СПОСОБ ПРЕДПОСЕВНОЙ ОБРАБОТКИ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ L-ФОРМ МИКОБАКТЕРИЙ
METHOD FOR PRE-INOCULATION PROCESSING OF PATHOLOGICAL MATERIAL FOR RECOVERY OF L-FORMS OF MYCOBACTERIA

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для выделения L-форм микобактерий из патологического материала от животных. Способ основан на обработке патологического материала и посеве на полужидкую питательную среду.
Известен способ, при котором предпосевную обработку патологического материала проводят с применением 5%, 6%, 10% раствора серной кислоты, с последующим центрифугированием при 3000 об/мин или измельчают в ступке без центрифугирования, с экспозицией кислоты 20-30 мин, а полученную взвесь высевают на плотную питательные среду [Наставление  по диагностике туберкулеза животных / МСХ РФ департамент ветеринарии. 18.11.2002 г., с.17-16; «Ветеринарная лабораторная практика» / Т.1. Москва. 1963 г., с. 279-280].
Недостатком этого способа является пагубное действие кислоты, а также концентрирование путем центрифугирования, потому что при центрифугировании происходит концентрирование не только микобактерий, но и банальной микрофлоры, что усложняет выделение культур.
Известен «Способ выделения L-форм микобактерий из проб патологического материала» [UA 39178 U, G01N 33/50, 10.02.2009]. Предпосевную обработку патологического материала проводят следующим образом: патологический материал измельчают в ступке и обрабатывают 3% раствором серной кислоты, затем материал отмывают физиологическим раствором, а полученную взвесь фильтруют через мембраны с диаметром пор 0,45 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой или Дорожковой. Недостатком этого способа является применение повышенной концентрации кислоты, а также фильтрация через фильтры с диаметром пор 0,45 мкм, через такой диаметр пор может проходить как L-формы микобактерий, так и другие виды бактерий.
Задача изобретения - повышение эффективности выделения L-форм микобактерий из патологического материала, уменьшение количества проростов посторонней микрофлоры, а также время проведения работы.
Для этого предложен способ предпосевной обработки для выделения  L-форм микобактерий из патологического материала, который заключается в следующем: патологический материал измельчают в ступке ножницами и обрабатывают 2% раствором серной кислоты с последующим двухкратным отмыванием. Затем патологический материал растирают до однородной массы с кварцевым песком и добавляют стерильный физиологический раствор, полученную взвесь фильтруют через стерильные мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой или Дорожковой. Посевы культивируют в термостате при температуре 37°С.
Пример 1. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают 2% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.
Пример 2. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают 3% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат  высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.
Пример 3. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают 5% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат  высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.
Пример 4. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают  10% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.
Результаты, полученные при сравнении четырех примеров представлены в таблице 1.
Пример
Раствор кислоты
Количество проб
Выделение культур L-форм микобактерий
Количество пророста
количество
процент
1
2%
60
35
58,3%
1%
2
3%
60
20
33,3%
4%
3
5%
60
9
15%
2%
4
10%
60
0
-
0%
При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 2% раствора серной кислоты (пример 1) выделено 35 (58,3%) культур L-форм микобактерий, тогда как рост посторонней микрофлоры отмечен только в 1% посевов.
При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 3% раствора серной кислоты (пример 2) выделено 20 (33,3%) культур L-форм микобактерий, тогда как рост посторонней микрофлоры отмечен только в 4% посевов.
При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 5% раствора серной кислоты (пример 3) выделено 9 (15%) культур L-форм микобактерий, тогда как рост посторонней микрофлоры отмечен только в 2% посевов.
При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 10% раствора серной кислоты (пример 4) культуры в L-форме микобактерий и проростов не выявлены.
Результаты проведенных исследований в сравнении с прототипом: предложенный способ для выделения L-форм микобактерий из патологического материала дает возможность повысить выделение L-форм микобактерий, так как через фильтры с диаметром пор 0,2 мкм не проходят другие виды бактерий, а также снизить процент пророста посевов. Предложенный способ предпосевной обработки для выделения L-форм микобактерий из патологического материала отвечает современным требованиям при работе с заразным материалом, безопасный и эффективный при работе.
Источники информации
1. Наставление по диагностике туберкулеза животных / МСХ РФ департамент ветеринарии. 18.11.2002 г., с.17-16.
2. «Ветеринарная лабораторная практика» / Т.1. Москва 1963 г., с.279-280.
3. «Способ выделения L-форм микобактерий из проб патологического материала» (UA 39178 U, G01N 33/50, 10.02.2009).