СПОСОБ ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ ЖИВОТНОВОДЧЕСКИХ ПОМЕЩЕНИЙ ОТ ВОЗБУДИТЕЛЯ ПСЕВДОМОНОЗА
METHOD OF DISINFECTION OF LIVESTOCK PREMISES FROM PSEUDOMONOSIS CAUSATIVE AGENT

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно ветеринарной санитарии.
Псевдомоноз - острая инфекционная болезнь животных и птицы, характеризующаяся у молодняка септическим процессом, поражением легких, желудочно-кишечного тракта и суставов, а у взрослых особей репродуктивных органов и молочной железы. Возбудителем псевдомоноза является грамотрицательная аэробная бактерия Pseudomonas aeruginosa, которая по антигенной структуре подразделяется на 20 серологических групп. В системе противоэпизоотических мероприятий при данной болезни в обязательном порядке предусматривается проведение ветеринарно-санитарных работ, связанных с обеззараживанием помещений, оборудования и предметов ухода за животными от возбудителя (Псевдомоноз животных / И.А. Болоцкий, А.Г. Шипицын, А.К. Васильев и др. - М.: Колос, 2010. - 223 с.).
Возбудитель псевдомоноза относится к группе устойчивых микроорганизмов (вторая группа), в отношении которых используются такие дезинфицирующие средства, как 4% раствор едкого натра, 2% раствор формалина, 3% раствор хлорной извести, 3% раствор нейтрального гипохлорита кальция, 5% раствор однохлористого йода и др. химические средства (Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора, 2002).
Обработку животноводческих помещений, оборудования и инструментария с профилактической целью и вынужденными мерами при возникновении болезни, как правило, осуществляют методом мелкокапельного орошения или аэрозольным методом с помощью различных распылителей или специальных устройств.
Недостатком традиционных дезинфицирующих средств и методов их применения является ряд обстоятельств, а именно:
- они реактогенные и вызывают разрушение различных материалов;
- токсичны для животных и человека, могут быть опасны при попадании на кожу и слизистые оболочки;
- после экспозиции требуют смывания с обеззараживаемой поверхности или инактивации (например, раствор формалина и глутарового альдегида инактивируют водным раствором аммиака, щелочи - органическими кислотами, хлорсодержащие и йодсодержащие дезинфектанты - тиосульфатом натрия);
- при использовании методом мелкокапельного орошения невозможно обеззараживать труднодоступные места, где могут сохраняться возбудители эшерихиоза - щели, кормушки, потолки, перегородки, электрокоммуникации;
- ряд дезинфектантов рекомендуется использовать только в виде горячих (70-80°C) растворов, что повышает стоимость процедуры;
- затруднительно использовать при низких (ниже 0°C) температурах.
3
Известен способ дезинфекции помещений путем обработки их озоно-воздушной смесью с концентрацией озона 2-5 мг/м в течение 50-70 мин с последующим разложением озона без проветривания помещений в течение 90-110 мин или путем проветривания в течение 10-20 мин (пат. РФ 2171118, прототип). Изобретение позволяет снизить бактериальную загрязненность воздуха и поверхностей в помещениях, улучшить дезодорацию воздуха и удешевить процесс дезинфекции за счет дорогостоящих дезинфицирующих препаратов и устройств, снизить трудоемкость процесса и обеспечить экологическую чистоту процесса дезинфекции.
Существенным недостатком данного способа является неприемлемость для использования в животноводческих помещениях, где микробная загрязненность воздуха и поверхностей в десятки тысяч раз больше, чем объектов медицинского назначения. Кроме того, в данном способе не указано, как влияет озон на выживаемость эшерихий.
Техническим решением задачи является разработка экономически/экологически целесообразного способа обеззараживания животноводческого помещения от возбудителей эшерихиоза с помощью озона.
3
3
Технический результат достигается тем, что разработан способ обеззараживания животноводческих помещений от синегнойной палочки, включающий обработку животноводческих помещений озоно-воздушной смесью, отличающийся тем, что обработку осуществляют в течение 120 мин с концентрацией озона в воздухе помещений 25 мг/м или в течение 60 мин с концентрацией озона в воздухе помещений 50 мг/м.
Для применения заявляемого технического решения были изучены обеззараживающие свойства озона, которые иллюстрируются следующими примерами.
Пример 1. Озоно-воздушную смесь получали методом диссоциации кислорода воздуха помещения в генераторе озона, который позволяет получать озон в различных концентрациях.
Бактерицидную концентрацию озоно-воздушной смеси для синегнойной палочки устанавливали экспериментально в условиях лаборатории. Озоно-воздушную смесь подавали в специальную камеру с датчиком концентрации озона, куда помещали чашки Петри с посевами тест-бактерий.
3
3
3
3
3
В каждую чашку вносили по 0,1 мл микробной суспензии, содержащей примерно 10000 микробных клеток Pseudomonas aeruginosa в 1 мл, которую равномерно распределяли по всей поверхности питательного агара (среда ЦПХ-агар). После этого посевы подвергали озонированию. В предварительных опытах было установлено, что озон в концентрации 6 мг/м приводит к полной гибели синегнойной палочки только спустя 4-5 ч, что неприемлемо для производственных условий. Поэтому в дальнейшем были испытаны концентрации озона из расчета 50, 25 и 12 мг/м при экспозиции 7, 15, 30, 60 и 120 мин. По окончании озонирования чашки с культурами помещали в термостат при температуре 37°C на 24 ч. Результаты опытов оценивали по количеству выросших колоний - колониеобразующих единиц (КОЕ). Каждое исследование проводили в трех повторностях. В качестве контроля использовались посевы, не подвергавшиеся озонированию. Результаты опыта представлены в таблице 1 из которой видно, что под действием различных концентраций озона клетки Pseudomonas aeruginosa теряют жизнеспособность уже через 7 мин, через 15 мин живых клеток остается от 71 до 44%, 30 мин - от 29 до 9%, а через 60 мин под действием озона в концентрации 50 мг/м все клетки погибли, а после воздействия озоном в концентрации 25 мг/м их осталось 4%, 12 мг/м - 12%.
3
3
После 2-часовой экспозиции отсутствие роста было во всех чашках, обработанных озоно-воздушной смесью при концентрации озона 50 и 25 мг/м, в то же время после воздействия озона в концентрации 12 мг/м количество живых клеток Pseudomonas aeruginosa составило 5%.
Таблица 1
Влияние озоно-воздушной смеси на выживаемость синегнойной палочки на поверхности питательного агара после обработки озоном
Экспозиция, мин
Pseudomonas aeruginosa
КОЕ
% выживших
КОЕ
% выживших
КОЕ
% выживших
концентрация озона 50 мг/м<sup>3</sup>
концентрация озона 25 мг/м<sup>3</sup>
концентрация озона 12 мг/м<sup>3</sup>
Контроль
1050
100
1257
100
1166
100
Опыт 7
706
67
913
73
964
83
15
466
44
751
60
833
71
30
96
9
219
17
336
29
60
0
0
48
4
135
12
120
0
0
0
0
61
5
3
3
Таким образом, наиболее эффективным режимом воздействия озоно-воздушной смеси на клетки кишечной палочки является 60 мин при концентрации озона 50 мг/м или 120 мин при концентрации озона 25 мг/м.
3
Пример 2. Был проведен опыт по определению дезинфицирующей эффективности озона в 2 режимах 60-минутном воздействии озоно-воздушной смесью при концентрации озона в ней 50 мг/м и 120-минутном воздействии при концентрации озона 25 мг/м. Озоно-воздушную смесь получали в генераторе озона, который позволяет получать озон в различных концентрациях.
2
5
2
В качестве объекта служили - отрезок доски и металлическая пластинка размерами 5×10 см (50 см), на которые с помощью орошения наносили суточную бульонную культуру синегнойной палочки из расчета 1-2×10 клеток на 1 см поверхности (примерная концентрация синегнойной палочки на загрязненных поверхностях животноводческих помещений). После высыхания поверхностей, с опытных и контрольных образцов сделали смывы для бактериологических исследований, а затем опытные объекты помещали в специальную камеру и подвергали воздействию озоно-воздушной смесью. После соответствующей экспозиции с поверхностей контрольных и опытных объектов осуществляли смывы, которые подвергали повторному исследованию.
3
3
Результаты опыта представлены в таблице 2, из которой видно, что при воздействии озоном в концентрации 25 мг/м на деревянную и металлическую поверхность в течение 120 мин происходит полное подавление жизнедеятельности клеток Pseudomonas aeruginosa. При воздействии озоном в концентрации 50 мг/м в течение 60 мин как на металлической так и на деревянной поверхности жизнеспособных клеток не обнаружено. В то же время на поверхности контрольных образцов количество клеток Pseudomonas aeruginosa практически осталось таким же, как и при первоначальном исследовании.
Таблица 2
Влияние озона на выживаемость клеток Pseudomonas aeruginosa на поверхности различных объектов под действием озона
Объект
Количество Pseudomonas aeruginosa, КОЕ/см<sup>2</sup>
до обработки
после обработки
25 мг/м<sup>3</sup>
50 мг/м<sup>3</sup>
25 мг/м<sup>3</sup>
50 мг/м<sup>3</sup>
Доска опыт
1,7×10<sup>5</sup>
1,3×10<sup>5</sup>
0
0
контроль
1,5×10<sup>5</sup>
1,1×10<sup>5</sup>
1,4×10<sup>5</sup>
1,0×10<sup>5</sup>
Металлическая пластинка опыт
1,6×10<sup>5</sup>
1,5×10<sup>5</sup>
0
0
контроль
1,7×10<sup>5</sup>
1,8×10<sup>5</sup>
1,6×10<sup>5</sup>
1,7×10<sup>5</sup>
3
Следовательно, озоно-воздушная смесь с концентрацией озона 25-50 мг/м при экспозиции 60-120 мин губительно действует на клетки Pseudomonas aeruginosa, находящиеся на поверхности деревянных и металлических объектов.
Пример 3. Исследования по изучению влияния озоно-воздушной смеси на кишечную палочку в условиях животноводческого объекта (свинарник-хрячник) после освобождения его от животных проводили на ГСП «Курганинский» Курганинского района Краснодарского края. Данное хозяйство неблагополучно по псевдомонозу хряков-производителей. Обработку помещения озоно-воздушной смесью проводили после его механической очистки от навоза и других загрязнений. Озоно-воздушную смесь получали при помощи восьми портативных электроозонаторов. Оценку качества дезинфекции помещения проводили согласно Правилам проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора (2002).
3
3
Результаты дезинфекции поверхностей свинарника-хрячника с помощью озоно-воздушной смеси представлены в таблицах 3 и 4. Из материалов данных таблиц видно, что обработка животноводческого помещения с большим уровнем бактериального загрязнения с помощью озоно-воздушной смеси с концентрацией озона 50 мг/м в течение 60 мин или с концентрацией озона 25 мг/м в течение 120 мин позволяет полностью освободить от синегнойной палочки стены, потолок, пол, перегородки и кормушки.
Таблица 3
Эффективность обработки свинарника-хрячника озоно-воздушной смесью при концентрации озона 50 мг/м<sup>3</sup> и экспозиции 60 мин
Место отбора проб
Уровень контаминации синегнойной палочкой, КОЕ/см<sup>2</sup>
до обработки
после обработки
Пол станков
3,3±0,8×10<sup>7</sup>
0
Стена
2,8±1,1×10<sup>5</sup>
0
Потолок
3,4±3,6×10<sup>5</sup>
0
Перегородки станков
1,2±0,7×10<sup>4</sup>
0
Кормушки
2,6±0,5х10<sup>3</sup>
0
Таблица 4
Эффективность обработки свинарника-хрячника озоно-воздушной смесью при концентрации озона 25 мг/м<sup>3</sup> и экспозиции 120 мин
Место отбора проб
Уровень контаминации синегнойной палочкой, КОЕ/см<sup>2</sup>
до обработки
после обработки
Пол станков
3,2±0,8×10<sup>7</sup>
0
Стена
3,8±1,3×10<sup>5</sup>
0
Потолок
2,4±0,6×10<sup>5</sup>
0
Перегородки станков
5,2±0,7×10<sup>4</sup>
0
Кормушки
6,3±3,6×10<sup>3</sup>
0
3
3
Таким образом, использование нового способа обеззараживания животноводческих помещений от возбудителей псевдомоноза с помощью озоно-воздушной смеси с концентрацией озона 50 мг/м в течение 60 мин или концентрацией озона 25 мг/м в течение 1200 мин является эффективным, экологически безопасным и может быть рекомендовано для использования в ветеринарии.