2
РАВНОМЕРНОМЕЧЕННЫЙ ТРИТИЕМ ПИРО-Glu-His-Pro-NH
2
UNIFORMLY TRITIUM-LABELLED PYRO-Glu-His-Pro-NH

Изобретение относится к области органической химии и может найти применение в аналитической химии и биологических исследованиях.
При изучении физиологически активных соединений необходимы их меченые аналоги.
Известно, что замена атомов соединений на их меченые аналоги не приводит к изменению каких-либо свойств исходного соединения (Evans Е.А. - Tritium and its compounds London Butterworths, 1974, p.48) [1].
2
Известен пиро-Glu-His-Pro-NH формулы:
2
2
пиро-Glu-His-Pro-NH - пептидный гормон гипоталамуса (Е.А. Nillni, К.А. Sevarino. // Endocrine Reviews, 1999, V. 20, No 5, P.599-648 [2]; R.O'Leary, B.O'Connor. // J. Neurochem., 1995, V. 65, P.953-963 [3]; N. Shibusawa, K. Hashimoto, M. Yamada. // The Cerebellum, 2008, P.84-95 [4]; J. Boler, F. Enzmann, K. Folkers, C. Y. Bowers, A. V. Serially. //Biochem. Biophys. Res. Commun., 1969, V. 37, P. 705-710 [5]; V. Monga, C.L. Meena, N. Kaur, R. Jain. //Current Medicinal Chemistry, 2008, V. 15, P.2718-2733 [6]). Данный гормон является нейропептидом, он принимает участие в нормализации некоторых психических функций организма человека. Например, установлено наличие антидепрессивного действия экзогенного пиро-Glu-His-Pro-NH при депрессиях. Основная химико-биологическая функция данного гормона заключается в усилении производства пролактина и в большей степени - усилении производства тиреотропного гормона передней долей гипофиза.
Однако его равномерномеченный тритием аналог не описан.
Техническим результатом, достигаемым настоящим изобретением, является расширение ассортимента меченых аналогов физиологически активных соединений.
2
Достигается указанный технический результат получением равномерномеченного тритием пиро-Glu-His-Pro-NH формулы I:
Ниже приведен пример реализации изобретения.
Пример I
2
2
3
Раствором 5 мг пиро-Glu-His-Pro-NH в 75 мкл метанола пропитывали 150 мг окиси алюминия и лиофилизировали. Высушенный остаток механически перемешивали с 10 мг 5% Pd/AlO. В ампулу помещали 66 мг смеси, вакуумировали и заполняли газообразным тритием до давления 400 гПа. Реакцию вели при 200°C в течение 15 мин. Ампулу снова вакуумировали, катализатор наносили на фильтр, вещество экстрагировали метанолом (5×0.5 мл). Экстракты упаривали, остаток растворяли в метаноле (3×1 мл) и вновь упаривали для удаления лабильного трития. Конечный метанольный раствор содержал 180 мКи пептида.
2
2
Анализ проводили на колонке Reprosil pur C18aq, 4*150 мм, 5 мкм, скорость потока - 1 мл/мин, А - вода с 0.1% гептафтормасляной кислотой, Б - метанол, градиент Б→0-30% за 15 мин: время удерживания пиро-Glu-His-Pro-NH - 11.54 мин. Равномерномеченный пиро-Glu-His-Pro-NH очищали препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографией.
18
Хроматографию проводили на колонке Kromasil 100C, 8×150 мм, 7 мкм, система: А - вода с 0.1% гептафтормасляной кислотой, Б - метанол, градиент Б→0-50% за 30 мин, скорость потока - 2 мл/мин. В результате получен меченый пептид с 75% радиохимической чистотой (80 мКи).
2
После повторной очистки радиохимическая чистота равномерномеченного пиро-Glu-His-Pro-NH - не менее 98%, выход - 15-20%, молярная радиоактивность - 75 Ки/ммоль.
2
Таким образом, получен равномерномеченный тритием пиро-Glu-His-Pro-NH.