СПОСОБЫ ОЧИСТКИ ГЕТЕРОДИМЕРНЫХ ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ

1. Способ очистки полиспецифического антитела IgG из смеси с помощью аффинной хроматографии, включающий
иммобилизацию полиспецифического антитела IgG из указанной смеси на первой колонке для аффинной хроматографии, имеющей специфичность связывания с константным доменом тяжелой цепи указанного антитела IgG; и
элюирование полиспецифического антитела из первой колонки для аффинной хроматографии буфером для элюирования, содержащим антиагрегационную композицию для очистки полиспецифического антитела из смеси, причем антиагрегационная композиция содержит один или более полиолов.
2. Способ по п. 1, в котором один или более полиолов выбраны из группы, состоящей из маннита, глицерина, сахарозы, трегалозы и их комбинаций.
3. Способ по п. 2, в котором один или более полиолов имеют концентрацию в диапазоне от около 5% до около 25% мас./об.
4. Способ по п. 3, в котором один или более полиолов содержат глицерин, имеющий концентрацию в диапазоне от около 5% до около 15% мас./об.
5. Способ по п. 4, в котором глицерин имеет концентрацию около 10% мас./об.
6. Способ по п. 3, в котором один или более полиолов включает сахарозу, имеющую концентрацию в диапазоне от около 5% до около 15% мас./об.
7. Способ по п. 6, в котором сахароза имеет концентрацию около 10% мас./об.
8. Способ по п. 3, в которой буфер для элюирования содержит около 10% мас./об. глицерина и около 10% мас./об. сахарозы.
9. Способ по п. 1, в котором колонка для аффинной хроматографии содержит смолу для хроматографии на основе белка А.
10. Способ по п. 9, в котором буфер для элюирования выбран из группы, состоящей из цитрата, ацетата, уксусной кислоты, 4-морфолинэтансульфоната (MES), цитрат-фосфата, сукцината и их комбинаций.
11. Способ по п. 10, в котором буфер для элюирования содержит цитрат в концентрации от около 20 мМ до около 30 мМ.
12. Способ по п. 11, в котором буфер для элюирования содержит цитрат в концентрации около 25 мМ.
13. Способ по п. 9, в котором буфер для элюирования имеет pH в диапазоне от около 3,2 до около 4,2.
14. Способ по п. 13, в котором буфер для элюирования имеет pH в диапазоне от около 3,4 до около 3,8.
15. Способ по п. 14, в котором буфер для элюирования имеет pH около 3,6.
16. Способ по п. 9, в котором буфер для элюирования содержит около 25 мМ цитрата, около 10% глицерина и около 10% сахарозы, и при этом буфер для элюирования имеет pH около 3,6.
17. Способ по п. 1, в котором колонка для аффинной хроматографии содержит смолу для домен-специфической хроматографии, которая связывается с доменом CH1 антитела IgG.
18. Способ по п. 17, в котором буфер для элюирования содержит буфер, выбранный из группы, состоящей из цитрата, ацетата, уксусной кислоты, 4-морфолинэтансульфоната (MES), цитрат-фосфата, сукцината и их комбинаций.
19. Способ по п. 18, в котором буфер для элюирования содержит уксусную кислоту в концентрации от 45 мМ до 55 мМ.
20. Способ по п. 19, в котором буфер для элюирования содержит уксусную кислоту в концентрации около 50 мМ.
21. Способ по п. 17, в котором буфер для элюирования имеет pH в диапазоне от около 3,4 до около 4,4.
22. Способ по п. 21, в котором буфер для элюирования имеет pH в диапазоне от около 3,8 до около 4,2.
23. Способ по п. 22, в котором буфер для элюирования имеет pH около 4,0.
24. Способ по п. 17, в котором буфер для элюирования содержит около 50 мМ уксусной кислоты, около 10% глицерина и около 10% сахарозы, и при этом буфер для элюирования имеет pH около 4,0.
25. Способ уменьшения агрегации полиспецифического антитела IgG в пуле элюирования при процедуре аффинной хроматографии, причем способ включает
иммобилизацию полиспецифического антитела IgG на колонке для аффинной хроматографии на основе белка А; и
элюирование полиспецифического антитела IgG из колонки для аффинной хроматографии на основе белка А буфером для элюирования, содержащим 25 мМ цитрата, 10% мас./об. глицерина и 10% мас./об. сахарозы, при этом буфер для элюирования имеет pH 3,6.
26. Способ уменьшения агрегации полиспецифического антитела IgG в пуле элюирования при процедуре аффинной хроматографии, причем способ включает
иммобилизацию полиспецифического антитела IgG на колонке для аффинной хроматографии, содержащей смолу для домен-специфической хроматографии, которая имеет аффинность связывания с доменом CH1 полиспецифического антитела IgG; и
элюирование полиспецифического антитела IgG из колонки для аффинной хроматографии буфером для элюирования, содержащим 50 мМ уксусной кислоты, 10% глицерина и 10% сахарозы, при этом буфер для элюирования имеет pH 4,0.
27. Способ по любому из пп. 1, 25 и 26, в котором полиспецифическое антитело IgG содержит первую и вторую связывающие единицы.
28. Способ по п. 27, в котором первая связывающая единица содержит вариабельную область тяжелой цепи антитела, содержащего только тяжелые цепи.
29. Способ по п. 27, в котором вторая связывающая единица содержит вариабельную область тяжелой цепи антитела и вариабельную область легкой цепи антитела.
30. Способ по п. 27, в котором первая связывающая единица содержит вариабельную область тяжелой цепи антитела, состоящего только из тяжелых цепей, а вторая связывающая единица содержит вариабельную область тяжелой цепи антитела и вариабельную область легкой цепи антитела.
31. Способ по п. 27, в котором первая связывающая единица имеет аффинность связывания с ассоциированным с опухолью антигеном.
32. Способ по п. 27, в котором вторая связывающая единица имеет аффинность связывания с эффекторной клеткой.
33. Способ по п. 32, в котором эффекторная клетка представляет собой Т-клетку.
34. Способ по п. 33, в котором вторая связывающая единица имеет аффинность связывания с белком CD3 на Т-клетке.
35. Способ по любому из пп. 1, 25 и 26, в котором полиспецифическое антитело IgG представляет собой биспецифическое антитело IgG.