Биотехнологические методы размножения декоративных сортов представителей рода Hydrangea L.

doi: 10.24411/0235-2451-2020-11111 УДК [635.925:582.711.26]:57.086.8

Биотехнологические методы размножения декоративных сортов представителей рода Hydrangea L.*

Л. Р. АХМЕТОВА, И. Л. КРАХМАЛЕВА, О. И. МОЛКАНОВА

Главный ботанический сад им. Н. В. Цицина РАН, ул. Ботаническая, 4, Москва, 127276, Российская Федерация

Резюме. Исследования проводили в условия Главного ботанического сада РАН в 2017-2020 гг. с целью определения особенностей клонального микроразмножения сортов трех видов рода гортензия: Hydrangeaarborescens(Sterilis); H. macrophylla (Bodensee, Forever and Ever Blue); H. paniculatа (Candlelight, Magical Candle, Polar Bear, Praecox, Wim's Red). На этапе введения в культуру in vitro в качестве инициальных эксплантов использовали латеральные почки и метамеры молодых побегов. На этапе стерилизации определяли оптимальную продолжительность экспозиции гипохлорита кальция в интервале от 7 до 10 минут (с шагом 1 минута) при последовательном использовании растворов фунгицида системного действия фундазол (2 %), этанола (70 %), гипохлорита кальция (7 %), сулемы (0,1 %). На этапе собственно микроразмножения подбирали лучшую концентрацию цитокинина 6-БАП из трех изучаемых - 0,5, 1,0 и 2,0 мг/л (контроль - питательная среда MS без добавления регуляторов роста). Наиболее эффективную стерилизацию обеспечивало применение 7 %-ного гипохлорита кальция в течение 8 минут. Выход жизнеспособных эксплантов при этом достигал 68.. .79 %. Доля влияния генотипа на реализацию морфогенетического потенциала изученных сортов составляла 42 %, гормонального состава питательной среды - 22 %. Самый высокий коэффициент размножения у H. arborescens и H. macrophylla отмечали при культивировании на питательной среде MS, содержащей 6-БАП в концентрации 1,0 мг/л, у сортов H. paniculatа Candlelight и Wim's Red - 2,0 мг/л, Magical Candle и Polar Bear - 1,0 мг/л. По регенерационной способности наибольшим морфогенетическим потенциалом характеризовались сорта вида H. paniculata (8,1), у сортов видов H. macrophylla (4,0) и H. arborescens (2,9) он был значительно ниже. Ключевые слова: Hydrangea arborescens, H. macrophylla, H. paniculata, сорта, клональное микроразмножение, регенерация. Сведения об авторах: Л. Р. Ахметова, младший научный сотрудник (liliyashka94@mail.ru); И. Л. Крахмалева, младший научный сотрудник (seglory@bk.ru); О. И. Молканова, кандидат сельскохозяйственных наук, ведущий научный сотрудник (molkanova@mail.ru). Для цитирования: Ахметова Л. Р, Крахмалева И. Л., Молканова О. И. Биотехнологические методы размножения декоративных сортов представителей рода Hydrangea L. // Достижения науки и техники АПК. 2020. Т 34. № 11. С. 79-82. doi: 10.24411/0235-2451-2020-11111.

*Работа выполнена в рамках ГЗ ГБС РАН (№18-118021490111 -5) и при поддержке ГК Минобрнауки России (№ 05.620.21.0002).

Biotechnological methods for reproduction of decorative Hydrangea L. varieties

L. R. Akhmetova, I. L. Krakhmaleva, O. I. Molkanova

Tsytsyn Main Botanic Garden, Russian Academy of Sciencesul. Botanicheskaya, 4, Moskva, 127276, Russian Federation Abstract. The studies were conducted at the Main Botanical Garden of the Russian Academy of Sciences in 2017-2020. The studies aimed to determine the characteristics of clonal micropropagation of varieties of three species of the genus hydrangea: Hydrangea arborescens (Sterilis); H. macrophylla (Bodensee, Forever and Ever Blue); and H. paniculata (Candlelight, Magical Candle, Polar Bear, Praecox, and Wim's Red). At the stage of introduction into in vitro culture, lateral buds and metameres of young shoots were used as initial explants. At the sterilization stage, the optimal duration of exposure to calcium hypochlorite was in the range from 7 minutes to 10 minutes (at 1-minute intervals) with the sequential use of solutions of the systemic fungicide benomyl (2%), ethanol (70%), calcium hypochlorite (7%), and mercuric chloride (0.1%). At the stage of micropropagation, we selected the best concentration of cytokinin 6-BAP out of the three studied concentrations: 0.5 mg/L, 1.0 mg/L, and 2.0 mg/L. The control was the MS culture medium without growth regulators. The most effective sterilization was provided by the use of 7% calcium hypochlorite for 8 minutes. The yield of viable explants, in this case, reached 68-79%. The share of the genotype influence on the realization of the morphogenetic potential of the studied varieties was 42%; the share of the influence of the hormonal composition of the nutrient medium was 22%. The highest multiplication factor in H. arborescens and H. macrophylla was observed when they were cultivated in the MS medium containing 6-BAP at the concentration of1.0 mg/L; for H. paniculata Candlelight and Wim's Red this indicator was 2.0 mg/L; for Magical Candle and Polar Bearthis indicator was 1.0 mg/L. In terms of regenerative capacity, the highest morphogenetic potential was characteristic of H. paniculata varieties (8.1); the morphogenetic potential of H. macrophylla and H. arborescens varieties was significantly lower - 4.0 and 2.9, respectively. Keywords: Hydrangea arborescens; H. macrophylla; H. paniculata; varieties; clonal micropropagation; regeneration. Author Details: L. R. Akhmetova, junior research fellow (liliyashka94@mail.ru); I. L. Krakhmaleva, junior research fellow (seglory@bk.ru); O. I. Molkanova, Cand. Sc. (Agr.), leading research fellow (molkanova@mail.ru).

For citation: Akhmetova LR, Krakhmaleva IL, Molkanova OI. [Biotechnological methods for reproduction of decorative Hydrangea L. varieties]. Dostizheniya nauki i tekhniki APK. 2020;34(11):79-82. Russian. doi: 10.24411/0235-2451-2020-11111.

Род Гортензия (Hydrangea L.) семейства Гортензие-вые (Hydrangeaceae Dumort.) относится к порядку Кизилоцветные (Cornales Dumort.). Род представлен более чем 80 видами и большим количеством сортов [1, 2]. Гортензия по праву считается одной из красивейших декоративных культур, которая ценится за огромное разнообразие сортов, продолжительный период цветения и нетребовательность в уходе. Сегодня растет спрос на высокодекоративные и малораспространенные сорта гортензии. Один из наиболее применяемых способов их вегетативного размножения - зеленое черенкование. Однако при необходимости производства большого количества посадочного материала новых и высокодекоративных сортов могут возникать определенные трудности. Поэтому немаловажна разработка современных эффективных технологий размножения. Производить быстро и в больших количествах вы-

ровненный посадочный материал, идентичный исходному генотипу возможно с использованием метода клонального микроразмножения.

Первые результаты исследований по культивированию представителей рода Hydrangea в условиях in vitro были опубликованы в 1987 г. [3]. На примере гортензии дубо-листной (Hydrangea quercifolia Bartr.) были получены жизнеспособные экспланты путем дифференциации каллуса из листьев и стимуляции пазушных почек. В 2004 г. было показано влияние стимуляторов роста на образование микропобегов [4], в 2007 г. - создан протокол клонального микроразмножения для коммерческого выращивания гортензии крупнолистной (Hydrangea macrophylla (Thunb.) Ser.) [5]. Но несмотря на значительное количество исследований, имеются лишь единичные сведения по сравнительной оценке морфогенетического потенциала

различных видов рода Hydrangea L. в зависимости от концентрации регуляторов роста.

Цель исследования - изучение особенностей регенерации и оптимизация приемов культивирования в условиях in vitro перспективных сортов разных видов гортензии.

Условия, материалы и методы. Работу проводили в лаборатории биотехнологии растений Федерального государственного бюджетного учреждении науки Главный ботанический сад им. Н. В. Цицина Российской академии наук (ГБС РАН) в 2017-2020 гг. Объектами исследования были 8 перспективных сортов 3 видов гортензии, которые относятся к наиболее декоративным и малораспространенным [6]: гортензия древовидная (Hydrangea arborescens L.). - Sterilis; гортензия крупнолистная (H. macrophylla (Thunb.) Ser.) - Bodensee, Forever and Ever Blue; гортензия метельчатая (Hydrangea paniculata Siebold) - Candlelight, Magical Candle, Polar Bear, Praecox, Wim's Red.

Исследования проводили согласно методике работы с культурой изолированных тканей и органов растений, основанной на общепринятых классических приемах (Бутенко Р. Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнология на их основе. М.: ФБК-ПРЕСС, 1999. 160 с.) и разработанной в лаборатории биотехнологии растений [7].

Исходный материал для введения в культуру in vitro отбирали с растений, выращиваемых в открытом грунте на коллекционно-производственном участке ГБС РАН. В качестве первичных эксплантов использовали латеральные почки и метамеры молодых побегов. Для поверхностной стерилизации последовательно применяли растворы фунгицида системного действия фундазол (2 %) в экспозиции 10 минут, этанол (70 %) - 2 мин., ги-похлорит кальция (7 %) - 7...10 мин., сулемы (0,1 %) - 1 мин. В связи с тем, что у исходного материала сортов H. macrophylla Bodensee и Forever and Ever Blue был выявлен высокий уровень инфицированности дополнительно применяли питательные среды с добавлением антибиотика Gentamicin в концентрации 0,25 мг/л в течение 10 дней. В исследованиях на этом этапе определяли оптимальную продолжительность обработки гипохлоритом кальция, которая составляла 7, 8, 9 и 10 мин.

На этапе инициации первичные экспланты выращивали на питательной среде MS (Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures//Physiol. Plant. 1962. Vol. 15. No. 43. Pp. 473-497) с 0,3 мг/л 6-БАП (6-бензиламинопурин). Через 20 суток проводили учет жизнеспособных экземпляров. На этапе собственно микроразмножения использовали питательную

100

80

I-

о

0

1

\0 о о о с

0 ф

1

я

60

40

20

75

79

68

10

H. arborescens

10

H. macrophylla Экспозиция, мин.

Рис. 1. Влияние экспозиции 7 %-ного раствора гипохлорита кальция при стерилизации на выход жизнеспособных эксплантов Н. агЬогевсепв (НСР05 7), Н. тасгорЬуНа (НСР05 9), Н. рапюШага (НСР05 10).

среду c минеральной основой MS с добавлением цитоки-нина 6-БАП в концентрации 0,5.2,0 мг/л, контроль - питательная среда MS без добавления регуляторов роста.

Опыты проводили в 3-кратной повторности по 10 эксплантов в каждом варианте. Регенеранты культивировали при освещении 2000.3000 лк и фотопериоде 16/8 ч, при температуре 23.25 °С. Через 35 суток учитывали морфометрические показатели развития регенерантов: число междоузлий и образовавшихся микропобегов, их высоту, на основе полученных данных рассчитывали коэффициент размножения.

Обработку полученных данных осуществляли с помощью иерархического и двухфакторного дисперсионного анализа (Лакин Г. Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1980. 352 с.) с использованием программного обеспечения Microsoft Office Excel 2010 и PAST 2.17c. Наименьшую существенную разницу определяли при 5 %-ном уровне значимости.

Результаты и обсуждение. Среди изученных сортов к наиболее декоративным по форме и окраске соцветия относятся H. paniculata - Magical Candle, Polar Bear, Praecox. У сортов H. paniculata - Candlelight, Wim's Red, Magical Candle, Polar Bear; H. arborescens - Sterilis окраска менялась в течение всего вегетационного периода. К числу ароматных отнесен сорт H. arborescens - Sterilis.

Этап стерилизации - наиболее сложный при разработке биотехнологических приемов размножения древесных культур. В первую очередь это связано с высокой степенью зараженности исходного материала. Наибольший выход жизнеспособных эксплантов (68.79 %) на этапе стерилизации обеспечило использование 7 %-ного раствора гипохлорита кальция в течение 8 мин. (рис. 1). Увеличение продолжительности экспозиции приводило к некрозу растительных тканей и последующей гибели эксплантов.

Известно, что на развитие клеточных и тканевых систем в условиях in vitro оказывают значительное влияние многие факторы. Наиболее важные среди них - физиологическое состояние исходных растений, тип экспланта, генотип, состав питательной среды и условия культивирования растений in vitro [8, 9, 10]. На этапе собственно микроразмножения отчетливо проявляются видовые и сортовые особенности растений, что выражается в различном количестве дополнительно заложенных почек и впоследствии развивающихся из них побегов. В некоторой степени это обусловлено генетически-детерминированным содержанием эндогенных гормонов [11]. В наших исследованиях наибольшее влияние на коэффициент размножения представителей рода Hydrangea L. оказывал генотип (42 %), доля влияния гормонального состава питательной среды (концентрация 6-БАП) составляла 22

%, взаимодействия этих двух факторов - 35 %, случайного фактора -1 %. Определяющее влияние генотипа на коэффициент размножения отмечали и ранее при исследовании растений различных таксономических групп [12, 13, 14].

По результатам иерархического дисперсионного анализа было установлено достоверное различие в ре-генерационной способности исследуемых представителей рода Hydrangea. Мор-фогенетический потенциал изученных сортов представленных видов (НСР05 1,3) возрастает в следующей

69

75

10

H. paniculata

0

--

я £

15,0 10,0

5,0 0,0

10,5 11,9 10,0

4,б 3,9

Candlelight Wim's Red Magical Candle Сорт Polar Bear Praecox

Рис. 2. Влияние сортовых особенностей H. paniculata на коэффициент размножения (НСР05 1,3).

последовательности: H. arborescens(2,9), H. macrophylla (4,0), H. paniculata (8,1).

При изучении регенерационной способности сортов разных видов гортензии выявлена возможность образования микропобегов из адвентивных почек через

25,0

g 20,0 X

а

о

Л 15,0

о га а

Ц10,0

-

? 5,0 я

о *

0,0

20,7 20,5

11,б

12,9

9,1

б,9

8,9

3,1

3^2,9

ж

9,3

5,0

18,б

0,0 0,5 1,0

Концентрация 6-БАП, мг/л

Рис. 3. Влияние взаимодействия (НСР05 3,0) сортовых особенностей (НСР( центрации 6-БАП (НСР05 0,8) на коэффициент размножения H. paniculata:  -- Wim's Red;  - Magical Candle; g] - Polar Bear; Щ - Praecox.

прямой органогенез. Кроме того, сорта H. paniculata существенно различались по коэффициенту размножения (рис. 2). Наибольшим (11,9) он был у сорта Wim's Red, что достоверно выше, чем у сортов Candlelight и Magical Candle, на 1,4 и 1,9 соответственно. Наименьшие коэффициенты размножения отмечены у сортов Polar Bear (4,6) и Praecox (3,9).

эффициенты размножения сортов Candlelight и Wim's Red по мере повышения концентрации 6-БАП с 0,5 до 2,0 мг/л увеличивались соответственно с 8,9 до 20,5 и с 9,1 до 18,6.

У сортов Magical Candle и Polar Bear наилучшие результаты наблюдали при культивировании на питательной среде, содержащей 1,0 мг/л 6-БАП (20,7 и 7,6 соответственно). Увеличение концентрации 6-БАП приводило к значительному уменьшению коэффициента размножения на 80 и 43 %. У сорта Praecox коэффициент размножения слабо изменялся в зависимости от концентрации регулятора роста (рис. 3).

Аналогичная тенденция прослеживалась и у сортов вида H. macrophylla - коэффициент размножения достигал максимальных в опыте значений при культивировании на питательной среде с 6-БАП в количестве 1,0 мг/л (рис.4). При этом у сорта Bodensee морфоге-нетический потенциал был больше, чем у сорта Forever and Ever Blue (коэффициенты размножения 5,7 и 4,6 соответственно).

Высота микропобегов сорта Forever and Ever Blue слабо варьировала в зависимости от концентрации 6-БАП и достигала максимума (1,28 см) при 1,0 мг/л. Побеги сорта Bodensee характеризовались наибольшей высотой (1,0 см) при культивировании на питательной среде с добавлением 6-БАП в концентрации 2,0 мг/л (рис. 5).

У H. arborescens сорта Sterilis максимальный в опыте коэффициент размножения отмечен при выращивании на питательной среде с 1,0 мг/л 6-БАП (4,00). Увеличение концентрации до 2,0 мг/л привело к его недостоверному снижению до 3,35 (см. табл.).

7,б

4,ï I

4,3 4,2 4,5

ta

2,0

5 1,3) и кон-Candlelight;

прямой органогенез. Кроме того, сорта H. paniculata существенно различались по коэффициенту размножения (рис. 2). Наибольшим (11,9) он был у сорта Wim's Red, что достоверно выше, чем у сортов Candlelight и Magical Candie, на 1,4 и 1,9 соответственно. Наименьшие коэффициенты размножения отмечены у сортов Polar Bear (4,6) и Praecox (3,9).

На этапе собственно микроразмножения для обеспечения активного образования и развития микропобегов важен правильный выбор концентрации цитокинина. Ко-

£ б,0

X

ф

Щ 5,0

0

1 4,0

0 ' я

ь 3,0

X

ф

§ 2,0 s

1 1,0 я

о

* 0,0

5,7

4,2 4,4 4,б 4,б 3,9 4,2

3,б  1 1

1 1 1 1

1 1 1 1

1 1 1 1

0,0

0,5

1,0

2,0

Концентрация 6-БАП, мг/л

Dcum^D паииилошси DDI^UIU^I

(1,0 см) при культивировании на питательной среде с добавлением 6-БАП в концентрации 2,0 мг/л (рис. 5).

У H. arborescens сорта Sterilis максимальный в опыте коэффициент размножения отмечен при выращивании на питательной среде с 1,0 мг/л 6-БАП (4,00). Увеличение концентрации до 2,0 мг/л привело к его недостоверному снижению до 3,35 (см. табл.).

Рис 4. Влияние взаимодействия (НСР05 3,0) сортовых особенностей (НСР05 1,3) и концентрации 6-БАП (НСР05 0,8) на коэффициент размножения:  - Bodensee; - Forever and Ever Blue.

Рис. 5. Влияние взаимодействия (НСР05 0,7) сортовых особенностей (НСР05 0,3) и концентрации 6-БАП (НСР05 0,2) на высоту микропобегов:  - Bodensee;  - Forever and Ever Blue.

Таблица. Влияние концентрации 6-БАП на коэффициент размножения H. arborescens сорта Sterilis

Концентрация 6-БАП, мг/л Коэффициент размножения

Sterilis

0,0 1,50

0,5 2,85

1,0 4,00

2,0 3,35

НСР05 0,79

Выводы. В результате проведенныхисследований были оптимизированы приемы клонального микроразмножения перспективных сортов разных видов гортензии. На этапе введения в культуру in vitro оптимальная продолжительность использования 7 %-ного раствора гипохлорита кальция при стерилизации 8 мин., выход жизнеспособных эксплантов при этом составляет 68.. .79 %.

На этапе собственно микроразмножения наибольшее влияние оказывали генетические особенности культуры (42 %), на долю концентрации 6-БАП приходилось 22 %, взаимодействия этих двух факторов - 35 %. При этом для большинства изученных сортов наиболее эффективным было добавление 6-БАП в концентрации 1,0 мг/л. Исключение составляли сорта гортензии метельчатой Candlelight и Wim's Red, для которых оптимальным было использование 6-БАП в количестве 2,0 мг/л.

Самый высокий регенерационный потенциал отмечен у сортов H. paniculata (8,1), у генотипов видов H. macrophylla и H. arborescens он был значительно меньше (в 2 раза и более). У сортов H. paniculata достоверно самым высоким коэффициентом размножения характеризовался сорт Wim's Red (11,9), наименьшим - Polar Bear и Praecox (4,6 и 3,9 соответственно).

Литература.

1. Hydrangea //The Plant List [Электронный ресурс]. URL: http://www.theplantlist.Org/1.1/bmwse/A/Hydrangeaceae/Hydrangea/(дата обращения: 01.07.2020).

2. Large scales of Hydrangea macrophylla using tissue culture technique /A. M. S. Arafa, A. A. Nower, S. S. Helme, et al. // int. J. Curr. Microbiol. App. Sci. 2017. Vol. 6. No. 5. P. 776-778. doi: 10.20546/ijcmas.2017.605.087.

3. Sebastian T. K., HeuserC. W. in vitro propagation ofHydrangea quercifolia Bartr. //Sci. Hort. 1987. Vol. 31. P. 303-309. doi: 10.1016/0304-4238(87)90056-2.

4. Ledbetter D. i, Preece J. E. Thidiazuron stimulates adventitious shoot production from Hydrangea quercifolia Bartr. leaf explants //Sci. Hort. 2004. Vol. 101. P. 121-126. doi: 10.1016/j.scienta.2003.09.014.

5. Abou Dahab T. A. M. in vitro propagation of Hydrangea macrophylla Thunb. //Arab. J. Biotechnol. 2007. Vol. 10. P. 161-178.

6. Ахметова Л. Р. Изучение особенностей вегетативного размножения некоторых сортов гортензий // Сборник научных трудов Государственного Никитского ботанического сада. 2017. № 145. С. 247-251.

7. Молканова О. И., Васильева О. Г., Коновалова Л. Н. Научные основы сохранения и воспроизводства генофонда ценных и редких видов растений в культуре in vitro //Бюллетень ГБС РАН. 2015. Вып. 201. № 2. С. 78-82.

8. Биотехнологические и молекулярно-генетические методы для сохранения и воспроизводства полезных и редких растений /О. И. Молканова, О. Г. Васильева, Н. А. Мамаева и др. //История науки и техники. 2010. № 5. С. 74-79.

9. Применение биотехнологических методов для сохранения генофонда редких видов растений / О. И. Молканова, Ю. Н. Горбунов, И. В. Ширнина и др. //Ботанический журнал. 2020. Т. 105. № 6. С. 610-619. doi: 10.31857/S0006813620030072.

10. Basics of long-term conservation and micropropagation of valuable plant species and cultivais in genepool collections of MBG RAS / O. Molkanova, O. Koroleva, i. Shirnina, et al. // J. Biotechnol. 2019. Vol. 305. P. 55. doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.05.194.

11. Шипунова А. А., Высоцкий В. А. Влияние некоторых факторов культивирования на клональное микроразмножение плодовых и ягодных растений //Плодоводство и ягодоводство России. 2002. Т. 9. С. 193-200.

12. Крахмалева И. Л., Козак Н. В, Молканова О. И. Особенности клонального микроразмножения разных видов и форм перспективных сортов рода Actinidia Lindl. //Плодоводство и ягодоводство России. 2019. Т. 58. С. 246-252. doi: 10.31676/2073-49482019-58-246-252.

13. in vitro direct and indirect regeneration of promising lavandin cultivars/ i. V. Mitrofanova, N. P. Lesnikova-Sedoshenko, T. N. Kuzmina, et ai. //Acta Hortic. 2020. Vol. 1285. P. 213-220. doi: 10.17660/ActaHortic.2020.1285.32.

14. in vitro propagation and preservation of promising chrysanthemum cultivars and hybrid forms / O. V. Mitrofanova, N. P. Lesnikova-Sedoshenko, N. N. ivanova, et al. //Acta Hortic. 2020. Vol. 1285. P. 139-146. doi: 10.17660/ActaHortic.2020.1285.22.

References

1. The Plant List [internet]. [place unknown]: The Plant List; 2013. Hydrangea; [cited 2020 July 01]. Available from: http://www.theplantlist. org/1.1/browse/A/Hydrangeaceae/Hydrangea/.

2. Arafa AMS, Nower AA, Helme S. Samia, et al. Large scales of Hydrangea macrophylla using tissue culture technique. int. J. Curr-. Microbiol. App. Sci. 2017;6(5):776-8. doi: 10.20546/ijcmas.2017.605.087.

3. Sebastian TK, Heuser CW. in vitro propagation of Hydrangea quercifolia Bartr. Sci. Hort. 1987;31:303-9. doi: 10.1016/0304-4238(87)90056-2.

4. Ledbetter Di, Preece JE. Thidiazuron stimulates adventitious shoot production from Hydrangea quercifolia Bartr-. leaf explants. Sci. Hort. 2004;101:121-6. doi: 10.1016/j.scienta.2003.09.014.

5. Abou Dahab TAM. in vitro propagation of Hydrangea macrophylla Thunb. Arab. J. Biotechnol. 2007;10:161-78.

6. Akhmetova LR. [Studying the features of vegetative propagation of some hydrangea varieties]. Sborniknauchnykh trudov Gosudarstvennogo Nikitskogo botanicheskogo sada. 2017;(145):247-51. Russian.

7. Molkanova Oi, Vasilyeva OG, Konovalova LN. [The scientific basis for conservation and sustainable reproduction of plant genepool in culture in vitro]. Byulleten' GBS RAN. 2015;201(2):78-82. Russian.

8. Molkanova Oi, Vasilyeva OG, Mamaeva NA, et al. [Biotechnological and molecular genetic methods forthe preservation and reproduction of useful and rare plants]. istoriya nauki i tekhniki. 2010;(5):74-9. Russian.

9. Molkanova Oi, Gorbunov YuN, Shurnina iV, et al. [Application of biotechnological methods for preserving the gene pool of rare plant species.]. Botanicheskiizhurnal. 2020;105(6):610-9. Russian. doi: 10.31857/S0006813620030072.

10. Molkanova O, Koroleva O, Shirnina i, et al. Basics of long-term conservation and micropropagation of valuable plant species and cultivars in genepool collections of MBG RAS. J. Biotechnol. 2019;305:55. doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.05.194.

11. Shipunova AA, Vysotsky VA. [influence of some cultivation factors on clonal micropropagation of fruit and berry plants]. Plodovodstvo i yagodovodstvo Rossii. 2002;9:193-200. Russian.

12. Krakhmaleva iL, Kozak NV, Molkanova Oi. [Features of clonal micropropagation of different species and forms of promising cultivars of the genus Actinidia Lindl.]. Plodovodstvo i yagodovodstvo Rossii. 2019;58:246-52. Russian. doi: 10.31676/2073-4948-2019-58-246-252.

13. Mitrofanova iV, Lesnikova-Sedoshenko NP, Kuzmina TN, et al. in vitro direct and indirect regeneration of promising lavandin cultivars. Acta Hortic. 2020;(1285):213-20. doi: 10.17660/ActaHortic.2020.1285.32.

14. Mitrofanova oV, Lesnikova-Sedoshenko NP, ivanova NN, et al. in vitro propagation and preservation of promising chrysanthemum cultvars and hybrid forms. Acta Hortic. 2020;(1285):139-46. doi: 10.17660/ActaHortic.2020.1285.22.