HYBRID GENES BLG-HIFN-G BASED ON REGULATORY SEQUENCE OF SHEEP BETA-LACTOGLOBULIN GENOME GENE FOR EXPRESSION OF HUMAN GAMMA-INTERFERON IN TRANSGENIC ANIMAL MAMMA GLAND
ГИБРИДНЫЕ ГЕНЫ BLG-HJFN-G НА ОСНОВЕ РЕГУЛЯТОРНЫХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ ГЕНОМНОГО ГЕНА БЕТА-ЛАКТОГЛОБУЛИНА ОВЦЫ ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ ГАММА-ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕКА В МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЕ ТРАНСГЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

6
7
FIELD: molecular biology, genetic engineering. SUBSTANCE: hybrid genes BLG-hIFN-g2 and BLG-hIFN-g3 have length about 10 thousand base pairs (t.b.p. ) and consist of: Sal I-SnaB I-fragment (length is 4.7 t.b.p.) that is 5'-flanking sequence of sheep beta-globulin gene (BLG); SnaB I-Asu II-fragment (1.7 t. b. p. ) that is part of human gamma-interferon genome gene (hIFN-g) involving the first exon without the first 113 b. p. of its nontranslatable region, the first two introns, the first two and part of the third exon; Asu II-Bam HI-fragment that is in the case of BLG-hIFN-g2 gene a sequence involving part of the third and all fourth exon, the third intron and part of 3'-flanking sequence of gene hIFN-g; in the case of gene BLG-hIFN-g3 - the sequence involving part of the third and all fourth exon of gene hIFN-g and part of the sixth exon, the sixth intron, the seventh exon containing polyadenylation signal, part of 3'-flanking sequence, part of the first, the second and third exons, two the first and part of the third intron of gene BLG; Bam HI-Sal I-fragment that is part of polylinker of plasmid pUC18; hybrid genes contain: unique recognition site for restriction endonuclease Sna BI artificially inserted into site Pvu II of nontranslatable part of the first exon of gene BLG. Genes BLG-hIFN-g provide expression of hIFN-g in mamma gland of transgenic animals. Milk of transgenic mouse females shows interferon antiviral activity 10-10 IU/ml for hybrid gene BLG-hIFN-g2 and 6000-40000 IU/ml for hybrid gene BLG-hIFN-g3. EFFECT: design of hybrid genes indicated above.
6
7
Гибридные гены BLG-hIFN-g2 и BLG-hIFN-g3 имеют длину около 10 т.п.о. и состо т из - Sal I-SnaB I - фрагмента, длиной 4.7 т.п.о., представл ющего собой 5'- фланкирующую последовательность гена бета-лактоглобулина овцы (ВLG); - SnaB I-Asu II - фрагмента, длиной 1.7 т.п.о., представл ющего собой часть геномного гена гамма-интерферона человека (hIFN-g), включающую первый экзон без 113 первых п.о. его нетранслируемой области, первые два интрона, первые два и часть третьего экзона; - Аsu II-ВamH I-фрагмента, представл ющего собой в случае гена ВLG-hIFN-g2 последовательность, включающую часть третьего и весь четвертый экзон, третий нитрон и часть 3'- фланкирующей последовательности гена hIFN-g; а в случае гена ВLG-hIFN-g3 - последовательность, включающую часть третьего и весь четвертый экзон гена hIFN-g и часть шестого экзона, шестой интрон, седьмой экзон, содержащей сигнал полиаденилировани , часть 3'- фланкирующей последовательности, часть первого, второй и третий экзоны, два первых и часть третьего нитрона гена ВLG; - ВаmH I-SaL I-фрагмента, представл ющего собой часть полилинкера плазмиды рUC18; содержат: -уникальный сайт узнавани  эндонуклеазой рестрикции SnaB I, искусственно введенный в сайт Рvu II нетранслируемой части первого экзона гена ВLG. Гены ВLG-hIFN-g обеспечивают экспрессию hIFN-g в молочной железе трансгенных животных. Молоко самок трансгенных мышей обладает интерфероновой антивирусной активностью 10 - 10МЕ/мл дл  гибридного гена ВLG-hIFN-g2 и 6000-40000 МЕ/мл дл  гибридного гена ВLG-hIFN-g3.