СПОСОБЫ СОХРАНЕНИЯ ФУНКЦИИ ПОЧЕК С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИНГИБИТОРОВ КСАНТИН ОКСИДОРЕДУКТАЗЫ
METHODS FOR PRESERVING RENAL FUNCTION WITH USING XANTHINE OXIDOREDUCTASE

Сведения о родственных заявках
По настоящей заявке испрашивается приоритет заявки №60/858509, поданной 13 ноября 2006 г, содержание которой включено путем отсылки в настоящую заявку.
Область техники
Настоящее изобретение относится к способам лечения субъектов с целью сохранения функции почек. В частности, настоящее изобретение включает введение субъекту, нуждающемуся в сохранении функции почек, терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного вещества, ингибирующего ксантин оксидоредуктазу, или его соли с целью сохранения функции почек у таких пациентов.
Предпосылки изобретения
Было отмечено, что пациенты, страдающие заболеваниями, такими как гиперурикемия, подагра, острый подагрический артрит, хронический подагрический артрит, узелковая подагра, мочекислая нефропатия и/или нефролитиаз (почечнокаменная болезнь), также иногда могут страдать от ослабления или нарушения функции почек, в особенности, при прогрессии заболевания с течением времени (см. Johnson, Blood Purif., 24:67-70 (2006), Siu, L., et al, AJKD, 47(l):51-99 (2006) и Iseki, L, et al, AJKD, 44(4):642-650 (2004)).
В общем, функция почек субъекта считается нормальной при уровне креатинина в сыворотке крови ≤1,5 мг/дл и клиренсе креатинина ≥50 мл/мин. При возрастании уровня креатинина в сыворотке крови выше 1,5 мг/дл или при падении клиренса креатинина ниже 50 мл/мин считается, что субъект страдает почечной недостаточностью. Еще одним показателем функции почек является скорость клубочковой фильтрации (GFR). GFR рассчитывают путем сравнения уровня креатинина в моче с результатами анализа крови; GFR считается более точным показателем состояния почек. Для большинства пациентов величина GFR более 60 мл/мин считается адекватной. Значительное падение величины GFR по сравнению с результатом предыдущего анализа может служить ранним индикатором заболевания почек, требующего медицинского вмешательства.
В экспериментальных моделях на животных функцию почек можно оценить путем измерения выделения белка с мочой и гломерулярной гемодинамики (включая GFR всей почки, GFR отдельного нефрона, давление и ток в клубочках, афферентное сопротивление и эфферентное сопротивление) с использованием техники микропункции почки, известной специалистам в уровне техники наряду с другими способами. Кроме того, для дальнейшего понимания причин и этиологии заболеваний почек могут использоваться гистологическая оценка вакуолярной дегенерации проксимальных почечных канальцев, тубулоинтерстициальный фиброз и утолщение сосудистой стенки афферентных артерий.
Для подагры характерно симптоматическое отложение кристаллов уратов в тканях суставов в результате перенасыщения уратами внеклеточных жидкостей, биохимическое отклонение, характеризующееся гиперурикемией (уровень уратов в сыворотке превышает 7,0 мг/дл у мужчин и 6,0 мг/дл у женщин). У пациентов, страдающих подагрой, с частотой 10-25% встречаются почечные конкременты или «камни», и у приблизительно 1% последних мочекислые почечные конкременты развиваются ежегодно.
Долговременное восстановление нормальных уровней уратов в сыворотке обычно предполагает использование антигиперурикемического агента. Терапия, понижающая уровень мочевой кислоты, рекомендуется субъектам, страдающим подагрой и одним или более следующих нарушений: острый подагрический артрит, хронический подагрический артрит, узелковая подагра, мочекислая нефропатия и/или нефролитиаз (почечнокаменная болезнь). Известны многие терапии, направленные на понижение уровня уратов в сыворотке крови, однако их воздействие на функцию почек полностью не изучено.
Сущность изобретения
В одном воплощении настоящее изобретение относится к способу сохранения функции почек у нуждающегося в этом субъекта, где способ включает стадию введения субъекту терапевтически эффективного количества ингибитора ксантин оксидоредуктазы или его фармацевтически приемлемой соли.
В другом воплощении настоящее изобретение относится к способу сохранения функции почек у нуждающегося в этом субъекта, где способ включает стадию введения субъекту терапевтически эффективного количества вещества или его фармацевтически приемлемой соли, где указанное вещество имеет формулу:
1
2
1
10
1
10
где R и R - каждый независимо представляет собой водород, гидроксильную группу, COOH-группу, незамещенную или замещенную С-С алкильную группу, незамещенную или замещенную С-Салкоксигруппу, незамещенную или замещенную гидроксиалкоксигруппу, фенилсульфинильную группу или цианогруппу (-CN);
3
4
где R и R - каждый независимо представляет собой водород или A, B, C или D, приведенные ниже:
1
2
3
4
где Т связывает A, B, C или D с ароматическим кольцом, приведенным выше на R, R, R или R.
5
6
1
10
1
10
где R и R - каждый независимо представляют собой водород, гидроксильную группу, COOH-группу, незамещенную или замещенную С-С алкильную группу, незамещенную или замещенную С-С алкоксигруппу, незамещенную или замещенную гидроксиалкоксигруппу, COO-глюкоронид или COO-сульфат;
7
8
1
10
1
10
где Rи R - каждый независимо представляет собой водород, гидроксильную группу, COOH-группу, незамещенную или замещенную С-С алкильную группу, незамещенную или замещенную С-С алкоксигруппу, незамещенную или замещенную гидроксиалкоксигруппу, COO-глюкоронид или COO-сульфат;
9
где Rпредставляет собой незамещенную пиридильную группу или замещенную пиридильную группу; и
10
10
где R представляет собой водород или низшую алкильную группу, низшую алкильную группу, замещенную пивалокси-группой, и в каждом случае Rсвязывается с одним из атомов азота в 1, 2, 4- триазольном кольце, приведенном выше.
В другом воплощении настоящее изобретение относится к способу сохранения функции почек у субъекта, нуждающегося в этом, где способ включает стадию введения субъекту терапевтически эффективного количества вещества или его фармацевтически приемлемой соли, где указанное вещество имеет формулу:
11
12
11
12
где R и R - каждый независимо представляет собой водород, замещенную или незамещенную низшую алкильную группу, замещенный или незамещенный фенил, или R и R могут совместно образовывать 4-8-членное углеродное кольцо вместе с атомом углерода, к которому они присоединены;
13
где R представляет собой водород или замещенную или незамещенную низшую алкильную группу;
14
16
2
17
17
16
17
17
где R представляет собой один или два радикала, выбранные из группы, состоящей из водорода, галогена, нитрогруппы, замещенного или незамещенного низшего алкила, замещенного или незамещенного фенила, -OR или -SONRR, где R представляет собой водород, замещенный или незамещенный низший алкил, фенилзамещенный низший алкил, карбоксиметил или его сложный эфир, гидроксиэтил или его эфир, или аллил; R и R - каждый независимо представляет собой водород или замещенный, или незамещенный низший алкил;
15
где R представляет собой водород или фармацевтически активную группу, образующую сложный эфир;
где А представляет собой линейный или разветвленный углеводородный радикал, содержащий от одного до пяти атомов углерода;
где B представляет собой галоген, кислород или этилендитиогруппу;
где Y представляет собой кислород, серу, азот или замещенный азот;
где Z представляет собой кислород, азот или замещенный азот; и
пунктирная линия обозначает одинарную связь, двойную связь или две одинарные связи.
Субъект, получающий лечение согласно способам, описанным в настоящем изобретении, может страдать одним или несколькими из следующих заболеваний: гиперурикемия, подагра, острый подагрический артрит, хронический подагрический артрит, узелковая подагра, мочекислая нефропатия или нефролитиаз. Кроме того, пациент может страдать прогрессирующей болезнью почек, включая, но не ограничиваясь тубулоинтерстициальными заболеваниями почек, повреждениями клеток почечных канальцев, нефритом, гломерулярными заболеваниями, гломерулонефритами, ишемией почек, ишемическим-реперфузионным повреждением почек, сосудистыми заболеваниями почек, тромбозом почечной артерии или вены, интерстициальным нефритом, токсическими гломерулопатиями, камнями в почках/нефролитиазом, длительной гипертонией, диабетической нефропатией, застойной сердечной недостаточностью, нефропатией, обусловленной серповидноклеточной анемией, и другими дискразиями крови, нефропатией, обусловленной гепатитом, ВИЧ, парвовирусом и вирусом BK (полиомавирус человека), кистозными заболеваниям почек, нефритом при волчанке, мембранным гломерулонефритом, мембранопролиферативным гломерулонефритом, фокальным гломерулярным склерозом, васкулитом, криоглобулинемией, ANCA (антинейтрофильные цитоплазматические аутоантитела)-положительным васкулитом, ANCA-отрицательным васкулитом, амилоидозом, множественной миеломой, болезнью почек, связанной с отложением легкой цепи, осложнениями пересадки почки, хроническим отторжением почечного трансплантата, хронической нефропатией трансплантата и хроническими почечными эффектами иммунодепрессантов. У субъектов, подвергающихся лечению, также может наблюдаться нарушение функции почек, выявляемое стандартными диагностическими методами. Например, у субъектов, подвергающихся лечению, может наблюдаться уровень креатинина в сыворотке ≥1,5 мг/дл или клиренс креатинина ≤50 мл/мин. Также у субъектов, подвергающихся лечению, может наблюдаться GFR≤60 мг/мин. Однако субъект, подвергающийся лечению, необязательно должен страдать определенным заболеванием или нарушением, если установлено, что сохранение или стабилизация функции почек необходимы или желательны с медицинской точки зрения.
Краткое описание чертежей
На фигуре 6 представлено влияние фебуксостата (Fx) на скорость клубочковой фильтрации у крыс после нефрэктомии (RK) с одновременной индуцированной оксоновой кислотой (OA) гиперурикемией и без нее.
На фигуре 7 представлено влияние фебуксостата (Fx) на гломерулярную гемодинамику у крыс после нефрэктомии (RK) с одновременной индуцированной оксоновой кислотой (OA) гиперурикемией и без нее.
На фигуре 8 представлено влияние фебуксостата (Fx) на морфологию почечных артериол у крыс после нефрэктомии (RK) с одновременной индуцированной оксоновой кислотой (OA) гиперурикемией и без нее.
На фигуре 9 представлено влияние фебуксостата (Fx) на тубулоинтерстициальный фиброз почек у крыс после нефрэктомии (RK) с одновременной индуцированной оксоновой кислотой (OA) гиперурикемией и без нее.
Подробное описание изобретения
Определения
Термины «вводить», «вводимый», «введенный» или «введение» означают любой способ предоставления лекарственного средства (такого как ингибитор ксантин оксидоредуктазы или его соль) субъекту или пациенту. Введение может производиться любым путем, известным специалистам в области техники. Такие пути включают, но не ограничиваются пероральным, защечным, внутривенным, подкожным, внутримышечным, ингаляционным и т.д. введением.
При использовании в настоящей заявке словосочетания «прогрессирующее заболевание почек», «терминальная стадия заболевания почек», «хроническая почечная недостаточность» (CRF), «хроническое заболевание почек» (CKD), используемые в настоящей заявке взаимозаменяемо, относятся к любым заболеваниям или дисфункциям почек, проявляющимся в течение времени, в отличие от внезапных событий (то есть острое заболевание почек или почечная недостаточность), приводящим к постепенному снижению функции почек у субъекта. Например, прогрессирующее заболевание почек, терминальная стадия заболевания почек, хроническое заболевание почек или хроническое повреждение почек включает, но не ограничивается заболеваниями или дисфункциями, вызванными тубулоинтерстициальными заболеваниями почек, повреждениями клеток почечных канальцев, хроническими инфекциями, хроническим воспалением, нефритом, гломерулярными заболеваниями, гломерулонефритами, ишемией почек, ишемическим-реперфузионным повреждением почек, сосудистыми заболеваниями, тромбозом почечной артерии или вены, интерстициальным нефритом, лекарственными препаратами, токсинами, травмами, камнями в почках/нефролитиазом, хронической гиперурикемией, длительной гипертонией, диабетом, застойной сердечной недостаточностью, нефропатией, обусловленной серповидноклеточной анемией и другими дискразиями крови, нефропатией, обусловленной гепатитом, ВИЧ, парвовирусом и вирусом BK (полиомавирус человека), кистозными заболеваниями почек, врожденными пороками, обструкцией, злокачественными заболеваниями, заболеваниями почек неясной природы, нефритом при волчанке, мембранным гломерулонефритом, мембранопролиферативным гломерулонефритом, фокальным гломерулярным склерозом, васкулитом, криоглобулинемией, ANCA (антинейтрофильные цитоплазматические аутоантитела)-положительным васкулитом, ANCA-отрицательным васкулитом, амилоидозом, множественной миеломой, болезнью почек, связанной с отложением легкой цепи, осложнениями пересадки почки, хроническим отторжением почечного трансплантата, хронической нефропатией трансплантата и хроническими почечными эффектами иммунодепрессантов.
При использовании в настоящей заявке термин «фармацевтически приемлемый» означает вещества или соединения, которые по результатам тщательной медицинской оценки могут применяться в контакте с тканями человека или низшими животными и не обладать чрезмерной токсичностью, не вызывать чрезмерного раздражения или аллергической реакции и т.д. и характеризуются приемлемым соотношением пользы и риска.
При использовании в настоящей заявке термин «субъект» означает животное, предпочтительно млекопитающее, включая человека. Термины «пациент» и «субъект» в настоящей заявке могут употребляться взаимозаменяемо.
Термины «терапевтически эффективное количество» или «профилактически эффективное количество» лекарственного средства (то есть по меньшей мере одного ингибитора ксантин оксидоредуктазы или его соли) означает количество лекарственного средства, нетоксичное, но достаточное для достижения желаемого эффекта сохранения функции почек у субъекта. Другими словами, эти термины означают достаточное количество, например, композиции, вещества, ингибирующего ксантин оксидоредуктазу, или состава, необходимого для сохранения функции почек, применимого с разумным соотношением пользы к риску к любому способу лечения.
Как и с другими лекарственными препаратами, следует понимать, что тотальная дневная доза фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению будет определяться лечащим врачом пациента по результатам тщательной медицинской оценки. Специфическая, терапевтически эффективная или профилактически эффективная дозировка для каждого конкретного пациента будет зависеть от ряда факторов, включая заболевание, подвергающееся лечению, и тяжесть заболевания; активность конкретных применяемых веществ, конкретную применяемую композицию; возраст, вес, общее состояние здоровья, пол и диету пациента; время введения, путь введения и скорость выведения конкретного применяемого вещества; лекарственные препараты, применяемые в комбинации или одновременно с конкретным применяемым веществом; и других факторов, известных специалисту в медицине. Например, специалист в уровне техники может начать с дозировок вещества, недостаточных для достижения желаемого терапевтического эффекта, и постепенно повышать дозировку до достижения желаемого эффекта.
В соответствии с этим, «эффективное» или «профилактическое» количество лекарственного препарата будет варьировать от субъекта к субъекту в зависимости от возраста и общего состояния здоровья пациента, конкретного лекарственного препарата или препаратов и т.д. Таким образом, не всегда возможно определить точное «терапевтически эффективное количество» или «профилактически эффективное количество». Однако специалист в области техники может определить подходящее «терапевтически эффективное количество» или «профилактически эффективное количество» в каждом конкретном случае.
Термины «лечить» и «лечение» означают ослабление выраженности и/или частоты симптомов, устранение симптомов и/или их первопричины, предотвращение появления симптомов и/или их первопричины и улучшение или восстановление повреждений. Таким образом, например, «лечение» пациента включает предотвращение определенного заболевания или нежелательного физиологического события у предрасположенного к ним пациента, а также лечение пациента с клинически выраженными симптомами путем индукции торможения или регресса нарушения или заболевания.
При использовании в настоящей заявке термин «ингибитор ксантин оксидоредуктазы» означает любое вещество, (1) представляющее собой ингибитор ксантин оксидоредуктазы, такой как, но не ограничивающейся, ксантиноксидазой; и (2) химическая структура которого не содержит пурина (т.е. «непуриновое» соединение). Термин «ингибитор ксантин оксидоредуктазы», как определено в настоящей заявке, также включает метаболиты, полиморфы, сольваты и неактивные формы примерных веществ, описываемых Формулами I и II ниже. Примеры ингибиторов ксантин оксидоредуктазы включают, но не ограничиваются 2-[4-(2-карбоксипропокси)-3-цианофенил]-4-метил-5-тиазокарбоксикислотой и соединениями, имеющими следующие Формулу I или Формулу II:
Вещества, имеющие Формулу I:
1
2
1
10
1
10
где R и R - каждый независимо представляет собой водород, гидроксильную группу, COOH-группу, незамещенную или замещенную С-С алкильную группу, незамещенную или замещенную С-Салкоксигруппу, незамещенную или замещенную гидроксиалкоксигруппу, фенилсульфинильную группу, или цианогруппу (-CN);
3
4
где R и R - каждый независимо представляет собой водород или A, B, C или D, приведенные ниже:
1
2
3
4
где Т связывает или присоединяет A, B, C или D к ароматическому кольцу, приведенному выше на R, R, R или R.
5
6
1
10
1
10
где R и R - каждый независимо представляет собой водород, гидроксильную группу, COOH-группу, незамещенную или замещенную С-С алкильную группу, незамещенную или замещенную С-С алкоксигруппу, незамещенную или замещенную гидроксиалкоксигруппу, COO-глюкоронид или COO-сульфат;
7
8
1
10
1
10
где Rи R - каждый независимо представляет собой водород, гидроксильную группу, COOH-группу, незамещенную или замещенную С-С алкильную группу, незамещенную или замещенную С-С алкоксигруппу, незамещенную или замещенную гидроксиалкоксигруппу, COO-глюкоронид или COO-сульфат;
9
где Rпредставляет собой незамещенную пиридильную группу или замещенную пиридильную группу; и
10
10
где R представляет собой водород или низшую алкильную группу, низшую алкильную группу, замещенную пивалокси-группой, и в каждом случае Rсвязывается с одним из атомов азота в 1, 2, 4- триазольном кольце, приведенном выше на Формуле I.
Вещества, имеющие Формулу II:
11
12
11
12
где R и R - каждый независимо представляет собой водород, замещенную или незамещенную низшую алкильную группу, замещенный или незамещенный фенил (замещенный фенил в составе этой Формулы II означает фенил, замещенный галогеном или низшим алкилом и т.д. Примеры включают, но не ограничиваются пара-толилом и пара-хлорфенилом), или R и R могут вместе образовывать 4-8-членное углеродное кольцо вместе с атомом углерода, к которому они присоединены;
13
где R представляет собой водород или замещенную или незамещенную низшую алкильную группу;
14
16
2
17
17
16
17
17
где R представляет собой один или два радикала, выбранные из группы, состоящей из водорода, галогена, нитрогруппы, замещенной или незамещенной низшей алкильной группы, замещенного или незамещенного фенила (замещенный фенил в Формуле II означает фенил, замещенный галогеном или низшим алкилом, и т.д. Примеры включают, но не ограничиваются пара-толилом и пара-хлорфенилом), -OR или -SONRR, где R представляет собой водород, замещенный или незамещенный низший алкил, фенилзамещенный низший алкил, карбоксиметил или его сложный эфир, гидроксиэтил или его эфир, или аллил; R и R - каждый независимо представляет собой водород или замещенную или незамещенную низшую алкильную группу;
15
где R представляет собой водород или фармацевтически активную группу, образующую сложный эфир;
где А представляет собой линейный или разветвленный углеводородный радикал, содержащий от одного до пяти атомов углерода;
где B представляет собой галоген, кислород или этилендитиогруппу;
где Y представляет собой кислород, серу, азот или замещенный азот;
где Z представляет собой кислород, азот или замещенный азот; и
пунктирная линия обозначает одинарную связь, двойную связь или две одинарные связи (например, если В означает этилендитиогруппу, пунктирная линия в структуре кольца может означать две одинарные связи).
1
7
При использовании в настоящей заявке термин «низший алкил (низшая алкильная группа)» означает С-Салкильную группу, включая, но не ограничиваясь метилом, этилом, н-пропилом, изопропилом, бутилом, изобутилом, вторбутилом, трет-бутилом, пентилом, изопентилом, гексилом, гепталом и т.д.
При использовании в настоящей заявке термин «низшая алкоксигруппа» означает группы, образованные путем связывания низшей алкильной группы с атомом кислорода, включая, но не ограничиваясь метокси-, этокси-, пропокси-, изопропокси-, бутокси-, изобутокси-, пентокси-, гексокси-, гептоксигруппой и т.д.
При использовании в настоящей заявке термин «низшая алкилтиогруппа» означает группы, образованные путем связывания низшего алкила с атомом серы.
При использовании в настоящей заявке термин «галоген» означает фтор, хлор, бром и йод.
При использовании в настоящей заявке термин «замещенный пиридил» означает пиридильную группу, которая может быть замещена галогеном, цианогруппой, низшей алкильной группой, низшей алкоксигруппой или низшей алкилтиогруппой.
При использовании в настоящей заявке термин «4-8-членное углеродное кольцо» означает циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил и т.д.
15
2
15
3
15
2
8
4
8
8
12
6
12
2
12
При использовании в настоящей заявке термин «фармацевтически приемлемая группа, образующая сложный эфир» означает группу, связывающуюся с карбоксильной группой сложноэфирной связью. Такие группы, образующие сложный эфир, могут выбираться из карбокси-защитных групп, обычно используемых для изготовления фармацевтически активных веществ, в особенности, неактивных форм лекарственных препаратов. Для настоящего изобретения указанная группа должна выбираться из групп, способных связываться с веществами, имеющими Формулу II, где R представляет собой водород, с помощью сложноэфирной связи. Получающиеся сложные эфиры эффективно повышают стабильность, растворимость и абсорбцию в желудочно-кишечном тракте соответвующих неэстеризованных форм указанных соединений, имеющих Формулу II, а также продлевать время, в течение которого в крови сохраняется их эффективный уровень. Кроме того, сложноэфирная связь может легко расщепляться при значениях pH, характерных для жидкостей тела, или с помощью ферментов in vivo с высвобождением биологически активной формы вещества, имеющего Формулу II. Предпочтительные фармацевтически приемлемые группы, образующие сложный эфир, включают, но не ограничиваются ими -1-(кислородзамещенные)-С-С алкильные группы, например, линейные, разветвленные, закольцованные или частично закольцованные алканоилоалкильные группы, такие как ацетоксиметил, ацетоксиэтил, пропионилоксиметил, пивалоилоксиметил, пивалоилоксиэтил, циклогексанацетоксиэтил, циклогексанкарбонилоксициклогексилметил и т.д, С-С алкоксикарбонилоксиалкильные группы, такие как этоксикарбонилоксиэтил, изопропоксикарбонилоксиэтил, изопропоксикарбонилоксипропил, t-бутоксикарбонилоксиэтил, изопентилоксикарбонилоксипропил, циклогексилоксикарбонилоксиэтил, циклогексилметоксикарбонилоксиэтил, борнилоксикарбонилоксиизопропил и т.д., С-С алкоксиалкилы, такие как метоксиметил, метоксиэтил и т.д., С-С оксациклоалкилы, такие как тетрагидропиранил, тетрагидрофуранил, замещенные С-С аралкилы, например, фенацил, фталидил и т.д., С-С арилы, например, фенилксилил, инданил и т.д., С-С алкенилы, например, аллил, (2-оксо-1,3-диоксолил)метил и т.д., и [4,5-дигидро-4-оксо-1H-пиразоло[3,4-d]пиритидин-1-ил]метил и т.д.
16
В R в Формуле II термин «сложный эфир» при использовании в словосочетании «сложный эфир карбоксиметила» означает сложный эфир, образованный низшим алкилом, такой как метиловый или этиловый сложный эфир; а термин «эфир», используемый в словосочетании «эфир гидроксиэтила», означает эфир, образованный путем замещения атома водорода гидроксильной группы в гидроксиэтильной группе алифатической или ароматической алкильной группой, такой как бензил.
Карбокси-защитные группы могут замещаться различными способами. Примеры заместителей включают атом галогена, алкильные группы, алкоксигруппы, алкилтиогруппы и карбоксигруппы.
При использовании в настоящей заявке термин «линейный или разветвленный углеводородный радикал» в определении А в Формуле II выше означает метилен, этилен, пропилен, метилметилен или изопропилен.
При использовании в настоящей заявке заместитель в «замещенном азоте» в определениях Y и Z в Формуле II выше представляет собой водород, низший алкил или ацил.
При использовании в настоящей заявке термин «фенил-замещенный низший алкил» означает низшую алкильную группу, замещенную фенилом, таким как бензил, фенэтил или фенилпропил.
2
4
При использовании в настоящей заявке термин «неактивная форма» означает производное веществ, приведенных выше на Формуле I и II, которые включают группы, расщепляемые химически или метаболически и путем сольволизиса, или при физиологических условиях превращаются в вещества, фармацевтически активные in vivo. Сложные эфиры карбоксикислот являются одним из примеров неактивных форм, которые могут использоваться для лекарственных форм согласно настоящему изобретению. Неактивные формы в виде метиловых сложных эфиров могут быть получены с помощью реакции вещества, имеющего вышеописанную формулу, в среде, такой как метанол, с кислым или основным катализатором эстерификации (например, NaOH, HSO). Неактивные формы в виде этиловых соединений получаются сходным образом с использованием этанола вместо метанола.
Примеры веществ, имеющих вышеприведенную Формулу I, представляют собой 2-[3-циано-4-(2- метилпропокси)фенил]-4-метилтиазол-5-карбоновую кислоту (также известную как «фебуксостат»), 2-[3-циано-4-(3-гидрокси-2-метилпропокси)фенил]-4-метил-5-тиазолкарбоновую кислоту, 2-[3-циано-4-(2-гидрокси-2-метилпропокси)фенил]-4-метил-5-тиазолкарбоновую кислоту, 2-(3-циано-4-гидроксифенил)-4-метил-5-тиазолкарбоновую кислоту, 2-[4-(2-карбоксипропокси)-3-цианофенил]- 4-метил-5-тиазолкарбоновую кислоту, 1-(3-циано-4-(2,2-диметилпропокси)фенил)-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту, 1-3-циано-4-(2,2-диметилпропокси)фенил]-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту, пиразоло [1,5-a]-1,3,5-триазин-4-(1Η)-он, 8-[3-метокси-4-(фенилсульфинил)фенил]-натриевую соль (±) или 3-(2-метил-4-пиридил)-5-циано-4-изобутоксифенил)-1,2,4-триазол.
Предпочтительные вещества, имеющие вышеприведенную Формулу I, представляют собой 2-[3-циано-4-(2-метилпропокси)фенил]-4-метилтиазол-5-карбоновую кислоту, 2-[3-циано-4-(3-гидрокси-2- метилпропокси)фенил]-4-метил-5-тиазолкарбоновую кислоту, 2-[3-циано-4-(2-гидрокси-2- метилпропокси)фенил]-4-метил-5-тиазолкарбоновую кислоту, 2-(3-циано-4-гидроксифенил)-4-метил-5-тиазолкарбоновую кислоту, 2-[4-(2-карбоксипропокси)-3-цианофенил]-4-метил-5-тиазолкарбоновую кислоту. Также было обнаружено, что эти предпочтительные вещества в терапевтически эффективных количествах не оказывают влияния на активность ни одного из следующих ферментов, участвующих в метаболизме пуринов и пиримидинов: гуанин деаминаза, гипоксантин-гуанин фосфорибозилтрансфераза, пурин нуклеотид-фосфорилаза, оротат фосфорибозилтрансфераза или оротидин-5-монофосфат декарбоксилаза (то есть не являются «селективными» ни для одного из этих ферментов, участвующих в метаболизме пуринов и пиримидинов). Способы определения активности каждого из вышеописанных ферментов описаны в Yasuhiro Takano, et al, Life Sciences, 76:1835-1847 (2005). Эти предпочтительные вещества также называются в литературе непуриновые селективные ингибиторы ксантин оксидазы (NP/SIXO).
Примеры веществ, имеющих вышеприведенную Формулу I, описаны в патенте США № 5268386 и EP 0415566 A1.
За исключением пиразоло [1,5-a]-1,3,5-триазин-4-(1Η)-она, 8-[3-метокси-4-(фенилсульфинил)фенил]-натриевой соли (±), способы получения веществ, ингибирующих ксантин оксидоредуктазу, имеющих Формулы I и II, для использования в способах согласно настоящему изобретению, известны из уровня техники и описаны, например, в патентах США №№ 5268386, 5614520, 6225474, 7074816, а также в EP 0 415 566 A1 и в публикациях Ishibuchi, S. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 11:879-882 (2001), каждая из этих публикаций включена в настоящую заявку путем отсылки. Другие вещества, ингибирующие ксантин оксидоредуктазу, могут быть обнаружены в тестах с использованием ксантин оксидоредуктазы и ксантина, если такие возможные соединения ингибируют превращение ксантина в мочевую кислоту. Такие тесты хорошо известны из уровня техники.
Пиразоло [1,5-a]-1,3,5-триазин-4-(1Η)-он, 8-[3-метокси-4-(фенилсульфинил)фенил]-натриевая соль (±) производится Otsuka Pharmaceutical Co. Ltd. (Tokyo, Japan) и описана в следующих публикациях: Uematsu T., et al, "Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Properties of a Novel Xanthine Oxidase Inhibitor, BOF-4272, in Healthy Volunteers, J. Pharmacology and Experimental Therapeutics, 270:453-459 (август 1994 г.), Sato, S., A Novel Xanthine Deydrogenase Inhibitor (BOF-4272). In Purine and Pyrimidine Metabolism in Man, т. VII, ч. A, под ред. P. A. Harkness, стр.135-138, Plenum Press, New York. Пиразоло [1,5-a]-1,3,5-триазин-4-(1Η)-он, 8-[3-метокси-4-(фенилсульфинил)фенил]-натриевая соль (±) может быть получена с помощью стандартных методов, известных из уровня техники.
Описание изобретения
Как уже кратко упоминалось выше, настоящее изобретение относится к способам сохранения функции почек у нуждающихся в этом субъектов. Было обнаружено, что класс соединений, известных как ингибиторы ксантин оксидоредуктазы, может применяться не только с целью понижения уровня уратов в сыворотке крови субъектов, но и для сохранения функции почек у указанных субъектов в течение длительного времени.
Поскольку ингибиторы ксантин оксидоредуктазы согласно настоящему изобретению эффективно понижают уровень уратов в сыворотке крови, эти соединения могут использоваться для лечения субъектов, страдающих гиперурикемией, подагрой, острым подагрическим артритом, хроническим подагрическим артритом, узелковой подагрой, мочекислой нефропатией и/или нефролитиазом. Такое лечение включает введение достаточных количеств ингибитора ксантин оксидоредуктазы для быстрого снижения уровня мочевой кислоты у пациента (т.е. в течение недели с начала лечения ингибитором ксантин оксидоредуктазы (см. Becker M, Kisicki J, Khosravan R, Wu J, Mulford D, Hunt B, MacDonald P, Joseph-Ridge N., Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids, 23(8 & 9):1111-1116 (октябрь 2004 г.)) и сохранения пониженного уровня уратов в сыворотке крови субъекта в течение длительного периода времени, предпочтительно в течение по меньшей мере 4 недель (см. Becker MA, Schumacher HR Jr, Wortmann RL, MacDonald PA, Palo WA, Eustace D, Vernillet L, Joseph-Ridge N, Arthritis Rheum., 52(3):916-923 (март 2005 г.)), более предпочтительно по меньшей мере в течение года, еще более предпочтительно по меньшей мере в течение двух лет и еще более предпочтительно в течение более 30 месяцев (см. Becker MA, Schumacher HR Jr, Wortmann RL, MacDonald PA, Eustace D, Palo WA, Streit J, Joseph- Ridge N., NEnglJMed, 354(6):1532-1533 (апрель 2006 г.)).
Было обнаружено, что введение ингибиторов ксантин оксидоредуктазы в количествах, эффективно снижающих уровень уратов в сыворотке крови субъекта в течение таких длительных периодов времени также оказывается терапевтически эффективным в отношении сохранения функции почек у субъекта в течение этого времени. Сохранение функции почек может оцениваться известными способами, такими как определение уровня креатинина, клиренса креатинина и GFR. Следует понимать, что сохранение функции почек подразумевает не только лучшее функционирование почек у субъектов, получающих ингибиторы ксантин оксидоредуктазы по сравнению с субъектами, получающими плацебо, но также поддержание функции почек достаточно близко к исходному уровню, то есть на стабильном уровне, необязательно улучшение функции почек от пониженного или ослабленного уровня до адекватного уровня. Другими словами, в то время как введение ингибиторов ксантин оксидоредуктазы эффективно для сохранения функции почек у субъекта на исходном уровне, т.е. стабилизации функции почек, оно необязательно эффективно улучшает функцию почек выше исходного уровня. Тем не менее, поддержание существующего уровня функции почек важно для субъектов, страдающих от заболеваний, таких как гиперурикемия, подагра, острый подагрический артрит, хронический подагрический артрит, узелковая подагра, мочекислая нефропатия и/или нефролитиаз, поскольку может замедлять прогрессию заболевания почек у таких пациентов.
При использовании GFR в качестве показателя функции почек сохранение функции почек субъекта означает поддержание GFR субъекта на уровне по меньшей мере около 75% или более по сравнению с исходным уровнем GFR субъекта; более предпочтительно на уровне по меньшей мере около 80% или более по сравнению с исходным уровнем GFR субъекта; и еще более предпочтительно на уровне по меньшей мере около 90% или более по сравнению с исходным уровнем GFR субъекта.
Кроме того, также было обнаружено, что введение ингибиторов ксантин оксидоредуктазы согласно настоящему изобретению также может использоваться для сохранения функции почек у субъектов, страдающих прогрессирующим заболеванием почек. Такие субъекты также могут страдать или не страдать гиперурикемией, подагрой, острым подагрическим артритом, хроническим подагрическим артритом, узелковой подагрой, мочекислой нефропатией и/или нефролитиазом. Лечение субъектов, страдающих прогрессирующим заболеванием почек, включает введение достаточного количества ингибитора ксантин оксидоредуктазы для быстрого эффекта поддержания или улучшения функции почек у субъекта (т.е. в течение двух недель с начала лечения ингибитором ксантин оксидоредуктазы) и поддержания улучшенной функции почек в течение длительного периода времени, предпочтительно по меньшей мере в течение 4 недель, более предпочтительно по меньшей мере в течение года, еще более предпочтительно по меньшей мере в течение двух лет и еще более предпочтительно в течение более 30 месяцев. Описанные выше в настоящей заявке способы оценки сохранения функции почек также могут использоваться для оценки сохранения функции почек у субъектов, страдающих прогрессирующим заболеванием почек. Следует понимать, что сохранение функции почек подразумевает не только лучшее функционирование почек у субъектов, получающих ингибиторы ксантин оксидоредуктазы по сравнению с субъектами, получающими плацебо, но также поддержание функции почек достаточно близко к исходному уровню, то есть на стабильном уровне, необязательно улучшение функции почек от пониженного или ослабленного уровня до адекватного уровня. Другими словами, в то время как введение ингибиторов ксантин оксидоредуктазы эффективно для сохранения функции почек у субъекта на исходном уровне, т.е. стабилизации функции почек, оно необязательно эффективно улучшает функцию почек выше исходного уровня. Тем не менее, поддержание существующего уровня функции почек важно для субъектов, страдающих прогрессирующим заболеванием почек, поскольку может замедлять прогрессию заболевания у таких пациентов.
Для применения в способах согласно настоящему изобретению рассматриваются композиции, содержащие по меньшей мере один ингибитор ксантин оксидоредуктазы. При использовании эксципиентов и лекарственных форм, описанных ниже, рецептуры, содержащие такие комбинации, выбираются специалистом в уровне техники. Далее, специалистам в области техники известно, что различные покрытия или другие техники сепарации могут применяться в тех случаях, когда комбинация веществ несовместима.
Соединения для использования в соответствии со способами согласно настоящему изобретению могут быть предоставлены в виде фармацевтически приемлемых солей неорганических или органических кислот. Фармацевтически приемлемые соли хорошо известны из уровня техники. Например, фармацевтически приемлемые соли детально описываются в работе S. M. Berge et al., J. Pharmaceutical Sciences, 66: 1 et seq. (1977). Соли могут готовиться in situ в процессе конечного выделения и очистки соединения или независимо путем реакции свободного основания с подходящей органической кислотой. Типичные кислотно-аддитивные соли включают ацетат, адипат, альгинат, цитрат, аспартат, бензоат, бензенсульфонат, бисульфат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, диглюконат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, фумарат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат (изотионат), лактат, малеат, метансульфонат, никотинат, 2-нафталенсульфонат, оксалат, пальмитоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, тиоцианат, фосфат, глутамат, бикарбонат, пара-толуенсульфонат и ундеканоат. Кроме того, основные азот-содержащие группы могут быть переведены в четвертичное состояние с помощью таких агентов, как низшие алкилгалиды, такие как метил-, этил-, пропил- и бутилхлориды, бромиды и йодиды; диалкилсульфаты, такие как диметил-, диэтил-, дибутил- и диамилсульфаты; длинноцепочечные галиды, такие как децил-, лаурил-, миристил- и стеарилхлориды, бромиды и йодиды; алкиларилгилалиды как бензил- и фенэтилбромиды и другие. Таким образом получают растворимые или диспергированные в воде или масле продукты. Примеры кислот, которые могут применяться для образования фармацевтически приемлемых аддитивных солей включают такие неорганические кислоты, как соляная, бромистоводородная, серная и фосфорная кислоты и такие органические кислоты, как щавелевая, малеиновая, янтарная и лимонная кислоты.
Основно-аддитивные соли могут готовиться in situ во время конечного выделения и очистки соединений путем реакции вещества, содержащего карбоновую кислоту, с подходящим основанием, таким как гидроксид, карбонат или бикарбонат фармацевтически приемлемого катиона металла или аммиаком, или органическим первичным, вторичным или третичным амином. Фармацевтически приемлемые соли включают, но не ограничиваются катионами на основе щелочных или щелочноземельных металлов, таких как соли лития, натрия, калия, кальция, магния или им подобных и нетоксичных катионов на основе четвертичных аммониев и аминов, включая в том числе аммоний, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний, метиламмоний, диметиламмоний, триметиламмоний, триэтиламмоний, диэтиламмоний и этиламмоний. Другие типичные органические амины, применимые для образования основно-аддитивных солей, включают этилендиамин, этаноламин, диэтаноламин, пиперидин, пиперазин и другие.
По меньшей мере один ингибитор ксантин оксидоредуктазы или его соль может быть составлен различными способами в зависимости от желаемого пути введения. Например, твердые лекарственные формы для перорального введения включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых лекарственных формах вещество, ингибирующее ксантин оксидоредуктазу, может смешиваться с по меньшей мере одним инертным, фармацевтически приемлемым эксципиентом или носителем, таким как цитрат натрия или моногидрофосфат кальция и/или а) наполнителями или разбавителями, такие как, но не ограничиваясь крахмалами, лактозой, сахарозой, глюкозой, маннитом и кремниевой кислотой; b) связующими веществами, такими как, но не ограничиваясь карбоксиметилцеллюлозой, альгинатами, желатином, поливинилпирролидоном, сахарозой и акацией; c) увлажнителями, такими как, но не ограничиваясь глицерином; d) дезинтегрирующими средствами, такими как, но не ограничиваясь агар-агаром, карбонатом кальция, картофельным крахмалом или крахмалом тапиоки, альгиновой кислотой, некоторыми силикатами и карбонатом натрия; e) средствами, замедляющими растворение, такими как, но не ограничиваясь парафином; (f) ускорителями абсорбции, такими как соединения четвертичного аммония; (g) смачивающими средствами, такими как, но не ограничиваясь цетиловым спиртом и моностеаратом глицерина; (h) поглотителями, такими как, не ограничиваясь каолиновыми и бентонитовыми глинами; и (i) смазками, такими как, но не ограничиваясь тальком, стеаратом кальция, стеаратом магния, твердыми полиэтиленгликолями, натрий- лаурилсульфатом и их смесями.
Твердые композиции сходного типа также могут применяться в качестве наполнителей в твердых и мягких желатиновых капсулах с использованием эксципиентов, таких как лактоза или молочный сахар, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли и т.д.
Твердые лекарственные формы в виде таблеток, капсул, пилюль и гранул могут иметь покрытия и оболочки, такие как кишечно-растворимые покрытия и другие покрытия, хорошо известные в области техники составления фармацевтических препаратов. Они могут необязательно содержать контрастные вещества и могут также иметь композицию, позволяющую высвобождать активное вещество (вещества) исключительно или преимущественно в определенной части желудочно-кишечного тракта, необязательно замедленно. Примеры заключающих композиций, которые могут использоваться, включают полимеры и воски.
Жидкие лекарственные формы для перорального введения включают фармацевтически приемлемые эмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. Помимо веществ, ингибирующих ксантин оксидоредуктазу, жидкие лекарственные формы могут содержать инертные разбавители, обычно использующиеся в уровне техники, такие как, например, вода или другие растворители, солюбилизирующие агенты и эмульгаторы, такие как, но не ограничиваясь этиловым спиртом, изопропиловым спиртом, этилкарбонатом, этилацетатом, бензиловым спиртом, бензилбензоатом, пропиленгликолем, 1,3-бутиленгликолем, диметилформамидом, маслами (в частности, хлопковым, арахисовым, кукурузным, зародышевым, оливковым, касторовым и кунжутным маслами), глицерином, тетрагидрофурфуриловым спиртом, полиэтиленгликолями и сложными эфирами сорбитана и жирных кислот и их смесей.
Также композиции могут вводиться через катетер для локальной доставки к необходимому месту, через коронарный шунт (устройство трубчатой формы из тонкой проволочной сетки), или с помощью разлагаемого полимера.
Композиции, применимые для парэнтерального введения, могут состоять из физиологически приемлемых, стерильных водных или неводных растворов, дисперсий, суспензий или эмульсий и стерильных порошков для восстановления в стерильные растворы или дисперсии для инъекций. Примеры применимых водных и неводных носителей, разбавителей, растворителей или сред включают, но не ограниваются водой, этанолом, полиолами (пропиленгликолем, полиэтиленгликолем, глицерином и т.д.), растительными маслами (такими как оливковое масло), инъецируемыми органическими сложными эфирами, такими как этилолеат, и их применимыми смесями.
Такие композиции также могут содержать адъюванты, такие как консерванты, смачивающие средства, эмульгаторы и дозаторы. Воздействие микроорганизмов можно предотвратить с помощью различных антибактериальных и противогрибковых средств, таких как парабены, хлорбутанол, фенол, сорбиновая кислота и другие. Также может быть желательно включение изотонических агентов, например, сахаров, хлорида натрия и других. Длительная абсорбция инъецируемой лекарственной формы может достигаться путем использования агентов, задерживающих абсорбцию, например, алюминий моностеарат и желатин.
Суспензии, в дополнение к активным веществам (т.е. вещества, ингибирующие ксантин оксидоредуктазу или их соли), могут содержать суспендирующие агенты, такие как, например, этоксилированные изостеариловые спирты, полиоксиэтиленовые сложные эфиры сорбитола и сорбитана, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант или смесь этих веществ и другие.
Необходимая текучесть может поддерживаться путем использования покрывающих материалов, таких как лецитин, сохранения необходимого размера частиц в случае дисперсий и использования поверхностно-активных веществ.
В некоторых случаях с целью продлить эффект препарата (т.е. веществ, ингибирующих ксантин оксидоредуктазу или их солей) желательно замедлить абсорбцию препарата из подкожной или внутримышечной инъекции. Этого можно достичь путем использования жидкой суспензии кристаллического или аморфного вещества, плохо растворимого в воде. Скорость абсорбции препарата в таком случае зависит от его скорости растворения, которая, в свою очередь, может зависеть от размера и формы кристаллов. В качестве альтернативы, замедленная абсорбция препарата, вводимого парэнтерально, достигается путем растворения или суспендирования препарата в масляной среде. Инъецируемые депо-формы готовятся путем образования микрокапсулированных частиц препарата в разлагаемых полимерах, таких как полилактид-полигликолид. В зависимости от соотношения препарата и полимера и природы конкретного используемого полимера, можно регулировать скорость высвобождения препарата. Примеры других разлагаемых полимеров включают полиортосложные эфиры и полиангидриды. Инъецируемые депо-препараты также получают путем заключения препарата в липосомы или микроэмульсии, совместимые с тканями тела.
Инъецируемые препараты можно стерилизовать, например, путем фильтрации через фильтр, удерживающий бактерии, или путем включения стерилизующих агентов в форме стерильных твердых композиций, которые можно растворить или диспергировать в стерильной воде или другой стерильной среде для инъекций непосредственно перед употреблением.
Лекарственные формы для наружного нанесения веществ согласно настоящему изобретению включают порошки, спреи, мази и лекарственные формы для ингаляции. Активное вещество (вещества) смешивают в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым переносчиком и любыми необходимыми консервантами, буферами или распылителями. Офтальмологические препараты, глазные мази, порошки и растворы также рассматриваются в охвате настоящего изобретения.
Следует понимать, что препараты, используемые согласно настоящему изобретению, в общем содержат терапевтически эффективное количество одного или более веществ, ингибирующих ксантин оксидоредуктазу.
Препараты согласно настоящему изобретению вводят и дозируют согласно надлежащей медицинской практике, принимая во внимание клиническое состояние конкретного пациента, место и способ введения, график введения и другие факторы, известные практикующим врачам.
Специалисты в области техники, исходя из известных соображений могут определить терапевтически эффективные или профилактически эффективные количества для целей настоящего изобретения. Дневное терапевтически эффективное или профилактически эффективное количество веществ, ингибирующих ксантин оксидоредуктазу, вводимое пациенту в одной или нескольких дозах, варьирует от 0,01 до приблизительно 750 миллиграмм на килограмм веса тела в день (мг/кг/день). Более точно, пациенту можно вводить от приблизительно 5,0 мг до приблизительно 300 мг один раз в день ежедневно, предпочтительно от приблизительно 20 мг до приблизительно 240 мг один раз в день ежедневно и наиболее предпочтительно от приблизительно 40 мг до приблизительно 120 мг один раз в день ежедневно соединения, ингибирующие ксантин оксидоредуктазу. Разумеется, специалисту в области техники следует понимать, что могут применяться и другие схемы приема, такие как введение более одного раза в день, использование лекарственных препаратов с замедленным, контролируемым или модифицированным высвобождением и им подобных с целью достижения желаемого результата, т.е. сохранения функции почек у субъекта.
Ниже приводятся примеры согласно настоящему изобретению в качестве примеров, но не ограничений.
Пример 1
Проводили проспективное исследование подгруппы, состоящей из 18 субъектов-людей, ранее болевших нефролитиазом, со слов пациентов перед набором на исследования. В двойном слепом исследовании 2 фазы продолжительностью 4 недели субъектов случайным образом распределяли по четырем группам воздействия: (1) фебуксостат 40 мг в день, (2) фебуксостат 80 мг в день, (3) фебуксостат 120 мг в день и (4) плацебо.
Субъекты, завершившие двойное слепое исследование, далее участвовали в открытом длительном исследовании и начинали лечение фебуксостатом в дозировке 80 мг в день. В течение первых 6 месяцев дозы фебуксостата могли титроваться до 40 мг или до 120 мг в день в зависимости от уровня уратов в сыворотке крови субъектов и появления побочных эффектов.
В подгруппе исследования проводился апостериорный анализ исхода нефролитиаза у субъектов исследования (n=13), получавших фебуксостат в течение ≥30 месяцев. В случае формирования почечного конкремента исследовали минеральный состав всех таких камней.
Использовали следующие критерии для включения в исследование: (1) присутствие в истории болезни подагры согласно предварительным критериям Американской ассоциации ревматизма; (2) нормальная функция почек, определяемая как уровень креатинина в сыворотке крови ≤1,5мг/дл и клиренса креатинина ≥50 мл/мин; (3) уровень уратов в сыворотке крови ≥8,0 мг/дл на момент начала двойного слепого исследования.
Использовали следующие критерии для исключения из исследования: (1) присутствие в истории болезни активной болезни печени, ксантинурии или любого другого серьезного заболевания; и (2) субъекты, у которых в течение одного месяца перед набором на исследования изменялась терапия тиазидным диуретиком или стероидами, а также субъекты, хронически принимающие нестероидные противовоспалительные средства.
В таблице 1 приведены исходные характеристики наблюдаемых 18 субъектов.
Таблица 1
Исходные характеристики
Все субъекты (N=18)
Пол
Мужской
16
Женский
2
Раса
Белая
17
другая
1
Возраст (лет)
Среднее (стандартное отклонение)
55,1 (13,25)32-80
Диапазон
Индекс массы тела (кг/м2)
Среднее (стандартное отклонение)
35,8 (6,44)23-48
Диапазон
Сопутствующие заболевания<sup>а</sup>
Гипертония
8
Ишемическая болезнь сердца
2
Гиперлипидемия
6
ожирение
5
Длительность заболевания подагрой (лет)
1-5
2
5-10
5
>10
11
Употребление алкоголя
Частое (1-14 порций в неделю)
6
Лекарственный анамнез лечения подагры
Аллопуринол (50 мг ежедневно - 300 мг дважды в день)
9
В таблице 2 приведены суммарные данные показателей функции почек, а также длительное изменение уровня уратов в сыворотке крови у субъектов, прошедших ≥30 месяцев лечения
Таблица 2
Субъект №<sup>a</sup>
История камней в почках<sup>b</sup> (лет)
Доза фебуксостата (мг/день)
Уровень мочевой кислоты в моче (мг/день)
Измеренный клиренс креатинина (мл/мин)
Уровень креатинина в сыворотке крови (мг/дл)
Расчетная GFR (мл/мин)
Уровень уратов в сыворотке крови (мг/дл)
DBДоза (мг)
OL доза (мг)
DB
DB
DB
OL<sup>c</sup>
DB
OL<sup>c</sup>
DB
OL<sup>c</sup>
BL
Нед4
BL
Нед 4
BL
Нед 4
Год 1
Год 2
Год 3
BL
Год 1
Год 2
Год 3
BL
Год 1
Год 2
Год 3
Субъекты, производящие избыточное количество (исходный уровень мочевой кислоты в моче >800 мг/день)
1
7,20
80
80
925
387
77
103
1,2
1,1
1,1
1,2
1,2
73
80
72
72
8,7
4,3
4,1
5,8
2<sup>d</sup>
14,30
80
80
975
504
101
147
1,3
1,2
1,2
1,1
1,2
67
73
80
72
9,7
5,9
4,2
3,2
3
11,39
80
80
941
319
97
93
1,2
1,1
1,2
1,1
1,2
67
67
74
66
8,7
4,4
4,8
3,9
Субъекты, выделяющие недостаточное количество (исходный уровень мочевой кислоты в моче <800 мг/день)
4
3,67
PL
80
706
572
77
95
1,3
1,3
1,2
1,3
1,3
62
68
61
61
11,6
6,1
7,6
5,8
5
2,38
80
80
740
286
80
88
1,3
1,2
1,4
1,3
1,4
62
57
62
57
11,0
4,5
6,4
3,3
6
0,22
40
80
790
504
67
82
1,2
1,2
1,3
1,4
1,5
67
61
56
51
8,7
6,4
9,7
7,5
7
43,23
PL
80
420
487
55
57
1,7
1,6
1,4
1,3
1,4
43
54
59
54
11,2
4,1
5,4
4,6
8
28,25
120
80
202
17
43
38
1,2
1,4
1,6
1,4
1,4
47
33
39
39
9,2
3,6
4,7
3,8
9
40,23
80
80
420
235
58
63
1,7
1,5
1,5
1,5
1,8
43
49
49
40
11,6
7,4
6,0
6,8
10
8,44
80
80
420
185
54
64
1,2
1,1
1,1
1,1
1,2
66
73
73
65
10,7
4,6
4,4
3,8
11
0,41
80
80
286
403
110
94
1,0
1,2
1,2
1,1
1,2
84
68
75
67
9,2
4,4
5,7
5,2
12
40,95
40
120
504
202
61
56
1,2
1,3
1,2
1,3
1,3
63
63
58
57
8,3
3,1
3,0
3,3
13<sup>e</sup>
16,46
PL
120
555
925
59
62
1,2
1,2
1,0
1,1
1,5
68
84
75
52
13,4
4,6
4,2
3,8
DB-двойное слепое, OL-открытое, BL-исходный уровень, PL-плацебо, NA-неприменимо.a - из 18 субъектов в подгруппе 5 субъектов, принимавших фебуксостат, прервали лечение ранее, чем через 6 месяцев после начала леченияb - интервал времени от обнаружения последнего камня в почках перед началом исследования до принятия первой дозы фебуксостатаc - для данных по годам 1, 2, и 3 использовали дни кумулятивного исследования; регистрировали ближайшие значения к 365±≤14 дней (год 1), 730±≤14 дней (год 2) и день 995 (год 3).d - у субъекта №2 на 1005-й день исследования был обнаружен камень, состоящий из оксалата кальция. Уровень мочевой кислоты в сыворотке крови составлял 4,2 мг/дл, доза фебуксостата составляла 80 мг в день. На 1265-й день исследования у субъекта был обнаружен второй камень, состоящий из оксалата кальцияe - у субъекта №13 на 17-й день двойного слепого исследования был обнаружен камень, состоящий из оксалата кальция. Уровень мочевой кислоты в сыворотке крови составлял 13,4 мг/дл, субъект получал плацебо. На 38-й день открытого исследования у субъекта был обнаружен второй камень, состоящий из оксалата кальция на фоне приема фебуксостата.
В таблице 3 приведены причины преждевременного прекращения участия субъектов в исследовании.
Таблица 3
Причина прекращения
n
исследование
Прекращено по желанию субъекта<sup>a</sup>
3
Двойное слепое
Нежелательные побочные эффекты<sup>b</sup>
1
Открытое
Несоблюдение правил
1
открытое
a - Субъекты завершили двойное слепое исследование, но отказались участвовать в открытом исследовании.b - Предпочтительный термин: повышения уровня креатинина (исходный уровень: 1,6 мг/дл, на момент выхода из исследования: 2,1 мг/мл, последующее наблюдение, день 163, через две недели после прекращения приема исследуемого препарата: 1,9 мг/дл).
В таблице 4 приведены суммарные данные о нежелательных побочных эффектах, наиболее часто встречавшихся во время исследования.
Таблица 4<sup>а</sup>
Все субъектыN=18
Количество субъектов с ≥1 побочных эффектов
17
Термины высокого уровня Медицинского словаря
Инфекция верхних дыхательных путей
12
Диаррея (исключая инфекции)
7
Признаки и симптомы, относящиеся к суставам
6
Инфекции нижних дыхательных путей и легких
5
Неклассифицированные признаки и симптомы, относящиеся к костно-мышечной системе и соединительной ткани
5
Неспецифические травмы
4
Боли в желудочно-кишечном тракте и в животе (исключая рот и горло)
3
Неклассифицированые отеки
3
Неклассифицированные сыпи, высыпания и экзантемы
3
Инфекции мочевых путей
3
a - нежелательные побочные эффекты, отмеченные у трех и более субъектов в течение открытого исследования
Из Примера 1 видно, что у субъектов, принимавших фебуксостат, в течение исследования функция почек поддерживалась на более или менее стабильном уровне.
Пример 2
Мыши вида/линии B6C3F1 в возрасте 6 недель на момент начала исследования получали фебуксостат, суспендированный в 0,5% растворе метилцеллюлозы, через оральный зонд. Вводимая дневная доза составляла 0 мг (контрольная группа), 3 мг, 12 мг, 24 мг или 48 мг. Через 13 недель введения препарата проводили гистопатологический анализ почек с целью выявления вакуолярной дегенерации проксимальных почечных канальцев (естественное изменение, известное у грызунов). Полученные данные приведены в таблице 5.
Таблица 5
Дневная доза
0(контроль)
3
12
24
48
Количество исследованных животных
M12
F12
M12
F12
M12
F12
M12
F12
M12
F12
Вакуолярная дегенерация проксимальных почечных канальцев
12
3
7*
1
5**
1
2**
0
1**
2
M - самцы, F - самки* - p≤0,05 (непараметрический тест Даннетта для множественных сравнений)** - p≤0,01 (непараметрический тест Даннетта для множественных сравнений)
Из Примера 2 видно, что введение фебуксостата уменьшало вакуолярную дегенерацию проксимальных почечных канальцев у исследуемых самцов мышей.
Пример 3
Самцов крыс Вистар (295-340 г) использовали для получения крыс после нефрэктомии (rats with remnant kidney, RK) следующим образом. Под неглубоким эфирным наркозом проводили 5/6 нефрэктомию путем удаления правой почки и выборочного перевязывания 2-3 ветвей левой почечной артерии. Далее крыс распределяли по четырем группам воздействия: группа 1, контрольные крысы RK (n=7); группа 2, крысы RK + фебуксостат (Fx) (n=8); группа 3, крысы RK + оксоновая кислота (OA) (n=6); и группа 4, крысы RK + ОА + Fx (n=10). Оксоновую кислоту (ОА) (Sigma-Aldrich, St Louis MO, USA) вводили через ротовой зонд в дозировке 750 мг/кг массы тела в день, начиная со следующего дня после 5/6 нефрэктомии. Сразу после операции вводили фебуксостат в питьевой воде в концентрации 30 мг/л (3-4 мг/кг/день), в то время как контрольная группа получала только питьевую воду (с добавлением 3,5 мг/л NaCl для сохранения концентрации солей, эквивалентной воде, содержащей фебуксостат).
На все группы воздействовали в течение четырех недель. Ежедневно измеряли массу тела (начиная непосредственно перед операцией) и потребление пищи и воды. Систолическое кровяное давление (измеряемое у крыс в сознании сфигмоманометром с хвостовой манжетой) и уровень мочевой кислоты в сыворотке крови замеряли непосредственно перед операцией (т.е. исходный уровень) и по истечении четырех недель. Замеряли исходный уровень протеинурии и протеинурию по истечении двух и четырех недель. По истечении четырех недель под пентобарбиталовым наркозом проводили микропункцию почки и мониторинг системного кровяного давления и последующую морфологическую оценку прегломерулярной микрососудистой сети почки.
Процедура микропункции для оценки гломерулярной гемодинамики
Животных обезболивали пентобарбиталом натрия (30 мг/кг, внутрибрюшинно, ip) и помещали на терморегулируемый столик с целью поддержания температуры тела на уровне 37°С. Трахею, яремную вену, бедренные артерии и левый мочеточник катетеризовали полиэтиленовыми шлангами (PE-240, PE-50 и PE-10). Левую почку обнажали, помещали в люситовую камеру, запечатывали агаром и покрывали раствором Рингера. Среднее артериальное давление (mean arterial pressure, MAP) мониторили с помощью датчика давления (модель p23 db; Gould, San Juan, Puerto Rico), соединенного с катетером в бедренной артерии, и записывали на самописец (Grass Instruments, Quincy, MA, USA). Периодически брали образцы крови и заменяли на кровь крысы-донора. Крыс поддерживали в эуволемическом состоянии путем инфузии 10 мг/кг массы тела изотонической сыворотки крови крыс в течение операции и последующей инфузии 25% раствора полифруктозана со скоростью 2,2 мл/ч (Inutest; Fresenius Kabi, Linz, Austria). По истечении 60 минут получали 5-7 образцов жидкости из проксимальных канальцев для определения скорости тока и концетрации полифруктозана. Внутриканальцевое давление в условиях свободного тока (free flow, FF) и остановленного тока (stop-flow, SF) и давление в околоканальцевых капиллярах измеряли с помощью прибора серво-нуль (servo-null device) (Servo Null Pressure System; Instrumentation for Physiology and Medicine, San Diego, CA, USA). Коллоидное осмотическое давление в клубочках подсчитывали, исходя из концентрации белка в крови из бедренной артерии (Ca) и поверхностных эфферентных артериол (Ce). Уровень полифруктозана в образцах сыворотки и мочи замеряли с использованием антроновой техники, описанной в работе Davidson and Sackner "Simplification of the anthrone method for the determination of inulin in clearance studies," J Lab Clin Med. 62:351-356 (1963), содержание которой включено в настоящую заявку путем отсылки. Вкратце, вначале образцы сыворотки крови очищали от белков с помощью трихлоруксусной кислоты. После центрифугирования супернатант использовали для измерения уровня полифруктозана. Концентрации полифруктозана в образцах сыворотки и мочи оценивали путем добавления антронового реагента с последующей инкубацией при 45°С в течение 5 минут; показания спектрофотометра считывали на длине волны 620 нм. Концентрации подсчитывали путем интерполяции величин абсорбции с использованием стандартной кривой (0,01-0,05 мг/мл). Тотальную GFR рассчитывали, используя следующую формулу: GFR=(UxV)/P, где U представляет собой концентрацию полифруктозана в моче, V представляет собой скорость тока мочи, и P представляет собой концентрацию полифруктозана в сыворотке крови.
PF
Объем жидкости, собранной из отдельных проксимальных канальцев, подсчитывали, исходя из длины колонны жидкости в капиллярной трубке постоянного известного диаметра. Концентрацию полифруктозана в канальцах измеряли микрофлуорометрическим способом, описанным в работе Vurek and Pegram Fluorometric method for the determination of nanogram quantities of inulin," Anal Biochem 16:409-419 (1966), содержание которой включено путем отсылки в настоящую заявку. В частности, образцы жидкости из канальцев переносили 8-нл пипеткой в капиллярные кюветы, запечатанные с одного конца и содержащие 3 мкл димедонового реагента (100 мг димедона в 10 мл 85% раствора ортофосфорной кислоты). После добавления образцов кюветы немедленно запечатывались. Кюветы центрифугировали пять раз на максимальной скорости в течение пяти минут в гематокритной центрифуге и нагревали на кипящей водяной бане в течение 10 минут. Флуоресценцию измеряли на луминесцентном спектрометре (Series 2; Aminco-Bowman, Rochester NY, USA) на длинах волн возбуждения и эмиссии 355 и 400 нм, соответственно, против чистого реагента в качестве 0% и 10 мг/мл полифруктозана в качестве 100%. Для каждой кюветы подсчитывали флуоресценцию как среднее четырех измерений; держатель вращали произвольно между измерениями. Концентрацию полифруктозана подсчитывали путем интерполяции значений флуоресценции с использованием стандартной кривой (0,5-2,5 мг/мл). Скорость клубочковой фильтрации отдельного нейрона (single-neuron glomerular filtration rate, SNGFR) подсчитывали, используя формулу SNGFR=(TF/P) x V, где PF - концетрация полифруктозана в канальцевой жидкости (TF) и сыворотке крови (P), а V - скорость тока жидкости в канальцах, получаемая хронометрированием сбора канальцевой жидкости (см. Baylis C, et al, "Effects of some vasodilator drugs on transcapillary fluid exchange in renal cortex," Am J Physiol 230: 1148-1158 (1976), содержание которой включено в настоящую заявку путем отсылки).
Концентрацию белка в афферентных и эфферентных образцах определяли по способу, описанному в Viets et al. in "Determination of serum protein concentration in nano liter blood samples using fluorescamine or o-phthalaldehyde", Anal Biochem 88:513-521 (1978), содержание которой включено в настоящую заявку путем отсылки. В частности, 5 нл сыворотки смешивали с 5 мкл раствора боратного буфера, содержащего Бридж и меркаптоэталол в 100-мл стеклянной капиллярной трубке. Далее добавляли 5 мкл о-фталальдегидного (o-phtalaldehyde, OPT) реагента. Содержимое смешивали путем центрифугирования капиллярной трубки несколько раз в гематокритной центрифуге. Флуоресценцию измеряли через 30-60 минут после центрифугирования на длинах волн возбуждения и эмиссии 362 и 419 нм, соответственно, на луминесцентном спектрометре (аналогично описанному выше). Концентрации белка подсчитывали путем интерполяции полученных значений флуоресценции в образцах против стандартной кривой (0,2-1,0 мг/мл). MAP, GFR, гидростатическое давление в клубочковых капиллярах (glomerular capillary hydrostatic pressure, PGC), ток плазмы через отдельный нефрон (QA), афферентное (AR), эфферентное (ER) и тотальное (TR) сопротивления, а также Kf вычисляли с помощью следующих уравнений, ранее приведенных в работе Brenner BM, "Nephron adaptation to renal injury or ablation", Am J Physiol 249:F324-F337, (1985), содержание которой включено в настоящую заявку путем отсылки:
PGC = SFP + πa, где πa означает коллоидное осмотическое давление сыворотки крови из бедренной артерии;
QA = SNGFR/SNFF, где SNFF означает фракцию фильтрации отдельного нефрона SNFF = 1-(Ca/Ce);
10
AR = (MAP-PGC/GBF) × (7,962×10), где GBF означает клубочковый кровоток;
GBF = QAZ(I -Hct), где Hct означает гематокрит;
10
ER = (PGC-PcZGBF-SNGFR) × (7,962×10);
TR = AR+ER;
Kf= SNGFR/EFP, где EFR означает эффективное давление фильтрации;
и EFP = [(PGC-πa-FF) + (PGC-πe-FF)] / 2, где πe означает коллоидное осмотическое давление сыворотки крови из поверхностных эфферентных артериол.
Оценка
Потребление пищи и воды оценивали ежедневно. Систолическое кровяное давление измеряли у животных в сознании с помощью сфигмоманометра с хвостовой манжетой, используя автоматическую систему (XBP-100; Kent Scientific Co, Torrington, CT, USA). Животных приучали к измерениям давления за неделю до каждого эксперимента. Уровень мочевой кислоты в сыворотке крови измеряли с использованием коммерческого набора реагентов (Diagnostic Chemicals Ltd, Charlottetown, PEI, Canada). Протеинурию определяли с помощью турбидиметрического метода с трихлоруксусной кислотой, как описано в работе Henry RJ et al,"Turbidimetric determination. of proteins with sulfosalicylic and tricholoroacetic acids", Proc Soc Exp Biol Med 92:748-751 (1956), содержание которой включено в настоящую заявку путем отсылки.
Гистология почек и морфологический анализ
После микропункции почки промывали путем перфузии физиологическим раствором на фосфатном буфере и фиксировали 4% параформальдегидом. Биопсии почек заливали в парафин. Срезы фиксированной ткани толщиной 4 мкм окрашивали периодной кислотой (реактивом Шиффа, PAS), а также трехцветной окраской по Массону. Морфологию артериол оценивали по непрямому иммунохимическому окрашиванию пероксидазой на α-гладкомышечный актин (DAKO Corp, Carpinteria, CA, USA). Срезы почек, инкубированные с нормальной кроличьей сывороткой, использовали в качестве отрицательного контроля к иммунохимическому окрашиванию на α-гладкомышечный актин.
Для каждой артериолы с помощью компьютерного анализа строили контуры сосуда и его внутренного просвета (исключая эндотелий) для подсчета полной площади средней оболочки сосудов (наружный контур - внутренний контур) в 10 артериолах на биопсию. Отношение средней оболочки стенки сосуда к просвету (media/lumen, M/L) подсчитывали, учитывая соотношение внутреннего и наружного контуров (см. Sanchez-Lozada LG et al, "Mild hyperuricemia induces glomerular hypertension in normal rats", Am J Physiol Renal Physiol 283:F1105-F1110 (2002); Sanchez- Lozada LG, et al., "Mild hyperuricemia induces vasoconstriction and maintains glomerular hypertension in normal and remnant kidney rats," Kidney Int 67:237-247 (2005), содержание которых включено в настоящую заявку путем отсылки). Количественный анализ проводился вслепую.
Степень тубулоинтерстициального фиброза определяли в 10 непересекающихся полях зрения коры (100х) на биопсию. Препараты анализировали с помощью световой микроскопии (Olympus BX51; Olympus America, Melville, NY, USA) и фотографировали с помощью цифровой видеокамеры (CoolSnap Pro; Media Cybernetics, Silver Spring, MD, USA). Фотографии обрабатывали с помощью компьютера и анализировали с помощью программы Image Pro-Plus (версия 5.0; Media Cybernetics, Silver Spring, MD, USA). Используя возможности распознавания цвета этой программы, положительные области, окрашенные синим (фиброз), отбирали и измеряли в пиксельных величинах; клубочки и сосуды предварительно исключали из поля зрения. Для каждой биопсии среднюю величину площади, окрашенной синим, подсчитывали путем усреднения значений, полученных на десяти проанализированных полях зрения.
Статистический анализ
Данные приведены в виде среднее ± стандартная ошибка среднего (standard error of the mean, SEM). Данные, полученные на соответствущих четырех группах воздействия, анализировали с помощью однонаправленного дисперсионного анализа (ANOVA). При значении величины p, вычисленной с помощью ANOVA, ≤ 0,05, при помощи теста Бонферрони для множественных сравнений делались следующие сравнения: контрольные RK vs. RK + Fx, контрольные RK vs.RK + ОА, контрольные RK vs.RK + ОА + Fx и RK + ОА vs.RK + ОА+ Fx. Отношения между переменными оценивали с помощью корреляционного анализа.
Результаты
Масса тела, потребление пищи и воды (фигура 1 и таблица 6).
Исходная масса тела была одинаковой у всех четырех групп воздействия. После операции масса тела уменьшилась у всех групп воздействия; скорее всего, это объяснялось пониженным потреблением пищи в течение первой недели после 5/6 нефрэктомии. В течение недель 2-4 животные ели нормально и начинали набирать массу тела. В конце исследования не наблюдалось значительной разницы в массе тела или прибавке массы тела между четырьмя группами воздействия. В двух группах, получавших фебуксостат, в целом крысы ели немного меньше и потребление воды было значительно снижено по сравнению с контрольной группой RK и группой RK + ОА. Данные, полученные ранее в этой же лаборатории (табл. 8) и в других лабораториях (см. Kretschmer BD, et al, "Modulatory role of food, feeding regime and physical exerciese on body weight and insulin resistance," Life Sci 76: 1553-1573, (2005)), свидетельствуют о том, что дневное потребление воды нормальными самцами крыс Wistar (масса тела ≥ 300 г), как правило, составляет 35-40 мл. Исходя из этих данных, настоящее исследование показывает, что у крыс RK значительно возрастало дневное потребление воды, и что потребление воды снижалось до уровня, близкого к нормальному, при воздействии фебуксостата. У нас нет четкого обоснования такого поведения, однако отвращение ко вкусу препарата маловероятно, поскольку в этой же лаборатории ранее было показано, что фебуксостат не влияет на дневное потребление воды нормальными крысами Sprague-Dawley. Однако хорошо известно, что концентрация мочи уменьшается в ответ на уменьшение функциональной массы почек (см. Hayslett JP, " Functional adaptation to reduction in renal mass," Physiol Rev 59:137-164 (1979)), что обуславливает полиурию и повышенное потребление воды. В этой связи было высказано предположение, что нарушение медуллярной архитектуры, обусловленное интерстициальным фиброзом, может способствовать нарушению концентрации мочи из-за невозможности образования гипертоничного медуллярного интерстиция (см. Gilbert RM, et al., "A study of the intrarenal recycling of urea in the rat with chronic experimental pyelonephritis," J Clin Invest 58:1348-1357 (1976)). Поскольку воздействие фебуксостата значительно снижало уровень тубулоинтерстициального фиброза у крыс RK (см. ниже), возможно, этот эффект может оказывать благоприятное влияние на способность оставшейся части почки концентрировать мочу, что приводит к нормализации потребления воды животными, получающими фебуксостат.
Уровень мочевой кислоты в сыворотке крови (фигура 2).
Исходные уровни мочевой кислоты в сыворотке крови были сходными у всех четырех групп воздействия. По истечении четырех недель у крыс RK, получавших фебуксостат, уровень мочевой кислоты в сыворотке крови снизился до приблизительно 63% от величины, характерной для контрольных крыс RK, однако эта разница не была статистически значимой. Как и ожидалось, по истечении четырех недель уровень мочевой кислоты в сыворотке крови крыс RK + ОА был значительно выше (более чем в 2 раза), чем у контрольных крыс RK. Воздействие фебуксостата на крыс, получавших ОА, предотвратило повышение уровня мочевой кислоты (см. фигуру 2).
Кровяное давление (фигуры 3 и 4).
Значения систолического кровяного давления, измеренного с помощью хвостовой манжеты у животных в сознании, приведены на фигуре 3. Исходные значения были сходными у всех четырех групп. По истечении четырех недель у крыс из всех четырех групп развивалась системная гипертония приблизительно одинаковой степени. Эти данные подтвердили в конце исследования путем измерения среднего артериального давления с помощью прямой внутриартериальной катетеризации под наркозом (см. фигуру 4).
Протеинурия (фигура 5).
Уровни выделения белка с мочой до операции были сходными у всех четырех групп воздействия. У контрольных крыс RK и крыс RK + ОА развивалась значительная протеинурия ко второй неделе, которая продолжала возрастать до окончания четвертой недели. У крыс RK с гиперурикемией в общем наблюдалась более сильная протеинурия, чем у крыс RK без гиперурикемии. Воздействие фебуксостата предотвращало повышение уровня выделения белка мочи у крыс RK как с гиперурикемией, так и без нее. На второй неделе у крыс RK + Fx и RK + ОА + Fx наблюдались уровни выделения белка с мочой, сходные с исходными; к концу 4 недели уровень выделения белка с мочой был на 75-80% ниже, чем в соответствующих контрольных группах (см. фигуру 5).
Гломерулярная гемодинамика (фигуры 6 и 7; таблицы 7 и 8)
По истечении четырех недель измеряли гломерулярную гемодинамику у всех животных с помощью техники микропункции. Как было ранее описано на этой модели повреждения почек, субтотальная ампутация почек приводила к функциональной адаптации оставшихся нейронов (см. Sanchez-Lozada LG, et al, "Mild hyperuricemia induces vasoconstriction and maintains glomerular hypertension in normal and remnant kidney rats," Kidney Int 67:237-247 (2005)). Несмотря на то, что скорость клубочковой фильтрации (GFR) у контрольных крыс RK (0,28±0,04 мл/мин, фигура 6) была значительно снижена, GFR отдельного нефрона (66,8±5,2 нл/мин, фигура 7) повышалась почти в 2 раза по сравнению с более ранними данными, полученными в этой же лаборатории на группе нормальных крыс Wistar (см. табл. 8). Гиперфильтрация в оставшихся нефронах была обусловлена значительным возрастанием клубочкового давления и тока плазмы в клубочках; оба этих эффекта, скорее всего, индуцируются отсутствием реакции афферентных артериол на системную гипертонию, и таким образом, афферентое сопротивление оставалось низким, несмотря на повышенное системное артериальное давление (см. фигуру 7, таблицы 7 и 8).
Как было показано ранее на крысах Sprague-Dawley (см. Sanchez-Lozada LG, et al, "Mild hyperuricemia induces vasoconstriction and maintains glomerular hypertension in normal and remnant kidney rats," Kidney Int 67:237-247 (2005)), присутствие гиперурикемии в дополнение к модели RK вызывает дополнительные изменения в гломерулярной гемодинамике у крыс Wistar. GFR у крыс RK + ОА была такой же низкой, как и в контрольной группе RK (см. фигуру 6), однако GFR отдельного нефрона была ниже по сравнению с контрольной группой RK. Кроме того, афферентное сопротивление было значительно повышено у крыс RK + ОА по сравнению с контрольными крысами RK (см. фигуру 7). Кортикальная вазоконстрикция у группы RK + ОА проявлялась в виде значительного уменьшения тока плазмы несмотря на отсутствие изменений или незначительные изменения давления в клубочках.
Воздействие фебуксостата на крыс RK + Fx и RK + ОА + Fx приводило к повышению GFR по сравнению с двумя группами, не получавшими фебуксостата (см. фигуру 6), и предотвращало гиперфильтрацию отдельных нефронов путем поддержания нормальных значений клубочкового давления и клубочкового тока плазмы. У крыс RK + ОА + Fx также наблюдалось повышенное сопротивление афферентных артериол по сравнению с соответствующими контрольными когортами, что позволяет предположить наличие у этих животных консервативного ауторегуляторного механизма (см. фигуру 7). В соответствии с таким механизмом наблюдалась отрицательная корреляция между сопротивлением афферентных артериол и клубочковым давлением (r=-0,57, p<0,001). На четвертой неделе наблюдались позитивные корреляции между уровнем мочевой кислоты и клубочковым давлением (r=0,47, p=0,008) и между клубочковым давлением и протеинурией (r=0,55, p=0,001).
Морфология почечных артериол (фигура 8).
Воздействие фебуксостата на животных RK предотвращало утолщение прегломерулярных сосудов, наблюдаемое в контрольной группе RK (см. фигуру 8). У крыс RK + ОА развивалось дополнительное утолщение афферентной артериолы по сравнению с контрольными животными RK; воздействие фебуксостата предотвращало это изменение (см. фигуру 8). Кроме того, наблюдались следующие положительные корреляции: уровень мочевой кислоты vs. площадь артериол (r=0,69, p<0,0001) и площадь артериол vs. клубочковое давление (r=0,66, p<0,0001). Не наблюдалось статистически значимых различий в отношении средней оболочки к просвету (M/L) между различными группами (см. фигуру 8); тем не менее, наблюдалась тенденция к снижению отношения M/L у крыс, получавших фебуксостат, по сравнению с соответствующими контрольными когортами.
Тубулоинтерстициальный фиброз (фигура 9).
У контрольной RK группы и группы RK + ОА развивался тубулоинтерстициальный (TI) фиброз сходной степени. Воздействие фебуксостатом значительно уменьшило эти структурные изменения как у крыс RK, так и у крыс RK + ОА. Кроме того, были обнаружены следующие положительные корреляции: уровень мочевой кислоты vs. TI фиброз (r=0,44, p=0,02) TI фиброз vs. протеинурия (r=0,74, p<0,0001); клубочковое давление vs. TI фиброз (r=0,65, p=0,0001); и TI фиброз vs. площадь артериол (r=0,67, p<0,0001).
В таблице 6 приведены суммарные данные по влиянию фебуксостата на массу тела и потребление пищи и воды крысами после нефрэктомии с одновременной гиперурикемией и без нее.
Таблица 6
Параметр
Время
Контроль RK(n=7)
RK + Fx(n=8)
RK + ОА(n=6)
RK + ОА + Fx(n=10)
Масса тела
Исходный
324,3 ± 1,1
322,3 ± 3,4
323,0 ± 7,9
319,7 ± 2,9
Конец недели 4
338,0 ± 5,0
340,6 ± 10,8
328,5 ± 6,6
316,7 ± 12,3
Прирост массы тела (от исходного)
Конец недели 4
13,7 ± 5,0
18,4 ± 8,2
5,5 ± 10,3
-3,0 ± 11,5
Потребление пищи в день (г)<sup>1</sup>
Неделя 1
11,5 ± 1,7
8,6 ± 1,5
14,2 ± 2,1
8,7 ±1,7
Неделя 2
17,4 ± 0,9
15,4 ± 0,5
19,7 ± 0,7
16,0 ±0,7#
Неделя 3
19,3 ± 0,8
20,2 ± 0,5
21,3 ± 1,0
18,4 ± 0,5
Неделя 4
22,4 ± 0,7
22,4 ± 1,3
20,7 ± 0,9
18,6 ± 0,5*
Потребление воды в день (мл)<sup>1</sup>
Неделя 1
38,0 ± 2,4
31,5 ± 1,4
44,3 ± 3,5
30,2 ±2,8#
Неделя 2
50,5 ± 3,0
32,6 ± 1,2*
58,6 ± 1,4
40,6 ±2,6*#
Неделя 3
52,4 ± 1,2
37,2 ± 2,5*
57,2 ± 2,6
38,6 ± 1,0*#
Неделя 4
55,5 ±2,3
39,4 ± 1,6*
48,6 ±3,0
40,5 ± 1,6*
RK - крысы после нефрэктомии; Fx - фебуксостат; ОА - оксоновая кислота (для индукции гиперурикемии).1 среднее ± стандартная ошибка среднего подсчитывали, исходя из среднего потребления пищи или воды за одну неделю для каждого животного.* - статистически достоверное отличие от контрольной RK группы.# - статистически достоверное отличие от группы RK + ОА.
Таблица 7 иллюстрирует влияние фебуксостата на гломерулярную гемодинамику у крыс после нефрэктомии с одновременной гиперурикемией и без нее.
Таблица 7
Параметр
Группа воздействия
Контроль RK(n=7)
RK + Fx(n=8)
RK + ОА(n=6)
RK + ОА + Fx(n=10)
MAP (мм рт. ст.)
171 ± 5
189 ± 8
198 ± 10
172 ± 8
PGC (мм рт. ст.)
63,6 ± 2,3
52,2 ± 1,9*
64,4 ± 1,1
52,0 ± 1,2*<sup>#</sup>
GFR (мл/мин)
0,28 ± 0,04
0,51 ± 0,04*
0,29 ± 0,06
0,44 ± 0,05
SNGFR (нл/мин)
66,8 ± 5,2
36,7 ± 3,1*
51,3 ± 4,8
42,2 ± 4,9*
QA (нл/мин)
263 ± 25
142 ± 11*
170 ± 16*
151 ± 19*
AR (дин*с*см<sup>-5</sup>)
2,02 ± 0,21
4,33 ± 0,30*
3,95 ± 0,36*
4,30 ± 0,60*
ER (дин*с*см<sup>-5</sup>)
0,97 ± 0,09
1,33 ±0,16
1,66 ± 0,22
1,43 ±0,15
Kf (нл/с*мм рт. ст.)
0,040 ± 0,002
0,035 ± 0,005
0,027 ± 0,003
0,037 ± 0,004
RK - крысы после нефрэктомии; Fx - фебуксостат; ОА - оксоновая кислота (для индукции гиперурикемии).MAP - среднее артериальное давление; PGC - давление в клубочковых капиллярах; GFR - скорость клубочковой фильтрации; SNGFR - GFR отдельного нефрона; QA - клубочковый ток плазмы; AR - афферентное сопротивление; ER - эфферентное сопротивление; Kf - коэффициент ультрафильтрации.* - статистически достоверное отличие от контрольной RK группы.# - статистически достоверное отличие от группы RK + ОА.
В таблице 8 приведены ранее полученные контрольные данные по нормальным самцам крыс Wistar.
Ранее полученные контрольные данные по нормальным самцам крыс Wistar.
Таблица 8
Параметр
Выборка
Размер выборки
6
6
Масса тела (г)
353 ± 6
317 ± 6
потребление воды в день (мл)
нд
39 ± 1
Потребление пищи в день (г)
нд
13 ± 1
Белок в моче (мг/день)
16 ± 1,5
нд
SBP (мм рт. ст.)
118 ± 3,4
нд
MAP (мм рт. ст.)
118 ± 2,7
нд
PGC (мм рт. ст.)
50,3 ± 1,2
нд
GFR (в одной почке; мл/мин)
0,81 ± 0,10
нд
SNGFR (нл/мин)
34,4 ± 2,8
нд
QA (нл/мин)
112 ± 9,5
нд
AR (дин*с*см<sup>-5</sup>)
2,6 ± 0,2
нд
ER (дин*с*см<sup>-5</sup>)
1,8 ± 0,2
нд
Kf (нл/с*мм рт. ст.)
0,042 ± 0,006
нд
нд - нет данных
Из приведенных результатов исследования, описанного в Примере 3, видно, что воздействие фебуксостата предотвращало протеинурию и повреждение почек у крыс RK с одновременной гиперурикемией и без нее. Кроме того, поскольку фебуксостат способствовал сохранению морфологии прегломерулярных сосудов, даже при наличии системной гипертонии поддерживалось нормальное клубочковое давление. Это исследование подчеркивает важность сохранения способности оставшихся нефронов к саморегуляции для замедления прогрессии заболевания почек. Таким образом, воздействие фебуксостата уменьшает функциональные и структурные изменения, обусловленные прогрессирующей и обширной потерей ткани почек на крысиной модели хронического заболевания почек в комбинации с гиперурикемией или без нее.
Несмотря на то, что настоящее изобретение было описано со ссылкой на отдельные предпочтительные в настоящее время воплощения, следует понимать, что модификации и вариации настоящего изобретения, очевидные для специалистов в области техники, намеренно охватываются настоящим изобретением.