НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 2-н-ПРОПИЛТИО-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-с]-1,2,4-ТРИАЗИН-7-ОНА ДИГИДРАТ И НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 2-н-БУТИЛТИО-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-с]-1,2,4-ТРИАЗИН-7-ОНА ДИГИДРАТ
SODIUM SALT OF 2-n-PROPYLTHIO-6-NITRO-1,2,4-TRIAZOLE[5,1-c]-1,2,4-TRIAZIN-7-ONE DIHYDRATE AND SODIUM SALT OF 2-n-BUTYLTHIO-6-NITRO-1,2,4-TRIAZOLE[5,1-c]-1,2,4-TRIAZIN-7-ONE DIHYDRATE

1. Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к области биологически активных соединений и касается ди-гидратов натриевых солей 2-пропилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-она и 2-бутилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-она, обладающего противовирусным действием, предназначенного для лечения и профилактики инфекционных заболеваний животных и человека вирусной природы. Изобретение может быть использовано в лечебных учреждениях, научно-исследовательских лабораториях, а также в животноводстве и птицеводстве.
2. Уровень техники
Имеются данные о противовирусном действии 6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-онов (Синтез и противовирусная активность 6-нитро-7-оксо-4,7-дигидроазоло [5,1-с][1,2,4]триазинов. В.Л.Русинов, Е.Н.Уломский, О.Н.Чупахин, М.М.Зубаиров, А.Б.Капустин, Н.И.Митин и др. / Химико-фармацевтический журнал. №9, 1990, с.41-44).
В настоящее время известна натриевая соль 2-метилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-она (1) дигидрат, которая принадлежит к ряду соединений, проявляющих противовирусное действие (О.Н.Чупахин, В.Л.Русинов, Е.Н.Уломский, В.Н.Чарушин, А.Ю.Петров, О.И.Киселев. Натриевая соль 2-метилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-она, дигидрат, обладающая противовирусной активностью. Патент РФ №2294936 от 10.03.2007), и может быть использована в медицинской практике, животноводстве, птицеводстве.
Натриевая соль 2-метилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-она дигидрат (1) является близким структурным аналогом заявляемых соединений и потому использована в качестве прототипа.
3. Сущность изобретения
Сущность изобретения составляют натриевая соль 2-н-пропилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-она дигидрат формулы (2) и натриевая соль 2-н-бутилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-она дигидрат формулы (3)
4. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.
4.1. Синтез дигидратов натриевых солей 2-алкилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло [5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-онов (2)
Соли 3-алкилтио-1,2,4-триазолил-5-диазония (4,5), полученную из 0,1 моль соответствующего 5-амино-3-алкилтио-1,2,4-триазола (6,7) (где алкил соответственно означает н-пропил и н-бутил) действием 0,1 моль нитрита натрия или калия в присутствии 0,25 экв. кислоты, с использованием в качестве растворителя водного этанола, конденсируют 11 мл (0,1 моль) этилнитроацетата в 150 мл 2 М растворе карбоната натрия. Выпавший осадок отфильтровывают, последовательно кристаллизуют из 20%-ной уксусной кислоты, воды и сушат на воздухе. Химическая схема синтеза заявляемых соединений приведена ниже.
Выход соединения (2) составляет 43%, выход соединения (3) - 47%.
ПЛ
6
2
2
3
7
11
5
1
Натриевая соль 2-н-пропилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-она дигидрат (2) имеет следующие физико-химические характеристики: Т>300°С; Н ЯМР спектр в ДМСО-(d δ, м.д.: 3,18 (т., 2Н, J=1,5 Гц, CH), 1,78 (м., 2Н, СН), 1,06 (т., 3Н, J=1.5 Гц, СН). Найдено: С - 26,56, Н - 3,75, N - 26,92. Брутто-формула - CHNaOS. Вычислено: С - 26,75, Н - 3,53, N - 26,74%.
ПЛ
6
2
2
3
8
13
6
5
1
Натриевая соль 2-н-бутилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-она дигидрат (3) имеет следующие физико-химические характеристики: Т>300°С; Н ЯМР спектр в ДМСО-(d δ, м.д.: 3,20 (т., 2Н, J=1.5 Гц), 1,74 (м., 2Н, CH), 1,49 (м., 2Н, СН), 0,96 (т., 3Н, J=1.5 Гц, СН). Найдено, %: С - 29,10; Н - 4,08; N - 25,46; CHNNaOS;
Вычислено, %: С - 29,27%; Н - 3,99%; N - 25,60%.
Заявляемые соединения представляют собой желтые кристаллические высокоплавкие (более 300°С) вещества, растворимые в воде, метаноле, ацетоне, диметилформамиде, диметилсульфоксиде, нерастворимое в бензоле, хлороформе и большинстве апротонных растворителей.
4.2. Противовирусные свойства дигидратов натриевых солей 2-алкилтио-6- нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-онов (2)
Пример 1. Определение противовирусной активности соединений в отношении вируса простого герпеса
Клетки. Использовали монослойные 24-часовые культуры перевиваемых клеток почек зеленой мартышки Vero.
Вирусы. В работе использовали вирус простого герпеса (ВПГ-1), штамм ЕС.
Максимальные переносимые концентрации соединений определяли с помощью МТТ-теста в культуре клеток Vero.
Исследование максимальной переносимой концентрации для заявляемых соединений (2,3) и соединения прототипа (1) показали, что цитотоксичность одинакова и составляет 1000 мкг/мл, что позволяет квалифицировать их как малотоксичные соединения.
Изучение противовирусной активности соединений в отношении вируса простого герпеса проводили на 96-луночных полистирольных микропланшетах на клеточных линиях Vero. Результаты оценивали через 72 часа культивирования зараженных клеток по степени цитопатического действия, вызываемого вирусом:
«++++» - более 90% клеток имеют характерные изменения (цитопатический эффект)
«+++» - около 60% клеток имеют характерные изменения;
«++» - менее 20% клеток имеют характерные изменения;
«+» - менее 10% клеток имеют характерные изменения;
«-» - клетки не изменены.
В таблице приведены данные по противовирусной активности заявляемых соединений (2,3) и соединения-прототипа (1) в отношении вируса простого герпеса (ВПГ-1).
Противовирусная активность соединений в отношении ВПГ-1
соединение
концентрация, мкг/мл
Концентрация вируса, lg (ТЦД<sub>50</sub>)/мл
3
2
1
(1) прототип
1000
+++
+++
+
500
+++
+++
++
200
++++
+++
++
100
++++
+++
++
50
++++
+++
++
20
++++
+++
++
(2)
1000
-
-
-
500
-
-
-
200
+
+
-
100
++
++
+
50
+++
++
+
20
++++
+++
+
(3)
1000
-
-
-
500
-
-
-
200
++
+
-
100
++
++
-
50
+++
++
+
20
++++
+++
+
ВПГ-1
++++
+++
++
Из данных, приведенных в таблице, видно, что соединение-прототип (1) практически не активно в отношении вируса простого герпеса (ВПГ-1) при концентрации вируса 3 lg (ТЦД5о)/мл даже в максимально переносимой концентрации (1000 мкг/мл). В то же время, заявляемые соединения в меньшей концентрации (500 мкг/мл) полностью подавляют цитопатическое действие вируса простого герпеса (ВПГ-1), то есть являются болеез активными противовирусными соединениями по сравнению с соединением-прототипом.