ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ПРЕДНАЗНАЧЕННАЯ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ СВЯЗАННОГО С С5 ЗАБОЛЕВАНИЯ, И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ СВЯЗАННОГО С С5 ЗАБОЛЕВАНИЯ
PHARMACEUTICAL COMPOSITION INTENDED FOR USE FOR TREATMENT OR PREVENTION OF C5-RELATED DISEASE AND METHOD FOR TREATMENT OR PREVENTION OF C5-RELATED DISEASE

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к дозам и схемам введения антитела к С5.
Предпосылки создания изобретения
Система комплемента играет центральную роль в клиренсе иммунных комплексов и иммунных ответах на инфекционные агенты, чужие антигены, инфицированные вирусом клетки и опухолевые клетки. Известно примерно 25-30 белков комплемента, которые присутствуют в виде сложной группы плазматических белков и мембранных кофакторов. Компоненты комплемента осуществляют свои иммунные защитные функции путем участия в ряде сложных ферментативных расщеплений и событий связывания с мембраной. Возникающие в результате этого каскады системы комплемента приводят к получению продуктов, обладающих опсоническими, иммунорегуляторными и литическими функциями.
В настоящее время является общепринятым, что система комплемента может активироваться тремя различными путями: классическим путем, лектиновым путем и альтернативным путем. В этих путях участвует много компонентов, и хотя они различаются своими начальными стадиями, затем они сходятся и включают одни и те же терминальные компоненты системы комплемента (с С5 по С9), которые ответственны за активацию и деструкцию клеток-мишеней.
Классический путь, как правило, активируется при образовании комплексов антиген-антитело. Независимо от этого первая стадия активации лектинового пути представляет собой связывание специфических лектинов, таких как маннан-связывающий лектин (MBL), Н-фиколин, М-фиколин, L-фиколин и лектин С-типа CL-11. В отличие от этого, альтернативный путь подвергается активации спонтанно с низким уровнем турновера, которая легко может повышаться на чужих или других аномальных поверхностях (бактерии, дрожжи, инфицированные вирусом клетки или поврежденная ткань). Эти пути сходятся в точке, в которой происходит расщепление компонента комплемента С3 активной протеазой с образованием С3а и C3b.
С3а представляет собой анафилатоксин. C3b связывается с бактериальными и другими клетками, а также с определенными вирусами и иммунными комплексами, и метит их для удаления из кровотока (играет роль опсонина). C3b формирует также комплекс с другими компонентами с образованием конвертазы С5, которая расщепляет С5 с образованием С5а и C5b.
С5 представляет собой белок с молекулярной массой 190 кДа, который присутствует в сыворотке здорового индивидуума в концентрации примерно 80 мкг/мл (0,4 мкМ). С5 является гликозилированным, при этом примерно 1,5-3% его массы приходится на долю углевода. Зрелый С5 представляет собой гетеродимер, в котором альфа-цепь с молекулярной массой 115 кДа сцеплена дисульфидом с бета-цепью с молекулярной массой 75 кДа. С5 синтезируется в виде одноцепочечного белка-предшественника (предшественник про-С5), состоящего из 1676 аминокислот (см., например, PTL1 и PTL2). Предшественник про-С5 расщепляется с высвобождением бета-цепи в виде аминоконцевого фрагмента и альфа-цепи в виде карбоксиконцевого фрагмента. Полипептидные фрагменты, представляющие собой альфа-цепь и бета-цепь, соединяются друг с другом посредством дисульфидной связи с образованием зрелого белка С5.
Зрелый С5 расщепляется с образованием С5а-фрагмента и C5b-фрагмента в процессе активации путей системы комплемента. В результате воздействия С5-конвертазы С5а отщепляется от альфа-цепи С5 в виде аминоконцевого фрагмента, содержащего первые 74 аминокислоты альфа-цепи. Оставшаяся часть зрелого С5 представляет собой C5b-фрагмент, который содержит остаток альфа-цепи, соединенный дисульфидом с бета-цепью. Примерно 20% массы С5а, составляющей 11 кДа, приходится на долю углевода.
С5а представляет собой другой анафилатоксин. C5b объединяется с С6, С7, С8 и С9 с образованием мембраноатакующего комплекса (MAC, C5b-9, комплекс терминальных компонентов системы комплемента (ТСС)) на поверхности клетки-мишени. Когда в мембраны клеток мишеней встраиваются в достаточном количестве MAC, то поры, образованные MAC, опосредуют быстрый осмотический лизис клеток мишеней.
Как указано выше, С3а и С5а являются анафилатоксинами. Они могут запускать дегрануляцию тучных клеток, что вызывает высвобождение гистамина и других медиаторов воспаления, которые приводят к сокращению гладких мышц, повышению проницаемости сосудов, активации лейкоцитов и другим проявлениям воспаления, включая клеточную пролиферацию, приводящую к повышенному содержанию паренхиматозных клеток. С5а функционирует также в качестве хемотаксического пептида, который служит для привлечения гранулоцитов, таких как нейтрофилы, эозинофилы, базофилы и моноциты, к области активации комплемента.
Активность С5а регулируется плазматическим ферментом карбоксипептидазой N, которая удаляет карбоксиконцевой аргинин из С5а, что приводит к образованию производного C5a-des-Arg. C5a-des-Arg обладает лишь 1% анафилактической активности и полиморфоядерной хемотаксической активности, присущей немодифицированному С5а.
В то время как правильно функционирующая система комплемента обеспечивает эффективную защиту от инфицирующих микроорганизмов, неправильная регуляция или активация системы комплемента участвует в патогенезе различных нарушений, включая, например, ревматоидный артрит (RA); волчаночный нефрит; повреждение, вызываемое ишемией-реперфузией; пароксизмальную ночную гемоглобинурию (PNH); атипичный гемолитико-уремический синдром (aHUS); болезнь плотных депозитов (DDD); дегенерацию желтого пятна (например, возрастную дегенерацию желтого пятна (AMD)); синдром: гемолиз, повышение активности ферментов печени и тромбоцитопения (HELLP); тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру (ТТР); спонтанную потерю плода; Pauci-иммунный (малоиммунный) васкулит (васкулит с гипокомплементемией); буллезный эпидермолиз; повторную потерю плода; рассеянный склероз (MS); травматическое повреждение головного мозга и повреждение, обусловленное инфарктом миокарда, сердечно-легочным шунтированием и гемодиализом (см., например, NPL1). Таким образом, ингибирование избыточной или неконтролируемой активации каскада комплемента может оказывать благоприятное клиническое действие на пациентов с указанными нарушениями.
Пароксизмальная ночная гемоглобинурия (PNH) представляет собой редкое нарушение крови, при котором эритроциты имеют дефекты и поэтому разрушаются быстрее, чем здоровые эритроциты. PNH обусловлена клональной экспансией гематопоэтических стволовых клеток с соматическими мутациями в гене PIG-A (фосфатидилинозитолгликан класса А), локализованном на X-хромосоме. Мутации в PIG-A приводят к ранней блокаде синтеза гликозилфосфатидилинозитола (GPI), молекулы, которая требуется для «заякоривания» многих белков на клеточных поверхностях. В результате при PNH кровяные клетки характеризуются дефицитом GPI-заякоренных белков, которые включают комплемент-регулирующие белки CD55 и CD59. В нормальных ситуациях эти комплемент-регулирующие белки блокируют образование MAC на клеточных поверхностях, предупреждая тем самым лизис эритроцитов. Отсутствие GPI-заякоренных белков вызывает опосредуемый системой комплемента гемолиз при PNH.
PNH характеризуется гемолитической анемией (пониженное количество эритроцитов), гемоглобинурией (присутствие гемоглобина в моче, что особенно проявляется после сна) и гемоглобинемией (присутствие гемоглобина в кровотоке). Известно, у что пораженных PNH индивидуумов имеют место пароксизмы, которые в данном случае представляют собой случаи появления темноокрашенной мочи. Гемолитическая анемия обусловлена внутрисосудистой деструкцией эритроцитов компонентами системы комплемента. Другие известные симптомы включают дисплазию, усталость, эректильную дисфункцию, тромбоз и повторяющуюся боль в брюшной области.
Экулизумаб представляет собой гуманизированное моноклональное антитело к белку С5 системы комплемента, и он является терапевтическим средством первой линии, которое разрешено для лечения пароксизмальной ночной гемоглобинурии (PNH) и атипического гемолитико-уремического синдрома (aHUS) (см., например, NPL2). Экулизумаб ингибирует расщепление С5 С5-конвертазой с образованием С5а и C5b, что предупреждает образование комплекса терминальных компонентов системы комплемента C5b-9. И С5а, и C5b-9 вызывают опосредуемые терминальным комплексом системы комплемента события, характерные для PNH и aHUS (см. также PTL3, PTL4, PTL5 и PTL6).
7
-1
В нескольких публикациях описаны антитела к С5. Например, в PTL7 описано антитело к С5, которое связывается с альфа-цепью С5, но не связывается с С5а, и блокирует активацию С5, а в PTL8 описано моноклональное антитело к С5, которое ингибирует образование С5а. С другой стороны, в PTL9 описано антитело к С5, которое распознает сайт протеолитического расщепления конвертазой С5 на альфа-цепи С5 и ингибирует превращение С5 в С5а и C5b. В PTL10 описано антитело к С5, которое характеризуется константой аффинности, составляющей по меньшей мере 1×10М.
Антитела (IgG) связываются с неонатальным Fc-рецептором (FcRn) и характеризуются продолжительными временами удерживания в плазме. Связывание IgG с FcRn, как правило, имеет место в кислых условиях (например, при рН 6,0) и редко происходит в нейтральных условиях (например, при рН 7,4). Как правило, IgG неспецифически встраиваются в клетки посредством эндоцитоза и возвращаются на клеточные поверхности посредством связывания с эндосомальным FcRn в кислых условиях в эндосомах. Затем IgG отделяются от FcRn в результате диссоциации в нейтральных условиях в плазме. IgG, которым не удалось связаться с FcRn, расщепляются в лизосомах. Если способность IgG к связыванию с FcRn в кислых условиях устраняют путем интродукции мутаций в его Fc-область, то IgG не возвращается из эндосом в плазму, что приводит к заметному снижению удерживания IgG в плазме. Опубликован метод, позволяющий повышать его связывание с FcRn в кислых условиях, предназначенный для повышения удерживания IgG в плазме. Когда связывание IgG с FcRn в кислых условиях повышают путем интродукции аминокислотной замены в его Fc-область, то IgG более эффективно возвращается из эндосом в плазму, и в результате повышается его удерживание в плазме. Кроме того, опубликованы также данные о том, что IgG с повышенной способностью к связыванию с FcRn в нейтральных условиях не отделяется путем диссоциации от FcRn в нейтральных условиях в плазме даже в том случае, если он возвращается на клеточную поверхность благодаря его связыванию с FcRn в кислых условиях в эндосомах, и следовательно, его удерживание в плазме не изменяется или, скорее, ухудшается (см., например, NPL3; NPL4; NPL5).
В последние годы были описаны антитела, которые связываются с антигенами рН-зависимым образом (см., например, PTL11 и PTL12). Указанные антитела сильно связываются с антигенами в нейтральных условиях в плазме и отделяются путем диссоциации от антигенов в кислых условиях, которые имеют место в эндосомах. После отделения путем диссоциации от антигенов антитела вновь приобретают способность связываться с антигенами, когда они возвращаются в плазму посредством FcRn. Таким образом, одна молекула антитела может повторно связываться с несколькими молекулами антигена. В целом, время удерживания антигена в плазме намного короче, чем время удерживания антитела, которое обладает указанным выше FcRn-опосредуемым механизмом рециклинга. Таким образом, когда антиген связан с антителом, то антиген в норме характеризуется пролонгированным удерживанием в плазме, что приводит к повышению концентрации антигена в плазме. С другой стороны, было установлено, что описанные выше антитела, которые связываются с антигенами рН-зависимым образом, позволяют элиминировать антигены из плазмы быстрее, чем типичные антитела, поскольку они отделяются путем диссоциации от антигенов в эндосомах в процессе FcRn-опосредуемого рециклинга. В PTL13 описан также основанный на компьютерном моделировании анализ, демонстрирующий, что антитело к С5, обладающее рН-зависимым связыванием, может усиливать выключение антигена.
Перечень ссылок
Патентная литература
[PTL1 патент США №6355245,
[PTL2] патент США №7432356,
[PTL3] WO 2005/074607,
[PTL4] WO 2007/106585,
[PTL5] WO 2008/069889,
[PTL6] WO 2010/054403,
[PTL7] WO 95/29697,
[PTL8] WO 2002/30985,
[PTL9] WO 2004/007553,
[PTL10] WO 2010/015608,
[PTL11] WO 2009/125825,
[PTL12] WO 2011/122011,
[PTL13] WO 2011/111007.
Непатентная литература
[NPL1] Holers и др., Immunol. Rev. 223, 2008, cc. 300-316,
[NPL2] Dmytrijuk и др., The Oncologist 13(9), 2008, cc. 993-1000,
[NPL3] Yeung и др., J Immunol. 182(12), 2009, cc. 7663-7671,
[NPL4] Datta-Mannan и др., J Biol. Chem. 282(3), 2007, cc. 1709-1717,
[NPL5] Dall'Acqua и др., J. Immunol. 169(9), 2002, cc. 5171-5180.
Краткое изложение сущности изобретения
В изобретении предложены фармацевтические композиции, предназначенные для применения для лечения или предупреждения связанного с С5 заболевания, и способы лечения или предупреждения связанного с С5 заболевания. В изобретении предложены также дозы и схемы введения антитела к С5 или фармацевтических композиций, содержащих антитело к С5.
При создании изобретения изучены более эффективные и безопасные дозы и схемы введения антитела к С5, предназначенные для применения для лечения и/или предупреждения связанных с С5 заболеваний, которые могут также снижать нагрузку на пациентов. При создании изобретения было установлено, что с этой точки зрения по меньшей однократное введение более низкой дозы перед введением более высоких доз с длительными интервалами, является предпочтительным для лечения или предупреждения связанного с С5 заболевания путем подкожного введения антитела к С5.
При создании изобретения изучены также приемлемые условия дозирования, включая дозу антитела, частоту и интервалы подкожных введений. В частности, в настоящем изобретении предложены: [1] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения в способе лечения или предупреждения связанного с С5 заболевания, которая приготовлена в форме для подкожной инъекции и содержит антитело к С5, где композицию вводят подкожно с использованием двух фаз, где на обеих фазах имеется интервал между каждыми двумя подкожными введениями, где каждая фаза включает по меньшей мере один интервал и где на первой фазе
I) по меньшей мере один интервал короче, чем по меньшей мере один интервал на второй фазе, и
II) доза антитела на одно введение является более низкой или такой же, что и доза антитела на одно введение на второй фазе;
[2] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения по п. [1], где по меньшей мере один интервал на первой фазе составляет от 1 дня до 2 месяцев;
[3] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения по п. [1] или п. [2], где по меньшей мере один интервал на первой фазе составляет от 5 до 14 дней;
[4] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения по одному из п.п. [1]-[3], где по меньшей мере один интервал на второй фазе составляет от 2 дней до 6 месяцев;
[5] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения по одному из п.п. [1]-[4], где указанный по меньшей мере один интервал на второй фазе составляет от 15 дней до 3 месяцев;
[6] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения по одному из п.п. [1]-[5], где доза антитела для подкожного введения на первой фазе составляет от 50 до 350 мг;
[7] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения по одному из п.п. [1]-[6], где доза антитела для подкожного введения на первой фазе составляет от 150 до 200 мг, и она ниже, чем доза для подкожного введения на второй фазе, предпочтительно доза антитела на первой фазе составляет 170 мг;
[8] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения по одному из п.п. [1]-[6], где доза антитела для подкожного введения на первой фазе составляет от 300 до 350 мг и является такой же, что и доза антитела для подкожного введения на второй фазе;
[9] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения по одному из п.п. [1]-[8], где количество подкожных введений на первой фазе составляет от 1 до 12;
[10] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения по одному из п.п. [1]-[9], где количество подкожных введений на первой фазе составляет от 5 до 10, предпочтительно количество равно 8;
[11] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения по одному из п.п. [1]-[10], где доза антитела на одно введение на второй фазе составляет от 350 до 1000 мг или от 650 до 700 мг;
[12] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения по одному из п.п. [1]-[7] и [9]-[11], где доза антитела к С5 на одной введение на первой фазе в 3-5 раз ниже, чем доза антитела к С5 на одно введение на второй фазе;
[13] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения по одному из п.п. [1]-[12], где фармацевтическая композиция приготовлена в форме для внутривенного введения и содержащееся в ней антитело к С5 вводят внутривенно перед первым подкожным введением на первой фазе;
[14] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения по п. [13], где первое подкожное введение на первой фазе осуществляют через интервал, составляющий от 0 дней до 1 месяца после конечного введения вводимой внутривенно фармацевтической композиции;
[15] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения по п. [13] или п. [14], где доза антитела для указанного внутривенного введения составляет от 100 до 2000 мг;
[16] Фармацевтическая композиция, предназначенная для применения по одному из п.п. [1]-[15], где связанное с С5 заболевание представляет собой любое заболевание, выбранное из группы, которая состоит из ревматоидного артрита (RA); волчаночного нефрита; повреждения, вызываемого ишемией-реперфузией; пароксизмальной ночной гемоглобинурии (PNH); атипичного гемолитико-уремического синдрома (aHUS); болезни плотных депозитов (DDD); дегенерации желтого пятна; синдрома: гемолиз, повышение активности ферментов печени и тромбоцитопения (HELLP); тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР); спонтанной потери плода; Pauci-иммунного васкулита; буллезного эпидермолиза; повторной потери плода; рассеянного склероза (MS); травматического повреждения головного мозга и повреждения, обусловленного инфарктом миокарда, сердечно-легочным шунтированием и гемодиализом;
[17] Способ лечения или предупреждения связанного с С5 заболевания, где способ включает подкожное введение индивидууму фармацевтической композиции, которая приготовлена в форме для подкожной инъекции и содержит антитело к С5, в котором композицию вводят подкожно с использованием двух фаз,
где на обеих фазах имеется интервал между каждыми двумя подкожными введениями, где каждая фаза включает по меньшей мере один интервал и где на первой фазе
I) по меньшей мере один интервал короче, чем по меньшей мере один интервал на второй фазе, и
II) доза антитела на одно введение является более низкой или такой же, что и доза антитела на одно введение на второй фазе;
[18] Применение антитела к С5 для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для лечения или предупреждения связанного с С5 заболевания, в котором композицию приготавливают в форме для подкожной инъекции и она содержит антитело к С5 и в котором композицию вводят подкожно с использованием двух фаз,
где на обеих фазах имеется интервал между каждыми двумя подкожными введениями, где каждая фаза включает по меньшей мере один интервал и где на первой фазе
I) по меньшей мере один интервал короче, чем по меньшей мере один интервал на второй фазе, и
II) доза антитела на одно введение является более низкой или такой же, что и доза антитела на одно введение на второй фазе; и
[19] Продукт для лечения или предупреждения связанного с С5 заболевания, который содержит (I) контейнер; (II) фармацевтическую композицию в контейнере, где фармацевтическая композиция приготовлена в форме для подкожной инъекции и содержит антитело к С5; и (III) документ, в котором представлена инструкция о том, что фармацевтическую композицию следует вводить подкожно с использованием двух фаз,
где на обеих фазах имеется интервал между каждыми двумя подкожными введениями, где каждая фаза включает по меньшей мере один интервал и где на первой фазе
I) по меньшей мере один интервал короче, чем по меньшей мере один интервал на второй фазе, и
II) доза антитела на одно введение является более низкой или такой же, что и доза антитела на одно введение на второй фазе.
Краткое описание чертежей
На чертежах показано:
на фиг. 1 на панелях А и Б - изменение концентрации 305LO15 в плазме обезьян циномолгус в зависимости от времени при подкожной инъекции (А) или внутривенной инъекции (Б) антитела 305LO15. Концентрацию 305LO15 в плазме оценивали с помощью ELISA. Каждая точка соответствует среднему значению для трех самцов или трех самок (А) и среднему значению для шести самцов или шести самок (Б);
на фиг. 2 - изменение концентрации 305LO15 в плазме обезьян циномолгус в зависимости от времени, когда обезьян обрабатывали с использованием начальной внутривенной инъекции и последующих подкожных поддерживающих инъекций антитела 305LO15. Концентрацию 305LO15 в плазме оценивали с помощью ELISA. Каждая точка соответствует среднему значению для пяти самцов или пяти самок;
на фиг. 3А - график, на котором представлены концентрации свободного С5 в плазме в зависимости от каждой концентрации антитела в плазме для каждого указанного дозируемого количества и пути введения. IV, внутривенная инъекция; SC, подкожная инъекция;
на фиг. 3Б - график, на котором представлены уровни измеренной активности комплемента в зависимости от каждой концентрации антитела в плазме для каждого указанного дозируемого количества и пути введения. IV, внутривенная инъекция; SC, подкожная инъекция;
на фиг. 4А - смоделированные зависимости концентрации в плазме 305LO15 от времени при режимах дозирования, запланированных для части 1 клинического исследования. IV, внутривенная инъекция; SC, подкожная инъекция;
на фиг. 4Б - смоделированная зависимость концентрации в плазме 305LO15 от времени при режимах дозирования, запланированных для части 2 клинического исследования. SC, подкожная инъекция; QW, введение один раз каждую неделю;
на фиг. 4В - смоделированные зависимости концентрации в плазме 305LO15 от времени при режимах дозирования, запланированных для части 3 клинического исследования. SC, подкожная инъекция; QW, введение один раз каждую неделю; Q2W, введение один раз каждые две недели; Q4W, введение один раз каждые четыре недели;
на фиг. 5 - профиль иммунокомплексов, образованных экулизумабом (ECZ), человеческим С5 (hC5) и/или 305LO15, проанализированных in vitro с помощью гель-фильтрации при рН 7,4 (верхняя панель) и при рН 6,0 (нижняя панель);
на фиг. 6 - измеренные у индивидуумов и смоделированные профили зависимости концентрации 305LO15 в плазме от времени у здоровых индивидуумов, которые получали 75 мг путем IV-инфузии (в течение 60 мин). Серой затененной областью обозначен 95% интервал предсказания смоделированного профиля зависимости концентрации 305LO15 от времени. Сплошная линия, обозначенная стрелкой, соответствует смоделированному профилю зависимости медианной концентрации 305LO15 от времени. Пунктирной линией обозначена пороговая доза PD, составляющая 40 мкг/г;
на фиг. 7 - измеренные у индивидуумов и смоделированные профили зависимости концентрации 305LO15 в плазме от времени у здоровых индивидуумов, которые получали 125 мг путем IV-инфузии (в течение 60 мин). Серой затененной областью обозначен 95% интервал предсказания смоделированного профиля зависимости концентрации 305LO15 от времени. Сплошная линия, обозначенная стрелкой, соответствует смоделированному профилю зависимости медианной концентрации 305LO15 от времени. Пунктирной линией обозначена пороговая доза PD, составляющая 40 мкг/г;
на фиг. 8 - измеренные у индивидуумов и смоделированные профили зависимости концентрации 305LO15 в плазме от времени у здоровых индивидуумов, которые получали 100 мг SC. Серой затененной областью обозначен 95% интервал предсказания смоделированного профиля зависимости концентрации 305LO15 от времени. Для моделирований, проведенных для однократной SC-дозы 100 мг, ожидается биодоступность, составляющая 90%. Пунктирной линией обозначена пороговая доз PD, составляющая 40 мкг/г;
на фиг. 9 - взаимосвязь между концентрациями 305LO15 в плазме и гемолитической активностью (LIA) после однократной IV-инфузии или SC-инъекции у здоровых индивидуумов. Ex vivo кривую дозовой зависимости LIA получали, используя образцы человеческой плазмы, обработанные различными концентрациями 305LO15;
на фиг. 10А - временной профиль уровней в сыворотке LDH (лактатдегидрогеназа) у страдающего PNH пациента, пациента X, который получал IV-дозу 375 мг 305LO15 в день 1, IV-дозу 500 мг 305LO15 в день 8, IV-дозу 1000 мг 305LO15 в день 22, SC-дозу 170 мг 305LO15 в день 36 и SC-дозу 170 мг 305LO15 в день 43 в части 2 исследования;
на фиг. 10Б - временной профиль гемолитической активности (LIA) у страдающего PNH пациента, пациента X, который получал IV-дозу 375 мг 305LO15 в день 1, IV-дозу 500 мг 305LO15 в день 8, IV-дозу 1000 мг 305LO15 в день 22, SC-дозу 170 мг 305LO15 в день 36 и SC-дозу 170 мг 305LO15 в день 43 в части 2 исследования;
на фиг. 11 - оптимизированный режим SC-доз, который изучали в части 3 исследования ВР39144.
Описание вариантов осуществления изобретения
Технологии и процедуры, которые описаны или на которые сделаны ссылки в настоящем описании, в целом хорошо известны специалистам в данной области, и их широко применяют с использованием общепринятых методологий, таких, например, как описанные у Sambrook и др., Molecular Cloning: А Laboratory Manual, 3-е изд., изд-во Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. 2001; Current Protocols in Molecular Biology, под ред. F.M. Ausubel и др., 2003; серии Methods in Enzymology, изд-во Academic Press, Inc.: PCR 2: A Practical Approach, под ред. M.J. MacPherson, B.D. Hames и G.R. Taylor, 1995, Antibodies, A Laboratory Manual, под ред. Harlow и Lane, 1988 и Animal Cell Culture, под ред. R.I. Freshney, 1987; Oligonucleotide Synthesis, под ред. M.J. Gait, 1984; Methods in Molecular Biology, изд-во Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook, под ред. J.E. Cellis, 1998, из-во Academic Press; Animal Cell Culture, под ред. R.I. Freshney, 1987; J. P. Mather и P.E. Roberts, Introduction to Cell and Tissue Culture, изд-во Plenum Press, 1998; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures, под ред. A. Doyle, J.B. Griffiths и D.G. Newell, изд-во J. Wiley and Sons, 1993-1998; Handbook of Experimental Immunology, под ред. D.M. Weir и С.С. Blackwell; Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells, под ред. J.M. Miller и M.P. Calos, 1987; PCR: The Polymerase Chain Reaction, под ред. Mullis и др., 1994; Current Protocols in Immunology, под ред. J.E. Coligan и др., 1991; Short Protocols in Molecular Biology, изд-во Wiley and Sons, 1999; C.A. Janeway и P. Travers, Immunobiology, 1997; P. Finch, Antibodies, 1997; Antibodies: A Practical Approach, под ред. D. Catty, изд-во IRL Press, 1988-1989; Monoclonal Antibodies: A Practical Approach, под ред. P. Shepherd и С.Dean, изд-во Oxford University Press, 2000; E. Harlow и D. Lane, Using Antibodies: A Laboratory Manual, изд-во Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999; The Antibodies, под ред. M. Zanetti и J. D. Capra, изд-во Harwood Academic Publishers, 1995; и Cancer: Principles and Practice of Oncology, под ред. V.T. DeVita и др., изд-во J.B. Lippincott Company, 1993.
I. Определения
«Интервал» (интервал между отдельными введениями) означает интервал между введением n-ой дозы (n означает целое число 1 или более) и введением (n+1)-ой дозы.
II. Фармацевтическая композиция для подкожной инъекции
Предложена фармацевтическая композиция, предназначенная для применения в способе лечения или предупреждения связанного с С5 заболевания. Фармацевтическая композиция приготовлена в форме для подкожной инъекции и содержит антитело к С5, при этом композицию вводят подкожно с использованием двух фаз,
где на обеих фазах имеется интервал между каждыми двумя подкожными введениями, где каждая фаза включает по меньшей мере один интервал и где на первой фазе
I) по меньшей мере один интервал короче, чем по меньшей мере один интервал на второй фазе, и
II) доза антитела на одно введение является более низкой или такой же, что и доза антитела на одно введение на второй фазе.
Подкожную инъекцию можно осуществлять с использованием общепринятых устройств и методов введения фармацевтической композиции в подкожную ткань путем инъекции. Можно выбирать также специфические устройства и методы для подкожной инъекции.
Примеры антител к С5
Антитело к С5 не ограничено конкретным вариантом и его можно выбирать соответственно из антител, известных в качестве антител к С5. Понятие «антитело к С5» или «антитело, которое связывается с С5» относится к антителу, которое обладает способностью связываться с С5 с аффинностью, достаточной для того, чтобы антитело можно было применять в качестве терапевтического агента, таргетирующего С5.
Согласно одному из объектов изобретения антитела к С5 ингибируют активацию С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела к С5, которые предупреждают расщепление С5, приводящее к образованию С5а и C5b, предупреждая тем самым возникновение анафилатоксической активности, ассоциированной с С5а, а также предупреждая сборку мембраноатакующего комплекса C5b-9 (MAC), ассоциированного с C5b. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела к С5 блокируют превращение С5 в С5а и C5b С5-конвертазой. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела к С5 блокируют доступ С5-конвертазы к сайту расщепления на С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела к С5 блокируют гемолитическую активность, обусловленную активацией С5. В других вариантах осуществления изобретения антитела к С5ингибируют активацию С5 классическим путем и/или альтернативным путем.
Согласно одному из объектов изобретения фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять для лечения или предупреждения связанного с С5 заболевания, основываясь, по меньшей мере частично, на вышеуказанных видах активности антител к С5, таких как ингибирование активации С5.
В некоторых вариантах осуществления изобретения активность С5 можно оценивать по его способности осуществлять лизис клеток в общей воде индивидуума. Способность С5 осуществлять лизис клеток или ее снижение можно оценивать с помощью методов, хорошо известных в данной области, например, с помощью стандартного гемолитического анализа, такого как гемолитический анализ, описанный в Experimental Immunochemistry, под ред. Kabat и Mayer, 2-е изд., 135-240, изд-во CC Thomas, Springfield, IL, 1961, cc. 135 139, или стандартного варианта этого анализа, такого как метод гемолиза куриных эритроцитов, описанный, например, у Hillmen и др., N. Engl. J. Med. 350(6), 2004, cc. 552-559. В некоторых вариантах осуществления изобретения активность С5 или ее ингибирование оценивают количественно с помощью CH50eq-анализа. CH50eq-анализ представляет собой метод измерения общей активности классического пути комплемента в сыворотке. Этот тест представляет собой анализ литической активности, в котором используют сенсибилизированные антителом эритроциты в качестве активатора классического пути комплемента и применяют различные разведения тестируемой сыворотки для определения количества, необходимого для обеспечения 50%-ного лизиса (СН50). Процент гемолиза можно определять, например, с использованием спектрофотометра. CH50eq-анализ представляет собой средство косвенного измерения образования комплекса терминальных компонентов комплемента (ТСС), поскольку сами ТСС непосредственно ответственны за измеряемый гемолиз. Ингибирование активации С5 можно обнаруживать и/или измерять с помощью методов, изложенных и проиллюстрированных в экспериментальных примерах. Применяя анализы указанных или других пригодных типов, можно осуществлять скрининг антител кандидатов, обладающих способностью ингибировать активацию С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения ингибирование активации С5 включает снижение активации С5 по данным анализа по меньшей мере на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35% или 40%, или более по сравнению с воздействием отрицательного контроля в сходных условиях. В некоторых вариантах осуществления изобретения оно относится к ингибированию активации С5 по меньшей мере на 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95%, или более.
В предпочтительных вариантах осуществления изобретения эпитоп антитела к С5 отличается от эпитопа экулизумаба.
В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5, предлагаемое в настоящем изобретении, связывается с эпитопом в бета-цепи С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 связывается с эпитопом в MG1-MG2-домене бета-цепи С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 связывается с эпитопом во фрагменте, состоящем из аминокислот 19-180 бета-цепи С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 связывается с эпитопом в MG1-домене (аминокислоты 20-124 SEQ ID NO: 1) бета-цепи С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 связывается с эпитопом во фрагменте, состоящем из аминокислот 33-124 бета-цепи С5 (SEQ ID NO: 1).
В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5, предлагаемое в настоящем изобретении, связывается с эпитопом в бета-цепи С5, который состоит из MG1-домена. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 связывается с эпитопом в бета-цепи (SEQ ID NO: 1) С5, который содержит по меньшей мере один фрагмент, выбранный из группы, которая состоит из аминокислот 47-57, 70-76 и 107-110. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 связывается с эпитопом во фрагменте бета-цепи (SEQ ID NO: 1) С5, который содержит по меньшей мере одну аминокислоту, выбранную из группы, которая состоит из Thr47, Glu48, Ala49, Phe50, Asp51, Ala52, Thr53, Lys57, His70, Val71, His72, Ser74, Glu76, Val107, Ser108, Lys109 и His110. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 связывается с эпитопом во фрагменте бета-цепи (SEQ ID NO: 1) С5, который содержит по меньшей мере одну аминокислоту, выбранную из группы, которая состоит из Glu48, Asp51, His70, His72, Lys109 и His110. В некоторых вариантах осуществления изобретения связывание антитела к С5 с мутантом С5 снижено по сравнению с его связыванием с С5 дикого типа, где мутант С5 имеет по меньшей мере одну аминокислотную замену в положении, выбранном из группы, которая состоит из Glu48, Asp51, His72 и Lys109. В другом варианте осуществления изобретения рН-зависимое связывание (описанное ниже) антитела к С5 с мутантом С5 снижено по сравнению с его рН-зависимым связыванием с С5 дикого типа, где мутант С5 имеет по меньшей мере одну аминокислотную замену в положении, выбранном из группы, которая состоит из His70, His72 и His110. В следующем варианте осуществления изобретения в мутанте С5 аминокислота в положении, выбранном из Glu48, Asp51 и Lys109, заменена на аланин и аминокислота в положении, выбранном из His70, His72 и His110, заменена на тирозин.
В другом объекте изобретения антитела к С5, предлагаемые в настоящем изобретении, могут обладать рН-зависимыми характеристиками связывания. В контексте настоящего описания понятие «рН-зависимое связывание» означает, что антитело обладает «пониженной способностью связываться с С5 при кислом рН по сравнению с его связыванием при нейтральном рН» (для целей настоящего описания оба понятия можно использовать взаимозаменяемо). Например, антитела с «рН-зависимыми характеристиками связывания» включают антитела, которые связываются с С5 с более высокой аффинностью при нейтральном рН, чем при кислом рН. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела связываются с С5 с аффинностью, по меньшей мере в 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более раз более высокой при нейтральном рН, чем при кислом рН. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела связываются с С5 с более высокой аффинностью при рН 7,4, чем при рН 5,8. В других вариантах осуществления изобретения антитела связываются с С5 с аффинностью, по меньшей мере в 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более раз более высокой при рН 7,4, чем при рН 5,8.
-7
-8
-9
-10
-11
-12
-9
-8
-7
-6
Для целей настоящего описания «аффинность» антитела к С5 выражают в понятиях KD антитела. KD антитела означает константу равновесия диссоциации взаимодействия антитело-антиген. Чем выше величина KD, характеризующая связывание антитела с его антигеном, тем слабее его аффинность связывания с указанным конкретным антигеном. Таким образом, в контексте настоящего описания понятие «более высокая аффинность при нейтральном рН, чем при кислом рН» (или эквивалентное понятие «рН-зависимое связывание») означает, что KD, характеризующая связывание антитела с С5 при кислом рН, выше, чем KD, характеризующая связывание антитела с С5 при нейтральном рН. Например, в контексте настоящего изобретения считается, что антитело связывается с С5 с более высокой аффинностью при нейтральном рН, чем при кислом рН, если KD, характеризующая связывание антитела с С5 при кислом рН, по меньшей мере в 2 раза выше, чем KD, характеризующая связывание антитела с С5 при нейтральном рН. Таким образом, антитела к С5, предлагаемые в настоящем изобретении, включают антитела, связывание которых с С5 при кислом рН характеризуется величиной KD, которая по меньшей мере в 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более раз превышает KD, характеризующую связывание с С5 при нейтральном рН. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при нейтральном рН может составлять 10, 10, 10, 10,10, 10 М или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при кислом рН может составлять 10М, 10М, 10М, 10М или более.
-7
-8
-9
-10
-11
-12
-9
-8
-7
-6
В других вариантах осуществления изобретения считается, что антитело связывается с С5 с более высокой аффинностью при нейтральном рН, чем при кислом рН, если величина KD, характеризующая связывание антитела с С5 при рН 5,8, по меньшей мере в 2 раза выше, чем KD, характеризующая связывание антитела с С5 при рН 7,4. В некоторых вариантах осуществления изобретения связывание антител с С5 при рН 5,8 характеризуется величиной KD, которая по меньшей мере в 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более раз превышает KD, характеризующую связывание антитела с С5 при рН 7,4. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при рН 7,4 может составлять 10, 10, 10, 10, 10, 10М или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при рН 5,8 может составлять 10, 10, 10, 10М или более.
-1
-2
-3
-4
-5
-6
-3
-2
-1
-2
-3
-4
-5
-6
-3
-2
-1
Характеристики связывания антитела с конкретным антигеном можно выражать также в виде kd антитела. Величина kd антитела означает константу скорости диссоциации антитела относительно конкретного антигена и ее выражают в виде величин, обратных секунде (т.е., с). Повышенная величина kd означает более слабое связывание антитела с его антигеном. Таким образом, настоящее изобретение включает антитела, связывание которых с С5 характеризуется более высокой величиной kd при кислом рН, чем при нейтральном рН. Антитела, предлагаемые в настоящем изобретении, включают антитела, связывание которых с С5 при кислом рН характеризуется величиной kd, которая по меньшей мере в 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более раз превышает kd, характеризующую связывание антитела с С5 при нейтральном рН. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при нейтральном рН может составлять 10, 10, 10, 10, 10 1/с или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при кислом рН может составлять 10, 10, 10 1/с или более. Антитела, предлагаемые в настоящем изобретении, включают также антитела, связывание которых с С5 характеризуется более высокой величиной kd при рН 5,8, чем при рН 7,4. Антитела, предлагаемые в настоящем изобретении, включают антитела, связывание которых с С5 при рН 5,8 характеризуется величиной kd, которая по меньшей мере в 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более раз превышает kd, характеризующую связывание антитела с С5 при рН 7,4. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при рН 7,4 может составлять 10, 10, 10, 10, 10 1/с или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при рН 5,8 может составлять 10, 10, 10 1/с или более.
-7
-8
-9
-10
-11
-12
-9
-8
-7
-6
-7
-8
-9
-10
-11
-12
-9
-8
-7
-6
В некоторых случаях «пониженную способность связываться с С5 при кислом рН по сравнению со способностью связываться при нейтральном рН» выражают в виде соотношения величины KD, характеризующей связывание антитела с С5 при кислом рН, и величины KD, характеризующей связывание антитела с С5 при нейтральном рН (или наоборот). Например, антитело может рассматриваться как обладающее «пониженной способностью связываться с С5 при кислом рН по сравнению со способностью связываться при нейтральном рН» для целей настоящего изобретения, если для антитела соотношение KD при кислом/нейтральном рН составляет 2 или более. В некоторых вариантах осуществления изобретения соотношение KD при рН 5,8/рН 7,4 для антитела составляет 2 или более. В некоторых вариантах осуществления изобретения соотношение KD при кислом/нейтральном рН для антитела может составлять 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при нейтральном рН может составлять 10, 10, 10, 10, 10, 10М или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при кислом рН может составлять 10, 10, 10, 10М или более. В других случаях антитело может рассматриваться как обладающее «пониженной способностью связываться с С5 при кислом рН по сравнению со способностью связываться при нейтральном рН», если для антитела характерно соотношение KD при рН 5,8/рН 7,4, составляющее 2 или более. В некоторых приведенных в качестве примеров вариантах осуществления изобретения соотношение KD при рН 5,8/рН 7,4 для антитела может составлять 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при рН 7,4 может составлять 10, 10, 10, 10, 10, 10 М или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина KD антитела при рН 5,8 может составлять 10, 10, 10, 10М или более.
-2
-3
-4
-5
-6
-3
-2
-1
-2
-3
-4
-5
-3
-2
-1
В некоторых случаях «пониженную способность связываться с С5 при кислом рН по сравнению со способностью связываться при нейтральном рН» выражают в виде соотношения величины kd, характеризующей связывание антитела с С5 при кислом рН, и величины kd, характеризующей связывание антитела с С5 при нейтральном рН (или наоборот). Например, антитело может рассматриваться как обладающее «пониженной способностью связываться с С5 при кислом рН по сравнению со способностью связываться при нейтральном рН» для целей настоящего изобретения, если для антитела соотношение kd при кислом/нейтральном рН составляет 2 или более. В некоторых вариантах осуществления изобретения соотношение kd при рН 5,8/рН 7,4 для антитела к С5 составляет 2 или более. В некоторых приведенных в качестве примеров вариантах осуществления изобретения соотношение kd при кислом/нейтральном рН для антитела может составлять 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более. В других приведенных в качестве примеров вариантах осуществления изобретения соотношение kd при рН 5,8/рН 7,4 для антитела может составлять 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при нейтральном рН может составлять 10, 10, 10, 10, 10 1/с или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при кислом рН может составлять 10, 10, 10 1/с или более. В некоторых приведенных в качестве примеров вариантах осуществления изобретения соотношение kd при рН 5,8/рН 7,4 для антитела может составлять 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 или более. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при рН 7,4 может составлять 10, 10, 10, 10, 10-6 1/с или менее. В другом варианте осуществления изобретения величина kd антитела при рН 5,8 может составлять 10,10, 10 1/с или более.
В контексте настоящего описании понятие «кислый рН» означает рН от 4,0 до 6,5. Понятие «кислый рН» включает одно из следующих значений рН 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4 и 6,5. В конкретных объектах изобретения «кислый рН» соответствует 5,8.
В контексте настоящего описании понятие «нейтральный рН» означает рН от 6,7 до примерно 10,0. Понятие «нейтральный рН» включает одно из следующих значений рН 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8,0, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8,8, 8,9, 9,0, 9,1, 9,2, 9,3, 9,4, 9,5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9, и 10,0. В конкретных объектах изобретения «нейтральный рН» соответствует 7,4.
Указанные в настоящем описании величины KD и kd можно определять с помощью биосенсора на основе метода поверхностного плазмонного резонанса для характеризации взаимодействий антитело-антиген. Величины KD и величины kd можно определять при 25°С или 37°С.
В другом объекте изобретения антитело к С5 содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), которая по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения последовательность VH представляет собой аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения последовательность VH, идентичная по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), инсерции или делеции относительно референс-последовательности, но антитело к С5, содержащее указанную последовательность, сохраняет способность связываться с С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения в целом от 1 до 10 аминокислот заменено, встроено и/или удалено путем делеции в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения замены, инсерции или делеции затрагивают области вне HVR (т.е. FR). Необязательно антитело к С5 содержит последовательность VH, представленную в SEQ ID NO: 2, включая пост-трансляционные модификации указанной последовательности. В конкретном варианте осуществления изобретения VH содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) HVR-H1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, (б) HVR-H2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, и (в) HVR-H3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5.
В контексте настоящего описания понятие «HVR» обозначает «гипервариабельный участок», а понятие «FR» обозначает «каркасный участок».
Понятие «каркасный участок» или «FR», означает остатки вариабельного домена, отличные от остатков гипервариабельного участка (HVR). FR вариабельного домена, как правило, состоит из четырех FR-доменов: FR1, FR2, FR3 и FR4. Таким образом, последовательности HVR и FR, как правило, имеют следующее расположение в VH (или VL): FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
Понятие «гипервариабельный участок» или «HVR» в контексте настоящего описания относится к каждому из участков вариабельного домена антитела, последовательности которых являются гипервариабельными («определяющие комплементарность участки» или «CDR») и/или формируют петли определенной структуры («гипервариабельные петли»), и/или содержат контактирующие с антигеном остатки («контакты с антигеном»). Как правило, антитела содержат шесть HVR; три в VH (H1, Н2, Н3) и три в VL (L1, L2, L3). Согласно настоящему описанию примеры HVR включают (а) гипервариабельные петли, включающие аминокислотные остатки 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (Н2) и 96-101 (Н3) (Chothia и Lesk, J. Mol. Biol. 196, 1987, cc. 901-917); (6) CDR, включающие аминокислотные остатки 24-34 (L1), 50-56 (L2), 89-97 (L3), 31-35b (H1), 50-65 (H2) и 95-102 (Н3) (Kabat и др., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-ое изд., изд-во Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD,1991, публикация NIH 91-3242); (в) области контакта с антигеном, включающие аминокислотные остатки 27 с-36 (L1), 46-55 (L2), 89-96 (L3), 30-35b (HI), 47-58 (Н2) и 93-101 (Н3) (MacCallum и др., J. Mol. Biol. 262, 1996, cc. 732-745); и (г) комбинации остатков, указанных в подпунктах (а), (б) и/или (в), включающие аминокислотные остатки HVR 46-56 (L2), 47-56 (L2), 48-56 (L2), 49-56 (L2), 26-35 (H1), 26-35b (H1), 49-65 (Н2), 93-102 (Н3) и 94-102 (Н3). Остатки в HVR и другие остатки в вариабельном домене (например, остатки в FR) нумеруют согласно Kabat и др., выше.
В другом объекте изобретения антитело к С5 содержит последовательность вариабельного домена легкой цепи ((VL), которая по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления изобретения последовательность VL представляет собой аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления изобретения последовательность VL, идентичная по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), инсерции или делеции относительно референс-последовательности, но антитело к С5, содержащее указанную последовательность, сохраняет способность связываться с С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения в целом от 1 до 10 аминокислот заменено, встроено и/или удалено путем делеции в SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления изобретения замены, инсерции или делеции затрагивают области вне HVR (т.е. FR). Необязательно антитело к С5 содержит последовательность VL, представленную в SEQ ID NO: 6, включая пост-трансляционные модификации указанной последовательности. В конкретном варианте осуществления изобретения VL содержит один, два или три HVR, выбранных из: (a) HVR-L1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, (б) HVR- L2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, и (в) HVR- L3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9.
В другом варианте осуществления изобретения антитело представляет собой полноразмерное антитело, например, интактное антитело IgG1-, IgG2-, IgG3- или IgG4-подклассса, или антитело, сконструированное так, чтобы оно имело области из двух или большего количества IgG, выбранных из IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, в области(ях), которая/которые являются гомологичными среди IgG-подклассов, с помощью рекомбинации. Антитело может содержать приемлемую Fc-область, содержащую последовательность человеческой Fc-области (например, Fc-области человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4).
Варианты Fc-области
В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5, предлагаемое в настоящем изобретении, содержит вариант Fc-области, в котором в нативную последовательность Fc-области антитела интродуцирована(ы) одна или несколько аминокислотных модификаций. Вариант Fc-области может содержать последовательность человеческой Fc-области (например, Fc-области человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4), включающую аминокислотную модификацию (например, замену) в одном или нескольких аминокислотных положениях.
Некоторые варианты осуществления изобретения относятся к варианту антитела, который обладает некоторыми, но не всеми эффекторными функциями, что делает его перспективным кандидатом для путей применения, для которых является важным время полужизни антитела in vivo, однако некоторые эффекторные функции (такие как комплементзависимая цитотоксичность (CDC) и ADCC) не являются необходимыми или являются вредными. Можно осуществлять анализы цитотоксичности in vitro и/или in vivo для подтверждения снижения/истощения CDC- и/или ADCC-активности. Например, можно осуществлять анализы связывания Fc-рецептора (FcR) для гарантии того, что у антитела отсутствует способность к связыванию с Fc-гамма R (и поэтому, вероятно, отсутствует ADCC-активность), но сохраняется способность связываться с FcRn. Первичные клетки, опосредующие ADCC, т.е. NK-клетки, экспрессируют только Fc-гамма RIII, в то время как моноциты экспрессируют Fc-гамма RI, Fc-гамма RII и Fc-гамма RIII. Данные об экспрессии FcR на гематопоэтических клетках обобщены в таблице 3 на с. 464 у Ravetch и Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9, 1991, cc. 457-492. Примерами анализов in vitro ADCC-активности представляющей интерес молекулы являются (но не ограничиваясь только ими) анализы, описанные в US №5500362 (см., например, Hellstrom и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, 1986, cc. 7059-7063 и Hellstrom и др., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82, 1985, cc. 1499-1502); US №5821337 (см. Bruggemann и др., J. Exp. Med. 166, 1987, cc. 1351-1361). В альтернативном варианте можно применять нерадиоактивные методы анализа (см., например, нерадиоактивный анализ цитотоксичности ACTI™ на основе проточной цитометрии (фирма CellTechnology, Inc. Маунтин-Вью, шт. Калифорния); и нерадиоактивный анализ цитотоксичности CytoTox 96 (фирма Promega, Мэдисон, шт. Висконсин). Пригодными для таких анализов эффекторными клетками являются мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) и естественные клетки-киллеры (NK). В альтернативном или дополнительном варианте ADCC-активность представляющей интерес молекулы можно оценивать in vivo, например, на животной модели, например, как описано у Clynes и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 1998, cc. 652-656. Можно осуществлять также анализы связывания C1q для подтверждения того, что антитело не может связывать C1q и поэтому у него отсутствует CDC-активность (см., например, описание ELISA для оценки связывания C1q и С3с в WO 2006/029879 и WO 2005/100402). Для оценки активации комплемента можно осуществлять анализ CDC (см., например, Gazzano-Santoro и др., J. Immunol. Methods 202, 1996, cc. 163-171; Cragg и др., Blood 101, 2003, cc. 1045-1052; и Cragg, Blood 103, 2004, cc. 2738-2743). Определение FcRn-связывания и клиренса/времени полужизни in vivo можно осуществлять также с использованием методов, известных в данной области (см., например, Petkova и др., Int'l. Immunol. 18(12), 2006, cc. 1759-1769).
Антитела с пониженной эффекторной функцией включают антитела с заменой одного или нескольких следующих остатков Fc-области, таких как 238, 265, 269, 270, 297, 327 и 329 (см., например, US №6737056). К указанным мутантам Fc относятся мутанты Fc с заменами в двух или большем количестве из следующих аминокислотных положений: 265, 269, 270, 297 и 327, включая так называемый мутант «DANA» Fc-области, несущий замену остатков 265 и 297 на аланин (US №7332581).
Описаны некоторые варианты антител с повышенной или пониженной способностью связываться с FcR (см., например, US №6737056; WO 2004/056312 и Shields и др., J. Biol. Chem. 276, 2001, cc. 6591-6604).
Согласно конкретным вариантам осуществления изобретения вариант антитела содержит Fc-область с одной или несколькими аминокислотными заменами, которые повышают ADCC, например, замены в положениях 298, 333, и/или 334 Fc-области (EU-нумерация остатков).
В некоторых вариантах осуществления изобретения в Fc-области осуществляют изменения, которые приводят к измененной (т.е. либо повышенной, либо пониженной) способности связывать C1q и/или комплементзависимой цитотоксичности (CDC), что описано, например, в US №6194551, WO 1999/51642 и у Idusogie и др., J. Immunol. 164, 2000, cc. 4178-4184.
Антитела с удлиненным временем полужизни и повышенной способностью к связыванию с неонатальным Fc-рецептором (FcRn), который ответствен за перенос материнских IgG эмбриону (Guyer и др., J. Immunol. 117, 1976, cc. 587-593 и Kim и др., J. Immunol. 24, 1994, cc. 2429-2434), описаны в US 2005/0014934 А1 (Hinton и др.). Эти антитела содержат Fc-область с одной или несколькими заменами, которые повышают связывание Fc-области с FcRn. Указанные варианты Fc-области включают варианты с заменами одного или нескольких следующих остатков Fc-области: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 или 434, например, замену остатка 434 в Fc-области (US №7371826).
Дополнительные примеры, касающиеся других вариантов Fc-области, описаны также у Duncan, Nature 322, 1988, cc. 738-740; в US №№5648260 и 5624821 и в WO 1994/29351.
В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5, предлагаемое в настоящем изобретении, содержит VH, представленную выше в качестве одного из вариантов осуществления изобретения, и константную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в одной из SEQ ID NO: 10, 11, 12, 13, 14 и 15. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5 содержит VL, представленную выше в качестве одного из вариантов осуществления изобретения, и константную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в одной из SEQ ID NO: 16, 17 и 18.
В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело к С5, предлагаемое в настоящем изобретении, представляет собой любое из антител, описанных в WO 2016/098356, WO 2017/123636 и WO 2017/132259.
Подкожное введение
Композицию, предназначенную для применения согласно настоящему изобретению, вводят подкожно с использованием двух фаз. На обеих фазах имеется интервал между каждыми двумя подкожными введениями. Каждая фаза включает по меньшей мере один интервал. Последний интервал первой фазы находится между последним подкожным введением на первой фазе и первым подкожным введением на второй фазе.
В некоторых вариантах осуществления изобретения по меньшей мере один интервал на первой фазе составляет от 1 дня до 2 месяцев. Пригодный интервал на первой фазе в приемлемом диапазоне можно определять в зависимости от состояний индивидуума или пациента. Конкретный интервал между подкожными инъекциями составляет 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 день, 12 дня, 13 дня, 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19 дней, 20 дней, 21 день, 22 дня, 23 дня, 24 дня, 25 дней, 26 дней, 27 дней, 28 дней, 29 дней, 30 дней, 31 день, 32 дня, 33 дня, 34 дня, 35 дней, 36 дней, 37 дней, 38 дней, 39 дней, 40 дней, 41 день или 42 дня. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал на первой фазе составляет 4-35 дней. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал на первой фазе составляет 5-14 дней. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал на первой фазе составляет 7 или 14 дней. На первой фазе фармацевтическую композицию можно вводить один раз каждую неделю (еженедельно) или один раз каждые 2 недели (раз в две недели или с двухнедельным интервалом).
В некоторых вариантах осуществления изобретения по меньшей мере один интервал на второй фазе составляет от 2 дней до 6 месяцев. Пригодную продолжительность по меньшей мере одного интервала на второй фазе в приемлемом диапазоне можно определять в зависимости от состояний индивидуума или пациента. Приведенная в качестве примера продолжительность по меньшей мере одного интервала на второй фазе составляет 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19 дней, 20 дней, 21 день, 22 дня, 23 дня, 24 дня, 25 дней, 26 дней, 27 дней, 28 дней, 29 дней, 30 дней, 31 день, 32 дня, 33 дня, 34 дня, 35 дней, 36 дней, 37 дней, 38 дней, 39 дней, 40 дней, 41 день, 42 дня, 43 дня, 44 дня, 45 дней, 46 дней, 47 дней, 48 дней, 49 дней, 50 дней, 51 день, 52 дня, 53 дня, 54 дня, 55 дней, 56 дней, 57 дней, 58 дней, 59 дней, 60 дней, 61 день, 62 дня, 63 дня, 64 дня, 65 дней, 66 дней, 67 дней, 68 дней, 69 дней, 70 дней, 71 день, 72 дня, 73 дня, 74 дня, 75 дней, 76 дней, 77 дней, 78 дней, 79 дней, 80 дней, 81 день, 82 дня, 83 дня, 84 дня, 85 дней, 86 дней, 87 дней, 88 дней, 89 дней, 90 дней, 91 день, 92 дня, 93 дня, 94 дня, 95 дней, 96 дней, 97 дней, 98 дней, 99 дней, 100 дней, 101 день, 102 дня, 103 дня, 104 дня, 105 дней, 106 дней, 107 дней, 108 дней, 109 дней, 110 дней, 111 день, 112 дня, 113 дня, 114 дней, 115 дней, 116 дней, 117 дней, 118 дней, 119 дней, 120 дней, 121 день, 122 дня, 123 дня, 124 дня, 125 дней, 126 дней, 127 дней, 128 дней, 129 дней, 130 дней, 131 день, 132 дня, 133 дня, 134 дня, 135 дней, 136 дней, 137 дней, 138 дней, 139 дней, 140 дней, 141 день, 142 дня, 143 дня, 144 дня, 145 дней, 146 дней, 147 дней, 148 дней, 149 дней, 150 дней, 151 день, 152 дня, 153 дня, 154 дня, 155 дней, 156 дней, 157 дней, 158 дней, 159 дней, 160 дней, 161 день, 162 дня, 163 дня, 164 дня, 165 дней, 166 дней, 167 дней, 168 дней, 169 дней, 170 дней, 171 день, 172 дня, 173 дня, 174 дня, 175 дней, 176 дней, 177 дней, 178 дней, 179 дней, 180 дней, 181 день, 182 дня, 183 дня или 184 дня. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения продолжительность по меньшей мере одного интервала на второй фазе составляет от 15 дней до 3 месяцев. На второй фазе фармацевтическую композицию можно вводить один раз каждый месяц (ежемесячно), один раз каждые два месяца (раз в два месяца или с интервалом в два месяца) или один раз каждые три месяца (раз в три месяца или с трехмесячным интервалом). Более длительный интервал может снижать нагрузку на пациента или его страдание.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическую композицию вводят подкожно в дозе, содержащей 17-6000 мг антитела, на первой и второй фазах. Пригодную дозу можно определять в приемлемом диапазоне в зависимости от состояний индивидуума или пациента. В случае, когда фармацевтическую композицию вводят путем подкожной инъекции индивидууму многократно, не требуется, чтобы дозы были одинаковыми в течение всего времени, и их можно определять в приемлемом диапазоне. Например, дозу можно постепенно снижать.
В некоторых вариантах осуществления изобретения доза для подкожного введения на первой фазе содержит 50-350 мг антитела. Когда доза антитела на одно подкожное введение на первой фазе ниже, чем доза антитела на одно подкожное введение на второй фазе, то доза антитела на одно подкожное введение на первой фазе составляет предпочтительно 150-200 мг. Конкретная предпочтительная доза в этом случае составляет 170 мг. Когда доза антитела на одно подкожное введение на первой фазе является такой же, что и доза антитела на одно подкожное введение на второй фазе, то доза на одно подкожное введение на первой фазе предпочтительно содержит от 300 до 350 мг антитела. Конкретная предпочтительная доза в этом случае составляет 340 мг. Когда фармацевтическую композицию вводят еженедельно (с интервалом примерно 7 дней) на первой фазе, то предпочтительно доза составляет 170 мг или 340 мг. Когда фармацевтическую композицию вводят на первой фазе один раз в две недели (с интервалом примерно 14 дней), то предпочтительная доза составляет 340 мг.
В некоторых вариантах осуществления изобретения доза антитела на одно введение на второй фазе составляет от 350 до 1000 мг. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения доза составляет от 650 до 700 мг. Когда фармацевтическую композицию вводят один раз в четыре недели (с интервалом примерно 28 дней) или ежемесячно, то предпочтительная доза составляет 680 мг. Наиболее предпочтительным для подкожного введения является режим дозирования, включающий 680 мг антитела один раз в четыре недели или ежемесячно, поскольку это может снижать нагрузку на пациента или его страдание.
В некоторых вариантах осуществления изобретения доза антитела к С5 на одно введение на первой фазе в 3-5 раз ниже, чем доза антитела к С5 на одно введение на второй фазе. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения доза антитела на одно подкожное введение на первой фазе в 4 раза ниже, чем доза антитела на одно подкожное введение на второй фазе.
В некоторых вариантах осуществления изобретения количество подкожных введений на первой фазе составляет от 1 до 12. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения количество составляет от 5 до 10. В других предпочтительных вариантах осуществления на первой фазе осуществляют 8 подкожных введений.
В конкретном варианте осуществления изобретения в фармацевтическую композицию можно включать фармацевтически приемлемый носитель, пригодный для обычной композиции для подкожной инъекции. Тип носителя для подкожной инъекции можно выбирать из носителей, известных в целом в данной области.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтическая композиция может представлять собой любую, выбранную из группы, которая включает жидкую, полутвердую и твердую композицию. Твердую композицию получают, как правило, путем лиофилизации из жидкой препаративной формы. Лиофилизированную композицию, как правило, восстанавливают с помощью воды или соляного раствора непосредственно перед подкожной инъекцией.
Когда композицию вводят подкожно, концентрация антитела к С5 в жидкой препаративной форме композиции определяется общепринятым диапазоном, известным в данной области. В конкретном варианте осуществления изобретения объем подкожной инъекции определяется обычным диапазоном, известным в данной области.
В некоторых вариантах осуществления изобретения связанное с С5 заболевание представляет собой опосредуемое комплементом заболевание или состояние, которое включает избыточную или неконтролируемую активацию С5. В некоторых вариантах осуществления изобретения связанное с С5 заболевание представляет собой по меньшей мере одно заболевание, выбранное из группы, которая состоит из ревматоидного артрита (RA); волчаночного нефрита; повреждения, вызываемого ишемией-реперфузией; пароксизмальной ночной гемоглобинурии (PNH); атипичного гемолитико-уремического синдрома (aHUS); болезни плотных депозитов (DDD); дегенерации желтого пятна; синдрома: гемолиз, повышение активности ферментов печени и тромбоцитопения (HELLP); тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР); спонтанной потери плода; Pauci-иммунного васкулита; буллезного эпидермолиза; повторной потери плода; рассеянного склероза (MS); травматического повреждения головного мозга и повреждения, обусловленного инфарктом миокарда, сердечно-легочным шунтированием и гемодиализом; устойчивой генерализованной миастении Гравис (gMG); нейромиелита зрительного нерва (NMO). В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения связанное с С5 заболевание представляет собой PNH.
В некоторых объектах изобретения фармацевтическую композицию, которая приготовлена в форме для внутривенного введения и содержит антитело к С5, вводят перед первым подкожным введением на первой фазе. Предпочтительно антитело к С5 во вводимой внутривенно композиции является таким же, что и антитело к С5 во вводимой подкожно композиции. Вводимая внутривенно фармацевтическая композиция представляет собой композицию, описанную ниже в настоящем описании.
В некоторых вариантах осуществления изобретения композицию для подкожной инъекции вводят подкожно в тот же день или через один или несколько дней после внутривенного введения дозы композиции для внутривенного введения. Одну или несколько доз композиции для внутривенной инъекции можно вводить индивидууму или пациенту перед введением первой дозы композиции для подкожной инъекции. В предпочтительном варианте осуществления изобретения первую дозу композиции для подкожной инъекции вводят после конечной дозы композиции для внутривенной инъекции.
В некоторых вариантах осуществления изобретения первое подкожное введение на первой фазе осуществляют в течение промежутка времени, составляющего от 0 дней до 1 месяца, после конечного введения вводимой внутривенно фармацевтической композиции. В частности, период времени между первым подкожным введением и конечным внутривенным введением составляет 0 дней (т.е. находится в пределах 24 ч), 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19 дней, 20 дней, 21 день, 22 дня, 23 дня, 24 дня, 25 дней, 26 дней, 27 дней, 28 дней, 29 дней, 30 дней или 31 день. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения период составляет от 0 дней (т.е. находится в пределах 24 ч) до 14 дней. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения период составляет от 0 дней (т.е. находится в пределах 24 ч) до 10 дней. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения период составляет от 0 дней (т.е. находится в пределах 24 ч) до 8 дней.
III. Фармацевтическая композиция для внутривенной инъекции
В некоторых объектах изобретения на первой фазе первое подкожное введение фармацевтической композиции, предназначенной для применения согласно настоящему изобретению, осуществляют после конечного введения композиции для внутривенного введения.
Таким образом, в одном из вариантов осуществления настоящего изобретения композицию, которая приготовлена в форме для внутривенного введения и содержит антитело к С5, вводят внутривенно перед первым подкожным введением на первой фазе. В предпочтительном варианте осуществления изобретения антитело к С5 во внутривенной композиции является таким же, что и антитело к С5 в подкожной композиции.
Предпочтительно после первого подкожного введения не осуществляют никаких внутривенных введений. Таким образом, согласно дополнительному варианту осуществления изобретения последнее внутривенное введение осуществляют перед первым подкожным введением.
Фармацевтическая композиция, приготовленная в форме для внутривенной инъекции, предлагаемая в настоящем изобретении, предназначена для применения для лечения или предупреждения связанного с С5 заболевания, содержит антитело к С5 и ее вводят внутривенно. Внутривенную инъекцию можно осуществлять с использованием общепринятых устройств и методов введения фармацевтической композиции в вену путем инъекции. Можно выбирать также специфические устройства и методы для внутривенной инъекции.
Антитело к С5, применяемое для внутривенной инъекции, может представлять собой любое антитело, описанное выше для фармацевтических композиций для подкожной инъекции. Фармацевтическая композиция для внутривенной инъекции и фармацевтическая композиция для подкожной инъекции могут содержать одно и то же антитело к С5 или могут содержать другое антитело к С5. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения антитело к С5, применяемое для внутривенной инъекции, представляет собой такое же антитело, что и описанное выше антитело, применяемое для подкожной инъекции.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическую композицию вводят внутривенно в дозе, содержащей 50-5000 мг антитела. Пригодную дозу можно определять в приемлемом диапазоне в зависимости от состояний индивидуума или пациента. В случае, когда фармацевтическую композицию вводят внутривенно индивидууму многократно, не требуется, чтобы дозы были одинаковыми в течение всего времени, и их можно определять произвольно, если дозы находятся в приемлемом диапазоне. Например, дозу можно постепенно снижать. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения диапазон доз составляет от 55 до 4000 мг антитела. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения диапазон доз составляет от 60 до 2500 мг антитела. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения диапазон доз составляет от 100 до 2500 мг антитела. Конкретными предпочтительными дозами являются дозы, составляющие 75, 125, 150, 300, 375, 500 и 1000 мг. Другими предпочтительными дозами являются дозы, составляющие 375, 500 и 1000 мг, и среди них наиболее предпочтительной является доза 1000 мг.
В некоторых вариантах осуществления изобретения количество введений фармацевтической композиции, которую вводят путем внутривенной инъекции, не ограничено конкретно и может представлять собой одно или несколько введений. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения количество введений может представлять собой одно, два или три введения. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения количество введений представляет собой одно или два введения. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения количество введений представляет собой одно введение. Уменьшение количества введений позволяет снижать нагрузку на пациента или его страдание.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, в том случае, когда фармацевтическую композицию вводят индивидууму или пациенту внутривенно многократно, композицию вводят один раз в час или каждые 14 дней. Пригодный интервал между внутривенными инъекциями можно определять в приемлемом диапазоне в зависимости от состояний индивидуума или пациента.
Конкретный интервал между внутривенными инъекциями составляет 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч, 24 ч, 25 ч, 26 ч, 27 ч, 28 ч, 29 ч, 30 ч, 31 ч, 32 ч, 33 ч, 34 ч, 35 ч, 36 ч, 37 ч, 38 ч, 39 ч, 40 ч, 41 ч, 42 ч, 43 ч, 44 ч, 45 ч, 46 ч, 47 ч, 48 ч, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней или 14 дней. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал между введениями составляет от 24 ч до 10 дней. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал между введениями составляет от 48 ч до 7 дней. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал между введениями составляет от 3 до 5 дней.
В конкретном варианте осуществления изобретения в фармацевтическую композицию можно включать фармацевтически приемлемый носитель, пригодный для обычной композиции для внутривенной инъекции. Тип носителя для внутривенной инъекции можно выбирать из носителей, известных в целом в данной области.
В некоторых вариантах осуществления изобретения препаративная форма фармацевтической композиции может представлять собой любую, выбранную из группы, которая включает жидкую, полутвердую и твердую препаративную форму. Твердую композицию получают, как правило, путем лиофилизации из жидкого препарата. Лиофилизированную композицию, как правило, восстанавливают с помощью воды или соляного раствора непосредственно перед внутривенной инъекцией. Препаративная форма фармацевтической композиции для внутривенной инъекции может быть такой же или отличаться от препаративной формы фармацевтической композиции для подкожной инъекции. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения препаративная форма фармацевтической композиции для внутривенной инъекции является такой же, что и препаративная форма фармацевтической композиции для подкожной инъекции, что способствует снижению стоимости производства.
Когда композицию вводят внутривенно, концентрация антитела к С5 в жидкой препаративной форме композиции определяется общепринятым диапазоном, известным в данной области. В конкретном варианте осуществления изобретения объем внутривенной инъекции определяется обычным диапазоном, известным в данной области.
В некоторых объектах изобретения дозу композиции для внутривенной инъекции вводят до начальной дозы другой фармацевтической композиции, которую вводят подкожно. Фармацевтическая композиция для подкожной инъекции представляет собой одну из описанных выше композиций.
В некоторых вариантах осуществления изобретения композицию для внутривенной инъекции вводят внутривенно в тот же день или за один или несколько дней до первой дозы композиции для подкожной инъекции, которую вводят подкожно. Одну или несколько доз композиции для внутривенной инъекции можно вводить индивидууму или пациенту до введения первой дозы композиции для подкожной инъекции. В предпочтительном варианте осуществления изобретения конечную дозу композиции для внутривенной инъекции вводят до первой дозы композиции для подкожной инъекции.
В некоторых вариантах осуществления изобретения дозу композиции для внутривенной инъекции вводят в тот же день или за 1 день-1 месяц до введения первой дозы композиции для подкожной инъекции. Конкретный интервал между введением дозы композиции для внутривенной инъекции и первой дозы композиции для подкожной инъекции составляет 0 дней (т.е. находится в пределах 24 ч), 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19 дней, 20 дней, 21 день, 22 дня, 23 дня, 24 дня, 25 дней, 26 дней, 27 дней, 28 дней, 29 дней, 30 дней или 31 день. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал составляет от 0 дней (т.е. находится в пределах 24 ч) до 14 дней. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал составляет от 0 дней (т.е. находится в пределах 24 ч) до 10 дней. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения интервал составляет от 0 дней (т.е. находится в пределах 24 ч) до 8 дней.
IV. Переход с применения другого фармакологического продукта
Согласно другому объекту изобретения фармацевтические композиции для подкожной или внутривенной инъекции можно применять для лечения или предупреждения связанного с С5 заболевания у индивидуума, которого лечили один или несколько раз с помощью по меньшей мере одного фармакологического продукта, предназначенного для применения для лечения или предупреждения заболевания. Например, фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять для лечения связанного с С5 заболевания у пациента, которого ранее лечили с помощью по меньшей мере одного фармакологического продукта, предназначенного для лечения заболевания, но для которого ожидается улучшенный ответ на лечение с использованием фармацевтических композиций, предлагаемых в настоящем изобретении. В таких случаях медикаментозное лечение можно переключать с фармакологического продукта на фармацевтическую композицию, предлагаемую в настоящем изобретении. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения начальную дозу композиции для внутривенной инъекции, предлагаемой в настоящем изобретении, вводят после конечной дозы фармакологического продукта, применяемого для предшествующего лечения.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармакологический продукт содержит действующее вещество, которое отличается от антитела к С5, применяемого в описанной выше композиции для подкожной и внутривенной инъекции. В некоторых вариантах осуществления изобретения действующее вещество фармакологического продукта представляет собой siPHK, мишенью которой является мРНК С5, или антитело к С5, отличающееся от антитела к С5, которое содержится в описанной выше композиции для подкожной и внутривенной инъекции. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения фармакологический продукт содержит антитело, которое отличается от антител в описанной выше композиции для подкожной и внутривенной инъекции. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения антитело, входящее в фармакологический продукт, который применяли для предшествующего лечения, представляет собой экулизумаб или его производное.
В некоторых вариантах осуществления изобретения начальную дозу композиции для внутривенной инъекции, предлагаемой в настоящем изобретении, вводят в тот же день или через один или несколько дней после введения конечной дозы фармакологического продукта. Конкретный интервал между введением конечной дозы фармакологического продукта и начальной дозы композиции для внутривенной инъекции, предлагаемой в настоящем изобретении, составляет 0 дней (это означает, что начальную дозу композиции для внутривенной инъекции вводят в тот же день, что и конечную дозу фармакологического продукта), 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19 дней, 20 дней или 21 день. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения композицию для внутривенной инъекции, предлагаемую в настоящем изобретении, вводят через 3 или большее количество дней после конечной дозы фармакологического продукта. В более предпочтительных вариантах осуществления изобретения композицию для внутривенной инъекции, предлагаемую в настоящем изобретении, вводят через 7 или большее количество дней после конечной дозы фармакологического продукта. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения композицию для внутривенной инъекции, предлагаемую в настоящем изобретении, вводят через 14 или большее количество дней после конечной дозы фармакологического продукта. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения композицию для внутривенной инъекции, предлагаемую в настоящем изобретении, вводят через 21 или большее количество дней после конечной дозы фармакологического продукта.
В некоторых вариантах осуществления изобретения начальную дозу композиции для внутривенной инъекции, предлагаемой в настоящем изобретении, вводят в тот же день или через один или несколько дней после введения конечной дозы фармакологического продукта. Конкретный интервал между введением конечной дозы фармакологического продукта и начальной дозы композиции для внутривенной инъекции, предлагаемой в настоящем изобретении, составляет 0 дней (это означает, что начальную дозу композиции для внутривенной инъекции вводят в тот же день, что и конечную дозу фармакологического продукта), 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 11 дней, 12 дней, 13 дней, 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19 дней, 20 дней или 21 день. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения композицию для внутривенной инъекции, предлагаемую в настоящем изобретении, вводят через 3 или большее количество дней после конечной дозы фармакологического продукта. В более предпочтительных вариантах осуществления изобретения композицию для внутривенной инъекции, предлагаемую в настоящем изобретении, вводят через 7 или большее количество дней после конечной дозы фармакологического продукта. В других предпочтительных вариантах осуществления изобретения композицию для внутривенной инъекции, предлагаемую в настоящем изобретении, вводят через 14 или большее количество дней после конечной дозы фармакологического продукта. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения композицию для внутривенной инъекции, предлагаемую в настоящем изобретении, вводят через 21 или большее количество дней после конечной дозы фармакологического продукта. V. Способ лечения или предупреждения
Другими объектами изобретения являются способы лечения или предупреждения связанного с С5 заболевания.
В одном из вариантов осуществления изобретения способ включает подкожное введение индивидууму фармацевтической композиции, которая приготовлена в форме для подкожной инъекции и содержит антитело к С5, в котором композицию подкожно вводят с использованием двух фаз, где на обеих фазах имеется интервал между каждыми двумя подкожными введениями, где каждая фаза включает по меньшей мере один интервал и где на первой фазе
I) по меньшей мере один интервал короче, чем по меньшей мере один интервал на второй фазе, и
II) доза антитела на одно введение является более низкой или такой же, что и доза антитела на одно введение на второй фазе.
Вводимая подкожно фармацевтическая композиция является такой же, что и описанная выше композиция.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическую композицию, которая приготовлена в форме для внутривенного введения и содержит антитело к С5, вводят до первого подкожного введения первой фазы. Вводимая внутривенно фармацевтическая композиция является такой же, что и описанная выше композиция.
Условия и заболевания, представляющие собой мишень для фармацевтической композиции для подкожной или внутривенной инъекции в указанном способе, являются такими же, что и упомянутые выше в разделах «II. Фармацевтическая композиция для подкожной инъекции» и «III. Фармацевтическая композиция для внутривенной инъекции».
VI. Вакцинация
У индивидуума, которому вводят антитело к С5, могут встречаться инфекционные заболевания, например, менингококковые инфекции. Для предупреждения указанных инфекционных заболеваний индивидуума можно иммунизировать с помощью вакцины, у которой известна способность лечить или предупреждать заболевание, до, после или при введении композиции для подкожной и внутривенной инъекции.
VII. Изделие
Другим объектом изобретения является изделие или продукт, содержащее/содержащий материалы, которые можно применять для лечения или предупреждения связанных с С5 заболеваний, указанных выше. Изделие или продукт содержит один или несколько контейнеров и этикетку или листовку-вкладыш в упаковку, которые размещены на контейнере или вложены в него. Приемлемыми контейнерами являются, например банки, пузырьки, шприцы, шприцы с раствором для SC-введения и т.д. Контейнеры можно изготавливать из различных материалов, таких как стекло или пластмасса. Контейнер содержит композицию, которая индивидуально или в сочетании с другой композицией является эффективной для лечения или предупреждения состояния, и может иметь стерильный порт доступа (например, контейнер может представлять собой пузырек, снабженный пробкой, которую можно прокалывать с помощью иглы для подкожных инъекций). По меньшей мере одно действующее вещество в композиции представляет собой антитело к С5, описанное выше. На этикетке, листовке-вкладыше в упаковку или аналогичном документе указано, что композицию можно применять для лечения выбранного состояния, например, любых описанных выше связанных с С5 заболеваний.
В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция, находящаяся в контейнере изделия или продукта, приготовлена в форме для подкожной инъекции. Согласно этому варианту осуществления изобретения изделие или продукт может дополнительно включать листовку-вкладыш в упаковку с информацией об указанном ниже методе введения. Фармацевтическую композицию вводят подкожно с использованием двух фаз, где на обеих фазах имеется интервал между каждыми двумя подкожными введениями. Каждая фаза включает по меньшей мере один интервал. На первой фазе I) по меньшей мере один интервал короче, чем по меньшей мере один интервал на второй фазе, и II) доза антитела на одно введение является более низкой или такой же, что и доза антитела на одно введение на второй фазе.
В некоторых вариантах осуществления изобретения изделие или продукт может содержать дополнительный контейнер с находящейся в нем композицией, которая содержит дополнительный терапевтический агент. Согласно этому варианту осуществления изобретения изделие может дополнительно содержать листовку-вкладыш в упаковку с информацией о том, что композиции можно применять для лечения конкретного состояния. В альтернативном или дополнительном варианте изделие может дополнительно включать еще один дополнительный контейнер с фармацевтически приемлемым буфером, таким как бактериостатическая вода для инъекций (БСВИ), забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Кроме того, оно может включать другие продукты, необходимые с коммерческой точки зрения и с точки зрения потребителя, в частности, другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.
Примеры
Ниже приведены примеры методов и композиций, предлагаемых в изобретении. Как должно быть очевидно, различные другие варианты осуществления изобретения можно применять на практике на основе общего описания изобретения, представленного выше
Пример 1
Создание антитела к С5
Антитело к С5 305LO15, описанное в WO 2016/098356, получали стандартным методом. В целом метод состоял в следующем. Объединяли гены, кодирующие вариабельный домен тяжелой цепи (VH) 305LO15, с генами, кодирующими модифицированный вариант SG115 (SEQ ID NO: 13) константного домена тяжелой цепи (СН) человеческого IgG1. Гены, кодирующие вариабельный домен легкой цепи (VL) 305LO15, объединяли с генами, кодирующими человеческий константный домен легкой цепи (CL) (SKI, SEQ ID NO: 18). Антитела экспрессировали в клетках HEK293, котрансфектированных комбинацией экспрессионных векторов для тяжелой и легкой цепей, и очищали с использованием белка А.
Пример 2
Фармацевтические средства на основе белков, например, лекарственные средства на основе антител, как правило, вводят внутривенно, поскольку белки трудно концентрировать. Так, экулизумаб, который в настоящее время является единственным антителом, разрешенным для лечения, вводят внутривенно. Если появится возможность использовать подкожную инъекцию, то это должно облегчить нагрузку на пациента, например, в отношении амбулаторного лечения и продолжительности времени пребывания в клинике для осуществления внутривенной инъекции, поскольку становится возможным осуществлять самоинъекцию.
Для изучения возможности осуществления подкожного введения антитела к С5 было выбрано антитело 305LO15, описанное в WO 2016/098356, вследствие его высокой растворимости. Предполагалось, что более высокая растворимость даст возможность введения фармацевтического средства на основе белка в меньшем объеме, позволяющем использовать подкожную инъекцию. Фармацевтические препаративные формы для внутривенной инъекции и подкожной инъекции получали в соответствии с описанной ниже общей рецептурой:
170 мг/мл 305LO15,
30 мМ гистидин/аспарагиновая кислота,
100мМ гидрохлорид аргинина,
0,05% Poloxamer 188,
рН 5,8.
Для сравнения фармакокинетических характеристик 305LO15 после подкожной инъекции или внутривенной инъекции обезьян циномолгус разделяли на две группы, группу, которую обрабатывали путем подкожной инъекции, и группу, которую обрабатывали путем внутривенной инъекции. 305LO15 вводили подкожно животным в первой группе (три самца и три самки) один раз каждую неделю в общей сложности 22 раза, вводя каждый раз антитело в дозе 40 мг/кг. Концентрацию 305LO15 в плазме этих животных измеряли с помощью ELISA в моменты времени, указанные на фиг. 1a. 305LO15 вводили внутривенно животным во второй группе (шесть самцов и шесть самок) один раз каждую неделю в общей сложности пять раз, вводя каждый раз антитело в дозе 40 мг/кг. Концентрацию 305LO15 в плазме животных измеряли с помощью ELISA в моменты времени, указанные на фиг. 1б.
Как продемонстрировано на фиг. 1а, концентрация 305LO15 в плазме обезьян циномолгус повышалась при подкожных инъекциях, это подтверждает, что 305LO15 можно вводить путем подкожной инъекции в терапевтических целях. Скорость первоначального повышения концентрации в плазме при подкожном введении (фиг. 1а), была ниже, чем при внутривенной инъекции (фиг. 1б).
Пример 3
Затем проводили исследование того, можно ли компенсировать относительно низкую скорость повышения концентрации в плазме после начальной подкожной инъекции с помощью внутривенной инъекции 305LO15. Пяти самцам и пяти самкам обезьян циномолгус осуществляли однократное введение внутривенным путем начальной дозы антитела 305LO15, составляющей 100 мг/кг. Через одну неделю после начального внутривенного введения начинали осуществлять подкожную инъекцию 305LO15. Подкожную инъекцию осуществляли в общей сложности 26 раз с частотой один раз каждую неделю, вводя при каждом дозировании антитело в дозе 40 мг/кг.
Как продемонстрировано на фиг. 2, скорость повышения концентрации 305LO15 в плазме была больше в том случае, когда начальную дозу антитела вводили путем внутривенной инъекции перед введением поддерживающих доз путем подкожной инъекции, чем в том случае, когда не вводили начальную дозу путем внутривенной инъекции. Концентрация 305LO15 в плазме достигала уровня, сопоставимого с уровнем, представленным на фиг. 1а, и поддерживалась на этом уровне. Можно предположить, что указанное более быстрое повышение концентрации 305LO15 в плазме вносит вклад в более быстрое достижение терапевтического действия лекарственного средства.
Пример 4
Для оценки эффективной концентрации 305LO15 в плазме определяли соотношение между концентрацией свободного антигена (С5) в плазме или активностью комплемента и концентрацией антитела (305LO15) в плазме у обезьян циномолгус. 305LO15 вводили внутривенно (0,8, 4 или 20 мг/кг) или подкожно (4 мг/кг). Концентрацию антитела и свободного С5 в плазме измеряли с помощью ELISA. Активность комплемента измеряли с помощью гемолитического анализа эритроцитов (RBC). Как продемонстрировано на фиг. 3, концентрация свободного С5 снижалась до уровня, составляющего менее чем несколько мкг/мл, когда концентрация 305LO15 в плазме поддерживалась на уровне выше 40 мкг 305ЕО15/мл (фиг. 3а) и концентрация 305LO15 в плазме, составляющая 40 мкг/мл или выше, ингибировала активность комплемента (гемолиз) до уровня, составляющего менее 20% от исходного уровня (т.е. в отсутствии антитела) (фиг. 3б). Установлено, что активность комплемента подавлялась до уровня, составляющего менее 20% от исходного уровня (т.е. в отсутствии инъекции антитела), когда концентрация 305LO15 в плазме поддерживалась на уровне, составляющем 40 мкг/мл или выше.
Пример 5
Для определения приемлемых доз и схем введения 305LO15, пригодных для поддержания эффективной концентрации 305LO15 в клинических испытаниях, прогнозировали путем моделирования зависимость концентрации 305LO15 в плазме человека. Во-первых, измеряли концентрации 305LO15 в плазме в зависимости от времени после введения антитела обезьянам циномолгус в дозах, составляющих 0,8, 4, 20 мкг антитела/кг при каждом введении дозы. ФК-параметры для обезьян циномолгус оценивали путем анализа данных с использованием 2-компартментной модели. ФК-параметры для человека оценивали на основе ФК-параметров для обезьян цинтомолгус с использованием аллометрического масштабирования. Полученные путем оценки ФК-параметры для человека представлены в таблице 1 (сокращения, использованные для обозначения параметров в таблице 1: BW, вес тела; CL, общий клиренс лекарственного средства; F, биодоступность или относительное количество введенного лекарственного средства, поступившая в кровоток; Ка, константа скорости абсорбции; МАт, моноклональное антитело; ФК, фармакокинетический параметр; Q, межкомпартментный клиренс; SC, подкожно; Vc, объем распределения в центральном компартменте; Vp, объем распределения в периферическом компартменте).
ФК-профиль для человека оценивали для каждой когорты, участвующей в фазе 1/2 исследования (фиг. 4). Часть 1 исследования была запланирована так, чтобы она включала три группы индивидуумов. Первая группа представляла собой группу индивидуумов, которым 305LO15 вводили внутривенно однократно в дозе 75 мг/человека. Вторая группа представляла собой группу индивидуумов, которым 305LO15 вводили внутривенно однократно в дозе 150 мг/человека. Третья группа представляла собой группу индивидуумов, которым 305LO15 вводили подкожно однократно в дозе 170 мг/человека. Было спрогнозировано, что концентрация 305LO15 в плазме индивидуумов, которым вводили любую одну из указанных выше доз, не будет поддерживаться на уровне выше порогового (40 мкг/мл) в течение более чем одной недели (фиг.4а).
Часть 2 исследования была запланирована так, чтобы она включала группу индивидуумов, которым 305LO15 вводили внутривенно трижды (сначала в дозе 300 мг/человека, затем 500 мг/человека через одну неделю после первого введения и, наконец, 1000 мг/человека через две недели после второго введения) и через две недели после конечного внутривенного введения вводили 305LO15 подкожно один раз в неделю в дозе 170 мг/человека. Было спрогнозировано, что при использовании режима дозирования, запланированного для части 2 исследования, концентрация 305LO15 будет поддерживаться на уровне выше порогового ФД-уровня (40 мкг/мл) (фиг. 4б).
Часть 3 исследования была запланирована так, чтобы она включала три группы индивидуумов. Сначала 305LO15 вводили индивидуумам во всех группах внутривенно один раз в дозе 500 мг/человека. Начиная со дня, следующего после дня начального введения, 305LO15 вводили подкожно индивидуумам в первой группе один раз каждую неделю в дозе 170 мг/человека, индивидуумам во второй группе один раз каждые две недели в дозе 340 мг/человека и индивидуумам в третьей группе один раз каждые четыре недели в дозе 600 мг/человека. Было спрогнозировано, что концентрация 305LO15 будет поддерживаться на уровне выше ФД-порога (40 мкг/мл) во всех трех группах, участвовавших в части 3 исследования (фиг. 4в).
Пример 6
Экулизумаб применяли для лечения пациентов с PNH или aHUS. В том случае, если было спрогнозировано, что 305LO15 должен оказывать более благоприятное действие, чем экулизумаб, на пациента с PNH или aHUS, пациента можно было переводить с лекарственной терапии с использованием экулизумаба на терапию с использованием 305LO15. Следует принимать во внимание, что существует возможность того, что 305LO15 образует иммунный комплекс с С5 и экулизумабом в организме, поскольку эпитоп для 305LO15 отличен от эпитопа для экулизумаба, это означает, что 305LO15 связывается с бета-цепью С5, в то время как экулизумаб связывается с альфа-цепью С5. Образование такого иммунного комплекса может вызывать аномальную активацию и, следовательно, желательно максимально избегать этого.
Для исследования того, образует ли 305LO15 иммунный комплекс с экулизумабом (ECZ, последовательность тяжелой цепи представлена в SEQ ID NO: 19, а последовательность легкой цепи представлена в SEQ ID NO: 20) и человеческим С5 (hC5, SEQ ID NO: 21), проводили анализ in vitro с помощью гель-фильтрации (SEC). hC5 получали согласно методу, описанному в WO 2016/098356. Осуществляли диализ ECZ, hC5 и 305LO15 в противотоке D-ЗФР, рН 7,4, для обмена буфера. Затем смешивали ECZ и hC5 и инкубировали при 37°С в течение 3-4 ч. После инкубации к смеси, содержащей ECZ и hC5, добавляли 305LO15. Конечную концентрацию ECZ и hC5 доводили до 200 мкг/мл, а концентрацию 305LO15 доводили до 0, 25, 125, 250 или 1250 мкг/мл. После инкубации указанных смесей при 37°С в течение 3-4 ч проводили SEC-анализ при рН 7,4 и рН 6,0. Конкретные условия для SEC указаны ниже.
система для ЖХВР: система Waters Alliance е2695 HPLC
колонка: TSKgel G4000SWXL
температура колонки: 25°С
элюент: 50 мМ Na-PB/300мМ NaCl, рН 7,4 или рН 6,0
скорость потока: 0,5 мл/мин
обнаружение: УФ-абсорбция при 220 нм
инъекция: 10 мкл
В результате было установлено, что 305LO15 в концентрациях от 125 до 1250 мкг/мл не оказывал влияния на SEC-профиль при рН 6,0, но оказывал влияние на профиль при рН 7,4. Более конкретно, когда 305LO15 смешивали с ECZ и hC5, то пики крупных иммунных комплексов ECZ/hC5/305LO15, которые не выявлялись при рН 6,0, были обнаружены при рН 7,4 (см. пики, указанные стрелками на фиг. 5, верхняя панель), в дополнение к пикам, соответствующим малым комплексам (см. пики, обозначенные как '2Ag+Ab' и 'Ag+Ab', на фиг. 5, верхняя панель). При рН 6,0 были обнаружены только пики, соответствующие малым комплексам (см. пики, представленные на фиг.5, нижняя панель, соответствующие '2Ag+Ab' 'Ag+Ab' на фиг. 5, верхняя панель). Это означает, что 305LO15 связывается с комплексом ECZ/hC5 при рН 7,4, но не при рН 6,0, что согласуется с характеристиками связывания 305LO15 (наличие связывания с hC5 при рН 7,4, но не при рН 6,0). На основе этих результатов было сделано предположение о том, что одновременное введение 305LO15 и ECZ индивидууму может приводить к образованию крупных иммунных комплексов в плазме.
Пример 7
Исследование ВР39144, представляющее собой адаптивную фазу I/II исследования по оценке безопасности, эффективности, фармакокинетических характеристик (ФК) и фармакодинамических характеристик (ФД) 305LO15 на здоровых добровольцах и пациентах с пароксизмальной ночной гемоглобинурией (PNH).
При проведении части 1 исследования ВР39144 (рандомизированное слепое для исследователя/индивидуума адаптивное плацебо-контролируемое проводимое на параллельных группах исследование) оценивали безопасность и переносимость однократных доз 305LO15 на здоровых добровольцах. При каждом уровне доз в каждой когорте случайным образом отбирали в общей сложности по 5 здоровых добровольцев для однократного введения 305LO15 или плацебо внутривенно (IV; когорты 1 и 2) или подкожно (SC; когорта 3). Исследование имело адаптивный план, в соответствии с которым постоянно осуществляли оценку достаточной безопасности, переносимости, ФК и ФД перед началом следующего введения. Запланированные уровни доз для когорт 1, 2 и 3 составляли 75 мг IV, 150 мг IV и 170 мг SC соответственно (фиг. 4а). На основе предварительного анализа ФК- и ФД-данных, полученных для когорты 1, дозы для когорт 2 и 3 были снижены до 125 мг IV (когорта 2) и 100 мг SC (когорта 3).
При осуществлении IV-инфузии образцы крови собирали перед введением дозы, после окончания IV-инфузии (1 ч), через 2, 6, 12, 24, 48, 72, 96 и 144 ч после введения дозы и в дни 14, 21, 28, 35, 42, 56, 84 и 91. При осуществлении SC-введения образцы крови собирали перед введением дозы, через 12, 24, 48, 72, 96 и 144 ч после введения дозы и в дни 14, 21, 28, 35, 42, 56, 84 и 91.
Предварительные результаты оценки безопасности, полученные при проведении части 1 исследования ВР39144, показали, что 305LO15 хорошо переносился при всех изученных уровнях доз (75 и 125 мг IV и 100 мг SC). Доступная информации о клинической безопасности не вызывала значительных опасений с точки зрения безопасности, и не было получено данных, позволяющих предположить наличие нежелательных явлений или аномалий при проведении лабораторных тестов. Не было выявлено заслуживающих внимания данных или трендов касательно жизненно важных признаков или в электрокардиограммах с 12-отведениями во всех группах обработки.
1/2
1/2
1/2
Предварительные результаты оценки ФК в сыворотке и смоделированные профили: концентрация 305bO15-время представлены на фиг. 6, фиг. 7 и фиг. 8. Эти данные свидетельствуют о том, что ФК-характеристики 305LO15 в организме здоровых индивидуумов согласовались с ФК-характеристиками для человека, ранее предсказанными на основе данных о ФК в организме обезьян циномолгус (пример 5). По-видимому, после IV-введения доз экспозиция должна быть пропорциональна дозе в диапазоне от 75 до 125 мг. Согласно оценкам конечное время полужизни (t) для типичного пациента с весом тела 70 кг должно составлять примерно 25 дней. Предварительные результаты оценки ФК после SC-введений свидетельствуют о том, что экспозиция 305LO15 достигала пика примерно в день 7, а биодоступность составляла примерно 90%. После абсорбции t было сопоставимо с t в случае IV-инфузии.
Предварительные оценки зависимости экспозиция-ответ подтвердили полученный ранее прогноз, а именно, что для обеспечения полного ингибирования комплемента требуется примерно 40 мкг 305LO15 на миллилитр крови (фиг. 9).
Пример 8
При проведении части 2 исследования ВР39144 (открытое многодозовое глобальное многоцентровое внутрииндивидуальное исследование с эскалацией дозы) оценивали безопасность и переносимость в течение в общей сложности 5 месяцев, и фармакодинамическое действие многократных доз 305LO15 на активность комплемента при лечении наивных пациентов с PNH. В этом исследовании участвовали шесть пациентов с PNH. Участвовавших в исследовании пациентов не лечили никаким ингибитором комплемента или их ранее лечили, но лечение было прекращено вследствие отсутствия эффективности, что было обусловлено единичной гетерозиготной миссенс-мутацией С5, и у них были выявлены повышенные уровни LDH в сыворотке (>1,5× ULN) при скрининге (ULN: верхний предел нормального диапазона).
Один пациент (пациент X) из шести пациентов представлял собой пациента с PNH, и он был кандидатом для лечения ингибиторами комплемента. Пациенту X вводили IV три однократные возрастающие дозы; путем однократной инфузии 375 мг 305LO15 в день 1, затем путем однократной инфузии 500 мг 305LO15 в день 8, и затем путем однократной инфузии 1000 мг 305LO15 в день 22. Первое SC-введение (170 мг) начинали в день 36, затем осуществляли еженедельно (QW) SC-инъекции (170 мг) 305LO15, которые должны были продолжаться в течение всего периода лечения, составлявшего 5 месяцев.
Предварительные результаты оценки фармакодинамических характеристик для пациента X представлены в таблице 2 и на фиг. 10. Уровни LDH, служащего фармакодинамическим маркером гемолиза, снижались до уровней, находящихся в пределах нормального диапазона, ко дню 15, продолжали снижаться далее до дня 36, и поддерживались на нормализованном уровне до дня 43 (таблица 2 и фиг. 10а). Как продемонстрировано в таблице 2 и на фиг. 10б, результаты липосомного иммуноанализа (LIA) свидетельствуют о том, что активность комплемента полностью ингибировалась по окончании инфузии в день начала исследования, день 1. Доза 305LO15, составлявшая 375 мг, которую вводили в день 1, поддерживала полное ингибирование комплемента вплоть до введения следующей дозы 305LO15, составлявшей 500 мг, в день 8. Доза 305LO15, составлявшая 500 мг, которую вводили в день 8, поддерживала полное ингибирование комплемента вплоть до введения следующей дозы 305LO15, составлявшей 1000 мг, в день 22. Доза 305LO15, составлявшая 1000 мг, которую вводили в день 22, поддерживала полное ингибирование комплемента вплоть до введения следующей SC-дозы 305LO15, составлявшей 170 мг, в день 36. SC-доза, которую вводили в день 36, поддерживала полное ингибирование комплемента до дня 43.
At 305LO15 хорошо переносилось, была отмечена лишь слабая боль в брюшной области, не связанная с лечением.
Пример 9
При проведении части 3 исследования ВР39144 (открытое многодозовое глобальное многоцентровое исследование) оценивали безопасность и переносимость в течение в общей сложности 5 месяцев и фармакодинамическое действие многократных доз 305LO15 на активность комплемента на пациентах с PNH, подвергающихся в рассматриваемый период времени лечению экулизумабом. В этом исследовании участвовали 18 пациентов с PNH. Участвующих в исследовании пациентов подвергали непрерывному лечению экулизумабом в течение по меньшей мере 3 месяцев до включения в опыт и пациентам регулярно осуществляли инфузии экулизумаба.
Один пациент (пациент Y) из 18 пациентов представлял собой пациента с PNH, которого лечили экулизумабом, при этом экулизумаб вводили последний раз за 14 дней до первой IV-инфузии 305LO15. Пациенту Y вводили путем однократной инфузии ударную дозу; осуществляли однократную инфузию 1000 мг 305LO15 в день 1. Первое SC-введение (680 мг) осуществляли в день 8, затем каждые 4 недели (Q4W) осуществляли SC-инъекции (680 мг) 305LO15, которые продолжали в течение всего периода лечения, составлявшего 5 месяцев.
Предварительные результаты оценки фармакодинамических характеристик для пациента Y представлены в таблице 3. Уровни LDH, служащего в качестве фармакодинамического маркера гемолиза, сохранялись на исходных уровнях, начиная с введения первой дозы, до дня 43 (таблица 3). Как продемонстрировано в таблице 3, результаты липосомного иммуноанализа (LIA) свидетельствуют о том, что активность комплемента полностью ингибировалась по окончании инфузии в день начала исследования, день 1. Доза 305LO15, составлявшая 1000 мг, которую вводили в день 1, поддерживала полное ингибирование комплемента вплоть до SC-введения дозы 305LO15, составлявшей 680 мг, в день 8. SC-доза, введенная в день 8, поддерживала полное ингибирование комплемента до дня 43.
Пример 10
Определение режима дозирования на пациентах с PNH Проведено открытое многодозовое глобальное многоцентровое исследование на пациентах с PNH, которых лечили экулизумабом (см. также пример 9). В этом исследовании участвовали примерно 18 взрослых мужчин и женщин, больных PNH, которых лечили экулизумабом. Целью части 3 исследования было определение оптимального режима SC-дозирования, обеспечивающего низкую лекарственную нагрузку на пациентов. При применении каждого изученного режима дозирования должны были достигаться экспозиции 305LO15, ингибирующие активацию терминального пути комплемента в течение всего периода дозирования. Требуемую экспозицию определяли на основе доступных ФК-, ФД-данных и данных об эффективности, полученных в части 2 исследования. Для всех пациентов, участвующих в части 3 исследования, дозирование 305LO15 начинали не позднее, чем через 2 недели после получения пациентом последней дозы экулизумаба. После ударной IV-дозы осуществляли многократное введение поддерживающих SC-доз.
В процессе осуществления части 3 исследования изменяли часть исходных режимов SC-дозирования для дополнительного повышения безопасности. Изучали три различных режима SC-дозирования (включая еженедельное [QW], один раз каждые две недели [Q2W] или ежемесячное [Q1M] дозирование) 305LO15 (см. фиг. 11). Пациенты, включенные в плечо А, получали SC-дозу 170 мг QW 8 раз на первой фазе. Начиная с 9-ой SC-дозы (день опыта 64), представляющей собой первое введение на второй фазе, пациенты, включенные в плечо А, начинали подвергаться поддерживающему режиму с использованием дозы 680 мг Q4W. Ударную IV-дозу вводили пациентам, например, примерно за 24 ч до первой SC-дозы. При осуществлении части 3 исследования пациентов лечили в течение максимум 5 месяцев. В случае, когда у пациента проявлялись признаки и симптомы его/ее основного заболевания, такие как прорывной гемолиз, которые могут являться результатом острого случая, такого как острое заболевание, травма или хирургическое вмешательство и т.д., то можно было вводить одну или несколько дополнительных IV-доз 305LO15. Перед введением указанной IV-дозы необходимо осуществлять внеплановое определение образца биомаркера ФД для оценки причины, лежащей в основе прорывного гемолиза.
Предварительные результаты исследования фармакодинамики у пациентов Z1 и Z2 в плече А представлены в таблице 4. Уровни LDH, служащего в качестве фармакодинамического маркера гемолиза, сохранялись на исходных уровнях, начиная с введения первой дозы до дня 106 (таблица 4). Как продемонстрировано в таблице 4, результаты липосомного иммуноанализа (LIA) свидетельствуют о том, что активность комплемента полностью ингибировалась по окончании инфузии в день начала исследования, день 1. Доза 305LO15, составлявшая 1000 мг, которую вводили в день 1, поддерживала полное ингибирование комплемента вплоть до первой SC-дозы 305LO15, составлявшей 170 мг, в день 8. Начиная с 9-ой SC-дозы (день опыта 64), указанные пациенты получали в поддерживающем режиме 680 мг Q4W. Полное ингибирование комплемента (LIA [ед./мл] <10) у пациента Z2 сохранялось в течение всего периода введения SC-доз (с дня 64 до дня 106). У пациента Z1 ингибирование комплемента было полным или достаточным в течение всего периода введения SC-доз (с дня 64 до дня 106). Применяемый в плече А исследования режим хорошо переносился с проявлением лишь слабых нежелательных явлений (парестезия плеча у пациента Z1, обычная простуда у пациента Z2), что не было связано с лечением.
Пример 11
Дополнительное открытое исследование. OLE, с участием пациентов с PNH Ниже представлено описание OLE для пациентов, участвующих в части 3 исследования, и у которых подтверждено благоприятное воздействие лечения с использованием 305LO15. Количество включенных в опыт пациентов не превышало количество пациентов, включенных в часть 3 исследования, описанного в примере 10'. У пациентов, которых переводили с начального режима, применяемого в части 3 исследования, сначала сохранялся такой же режим SC-дозирования, который они получали в части 3 исследования. В зависимости от возникающих связанных с безопасностью вопросов, ФК- и ФД-данных, полученных в части 3 исследования, режим SC-дозирования для пациентов, включенных в OLE, соответствующим образом адаптировали. Продолжительность лечения составляла максимум 2 года с момента включения в OLE.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ЧУГАИ СЕЙЯКУ КАБУСИКИ КАЙСЯ
<120> ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ПРЕДНАЗНАЧЕННАЯ 5 ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ
ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ СВЯЗАННОГО С C5 ЗАБОЛЕВАНИЯ,
И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ СВЯЗАННОГО С C5 ЗАБОЛЕВАНИЯ
<130> C1-A1820P
<150> US 62/713,211
<151> 2018-08-01
<150> US 62/764,952
<151> 2018-08-17
<150> US 62/760,204
<151> 2018-11-13
<160> 21
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 673
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Gly Leu Leu Gly Ile Leu Cys Phe Leu Ile Phe Leu Gly Lys Thr
1 5 10 15
Trp Gly Gln Glu Gln Thr Tyr Val Ile Ser Ala Pro Lys Ile Phe Arg
20 25 30
Val Gly Ala Ser Glu Asn Ile Val Ile Gln Val Tyr Gly Tyr Thr Glu
35 40 45
Ala Phe Asp Ala Thr Ile Ser Ile Lys Ser Tyr Pro Asp Lys Lys Phe
50 55 60
Ser Tyr Ser Ser Gly His Val His Leu Ser Ser Glu Asn Lys Phe Gln
65 70 75 80
Asn Ser Ala Ile Leu Thr Ile Gln Pro Lys Gln Leu Pro Gly Gly Gln
85 90 95
Asn Pro Val Ser Tyr Val Tyr Leu Glu Val Val Ser Lys His Phe Ser
100 105 110
Lys Ser Lys Arg Met Pro Ile Thr Tyr Asp Asn Gly Phe Leu Phe Ile
115 120 125
His Thr Asp Lys Pro Val Tyr Thr Pro Asp Gln Ser Val Lys Val Arg
130 135 140
Val Tyr Ser Leu Asn Asp Asp Leu Lys Pro Ala Lys Arg Glu Thr Val
145 150 155 160
Leu Thr Phe Ile Asp Pro Glu Gly Ser Glu Val Asp Met Val Glu Glu
165 170 175
Ile Asp His Ile Gly Ile Ile Ser Phe Pro Asp Phe Lys Ile Pro Ser
180 185 190
Asn Pro Arg Tyr Gly Met Trp Thr Ile Lys Ala Lys Tyr Lys Glu Asp
195 200 205
Phe Ser Thr Thr Gly Thr Ala Tyr Phe Glu Val Lys Glu Tyr Val Leu
210 215 220
Pro His Phe Ser Val Ser Ile Glu Pro Glu Tyr Asn Phe Ile Gly Tyr
225 230 235 240
Lys Asn Phe Lys Asn Phe Glu Ile Thr Ile Lys Ala Arg Tyr Phe Tyr
245 250 255
Asn Lys Val Val Thr Glu Ala Asp Val Tyr Ile Thr Phe Gly Ile Arg
260 265 270
Glu Asp Leu Lys Asp Asp Gln Lys Glu Met Met Gln Thr Ala Met Gln
275 280 285
Asn Thr Met Leu Ile Asn Gly Ile Ala Gln Val Thr Phe Asp Ser Glu
290 295 300
Thr Ala Val Lys Glu Leu Ser Tyr Tyr Ser Leu Glu Asp Leu Asn Asn
305 310 315 320
Lys Tyr Leu Tyr Ile Ala Val Thr Val Ile Glu Ser Thr Gly Gly Phe
325 330 335
Ser Glu Glu Ala Glu Ile Pro Gly Ile Lys Tyr Val Leu Ser Pro Tyr
340 345 350
Lys Leu Asn Leu Val Ala Thr Pro Leu Phe Leu Lys Pro Gly Ile Pro
355 360 365
Tyr Pro Ile Lys Val Gln Val Lys Asp Ser Leu Asp Gln Leu Val Gly
370 375 380
Gly Val Pro Val Thr Leu Asn Ala Gln Thr Ile Asp Val Asn Gln Glu
385 390 395 400
Thr Ser Asp Leu Asp Pro Ser Lys Ser Val Thr Arg Val Asp Asp Gly
405 410 415
Val Ala Ser Phe Val Leu Asn Leu Pro Ser Gly Val Thr Val Leu Glu
420 425 430
Phe Asn Val Lys Thr Asp Ala Pro Asp Leu Pro Glu Glu Asn Gln Ala
435 440 445
Arg Glu Gly Tyr Arg Ala Ile Ala Tyr Ser Ser Leu Ser Gln Ser Tyr
450 455 460
Leu Tyr Ile Asp Trp Thr Asp Asn His Lys Ala Leu Leu Val Gly Glu
465 470 475 480
His Leu Asn Ile Ile Val Thr Pro Lys Ser Pro Tyr Ile Asp Lys Ile
485 490 495
Thr His Tyr Asn Tyr Leu Ile Leu Ser Lys Gly Lys Ile Ile His Phe
500 505 510
Gly Thr Arg Glu Lys Phe Ser Asp Ala Ser Tyr Gln Ser Ile Asn Ile
515 520 525
Pro Val Thr Gln Asn Met Val Pro Ser Ser Arg Leu Leu Val Tyr Tyr
530 535 540
Ile Val Thr Gly Glu Gln Thr Ala Glu Leu Val Ser Asp Ser Val Trp
545 550 555 560
Leu Asn Ile Glu Glu Lys Cys Gly Asn Gln Leu Gln Val His Leu Ser
565 570 575
Pro Asp Ala Asp Ala Tyr Ser Pro Gly Gln Thr Val Ser Leu Asn Met
580 585 590
Ala Thr Gly Met Asp Ser Trp Val Ala Leu Ala Ala Val Asp Ser Ala
595 600 605
Val Tyr Gly Val Gln Arg Gly Ala Lys Lys Pro Leu Glu Arg Val Phe
610 615 620
Gln Phe Leu Glu Lys Ser Asp Leu Gly Cys Gly Ala Gly Gly Gly Leu
625 630 635 640
Asn Asn Ala Asn Val Phe His Leu Ala Gly Leu Thr Phe Leu Thr Asn
645 650 655
Ala Asn Ala Asp Asp Ser Gln Glu Asn Asp Glu Pro Cys Lys Glu Ile
660 665 670
Leu
<210> 2
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 2
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val His Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Gly Ala Ile Phe Thr Gly Ser Gly Ala Glu Tyr Lys Ala Glu Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Asp Ala Gly Tyr Asp Tyr Pro Thr His Ala Met His Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 3
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 3
Ser Ser Tyr Tyr Met Ala
1 5
<210> 4
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 4
Ala Ile Phe Thr Gly Ser Gly Ala Glu Tyr Lys Ala Glu Trp Ala Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 5
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 5
Asp Ala Gly Tyr Asp Tyr Pro Thr His Ala Met His Tyr
1 5 10
<210> 6
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 6
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Glu Thr Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Thr Lys Val Gly Ser Ser
85 90 95
Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 7
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ser Leu Ala
1 5 10
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 8
Gly Ala Ser Glu Thr Glu Ser
1 5
<210> 9
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 9
Gln Asn Thr Lys Val Gly Ser Ser Tyr Gly Asn Thr
1 5 10
<210> 10
<211> 325
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 10
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu
325
<210> 11
<211> 325
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 11
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Tyr Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Tyr His Val Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu
325
<210> 12
<211> 325
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 12
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro
325
<210> 13
<211> 328
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 13
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Arg Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr
305 310 315 320
Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
325
<210> 14
<211> 325
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 14
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Arg Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro
325
<210> 15
<211> 325
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 15
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Arg Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro
325
<210> 16
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 16
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Cys
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 17
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 17
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 18
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> An artificially synthesized sequence
<400> 18
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 19
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Eculizumab heavy chain
<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Pro Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys
210 215 220
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 20
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Eculizumab light chain
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Asn Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 21
<211> 1676
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 21
Met Gly Leu Leu Gly Ile Leu Cys Phe Leu Ile Phe Leu Gly Lys Thr
1 5 10 15
Trp Gly Gln Glu Gln Thr Tyr Val Ile Ser Ala Pro Lys Ile Phe Arg
20 25 30
Val Gly Ala Ser Glu Asn Ile Val Ile Gln Val Tyr Gly Tyr Thr Glu
35 40 45
Ala Phe Asp Ala Thr Ile Ser Ile Lys Ser Tyr Pro Asp Lys Lys Phe
50 55 60
Ser Tyr Ser Ser Gly His Val His Leu Ser Ser Glu Asn Lys Phe Gln
65 70 75 80
Asn Ser Ala Ile Leu Thr Ile Gln Pro Lys Gln Leu Pro Gly Gly Gln
85 90 95
Asn Pro Val Ser Tyr Val Tyr Leu Glu Val Val Ser Lys His Phe Ser
100 105 110
Lys Ser Lys Arg Met Pro Ile Thr Tyr Asp Asn Gly Phe Leu Phe Ile
115 120 125
His Thr Asp Lys Pro Val Tyr Thr Pro Asp Gln Ser Val Lys Val Arg
130 135 140
Val Tyr Ser Leu Asn Asp Asp Leu Lys Pro Ala Lys Arg Glu Thr Val
145 150 155 160
Leu Thr Phe Ile Asp Pro Glu Gly Ser Glu Val Asp Met Val Glu Glu
165 170 175
Ile Asp His Ile Gly Ile Ile Ser Phe Pro Asp Phe Lys Ile Pro Ser
180 185 190
Asn Pro Arg Tyr Gly Met Trp Thr Ile Lys Ala Lys Tyr Lys Glu Asp
195 200 205
Phe Ser Thr Thr Gly Thr Ala Tyr Phe Glu Val Lys Glu Tyr Val Leu
210 215 220
Pro His Phe Ser Val Ser Ile Glu Pro Glu Tyr Asn Phe Ile Gly Tyr
225 230 235 240
Lys Asn Phe Lys Asn Phe Glu Ile Thr Ile Lys Ala Arg Tyr Phe Tyr
245 250 255
Asn Lys Val Val Thr Glu Ala Asp Val Tyr Ile Thr Phe Gly Ile Arg
260 265 270
Glu Asp Leu Lys Asp Asp Gln Lys Glu Met Met Gln Thr Ala Met Gln
275 280 285
Asn Thr Met Leu Ile Asn Gly Ile Ala Gln Val Thr Phe Asp Ser Glu
290 295 300
Thr Ala Val Lys Glu Leu Ser Tyr Tyr Ser Leu Glu Asp Leu Asn Asn
305 310 315 320
Lys Tyr Leu Tyr Ile Ala Val Thr Val Ile Glu Ser Thr Gly Gly Phe
325 330 335
Ser Glu Glu Ala Glu Ile Pro Gly Ile Lys Tyr Val Leu Ser Pro Tyr
340 345 350
Lys Leu Asn Leu Val Ala Thr Pro Leu Phe Leu Lys Pro Gly Ile Pro
355 360 365
Tyr Pro Ile Lys Val Gln Val Lys Asp Ser Leu Asp Gln Leu Val Gly
370 375 380
Gly Val Pro Val Thr Leu Asn Ala Gln Thr Ile Asp Val Asn Gln Glu
385 390 395 400
Thr Ser Asp Leu Asp Pro Ser Lys Ser Val Thr Arg Val Asp Asp Gly
405 410 415
Val Ala Ser Phe Val Leu Asn Leu Pro Ser Gly Val Thr Val Leu Glu
420 425 430
Phe Asn Val Lys Thr Asp Ala Pro Asp Leu Pro Glu Glu Asn Gln Ala
435 440 445
Arg Glu Gly Tyr Arg Ala Ile Ala Tyr Ser Ser Leu Ser Gln Ser Tyr
450 455 460
Leu Tyr Ile Asp Trp Thr Asp Asn His Lys Ala Leu Leu Val Gly Glu
465 470 475 480
His Leu Asn Ile Ile Val Thr Pro Lys Ser Pro Tyr Ile Asp Lys Ile
485 490 495
Thr His Tyr Asn Tyr Leu Ile Leu Ser Lys Gly Lys Ile Ile His Phe
500 505 510
Gly Thr Arg Glu Lys Phe Ser Asp Ala Ser Tyr Gln Ser Ile Asn Ile
515 520 525
Pro Val Thr Gln Asn Met Val Pro Ser Ser Arg Leu Leu Val Tyr Tyr
530 535 540
Ile Val Thr Gly Glu Gln Thr Ala Glu Leu Val Ser Asp Ser Val Trp
545 550 555 560
Leu Asn Ile Glu Glu Lys Cys Gly Asn Gln Leu Gln Val His Leu Ser
565 570 575
Pro Asp Ala Asp Ala Tyr Ser Pro Gly Gln Thr Val Ser Leu Asn Met
580 585 590
Ala Thr Gly Met Asp Ser Trp Val Ala Leu Ala Ala Val Asp Ser Ala
595 600 605
Val Tyr Gly Val Gln Arg Gly Ala Lys Lys Pro Leu Glu Arg Val Phe
610 615 620
Gln Phe Leu Glu Lys Ser Asp Leu Gly Cys Gly Ala Gly Gly Gly Leu
625 630 635 640
Asn Asn Ala Asn Val Phe His Leu Ala Gly Leu Thr Phe Leu Thr Asn
645 650 655
Ala Asn Ala Asp Asp Ser Gln Glu Asn Asp Glu Pro Cys Lys Glu Ile
660 665 670
Leu Arg Pro Arg Arg Thr Leu Gln Lys Lys Ile Glu Glu Ile Ala Ala
675 680 685
Lys Tyr Lys His Ser Val Val Lys Lys Cys Cys Tyr Asp Gly Ala Cys
690 695 700
Val Asn Asn Asp Glu Thr Cys Glu Gln Arg Ala Ala Arg Ile Ser Leu
705 710 715 720
Gly Pro Arg Cys Ile Lys Ala Phe Thr Glu Cys Cys Val Val Ala Ser
725 730 735
Gln Leu Arg Ala Asn Ile Ser His Lys Asp Met Gln Leu Gly Arg Leu
740 745 750
His Met Lys Thr Leu Leu Pro Val Ser Lys Pro Glu Ile Arg Ser Tyr
755 760 765
Phe Pro Glu Ser Trp Leu Trp Glu Val His Leu Val Pro Arg Arg Lys
770 775 780
Gln Leu Gln Phe Ala Leu Pro Asp Ser Leu Thr Thr Trp Glu Ile Gln
785 790 795 800
Gly Val Gly Ile Ser Asn Thr Gly Ile Cys Val Ala Asp Thr Val Lys
805 810 815
Ala Lys Val Phe Lys Asp Val Phe Leu Glu Met Asn Ile Pro Tyr Ser
820 825 830
Val Val Arg Gly Glu Gln Ile Gln Leu Lys Gly Thr Val Tyr Asn Tyr
835 840 845
Arg Thr Ser Gly Met Gln Phe Cys Val Lys Met Ser Ala Val Glu Gly
850 855 860
Ile Cys Thr Ser Glu Ser Pro Val Ile Asp His Gln Gly Thr Lys Ser
865 870 875 880
Ser Lys Cys Val Arg Gln Lys Val Glu Gly Ser Ser Ser His Leu Val
885 890 895
Thr Phe Thr Val Leu Pro Leu Glu Ile Gly Leu His Asn Ile Asn Phe
900 905 910
Ser Leu Glu Thr Trp Phe Gly Lys Glu Ile Leu Val Lys Thr Leu Arg
915 920 925
Val Val Pro Glu Gly Val Lys Arg Glu Ser Tyr Ser Gly Val Thr Leu
930 935 940
Asp Pro Arg Gly Ile Tyr Gly Thr Ile Ser Arg Arg Lys Glu Phe Pro
945 950 955 960
Tyr Arg Ile Pro Leu Asp Leu Val Pro Lys Thr Glu Ile Lys Arg Ile
965 970 975
Leu Ser Val Lys Gly Leu Leu Val Gly Glu Ile Leu Ser Ala Val Leu
980 985 990
Ser Gln Glu Gly Ile Asn Ile Leu Thr His Leu Pro Lys Gly Ser Ala
995 1000 1005
Glu Ala Glu Leu Met Ser Val Val Pro Val Phe Tyr Val Phe His
1010 1015 1020
Tyr Leu Glu Thr Gly Asn His Trp Asn Ile Phe His Ser Asp Pro
1025 1030 1035
Leu Ile Glu Lys Gln Lys Leu Lys Lys Lys Leu Lys Glu Gly Met
1040 1045 1050
Leu Ser Ile Met Ser Tyr Arg Asn Ala Asp Tyr Ser Tyr Ser Val
1055 1060 1065
Trp Lys Gly Gly Ser Ala Ser Thr Trp Leu Thr Ala Phe Ala Leu
1070 1075 1080
Arg Val Leu Gly Gln Val Asn Lys Tyr Val Glu Gln Asn Gln Asn
1085 1090 1095
Ser Ile Cys Asn Ser Leu Leu Trp Leu Val Glu Asn Tyr Gln Leu
1100 1105 1110
Asp Asn Gly Ser Phe Lys Glu Asn Ser Gln Tyr Gln Pro Ile Lys
1115 1120 1125
Leu Gln Gly Thr Leu Pro Val Glu Ala Arg Glu Asn Ser Leu Tyr
1130 1135 1140
Leu Thr Ala Phe Thr Val Ile Gly Ile Arg Lys Ala Phe Asp Ile
1145 1150 1155
Cys Pro Leu Val Lys Ile Asp Thr Ala Leu Ile Lys Ala Asp Asn
1160 1165 1170
Phe Leu Leu Glu Asn Thr Leu Pro Ala Gln Ser Thr Phe Thr Leu
1175 1180 1185
Ala Ile Ser Ala Tyr Ala Leu Ser Leu Gly Asp Lys Thr His Pro
1190 1195 1200
Gln Phe Arg Ser Ile Val Ser Ala Leu Lys Arg Glu Ala Leu Val
1205 1210 1215
Lys Gly Asn Pro Pro Ile Tyr Arg Phe Trp Lys Asp Asn Leu Gln
1220 1225 1230
His Lys Asp Ser Ser Val Pro Asn Thr Gly Thr Ala Arg Met Val
1235 1240 1245
Glu Thr Thr Ala Tyr Ala Leu Leu Thr Ser Leu Asn Leu Lys Asp
1250 1255 1260
Ile Asn Tyr Val Asn Pro Val Ile Lys Trp Leu Ser Glu Glu Gln
1265 1270 1275
Arg Tyr Gly Gly Gly Phe Tyr Ser Thr Gln Asp Thr Ile Asn Ala
1280 1285 1290
Ile Glu Gly Leu Thr Glu Tyr Ser Leu Leu Val Lys Gln Leu Arg
1295 1300 1305
Leu Ser Met Asp Ile Asp Val Ser Tyr Lys His Lys Gly Ala Leu
1310 1315 1320
His Asn Tyr Lys Met Thr Asp Lys Asn Phe Leu Gly Arg Pro Val
1325 1330 1335
Glu Val Leu Leu Asn Asp Asp Leu Ile Val Ser Thr Gly Phe Gly
1340 1345 1350
Ser Gly Leu Ala Thr Val His Val Thr Thr Val Val His Lys Thr
1355 1360 1365
Ser Thr Ser Glu Glu Val Cys Ser Phe Tyr Leu Lys Ile Asp Thr
1370 1375 1380
Gln Asp Ile Glu Ala Ser His Tyr Arg Gly Tyr Gly Asn Ser Asp
1385 1390 1395
Tyr Lys Arg Ile Val Ala Cys Ala Ser Tyr Lys Pro Ser Arg Glu
1400 1405 1410
Glu Ser Ser Ser Gly Ser Ser His Ala Val Met Asp Ile Ser Leu
1415 1420 1425
Pro Thr Gly Ile Ser Ala Asn Glu Glu Asp Leu Lys Ala Leu Val
1430 1435 1440
Glu Gly Val Asp Gln Leu Phe Thr Asp Tyr Gln Ile Lys Asp Gly
1445 1450 1455
His Val Ile Leu Gln Leu Asn Ser Ile Pro Ser Ser Asp Phe Leu
1460 1465 1470
Cys Val Arg Phe Arg Ile Phe Glu Leu Phe Glu Val Gly Phe Leu
1475 1480 1485
Ser Pro Ala Thr Phe Thr Val Tyr Glu Tyr His Arg Pro Asp Lys
1490 1495 1500
Gln Cys Thr Met Phe Tyr Ser Thr Ser Asn Ile Lys Ile Gln Lys
1505 1510 1515
Val Cys Glu Gly Ala Ala Cys Lys Cys Val Glu Ala Asp Cys Gly
1520 1525 1530
Gln Met Gln Glu Glu Leu Asp Leu Thr Ile Ser Ala Glu Thr Arg
1535 1540 1545
Lys Gln Thr Ala Cys Lys Pro Glu Ile Ala Tyr Ala Tyr Lys Val
1550 1555 1560
Ser Ile Thr Ser Ile Thr Val Glu Asn Val Phe Val Lys Tyr Lys
1565 1570 1575
Ala Thr Leu Leu Asp Ile Tyr Lys Thr Gly Glu Ala Val Ala Glu
1580 1585 1590
Lys Asp Ser Glu Ile Thr Phe Ile Lys Lys Val Thr Cys Thr Asn
1595 1600 1605
Ala Glu Leu Val Lys Gly Arg Gln Tyr Leu Ile Met Gly Lys Glu
1610 1615 1620
Ala Leu Gln Ile Lys Tyr Asn Phe Ser Phe Arg Tyr Ile Tyr Pro
1625 1630 1635
Leu Asp Ser Leu Thr Trp Ile Glu Tyr Trp Pro Arg Asp Thr Thr
1640 1645 1650
Cys Ser Ser Cys Gln Ala Phe Leu Ala Asn Leu Asp Glu Phe Ala
1655 1660 1665
Glu Asp Ile Phe Leu Asn Gly Cys
1670 1675
<---