Субпопуляции регуляторных Т-лимфоцитов в периферической крови больных ревматоидным артритом

DOI: 10.15690/vramn656

П.Н. Кравченко1, Г.А. Жулай1, А.В. Чуров1, Е.К. Олейник1, В.М. Олейник1, О.Ю. Барышева2,Н.Н. Везикова2, И.М. Марусенко2

1 Институт биологии Карельского научного центра РАН, Петрозаводск, Российская Федерация 2 Петрозаводский государственный университет, Петрозаводск, Российская Федерация

Субпопуляции регуляторных Т-лимфоцитов в периферической крови больных ревматоидным артритом

Обоснование. Ревматоидный артрит (РА) представляет собой воспалительное аутоиммунное заболевание, связанное с нарушением Т-клеточной толерантности в организме. Контроль за активацией Т-клеток и развитием аутоиммунных реакций обеспечивают регуляторные CD4+ Т-лимфоциты (Тгeg), которые вызывают супрессию иммунного ответа. Вместе с тем в литературе нет единого мнения о содержании этих клеток в периферической крови у больных РА и о их роли в патогенезе заболевания. Цель исследования. Оценить количество регуляторных Т-клеток (Treg) периферической крови больных РА по экспрессии молекул CD4, CD25, CD127, FOXP3, а также уровень экспрессии двух функциональных молекул (CTLA-4 и CCR4) Treg-клетками больных РА. Методы. Исследовали образцы периферической крови больных РА (в возрасте 65,5 года [54; 68,3]) и здоровых доноров (в возрасте 58лет [44; 66]). Содержание клеток и экспрессию молекул оценивали методом проточной цитометрии. Результаты. Изучены образцы крови 36 больных РА и 20здоровых доноров. Число клеток с Treg-ассоциированными фенотипами CD4+CD25hi и CD4+CD25hiCD127low/~ у больных РА было больше по сравнению со здоровыми донорами (p<0,05). Также у больных РА отмечено повышенное число CD4+ Т-клеток, экспрессирующих FOXP3 (p<0,01), 148 что можно связать c увеличением популяции CD4+FOXP3+CD25-лимфоцитов (p<0,05), тогда как содержание CD4+FOXP3+CD25+Treg-клеток при РА было на уровне контроля. У больных РА экспрессия CTLA-4 Treg-клетками не отличалась от контроля, в то время как уровень экспрессии хемокинового рецептора CCR4, обеспечивающего миграцию лимфоцитов в воспаленные и барьерные ткани, значительно возрастал (p<0,01). Заключение. При РА наблюдается увеличение содержания Т-клеток с высокой экспрессией антигена CD25, который является маркером как активированных клеток, так и Treg-лимфоцитов. Однако содержание Treg-клеток у больных РА было на уровне контроля. Повышенная экспрессия хемокинового рецептора CCR4 на Т-клетках пациентов с РА позволяет предположить значительное усиление миграции CD4-лимфоцитов с периферии к местам воспаления, в частности в синовиальную жидкость суставов. Ключевые слова: регуляторные Т-клетки, ревматоидный артрит, FOXP3, CD127, CCR4, CTLA-4.

P.N. Kravchenko1, G.A. Zhulai1, A.V. Churov1, E.K. Oleinik1, V.M. Oleinik1, O.Yu. Barysheva2, N.N. Vezikova2, I.M. Marusenko2

1 Karelian Research Center of the Russian Academy of Sciences, Petrozavodsk, Russian Federation 2 Petrozavodsk State University, Petrozavodsk, Russian Federation

Subpopulations of Regulatory T-lymphocytes in the Peripheral Blood of Patients with Rheumatoid Arthritis

Background: Rheumatoid arthritis (RA) is an inflammatory rheumatic disease associated with a dysfunction of the T cell-mediated tolerance and leading to the disability of working population. The regulatory CD4+ T cells play an important role in the regulation of autoimmunity and can suppress immune responses. With that, there is no consensus on the content of these lymphocytes and their role in the pathogenesis of RA. Objective: The aim of the study was to assess the content of peripheral blood regulatory Tcells (Treg) according to the expression of membrane markers CD4, CD25, CD127 and intracellular FOXP3 marker, as well as the expression of two functional molecules (CTLA-4 and CCR4) in Treg cells of patients with RA. Methods: Peripheral blood samples of RA patients (median age 65,5 years [54;68,3]) and healthy controls (median age 58years [44; 66]) were analyzed. Cell count and the expression level of molecules were assessed by flow cytometry. Results: Peripheral blood samples of 36 RA patients and 20 healthy donors were analyzed. The number of the cells with Treg-associated phenotypes CD4+CD25h and CD4+CD25h'CD127low//~ was higher in RA patients in comparison with healthy donors. Increased levels of RA CD4+ T cells expressing FOXP3 were also observed. This may be due to increasing in the number of CD4+FOXP3+CD25- lymphocytes, whereas the content of RA CD4+FOXP3+CD25+ Treg cells was at the level of the control. The expression of the functional molecule CTLA-4 in Treg cells ofpatients with RA was not different from the control, while the expression level of the chemokine receptor CCR4 which provides migration of lymphocytes at sites of inflammation and barrier tissues was significantly increased in RA patients. Conclusion: Increase in the levels of certain Treg-associated lymphocyte populations were detected in peripheral blood of RA patients. During the natural course of RA, alterations in the level of the chemokine receptor CCR4 might indicate the enhanced lymphocyte migration. Key words: regulatory Tcells, rheumatoid arthritis, FOXP3, CD127, CCR4, CTLA-4.

Обоснование

Методы

Ревматоидный артрит (РА) относится к числу наиболее распространенных и тяжелых аутоиммунных заболеваний, связанных с нарушением иммунологической толерантности. Ключевую роль в развитии РА играет популяция Т-хелперов, которые участвуют в развитии воспаления с помощью хемокинов и цитокинов. Важную роль в предотвращении развития аутоиммунных реакций и поддержании гомеостаза выполняет популяция регуляторных CD4+ Т-лимфоцитов (Treg) [1], которые проявляют супрессорную активность по отношению к другим иммуноцитам. Поэтому изучение развития и функционального состояния пула Treg-клеток при РА представляется очень важным для понимания патогенеза этого заболевания.

Для характеристики фенотипа Treg-клеток применяют ряд молекулярных маркеров [2, 3]. Однако в большинстве случаев при активации эти маркеры могут экспрессироваться и на эффекторных Т-лимфоцитах.

На сегодняшний день самым надежным маркером для определения таких клеток служит транскрипционный фактор FOXP3 (Forkhead Box P3), который необходим для развития и функционирования Treg-клеток. Еще одной особенностью Treg-клеток является конститутивная повышенная экспрессия а-цепи рецептора интерлейкина (Interleukin, IL) 2 (CD25) [2]. Также для идентификации Treg-клеток стали использовать молекулу CD127 (а-цепи рецептора IL 7), поскольку было обнаружено, что ее экспрессия обратно пропорциональна экспрессии транскрипционного фактора FOXP3[3].

Для реализации своих функций Treg-клетки используют различные механизмы [4]. Один из механизмов Treg-опосредованной супрессии иммунного ответа связан с понижением костимуляции посредством экспрессии цитотоксического Т-лимфоцитарного антигена 4 (С1ЪА-4).Эта молекула является негативной кости-муляторной молекулой, передающей клетке-мишени сигнал, ингибирующий ее активацию и пролиферацию. Известно, что Treg-клетки конститутивно экспресси-руют эту молекулу, и что использование анти-С1ЪА-4 моноклональных антител отменяет подавление пролиферации эффекторных Т-клеток in vitro [4]. Несмотря на многочисленные исследования, посвященные изучению Treg-лимфоцитов при аутоиммунных заболеваниях, по-прежнему нет однозначных данных о содержании и роли этих клеток в периферической крови больных РА [5-9]. Отмечается увеличение количества Treg-клеток в синовиальной жидкости сустава у больных РА [5, 9]. Кроме того, Treg-клетки экспрессируют целый ряд рецепторов хоминга, к которым относятся CCR1, CCR2, CCR4, CCR5, CCR6, CCR8 и др., предположительно участвующие в привлечении Treg-клеток в места воспаления. Предполагается, что ассоциированный с Treg-клетками хемокиновый рецептор CCR4 может обеспечивать такую миграцию периферических Treg-клеток [10].

Цель данного исследования — определение количества регуляторных Т-клеток (Treg) периферической крови больных РА на основе анализа экспрессии молекулярных маркеров CD4, CD25, CD127, FOXP3, а также уровня экспрессии функциональных молекул Treg-клеток больных РА — CTLA-4 и CCR4; определение содержания отдельных Treg-ассоциированных фенотипов в периферической крови больных РА.

Дизайн исследования

Данное исследование является сравнительным нерандомизированным.

Критерии соответствия

В наблюдаемую группу входили пациенты обоего пола в возрасте от 38 до 80 лет. Диагноз РА устанавливался на основании критериев Американской коллегии ревматологов (American College of Rheumatology, ACR, 1987), которые также используются в качестве основных критериев в РФ. Контрольную группу составили относительно здоровые лица в возрасте от 25 до 70 лет, у которых в анамнезе отсутствовали указания на аутоиммунные, сердечно-сосудистые заболевания, аллергии, онкопатологии, перси-стирующие вирусные инфекции. К критериям исключения относили также острые респираторные вирусные инфекции, перенесенные в течение последнего месяца до момента взятия образцов периферической крови.

Условия проведения

Исследование проведено на базе ФГБУН «Институт биологии Карельского научного центра» РАН (ИБ КарНЦ РАН, Петрозаводск) на научном оборудовании Центра коллективного пользования ИБ КарНЦ РАН. Обследование больных и взятие клинического материала проводили в ГБУЗ «Республиканская больница им. В.А. Баранова» (Петрозаводск).

Продолжительность исследования

Исследование проведено в период с сентября 2014 по апрель 2015 г.

Исходы исследования

В качестве основного оцениваемого результата рассматривали содержание Treg-клеток с фенотипами CD4+CD25hi, CD4+CD25hiCD127low/_, CD4+CD25+FOXP3+, CD4+FOXP3+CD25" в периферической крови больных РА по сравнению со здоровыми донорами. Дополнительно оценивали уровень экспрессии молекул CTLA-4 и CCR4, ассоциированных с Treg-клетками.

Методы регистрации исходов

Взятие крови проводили из локтевой вены в стандартные вакуумные пробирки объемом 4 мл, содержащие коагулянт. Цельную кровь использовали для анализа лимфоцитов методом проточной цитометрии на приборе Cytomics FC500 (Beckman Coulter, США). Окрашивание клеток выполняли при помощи моноклональных антител CD4-FITC, CD4-PC7, CTLA-4-PE, CCR4-PE, CD25-PC5, CD127-PC7 (Beckman Coulter, США), FOXP3-FITC (eBioscience, США), а также соответствующих изоти-пических контролей. Внутриклеточное окрашивание антителами к FOXP3 проводили с применением набора реагентов для пермеабилизации и фиксации клеток (eBioscience, США). Для анализа внутриклеточной экспрессии CTLA- 4 использовали набор для пермеабили-зации IntraPrep (Beckman Coulter, США). Для лизиса эритроцитов применяли реагент FACS Lysing Solution (BD Biosciences, США).

Этическая экспертиза

Для проведения исследования в соответствии с Хельсинкской декларацией было получено разрешение Комитета по медицинской этике при Министерстве здраво-

149

150

охранения и социального развития Республики Карелия и Петрозаводском государственном университете (протокол № 25 от 12.02.2013 г.), а также информированное согласие от участников исследования.

Статистический анализ

Полученные результаты анализировали с помощью компьютерного пакета прикладных программ 81а1М1са 6.0. Применяли стандартные методы вычисления средних величин и стандартных отклонений (М+ВБ). Достоверность различий между группами рассчитывали по критерию Манна-Уитни. Критический уровень значимости (р) при проверке статистических гипотез принимали за 0,05.

Результаты

Участники исследования

В работе изучено 36 образцов периферической крови больных РА, возраст которых по медиане составил 65,5 [54; 68,25] лет. В исследовании принимали участие больные со II и III стадией заболевания по индексу активности болезни DAS28 (Disease Activity Score), у которых преобладала (94%) серопозитивная форма РА.

см

5

U

10fl

103

10

ю1

85,79% ¡ЩЩШШШ- 0,47%

 10,44% h&mL '   3,30%

10°

101

102

103

ю4

Все больные получали терапию базисными противовоспалительными препаратами. Базисная терапия включала преимущественно метотрексат, а также сульфасалазин. Терапия назначалась врачами согласно стандартной схеме лечения, принятой в данном клиническом учреждении. Контрольную группу составили 20 здоровых доноров в возрасте 58,0 [44; 66] лет.

Основные результаты исследования

Для определения популяции Тгея-клеток широко используются мембранные молекулы СБ25 и СБ127 (рис. 1, А, Б). В работе проанализировано содержание Тгея-клеток с фенотипами СБ4+СБ25Ы и СБ4+СВ25ЫСВ1271™/" в периферической крови больных РА (п=14) и здоровых доноров (п=20) и отмечено их увеличение у пациентов с РА по сравнению с контролем (рис. 2).

Поскольку привлечение клеток из кровотока к местам локального воспаления обеспечивается хемоки-нами, было интересно оценить уровень экспрессии ассоциированного с Тгея-клетками хемокинового рецептора ССК4: так, результаты проведенного исследования продемонстрировали более высокий его уровень у больных РА (р<0,01)(табл.). Повышенная экспрессия ССК4 наблюдалась также на СБ4+ Т-лимфоцитах у больных РА (см. табл.), в то время как экспрессия этого

А104

103

ю

ем

э

юг

10

10°

0,00% 3,89%

0,00% 'Щ: 96,11%

10°

10'

CD25

ю2

CD4

103

ю1

Рис. 1. Экспрессия Т^-ассоциированных молекул на СБ4+ Т-лимфоцитах периферической крови здорового донора

Примечание. Представлены индивидуальные значения относительного числа лимфоцитов после гейтирования по СБ4: А —

СВ4+СВ25ЫСВ1271<Ж/-; Б —СБ4+СБ25Ы; В —СВ4+СБ25+РОХР3+; Г —СБ4+РОХР3+.

12 5ю

о н ш

9 8

I—

+

*

о

« 6

К а>

р<0,01

Контроль  Больные РА

р<0,01

/><0,05

/><0,005

А

С04+С025"1 С04ЧЮ25МС012710

С04Т0ХРЗ+

С04*С025Т0ХРЗ* С04*С025Т0ХРЗ*

Рис. 2. Содержание СБ4+ Т-клеток с Т^-ассоциированными фенотипами в периферической крови здоровых доноров (контроль) и у больных РА

Примечание. Данные представлены как M+SD, уровень значимости оценивали по критерию Манна-Уитни.

Таблица. Относительный уровень экспрессии ССЯ4 на лимфоцитах периферической крови больных ревматоидным артритом

Показатель CD4+ Т-клетки

CCR4+/CD4+ CCR4+/

Контроль (п=20) 39,92+8,5 78,42+9,4 72,43+14,2

Больные РА (п=14) 53,06+12,7* 90,21+4,2* 87,7+6,6*

151

Примечание. * — различия достоверны по сравнению с контролем прир<0,01. Данные представлены как M+SD.

рецептора относительно общего числа лимфоцитов была на уровне контроля (31,72+10,2 и 32,31+7,4%, соответственно).

Развитие аутоиммунной реакции сопровождается не только изменением содержания Тгея-клеток, но и нарушением их функциональной активности [1], что может быть связано с уровнем экспрессии некоторых Тгея-ассоциированных молекул, важных для проявления супрессорной активности, в частности с изменением уровня экспрессии СТЬА-4. По нашим данным, у больных РА экспрессия антигена СТЬА-4 в CD4+CD25hl и CD4+CD25hiCD127low/- Т-клетках составила 90,76+7,0 и 90,78+7,1% от CD4+ Т-клеток, соответственно, и, несмотря на повышенное содержание этих клеток у больных РА, была на уровне контроля (95,6+2,9 и 94,55+2,8%, соответственно). В доступной литературе отмечены колебания уровня экспрессии этой молекулы у больных РА [8, 11, 12].

Помимо этого, в работе проанализирована экспрессия транскрипционного фактора БОХРЗ (рис. 1, В, Г), необходимого для поддержания пула Тгея-клеток на периферии и важного для реализации их супрессорной функции [2]. У больных РА (п=22) число CD4+ Т-клеток, экспрессирующих БОХР3+, было выше, тогда как относительное содержание CD4+CD25+FOXP3+ Т-клеток соответствовало уровню контроля (п=20; см. рис. 2). Интересно, что экспрессия FOXP3 была увеличена также в клетках, не экспрессирующих антиген CD25: содержание CD4+FOXP3+CD25" Т-клеток при РА было выше, чем в контроле (см. рис. 2). В связи с этим была проведена оценка экспрессии FOXP3 Т-хелперами больных и здоровых лиц в гейтах CD25hl и CD25+: оказалось, что уровень экспрессии FOXP3 у больных РА в этих клетках снижен ^25ы — 82,17+14,2%, CD25+ — 39,21+12,0%) по сравнению с контролем (CD25hl — 93,54+4,12%, CD25+ — 65,28+17,6%; р<0,05).

Обсуждение

Ревматоидный артрит — это системное воспалительное аутоиммунное заболевание неизвестной этиологии, связанное с нарушением Т-клеточной толерантности в организме. Важную роль в поддержании толерантности и предотвращении аутоиммунизации играют Тгея-клетки. Так, в экспериментальных исследованиях было показано, что удаление Тгея-клеток приводит к экспансии Т-эффекторных лимфоцитов с последующим развитием аутоиммунных расстройств [2]. Поэтому предполагают, что патогенез РА может быть связан с нарушением иммунной регуляции, опосредованным недостаточностью Тгея-клеток. Данные литературы о содержании этих клеток в периферической крови больных РА неоднозначны [5—9]. Данные, полученные в результате нашего исследования, показали, что в периферической крови пациентов с РА увеличено число клеток с фенотипами CD4+CD25hl, CD4+CD25hlCD127low/-, CD4+FOXP3+. В то же время относительное число CD4+CD25+FOXP3+ Т-клеток было на уровне контроля (см. рис. 2).

Повышение экспрессии молекулы CD25, так же как и снижение экспрессии CD127, происходит в период активации Т-лимфоцитов. №Е. Аей5 с соавт. [13] сообщают, что не все CD4+CD25hl и CD4+CD25+CD127low/-Т-клетки, выделенные из крови больных РА, могут обладать супрессорными свойствами: экспрессия FOXP3 наблюдается при стимуляции и активации некоторых популяций эффекторных лимфоцитов, которые не относятся к Тгея-клеткам [1, 14], что с учетом особенностей патогенеза РА усложняет идентификацию минорной популяции Тгея-клеток. Исходя из этого, можно предположить, что использование фенотипов CD4+CD25hl, CD4+CD25+CD127low/- и CD4+FOXP3+ недостаточно точно отражает уровень Тгея-клеток при РА, поскольку

они могут включать в себя значительную долю активированных CD4+ Т-клеток. Повышенный уровень клеток с такими фенотипами у больных РА наблюдали и другие авторы [5, 11]. При этом увеличение Тгея-клеток было отмечено не только на периферии, но и в синовиальной жидкости пораженных суставов [5, 9]. Миграцию клеток к местам воспаления обеспечивают хемокины. Предполагается, что секреция хемокинового рецептора ССК4, лигандами которого являются ССЬ22 и ССЬ17, позволяет Т-лимфоцитам и Тгея-клеткам мигрировать к местам воспаления [10]. В пользу этого могут свидетельствовать полученные нами данные об усилении экспрессии ССК4 на Т-хелперах и Тгея-клетках в периферической крови при РА. Среди немногочисленных исследований по изучению экспрессии ССК4 при РА известны данные 7. Лao с соавт. [15], которые показали, что в привлечении периферических Тгея-клеток в синовиальную жидкость сустава больных могут участвовать несколько хемокино-вых рецепторов (ССК5, CXCR4), в том числе ССК4. Однако, помимо Тгея-клеток, выполняющих защитную роль при РА, хемокиновый рецептор ССК4 может приводить и к увеличению миграции патогенных активированных клонов Т-хелперов.

мечено их увеличение у больных РА, происходившее за счет нарастания CD4+FOXP3+CD25"-лимфоцитов, тогда как число CD4+FOXP3+CD25+ Тгея-клеток при РА было на уровне контроля. Повышенный уровень Тгея-ассоциированных фенотипов CD4+CD25hl, CD4+CD25+CD127low/- и CD4+FOXP3+ у больных РА может быть связан с активацией Т-хелперов при развитии патологии. Также интерес представляет значительное увеличение экспрессии хемокинового рецептора ССК-4 как на Тгея-клетках, так и на CD4+ Т-лимфоцитах периферической крови больных РА. Мы предполагаем, что повышенная экспрессия хемокинового рецептора ССК-4, по-видимому, способствует привлечению периферических Т-хелперов и Тгея-клеток в синовиальную жидкость сустава больных.

Источник финансирования

Финансирование проекта осуществлялось на средства гранта Президента РФ (МК-3680.2015.7), РФФИ (№ 16-04-00567) и из средств федерального бюджета на выполнение государственного задания № 0221-20140011

152 Заключение

У больных РА выявлено повышенное содержание клеток с фенотипами CD4+CD25hl и CD4+CD25hiCD127low/-. При анализе количества CD4 Т-клеток, экспрессирующих FOXP3, было также от-

Конфликт интересов

Авторы данной статьи подтвердили отсутствие иных явных и потенциальных конфликтов интересов, о которых необходимо сообщить.

ЛИТЕРАТУРА

1. Buckner JH. Mechanisms of impaired regulation by CD4(+) CD25(+)FOXP3(+) regulatory T cells in human autoimmune diseases. Nat Rev Immunol. 2010;10(12):849-859. doi: 10.1038/ nri2889.

2. Sakaguchi S, Miyara M, Costantino CM, Hafler DA. FOXP3+ regulatory T cells in the human immune system. Nat Rev Immunol. 2010;10(7):490-500. doi: 10.1038/nri2785.

3. Seddiki N, Santner-Nanan B, Martinson J, et al. Expression of interleukin (IL)-2 and IL-7 receptors discriminates between human regulatory and activated T cells. J Exp Med. 2006;203(7):1693-1700. doi: 10.1084/jem.20060468.

4. Shevach EM. Mechanisms of foxp3+ T regulatory cell-mediated suppression. Immunity. 2009;30(5):636—645. doi: 10.1016/j. immuni.2009.04.010.

5. Han GM, O'Neil-Andersen NJ, Zurier RB, Lawrence DA. CD4+CD25high T cell numbers are enriched in the peripheral blood of patients with rheumatoid arthritis. Cell Immunol. 2008;253(1-2):92-101. doi: 10.1016/j.cellimm.2008.05.007.

6. Kawashiri S-Y, Kawakami A, Okada A, et al. CD4+CD25highCD127low/-Treg cell frequency from peripheral blood correlates with disease activity in patients with rheumatoid arthritis. J Rheumatol. 2011;38(12):2517-2521. doi: 10.3899/ jrheum.110283.

7. Kim JR, Chae JN, Kim SH, Ha JS. Subpopulations of regulatory T cells in rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, and Behcet's disease. J Korean Med Sci. 2012;27(9):1009-1013. doi: 10.3346/jkms.2012.27.9.1009.

8. Kosmaczewka A, Ciszak L, Swierkot J, et al. Alterations in Both the Activatory and Inhibitory Potential of Peripheral Blood CD4+ T Cells in Rheumatoid Arthritis Patients Correlate with Disease

Progression. Pathol Oncol Res. 2014;20(2):235-243. doi: 10.1007/ s12253-013-9687-0.

9. Moradi B, Schnatzer P, Hagmann S, et al. CD4+CD25+/ highCD127low/- regulatory T cells are enriched in rheumatoid arthritis and osteoarthritis joints — analysis of frequency and phe-notype in synovial membrane, synovial fluid and peripheral blood. ArthritisRes Ther. 2014;16(2):R97. doi: 10.1186/ar4545.

10. Campbell DJ, Koch MA. Phenotypical and functional specialization of FOXP3+ regulatory T cells. Nat Rev Immunol. 2011;11(2):119—130. doi: 10.1038/nri2916.

11. Alvarez-Quiroga C, Abud-Mendoza C, Doniz-Padilla L, et al. CTLA-4-Ig therapy diminishes the frequency but enhances the function of Treg cells in patients with rheumatoid arthritis. J Clin Immunol. 2011;31(4):588—595. doi: 10.1007/s10875-011-9527-5.

12. Flores-Borja F, Jury EC, Mauri C, Ehrenstein MR. Defects in CTLA-4 are associated with abnormal regulatory T cell function in rheumatoid arthritis. Proc Natl Acad Sci USA. 2008;105(49):19396-19401. doi: 10.1073/pnas.0806855105.

13. Aerts NE, Dombrecht EJ, Ebo DG, et al. Activated T cells complicate the identification of regulatory T cells in rheumatoid arthritis. Cell Immunol. 2008;251(2):109-115. doi: 10.1016/j. cellimm.2008.04.008.

14. Miyara M, Yoshioka Y, Kitoh A, et al. Functional delineation and differentiation dynamics of human CD4+ T cells expressing the FoxP3 transcription factor. Immunity. 2009;30(6):899—911. doi: 10.1016/j.immuni.2009.03.019.

15. Jiao Z, Wang W, Jia R, et al. Accumulation of FoxP3-expressing CD4+CD25+ T cells with distinct chemokine receptors in synovial fluid of patients with active rheumatoid arthritis. Scand J Rheumatol. 2007;36(6):428-433. doi: 10.1080/03009740701482800.

КОНТАКТНАЯ ИНФОРМАЦИЯ Кравченко Полина Николаевна, младший научный сотрудник группы иммунологии ФГБУН «ИБ КарНЦ» РАН Адрес: 185910, Республика Карелия, Петрозаводск, ул. Пушкинская, д. 11, тел.: +7 (8142) 76-98-10, e-mail: k-polina13@mail.ru

Жулай Галина Анатольевна, младший научный сотрудник группы иммунологии ФГБУН«ИБ КарНЦ» РАН Адрес: 185910, Республика Карелия, Петрозаводск, ул. Пушкинская, д. 11, тел.: +7 (8142) 76-98-10, e-mail: zhgali-111@rambler.ru

Чуров Алексей Викторович, кандидат биологических наук, научный сотрудник группы иммунологии ФГБУН «ИБ КарНЦ» РАН

Адрес: 185910, Республика Карелия, Петрозаводск, ул. Пушкинская, д. 11, тел.: +7 (8142) 76-98-10, e-mail: achurou@yandex.ru

Олейник Евгения Константиновна, доктор биологических наук, доцент, главный научный сотрудник, руководитель группы иммунологии ФГБУН «ИБКарНЦ» РАН

Адрес: 185910, Республика Карелия, Петрозаводск, ул. Пушкинская, д. 11, тел.: +7 (8142) 76-98-10, e-mail: ole@krc.karelia.ru

Олейник Виктор Михайлович, доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник группы иммунологии ФГБУН«ИБ КарНЦ» РАН

Адрес: 185910, Республика Карелия, Петрозаводск, ул. Пушкинская, д. 11, тел.: +7 (8142) 76-98-10, e-mail: sdgraph@yandex.ru

Барышева Ольга Юрьевна, доктор медицинских наук, доцент, профессор кафедры госпитальной терапии медицинского института ФГБОУ ВПО «Петрозаводский государственный университет» Адрес: 185910, Республика Карелия, Петрозаводск, пр. Ленина, д. 33, тел.: +7 (8142) 76-44-45, e-mail: olgar@karelia.ru

Везикова Наталья Николаевна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой госпитальной терапии медицинского института ФГБОУ ВПО «Петрозаводский государственный университет» Адрес: 185910, Республика Карелия, Петрозаводск, пр. Ленина, д. 33, тел.: +7 (8142) 76-42-88, e-mail: vezikov23@mail.ru

Марусенко Ирина Михайловна, доктор медицинских наук, профессор кафедры госпитальной терапии медицинского института ФГБОУ ВПО «Петрозаводский государственный университет» Адрес: 185910, Республика Карелия, Петрозаводск, пр. Ленина, д. 33, тел.: +7 (8142) 77-31-78, e-mail: feva@karelia.ru

153