Изучение действия жирорастворимых соединений палладия на активность лактатдегидрогеназы

Таким образом, данные фитоценотических исследований подтвердили, что Astragalus onobrychis L. в растительном покрове Восточного Приазовья выступает в роли эдификатора (астрагаловая, астрагалово-вязелевая и др. ассоциации), доминанта (астрагалово-хвойниковая ассоциация), а также содоминанта (колосняково-астрагаловая, солодково-астрагаловая и др. ассоциации) и ассектатора (хвойниковая с участием астрагала эспарцетно-го, колосняковая и др. ассоциации).

Литература

1. КомаровВ.Л. Флора СССР. М.; Л., 1980. Т. 12.

2. Ларин И.В. и др. Кормовые растения сенокосов и пастбищ СССР. М.; Л., 1951.

3. Гужва Н.Н. Фенольные соединения растений рода Астрагал, синтетические аналоги, биологическое действие: Автореф. дис. ... канд. фарм. наук. Пятигорск, 1990.

4. Гужва Н.Н. и др. // Химия природных соединений. Ташкент, 1992. № 6. С. 714.

5. Соколов П.Д. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Hydrangeaceae-Holoragaceae. Л., 1987.

6. Алания М.Д., Кемертелидзе Э.П., Комисаренко Н.Ф. Флавоноиды некоторых видов Astragalus L. флоры Грузии. Тбилиси, 2002.

7. Гужва Н.Н. и др. // Тез. докл. Всесоюз. конф. Томск, 1989. С 49-50.

8. Комгсаренко А.М. и др. // Клш фармащя. Укр. 1998. Т. 2. № 3. С. 83-88.

9. Абрамова Н.О. и др. Об антиаксидантных свойствах экстрактов корней и наземных частей Astragalus Onobrychis L. Деп. В ВИНИТИ 15.12.03. № 2175-В2003.

10. Алёхин В.В. Метод полевого изучения растительности и флоры. М., 1938.

11. Воронов А.Г. Геоботаника. М., 1973.

12. ШретерА.И. Методика определения запасов лекарственных растений. М., 1986.

Кубанский государственный университет 1 декабря 2004 г.

УДК: 577.1: 546.98

ИЗУЧЕНИЕ ДЕЙСТВИЯ ЖИРОРАСТВОРИМЫХ СОЕДИНЕНИЙ ПАЛЛАДИЯ НА АКТИВНОСТЬ ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ

© 2005 г. Н.Ю. Фомина, В.Б. Бородулин, Ю.Г. Крючина, Н.В. Булкина

Fatsoluble palladium compound I (PdFz2Cl2) operates on lactate dehydrogenase (LDH) activity as mixed inhibitor, and compound II (PdFk2Cl2) operates on one as notcompetitive inhibitor. Compound I reduce LDH activity on 40 %, compound II reduce LDH activity on 30 %. Nitrofuranum compounds III and IV did not inhibit LDH.

Цель настоящего исследования - изучение действия соединений палладия на один из центральных ферментов гликолиза - лактатдегидрогеназу.

В работе использовали соединения I. PdФЗ2Cl2 - транс-дихлороди-1-(5-нитро-2-фурфурилвденамино)-1,3,4-триазолпалладий (II); II. PdФК2Cl2 -транс-дихлороди-1 -(5-нитро-2-фурилаллилиденамино)-1,3,4-триазолпалла-дий (II); III. Фуразонал - М-(5-нитро-2-фурфурилиденамино)-1,3,4-три-азол; IV. Фуракрилин - М-(5-нитро-2-фурилаллилиденамино)-1,3,4-три-азол. Соединения были синтезированы в научно-исследовательском институте химии при Саратовском государственном университете им. Н.Г. Чернышевского под руководством канд. хим. наук А. Д. Шебалдовой [1].

Активность ЛДГ определяли с помощью оптического теста Варбурга [2]. В работе использовали препараты фирмы «Merck» (Германия): 1/15 М фосфатный буфер, пируват натрия (3.64-10-2 М), НАДН (4,5-10-5 М), лак-татдегидрогеназа, растворы соединений I-IV (в диметилформамиде (ДМФА)). Ход ферментативной реакции прослеживали по изменению спектров НАДН, которые регистрировали на спектрофотометре «Specord UV VIS» в диапазоне волн от 220 до 400 нм. Активность ЛДГ определяли по уменьшению содержания НАДН (максимум поглощения при длине волны 340 нм) в реакционной смеси в результате энзиматического восстановления пирувата в лактат. Удельную активность фермента выражали в наномолях субстрата, превращенного в продукт реакции за 1 мин на 1 мг фермента при температуре 25 °С и оптимуме рН.

Действие соединения палладия на активность ЛДГ определяли по уменьшению скорости реакции и изменению константы Михаэлиса (Km). Для определения Km вычисляли скорость реакции при различных концентрациях субстрата - пирувата натрия. Для этого готовили разведение пирувата натрия в концентрациях от 3,64-10-2 до 1Д35-10-3 М. Затем строили график зависимости скорости ферментативной реакции (V, моль/лх) от концентрации субстрата (C, М пирувата натрия). Максимальная скорость ферментативной реакции, катализируемой ЛДГ, составляет 3,3 х х 10-6 моль/л-с. Km фермента лактатдегидрогеназы составляет 0,2 х 10-2 М пирувата натрия.

В присутствии соединения I наблюдали снижение максимальной скорости реакции (Vmax = 3,0 х 10-6 моль/л-с) в сочетании с увеличением константы Михаэлиса (Km = 0,55 х 10-2 М пирувата натрия). Следовательно, можно сделать вывод о смешанном типе ингибирования данного соединения. Отмечается увеличение максимальной скорости в присутствии ДМФА и соединения III (Vmax = 3,9 х 10-6, Vmax = 4,1 х 10-6 моль/л-с соответственно) при сохранении контрольного значения Km (в случае ДМФА и соединения III Km = 0,22 х 10-4 М пирувата натрия).

В присутствии соединения II наблюдали снижение максимальной скорости реакции (Vmax = 2,8 х 10-6 моль/л-с) и незначительное снижение константы Михаэлиса (Кт = 0,16 х 10-4 М пирувата натрия); в присутствии соединения IV зафиксировано увеличение Vmax в сочетании с незначительным увеличением Кт (Vmax = 3,8 х 10-6 моль/л-с, Кт = 0,21 х 10-4 М

пирувата натрия). Следовательно, соединение II является неконкурентным ингибитором ЛДГ.

Наибольшее ингибирующее действие на активность ЛДГ оказывало соединение I, снижавшее активность фермента на 40 %. Менее выраженным - соединение II, которое снижало активность ЛДГ на 30 %. Наименьшее ингибирующее действие оказывали нитрофурановые препараты III и IV. Учитывая активирующее действие ДМФА и нитрофурановых препаратов и ингибирующее действие комплексов палладия с нитрофура-нами, можно предположить, что ведущую роль в ингибировании ЛДГ играет атом палладия.

В настоящее время изучается биологическая активность соединений палладия с целью выявления цитотоксических, антибактериальных и противоопухолевых свойств, которые позволят использовать соединения палладия для лечения онкологических заболеваний [3-6].

При исследовании новых нитрофуран- и палладийсодержащих препаратов, обладающих противоопухолевой и антибактериальной активностью, необходимо учитывать ингибирующее действие комплексов палладия с нитрофуранами на активность ЛДГ.

Литература

1. Корниенко Г.К. и др. // Хим.-фарм. журн. 1984. № 11. С. 1339-1344.

2. Практикум по биохимии. М., 1989.

3. Canete M. et al. // Anticancer. Drug. Des. 2000. Vol. 15. P. 143-150.

4. Kovala-Demertzi D. et al. // Biometals. 2003. Vol. 16. P. 411-418.

5. Kruszewski M. et al. // Teratog. Carcinog. Mutagen. 2003. Vol. 23. P. 1-11.

6. MergetR., Rosner G. // Sci. Total. Environ. 2001. Vol. 270. P. 165-173.

Саратовский государственный медицинский университет 16 февраля 2005 г.