Композиция для контроля массы тела и поддержания функционального состояния организма человека
COMPOSITION FOR BODY MASS CONTROL AND HUMAN BODY FUNCTIONAL STATE MAINTENANCE

Изобретение относится к медицине, касается композиции для контроля массы тела и поддержания функционального состояния организма людей с избыточной массой тела и алиментарным ожирением.
Проблема профилактики и лечения избыточной массы тела и, тем более, ожирения приобрела небывалую актуальность и значимость ее растет. Всемирная Организация Здравоохранения (ВОЗ) объявила это заболевание «эпидемией XXI века». Согласно данным ВОЗ, избыточный вес и ожирение определяются как аномальные и излишние жировые отложения, которые могут нанести ущерб здоровью. Существует хорошо доказанная взаимосвязь между избыточной массой тела и ожирением и рядом заболеваний. Избыточная масса тела и ожирение относятся к числу пяти основных факторов риска смерти. Огромное количество случаев ранней инвалидности и преждевременной смерти связано именно с наличием данного состояния. По данным Парламентских слушаний Государственной Думы Российской Федерации (ноябрь 2012 г.) более 50% жителей России старше 30 лет страдают этим недугом и, как следствие, растет заболеваемость сахарным диабетом, сердечно-сосудистой и эндокринной систем (включая метаболический синдром), опорно-двигательного аппарата, онкологическими болезнями.
Считается, что чрезмерное накопление жировой ткани связано или с неправильным пищевым поведением, или с наличием генетической предрасположенности, или эндокринными нарушениями, или нарушениями центральной нервной системы, а гиподинамия, стрессы и плохая экология только лишь усугубляют ситуацию. Однако перечисленные факторы довольно разнородны и имеют между собой очень мало общего. Известны случаи ожирения, которые не могут объясняться указанными выше причинами. Зачастую избыточные жировые накопления возникают вследствие нарушения энергетического баланса в организме, в результате чего часть полученной с пищей энергии вместо преобразования в активную форму (тепло и/или работу) сохраняется в виде пассивного запаса энергии в жировых клетках.
Наиболее часто встречается алиментарное ожирение, обычно у лиц с наследственной предрасположенностью к полноте. Данный вариант ожирения развивается в тех случаях, когда калорийность пищи превышает энергозатраты организма. Для алиментарного ожирения характерно постепенное увеличение массы тела. Подкожная жировая ткань распределяется равномерно, иногда в большей степени накапливается в области живота и бедер. Признаки поражения эндокринных желез при этом отсутствуют. Этим видом ожирения чаще страдают женщины среднего и пожилого возраста, ведущие малоподвижный образ жизни. При сборе анамнеза с подробным выяснением суточного рациона обычно устанавливают, что больные систематически переедают.
2
Для классификации ожирения и избыточной массы тела часто используется индекс массы тела (ИМТ), представляющий отношение массы тела к росту. Рассчитывается индекс как отношение массы тела в килограммах к квадрату роста в метрах (кг/м). По определению ВОЗ, если ИМТ больше или равен 25 - у пациента имеет место избыточная масса тела. Если ИМТ больше или равен 30 - ожирение. В клинической практике основным применяемым диагностическим критерием ожирения является определение избытка общей массы тела по отношению к норме, установленной статистически. Однако для определения тяжести заболевания важен не столько избыток общей массы тела, сколько избыток массы жировой ткани, который может существенно отличаться даже у лиц, имеющих одинаковый возраст, рост и массу тела. В связи с этим, наиболее актуальным для диагностики и оценки эффективности лечения избыточной массы тела и ожирения является определение состава тела и именно жировой массы.
В связи с высокой значимостью данной проблемы возрастает необходимость изыскания новых подходов в профилактике и лечении данной патологии.
В настоящее время применяются самые разнообразные способы лечения избыточной массы тела и ожирения. Это различные системы физических нагрузок, мышечная электростимуляция, хирургическая пластика. При ИМТ ≥ 30, а также и при ИМТ ≥ 27 и наличии связанных с ожирением патологических состояний должна проводиться фармакотерапия избыточной массы тела. В отдельном ряду стоит диетотерапия (в том числе лечение голодом), а также психотерапевтические способы лечения, нацеленные на коррекцию личности [1-6].
Общепринятая стратегия помощи больным с избыточной массой тела и ожирением заключается в применении в отношении всех больных программы немедикаментозной терапии, которая при необходимости может быть дополнена методами медикаментозного и (или) хирургического лечения ожирения. Немедикаментозные методы лечения ожирения, которые с известной долей вероятности могут обеспечить постепенное непрерывное снижение массы тела, базируются на изменении образа жизни, модификации питания, уменьшении потребления алкоголя, увеличении физических нагрузок. В настоящее время установлено, что взрослые пациенты с ожирением могут еженедельно терять около 0,5 кг массы тела при уменьшении дневного потребления пищевых продуктов на 500-1000 ккал от исходного уровня. Более серьезное ограничение питания с применением низкокалорийных диет позволяет ускорить снижение массы тела, но при этом практически не влияет на долговременные результаты диетотерапии. Сочетание ограничительных диет с повышением физической активности делает поддержание снижения массы тела в течение длительного периода более вероятным. Комбинирование диеты с нагрузками в течение полугода способно обеспечить снижение массы тела при ожирении на 5-10% [7].
Тем не менее, несмотря на доказанную эффективность сочетания диетотерапии с повышением физической активности, только 20% пациентов, стремящихся снизить массу тела, успешно сочетают эти лечебные подходы. Практический опыт свидетельствует, что снижение массы тела, достигаемое с использованием немедикаментозных методов, требует от пациента постоянного соблюдения неких условий: постоянного соблюдения диеты, поддержания физической активности на достигнутом уровне и прочее. Пациентам с ожирением, как правило, достаточно сложно постоянно придерживаться ограничительных рекомендаций, в том числе из-за особенностей поведения, и их масса тела постепенно возвращается к исходному уровню или даже начинает превышать его.
Немедикаментозное лечение ожирения не может быть успешным без адекватной поведенческой терапии. Данное направление немедикаментозного лечения предусматривает создание у пациента мотивации на снижение массы тела, ориентацию его на пожизненное выполнение программы борьбы с ожирением, самоконтроль с ведением дневника массы тела, питания и режима физической активности, ограничение приема препаратов, способствующих повышению массы тела, лечение половой дисфункции и депрессивных нарушений, борьбу со стрессом, «седиментарным» образом жизни, соблюдение правил приема пищи и другие мероприятия.
Так как ожирение является хроническим патологическим состоянием, то, приступая к его лечению - немедикаментозному или фармакотерапии, следует ожидать, что оно будет достаточно длительным. Многочисленные клинические исследования свидетельствуют, что после прекращения приема препаратов, снижающих массу тела, почти неминуемо происходит ее возрастание, часто до уровня, превосходящего исходный. Выбор того или иного препарата является эмпирическим и базируется на рассмотрении общего состояния больного, лежащих в основе ожирения заболеваний, имеющихся противопоказаний к применению, сопутствующей терапии (риск взаимодействий), необходимости мониторинга стоимости лечения и, наконец, предпочтений самого пациента.
В настоящее время на фармацевтическом рынке присутствует целый ряд фитопрепаратов и биологически активных добавок к пище (БАД), предлагаемых их производителями для снижения массы тела и/или профилактики ожирения, которые могут быть использованы у лиц с избыточной массой тела на этапе немедикаментозного лечения как пищевые добавки к используемой диете. Чаще всего, в качестве компонентов таких добавок используют зеленый кофе, экстракт зеленого чая сухой, хитозан, корицу, куркуму, имбирь, гуарану, гарцинию, хрома пиколинат, L-карнитин, некоторые жирные кислоты, алкалоиды эфедры, включая эфедрин, столбики и рыльца кукурузы и другие [8-13].
При рассмотрении проблемы коррекции массы тела следует также учитывать такое понятие как метаболический синдром. Оно включает в себя пять показателей: абдоминальное ожирение, повышенное артериальное давление, повышение уровня глюкозы в крови натощак, высокое содержание в крови триглицеридов и низкое содержание липопротеидов высокой плотности. При этом появление одного из названных факторов свидетельствует о повышенном риске развития всех остальных.
К сожалению, официальная медицина, судя по материалам последней конференции по метаболическому синдрому (ноябрь 2014 г.), использует крайне ограниченную номенклатуру природных компонентов для борьбы с этим многофакторным патологическим состоянием организма. Свидетельств эффективности такого рода средств для снижения массы тела и лечения ожирения, соответствующих данным доказательной медицины, крайне недостаточно. Поэтому изыскание рецептур на основе природных соединений для снижения жировой массы тела, их всестороннее изучение и разработка рекомендаций для использования в практике являются весьма актуальными.
Из числа средств для коррекции массы тела достаточно хорошо известна БАД Редуксин-Лайт Усиленная Формула (ООО «Полярис», г. Мурманск) [14]. В настоящее время указанная БАД в практике снижения массы тела и лечения ожирения наиболее широко применяется различными группами населения, по принципу действия близка к заявляемой композиции, в связи с чем принята в качестве композиции-прототипа.
В состав композиции-прототипа, изготовленной в твердой дозированной форме для перорального применения в виде капсул по 650 мг, входят четыре безопасных природных компонента, источниками которых являются растения:
5-гидрокситриптофан, полученный из семян гриффонии
50 мг
конъюгированная линолевая кислота
500 мг
корень ямса китайского измельченный
70 мг
вытяжка из экстракта ямса дикого
30 мг
Основное действие композиции-прототипа проходит по двум направлениям: контроль аппетита и ускорение наступления насыщения, а также моделирование подтянутого и привлекательного силуэта за счет воздействия на «проблемные зоны».
Композиция-прототип способствует эффективному снижению массы тела, позволяет устранить риски ожирения и вернуться к стройности фигуры путем:
- снижения жировой массы тела (жировые отложения как в подкожной клетчатке, так и вокруг внутренних органов (висцеральный жир));
- увеличения мышечной массы и формирования «здорового» контура фигуры;
- коррекции «проблемных зон» (талия, бедра, живот) с помощью комбинированного воздействия на мышечную и жировую ткань;
- уменьшения аппетита;
- улучшения эмоционального фона, что облегчает соблюдение диеты и мотивирует к дальнейшему похудению.
Входящие в состав композиции-прототипа компоненты влияют на основные слагаемые эффективного похудения и восстановления нормального телосложения.
Контроль аппетита обеспечивается за счет присутствия в составе композиции-прототипа 5-гидрокситриптофана - важной аминокислоты для человеческого организма для выработки гормона «радости» серотонина. Серотонин способствует снижению аппетита, ускоряет наступление насыщения, улучшает настроение и нормализует сон у лиц, соблюдающих диету, делая процесс похудения значительно легче.
«Конъюгированная линолевая кислота (КЛК)» является обобщенным термином, используемым для обозначения смеси изомеров положения и геометрических изомеров незаменимой жирной кислоты - линолевой кислоты [15]. В составе композиции-прототипа КЛК в сочетании с корнем ямса китайского измельченным и вытяжкой из экстракта ямса дикого, работая в синергии, воздействуют на жировую и мышечную ткани, способствуя сжиганию имеющихся жировых запасов, препятствуя образованию новых жировых отложений, а также тонизируя мышечную ткань. Кроме того, их действие способствует усилению бетта-окисления жирных кислот и формированию оптимального соотношения жировой и мышечной ткани. За счет этого силуэт становится подтянутым и привлекательным.
КЛК в синергии с корнем ямса китайского измельченным и вытяжкой из экстракта ямса дикого способствуют уменьшению накопления жиров адипоцитами (клетками жировой ткани), ускоряет снижение жировой массы и уменьшение объемов в «проблемных зонах» - талия, живот, бедра.
Кроме подкожного жира, происходит уменьшение еще и висцерального жира (жира вокруг внутренних органов), за счет этого талия становится тоньше, а живот меньше. Бедра становятся уже за счет работы бедренных мышц, которые наиболее интенсивно сжигают жир при содействии компонентов, входящих в состав композиции-прототипа.
Также КЛК способствует увеличению мышечной массы, в особенности при сочетании ее приема с занятиями физическими упражнениями.
Таким образом, КЛК оказывает «моделирующее» действие на силуэт тела за счет одновременного влияния на уменьшение жировой массы, а также роста и укрепления мышечной массы. При этом жир начинает уходить из мест наибольшего его скопления - талия, бедра, живот.
Корень ямса китайского измельченный снижает стремление к потреблению жиров, повышает выведение (экскрецию) холестерина с желчью. Сапонины вытяжки из экстракта ямса дикого служат источником дегидроэпиандростерона (ДГЭА), который тормозит образование висцерального жира. Это улучшает функцию жизненно важных органов и предотвращает осложнения ожирения.
Для снижения жировой массы тела и формирования подтянутого силуэта рекомендуют принимать композицию-прототип по 1 капсуле 2 раза в день во время еды или сразу после приема пищи в течение 1 месяца. Как правило, существует необходимость повторения курсового приема 3-4 раза в год. Приобрести композицию-прототип абсолютно несложно.
Наряду с отмеченными достоинствами для композиции-прототипа характерен ряд недостатков:
- недостаточная суточная дозировка КЛК для обеспечения требуемой эффективности композиции-прототипа;
- отсутствуют убедительные данные клинической эффективности КЛК по данным метаанализа [16];
- высокая стоимость месячного приема (3000-3500 рублей), что делает недоступным композицию-прототип для многих групп населения;
- снижение массы тела и уменьшение риска появления ожирения, заметное уменьшение объемов в «проблемных зонах» гарантированы только в случае сочетания приема композиции-прототипа с физической активностью.
По набору входящих в нее биологически активных веществ композиция-прототип не может в полной мере обеспечить эффективное влияние на развитие рассматриваемой патологии и предотвратить ее осложнения.
Многофакторный характер формирования избыточной массы тела и, тем более, ожирения, требует разработки и практического использования многокомпонентных рецептур на основе безопасных природных соединений, влияющих на различные аспекты патологии.
В связи с этим, целью изобретения явилось расширение ассортимента средств для контроля массы тела за счет создания сбалансированного поликомпонентного комплекса на основе безопасных природных соединений, источниками которых являются растения, обеспечивающего эффективное комплексное воздействие на организм, заключающееся в снижении массы тела и поддержании функционального состояния организма, показатели которого снижены при развитии указанной патологии, не содержащей опасные для здоровья вещества, нетоксичной, не обладающей способностью к кумуляции, сенсибилизирующим действием и отдаленными негативными последствиями, стабильной при хранении.
Достижение поставленной цели возможно за счет создания сбалансированного поликомпонентного комплекса, состав которого представлен безопасными природными соединениями, источниками которых являются растения, а также митохондриальными метаболитами и соответствует основным патогенетическим механизмам ожирения и его осложнений, что позволяет осуществлять контроль за массой тела за счет комплексного воздействия на механизмы развития ожирения и поддерживать функциональное состояние организма.
Комплексное воздействие заявляемой композиции на механизмы контроля массы тела заключается в:
- снижении усвоения углеводов из пищи;
- переключении на использование в качестве источника энергии жиров вместо углеводов;
- усилении процессов расщепления жировой ткани;
- повышении утилизации висцерального жира;
- активизации процессов сжигания жиров в клеточных митохондриях;
- ремоделировании тела человека за счет повышения тощей массы тела;
- снижении аппетита;
- дополнительном поступлении в организм микронутриентов;
- антидепрессантном действии.
Для реализации указанного комплексного воздействия в поликомпонентный состав заявляемой композиции включены:
- экстракт зеленого кофе;
- экстракт бурых водорослей - источник фукоксантина;
- экстракт семян африканского манго;
- экстракт корневища имбиря;
- L-карнитин;
10
- коэнзим Q;
- α-липоевая кислота.
Отличительная особенность заявляемой композиции, прежде всего, заключается в том, что в ее составе присутствуют факторы, определяющие утилизацию глюкозы и жиров.
В числе факторов, определяющих утилизацию глюкозы, в качестве главного действующего компонента использован экстракт зеленого кофе, стандартизированный по общему содержанию и профилю хлорогеновых кислот (CGA), прежде всего, высокого содержания эллаговой и других феноловых кислот. За счет этого экстракт зеленого кофе способствует подавлению активности пищеварительных ферментов, расщепляющих крахмал пищи, и снижению расщепления гликогена в печени (за счет ингибирования глюкозо-6-фосфатазы). Под воздействием экстракта зеленого кофе происходит снижение поступления глюкозы в кровь и ее концентрации в плазме крови, модуляция синтеза кишечных инкретиновых гормонов - глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (ГИП) и глюкогоноподобного пептида-1 (ГПП-1), что влияет на постпрандиальную секрецию инсулина и тем самым ингибирует продукцию глюкозы и способствует ее усвоению тканями. В результате снижается риск развития ожирения, гипергликемии и диабета.
Экстракт зеленого кофе повышает способность организма сжигать жир и обладает уникальной способностью предотвращать избыточное поступление углеводов в плазму крови (предотвращает распад гликогена в печени и всасывание глюкозы в кишечнике).
Помимо экстракта зеленого кофе в состав заявляемой композиции включены активные ингредиенты, позволяющие усилить основной эффект заявляемой композиции:
- каротиноид из бурой водоросли - фукоксантин - воздействует на висцеральный жир;
- экстракт семян африканского манго уменьшает инсулинорезистентность и снижает образование жирных кислот в жировой ткани;
- экстракт корневища имбиря нормализует функции пищеварительной системы, способствует нормализации липидного профиля, активизирует обменные процессы.
10
Для активизации энергетического метаболизма на клеточном уровне и сжигания за счет этого жиров и углеводов в клетках в состав заявляемой композиции дополнительно введен метаболитный комплекс, состоящий из L-карнитина, α-липоевой кислоты, коэнзима Q-митохондриальных метаболитов.
Важное значение для стимуляции метаболизма глюкозы имеет α-липоевая кислота. Она является необходимым компонентом энергетически важного, аэробного пути превращения глюкозы, предопределяющего ее трансформацию через анаэробно образующийся пируват в ключевой компонент энергетического цикла Кребса - ацетилкофермент А. α-липоевая кислота способствует снижению концентрации глюкозы в плазме крови и накоплению гликогена в печени, участвует в регулировании углеводного и липидного обменов, стимулирует обмен холестерина, повышает содержание глютатиона, что в сочетании с антиоксидантным действием восстановленной формы α-липоевой кислоты вносит существенный вклад в антиоксидантную активность заявляемой композиции. Благодаря участию в метаболизме жиров α-липоевая кислота увеличивает биосинтез фосфолипидов, в частности, фосфоинозитола, что способствует стабилизации часто повреждающихся в условиях ожирения клеточных мембран.
10
10
10
Для обеспечения энергетически выгодного аэробного пути утилизации глюкозы при участии α-липоевой кислоты в состав заявляемой композиции входит коэнзим Q (КoQ), поскольку биохимическим механизмом образования аденозинтрифосфата (АТФ) на этом пути являются электронотранспортные цепи митохондрий, в функционировании которых важную роль играет коэнзим Q.
Факторами, определяющими утилизацию жиров, являются экстракты семян африканского манго и корневища имбиря, которые нормализуют липидный обмен и способствуют оптимизации липидного профиля с одновременной интенсификацией обмена веществ. Следует особо подчеркнуть уникальность действия компонентов семян африканского манго, которая заключается в активизации расщепления жиров за счет повышения чувствительности жировой ткани к лептину - пептидному гормону, вырабатываемому собственно клетками жировой ткани, что приводит к подавлению секреции нейропептида Y. Как известно, увеличение продукции этого гипоталамического медиатора приводит к стимуляции аппетита и увеличению потребления пищи. В то же время, под действием лептина увеличивается продукция липолитических факторов гипоталамуса, торможение центров голода и уменьшение потребления пищи, а также активации симпатического отдела нервной системы, что приводит к усилению процессов липолиза и снижению жировой массы. Помимо этого, компоненты африканского манго повышают чувствительность тканей к инсулину за счет активизации выделения еще одного пептида жировой ткани - адипонектина. Последний профилактирует воспалительные процессы в эндотелии сосудистой стенки. Эти свойства африканского манго оказывают благоприятное влияние на уровень сахара в крови и предупреждают атеросклеротическое поражение сосудов, что является частым явлением у лиц с повышенной массой тела, а тем более с ожирением и метаболическим синдромом.
10
10
10
Следующий важный компонент заявляемой композиции, активно влияющий на жировой обмен, - L-карнитин в сочетании с КoQ. L-карнитин является молекулярным транспортером длинноцепочечных жирных кислот жиров (в том числе и пищевых) в митохондрии, где с участием КoQ дыхательной митохондриальной цепи осуществляется синтез АТФ, что способствует снижению уровня жиров в организме. Именно для обеспечения необходимого условия эффективности окисления жирных кислот в составе заявляемой композиции предусмотрено сочетание L-карнитина с КoQ.
Важным интенсификатором окисления и «сгорания» как углеводов, так и жиров в митохондриях клеток является каротиноид из бурой водоросли - фукоксантин. Фукоксантин индуцирует экспрессию белка UCP-1, разобщающего перенос электронов в электронотра-нспортной цепи митохондрий и окислительное фосфорилирование с образованием АТФ. Следствием такого процесса является интенсификация процессов окисления жиров и углеводов для покрытия возникающего в клетках дефицита энергии. Особенно важно, что указанный процесс имеет место в висцеральной жировой ткани, что не только способствует уменьшению жировых отложений вокруг талии, но, что особенно важно, снижает висцерально-абдоминальное ожирение (одного из показателей метаболического синдрома). Более того, в плане профилактики осложнений ожирения, в первую очередь, висцерально-абдоминального типа, является свойство фукоксантина стимулировать биосинтез в печени докозагексаеновой кислоты из предшественников (α-линоленовой и эйкозапентаеновой кислот), не только способствующей снижению уровня атерогенного холестерина в плазме крови и риска развития атеросклероза (особенно выраженного у лиц с избыточной массой тела и, особенно метаболическим синдромом), но и способствует разрешению воспаления эндотелия сосудов.
10
10
Из других важных свойств компонентов, входящих в состав заявляемой композиции, следует указать на антиоксидантное действие (эллаговая и другие феноловые кислоты и полифенолы зеленого кофе, фукоксантин бурой водоросли, полифенолы корневища имбиря, α-липоевая кислота, кофермент Q и т.д.), профилактическое антиканцерогенное действие (особенно фукоксантина), гепатопротекторную активность (корневище имбиря, африканское манго, кофермент Q), которые являются важными факторами профилактики опасных осложнений у лиц с избыточной массой тела и тем более ожирением.
Кроме того, для заявляемой композиции характерно наличие ряда дополнительных положительных эффектов в отношении организма человека, что особенно важно для тех, кто стремится не только похудеть, но и поддержать функциональное состояние своего организма. Заявляемая композиция оказывает положительное влияние на углеводный обмен (улучшение показателей глюкозотолерантного теста), на жировой обмен (улучшение липидного профиля плазмы крови), способствует мягкому снижению артериального давления, повышению физической работоспособности и выносливости, устойчивости к гипоксии и воздействию других неблагоприятных факторов, улучшению умственной работоспособности за счет улучшения мнестических функций ЦНС (памяти и способности к обучению).
Следует также отметить, что при приеме заявляемой композиции не требуется изменения обычного образа жизни. Заявляемую композицию можно принимать дополнительно к пище, не изменяя диету и/или физическую активность в течение дня, что немаловажно для людей с избыточной массой тела и ожирением.
Заявляемая композиция имеет сложный поликомпонентный состав, а ее эффективность в отношении снижения массы тела превосходит эффективность входящих в ее состав компонентов, что обеспечивается за счет эффективного комплексного восстановления обменных процессов в клетке, нарушенных, как правило, при ожирении.
В целом компоненты заявляемой композиция подобраны таким образом, что ее качественный и количественный состав нацелены на торможение всасывания и биосинтеза основных энергетических компонентов пищи (углеводов и жиров) и интенсификацию их аэробного катаболизма.
Для улучшения технологичности процесса получения заявляемой композиции в ее состав введены вспомогательные технологические добавки, в качестве которых использованы лактоза, тальк, кальция стеарат, диоксид кремния.
Таким образом, в составе заявляемой композиции ингредиенты подобраны таким образом, что заявляемая композиция представляет собой сбалансированный комплекс, а количество их в одной капсуле массой 500 мг составляет, мг:
экстракт зеленого кофе
100,0
экстракт бурых водорослей - источник фукоксантина
75,0
экстракт семян африканского манго
31,25
экстракт корневища имбиря
75,0
L-карнитин
125,0
коэнзим Q<sub>10</sub>
12,5
α-липоевая кислота
15,0
лактоза
51,25
тальк
5,0
кальция стеарат
5,0
диоксид кремния
5,0
Возможность достижения цели изобретения подтверждается результатами проведенных исследований, представленными в следующих примерах.
Пример 1. Получение заявляемой композиции в капсулированной твердой дозированной форме для перорального введения
Заявляемая композиция выполнена в капсулированной твердой дозированной форме, что не только существенно упрощает ее использование при пероральном приеме, но и обеспечивает надежную защиту входящих в ее состав компонентов от воздействия факторов, вызывающих их деградацию.
Процесс получения заявляемой композиции в капсулированной твердой дозированной форме предусматривал выполнение следующих стадий:
- подготовка сырья (просеивание субстанций через вибросито SGS-30 с размером ячейки 1 мм, измельчение отсева на молотковой мельнице ММ-10 и повторное просеивание);
10
- приготовление смеси для грануляции (дозирование составляющих заявляемой композиции в следующем порядке: вначале последовательно дозируют основные составляющие композиции, в том числе экстракты зеленого кофе, бурых водорослей, семян африканского манго, корневища имбиря, L-карнитин, коэнзим Q, α-липоевую кислоту, затем последовательно дозируют вспомогательные компоненты, в том числе лактозу, тальк, кальция стеарат, диоксид кремния);
- получение смеси для капсулирования путем смешивания в смесителе V-образном С-300 (время смешивания из расчета 100 кг - 1 час);
- контроль качества смеси для капсулирования;
- капсулирование с использованием капсульного станка (автомата) ZANASI 40Е;
- при капсулировании строгий периодический контроль внешнего вида и средней массы капсул;
- обеспыливание готовых капсул с использованием обеспыливателя.
10
Для введения основных составляющих заявляемой композиции использованы: экстракт зеленого кофе (NATUREX, Франция), экстракт бурых водорослей, содержащий 10% фукоксантина (A AND Z FOOD ADDITIVES Co., LTD, Китай), экстракт семян африканского манго (NATUREX, Франция), экстракт корневища имбиря (NATUREX, Франция), L-карнитин (LONZA, Швейцария), коэнзим Q (QINGDAO SAMIN CHEMICAL CO., Ltd, Китай), α-липоевая кислота (SABINSA CORPORATION, Индия).
Как видно, процесс получения заявляемой композиции в капсулированной твердой дозированной форме для перорального введения отличается простотой, а используемые при этом ингредиенты выпускаются в промышленных условиях и доступны.
Пример 2. Оценка безопасности заявляемой композиции
Безопасность заявляемой композиции оценивали по результатам санитарно-химического анализа, микробиологических исследований, определения токсикологических характеристик, в том числе острой токсичности при внутрижелудочном введении, хронической токсичности, а также определения способности к кумуляции, сенсибилизирующего действия, развития возможных отдаленных последствий.
Санитарно-химический анализ
Подготовку проб проводили по ГОСТ 26929-94 «Сырье и продукты пищевые. Подготовка проб. Минерализация для определения токсичных элементов. Межгосударственный стандарт». Свинец и кадмий определяли по ГОСТ 30178-96 «Сырье и продукты пищевые. Атомно-абсорбционный метод определения токсичных элементов. Межгосударственный стандарт». Мышьяк определяли согласно ГОСТ 26930-86 «Сырье и продукты пищевые. Метод определения мышьяка». Ртуть определяли согласно «Методическим указаниям по обнаружению и определению содержания общей ртути в пищевых продуктах методом беспламенной атомной абсорбции» (№5178-90).
Содержание хлорорганических пестицидов (токсикантов) определяли согласно «Методическим указаниям по определению остаточных количеств хлорорганических пестицидов» (№1766-77) и официальным методам анализа АОAC («Official methods of analysis of the АОАС», 1984, 14th ed., Chapter 29, P. 537-538).
Исследования проводили с использованием весов лабораторных ВЛР-500, газожидкостного хроматографа «Карло Эрба» (модель HRGC 5700), обменных клеток итальянской фирмы «Texnoplast».
Результаты проведенных измерений представлены в таблице 1 и свидетельствуют, что в заявляемой композиции содержание токсикантов (хлорорганические пестициды ГХЦТ и ДЦТ) и опасных для здоровья веществ (свинец, кадмий, ртуть, мышьяк) не превышает допустимые уровни, установленные Техническим регламентом Таможенного союза TP ТС 021/2011 «О безопасности пищевой продукции» (приложение 3, раздел 10) [17]. Такие же пестициды как алдрин и гептахлор в заявляемой композиции не обнаружены.
Микробиологические исследования
Микробиологические исследования проводили в соответствии с требованиями методических указаний МУК 4.2.577-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов» и МУК 2.3.2.721-98 «Определение безопасности и эффективности биологически активных добавок к пище», ГОСТ Р 52814-2007 «Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella», ГОСТ Р 52816-2007 «Продукты пищевые. Метод выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)», ГОСТ 10444.12-88 «Продукты пищевые. Метод определения дрожжей и плесневых грибов», ГОСТ 30726-2001 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий вида Escherichia coli».
Экспериментально установлено, что по микробиологическим показателям безопасности заявляемая композиция соответствует требованиям, установленным Техническим регламентом Таможенного союза TP ТС 021/2011 «О безопасности пищевой продукции» (приложения 1 и 2, раздел 1.9) (таблица 2)].
Исследование острой токсичности.
Для определения показателей острой токсичности заявляемую композицию вюдили здоровым беспородным белым крысам обоих полов массой тела 130-150 г и 180-200 г внутрижелудочно в виде водно-крахмальных взвесей. Введение осуществляли через металлический атравматичный зонд в возрастающих дозах с использованием пробит-анализа по Литчфилду-Уилкоксону в модификации З. Рота [18].
В ходе эксперимента для исследования действия заявляемой композиции были сформированы опытные группы по 6 животных одного пола в каждой. Кроме того, имелись аналогичные по численности группы контрольных животных каждого пола, которым по тому же пути вводили эквивалентные объемы растворителя - 1% крахмальной взвеси. Животные распределялись по группам случайным образом методом рандомизации. В качестве критериев приемлемости рандомизации считали отсутствие внешних признаков заболеваний и гомогенность групп по массе тела (±10%).
Наблюдение за подопытными животными осуществляли в течение 14 сут с регистрацией показателей: летальность, время гибели животных, симптоматика отравления, результаты ежедневного наблюдения общего состояния и поведения, взвешивания, результаты контроля потребления корма и воды, результаты вскрытия и макроскопического описания погибших и выживших животных в конце исследования (эвтаназия осуществлялась передозировкой эфира), результаты определения массовых коэффициентов (МК) внутренних органов.
Введение заявляемой композиции в максимально переносимых дозах (20 г/кг для крыс и 25 г/кг для мышей) не вызывало гибели подопытных животных. Не отмечали и какие-либо другие признаки негативного действия заявляемой композиции. В первые сутки отмечались заторможенность, вялость, снижение потребления корма и воды, диарея. В остальные дни общее состояние и поведение животных опытных групп не отличались от животных контрольной группы. В частности, не отмечали какие-либо диспепсические явления. На вскрытии - без особенностей. Половых различий в течении интоксикации не отмечалось.
При вскрытии через день после острого введения выявлено: листки плевры и органы грудной клетки не изменены. Легкие бледно-розовые, воздушные, без уплотнений на ощупь. Размеры сердца в пределах нормы. В полостях сердца содержится небольшое количество жидкой крови. Мышца сердца плотная, коричневой окраски. Желудок заполнен небольшим количеством плотной пищи. Слизистая оболочка блестящая, складчатая, слегка розоватой окраски.
Слизистая тонкого кишечника блестящая, гладкая, розоватой окраски. Размеры и форма печени не отличаются от контроля. Поверхность печени гладкая. Капсула тонкая, прозрачная. Рисунок печени на разрезе не изменен. Ткань печени умеренно полнокровна. Почки обычной величины и формы, коричневатого цвета, плотные, с отчетливыми корковым и мозговым веществом на разрезе. Щитовидная железа, надпочечники и поджелудочная железа по внешнему виду не отличаются от контроля.
Результаты изучения динамики изменения массы тела, потребления воды и корма подопытных животных, а также динамики изменения массы тела выживших белых мышей, получавших заявляемую композицию в течение 14 сут наблюдения за ними практически не различались (таблицы 3-6).
Анализ величин МК органов выживших белых крыс и мышей позволил установить, что острое введение им заявляемой композиции в максимально переносимой дозе не вызывало какие-либо достоверные отличия по сравнению с контрольной группой животных, получавших 1% крахмальную взвесь (таблицы 7 и 8).
Состояние переживших острую интоксикацию животных свидетельствует о хорошей переносимости и безвредности заявляемой композиции при введении ее в максимально переносимых дозах.
Таким образом, результаты токсикометрии, данные некропсии и результаты наблюдений за подопытными животными на протяжении 14 сут после острого введения позволяют отнести заявляемую композицию к нетоксичным (относительно безвредным по С.Д. Заугольникову) и малоопасным (IV класс опасности по ГОСТ 12.1.007) веществам.
Исследование способности к кумуляции
Исследования способности к кумуляции проводили на белых нелинейных крысах-самцах массой 180-200 г при введении заявляемой композиции внутрижелудочно через атравматичный металлический зонд в течение 30 дней при суточной дозе 1,5 г/кг. Животные контрольной группы получали 1% крахмальную взвесь в аналогичном объеме.
Контроль основных физиологических показателей осуществляли через 30 дней хронического ежедневного введения заявляемой композиции.
В течение всего периода наблюдения летальных эффектов не наблюдали. Общее состояние и поведение подопытных животных оставалось нормальным и не отличалось от показателей контрольной группы в течение всего эксперимента.
Вскрытие крыс, умерщвленных на следующий день после последнего введения заявляемой композиции, показало, что размеры, форма и окраска их внутренних органов не имели макроскопических изменений по сравнению с контрольной группой. Слизистая оболочка желудка и тонкого кишечника были блестящими, бледно-розовыми, без признаков раздражения или воспаления.
При гистологическом исследовании препаратов легких, миокарда, печени, почек и слизистой желудка подопытных животных, получавших заявляемую композицию, дистрофические, воспалительные или некробиотические изменения органов не выявлены.
Следовательно, хроническое внутрижелудочное введение в организм подопытных животных заявляемой композиции не вызывало дистрофических или деструктивных изменений паренхиматозных органов и не сопровождалось раздражением слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Таким образом, по интегральному показателю кумуляции заявляемая композиция не обладает способностью к кумуляции.
Исследование сенсибилизирующего действия
2
Изучение сенсибилизирующего действия заявляемой композиции проводили на морских свинках. Для этого в кожу наружной поверхности уха животных туберкулиновым шприцем вводили однократно 0,02 мл водного разведения заявляемой композиции в дозе 10 мг/кг, а через 10 дней на предварительно выстриженные участки кожи боковой поверхности спины размером 2×2 см наносили и фиксировали заявляемую композицию в виде порошка из расчета 20 мг/см. Забор крови у подопытных животных осуществляли через 3 ч после постановки кожных проб.
Результаты оценки влияния заявляемой композицииа на показатели сенсибилизирующего действия представлены в таблице 9 и свидетельствуют об отсутствии признаков сенсибилизации в периферической крови - эозинофилии или увеличения уровня лизиса в реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) по сравнению с контролем. При осмотре кожи спины подопытных животных признаков раздражения не отмечалось. Следовательно, заявляемая композиция при эпикутанном контакте не обладает сенсибилизирующим действием, то есть не провоцирует развитие аллергии.
Исследование развития возможных отдаленных последствий
Изучение возможного гонадотоксического эффекта проводили в соответствии с методическими рекомендациями по показателям, обязательным при первичной оценке химических веществ [19, 20]. Изучение мутагенной активности проводили по частоте образования микроядер в полихроматофильных эритроцитах костного мозга (из бедренной кости) белых мышей в соответствии с методическими рекомендациями [21, 22].
Результаты изучения возможных гонадотоксического и мутагенного эффектов заявляемой композиции при введении ее в течение 10 дней в дозе 1 г/кг, проведенного через 15 дней после окончания ее введения, свидетельствуют об отсутствии достоверно значимых сдвигов показателей гонадотоксичности и мутагенности (таблица 10). Угнетения сперматогенеза или увеличения частоты мутаций также не наблюдалось.
Следовательно, заявляемая композиция не обладает токсическим влиянием на репродуктивную функцию и не оказывает мутагенного эффекта. Это свидетельствует о ее безопасности в плане развития отдаленных негативных последствий у человека.
Пример 3. Оценка стабильности заявляемой композиции в процессе хранения
Исследовали возможность сохранения активности и безопасности заявляемой композиции, выполненной в твердой форме в виде порошка, и устанавливали гарантированный срок годности в случае хранения при различных температурах и без использования специального оборудования.
10
В ходе эксперимента порошок закладывали в 120 потребительских упаковок в виде двойных полиэтиленовых пакетов и хранили их в течение 3,0 лет при температурах 5±2°С, 10±3°С, 25±5°С, 35±6°С (по 25 упаковок на каждый температурный режим хранения). Через каждые 6 мес хранения отбирали по 5 упаковок от соответствующего температурного режима и определяли характеристики порошка: органолептические показатели (внешний вид, цвет, запах), физико-химические показатели (содержание полифенолов в пересчете на танин, гидроксикоричных кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту, фукоксантина, L-карнитина, α-липоевой кислоты, коэнзима Q, массовая доля влаги, распадаемость, средняя масса содержимого капсулы), микробиологическую чистоту. Для оценки возможных изменений указанных характеристик при хранении определяли их значения в начале исследований.
Данные, представленные в таблице 11, свидетельствуют о том, что при обычной температуре хранения (25±5°С) органолептические и физико-химические показатели, а также микробиологическая чистота заявляемой композиции, выполненной в твердой форме в виде порошка, практически не изменяются в течение 3,0 лет.
Таким образом, гарантированный срок хранения заявляемой композиции составляет не менее 3,0 лет при условии соблюдения сохранности упаковки. Особые температурные условия хранения или использование специального оборудования при этом не требуются.
Пример 4. Оценка биологической активности заявляемой композиции
Биологическую активность заявляемой композиции оценивали на основании изучения ее способности нормализовать жировой обмен и вызывать за счет этого коррекцию массы тела подопытных животных, а также поддерживать функциональное состояние организма и, прежде всего, адаптационные возможности, сниженные, как правило, при наличии избыточной массы тела и ожирении.
Изучение характеристик биологической активности заявляемой композиции выполняли в сравнении с показателями наиболее широко применяемой в практике БАД Редуксин-Лайт Усиленная Формула (композиция-прототип).
Опыты по оценке указанных характеристик выполнены на белых нелинейных крысах-самцах стандартной массой 150-160 г, поступивших из питомника РАМН «Рапполово» Ленинградской области, у которых было смоделировано экспериментальное ожирение.
При моделировании экспериментального ожирения у крыс в качестве модели индуцирования гиперлипидемии и ожирения использовали диету, перенасыщенную жирами [23]. Для этого экспериментальные животные потребляли гомогенный корм следующего состава:
- казеин - 5%;
- подсолнечное масло в смеси со свиным жиром - 40%;
- глюкоза - 43%;
- агар - 2%;
- соли, витамины - 4%;
- холиевая кислота - 1%;
- тиоурацил - 1%;
- холестерин - 4%.
Кроме этого, крысам дополнительно внутрижелудочно вводили 10% масляную эмульсию свиного жира в дозе 100 мг/кг.
Заявляемую композицию вводили в дозе 150 мг/кг (приблизительная «терапевтическая-профилактическая» доза для крыс с учетом коэффициента межвидового переноса доз, равного 5,9 для человека средней массой 70 кг, исходя из 4-х капсул в сутки).
Композицию-прототип вводили в дозе 120 мг/кг (приблизительная «терапевтическая-профилактическая» доза для крыс с учетом коэффициента межвидового переноса доз, равного 5,9 для человека средней массой 60-70 кг, исходя из 2-х капсул в сутки по 650 мг (ООО «Полярис», г. Мурманск)).
Вводили заявляемую композицию и композицию-прототип внутрижелудочно через атравматичный зонд за час до введения свиного жира на протяжении 1,5 мес на фоне указанной выше диеты.
Интактная группа крыс получала обычную виварную диету.
Все животные получали воду ad libitum.
Все тесты и последующий забор крови осуществляли в конце исследования через 18 ч после последнего введения заявляемой композиции и композиции-прототипа. В этот период подопытные животные были лишены пищи.
Статистическую обработку результатов экспериментов проводили по Стьюденту-Фишеру.
Изучение способности коррекции массы тела подопытных животных за счет нормализации жирового обмена.
В ходе эксперимента изучали влияние заявляемой композиции и композиции-прототипа на показатели жирового обмена и массу тела. Все лабораторные тесты проводили по стандартным методикам [24, 25]. β-липопротеиды (β-ЛП) сыворотки крови определяли турбодиметрическим методом, свободные (неэтерифицированные) жирные кислоты (НЭЖК) - титрометрически, общий билирубин (ОБ) - спектрофотометрически, фосфолипиды (ФЛ) - по содержанию общего фосфора.
Динамику изменения массы тела крыс изучали с использованием весов ВЛР-500.
Также в конце эксперимента подопытных животных индивидуально высаживали в обменные клетки итальянской фирмы «Tecniplast Gazzada» на 24 ч для сбора экскрементов (кала). Затем в кале общепринятыми методами определяли количество нейтрального жира, наличие жирных кислот и мыла [26].
Результаты экспериментов, представленные в таблицах 12 и 13, подтвердили адекватность использованной модели ожирения: в контрольной группе (без профилактики) значительно возросло содержание в крови общих липидов, липопротеидов низкой плотности, триглицеридов, холестерина, а содержание фосфолипидов в сыворотке, наоборот, снизилось, увеличился коэффициент атерогенности. Масса тела подопытных животных при этом значительно возросла.
В опытных группах, получавших заявляемую композицию и композицию-прототип, наблюдалась нормализация показателей липидного обмена. Животные в опытных группах были более активными, без признаков ожирения. При этом заявляемая композиция снижала массу тела на 21% больше (р<0,05), чем в случае использования композиции-прототипа.
Таким образом, экспериментально установлено, что заявляемая композиция проявляет гиполипидемическое действие и эффективно снижает массу тела подопытных животных.
Об этом свидетельствует также нормализация копрограммы при профилактическом применении заявляемой композиции и композиции-прототипа.
Влияние на устойчивость крыс к воздействию высоких температур
Адаптогенные свойства заявляемой композиции оценивали по воздействию на подопытных животных температурного фактора, что позволяет провести комплексную оценку влияния заявляемой композиции на метаболические системы, устойчивость функционирования которых в условиях гипертермии определяет выживаемость особей.
Для оценки устойчивости крыс в условиях гипертермии подопытную и контрольную группы по 6 животных в клетке помещали в вентилируемый термостат и выдерживали при температуре 60°С. Устройство термокамеры позволяло обеспечить адекватный газообмен, достаточный для предупреждения кислородной недостаточности, и позволяло наблюдать за животными через смотровое застекленное отверстие. В ходе наблюдения регистрировали развитие симптоматики поражения и отмечали время манифестации судорожного синдрома и гибели особей.
Экспериментальные данные свидетельствуют, что четырехнедельное введение заявляемой композиции способствует положительному влиянию на устойчивость крыс к гипертермии (таблица 14). Скорость развития судорожного синдрома у крыс, получавших заявляемую композицию, имеет отчетливую тенденцию к снижению, а продолжительность их жизни в условиях гипертермии достоверно выше. Таким образом, заявляемая композиция обладает адаптогенным действием и при курсовом применении способна увеличить устойчивость к воздействию экстремальных факторов.
Влияние на когнитивные функции
Эксперименты на животных выполняли в соответствии с «Методическими рекомендациями по доклиническому изучению лекарственных средств с ноотропным типом действия» [27].
Базисной моделью для оценки влияния веществ на формирование и воспроизведение памятного следа в норме и в условиях его экспериментального нарушения является методика условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ) [28]. Основными преимуществами этого метода являются быстрота выработки рефлекса (обучение с одной пробы) и возможность дифференцированного воздействия на различные фазы памяти. Метод основан на торможении врожденной деятельности или приобретенных навыков, приводящим к отрицательным последствиям для организма. В условиях пассивного избегания животное обучается избегать вредные факторы путем подавления определенных форм поведения, в данном исследовании - избегать предпочитаемого темного пространства. Существует несколько вариантов методики УРПИ, вырабатываемых в одном сочетании. В данном исследовании использовалиа наиболее часто используемую форму УРПИ.

Подопытные животные были разделены на 4 группы: контрольную и три опытные по 10 особей в каждой. Перед выработкой УРПИ подопытным животным первой и второй опытной групп на протяжении 10 дней внутрижелудочно вводили, соответственно, заявляемую композицию и композицию-прототип в дозе 100 мг/кг каждой. Животным третьей опытной группы также на протяжении 10 дней вводили внутрижелудочно препарат сравнения «Ноопепт таблетки 10 мг» (ЗАО «Мастер-клон», Москва) в виде водной взвеси в дозе 5 мг/кг (адаптированная для грызунов максимальная терапевтическая доза для человека в расчете на активный компонент). Животным контрольной группы вводили 1% крахмальную взвесь в объеме 0,2 мл.
Установка для выработки рефлекса пассивного избегания представляет собой фанерный ящик - отсек, который состоит из освещенной части с вмонтированной лампой накаливания мощностью 40 Вт и затемненной с медными стержнями диаметром 2 мм на полу. К стержням через латер и замыкающий ключ подают ток от сети. Между собой части разделены перегородкой с отверстием, которое перекрывает заслонка.
На 11 день исследования проводили выработку УРПИ у крыс в установке, запускающим стимулом которой было нахождение животного в ярко освещенном пространстве. Крысу помещали в светлую часть отсека. После перехода крысы в темную часть сразу же наносили неустранимое болевое воздействие 5 последовательными стимулами переменного тока (1 мА, длительностью 1 с каждый с интервалом 2 с).
При тестировании (повторном помещении в освещенную часть отсека через 24 ч с целью определения сохранения УРПИ) за каждым животным наблюдали в течение 180 с. При этом регистрировали время латентного периода перехода крысы в темную часть отсека, время пребывания в светлой и темной частях отсека и число животных, не зашедших в темную часть отсека (число обученных животных).

Результаты, представленные в таблице 15, свидетельствуют, что заявляемая композиция, композиция-прототип и препарат «Ноопепт таблетки 10 мг» в случае их применения с профилактической целью улучшают мнестические функции ЦНС подопытных животных: увеличивалось время пребывания в светлой камере, удлинялся латентный период, сокращалось время пребывания в темной камере, где животные испытывали болевые ощущения. Следовательно, у подопытных животных улучшались память и способность к обучению. При этом экспериментально установлено, что по эффективности заявляемая композиция превосходит композицию-прототип и не уступает известному и широко применяемому ноотропному препарату «Ноопепт таблетки 10 мг».
Влияние на устойчивость крыс к воздействию гипоксии
При оценке адаптогенного и цитопротективного эффектов заявляемой композиции выполняли моделирование гипоксии в замкнутом объеме («баночная гипоксия») [29].
Дыхание из замкнутого пространства - ререспирация - является достаточно адекватной и простой моделью острой гипоксии [7, 26]. Животное, поглощая кислород из замкнутого пространства вследствие дыхания, вызывает развитие его дефицита - гипоксическую гипоксию, что позволяет оценивать исследуемый препарат по интегральным показателям летальности за определенное время наблюдения и устойчивости к дефициту кислорода (максимальной продолжительности жизни).
Животных помещали в банку объемом 2 л, плотно закрытую стеклянной крышкой, смазанной герметиком. Фиксировали с помощью секундомера максимальную продолжительность жизни и симптомы танатогенеза. Банки с животными во время исследования находились в кондиционере, обеспечивающем постоянство условий эксперимента (температура +20°С, влажность - 65-70%, атмосферное давление).
Перед экспериментом животным опытных групп на протяжении четырех недель внутрижелудочно вводили заявляемую композицию и композицию-прототип в дозе 150 мг/кг каждого. Животным контрольной группы вводили 1% крахмальную взвесь в объеме 0,2 мл.
Экспериментально установлено, что заявляемая композиция способствует значимому повышению устойчивости животных к воздействию неблагоприятных факторов, моделирующих условия закрытых помещений, задымленной среды и подземного транспорта, то есть проявляет цитопротективное действие (таблица 16). Заявляемая композиция достоверно увеличивает время жизни крыс и по этому показателю значительно превосходит композицию-прототип.
Влияние на двигательную и исследовательскую активность
Избыточная масса тела способствует снижению двигательной активности и эмоциональности. В связи с этим, было изучено влияние на указанные показатели заявляемой композиции и композиции-прототипа в случае их профилактического применения.
Двигательную активность изучали с помощью автоматической системы регистрации движений «Клетка активности» (Ugo Basile, Италия). Подопытные животные были разделены на три группы: контрольная и две опытные по 10 особей в каждой.
В ходе эксперимента для оценки спонтанной двигательной активности (СДА) крысу помещали на 3 мин в камеру.
Результаты оценки влияния заявляемой композиции и композиции-прототипа на СДА крыс представлены в таблице 17 и свидетельствуют, что профилактическое применение заявляемой композиции способствует повышению общей двигательной активности крыс, превосходя по этому показателю композицию-прототип.
Исследовательскую активность изучали с помощью круглой пластиковой арены диаметром 100 см с бортами по периметру. Пол арены приподнят и разделен на 9 квадратов с отверстиями для регистрации исследовательской активности. Над камерой размещен источник света. Характер и количество движений отмечает регистратор. Регистрировали шесть компонентов поведения подопытных животных в течение 5 мин наблюдения за ними: латентный период выхода, вертикальную и горизонтальную активность, количество заглядываний в норки, груминг и болюсы. Для определения выраженности эффекта использовали отношение количества движений в опыте и контроле.
Из данных, представленных в таблице 18, видно снижение активности подопытных животных контрольной группы. У крыс с ожирением отмечали снижение исследовательской активности (общее количество вертикальных стоек, заглядываний в норку), а также повышение уровня тревожности (число дефекаций и груминга).
Профилактическое применение заявляемой композиции способствовало повышению исследовательской активности животных, превосходя действие композиции-прототипа.
Влияние на физическую работоспособность и мышечную силу
Физическая работоспособность и мышечная сила являются важными показателями, свидетельствующими об активности животных. Оценивали биологическую активность заявляемой композиции по длительности плавания и мышечной силе подопытных животных.
Влияние на длительность плавания мышей
Плавание является тяжелой физической динамической нагрузкой и позволяет оценить эффективность адаптогенов и активность окислительно-восстановительных процессов в мышцах мышей. В ходе эксперимента плавание осуществлялось при температуре воды 37°С и выполнялось с грузом, представляющим собой свинцовую трубку на резиновом кольце, прикрепленную к корню хвоста мыши и составляющую 10% от массы тела. Одновременно в большой ванне плавали по 5 животных из контрольной и двух опытных групп. Животным первой и второй опытных групп ежедневно внутрижелудочно вводили, соответственно, заявляемую композицию и композицию-прототип в дозе 150 мг/кг каждой. Мыши контрольной группы получали ежедневно внутрижелудочно 1% крахмальную взвесь в объеме 0,2 мл.
Критерием утомления и прекращения плавания считали первое «ныряние» мыши с погружением носовых ходов в воду. Регистрировали продолжительность плавания мышей от момента помещения их в ванну до момента первого «ныряния». Результаты тестирования, проведенного через 14 дней после ежедневного введения заявляемой композиции, свидетельствуют, что ежедневное профилактическое введение крысам заявляемой композиции оказывает протективное действие и снижает утомляемость (таблица 19), повышает их выносливость в тесте плавания приблизительно на 93%, то есть значительно повышает адаптационные способности организма. Композиция-прототип повышает выносливость крыс приблизительно на 40%. Таким образом, в рассматриваемом тесте заявляемая композиция по эффективности превосходит композицию-прототип более чем в 2 раза.
Влияние на мышечную силу крыс
Оценка мышечной силы проводилась на белых крысах с использованием динамометра для крыс. Результаты, представленные в таблице 20, свидетельствуют, что по результатам теста на мышечную силу в случае ежедневного профилактического применения заявляемой композиции отмечается увеличение данного показателя на 52% по сравнению с контролем.
Использование в течение 14 дней композиции-прототипа способствовало тому, что указанный показатель составил приблизительно 15%.
Таким образом, по показателю влияния на мышечную силу заявляемая композиция также превосходит композицию-прототип.
Пример 5. Оценка эффективности заявляемой композиции.
Всего в исследование были включены 30 пациентов мужского и женского пола с алиментарным ожирением I-II степени, которые были разделены на две группы:
- 15 пациентов получали заявляемую композицию в течение 90 дней в дозировке по 2 капсулы 2 раза в день во время еды (группа 1). Пациентам были проведены процедуры по оценке эффективности препарата, клинический и биохимические анализы крови и анализ мочи 1 раз в 30 дней на протяжении 90 дней.
- 15 пациентов получали заявляемую композицию в течение 90 дней в дозировке по 2 капсулы 2 раза в день во время еды (группа 2). Пациентам были проведены процедуры по оценке эффективности препарата 1 раз в 30 дней.
В число пациентов вошли 10 мужчин и 20 женщин в возрасте от 20 до 59 лет. На момент начала наблюдения общее количество пациентов составило 30, выбывания пациентов из группы в процессе наблюдения не было, 30 пациентов закончили все исследования.
В число пациентов вошли лица среднего возраста без выраженной сопутствующей патологии органов и систем, выборка была репрезентативной, что обеспечивает высокую степень генерализации результатов исследования.
Заявляемую композицию применяли в течение 90 последовательных дней. Во время приема заявляемой композиции пациентам было рекомендовано не изменять пищевые привычки (не увеличивать или уменьшать объем потребляемой пищи, не использовать различные диеты (если подобных диет пациент не придерживался ранее), избегать застолья, избегать употребления алкогольных напитков; не бросать курить во время проведения исследований) и менять физическую активность (не начинать интенсивные занятия спортом и/или не увеличивать интенсивность прогулок или обычных физических нагрузок, не снижать интенсивность привычной ежедневной физической нагрузки).
На протяжении исследования проводились следующие визиты пациентов в клинику: скрининговый визит (Визит 1) для включения больного в исследование, визит рандомизации и начала приема заявляемой композиции (Визит 2), визиты наблюдения (Визит 3 и Визит 4) и заключительный визит через три месяца после начала приема заявляемой композиции (Визит 5).
На визите скрининга, визите рандомизации, визитах наблюдения, заключительном визите только пациентам когорты 1 (n=15) назначался анализ крови клинический, анализ крови биохимический и анализ мочи. Все другие процедуры визитов для пациентов обеих когорт были одинаковыми.
Визит 1 осуществлялся за 7±2 дней до первого приема заявляемой композиции. При проведении Визита 1 выполнялось комплексное клинико-лабораторное обследование: стандартизированный опрос больного, изучение его истории болезни, физикальный осмотр и оценка жизненно-важных признаков пациента, оценка клинических данных, выполнение и оценка лабораторных тестов (клинический анализ крови, анализ мочи, биохимический анализ крови, тест на беременность для женщин детородного возраста), проведение калиперометрии и измерения окружности живота, исследование биоимпедансного состава массы тела с использованием анализатора биоимпедансного состава массы тела «Диамант-АИСТ» (ЗАО «Диамант», г. Санкт-Петербург). Продолжительность скрининга составляла 2-7 дней.
Через 7±2 дней от начала Визита 1, после полного завершения клинико-лабораторного обследования, в день Визита 2 оценивали нежелательные явления и сопутствующую терапию, проводили оценку пищевого поведения и психологическое тестирование, включали больного в исследование и проводили рандомизацию.
Визит 3 проводился через 30±2 дня после Визита 2 с целью оценки эффективности и безопасности приема заявляемой композиции, а также комплайнса. Оценивали дневник пациента и соблюдение пациентом режима питания и физических нагрузок в процессе исследования, нежелательные явления, сопутствующую терапию, оценивали физикальные данные, жизненно-важные признаки, выполняли клинический и биохимический анализ крови, анализ мочи, проводили калиперометрию и измерение окружности живота, исследование биоимпедансного состава массы тела, оценку пищевого поведения, комплайнса и переносимость заявляемой композиции.
Через 30±2 дней после Визита 3 проводился Визит 4 с целью оценки эффективности и безопасности приема заявляемой композиции, а также комплайнса. Оценивали дневник пациента и соблюдение пациентом режима питания и физических нагрузок в процессе исследования, нежелательные явления, сопутствующую терапию, жизненно-важные признаки и проводили физикальный осмотр пациента, выполняли клинический и биохимический анализы крови, анализ мочи, оценивали комплайнс и переносимость препарата.
Период исследования для каждого отдельного пациента составил 104 дня и состоял из этапа скрининга в течение 3-7 дней, 8-недельного этапа лечения и последующего наблюдения в течение 2 недель. Суточный прием заявляемой композиции - по 2 капсулы 2 раза в день утром и вечером во время еды. Всего каждый пациент получил 384 капсулы (в том числе 24 капсулы на непредвиденный случай).
Эффективность действия заявляемой композиции оценивали по ее влиянию на:
- нутриционный статус пациентов путем изучения динамики массы тела и ИМТ;
- динамику количества жировой ткани в организме (жировой массы тела);
- динамику суммарной толщины кожно-жировых складок;
- динамику окружности талии.
Влияние на нутриционный статус пациентов.
Экспериментально установлено, что через 1 месяц приема заявляемой композиции масса тела и ИМТ снизились у 17 пациентов (57%), через 2 месяца - у 25 пациентов (83%), и через 3 месяца - у 28 (93%) пациентов.
В течение 3-месячного периода наблюдения большее число пациентов с ожирением отмечало положительный эффект - снижение массы тела. К концу периода наблюдения только у 2 (7%) пациентов масса тела не изменилась, у всех остальных пациентов масса тела снизилась.
2
2
2
2
ИМТ пациентов является производной величиной от массы тела, и, соответственно, в процессе наблюдения ИМТ претерпевал изменения, сходные с динамикой массы тела. Среднее значение ИМТ пациентов на момент начала наблюдения составляло 32,2 кг/м, через 1 месяц после начала приема препарата оно снизилось до 32,0 кг/м, через 2 месяц - до 31,4 кг/м, и к 3-му месяцу наблюдения среднее значение ИМТ составило 30,4 кг/м.
Результаты апостериорных сравнений с помощью критерия Бонферрони представлены в таблице 21. В результате парных сравнений значений массы тела пациентов статистически значимое снижение массы тела отмечено со 2-го месяца приема заявляемой композиции.
С течением времени наблюдения (от начала приема и до конца 3-месячного периода приема заявляемой композиции) выявлен статистически значимый линейный тренд снижения массы тела пациентов. Динамика средних значений массы тела и ИМТ на фоне приема заявляемой композиции и линейные тренды представлены на фигурах 1 и 2 (пунктиром обозначены линии тренда). Средняя доля снижения массы тела в последовательные периоды наблюдения на фоне приема заявляемой композиции представлена на фигуре 3.
За 3-месячный период наблюдения средняя масса тела пациентов уменьшилась с 91,3 кг до 86,1 кг и снижение составило 5,2 кг. У 14 (47%) пациентов снижение массы тела составило более 5 кг: у 3 (10%) пациентов отмечено значительное уменьшение массы тела (более 10 кг), у 11 (37%) пациентов отмечено уменьшение массы тела в объеме от 5 до 10 кг. У 14 (47%) пациентов снижение массы тела составило от 3 до 5 кг.
Таким образом, экспериментально наблюдали статистически значимое последовательное снижение массы тела пациентов на фоне приема заявляемой композиции, которое достоверно наблюдали, начиная со 2-го месяца от начала приема.
Влияние на динамику количества жировой ткани в организме (жировой массы тела).
Оценку динамики жировой массы тела проводили на основании результатов биоимпедансного анализа состава организма. Данный метод позволяет оценить жировую массу тела - общее количество жировой ткани в организме, включающее как висцеральную жировую ткань, так и подкожную жировую клетчатку. За 3-месячный период наблюдения жировая масса пациентов уменьшилась с 30,51 кг до 27,25 кг и составила 3,26 кг. Динамика медианы жировой массы на фоне приема заявляемой композиции представлена на фигуре 4.
Так как распределение жировой массы тела существенно отличалось от нормального, для анализа повторных измерений был использован критерий Фридмана, который также показал наличие статистически значимых различий между значениями жировой массы, измеренными в последовательные периоды наблюдения.
Для оценки апостериорных сравнений рассчитывался скорректированный уровень статистической значимости с учетом эффекта множественных сравнений. Результаты апостериорных сравнений значений жировой массы, проведенные с помощью парного критерия Вилкоксона, представлены в таблице 22.
Анализ динамики безжировой массы показал отсутствие статистически значимой динамики данного показателя за период наблюдения (56,5±9,2 кг исходно, 55,1±6,7 кг через 3 месяца), как и массы водных секторов организма (42,8±6,7 кг исходно, 42,1±5,0 кг через 3 месяца).
В результате парных сравнений установлено, что через 3 месяца после приема заявляемой композиции наблюдалось близкое к статистически значимому снижение жировой массы по данным биоимпедансного анализа состава организма.
Колебания жировой массы пациентов в течение периода наблюдения, возможно, связаны с изменением водных секторов в организме, на основании которых рассчитывается значение жировой массы по результатам биоимпедансного анализа.
Влияние на динамику суммарной толщины кожно-жировых складок.
Эффективность действия заявляемой композиции оценивали также по ее влиянию на динамику суммарной толщины кожно-жировых складок (КЖС).
Суммарная толщина КЖС рассчитывалась как сумма измеренной калипером толщины 4-х кожно-жировых складок. Данный показатель позволяет косвенно оценить объем подкожной жировой клетчатки, изолированно от висцеральной жировой ткани.
По результатом дисперсионного анализа повторных измерений с поправкой Greenhouse-Geisser, суммарная толщина КЖС пациентов на момент начала наблюдения и в течение последующих визитов статистически значимо снижалась. За 3-месячный период наблюдения отмечено уменьшение суммарной толщины КЖС на 12,6 см. Результаты парных сравнений свидетельствуют в пользу того, что статистически значимое снижение суммарной толщины КЖС наблюдалось уже начиная с 1-го месяца приема заявляемой композиции (результаты попарных апостериорных сравнений с помощью критерия Бонферрони представлены в таблице 23).
В результате анализа был выявлен статистически значимый линейный тренд снижения толщины подкожной жировой клетчатки пациентов с течением времени наблюдения. Динамика средних значений суммарной толщины КЖС на фоне приема заявляемой композиции и имеющийся линейный тренд на снижение представлены на фигуре 5 (пунктиром обозначена линия тренда).
Влияние на динамику окружности талии
Окружность талии позволяет косвенно оценить объем висцеральной жировой ткани.
За 3-месячный период наблюдения пациентов, принимающих заявляемую композициют, отмечено уменьшение окружности талии на 3,2 см. По результатом дисперсионного анализа повторных измерений с поправкой Greenhouse-Geisser, окружность талии пациентов на момент начала наблюдения и в течение последующих визитов различалась. Статистически значимое уменьшение окружности талии отмечалось через 2 месяца от начала приема заявляемой композиции (результаты апостериорных сравнений с помощью критерия Бонферрони представлены в таблице 24).
Статистически значимый линейный тренд уменьшения окружности талии с течением времени наблюдения на фоне приема заявляемой композиции представлен на фигуре 6 (пунктиром обозначена линия тренда).
Таким образом, по результатам исследования эффективности заявляемой композиции у пациентов с ожирением в течение 3-месячного периода приема отмечено статистически подтвержденное достоверное улучшение соматометрических показателей и показателей компонентного состава организма: уменьшение массы тела пациентов и ИМТ, жировой массы тела, толщины подкожной жировой клетчатки и окружности талии. После 3-месячного курса приема заявляемой композиции терапевтический успех был достигнут у 93% пациентов.
На фоне приема заявляемой композиции уже через 1 месяц от начала приема наблюдалось достоверное уменьшение толщины КЖС, через 2 месяца - снижение массы тела / ИМТ и уменьшение окружности талии, через 3 месяца - снижение жировой массы (фигура 7).
Несмотря на то, что масса тела и ИМТ пациентов оставались высокими и соответствовали ожирению, основные показатели нутриционного статуса пациентов достоверно уменьшились, что имеет существенное значение, принимая во внимание категорию обследованных (пациенты с ожирением) и особенности их пищевого поведения (преобладание экстернального пищевого поведения).
Оценка переносимости и безопасности применения заявляемой композиции
За период наблюдения в течение двух месяцев ни один из пациентов не прекратил прием заявляемой композиции. Высокую приверженность к приему заявляемой композиции продемонстрировали 100% пациентов.
При оценке безопасности курсового приема заявляемой композиции не было отмечено значимых изменений показателей жизненно-важных функций и появления значимых клинических симптомов, не отмечено клинически значимых изменений клинических и биохимических показателей крови, изменений в общем анализе мочи, которые могли бы указывать на негативное влияние исследуемого препарата на функцию соответствующих органов и систем (лабораторные показатели изменялись в пределах референтных значений и в том случае, когда изменения показателей были статистически значимы).
Результаты общего анализа мочи соответствовали референтным значениям как до, так и после курса приема заявляемой композиции.
Динамика основных лабораторных показателей у пациентов, входящих в группу оценки безопасности, представлена в таблице 25.
Таким образом, проведенные исследования показали, что при воздействии заявляемой композиции, представляющей собой сбалансированный комплекс безопасных природных соединений, источниками которых являются растения, и митохондриальных метаболитов:
- снижается масса тела пациентов с ожирением, улучшается композиционный состав организма: снижается масса жировой ткани, уменьшается окружность талии и объем подкожной жировой клетчатки. Через 3 месяца от начала приема препарата снижение массы тела достигается практически у всех пациентов, его принимающих. К концу периода наблюдения у 93% пациентов, получающих заявляемую композицию, отмечали снижение массы тела, при этом у 50% из них масса тела снижается более чем на 5 кг;
- на фоне курсового приема наблюдается последовательное достоверное снижение соматометрических показателей, которое становится более явным по мере увеличения длительности приема препарата. Достоверное уменьшение толщины КЖС наблюдается через 1 месяц от начала приема, достоверное снижение массы тела / ИМТ и уменьшение окружности талии - через 2 месяца, достоверное снижение жировой массы - через 3 месяца.
Прием заявляемой композиции обеспечивает также дополнительные положительные эффекты, что особенно важно для тех, кто стремится не только похудеть, но и поддержать функциональное состояние своего организма. Заявляемая композиция оказывает положительное влияние на углеводно-жировой обмен (улучшение биохимических показателей плазмы крови), повышению физической работоспособности и выносливости, устойчивости к воздействию неблагоприятных факторов, улучшению умственной работоспособности за счет улучшения мнестических функций ЦНС (памяти и способности к обучению).
Кроме того, заявляемая композиция хорошо переносится пациентами с ожирением, является безопасной для данной категории пациентов, так как не содержит токсичные и опасные для здоровья компоненты в количествах, превышающих допустимые уровни, нетоксична, не обладает способностью к кумуляции и не имеет нежелательные побочные эффекты.
Заявляемое изобретение удовлетворяет критерию «новизна», так как впервые для коррекции массы тела у пациентов с ожирением предлагается использовать композицию, представляющую собой сбалансированный комплекс безопасных природных соединений, источниками которых являются растения, и митохондриальных метаболитов, совместное комплексное воздействие которых обеспечивает не только эффективное снижение массы тела и улучшение композиционного состава организма, но и поддержание функционального состояния организма, выполненную в твердой капсулированной дозированной форме для перорального введения.
Заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень», так как из доступной информации не представлялась очевидной целесообразность сочетания в составе заявляемой композиции природных соединений, источниками которых являются растения, и митохондриальных метаболитов, а также возможность поддержания при этом функционального состояния организма.
Соответствие заявляемого изобретения критерию «пригодность для применения» подтверждается приведенными результатами многочисленных исследований, показавшими несложную технологию производства заявляемой композиции в твердой капсулированной дозированной форме для перорального введения, ингредиенты которой выпускаются в промышленных условиях и доступны, а заявляемая композиция обладает высокой стойкостью при хранении, безопасна, обеспечивает эффективное снижение массы тела и улучшение композиционного состава организма, способствует поддержанию функционального состояния организма.
Список литературы
1. RU 2136323 C1, 13.01.1998.
2. RU 2185178 C1, 20.07.2002.
3. RU 2318547 C1, 10.03.2008.
4. RU 2350339 C1, 27.03.2009.
5. RU 2371208 C1, 27.10.2009.
6. RU 2409396 C1, 11.08.2009.
7. Руководство по физиологии. Экологическая физиология человека. Адаптация человека к экстремальным условиям среды. Под ред. О.Г. Газенко. М.: «Наука», 1979, С. 333-336.
8. RU 2290185 С1, 27.12.2006.
9. RU 2373772 С1, 27.11.2009.
10. RU 2316973 С1, 20.02.2008.
11. RU 2316972 С1, 20.02.2008.
12. RU 2260986 С1, 27.09.2005.
13. RU 2310342 С1, 20.11.2007.
14. RU. 77.99.11.003.Е.003517.04.14 от 10.04.2014.
15. Chin S.F., Liu W., Storkson J.M., Ha Y.L., M.W. Pariza Dietary sources of conjugated dienoic isomers oflinoleic acid, a newly recognized class of anticarcinogens, J. Food Сотр. Anal. 1992, 5: 185-197.
16. Onakpoya I.J., Posadzki P.P., Watson L.K., Davies L.A., Ernst E. The efficacy of long-term conjugated linoleic acid (CLA) supplementation on body composition in overweight and obese individuals: a systematic review and meta-analysis of randomized clinical trials // Eur J Nutr. 2012 Mar; 51 (2): 127-34.
17. Технический регламент Таможенного союза TP ТС 021/2011 «О безопасности пищевой продукции» (приложения 1 и 2, раздел 1.9, приложение 3, раздел 10). 242 с.
18. Гланц Э. Медико-биологическая статистика. М.. 1999.
19. Методы экспериментальных исследований по установлению порогов действия промышленных ядов на генеративную функцию. Методические рекомендации. М., 1969. 25 с.
20. Методы экспериментальных исследований по установлению порогов действия промышленных ядов на генеративную функцию с целью гигиенического нормирования. Методические рекомендации 1744-77. М., 1978. 35 с.
21. Оценка мутагенной активности химических веществ микроядерным методом. Методические рекомендации 28/10. М., 1984. 21 с.
22. Критерии оценки и методы прогнозирования отдаленных последствий действия на организм вредных веществ в воздухе рабочей зоны. Информационное письмо. НИИ гиг. тр. и проф. забол. М., 1985. 15 с.
23. Воспроизведение заболеваний у животных для экспериментально-терапевтических исследований. Под. ред. Н.В. Лазарева. МедГИЗ, 1954, С. 54-55, 221-225.
24. Меньшиков В.В., Дилекторская Л.Н., Золотницкая Р.П. Лабораторные методы исследований в клинике. Справочник. М.: «Медицина», 1987, 368 с.
25. Колб В.Г., Камышников B.C. Клиническая биохимия. Минск: «Беларусь», 1976, С. 150-171.
26. Руководство к практическим занятиям по патологической физиологи. Под ред. О.М. Павленко. М.: «Медицина», 1974, с. 174-175.
27. «Методические рекомендации по доклиническому изучению лекарственных средств с ноотропным типом действия» (в книге «Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств». Под ред. А.Н. Миронова. Часть первая. М.: Гриф и К, 2012, С. 276-297).
28. Буреш Я. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. М.: Высш. шк., 1991. 399 с.