ИММУНОГЛОБУЛИНОПОДОБНЫЕ МОЛЕКУЛЫ, НАПРАВЛЕННЫЕ ПРОТИВ ФИБРОНЕКТИНА-EDA

1. Антитело, которое связывает фибронектин-EDA, или антигенсвязывающий фрагмент указанного антитела для применения для улучшения ангиогенеза, предпочтительно, после повреждения ткани.
2. Антитело, которое связывает фибронектин-EDA, или антигенсвязывающий фрагмент указанного антитела для применения по п. 1, отличающиеся тем, что ангиогенез улучшают у субъекта, страдающего ишемическим заболеванием, предпочтительно, в ишемизированной ткани указанного субъекта.
3. Способ стимуляции ангиогенеза у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества антитела, которое связывает фибронектин-EDA, или антигенсвязывающего фрагмента указанного антитела.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что указанный субъект страдает ишемическим заболеванием и предпочтительно, отличающийся тем, что ангиогенез улучшают в ишемизированной ткани указанного субъекта.
5. Выделенная иммуноглобулино(Ig)-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы, которая специфично связывается с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 28.
6. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по п. 5, отличающиеся тем, что аминокислота в положении 3 последовательности SEQ ID NO: 1 выбрана из гистидина, аргинина, лизина и аланина, причем, предпочтительно, аминокислота в положении 3 последовательности SEQ ID NO: 1 представляет собой гистидин, и/или при этом аминокислота в положении 4 последовательности SEQ ID NO: 1 выбрана из глутаминовой кислоты и аланина, при этом, предпочтительно, что аминокислота в положении 4 последовательности SEQ ID NO: 1 представляет собой глутаминовую кислоту, и/или при этом аминокислота в положении 5 последовательности SEQ ID NO: 1 выбрана из лейцина и аланина, при этом, предпочтительно, аминокислота в положении 5 последовательности SEQ ID NO: 1 представляет собой лейцин.
7. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по п. 5 или 6, отличающиеся тем, что указанная Ig-подобная молекула или ее антигенсвязывающий фрагмент специфично связываются с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2.
8. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по любому из пп. 5-7, которая представляет собой антитело.
9. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по любому из пп. 5-8, которая является моноклональной.
10. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по любому из пп. 5-9, которая происходит от мыши или которая получена от мыши.
11. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по любому из пп. 5-10, которая является химерной.
12. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по любому из пп. 5-11, которая происходит от человека или является гуманизированной.
13. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы, которая содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую: определяющую комплементарность область (CDR)1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, в которой заменено не более 3, предпочтительно, не более 2, более предпочтительно, не более 1 аминокислоты.
14. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по п. 13, которая содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую:
1
1
CDR1, имеющую аминокислотную последовательность GYSIXSGYSWH, где X выбран из Т и А;
2
3
2
3
CDR2, имеющую аминокислотную последовательность YIHXSGXANYNPSLKS, где Х выбран из Y и F, и где Х выбран из S и I;
4
5
6
4
5
6
CDR3, имеющую аминокислотную последовательность EXXGXFDY, где Х выбран из K и А, Х выбран из Т и R, и Х выбран из F и Y.
15. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы, которая содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую: CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, в которой заменено не более 3, предпочтительно, не более 2, более предпочтительно, не более 1 аминокислоты, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, в которой заменено не более 3, предпочтительно, не более 2, более предпочтительно, не более 1 аминокислоты.
16. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по п. 15, которая содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую:
7
8
9
7
8
9
CDR1, имеющую аминокислотную последовательность RSSQSXVXSNGNTYLX, где Х выбран из L и I, X выбран из Н и R, и Х выбран из Н и Т;
CDR2, имеющую аминокислотную последовательность KVSNRFS;
10
11
12
10
11
12
CDR3, имеющую аминокислотную последовательность XQXXHVPPT, где Х выбран из S и F, Х выбран из S и G, и Х выбран из А и S.
17. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы, которая содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую: CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, в которой заменено не более 3, предпочтительно, не более 2, более предпочтительно, не более 1 аминокислоты; и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, в которой заменено не более 3, предпочтительно, не более 2, более предпочтительно, не более 1 аминокислоты, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, в которой заменено не более 3, предпочтительно, не более 2, более предпочтительно, не более 1 аминокислоты.
18. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по п. 17, которая содержит
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую:
1
1
CDR1, имеющую аминокислотную последовательность GYSIXSGYSWH, где Х выбран из Т и А;
2
3
2
3
CDR2, имеющую аминокислотную последовательность YIHXSGXANYNPSLKS, где Х выбран из Y и F, и где Х выбран из S и I; и
4
5
6
4
5
6
CDR3, имеющую аминокислотную последовательность EXXGXFDY, где Х выбран из K и А, Х выбран из Т и R, и Х выбран из F и Y;
и вариабельную область легкой цепи, содержащую:
7
8
9
7
8
9
CDR1, имеющую аминокислотную последовательность RSSQSXVXSNGNTYLX, где Х выбран из L и I, Х выбран из Н и R, и Х выбран из Н и Т;
CDR2, имеющую аминокислотную последовательность KVSNRFS; и
10
11
12
10
11
12
CDR3, имеющую аминокислотную последовательность XQXXHVPPT, где Х выбран из S и F, Х выбран из S и G, и Х выбран из А и S.
19. Ig-подобная молекула, антитело или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы, которая содержит
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую:
CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9;
CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и
CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11;
и вариабельную область легкой цепи, содержащую:
CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12;
CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; и
CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14.
20. Ig-подобная молекула, антитело или их антигенсвязывающий фрагмент, которые содержат
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую:
CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3;
CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; и
CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5;
и вариабельную область легкой цепи, содержащую:
CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6;
CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; и
CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8.
21. Ig-подобная молекула, антитело или их антигенсвязывающий фрагмент, которые содержат
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую:
CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;
CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16; и
CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17;
и вариабельную область легкой цепи, содержащую:
CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18;
CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19; и
CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20.
22. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы, которая содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую: определяющую комплементарность область (CDR)1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SHY.
23. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы, которая содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую: CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты.
24. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы, которая содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую: CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SHY; и дополнительно содержащий вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, в которой заменено не более 2, предпочтительно, не более 1 аминокислоты.
25. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по п. 24, которая содержит
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую:
CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29;
CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; и
CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SHY;
и/или вариабельную область легкой цепи, содержащую:
CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31;
CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32; и
CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33.
26. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по любому из пп. 13-25, отличающийся тем, что CDR-области легкой цепи и/или тяжелой цепи интегрированы в каркасные области, полученные от человека.
27. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по любому из пп. 13-25, которая представляет собой антитело.
28. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по п. 27, которая представляет собой химерное антитело.
29. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по п. 27, которая представляет собой гуманизированное антитело.
30. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по п. 12 или 29, которая содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем, указанная тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, и указанная легкая цепь имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, или указанная тяжелая цепь имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36, и указанная легкая цепь имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37.
31. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по п. 12 или 29, которая содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем, указанная тяжелая цепь содержит константную область тяжелой цепи IgG4, представленной в SEQ ID NO: 34, и указанная легкая цепь содержит константную область легкой цепи IgG4, представленной в SEQ ID NO: 35, или указанная тяжелая цепь содержит константную область тяжелой цепи IgG4, представленной в SEQ ID NO: 36, и указанная легкая цепь содержит константную область легкой цепи IgG4, представленной в SEQ ID NO: 37.
32. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по п. 31, которая отличается тем, что указанная тяжелая цепь и/или легкая цепь дополнительно содержат вариабельную область, содержащую одну или более, предпочтительно, все каркасные области тяжелой цепи IgG4, представленной в SEQ ID NO: 34, и/или легкой цепи IgG4, представленной в SEQ ID NO: 35, или указанная тяжелая цепь и/или легкая цепь дополнительно содержат вариабельную область, содержащую одну или более, предпочтительно, все каркасные области тяжелой цепи IgG4, представленной в SEQ ID NO: 36, и/или легкой цепи IgG4, представленной в SEQ ID NO: 37.
33. Антитело, которое связывает фибронектин-EDA, или антигенсвязывающий фрагмент указанного антитела для применения или способа согласно любому из пп. 1-4, причем указанное антитело или фрагмент представляет собой Ig-подобную молекулу или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по любому из пп. 5-32.
34. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая Ig-подобную молекулу или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по любому из пп. 5-32.
35. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 34.
36. Вектор по п. 35, представляющий собой вектор для генной терапии.
37. Клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п. 34 или вектор по п. 35 или 36.
38. Клетка-хозяин по п. 37, представляющая собой клетку-хозяина млекопитающего.
39. Клетка-хозяин по любому из п. 37 или 38, которая представляет собой гибридому.
40. Фармацевтическая композиция, содержащая агент, выбранный из группы, состоящей из (а) Ig-подобной молекулы или антигенсвязывающего фрагмента указанной молекулы по любому из пп. 5-32, (b) молекулы нуклеиновой кислоты по п. 34, (с) вектора по любому из пп. 34-36 и (d) клетки-хозяина по любому из пп. 38-39, и фармацевтически приемлемый носитель.
41. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по любому из пп. 5-32, или фармацевтическая композиция по п. 40 для применения в качестве лекарственного средства.
42. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по любому из пп. 5-32, или фармацевтическая композиция по п. 40 для применения для лечения, предотвращения или предупреждения прогрессирования нежелательного ремоделирования сердца и состояний, возникающих в результате или связанных с инфарктом миокарда и/или перегрузкой давлением.
43. Ig-подобная молекула или антигенсвязывающий фрагмент указанной молекулы по любому из пп. 1-32, или фармацевтическая композиция по п. 40 для применения для лечения, предотвращения или предупреждения прогрессирования нежелательного ремоделирования тканей.
44. Способ лечения, предотвращения или предупреждения прогрессирования нежелательного ремоделирования сердца и состояний, возникающих в результате или связанных с инфарктом миокарда и перегрузкой давлением, который включает введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества агента, выбранного из группы, состоящей из (а) Ig-подобной молекулы или ее антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп. 5-32, (b) молекулы нуклеиновой кислоты по п. 34, (с) вектора по любому из пп. 34-36 и (d) клетки-хозяина по любому из пп. 38-39.
45. Антитело анти-фибронектин-EDA или антигенсвязывающий фрагмент указанного для применения или способа согласно любому из пп. 2-4, 33 или 44, при этом указанный субъект представляет собой человека.