Роль иммунорегуляторных цитокинов в патогенезе хронического гастрита и язвенной болезни, поиск предикторов заболеваний

ЛИТЕРАТУРА

1. Бугун О.В. Клинико-патогенетические варианты артериальной гипертензии у детей и подростков и обоснование рациональной терапии и реабилитационных программ: Дисс. ... д-ра мед. наук. - Иркутск, 2008. - 412 с.

2. ДолгихВ.В., КолесниковаЛ.И. Патогенез эссенциальной артериальной гипертензии у детей. - Иркутск: Изд-во ВСНЦ СО РАМН, 1999. - 220 с.

3. Подчерняева Н. Тромбоз в педиатрической практике. // Врач.- 2006. - №9. - С.20-23.

4. Чупрова А.В., Хозяинова Ж.В., Соловьев О.Н., Яхонтов Д.А. Состояние системы свертывания крови при артериальной гипертензии у детей // Педиатрия. - 1998. - №6. - С.48-52.

5. Keskin A., Tombuloglu M., Buyukkececi F ИЬипо1Шс

activity and platelet release reaction in essential hypertension // Jpn Heart J. - 1994. - Vol. 35. №6. - P.757-763.

6. Kjeldsen S.E., Julius S., Hender T., et al. Stroke is more common than myocardial infarction in hypertension analysis based on 11 major randomized intervention trials // Blood Press. - 2001. - Vol. 10. - P.190-192.

7. Salomaa V., Rasi V., Kulantinal S., et al. Haemostatic factors a predictors of coronary events and total mortality // Arteriosclerosis, Thrombosis Vascular Bioligy. - 2002. - Vol. 22. №2. - P.353-358.

8. Spenser C.G.C., Gurney D., Blann A.D., et al. Platelet and haemoreological markers in high risk hypertensives are improved by tighter blood pressure control and factor modification // Clinical Sciens. - 2000. - Vol. 9. №2. - P. 17.

Информация об авторах: e-mail: marina_gomellya@mail.ru, Гомелля Марина Владимировна - к.м.н., ассистент; Долгих Владимир Валентинович - заместитель директора по науке, главный врач клиники, д.м.н., профессор; Филиппов Евгений Семёнович - заведующий кафедрой, д.м.н., профессор; Рычкова Любовь Владимировна -заведующая отделом экологической педиатрии, д.м.н.

© ШТЫГАШЕВА О.В., АГЕЕВА Е.С., ИПТЫШЕВ В.М. - 2011 УДК 616.98:579.835.12

РОЛЬ ИММУНОРЕГУЛЯТОРНЫХ ЦИТОКИНОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ ХРОНИЧЕСКОГО ГАСТРИТА И ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ, ПОИСК ПРЕДИКТОРОВ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Ольга Владимировна Штыгашева, Елизавета Сергеевна Агеева, Виктор Михайлович Иптышев (Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова, г. Абакан, ректор - д.м.н. О.В. Штыгашева, кафедра внутренних болезней, зав. - д.м.н. О.В. Штыгашева, кафедра фундаментальной медицины и гигиены,

зав. - к.м.н. Е.С. Агеева)

Резюме. Определены уровни IL-2 и IL-б в сыворотке крови у коренных жителей Республики Хакасия, больных язвенной болезнью и хроническим гастритом, ассоциированных с Helicobacter pylori. Изучено распределение генотипов полиморфных локусов генов -330 T/G IL-2, -174 G>C IL-б. Генотипирование проводили методом полимеразной цепной реакции с использованием рестрикционного анализа. Обсуждается целесообразность определения популяционных рисковых и протективных генотипов развития Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний у хакасов.

Ключевые слова: полиморфизм генов, иммунный ответ, Helicobacter pylori, язвенная болезнь, хакасы

THE ROLE OF IMMUNOREGULATORY CYTOKINES IN PATHOGENESIS OF CHRONIC GASTRITIS AND PEPTIC ULCER, SEARCH FOR DISEASE PREDICTORS

O.V Shtygasheva, E.S. Ageeva, V.M. Iptyshev

Summary. The IL-2 and IL-б levels have been defined in the blood serum of patients with peptic ulcer and chronic gastritis associated with Helicobacter pylori. Distribution of genotypes of polymorphous genes locus -330 T/G IL-2, -174 G>C IL-б has been studied. All patients are aboriginal inhabitants of the Republic Khakasia. Analysis of genes polymorphism was performed using PCR and RFLP methods. The expediency of population risk and protective genotypes determination in Khakas patients with Helicobacter pylori has been discussed.

Key words: gene polymorphism, immune response, Helicobacter pylori, peptic ulcer, Khakas.

Известно, что способность давать адекватный иммунный ответ является отражением генетической структуры макроорганизма [8]. Наиболее распространенным вариантом наследственной предрасположенности является сочетание у индивида аллелей генов, совокупный эффект которых определяет особенности иммунитета, повышающих риск развития инфекционных заболеваний [3,7]. Различные исследования конкретных аллельных вариантов, ассоциированных с той или иной формой заболевания, противоречат друг другу. Возможным объяснением этому является наличие популяционно-зависимых ассоциаций между аллелями генов и особенностями клинических проявлений [9,11].

Интерлейкины являются неотъемлемыми участниками иммунных реакций. В частности, функции ^-2 заключаются в направленной дифференцировке и пролиферации ТЬ1-лимфоцитов, стимуляции №К-клеток. В литературе обсуждается участие ^-2 в H. pyloп-индуцированном иммунном ответе, в связи с тем, что данный цитокин является фактором, приводящим к атрофии и ингибированию желудочной секреции.

Синтез IL-2 особенно активен у больных с преобладанием эрозивно-язвенных изменений слизистой [4].

Другим иммунорегуляторным цитокином, ключевым медиатором Thj-пути, является IL-6 [13]. IL-6 способствует переключению синтеза IgM на IgG, являясь фактором дифференцировки В-клеток [12]. Имеет большое значение в инициации опухолевого роста [10]. Вырабатывается в ответ на антигенную стимуляцию H. pylori, максимальная секреция IL-6 эпителиоцитами желудка достигается через 12 ч.

Целью работы является анализ ассоциаций хронического гастрита и язвенной болезни с полиморфизмом генов иммунорегуляторных цитокинов -330 T/G IL-2 и -174 G>C IL-6 у больных с H. pylori персистенцией, коренных жителей Республики Хакасия.

Материалы и методы

Объект исследования - больные язвенной болезнью (n=21) и хроническим гастритом (n=34), хакасов (монголоиды, коренные жители Республики Хакасия). Средний возраст - 42,9 лет. Группу контроля составили

35 здоровых доноров добровольцев, сопоставимых по полу и возрасту.

Наличие H. pylori определяли при помощи морфологического, быстрого уреазного и серологического методов.

Оценку уровня цитокинов (IL-2 и IL-6) в сыворотке крови проводили методом ИФА по инструкции, предлагаемой фирмой-производителем тест-систем («Протеиновый контур», Россия) на микропланшетном фотометре ImmunoChem 2100 («ThermoLabSistems», Финляндия).

Для исследования аллельных полиморфизмов генов ДНК выделяли из венозной крови методом фенол-хлороформной экстракции. Амплификацию проводили с использованием праймеров и ферментов рестрикции, представленных в таблице 1 («Сибэнзим», г. Новосибирск). ПЦР-продукты анализировали с помощью электрофореза в 4% агарозном геле. В качестве маркера размера ДНК использовали плазмиду pUC19, расщепленную рестриктазой MspI (табл. 1).

В работе с обследуемыми соблюдались этические принципы, предъявляемые ст.24 Конституции РФ и Хельсинской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (World Medical Association Declaration of Helsinki, 1964). Все больные были ознакомлены и подписали информированное согласие, подтверждающее их добровольное участие в исследовании.

Нормальность распределения результатов исследования оценивали с использованием теста Колмогорова-Смирнова. Для проверки статистической значимости различий показателей в сравниваемых группах использовали t-критерий Стьюдента.

В случае отсутствия нормальности распределения использовали критерии Вилкоксона и Манна-Уитни. Результаты измерений представлены в виде M±m, где «М» - среднее арифметическое, а «m» -относительная ошибка, n - величина выборки. Различия между группами считали значимыми для р<0,05. Сравнение частот аллелей проводили с помощью критерия х2 с поправкой Йейтса на непрерывность, анализ ассоциации полиморфизмов с хроническим гастритом и язвенной болезнью - с помощью критерия отношения шансов (OR - odd ratio). Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез р=0,05.

Результаты и обсуждение

Проведенное эпидемиологическое исследование распространенности язвенной болезни у коренных и пришлых жителей Республики Хакасии показало, что при высокой инфицированности H. pylori (95,4% среди европеоидов и 95,2% среди монголоидов) имеются выраженные различия показателей заболеваемости среди представителей этих этнических популяций (8,1% и 4,5% соответственно) [5,6]. Обнаруженные нарушения соотношения клеточного и гуморального звеньев иммунитета свидетельствуют о существенной роли популяционных особенностей иммунного реагирования в патогенезе H. pylori-ассоциированных заболеваний [1,2].

Изучение цитокинового спектра в сыворотке крови у хакасов показало, что уровень ^-2 был наименьшим у больных язвенной болезнью - 29±2,1 пг/мл по сравнению с уровнем интерлейкина в группе больных хроническим гастритом 132,8±14,9 пг/мл (р<0,05) и в контроле 219,3±213,8 пг/мл (р<0,05). Концентрация ^-6 не отличалась у больных хроническим гастритом и язвенной болезнью по сравнению с контролем (30,9±8,1 пг/ мл, 34,5±11,9 пг/мл и 32,7±15,1 пг/мл соответственно).

При анализе полиморфизма промоторной области гена ^-2 в точке -330 Т/О среди здорового коренного населения было показано, что гомозиготный ТТ-330 ^-2 и гетерозиготный GG-330 ^-2 генотипы представлены одинаково (табл. 2).

Среди хакасов, больных язвенной болезнью и хроническим гастритом, увеличивалась доля GG-330 ^-2, при чем в группе с язвенной болезнью в большей степени по сравнению с хроническим гастритом. Известно, что гомозиготный генотип GG-330 ^-2 ассоциирован с экспрессией продукта в наибольшем количестве по сравнению с вариантами TG или ТТ. Можно

предположить, что генотип GG-330 ГЬ-2 способствует развитию язвенной болезни и хронического гастрита у хакасов. Доля ТТ-330 ^-2 снижалась при язвенной болезни и еще в большей степени при хроническом гастрите по сравнению с контролем (табл. 2). Однако факт того, что данный генотип для хакасов является протек-тивным при развитии Н. ру1оп-ассоциированных заболеваний не имел статистического подтверждения.

Исследование частоты встречаемости генотипов -174 G>C ^-6 как среди контрольной группы, так и среди больных с хронически гастритом и язвенной болезнью показало, что распределение генотипов не отличалось в исследуемых группах (табл. 2). Доминирующим генотипом являлся GG-174 G>C ^-6. Доля гетерозигот GС-174 G>C ^-6 у больных хроническим гастритом и язвенной болезнью была ниже, чем в контроле, но различия не являлись значимыми. Генотип СС был самым редким у хакасов, а при хроническом гастрите данный генотип, в пределах нашего исследования, выявлен не был.

^-2 является фактором, который участвует в реализации ^-клеточных реакций. Уровень и скорость продукции цитокина может играть амбивалентную роль в патогенезе гастродуоденальной патологии. С одной стороны, эффективное воспаление слизистой оболочки желудка будет препятствовать колонизации патогена.

Таблица 1

Праймеры, используемые в работе

Полиморфизм Локализация в гене Структура праймеров, 5' ^ 3' Рестриктаза Размер продукта

-330 T/G IL-2 4q26-q27 F : CACAATATGCTATTCACATGTTCAGTTAGTCATA R : TACCTTCAI 1 1 1 ICCTCTTCTGATG FauND I ТТ-217 GT-217 и 252 GG-252

-174 G > C IL-6 7p21 F :TGA CTT CAG CTT TAC TCT TTG T R : CTG ATT GGA AAC CTT ATT AAG SfaNI GG-58 и 140 GC-58, 140 и 198 СС-198

Таблица 2

Распределение частот генотипов полиморфизмов генов -330 Т/О и 1Ь-2 -174 С >С 1Ь-6 (в %) у хакасов

Полиморфизм генов Генотип Здоровые доноры (n=35) Больные

Хронический гастрит

-330 T/G IL-2 GG 28,6 41,2 1 47,6 1

GT 37,1 41,2 28,6 2

ТТ 34,3 17,6 23,8 1

-174 С >C IL-6 GG 70,0 75,0 73,9

GC 27,1 25,0 21,7

CC 2,9 0 4,4

Примечание. 1 - р<0,05 - значимость различий показателей по сравнению со здоровыми донорами, 2 - р<0,05 - значимость различий показателей коренных и пришлых.

С другой стороны, выраженность воспаления коррелирует с деструкцией собственных тканей. Вероятно, что снижение цитокина является плохим прогностическим признаком, свидетельствующим о гибели клеток-продуцентов IL-2. Полученные нами результаты в отношении IL-6 не позволяют оценить вклад этого цитокина в патогенез хронического гастрита и язвенной болезни, и требуют дальнейшего изучения.

Таким образом, учитывая, что в контексте общей иммуногенетической концепции патогенеза хронического гастрита и язвенной болезни, ассоциированных с инфекцией H. pylori, значимыми факторами являются не только повышение или снижение уровня отдельных цитокинов, но и соотношение цитокинов с различным

ЛИТЕРАТУРА

1. Агеева Е.С., Штыгашева О.В., Рязанцева Н.В. Особенности патогенеза Helicobacter pylori-инфекции у представителей хакасской популяции // Бюллетень сибирской медицины. - 2009. - №4. - С.5-10.

2. Агеева Е.С., Штыгашева О.В., Цуканов В.В., Рязанцева Н.В. Иммунологические особенности течения гастродуоденальной патологии у жителей Хакасии // Иммунология. -2009. - №3. - С.162-165.

3. Гончарова И.А., Фрейдин М.Б., Рудко А.А. и др. Геномные основы предрасположенности к инфекционным заболеваниям // Информационный вестник Вавиловского общества генетиков и селекционеров. - 2006. - Т. 10. №3. - С.540-552.

4. Кондрашина Э.А., Калининина Н.М., Давыдова Н.И. и др. Особенности цитокинового профиля у пациентов с хроническим H. pylori-ассоциированным гастритом и язвенной болезнью // Цитокины и воспаление. - 2002. - Т. 1. №4. - С.3-11.

5. Штыгашева О.В., Цуканов В.В. Ассоциация саg A и vac A штаммов Helicobacter pylori и язвенной болезни в организованной популяции г. Абакана // Росс. журнал гастроэнтерол., гепатол. и колопроктол. - 2004. - №2. - С.84-87.

6. Штыгашева О.В., Цуканов В.В. Распространенность инфекции Helicobacter pylori и частота диспептических жалоб у населения Хакасии // Российский журнал гастроэнтерол.,

их биологическим действием, можно заключить следующее. В проведенном исследовании не установлена протекторная роль полиморфизмов генов -330 T/G IL-2 и -174 G>C IL-6 в развитии язвенной болезни и хронического гастрита, ассоциированных с инфекцией H. pylori у хакасов. В тоже время поиск предикторов заболеваний, может быть полезным в углубленном изучении сочетания (ансамблей) генотипов (гаплотипов) в патогенезе этих заболеваний. Данные о распределении полиморфизмов генов -330 T/G IL-2 и -174 G>C IL-6, полученные для конкретной этнической группы - хакасов, в результате нашего исследования являются пионерскими и могут быть важны для понимания феномена консервации штаммов H. pylori в популяции хакасов [6].

гепатол. и колопроктол. - 2004. - №2. - С.33-36.

7. Casanova J.-L., Abel L. Genetics dissection of immunity to micobacteria: the human model // Ann. Rev. Immunol. - 2002. -Vol. 20. - P581-620.

8. Frodham A.J., Hill A.V.S. Genetics of infectious disease // Hum. Mol. Genet. - 2004. - Vol. 13. - R187-R194.

9. Landi S., Moreno V., Gioia-Patricola L., et al. Association of common polymorphisms in inflammatory genes interleukin (IL) 6, IL8, tumor necrosis factor-CV, NF-a;B1, and peroxisome proliferator-activated receptor Twith colorectal cancer // Cancer Res. - 2003. - Vol. 63. - P.3560-3566.

10. Litovkin K.V., Domenyuk V.P., Bubnov V.V., Zaporozhan V.N. Interleukin-6 -174G/C polymorphism in breast cancer and uterine leiomyoma patient: a population-based case control study // Exp. Oncol. - 2007. - Vol. 29. №4. - P295-298.

11. McCarron S.L., Edwards S., Evans P.R., et al. Influence of cytokine gene polymorphisms on the development of prostate cancer // Cancer Res. - 2002. - Vol. 62. - P.3369-3372.

12. Papanicolaou D.A., Wilder R.L., Manolagas .C., et al. The pathological roles of interleukin-6 in human disease // Ann Intern. Med. - 1998. - Vol. 128. - P127-137.

13. Smith K.S., Bateman A.C., Fussell H.M., et al. Cytokine gene polymorphism and breast cancer susceptibility and prognosis // Eur. J. Immunogenet. - 2004. - Vol. 31. - P167-173.

Информация об авторах: б55017, Республика Хакасия, г. Абакан, ул. Ленина, 90, тел. (3902) 243018; факс: (3902) 243573, e-mail: olgashtygasheva@rambler.ru, Ageevaeliz@rambler.ru, Штыгашева Ольга Владимировна - ректор, заведующая кафедрой, д.м.н.; Агеева Елизавета Сергеевна - заведующая кафедрой, к.м.н.;

Иптышев Виктор Михайлович - преподаватель.

© КУЛИКОВ Л.К., БУСЛАЕВ О.А., ШАЛАШОВ С.В., ЦЫБИКОВ С.Г., МИХАЙЛОВ А.Л., ЕГОРОВ И.А., АНТОНОВ В.Н., СОБОТОВИЧ В.Ф., ПРИВАЛОВ Ю.А. - 2011

ХИРУРГИЯ ПОСЛЕОПЕРАЦИОННЫХ ГРЫЖ - НОВОЕ РЕШЕНИЕ

Леонид Константинович Куликов1, Олег Александрович Буслаев2, Сергей Владимирович Шалашов2, Сергей Гармажапович Цыбиков2, Александр Леонидович Михайлов2, Иван Александрович Егоров2, Валерий Николаевич Антонов2, Владимир Филиппович Соботович1, Юрий Анатольевич Привалов1 ('Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, ректор - д.м.н., проф. В.В. Шпрах; 2НУЗ «Дорожная клиническая больница на ст. Иркутск-пассажирский ОАО «РЖД», гл. врач - к.м.н.

Е.А. Семенищева)

Резюме. Разработан метод комбинированной пластики при послеоперационных вентральных грыжах в варианте «Inlay» и «Sublay». Существенным отличием от традиционных методик является характер фиксации сетчатого протеза в тканях. При этом протез не подшивают к тканям, а фиксируют при помощи полосок, выкроенных по его краям. Подробно изложена техника операции. Показаны преимущества представленного метода, результаты его использования на практике.

Ключевые слова: послеоперационная грыжа, герниопластика, раскроенный сетчатый протез.

INCISIONAL HERNIA SURGERY - A NEW SOLUTION

L.K. Kulikov1, O.A. Buslaev2, S.V Shalashov2, S.G. Tsybikov2, A.L. Mihailov2, I.A. Egorov2,

V.N. Antonov2, V.F. Sobotovich1, U.A. Privalov1 ('Irkutsk State Institute for Postgraduate Medical Education; 2Railway Clinic at The Irkutsk Railway

Station of JSC «Russian Railroads»)

Summary. It has been worked out the method of combined incisional hernia repair and abdominoplasty in variations of “Inlay” and “Sublay”. The significant difference from traditional methods is the type of fixation of the mesh repair in tissues. During these operations the mesh repair is not sewn underneath, but fixed with the help of straps cut out by its size. The