ЭКСПРЕССИОННЫЕ КАССЕТЫ MeCP2

1. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая экспрессионную кассету MeCP2, причем эта экспрессионная кассета содержит в функциональной связи в направлении от 5'-конца к 3'-концу:
- 5'-область контроля транскрипции, содержащую промотор, способный управлять транскрипцией в нервных клетках;
- открытую рамку считывания, кодирующую белок MeCP2;
- сигналы управления трансляцией;
- 3'-нетранслируемую область (3’UTR), содержащую один или несколько из следующих элементов:
(i) сайт связывания для mir-22;
(ii) сайт связывания для mir-19;
(iii) сайт связывания для miR-132;
(iv) сайт связывания для miR124; и
(v) AU-богатый элемент; и
- сигналы терминации транскрипции;
где экспрессионная кассета MeCP2 имеет длину не более чем примерно 5 т.п.н.
2. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где 3’UTR содержит сайты связывания для, по меньшей мере, одной из следующих микро-РНК: miR-22, miR-19, miR-132 и miR-124.
3. Молекула нуклеиновой кислоты по п.2, где 3’UTR содержит сайты связывания для, по меньшей мере, 2, по меньшей мере, 3 или всех 4 микро-РНК из miR-22, miR-19, miR-132 и miR-124.
4. Молекула нуклеиновой кислоты по п.3, где 3’UTR содержит сайты связывания для:
miR-22 и miR-19;
miR-22 и mir-132;
miR-22 и miR124;
miR-19 и miR-132;
miR-19 и miR-124;
miR-132 и miR-124;
miR-22, miR-19 и miR-132;
miR-22, miR-19 и miR-124;
miR-22, miR-132 и miR-124;
miR-19, miR-132 и miR-124;
или miR-22, miR-19, miR-132 и miR-124.
5. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, где 3’UTR содержит AU-богатый элемент.
6. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-5, где кодируемый белок MeCP2 содержит:
(i) метил-CpG-связывающий домен (MBD), имеющий последовательность
PAVPEASASPKQRRSIIRDRGPMYDDPTLPEGWTRKLKQRKSGRSAGKYDVYLINPQGKAFRSKVELIAYFEKVGDTSLDPNDFDFTVTGRGSPSRREQKPP (SEQ ID NO: 5)
или ее вариант, имеющий с ней, по меньшей мере, 70% идентичности, например, по меньшей мере, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности;
(ii) домен взаимодействия с NCoR/SMRT (NID), имеющий последовательность
PGSVVAAAAAEAKKAVKESSIRSVQETVLPIKKRKTRETV (SEQ ID NO: 6)
или ее вариант, имеющий с ней, по меньшей мере, 70% идентичности, например, по меньшей мере, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности; и
(iii) сигнал ядерной локализации (NLS).
7. Молекула нуклеиновой кислоты по п.6, где кодируемый белок MeCP2 содержит или состоит из последовательности:
SEDQDLQGLKDKPLKFKKVKKDKKEEKEGKHEPVQPSAHHSAEPAEAGKAETSEGSGSAPAVPEASASPKQRRSIIRDRGPMYDDPTLPEGWTRKLKQRKSGRSAGKYDVYLINPQGKAFRSKVELIAYFEKVGDTSLDPNDFDFTVTGRGSPSRREQKPPKKPKSPKAPGTGRGRGRPKGSGTTRPKAATSEGVQVKRVLEKSPGKLLVKMPFQTSPGGKAEGGGATTSTQVMVIKRPGRKRKAEADPQAIPKKRGRKPGSVVAAAAAEAKKKAVKESSIRSVQETVLPIKKRKTRETVSIEVKEVVKPLLVSTLGEKSGKGLKTCKSPGRKSKESSPKGRSSSASSPPKKEHHHHHHHSESPKAPVPLLPPLPPPPPEPESSEDPTSPPEPQDLSSSVCKEEKMPRGGSLESDGCPKEPAKTQPAVATAATAAEKYKHRGEGERKDIVSSSMPRPNREEPVDSRTPVTERVSS (SEQ ID NO: 9);
или представляет собой ее функциональный вариант, имеющий с ней, по меньшей мере, 70% идентичности, например, по меньшей мере, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности; или представляет собой функциональный фрагмент любой из них.
8. Молекула нуклеиновой кислоты по п.6, где кодируемый белок MeCP2 содержит или состоит из последовательности:
PAVPEASASPKQRRSIIRDRGPMYDDPTLPEGWTRKLKQRKSGRSAGKYDVYLINPQGKAFRSKVELIAYFEKVGDTSLDPNDFDFTVTGRGSPSRREQKPPKKPKSPKAPGTGRGRGRPKGSGTTRPKAATSEGVQVKRVLEKSPGKLLVKMPFQTSPGGKAEGGGATTSTQVMVIKRPGRKRKAEADPQAIPKKRGRKPGSVVAAAAAEAKKKAVKESSIRSVQETVLPIKKRKTRETV (SEQ ID NO: 10)
или представляет собой ее вариант, имеющий с ней, по меньшей мере, 70% идентичности, например, по меньшей мере, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности.
9. Молекула нуклеиновой кислоты по п.6, где кодируемый белок MeCP2 содержит или состоит из последовательности:
PAVPEASASPKQRRSIIRDRGPMYDDPTLPEGWTRKLKQRKSGRSAGKYDVYLINPQGKAFRSKVELIAYFEKVGDTSLDPNDFDFTVTGRGSPSRREQKPPGSSGSSGPKKKRKVPGSVVAAAAAEAKKKAVKESSIRSVQETVLPIKKRKTRETV (SEQ ID NO: 11)
или представляет собой ее вариант, имеющий с ней, по меньшей мере, 70% идентичности, например, по меньшей мере, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности.
10. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 6-9, где белок MeCP2 дополнительно содержит N-концевую часть, имеющую последовательность MAAAAAAAPSGGGGGGEEERLEEK (SEQ ID NO: 12), MVAGMLGLREEK (SEQ ID NO: 13) или последовательность, имеющую с той или другой последовательностью, по меньшей мере, 70% идентичности.
11. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-10, где 5'-регуляторная область транскрипции содержит основной промотор MeCP2, сайленсер MeCP2 и/или регуляторный элемент ЦНС.
12. Нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-11, где длина экспрессионной кассеты может составлять не более чем примерно 4,9 т.п.н., 4,8 т.п.н., 4,7 т.п.н., 4,6 т.п.н., 4,5 т.п.н. или 4,4 т.п.н.
13. Нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-12, дополнительно содержащая 5'ITR и 3'ITR, где ITR фланкируют экспрессионную кассету.
14. Нуклеиновая кислота по п.13, которая представляет собой геном rAAV.
15. Нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-11, где экспрессионная кассета имеет длину не более чем примерно 2,4 т.п.н., не более чем 2,3 т.п.н. или не более чем 2,2 т.п.н.
16. Нуклеиновая кислота по п.15, содержащая в направлении от 5'-конца к 3'-концу, экспрессионную кассету MeCP2 настоящего изобретения и обратный комплемент указанной экспрессионной кассеты.
17. Нуклеиновая кислота по п.16, дополнительно содержащая 5'ITR и 3'ITR.
18. Нуклеиновая кислота по п.17, которая представляет собой геном вектора scAAV.
19. Частица вириона AAV, содержащая нуклеиновую кислоту по п.14 или 18.
20. Упаковывающая клетка, способная продуцировать частицу вириона AAV по п.19.
21. Фармацевтическая композиция, содержащая нуклеиновую кислоту по любому из пп. 1-18 или частицу вириона AAV по п.19 в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.
22. Фармацевтическая композиция по п.21, приготовленная для внутривенного и интратекального введения.
23. Нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-18 или частица вириона AAV по п.19 для применения в усилении экспрессии белка MeCP2 в клетке-мишени.
24. Нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-18 или частица вириона AAV по п.19 для применения в лечении синдрома Ретта.
25. Способ лечения синдрома Ретта у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя введение нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-18 или частицы вириона AAV по п.19 указанному субъекту.
26. Применение нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-18 или частицы вириона AAV по п.19 в приготовлении лекарственного средства для лечения синдрома Ретта.
27. Способ, включающий в себя этап тестирования субъекта на наличие одной или нескольких мутаций в гене MeCP2, указывающих на наличие или предрасположенность к синдрому Ретта, и этап выбора субъекта для лечения нуклеиновой кислотой по любому из пп. 1-18 или частицей вириона AAV по п.19, если идентифицирована одна или несколько таких мутаций.