СПОСОБЫ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ДОСТОВЕРНОГО ДОСТИЖЕНИЯ ПРИЕМЛЕМЫХ УРОВНЕЙ ТЕСТОСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ
METHOD AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR RELIABLE ACHIEVEMENT OF ACCEPTABLE LEVELS OF TESTOSTERONE IN SERUM

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к области науки о фармацевтических композициях, а также к области терапевтического применения гормонов в заместительной гормональной терапии мужчин и мужской контрацепции. В частности, изобретение относится к композициям сложных эфиров тестостерона в касторовом масле, которые после внутримышечной инъекции обеспечивают достоверные физиологически приемлемые уровни тестостерона в сыворотке в течение продолжительного периода времени.
Предпосылки создания изобретения
В течение нескольких десятилетий препараты тестостерона применяли в клинических условиях для лечения первичного и вторичного мужского гипогонадизма с целью достижения нормальных физиологических уровней тестостерона и облегчения симптомов дефицита андрогена. Кроме того, препараты тестостерона применяли в мужской контрацепции в качестве единственного терапевтического действующего вещества для подавления сперматогенеза, а также в качестве действующего вещества в сочетании с прогестинами или иными подавляющими гонадотропин агентами.
Мужской гипогонадизм характеризуется дефицитом производства эндогенного тестостерона, что приводит к аномально низким уровням тестостерона в кровотоке, т.е. уровням тестостерона в сыворотке ниже 10 нмолей/л.
Мужской гипогонадизм можно подразделять на первичный и вторичный:
первичный или гипергонадотропный гипогонадизм, врожденный или приобретенный, может быть обусловлен нарушением тестикулярной функции вследствие крипторхидизма, билатерального тестикулярного перекрута, орхита, орхидэктомии, синдрома Кляйнфелтера, химиотерапии или токсического повреждения, обусловленного алкоголем или тяжелыми металлами; вторичный или гипогонадотропный гипогонадизм, врожденный или приобретенный, вызывается идиопатическим дефицитом гонадотропин-рилизинг-гормона (ГРГ) или повреждением гипофиза-гипоталамуса, обусловленным опухолями, травмой или облучением. В преобладающем большинстве случаев гипогонадизм связан с первичным дефектом яичек.
Клиническая картина гипогонадизма у взрослого мужчины может сильно варьироваться. Например, дефицит тестостерона сопровождается симптомами различной тяжести, к которым относятся нарушение половой функции, снижение мышечной массы и мышечной силы, состояние депрессии и остеопороз.
Целью современных стандартных терапевтических методов лечения является восстановление физиологически приемлемых уровней тестостерона в сыворотке, которые соответствуют концентрациям от примерно 12 до примерно 36 нмолей. До сих пор стандартная заместительная тестостероновая терапия в большинстве стран во всем мире заключается во внутримышечной инъекции сложных эфиров тестостерона, таких как энантат тестостерона или ципионат тестостерона, которую осуществляют два-три раза в неделю. Помимо неудобства, связанного с частыми посещениями кабинета врача, пациенты жалуются на изменения самочувствия вследствие кратковременных флуктуации уровней тестостерона в сыворотке, обусловленных фармакокинетическим профилем, после внутримышечной инъекции, например, энантата тестостерона.
В настоящее время повысился интерес к применению сложных эфиров тестостерона с более длинной алифатической цепью и/или более высокой - гидрофобностью, таких как ундеканоат тестостерона, что позволяет увеличивать интервал времени между инъекциями. Более продолжительные интервалы времени между инъекциями являются предпочтительными для пациента.
Например, Zhang G. и др., 1998, опубликовали данные о инъекции композиции, содержащей ундеканоат тестостерона в концентрации 250 мг в 2 мл масла чайного дерева, которая позволяла вводить дозу ундеканоата тестостерона, составляющую 500 или 1000 мг (Zhang G. и др., A pharmacokinetic study ofinjectable testosterone undecanoate in hypogonadal men, J. Andrology, 19(6), 1998). В работе Zhang и др., 1999, рассматривается вводимый путем инъекции ундеканоат тестостерона в качестве возможного средства мужской контрацепции (Zhang и др., J din Endocrin & metabolism, 84(10), 1999, сс.3642-3646).
Кроме того, в работе Behre и др., 1999, описаны препараты ундеканоата тестостерона для заместительной тестостероновой терапии, представляющие собой ундеканоат тестостерона в масле чайного дерева с концентрацией 125 мг/мл и ундеканоат тестостерона в касторовом масле с концентрацией 250 мг/мл (Behre и др.. Intramuscular injection of testosterone undecanoate for the treatment of male hypogonadism: phase I studies. European J endocrin, 140, 1999, сс.414-419).
Для мужской контрацепции предложены ежемесячные внутримышечные инъекции 250 мг ундеканоата тестостерона и 200 мг медроксипрогестерона ацетата (МПА) (Chen Zhao-dian и др., clinical study of testosterone undecanoate compound on male contraception, J Clin androl, 1, изд.1, 1986, реферат).
Wang Lie-zhen и др. опубликовали данные о заместительной тестостероновой терапии с использованием ежемесячных внутримышечных инъекций 250 мг ундеканоата тестостерона (Wang Lie-zhen и др. The therapeutic effect of domestically produced testosterone undecanoate in Klinefelt syndrome New Drugs Market 8, 1991, сс.28-32).
В WO 95/12383 (китайская заявка на патент) описаны предназначенные для инъекции композиции ундеканоата тестостерона в растительных маслах, необязательно в смеси с бензилбензоатом. При использовании для мужской контрацепции и в заместительной терапии композиции инъецируют ежемесячно.
В US 4212863 описана липидная композиция стероидов для орального или парентерального введения на основе различных масляных носителей, необязательно включающая бензилбензоат, который, как указано, снижает вязкость липидного носителя и/или повышает растворимость.
В работе Eckardstein и Niesclag, 2002, опубликованы данные о лечении страдающего гипогонадизмом мужчины с помощью ундеканоата тестостерона, где указано, что можно достигать физиологически приемлемых уровней тестостерона в течение продолжительного периода времени с помощью четырех инъекций ундеканоата тестостерона с 6-недельными интервалами при начале лечения и последующих инъекций через более продолжительные интервалы времени (Eckardstein and Niesclag, treatment of male hypogonadism with testosterone undecanoate injected at extended intervals of 12 weeks, J Andrology, 23(3), 2002).
Однако широко известно, что терапевтические методы лечения с использованием сложных эфиров тестостерона, таких как ундеканоат тестостерона, все еще требуют совершенствования с точки зрения обеспечения достоверных уровней тестостерона в сыворотке, находящихся в физиологически приемлемом диапазоне, в течение продолжительного периода времени. Существует необходимость разработки достоверных стандартных режимов, приемлемых для широкой популяции мужчин, нуждающихся в этом, предпочтительно режимов, не требующих периодического контроля уровней тестостерона в сыворотке, и режимов, при которых стационарные состояния достигаются в течение более короткого периода времени.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к инъецируемым композициям, содержащим обладающие продолжительным действием сложные эфиры тестостерона, которые предназначены для применения в заместительной тестостероновой терапии. После введения композиции путем инъекции физиологически нормальные уровни тестостерона в сыворотке достигаются в течение короткого периода времени. Кроме того, физиологически нормальные уровни тестостерона в сыворотке поддерживаются в течение продолжительного периода времени, при этом отсутствуют флуктуации в диапазоне концентраций, характерном для гипогонадизма. Композиции в течение продолжительного периода времени являются стабильными с точки зрения химических характеристик сложного эфира тестостерона, а также стабильными с точки зрения физических характеристик носителя.
9
16
Таким образом, первым объектом настоящего изобретения является композиция, предназначенная для введения путем инъекции, например путем внутримышечных инъекций, которая содержит сложный эфир тестостерона, выбранный из группы сложных эфиров, включающей линейные и разветвленные С-С-алканоаты, предпочтительно ундеканоат тестостерона; и носитель, содержащий касторовое масло и сорастворитель.
9
16
Далее вторым объектом настоящего изобретения является способ лечения заболеваний и симптомов, связанных с дефицитом эндогенных уровней тестостерона у человека. К ним относятся, например, способы лечения первичного и вторичного гипогонадизма; связанных с гипофизом заболеваний; симптомов нарушения половой функции; симптомов снижения мышечной массы и мышечной силы; симптомов депрессивного состояния; или симптомов остеопороза. Способ заключается в том, что путем инъекции вводят сложный эфир тестостерона, выбранный из группы сложных эфиров, включающей линейные и разветвленные С-С-алканоаты, такой как ундеканоат тестостерона, согласно конкретной схеме, предусматривающей:
I) начальную фазу, на которой вводят путем инъекции 2-4 дозы указанного сложного эфира тестостерона с интервалом 4-8 недель между каждыми введениями, причем каждая доза представляет собой количество, терапевтически эквивалентное дозе ундеканоата тестостерона от 500 до 2000 мг; и затем
II) поддерживающую фазу, на которой последовательно вводят путем инъекции дозы указанного сложного эфира тестостерона с интервалом по меньшей мере 9 недель между каждыми последовательными введениями, причем каждая доза представляет собой количество, терапевтически эквивалентное дозе ундеканоата тестостерона от 500 до 2000 мг.
Другие объекты изобретения относятся к применению указанных выше композиций для мужской контрацепции.
9
16
Следующие объекты изобретения относятся к применению сложного эфира тестостерона, выбранного из группы сложных эфиров, включающей линейные и разветвленные С-С-алканоаты, для приготовления лекарственных средств в форме для парентерального введения, такой как форма для внутримышечной инъекции, и которые дополнительно включают носитель, содержащий касторовое масло и сорастворитель. Указанные лекарственные средства предназначены прежде всего для лечения первичного и вторичного гипогонадизма у особи мужского пола, для лечения заболеваний и симптомов, связанных с недостаточными уровнями тестостерона у особи мужского пола, подвергающейся лечению прогестином или другим подавляющим гонадотропин агентом.
Подробное описание изобретения
В настоящем изобретении разработаны стандартные способы, обеспечивающие улучшенные фармакокинетические профили тестостерона in vivo. После начала лечения с помощью препаратов тестостерона, предлагаемых в изобретении, быстро достигаются физиологически нормальные уровни тестостерона в сыворотке и достоверные уровни тестостерона в сыворотке, находящиеся в нормальном физиологическом диапазоне, поддерживаются в течение продолжительного периода времени. Преимуществом представленных в настоящем описании стандартных способов является то, что они позволяют использовать существенно более продолжительные интервалы времени между инъекциями, причем не требуется обязательного контроля уровней тестостерона в сыворотке.
Стандартный способ, предлагаемый в изобретении, предусматривает объединение пригодной лекарственной формы композиции, содержащей слабо расщепляющиеся сложные эфиры тестостерона, такие как ундеканоат тестостерона, и пригодной схемы введения путем инъекции строго определенных доз таких сложных эфиров тестостерона.
Не вдаваясь в конкретную теорию, можно считать, что фармакокинетический профиль сложного эфира тестостерона, вводимого внутримышечно, особенно в том случае, когда требуется обеспечивать эффект депо, зависит от многих параметров. Эффект депо можно обеспечивать, как правило, путем выбора сложного эфира тестостерона, который при попадании в кровоток медленно расщепляется с высвобождением свободного тестостерона. Дополнительным фактором, оказывающим влияние на эффект депо, является скорость диффузии сложного эфира тестостерона из места инъекции в систему кровотока. Скорость диффузии может зависеть от инъецированной дозы и объема, поскольку предполагается, что градиент концентрации сложного эфира тестостерона в месте введения оказывает влияние на скорость диффузии. Кроме того, тип носителя, инъецируемого вместе со сложными эфирами тестостерона, должен оказывать влияние на скорость диффузии сложных эфиров тестостерона из носителя в окружающие ткани и на скорость абсорбции в кровоток. Следовательно, для обеспечения эффекта депо после внутримышечной инъекции сложных эфиров тестостерона следует учитывать коэффициент распределения (коэффициент распределения в системе н-октанол - вода) сложного эфира тестостерона в носителе, а также вязкость носителя.
Кроме того, для обеспечения безопасности и простоты обработки сложный эфир тестостерона должен быть соответствующим образом растворен в носителе. Часто оказывается невозможно предсказать тип носителей, в которых может растворяться сложный эфир тестостерона и которые обеспечивают требуемый эффект депо. Таким образом, может оказаться необходимым использовать смеси различных растворителей, хотя это нежелательно с точки зрения процесса изготовления.
При создании настоящего изобретения было установлено, что требуемый эффект депо in vivo для сложных эфиров тестостерона, таких как ундеканоат тестостерона, достигается при внутримышечной инъекции сложных эфиров тестостерона в носителе, содержащем касторовое масло и пригодный сорастворитель. Сорастворитель может снижать вязкость касторового масла и тем самым позволяет решать проблему, связанную с большой вязкостью касторового масла при инъекции. С другой стороны, сорастворитель может увеличивать скорость диффузии сложного эфира тестостерона, что приводит к менее выраженному эффекту депо после внутримышечной инъекции.
9
16
Таким образом, первым объектом изобретения является композиция, содержащая сложный эфир тестостерона, выбранный из из группы сложных эфиров, включающей линейные и разветвленные С-С-алканоаты, и носитель, содержащий касторовое масло и сорастворитель.
Композицию приготавливают в виде, пригодном для парентерального введения, предпочтительно введения путем внутримышечной инъекции.
9
16
Понятие "линейные и разветвленные С-С-алканоаты" обозначает алифатические сложные эфиры с длиной цепи от 9 до 16 атомов углерода. Это означает, что алифатические сложные эфиры содержат 9-16 атомов углерода.
Так, в приемлемых вариантах осуществления изобретения сложный эфир тестостерона выбирают из сложных эфиров, в которых сложноэфирная группа представляет собой нонканоат, деканоат, ундеканоат, додеканоат, тридеканоат, тетрадеканоат, пентадеканоат или гексадеканоат. Предпочтительно сложноэфирную группу следует вводить в 17β-положение молекулы тестостерона. В рассматриваемом в настоящем описании варианте осуществления изобретения сложный эфир тестостерона представляет собой ундеканоат тестостерона, т.е. сложный эфир тестостерона, несущий алифатическую боковую цепь в 17β-положении. Его химическое название ундеканоат 17β-гидроксиандрост-4-ен-3-она.
Под понятие "касторовое масло" подпадает касторовое масло со степенью очистки, пригодной для парентерального применения, например, методом, описанным в DAB, согласно которому его получают путем первого отжима клещевины обыкновенной (Ricinus communis) без применения процессов экстракции, в результате чего касторовое масло находится в форме, не содержащей антиоксидантов. Следует также иметь в виду, что касторовое масло является негидрогенизированным или по меньшей мере частично негидрогенизированным. В некоторых вариантах осуществления изобретения небольшая часть двойных связей может быть гидрогенизирована, например может быть гидрогенизировано менее 20 мас.% двойных связей. Предпочтительно может быть гидрогенизировано менее 10 мас.% двойных связей, более предпочтительно гидрогенизировано менее 5 мас.%, еще более предпочтительно менее 2 мас.%, наиболее предпочтительно менее 1 мас.% двойных связей. Касторовое масло находится в жидкой форме при комнатной температуре.
Установлено, что присутствующий в носителе сорастворитель, по меньшей мере его часть, представляет собой необходимый элемент композиций, предлагаемых в изобретении. В целом такие сорастворители можно выявлять на основе их способности снижать вязкость касторового масла, что определяют с использованием вискозиметра Хепплера.
Инъекция обладающих высокой вязкостью носителей, таких как касторовое масло, связана с техническими ограничениями, касающимися размера канюли, вследствие сопротивления носителю при его прохождении через канюлю. Как правило рекомендуется, чтобы вязкость инъецируемого раствора составляла менее 100 мПа. В определенных случаях вязкость конечного продукта, готового для инъекции, такого как восстановленный продукт, может составлять при комнатной температуре, например, менее 100 мПа, например 90, 80, 70 мПа. В некоторых вариантах осуществления изобретения вязкость носителя может составлять при комнатной температуре менее 60, 50, 40 или 30 мПа.
Так, можно применять такие варианты осуществления изобретения, в которых сорастворитель выбран из сорастворителей, которые после смешивания с касторовым маслом в объемном соотношении масло: сорастворитель от 1:0,2 до 1:3 понижают вязкость от 950-1100 до 20 мПа при комнатной температуре. Предпочтительно сорастворитель выбран из сорастворителей, которые после смешивания с касторовым маслом в объемном соотношении масло: сорастворитель примерно от 1:1 до 1:3 понижают вязкость от 950-1100 до примерно 80-100 мПа. Вязкость носителя можно определять с помощью устройства типа вискозиметра Хепплера. Вискозиметр Хепплера состоит из наклонной стеклянной трубки, внутри которой сфера известной плотности, массы и диаметра плавно спускается в жидкости, вязкость которой требуется измерить, при этом регистрируют время падения шарика. Вязкость измеряют при фиксированной температуре, как правило при комнатной температуре, такой как 20 или 25°С. Измерения повторяют до тех пор, пока измеряемые величины не выйдут на постоянный уровень.
Сорастворитель можно характеризовать по его способности снижать вязкость носителя, такого как касторовое масло, в зависимости от соотношения растворителя и сорастворителя.
В одном из представляющих интерес вариантов осуществления изобретения вязкость смеси касторового масла и сорастворителя при изменении их объемного соотношения от 1:0,1 до 1:1,7 уменьшается от 60 до 5% по отношению к вязкости касторового масла.
В приемлемом варианте осуществления изобретения вязкость смеси касторового масла и сорастворителя, взятая в объемном соотношении 1:0,02, снижается примерно на 10% по отношению к вязкости касторового масла. В других вариантах осуществления изобретения, когда объемное соотношение масла и сорастворителя составляет 1:0,04, вязкость снижается на 20% по отношению к вязкости касторового масла, когда объемное соотношение составляет 1:0,08, вязкость снижается на 25%, когда объемное соотношение составляет 1:0,1, вязкость снижается на 40%, когда объемное соотношение составляет 1:0,2, вязкость снижается на 50%, когда объемное соотношение составляет 1:0,35, вязкость снижается на 75%, когда объемное соотношение составляет 1:0,5, вязкость снижается на 80%, когда объемное соотношение составляет 1:1, вязкость снижается на 90%, или когда объемное соотношение составляет 1:1,6, вязкость снижается на 95%.
В других представляющих интерес вариантах осуществления изобретения вязкость композиции составляет менее 100 мПа. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления изобретения вязкость носителя, такого как смесь касторового масла и сорастворителя, такого как бензилбензоат, при комнатной температуре (20-25°С) составляет менее 90 мПа, вязкость носителя составляет примерно 60-100, например 70-100, например 80-90 мПа.
Как отмечалось, вязкость инъецированного носителя может определять фармакокинетический профиль инъецированной субстанции. Так, для получения конечного продукта, характеризующегося приемлемым эффектом депо in vivo, объемное соотношение касторового масла и сорастворителя составляет от 1:0,2 до 1:3, например от 1:0,5 до 1:3, или от 1:0,75 до 1:2,5. Предпочтительно объемное соотношение составляет от 1:1 до 1:2.
В рассматриваемых в настоящем описании вариантах осуществления изобретения сорастворитель представляет собой бензилбензоат. В принципе, в комбинации с касторовым маслом можно применять другие типы сорастворителей, такие, например, как этанол или бензиловый спирт. Представляющими интерес сорастворителями, предлагаемыми в настоящем изобретении, являются сорастворители, которые обладают способностью растворять сложные эфиры тестостерона и смешиваются с касторовым маслом. Особый интерес представляют сорастворители, пригодные для растворения примерно 100-500 мг, например 250 мг ундеканоата тестостерона, в 1 мл сорастворителя в течение 50 мин при 40°С или в течение 20 мин при 60°С.
Растворимость сложных эфиров тестостерона можно изменять путем добавления сорастворителя к носителю, представляющему собой касторовое масло. По-видимому, растворимость можно улучшать. Так, в некоторых вариантах осуществления изобретения сложный эфир тестостерона полностью растворяется в композиции, а в других вариантах осуществления изобретения сложный эфир тестостерона частично диспергируется в композиции.
Предпочтительно сложные эфиры тестостерона полностью растворяются в носителе. Это означает, что при анализе с использованием дифракции рентгеновских лучей нельзя обнаружить никаких частиц тестостерона.
В настоящем изобретении предложены композиции, в которых сорастворитель присутствует в носителе в концентрациях от 10 до 90 об.%. Предпочтительно концентрация сорастворителя в носителе составляет от 15 до 85 об.%, более предпочтительно от 20 до 80, например от 45 до 85 или от 55 до 85 об.%.
Другими словами носитель содержит касторовое масло в объемной концентрации от 20 до 85 об.%. Предпочтительно концентрация касторового масла в носителе составляет от 25 до 60, например от 25 до 55 об.%. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения концентрация касторового масла в носителе составляет от 25 до 50, например от 25 до 45 или от 25 до 40 об.%.
Следует иметь в виду, что согласно изобретению композиция не должна содержать другое растительное масло, такое, например, как масло чайного дерева. Это означает, что касторовое масло является единственным растительным маслом, присутствующим в композиции, или что касторовое масло составляет по меньшей мере 50 об.% в пересчете на общее содержание растительного масла в носителе, например, по меньшей мере 60, 70, 80 или 90 об.%.
В целом считается, что требуемая концентрация сорастворителя зависит от многих факторов, таких как I) количество сложного эфира тестостерона в предназначенном для инъекции носителе, II) требуемое снижение вязкости и III) характеристики высвобождения сложного эфира тестостерона из предназначенного для инъекции носителя в месте инъекции (скорость диффузии). В представляющих интерес вариантах осуществления изобретения сорастворитель составляет по меньшей мере 10 об.% по отношению к носителю, предпочтительно по меньшей мере 15, более предпочтительно по меньшей мере 25, наиболее предпочтительно по меньшей мере 40, например по меньшей мере 50 об.%. Важно отметить, что количество сорастворителя составляет от примерно 40 до 80 об.% по отношению к носителю, например примерно от 50 до 70 об.%, наиболее предпочтительно количество сорастворителя составляет от примерно 55 до 65 об.% по отношению к носителю.
В некоторых вариантах осуществления изобретения концентрацию сорастворителя в носителе следует ограничивать для уменьшения скорости диффузии сложных эфиров тестостерона, например, в месте инъекции. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения концентрация сорастворителя в носителе должна составлять менее 90, предпочтительно менее 85, более предпочтительно менее 80, например менее 75 об.%.
Известно, что объем, который можно инъецировать внутримышечно, влияет на скорость высвобождения действующего вещества из носителя. Как правило считается, что максимальный инъецируемый объем, который можно вводить путем однократной внутримышечной инъекции в одно место инъекции, составляет 5 мл. Если требуется вводить путем внутримышечной инъекции объемы более 5 мл, то инъецируемый объем необходимо разделить на две или большее количество инъекций, которые осуществляют в разные места. Однако осуществление нескольких инъекций для введения одной дозы, как правило, является нежелательным вследствие неудобства, создаваемого пациенту.
Инъекция однократной дозы в одно место инъекции обладает большими преимуществами с точки зрения контроля скорости высвобождения действующего вещества по сравнению с несколькими инъекциями разделенных однократных доз. Настоящее изобретение относится к схемам инъекций, в которых однократную дозу сложного эфира тестостерона разделяют не более чем на две отдельные инъекции в одно или несколько мест инъекции. Наиболее предпочтительно однократную дозу сложного эфира тестостерона вводят путем однократной инъекции в одно место инъекции. Таким образом, в рассматриваемых в настоящем описании вариантах осуществления изобретения дозу сложных эфиров тестостерона вводят в виде однократной инъекции в одно место инъекции, причем инъецируемый объем составляет от 1 до 5, предпочтительно от 1 до 4, например от 1,5 до 4 мл. Приемлемые инъецируемые объемы, предлагаемые в изобретении, которые гарантируют воспроизводимые вводимые объемы и одинаковое высвобождение сложных эфиров тестостерона, составляют менее 5 мл, например примерно 5, примерно 4, примерно 3, примерно 2 и примерно 1 мл.
Для того чтобы применять однократные инъекции и небольшие инъецируемые объемы, концентрация сложных эфиров тестостерона в композициях должна быть относительно высокой. Так, концентрация сложного эфира тестостерона, такого как ундеканоат тестостерона, составляет от 100 до 1000 мг/мл носителя. Однако в других предпочтительных вариантах осуществления изобретения концентрация сложного эфира тестостерона, такого как ундеканоат тестостерона, составляет от 130 до 750 мг/мл носителя, более предпочтительно от 150 до 500, наиболее предпочтительно от 175 до 400, например, примерно 250 мг/мл носителя.
Композицию удобно приготавливать в виде стандартной дозы, такой как стандартная доза, предназначенная для инъекции в виде однократной дозы. В таких вариантах осуществления изобретения доза сложного эфира тестостерона, такого как ундеканоат тестостерона, составляет от 500 до 4000, предпочтительно от 500 до 3000, более предпочтительно от 750 до 2000, наиболее предпочтительно от 750 до 1500, например 1000 мг.
Кроме того, предполагается, что композиции, предлагаемые в изобретении, содержат другое терапевтическое действующее вещество, такое как прогестин и/или другой подавляющий гонадотропин агент, отличный от сложного эфира тестостерона.
В контексте настоящего описания понятие "прогестин" обозначает все соединения, обладающие прогестиновой активностью, такие как ципротерон, дроспиренон, этоногестрел, дезогестрел, гестоден, левоноргестрел, норэтистероны, норгестимат, норэтиндрон, норэтиндрона ацетат, норэтинодрел, норгестимат, норгестрел, медрогестон, медрогестерона ацетат и прогестерон.
Композиции, предлагаемые в изобретении, являются химически стабильными в отношении сложных эфиров тестостерона. Это означает, что после продолжительного хранения (например, в течение 7 недель или 17 недель, или даже более) в условиях, которые как правило ускоряют процессы разложения, например при изменениях температуры, высоких и низких температурах и различной относительной влажности, нельзя обнаружить продукты разложения. Например, после хранения композиции в течение по меньшей мере 7 недель, например в течение 16 или 17 недель, 6 месяцев или 9 или 12 месяцев, при 40°С и 25%-ной относительной влажности в темноте в ней присутствует менее 1 мас.% продуктов разложения сложных эфиров тестостерона. Предпочтительно после хранения в указанных выше условиях присутствует менее 0,5, например менее 0,2, мас.% продуктов разложения сложных эфиров тестостерона.
Кроме того, носитель, представляющий собой касторовое масло и бензилбензоат, также обладает высокой стабильностью, характеризующейся тем, что после хранения композиции в течение продолжительного периода времени при различных температурах нельзя обнаружить продукта сублимации раствора.
Композиции, предлагаемые в изобретении, можно получать известными специалистам методами.
На первом этапе получения композиции, предлагаемой в изобретении, осуществляют растворение сложного эфира тестостерона в сорастворителе. Затем раствор, содержащий ундеканоат тестостерона/сорастворитель, объединяют с касторовым маслом. Затем конечный раствор можно фильтровать через фильтр с размером отверстий 0,2 мкм, необязательно вносить, например, в пузырьки из желтого стекла, после чего окончательно стерилизовать при 180°С в течение 3 ч.
Следует отметить, что носитель, в котором растворяют сложный эфир тестостерона, может дополнительно содержать один или несколько эксципиентов, таких как консерванты, стабилизаторы, другие сорастворители и антиоксиданты. Приемлемые носители должны быть стерильными, апирогенными и не содержащими частиц.
Как указано выше, в настоящем изобретении предложена композиция сложных эфиров тестостерона, обладающая улучшенными фармакокинетическими профилями тестостерона в крови благодаря
- выбору соответствующего носителя для инъекции сложных эфиров тестостерона для того, чтобы гарантировать медленную диффузию сложных эфиров тестостерона из места инъекции и медленное расщепление сложного эфира тестостерона с высвобождением свободного тестостерона в кровоток, и
- выбору простой и достоверной схемы введения такой композиции для лечения заболеваний и симптомов, связанных с дефицитом эндогенных уровней тестостерона в организме мужчины.
9
16
Таким образом, следующим объектом изобретения является способ лечения заболеваний и симптомов, связанных с дефицитом эндогенных уровней тестостерона в организме особи мужского пола, такой как особь мужского пола млекопитающего, например мужчина, заключающийся в том, что вводят путем инъекции, такой как внутримышечная инъекция, сложный эфир тестостерона, выбранный из группы сложных эфиров, включающей линейные и разветвленные С-С-алканоаты, причем способ, кроме того, предусматривает:
I) начальную фазу, которая заключается во введении путем 2-4 инъекций однократной дозы указанного сложного эфира тестостерона с интервалом 4-8 недель между каждыми инъекциями, причем каждая доза представляет собой количество, терапевтически эквивалентное дозе ундеканоата тестостерона от 500 до 2000 мг; после которой следует
II) поддерживающая фаза, которая заключается в последовательном введении путем инъекции однократной дозы указанного сложного эфира тестостерона с интервалом по меньшей мере 9 недель между каждыми последовательными инъекциями, причем каждая доза представляет собой количество, терапевтически эквивалентное дозе ундеканоата тестостерона от 500 до 2000 мг.
Фраза "терапевтически эквивалентный" обозначает дозу любого сложного эфира тестостерона, предлагаемого в изобретении, в пересчете на соответствующую терапевтически приемлемую дозу ундеканоата тестостерона. Например, если установлено, что терапевтически пригодная доза ундеканоата тестостерона для восстановления уровней тестостерона в крови в диапазоне 12-35 нмолей составляет примерно 1000 мг, то доза любого сложного эфира тестостерона, предлагаемого в изобретении, представляет собой дозу, обеспечивающую такой же эффект, что и указанная доза ундеканоата тестостерона.
Понятие "вводимый путем инъекции" обозначает любую форму инъекции в мышечную ткань или подкожной инъекции. Предпочтительной формой инъекции является внутримышечная инъекция.
Предпочтительно начальная фаза включает 2 или 3 инъекции дозы указанного сложного эфира тестостерона, такого как ундеканоат тестостерона, с интервалом 4-8 недель между каждыми последовательными инъекциями. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения начальная фаза включает 2 инъекции однократной дозы указанного сложного эфира тестостерона с интервалом 4-10 недель между каждыми последовательными инъекциями. В рассматриваемых в настоящем описании вариантах осуществления изобретения интервал между инъекциями на начальной стадии составляет 6 недель.
9
16
Следующие объекты изобретения относятся к применению сложного эфира тестостерона, выбранного из группы сложных эфиров, включающей линейные и разветвленные С-С-алканоаты, для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения первичного и вторичного гипогонадизма у особи мужского пола, причем указанное лекарственное находится в форме, предназначенной для введения путем инъекции, и дополнительно включает носитель, содержащий касторовое масло и сорастворитель.
При создании настоящего изобретения было установлено, что после первого 6-недельного интервала времени между инъекциями (инъекция первой дозы и последующая инъекция второй дозы через 6 недель после первой инъекции) время до достижения стационарного состояния сокращается. Таким образом, поддерживающая фаза может начинаться уже после 6-недельной терапии. Кроме того, в настоящем описании представлены данные о том, что последующую инъекцию ундеканоата тестостерона можно осуществлять с интервалами 10 или 12 недель между инъекциями для достижения уровней тестостерона в сыворотке, остающихся целиком в нормальном диапазоне от 10 до 35 нмолей/л в течение всего периода времени между инъекциями. Это означает, что найдена схема, обеспечивающая достоверные уровни тестостерона в сыворотке, составляющие 10-35 нмолей/л.
Фармакокинетический профиль композиции, предлагаемой в изобретении, позволяет обеспечивать продолжительные периоды времени между инъекциями после того, как впервые достигается стационарное состояние. Так, в предпочтительных вариантах осуществления изобретения на поддерживающей фазе последовательные инъекции осуществляют с интервалом 10 недель между последовательными инъекциями, предпочтительно с интервалом 11 недель, например, с интервалами 12, 13, 14, 15 и 16 недель между последовательными инъекциями композиций, предлагаемых в изобретении.
Конкретная инъецируемая доза сложного эфира тестостерона также может изменять эффект депо композиций, предлагаемых в изобретении. Поэтому в приемлемых вариантах осуществления изобретения инъецированная однократная доза указанного сложного эфира тестостерона представляет собой количество, терапевтически эквивалентное однократной дозе ундеканоата тестостерона, составляющей от 750 до 1500 мг. Предпочтительно дозу, составляющую 1000 мг ундеканоата тестостерона, вводят путем инъекции в виде однократной дозы или любой терапевтически эквивалентной дозы другого ундеканоата тестостерона, предлагаемого в изобретении.
Следует иметь в виду, что указанные выше однократные дозы, такие как дозы, инъецируемые на начальной фазе, и дозы, инъецируемые на поддерживающей фазе, могут быть одинаковыми или разными. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения дозы, инъецируемые на начальной фазе, содержат одинаковые количества сложного эфира тестостерона. В других вариантах осуществления изобретения дозы, инъецируемые на начальной фазе, варьируются от одной инъекции к другой. Аналогично этому в некоторых вариантах осуществления изобретения дозы, инъецируемые на поддерживающей фазе, являются одинаковыми в течение рассматриваемого периода или они могут варьироваться. Очевидно, что дозы, применяемые на начальной фазе, могут отличаться от доз, применяемых на поддерживающей фазе. Однако предпочтительно, чтобы дозы сложных эфиров тестостерона, инъецируемые на начальной фазе и на поддерживающей фазе, содержали одно и то же количество сложного эфира тестостерона.
Как указано выше, изобретение относится к способу лечения заболеваний и симптомов, связанных с дефицитом эндогенных уровней тестостерона в организме особи мужского пола, такой как особь мужского пола млекопитающего, например мужчина. В контексте настоящего описания недостаточные уровни тестостерона в организме мужчины, такого как мужчина, страдающий гипогонадизмом, обозначают уровни тестостерона в сыворотке ниже 10 или 9 нмолей/л.
В одном варианте осуществления изобретения дефицит эндогенных уровней тестостерона может быть обусловлен лечением с использованием прогестинов или подавляющих гонадотропин агентов. Так, способы лечения дефицита эндогенных уровней тестостерона у мужчины могут включать способы осуществления мужской контрацепции. Поэтому в некоторых вариантах осуществления изобретения способы лечения и применения направлены на осуществление мужской контрацепции, если лечение необязательно предусматривает применение прогестина или другого подавляющего гонадотропин агента.
9
16
Таким образом, следующие объекты изобретения относятся к применению сложного эфира тестостерона, выбранного из группы сложных эфиров, включающей линейные и разветвленные С-С-алканоаты, для приготовления лекарственного средства для лечения заболеваний и симптомов, связанных с недостаточными уровнями тестостерона у особи мужского пола, подвергающегося лечению прогестином или другим подавляющим гонадотропин агентом, где указанное лекарственное средство находится в форме, предназначенной для инъекции, такой как форма для внутримышечной инъекции, и сложный эфир тестостерона, такой как ундеканоат тестостерона, присутствует в носителе, содержащем касторовое масло и сорастворитель.
В целом изобретение относится к применению представленной в настоящем описании композиции, которая предназначена для мужской контрацепции или для лечения заболеваний и симптомов, связанных с недостаточными уровнями тестостерона у особи мужского пола.
Заболевания и симптомы, связанные с недостаточными уровнями тестостерона у особи мужского пола, в целом могут включать нарушение половой функции, снижение мышечной массы и мышечной силы, состояние депрессии и/или остеопороз.
В целом к болезням, представляющим интерес, относятся первичный и вторичный гипогонадизм и заболевания гипофиза. Таким образом, некоторые варианты осуществления изобретения относятся к лечению заболеваний, связанных с первичным и вторичным гипогонадизмом, и заболеваний гипофиза. Первичный гипогонадизм может быть обусловлен нарушением тестикулярной функции вследствие крипторхидизма, билатерального тестикулярного перекрута, орхита, орхидэктомии, синдрома Кляйнфелтера, химиотерапии или токсического повреждения, обусловленного алкоголем или тяжелыми металлами. Вторичный гипогонадизм может вызываться идиопатическим дефицитом гонадотропин-рилизинг-гормона (ГРГ) или повреждением гипофиза-гипоталамуса, обусловленным опухолями, травмой или облучением.
Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения способ лечения и применения, предлагаемые в изобретении, относятся к страдающему гипогонадизмом мужчине, мужчине, страдающему заболеваниями гипофиза, и/или мужчине, подвергающемуся лечению подавляющими гонадотропин агентами или прогестинами.
Кроме того, как указано, однократную дозу сложного эфира тестостерона следует выбирать таким образом, чтобы достигать достоверных уровней тестостерона в сыворотке. Так, в одном из вариантов осуществления изобретения применение сложного эфира тестостерона для приготовления лекарственного средства подразумевается, что указанный сложный эфир тестостерона содержится в стандартной дозе в количестве, терапевтически эквивалентном дозе ундеканоата тестостерона, или что указанный сложный эфир тестостерона применяют в дозе, которая соответствует вводимой с интервалом 6 недель (6-недельной дозе) ундеканоата тестостерона, составляющей от 500 до 2000 мг. В некоторых вариантах осуществления изобретения доза соответствует 6-недельной дозе, составляющей от 500 до 2000 мг, 10-недельной дозе, составляющей от 500 до 2000 мг, 11-недельной дозе, составляющей от 500 до 2000 мг, 12-недельной дозе, составляющей от 500 до 2000 мг, 13-недельной дозе, составляющей от 500 до 2000 мг, 14-недельной дозе, составляющей от 500 до 2000 мг, 15-недельной дозе, составляющей от 500 до 2000 мг, и 16-недельной дозе, составляющей от 500 до 2000 мг ундеканоата тестостерона. Предпочтительно такие 6-, 9-, 10-, 11-, 12-, 13-, 14-, 15- и 16-недельные дозы сложного эфира тестостерона терапевтически эквивалентны дозе ундеканоата тестостерона, составляющей от 750 до 1500 мг, предпочтительно 1000 мг.
Кроме того, следует понимать, что представленные в настоящем описании способы лечения и применения включают варианты осуществления изобретения, в которых сложный эфир тестостерона, такой как ундеканоат тестостерона, присутствует в составе указанной в описании композиции.
Описание чертежей
На чертеже показаны:
Общие уровни тестостерона в сыворотке после инъекции ундеканоата тестостерона.
На чертеже показаны уровни тестостерона (общие количества) после инъекции композиции ундеканоата тестостерона в носителе, содержащем 4 мл смеси касторового масла и бензилбензоата в объемном соотношении 1:1,7. Схема инъекции описана в примере 3. Пунктирными линиями показана начальная фаза, включающая две инъекции 1000 мг ундеканоата тестостерона (УТ) с интервалом 6 недель и последующие 3 инъекции УТ с интервалом 10 недель между инъекциями. Сплошные линии соответствуют последующим инъекциям 1000 мг УТ с интервалом 12 недель между инъекциями.
Примеры
Пример 1
Композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, находятся в форме, предназначенной для внутримышечной инъекции, и их получают согласно методам, известным специалистам в данной области.
Композиции в целом приготавливают путем включения терапевтически эффективного количества любого сложного эфира тестостерона, предлагаемого в изобретении, такого как ундеканоат тестостерона, в соответствующий носитель, содержащий касторовое масло и сорастворитель, такой как бензилбензоат. Можно добавлять другие эксципиенты. В завершение композиции подвергают процессу стерилизации. Носитель, в котором растворяют действующее вещество, может содержать эксципиенты, такие как консерванты, стабилизаторы, сорастворители и антиоксиданты. Приемлемые носители должны быть стерильными, апирогенными и не содержащими частиц.
Композиции можно приготавливать в виде стандартных доз, находящихся, например, в ампулах или в контейнерах, содержащих несколько доз.
Согласно одному из вариантов осуществления изобретения композиции можно приготавливать, осуществляя следующие стадии:
I) предварительную стерилизацию эксципиентов и сложных эфиров тестостерона;
II) приготовление раствора сложных эфиров тестостерона;
III) добавление одного или нескольких эксципиентов к раствору сложных эфиров тестостерона;
IV) фильтрацию композиции;
V) приготовление/заполнение контейнеров, содержащих одну или несколько доз;
VI) стерилизацию.
В одном конкретном примере осуществления изобретения ундеканоат тестостерона растворяют в бензилбензоате, затем раствор ундеканоата тестостерона/сорастворителя объединяют с касторовым маслом, продукт фильтруют через фильтр с размером пор 0,2 мкм, вносят в пузырьки из желтого стекла и подвергают окончательной стерилизации при 180°С в течение 3 ч.
Пример 2
Терапевтическую эффективность и безопасность композиции, содержащей 1000 мг ундеканоата тестостерона в 4 мл носителя, представляющего собой смесь касторового масла и бензилбензоата в объемном соотношении 1:1,7, изучали на мужчинах, страдающих гипогонадизмом. Композицию (4 мл, 1000 мг ундеканоата тестостерона) вводили путем внутримышечной инъекции страдающим гипогонадизмом мужчинам согласно следующей схеме:
- начальная фаза включала 4 инъекции композиции с интервалом 6 недель между инъекциями;
- поддерживающая фаза включала осуществление инъекций композиции с интервалами 10 или 12 недель между инъекциями.
Рассматриваемый опыт представлял собой однонаправленное исследование эффективности и безопасности продолжительных внутримышечных инъекций ундеканоата тестостерона, применяемых для лечения симптомов гипогонадизма у мужчин. Пациентам осуществляли 4 инъекции по 1000 мг ундеканоата тестостерона, причем первые три инъекции осуществляли с интервалом 6 недель, а четвертую инъекцию и последующие инъекции осуществляли с 12-недельными интервалами.
Протокол:
Название действующего вещества:
Ундеканоат тестостерона (УТ)
Цели:
Для получения дополнительной информации о эффективности и безопасности препарата УТ после продолжительного введения в течение периода времени более 18 месяцев с удлиненными (12-недельными) интервалами между инъекциями 1000 мг УТ в 4 мл масляного раствора
Методология:
Открытое однонаправленное исследование с применением нескольких доз
Общее количество участников эксперимента:
плановое: 36
Название действующего вещества:
Ундеканоат тестостерона (УТ)
Диагноз и основные критерии для включения:
Страдающие гипогонадизмом мужчины возрастом от 18 до 65 лет и имеющие уровни Т (тестостерона) в сыворотке в отсутствие лечения андрогеном ниже 5 нмолей/л, которые правильно завершили основное исследование с завершающим обследованием, у которых не обнаружено никаких относящихся к делу патологических данных, и которые дали свое письменное согласие либо продолжить лечение с применением УТ после завершения исследования, либо перейти от лечения с применением ЭТ (энантат тестоетерона) на лечение с применением УТ
Тестируемый продукт:
Ундеканоат тестостерона (УТ)
Доза:
Для пациентов, принимающих УТ: 8×1000 мг с 12-недельными интервалами
Путь введения:
Внутримышечные инъекции (в мышцу gluteus medius (средняя ягодичная мышца))
Продолжительность лечения:
80 недель 84 недели
Критерии эффективности:
Основные параметры: эритропоэз (гемоглобин, гематокрит), сила сжатия; вторичные параметры: уровни в сыворотке тестостерона (Т), дигидротестостерона (ДГТ), эстрадиола (Э2), лютениизирующего гормона (ЛГ), фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), лептина и глобулина, связывающего половые гормоны (ПГСГ); плотность костной ткани; параметры костного метаболизма; конституция тела; уровень липидов (общего холестерина, триглицеридов, липопротеинов низкой плотности, высокой плотности и очень малой плотности, аполипопротеина А1 и В, липопротеина (а))
Критерии безопасности:
Побочные действия (ПД); уровни в сыворотке антигена предстательной железы (ПЖА); результаты ультразвукового обследования предстательной железы; гематологические параметры и параметры печени (ASAT (аспартатаминотрансфераза), ALAT (аланин-аминотрансфераза), гамма-ГТ (глутамилтранспептидаза), уровень общего билирубина), уровни ферритина, железа;
Результаты данного исследования позволяют сделать следующее заключение:
Лечение в течение года с использованием только 4 доз УТ по 1000, вводимых путем инъекций (i.m.) мг, оказалось достаточным для восстановления физиологических уровней Т в сыворотке у всех 36 пациентов в течение основной части периода наблюдения. Это свидетельствует о том, что интервал 12 недель между инъекциями позволяет получать адекватную реакцию у большинства пациентов.
Пример 3
Фармакокинетический профиль композиций, предлагаемых в изобретении Фармакокинетический профиль композиции, содержащей 1000 мг ундеканоата тестостерона (УТ) в 4 мл носителя, представляющего собой смесь касторового масла и бензилбензоата в объемном соотношении 1:1,7, тестировали на страдающих гипогонадизмом мужчинах (у которых уровни тестостерона в сыворотке составляли менее 10 нмолей/л). После начальной фазы, на которой осуществляли две первые внутримышечные инъекции по 1000 мг УТ с 6-недельным интервалом между двумя инъекциями, следовала поддерживающая фаза, на которой осуществляли 3 последовательные внутримышечные инъекции по 1000 мг УТ с интервалом 10 недель между каждыми инъекциями. Затем дозу 1000 мг ундеканоата тестостерона (УТ) вводили путем внутримышечной инъекции через каждые 12 недель. Осуществляли 5 периодов обработки с интервалом 12 недель между каждыми инъекциями.
Результаты этого исследования (см. чертеж) показывают, что схема лечения позволяла достигать уровней тестостерона (общие уровни), характеризующихся тем, что максимальные и минимальные уровни находились в физиологически приемлемом диапазоне и с течением времени не было обнаружено накопления тестостерона. Кроме того, минимальные уровни тестостерона (общие уровни) через 12 недель не опускались ниже наименьшей приемлемой концентрации тестостерона, составляющей примерно 10 нмолей. Путем экстраполяции уровней тестостерона в сыворотке установлено, что аналогичные результаты могут быть получены и для периода обработки, составляющего 14 недель. Результаты исследования свидетельствуют также о том, что инъекция 1000 мг УТ в виде указанной выше композиции, осуществляемая с интервалом 12 недель между инъекциями, была эффективной в течение периода, составляющего 14 недель.
Пример 4
Сравнение начальной фазы, предусматривающей 6-недельный интервал между инъекциями, и начальной фазы, предусматривающей 10-недельный интервал между инъекциями
Фармакокинетический профиль композиции, содержащей 1000 мг ундеканоата тестостерона (УТ) в 4 мл носителя, представляющего собой смесь касторового масла и бензилбензоата в объемном соотношении 1:1,7, тестировали на страдающих гипогонадизмом мужчинах с использованием двух различных режимов.
При осуществлении режима А после начальной фазы, на которой осуществляли первые две внутримышечные инъекции по 1000 мг УТ с интервалом между двумя инъекциями, составляющим в среднем 9,2 недели (64,4 дня), следовала поддерживающая фаза, на которой осуществляли последовательные внутримышечные инъекции по 1000 мг УТ, отделенная от второй инъекции интервалом времени, составляющим в среднем 10,2 недели (76,2 дня).
При осуществлении режима Б после начальной фазы, на которой осуществляли первые две внутримышечные инъекции по 1000 мг УТ с интервалом между двумя инъекциями, составляющим в среднем 6,1 недели (42,5 дня), следовала поддерживающая фаза, на которой осуществляли последовательные внутримышечные инъекции по 1000 мг УТ, отделенная от второй инъекции интервалом времени, составляющим в среднем 10,1 недели (70,5 дня).
Перед каждой последующей инъекцией УТ определяли концентрацию тестостерона (общую) в сыворотке.
Результаты
В приведенной ниже таблице представлено сравнение средних уровней тестостерона (общих) в сыворотке для режима А и режима Б, полученных на основе данных для 6 мужчин.
Средние уровни тестостерона (общие) в сыворотке в зависимости от количества недель между инъекциями
↓ 1-я инъекция
↓ 2-я инъекция
Режим
Исходное значение; средний уровень тестостерона (нмолей/л) перед 1-й инъекцией
Среднее количество недель после 1-й инъекции
Средний уровень тестостерона (нмолей/л) через указанное количество недель
Среднее количество недель после 2-й инъекции
Средний уровень тестостерона (нмолей/л) через указанное количество недель
А
7,9
9,2
7,0
10,8
8,8
В
6,8
6,1
12,2
10,1
12,5
По-видимому, режимы, предусматривающие продолжительные интервалы времени между инъекциями, как на начальной фазе, так и на поддерживающей фазе, не позволяют достигать достаточных уровней тестостерона, превышающих 10 нмолей, в течение всего периода времени вплоть до следующей инъекции (режим А). Однако при уменьшении интервала времени между инъекциями на начальной фазе до 6 недель достигается достоверный режим, при котором достаточные уровни тестостерона восстанавливаются очень быстро и сохраняются на уровне выше 10 нмолей/л.