КОНЪЮГИРОВАННАЯ ПОЛИМЕРНАЯ ЧАСТИЦА И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ

1. Способ конъюгирования подложки, предусматривающий:
обмен связанного с биомолекулой противоиона с липофильным противоионом с получением биомолекулярного комплекса;
диспергирование биомолекулярного комплекса в неводном растворителе и
связывание биомолекулярного комплекса с подложкой в присутствии неводного растворителя.
2. Способ по п. 1, в котором биомолекула представляет собой полинуклеотид.
3. Способ по любому из пп. 1-2, в котором липофильный противоион представляет собой липофильный ион аммония, липофильный ион фосфония, липофильный ион арсония, липофильный ион сульфония или их комбинацию.
4. Способ по п. 3, в котором липофильный ион аммония представляет собой тетраалкиламмоний, тетраариламмоний, смешанный алкил- и ариламмоний или их комбинацию.
5. Способ по п. 4, в котором липофильный ион аммония выбран из группы, состоящей из тетраметиламмония, тетраэтиламмония, тетрапропиламмония, тетрабутиламмония, тетрапентиламмония, тетрагексиламмония, тетрагептиламмония, тетраоктиламмония, их алкиловых и ариловых смесей и их комбинации.
6. Способ по п. 3, в котором липофильный ион фосфония представляет собой тетрафенилфосфоний.
7. Способ по п. 3, в котором липофильный ион арсония представляет собой тетраалкиларсоний, тетраариларсоний, ион смешанного алкил- и ариларсония или их комбинацию.
8. Способ по п. 7, в котором липофильный ион арсония представляет собой тетрафениларсоний.
9. Способ по п. 3, в котором липофильный ион сульфония представляет собой ион триалкилсульфония.
10. Способ по любому из пп. 1-2, 4-9, в котором неводный растворитель не вступает в реакцию со связывающими группами на подложке и биомолекуле.
11. Способ по любому из пп. 1-2, 4-9, в котором неводный растворитель является полярным.
12. Способ по любому из пп. 1-2, 4-9, в котором неводный растворитель представляет собой амид, мочевину, карбонат, простой эфир, сульфоксид, сульфон, стерически затрудненный спирт или их комбинацию.
13. Способ по п. 12, в котором амид или мочевина выбраны из группы, состоящей из формамида, N,N-диметилформамида, ацетамида, N,N-диметилацетамида, гексаметилфосфорамида, пирролидона, N-метилпирролидона, N,N,N′,N′-тетраметилмочевины, N,N′-диметил-N,N′-триметиленмочевины и их комбинации.
14. Способ по п. 12, в котором карбонат выбран из группы, состоящей из диметилкарбоната, пропиленкарбоната и их комбинации.
15. Способ по п. 12, в котором простой эфир представляет собой тетрагидрофуран.
16. Способ по п. 12, в котором сульфоксид или сульфон выбран из группы, состоящей из диметилсульфоксида, диметилсульфона и их комбинации.
17. Способ по п. 12, в котором стерически затрудненный спирт включает трет-бутиловый спирт.
18. Способ по любому из пп. 1-2, 4-9, 13-17, в котором подложка включает полимерную частицу.
19. Способ по п. 18, в котором полимерная частица включает связывающую группу, способную вступать в реакцию с реакционноспособной группой, содержащейся в биомолекуле.
20. Способ по п. 19, в котором связывающая группа включает один из нуклеофила или электрофила, а реакционноспособный партнер включает другой из нуклеофила или электрофила.
21. Способ конъюгирования полимерной частицы, предусматривающий:
обмен связанного с полинуклеотидом катионного противоиона с липофильным катионным противоионом с получением полинуклеотидного комплекса, причем полинуклеотид включает нуклеофильную или электрофильную реакционноспособную группу;
диспергирование полинуклеотидного комплекса в нереакционноспособном неводном растворителе и
связывание полинуклеотида с полимерной частицей посредством нуклеофильного или электрофильного замещения, причем полимерная частица включает электрофильную группу или нуклеофильную группу.
22. Полимерная частица, содержащая полимер, конъюгированный с полинуклеотидом при помощи способа по любому из пп. 1-21.
23. Способ секвенирования, предусматривающий:
амплификацию целевого полинуклеотида в присутствии конъюгированной с олигонуклеотидом полимерной частицы с получением конъюгированной с полинуклеотидом полимерной частицы, причем олигонуклеотид по меньшей мере частично комплементарен целевому полинуклеотиду, а конъюгированная с олигонуклеотидом полимерная частица получена при помощи способа по любому из пп. 1-21;
внесение конъюгированной с полинуклеотидом полимерной частицы в устройство для секвенирования;
внесение праймера к конъюгированной с полинуклеотидом полимерной частице;
встраивание нуклеотида и
детектирование встраивания.
24. Способ по п. 23, в котором детектирование включает детектирование изменения концентрации ионов, связанного со встраиванием нуклеотида.
25. Способ выделения целевого полинуклеотида, предусматривающий:
приведение первого раствора, включающего целевой полинуклеотид, в контакт с конъюгированной с зондом подложкой, причем зонд у конъюгированной с зондом подложки является по меньшей мере частично комплементарным целевому полинуклеотиду, а конъюгированная с зондом подложка получена при помощи способа по любому из пп. 1-21;
промывание конъюгированной с зондом подложки пока целевой полинуклеотид связан с зондом и
высвобождение целевого полинуклеотида во втором растворе.
26. Способ конъюгирования олигонуклеотида с полимером, предусматривающий:
обработку содержащего функциональную аминогруппу полимера сложным бис-NHS-эфиром или дисукцинимидилкарбонатом с получением функционализированного полимера и
обработку функционализированного полимера олигонуклеотидом с концевой аминогруппой с получением конъюгированного полимера, включающего олигонуклеотид.
27. Способ по п. 26, дополнительно предусматривающий:
обеспечение наличия исходного полимера, включающего гидроксильную функциональную группу;
обработку исходного полимера для замещения гидроксильной функциональной группы на галоген и
дополнительную обработку исходного полимера полиэфиром с защищенной концевой аминогруппой с получением полимера, содержащего функциональную аминогруппу.
28. Способ по п. 26 или 27, в котором полимер представлен в форме полимерной частицы.