Штамм бактерий Bacillus subtilis - деструктор нефти и нефтепродуктов
Bacillus subtilis STRAIN - OIL AND PETROLEUM DESTRUCTOR

Штамм бактерий Bacillus subtilis – деструктор нефти и нефтепродуктов
Изобретение относится к области микробиологии и представляет собой новый бактериальный штамм Bacillus subtilis  СНБС-1 – деструктор нефти и нефтепродуктов, который может быть использован для очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат).
В настоящее время загрязнение окружающей среды нефтяными углеводородами является одной из актуальных проблем. Ежегодно в России происходит в среднем около 20 тысяч инцидентов, связанных с попаданием нефти и нефтепродуктов в почвы и открытые водоемы. При масштабных разливах загрязнения распространяются на сопредельные территории, в результате нарушенные земли на долгие годы выводятся из  хозяйственного оборота. Из многочисленных методов, которые позволяют сократить сроки реабилитации нефтезагрязненных почв, наиболее оправданными и экологичными считаются биологические способы, основанные на интенсификации микробиологической деструкции нефтяных углеводородов (см. Коронелли Т.В., Комарова Т.И., Ильинский В.В. и др. Интродукция бактерий рода Rhodococcus в тундровую почву, загрязненную нефтью // Прикладная биохимия и микробиология, 1997. Т.33. №2. – С.198-201).
Хорошую эффективность в очистке почв от нефти и нефтепродуктов оказывает консорциум нефтеокисляющих микроорганизмов в составе Pseudomonas putida ПИ Ко-1, Pseudomonas fluorescens ПИ-896, Micrococcus sp. ПИ Ky-1, Burkholderia caryophylli Jap-3, Serratia odorifera Jap-1 при весовом соотношении 3-12 мас.% каждого микроорганизма (см. RU № 2191643, МПК B09C1/10, C12N1/20, C12N1/20, C12R1:01, опубл. 27.10.2002).
Недостатком известного решения является то, что при приготовлении рабочей суспензии микроорганизмов температура поддерживается на уровне +18…+22ºС, т.е. микроорганизмы, входящие в состав консорциума, не способны к деградации нефтепродуктов при пониженных положительных температурах (+5ºС).
Известны штаммы:  Acinetronacter sp. HB-1 (см. RU № 2077579, МПК C12N1/20, C02F3/34, B09C1/10, C12R1:01, C12N1/20, B09C101:00, опубл. 20.04.1997); Pseudomonas putida 36 (см. SU № 1076446, МПК C02F3/34, B09C1/10, C12N1/20 C02F3/34, C02F101:32, C12N1/20, C12R1:40, опубл. 28.02.1984); Pseudomonas alcaligenes E7 (см. RU № 2134723, МПК C12N1/20, C02F3/34, B09C1/10, C12N1/20, C12R1:38, опубл. 20.08.1999).
Недостатком известных штаммов является то, что они также утилизируют нефть при сравнительно высоких температурах.
Известен нефтедеструктор, включающий культуру бактерий и микробное удобрение, содержащее нативные микроорганизмы: Clavibacter michiganese, Bacillus amyloliguefaciens, Micrococcus varians (см. Архипченко И.А., Загвоздкин В.К. Очистка нефтезагрязненных почв с помощью препаратов на основе микробных удобрений // Экология и промышленность России. Спецвыпуск. 2004. С. 16-18).
Недостатком является то, что нефтедеструктирующая активность клеток микроорганизмов не достаточна для проведения нефтеочистки почвы в районах с коротким тепловым периодом.
Известен штамм бактерий  Bacillus subtilis Zb52, предназначенный для биоочистки сточных вод (см. KZ № 27045, МПК C12N 1/20, C12N 9/56, C12R 1/125, опубл. 14.06.2013). Штамм бактерий эффективен для очистки сточных вод, активно расщепляет животные жиры.
Недостатком известного штамма бактерий является неизученность окисляющей активности по отношению к нефти и нефтепродуктам, что не позволяет оценить его деструктирующую способность по отношению к нефтяным углеводородам.
Известны штаммы: Bacillus atropheus IPNG-ELA-2 (см. RU №2482179, МПК C12N 1/26, C02F 3/34, В09С 1/10, C12R 1/57, опубл. 20.05.2013) и Bacillus vallismortis ВКПМ В-11017 (см. RU №2525930, МПК C12N 1/20, C02F 3/34, В09С 1/10, C12R 1/07, опубл. 20.04.14), обладающие высокой утилизирующей эффективностью по отношению к нефти и нефтепродуктам.
Недостатком известных штаммов является то, что они не могут развиваться и утилизировать нефть и нефтепродукты при температурах +5 и +40°С, а также то, что для наращивания биомассы из клеток штаммов Bacillus atropheus IPNG-ELA-2 и Bacillus vallismortis ВКПМ В-11017 требуется специальная среда с добавлением перфторуглеродов в виде дефицитного и дорогостоящего препарата «Перфторан», что не экономично и усложняет процедуру накопления клеточной биомассы штаммов, используемых для очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов.
В качестве прототипа служит штамм бактерий «Bacillus subtilis Колыма 7/2» (см. RU №2446900, МПК В09С 1/10, опубл. 10.04.2012), обладающий способностью снижать концентрацию нефти в почве до 0,48% в течение 3 месяцев летнего периода.
Недостатком изобретения является то, что штамм осуществляет деградацию только нефти, притом только в почве, и не способен утилизировать нефтепродукты (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат), в том числе в условиях широкого диапазона температур от +5 до +40°С.
Задачей изобретения является расширение номенклатуры штаммов, обладающих утилизирующей способностью по отношению как к нефти, так и нефтепродуктам (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат) в относительно короткие сроки, в широком диапазоне температур от +5 до +40°С, который может быть использован как для очистки воды, так и для очистки почвы как от нефти, так и от нефтепродуктов (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат).
Поставленная задача решена тем, что получен штамм Bacillus subtilis СНБС-1 - деструктор нефти и нефтепродуктов, обладающий утилизирующей способностью по отношению к нефти и нефтепродуктам (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат), перспективный как для очистки почв, так и для очистки воды от загрязнений нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат) в широком диапазоне температур (от +5 до +40°С), в относительно короткие сроки (3-45 суток).
Заявляемый штамм бактерий Bacillus subtilis СНБС-1 выделен 16 февраля 2015 года из мерзлых почвенных образцов, загрязненных дизельным топливом (соляркой), отобранных возле емкостей Момского РЭС ОАО «Сахаэнерго», Северо-Восток Якутии, Момский район, село Хонуу.
Штамм идентифицирован и депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ), ФГУП «ГосНИИгенетика», 117545, Москва, 1-й Дорожный пр-д, 1, регистрационный номер ВКПМ В-12239.
Первичный скрининг по базе данных GenBank показал, что исследуемый штамм принадлежит к следующим систематическим группам: Bacteria; Firmicutes; Bacilli; Bacillales; Bacillaceae; Bacillus, причем гомология с некоторыми видами рода Bacillus составляет 99%.
При секвенировании вариабельных участков 16S rDNA получена следующая собранная нуклеотидная последовательность для исследуемого штамма:
CTTCTGCMTCAGTTCCCCAGTTTCCAATGACCCTCCCCGGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAACCGCCTGCGAGCCCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAGGTACCGTCAAGGTGCCGCCCTATTTGAACGGCACTTGTTCTTCCCTAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCGGCGTTGCTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTACGCATCGTYGCCTTGGTGAGCCRTTACCTCACCAACTAGCTAATGCGCCGCGGGTCCATCTGTAAGTGGTAGCCGAAGCCACCTTTTATGTTTGAACCATGCGGTTCAAACAAGCATCCGGTATTAGCCCCGGTTTCCCGGAGTTATCCCAGTCTTACAGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCGTCCGCCGCTAACATCAGGGAGCAAGCTCCCATCTGTCCGCTCGACTTGCATGTATTAGGCACGCCGCCAGCGTTCGTCCTGAGCCAGGATCAAACTCT
Результаты обработки секвенсов при помощи компьютерной программы RDB II, предназначенной для определения родства микроорганизмов и построения филогенетических деревьев, представлены в графическом виде:
S000003473     0.986 0.940 1423  Bacillus subtilis (T); DSM10; AJ276351
S000006847     0.986 0.942 1435  Bacillus mojavensis (T); IFO15718; AB021191
S000012241     0.988 0.992 1440  Bacillus vallismortis (T); DSM11031; AB021198
S000014133     0.988 0.969 1426  Bacillus atrophaeus (T); JCM9070; AB021181
S000428475     0.988 0.935 1337  Bacillus subtilis (T); NRRL B-23049; AF074970
S000734915     0.986 0.960 1389  Bacillus amyloliquefaciens (T); NBRC 15535; AB255669
S001239910     0.980 0.903 1355  Bacillus methylotrophicus (T); CBMB205; EU194897
S001576866     0.981 0.965 1433  Bacillus siamensis (T); PD-A10; GQ281299
S002234727     0.984 0.926 1374  Bacillus tequilensis (T); 10b; HQ223107
S002287710     0.980 0.887 1469  Bacillus licheniformis (T); ATCC 14580; DSM 13; CP000002
S004067890     0.986 0.976 1453  Bacillus amyloliquefaciens (T); DSM7; FN597644
По данным анализа RDP II 16S рРНК было построено филогенетическое дерево с гомологичными штаммами Bacillus subtilis СНБС-1 (см. чертеж).
По результатам проведенного анализа секвенсов вариабельных участков генов, кодирующих 16S рРНК (99 %), а также ПЦР анализа с использованием видоспецифических праймеров тестируемый штамм отнесен к виду Bacillus subtilis.
Полученный штамм характеризуется следующими признаками.
Морфологические признаки.
Грамположительные споровые палочки, расположенные беспорядочными скоплениями.
Культуральные признаки.
На мясопептонном агаре (МПА) (масс.%): ферментативный пептон – 1,0; натрий хлористый – 0,5; агар – 1,0; вода мясная - остальное, рН 7,0-7,2, формирует желтые округлой формы колонии, диаметром до 5 мм. Консистенция мягкая, легко снимаются с поверхности агара, легко размазываются.
На питательном агаре на основе гидролизата рыбной муки (масс. %): гидролизат рыбной муки - 1,2; пептон ферментативный - 1,2; натрий хлористый - 0,6; агар - 1,0; вода дистиллированная остальное; рН 7,1 - 7,5,  формирует желтые округлой формы колонии, диаметром до 1-3 мм. Консистенция мягкая, легко снимаются с поверхности агара, легко размазываются.
На среде Сабуро (масс. %): гидролизат рыбной муки – 1,0; панкреатический гидролизат казеина – 1,0; дрожжевой экстракт – 0,2; натрия фосфат однозамещенный – 0,2; D-глюкоза – 4,0; агар – 1,0; вода дистиллированная – остальное; рН 6,0±3, формирует непрозрачные желтоватые колонии, диаметром 1-5 мм. Консистенция мягкая, легко снимаются с поверхности среды, легко размазываются.
В мясопептонном бульоне (масс. %): ферментативный пептон – 1,0, натрий хлористый – 0,5, вода мясная – остальное; рН 7,0-7,2, образуют муть и пленку на поверхности бульона.
3
4
2
2
4
2
4
На минеральной среде Мюнца (см. Керстен Д.К. Морфологические и культуральные свойства индикаторных микроорганизмов нефтегазовой съемки. - Микробиология, 1963, №5- С.1024-1030) с нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат, бензин) следующего состава: (масс. %) KNO– 0,4; MgSO·7HO– 0,08; NaCl – 0,1; K HPO–0,14; KH PO–0,06; агар-2,0; нефть или нефтепродукты – 1,0; вода дистиллированная – остальное, рН – 7,2, растет в виде серовато-желтых выпуклых колоний диаметром 1 мм.
Физиолого-биохимические признаки.
Штамм аэроб, растёт при температуре от +5 до +40°С, более интенсивно растет +16…+37°С. Растёт при рН 5,5 – 9,0. Оптимум рН 6,0 – 8,0. Растёт в солевом бульоне с добавлением 0,1 - 2,0% NaCl.
Используемые источники углерода: сорбит.
Проверенные неиспользуемые источники углерода: лактоза, глюкоза, цитрат натрия, малонат натрия. Штамм индол-отрицателен. Реакция Фогес - Проскауэра отрицательная. Фенилаланиндезоксаминаза отрицательная. Не ферментирует бета-галактозидазу. Утилизирует инозит. Продукт, синтезируемый штаммом: поверхностно-активные вещества, способные деструктировать нефть. Использует в качестве источника энергии углеводороды нефти и нефтепродуктов.
Штамм не токсичен по отношению к высшим растениям. Биотестирование проведено на семенах овса обыкновенного и редьки масличной.
Штамм может поддерживаться регулярными пересевами (1 раз в 10-14 дней) на скошенном мясопептонном агаре или храниться в лиофилизированном состоянии в ампулах при температуре +4°С.
Изобретение поясняется следующими примерами.
Пример 1. Выделение и культивирование штамма Bacillus subtilis СНБС-1.
Штамм бактерий Bacillus subtilis СНБС-1 выделен из мерзлых почвенных образцов, загрязненных соляркой, методом накопительных культур на среде Мюнца с нефтью с последующим пересевом на МПА.
3
4
2
2
4
2
4
3
Для этого 1,0 г мерзлого грунта с вышеуказанного объекта вносили в 250 мл минеральной среды Мюнца следующего состава: (масс. %) KNO– 0,4; MgSO·7HO– 0,08; NaCl – 0,1; K HPO–0,14; KH PO–0,06; вода дистиллированная – остальное, рН – 7,2, В качестве единственного источника углерода и энергии использовали нефть, которую вносили в среду Мюнца в количестве 1000 мг на 1,0 дмсреды. На первом этапе инкубация проводилась в качалочных условиях при 200 об/мин и температуре +20±1°С. Рост бактерий наблюдали уже через 3 дня инкубации по образованию мутной эмульсии и с дезинтеграции слоя нефти.
Чистая культура бактерий Bacillus subtilis СНБС-1 была получена путем культивирования при выше перечисленных условиях и многократных пересевов (более 10) накопительной культуры на чашки Петри с МПА.
Далее посевы инкубировали в стационарных условиях при различных температурах от +5 до +40°С. Через 72 ч на поверхности МПА наблюдали появление пастообразных блестящих колоний желтого цвета, диаметром до 5 мм, которые по культурально-морфологическим и биохимическим признакам, а также по результатам проведенного анализа нуклеотидных последовательностей гена 16S рРНК и ключевых фенотипических признаков согласно таксономическим описаниям, приведенным в Определителе Берги (см. Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology Book Review Int. J. of Syst. Bact.; July 1985, p. 408) идентифицированы как штамм Bacillus subtilis .
Пример 2. Приготовление бактериального препарата на основе клеток штамма Bacillus subtilis СНБС-1.
9
3
Изолированные колонии, полученные по примеру 1, пересевали на скошенный МПА и инкубировали 48 часов при температуре +20±1°С. Выросшие на МПА культуры Bacillus subtilis СНБС-1 смывали 0,9 % раствором NaCl; готовили исходную микробную суспензию бактериального изолята с титром 1х10 микробных клеток/смпо оптическому стандарту ГИСК им. А.М. Тарасевича.
9
3
Для получения препарата готовили жидкую минеральную среду по примеру 1 и культивировали в колбах в качалочных условиях в течение 48 часов, при температуре 20±1°С, при 200 оборотах/мин. Полученную жидкую смесь клеток штамма Bacillus subtilis СНБС-1, с титром 1х10 клеток/см использовали в качестве препарата для обработки почвы и воды, загрязненной нефтью и нефтепродуктами.
Пример 3. Исследование нефтеокисляющей активности штамма Bacillus subtilis СНБС-1.
3
9
3
Клетки штамма Bacillus subtilis СНБС-1 смывают 0,9 % раствором NaCl со скошенного мясопептонного агара. Готовят исходную микробную суспензию бактериального изолята, объемом 25 см, с концентрацией 1х10 микробных клеток/смпо оптическому стандарту ГИСК им. А.М. Тарасевича.
Полученный бактериальный изолят штамма Bacillus subtilis СНБС-1 культивируют в водной среде с минеральным составом по примеру 1 в условиях постоянной аэрации.
3
3
9
3
В колбочки объемом 250,0 смвносят по 100,0 см готовой минеральной среды и 1000 мг нефти. Колбы засевают клетками штамма до концентрации 1·10 клеток/ см. В качестве контроля ставят такую же колбу со средой, нефтью и без бактерий для определения общих (естественных) потерь. Опыт проводят в трех повторениях. Колбы культивируют при разных температурах (от +5°C до +40°С) в течение 3-5 суток.
Данные эксперимента показывают, что в водной среде с минеральными компонентами предлагаемый штамм уже на 3-и сутки при температуре +5°C утилизирует 4,8-5,4 % - нефти и нефтепродуктов; при температуре +20°C – 57,2-57,8%; при температуре +30°C – 62,6 – 63,7 %, при температуре +40°C – 52,2-52,8%; в зависимости от типа ксенобиотика (см. таблицу 1).
Пример 4. Очистка воды от нефти с помощью клеток штамма Bacillus subtilis СНБС-1.
3
3
3
9
3
3
В эксикатор объемом 5,0 дмвносят по 3,0 дмводопроводной воды, отстоявшейся в течение суток при комнатной температуре. В воду добавляют 30000 мг сырой неочищенной нефти и 30,0 смбактериального изолята штамма Bacillus subtilis СНБС-1 (по примеру 2), содержащего 1,0·10 клеток/см суспензии. В качестве контроля используют воду в количестве 3,0 дмс добавлением 30000 мг нефти и без внесения микробной суспензии бактериального изолята.
Эксперимент проводят в течение 45 суток при температуре +20±1˚С.
Биодеградацию нефти определяют спектрометрическим методом с использованием концентратомера «ИКН-025» (см. ФР.1.31.2007.03234 МВИ 01.02.117 Методика выполнения измерений массовой концентрации нефтепродуктов в питьевых, природных и сточных водах ИК-спектрометрическим методом с использованием концентратомера «ИКН-025»).
Полученные результаты показали, что в воде под влиянием штамма Bacillus subtilis СНБС-1 за 45 суток деструкция нефти составила 68,2 %. Деструкция в контрольной ёмкости без добавления штамма Bacillus subtilis СНБС-1 – 2,3% за тот же промежуток времени (см. таблицу 2).
Пример 5. Очистка почвы от нефтезагрязнений с помощью клеток штамма Bacillus subtilis СНБС-1.
Опыты с применением клеток штамма Bacillus subtilis СНБС-1 для очистки почвы от нефти проведены на супесчанной почве в условиях модельного опыта. Исходное содержание нефтепродуктов (НП) в почве до обработки почв клетками штамма Bacillus subtilis СНБС-1 составило 3000 мг/кг, что соответствовало среднему уровню загрязнения в соответствии с нормативными документами (см. Письмо Минприроды России от 27.12.1993 г. № 04-25/61-5678 «О порядке определения размеров ущерба от загрязнения земель химическими веществами»; Методические рекомендации по выявлению деградированных и загрязненных земель. Комитет РФ по земельным ресурсам от 27 марта 1995 г. № 3-15/582, 29 с.).
Эффективность применения штамма Bacillus subtilis СНБС-1 оценивали по степени деградации нефтезагрязнения в почвенных образцах, отобранных для анализа до и после внесения микробной суспензии согласно инструкции (см. РД 39-0177098-015-90 «Инструкция по контролю за состоянием почв на объектах предприятий  Миннефтепрома»).
Для этого образцы почвы до и после обработки биопрепаратом подвергались экстракции в аппарате Сокслета четыреххлористым углеродом, после чего экстрагент удаляли перегонкой с дефлегматором, доводя остаток до постоянного веса. Определение влажности образцов проводили общепринятым методом (см. ГОСТ 28268-89 «Почвы. Методы определения влажности, максимальной гигроскопической влажности»), после чего производили перерасчет содержания нефтепродуктов на сухую почву.
Установлено, что степень биодеградации нефтепродуктов в опытных образцах через 45 суток после однократной обработки почв бактериальной суспензией на основе клеток штамма Bacillus subtilis СНБС-1 составила при температуре +5±1ºС – 9,3%; при температуре +20±1ºС – 56,6%; при температуре +30±1ºС – 61,6%; при температуре +40±1ºС – 53,9% (см. таблицу 3).
Таким образом, преимуществом предлагаемого штамма является то, что он обладает высокой утилизирующей способностью по отношению как к нефти, так и к нефтепродуктам в относительно короткие сроки (от 3 до 45 суток), в широком диапазоне температур от +5 до +40°С, может быть использован как для очистки почвы, так и для очистки воды от загрязнений нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат).
Таблица 1
Степень утилизации нефтепродуктов штаммом Bacillus subtilis СНБС-1
в водной среде с минеральными компонентами
Вариант опыта
Отбор контрольных проб
Содержание нефтепродуктов, мг/дм<sup>3</sup>
t°С
+5
+20
+30
+40
Вода+минеральные компоненты+штамм+нефть
до опыта
1000,0
1000,0
1000,0
1000,0
после опыта
949,0
422,0
374,0
476,0
% деструкции
5,1
57,8
62,6
52,4
Вода+минеральные компоненты+штамм+дизельное топливо
до опыта
1000,0
1000,0
1000,0
1000,0
после опыта
952,0
428,0
363,0
469,0
% деструкции
4,8
57,2
63,7
53,1
Вода+минеральные компоненты+штамм+масло моторное
до опыта
1000,0
1000,0
1000,0
1000,0
после опыта
946,0
422,0
372,0
472,0
% деструкции
5,4
57,8
62,8
52,8
Вода+минеральные компоненты+штамм+масло гидравлическое
до опыта
1000,0
1000,0
1000,0
1000,0
после опыта
952,0
426,0
372,0
478,0
% деструкции
4,8
57,4
62,8
52,2
Вода+минеральные компоненты+штамм+газовый конденсат
до опыта
1000,0
1000,0
1000,0
1000,0
после опыта
948,0
424,0
370,0
474,0
% деструкции
5,2
57,6
63,0
52,6
Таблица 2
Деструкция нефти в воде штаммом Bacillus subtilis СНБС-1
Вариант опыта
Содержание нефтепродуктов, мг/дм<sup>3</sup>
Степень утилизации нефти, %
до опыта
после опыта
Вода+нефть+ Bacillus subtilis  СНБС-1
30 000,0
9 540,0
68,2
Контроль: Вода+нефть
30 000,0
29 300,0
2,3
Таблица 3
Деструкция нефтепродуктов в почве  под влиянием клеток штамма Bacillus subtilis СНБС-1
Вариант опыта
Содержание нефти, мг/кг
Деградация нефти,%
до очистки
после очистки
Опыт при температуре +5±1ºС
Контроль (почва + нефть)
3000,0
2940,0
2,0
Почва + нефть + Bacillus subtilis  СНБС-1
3000,0
2720,0
9,3
Опыт при температуре +20±1ºС
Контроль (почва + нефть)
3000,0
2820,0
6,0
Почва + нефть + Bacillus subtilis  СНБС-1
3000,0
1300,0
56,6
Опыт при температуре +30±1ºС
Контроль (почва + нефть)
3000,0
2794,0
6,8
Почва + нефть + Bacillus subtilis  СНБС-1
3000,0
1150,0
61,6
Опыт при температуре +40±1ºС
Контроль (почва + нефть)
3000,0
2760,0
8,0
Почва + нефть + Bacillus subtilis  СНБС-1
3000,0
1270,0
53,9