Разбавитель (среда) ВНИИГРЖ для хранения спермы жеребцов при 4-5оС
DILUTANT (MEDIUM) OF ALL-RUSSIAN RESEARCH INSTITUTE OF GENETICS AND BREEDING OF ANIMALS FOR STORAGE OF STALLIONS SPERM AT 4-5°C

Изобретение относится к коневодству. Может применяться в сфере искусственного осеменения лошадей.
Искусственное осеменение получило широкое распространение во многих странах как метод разведения домашних животных. При этом используется сперма, сохраненная путем замораживания или в специальных средах при плюсовых температурах. Лучшие результаты при искусственном осеменении лошадей получены при использовании охлажденной спермы. В настоящее время разработан ряд сред для разбавления и криоконсервации спермы жеребцов. При этом разные авторы отмечают значительные индивидуальная различия сохранности спермиев при использовании разбавителей различного состава и указывают на необходимость подбора наиболее оптимального разбавителя в каждом случае индивидуально [1, 2]. Поэтому возникла необходимость разработки наиболее оптимального разбавителя пригодного для разбавления и хранения спермы от разных производителей.
В качестве прототипа была выбрана среда ЛХЦЖ, имеющая наиболее близкий к заявляемому объекту изобретения состав компонентов и также используемая в хранении спермы жеребцов при плюсовых температурах. Основным недостатком среды ЛХЦЖ является небольшая продолжительность сохранения биологической полноценности спермы.
Задачей предлагаемого изобретения было существенное повышение биологической полноценности спермиев жеребцов при хранении при 4-5°C 72 ч и больше.
По итогам многочисленных экспериментов было установлено, что для решения этой задачи целесообразно в качестве защитного средства дополнительно ввести в состав прототипа-разбавителя сухое молоко и привести соотношение растворенных в дистиллированной воде компонентов до следующих диапазонов: сухое молоко - 4-7 г, лактоза - 4-7 г, двунатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (трилон Б, хелатон-3) - 0,1 г, натрий двууглекислый - 0,008 г, натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный - 0,089 г, желток куриных яиц 1,6-2 мл, гентамицин - 0,005 г.
Для проверки диапазонов содержания компонентов были испытаны 3 варианта новой среды, названной ВНИИГРЖ, в сравнении с прототипом, составы которых показаны в таблице 1.
Степень разбавления: 1 часть спермы и 2-3 части среды. Частота осеменения кобыл при хранении спермы при плюсовых температурах: один раз при контроле овуляции, или каждые 36 ч при достижении фолликула 35 мм.
В таблице 2 приведены результаты сравнительных испытаний различных вариантов среды после хранения спермы при 4-5°C в течение 96 ч. Хорошо видно, что объект изобретения имеет значительное преимущество перед прототипом по переживаемости и активности сперматозоидов, особенно заметное в варианте III. При хранении спермы, разбавленной в разрабатываемой среде, наблюдалась меньшее число поврежденных и набухших акросом по сравнению с прототипом. В табл. 3 приведены результаты оценки средней разницы между прототипом ЛХЦЖ и различных вариантов среды ВНИИГРЖ. Видно, что по всем исследуемым параметрам объект изобретения имеет преимущество перед прототипом.
Среду «ВНИИГРЖ» готовят следующим образом. В стерильную колбу добавляют сухое молоко, лактозу, двунатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (трилон Б, хелатон-3), натрий двууглекислый, натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный добавляют дистиллированной воды до 100 мл и кипятят. Затем охлаждают до 35-37°C и добавляют желток куриного яйца.
Технический результат предлагаемого изобретения заключается в существенном повышении длительности хранения спермы жеребцов при 4-5°C с сохранением пригодности к осеменению и с минимальными индивидуальными различиями.
Источники информации
1. Платонова Н.П., Никиткина Е.В. Влияние состава разбавителя на морфологические изменения спермиев жеребцов // Актуальные проблемы биологии воспроизводства //, ВИЖ, 2007, с. 473-476.
2. Aurich С, Seeber Р,  Comparison of different extenders with defined protein composition for storage ofstallion spermatozoa at 5 degrees // Reprod Domest Anim 2007 Aug; 42(4):445-8.