ПОЛУЧЕНИЕ АНТИТЕЛ ИЗ ОДНИХ ТЯЖЕЛЫХ ЦЕПЕЙ В ТРАНСГЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

H
H
H
H
H
1. Способ получения V антител из одних тяжелых цепей в трансгенных нечеловеческих млекопитающих, включающий стадии обеспечения более одного гетерологического V локуса тяжелых цепей в данном млекопитающем, причем каждый V локус тяжелых цепей содержит один или более сегментов V гена, один или более сегментов D гена, один или более сегментов J гена и сегмент гена, кодирующий постоянную область тяжелых цепей, которая при экспрессии не включает участок C1 и экспрессирующий V антитела из одних тяжелых цепей, по крайней мере, одного из вышеупомянутых локусов.
H
2. Способ по п.1, в котором V локус тяжелых цепей содержит один или множественные сегменты V гена.
3. Способ по п.1, в котором каждый локус содержит только один сегмент V гена.
4. Способ по п.3, в котором каждый сегмент V гена отличается от всех других сегментов V гена.
5. Способ по п.3, в котором каждый сегмент V гена идентичен всем другим сегментам V гена.
6. Способ по п.5, в котором остальные сегменты генов в каждом локусе такие же, как и сегменты во всех других локусах.
7. Способ по п.5, в котором остальные сегменты генов в каждом локусе отличаются от сегментов во всех других локусах.
8. Способ по п.1, в котором каждый локус содержит множественные сегменты V гена.
9. Способ по п.8, в котором все сегменты V гена в любом одном локусе получены из организмов одного и того же вида.
10. Способ по п.8, в котором сегменты V гена в любом одном локусе получены из организмов различных видов.
11. Способ по п.9, в котором сегменты V гена человеческого происхождения.
12. Способ по п.1, в котором множественные локусы тяжелых цепей содержат любое количество или комбинацию 39 функциональных человеческих сегментов V гена и их генно-инженерных модификаций с улучшенными свойствами растворимости, распространенными по всем множественным локусам.
13. Способ по п.1, в котором каждый отдельный локус тяжелых цепей присутствует в виде единственной копии в геноме трансгенного нечеловеческого млекопитающего.
H
14. Способ по п.1, в котором каждый V локус тяжелых цепей содержит от одного до сорока сегментов D гена.
15. Способ по п.1, в котором сегменты D гена являются человеческими сегментами D гена.
H
16. Способ по п.1, в котором каждый V локус тяжелых цепей содержит от одного до двадцати сегментов J гена.
17. Способ по п.16, в котором сегменты J гена являются человеческими сегментами J гена.
H
18. Способ по п.1, в котором каждый V локус тяжелых цепей содержит одинаковые сегменты D и J генов.
H
19. Способ по п.1, в котором каждый V локус тяжелых цепей содержит различные комбинации сегментов D и J генов.
H
20. Способ по п.1, в котором каждый V локус тяжелых цепей содержит один или более сегментов V гена, двадцать пять функциональных человеческих сегментов D гена и 6 человеческих сегментов J гена.
H
H
in vivo
21. Способ по п.1, в котором каждый V локус тяжелых цепей содержит сегмент гена, кодирующий, по крайней мере, одну постоянную область тяжелых цепей, обеспечивая эффекторные функции , причем постоянная область при экспрессии не включает участок C1 в антителе.
22. Способ по п.21, в котором каждый локус содержит только один сегмент гена, кодирующий одну частную постоянную область.
23. Способ по п.21, в котором каждый локус содержит более одного сегмента гена, каждый из которых кодирует отдельную постоянную область.
24. Способ по п.21, в котором каждый локус содержит одинаковые сегменты гена, кодирующие постоянную область.
25. Способ по п.21, в котором каждый локус имеет различные или различные комбинации сегментов гена, кодирующих постоянную область.
1-4
1-2
H
26. Способ по п.21, в котором каждый сегмент гена, кодирующий постоянную область тяжелых цепей, содержит один или более экзонов постоянной области тяжелых цепей классов Cδ, Cγ, Cμ, Cε или Cα, при условии, что сегменты гена постоянной области тяжелой цепи не экспрессируют участок C1.
27. Способ по п.21, в котором постоянная область тяжелых цепей человеческого происхождения.
H
28. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором два или более гетерологических V локусов тяжелых цепей в данном млекопитающем присутствуют вместе на одной и той же хромосоме.
H
29. Способ по п.1, в котором один или более гетерологических V локусов тяжелых цепей в данном млекопитающем присутствуют на различных хромосомах.
30. Способ по п.1, в котором трансгенное нечеловеческое млекопитающее является грызуном.
31. Способ по п.30, в котором грызун является мышью.
H
32. Трансгенное нечеловеческое млекопитающее, содержащее более одного гетерологического V локуса, как определено в п.1.
33. Способ получения антител из одних тяжелых цепей посредством иммунизации трансгенного нечеловеческого млекопитающего по п.32 антигеном.
H
34. Способ получения антигенспецифических V антител из одних тяжелых цепей с высокой аффинностью, включающий
иммунизацию трансгенного нечеловеческого млекопитающего по п.32 антигеном;
получение B-клеточных гибридом;
селекцию клеток, экспрессирующих антигенспецифическое антитело из одних тяжелых цепей; и
H
выделение антигенспецифического рекомбинированного V антитела из одних тяжелых цепей со зрелой аффинностью.