КОНЪЮГАТЫ УРАТОКСИДАЗЫ С СОХРАНЕННОЙ УРИКОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ И УВЕЛИЧЕННЫМ ПЕРИОДОМ ПОЛУРАСПАДА, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ СНИЖЕНИЯ УРОВНЕЙ МОЧЕВОЙ КИСЛОТЫ И СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ТЕТРАМЕРНОЙ ФОРМЫ УРАТОКСИДАЗЫ ИЗ РАСТВОРА ТЕТРАМЕРНОЙ ФОРМЫ И АГРЕГАТОВ УРАТОКСИДАЗЫ

1. Конъюгаты уратоксидазы (уриказы) с сохраненной уриколитической активностью и увеличенным периодом полураспада in vivo по сравнению с неконъюгированной уриказой, включающие в себя очищенную уриказу и полиэтиленгликоль (ПЭГ), отличающиеся тем, что, по меньшей мере, 90% упомянутой уриказы представляет собой тетрамер.
2. Конъюгаты по п.1, отличающиеся тем, что указанный ПЭГ имеет средний молекулярный вес примерно 10÷60 кДа.
3. Конъюгаты по п.2, отличающиеся тем, что указанный ПЭГ имеет средний молекулярный вес 10 кДа.
4. Конъюгаты по п.2, отличающиеся тем, что указанный ПЭГ имеет средний молекулярный вес примерно 20 кДа.
5. Конъюгаты по п.2, отличающиеся тем, что указанный ПЭГ имеет средний молекулярный вес примерно 30 кДа.
6. Конъюгаты по п.1, отличающиеся тем, что среднее количество нитей указанного ПЭГ, ковалентно связанных с каждой субъединицей, из которых состоит указанный тетрамер, составляет от 2 до 10.
7. Конъюгаты по п.1, отличающиеся тем, что в качестве уриказы они включают в себя уриказу млекопитающего.
8. Конъюгаты по п.7, отличающиеся тем, что в качестве уриказы, они включают в себя уриказу свиной печени, уриказу бычьей печени или уриказу овечьей печени.
9. Конъюгаты по п.1, отличающиеся тем, что в качестве уриказы они включают в себя рекомбинантную уриказу.
10. Конъюгаты по п.9, отличающиеся тем, что рекомбинантная уриказа имеет аминокислотную последовательность уриказы свиной печени, бычьей печени, овечьей печени или печени бабуина.
11. Конъюгаты по п.9, отличающиеся тем, что в качестве рекомбинантной уриказы они включают в себя химерную уриказу.
12. Конъюгаты по п.11, отличающиеся тем, что указанная химерная уриказа содержит, по меньшей мере, одну часть уриказы свиной печени и, по меньшей мере, одну часть уриказы печени бабуина.
13. Конъюгаты по п.12, отличающиеся тем, что указанная химерная уриказа является химерной уриказой свиньи и бабуина (СБХ-уриказой).
14. Конъюгаты по п.12, отличающиеся тем, что в качестве химерной уриказы они включают в себя уриказу с последовательностью свиной уриказы SEQ ID NO:1 с остатком лизина вместо остатка аргинина в положении 291 (R291K) и с остатком серина вместо остатка треонина в положении 301 (T301S) (CKS-уриказой).
15. Конъюгаты по п.9, отличающиеся тем, что в качестве рекомбинантной уриказы они включают в себя уриказу с аминокислотной последовательностью уриказы печени бабуина (SEQ ID NO:2) с остатком гистидина вместо тирозина в положении 97 (Y97H).
16. Конъюгаты по п.9, отличающиеся тем, что в качестве рекомбинантной уриказы они включают в себя укороченную с аминоконца и/или карбоксильного конца рекомбинантную уриказу.
17. Конъюгаты по п.6, отличающиеся тем, что они включают в себя ПЭГ при среднем количестве от 3 до 8 ковалентно связанных нитей на субъединицу уриказы, из которых состоит тетрамер.
18. Конъюгаты по п.17, отличающиеся тем, что они включают в себя ПЭГ при среднем количестве от 4 до 6 ковалентно связанных нитей на субъединицу уриказы, из которых состоит тетрамер.
19. Конъюгаты по п.1, отличающиеся тем, что они имеют ковалентный линкер между ПЭГ и уриказой, выбранный из группы, состоящей из уретанового линкера, вторичного аминового линкера и амидного линкера.
20. Конъюгаты по п.1, отличающиеся тем, что в качестве ПЭГ они включают в себя линейный ПЭГ.
21. Конъюгаты по п.1, отличающиеся тем, что в качестве ПЭГ они включают в себя разветвленный ПЭГ.
22. Конъюгаты по п.1, отличающиеся тем, что, по меньшей мере, 95% указанной уриказы представляет собой тетрамер.
23. Конъюгаты по п.16, отличающиеся тем, что в качестве укороченной с аминоконца и/или карбоксильного конца рекомбинантной уриказы они включают в себя указанную уриказу с аминоконцом, укороченным, по меньшей мере, на шесть первых аминокислот.
24. Фармацевтическая композиция для снижения повышенных уровней мочевой кислоты в жидкости или ткани тела млекопитающего, содержащая конъюгат очищенной уриказы с полиэтиленгликолем (ПЭГ) и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что, по меньшей мере, 90% упомянутой уриказы представляет собой тетрамер.
25. Фармацевтическая композиция по п.24, отличающаяся тем, что она имеет стабилизированную лиофилизированную форму, быстро восстанавливаемую растворением с получением раствора, пригодного для парентерального введения.
26. Способ выделения тетрамерной формы уратоксидазы (уриказы) из раствора уриказы, содержащего тетрамерную форму уриказы и агрегаты уриказы, отличающийся тем, что указанный раствор наносят, по меньшей мере, на одну разделительную колонку при рН примерно 9÷10,5, затем с указанной разделительной колонки собирают, по меньшей мере, одну фракцию, в которой, по меньшей мере, 90% уриказы имеет тетрамерную форму.
27. Способ по п.26, отличающийся тем, что указанный раствор наносят при рН 10,2.
28. Способ по п.26, отличающийся тем, что используют разделительные колонки с ионным обменом и/или размерной эксклюзией.
29. Способ по п.26, отличающийся тем, что дополнительно анализируют, по меньшей мере, одно свойство указанных фракций, выбранное из группы, состоящей из наличия указанной тетрамерной уриказы и отсутствия указанных агрегатов уриказы.
30. Способ по п.29, отличающийся тем, что анализируют, по меньшей мере, одним аналитическим методом, выбранным из группы, состоящей из хроматографии, центрифугирования, светорассеяния и электрофореза.
31. Способ по п.29, отличающийся тем, что указанный аналитический метод представляет собой высокоэффективную жидкостную хроматографию.