ЭКСТРАКТ ЦЕЛЬНЫХ СЕМЯН MORINGA SP. И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ В КОСМЕТИЧЕСКИХ И/ИЛИ ДЕРМАТОЛОГИЧЕСКИХ КОМПОЗИЦИЯХ
MORINGA SP. WHOLE SEED EXTRACT AND USING IT IN COSMETIC AND/OR DERMATOLOGIC COMPOSITIONS

Moringa
Настоящее изобретение относится к экстракту цельных семян  sp., содержащему масло (в том числе триглицериды, жирные кислоты и полярные липиды) и полифенолы, и применению указанного экстракта в косметических и/или дерматологических композициях.
Moringaceae
M. oleifera
Moringa pterygosperma
Моринга представляет собой небольшое дерево, родиной которого является Индия, но которое культивируют по всему миру и которое прижилось и стало популярным в различных климатических условиях. Существует 13 видов моринги, принадлежащих к семейству , при этом наиболее известна (синоним: ).
Moringa oleifera
представляет собой небольшое дерево, от 4 до 8 метров высотой, с открытой кроной, распростертой наподобие зонтика. Листья этого растения опадающие, от 30 до 70 см длиной, цветки белые и очень ароматные, плод представляет собой вытянутую, удлиненную кожистую свисающую коробочку треугольной формы, которая достигает от 30 до 40 см в длину. Семена представляют собой закругленные треугольники длиной 1,2 см и шириной 1 см, с тремя перепончатыми боковыми лепестками, отходящими от семян и имеющими длину 2 см.
Дикое или культивируемое в тропическом, влажном или очень сухом климате это дерево может выживать в экстремальных условиях и расти очень быстро. Очень глубокая корневая система моринги позволяет ей обходиться без воды на протяжении нескольких месяцев.
Моринга имеет большое количество местных названий, в том числе дерево Бена, Крылатый Бен, neverdié, анамамбо, хреновое дерево, дерево «барабанные палочки» (Drumstick tree), а также "дерево, которое никогда не умирает" или “чудо-дерево”. Действительно, моринга известна в аюрведической медицине как средство для излечения 300 болезней и, кроме того, как растение, имеющее очень большую питательную ценность. Ее плоды едят в приготовленном виде, листья употребляются как овощ и имеют такую питательную ценность, что в некоторых странах позволяют решить проблему недостаточного питания.
Съедобное масло, богатое олеиновой кислотой, получают из семян, которые также применяют в качестве флокулянтов для дезинфекции воды. Масло получают путем отжима или путем экстракции гексаном из семян, оболочка которых была удалена. Для использования флокулирующих свойств после отжима извлекают жмых масличных семян.
Moringa
Семена можно употреблять в пищу как бобы, пока они еще зеленые. Зрелые семена содержат примерно 40% масла. Масло из  sp. представляет собой кулинарное масло хорошего качества (подобно оливковому маслу) и также используется в парфюмерии для производства мыла или в качестве осветительного масла (оно очень устойчиво к окислению).
В традиционной медицине это масло используют для облегчения боли во время приступов подагры или ревматизма (The Indian Materia Medica, pp. 811-816). Семена применяют перорально как жаропонижающее средство (Hukkeri et al., Indian J. Pharm. Sci. (2006) 68, pp. 124-126).
Масло из семян, полученное путем отжима или экстракции с применением сильно неполярного растворителя (в частности, гексана), широко используют в косметологии благодаря его питательным свойствам, обусловленным триглицеридами, которые содержатся в масле.
Moringa
Описано применение водного экстракта семян в косметологии: содержащиеся в нем пептиды и белки проявляют активность против морщин и очищающие свойства; семена сначала очищают от кожицы и обезжиривают (патенты США 6500470 и США 2006/0275247). Водные и обезжиренные белковые фракции, экстрагированные из цельных или очищенных от кожицы семян  sp., оказывают на кожу увлажняющее, восстанавливающее и противоморщинное воздействие (патент EP 1064008). Указанную белковую фракцию семян можно охарактеризовать как “очень полярную”.
Согласно литературе, семена состоят из стеринов (кампестерина, стигмастерина, β-ситостерина, Δ5-авенастерина, клеростерина…), жирных кислот (C18:1-олеиновой - от 68 до 76%, C16:0 - от 6 до 7,8%, C18:0 - от 4 до 7,6%, C20:0 - от 2,8 до 4% и C22:0 - от 5 до 6,7%), белков (от 26 до 32%), волокон, токоферола (α, γ, δ: соответственно 134, 93 и 48 мг/кг масла).
Moringa
Семена также содержат глюкозинолаты, в том числе 4-(α-L-рамнопираносилокси)бензилглюкозинолат. Также было описано, что листья и семена  sp.содержат некоторые цитокинины, такие как зеатин, дигидрозеатин и изопентиладенин (патент США 2006/0222682).
Moringa
Заявитель продемонстрировал применение конкретного экстракта цельных семян  sp., содержащего масло (в том числе триглицериды, жирные кислоты и полярные липиды) и полифенолы, в качестве активного компонента в косметических и/или дерматологических композициях.
Moringa
Таким образом, объектом настоящего изобретения является экстракт цельных семян  sp., содержащий масло (в том числе триглицериды, жирные кислоты и полярные липиды) и полифенолы. В контексте настоящего изобретения под “цельными семенами” следует понимать семена, оболочка которых не была удалена.
Moringa
Экстракт цельных семян  sp. характеризуется (% по массе относительно массы сухого экстракта):
- содержанием масла от 5% до 50%, в том числе (i) от 2% до 10% триглицеридов и жирных кислот и (ii) от 5% до 15% полярных липидов;
- содержанием всех полифенолов от 0,01% до 5% (выраженным в г пирогаллола на 100 г сухого экстракта).
Согласно характеристике настоящего изобретения, содержание масла в указанном экстракте составляет от 25% до 40% (% по массе относительно массы сухого экстракта).
Moringa
Moringa oleifera
Moringa drouhardii
Согласно другой характеристике настоящего изобретения, вид  предпочтительно представляет собой  или .
Moringa
Moringa
Указанный экстракт  sp. согласно настоящему изобретению, косметическая и дерматологическая ценность которого была продемонстрирована, получен из цельных семян  sp., преимущественно высушенных, размолотых и затем подвергнутых по меньшей мере одной экстракции с применением умеренно полярного растворителя.
1
4
В контексте настоящего изобретения под термином «умеренно полярный растворитель» следует понимать растворитель, выбранный из группы, состоящей из C-Cспирта, ацетона, смеси вода/спирт и смеси вода/ацетон, применяемых по отдельности или в комбинации.
Растворитель предпочтительно представляет собой смесь этанол/вода. Преимущественно, когда такая смесь этанол/вода характеризуется различными соотношениями этанол/вода в диапазоне от 9/1 до 7/3 (об./об.).
Более предпочтительно, умеренно полярный растворитель представляет собой смесь этанол/вода в соотношении 9/1 или 3/1 (об./об.).
Экстракцию проводят при перемешивании или в статических условиях, при нагревании с обратным холодильником или при температуре окружающей среды, при соотношении растение/объем растворителя, которое может варьировать от 1/5 до 1/20 в течение от 30 минут до 48 часов. Экстракцию можно проводить повторно 2 или 3 раза.
Затем выжимки отделяют от экстракта путем центрифугирования или фильтрования, и раствор можно в большей или меньшей степени сконцентрировать до получения сухого экстракта с выходом от 5% до 10%. Поскольку полученный экстракт не является высокогомогенным, во время стадии сушки можно добавить носитель в весовом соотношении относительно экстрагируемого сухого вещества, которое может варьировать от 1% до 75%. Носитель может представлять собой мальтодекстрин, лактозу, диоксид кремния или любой другой косметологически приемлемый носитель, солюбилизирующий экстракт, такой как, например, пропиленгликоль/этоксилированный олеиновый спирт в различных соотношениях.
Moringa
Полученный экстракт  sp. характеризуется содержанием в нем масла (в том числе триглицеридов, жирных кислот и полярных липидов) и полифенолов.
Moringa
Другой объект настоящего изобретения относится к указанному экстракту  sp. для применения в качестве активного компонента против старения.
Предпочтительно, указанный экстракт адаптирован для борьбы против всех признаков старения кожи у людей со зрелой кожей. В контексте настоящего изобретения под термином “зрелая кожа” следует понимать кожу у людей в возрасте как правило старше 55 лет, и предпочтительно старше 60 лет.
Признаки старения кожи характеризуются, в частности, потерей плотности и/или эластичности, и/или тонуса, и/или упругости кожи и появлением морщин и тонких морщинок.
Таким образом, задача настоящего изобретения состоит в получении нового активного ингредиента, способного одновременно обеспечивать защиту, увлажнение и питание эпидермиса/зрелой кожи и, следовательно, обеспечить разглаживающее действие на кожу, восстановление ее структуры и уменьшение обвисания.
Moringa sp.
С помощью различных видов испытаний Заявитель оценил общее действие экстрактов  согласно настоящему изобретению против старения.
Было показано, что такой новый экстракт одновременно вызывает различного рода требуемые действия, а именно:
- антиоксидантное, противорадикальное действие для ограничения окислительного процесса, связанного с внутренним и внешним старением;
- действие на восстановление барьерной функции кожи (белковой и липидной структуры эпидермиса), меняющейся с возрастом: применение указанного экстракта позволяет ограничить обезвоживание кожи и таким образом защитить кожу;
- действие на внеклеточный матрикс для усиления механических свойств зрелой кожи (плотности, эластичности, тонуса).
Экстракт согласно настоящему изобретению способствует увлажнению, разглаживанию, предотвращению обвисания и восстановлению структуры кожи. Таким образом, экстракт согласно настоящему изобретению позволяет улучшить внешний вид и выровнять цвет кожи.
Другой объект настоящего изобретения относится к применению экстракта, определенного выше, для усиления и восстановления барьерной функции кожи.
В контексте изобретения термин “усилить барьерную функцию кожи” означает улучшить барьерную функцию кожи.
Одна из фундаментальных функций кожи состоит в обеспечении барьера между телом и внешней окружающей средой, противостоящего, в одном направлении, проникновению через эпидермис грибов, бактерий и аллергенов из окружающей среды («снаружи внутрь») и, в другом направлении, потере воды («изнутри наружу»).
Эпидермис представляет собой многослойный эпителий эктодермального происхождения, который постоянно обновляется. Можно выделить несколько слоев различной морфологической природы и клеточного состава, перечисляя изнутри наружу: базальный слой, слой клеток, кератиноциты которых имеют очень высокую способность к пролиферации, что приводит к самовосстановлению эпидермиса, надбазальные слои (гранулярные, шиповатые слои) и, наконец, роговой слой эпидермиса (Stratum Corneum, SC). Эти ступени соответствуют все более и более повышенным уровням дифференциации кератиноцитов. Кератиноциты базального слоя теряют свою способность к пролиферации, как только они начинают процесс перемещения по направлению к поверхности эпидермиса, во время которого кератиноциты следуют программе дифференцировки, ведущей к ороговению, процессу запрограммированной гибели клеток. Барьерную функцию кожи сначала осуществляет роговой слой эпидермиса, твердая и уплотненная составная структура, состоящая из двух составляющих:
- межкорнеоцитарного цемента, богатого липидами: липиды, упорядоченные в пластины и ковалентно связанные с клетками, ограничивают проникновение молекул через роговой слой эпидермиса;
- слоев ороговевших, мертвых клеток, лишенных органитов (корнеоцитов), что соответствует конечной стадии дифференцировки кератиноцитов.
Целостность внеклеточного липидного цемента, а также всех клеточных элементов рогового слоя эпидермиса и баланс между пролиферацией и дифференцировкой кератиноцитов играют ключевую роль в поддержании функциональной барьерной функции эпидермиса.
Нарушение барьерной функции, хроническое или острое, делает тело чувствительным к внешнему воздействию и обезвоживанию.
В частности, улучшение барьерной функции является решающим, когда барьерная функция кожи изменилась и должна быть восстановлена. Это имеет место при определенных физиологических состояниях, под действием времени (старение кожи) или в связи с гормональным нарушением или стрессом. Скорость такого восстановления, позволяющая вернуться к гомеостазу, замедленна. Кроме того, барьерная функция кожи изменяется при большинстве из наиболее распространенных патологий кожи у населения, которые часто сопровождаются воспалением (сухостью кожи…).
stratum corneum
Улучшение барьерной функции может также быть полезным в случае необходимости усиления первоначальной функция кожи, в частности, для обеспечения лучшей сопротивляемости организма внешнему воздействию, которому оно может подвергаться, в частности воздействию окружающей среды (ультрафиолетовым лучам, влажности, температуры окружающей среды, загрязнению, ожогам). Барьерная функция кожи включает все механизмы естественной защиты против стресса, которому подвергается кожа. Важнейший элемент, выполняющий эту функцию, расположен в самой поверхностной части эпидермиса, в области рогового слоя эпидермиса, называемого .
С помощью различных тестов было продемонстрировано, что экстракт, определенный выше, преимущественно воздействует на восстановление липидной структуры и белковой структуры эпидермиса.
Применение экстракта согласно настоящему изобретению особенно эффективно для усиления и восстановления барьерной функции кожи.
Moringa
Другой объект настоящего изобретения относится к косметической и/или дерматологической композиции, содержащей в качестве действующего начала экстракт цельных семян  sp. согласно изобретению и по меньшей мере один косметологически и/или дерматологически приемлемый эксципиент.
Moringa
Указанная косметическая и/или дерматологическая композиция согласно настоящему изобретению содержит сухой экстракт цельных семян  sp., составляющий от 0,1 г до 5 г на 100 г указанной композиции.
Moringa
Предпочтительно, указанное количество экстракта  sp. составляет от 0,25 г до 1 г на 100 г косметической и/или дерматологической композиции.
В частности, изобретение относится к косметической композиции против старения. Указанная косметическая композиция предпочтительно адаптирована для борьбы против всех признаков старения кожи у людей со зрелой кожей.
Косметическая композиция против старения согласно настоящему изобретению может также содержать один или несколько активных компонентов, таких как активные ингредиенты, адаптированные для защиты от солнца, и/или активные ингредиенты, адаптированные для депигментации кожи.
Активные ингредиенты, адаптированные для защиты от солнца, дополнительно выбраны из молекул, полученных путем химического синтеза, известных своим действием против ультрафиолетовых лучей спектра А, действием против ультрафиолетовых лучей спектра В, таких как октокрилен и/или диоктилбутамидотриазон и/или бис-этилгексилоксифенилметоксифенилтриазин.
Кроме того, активные ингредиенты, адаптированные для депигментации кожи, осветления и выравнивания цвета кожи, могут представлять собой ниацинамид, витамин C и его производные.
Косметологически приемлемый эксципиент с учетом получения косметической композиции против старения выбирают таким образом, чтобы обеспечить возможность топического или перорального введения.
Предпочтительно, форма для топического нанесения выбрана из группы, состоящей из молочка, крема, бальзама, масла, лосьона, геля, пенообразующего геля, мази, спрея и т.п.
Предпочтительно, пероральная форма выбрана из группы, состоящей из таблеток, капсул, пастилок, порошков, гранул, растворов или суспензий для перорального приема.
В частности, изобретение также относится к косметической и/или дерматологической композиции, адаптированной для усиления и восстановления барьерной функции кожи.
Косметологически и/или дерматологически приемлемый эксципиент с учетом получения косметической и/или дерматологической композиции, усиливающей и восстанавливающей барьерную функцию кожи, выбирают таким образом, чтобы обеспечить возможность топического нанесения.
Предпочтительно, форму для топического нанесения выбирают из группы, состоящей из молочка, крема, бальзама, масла, лосьона, геля, пенообразующего геля, мази, спрея и т.п.
Moringa
Другой объект настоящего изобретения относится к косметическому способу борьбы со всеми признаками старения кожи у людей со зрелой кожей, характеризующемуся тем, что он включает применение, при местном или пероральном введении, экстракта цельных семян  sp. согласно изобретению.
Далее в качестве неограничивающих примеров приведены способы получения и композиции, предложенные в изобретении.
ПРИМЕРЫ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО ЭКСТРАКТА
Пример 1
Moringa oleifera
2,5 кг цельных семян , высушенных и размолотых, экстрагировали в 17,5 л этанола 90 (соотношение этанол/вода = 9/1) с помощью двух противоточных экстракций при 80°C. После охлаждения окружающей среды до 50°C экстрагированный раствор извлекли путем отделения твердого вещества от жидкости. Пробу высушили, что позволило получить 243 г экстракта. Этот экстракт характеризовался 36% содержанием масла, включая (i) 10% триглицеридов и жирных кислот и (ii) 10% полярных липидов, и суммарным содержанием всех полифенолов, равным 0,02% (выраженным в г пирогаллола на 100 г сухого экстракта).
Пример 2
Moringa oleifera
20 г цельных семян , высушенных и размолотых, экстрагировали при нагревании с обратным холодильником в 100 мл смеси этанол/вода 75:25 в течение 1 часа. Экстрагированный раствор извлекли путем отделения твердого вещества от жидкости и высушили с применением роторного испарителя при 50°C. Таким образом, получили 1,66 г экстракта в форме коричневой пасты, оттитрованной при 5% масла и 0,68% всех полифенолов, выраженных в виде пирогаллола.
Пример 3
Moringa drouhardii
20 г цельных семян , высушенных и размолотых, экстрагировали при нагревании с обратным холодильником в 200 мл смеси этанол/вода 90:10 в течение 1 часа. Экстрагированный раствор извлекли путем отделения твердого вещества от жидкости и высушили с применением роторного испарителя при 50°C. Таким образом, получили 1,29 г экстракта в форме желто-коричневой пасты, оттитрованной при 35% масла (триглицеридов, жирных кислот и полярных липидов) и 1,3% всех полифенолов, выраженных в виде пирогаллола.
ПРИМЕРЫ КОСМЕТИЧЕСКИХ КОМПОЗИЦИЙ
Пример 4: для ухода за областью вокруг глаз
Состав
Количество
Сухой экстракт семени <i>Moringa</i> sp.
0,5 г
Токоферил ацетат (альфа)
0,5 г
Декстран сульфат
0,3 г
Диоктилбутамидотриазон
1-10 г
Октокрилен
1-10 г
Бис-этилгексилоксифенил метоксифенил триазин
1-10 г
Воск гликозид 202
1-5 г
Стеарат GLY./ПЭГ-100 стеарат
1-5 г
C<sub>12</sub>-C<sub>15 </sub>бензоат
5 г
Пентаноат(нео)изодецил
1-8 г
Силоксан(циклопента)декаметил
1-8 г
Глицерин 99,5%
1-5 г
Сополимер гидроксиэтилакрилата иакрилоилдиметилтаурата натрия
1 г
Камедь ксантановая TF
0,3 г
Каприлгликоль
qs
Сорбат калия
qs
Очищенная вода
qs 100 г
Пример 5: восстанавливающий крем, улучшающий цвет кожи
Состав
Количество
Сухой экстракт семени <i>Moringa</i> sp.
0,5 г
Токоферил ацетат (альфа)
0,1 г
Ниацинамид
2 г
Метоксициннамат(p)этилгексил
1-10 г
Октокрилен
1-10 г
Бис-этилгексилоксифенил метоксифенил триазин
1-10 г
Бегенин(три)/ПЭГ-20
1-8 г
Цетиловый спирт >95%
1 г
Пальмитатгликоль
2 г
Силоксан(циклопента)декаметил
1-5 г
Метикон(ди)200FL
1-5 г
Каприновые каприловые/триглицериды.30 70
1-5 г
Метикон(цикло) Mel.9040
1-5 г
Камедь ксантановая TF
0,3 г
Сополимер гидроксиэтилакрилата иакрилоилдиметилтаурата натрия
0,7 г
Глицерин 99,5%
1-5 г
Каприлгликоль
qs
Сорбиновая кислота
qs
Бутилгидрокситолуол
0,01 г
Оксид титана/AI/серицит Mel.
1-5 г
Гидроксид натрия
qs
Очищенная вода
qs 100 г
ОЦЕНКА АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ
Тест с применением ДФПГ
Moringa oleifera
Антиоксидантную активность экстракта семян  согласно настоящему изобретению оценивали с помощью теста с применением ДФПГ. Этот тест основан на измерении способности улавливать антиоксиданты с помощью стабильного радикала 2,2-дифенил-1-пикрилгидразил (ДФПГ). Этот стабильный радикал, характеризующийся поглощением при 517 нм, восстанавливается до соответствующего гидразина при химическом взаимодействии с донором водорода.
Результаты:
Полученные результаты выражены в IC50, соответствующей концентрации, вызывающей 50% снижение поглощения метанольного раствора ДФПГ при 0,06 мМ.
Тестируемый продукт
IC<sub>50</sub> (мкг/мл)
Неполярный экстракт (гексан) цельных семян
>1000 (неактивный)
Экстракт семян, лишенных оболочки,с 90% EtOH
1000 (неактивный)
Экстракт согласно Примеру 1
280
Экстракт оболочки в 90% EtOH
30
Витамин E (образец сравнения)
6-10
Экстракт согласно изобретению имеет антиоксидантную активность, обеспеченную главным образом молекулами, присутствующими в оболочке.
Хемилюминесценция
2
-
Хемилюминесценция представляет собой метод, при котором обеспечивается образование свободных радикалов (супероксидный радикал O°) под действием фотохимического сигнала. Интенсивность окисления в 1000 раз больше, чем интенсивность, полученная при нормальных условиях. Обнаружение проводится с помощью хемилюминесценции и позволяет оценить антиоксидантную активность липо- или гидрорастворимых экстрактов или молекул. Результаты выражены, соответственно, в эквивалентном количестве витамина C или тролокса (6-гидрокси-2,5,7,8-тетраметилхроман-2-карбоновая кислота). Чувствительность составляет порядка наномоля. Схема приведена на Фигуре 1.
Результаты:
Необходимо 65 мкг экстракта согласно Примеру 1 для получения эквивалента активности относительно активности, обнаруженной для 1 мкг тролокса: эквивалент активности в отношении ликопена, молекулы, известной благодаря своей антиоксидантной активности.
Moringa
Этот тест также подтвердил, что наблюдаемая антиоксидантная активность обусловлена, главным образом, молекулами, содержащимися в оболочке: только 4,7 мкг 90% EtOH экстракта оболочки необходимо для 1 мкг тролокса (эквивалент активности в отношении генистеина). Это подтверждает важность применения согласно изобретению цельных семян  sp.
Свободные радикалы, выработка которых возрастает в условиях внешнего стресса (холод, загрязнение, табак, УФ), ответственны за изменения ДНК клеток кожи, а также клеточных мембран и митохондрий. Антирадикальная активность экстракта, полученного согласно Примеру 1, позволяет бороться против внутреннего и внешнего старения кожи.
ОЦЕНКА АКТИВНОСТИ ПО ОТНОШЕНИЮ К ВОССТАНОВЛЕНИЮ БАРЬЕРНОЙ ФУНКЦИИ
J Invest Dermatol
Эпидермис играет основную роль в защите кожи, обеспечивая химический и механический барьер организма. Он гарантирует сохранение изоляции, главным образом, барьерную функцию кожи. Корнеоциты, кератиноциты рогового слоя эпидермиса, связанные с липидным матриксом, обеспечивают огромную часть этой функции. Однако регулированию способствуют более глубокие слои, а не исполнители указанной функции. Регулирование обеспечивает способность кератиноцитов эпидермиса к дифференцировке, а не барьер в виде функциональной селективной проницаемости (Elias PM.  125 183-200 (2005)).
Skin Pharmacol Physiol.
С точки зрения белков эпидермальная дифференцировка в основном сосредоточена на развитии структурных белков, которые представляют собой кератины и которые вносят вклад в целостность структуры эпидермиса. Их экспрессия изменяется как функция степени созревания кератиноцитов. Основный кератин 1 и кислотный кератин 10 являются ранними маркерами дифференцировки кератиноцитов, присутствующими в базальном слое эпидермиса. Можно проследить экспрессию других маркеров этого биологического процесса, более поздних маркеров, например, экспрессию белков роговой оболочки, таких как инволюкрин, а также некоторых основных ферментов на начальном этапе поперечного сшивания структурных белков друг с другом и с липидами кератиноцитов, трансглутаминазами, такими как трансглутаминаза 1 (TG1) (Houben E, et al. ; 20(3):122-32 (2007)).
FEBS Lett.
Одновременно происходит синтез и перенос липидов кератиноцитов на начальном этапе образования межкорнеоцитного липидного цемента, необходимого кожному барьеру, формирование которого представляет собой последнюю фазу конечной эпидермальной дифференцировки. Такой внеклеточный липидный матрикс обеспечивает основной барьер для чрезкожного перемещения воды и электролитов (Mizutani Y., et al. 563: 93 (2004)). Соответственно, некоторое количество ферментов и переносчиков липидов проявляют экспрессию соответствующих кератиноцитов, дополненную дифференцировкой. В частности, основную роль на стадиях регулирования играют некоторые члены семейства переносчиков ABC (кассетного транспортера, связывающего аденозинтрифосфат), а не липидный барьер. Так, чувствительными маркерами являются ABC G1, который, в частности, переносит глицерин, и ABC A12, необходимый для переноса предшественников липидов в ламеллярных телах. Эпидермальные церамиды играют основную специфическую роль и представляют собой важнейший маркер уровня функциональных возможностей кожного барьера. Таким образом, ферменты, способствующие синтезу церамидов в коже, проявляют свою экспрессию и свою активность, которые особенно возрастают во время разрушения эпидермальной барьерной функции и в зависимости от уровня эпидермальной дифференцировки. Вышеуказанное имеет место, в частности, в случае сфинголипида C4-гидроксилаза/дельта-4 десатуразы или hDES2, дигидроцерамидгидроксилазная активность которого вносит вклад в синтез фитоцерамидов в коже человека (Feingold, K.R. J Lipid Res 48: 2531-2546 (2007)).
Прежде всего действие экстрактов согласно изобретению было сначала изучено на модели дифференцированных нормальных человеческих кератиноцитов (NHK).
Затем это действие было изучено на модели старения кератиноцитов.
Модель дифференцировки нормальных человеческих кератиноцитов
Moringa
Было проанализировано действие экстрактов  sp. на экспрессию генов различных белков, участвующих в синтезе или транспорте эпидермальных липидов, ABC G1 и hDES2.
Результаты:
Результаты выражены в процентах стимуляции экспрессии генов (мРНК) различных маркеров эпидермальной дифференцировки, выраженной с помощью NHK (по отношению к необработанным клеткам). Значимым положительным эффектом считалась стимуляция от 100%. Полученные результаты представлены ниже в таблице.
Таблица 1Действие витамина D3, росиглитазона и экстракта согласно изобретению в модели дифференцированных нормальных человеческих кератиноцитов (NHK)
Способы обработки клеток
ABC G1
hDES2
Вит D3 5 мкМ
170%
780%
Росиглитазон 10 мкМ
330%
190%
Экстракт согласно Примеру 1 (20 мкг/мл)
150%
100%
Экстракт, полученный согласно Примеру 1, при 20 мкг/мл вызывал экспрессию генов hDES2 и ABC G1. Вместо гидрофобного барьера экстракт, полученный согласно Примеру 1, позволил восстановить эпидермальную дифференцировку липидов на начальном этапе регулирования, что позволило ограничить обезвоживание кожи, в частности, встречающееся в случае зрелой кожи.
Модель старения кератиноцитов
2
2
Moringa
Для изучения способности кожного барьера к регенерации, которая понижена у зрелых субъектов (Tagami, Arch. Derm. Res. 2007), применяли модель, имитирующую процесс старения кератиноцитов с применением линий дифференцировки человеческих кератиноцитов HaCaT, обработанных HO. Анализировали действие экстрактов  sp. на восстановление экспрессии (мРНК) маркеров белковой дифференцировки, экспрессия которых была ингибирована при старении клеток, таких как K1 и инволюкрин.
Результаты:
Экстракт согласно Примеру 1 при 1 и 10 мкг/мл приводил к восстановлению экспрессии K1 (11 и 35% соответственно) и инволюкрина (15% для 10 мкг/мл).
Вывод
Результаты, полученные с применением двух моделей, демонстрируют хорошую комплементарность действия (в отношении как восстановления липидной структуры, так и белковой структуры эпидермиса) экстракта, предложенного в настоящем изобретении.
ОЦЕНКА АКТИВНОСТИ ВНЕКЛЕТОЧНОГО МАТРИКСА
Внеклеточный матрикс (ECM) представляет собой динамическую структуру, играющую структурную и регулирующую роль в тканях, благодаря чему кожа обладает свойством набухания и механическими свойствами: плотностью, эластичностью и тонусом. В области эпидермиса матрикс заполняет межклеточное пространство и играет роль в сохранении эпидермальной структуры. Он также обеспечивает обмены между клетками эпидермиса и участвует в клеточной активности. ECM эпидермиса состоит, в частности, из коллагена (волокнистого белка) типа IV. Когда клетка стареет, компоненты ECM преимущественно разрушаются под действием ферментов типа цинк-зависимых эндопептидаз, которые называют матричными металлопротеиназами или MMP. Последние активно участвуют в процессе рубцевания, но они также способствуют обвисанию кожи и появлению морщин, которые являются первыми признаками старения кожи. Среди них MMP-9 представляет собой желатиназу, которая проявляет активность против молекул денатурированного коллагена (желатина), но также может расщеплять природные молекулы коллагена типа IV, V и VII.
Moringa
2
2
Влияние экстрактов  sp. на экспрессию мРНК MMP-9 анализировали на линиях дифференцировки человеческих кератиноцитов HaCaT, обработанных с применением HO, имитируя процесс старения клеток.
Результаты:
Экстракт, полученный согласно Примеру 1, значительно подавляет экспрессию генов MMP-9 при трех концентрациях - 1, 10 и 30 мкг/мл.
Экстракт, полученный согласно Примеру 1, позволяет восстановить механические свойства ECM: плотность, эластичность и тонус ECM кожи и также позволяет восстановить белковую структуру эпидермиса.