КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ ЧЕЛОВЕКА
COMPOSITION FOR IMPORVEMENT OF HUMAN REPRODUCTION

Изобретение относится к области фармакологии, в частности к биологически активным добавкам к пище, и может быть использовано для улучшения функционального состояния органов женской и мужской репродуктивной системы.
По статистике число бесплодных семейных пар устойчиво возрастает. По данным ВОЗ число бесплодных пар составляет около 17,5%. То есть, каждая 6-я супружеская пара имеет проблемы с зачатием в тот или иной период своего репродуктивного возраста (Сухих Г.Т., Божедомов В.А. Мужское бесплодие. М.: Эксмо, 2008. С. 239). Проблема бесплодия в паре рассматривалась урологами и гинекологами обособленно друг от друга. В связи с этим восстановление сперматогенеза у мужчин и возможность зачатия у их партнерш не всегда приводят к реализации репродуктивной функции (Вишневский А.С., Сафронникова Н.Р., Мельникова Н.Ю., Григорьева Т.А. Новые подходы к синдрому гиперпролактинемии. Журн. акуш. и жен. болезней 2000; 1(XLIX):39-4). Таким образом, проблему бесплодия в паре целесообразно решать совместно специалистам 2 смежных специальностей. Лечение обоих партнеров в бесплодной паре при наличии показаний и их информированность о том, что каждый проходит курс терапии, улучшающей их репродуктивные возможности, положительно сказывается на доверительных отношениях друг к другу и дополнительно мотивирует к реализации репродуктивной функции.
По известным литературным источникам - из L-аргинина образуется оксид азота, способствующий расширению сосудов, что приводит к улучшению кровообращения и насыщению тканей кислородом, тем самым улучшая состояние органов репродуктивной системы и повышает вероятность зачатия. (Eugenia Mata-Greenwood, and Dong-Bao Chen, Racial Differences in Nitric Oxide-Dependent Vasorelaxation // Reprod Sci. 2008 Jan; 15(1): 9-25).
Витекс (экстракт) стимулирует выработку прогестерона и одновременно снижает выделение пролактина, что улучшает имплантацию оплодотворенной яйцеклетки, и устраняет возможную причину ненаступления беременности (Brown DJ. 1995. Vitex agnus castus. Clinical Monograph. Townsend Letters for Doctors and Patients, October).
L-карнитин играет ключевую роль в метаболизме сперматозоидов, обеспечивая доступность энергии, используемой сперматозоидами для подвижности, созревания и процесса сперматогенеза. Благодаря этому он увеличивает количество и подвижность сперматозоидов, стимулирует их созревание (Lenzi A., Lombardo F. et al. Use of carnitine therapy in selected cases of male factor infertility: a double-blind crossover trial // Fertil. Steril. 2003 Feb; 79 (2): 292-300. PMID: 12568837), способствует уменьшению количества их атипичных (патологических) форм (Lenzi A.,  et al. A placebo-controlled double-blind randomized trial of the use of combined l-carnitine and l-acetyl-carnitine treatment in men with asthenozoospermia // Fertil. Steril. 2004 Jun; 81 (6): 1578-1584).
Фолиевая кислота в период подготовки к зачатию и во время беременности снижает риск преждевременного прерывания беременности, кровотечений, развития дефектов нервной трубки и других пороков развития у новорожденных (MRC VITAMIN STUDY RESEARCH GROUP Prevention of neural tube defects: Results of the Medical Research Council Vitamin Study // The Lance Volume 338, 20 July 1991, Pages 131-137). У мужчин прием фолиевой кислоты позволяет увеличить общее число сперматозоидов при одновременном уменьшении числа сперматозоидов с аномальной морфологией и сниженной подвижностью. Кроме того, в исследованиях на лабораторных животных и людях была продемонстрирована способность фолиевой кислоты уменьшать количество повреждений ДНК в половых клетках, а следовательно, и риск рождения детей с генетическими аномалиями (Swayne B.G., Kawata A., Behan N.A., Williams A., Wade M.G., Macfarlane A.J., Yauk C.L. Investigating the effects of dietary folic acid on sperm count, DNA damage and mutation in Balb/c mice // Mutat Res. 2012 Sep 1; 737(1-2):1-7. doi: 10.1016/j.mrfmmm.2012.07.002. Epub 2012 Jul 20; Ebisch I.M., Thomas С.М., Peters W.H., Braat D.D., Steegers-Theunissen R.P. The importance of folate, zinc and antioxidants in the pathogenesis and prevention of subfertility // Hum Reprod Update. 2007 Mar-Apr; 13(2): 163-74. Epub 2006 Nov 11).
Цинк является одним из самых важных элементов в период беременности. Он необходим для работы генетического аппарата, требуется для образования и развития ядра клетки, а также для роста и деления клеток. Цинк участвует в регуляции синтеза нуклеиновых кислот, белков, жиров и углеводов. Прием цинка помогает предупредить преждевременную отслойку плаценты, осложненные роды, врожденные пороки развития ребенка и другие проблемы. У мужчин цинк необходим для синтеза основного мужского гормона тестостерона и фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), которые отвечают за выработку спермы (Liu D.Y., Sie B.S. et al. Relationship between seminal plasma zinc concentration and spermatozoa-zona pellucida binding and the ZP-induced acrosome reaction in subfertile men // Asian J. Androl. 2009 Jul; 11 (4): 499-507. Epub 2009. May 11. PMID: 19434054; Jalali G.R., Roozbeh J. et al. Impact of oral zinc therapy on the level of sex hormones in male patients on hemodialysis // Ren. Fail. 2010 May; 32 (4): 417-419. PMID: 20446777).
Витамин E - улучшает насыщение тканей кислородом, необходим для метаболизма белков, жиров и углеводов. Не менее важна и антиоксидантная функция витамина Е, благодаря которой он защищает клетки от вредного воздействия свободных радикалов. При гиповитаминозе Е женщина постоянно ощущает нарастающую мышечную слабость, боли, возможен непроизвольный аборт. Нехватка витамина Е в организме матери может сказаться на недоношенных детях - у них возможны нарушения зрения и гемолитическая анемия. Витамин Е у мужчин повышает жизнеспособность сперматозоидов, увеличивает их подвижность и концентрацию, эффективен при астенозооспермии и олигоастенозооспермии (Kobori Y., Ota S., Sato R., Yagi H., Soh S., Arai G., Okada H. Antioxidant cosupplementation therapy with vitamin C, vitamin E, and coenzyme Q10 in patients with oligoasthenozoospermia. // Arch Ital Urol Androl. 2014 Mar 28; 86(1):1-4. doi: 10.4081/aiua.2014.1.1).
Витамин C - поддерживает синтез коллагена (основного соединительного элемента стенок сосудов и костной ткани), принимает участие в метаболизме холестерина, процессах углеводного обмена и многих важных биохимических реакциях. Также витамин C укрепляет капилляры и обладает противовоспалительными свойствами. Дефицит витамина C может привести к преждевременному разрыву плодных оболочек.
Селен - входит в состав большого количества ферментов, в том числе повышающих фертильность (способность к зачатию). Дефицит селена может приводить к нарушению гормонального баланса, усилению токсического действия тяжелых металлов. Селен необходим для работы половой системы, является активным антиоксидантом, особенно, если поступает в организм одновременно с витамином E. Селен повышает подвижность сперматозоидов и способствует увеличению их количества. Недостаток селена приводит к ухудшению качества спермы и снижению либидо.
Йод - входит в состав важнейшего гормона тироксина, который активно взаимодействует с гипофизом и половыми гормонами. Недостаток йода в организме женщины приводит к снижению фертильности и эмоциональной заторможенности. Нехватка этого микроэлемента во время беременности является причиной врожденных пороков плода.
Магний - регулирует более 300 биохимических процессов в организме, в том числе особенно интенсивно протекающие при беременности синтез белков и активацию аминокислот. Также магний обеспечивает передачу электрических сигналов между клетками. Недостаток магния часто встречается у женщин и особенно опасен во время беременности, так как может вызвать замедление роста плода, выкидыш, эклампсию (болезнь беременных, связанная с судорогами и высоким артериальным давлением).
Витамин B6 (пиридоксин) - необходим для синтеза аминокислот, из которых синтезируются белки - основной «строительный материал» для клеток нового организма. Также он обеспечивает нормальное развитие мозга и нервной системы ребенка. Кроме того, витамин В6 снижает раздражительность и агрессивность, уменьшает проявление токсикозов в первой половине беременности.
Витамин B2 (рибофлавин) - участвует в формировании и развитии плаценты и поэтому требуется на самой ранней стадии беременности (когда женщина может еще не знать о ней). Многие комбинированные оральные контрацептивы оказывают негативное влияние на обмен витамина B2, поэтому его прием полезен во время подготовки к зачатию.

Известен гомеопатический лекарственный препарат «Мастодинон» (производство Bionorica SE, Германии), который имеет следующие показания к применению: предменструальный синдром (мастодиния, напряженность молочных желез, психическая лабильность, запор, отеки, головная боль/мигрень); фиброзно-кистозная мастопатия; нарушения менструального цикла и/или бесплодие, вызванные недостаточностью желтого тела.
Основным недостатком препарата является то, что регуляция второй фазы менструального цикла, связанная со снижением содержания пролактина, обеспечивается - Vitex agnus castus (Agnus castus), остальные компоненты используются при нарушениях менструальной функции, лечении нервных расстройств, головных болей, лечении мигрени, повышенной раздражительности. А также не решает проблему оксидативного стресса и не восполняет недостаток витаминов и минералов, необходимых для подготовки женского организма к зачатию и сохранению беременности.

Известна биологически активная добавка к пище «Спермактин», (производство West Coast Laboratories Inc., США), содержащая L-карнитин, ацетил-L-карнитин и фруктозу. Рекомендуется для применения при ля коррекции олигоастенозооспермии III-IV стадии, при подготовке к применению репродуктивных технологий в терапии бесплодия (ЭКО, ПЭ, ИКСИ и др.), для улучшения качества спермы при донорстве и криоконсервации.
Основными недостатками данной добавки являются: отсутствие в составе антиоксидантов и фолиевой кислоты, что не позволяет уменьшать процессы повреждения клеточных структур и ДНК, не снижает риски рождения детей с генетическими аномалиями; наличие в составе фруктозы не повышает эффективности (за счет быстрого метаболизма фруктозы в печени) и может привести к появлению побочных эффектов (таких, как активация липогенеза и повышение веса, повышение риска формирования метаболического синдрома) (Kimber L. Stanhope, Jean-Marc Schwarz, and Peter J. Havel Adverse metabolic effects of dietary fructose: Results from recent epidemiological, clinical, and mechanistic studies // Curr Opin Lipidol. 2013 Jun; 24(3): 198-206.doi: 10.1097/MOL.0b013e3283613bca, PMCID: PMC4251462).

Другая биологически активная добавка «Андродоз» содержит в своем составе L-аргинин, L-карнитин, L-карнозин, коэнзим Q10, глицирризиновую кислоту, цинк, витамин Е, витамин А и селен.
Основными недостатками данной добавки являются: выпуск в форме капсул; наличие в составе компонента, негативно действующего на репродуктивную систему: L-карнозина (получены данные о потенциальной репродуктивной токсичности при исследовании на животных) и потенциально тератогенного витамина A (Health risks related to high intake of preformed retinol (vitamin A) in the Nordic countries).
Наиболее близкими к заявленным композициям является EP 1496747 А1 «Method and composition for improving fertility health in female and male animals and human». Данная биологически активная добавка для женщин представляет собой лекарственную форму - капсулы и содержит: траву витекса священного, антиоксиданты зеленого чая, витамин E, селен, L-аргинин, фолиевую кислоту, витамины B6, B12, железо, цинк и магний. Биологически активная добавка для мужчин представляет собой лекарственную форму - капсулы и содержит L-карнитин, фолиевую кислоту, витамин C и E, коэнзим Q10, селен, цинк, витамины группы B.
Общим недостатком данных композиции является использование лекарственно формы - капсулы, они неудобны в применении, что связано с трудностью их проглатывания пациентом, и медленным достижением максимальной концентрации лекарственных веществ в кровотоке, что связано с постепенным растворением оболочки капсулы.
Кроме того, важным недостатком EP 1496747 A1 (женской формулы), является наличие фармакокинетического взаимодействия между компонентами, так железо и цинк нарушают процесс усвоения друг друга, что приводит к изменению их биодоступности (Whittaker P. Iron and zinc interaction in humans. American Journal of Clinical Nutrition 1998; 68: 442S-446S). Также известно, что антиоксиданты зеленого чая представлены соединениями полифенольной структуры, которые при наличии железа связываются с ним в хелатные комплексы, которые не всасываются и соответственно не оказывают нужного фармакологического эффекта (Samman S., Sandstrom В., Toft JB., Bukhave K., Jensen M., Sorensen SS., Hansen M.: Green tea or rosemary extract added to foods reduces nonheme-iron absorption. Am J Clin Nutr 2001; 73:607-612). Также, достигшая системного кровотока часть компонентов экстракта зеленого чая может приводить к лекарственному поражению печени на фоне приема других фарм. препаратов. Проведенное в Америке масштабное исследование показало, что у 6,7% потребительниц экстракта зеленого чая (женщины в постменопаузе) повышается уровень АЛТ (аланинаминотрасферазы) - важного маркера повреждения печени. Причем в 1,3% это повышение имеет клиническую значимость (Dostal AM, Samavat Н, Bedell S, Torkelson С, Wang R, Swenson K, Le C, Wu AH, Ursin G, Yuan JM, Kurzer MS. The safety of green tea extract supplementation in postmenopausal women at risk for breast cancer: results of the Minnesota Green Tea Trial. Food Chem Toxicol. 2015 Sep; 83:26-35). Всего зафиксировано 34 случая лекарственного гепатита, с большой вероятностью спровоцированного приемом экстракта зеленого чая (для обоих полов). Два из них закончились смертельным исходом (Mazzanti G, Menniti-Ippolito F, Moro PA, Cassetti F, Raschetti R, Santuccio C, Mastrangelo S.Hepatotoxicity from green tea: a review of the literature and two unpublished cases. Eur J Clin Pharmacol. 2009 Apr; 65(4):331-41).
Важным недостатком EP 1496747 A1 (мужской формулы) является наличие в составе феруловой кислоты. Существует только одно in vitro исследование по феруловой кислоте, показавшее улучшение качества спермы при мужском бесплодии (Zheng RL, Zhang Н. Effects of ferulic acid on fertile and asthenozoospermic infertile human sperm motility, viability, lipid peroxidation, and cyclic nucleotides. // Free Radic Biol Med. 1997; 22(4):581-6). Таким образом, для включения феруловой кислоты в состав препарата нет клинических оснований. В модельном эксперименте показано существенное ухудшение почечной недостаточности, вызванное приемом феруловой кислоты (Peng СС, Hsieh CL, Wang НЕ, Chung JY, Chen KC, Peng RY. Ferulic acid is nephrodamaging while gallic acid is renal protective in long term treatment of chronic kidney disease. // Clin Nutr. 2012 Jun; 31(3):405-14). Нефротоксичность феруловой кислоты косвенно подтвердилась в другой работе. Прием феруловой кислоты модельными животными с сахарным диабетом либо просто ухудшал, либо даже провоцировал развитие рака почки (Hsieh CL, Peng СС, Cheng YM, Lin LY, Ker YB, Chang CH, Chen KC, Peng RY. Quercetin and ferulic acid aggravate renal carcinoma in long-term diabetic victims. // J Agric Food Chem. 2010 Aug 25; 58(16):9273-80). Неоднозначен эффект феруловой кислоты на половое поведение самцов. В модельном эксперименте самцы перепелок демонстрировали снижение копулятивной активности (de Man Е, Peeke HV. Dietary ferulic acid, biochanin A, and the inhibition of reproductive behavior in Japanese quail. // Pharmacol Biochem Behav. 1982 Sep; 17(3):405-11).
Кроме того, неблагоприятно на общем профиле эффективности сказывается применение аскорбиновой кислоты и цианкобаламина, которые при совместном применении взаимодействуют на этапе всасывания (витамин C снижает биодоступность цианокобаламина путем его окисления; кроме того, витамин C может привести к формированию инертной формы селена, что снижает его эффективность). Отсутствие в составе фолиевой кислоты не позволяет повысить эффективность антиоксидантов, входящих в состав композиции и снизить риски повреждений ДНК, что важно для профилактики рождения детей с различными генетическими аномалиями.
Настоящее изобретение направлено на устранение указанных недостатков и создание биологически активных добавок с учетом фармакокинетического взаимодействия компонентов, направленной на улучшение функционального состояния органов мужской и женской репродуктивной системы, с дополнительным эффектом гармонизации органолептического восприятия композиции.
Заявленный результат достигается тем, что биологически активная добавка, содержит следующие компоненты в лекарственной форме - саше.
Женская формула
1 саше массой 5,0 г содержит:
Активные вещества:
L-Аргинин - 777,75-1052,25 мг;
Магния цитрат - 433,44-593,40 мг, содержащего магния - 68,00-92,00 мг;
Аскорбиновая кислота (витамин C) - 76,50-103,50 мг;
Экстракт витекса священного (Vitex agnus-castus) - 34,00-46,00 мг, содержащего аукубин в количестве - 0,204-0,276 мг;
Цинка цитрат - 32,64-44,16, содержащего цинк - 10,2-13,8 мг;
Токоферола ацетат 50% - 25,50-34,50 мг, или витамина E - 12,75-17,25 мг;
Пиридоксина гидрохлорид (витамин B6) - 1,70-2,30 мг;
Рибофлавин (витамин B2) - 0,85-1,15 мг;
Фолиевая кислота (витамин B9) - 0,442-0,598 мг;
Калия йодат - 0,215-0,291 мг, содержащего йод - 0,127-0,173 мг;
Селенит натрия - 0,103-0,139 мг, содержащего селен - 0,047-0,063 мг.
Вспомогательное сырье:
Сахарная пудра - 2572,906 мг;
Лимонная кислота Е330 - 600,000 мг;
Кремния диоксид аморфный E551 - 125,000 мг;
Ароматизатор натуральный клюквенный - 50,000 мг;
Экстракт стевии - 11,800 мг;
Краситель E120 (содержание карминовой кислоты 50%) - 7,000 мг.
Мужская формула
1 саше массой 5,0 г содержит:
Активные вещества:
Карнитина тартрат - 937,13-1267,88 мг или L-карнитин - 637,5-862,50) мг;
Цинка сульфат - 78,54-106,26 мг, содержащего цинк - 17,85-24,15 мг;
Альфа-токоферола ацетат 50% - 51,00-69,00 мг или витамин E - 25,50-34,50 мг;
Фолиевая кислота (витамин В9) - 0,340-0,460 мг;
Селенит натрия - 0,130-0,176 мг, содержащего селен - 0,059-0,081 мг.
Вспомогательное сырье
Сахарная пудра - 3662,547 мг;
Ароматизатор «Апельсин» натуральный - 60,000 мг;
Экстракт стевии E960 - 12,000 мг;
Кремния диоксид аморфный E551 - 10,000 мг.
Заявленная композиция содержит активные компоненты в количестве необходимом для оказания необходимого терапевтического эффекта. Нами экспериментально было установлено, что именно при таком соотношение компонентов происходит усиление воздействия каждого из активных компонентов.
Заявляемая композиция обычно используется для улучшения репродуктивной функции человека следующим образом:
Соответствующую композицию (мужскую или женскую) принимают один раз в день во время еды, растворив содержимое саше-пакета в 200-300 мл воды. Курс проводят в течение одного месяца, при необходимости курс повторяется.
ПРИМЕРЫ РЕАЛИЗАЦИИ:
Пример 1
Улучшение микроциркуляции в органах репродуктивной системы. Опыты проведены на 30 крысах особей женского пола линии Wistar массой 200-220. В эксперимент были отобраны особи в фазу эструс, с одинаковой длительностью эстрального цикла. В ходе эксперимента было исследовано 3 группы животных (по десять животных в каждой группе):
1 группа - интактные животные, которые в течение 21 дня получали 1% крахмальный клейстер;
2 группа - группа животных, которые в течение 21 дня получали L-аргинин в дозе 200 мг/кг;
3 группа - контрольных животных, которые в течение 21 дня получали содержимое саше растворенное в 1% крахмальном клейстере.
О выраженности эффекта судили по уровню микроциркуляции в яичниках и матке на 22-ой день. Для этого под наркозом (хлоралгидрат, 300 мг/кг массы тела животного, внутрибрюшинно) животное фиксировали, проводили манипуляции для доступа к органам репродуктивной системы и при помощи лазер допплер флоуметра Biopac-systems МР-150 и датчика игольчатого типа TSD-144 (США), осуществляли регистрацию уровня микроциркуляции в яичниках и матке. Уровень микроциркуляции оценивали в десяти точках каждого из яичников и матки, из полученных значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в органе.
Группы экспериментальных животных и уровень микроциркуляции в органах представлены в таблице 1.
Уровень микроциркуляции в яичниках интактных крыс составил 162,4±22,1 п.е. (перфузионных единиц), в группе с L-аргинином 177,5±19,6 п.е., что достоверно не отличается от группы интактных животных. Уровень микроциркуляции в группе контроля составил 182,5±17,0 п.е., что достоверно выше значения в группе интактных животных (p<0,05).
Уровень микроциркуляции в матке интактных крыс составил 345,2±27,3 п.е., в группе с L-аргинином 364,4±23,8 п.е., что достоверно не отличается от группы интактных животных. Уровень микроциркуляции в группе контроля составил 399,7±22,2 п.е., что достоверно выше значения в группе интактных животных (p<0,05).
Полученные данные свидетельствую о синергическом действии компонентов композиции на уровень микроциркуляции в репродуктивной системе, так уровень микроциркуляции в группе животных получавших композицию возрастает в яичнике на 12,4%, в матке на 15,7% в сравнении с группой интактных животных, в то время как монокомпонент - L-аргинин увеличивает уровень микроциркуляции, достоверно не отличающийся от группы интактных животных.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о достоверном увеличении уровня микроциркуляции в репродуктивных органах крыс представленной композицией при системном введении.
Пример 2
Морфологическая оценка состояния фолликулярного аппарата яичников крыс. Опыты проведены на 30 крысах линии Wistar массой 200-220 г, взятых в фазу эструс. В ходе эксперимента было исследовано 3 группы животных:
1 группа - интактные животные, которые в течение 21 дня получали 1% крахмальный клейстер;
2 группа - группа животных, которые в течение 21 дня получали L-аргинин в дозе 200 мг/кг;
3 группа - контрольных животных, которые в течение 21 дня получали содержимое саше растворенное в 1% крахмальном клейстере.
После измерения уровня микроциркуляции (Пример 1) проводили забор органов для последующего морфологического исследования.
Для морфологических исследований правый яичник фиксировали в 10% растворе формалина. После фиксации материал полностью заливали в стандартном режиме в парафин. Срезы для стандартного гистологического исследования окрашивали гематоксилином и эозином. Описательное исследование гистологических препаратов выполняли под микроскопом Axio Scope A1 (Carl Zeiss Microimaging GMbH, Германия).
Проводили подсчет численной плотности примордиальных, первичных, вторичных, третичных и атретических фолликулов.
Группы экспериментальных животных и численность фолликулов представлены в таблице 2.
Количество третичных фолликулов у интактных крыс составило 5,2±1,9, в группе с L-аргинином 6,0±1,2, что достоверно не отличается от группы интактных животных. Количество третичных фолликулов в группе контроля составило 7,5±1,4, что достоверно выше значения в группе интактных животных (p<0,05).
Полученные данные свидетельствую о повышении уровня овариального резервы группы контрольных животных, получавших заявленную фармацевтическую композицию, и предполагает увеличение вероятности оплодотворения.
Пример 3
Изменение показателей спермограммы. Опыты проведены на 30 крысах-самцах линии Wistar половозрелого возраста массой 190-250 г. В ходе эксперимента было исследовано 3 группы животных:
1 группа - интактные животные, которые в течение 60 дней получали 1% крахмальный клейстер;
2 группа - группа животных, которые в течение 60 дней получали биологически активную добавку «Спермактин», растворенную в крахмальном клейстере в дозе 428 мг/кг содержимого саше;
3 группа - контрольных животных, которые в течение 60 дней получали исследуемую биологически активную добавку, растворенную в крахмальном клейстере в дозе 428 мг/кг содержимого саше.
На 61 день эксперимента животных выводили из эксперимента путем шейной дислокации. Левый семенник удаляли вместе с придатком. Каудальная часть придатка отделялась от яичка и разрывалась для сбора семенной жидкости на предметном стекле микроскопа.
Подвижность оценивалась сразу: семенная жидкость помещалась на предварительно подогретое предметное стекло, после чего к ней добавляли две капли теплого 2,9% цитрата натрия. Затем данное предметное стекло помещали в микроскоп с объективом 40x и рассчитывали подвижность в процентах (Raji et al., 2003).
Исследование жизнеспособности (процент живых сперматозоидов) было сделано с использованием эозин/нигрозинового красителя. Подвижные (живые) сперматозоиды не окрашиваются, в то время как неподвижные (умершие) сперматозоиды окрашиваются в вишнево-красный цвет. Подсчет производили с использованием микроскопа с 40 целей микроскопа и рассчитывали средний показатель жизнеспособности (Acharya et al., 2008).
Морфологию оценивали путем окрашивания мазков азур-эозином и последующим исследованием под микроскопом при масляной иммерсии. Были подсчитаны сперматозоиды с различными аномалиями (оценивались дефекты головки, шейки и средней части, хвоста) и процент рассчитывался в соответствии с методом, описанным Wyrobek и Bruce.
Количество сперматозоидов оценивалось с использованием камеры Горяева.
Группы экспериментальных животных и показатели спермограммы представлены в Таблице 3.
Результаты оценки морфологии сперматозоидов представлены в Таблице 4.
Таким образом, применение комплексной биологически активной добавки для мужчин достоверно улучшает показатели спермограммы: способствует повышению подвижности и жизнеспособности сперматозоидов и снижает число различных дефектов их строения. Это позволяет рекомендовать данную добавку для улучшения состояния репродуктивной системы у мужчин и повышения фертильности, в том числе, парах с бесплодием.