Белки, связывающие NKG2D, CD16 и опухолеассоциированный антиген

1. Белок, содержащий:
(a) первый антигенсвязывающий участок, который связывается с членом D группы 2 естественных киллеров (NKG2D);
(b) второй антигенсвязывающий участок, который связывается с антигеном, выбранным из группы, состоящей из EpCAM, антигена злокачественной опухоли 125 (CA125), натрий-фосфатного котранспортера 2B (NaPi2b), молекулы клеточной адгезии нектина-4 (Nectin4), фукозил-GM1 (моносиалотетрагексозилганглиозида), белка 8, содержащего домен дезинтегрина и металлопротеиназы (ADAM8), белка 9, содержащего домен дезинтегрина и металлопротеиназы (ADAM9), члена 4 семейства 44 растворимых переносчиков (SLC44A4), и сиалированного антигена Льюиса (CA19-9); и
(c) Fc-домен антитела или его часть, достаточная для связывания с кластером дифференцировки 16 (CD16), или третий антигенсвязывающий участок, который связывается с CD16.
2. Белок, содержащий:
(a) первый антигенсвязывающий участок, который связывается с NKG2D;
(b) второй антигенсвязывающий участок, который связывается с EpCAM; и
(c) Fc-домен антитела или его часть, достаточная для связывания с CD16, или третий антигенсвязывающий участок, который связывается с CD16.
3. Белок, содержащий:
(a) первый антигенсвязывающий участок, который связывается с NKG2D;
(b) второй антигенсвязывающий участок, который связывается с опухолеассоциированным антигеном, выбранным из антигена злокачественной опухоли 125 (CA125), натрий-фосфатного котранспортера 2B (NaPi2b), молекулы клеточной адгезии нектина-4 (Nectin4), фукозил-GM1 (моносиалотетрагексозилганглиозида), белка 8, содержащего домен дезинтегрина и металлопротеиназы (ADAM8), белка 9, содержащего домен дезинтегрина и металлопротеиназы (ADAM9), члена 4 семейства 44 растворимых переносчиков (SLC44A4), и сиалированного антигена Льюиса (CA19-9); и
(c) Fc-домен антитела или его часть, достаточная для связывания с CD16, или третий антигенсвязывающий участок, который связывается с CD16.
4. Белок, содержащий:
(a) первый антигенсвязывающий участок, который связывается с NKG2D;
(b) второй антигенсвязывающий участок, который связывается с опухолеассоциированным антигеном, выбранным из натрий-зависимого транспортного белка фосфата 2b (NaPi2b); и
(c) Fc-домен антитела или его часть, достаточная для связывания с CD16, или третий антигенсвязывающий участок, который связывается с CD16.
5. Белок, содержащий:
(a) первый антигенсвязывающий участок, который связывается с NKG2D;
(b) второй антигенсвязывающий участок, который связывается с опухолеассоциированным антигеном нектином-4; и
(c) Fc-домен антитела или его часть, достаточная для связывания с CD16, или третий антигенсвязывающий участок, который связывается с CD16.
6. Белок, содержащий:
(a) первый антигенсвязывающий участок, который связывается с NKG2D;
(b) второй антигенсвязывающий участок, который связываетсяс антигеном фукозил-GM1, ассоциированным с множественной миеломой,; и
(c) Fc-домен антитела или его часть, достаточная для связывания с CD16, или третий антигенсвязывающий участок, который связывается с CD16.
7. Белок, содержащий:
(a) первый антигенсвязывающий участок, который связывается с NKG2D;
(b) второй антигенсвязывающий участок который связывается с a T-клеточным опухолеассоциированным антигеном, выбранным из SLC44A4; и
(c) Fc-домен антитела или его часть, достаточная для связывания с CD16, или третий антигенсвязывающий участок, который связывается с CD16.
8. Белок по любому из пп. 1-7, где первый антигенсвязывающий участок связывается с NKG2D у людей, не являющихся человеком приматов, и грызунов.
9. Белок по любому из пп. 1-8, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи.
10. Белок по п. 9, где вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи присутствуют в одном полипептиде.
11. Белок по п. 9 или 10, где второй антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи.
12. Белок по п. 11, где вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка присутствуют в одном полипептиде.
13. Белок по п. 11 или 12, где вариабельный домен легкой цепи первого антигенсвязывающего участка имеет аминокислотную последовательность, идентичную аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи второго антигенсвязывающего участка.
14. Белок, содержащий:
(a) первый антигенсвязывающий участок, который связывается с NKG2D;
b) второй антигенсвязывающий участок, включающий одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), который связывается с EpCAM; и
(c) Fc-домен антитела или его часть, достаточная для связывания с CD16, или третий антигенсвязывающий участок, который связывается с CD16.
15. Белок по п. 14, где scFv связан с Fc-доменом антитела или с его частью, достаточной для связывания с CD16, или с третьим антигенсвязывающим участком, который связывается с CD16, через шарнир, включающий Ala-Ser или Gly-Ala-Ser, где scFv содержит вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи.
16. Белок по п. 15, где scFv связан с Fc-доменом антитела.
17. Белок по п. 14 или 15, где вариабельный домен тяжелой цепи scFv образует дисульфидный мостик с вариабельным доменом легкой цепи scFv.
18. Белок по п. 17, где дисульфидный мостик образован между C44 из вариабельного домена тяжелой цепи и C100 из вариабельного домена легкой цепи.
4
4
19. Белок по п. 18, где scFv связан с Fc-доменом антитела, где вариабельный домен легкой цепи scFv расположен у N-конца вариабельного домена тяжелой цепи scFv и связан с вариабельным доменом тяжелой цепи scFv через гибкий линкер (GlyGlyGlyGlySer) ((G4S)), и Fab связанй с Fc-доменом антитела.
20. Белок по любому из пп. 15-19, где вариабельный домен тяжелой цепи scFv связан с вариабельным доменом легкой цепи scFv через гибкий линкер.
4
4
21. Белок по п. 20, где гибкий линкер содержит (GlyGlyGlyGlySer) ((G4S)).
22. Белок по любому из пп. 15-21, где вариабельный домен тяжелой цепи scFv расположен у N-конца или C-конца вариабельного домена легкой цепи scFv.
23. Белок по п. 22, где вариабельный домен легкой цепи scFv расположен у N-конца вариабельного домена тяжелой цепи scFv.
24. Белок по любому из пп. 14-23, где Fab-фрагмент связан с Fc-доменом антитела или с его частью, достаточной для связывания с CD16, или с третьим антигенсвязывающим участком, который связывается с CD16.
25. Белок по п. 24, где часть тяжелой цепи Fab-фрагмента содержит вариабельный домен тяжелой цепи и CH1-домен, и где вариабельный домен тяжелой цепи связан с CH1-доменом.
26. Белок по п. 24 или 25, где Fab-фрагмент связан с Fc-доменом антитела.
27. Белок по любому из пп. 14-26, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO:208 и SEQ ID NO:209.
28. Белок по любому из пп. 15-27, содержащий scFv, связанный с Fc-доменом антитела, где scFv, связанный с Fc-доменом антитела, представлен последовательностью, выбранной из SEQ ID NO:210 и SEQ ID NO:211.
29. Белок по любому из пп. 15-27, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO:212 и SEQ ID NO:213.
30. Белок по любому из пп. 15-26, содержащий последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:210 и SEQ ID NO:211.
31. Белок по любому из пп. 15-26, содержащий последовательность, по меньшей мере, на 95% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:210 и SEQ ID NO:211.
32. Белок по любому из пп. 15-26, содержащий последовательность, по меньшей мере, на 99% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:210 и SEQ ID NO:211.
33. Белок по любому из пп. 15-32, содержащий последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:212 и SEQ ID NO:213.
34. Белок по любому из пп. 15-32, содержащий последовательность, по меньшей мере, на 95% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:212 и SEQ ID NO:213.
35. Белок по любому из пп. 15-32, содержащий последовательность, по меньшей мере, на 99% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:212 и SEQ ID NO:213.
36. Белок, содержащий:
(a) первый антигенсвязывающий участок, содержащий одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), который связывается с NKG2D;
(b) второй антигенсвязывающий участок, который связывается с EpCAM; и
(c) Fc-домен антитела или его часть, достаточная для связывания с CD16, или третий антигенсвязывающий участок, который связывается с CD16.
37. Белок по п. 36, дополнительно содержащий дополнительный антигенсвязывающий участок, который связывается с EpCAM.
38. Белок по п. 36 или 37, где второй антигенсвязывающий участок, который связывается с EpCAM, представляет собой Fab-фрагмент.
39. Белок по п. 37 или 38, где второй и дополнительный антигенсвязывающие участки, которые связываются с EpCAM, представляют собой Fab-фрагменты.
40. Белок по п. 36 или 37, где второй и дополнительный антигенсвязывающие участки, которые связываются с EpCAM, представляют собой scFv.
41. Белок по любому из пп. 36-40, где вариабельный домен тяжелой цепи scFv, который связывается с NKG2D, расположен у N-конца или C-конца вариабельного домена легкой цепи scFv.
42. Белок по п. 41, где вариабельный домен легкой цепи расположен у N-конца вариабельного домена тяжелой цепи scFv, который связывается с NKG2D.
43. Белок по любому из пп. 36-42, где scFv, который связывается с NKG2D, связан с Fc-доменом антитела или с его частью, достаточной для связывания с CD16, или с третьим антигенсвязывающим участком, который связывается с CD16.
44. Белок по п. 43, где scFv, который связывается с NKG2D, связан с Fc-доменом антитела или с его частью, достаточной для связывания с CD16, или с третьим антигенсвязывающим участком, который связывается с CD16, через шарнир, содержащий Ala-Ser или Gly-Ala-Ser.
45. Белок по п. 43, где scFv, который связывается с NKG2D, связан с C-концом Fc-домена антитела или с его частью, достаточной для связывания с CD16, или с третьим антигенсвязывающим участком, который связывается с CD16, через гибкий линкер, содержащий SGSGGGGS (SEQ ID NO: 207).
46. Белок по п. 45, где C-конец Fc-домена антитела связан с N-концом вариабельного домена легкой цепи scFv, который связывается с NKG2D.
47. Белок по любому из пп. 36-46, где в scFv, который связывается с NKG2D, образуется дисульфидный мостик между вариабельным доменом тяжелой цепи scFv и вариабельным доменом легкой цепи scFv.
48. Белок по п. 47, где дисульфидный мостик образуется между C44 из вариабельного домена тяжелой цепи и C100 из вариабельного домена легкой цепи.
49. Белок по любому из пп. 36-48, где в scFv, который связывается с NKG2D, вариабельный домен тяжелой цепи связан с вариабельным доменом легкой цепи через гибкий линкер.
4
4
50. Белок по п. 49, где гибкий линкер содержит (GlyGlyGlyGlySer) (G4S)).
51. Белок по любому из пп. 40-50, где второй и дополнительный антигенсвязывающие участки scFv связаны с Fc-доменом антитела или или с его частью, достаточной для связывания с CD16, или с третьим антигенсвязывающим участком, который связывается с CD16, через шарнир, содержащий Ala-Ser.
52. Белок по любому из пп. 40-51, где второй и дополнительный антигенсвязывающие участки scFv связаны с Fc-доменом антителачерез шарнир, содержащий Ala-Ser.
53. Белок по п. 51 или 52, где дисульфидный мостик образуется между вариабельным доменом тяжелой цепи и вариабельным доменом легкой цепи второго антигенсвязывающего участка и/или дополнительного антигенсвязывающего участка.
54. Белок по п. 53, где дисульфидный мостик образуется между C44 из вариабельного домена тяжелой цепи и C100 из вариабельного домена легкой цепи.
4
4
,
55. Белок по любому из пп. 36-54, где scFv, который связывается с NKG2D, содержит вариабельный домен легкой цепи, расположенный у N-конца вариабельного домена тяжелой цепи, где вариабельный домен легкой цепи связан с вариабельным доменом тяжелой цепи scFv через гибкий линкер (GlyGlyGlyGlySer) (G4S)), и scFv который связывается с NKG2D, связан с Fc-доменом антитела через шарнир содержащий Ala-Ser или Gly-Ala-Ser.
56. Белок, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:203.
57. Белок, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:203 и SEQ ID NO:204.
58. Белок, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:203.
59. Белок, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 95% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:203.
60. Белок, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:203.
61. Белок по любому из предшествующих пунктов, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:85, и SEQ ID NO:93.
62. Белок по любому из пп. 1-60, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:41, и вариабельный домен легкой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:42.
63. Белок по любому из пп. 1-60, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:49, и вариабельный домен легкой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:50.
64. Белок по любому из пп. 1-60, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:57, и вариабельный домен легкой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:58.
65. Белок по любому из пп. 1-60, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:59, и вариабельный домен легкой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:60.
66. Белок по любому из пп. 1-60, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:61, и вариабельный домен легкой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:62.
67. Белок по любому из пп. 1-60, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:69, и вариабельный домен легкой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:70.
68. Белок по любому из пп. 1-60, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:77, и вариабельный домен легкой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:78.
69. Белок по любому из пп. 1-60, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:85, и вариабельный домен легкой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:86.
70. Белок по любому из пп. 1-60, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:93, и вариабельный домен легкой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:94.
71. Белок по любому из пп. 1-60, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:101, и вариабельный домен легкой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:102.
72. Белок по любому из пп. 1-60, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:103, и вариабельный домен легкой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный SEQ ID NO:104.
73. Белок по любому из пп. 1-10, где первый антигенсвязывающий участок представляет собой однодоменное антитело.
H
NAR
74. Белок по п. 73, где однодоменное антитело представляет собой VH-фрагмент или V-фрагмент.
75. Белок по любому из пп. 1-10 или 73-74, где второй антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи.
76. Белок по п. 75, где вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка присутствуют в одном полипептиде.
77. Белок по любому из пп. 1, 2, или 61-72, где второй антигенсвязывающий участок связывает EpCAM, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:115, и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:119.
78. Белок по п. 77, где вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, включающую:
последовательность CDR1 тяжелой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:116;
последовательность CDR2 тяжелой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:117; и
последовательность CDR3 тяжелой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:118.
79. Белок по п. 78, где вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, включающую:
последовательность CDR1 легкой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:120;
последовательность CDR2 легкой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:121;
и последовательность CDR3 легкой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:122.
80. Белок по любому из пп. 1, 2, или 61-72, где второй антигенсвязывающий участок связывает EpCAM, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:123, и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:127.
81. Белок по п. 80, где вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, включающую:
последовательность CDR1 тяжелой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:124;
последовательность CDR2 тяжелой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:125; и
последовательность CDR3 тяжелой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:126.
82. Белок по п. 81, где вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, включающую:
последовательность CDR1 легкой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:128;
последовательность CDR2 легкой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:129; и
последовательность CDR3 легкой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:130.
83. Белок по любому из пп. 1, 2, или 61-72, где второй антигенсвязывающий участок связывает EpCAM, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:131, и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:135.
84. Белок по п. 83, где вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, включающую:
последовательность CDR1 тяжелой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:132;
последовательность CDR2 тяжелой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:133; и
последовательность CDR3 тяжелой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:134.
85. Белок по п. 84, где вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, включающую:
последовательность CDR1 легкой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:136;
последовательность CDR2 легкой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:137; и
последовательность CDR3 легкой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:138.
86. Белок по любому из пп. 1, 2, или 61-72, где второй антигенсвязывающий участок связывает EpCAM, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:139, и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:143.
87. Белок по п. 86, где вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, включающую:
последовательность CDR1 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:140;
последовательность CDR2 тяжелой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:141; и
последовательность CDR3 тяжелой цепи идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:142.
88. Белок по п. 87, где вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, включающую:
последовательность CDR1 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:144;
последовательность CDR2 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:145; и
последовательность CDR3 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:146.
89. Белок по любому из пп. 1, 3, или 61-72, где второй антигенсвязывающий участок связывает CA125, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:155, и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:159.
90. Белок по любому из пп. 1, 3, или 61-72, где второй антигенсвязывающий участок связывает CA125, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:163, и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:167.
91. Белок по любому из пп. 1, 4, или 61-72, где второй антигенсвязывающий участок связывает NaPi2b, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:171, и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:175.
92. Белок по любому из пп. 1, 5, или 61-72, где второй антигенсвязывающий участок связывает нектин-4, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:179, и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:183.
93. Белок по любому из пп. 1, 6, или 61-72, где второй антигенсвязывающий участок связывает фукозил-GM1, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:187, и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:191.
94. Белок по любому из пп. 1, 7, или 61-72, где второй антигенсвязывающий участок связывает SLC44A4, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:195, и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную SEQ ID NO:199.
95. Белок по любому из пп. 1-94, где Fc-домен антитела содержит шарнир и CH2-домены человеческого антитела IgG1.
96. Белок по п. 95, где Fc-домен содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную аминокислотам 234-332 человеческого антитела IgG1.
97. Белок по п. 96, где Fc-домен содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную Fc-домену человеческого IgG1 и отличается по одному или двум положениям, выбранным из группы, состоящей из Q347, Y349, L351, S354, E356, E357, K360, Q362, S364, T366, L368, K370, N390, K392, T394, D399, S400, D401, F405, Y407, K409, T411, K439.
D
98. Белок по любому из пп. 1-96, где белок связывается с NKG2D с K 10 нМ или более слабой аффинностью.
99. Состав, содержащий белок по любому из предшествующих пунктов и фармацевтически приемлемый носитель.
100. Клетка, содержащая одну или более нуклеиновых кислот, экспрессирующих белок по любому из пп. 1-98.
101. Способ прямого и/или косвенного усиления гибели опухолевой клетки, способ, включающий воздействие белка по любому из пп. 1-98 нa опухоль и клетки-естественные киллеры.
102. Способ лечения злокачественной опухоли, где способ включает введение пациенту белка по любому из пп. 1-98 или состава по п. 99.
103. Способ по п. 102, где, если второй участок связывания связывает EpCAM, то злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из рака головы и шеи, рака яичников, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, колоректального рака, рака предстательной железы, рака желудка, рака печени, рака пищевода, и рака легких.