ОПОСРЕДОВАННАЯ НУКЛЕАЗОЙ ЭКСПАНСИЯ ПОВТОРОВ

1. Способ получения модифицированной клетки с увеличенным числом копий повторяющейся последовательности в целевом геномном локусе, предусматривающий:
(а) обеспечение популяции клеток, содержащих последовательность экспансии повторов, содержащую множество копий повторяющейся последовательности в целевом геномном локусе;
(b) введение в популяцию клеток нуклеазного средства или нуклеиновой кислоты, кодирующей нуклеазное средство, причем нуклеазное средство производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв в целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца или 3’-конца последовательности экспансии повторов для получения популяции модифицированных клеток; а также
(c) количественное определение числа копий повторяющейся последовательности в популяции модифицированных клеток и выбор модифицированной клетки, в которой число копий повторяющейся последовательности было увеличено.
2. Способ по п. 1, при котором экзогенная матрица репарации не вводится в популяцию клеток.
3. Способ по п. 1 или 2, при котором целевой сайт нуклеазы находится в пределах приблизительно 50, приблизительно 40, приблизительно 30, приблизительно 20 или приблизительно 10 нуклеотидов от 5’-конца или 3’-конца последовательности экспансии повторов или перекрывается с 5’-концом или 3’-концом последовательности экспансии повторов.
4. Способ по п. 3, при котором целевой сайт нуклеазы находится в пределах приблизительно 25, приблизительно 24, приблизительно 23, приблизительно 22, приблизительно 21, приблизительно 20, приблизительно 19, приблизительно 18, приблизительно 17, приблизительно 16, приблизительно 15, приблизительно 14, приблизительно 13, приблизительно 12, приблизительно 11, приблизительно 10, приблизительно 9, приблизительно 8, приблизительно 7, приблизительно 6, приблизительно 5, приблизительно 4, приблизительно 3 или приблизительно 2 нуклеотидов от 5’-конца или 3’-конца последовательности экспансии повторов или перекрывается с 5’-концом или 3’-концом последовательности экспансии повторов.
5. Способ по п. 4, при котором целевой сайт нуклеазы перекрывается с 5’-концом или 3’-концом последовательности экспансии повторов.
6. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором целевой сайт нуклеазы находится возле 5’-конца последовательности экспансии повторов.
7. Способ по любому из пп. 1-5, при котором целевой сайт нуклеазы находится возле 3’-конца последовательности экспансии повторов.
8. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором целевой сайт нуклеазы находится за пределами последовательности экспансии повторов.
9. Способ по любому из предыдущих пунктов, при котором сайт, в котором нуклеазное средство производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв, находится в пределах приблизительно 50, приблизительно 40, приблизительно 30, приблизительно 20 или приблизительно 10 нуклеотидов от 5’-конца или 3’-конца последовательности экспансии повторов.
10. Способ по п. 9, при котором сайт, в котором нуклеазное средство производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв, находится в пределах приблизительно 25, приблизительно 24, приблизительно 23, приблизительно 22, приблизительно 21, приблизительно 20, приблизительно 19, приблизительно 18, приблизительно 17, приблизительно 16, приблизительно 15, приблизительно 14, приблизительно 13, приблизительно 12, приблизительно 11, приблизительно 10, приблизительно 9, приблизительно 8, приблизительно 7, приблизительно 6, приблизительно 5, приблизительно 4, приблизительно 3 или приблизительно 2 нуклеотидов от 5’-конца или 3’-конца последовательности экспансии повторов.
11. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором сайт, в котором нуклеазное средство производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв, находится возле 5’-конца последовательности экспансии повторов.
12. Способ по любому из пп. 1-10, при котором сайт, в котором нуклеазное средство производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв, находится возле 3’-конца последовательности экспансии повторов.
13. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором сайт, в котором нуклеазное средство производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв, находится за пределами последовательности экспансии повторов.
14. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором целевой сайт нуклеазы сохраняется после репарации двухцепочечного разрыва или одноцепочечного разрыва клеткой.
15. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором репарация двухцепочечного разрыва или одноцепочечного разрыва не приводит к вставкам или делециям вне последовательности экспансии повторов.
16. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором нуклеазное средство производит двухцепочечный разрыв возле 5’-конца или 3’-конца последовательности экспансии повторов.
17. Способ по любому из пп. 1-15, при котором нуклеазное средство представляет собой никазу, которая производит одноцепочечный разрыв возле 5’-конца или 3’-конца последовательности экспансии повторов.
18. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором в клетку вводится первое нуклеазное средство или нуклеиновая кислота, кодирующая первое нуклеазное средство, и второе нуклеазное средство, или нуклеиновая кислота, кодирующая второе нуклеазное средство, причем первое нуклеазное средство производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв в первом целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца последовательности экспансии повторов, а второе нуклеазное средство производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв во втором целевом сайте нуклеазы возле 3’-конца последовательности экспансии повторов.
19. Способ по п. 18, при котором первое нуклеазное средство производит двухцепочечный разрыв в первом целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца последовательности экспансии повторов, а второе нуклеазное средство производит двухцепочечный разрыв во втором целевом сайте нуклеазы возле 3’-конца последовательности экспансии повторов.
20. Способ по п. 18, при котором первое нуклеазное средство производит одноцепочечный разрыв в первом целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца последовательности экспансии повторов, а второе нуклеазное средство производит одноцепочечный разрыв во втором целевом сайте нуклеазы возле 3’-конца последовательности экспансии повторов.
21. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором нуклеазное средство представляет собой нуклеазу цинковых пальцев (ZFN), эффекторную нуклеазу, подобную активатору транскрипции (TALEN), или белок, ассоциированный с короткими палиндромными повторами, регулярно расположенными группами (CRISPR) (Cas), и направляющую РНК.
22. Способ по п. 21, при котором нуклеазное средство представляет собой белок Cas и направляющую РНК.
23. Способ по п. 22, при котором белок Cas представляет собой белок Cas9.
24. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором последовательность экспансии повторов представляет собой гетерологичную последовательность экспансии повторов.
25. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором последовательность экспансии повторов содержит по меньшей мере приблизительно 10, по меньшей мере приблизительно 20, по меньшей мере приблизительно 30, по меньшей мере приблизительно 40, по меньшей мере приблизительно 50, по меньшей мере приблизительно 60, по меньшей мере приблизительно 70, по меньшей мере приблизительно 80 или по меньшей мере приблизительно 90 копий повторяющейся последовательности.
26. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором копии повторяющейся последовательности являются смежными в последовательности экспансии повторов.
27. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором повторяющаяся последовательность представляет собой тринуклеотидный повтор, тетрануклеотидный повтор, пентануклеотидный повтор, гексануклеотидный повтор или додекануклеотидный повтор.
28. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором повторяющаяся последовательность содержит любую из SEQ ID NO: 1-12.
29. Способ по п. 28, при котором:
(i) повторяющаяся последовательность содержит SEQ ID NO: 2, а целевой геномный локус представляет собой локус HTT, AR, ATN1, ATXN1, ATXN2, ATXN3, CACNA1A, ATXN7, PPP2R2B или TBP;
(ii) повторяющаяся последовательность содержит SEQ ID NO: 3, а целевой геномный локус представляет собой локус FMR1;
(iii) повторяющаяся последовательность содержит SEQ ID NO: 4, а целевой геномный локус представляет собой локус DMPK, JPH3, ATXN8 или TCF4;
(iv) повторяющаяся последовательность содержит SEQ ID NO: 5, а целевой геномный локус представляет собой локус FXN;
(v) повторяющаяся последовательность содержит SEQ ID NO: 6, а целевой геномный локус представляет собой локус AFF2;
(vi) повторяющаяся последовательность содержит SEQ ID NO: 7, а целевой геномный локус представляет собой локус PABPN1;
(vii) повторяющаяся последовательность содержит SEQ ID NO: 8, а целевой геномный локус представляет собой локус CNBP;
(viii) повторяющаяся последовательность содержит SEQ ID NO: 9, а целевой геномный локус представляет собой локус ATXN10;
(ix) повторяющаяся последовательность содержит SEQ ID NO: 10, а целевой геномный локус представляет собой локус TK2 или BEAN1;
(x) повторяющаяся последовательность содержит SEQ ID NO: 11, а целевой геномный локус представляет собой локус NOP56;
(xi) повторяющаяся последовательность содержит SEQ ID NO: 1, а целевой геномный локус представляет собой локус C9ORF72 или
(xii) повторяющаяся последовательность содержит SEQ ID NO: 12, а целевой геномный локус представляет собой локус CSTB.
30. Способ по п. 29, при котором повторяющаяся последовательность содержит SEQ ID NO: 1, а целевой геномный локус представляет собой локус C9ORF72.
31. Способ по п. 30, при котором нуклеазное средство представляет собой белок Cas9 и направляющую РНК, а целевой сайт нуклеазы содержит SEQ ID NO: 28 или 33.
32. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором клетки представляют собой клетки отличных от человека животных.
33. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором клетки представляют собой эмбриональные стволовые клетки отличных от человека животных, мотонейроны, полученные из эмбриональных стволовых клеток, клетки головного мозга, кортикальные клетки, нейрональные клетки, мышечные клетки, клетки сердца или половые клетки.
34. Способ по любому из пп. 1-32, при котором клетки представляют собой эмбрионы на одноклеточной стадии отличных от человека животных.
35. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором клетки представляют собой клетки грызунов.
36. Способ по п. 35, при котором клетки представляют собой клетки мыши или клетки крысы.
37. Способ по п. 36, при котором клетки представляют собой клетки мыши.
38. Способ по п. 37, при котором клетки представляют собой эмбриональные стволовые клетки мыши или эмбрионы мыши на одноклеточной стадии.
39. Способ по любому из пп. 1-31, при котором клетки представляют собой человеческие индуцированные плюрипотентные стволовые клетки.
40. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором клетки находятся in vitro.
41. Способ по любому из пп. 1-38, при котором клетки находятся in vivo.
42. Способ по любому из предшествующих пунктов, причем способ предусматривает несколько циклов стадий (а)-(с), причем популяция клеток на стадии (а) в каждом цикле после первого цикла представляет собой клональную популяцию клеток, размноженных из модифицированной клетки, выбранной на стадии (c) предыдущего цикла.
43. Способ по п. 42, причем способ предусматривает по меньшей мере 3 цикла или по меньшей мере 4 цикла.
44. Способ по п. 42 или 43, причем способ выполняется в первый раз с первым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв в первом целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца последовательности экспансии повторов, для получения первой модифицированной клетки, и способ выполняется второй раз на первой модифицированной клетке со вторым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв во втором целевом сайте нуклеазы возле 3’-конца последовательности экспансии повторов, для получения второй модифицированной клетки.
45. Способ по п. 42 или 43, причем способ выполняется в первый раз с первым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв в первом целевом сайте нуклеазы возле 3’-конца последовательности экспансии повторов, для получения первой модифицированной клетки, и способ выполняется второй раз на первой модифицированной клетке со вторым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв во втором целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца последовательности экспансии повторов, для получения второй модифицированной клетки.
46. Способ по п. 42 или 43, причем способ осуществляют в первый раз с первым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв в первом целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца последовательности экспансии повторов, для получения первой модифицированной клетки, и способ выполняется второй раз на первой модифицированной клетке со вторым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв во втором целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца последовательность экспансии повторов, для получения второй модифицированной клетки.
47. Способ по п. 42 или 43, причем способ выполняется в первый раз с первым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв в первом целевом сайте нуклеазы возле 3’-конца последовательности экспансии повторов, для получения первой модифицированной клетки, и этот способ выполняется второй раз на первой модифицированной клетке со вторым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв во втором целевом сайте нуклеазы возле 3’-конца последовательности экспансии повторов, для получения второй модифицированной клетки.
48. Способ по п. 42 или 43, причем способ выполняется в первый раз с первым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв в первом целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца последовательности экспансии повторов, для получения первой модифицированной клетки, и способ выполняется второй раз на первой модифицированной клетке со вторым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв во втором целевом сайте нуклеазы возле 3’-конца последовательности экспансии повторов, для получения второй модифицированной клетки.
49. Способ по п. 42 или 43, причем способ выполняется в первый раз с первым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв в первом целевом сайте нуклеазы возле 3’-конца последовательности экспансии повторов, для получения первой модифицированной клетки, и способ выполняется второй раз на первой модифицированной клетке со вторым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв во втором целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца последовательности экспансии повторов, для получения второй модифицированной клетки.
50. Способ по п. 42 или 43, причем способ выполняется в первый раз с первым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв в первом целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца последовательности экспансии повторов, для получения первой модифицированной клетки, и способ выполняется второй раз на первой модифицированной клетке со вторым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв во втором целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца последовательности экспансии повторов, для получения второй модифицированной клетки.
51. Способ по п. 42 или 43, причем способ выполняется в первый раз с первым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв в первом целевом сайте нуклеазы возле 3’-конца последовательности экспансии повторов, для получения первой модифицированной клетки, и этот способ выполняется второй раз на первой модифицированной клетке со вторым нуклеазным средством, которое производит двухцепочечный разрыв во втором целевом сайте нуклеазы возле 3’-конца последовательности экспансии повторов, для получения второй модифицированной клетки.
52. Способ по п. 42 или 43, причем способ выполняется в первый раз с первым нуклеазным средством, которое производит одноцепочечный разрыв в первом целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца последовательности экспансии повторов, для получения первой модифицированной клетки, и способ выполняется второй раз на первой модифицированной клетке со вторым нуклеазным средством, которое производит одноцепочечный разрыв во втором целевом сайте нуклеазы возле 3’-конца последовательности экспансии повторов, для получения второй модифицированной клетки.
53. Способ по п. 42 или 43, причем способ выполняется в первый раз с первым нуклеазным средством, которое производит одноцепочечный разрыв в первом целевом сайте нуклеазы возле 3’-конца последовательности экспансии повторов, для получения первой модифицированной клетки, и способ выполняется второй раз на первой модифицированной клетке со вторым нуклеазным средством, которое производит одноцепочечный разрыв во втором целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца последовательности экспансии повторов, для получения второй модифицированной клетки.
54. Способ по п. 42 или 43, причем способ выполняется в первый раз с первым нуклеазным средством, которое производит одноцепочечный разрыв в первом целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца последовательности экспансии повторов, для получения первой модифицированной клетки, и способ выполняется второй раз на первой модифицированной клетке со вторым нуклеазным средством, которое производит одноцепочечный разрыв во втором целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца последовательности экспансии повторов, для получения второй модифицированной клетки.
55. Способ по п. 42 или 43, причем способ выполняется в первый раз с первым нуклеазным средством, которое производит одноцепочечный разрыв в первом целевом сайте нуклеазы возле 3’-конца последовательности экспансии повторов, для получения первой модифицированной клетки, и способ выполняется второй раз на первой модифицированной клетке со вторым нуклеазным средством, которое производит одноцепочечный разрыв во втором целевом сайте нуклеазы возле 3’-конца последовательности экспансии повторов, для получения второй модифицированной клетки.
56. Способ по пп. 46, 47, 50, 51, 54 или 55, при котором первый целевой сайт нуклеазы является таким же, как и второй целевой сайт нуклеазы.
57. Способ по любому из предшествующих пунктов, при котором целевой сайт нуклеазы находится за пределами последовательности экспансии повторов, причем целевой сайт нуклеазы находится в пределах приблизительно 50, приблизительно 40, приблизительно 30, приблизительно 20 или приблизительно 10 нуклеотидов от 5’-конца или 3’-конца последовательности экспансии повторов, и причем нуклеазное средство представляет собой белок Cas9 и направляющую РНК.
58. Способ по п. 57, при котором нуклеазное средство представляет собой никазу, которая производит одноцепочечный разрыв возле 5’-конца или 3’-конца последовательности экспансии повторов, причем целевой сайт нуклеазы сохраняется после репарации клеткой одноцепочечного разрыва и причем репарация одноцепочечного разрыва не приводит к вставкам или делециям за пределами последовательности экспансии повторов.
59. Отличное от человека животное или клетка отличного от человека животного, содержащая в своем геноме гетерологичную последовательность экспансии гексануклеотидных повторов, вставленную в эндогенный локус C9orf72, причем гетерологичная последовательность экспансии гексануклеотидных повторов содержит более чем приблизительно 100 повторов гексануклеотидной последовательности, представленной в виде SEQ ID NO: 1.
60. Отличное от человека животное или клетка отличного от человека животного, по п. 59, в которой гетерологичная последовательность экспансии гексануклеотидных повторов содержит по меньшей мере приблизительно 300 повторов гексануклеотидной последовательности, представленной в виде SEQ ID NO: 1.
61. Отличное от человека животное или клетка отличного от человека животного по п. 60, в которой экспансия гексануклеотидных повторов содержит по меньшей мере приблизительно 500 повторов гексануклеотидной последовательности, представленной в виде SEQ ID NO: 1.
62. Отличное от человека животное или клетка отличного от человека животного по п. 61, в которой экспансия гексануклеотидных повторов содержит по меньшей мере приблизительно 600 повторов гексануклеотидной последовательности, представленной в виде SEQ ID NO: 1.
63. Отличное от человека животное или клетка отличного от человека животного по любому из пп. 59-62, в которой повторы являются смежными в гетерологичной последовательности экспансии повторов.
64. Отличное от человека животное или клетка отличного от человека животного по любому из пп. 59-63, в которой гетерологичная последовательность экспансии гексануклеотидных повторов расположена между первым некодирующим эндогенным экзоном и экзоном 2 эндогенного локуса C9orf72.
65. Отличное от человека животное или клетка отличного от человека животного по любому из пп. 59-64, в которой эндогенный локус C9orf72 содержит нуклеотидную последовательность C9ORF72 человека.
66. Отличное от человека животное или клетка отличного от человека животного по п. 65, в которой нуклеотидная последовательность C9ORF72 человека содержит SEQ ID NO: 46 и/или SEQ ID NO: 47.
67. Отличное от человека животное или клетка отличного от человека животного по любому из пп. 59-66, причем отличное от человека животное является грызуном или клетка отличного от человека животного является клеткой грызуна.
68. Отличное от человека животное или клетка отличного от человека животного по п. 67, причем грызун представляет собой крысу или мышь или причем клетка отличного от человека животного представляет собой клетку крысы или клетку мыши.
69. Отличное от человека животное или клетка отличного от человека животного по любому из пп. 59-68, причем отличное от человека животное или клетка отличного от человека животного является гетерозиготной по гетерологичной последовательности экспансии гексануклеотидных повторов.
70. Отличное от человека животное или клетка отличного от человека животного по любому из пп. 59-69, причем отличное от человека животное или клетка отличного от человека животного проявляет следующее:
(а) повышенная экспрессия транскриптов C9orf72, которые сохраняют интронную последовательность, по сравнению с контрольным отличным от человека животным или контрольной клеткой отличного от человека животного, содержащей локус C9orf72 дикого типа; и/или
(b) увеличенное количество фокусов РНК, по сравнению с контрольным отличным от человека животным или контрольной клеткой отличного от человека животного, содержащей локус C9orf72 дикого типа; и/или
(c) повышенное содержание белков с дипептидными повторами, по сравнению с контрольным отличным от человека животным или контрольной клеткой отличного от человека животного, содержащей локус C9orf72 дикого типа.
71. Клетка отличного от человека животного по любому из пп. 59-70, причем клетка отличного от человека животного представляет собой эмбриональную стволовую клетку, мотонейрон, полученный из эмбриональных стволовых клеток, клетку головного мозга, кортикальную клетку, нейронную клетку, мышечную клетку, клетку сердца или половую клетку.
72. Клетка отличного от человека животного по любому из пп. 59-70, причем клетка отличного от человека животного представляет собой эмбрион на одноклеточной стадии.
73. Клетка отличного от человека животного по любому из пп. 59-72, причем клетка отличного от человека животного находится in vitro.
74. Клетка отличного от человека животного по любому из пп. 59-72, причем клетка отличного от человека животного находится in vivo.
75. Отличное от человека животное по любому из пп. 59-70, причем отличное от человека животное содержит в своем геноме зародышевой линии гетерологичную последовательность экспансии гексануклеотидных повторов, вставленную в эндогенный локус C9orf72.
76. Геном отличного от человека животного, содержащий гетерологичную последовательность экспансии гексануклеотидных повторов, вставленную в эндогенный локус C9orf72, причем гетерологичная последовательность экспансии гексануклеотидных повторов содержит более чем приблизительно 100 повторов гексануклеотидной последовательности, представленной в виде SEQ ID NO: 1.
77. Ген C9orf72 отличного от человека животного, содержащий гетерологичную последовательность экспансии гексануклеотидных повторов, причем гетерологичная последовательность экспансии гексануклеотидных повторов содержит более чем приблизительно 100 повторов гексануклеотидной последовательности, представленной в виде SEQ ID NO: 1.
78. Нуклеазное средство для применения в способе получения модифицированной клетки с увеличенным числом копий повторяющейся последовательности в целевом геномном локусе, которая содержит последовательность экспансии повторов, содержащую множество копий повторяющейся последовательности в целевом геномном локусе, причем нуклеазное средство предназначено для создания двухцепочечного разрыва или одноцепочечного разрыва в целевом сайте нуклеазы возле 5’-конца или 3’-конца последовательности экспансии повторов.
79. Способ оценки терапевтического кандидата для лечения заболевания или состояния, связанного с последовательностью экспансии гексануклеотидных повторов в локусе C9orf72, предусматривающий:
(а) введение средства-кандидата отличному от человека животному по любому из пп. 59-70 и 75 или в клетку отличного от человека животного по любому из пп. 59-74;
(b) выполнение одного или нескольких анализов для определения того, оказывает ли средство-кандидат эффект на один или несколько признаков или симптомов, связанных с заболеванием или состоянием; а также
(c) идентификацию средства-кандидата, которое оказывает влияние на один или несколько признаков или симптомов, связанных с заболеванием или состоянием, в качестве терапевтического кандидата.
80. Способ по п. 79, при котором средство-кандидат вводят in vivo отличному от человека животному, и один или несколько анализов проводят in vitro в клетках, выделенных из отличного от человека животного после введения средства-кандидата.
81. Способ по п. 79, при котором средство-кандидат вводят in vitro в мотонейрон, полученный из отличных от человеческих эмбриональных стволовых клеток.
82. Способ по любому из пп. 79-81, при котором один или несколько анализов включают в себя количественную полимеразную цепную реакцию (qPCR) для обнаружения содержащих интрон транскриптов РНК C9orf72.
83. Способ по любому из пп. 79-82, при котором один или несколько анализов включают в себя измерение фокусов РНК, содержащих смысловой или антисмысловой транскрипт РНК C9orf72, причем фокусы РНК необязательно измеряют флуоресцентной гибридизацией in situ.
84. Способ по любому из пп. 79-83, при котором один или несколько анализов включают в себя измерение накопления белков с дипептидными повторами, необязательно причем белки с дипептидными повторами представляют собой белки с дипептидными повторами полиGA или белки с дипептидными повторами полиGP, и необязательно причем накопление белков с дипептидными повторами измеряется иммуногистохимическим способом.