ХИМЕРНЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ

N
1. Химерный полипептид, содержащий остов LH из первого подтипа ботулинического нейротоксина серотипа F (BoNT/F) и область петли для активации из другого подтипа BoNT/F.
2. Полипептид по п.1, где остов LH
обладает по меньшей мере 60% идентичностью последовательности по меньшей мере с одной из SEQ ID NO: 17-32.
N
3. Полипептид по п.1 или 2, где остов LH
содержит:
N
(a) полипептидную последовательность, обладающую по меньшей мере 40% идентичностью последовательности по меньшей мере с одной из SEQ ID NO: 33-48; и/или
(b) полипептидную последовательность, обладающую по меньшей мере 70% идентичностью последовательности по меньшей мере с одной из SEQ ID NO: 49-64.
4. Полипептид по любому из пп.1-3, где остов LH
происходит из подтипа BoNT/F
или подтипа BoNT/F
.
N
5
7
5. Полипептид по любому из пп.1-4, где петля для активации содержит аминокислотную последовательность, совпадающую с консенсусной последовательностью KSIIPRKGTKAPPRL (SEQ ID NO: 65), или аминокислотную последовательность, в которой не более пяти аминокислот добавлены, делетированы или заменены в консенсусной последовательности.
6. Полипептид по п.5, где петля для активации происходит из подтипа BoNT/F
, подтипа BoNT/F
, подтипа BoNT/F
, подтипа BoNT/F
или подтипа BoNT/F
.
1
2
3
4
6
7. Полипептид по п.5 или 6, где петля для активации содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:
(a) KSVIPRKGTKAPPRL (SEQ ID NO: 66);
(b) KSIIPRKGTKQSPSL (SEQ ID NO: 67); или
(c) KSIIPRKGTKAPPRL (SEQ ID NO: 65).
8. Полипептид по любому из предшествующих пунктов, где остов LH
происходит из подтипа BoNT/F
, и петля для активации BoNT/F содержит аминокислотную последовательность KSVIPRKGTKAPPRL (SEQ ID NO: 66).
N
7
9. Полипептид по любому из предшествующих пунктов, где участок расщепления внутри петли для активации BoNT/F специфически узнает и расщепляет эндопептидаза.
10. Полипептид по п.9, где расщепление посредством эндопептидазы приводит к образованию активного голотоксина.
11. Химерный двухцепочечный полипептид BoNT/F, содержащий:
(a) полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 40% идентичностью последовательности по меньшей мере с одной из SEQ ID NO: 33-48; и
(b) полипептид H
, содержащий аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 70% идентичностью последовательности по меньшей мере с одной из SEQ ID NO: 49-64;
N
где N-конец полипептида H
содержит аминокислотные остатки из подтипа BoNT/F, отличного от остального полипептида H
.
N
N
12. Двухцепочечный полипептид по п.11, где N-концевой аминокислотный остаток полипептидной последовательности H
представляет собой A или Q.
N
13. Двухцепочечный полипептид по п.11 или 12, где N-конец полипептидной последовательности H
начинается с аминокислотного мотива, выбранного из группы, состоящей из APPRLCIK (SEQ ID NO: 70), APPRLCIT (SEQ ID NO: 71), QSPSLCIK (SEQ ID NO: 72) и QSPSLCIT (SEQ ID NO: 73).
N
14. Двухцепочечный полипептид по любому из пп.11-13, где полипептидная последовательность легкой цепи и/или полипептидная последовательность H
происходит из подтипа BoNT/F
или подтипа BoNT/F
.
N
5
7
15. Двухцепочечный полипептид по любому из пп.11-14, который можно получать из полипептида по любому из пп.1-10.
16. Полипептид по любому из пп.1-10 или двухцепочечный полипептид по любому из пп.11-15, дополнительно содержащий нацеливающую группу, адаптированную для связывания полипептида с клеткой посредством связывания нацеливающей группы непосредственно с клеткой или посредством связывания нацеливающей группы с лигандом или лигандами, которые связываются с клеткой.
17. Полипептид или двухцепочечный полипептид по п.16, где нацеливающая группа представляет собой нацеливающую группу из нейротоксина клостридий.
18. Полипептид или двухцепочечный полипептид по п.17, где нацеливающая группа представляет собой не относящуюся к клостридиям нацеливающую группу.
19. Молекула полинуклеотида, кодирующая полипептид, как определено по любому из пп.1-10.
20. Экспрессирующий вектор, содержащий полинуклеотид, как определено по п.19, функционально связанный с промотором.
21. Способ получения полипептида, как определено по любому из пп.1-10, включающий стадию экспрессии полинуклеотида, как определено по п.19, в клетке, и выделения экспрессированного полипептида.
22. Способ по п.21, дополнительно включающий стадию введения полинуклеотида, как определено по п.19, в клетку.
23. Способ активации полипептида, как определено по любому из пп.1-10, включающий инкубацию указанного полипептида с эндопептидазой, где расщепление полипептида в петле для активации BoNT/F переводит полипептид из одноцепочечного полипептида в двухцепочечной полипептид, чем осуществляется активация полипептида.
24. Способ по п.23, где эндопептидаза представляет собой Lys-C.
25. Клетка, экспрессирующая полипептид, как определено по любому из пп.1-10.
26. Клетка по п.25, содержащая полинуклеотид, как определено по п.19, или экспрессирующий вектор, как определено по п.20.
27. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид, как определено по любому из пп.1-10 или 16-18, или двухцепочечный полипептид, как определено по любому из пп.11-18.
28. Фармацевтическая композиция по п.27, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемый наполнитель или разбавитель.
29. Фармацевтическая композиция, как определено по п.27 или 28, для применения в способе предотвращения или лечения заболевания или нарушения, при котором показана терапия с использованием ботулинического нейротоксина.
30. Применение фармацевтической композиции, как определено по п.27 или 28, в производстве лекарственного средства для предотвращения или лечения заболевания или нарушения, при котором показана терапия с использованием ботулинического нейротоксина.
31. Косметическая композиция, содержащая полипептид, как определено по любому из пп.1-10 или 16-18, или двухцепочечный полипептид, как определено по любому из пп.11-18.
32. Косметическая композиция по п.31, дополнительно содержащая косметически приемлемый наполнитель или разбавитель.
33. Применение косметической композиции, как определено по п.31 или 32, для предотвращения или смягчения косметического показания, при котором показано применение ботулинического нейротоксина.
34. Химерный BoNT, содержащий остов из подтипа BoNT/F1 и область петли для активации из подтипа BoNT/F7.
35. Химерный BoNT по п.34 для применения в терапии.