СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИРОВАННОГО ИЗВЛЕЧЕНИЯ РОСТРАЛЬНЫХ И КАУДАЛЬНЫХ ЧАСТЕЙ МИНДАЛЕВИДНОГО КОМПЛЕКСА МОЗГА И УСТРОЙСТВО ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
METHOD OF DIFFERENTIATED EXTRACTION OF ROSTRAL AND CAUDAL PARTS OF RAT'S AMYGDALA AND DEVICE FOR ITS REALISATION

Изобретение относится к медицине, а именно к нейробиологии.
Известен способ приготовления переживающих срезов пириформной доли мозга (И.Г.Акмаев, Л.Б.Калимуллина Миндалевидный комплекс мозга, М. «Наука», 1993, стр. 177-181), в котором иссечение пириформной доли мозга, включающей миндалевидный комплекс, осуществляют специальным резцом, выполненным в форме эллиптического параболоида. При этом угол иссечения устанавливают от 18-22 градусов к продольной оси мозга.
Недостатком этого способа является невозможность одномоментной дифференциации иссекаемого миндалевидного комплекса на кортикомедиальный и базолатеральный отделы.
Известен также способ [изобретение по А.С. №1679246, кл. G01N 33/48, A61B 10/00, опубл. 23.09.1991], в котором иссечение пириформной доли мозга, включающей миндалевидный комплекс, осуществляют специальным резцом, выполненным в форме эллиптического параболоида. При этом угол иссечения устанавливают от 18-22 градусов к продольной оси мозга.
Недостатком этого способа является невозможность одномоментной дифференциации иссекаемого миндалевидного комплекса на кортикомедиальный и базолатеральный отделы.
Наиболее близким является способ [патент №2438193, кл. G09B 23/28, опубл. 27.06.2009], в котором при приготовлении переживающих срезов пириформной доли мозга путем иссечения ткани по форме эллиптического параболоида под углом от 18 до 22 градусов к продольной оси мозга с последующей инкубацией в питательной среде, иссечение производят с одномоментной дифференциацией пириформной доли мозга на кортикомедиальный и базолатеральный отделы миндалевидного комплекса.
Недостатком этого способа является невозможность одномоментной дифференциации на ростральные и каудальные части кортикомедиального и базолатерального отделов иссекаемого миндалевидного комплекса.
Целью изобретения является полное извлечение структур пириформной доли мозга крысы с одномоментной дифференциацией их на ростральные и каудальные части кортикомедиального и базолатерального отделов миндалевидного комплекса.
Поставленная цель достигается дифференцированным извлечением образцов ткани миндалевидного комплекса мозга крысы в два этапа, при этом извлеченные ростральные и каудальные части комплекса имеют конусовидную форму.
На первом этапе иссечение ткани проводится в ростро-каудальном направлении, начиная от обонятельной вырезки мозга, что позволяет выделить ростральные части кортикомедиального и базолатерального отделов миндалевидного комплекса мозга.
На втором этапе иссечение ткани осуществляется в каудо-ростральном направлении, начиная от уровня задней поверхности серого бугра гипоталамической области мозга.
Поставленная цель достигается также тем, что устройство для дифференцированного извлечения ростральных и каудальных частей миндалевидного комплекса конусовидной формы выполнено в виде резца с полостями, передней режущей кромкой с выступом и имеющего центральную режущую часть, при этом резец дополнительно содержит ограничители емкости полостей, выполненные с возможностью передвижения внутри полостей и располагающиеся симметрично с каждой стороны от центральной режущей части, разделяя полости резца на две части.
Способ позволяет получить пириформную долю мозга крысы с одномоментным разделением ее на ростральные и каудальные части кортикомедиального и базолатерального отделов миндалевидного комплекса с сохраненными нейрональными связями.
Для дифференцированного извлечения ростральных и каудальных частей кортикомедиального и базолатерального отделов миндалевидного комплекса в составе пириформной доли предложено устройство (рис 1) в виде резца 1 с рукояткой 1а и двумя полостями 2, содержащего центральную режущую часть 3 и переднюю режущую кромку 4 с выступом.
Резец содержит ограничители емкости полостей 5, которые плотно прилегают к стенкам полостей, но при этом выполнены съемными с возможностью передвижения их внутри полостей. Ограничители 5 располагаются симметрично с каждой стороны от центральной режущей части 3, разделяя полости 2 резца на две части. На внутренние боковые поверхности полостей резца нанесена разметка 6.
За счет ограничения емкости полостей для кортикомедиального и базолатерального отделов возможно осуществлять двухэтапное дифференцированное извлечение ростральных и каудальных частей указанных отделов мозга крысы.
Способ осуществляется следующим образом.
После декапитации и извлечения мозга из черепа крысы его располагают базальной поверхностью кверху, затем делают разрез мягких оболочек мозга вдоль медиальной границы миндалевидного комплекса, мешающих извлечению его ростральных и каудальных частей. Извлечение ростральных и каудальных частей миндалевидного комплекса проводится под углом ά=18-22° (рис.2) к продольной оси мозга, что совпадает с топографией расположения миндалевидного комплекса.
На рис.2 на базальной поверхности мозга крысы обозначены обонятельная вырезка мозга (incisure olfactoria) 7, миндалевидный комплекс 8, кортикомедиальный 9 и базолатеральный 10 отделы мозга крысы, 11 серый бугор гипоталамической области мозга, 12 точка начала I этапа извлечения (ростро-каудальное направление), 13 точка начала II этапа извлечения (каудо-ростральное направление).
На рис.3 представлены направления движения резца: угол установки режущей кромки резца к поверхности мозга β, угол изменения положения резца в ткани мозга относительно поверхности мозга γ.
На первом этапе извлечения (рис.2), передняя режущая кромка 4 резца 1 устанавливается на обонятельную вырезку мозга (incisura olfactoria) 7 на точку начала I этапа извлечения 12 под углом β=90° (рис.3) к поверхности мозга. Затем для извлечения ростральных частей кортикомедиального и базолатерального отделов переднюю режущую кромку 4 резца 1 погружают в ткань мозга под углом β=90° на глубину выступа передней режущей кромки 4 (до 1,5 мм). Затем положение резца 1 меняют до γ=20-35° (оптимально 25-30°) к поверхности мозга и вводят наклонно вниз под углом γ в ростро-каудальном направлении (от лобного полюса мозга к затылочному) до полного заполнения его полостей 2 тканью мозга. При этом угол направления движения резца составляет ά=18-22° к продольной оси мозга.
Результатом первого этапа извлечения является получение двух равных по величине кусочков ткани конусовидной формы, являющихся ростральными частями кортикомедиального и базолатерального отделов миндалевидного комплекса.
На втором этапе извлечения передняя режущая кромка 4 резца 1 устанавливается на уровне задней поверхности серого бугра гипоталамической области мозга 11 на точку начала II этапа извлечения 13 под углом β=90° (рис.3) к поверхности мозга. Затем для извлечения каудальных частей кортикомедиального и базолатерального отделов переднюю режущую кромку 4 резца 1 погружают в ткань мозга под углом β=90° на глубину выступа передней режущей кромки 4 (до 1,5 мм). Затем положение резца 1 меняют до γ=20-35° (оптимально 25-30°) к поверхности мозга и вводят наклонно вниз под углом 7 в каудо-ростральном направлении (от затылочного полюса мозга к лобному) до полного заполнения его полостей 2 тканью мозга. При этом угол направления движения резца составляет ά=18-22° к продольной оси мозга.
Результатом второго этапа извлечения является получение двух равных по величине кусочков ткани конусовидной формы, являющихся каудальными частями кортикомедиального и базолатерального отделов миндалевидного комплекса.
Предлагаемые способ и устройство позволяет выделить полностью пириформную долю с миндалевидным комплексом с дифференциацией его на ростральные и каудальные части кортикомедиального и базолатерального отделов с сохраненными нейрональными связями и использовать их для приготовления переживающих срезов в нейробиологических исследованиях, а также для получения гомогенатов и супернатантов для ВЭЖХ в нейрохимических исследованиях.