ОЧИСТКА АНТИТЕЛА

1. Способ получения препарата антител с уменьшенным уровнем белков клетки-хозяина (HCP) из смеси, содержащей антитело и, по меньшей мере, один HCP, причем способ включает в себя:
(a) нанесение смеси на первую ионообменную смолу в буфере для уравновешивания, где наносят более чем 30 г антитела на литр смолы;
(b) отмывку HCP со смолы с помощью множества стадий промывки; и
(c) элюцию антитела со смолы с помощью буфера для элюции для получения первого элюата,
так что получают препарат антитела с уменьшенным уровнем HCP.
2. Способ по п.1, где нанесение и отмывку осуществляют при рН приблизительно 5 и где наносят приблизительно 35-70 г антитела на литр смолы.
3. Способ по п.1, где нанесение и отмывку осуществляют при рН приблизительно 5 и где наносят приблизительно 70 г антитела на литр смолы.
4. Способ по п.1, где смесь, содержащую антитело и, по меньшей мере, один HCP, не подвергают связыванию с белком A перед нанесением смеси на первую ионообменную смолу.
5. Способ по п.1, где множество стадий промывки включают в себя, по меньшей мере, первую промывку и вторую промывку, где присутствует увеличение электропроводности от первой промывки до второй промывки.
6. Способ по п.5, где первую промывку проводят с помощью буфера для уравновешивания, и вторую промывку проводят с помощью смеси буфера для элюции и воды.
7. Способ по п.6, где смесь буфера для элюции и воды содержит приблизительно 40-50% буфера для элюции и приблизительно 50-60% воды.
8. Способ по п.7, где смесь буфера для элюции и воды содержит приблизительно 45% буфера для элюции и приблизительно 55% воды.
9. Способ по п.8, где буфер для элюции содержит 20 мМ фосфат натрия и 150 мМ хлорид натрия.
10. Способ по п.1, где нанесение, отмывку и элюцию осуществляют при pH 7.
11. Способ по п.1, нанесение, отмывку и элюцию осуществляют при pH между приблизительно pH 5 и приблизительно pH 7.
12. Способ по п.1, где нанесение, отмывку и элюцию осуществляют при pH 5.
13. Способ по п.1, где первая ионообменная смола представляет собой катионообменную смолу.
14. Способ по п.13, где катионообменной смолой набивают колонку, и смесь, содержащую антитело и, по меньшей мере, один HCP, наносят на колонку.
15. Способ по п.14, где катионообменная смола включает в себя синтетическую полимерную смолу на основе метакрилата, присоединенного к группе сульфоната.
16. Способ по п.1, который дополнительно включает в себя подвергание первого элюата стадии инактивации вирусов.
17. Способ по п.16, где инактивации вирусов достигают посредством pH-инактивации вирусов для получения препарата с инактивированными вирусами.
18. Способ по п.17, где препарат с инактивированными вирусами наносят на вторую ионообменную смолу, где перед нанесением препарата с инактивированными вирусами на вторую ионообменную смолу pH и электропроводность препарата с инактивированными вирусами доводят так, чтобы они являлись по существу сходными с pH и электропроводностью второй ионообменной смолы.
19. Способ по п.18, где pH второй ионообменной смолы лежит в диапазоне от приблизительно pH 7,7 до приблизительно pH 8,3, и pH препарата с инактивированными вирусами доводят так, чтобы он лежал в диапазоне от приблизительно pH 7,7 до приблизительно pH 8,3.
20. Способ по п.19, где pH второй ионообменной смолы составляет приблизительно pH 8,0 и pH препарата с инактивированными вирусами доводят так, чтобы он составлял приблизительно pH 8,0.
21. Способ по п.18, где электропроводность второй ионообменной смолы лежит в диапазоне от приблизительно 3,5 мСм/см до приблизительно 5,2 мСм/см, и электропроводность препарата с инактивированными вирусами доводят так, чтобы она лежала в диапазоне от приблизительно 3,5 мСм/см до приблизительно 5,2 мСм/см.
22. Способ по п.21, где электропроводность второй ионообменной смолы составляет приблизительно 5,0 мСм/см, и электропроводность препарата с инактивированными вирусами доводят так, чтобы она составляла приблизительно 5,0 мСм/см.
23. Способ по п.18, где вторая ионообменная смола представляет собой анионообменную смолу.
24. Способ по п.23, где анионообменная смола представляет собой смолу Q-сефарозу.
25. Способ по п.18, где второй ионообменной смолой набивают колонку, и препарат с инактивированными вирусами наносят на колонку, так что получают первый проскок.
26. Способ по п.25, где первый проскок наносят на колонку для гидрофобного взаимодействия, так что получают второй элюат.
27. Способ по п.26, где колонка для гидрофобного взаимодействия представляет собой колонку с фенилсефарозой.
28. Способ по п.26, где первый проскок, наносимый на колонку для гидрофобного взаимодействия, содержит от приблизительно 20 до приблизительно 40 г антитела на литр материала для колонки для гидрофобного взаимодействия.
29. Способ по п.28, где первый проскок, наносимый на колонку для гидрофобного взаимодействия, содержит от приблизительно 30 до приблизительно 36 г антитела на литр материала для колонки для гидрофобного взаимодействия.
30. Способ по п.26, где второй элюат не подвергают фракционированию пиков продукта.
31. Способ по п.1, включающий в себя:
(a) нанесение смеси на катионообменную смолу в буфере для уравновешивания, где смесь не подвергали связыванию с белком A перед нанесением на катионообменную смолу и где наносят более чем 30 г антитела на литр смолы;
(b) отмывку HCP с катионообменной смолы с помощью множества стадий промывки;
(c) элюцию антитела с катионообменной смолы с помощью буфера для элюции для получения первого элюата;
(d) подвергание первого элюата стадии инактивации вирусов;
(e) нанесение препарата с инактивированными вирусами на анионообменную смолу для получения первого проскока; и
(f) нанесение первого проскока на колонку для гидрофобного взаимодействия, так что получают второй элюат;
так что получают препарат антител с уменьшенным уровнем HCP.
32. Способ по п.31, где катионообменная смола обладает pH 7, и наносят приблизительно 35 г антитела на литр смолы.
33. Способ по п.31, где катионообменная смола обладает pH 5, и наносят приблизительно 70 г антитела на литр смолы.
34. Способ по п.31, где множество стадий промывки включает в себя промывку смолы с помощью первой промывки с использованием буфера для уравновешивания и второй промывки с использованием смеси буфера для элюции и воды.
35. Способ по п.34, где смесь буфера для элюции и воды содержит приблизительно 40-50% буфера для элюции и приблизительно 50-60% воды.
36. Способ по п.31, где перед нанесением препарата с инактивированными вирусами на анионообменную смолу pH и электропроводность препарата с инактивированными вирусами доводят так, чтобы они являлись по существу сходными с pH и электропроводностью анионообменной смолы.
37. Способ по п.31, где первый элюат содержит в диапазоне от приблизительно 90 до приблизительно 100 раз меньше HCP, чем смесь, как определено по ELISA HCP.
38. Способ по п.31, где первый проскок содержит в диапазоне от приблизительно 840 до приблизительно 850 раз меньше HCP, чем первый элюат, как определено по ELISA HCP.
39. Способ по п.31, где второй элюат содержит в диапазоне от приблизительно 3 до приблизительно 5 раз меньше HCP, чем первый проскок, как определено по ELISA HCP.
40. Способ по п.1, включающий в себя:
(a) нанесение смеси на катионообменную смолу в буфере для уравновешивания, где катионообменная смола обладает pH 7, и наносят приблизительно 35 г антитела на литр смолы, или катионообменная смола обладает pH в диапазоне от pH 5 до pH 7, и наносят от приблизительно 35 до приблизительно 70 г антитела на литр смолы, или катионообменная смола обладает pH 5, и наносят приблизительно 70 г антитела на литр смолы;
(b) отмывку HCP с катионообменной смолы с помощью стадий промывки, включающих в себя первую промывку с использованием буфера для уравновешивания и вторую промывку с использованием смеси буфера для элюции и воды;
(c) элюцию антитела с катионообменной смолы с помощью буфера для элюции для получения первого элюата;
(d) подвергание первого элюата стадии инактивации вирусов, где инактивации вирусов достигают посредством pH-инактивации вирусов для получения препарата с инактивированными вирусами;
(e) нанесение препарата с инактивированными вирусами на анионообменную смолу, где перед нанесением препарата с инактивированными вирусами на анионообменную смолу pH и электропроводность препарата с инактивированными вирусами доводят так, чтобы они являлись по существу сходными с pH и электропроводностью анионообменной смолы, так что получают первый проскок; и
(f) нанесение первого проскока на колонку для гидрофобного взаимодействия, так что получают второй элюат;
так что получают препарат антитела с уменьшенным уровнем HCP.
41. Способ по п.40, где смесь с антителом не подвергали связыванию с белком A перед нанесением на катионообменную смолу.
42. Способ по п.40, где смесь буфера для элюции и воды содержит приблизительно 40-50% буфера для элюции и приблизительно 50-60% воды.
43. Способ по п.40, где первый элюат содержит в диапазоне от приблизительно 90 до приблизительно 100 раз меньше HCP, чем смесь, как определено по ELISA HCP.
44. Способ по п.40, где первый проскок содержит в диапазоне от приблизительно 840 до приблизительно 850 раз меньше HCP, чем первый элюат, как определено по ELISA HCP.
45. Способ по п.40, где второй элюат содержит в диапазоне от приблизительно 3 до приблизительно 5 раз меньше HCP, чем первый проскок, как определено по ELISA HCP.
46. Способ по любому из пп.1-45, где HCP содержит прокатепсин L, так что получают препарат антитела с уменьшенным уровнем прокатепсина L.
47. Способ по п.46, где первый элюат обладает активностью катепсина L в диапазоне от приблизительно 25 до приблизительно 60 RFU/с/мг антитела, как это измеряют посредством анализа кинетики катепсина L.
48. Способ по п.46, где проскок обладает активностью катепсина L в диапазоне от приблизительно 0,4 до приблизительно 4 RFU/с/мг антитела, как это измеряют посредством анализа кинетики катепсина L.
49. Способ по п.46, где второй элюат обладает активностью катепсина L в диапазоне от приблизительно 0,5 до приблизительно 1,5 RFU/с/мг антитела, как это измеряют посредством анализа кинетики катепсина L.
50. Способ по любому из п. 46, где уровень прокатепсина L является воспроизводимо низким.
51. Способ по любому из пп.1-45, где антитело представляет собой антитело против фактора некроза опухоли-альфа (TNFα) или его антигенсвязывающую часть.
52. Способ по п.51, где антитело против TNFα или его антигенсвязывающая часть представляет собой гуманизированное антитело, химерное антитело или мультивалентное антитело.
53. Способ по п.51, где антитело против TNFα или его антигенсвязывающая часть представляет собой инфликсимаб или голимумаб.
54. Способ по п.51, где антитело против TNFα или его антигенсвязывающая часть представляет собой антитело человека.
55. Способ по п.54, где антитело против TNFα или его антигенсвязывающая часть выбраны из группы, состоящей из
D
off
50
-8
-3
-1
-7
in vitro
(а) выделенного антитела человека, которое диссоциирует от TNFα человека с K 1·10 M или менее и константой скорости K 1·10 с или менее, обе определены посредством поверхностного плазмонного резонанса, и нейтрализует цитотоксичность TNFα в общепринятом анализе  L929 с IC 1·10 M или менее;
(b) выделенного антитела человека со следующими характеристиками:
off
-3
-1
i) диссоциирует от TNFα человека с константой скорости K 1·10 с или менее, как определено посредством поверхностного плазмонного резонанса;
ii) обладает доменом CDR3 легкой цепи, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3, или модифицированную из SEQ ID NO:3 посредством одиночной замены на аланин в положении 1, 4, 5, 7 или 8, или посредством от одной до пяти консервативных аминокислотных замен в положениях 1, 3, 4, 6, 7, 8 и/или 9;
iii) обладает доменом CDR3 тяжелой цепи, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, или модифицированную из SEQ ID NO:4 посредством одиночной замены на аланин в положении 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 или 11 или посредством от одной до пяти консервативных аминокислотных замен в положениях 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 и/или 12;
(c) выделенного антитела человека с вариабельной областью легкой цепи (LCVR), содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, и вариабельной областью тяжелой цепи (HCVR), содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2; и
(d) адалимумаба.
56. Фармацевтическая композиция, содержащая препарат антитела с уменьшенным уровнем HCP, полученный с использованием способа по любому из пп.1-45, и фармацевтически приемлемый носитель.
57. Фармацевтическая композиция по п.56, где препарат антитела с уменьшенным уровнем HCP включает не более чем приблизительно 70 нг HCP на мг антитела, как измерено посредством ELISA HCP, и фармацевтически приемлемый носитель.
58. Фармацевтическая композиция по п.57, где уровень HCP составляет не более чем приблизительно 13 нг HCP на мг антитела, как измерено посредством ELISA HCP.
59. Фармацевтическая композиция по п.57, где уровень HCP составляет не более чем приблизительно 5 нг HCP на мг антитела, как измерено посредством ELISA HCP.
60. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело с уменьшенным уровнем прокатепсина L и фармацевтически приемлемый носитель, где уровень прокатепсина L составляет не более, чем активность катепсина приблизительно 3,0 RFU/с/мг антитела.
61. Фармацевтическая композиция по любому из пп.56-60 и, где антитело представляет собой антитело против фактора некроза опухоли-альфа (TNFα) или его антигенсвязывающую часть.
62. Способ лечения нарушения, при котором активность TNFα является неблагоприятной, включающий в себя введение человеку композиции по п.61.
63. Изделие, содержащее упаковочный материал, состав с адалимумабом и этикетку или вкладыш, содержащиеся внутри упаковочного материала, указывающие, что состав с адалимумабом содержит количество НСР, выбранное из группы, состоящей из: не более чем приблизительно 70 нг HCP на мг адалимумаба, не более чем приблизительно 13 нг HCP на мг адалимумаба и не более чем приблизительно 5 нг HCP на мг адалимумаба.
64. Изделие, содержащее упаковочный материал, состав с адалимумабом и этикетку или вкладыш, содержащиеся внутри упаковочного материала, указывающие, что состав с адалимумабом содержит уровень прокатепсина L не превышающий тот, на который указывает активность катепсина L приблизительно 3,0 RFU/с/мг адалимумаба.