СПОСОБ МОНИТОРИНГА ИНТЕНСИВНОСТИ ВОСПАЛЕНИЯ ПРИ ГИПЕРПЛАЗИИ ЭНДОМЕТРИЯ

Полезная модель относится к медицине, а именно к способам диагностики и оценки интенсивности воспаления при гиперплазии эндометрия и может быть использована в лабораторной диагностике для определения интенсивности и мониторинга воспалительного процесса, ассоциированного с гиперпластическими заболеваниями эндометрия.
Согласно современной этиопатогенетической концепции гиперплазии эндометрия, в качестве ведущего фактора рассматривается избыточная эстрогенная стимуляция на фоне недостаточности прогестеронового воздействия. Установлено, что чаще всего дисбаланс гормональной регуляции, сопровождающийся избыточной пролиферацией эндометрия, наблюдается при гиперпластических процессах в яичниках, некорректном применении эстрогенных препаратов, гиперплазии коры надпочечников, а также изменении в метаболизме гормонов вследствие нарушений жирового и углеводного обмена. Но, во многих случаях развитие гиперпластических процессов в эдометрии происходит без гиперестрогенемии. Среди возможных механизмов развития гиперплазии эндометрия важным фактором является воспалительный процесс, который наблюдается в 46-59 % больных с гиперплазией и более, чем в 20% случаев является причиной ее развития. Роль воспаления в развитии гиперпластических процессов эндометрия подтверждается успешным опытом использования противовоспалительной терапии в комплексном лечении гиперплазии эндометрия.
Недостаточная эффективность существующих терапевтических схем обуславливает необходимость уточнения превалирующего механизма развития в каждом клиническом случае и проведения лечения с учетом ведущего патогенетического механизма. Разработка диагностического подхода для выявления наличия воспалительного компонента в патогенезе гиперплазии эндометрия и его мониторинга позволяет усовершенствовать существующие схемы лечения с учетом роли воспаления.
В качестве прототипа выбран способ оценки интенсивности воспаления при гиперплазии эндометрия (Хмельницкий O.K.
Патоморфологическая диагностика гинекологических заболеваний. - СПб: Сотис, 1994. - С. 136-144; Кузнецова А.В. Хронический эндометрит // Архив патологии. - 2000. - № 3. - С. 48-52), заключающийся в получении маточного биоптата и проведении стандартного гистологического исследования, с помощью которого оценивают комплекс нарушений микроциркуляции, лимфо-лейкоцитарную инфильтрацию, склеротические изменения, являющиеся общими морфологическими признаками хронического воспаления.
Признаками, совпадающими с существенными признаками заявляемого способа, являются: исследование биоптата эндометрия и определение в нем неспецифических критериев воспалительного процесса.
Техническим результатом полезной модели является: использование более объективной и параметрической оценки с возможностью количественного определения интенсивности воспалительного компонента при гиперплазии эндометрия, высокая информативность независимо от фазы менструального цикла.
Причинами, препятствующими достижению ожидаемого технического результата, являются: низкая точность оценки морфологических изменений и сложность их анализа при гиперплазии эндометрия, ассоциированной с хроническим воспалительным процессом, отсутствие возможности оценивать интенсивность воспалительного компонента.
В основу полезной модели поставлена задача усовершенствования способа-прототипа путем осуществления иммуногистохимического исследования биоптата эндометрия вместо его гистологического исследования за счет определения в маточном биоптате уровня экспресии общего лейкоцитарного антигена CD 45, являющийся наиболее распространенным гликопротеином гематопоэтической системы и представленный на поверхности большинства клеток, принимающих участие в иммунно-воспалительной реакции: Τ и В лимфоцитов, гранулоцитов, моноцитов и макрофагов, поэтому его определение способно с высокой
точностю и объетивностью установить наличие и интенсивность воспалительного компонента при гиперплазии эндометрия.
Поставленная задача решается тим, что в способе мониторинга интенсивности воспаления при гиперплазии эндометрия, включающем исследование биоптата эндометрия и определение в нем неспецифических критериев воспалительного процесса, в соответствии с полезной моделью, определяют наличие и степень экспресии общего лейкоцитарного антигена CD 45 в биоптате эндометрия по отношению к норме, составляющей 4,2±1,2%, и при повышении уровня экспресии CD 45 до 21%, устанавливают умеренную интенсивность воспалительного компонента при гиперплазии эндометрия, при повышении уровня экспрессии CD45 более 21 %, устанавливают высокую интенсивность воспалительного компонента, что позволяет осуществлять мониторинг характера воспалительного процесса.
Между совокупностью существенных признаков предложенного способа и ожидаемым техническим результатом, проявляется следующая причинно-следственная связь: определение экспресии общего лейкоцитарного антигена CD 45 в биоптате эндометрия позволяет определить наличие и параметрически оценить степень интенсивности воспалительного компонента, и проводить его мониторинг при гиперплазии эндометрия независимо от фазы менструального цикла.
Способ заключается в следующем.
Маточный биоптат получают путем проведения лечебно-диагностического выскабливания полости матки. Полученную ткань фиксируют в 10 % растворе нейтрального забуференного формалина. Фиксатор отмывают в проточной воде в течение 24 часов. Ткань эндометрия обезвоживают в серии спиртов, обрабатывают в ксилоле, выдерживают в насыщенном при +37°С растворе парафина в ксилоле, помещают в парафин при +56°С, потом - в смесь парафина и ксилола с дальнейшим
изготовлением парафиновых блоков. Из парафиновых блоков готовили срезы толщиной 4-5 мкм, красили гематоксиллином Мейера и эозином.
Иммуногистохимическое исследование проводили по стандартным методикам и протоколам на серийных парафиновых срезах толщиной 4-5 мкм, которые были размещены на адгезивном стекле, покрытом полилизином ("Menzel-Glaser", Германия). Иммуногистохимическое исследование выполнялось с помощью системы визуализации EnVision™ FLEX+, High рН (Dako Autostainer/Autostainer Plus), Code K8024 фирмы Dako (Дания), которая предназначена для работа на автостейнере (Dako Autostainer Instruments). Демаскировку антигенов выполняли в камере Паскаля в течение 3 минут с температурой, повышающейся до 115°С с последующим постепенным снижением. Автостейнер обеспечивает стандартизацию в постановке иммуногистохимического метода исследования и получения препаратов высокого качества для дальнейшей корректной диагностики. Вмонтированный компьютер осуществляет точный контроль соблюдения температурного режима, работу таймера, индикацию в случае возникновения ошибки. Программное обеспечение предусматривает проведение стандартных протоколов иммуногистохимических исследований.
Для идентификации клеток лимфоидного ряда проводили иммуногистохимическое исследование с использованием Мишиных моноклональных антител к рецепторам общего лейкоцитарного антигена CD 45 (Clone 2В11+PD7/26) в соответствии с протоколом исследования фирмы Dako. Результаты иммуногистохимического исследования оценивали с учетом разделения трансмембранной экспрессии CD 45+ иммунокомпетентных клеток у строме эндометрия. У качестве позитивного контроля использовали ткань миндалин, в качестве негативного - мозговую ткань. Подсчет позитивных клеток проводили в 10 полях зрения из расчета на 100 стромальных клеток при увеличении х200 в процентном эквиваленте.
Морфометрическое исследование включало подсчет клеток с помощью программы Software DP-SOFT. Фотографирование осуществляли с помощью цифровой камеры OLYMPUS С 5050Z, установленной на микроскопе OLYMPUS СХ41.
Для подтверждения результатов, полученных при определении уровней экспрессии общего лейкоцитарного антигена CD45, в качестве диагностических критериев воспалительного компонента при гиперплазии эндометрия и возможности их использования для мониторинга воспаления, проведена серия клинических исследований с определением уровней экспрессии CD45 в маточных биоптатах 89 больных женщин с разными гистологическими формами гиперплазии эндометрия. В качестве контроля применяли измерение аналогичных показателей у 18 клинически здоровых женщин.
В таблице приведены данные об уровне экспрессии общего лейкоцитарного антигена CD45 в биоптатах эндометрия у женщин с разными формами гиперплазии эндометрия, а также основанные на изменении этого показателя уровни интенсивности воспалительного компонента при гиперплазии эндометрия.
Выраженное повышение CD 45 в биоптатах эндометрия более, чем в 12 раз выше контроля, зафиксированное при клиническом обследовании женщин, больных разными формами гиперплазии эндометрия, подтверждает возможность использования определения экспрессии общего лейкоцитарного антигена CD 45 в биоптатах эндометрия в качестве диагностического критерия воспалительного компонента при гиперплазии эндометрия и его мониторинга.
В результате проведенных исследований было установлено, что лейкоцитарная инфильтрация в нормальном эндометрии, которая определяется по уровню экспрессии CD 45, составляет 4,2±1,2 %. При повышении уровня экспрессии CD 45 до 5 раз по отношению к норме, то есть до 21 %, устанавливают умеренную интенсивность воспалительного
компонента при гиперплазии эндометрия. При увеличении уровня экспрессии CD 45 выше, чем 21 %, устанавливают высокую интенсивность воспалительного компонента при гиперплазии эндометрия, что позволяет осуществлять мониторинг характера воспалительного процесса.
В сравнении со способом-прототипом заявленный способ мониторинга воспалительного компонента при гиперплазии эндометрия позволяет, используя иммуногистохический метод исследования уровня экспрессии общего лейкоцитарного антигена CD 45, определить наличие у больной воспалительного компонента, ассоциированного с гиперплазией эндометрия, проводить мониторинг интенсивности воспаления в эндометрии, повышать точность диагностики, обосновывать необходимость проведения противовоспалительной терапии, что может быть использовано при установлении наличия воспалительного компонента гиперпластических заболеваний эндометрия.
Пример 1.
Больная Т., возраст 39 лет, обратилась с жалобами на ановуляторные маточные кровотечения, возникающие после задержки очередной менструации, кровянистый выделения в междуменструальный период. После проведения первичного обследования, в которое входило и стандартное морфологическое исследование биоптата, был установлен диагноз комплексной гиперплазии эндометрия, назначали комбинированную гормональную терапию, которая вызывала только частичное улучшение. Ановуляторные маточные кровотечения сохранялись, хотя снизился объем кровопотери.
Было назначено иммуногистохимическое исследование уровня экспрессии общего лейкоцитарного антигена CD 45 предложенным способом, в результате которого было выявлено повышение уровня CD 45 до 42,4%. Таким образом, была установлена высокая интенсивность воспалительного компонента. Благодаря применению предложенного способа, терапевтическая схема была своевременно дополнена
использованием противовоспалительных антибактериальных, иммуномодулирующих средств и физиотерапевтическими методами лечения.
Пример 2.
Больная П., возраст 34 года, обратилась с жалобами на овуляторные маточные кровотечения умеренной интенсивности, периодическую боль внизу живота, кровянистые выделения в междуменструальный период.
После проведения обследования, в которое входило иммуногистохимическое исследование уровня экспрессии общего лейкоцитарного антигена CD 45 в биоптате данным способом, который составил 16,5 %, был установлен диагноз простой гиперплазии эндометрия с умеренной интенсивностью воспалительного компонента. Была назначена комбинированная гормональная терапия с добавлением противовоспалительных и иммунокоррегирующих препаратов.
Использование предложенного способа позволяет на основе объективных параметрических критериев определить наличие и интенсивность воспалительного процесса, проводить мониторинг его развития, сокращает время для назначения адекватной противовоспалительной терапии, определять необходимую продолжительность терапии и осуществлять прогноз, а также позволяет объективно оценивать эффективность проводимой терапии.
Примечание. Звездочками обозначено достоверность сравнения (р<0,05); * -относительно контроля