ПОЛНОСТЬЮ ПРОТОЧНЫЙ СПОСОБ ОЧИСТКИ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ

1. Способ очистки белка из раствора, включающий:
(a) стадию фильтрации, включающую:
- пропускание указанного раствора по меньшей мере через одну матрицу хелатирующего агента в проточном режиме,
- извлечение отфильтрованного белкового раствора из фильтрата указанной по меньшей мере одной матрицы хелатирующего агента;
(b) стадию обмена, включающую:
- пропускание отфильтрованного белкового раствора, полученного в конце стадии (а), по меньшей мере через одну диафильтрационную мембрану с использованием только одного буфера для обмена,
- извлечение частично очищенного ретентата, содержащего белок, указанной по меньшей мере одной диафильтрационной мембраны;
(c) полирующую стадию, включающую:
- пропускание ретентата, полученного в конце стадии (b), через комбинацию мембранных адсорберов в проточном режиме, при этом два мембранных адсорбера из указанной комбинации мембранных адсорберов ортогональны с точки зрения механизмов действия, и указанная комбинация мембранных адсорберов была предварительно уравновешена уравновешивающим буфером, который идентичен одному буферу, используемому для обмена на стадии (b),
- извлечение очищенного белка из фильтрата указанной комбинации мембранных адсорберов;
где указанный способ очистки не включает стадию хроматографии с Протеином А.
2. Способ по п. 1, где отфильтрованный белковый раствор, полученный в конце стадии (а), пропускают непосредственно через по меньшей мере одну диафильтрационную мембрану без какой-либо обработки, такой как регуляция pH, замена буфера или разбавление.
3. Способ по п. 1 или 2, где ретентат, полученный в конце стадии (b), пропускают непосредственно через указанную комбинацию мембранных адсорберов без какой-либо обработки, такой как регуляция pH, замена буфера или разбавление.
4. Способ по любому из пп. 1-3, где способ не содержит промежуточного хранения между тремя стадиями (а), (b) и (с).
5. Способ по любому из пп. 1-4, где способ включает функционально закрытую поточную линию.
6. Способ по любому из пп. 1-5, где для всего способа очистки используется только один буфер.
7. Способ по любому из пп. 1-6, где один буфер содержит Tris, Tris-HCl, бис-Tris, фосфат и/или лимонную кислоту, в частности, содержит или состоит из (i) бис-Tris, Tris или Tris-HCl, (ii) уксусной кислоты, (iii) воды и (iv) необязательно соли.
8. Способ по любому из пп. 1-7, где по меньшей мере одна матрица хелатирующего агента стадии фильтрации выбрана из группы, состоящей из активированного угля, диатомитовой земли, свободной катионообменной смолы, свободной анионообменной смолы и свободной смолы смешанного режима.
9. Способ по п. 8, где по меньшей мере одна матрица хелатирующего агента представляет собой комбинацию двух различных матриц хелатирующего агента.
10. Способ по п. 9, где комбинация двух различных матриц хелатирующих агентов представляет собой комбинацию активированного угля и свободной анионообменной смолы.
11. Способ по любому из пп. 1-10, где по меньшей мере одна диафильтрационная мембрана на стадии обмена представляет собой модуль однопоточной фильтрации в тангенциальном потоке (SPTFF) или модуль фильтрации в тангенциальном потоке (TFF).
12. Способ по любому из пп. 1-11, где по меньшей мере одна диафильтрационная мембрана стадии обмена имеет форму кассеты, половолоконную или рулонную форму.
13. Способ по любому из пп. 1-12, где отфильтрованный белковый раствор концентрируют на стадии обмена.
14. Способ по любому из пп. 1-13, где комбинация мембранных адсорберов на «полирующей» стадии представляет собой комбинацию по меньшей мере двух мембранных адсорберов, выбранных из группы, состоящей из катионообменных мембранных адсорберов, анионообменных мембранных адсорберов, мультимодальных мембранных адсорберов и мембранных адсорберов гидрофобного взаимодействия.
15. Способ по любому из пп. 1-14, где комбинация мембранных адсорберов на полирующей стадии представляет собой комбинацию катионообменного мембранного адсорбера и анионообменного мембранного адсорбера.
16. Способ по любому из пп. 1-15, дополнительно включающий стадию нанофильтрации после стадии (с).
17. Способ по п. 16, дополнительно включающий стадию конечной ультрафильтрации и/или диафильтрации после стадии нанофильтрации.
18. Способ по любому из пп. 1-17, где белок представляет собой моноклональное антитело.
19. Способ по любому из пп. 1-18, где один буфер содержит:
- от 5 до 40 мМ бис-Tris, от 15 до 150 мМ NaCl, с pH, доведенным до 6-9 с помощью уксусной кислоты,
- от 5 до 40 мМ Tris или Tris-HCl, от 15 до 150 мМ NaCl, с pH, доведенным до 6-9 с помощью уксусной кислоты,
- от 5 до 40 мМ Tris или Tris-HCl, от 15 до 150 мМ NaCl, с pH, доведенным до 6-9 с помощью лимонной кислоты, или
2
4
2
4
- от 15 до 150 мМ NaCl, с pH, доведенным до 6-9 с помощью NaHPO/NaHPO.
20. Способ по любому из пп. 1-19, дополнительно включающий стадию включения выделенного очищенного белка в фармацевтическую композицию.
21. Набор, содержащий или состоящий из:
(a) по меньшей мере, одной матрицы хелатирующего агента, по меньшей мере, одной диафильтрационной мембраны и комбинации мембранных адсорберов, где два мембранных адсорбера указанной комбинации мембранных адсорберов являются ортогональными с точки зрения механизмов действия; и
(b) одного буфера, содержащего Tris, Tris-HCl, бис Tris, фосфат и/или лимонную кислоту.