СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АПОЛИПОПРОТЕИНА A-I (АРО A-I)

1. Способ получения Apo A-I из белковой фракции, содержащей Apo A-I (A), включающий
1
4
a) суспендирование белковой фракции, содержащей Apo A-I (A), в буферном растворе (B), содержащем от 15 до 30% линейного или разветвленного C-С спирта (масс/масс), где суспендированная белковая фракция, содержащая Apo A-I (А), имеет рН в диапазоне от 6,4 до 10,0,
(b) удаление примесей из суспензии при поддержании белков Apo A-I в солюбилизированном состоянии,
(с) осаждение Apo A-I из суспензии и
(d) сбор осадка Apo A-I.
1
4
2. Способ по п.1, где буферный раствор (B) содержит 20% линейного или разветвленного C-С спирта (масс/масс).
3. Способ по п.1 или 2, где суспендированная Apo A-I-содержащая белковая фракция (А) имеет рН в диапазоне от 7,2 до 8,8.
4. Способ по любому из пп.1-3, где суспендированная Apo A-I-содержащая белковая фракция (А) имеет рН в диапазоне от 8,1 до 8,5.
5. Способ по п.1 или 2, где суспендированная Apo A-I-содержащая белковая фракция (А) имеет рН в диапазоне от 7,0 до 7,6.
3
6. Способ по любому из пп.1-5, где буферный раствор (В) содержит от 5 до 35 мМ NaHCO.
1
4
7. Способ по любому из пп.1-6, где линейный или разветвленный C-С спирт представляет собой этанол.
8. Способ по любому из пп.1-7, в котором на стадии (а) объемное отношение Apo A-I-содержащей белковой фракции (А) к буферному раствору (B) составляет от 1:1 до 1:5.
9. Способ по любому из пп.1-8, где проводимость суспензии, полученной на стадии (a), составляет менее 5 мСм/см.
1
4
10. Способ по любому из пп.1-9, где примеси удаляют на стадии (b) путем осаждения добавлением линейного или разветвленного C-С спирта до концентрации 55-65% (масс/масс).
1
4
11. Способ по любому из пп.1-10, где температура линейного или разветвленного C-С спирта, добавляемого к суспензии на стадии (b), находится в диапазоне примерно от -5°С до 15°С.
12. Способ по любому из пп.1-11, где примеси удаляют на стадии (b) путем осаждения с последующими фильтрованием, центрифугированием, декантацией, ультрафильтрацией и/или седиментацией.
13. Способ по любому из пп.1-12, в котором на стадии (c) рН суспензии доводят до значения в диапазоне от 4,6 до 5,6.
14. Способ по любому из пп.1-13, в котором на стадии (с) температуру суспензии доводят до значения в диапазоне от -2 до 20°С, чтобы осадить Apo A-I.
15. Способ по любому из пп.1-14, дополнительно включающий в себя стадию(е), на которой проводят делипидирование собранного осадка Apo A-I путем добавления этанола в диапазоне концентраций от 40 до 96% (масс/масс).
16. Apo A-I, полученный с помощью способа, описанного в любом из предшествующих пунктов.
17. Очищенный Apo A-I, содержащий менее 0,3 мг IgA на грамм Apo A-I.
18. Фармацевтическая композиция, содержащая Apo A-I по п.16 или 17 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
19. Способ получения фармацевтической композиции, включающий получение Apo A-I способом по любому из пп.1-15 и объединение Apo A-I с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.
20. Восстановленные HDL, содержащие Apo A-I по п.16 или 17.
21. Фармацевтическая композиция, содержащая восстановленные HDL по п.20 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
22. Способ получения восстановленных HDL, включающий получение Apo A-I способом по любому из пп.1-15, и объединение Apo A-I с липидом с получением восстановленных HDL.
23. Способ получения фармацевтической композиции, включающий получение Apo A-I способом по любому из пп.1-15; объединение Apo A-I с липидом с получением восстановленных HDL; и объединение восстановленных HDL с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем с получением фармацевтической композиции.