусловливает мощную и длительную активацию процессов перекисного окисления липидов с угнетением антирадикальной защиты. Персистирующие антигены цитомегаловируса, медиаторы воспаления (TNFα, IL-1, INFγ), метаболиты перекисного окисления липидов усиливают активность фермента фосфолипазы А и, тем самым, интенсифицируют каскад преобразований арахидоновой кислоты, с образованием метаболически активных простагландинов Е и F, которые играют важную роль в развитии беременности, являясь активаторами родов. Равномерное соотношение концентраций этих двух простагландинов сдерживают сокращение матки, предотвращая выкидыши на ранних сроках гестации [8].
Биологические эффекты простагландинов регулируются СОХ-2 - ферментом, обеспечивающим синтез простаноидов, а также соответствующими рецепторами, с которыми простаноиды взаимодействуют. Фермент СОХ-2 синтезируется в различных тканях, в том числе и в плаценте. Результаты исследований показали, что увеличение экспрессии СОХ-2 в плаценте играет важную роль в развитии плацентарных нарушений, при патологическом течении беременности [16], путем уменьшения плацентарного кровотока [13].
2
Плацента человека, эмбриональные мембраны и децидуальная ткань продуцируют простагландины на протяжении всей беременности, увеличиваясь к моменту родов [12]. Так, например, простагландин Е, синтезированный в амнионе и высвобожденный в амниотическую жидкость, может влиять на физиологию плода, путем ингибирования дыхания плода [17].
В литературе имеются данные, указывающие на потенциальные связи окислительного стресса и индукции СОХ-2 в плаценте, что приводит к избыточному синтезу простагландинов [14, 19]. Индукция СОХ-2 связана с окислительным стрессом за счет активации р38МАРК и NF-kB семейства транскрипционных факторов [15]. Простагландин, синтезируемый в плаценте в ответ на окислительный стресс, высвобождается в кровоток матери и индуцирует процесс родов, путем увеличения сократительной способности матки [10]. Следовательно, СОХ-2, через синтез простагландинов, влияет на регуляцию важнейших физиологических процессов во время беременности.
Вместе с тем, анализ современной литературы показал, что данных о влиянии цитомегаловирусной инфекции на индукцию липолитического фермента СОХ-2, приводящей к повышению продукции простагландинов и нарушению имплантации эмбриона нет.
Вышеизложенное явилось основанием к исследованию в гомогенате ворсинчатого хориона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией, показателя СОХ-2 для оценки нарушения имплантации эмбриона.
Способ осуществляют следующим образом.
У беременных женщин с выявленной цитомегаловирусной инфекцией и состоявшимся выкидышем на первом триместре беременности исследуют ворсинчатый хорион, полученный после выскабливания стенок полости матки. Определение уровня СОХ-2 проводят методом иммуноферментного анализа с использованием тест-систем «Assay Desings, СОХ-2» (США). Учет реакции проводят на иммуноферментном анализаторе Stat Fax-2100 (США) согласно протоколам для постановки иммуноферментного анализа фирмы-производителя в гомогенате ворсинчатого хориона.
При значении СОХ-2 более 16,85 нг/мл делают заключение о нарушении имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомеговирусной инфекцией.
Использование способа позволяет оценить нарушение имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией, и дает возможность определить причину плацентарных нарушений за счет исследования одного биологического образца - ворсинчатого хориона с использованием одного метода исследования - иммуноферментного анализа.
Отличительными признаками данного способа являются: ранние сроки беременности до 12 недель, установлены диагностические величины СОХ-2, при значении более 16,85 нг/мл делают заключение о нарушении имплантации эмбриона.
Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.
Пример 1. Беременная С., 24 г., находилась на стационарном лечении в гинекологическом отделении Городской клинической больницы (г. Благовещенск). Поступила с болями внизу живота и кровянистыми выделениями из половых путей. Гинекологический анамнез осложнен: 1 медицинский аборт без осложнений.
Проведено исследование крови на ЦМВ, УЗИ органов малого таза.
По ИФА выявлены антитела IgM к ЦМВ, титр антител IgG - 1600, индекс авидности - 86%.
По УЗИ: в полости матки плодное яйцо с эмбрионом 6 недель 4 дня. Сердцебиение определяется. Гипертонус по задней стенки матки. Внутренний зев сомкнут. Ниже плодного яйца гематома небольших размеров (отслойка ворсинчатого хориона).
Диагноз: Беременность 6-7 недель. Угрожающий самопроизвольный выкидыш. Хроническая цитомегаловирусная инфекция, стадия обострения.
На третий день стационарного лечения усилились боли внизу живота и кровянистые выделения из половых путей. Выставлен диагноз самопроизвольный выкидыш в ходу при сроке 7 недель беременности. Проведено выскабливание стенок полости матки.
По заявленному способу в гомогенате ворсинчатого хориона определено содержание СОХ-2 - 17,12 нг/мл.
Заключение: Нарушение имплантации эмбриона.
Пример 2. Беременная Л., 22 г., поступила в гинекологическое отделение Городской клинической больницы (г. Благовещенск) для проведения медицинского аборта. Гинекологический анамнез осложнен: 1 медицинский аборт без осложнений.
Проведено обследование крови на ЦМВ, УЗИ органов малого таза.
По ИФА титр антител IgG ЦМВ - 1:800, индекс авидности - 95%.
По УЗИ: в полости матки плодное яйцо с эмбрионом 7 недель 3 дня. Сердцебиение определяется. Внутренний зев сомкнут.
Диагноз: Беременность 7-8 недель. Хроническая цитомегаловирусная инфекция, латентная стадия.
При сроке 7 недель беременности проведен медицинский аборт.
По заявленному способу в гомогенате хориона определено содержание СОХ-2 - 10,34 нг/мл.
Заключение: Физиологическое течение беременности. Угроза нарушения имплантации эмбриона отсутствует.
Указанным способом обследованы 55 беременных женщин с цитомегаловирусной инфекцией и состоявшимся выкидышем на сроке до 12 недель беременности. Результаты исследования представлены в таблице 1.
Преимущества заявляемого способа:
1. Высокая точность - 87%, чувствительность - 67% и специфичность - 95%.
2. Хорошая воспроизводимость метода.
3. Простота, доступность и экономичность выполнения методики.
4. Простота в интерпретации результатов обследования.
Литература
1. Боровкова Л.В., Колобова С.О. Современный взгляд на проблему невынашивания беременности инфекционного генеза // Консилиум. 2016. №3(146). С. 19-24.
2. Долгушина Н.В., Макацария А.Д. Вирусные инфекции у беременных. М.: Триада-Х, 2009. 35 с.
3. Короткова Н.А., Прилепская В.Н. Цитомегаловирусная инфекция и беременность (предгравидарная подготовка и терапия) // Эффективная фармакотерапия. 2016. №22. С. 28-32.
4. Серов В.Н., Сидельникова В.М., Агаджанова А.А., Тетруашвили Н.К. Плацентарная недостаточность в клинике невынашивания беременности // Русский медицинский журнал. 2003, T. 11, №6, С. 88-93.
5. Сидельникова В.М. Актуальные проблемы невынашивания беременности. Москва, 1999. 138 с.
6. Тетруашвили Н.К. Привычное невынашивание // Клинические рекомендации. М., 2008.
7. Тихомиров А.Л., Лубнин Д.М. Привычное невынашивание беременности: причины, диагностика и современные подходы к терапии // Фармакинетика. 2004. №1. С. 28-39.
8. Функция простагландинов в организме человека / электронный ресурс https://gormonys.ru/other/prostaglandiny.html /дата обращения: 15.01.2018.
9. Bennett P.R., Henderson D.J., Moore G.E. Changes in expression of the cyclooxygenase gene in human fetal membranes and placenta with labor // Am. J. obstet.Gynecol. 1992; 167(1): 212-6.
10. Burdon C, Mann C, Cindrova-Davies Т., Ferguson-Smith A.C., Burton G.J. Oxidative stress and the induction of cyclooxygenase enzymes and apoptosis in the murine placenta // Placenta. 2007; 28(7): 724-733.
11. Chou D., Ma Y., Zhang J. Cytomegalovirus infection of trophoblast cell elicits an inflammatory response: a possible mechanism of placental dusfunction // Am. J. Obstet. Gynecol. 2006; 194(2): 534-541.
12. Phillips R.J., Fortier M.A., Lopez Bernal A. Prostaglandin pathway gene expression in human placenta, amnion and choriodecidua is differentially affected by preterm and term labour and by uterine inflammation // BMC Pregnancy Childbirth. 2014; 22(14): 241.
13. Goksu Erol A.Y., Nazli M., Yildiz S.E. Expression levels of cyclooxygenase-2, tumor necrosis factor-a and inducible NO synthase in placental tissue of normal and preeclamptic pregnancies // J. Matern Fetal Neonatal Med. 2012; 25(6): 826-830.
14. Malek A., Sager R., Schneider H. Effect of hypoxia, oxidative stress and lipopolysaccharides on the release of prostaglandins and cytokines from human term placental explants // Placenta. 2001; 22 (Suppl. A): S45-S50.
15. Newton R., Kuitert L.M., Bergmann M., Adcock I.M., Barnes P.J. Evidence for involvement of NF-kappaB in the transcriptional control of COX-2 gene expression by IL-lbeta // Biochem Biophys Res Commun. 1997; 237: 28-32.
16. Okawara M., Seki H., Matsuoka K., Hashimoto F., Hayashi H., Takeda S. Examination of the expression of cyclooxygenase-2 in placenta villi from sufferers of pregnancy induced hypertension // Biol. Pharm. Bull. 2009; 32(12): 2053-2056.
2
17. Sorokin Y, Hallak M, Klein O, Kalderon I, Abramovici H. Effects of induction of labor with prostaglandin E on fetal breathing and body movements: controlled, randomized, double-blind study // Obstet Gynecol. 1992; 80:788-791.
18. Xu Y., Khipp G.T., Cook T.J. Expression of cyclooxygenase isoforms in developing rat placenta, human term placenta, and BeWo human trophoblast model // Mol. Pharm. 2005.2(6): 481-490.
19. White V. Oxidative stress and altered prostanoid production in the placenta of streptozotocin - induced diabetic rat // Reprod Fertil Dev. 2002; 14: 117-123.