Лекарственное средство для защиты животных от эктопаразитов
MEDICINAL PRODUCT FOR THE PROTECTION OF ANIMALS FROM ECTOPARASITES

Изобретение относится к области ветеринарной фармакологии, а именно к лекарственным средствам, защищающим сельскохозяйственных животных от эктопаразитов.
В настоящее время в России активно развиваются многие отрасли животноводства. Однако, интенсивное развитие животноводства возможно только при условии высокого уровня ветеринарного обслуживания животных, который во многом зависит от обеспечения ветслужбы лечебно-профилактическими средствами. Для сохранения устойчивого ветеринарного благополучия, продовольственной и экономической безопасности страны необходимо создание новых высокоэффективных лекарственных средств, позволяющих значительно снизить наносимый экономический ущерб. Поэтому актуальной научной задачей является улучшение ветеринарного обслуживания животноводства, разработка наиболее эффективных методов и средств профилактики и лечения широко распространенных болезней сельскохозяйственных животных, в том числе и вызываемых эктопаразитами, которые наносят значительный экономический ущерб, т.к. беспокоят и изнуряют животных, а также снижают качество и количество продукции шерсти и мяса.
Известны инсектоакарицидные средства на основе пиретроидов - см., например, Инструкцию №1-11/12 по применению средства инсектоакарицидного «Медилис-ЦИПЕР», 2012; Инструкцию №0033 по применению средства инсектоакарицидного «Цифлунит-ON», 2014; Инструкцию по применению инсектоакарицидного микрокапсулированного средства «Дельтрин», 2014; Инструкцию по применению средства средства «Дельтрин», 2014; Инструкцию по применению средства инсектицидного «Дизуран», 2018; Инструкцию по применению средства инсектоакарицидного «Димигран», 2020.
Указанные выше средства полностью уничтожают паразитов и не наносят вреда здоровью человека и животных. Однако используются данные средства для обработки объектов различных категорий: в производственных и жилых помещениях, на объектах коммунально-бытового назначения, на предприятиях общественного питания и др.
Известны инсектоакарицидные средства на основе пиретроидов в форме раствора для наружного применения для различных видов животных - см., например, Инструкцию по применению препарата Цифлунит Флок при энтомозах овец и коз, 2016; Инструкцию по ветеринарному применению лекарственного препарата Бутокс 50, 2018; Инструкцию по ветеринарному применению лекарственного препарата Селафорт, 2021.
Указанные выше средства обладают широким спектром контактного и кишечного инсектоакарицидного действия, активны в отношении различных видов клещей, мух, гнуса, клопов и других эктопаразитов животных, однако не могут в полной мере удовлетворить потребности животноводческой отрасли.
Задачей изобретения является расширение ассортимента высокоэффективных лекарственных средств для защиты различных видов животных от эктопаразитов.
Поставленная задача решается тем, что предложенное лекарственное средство для защиты животных от эктопаразитов содержит дельтаметрин, дифлубензурон, пиперонилбутоксид, бутилгидрокситолуол, бутилгидроксианизол и моноэтиловый эфир диэтиленгликоля при следующем соотношении ингредиентов, мг/мл: дельтаметрин - 6,75-8,25, дифлубензурон - 2,7-3,3, пиперонилбутоксид - 1,35-1,65, бутилгидрокситолуол - 0,045-0,055, бутилгидроксианизол - 0,09-0,15, моноэтиловый эфир диэтиленгликоля - до 1 мл.
Техническим результатом заявленного изобретения является то, что полученное лекарственное средство безопасно, стабильно при изготовлении и хранении, обладает высокой инсектоакарицидной и репеллентной эффективностью, длительным защитным действием против эктопаразитов, препятствует процессу восполнения их популяции за счет уменьшения количества жизнеспособных особей, и тем самым способствует снижению уровня стресса и повышению продуктивности животных.
Заявленное изобретение характеризуется следующими примерами его выполнения, которые, однако, не ограничивают объем притязаний заявителя.
Пример 1. Технологический процесс производства заявленного лекарственного средства.
В подготовленный реактор загружают 13,2 кг моноэтилового эфира диэтиленгликоля, включают нагрев 45°С. При достижении температуры нагрева, емкость с содержимым устанавливают под механическую мешалку. Включают перемешивание, доводят скорость перемешивания до уровня образования устойчивой воронки. Загружают 0,18 кг бутилгидрокситолуола, перемешивают 3-7 минут до полного растворения компонента. К раствору бутилгидрокситолуола в моноэтиловом эфире диэтиленгликоля загружают 0,36 кг бутилгидроксианизола. Перемешивают 3-7 минут до полного растворения компонента. Загружают в реактор 0,5 кг пиперонилбутоксида. Перемешивают 10-20 минут до полного растворения компонента. В реактор загружают 1,0 кг дифлубензурона, перемешивают содержимое реактора в течение 10-20 минут до полного растворения компонента. В реактор загружают 2,9 кг дельтаметрина, перемешивают содержимое реактора в течение 10-20 минут до однородности, охлаждают до 20-25°С и передают на розлив и укупорку.
Полученное лекарственное средство содержит в мг/мл: дельтаметрин - 7,5, дифлубензурон - 3,0, пиперонилбутоксид - 1,5, бутилгидроксианизол - 0,1, бутилгидрокситолуол - 0,05, моноэтиловый эфир диэтиленгликоля - до 1 мл.
Пример 2. Изучение инсектоакарицидной эффективности заявленного лекарственного препарата на овцах.
Исследования проводили на естественно или экспериментально зараженных животных, т.к. надежная модель доклинических экспериментальных исследований in vitro для полной оценки инсектоакарицидной эффективности при эктопаразитозах отсутствует.
В опыте учувствовали 40 клинически здоровых овец породы Дагестанская горная в возрасте 1-2 года живой массой 35-40 кг, которые подвергались инфестации клещами и нападению двукрылых насекомых. Животным не применяли каких-либо лекарственных препаратов не менее, чем за 1 месяц до начала эксперимента, влияющих на его результаты.
Животных разделили на 2 группы: опытная группа №1 - 20 животных, контрольная группа №2 - 20 животных.
Препарат применяли методом полива на кожу спины от головы до основания хвоста вдоль позвоночника. Заявленный препарат наносили на сухую неповрежденную кожу однократно, в дозе 10 мл/животное.
Овец контрольной группы не обрабатывали.
Во время опыта животные находились в равных условиях содержания и кормления. За животными вели наблюдение и отмечали переносимость препарата.
Для определения количества иксодовых клещей вели их подсчет в области уха, на хвосте и вымени.
При обследовании животных в начале опыта установили, что все они подвергаются нападению иксодовых клещей (имаго) с экстенсивностью инвазии (ЭИ) 100% и индексом обилия (ИО) 6,3-5,9 экз./животное.
Эффективность препарата учитывали по количеству иксодовых клещей на опытной (№1) и контрольной (№2) группах животных в дни: 0, 2, 10, 14, 28 и 42 день, методом визуального осмотра и подсчета эктопаразитов на каждом животном.
Экстенсивность инвазии (ЭИ) - отношение числа инвазированных животных к общему числу обследованного поголовья, выраженное в процентах). Экстенсивность инвазии (ЭИ) определяли по формуле:
ЭИ=И×100/Σж.,
где И - инвазированные, Σж. - количество животных в группе.
Количество животных, инвазированных клещами в день 0-40 (20 голов в группе №1, и №2).
ЭИ=40×100/40=100%
Количество животных, инвазированных клещами в день 2 - группа №1 - 20, №2 - 20.
ЭИ (группа №1)=20×100/20=100%
ЭИ (группа №2)=20×100/20=100%
Количество животных, инвазированных клещами в день 10 - группа №1 - 9, №2-20.
ЭИ (группа №1)=10×100/20=50%
ЭИ (группа №2)=20×100/20=100%
Количество животных, инвазированных клещами в день 14 - группа №1 - 9, №2 - 20.
ЭИ (группа №1)=9×100/20=45%
ЭИ (группа №2)=20×100/20=100%
Количество животных, инвазированных клещами в день 28 - группа №1 - 0, №2 - 20.
ЭИ (группа №1)=0×100/20=0%
ЭИ (группа №2)=20×100/20=100%
Количество животных, инвазированных клещами в день 42 - группа №1 - 3, №2 - 17.
ЭИ (группа №1)=3×100/20=15%
ЭИ (группа №2)=17×100/20=85%
Индекс обилия, (ИО) - среднее число особей данного вида паразита (или систематической группы), приходящееся на единицу учета.
ИО определяли по формуле:
ИО=Σкл./ Σж.,
где Σкл. - общее количество клещей
Количество животных в группах - группа №1 - 20, №2 - 20;
Общее количество клещей в день 0 - группа №1 - 127, №2 - 118
ИО (группа №1)=127/20=6,3
ИО (группа №2)=118/20=5,9
Общее количество клещей в день 2 - группа №1 - 73, №2 - 117
ИО (группа №1)=73/20=3,6
ИО (группа №2)=117/20=5,8
Общее количество клещей в день 10 - группа №1 - 22, №2 - 123
ИО (группа №1)=22/20=1,1
ИО (группа №2)=123/20=6,1
Общее количество клещей в день 14 - группа №1 - 0, №2 - 128
ИО (группа №1)=0/20=0
ИО (группа №2)=128/20=6,4
Общее количество клещей в день 28 - группа №1 - 0, №2 - 105
ИО (группа №1)=0/20=0
ИО (группа №2)=105/20=5,2
Общее количество клещей в день 42 - группа №1 - 36, №2 - 90
ИО (группа №1)=36/20=1,8
ИО (группа №2)=90/20=4,5
Коэффициент отпугивающего действия (КОД) показывает, на сколько процентов снижается количество нападений эктопаразитов на животных, обработанных препаратом, по сравнению с контрольными животными, находящихся в тех же условиях в течение одного и того же времени.
КОД для иксодид определяли по формуле согласно Методическим рекомендациям (МУ 3.5.2.1759-03 Методы определения эффективности инсектицидов, акарицидов, регуляторов развития и репеллентов, используемых в медицинской дезинсекции.):
А - количество клещей в контроле за определенный промежуток времени;
В - количество клещей в опыте за определенный промежуток времени;
100 - коэффициент, используемый при вычислении процентного соотношения.
Оценивают длительность репеллентного действия как время, в течение которого КОД снижался до 70% и ниже.
Расчет КОД в опытной группе №1:
День 2=(5,8-3,6)/5,8×100%=37,9%
День 10=(6,1-1,1)/6,1×100%=81,9%
День 14=(6,4-0)/6,4×100%=100%
День 28=(5,25-0)/5,25×100%=100%
День 42=(4,5-1,3)/4,5×100%=71,1%
День 56=(4,5-1,8)/4,5×100%=60%
Как следует из приведенных выше данных, эффективность заявленного препарата была высокой и составила через 42 дня против клещей - 71,1%. Через 56 дней КОД против клещей опустился ниже 70% и составил 60%.
Достоверное же снижение индекса обилия иксодовых клещей в опытной группе №1 в 3,5 раза меньше, чем в контрольной группе №2.
Таким образом, акарицидное и репеллентное действие заявленного препарата против иксодовых клещей продолжалось в течение 42 дней.
В таблице 1 показана продолжительность защитного действия заявленного препарата против двукрылых насекомых.
Различия определяли при Р≤0,05 уровне значимости. Значение t-критерия Стьюдента: 4.59. Различия статистически значимы (р=0.000263).
Эффективность заявленного препарата против кровососущих двукрылых насекомых была высокой и составила через 70 дней - 82,8%. Через 12 недель (84 дня) КОД опустился ниже 70%.
Численность насекомых на животных контрольной группы в период опыта колебалась от 58 до 1067 экз./10 гол., на животных опытной группы - от 22 до 73 экз./10 гол.
Таким образом, репеллентный эффект заявленного препарата против двукрылых насекомых сохранялся в течение 10 недель (70 дней).
Серьезных побочных явлений и осложнений при применении заявленного лекарственного препарата у животных опытных групп отмечено не было.
В результате проведенных исследований установлено, что защитное действие после однократной обработки заявленным препаратом в зависимости от численности эктопаразитов и погодных условий продолжается против иксодовых клещей 42 дня, против двукрылых насекомых - до 70 дней.
Кроме того, использование заявленного препарата снижает риск передачи трансмиссивных заболеваний, возбудители которых передаются кровососущими насекомыми и клещами, а благодаря снижению стресса при выпасе, повышается упитанность и улучшается качество шерсти животных.
Пример 3. Изучение инсектоакарицидной эффективности заявленного лекарственного препарата на крупном рогатом скоте.
Так как надежная модель доклинических экспериментальных исследований in vitro для полной оценки инсектоакарицидной эффективности при эктопаразитозах отсутствует, проводили исследования на естественно зараженных животных.
Исследовательская популяция состояла из клинически здоровых 30 коров, 10 телят и 10 бычков красно - степной породы в возрасте 2-3 года живой массой: коровы - 350-450 кг, бычки - 250-350, телята - 75-90 кг.
Все животные подвергались нападению эктопаразитов и двукрылых насекомых. Животным не применяли каких-либо лекарственных препаратов, влияющих на результаты эксперимента, не менее, чем за 1 месяц до его начала.
Животных распределили в группы по принципу аналогов.
Исследования проводили в 6 группах: 1 опытная группа (применяли препарат против клещей); 2 опытная группа (применяли препарат против клещей, вшей); 5 опытная группа (применяли препарат против двукрылых кровососущих насекомых); 3-4-6 являлись контрольными группами (препарат не применяли).
Оценку эффективности проводили на основании снижения численности или отсутствия вшей и клещей на обработанных животных опытных групп (№1, №2, №5) в сравнении с необработанными животными контрольных (№3, №4, №6), до и после начала опыта ежедневно.
Эффективность препарата учитывали по количеству иксодовых клещей на обработанных животных опытных групп (№1, №2, №5) в сравнении с необработанными животными контрольных (№3, №4, №6) групп в дни: 0, 2, 10, 14, 28 и 42 день путем визуального осмотра и подсчета эктопаразитов на каждом животном.
Препарат наносили на сухую неповрежденную кожу спины от головы до основания хвоста вдоль позвоночника, однократно, согласно таблице 2.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием программы «Primer of Biostatistics 4. 03. For Windows» или аналогичной методом критерия Стьюдента.
Результаты испытания препарата против иксодовых клещей, вшей и кровососущих двукрылых насекомых у крупного рогатого скота приведены таблицах 3-5.
Как следует из данных, приведенных в указанных выше таблицах, заявленный препарат обеспечивает защиту против двукрылых кровососущих насекомых в течение 70 дней, против вшей - в течение 14 дней, против клещей - в течение 42 дней.
Кроме того, т.к. заявленный препарат способствует снижению стресса при выпасе, то повышается упитанность животных и качество их продукции.
Необходимо также отметить, что при обработках животных снижается риск передачи трансмиссивных (передающихся через укусы кровососущих эктопаразитов) заболеваний, таких как бабезиоз, анаплазмоз, тейлериоз, сибирская язва, туляримия, ящур, туберкулез, бруцеллез, сетариоз, моракселлез, блютанг, заразный узелковый дерматит крупного рогатого скота, вольфартиоз и онхоцеркоз.
Пример 4. Изучение репеллентной и акарицидной эффективности заявленного препарата против иксодовых клещей.
Репеллентную и акарицидную эффективность заявленного препарата против иксодовых клещей Dermacentor marginatus изучали на 60 головах крупного рогатого скота породы казахская белоголовая живой массой 400-450 кг.
Было сформировано 3 группы животных: две опытные и одна контрольная. Животных опытных групп обрабатывали индивидуально, однократно, путем нанесения препарата на кожный покров от основания хвоста до головы вдоль линии позвоночника, в дозе 15 мл на каждые 100 кг массы тела животного, но не более 75 мл на голову.
Животным контрольной группы заявленный препарат не применяли.
Достоверное снижение индекса обилия иксодовых клещей в первой и второй опытной группе было отмечено уже через 3 дня: 1,3±0,4 экз/гол группа №2. При этом, в группе №1 наблюдаем 100% избавление животных от иксодид. В течение 14 дней животные в группе №1 оставались стерильны от паразитов. Через 21 и 28 дней наблюдали единичных присосавшихся клещей в первой и второй группе. Коэффициент отпугивающего действия (КОД) оставался высоким: 90,8 и 88,1% в группе №1 и 89,2 и 85,1% - в группе №2. И только через 35 дней экстенсивность инвазии опытных групп достигла 100% и КОД снизился до 45,8% и 40,7% соответственно. Все контрольные животные (группа №3) сохраняли инфестации на протяжении всего опыта - 35 дней.
Таким образом, репеллентное и акарицидное действие заявленного препарата против иксодовых клещей рода Dermacentor сохранялось в течение 28 дней.
Пример 5. Инсектицидное действие заячвленного препарата препарата против мелофагов (М. ovinus) у овец.
Овечьи кровососки являются переносчиками возбудителей ряда заразных болезней (трипаносомоз, спирохетозы, риккетсиозы, бруцеллез). Овечьи кровососки и их куколки, паразитируя на овцах в течение всего года, приводят к снижению качества шерсти. При этом у животных нарушается обмен веществ, развиваются вторичные иммунодефицита, снижается резистентность организма к другим болезням. Массовое поражение овец кровососками (более 100 экз./гол.) уменьшает среднесуточный привес на 13,4%, настриг шерсти на 20%, выход чистого волокна на 2-3%.
Эффективность заявленного лекарственного препарата изучали на животных, спонтанно зараженных мелофагами (ЭИ - 100%) в одном из хозяйств Ставропольского края. В опыте участвовало 50 баранчиков северо-кавказской породы, 2019 г. р., живой массой 35-45 кг. Животных разделили на 2 группы: 1) опытная группа №1 - 30 животных, которым применяли препарат методом полива на кожу спины в дозе 10,0 мл на животного, однократно; 2) контрольная группа №2 - 20 животных, препарат не применяли. Во время опыта животные находились в равных условиях содержания и кормления. За животными вели наблюдение и отмечали переносимость препарата. У животных опытной группы отклонений от физиологической нормы выявлено не было. Эффективность препарата учитывали по количеству паразитирующих кровососок на опытной (№1) и контрольной (№2) группах животных до начала опыта и через 3, 7, 14, 21 день методом визуального осмотра и подсчета эктопаразитов на каждом животном. Экстенсивность инвазии (ЭИ), индекс обилия (ИО), определяли по общепринятой методике.
В результате опыта установлено, что эффективность заявленного лекарственного препарата против мелофагов у овец составила 100%
Важно отметить, что уже через трое суток наблюдается достоверное снижение количества мелофагов - в первый день исследования ИО 49,1±1,2; через 3 дня - ИО - 5,3±1,4 (экз./гол.). Через 7 дней наступило 100% освобождение животных от мелофагов. У контрольной группы - соответственно - в первый день исследования ИО 51,7±1,7; через 3 дня - ИО - 62,1±1,6 (экз./гол.).
Таким образом, проведенные исследования показали высокое инсектицидное действие заявленного препарата при мелофагозе овец.
В описанных выше исследованиях был испытан препарат, содержащий в 1 мл: дельтаметрин - 7,5 мг, дифлубензурон - 3,0 мг, пиперонилбутоксид - 1,5 мг, бутилгидрокситолуол - 0,05 мг, бутилгидроксианизол - 0,1 мг, моноэтиловый эфир диэтиленгликоля - до 1 мл.
Однако, в целях установления оптимальной терапевтической дозы комбинированного инсектоакарицидного препарата в форме раствора для наружного применения, провели тестирование образцов серий препарата с различной концентрацией активных и вспомогательных фармацевтических субстанций. Оценивали острое инсектицидное, акарицидное и репеллентное действие, продолжительность остаточного действия препаратов и физиологическое состояние животных.
В результате проведенных сравнительных исследований установлено, что раздражающего действия, аллергических реакций у препарата с содержанием дельтаметрина - от 6,75 до 8,25 мг, дифлубензурона - от 2,2 до 3,3 мг, пиперонилбутоксида - от 1,35 до 1,65 мг,бутилгидрокситолуола - от 0,045 до 0,055 мг и бутилгидроксианизола - от 0,09 до 0,015 мг за весь период проведения опыта не регистрировалось. Заявленное лекарственное средство в указанных соотношениях ингредиентов сохраняет высокую инсектоакарицидную и репеллентную эффективность, длительное защитное действие против эктопаразитов, снижает риск возможных нежелательных реакций препарата при его применении целевым видам животных, а также сохраняет стабильность лекарственной формы.
При снижении концентрации дельтаметрина в препарате ниже 6,75 мг/мл при пропорциональном снижении остальных ингредиентов, достоверно снижается инсектоакарицидная и репеллентная эффективность заявленного лекарственного средства, а также стабильность готового препарата.
У животных, которым наносили препарат, содержащий дельтаметрин в количествах, превышающих 8,25 мг/мл, при пропорциональном повышении содержания остальных ингредиентов, были отмечены признаки раздражающего действия: беспокойство, алопеции в месте нанесения препарата, непродолжительное угнетенное состояние и снижение аппетита.
Таким образом:
- заявленное лекарственное средство при указанном в формуле изобретения соотношении действующих и вспомогательных веществ обеспечивает безопасность, эффективность и стабильность лекарственной формы;
- при рекомендованном режиме хранения от 2°С до 25°С качественные и количественные характеристики препарата стабильны в течение 36 месяцев;
- при производстве рецептуры использовались активные фармацевтические субстанции, разрешенные для производства лекарственных ветеринарных препаратов в странах членах Таможенного союза и Евразийского экономического сообщества;
- после накожного нанесения лекарственного препарата, входящие в его состав активные вещества равномерно распределяются по поверхности, практически не всасываясь в системный кровоток, накапливаются в эпидермисе, волосяных луковицах и сальных железах животного, оказывают длительное контактное инсектоакарицидное и репеллентное действие;
- заявленное лекарственное средство активно в отношении личиночных и имагинальных фаз развития эктопаразитов, в том числе устойчивых к другим инсектоакарицидам, вызывает прекращение яйцекладки и/или нарушение выводимости личинок, образование уродливых нежизнеспособных особей и пополнение популяции эктопаразитов;
- препарат снижает риск заражения животных трансмиссивными заболеваниями, переносчиками которых являются клещи и насекомые, в том числе бабезиозом, анаплазмозом, тейлериозом, сибирской язвой, туляримией, ящуром, туберкулезом, бруцеллезом, сетариозом, моракселлезом, блютангом, заразным узелковым дерматитом крупного рогатого скота, вольфартиозом и онхоцеркозом, т.к. после накожного нанесения вызывает гибель эктопаразитов до передачи животному возбудителя заболевания;
- применение препарата позволяет снизить стресс животных при выпасе, что приводит к оздоровлению стад, повышению их продукции и улучшению ее качества;
- заявленное лекарственное средство по степени воздействия на организм относится к веществам «умеренно опасным», в рекомендуемых дозах не обладает местно-раздражающим действием на кожу, аллергизирующими и иммунотоксическими свойствами, при попадании в глаза вызывает слабо выраженное раздражение слизистых оболочек;
- защитное действие после однократной обработки препаратом в зависимости от численности эктопаразитов и погодных условий продолжается против иксодовых клещей 4-6 недель, против насекомых - 8-10 недель. Повторные обработки животных проводят по показаниям, но не чаще одного раза в 28 дней.