ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА

1. Выделенное антитело, специфически связывающее рецептор человеческого эпидермального фактора роста 2 (HER2) и сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), содержащее последовательность гипервариабельной области (HVR) L1, включающую последовательность NIAKTISGY (SEQ ID NO: 1).
2. Антитело по п.1, отличающееся тем, что дополнительно содержит одну или две HVR последовательности, выбранные из группы, состоящей из:
(i) HVR-L2, содержащей последовательность WGSFLY (SEQ ID NO: 2); и
(ii) HVR-L3 содержащей последовательность HYSSPP (SEQ ID NO: 3).
3. Антитело по п.1, отличающееся тем, что дополнительно содержит одну, две или три HVR последовательности, выбранные из группы, состоящей из:
(i) HVR-H1, содержащей последовательность NIKDTY (SEQ ID NO: 4);
(ii) HVR-H2, содержащей последовательность RIYPTNGYTR (SEQ ID NO: 5); и
(iii) HVR-Н3, содержащей последовательность WGGDGFYAMD (SEQ ID NO: 6).
4. Антитело по п.1, отличающееся тем, что дополнительно содержит одну, две или три HVR последовательности, выбранные из группы, состоящей из:
(i) HVR-H1, содержащей последовательность NISGTY (SEQ ID NO: 7);
(ii) HVR-H2, содержащей последовательность RIYPSEGYTR (SEQ ID NO: 8); и
(iii) HVR-Н3, содержащей последовательность WVGVGFYAMD (SEQ ID NO: 9).
5. Антитело по п.1, отличающееся тем, что связывает человеческий и мышиный VEGF с Kd 150 нМ или сильнее и HER2 с Kd 7 нМ или сильнее.
6. Антитело по п.1, отличающееся тем, что ингибирует VEGF-индуцированную пролиферацию клеток и пролиферацию HER2-экспрессирующих клеток по сравнению с контролем.
7. Антитело по п.1, отличающееся тем, что ингибирует связывание VEGF с VEGF рецептором 2 (VEGFR2).
8. Выделенное антитело, отличающееся тем, что связывает человеческий и мышиный VEGF с Kd 150 нМ или сильнее и HER2 с Kd 7 нМ или сильнее, и тем, что ингибирует VEGF-индуцированную пролиферацию клеток и пролиферацию HER2-экспрессирующих клеток по сравнению с контролем.
9. Антитело по п.8, отличающееся тем, что связывает человеческий и мышиный VEGF с Kd 36 нМ или сильнее и HER2 с Kd 1 нМ или сильнее.
10. Фрагмент выделенного антитела, отличающийся тем, что связывает человеческий и мышиный VEGF с Kd 58 нМ или сильнее и HER2 с Kd 6 нМ или сильнее, и тем, что указанный фрагмент антитела ингибирует VEGF-индуцированную пролиферацию клеток и пролиферацию HER2-экспрессирующих клеток по сравнению с контролем.
11. Фрагмент антитела по п.10, отличающийся тем, что связывает человеческий и мышиный VEGF с Kd 33 нМ или сильнее и HER2 с Kd 0.7 нМ или сильнее.
12. Фрагмент антитела по п.п.10 или 11, отличающийся тем, что представляет собой фрагмент Fab.
13. Выделенное антитело, отличающееся тем, что содержит области HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, причем каждая из этих областей содержит, по порядку, последовательность SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 и 6, и тем, что специфически связывает HER2 и VEGF.
14. Выделенное антитело, отличающееся тем, что содержит области HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3, причем каждая из этих областей содержит, по порядку, последовательность SEQ ID NO: 1, 2, 3, 7, 8 и 9, и тем, что указанное антитело специфически связывает HER2 и VEGF.
1
3
4
5
6
7
8
9
1
3
4
5
15. Выделенное антитело, содержащее последовательность HVR L1, включающую последовательность XIXXXXXXXY (SEQ ID NO: 83), в которой X обозначает любую аминокислоту, за исключением Asp, Х обозначает любую аминокислоту, за исключением Pro, X обозначает любую аминокислоту, за исключением Arg, X обозначает любую аминокислоту, за исключением Ser, и отличающееся тем, что указанное антитело специфически связывает HER2 и VEGF.
1
3
4
5
16. Выделенное антитело по п.15, отличающееся тем, что X обозначает Asn, Х обозначает Ala, X обозначает Lys, X обозначает Thr, или любую их комбинацию.
5
7
8
17. Выделенное антитело по п.15 или 16, отличающееся тем, что X обозначает Thr, X обозначает Ser и X обозначает Gly.
18. Выделенное антитело по любому из пп.15 и 16, отличающееся тем, что дополнительно содержит одну или две HVR последовательности, выбранных из группы, состоящей из:
(i) HVR-L2 содержащей последовательность WGSFLY (SEQ ID NO: 2); и
(ii) HVR-L3, содержащей последовательность HYSSPP (SEQ ID NO: 3).
19. Выделенное антитело по любому из пп.15 и 16, отличающееся тем, что дополнительно содержит одну, две или три HVR последовательности, выбранных из группы, состоящей из:
(i) HVR-H1, содержащей последовательность NIKDTY (SEQ ID NO: 4);
(ii) HVR-H2, содержащей последовательность RIYPTNGYTR (SEQ ID NO: 5); и
(iii) HVR-Н3, содержащей последовательность WGGDGFYAMD (SEQ ID NO: 6).
20. Выделенное антитело по любому из пп.15 и 16, отличающееся тем, что дополнительно содержит одну, две или три HVR последовательности, выбранных из группы, состоящей из:
(i) HVR-H1, содержащей последовательность NISGTY (SEQ ID NO: 7);
(ii) HVR-H2, содержащей последовательность RIYPSEGYTR (SEQ ID NO: 8); и
(iii) HVR-Н3, содержащей последовательность WVGVGFYAMD (SEQ ID NO: 9).
21. Выделенное антитело по любому из пп.15 и 16, отличающееся тем, что связывает человеческий и мышиный VEGF с Kd 150 нМ или сильнее и HER2 с Kd 7 нМ или сильнее.
22. Выделенное антитело по любому из пп.15 и 16, отличающееся тем, что ингибирует VEGF-индуцированную пролиферацию клеток и пролиферацию HER2-экспрессирующих клеток по сравнению с контролем.
23. Выделенное антитело по любому из пп.15 и 16, отличающееся тем, что ингибирует связывание VEGF с VEGFR2.
2
3
4
5
6
7
8
9
24. Выделенное антитело по любому из пп.15 и 16, отличающееся тем, что дополнительно содержит последовательность HVR H2, включающую последовательность RXXXXXXXXR (SEQ ID NO: 84), и тем, что указанное антитело специфически связывает HER2 и VEGF.
2
3
4
5
6
7
8
9
5
6
25. Выделенное антитело, специфически связывающее HER2 и VEGF, содержащее последовательность HVR-H2, включающую последовательность RXXXXXXXXR (SEQ ID NO: 85), в которой X обозначает любую аминокислоту, за исключением Thr, а Х обозначает любую аминокислоту, за исключением Asn.
5
6
5
6
26. Выделенное антитело по п.25, отличающееся тем, что Х обозначает Ser, Х обозначает Glu, или Х обозначает Ser, а Х обозначает Glu.
8
27. Выделенное антитело по п.25 или 26, отличающееся тем, что X обозначает Tyr.
28. Выделенное антитело по любому из пп.25 и 26, отличающееся тем, что дополнительно содержит одну или две HVR последовательности, выбранные из группы, состоящей из:
(i) HVR-H1, содержащей последовательность NISGTY (SEQ ID NO: 7);
(ii) HVR-Н3, содержащей последовательность WVGVGFYAMD (SEQ ID NO: 9).
29. Выделенное антитело по любому из пп.25 и 26, отличающееся тем, что дополнительно содержит одну, две или три HVR последовательности, выбранные из группы, состоящей из;
(i) HVR-L1, содержащей последовательность NIAKTISGY (SEQ ID NO: 1);
(ii) HVR-L2, содержащей последовательность WGSFLY (SEQ ID NO: 2);
(iii) HVR-L3, содержащей последовательность HYSSPP (SEQ ID NO: 3).
30. Выделенное антитело по любому из пп.25 и 26, отличающееся тем, что связывает человеческий и мышиный VEGF с Kd 150 нМ или сильнее, a HER2 с Kd 7 нМ или сильнее.
31. Выделенное антитело по любому из пп.25 и 26, отличающееся тем, что ингибирует VEGF-индуцированную пролиферацию клеток и пролиферацию HER2-экспрессирующих клеток по сравнению с контролем.
32. Выделенное антитело по любому из пп.25 и 26, отличающееся тем, что ингибирует связывание VEGF с VEGFR2.
33. Антитело по любому из п.1 или 13, отличающееся тем, что является моноклональным антителом.
34. Антитело по любому из п.1 или 13, отличающееся тем, что представляет собой IgG антитело.
35. Фрагмент антитела по любому из п.1 или 13, отличающийся тем, что специфически связывает HER2 и VEGF.
36. Фрагмент по п.35, отличающийся тем, что представляет собой Fab фрагмент или фрагмент вариабельной области одноцепочечного антитела (scFv).
37. Антитело или фрагмент антитела по любому из пп.1, 10, 13-15, 25, отличающиеся тем, что по меньшей мере участок каркасной последовательности представляет собой консенсусную последовательность человеческой каркасной области.
38. Полинуклеотид, кодирующий антитело или фрагмент антитела по любому из пп.1, 10, 13-15, 25.
39. Полинуклеотид, кодирующий последовательность HVR-L1, содержащую последовательность NIAKTISGY (SEQ ID NO: 1).
40. Полинуклеотид, кодирующий последовательность HVR-L1, содержащую последовательность NIAKTISGY (SEQ ID NO: 1) и (i) последовательность HVR-L2, содержащую последовательность WGSFLY (SEQ ID NO: 2), или (ii) последовательность HVR-L3, содержащую последовательность HYSSPP (SEQ ID NO: 3), или как последовательность по п.(i), так и последовательность по п.(ii).
41. Полинуклеотид по п.39 или 40, отличающийся тем, что дополнительно кодирует одну, две или три HVR последовательности, выбранные из группы, состоящей из:
(i) HVR-H1, содержащей последовательность NIKDTY (SEQ ID NO: 4);
(ii) HVR-H2, содержащей последовательность RIYPTNGYTR (SEQ ID NO: 5); и
(iii) HVR-Н3, содержащей последовательность WGGDGFYAMD (SEQ ID NO: 6).
42. Полинуклеотид по п.39 или 40, отличающийся тем, что дополнительно кодирует одну, две или три HVR последовательности, выбранные из группы, состоящей из:
(i) HVR-H1, содержащей последовательность NISGTY (SEQ ID NO: 7);
(ii) HVR-H2, содержащей последовательность RIYPSEGYTR (SEQ ID NO: 8); и
(iii) HVR-Н3, содержащей последовательность WVGVGFYAMD (SEQ ID NO: 9).
43. Полинуклеотид, кодирующий последовательность HVR-H1, содержащую последовательность NISGTY (SEQ ID NO: 7).
44. Полинуклеотид, кодирующий последовательность HVR-H2, содержащую последовательность RIYPSEGYTR (SEQ ID NO: 8).
45. Полинуклеотид, кодирующий последовательность HVR-H3, содержащую последовательность WVGVGFYAMD (SEQ ID NO: 9).
46. Полинуклеотид, кодирующий последовательность HVR-H1, содержащую последовательность NISGTY (SEQ ID NO: 7); последовательность HVR-H2, содержащую последовательность RIYPSEGYTR (SEQ ID NO: 8); и последовательность HVR-H3, содержащую последовательность WVGVGFYAMD (SEQ ID NO: 9).
1
3
4
5
6
7
8
9
1
3
4
5
47. Полинуклеотид, кодирующий последовательность HVR-L1, содержащую последовательность XIXXXXXXXY (SEQ ID NO: 83), где X обозначает любую аминокислоту, за исключением Asp, Х обозначает любую аминокислоту, за исключением Pro, Х обозначает любую аминокислоту, за исключением Arg, X обозначает любую аминокислоту, за исключением Ser.
1
3
4
5
6
7
8
9
1
3
4
5
48. Полинуклеотид, кодирующий последовательность HVR-L1, содержащую последовательность XIXXXXXXXY (SEQ ID NO: 83), в которой X обозначает любую аминокислоту, за исключением Asp, Х обозначает любую аминокислоту, за исключением Pro, X обозначает любую аминокислоту, за исключением Arg, X обозначает любую аминокислоту, за исключением Ser, и (i) последовательность HVR-L2, содержащую последовательность WGSFLY (SEQ ID NO: 2), или (ii) последовательность HVR-L3, содержащую последовательность HYSSPP (SEQ ID NO: 3), или как последовательность по п.(i), так и последовательность по п.(ii).
1
3
4
5
7
8
49. Полинуклеотид по п.47 или 48, отличающийся тем, что X обозначает Asn, Х обозначает Ala, X обозначает Lys, X обозначает Thr, Х обозначает Ser, X обозначает Gly, или любую их комбинацию.
2
3
4
5
6
7
8
9
5
6
50. Полинуклеотид, кодирующий последовательность HVR-H2, содержащую последовательность RXXXXXXXXR (SEQ ID NO: 85), в которой X обозначает любую аминокислоту, за исключением Thr, а Х обозначает любую аминокислоту, за исключением Asn.
2
3
4
5
6
7
8
9
5
6
51. Полинуклеотид, кодирующий последовательность HVR-H1, содержащую последовательность NISGTY (SEQ ID NO: 7); последовательность HVR-H2, содержащую последовательность RXXXXXXXXR (SEQ ID NO: 85), в которой Х обозначает любую аминокислоту, за исключением Thr, а Х обозначает любую аминокислоту, за исключением Asn; и последовательность HVR-H3, содержащую последовательность WVGVGFYAMD (SEQ ID NO: 9).
5
6
8
52. Полинуклеотид по п.50 или 51, отличающийся тем, что Х обозначает Ser, Х обозначает Glu, X обозначает Tyr, или любая их комбинация.
53. Полипептид, содержащий последовательность HVR-L1, включающую последовательность NIAKTISGY (SEQ ID NO: 1).
1
3
4
5
6
7
8
9
1
3
4
5
54. Полипептид, содержащий последовательность HVR-L1, включающую последовательность XIXXXXXXXY (SEQ ID NO: 83), в которой X обозначает любую аминокислоту, за исключением Asp, Х обозначает любую аминокислоту, за исключением Pro, X обозначает любую аминокислоту, за исключением Arg, X обозначает любую аминокислоту, за исключением Ser.
55. Полипептид, содержащий последовательность HVR-L1, включающую последовательность NIAKTISGY (SEQ ID NO: 1), и (i) последовательность HVR-L2, включающую последовательность WGSFLY (SEQ ID NO: 2), или (ii) последовательность HVR-L3, включающую последовательность HYSSPP (SEQ ID NO: 3), или как последовательность по п.(i), так и последовательность по п.(ii).
1
3
4
5
6
7
8
9
1
3
4
5
56. Полипептид, содержащий последовательность HVR-L1, включающую последовательность XIXXXXXXXY (SEQ ID NO: 83), в которой X обозначает любую аминокислоту, за исключением Asp, Х обозначает любую аминокислоту, за исключением Pro, X обозначает любую аминокислоту, за исключением Arg, X обозначает любую аминокислоту, за исключением Ser, и (i) последовательность HVR-L2, включающую последовательность WGSFLY (SEQ ID NO: 2), или (ii) последовательность HVR-L3, включающую последовательность HYSSPP (SEQ ID NO: 3), или как последовательность по п.(i), так и последовательность по п.(ii).
1
3
4
5
7
8
57. Полипептид по п.54 или 56, отличающийся тем, что X обозначает Asn, Х обозначает Ala, X обозначает Lys, X обозначает Thr, X обозначает Ser, X обозначает Gly, или любую их комбинацию.
58. Полипептид по пп.54-56, отличающийся тем, что дополнительно содержит одну, две или три последовательности HVR, выбранные из группы, состоящей из:
(i) HVR-H1, содержащей последовательность NIKDTY (SEQ ID NO: 4);
(ii) HVR-H2, содержащей последовательность RIYPTNGYTR (SEQ ID NO: 5); и
(iii) HVR-Н3, содержащей последовательность WGGDGFYAMD (SEQ ID NO: 6).
59. Полипептид по пп.54-56, отличающийся тем, что дополнительно содержит одну, две или три последовательности HVR, выбранные из группы, состоящей из:
(i) HVR-H1, содержащей последовательность NISGTY (SEQ ID NO: 7);
(ii) HVR-H2, содержащей последовательность RIYPSEGYTR (SEQ ID NO: 8); и
(iii) HVR-Н3, содержащей последовательность WVGVGFYAMD (SEQ ID NO: 9).
60. Полипептид, содержащий последовательность HVR-H1, включающую последовательность NISGTY (SEQ ID NO: 7).
61. Полипептид, содержащий последовательность HVR-H2, включающую последовательность RIYPSEGYTR (SEQ ID NO: 8),
62. Полипептид, содержащий последовательность HVR-Н3, включающую последовательность WVGVGFYAMD (SEQ ID NO: 9).
2
3
4
5
6
7
8
9
5
6
63. Полипептид, содержащий последовательность HVR-H2, включающую последовательность RXXXXXXXXR (SEQ ID NO: 85), в которой X обозначает любую аминокислоту, за исключением Thr и Х обозначает любую аминокислоту, за исключением Asn.
64. Полипептид, содержащий последовательность HVR-H1, включающую последовательность NISGTY (SEQ ID NO: 7); последовательность HVR-H2, включающую последовательность RIYPSEGYTR (SEQ ID NO: 8); и последовательность HVR-H3, включающую последовательность WVGVGFYAMD (SEQ ID NO: 9).
2
3
4
5
6
7
8
9
5
6
65. Полипептид, содержащий последовательность HVR-H1, включающую последовательность NISGTY (SEQ ID NO: 7); последовательность HVR-H2, включающую последовательность RXXXXXXXXR (SEQ ID NO: 85), в которой Х обозначает любую аминокислоту, за исключением Thr, и Х обозначает любую аминокислоту, за исключением Asn; и последовательность HVR-H3, включающую последовательность WVGVGFYAMD (SEQ ID NO: 9).
5
6
8
66. Полипептид по п.63 или 65, отличающийся тем, что X обозначает Ser, Х обозначает Glu, X обозначает Tyr, или любую их комбинацию.
67. Вектор, содержащий полинуклеотид по любому из пп.38-40, 43-48, 50, 51.
68. Вектор по п.67, отличающийся тем, что является экспрессирующим вектором.
69. Клетка-хозяин, содержащая вектор по пп.67 или 68.
70. Клетка-хозяин по п.69, отличающаяся тем, что является прокариотической клеткой.
71. Клетка-хозяин по п.69, отличающаяся тем, что является эукариотической клеткой.
72. Клетка-хозяин по п.71, отличающаяся тем, что является клеткой млекопитающего.
73. Способ получения антитела или фрагмента антитела по любому из пп.1-37, который заключается в культивировании клетки-хозяина, которая содержит вектор, содержащий полинуклеотид по любому из пп.38-52, и в извлечении указанного антитела.
74. Способ по п.73, отличающийся тем, что клетка-хозяин является прокариотической клеткой.
75. Способ по п.73, отличающийся тем, что клетка-хозяин является эукариотической клеткой.
76. Способ по п.75, отличающийся тем, что клетка-хозяин является клеткой млекопитающего.
77. Способ лечения опухоли у субъекта, заключающийся во введении указанному субъекту антитела или фрагмента антитела по любому из пп.1-37, причем указанное введение проводят в течение такого времени и в таком количестве, которые достаточны для лечения или предупреждения указанной опухоли у указанного субъекта.
78. Способ по п.77, отличающийся тем, что указанная опухоль представляет собой колоректальную опухоль (опухоль толстой и прямой кишки), рак молочной железы, рак легкого, почечноклеточную карциному, глиому, глиобластому или рак яичника.
79. Способ по п.77, включающий также введение дополнительного противоракового терапевтического средства указанному субъекту.
80. Способ по п.79, отличающийся тем, что указанное дополнительное противораковое терапевтическое средство включает другое антитело или другой фрагмент антитела, химиотерапевтический агент, цитотоксический агент, антиангиогенный агент, иммунодепрессант, пролекарство, цитокин, антагонист цитокина, цитотоксическую лучевую терапию, кортикостероид, антиэметик, противораковую вакцину, анальгетик или ингибитор роста.
81. Способ по п.79, отличающийся тем, что указанное дополнительное противораковое терапевтическое средство вводят до или после введения антитела или фрагмента антитела по любому из пп.1-37.
82. Способ по п.79, отличающийся тем, что указанное дополнительное противораковое терапевтическое средство вводят одновременно с введением антитела или фрагмента антитела по любому из пп.1-37.
83. Способ лечения аутоиммунного заболевания у субъекта, заключающийся во введении указанному субъекту антитела или фрагмента антитела по любому из пп.1-37, причем указанное введение проводят в течение такого времени и в таком количестве, которые достаточны для лечения или предупреждения указанного аутоиммунного заболевания у указанного субъекта.
84. Способ лечения незлокачественного заболевания у субъекта, включающего патологическую активацию HER2 у субъекта, заключающийся во введении указанному субъекту антитела или фрагмента антитела по любому из пп.1-37, причем указанное введение проводят в течение такого времени и в таком количестве, которые достаточны для лечения или предупреждения указанного незлокачественного заболевания у указанного субъекта.
85. Способ по пп.77, 83 или 84, отличающийся тем, что субъектом является человек.