АМИДЫ 3-ЗАМЕЩЕННОЙ 5- И 6-АМИНОАЛКИЛИНДОЛ-2-КАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ И РОДСТВЕННЫЕ АНАЛОГИ КАК ИНГИБИТОРЫ КАЗЕИНКИНАЗЫ IΕ
AMIDES OF 3-SUBSTITUTED 5- AND 6-AMINOALKYLINDOLE-2-CARBOXYLIC ACID AND RELATED ANALOGUES SUCH AS CASEIN KINASE IΕ INHIBITORS

Предпосылки создания изобретения
1. Область изобретения
Настоящее изобретение относится к группе замещенных амидов 5-аминоалкил-1Н-индол-2-карбоновой кислоты и 6-аминоалкил-1Н-индол-2-карбоновой кислоты. Более точно, изобретение относится к амидам 3-арилтиозамещенных и 3-гетероциклтиозамещенных 5-аминоалкил-1Н-индол-2-карбоновой кислоты и 6-аминоалкил-1Н-индол-2-карбоновой кислоты, а также к их родственным аналогам. Соединения, являющиеся объектом изобретения, представляют собой ингибиторы фосфорилирования часового белка человека Period (hPER) под действием казеинкиназы Iε человека и поэтому являются полезными в качестве фармацевтических агентов, особенно для лечения и/или профилактики заболеваний и расстройств, имеющих отношение к центральной нервной системе.
2. Предшествующая область техники
Ритмические изменения в поведении характерны для многих живых организмов, от одноклеточных до человека. Если ритм при постоянных условиях сохраняется и имеет период около суток, при этом слабо зависит от температуры, такой ритм называют "циркадным" (Konopka, R.J. and Benzer, S. (1971) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 68, 2112-2116).
Циркадные ритмы генерируются эндогенными биологическими водителями ритма (циркадными часами), которые существуют у большинства живых организмов, включая человека, грибы, насекомых и бактерии (Dunlap, J.C. (1999) Cell 96, 271-290; Hastings, J.W. et al. Circadian Rhythms, The Physiology of Biological Timing. In: Prosser, C.L. ed. Neural and Integrative Animal Physiology, New York: Wiley-Liss (1991) 435-546; Allada, R. et al. (1998) Cell 93, 791-804; Kondo et al. (1994) Science 266, 1233-1236; Crosthwaite, S.K. et al. (1997) Science 276, 763-769; Shearman, L.P. et al. (1997) Neuron, 19, 1261-1269). Циркадные ритмы являются самоподдерживающимися и остаются постоянными даже в условиях полной темноты, но могут синхронизироваться с новым режимом смены день/ночь (подстраиваться под него) по сигналам внешней среды, таким как световые и температурные циклы (Pittendrigh, C.S. (1993) Annu. Rev. Physiol., 55, 16-54; Takahashi, J.S. (1995) Annu. Rev. Neurosci. 18, 531-553; Albrecht, U. et al. (1997) Cell, 91, 1055-1064). Циркадные часы играют ключевую роль в поддержании многих биологических ритмов и регулируют множество циркадных проявлений, таких как дневные флуктуации поведения, приём пищи, циклы сна и бодрствования, а также физиологические изменения, такие как выработка гормонов и колебания температуры тела (Hastings, M. (1997) Trends Neurosci. 20, 459-464; Reppert, S.M. and Weaver, D.R. (1997) Cell 89, 487-490).
Drosophila melanogaster
,
.
,
Drosophila
Drosophila
Period
dper
Drosophila
Timeless
dtim
dper
dtim
dper
per
per
per
per
S
L
o
Генетические и молекулярные исследования плодовой мушки  прояснили роль некоторых генов, участвующих в циркадной ритмичности. Такие исследования привели к выявлению пути, который жестко авторегулируется и включает транскрипционную/трансляционную обратную связь (Dunlap, J.C. (1999) Cell 96, 271-290; Dunlap, J.C. (1996) Annu. Rev. Genet 30, 579-601; Hall, J.C. (1996) Neuron 17, 799-802). Основными элементами циркадного осциллятора у  являются два стимулирующих белка dCLOCK/dBMAL (CYCLE) и два ингибирующих белка dPERIOD (dPER) и dTIMELESS (dTIM). dCLOCK и dBMAL гетеродимеризуются с образованием транскрипционного фактора dCLOCK/dBMAL, который промотирует экспрессию двух генов, называемых  () и  (). В конечном счете, происходит считывание мРНК этих генов для обеспечения синтеза белков dPER и dTIM соответственно. В течение нескольких часов в цитоплазме происходит синтез и фосфорилирование белковых производных dPER и dTIM, затем их уровень достигает критического, они образуют гетеродимеры и транслоцируются в ядро. Попав в ядро, dPER и dTIM функционируют как отрицательные регуляторы собственной транскрипции, накопление dPER и dTIM тормозится, и вновь начинается активация  и  за счет присутствия dCLOCK/dBMAL (Zylka, M.J. et al. (1998) Neuron 20, 1103-1110; Lowrey, P.L. et al. (2000) 288, 483-491). Было показано, что ген  является необходимым элементом контроля циркадных ритмов вылупления взрослой особи (появление взрослой мухи из куколки), поведения и локомоторной деятельности (Konopka, R.J., & Benzer, S. (1971) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 68, 2112-2116). Миссенс-мутации гена  могут либо укоротить (), либо удлинить () период циркадного ритма, тогда как нонсенс-мутации () порождают аритмичность в их поведении (Hall, J.C. (1995) Trends Neurosci. 18, 230-240).
Per
Per1
mPer1
mPer2
mPer3
Per
Per
Drosophila
tim
mTim
Drosophila
Per
У млекопитающих супрахиазматическое ядро (СХЯ) переднего гипоталамуса является местом главных биологических часов (см. обзор Panda et al, (2002) Nature 417, 329-335; Reppert, S.M. and Weaver, D.R. (1997) Cell, 89, 487-490). Часы СХЯ включены в 24-часовой дневной цикл за счет ежедневного цикла день-ночь, причем свет действует через прямые и непрямые каналы передачи сетчатка-СХЯ (Klein, D.C. et al. (1991) Suprachiasmatic Nuclei: The Mind's Clock, Oxford University Press, New York). В СХЯ грызунов выявлены и клонированы три гена , которые обозначаются как мышиные гены  (), и . Белки, соответствующие таким генам млекопитающих (mPER1, mPER2, mPER3), имеют несколько общих областей гомологии друг с другом, и каждый ген млекопитающих  кодирует белок с доменом димеризации белка, который представляется как PAS (PAS является сокращением, состоящим из первых букв трех белков PER, ARNT и SIM, которые, как было установлено, обладают таким функционально важным доменом димеризации), который высоко гомологичен домену PAS PER насекомых. Уровни матричных РНК  (мРНК) и белка колеблются в течение циркадных суток и, в конечном счете, участвуют в положительном и отрицательном регулировании биологических часов, но только mPER1 и mPER2 осциллируют в ответ на воздействие света (Zylka, M.J. et al. (1998) Neuron 20, 1103-1110.; Albrecht, U. et al., (1997) Cell 91, 1055-1064; Shearman, L.P. et al. (1997) Neuron, 19, 1261-1269). Гомолог гена  у млекопитающих был клонирован и обозначен как . Тем не менее, не наблюдалось никаких доказательств взаимодействий mPER-mTIM, аналогичных регистрируемым у , и было высказано предположение о том, что взаимодействия PER-PER могут быть заменены функцией димеров PER-TIM при молекулярном действии циркадных часов млекопитающих (Zylka, M.J. et al., (1998) Neuron 21, 1115-1122). Другая возможность заключается в том, что ритмы в PER1 и PER2 образуют отрицательные обратные связи, которые регулируют транскрипционную активность белка Clock (через их домены PAS), что в свою очередь приводит в действие экспрессию любого или обоих генов  (Shearman, L.P. et al. (1997) Neuron, 19, 1261-1269).
mPer
mPer2
mPer1
mPer2
mPer2
mPer1
mPer3
Brdm1
Представления о роли трех генов  в действии часового механизма млекопитающих были предметом множества исследований. Структурная гомология белков mPER по отношению к dPER позволила надеяться на то, что белки mPER будут функционировать в качестве отрицательных элементов в цепи обратной связи млекопитающих. Предполагается, что PER1 участвует в отрицательном регулировании собственной транскрипции в цепи обратной связи, но полученные недавно данные указывают на то, что он участвует во входном каскаде (Hastings, M.H. et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 26, 15211-15216). PER2 является наиболее хорошо изученным белком, и мутантный белок мыши mPER2 (), не имеющий 87 остатков в карбоксильной части домена димеризации PAS, обладает укороченным циркадным циклом в нормальных условиях день-ночь, но проявляет аритмичность в полной темноте. Мутация также уменьшает осциллирующую экспрессию обоих  и  в СХЯ, показывая, что  может регулировать  «in vivo» (Zheng, B. et al. (1999) Nature 400, 169-173). Было показано, что PER2 обладает двойной функцией в регулировании «колесиков» в центральных часах (Shearman, L.P. et al. (2000) Science 288, 1013-1018). В этом исследовании было продемонстрировано, что PER2 связывается с криптохромными (CRY) белками и транслоцируется в ядро, в котором отрицательно регулируемая транскрипция CRY приводится в действие позитивными транскрипционными комплексами CLOCK и BMAL1. После проникновения в ядро PER2 инициирует положительный рычаг часов за счет положительного регулирования транскрипции BMAL1 по еще неизвестному механизму. Функция PER3 известна плохо, однако в  нокаутных мышей наблюдается слабое воздействие на циркадную активность, и поэтому предполагалось, что PER3 участвует в циркадно регулируемых выходных каналах (Shearman, L.P. et al. (2000) Mol. Cell. Biol. 17, 6269-6275). Сообщалось, что белки mPER взаимодействуют друг с другом и что mPER3 может служить носителем mPER1 и mPER2 для доставки их в ядро, что имеет важнейшее значение для генерации циркадных сигналов в СХЯ (Kume, K. et al. (1999) Cell 98, 193-205; Takano, A. et al. (2000), FEBS Letters, 477, 106-112).
Drosophila
dbt
dbt
dbt
Теоретически было обосновано, что фосфорилирование компонентов циркадных часов регулирует продолжительность цикла. Первым генетическим свидетельством того, что специфическая протеинкиназа регулирует циркадный ритм , было открытие нового гена doubletime (), кодирующего протеин серин-треонин киназу (Price J.L. et al. (1998) Cell 94, 83-95; Kloss B. et al. (1998) Cell 94, 97-107). Миссенс-мутации в  приводят к измененному циркадному ритму. Нулевые аллели  вызывают гипофосфорилирование dPER и аритмию.
К киназам млекопитающих, наиболее близкородственным DBT, относятся казеинкиназа Iε (CKIε) и казеинкиназа Iδ (CKIδ). Показано, что обе киназы связываются с mPER1, а в нескольких исследованиях было продемонстрировано, что CKIε фосфорилирует и мышиный, и человеческий PER1 (Price J.L. et al. (1998) Cell 94, 83-95; Kloss B. et al. (1998) Cell 94, 97-107). В исследовании клеток эмбриона почки человека 293T, трансфектированных совместно с hCKIε дикого типа, hPER1 продемонстрировал значительное повышение фосфорилирования (показанное на примере сдвига молекулярной массы). В этом исследовании фосфорилированный hPER1 имеет период полураспада, равный примерно двенадцати часам, тогда как нефосфорилированный hPER1 остается стабильным в клетке более 24 часов, указывая на то, что фосфорилирование hPER1 приводит к падению стабильности белка (Kessler, G.A. et al. (2000) NeuroReport, 11, 951-955). В другом исследовании было также показано, что последовательность фосфорилирования PER1 hCKIε включает цитоплазматическую фиксацию и нестабильность белка (Vielhaber, E. et al. (2000) Mol. Cell. Biol. 13, 4888-4899; Takano, A. et al. (2000) FEBS Letters 477, 106-112).
tau
Не было никаких биохимических причин выбирать между CKIε или CKIδ как потенциальным регулятором у млекопитающих до тех пор, пока в работе Lowery et al. [(2000) Science 288, 483-491] не было обнаружено, что у сирийского золотистого хомячка полудоминантные мутации в CKIε (мутация , Ralph, M.R. and Menaker, M. (1988) Science 241, 1225-1227) вызывали сокращение циркадных суток как у гетерозиготных (22 ч), так и у гомозиготных (20 ч) животных. В этом случае пониженные уровни активности CKIε приводили к меньшему фосфорилированию PER при предположительно более высоких уровнях цитоплазмического белка PER, что вызывало повышенное проникновение в ядро и изменение циркадных циклов. В последнее время предполагалось, что CKIδ может также участвовать в регулировании циркадной ритмичности за счет посттрансляционной модификации часов белков млекопитающих hPER1 и hPER2 [Camacho, F. et al., (2001) FEBS Letters 489(2,3), 159-165]. Поэтому ингибиторы, включая ингибиторы из числа малых молекул, CKIε и/или CKIδ человека или млекопитающих предоставляют новые возможности фазового сдвига или сброса циркадных часов. Как показано ниже, изменение циркадного ритма может оказаться полезным для лечения расстройств сна или настроения.
rd
Mper1-luc
Mper1
В патенте US 6555328 B1 раскрываются методы скрининга клеток для выявления соединений, которые изменяют циркадные ритмы, основанные на тестовом соединении, меняющем способность человеческой казеинкиназы 1ε и/или человеческой казеинкиназы 1δ фосфорилировать человеческие clock белки hPER1, hPER2 и hPER3. Например, клетки HEK293T трансфектируются совместно с hCKIε и Per1 или Per2. В целях оценки значимости ингибирования CKIε и ингибиторов CKIε для циркадной биологии была создана высокопродуктивная клеточная культура (33 Annual Meeting, Soc. for Neurosci., November 8-12, 2003, Abstract numbers 284.1, 284.2, and 284.3), в которой циркадные ритмы могут отслеживаться стандартным образом. В этом анализе фибробласты Rat-1 стабильно экспрессируют конструкт , что позволяет определять ритмическую активацию промотора  в живых клетках, многократно оценивая активность люциферазы по изменению выхода света в течение нескольких дней. Формат периодического контроля культуры обеспечивает точную и воспроизводимую оценку концентрационно-зависимых эффектов воздействия ингибиторов CKIε на циркадный ритм и дает возможность установить связь ингибирования CKIε с изменениями циркадного периода.
Нарушения сна подразделялись на четыре основных категории, которые включают первичные нарушения сна (диссомнии и парасомнии), расстройства сна, связанные с медицинскими/психическими нарушениями, и категорию предполагаемых расстройств сна для тех нарушений сна, которые невозможно классифицировать из-за недостатка данных. Считается, что первичные нарушения сна возникают из-за отклонений непосредственно в системах, ответственных за генерацию сна-пробуждения (гомеостатическая система) или регистрации времени (циркадная система). Диссомнии относятся к нарушениям формирования или поддержания сна и включают первичную бессонницу, гиперсомнию (чрезмерную сонливость), нарколепсию, нарушения сна, связанные с дыханием, нарушения сна, связанные с циркадным ритмом, и диссомнии, не вошедшие в указанные категории. Первичная бессонница характеризуется сохраняющимися (>1 месяца) проблемами инициации и поддержания сна или невосстановительного сна. Проблемы сна, связанные с первичной бессонницей, приводят к значительным нарушениям или расстройствам, включая раздражительность в дневное время, потерю внимания и концентрации, усталость и недомогание, ухудшение настроения и мотивации. Нарушения сна, связанные с циркадным ритмом, включают синдром десинхроноза при перелетах, синдром нарушения сна при посменной работе, синдром преждевременной фазы сна и синдром задержки фазы сна (J. Wagner, M.L. Wagner and W.A. Hening, Annals of Pharmacotherapy (1998) 32, 680-691). Лица с режимом вынужденного сна демонстрируют более высокий уровень бодрствования в процентах от времени сна в определенные периоды циркадных суток (Dijk and Lockley, J. Appl. Physiol. (2002) 92, 852-862). Принято считать, что с возрастом происходит смещение циркадного ритма сна, которое часто приводит к менее качественному сну (Am J Physiol Endocrinol Metab. (2002) 282, E297-E303). Таким образом, сон, возникающий вне циркадной фазы, может быть ущербным с точки зрения качества и количества, что подкрепляется дополнительными примерами изменений сна при посменной работе и десинхронозе при перелетах. Изменение циркадных часов человека может вызывать нарушения сна, и агенты, которые модулируют циркадную ритмичность, например ингибитор CKIε и/или CKIδ, могут быть полезными для лечения нарушений сна и в особенности нарушений сна, связанных с циркадным ритмом.
Нарушения настроения подразделяются на депрессивные расстройства («монополярные депрессии»), биполярные расстройства и два вида расстройств, основанных на этиологии, которые включают нарушения настроения, вызванные общим состоянием здоровья, и нарушение настроения под воздействием наркотических веществ. Депрессивные расстройства дополнительно подразделяются на основные депрессивные расстройства, дистимические расстройства и депрессивные расстройства, не отнесенные к другим категориям. Биполярные расстройства дополнительно подразделяются на биполярные расстройства I и II типа. Отмечалось, что определение «сезонный характер» может применяться в отношении больших депрессивных расстройств, которые носят периодический характер, а также в отношении приступов больших депрессивных расстройств в биполярных расстройствах I и II типа. Заметная анергия, гиперсомния, переедание, набор веса и потребность в углеводах часто характеризуют большие депрессивные проявления, которые носят сезонный характер. Неясно, проявляется ли сезонный характер с большей вероятностью в больших депрессивных расстройствах, которые носят периодический характер, или в биполярных расстройствах. Тем не менее, в рамках биполярных расстройств сезонный характер представляется более вероятным при биполярных расстройствах II типа, чем при биполярных расстройствах I типа. У некоторых лиц начало проявления маний или гипоманий может быть также связано с определенным временем года. Сезонность зимнего типа, как правило, различается в зависимости от географической широты, возраста и пола. Распространенность заболевания увеличивается в более высоких широтах, подверженность риску зимних проявлений депрессии уменьшается с возрастом, а женщины составляют от 60% до 90% от общего количества сезонно зависимых людей. Сезонные аффективные расстройства (SAD), термин, широко используемый в литературе, являются подтипом расстройств настроения, которые в Руководстве по диагностике и статистике психических расстройств (DSM-IV) (American Psychiatric Association: “Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders”, Fourth Edition, Text Revision. Washington, DC, American Psychiatric Association, 2000) обозначаются термином «сезонного характера» при описании сезонного характера приступов больших депрессивных расстройств при биполярных расстройствах I типа, биполярных расстройствах II типа или периодических больших депрессивных расстройствах (E. M. Tam et al., Can. J. Psychiatry (1995) 40, 457-466). Характеристики и диагнозы депрессивных нарушений, больших депрессивных расстройств, приступов больших депрессивных расстройств, биполярных расстройств I типа, биполярных расстройств II типа и сезонных эффектов описаны в DSM-IV.
Пациенты, страдающие большими депрессивными расстройствами, в том числе SAD, которые характеризуются периодическими приступами депрессии, обычно зимой, продемонстрировали позитивную ответную реакцию на световую терапию (Kripke, Journal of Affective Disorders (1998) 49(2), 109-117). Успех применения терапии, основанной на использовании яркого света, для пациентов, страдающих SAD и большой депрессией, позволил предложить несколько гипотез для объяснения фундаментального механизма действия терапевтического эффекта света. К таким гипотезам относится «гипотеза циркадного ритма», которая предполагает, что антидепрессивный эффект яркого света может быть связан с фазовым сдвигом циркадного водителя ритма по отношению к сну (E. M. Tam et al., Can. J. Psychiatry (1995) 40, 457-466). Подтверждением связи между световой терапией и циркадным ритмом стал тот факт, что клинически эффективная световая терапия при больших депрессивных расстройствах вызывает сопутствующий сдвиг в циркадной фазе, и клиническая эффективность световой терапии, очевидно, зависит от способности световой терапии обеспечивать световой сдвиг (Czeisler et al., The Journal of Physiology (2000) 526 (Part 3), 683-694; Terman et al., Arch. Gen. Psychiatry (2001) 58, 69-75). Кроме того, было показано, что световая терапия ускоряет и усиливает эффективность фармакологического лечения больших депрессивных расстройств (Benedetti et al., J. Clin. Psychiatry (2003) 64, 648-653). Поэтому можно ожидать, что ингибирование казеинкиназы Iε и/или казеинкиназы Iδ вызовет сдвиг циркадной фазы и такое ингибирование представляет собой потенциально клинически эффективную моно- или комбинированную терапию для нарушений настроения.
Следует отметить, что нарушение сна является критическим симптомом для многих психиатрических расстройств (W.V. McCall, J. Clin. Psychiatry (2001) 62 (suppl 10), 27-32). Нарушения сна представляют собой общую особенность депрессивных нарушений, и бессонница является нарушением сна, которое часто встречается при депрессии, присутствуя более чем у 90% пациентов, страдающих депрессией (M.E. Thase, J. Clin. Psychiatry (1999) 60 (suppl 17), 28-31). Накопленные данные подтверждают общий патогенез для первичной бессонницы и больших депрессивных расстройств. Высказывалась гипотеза о том, что гиперактивность рилизинг-фактора кортикотропина (CRF) (в связи с генетической предрасположенностью или, возможно, из-за раннего стресса) вызывает процесс, приводящий к повышенным и протяженным нарушениям сна и, в конечном счете, к первичной бессоннице. Циркадная ритмичность при секреции CRF в отсутствие стресса может играть роль обычной экспрессии сон-пробуждение (G.S. Richardson and T. Roth, J. Clin Psychiatry (2001) 62 (suppl 10), 39-45). Поэтому вещества, которые модулируют циркадную ритмичность, например, посредством ингибирования казеинкиназы Iε и/или казеинкиназы Iδ, могут быть полезными при лечении депрессивных нарушений, связанных с эффектами секреции CRF.
Все ссылки, приведенные выше в настоящем документе, включаются в настоящий документ.
Таким образом, объектом настоящего изобретения является получение группы замещенных амидов 5-аминоалкил-1Н-индол-2-карбоновой кислоты и 6-аминоалкил-1Н-индол-2-карбоновой кислоты и их родственных аналогов, являющихся ингибиторами казеинкиназы Iε. Данный и другие объекты изобретения станут очевидны из подробного описания изобретения, приведенного ниже.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к замещенным амидам 5-аминоалкил-1Н-индол-2-карбоновой кислоты формулы I и замещенным амидам 6-аминоалкил-1Н-индол-2-карбоновой кислоты формулы II, стереоизомерам, энантиомерам, рацематам и таутомерам названных соединений и их фармацевтически приемлемым солям, являющимся ингибиторами активности казеинкиназы Iε человека, а также способам применения соединений формулы I и формулы II в качестве лекарственных средств для лечения заболеваний и расстройств центральной нервной системы, таких как, например, расстройства настроения, включая тяжелую депрессию, биполярные расстройства I и II типа и расстройства сна, включая нарушения сна, связанные с нарушением циркадного ритма, такие как, например, расстройство сна при посменной работе, синдром десинхроноза при перелетах, синдром преждевременной фазы сна и синдром задержки фазы сна.
В соответствии с вышеизложенным общий пример осуществления настоящего изобретения относится к получению соединений формулы I или формулы II:
где
n
Х представляет S или S(O);
1
1
6
R представляет H или С-Салкил;
2
5
6
R представляет NRR;
3
R представляет арил или гетероцикл;
4
1
6
R представляет C-Cалкил или галоген;
5
1
6
R представляет H или C-Cалкил;
6
1
6
R представляет H или C-Cалкил;
7
2
8
9
R представляет CHNRR, где
8
1
10
3
8
1
6
2
6
2
6
1
6
2
6
1
6
2
6
1
6
1
6
1
6
R представляет H, C-Cалкил, С-Сциклоалкил, арил, арил(C-Cалкил), арил(С-Салкенил), диарил(С-Салкенил), гетероцикл, гетероцикл(C-Cалкил), гетероцикл(С-Салкенил), гидрокси(С-Салкил), дигидрокси(С-Салкил), ацил, С-Салкоксикарбонил, арил(С-Салкокси)карбонил, карбамоил(С-Салкил) или P;
9
1
10
1
6
2
6
8
9
R представляет H, C-Cалкил, гетероцикл(С-Салкил), или гетероцикл(С-Салкенил); или R и R вместе с азотом, с которым они связаны, образуют гетероцикл;
Р представляет Gly или L- или D-Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Cys, Thr, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asp, Gly, Asn или Gln;
m равно 0, 1 или 2;
n равно 1 или 2; или
стереоизомер, энантиомер, рацемат или таутомер указанного соединения; или его фармацевтически приемлемая соль.
Дополнительным осуществлением настоящего изобретения является способ ингибирования активности казеинкиназы Iε у пациентов, включающий введение указанным пациентам терапевтически эффективного количества ингибитора казеинкиназы Iε.
Другим примером осуществления настоящего изобретения является способ ингибирования активности казеинкиназы Iε у пациентов, включающий введение указанным пациентам терапевтически эффективного количества соединения формулы I или формулы II.
Другим примером осуществления настоящего изобретения является способ лечения пациентов, страдающих от болезней или расстройств, состояние которых можно облегчить ингибированием казеинкиназы Iε; способ, включающий введение вышеупомянутым пациентам терапевтически эффективного количества соединения формулы I или формулы II.
ДЕТАЛЬНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Используемое выражение «стереоизомер» является общим термином, применяемым для всех изомеров индивидуальных молекул, которые отличаются только пространственной ориентацией своих атомов. Термин «стереоизомер» включает зеркальные изомеры (энантиомеры), смеси зеркальных изомеров (рацематы, рацемические смеси), геометрические (цис/транс или E/Z) изомеры и изомеры соединений с несколькими хиральными центрами, не являющиеся зеркальными отображениями друг друга (диастереоизомеры). Соединения настоящего изобретения могут иметь асимметрические центры и существовать в виде рацематов, рацемических смесей, индивидуальных диастереоизомеров или энантиомеров или же могут существовать в форме геометрических изомеров, причем все изомерные формы упомянутых соединений включены в настоящее изобретение.
Stereochemistry of Organic Compounds
Используемые обозначения «R» и «S» применяются как повсеместно используемые в органической химии для указания специфической конфигурации хирального центра. Обозначение «R» (rectus, правый) относится к конфигурации хирального центра с расположением старших по рангу групп по часовой стрелке (от группы с наибольшим рангом к группе со вторым наименьшим), если смотреть вдоль связи в направлении группы, наименьшей по старшинству. Обозначение «S» (sinister, левый) относится к конфигурации хирального центра с расположением старших по рангу групп против часовой стрелки (от группы с наибольшим рангом к группе со вторым наименьшим), если смотреть вдоль связи в направлении группы, наименьшей по старшинству. Старшинство групп определяется правилами последовательности, причем приоритет в первую очередь основан на атомном номере (в порядке убывания атомных номеров). Перечень и обсуждение старшинства групп приводится в книге “,” Ernest L. Eliel, Samuel H. Wilen and Lewis N. Mander, editors, Wiley-Interscience, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994.
Кроме системы (R)-(S), в настоящем документе может также применяться более старая система D-L для обозначения абсолютной конфигурации, особенно в отношении аминокислот. В данной системе формула проекции Фишера ориентируется таким образом, чтобы первый атом углерода основной цепи находился в верхней части. Префикс «D» используется для описания абсолютной конфигурации изомера, в которой функциональная (определяющая) группа находится справа от углерода хирального центра, а «L» - для изомера, в котором она расположена слева.
Используемые термины «таутомер» или «таутомерия» описывают одновременное существование двух (или более) соединений, которые отличаются друг от друга только положением одного (или нескольких) подвижных атомов, а также распределением электронов, например кето-енольные таутомеры или таутомерия.
1
6
1
6
Используемый в настоящем документе термин «алкил» относится к алифатической углеводородной группе с насыщенной линейной или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, по которым указанный алкил произвольно замещается одним или несколькими атомами галогена. К данному определению термина «алкил» относятся: метил, этил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил, трет-бутил, трифторметил, пентафторэтил, хлорметил, хлордифторметил, бромметил и подобные группы. Также к данному значению термина «алкил» относятся, при использовании отдельно или в комбинации с другими группами, такими как, например, арил(С-Салкил) или гетероцикл(С-Салкил), термины «алкилен» или «алкиленил», как они определены ниже.
Используемые термины «алкилен» или «алкиленил» относятся к линейной или разветвленной двухвалентной насыщенной алифатической цепи, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, и включает метиленил, этиленил, пропиленил, изопропиленил, бутиленил, изобутиленил, трет-бутиленил, пентиленил, изопентиленил, гексиленил и другие подобные группы.
Используемый термин «алкенил» относится к линейной или разветвленной моновалентной ненасыщенной алифатической цепи, содержащей от 2 до 6 атомов углерода, и включает этенил (также известный как винил), 1-метилэтенил, 1-метил-1-пропенил, 1-бутенил, 1-гексенил, 2-метил-2-пропенил, 2,4-гексадиенил, 1-пропенил, 2-пропенил, 2-бутенил, 2-пентенил и подобные группы.
Используемый термин «алкинил» относится к линейной или разветвленной моновалентной ненасыщенной алифатической цепи, имеющей от 2 до 6 атомов углерода с, по крайней мере, одной тройной связью и включает этинил, 1-пропинил, 1-бутинил, 1-гексинил, 2-пропинил, 2-бутинил, 2-пентинил и подобные группы.
Используемый термин «алкокси» или «алкилокси» относится к моновалентной замещающей группе, состоящей из линейной или разветвленной алкильной цепи, включающей в себя от 1 до 6 атомов углерода, присоединенной через атом кислорода эфирной группы и имеющей свободную валентность при атоме кислорода эфирной группы, и включает метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси, втор-бутокси, трет-бутокси и подобные группы.
втор
трет
Используемый термин «алкилтио» относится к моновалентной замещающей группе, состоящей из линейной или разветвленной алкильной цепи, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, присоединенной через атом серы и имеющей свободную валентность при этом атоме серы, и включает метилтио, этилтио, пропилтио, изопропилтио, бутилтио, -бутилтио, -бутилтио и подобные группы.
Используемый термин «алкенилокси» относится к линейной или разветвленной моновалентной ненасыщенной алифатической цепи, содержащей от 2 до 6 атомов углерода, присоединенной через атом кислорода эфирной группы и имеющей свободную валентность при этом атоме кислорода, и включает этенилокси (также известную как винилокси), 1-метилэтенилокси, 1-метил-1-пропенилокси, 1-бутенилокси, 1-гексенилокси, 2-метил-2-пропенилокси, 2,4-гексадиенилокси, 1-пропенилокси, 2-пропенилокси, 2-бутенилокси, 2-пентенилокси и подобные группы.
Используемый термин «алкинилокси» относится к линейной или разветвленной моновалентной ненасыщенной алифатической цепи, содержащей от 2 до 6 атомов углерода с, по крайней мере, одной тройной связью, присоединенной через атом кислорода эфирной группы и имеющей свободную валентность при атоме кислорода эфирной группы, и включает этинилокси, 1-пропинилокси, 1-бутинилокси, 1-гексинилокси, 2-пропинилокси, 2-бутинилокси, 2-пентинилокси и подобные группы.
3
8
Используемый термин «С-Сциклоалкил» относится к насыщенной моноциклической или бициклической углеводородной кольцевой структуре, содержащей от 3 до 8 атомов углерода, и включает циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, норборнил и подобные групы.
Используемый термин «гидроксиалкил» относится к линейной или разветвленной моновалентной насыщенной алифатической цепи, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, где один из вышеупомянутых атомов углерода замещен гидроксильной группой. К гидроксиалкилам в этом значении относятся гидроксиметил, 1-гидроксиэтил, 2-гидроксиэтил, 1-гидроксипропил, 2-гидроксипропил и подобные группы.
Используемый термин «дигидроксиалкил» относится к линейной или разветвленной моновалентной насыщенной алифатической цепи, содержащей от 2 до 6 атомов углерода, где два из вышеупомянутых атомов углерода замещены (каждый) гидроксильной группой. К дигидроксиалкилам в этом значении относятся 1,2-дигидроксиэтил, 1,2-дигидроксипропил, 1,3-дигидроксипропил и подобные группы.
2
Используемый термин «карбамоилалкил» относится к линейной или разветвленной моновалентной насыщенной алифатической цепи, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, где один из упомянутых атомов углерода замещен аминокарбонильной группой (HNC(=O)). К карбамоилалкилам в этом значении относятся 1-карбамоилэтил, 2-карбамоилэтил и подобные группы.
1
6
1
6
2
6
2
6
2
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
Используемый термин «арил» или “Ar” представляет любую стабильную моноциклическую, бициклическую или трициклическую углеродную кольцевую систему, имеющую до семи членов в каждом кольце, где, по крайней мере, одно кольцо ароматическое и незамещенное или замещено одной-тремя замещающими группами, каждая из которых, независимо от других, выбрана из метилендиокси, гидрокси, С-С-алкокси, галоген, С-Салкил, С-Салкенил, С-С-алкинил, трифторметил, трифторметокси, NO, NH, NH(C-Cалкил), N(С-Салкил), NH-ацил, N(С-Салкил)-ацил, гидрокси(С-Салкил), дигидрокси(С-Салкил), CN, C(=O)O(С-Салкил), фенил, фенил(С-Салкил), фенил(С-Салкенил), фенокси и фенил(С-Салкокси). Под значение «арил» или “Ar” подпадают фенил, 2-хлорфенил, 3-хлорфенил, 4-хлорфенил, 2-фторфенил, 3-фторфенил, 4-фторфенил, 2-бромфенил, 3-бромфенил, 4-бромфенил, 2-трифторметилфенил, 3-трифторметилфенил, 4-трифторметилфенил, 2-метоксифенил, 3-метоксифенил, 4-метоксифенил, 2-аминофенил, 3-аминофенил, 4-аминофенил, 2-метиламинофенил, 3-метиламинофенил, 4-метиламинофенил, 2-диметиламинофенил, 3-диметиламинофенил, 4-диметиламинофенил, 2-метилфенил, 3-метилфенил, 4-метилфенил, 2-нитрофенил, 3-нитрофенил, 4-нитрофенил, 2,4-дихлорфенил, 2,3-дихлорфенил, 3,5-диметилфенил, 2-трифторметоксифенил, 3-трифторметоксифенил, 4-трифторметоксифенил, нафтил, тетрагидронафтил, 2-бифенил, 3-бифенил, 4-бифенил, 2-феноксифенил, 3-феноксифенил, 4-феноксифенил, 2-бензилоксифенил, 3-бензилоксифенил, 4-бензилоксифенил, 4-метоксикарбонилфенил, 2-циано-4,5-диметоксифенил, 2-фтор-3-трифторфенил, 3-фтор-5-трифторфенил, 2-фтор-6-трифторметилфенил, 2,4-диметоксифенил, 4-гидрокси-3-метоксифенил, 3,5-дихлор-2-гидроксифенил, 3-бром-4,5-диметоксифенил, 4-бензилокси-3-метилфенил, 3-бензилокси-4-метилфенил, 4-стирилфенил, 9-антрил, 10-хлор-9-антрил и подобные группы.
1
6
1
6
Используемый термин «арил(С-Салкил)» относится к арильной группе, как она определена выше, присоединенной к линейной или разветвленной алкиленовой цепи, которая содержит от 1 до 6 атомов углерода и имеющей свободную валентность при одном из атомов углерода алкиленовой цепи. К арил(С-Салкилам) в данном значении относятся фенилметил (бензил), фенилэтил, 4-фторбензил, 4-хлорбензил, 4-бромбензил, 2-нитробензил, 3-нитробензил, 4-нитробензил, 4-диметиламинобензил, 2-метилбензил, 3-метилбензил, 4-метилбензил, 2-метоксибензил, 3-метоксибензил, 4-метоксибензил, 2-бензилоксибензил, 3-бензилоксибензил, 4-бензилоксибензил, 2-трифторметилбензил, 3-трифторметилбензил, 4-трифторбензил, 3-фтор-5-трифторметилбензил, 2-фтор-3-трифторметилбензил, 2,4-диметоксибензил, 3,5-дихлор-2-гидроксибензил, 3-бром-4,5-диметоксибензил, 4-бензилокси-3-метилбензил, 3-бензилокси-4-метил, 4-фенилбензил и подобные группы.
2
6
2
6
Используемый термин «арил(С-Салкенил)» относится к арильной группе, как она определена выше, присоединенной через линейную или разветвленную моновалентную ненасыщенную алифатическую цепь, которая содержит от 2 до 6 атомов углерода и имеющей свободную валентность при одном из углеродов алкиленовой цепи. К арил(С-Салкенилам) в данном значении относятся 3-фенилпропен-1-ил, 2-фенилэтенил, 3-(4-гидрокси-3-метоксифенил)-2-пропен-1-ил, 4-фенил-3-бутенил, 3-фенил-3-бутенил и подобные группы.
2
6
2
6
Используемый термин «диарил(С-Салкенил)» относится к линейной или разветвленной моновалентной ненасыщенной алифатической цепи, содержащей от 2 до 6 атомов углерода, где данная цепь замещена двумя арильными группами, а арил понимается согласно вышеприведенному определению, и вышеупомянутые арильные группы могут быть одновременно связаны с одним из вышеупомянутых атомов углерода алифатической цепи, или эти арильные группы могут быть независимо связаны с любыми двумя из вышеупомянутых двух-шести атомов углерода алифатической цепи, причем свободная валентность будет при одном из атомов углерода алкиленовой цепи. К диарил(С-Салкенилам) в данном значении относятся 3,3-дифенил-2-пропен-1-ил и подобные группы.
1
6
1
6
Используемый термин «арил(С-Салкокси)» относится к арильной группе, как она определена выше, связанной с линейной или разветвленной алкокси-группой, содержащей от одного до шести атомов углерода, как определено выше, и имеющей свободную валентность при атоме кислорода эфирной группы. К арил(С-Салкокси) в данном значении относятся фенилметокси (бензилокси), фенилэтокси и подобные группы.
1
6
1
6
1
6
Используемый термин «арил(С-Салкиламино)» относится к арильной группе, как она определена выше, связанной посредством линейной или разветвленной алкиленовой цепи, содержащей от одного до шести атомов углерода, с атомом азота и имеющей свободную валентность при этом атоме азота, где вышеупомянутый атом азота может иметь заместитель в виде атома водорода или С-Салкила. Среди относящихся к определению «арил(С-Салкиламино)» - фенилметиламино (бензиламино), фенилэтиламино, N-метил-N-бензиламино и подобные группы.
1
6
1
6
Используемый термин «арил(С-Салкилтио)» относится к арильной группе, как она определена выше, связанной посредством линейной или разветвленной алкиленовой цепи, содержащей от одного до шести атомов углерода, с атомом серы и имеющей свободную валентность при этом атоме серы. Среди подподающих под определение «арил(С-Салкилтио)» - фенилметилтио (бензилтио), фенилэтилтио и подобные группы.
1
6
1
6
1
6
Используемый термин «ацил» относится к Н-(С=О)-, С-Салкил-(С=О)-, арил-(С=О)-, арил(С-Салкил)-(С=О)-, гетероцикл(С=О)-, или гетероцикл(С-Салкил)-(С=О)-группам, где алкил, арил и гетероцикл определены выше, а свободная валентность находится при карбонильной (С=О) группе. К ацилам в данном значении относятся ацетил, пропионил, бутирил, изобутирил, трифторацетил, трихлорацетил, бензоил и подобные группы.
втор
Используемый термин «алкоксикарбонил» относится к моновалентной замещающей группе, включающей в себя линейную или разветвленную алкильную цепь, содержащую от одного до шести атомов углерода, которая присоединяется через атом кислорода эфирной группы к карбонильной группе, свободная валентность находится при карбонильной группе. К алкоксикарбонилам в данном значении относятся метоксикарбонил, этоксикарбонил, пропилоксикарбонил, изопропилоксикарбонил, бутоксикарбонил, -бутоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил (t-Boc или Boc) и подобные им группы.
1
6
1
6
1
6
Используемый термин «арил(С-Салкокси)-карбонил» относится к моновалентной замещающей группе, включающей в себя арил(С-Салкокси)-группу, как она определена выше, связанную через атом кислорода эфирной группы с карбонильной группой и имеющую свободную валентность при карбонильной группе. К арил(С-Салкокси)-карбонилам в данном значении относятся фенилметоксикарбонил (также известный как бензилоксикарбонил или карбобензилокси, CBZ), фенилэтоксикарбонил, фенилпропоксикарбонил и подобные группы.
1
6
1
6
2
6
2
6
2
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
2
6
1
6
2
6
1
6
трет
Используемый термин «гетероцикл» или «гетероциклический» означает стабильную, состоящую из 5-7 членов моноциклическую или стабильную, состоящую из 8-11 членов бициклическую гетероциклическую кольцевую систему, насыщенную или ненасыщенную, состоящую из атомов углерода, а также включающую от одного до трех гетероатомов из группы N, O и S и где гетероатомы азота или серы могут быть опционально окислены, а гетероатом азота может быть опционально кватернизован; термин описывает любую бициклическую группу, в которой любое из определенных выше гетероциклических колец соединено с бензольным кольцом. Гетероциклическое кольцо может быть присоединено по любому гетероатому или атому углерода, что в результате дает стабильную структуру. Гетероциклическое кольцо может быть незамещенным или иметь от одной до трех замещающих групп, независимо выбранных из списка, включающего С-Салкокси, гидрокси, галоген, С-Салкил, С-С-алкенил, С-Салкинил, трифторметил, трифторметокси, NO, NH, NH(C-Cалкил), N(С-С-алкил), NH-ацил, N(С-Салкил)ацил, C(=O)O(С-Салкил), С(=О)NH, С(=О)NH(C-Салкил), С(=О)N(C-С-алкил), гидрокси(С-Салкил), дигидрокси(С-Салкил), арил, арил(С-Салкил), арил(С-Салкенил), арил(С-Салкокси), арилсульфонил и пиримидин-2-ил. Под определение гетероцикла или гетероциклического подпадают пиперидинил, 4-гидроксиметил-пиперидинил, 3-карбомоилпиперидинил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4,5]деканил, пиперазинил, 2-оксопиперазинил, 4-фторфенилпиперазинил, 1,4-диазепинил или гомопиперазинил, 4--бутоксикарбонил-1,4-диазепинил, 4-пиримидин-2-илпиперазинил, 4-(3-фенилпропенил)-пиперазинил, 2-оксопиперидинил, 2-оксопирролидинил, 2-оксоазепинил, азепинил, пирролил, пирролидинил, 2-гидроксиметил-пирролидинил, пиразолил, пиразолидинил, имидазолил, имидазолинил, имидазолидинил, пиридил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, оксазолил, оксазолидинил, изоксазолил, изоксазолидинил, морфолинил, тиазолил, тиазолидинил, изотиазолил, хинуклидинил, изотиазолидинил, индолил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, тиадиазолил, бензопиранил, бензотиазолил, бензоксазолил, фурил, 2-нитрофурил, тетрагидрофурил, 2-(2-хлорфенил)-фурил, бензофуранил, тетрагидропиранил, тиенил, 2-нитротиенил, бензотиенил, тиаморфолинил, оксадиазолил, 1-фенилсульфонилпирролил и подобные группы.
1
6
1
6
1
6
1
6
Используемые термины «гетероцикл(С-Салкил)» или «гетероциклический «С-Салкил» относятся к гетероциклу или гетероциклическому кольцу, как они определены выше, соединенным при помощи линейной или разветвленной алкиленовой цепи, содержащей от одного до шести атомов углерода, с атомом углерода или гетероатомом, входящим в группу О, N и S. К данному значению терминов «гетероцикл-(С-Салкил)» и «гетероциклический «С-Салкил» относятся 2-фуранметил, 2-тенил(2-тиофенметил), 5-нитро-2-тенил, 5-(2-хлорфенил)-2-фуранметил, 1-(фенилсульфонил)-1Н-пиррол-2-метил и подобные группы.
2
6
2
6
Используемые термины «гетероцикл(С-Салкенил)» или «гетероциклический «С-Салкенил» относятся к гетероциклу или гетероциклическому кольцу, как они определены выше, присоединенным посредством линейной или разветвленной моновалентной ненасыщенной алифатической цепи, в которой содержится от 2 до 6 атомов углерода; под значение данного термина подпадают 3-(2-фуранил)-2-пропен-1-ил, 3-(3-фуранил)-2-пропен-1-ил, 3-(2-тиенил)-2-пропен-1-ил, 3-(3-тиенил)-2-пропен-1-ил, 3-(4-пиридинил)-2-пропен-1-ил, 3-(3-пиридинил)-2-пропен-1-ил и подобные группы.
1
6
1
6
1
6
1
6
Используемые в настоящем документе термины «гетероцикл(С-Салкокси)» или «гетероциклический «С-Салкокси» относятся к гетероциклу или гетероциклическому кольцу, как они определены выше, присоединенным посредством линейной или разветвленной алкиленовой цепочки, в которой содержится от одного до шести атомов углерода, через атом кислорода эфирной группы и имеющим свободную валентность при атоме кислорода эфирной группы. К гетероцикл-(С-С-алкокси) или гетероциклическим «С-С-алкокси» в данном значении относятся 2-тиенилметокси, 3-тиенилметокси, 2-фуранметокси, 3-фуранметокси, 4-пиридинилметокси, 3-пиридинилметокси, 2-пиридинилметокси и подобные группы.
1
6
Используемые термины «гетероцикл(С-Салкиламино)» или «гетероциклический
1
6
1
6
1
6
1
6
«С-Салкиламино» относятся к гетероциклу или гетероциклическому кольцу, как они определены выше, соединенным с линейной или разветвленной алкиленовой цепочкой, которая содержит от одного до шести атомов углерода, присоединяется к атому азота; свободная валентность находится при данном атоме азота, этот атом азота произвольно замещается водородом или С-Салкилом. К гетероцикл(С-Салкиламино) или гетероциклическим «С-Салкиламино» относятся 2-тиенилметиламино, 3-тиенилметиламино, 2-фуранметиламино, 3-фуранметиламино, 4-пиридинилметиламино, 3-пиридинилметиламино, 2-пиридинилметиламино и подобные группы.
1
6
1
6
1
6
1
6
Используемые в настоящем документе термины «гетероцикл(С-Салкилтио)» или «гетероциклический «С-Салкилтио» относятся к гетероциклу или гетероциклическому кольцу, как они определены выше, соединенным посредством линейной или разветвленной алкиленовой цепочки, содержащей от одного до шести атомов углерода, с атомом серы, и имеющим свободную валентность при данном атоме серы. К гетероцикл(С-Салкилтио) или гетероциклическим «С-Салкилтио» в данном значении относятся 2-тиенилметилтио, 3-тиенилметилтио, 2-фуранметилтио, 3-фуранметилтио, 4-пиридинилметилтио, 3-пиридинилметилтио, 2-пиридинилметилтио и подобные группы.
Используемые термины «галоген», “hal” или «гало» относятся к группе, куда входят фтор, хлор, бром и йод.
«Р» в настоящем документе относится к альфа-аминокислотам как в L-, так и в D-конфигурации или смесям L- и D-конфигураций, включая рацемическую смесь, имеющим свободную валентность при карбонильном атоме углерода С-1 аминокислоты. Альфа-аминокислоты (и их общепринятые сокращения), подпадающие под определение Р, представляют глицин (Gly), аланин (Ala), валин (Val), лейцин (Leu), изолейцин (Ile), серин (Ser), цистеин (Cys), треонин (Thr), метионин (Met), пролин (Pro), фенилаланин (Phe), тирозин (Tyr), триптофан (Trp), гистидин (His), лизин (Lys), аргинин (Arg), аспарагиновая кислота (Asp), глутаминовая кислота (Glu), аспарагин (Asn) и глутамин (Gln).
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Когда любая переменная величина (например, арил, гетероцикл, R, R, R, R, R, R, R, R, R, X) встречается чаще, чем один раз в любом компоненте или соединении формулы I или формулы II настоящего изобретения, ее определение при каждом появлении является независимым от ее определения в любом из других случаев, если не указано обратное. Кроме того, комбинации замещающих групп и/или переменных допустимы, только если такие комбинации приводят к стабильным соединениям.
Термины «лечить», «лечение» относятся к:
(i) профилактике заболевания, расстройства или состояния у пациента, который может быть предрасположен к заболеванию, расстройству и/или состоянию, однако его наличие еще не было диагностировано;
подавлению заболевания, расстройства или состояния, то есть замедлению его развития; или
(iii) устранению заболевания, расстройства или состояния, то есть регрессии заболевания, расстройства и/или состояния.
Термин «пациент» относится к теплокровному животному, например млекопитающему, которое страдает конкретным заболеванием, расстройством или состоянием. Изначально предполагается, что морские свинки, собаки, кошки, крысы, мыши, лошади, крупный рогатый скот, овцы и люди являются примерами животных, объединенных данным термином.
Термин «заболевание» относится к болезни, недомоганию или прекращению, прерыванию или нарушению функций организма, систем или органов.
Термин «расстройство» представляет нарушение функции, структуры или и того, и другого, возникающее в результате генетического или эмбриологического нарушения развития или в связи с экзогенными факторами, например ядом, травмой или заболеванием.
Термин «состояние» представляет общее состояние, здоровье или физическую форму.
Термин «профилактика» означает предупреждение заболевания.
Термин «нарушение сна», «нарушения сна» или «расстройство сна» означает бессонницу.
Термин «бессонница» означает невозможность сна в отсутствие внешних препятствий, например шума, яркого света и т.п., в тот период суток, когда обычно наступает сон, и степень подобной невозможности может меняться от возбужденного состояния или тревожной дремоты до ограничения нормальной продолжительности сна или абсолютного бодрствования. Термин «бессонница» включает первичную бессонницу, бессонницу, связанную с психическим расстройством, бессонницу, вызванную приемом препаратов, и бессонницу циркадного ритма, связанную с изменением нормального режима сон-пробуждение (изменение рабочей смены, расстройство сна при посменной работе, десинхроноз при перелетах или синдром десинхроноза при перелетах и т.п.).
Термин «первичная бессонница» означает затруднения при засыпании, при поддержании сна или при восстановительном сне, которые не вызваны психическим расстройством или не связаны с физиологическими последствиями приема определенных препаратов или отказа от них (бессонница, вызванная приемом препаратов).
Термин «расстройство сна, связанное с циркадным ритмом» включает десинхроноз при перелетах или синдром десинхроноза при перелетах, нарушение сна при посменной работе, синдром преждевременной фазы сна и синдром задержки фазы сна.
Термин «эффективное ингибирующее количество соединения» или «эффективное количество соединения, ингибирующее казеинкиназу Iε» означает достаточное количество соединения, которое становится биодоступным посредством соответствующего способа введения для лечения пациента, страдающего заболеванием, расстройством или состоянием, поддающимся такому лечению.
Термин «терапевтически эффективное количество» означает количество соединения, которое эффективно для лечения данного заболевания, расстройства или состояния.
Термин «фармацевтически приемлемая соль» следует применять к любой соли, известной ранее или обнаруженной в будущем, которая используется специалистами, является нетоксичной органической или неорганической аддитивной солью и которую допустимо использовать в качестве лекарственного средства. Примерами приемлемых солей могут служить гидроксиды щелочных металлов или щелочноземельных металлов, такие как гидроксиды натрия, калия, кальция или магния; аммиак и алифатические, циклические или ароматические амины, такие как метиламин, диметиламин, триэтиламин, диэтиламин, изопропилдиэтиламин, пиридин и пиколин. В качестве примеров кислот, которые образуют приемлемые соли, можно привести неорганические кислоты, такие как, например, соляная, бромоводородная, серная, фосфорная и подобные кислоты, органические карбоновые кислоты, такие как, например, уксусная, пропионовая, гликолевая, молочная, пировиноградная, малоновая, янтарная, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, малеиновая, гидроксималеиновая и дигидроксималеиновая, бензойная, фенилуксусная, 4-аминобензойная, 4-гидроксибензойная, антраниловая, коричная, салициловая, 4-аминосалициловая, 2-феноксибензойная, 2-ацетоксибензойная, манделовая и подобные кислоты, а также органические сульфоновые кислоты, такие как метансульфоновая, бензолсульфоновая и пара-толуолсульфоновая кислоты.
Выражение «удлинение периода циркадного ритма» относится к увеличению интервала между основополагающими событиями в процессе, который происходит регулярно с периодичностью примерно в 24 часа.
Выражение «сокращение периода циркадного ритма» относится к уменьшению интервала между основополагающими событиями в процессе, который происходит регулярно с периодичностью примерно в 24 часа.
Термин «фармацевтический носитель» или «фармацевтически приемлемый носитель» относится к известным фармацевтическим наполнителям, применяемым для создания терапевтически активных соединений с целью их назначения пациентам и которые являются в достаточной степени нетоксичными и не вызывающими аллергических реакций в условиях использования. Точная пропорция таких наполнителей определяется растворимостью и химическими свойствами активного вещества, избранным способом применения, а также стандартной фармацевтической практикой. При использовании способов настоящего изобретения активный ингредиент предпочтительно включается в состав, содержащий фармацевтический носитель, хотя эти соединения эффективны и могут назначаться сами по себе. С учетом вышесказанного пропорция активного ингредиента может варьировать от приблизительно 1% до приблизительно 90% по весу.
Другие сокращения, которые могут встретиться в данной заявке, следует понимать следующим образом:
3
2
2
T
пара
o
Me (метил), Et (этил), Ph (фенил), EtN (триэтиламин), p-TsOH (-толуолсульфоновая кислота), TsCl (пара-толуолсульфонилхлорид), hept (гептан), DMF (диметилформамид), NMP (1-метил-2-пирролидон или N-метил-2-пирролидон), IPA (изопропанол или изопропиловый спирт), DBU (1,8-диазабицикло[5.4.0]ундек-7-ен), DBN (1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен), кт или к.т. (комнатная температура или температура окружающей среды), мин или мин. (минут), ч (час или часов), UV (ультрафиолетовый), ЖХ-МС (масс-спектрометрия с жидкостной хроматографией), t-Boc или Boc (трет-бутоксикарбонил), Bn (бензил), t-Bu (трет-бутил), i-Pr (изопропил), TFA (трифторуксусная кислота), HOAc (уксусная кислота), EtOAc (этилацетат), EtO (диэтиловый эфир), EtOH (этанол), DIEA (диизопропилэтиламин), EDC (1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид); HOBT (1-гидроксибензотриазол), г (грамм), мг (миллиграмм), мкг (микрограмм), нг (нанограмм), мл (миллилитр), мкл (микролитр), л (литр), ВЖХ (жидкостная хроматография высокого разрешения), ТСХ, тсх или Тсх (тонкослойная хроматография), г/л (грамм/литр), SiO (силикагель), л/мин (литров в минуту), мл/мин (миллилитров в минуту), ммоль (миллимоль),М (молярный), мМ (миллимолярный), мкМ (микромолярный), нМ (наномолярный), мкКи (микроКюри), имп/мин (импульсов в минуту), об/мин (оборотов в минуту), мм (миллиметр), мкм (микрометр), µ (микрон), нм (нанометр), мд (миллионных долей), psi (фунтов на квадратный дюйм), экв. (эквивалент), R (время удерживания), C (градусов Цельсия) и K (градусов Кельвина).
Соответственно, осуществление настоящего изобретения относится к получению соединений формулы I и формулы II:
1
1
6
2
5
6
3
4
1
6
5
1
6
6
где X представляет S или S(O)n; R представляет H или C-Cалкил; R представляет NRR; R представляет арил или гетероцикл; R представляет C-Cалкил или галоген; R представляет H или C-Cалкил; R представляет H или
1
6
7
2
8
9
8
1
10
3
8
1
6
2
6
2
6
1
6
2
6
1
6
2
6
1
6
1
6
1
6
9
1
10
1
6
2
6
8
9
C-Cалкил; R представляет CHNRR, где R представляет H, C-Cалкил, C-Cциклоалкил, арил, арил(C-Cалкил), арил(C-Cалкенил), диарил(C-Cалкенил), гетероцикл, гетероцикл(C-Cалкил), гетероцикл(C-Cалкенил), гидрокси(C-Cалкил), дигидрокси(C-Cалкил), ацил, C-Cалкоксикарбонил, арил(C-Cалкокси)карбонил, карбамоил(C-Cалкил), или P; R представляет H, C-Cалкил, гетероцикл(C-Cалкил) или гетероцикл(C-Cалкенил); или R и R вместе с азотом, к которому они присоединены, представляют гетероцикл; P представляет Gly, или L- или D-Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Cys, Thr, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asp, Gly, Asn или Gln; m равно 0, 1 или 2; n равно 1 или 2; или стереоизомер, энантиомер, рацемат или таутомер указанного соединения; либо их фармацевтически приемлемая соль.
Одно из осуществлений настоящего изобретения относится к соединениям формулы I или формулы II, где Х представляет S.
2
2
Другое осуществление настоящего изобретения относится к соединениям формулы I или формулы II, где Х представляет S, a R представляет NH.
2
2
7
2
8
9
Другое осуществление настоящего изобретения относится к соединениям формулы I или формулы II, где Х представляет S, R представляет NH, m равно 0, R представляет CHNRR.
2
2
7
2
8
9,
1
1
6
Другое осуществление настоящего изобретения относится к соединениям формулы I или формулы II, где Х представляет S, R представляет NH, m равно 0, R представляет CHNRR R представляет C-Cалкил. Соединение амид 1-метил-5-метиламинометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты является типичным примером соединения формулы I в рамках данного способа осуществления.
2
2
7
2
8
9
1
Другое осуществление настоящего изобретения относится к соединениям формулы I или формулы II, где Х представляет S, R представляет NH, m равно 0, R представляет CHNRR, R представляет Н.
1
2
2
Другое осуществление настоящего изобретения относится к соединениям формулы I, где Х представляет S, R представляет H, R представляет NH, m равно 0,
7
2
8
9
8
1
10
3
8
1
6
2
6
1
6
9
R представляет CHNRR, R представляет H, C-Cалкил, C-Cциклоалкил, гидрокси(C-Cалкил), дигидрокси(C-Cалкил) или C-Cалкоксикарбонил и R представляет H. Следующие соединения представляют собой:
амид 5-аминометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
трет
-бутиловый эфир (2-карбамоил-3-фенилсульфанил-1H-индол-5-илметил)-карбаминовой кислоты,
амид 5-метиламинометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 3-(3-хлорфенилсульфанил)-5-метиламинометил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 3-(3-фторфенилсульфанил)-5-метиламинометил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 3-фенилсульфанил-5-пропиламинометил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-бутиламинометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-пентиламинометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-гептиламинометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-(бицикло[2.2.1]гепт-2-иламинометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-[(2-гидрокси-1-гидроксиметил-1-метилэтиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-[(2-гидрокси-1-метилэтиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-[(2,3-дигидроксипропиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-этиламинометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 3-фенилсульфанил-5-пропиламинометил-1H-индол-2-карбоновой кислоты и
амид 5-(изопропиламинометил)-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты.
1
2
2
Другое осуществление настоящего изобретения относится к соединениям формулы I, где X представляет S, R представляет H, R представляет NH, m равно 0,
7
2
8
9
8
1
6
1
6
9
R представляет CHNRR, R представляет арил, арил(C-Cалкил), гетероцикл- или карбамоил(C-Cалкил), R представляет H. Следующие соединения представляют собой:
амид 5-(бензиламинометил)-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 3-фенилсульфанил-5-(хинолин-6-иламинометил)-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-[(2-циано-4,5-диметоксифениламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 3-фенилсульфанил-5-[(3-трифторметилфениламино)метил]-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-[(1-карбамоилэтиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-[(3-метоксифениламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-[(4-бутилфениламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты и
амид 5-[(2-фторфениламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты.
1
2
2
Другое осуществление настоящего изобретения относится к соединениям формулы I, где X представляет S, R представляет H, R представляет NH, m равно 0,
7
2
8
9
8
9
R представляет CHNRR, а R и R вместе с азотом, с которым они связаны, образуют гетероцикл. Нижеследующие соединения представляют собой:
амид 5-(4-гидроксиметилпиперидин-1-илметил)-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-морфолин-4-илметил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 3-фенилсульфанил-5-пиперидин-1-илметил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-(3-карбамоилпиперидин-1-илметил)-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 3-фенилсульфанил-5-(4-пиримидин-2-илпиперазин-1-илметил)-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-[4-(3-фенилпропенил)пиперазин-1-илметил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
трет
-бутиловый эфир 4-(2-карбамоил-3-фенилсульфанил-1H-индол-5-илметил)-[1,4]диазепан-1-карбоновой кислоты,
амид 5-[1,4]диазепан-1-илметил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-(2-гидроксиметил-пирролидин-1-илметил)-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 5-(1,4-диокса-8-аза-спирол[4,5]дек-8-илметил)-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты и
амид 5-[4-(4-фторфенил)пиперазин-1-илметил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты.
1
2
2
7
2
8
9
8
1
10
1
6
1
6
1
6
9
1
6
Другое осуществление настоящего изобретения относится к соединениям формулы II, где X представляет это S, R представляет H, R представляет NH, m равно 0, R представляет CHNRR, R представляет H, C-Cалкил, арил(C-Cалкил), гетероцикл(C-Cалкил) или C-Cалкоксикарбонил и R представляет H или гетероцикл(C-Cалкил). Нижеследующие соединения представляют собой:
амид 6-аминометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
трет
-бутиловый эфир (2-карбамоил-3-фенилсульфанил-1H-индол-6-илметил)-карбаминовой кислоты,
амид 6-(бензиламинометил)-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(4-нитробензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(4-диметилэтиламинобензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(4-метилбензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(4-метоксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(4-бромбензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(4-хлорбензиламино)-метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-{[(бифенил-4-илметил)амино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(3-нитробензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(2-нитробензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 3-фенилсульфанил-6-[(4-трифторметилбензиламино)метил]-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(3-фтор-5-трифторметилбензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-{[(2-метоксинафталин-1-илметил)амино]метил]}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(2,4-диметоксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(3-феноксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(3-метоксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(2- метоксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(3-метилбензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(2-фтор-3-трифторметилбензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(2-метоксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-{[(10-хлорантрацен-9-илметил)амино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(3,5-дихлор-2-гидроксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(3-бром-4,5-диметоксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(4-бензилокси-3-метоксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(3-бензилокси-4-метоксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-{[(5-нитротиофен-2-илметил)амино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
метиловый эфир 4-{[(2-карбамоил-3-фенилсульфанил-1H-индол-6-илметил)амино]метил}бензойной кислоты,
амид 3-фенилсульфанил-6-[(4-стирилбензиламино)метил]-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(2-фтор-6-трифторметилбензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-({[5-(2-хлорфенил)-фуран-2-илметил]амино}метил)-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-{[(1-бензолсульфонил-1H-пиррол-2-илметил)амино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-{[бис-(5-нитрофуран-2-илметил)амино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты и
амид 6-{[(5-нитрофуран-2-илметил)амино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты.
1
2
2
7
2
8
9
8
9
Другое осуществление настоящего изобретения относится к соединениям формулы II, где X представляет S, R представляет H, R представляет NH, m равно 0, R представляет CHNRR, R представляет Р, и R представляет H. Нижеследующие соединения представляют собой:
амид 6-[(2-аминопропиониламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(2-аминоацетиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(2-амино-3-метилпентаноиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
2-аминопентандиойной кислоты 5-амид1-[(2-карбамоил-3-фенилсульфанил-1H-индол-6-илметил)-амид],
амид 6-{[(2-амино-3-(1H-индол-3-ил)пропиониламино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(2-амино-3-фенилпропиониламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-[(2-амино-4-метилсульфанилбутириламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
6-[(2,6-диаминогексаноиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты амид и
N
H
3-амино--(2-карбамоил-3-фенилсульфанил-1-индол-6-илметил)-сукцинамовой кислоты.
1
2
2
7
2
8
9
8
2
6
2
6
2
6
9
2
6
Другое осуществление настоящего изобретения относится к соединениям формулы II, где X представляет S, R представляет H, R представляет NH, m равно 0, R представляет CHNRR, R представляет арил(C-Cалкенил), диарил(C-Cалкенил) или гетероцикл(C-Cалкенил) и R представляет H или гетероцикл(C-Cалкенил). Нижеследующие соединения представляют собой:
амид 6-{[(бис-(3-фуран-2-илаллил)амино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты,
амид 6-{[(3,3-дифенилаллиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, и
амид 6-{[3-(4-гидрокси-3-метоксифенил)аллиламино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты.
Соединения настоящего изобретения могут быть получены при помощи процессов, аналогичных уже известным способам. Схемы реакций 1, 2, 3, 4 и 5 и текст соответствующих разделов описывают получение различных соединений настоящего изобретения. Описываемые методы и примеры даются с иллюстративной целью и не ограничивающими объем настоящего изобретения. Альтернативные реагенты, условия реакций и другие комбинации и изменения стадий, приведенных здесь для получения конкретных примеров, являются очевидными для специалиста. Таблицы 1 и 2 предлагают списки отдельных соединений, относящихся к настоящему изобретению, которые получают в соответствии с методиками синтеза, описанными здесь, а биологические свойства соединений настоящего изобретения приведены в таблице 3.
ХИМИЧЕСКИЙ СИНТЕЗ
Схема 1
Как показано на схеме 1, необязательно замещенные исходные вещества этил 5-цианоиндол-2-карбоксилат (3) и этил-6-цианоиндол-2-карбоксилат (5) получают методами, хорошо известными специалистам, из известных или коммерчески доступных необязательно замещенных 3-метил-4-нитробензонитрила (1a) или 4-метил-3- нитробензонитрила (1b) соответственно. Как показано на схеме 1, стадия a, диэфир оксолата, такой как, например, диэтилоксолат, добавляют к раствору подходящего основания, такого как, например, этоксид натрия, в абсолютном этаноле в интервале температур примерно от 0°C до комнатной, а затем добавляют исходный бензонитрил 1a или 1b при температуре порядка от 0°C до комнатной. После перемешивания смеси при температуре около комнатной в течение приблизительно 8-24 ч реакцию останавливают добавлением подходящей кислоты, такой как, например, соляная кислота, серная кислота или им подобные, растворитель удаляют при пониженном давлении и осадок делят между водой и подходящим органическим растворителем, таким как, например, метиленхлорид, хлороформ, этилацетат или подобные растворители. Органическую фазу сушат, концентрируют и очищают осадок хроматографическими методами, хорошо известными специалистам, получая оксопропионовый эфир 2 или 4 соответственно. Каждый из оксопропионовых эфиров 2 или 4 восстанавливают водородом в присутствии подходящего катализатора, например палладия на углероде, в подходящем растворителе, например этаноле, до тех пор, пока не абсорбируется расчетное количество водорода. Реакционную смесь фильтруют и фильтрат концентрируют с получением неочищенного индола, который очищают хроматографическими методами, хорошо известными специалистам, с получением необязательно замещенного этил-5-цианоиндол-2-карбоксилата (3а) или этил-6-цианоиндол-2-карбоксилата (5а) соответственно. Как показано на схеме 1, стадия с, исходные эфиры необязательно замещенного этил-5-цианоиндол-2-карбоксилата (3а) или этил-6-цианоиндол-2-карбоксилата (5а) могут быть переэтерифицированы до соответствующего метилового эфира 3b или 5b соответственно, при помощи методов, хорошо известных специалистам, таких как, например, перемешивание смеси метанола, карбоната калия и этилового эфира 3а или 5а в интервале температур от приблизительно комнатной до температуры перегонки растворителя, охлаждение, выделение и очистка продукта методами, хорошо известными специалистам, позволяют получить эфир 3b или 5b соответственно. В качестве альтернативы метиловые эфиры 3b или 5b легко получить заменой диэтилоксолата на диметилоксолат и этоксида натрия в абсолютном этаноле на метоксид натрия в метаноле в вышеописанном синтезе.
Схема 2
На схеме 2 показано получение необязательно замещенных промежуточных 3-арилтио- или 3-гетероциклтио-5-аминометилиндол-2-карбоксамидов 8b и 3-арилтио- или 3-гетероциклтио-6-аминометилиндол-2-карбоксамидов 11b. Как показано на схеме, и 2, 5-цианоэфиры 3a/3b, и 6-цианоэфиры 5a/5b превращают в первичные амиды 6 и 9 соответственно методами, известными специалистам. Так, обработка реакционной смеси, содержащей около 7М аммиака и эфир 3a или 3b или эфир 5a или 5b в подходящем полярном растворителе, таком как, например, метанол или этанол, с добавлением стружки гидроксида лития и нагреванием полученной смеси в камере повышенного давления при приблизительно 100°C в течение около 16 ч приводит после хроматографической очистки, хорошо известной специалистам, к первичному амиду 6 или 9 соответственно. В качестве альтернативы могут быть использованы другие условия реакции, хорошо известные специалистам, такие как обработка раствора соответствующего эфира в подходящем полярном растворителе, таком как, например, метанол или этанол, раствором аммиака в количестве от 5 до 7М в интервале от примерно 1 до примерно 3 суток при температуре окружающей среды, или подогревание этого раствора до приблизительно 55°C в течение 10 ч, позволяют получить первичный амид 6 или 9 соответственно после выделения методами, хорошо известными специалистам. В качестве альтернативы соответствующий эфир может быть суспендирован в смеси концентрированного раствора гидрохлорида аммония и хлорида лития при температуре окружающей среды в течение приблизительно от 3 до 5 дней, до тех пор пока анализ методом тонкослойной хроматографии или другим подходящим хроматографическим методом, хорошо известным специалистам, не покажет, что реакция практически завершена. Первичные амиды 6 и 9 выделяют из реакционной смеси методами, хорошо известными специалистам.
2
2
1
6
1
6
2
1
6
Другие методы приготовления амидов, являющихся объектом изобретения, легко доступны специалистам. Например, карбоновые кислоты, соответствующие соединениям 3 или 5 схемы 1, где R представляет Н, могут быть получены гидролизом соответствующих эфиров 3a и 3b или 5a и 5b методами, хорошо известными специалистам. Например, подходящее основание, такое как, например, гидроксид калия, гидроксид натрия, гидроксид лития и подобные основания, добавляется к смеси эфира 3a или 3b или 5a или 5b в подходящем растворителе, таком как, например, смесь тетрагидрофурана и воды. Смесь подогревают в интервале температур порядка 90°C-110°C в течение от приблизительно получаса до 2 ч. Продукт реакции получают в виде соли при помощи фильтрации и фильтрат концентрируют до осаждения дополнительного количества вещества. Осадок объединяют с осадком на фильтре и подкисляют методами, хорошо известными специалистам, например, такими как подкисление при помощи подходящей кислоты, такой как уксусная кислота, в подходящем растворителе, например метаноле, этаноле и подобных растворителях, для получения соответствующих карбоновых кислот формулы 3 или 5 соответственно, где R представляет Н. Эти карбоновые кислоты легко превращаются в амиды, являющиеся объектом изобретения, методами, хорошо известными специалистам, такими как раствор карбоновой кислоты 3 или 5 в подходящем растворителе, таком как диметилформамид, может быть обработан основанием, таким как диизопропилэтиламин, карбодиимидом, например 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид гидрохлоридом, 1-гидроксибензотриазолом и хлоридом аммония. Когда реакция завершена, что подтверждает тонкослойная хроматография или другие подходящие хроматографические методы, хорошо известные специалистам, смесь может быть разбавлена подходящим растворителем и продукт может быть выделен и хроматографически очищен методами, хорошо известными специалистам, в виде первичных амидов 6 или 9 соответственно, где R представляет NH. Если вместо хлорида аммония использовать первичные или вторичные C-Cалкиламины, можно также получить соответствующие вторичные или третичные C-Cалкиламиды, отвечающие формулам 6 или 9, где NH замещен на NH(C-Cалкил) или
1
6
2
N(C-Cалкил) соответственно.
Как показано на схеме 2, стадия е, нитрильная группа необязательно замещенного 5-цианоиндол-2-карбоксамида 6 и 6-цианоиндол-2-карбоксамида 9 в обоих случаях восстанавливается до соответствующего первичного амина, который одновременно защищается Boc-группой, что приводит к получению промежуточных первичных аминов 7 и 10 соответственно методами, хорошо известными специалистам. Например, раствор 5-цианоиндол-2-карбоксамида 6 или 6-цианоиндол-2-карбоксамида 9 в соответствующем полярном растворителе, таком как, например, метанол, обрабатывают хлоридом никеля и Boc-ангидридом. Затем смесь обрабатывают при температуре порядка 0°C-15°C подходящим восстанавливающим агентом, таким как, например, борогидрид натрия, а затем перемешивают при комнатной температуре в течение 8-24 ч. Реакционную смесь концентрируют, экстрагируют и продукт реакции выделяют методами, хорошо известными специалистам, получая соответствующие 5- или 6- Boc-защищенные аминометилиндол-2-карбоксамиды 7 или 10 соответственно.
3
Как показано на схеме 2, стадия f, каждый из промежуточных амидов 7 и 10 превращается в соответствующие 3-арилтио- или 3-гетероциклтиосоединения 8а или 11а соответственно методами, хорошо известными специалистам. Например, суспензию промежуточного амида 7 или 10 в подходящем растворителе, например диметилформамиде или NMP, обрабатывают подходящим основанием, таким как, например, гидрид натрия или гидрид лития, при температуре окружающей среды с последующей обработкой подходящим диарилдисульфидом или дигетероциклдисульфидом, после чего данную смесь перемешивают в интервале температур от комнатной до около 100°C в течение 12-20 часов. За ходом реакции наблюдают с помощью тонкослойной хроматографии или других хроматографических методов, хорошо известных специалистам. По окончании реакции реакционную смесь экстрагируют хорошо известными специалистам методами. Искомый промежуточный продукт - 5-Boc-защищенный аминометилиндол-2-карбоксамид 8а или 6-Boc-защищенный аминометилиндол-2-карбоксамид 11а - выделяют и хроматографически очищают методами, хорошо известными специалистам, получая вещества 8a и 11a, где R представляет это арил или гетероцикл. Как показано на схеме 2, стадия g, кислотный гидролиз защитной Boc-группы осуществляют одним из способов, хорошо известных специалистам, например обрабатывают соединение 8a или 11a избытком трифторуксусной кислоты при комнатной температуре в течение примерно 5-30 мин, концентрируют реакционную смесь и выделяют соответствующий первичный амин 8b или 11b соответственно в виде трифторуксусной соли.
3
В качестве альтернативы, как показано на схеме 2, стадия f, смесь диарилдисульфида или дигетероциклдисульфида и примерно один эквивалент карбоната цезия в подходящем растворителе, например диметилформамиде или NMP, обрабатывают необязательно замещенным промежуточным амидом 7 или 10, после чего подогревают реакционную смесь до температуры порядка 80-120°C в течение 1-6 часов. За ходом реакции наблюдают при помощи тонкослойной хроматографии или других хроматографических методов, хорошо известных специалистам. Искомый, необязательно замещенный промежуточный продукт 3-арилтио- или 3-арилгетероциклтио-5-Boc-защищенный аминометилиндол-2-карбоксамид 8а и 3- арилтио- или 3-арилгетероциклтио-6-Boc-защищенный аминометилиндол-2-карбоксамид 11а выделяют и хроматографически очищают методами, хорошо известными специалистам, получая соединения 8а и 11а, где R представляет арил или гетероцикл. Защитную Boc-группу соединений 8а и 11а удаляют кислотным гидролизом, как описано выше, получая соответствующий первичный амин 8b или 11b соответственно в виде трифторуксусной соли.
Схема 3
2
2
Как показано на схеме 3, каждое из необязательно замещенных промежуточных соединений 13, 14 и 15 получают из необязательно замещенного амида 5-цианоиндол-2-карбоновой кислоты 6. Как показано на схеме 3, стадия h, амид 5-цианоиндол-2-карбоновой кислоты 6 превращают в соответствующее 3-арилтио- или 3-арилгетероциклтиосоединение 12, как описано выше в схеме 2, стадия f, получая амид 3-гетероциклтио-5-цианоиндол-2-карбоновой кислоты 12 после выделения и очистки методами, хорошо известными специалистам. Как показано на схеме 3, стадия i, нитрильная группа промежуточного соединения 12 восстанавливается методами, хорошо известными специалистам, например, при обработке суспензии промежуточного продукта 12 и NaHPO в пиридине и воде водной суспензией никелевого катализатора Ренея и нагревании при температуре порядка 95°C в течение 4-5 часов. Реакционную смесь фильтруют, фильтрат концентрируют до минимального объема и обрабатывают ледяной водой с получением после выделения и высушивания при помощи методов, хорошо известных специалистам, промежуточного амида 5-формил-3-замещенной индол 2-карбоновой кислоты 13.
1
1
6
1
6
1
1
6
1
6
1
6
трет
Как показано на схеме 3, стадия j, атом азота индольного кольца необязательно замещенного 3-арилтио- или 3-арилгетероциклтио-5-формилиндол-2-карбоксамида 13 N-алкилируют для получения соединения 14, где R представляет C-Cалкил, при помощи методов, хорошо известных специалистам. Так, раствор промежуточного соединения 13 в подходящем полярном растворителе, например диметилформамиде или NMP, обрабатывают при температурах, близких к комнатной, соответствующим основанием, таким как, например, гидроксид калия, гидроксид натрия или -бутоксид калия, а затем раствором C-Cалкилгалогенида в подходящем полярном растворителе, таком как, например, диметилформамиде или NMP. Реакционную смесь перемешивают в течение порядка 24-72 ч при комнатной температуре и разбавляют подходящим растворителем, таким как этилацетат. Органическую фазу промывают соляным раствором, высушивают и концентрируют, получая, таким образом, N-алкилированное соединение 14, где R - это C-Cалкил. Специалист в данной области знает, что для N-алкилирования азота индола могут быть использованы также и другие условия, например обработка раствора соединения формулы 13 и подходящего растворителя, например 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2-(1Н)-пиримидинона с C-Cдиалкилсульфатом и подходящим основанием, например карбонатом цезия, при температуре окружающей среды в течение необходимого периода времени. В качестве альтернативы азот индольного кольца может быть алкилирован также и обработкой раствора соединения формулы 13 в пиридине C-Cалкилгалогенидом в присутствии подходящего основания, такого как, например, карбонат цезия, при нагревании в течение необходимого периода времени. Кроме того, специалистам известно, что N-алкилирование азота индольного конца может быть выполнено на других стадиях синтеза, приведенных на схемах 1-4.
Как также показано на схеме 3, необязательно замещенный промежуточный продукт 6 также восстанавливают с использованием никелевого катализатора Ренея в условиях, описанных для стадии i - восстановления промежуточного продукта 12 до 13, получая необязательно замещенный амид 5-формилиндол-2-карбоновой кислоты 15. Альдегид 15 превращают восстановительным амминированием в амиды, необязательно замещенные 5-алкиламинометилиндол-2-карбоновой кислоты, методами, хорошо известными специалистам, такими как, например, обработка раствора необязательно замещенного альдегида 15 в подходящем растворителе, таком как смесь уксусной кислоты и тетрагидрофурана, алкиламином, с последующим добавлением подходящего основания, такого как, например, карбонат калия или натрия, и подходящего восстановительного агента, такого как, например, цианоборогидрид натрия, при температурах, близких к комнатной. За ходом реакции наблюдают при помощи хроматографических методов, хорошо известных специалистам, таких как тонкослойная хроматография, и, когда реакция завершена, разбавляют реакционную смесь подходящим растворителем, промывают бикарбонатом натрия или бикарбонатом калия и высушенную органическую фазу концентрируют, получая необязательно замещенный амид 5-алкиламинометилиндол-2-карбоновой кислоты 16.
Схема 4
Схема 4 дает представление о методах превращения необязательно замещенных промежуточных продуктов 8b, 11b, 13, 14 и 16 в соединения формулы I и II, являющиеся объектом изобретения, при помощи методов, хорошо известных специалистам. Специалист легко поймет, что эти методы подходят в целом для приготовления соединений формулы I и II из соединений-предшественников, каждое из которых не приведено на схеме 4, и что эти методы даны с целью иллюстрации и не ограничивают сферу применения изобретения. Первичные амины 8b и 11b считаются соединениями формулы I и II настоящего изобретения соответственно.
Как показано на схеме 4, реакция VIII, смесь первичного амина 8b или 11b в виде соли, такой как, например, трифторуксусная соль, полученная в результате отщепления защитной Вос-группы от соединения-предшественника 8a или 11a соответственно, и подходящего основания, такого как карбонат калия или карбонат натрия, в полярном растворителе, таком как диметилформамид, обрабатывают алкилгалогенидом при температуре, близкой к комнатной. За ходом реакции наблюдают при помощи хроматографических методов, хорошо известных специалистам, таких как тонкослойная хроматография, и, когда реакция завершена, разбавляют реакционную смесь подходящим растворителем, таким как, например этилацетат, промывают органическую фазу солевым раствором, высушивают и концентрируют для получения алкиламинометилиндола формулы I или II соответственно.
3
Как показано на схеме 4, реакция IX, раствор необязательно замещенного первичного амина 8b или 11b в виде соли, такой как, например, трифторуксусная соль, полученная гидролизом защитной Вос-группы промежуточного продукта 8a или 11a соответственно, в подходящем растворителе, таком как, например, уксусная кислота и тетрагидрофуран, нейтрализуют карбонатом калия, смесь обрабатывают соответствующим альдегидом и перемешивают при комнатной температуре в течение примерно 10 мин. Затем смесь добавляют к подходящему восстанавливающему агенту, такому как, например, смола MP-CNBH, при температуре, близкой к комнатной, и перемешивают. За ходом реакции наблюдают при помощи хроматографических методов, хорошо известных специалистам, таких как тонкослойная хроматография. Когда реакция завершена, реакционную смесь отделяют от смолы, и смолу промывают подходящим растворителем, таким как, например, тетрагидрофуран. Объединенный реакционный фильтрат и смывы концентрируют с получением требуемого N-замещенного аминометилиндола формулы I или II соответственно.
Как показано на схеме 4, реакция XII, раствор необязательно замещенного первичного амина 8b или 11b в виде соли, например трифторуксусной соли, полученной при гидролизе промежуточных продуктов 8a или 11a соответственно, приводящем к отщеплению защитной Вос-группы, в подходящем растворителе, таком как, например, уксусная кислота и тетрагидрофуран, нейтрализуют карбонатом калия с последующим добавлением соответствующего альдегида и цианоборогидрида натрия при температуре, близкой к комнатной. За ходом реакции наблюдают при помощи хроматографических методов, хорошо известных специалистам, таких как тонкослойная хроматография. Когда реакция завершена, добавляют этилацетат и промывают органическую фазу солевым раствором, высушивают и концентрируют, получая искомый N-замещенный аминометилиндол формулы I или II соответственно.
8
9
Как показано на схеме 4, реакция XV, раствор необязательно замещенного первичного амина 8b или 11b в подходящем растворителе, например в диметилформамиде или NMP, обрабатывают водным раствором подходящего основания, такого как, например, карбонат калия, карбонат натрия или подобные им основания, а затем эфиром N-гидроксисукцинимида N-Boc-замещенной альфа-аминокислоты при температуре, близкой к комнатной. За ходом реакции наблюдают при помощи хроматографических методов, хорошо известных специалистам, таких как тонкослойная хроматография. Когда реакция завершена, добавляют этилацетат и промывают органическую фазу раствором бикарбоната и солевым раствором, высушивают и концентрируют, получая аминометилиндол формулы I или II соответственно, где R представляет N-Boc-защищенную альфа-аминокислотную группу, а R представляет водород. Защитную Вос-группу удаляют обработкой трифторуксусной кислотой в течение 5-15 мин и затем добавляют эфир для осаждения трифторуксусной соли искомого производного амида аминокислоты формулы I или II соответственно.
3
Как показано на схеме 4, реакция Х, раствор необязательно замещенного амида 3-арилтио- или 3-арилгетероциклтио-5-формилиндол-2-карбоновой кислоты 13 или 14 в подходящем растворителе, таком как, например, уксусная кислота и тетрагидрофуран, обрабатывают первичным амином при температуре, близкой к комнатной. По истечении 40 минут реакционный раствор добавляют к подходящему восстанавливающему агенту, такому как, например, смоле MP-CNBH при комнатной температуре. За ходом реакции наблюдают при помощи хроматографических методов, хорошо известных специалистам, таких как тонкослойная хроматография. Когда реакция завершена, реакционную смесь отделяют от смолы и смолу промывают подходящим растворителем, таким как, например, тетрагидрофуран. Объединенный реакционный фильтрат и смывы концентрируют, получая требуемую 3-арилтио- или 3-гетероциклтио-5-N-замещенную аминометилиндол-2-карбоновой кислоту формулы I.
Как показано на схеме 4, реакция XIII, раствор необязательно замещенного амида 3-арилтио- или 3-гетероциклтио-5-формилиндол-2-карбоновой кислоты 13 или 14 в подходящем растворителе, таком как, например, уксусная кислота и тетрагидрофуран, обрабатывают подходящим основанием, таким как, например, триэтиламин, подходящим первичным или вторичным амином и затем цианоборогидридом натрия при температуре, близкой к комнатной. За ходом реакции наблюдают при помощи хроматографических методов, хорошо известных специалистам, таких как тонкослойная хроматография. Когда реакция завершена, добавляют этилацетат и органическую фазу промывают раствором бикарбоната натрия, высушивают и концентрируют, получая искомый 5-N-замещенный аминометилиндол формулы I.
Как показано на схеме 4, реакция Ia, необязательно замещенный амид 5-N-замещенной аминометилиндол-2-карбоновой кислоты 16 обрабатывают диарилдисульфидом или дигетероциклдисульфидом, как описано выше в схеме 2, стадия f, с использованием гидрида натрия, получая соединения 8a и 11a из амидов 7 или 10 соответственно, из которых затем получают 3-арилтио- или 3-гетероциклтио-5-замещенный аминометилиндол-2-карбоксамид формулы I.
Как показано на схеме 4, реакция Ib, необязательно замещенный амид 5-N-замещенной аминометилиндол-2-карбоновой кислоты 16 обрабатывают диарилдисульфидом или дигетероциклдисульфидом, как описано выше в схеме 2, стадия f, с использованием карбоната цезия, с получением соединений 8a и 11a из 7 или 10 соответственно, из которых затем получают 3-арилтио- или 3-гетероциклтио-5-N-замещенный аминометилиндол-2-карбоксамид формулы I.
n
2
2
2
3
n
3
Кроме того, соединения формулы I или формулы II, где X представляет S(O) и n равно 1 или 2 соответственно, могут быть получены методами, хорошо известными специалистам, такими как, например, обработка раствора Вос-защищенного соединения 8a или 11a (схема 2) HO и NaCO. Или же Boc-защищенное соединение 7 или 10 (схема 2) можно обработать подходящим основанием, таким как, например, гидрид натрия или карбонат цезия, с последующей обработкой арилсульфонилхлоридом, арилтионилхлоридом, гетероциклсульфонилхлоридом или гетероциклтионилхлоридом (используемым вместо диарилдисульфида или дигетероциклдисульфида), как описано выше на схеме 2, стадия f. Промежуточные тионильные и сульфонильные соединения из этих реакций могут быть гидролизованы для удаления защитной Вос-группы, после чего каждый из полученных промежуточных продуктов с удаленной защитой может быть превращен в соединения формулы I или формулы II, где X представляет S(O), n равно 1 или 2 и R представляет арил или гетероцикл, при помощи методов, подобных описанным здесь.
Схема 5
Как показано на схеме 5, диарилдисульфиды получают, обрабатывая раствор арилсульфида в подходящем органическом растворителе, таком как, например, метанол, водным раствором пербората натрия и оставляя реакционную смесь при температуре окружающей среды на 12-24 ч. Диарилдисульфид может быть выделен и очищен методами, хорошо известными специалистам. Дигетероциклдисульфиды, такие как, например, бис(2-пиридинил)дисульфид, получают сходным образом. И арилсульфид, и гетероциклсульфид могут иметь замещающие группы, согласно вышеприведенному определению «арила» и «гетероцикла».
Все соединения настоящего изобретения, которые здесь описаны, могут быть использованы для лечения различных болезней и расстройств, как описано в настоящем документе. Как было сказано, соединения, которые используют в способах применения настоящего изобретения, способны ингибировать действие казеинкиназы Iε.
Одно осуществление настоящего изобретения относится к способу ингибирования активности казеинкиназы Iε у пациентов путем введения данным пациентам терапевтически эффективного количества ингибитора казеинкиназы Iε, в результате чего упомянутое ингибирование казеинкиназы Iε приводит к удлинению периода циркадного ритма.
Другое осуществление настоящего изобретения относится к способу ингибирования активности казеинкиназы Iε у пациентов, который приводит к удлинению периода циркадного ритма. Способ заключается во введении данным пациентам терапевтически эффективного количества соединения формулы I или формулы II настоящего изобретения. Другое осуществление настоящего изобретения относится к способу лечения пациентов, страдающих от болезней или расстройств, которые могут быть облегчены ингибированием активности казеинкиназы Iε при помощи назначения указанным пациентам терапевтически эффективного количества соединения формулы I или формулы II, что приводит к удлинению периода циркадного ритма.
Следующее осуществление настоящего изобретения составляет способ лечения расстройства настроения или расстройства сна. Другое осуществление настоящего изобретения составляет способ лечения расстройства настроения, где под расстройством настроения понимают депрессивное расстройство или биполярное расстройство. Следующее осуществление настоящего изобретения составляет способ лечения депрессивного расстройства, где под депрессивным расстройством понимают глубокое депрессивное расстройство. Другое осуществление настоящего изобретения составляет способ лечения расстройства настроения, где под расстройством настроения понимают биполярное расстройство. Следующее осуществление настоящего изобретения составляет способ лечения биполярного расстройства, где под биполярным расстройством следует понимать биполярное расстройство I типа или биполярное расстройство II типа. Другое осуществление настоящего изобретения составляет способ лечения расстройства сна. Следующее осуществление настоящего изобретения составляет способ лечения расстройства сна, где под расстройством сна следует понимать расстройство циркадного ритма сна. Следующее осуществление настоящего изобретения составляет способ лечения расстройства циркадного ритма сна, где расстройство циркадного ритма сна принадлежит к группе, в которую входят расстройство сна при посменной работы, синдром десинхроноза при перелетах, синдром преждевременной фазы сна и синдром задержки фазы сна. Специалистам понятно, что болезни и расстройства, перечисленные выше, не следует понимать ограничительно и что они даны для иллюстрации эффективности соединений настоящего изобретения. Таким образом, следует понимать, что соединения настоящего изобретения можно использовать для лечения любой болезни или расстройства, облегчаемых ингибированием казеинкиназы Iε.
В другом осуществлении настоящего изобретения фармацевтические композиции, содержащие фармацевтически приемлемые носители и соединения формулы I или формулы II, или стереоизомера, энантиомера, рацемата или таутомера указанного соединения, или его фармацевтически приемлемую соль, получают способами, хорошо известными специалистам в области фармацевтики. Носитель или наполнитель может быть твердым, полутвердым или жидким веществом, которое может служить разбавителем или средой для активного ингредиента. Подходящие носители или наполнители хорошо известны специалистам. Фармацевтическую композицию можно вводить перорально, путем ингаляций, парентерально или топикально и можно назначать пациентам в форме таблеток, капсул, суспензий, сиропов, аэрозолей, средств для ингаляций, суппозитариев, мазей, порошков, растворов и в другой форме. Термин «фармацевтический носитель» или «фармацевтически приемлемый носитель» в настоящем документе означает один или несколько наполнителей. Как описано здесь, фармацевтические композиции настоящего изобретения осуществляют ингибирование казеинкиназы Iε и поэтому являются полезными для лечения болезней и расстройств, которые можно облегчить ингибированием казеинкиназы Iε.
При приготовлении фармацевтических композиций или препаратов из соединений настоящего изобретения следует принять меры, чтобы активное соединение или соединения были биологически доступны в эффективных терапевтических количествах при избранном способе введения, включая пероральный, парентеральный и подкожный способы. Например, эффективные способы введения включают в себя подкожный, внутривенный, чрескожный, интраназальный, ректальный, вагинальный и подобные способы, включая высвобождение из имплантатов, а также инъекцию активного ингредиента и/или состава непосредственно в ткань.
Для перорального введения соединения настоящего изобретения могут быть включены в состав твердых или жидких препаратов, которые включают в себя или не включают инертные растворители или съедобные носители, такие как капсулы, пилюли, таблетки, порошки, растворы, суспензии и эмульсии. Такие капсулы, пилюли, таблетки и тому подобное могут также содержать один или более следующих адъювантов (вспомогательных лекарственных средств): связующие вещества, такие как микрокристаллическая целлюлоза, трагакантовая камедь; наполнители, например крахмал или лактоза; измельчитель, например альгиновая кислота, кукурузный крахмал и тому подобное; лубриканты, например стеариновая кислота, стеарат магния или Sterotex, (Stokely-Van Camp Inc., Индианаполис, штат Индиана); вещества, способствующие скольжению, в частности коллоидный диоксид кремния; подсластители, например сахароза или сахарин, и ароматизаторы, например перечная мята, метилсалицилат или фруктовый ароматизатор. Когда единица дозировки представляет собой капсулу, она может также содержать жидкий носитель, такой как полиэтиленгликоль или жирные масла. Используемые материалы должны быть фармацевтически чистыми и нетоксичными в используемых количествах. В качестве альтернативы фармацевтические композиции можно готовить в форме, подходящей для замедленного высвобождения с тем, чтобы вводить терапевтическое количество соединения настоящего изобретения в подходящей форме раз в день, раз в неделю или раз в месяц, используя методы, хорошо известные специалистам. Например, для этого можно было бы предложить какой-либо медленно разрушающийся полимер, содержащий активный ингредиент.
При парентеральном введении соединения настоящего изобретения можно назначать в виде доз инъекций раствора или суспензии данного соединения в физиологически приемлемом растворителе с добавлением фармацевтического носителя, которым может являться стерильная жидкость, такая как вода-масло, либо без добавления поверхностно-активных веществ и других фармацевтически приемлемых наполнителей. Например, масла, которые могут быть использованы в препаратах, могут быть нефтехимического, животного, растительного или синтетического происхождения, такие как, например, арахисовое масло, соевое масло и минеральное масло. В целом, вода, соляной раствор, водный раствор декстрозы или родственного сахара, этанол и гликоли, например пропиленгликоль, являются предпочтительными жидкими носителями, особенно в случае растворов для впрыскивания. Парентеральные препараты можно заключать в ампулы, одноразовые шприцы или бутылочки для многократного приема, сделанные из инертного пластика или стекла.
Растворы или суспензии, описанные выше, могут также включать одно или несколько следующих вспомогательных веществ: стерильные разбавители, например воду для инъекций, физиологический раствор, нелетучие масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные агенты, например аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатирующие агенты, например этилендиаминтетрауксусная кислота; буферы, например ацетаты, цитраты или фосфаты, а также агенты для регулирования изотоничности, например хлорид натрия или декстроза.
th
Соединения настоящего изобретения могут применяться в форме кожных пластырей, инъекций с замедленным всасыванием или имплантируемого препарата, приготовляемого таким образом, чтобы обеспечить замедленное высвобождение активного ингредиента. Возможно прессование активного ингредиента в гранулы или небольшие цилиндры и подкожная или внутримышечная имплантация в форме инъекции с замедленным всасыванием или импланта. Для имплантов могут использоваться инертные материалы, например биоразрушаемые полимеры и синтетические силиконы. Подходящие фармакологические носители и методы приготовления составов приводятся в стандартных пособиях, например Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19edition, Volumes 1 and 2, 1995, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania, U.S.A., которое в силу ссылки на него включается в настоящий документ.
Для лечения различных описанных здесь заболеваний, расстройств и состояний приемлемая доза составляет примерно от 0,01 мг/кг в день до 250 мг/кг в день, предпочтительно примерно от 0,05 мг/кг в день до 100 мг/кг в день и желательно от 0,05 мг/кг в день до примерно 40 мг/кг в день. Соединения настоящего изобретения можно применять в режиме от 1 до 4 раз в день в соответствии с природой заболевания, расстройства или состояния, подлежащего лечению.
ПРИМЕРЫ
Нижеследующие примеры приведены для иллюстрации настоящего изобретения, не ограничивая объем изобретения. В таблицах 1 и 2 указаны свойства соединений, приводимых в качестве примеров; синтез этих соединений описан ниже.
4
Если не оговорено отдельно, материалы получали от коммерческих поставщиков и использовали без дополнительной очистки. Все реакции проводили в инертной атмосфере, используя безводные реагенты и растворители. Флеш-хроматографию проводили на приборе Isco CombiFlash companion™, используя готовые к употреблению силикагельные картриджи Advantage FlashReady™ и системы растворителей, как описано ниже. Тонкослойную хроматографию проводили, используя 0,25 мм пластины, покрытые силикагелем 60F-254 (ЕM), пятна продукта обнаруживали, используя пары йода, УФ-свет или красящий реагент, такой как раствор KMnO.
-1
1
13
+
3
3
Инфракрасные (ИК-) спектры записывали, используя спектрометр Nexus 670 FTIR (Nicolet), приготовляя образцы, как указано, и результат выражали в волновых числах (см). H ЯМР спектры регистрировали на спектрометрах (500 МГц) Varian Gemini и/или Мercury 300, Unity 400 или Unity plus и/или Inova, выражая химический сдвиг (δ) в мд (миллионных долях) относительно тетраметилсилана (0,0 мд) или хлороформа (CDCl, 7,26 мд) в качестве стандарта. C ЯМР-спектры записывали, используя прибор Varian Unity (100,57 МГц, частота 13C), выражая химический сдвиг (δ) в мд относительно CDCl (77,0 мд), если не указано иное. Масс-спектры (МС) регистрировали при помощи масс-спектрометрической системы Finnigan MAT модель TSQ 700 с химической ионизацией при 120 эВ, используя метан (CI, 120 эВ). Жидкостную хроматографию в комбинации с масс-спектрометрией (ЖХ-МС) проводили, используя прибор Micromass LCT, соединенный с автоматом для работы с жидкостями Gilson 215. Масс-спектрометрический анализ высокого разрешения (для получения точных масс-спектров) проводили в режиме ESI при массовом разрешении от 10 000, используя масс-спектрометр Micromass QTOF. Точные массовые числа определяли для протонированных молекулярных ионов (M1), где М относится к молекулярному иону. Восстановительное аминирование с использованием восстановителя, связанного со смолой, проводили, используя полистирол с дивинилбензолом Argonaut Macroporous (МР). Использовался реагент цианоборгидрид МP (партия № 01617) в количестве 2,55 ммоль/г.
Общие методы синтеза
Общий метод синтеза Iа (Получение амидов 3-арилтио- или 3-гетероциклтиоиндол-2-карбоновой кислоты с использованием NaH)
2
2
2
2
2
2
2
К NaH (60% суспензия в масле, 1,2 экв., 9,8 ммоль) в DMF (75 мл) в атмосфере N при помешивании и комнатной температуре добавляют индол-2-карбоксамид (8,18 ммоль) в виде раствора в DMF (5 мл). Через 5 мин добавляют диарилдисульфид или дигетероциклдисульфид (1,0 экв., 8,18 ммоль) одной порцией и подогревают реакционную смесь при помешивании до 95°C в течение 16 ч. После окончания реакции разделяют аликвоту между EtOAc/HO и анализируют данную аликвоту на ТСХ (10% MeOH/CHCl). Реакционную смесь концентрируют под вакуумом, разбавляют водой и перемешивают в течение 30 мин, отфильтровывают и сушат на воздухе. Хроматографируют неочищенное вещество на SiO и элюируют с использованием CHCl/MeOH (9:1), получая амид 3-арилтио- или 3-гетероциклтио-индол-2-карбоновой кислоты (ссылка: Atkinson et al. Syn. Comm. 1988, 480).
Общий метод синтеза Ib (Получение амидов 3-арилтио- или 3-гетероциклтиоиндол-2-карбоновой кислоты с использованием Cs
CO
)
2
3
2
3
К индол-2-карбоксамиду (1,06 ммоль), растворенному в сухом DMF (10 мл), добавляют CsCO (100 мг, 0,31 ммоль) и затем диарилдисульфид или дигетероцикледисульфид (0,64 ммоль). Подогревают реакционную смесь в атмосфере
2
4
2
N при 100°C в течение 2,5 ч (за полнотой прохождения реакции следят при помощи ТСХ/ЖХ-МС). Позволяют реакционной смеси остыть до комн.т., концентрируют до минимального объема и разделяют между солевым раствором (6 мл) и EtOAc (3 мл). Экстрагируют EtOAc, сушат объединенные экстракты (MgSO) и концентрируют с получением неочищенного продукта. Очищают продукт на колонке ISCO (4,0 г SiO) с получением амида 3-арилтио- или 3-гетероциклтиоиндол-2-карбоновой кислоты.
Общий метод синтеза II (переэтерификация)
2
3
2
2
Добавляют KCO (1,20 экв., 50,7 ммоль) к этилиндол-2-карбоксилату (42,3 ммоль) в MeOH (50 мл) и перемешивают полученную суспензию при нагревании при 55°C в течение 1 ч. Следят за ходом реакции по ТСХ (EtO/гепт.) и по завершении концентрируют реакционную смесь под вакуумом, разбавляют HO и перемешивают в течение 15 мин. Отделяют осадок фильтрованием и сушат в вакуумной печи при 65°C в течение 3 ч с получением метилового эфира индол-2-карбоновой кислоты.
Общий метод синтеза III (амидирование при помощи NH
OH)
4
4
2
Перемешивают этиловый или метиловый эфир индол-2-карбоновой кислоты (40,0 ммоль) в виде суспензии в NHOH (100 мл) и LiCl (1,0 экв.) при к.т. в течение 16 ч. Выделяют осадок из реакционной смеси при помощи фильтрации, промывают HO и сушат на воздухе, получая амид индол-2-карбоновой кислоты.
Общий метод синтеза IV (амидирование при помощи NH
/MeOH)
3
3
2
2
2
2
Перемешивают этиловый или метиловый эфир индол-2-карбоновой кислоты (4,67 ммоль) в 7N NH/MeOH (20 мл) и добавляют LiCl (1,0 экв., 4,67 ммоль). Перемешивают реакционную смесь при к.т. в течение 5 дней и наблюдают за ходом реакции при помощи ТСХ (10% MeOH/CHCl). В течение этого времени может выпасть осадок. Концентрируют реакционную смесь до минимального объема, разбавляют HO и отфильтровывают осадок. Промывают осадок дополнительным количеством HO и сушат под вакуумом при 60°C с получением амида индол-2-карбоновой кислоты в твердом виде.
Общий метод синтеза V (получение 2-индолкарбоновой кислоты из этилового или метилового эфира)
2
2
К этиловому или метиловому эфиру индол-2-карбоновой кислоты (27,0 ммоль) в виде суспензии в MeOH/HO (3:1, 160 мл) добавляют NaOH (82,0 ммоль). Перемешивают при к.т. в течение 16 ч, концентрируют реакционную смесь, подкисляют HCl и отделяют осадок фильтрованием. Промывают осадок на фильтре дополнительным количеством HO и сушат в вакуумной печи, получая 2-индолкарбоновую кислоту.
Общий метод синтеза VI (амидирование 2-индолкарбоновой кислоты)
4
2
Добавляют к 2-индолкарбоновой кислоте (31,0 ммоль), растворенной в безводном THF (50 мл), карбонилдиимидазол (1,10 экв., 5,5 г, 34,0 ммоль) и перемешивают в течение 1 ч. Затем добавляют концентрированный NHOH (50 мл) одной порцией и перемешивают реакционную смесь при к.т. Через 16 ч отбирают осадок, отделяемый фильтрацией, промывают HO и сушат под вакуумом при 40°C, получая искомый 2-индолкарбоксамид.
Общий метод синтеза VII (амидирование с использованием первичных и вторичных аминов 2-индолкарбоновой кислоты)
2
Добавляют к 2-индолкарбоновой кислоте (12,4 ммоль) в безводном THF (30 мл) карбонилдиимидазол (1,5 экв., 18,6 ммоль) и перемешивают в течение 1 ч. Добавляют требуемый амин [например, метиламин, этиламин, диметиламин, пирролидин, пиперидин, пиперазин или морфолин, (3,0 экв., 37,2 ммоль)] одной порцией и перемешивают реакционную смесь при к.т. Через 16 ч останавливают реакцию добавлением HO, собирают выпавший осадок фильтрацией и сушат под вакуумом, получая искомый 2-индолкарбоксамид.
Общий метод синтеза VIII (N-алкилирование аминометилиндола).
2
2
2
3
2
2
3
2
4
Обрабатывают 5- или 6-Boc-аминометилиндол (0,5 ммоль) трифторуксусной кислотой (ТФУ, 5 мл) и HO (0,25 мл) и перемешивают при к.т. в течение 10 мин (следят за ходом реакции при помощи ЖК-МС). Осаждают трифторуксусную соль добавлением EtO, отделяют ее фильтрацией и сушат под вакуумом при 70°C. Растворяют ТФУ-соль (0,24 ммоль) в DMF (3,0 мл), обрабатывают KCO (0,48 ммоль), затем добавляют соответствующий алкилгалогенид (0,50 ммоль). Через 4 ч или по завершении реакции, как покажет ТСХ (10% MeOH/CHCl-0,25% NH), разбавляют реакционную смесь EtOAc, промывают HO, сушат (MgSO) и концентрируют. Очищают продукт реакции хроматографией, получая искомый 5- или 6-алкиламинометилиндол.
Общий метод синтеза IX (восстановительное аминирование 5- или 6-аминометилиндола при помощи MP-CNBH
)
3
2
3
3
2
2
2
Нейтрализуют раствор ТФУ-соли 5- или 6-аминометилиндола (0,061 ммоль) и AcOH/THF (1:4, 2,5 мл), добавляя KCO (1,0 экв., 0,061 ммоль). К полученной смеси добавляют требуемый альдегид (1,0 экв., 0,061 ммоль) и перемешивают реакцию при к.т. в течение 10 мин. Набирают реакционную смесь в одноразовый полипропиленовый шприц (5 мл, HSW) с полипропиленовой мембраной и пробкой, заполненный смолой МP-CNBH (2,5 экв.). Помещают шприц во встряхиватель LabQuake Shaker и вращают в течение 16 ч. За ходом реакции следят при помощи TCX (10% MeOH/CHCl) и по ее завершении впрыскивают реакционную смесь в стеклянный флакон c навинчивающейся крышкой, объединяют с THF-смывом со смолы и концентрируют под вакуумом. В некоторых случаях для получения вещества в виде кристаллов обрабатывают аморфный осадок HCl (1,0 мл) и осаждают EtO (1,0 мл) с получением HCl-соли.
Общий метод синтеза X (восстановительное аминирование амидов 5- и 6-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты с помощью MP-CNBH
)
3
3
3
2
2
Добавляют к 5- или 6-индолальдегиду (0,077 ммоль) в AcOH/THF (1:4, 2,5 мл) соответствующий первичный или вторичный амин (2 экв., 0,152 ммоль) и оставляют реакционную смесь при к.т. Через 40 мин набирают реакционную смесь в полипропиленовый одноразовый шприц (5 мл, HSW), снабженный полипропиленовой мембраной и пробкой и заполненный смолой МP-CNBH (2,0 экв.). Помещают шприц во встряхиватель LabQuake Shaker и вращают в течение 16 ч. Если используется HCl-соль амина, добавляют EtN (1,1 экв.) для нейтрализации соли. За ходом реакции следят при помощи TCX (10% MeOH/CHCl) и, когда она завершена, впрыскивают реакционную смесь в стеклянный флакон с навинчивающейся крышкой, объединяют с THF-смывом со смолы и концентрируют под вакуумом с выделением продукта реакции.
Общий метод синтеза XI (Восстановление нитрила с помощью никелевого катализатора Ренея)
2
2
2
2
2
2
2
Восстанавливают 5- или 6-индолнитрил, как описано в Sundberg, R. J.; Dalhausen, D. J.; Manikumar, G.; Mavunkel, B.; Biswas, A. et al. J. Heterocyclic Chem. 1988, 25, 129-137. А именно, готовят суспензию амида 5- или 6-циано-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты (4,59 ммоль) и NaHPO (3,0 экв., 13,7 ммоль) в растворе пиридина (20 мл), AcOH (10 мл) и HO (10 мл). Добавляют к данной реакционной смеси водную суспензию никелевого катализатора Ренея (1,0 мл) и подогревают реакционную смесь при 95°C в течение 4,5 ч. Охлаждают реакционную смесь, отфильтровывают через Celite (инфузорная земля) (Celite Corporation, 137 West Central Avenue, Lompor, California 93436) в атмосфере N и промывают небольшим количеством пиридина и HO. Концентрируют фильтрат под вакуумом до минимального объема, разбавляют темно-зеленую масляную массу ледяной HO и перемешивают в течение 5 мин, за это время должен сформироваться осадок. Отделяют осадок фильтрованием, промывают EtO и сушат на воздухе, получая 5- или 6-формилированный продукт соответственно.
Общий метод синтеза XII (Восстановительное аминирование 5- или 6-аминометилиндола при помощи NaBH
CN).
3
2
3
3
2
2
3
4
Добавляют к раствору ТФУ-соли 5- или 6-аминометилиндола (0,12 ммоль) и AcOH/THF (1:4, 5,0 мл), соответствующий альдегид (0,108 ммоль), а затем KCO (1,0 экв., 0,12 ммоль) и NaCNBH (2,5 экв., 0,3 ммоль). Перемешивают реакционную смесь при к.т. и следят за ходом реакции при помощи TCX (10% MeOH/CHCl). По завершении реакции разбавляют реакционную смесь EtOAc, промывают насыщенным NaHCO и солевым раствором, сушат (MgSO) и концентрируют в вакууме с получением неочищенного продукта. Очищают его хроматографией, получая искомое соединение.
Общий метод синтеза XIII (Восстановительное аминирование амида 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты с использованием
NaBH
CN)
3
3
3
2
2
3
4
К раствору альдегида 13 или N-алкилированного альдегида 14 (0,26 ммоль) и AcOH/THF (1:4, 5,0 мл) добавляют соответствующий амин (0,52 ммоль), затем EtN (1,0 экв., 0,26 ммоль), а после этого NaCNBH (2,5 экв., 0,65 ммоль). Перемешивают реакционную смесь при к.т. и следят за ходом реакции при помощи TCX (10% MeOH/CHCl). По завершении реакции разбавляют реакционную смесь EtOAc, промывают насыщенным NaHCOи солевым раствором, сушат (MgSO) и концентрируют в вакууме с получением неочищенного продукта. Очищают его с получением искомого соединения. В качестве побочного продукта реакции получается небольшое количество бис-алкилированного продукта.
Общий метод синтеза XIV (N-метилирование амида 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты)
2
3
4
К индолальдегиду 13 (400 мг, 1,35 ммоль), растворенному в DMF (20 мл), добавляют KOH (1,2 экв., 91,0 мг) в виде водного раствора (3,0 мл, HO). Добавляют к реакционной смеси по каплям раствор MeI (101 мкл) и DMF (1,0 мл). Перемешивают реакционную смесь при к.т. в течение 48 ч. Разбавляют EtOAc (200 мл), промывают органическую фазу насыщенным NaHCO и сушат (MgSO). Концентрируют органическую фазу с получением неочищенного продукта 14.
Общий метод синтеза XV (Связывание аминокислот с 5- или 6-аминометилиндолом)
2
3
3
4
2
Растворяют 5- или 6-аминометилиндол (0,242 ммоль, 8b или 11b в виде ТФУ-соли) в DMF (10 мл), добавляют 10% водный раствор KCO (1,0 мл) и затем добавляют N-Boc-защищенный N-гидроксисукцинимидный эфир аминокислоты (1,10 экв., 0,266 ммоль). Перемешивают при к.т. и следят за ходом реакции при помощи ЖХ-МС. По завершении реакции разбавляют реакционную смесь EtOAc (200 мл) и промывают органическую фазу насыщенным NaHCO (3x) и солевым раствором (1x), сушат (MgSO) и концентрируют под вакуумом. Снимают защитную группу с неочищенного аналога аминокислоты обработкой 99% ТФУ в течение 10 мин, концентрируют и затем осаждают продукт реакции в виде ТФУ-соли путем добавления EtO.
Получение этилового и метилового эфиров 5- и 6-циано-1H-индол-2-карбоновой кислоты (Схема 1)
Этиловый эфир 3-(5-циано-2-нитрофенил)-2-оксопропионовой кислоты, 2 (m=0)
2
2
2
2
4
2
Растворяют металлический натрий (0,345 г) в абсолютном EtOH (25 мл), добавляют диэтилоксалат (10 мл) и затем добавляют 3-метил-4-нитробензонитрил (1a, m=0, 1,6 г, Aldrich) в виде раствора в EtOH (25 мл). Перемешивают реакционную смесь при к.т. в течение 16 ч, останавливают реакцию добавлением 5N HCl (3 мл) и удаляют EtOH при сниженном давлении. Разделяют полученный осадок между CHCl (100 мл) и HO (50 мл). Промывают органический слой последовательно HO (50 мл) и солевым раствором (50 мл), сушат (MgSO) и концентрируют с получением неочищенного маслянистого продукта. Очищают хроматографией на SiO (циклогексан-EtOAc, 70-30 об.) с получением после высушивания (40°C, пониженное давление централизованной вакуумной системы) искомого вещества (1,2 г) в виде желтых кристаллов.
Этиловый эфир 5-циано-1H-индол-2-карбоновой кислоты, 3a (m=0)
2
2
2
2
2
Добавляют к этиловому эфиру 1,2 г 3-(5-циано-2-нитрофенил)-2-оксопропионовой кислоты 2 (m=0) в EtOH (40 мл) 10% Pd/C (0,40 г) и перемешивают в атмосфере водорода, пока не будет поглощено расчетное количество водорода. Отфильтровывают реакционную смесь и концентрируют фильтрат с получением 1,1 г неочищенного продукта. Очищают хроматографией на SiO, элюируя CHCl. Концентрируют нужные фракции и сушат под вакуумом остаток в течение ночи (40°C) с получением искомого соединения (0,5 г) в виде белых кристаллов, Rf=0,9 (силикагель, 10% MeOH/CHCl).
Этиловый эфир 3-(4-циано-2-нитрофенил)-2-оксопропионовой кислоты, 4 (m=0)
2
2
2
2
4
2
Растворяют металлический натрий (0,345 г) в абсолютном EtOH (25 мл), добавляют диэтилоксалат (10 мл) и затем добавляют 4-метил-3-нитробензонитрил (1b, m=0, 1,6 г, Aldrich) в виде раствора в EtOH (25 мл). Перемешивают реакционную смесь при к.т. в течение 16 ч, останавливают реакцию добавлением 5Н HCl (3 мл) и удаляют EtOH при пониженном давлении. Разделяют остаток между CHCl (100 мл) и HO (50 мл). Промывают органический слой последовательно HO (50 мл) и солевым раствором (50 мл), сушат (MgSO) и концентрируют с получением неочищенного масляного продукта. Очищают хроматографией на SiO, элюируя смесью циклогексан-EtOAc, 70-30 об. с получением после высушивания (40°C, пониженное давление централизованной вакуумной системы) искомого соединения (1,5 г) в виде желтых кристаллов, т.пл. 118°C.
Этиловый эфир 6-циано-1H-индол-2-карбоновой кислоты, 5a (m=0)
2
2
2
Добавляют к 1,5 г этилового эфира 3-(4-циано-2-нитрофенил)-2-оксопропионовой кислоты в EtOH (40 мл) 10% Pd/C (0,45 г) и перемешивают в атмосфере водорода, пока не будет поглощено расчетное количество водорода. Отфильтровывают реакционную смесь и концентрируют фильтрат с получением 1,1 г неочищенного продукта. Очищают хроматографией на SiO, элюируя CHCl. Концентрируют нужные фракции и сушат под вакуумом остаток в течение ночи (40°C) с получением искомого соединения (0,8 г) в виде белых кристаллов, т.пл. 176°C.
Метиловый эфир 5-циано-1H-индол-2-карбоновой кислоты, 3b (m=0) и метиловый эфир 6-циано-1H-индол-2-карбоновой кислоты, 5b (m=0)
Каждый из искомых эфиров 3b и 5b может быть приготовлен из соответствующих этиловых эфиров 3a и 5a соответственно с использованием переэтерификации, как описано в общем методе синтеза II.
Получение амидов 3-арилтио- или 3-гетероциклтио-5-аминометилиндол-2- карбоновой кислоты 8b и амидов 3-арилтио- или 3-гетероциклтио-6-аминометилиндол-2-карбоновой кислоты 11b.
(Схема 2)
Амид 5-циано-1H-индол-2-карбоновой кислоты, 6 (m=0)
3
6
2
2
1
Обрабатывают этиловый эфир 5-циано-1H-индол-2-карбоновой кислоты, 3a (m=0, 1,0 г, 4,67 ммоль) 7 N NH/MeOH, как описано в общем методе синтеза IV, с получением искомого соединения в виде твердого вещества цвета слоновой кости (720 мг, 83,3%): т.пл. >300°C; H ЯМР (DMSO-d) δ 12,0 (уш.с, 1H), 8,21 (с, 1H), 8,14 (уш.с, 1H), 7,51 (м, 3H), 7,25 (с, 1H); TCX (10% MeOH/CHCl): Rf=0,40, набл. m/z=186 (M+1).
Трет-бутиловый эфир (2-карбамоил-1H-индол-5-илметил)-
карбаминовой кислоты, 7 (m=0)
2
2
4
2
3
4
Растворяют индол 6 (m=0, 9,5 г, 51,3 ммоль) в MeOH (500 мл) и добавляют NiCl (7,3 г, 1,1 экв., 56,4 ммоль) и BocO (22,4 г, 2,0 экв., 102,6 ммоль). Охлаждают реакционную смесь до температуры ледяной бани и затем добавляют NaBH (13,6 г, 7,0 экв., 0,36 моль). Перемешивают реакционную смесь при к.т. под N. Через 16 ч концентрируют реакционную смесь, растворяя остаток в EtOAc, промывают насыщенным NaHCO и экстрагируют несколько раз EtOAc. Объединяют экстракты, сушат (MgSO) и концентрируют с получением искомого соединения 7 (m=0), которое используют без дальнейшей очистки. Rf=0,30, набл. m/z=290 (M+1). (см.: Caddick, S, et al. Tet. Lett. 2000, 41, 3513-16).
Трет-бутиловый эфир (2-кaрбамоил-3-фенилсульфанил-1H-индол-5-илметил)-карбаминовой кислоты, 8a (m=0, R
=Ph).
3
1
6
2
2
J
Обрабатывают амид 7 (m=0, 4,0 г, 13,8 ммоль) фенилдисульфидом (1,0 экв., 3,02 г, 13,8 ммоль), как описано в общем методе I, с получением искомого соединения 8a (соединение Ib, где m=0) в виде твердого вещества бледно-желтого цвета (2,36 г, 42,9%); H ЯМР (DMSO-d) δ 12,2 (уш.с, 1H), 7,94 (уш.с, 1H), 7,71 (уш.с, 1H), 7,5-6,9 (м, 9H), 4,17 (д, 2H, =6,0 Гц), 1,40 (с, 9H). TCX (5% MeOH/CHCl): Rf=0,25, набл. m/z=398 (M+1).
Амид 5-аминометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, 8b (m=0, R
=Ph)
3
3
2
3
6
1
J
Обрабатывают 5-Boc-аминометилированное соединение 8a (m=0, R=Ph; Ib) (1,6 г) ТФУ (99%, 10 мл) и перемешивают при к.т. в течение 10 мин. Концентрируют реакционную смесь и осаждают продукт добавлением EtO с получением ТФУ-соли искомого соединения 8b (соединение Ia, где m=0, R=Ph) в виде твердого вещества белого цвета (1,6 г): H ЯМР (DMSO-d) δ 12,5 (уш.с, 1H), 7,92 (уш.с, 1H), 7,70 (уш.с, 1H), 7,5-6,9 (м, 10H), 4,17 (д, 2H, =6,2 Гц).
Амид 6-циано-1H-индол-2-карбоновой кислоты, 9 (m=0)
3
6
1
J
J
Обрабатывают этиловый эфир 6-циано-1H-индол-2-карбоновой кислоты 5a (m=0, 1,0 г, 4,67 ммоль) 7 N NH/MeOH, как описано в общем методе IV, с получением искомого соединения в виде твердого вещества цвета слоновой кости (766 мг, 88,6%), т.пл. 241-242°C; H ЯМР (DMSO-d) δ 11,5 (уш.с, 1H), 8,16 (уш.с, 1H), 7,83 (с, 1H), 7,80 (д, 1H, =8,0 Гц), 7,58 (уш.с, 1H), 7,35 (д, 1H, =8,0 Гц), 7,23 (с, 1H).
Трет-бутиловый эфир (2-карбамоил-1H-индол-6-илметил)-карбаминовой кислоты, 10 (m=0)
2
2
2
4
2
3
4
6
2
2
1
Растворяют индол 9 (m=0, 0,56 г, 3 ммоль) в MeOH (25 мл), перемешивают при к.т. под N и добавляют NiCl (0,36 г, 1,0 экв., 3,0 ммоль) и BocO (1,31 г, 2,0 экв., 6,0 ммоль). Охлаждают смесь до температуры ледяной бани и затем добавляют NaBH (0,79 г, 21 ммоль). Перемешивают реакционную смесь при к.т. под N. Через 16 ч концентрируют реакционную смесь, растворяют остаток в EtOAc, промывают насыщенным NaHCO и экстрагируют несколько раз EtOAc. Объединяют экстракты, сушат (MgSO) и концентрируют с получением искомого соединения (433 мг, 49,5%) в виде твердого кристаллического вещества желтого цвета, которое используют без дальнейшей очистки, т.пл. 209-209,5°C; H ЯМР (DMSO-d) δ 11,4 (уш.с, 1H), 7,87 (уш.с, 1H), 7,49 (д, 1H, J=8,0 Гц), 7,27 (с перекрывается с уш.с, 3H), 7,06 (с, 1H), 6,92 (д, 1H, J=8,1 Гц), 4,18 (д, 2H, J=5,9 Гц), 1,40 (с, 9H). TCX (10% MeOH/CHCl): Rf=0,35, набл. m/z=290 (M+1).
Трет-бутиловый эфир (2-карбамоил-3-фенилсульфанил-1H-индол-6-илметил)-карбаминовой кислоты, 11a (m=0, R
=Ph)
3
3
3
6
2
2
1
J
Обрабатывают амид 10 (m=0, R=Ph; 411 мг, 1,42 ммоль) фенилдисульфидом (310 мг, 1,42 ммоль), как описано в общем методе I, с получением искомого соединения 11a (соединение IIb, где m=0 и R представляет Ph) в виде твердого вещества желто-коричневого цвета (60 мг, 10,6%), т.пл. 118-121°C; H ЯМР (DMSO-d) δ 12,25 (уш.с, 1H), 7,90 (уш.с, 1H), 7,70 (уш.с, 1H), 7,52 (м, 2H), 7,40 (м, 3H), 7,37-7,0 (м, 4H), 4,19 (д, 2H, =6,4 Гц), 1,40 (с, 9H). TCX (10% MeOH/CHCl) Rf=0,55, набл. m/z=398 (M+1).
Амид 6-аминометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты -ТФУ-соль, 11b (m=0, R
=Ph)
3
3
2
3
6
1
J
Обрабатывают 6-Boc-аминометил-соединение 11a (m=0, R=Ph; 1,6 г) ТФУ (99%, 10 мл) и перемешивают при к.т. в течение 10 мин. Концентрируют реакционную смесь и осаждают продукт добавлением EtO с получением искомого соединения 11b (соединение IIa, где m=0 и R представляет Ph) в виде твердого вещества белого цвета (1,6 г): H ЯМР (DMSO-d) δ 12,55 (с, 1H), 8,14 (уш.с, 1H), 8,05 (с, 1H), 7,75 (уш.с, 1H), 7,64 (с, 1H), 7,51 (д, 1H), 7,3-7,0 (м, 6H), 4,15 (д, 2H, =5,8 Гц). TCX
2
2
(10% MeOH/CHCl): Rf=0,55, набл. m/z=398 (M+1).
Получение амидов 3-арилтио- и 3-гетероциклтио-5-формилиндол-2-карбоновой кислоты 13 и 14, а также амидов 5-N-замещенной аминометилиндол-2-карбоновой кислоты 16
(Схема 3)
Амид 5-циано-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, 12 (m=0, R
=Ph)
3
2
2
Обрабатывают соединение 6 (m=0, 6,0 г, 32,4 ммоль) дифенилдисульфидом (1,10 экв., 7,78 г), как описано в общем методе синтеза I, с получением неочищенного искомого соединения 12 (6,5 г, 68,4%) в виде твердого вещества цвета слоновой кости, которое используют без очистки, Rf=0,5 (5% MeOH/CHCl).
Амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, 13 (m=0, R
=Ph)
3
3
2
2
2
2
2
Восстанавливают соединение 12 (m=0, R=Ph; 1,13 г, 3,86 ммоль) с использованием никелевого катализатора Ренея (90,7 г), как описано в общем методе синтеза XI, с получением после хроматографии на SiO (2% MeOH/CHCl) искомого соединения 13 (0,69 г, 60%) в виде твердого вещества бледно-желтого цвета, Rf=0,45 (5% MeOH/CHCl).
Амид 5-формил-1-метил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, 14 (m=0, R
=CH
, R
=Ph)
1
3
3
3
2
2
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph; 400 мг, 1,35 ммоль) MeI (101 мкл), как описано в общем методе XIV, с получением искомого 5-формил-1-метилиндольного соединения 14 (280 мг, 67%), Rf (5% MeOH/CHCl)=0,75.
Амид 5-формил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, 15 (m=0)
2
2
Обрабатывают амид 5-циано-1H-индол-2-карбоновой кислоты 6 (m=0, 500 мг, 2,7 ммоль) никелевым катализатором Ренея (0,6 г), как описано в общем методе XI, с получением искомого соединения 15 (230 мг, 45,4%) в виде твердого вещества желтого цвета, TCX (10% MeOH/CHCl), Rf=0,75.
Амид 5-метиламинометил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, 16 (m=0, R
=CH
)
8
3
3
2
2
3
Обрабатывают альдегид 15 (m=0, 230 мг, 1,22 ммоль) метиламина гидрохлоридом (2,0 экв., 165 мг, 2,44 ммоль) и NaBHCN (3 экв., 239 мг, 3,7 ммоль), как описано в общем методе XII, с получением искомого соединения 16 (230 мг, 92,7%) в виде твердого вещества желто-коричневого цвета; TCX (10% MeOH/CHCl-0,2% EtN) Rf=0,25, набл. m/z=204 (M+1).
Получение амидов 5-замещенной 3-арилтиоиндол-2-карбоновой кислоты I из 8b, 13, 14 и 16
(Схемы 2 и 4)
Амид 5-аминометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Ia и трет-бутиловый эфир (2-карбамоил-3-фенилсульфанил-1H-индол-5-илметил)-карбаминовой кислоты, Ib
Искомые соединения Ia и Ib получают, как описано выше, см. метод синтеза соединений 8a и 8b по схеме 2.
Амид 5-метиламинометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Ic
3
2
2
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,17 ммоль) метиламин-HCl (2,0 экв., 23 мг, 0,34 ммоль), как описано в общем методе X, с получением амида 5-метиламинометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Ic (18 мг, 34,6%) в виде твердого вещества желтого цвета, TCX Rf=0,2 (15% MeOH/CHCl), набл. m/z=312 (M+1).
Амид 3-(3-хлорфенилсульфанил)-5-метиламинометил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Id
Обрабатывают амид 5-метиламино-1H-индол-2-карбоновой кислоты 16 (m=0,
8
3
2
2
3
R=CH) (50 мг, 0,25 ммоль) 3-хлорфенилдисульфидом (77,8 мг, 0,27 ммоль), как описано в общем методе Ib, с получением Id в виде твердого вещества цвета слоновой кости (22 мг, 25,8%), TCX Rf=0,15 (50% MeOH/CHCl-0,5% EtN).
Амид 3-(3-фторфенилсульфанил)-5-метиламинометил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Ie
Обрабатывают амид 5-метиламино-1H-индол-2-карбоновой кислоты 16 (m=0,
8
3
2
2
3
R=CH) (65 мг, 0,32 ммоль) 3-фторфенилдисульфидом (89,5 мг, 0,352 ммоль), как описано в общем методе Ib, с получением Ie в виде твердого вещества цвета слоновой кости (42 мг, 40%), TCX Rf=0,15 (50% MeOH/CHCl-0,5% EtN).
Амид 5-(бензиламинометил)-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, If
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбoновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (60 мг, 0,203 ммоль) бензиламином (43,5 мг, 0,406 ммоль), как описано в общем методе X, с получением If (45 мг, 52,9%), выделяемого в виде HCl-соли, набл. m/z=388 (M+1).
Амид 1-метил-5-метиламинометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Ig
1
3
3
Обрабатывают амид 5-формил-1-метил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 14 (m=0, R=CH, R=Ph) (80 мг, 0,26 ммоль) гидрохлоридом метиламина, как описано в общем методе XIII, с получением Ig (37 мг, 44,2%), выделяемого в виде HCl-соли, набл. m/z=326 (M+1).
Амид 5-(4-гидроксиметилпиперидин-1-илметил)-3-фенилсульфанил-1H-
индол-2-карбоновой кислоты, Ih
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,169 ммоль) 4-пиперидинметанолом (43,6 мг, 0,338 ммоль), как описано в oбщем методе X, с получением Ih (32 мг, 43,9%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX Rf (свободное основание)=0,25 (10% MeOH/CHCl-0,5% EtN), набл. m/z=396 (M+1).
Амид 5-морфолин-4-илметил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Ii
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,169 ммоль) морфолином (29,45 мг, 0,338 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Ii (34 мг, 50,0%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX Rf (свободное основание)=0,80 (10% MeOH/CHCl-0,5% EtN), набл. m/z=368 (M+1).
Амид 3-фенилсульфанил-5-пропиламинометил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Ij
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,169 ммоль) пропиламина гидрохлоридом (32,3 мг, 0,338 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Ij (27 мг, 47,3%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX Rf (свободное основание)=0,40 (10% MeOH/CHCl-0,5% EtN), набл. m/z=362 [M+23 (Na)].
Амид 5-бутиламинометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Ik
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,169 ммоль) бутиламином (15,9 мкл, 0,161 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Ik (24 мг, 40,3%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX Rf (свободное основание)=0,20 (10% MeOH/CHCl-0,5% EtN), набл. m/z=376 [M+23 (Na)], 354 (M+1).
Амид 3-фенилсульфанил-5-пиперидин-1-илметил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Il
3
3
2
2
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,169 ммоль) пиперидином (33,5 мкл, 0,338 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Il (30,0 мг, 48,7%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX Rf (свободное основание)=0,20 (10% 7 N NH в MeOH/CHCl), набл. m/z=366,2 (M+1).
Амид 5-пентиламинометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Im
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,169 ммоль) пентиламином (19,6 мкл, 0,338 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Im (20,0 мг, 32,2%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX Rf (свободное основание)=0,20 (10% MeOH/CHCl-0,5% EtN), набл. m/z=368 (M+1).
Амид 5-гептиламинометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, In
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,169 ммоль) гептиламином (22,3 мкл, 0,338 ммоль), как описано в общем методе X, с получением In (20,0 мг, 31,1%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX Rf (свободное основание)=0,20 (10% MeOH/CHCl-0,5% EtN), набл. m/z=382 (M+1).
Амид 5-(3-карбамоилпиперидин-1-илметил)-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Io
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,169 ммоль) пиперидин-3-карбоксамидом (64,1 мг, 0,338 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Io (32,0 мг, 46,4%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX Rf (свободное основание)=0,10 (10% MeOH/CHCl-0,5% EtN), набл. m/z=409 (M+1).
Амид 3-фенилсульфанил-5-(4-пиримидин-2-илпиперазин-1-илметил)-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Ip
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,169 ммоль) 2-пиперазин-1-илпиримидином (101 мг, 0,5 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Ip (17,0 мг, 22,6%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX Rf (свободное основание)=0,40 (10% MeOH/CHCl-0,5% EtN), набл. m/z=445 (M+1).
Амид 5-[4-(3-фенилпропенил)пиперазин-1-илметил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iq
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,169 ммоль) 1-(3-фенилпропенил)пиперазином (118,6 мг, 0,5 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Iq (16,0 мг, 19,7%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX Rf (свободное основание)=0,35 (10% MeOH/CHCl-0,25% EtN), набл. m/z=483 (M+1).
Трет-бутиловый эфир 4-(2-карбамоил-3-фенилсульфанил-1H-индол-5-илметил)-[1,4]диазепан-1-карбоновой кислоты, Ir
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (100 мг, 0,338 ммоль) Boc-1,4-диазепином (93 мг, 0,5 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Ir (96 мг, 59,3%), TCX Rf (свободное основание)=0,45 (10% MeOH/CHCl-0,25% EtN), набл. m/z=481 (M+1).
Амид 5-[1,4]диазепан-1-илметил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Is
Обрабатывают Boc-защищенный индол Ir (62 мг, 0,129 ммоль) ТФУ (2,0 мл) при к.т. в течение 10 мин, с получением Is (53 мг) в виде ТФУ-соли, набл. m/z=381 (M+1).
Амид 5-(бицикло[2,2,1]гепт-2-иламинометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, It
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,169 ммоль) 2-аминонорборана гидрохлоридом (18,8 мг, 0,169 ммоль), как описано в общем методе X, с получением It (27 мг, 40,9%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX Rf (свободное основание)=0,8 (10% MeOH/CHCl-0,25% EtN), набл. m/z=392 (M+1), 414 (M+Na).
Амид 3-фенилсульфанил-5-(хинолин-6-иламинометил)-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iu
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,169 ммоль) 6-аминохинолином (24,4 мг, 0,169 ммоль,) как описано в общем методе X, с получением Iu (6,0 мг, 8,4%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX Rf (свободное основание)=0,5 (10% MeOH/CHCl-0,25% EtN), набл. m/z=425 (M+1).
Амид 5-[(2-гидрокси-1-гидроксиметил-1-метилэтиламино)метил]-3-
фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iv
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,169 ммоль) 2-амино-2-метил-1,3-пропандиолом (50 мг, 0,47 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Iv (21,0 мг, 32,3%) в виде твердого вещества желто-коричневого цвета, TCX Rf=0,15 (10% MeOH/CHCl-0,25% EtN), набл. m/z=386 (M+1).
Амид 5-(2-гидроксиметилпирролидин-1-илметил)-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iw
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,169 ммоль) 2-гидроксиметилпирролидином (46 мг, 0,45 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Iw (42,0 мг, 65,6%) в виде твердого вещества желто-коричневого цвета, TCX Rf=0,15 (10% MeOH/CHCl-0,25% EtN), набл. m/z=382 (M+1).
Амид 5-[(2-гидрокси-1-метил-этиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Ix
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (80 мг, 0,27 ммоль) 2-амино-2-пропанолом (22,3 мг, 0,297 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Ix (31,0 мг, 32,3%) в виде твердого вещества цвета слоновой кости, т.пл.=192,7-193,6°C, TCX Rf=0,10 (10% MeOH/CHCl-0,20% EtN), набл. m/z=356 (M+1).
Амид 5-[(2,3-дигидроксипропиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iy
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (80 мг, 0,27 ммоль) 1-амино-2,3-пропилендиолом (27,1 мг, 0,297 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Iy (31,0 мг, 32,3%) в виде бесцветных игл, TCX Rf=0,30 (50% MeOH/CHCl-0,20% EtN), набл. m/z=372 (M+1), 394 (M+Na).
Амид 5-(1,4-диокса-8-аза-спиро[4,5]дек-8-илметил)-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iz
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (80 мг, 0,27 ммоль) 1,4-диокса-8-аза-спиро[4,5]деканом (71,6 мг, 0,50 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Iz (51,0 мг, 44,7%) в виде твердого вещества желто-коричневого цвета, TCX Rf=0,35 (10% MeOH/CHCl-0,20% EtN), набл. m/z=424 (M+1).
Амид 5-[4-(4-фторфенил)пиперазин-1-илметил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iaa
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (80 мг, 0,27 ммоль) 1-(4-фторфенил)пиперазином (90 мг, 0,50 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Iaa (69,0 мг, 55,6%) в виде твердого вещества цвета слоновой кости, TCX Rf=0,4 (10% MeOH/CHCl-0,20% EtN), набл. m/z=461 (M+1).
Амид 5-[(2-циано-4,5-диметоксифениламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iab
3
3
2
2
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,17 ммоль) 2-амино-4,5-диметоксибензонитрилом (89 мг, 0,50 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Iab (28 мг, 36,4%) в виде твердого вещества цвета слоновой кости, TCX Rf=0,1 (2% 7Н NH-MeOH/CHCl), набл. m/z=481 (M+Na).
Амид 3-фенилсульфанил-5-[(3-трифторметилфениламино)метил]-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iac
3
2
2
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,17 ммоль) 3-трифторметиланилином (80 мг, 0,50 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Iac (36 мг, 48,3%) в виде твердого вещества цвета слоновой кости, TCX Rf=0,5 (5% MeOH/CHCl), набл. m/z=442 (M+1).
Амид 5-этиламинометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iad
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (80 мг, 0,27 ммоль) этиламина гидрохлоридом (23,9 мг, 0,30 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Iad (53,0 мг, 60,4%) в виде твердого вещества цвета слоновой кости, TCX Rf=0,1 (10% MeOH/CHCl-0,2% EtN), набл. m/z=326 (M+1).
Амид 3-фенилсульфанил-5-пропиламинометил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iae
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (80 мг, 0,27 ммоль) пропиламина гидрохлоридом (28 мг, 0,30 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Iae (41,0 мг, 44,8%) в виде твердого вещества цвета слоновой кости, TCX Rf=0,1 (10% MeOH/CHCl-0,2% EtN), набл. m/z=340 (M+1).
Амид 5-[(1-карбамоилэтиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iaf
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,17 ммоль) 2-аминопропионамидом (62,3 мг, 0,50 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Iaf (39 мг, 62,9%) в виде твердого вещества цвета слоновой кости, TCX Rf=0,5 (10% MeOH/CHCl-0,2% EtN), набл. m/z=369 (M+1).
Амид 5-[(3-метоксифениламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iag
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,17 ммоль) 3-метоксианилином (61,6 мг, 0,50 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Iag (26 мг, 37,7%) в виде твердого вещества цвета слоновой кости, TCX Rf=0,6 (5% MeOH/CHCl-0,2% EtN), набл. m/z=404 (M+1).
Амид 5-[(4-бутилфениламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iah
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,17 ммоль) 4-бутиланилином (74 мг, 0,50 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Iah (17 мг, 23,4%) в виде твердого вещества цвета слоновой кости, TCX Rf=0,8 (5% MeOH/CHCl-0,2% EtN), набл. m/z=430 (M+1).
Амид 5-[(2-фторфениламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iai
3
2
2
3
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (50 мг, 0,17 ммоль) 2-фторанилином (55 мг, 0,50 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Iai (12 мг, 18,2%) в виде твердого вещества цвета слоновой кости, TCX Rf=0,8 (5% MeOH/CHCl-0,2% EtN), набл. m/z=392 (M+1).
Амид 5-(изопропиламинометил)-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, Iaj
3
3
2
2
Обрабатывают амид 5-формил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты 13 (m=0, R=Ph) (80 мг, 0,27 ммоль) изопропиламином (19,2 мг, 0,32 ммоль), как описано в общем методе X, с получением Iaj (17 мг, 18,6%) в виде твердого вещества цвета слоновой кости, TCX Rf=0,3 (10% 7Н NH-MeOH/CHCl), набл. m/z=362 (M+Na).
Соединения формулы I
2
2
7
2
8
9
где m равно 0, R представляет NH, R представляет CHNRR и X представляет S.
Таблица 1
Пример №
R<sub>1</sub>
R<sub>3</sub>
NR<sub>8</sub>R<sub>9</sub>
Ia
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
NH<sub>2</sub>
Ib
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
Boc-NH
Ic
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
CH<sub>3</sub>NH
Id
H
3-F-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>
CH<sub>3</sub>NH
Ie
H
3-Cl-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>
CH<sub>3</sub>NH
If
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>CH<sub>2</sub>NH
Ig
CH<sub>3</sub>
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
CH<sub>3</sub>NH
Ih
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000009.tif" he="13" wi="28" img-content="undefined" img-format="tif" />
Ii
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000010.tif" he="13" wi="14" img-content="undefined" img-format="tif" />
Ij
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
CH<sub>3</sub>(CH<sub>2</sub>)<sub>2</sub>NH
Ik
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
CH<sub>3</sub>(CH<sub>2</sub>)<sub>3</sub>NH
Il
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000011.tif" he="13" wi="14" img-content="undefined" img-format="tif" />
Im
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
CH<sub>3</sub>(CH<sub>2</sub>)<sub>4</sub>NH
In
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
CH<sub>3</sub>(CH<sub>2</sub>)<sub>6</sub>NH
Io
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000012.tif" he="18" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
Ip
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000013.tif" he="14" wi="29" img-content="undefined" img-format="tif" />
Iq
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000014.tif" he="10" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
Ir
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000015.tif" he="17" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
Is
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000016.tif" he="15" wi="20" img-content="undefined" img-format="tif" />
It
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000017.tif" he="17" wi="20" img-content="undefined" img-format="tif" />
Iu
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000018.tif" he="15" wi="28" img-content="undefined" img-format="tif" />
Iv
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000019.tif" he="15" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
Iw
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000020.tif" he="12" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
Ix
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000021.tif" he="13" wi="22" img-content="undefined" img-format="tif" />
Iy
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000022.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
Iz
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000023.tif" he="14" wi="22" img-content="undefined" img-format="tif" />
Iaa
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000024.tif" he="12" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
Iab
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000025.tif" he="23" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
Iac
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
3-CF<sub>3</sub>-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>NH
Iad
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
CH<sub>3</sub>CH<sub>2</sub>NH
Iae
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
CH<sub>3</sub>(CH<sub>2</sub>)<sub>2</sub>NH
Iaf
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000026.tif" he="15" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
Iag
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
3-CH<sub>3</sub>O-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>NH
Iah
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
4-CH<sub>3</sub>(CH<sub>2</sub>)<sub>3</sub>-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>NH
Iai
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
2-F-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>NH
Iaj
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>CHNH
Получение амидов 6-замещенной 3-арилтиоиндол-2-карбоновой кислоты II
(Схемы 2 и 4)
Амид 6-аминометил-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIa, и трет-бутиловый эфир (2-карбамоил-3-фенилсульфанил-1H-индол-6-илметил)-карбаминовой кислоты, IIb
Искомые соединения IIa и IIb получают, как описано выше в методе синтеза соединений 11a и 11b в соответствии со схемой 2.
Амид 6-(бензиламинометил)-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIc
3
2
2
3
Обрабатывают индол 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (100 мг, 0,24 ммоль) бензальдегидом (0,8 экв., 20,4 мг, 0,198 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIc (80 мг, 56,3%) в виде ТФУ-соли. TCX свободного основания (12% MeOH/CHCl-1,0% NH): Rf=0,40, набл. m/z=388 (M+1).
Амид 6-[(4-нитробензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IId
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (175 мг, 0,42 ммоль) 4-нитробензальдегидом (0,8 экв., 50,8 мг, 0,336 ммоль), как описано в методе IX, с получением IId ((79 мг, 28,7%), выделяемого в виде HCl-соли. TCX свободного основания (12% MeOH/CHCl-1,0% NH): Rf=0,45, набл. m/z=433 (M+1).
Амид 6-[(4-диметиламинобензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIe
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (75 мг, 0,18 ммоль) 4-диметиламинобензальдегидом (0,8 экв., 21,5 мг, 0,144 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIe (35 мг, 27,6%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (12% MeOH/CHCl-1,0% NH): Rf=0,45, набл. m/z=431 (M+1).
Амид 6-[(4-метилбензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIf
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (100 мг, 0,24 ммоль) толуальдегидом (0,8 экв., 23,8 мг, 0,192 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIf (44 мг, 29,9%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-1,0% NH): Rf=0,40, набл. m/z=402 (M+1).
Амид 6-[(4-метоксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIg
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (100 мг, 0,24 ммоль) пара-анисовым альдегидом (0,8 экв., 26,7 мг, 0,192 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIg (42 мг, 27,5%), выделяемого в виде HCl-соли, набл. m/z=418 (M+1).
Амид 6-[(4-бромбензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIh
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (100 мг, 0,24 ммоль) 4-бромбензальдегидом (0,8 экв., 35,9 мг, 0,192 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIh (54 мг, 34,5%), выделяемого в виде HCl-соли в форме желтого порошка, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,50, набл. m/z=466 (M+1).
Амид 6-[(4-хлорбензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIi
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (110 мг, 0,266 ммоль) 4-хлорбензальдегидом (0,8 экв., 30,4 мг, 0,213 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIi (47 мг, 27,7%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,60, набл. m/z=422 (M+1).
Амид 6-{[(бифенил-4-илметил)амино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIj
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (110 мг, 0,266 ммоль) 4-фенилбензальдегидом (0,8 экв., 39,2 мг, 0,213 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIj (40 мг, 21,6%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (5% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,20, набл. m/z=464 (M+1).
Амид 6-[(3-нитробензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIk
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (110 мг, 0,266 ммоль) 3-нитробензальдегидом (0,8 экв., 32,5 мг, 0,213 ммоль,) как описано в методе IX, с получением IIk (48 мг, 27,7%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,55, набл. m/z=433 (M+1).
Амид 6-[(2-нитробензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIl
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (110 мг, 0,266 ммоль) 2-нитробензальдегидом (0,8 экв., 32,5 мг, 0,213 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIl (36 мг, 20,8%) в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,55, набл. m/z=433 (M+1).
Амид 3-фенилсульфанил-6-[(4-трифторметилбензиламино)метил]-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIm
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (110 мг, 0,266 ммоль) 4-трифторметилбензальдегидом (0,8 экв., 37,8 мг, 0,213 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIm (50 мг, 27,5%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,40, набл. m/z=456 (M+1).
Амид 6-[(3-фтор-5-трифторметилбензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIn
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (110 мг, 0,266 ммоль) 3-фтор-5-трифторметилбензальдегидом (0,8 экв., 42,2 мг, 0,213 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIn (38 мг, 20,2%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,25, набл. m/z=474 (M+1).
Амид 6-[(2-аминопропиониламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIo
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (100 мг, 0,24 ммоль) Boc-Ala-OSu (1,10 экв., 76,2 мг, 0,266 ммоль,) как описано в методе XV, с получением Boc-защищенного продукта, затем обрабатывают ТФУ (5,0 мл, 99%) с получением IIo (78 мг, 48,2%) в виде ТФУ-соли, набл. m/z=369 (M+1), 391 (M+Na).
Амид 6-[(2-аминоацетиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIp
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (60 мг, 0,145 ммоль) Boc-Gly-OSu (1,10 экв., 43,5 мг, 0,16 ммоль), как описано в методе XV, с получением Вос-защищенного продукта, затем обрабатывают ТФУ (5,0 мл, 99%) с получением IIp (56 мг, 82,3%) в виде ТФУ-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,20, набл. m/z=355 (M+1).
Амид 6-[(2-амино-3-метилпентаноиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIq
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (60 мг, 0,145 ммоль) Boc-Ile-OSu (1,10 экв., 52,5 мг, 0,16 ммоль), как описано в методе VIII, с получением Вос-защищенного продукт, затем обрабатывают ТФУ (5,0 мл, 99%) с получением IIq (41 мг, 53,9%) в виде ТФУ-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,25, набл. m/z=411 (M+1).
1-[(2-Карбамоил-3-фенилсульфанил-1H-индол-6-илметил)-амид] 5-амида 2-аминопентандиойной кислоты IIr
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (60 мг, 0,145 ммоль) Boc-Gln-OSu (1,10 экв., 54,9 мг, 0,16 ммоль), как описано в методе XV, с получением Вос-защищенного продукта, затем обрабатывают ТФУ (5,0 мл, 99%) с получением IIr (42 мг, 53,8%) в виде ТФУ-соли, набл. m/z=426 (M+1).
Амид 6-{[(2-амино-3-(1H-индол-3-ил)пропиониламино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIs
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (60 мг, 0,145 ммоль) Boc-Trp-OSu (1,10 экв., 64,2 мг, 0,16 ммоль), как описано в методе VIII, с получением Вос-защищенного продукта, затем обрабатывают ТФУ (5,0 мл, 99%) с получением IIs (64 мг, 73,8%) в виде ТФУ-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,15, набл. m/z=484 (M+1).
Амид 6-[(2-амино-3-фенилпропиониламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIt
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (60 мг, 0,145 ммоль) Boc-Phe-OSu (1,10 экв., 58 мг, 0,16 ммоль), как описано в методе XV, с получением Вос-защищенного продукта, затем обрабатывают ТФУ (5,0 мл, 99%) с получением IIt (59 мг, 72,8%) в виде ТФУ-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,20, набл. m/z=445 (M+1).
Амид 6-[(2-амино-4-метилсульфанилбутириламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIu
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (60 мг, 0,145 ммоль) Boc-Met-OSu (1,10 экв., 55,4 мг, 0,16 ммоль), как описано в методе XV, с получением Вос-защищенного продукта, затем обрабатывают ТФУ (5,0 мл, 99%) с получением IIu (58 мг, 73,7%) в виде ТФУ-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,55, набл. m/z=429 (M+1).
Амид 6-{[(2-метоксинафталин-1-илметил)амино]-метил]}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIv
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (110 мг, 0,266 ммоль) 2-метокси-1-нафтальдегидом (0,8 экв., 40,0 мг, 0,213 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIv (48 мг, 35,8%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (15% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,15, набл. m/z=468 (M+1).
Амид 6-[(2,4-диметоксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIw
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (110 мг, 0,266 ммоль) 2,4-диметокси-бензальдегидом (0,8 экв., 36,1 мг, 0,213 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIw (58 мг, 45%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (15% MeOH/CHCl-0,25% NH) Rf=0,15, набл. m/z=448 (M+1).
Амид 6-[(3-феноксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIx
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (110 мг, 0,266 ммоль) 3-феноксибензальдегидом (0,8 экв., 44,4 мг, 0,213 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIx (46 мг, 33,6%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,4, набл. m/z=480 (M+1).
Амид 6-[(3-метоксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIy
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (110 мг, 0,266 ммоль) 3-метоксилбензальдегидом (0,8 экв., 29,9 мг, 0,213 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIy (42 мг, 34,8%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,25, набл. m/z=418 (M+1).
Амид 6-[(2-метилбензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIz
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (110 мг, 0,266 ммоль) 2-метилбензальдегидом (0,8 экв., 27,7 мг, 0,213 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIz (32 мг, 27,6%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,35, набл. m/z=402 (M+1).
Амид 6-[(3-метилбензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIaa
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (110 мг, 0,266 ммоль) 3-метил-бензальдегидом (0,8 экв., 27,7 мг, 0,213 ммоль,) как описано в методе IX, с получением IIaa (53 мг, 45,7%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,4, набл. m/z=402 (M+1).
Амид 6-[(2-фтор-3-трифторметилбензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIab
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (100 мг, 0,24 ммоль) 2-фтор-3-трифторметилбензальдегидом (1,0 экв., 48,5 мг, 0,24 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIab (74 мг, 60,2%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (2% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,3, набл. m/z=474 (M+1).
Амид 6-[(2-метоксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIac
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (100 мг, 0,24 ммоль) 2-метокси-бензальдегидом (1,0 экв., 33,4 мг, 0,24 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIac (48 мг, 43,8%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,40, набл. m/z=418 (M+1).
Амид 6-[(2,6-диаминогексаноиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIad
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (100 мг, 0,242 ммоль) Boc-Lys-(Boc)-OSu (то есть эфиром лизин-N-гидроксисукцинимида с двойной N-Boc-защитой) (1,10 экв., 118 мг, 0,266 ммоль), как описано в методе XV, с получением Вос-защищенного продукта, затем обрабатывают ТФУ (5,0 мл, 99%) с получением IIad (72 мг, 45,6%) в виде ТФУ соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,35, набл. m/z=426 (M+1).
H
3-амино-N-(2-карбамоил-3-фенилсульфанил-1-индол-6-илметил)сукцинамовая кислота, IIae
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (60 мг, 0,145 ммоль) Boc-Asp(OtBu)-OSu (1,10 экв., 61,8 мг, 0,16 ммоль), как описано в методеXV, с получением Вос-защищенного продукта, затем обрабатывают ТФУ (5,0 мл, 99%) с получением IIae (52 мг, 68,1%) в виде ТФУ-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,55, набл. m/z=413 (M+1).
Амид 6-{[(10-хлор-антрацен-9-илметил)амино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIaf
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (90 мг, 0,218 ммоль) 10-хлор-9-антральдегидом (1,0 экв., 52,5 мг, 0,218 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIaf (53 мг, 43,6%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,40, набл. m/z=522 (M+1).
Амид 6-{[(бис-(3-фуран-2-илаллил)амино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIag
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (90 мг, 0,218 ммоль) транс-3-(2-фурил)акролеином (2,0 экв., 53,2 мг, 0,436 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIag (28 мг, 23,5%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,65, набл. m/z=510 (M+1).
Амид 6-[(3,5-дихлор-2-гидроксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIah
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (90 мг, 0,218 ммоль) 2-гидрокси-3,5-дихлорбензальдегидом (1,0 экв., 41,6 мг, 0,218 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIah (37 мг, 33,4%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,5, набл. m/z=509 (M+1).
Амид 6-[(3-бром-4,5-диметоксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIai
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (90 мг, 0,218 ммоль) 3,4-диметокси-5-бромбензальдегидом (1,0 экв., 54 мг, 0,218 ммоль,) как описано в методе IX, с получением IIai (63 мг, 51,4%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,5, набл. m/z=526 (M+1).
Амид 6-[(4-бензилокси-3-метоксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIaj
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (90 мг, 0,218 ммоль) 3-метокси-4-феноксибензальдегидом (1,0 экв., 53 мг, 0,218 ммоль,) как описано в методе IX, с получением IIaj (60 мг, 49,2%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,5, набл. m/z=524 (M+1).
Амид 6-[(3-бензилокси-4-метоксибензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIak
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (90 мг, 0,218 ммоль) 3-бензилокси-4-метоксибензальдегидом (1,0 экв., 53 мг, 0,218 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIak (62 мг, 50,8%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,5, набл. m/z=524 (M+1).
Амид 6-{[(5-нитротиофен-2-илметил)амино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIal
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (90 мг, 0,218 ммоль) 5-нитро-2-тиофенкарбоксиальдегидом (1,0 экв., 34,3 мг, 0,218 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIal (36 мг, 35%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,55, набл. m/z=439 (M+1).
Метиловый эфир 4-{[(2-карбамоил-3-фенилсульфанил-1H-индол-6-илметил)амино]метил}бензойной кислоты, IIam
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (80 мг, 0,194 ммоль) метил-4-формилбензоатом (1,0 экв., 31,85 мг, 0,194 ммоль,) как описано в методе IX, с получением IIam (39 мг, 41,9%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,50, набл. m/z=446 (M+1).
Амид 6-{[(3,3-дифенилаллиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIan
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (80 мг, 0,194 ммоль) β-фенилкоричным альдегидом (1,0 экв., 40,4 мг, 0,194 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIan (28 мг, 27,5%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,50, набл. m/z=490 (M+1).
Амид 3-фенилсульфанил-6-[(4-стирилбензиламино)метил]-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIao
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (90 мг, 0,218 ммоль) транс-4-стильбенкарбоксиальдегидом (1,0 экв., 45,4 мг, 0,218 ммоль,) как описано в методе IX, с получением IIao (25 мг, 21,8%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,6, набл. m/z=490 (M+1).
Амид 6-[(2-фтор-6-трифторметилбензиламино)метил]-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIap
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (90 мг, 0,218 ммоль) 2-трифторметил-6-фторбензальдегидом (1,0 экв., 41,0 мг, 0,218 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIap (22 мг, 19,8%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,6, набл. m/z=474 (M+1).
Амид 6-{[3-(4-гидрокси-3-метоксифенил)аллиламино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIaq
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (90 мг, 0,218 ммоль) 4-гидрокси-3-метоксикоричным альдегидом (1,0 экв., 38,8 мг, 0,218 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIaq (20 мг, 18,5%), выделяемого в виде HCl-соли, набл. m/z=490 (M+1).
Амид 6-({[5-(2-хлорфенил)-фуран-2-илметил]амино}метил)-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIar
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (90 мг, 0,218 ммоль) 5-(2-хлор-фенил)фурфуралем (1,0 экв., 45 мг, 0,218 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIar (28 мг, 24,6%), выделяемого в виде HCl-соли, набл. m/z=488 (M+1).
Амид 6-{[(1-бензосульфонил-1H-пиррол-2-илметил)амино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIas
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (90 мг, 0,218 ммоль) 1-(фенилсульфонил)-2-пирролкарбоксальдегидом (1,0 экв., 51,3 мг, 0,218 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIas (53 мг, 44%), выделяемого в виде HCl-соли, набл. m/z=517 (M+1).
Амид 6-{[бис-(5-нитрофуран-2-илметил)амино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIat
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (90 мг, 0,218 ммоль) 5-нитро-2-фуральдегидом (2,0 экв., 61,5 мг, 0,436 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIat (22 мг, 17,3%), выделяемого в виде HCl-соли, набл. m/z=548 (M+1).
Амид 6-{[(5-нитрофуран-2-илметил)амино]метил}-3-фенилсульфанил-1H-индол-2-карбоновой кислоты, IIau
3
2
2
3
Обрабатывают 11b (схема 4, m=0, R=Ph) (90 мг, 0,218 ммоль) 5-нитро-2-фуральдегидом (1,0 экв., 31 мг, 0,218 ммоль), как описано в методе IX, с получением IIau (43 мг, 43,1%), выделяемого в виде HCl-соли, TCX свободного основания (10% MeOH/CHCl-0,25% NH): Rf=0,5 набл. m/z=423 (M+1).
Таблица 2
Соединения формулы II
2
2
7
2
8
9
где m равно 0, R представляет NH, R представляет CHNRR и X представляет S.
Пример №
R<sub>1</sub>
R<sub>3</sub>
NR<sub>8</sub>R<sub>9</sub>
IIa
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
NH<sub>2</sub>
IIb
H
C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>
Boc-NH
IIc
H
C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>CH<sub>2</sub>NH
IId
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
4-O<sub>2</sub>N-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIe
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
4-(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>N-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIf
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
4-CH<sub>3</sub>-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIg
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
4-CH<sub>3</sub>O-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIh
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
4-Br-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIi
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
4-Cl-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIj
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
4-C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIk
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
3-O<sub>2</sub>N-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIl
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
2-O<sub>2</sub>N-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIm
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
4-CF<sub>3</sub>-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIn
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
3-F-5-CF<sub>3</sub>-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIo
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
CH<sub>3</sub>CH(NH<sub>2</sub>)C(=O)NH
IIp
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
H<sub>2</sub>NCH<sub>2</sub>C(=O)NH
IIq
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000028.tif" he="25" wi="31" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIr
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000029.tif" he="29" wi="37" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIs
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000030.tif" he="29" wi="46" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIt
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000031.tif" he="30" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIu
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000032.tif" he="21" wi="41" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIv
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000033.tif" he="24" wi="43" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIw
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
2,4-(CH<sub>3</sub>O)<sub>2</sub>-C<sub>6</sub>H<sub>3</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIx
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
3-C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>O-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIy
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
3-CH<sub>3</sub>O-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIz
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
2-CH<sub>3</sub>-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIaa
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
3-CH<sub>3</sub>-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIab
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
2-F-3-CF<sub>3</sub>-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIac
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
2-CH<sub>3</sub>O-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIad
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000034.tif" he="23" wi="47" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIae
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000035.tif" he="25" wi="36" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIaf
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000036.tif" he="29" wi="38" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIag
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000037.tif" he="39" wi="37" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIah
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
3,5-(Cl)<sub>2</sub>-2-OH-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIai
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
3-Br-4,5-(CH<sub>3</sub>O)<sub>2</sub>-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIaj
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
4-C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>CH<sub>2</sub>O-3-CH<sub>3</sub>-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIak
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
3-C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>CH<sub>2</sub>O-4-CH<sub>3</sub>-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIal
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000038.tif" he="19" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIam
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000039.tif" he="16" wi="53" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIan
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
(C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>)<sub>2</sub>C=CCH<sub>2</sub>NH
IIao
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000040.tif" he="18" wi="66" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIap
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
2-F-6-CF<sub>3</sub>-C<sub>6</sub>H<sub>4</sub>CH<sub>2</sub>NH
IIaq
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000041.tif" he="24" wi="54" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIar
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000042.tif" he="25" wi="51" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIas
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000043.tif" he="22" wi="48" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIat
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000044.tif" he="24" wi="49" img-content="undefined" img-format="tif" />
IIau
H
C<sub>6</sub>H<sub>5</sub>
<img file="00000045.tif" he="15" wi="41" img-content="undefined" img-format="tif" />
Биологические примеры
33
Анализ фильтрации казеинкиназы эпсилон Р-АТФ для скрининга ингибиторов CK1ε
33
50
Цель: В ходе данного анализа измеряется способность соединения ингибировать фосфорилирование субстрата казеина ферментом казеинкиназой 1ε с использованием анализа фильтрации Р-АТФ in vitro. Соединения тестировали при пяти концентрациях по два раза с тем, чтобы определить значения IC или % ингибирования при 10 мкМ концентрации, которые приведены в таблице 3.
Материалы:
Оборудование:
Лабораторный робот для жидкостей Beckman Biomek 2000
Автоматизированная 96-канальная пипетка Beckman Multimek 96
Вакуумный коллектор Millipore базовый комплект #MAVM0960R
Дозатор жидкостей Titertek Multidrop
Жидкостный сцинтилляционный счетчик Packard TopCount NXT
Планшеты:
Планшета Costar EIA/RIA #9018
Полистирольная планшета с 96 ячейками и U-образным дном Falcon #353910
Фильтрационные планшеты с 96 ячейками Millipore Multiscreen
#MAPHNOB50
Адаптерные планшеты Millipore Multiscreen TopCount #SE3M203V6
Химические реактивы:
EGTA, поставщик SIGMA #E-3889
Казеин (дефосфорилированный), поставщик SIGMA #C-4032
АТФ, поставщик SIGMA #A-7699
DTT, поставщик Fisher Biotech #BP1725
Трихлоруксусная кислота, поставщик SIGMA #T-6399
33
γ-P-АТФ 1мКи / 37 МБк, поставщик Perkin Elmer Life Sciences #NEG-602H
Ферменты:
o
Казеинкиназа 1ε в конечной концентрации 0,58 мг/мл, полученная в процессе ферментации и очистки, которые хорошо известны специалистам в данной области. Хранится в виде 100 мкл аликвот при минус 80C.
Соединения:
Соединения для анализа поставляются в виде замороженных исходных растворов с концентрацией 10 мМ в 100% DMSO.
Условия анализа:
Конечный общий анализируемый объем на одну ячейку, который равен 50 мкл, получают следующим образом:
5 мкл разбавленного исходного раствора соединения (10, 1, 0,1, 0,01 или 0,001 мкM),
5 мкл дефосфорилированного казеина с конечной концентрацией 0,2 мкг/мкл,
20 мкл CK1ε с конечной концентрацией 3 нг/мкл и
33
20 мкл γ-P-АТФ с конечной концентрацией 0,02 мкКи/мкл, смешанной с нерадиоактивной АТФ (конечная концентрация 10 мкM).
Методы:
2
Готовят 500 мл свежего буфера для анализа: 50 мМ трис pH 7,5, 10 мМ MgCl, 2 мМ DTT и 1 мМ EGTA.
Получают соединения для анализа в виде 10 мкл 10 мМ исходного раствора в 100% DMSO. С помощью робота для жидкостей Biomek 2000 получают последовательные разбавления с получением конечных разбавлений веществ 10, 1, 0,1, 0,01 и 0,001 мМ, которые добавляют в количестве 5 мкл в планшеты с U-образным дном Falcon. Обычно тестируют 8 соединений на одной планшете с 96 ячейками, используя в качестве контрольных ряды ячеек 1 и 12. Обычно в скрининг берут 32 соединения, что равнозначно 4 аналитическим планшетам.
Карты аналитических планшет составляются в соответствии со следующей структурой CK1ePlateMap.xls
2
Добавляют 5 мкл указанного соединения, затем добавляют 5 мкл дефосфорилированного казеина (растворенного в дистиллированной H0) (0,2 мкг/мкл) и 20 мкл CK1ε (3 нг/мкл) в соответствующие ячейки.
33
6
Наконец, добавляют 20 мкл γ-P-АТФ (0,02 мкКи/мкл)/10 мкМ нерадиоактивной АТФ (что равно приблизительно 2×10 имп/мин на ячейку).
Встряхивают аналитическую планшету с U-образным дном Falcon, в ячейках которой содержится указанная реакционная смесь объемом 50 мкл, на шейкере типа Vortex и затем инкубируют при комнатной температуре в течение 2 часов.
Через 2 часа останавливают реакцию добавлением 65 мкл ледяной 2 мМ нерадиоактивной АТФ (приготовленной в аналитическом буфере) в ячейки аналитической планшеты с использованием пипетки Beckman Multimek.
2
Одновременно добавляют 25 мкл 100% ледяной TCA (трихлоруксусной кислоты) в дистиллированной HO в соответствующее число фильтрационных планшет Millipore MAPH.
Используя ручной 8-канальный дозатор, переносят 100 мкл реакционной смеси из ячеек планшеты с U-образным дном Falcon в ячейки фильтрационных планшет Millipore MAPH, предварительно обработанные TCA.
Осторожно перемешивают фильтрационные планшеты Millipore MAPH и оставляют при комнатной температуре на срок не менее 30 минут для осаждения белка.
Через 30 минут помещают фильтрационные планшеты в вакуумный коллектор Millipore и фильтруют при давлении не выше 8 мм рт. ст., поскольку в фильтрах MAPH при более высоком давлении возникает воздушная пробка.
Фильтрационные планшеты последовательно промывают и фильтруют 2×150 мкл 20% TCA, 2×150 мкл 10% TCA и 2×150 мкл 5% TCA (всего 6 промывок на планшету/900 мкл на ячейку).
Оставляют планшеты сушиться в течение ночи при комнатной температуре. На следующий день добавляют 40 мкл сцинтилляционной жидкости Packard Microscint-20 на ячейку при помощи дозатора Titertek Multidrop; запечатывают планшеты и измеряют радиоактивность (2 мин на ячейку) на сцинтилляционном счетчике Packard Topcount NXT (получая таким образом значения имп/мин на ячейку).
Расчеты:
1. Регистрируют и заносят данные, выраженные в имп/мин, в специализированную базу расчета и архивации данных (Activity Base, поставляемая IDBS версия 5.0).
2. Столбец 1 в каждой планшете отражает общую активность фосфорилирования фермента в отсутствие любого ингибирующего соединения, а потому соответствует 100%. Столбец 12 отражает любую неспецифическую активность фосфорилирования/остаточную радиоактивность в отсутствие ингибирующего соединения и фермента. Как правило, наблюдается примерно 1% от полного числа импульсов в минуту, которые являются неспецифическими.
50
3. Определяя «полное» и «неспецифическое» число импульсов в минуту для каждой планшеты, можно установить % ингибирования способности фермента фосфорилировать субстрат при каждой концентрации тестового соединения. Такой % данных ингибирования используют для расчета величины IC (концентрация, при которой соединение в состоянии ингибировать активность фермента на 50%) для соединения, используя программу моделирования нелинейных зависимостей, включенную в протокол расчетов Activitybase (DG0027-CK1-D-BL).
m
4. Кинетические исследования в данной аналитической системе показали, что значение K для АТФ составляет 21 мкM.
Анализ активности казеинкиназы 1δ в отношении мембранной аффинности стрептавидина для CKIδ ингибиторов. Цель:
Оценка тестовых соединений для активности CKIδ в планшетах для анализа стрептавидин-биотиновой мембранной аффинности (SAM) (Promega V7542)
Материалы и реактивы
33
HEPES Sigma #H3375 М.В.=238,3; β-глицерофосфат Sigma #G-9891 М.В.=216,0; EDTA 0,5 M, pH 8,0 GibcoBRL; ортованадат натрия ACROS #205330500 М.В.=183,9; DTT (DL-дитиотреитол) Sigma #D-5545 М.В.=154,2; хлорид магния ACROS #41341-5000 М.В.=203,3; АТФ Sigma #A-7699 М.В.=551,1; γP АТФ NEN # NEG602H; казеинкиназа 1δ Sigma #C4455; субстрат казеинкиназы 1 New England Peptide Biotin-RRKDLHDDEEDEAMSITA М.В.=2470
Буфер для киназы (КВ, 100 мл) готовится следующим образом:
50 мМ HEPES, pH 8,0 5 мл 1M исходного раствора
10 мМ MgCl 1 мл 1M исходного раствора
10 мМ β-глицерофосфата 1 мл 1M исходного раствора
2,5 мМ EDTA 500 мкл 500 мМ исходного раствора
1 мМ ортованадата натрия 100 мкл 1M исходного раствора
1 мМ DTT 100 мкл 1 M исходного раствора
вода 92,3 мл
Основную смесь АТФ получают следующим образом:
получают 1 мл 1М раствора АТФ в воде (1М исходный раствор АТФ).
К 12 мл KB:
добавляют 12 мкл 1M раствора ATФ, затем
33
добавляют 12 мкл P ATФ (10 мкКи/мкл), NEG602H, Perkin Elmer
Получают реакционную планшету и проводят анализ следующим образом:
1) добавляют 10 мкл KB на ячейку вместе с тестовым ингибирующим соединением или без него в ячейки реакционной планшеты;
2) добавляют 60 мкл KB на ячейку;
3) добавляют 10 мкл 500 мкM пептидного субстрата на ячейку;
o
4) доводят температуру планшеты до 37C;
5) добавляют 10 мкл разбавленной 1:10 CK1δ на ячейку=0,42 мкг, или 0,68 единиц;
6) инициируют реакцию добавлением 10 мкл основной смеси АТФ на ячейку;
o
7) помещают реакционную планшету в инкубатор при 37C на 10 мин;
8) останавливают реакцию 10 мкл 1M АТФ. Переносят 20 мкл в планшету SAM и выдерживают 10 мин при комнатной температуре;
3
4
9) промывают три раза 100 мкл 2M раствора NaCl, затем три раза 100 мкл 2M раствора NaCl и 1% раствора HPO и после этого - три раза 100 мкл воды на вакуумном коллекторе;
10) сушат фильтрационную планшету под лампой в течение 30 мин;
11) герметизируют дно планшеты и добавляют 20 мкл MicroScint 20;
12) считывают с помощью TOPCOUNT.
Экспериментальная методика клеточного анализа циркадного ритма
Mper1-luc
2
2
Клеточная культура: Наносят культуры фибробластов  Rat-1 (P2C4) каждые 3-4 дня (конфлуентность ~10-20%) на 150 см вентилируемые полистирольные матрасы для культивирования тканей (Falcon #35-5001) и выдерживают в культуральной среде [EMEM (Cellgro #10-010-CV); 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS; Gibco #16000-044); и 50 ед. акт./мл пенициллин-стрептомицина (Cellgro #30-001-C1)] при 37°C и 5% CO. Данные приведены в таблице 3.
mPer1
Mper1-luc
Стабильная трансфекция: Проводят совместную трансфекцию культур фибробластов Rat-1 с конфлуентностью 30-50% вместе с векторами, содержащими селективный маркер на устойчивость к зеоцину для стабильной трансфекции и промотируемый репортерный ген люциферазы mPer-1. Через 24-48 часов культуры переносят в 96-ячеечные планшеты и выдерживают в культуральной среде с добавлением 50-100 мкг/мл зеоцина (Invitrogen #45-0430) в течение 10-14 дней. Оценивают репортерную экспрессию устойчивых к зеоцину стабильных трансфектантов добавлением в культуральную среду 100 мкМ люциферина (Promega #E1603) и анализируя активность люциферазы на сцинтилляционном счетчике TopCount (Packard Model #C384V00). Синхронизируют клоны Rat-1, демонcтрирующие устойчивость к зеоцину и активность люциферазы, определяемую , анафилактическим шоком, добавляя 50% лошадиной сыворотки [HS (Gibco #16050-122)] и оценивая активность циркадного репортера. Для тестирования соединений выбирают фибробласты  Rat-1 клона P2C4.
Mper1-luc
2
2
2
Протокол синхронизации: Переносят фибробласты  Rat-1 (P2C4) (конфлуентность 40-50%) на непрозрачные 96-ячеечные планшеты для культур тканей (PerkinElmer #6005680) и выдерживают в культуральной среде с добавлением 100 мкг/мл зеоцина (Invitrogen #45-0430), до тех пор пока культуры не достигнут 100% конфлуентности (48-72 ч). Синхронизуют культуры 100 мкл синхронизирующей среды [EMEM (Cellgro #10-010-CV); 100 ед. акт./мл пенициллина-стрептомицина (Cellgro #30-001-C1); 50% HS (Gibco #16050-122)] в течение 2 часов при 37°C и 5% CO. После синхронизации культуры промывают 100 мкл EMEM (Cellgro #10-010-CV) в течение 10 минут при комнатной температуре. После промывания заменяют среду 300 мкл CO-независимой средой [CO2I (Gibco #18045-088); 2 мМ L-глутамина (Cellgro #25-005-C1); 100 ед. акт./мл пенициллина-стрептомицина (Cellgro #30-001-C1); 100 мкМ люциферина (Promega #E1603)]. Добавляют соединения, тестируемые на предмет циркадного эффекта, к CO-независимой среде в 0,3% DMSO (конечная концентрация). Сразу же запечатывают культуры пленкой TopSeal-A (Packard #6005185) и переносят для измерения активности люциферазы.
Автоматизированные измерения циркадного репортера: После синхронизации хранят аналитические планшеты при 37°C в инкубаторе тканевых культур (Forma Scientific Model #3914). Оценивают активность люциферазы «in vivo», измеряя относительный выход света по сцинтилляционному счетчику TopCount (Packard Model #C384V00). Переносят планшеты из инкубатора в считыватель с помощью роботизированного манипулятора ORCA (Beckman Instruments) и программного обеспечения автоматизированного регламента SAMI-NT (версия 3.3; SAGIAN/Beckman Instruments).
Δt+1h
Δt+1h
Анализ данных: Используют Microsoft Excel и XLfit (версия 2.0.9; IDBS) для импорта, обработки и графического отображения данных. Проводят анализ периодов, либо определяя интервал между соответстветствующими минимумами выхода света в течение нескольких дней, либо посредством преобразования Фурье. Оба метода позволяют получить практически одинаковые оценки периода для всего диапазона циркадных периодов. Приводят активность как EC, которая представляет собой эффективную микромолярную концентрацию, которая вызывает 1-часовое удлинение периода. Анализируют данные, аппроксимируя гиперболической кривой данные, выраженные как изменение периода (ось y) от концентрации тестового соединения (ось х) в XLfit и интерполируя EC из этой кривой.
Анализ циркадного цикла крыс
-1
Данный анализ позволяет оценить воздействие тестового соединения на циркадный цикл «in vivo». Исследование предполагает использование самцов крыс породы Wistar (Charles River) с начальной массой тела 200-250 г. Прежде чем приступить к тестированию в контролируемой среде, каждое животное размещают индивидуально, после чего поддерживают термонейтральную температуру окружающей среды в пределах 24-28°C в течение 12/12 часов (ч) цикла день/ночь (с включением света в 06:00 ч) и дают неограниченное количество стандартного лабораторного корма и воды. Каждой крысе имплантируют внутрибрюшинный телеметрический передатчик (Minnimitter-VMFH, серия 4000, Sunriver, OR) для мониторинга базовой температуры тела и общей активности. Каждый передатчик имплантируют в соответствии с рекомендациями изготовителя под общим наркозом кетамин/ксилазин (78/13 мг кг, внутрибрюшинно) и дают животным восстановиться в течение 7-10 дней. Для определения внутреннего циркадного цикла каждой особи после периода восстановления животных переводят на постоянный ночной цикл (цикл 0/24 ч, день/ночь) и дают животным возможность свободно перемещаться в течение 7-10 дней до введения тестового соединения. В соответствии со схемой дозирования животные получают либо носитель, либо соединение (внутрибрюшинно, подкожно или перорально) в конкретные моменты ЦВ (цикрадного времени) в течение 48-часового периода. После реализации схемы дозирования за животными устанавливается наблюдение в течение 5-7 дней при постоянном ночном цикле (0/24 часовой цикл день/ночь). Для каждого эксперимента регистрируют брюшную температуру и данные по общей активности через 5-минутные интервалы. Для анализа используют программное обеспечение VitalView и Actiview, поставляемые Minimitter. Строят график регистрируемых брюшинных температур, получаемых для каждой крысы в первый день на горизонтальной линии. Совмещают линию наблюдаемых брюшинных температур с абсциссой циркадного времени (ось х). Откладывают регистрируемые брюшинные температуры для каждого последующего дня как отдельные линии аналогичным образом с получением ординаты (ось у, дни). Соединяют начальный рост базовой температуры тела, который наблюдается ежедневно, прямой линией, что позволяет использовать сразу несколько дней для оценки циркадной фазы в любой заданный день для любой отдельно взятой крысы. Определяют влияние введения препарата на фазу, проводя прямую линию через несколько дней для оценки фазы до и после введения дозы. Лечение активным соединением будет вызывать более заметное смещение между прямой линией, соединяющей ежедневный начальный рост базовой температуры тела до введения соединения, и прямой линией, соединяющей начальный рост базовой температуры тела после введения соединения, относительно линий контрольного введения носителя до и после введения. Для опытных животных вычисляют разницу между такими фазами, экстраполированную на день до введения. Используют тест ANOVA наряду с t-критерием Стьюдента, для того чтобы сравнить циркадные сдвиги средней температуры тела в минутах между группами.
Таблица 3
Биологические данные
Соед. №
Анализ фильтрации казеинкиназы Iε <sup>33</sup>P-АТФK<sub>i </sub>(мкМ)(<sup>*</sup> означает среднее из 2 или более определений)
Клеточный анализEC<sub>Δτ+1h</sub> (мкМ)
Ia
0,07
0,44
Ib
Ic
0,14<sup>*</sup>
Id
0,14
5,67
Ie
0,34
3,34
If
0,71
Ig
4,45
Ih
1,74
Ii
0,24
Ij
0,20<sup>*</sup>
Ik
0,093
Il
0,88
Im
0,064
4,55
In
0,11
5,11
Io
≈10
Ip
0,074
1,87
Iq
0,31
>3
Ir
0,13
>10
Is
0,12<sup>*</sup>
7,85
It
0,45
2,70
Iu
0,60
Iab
>10
Iac
≈10
Iad
0,09
Iae
0,58
Iaf
0,39
Iag
2,23
Iah
4,28*
Iai
6,85
6,91
Iaj
0,54
IIa
0,097
IIb
2,33
IIc
0,72
IId
0,47
IIe
0,73
IIf
0,81
IIg
0,52
IIh
0,74
IIi
0,39
IIj
1,39
IIk
1,19
IIl
1,77
IIm
4,88
IIn
4,99
IIo
0,17
IIp
0,12
IIq
0,15
IIr
0,27
IIs
0,1
IIt
1,28
IIu
IIv
1,01
IIw
0,29
IIx
1,19
IIy
0,38
IIz
0,57
IIaa
0,46
IIab
4,04
IIac
0,24
IIad
0,11*
IIae
0,78
IIaf
4,83
IIag
6,92
IIah
3,50
IIai
0,60
IIaj
2,10
IIak
0,64
IIal
1,21
IIam
2,42
IIan
>10,0
IIao
>10,0
IIap
>10,0
IIaq
0,14
IIar
2,54
IIas
6,25
IIat
>10,0
IIau
0,70