СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НИЗКОГИДРОЛИЗОВАННОЙ ПЕПТИДНОЙ КОМПОЗИЦИИ ИЗ БЕЛКОВ МОЛОЧНОЙ СЫВОРОТКИ
METHOD FOR PRODUCTION OF LOW HYDROLYSED PEPTIDE COMPOSITION OF MILK WHEY PROTEINS

Изобретение относится к молочной промышленности, в частности к получению низкогидролизованных пептидных композиций из белков молочной сыворотки с антиоксидантными и гипотензивными свойствами и привлекательными органолептическими характеристиками, используемых при производстве функциональных пищевых продуктов массового потребления и специализированных продуктов для лиц с пищевой непереносимостью белков молока.
В последнее десятилетие большое внимание уделяется разработке функциональных пищевых продуктов массового потребления и специализированных продуктов для питания ключевых категорий лиц с пищевой непереносимостью или аллергией на определенные пищевые компоненты, или алиментарно-зависимыми заболеваниями. При этом основой данных категорий пищевых продуктов, придающих им соответствующие свойства, являются функциональные пищевые ингредиенты. Многочисленные исследования показали, что ферментативные гидролизаты пищевых белков, в том числе гидролизаты казеина и белков молочной сыворотки, обладают не только питательной ценностью за счет содержания незаменимых и заменимых аминокислот в легкоусвояемой форме, но и являются источником биологически активных пептидов, участвующих в регуляции различных функций организма, включая поддержание баланса микрофлоры желудочно-кишечного статуса, антиоксидантного и иммунного статуса, регуляцию артериального давления и др. Таким образом, очевидно, что для профилактики развития клинических признаков пищевой непереносимости молочных белков, повышения антиоксидантного статуса, профилактики функциональных нарушений со стороны деятельности сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта и восстановления баланса его микрофлоры необходимо разрабатывать способы получения пептидных композиций, обладающих антиоксидантным, гипотензивным и пребиотическим действием.
В частности, известен способ получения гидролизата белка молочной сыворотки, предусматривающий смешивание сывороточного белкового продукта, содержащего по меньшей мере 65% белка из расчета по сухому веществу, и воды с получением суспензии с содержанием белка до 20%, протеолитический гидролиз суспензии до степени гидролиза 15 и 35%, выделение из смеси на ультра- или микрофильтрационном устройстве со значением отсекания выше 10000 белкового гидролизата в виде пермеата, отличающийся тем, что перед протеолитическим гидролизом суспензию подвергают тепловой обработке при температуре выше 60°C, нагретую таким образом смесь подвергают регулированию pH щелочным веществом, гидролиз ведут протеазой, продуцируемой В. licheniformis, предпочтительно Alcalase, и/или протеазой, продуцируемой В. subtilis, предпочтительно Neutrase, посредством метода нестатичного pH, после выделения белкового гидролизата проводят инактивацию ферментов (см. Патент РФ №2084172, 27.05.1992 г.).
Недостатком данного способа является получение средне (степень гидролиза 5-20%) и глубоко (степень гидролиза более 20%) гидролизованных пептидных композиций со средней длиной пептидной цепи не более 5 аминокислотных остатков, обладающих низкой степенью горечи, что снижает как потребительские свойства гидролизатов, так и пищевых продуктов на их основе. Кроме того, в примерах, раскрывающих данное изобретение, приводятся данные по использованию для гидролиза сывороточных белков молока композиции из двух ферментных препаратов (Neutrase и Alcalase 2.4L), что приводит к увеличению себестоимости получения гидролизатов.
Известен способ получения частичного гидролизата молочных белков (при соотношении сывороточные белки/казеин от 40/60 до 80/20), включающий гидролиз, концентрирование и сушку. Гидролиз осуществляют в одну стадию под действием смеси ферментов трипсина и химотрипсина, при этом белок предварительно термически денатурируют при (70-80)°C. Гидролиз проводят в 4-6% растворе субстрата при фермент-субстратном соотношении 0,6-0,8% при температуре (30-50)°C в течение 2-6 часов. Устанавливают исходный pH 7,5-8,0 ед. и далее в ходе процесса не pH-статируют, позволяя pH опуститься до величины 6,5-6,8 ед. Далее проводят термическую инактивацию фермента при температуре (80-90)°C, концентрирование и сушку. Гидролизат используют в продуктах непосредственно, без дальнейшей очистки. По данным иммуноферментного анализа (проводимого в варианте метода торможения непрямого иммуноферментного теста) антигенность гидролизата снижается на 75-95% в сравнении с исходным белком (см. Патент US №5405637, НКИ 426/580, 11.04.1995 г.).
Приведены исследования молекулярно-массового распределения методом эксклюзионной жидкостной хроматографии высокого давления на колонке TSK, которые, однако, были получены в водно-органических средах и поэтому недостаточно адекватно отражают состав гидролизата.
Аналогичный метод получения "частичных" гидролизатов молочного белка приводится в патенте (см. Патент US №5589357, НКИ 435/68.1, 31.12.1996 г.). В отличие от описанного выше способа инактивацию смеси ферментов трипсин+химитрипсин в гидролизате проводят острым паром.
Недостатки представленных выше аналогов следующие:
- дополнительно необходима стадия термической инактивации фермента, которая может приводить к ухудшению качества продукта (снижению биологической ценности из-за потери части незаменимых аминокислот);
- непосредственно после проведения гидролиза и инактивации ферментов гидролизат сушат без дополнительной очистки. Это приводит к тому, что в состав продукта попадают остаточные количества нерасщепленного белкового субстрата и компоненты ферментных препаратов, которые могут сами по себе обладать аллергенным действием, что ухудшает качество продукта и снижает возможность его использования в гипоаллергенных смесях;
4
- степень снижения антигенности получаемого продукта составляет 75-95%, что соответствует снижению в 4-20 раз. Этого крайне недостаточно для использования данного гидролизата в гипоаллергенных продуктах питания. В составе гипоаллергенных смесей профилактического назначения степень снижения антигенных свойств должна составлять 10 (10.000) раз или более;
- в ходе проведения процесса производится мониторинг молекулярно-массового распределения пептидов методом эксклюзионной хроматографии на колонке TSK G-2000 SWXL. Однако при этом применяется растворитель, содержащий ацетонитрил, что может исказить результаты анализа, а именно привести к занижению содержания пептидов с молекулярными массами более 10 кДа (килодальтон) вследствие выпадения их в осадок при растворении в подвижной фазе, содержащей ацетонитрил. При этом следует отметить - степень потери белково-пептидного материала зависит от концентрации ацетонитрила в подвижной фазе, что делает результаты анализа неопределенными.
Наиболее близким по техническому решению к заявляемому способу является способ получения ферментативного гидролизата сывороточных белков со средней степенью гидролиза. Способ включает получение белкового раствора, его пастеризацию, ферментативный гидролиз панкреатином, ультра- и диафильтрацию полученного гидролизата с разделением на фильтрат и концентрат, сушку. Белковый раствор получают из сухого концентрата сывороточного белка, а гидролиз ведут при фермент-субстратном соотношении 1,5-2,5%, при температуре 48-54°C в течение 3-3,5 часов, с начальным pH 7,9-8,3 (см. Патент РФ №2375910).
Недостатками предложенного способа являются:
- использование панкреатина для получения гидролизата, что приводит к увеличению его себестоимости по сравнению с гидролизатами, полученными при использовании бактериальных пищевых ферментных препаратов.
- диафильтрация полученного раствора, приводящая к дополнительным потерям белка.
Технический результат заявляемого изобретения заключается в получении низкогидролизованных пептидных композиций из белков молочной сыворотки с привлекательными органолептическими характеристиками (без горечи), с антиоксидантной и гипотензивной активностью и пониженным содержанием белков-аллергенов молочной сыворотки, что дает возможность их использования при производстве функциональных пищевых продуктов массового потребления и специализированных пищевых продуктов для людей с пищевой непереносимостью белков молока.
«Protamex» является протеазным комплексом, продуцируемым микроорганизмами рода Bacillus. Активность ферментативного препарата составляет не менее 400 Протеолитических единиц на 1 г. Использование фермента «Protamex», разрешенного для применения в пищевых производствах и пищевых системах, обеспечивает приятный вкус готовому продукту без наличия горечи в отличие от известных аналогичных продуктов и серо-бежевый или кремовый цвет.
Технический результат достигается тем, что способ получения низкогидролизованных пептидных композиций белков молочной сыворотки включает приготовление белкового раствора (очистку молочной сыворотки, сепарирование), его пастеризацию, ультрафильтрацию, ферментативный гидролиз препаратом «Protamex» и пастеризацию полученного гидролизата для термической инактивации ферментного препарата «Protamex». Белковый раствор получают из сухого концентрата сывороточного белка, сухой молочной сыворотки или используют нативную подсырную сыворотку. При содержании жира в белковом растворе более 0,05% его обезжиривают пропусканием через сепаратор. Пастеризацию белкового раствора проводят при температуре от 75 до 85°C с выдержкой 20-30 с. Ультрафильтрацию белкового раствора проводят при температуре 8-12°C на ультрафильтрационных мембранах с молекулярной массой отсекаемых компонентов от 1 до 5 кДа до содержания сухих веществ в ретентате 8-18%. Перед внесением ферментного препарата «Protamex» ретентат подогревают до температуры 50-55°C и его начальное значение pH доводят добавлением 20% водного раствора гидроксида натрия до 7,0-7,2, а гидролиз ведут при температуре 50-55°C, дозе (E/S) ферментного препарата «Protamex» 2.5-4,0% от содержания белка в ретентате в течение 1,5 часов без pH-статирования, после чего полученный гидролизат пастеризуют при температуре 80-85°C в течение 5-10 минут.
Экспериментально было установлено, что оптимальная температура проведения гидролиза составляет 50-55°C. Отклонение в меньшую сторону ниже 50°C нежелательно, т.к. приводит к увеличенному содержанию остающихся в реакционной смеси негидролизованных высокомолекулярных белковых структур, что снижает выход получаемого продукта и приводит к снижению качества, повышению остаточной аллергенности гидролизата. Отклонение в большую сторону (свыше 55°C) также нежелательно, т.к. приводит к ускорению процесса термической инактивации ферментного препарата, что влечет за собой уменьшение выхода готового продукта. Кроме того, это приводит к перерасходу энергии на поддержание температуры в ходе процесса и последующее охлаждение готового продукта, что вызывает увеличение себестоимости продукта.
Экспериментально было установлено, что ультрафильтрация белкового раствора на мембранах с молекулярной массой отсекаемых компонентов от 1 до 5 кДа позволяет получить концентрат белков молочной сыворотки (ретентант) с максимальным выходом. Использование мембран с меньшей пористостью снижают выход как ретентата, так и конечного продукта (гидролизата).
Проведение гидролиза ретентата ферментным препаратом «Protamex» при установлении начального pH 7,0-7,2 ед., которое в течение гидролиза постепенно снижается, позволяет не проводить в дальнейшем pH-статирование, что уменьшает количество солей, поступающих в продукт, и, следовательно, улучшает его качество. Регулирование начального pH реакционной смеси осуществляют 20%-ным раствором щелочи (гидроксида натрия).
Пастеризация гидролизата необходима для улучшения его микробиологических показателей, а также термической инактивации ферментного препарата «Protamex». Уменьшение температуры пастеризации ниже заявленного диапазона значений приводит к возрастанию риска микробной контаминации гидролизата и продуктов на его основе при их последующем хранении.
Заявляемая совокупность признаков позволяет получить низкогидролизованные пептидные композиции белков молочной сыворотки с привлекательными органолептическими характеристиками, пониженной антигенностью, антиоксидантной и гипотензивной активностью. В заявляемом изобретении остаточная антигенность контролируется методами высокоэффективной жидкостной хроматографии и иммуноферментного анализа и рассчитывается как отношение содержания аллергенов молочной сыворотки в гидролизате и ретентате.
Результаты определения содержания белков-аллергенов в ретентатах и гидролизатах молочной сыворотки представлены в таблице 1. Как видно из представленных данных остаточная антигенность гидролизатов по содержанию бычьего сывороточного альбумина не превышает 1,5%, α-лактальбумина - 11%, молочных белков, главным образом β-лактоглобулина - 85%.
Антиоксидантную емкость ретентата и гидролизатов белков молочной сыворотки определяли спектрофотометрическим методом TEAC (Trolox Equivalent Antioxidant Capacity) по отношению к катион-радикалу АБТС (диаммонийная соль 2-азинобис-(3-этилбензтиазолин-6-сульфоновой кислоты)) и спектрофлуориметрическим методом ORAC (Oxygen Radical Absorbance Capacity) по отношению к пероксильному радикалу. Антиоксидантную емкость выражали концентрацией эквивалентов водорастворимого аналога витамина E - тролокса. Результаты определения антиоксидантной емкости в ретентатах и гидролизатах молочной сыворотки представлены в таблице 2. Показано, что в процессе ферментативного гидролиза антиоксидантная емкость гидролизатов увеличивалась в 1,8-2,0 раза по отношению к катион-радикалу АБТС и в 1,08-1,57 раза по отношению к пероксильному радикалу, что обусловлено образованием антиоксидантных пептидов и снятием стерических барьеров для взаимодействия остатков редокс-активных аминокислот с радикалами за счет разрушения третичной структуры белков молочной сыворотки. При этом увеличение дозы ферментного препарата «Protamex» с 2,5 до 4,0% от белка в ретентате приводит к увеличению антиоксидантной емкости получаемого гидролизата на 15-39% в зависимости от типа радикала (таблица 2).
Гипотензивную активность ретентата и гидролизатов белков молочной сыворотки определяли спектрофлуориметрическим методом по их способности ингибировать ангиотензин-1-превращающий фермент (АПФ), являющийся ключевым звеном реннин-ангиотензин-альдостероновой системы регуляции артериального давления. Для определения АПФ-ингибирующей активности гидролизатов и ретентата использовали субстрат с внутренним тушением флуоресценции трифторацетат o-аминобензоил-фенилаланил-аргинил-лизил(динитрофенил)-пролина. За величину гипотензивной активности принимали концентрацию гидролизатов и ретентата (мл/л), при которой наблюдалось 50% ингибирование активности АПФ. Результаты определения гипотензивной активности в ретентатах и гидролизатах молочной сыворотки представлены в таблице 2. Показано, что в процессе ферментативного гидролиза гипотензивная активность гидролизатов увеличивалась в 3,7-5,3 раза, что обусловлено образованием АПФ-ингибирующих пептидов. При этом увеличение дозы ферментного препарата «Protamex» с 2,5 до 4,0% от белка в ретентате приводит к увеличению гипотензивной активности получаемого гидролизата на 16% (таблица 2).
2
Идентификацию пептидов, присутствующих в гидролизатах молочной сыворотки, проводили путем их фракционирования методом препаративной гель-проникающей хроматографии с последующим хроматографическим анализом полученных фракций методом обращено-фазовой хроматографии с детекцией методом масс-спектрометрии ионно-циклотронного резонанса с преобразованием Фурье (FT-ICR-MS) и автоматическим поиском по базе данных белковых последовательностей UniProt KB_SwisProt sprot_v.57.9. В гидролизатах из белков молочной сыворотки идентифицировано 199 пептидов размером от 5 до 25 аминокислотных остатков (таблица 3), для которых основными белками предшественниками являлись бычий сывороточный альбумин, β-лактоглобулин, казеины. Среди идентифицированных пептидов 86 содержат остатки редокс-активных аминокислот (тирозина, триптофана, метионина, цистеина и гистидина), ответственных за антиоксидантные свойства соответствующих пептидов. Анализ последовательностей идентифицированных пептидов с помощью базы данных BioPep позволил установить наличие в составе пептидных композиций 2 пептидов VKEAMAPK и ЕАМАРК из β-казеина, обладающих антиоксидантной активностью, и 3 пептидов ALKAWSVAR (бычий сывороточный альбумин), AMKPWIQPK (αs-казеин) SAPLR (белок, взаимодействующий с белком, подобным фактору 6 АДФ-рибозилирования), обладающих АПФ-ингибирующей активностью.
Качественные преимущества получаемых гидролизатов заключаются в следующем:
- в пониженной антигенности за счет сниженного содержания аллергенов молочной сыворотки - α-лактальбумина, β-лактоглобулина, бычьего сывороточного альбумина;
- в наличии антиоксидантных и гипотензивных свойств;
- в привлекательных органолептических характеристиках, нейтральном вкусе без привкуса горечи;
- возможности использования при производстве функциональных пищевых продуктов массового спроса.
Благодаря этому гидролизаты в качестве белковых компонентов могут быть использованы для получения функциональных продуктов для профилактического питания детей и взрослых, предрасположенных к пищевой аллергии и непереносимости белков коровьего молока;
Способ получения пептидных композиций из белков молочной сыворотки осуществляется следующим образом.
Сухой концентрат сывороточных белков (КСБ) растворяют при постоянном перемешивании в питьевой воде с температурой (40-45)°C, охлаждают и оставляют набухать в течение 3,0-6,0 часов при перемешивании каждые 30 минут. Полученный раствор сывороточных белков пастеризуют при температуре 85°C с выдержкой 20 с, охлаждают и подают на ферментативный гидролиз.
Сухую молочную сыворотку растворяют при постоянном перемешивании в питьевой воде с температурой (40-45)°C, охлаждают и оставляют набухать в течение 3,0-6,0 часов при перемешивании каждые 30 минут. Полученный раствор сывороточных белков пастеризуют при температуре 85°C с выдержкой 20 с, охлаждают и подают на ультрафильтрацию.
Сыворотку подсырную нативную очищают, сепарируют на сепараторах-сливкоотделителях для обезжиривания, пастеризуют при температуре от 75 до 85°C с выдержкой 20-30 с, охлаждают и подают на ультрафильтрацию.
Раствор сывороточных белков разделяют на ультрафильтрационной установке с пропускной способностью мембран от 1 до 5 кДа, трансмембранном давлении 0,2-0,4 атм на ретентат (массовая доля сухих веществ 8-11% и фильтрат.
Ретентат или раствор КСБ подогревают до температуры 50-55°C, pH раствора доводят до 7,0-7,2 добавлением необходимого количества 20% водного раствора гидроксида натрия, псосле чего в реакционную смесь вносят ферментный препарат «Protamex» в дозировке 2,5-4,0% от количества белка в реакционной смеси.
Ферментативный гидролиз раствора сывороточных белков ведут с использованием ферментного препарата «Protamex» при температуре 50-55°C в течение 1,5 часов.
По окончании ферментации гидролизаты пастеризуют при температуре 80-85°C в течение 5-10 минут с последующим охлаждением до температуры 30±2°C. Полученные жидкие гидролизаты фасуют и направляют на хранение.
Следующие примеры иллюстрируют способ получения пептидных композиций из белков молочной сыворотки.
Пример 1
65 кг сухой сыворотки растворяют при перемешивании в питьевой воде (935 кг) с температурой 40°C до образования раствора с массовой долей сухих веществ (белок, жир, лактоза, соли) от 7%, охлаждают до 4°C и оставляют набухать в течение 3,0-6,0 часов при перемешивании каждые 30 мин. Полученный раствор сывороточных белков пастеризуют при температуре 85°C с выдержкой 20 с, затем охлаждают до температуры 40°C и подают на концентрирование на мембранах с пропускной способностью от 1 до 5 кДа. Используют полисульфоновые мембраны UF DHT 20-6338/30FF.
По окончании ультрафильтрации полученный ретентат с массовой долей сухих веществ 9% направляют на ферментативный гидролиз.
Ретентат подогревают до температуры 52-54°C, доводят его pH до 7,1 добавлением 3,2 л 20% раствора гидроксида натрия, после чего в реакционную смесь вносят 687.5 г ферментного препарата «Protamex» (2,5% от количества белка в реакционной смеси).
Ферментативный гидролиз ретентата ведут при температуре 52-54°C в течение 1,5 часов.
Гидролизаты пастеризуют при температуре 82-84°C в течение 10 минут с последующим охлаждением до температуры 30°C.
Получают 167 л пептидной композиции из белков молочной сыворотки с массовой долей сухих веществ 10,6%, массовой долей общего азота 0,43%, общим содержанием свободных аминокислот в эквивалентах глютаминовой кислоты 3,44±0,23 мг/мл, степенью гидролиза 4,91±0,26%, остаточной антигенностью по содержанию α-лактальбумина 4,6%, бычьего сывороточного альбумина 0,6%, β-лактоглобулина 72,1%, обладающей антиоксидантной и гипотензивной активностью (таблица 2).
Пример 2
Процесс проводят аналогично примеру 1. Отличается тем, что в реакционную смесь вносят 1100 г ферментного препарата «Protamex» (4,0% от количества белка в реакционной смеси).
Получают 160 л пептидной композиции из белков молочной сыворотки с массовой долей сухих веществ 9,9%, массовой долей общего азота 0,44%, общим содержанием свободных аминокислот в эквивалентах глютаминовой кислоты 3,78±0,25 мг/мл, степенью гидролиза 5,37±0,30%, остаточной антигенностью по содержанию α-лактальбумина 10,8%, бычьего сывороточного альбумина 1,3%, β-лактоглобулина 84,8%, обладающей антиоксидантной и гипотензивной активностью (таблица 2).
Таблица 1
Содержание белков-алергенов и остаточная аллергенность ретентатов и гидролизатов белков молочной сыворотки
Образец
C(молочного белка - αs<sub>1</sub>-, αs<sub>2</sub>-, β-, к-казеины и β-лактоглобулин), мг/мл, при иммуноанализе набором Ridascreen Fast Milk (R-Biopharm, Германия)
Остаточная антигенность, %
C(α-лактальбумина), мг/мл, при иммуноанализе набором E91018Bo (Life Science Inc., США)
Остаточная антигенность, %
C(бычьего сывороточного альбумина), мг/мл при иммуноанализе набором Bovine serum albumin (BSA) assay (Cygnus technologies Inc., США)
Остаточная нтигенность,%
Получение пептидной композиции при E/S=2,5%
УФ-ретентат молочной сыворотки
53,07±8,87
100,00
1,21±0,18
100,00
0,96±0,10
100,00
Гидролизат молочной сыворотки
38,24±7,60
72,06
0,055±0,001
4,55
0,006±0,002
0,63
Получение пептидной композиции при E/S=4,0%
УФ-ретентат молочной сыворотки
53,42±7,78
100,00
0,87±0,13
100,00
0,98±0,07
100,00
Гидролизат молочной сыворотки
45,32±1,72
84,84
0,094±0,006
10,80
0,013±0,003
1,33
Таблица 2
Антиоксидантная емкость (мМ эквивалентов тролокса) и гипотензивная активность (IC50 мл/л) ретентатов и гидролизатов белков молочной сыворотки
Образец
Антиоксидантная емкость
Гипотензивная активность (IC50)
TEAC
ORAC
Получение пептидной композиции при E/S=2,5%
УФ-ретентат молочной сыворотки
4,31±0,18
2,83±0,18
321,8
Гидролизат молочной сыворотки
7,77±0,19
3,07±0,19
86,8
Получение пептидной композиции при E/S=4,0%
УФ-ретентат молочной сыворотки
4,47±0,15
2,72±0,14
395,0
Гидролизат молочной сыворотки E/S=4,0%
8,95±0,23
4,27±0,14
74,4
Таблица 3
Пептидный профиль гидролизатов белков молочной сыворотки
Белок-предшественник Bos taurus
Последовательность пептида
Молекулярная масса, Да
Acetyl-CoA carboxylase 1
LIAEK
572,3533
Sodium- and chloride-dependent glycine transporter
ILEAK
572,3533
WDR12
LLEAK
572,3533
CE290
D1LQK
615,3592
Ras GTPase-activating protein 3
VFQSVK
706,4014
Beta-catenin-like protein 1
LLNKFTENDSEK
1436,715
Serum albumin
DTHKSEIAHR
1192,595
K2CA
LQDLK
615,3592
Structural maintenance of chromosomes protein 1A
QESSR
605,2769
MKI67 FHA domain-interacting nucleolar phosphoprotein
LLKCHFIPPEK
1323,737
Nuclear migration protein nudC
INPENSK
800,4028
Adenylate cyclase type 1
LLNELFGK
932,5331
UPF0490 protein Clorf201 homolog
AGFVSK
607,333
Complement C3
ADALVGK
672,3806
Protein KRI1 homolog
KEILAK
700,4483
Thyroglobulin
GQEIPGTR
856,4403
Mitochondrial import inner membrane translocase subunit TIM50
QMIIEPTSPCLLPDPLR
1922,001
Transforming growth factor-beta-induced protein ig-h3 (Fragments)
XKNLLLNHMDVLK
1564,876
Endoplasmic reticulum protein ERp29
LIEKNK
743,4541
Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase
SRAAVGNK
801,4457
Alpha-S2-casein
ISQRYQK
921,5032
Cytochrome с oxidase subunit 8B, mitochondrial
GWAVPK
656,3646
DnaJ homolog subfamily С member 14
EPKSAR
686,3711
Rho guanine nucleotide exchange factor 10-like protein
LMRVK
661,3945
Pyruvate carboxylase, mitochondrial
DTQAMK
692,3163
Selenium-binding protein 1
VIQVPPK
779,4905
Palmitoyl-protein thioesterase 1
KMVEKK
777,4418
Rab GTPase-binding effector protein 2
ASLPR
542,3176
Rho GDP-dissociation inhibitor 3
EIVSGLK
744,4381
ERP27
LVDNK
587,3279
Beta-2-microglobulin
IVKWDRDL
1043,576
Serum albumin
ALKAWSVAR
1000,582
Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase isozyme L1
LGREAASR
858,4671
Mitochondrial Rho GTPase 1
IDLQK
615,3592
Serum albumin
YTRKVPQVSTPTLVEVSR
2059,143
STMN1
EVLQK
615,3592
Interleukin-12 subunit alpha
LLMDPK
715,3938
Beta-casein
VKEAMAPK
872,4789
Aconitate hydratase, mitochondrial
NINIVRKR
1011,63
Seizure protein 6 homolog
LISSPK
643,3905
GLNA
KDPNK
600,3231
UPF0407 protein C2orf39 homolog
FDEITVKWEEGK
1479,725
Hexokinase-1
GESAIS
562,2598
JSPR1
EPVSK
558,3013
Peroxisome assembly protein 12 OS=Bos taurus GN=PEX12 PE=2 SV=1
LAGVR
514,3227
ACTN4
EAMLK
590,3098
Protein THEMIS
ILASEIR
800,4756
Myosin-2
VKQKLEK
871,5491
PAF
VVASR
530,3176
ADP-ribosylation factor-like protein 6-interacting protein 6
SAPLR
542,3176
Fibrinogen gamma-B chain
KTTMK
607,3363
Probable carboxypeptidase PM20D1
DGFIYGRGTLDNK
1454,715
Twinfilin-1
QLNYVQLEIDIK
1474,803
60S ribosomal protein L9
GTVQQADE
846,3719
Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP1B
QEVIK
615,3592
Vacuolar protein-sorting-associated protein 36
LLLAEK
685,4374
N-terminal kinase-like protein
GPMKLGTR
858,4745
TM223
ALQSLSARR
1000,578
Serum albumin
SLGKVGTR
816,4818
Serum albumin
AEFVEVTK
921,4807
Serum albumin
AEFVEVTKLVTDLTK
1691,935
Serum albumin
LSQKFPKAEFVEVTK
1749,967
ZNHI1
RVLDR
657,3922
Transmembrane protein 131-like
QILSITK
801,496
Abnormal spindle-like microcephaly-associated protein homolog (Fragment)
AGKHQR
695,3827
Uveal autoantigen with coiled-coil domains and ankyrin repeats protein
DLLQK
615,3592
UPF0453 protein C12orf44 homolog
VGEKLCEK
904,4688
Glucosamine-fructoses-phosphate aminotransferase [isomerizing] 2
NIENVK
715,3864
Tax 1-binding protein 1 homolog
EIADKTEK
932,4814
Allergen Bos d 2
DKIVEGGPLR
1082,608
DCE1
ANFFR
653,3285
Beta-lactoglobulin
LSFNPTQLEEQCHI
1657,777
Alpha-S2-casein
LTEEEKNR
1017,509
Uncharacterized protein KIAA1539 homolog
KGYSVPK
777,4385
WDR12
MPLFK
650,3462
Uncharacterized potential
VYEDSGIPLPADSPK
1586,783
DNA-binding protein C17orf49 homolog
MYB
TPAIK
528,3271
WD repeat-containing protein 92
DISMNK
706,332
DNA-directed RNA polymerases I, II, and III subunitRPABCl
QSLVDMAPK
1003,501
LIGA
QLDIK
615,3592
Protein ariadne-1 homolog
VQDKYR
807,4239
Lethal(3)malignant brain tumor-like 2 protein
GYLMK
626,3098
Complement C4 (Fragments)
VLREDSR
873,4668
Protein FAM92A1
MKRDDLK
904,48
RNA-binding protein 5
EGSGLGRK
802,4297
Complement factor B
VGSQYR
708,3555
MARCKS-related protein
MGSQSSKAPR
1047,513
Acidic leucine-rich nuclear phosphoprotein 32 family member A
KLENLK
743,4541
Semaphorin-3C
ICPNDTGGLR
1101,524
cGMP-dependent 3',5'-cyclic phosphodiesterase
MLDLMR
809,3775
Alpha-1-syntrophin
MPILISK
816,4779
LysM and putative peptidoglycan-binding domain-containing protein 2
LDLQIK
728,4432
Chromodomain-helicase-DNA-binding protein 1-like 1
VDGSVRGEER
1102,537
Leucine-rich repeat-containing protein 41
KSEAK
561.3122
RAB6-interacting golgin
TQAETMKLK
1048,559
COX assembly mitochondrial protein homolog
TGIPTK
615,3592
Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase 1
AVNQDK
673,3395
XPO2
LLAVSK
633,4197
Sodium-driven chloride bicarbonate exchanger
EYGLSYLSLR
1201,623
Serum albumin
DAFLGSFLYEYSR
1566,735
TT23L
ASPIR
542,3176
Coiled-coil domain-containing protein 104
KDMKIK
761,4469
GTPIR
542,3176
E3 SUMO-protein ligase RanBP2 (Fragment) OS=Bos taurus GN=RANBP2 PE=2 SV=2
LVDTGR
659.3602
SDF2
EQVLK
615,3592
Flotillin-2
LKAEAYQK
949,5232
Myosin-Ic
SELSDK
677,3232
Glycosylation-dependent cell adhesion molecule 1
LPLSILKEK
1039,664
Cathelicidin-1
AVDQLNEQSSEPNIYR
1861,881
Alpha-1B-glycoprotein
VLSPAGPEAQFELR
1512,794
Alpha-1B-glycoprotein
SLLSELSDPVELRVAGS
1770,936
Ubiquitin-like domain-containing CTD phosphatase 1
DKELLK
744,4381
ERP27
QLDLK
615,3592
Leucine zipper putative tumor suppressor 2
LIPVSGKLEK
1082,67
RNA-binding protein 5
AAERREK
858,4671
Folate receptor alpha
FYAENPTSGSTPQGI
1567,715
Zinc-alpha-2-glycoprotein
RKWEAEAVYVQR
1533,805
Zinc-alpha-2-glycoprotein
SLTRPLTVPWDPRQQAE
1993,038
Zinc-alpha-2-glycoprotein
AEPLAPWSQVEGMEDWEKESALQR
2785,302
Zinc-alpha-2-glycoprotein
RAEPLAPWSQVEGMEDWEKESALQR
2941,403
1 -phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase beta-4 (Fragment)
IVAQYDK
835,444
Phosphatidylcholine transfer protein
SGVIRVK
757,481
Glycosylation-dependent cell adhesion molecule 1
SLFSHAFEVVKT
1363,714
LETM1 domain-containing protein 1
ALQMKALCR
1048,552
Polymeric immunoglobulin receptor
AQDFQGR
820,3828
Polymeric immunoglobulin receptor
KAQDFQGR
948,4777
Serum albumin
IETMREK
905,464
Serum albumin
FKDLGEEHFK
1248,614
Serum albumin
LSQKFPKAEFVEVTKLVTDLTK
2520,42
Guanine nucleotide-binding protein G(I)/G(S)/G(O) subunit gamma-11
GSCIIS
578,2734
Dynamin-l-like protein
KEAADMLK
920,4637
UPF0609 protein C4orf27 homolog
MVGGGAKR
790,412
Alpha-1-acid glycoprotein
HAEDKLITR
1081,588
Monoacylglycerol lipase ABHD6
ELQESAAVEK
1102,551
KTEL motif-containing protein 1
MMAEVVRR
990,5103
Calcium-transporting ATPase type 2C member 1
YLSMLR
797,4105
Drebrin-like protein SV=1
LKSPFLQK
959,5804
Uncharacterized protein C14orf38 homolog
KVKQELK
871,5491
Zinc-alpha-2-glycoprotein
KWEAEAVYVQR
1377,704
Beta-casein
INKKIEK
871,5491
GA-binding protein subunit beta-2
DMLKMTALHWATEHHHRDVVELLIK
3022,563
Aldehyde dehydrogenase family 3 member B1
IVMTAAAK
819,4524
Ropporin-1
ERSERVALSNWAELTPELLK
2340,244
Alpha-Si-casein
EKVNELSK
945,5131
RL10A
KLNKNKK
871,5603
Glycosylation-dependent cell adhesion molecule 1
SSRQPQSQNPK
1255,627
Nicotinate phosphoribosyltransferase
LIAGPDK
712,4119
CDKN2AIP N-terminal-like protein
MVGGEAAAAVEELISGVR
1757,898
28S ribosomal protein S34, mitochondrial
LIAELARRVR
1195,751
Dynein intermediate chain 1, axonemal
LLNLVREVK
1082,681
Protein kintoun
QMLDATALEAVEK
1417,712
39S ribosomal protein L47, mitochondrial
MAAASLAVFCR
1138,563
Brain acid soluble protein 1
DAQDTTKPEDK
1246,568
Histone-binding protein RBBP7
EGKIVDAK
858,4811
Nuclear factor 1B-type
GIPLESTDGER
1172,567
Beta-casein
EAMAPK
645,3156
3-oxoacyl-[acy1-carrier-protein] synthase, mitochondrial
VSPFFVPK
919,5168
Transforming growth factor-beta receptor-associated protein 1
RNIPK
626,3864
NADH dehydrogenase [ubiquinone] flavoprotein 3, mitochondrial
QSPPK
555,3017
UPF0534 protein C4orf43 homolog
LNLIGEK
785,4647
F-actin-capping protein subunit beta
DIVNGLR
785,4395
Melanocyte-stimulating hormone receptor
MPALGSQRR
1014,539
Protein argonaute-2
VKFTK
621,385
S-adenosylmethionine synthetase isoform type-1
RSGQLPWLQPDSK
1510,789
Zinc finger CCHC domain-containing protein 12
TSIIARMSNSR
1250,64
COQ5
LLSQEK
716,4068
Uroplakin-3-like protein
FLVMSDR
866,432
Folliculin
FTKVDSRPKEDTQK
1677,869
Trichohyalin-like protein 1
QLPTKK
713,4436
Protein FAM92B
LKDIQK
743,4541
UDP-glucose 6-dehydrogenase
IAILGFAFK
978,5902
Transmembrane and coiled-coil domain-containing protein C6orf 129 homolog
RSLEKEKSSLMNK
1564,824
General transcription factor II-I
ALQSPKRPR
1051,625
Kinetochore protein Spc25
KENLLK
743,4541
Coiled-coil domain-containing protein 105
HSWVNISR
997,5094
Sodium/potassium-transporting ATPase subunit alpha-2
AQDILAR
785,4395
GNAT2
EAKTVK
674,3963
Alpha-S2-casein
AMKPWIQPK
1097,606
Electron transfer flavoprotein subunit beta
LAEKEK
716,4068
ASAP1
KPFDK
633,3486
Fibroblast growth factor 5
LHASAK
625,3547
Sterol-4-alpha-carboxylate 3-dehydrogenase, decarboxylating
MKFMIGNGK
1040,515
CO038
KFDPK
633,3486
SELT
YPDIR
662,3388
Galactose-3-O-sulfotransferase 3
LQQATK
687,3915
Factor Xlla inhibitor
VYDPKG
677,3384
Zinc finger protein 350
SPQSSVVLQEK
1200,635
SUCB1
LQGTR
573,3235
GMFB
VFEIR
662,3752
Cleavage and polyadenylation specificity factor subunit 2
QVLLR
627,4068
Nucleotide exchange factor SIL1
LQQYR
706,3762
DNA nucleotidylexotransferase
KMGTTR
708,3589
Heat shock factor-binding protein 1
IDDMSSR
822,3542
Dynamin-1
DEMLR
678,3007
LisH domain-containing protein ARMC9
SMTYLK
741,3731
Uncharacterized protein KIAA1462 homolog
LDGAVPAPDPR
1106,572
DnaJ homolog subfamily C
NEFYK
699,3228
member 27
Calcyclin-binding protein
MQQKSQRK
1048,545
Leucine-rich repeat-containing protein 28
HKNLFLNYR
1203,651