СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РИСКА РАЗВИТИЯ АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ У ДЕТЕЙ
METHOD FOR DETERMINING RISK OF DEVELOPING ALLERGIC SENSITISATION IN INFANTS

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть применено для ранней диагностики развития аллергической сенсибилизации у детей грудного возраста.
Известен способ прогнозирования развития аллергических атопических и псевдоаллергических реакций у детей раннего возраста, основанный на диагностике внутриутробной сенсибилизации и неспецифической гиперреактивности у новорожденных, включающий определение липидных медиаторов аллергии, компонентов медленно действующего вещества анафилаксии - лейкотриенов, при экспозиции лейкоцитов пуповинной крови с аллергеном и фактором активации тромбоцитов (ФАТ). Технический результат: метод позволяет с высокой достоверностью прогнозировать развитие аллергических осложнений у детей на первом году жизни.(см.патент РФ 2187817 G01N 33/543, 2000).
Известен способ определения риска развития атопических заболеваний у новорожденных детей, включающий определение в пуповинной крови концентрации CD26+ и CD30+ лимфоцитов и их соотношения. При значении соотношения CD26/CD30 лимфоцитов <189 и при показателях содержания CD26+лимфоцитов <1716 кл./мкл ребенка определяют в группу риска по развитию атопических заболеваний. Использование способа обеспечивает раннее выявление детей, относящихся к группе риска по развитию атопических заболеваний, что позволяет использовать профилактические мероприятия (см.патент РФ 2331881, G01N 33/48, 2007).
Известен способ прогнозирования атопического дерматита у новорожденных, сущность которого состоит в том, что в лимфоцитах периферической крови новорожденного определяют дозу активных рибосомных генов (10AgЯOP) и при ее значении менее 18 усл. ед. прогнозируют возникновение атопического дерматита. Использование изобретения позволяет с высокой точностью прогнозировать развитие атопического дерматита задолго до появления клинических признаков, что дает возможность своевременно провести ребенку профилактические мероприятия и избежать тяжелых последствий при данной патологии (см.патент РФ 2353927, G01N 33/48, 2009).
Известен способ прогнозирования риска развития аллергических заболеваний у детей раннего возраста. Способ основан на выявлении риска сенсибилизации и неспецифической гиперреактивности у детей раннего возраста, включающий исследование окислительной модификации белков слюны по уровню карбонильных производных - алифатических альдегид- и кетон-динитрофенилгидразонов нейтрального характера и алифатических альдегид-динитрофенилгидразонов основного характера. При повышении интенсивности окислительной модификации белков слюны прогнозируют возможность возникновения атопических заболеваний у детей старшего возраста (см.патент РФ 2424528, G01N 33/52, 2009).
Известные способы позволяют получать достоверные результаты риска развития аллергических заболеваний у детей.
Однако методы взятия проб для исследования дополнительно воздействуют на ребенка, вызывая болезненные ощущения, например взятие крови.
Технической задачей заявленного способа является создание неинвазивного метода для надежного и достоверного прогнозирования аллергической сенсибилизации у детей раннего возраста.
Поставленная задача решается в способе определения риска развития аллергической сенсибилизации у детей путем проведения клинико-лабораторного исследования, при котором определяют экскрецию альфа-лактальбумина женского молока в моче ребенка, при этом забор мочи осуществляют однократно в период от 7 до 21 дня жизни ребенка, и при значении содержания в моче альфа-лактальбумина выше 40 нг/л ребенка определяют в группу риска аллергической патологии. Кроме того, дополнительно определяют семейную предрасположенность к аллергическим заболеваниям.
Среди факторов риска развития пищевой аллергии выделяют высокую проницаемость барьера желудочно-кишечного тракта для макромолекул, запускающих каскад аллергической реакции в шоковом органе. У детей проницаемость барьера кишечного эпителия в раннем постнатальном периоде повышена по сравнению со взрослыми, что может быть связано с определенной незрелостью ферментной системы желудочно-кишечного тракта, а возможно и с эволюционно приобретенным и целесообразным свойством пассивной иммунизации организма новорожденного иммуноглобулинами материнского молока.
В проведенных исследованиях было установлено, что экскреция альфа-лактальбумина женского молока с мочой может рассматриваться в качестве индикатора целостности барьера желудочно-кишечного тракта у детей первых дней жизни.
Пример.
Для определения риска развития аллергической сенсибилизации у детей были обследованы дети в возрасте от 7 до 21 дня, возрастной интервал матерей составил от 20 до 42 лет. Всего исследован 61 ребенок: мальчиков - 33, девочек - 28.
У всех детей определяли уровень экскреции альфа-лактальбумина грудного молока в моче.
На 7-21 день после рождения ребенка у него производился забор разовой порции мочи в мочеприемник в объеме не менее 1 мл.
Наблюдение за детьми, включенными в обследование, проводилось в течение четырех-шести месяцев жизни. Оценивалось состояние детей и появление симптомов пищевой аллергии за этот период, до введения прикорма.
Определение концентрации альфа-лактальбумина женского молока в моче проводили с помощью твердофазного иммуноферментного метода с модификациями, затрагивающими проведение пробоподготовки: к 1,35 мл мочи добавляли 0,15 мл 1,0 М калий-фосфатного буфера pH 7,5, определяя pН смеси, значение которого должно находиться в пределах 7,4-7,6. При более низком значение pH пробу дополнительно подщелачивали 1,0М калий-фосфатным буфером. Затем образцы центрифугировали при +4°С на центрифуге B-6J (Бекман, Австрия) в течение 20 минут при 3000 об/мин и анализировали супернатант.
При построении калибровочной кривой для проведения твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) мочи использовали хроматографически гомогенный стандартный образец альфа-лактальбумина, выделенный из донорского грудного молока, очищенный ультра- и микрофильтрацией, и поликлональные кроличьи антитела, меченные пероксидазой. Расчет концентраций альфа-лактальбумина в образцах мочи и статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета программ EXCEL. Интервал определяемых по калибровочной кривой концентраций альфа-лактальбумина в моче: (0,9-125,0) нг/мл при погрешности определения -5%.
Кроме того, проводился анализ семейной предрасположенности к аллергическим заболеваниям, течения беременности, характер родов (самостоятельные или кесарево сечение), данные клинического осмотра детей.
На момент обследования и определения экскреции альфа-лактальбумина с мочой дети были здоровы, без проявлений аллергии и желудочно-кишечных симптомов и находились на грудном вскармливании.
Семейная предрасположенность к аллергическим заболеваниям установлена у 28 детей (46,9%), из них по линии матери у 14 детей (23,0%), по линии отца у 9 детей (14,8%), у обоих родителей - у 5 детей (8,2%). Беременность у подавляющего большинства матерей (95,2%) протекала без токсикоза. У 8 (13,1%) матерей в родах использовалось оперативное вмешательство (кесарево сечение).
По результатам проведенного определения содержания альфа-лактальбумина в моче выделены две группы детей: первая (n=52) с низким уровнем экскреции альфа-лактальбумина в пределах от следовых значений
(<0,9 нг/мл) до 40,0 нг/мл (среднее значение - 7,9+1.3 нг/мл; вторая (n=9) с высокой экскрецией альфа-лактальбумина от 40,0 до 300,0 нг/мл (среднее значение 111,5+9,1 нг/мл). (табл.1). Семейная предрасположенность к аллергическим заболеваниям установлена в первой группе у 21 ребенка (40,4%) и у 7 детей во второй группе (77,7%), различие статистически достоверно (Р<0,05).
При этом в первой группе детей с низкой экскрецией альфа-лактальбумина атопический дерматит развился у двух из пятидесяти двух детей (3,8%). Во второй группе детей с высокой экскрецией альфа-лактальбумина отмечена значительно и статистически высоко достоверно более высокая частота развития этого заболевания: у 6 детей из девяти (66,7%) (Р,<0,01). Важно учесть, что из всех 28 детей с отягощенным семейным анамнезом атопический дерматит развился у восьми детей (28,6%), то есть с частотой статистически высоко достоверно более низкой (Р<0,01), чем для детей, у которых семейная аллергическая отягощенность сочеталась с высокой экскрецией с мочой альфа-лактальбумина (6 детей из 7; 85,7%).
Полученные в данном исследовании результаты подтверждают перспективность тестирования у детей первых дней жизни экскреции с мочой альфа-лактальбумина материнского молока для диагностики в дальнейшем возможного повышенного риска аллергической сенсибилизации у детей.
Таблица 1
Уровень экскреции альфа-лактальбумина в моче у детей первых дней жизни (с 7 до 21)
Показатели
Низкий уровень (n=52)
Высокий уровень (n=9)
Колебания
0,3-40,0 нг/мл
40,0-300,0 нг/мл
Среднее значение
7,9+1,3
111,5+9,1