СИНТЕТИЧЕСКИЕ ТРАНЗИТНЫЕ ПЕПТИДЫ ХЛОРОПЛАСТА ИЗ BRASSICA

1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая:
синтетическую нуклеотидную последовательность из Brassica, которая кодирует пептид, содержащий непрерывную аминокислотную последовательность первого транзитного пептида хлоропласта Brassica, при этом пептид дополнительно содержит непрерывную аминокислотную последовательность второго транзитного пептида хлоропласта.
2. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, дополнительно содержащая интересующую нуклеотидную последовательность, функционально связанную с синтетической нуклеотидной последовательностью из Brassica.
3. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что первый транзитный пептид хлоропласта Brassica происходит из Brassica napus или Brassica rapa.
4. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 3, отличающаяся тем, что второй транзитный пептид хлоропласта происходит из иного вида Brassica, чем первый транзитный пептид хлоропласта Brassica.
5. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что первый транзитный пептид хлоропласта Brassica происходит из гена 3-енолпирувилшикимат-5-фосфатсинтетазы.
6. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что второй транзитный пептид хлоропласта происходит из гена 3-енолпирувилшикимат-5-фосфатсинтетазы.
7. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что пептид по меньшей мере на 80% идентичен транзитному пептиду хлоропласта, выбранному из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 3 и 4.
8. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 7, отличающаяся тем, что пептид по меньшей мере на 85% идентичен транзитному пептиду хлоропласта, выбранному из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 3 и 4.
9. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 8, отличающаяся тем, что пептид по меньшей мере на 90% идентичен транзитному пептиду хлоропласта, выбранному из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 3 и 4.
10. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 9, отличающаяся тем, что пептид по меньшей мере на 95% идентичен транзитному пептиду хлоропласта, выбранному из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 3 и 4.
11. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 10, отличающаяся тем, что пептид по меньшей мере на 98% идентичен транзитному пептиду хлоропласта, выбранному из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 3 и 4.
12. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 11, отличающаяся тем, что пептид выбран из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 3 и 4.
13. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что интересующая нуклеотидная кодирующая последовательность не кодирует пептид SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2.
14. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что нуклеотидная последовательность, которая кодирует пептид, специфически гибридизуется с нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 5, 6, 8 и 9.
15. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 2, дополнительно содержащая по меньшей мере одну дополнительную нуклеотидную последовательность(и), каждая из которых кодирует транзитный пептид хлоропласта, при этом дополнительная нуклеотидная последовательность(и) функционально связана с интересующей нуклеотидной последовательностью.
16. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 15, отличающаяся тем, что по меньшей мере одна дополнительная нуклеотидная последовательность(и) происходит из организма, выбранного из группы, состоящей из прокариотов, низших фотосинтезирующих эукариотов и хлорофитов.
17. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 2, отличающаяся тем, что синтетическая нуклеотидная последовательность из Brassica и интересующая нуклеотидная последовательность функционально связаны с одной или более регуляторными последовательностями.
18. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 2, которая кодирует химерный полипептид, содержащий пептид, кодируемый интересующей нуклеотидной последовательностью, и пептид, кодируемый синтетической нуклеотидной последовательностью из Brassica.
19. Химерный полипептид, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты по п. 18.
20. Химерный полипептид по п. 19, отличающийся тем, что пептид, кодируемый интересующей нуклеотидной последовательностью, направляется в пластиду в содержащей пластиду клетке.
21. Химерный полипептид по п. 20, содержащий транзитный пептид хлоропласта, который удаляется, когда пептид, кодируемый интересующей нуклеотидной последовательностью, направляется в пластиду.
22. Химерный полипептид по п. 19, отличающийся тем, что пептид, кодируемый интересующей нуклеотидной последовательностью, представляет собой биологически активный пептид.
23. Химерный полипептид по п. 19, отличающийся тем, что пептид, кодируемый интересующей нуклеотидной последовательностью, представляет собой флуоресцентный пептид.
24. Химерный полипептид по п. 22, отличающийся тем, что биологически активный пептид представляет собой фермент.
25. Химерный полипептид по п. 22, отличающийся тем, что биологически активный пептид обычно экспрессируется в пластиде клетки, в которой пептид экспрессируется естественным образом.
26. Химерный полипептид по п. 22, отличающийся тем, что биологически активный пептид участвует в процессе, выбранном из группы, состоящей из устойчивости к гербицидам, устойчивости к вирусам, устойчивости к бактериальным патогенам, устойчивости к насекомым, устойчивости к нематодам, устойчивости к грибкам, мощности растения, урожайности, температурной толерантности, толерантности к состоянию почвы, толерантности к низкому уровню освещенности, толерантности к низкому содержанию воды, толерантности к высокому содержанию воды, толерантности к химическому составу окружающей среды, окраски семян, модификации крахмала, синтеза аминокислот, фотосинтеза, синтеза жирных кислот, синтеза масла, синтеза аротеноидов, синтеза терпеноидов, синтеза крахмала и устойчивости к гербицидам.
27. Химерный полипептид по п. 22, отличающийся тем, что биологически активный пептид выбран из группы, состоящей из зеаксантин эпоксидазы, холин-монооксигеназы, феррохелатазы, десатуразы омега-3 жирных кислот, глютамин-синтетазы, провитамина A, гормонов, белков Bt-токсинов и маркеров, полезных для идентификации растений, содержащих интересующий признак.
28. Химерный полипептид по п. 26, отличающийся тем, что биологически активный пептид участвует в развитии устойчивости к гербицидам.
29. Химерный полипептид по п. 24, отличающийся тем, что биологически активный пептид выбран из группы, состоящей из: ацетолактат синтазы (ALS), мутантной ALS, предшественников ALS, 3-енолпирувилшикимат-5-фосфатсинтетазы (EPSPS), CP4 EPSPS, EPSPS класса III и EPSPS класса IV.
30. Растительный экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 2.
31. Растительный материал, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 2.
32. Растительный материал по п. 31, выбранный из группы, состоящей из клетки растения, ткани растения, культуры тканей растения, каллусной культуры, части растения и целого растения.
33. Растительный материал по п. 31, дополнительно содержащий полипептид, содержащий пептид.
34. Растительный материал по п. 33, отличающийся тем, что интересующая нуклеотидная последовательность кодирует часть полипептида, который направляется в пластиду в клетке растительного материала.
35. Растительный материал по п. 31, отличающийся тем, что молекула нуклеиновой кислоты стабильно интегрирована в геном клетки из растительного материала.
36. Растительный материал по п. 31, представляющий собой целое растение.
37. Растительный материал по п. 31, представляющий собой клетку растения, которая не способна к регенерации для образования растения.
38. Растительный материал по п. 31, полученный из растения, выбранного из группы, состоящей из Arabidopsis, люцерны, Brassica, бобов, брокколи, капусты, моркови, цветной капусты, сельдерея, китайской капусты, хлопка, огурцов, баклажанов, салата, дыни, гороха, перца, арахиса, картофеля, тыквы, редьки, рапса, шпината, сои, тыквы крупноплодной, сахарной свеклы, подсолнечника, табака, томатов, арбуза, кукурузы, лука, риса, сорго, пшеницы, ржи, проса, сахарного тростника, овса, тритикале, проса прутьевидного и газонной травы.
39. Способ получения трансгенного растительного материала, включающий:
получение выделенной молекулы нуклеиновой кислоты по п. 2; и
трансформирование растительного материала молекулой нуклеиновой кислоты.
40. Способ по п. 39, отличающийся тем, что растительный материал выбран из группы, состоящей из клетки растения, ткани растения, культуры тканей растения, каллусной культуры, части растения и целого растения.
41. Способ по п. 39, отличающийся тем, что растительный материал не является целым растением.
42. Трансгенный растительный материал, полученный способом по п. 39.
43. Трансгенный растительный материал по п. 42, представляющий собой клетку растения, которая не способна к регенерации для образования растения.
44. Трансгенное растение, регенерированное из трансгенного растительного материала по п. 42.
45. Трансгенный растительный товарный продукт, полученный из растительного материала по п. 42.
46. Трансгенный растительный материал по п. 42, отличающийся тем, что интересующая нуклеотидная последовательность кодирует биологически активный пептид.
47. Трансгенный растительный материал по п. 46, отличающийся тем, что биологически активный пептид участвует в процессе, выбранном из группы, состоящей из устойчивости к гербицидам, устойчивости к вирусам, устойчивости к бактериальным патогенам, устойчивости к насекомым, устойчивости к нематодам, устойчивости к грибкам, мощности растения, урожайности, температурной толерантности, толерантности к состоянию почвы, толерантности к низкому уровню освещенности, толерантности к низкому содержанию воды, толерантности к высокому содержанию воды, толерантности к химическому составу окружающей среды, окраски семян, модификации крахмала, синтеза аминокислот, фотосинтеза, синтеза жирных кислот, синтеза масла, синтеза аротеноидов, синтеза терпеноидов, синтеза крахмала и устойчивости к гербицидам.
48. Трансгенный растительный материал по п. 46, отличающийся тем, что биологически активный пептид выбран из группы, состоящей из зеаксантин эпоксидазы, холин-монооксигеназы, феррохелатазы, десатуразы омега-3 жирных кислот, глютамин-синтетазы, провитамина A, гормонов, белков Bt-токсинов и маркеров, полезных для идентификации растений, содержащих интересующий признак.
49. Трансгенный растительный материал по п. 47, отличающийся тем, что биологически активный пептид участвует в развитии устойчивости к гербицидам.
50. Трансгенный растительный материал по п. 46, отличающийся тем, что биологически активный пептид выбран из группы, состоящей из: ацетолактат синтазы (ALS), мутантной ALS, предшественников ALS, 3-енолпирувилшикимат-5-фосфатсинтетазы (EPSPS), CP4 EPSPS и EPSPS класса III.
51. Трансгенный растительный материал по п. 49, проявляющий повышенную устойчивость к гербицидам или толерантность к гербицидам по сравнению с растительным материалом дикого типа того же вида.
52. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая компоненты из Brassica для направления полипептида в хлоропласт.
53. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 52, дополнительно содержащая интересующую нуклеотидную последовательность, функционально связанную с компонентами из Brassica для направления полипептида в хлоропласт.
54. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 53, кодирующая химерный полипептид, содержащий пептид, кодируемый интересующей нуклеотидной последовательностью.
55. Химерный полипептид, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты по п. 54.
56. Химерный полипептид по п. 55, отличающийся тем, что пептид, кодируемый интересующей нуклеотидной последовательностью, направляется в пластиду в содержащей пластиду клетке.
57. Химерный полипептид по п. 56, содержащий транзитный пептид хлоропласта, который удаляется, когда пептид, кодируемый интересующей нуклеотидной последовательностью, направляется в пластиду.
58. Химерный полипептид по п. 55, отличающийся тем, что пептид, кодируемый интересующей нуклеотидной последовательностью, представляет собой биологически активный пептид.
59. Полипептид по п. 58, отличающийся тем, что биологически активный пептид участвует в процессе, выбранном из группы, состоящей из устойчивости к гербицидам, устойчивости к вирусам, устойчивости к бактериальным патогенам, устойчивости к насекомым, устойчивости к нематодам, устойчивости к грибкам, мощности растения, урожайности, температурной толерантности, толерантности к состоянию почвы, толерантности к низкому уровню освещенности, толерантности к низкому содержанию воды, толерантности к высокому содержанию воды, толерантности к химическому составу окружающей среды, окраски семян, модификации крахмала, синтеза аминокислот, фотосинтеза, синтеза жирных кислот, синтеза масла, синтеза аротеноидов, синтеза терпеноидов, синтеза крахмала и устойчивости к гербицидам.
60. Полипептид по п. 58, отличающийся тем, что биологически активный пептид выбран из группы, состоящей из зеаксантин эпоксидазы, холин-монооксигеназы, феррохелатазы, десатуразы омега-3 жирных кислот, глютамин-синтетазы, провитамина A, гормонов, белков Bt-токсинов и маркеров, полезных для идентификации растений, содержащих интересующий признак.
61. Полипептид по п. 58, отличающийся тем, что биологически активный пептид выбран из группы, состоящей из: ацетолактат синтазы (ALS), мутантной ALS, предшественников ALS, 3-енолпирувилшикимат-5-фосфатсинтетазы (EPSPS), CP4 EPSPS и EPSPS класса III.
62. Растительный экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 53.
63. Растительный материал, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 53.
64. Растительный материал по п. 63, отличающийся тем, что молекула нуклеиновой кислоты стабильно интегрирована в геном клетки из растительного материала.
65. Растительный материал по п. 63, представляющий собой целое растение.
66. Растительный материал по п. 63, представляющий собой клетку растения, которая не способна к регенерации для образования растения.
67. Растительный материал по п. 63, полученный из растения, выбранного из группы, состоящей из Arabidopsis, люцерны, Brassica, бобов, брокколи, капусты, моркови, цветной капусты, сельдерея, китайской капусты, хлопка, огурцов, баклажанов, салата, дыни, гороха, перца, арахиса, картофеля, тыквы, редьки, рапса, шпината, сои, тыквы крупноплодной, сахарной свеклы, подсолнечника, табака, томатов, арбуза, кукурузы, лука, риса, сорго, пшеницы, ржи, проса, сахарного тростника, овса, тритикале, проса прутьевидного и газонной травы.
68. Способ получения трансгенного растительного материала, включающий:
получение выделенной молекулы нуклеиновой кислоты по п. 53; и
трансформирование растительного материала молекулой нуклеиновой кислоты.
69. Способ по п. 68, отличающийся тем, что растительный материал выбран из группы, состоящей из клетки растения, ткани растения, культуры тканей растения, каллусной культуры, части растения и целого растения.
70. Способ по п. 68, отличающийся тем, что растительный материал не является целым растением.
71. Трансгенный растительный материал, полученный способом по п. 68.
72. Трансгенное растение, регенерированное из трансгенного растительного материала по п. 68.
73. Растительный материал по п. 71, отличающийся тем, что трансгенный растительный материал представляет собой целое растение.
74. Растительный материал по п. 71, отличающийся тем, что трансгенный растительный материал представляет собой клетку растения, которая не способна к регенерации для образования растения.
75. Трансгенный растительный товарный продукт, полученный из трансгенного растительного материала по п. 71.
76. Трансгенный растительный материал по п. 71, отличающийся тем, что интересующая нуклеотидная последовательность кодирует биологически активный пептид.