МЫШИ ADAM6

1. Способ получения полипептида, содержащего последовательность вариабельного домена тяжелой или легкой цепи человека, включающий этапы:
(a) иммунизации генетически модифицированной мыши антигеном, причем указанная мышь:
(i) имеет геном, который содержит:
H
H
H
(A) один или более нереаранжированных генных сегментов V человека, один или более нереаранжированных генных сегментов D человека и один или более нереаранжированных генных сегментов J человека, функционально связанных с константной областью тяжелой цепи мыши в эндогенном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина мыши,
L
L
(B) один или более нереаранжированных генных сегментов V человека и один или более нереаранжированных генных сегментов J человека, функционально связанных с константной областью легкой цепи, и
(C) нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок ADAM6 мыши, причем указанная нуклеотидная последовательность интегрирована в геном мыши, при этом указанный белок ADAM6 мыши экспрессируется у указанной генетически модифицированной мыши;
(ii) вырабатывает антитела при иммунизации указанным антигеном, причем каждое из указанных антител содержит вариабельный домен тяжелой цепи человека, функционально связанный с константным доменом тяжелой цепи мыши, и вариабельный домен легкой цепи человека, функционально связанный с константным доменом легкой цепи; и
(iii) является фертильной;
(b) обеспечения выработки иммунного ответа указанной генетически модифицированной мыши на указанный антиген,
(c) выделения В-клетки из указанной генетически модифицированной мыши, которая экспрессирует антитело, которое специфично связывает указанный антиген,
(d) определения последовательности вариабельного домена тяжелой или легкой цепи человека из антитела, которое специфично связывает указанный антиген и которое было выработано указанной В-клеткой, выделенной из указанной генетически модифицированной мыши, и
(e) получения полипептида, содержащего указанную выявленную последовательность вариабельного домена тяжелой или легкой цепи человека.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что определение последовательности вариабельного домена тяжелой или легкой цепи человека включает определение нуклеотидной последовательности, которая кодирует последовательность вариабельного домена тяжелой или легкой цепи человека, соответственно.
3. Способ получения полностью человеческой тяжелой цепи или полностью человеческой легкой цепи, включающий этапы:
(a) иммунизации генетически модифицированной мыши антигеном, причем указанная мышь:
(i) имеет геном, который содержит:
H
H
H
(A) один или более нереаранжированных генных сегментов V человека, один или более нереаранжированных генных сегментов D человека и один или более нереаранжированных генных сегментов J человека, функционально связанных с константной областью тяжелой цепи мыши в эндогенном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина мыши,
L
L
(B) один или более нереаранжированных генных сегментов V человека и один или более нереаранжированных генных сегментов J человека, функционально связанных с константной областью легкой цепи, и
(C) нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок ADAM6 мыши, причем указанная нуклеотидная последовательность интегрирована в геном мыши, при этом указанный белок ADAM6 мыши экспрессируется у указанной генетически модифицированной мыши;
(ii) вырабатывает антитела при иммунизации указанным антигеном, причем каждое из указанных антител содержит вариабельный домен тяжелой цепи человека, функционально связанный с константным доменом тяжелой цепи мыши; и
(iii) является фертильной; и
(b) обеспечения выработки иммунного ответа указанной генетически модифицированной мыши на указанный антиген,
(c) выделения В-клетки из указанной генетически модифицированной мыши, которая экспрессирует антитело, которое специфично связывает указанный антиген,
(d) определения последовательности вариабельного домена тяжелой или легкой цепи человека из антитела, которое специфично связывает антиген и которое было выработано указанной В-клеткой указанной генетически модифицированной мыши, и
(e) связывания функциональным образом указанной последовательности вариабельного домена тяжелой или легкой цепи человека с последовательностью константного домена тяжелой или легкой цепи человека, соответственно, для образования полностью человеческой тяжелой цепи или полностью человеческой легкой цепи.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, связывание функциональным образом указанной последовательности вариабельного домена тяжелой или легкой цепи человека с последовательностью константного домена тяжелой и легкой цепи человека, соответственно, включает связывание функциональным образом нуклеотидной последовательности, кодирующей указанную последовательность вариабельного домена тяжелой или легкой цепи человека, с нуклеотидной последовательностью, кодирующей указанную последовательность константного домена тяжелой или легкой цепи человека.
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов V человека выбраны из группы, состоящей из V6-1, V1-2, V1-3, V2-5, V3-7, V1-8, V3-9, V3-11, V3-13, V3-15, V3-16, V1-18, V3-20, V3-21, V3-23, V1-24, V2-26, V4-28, V3-30, V4-31, V3-33, V4-34, V3-35, V3-38, V4-39, V3-43, V1-45, V1-46, V3-48, V3-49, V5-51, V3-53, V1-58, V4-59, V4-61, V3-64, V3-66, V1-69, V2-70, V3-72, V3-73, V3-74 и их комбинации.
L
L
6. Способ по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов V человека и один или более нереаранжированных генных сегментов J человека функционально связаны с константной областью легкой цепи мыши в эндогенном локусе легкой цепи мыши.
L
L
7. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов V человека и один или более нереаранжированных генных сегментов J человека представляют собой один или более нереаранжированных генных сегментов Vκ человека и один или более нереаранжированных генных сегментов Jκ человека.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов Vκ человека и один или более нереаранжированных генных сегментов Jκ человека функционально связаны с константной областью легкой κ-цепи мыши в эндогенном локусе легкой κ-цепи мыши.
L
9. Способ любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов V человека выбраны из группы, состоящей из Vκ1-5, Vκ1-6, Vκ1-8, Vκ1-9, Vκ1-12, Vκ1-16, Vκ1-17, Vκ1-27, Vκ1-33, Vκ1-37, Vκ1-39, Vκ2-24, Vκ2-28, Vκ2-29, Vκ2-30, Vκ2-40, Vκ3-11, Vκ3-15, Vκ3-20, Vκ4-1, Vκ6-21 и их комбинации.
L
L
10. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов V человека и один или более нереаранжированных генных сегментов J человека представляют собой один или более нереаранжированных генных сегментов Vλ человека и один или более нереаранжированных генных сегментов Jλ человека.
11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов Vλ человека и один или более нереаранжированных генных сегментов Jλ человека функционально связаны с константной областью легкой λ-цепи мыши в эндогенном локусе легкой λ-цепи мыши.
12. Способ по п. 10, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов Vλ человека и один или более нереаранжированных генных сегментов Jλ человека функционально связаны с константной областью легкой κ-цепи мыши в эндогенном локусе легкой κ-цепи мыши.
13. Способ по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что указанная нуклеотидная последовательность, кодирующая белок ADAM6 мыши:
(a) присутствует на той же хромосоме, как и эндогенный локус тяжелой цепи иммуноглобулина мыши; и/или
(b) присутствует в эктопическом положении.
14. Способ по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что указанный белок ADAM6 мыши представляет собой белок ADAM6a мыши или белок ADAM6b мыши.
H
H
H
15. Способ по любому из пп. 1-14, отличающийся тем, что указанная нуклеотидная последовательность, которая кодирует указанный белок ADAM6 мыши, является смежной с указанными одним или более генными сегментами V человека, одним или более генными сегментами D человека или одним или более генными сегментами J человека.
16. Способ получения полинуклеотида, содержащего последовательность вариабельной области тяжелой или легкой цепи человека, включающий этапы:
(a) иммунизации генетически модифицированной мыши антигеном, причем указанная мышь:
(i) имеет геном, который содержит:
H
H
H
(A) один или более нереаранжированных генных сегментов V человека, один или более нереаранжированных генных сегментов D человека и один или более нереаранжированных генных сегментов J человека, функционально связанных с константной областью тяжелой цепи мыши в эндогенном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина мыши,
L
L
(B) один или более нереаранжированных генных сегментов V человека и один или более нереаранжированных генных сегментов J человека, функционально связанных с константной областью легкой цепи, и
(C) нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок дезинтегрин и металлопротеиназу 6 (ADAM6) мыши, причем указанная нуклеотидная последовательность интегрирована в геном мыши, при этом указанный белок ADAM6 мыши экспрессируется у указанной генетически модифицированной мыши;
(ii) вырабатывает антитела при иммунизации указанным антигеном, причем каждое из указанных антител содержит тяжелую цепь, содержащую вариабельный домен тяжелой цепи человека, функционально связанный с константным доменом тяжелой цепи мыши, и легкую цепь, содержащую вариабельный домен легкой цепи человека, функционально связанный к константным доменом легкой цепи; и
(iii) является фертильной;
(b) обеспечения выработки иммунного ответа указанной генетически модифицированной мыши на указанный антиген,
(c) выделения В-клетки из указанной генетически модифицированной мыши, которая экспрессирует антитело, которое специфично связывает указанный антиген,
(d) определения последовательности вариабельной области тяжелой или легкой цепи человека, которая кодирует вариабельный домен тяжелой или легкой цепи человека, соответственно, из антитела, которое специфично связывает антиген и которое было экспрессировано указанной выделенной B-клеткой указанной генетически модифицированной мыши.
17. Способ получения нуклеотидной последовательности, кодирующей полностью человеческую тяжелую цепь или полностью человеческую легкую цепь, включающий этапы:
(a) иммунизации генетически модифицированной мыши антигеном, причем указанная мышь:
(i) имеет геном, который содержит:
H
H
H
(A) один или более нереаранжированных генных сегментов V человека, один или более нереаранжированных генных сегментов D человека и один или более нереаранжированных генных сегментов J человека, функционально связанных с константной областью тяжелой цепи мыши в эндогенном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина мыши,
L
L
(B) один или более нереаранжированных генных сегментов V человека и один или более нереаранжированных генных сегментов J человека, функционально связанных с константной областью легкой цепи, и
(C) нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок ADAM6 мыши, причем указанную нуклеотидную последовательность внедряют в геном мыши, при этом указанный белок ADAM6 мыши экспрессируется у указанной генетически модифицированной мыши;
(ii) вырабатывает антитела при иммунизации указанным антигеном, причем каждое из указанных антител содержит тяжелую цепь, содержащую вариабельный домен тяжелой цепи человека, функционально связанный с константным доменом тяжелой цепи мыши, и легкую цепь, содержащую вариабельный домен легкой цепи человека, функционально связанный к константным доменом легкой цепи; и
(iii) является фертильной;
(b) обеспечения выработки иммунного ответа указанной генетически модифицированной мыши на указанный антиген,
(c) выделения В-клетки из указанной генетически модифицированной мыши, которая экспрессирует антитело, которое специфично связывает указанный антиген,
(d) определения последовательности вариабельной области тяжелой или легкой цепи человека, которая кодирует вариабельный домен тяжелой или легкой цепи человека, соответственно, из антитела, которое специфично связывает указанный антиген и которое было выработано указанной генетически модифицированной мышью; и
(e) связывания функциональным образом указанной последовательности вариабельной области тяжелой или легкой цепи человека с последовательностью константной области тяжелой или легкой цепи человека, соответственно, для образования нуклеотидной последовательности, кодирующей полностью человеческую тяжелую цепь или полностью человеческую легкую цепь.
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
18. Способ по п. 16 или 17, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов V человека выбраны из группы, состоящей из V6-1, V1-2, V1-3, V2-5, V3-7, V1-8, V3-9, V3-11, V3-13, V3-15, V3-16, V1-18, V3-20, V3-21, V3-23, V1-24, V2-26, V4-28, V3-30, V4-31, V3-33, V4-34, V3-35, V3-38, V4-39, V3-43, V1-45, V1-46, V3-48, V3-49, V5-51, V3-53, V1-58, V4-59, V4-61, V3-64, V3-66, V1-69, V2-70, V3-72, V3-73, V3-74 и их комбинации.
L
L
19. Способ по любому из пп. 16-18, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов V человека и один или более нереаранжированных генных сегментов J человека функционально связаны с константной областью легкой цепи мыши в эндогенном локусе легкой цепи мыши.
L
L
20. Способ по любому из пп. 16-19, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов V человека и один или более нереаранжированных генных сегментов J человека представляют собой один или более нереаранжированных генных сегментов Vκ человека и один или более нереаранжированных генных сегментов Jκ человека.
21. Способ по п. 20, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов Vκ человека и один или более нереаранжированных генных сегментов Jκ человека функционально связаны с константной областью κ легкой цепи мыши в эндогенном локусе κ легкой цепи мыши.
L
22. Способ по любому из пп. 16-21, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов V человека выбраны из группы, состоящей из Vκ1-5, Vκ1-6, Vκ1-8, Vκ1-9, Vκ1-12, Vκ1-16, Vκ1-17, Vκ1-27, Vκ1-33, Vκ1-37, Vκ1-39, Vκ2-24, Vκ2-28, Vκ2-29, Vκ2-30, Vκ2-40, Vκ3-11, Vκ3-15, Vκ3-20, Vκ4-1, Vκ6-21 и их комбинации.
L
L
23. Способ по любому из пп. 16-19, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов V человека и один или более нереаранжированных генных сегментов J человека представляют собой один или более нереаранжированных генных сегментов Vλ человека и один или более нереаранжированных генных сегментов Jλ человека.
24. Способ по п. 23, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов Vλ человека и один или более нереаранжированных генных сегментов Jλ человека функционально связаны с константной областью легкой λ-цепи мыши в эндогенном локусе легкой λ-цепи мыши.
25. Способ по п. 23, отличающийся тем, что указанные один или более нереаранжированных генных сегментов Vλ человека и один или более нереаранжированных генных сегментов Jλ человека функционально связаны с константной областью легкой κ-цепи мыши в эндогенном локусе легкой κ-цепи мыши.
26. Способ по любому из пп. 16-25, отличающийся тем, что указанная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая указанный белок ADAM6 мыши:
(a) присутствует на той же хромосоме, как и эндогенный локус тяжелой цепи иммуноглобулина мыши; и/или
(b) присутствует в эктопическом положении.
27. Способ по любому из пп. 16-26, отличающийся тем, что указанный белок ADAM6 мыши представляет собой белок ADAM6a мыши или белок ADAM6b мыши.
H
H
H
28. Способ по любому из пп. 16-27, отличающийся тем, что указанная нуклеотидная последовательность, которая кодирует указанный белок ADAM6 мыши, является смежной с одним или более нереаранжированными генными сегментами V человека, одним или более нереаранжированными генными сегментами D человека и одним или более нереаранжированными генными сегментами J человека.