ХЕЛАТНЫЙ ЦИС-S,S-КОМПЛЕКС ДИХЛОРДИ-1,6-(3,5-ДИМЕТИЛИЗОКСАЗОЛ-4-ИЛ)-2,5-ДИТИАГЕКСАН ПАЛЛАДИЯ(II), ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНУЮ АКТИВНОСТЬ
HEPATOPROTECTIVE CHELATE CIS-S,S-COMPLEX OF DICHLORO-DI-1,6-(3,5-DIMETHYLISOXAZOLE-4-YL)-2,5-DITHIOHEXANE OF PALLADIUM (II)

Предлагаемое изобретение относится к органической химии и медицине, в частности к новому химическому соединению, проявляющему гепатопротекторную активность.
Известны серосодежащие фармакологические композиции на основе окисленного глутатиона GSSG с производными пуриновых оснований, проявляющие гепатопротекторную активность [Патент РФ №2178710, 2002 г.]. Для получения гепатопротекторного агента необходимо использование труднодоступных и дорогостоящих исходных реагентов.
Известен синтетический гепатопротектоный препарат диизопропил 1,3-дитиол-2-илиденмалонат (Малотилат, синонимы: Максималон, Кантек, Трактал), синтез и клинические испытания которого впервые были проведены в Японии [Borole, K.D. Preventive effect of malotilate on ethanol induced hepatic disfunction in rats / K.D. Borole, S.L. Bodhankar // Int. J. Pharm. Bio. Sci. - 2014. - V. 5. - №1. - P. 151-157]. В экспериментах на животных данный препарат нормализует морфологические и биохимические процессы в гепатоцитах при их повреждении четыреххлористым углеродом (тетрахлорметаном). Малотилат способствует коррекции процессов биосинтеза и транспорта м-РНК и т-РНК, включению 14 С-лейцина в белки микросом и цитозоля печени в условиях токсического поражения. Получение известного гепатопротекторного препарата базируется на многостадийном синтезе.
3
В качестве прототипа и препарата сравнения взят эталонный серосодержащий гепатопротекторный препарат S-аденозилметионин - «гептрал», содержащий в молекуле фуранозный цикл, аза-гетероцикл, координированный фрагмент со связью CH-S и аминокислотную группу, фармакологическая активность которого описана в многочисленных источниках [Справочник Машковского. Лекарственные средства [Электронный ресурс] - Режим доступа http://mashkovsky.ru/tiki-index.php?page=Адеметионин: Ю.А. Кучерявый, С.В. Морозов. Гепатопротекторы: рациональные аспекты применения: учеб. пособие для врачей. М.: Форте Принт, 2012. - 36 с.; N.A Osna. Hepatoprotective effects of S-adenosyl-L-methionine against alcohol- and cytochrome P450 2E1-induced liver injury. World J. Gastroenterol. 2010, 16(11), P. 1366-1376].
Синтез указанного препарата многостадиен и базируется на биотехнологическом способе получения.
Задачей изобретения является расширение арсенала биологически активных веществ, в том числе обладающих гепатопротекторной активностью.
Технический результат - получение практически нетоксичного биологически активного нового химического вещества, обладающего гепатопротекторной активностью.
Сущность изобретения: хелатный цис-S,S-комплекс дихлорди-1,6-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-2,5-дитиагексан палладия(II) формулы (1):
,
проявляющий гепатопротекторную активность.
Указанное соединение и его свойства в литературе не описаны.
Заявляемое соединение синтезируют взаимодействием 1,2-бис[сульфанилметил(3,5-диметилизоксазол-4-ил)]этана с хлоридом палладия в среде ацетонитрила при мольном соотношении 1,2-бис[сульфанилметил(3,5-диметилизоксазол-4-ил)]этан: хлорид палладия, равном 1:1, при температуре 15-25°C, предпочтительно 20°C, и атмосферном давлении в течение 2-4 ч, предпочтительно 3 ч. Повышение температуры реакции выше 25°C (например, 60°C) или понижение температуры ниже 15°C (например, 0°C) увеличивают энергозатраты и не приводят к существенному увеличению выхода хелатного цис-S,S-комплекса дихлорди-1,6-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-2,5-дитиагексан палладия(II). Бидентантный реагент 1,2-бис[сульфанилметил(3,5-диметилизоксазол-4-ил)]этан синтезирован по методике [В.Р. Ахметова, Н.С. Ахмадиев, Е.С. Мещерякова, Л.М. Халилов, А.Г. Ибрагимов. Многокомпонентный синтез и биологическая активность (сульфанилалкил)-замещенных азагетероциклов. ХГС, 2014. №5. С. 806-815].
Пример 1
Синтез заявляемого соединения
В стеклянном сосуде при перемешивании и температуре 60°C растворяют 0.2492 г (1.405 ммоль) хлорида палладия(II) в 15 мл ацетонитрила, прибавляют 0.4392 г (1.405 ммоль) 1,2-бис[сульфанилметил(3,5-диметилизоксазол-4-ил)]этана и перемешивают при комнатной температуре (~20°C) в течение 3 ч. Образовавшийся ярко-желтый осадок фильтруют через бумажный фильтр (синяя лента), промывают ацетонитрилом, водой, высушивают без нагревания на воздухе и получают 0.3705 г (54%) цис-S,S-комплекса дихлорди-1,6-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-2,5-дитиагексан палладия(II) (1). Реакция протекает по схеме:
Хелатный цис-S,S-комплекс дихлорди-1,6-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-2,5-дитиагексан палладия(II) формулы (1) образуется только с участием бис[сульфанилметил(3,5-диметилизоксазол-4-ил)]этана и хлорида палладия, взятых в мольном соотношении 1:1.
Другие примеры синтеза заявляемого соединения приведены в таблице 1.
Спектральные характеристики соединения формулы (1).
Хелатный цис-S,S-комплекс дихлорди-1,6-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-2,5-дитиагексан палладия(II)
Порошок желтого цвета.
-1
ИК-спектр (v, см): 334 с.(v Pd-Cl), 307 ср. (v Pd-S).
1
а и е
а и е
3
3
2
2
Спектр ЯМР Н (δ, м.д., J, Гц): 2.26 (с, 6Н, 2 СН (13,23); 2.43 (с, 6Н, 2 СН (6,22)); 2.93 и 3.51 (д, 4Н, J=14.0, 2 СН (9,10)); 4.18 и 4.47 (д, 4Н, J=8.6, 2 СН(7,14));
13
Спектр ЯМР С (δ, м.д.): 10.34 (С-13,23); 11.49 (С-6,22); 29.74 (С-9,10); 37.50 (С-7,14); 107.77 (С-4,15); 159.61 (С-3,16); 168.92 (С-5,19).
+
2
14
20
2
2
2
теор
Масс-спектр, m/z: 512.2637 [M+Na]. Найдено (%):С, 34.07; Н, 3.84; Cl, 15.10; N, 5.82; Pd, 22.47, S, 13.10. PdClCHNOS. М=489.7783. Вычислено (%): С, 34.33; Н, 4.12; Cl, 14.48; N, 5.72; Pd, 21.73, S, 13.09.
Пример 2
Оценка токсичности заявляемого соединения
Острую токсичность определяли при внутрибрюшинном (в/б) введении интактным мышам по методу Litchfield J. и Wilcoxon F. в модификации Прозоровского В.Б. [Прозоровский В.Б. Использование метода наименьших квадратов для пробит-анализа кривых летальности // Фармакология, токсикология. 1962. №1. С. 115-119] в Башкирском государственном медицинском университете.
Выживаемость животных наблюдали в течение 14 суток. Результаты приведены в таблице 2.
50
По результатам сравнительной оценки определения острой токсичности у белых мышей при внутрибрюшинном и пероральном введении установлено, что соединение общей формулы (1) относятся к группе практически нетоксичных соединений по классификации К.К. Сидорова (1001-3000 мг/кг) [Сидоров К.К. О классификации токсичности ядов при парентеральных способах введения // Токсичность новых промышленных химических веществ. 1973. №13. С. 47-51]. При пероральном введении значение ЛД не имеет существенных отличий от таковых при внутрибрюшинном введении.
Пример 3
Оценка гепатопротекторной активности заявляемого соединения на модели острого гепатита
4
4
Скрининговые исследования гепатопротекторной активности проводили in vivo на модели острой интоксикации CCl по 0.2 мл/кг введенной однократно в/б в виде 50% раствора в оливковом масле. За час до CCl в/б вводили испытуемые соединения в дозе 25 мг/кг. Препаратом сравнения служил фармакологически известный гепатопротекторный препарат - гептрал (S-аденозилметионин) 25 мг/кг, интактная группа получала 0.2 мл физраствора (таблица 3).
4
Соединение формулы (1) в дозе 25 мг/кг внутрибрюшинно оказывает выраженное антитоксическое действие на модели острой интоксикации CCl, что проявляется в достоверном снижении летальности с 50% до 0% в отношении контрольных (нелеченых) животных.
4
Для контроля развития цитолитического синдрома и степени поражения печени проводились биохимические пробы сыворотки крови на фоне острого гепатита CCl на десятый день наблюдения.
Свидетельством токсического поражения печени и развития цитолитического синдрома (маркеры заболевания печени) является не только повышение активности ферментов цитолиза в сыворотке крови, но и преобладание уровня аланинаминотрансферазы (АЛТ) к аспартатаминотрансферазе (ACT). Введение соединения формулы (1) в дозе 25 мг/кг на 70% достоверно снижало (р<0.05) уровень АЛТ (в сравнении с нелеченой группой животных). Группа, получавшая препарат сравнения гептрал в той же дозе, лишь на 53% (р<0.05) (таблица 4).
Достоверного снижения ACT в группах контрольных и леченых животных не было. Во всех группах с острым гепатитом к десятому дню наблюдений было повышение уровня прямого билирубина, по сравнению с данными показателей интактной группы животных.
Пример 4
Оценка гистологических исследований
Окраска гематоксилином, эозином, по общепринятым методикам на гистологическом комплексе MICROM («Карл Цейс», Германия). Определен индекс гистологической активности (ИГА). Система оценки показателей белковой дистрофии, воспалительной инфильтрации, гиалиново-капельной дистрофии - 4-балльная.
4
Введение CCl белым мышам без лечения привело к грубым структурным изменениям в виде крупнокапельной дистрофии гепатоцитов, лимфогистиоцитарной инфильтрации, нарушениям структур печени.
Предварительное введение испытуемых соединений и гептрала в дозе 25 мг/кг привело к меньшей выраженности изменений морфологических структур печени: уменьшению воспалительной инфильтрации, некрозов гепатоцитов, снижению степени дистрофии гепатоцитов.
Полуколичественный метод оценки степени активности патологических процессов в печени показывает:
1) достоверное снижение ИГА по сравнению с данными контрольных животных наблюдается на фоне терапии соединением общей формулы (1);
2) степень жировой дистрофии печени у белых мышей, леченных соединением формулы (1), минимальна: гепатоциты с жировыми включениями находятся только на периферии печеночной дольки.
Таким образом, получено новое практически нетоксичное (IV класс) соединение хелатный цис-S,S-комплекс дихлорди-1,6-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-2,5-дитиагексан палладия(II) формулы (1), обладающее гепатопротекторной активностью у лабораторных животных (белых мышей) в дозе 25 мг/кг внутрибрюшинно на модели острого гепатита, вызванного четыреххлористым углеродом. Соединение, содержащее палладий, не уступает препарату сравнения гептралу (S-аденозилметионин) по показателям:
а) выживаемости животных (100%, гептрал - 80%);
б) биохимическим (АЛТ, ACT, прямой билирубин);
в) гистологическим (поражения паренхимы печени минимальны).