Способы очистки вируса, продуцированного in vitro, и анализ элиминации вируса

1. Способ очистки вируса без оболочки или с псевдооболочкой, размножившегося в клеточной культуре, включающий стадию обработки образца, содержащего вирус без оболочки или с псевдооболочкой, детергентом.
2. Способ по п. 1, где вирус, размножившийся в клеточной культуре, представляет собой вирус гепатита Е (HEV).
3. Способ по п. 1, где вирус, размножившийся в клеточной культуре, представляет собой вирус гепатита A (HAV) или свиной парвовирус (PPV).
4. Способ по п. 1, где вирус продуцирован в клеточной культуре in vitro.
5. Способ по п. 4, где клеточная культура in vitro включает стабильную клеточную линию.
6. Способ по п. 5, где указанная стабильная клеточная линия выбрана из группы, состоящей из HepG2 (номер НВ-8065 в Американской коллекции типовых культур (АТСС)) и HepG2/C3A (номер CRL-10741 в АТСС).
7. Способ по п. 1, где детергент выбран из группы, состоящей из додецилсульфата лития, Тритона Х-100 и их смесей.
8. Способ по п. 7, где концентрация Тритона Х-100 составляет 0,5% и концентрация додецилсульфата лития составляет 0,1%.
9. Способ по п. 1, где стадию обработки осуществляют в течение 1 часа.
10. Способ по п. 1, где образец представляет собой супернатант, полученный в результате ультрацентрифугирования осветленной суспензии лизата клеток, инфицированных вирусом.
11. Способ по п. 1, где образец представляет собой концентрат, полученный в результате проточной фильтрации осветленной суспензии лизата клеток, инфицированных вирусом.
12. Способ измерения уровня вируса без оболочки или с псевдооболочкой в образце, включающий стадии:
а) внесения образца в смесь, содержащую клеточную линию и культуральную среду;
б) инкубирования для обеспечения размножения вируса без оболочки или с псевдооболочкой, в случае его присутствия в образце, с получением инкубированной порции;
в) обработки по меньшей мере одним детергентом с получением обработанной порции;
г) сбора части обработанной порции с получением собранной порции; и
д) измерения уровня вируса без оболочки или с псевдооболочкой в собранной порции.
13. Способ по п. 12, где указанный образец получен из млекопитающего.
14. Способ по п. 13, где указанный образец содержит плазму или кровь.
15. Способ по п. 12, где вирус без оболочки или с псевдооболочкой представляет собой HEV.
16. Способ по п. 12, где вирус без оболочки или с псевдооболочкой представляет собой HAV или PPV.
17. Способ по п. 12, где вирус размножается в клеточной культуре in vitro, включающей стабильную клеточную линию.
18. Способ по п. 12, где указанная клеточная линия выбрана из группы, состоящей из HepG2 (номер НВ-8065 в АТСС) и HepG2/C3A (номер CRL-10741 в АТСС).
19. Способ по п. 12, где указанный образец содержит первый концентрат, полученный посредством проточной фильтрации части инкубированной порции через мембрану.
20. Способ по п. 12, где указанный образец содержит первый супернатант, полученный посредством проточной фильтрации части инкубированной порции через мембрану с получением первого концентрата и центрифугирования указанного первого концентрата.
21. Способ по п. 12, где указанный образец обрабатывают по меньшей мере одним детергентом или смесью детергентов с получением первого раствора.
22. Способ по п. 21, дополнительно включающий:
а) получение первого осадка, получаемого путем центрифугирования первого раствора;
б) получение второго раствора, получаемого путем ресуспендирования первого осадка в фосфатно-буферном растворе (PBS);
в) получение третьего раствора, получаемого путем осветления второго раствора;
г) получение первого фильтрата, получаемого путем фильтрования третьего раствора с использованием мембраны; и
д) получение второго концентрата, получаемого путем ультрафильтрования первого фильтрата, где указанный второй концентрат содержит обработанную порцию.
23. Способ по п. 12, где измерение уровня вируса без оболочки или с псевдооболочкой включает выявление биологического вещества.
24. Способ по п. 23, где указанное биологическое вещество содержит полинуклеотидную последовательность и/или полипептидную последовательность вируса.
25. Способ по п. 24, где указанное биологическое вещество представляет собой рибонуклеиновую кислоту HEV.
26. Способ по п. 25, где измерение биологического вещества включает:
а) получение первой реакционной смеси, содержащей рибонуклеиновую кислоту HEV, получаемой путем смешивания части обработанной порции раствором для лизиса;
б) получение второй реакционной смеси, получаемой путем добавления первого реагента к первой реакционной смеси, где указанная вторая реакционная смесь содержит дезоксирибонуклеиновую кислоту, которая комплементарна рибонуклеиновой кислоте HEV;
в) добавление к указанной второй реакционной смеси второго реагента, который по меньшей мере частично комплементарен последовательности, находящейся в пределах указанной дезоксирибонуклеиновой кислоты;
г) добавление к указанной второй реакционной смеси третьего реагента, который по меньшей мере частично комплементарен последовательности, находящейся в пределах указанной дезоксирибонуклеиновой кислоты;
д) амплификацию последовательности, охватываемой указанными вторым и третьим реагентами в пределах указанной дезоксирибонуклеиновой кислоты; и
е) измерение концентрации амплифицированной последовательности.
27. Способ по п. 26, где указанный второй реагент и указанный третий реагент содержат олигонуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
а) 5'-CGGCTATCGGCCAGAAGTT-3' (SEQ ID NO: 1);
б) 5'-CCGTGGCTATAACTGTGGTCT-3' (SEQ ID NO: 2) и
в) 5'-FAM-TTTTTACGC-ZEN-AGGCTGCCAAGGCC-3IABkFQ-3' (SEQ ID NO: 3).