АНТИ-RSPO АНТИТЕЛА И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Изолированное антитело, которое связывается с RSPO2, где антитело ингибирует взаимодействие RSPO2 с трансмембранной Е3 убиквитиназой.
2. Изолированное антитело по п. 1, где антитело не ингибирует взаимодействие RSPO2 с одним или несколькими из LGR4, LGR5 и/или LGR6 (например, усиливает взаимодействие RSPO2 с одним или несколькими из LGR4, LGR5 и/или LGR6).
3. Изолированное антитело, которое связывается с RSP02, где антитело содержит (а) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую (i) гипервариабельную область-L1 (HVR-L1), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 53, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 55, и (b) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57, и (iii) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58.
4. Изолированное антитело по п. 3, где антитело содержит (а) последовательность VL SEQ ID NO: 105 и последовательность VH SEQ ID NO: 106.
5. Изолированное антитело по п. 1, где антитело ингибирует взаимодействие RSPO2 с одним или несколькими из LGR4, LGR5 и/или LGR6.
6. Изолированное антитело, которое связывается с RSPO2, где антитело содержит:
(a) VH, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61; и VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63, и (iii) HVR-Н3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64;
(b) VH, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67; и VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 69, и (iii) HVR-Н3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70; или
(с) VH, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 71, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73; и VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 74, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 75, и (iii) HVR-Н3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76.
7. Изолированное антитело по п. 6, где антитело содержит:
(a) последовательность VL SEQ ID NO: 107 и последовательность VH SEQ ID NO: 108;
(b) последовательность VL SEQ ID NO: 109 и последовательность VH SEQ ID NO: 110; или
(c) последовательность VL SEQ ID NO: 111 и последовательность VH SEQ ID NO: 112.
8. Изолированное антитело, которое связывается с RSPO3, где антитело ингибирует взаимодействие RSPO3 с трансмембранной Е3 убихитиазой.
9. Изолированное антитело по п. 8, где антитело ингибирует взаимодействие RSPO3 с одним или несколькими из LGR4, LGR5 и/или LGR6.
10. Изолированное антитело, которое связывается с RSPO3, где антитело содержит:
(a) VL, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; и VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и (iii) HVR-Н3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10;
(b) VL, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; и VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, и (iii) HVR-Н3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16;
(c) VL, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19; и VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:21, и (iii) HVR-Н3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22;
(d) VL, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; и VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, и (iii) HVR-Н3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28;
(e) VL, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:29, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:30, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:31; и VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:32, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:33, и (iii) HVR-Н3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:34;
(f) VL, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:35, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:36, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 37; и VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:38, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:39, и (iii) HVR-Н3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:40;
(g) VL, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:41, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:42, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:43; и VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:44, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:45, и (iii) HVR-Н3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46
(h) VL, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:23, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:24, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:25; и VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:26, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:27, и (iii) HVR-Н3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188; или
(i) a VL, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:23, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:24, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:25; и VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, и (iii) HVR-Н3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 189.
11. Изолированное антитело по п. 10, в котором антитело содержит
(a) VL последовательность VL SEQ ID NO: 89 и последовательность VH SEQ ID NO: 90;
(b) VL последовательность VL SEQ ID NO: 91 и последовательность VH SEQ ID NO: 92;
(c) VL последовательность VL SEQ ID NO: 93 и последовательность VH SEQ ID NO: 94;
(d) VL последовательность VL SEQ ID NO: 95 и последовательность VH SEQ ID NO: 96;
(e) VL последовательность VL SEQ ID NO: 97 и последовательность VH SEQ ID NO: 98;
(f) VL последовательность VL SEQ ID NO: 99 и последовательность VH SEQ ID NO: 100;
(g) VL последовательность VL SEQ ID NO: 101 и последовательность VH SEQ ID NO: 102;
(h) VL последовательность VL SEQ ID NO: 190 и последовательность VH SEQ ID NO: 191;
(i) VL последовательность VL SEQ ID NO: 192 и последовательность VH SEQ ID NO: 193;
(j) VL последовательность VL SEQ ID NO: 194 и последовательность VH SEQ ID NO: 195;
(k) VL последовательность VL SEQ ID NO: 196 и последовательность VH SEQ ID NO: 197;
(l) VL последовательность VL SEQ ID NO: 198 и последовательность VH SEQ ID NO: 199;
(m) VL последовательность VL SEQ ID NO: 200 и последовательность VH SEQ ID NO: 201;
(n) VL последовательность VL SEQ ID NO: 202 и последовательность VH SEQ ID NO: 203;
(o) VL последовательность VL SEQ ID NO: 204 и последовательность VH SEQ ID NO: 205;
(p) VL последовательность VL SEQ ID NO: 206 и последовательность VH SEQ ID NO: 207;
(q) VL последовательность VL SEQ ID NO: 208 и последовательность VH SEQ ID NO: 209;
(r) VL последовательность VL SEQ ID NO: 210 и последовательность VH SEQ ID NO: 211;
(w) VL последовательность VL SEQ ID NO: 212 и последовательность VH SEQ ID NO: 213; или
(x) VL последовательность VL SEQ ID NO: 214 и последовательность VH SEQ ID NO: 215.
12. Изолированное антитело, которое связывается с RSPO2 и RSPO3.
13. Изолированное антитело по п. 12, где антитело ингибирует взаимодействие RSPO2 и RSP03 с трансмембранной Е3 убиквитиназой.
14. Изолированное антитело по любому из пп. 12 и 13, где антитело ингибирует взаимодействие RSPO3 с одним или несколькими из LGR4, LGR5 и/или LGR6.
15. Изолированное антитело по любому из пп. 12 и 13, где антитело ингибирует взаимодействие RSPO2 с одним или несколькими из LGR4, LGR5 и/или LGR6.
16. Изолированное антитело по любому из пп. 12 и 13, где антитело не ингибирует взаимодействие RSPO2 с одним или несколькими из LGR4, LGR5, и/или LGR6 (например, усиливает связывание RSPO2 с одним или несколькими из LGR4, LGR5, и/или LGR6).
17. Изолированное антитело по любому из пп. 12 и 13, в котором антитело содержит первый вариабельный домен и второй вариабельный домен, где первый вариабельный домен содержит первый набор из шести HVRs и второй вариабельный домен содержит второй набор из шести HVRs, и где первый и второй наборы из шести HVRs идентичны.
18. Изолированное антитело, которое связывается с RSPO2 и RSPO3, где антитело содержит: (a) VL, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49; и (b) VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51, и (iii) HVR-Н3 содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52.
19. Изолированное антитело по п. 18, антитело содержит (а) последовательность VL SEQ ID NO: 103 и последовательность VH SEQ ID NO: 104.
20. Изолированное антитело по любому из пп. 12, 13, 18 и 19, где антитело содержит первый вариабельный домен и второй вариабельный домен, где первый вариабельный домен содержит первый набор из шести HVRs и второй вариабельный домен содержит второй набор из шести HVRs, и где первый и второй наборы из шести HVRs различны.
21. Изолированное антитело по п. 20, в котором первый набор из шести HVRs является шестью HVRs любого одного из 4Н1, 4D4, 5С2, 5D6, 5Е11, 6Е9 и 21С2 и второй набор из шести HVRs является шестью HVRs любого одного из 1А1, 11F11, 36D2 и 49G5.
22. Изолированное антитело по п. 21, где первый набор из шести HVRs является шестью HVRs любого одного из 4Н1, 4D4, 5С2, 5D6, 5Е11, 6Е9 и 21С2 а второй набор из шести HVRs является шестью HVRs из 1А1.
23. Изолированное антитело по любому из пп. 1-2, 5, 8-9, 13 и 21-22, где трансмембранная Е3 убиквитиназа представляет собой ZNRF3 и/или RNF43.
24. Изолированное антитело, которое связывается с RSPO3, где антитело содержит:
(a) VL, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 79; и VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 81, и (iii) HVR-Н3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 82;
(b) VL, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 83, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85; и VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 87, и (iii) HVR-Н3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88; или
(c) VL, содержащую (i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77, (ii) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78, и (iii) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 79; и VH, содержащую (i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80, (ii) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 81, и (iii) HVR-Н3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 216.
25. Изолированное антитело, которое связывается с RSPO3, где антитело связывается с участком в пределах аминокислот 47-108 (например, 49-108) RSPO3.
26. Изолированное антитело, которое связывается с эпитопом RSPO3, где эпитоп RSPO3 содержит аминокислотные остатки RSPO3: Gln72, Pro90, Asp91 и Lys94.
27. Изолированное антитело по п. 26, в котором эпитоп RSPO3 содержит аминокислоты RSPO3: Asn 52, Leu55, Phe63, Gln72, Tyr89, Pro90, Asp91, Lys94 и Lys97.
28. Изолированное антитело по п. 27, в котором эпитоп RSPO3 содержит аминокислотные остатки RSPO3: Ser49, Asn52, Cys54, Leu55, Ser56, Phe63, Leu65, Gln72, Ile73, Gly74, Tyr84, Tyr89, Pro90, Asp91, Ile92, Lys94, Lys97 и Lys108.
29. Изолированное антитело, которое связывается с эпитопом RSPO3a, в котором эпитоп RSPO3 содержит аминокислоты RSPO3: Thr47, Leu55, Gln72, Pro90, Asp91 и Lys94.
30. Антитело по п. 29, в котором эпитоп RSPO3 содержит аминокислоты RSPO3: Thr47, Asn52, Leu55, Phe63, Gln72, Tyr89, Pro90, Asp91, Ile92, Lys94 и Lys97.
31. Изолированное антитело по п. 30, в котором эпитоп RSPO3 содержит аминокислотные остатки RSPO3: Thr47, Asn52, Cys54, Leu55, Ser56, Phe63, Leu65, Gln72, Tyr84, Tyr89, Pro90, Asp91, Ile92, Asn93, Lys94, Lys97 и Lys108.
32. Изолированное антитело по любому из пп. 1-13, 18, 19, 21, 22, 24-31, в котором антитело ингибирует сигнальный путь Wnt, опосредованный RSPO2 и/или RSPO3.
33. Изолированное антитело по п. 32, которое представляет собой фрагмент антитела, которое связывается с RSPO2 и/или RSPO3.
34. Антитело по любому из пп. 1-13, 18, 19, 21, 22, 24-31 и 33, которое представляет собой моноклональное антитело.
35. Антитело по любому из пп. 1-13, 18, 19, 21, 22, 24-31 и 33, которое представляет собой человеческое, гуманизированное или химерное антитело.
36. Антитело по любому из пп. 1-13, 18, 19, 21, 22, 24-31 и 33, которое представляет собой антитело IgG1 или IgG2a полной длины.
37. Изолированная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело по любому из пп. 1-36.
38. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п. 37.
39. Способ получения антитела, включающий культивирование клетки-хозяина по п. 38 таким образом, что получают антитело.
40. Способ по п. 39, дополнительно содержащий выделение антитела из клетки-хозяина.
41. Иммуноконъюгат, содержащий антитело по любому из пп. 1-36 и цитотоксический агент.
42. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по любому из пп. 1-36 и фармацевтически приемлемый носитель.
43. Фармацевтическая композиция по п. 42, дополнительно содержащая дополнительный терапевтический агент.
44. Применение антитела по любому из пп. 1-36 в производстве лекарственного средства для лечения рака.
45. Применение антитела по любому из пп. 1-36, в котором рак представляет собой рак желудочно-кишечного тракта, рак желудка, рак толстой кишки, колоректальный рак, рак легких или ректальный рак.
46. Применение антитела по любому из пп. 1-36, в производстве лекарственного средства для ингибирования сигнального пути Wnt, ингибирования ангиогенеза и/или васкулогенеза, и/или ингибирования клеточной пролиферации.
47. Применение по любому из пп. 44-46, где рак характеризуется повышенной экспрессией одного или более RSPO (например, RSPO2 и/или RSPO3) по сравнению с эталоном.
48. Применение по любому из пп. 44-46, где рак характеризуется транслокацией RSPO (например, транслокацией RSPO2 и/или транслокацией RSPO3).
49. Способ лечения индивидуума, имеющего рак, включающий введение индивидууму эффективного количества антитела по любому из пп. 1-36.
50. Способ по п. 49, в котором рак представляет собой рак желудочно-кишечного тракта, рак желудка, рак толстой кишки, колоректальный рак, рак легких, или ректальный рак.
51. Способ по любому из пп. 49 и 50, дополнительно включающий введение индивидууму дополнительного терапевтического агента.
52. Способ ингибирования сигнального пути Wnt, ингибирования ангиогенеза и/или васкулогенеза и/или ингибирования клеточной пролиферации у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества антитела по любому из пп. 1-36 для ингибирования сигнального пути Wnt, ингибирования ангиогенеза и/или васкулогенеза и/или ингибирования клеточной пролифераци.
53. Способ по любому из пп. 49 и 50 и 52, где рак характеризуется повышенной экспрессией одного или более RSPO (например, RSPO2 и/или RSPO3) по сравнению с эталоном.
54. Способ по любому из пп. 49 и 50 и 52, где рак характеризуется транслокацией RSPO (например, транслокацией RSPO2 и/или транслокацией RSPO3).