ПРИМЕНЕНИЕ ГЛИКОЗИДАЗ В ПОЛУЧЕНИИ ОЛИГОСАХАРИДОВ

1. Способ получения целевого олигосахарида с использованием генетически сконструированной микробной клетки-хозяина, который включает следующие стадии:
(i) предоставление генетически сконструированной микробной клетки-хозяина, которая способна продуцировать целевой олигосахарид, причем указанная микробная клетка-хозяин генетически сконструирована с возможностью экспрессии по меньшей мере одной гетерологичной гликозидазы, способной осуществлять внутриклеточную деградацию побочных продуктов метаболизма - сахаридов, которые образуются в процессе внутриклеточного биосинтеза целевого олигосахарида, и при этом указанная микробная клетка-хозяин способна повторно использовать продукты деградации, являющиеся результатом ферментативной активности указанной гликозидазы, для продукции целевого олигосахарида;
(ii) культивирование генетически сконструированной микробной клетки-хозяина в условиях и в среде, являющихся пермиссивными в отношении продукции целевого олигосахарида, с получением, таким образом, целевого олигосахарида; и
(iii) возможно выделение целевого олигосахарида.
2. Генетически сконструированная микробная клетка-хозяин для получения целевого олигосахарида, где указанная микробная клетка-хозяин:
a) способна продуцировать целевой олигосахарид;
b) генетически сконструирована с возможностью экспрессии по меньшей мере одной гетерологичной гликозидазы, которая может осуществлять внутриклеточную деградацию побочных продуктов метаболизма - сахаридов, которые образуются в процессе внутриклеточного биосинтеза целевого олигосахарида; и
c) способна повторно использовать продукты деградации, полученные в результате ферментативной активности указанной гликозидазы, для продукции целевого олигосахарида.
3. Способ по п. 1 или генетически сконструированная микробная клетка-хозяин по п. 2, где гетерологичная гликозидаза выбрана из группы, состоящей из фукозидаз, сиалидаз, гексозаминидаз, галактозидаз и глюкозидаз.
4. Способ по п. 1 или генетически сконструированная микробная клетка-хозяин по п. 2 или 3, где гетерологичная гликозидаза выбрана из группы, состоящей из α-1,2-фукозидаз, α-1,3-фукозидаз, α-2,3-сиалидаз, α-2,6-сиалидаз, α-2,8-сиалидаз, β-1,3-галактозидаз, β-1,4-галактозидаз, β-1,6-галактозидаз, β-N-ацетилгексозаминидаз и β-1,3-глюкозидаз.
5. Способ по любому из пп. 1, 3-4 или генетически сконструированная микробная клетка-хозяин по любому из пп. 2-4, где указанная генетически сконструированная микробная клетка-хозяин генетически сконструирована с возможностью экспрессии гетерологичной гликозилтрансферазы, предпочтительно в виде гликозилтрансферазы, выбранной из группы, состоящей из фукозилтрансфераз, сиалилтрансфераз, галактозилтрансфераз, N-ацетил-глюкозаминилтрансфераз и глюкозилтрансфераз.
6. Способ по любому из пп. 1, 3-5 или генетически сконструированная микробная клетка-хозяин по любому из пп. 2-5, где указанная микробная клетка-хозяин генетически сконструирована с возможностью экспрессии гетерологичной α-1,3-фукозилтрансферазы и гетерологичной α-1,2-фукозидазы.
7. Способ по любому из пп. 1, 3-5 или генетически сконструированная микробная клетка-хозяин по любому из пп. 2-5, где указанная микробная клетка-хозяин генетически сконструирована с возможностью экспрессии гетерологичной α-1,2-фукозилтрансферазы и гетерологичной α-1,3-фукозидазы.
8. Способ по любому из пп. 1, 3-5 или генетически сконструированная микробная клетка-хозяин по любому из пп. 2-5, где указанная микробная клетка-хозяин генетически сконструирована с возможностью экспрессии гетерологичной β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы, гетерологичной α-1,2-фукозилтрансферазы, гетерологичной β-1,3-галактозилтрансферазы и гетерологичной α-1,3-фукозидазы.
9. Способ по любому из пп. 1, 3-5 или генетически сконструированная микробная клетка-хозяин по любому из пп. 2-5, где указанная микробная клетка-хозяин генетически сконструирована с возможностью экспрессии гетерологичной α-2,6-сиалилтрансферазы и гетерологичной α-2,3-сиалидазы.
10. Способ по любому из пп. 1, 3-5 или генетически сконструированная микробная клетка-хозяин по любому из пп. 2-5, где указанная микробная клетка-хозяин генетически сконструирована с возможностью экспрессии гетерологичной β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы, гетерологичной β-1,4-галактозилтрансферазы и гетерологичной β-1,3-галактозидазы, и/или β-1,3-глюкозидазы, и/или галактан-β-1,3-галактозидазы.
11. Способ по любому из пп. 1, 3-5 или генетически сконструированная микробная клетка-хозяин по любому из пп. 2-5, где указанная микробная клетка-хозяин генетически сконструирована с возможностью экспрессии гетерологичной β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы, гетерологичной β-1,3-галактозилтрансферазы и гетерологичной β-1,3-глюкозидазы и/или галактан-β-1,3-галактозидазы.
12. Способ по любому из пп. 1, 3-11 или генетически сконструированная микробная клетка-хозяин по любому из пп. 2-11, где целевой олигосахарид представляет собой олигосахарид грудного молока, предпочтительно олигосахарид грудного молока, выбранный из группы, состоящей из 2'-фукозиллактозы (2'-FL), 3-фукозиллактозы (3-FL), 2'3-дифукозиллактозы, лакто-N-триозы II, лакто-N-тетраозы, лакто-N-неотетраозы, лакто-N-фукопентаозы I, лакто-N-неофукопентаозы I, лакто-N-фукопентаозы II, лакто-N-фукопентаозы III, лакто-N-фукопентаозы V, лакто-N-неофукопентаозы V, лакто-N-дифукогексаозы I, лакто-N-дифукозилгексаозы II, пара-Лакто-N-фукозилгексаозы, фукозил-лакто-N-сиалилпентаозы b, фукозил-лакто-N-сиалилпентаозы с, фукозил-лакто-N-сиалилпентаозы с, дисиалил-лакто-N-фукопентаозы, 3-фукозил-3'-сиалиллактозы, 3-фукозил-6'-сиалиллактозы, лакто-N-неодифукогексаозы I, 3'-сиалиллакозы, 6'-сиалиллактозы, сиалиллакто-N-тетраозы a (LST-a), сиалиллакто-N-тетраозы b (LST-b), сиалиллакто-N-тетраозы с (LST-c) и дисиалиллакто-N-тетраозы.
13. Применение генетически сконструированной микробной клетки-хозяина по любому из пп. 2-12 для получения целевого олигосахарида, предпочтительно олигосахарида, выбранного их группы ОГМ.
14. Олигосахарид, предпочтительно олигосахарид, выбранный из группы ОГМ, полученный способом по любому из пп. 1, 3-12 или посредством применения генетически сконструированной микробной клетки-хозяина по любому из пп. 2-12, для изготовления питательной композиции.
15. Питательная композиция, содержащая по меньшей мере один олигосахарид, который получен способом по любому из пп. 1, 3-12 или посредством применения генетически сконструированной микробной клетки-хозяина по любому из пп. 2-12, где по меньшей мере один олигосахарид представляет собой предпочтительно ОГМ.