Изучение антиоксидантного действия некоторых представителей астровых Восточной Сибири

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ

© ЦЫРЕНЖАПОВ А.В., ГОРЯЧКИНА Е.Г., МАЗУНОВА О.И., ФЕДОСЕЕВА Г.М. - 2013 УДК 615.017:616.079

ИЗУЧЕНИЕ АНТИОКСИДАНТНОГО ДЕЙСТВИЯ НЕКОТОРЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ АСТРОВЫХ ВОСТОЧНОЙ СИБИРИ

Арсэн Владимирович Цыренжапов1, Елена Геннадьевна Горячкина2,

Ольга Игоревна Мазунова2, Галина Михайловна Федосеева2

Резюме. Изучено антиоксидантное действие растений семейства Asteraceae, произрастающих на территории Восточной Сибири. Наиболее выраженное мембраностабилизирующее действие (in vitro) показали сухие экстракты эдельвейса скученного, гетеропапуса алтайского и кошачьей лапки двудомной, в отличие от экстрактов трёхрё-берника непахучего и нивяника обыкновенного. Кроме того, установлено их положительное влияние при экспериментальном гепатите. При этом экстракт эдельвейса скученного уже на 7 сутки опыта снижал уровни малонового диальдегида (МДА) крови на 27%, диеновых конъюгатов в крови - на 36%, МДА в желчи у белых крыс - на 22% по сравнению с контролем. Сухие экстракты гетеропапуса алтайского и кошачьей лапки двудомной уступили по уровню антиоксидантного действия препарату сравнения холосасу.

Ключевые слова: гетеропаппус алтайский, кошачья лапка двудомная, нивяник обыкновенный, трёхрёберник непахучий, эдельвейс скученный, антиоксидантная активность, мембраностабилизирующее действие.

THE STUDY OF ANTIOXIDANT ACTION OF REPRESENTATIVES OF SOME ASTERACEAE IN EASTERN SIBERIA

A.V. Tsyrenzhapov1, E.G. Goryachkina2, O.I. Mazunova2, G.M. Fedoseeva2

('Scientific Center of Reconstructive and Restorative Medicine, Siberian Branch of the Russian Academy of Medical

Sciences, Irkutsk; 2Irkutsk State Medical University, Russia)

Summary. An antioxidant action of plants of the Asteraceae growing on the territory of Eastern Siberia is studied. The dry extracts of an Leontopodium conglobatum, Heteropappus altaicus, Anthenaria dioica, in contrast to the extracts of a Tripleurospermum inodorum and Leucantemum vulgare showed the most expressed membrane stabilizing effect (in vitro). Besides, their positive influence is established in experimental hepatitis. Thus extract of an Leontopodium conglobatum for the 7th days of experience 27% lowered levels of MDA and diene conjugates in blood and MDA in bile of white rats, 36% and 22%, respectively, in comparison with control. Dry extracts of Heteropappus altaicus and a Anthenaria dioica conceded on the level of antioxidant action to a comparison preparation.

Key words: Heteropappus altaicus, Anthenaria dioica, Leucantemum vulgare, Tripleurospermum inodorum, Leontopodium conglobatum, antioxidant activity, membrane-stabilizing effect.

Болезни печени представляют одну из наиболее актуальных проблем современного здравоохранения, учитывая их высокую распространенность и неуклонный рост в современном мире [4].

Ключевая роль в прогрессировании хронических диффузных заболеваний печени принадлежит угнетению адаптационных реакций системы антиоксидантной защиты [6].

Известно, что природные полифенолы: витамины, фла-воноиды (в частности, кверцетин, рутин и др.), широко применяются в качестве антиоксидантов [13]. Растения, содержащие полифенолы, являются перспективными для включения в состав лекарственных препаратов и биологически активных добавок к пище, назначаемых при соответствующих заболеваниях или с целью профилактики.

Ранее сообщалось о результатах изучения полифеноль-ного комплекса представителей семейства астровых (сложноцветных) флоры Восточной Сибири [2].

Целью работы явилось изучение антиоксидантной активности некоторых представителей семейства сложноцветных (астровых) флоры Восточной Сибири для определения перспективности внедрения в медицинскую практику.

Материалы и методы

Объектами исследования послужили трёхрёберник непахучий

- Leontopodium conglobatum и кошачья лапка двудомная (КЛД) - Anthenaria dioica. Сырьё - трава - собрано в период

массового цветения и содержало максимальное количество окисляемых полифенолов. Сухие экстракты получены по общепринятой методике [2].

На первом этапе (in vitro) проведёно скриниг-исследование мембраностабилизирующего действия лекарственных средств указанных растений. В качестве объекта исследования использована суспензия отмытых эритроцитов донорских 1%. Гемолиз эритроцитов вызывали реактивом Фентона (перекисный гемолиз) и добавлением воды очищенной (осмотический гемолиз) [5]. Сухие экстракты исследовали в соотношении 0,5 мг/1 мл. Степень гемолиза измеряли спектрофотометрически через 24 часа по поглощению надосадочной жидкости при 420 нм.

На втором этапе (in vivo) антиоксидантное действие сухих экстрактов, с выраженным мембраностабилизирующим действием, изучали на животных при экспериментальном токсическом гепатите. Опыты проводили на 60 белых крысах линии Wistar обоего пола, массой 300 г, в строго определенные часы при одном температурном и пищевом режиме.

Экспериментальный токсический гепатит вызывали подкожным введением крысам тетрахлорметана раствора масляного 50% [7].

Изучаемые экстракты вводили опытной группе крыс зондом в желудок в объеме 1 мл на 100 г массы животного (21 день). Исследуемые таким образом сухие экстракты ЭС, ГА и КЛД вводили животным в дозе 100 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали холосас [8], который вводили крысам с экспериментальным гепатитом в объёме 0,1 мл на 100 г массы. Контрольной группе животных вводили в том же объеме интрагастрально воду очищенную. Оценку жел-

Таблица 1

Влияние сухих экстрактов ЭС, ГА и КЛД на внешнесекреторную функцию печени при токсическом гепатите у белых крыс (М±т), п=10

Условия Скорость секреции желчи в течение Общее количество

опыта 4 часов, мг/мин на 100 г желчи за 1-4 часы

1 ч 2 ч 3 ч 4 ч мг/100 г

7 сутки

Интактные 6,2±0,3 6,3±0,6 6,3±0,6 6,1±0,6 1494±101

Контроль 5,6±0,3 5,3±0,2 5,3±0,2 4,9±0,3 1266±23

Холосас 7,0±0,6 7,0±0,5 6,7±0,6 5,7±0,5 1584±126

ЭС 6,2±0,5 6,7±0,5 6,5±0,6 5,8±0,5 1512±148

ГА 6,2±0,2 5,9±0,3 5,8±0,3 5,6±0,4 1410+112

КЛД 6,8±0,3 6,3±0,6 6,0±0,6 5,8±0,6 1494+101

14 сутки

Контроль 5,6±0,2 5,2±0,1 5,0±0,2 4,7±0,2 1230+39

Холосас 6,8±0,3 7,0±0,2 7,1±0,4 6,3±0,05 1632+99

ЭС 6,0±0,2 6,0±0,4 5,8±0,5 5,7±0,4 1410+83

ГА 5,9±0,4 5,6±0,4 5,6±0,5 5,4±0,4 1350+104

КЛД 6,5±0,2 7,1±0,1 6,0±0,2 5,5±0,2 1482+40

21 сутки

Контроль 5,9±0,1 5,8±0,2 5,4±0,4 4,5±0,2 1296+80

Холосас 6,9±0,2 6,3±0,1 6,0±0,1 5,8±0,1 1500+11

ЭС 6,4±0,6 6,0±0,4 5,8±0,1 5,0±0,2 1392+105

ГА 6,0±0,3 5,9±0,3 5,9±0,5 5,0±0,3 1368+63

КЛД 6,5±0,1 6,2±0,2 5,9±0,4 5,2±0,2 1428+80

чевыделительной функции печени крыс проводили на 7, 14 и 21 сутки наблюдения, по скорости секреции желчи, общему ее объему [11]. В эти же сроки, активность перекисного окисления липидов (ПОЛ) контролировали посредством спектрофотометрического определения содержания конечного продукта ПОЛ МДА в сыворотке крови [12], в сецернируемой желчи [10]. Кроме того, изучали в сыворотке крови крыс уровень содержания ДК [1].

Для представления количественных данных приводили описательные статистики: среднее (М) и стандартная ошибка (т). При анализе межгруп-повых различий для независимых выборок по каждому из количественных признаков после проверки распределения на нормальность использовали параметрический критерий Стьюдента (1-тест) [9]. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез р=0,05.

Результаты и обсуждение

На I этапе исследований установлено, что сухой экстракт ЭС проявляет мембраностабилизирующее действие (в условиях in vitro). При этом он снижает степень гемолиза эритроцитов в 1,5 раза по сравнению с контролем. Сухой экстракт ГА уменьшает степень гемолиза эритроцитов, вызванного реактивом Фентона, на 35% по сравнению с контролем. Одновременно ЭС и ГА способствовали снижению степени гемолиза эритроцитов на 12% при добавлении в среду воды очищенной по сравнению с контролем.

Сухие экстракт КЛД и НО также проявляют мембраностабилизирующую активность, о чём свидетельствует уменьшение гемолиза, вызванного реактивом Фентона, соответственно, на 21% и на 15% по сравнению с контролем.

Использование указанных экстрактов не сопровождалось существенным повышением устойчивости мембран эритроцитов к действию воды очищенной.

Сухой экстракт ТН обладает мембраностабилизирующей активностью,

о чём свидетельствует уменьшение степени гемолиза, вызванного реактивом Фентона на 11% по сравнению с контролем. Экстракт не вызывал повышение устойчивости мембран эритроцитов к действию воды очищенной.

Таким образом, активность экстрактов ЭС и ГА превосходит эффекты других экстрактов. Экстракты ТН и НО уступают по мембраностабилизирующему действию.

На II этапе исследований установлено, что в процессе экспериментальной фармакотерапии токсического гепатита сухим экстрактом ЭС наблюдали ускорение желчевыделительной функции печени крыс (табл. 1).

На 7 день эксперимента у крыс, получавших ЭС, скорость секреции желчи возрастала на 1026%, а общее количество желчи, выделенное за 1-4 часа наблюдения, повышалось на 19% по сравнению с контролем. На 14 день опыта, под влиянием ЭС, скорость секреции желчи возрастала на 7-21%, общее количество желчи повышалось на 14%, по сравнению с контролем. На 21 день опыта у крыс, получавших испытуемый ЭС, скорость секреции желчи и концентрация желчных кислот возрастала на 8-11% и общее количество выделенной желчи на 7%, по сравнению с контролем.

Следует отметить, что сухой экстракт ГА проявил незначительное увеличение холереза и общего количества желчи.

Тогда как, сухой экстракт КЛД проявил значительное холеретическое действие, по сравнению с контролем, уже с 7 дня эксперимента (табл. 1). При этом препарат сравнения холосас на 7-14-21 день эксперимента проявил выраженное холеретическое действие и повышал общее количество выделенной желчи по сравнению с контролем. Параллельно

проведенные исследования уровня продуктов ПОЛ в биологических жидкостях показали, что ЭС обладает выраженным антиоксидантным действием. Так, уже с 7 дня опыта он снижал уровень МДА в крови и желчи на 27% и 22% соответственно по сравнению с контролем (табл. 2).

Второе изучаемое растение, ГА, проявил выраженное действие на 21 день опыта. Сухой экстракт КЛД на всех этапах исследования проявил незначительное действие. Препарат сравнения холосас оказывал выраженное антиоксидантное действие на всех сроках исследования (табл. 2).

Таблица 2

Влияние сухих экстрактов ЭС, ГА и КЛД на биохимические показатели биологических жидкостей у крыс при токсическом гепатите (М±т), п=10

Показатели Интактные крысы Контроль Холосас ЭС ГА КЛД

7 сутки

МДА крови, мкмоль/мл мин 1,3+0,05 1,9+0,06 1,4+0,01 1,4+0,10 1,6+0,04 1,7+0,03

МДА желчи, мкмоль/мл мин 19,0+1,8 46+0,3 31+0,5 36+0,3 40,2+0,05 41,0+0,6

ДК крови, условные ед. 6,0+0,27 9,4+0,62 6,0+0,46 6,1+0,28 7,5+0,2 8,1+0,7

14 сутки

МДА, крови мкмоль/мл мин 1,2+0,05 1,6+0,03 1,1+0,03 1,1+0,06 1,3+0,1 1,4+0,06

МДА желчи, мкмоль/мл мин 18,0+0,9 37,5+0,2 27,0+0,6 31,1+0,8 33+0,3 35,4+0,3

ДК крови, условные ед 6,0+0,27 10,4+1,42 7,5+0,25 8,9+0,49 9,2+0,4 9,4+0,2

21 сутки

МДА, крови мкмоль/мл мин 0,5+0,05 1,2+0,03 0,7+0,03 0,8+0,06 0,9+0,09 1,1+0,1

МДА желчи, мкмоль/мл мин 17,0+0,3 35,0+0,2 25,5+0,3 29,0+0,4 31,2+0,3 32,3+0,4

ДК крови, условные ед 4,0+0,27 8,4+1,42 5,5+0,25 6,9+0,49 7,1+0,04 6,9+0,4

ЛИТЕРАТУРА

1. Гаврилов Б.В., Мишкорудная М.И.

Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови // Лабораторное дело. -1983. - №3. - С.33-35.

2. Государственная фармакопея СССР. Вып. 2. Общие ме-

тоды анализа. Лекарственное растительное сырье. - XI изд., доп. - М: Медицина, 1990. - 44о с.

3. Горячкина Е.Г., Федосеева Г.М., Максимова О.П. Фармакогностическое изучение перспективных представителей флоры Восточной Сибири: эдельвейс скучен-

ный или Leontopodium conglobatum (Tuch.) Hand.-Mazz // Естественные и технические науки. Современная медицина и фармацевтика: анализ и перспективы развития: Материалы I Международной научно-практической конференции. - М.,

2011. - С.бб-У0.

4. Звягинцева Т.Д. Эффективное лечение хронических диффузных заболеваний печени // Здоровье Украины. - 200У.

- №11-12. - С.50-51.

5. Ковалев И.Е, Данилова Н.П., Андронати С.А., Жеребин Ю.Л. Влияние эномеланина на гемолиз эритроцитов, вызываемый свободнорадикальными реакциями и др. факторами // Фармакология и токсикология. - 198б. - №4. - С.89-91.

6. Кулагина Е.А., Курилович С.А., Максимов В.Н. и др. Клинико-генетическое исследование синдрома перегрузки железом при хронических диффузных заболеваниях печени // Бюллетень СО РАМН. - 2009. - №3. - С.Зб-41.

У. Левшин Б.И. Экспериментальная фармакотерапия препаратами селена и тиазолидина токсического поражения печени: Автореф. дисс. ... д-ра мед. наук. - Харьков, 19У3. - 29 с.

8. Машковский М.Д. Лекарственные средства: Справочник. - М.: Новая волна, 200б. - 400 с.

9. Методы статистической обработки медицинских дан-

ных: Методические рекомендации для ординаторов и аспирантов медицинских учебных заведений, научных работников / Сост. А.Г. Кочетов, О.В. Лянг., В.П. Масенко и др. - М.: РКНПК, 2012. - 42 с.

10. Скакун Н.П., Высоцкий И.Ю. Применение метода с ти-обарбитуровой кислотой для определения продуктов липо-пероксидации в желчи. // Новые лабораторные диагностики хронических болезней внутренних органов: III съезд республиканского научного общества врачей лаборантов (тезисы докладов). - Ужгород, 1983. — С.386-387.

11. Скакун Н.П., Олейник А.Н. Сравнительное действие атропина и метацина на внешнесекреторную функцию печени // Фармакология и токсикология. - 1967. - Т. 30. №3. -С.334-337.

12. Темирбулатов Р.А., Селезнев Е.И. Метод повышения интенсивности свободнорадикального окисления липидсодержащих компонентов крови и его диагностическое значение // Лабораторное дело. - 1981. - №4. - С.209-211.

13. Филиппенко Т.А., Грибова Н.Ю. Антиоксидантное действие экстрактов лекарственных растений и фракций их фенольных соединений // Химия растительного сырья. -

2012. - №1. - С.77-81.

REFERENCES

1. Gavrilov B. V., Mishkorudnaya M.I. The spectrophotometric determination of lipid hydroperoxide in plasma // Laboratornoye delo. - 1983. - №3. - P33-35. (in Russian).

2. Governmental pharmacopeia the USSR. Vol. 2. General methods of analysis. Medicinal vegetative raw material. - XI ed., suppl. - Moskow: Medicine, 1990. - 440 p. (in Russian).

3. Goryachkina E.G., Fedoseyeva G.M., Maximova O.P. Pharmacognostic prospective study of promising members of flora of Eastern Siberia: Leontopodium conglobatum (Tuch.) Hand.-Mazz // Estestvehye i technicheskie nauki. Sovremennaya medicina i pharmaceutica: analysis i perspectivy rasvitia: Materialy I Mezhdunarodnoy nauchno-practicheskoy conferencii.

- Moskow, 2011. - P.66-70. (in Russian).

4. Zvyagintsev T.D. Effective treatment of chronic diffuse liver disease // Zdorovie Ukrainy. - 2007. - №11-12. - P50-51. (in Russian).

5. Kovalev I.E., Danylova N.P., Andronati SA, Zherebin J.L. Influence of enomelanina on erythrocyte hemolysis caused by free radical reactions and other factors // Pharmacologia i toxikologia.

- 1986. - № 4. - P89-91. (in Russian).

6. Kulagin E.A., Kurylowicz S.A., Maximov V.N., et al. Clinical and genetic investigastion of ferrum overload syndrom at chronic diffuse liver diseases // Bjulleten’ Sibirskogo Otdelenia Rossijskoj Akademii Medizinskich Nauk. - 2009. - №3. - P36-41. (in Russian).

7. Levshin B.I. Experimental pharmacotherapy drugs selenium and thiazolidine of liver toxicity: Authoreferat dissertacii. ... Dr. med. science. - Kharkov, 1973. - 29 p. (in Russian).

8. Mashkovsky M.D. Medicines. Handbook. - Moscow: Novaya Volna, 2006. - 400 p. (in Russian).

9. The statistical processing of medical data: Methodical Instructions residents and graduate students of medical schools, researchers / Comp. A.G. Kochetov, O.V. Liang., V.P Masenko etc.

- Moskow: Kardiologiya, 2012. - 42 p. (in Russian).

10. Skakun N.P., Vysotsky I.Y. Application of the method with thiobarbituric acid for the determination of lipid peroxidation products in the bile // Noviye laboratorniye diagnostici dlya chronicheskich zabolevani vnutrenich organov: III Congress respublikanskogo obshestva vrachei laborantov (tezysi). -Uzhhorod, 1983. - P 386-387. (in Russian).

11. Skakun N.P., Oleynik A.N. Comparative effects of atropine and metatsina on exocrine function of the liver // Pharmacologiya

i toxicologiya. - 1967. - Vol. 30. № 3. - P334-337. (in Russian).

12. Temirbulatov R.A., Seleznev E.I. A method for increasing the intensity of free radical oxidation of lipid-containing blood components, and its diagnostic value // Laboratornoye delo. -1981. - №4. - P209-211. (in Russian).

13. Filippenko T.A., Gribova N.Y. The antioxidant effect of medicinal plant extracts and fractions of phenolic compounds // Chymiya rastitelnogo syriya. - 2012. - №1. - P77-81. (in Russian).

Информация об авторах:

Цыренжапов Арсен Владимирович - к.м.н., младший научный сотрудник, 664003, г. Иркутск, ул. Борцов Революции, д.1, тел. (3952) 290354; Горячкина Елена Геннадьевна - доцент кафедры фармакогнозии и ботаники ИГМУ, к.ф.н., 664003, Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, тел. (3952) 613174, e-mail: rosforest@mail.ru; Федосеева Галина Михайловна -профессор кафедры, д.ф.н.; Мазунова Ольга Игоревна - аспирант кафедры.

Information about the author:

Tsyrenzhapov Arsena Vladimirovich - PhD, Junior Researcher, Bortzov Revolutsii srt., 1, Irkutsk, 664003, Russia, (3952) 290354, e-mail: arsen_21@mail.ru; Goryachkina Elena Gennadievna - PD, PhD, Associate Prof., Krasnogo Vosstaniya St., 1, Irkutsk, 664003, Russia, tel. (3952) 613174, e-mail: rosforest@mail.ru; Fedoseeva Galina Michailovna - Prof., PD, PhD, Krasnogo Vosstaniya st., 1, Irkutsk, 664003, Russia, tel. (3952) 613174; Mazunova Olga Igorevna - graduate student, Krasnogo Vosstaniya, St., 1, Irkutsk, 664003,

Russia, tel. (3952) 613174.

© ЕФРЕМОВ Е.А., ЗЫКОВА И.Д., ЕФРЕМОВ А.А. - 2013 УДК: 615.322 : 616. 1-085

КОМПОНЕНТНЫЙ СОСТАВ ЭФИРНОГО МАСЛА И НЕКОТОРЫХ ЭКСТРАКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ PULMONARIA MOLLIS HORNEM

Ефремов Евгений Александрович, Ирина Дементьевна Зыкова, Александр Алексеевич Ефремов

Резюме. Методом хромато-масс-спектрометрии исследован компонентный состав эфирного масла медуницы мягкой (Pulmonaria mollis Hornem), полученного в условиях исчерпывающей гидропародистилляции.