ЭНАНТИОСЕЛЕКТИВНОЕ ФЕРМЕНТАТИВНОЕ СУЛЬФОКСИДИРОВАНИЕ ХИРАЛЬНЫХ АРИЛСУЛЬФИДОВ

1. Выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты, кодирующий оксигеназную субъединицу (StyA), и выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты, кодирующий редуктазную субъединицу (StyB), где полипептиды, кодируемые нуклеотидными последовательностями для оксигеназной субъединицы (StyA) и нуклеотидной последовательностью для редуктазной субъединицы (StyB), вместе имеют активность в отношении хиральных арилсульфидов, и где указанные фрагменты нуклеиновых кислот выбраны из группы
a) фрагмента нуклеиновой кислоты, содержащего нуклеотидную последовательность на по меньшей мере 80% идентичную последовательности SEQ ID NO 1, и нуклеотидную последовательность на по меньшей мере 80% идентичную последовательности SEQ ID NO 2,
b) фрагмента нуклеиновой кислоты, содержащего последовательность, комплементарную последовательности SEQ ID NO 1, и фрагмента нуклеиновой кислоты, содержащего последовательность, комплементарную последовательности SEQ ID NO 2,
c) фрагмента нуклеиновой кислоты, содержащего последовательность, которая специфически гибридизуется с указанным фрагментом нуклеиновой кислоты согласно a) или указанной комплементарной последовательностью согласно b).
2. Выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты по п. 1, где хиральный арилсульфид, в отношении которого полипептиды, кодируемые нуклеотидными последовательностями для оксигеназной субъединицы (StyA) и нуклеотидной последовательностью для редуктазной субъединицы (StyB), вместе имеют активность, представляет собой арилсульфид формулы I
,
где X представляет собой C или N, и
1
где если X представляет собой N, R отсутствует,
1
2
2
1
6
1
6
и если X представляет собой C, R выбран из группы, состоящей из H, NO, галогена, NH, C - C алкила или C - C O-алкила, и
где n представляет собой 0 или 1, и
2
1
6
где R представляет собой C - C алкил, и
3
где R представляет собой галоген или H.
3. Выделенный фрагмент нуклеиновой кислоты по п. 2, где хиральный арилсульфид, в отношении которого полипептиды, кодируемые нуклеотидными последовательностями для оксигеназной субъединицы (StyA) и нуклеотидной последовательностью для редуктазной субъединицы (StyB), вместе имеют активность, представляет собой арилсульфид формулы I
где X представляет собой N, и
1
где R отсутствует, и
где n представляет собой 1, и
2
1
3
где R представляет собой C - C алкил, и
3
где R представляет собой галоген или H.
4. Рекомбинантный экспрессионный вектор, содержащий выделенные фрагменты нуклеиновой кислоты по п. 1, где указанный рекомбинантный экспрессионный вектор выбран из группы
a) рекомбинантного экспрессионного вектора, содержащего выделенные фрагменты нуклеиновой кислоты по п. 1, а также lac-репрессор, содержащий нуклеотидную последовательность на по меньшей мере 80% идентичную последовательности SEQ ID NO 3,
b) рекомбинантного экспрессионного вектора, содержащего нуклеотидную последовательность на по меньшей мере 80% идентичную последовательности SEQ ID NO 4
c) рекомбинантного экспрессионного вектора, содержащего последовательность, комплементарную последовательности SEQ ID NO 4
d) рекомбинантного экспрессионного вектора, содержащего последовательность, которая специфически гибридизуется с указанным фрагментом нуклеиновой кислоты согласно b) или указанной комплементарной последовательностью согласно c).
5. Выделенные фрагменты нуклеиновой кислоты по п. 1, где нуклеотидная последовательность для оксигеназной субъединицы (StyA) кодирует полипептид с последовательностью на по меньшей мере 80% идентичной последовательности SEQ ID NO 5, и где нуклеотидная последовательность для редуктазной субъединицы (StyB) кодирует полипептид с последовательностью на по меньшей мере 80% идентичной последовательности SEQ ID NO 6.
6. Выделенные фрагменты нуклеиновой кислоты по п. 1, где нуклеотидная последовательность для оксигеназной субъединицы (StyA) кодирует полипептид с последовательностью SEQ ID NO 5, и где нуклеотидная последовательность для редуктазной субъединицы (StyB) кодирует полипептид с последовательностью SEQ ID NO 6.
7. Применение оксигеназной субъединицы (StyA) по п. 5 вместе с редуктазной субъединицей (StyB) по п. 5 или
применение оксигеназной субъединицы (StyA) по п. 5 вместе с редуктазной субъединицей (StyB) по п. 6 или
применение оксигеназной субъединицы (StyA) по п. 6 вместе с редуктазной субъединицей (StyB) по п. 5 или
применение оксигеназной субъединицы (StyA) по п. 6 вместе с редуктазной субъединицей (StyB) по п. 6 или
для энантиоселективного окисления соединения формулы I
формула I,
где X представляет собой C или N, и
1
где если X представляет собой N, R отсутствует ,
1
2
2
1
6
1
6
и если X представляет собой C, R выбран из группы, состоящей из H, NO, галогена, NH, C - C алкила или C - C O-алкила, и
где n представляет собой 0 или 1, и
2
1
6
где R представляет собой C - C алкил и
3
где Rпредставляет собой галоген или H
в S -сульфинил-энантиомер.
8. Применение по п. 7 для энантиоселективного окисления 2-хлор-4-(метилсульфанилметил)пиридина до 2-хлор-4-((метил-S-сульфинил)метил) пиридина.
9. Способ энантиоселективного окисления соединения формулы I в S-сульфинил-энантиомер, включающий
обеспечение соединения формулы I,
обеспечение оксигеназной субъединицы (StyA) по п. 5 или 6 вместе с редуктазной субъединицей (StyB) по п. 5 или 6 в виде полипептидов,
реакцию указанного соединения формулы I с указанными полипептидами в течение 2-48 ч, причем значение pH находится в интервале 5-9, и температура находится в интервале 15-40°C.
10. Способ по п. 9, где оксигеназная субъединица (StyA) по п. 5 или 6 и редуктазная субъединица (StyB) по п. 5 или 6 экспрессируются в рекомбинантных клетках, обеспеченных в среде для культивирования клеток, соединение формулы I непосредственно добавляют в среду для культивирования клеток сразу, как только клетки достигли заданной плотности клеток, и где продукт накапливается в среде для культивирования клеток.
11. Способ по п. 10, где соединение формулы I добавляют непрерывно или через равные интервалы времени при концентрации, которая ниже скорости превращения полипептидов по п. 4.
12. Применение способа по п. 10 или 11 для обеспечения S-энантиомера окисленного соединения формулы I с ee значением более 95%.
13. Применение способа по п. 12 для обеспечения S-энантиомера окисленного соединения формулы I при скорости от 10 г/л×ч до 60 г/л×ч.