ИММУНОКОНЪЮГАТЫ IL2 И МУТАНТНОГО TNF

1. Конъюгат, содержащий интерлейкин-2 (IL2), мутант фактора некроза опухоли (TNFα) человека и молекулу антитела, которая связывает фибронектин,
где мутант TNFα человека имеет сниженную активность относительно TNFα человека дикого типа и содержит аминокислотную последовательность TNFα дикого типа с заменой R в положении, соответствующем R32 SEQ ID NO: 15 или R52 SEQ ID NO: 17, на A, F или V;
где молекула антитела представляет собой одноцепочечный Fv (scFv) или диантитело.
2. Конъюгат по п. 1, где мутант TNFα человека имеет мутацию R на A в указанном положении.
3. Конъюгат по п. 1 или 2, где TNFα человека содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37 или SEQ ID NO: 39.
4. Конъюгат по любому из пп. 1-3, где молекула антитела связывает экстрадомен-A (ED-A) фибронектина.
5. Конъюгат по п. 4, где
(i) молекула антитела содержит антигенсвязывающий центр, имеющий определяющие комплементарность области (CDR) антитела F8, указанные в SEQ ID NO: 6-11,
(ii) молекула антитела содержит домены VH и VL антитела F8, указанные в SEQ ID NO: 2 и 4; и/или
(iii) где молекула антитела содержит аминокислотную последовательность scFv F8, указанную в SEQ ID NO: 5.
6. Конъюгат по любому из пп. 1-3, где молекула антитела связывает экстрадомен-B (ED-B) фибронектина.
7. Конъюгат по п. 6, где
(i) молекула антитела содержит антигенсвязывающий центр, имеющий определяющие комплементарность области (CDR) антитела L19, указанные в SEQ ID NO: 18-23,
(ii) молекула антитела содержит домены VH и VL антитела L19, указанные в SEQ ID NO: 24 и 25, и/или
(iii) молекула антитела содержит аминокислотную последовательность scFv L19, указанную в SEQ ID NO: 26.
8. Конъюгат по любому из пп. 1-7, где молекула антитела представляет собой или содержит одноцепочечный Fv (scFv) и где
(i) IL2 связан с N-концом домена VH scFv через пептидный линкер и мутант TNF связан с C-концом домена VL scFv через пептидный линкер,
(ii) мутант TNF связан с N-концом домена VH scFv через пептидный линкер и IL2 связан с C-концом домена VL scFv через пептидный линкер, или
(iii) IL2 и мутант TNF связаны с C-концом домена VL scFv через пептидный линкер или IL2 и TNFα связаны с N-концом scFv через пептидный линкер.
9. Конъюгат по любому из пп. 1-5, где
(i) конъюгат содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 с мутацией R на A в положении 432 или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16 с мутацией R на A в положении 452, или
(ii) конъюгат содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36 или SEQ ID NO: 38.
10. Конъюгат по любому из пп. 1-3 и пп. 6-7, где
(i) конъюгат содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70 с мутацией R на A в положении 430 или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 71 с мутацией R на A в положении 450, или
(ii) конъюгат содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44 или SEQ ID NO: 45.
11. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая конъюгат по любому из пп. 1-10, или экспрессирующий вектор, содержащий указанную нуклеиновую кислоту, или клетка-хозяин, содержащая указанный вектор.
in vivo
12. Конъюгат по любому из пп. 1-10 для применения в способе лечения злокачественной опухоли путем нацеливания IL2 и TNF на новообразованные сосуды  или для применения в способе доставки IL2 и TNF в новообразованные сосуды опухоли у пациента.
13. Конъюгат для применения по п. 10, где злокачественная опухоль представляет собой меланому, рак головы и шеи, рак почки или саркому, или опухоль является результатом меланомы, рака головы и шеи, рака почки или саркомы.