Динамика антител к отдельным антигенам вируса гепатита с у детей первых лет жизни

Динамика антител к отдельным антигенам вируса гепатита с у детей первых лет жизни

Л. И. Николаева, М. Н. Горошанская, Т. В. Чередниченко, О. В. Молочкова, М. И. Михайлов, В. Ф. Учайкин

ГУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М. П. Чумакова РАМН, Московская область, ГОУ ВПО Российский государственный медицинский университет, Москва

Цель данного исследования — изучение эволюции и динамики уровня антител к отдельным белкам вируса гепатита С (ВГС) у детей первых лет жизни, рожденных матерями, инфицированными данным вирусом. Под длительным наблюдением находились 32 ребенка с 2 месяцев до 2 лет жизни, 10 малышей наблюдались в паре мать-дитя. В два-три месяца жизни у детей были обнаружены ВГС-специфические антитела, направленность которых совпадала с материнскими антителами. Различия в количественном составе антител (в титрах) составили по разным антигенам от 3 до 5 разведений. Мониторинг анти-кор 1дС у 10 инфицированных и 22 незараженных детей выявил разную тенденцию изменения титров этих антител. Контроль динамики анти-кор 1дС можно использовать при выявлении ВГС-инфицированных детей. Ключевые слова: гепатит С, гуморальный ответ, новорожденные дети

Гепатит С — повсеместно распространенная инфекция, являющаяся основной причиной формирования хронических заболеваний печени как у взрослых, так и у детей. В Российской федерации число детей до 14 лет, инфицированных данным вирусом, продолжает неуклонно увеличиваться [1]. Дети первых лет жизни, рожденные ВГС-инфицированными матерями, имеющие антитела к вирусу гепатита С (ВГС), составляют особую группу. С одной стороны все они являются носителями материнских антител до определенного времени, но с другой — часть из них инфицированы вирусом.

В 80% случаев дети заражаются от своих матерей в процессе родов [2]. Возможно также внутриутробное инфицирование при использовании приборов для мониторинга плода и при длительном (более 6 часов) разрыве плодных оболочек. До конца не решен вопрос о возможности проникновения вируса через плаценту. Есть сообщение об очень редком обнаружении вируса в околоплодной жидкости, но оно не сопровождалось заражением плода [3].

По данным разных исследователей доля ВГС-инфи-цированных лиц среди беременных женщин нашей страны составляет 1,4—2,7% [4, 5]; в группе будущих матерей с урогенитальными инфекциями — 8,3—8,9% [5]; среди женщин с наркотической зависимостью — 65,5% [6]. Вероятность вертикальной передачи ВГС тем больше, чем выше вирусная нагрузка у матери [7]. Риск заражения новорожденного ребенка в среднем составляет около 5%, достигая наивысшего значения 60% у матерей с сопутствующей ВИЧ-инфекцией [7, 8].

При изучении ВГС-специфического гуморального иммунитета у детей первых лет жизни в основном изучены аспекты качественного состава антител [9, 10]. Целью данной работы является исследование эволюции и динамики уровня антител к отдельным белкам вируса гепатита С у детей, рожденных ВГС-инфицированными матерями.

Материалы и методы исследования

Тридцать два ребенка (21 мальчик и 11 девочек) в возрасте от 2 месяцев до 2 лет, без маркеров острых вирусных гепатитов А, В, О и ВИЧ-инфекции, составили анализируемую группу. Среди этих детей была выделена группа из 10 малышей, обследованных вместе с матерями.

Образцы сывороток были собраны в период с XII. 2002 г. по XII. 2004 г. и хранились в аликвотах

при —70 °С. Для выявления анти-ВГС IgG были использованы тест-системы Immunocomb HCV II assay («Ог-genics», Израиль) и РекомбиБест анти-ВГС-спектр (ЗАО «Вектор-Бест», Россия). Величины титров антител к отдельным вирусным белкам определяли в тест-системе РекомбиБест анти-ВГС-спектр при 2-кратном разведении сывороток. Анти-ВГС IgM выявляли и титровали в тест-системе РекомбиБест анти-ВГС-IgM (ЗАО «Вектор-Бест», Россия).

Активность сывороточных аланин- и аспартатами-нотрансфераз (АлАТ и АсАТ соответственно) определялась кинетическим методом. Нормальный диапазон их значений 3—40 МЕ/л.

РНК ВГС выявляли в сыворотке крови методами обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции, используя тест-набор АмплиСенс HCV-240/BKO-440 (ЦНИИ эпидемиологии, Москва).

Количественные данные выражались как среднее арифметическое значение со средней ошибкой среднего арифметического (т). Достоверность различий параметров в группах пациентов рассчитывалась по %2-критерию Пирсона с учетом поправки Йетсена [11]. Результаты считались достоверными при р < 0,05.

Результаты и их обсуждение

При первичном обследовании 32 детей установлено, что 14 малышей имели повышенные уровни печеночных ферментов, у 3 была выявлена РНК ВГС в крови, у 6 детей наблюдалась незначительная гепато-и спленомегалия. Как будет подтверждено впоследствии, 10 детей (6 мальчиков и 4 девочки) были инфицированы ВГС. В этой группе детей у 9 человек было выявлено низкое повышение активности АлАТ (среднее значение 49,2 + 6,8 МЕ/л) и АсАт (среднее значение 60,9 + 10,3 МЕ/л) и у одного ребенка — значительно повышенные АлАт (440 МЕ/л) и АсАт (400 МЕ/л). Трое ребят из этой группы имели РНК ВГС в крови.

У 4 неинфицированных детей из группы в 22 человека при первичном обследовании также были выявлены повышенные показатели активности АлАТ (среднее значение 48,8 + 12,7 МЕ/л) и АсАТ (среднее значение 56,8 + 15,8 МЕ/л). Позже будет установлено, что у этих детей была цитомегаловирусная инфекция. Но из-за наличия анти-ВГС можно было предположить гепатит С. Таким образом, у детей грудного возраста, имеющих материнские анти-ВГС, в ряде случаев

Л. И. Николаева и ар. Линамика антител к отаельным антигенам вируса гепатита с у летей первых лет жизни

Таблица 1. Величины титров специфических 1дМ и 1дС к отдельным антигенам ВГС у двух- и трехмесячных детей и их матерей

возникают трудности при постановке диагноза. Возможно, в этой ситуации может помочь дополнительный лабораторный показатель — анализ динамики антител к наиболее иммуногенному антигену ВГС — к нуклеокапсидному (кор) белку. Антитела к этому антигену являются диагностически значимыми, они позволяют уточнить фазу инфекции и контролировать течение болезни [12].

При первичном обследовании, которое обычно происходило в 2—3 месяц жизни, величины титров анти-кор 1дС имели значения: 1/20, 1/40, 1/80, 1/320, 1/640. Столь широкий набор значений титров отражает разный уровень материнских антител. Дети, инфицированные ВГС, имели более высокие титры анти-кор 1дС (1/320—1/640) во 2—3 месяц жизни, но различия между титрами инфицированных и неинфицирован-ных детей были статистически не достоверны. В первый месяц наблюдения титры анти-кор 1дС либо сохраняются стабильными, либо снижаются на 1 разведение. С трех месяцев до шести наблюдается две различные

1 Разведения

9(1/1280) * * * *

* * * * * * * * * *

7(1/320) - ч*,' *

5(1/80) *

- 4

3(1/20) -

" Время, месяц 3(1/5) - - - ___

I  I I   I   I   I   I  I I  I I

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24

Рисунок 1. Динамика анти-кор 1дС у детей, инфицированных (8) и не инфицированных (3) ВГС

тенденции в динамике анти-кор IgG у детей (рис. 1). У малышей, инфицированных в родах, происходит увеличение этих антител до титров 1/640 и у некоторых детей даже до значений 1/1280. Такое увеличение титров анти-кор IgG связано с появлением собственных детских анти-кор IgG, которые до этого момента 6ыли скрыты высоким уровнем материнских антител. У детей, не инфицированных в родах, в этот период происходит интенсивное снижение анти-кор IgG. Полное исчезновение этих антител в исследованной нами группе детей наступило в период с 7 до 16 месяцев. В 7 месяцев антитела перестали определяться у 27,3% детей, в 12 месяцев — еще у 40,9% малышей, к 16 месяцам — еще у 31,8% детей. Чем выше титры материнских анти-кор IgG, тем дольше они определяются в крови детей. Наши данные по времени исчезновения материнских антител у неинфицированных детей сходны с результатами S. Ferrero и соавторов [13]. В исследовании этих авторов, проведенном в группе из 188 новорожденных, материнские антитела к 6 месяцам перестали определяться у 37,2% детей и к 1 году жизни — еще у 50,8% малышей. По данным этих же авторов, если матери имели РНК ВГС на момент родов, то антитела к вирусу у их детей исчезали на 2 месяца позже, чем у малышей, матери которых не имели РНК ВГС. К сожалению, у нас не было возможности провести подо6ные исследования, так как около 40% детей были отказными.

Среди наблюдаемых детей было 10 малышей (8 мальчиков и 2 девочки), обследованных вместе с матерями. У трех детей при первичном обследовании были выявлены повышенные АлАт (68,7 ± 10,3 МЕ/л) и АсАт (94,0 ± 39,6 МЕ/л), РНК ВГС в крови не определялась. Как будет установлено позже, один ребенок был инфицирован ВГС, двое других — цитомегало-вирусом. При сравнительном анализе пар дитя-мать у двух-трехмесячных детей обнаружено полное сходство в направленности антител с материнскими ВГС-специ-фическими иммуноглобулинами. В таблице 1 представлены данные по трем парам дитя-мать, наиболее характерно отражающими всю группу. Различия в количественном составе антител, определенные в титрах, составили по разным антигенам от 3 до 5 разведении. В дальнейшем мониторинг ВГС-специфических антител изучали по динамике анти-кор IgG (как отмечено выше, этот маркер удобен из-за высокой иммуногеннос-ти) в парах дитя-мать в течение 9 месяцев. Данные представлены в таблице 2 по трем парам дитя-мать, где не было инфицирования детей. Обнаружено, что различия в титрах этих антител у матерей и их малышей в 2-х месячном возрасте составили 4 разведения, с каждым месяцем они увеличивались (табл. 2). Это явление связано с постепенным снижением материнских антител у детей, не зараженных вирусом. У инфицированного малыша в период с 2 до 5 месяцев титры анти-кор IgG увеличились на 2 разведения.

Доля ВГС-инфицированных детей в нашем исследовании составила 31,2%. Это высокие показатели, но они отражают долю инфицированных детей в специальной группе малышей, поступивших в клинику с подозрением на гепатит или на контрольное обследование из-за наличия антител к ВГС. По данным разных

Пациенты Анти-ВГС IgM Анти-кор IgG Анти-№3 IgG Анти-№4 IgG Анти-№5 IgG

Ребенок Д. нет 1/40 нет 1/20 нет

Мать Д. нет 1/640 1/10 1/160 нет

Ребенок С. нет 1/160 1/40 1/10 нет

Мать С. нет 1/2560 1/640 1/320 1/10

Ребенок К. нет 1/80 1/5 нет нет

Мать К. 1/10 1/1280 1/80 нет нет

Таблица 2. Динамика различий в количественном выявлении анти-кор 1дС у детей по сравнению с уровнем этих антител у матерей

Возраст Пациенты 2 мес. 4 мес. 6 мес. 9 мес.

Ребенок К. 4* 6 6 9

Ребенок Д. 4 5 8 9

Ребенок С. 4 4 7 8

Среднее значение 4 5 7 ~9

* — цифрами отмечены разницы между предельными разведениями антител матерей и разведениями антител их детей

Л. И. Николаева и ар. Линамика антител к отлельным антигенам вируса гепатита с у летей первых лет жизни

авторов риск вертикальной передачи ВГС в нашей стране составляет от 5 до 8% [14—16], что существенно ниже, чем в нашей группе детей.

Выводы

1. У детей, рожденных ВГС-инфицированными матерями, во второй-третий месяцы жизни специфические антитела имели такую же направленность, как у матерей, но уровень антител был ниже на 3—5 разведения.

2. В период с 3 по 6 месяцы у ВГС-инфицирован-ных детей уровень антител к нуклеокапсидному (кор) антигену увеличивался до титров 1/640—1/1280, а у неинфицированных детей снижался с последующим исчезновением в период от 7 до 16 месяцев.

3. Мониторинг титров антител к нуклеокапсидному (кор) антигену может дать дополнительную информацию о вероятности инфицирования новорожденного ребенка.

Литература:

1. Инфекционная заболеваемость в Российской Федерации за январь-сентябрь 2004 г. // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2005. — № 1. — С. 64—65.

2. Гепатит С у детей первого года жизни / В. Ф. Учайкин, Т. В. Чередниченко, Е. Б. Баранова, А. Е. Гущин // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 1997. — № 2. — С. 29—33.

3. Recovery of hepatitis С virus RNA in pregnant women / С. Delamare et al. // J. Hepatology. — 1999. — V. 31. — P. 416—420.

4. Распространенность гепатита С и отдельных генотипов вируса гепатита С в регионах с умеренной активностью эпидемического процесса / С. Н. Кузин и др. // Вопр. виросол. — 1999. — № 2. — С. 79—83.

5. Сологуб Т. В. Комбинированная терапия Интроном А и Ребетолом — современный стандарт в лечении гепатита / Т. В. Сологуб, И. В. Волчек, Н. Н. Нестеров // Terra Medica. — 2000. — № 3. — С. 2—6.

6. Infrequent vertical transmission of hepatitis С virus / J. Lam et al. // J. Inf. Dis. — 1993. — V. 167. — P. 567—576.

7. Viral load in HCV RNA-positive pregnant women / D. M. Paternoster et al. // Am. J. Gastroenterol. — 2001. — V. 96. — P. 2751—2754.

8. Increased vertical transmission of human immunodeficiency virus from hepatitis С coinfectid mothers / J. Lew et al. // J. Inf. Dis. — 1997. — V. 176. — P. 414—420.

9. Николаева Л. И. Значение выявления антител к различным белкам вируса гепатита С у детей раннего возраста / Л. И. Николаева, М. И. Миминошвили, О. Н. Ястребова // Росс. гастроэнтерол. журнал. — 2000. — № 2. — С. 113.

10. Клинико-патогенетическое значение обнаружения антител к различным белкам вируса гепатита С при HCV-инфекции / Т. В. Чередниченко, Л. И. Николаева, О. В. Молочкова, М. Н. Горошанская // Актуал. вопр. инфекц. патологии у детей. Мат. III Конгр. педиатров-инфекционистов. — Москва, 2004 г. — С. 208.

11. Юнкеров В. И. Математико-статистическая обработка данных медицинских исследований / В. И. Юнкеров, С. Г. Григорьев. — С.-Пб.: Изд. «Военно-Медицинская Академия», 2002. — С. 34—57.

12. Virus-specific antibody titres in different phases of hepatitis С virus infection / L. I. Nikolaeva et al. // J. Viral Hepatitis. — 2002. — V. 9. — P. 429—437.

13. Prospective study of mother-to-infant transmission of hepatitis С virus: a 10 year survey (1990—2000) / S. Ferrero et al. // Acta Obstet. Gynecol. Scand. — 2003. — № 82. — C. 229—234.

14. Ситуация по вирусным гепатитам в Российской Федерации / По материалам аналитической записки Департамента ГСЭН МЗ РФ по вопросу «Распространение вирусных гепатитов как угроза национальной безопасности» // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. — 2003. — № 2. — С. 20—23.

15. Ершова О. Н. Перинатальная передача вируса гепатита С / Мир вирусных гепатитов. — 2000. — № 3. — С. 6.

16. Характеристика активности перинатальной передачи вируса гепатита С / О. Н. Ершова и др. // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2005. — № 1. — С. 39—41.

Респираторная вирусная инфекция у детей и подростков с аллергической патологией

В. А. Булгакова, И. И. Балаболкин, Т. Б. Сенуова

ГУ Научный центр здоровья детей РАМН, Москва

Выявлена массивная персистенция респираторных вирусов в носоглотке детей и подростков с аллергическими болезнями, низкий уровень специфических 1дС к вирусам гриппа и парагриппа, высокий уровень 1дС и 1дМ к респиратор-но-синцитиальному вирусу в сыворотке крови. Показано, что более 70% детей и подростков с аллергической патологией в течение года от 4 до 8 раз и более переносят интеркуррентные ОРВИ, что позволяет отнести их к группе часто болеющих детей. Установлено, что интеркуррентные вирусные инфекции вызывают обострение бронхиальной астмы и атопического дерматита у детей и подростков. Проведение специфической профилактики гриппа у детей и подростков с аллергическими болезнями субьединичной вакциной Инфлювак способствует снижению частоты ОРВИ и уменьшению количества обострений бронхиальной астмы.

Ключевые слова: ОРВИ, аллергические болезни, вирусы, дети и подростки, профилактика гриппа

Среди детей и подростков с аллергической патологией значительную группу составляют больные, склонные к возникновению частых острых респираторных вирусных заболеваний [1—3]. Установлено, что респираторные вирусные инфекции способны ускорять реакции гиперчувствительности как замедленного, так и немедленного типа в ответ на стимуляцию

различными аллергенами [4—6]. Возникающее под воздействием вирусной инфекции нарушение барьерной функции слизистой оболочки дыхательных путей и кишечника приводит к проникновению экзогенных аллергенов во внутренние среды организма и повышению уровня сенсибилизации организма [7—9]. Одним из механизмов формирования обострения бронхиальной