АНТИТЕЛА С ПРИВИТЫМИ НАТРИЙУРЕТИЧЕСКИМ ПЕПТИДОМ С-ТИПА

1. Антитело или его фрагмент, содержащее по меньшей мере одну гетерологичную аминокислотную последовательность, включенную вовнутрь по меньшей мере одного CDR участка указанного антитела или его фрагмента, где указанная по меньшей мере одна гетеро логичная аминокислотная последовательность содержит N-терминальную линкерную последовательность (Ntls), натрийуретический пептид С-типа (CNP) и С-терминальную линкерную последовательность (Ctls), где необязательно по меньшей мере часть указанного по меньшей мере одного CDR участка замещена указанной по меньшей мере одной гетерологичной аминокислотной последовательностью, включенной в него, и где
а) по меньшей мере 12 аминокислотных остатков присутствуют между
i) аминокислотным остатком НС res25 по Кэботу и первым аминокислотным остатком указанного CNP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH1;
ii) аминокислотным остатком НС res51 по Кэботу и первым аминокислотным остатком указанного CNP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH2;
iii) аминокислотным остатком НС res92 по Кэботу и первым аминокислотным остатком указанного CNP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH3;
iv) аминокислотным остатком LC res26 по Кэботу и первым аминокислотным остатком указанного CNP в случае включения
указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL1;
v) аминокислотным остатком LC res49 по Кэботу и первым аминокислотным остатком указанного CNP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL2; и/или
vi) аминокислотным остатком LC res88 по Кэботу и первым аминокислотным остатком указанного CNP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL3; и где
b) по меньшей мере 9 аминокислотных остатков присутствуют между последним аминокислотным остатком указанного CNP и
i) аминокислотным остатком НС res35a по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH1;
ii) аминокислотным остатком НС res57 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH2;
iii) аминокислотным остатком НС res 106 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH3;
iv) аминокислотным остатком LC res 32 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL1;
v) аминокислотным остатком LC res57 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL2; и/или
vi) аминокислотным остатком LC res98 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL3.
2. Антитело или его фрагмент по п. 1, где указанный CNP выбран из группы, состоящей из человеческого CNP, имеющего последовательность SEQ ID NO 25, и пептида, имеющего последовательность, на по меньшей мере 80% идентичную ей.
3. Антитело или его фрагмент по п. 1, где
а) указанная Ntls содержит
i) GS линкерную последовательность;
ii) PN линкерную последовательность;
iii) аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса человеческого антитела IgG, или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, в частности аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса домена fab человеческого антитела IgG, или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, более конкретно последовательность согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4, или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4
iv) последовательность согласно SEQ ID NO 6 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
v) последовательность согласно SEQ ID NO 7 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
vi) последовательность согласно SEQ ID NO 9 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
vii) последовательность согласно SEQ ID NO 11 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
viii) последовательность согласно SEQ ID NO 13 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
ix) последовательность согласно SEQ ID NO 15 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
x) последовательность согласно SEQ ID NO 21 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; или
xi) любую их комбинацию, и где
b) указанная Ctls содержит
i) GS линкерную последовательность;
ii) PN линкерную последовательность;
iii) аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса человеческого антитела IgG или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, в частности аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса домена fab человеческого антитела IgG или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, более конкретно последовательность согласно любой из SEQ ID NO 1, 3 или 5 или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 3 или 5;
iv) последовательность согласно SEQ ID NO 6 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
v) последовательность согласно SEQ ID NO 8 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
vi) последовательность согласно SEQ ID NO 10 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
vii) последовательность согласно SEQ ID NO 12 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
viii) последовательность согласно SEQ ID NO 14 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
ix) последовательность согласно SEQ ID NO 15 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
x) последовательность согласно SEQ ID NO 20 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
xi) последовательность согласно SEQ ID NO 22 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; или
xii) любую их комбинацию.
4. Антитело или его фрагмент по п. 3, где
i) указанная Ntls и указанная Ctls каждая содержит GS линкерную последовательность;
ii) указанная Ntls и указанная Ctls каждая содержит PN линкерную последовательность;
iii) указанная Ntls и указанная Ctls каждая содержит аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса человеческого антитела IgG, или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, в частности аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса домена fab человеческого антитела IgG, или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, более конкретно указанная Ntls содержит последовательность согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4 или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4, и указанная Ctls содержит последовательность согласно любой из SEQ ID NO 1, 3 или 5 или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 3 или 5;
iv) указанная Ntls и указанная Ctls каждая содержит последовательность согласно SEQ ID NO 6 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
v) указанная Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 7 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и указанная Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 8 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
vi) указанная Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 9 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и указанная Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 10 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
vii) указанная Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 11 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и указанная Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 12 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
viii) указанная Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 13 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и указанная Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 14 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
ix) указанная Ntls и указанная Ctls каждая содержит последовательность согласно SEQ ID NO 15 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей;
x) указанная Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 9 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и указанная Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 20 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; или
xi) указанная Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 21 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и указанная Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 22 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей.
5. Антитело или его фрагмент по п. 1, где указанная Ntls дополнительно содержит якорный элемент А1 на ее С-терминальном конце, и/или где указанная Ctls дополнительно содержит якорный элемент А2 на ее N-терминальном конце, где А1 и/или А2 преимущественно содержат глициновый и сериновый остатки, в частности где по меньшей мере 60% аминокислотных остатков А1 и/или А2 выбраны из глициновых и сериновых остатков.
6. Антитело или его фрагмент по п. 1, где аминокислотное удлинение, присутствующее между
i) аминокислотным остатком НС res25 по Кэботу и первым аминокислотным остатком CNP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH1;
ii) аминокислотным остатком НС res51 по Кэботу и первым аминокислотным остатком CNP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH2;
iii) аминокислотным остатком НС res92 по Кэботу и первым аминокислотным остатком CNP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH3;
iv) аминокислотным остатком LC res26 по Кэботу и первым аминокислотным остатком CNP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL1;
v) аминокислотным остатком LC res49 по Кэботу и первым аминокислотным остатком CNP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL2; и/или
vi) аминокислотным остатком LC res88 по Кэботу и первым аминокислотным остатком CNP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL3
содержит последовательность согласно любой из SEQ ID NO 26-38 или последовательность, имеющую идентичность по меньшей мере 80% с последовательностью согласно любой из SEQ ID NO 26-38;
и где аминокислотное удлинение, присутствующее между последним аминокислотным остатком указанного CNP и
i) аминокислотным остатком НС res35a по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH1;
ii) аминокислотным остатком НС res57 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH2;
iii) аминокислотным остатком НС res 106 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH3;
iv) аминокислотным остатком LC res 32 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL1;
v) аминокислотным остатком LC res57 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL2; и/или
vi) аминокислотным остатком LC res98 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL3
содержит последовательность согласно любой из SEQ ID NO 39-51 или последовательность, имеющую идентичность по меньшей мере 80% с последовательностью согласно любой из SEQ ID NO 39-51.
7. Антитело или его фрагмент по п. 1, где указанная Ntls и/или указанная Ctls содержат (содержит) по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 и до 30, 28, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 или 10 аминокислотных остатков в общем.
8. Антитело или его фрагмент по п. 1, где аминокислотное удлинение, присутствующее между
i) аминокислотным остатком НС res25 по Кэботу и аминокислотным остатком НС res35a по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH1;
ii) аминокислотным остатком НС res51 по Кэботу и аминокислотным остатком НС res57 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH2;
iii) аминокислотным остатком НС res92 по Кэботу и аминокислотным остатком НС res 106 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH3;
iv) аминокислотным остатком LC res26 по Кэботу и аминокислотным остатком LC res 32 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL1;
v) аминокислотным остатком LC res49 по Кэботу и аминокислотным остатком LC res57 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL2; и/или
vi) аминокислотным остатком LC res88 по Кэботу и аминокислотным остатком LC res98 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL3,
содержит последовательность согласно любой из SEQ ID NO 52-64, или последовательность, имеющую идентичность по меньшей мере 80% с последовательностью согласно любой из SEQ ID NO 52-64.
9. Антитело или его фрагмент по п. 1, содержащее по меньшей мере один дополнительный натрийуретический пептид, в частности где указанный CNP и указанный по меньшей мере один дополнительный натрийуретический пептид включены в по меньшей мере два раздельных CDR участка, более конкретно - где указанный по меньшей мере один дополнительный натрийуретический пептид выбран из ANP, BNP и CNP, более предпочтительно из ANP и BNP.
10. Антитело или его фрагмент по п. 1, где указанное антитело или его фрагмент представляет собой человеческое или гуманизированное антитело или его фрагмент, в частности где указанное антитело или его фрагмент относится к классу IgG.
11. Антитело или его фрагмент по п. 1, где
(i) легкая цепь содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO 66, и тяжелая цепь содержит или состоит из аминокислотной последовательности согласно любой из SEQ ID NO 445 и 446; или
(ii) легкая цепь содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO 447, и тяжелая цепь содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO 445.
12. Фрагмент антитела по любому из пп. 1-11, где указанный фрагмент антитела выбран из группы, состоящей из Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2 и Fv фрагментов, диател, однодоменных антител (Dabs), линейных антител, одноцепочечных молекул антитела (scFv); и дисульфид-стабилизированных фрагментов антитела (dsFv).
13. Композиция, содержащая антитело или его фрагмент по любому из пп. 1-12 и необязательно фармацевтически приемлемый носитель.
14. Нуклеиновая кислота или смесь нуклеиновых кислот, кодирующая антитело или его фрагмент по любому из пп. 1-12.
15. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту или смесь нуклеиновых кислот по п. 14.
16. Способ получения антитела или его фрагмента, включающий культивирование клетки-хозяина по п. 15 в условиях, подходящих для экспрессии антитела или его фрагмента.
17. Антитело или его фрагмент по любому из пп. 1-12 для применения в способе лечения.
18. Антитело или его фрагмент по любому из пп. 1-12 для применения для лечения сердечно-сосудистых, почечных, легочных, скелетных, глазных, тромбоэмболических или фиброзных заболеваний или нарушений, карликовости, ахондроплазии или других связанных с cGMP и/или натрийуретическим пептидом нарушений.