Количество катионных белков в гранулах нейтрофилов и экспрессия на их мембране эритроцитарных, комплементарных и Fcγ-рецепторов при определенных формах хронического гломерулонефрита у человека

Медицинская Иммунология 2003, Т. 5, М 1-2, стр 137-142 ©2003, СПбРОРААКИ

Краткие сообщения

КОЛИЧЕСТВО КАТИОННЫХ БЕЛКОВ В ГРАНУЛАХ НЕЙТРОФИЛОВ И ЭКСПРЕССИЯ НА ИХ МЕМБРАНЕ ЭРИТРОЦИТАРНЫХ, КОМПЛЕМЕНТАРНЫХ И Fey- РЕЦЕПТОРОВ ПРИ ОПРЕДЕЛЕННЫХ ФОРМАХ ХРОНИЧЕСКОГО ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТА У ЧЕЛОВЕКА

НИИЭМ РАМН, отдел общей патологии и патофизиологии

Резюме. Нейтрофильные гранулоциты участвуют в патогенезе многих заболеваний, поскольку они не только поглощают и обезвреживают бактерии, но и высвобождают комплекс различных агентов, которые при определенных условиях способны нарушать нормальную деятельность клеток и разрушать соединительную ткань. Возможно, эти клетки играют определенную роль и в развитии хронического гломеруло-нефрита, хотя значение нейтрофильных гранулоцитов при данной патологии не полностью ясно. В данной работе исследовали содержание катионных белков в нейтрофильных гранулоцитах периферической крови у больных хроническим гломерулонефритом с помощью лизосомально-катионного теста и оценивали уровень экспрессии Е-, СЗЬ- и Fey- рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов. В сыворотке периферической крови определяли: концентрацию циркулирующих иммунных комплексов, иммуноглобулинов М, G, А классов, а также гемолитическую активность комплемента. Обследовано 56 больных хроническим гломерулонефритом, имеющих сохранную функцию почек и не получавших патогенетическую терапию (20-е мембранозно-пролиферативным гломерулонефритом 1 т.; 15 - с IgA-нефропатией; 21-е мезан-гиально-пролиферативным гломерулонефритом). Контрольная группа состояла из 12 практически здоровых людей. При всех морфологических формах хронического гломерулонефрита выявлено выраженное снижение содержания катионных белков в нейтрофильных гранулоцитах. Экспрессия Е-рецепторов на мембране нейтрофилов также снижена при изученных формах хронического гломерулонефрита, а экспрессия СЗЬ-рецепторов - повышена. Анализ корреляций между изученными показателями активности нейтрофильных гранулоцитов и другими иммунологическими параметрами показывает наличие существенных различий в протекании защитных реакций при мембранозно-пролиферативном гломерулонефрите 1 типа, IgA-нефропатии и мезангиально-пролиферативном гломерулонефрите, что позволяет предположить возможность участия нейтрофильных лейкоцитов в патогенезе данных форм патологии у человека.

Ключевые слова: катионные белки, нейтрофилы, хронический гломерулонефрит.

Abramova T.V.

CONTENT OF CATIONIC PROTEINS IN NEUTROPHIL GRANULES AND EXPRESSION OF E-, C3B-AND FCr- RECEPTORS ON NEUTROPHIL MEMBRANE IN CHRONIC GLOMERULONEPHRITIS

Абрамова T.B.

Адрес для переписки:

Санкт-Петербург, ул.акад. Павлова 12, НИИЭМ РАМН, отдел общей патологии и патофизиологии.

Тел.: (812)234-07-64, факс: (812)234-94-93. E-mail: abramova@vk5270.spb.edu

Abstract. Neutrophilic granulocytes are involved in pathogenesis of many diseases since they do not only absorb and decontaminate bacteria but also release a complex of different agents, which under certain conditions can disturb the normal activity of cells and damage the connective tissue. These cells might play a certain role in the development of chronic glomerulone-

phritis, though the role of neutrophilic granulocytes in this pathology is not quite clear yet. This work investigated the content of cationic proteins in the neutrophilic granulocytes of peripheral blood in patients with chronic glomerulonephritis using the lysosomic-cationic test and estimated the level of expression of E-, C3b- and Fey- receptors on the membrane of neutrophilic granulocytes. The concentration of the circulating immune complexes of M, G, A class immunoglobulines as well as hemolytic complement activity were estimated in peripheral blood serum. 56 patients with chronic glomerulonephritis having preserved function of the kidneys who did not get any pathogenetic therapy (20 of them with membranoproliferative type 1 glomerulonephritis; 15 - with IgA nephropathy; 21 with mesangial proliferative glomerulonephritis) were examined. The control group consisted of practically healthy people. The reduced content of cationic proteins in neutrophilic granulocytes was revealed in patients with all forms of chronic glomerulonephritis. The expression of E- receptors on the neutrophilic membrane was decreased in all studied forms of chronic glomerulonephritis but the expression C3b- receptors was higher. An analysis of correlations of the indices studied of neutrophilic granulocytes activity and other immunological parameters show significant differences in the course of defence reactions in membranoproliferative type 1 glomerulonephritis, IgA nephropathy and mesangial proliferative glomerulonephritis. It allows to suggest possible participation of neutrophilic leukocytes in pathogenesis of such pathology in man. (Med.Immunol., 2003, vol.5, N1-2,

pp 137-142)

Введение

Нейтрофильный гранулоцит (НГ) - это клетка, которая одной из первых реагирует на развитие воспалительного процесса в организме. Попадая в очаг воспаления, НГ участвует в развитии патологического процесса, выделяя хемокины, привлекает в очаг воспаления мононуклеарные лейкоциты. Известно что, нейтрофильные гранулоциты участвуют в развитии патологических процессов при многих заболеваниях, высвобождая комплекс различных агентов, нарушающих нормальную деятельность клеток и разрушающих соединительную ткань [5]. Не является исключением и хронический гломерулонефрит (ХГН) [24, 25, 18], хотя роль нейтрофильных гранулоцитов при данной патологии не полностью ясна. Большое количество работ, демонстрирующих активную роль НГ в развитии поражения почечной ткани, выполнено на экспериментальных моделях гломерулонефрита. В этих исследованиях авторы обращают внимание на взаимосвязь развития полного клинико-морфологического синдрома с количеством и активностью НГ, инфильтрирующих почечную ткань [15, 20].

Многие авторы придают большое значение деструкции тканей, возникающей в результате оксидан-тного респираторного взрыва, инициированного НГ. Shah [28] показал, что кислородно-реактивные промежуточные метаболиты могут участвовать в патогенезе повреждения почечной ткани. Увеличение количества этих веществ в очаге воспаления может играть роль в развитии нарушения гломерулярного фильтра, появления протеинурии у крыс и повреждении почечных клеток. Кроме того, в нейтрофильных гранулах содержатся различные гидролитические ферменты и антимикробные полипептиды, которые могут вызывать повреждения стенки сосудов. Например, катионные белки (КБ), выделяемые из лизосомальных гранул НГ, повышают проницаемость стенки сосудов in vivo; протеазы разрушают базальную мембрану сосудов in vivo и in vitro; гепараназа разрушает гепарансульфат на базальной мембране

капилляров in vitro [22]. Протеазы, содержащиеся в НГ, являются медиаторами тканевой деструкции, разрушая важные компоненты экстрацеллюлярного матрикса (эластины, протеогликаны и гликопротеины). Ферменты нейтрофильных гранул могут разрушать и различные ключевые протеины плазмы крови (иммуноглобулины, белки комплемента, факторы свертывания) [16,17]. Активность протеаз регулируется большим количеством антипротеаз, содержащихся в плазме крови и интерстициальной жидкости [31]. В патогенезе повреждения почечной ткани участвуют и фосфолипазные продукты НГ [23, 33].

НГ, как и другие виды лейкоцитов, привлекаются в ткань различными хемоаттрактантами[14, 27, 13]. В инфильтрации почечной ткани НГ активную роль играют различные молекулы, обеспечивающие адгезию (селектины, интегрины) [30, 29].

Цель представленной работы заключалась в изучении изменений количественных и функциональных показателей нейтрофильно-гранулоцитарных клеток при ХГН у человека и исследовании корреляционных взаимосвязей между этими показателями и гемолитической активностью комплемента, концентрацией циркулирующих иммунных комплексов, и иммуноглобулинов сыворотки крови при хроническом гломерулонефрите.

Материалы и методы

Исследование проведено на 56 больных ХГН, проходивших обследование и лечение в нефрологи-ческих отделениях №1 и №2 клиники пропедевтики внутренних болезней СПбГМУ им. акад. И.П.-Павлова. Контрольная группа состояла из 12 практически здоровых человек, у которых исследовали изучаемые показатели периферической крови. У всех обследованных больных функция почек была сохранная. Обследование проведено до начала патогенетической терапии. Всем больным для установления диагноза ХГН была проведена прижизненная

нефробиопсия. Морфологическое исследование ткани нефробиоптата выполняли с помощью световой, иммунофлюоресцентной и электронной микроскопий. Забор крови производили из локтевой вены в стандартных условиях (утром, натощак), в сроки, максимально приближенные к нефробиопсии.

Морфологически у 20 обследованных был выявлен мембранозно-пролиферативный гломерулонефрит I типа (МПГН 1т) (подтвержден электронно-микроскопическим исследованием), у 15 - ^А-нефропа-тия (на основании наличия отложений ^А, X- и к-лег-ких цепей иммуноглобулинов в свежезамороженных срезах почечного биоптата) и у 21 пациента был выставлен мезангиально-пролиферативный гломерулонефрит (МезПГН). Иммунофлюоресцентное исследование нефробиоптата и некоторые иммунологические исследования были проведены нами в лаборатории клинической иммунологии и морфологии НИО НИИ нефрологии. Анализ срезов ткани почки на световом уровне выполнила с.н.с. Клемина И.К., а электронномикроскопическое исследование ткани нефробиоптата провела с.н.с. Титова В. А.. Изучение состояния НГ было осуществлено на базе Отдела общей патологии и патофизиологии ГУ НИИ ЭМ РАМН.

Суммарное содержание катионных белков в НГ периферической крови определяли по методу В.Е.-Пигаревского [9] с последующем вычислением цитохимического показателя. Изучение экспрессии рецепторов на мембране НГ проводили методом розет-кообразования. НГ выделяли из гепаринизированной периферической крови в желатиновом градиенте. Для определения уровня экспрессии рецепторов к эритроцитам барана (Е) на мембране НГ использовались бараньи эритроциты, сохранявшиеся в консерванте Олсвера при I = 4°С до 10 дней, после трехкратной отмывки 0,9% №С1 и разведенных средой 199 до 0.5% концентрации. Для определения комплементарных (СЗЬ) рецепторов на мембране НГ использовали метод розеткообразования с эритроцитами барана, сенсибилизированными антителами в присутствии мышиного комплемента. В качестве гемолитической сыворотки использовали сыворотку кроликов, иммунизированных эритроцитами барана [7]. Для выявления Есу-рецепторов на мембране НГ

использовали человеческие эритроциты резус отрицательной АВ (4) группы крови, фиксированные в 6% растворе формалина и обработанные ^С-антителами [6]. Подсчитывался процент клеток, образующих розетки, по отношению к общему количеству лейкоцитов. Уровень комплемента в сыворотке крови определяли по 50% гемолизу эритроцитов барана [3]. Концентрацию иммуноглобулинов классов М, С и А в сыворотке крови оценивали методом радиальной иммунодиффузии [21]. Концентрацию циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови определяли путем осаждения с помощью по-лиэтиленгликоля (м.м.6000)[26].

Полученные данные обрабатывали с помощью программы “5ТАТ15Т1СА”.

Результаты

В таблице 1 представлены данные изучения содержания КБ в НГ периферической крови и уровня экспрессии исследованных рецепторов. При всех трех изученных нами морфологических формах ХГН было выявлено снижение показателей ЛКТ по сравнению со здоровыми людьми (табл. 1). Показатели ЛКТ у больных с МПГН 1т., ^А-нефропатией и МезПГН не различались. Относительное количество НГ периферической крови, экспрессирующих Е-рецепторы, у больных с ^А-нефропатией и с МезПГН снижено по сравнению с их количеством у здоровых людей. Снижение экспрессии Е-рецепто-ров на мембране НГ не наблюдали у больных с МПГН I т. Среднее относительное количество НГ, несущих на своей мембране СЗЬ-рецепторы, превышало нормальные величины. Интенсивность экспрессия Бсу-рецепторов на мембране НГ у больных с исследованными формами ХГН не отличалась от нормальных величин (табл.1).

Выяснение степени взаимосвязи всех исследованных нами показателей позволило определить прямолинейные и криволинейные корреляции между этими показателями [1]. Достоверные коэффициенты корреляций представлены в таблице 2.

Из данных, представленных в таблице 2, видно, что содержание КБ в НГ коррелирует с концентра-

Табл. 1. ПОКАЗАТЕЛИ ЛИЗОСОМАЛЬНО-КАТИОННОГО ТЕСТА И ЭКСПРЕССИИ Е+ -, СЗЬ+ -, И Рсідв*-РЕЦЕПТОРОВ НА МЕМБРАНЕ НГ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТОМ И ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ

Группы ^^сследованных Показатель\™°де^ (Х±т) Здоровые люди п = 12 Пациенты с

МПГН I т п = 20 ІдА-нефропатия п=15 МезПГН п = 21

ЛКТ 1,47 ±0,02 1,01 ±0,05*** 0,92 ± 0,07*** 1,03 ±0,04***

НГ-Е+-Р0К(%) 39,8 ± 2,33 34,7 ±3,85 19,6 ±2,60*** 28,9 ±3,10**

НГ-СЗЬ+-Р0К(%) 8,1 ±1,62 16,8 ±2,49** 19,6 ±4,25* 18,9 ±2,86**

Н Г- ЯсІдС*-Р0К(%) 13,6 ±2,84 13,6 + 2,62 16,1 ±2,64 15,5 ±2,36

Примечание: * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001 - достоверность различия с соответствующими показателями здоровых людей

цией циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови у больных с ^А-нефропатией и МПГН 1 т, причем, при МПГН 1 т выявлена положительная корреляционная зависимость, а при ^А-нефропатии - отрицательная. С интенсивностью экспрессии Е-рецепторов на мембране НГ у больных МПГН 1 т коррелирует уровень гемолитической активности комплемента, концентрации ^М и циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке периферической крови. У больных с ^А-нефро-патией уровень экспрессии Е-рецепторов на мембране НГ коррелирует с гемолитической активностью комплемента и концентрацией в сыворотке крови. При МезПГН обнаружена корреляция величины экспрессии СЗЬ-рецепторов на НГ с уровнем гемолитической активности комплемента и содержанием циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке периферической крови.

Обсуждение

Полученные нами данные показали, что при изученных морфологических формах гломерулонефри-та наблюдается выраженное снижение показателей ЛКТ. Поскольку, исследование процессов созревания НГ в костном мозге в настоящей работе не проводили, мы можем лишь высказать предположение о возможных механизмах снижения количества КБ в этих клетках. С одной стороны, известно, что при ХГН развивается вторичный иммунодефицит, проявляющийся снижением функциональной активности лимфоидных клеток [2]. В то же время известно, что лимфоциты принимают участие в созревании НГ в костном мозге, являясь необходимым зве-

ном этого процесса [4]. С другой стороны, при развитии любого воспалительного процесса в организме происходит активный выброс КБ из НГ [8], что и ведет к снижению показателей ЛКТ при этих процессах. Таким образом, снижение содержания КБ в лизосомах НГ у больных ХГН может быть результирующей этих двух процессов.

Как известно, НГ активно участвует в утилизации циркулирующих иммунных комплексов, которые в свою очередь могут дестабилизировать клеточную мембрану [ 19]. Оба эти процесса могут приводить к снижению содержания КБ в НГ. Но, при первом типе реакции (утилизация ЦИК из кровеносного русла), разумно предположить положительную корреляцию, что и было выявлено при изучении этих процессов у больных с МПГН 1т. Дестабилизация циркулирующими иммунными комплексами мембраны нейтрофильных гранулоцитов, с излиянием катионных белков при отсутствии активного фагоцитоза ЦИК, должна, по-видимому, выражаться отрицательной корреляцией, которая и имела место при IgA-нефропатии. Ряд авторов [12, 32] указывают на повышение активности НГ при IgA-нефропатии, которая связана, по их мнению, с особой формой IgA, этот измененный иммуноглобулин вызывает мобилизацию кальция и продукцию сво-бодно-радикального кислорода НГ, что и может приводить, как считает Lai (1993) [12], к дестабилизации мембраны нейтрофильных гранулоцитов.

Снижение относительного содержания НГ, несущих Е-рецептор, можно объяснить недостаточным синтезом этих рецепторов в костном мозге, хотя, невозможно исключить и снижение экспрессии этих рецепторов [10].

Табл.2. КОЭФФИЦИЕНТЫ ЛИНЕЙНОЙ (г) КОРРЕЛЯЦИИ И НЕЛИНЕЙНОЙ (R) КОРРЕЛЯЦИИ СПИРМЕНА МЕЖДУ ВЕЛИЧИНАМИ ИЗУЧЕННЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У БОЛЬНЫХ С МПГН 1 ТИПА, 1дА-НЕФР0ПАТИИ И МезПГН

Группа больных Показатель Пациенты с

МПГН 1 т. IgA-нефропатией МезПГН

ЛКТ х НГ(Е+-Р0К)% _ r = - 0,536* r = -0,795***

ЛКТ х Hr(FclgGR+-POK)% R = 0,563** - R = - 0,679***

ЛКТ хТ(Е+-Р0К)% R = 0,600** r = - 0,734** -

ЛКГхцикус.ед. R = 0,479* R = - 0,552* -

ЛКТ х IgG г/л R =-0,513* - r = 0,667**

НГ(Е+-Р0К)% х Hr(FcFclgGR+-POK)% - - R = 0,578**

НГ(Е+-Р0К)% х Т(Е+-Р0К)% - r = 0,806*** -

НГ(Е+-Р0К)% х T(FclgMR+-POK)% R = 0,511* R = 0,817*** -

НГ(Е+-Р0К)% х СНМ ус.ед. R = - 0,444* R = - 0,575* -

НГ(Е+-Р0К)% х цик ус.ед. R = 0,616** - -

НГ(Е+-Р0К)%х1дМ ус.ед. R = 0,485* - -

НГ(Е+-Р0К)%х IgG ус.ед. - R = 0,516* -

НГ(СЗЬ+-РОК)%хСН5о ус.ед. - - r =-0,536*

НГ(СЗЬ+-Р0К)% х цик ус.ед. - R = - 0,688***

Примечание: * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001 - значимость коэффициента корреляции.

При всех трех морфологических формах гломеру-лонефрита среднее относительное количество клеток, несущих СЗЬ-рецептор, достоверно превышало нормальные величины. Считается, что СЗЬ-рецептор относится к подклассу интегринов, характеризует степень активности НГ в реакции с эндотелиальными клетками кровеносных сосудов, в результате которой открывается доступ клеткам иммунной системы в паравазальное пространство, что и является одним из механизмов формирования в ткани почки инфильтрата, содержащего полиморфноядерные и мононук-леарные клетки. Кроме того, данный рецептор опосредует присоединение растворимых комплексов и включается в процесс эндоцитоза, функционально взаимодействуя с Рсу-рецепторами на мембране НГ [29]. СЗЬ-рецептор, являясь промотором прикрепления, способен реагировать на изменение микроокружения перераспределением этих рецепторов в клетке и на ее поверхности. На циркулирующих НГ большинство рецепторов находятся в скрытом состоянии (в составе мембран специфических, желатиназных и секреторных гранул), что делает их недоступными для взаимодействия с экстрацеллюлярными лигандами (СЗЬ) [И]. Однако, при инкубации с хемотак-сическими пептидами происходит быстрое увеличение числа молекул рецептора на плазматической мембране. Этот процесс приводит к выходу содержимого матрикса нейтрофильных гранул. Возможно, наблюдаемое у обследованных нами пациентов, снижение содержания катионных белков НГ обусловлено этим механизмом. Хотя, достоверные корреляции между показателями Л КТ и уровнем экспрессии СЗЬ-рецепторов на НГ не обнаружены.

Уровень экспрессии СЗЬ-рецепторов на мембране НГ коррелировал с концентрацией ЦИК и гемолитической активностью комплемента в сыворотке крови только у больных МезПГН.

Не было выявлено изменений экспрессии Рсу-рецепторов на мембране НГ у больных ХГН по сравнению с этим же показателем у здоровых людей.

Заключение

Таким образом, при мембранозно-пролиферативном гломерулонефрите 1 типа, ^А-нефропатии и мезангиально-пролиферативном гломерулонефрите в нейтрофильных гранулоцитах резко снижено содержание катионных белков. По-видимому, это явление связано с наблюдаемым у таких больных иммунодефицитом и с появлением в крови особой формы циркулирующих иммунных комплексов. У больных с исследованными нами формами хронического гломе-рулонефрита выявлено выраженное повышение относительного количества нейтрофильных гранулоци-тов в периферической крови, несущих СЗЬ-рецептор, что указывает на стимуляцию этих клеток. Полученные различия корреляций между изученными нами

показателями НГ и другими иммунологическими параметрами показывает наличие существенных различий в протекании защитных реакций при мембранозно-пролиферативном гломерулонефрите 1 типа, IgA-нефропатии и мезангиально-пролиферативном гломерулонефрите.

Полученные данные об изменении функционального состояния нейтрофильных гранулоцитов периферической крови при исследованных морфологических формах хронического гломерулонефрита подтверждают заинтересованность этих клеток в патологических процессах, протекающих при данных формах патологии у человека.

Список литературы

1.Гланц С. Медико-биологическая статистика:(-пер. с англ.). - Москва: Практика, 1999. -460 с.

2.Буглова С.Е., Чиж К.А., Сумисик Л.В. Иммунологические критерии активности гломерулонефрита // Тер. архив. - 1992. - Т.64, №11. - С. 75 - 79.

3.Кэбот Е., Мейер М. Экспериментальная иммуно-логия:(пер. с англ.). - М. Медицина, 1968. - С140-158

4.Лесников В.А. Нейрогуморальные механизмы регуляции функций костного мозга как источника стволовых кроветворных клеток / В кн. Иммунофизиология. Под ред. чл.-корр. РАМН Е.А.Корневой.

- Санкт-Петербург. Наука. 1993. - С 294-319.

5.Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о ней-трофиле и макрофаге,- Новосибирск: Наука, 1989.-344с.

6.Новиков Д.Н. Справочник по клинической иммунологии и аллергологии - Минск, Беларусь. 1987. -218 с.

7.Петрова И.В., Шкурко В.И., Арапова О.Ю., Васильева Л.П. Определение розеткообразующих клеток, комплемента и комплементфиксирующих антител в клинике аутоиммунных и иммунодефи-цитных заболеваний// Методические рекомендации. НИИ травматологии и искусственных органов М3 СССР. - М.,1980. -23с.

8.Пигаревский В.Е. Новое в клинико-морфоло-гической оценке функционального состояния нейтрофильных гранулоцитов/ В кн. Клиническая морфология нейтрофильных гранулоцитов. Сборник научных трудов под ред. проф. В.Е.Пигаревского,-Ленинград, 1988. - СЗ-11 .

Э.Пигаревский В.Е. Лизосомально-катионный тест / В кн. Клиническая морфология нейтрофильных гранулоцитов. Сборник научных трудов под ред. проф. В.Е.Пигаревского.- Ленинград, 1988. -С87-102 .

Ю.Шалыгина Н.Б., Астафьева Н.В., Шалыгина А.Ю., Серебровская Л.В., Габрилович Д.Е., Семашко М.И., Хабарова В.В. Клеточный иммунный ответ при различных формах дифтерии у взрослых // ЖМЭИ. - 1990. - №8. - С 84-88.

11.Bainton D. F. Developmental biology of neutrophils and eosinophils // Inflammation: basic principles and clinical correlates, 3 rd., edited by John I. Gallin and Ralph Snyderman. - Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia. - 1999. - P.13-34.

12.Chen H.C., Tomino Y., Yaguchi Y., Fukui M„ Yokoyama K., Watanabe A., Koide H. Oxidative metabolism of polymorphonuclear leukocytes (PMN) in patients with IgA nephropathy // Journal of Clinical Laboratory Analysis. - 1992. -Vol 6, №1. -P.35-39.

13.Feng L., Xia Y., Yoshimura T., Wilson C.B. Modulation of neutrophil influx glomerulonefritis in the rat with anti-macrophage inflammatory protein-2 (MIP-2) antibody //J. of Clin. Investigation. - 1995.

- № 3. - P. 1009-1017.

14.Harada A., Sekido N., Akahoshi T.. Essential involvement of interleukin-8 (IL-8) in acute inflammation // J. of Leukocyte Biology. - 1994. - Vol. 56, № 5. - P.559-564.

15.Huang X.R., Holdsworth S.R., Tipping P.G. Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis //J. of the American Society of Nephrology.-1997. - Vol.8, № 7,- P.l 101-1108.

16.Janoff A. Neutrophil proteases in inflammation // Ann. Rev. Medicine. - 1972. - Vol. 23. - P. 177 -190.

17.Janoff A. Elastase in tissue injury // Ann. Rev. Medicine. - 1985. - Vol.36. - P.207-216.

18.Kincaid-Smith P., Nicholls K., Birchall I. Polymorphs infiltrate glomeruli in mesangial IgA // Amer.J. of Kidney Diseases.- 1997,- Vol. 45, № 3. -P.868-875.

19.Lai K.N., Leung J.C. Heat-aggregated IgA prepared from patients with IgA nephropathy increases calcium mobilization and superoxide production of human neutrophils in vitro //J. Nephron. - 1993. -Vol.64, № 1. - P.129-135.

20.Linas S. L., Whittenburg D., Parsons P.E., Repine J.E. Ishemia increases neutrophil retention and worsens acute renal failure: role of oxygen metabolites and ICAM-1 // Amer.J. Kidney International. - 1995. -Vol. 48. - P.1584-1591.

21.Manchini G., Garbonara A.L., Heremas J.F. Immunochemical quantitation of antigens by single radial immunodiffusion // Immunochemistry. - 1965.

- Vol 2,- P.235-258.

22.Matzner Y„ Bar N.M., Yahalom J., Ishai M.R., Fuks Z., Vlodavsky I. Degrdation of heparan sulfate in the subendothelial extracellular matrix by a readily released heparanase from human neutrophils: Possible role in invasion through basement membranes //J.Clin Invest.-1985,- Vol. 76. - P.1306-1313.

23.McIntyre T.M., Zimmerman G.A., Prescott S.M. Leukotrienes C4 and D4 stimulate human endothelial cells to synthesize platelet-activating factor and bind neutrophils // Proc. Natl. Acad. Sci USA. - 1986. -Vol. 83. - P. 2204 - 2208.

24.Noris М., Remuzzi G. New insights into circulating cell-endothelium interactions and their significance for glomerular pathophysiology // Amer. J. Kidney International. - 1995. - Vol. 26, № 3. - P.541-548.

25.0da Т., Hotta O., Taguma Y., Kitamura H., Sudo K., Harigome I., Chiba S., Yoshizawa N., Nagura H. Involvement of neutrophil elastase in crescentic glomerulonephritis // J. Human Pathology.- 1997. -Vol. 28, № 6. - P. 720-728.

26.Riho J., Hoskava V., Koslik F.G. The use of polyethylene glycol for immune complex detection in human sera // Molecular Immunology. - 1979. - Vol

16, №7. - P.489-493.

27.Sallem S., Dai Z., Coelha S.N., Konieczny B.T., Assmann K.Z., Baddoura F.K., Lakkis F.G. IL-4 is an endogenous inhibitor of neutrophil influx and subsequent pathology in acute antibody-mediated inflammation //1, of Immunology. - 1998. - Vol. 160, № 2. - P.979-984.

28.Shah S.V. The role of reactive oxygen metabolites in glomerular disease // Annu Rev Physiol. - 1995. -Vol. 57. - P. 245-262.

29.Tang Т., Rosenkrnz A., Assmann K.Z.M., Goodman M.Z., Gutierrez-Ramos J.C., Carroll M.C., Cotran R.S., Mayadas T.N. A role for Mac-1 (CD1 lb/ CD18) in immune complex-stimulated neutrophil function in vivo: Mac-1 deficiency abrogates sustained Fey - receptor - dependent neutrophil adhesion and complement - dependent proteinuria in acute glomerulonephritis // J. of Exp. Med. - 1997. - Vol. 186, №11.-P. 1853-1863.

30.Tipping P.G., Huang X.R., Berndt M.C., Holdswoth S.R. A role P-selectinin complement-independent neutrophil-mediated glomerular injuri // Amer.J. Kidney International. - 1994. - Vol. 46, №1.

- P. 79-88.

31.Travis J., Savesen G.S. Human plasma proteinase inhibitors // Ann. Rev. Biochem.- 1983. - Vol. 52.- P. 655 - 709.

32.Ventura M.T., Gesualdo L., Capobianco V., Tortorella C., Antopaci S., Schena F.P. Effect of in vitro nutrient supplementation on polymorphonuclear cell respiratory burst in primary IgA nephropathy //J.Clinical Nephrology. - 1995. - Vol. 43, №1. - P.14-19.

33.Yared A., Albrightson W.C., Griswold D., Takahashi K., Fogo A., Bard K.F. Functional significance of leukotriene B4 in normal and glomerulonephritic kidneys // T. Am. Soc. Nephrol. -1991.-Vol. 2.-P. 45-56.

поступила в редакцию 31.12.2002 отправлена на доработку 20.03.2003 принята к печати 06.04.2003