Изменения мукозальной микробиоты желудка и толстого кишечника при язвенной болезни желудка

КАПКАЕВА Р. Х., КУЗНЕЦОВА Р. Ю., МАТВЕЕВА Л. В., МИШАНИНА Л. С., МОСИНА Л. М.

ИЗМЕНЕНИЯ МУКОЗАЛЬНОЙ МИКРОБИОТЫ ЖЕЛУДКА И ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА ПРИ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ ЖЕЛУДКА

Аннотация. При обследовании больных с обострением язвенной болезни желудка определяли частоту высеваемости, количество микроорганизмов желудка и толстого кишечника до и после терапии в сравнении с аналогичными показателями здоровых лиц. Признаки дисбактериоза толстого кишечника у больных при лечении обострения выявлялись на 25% чаще и требовали коррекции.

Ключевые слова: язвенная болезнь, микробиота, Helicobacter pylori.

KAPKAEVA R. KH., KUZNETSOVA R. YU., MATVEEVA L. V., MISHANINA L. S., MOSINA L. M. CHANGES IN MUCOSAL MICROBIOTA OF STOMACH AND COLON AT GASTRIC ULCER

Abstract. The examination of patients with active gastric ulcer determined the isolation rate and number of microorganisms in the stomach and large intestine before and after treatment in comparison with similar indicators of healthy individuals. Signs of dysbiosis of the large intestine in patients during the treatment of acute exacerbations were identified 25% more often and required correction.

Keywords: gastric ulcer, microbiota, Helicobacter pylori.

В структуре заболеваний гастродуоденальной зоны (ГДЗ) доля язвенной болезни (ЯБ) весьма значима. Считается [4], что доброкачественные язвы желудка являются, возможно, предраковыми состояниями с риском малигнизации < 5 %.

Рядом ученых [1-3; 5] выявлена связь распространенности ЯБ желудка с инфицированностью Helicobacter pylori (H. pylori). Имеются данные, указывающие на повышенный риск развития ЯБ желудка у лиц, инфицированных сagA+-штаммами H. pylori по сравнению с инфицированными сagA"-штаммами [2; 5].

Целью исследования стала оценка состава микробоценоза желудка и кишечника у больных ЯБ желудка.

Материал и методы. При получении информированного согласия обследовали 42 больных ЯБ желудка и 40 клинически здоровых добровольцев без признаков обострения заболеваний ГДЗ, вошедших в контрольную группу.

У обследованных лиц при эзофагогастродуоденоскопии (ЭГДС) проводили забор гастробиоптатов для патогистологического и микробиологического исследования.

Фекалии для микробиологического исследования на дисбиоз собирали дважды: при поступлении и на 10-й день терапии и доставляли в лабораторию в течение 1-1,5 часов после взятия пробы.

Определение уреазной активности H. pylori в биоптатах СОЖ проводили при помощи тест-системы ХЕЛПИЛ (Бланк) (ООО «АМА», Россия).

Экспресс-диагностика хеликобактериоза дыхательным методом проводилась с применением тест-системы ХЕЛИК с индикаторной трубкой (ООО «АМА», Россия).

Мукозную микробиоту желудка изучали микроскопическим (окраска по Граму, Романовскому-Гимзе) и микробиологическим методом. Количественный посев производили на плотные и жидкие питательные среды с целью обнаружения микроорганизмов. Количество бактерий и грибов определяли путем подсчета колониеобразующих единиц в 1 г материала (КОЕ/г) с учетом массы, количества посевного материала и разведения.

Исследование микробиоты фекалий проводили после пробоподготовки путем посева на питательные среды для культивирования соответствующих микроорганизмов. Учет посевов включал макро- и микроскопическое изучение изолированных колоний, их подсчет и пересев материала из типичных колоний для идентификации чистой культуры. Подсчет колоний микроорганизмов на плотных питательных средах проводили с учетом степени разведения фекалий.

Результаты. При микроскопии мазков-отпечатков гастробиоптатов в контрольной группе хеликобактерии определялись у 40 % обследованных, клетки дрожжеподобных грибов не обнаруживались, у обследованных больных хеликобактерии выявлялись в 69 %, грибы рода Candida - в 16,7 % случаев.

У здоровых лиц при посеве гастробиоптатов с пристеночной слизью на питательные среды наиболее часто определялись Staphylococcus epidermidis (в 60 %), Streptococcus spp. (в 50 %), Lactobacillus spp. (в 47,5 %), Bifidobacterium spp. (в 45 %), H. pylori (в 40 %), Escherichia coli (в 40 % случаев). Реже высевались Corynebacterium spp. (в 22,5 %), Candida spp. (в 20 %), Micrococcus spp. (в 17,5 %). Наименьшая частота высеваемости определялась у Actinomyces spp., Neisseria spp. - в 5 % случаев, Staphylococcus aureus - в 2,5 % случаев.

У больных с обострением ЯБ желудка превалировала встречаемость Staphylococcus epidermidis (в 78,6 %), H. pylori (в 69 %), Streptococcus spp. (в 59,5 %), Candida spp. (в 40,5 %). У трети больных высевались Corynebacterium spp. и Staphylococcus aureus, у 31 % -Lactobacillus spp., Micrococcus spp. Частота высеваемости Escherichia coli составила 26,2 %, Bifidobacterium spp. - до 9,5 %, Neisseria spp. - 7,14%. Встречаемость Actinomyces spp.

возросла относительно контрольной группы на 11,7 %. Микробиотические изменения были более выражены при тяжелом течении ЯБ с частыми рецидивами и дисплазией слизистой оболочки желудка (СОЖ).

У здоровых лиц наибольшие количества определялись у Escherichia coli (3,87 lg КОЕ/г), Lactobacillus spp. (3,71 lg КОЕ/г), Streptococcus spp. (3,68 lg КОЕ/г), H. pylori (3,65 lg КОЕ/г), Corynebacterium spp. (3,41 lg КОЕ/г), Staphylococcus epidermidis (3,27 lg КОЕ/г). В меньших количествах высевались Candida spp. (2,89 lg КОЕ/г), Bifidobacterium spp. (2,80 lg КОЕ/г), Neisseria spp. (2,78 lg КОЕ/г). Наименьшие количества определялись у Micrococcus spp. (2,45 lg КОЕ/г), Actinomyces spp. (2,39 lg КОЕ/г), Staphylococcus aureus (2,3 lg КОЕ/г). Высеваемость H. pylori в достаточно большом количестве у 40 % здоровых лиц свидетельствует о представительстве его в нормомикробиоценозе желудка. Признаки дисбиоза гастродуоденальной зоны не наблюдались.

У больных в наибольших количествах высевались Staphylococcus epidermidis (3,72±0,42 lg КОЕ/г), H. pylori (3,26±0,31 lg КОЕ/г) и Streptococcus spp. (2,89±0,38 lg КОЕ/г), что было значительно больше значений контрольной группы (р<0,001-0,05). Candida spp. высевались в количестве (1,79±0,21 lg КОЕ/г), превышающем значения здоровых лиц на 203,4 % (р<0,001). Количество Corynebacterium spp. (1,24±0,10 lg КОЕ/г) и Micrococcus spp. (0,91±0,08 lg КОЕ/г) было больше среднего уровня контрольной группы на 117,5 % (р<0,001). Staphylococcus aureus высевались в количестве (1,22±0,14 lg КОЕ/г), превышающем значения здоровых лиц в 20 раз (р<0,001). Количество Lactobacillus spp. (1,17±0,13 lg КОЕ/г) было меньше, чем в контрольной группе на 29,9 % (р<0,05). Уровень Escherichia coli (1,14±0,13 lg КОЕ/г) был меньше значений контрольной на 26,9 % (р<0,05). Количество Actinomyces spp. (0,51±0,06 lg КОЕ/г) превышало данные здоровых лиц на 325 % (р<0,001). Neisseria spp. высевались в количестве (0,28±0,04 lg КОЕ/г), 2-кратно превышающем значения контрольной группы. Минимальное количество в группе определялось у Bifidobacterium spp. - 0,18±0,03 lg КОЕ/г, что было меньше значений контрольной группы на 85,7 % (р<0,001). В итоге у 33 (78,5 %) больных с обострением ЯБ желудка выявлены признаки дисбактериоза ГДЗ: I степени - у 59,5 % больных, II степени - у 19 % больных.

При посеве фекалий на питательные среды в контрольной группе наиболее часто определялись Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp., типичные Escherichia coli (в 100 % случаев). Реже высевались Enterococcus spp. (в 80 %), Clostridium spp. (в 45 % случаев). Наименьшая частота высеваемости определялась у лактозонегативных Escherichia coli и Staphylococcus epidermidis (в 17,5 %). Наибольшие количества определялись у Bifidobacterium spp. (9,472±0,56 lg КОЕ/г), типичных Escherichia coli (7,835±0,31 lg КОЕ/г),

Lactobacillus spp. (6,92±0,45 lg КОЕ/г). У 32 обследованных высевались Enterococcus spp. в количестве 6,042±0,35 lg КОЕ/г (в среднем по группе - 4,833±0,3 lg КОЕ/г), у 18 -Clostridium spp. в количестве 3,321±0,22 lg КОЕ/г (в среднем по группе - 1,494±0,12 lg КОЕ/г), у 7 - лактозонегативные Escherichia coli в количестве 4,293±0,26 lg КОЕ/г (в среднем по группе - 0,751±0,08 lg КОЕ/г). Наименьшие количества определялись у Staphylococcus epidermidis: у 7 (17,5%) - 2,623±0,20 lg КОЕ/г, в среднем по группе - 0,459±0,06 lg КОЕ/г. Рост на питательных средах условно-патогенных микроорганизмов Klebsiella spp., Proteus spp., коагулазопозитивных Staphylococcus aureus, дрожжеподобных грибов рода Candida не отмечался. Таким образом, у здоровых лиц признаки дисбиоза кишечника не наблюдались.

У больных микробиотические изменения были более выражены при тяжелом течении ЯБ желудка с частыми рецидивами и дисплазией СОЖ. Bifidobacterium spp. в нормальных количествах высевались лишь у 30 (71,4 %) больных - 8,433±0,70 lg КОЕ/г, в сниженных - у 9 (21,4 %) - 7,185±0,56 lg КОЕ/г, в резко сниженных - у 3 (7,14 %) - 6,286±0,42 lg КОЕ/г. Lactobacillus spp. в нормальных количествах высевались лишь у 27 (64,3 %) больных -7,821±0,65 lg КОЕ/г, в сниженных - у 10 (23,8 %) - 6,578±0,51 lg КОЕ/г, в резко сниженных -у 5 (11,9 %) - 5,101±0,43 lg КОЕ/г, в среднем по группе - 7,201±0,58 lg КОЕ/г. Типичные эшерихии в нормальных количествах высевались у 36 (85,7 %) больных - 7,85±0,49 lg КОЕ/г, в сниженных - у 2 (4,8 %) - 5,951±0,37 lg КОЕ/г, в повышенных - у 4 (9,5 %) - 9,256±0,56 lg КОЕ/г, в среднем по группе - 7,894±0,48 lg КОЕ/г. Лактозонегативные Escherichia coli выделялись у 10 (23,8 %) больных в количестве 4,353±0,29 lg КОЕ/г, в среднем по группе их содержание составило 1,036±0,11 lg КОЕ/г, что на 37,9 % (р<0,05) превысило значения контрольной группы. Микроорганизмы Enterococcus spp. в нормальных количествах высевались у 34 (81 %) больных - 7,385±0,47 lg КОЕ/г, в сниженных - у 3 (7,14 %) -5,165±0,23 lg КОЕ/г, в повышенных - у 1 (2,4 %) - 9,079 lg КОЕ/г, в среднем по группе -6,563±0,51 lg КОЕ/г, что на 35,7 % (р<0,01) превысило значения контрольной группы. Встречаемость и количественный уровень клостридий в толстом кишечнике значимо увеличились при ульцерозном процессе: у 33 (78,6 %) - 3,085±0,25 lg КОЕ/г, у 9 (21,4 %) -5,573±0,38 lg КОЕ/г, в среднем по группе - 3,618±0,32 lg КОЕ/г, что на 142,2 % (р<0,001) превысило значения контрольной группы. Staphylococcus epidermidis в нормальных количествах высевались у 27 (64,3 %) больных - 2,879±0,23 lg КОЕ/г, в повышенных - у 4 (9,5 %) - 4,355±0,29 lg КОЕ/г, в среднем по группе - 2,266±0,19 lg КОЕ/г, что пятикратно (р<0,001) превысило значения здоровых лиц. Коагулазопозитивные Staphylococcus aureus выделялись у 4 (9,5 %) больных в количестве 3,345±0,31 lg КОЕ/г, в среднем по группе их уровень составил 0,319±0,05 lg КОЕ/г. Грибы рода Candida в нормальных количествах высевались у 12 (28,6 %) больных - 3,117±0,26 lg КОЕ/г, в повышенных - у 10 (23,8 %) -

4,623±0,33 lg КОЕ/г, в среднем по группе - 1,991±0,18 lg КОЕ/г. Условно-патогенные микроорганизмы Klebsiella spp., Proteus spp. выделялись у 1 больного в количестве 4,699 и 4,602 lg КОЕ/г соответственно. Таким образом, у больных с обострением ЯБ желудка выявлялся дисбактериоз толстого кишечника: у 16,7 % больных - I степень, у 4,76 % - II степень, у 7,14 % - III степень.

На фоне эрадикационной и антисекреторной терапии Bifidobacterium spp. в нормальных количествах стали высеваться реже - у 27 (64,3 %) больных - 8,340±0,66 КОЕ/г, чаще в сниженных - у 10 (23,8 %) - 7,171±0,54 lg КОЕ/г, в резко сниженных - у 5 (11,9 %) -6,175±0,40 lg КОЕ/г, в среднем по группе - 7,804±0,62 lg КОЕ/г. Lactobacillus spp. повторяли динамику бифидобактерий: в нормальных количествах высевались у 25 (59,5 %) больных -7,395±0,59 lg КОЕ/г, в сниженных - у 11 (26,2 %) - 6,497±0,48 lg КОЕ/г, в резко сниженных -у 6 (14,3 %) - 4,953±0,40 lg КОЕ/г, в среднем по группе - 6,811±0,53 lg КОЕ/г. Типичные эшерихии в нормальных количествах высевались у 36 (85,7 %) больных - 7,773±0,52 lg КОЕ/г, в сниженных - у 1 (2,4 %) - 5,699 lg КОЕ/г, в повышенных - у 5 (11,9 %) - 9,359±0,58 lg КОЕ/г, в среднем по группе - 7,912±0,54 lg КОЕ/г. Лактозонегативные Escherichia coli выделялись у 11 (26,2 %) больных в количестве 4,577±0,30 lg КОЕ/г, в среднем по группе их содержание составило 1,199±0,13 lg КОЕ/г. Enterococcus spp. в нормальных количествах высевались у 33 (78,6 %) больных - 7,266±0,43 lg КОЕ/г, в сниженных - у 6 (14,3 %) -5,105±0,24 lg КОЕ/г, в среднем по группе - 6,438±0,32 lg КОЕ/г. Встречаемость и количественный уровень клостридий в толстом кишечнике значимо увеличились на фоне терапии: лишь у 23 (54,8 %) выделялись в нормальных количествах - 3,416±0,28 lg КОЕ/г, у 19 (45,2 %) в повышенных - 5,649±0,36 lg КОЕ/г, в среднем по группе - 4,426±0,32 lg КОЕ/г, что на 1,046 lg КОЕ/г (30,9 %) (р<0,05) превысило значения показателя до лечения. Staphylococcus epidermidis в нормальных количествах высевались вдвое реже - у 14 (33,3 %) больных - 2,931±0,22 lg КОЕ/г, в повышенных чаще в 4,25 раза - у 17 (40,5 %) - 4,732±0,30 lg КОЕ/г, в среднем по группе - 2,892±0,24 lg КОЕ/г, что на 0,626 lg КОЕ/г (27,6 %) (р<0,05) превысило значения показателя до лечения. Коагулазопозитивные Staphylococcus aureus выделялись у тех же 4 (9,5 %) больных, но в большем количестве - 4,059±0,28 lg КОЕ/г, в среднем по группе - 0,387±0,05 lg КОЕ/г. Грибы рода Candida высевались чаще: в нормальных количествах - у 15 (35,7 %) больных - 3,147±0,25 lg КОЕ/г, в повышенных - у 17 (40,5 %) - 4,760±0,34 lg КОЕ/г, в среднем по группе - 3,051±0,29 lg КОЕ/г, что на 1,06 lg КОЕ/г (53,2 %) (р<0,001) превысило значения показателя до лечения. Условно-патогенные микроорганизмы Klebsiella spp. и Proteus spp. на фоне терапии также выделялись чаще: у 3 (7,14 %) и 2 (4,8 %) больных в количестве 4,839±0,25 и 4,801±0,23 lg КОЕ/г соответственно, превысив (р<0,001) в 3 и 2 раза количество до лечения. В итоге, у больных при лечении

обострения ЯБ желудка дисбактериоз толстого кишечника выявлялся чаще: у 16,7 % больных - I степень, у 7,14 % - II степень, у 11,9 % - III степень.

Таким образом, на фоне антисекреторной и эрадикационной терапии ЯБ желудка дисбиотические изменения в толстом кишечнике становились более выраженными: увеличивались высеваемость и количество клостридий, клебсиелл, протея, эпидермального стафилококка, кандид при тенденции к снижению бифидобактерий и лактобактерий. Выявленная динамика указывает на необходимость коррекции состава кишечной микробиоты при лечении больных ЯБ, что потенциально будет способствовать ускорению репарации язвенного дефекта.

ЛИТЕРАТУРА

1. Курусин В. М., Матвеева Л. В. Гендерные различия микробиоты желудка при заболеваниях гастродуоденальной зоны // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2016. - № 126 (2). - С. 25-29.

2. Макаренко Е. В. Клиническое значение факторов патогенности Helicobacter pylori // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2005. -№ 3. - С. 22-27.

3. Матвеева Л. В., Капкаева Р. Х., Мосина Л. М., Курусин В. М. Изменения пристеночной микробиоты желудка в зависимости от стадии атрофии слизистой оболочки на фоне активного воспалительного процесса // Медицинский альманах. -2016. - № 1 (41). - С. 44-47.

4. Никишаев В. И., Врублевская Е. О., Лемко И. И. Эндоскопические классификации и комментарии к ним. - К.: Гамма Колiр, 2004. - 32 с.

5. Чернявский В. И., Бирюкова С. В., Мартынов А. В. Смелянская М. В., Беляевская С. Ю., Перемот С. Д., Криворучко И. А., Романова М. В., Радченко А. А., Сейдаметов Р. Р. Helicobacter pylori - Herpesviridae ассоциации в этиопатогенезе неопластических поражений желудка. Современные аспекты изучения // Анналы Мечниковского института. - 2005. - № 1. - С. 48-62.