Изменения реализации апоптотической программы трансформированных клеток линии Jurkat и мононуклеарных лейкоцитов здоровых доноров при воздействии сульфида водорода

низкая активность ММП-2,-7 отмечена в ткани опухоли по сравнению со всеми исследуемыми органами. Опухоленосительство сопровождалось повышением активности ММП-2,-7 в селезенке. В ткани опухоли при сравнении с легкими (органом, из которого произошла опухоль) активность ММП-2,-7 значительно снижена (в 2,5 раза). В ткани легких мышей с АЛЛ активность ММП-2,-7 выше по сравнению с аналогичными показателями интактных животных, что, возможно, обусловлено развитием метастазов. В сыворотке крови мышей с опухолью активность ММП-2,-7 значимо ниже по сравнению с показателями интактных животных. В ткани опухоли преобладала проММП-9,

не обладающая ферментативной активностью, что, возможно, объясняет снижение общей активности ММП. Выявлено, что концентрация белка в исследуемых органах интактных животных и мышей с АЛЛ не изменялась, что указывает на изменения удельной активности ММП (в расчете на мг белка).

Выводы. Увеличение активности ММП-2,-7 характерно для метастазирования АЛЛ мышей, в то время как активность ММП-2,-7 в ткани опухоли ниже, чем в легких и других органах опухоленосителей. В ткани опухоли преобладала проММП-9, не обладающая ферментативной активностью, что, вероятно, подтверждает снижение общей активности ММП.

ИЗМЕНЕНИЯ РЕАЛИЗАЦИИ АПОПТОТИЧЕСКОЙ ПРОГРАММЫ ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ КЛЕТОК ЛИНИИ JURKAT И МОНОНУКЛЕАРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ СУЛЬФИДА ВОДОРОДА

Л.А. КЛЕПЦОВА, Е.Г СТАРИКОВА, ю.В. СТАРИКОВ, Е.В. КАЙГОРОДОВА

ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет», кафедра патофизиологии, г. Томск

Актуальность. Исследования последних лет продемонстрировали, что опухолевая трансформация, как и опухолевая прогрессия, обусловлены изменениями молекулярных механизмов, контролирующих апоптоз. В последние годы внимание исследователей приковано к изучению нового класса регуляторных молекул, к которым относится сульфид водорода. Однако информация об участии данного газотрансмиттера в механизмах дизрегуляции апоптоза опухолевых клеток малочисленна и противоречива.

Цель - определить влияние сульфида водорода (H2S) на реализацию апоптотической программы клеток линии Jurkat и мононуклеарных лейкоцитов здоровых доноров.

Материал и методы. В работе использованы клетки линии Jurkat (T-лимфобластная лейкемия) и мононуклеарные лейкоциты (выделяли из крови у 10 здоровых доноров путем центрифугирования на слое фиколла («Pharmacia», Швеция) плотностью 1,077). Клетки инкубировали при температуре 37°С в полной питательной

среде с добавлением различных концентраций донора сульфида водорода (натрий гидросульфид гидрат (NaHS) («Sigma», USA). Количество клеток с признаками некроза оценивали методом световой микроскопии при окраске трипа-новым синим («Serva», США). Апоптотически измененные клетки регистрировали с помощью TUNEL-метода с использованием флуоресцентной микроскопии («Webstain», США).

Результаты. Для определения роли сульфида водорода в реализации апоптоза клетки линии Jurkat и мононуклеарные лейкоциты культивировали в присутствии различных концентраций NaHS (от 10 мкм до 1 мМ) в течение 15 мин. Результатом инкубации клеток с 1 мМ и 500 мкм донора H2S являлся некроз клеток. Указанные концентрации не использовались в дальнейшем для определения влияния сульфида водорода на программированную гибель клеток. Установлено, что инкубация клеток линии Jurkat в течение 15 мин с 10 мкм NaHS приводила к увеличению числа апоптотически измененных

клеток в 2,2 раза, с 50 мкм - к достоверному снижению исследуемого параметра, со 100 мкм - к увеличению апоптотической гибели в 1,5 раза по сравнению с контролем. При этом добавление в культуральную среду 100 мкм NaHS сопровождалось некротической гибелью более 50% клеток, 50 мкм - увеличением числа некротизированных клеток в 5 раз, при воздействии на клетки 10 мкм NaHS количество лимфоцитов с признаками некроза превосходило аналогичный параметр в интактной культуре в 1,7 раза. Полученные данные свидетельствуют, что проапоптотическая для клеток линии Jurkat доза донора сульфида водорода (10 мкм) не вызывала изменений программированной гибели мононуклеарных лейкоцитов, полученных у

здоровых доноров. Более того, увеличение числа некротических клеток в культуре мононуклеа-ров здоровых доноров относительно контроля наблюдалось только при воздействии 100 мкм NaHS, при этом не было изменения числа TUNEL-положительных мононуклеаров.

Выводы. Клетки Т-лимфобластной лейкемии более сенсибилизированы к действию сульфида водорода, чем мононуклеарные лейкоциты, полученные у здоровых доноров. NaHS в концентрации 10 мкм обладает проапоптоти-ческими свойствами в отношении клеток линии Jurkat и может быть использован для изучения молекулярных механизмов влияния сульфида водорода на реализацию апоптотической программы клеток.

ЭКСПРЕССИЯ ЦИРКАДИАННЫХ ГЕНОВ В ТКАНЯХ ПЕЧЕНИ И ОПУХОЛЯХ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПРИ СТАРЕНИИ ТРАНСГЕННЫХ МЫшЕЙ HER-2/NEU

С.Н. КОЛОМЕЙЧУК1, Э.В. ГУРОВ1, Т.С. ПИСКУНОВА2, М.Л. ТЫНДЫК2, В.Н. АНИСИМОВ2

Институт биологии Карельского научного центра РАН, г. Петрозаводск 1 НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова Росмедтехнологий, г. Санкт-Петербург2

Актуальность. Одним из регуляторов физиологических ритмов у человека и животных является смена циркадианного цикла дня и ночи. При значительных отклонениях циркадианных ритмов, связанных с генетическим дефектом или воздействием факторов внешней среды, могут возникать серьезные нарушения различных физиологических процессов. Нарушение циркадианных ритмов может являться фактором риска в развитии различных новообразований, в том числе и рака молочной железы. Целью работы являлось выявление роли генов циркадианного ритма в развитии рака молочной железы при старении трансгеннных мышей HER-2/neu.

Материал и методы. В опытах были использованы архивные образцы залитых в парафин тканей трансгенных мышей линии HER-2/neu (возраст от 8 до 15 мес). Всего было исследовано 23 образца опухоли молочной железы и 11 образцов нормальной ткани (печень). Парафиновые срезы толщиной 5-6 мкм были подготовлены

с помощью гистологической станции Thermo Scientific (Thermo Scientific, Финляндия). Полученные срезы помещали в микропробирку и проводили выделение РНК. Уровень экспрессии генов оценивали методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени. В качестве флуорофора для детекции продуктов использовали интеркалирующий краситель SYBR Green. Экспрессию генов оценивали по соотношению интенсивности сигналов, соответствующих гену-мишени и гену-рефери. Достоверность различий между контрольными и опухолевыми образцами определяли с помощью критерия Вилкоксона-Манна-Уитни.

Результаты. Было обнаружено, что относительный уровень экспрессии гена Perl достоверно снижен в опухолевой ткани молочной железы мышей в возрасте от 8 до 15 месяцев по сравнению с нормальной тканью печени животных (p<0,05). Исключением явилась точка 9 месяцев, где не было отмечено достоверных