Оценка качества вакцины туляремийной живой по результатам испытаний в рамках обязательной сертификации

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2016 УДК 615.371:615.072

Оценка качества вакцины туляремийной живой по результатам испытаний в рамках обязательной сертификации

И. В. Касина1, Л. И. Ращепкин2, А. А. Горяев1, С. А. Алексеева1, Т. И. Немировская1, А. А. Мовсесянц1

1 Федеральное государственное бюджетное учреждение

«Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, Россия

2 Федеральное казенное учреждение здравоохранения Медико-санитарная часть № 64 Федеральной службы исполнения наказаний, Саратов, Россия

Поступила 19.08.2016 г. Принята к публикации 17.11.2016 г.

В статье представлен анализ результатов испытаний, проведенных в ходе экспертизы качества вакцины туляремийной живой в ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России в 201 1-2015 гг. Из 34 серий вакцины, выпущенных в 2011 г., 14 серий не соответствовали требованиям нормативной документации (НД) по показателям: «Специфическая активность (процент живых микробных клеток)», «Количество накожных доз» и «Термостабильность». Результаты экспериментальных исследований подтвердили нестандартность образцов серий вакцины туляремийной живой по показателям «Специфическая активность (процент живых микробных клеток)», что, соответственно, приводит к различию тестируемых образцов вакцины по количеству накожных и внутрикожных доз. Подтверждено, что П-агар является питательной средой, обеспечивающей все необходимые условия для культивирования вакцинного штамма ГгапавеНа tularensis. Анализируются возможные причины нестандартности качества серий, выпущенных в 2011 г. Результаты испытаний 93 серий туляремийной вакцины, произведенных в 2012-2015 гг., показали их полное соответствие требованиям НД. Стабильное обеспечение качества туляремийной вакцины послужило основанием для возможности выбора, аттестации и утверждения новых серий препарата в качестве отраслевых стандартных образцов.

Ключевые слова: ГгапавеНа tularensis; вакцина туляремийная живая; нормативная документация; специфическая активность; процент живых микробных клеток; концентрация микробных клеток; количество накожных доз; термостабильность; колониеобразующая единица; отраслевой стандартный образец.

Библиографическое описание: Насина ИВ, Ращепкин ЛИ, Горяев АА, Алексеева СА, Немировская ТИ, Мовсесянц АА. Оценка качества вакцины туляремийной живой по результатам испытаний в рамках обязательной сертификации. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение 2016;16 (4): 253-259.

Туляремия — острое природно-очаговое инфекционное заболевание из группы бактериальных зоонозов, которое вызывается бактерией РгапавеИа tularensis, протекающее с интоксикацией, лихорадкой, развитием лимфаденита и поражением различных органов. Относится к группе особо опасных инфекционных болезней, так как возбудитель туляремии является патогенным биологическим агентом (ПБА) II группы. Одной из характерных эпидемиологических особенностей туляремии является почти 100 % восприимчивость к ней человека без различия в возрасте, кроме того, больные люди не представляют опасности для здоровых. В результате перенесенного заболевания формируется стойкий иммунитет [1-5].

Природные очаги туляремии распространены на всех континентах Северного полушария в Европе, Азии и Северной Америке, заболевания людей регистрируются в виде спорадических случаев и эпидемических вспышек [6, 7]. В России туляремия постоянно обнаруживается практически на всей территории [1, 8, 9]. В 90-е годы прошлого века в нашей стране ежегодно диагностировалось от 100 до 400 случаев заболевания людей. В 2000-2011 гг. заболеваемость в России существенно снизилась и составляла 50-123 случаев в год, что не исключает возникновение вспышек, охватывающих несколько сотен человек, как это произошло в 2005 г., и более 1000 — в 2013 г. в результате обострения эпизоотического процесса в природном очаге туляремии [8, 9].

В настоящее время иммунизация является самым надежным способом профилактики туляремии. Для про-

филактики заболевания в России используется туляре-мийная вакцина, представляющая собой живую культуру вакцинного штамма Г. tularensis 15 НИИЭГ, лиофилизиро-ванного в стабилизирующей среде. Вакцинация рекомендована населению с 7-летнего возраста, проживающему на энзоотичных по туляремии территориях, а также по эпидемическим показаниям. Туляремийная вакцина через 20-30 суток после прививки обеспечивает развитие стойкого иммунитета продолжительностью до 5 лет [1,3]. В Российской Федерации против туляремии ежегодно подлежит вакцинации более 300 тыс. и ревакцинации более 1 млн человек [9]. Соответственно, постоянный контроль качества туляремийной вакцины является неотъемлемой составляющей системы вакцинопрофилактики.

Цель работы — оценка качества вакцины туляремийной живой по результатам сертификационных испытаний в ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России за период 2011-2015 гг.

В задачи исследования входило проведение испытаний вакцины туляремийной живой в соответствии с требованиями НД Р N002348/01-010212, анализ полученных результатов и выбор серий вакцины в качестве кандидатов в отраслевые стандартные образцы (ОСО).

Материалы и методы

В Испытательном центре экспертизы качества МИБП проведены испытания 127 серий вакцины туляремийной живой. Серии вакцины, выпущенные в 2011 г., условно обозначены под номерами 1-14, в 2012 г. — под номерами

15-64, в 2013 г. — под номерами 65-75, в 2014 г. — под номерами 76-92, в 2015 г. — под номерами 93-107.

Испытания проводили в строгом соответствии с методами, указанными в НД на лекарственный препарат по показателям: «Описание», «Подлинность», «Время растворения», «рН», «Время седиментационной устойчивости», «Размер частиц», «Потеря в массе при высушивании», «Точность розлива», «Вакуум, герметизация», «Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов», «Специфическая безопасность», «Специфическая активность (концентрация микробных клеток; процент живых микробных клеток, степень диссоциации)», «Количество накожных доз», «Прививаемость» и «Термостабильность».

Статистическая обработка результатов выполнена с помощью программы Microsoft Excel.

Результаты и обсуждение

Одним из основных показателей качества вакцины является «Специфическая активность», обусловленная общей концентрацией микробных клеток и процентом живых микробных клеток. На основании результатов, полученных по данному показателю, определяется количество накожных и внутрикожных доз вакцины в ампуле. Штаммы F. tularensis особо требовательны к условиям культивирования, они не растут на питательных средах широкого применения — мясо-пептонных агаре и бульоне, агаре и бульоне Хоттингера. Оптимальными условиями для их культивирования являются слабощелочные агаровые или желточные среды с добавлением цистеина, кроличьей де-фибринированной крови, тканевых экстрактов и других стимуляторов роста [2,3,10,11]. Используемая нами питательная среда для культивирования и выделения ту-ляремийного микроба (FT-агар) изготовлена на основе сернокислотного гидролизата рыбной муки с цистеином, стимулятором роста гемофильных бактерий и глюкозо-витаминной добавкой (глюкоза, тиамин хлорид, кальция пантотенат). FT-агар по ростовым свойствам соответствовал требованиям НД: при посеве 10 м.к. вакцинного штамма F. tularensis обеспечивал рост единичных (от 4 до 8) колоний, а при посеве 100 м.к. — от 60 до 80 % от посевной дозы.

При экспертизе качества 34 серий вакцины, выпущенных в 2011 г., у 14 серий были выявлены несоответствия требованиям НД по показателю «Специфическая активность (процент живых микробных клеток)». Содержание живых микробных клеток было ниже нормы (менее 40 % от общего количества). Но при этом по показателю «Специфическая активность (концентрация микробных клеток)» все серии соответствовали требованиям НД (табл. 1).

По показателям качества: «Описание», «Подлинность», «Время растворения», «рН», «Время седиментаци-онной устойчивости», «Размер частиц», «Потеря в массе при высушивании», «Точность розлива», «Вакуум, герметизация», «Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов», «Специфическая безопасность», «Прививаемость» и «Термостабильность» все испытуемые серии вакцины соответствовали требованиям НД.

Достоверность полученных результатов несоответствий серий требованиям НД по показателю «Специфическая активность (процент живых микробных клеток)» была подтверждена проведением двукратных испытаний. Как видно из результатов, представленных в таблице 1, в образцах серий вакцины № 1, 2, 5, 6 и 10 содержание живых микробных клеток было недостаточным и не составило су-

щественной разницы в результате повторного испытания (от 18 до 29 %). В сериях вакцины № 12, 13 и 14 выявлены значительные колебания (от 0,2 до 69 %) содержания живых микробных клеток в разных образцах. В сериях № 3,4, 9 и 11 при низком содержании живых микробных клеток в среднем по трем образцам отмечалась двукратная и более разница между результатами двух испытаний, например, в серии № 11 количество живых микробных клеток в первом испытании составило 23 % и только 1,5 % — во втором испытании. Самое низкое содержание живых микробных клеток обнаружено в образцах серий вакцины № 7 и 8 (от 5 до 10 %) и подтверждено повторными испытаниями. Количество накожных и внутрикожных доз, вводимых людям, является расчетной величиной, зависящей от содержания живых микробных клеток в образце. В связи с отмеченной нестандартностью тестируемых образцов вакцины, количество иммунизирующих доз в них было или недостаточным или значительно превышало норму. В итоге эти серии также не соответствовали требованиям НД по показателю «Количество накожных доз».

Кроме того, из шести серий вакцины, представленных на испытания по всем показателям, в четырех сериях было выявлено несоответствие требованиям НД по показателю «Термостабильность» (табл. 2). Показатель термостабильности — это срок (не менее 7 сут), в течение которого в препарате сохраняется 50 % живых микробных клеток от их первоначального количества после хранения образцов вакцины при температуре (37±1) °С.

Испытание по показателю «Термостабильность» проводилось по методике определения процента живых микробных клеток после хранения образцов вакцины при температуре (37±1) °С в течение 14 сут. Далее показатель «Термостабильность» препарата в сутках рассчитывался по формуле, в которой учитывается первоначальное среднее количество живых микробных клеток, среднее количество живых микробных клеток после хранения образцов при температуре (37±1) °С и срок хранения — 14 сут. Как видно из результатов, представленных в таблице 2, показатели содержания живых микробных клеток в образцах четырех серий составляли от 0 до 6 %. Данные результаты свидетельствуют о том, что и первоначальное количество живых микробных клеток в этих образцах было недостаточным. Соответственно, и показатель «Термостабильность» составил менее 7 сут. Значительные различия в содержании живых микробных клеток подтверждают нестандартность представленных образцов.

В ходе испытаний также было отмечено отличие внешнего вида некоторых образцов восстановленной вакцины друг от друга: сразу после внесения 0,9 % раствора натрия хлорида в одних образцах суспензия была однородной и равномерно взвешенной, в других наблюдались гелеобразные включения. После перемешивания в течение регламентированного времени растворения в соответствии с НД (3 мин) различия восстановленного препарата нивелировались.

В процессе поиска причин полученных несоответствий нами был проведен ряд дополнительных экспериментальных исследований. В РТ-агар в качестве дополнительных стимуляторов роста поочередно вносили: гемолизи-рованную лошадиную кровь до конечной концентрации 5 %; дефибринированную кроличью кровь до конечной концентрации 5 %; увеличивали содержание глюкозы в питательной среде до концентрации 10 % вместо регламентированных 6 %. Однако внесение в среду различных обогащающих добавок не повлияло на результаты испытаний по показателю «Специфическая активность (про-

цент живых микробных клеток)». При сравнительном высеве образцов вакцины на питательные среды, как с дополнительными добавками, так и без них, было получено идентичное количество колониеобразующих единиц (КОЕ). Таким образом, нами было подтверждено, что FT-агар является оптимальной питательной средой, обеспечивающей все необходимые условия для культивирования вакцинного штамма F. tularensis.

С целью оценки объективности полученных результатов проводились параллельные высевы вакцины из одного образца (объединение содержимого двух ампул) и из одной ампулы в условиях промежуточной прецизионности (двумя сотрудниками), а также высев содержимого одного образца в полном объеме. Результаты, полученные сотрудниками, во всех опытах показали незначительные колебания (от 5 до 12 %), высокую воспроизводимость при повторных испытаниях и подтвердили большой разброс содержания живых микробных клеток (от 4 до 82 %) и накожных доз (от 1 до 82, при норме от 15 до 50) в образцах и ампулах одной серии.

Результаты проведенных нами исследований подтвердили нестандартность серий туляремийной вакцины по показателям «Специфическая активность (процент жи-

вых микробных клеток)», «Количество накожных доз» и «Термостабильность». В итоге из 34 серий вакцины, выпущенных в 2011 г., — 14 серий (41 %) были признаны несоответствующими требованиям НД.

Из вышеизложенного следует, что возможными причинами получения нестандартных серий туляремийной вакцины по показателям «Специфическая активность (процент живых микробных клеток)», «Количество накожных доз» и «Термостабильность» могли послужить нарушения технологии производства в процессе лиофилиза-ции или неравномерное перемешивание вакцины при ее розливе.

Анализируя результаты испытаний 93 серий туляремийной вакцины, выпущенных в 2012-2015 гг., следует отметить, что все серии препарата после первого испытания соответствовали требованиям НД, в том числе и по показателю «Специфическая активность (процент живых микробных клеток)» (табл. 2). В среднем по сериям общая концентрация микробных клеток составила 1,61010 при двух стандартных отклонениях 0,4, что соответствовало норме — (2±1)1010 м.к./мл. При этом количество живых микробных клеток в них в среднем получилось 49 %, при

Таблица 1. Результаты испытания по показателю «Специфическая активность» вакцины туляремийной живой, выпущенной в 2011 г.

Образцы серий № п/п Испытание Общая концентрация м.к./мл1

% ж.м.к.2 Кол-во 3 накожных доз % ж.м.к.2 Кол-во 3 накожных доз % ж.м.к.2 Кол-во 3 накожных доз

1 1 1,77.10'° 21 18 19 17 13 12 17,5

2 1,77.10'° 34 30 34 30 19 16 29

2 1 1,6-1010 24 19 29 23 26 20 26

2 1,7-1010 12 10 34 28 25 21 24

3 1 1,8-1010 30 28 29 26 29 26 29,4

2 1,77-1010 8,5 7 3 3 1,5 1 4

4 1 1,9-1010 30 30 26 25 26 25 27,4

2 1,9-1010 11 11 9 9 15 14 12

5 1 1,7-1010 25 22 22 19 24 21 23,5

2 1,7-1010 25 21 20 17 17 14 20,6

6 1 1,7-1010 10 8 20 17 23 20 18

2 1,7-1010 15 12 17 15 17 15 16

7 1 1,7-1010 10 8 13 11 8 6 10,2

2 1,77-1010 11 9 7 6 10 8 9

8 1 1,8-1010 10 9 7 6 6 5 7

2 1,96-1010 4 3 3 3 7 6 5

9 1 1,33-1010 11 7 8 5 16 11 11

2 1,33-1010 11 7 17 11 32 21 20

10 1 1,1-1010 23 12 15 8 32 16 23,3

2 1,2-1010 1 1 35 28 24 13 20

11 1 1,36Ч010 25 17 15 10 29 19 23

2 1,43-1010 2 2 2 1 1 1 1,5

12 1 1,8-1010 19 19 26 22 46 42 31

2 2,2-1010 69 80 1 1 1 1 24

13 1 1,67-1010 61 48 1,5 1 12 10 26

2 1,5-1010 48 40 30 21 0,2 0,3 26

14 1 1,67-1010 33 25 9,4 8 0,6 1 14,3

2 1,7-1010 1 1 33 28 51 43 28,2

1 Норма: (2±1)-1010 м.к./мл).

2 Процент живых микробных клеток (% ж.м.к.) (норма: не менее 40 %).

3 Количество накожных доз (норма: от 15 до 50).

Таблица 2. Результаты испытания по показателю «Термостабильность» вакцины туляремийной живой, выпущенной в 2011 г.

Образцы серий № п/п Общая концентрация м.к./мл1 (среднее по трем образцам) % ж.м.к.2 1-й образец (объединение двух ампул) % ж.м.к.2 2-й образец (объединение двух ампул) % ж.м.к.2 3-й образец (объединение двух ампул) % ж.м.к.2 (средний по трем образцам) Показатель «Термостабильность», сут3

1 1,5-1010 2 1 6 3 4,2

2 1,5-1010 4 5 3 4 5

3 1,1-1010 0 0 1 1 1,3

4 2,0-1010 2 1 1 1 3

1 Норма: (2±1)1010 м.к./мл.

2 Процент живых микробных клеток ( % ж.м.к.).

3 Норма: не менее 7 сут.

Таблица 3. Результаты испытания по показателю «Специфическая активность» вакцины туляремийной живой, выпущенной в 2012-2015 гг.

Образцы серий № п/п Общая концентрация м.к./мл1

15 2,0-1010 62 46 1,9-1010 59 77 1,55-1010 50

16 1,3-1010 50 47 1,8-1010 54 78 1,52-1010 46

17 1,8-1010 49 48 1,7-1010 43 79 1,5-1010 43

18 1,6-1010 42 49 1,8-1010 46 80 1,5-1010 43

19 1,4-1010 47 50 1,8-1010 51 81 1,6-1010 49

20 1,4-1010 52 51 1,9-1010 54 82 1,5-1010 42

21 1,7-1010 53 52 1,9-1010 45 83 1,6-1010 44

22 1,6-1010 62 53 1,8-1010 43 84 1,8-1010 44

23 1,6-1010 51 54 1,6-1010 52 85 2,0-1010 43

24 1,7-1010 47 55 1,6-1010 44 86 1,6-1010 45

25 1,8-1010 47 56 1,6-1010 49 87 1,5-1010 51

26 1,3-1010 46 57 1,9-1010 55 88 1,3-1010 43

27 1,6-1010 42 58 1,8-1010 50 89 1,3-1010 45

28 1,3-1010 53 59 2,0-1010 52 90 1,4-1010 50

29 1,4-1010 41 60 1,5-1010 54 91 1,5-1010 47

30 1,8-1010 51 61 1,6-1010 62 92 1,3-1010 47

31 1,8-1010 54 62 1,5-1010 50 93 1,0-1010 49

32 1,9-1010 45 63 1,5-1010 48 94 1,6-1010 47

33 1,8-1010 41 64 1,3-1010 49 95 1,6-1010 46

34 1,7-1010 44 65 1,5-1010 54 96 1,7-1010 43

35 1,7-1010 46 66 1,5-1010 54 97 1,2-1010 44

36 2,1-1010 44 67 1,7-1010 54 98 1,2-1010 50

37 2,0-1010 60 68 1,5-1010 48 99 1,2-1010 44

38 2,0-1010 51 69 1,7-1010 57 100 1,4-1010 50

39 1,5-1010 53 70 1,5-1010 51 101 1,5-1010 49

40 1,7-1010 59 71 1,5-1010 48 102 1,9-1010 47

41 1,5-1010 48 72 1,8-1010 58 103 1,4-1010 63

42 2,0-1010 42 73 1,6-1010 52 104 1,5-1010 43

43 2,2-1010 43 74 1,7-1010 54 105 1,3-1010 55

44 1,6-1010 52 75 1,6-1010 43 106 1,5-1010 65

45 1,8-1010 43 76 1,57-1010 42 107 1,5-1010 43

1 Норма: (2±1)-1010 м.к./мл.

2 Процент живых микробных клеток (% ж.м.к.) (норма: не менее 40 %).

Таблица 4. Результаты испытания по показателю «Термостабильность» вакцины туляремийной живой, выпущенной в 2012-2015 гг.

Образцы серий № п, п Общая концентрация м.к./мл1 (среднее по трем образцам) % ж.м.к2 1-й образец (объединение двух ампул) % ж.м.к.2 2-й образец (объединение двух ампул) % ж.м.к.2 3-й образец (объединение двух ампул) % ж.м.к.2 (по трем образцам) Показатель «Термостабиль- 3 ность», сут

1 1,5-1010 24 26 20 23 15

2 1,3-1010 23 20 22 21 8

3 1,2-1010 37 32 17 29 15

4 1,6-1010 16 23 25 21 9

5 1,8-1010 16 15 17 16 8

6 1,5-1010 16 20 24 20 11

7 1,3-1010 21 20 19 20 7

8 1,5-1010 29 27 24 27 10

9 1,3-1010 31 25 30 28 13

10 1,4-1010 37 26 21 28 10

11 1,3-1010 38 31 24 31 15

12 1,3-1010 26 19 31 25 12

13 1,4-1010 16 12 15 14 8

14 1,5-1010 25 30 26 27 14

15 1,3-1010 14 16 15 15 7

16 1,2-1010 24 18 16 20 9

17 1,2-1010 28 26 29 28 12

18 1,3-1010 14 15 15 15 7

19 1,3-1010 14 15 14 14 8

1 Норма: (2±1)-1010м.к./мл.

2 Процент живых микробных клеток (% ж.м.к.).

3 Норма: не менее 7 сут.

стандартном отклонении 5,6 %, двух стандартных отклонениях 11,2 %, что также соответствовало норме — не менее 40 %. Особенно важно отметить, что колебания количества живых микробных клеток в образцах одной серии были в пределах 10-15 %, что соответствовало допустимым изменениям (не более 20 %). Соответствие образцов серий по содержанию живых микробных клеток свидетельствует об их соответствии требованиям НД по показателю «Количество накожных доз». Содержание прививочных доз в них находилось в пределах нормы — от 15 до 50. Результаты наших испытаний по этим показателям практически совпали с паспортными данными представленных серий от производителя. В ходе испытаний было также отмечено, что после внесения 0,9 % раствора натрия хлорида в ампулу, вакцина полностью растворялась в течение 1 мин при встряхивании, суспензия была однородной и равномерно взвешенной. Из 19 серий вакцины, представленных на испытания по всем показателям, показатель «Термостабильность» также находился в пределах нормы (от 7 до 15 сут), что подтверждает стандартность образцов по количеству живых микробных клеток (табл. 4).

Стабильное обеспечение стандартности качества ту-ляремийной вакцины по показателям «Специфическая активность (процент живых микробных клеток)», «Количество накожных доз» и «Термостабильность» послужило основанием для возможности выбора, аттестации и утверждения новых серий препарата в качестве отраслевых стандартных образцов в 2014 г. (ОСО 42-28-398-2014) и в 2016 г. (ОСО 42-28-398-2016). Основной аттестованной характеристикой ОСО туляремийной вакцины является показатель «Специфическая активность (концентрация микробных клеток; процент живых микробных клеток)» [12]. Аттестованное значение стандартного образца вакцины

(ОСО 42-28-398-2014) по показателю «Специфическая активность (процент живых микробных клеток)» при доверительной вероятности 0,95 составило (54,0±11,7) %., а ОСО 42-28-398-2016 — (46,0±5,8) %.

Выводы

1. За период с 2011 по 2015 г. в Испытательном центре экспертизы качества МИБП ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России были проведены испытания 127 серий вакцины туляремийной живой, представленных с целью подтверждения их качества на соответствие требованиям НД.

2. Результаты испытаний позволили сделать вывод о нестандартности образцов серий вакцины, выпущенных в 2011 г., что могло быть обусловлено нарушениями технологии производства. Предположительно причиной могли стать нарушения технологии производства в процессе лиофилизации или неравномерное перемешивание вакцины при ее розливе.

3. Серии туляремийной вакцины, выпущенные в 2012-2015 гг., соответствовали требованиям НД по всем показателям, включая показатели: «Специфическая активность (процент живых микробных клеток)», «Количество накожных доз» и «Термостабильность».

4. Проведен выбор серий препарата для аттестации в качестве отраслевого стандартного образца в 2014 г. (ОСО 42-28-398-2014) и в 2016 г. (ОСО 42-28-398-2016).

Литература

1. Олсуфьев НГ, Дунаева ТН. Природная очаговость. Эпидемиология и профилактика туляремии. М.; 1970.

2. Олсуфьев НГ. Таксономия, микробиология и лабораторная диагностика возбудителя туляремии. М.; 1975.

3. Мещерякова ИС. Таксономия, идентификация и иммунологическая диагностика туляремии: автореф. дис. ... д-ра мед. наук. М.; 1990.

4. Harik NS. Tularemia: epidemiology, diagnosis, and treatment. Pediatric Annals 2013; 42(7): 288-92.

5. Sjostedt A. Tularemia: history, epidemiology, pathogen physiology, and clinical manifestations. Annals NY Acad Sci. 2007; 1105: 1-29.

6. WHO Guidelines on Tularaemia. WH0/CDS/EPR/2007.7 [Internet]. 2007 [cited 2013 Feb 12]. Available from: http://www.who.int/ csr/resources/publications/WH0_CDS_EPR_2007_7.pdf.

7. Tularemia — United States, 2001-2010. MMWR Morb Mortal WklyRep. 2013; 62(47): 963-6.

8. Носилко СА, Балахонов СВ, Бренёва НВ, Чеснокова МВ, Анда-ев ЕИ, Носков АН и др. Эпидемиологическая ситуация по зоо-нозным, природно-очаговым инфекционным болезням в Сибири и на Дальнем Востоке в 2013 г. и прогноз на 2014 г. Проблемы особо опасных инфекций 2014; (2): 53-7.

9. О состоянии санитарно-эпидемиологического благополучия населения в Российской Федерации в 2013 году: Государственный доклад. М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; 2014. Available from: http://rospotrebnadzor.ru/bitrix/redi-rect.php?event1=file&event2=download&event3=gd_2013_dlya-sayta.pdf&goto=/upload/iblock/3b8/gd_2013_dlya-sayta.pdf.

10. Поздеев ОН. Медицинская микробиология. М.; 2004.

11. Методические указания «Порядок организации и проведения лабораторной диагностики туляремии для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней». МУН 4.2.2939-11. М.; 2011.

12. Насина ИВ, Горяев АА, Ращепкин ЛИ, Фадейкина ОВ, Немировская ТИ, Устинникова ОБ и др. Аттестация и продление срока годности новой серии отраслевого стандартного образца специфической активности и иммуногенности вакцины туляремийной живой. Биопрепараты 2015; (4): 32-8.

Об авторах

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации. Российская Федерация, 127051, Москва, Петровский бульвар, 8, стр. 2. Насина Ирина Владимировна. Ведущий эксперт лаборатории бактериальных вакцин Испытательного центра экспертизы качества МИБП, канд. биол. наук.

Горяев Артем Анатольевич. Заместитель начальника управления экспертизы противобактериальных МИБП, канд. биол. наук. Алексеева Светлана Александровна. Эксперт 1-й категории лаборатории бактериальных вакцин Испытательного центра экспертизы качества МИБП, канд. биол. наук.

Немировская Татьяна Ивановна. Начальник лаборатории бактериальных вакцин Испытательного центра экспертизы качества МИБП, канд. мед. наук.

МовсесянцАрташесАвакович. Начальник Испытательного центра экспертизы качества МИБП, д-р мед. наук, профессор.

Федеральное казенное учреждение здравоохранения Медико-санитарная часть № 64 Федеральной службы исполнения наказаний. Российская Федерация, 410028, г. Саратов, ул. Рабочая, 18.

Ращепкин Леонид Иванович. Начальник бактериологической лаборатории по диагностике туберкулеза филиала «Туберкулезная больница».

Адрес для переписки: Касина Ирина Владимировна; Kasina@expmed.ru

Live tularemia vaccine quality assessment according to test results under the mandatory certification

I. V. Kasina1, L. I. Raschepkin2, A. A. Goryaev1, S. A. Alekseeva1, T. I.Nemirovskaya1, A. A. Movsesyants1

1 Federal State Budgetary Institution

«Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products»

of the Ministry of Health of the Russian Federation, 127051, Moscow, Russia

2 Federal Government Healthcare Institution Medical Unit № 64 of the Federal Service for Corrections, Saratov, Russia

The results of the tests for the quality assessment of live tularemia vaccine under the Federal State Budgetary Institution «Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation in 201 1-2015 were analyzed in the present article. There were 14 batches (of 34) which did not comply with the requirements of regulatory documents (RD) in terms of «Specific activity (percentage of live microbial cells)», «Number of cutaneous doses» and «Thermal stability». The experimental results had confirmed the irregularity of tularemia vaccine batch samples in terms of «Specific activity (percentage of live microbial cells)» which, respectively, led to differences in vaccine samples in terms of the number of cutaneous and intradermal doses. It was confirmed that FT-agar is a nutrient providing all the necessary conditions for cultivating Francisella tularensis strain. Possible causes of irregular quality of the batches released in 2011 was considered in the present article. Test results for 93 batches of tularemia vaccine manufactured in 2012-2015 shown their full compliance with the requirements of RD. Consistent quality assurance of tularemia vaccine became the basis for the possibility of choice, certification and approval of new drug batches as industrial reference standards.

Key words: Francisella tularensis; live tularemia vaccine; regulatory documents; specific activity; percentage of live microbial cells; concentration of microbial cells; number of cutaneous doses; thermal stability; colony forming unit; growth media for cultivation and isolation of tularemia microbe (FT-agar); industry reference standard.

For citation: Kasina IV, Raschepkin LI, Goryaev AA, Alekseeva SA, Nemirovskaya TI, Movsesyants AA. Live tularemia vaccine quality assessment according to test results under the mandatory certification. BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment 2016; 16 (4): 253-259.

References

1. Olsufiev NG, Dunaeva TN. Natural foci. Epidemiology and prevention of tularemia. Moscow; 1970 (in Russian).

2. Olsufiev NG. Taxonomy, microbiology and laboratory diagnosis of tularemia pathogen. Moscow; 1975 (in Russian).

3. Mescheryakova IS. Taxonomy, identification and immunological diagnosis of tularemia. Dr. Med. Sci [thesis]. Moscow; 1990 (in Russian).

4. Harik NS. Tularemia: epidemiology, diagnosis, and treatment. Pediatric Annals 2013; 42(7): 288-92.

5. Sjostedt A. Tularemia: history, epidemiology, pathogen physiology, and clinical manifestations. Annals NY Acad Sci. 2007; 1105: 1-29.

6. WHO Guidelines on Tularaemia. WH0/CDS/EPR/2007.7 [Internet]. 2007 [cited 2013 Feb 12]. Available from: http://www.who.int/ csr/resources/publications/WH0_CDS_EPR_2007_7.pdf.

7. Tularemia — United States, 2001-2010. MMWR Morb Mortal WklyRep. 2013; 62(47): 963-6.

8. Kosilko SA, BalakhonovSV, Breneva NV, Chesnokova MV, Andaev EI, Noskov AK, et al. Epidemiological situation on zoonotic and

natural-focal infectious diseases in Siberia and Far East in 2013; prognosis for 2014. Problemy osobo opasnyh infektsiy 2014; (2): 53-7 (in Russian).

9. On the status of sanitary and epidemiological welfare of the population in the Russian Federation in 2013: State Report. Moscow: Federal Service for Supervision of Consumer Rights Protection and Human Welfare; 2014. Available from: http://rospotrebnad-zor.ru/bitrix/redirect.php?event1=file&event2=download&event3= gd_2013_dlya-sayta.pdf&goto=/upload/iblock/3b8/gd_2013_dlya-sayta.pdf (in Russian).

10. Pozdeev OK. Medical Microbiology. Moscow; 2004 (in Russian).

11. Guidelines «Procedure for organizing and conducting tularemia laboratory diagnostics laboratory territorial, regional and federal levels». MUK 4.2.2939-11. Moscow; 2011 (in Russian).

12. Kasina IV, Goryaev AA, Rashchepkin LI, Fadeykina OV, Nemirovs-kaya TI, Ustinnikova OB, et al. Certification and shelf-life extension of a new batch of the branch reference standard for live tularemic vaccine's specific activity and immunogenicity. Biopreparation 2015; (4): 32-8 (in Russian).

Authors

Federal State Budgetary Institution «Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation, Petrovsky boulevard 8, bld. 2, Moscow 127051, Russian Federation.

Kasina IV. Leading expert of Laboratory of bacterial vaccines of Test Center for Quality Expertise of medical immunobiological preparations. Candidate of Biological Sciences.

Goryaev AA. Deputy head of Office for expertise of antibacterial medical immunobiological preparations. Candidate of Biological Sciences. Alekseeva SA. 1st professional category expert of Laboratory of bacterial vaccines of Test Center for Quality Expertise of medical immunobiological preparations. Candidate of Biological Sciences.

Nemirovskaya TI. Head of Laboratory of bacterial vaccines of Test Center for Quality Expertise of medical immunobiological preparations. Candidate of Medical Sciences.

Movsesyants AA. Head of Test Center for Quality Expertise of medical immunobiological preparations. Doctor of Medical Sciences, professor.

Federal State Health Agency Health Service № 64 of the Federal Penitentiary Service of Russia, Rabochaya street 18, Saratov 410028, Russian Federation.

Raschepkin LI. Head of the bacteriological laboratory for the diagnosis of tuberculosis of the branch «Tuberculosis Hospital».