CD437 ПОВЫШАЕТ ЗАХВАТ ЖЕЛЕЗА КЛЕТКАМИ МЕТАСТАТИЧЕСКОЙ МЕЛАНОМЫ

DOI: https://doi.org/10.17650/1726-9784-2022-21-3-34-39

Cct0

CD437 повышает захват железа клетками метастатической меланомы

А.А. Вартанян, Ю.А. Хоченкова, В.С. Косоруков

ФГБУ«Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России; Россия, 115522 Москва, Каширское шоссе, 24

Контакты: Амалия Арташевна Вартанян zhivotov57@mail.ru

Введение. CD437, аналог витамина А, является агонистом y-рецептора ретиноевой кислоты (RARy). Известно также, что CD437 вызывает р53-независимое повреждение ДНК с помощью механизма, независимого от пути, опосредованного RARy- У онкологических больных очень часто обнаруживается дефицит железа, а также нарушена доставка железа к тканям.

Цель исследования - изучение влияния CD437 на метаболизм железа в клетках метастатической меланомы. Материалы и методы. В экспериментах были использованы: 2D-культивирование клеток метастатической меланомы Mel Z, фазово-контрастная и флуоресцентная микроскопия, проточная цитофлуориметрия. Результаты. В экспериментах с клетками меланомы линии Mel Z, не обработанными CD437 (контроль), рецептор трансферрина CD71 экспрессировали 40 ± 4 % клеток (p <0,05), а при инкубации с CD437 количество клеток, экспрессирующих CD71, возрастало до 80 ± б % (p <0,05). Далее мы исследовали экспрессию ферритина, связывающего железо, не участвующее в метаболизме клетки. В контрольных экспериментах ферритин экспрессировали 84 ± б % клеток (p <0,05). При росте клеток в присутствии CD437 ферритин стали экспрессировать все клетки (100 %, p <0,05). Подобный сценарий указывает на то, что CD437, по всей видимости, способствует накоплению в клетке свободного, несвязанного железа, которое может индуцировать ферроптоз. В контрольных экспериментах, без добавления CD437, уровень перекисного окисления липидов мембран, индикатора ферропто-за, был незначительным. Перекисное окисление липидов, индуцированное CD437, составляло 55 ± 5 % (p <0,05) от интенсивности флуоресценции, индуцированной эрастином, положительным контролем. Заключение. CD437 повышает захват железа клетками метастатической меланомы. Низкий уровень перекисного окисления липидов мембран, индуцированного CD437, не позволяет рассматривать его как индуктор ферроптоза. Нужны дополнительные исследования для поиска мишеней, связывающих железо, альтернативных ферритину.

Ключевые слова: меланома, железо, CD437, CD71, ферритин, ферроптоз

Для цитирования: Вартанян А.А., Хоченкова Ю.А., Косоруков В.С. CD437 повышает захват железа клетками метастатической меланомы. Российский биотерапевтический журнал 2022;21(3):34-9. DOI: 10.17650/17269784-2022-21-3-34-39

CD437 increases the iron uptake by metastatic melanoma cells

Amalia A. Vartanian, Yulia A. Khochenkova, Vyacheslav S. Kosorukov

N.N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology, Ministry of Health of Russia; 24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115522, Russia Contacts: Amalia Artashevna Vartanian zhivotov57@mail.ru

Background. CD437, an analog of vitamin A, is an agonist of the retinoic acid y-receptor (RARy). CD437 is also known to cause p53-independent DNA damage by a mechanism independent of the RAR-mediated pathway. In cancer patients, iron deficiency is constantly detect, the delivery of iron to tissues is also destroyed. Aim. To study the effect of CD437 on iron metabolism in metastatic melanoma cells, Mel Z. Materials and methods. In this study 2D cultivation of metastatic Mel Z melanoma cells, phase-contrast and fluorescence microscopy, flow cytofluorimetry were used.

Results. In control cells without the addition of CD437 CD71, transferrin receptor, expressed 40 ± 4 % (p <0.05) of Mel Z cells, in the presence of CD437 CD71 expression increased to 80 ± 6 %. Next, we have studied the expression of ferritin. Iron, which is not involved in cell metabolism, is bound by ferritin. In control experiments, ferritin

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ | RUSSiAN JOURNAL OF BiOTHERAPY

3'2022 ТОМ 21 | VOL. 21

Оригинальные статьи | Original reports 35

was expressed by 84 ± 6 % (p <0.05) of cells. When the cells grew in the presence of CD437, ferritin was expressed by all the cells (100 %, p <0.05). Such a scenario indicates that CD437 may contribute to the accumulation of free, unbound iron in the cell, which can induce ferroptosis. In control experiments without the addition of CD437, the level of membranes lipid peroxidation, an indicator of ferroptosis, was insignificant. Lipid peroxidation induced by CD437 was 55 ± 5 % (p <0.05) of the fluorescence intensity induced by erastin, positive control. Conclusion. CD437 increases the iron uptake by metastatic melanoma cells. The low level of membranes lipid peroxidation induced by CD437 does not allow it to be considered as an inducer of ferroptosis. Additional investigations are needed to find iron-binding targets alternative to ferritin. Keywords: melanoma, iron, CD437, CD71, ferritin, ferroptosis For citation: Vartanian A.A., Khochenkova Yu.A., Kosorukov V.S. CD437 increases the iron uptake by metastatic melanoma cells. Rossiyskiy bioterapevticheskiy zhurnal = Russian Journal of Biotherapy 2022;21(3):34-9. (In Russ.). DOI: 10.17650/1726-9784-2022-21-3-34-39 Введение тивного поглощения железа опухолевыми клетками Синтетический ретиноид 6-[3-(1-адамантил)- может быть необходимость этого металла как кофак-4-гидроксифенил]-2-нафталинкарбоновая кислота тора ДНК-полимеразного комплекса [14]. Железо (CD437), аналог витамина А, является агонистом также является активной частью дыхательных фер-у-рецептора ретиноевой кислоты (RARy) [1]. Его про- ментов (при его недостатке ткани не могут усваивать тивоопухолевая активность была подтверждена кислород) и участвует в генерации аденозинтрифос-на моделях ксенотрансплантатов животных, демон- форной кислоты — источника биологической энергии стрируя высокий потенциал для лечения и/или про- в живых организмах [15, 16]. CD71, рецептор Tf, — филактики рака [2—4]. Интерес к аналогам витамина практически единственный белок, доставляющий А вызвал феномен, наблюдаемый на многих опухо- железо в клетку [17]. Следует отметить, что низкая лях, — концентрация витамина А в опухолевых клет- экспрессия CD71 на опухолевых клетках коррелиру-ках значительно снижена по сравнению со здоровыми ет с меньшей частотой выявления метастазов и более клетками. Это сопровождается снижением экспрес- длительной общей и безрецидивной выживаемостью сии рецепторов ретиноевой кислоты и приводит к по- больных [18]. Взаимодействие комплекса Tf/Fe3+ с ре-вышению экспрессии маркеров стволовой клетки цептором CD71 приводит к интернализации ком-опухоли и, следовательно, короткой безрецидивной плекса CD71/Tf/Fe3+ в клетку. В клетке железо дис-выживаемости онкологических больных [5]. Эффект социрует из комплекса и в основном используется для CD437 как агониста RARy был одной из первых опи- включения в гем или кофакторы ферментов. Железо, санных активностей этого ретиноида. CD437 изби- не участвующее в метаболизме клетки, депонируется рательно связывается с RARy и трансактивирует ре- в составе ферритина [19]. Ферритин позволяет клет-цептор, запуская дифференцировку клеток [6]. ке сохранять железо в нетоксичной форме, из ко-Активно обсуждается в литературе и способность торой оно может быть мобилизовано для синтеза CD437 вызывать р53-независимое повреждение ДНК гемоглобина и негемовых железосодержащих бел-с помощью механизма, независимого от пути, опо- ков. Не связанное с ферритином свободное железо средованного RARy [7—9]. CD437-опосредованное в результате окисления Fe2+ в Fe3+ (реакция Фентона: повреждение ДНК объясняет, почему большинство Fe2+ + H2O2 ^ Fe3+OH- + *OH) и генерации радика-клеток, независимо от их чувствительности к рети- ла кислорода способствует накоплению в клетке ак-ноевой кислоте, отвечают на CD437. Недавно нами тивных форм кислорода [20]. Ферритин практически было получено экспериментальное подтверждение «обезвреживает» свободное, не использованное клет-ингибирования миграционной и инвазивной актив- кой железо. ности клеток метастатической меланомы CD437 [10]. Меланома — одна из наиболее агрессивных зло-Многочисленные специфические реакции опухоле- качественных опухолей человека. В основе леталь-вых клеток на этот ретиноид предполагают существо- ности меланомы лежит высокая подвижность клеток вание в опухолевой клетке нескольких мишеней его опухоли, что позволяет им метастазировать почти во действия. все органы [21]. Из-за невысокой чувствительности У онкологических больных дефицит железа об- меланомы к существующим противоопухолевым препа-наруживается очень часто [11]. Опухолевые клетки ратам крайне редко удается достигнуть регрессии мета-активно «изымают» из крови трансферрин (Tf), пе- стазов и добиться стойкой длительной ремиссии [22]. реносчик железа. Захват железа тем значительнее, Цель настоящего исследования — изучение влия-чем больше масса самой опухоли и чем более она ния CD437 на метаболизм железа в клетках метаста-злокачественна [12, 13]. Одной из причин такого ак- тической меланомы.

3'2022 том 21 | vol. 21 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ | RUSSIAN JOURNAL OF BiOTHERAPY

36 Оригинальные статьи | Original reports

Материалы и методы поглощение зеленого. После инкубации в течение Материалы. Ретиноид CD437 и эрастин были 30 мин с флуоресцентной меткой клетки трижды про-приобретены у Sigma-Aldrich Corporation (США). мывали фосфатным буфером. Интенсивность флуорес-Антитела к CD71, FITC-конъюгированные, были ценции определяли на флуоресцентном микроскопе IN получены от BD BioScience (США). C11-BODIPY Cell Analyzer (GE Healthcare, США) (581/591 нм). приобретен у Thermо Fisher Scientific (США). Анти- Статистический анализ. Данные представлены тела к ферритину (clone F31) были любезно предо- как среднее значение ± стандартное отклонение. Раз-ставлены О.Н. Солоповой. личия считали статистически значимыми прир <0,05. Культура клеток. В работе использована клеточная Статистический анализ проведен с использованием линия меланомы Mel Z, выведенная из опухолевого программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad материала пациента, находившегося на лечении в На- Software, La Jolla, США). учно-исследовательском институте клинической онкологии ФГБУ «Национальный медицинский ис- Результаты и обсуждение следовательский центр онкологии им. Н.Н. Блохина» Опухолевые клетки перепрограммируют метабо-Минздрава России. Клетки культивировали в полной лизм железа, увеличивая экспрессию рецептора Tf, среде RPMI-1640, содержащей 10 % телячьей эмбрио- CD71, и накапливая ферритин, депонирующий же-нальной сыворотки, 2 ммоль/мл глутамина и 0,1 мг/мл лезо, причем иногда в таких количествах (например, гентамицина. В экспериментах использовали клетки в клетках рака молочной железы), что он может 70—75 % конфлюентности. играть роль маркера, т. е. с его помощью можно от-Определение экспрессии ферритина и CD71. Клет- личать злокачественное поражение молочной железы ки Mel Z инкубировали с 1 мкМ СD437 в течение 24 ч от доброкачественного [19]. Стабильно воспроизво-при 37 °С. Фенотипирование антигенов клеточной димая противоопухолевая активность CD437 на моде-поверхности проводили в реакции прямой иммуно- лях ксенотрансплантатов животных, демонстрирующая флуоресценции. 1 х 105 клеток трижды промывали высокий потенциал для лечения рака, позволила нам фосфатно-солевым буфером (PBS) pH 7,5 и ресуспен- поднять вопрос о возможном участии железа в этом дировали в PBS. В каждую пробирку с клетками до- эффекте. Мы предположили, что CD437, снижая по-бавляли моноклональные антитела к СD71, меченные ступление железа в клетку и увеличивая экспрессию FITC, и инкубировали в течение 30 мин при 4 °С. ферритина, мог бы ингибировать репликацию ДНК По истечении срока инкубации клетки дважды про- и предотвратить неконтролируемую пролиферацию мывали PBS от несвязавшихся антител и ресуспен- опухолевых клеток. дировали в 200 мкл PBS, содержащего 1 % формалин. Ранее нами при инкубации клеток Mel Z с СD437 Экспрессию CD71 оценивали на проточном цито- в диапазоне концентраций от 0,001 до 1 мМ была флуориметре ACEA NovoCyte 2000R (Acea Bioscience, определена нецитотоксическая концентрация (IC10) США). В каждой пробе анализировали до 10 тыс. СD437, составившая 1 мкМ [10]. Влияние CD437 на событий. Анализируемый гейт устанавливали на ос- экспрессию CD71 и ферритина исследовали при ин-новании комбинации светорассеивания и размера кубации клеток с нецитотоксическими концентра-клеток. Для определения экспрессии ферритина вво- циями CD437 (1 мкМ). Такая схема эксперимента дилась дополнительная процедура — пермеабилиза- позволяла исключить вклад цитотоксичности CD437 ция клеток. Пермеабилизацию проводили, используя в этот процесс. CD71 экспрессировали 40 ± 4 % кле-PBS с 0,1 % Triton X-100 в течение 10 мин, далее клет- ток (p <0,05) в контроле, а при инкубации с СD437 ки дважды промывали центрифугированием и ресу- количество клеток, экспрессирующих этот маркер, спендировали в 0,1 мл PBS. возрастало до 80 ± 6 % (p <0,05) (рис. 1, а). На следу-Исследование влияния CD437 на индукцию фер- ющем этапе работы мы исследовали влияние СD437 роптоза in vitro. Клетки Mel Z растили в полной среде на экспрессию ферритина. Мы ожидали, что двукрат-RPMI-1640 в 24-луночном планшете. Через 24 ч роста ное повышение захвата железа клетками меланомы клеток в СО2-инкубаторе при 37 °С добавляли 10,0 мкМ должно сопровождаться активацией экспрессии фер-эрастина или 1,0 мкМ CD437 и инкубировали в те- ритина, депонирующего несвязанное железо. В кон-чение 5 ч. В качестве контроля использовали клетки, трольных экспериментах ферритин экспрессировали растущие в полной среде RPMI-1640 без индуктора 84 ± 6 % клеток (p <0,05). При инкубации с СD437 ферроптоза. Затем среду заменяли свежей, не содержа- ферритин стали экспрессировать все клетки (100 %, щей сыворотки, и добавляли 5 мкМ СП-BODIPY Ин- p <0,05) (рис. 1, б). дикатор перекисного окисления липидов СП-BODIPY — Подобный сценарий указывает на то, что СD437, это флуорофор, который при переходе из тиоэфира по всей видимости, способствует накоплению в клет-в сульфоксид меняет флуоресцентные характеристи- ке свободного железа. Присутствие в клетке железа ки: убывает поглощение красного цвета и нарастает в свободном состоянии запускает реакцию Фентона

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ | RUSSiAN JOURNAL OF BiOTHERAPY 3'2022 том 21 | vol. 21

Рис. 1. Влияние CD437на экспрессию CD71 (а) и ферритина (б) клетками MelZпосле 24 ч инкубации Fig. 1. The influence of CD437on CD71 (а) and ferritin (б) expression in Mel Zcells after 24 h incubation

Рис. 2. Влияние CD437на индукцию ферроптоза в Mel Zклетках. Флуоресценция C11-BODIPYв клетках Mel Z: а — контрольные клетки, без добавления CD437; б — клетки с 10,0мкМэрастина; в — клетки с 1,0мкМCD437; г — уровень перекисного окисления липидов в клетках Mel Z: 1 — интенсивность флуоресценции в контрольных клетках, без добавления CD437; 2 — индуцированная эрастином; 3 — индуцированная CD437. у 200

Fig. 2. The influence of CD437 on ferroptosis induction in Mel Z cells. The fluorescence of C11-BODIPY in Mel Z: а — control cells, without addition of CD437; б — cells grown with 10.0 ^M erastin; б — cells grown with 1.0 ^M of CD437:1 —fluorescence intensity of control cells, without CD437addition; 2 — after 24 h incubation with erastin; 3 — after 24 h incubation with CD437. у 200

и увеличивает уровень активных форм кислорода. Ферроптоз сегодня рассматривается как железозави-симая регулируемая гибель клетки. Гибель клетки по типу ферроптоза базируется на перекисном окислении липидов мембран, которое сопровождается появлением многочисленных пор в плазматической мембране. Содержимое клетки вытекает в межклеточную среду, клетка уменьшается в размерах, сморщивается. Процесс этот абсолютно одинаков для всех типов клеток [23]. К бесконтрольному перекисному окислению липидов клеточных мембран приводят отказ механизмов антиоксидантной защиты клети и дисбаланс клеточных метаболических процессов (например, метаболизма липидов и кратковременного повышения уровня железа) [24].

В наших исследованиях о роли CD437 в гибели клеток по типу ферроптоза в качестве положительного контроля мы использовали эрастин. Эрастин, исторически первый индуктор ферроптоза, и сегодня

продолжает оставаться «золотым стандартом». Ранее нами были протестированы 0,1 мкМ, 1,0 мкМ и 10 мкМ эрастина на способность индуцировать ферроптоз в клетках меланомы Mel Z. Массовая гибель клеток наблюдалась при 10 мкМ эрастина. 10 мкМ эрастина не вызывало фрагментацию ядра, что является итогом активации апоптоза. На гибель клеток, индуцированную эрастином, не оказывало влияния и присутствие 20 мкМ хлорокина, ингибитора аутофагии [25]. О гибели клеток Mel Z по типу ферроптоза судили по интенсивности перекисного окисления липидов, которое фиксировали после инкубации клеток с флуоресцентной меткой C11-BODIPY Для исключения индукции апоптоза и/или некроза CD437 в клетках Mel Z мы использовали нецитотоксические концентрации CD437. В контрольных экспериментах без добавления CD437 уровень перекисного окисления липидов был незначительным (рис. 2, а). Перекисное окисление липидов мембран, индуцированное 1 мкМ CD437,

3'2022 ТОМ 21 I VOL. 21

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ I RUSSIAN JOURNAL OF BiOTHERAPY

38

Оригинальные статьи | Original reports

составляло 55 ± 5 % (p <0,05) от интенсивности флуоресценции положительного контроля, 10 мкМ эра-стина (рис. 2, б—г). В клетках, инкубированных с эк-вимолярным количеством диметилсульфоксида, интенсивность флуоресценции была невысокой и равнялась значениям интенсивности флуоресценции контрольных клеток (данные не приводятся). Низкий уровень перекисного окисления липидов мембран Mel Z в ответ на CD437 не позволяет рассматривать его как индуктор ферроптоза в клетках метастатической меланомы.

Железо используется клеткой для включения в гем или кофакторы ферментов. Не участвующее в метаболизме железо клетки депонируется в составе ферритина. В отношении локализации свободного, не связавшегося с ферритином железа в клетках в настоящее время имеется лишь ограниченное число данных. Предполагают, что существуют небольшие

клеточные лабильные пулы железа, и с таким пулом связывают токсичность железа для клетки. По всей видимости, CD437, повышая захват железа клетками метастатической меланомы, пополняет лабильные пулы свободного железа. Наблюдаемое нами повышение захвата железа клетками метастатической меланомы позволяет поднять вопрос об инициации дополнительных исследований для поиска не идентифицированных ранее мишеней связывания железа.

Заключение

CD437 повышает захват железа клетками метастатической меланомы. Низкий уровень перекисно-го окисления липидов мембран, индуцированного CD437, не позволяет рассматривать его как индуктор ферроптоза. Нужны дополнительные исследования для поиска мишеней, связывающих железо, альтернативных ферритину.

ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES

1. Alvarez S., Bourguet W., Gronemeyer H., de Lera A.R. Retinoic acid receptor modulators: a perspective on recent advances and promises. Expert Opin Ther Pat 2011;21(1):55-63.

DOI: 10.1517/13543776.2011.536531

2. Han T., Goralski M., Capota E. et al. The antitumor toxin CD437 is a direct inhibitor of DNA polymerase a. Nat Chem Biol 2016;12(7):511-5. DOI: 10.1038/nchembio.2082

3. di Masi A., Leboffe L., De Marinis E. et al. Retinoic acid receptors: from molecular mechanisms to cancer therapy. Mol Aspects Med 2015;41:1-115. DOI: 10.1016/j.mam.2014.12.003

4. Langdon S.P., Rabiasz G.J., Ritchie A.A. et al. Growth-inhibitory effects of the synthetic retinoid CD437 against ovarian carcinoma models in vitro and in vivo. Cancer Chemother Pharmacol 1998;42(5):429-32. DOI: 10.1007/s002800050841

5. Doldo E., Costanza G., Agostinelli S. et al. Vitamin A, cancer treatment and prevention: the new role of cellular retinol binding proteins. Biomed Res Int 2015;2015:624627.

DOI: 10.1155/2015/624627

6. Shyu R.Y., Lin D.Y., Reichert U., Jiang S.Y. Synthetic retinoid CD437 induces cell dependent cycle arrest by differential regulation of cell cycle associated proteins. Anticancer Res 2002;22(5):2757-64. PMID: 12529993.

7. Zhao X., Demary K., Wong L. et al. C. Retinoic acid receptor-independent mechanism of apoptosis of melanoma cells

by the retinoid CD437 (AHPN). Cell Death Differ 2001;8(9):878-86. DOI: 10.1038/sj.cdd.4400894

8. Zhao X., Spanjaard R.A. The apoptotic action of the retinoid CD437/AHPN: diverse effects, common basis. J Biomed Sci 2003:10(1):44-50. DOI: 10.1007/BF02255996

9. Lotan R. Receptor-independent induction of apoptosis by synthetic retinoids. J Biol Regul Homeost Agents 2003;17(1): 13-28. PMID: 12757019

10. Вартанян А.А., Хоченкова Ю.А., Кособокова Е.Н и др. CD437снижает метастатический потенциал клеток меланомы. Вестник Московского Университета. Серия 2: Химия 2021;62(4):10-7.

Vartanian A.A., Khochenkova Yu.A., Kosobokova E.N. et al. CD437 reduces metastatic potential of melanoma cells. Vestnik Moscovscogo Universiteta. Seriya 2: Himiya = Moscow University Chemistry Bulletin 2021;62(4):10-7. (In Russ.).

11. Ludwig H., Evstatiev R., Komek G. et al. Iron metabolism and iron supplementation in cancer patients. Wien Klin Wochenschr 2015;127(23—24):907—19. DOI: 10.1007/s00508-015-0842-3

12. Gozzelino R., Arosio P. Iron homeostasis in health and disease. Int J Mol Sci 2016;17(1):E130—E8. DOI: 10.3390/ijms17010130

13. Zhang D.L., Ghosh M.C., Rouault T.A. The physiological functions of iron regulatory proteins in iron homeostasis —

an update. Front Pharmacol 2014;5:124-9. DOI: 10.3389/fphar. 2014.00124

14. Jozwiakowski S.K., Kummer S., Gari K. Human DNA polymerase delta requires an iron-sulfur cluster for high-fidelity DNA synthesis. Life Sci Alliance 2019;2(4):e201900321. DOI: 10.26508/lsa.201900321

15. Kleingardner J.G., Bren K.L. Biological significance and applications of heme proteins and peptides. Acc Chem Res 2015;48(7):1845-52. DOI: 10.1021/acs.accounts.5b00106

16. Paul B.T., Manz D.H., Torti F.M., Torti S.V. Mitochondria and iron: current questions. Expert Rev Hematol 2017;10(1):65-79. DOI: 10.1080/17474086.2016.1268047

17. Shen Y., Li X., Dong D. et al. Transferrin receptor 1 in cancer: a new sight for cancer therapy. Am J Cancer Res 2018;8(6):916—31. PMID: 30034931

18. Habashy H.O., Powe D.G., Staka C.M. et al. Transferrin receptor (CD71) is a marker of poor prognosis in breast cancer and can predict response to tamoxifen. Breast Cancer Res Treat 2010;119(2):283—93. DOI: 10.1007/s10549-009-0345-x

19. Bitonto V., Alberti D., Ruiu R. et al. L-ferritin: a theranostic agent of natural origin for MRI visualization and treatment of breast cancer. J Control Release 2020;319:300-10. DOI: 10.1016/j.jconrel.2019.12.051

20. Dixon S.J., Lemberg K.M., Lamprecht M.R. et al. Ferroptosis: an iron-dependent form of nonapoptotic cell death. Cell 2012;149(5):1060—72. DOI: 10.1016/j.cell.2012.03.042

21. Damsky W.E., Theodosakis N., Bosenberg M. Melanoma metastasis: new concepts and evolving paradigms. Oncogene 2014;33(19):2413—18. DOI: 10.1038/onc.2013.194

22. Simon A., Kourie H.R., Kerger J. Is there still a role for cytotoxic chemotherapy after targeted therapy and immunotherapy

in metastatic melanoma? A case report and literature review. Chin J Cancer 2017;36(1):10. DOI: 10.1186/s40880-017-0179-6

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ | RUSSiAN JOURNAL OF BiOTHERAPY

3'2022 ТОМ 21 | VOL. 21

23. Li J., Cao F., Yin H.L. et al. Ferroptosis: past, present and future. Cell Death Dis 2020;11(2):88. DOI: 10.1038/s41419-020-2298-2

24. Yang W.S., Stockwell B.R. Ferroptosis: death by lipid peroxidation. Trends Cell Biol 2016;26(3):165-76. DOI: 10.1016/j.tcb.2015.10.014

25. Вартанян А.А., Осипов В.Н., Хоченков Д.А. и др. Производные хиназолина, индуцирующие ферроптоз в ме-

тастатических клетках меланомы и рака толстой кишки. Патент на изобретение RU 2722308 C1, 2020.

Vartanian A.A., Osipov V.N., Khochenkov D.A. et al. Quinazoline derivatives inducing ferroptosis in metastatic melanoma cells and colon cancer. Patent of Invention RU 2722308 C1, 2020.

Благодарности

Авторы благодарят М.А. Барышникову и Д.А. Хоченкова за помощь в обсуждении результатов. Acknowledgments

The authors thank M. Baryshnikova and D. Khochenkov for valuable comments and critical reading the manuscript. Вклад авторов

A.А. Вартанян: разработка концепции и дизайна исследования, сбор и обработка данных, подготовка рукописи; Ю.А. Хоченкова: сбор и обработка данных, предоставление материалов исследования на проточном флуориметре;

B.С. Косоруков: анализ и интерпретация данных. Author's contribution

A.A. Vartanian: developing the concept and design of the research, data collection and processing, preparation of the manuscript; Yu.A. Khochenkova: data collection and processing, providing research materials от Flow Cytometry; V.S. Kosorukov: data analysis and interpretation.

ORCID авторов / ORCID of authors

A.А. Вартанян / A.A. Vartanian: https://orcid.org/0000-0001-9342-5523 Ю.А. Хоченкова / Yu.A. Khochenkova: https://orcid.org/0000-0001-8392-5495

B.С. Косоруков / V.S. Kosorukov: https://orcid.org/0000-0002-8462-2178

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.

Финансирование. Работа выполнена в рамках НИОКТР № АААА-А20-120031190017-7 «Разработка и доклиническое исследование лекарственного средства BEL400, предназначенного для терапии опухолей».

Funding. This work was carried out with the financial support of experimental scientific development program № АААА-А20-120031190017-7 "Development and preclinical study of the drug BEL400 for tumor therapy".

Статья поступила: 16.08.2022. Принята к публикации: 19.09.2022. Article submitted: 16.08.2022. Accepted for publication: 19.09.2022.

3'2022 ТОМ 21 I VOL. 21

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ I RUSSIAN JOURNAL OF BIOTHERAPY