АНТИТЕЛА ПРОТИВ 5Т4 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Антитело, которое специфически связывает антиген 5Т4 человека, причем указанное антитело:
(а) содержит антигенсвязывающий домен антител мыши А1, А2 или A3;
(б) конкурирует за связывание 5Т4 с антителами мыши А1, А2 или A3;
(в) связывает эпитоп 5Т4, с которым связываются антитела А1, А2 или A3;
или
(г) содержит 5Т4-связывающий фрагмент антитела согласно (а)-(в).
2
2. Антитело по п.1, отличающееся тем, что указанное антитело представляет собой химерное антитело, гуманизированное антитело, одноцепочечное антитело, Fab фрагмент, F(ab) фрагмент, Fv фрагмент, тетрамерное антитело, четырехвалентное антитело, антитело с множественной специфичностью, домен-специфичное антитело, однодоменное антитело или рекомбинантный белок.
3. Антитело по п.1, отличающееся тем, что указанное антитело представляет собой моноклональное антитело мыши.
-7
-12
4. Антитело по п.1, отличающееся тем, что указанное антитело имеет афинность связывания с антигеном 5Т4 человека, составляющую от по меньшей мере примерно 1×10 до примерно 1×10 моль.
5. Антитело по п.1, отличающееся тем, что указанное антитело специфично направлено на 5Т4-экспрессирующие клетки in vivo.
6. Антитело по п.1, отличающееся тем, что вариабельная область тяжелой цепи указанного антитела содержит последовательность остатков аминокислот 20-138 последовательности SEQ ID №:2, остатков 19-135 последовательности SEQ ID №:6, остатков 20-141 последовательности SEQ ID №:10, остатков 1-119 последовательности SEQ ID №:49; или остатков вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного антитела А1, А2 или A3.
7. Антитело по п.1, отличающееся тем, что вариабельная область легкой цепи указанного антитела содержит последовательность остатков 21-127 последовательности SEQ ID №:4, остатков 23-130 последовательности SEQ ID №:8, остатков 21-127 последовательности SEQ ID №:12; или
остатков вариабельной области легкой цепи гуманизированного антитела А1, А2 или A3.
8. Антитело по п.1, отличающееся тем, что вариабельная область тяжелой цепи указанного антитела содержит последовательность остатков аминокислот 20-138 последовательности SEQ ID №:2 и в котором вариабельная область легкой цепи содержит последовательность остатков аминокислот 21-127 последовательности SEQ ID №:4.
9. Антитело по п.1, отличающееся тем, что вариабельная область тяжелой цепи указанного антитела содержит последовательность остатков аминокислот 19-135 последовательности SEQ ID №:6 и в котором вариабельная область легкой цепи содержит последовательность остатков аминокислот 23-130 последовательности SEQ ID №:8.
10. Антитело по п.1, отличающееся тем, что вариабельная область тяжелой цепи указанного антитела содержит последовательность остатков аминокислот 20-141 последовательности SEQ ID №:10 и в котором вариабельная область легкой цепи содержит последовательность остатков аминокислот 21-127 последовательности SEQ ID №:12.
11. Антитело по п.2, отличающееся тем, что указанное антитело представляет собой гибридное или гуманизированное антитело против 5Т4.
12. Антитело по п.11, отличающееся тем, что указанное антитело содержит константные области, полученные из константных областей антител человека.
13. Антитело по п.12, отличающееся тем, что константная область легкой цепи человека получена из константной области легкой цепи каппа человека.
14. Антитело или фрагмент антитела по п.12, отличающееся тем, что константная область тяжелой цепи человека получена из константной области легкой цепи lgG1, lgG2, lgG3 или lgG4 человека.
15. Антитело или фрагмент антитела по п.14, отличающееся тем, что константная область тяжелой цепи человека lgG4 содержит пролин в положении 241.
16. Антитело по п.11, отличающееся тем, что вариабельная область хотя бы одной легкой цепи или хотя бы одной тяжелой цепи указанного антитела содержит:
(а) каркасные области, содержащие остатки каркасной области антитела человека; и
(б) один или более гипервариабельных участков вариабельной области легкой цепи последовательности SEQ ID №:4, 8 или 12, или один и более гипервариабельных участков вариабельной области тяжелой цепи последовательности SEQ ID №:2, 6 или 10.
17. Антитело по п.16, отличающееся тем, что остатки аминокислот человека представляют собой остатки аминоксилот каркасных областей антител человека, выбранных из группы, состоящей из:
(а) каркасной области тяжелой цепи антитела человека, выбранной из группы, включающей: DP-21 (VH7), DP-54 (VH3-07), DP-47 (VH3-23), DP-53 (VH-74), DP-49 (VH3-30), DP-48 (VH3-13), DP-75, DP-8 (VH1-2), DP-25, VI-2b и VI-3 (VH1-03), DP-15 и V1-8 (VH1-08), DP-14 и V1-18 (VH1-18), DP-5 и V1-24P (VH1-24), DP-4 (VH1-45), DP-7 (VH1-46), DP-10, DA-6 и YAC-7 (VH1-69), DP-88 (VH1-e), DP-3 и DA-8 (VH1-f);
(б) каркасной области легкой цепи антитела человека DPK24 подгруппы IV клона зародышевой линии, VkIII подгруппы (DPK23, DPK22, DPK20, DPK21) или VkI клона зародышевой линии (DPK9, DPK1, O2, DPK-7);
(в) консенсусной последовательности каркасной области тяжелой цепи по п.(а); или
(г) каркасной области, которая по меньшей мере на 63% идентична каркасной области по п.(а)-(с).
18. Антитело по п.16, которое содержит по меньшей мере два гипервариабельных участка, имеющих любую из последовательностей SEQ ID №:2, 4, 6, 8, 10, или 12.
19. Антитело по п.18, отличающееся тем, что антитело является гуманизированным, при этом легкая цепь указанного антитела содержит вариабельную область, содержащую по меньшей мере два или три гипервариабельных участка любой из последовательностей SEQ ID №:4, 8 или 12.
20. Антитело по п.19, отличающееся тем, что антитело является гуманизированным, при этом легкая цепь указанного антитела содержит вариабельную область, содержащую три гипервариабельных участка любой из последовательностей SEQ ID №:4, 8 или 12.
21. Антитело по п.16, отличающееся тем, что антитело является гуманизированным, при этом тяжелая цепь указанного антитела содержит вариабельную область, содержащую по меньшей мере два гипервариабельных участка любой из последовательностей SEQ ID №:2, 6 или 10.
22. Антитело по п.21, отличающееся тем, что антитело является гуманизированным, при этом тяжелая цепь указанного антитела содержит вариабельную область, содержащую три гипервариабельных участка любой из последовательностей SEQ ID №:2, 6 или 10.
23. Антитело по п.16, которое антитело является гуманизированным и содержит гипервариабельные участки последовательностей SEQ ID №:2 и 4, гипервариабельные участки последовательностей SEQ ID №:6 и 8 или гипервариабельные участки последовательностей SEQ ID №:10 и 12.
24. Антитело по п.11, отличающееся тем, что последовательность вариабельной области тяжелой цепи указанного антитела содержит:
(а) последовательность остатков аминокислот 20-138 последовательности SEQ ID №:2;
(б) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 85% идентична остаткам 20-138 последовательности SEQ ID №:2;
(в) последовательность остатков аминокислот 19-135 последовательности SEQ ID №:6
(г) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 86% идентична остаткам 19-135 последовательности SEQ ID №:6;
(д) аминокислотную последовательность остатков 20-141 из последовательности с идентификационным номером SEQ ID №:10,
(е) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 91% идентична остаткам 20-141 последовательности SEQ ID №:10,
(ж) последовательность остатков аминокислот любой из последовательностей SEQ ID №:49, 51, 52, 54, 56, 77, 78, 81, или 82;
(з) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 91% идентична последовательности SEQ ID №:51;
(и) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 78% идентична последовательности с идентификационным номером SEQ ID №:54;
(к) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 89% идентична последовательности SEQ ID №:77;
(л) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 79% идентична последовательности SEQ ID №:78;
(м) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID №:81; или
(н) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 78% идентична последовательности SEQ ID №:82.
25. Антитело по п.11, отличающееся тем, что последовательность вариабельной области легкой цепи указанного антитела содержит:
(а) последовательность остатков аминокислот 21-127 последовательности SEQ ID №:4;
(б) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 94% идентична остаткам 21-127 последовательности SEQ ID №:4;
(в) последовательность остатков аминокислот 23-130 последовательности SEQ ID №:8;
(г) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 96% идентична остаткам 23-130 последовательности SEQ ID №:8;
(д) последовательность остатков аминокислот 21-127 последовательности SEQ ID №:12;
(е) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 98% идентична остаткам 21-127 последовательности SEQ ID №:12;
(ж) последовательность остатков аминокислот любой из последовательностей SEQ ID №:58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 79, 80, 83, или 84;
(з) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 83% идентична последовательности SEQ ID №:60;
(и) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 93% идентична последовательности SEQ ID №:70;
(к) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 85% идентична последовательности SEQ ID №:76;
(л) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 85% идентична последовательности SEQ ID №:76;
(м) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 88% идентична последовательности SEQ ID №:79;
(н) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 84% идентична последовательности SEQ ID №:80;
(м) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 90% идентична последовательности SEQ ID №:83; или
(н) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 91% идентична последовательности SEQ ID №:84.
26. Конъюгат антитела с лекарственным средством для доставки лекарственного средства, включающий:
(а) антитело согласно любому из пп.1-25 и
(б) лекарственное средство, которое напрямую или опосредовано связано с антителом.
27. Конъюгат антитела с лекарственным средством по п.26, отличающийся тем, что указанное лекарственное средство представляет собой терапевтический агент, выбранный из группы, состоящей из цитотоксина, радиоизотопа, иммуномодулирующего средства, противоангиогенного средства, противопрофилеративного средства, проапоптического средства, химиотерапевтического агента и терапевтической нуклеиновой кислоты.
28. Конъюгат антитела с лекарственным средством по п.27, отличающийся тем, что терапевтический агент представляет собой цитотоксин.
29. Конъюгат антитела с лекарственным средством по п.26, отличающийся тем, что цитотоксин представляет собой антибиотик, ингибитор полимеризации тубулина, алкилирующий агент, ингибитор синтеза белка, ингибитор протеин киназы, ингибитор фосфатазы, ингибитор топоизомеразы или фермент.
30. Конъюгат антитела с лекарственным средством по п.27, отличающийся тем, что цитотоксин представляет собой антибиотик.
31. Конъюгат антитела с лекарственным средством по п.30, отличающийся тем, что антибиотик представляет собой калихеамицин.
32. Конъюгат антитела с лекарственным средством по п.31, отличающийся тем, что калихеамицин представляет собой N-ацетильное производное или дисульфидный аналог калихеамицина.
33. Конъюгат антитела с лекарственным средством по п.32, отличающийся тем, что калихеамицин представляет собой N-ацетил-γ-калихеамицин.
34. Конъюгат антитела с лекарственным средством по п.26, отличающийся тем, что лекарственное средство связано с антителом через линкер.
35. Конъюгат антитела с лекарственным средством по п.34, отличающийся тем, что линкер выбирают из группы, включающей 4-(4'-ацетилфенокси)-масляную кислоту (AcBut), 3-ацетилфенилуксусную кислоту (AcPac), 4-меркапто-4-метил-валериановую кислоту (Amide), и их производные.
36. Способ доставки лекарственного средства в 5Т4-экспрессирующие клетки, включающий приведение клеток в контакт с конъюгатом антитела с лекарственным средством, содержащим (i) антитело против 5Т4 по п.1 формулы изобретения и (ii) лекарственное средство, которое связано с антителом против 5Т4 напрямую или опосредовано.
37. Способ по п.36, отличающийся тем, что лекарственное средство приникает в целевую клетку.
38. Способ лечения субъекта, имеющего 5Т4-положительный рак, который включает введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата антитела против 5Т4 с лекарственным средством, при этом указанный конъюгат содержит (i) антитело против 5Т4 по любому из пп.1-25 формулы изобретения и (ii) терапевтическое средство, которое связано с антителом против 5Т4 напрямую или опосредовано.
39. Способ по п.38, отличающийся тем, что конъюгат антитела против 5Т4 с лекарственным средством представляет собой конъюгат антитела против 5Т4 с калихеамицином, при этом способ дополнительно включает введение второго терапевтического средства, причем конъюгат антитела против 5Т4 с калихеамицином и второе лекарственное средство вводят одновременно или последовательно в любом порядке.
40. Антитело, которое специфично связывается с эпитопом 5Т4 человека, содержащее остатки 173-252 и 276-355 последовательности SEQ ID №:87, за исключением остатков 213-214 указанной последовательности.
41. Антитело, которое специфично связывается с эпитопом 5Т4 человека, содержащее аминокислоты 276-355 последовательности SEQ ID №:87.
42. Антитело, которое специфично связывается с эпитопом 5Т4 человека, содержащее аминокислоты 83-163 последовательности SEQ ID №:87.
43. Антитело, которое специфично связывается с 5Т4 яванского макака, которое имеет последовательность аминокислот SEQ ID №:86.
44. Изолированный белок 5Т4, включающий:
(а) последовательности аминокислот SEQ ID №:85 или 86 или
(б) последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности SEQ ID №:85.
45. Антитело, которое специфично связывает изолированный белок 5Т4 по п.44.
46. Изолированная нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи антитела против 5Т4, включающая:
(а) последовательность нуклеотидов 58-414 последовательности SEQ ID №:1;
(б) последовательность нуклеотидов 55-405 последовательности SEQ ID №:5;
(в) последовательность нуклеотидов 58-423 последовательности SEQ ID №:9;
(г) последовательность, кодирующую любую из последовательностей SEQ ID №:48, 50, 53 или 55;
(д) последовательность, которая на 89% идентична последовательности SEQ ID №:50, если покрытие запроса составляет 100%;
(е) последовательность, которая на 82% идентична последовательности с идентификационным номером SEQ ID №:53, если покрытие запроса составляет 100%; или
(ж) нуклеиновую кислоту, которая специфично гибридизуется с комплементом любой из последовательностей (а)-(г) при строгих условиях гибридизации.
47. Изолированная нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельную область легкой цепи антитела против 5Т4, включающая:
(а) последовательность нуклеотидов 61-381 последовательности SEQ ID №:3;
(б) последовательность нуклеотидов 67-390 последовательности SEQ ID №:7;
(в) последовательность нуклеотидов 61-381 последовательности SEQ ID №:11;
(г) последовательность нуклеотидов, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи гуманизированного антитела А1, А2 или A3, которая имеет любую последовательность из SEQ ID №:57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73 или 75;
(д) последовательность нуклеотидов, которая на 84% идентична последовательности SEQ ID №:59, если покрытие запроса составляет 100%;
(е) последовательность нуклеотидов, которая на 86% идентична последовательности SEQ ID №:69, если покрытие запроса составляет 100%;
(ж) последовательность нуклеотидов, которая на 85% идентична последовательности SEQ ID №:75, если покрытие запроса составляет 100%; или
(з) нуклеиновую кислоту, которая специфично гибридизуется с комплементом любой из последовательностей (а)-(г) при строгих условиях гибридизации.