Действие комбинированного препарата Тержинан® на микроорганизмы, выделенные из урогенитального тракта женщин. Опыт in vitro

УДК: 618.1-022.7-085 DOI: 10.17816/JOWD66521-26

ДЕЙСТВИЕ КОМБИНИРОВАННОГО ПРЕПАРАТА ТЕРЖИНАН НА МИКРООРГАНИЗМЫ, ВЫДЕЛЕННЫЕ ИЗ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА ЖЕНЩИН. ОПЫТ IN VITRO © А.М. Савичева, Е.В. Спасибова

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», Санкт-Петербург

Для цитирования: Савичева А.М., Спасибова Е.В. Действие комбинированного препарата Тержинан на микроорганизмы, выделенные из урогенитального тракта женщин. Опыт in vitro. - 2017. - Т. 66. - № 5. - С. 21-26. doi: 10.17816/JOWD66521-26

Поступила в редакцию: 04.07.2017 Принята к печати: 22.09.2017

Введение. Исследование представляет собой опыт in vitro, проведенный с целью определения чувствительности микроорганизмов, выделенных из урогенитального тракта женщин, к комбинации препаратов, входящих в состав Тержинана. Методы. В исследование были включены 516 штаммов микроорганизмов, выделенных из влагалища женщин репродуктивного возраста: Candida spp. (n = 83), бактерии семейства Enterobacteriaceae (n = 138), Streptococcus agalactiae (n = 72), Enterococcus spp. (n = 147), Staphylococcus spp. (n = 37), Actinomyces urogenitalis (n = 7), Gardnerella vaginalis (n = 27), Atopobium vaginae (n = 5). Взвесь каждого штамма микроорганизма в объеме 0,5 мл (0,5 по Мак-Фарланду) наносили на поверхность плотной питательной среды (Muller-Hinton Agar или 5 % Blood Muller-Hinton Agar). Затем поочередно на три сектора калиброванной петлей наносили разведения препарата Тержинан. Чашки Петри инкубировали 24 ч при температуре 37 °С. Учет результатов проводили визуально, замеряя диаметр зоны задержки роста. Результаты. Большинство клинических изолятов Candida albicans были чувствительны (S) к препарату, исследуемому как в цельном виде (без разведения), так и в разведениях в 10 и 100 раз. Тержинан без разведения и в разведении 1 : 10 (то есть в концентрации 0,1) оказывал 100 % эффект на все тестируемые бактерии семейства Enterobacteriaceae. Чувствительность грамположительных бактерий к антибиотикам, входящим в состав Тержинана, составила 74,1 %. Высокочувствительными (100 %) были стафилококки, в том числе Staphylococcus aureus. Чувствительность Streptococcus agalactiae и Enterococcus spp. составила 70 %. Все выделенные клинические штаммы Gardnerella vaginalis и Atopobium vaginae были чувствительны к комбинации антибактериальных препаратов, входящих в состав Тержинана, что коррелирует с данными о высокой эффективности лечения им бактериального вагиноза. Выводы. В опыте in vitro комбинированный препарат Тержинан показал высокую эффективность в отношении основных групп микроорганизмов, выделяемых из влагалища, в том числе при патологических состояниях, таких как бактериальный вагиноз и вульвовагинит различной этиологии.

Ключевые слова: Тержинан; штаммы микроорганизмов; бактериальный вагиноз; вульвовагинит; чувствительность к антибактериальным препаратам.

EFFECT OF THE COMBINED PREPARATION TERZHINAN ON MICROORGANISMS ISOLATED FROM THE UROGENITAL TRACT OF WOMEN. IN VITRO EXPERIMENT © A.M. Savicheva, E.V. Spasibova

The Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology named after D.O. Ott, Saint Petersburg, Russia

For citation: Savicheva AM, Spasibova EV. Effect of the combined preparation Terzhinan on microorganisms isolated from the urogenital tract of women. In vitro experiment. Journal of Obstetrics and Women's Diseases. 2017;66(5):21 -26. doi: 10.17816/ JOWD66521-26

Received: 04.07.2017 Accepted: 22.09.2017

Introduction. The study is in vitro experiment, aimed to determine antibiotic susceptibility of microorganisms isolated from the urogenital tract of women to the combination of substances included in the preparation Terzhinan. Methods. In total, 516 microorganism strains isolated from the vagina of reproductive age women have been tested: Candida spp. (n = 83), bacteria of the family Enterobacteriaceae (n = 138), Streptococcus agalactiae (n = 72), Enterococcus spp. (n = 147), Staphylococcus spp. (n = 37), Actinomyces urogenitalis (n = 7), Gardnerella vaginalis (n = 27), Atopobium

vaginae (n = 5). Suspensions of each strain in a volume of 0.5 ml (0.5 according to McFarland) were applied onto culture medium (Muller-Hinton Agar or 5% Blood Muller-Hinton Agar). Furthermore, serial dilutions of Terzhinan were applied with a calibrated loop onto three sectors. Petri dishes were then incubated at 37 °C for 24 h. The results were evaluated visually, by measuring growth inhibition zones. Results. The majority of Candida albicans isolates were susceptible (S) to the preparation, using both undiluted and diluted (10 and 100 times) preparation. Terzhinan without dilution and in the dilution 1:10 was 100% effective against all tested bacteria of the family Enterobacteriaceae. Susceptibility of gram positive bacteria to the antibiotics included in Terzhinan, was 74.1%. All isolates of staphylococci, including Staphylococcus aureus, were susceptible. The frequency of susceptible strains of Streptococcus agalactiae and Enterococcus spp. was 70%. All clinical isolates of Gardnerella vaginalis and Atopobium vaginae were susceptible to the combinations of antibiotics included in the preparation Terzhinan, which is in agreement with data on its high efficiency in the treatment of bacterial vaginosis. Conclusions. In in vitro experiment, the combined preparation Terzhinan showed high activity against major groups of microorganisms isolated from the vagina including pathological conditions, such as bacterial vaginosis and vulvovaginitis of different etiology.

Keywords: Terzhinan; strains of microorganisms; bacterial vaginosis; vulvovaginitis; susceptibility to antibacterial drugs.

Введение

Вульвовагиниты различной этиологии и бактериальный вагиноз являются наиболее частой причиной обращения женщин к гинекологу. В структуре воспалительных заболеваний женских половых органов суммарная частота бактериального вагиноза, кандидозного вульвовагинита и аэробного вагинита достигает 90 %. Характерными особенностями этих состояний в настоящее время являются полимикробная этиология, стертая клиническая картина и склонность к рецидивированию. Это обусловлено формированием смешанных биопленок, которое способствует ускорению роста, увеличению количества и активности микроорганизмов, входящих в их состав, повышению их выживаемости и снижению эффективности терапии монопрепаратами.

Возбудителями специфических вагинитов являются Trichomonas vaginalis, Candida spp. При аэробных вагинитах наиболее часто выделяются стафилококки, стрептококки, бактерии семейства Enterobacteriaceae. Бактериальный вагиноз (БВ) представляет собой клинический полимикробный синдром, при котором происходит замещение вагинальных лактобацилл большим количеством преимущественно анаэробных микроорганизмов. Доминирующими бактериями, ассоциированными с БВ, являются Gardnerella vaginalis и Atopobium vaginae.

Препарат Тержинан (вагинальные таблетки Лаборатории БУШАРА-РЕКОРДАТИ, Франция) существует на российском фармакологическом рынке в течение многих лет и успешно зарекомендовал себя в клинической практике. Каждая вагинальная таблетка содержит: тернидазол 200 мг — производное имидазола для местного применения, активный в отношении обли-гатных, факультативных анаэробных бактерий

(в том числе Gardnerella vaginalis) и трихомонад; неомицина сульфат 100 мг (65 000 МЕ) — ами-ногликозидный антибиотик широкого спектра действия, эффективный в отношении грампо-ложительных и грамотрицательных бактерий; нистатин 100 000 ЕД — полиеновый противогрибковый антибиотик, подавляющий рост грибов рода Candida; преднизолон 3 мг — кор-тикостероид, оказывающий противовоспалительное и десенсибилизирующее действие.

Проведенные исследования доказывают высокую эффективность Тержинана при лечении вульвовагинитов различной этиологии и бактериального вагиноза [1]. Он рекомендован как препарат выбора для местной терапии кандидозных вульвовагинитов у беременных и небеременных женщин [2]. Исследование Е.В. Липовой и Р.С. Хрзаян (2006) показало высокую эффективность монотерапии Тержинаном бактериального вагиноза [3].

Нарушения физиологического микробиоценоза служат кофактором развития церви-кальной интраэпителиальной неоплазии (CIN) вследствие изменения восприимчивости клеток влагалищного эпителия к вирусу папилломы человека (ВПЧ) [4, 5].

Комплексный подход к терапии пациенток с предраковыми заболеваниями шейки матки включает в себя, наряду с хирургическим лечением, применение антибактериальных препаратов местного действия. Предоперационное назначение Тержинана пациенткам с неопухолевыми заболеваниями шейки матки позволяет дифференцированно подходить к их ведению и снижает частоту необоснованного хирургического лечения на 20 % [6]. Применение Тержинана в сочетании с деструкцией у пациентов с ВПЧ-ассоциированными CIN I на фоне дисбиоза влагалища обеспечивает статистиче-

ски значимое сокращение сроков эпителизации шейки матки [7].

Целью нашего исследования стало определение чувствительности микроорганизмов, выделенных из урогенитального тракта женщин, к комбинации препаратов, входящих в состав Тержинана.

Материалы и методы

В исследовании изучались 516 штаммов микроорганизмов: Candida albicans (n = 63), Candida krusei (n = 11), Candida glabrata (n = 9), Esherichia coli (n = 85), Citrobacter spp. (n = 17), Klebsiella pneumoniae (n = 36), Streptococcus agalactiae (n = 72), Enterococcus spp. (n = 147), Staphylococcus aureus (n = 23), Staphylococcus epidermidis (n = 7), Staphylococcus hominis (n = 4), Staphylococcus haemolyticus (n = 3), Actinomyces urogenitalis (n = 7), Gardnerella vaginalis (n = 27), Atopobium vaginae (n = 5). Все микроорганизмы были выделены из влагалища женщин репродуктивного возраста.

В опыте in vitro использовали суточные культуры бактерий, выращенные на плотных питательных средах: агаре Сабуро для дрож-жеподобных грибов, 5 % кровяном агаре для факультативных анаэробных бактерий, агаре Шедлера с 5 % бараньей крови для анаэробов. Идентификацию микроорганизмов проводили методом MALDI-TOF на масспектрометре Microflex

Таблетки Тержинана растворяли в 10 мл изотонического раствора натрия хлорида (0,9 % NaCl). Исследовали следующие разведения Тержинана: концентрированный раствор (содержимое 1 таблетки) и разведения этого препарата — 1 : 10 и 1 : 100.

Для определения чувствительности микроорганизмов к препарату использовали следующие питательные среды: Muller-Hinton Agar и Blood Muller-Hinton Agar (Oxoid, Великобритания) с добавлением 3 % донорской эритроцитарной

массы и 2 % сыворотки крупного рогатого скота. Питательную среду выбирали в зависимости от потребности микроорганизмов в дополнительных питательных веществах и условий культивирования.

При проведении исследования 0,5 мл взвеси каждого штамма микроорганизма в изотоническом растворе (мутность доводили до 0,5 по Мак-Фарланду) наносили на поверхность плотной питательной среды (Muller-Hinton Agar или 5 % Blood Muller-Hinton Agar) и равномерно с помощью шпателя распределяли по поверхности. Затем поочередно на три сектора калиброванной петлей наносили препарат Тержинан в концентрированном виде и в разведениях (1 : 10, 1 : 100). Чашки Петри с нанесенными культурами и разведениями препарата инкубировали 24 ч при температуре термостата 37 °C. Культуры лактобацилл, гарднерелл и Atopobium vaginae инкубировали в анаэростате с газогене-рирующими пакетами (Oxoid, Великобритания) при температуре 37 °C в течение 24 ч.

Учет результатов чувствительности микроорганизмов к препарату в разных разведениях проводили визуально, замеряя диаметр зоны задержки роста. Чувствительной к данному препарату считали культуру микроорганизма с диаметром задержки роста для дрожжеподобных грибов более 18 мм (по нистатину), для других микроорганизмов — более 17 мм (по неомицину).

Результаты и обсуждение

В табл. 1 приведены данные по чувствительности 83 штаммов Candida spp., выделенных из влагалища женщин репродуктивного возраста, к Тержинану. Большинство клинических изолятов Candida albicans были чувствительны (S) к препарату, исследуемому как в цельном виде (без разведения), так и в разведениях в 10 и 100 раз.

Эти данные свидетельствуют о том, что нистатин, входящий в состав Тержинана, являет-

Таблица 1

Чувствительность дрожжеподобных грибов рода Candida к Тержинану

Table 1

Susceptibility of yeasts of the genus Candida to Terzhinan

Вид дрожжеподобных грибов Препарат без разведения Концентрация препарата

0,1 0,01

S, %

Candida albicans

Candida krusei (n = 11) 0 (n = 11) 0 0

Candida glabrata (n = 9) 0 (n = 9) 0 0

Таблица 2

Чувствительность микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae к Тержинану

Table 2

Susceptibility of microorganisms of the family Enterobacteriaceae to Terzhinan

Микроорганизм Препарат без разведения Концентрация препарата

0,1 0,01

S, %

Энтеробактерии

Escherichia coli

Citrobacter spp.

Klebsiella spp.

Таблица 3

Чувствительность грамположительных микроорганизмов к Тержинану

Table 3

Susceptibility of gram positive microorganisms to Terzhinan

Микроорганизм Препарат без разведения Концентрация препарата

0,1 0,01

S, %

Грамположительные микроорганизмы

Streptococcus agalactiae (gr. B) (n = 72) 68,1 (49) 56,9 (41) 0

Enterococcus sрp. (n = 147) 70,1 (103) 60,5 (89) 0

Staphylococcus aureus

Staphylococcus epidermidis

Staphylococcus hominis

Staphylococcus haemolyticus

Actinomyces urogenitalis

ся эффективным препаратом в лечении канди-дозных вульвовагинитов, вызванных Candida albicans (наиболее частая причина этого заболевания). Что касается других кандид, то все выделенные штаммы — Candida krusei и Candida glabrate — были устойчивы к нистатину.

Результаты исследования чувствительности энтеробактерий к Тержинану приведены в табл. 2.

Бактерии семейства Enterobacteriaceae — частые возбудители аэробных вагинитов. В настоящее время описаны случаи выявления резистентности грамотрицательных бактерий к наиболее часто используемым антибактериальным препаратам, поэтому изучение действия Тержинана на эту группу микроорганизмов представлялось нам актуальным.

Тержинан без разведения и в разведении 1 : 10 (то есть в концентрации 0,1) оказывал 100 % эффект на все тестируемые нами грамотрицательные микроорганизмы. Это имеет существенное клиническое значение, так как таблетка вводится во влагалище и препарат по-

ступает в просвет влагалища в концентрированном виде. Что касается чувствительности грамотрицательных микроорганизмов к большим разведениям (в 100 раз), только незначительная часть изолятов была резистентной к этой концентрации препарата. В клинической практике вряд ли следует ожидать большого разведения препарата вагинальными выделениями.

Чувствительность грамположительных бактерий к антибиотикам, входящим в состав Тержинана в неразведенном состоянии, составила 74,1 % (табл. 3). В разведении 1 : 10 доля чувствительных штаммов грамположительных микроорганизмов оставалась 63,9 %, а в разведении 1 : 100 — лишь 12,2 %. Что касается каждого вида микроорганизмов в отдельности, следует отметить высокую чувствительность стафилококков к компонентам препарата Тержинан, в том числе и Staphylococcus aureus, а также Actinomyces urogenitalis. Энтерококки и Streptococcus agalactiae (стрептококки группы В) оказались менее чувствительны к этому

Таблица 4

Чувствительность БВ-ассоциированных микроорганизмов к Тержинану

Table 4

Susceptibility of BV-associated microorganisms to Terzhinan

Микроорганизм Препарат без разведения Концентрация препарата

0,1 0,01

S, %

БВ-ассоциированные м/о (n = 32) 100 (32) 93,8 (30) 0

Gardnerella vaginalis (n = 27) 100 (27) 92,6 (25) 0

Atopobium vaginae (n = 5) 100 (5) 100 (5) 0

препарату (порядка 70 % при исследовании препарата в концентрированном виде).

Результаты оценки действия препарата Тержинан на бактерии, ассоциированные с БВ, представлены в табл. 4. Большинство изученных нами клинических изолятов гарднерелл и A. vaginae оказались чувствительны к комбинации антибактериальных препаратов, входящих в состав Тержинана, что коррелирует с данными о высокой эффективности лечения им БВ.

Таким образом, в опыте in vitro комбинированный препарат Тержинан показал высокую эффективность в отношении основных групп микроорганизмов, выделяемых из влагалища, в том числе при патологических состояниях, таких как бактериальный вагиноз и вульво-вагинит различной этиологии. Большая часть исследуемых штаммов микроорганизмов, таких как бактерии семейства Enterobacteriaceae, стафилококки, в том числе золотистый стафилококк, Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, Candida albicans, были чувствительны к исследуемому препарату. Недостаточная эффективность Тержинана в отношении Streptococcus agalactiae ограничивает его использование для назначения при выявлении во влагалище стрептококков группы В.

В целом препарат Тержинан, на основании исследования чувствительности микроорганизмов in vitro, может быть рекомендован для лечения бактериального вагиноза (чувствительность Gardnerella vaginalis и Atopobium vaginae 100 %), аэробного вагинита, кандидозного вульвовагинита, вызванного Candida albicans.

Литература

1. Прилепская В.Н., Межевитинова Е.А., Абакаро-ва П.Р., и др. Лечение вульвовагинитов и ваги-нозов: клинико-лабораторная эффективность // Гинекология. - 2013. - T. 15. - № 4. - C. 24-29. [Prilepskaya VN, Mezhevitinova EA, Abakarova PR.

Vulvovaginitis and vaginosis treatment : clinical and laboratory efficiency. Gynecology. 2013; 15(4):24-29. (In Russ.)]

2. Савичева А.М., Захаревич Н.Н., Михнина Е.А. Применение препарата тержинан при вагинальном кандидозе. 1997. [Savicheva AM, Zaharevich NN, Mihnina EA. Primenenie preparata terzhinan pri vaginal'nom kandidoze. 1997 g. (In Russ.)]. Доступен по: https://medi.ru/info/2247. Ссылка активна на 07.05.17.

3. Липова Е.В., Хрзаян Р.С. Эффективность монотерапии бактериального вагиноза и урогениталь-ного кандидоза Тержинаном — комбинированным местнодействующим препаратом // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2006. - T. 6. -№ 5. - C. 66-68. [Lipova EV, Khrzayan RS. Efficiency of monotherapy for bacterial vaginosis and urogenital candidiasis with the combined topical agent Terginan. Rossijskij vestnik akushera-ginekologa. 2006;6(5):66-68. (In Russ.)]

4. Boyle DC, Barton SE, Uthayakumar S, et al. Is bacterial vaginosis associated with cervical intraepithelial neoplasia? Int J Gynec Cancer. 2003; 13(2): 159-63. doi: 10.1046/j.1525-1438.2003.13007.x.

5. Vetrano G, Pacchiarotti A, Lombardi G, et al. Correlation between squamous intraepithelial lesions (SILs) and bacterial vaginosis. Eur J Gynaec Oncol. 2007;28(4):310-2.

6. Леваков С.А., Боровкова Е.И., Дабагян Л., Ше-шукова Н.А. Комплексный подход к лечению пациенток с предраковыми заболеваниями шейки матки в репродуктивном возрасте // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. -2015. - № 3. - C. 13-17. [Levakov SA, Borovkova EI, Sheshukova NA, Dabagyan L. A complex approach to treatment of female patients of reproductive age with precancerous diseases of the cervix. Voprosy ginekologii, akusherstva iperinatologii. 2015;(3):13-17. (In Russ.)]

7. Каратюк Т.И. Эффективность применения комбинированного препарата неомицина, нистатина, преднизолона, тернидазола при проведении

деструктивного лечения шейки матки // Клиническая дерматология и венерология. - 2011. - № 5. -C. 78-80. [Karatiuk TI. The efficacy of the application of a composite neomycin-nistatinum-prednisolone-

ternidazole preparation for the destructive treatment of uterine cervix. Klinicheskaja dermatologija i vene-rologija: nauchno-prakticheskij zhurnal. 2011;(5):78-80. (In Russ.)]

Адреса авторов для переписки (Information about the authors) Алевтина Михайловна Савичева — заслуженный деятель науки РФ, д-р мед. наук, профессор, заведующая лабораторией микробиологии. ФГБНУ «НИИ АГиР им. Д.О. Отта», Санкт-Петербург. E-mail: savitcheva@mail.ru.

Елена Владимировна Спасибова — врач-бактериолог лаборатории микробиологии. ФГБНУ «НИИ АГиР им. Д.О. Отта», Санкт-Петербург. E-mail: elena.rybina@gmail.com.

Alevtina M. Savicheva — Honoured Worker of Science of Russia, Professor, MD, Head of the Laboratory of Microbiology. The Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology named after D.O. Ott, Saint Petersburg, Russia. E-mail: savitcheva@mail.ru.

Elena V. Spasibova — Bacteriologist of the Laboratory of Microbiology. The Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology named after D.O. Ott, Saint Petersburg, Russia. E-mail: elena.rybina@gmail.com.