ПРОНИКАЮЩИЕ В КЛЕТКИ ПЕПТИДЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ ИНТЕРФЕРОН-РЕГУЛИРУЮЩИЙ ФАКТОР 5

1. Пептид, проникающий в клетку, который связывает регуляторный фактор интерферона IRF5 (CPP-IRF5), где пептид содержит аминокислотную последовательность длиной от 20 до 40 аминокислот, и где указанная аминокислотная последовательность дополнительно содержит, в частности, мотив аминокислотной последовательности, выбранный из группы, состоящей из:
a) I-x-L-x-I-S-x-P-x-x-K (SEQ ID №25), где
I представляет собой изолейцин,
L представляет собой лейцин,
S представляет собой серин,
P представляет собой пролин,
K представляет собой лизин, а
x независимо выбран среди всех аминокислот; или
b) Y-R1-R2-R3-R8-R4-R5-R9 (SEQ ID № 24), где
Y представляет собой тирозин,
R1 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы триптофана (W) или аланина (А),
R2 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из лейцина (L) или треонина (Т),
R3 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из лейцина (L), аланина (А), аспарагиновой кислоты (D), фенилаланина (F) или тирозина (Y),
R8 представляет собой лейцин (L),
R4 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из лейцина (L), глицина (G) или треонина (Т),
R5 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из фенилаланина (F), лейцина (L) или метионина (M), и
R9 представляет собой валин (V) или лейцин (L); или
c) K-D-R6-M-V-R7-F-K-D (SEQ ID № 2), где
K представляет собой лизин,
D представляет собой аспарагиновую кислоту,
R6 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из лейцина и аспарагиновой кислоты,
M представляет собой метионин,
R7 выбран из группы, состоящей из глутамин-триптофана (Q-W) и аргинин-фенилаланина (R-F), и
F представляет собой фенилаланин;
или его фармацевтически приемлемые соли.
2. Пептид CPP-IRF5 по п. 1, который содержит аминокислотную последовательность длиной от 20 до 40 аминокислот, где указанная аминокислотная последовательность дополнительно содержит, в частности, мотив аминокислотной последовательности, выбранный из группы, состоящей из:
a) Y-R1-R2-R3-L-R4-R5-V (SEQ ID № 1), где
Y представляет собой тирозин,
R1 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы триптофана (W) или аланина (А),
R2 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из лейцина (L) или треонина (Т),
R3 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из лейцина (L), аланина (А), аспарагиновой кислоты (D) или фенилаланина (F),
L представляет собой лейцин,
R4 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из лейцина (L), глицина (G) или треонина (Т),
R5 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из фенилаланина (F), лейцина (L) или метионина (M), и
V представляет собой валин; или
b) K-D-R6-M-V-R7-F-K-D (SEQ ID № 2), где
K представляет собой лизин,
D представляет собой аспарагиновую кислоту,
R6 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из лейцина и аспарагиновой кислоты,
M представляет собой метионин,
R7 выбран из группы, состоящей из глутамин-триптофана (Q-W) и аргинин-фенилаланина (R-F), а
F представляет собой фенилаланин;
или его фармацевтически приемлемые соли.
3. Пептид CPP-IRF5 по п. 1, который содержит аминокислотную последовательность длиной от 20 до 35 аминокислот.
4. Пептид CPP-IRF5 по п. 1, где мотив аминокислотной последовательности представляет собой I-x-L-x-I-S-x-P-x-x-K (SEQ ID № 25), где x является таким, как определено в п. 1.
5. Пептид CPP-IRF5 по п. 1, где мотив аминокислотной последовательности представляет собой Y-R1-R2-R3-R8-R4-R5-R9 (SEQ ID № 24), где R1, R2, R3, R4, R5, R8 и R9 являются такими, как определено в п. 1.
6. Пептид CPP-IRF5 по п. 1, где мотив аминокислотной последовательности представляет собой Y-R1-R2-R3-L-R4-R5-V (SEQ ID № 1), где R1, R2, R3, R4 и R5 являются такими, как определено в п. 2.
7. Пептид CPP-IRF5 по п. 1, где мотив аминокислотной последовательности представляет собой MANLG-Y-R1-R2-R3-L-R4-R5-V (SEQ ID № 3), где М представляет собой метионин, А представляет собой аланин, N представляет собой аспарагин, L представляет собой лейцин, G представляет собой глицин, Y является тирозин, V представляет собой валин, a R1, R2, R3, R4 и R5 являются такими, как определено в п. 1.
8. Пептид CPP-IRF5 по п. 1, где мотив аминокислотной последовательности представляет собой MANLG-Y-R1-R2-R3-L-R4-R5-V (SEQ ID № 3), где M представляет собой метионин, A представляет собой аланин, N представляет собой аспарагин, L представляет собой лейцин, G представляет собой глицин, Y представляет собой тирозин, V представляет собой валин, a R1, R2, R3, R4 и R5 являются такими, как определено в п. 2.
9. Пептид CPP-IRF5 по п. 1, где мотив аминокислотной последовательности представляет собой K-D-R6-M-V-R7-F-K-D (SEQ ID № 2), где R6 и R7 являются такими, как определено в п. 2.
10. Пептид CPP-IRF5 по п. 1, дополнительно содержащий второй пептид, который представляет собой проникающий в клетку пептид (СРР).
11. Пептид CPP-IRF5 по п. 1, дополнительно содержащий N-концевую модификацию, C-концевую модификацию или обе модификации.
12. Пептид CPP-IRF5 по п. 1, дополнительно содержащий N-концевую модификацию, выбранную из ацетилирования, C-концевую модификацию, выбранную из амидирования, или обе модификации.
13. Пептид CPP-IRF5 по п. 1, которые содержат аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
SEQ ID № 13: IRLQISNPYLKFIPLKRAIWLIK,
SEQ ID № 14: MIILIISFPKHKDWKVILVK,
SEQ ID № 4: MANLGYWLLLLFVTMWTDVGLAKKRPKP,
SEQ ID № 5: MANLGYWLALLFVTMWTDVGLFKKRPKP,
SEQ ID № 8: KDLMVQWFKDGGPSSGAPPPS,
SEQ ID № 9: IRLQISNPDLKDLMVQWFKDGGPSSGAPPPS и
SEQ ID № 10: PFPPLPIGEEAPKDDMVRFFKDLHQYLNVV.
14. Пептид, проникающий в клетку, который связывает регуляторный фактор интерферона IRF5 (CPP-IRF5), где указанный пептид содержит аминокислотную последовательность длиной от 20 до 40 аминокислот, выбранную из группы, состоящей из:
SEQ ID № 6: MANLGYWLLALFVTYWTDLGLVKKRPKP,
SEQ ID № 7: MANLGYWLYALFLTMVTDVGLFKKRPKP,
или его фармацевтически приемлемые соли.
15. Пептид CPP-IRF5 по п. 1, которые содержат аминокислотную последовательность SEQ ID № 13: IRLQISNPYLKFIPLKRAIWLIK.
16. Способ скрининга пептидов, которые ингибируют IRF5, включающий:
a) обеспечение анализируемого пептида,
b) разведение указанного пептида в растворе,
c) получение первого буферного раствора, содержащего биотин-IRF5 и His-IRF5, где каждый IRF5 представляет собой смесь мономера и димера,
d) объединение разведенного раствора пептида, полученного на этапе (b), с буферным раствором, полученным на этапе (с), и инкубация при комнатной температуре,
e) получение второго буферного раствора, содержащего стрептавидин, конъюгированный с Eu, в качестве донора флуоресценции, и анти-His-антитело, меченое АРС (аллофикоцианином), в качестве акцептора флуоресценции, для обнаружения формирования димера биотина-IRF5 и His-IRF5,
f) объединение второго буферного раствора, полученного на этапе (е), с объединенными растворами, полученными на этапе (d), и инкубация примерно при 4°C в течение примерно 1 дня,
g) определение формирования димеров через анализ FRET, в котором сниженный сигнал FRET по сравнению с контрольной группой указывает на ингибирование формирования IRF5-димеров пептидом.
17. Способ по п. 16, где FRET-анализ является однородным анализом резонансного переноса энергии флуоресценции с временным разрешением (TR-FRET).
18. Способ по п. 16, где IRF5 выбран из группы, состоящей из мутантного S430D (222-467) и IRF5 дикого типа (222-467).
19. Фармацевтическая композиция, включающая один или более чем один пептид CPP-IRF5 по любому из пп. 1-15 или их фармацевтически приемлемые соли и один или более чем один фармацевтически приемлемый эксципиент.
20. Пептид CPP-IRF5 по любому из пп. 1-15 или их фармацевтически приемлемые соли для применения в качестве терапевтически активных веществ.
21. Пептид CPP-IRF5 по любому из пп. 1-15 или их фармацевтически приемлемые соли для применения при лечении или профилактике системной красной волчанки (SLE) или других аутоиммунных заболеваний, при которых сигналинг IRF5 играет важную роль.
22. Способ лечения или профилактики системной красной волчанки (SLE) или других аутоиммунных заболеваний, при которых сигналинг IRF5 играет важную роль, где способ включает введение субъекту пептидов CPP-IRF5 по любому из пп. 1-15 или их фармацевтически приемлемых солей.
23. Применение пептидов CPP-IRF5 по любому из пп. 1-15 или их фармацевтически приемлемых солей при лечении или профилактике системной красной волчанки (SLE) или других аутоиммунных заболеваний, при которых сигналинг IRF5 играет важную роль.
24. Применение пептидов CPP-IRF5 по любому из пп. 1-15 или их фармацевтически приемлемых солей при получении лекарственных средств для лечения или профилактики системной красной волчанки (SLE) или других аутоиммунных заболеваний, при которых сигналинг IRF5 играет важную роль.
25. Пептид, проникающий в клетку, который связывает регуляторный фактор интерферона IRF5 (CPP-IRF5), где указанный пептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID №№ 4-10 и 13-14.
26. Пептид, проникающий в клетку, который связывает регуляторный фактор интерферона IRF5 (CPP-IRF5), где указанный пептид содержит аминокислотную последовательность длиной по меньшей мере от 20 до примерно 35 аминокислот, где указанная аминокислотная последовательность также содержит, в частности, мотив аминокислотной последовательности, выбранный из группы, состоящей из:
a) Y-R1-R2-R3-L-R4-R5-V (SEQ ID № 1),
где Y представляет собой тирозин (Tyr), R1 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы триптофана (Trp) или аланина (Ala), R2 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из лейцина (Leu) или треонина (Thr), R3 представляет собой аминокислоту, выбранную из
группы, состоящей из лейцина (Leu), аланина (Ala), аспарагиновой кислоты (Asp) или фенилаланина (Phe), L представляет собой лейцин (Leu), R4 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из лейцина (Leu), глицина (G) или треонина (Thr), R5 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из фенилаланина (Phe), лейцина (Leu) или метионина (Met), а V представляет собой валин (Val); или
b) K-D-R6-M-V-R7-F-K-D (SEQ ID № 2),
где K представляет собой лизин (Lys); D представляет собой аспарагиновую кислоту (Asp), R6 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из лейцина (Leu) или аспарагиновой кислоты (Asp), М представляет собой метионин (Met), R7 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Q-W и R-F, a F представляет собой фенилаланин (Phe).
27. Пептид по п. 26, проникающий в клетку, где мотив аминокислотной последовательности представляет собой MANLG-Y-R1-R2-R3-L-R4-R5-V (SEQ ID № 3).
28. Пептид по п. 27, проникающий в клетку, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID №№ 4-7.
29. Пептид по п. 26, проникающий в клетку, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID №№ 8-10, где также мотив аминокислотной последовательности представляет собой K-D-R6-M-V-R7-F-K-D (SEQ ID № 2).
30. Выделенный и очищенный пептид длиной по меньшей мере от 20 до примерно 40 аминокислот, состоящий из первого и возможного второго полипептида, где первый пептид:
i. содержит аминокислотную последовательность длиной по меньшей мере 20 аминокислот,
ii. способен связывать регуляторный фактор интерферона 5 (IRF5),
iii. и где первый пептид включает, в частности, мотив аминокислотной последовательности K-D-R6-M-V-R7-F-K-D (SEQ ID № 2),
а возможный второй пептид представляет собой пептид, проникающий в клетку (СРР).
31. Выделенный и очищенный пептид длиной по меньшей мере от 20 до примерно 40 аминокислот, состоящий из первого и возможного второго полипептида, где первый пептид
i. содержит аминокислотную последовательность длиной по меньшей мере 20 аминокислот,
ii. способен связывать человеческий регуляторный фактор интерферона 5 (IRF5),
iii. и где первый пептид включает аминокислотную последовательность SEQ ID №№ 8-10,
а возможный второй пептид представляет собой пептид, проникающий в клетку (СРР).