СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ, ОЧИСТКИ И СОСТАВЛЕНИЯ КОНЪЮГАТОВ АНТИТЕЛО-ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО

1. Непрерывный способ получения композиции конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC), включающий (i) конъюгацию антитела или его антигенсвязывающего фрагмента с лекарственным средством для образования ADC, (ii) удаление неконъюгированного лекарственного средства и (iii) перенос ADC в стабильный буфер, причем (i)-(iii) выполняют непрерывно, и при этом однопроходную фильтрацию в тангенциальном потоке (SPTFF - англ.: single-pass tangential flow filtration) и/или противоточную диафильтрацию используют для удаления неконъюгированного лекарственного средства и/или переноса ADC в стабильный буфер.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что SPTFF и/или противоточную диафильтрацию используют для удаления неконъюгированного лекарственного средства для переноса ADC в стабильный буфер.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что проточную колоночную хроматографию используют для удаления неконъюгированного лекарственного средства, а SPTFF и/или противоточную диафильтрацию используют для переноса ADC в стабильный буфер.
4. Способ по любому из пп. 1-3, дополнительно включающий предварительную обработку антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, причем предварительную обработку антитела или его антигенсвязывающего фрагмента проводят непрерывно с этапами (i)-(iii) или предварительную обработку антитела или его антигенсвязывающего фрагмента проводят в общем объеме перед этапами (i)-(iii).
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что предварительную обработку антитела или его антигенсвязывающего фрагмента проводят с использованием SPTFF и/или противоточной диафильтрации, необязательно, при этом только один этап SPTFF или противоточной диафильтрации используют в ходе предварительной обработки.
6. Способ по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что способ дополнительно включает предварительную обработку лекарственного средства для конъюгации.
7. Непрерывный способ получения композиции конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC), включающий (i) предварительную обработку антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, (ii) конъюгацию антитела или его антигенсвязывающего фрагмента с лекарственным средством для образования ADC, (iii) удаление неконъюгированного лекарственного средства и (iv) перенос ADC в стабильный буфер, причем этапы (i)-(iv) выполняют непрерывно, и при этом однопроходную фильтрацию в тангенциальном потоке (SPTFF) и/или противоточную диафильтрацию используют для удаления неконъюгированного лекарственного средства и/или переноса ADC в стабильный буфер.
8. Способ по любому из пп. 4-7, отличающийся тем, что предварительная обработка антитела или его антигенсвязывающего фрагмента включает перенос антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в буфер для конъюгации и/или где предварительная обработка антитела или его антигенсвязывающего фрагмента включает восстановление антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и/или окисление антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, необязательно при этом (а) восстановление и/или окисление достигают без использования SPTFF или противоточной диафильтрации, или (b) восстановление и/или окисление достигают с использованием только одного этапа SPTFF или противоточной диафильтрации.
9. Способ получения конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC) путем процесса непрерывной конъюгации, включающий добавление одного или более реагентов реакции конъюгации к реакции конъюгации в ходе реакции конъюгации и после образования по меньшей мере одного продукта реакции конъюгации (ADC), при этом необязательно реагент для реакции конъюгации содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, лекарственное средство, присоединенное к линкеру, линкер, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, присоединенные к линкеру, или лекарственное средство.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что реакция конъюгации происходит в проточном реакторе.
11. Способ по п. 9 или 10, дополнительно включающий предварительную обработку антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, причем (а) предварительную обработку антитела или его антигенсвязывающего фрагмента проводят непрерывно при помощи реакции конъюгации или (b) предварительную обработку антитела или его антигенсвязывающего фрагмента проводят в общем объеме перед реакцией конъюгации.
12. Способ по п. 10 или 11, отличающийся тем, что предварительную обработку антитела или его антигенсвязывающего фрагмента проводят с использованием SPTFF и/или противоточной диафильтрации, необязательно, при этом только один этап SPTFF или противоточной диафильтрации используют в ходе предварительной обработки, предварительная обработка антитела или его антигенсвязывающего фрагмента включает перенос антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в буфер для конъюгации, и/или предварительная обработка антитела или его антигенсвязывающего фрагмента включает восстановление антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и/или окисление антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.
13. Способ по любому из пп. 4-8, отличающийся тем, что предварительную обработку антитела или его антигенсвязывающего фрагмента проводят непрерывно с этапами (i)-(iii), и при этом ADC концентрируют с использованием однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке и/или противоточной диафильтрации, очищают с использованием однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке и/или противоточной диафильтрации и/или переносят в буфер для состава с использованием однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке и/или противоточной диафильтрации.
14. Способ по любому из пп. 9-13, отличающийся тем, что ADC концентрируют, очищают и/или переносят в буфер для состава с использованием проточной хроматографии.
15. Способ концентрирования конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC), очистки конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC) или переноса конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC) в буфер для состава, включающий использование однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке и/или противоточной диафильтрации.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что ADC получали в процессе серийной конъюгации.
17. Способ по п. 15, отличающийся тем, что ADC получали в процессе непрерывной конъюгации.
18. Способ по любому из пп. 13 и 15-17, отличающийся тем, что при однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке используют ультрафильтрационную мембрану или где при однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке используют диафильтрационную мембрану.
19. Способ по любому из пп. 1-18, отличающийся тем, что способ улучшает стабильность производства ADC и/или где способ снижает время производства ADC.
20. Способ по любому из пп. 1-8, 12, 13 и 15-19, отличающийся тем, что однопроходная фильтрация в тангенциальном потоке и/или противоточная диафильтрация улучшают стабильность производства ADC, снижают время, требуемое для концентрации, очистки или переноса ADC, и/или уменьшают количество используемого буфера.
21. Способ по любому из пп. 1-20, отличающийся тем, что способ дополнительно включает поточный мониторинг аналита, при этом необязательно поточный мониторинг измеряет концентрацию компонента, добавляемого в реакцию конъюгации ADC, и/или поточный мониторинг измеряет скорость потока компонента, добавляемого в реакцию конъюгации ADC.
22. Способ получения конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC), отличающийся тем, что для измерения добавления компонента в реакцию конъюгации ADC используют поточный мониторинг, при этом необязательно поточный мониторинг измеряет концентрацию компонента, добавляемого в реакцию конъюгации ADC, и/или поточный мониторинг измеряет скорость потока компонента, добавляемого в реакцию конъюгации ADC.
23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что компонент представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, лекарственное средство, линкер, лекарственное средство, присоединенное к линкеру, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, присоединенный к линкеру и/или буфер для конъюгации.
24. Способ по п. 22, отличающийся тем, что способ дополнительно включает поточный мониторинг для измерения добавления компонента в реакцию in situ, при этом необязательно компонент представляет собой лекарственное средство, линкер и/или буфер для реакции in situ.
25. Способ получения конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC), отличающийся тем, что поточный мониторинг аналита используют для определения того, когда (i) прекратить добавление буфера для конъюгации в реакцию конъюгации ADC (ii), прекратить рециркуляцию буфера для конъюгации в реакции конъюгации ADC и/или (iii) начать вымывание буфера для конъюгации из реакции конъюгации ADC, при этом необязательно аналит представляет собой неконъюгированное лекарственное средство или неконъюгированное лекарственное средство, присоединенное к линкеру.
26. Способ очистки конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC) после процесса конъюгации ADC, отличающийся тем, что способ включает поточный мониторинг аналита, при этом необязательно очистка включает фильтрацию.
27. Способ по п. 26, отличающийся тем, что фильтрация представляет собой ультрафильтрацию или диафильтрацию, необязательно, при этом диафильтрация представляет собой противоточную диафильтрацию.
28. Способ по п. 26, отличающийся тем, что фильтрация представляет собой фильтрацию в тангенциальном потоке, при этом необязательно фильтрация в тангенциальном потоке представляет собой однопроходную фильтрацию в тангенциальном потоке.
29. Способ по любому из пп. 22-28, отличающийся тем, что аналит находится в ретентате.
30. Способ по п. 29, отличающийся тем, что аналит представляет собой (i) концентрацию неконъюгированного лекарственного средства или неконъюгированного лекарственного средства, присоединенного к линкеру, (ii) концентрацию ADC или антитела, или его антигенсвязывающего фрагмента, (iii) концентрацию компонента буфера для реакции конъюгации или буфера для фильтрации, (iv) значение рН, (v) находится в пермеате, (vi) представляет собой концентрацию ADC или антитела, или его антигенсвязывающего фрагмента, (vii) концентрацию неконъюгированного лекарственного средства или неконъюгированного лекарственного средства, присоединенного к линкеру, (viii) и/или концентрацию неконъюгированного лекарственного средства или неконъюгированного лекарственного средства, присоединенного к линкеру.
31. Способ по любому из пп. 26-30, отличающийся тем, что очистка включает хроматографию, а аналит измеряют в конце хроматографической колонки, при этом необязательно аналит представляет собой ADC или антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент, и/или аналит представляет собой неконъюгированное лекарственное средство, неконъюгированное лекарственное средство, присоединенное к линкеру, компонент буфера для реакции конъюгации или компонент буфера для хроматографии.
32. Способ по любому из пп. 22-31, отличающийся тем, что реакция конъюгации представляет собой реакцию серийной конъюгации.
33. Способ по любому из пп. 22-31, отличающийся тем, что реакция конъюгации представляет собой реакцию непрерывной конъюгации.
34. Способ по любому из пп. 22-32, отличающийся тем, что поточный мониторинг выполняют с использованием технологии переменной длины пути, устройства с проточной ячейкой, УФ-датчика, Рамановской спектроскопии или инфракрасной спектроскопии с преобразованием Фурье (FITR).
35. Способ по любому из пп. 22-33, отличающийся тем, что поточный мониторинг аналита выполняют с использованием FlowVPE.
36. Способ по любому из пп. 22-35, отличающийся тем, что поточный мониторинг улучшает выход ADC, улучшает выделение ADC, уменьшает время производства ADC и/или уменьшает количество используемого буфера.
37. Способ получения конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC), отличающийся тем, что поточный мониторинг аналита используют для определения момента прекращения добавления компонента реакции конъюгации в реакцию конъюгации ADC, при этом необязательно компонент представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, лекарственное средство, линкер, лекарственное средство, присоединенное к линкеру и/или буфер для реакции конъюгации.
38. Способ по любому из пп. 1-37, отличающийся тем, что ADC содержит антитело.
39. Способ по любому из пп. 1-37, отличающийся тем, что ADC содержит антигенсвязывающий фрагмент антитела.
40. Способ по любому из пп. 1-39, отличающийся тем, что ADC содержит антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с CD37, CD33, FOLR1, CD123, CD19, cMET, AD AMP или HER2.
41. Способ по п. 40, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL и CDR3 VL huMovl9, Z4681A или G4732A, при этом необязательно CDR представляют собой CDR, определенные по Kabat, CDR, определенные по Chothia, или CDR, определенные по AbM.
42. Способ по п. 40, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательности CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL и CDR3 VL, содержащие последовательности SEQ ID NO: 1-6 соответственно, SEQ ID NO: 7-12 соответственно, SEQ ID NO: 13-18 соответственно, SEQ ID NO: 19-–24 соответственно, SEQ ID NO: 25-30 соответственно, или SEQ ID NO: 31-36 соответственно, (ii) последовательности VH и VL, содержащие последовательности SEQ ID NO: 37 и 38 соответственно, SEQ ID NO: 37 и 39 соответственно, SEQ ID NO: 40 и 41 соответственно, SEQ ID NO: 42 и 43 соответственно, SEQ ID NO: 44 и 45 соответственно, SEQ ID NO: 46 и 47 соответственно, или SEQ ID NO: 48 и 49 соответственно, или (iii) антитело содержит последовательности тяжелой и легкой цепей, содержащие последовательности SEQ ID NO: 50 и 51 соответственно, SEQ ID NO: 50 и 52 соответственно, SEQ ID NO: 53 и 54 соответственно или SEQ ID NO: 55 и 56 соответственно.
43. Способ по любому из пп. 1-42, отличающийся тем, что ADC содержит линкер, выбранный из группы, состоящей из SMCC, sSPDB и пептидного линкера и/или содержит мейтансиноид, причем необязательно мейтансиноид представляет собой DM1 или DM4, или индолинобензодиазепин, при этом необязательно индолинобензодиазепин представляет собой DGN462 или DGN549.
44. Способ по любому из пп. 1-43, отличающийся тем, что ADC представляет собой IMGN529, IMGN779, IMGN853, IMGN632 или Kadcyla.
45. Способ получения IMGN853, включающий (i) смешивание антитела huMovl9 и DM4, связанного с сульфо-SPDB, в процессе непрерывной конъюгации с образованием IMGN853, необязательно, при этом поточный мониторинг используют для измерения концентрации антитела huMovl9, добавляемого в реакцию конъюгации, (ii) необязательно, концентрирование IMGN853 с использованием однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке и/или противоточной диафильтрации, необязательно, при этом поточный мониторинг используют для измерения концентрации неконъюгированного лекарственного средства в ретентате, (iii) очистку IMGN853 с использованием однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке и/или противоточной диафильтрации, необязательно, при этом поточный мониторинг используют для измерения концентрации неконъюгированного лекарственного средства в ретентате, и (iv) перенос IMGN853 в буфер для состава с использованием однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке и/или противоточной диафильтрации, необязательно, при этом поточный мониторинг используют для измерения концентрация примесей в ретентате.
46. Способ получения IMGN779, включающий (i) смешивание антитела Z4681A и DGN462, связанного с сульфо-SPDB, в процессе непрерывной конъюгации с образованием IMGN779, необязательно, при этом поточный мониторинг используют для измерения концентрации антитела Z4681A, добавляемого в реакцию конъюгации, (ii) необязательно, концентрирование IMGN779 с использованием однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке и/или противоточной диафильтрации, необязательно, при этом поточный мониторинг используют для измерения концентрации неконъюгированного лекарственного средства в ретентате, (iii) очистку IMGN779 с использованием однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке и/или противоточной диафильтрации, необязательно, при этом поточный мониторинг используют для измерения концентрации неконъюгированного лекарственного средства в ретентате, и (iv) перенос IMGN779 в буфер для состава с использованием однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке и/или противоточной диафильтрации, необязательно, при этом поточный мониторинг используют для измерения концентрация примесей в ретентате.
47. Способ получения IMGN632, включающий (i) смешивание антитела G4732A и сульфированного DNG549C в процессе непрерывной конъюгации с образованием IMGN632, (ii) необязательно, концентрирование IMGN632 с использованием однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке и/или противоточной диафильтрации, необязательно, при этом поточный мониторинг используют для измерения концентрации неконъюгированного лекарственного средства в ретентате, (iii) очистку IMGN632 с использованием однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке и/или противоточной диафильтрации, необязательно, при этом поточный мониторинг используют для измерения концентрации неконъюгированного лекарственного средства в ретентате, и (iv) перенос IMGN632 в буфер для состава с использованием однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке и/или противоточной диафильтрации, необязательно, при этом поточный мониторинг используют для измерения концентрация примесей в ретентате, необязательно антитело G4732A восстанавливается и окисляется только за один этап SPTFF или противоточной диафильтрации перед процессом конъюгации.
48. Способ по любому из пп. 1-14 или 18-47, отличающийся тем, что способ включает повышение первой температуры процесса конъюгации по меньшей мере на 5°C до повышенной температуры, причем повышенную температуру поддерживают в течение не более 20 минут, при этом необязательно повышенная температура составляет не более 55°С.
49. Способ получения ADC, включающий повышение первой температуры процесса конъюгации по меньшей мере на 5°C до повышенной температуры, причем повышенную температуру поддерживают в течение не более 20 минут, при этом необязательно повышенная температура составляет не более 55°С, составляет от 35 до 55°C или составляет от 40 до 50°C.
50. Способ по п. 48 или 49, отличающийся тем, что первую температуру повышают по меньшей мере на 10°С, по меньшей мере на 15°С, по меньшей мере на 20°С или по меньшей мере на 30°С.
51. Способ по п. 48 или 49, отличающийся тем, что повышение первой температуры до повышенной температуры занимает не более 2 минут или занимает не более 1 минуты.
52. Способ по п. 48 или 49, дополнительно включающий снижение повышенной температуры, необязательно, до первой температуры, причем необязательно снижение занимает не более 2 минут или занимает не более 1 минуты.
53. Способ по п. 52, отличающийся тем, что этапы повышения первой температуры до повышенной температуры, а затем снижения повышенной температуры повторяют (i) по меньшей мере дважды, (ii) по меньшей мере трижды, (iii) 2-20 раз или (iv) 5-10 раз.
54. Способ по любому из пп. 1-14 или 18-47, отличающийся тем, что способ включает снижение первой температуры процесса конъюгации по меньшей мере на 5°C до пониженной температуры, причем пониженную температуру поддерживают в течение не более 20 минут, при этом необязательно первую температуру снижают не более чем на 30°С.
55. Способ получения ADC, включающий снижение первой температуры процесса конъюгации по меньшей мере на 5°C до пониженной температуры, причем пониженную температуру поддерживают в течение не более 20 минут, при этом необязательно первую температуру снижают не более чем на 30°С.
56. Способ по п. 54 или 55, отличающийся тем, что температуру снижают по меньшей мере на 10°С, по меньшей мере на 15°С или по меньшей мере на 20°С.
57. Способ по любому из пп. 54-56, отличающийся тем, что снижение первой температуры до пониженной температуры занимает не более 2 минут или занимает не более 1 минуты.
58. Способ по любому из пп. 54-57, дополнительно включающий повышение пониженной температуры, необязательно, до первой температуры, при этом необязательно повышение пониженной температуры до первой температуры занимает не более 2 минут или занимает не более 1 минуты.
59. Способ по п. 58, отличающийся тем, что этапы снижения первой температуры до пониженной температуры, а затем повышения пониженной температуры повторяют (i) по меньшей мере дважды (ii) по меньшей мере трижды, (iii) 2-20 раз или (iv) 5-10 раз.
60. Способ по любому из пп. 48-59, отличающийся тем, что повышенную температуру или пониженную температуру поддерживают в течение (i) не более 15 минут, (ii) от 30 секунд до 15 минут, (iii) 5-10 минут, (iv) 10-15 минут или (v) в течение 1-5 минут.
61. Способ по любому из пп. 1-14 или 18-60, отличающийся тем, что способ включает изменение первого значения pH процесса конъюгации по меньшей мере на 0,5 до измененного значения pH, причем измененное значение pH поддерживают в течение не более чем 20 минут, при этом необязательно способ включает изменение первого значения pH процесса конъюгации по меньшей мере на 0,5 до измененного значения pH, причем измененное значение pH поддерживают в течение не более чем 20 минут, причем необязательно первое значение рН увеличивают по меньшей мере на 1, необязательно, причем измененное значение рН не превышает 9.
62. Способ получения ADC, включающий изменение первого значения pH процесса конъюгации по меньшей мере на 0,5 до измененного значения pH, причем измененное значение pH поддерживают в течение не более чем 20 минут, причем необязательно первое значение рН увеличивают по меньшей мере на 1, необязательно, причем измененное значение рН не превышает 9.
63. Способ по п. 61 или 62, отличающийся тем, что первое значение рН увеличивают по меньшей мере на 2 или по меньшей мере на 3.
64. Способ по п. 61 или 62, отличающийся тем, что первое значение рН уменьшают по меньшей мере на 1, необязательно, причем измененное значение рН не опускается ниже 4.
65. Способ по п. 64, отличающийся тем, что первое значение рН уменьшают по меньшей мере на 2 или по меньшей мере на 3.
66. Способ по любому из пп. 61-65, дополнительно включающий изменение измененного значения рН, необязательно, до первого значения рН.
67. Способ по п. 66, отличающийся тем, что этапы изменения первого значения рН до измененного значения рН, а затем изменения измененного значения рН повторяют (i) по меньшей мере дважды, (ii) по меньшей мере трижды, (iii) 2-20 раз или (iv) 5-10 раз.
68. Способ по любому из пп. 61-67, отличающийся тем, что измененное значение рН поддерживают в течение (i) не более 15 минут, (ii) от 30 секунд до 15 минут, (iii) 5-10 минут, (iv) 10-15 минут или (v) 1-5 минут.
69. ADC, изготовленный в соответствии со способом, изложенным в любом из пп. 1-68.