Сравнительный анализ выживаемости типичных штаммов и штаммов геновариантов Vibrio cholerae биовара Эль Тор in vitro и in vivo

УДК 616.932

С.П.Заднова, Т.А.Кульшань, Н.Б.Челдышова, А.А.Крицкий, Н.А.Плеханов, Н.И.Смирнова

сравнительный анализ выживаемости типичных штаммов и штаммов геновариантов vibrio cholerae биовара эль тор in vitro и in vivo

ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», Саратов,

Российская Федерация

Цель исследования состояла в проведении экспериментов по изучению выживаемости токсигенных штаммов геновариантов V. cholerae биовара Эль Тор в автоклавированной речной воде и организме лабораторных животных в сравнении с типичными штаммами. В результате установлено, что в автоклавированной речной воде ге-новарианты так же, как и типичные Эль Тор вибрионы выживали длительное время (свыше пяти месяцев). При этом количество микробных клеток в популяции типичных штаммов со временем уменьшалось, в то же время в штаммах геновариантов в период между 7-ми и 21-ми сутками наблюдался рост штаммов. На 7-е сутки КОЕ штаммов геновариантов превышало количество бактерий типичных штаммов в 1,5-2,5 раза, на 21-е - в 1,8-3,0 раза. Селективное преимущество геновариантов было также подтверждено при постановке конкурентной пробы in vitro (речная вода) с типичными штаммами. Геноварианты доминировали над типичными штаммами V. cholerae биовара Эль Тор и в смешанной популяции in vivo (биопробные животные). Так, КОЕ штаммов геновариантов при высеве кишечного содержимого и гомогената кишечной стенки превышало число клеток типичных штаммов в 1,25-84,0 раза. Высказано предположение, что одной из причин селективного преимущества геновариантов может быть их более высокий уровень адаптации в результате изменения метаболической активности клеток. Выявленная способность токсигенных штаммов геновариантов не только длительное время сохраняться в водоемах нашей страны, но и размножаться в них создает неблагоприятный прогноз по холере.

Ключевые слова: геноварианты V. cholerae биовара Эль Тор, выживаемость, речная вода, лабораторные животные.

S.P.Zadnova, T.A.Kul'shan', N.B.Cheldyshova, A.A.Kritsky, N.A.Plekhanov, N.I.Smirnova

Comparative Analysis of Survival Capacity among Typical and Genovariant Strains of Vibrio cholerae, Biovar El Tor in vivo and in vitro

Russian Research Anti-Plague Institute "Microbe", Saratov, Russian Federation

Objective of the study was to conduct experiments on survival capacity of toxigenic genovariant strains as compared to typical strains of V. cholerae, biovar El Tor in autoclaved river water and in the organism of laboratory animals. Consequently, it was determined that both, genovariant and typical El Tor vibrios, sustained for a significant period of time (more than 5 months) in the river water, though a number of the bacterial cells in the population of the typical ones gradually decreased, while in the genovariant strains - the growth was observed in between the 7th and 21st day. CFU of the genovariants was 1.5-2.5 and 1.8-3.0 times higher than the amount of typical strain bacteria on the day 7 and day 21, respectively. Selective advantage of genovariants was also confirmed by competitive test in vitro. Furthermore, genovariants dominated over typical strains of V. cholerae, biovar El Tor in the mixed population in vivo (bioassay animals): CFU of the genovariants 1.25-84.0 times exceeded that of the typical strains when seeding out the contents of intestine and gastrointestinal wall homogenate. Put forward was an assumption that one of the factors for genovariant selective advantage might be enhanced adaptation ability affected by changes of cell metabolic activity. Identified capacity of geno-variant toxigenic strains - not only to sustain in open water bodies of our country, but also to propagate in there, creates unfavorable epidemiological situation on cholera.

Key words: genovariants of Vibrio cholerae, biovar El Tor, survival capacity, river water, laboratory animals.

Способность выживать и размножаться в различных условиях внешней среды является одним из важных свойств многих патогенных бактерий и предпосылкой для развития инфекционных болезней. К данной группе патогенов относится и холерный вибрион - Vibrio cholerae, который может существовать как в организме человека, так и в воде открытых водоемов. При попадании в кишечник человека токси-генные штаммы V. cholerae 01 и 0139 серогрупп продуцируют факторы вирулентности, необходимые для преодоления защитной системы хозяина, и вызывают холеру - особо опасную инфекционную болезнь, характеризующуюся профузной диареей и способной к быстрому эпидемическому распространению. Во

внешней среде активно экспрессируются гены пер-систенции, способствующие адаптации V. с^1егае при смене среды обитания и выживанию в данных условиях [8, 10]. В результате интенсивного изучения вопросов экологии холерного вибриона установлено, что типичные токсигенные штаммы V. с^1егае биовара Эль Тор, вызвавшие начало текущей, 7-й, пандемии холеры в отличие от штаммов V. с^1егае классического биовара (возбудителя предыдущей 6-й пандемии холеры) способны быстро адаптироваться при смене среды обитания и длительное время сохранятся во внешней среде [1, 2, 7, 8, 11].

в настоящее время возбудителями холеры являются токсигенные штаммы геновариантов

V. с^1ете биовара Эль Тор, содержащих в профа-ге вирулентности СТХф классический аллель гена МхВ (или МхВ1) и отличающихся от типичных Эль Тор вибрионов повышенной вирулентностью [12]. Геноварианты V. сЫ1ете биовара Эль Тор получили глобальное распространение в мире, вытеснив на эндемичной территории типичные штаммы, и с 1993 г. явились причиной всех вспышек и спорадических случаев холеры, зарегистрированных в Российской Федерации [3, 5, 6]. В последние годы (2005, 2011, 2014) геноварианты обнаруживаются и при мониторинговых исследованиях в воде открытых водоемов на разных территориях россии [4]. При этом, несмотря на активно проводимый молекулярно-генетический анализ, вопросы экологии штаммов геновариантов изучены недостаточно. в связи с вышеизложенным цель нашего исследования состояла в проведении экспериментов по изучению выживаемости токсигенных штаммов ге-новариантов V. сЫ1егае биовара Эль Тор в автокла-вированной речной воде и организме лабораторных животных в сравнении с типичными штаммами.

Материалы и методы

В работе были использованы 46 штаммов V. ^о1-егае биовара Эль Тор, выделенных от больных, носителей и внешней среды в 1970-2012 гг. и хранящихся в лиофилизированном состоянии в Государственной

коллекции патогенных бактерий (РосНИПЧИ «Микроб», Саратов). Среди изученных 24 штамма относились к типичным Эль Тор вибрионам, а 22 - к геновариантам V. cholerae биовара Эль Тор (табл. 1). Культивирование штаммов осуществляли на среде LB в течение 16-18 ч при температуре 37 °С.

Для определения выживаемости штаммов в водной среде из агаровой культуры каждого штамма готовили взвесь 1109 КОЕ/мл, используя в качестве стандарта отраслевой стандартный образец ОСО 42-28-59-86П. Затем 0,5 мл приготовленной взвеси помещали во флаконы с 50 мл автоклавированной речной воды.

Конкурентные способности штаммов определяли по методу R.Freter etal. [9] с модификациями путем посева смеси клеток двух сравниваемых штаммов в стерилизованную речную воду и последующего сравнения их выживаемости. Из бактериальных культур тестируемых штаммов, выращенных на LB агаре при температуре 37 °С, готовили суспензии одинаковой оптической плотности, определяя ее на спектрофотометре «Biowave DNA» (США). Полученные суспензии разводили до концентрации 1107 м.к. Взвеси сравниваемых штаммов вносили по 0,5 мл в 4,5 мл стерилизованной речной воды так, чтобы конечная концентрация каждого штамма составляла 5 106 м.к./ мл. Кроме того, параллельно каждый из сравниваемых штаммов помещали в отдельную пробирку со стерильной речной водой в той же концентрации для

Таблица 1

Штаммы V. cholerae биовара Эль Тор, использованные в работе

Штамм

Место и год выделения

Источник выделения

М818

М886, М887, М888, М889, М890,М892, М893, М905, М943, М982, М1055

М1061

М1062

Р3644, Р3646, М962 M1011 М641, М642 М1261, С402 Р14380, Р14376

М1270

М1298, М1299, М1264 М1275, М1293 М1266, М1268 Р17644, Р17645 М1326, М1328 М1344, М1345 М1429 М1430 Р18899

Л3225, Л3226, Л4150 301

М1509

Типичные штаммы Эль Тор вибрионов

Саратов, 1970

Астрахань, 1970

Астрахань, 1970 Астрахань, 1970 Астрахань, 1970, 1972 Башкирия, 1972 Астрахань, 1975 Пермь, Ставрополь,1990 Ростов-на-Дону, 1990

Геноварианты

Казань, 1993 Краснодар, 1993 Дагестан, 1993,1994 Пермь, Магнитогорск,1994 Иркутск, 1997 Дагестан, 1998 Казань, 2001 Башкирия, 2004

Тверь, 2005 Мурманск, 2006 Москва, 2010 Таганрог, 2011 Москва, 2012

Больной

Больные

Вибрионоситель

Контактный Внешняя среда Больной Контактные Больной Больной

Больной Больные Больные Больные Больные Больной Больной Больной Больной Больной Больные Внешняя среда Больной

учета характера роста и выживаемости. Высевы делали на 4-7, 8-11, 15-24 и 71-е сутки совместного культивирования тестируемых штаммов на чашки с LB агаром, содержащим соответствующий антибиотик, подсчитывая число выросших колоний.

Постановку конкурентной пробы in vivo проводили в лигированных петлях тонкой кишки взрослых кроликов [13] с небольшими модификациями. В лигированные петли длинной 10-12 см вводили 1 мл суспензии, содержащей смесь клеток двух штаммов (типичный и геновариант) в концентрации 5 106 КОЕ/мл каждого штамма. Через 24 ч после заражения животных забивали хлороформом, вскрывали брюшную полость, извлекали петли тонкого кишечника. отбирали кишечное содержимое лигиро-ванных петель и забирали их отрезки длинной 3 см. Взятые отрезки растирали в фарфоровой ступке с 1 см3 стерильного кварцевого песка и 5 мл 0,9 % раствора хлорида натрия. Затем из соответствующих разведений кишечного содержимого и растертых стенок тонкого кишечника делали высев на LB агар, содержащий определенный антибиотик, и подсчитывали число выросших колоний. Эксперименты на биомоделях проводили с соблюдением принципов гуманного обращения с лабораторными животными.

Выделение ДНК осуществляли с использованием коммерческого набора «ДНК-сорб В» в соответствии с инструкцией производителя из суспензии бактериальных клеток, предварительно обработанных мер-тиолятом натрия до конечной концентрации 1:10000 (0,01 %) и прогретых при 56 °С в течение 30 мин согласно МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». При постановке полимеразной цепной реакции использовали олигонуклеотидные праймеры, описанные ранее [6] и синтезированные в ЗАО «Синтол» (Россия). Амплификацию ДНК осуществляли на программируемом амплификаторе «Терцик» («ДНК-Технология», Россия). Полученные продукты анализировали методом электрофореза в 2 % агарозном геле.

результаты и обсуждение

На первом этапе работы все взятые штаммы были проверены с помощью ПЦР-тестирования на наличие 30 генов, входящих в состав мобильных генетических элементов (профагов СТХф (ctxA, ctxB, zot, ace, cep, orfU, rstR, rstA, rstB) и RS^ (rstC), островов патогенности VPI-1 (mop, tcpA, tcpB, aldA, tcpH, tcpP, toxT) и VPI-2 (hel1760, nanH, rep1803), островов пандемичности VSP-I (deo175, tnp0185, pro0490) и VSP-II (vc0514, vc0502) и коровой части хромосомы (mshA, attRS, toxR, rtxA, hapA). В результате установлено, что независимо от года, территории и источника выделения как типичные штаммы, так и геноварианты содержали тестируемые гены мобильных генетических элементов и коровой обла-

сти хромосомы и являлись вирулентными.

Затем исследованные штаммы были помещены в одинаковые условия, моделирующие пребывание холерных вибрионов в естественной водной среде. В качестве среды обитания использовали автоклави-рованную речную воду. Посевы инкубировали при комнатной температуре (20-22 °С), делая высевы на чашки с питательным агаром через каждые семь дней по 0,1 мл контаминированной речной воды на протяжении всего срока наблюдения. В результате установлено, что изученные штаммы геновариан-тов V. cholerae биовара Эль Тор так же, как и типичные Эль Тор вибрионы, способны длительное время (свыше пяти месяцев, срок наблюдения) выживать в речной воде при комнатной температуре. Однако ге-новарианты лучше адаптировались в данной среде. Так, нами было выявлено, что количество микробных клеток в популяции типичных штаммов со временем уменьшалось, в то же время снижение КОЕ в популяции всех изученных штаммов геновариантов происходило скачкообразно и наблюдались периоды увеличения количества высеваемых бактерий, что указывает на рост штаммов (рисунок). При этом рост штаммов наблюдался в период между 7-ми и 21-ми сутками. Так, на 7-е сутки КОЕ штаммов геновари-антов превышало количество бактерий типичных штаммов в 1,5-2,5 раза, а на 21-е - в 1,8-3,0 раза. В последующие дни количество бактерий геновариан-тов также постепенно снижалось.

Согласно данным литературы, с приобретением нового генетического материала (аллель ctxB1) в штаммах геновариантов не только повысилась вирулентность, но и изменился метаболизм клеток [15]. Выявленная нами способность штаммов гено-вариантов расти в условиях недостатка питательных веществ, возможно, связана с их лучшей адаптацией к изменяющимся условиям внешней среды. Повышение адаптационных способностей могло произойти в результате изменения метаболической активности клеток и повышения скорости их роста. Однако для подтверждения данного предположения необходимы дополнительные исследования.

5 35

7 14 21 62 76

Динамика выживаемости некоторых типичных штаммов и гено-вариантов V. cholerae биовара Эль Тор в речной воде (приведены средние данные трех экспериментов):

М818 - типичный штамм; М1266, М1298, М1429 - геноварианты

Таким образом, исследованные штаммы генова-риантов V. с^1ете биовара Эль Тор при попадании в речную воду способны не только в ней сохраняться, но и увеличивать численность популяции, в отличие от типичных штаммов, популяция которых постепенно погибала.

Учитывая, что геноварианты в настоящее время полностью вытеснили типичные штаммы V. с^1ете биовара Эль Тор на эндемичной территории, на следующем этапе исследований мы определяли конкурентную способность типичных штаммов и генова-риантов при их совместном обитании в водной среде и в организме лабораторных животных. Для проведения данных исследований были подобраны три пары токсигенных штаммов, выделенных на территории России в разные периоды текущей пандемии. Типичные штаммы (М1011, М1062, М893) были изолированы в 1970-1972 гг., штаммы геновариан-тов (М1270, Р17644, 301) - в 1993-2011 гг. (табл. 1). Предварительно для дифференциации штаммов были получены клоны, резистентные к определенному антибиотику - спектиномицину (М1270 SpR, Р17644 SpR, 301 SpR), рифампицину (М1062 ШР, М893 ШР) и канамицину (М1011 Кта). За весь период наблюдения было установлено, что в бактериальных популяциях типичные штаммы имели более низкий уровень выживаемости по сравнению с ге-новариантами (табл. 2).

Так, в конкурентной пробе М1011 Кта и М1270 SpR количество геновариантов уже на 2-е сутки превышало количество типичных штаммов в 38,8 раз. На 6-е сутки их совместной инкубации наблюдалось отсутствие роста на среде с канамицином типичных штаммов V. с^1ете биовара Эль Тор на фоне активного роста на среде со спектиномици-ном геновариантов, чья популяция сократилась незначительно. Подобная картина наблюдалась и при высеве других сравниваемых штаммов бактерий из конкурентных проб. В популяции штаммов 30^ра и М893ШР на 4-е сутки исследования уровень обоих штаммов клеток был примерно одинаковым. Однако на 18-е и 20-е сутки КОЕ типичных штаммов было соответственно в 2,5 и 3,2 раза меньше, чем генова-

риантов, а в пробе M1062RifR/P17644SpR КОЕ гено-вариантов превышало количество бактерий у типичных штаммов в указанные периоды времени в 1,7 и 11,0 раз (табл. 2).

При совместном культивировании типичных штаммов и геновариантов V. с^1ете биовара Эль Тор в речной воде при комнатной температуре уровень выживаемости геновариантов был гораздо выше, чем типичных штаммов.

Особый интерес представляло сравнение жизнеспособности типичных штаммов и геновариантов V. сЫ1ете биовара Эль Тор в организме чувствительных лабораторных животных. в связи с этим следующим этапом работы явилась постановка конкурентной пробы указанных выше пар штаммов в лигированных петлях тонкой кишки взрослых кроликов. В результате установлено, что как при высеве кишечного содержимого, так и гомогената кишечной стенки количество клеток штаммов геновариантов V. сЫ1ете биовара Эль Тор в трех изучаемых парах превышало число клеток типичных штаммов в 1,2584,0 раза (табл. 2).

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что изученные штаммы геновариантов V. сЫ1ете биовара Эль Тор способны не только длительное время выживать в речной воде, но и размножаться в ней. Увеличение численности популяции токсигенных штаммов геновариантов, отличающихся повышенной вирулентностью, при попадании их в поверхностные водоемы нашей страны в летнее время создаст реальную угрозу попадания их в организм человека и развития заболевания. Также показано, что и в речной воде, и в организме биопробных животных в смешанной популяции ге-новарианты доминируют над типичными штаммами V. сЫ1ете биовара Эль Тор уже через короткий период их совместного обитания. Возможно, одной из причин селективного преимущества геновариантов в природных популяциях является их более высокий уровень адаптации к окружающей среде по сравнению с типичными штаммами в результате изменения метаболической активности клеток. дальнейшее изучение механизмов выживания штаммов геновари-

Таблица 2

результаты определения выживаемост и типичных штаммов и геновариантов V. еНо1егае биовара Эль Тор в речной воде и в лигированных петлях тонкой кишки взрослых кроликов, по данным конкурентной пробы

Штаммы Количество КОЕ/мл*, определенное в водной среде через Кишечное содержимое, КОЕ/мл* Стенки тонкого кишечника, КОЕ/мл*

2 сут 4 сут 6 сут 18 сут 20 сут

М1011 Кт11 2,4 104 1,06104 0 0 н.о. 0,03108 0,02108

М1270 8Р11 9,32105 8,22-105 6,4104 4,5-104 н.о. 2,52-108 3,35108

М1062 RifR н.о. 2,0104 н.о. 1,05104 1,0103 0,65108 0,65108

Р17644 8р11 н.о. 6,04104 н.о. 2,5 104 1,1104 1,64108 0,87108

М893 RifR н.о. 5,1105 н.о. 1,24 1 04 1,0104 4,0106 1,64 1 08

301 8р11 н.о. 5,3105 н.о. 4,0 104 3,2 104 5,0106 2,4 1 08

Примечания: н.о. - не определяли; М1270 Р17644 301 8Р11 - геноварианты; М1011 Кт11, М1062 RifR, М893 RifR- типичные штаммы; КОЕ/мл* - средние значения 3 экспериментов.

антов, а также выявление факторов внешней среды (макроорганизма), обеспечивающих им селективное преимущество, может внести существенный вклад в понимание природы адаптационной изменчивости V. cholerae.

Авторы подтверждают отсутствие конфликта финансовых/нефинансовых интересов, связанных с написанием статьи.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Бароян О.В. Холера Эль-Тор. 2-е изд. перераб. и доп. М.: Медицина; 1971. 256 с.

2. Марамович А.С., Урбанович Л.Я., Куликалова Е.С., Шкаруба Т.Т. Роль и значение поверхностных водоемов в становлении и развитии VII пандемии холеры. Эпидемиоп. и инф. бол. 2009; 2:21-6.

3. Миронова Л.В., Бадахонов С.В., Урбанович Л.Я., Кожевникова А.С., Половинкина В.С., Куликалова Е.С., Афанасьев М.В. Молекулярно-генетический анализ эпидемически опасных штаммов Vibrio cholerae eltor, изолированных в Сибирском и Дальневосточном регионах России. Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2012; 2:13-21.

4. Москвитина Э.А., Адаменко О.Л., Крутиков В.Д., Титова С.В., Монахова Е.В., Писанов Р.В., Иванова С.М., Анисимова Г.Б. Холера: эпидемиологическая обстановка в мире в 2005-2014 гг., прогноз на 2015 г. Пробл. особо опасных инф. 2015;1:18-25.

5. Савельев В.Н., Савельева И.В., Васильева О.В., Бабенышев Б.В., Ковалев Д.А., Грижебовский Г.М., Антоненко

A.Д., Курбанов Ш.Х., Бутаев Т.М., Куличенко А.Н. Эволюция Vibrio cholerae eltor и обнаружение их генотипических вариантов на Кавказе. Пробл. особо опасных инф. 2012; 4(114):58-60.

6. Смирнова Н.И., Заднова С.П., Шашкова А.В., Кутырев

B.В. Вариабельность генома измененных вариантов Vibrio cholerae биовара Эль-Тор, изолированных на территории России в современный период. Мол. генетт., микробиол. и вирусол. 2011; 3:11-8.

7. Хайтович А.Б., Михайлова А.Е. Факторы сохранения холерных вибрионов в водоемах. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2000; 6:99-104.

8. Faruque S.M., Nair G.B. Vibrio cholerae: Genomics and Molecular Biology. Caister Academic Press; 2008.

9. Freter R., O'Brien P.C., Macsai M.S. Role of chemotaxis in the association of motile bacteria with intestinal mucosa: in vivo studies. Infect. Immun. 1981; 34(1):234-40.

10. Kaper J.B., Morris J., Levin M. Cholera. Clin. Microbiol. Rev. 1995; 8(1):48-89.

11. Lutz C., Erken M., Noorian P., Sun S., McDougald D. Environmental reservoirs and mechanism persistence of Vibrio choler-ae. Front. Microbiol. 2013; 4:375. DOI: f0.3389/fmicb.2013.00375.

12. Nair G.B., Qadri F., Holmgren J., Svennerholm A.M., Safa A., Bhuiyan N.A., Ahmad Q.S., Faruque S.M., Faruque A.S.G., Takeda Y., Sack D.A. Cholera due to altered El Tor strains of Vibrio cholerae O1 in Bangladesh. J. Clin. Microbiol. 2006; 44(11):4211-3.

13. Pierce N.F., Cray W.C., Kaper J.B., Mekalanos J.J. Determinants of immunogenicity and mechanisms protection by virulent and mutant Vibrio cholerae O1 in rabbits. Infect. Immun. 1988; 56(1):142-8.

14. Son M.S Megli C.J. Kovacikova G., Qadri F., Taylor R.K. Characterization of Vibrio cholerae Ol El Tor biotype variant clinical isolates from Bangladesh and Haiti, including a molecular genetic analysis of virulence genes. Infect. Immun. 2011; 49:3739-49.

References

1. Baroyan O.V. [Cholera El Tor]. Second edition. Updated and revised. M.: Meditsina; 1971. 256 p.

2. Maramovich A.S., Urbanovich L.Ya., Kulikalova E.S., Shkaruba T.T. [Role and significance of surface water bodies in emergence and development of the seventh cholera pandemic]. Epidemiol. Infek. Bol. 2009; 2:21-6.

3. Mironova L.V., Balakhonov S.V., Urbanovich L.Ya., Kozhevnikova A.S., Polovinkina V.S., Kulikalova E.S., Afanas'ev M.V. [Molecular-genetic analysis of epidemically hazardous Vibrio cholerae eltor strains isolated in Siberian and Far East Regions of the Russian Federation]. Mol. Genet. Mikrobiol. Virusol. 2012; 2:13-21.

4. Moskvitina E.A., Adamenko O.L., Kruglikov V.D., Titova S.V., Monakhova E.V., Pisanov R.V., Ivanova S.M., Anisimova G.B. [Cholera: epidemiological situation around the world in 2005-2014, and prognosis for 2015]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2015; 1:18-25.

5. Savel'ev V.N., Savel'eva I.V., Vasil'eva O.V., Babenyshev B.V., Kovalev D.A., Grizhebovsky G.M., Antonenko A.D., Kurbanov Sh.Kh., Butaev T.M., Kulichenko A.N. [Evolution of Vibrio cholerae El Tor and detection of their genovariants in the Caucasus]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2012; 4(114):58-60.

6. Smirnova N.I., Zadnova S.P., Shashkova A.V., Kutyrev V.V. [Genome variability in the altered variants of Vibrio cholerae, biovar El Tor, isolated in the territory of Russia in the modern period]. Mol. Genet. Mikrobiol. Virusol. 2011; 3:11-8.

7. Khaitovich A.B., Mikhailova A.E. [Factors contributing to cholera vibrio sustainability in surface water bodies]. Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 2000; 6:99-104.

8. Faruque S.M., Nair G.B. Vibrio cholerae: Genomics and Molecular Biology. Caister Academic Press; 2008.

9. Freter R., O'Brien P.C., Macsai M.S. Role of chemotaxis in the association of motile bacteria with intestinal mucosa: in vivo studies. Infect. Immun. 1981; 34(1):234-40.

10. Kaper J.B., Morris J., Levin M. Cholera. Clin. Microbiol. Rev. 1995; 8(1):48-89.

11. Lutz C., Erken M., Noorian P., Sun S., McDougald D. Environmental reservoirs and mechanism persistence of Vibrio cholerae. Front. Microbiol. 2013; 4:375. DOI: 10.3389/fmicb.2013.00375.

12. Nair G.B., Qadri F., Holmgren J., Svennerholm A.M., Safa A., Bhuiyan N.A., Ahmad Q.S., Faruque S.M., Faruque A.S.G., Takeda Y., Sack D.A. Cholera due to altered El Tor strains of Vibrio cholerae O1 in Bangladesh. J. Clin. Microbiol. 2006; 44(11):4211-3.

13. Pierce N.F., Cray W.C., Kaper J.B., Mekalanos J.J. Determinants of immunogenicity and mechanisms protection by virulent and mutant Vibrio cholerae O1 in rabbits. Infect. Immun. 1988; 56(1):142-8.

14. Son M.S., Megli C.J., Kovacikova G., Qadri F., Taylor R.K. Characterization of Vibrio cholerae O1 El Tor biotype variant clinical isolates from Bangladesh and Haiti, including a molecular genetic analysis of virulence genes. Infect. Immun. 2011; 49:3739-49.

Authors:

Zadnova S.P., Kul'shan' T.A., Cheldyshova N.B., Kritsky A.A., Plekhanov N.A., Smirnova N.I. Russian Research Anti-Plague Institute "Microbe". 46, Universitetskaya St., Saratov, 410005, Russian Federation. E-mail: rusrapi@microbe.ru

об авторах:

Заднова С.П., Кульшань Т.А., Челдышова Н.Б., Крицкий А.А., Плеханов Н.А., Смирнова Н.И. Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб». Российская Федерация, 410005, Саратов, ул. Университетская, 46. E-mail: rusrapi@microbe.ru

Поступила 03.07.15.