СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АПОЛИПОПРОТЕИНА Е4

1. Способ (in vitro) детектирования аполипопротеина Е изотипа (ApoE4) 4 или его фрагментов в образце крови субъекта, включающий стадии:
а. контактирование указанного образца с твердой фазой,
контактирование указанного образца одновременно или последовательно по меньшей мере с одним связывающим агентом, который специфически связывается с ApoE4, с образованием тем самым комплекса ApoE4-связывающий агент, где указанный связывающий агент представляет антитело или функциональный фрагмент антитела или каркасный белок, отличный от IgG, и
b. детектирование комплекса ApoE4-связывающий агент, где указанный комплекс ApoE4-связывающий агент иммобилизован на указанной твердой фазе, где твердая фаза не покрыта каким-либо связывающим агентом или захватывающей молекулой, и где связывание ApoE4 или комплекса ApoE4-связывающий агент с указанной твердой фазой происходит в присутствии детергента.
2. Способ по п.1, где ApoE4 или его фрагменты иммобилизованы на указанной твердой фазе, и связывающий агент связан с ApoE4.
3. Способ по пп.1 или 2, где фрагменты ApoE4 содержат по меньшей мере 6 аминокислот в длину при условии, что аминокислота 158 (аргинин) входит в указанный фрагмент, где последовательность, включающая аминокислоту 158, относится к SEQ ID NO:1.
4. Способ по пп.1-3, где комплекс ApoE4-связывающий агент детектируется качественно и количественно.
5. Способ по пп.1-4, где количественное определение комплекса ApoE4-связывающий агент указывает на концентрацию ApoE4 в указанном образце, где концентрация показывает, насколько субъекты являются гомозиготными или гетерозиготными по аллелям ApoE4.
7
-1
8
-1
9
-1
10
-1
6. Способ по пп.1-5, где связывающий агент представляет антитело или функциональный фрагмент антитела или каркасный белок, отличный от IgG, с константой аффинности связывания по меньшей мере 10 М, предпочтительно 10 М, предпочтительной константой аффинности выше 10 М, наиболее предпочтительно выше 10 М.
7. Способ по пп.1-6, где связывающий агент помечен меткой для детектирования, где указанная метка выбрана из группы, включающей хемилюминесцентную метку, ферментную метку, флуоресцентную метку или метку на основе радиоактивного йода.
8. Способ по пп.1-7, где детектирование ApoE4 используется для классификации субъекта, как ApoE4-позитивного или ApoE4-негативного, когда уровень детектированного ApoE4 выше определенного порогового значения, где указанное пороговое значение определяется конкретным значением внутреннего положительного контроля.
9. Способ по пп.1-8, где твердая фаза выбрана из группы, состоящей из полимерной поверхности (например, полистирола), стеклянной поверхности, целлюлозы и производных целлюлозы (например, нитроцеллюлозы, поливинилиденфторида, нейлона).
10. Способ по пп.1-9, где твердая фаза выбрана из группы стеклянных или полимерных поверхностей, где полимерная поверхность включает, не ограничиваясь этим, полистирол, поли(дивинилбензол), стирол-акриловый сополимер, стирол-бутадиеновый сополимер, стирол-дивинилбензольный сополимер, поли(стирол-оксиэтилен), полиметилметакрилат, полиуретан, полиглутаральдегид, полиэтиленимин, поливинилпирролидон, N,N'-метилен-бис-акриламид, полиолефины, полиэтилен, политетрафторэтилен, полиэтилентерефталат, полипропилен, поливинилхлорид, поливинилацетат, полиакрилонитрил, полисульфон, поли(сульфоновый эфир), полидиметилсилоксан, пиролизованные материалы, блок-сополимеры и сополимеры вышеуказанных соединений, силиконы или диоксид кремния.
11. Способ по пп.1-10, где указанный образец крови контактирует с ненасыщенной твердой фазой.
12. Способ по пп.1-11, где необязательный стабилизирующий белок в реакционном буфере стабилизирует связывание ApoE4 и его фрагментов в образце крови с твердой фазой посредством блокирования сайтов неспецифического связывания и взаимодействия с конформацией ApoE4, где стабилизирующий белок выбран из группы, включающей бычий сывороточный альбумин (BSA), человеческий сывороточный альбумин, казеин, молочные белки, иммуноглобулины, стабилизирующие аминокислоты (например, аланин, аргинин, глицин, изолейцин, лизин, пролин, серин), и предпочтительно стабилизирующим белком является бычий сывороточный альбумин (BSA).
13. Способ по пп.1-12, где концентрация BSA в качестве стабилизирующего белка находится в диапазоне 0-10%, предпочтительно, 0,2-5%, наиболее предпочтительно 0,5-2,5%.
14. Способ по пп.1-13, где детергент выбран из группы анионных детергентов (например, додецилсульфата натрия (SDS)), катионных детергентов (например, цетилтриметиламмония бромида (CTAB)), цвиттер-ионных детергентов (например, CHAPS) и/или неионных детергентов (например, твина-20, тритона X-100).
15. Способ по пп.1-14, где концентрация твина-20 выбрана в диапазоне 0,001-10%, предпочтительно 0,01-1%, наиболее предпочтительно 0,2-0,5%.
16. Способ по пп.1-15, где концентрация тритона Х-100 выбрана в диапазоне 0,001-0,5%, предпочтительно 0,01-0,2%, наиболее предпочтительно 0,05-0,1%.
17. Способ по любому из предшествующих пунктов, где образец крови выбран из группы цельной крови, сыворотки и цитратной плазмы, гепаринизированной плазмы, ЭДТА-плазмы.
18. Способ по любому из предшествующих пунктов, где субъект выбран из группы, включающей живого человека или организм человека, предпочтительно субъекта-человека, где субъект является здоровым, предположительно здоровым, страдающим когнитивным нарушением, деменцией, в частности, AD.
19. Набор, содержащий:
а. один связывающий агент, направленный против эпитопа, входящего в последовательность ApoE4 или его фрагментов, где связывающий агент помечен детектируемой меткой,
b. твердую фазу (например, планшет, пробирку, шарики, пластину),
с. реакционный буфер, содержащий детергент.
20. Применение набора по любому из предшествующих пунктов для детектирования и/или количественного определения ApoE4 in vitro в образце крови субъекта.
21. Применение способа по любому из предшествующих пунктов для стратификации риска или стратификации применения терапевтических мероприятий для заболевания или патологического состояния, ассоциированного с повышенными уровнями ApoE4.
22. Применение способа по любому из предшествующих пунктов, где заболевание или патологическое состояние выбрано из группы когнитивного нарушения и нейродегенеративных заболеваний, включая деменцию и/или болезнь Альцгеймера (AD).
23. Способ по любому из предшествующих пунктов для выявления риска развития AD, где повышенный уровень ApoE4 выше определенного порогового значения является прогностическим для повышенного риска развития AD.
24. Способ по любому из предшествующих пунктов, где указанное присутствие ApoE4 или комплекса ApoE4-связывающий агент коррелирует с риском развития/заболеваемости AD.