Диагностическое значение цитокинов при внутриутробном инфицировании плода

циллину, цефазолину, доксициклину, левоми-цетину, карбенициллину.

Известно о генетической связи факторов резистентности и патогенности [8]. Гены антибиотикорезистентности расположены на плазмидах и транспозонах [4, 5]. Прослежено, что эпидемические штаммы, как правило, обладают множественной антибиотикорези-стентностью плазмидной природы [7, 9]. Такие плазмиды включают в свой репликон дополнительно к Я - детерминантам гены, ответственные за синтез токсинов [7], адгезинов [7], антилизоцимной активности, сериновой протеазы, инактивирующей секреторный иммуноглобулин А [2]. Наследование сложных Я - плазмид реципиентными бактериями сообщает им, наряду с множественной лекарственной устойчивостью, и свойства наследуемых факторов патогенности [1, 2]. Вартересян И. И. и соавт. предлагают изучать плазмидный профиль (Я - плазмиды) клинических штаммов сальмонелл, распространённых в конкретном регионе, для мониторинга антибио-

тикорезистентности с целью успешного маневрирования средствами терапии [5].

Выводы

1. Частота обнаружения генетических детерминант гемолизинов (hly A и hly B) и фимбриальных антигенов типа S (sfa G и sfa A) у клинических штаммов сальмонелл коррелирует с тяжестью течения болезни.

2. Клинические штаммы Salmonella spp. полирезистентны к антибактериальным препаратам (62,5%). Наибольшая устойчивость показана к ампициллину (51,6%), левомице-тину (30%) и цефазолину (23%), наименьшая -к цефотаксиму (1,1%), ципрофлоксацину (2,1%) и специфическим бактериофагам (1,1%).

3. Увеличение количества генетических детерминант, обнаруживаемых у отдельного штамма, сопровождается снижением чувствительности сальмонелл к антибактериальным препаратам. Множественная устойчивость к антибактериальным препаратам согласуется с тяжестью заболевания.

Сведения об авторах статьи:

Назмутдинова Рита Галиевна - заочный аспирант кафедры инфекционных болезней с курсами дерматовенерологии и косметологии ИПО БГМУ, зав. инфекционным отделением, МБУ «Городская больница №1 ГО г. Октябрьский», раб.т. 8(34767) 5-11-33адрес: г. Октябрьский, ул. Ст Кувыкина, д.30. e-mail: nazmutdinovarg@mail.ru

Мурзабаева Расима Тимерьяровна - д.м.н., профессор кафедры инфекционных болезней с курсом дерматовенерологии ИПО БГМУ, раб. тел. 8 (347) 250-18-83, доп.2-94; адрес: г.Уфа, ул. Запотоцкого, д.37, к. 4. e-mail: rmurzabaeva@yandex.ru Мавзютов Айрат Радикович - д.м.н., профессор, декан МПФ и МБ, зав. кафедрой прикладной и фундаментальной микробиологии ГБОУ ВПО «БГМУ». ООО «Исследовательский центр «Лаборатория»; раб. тел. 2736187;

Раб. адрес: г. Уфа, ул. Ленина, д.3; e-mail: ufalab@mail.ru

ЛИТЕРАТУРА

1. Бондаренко, В.М. «Острова» патогенности бактерий // Журн. микробиол. - 2001. - №4. - С.67 - 74.

2. Бондаренко, В.М. Роль бактериальной протеазы, деградирующей секреторный иммуноглобулин А в персистенции клебсиелл /

В.М. Бондаренко, О.В. Агапова, Н.А. Виноградов // Журн. микробиол.- 2000.- №4. - С.12-16.

3. Бухарин, О.В. Персистенция патогенных бактерий. - М., 1999. - 370с.

4. Вартересян, И. И. Конъюгативные плазмиды антибиотикорезистентных штаммов сальмонелл/И. И. Вартересян, З.У. Геворкян,

Н.Н Саркисян. [и др.] . // Журн. микробиол. - 2002. - №1. - С. 78-79.

5. Гашимова, Д.Т. Характеристика адгезивных свойств бактерий рода Morganella morganii /Д.Т. Гашимова, З.Г. Габидуллин, А.Р. Мавзютов, А.К. Булгаков. //Актуальные вопросы инфекционной патологии: сборник научных трудов - Уфа, 1998. - С. 100-101.

6. Милютина, Л.Н. Эволюция лекарственной резистентности Salmonella enteritidis, выделенных от детей/Л.Н. Милютина,

О.В.Гурьева, С.Ш. Рожнова, М.А. Головинова // Журн. эпидем. и инфекц. болезни. - 2008. - №2. - С.44-47.

7. Рожнова, С.Ш. Л.А. Кафтырева. Значение плазмид в эволюции возбудителей и эпидемического процесса внутрибольничных сальмонеллёзов // Журн. эпидем. и инфекц. болезни. - 2000- № 5. - С. 25-27.

8. Martinez J.L., Baquero F. Interactions among strategies associated with bacterial infection: pathogenicity, epidemicity and antibiotic

resistance // Clin. Microbiol. Rev. - 2002. - Vol.15. - №4. - Р.647-679.

9. Silva J., Gatica R., Aguilar C. et al. Outbreak of infection with extended-spectrum lactamase-producing Klebsiella pneumoniae in a Mexican hospital // J. Clinic. Microbiol. - 2001. - Vol. 39. - №9. - P.3193-3196.

УДК 616.9-053.1:612.017.4 © Л.А. Русакова, У.Р. Хамадьянов, 2011

Л.А. Русакова, У.Р. Хамадьянов ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ЦИТОКИНОВ ПРИ ВНУТРИУТРОБНОМ ИНФИЦИРОВАНИИ ПЛОДА

ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, г. Уфа

На основе количественного измерения 11-1 р, 10 и ФНО в трех биологических жидкостях, таких как сыворотки венозной и пуповинной крови, а также околоплодные воды, у женщин высокого инфекционного риска с реализацией инфекции у новорожденных без ее реализации, а также условно здоровых женщин установлена высокая диагностическая ценность про- и противовоспалительных цитокинов. Наиболее статистически значимым признаком внутриутробного инфицирования (ВУИ) у плода является концентрация 11-1 р.

Ключевые слова: внутриутробное инфицирование плода, диагностика, цитокины.

L.R. Rusakova, U.R. Khamadjanov DIAGNOSTIC VALUE OF CYTOKINES IN PRENATAL EXPOSURE TO INFECTION

Based on the quantitative measurements of Il-1p, 10 and tumor necrosis factor (TNF) in three biological fluid samples, such as venous blood and umbilical blood sera, as well as amniotic fluid, taken from women of high risk vertical infection transmission, from women of transmission-free cases, as well as from quasi-healthy women, a high diagnostic value of pro-and anti-inflammation cytokines has been identified. The most statistically significant feature of IUI in the fetus has been found to be high concentration of Il-1p.

Key words: intrauterine infection (IUI) of fetus, diagnosis, cytokines.

Внутриутробное инфицирование (ВУИ) плода является актуальной проблемой в акушерской и неонатологической практике. Учитывая тот факт, что реализация инфекционного процесса определяется патогенностью возбудителей инфекции и эффективностью защитных сил организма, особое значение придается оценке изменений показателей клеточного и гуморального иммунитета. В последнее время большое внимание во взаимодействии клеток специфического и неспецифического иммунитета, а также гемостаза уделяется цитокинам [1,2,3,4,5]. Из множества про-(ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-15, ФНО и др.) и противовоспалительных (ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-13, трансформирующий фактор роста и др.) цитокинов основными маркерами воспалительного процесса в тканях и органах человека являются ИЛ - 1, 6, 10, ФНО [2, 7].

Целью нашего исследования явилась сравнительная оценка уровня цитокинов ИЛ-1Р, ИЛ-10 и ФНО-а у пациенток группы высокого инфекционного риска при реализации внутриутробной инфекции у плода и новорожденного и без ее проявления.

Материал и методы

В настоящей работе представлены результаты комплексного клинико-

лабораторного исследования, проведенного в условиях женской консультации, гинекологического отделения и отделения патологии беременных на базе клинического родильного дома №4 г. Уфы в период с 2008 по 2011 г.г. Для решения поставленной цели нами было обследовано 315 беременных женщин на всех сроках беременности, входящих в группу высокого инфекционного риска. Критерием исключения были женщины с тяжелыми экстра-генитальными, аутоиммунными, эндокринными заболеваниями, гестозом средней и тяжелой степени, которые сами по себе могут приводить к акушерской патологии. Проспективно было обследовано 90 беременных, из которых 76 составили группу высокого инфекционного риска. В зависимости от реализации ВУИ у новорожденных в раннем неонатальном периоде были выделены следующие группы: I (основная) - 35 пациенток высокого инфекционного риска с реализацией ВУИ; II (основная) - 41 беременная высокого инфек-

ционного риска без реализации ВУИ у новорожденных; III (контрольная) - 14 условно здоровых женщин, родивших здоровых детей. Всем беременным было проведено комплексное клинико-лабораторное обследование с использованием молекулярно-биологических методов определения возбудителей инфекции. Уровень цитокинов определяли методом им-муноферментного анализа с помощью набора реагентов ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск). В качестве исследуемых образцов использовались сыворотки венозной крови матери, пуповинной крови и околоплодные воды. Забор амниотической жидкости проводили в асептических условиях методом амнио-центеза во время операции кесарева сечения. Статистическую обработку данных проводили с использованием интегрированного пакета Statistica 8 for Windows фирмы StatSoft. Для анализа результатов использовали как параметрические, так и непараметрические методы статистики. Сравнительная оценка показателей независимых выборок исследуемых групп проведена с помощью однофакторного дисперсионного анализа и рангового дисперсионного анализа Краскелла-Уоллеса.

Результаты и обсуждение

Все беременные были сопоставимы по исходной клинической характеристике. Средний возраст пациенток в I (основной) группе составил 25,6±0,5 года, во II (основной) -

24,7±0,5 года, в III контрольной - 24,8±0,5 года. Средний возраст менархе у женщин I группы составил 13,5±0,2 года, II группы 13,8±0,1, контрольной - 13,4±0,1 года. Среди первородящих отягощенный акушерско-гинекологический анамнез (медицинские аборты, самопроизвольные и несостоявшиеся выкидыши) имел место у 51,4%(18) женщин - в I группе, у 61,2%(52) во II и у 16,7%(3) женщин в контрольной группе. У повторнородящих акушерский анамнез был отягощен у 58,2%(32) в I группе, у 24%(24) во II группе и - в 41%(9) женщин в контрольной группе. Среди заболеваний, отягощающих гинекологический анамнез у обследованных женщин, первое место по частоте занимали хронические воспалительные заболевания матки и придатков: в I группе - у 22 (24,4%) беременных, во II - у 43 (23,2%). Выявлено статисти-

чески достоверное очень сильное влияние хронических воспалительных генитальных заболеваний (р=0,00000), а также меньшее влияние хронических воспалительных экстра-генитальных заболеваний (р=0,00405) на развитие внутриутробного инфицирования плода. ОРВИ в реализации ВУИ в нашем исследовании была статистически не значима. При оценке возбудителей, выделенных из вены беременных, установлено следующее: в группе без реализации ВУИ микоплазмы, хлами-дии и уреаплазмы составили 8%(2), цитомега-ловирус 20%(5), вирус простого герпеса 36%(9), кандида 3%(12), ассоциации 60%(15). Анализ группы с реализацией ВУИ выделил такие наиболее частые возбудители, как микоплазмы, хламидии и вирус простого герпеса, составившие по 50%(10) соответственно, цитомегаловирусная инфекция встречалась в 45% (9) случаев, реже встречались уреаплазмы - в 20%(4) и кандида в 15%(3) случаев. Исходя из данных нашего исследования отмечена статистически достоверная сильная связь микробных ассоциаций, выделенных из вены

беременных с развитием внутриутробного инфицирования плода (р=0,01232). Причем наиболее сильное влияние в равном количестве пришлось на хламидии и микоплазмы (р=0,00226). В результате изучения спектра возбудителей ТОЯСИ-комплекса в околоплодных водах в группе с реализацией ВУИ выделены только вирус простого герпеса у 3(15%) беременных и цитомегаловирус у 11(55%). При анализе полученных данных ПЦР -исследования околоплодных вод отмечено статистически достоверно сильное влияние вирусов на развитие внутриутробного инфицирования плода (р=0,00240), причем наибольшее повреждающее действие оказывает цитомегаловирус (р=0,00015). Нами был проведен сравнительный анализ цитокинов в сыворотке пуповинной крови, околоплодных водах и венозной крови матери. Уровень ци-токинов в сыворотке пуповинной крови представлен в табл. 1, где показатели в I (основной) группе статистически значимо отличаются от II (основной) группы (р=0,045562).

Таблица 1

Сравнительная характеристика показателей цитокинов, полученных из сыворотки пуповинной крови

Показа- I группа (N=20) II группа (N=10) III группа (N=15) Уровень

тель М±о Ме М±о Ме М±о Ме значимости

11-1 р 95,49±42,4 87,5 (71-105) 66,0±19,17 68,5 (56-76) 74,2±22,17 69,0 (56-96) Р1,2= 0,045562; Р1,3 =1,0

11-10 66,85±27,28 62,0 (45-83) 68,0±24,96 63,0 (50,6-87,0) 74,73±22,9 72,0 (55-92) Р1,2=1,0 Р1,3 =0,9

ФНО 52±18,56 46,0 (41-56,5) 45,30±17,83 40,5 (31,0-54,0) 37,67±11,82 37,0 (32-45) Р1,2=0,67 Р1,3 =0,042

11-1 р/ 11-10 1,66±0,76 1,37 (1,09-2,11) 1,06±0,43 1,11 (0,65-1,24) 1,01±0,17 1,08 (0,96-1,1) Р1,2=0,11 Р1,3 =0,0041

Уровень ИЛ-1Р, полученный из сыворотки пуповинной крови от пациенток II (основной) группы, статистически значимо ниже по сравнению с группой с реализацией ВУИ, но существенно не отличается от группы условно здоровых женщин. При оценке уровня ИЛ-10 статистически значимых различий не выявлено. Анализируя концентрации ФНО, было отмечено, что показатели I и II групп достоверно не отличались, но зато уровень III группы был статистически значимо ниже по сравнению с I (основной) группой (р=0,042).

Оценивая соотношение ИЛ-1р/ИЛ-10, нами установлено, что показатели в группе условно здоровых женщин были также ниже по сравнению с пациентками, родившими детей с признаками ВУИ (р= 0,0041). При проведении множественного рангового сравнения цитокинов в сыворотке венозной крови (табл. 2) уровень ИЛ-1Р в группе с реализацией ВУИ оказался статистически достоверно выше, чем в группе без реализации ВУИ(р=0,006) и в группе условно здоровых женщин, родивших здоровых детей (р=0,033).

Таблица 2

Сравнительная характеристика показателей цитокинов, полученных из сыворотки венозной крови матери

Показа- тель I группа

М±о Ме М±о Ме М±о Ме

И-1р 100,89±21,09 98 (87-123) 83,79±25,82 78(67-102) 82,93±24,90 76(61-103) Р1,2= 0,006 Р1,3 =0,033

П-10 62,89±27,86 57 (53-67) 77,17±24,23 74,4 (65-80) 89,07±25,43 87 (72-108) Р1,2=0,000865 Р1,3= 0,00009

ФНО 45,49±18,37 45,0 (34-58) 26,32±8,91 25,5 (19,0-31,0) 31,67±14,71 29,0 (19-45) Р1,2= 0,000003 Р1,3 =0,025654

И-1р/ И-10 1,81±0,69 1,64 (1,39-2,09 1,15±0,45 0,98 (0,86-1,44) 1,03±0,56 0,91 (0,63-1,13) Р1,2 = 0,000061 Р1,3=0,000069

Уровень ИЛ-10 сыворотки венозной крови в группе с реализацией ВУИ статистически значимо ниже, чем в группе без реализации ВУИ (р=0,000865) и в группе условно здоровых женщин (р=0,00009). Уровень ФНО сыворотки венозной крови в группе с реализацией ВУИ оказался выше, чем в группе без реализации ВУИ (р=0,000003) и в контрольной группе (р=0,025654). Как видно из табл. 2, соотношение ИЛ-1р/ИЛ-10 у пациенток I группы было достоверно выше по сравнению с пациентками II (р=0,000061) и контрольной (р= 0,000069) групп. При анализе показателей цитокинов в околоплодных водах у пациенток трех сравниваемых групп было установлено, что в группе с реализацией ВУИ уровень ИЛ-1Р оказался статистически значимо выше, чем в группе без реализации ВУИ(р=0,002678) и в контрольной группе условно здоровых женщин (р=0,000549). Уровень ИЛ-10 околоплодных вод между группами статистически значимо не различался. Уровень ФНО околоплодных вод в группе с реализацией ВУИ статистически достоверно выше, чем в контрольной группе (р=0,025654), и не отличался

от группы высокого риска без реализации ВУИ. Оценивая соотношение ИЛ-1р/ИЛ-10, нами получено, что показатели в I группе достоверно превышали его показатели у пациенток II (р=0,000061) и контрольной групп (р=0,000069).

Выводы

В результате проведенного исследования установлено, что повышенный уровень провоспалительных цитокинов, в частности ИЛ-1Р, является диагностическим критерием наличия внутриутробной инфекции. Достоверное повышение коэффициента соотношения провоспалительных и противовоспалительных цитокинов во всех трех исследуемых биологических средах указывает на наличие ВУИ с последующей реализацией у плода и новорожденного. Достоверно низкий уровень противовоспалительного ИЛ-10 в плазме венозной крови беременной является неблагоприятным признаком, указывающим на наличие внутриутробной инфекции и высокой степени ее реализации у плода и новорожденного.

Сведения об авторах статьи:

Русакова Людмила Аркадьевна, аспирант кафедры акушерства и гинекологии № 1 БГМУ.

Адрес: 450000, РБ, г. Уфа, ул. Ленина, 3. E-mail: milarus@bk.ru

Хамадьянов Ульфат Рахимьянович, проф., д.м.н., зав. кафедрой акушерства и гинекологии №1 БГМУ.

Адрес: 450000, РБ, г. Уфа, ул. Ленина, 3. E-mail: Hamadyanov@yandex.ru

ЛИТЕРАТУРА

1. Галимов, А.И. Инфекционно-воспалительные осложнения после экстренного кесарева сечения и принципы их профилактики //Медицинский вестник Башкортостана. -2010. - №3. - С.48-50.

2. Кулаков, В.И. [и др.]. Содержание цитокинов в амниотической жидкости, пуповинной крови и сыворотке крови женщин с внутриутробной инфекцией./ В. И. Кулаков, Г. Т. Сухих, Н.Е.Кан //Акушерство и гинекология. - 2005. №5. - С.14-17.

3. Сидорова И.С., Макаров И.О., Матвиенко Н. А. Внутриутробные инфекции. - М., 2006.

4. Орджоникидзе, Н.В. [и др.]. Диагностика внутриутробной инфекции/Н.В. Орджоникидзе, Е.К. Ушницкая //Акушерство и гине-

кология. - 2008.- №5. - С.12-14.

5. Макаров, О.В. [и др.]. Современные представления о диагностике внутриутробной инфекции /О.В. Макаров, И.В. Бахарева, Л.В. Ганковская, Л.С. Идрисова //Российский вестник акушера-гинеколога. - 2006. -№1. - С. 11-15.

6. Хамадьянов, У.Р. Д.Ф.Абсалямова. Перспективы применения сорбционно-пробиотических технологий в комплексной терапии

у женщин с угрозой невынашивания беременности / У.Р.Хамадьянов, Д.Ф.Абсалямова //Медицинский вестник Башкортостана. 2009.- №3.-С.43-48.

7. Greig P.C. Amniotic fluid interleukin-10 concentrations increase through pregnancy and are elevated in patients with preterm labor associated with intrauterine infection. / P.C. Greig, W.N. Herbert, B.L. Robinette, L.A. Teot// American Journal Obstetrics and Gynecology.-1995; № 4.- p.1223-1227.

УДК 616.9-022-053.1 © Л.А. Русакова, У.Р. Хамадьянов, 2011

Л.А. Русакова, У.Р. Хамадьянов РОЛЬ ИНФЕКЦИОННОГО АГЕНТА В ЭТИОЛОГИИ И ПАТОГЕНЕЗЕ ВНУТРИУТРОБНОЙ ИНФЕКЦИИ

ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, г. Уфа

На основе изучения микробиоценоза влагалища, кишечника, околоплодных вод и флоры с плодовой поверхности плаценты у женщин высокого инфекционного риска с реализацией инфекции у новорожденных, без ее реализации, а также условно здоровых женщин установлена высокая диагностическая ценность бактериологического метода исследования. Ведущее значение в развитии внутриутробного инфицирования плода имеют Streptococcus faecalis, Staphylococcus epidermidis и E.Coli, выделенные из влагалища и плодовой поверхности плаценты.

Ключевые слова: внутриутробное инфицирование плода, диагностика, биоцеоз, микрофлора.