Способ моделирования пародонтита
METHOD FOR MODELING PERIODONTITIS

Изобретение относится к стоматологии и экспериментальной медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для создания экспериментальной модели пародонтита.
Поиск оптимальной экспериментальной модели пародонтита на животных необходим для изучения возможности использования новых методов и лекарственных форм при лечении заболеваний пародонта. Использование патоморфологических исследований для оценки эффективности новых методов лечения позволяет объективно оценить ожидаемый результат фармакотерапии, что, как правило, невозможно на человеке.
2
Известен способ получения модели пародонтита, включающий помещение половозрелых крыс в общую клетку площадью 0,018 м на особь. При этом перед помещением в клетку, под эфирным наркозом, используя стоматологический цемент, создают искусственную зубную бляшку вокруг шейки верхних и нижних резцов с шероховатой поверхностью, заходящую под десну на 0,1-0,5 мм, при этом в процессе моделирования животные получают кашицеобразную пищу. На 30-е сутки наблюдали отечность и цианоз десны, в области резцов наблюдали появление карманов глубиной 1-2 мм, появление подвижности резцов 1-2 степени [Патент РФ №2252009, 2005]. Недостатком данного метода являться отсутствие надежности метода, выпадением стоматологического цемента во время проведения эксперимента.
В настоящее время наиболее популярны лигатурные методы воспроизведения пародонтита в различных интерпретациях.
Известен способ моделирования пародонтита, когда использован «лигатурный метод», сущность которого заключается во вшивании шелковой лигатуры в десну в области нижних резцов. Через 14 дней лигатуру удаляли и еще через 15 и 30 дней после наложения лигатуры изучали состояние пародонта методом прижизненной микроскопии сосудов микроциркуляторного русла. После забоя животных (15 и 30 дней после снятия лигатуры) проводили патоморфологическое исследование челюстей [Боричевская Л.В. Течение пародонтита при экспериментальном судорожном синдроме, обоснование методов коррекции, Автореферат, 2002. - М. - 25 с.].
Известен способ моделирования пародонтита, в котором для моделирования иммунодефицитного состояния (ИДС) крысам подкожно в бедро вводили циклофосфан по 50 мг/кг. Сначала по инъекции двое суток подряд, затем для поддержания ИДС циклофосфан вводили в той же дозе (50 мг/кг, однократно) с периодичностью 10 суток. На 10-й день после первой инъекции циклофосфана, когда у животных развилось ИДС, воспроизводили пародонтит путем прошивания десны тонкой шелковой лигатурой вокруг резцов нижней челюсти на 14 суток [Дубровин Д.С. Применение полиоксидония для коррекции течения пародонтита на фоне иммунодефицитного состояния (экспериментальное исследование), Автореферат, 2004. - М. - 23 с.]. Недостатком использованной модели является использование циклофосфана, который, являясь цитостатиком, обладает анкилирующим действием с преимущественным угнетением активности В-субпопуляций лимфоцитов, основной механизм иммунодепрессивного действия которых заключается в блокировании митоза опухолевых клеток, что патогенетически не соответствует механизму развития пародонтита у человека.
Известен способ моделирования пародонтита, взятый за прототип, заключающийся в том, что половозрелым крысам породы «Wistar» в/м вводят преднизолон из расчета 12 мг/кг веса животного на 1-е, 3-и и 5-е сутки, при этом на 5-е сутки на второй моляр верхней челюсти под в/м наркозом накладывают лигатуру [Патент РФ №2625295, 2017]. Недостатком прототипа является то, что элементы поражения не типичны по своим патоморфологическим свойствам для пародонтита у человека, а также отсутствие воздействия на лабораторных животных общих этиологических факторов (отсутствие зубных отложений). Это снижает достоверность моделируемой патологии. Проявления воспаления десен, полученные с помощью методики прототипа, не типичны по своим морфологическим свойствам для пародонтита у человека.
Задачей изобретения является разработка наиболее оптимальной модели пародонтита у крыс.
Технический результат при использовании изобретения - повышение достоверности патологического процесса за счет моделирования у подопытных животных воспаления пародонта, сходного по патоморфологическим проявлениям с пародонтитом у человека.
Предлагаемый способ моделирования пародонтита осуществляют следующим образом: крысам породы Вистар проводят предоперационную подготовку в течение 12 часов до операции моделирования пародонтита. При операциях на животных применяют ингаляционный эфирный наркоз. Для моделирования экспериментального пародонтита животным накладывают ретракционную нить Ultrapak#00 в области нижних центральных резцов в круговой связке зуба на глубину 1,5 мм, искусственно создают зубодесневой карман. Для имитации зубных отложений и удерживания ретракционной нити в круговой связке зуба накладывают стоматологический стеклоиономерный цемент GC Фуджи на лингвальную и вестибулярную поверхность шейки зуба нижних резцов. Во время эксперимента животные получают кашицеобразную высокоуглеродистую пищу. Для ускорения развития воспаления животным вводят в/м преднизолон из расчета 12 мг/кг массы животного на 1-е, 3-и, 5-е, 7-е и 9-е сутки.
Все манипуляции с животными проводили в соответствии со следующими документами: санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально биологических клиник (вивариев) №1045-73 от 06.04.1973 г., Конвенцией по защите животных, используемых в эксперименте и других научных целях (г. Страсбург, Франция, 1986), Директивой Совета 86/609/ЕЕС от 24.11.86 г. по согласованию законов, правил и административных распоряжений стран участниц в отношении защиты животных, используемых в экспериментальных и других научных целях, руководства по уходу и использованию лабораторных животных (восьмое издание, Вашингтон, США), Хельсинкской декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации. Для выполнения работы использовались животные без внешних признаков заболевания, прошедшие карантинный режим в условиях вивария. Суточный рацион питания животных состоял из мягкой пищи: сухого корма, размоченного в воде, вареных овощей и фруктов, витаминной добавки, включающей витамины групп А, В, С. В течение эксперимента (30 дней) животных не кормили твердой пищей. Доступ животных к пище и воде был свободным на протяжении всего эксперимента. Экспериментальные животные к началу исследования имели интактную слизистую оболочку полости рта: бледно-розовый цвет, без патологических изменений, кровоточивости десны и наличия экссудата при пальпации зубодесневых карманов не отмечалось. Глубина зубодесневых карманов в среднем у животных составляла (1,0±0,017 мм). На 4 день эксперимента у животных наблюдают клинические признаки воспаления десны: отечность, кровоточивость, наличие обильного мягкого зубного налета.
На 7 сутки определяют клинические признаки воспаления десны: кровоточивость десны, пародонтальные карманы глубиной 2 мм, появление подвижности 1 и 2 степени.
На 14 сутки эксперимента наблюдают: признаки воспаления слизистой оболочки десны, с кровоточивостью десны с обильным серозным отделяемым из зубодесневых карманов, при зондировании определяют пародонтальные карманы глубиной (2,02±0,18 мм) подвижностью резцов нижней челюсти II степени у крысы на фоне наложения ретракционной нити, стоматологического цемента - в виде имитации зубных отложений, а также на фоне 5 кратного введения преднизолона.
На 21 сутки эксперимента наблюдают: признаки воспаления слизистой оболочки десны, с кровоточивостью десны с обильным гнойным отделяемым из зубодесневых карманов, при зондировании определяют пародонтальные карманы глубиной (2,30±0,13 мм) подвижностью резцов нижней челюсти III степени у крысы на фоне наложения ретракционной нити, стоматологического цемента - в виде имитации зубных отложений, а также на фоне 5 кратного введения преднизолона.
Признаками пародонтита являлись: воспаление мягких тканей, окружающих зуб (кровоточивость десны, гиперемия, отечность); образование пародонтального кармана с замещением грануляционной тканью резорбированной костной ткани, а также патологическая подвижность зубов. Рентгенологически определяли признаки деструкции вершины межзубной перегородки.
Достоинством данной методики создания модели экспериментального пародонтита является то, что клиническая и патоморфологическая картина достигается под воздействием местных факторов: ретракционной нити, стоматологического стеклоиономерного цемента, имитирующих зубные отложения, которые будут нарушать целостность зубодесневой связки нижних резцов (зубные карманы), исключая восстановление тканей пародонта. Для подавления клеточного иммунитета, клинически проявляющегося в виде воспалительного процесса, вводят оптимальную дозу преднизолона.
Таким образом, в заявляемом способе моделирования пародонтит у экспериментальных животных наблюдается через 14-20 дней. Относительно короткий процесс моделирования пародонтита (не более месяца). При этом создается локальное поражение пародонта, не отягощенное какой либо другой патологией у животного, и имеющее как местные (зубная бляшка, мягкая пища,) так и общие (стресс) патогенетические факторы, на фоне изменения реактивности организма, что соответствует современной теории возникновения пародонтита как полиэтиологичного заболевания у человека.
Сущность изобретения поясняется следующим примером. Крысе породы Вистар массой тела 200 г проводили предоперационную подготовку в течение 12 часов до операции. Под ингаляционным эфирным наркозом крысе накладывают ретракционную нить Ultrapak# 00 в области нижних центральных резцов в круговой связке зуба на глубину 1,5 мм, тем самым искусственно создают зубодесневой карман. Для имитации зубных отложений и удерживания ретракционной нити в круговой связке зуба накладывали стоматологический стеклоиономерный цемент GC Фуджи на лингвальную и вестибулярную поверхность шейки зуба нижних резцов. Во время эксперимента животное получало кашицеобразную высокоуглеродистую пищу. Кроме этого, в/м вводили преднизолон из расчета 12 мг/кг массы животного на 1-е, 3-й,5-е, 7-е и 9-е сутки. На 4 день эксперимента у животного наблюдали клинические признаки воспаления десны: отечность, кровоточивость, наличие обильного мягкого зубного налета.
На 7 сутки определяют клинические признаки воспаления десны: кровоточивость десны, пародонтальные карманы глубиной 2 мм, появление подвижности 1 и 2 степени.
На 14 сутки эксперимента наблюдают: признаки воспаления слизистой оболочки десны, с кровоточивостью десны с обильным серозным отделяемым из зубодесневых карманов, при зондировании определяли пародонтальные карманы глубиной (2,02±0,18 мм) подвижностью резцов нижней челюсти II степени.
На 21 сутки эксперимента наблюдают: признаки воспаления слизистой оболочки десны, с кровоточивостью десны с обильным серозно-гнойным отделяемым из зубодесневых карманов, при зондировании определяли пародонтальные карманы глубиной (2,30±0,13 мм) подвижностью резцов нижней челюсти III степени.