РЕДАКТИРОВАНИЕ ГЕНА ПЕРВИЧНЫХ КЛЕТОК

1. Полинуклеотид, содержащий:
а. первую и вторую области гомологии, гомологичные первой и второй последовательностям нуклеиновой кислоты-мишени и ориентированные для облегчения гомологичной рекомбинации;
b. нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептидную последовательность TCR и расположенную между первой и второй областями гомологии; и
с. первую нуклеотидную последовательность, кодирующую элемент вырезания рибосомы 2A и расположенную выше нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид TCR, и вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую элемент вырезания рибосомы 2A и расположенную ниже нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид TCR, где первая и вторая нуклеотидные последовательности, кодирующие элемент вырезания рибосомы 2А, имеют одинаковые аминокислотные последовательности и являются дивергентными по кодонам по отношению друг к другу.
2. Полинуклеотид по п. 1, где первая и вторая области гомологии полинуклеотида имеют длину приблизительно от 300 оснований до приблизительно 2000 оснований.
3. Полинуклеотид по п. 1 или 2, где элемент вырезания рибосомы 2A представляет собой элемент вырезания рибосомы P2A.
4. Полинуклеотид по любому из пп. 1-3, также включающий:
а. нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность Gly-Ser-Gly и расположенную непосредственно выше нуклеотидных последовательностей, кодирующих элементы вырезания рибосомы 2A;
b. нуклеотидную последовательность, кодирующую сайт расщепления фурином и расположенную выше второй нуклеотидной последовательностью, кодирующей элемент вырезания рибосомы 2А; и
с. нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальный пептид и расположенную выше нуклеотидной последовательности, кодирующей TCR.
5. Полинуклеотид по любому из пп. 1-4, также содержащий вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептидную последовательность TCR и расположенную между второй нуклеотидной последовательностью, кодирующей элемент вырезания рибосомы 2A, и второй областью гомологии.
6. Полинуклеотид по п. 5, где полинуклеотид также включает вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальный пептид и расположенную выше второй нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид TCR, где сигнальный пептид является таким же.
7. Полинуклеотид по п. 4 или 6, где сигнальная последовательность представляет собой сигнальную последовательность человеческого гормона роста.
8. Полинуклеотид по любому из пп. 1-7, где полинуклеотид представляет собой кольцевую ДНК.
9. Полинуклеотид по любому из пп. 1-8, где нуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид TCR, кодирует TCR, который распознает специфичный для рака эпитоп, презентированный на аллеле MHC.
10. Полинуклеотид по любому из пп. 1-9, где первая и вторая последовательности нуклеиновой кислоты-мишени идентичны первой и второй области эндогенного локуса TCR.
11. Композиция, содержащая полинуклеотид по любому из пп. 1-10 и нуклеазу.
12. Композиция по п. 11, также содержащая оцрРНК, где нуклеаза представляет собой нуклеазу семейства регулярно кластеризованных перемежающихся коротких палиндромных повторов (CRISPR) или ее производное.
13. Способ модификации иммунной клетки, включающий:
а. получение композиции по п. 11 или 12; и
b. доставку композиции в клетку не-вирусным способом.
14. Способ по п. 13, где не-вирусный способ представляет собой электропорацию.
15. Иммунная клетка, содержащая полинуклеотид по любому из пп. 1-10, композицию по любому из пп. 11 или 12, или модифицированная способом по п. 13 или 14.
16. Иммунная клетка по п. 15, где иммунная клетка выделена у индивидуума.
17. Иммунная клетка по п. 15 или 16, где иммунная клетка представляет собой первичную клетку.
18. Иммунная клетка по любому из пп. 15-17, где иммунная клетка представляет собой цитотоксический Т-лимфоцит (CTL), CD8+-T-клетку, CD4+-Т-клетку, первичную Т-клетку, опухоль-инфильтрирующую Т-клетку, регуляторную Т-клетку, хелперную Т-клетку, Th1-клетку, Th2-клетку, Th17-клетку, альфа-бета-Т-клетку, гамма-дельта-Т-клетку, В-клетку, моноцит, макрофаг, дендритную клетку, природную Т-клетку-киллер или стволовую клетку.
19. Иммунная клетка по любому из пп. 15-18 для ее применения в целях приготовления лекарственного средства для лечения пациента с раком.
20. Иммунная клетка по п. 19, где рак представляет собой меланому, рак прямой и ободочной кишки или рак легких.
21. Композиция, содержащая иммунную клетку по любому из пп. 15-20.
22. Композиция по п. 21, содержащая фармацевтически приемлемый наполнитель.
23. Композиция по п. 21 или 22 для ее применения в целях приготовления лекарственного средства для лечения пациента с раком.
24. Композиция по п. 23, где рак представляет собой меланому, рак прямой и ободочной кишки или рак легких.