СИНТЕТИЧЕСКИЕ ПРОИСХОДЯЩИЕ ИЗ BRASSICA ТРАНЗИТНЫЕ ПЕПТИДЫ ХЛОРОПЛАСТОВ

1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая синтетическую происходящую из Brassica нуклеотидную последовательность, которая кодирует пептид, содержащий непрерывную аминокислотную последовательность первого транзитного пептида хлоропластов Brassica, причем пептид дополнительно содержит непрерывную аминокислотную последовательность второго транзитного пептида хлоропластов.
2. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, дополнительно содержащая представляющую интерес нуклеотидную последовательность, функционально связанную с синтетической происходящей из Brassica нуклеотидной последовательностью.
3. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где первый транзитный пептид хлоропластов Brassica происходит из Brassica napus.
4. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 3, где второй транзитный пептид хлоропластов происходит из Brassica sp., отличного от вида, из которого происходит первый транзитный пептид хлоропластов Brassica.
5. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где второй транзитный пептид хлоропластов происходит из Arabidopsis sp.
6. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 5, где второй транзитный пептид хлоропластов происходит из Arabidopsis thaliana.
7. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где первый транзитный пептид хлоропластов Brassica происходит из
гена 3-енолпирувилшикимат-5-фосфатсинтетазы.
8. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где второй транзитный пептид хлоропластов происходит из гена 3-енолпирувилшикимат-5-фосфатсинтетазы.
9. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где пептид по меньшей мере на 80% идентичен транзитному пептиду хлоропластов, выбранному из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6 и 8.
10. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 9, где пептид по меньшей мере на 85% идентичен транзитному пептиду хлоропластов, выбранному из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6 и 8.
11. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 10, где пептид по меньшей мере на 90% идентичен транзитному пептиду хлоропластов, выбранному из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6 и 8.
12. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 11, где пептид по меньшей мере на 95% идентичен транзитному пептиду хлоропластов, выбранному из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6 и 8.
13. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 12, где пептид по меньшей мере на 98% идентичен транзитному пептиду хлоропластов, выбранному из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6 и 8.
14. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 13, где пептид выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6 и 8.
15. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где
представляющая интерес кодирующая нуклеотидная последовательность не кодирует пептид SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3.
16. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где нуклеотидная последовательность, которая кодирует пептид, специфично гибридизуется с нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6 и 8.
17. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 2, дополнительно содержащая по меньшей мере одну дополнительную нуклеотидную последовательность(и), каждая из которых кодирует транзитный пептид хлоропластов, где дополнительная нуклеотидная последовательность(и) функционально связана с представляющей интерес нуклеотидной последовательностью.
18. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 17, где по меньшей мере одна дополнительная нуклеотидная последовательность(и) происходит из организма, выбранного из группы, состоящей из прокариот, низших фотосинтезирующих эукариот и хлорофитов.
19. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 2, где синтетическая происходящая из Brassica нуклеотидная последовательность и представляющая интерес нуклеотидная последовательность функционально связаны с одной или несколькими регуляторными последовательностями.
20. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 2, где молекула нуклеиновой кислоты кодирует химерный полипептид, содержащий пептид, кодируемый представляющей интерес нуклеотидной последовательностью, и пептид, кодируемый
синтетической происходящей из Brassica нуклеотидной последовательностью.
21. Химерный полипептид, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты по п. 20.
22. Химерный полипептид по п. 21, где пептид, кодируемый представляющей интерес нуклеотидной последовательностью, нацелен в пластиду в содержащей пластиду клетке.
23. Химерный полипептид по п. 22, где полипептид содержит транзитный пептид хлоропластов, который удаляется, когда пептид, кодируемый представляющей интерес нуклеотидной последовательностью, нацеливается в пластиду.
24. Химерный полипептид по п. 21, где пептид, кодируемый представляющей интерес нуклеотидной последовательностью, представляет собой биологически активный пептид.
25. Химерный полипептид по п. 21, где пептид, кодируемый представляющей интерес нуклеотидной последовательностью, представляет собой флуоресцентный пептид.
26. Химерный полипептид по п. 24, где биологически активным пептидом является фермент.
27. Химерный полипептид по п. 24, где биологически активный пептид в норме экспрессируется в пластиде клетки, в которой пептид экспрессируется нативным образом.
28. Химерный полипептид по п. 24, где биологически активный пептид вовлечен в процесс, выбранный из группы, состоящей из устойчивости к гербицидам, устойчивости к вирусам, устойчивости к бактериальным патогенам, устойчивости к насекомым, устойчивости к круглым червям, устойчивости к грибам, силы роста
растений, урожайности растений, температурной устойчивости, устойчивости к условиям почвы, устойчивости к низкому уровню освещенности, устойчивости к низкому уровню воды, устойчивости к высокому уровню воды, устойчивости химической среде, окраске семян, модификации крахмала, синтеза аминокислот, фотосинтеза, синтеза жирных кислот, синтеза масел, синтеза аротиноидов, синтеза терпеноидов, синтеза крахмала и устойчивости к гербицидам.
29. Химерный полипептид по п. 24, где биологически активный пептид выбран из группы, состоящей из зеаксантинэпоксидазы, холинмонооксигеназы, феррохелатазы, десатуразы омега-3 жирных кислот, глутаминсинтетазы, провитамина A, гормонов, белков Bt-токсина и маркеров, пригодных для идентификации растений, содержащих представляющий интерес признак.
30. Химерный полипептид по п. 28, где биологически активный пептид вовлечен в устойчивость к гербицидам.
31. Химерный полипептид по п. 26, где биологически активный пептид выбран из группы, состоящей из: ацетолактазсинтазы (ALS), мутантной ALS, предшественников ALS, 3-енолпирувилшикимат-5-фосфатсинтетазы (EPSPS), CP4 EPSPS и EPSPS класса III.
32. Экспрессирующий вектор растений, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 2.
33. Растительный материал, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 2.
34. Растительный материал по п. 33, где растительный материал выбран из группы, состоящей из клетки растения, ткани растения, культуры ткани растения, культуры каллюса, части растения и
целого растения.
35. Растительный материал по п. 33, дополнительно содержащий полипептид, содержащий пептид.
36. Растительный материал по п. 35, где представляющая интерес нуклеотидная последовательность кодирует часть полипептида, которая нацелена в пластиду в клетке растительного материала.
37. Растительный материал по п. 33, где молекула нуклеиновой кислоты стабильно встроена в геном клетки из растительного материала.
38. Растительный материал по п. 33, где растительным материалом является целое растение.
39. Растительный материал по п. 33, где растительный материал происходит из растения, выбранного из группы, состоящей из Arabidopsis, люцерны, Brassica, боба, брокколи, капусты, моркови, цветной капусты, сельдерея, китайской капусты, хлопка, огурца, баклажана, салата-латука, дыни, гороха, перца, арахиса, картофеля, тыквы обыкновенной, хрена, рапса, шпината, сои, тыквы крупноплодной, сахарной свеклы, подсолнечника, табака, томата, арбуза, кукурузы, лука, риса, сорго, пшеницы, ржи, проса культурного, сахарного тростника, овса, тритикале, проса прутьевидного и травы рулонного газона.
40. Способ получения трансгенного растительного материала, причем способ включает:
получение выделенной молекулы нуклеиновой кислоты по п. 2; и
трансформацию растительного материала молекулой нуклеиновой кислоты.
41. Способ по п. 40, где растительный материал выбран из группы, состоящей из клетки растения, ткани растения, культуры ткани растения, культуры каллюса, части растения и целого растения.
42. Способ по п. 40, где растительный материал не является целым растением.
43. Трансгенный растительный материал, полученный способом по п. 40.
44. Трансгенное растение, регенерировавшее из трансгенного растительного материала по п. 43.
45. Товарный продукт трансгенного растения, изготовленный из растительного материала по п. 43.
46. Трансгенный растительный материал по п. 43, где представляющая интерес нуклеотидная последовательность кодирует биологически активный пептид.
47. Трансгенный растительный материал по п. 46, где биологически активный пептид вовлечен в процесс, выбранный из группы, состоящей из устойчивости к гербицидам, устойчивости к вирусам, устойчивости к бактериальным патогенам, устойчивости к насекомым, устойчивости к круглым червям, устойчивости к грибам, силы роста растений, урожайности растений, температурной устойчивости, устойчивости к условиям почвы, устойчивости к низкому уровню освещенности, устойчивости к низкому уровню воды, устойчивости к высокому уровню воды, устойчивости химической среде, окраске семян, модификации крахмала, синтеза аминокислот, фотосинтеза, синтеза жирных кислот, синтеза масел, синтеза аротиноидов, синтеза терпеноидов, синтеза крахмала и
устойчивости к гербицидам.
48. Трансгенный растительный материал по п. 46, где биологически активный пептид выбран из группы, состоящей из зеаксантинэпоксидазы, холинмонооксигеназы, феррохелатазы, десатуразы омега-3 жирных кислот, глутаминсинтетазы, провитамина A, гормонов, белков Bt-токсина и маркеров, пригодных для идентификации растений, содержащих представляющий интерес признак.
49. Трансгенный растительный материал по п. 47, где биологически активный пептид вовлечен в устойчивость к гербицидам.
50. Трансгенный растительный материал по п. 46, где биологически активный пептид выбран из группы, состоящей из: ацетолактазсинтазы (ALS), мутантной ALS, предшественников ALS, 3-енолпирувилшикимат-5-фосфатсинтетазы (EPSPS), CP4 EPSPS и EPSPS класса III.
51. Трансгенный растительный материал по п. 49, где растительный материал обладает увеличенной резистентностью к гербицидам или устойчивостью к гербицидам по сравнению с растительным материалом дикого типа того же вида.
52. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая происходящее из Brassica средство для нацеливания полипептида на хлоропласт.
53. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 52, дополнительно содержащая представляющую интерес нуклеотидную последовательность, функционально связанную с происходящим из Brassica средством для нацеливания полипептида на хлоропласт.
54. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 53, где молекула нуклеиновой кислоты кодирует химерный полипептид, содержащий пептид, кодируемый представляющей интерес нуклеотидной последовательностью.
55. Химерный полипептид, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты по п. 54.
56. Химерный полипептид по п. 55, где пептид, кодируемый представляющей интерес нуклеотидной последовательностью, нацелен в пластиду в содержащей пластиду клетке.
57. Химерный полипептид по п. 56, где полипептид содержит транзитный пептид хлоропластов, который удаляется, когда пептид, кодируемый представляющей интерес нуклеотидной последовательностью, нацеливается в пластиду.
58. Химерный полипептид по п. 55, где пептид, кодируемый представляющей интерес нуклеотидной последовательностью, представляет собой биологически активный пептид.
59. Полипептид по п. 58, где биологически активный пептид вовлечен в процесс, выбранный из группы, состоящей из устойчивости к гербицидам, устойчивости к вирусам, устойчивости к бактериальным патогенам, устойчивости к насекомым, устойчивости к круглым червям, устойчивости к грибам, силы роста растений, урожайности растений, температурной устойчивости, устойчивости к условиям почвы, устойчивости к низкому уровню освещенности, устойчивости к низкому уровню воды, устойчивости к высокому уровню воды, устойчивости химической среде, окраске семян, модификации крахмала, синтеза аминокислот, фотосинтеза, синтеза жирных кислот, синтеза масел, синтеза аротиноидов,
синтеза терпеноидов, синтеза крахмала и устойчивости к гербицидам.
60. Полипептид по п. 58, где биологически активный пептид выбран из группы, состоящей из зеаксантинэпоксидазы, холинмонооксигеназы, феррохелатазы, десатуразы омега-3 жирных кислот, глутаминсинтетазы, провитамина A, гормонов, белков Bt-токсина и маркеров, пригодных для идентификации растений, содержащих представляющий интерес признак.
61. Полипептид по п. 58, где биологически активный пептид выбран из группы, состоящей из: ацетолактазсинтазы (ALS), мутантной ALS, предшественников ALS, 3-енолпирувилшикимат-5-фосфатсинтетазы (EPSPS), CP4 EPSPS и EPSPS класса III.
62. Экспрессирующий вектор растений, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 53.
63. Растительный материал, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 53.
64. Растительный материал по п. 63, где молекула нуклеиновой кислоты стабильно встроена в геном клетки из растительного материала.
65. Растительный материал по п. 63, где растительным материалом является целое растение.
66. Растительный материал по п. 63, где растительный материал происходит из растения, выбранного из группы, состоящей из Arabidopsis, люцерны, Brassica, боба, брокколи, капусты, моркови, цветной капусты, сельдерея, китайской капусты, хлопка, огурца, баклажана, салата-латука, дыни, гороха, перца, арахиса, картофеля, тыквы обыкновенной, хрена, рапса, шпината, сои, тыквы
крупноплодной, сахарной свеклы, подсолнечника, табака, томата, арбуза, кукурузы, лука, риса, сорго, пшеницы, ржи, проса культурного, сахарного тростника, овса, тритикале, проса прутьевидного и травы рулонного газона.
67. Способ получения трансгенного растительного материала, причем способ включает:
получение выделенной молекулы нуклеиновой кислоты по п. 53; и
трансформацию растительного материала молекулой нуклеиновой кислоты.
68. Способ по п. 67, где растительный материал выбран из группы, состоящей из клетки растения, ткани растения, культуры ткани растения, культуры каллюса, части растения и целого растения.
69. Способ по п. 67, где растительным материалом не является целое растение.
70. Трансгенный растительный материал, полученный способом по п. 67.
71. Трансгенное растение, регенерировавшее из трансгенного растительного материала по п. 70.
72. Растительный материал по п. 70, где трансгенный растительный материал не является целым растением.
73. Товарный продукт трансгенного растения, изготовленный из трансгенного растительного материала по п. 70.
74. Трансгенный растительный материал по п. 70, где представляющая интерес нуклеотидная последовательность кодирует биологически активный пептид.
75. Растительный материал по п. 34, где растительный материал
представляет собой клетку растения, которая неспособна регенерировать с образованием растения.
76. Способ по п. 41, где растительный материал представляет собой клетку растения, которая неспособна регенерировать с образованием растения.