СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДНК-ВАКЦИНЫ ДЛЯ ИММУНОТЕРАПИИ РАКА

1. Способ получения ДНК-вакцины для иммунотерапии рака, включающий по меньшей мере следующие этапы:
a) трансформацию ослабленного штамма Salmonella по меньшей мере одной молекулой ДНК, содержащей по меньшей мере одну кассету экспрессии, кодирующую по меньшей мере один антиген или по меньшей мере один фрагмент антигена;
b) определение характеристик по меньшей мере одного клона трансформированной клетки, полученного на этапе (а);
c) отбор по меньшей мере одного из клонов трансформированной клетки, охарактеризованных на этапе (b), и дополнительное определение характеристик указанного по меньшей мере одного выбранного клона трансформированной клетки.
2. Способ по п. 1, в котором ослабленным штаммом Salmonella является вид Salmonella enterica, в частности Salmonella typhi, более конкретно Salmonella typhi Ту21а.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором кассетой экспрессии является эукариотическая кассета экспрессии.
4. Способ по любому из пп. 1-3, в котором указанный антиген выбран из группы, состоящей из антигена опухоли и антигена опухолевой стромы, в частности выбран из группы, состоящей из антигена опухоли человека и антигена опухолевой стромы человека, более конкретно выбран из группы, состоящей из антигена опухоли дикого типа человека, белка, идентичность последовательности которого по меньшей мере на 80% совпадает с антигеном опухоли дикого типа человека, антигена опухолевой стромы дикого типа человека и белка, идентичность последовательности которого по меньшей мере на 80% совпадает с антигеном опухолевой стромы дикого типа человека.
5. Способ по любому из пп. 1-4, в котором указанная по меньшей мере одна молекула ДНК содержит ген устойчивости к антибиотику канамицину, pMB1 ori и эукариотическую кассету экспрессии, кодирующую указанный антиген под контролем промотора CMV, в частности в котором указанной молекулой ДНК является плазмида ДНК, более конкретно в котором плазмида ДНК содержит последовательность нуклеиновой кислоты, как представлено в SEQ ID NO 1.
6. Способ по любому из пп. 1-5, в котором на этапе (а) указанный ослабленный штамм Salmonella трансформируют электропорацией указанной по меньшей мере одной молекулой ДНК, содержащей по меньшей мере одну кассету экспрессии, кодирующую по меньшей мере один антиген или по меньшей мере один фрагмент антигена.
7. Способ по любому из пп. 1-6, в котором этап (b) включает в себя по меньшей мере один из следующих подэтапов:
bi) оценку роста клеток по меньшей мере одного клона трансформированной клетки, полученного на этапе (а), на протяжении времени;
bii) оценку стабильности по меньшей мере одной молекулы ДНК, содержащей по меньшей мере одну кассету экспрессии, кодирующую по меньшей мере один антиген или по меньшей мере один фрагмент антигена в по меньшей мере одном клоне трансформированной клетки, полученном на этапе (а);
biii) выделение по меньшей мере одной молекулы ДНК, содержащей по меньшей мере одну кассету экспрессии, кодирующую по меньшей мере один антиген или по меньшей мере один фрагмент антигена, из по меньшей мере одного клона трансформированной клетки, полученного на этапе (а), и определение характеристик по меньшей мере одной выделенной молекулы ДНК посредством рестрикционного анализа и/или секвенирования;
biv) выделение по меньшей мере одной молекулы ДНК, содержащей по меньшей мере одну кассету экспрессии, кодирующую по меньшей мере один антиген или по меньшей мере один фрагмент антигена, из по меньшей мере одного клона трансформированной клетки, полученного на этапе (а), трансфекцию по меньшей мере одной выделенной молекулы ДНК по меньшей мере в одну эукариотическую клетку и оценку экспрессии по меньшей мере одного антигена или по меньшей мере одного фрагмента антигена в указанной по меньшей мере одной эукариотической клетке.
8. Способ по п. 7, в котором этап (b) включает в себя один, два, три или все четыре из указанных подэтапов (bi), (bii), (biii) и (biv).
9. Способ по любому из пп. 1-8, в котором этап (с) включает в себя по меньшей мере один из следующих подэтапов:
ci) оценку количества жизнеспособных клеток на мл клеточной суспензии по меньшей мере одного клона трансформированной клетки, выбранного на этапе (с);
cii) оценку стабильности по меньшей мере одной молекулы ДНК, содержащей по меньшей мере одну кассету экспрессии, кодирующую по меньшей мере один антиген или по меньшей мере один фрагмент антигена в по меньшей мере одном клоне трансформированной клетки, выбранном на этапе (с);
ciii) выделение по меньшей мере одной молекулы ДНК, содержащей по меньшей мере одну кассету экспрессии, кодирующую по меньшей мере один антиген или по меньшей мере один фрагмент антигена, из по меньшей мере одного клона трансформированной клетки, выбранного на этапе (с), и определение характеристик по меньшей мере одной выделенной молекулы ДНК посредством рестрикционного анализа и/или секвенирования;
civ) выделение по меньшей мере одной молекулы ДНК, содержащей по меньшей мере одну кассету экспрессии, кодирующую по меньшей мере один антиген или по меньшей мере один фрагмент антигена, из по меньшей мере одного клона трансформированной клетки, выбранного на этапе (с), трансфекцию по меньшей мере одной выделенной молекулы ДНК в по меньшей мере одну эукариотическую клетку и оценку экспрессии по меньшей мере одного антигена или по меньшей мере одного фрагмента антигена в указанной по меньшей мере одной эукариотической клетке;
cv) испытание на наличие бактериальных, грибковых и/или вирусных контаминаций в по меньшей мере одном клоне трансформированной клетки, выбранном на этапе (с);
cvi) верифицирование идентичности бактериального штамма по меньшей мере одного клона трансформированной клетки, выбранного на этапе (с).
10. Способ по п. 9, в котором этап (с) включает в себя один, два, три, четыре, пять или все шесть из указанных подэтапов (ci), (cii), (ciii), (civ), (cv) и (cvi).
11. Способ по п. 9 или 10, в котором на этапе (с) испытание на наличие бактериальных и/или грибковых контаминаций выполняют выращиванием по меньшей мере одного клона трансформированной клетки, выбранного на этапе (с), в по меньшей мере одной подходящей селективной среде или на по меньшей мере одной подходящей селективной среде.
12. Способ по пп. 9-11, в котором на этапе (cvi) идентичность бактериального штамма верифицируют выращиванием по меньшей мере одного клона трансформированной клетки, выбранного на этапе (с), на галактозной агаре с бромтимоловым синим и/или на агаре Клиглера с железом, и/или оценкой наличия O5- и/или O9-поверхностного антигена (антигенов) Salmonella.
13. ДНК-вакцина, полученная способом по любому из пп. 1-12.
14. Применение ДНК-вакцины по п. 13 в иммунотерапии рака.
15. Применение по п. 14, в котором иммунотерапия рака включает в себя персонализированную иммунотерапию рака.