2,5-ЗАМЕЩЕННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ОКСАЗОЛОПИРИМИДИНА
2,5-SUBSTITUTED OXAZOLOPYRIMIDINE DERIVATIVES

Настоящее изобретение относится к 2,5-замещенным оксазолопиримидиновым соединениям и их физиологически приемлемым солям.
Структурно подобные соединения уже описаны ранее (см. WO 2009/154775) и представляют собой соединения, применимые для лечения рассеянного склероза. Механизм действия указанных соединений состоит в инициировании потери чувствительности сигнального пути EDG-1 активацией EDG-1 рецептора (так называемый сверхагонизм), который после этого эквивалентен функциональному антагонизму сигнального пути EDG-1. Системно это означает, что, главным образом, на лимфоцитах сигнальный путь EDG-1 подавляется перманентно, в результате чего эти клетки более не могут хемотактично следовать S1P градиенту между кровью и лимфатической жидкостью. То есть, поврежденные лимфоциты больше не могут покидать вторичную лимфатическую ткань (повышенный хоуминг), и количество свободно циркулирующих в плазме лимфоцитов значительно снижается. Такой недостаток лимфоцитов в плазме (лимфопения) вызывает иммуносупрессию, которая непременно необходима для механизма действия модуляторов рецептора EDG-1, описанных в WO 2009/154775.
Предметом настоящего изобретения являются соединения, которые специфически подходят для заживления ран и, в частности, для лечения расстройств, связанных с заживлением ран у пациентов, страдающих сахарным диабетом. Кроме того, было желательно получить соединения, которые подходят для лечения синдрома диабетической стопы (diabetic foot syndrome - DFS). К тому же было желательно добиться воспроизводимой активации сигнального пути EDG-1 рецептора, что дает возможность, говоря фармакологическими терминами, персистентно активировать EDG-1 сигнальный путь.
Настоящее изобретение относится к производным оксазолопиримидина формулы I
1
2
где А, R и R принимают значения, определенные ниже. Таким образом, механизм действия соединений формулы I не основан на потери чувствительности EDG-1 сигнального пути и, следовательно, диаметрально противоположен механизму действия, описанному в WO 2009/154775. Изобретение также относится к способам получения соединений формулы I, их применению, в частности, в качестве активных ингредиентов в фармацевтических средствах и фармацевтическим композициям, включающим указанные соединения.
По сравнению со здоровыми людьми у пациентов с сахарным диабетом имеет место замедленное заживление ран и повышенная скорость инфицирования, особенно в случае длительной гипергликемии, вызванной, например, плохим регулированием содержания сахара в крови. Причинами этого являются нарушения кровообращения, особенно в области небольших сосудов, которые приводят к кислородной недостаточности и недостаточной поставке питательных веществ к тканям. Кроме того, снижается клеточное деление и скорость клеточной миграции кератоцитов, фибробластов и кожных эндотелиальных клеток. Более того, активность различных защитных клеток (гранулоцитов) со сниженным фагоцитозом (поглощение и деструкция бактерий) ограничивается. Функция антител (иммуноглобулинов) против бактерий также ограничена в случае высоких значений содержания сахара в крови. Поэтому раны и инфекции у пациентов с сахарным необходимо лечить особым способом.
EDG-1 рецептор является представителем семейства рецепторов гена эндотелиальной дифференциации (Edg), включающего восемь идентифицированных в настоящее время рецепторов класса А (G-белок-связанных рецепторов - GPCR). Это семейство может подразделяться на подсемейства сфингозин-1-фосфат-активированных рецепторов (S1P) (пять представителей) и рецепторов, активированных лизофосфатидной кислотой (LPA; три представителя). Эндогенный лигандный S1P представляет собой плюрипотентный лизофосфолипид, воздействующий на клетки различных типов активацией GPCR из семейства Edg рецепторов, а именно: Edg-1 (=S1P1), Edg-3 (=S1P3), Edg-5 (=S1P2), Edg-6 (=S1P4) и Edg-8 (S1P5). Хотя S1P также описан как внутриклеточный мессенджер, ряд клеточных ответов S1P опосредуется посредством активации Edg рецепторов. S1P генерируется ферментным семейством сфингозинкиназ (sphingosine kinases - SPHK) и разлагается различными фосфатазами или лиазами.
Предметом настоящего изобретения является оксазолопиримидиновое соединение формулы I в любой из его стереоизомерных форм или в виде смеси стереоизомерных форм в любом соотношении, его физиологически приемлемая соль или физиологически приемлемый сольват любого из указанных соединений.
где
A выбран из NH, O и S;
1
1
11
1
6
2
6
2
6
3
7
u
2u
v
2v
1
4
R выбран из (C-C)-алкила, (C-C)-алкенила, (C-C)-алкинила, (C-C)-циклоалкил-CH- и Het-CH-, где u и v выбраны из 1 и 2, или R представляет собой остаток насыщенного или ненасыщенного 3-10-членного моноциклического или бициклического кольца, которое включает 0, 1, 2, 3 или 4 одинаковых или разных гетероатома, выбранных из атомов N, О и S, где один или два атома азота кольца могут нести на себе атом водорода или (C-C)-алкильный заместитель и один или два атома серы кольца могут нести на себе одну или две оксогруппы и где остаток кольца является необязательно замещенным по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R;
2
21
22
R выбран из фенила и остатка ароматического 5-6-членного моноциклического гетероцикла, который содержит в кольце 1, 2 или 3 одинаковых или разных гетероатома, выбранных из атомов N, O и S, где один из атомов азота кольца может нести на себе атом водорода или заместитель R и где фенил и остаток ароматического гетероцикла являются необязательно замещенными по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R;
11
1
4
3
7
1
4
1
4
m
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
R выбран из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси, оксогруппы, (C-C)-алкил-S(O)-, аминогруппы, (C-C)-алкиламино, ди((C-C)-алкил)амино, (C-C)-алкилкарбониламино, (C-C)-алкилсульфониламино, нитрогруппы, цианогруппы, (C-C)-алкилкарбонила, аминосульфонила, (C-C)-алкиламиносульфонила и ди((C-C)-алкил)аминосульфонила;
21
1
4
3
7
w
2W
R выбран из (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкил-CH- и оксигруппы, где w выбран из 0, 1 и 2;
22
23
23
1
4
1
4
1
4
m
1
4
R выбран из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилоксигруппы, (C-C)-алкил-S(O)-, аминогруппы, нитрогруппы, цианогруппы, гидроксикарбонила, (C-C)-алкилоксикарбонила, аминокарбонила, аминосульфонила, R и R-O-;
23
24
1
4
R представляет собой остаток насыщенного 3-7-членного моноциклического или бициклического кольца, которое включает 0, 1, 2, 3 или 4 одинаковых или разных гетероатома, выбранных из атомов N, O и S, где один или два атома азота кольца могут нести на себе атом водорода или (C-C)-алкильный заместитель и один из атомов серы кольца может нести на себе одну или две оксогруппы и где остаток кольца является необязательно замещенным по одному или нескольким атомам углерода одинаковыми или разными заместителями R;
24
1
4
R выбран из галогена, (C-C)-алкила, гидроксильной и оксогруппы;
1
4
Het представляет собой остаток насыщенного 4-7-членного моноциклического гетероцикла, который содержит в кольце 1 или 2 одинаковых или разных гетероатома, выбранных из атомов N, O и S, и который присоединен через атом углерода кольца, где остаток гетероцикла является необязательно замещенным одним или несколькими одинаковыми или разными заместителями, выбранными из атома фтора и (C-C)-алкила;
m выбран из 0, 1 и 2, где все численные значения m являются независимыми друг от друга;
1
4
где все циклоалкильные группы, независимо друг от друга и независимо от любых других заместителей, являются необязательно замещенными одним или несколькими одинаковыми или разными заместителями, выбранными из атома фтора и (C-C)-алкила;
u
2u
v
2v
w
2w
где все алкильные, CH, CH, CH, алкенильные и алкинильные группы, независимо друг от друга и независимо от любых других заместителей, являются необязательно замещенными одним или несколькими фтор-заместителями.
22
11
Структурные элементы, такие как группы, заместители, элементы гетероцикла, числа или другие отличительные признаки, например алкильные группы, группы, подобные R или R, числа, такие как m, u и v, которые могут встречаться несколько раз в соединениях формулы I, независимо друг от друга могут иметь одинаковые значения и в любом случае могут быть одинаковыми или различающимися. Например, алкильные группы в диалкиламиногруппе могут быть одинаковыми или разными.
Алкильные, алкенильные и алкинильные группы могут быть линейными, т.е. с прямой цепью, или разветвленными. Это также применимо, когда они представляют собой части других групп, например алкилоксигрупп (=алкоксигруппы, алкил-O-группы), алкилоксикарбонильных групп или алкил-замещенных аминогрупп, или когда они являются замещенными. В зависимости от соответствующего определения, число атомов углерода в алкильной группе может быть равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6, либо 1, 2, 3 или 4, либо 1, 2 или 3. Примерами алкила являются метил, этил, пропил, включая н-пропил и изопропил, включая н-бутил, втор-бутил, изобутил и трет-бутил, пентил, включая н-пентил, 1-метилбутил, изопентил, неопентил и трет-пентил, и гексил, включая н-гексил, 3,3-диметилбутил и изогексил. Двойные связи и тройные связи в алкенильных группах и алкинильных группах могут находиться в любых положениях. В одном варианте осуществления изобретения алкенильные группы содержат одну двойную связь и алкинильные группы содержат одну тройную связь. В одном варианте осуществления изобретения алкенильная группа или алкинильная группа содержит по меньшей мере три атома углерода и присоединена к остатку молекулы через атом углерода, который не задействован в двойной связи или тройной связи. Примерами алкенила и алкинила являются этенил, проп-1-енил, про-2-енил (=аллил), бут-2-енил, 2-метилпроп-2-енил, 3-метилбут-2-енил, гекс-3-енил, гекс-4-енил, проп-2-инил (=пропаргил), бут-2-инил, бут-3-инил, гекс-4-инил или гекс-5-инил. Замещенные алкильные группы, алкенильные группы и алкинильные группы могут быть замещенными в любых положениях при условии, что соответствующее соединение является достаточно стабильным и подходит для нужной цели, такой как применение в качестве лекарственного средства. Необходимое условие, что конкретная группа и соединение формулы I являются достаточно стабильными и подходят для желательной цели, такой как применение в качестве лекарственного средства, обычно имеет силу и в отношении определений всех групп в соединениях формулы I.
u
2u
v
2v
w
2w
2
2
2
2
2
2
3
3
2
3
2
2
3
u
2u
u
2u
Когда это применимо, приведенные выше пояснения, относящиеся к алкильным группам, имеют силу, соответственно, и в отношении двухвалентных алкильных групп, таких как группы CH, CH и CH, которые, таким образом, также могут быть линейными или разветвленными. Примерами двухвалентных алкильных групп являются -CH- (=метилен), -CH-CH-, -CH-CH-CH-, -CH(CH)-, -C(CH)-, -CH(CH)-CH-, -CH-CH(CH)-. Если численное значение в двухвалентной группе, такое как, например, значение u в группе CH, равно 0 (=нулю), две группы, которые присоединены к указанной группе, такой как CH, соединяются непосредственно через одинарную связь.
1
4
1
4
3
7
Число атомов углерода в кольце циклоалкильной группы может быть равно 3, 4, 5, 6 или 7. В одном варианте осуществления изобретения число атомов углерода в кольце циклоалкильной группы, независимо от числа атомов углерода в кольце любой другой циклоалкильной группы, равно 3, 4, 5 или 6, в другом варианте осуществления изобретения равно 3, 4 или 5, в еще одном варианте осуществления изобретения равно 3 или 4, в еще одном варианте осуществления изобретения равно 3, в еще одном варианте осуществления изобретения равно 5, 6 или 7, в еще одном варианте осуществления изобретения равно 5 или 6, в еще одном варианте осуществления изобретения равно 6 или 7, в еще одном варианте осуществления изобретения равно 6. Примерами циклоалкильных групп являются циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил. Независимо от любого другого и независимо от любых других заместителей, циклоалкильные группы являются необязательно замещенными одним или несколькими одинаковыми или разными (C-C)-алкильными заместителями, которые могут находиться в любых положениях, т.е., циклоалкильные группы могут быть не замещенными алкильными заместителями или замещенными алкильными заместителями, например 1, 2, 3 или 4, либо 1 или 2, C-C-алкильными заместителями, например метильными группами. Примерами алкил-замещенных циклоалкильных групп являются 4-метилциклогексил, 4-трет-бутилциклогексил или 2,3-диметилциклопентил. Примерами циклоалкилалкильных групп, которые могут представлять такие группы, как например (C-C)-циклоалкил, являются циклопропилметил, циклобутилметил, циклопентилметил, циклогексилметил, циклогептилметил, 1-циклопропилэтил, 2-циклопропилэтил, 1-циклобутилэтил, 2-циклобутилэтил, 2-циклопентилэтил, 2-циклогексилэтил, 2-циклогептилэтил.
2
2
2
2
2
2
2
3
3
2
1
4
Независимо от любого другого и независимо от любых других заместителей, алкильные группы, двухвалентные алкильные группы, алкенильные группы, алкинильные группы и циклоалкильные группы являются необязательно замещенными одним или несколькими атомами фтора, которые могут находиться в любых положениях, т.е. указанные группы могут быть группами, не замещенными атомами фтора, или группами, замещенными атомами фтора, например 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13, либо 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9, либо 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7, либо 1, 2, 3, 4 или 5, либо 1, 2 или 3, либо 1 или 2 атомами фтора. Примерами фторзамещенных указанных групп являются трифторметил, 2-фторэтил, 2,2,2-трифторэтил, пентафторэтил, 3,3,3-трифторпропил, 2,2,3,3,3-пентафторпропил, 4,4,4-трифторбутил, гептафторизопропил, -CHF-, -CF-, -CF-CH-, -CH-CF-, -CF-CF-, -CF(CH)-, -C(CF)-, 1-фторциклопропил, 2,2-дифторциклопропил, 3,3-дифторциклобутил, 1-фторциклогексил, 4,4-дифторциклогексил, 3,3,4,4,5,5-гексафторциклогексил. Примерами алкилоксигрупп, в которых алкильный фрагмент является фторзамещенным, являются трифторметокси, 2,2,2-трифторэтокси, пентафторэтокси и 3,3,3-трифторпропокси. В одном варианте осуществления изобретения общее число фтор-заместителей и (C-C)-алкильных заместителей, которые независимо от любых других заместителей необязательно присутствуют на циклоалкильных группах в соединениях формулы I, равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11, в другом варианте осуществления изобретения равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9, в еще одном варианте осуществления изобретения равно 1, 2, 3, 4 или 5, в еще одном варианте осуществления изобретения равно 1, 2, 3 или 4.
1
4
1
4
1
4
2
-
Группы, подобные фенильной, нафтильной (=нафталенил), и остатки ароматических гетероциклов, которые являются необязательно замещенными одним или несколькими заместителями, могут быть незамещенными или могут быть замещенными, например 1, 2, 3, 4 или 5, либо 1, 2, 3 или 4, либо 1, 2 или 3, либо 1 или 2, либо 1, одинаковыми или разными заместителями, которые могут находиться в любых положениях. В одном варианте осуществления изобретения общее число нитро-заместителей в соединении формулы I составляет не более двух. Ароматические азотсодержащие гетероциклы, в которых в исходной кольцевой системе атом азота цикла несет на себе атом водорода в 5-членном кольце, такие как, например, пиррольное, имидазольное, индольное или бензимидазольное кольцо, могут быть замещенными по атомам углерода и/или по таким атомам азота в цикле. В одном варианте осуществления изобретения заместители на таких атомах азота в кольце выбраны из (C-C)-алкильных групп, т.е. такие атомы азота в ароматических гетероциклах несут на себе атом водорода или (C-C)-алкильный заместитель. Когда в отношении атомов азота в кольце в ароматических гетероциклах и любых других гетероциклах заявлено, что они несут на себе атом водорода или заместитель, такие атомы азота несут на себе атом водорода или заместитель либо они не несут атом водорода или заместитель. Атомы азота кольца, которые несут на себе атом водорода или заместитель, встречаются в азотсодержащем ароматической 5-членном кольце, которое присутствует, например, в пирроле, имидазоле, индоле или бензимидазоле, и в неароматическом кольце, включая насыщенное кольцо. Атомы азота кольца, которые не несут атом водорода или заместитель, если они не находятся в положительно заряженной форме, включая любые дополнительные атомы азота в дополнение к атомам азота кольца, которые несут атом водорода или заместитель, встречаются в ароматическом кольце, которое присутствует, например, в тиазоле, имидазоле, пиридине или бензимидазоле, и в неароматическом кольце, в котором они представляют собой атомы мостиковой связи (bridgehead atom) или являются частью двойной связи, и они имеют место в качестве атомов азота кольца, через которые кольцо присоединяется. Подходящие атомы азота кольца в ароматических гетероциклах в соединениях формулы I, такие как атом азота в пиридиновом кольце, в особенности атом азота в ароматическом гетероцикле, представленном как R, могут также нести на себе окси-заместитель -O и могут быть представлены как N-оксид, и такие атомы азота кольца также могут присутствовать в форме четвертичной соли, например в форме N-(C-C)-алкильной соли, такой как N-метильная соль, где в одном варианте осуществления изобретения противоионом в такой четвертичной соли является физиологически приемлемый анион, полученный из кислоты, которая образует физиологически приемлемую соль. В монозамещенных фенильных группах заместитель может находиться в положении 2, положении 3 или положении 4. В дизамещенных фенильных группах заместители могут находиться в 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-положениях. В тризамещенных фенильных группах заместители могут находиться 2,3,4-, 2,3,5-, 2,3,6-, 2,4,5-, 2,4,6- или 3,4,5-положениях. Нафтил может представлять собой 1-нафтил (=нафталин-1-ил) или 2-нафтил (=нафталин-2-ил). В монозамещенных 1-нафтильных группах заместитель может находиться в 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-положении. В монозамещенных 2-нафтильных группах заместитель может находиться в 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-положении. В дизамещенных нафтильных группах заместители могут аналогично находиться в любых положениях кольца, через которое присоединяется нафтильная группа, и/или другого кольца.
1
2
1
1
В остатках ароматических гетероциклов, представленных R или R, которые могут быть определены как гетероарильные группы, так же как и во всех других гетероциклических кольцах в соединениях формулы I, включая группу Het и неароматические гетероциклические группы, представленные R, гетероатомы кольца обычно выбраны из атомов N, O и S, где атомы N включают атомы азота кольца, которые несут атом водорода или заместитель, а также атомы азота кольца, которые не несут атом водорода или заместитель. Гетероатомы кольца могут находиться в любых положениях при условии, что гетероциклическая система известна в данной области техники, является стабильной и подходит в качестве подгруппы для желательной цели применения соединения формулы I, такой как применение в качестве лекарственного вещества. В одном варианте осуществления изобретения два атома кислорода кольца не могут находиться в соседних положениях любого гетероцикла, в другом варианте осуществления изобретения два гетероатома кольца, выбранные из атомов кислорода и серы, не могут находиться в соседних положения кольца любого гетероцикла. Насыщенные кольца не содержат двойной связи в кольце. Ненасыщенные кольцевые системы могут быть ароматическими или частично ненасыщенными, включая частично ароматические, где в последнем случае одно кольцо в бициклической кольцевой системе является ароматическим и кольцевая система присоединена через атом в неароматическом кольце. В зависимости от соответствующей группы ненасыщенные кольца могут содержать одну, две, три, четыре или пять двойных связей в кольце. Ароматические группы включают циклическую систему из шести или десяти делокализованных пи-электронов в кольце. В зависимости от соответствующей группы, насыщенные и неароматические ненасыщенные гетероциклические кольца, включая Het и неароматические группы, представленные R, могут быть 3-членными, 4-членными, 5-членными, 6-членными, 7-членными, 8-членными, 9-членными или 10-членными. В одном варианте осуществления изобретения ароматические гетероциклические кольца представляют собой 5-членные или 6-членные моноциклические кольца или 8-членные, 9-членные или 10-членные бициклические кольца, в другом варианте осуществления изобретения - 5-членные или 6-членные моноциклические кольца либо 9-членные или 10-членные бициклические кольца, в еще одном варианте осуществления изобретения - 5-членные или 6-членные моноциклические кольца, где 8-членные, 9-членные или 10-членные бициклические кольца состоят из двух конденсированных 5-членных колец, 5-членного кольца и 6-членного кольца, которые конденсированы друг с другом, и двух конденсированных 6-членных колец, соответственно. В бициклических ароматических гетероциклических группах одно или оба кольца могут содержать гетероциклические группы, и одно или оба кольца могут быть ароматическими. Обычно бициклические кольцевые системы, содержащие ароматическое кольцо и неароматическое кольцо, рассматриваются как ароматические, когда они присоединены через атом углерода в неароматическом кольце, и как неароматические, когда они присоединены через атом углерода в неароматическом кольце. Если не заявлено иное, гетероцикличие группы, включающие ароматические гетероциклические группы, могут присоединяться через подходящий атом углерода кольца и, в случае азотсодержащих гетероциклов, через любой подходящий атом азота кольца. В одном варианте осуществления изобретения ароматическая гетероциклическая группа в соединении формулы I, независимо от любой другой ароматической гетероциклической группы, присоединена через атом углерода кольца, в другом варианте осуществления изобретения - через атом азота кольца. В зависимости от определения соответствующей гетероциклической группы, в одном варианте осуществления изобретения число гетероатомов кольца, которые могут присутствовать в гетероциклической группе, независимо от числа гетероатомов кольца в любой другой гетероциклической группе, равно 1, 2, 3 или 4, в другом варианте осуществления изобретения равно 1, 2 или 3, в еще одном варианте осуществления изобретения равно 1 или 2, в еще одном варианте осуществления изобретения равно 1, где гетероатомы кольца могут быть одинаковыми или разными. Гетероциклические группы, которые являются необязательно замещенными, независимо от любой другой гетероциклической группы, могут быть незамещенными или замещенными одним или несколькими одинаковыми или разными заместителями, например 1, 2, 3, 4 или 5, либо 1, 2, 3 или 4, либо 1, 2 или 3, либо 1 или 2 заместителями, либо 1 заместителем, которые указаны в определении соответствующей группы. Заместители на гетероциклических группах могут находиться в любых положениях. Например, в пиридин-2-ильной группе заместители могут находиться в 3-положении и/или 4-положении и/или 5-положении и/или 6-положении, в пиридин-3-ильной группе заместители могут находиться в 2-положении и/или 4-положении и/или 5-положении и/или 6-положении, в пиридин-4-ильной группе заместители могут находиться в 2-положении и/или 3-положении и/или 5-положении и/или 6-положении.
Примерами исходных гетероциклов, из которых могут быть получены гетероциклические группы, включая ароматические гетероциклические группы, насыщенные гетероциклические группы и неароматические ненасыщенные гетероциклические группы, являются азет, оксет, пиррол, фуран, тиофен, имидазол, пиразол, [1,3]диоксол, оксазол (=[1,3]оксазол), изоксазол (=[1,2]оксазол), тиазол (=[1,3]тиазол), изотиазол (=[1,2]тиазол), [1,2,3]триазол, [1,2,4]триазол, [1,2,4]оксадиазол, [1,3,4]оксадиазол, [1,2,4]тиадиазол, [1,3,4]тиадиазол, тетразол, пиридин, пиран, тиопиран, пиридазин, пиримидин, пиразин, [1,3]оксазин, [1,4]оксазин, [1,3]тиазин, [1,4]тиазин, [1,2,3]триазин, [1,3]дитиин, [1,4]дитиин, [1,2,4]триазин, [1,3,5]триазин, [1,2,4,5]тетразин, азепин, [1,3]диазепин, [1,4]диазепин, [1,3]оксазепин, [1,4]оксазепин, [1,3]тиазепин, [1,4]тиазепин, азоцин, азецин, циклопента[b]пиррол, 2-азабицикло[3.1.0]гексан, 3-азабицикло[3.1.0]гексан, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан, индол, изоиндол, бензотиофен, бензофуран, [1,3]бензодиоксол (=1,2-метилендиоксибензол), [1,3]бензоксазол, [1,3]бензтиазол, бензимидазол, тиено[3,2-c]пиридин, хромен, изохромен, [1,4]бензодиоксин, [1,4]бензоксазин, [1,4]бензотиазин, хинолин, изохинолин, циннолин, хиназолин, хиноксалин, фталазин, тиенотиофен, [1,8]нафтиридине и другие нафтиридины, птеридин, и соответственно насыщенные и частично ненасыщенные гетероциклы, в которых одна или несколько, например одна, две, три, четыре или все двойные связи в кольцевой системе, включая двойные связи в ароматическом кольце, замещены одинарными связями, такие как, например, азетидин, оксетан, пирролидин, тетрагидрофуран, тетрагидротиофен, имидазолидин, оксазолидин, тиазолидин, дигидропиридин, пиперидин, тетрагидропиран, пиперазин, морфолин, тиоморфолин, азепан, хроман, изохроман, [1,4]бензодиоксан (=1,2-этилендиоксибензол), 2,3-дигидробензофуран, 1,2,3,4-тетрагидрохинолин, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин.
Примерами остатков ароматических гетероциклов, которые могут встречаться в соединениях формулы I, являются тиофенил (=тиенил), включая тиофен-2-ил и тиофен-3-ил, пиридинил (=пиридил), включая пиридин-2-ил (=2-пиридил), пиридин-3-ил (=3-пиридил) и пиридин-4-ил (=4-пиридил), имидазолил, включая, например, 1H-имидазол-1-ил, 1H-имидазол-2-ил, 1H-имидазол-4-ил и 1H-имидазол-5-ил, [1,2,4]триазолил, включая 1H-[1,2,4]-триазол-1-ил и 4H-[1,2,4]-триазол-3-ил, тетразолил, включая 1H-тетразол-1-ил и 1H-тетразол-5-ил, хинолинил (=хинолил), включая хинолин-2-ил, хинолин-3-ил, хинолин-4-ил, хинолин-5-ил, хинолин-6-ил, хинолин-7-ил и хинолин-8-ил, которые являются необязательно замещенными, как указано в определении соответствующей группы. Примерами остатков насыщенных и частично ненасыщенных гетероциклов, которые могут встречаться в соединениях формулы I, являются азетидинил, пирролидинил, включая пирролидин-1-ил, пирролидин-2-ил и пирролидин-3-ил, 2,5-дигидро-1H-пирролил, пиперидинил, включая пиперидин-1-ил, пиперидин-2-ил, пиперидин-3-ил и пиперидин-4-ил, 1,2,3,4-тетрагидропиридинил, 1,2,5,6-тетрагидропиридинил, 1,2-дигидропиридинил, азепанил, азоканил, азеканил, октагидроциклопента[b]пирролил, 2,3-дигидробензофуранил, включая 2,3-дигидробензофуран-7-ил, 2,3-дигидро-1H-индолил, октагидро-1H-индолил, 2,3-дигидро-1H-изоиндолил, октагидро-1H-изоиндолил, 1,2-дигидрохинолинил, 1,2,3,4-тетрагидрохинолинил, декагидрохинолинил, 1,2-дигидроизохинолинил, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолинил, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолинил, декагидроизохинолинил, декагидроизохинолинил, 4,5,6,7-тетрагидротиено[3,2-c]пиридинил, пиразолидинил, имидазолидинил, гексагидропиримидинил, 1,2-дигидропиримидинил, пиперазинил, [1,3]диазепанил, [1,4]диазепанил, оксазолидинил, [1,3]оксазинанил, [1,3]оксазепанил, морфолинил, включая морфолин-2-ил, морфолин-3-ил и морфолин-4-ил, [1,4]оксазепанил, тиазолидинил, [1,3]тиазинанил, тиоморфолинил, включая тиоморфолин-2-ил, тиоморфолин-3-ил и тиоморфолин-4-ил, 3,4-дигидро-2H-[1,4]тиазинил, [1,3]тиазепанил, [1,4]тиазепанил, оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиенил, изоксазолидинил, изотиазолидинил, оксазолидинил, [1,2,4]оксадиазолидинил, [1,2,4]тиадиазолидинил, [1,2,4]триазолидинил, [1,3,4]оксадиазолидинил, [1,3,4]тиадиазолидинил, [1,3,4]триазолидинил, 2,3-дигидрофуранил, 2,5-дигидрофуранил, 2,3-дигидротиенил, 2,5-дигидротиенил, 2,3-дигидропирролил, 2,3-дигидроизоксазолил, 4,5-дигидроизоксазолил, 2,5-дигидроизоксазолил, 2,3-дигидроизотиазолил, 4,5-дигидроизотиазолил, 2,5-дигидроизотиазолил, 2,3-дигидропиразолил, 4,5-дигидропиразолил, 2,5-дигидропиразолил, 2,3-дигидрооксазолил, 4,5-дигидрооксазолил, 2,5-дигидрооксазолил, 2,3-дигидротиазолил, 4,5-дигидротиазолил, 2,5-дигидротиазолил, 2,3-дигидроимидазолил, 4,5-дигидроимидазолил, 2,5-дигидроимидазолил, тетрагидропиридазинил, тетрагидропиримидинил, тетрагидропиразинил, тетрагидро[1,3,5]тиазинил, [1,3]дитианил, тетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, [1,3]диоксоланил, 3,4,5,6-тетрагидропиридинил, 4H-[1,3]тиазинил, 1,1-диоксо-2,3,4,5-тетрагидротиенил, 2-азабицикло[3.1.0]гексил, включая 2-азабицикло[3.1.0]гекс-2-ил, 3-азабицикло[3.1.0]гексил, включая 3-азабицикло[3.1.0]гекс-3-ил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептил, включая 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гепт-5-ил, которые присоединены через любой подходящий атом углерода кольца или атом азота кольца и являются необязательно замещенными, как указано в определении соответствующей группы.
Галоген представляет собой фтор, хлор, бром или йод. В одном варианте осуществления изобретения любой галоген в соединении формулы I независимо от любого другого галогена, выбран из фтора, хлора и брома, в другом варианте осуществления изобретения - из фтора и хлора.
2
2
Когда оксогруппа присоединена к атому углерода, она замещает два атома водорода на атоме углерода исходной системы. Таким образом, если CH группа в цепи или кольце является замещенной оксогруппой, т.е. атомы водорода замещены атомом кислорода с двойной связью, она становится C(O) (=C(=O)) группой. Понятно, что оксогруппа не может быть заместителем на атоме углерода в ароматическом кольце, таком как, например, кольцо фенильной группы. Когда атом серы в кольце гетероциклической группы может нести одну или две оксогруппы, он представляет собой неокисленный атом серы S в том случае, если он не несет на себе какай бы то ни было оксогруппы, или он входит в состав S(O) группы (=сульфоксидная группа, S-оксидная группа) в том случае, если он несет одну оксогруппу, либо он входит в состав S(O)группы (=сульфоновая группа, S,S-диоксидная группа) в том случае, когда он несет на себе две оксогруппы.
Настоящее изобретение включает все стереоизомерные формы соединений формулы I и их соли и сольваты. Что касается каждого хирального центра, независимо от любого другого хирального центра, соединения формулы I могут быть представлены в S конфигурации или по существу S конфигурации, либо в R конфигурации или по существу R конфигурации, либо в виде смеси e S изомера и R изомера в любом соотношении. Изобретение включает все возможные энантиомеры и диастереомеры и смеси двух или нескольких стереоизомеров, например смеси энантиомеров и/или диастереомеров, во всех соотношениях. Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению, которые могут существовать в виде энантиомеров, могут быть представлены в энантиомерно чистой форме, в форме как левовращающего, так и правовращающего антиподов и в форме смесей двух энантиомеров во всех соотношениях, включая рацематы. В случае E/Z изомеризма или цис/транс-изомеризма, например по двойным связям или кольцам, таким как циклоалкильные кольца, изобретение включает E форму и Z форму, или цис-форму и транс-форму, а также смеси указанных форм со всех соотношениях. В одном варианте осуществления изобретения соединение, которое может существовать в двух или нескольких изомерных формах, является чистым или по существу чистым индивидуальным изомером. Получение отдельных стереизомеров может осуществляться, например, разделением смеси изомеров традиционными способами, например хроматографией или кристаллизацией, применением стереохимически чистых форм исходных материалов в синтезе или стереоселективным синтезом. Необязательно, (дериватизация) получение может проводиться до разделения стереоизомеров. Разделение смеси стереоизомеров может проводиться на стадии получения соединения формулы I, на стадии получения исходного материала или промежуточного продукта в процессе синтеза. Настоящее изобретение включает также все таутомерные формы соединений формулы I и их соли и сольваты.
В том случае, когда соединения формулы I содержат одну или несколько кислотных и/или основных групп, т.е. солеобразующих групп, изобретение также включает в себя их соответствующие физиологически или токсикологически приемлемые соли, т.е. нетоксичные соли, в частности их фармацевтически приемлемые соли. Таким образом, соединения формулы I, которые содержат кислотную группу, такую как гидроксикарбонильная группа (=карбоксильная группа=C(O)-OH группа), и могут использоваться согласно изобретению, например, в виде солей щелочных металлов, солей щелочно-земельных металлов и в виде аммониевых солей. Более конкретные примеры таких солей включают натриевые соли, калиевые соли, кальциевые соли, магниевые соли, четвертичные аммониевые соли, такие как тетраалкиламмониевые соли, или кислотно-аддитивны соли с аммиаком или органическими аминами, такими как, например, этиламин, этаноламин, триэтаноламин или аминокислоты. Соединения формулы I, которые содержат основную группу, т.е. группу, которая может протонироваться, такую как аминогруппа или азотсодержащий гетероцикл, могут применяться согласно изобретению в форме их аддитивных солей с неорганическими и органическими кислотами. Примеры подходящих кислот включают соляную кислоту, бромистоводородную кислоту, фосфорную кислоту, серную кислоту, метансульфоновую кислоту, щавелевую кислоту, уксусную кислоту, трифторуксусную кислоту, винную кислоту, молочную кислоту, бензойную кислоту, малоновую кислоту, фумаровую кислоту, яблочную кислоту, лимонную кислоту и другие кислоты, известные специалисту данной области техники. Если соединение формулы I одновременно содержит кислотную группу и основную группу в молекуле, соединение также включает в дополнение к упомянутым солевым формам, внутренние соли (=бетаины, цвиттерионы). Соли соединений формулы I могут быть получены традиционными способами, которые известны специалисту данной области техники, например контактированием соединения формулы I с органической или неорганической кислотой или основанием в растворителе или разбавителе либо анионным обменом или катионным обменом из другой соли. Изобретение также включает в себя все соли соединений формулы I, которые вследствие низкой физиологической совместимости солеобразующей кислоты или солеобразующего основания непосредственно не подходят для применения в фармацевтике, но которые могут применяться, например, в качестве промежуточных продуктов для химических реакций или для получения физиологически приемлемых солей.
1
4
Настоящее изобретение дополнительно включает все сольваты соединений формулы I, например гидраты или продукты реакции присоединения со спиртами, такими как (C-C)алканолы, активные метаболиты соединений формулы I, а также пролекарства и производные соединений формулы I, которые в условиях in vitro могут не обязательно проявлять фармакологическую активность, но которые в условиях in vivo превращаются в фармакологически активные соединения, например сложные эфиры или амиды групп карбоновой кислоты.
В одном варианте осуществления изобретения A выбран из NH и O, в другом варианте осуществления изобретения A выбран из NH и S, в еще одном варианте осуществления изобретения A выбран из О и S, в еще одном варианте осуществления изобретения A представляет собой NH, в еще одном варианте осуществления изобретения A представляет собой O, в еще одном варианте осуществления изобретения A представляет собой S.
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
6
2
6
2
6
1
6
2
5
1
4
1
6
3
7
u
2u
v
2v
3
7
u
2u
v
2v
3
7
u
2u
v
2v
3
7
u
2u
u
2u
u
2u
u
2u
В одном варианте осуществления изобретения R выбран из (C-C)-алкила, (C-C)-алкенила и (C-C)-алкинила, в другом варианте осуществления изобретения R представляет собой (C-C)-алкил, в еще одном варианте осуществления изобретения R представляет собой (C-C)-алкил, и в еще одном варианте осуществления изобретения R представляет собой (C-C)-алкил при условии, что R не может быть алкильной группой, если A представляет собой S. В еще одном варианте осуществления изобретения R выбран из (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкил-CH- и Het-CH-, в еще одном варианте осуществления изобретения - из (C-C)-циклоалкил-CH- и Het-CH-, в еще одном варианте осуществления изобретения R представляет собой (C-C)-циклоалкил-CH-, и в еще одном варианте осуществления изобретения R представляет собой Het-CH-, где в данном варианте осуществления изобретения u и v независимо друг от друга выбраны из 1 и 2. В одном варианте осуществления изобретения u равно 1, в другом варианте осуществления изобретения u равно 2. В одном варианте осуществления изобретения v равно 1, в другом варианте осуществления изобретения v равно 2. В одном варианте осуществления изобретения группа (C-C)-циклоалкил-CH-, обозначенная как R, выбрана из циклопропил-CH-, циклобутил-CH- и циклопентил-CH-.
1
3
11
1
11
1
1
1
1
1
1
1
1
1
11
1
3
7
u
2u
v
2v
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
В одном варианте осуществления изобретения R выбран из (C-C)-циклоалкил-CH- и Het-CH- или R представляет собой остаток насыщенного или ненасыщенного 3-10-членного моноциклического или бициклического кольца, которое включает 0, 1, 2, 3 или 4 одинаковых или разных гетероатомов в кольце, выбранных из атомов N, O и S, где один или два атомов азота кольца могут нести на себе атом водорода или (C-C)-алкильный заместитель и один или два атома серы кольца могут нести на себе одну или две оксогруппы и где остаток кольца является необязательно замещенным по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R, и в другом варианте осуществления изобретения R представляет собой остаток насыщенного или ненасыщенного 3-10-членного моноциклического или бициклического кольца, которое включает 0, 1, 2, 3 или 4 одинаковых или разных гетероатомов кольца, выбранных из атомов N, O и S, где один или два атома азота кольца могут нести на себе атом водорода или (C-C)-алкильный заместитель и один или два атома серы кольца могут нести на себе одну или две оксогруппы и где остаток кольца является необязательно замещенным по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R. В одном варианте осуществления изобретения число гетероатомов в кольце, обозначенным R, равно 0, 1, 2 или 3, в другом варианте осуществления изобретения оно равно 0, 1 или 2, в еще одном варианте осуществления изобретения оно равно 0 или 1, в еще одном варианте осуществления изобретения оно равно 0, в еще одном варианте осуществления изобретения оно равно 1, 2, 3 или 4, в еще одном варианте осуществления изобретения оно равно 1, 2 или 3, в еще одном варианте осуществления изобретения оно равно 1 или 2, в еще одном варианте осуществления изобретения оно равно 1. Таким образом, остаток кольца, обозначенный как R, может быть карбоциклическим или гетероциклическим. В одном варианте осуществления изобретения гетероатомы кольца в R выбраны из атомов N и O, в другом варианте осуществления изобретения - из атомов N и S, в еще одном варианте осуществления изобретения - из атомов O и S, в еще одном варианте осуществления изобретения они представляют собой атомы N, где атомы азота кольца могут нести на себе атом водорода или (C-C)-алкильный заместитель, когда находятся в насыщенных или частично ненасыщенных гетероциклах или в 5-членных ароматических кольцах в гетероциклах, таких как, например, пиррол или бензимидазол, или не несут атома водорода или (C-C)-алкильный заместитель, когда находятся в ароматических гетероциклах, таких как, например, имидазол или пиридин. В остатке гетероцикла, представляющем R, который включает в кольце один или несколько атомов серы, в одном варианте осуществления изобретения один из атомов серы является окисленным и несет на себе одну или две оксогруппы, а любые другие атомы серы в кольце являются неокисленными. Остаток моноциклического или бициклического кольца, представляющий R, может присоединяться к группе A через любой подходящий атом углерода в кольце или атом азота в кольце. В одном варианте осуществления изобретения он присоединен через атом углерода кольца, в другом варианте осуществления изобретения он присоединен через атом углерода кольца или, в случае, когда A представляет собой NH, через атом азота кольца, и в другом варианте осуществления изобретения он присоединен через атом азота кольца. Остаток моноциклического или бициклического кольца, представляющий R, может быть ненасыщенным и в этом случае содержит в кольце 1, 2, 3, 4 или 5, либо 1, 2, 3 или 4, либо 1, 2 или 3, либо 1 или 2 двойных связи, либо 1 двойную связь и может в любом одном или в любом из двух колец быть ароматическим или неароматическим, или он может быть насыщенным и в данном последнем случае не содержит двойной связи в кольце. В одном варианте осуществления изобретения остаток кольца, представляющий R, является насыщенным или ароматическим, в другом варианте осуществления изобретения он является насыщенным, в еще одном варианте осуществления изобретения он является ароматическим. В одном варианте осуществления изобретения остаток 3-членного или 4-членного кольца, представляющий R, является насыщенным. Если R включает атомы азота в кольце, которые могут нести на себе атом водорода или (C-C)-алкильный заместитель, может присутствовать один из таких атомов азота в кольце или два из таких атомов азота в кольце. В одном варианте осуществления изобретения число необязательных заместителей R на атомах углерода кольца, представляющем R, равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6, в другом варианте осуществления изобретения - 1, 2, 3, 4 или 5, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1, 2, 3 или 4, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1, 2 или 3, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1 или 2 и в еще одном варианте осуществления изобретения равно 1.
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
11
1
1
11
5
7
1
4
1
4
Кольцо, которое может представлять R, может быть 3-членным, 4-членным, 5-членным, 6-членным, 7-членным, 8-членным, 9-членным или 10 членным. В одном варианте осуществления изобретения R является 4-10-членным, в другом варианте осуществления изобретения - 4-9-членным, в еще одном варианте осуществления изобретения - 4-8-членным, в еще одном варианте осуществления изобретения - 4-7-членным, в еще одном варианте осуществления изобретения - 5-7-членным, в еще одном варианте осуществления изобретения - 5-членным или 6-членным, в еще одном варианте осуществления изобретения - 6-членным, в еще одном варианте осуществления изобретения - 8-10-членным, в еще одном варианте осуществления изобретения - 9-10-членным. В одном варианте осуществления изобретения 3-членное кольцо, представляющее R, не включает в себя гетероатомов. В одном варианте осуществления изобретения R является моноциклическим, в другом варианте осуществления изобретения - бициклическим. В одном варианте осуществления изобретения бициклическая группа, представляющая R, является по меньшей мере 7-членной. Среди прочих, остаток кольца, представляющий R, может представлять собой циклоалкильную группу, фенильную группу, нафтильную группу, остаток ненасыщенной ароматической или неароматической гетероциклической группы или остаток насыщенной гетероциклической группы, которые являются необязательно замещенными по атомам углерода кольца и атомам азота кольца, как определено относительно R. Насколько это применимо, все пояснения, приведенные выше относительно таких групп, применяются соответственно и по отношению к R. Другим примером групп, которые могут представлять R, являются циклоалкенильные группы, такие как (C-C)-циклоалкенильные группы, которые могут присоединяться через любой атом углерода кольца и являются необязательно замещенными, как определено относительно R. В одном варианте осуществления изобретения необязательные заместители R на циклоалкенильной группе, представляющей R, выбраны из атома фтора и (C-C)-алкила. В одном варианте осуществления изобретения циклоалкенильные группы содержат одну двойную связь в кольце, которая может находиться в любом положении. Примерами циклоалкенила являются циклопентенил, включая циклопент-1-енил, циклопент-2-енил и циклопент-3-енил, циклогексенил, включая циклогекс-1-енил, циклогекс-2-енил и циклогекс-3-енил, и циклогептенил, включая циклогепт-1-енил, циклогепт-2-енил, циклопент-3-енил и циклогепт-4-енил. Примеры остатков колец, из которых выбран R в одном варианте осуществления изобретения, представляют собой циклобутил, циклопентил, циклогексил, фенил, оксетанил, включая оксетан-3-ил, тетрагидрофуранид, включая тетрагидрофуран-3-ил, тетрагидротиофенил, включая тетрагидротиофен-3-ил, тетрагидропиранил, включая тетрагидропиран-4-ил, азетидинил, включая азетидин-1-ил, пирролидинил, пиперидинил, имидазолидинил, пиперазинил, морфолинил, включая морфолин-1-ил, тиоморфолинил, фуранил, включая фуран-3-ил, тиофенил, включая тиофен-3-ил, пиразолил, включая пиразол-3-ил, имидазолил, тиазолил, включая тиазол-2-ил, пиридинил, включая пиридин-2-ил, пиридин-3-ил и пиридин-4-ил, пиридазинил, включая пиридазин-3-ил, где во всех указанных группах, если это применимо, один или два атома азота кольца могут нести на себе атом водорода или (C-C)-алкил и все указанные группы являются необязательно замещенными по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R и где во всех указанных группах, если это применимо, атом серы кольца может быть неокисленным, т.е. присутствует как атом серы, или несет на себе одну или две оксогруппы, т.е. представлен в форме сульфоксида или сульфона.
1
11
1
1
1
11
1
4
В одном варианте осуществления изобретения R выбран из фенила и остатка насыщенного или ненасыщенного 3-7-членного моноциклического кольца, в другом варианте осуществления изобретения - из фенила и остатка насыщенного или ненасыщенного 5-7-членного моноциклического кольца, в еще одном варианте осуществления изобретения - из фенила, пиридинила и остатка насыщенного 3-7-членного моноциклического кольца, в еще одном варианте осуществления изобретения - из фенила, пиридинила и остатка насыщенного 5-7-членного моноциклического кольца, в еще одном варианте осуществления изобретения - из фенила и остатка насыщенны 3-7-членного моноциклического кольца, в еще одном варианте осуществления изобретения - из фенила и остатка насыщенного 5-7-членного моноциклического кольца, где во всех указанных вариантах осуществления изобретения моноциклическое кольцо включает 1 или 2 одинаковых или разных гетероатома, выбранных из атомов N, O и S, где один или два атома азота в кольце могут нести на себе атом водорода или (C-C)-алкильный заместитель и один или два атома серы в кольце могут нести на себе одну или две оксогруппы, где фенил, пиридинил и остаток кольца являются необязательно замещенными по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R и где пиридинил включает пиридин-2-ил, пиридин-3-ил и пиридин-4-ил. В еще одном варианте осуществления изобретения R выбран из фенила и пиридинила, в другом варианте осуществления изобретения R представляет собой пиридинил, в еще одном варианте осуществления изобретения R представляет собой фенил, где в указанных вариантах осуществления изобретения пиридинил включает группы пиридин-2-ил, пиридин-3-ил и пиридин-4-ил и в одном варианте осуществления изобретения выбран из любой одной или нескольких из этих групп и где во всех этих вариантах осуществления изобретения фенил и пиридинил являются необязательно замещенными по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R.
3
7
3
6
3
5
1
4
1
4
1
3
21
21
21
В одном варианте осуществления изобретения число w выбрано из 0 и 1, в другом варианте осуществления изобретения оно равно 0, в еще одном варианте осуществления изобретения оно равно 1. В одном варианте осуществления изобретения (C-C)-циклоалкильная группа в R представляет собой (C-C)-циклоалкил, в другом варианте осуществления изобретения - (C-C)-циклоалкил, в еще одном варианте осуществления изобретения - циклопропил. В одном варианте осуществления изобретения R выбран из (C-C)-алкила и оксигруппы, в другом варианте осуществления изобретения R представляет собой (C-C)-алкил, в еще одном варианте осуществления изобретения он представляет собой (C-C)-алкил, в еще одном варианте осуществления изобретения он представляет собой метил, и в еще одном варианте осуществления изобретения он представляет собой оксигруппу.
2
2
21
22
2
22
2
21
22
2
21
22
2
2
2
2
22
2
2
22
В одном варианте осуществления изобретения число гетероатомов в кольце ароматического гетероцикла, представляющем R, равно 1 или 2, в другом варианте осуществления изобретения оно равно 1. В одном варианте осуществления изобретения R выбран из фенила и остатка ароматического 6-членного моноциклического гетероцикла, который содержит в кольце 1, 2 или 3 атома азота, в другом варианте осуществления изобретения - 1 или 2 атома азота, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1 атом азота, где один из атомов азота кольца может нести на себе заместитель R, который представляет собой оксигруппу, т.е. где один из атомов азота кольца может быть окисленным до N-оксида, и где фенил и остаток ароматического гетероцикла являются необязательно замещенными по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R. В другом варианте осуществления изобретения R представляет собой фенил, где фенил является необязательно замещенным по одному или нескольким атомам кольца одинаковыми или разными заместителями R, в еще одном варианте осуществления изобретения R представляет собой пиридинил, где атом азота кольца может нести на себе заместитель R, который представляет собой оксигруппу, т.е. где атом азота кольца может быть окисленным до N-оксида, и где пиридинил является необязательно замещенным по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R. В еще одном варианте осуществления изобретения R представляет собой остаток ароматического 5-членного гетероцикла, который содержит в кольце 1, 2 или 3 одинаковых или разных гетероатома, выбранных из атомов N, О и S, где один из атомов азота кольца может нести на себе атом водорода или заместитель R и где остаток ароматического гетероцикла является необязательно замещенным по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R. В одном варианте осуществления изобретения остаток ароматической гетероциклической группы, представляющий R, выбран из фуранила, тиофенила, оксазолила, тиазолила, пиридинила, пиридазинила, пиримидинила и пиразинила, в другом варианте осуществления изобретения - из фуранила, тиофенила, тиазолила, пиридинила, пиридазинила, пиримидинила и пиразинила, в еще одном варианте осуществления изобретения - из фуранила, тиофенила, пиридинила, пиридазинила, пиримидинила и пиразинила, в еще одном варианте осуществления изобретения - из фуранила, тиофенила, пиридинила и пиримидинила, в еще одном варианте осуществления изобретения - из фуранила, тиофенила и пиридинила, которые являются необязательно замещенными, как указано в отношении R. В еще одном варианте осуществления изобретения R выбран из одной или нескольких групп, в том числе фуран-2-ила, тиофен-2-ила, пиридин-3-ила, пиридин-4-ила и пиримидин-5-ила, в другом варианте осуществления изобретения - из фенила, фуран-2-ила, тиофен-2-ила, пиридин-3-ила, пиридин-4-ила и пиримидин-5-ила, в еще одном варианте осуществления изобретения - из пиридин-3-ила и пиридин-4-ила, в еще одном варианте осуществления изобретения - из фенила, пиридин-3-ила и пиридин-4-ила, где все перечисленные группы являются необязательно замещенными, как указано в отношении R. В одном варианте осуществления изобретения число заместителей R, которые необязательно присутствуют на атомах углерода кольца в R, равно 1, 2, 3, 4 или 5, в другом варианте осуществления изобретения - 1, 2, 3 или 4, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1, 2 или 3, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1 или 2, в еще одном варианте осуществления изобретения равно 1. Атомы углерода кольца в R, которые не несут на себе заместитель R, несут атом водорода.
11
1
4
3
7
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
3
7
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
3
7
1
4
1
4
m
1
4
1
4
1
4
3
7
1
4
1
4
1
4
1
4
3
7
1
4
1
4
1
4
1
4
3
7
1
4
1
4
1
4
1
7
1
4
1
4
1
4
1
4
3
7
1
4
В одном варианте осуществления изобретения R выбран из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси, оксигруппы, (C-C)-алкил-S(O)m-, амино, (C-C)-алкиламино, ди((C-C)-алкил)амино, (C-C)-алкилкарбониламино, (C-C)-алкилсульфониламино, цианогруппы, (C-C)-алкилкарбонила, аминосульфонила, (C-C)-алкиламиносульфонила и ди((C-C)-алкил)аминосульфонила, в другом варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси, оксогруппы, (C-C)-алкил-S(O)m-, аминогруппы, (C-C)-алкиламино, ди((C-C)-алкил)амино, цианогруппы, аминосульфонила, (C-C)-алкиламиносульфонила и ди((C-C)-алкил)аминосульфонила, в другом варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси, оксогруппы, (C-C)-алкил-S(O)-, аминогруппы, (C-C)-алкиламино, ди((C-C)-алкил)амино, цианогруппы и аминосульфонила, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси, оксогруппы, аминогруппы, (C-C)-алкиламино, ди((C-C)-алкил)амино, цианогруппы и аминосульфонила, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси, оксогруппы, аминогруппы, (C-C)-алкиламино и ди((C-C)-алкил)амино, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, (C-C)-алкилокси и ди((C-C)-алкил)амино, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы и (C-C)-алкилокси, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила и (C-C)-алкилокси, в еще одном варианте осуществления изобретения - из фтора, хлора, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы и (C-C)-алкилокси, где во всех этих вариантах осуществления изобретения все алкильные группы независимо друг от друга являются необязательно замещенными одним или несколькими фтор-заместителями.
11
1
1
1
4
3
7
1
4
1
4
1
4
1
44
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
3
7
1
4
1
4
m
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
3
7
1
4
1
4
m
1
4
1
4
1
4
3
7
1
4
1
4
1
4
1
4
3
7
1
4
1
4
1
4
1
4
3
7
1
4
1
4
1
4
3
7
1
4
1
4
1
4
1
4
3
7
1
4
В одном варианте осуществления изобретения необязательные заместители R на остатке ароматического кольца, представляющем R, например на фенильной группе или пиридинильной группе, представляющих R, выбраны из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси, (C-C)-алкил-S(O)m-, аминогруппы, (C-C)-алкиламино, ди((C-C)-алкил)амино, (C-C)-алкилкарбониламино, (C-C)-алкилсульфониламино, цианогруппы, (C-C)-алкилкарбонила, аминосульфонила, (C-C)-алкиламиносульфонила и ди((C-C)-алкил)аминосульфонила, в другом варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси, (C-C)-алкил-S(O)-, аминогруппы, (C-C)-алкиламино, ди((C-C)-алкил)амино, цианогруппы, аминосульфонила, (C-C)-алкиламиносульфонила и ди((C-C)-алкил)аминосульфонила, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси, (C-C)-алкил-S(O)-, аминогруппы, (C-C)-алкиламино, ди((C-C)-алкил)амино, цианогруппы и аминосульфонила, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси, аминогруппы, (C-C)-алкиламино, ди((C-C)-алкил)амино, цианогруппы и аминосульфонила, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси, аминогруппы, (C-C)-алкиламино и ди((C-C)-алкил)амино, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, (C-C)-алкилокси и ди((C-C)-алкил)амино, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы и (C-C)-алкилокси, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила и (C-C)-алкилокси, в еще одном варианте осуществления изобретения - из фтора, хлора, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы и (C-C)-алкилокси, где во всех этих вариантах осуществления изобретения алкильные группы независимо друг от друга являются необязательно замещенными одним или несколькими фтор-заместителями.
11
1
1
11
1
4
3
7
1
4
1
4
m
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
3
7
1
4
1
4
1
4
1
4
3
7
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
В одном варианте осуществления изобретения необязательные заместители R на остатке насыщенного или неароматического ненасыщенного кольца, представляющего R, выбраны из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси, оксогруппы, (C-C)-алкил-S(O)-, аминогруппы, (C-C)-алкиламино, ди((C-C)-алкил)амино, (C-C)-алкилкарбониламино, (C-C)-алкилсульфониламино и цианогруппы, в другом варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси, оксогруппы, амино, (C-C)-алкиламино, ди((C-C)-алкил)амино и циано, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-циклоалкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси и оксогруппы, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси и оксогруппы, в еще одном варианте осуществления изобретения - из фтора, хлора, (C-C)-алкила, гидроксильной группы, (C-C)-алкилокси и оксогруппы, в еще одном варианте осуществления изобретения - из (C-C)-алкила, гидроксильной и оксогруппы, в еще одном варианте осуществления изобретения - из алкила и гидроксильной группы, и в еще одном варианте осуществления изобретения они представляют собой (C-C)-алкил, где во всех этих вариантах осуществления изобретения все алкильные группы независимо друг от друга являются необязательно замещенными одним или несколькими фтор-заместителями. В том случае, когда остаток кольца, представляющий R, содержит любые оксогруппы в качестве заместителей R, в одном варианте осуществления изобретения присутствует не более двух таких оксо-заместителей, в другом варианте осуществления изобретения присутствует не более одного такого оксо-заместителя.
22
2
23
23
23
23
23
23
23
1
4
1
4
1
4
m
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
В одном варианте осуществления изобретения заместители R, которые необязательно присутствуют на группе R, выбраны из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилокси-, (C-C)-алкил-S(O)-, аминогруппы, нитрогруппы, цианогруппы, R и R-O-, в другом варианте осуществления изобретения - из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилокси-, аминогруппы, цианогруппы, R и R-O-, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилокси-, R и R-O-, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил- и (C-C)-алкилокси-, где во всех вариантах осуществления изобретения R принимает значения, определенные в изобретении.
22
22
22
2
22
23
23
23
22
2
22
22
22
23
23
22
2
22
22
22
23
23
23
23
23
23
23
22
2
22
22
22
2
2
2
22
22
22
22
2
22
22
22
1
4
1
4
1
4
m
1
4
1
4
1
4
1
4
m
1
4
1
4
1
4
m
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
m
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
m
1
4
1
4
1
4
1
44
1
4
1
4
1
4
В одном варианте осуществления изобретения 1, 2 или 3 заместителя R, в другом варианте осуществления изобретения - 1 или 2 заместителя R, и в еще одном варианте осуществления изобретения 1 заместители R, которые необязательно присутствуют на группе R, принимают значения, определенные в общем описании R и, таким образом, выбраны из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилокси-, (C-C)-алкил-S(O)-, аминогруппы, нитрогруппы, цианогруппы, гидроксикарбонила, (C-C)-алкилоксикарбонила, аминокарбонила, аминосульфонила, R и R-O-, где R принимает значения, определенные в описании, и любые дополнительные заместители R, которые необязательно присутствуют на группе R, например 1, 2 или 3 дополнительных заместителя R, либо 1 или 2 дополнительных заместителя R, либо 1 дополнительный заместитель R, выбраны из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилокси-, (C-C)-алкил-S(O)-, аминогруппы, нитрогруппы, цианогруппы, R и R-O-, где все алкильные группы независимо друг от друга являются необязательно замещенными одним или несколькими фтор-заместителями, как это обычно применимо к алкильным группам. В одном варианте осуществления изобретения указанные заместители R, которые необязательно присутствуют на группе R и которые в описанным выше варианте осуществления изобретения принимают значения, определенные в описании R, например 1 или 2 таких заместителя R, или 1 такой заместитель R, выбраны из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилокси-, (C-C)-алкил-S(O)-, аминогруппы, нитрогруппы, цианогруппы, R и R-O-, в другом варианте осуществления изобретения - из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилокси-, (C-C)-алкил-S(O)m-, аминогруппы, R и R-O-, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилокси-, аминогруппы, R и R-O-, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилокси-, (C-C)-алкил-S(O)-, аминогруппы и цианогруппы, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилокси- и цианогруппы, где R принимает значения, определенные в описании. В одном варианте осуществления изобретения указанные заместители R, которые необязательно присутствуют на группе Rи которые в описанном выше варианте осуществления изобретения принимают значения, определенные в описании R, например 1 или 2 таких заместителя R, или 1 такой заместитель R, не расположены на атомах углерода кольца в группе R, которые являются соседними к атому, через который группа R присоединена к оксазолопиримидиновому кольцу, изображенному в формуле I. В другом варианте осуществления изобретения в случае, когда фенильная группа представляет R, 1 или 2 таких заместителей R, или 1 такой заместитель R необязательно находятся в любом из положений 3, 4 и 5 фенильной группы, и в еще одном варианте осуществления изобретения 1 такой заместитель R находится в положении 4 фенильной группы. В одном варианте осуществления изобретения указанные дополнительные заместители R, которые необязательно присутствуют на группе R, например 1, 2 или 3 дополнительных заместителя R, либо 1 или 2 дополнительных заместителя R, либо 1 дополнительный заместитель R, выбраны из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилокси-, (C-C)-алкил-S(O)-, аминогруппы и цианогруппы, в другом варианте осуществления изобретения - из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилокси-, аминогруппы и цианогруппы, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилокси- и цианогруппы, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена, (C-C)-алкил- и (C-C)-алкилокси-, в еще одном варианте осуществления изобретения - из галогена и (C-C)-алкил-, где во всех этих вариантах осуществления изобретения все алкильные группы независимо друг от друга являются необязательно замещенными одним или несколькими фтор-заместителями.
23
23
23
23
23
23
23
3
7
В одном варианте осуществления изобретения R представляет собой остаток моноциклического кольца, в другом варианте осуществления изобретения - остаток бициклического кольца. Остаток кольца, представляющего R, может быть карбоциклическим или гетероциклическим. В одном варианте осуществления изобретения остаток моноциклического кольца, представляющего R, является карбоциклическим, в другом варианте осуществления изобретения - гетероциклическим. В одном варианте осуществления изобретения остаток бициклического кольца, представляющего R, является карбоциклическим, в другом варианте осуществления изобретения - гетероциклическим. В одном варианте осуществления изобретения число гетероатомов кольца в R равно 0, 1, 2 или 3, в другом варианте осуществления изобретения - 0, 1 или 2, в еще одном варианте осуществления изобретения - 0 или 1, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1, 2, 3 или 4, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1, 2 или 3, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1 или 2, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1, и в еще одном варианте осуществления изобретения оно равно 0, следовательно в этом последнем случае R представляет собой (C-C)-циклоалкильную группу. В одном варианте осуществления изобретения остаток a моноциклическом кольце, представляющего R, является оксетанильной группой, такой как, например, оксетан-3-ил.
23
23
23
23
23
23
23
24
23
23
23
23
23
23
23
1
4
В одном варианте осуществления изобретения гетероатомы кольца в R выбраны из атомов N и О, в другом варианте осуществления изобретения - из атомов О и S, в еще одном варианте осуществления изобретения они представляют собой атомы N, и в еще одном варианте осуществления изобретения они представляют собой атомы О, где атомы азота кольца могут нести на себе атом водорода или (C-C)-алкильный заместитель. R может присоединяться через любой подходящий атом углерода кольца и атом азота кольца. В том случае, когда R присоединен к атому кислорода, в одном варианте осуществления изобретения Rприсоединен через атом углерода кольца. В другом варианте осуществления изобретения R присоединен через атом углерода кольца безотносительно атома, к которому R присоединен. В еще одном варианте осуществления изобретения R присоединен через атом азота кольца. В одном варианте осуществления изобретения число необязательных заместителей R на атомах углерода кольца в R равно 1, 2, 3 или 4 или 5, в другом варианте осуществления изобретения - 1, 2, 3 или 4, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1, 2 или 3, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1 или 2, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1. R могут быть 3-членным, 4-членным, 5-членным, 6-членным или 7-членным. В одном варианте осуществления изобретения R является 4-7-членным, в еще одном варианте осуществления изобретения - 4-6-членным, в еще одном варианте осуществления изобретения - 5-6-членным, в еще одном варианте осуществления изобретения - 4-5-членным. В одном варианте осуществления изобретения 3-членное кольцо, представляющее R, не включает каких либо гетероатомов. Примерами остатков колец, из которых выбран R, в одном варианте осуществления изобретения являются оксетан-3-ил, азетидин-1-ил, пирролидин-1-ил, пиперидин-1-ил, пиперидин-4-ил, морфолин-4-ил и пиперазин-1-ил, которые являются необязательно замещенными, как определено выше. В одном варианте осуществления изобретения R выбран из любого одного или нескольких из остатков оксетан-3-ила, азетидин-1-ила, пирролидин-1-ила, пиперидин-1-ила, морфолин-4-ила и пиперазин-1-ила, в другом варианте осуществления изобретения - из любого одного или нескольких остатков оксетан-3-ила, азетидин-1-ила, пиперидин-1-ила, морфолин-4-ила и пиперазин-1-ила, в другом варианте осуществления изобретения - из любого одного или нескольких из остатков оксетан-3-ила, азетидин-1-ила, пирролидин-1-ила и пиперидин-1-ила, и в еще одном варианте осуществления изобретения Rпредставляет собой оксетан-3-ил, где все указанные остатки являются необязательно замещенными, как показано.
24
1
4
1
4
1
4
В одном варианте осуществления изобретения R выбран из галогена, (C-C)-алкила и гидроксильной группы, в другом варианте осуществления изобретения - из фтора, (C-C)-алкила и гидроксильной группы, в еще одном варианте осуществления изобретения - из фтора, метила и гидроксильной группы, в еще одном варианте осуществления изобретения - из фтора и метила, в еще одном варианте осуществления изобретения - из метила и гидроксильной группы, в еще одном варианте осуществления изобретения - из фтора, (C-C)-алкила, гидроксильной и оксогруппы.
1
4
1
4
В одном варианте осуществления изобретения гетероатомы в кольце Het выбраны из атомов N и O, в другом варианте осуществления изобретения - из атомов O и S, в еще одном варианте осуществления изобретения они представляют собой атомы О. В еще одном варианте осуществления изобретения число гетероатомов кольца в Het равно 1. В одном варианте осуществления изобретения два атома кислорода в кольце в Het не находятся в соседних положениях, в другом варианте осуществления изобретения два гетероатома кольца, выбранные из атомов О и S, не находятся в соседних положениях, в еще одном варианте осуществления изобретения два гетероатома кольца не находятся в соседних положениях в кольце. Атомы азота кольца в Het несут атом водорода или заместитель, как определено. В одном варианте осуществления изобретения необязательные заместители на атомах азота кольца в Het представляют собой (C-C)-алкильные заместители. В одном варианте осуществления изобретения необязательные заместители на атомах азота кольца и атомах углерода кольца в Het представляют собой (C-C)-алкильные заместители. В одном варианте осуществления изобретения число необязательных заместителей на Het равно 1, 2, 3, 4 или 5, в другом варианте осуществления изобретения - 1, 2, 3 или 4, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1, 2 или 3, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1 или 2, в еще одном варианте осуществления изобретения - 1. Het может присоединяться через любой подходящий атом углерода кольца. В одном варианте осуществления изобретения Het присоединен через атом углерода кольца, который не является соседним по отношению к гетероатому. Het может быть 4-членным, 5-членным, 6-членным или 7-членным. В одном варианте осуществления изобретения Het является 4-членным или 5-членным, в другом варианте осуществления изобретения 5-7-членным, в другом варианте осуществления изобретения - 5-членным или 6-членным, в еще одном варианте осуществления изобретения - 4-членным. Примерами Het, из которых выбран один или несколько Het, в одном варианте осуществления изобретения являются оксетанил, включая оксетан-2-ил и оксетан-3-ил, тетрагидрофуранил, включая тетрагидрофуран-2-ил и тетрагидрофуран-3-ил, тетрагидропиранил, включая тетрагидропиран-2-ил, тетрагидропиран-3-ил и тетрагидропиран-4-ил, оксепанил, включая оксепан-2-ил, оксепан-3-ил и оксепан-4-ил, [1,3]диоксоланил, включая [1,3)диоксолан-2-ил и [1,3]диоксолан-4-ил, [1,4]диоксанил включая [1,4]диоксан-2-ил, тиетанил, включая тиетан-2-ил и тиетан-3-ил, тетрагидротиофенил, включая тетрагидротиофен-2-ил и тетрагидротиофен-3-ил, тетрагидротиопиранил, включая тетрагидротиопиран-2-ил, тетрагидротиопиран-3-ил и тетрагидротиопиран-4-ил, [1,4]дитианил включая [1,4]дитиан-2-ил, азетидинил, включая азетидин-2-ил и азетидин-3-ил, пирролидинил, включая пирролидинил-2-ил и пирролидинил-3-ил, пиперидинил, включая пиперидинил-2-ил, пиперидинил-3-ил и пиперидинил-4-ил, азепанил, включая азепан-2-ил, азепан-3-ил и азепан-4-ил, оксазолидинил, включая оксазолидин-2-ил, оксазолидин-4-ил и оксазолидин-5-ил, тиазолидинил, включая тиазолидин-2-ил, тиазолидин-4-ил и тиазолидин-5-ил, морфолинил, включая морфолин-2-ил и морфолин-3-ил, тиоморфолинил, включая тиоморфолин-2-ил и тиоморфолин-3-ил, которые все являются необязательно замещенными, как определено относительно Het.
Предметом изобретения являются все соединения формулы I, где любой один или несколько структурных элементов, таких как группы, заместители и числа, определены в любом из конкретных вариантов осуществления изобретения или определений элементов или принимает любое одно или несколько определенных значений, которые указаны в описании как примеры элементов, где все комбинации одного или нескольких определенных вариантов осуществления изобретения или определений и/или конкретных значений элементов являются предметом настоящего изобретения. Кроме того, что касается всех таких соединений формулы I, все их стереоизомерные формы и смеси стереоизомерных форм в любом соотношении, а также все физиологически приемлемые соли и физиологически приемлемые сольваты любого из них являются предметом настоящего изобретения.
Примеры соединений согласно настоящему изобретению, которые в отношении любых структурных элементов определены в описанных вариантах осуществления изобретения или определениях таких элементов и которые являются предметом настоящего изобретения, представляют собой соединения формулы I, где
A выбран из O и S;
1
1
11
3
7
u
2u
v
2v
1
4
R выбран из (C-C)-циклоалкил-CH- и Het-CH-, где u и v выбраны из 1 и 2, или R представляет собой остаток насыщенного или ненасыщенного 3-10-членного моноциклического или бициклического кольца, которое включает в себя 0, 1, 2, 3 или 4 одинаковых или разных гетероатома, выбранных из атомов N, O и S, где один или два атома азота кольца могут нести на себе атом водорода или (C-C)-алкильный заместитель и один или два атома серы кольца могут нести на себе одну или две оксогруппы и где остаток кольца является необязательно замещенным по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R;
2
22
R выбран из фенила и пиридинила, где атом азота пиридинила может нести на себе окси-заместитель и где фенил и пиридинил являются необязательно замещенными по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R;
и все другие группы и числа принимают значения, определенные в общем определении соединения формулы I или в любых конкретных вариантах осуществления изобретения или определениях структурных элементов в любых их стереоизомерных формах или в виде смеси стереоизомерных форм в любом соотношении, и их физиологически приемлемых солях и физиологически приемлемых сольватах любого из указанных соединений.
Другим таким примером являются соединения формулы I, где A представляет собой O;
1
1
11
3
7
u
2u
v
2v
1
4
R выбран из (C-C)-циклоалкил-CH- и Het-CH, где u и v выбраны из 1 и 2, или R представляет собой остаток насыщенного или ненасыщенного, 3-10-членного моноциклического кольца, которое включает в себя 0, 1 или 2 одинаковых или разных гетероатома, выбранных из атомов N, O и S, где один или два атома азота кольца могут нести на себе атом водорода или (C-C)-алкильный заместитель и один или два атома серы в кольце могут нести на себе одну или две оксогруппы и где остаток кольца является необязательно замещенным по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R;
2
22
R выбран из фенила и пиридинила, где атом азота пиридинила может нести на себе оксо-заместитель и где фенил и пиридинил являются необязательно замещенными по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R;
11
1
4
1
4
R выбран из галогена, (C-C)-алкила, (C-C)-алкилокси и цианогруппы;
22
23
23
1
4
1
4
R выбран из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилокси, цианогруппы, R и R-O-;
23
24
1
4
R представляет собой остаток насыщенного 3-6-членного моноциклического кольца, которое включает в себя 0 или 1 гетероатом, выбранный из атомов N, O и S, где один или два атома азота кольца могут нести на себе атом водорода или (C-C)-алкильный заместитель и один из атомов серы кольца может нести на себе одну или две оксогруппы и где остаток кольца является необязательно замещенным по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R;
24
1
4
R выбран из атома фтора, (C-C)-алкила и гидроксильной группы;
1
4
Het представляет собой остаток насыщенного 4-7-членного моноциклического гетероцикла, который содержит в кольце 1 гетероатом, выбранный из атомов N, O и S, и который присоединен через атом углерода кольца, где остаток гетероцикла является необязательно замещенным одним или несколькими одинаковыми или разными заместителями, выбранными из атома фтора и (C-C)-алкила;
1
4
где все циклоалкильные группы, независимо друг от друга и независимо от любых других заместителей, являются необязательно замещенными одним или несколькими одинаковыми или разными заместителями, выбранными из атома фтора и (C-C)-алкила;
u
2u
v
2v
где все алкильные, CH и CH группы, независимо друг от друга и независимо от любых других заместителей, являются необязательно замещенными одним или несколькими фтор-заместителями,
в любой из их стереоизомерных форм или в виде смеси стереоизомерных форм в любом соотношении и физиологически приемлемые соли и физиологически приемлемые сольваты любого из указанных соединений.
Еще одним таким примером являются соединения формулы I, где A представляет собой О;
1
11
1
4
R представляет собой остаток насыщенного или ненасыщенного 3-7-членного моноциклического кольца, которое включает в себя 0 или 1 гетероатом, выбранный из атомов N, O и S, где атом азота кольца может нести на себе атом водорода или (C-C)-алкильный заместитель и атом серы кольца может нести одну или две оксогруппы и где остаток кольца является необязательно замещенным по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R;
2
22
R выбран из фенила и пиридинила, где атом азота пиридинила может нести на себе окси-заместитель и где фенил и пиридинил являются необязательно замещенными по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R;
11
1
4
1
4
R выбран из галогена, (C-C)-алкила и (C-C)-алкилокси;
22
23
23
1
4
1
4
R выбран из галогена, гидроксильной группы, (C-C)-алкил-, (C-C)-алкилокси, R и R-O-;
23
24
1
4
R представляет собой остаток насыщенного 3-6-членного моноциклического кольца, которое включает в себя 0 или 1 гетероатом, выбранный из атомов N, O и S, где один или два атома азота кольца могут нести на себе атом водорода или (C-C)-алкильный заместитель и один из атомов серы кольца может нести одну или две оксогруппы и где остаток кольца является необязательно замещенным по одному или нескольким атомам углерода кольца одинаковыми или разными заместителями R;
24
1
4
R выбран из атома фтора, (C-C)-алкила и гидроксильной группы;
1
4
где все циклоалкильные группы, независимо друг от друга и независимо от любых других заместителей, являются необязательно замещенными одним или несколькими одинаковыми или разными заместителями, выбранными из атома фтора и (C-C)-алкила;
где все алкильные группы, независимо друг от друга и независимо от любых других заместителей, являются необязательно замещенными одним или несколькими фтор-заместителями,
в любой из их стереоизомерных форм или в виде смеси стереоизомерных форм в любом соотношении и физиологически приемлемые соли и физиологически приемлемые сольваты любого из указанных соединений.
Аналогично, что касается всех конкретных соединений, раскрытых в данном описании, таких как, например, соединения, которые представляют варианты осуществления изобретения, где различные группы и числа в общем определении соединений формулы I принимают конкретные значения, представленные в соответствующем конкретном соединении, заявлено, что они являются предметом настоящего изобретения в любой из их стереоизомерных форм или в виде смеси стереоизомерных форм в любом соотношении, а также физиологически приемлемые соли и физиологически приемлемых сольватов любого из указанных соединений. Безотносительно того, раскрыто ли конкретное соединение в описании в форме свободного соединения и/или в форме его конкретной соли, указанное соединение является предметом данного изобретения в форме свободного соединения и в форме всех его физиологически приемлемых солей, и если раскрыта специфическая соль, то в форме данной специфической соли, а также в форме физиологически приемлемых сольватов любого из указанных соединений. Таким образом, предметом изобретения также является соединение формулы I, которое выбрано из любого одного или нескольких специфических соединений формулы I, раскрытых в данном описании, включая примеры соединений, представленные ниже и их физиологически приемлемые соли, а также физиологически приемлемые сольваты любого из указанных соединений, где соединение формулы I представляет собой предмет настоящего изобретения в любой из его стереоизомерных форм или в виде смеси стереоизомерных форм в любом соотношении, если это применимо. Примером указанного соединения является соединение формулы I или его физиологически приемлемая соль или физиологически приемлемый сольват любого из них, которые выбраны из соединений
5-(2-фторфенокси)-2-(4-метокси-3,5-диметилфенил)оксазоло[5,4-d]пиримидин,
4-[5-(2-фторфенокси)оксазоло[5,4-d]пиримидин-2-ил]-2,6-диметилфенол,
5-(2-фторфенокси)-2-(3-метоксифенил)оксазоло[5,4-d]пиримидин,
4-[5-(2-фторфенокси)оксазоло[5,4-d]пиримидин-2-ил]фенол,
5-(2-фторфенокси)-2-(4-метокси-3-метилфенил)оксазоло[5,4-d]пиримидин,
5-(2-фторфенокси)-2-(4-метокси-3-трифторметилфенил)оксазоло[5,4-d]пиримидин,
4-[5-(2-фторфенокси)оксазоло[5,4-d]пиримидин-2-ил]-2-метилфенол,
2-(4-метокси-3,5-диметилфенил)-5-феноксиоксазоло[5,4-d]пиримидин,
2-(4-метокси-3,5-диметилфенил)-5-(пиридин-3-илокси)оксазоло[5,4-d]пиримидин, и
4-[5-(2-фторфенокси)оксазоло[5,4-d]пиримидин-2-ил]-2-трифторметилфенол.
Еще одним предметом настоящего изобретения являются способы получения соединений формулы I и их солей и сольватов, посредством которых могут быть получены соединений и которые представлены ниже. В одном способе соединение формулы II подвергается взаимодействию с соединением формулы III для получения соединения формулы I
1
2
1
2
1
4
где группы A, R и R в соединениях формул II и III принимают значения, определенные для соединений формулы I, и, кроме того, функциональные группы могут быть представлены в защищенной форме или в форме предшественника группы, который далее подвергается превращению в конечную группу. Группа L в соединениях формулы II представляет собой удаляемую группу, которая может быть замещена в реакции ароматического нуклеофильного замещения, такая как сульфонилокси-группа, например метансульфонилокси или трифторметансульфонилокси, атом галогена, например хлора или брома, сульфоксидная группа или сульфоновая группа, например группа формулы -S(O)-Alk или -S(O)-Alk, где Alk представляет собой (C-C)-алкильную группу, например метил или этил.
Взаимодействие соединений формул II и III представляет собой реакцию ароматического нуклеофильного замещения по атому углерода в положении 5 оксазоло[5,4-d]пиримидинового кольца, т.е. в пиримидиновом фрагменте, и может проводиться в стандартных условиях таких реакций, которые хорошо известны специалисту данной области техники. Обычно реакция проводится в инертном растворителе, например в углеводороде или хлорированном углеводороде, таком как бензол, толуол, ксилол, хлорбензол, дихлорметан, хлороформ или дихлорэтан, в простом эфире, таком как тетрагидрофуран (ТГФ), диоксан, простой дибутиловый эфир, простой диизопропиловый эфир или 1,2-диметоксиэтан (DME), кетоне, таком как ацетон или бутан-2-он, сложном эфире, таком как этилацетат или бутилацетат, в нитриле, таком как ацетонитрил, в амиде, таком как N,N-диметилформамид (ДМФА), N,N-диметилацетамид (ДМА) или N-метилпирролидин-2-он (NMP), или в смеси растворителей, при температурах от примерно 20°C до примерно 160°C, например при температурах от примерно 40°C до примерно 100°C, в зависимости от особенностей конкретного случая. Обычно благоприятно для повышения нуклеофильности соединения формулы III добавлять основание, например третичный амин, такой как триэтиламин, этилдиизопропиламин или N-метилморфолин, или неорганическое основание, такое как гидрид, гидроксид, карбонат или гидрокарбонат щелочно-земельного металла, такой как гидрид натрия, гидроксид натрия, гидроксид калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия или гидрокарбонат натрия, или алкоксид или амид, такой как метоксид натрия, этоксид натрия, метоксид калия, трет-бутоксид калия, амид натрия или диизопропиламид лития. Соединение формулы III также может подвергаться обработке основанием с получением соли отдельно перед взаимодействием с соединением формулы II.
1
Исходные соединения формул II и III могут быть получены в соответствии с методиками, описанными в научной литературе, или аналогично методикам, описанным в научной литературе, и во многих случаях являются коммерчески доступными. Например, соединения формулы II могут быть получены взаимодействием 5-аминопиримидин-производного формулы IV с активированным производным карбоновой кислоты формулы V с получением соединения формулы VI, циклизацией последнего соединения через образование оксазоло[5,4-d]пиримидиновой циклической системы с получением соединения формулы VII, которое уже может представлять собой соединение формулы II в зависимости от значения R' и L, и необязательно модификацией группы R' в соединении формулы VII с получением соединения формулы II.
2
2
2
2
1
Группа R в соединениях формул V, VI и VII принимает значения, определенные для соединений формул I, и функциональные группы также могут быть представлены в защищенной форме или в форме предшественника группы, который затем превращается в конечную группу. Группы R' в соединениях формул IV, VI и VII могут представлять собой гидроксильную группу или атом галогена, такого как хлор или бром. Группа L в соединениях формулы V представляет собой нуклеофильно замещаемую удаляемую группу и, в частности, может представлять собой атом галогена, такого как хлор или бром, и, таким образом, соединение формулы V может представлять собой галогенангидрид карбоновой кислоты. L также может представлять собой группу формулы R-C(О)-О, и, таким образом, соединение формулы V может представлять собой, например, ангидрид карбоновой кислоты. Соединения, задействованные в синтезе соединений формулы I, такие как соединение формулы IV, также могут быть представлены в другой таутомерной форме, например в кето-форме, в том случае, когда группы R в соединении формулы IV представляют собой гидроксильные группы. Соединения, задействованные в синтезе соединений формулы I, включая исходные соединения, промежуточные продукты и продукты, также могут применяться или могут быть получены в форме соли.
1
Соединения формулы IV являются коммерчески доступными или могут быть получены в соответствии с методиками, описанными в научной литературе. Например, соединение формулы IV, где R' представляет собой гидроксильную группу, которое представляет собой 5-аминоурацил, в его таутомерной гидрокси-форме может быть получено из урацила нитрованием с получением 5-нитроурацила и восстановлением нитрогруппы, например как описано в публикации B. Johnson et al., J. Am. Chem. Soc. 41 (1919), 782-789. Соединение формулы IV, где Rпредставляет собой хлор, т.е. 5-амино-2,4-дихлорпиримидин, может быть получено из 5-нитроурацила хлорированием, например обработкой оксихлоридом фосфора, и восстановлением нитрогруппы в полученном 2,4-дихлор-5-нитропиримидине, например как описано в публикации N. Whittaker, J. Chem. Soc. (1951), 1565-1570.
Взаимодействие соединений формулы IV и V может проводиться в стандартных условиях ацилирования амина активированным производным карбоновой кислоты, таким как хлорангидрид или ангидрид. Обычно реакция проводится в инертном растворителе, например в углеводороде или хлорированном углеводороде, таком как бензол, толуол, ксилол, хлорбензол, дихлорметан, хлороформ или дихлорэтан, в простом эфире, таком как ТГФ, диоксан, простой дибутиловый эфир, простой диизопропиловый эфир или DME, в кетоне, таком как ацетон или бутан-2-он, сложном эфире, таком как этилацетат или бутилацетат, или в воде либо в смеси растворителей, при температурах от примерно -10°C до примерно 40°C, например при температурах от примерно 0°C до примерно 30°C. Обычно реакция проводится с добавлением основания, например третичного амина, такого как триэтиламин, этилдиизопропиламин или N-метилморфолин, или неорганического основания, такого как гидроксид, карбонат или гидрокарбонат щелочного металла, например гидроксида натрия, гидроксида калия, карбоната натрия, карбоната калия или гидрокарбоната натрия.
В том случае, когда группа R' в соединении формулы VI представляет собой гидроксильную группу, циклизация соединения формулы VI в соединение формулы VII удобно проводить в присутствии галогенирующего агента, такого как галогенид фосфора, например пентахлорида фосфора или оксихлорида фосфора либо их смеси, в инертном растворителе, например в углеводороде или хлоированном углеводороде, таком как бензол, толуол, ксилол, хлорбензол, дихлорметан, хлороформ или дихлорэтан, при температурах от примерно 20°C до примерно 100°C, например при температурах от примерно 50°C до примерно 80°C.
0
В том случае, когда группа R' в соединении формулы VI представляет собой атом галогена, такого как хлор, циклизация соединения формулы VI в соединение формулы VII может проводиться термически, например посредством нагревания соединения формулы VI в инертном растворителе, таком как углеводород или хлорированный углеводород, например толуол, ксилол или хлорбензол, амид, например ДМФА, ДМА или NMP, или нитрил, например ацетонитрил, до температур от примерно 100C до примерно 200°C, например до температур от примерно 120°C до примерно 180°C, необязательно под давлением и необязательно в присутствии основания, такого как третичный амин, например триэтиламин, этилдиизопропиламин или N-метилморфолин, или неорганического основания, например гидроксида, карбоната или гидрокарбоната щелочного металла, такого как гидроксид натрия, гидроксид калия, карбонат натрия, карбонат калия или гидрокарбонат натрия. Термическая циклизация может успешно проводиться в микроволновом реакторе.
1
1
2
1
4
Соединение формулы VII может уже представлять собой соединение формулы II и применяться в реакции с соединением формулы III, если оно было получено из соединения формулы VI, где R'представляет собой атом галогена, такого как хлор, и атом галогена в продукте циклизации не был замещен, например во время обработки, или если оно было получено из соединения формулы VI, где R' представляет собой гидроксильную группу, и одновременно с циклизацией вторая гидроксильная группа в соединении формулы VII галогенируется, например посредством замещения атомом хлора, что может осуществляться во время циклизации с помощью галогенида фосфора. Если соединение формулы VII, где R' представляет собой гидроксильную группу, получено в качестве продукта циклизации, гидроксильная группа может подвергаться превращению в удаляемую группу в стандартных условиях, например в атом галогена, такой как атом хлора, обработкой галогенирующим агентом, таким как галогенид фосфора, или в сульфонилоксигруппу, как показано выше, обработкой сульфонилхлоридом или ангидридом сульфоновой кислоты. В зависимости от особенностей конкретного случая, таких как реакционная способность конкретного соединения формулы III, которое должно подвергаться взаимодействию с соединением формулы II, может быть также полезно модифицировать группу R' в соединении формулы VII, даже если она уже является удаляемой группой. Например, соединение формулы VII, где R представляет собой галоген, такой как хлор, может подвергаться превращению в соединение формулы II, где L представляет собой группу -S(O)-Alk, которое затем подвергается взаимодействию с соединением формулы III обработкой алкансульфиновой кислотой формулы Alk-S(O)-OH, где Alk представляет собой (C-C)-алкил. Такое превращение обычно проводится в присутствии основания, такого как гидрид, гидроксид, карбонат или гидрокарбонат щелочного металла, например гидрида натрия, гидроксида натрия, гидроксид калия, карбоната натрия, карбоната калия, карбоната цезия или гидрокарбоната натрия, в инертном растворителе, таком как углеводород или хлорированный углеводород, например бензол, толуол, ксилол, хлорбензол, дихлорметан, хлороформ или дихлорэтан, простой эфир, например ТГФ, диоксан, простой дибутиловый эфир, простой диизопропиловый эфир или DME, амид, такой как ДМФА или NMP, или в смеси растворителей, при температурах от примерно 20°C до примерно 150°C, например при температурах от примерно 50°C до примерно 120°C. Алкансульфиновая кислота также может подвергаться обработке основанием и превращаться в соль перед взаимодействием с соединением формулы VII.
Кроме того, соединения формулы I могут быть получены из подходящих соединений, полученных в соответствии с описанными выше способами введения функциональной группы или модификации содержащейся функциональной группы согласно стандартным методикам, например этерификацией, амидированием, гидролизом, этерификацием, алкилированием, ацилированием, сульфонилированием, восстановлением, окислением, превращением в соли и др. Например, гидроксильная группа, которая может высвобождаться из группы простого эфира посредством расщепления простого эфира, например с помощью трибромида бора, или из защищенной гидроксильной группы посредством удаления защиты, может этерифицироваться с получением сложного эфира карбоновой кислоты или сложного эфира сульфоновой кислоты или этерифицироваться с получением простого эфира. Реакции этерифицирования гидроксильной группы с получением простого эфира могут успешно проводиться алкилированием соответствующего галогенированного соединения, например бромида или йодида, в присутствии основания, например карбоната щелочного металла, такого как карбоната калия или карбоната цезия, в инертном растворителе, например в амиде, таком как ДМФА или NMP, или в кетоне, таком как ацетон или бутан-2-он, или с соответствующим спиртом в условиях реакции Митсунобу (Mitsunobu), т.е. в присутствии азодикарбоксилата, такого как диэтилазодикарбоксилат или диизопропилазодикарбоксилат, и фосфина, такого как трифенилфосфин или трибутилфосфин, в инертном апротонном растворителе, например в простом эфире, таком как ТГФ или диоксан (сравн. О. Mitsunobu, Synthesis (1981), 1-28).
1
2
Гидроксильная группа может подвергаться превращению в галогенид обработкой галогенирующим агентом. Атом галогена может замещаться различными группами в результате реакции замещения, кроторая также может представлять собой реакцию, катализируемую переходным металлом. Нитрогруппа может подвергаться восстановлению до аминогруппы, например каталитическим гидрированием. Аминогруппа может подвергаться модификации в стандартных условиях алкилирования, например взаимодействием с галогенсодержащим соединением или восстановительным аминированием карбонильного соединения, либо ацилированием или сульфонилированием, например взаимодействием с реакционноспособным производным карбоновой кислоты, таким как хлорангидрид или ангидрид кислоты, или с активированной карбоновой кислотой, которая может быть получена обработкой связующим агентом, таким как N,N'-карбонилдиимидазол (CDI), карбодиимид, например 1,3-дициклогексилкарбодиимид (DCC), или гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (EDC), гексафторфосфат O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония (HATU), тетрафторборат O-(циано(этоксикарбонил)метиленамино)-N,N,N',N-тетраметилурония (TOTU) или тетрафторборат [(бензотриазол-1-илокси)-диметиламино-метилен]-диметиламмония (TBTU). Группа сложного эфира карбоновой кислоты может подвергаться гидролизу в кислых или основных условиях с получением карбоновой кислоты. Группа карбоновой кислоты может активироваться и превращаться в реакционно-способное производное, как указано выше, и подвергаться взаимодействию со спиртом, амином или аммиаком с получением сложного эфира или амида. Первичный амид может подвергаться дегидратированию с получением нитрила. Атом серы, например в алкил-S-группе или в гетероциклическом кольце, может подвергаться окислению пероксидом, таким как пероксид водорода и надкислота, с получением сульфоксидного фрагмента S(O) или сульфонового фрагмента S(O). Группа карбоновой кислоты, группа сложного эфира карбоновой кислоты и кетогруппа могут подвергаться восстановлению до спирта, например комплексным гидридом, таким как алюмогидрид лития, боргидрид лития или борогидрид натрия.
Все реакции, используемые в описанных выше синтезах соединений формулы I сами по себе известны специалисту в данной области техники и могут проводиться в стандартных условиях в соответствии или аналогично методикам, описанным в научной литературе, например в Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie (Methods of Organic Chemistry), Thieme-Verlag, Stuttgart, или Organic Reactions, John Wiley&Sons, New York. Если нужно, полученные соединения формулы I, а также любые промежуточные продукты могут подвергаться очистке в соответствии со стандартными методиками, например перекристаллизацией или хроматографией. Как уже упоминалось, все исходные соединения и промежуточные продукты, используемые в описанных выше синтезах, которые содержат кислотную или основную группу, также могут применяться в форме солей. И как уже упоминалось выше, в зависимости от особенностей конкретного случая во избежание нежелательного направления реакции или побочных реакций в процессе синтеза соединения, обычно может быть необходимо или полезно временно блокировать функциональные группы введением защитных групп и удалением их на более поздней стадии синтеза или вводить функциональные группы в форме предшественников, которые позднее подвергаются превращению в желательные функциональные группы. В качестве примеров защитных групп могут быть упомянуты защитные группы аминогрупп, которые могут представлять собой ацильные группы или алкилоксикарбонильные группы, например трет-бутилоксикарбонильная группа (=Boc), которая может удаляться обработкой трифторуксусной кислотой (=ТФУК), бензилоксикарбонильная группа, которая может удаляться каталитическим гидрированием, или флуорен-9-илметоксикарбонильная группа, которая может удаляться обработкой пиперидином, и защитные группы карбоновой кислоты, которая может защищаться превращением в сложноэфирную группу, такую как сложные трет-бутиловые эфиры, которые могут удаляться обработкой трифторуксусной кислотой, или сложные бензиловые эфиры, которые могут удаляться каталитическим гидрированием. В качестве примера группы-предшественника может быть упомянута нитрогруппа, которая может превращаться в аминогруппу восстановлением, например каталитическим гидрированием. Такие стратегии синтеза и защитные группы и группы-предшественники, которые подходят в конкретном случае, известны специалистам данной области техники.
1
2
1
2
Еще одним предметом настоящего изобретения являются новые исходные соединения и промежуточные продукты, задействованные в синтезе соединений формулы I, включая соединения формулы II, III, IV, V, VI и VII, где A, R, R, R', L и L принимают значения, определенные выше, в любых их стереомерных формах или в виде смеси стереоизомерных форм в любом соотношении, и соли и сольваты любого из указанных соединений, а также их применение в качестве промежуточных продуктов. Изобретение также включает все таутомерные формы указанных промежуточных продуктов и исходных соединений. Все пояснения и варианты осуществления изобретения, описанные выше и относящиеся к соединениям формулы I, также применимы соответственно к указанным промежуточным продуктам и исходным соединениям. Предметом настоящего изобретения являются, в частности, новые конкретные исходные соединения и промежуточные продукты, раскрытые в данном описании. Независимо от того, раскрыто соединение в форме свободного соединения и/или конкретной соли, они являются предметом изобретения в форме свободных соединений и в форме их солей, и если раскрыта конкретная соль, дополнительно в форме данной конкретной соли, а также в форме сольватов любого из них.
Соединения формулы I, необязательно в комбинации с другими фармацевтически активными соединениями, могут вводиться животным, в частности млекопитающим, включая людей, в качестве фармацевтических средств сами по себе, в смесях с одним другим таким фармацевтическим средством или в форме фармацевтических композиций. Введение может осуществляться перорально, например в форме таблеток, таблеток с пленочным покрытием, таблеток, покрытых сахаром, гранул, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, включая водные, спиртовые и мясляные растворы, соков, капель, сиропов, эмульсий или суспензий, ректально, например в форме свечей, или парентерально, например в форме растворов для подкожной, внутримышечной или внутривенной инъекции или инъекции или инфузии, в частности в форме водных растворов. Соединения формулы I могут дополнительно применяться в способах локальной доставки лекарственного средства, например в стентах с покрытиями для предотвращения или снижения повторного стеноза, или местным применением с помощью катетера. Подходящая форма введения зависит, среди прочего, от заболевания, подлежащего лечению, и его тяжести.
Количество соединения формулы I и/или его фармакологически приемлемых солей и/или сольватов, присутствующее в фармацевтических композициях, обычно находится в интервалах от примерно 0,2 до примерно 800 мг, например от примерно 0,5 до примерно 500 мг, например от примерно 1 до примерно 200 мг, на единичную дозу, но в зависимости от типа фармацевтической композиции оно также может быть выше. Фармацевтические композиции обычно включают от примерно 0,5 до примерно 90 процентов по массе соединения формулы I и/или его фармацевтически приемлемых солей и/или сольватов. Получение фармацевтических композиций может осуществляться способом, известным в данной области техники. Для этого одно или несколько соединений формулы I и/или их фармацевтически приемлемых солей и/или сольватов вместе с одним или несколькими твердыми или жидкими фармацевтическими носителями и/или наполнителями и/или добавками или вспомогательными веществами и, если необходимо, комбинированное лекарственное средство, другие фармакологически активные соединения, обладающие терапевтическим или профилактическим действиям, вводятся в подходящую форму для введения и дозирования, которое может применяться для лечения людей или в ветеринарии. В качестве носителей и добавок могут применяться подходящие органические и неорганические вещества, которые не взаимодействуют нежелательным образом с соединениями формулы I или их фармакологически приемлемыми солями или сольватами. В качестве примеров типов добавок, которые могут содержаться в фармацевтических композициях и лекарственных средствах, могут быть упомянуты лубриканты, консерванты, загустители, стабилизаторы, дезинтегрирующие вещества, смачивающие агенты, добавки для достижения депо-эффекта, эмульгаторы, соли, например для регулирования осмотического давления, буферные вещества, красители, вкусовые добавки и отдушки. Примерами носителей и добавок являются вода, физиологический раствор хлорида натрия, растительные масла, воски, спирты, такие как этанол, изопропанол, 1,2-пропандиол, бензиловые спирты или глицерин, многоатомные спирты, маннит, полиэтиленгликоли, полипропиленгликоли, триацетат глицерина, поливинилпирролидон, желатин, целлюлоза, углеводы, такие как лактоза, глюкоза, сахароза или крахмал, такой как кукурузный крахмал, стеариновая кислота и ее соли, такие как стеарат магния, тальк, ланолин, вазелин или их смеси, например смеси воды с одним или несколькими органическими растворителями, такие как смеси воды со спиртами. Соединения формулы I и их физиологически приемлемые соли и сольваты также могут подвергаться лиофилизации, и полученные лиофилизаты могут применяться для получения, например, композиций для инъекций.
Дозировка соединения формулы I и/или его фазиологически приемлемой соли и/или сольвата, подлежащая введению, зависит от конкретного случая и обычно адаптируется лечащим врачом в соответствии с обычными правилами и методиками к конкретным обстоятельствам для достижения оптимального эффекта. Она зависит, например, от природы и тяжести расстройства, подлежащего лечению, пола, возраста, массы и индивидуальной восприимчивости человека или животного, от эффективности и продолжительности действия используемого соединения, от того, является ли лечение терапевтическим лечением острого или хронического заболевания либо является профилактическим, и от того, вводятся ли помимо соединения формулы I другие активные соединения или нет. Обычно, для достижения желаемых результатов при введении взрослому пациенту массой 75 кг подходящей, например, является суточная доза от примерно 0,01 мг/кг до примерно 100 мг/кг, от примерно 0,1 мг/кг до примерно 10 мг/кг или от примерно 0,3 мг/кг до примерно 5 мг/кг (в каждом случае мг на кг массы тела). Суточная доза может вводиться в одной дозе или, в частности, когда вводятся большие количества, может подразделяться на несколько доз, например две, три или четыре отдельные дозы. Введение также может проводиться непрерывно, например непрерывной инфузией или инъекцией. В зависимости от индивидуального поведения в каждом конкретном случае может быть необходимо повысить и снизить указанные дозировки.
Представленные далее примеры иллюстрируют изобретение.
Когда соединения примеров, содержащие основные группы, очищают препаративной жидкостной хроматографией высокого давления (ВЭЖХ) на материале колонки обращенной фазы (ОФ) и, как правило, элюент представляет собой градиентную смесь воды и ацетонитрила, содержащую трифторуксусную кислоту (ТФУК), указанные соединения получают частично в форме их кислотно-аддитивной соли с трифторуксусной кислотой, в зависимости от условий обработки, таких как условия выпаривания или лиофилизации. В названиях соединений примеров и их структурных формулах любая такая содержащаяся трифторуксусная кислота не указана.
+
+
+
Полученные соединения обычно характеризуются спектроскопическими данными и хроматографическими данными, в частности данными масс-спектра (МС)и временем удерживания ВЭЖХ (Rt; минуты), которые были получены комбинированной аналитической ВЭЖХ/МС (ЖХ/МС), и/или спектром ядерного магнитного резонанса (ЯМР). В ЯМР характеристике представлены химический сдвиг δ (в м.д.), число атомов водорода и мультиплетности (с=синглет, д=дублет, дд=дублет дублетов, т=триплет, дт=двойной триплет, кв=квартет, м=мультиплет; уш.=уширение) сигналов. В МС характеристике обычно представлено массовое число (m/z) пика молекулярного иона M, например M, или связанного иона, такого как ион M+1, например [M+1], т.е. протонированного молекулярного иона [M+H], который может быть получен в зависимости от использованного метода ионизации. Обычно методом ионизации является электрораспылительная ионизация (ESI). Используются следующие условия ЖХ/МС:
Метод ЖХ1
+
Колонка: UPLC BEH C18, 50×2,1 мм, 1,7 мкм; скорость истечения: 0,9 мл/мин.; элюент A: ацетонитрил+0,08% муравьиная кислота; элюент B: вода+0,1% муравьиная кислота; градиент: от 5% A+95% B до 95% A+5% B в течение 1,1 мин., затем 95% A+5% B в течение 0,6 мин.; метод МС ионизации: ESI.
Метод ЖХ2
+
Колонка: YMC-Pack J'sphere H80, 33×2,1 мм, 4 мкм, скорость истечения: 1,0 мл/мин.; элюент A: ацетонитрил+0,05 %ТФУК; элюент B: вода+0,05% ТФУК; градиент: от 2% A+98% B до 95% A+5% B в течение 5 мин., затем 95% A+5% B в течение 1,25 мин.; метод МС ионизации: ESI.
Метод ЖХ3
+
Колонка: Waters XBridge C18, 50×4,6 мм, 2,5 мкм; скорость истечения: 1,3 мл/мин.; элюент A: ацетонитрил+0,05% ТФУК; элюент B: вода+0,05% ТФУК; градиент: 5% A+95% B в течение 0,3 мин., далее от 5% A+95% B до 95% A+5% B в течение 3,2 мин. и затем 95% A+5% B в течение 0,5 мин.; метод МС ионизации: ESI.
Пример 1
5-(2-Фторфенокси)-2-(4-метокси-3,5-диметилфенил)оксазоло[5,4-d]пиримидин
(a) N-(2,4-Дихлорпиримидин-5-ил)-4-метокси-3,5-диметилбензамид
Раствор 3,2 г 5-амино-2,4-дихлорпиримидина в 50 мл этилацетата добавляют к смеси 25 мл насыщенного водного раствора гидрокарбоната натрия и 25 мл воды. Затем к полученной смеси при комнатной температуре в течение 15 минут добавляют раствор 4,9 г 3,5-диметил-4-метоксибензоилхлорида. Смесь интенсивно перемешивают в течение 4 часов. Затем слои разделяют и водный слой дважды экстрагируют этилацетатом. После сушки над сульфатом натрия и фильтрации растворитель удаляют в вакууме, получая 7,54 г сырого продукта. Сырой продукт растирают с 25 мл изопропанола. Смесь фильтруют и промывают 10 мл изопропанола, получая 2,74 г указанного в заголовке продукта в виде твердого белого вещества.
(b) 5-Хлор-2-(4-метокси-3,5-диметил-фенил)оксазоло[5,4-d]пиримидин
Раствор 2,74 г N-(2,4-дихлорпиримидин-5-ил)-4-метокси-3,5-диметилбензамида и 3,2 мл N,N-диизопропилэтиламина в 17 мл ацетонитрила разделяют на две части, которые выдерживают в микроволновом реакторе в течение 1 часа при 160°C. Оба раствора объединяют и осадок выделяют фильтрацией, получая 600 мг указанного в заголовке соединения в виде темного, но вполне чистого твердого вещества (600 мг). Растворители маточной жидкости удаляют в вакууме и полученный остаток очищают хроматографией (силикагель; элюирование с градиентом: гептан/этилацетат), получая дополнительные 600 мг указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества бледно-желтого цвета.
(c) 5-(2-Фторфенокси)-2-(4-метокси-3,5-диметилфенил)оксазоло[5,4-d]пиримидин
149 мг гидрида натрия добавляют в атмосфере аргона к раствору 418 мг 2-фторфенола в 15 мл диметилацетамида. Смесь перемешивают в течение 30 минут при комнатной температуре, после чего к смеси медленно добавляют раствор 900 мг 5-хлор-2-(4-метокси-3,5-диметилфенил)оксазоло[5,4-d]пиримидина в 20 мл диметилацетамида. Смесь перемешивают в течение 1,5 часов при комнатной температуре. После исчезновения исходного оксазоло[5,4-d]пиримидина к реакционной смеси добавляют водный раствор лимонной кислоты (100 г/л) до достижения нейтрального значения pH. Водный слой дважды экстрагируют 15 мл этилацетата, объединенные органические слои сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворители удаляют в вакууме. Указанное в заголовке соединение выделяют хроматографией (силикагель; элюирование с градиентом: гептан/этилацетат), получая 820 мг продукта в виде твердого белого вещества.
+
ЖХ/МС (метод ЖХ3): Rt=3,56 мин.; m/z=366,0 [M+H].
Пример 2
4-[5-(2-Фторфенокси)оксазоло[5,4-d]пиримидин-2-ил]-2,6-диметилфенол
+
Раствор 510 мг 5-(2-фторфенокси)-2-(4-метокси-3,5-диметилфенил)оксазоло[5,4-d]пиримидина в 20 мл дихлорметана охлаждают до 0°C. К полученной смеси в течение 10 минут добавляют 4,2 мл 1M раствора трибромида бора в дихлорметане. Смесь перемешивают при 0°C в течение 1 часа, после чего добавляют еще 2 мл 1M раствора трибромида бора в дихлорметане. Смесь перемешивают еще в течение часа и затем медленно добавляют 10 мл насыщенного водного раствора гидрокарбоната натрия. Водный слой экстрагируют дважды 15 мл дихлорметана и объединенные органические слои сушат над сульфатом натрия и фильтруют. Растворители удаляют в вакууме, получая 445 мг указанного в заголовке соединения в виде твердого белого вещества. ЖХ/МС (метод ЖХ2): Rt=3,62 мин.; m/z=352,13 [M+H]
Аналогично получению соединений примеров, описанных выше, получают соединения формулы I, представленные в таблице 1. Некоторые из них получены в форме солей трифторуксусной кислоты.
Таблица 1Примеры соединений формулы I
Пример
Название соединения
ЖХ/МС
m/z [M+H]<sup>+</sup>
Rt [мин.]
3
5-(2-Фторфенокси)-2-(3-метокси-фенил)оксазоло[5,4-d]пиримидин
ЖХ1
338,2
1,29
4
4-[5-(2-Фторфенокси)оксазоло[5,4-d]пиримидин-2-ил]фенол
ЖХ1
324,21
1,23
5
5-(2-Фторфенокси)-2-(4-метокси-3-метилфенил)оксазоло[5,4-d]пиримидин
ЖХ1
352,22
1,27
6
5-(2-Фторфенокси)-2-(4-метокси-3- трифторметилфенил)оксазоло[5,4-d]пиримидин
ЖХ1
406,16
1,38
7
4-[5-(2-Фторфенокси)оксазоло[5,4-d]пиримидин-2-ил]-2-метилфенол
ЖХ1
338,15
1,28
8
2-(4-Метокси-3,5-диметилфенил)-5-феноксиоксазоло[5,4-d]пиримидин
ЖХ3
348,03
3,55
9
2-(4-Метокси-3,5-диметилфенил)-5-(пиридин-3-илокси)оксазоло[5,4-d]пиримидин
ЖХ3
349,01
2,78
10
4-[5-(2-Фторфенокси)оксазоло[5,4-d]пиримидин-2-ил]-2-трифторметилфенол
ЖХ1
392,11
1,31
11
2,6-Диметил-4-[5-(пиридин-3-илокси)оксазоло[5,4-d]пиримидин-2-ил]фенол
ЖХ1
335,14
1,15
12
4-[5-(3-Фторфенокси)оксазоло[5,4-d]пиримидин-2-ил]-2-изопропил-6-метилфенол
ЖХ1
380,15
1,38
13
5-(2-Фторфенокси)-2-(4-метансульфонил-3-метилфенил)оксазоло[5,4-d]пиримидин
ЖХ1
400,1
1,27
14
5-(2-фторфенокси)-2-(4-метансульфонил-2-метилфенил)оксазоло[5,4-d]пиримидин
ЖХ1
400,12
1,26
Определение фармакологической активности
А) GTP-y-S биологическое испытание с использованием Edg-1 рецепторов человека
Для определения активации Edg-1 рецепторов соединениями согласно изобретению используют GTP-y-S (гуанозин-5'-[тио]трифосфат) биологическое испытание для G-белок-связанного рецепторного связывания на основе принципа сцинтилляционной близости, применяя мембранный препарат из клеточной линии СНО Flp-ln, которая стойко повышенно продуцирует Edg-1 рецептор человека.
(a) Генерация клеточной линии
TM
Flp-ln экспрессионная система (Invitrogen, cat. no. K6010-01) дает возможность генерировать стабильные клеточные линии млекопитающих, в которых целевой ген был интегрирован через гомологическую рекомбинацию на специфическом геномном местоположении, называемом сайт мишени Flp рекомбинации (Flp Recombination Target - FRT), посредством Flp рекомбинации, инкодированной плазмидом pOG44 экспрессии. Интеграция pcDNA5/FRT экспрессионного конструкта в Flp-ln клеточную линию генома хозяина приводит к транскрипции целевого гена. Стабильно трансфектированные клетки становятся стойкими к гидромицину.
2
За один день до трансфектирования 200000 клеток Flp-ln-СНО высевают в Ham F-12 среду (Invitrogen, cat. no. 31765), снабженную 10% фетальной телячьей сывороткой (fetal calf serum - FCS; Perbio Science, cat. no. SH30068.03) на 6-луночный планшет и инкубируют при 37°С/5% СО в течение ночи. Используя FuGENE 6 реагент трансфектирования (Roche, cat. no. 11988387001), клетки совместно трансфектируют с Flp рекомбиназной экспрессионной плазмидой pOG44 и модифицированной плазмидой, дополнительно содержащей edg-1 ген (инвентарный номер NM_001400), называемый pcDNA5-FRT-TO_nFLAG_DEST-EDG-1, в соотношении 9:1. Для получения модифицированной pcDNA5-FRT-TO_nFLAG_DEST плазмиды Invitrogen-плазмиду pcDNA5/FRT/TO (Invitrogen, cat. no. V6520-20) адаптируют для Gateway (Invitrogen) клонирующей системы вставкой Gateway кассеты, содержащей сайты рекомбинации attR, фланкирующие ccdB ген и ген, стойкий к хлорамфениколу (Gateway conversion system, Invitrogen, cat. no. 11828-029). Кроме того, добавляют детерминанту FLAG метки перед сайтом 5' att рекомбинации для предоставления возможности рекомбинантной экспрессии N-терминально FLAG-меченных белков.
Для трансфектирования одной лунки 1,08 мкг pOG44 и 0,12 мкг pcDNA5-FRT-TO_nFLAG_DEST-EDG-1 смешивают со 100 мкл не содержащей сыворотки Ham F-12 среды, содержащими 6 мкл реагента трансфектирования FuGENE 6. Смесь инкубируют в течение 20 минут, после чего комплекс реагент трансфектирования/ДНК распределяют по каплям на клетки. Клетки выдерживают в течение 24 часов при 37°C. Затем клетки из 3 лунок переносят в T75 колбу (Greiner Cellstar, cat. no. 658175), содержащую Ham F-12 среду, содержащую 10% FCS, но без антибиотика, и выдерживают в указанных условиях в течение 24 часов. Через 48 часов после трансфектирования среду заменяют селекционной средой (Ham F-12, содержащая 10% FCS и 300 мкг/мл гидромицина B (Invitrogen, cat. no. 10687-010)). Среду заменяют через каждый 2-3 дня до тех пор, пока не получают стойкую популяцию клеток. Клетки несколько раз разделяют и высевают в новую колбу таким образом, чтобы не получить более 25% слияния клеток. По истечении двух недель селекции клетки переносят в T175 колбы (Greiner Cellstar, cat. no. 660175) и выращивают для получения партий клеток. Клетки собирают из культуральных колб кратковременной обработкой (от 2 до 5 мин.) Accutase (PAA, cat. no. L11-007), повторным суспендированием в селекционной среде (см. выше) и центрифугируют при 200×g в течение 5 минут. Клетки снова суспендируют в смеси 90% FCS и 10% диметилсульфоксида и хранят замороженными в жидком азоте.
(b) Мембранный препарат
Мембранный препарат получают стандартными методами из описанной выше клеточной линии CHO Flp-ln, стойко повышенно продуцирующей Edg-1 рецептор человека. Кратко, криоконсервированные клетки переносят в культуру и выращивают до слияния в T175 колбах клеточной культуры (Becton Dickinson, cat. no. 35 5001). Клеточную культуру останавливают промывкой фосфатно-буферным раствором, не содержащим кальция (PBS; Gibco, cat. no. 14190), клетки собирают резиновым скребком (rubber-policeman) в охлажденном до 4°C, не содержащем кальция PBS, снабженном коктейлем ингибитора протеазы (полный ингибитор протеазы; Roche, cat. no. 1697498; 1 таблетка на 50 мл), и последовательно центрифугируют при 4°C в течение 15 минут при 1100 g (Heraeus Minifuge T). Для клеточного лизиса пеллет снова суспендируют в охлажденном до 4°C гипотоническом буфере, содержащем 5 мМ HEPES (Sigma-Aldrich, cat. no. H-0981), 1 мМ EDTA (двунатриевая соль; Merck, cat. No. 8418), снабженном коктейлем ингибитора протеазы (описан выше), в котором клетки хранят в течение дополнительных 15 минут на льду. После лизиса клетки центрифугируют при 4°C в течение 10 минут при 400×g (Heraeus Minifuge T). Пеллет разрушают в гомогенизаторе Dounce, разбавляют супернатантом, полученном в результате проведенного ранее центрифугирования, и затем снова центрифугируют при 4°C в течение 10 минут при 500×g (Heraeus Minifuge T) для отделения ядер и неповрежденных клеток от мембран, присутствующих, главным образом, в супернатанте. После этого супернатант разбавляют гипотоническим буфером и центрифугируют (Beckmann, Avanti J251) при приблизительно 18600×g в течение 2 часов при 4°C. После центрифугирования мембранный пеллет снова суспендируют в буфере для хранения, состоящем из 20 mM HEPES; 150 мМ NaCl (Merck, cat. no. 6400), 1 мМ EDTA (как описано выше), содержащем коктейль ингибитора протеазы (как описано выше). Мембранный препарат делят на аликвоты и хранят при -80°C. Концентрацию белка мембранного препарата определяют в образце посредством коммерческого биологического анализа протеина (Bio-Rad, DC Protein Assay, cat. nos. 500-0113, 500-0114, 500-0115).
(c) GTP-y-S биологическое испытание
35
Edg-1 мембранный препарат, полученный в (b), используют в коммерчески доступном аналитическом наборе сцинтилляционного приближения (scintillation proximity assay - SPA) для G-белок-связанного рецепторного связывания от Amersham Biosciences/GE Healthcare (code RPNQ0210), в котором лиганд-индуцированное связывание S-меченного радиоактивным изотопом GTP-y-S с рецептор-содержащей мембраной, которая связывается со сцинтилляционными гранулами, стимулирует эмиссию света и позволяет количественно определить in vitro активность Edg-1 агонистического соединения. Биологический анализ проводят на 96-луночном планшете по существу в соответствии с инструкциями производителя. Перед началом экспериментов сцинтилляционные гранулы суспендируют в буфере восстановления, содержащем Tris-HCl (pH 7,4), снабженный 0,1% (масс./об.) азида натрия и последовательно разбавленный на льду аналитическим буфером (состоящим из 20 мМ HEPES, 100 мМ NaCl, 1 мМ EDTA (как описано выше), 1 мМ дитиотреитола (DTT), pH 7,4) до конечной концентрации гранул 30 мг/мл.
35
35
В лунки загружают 10 мкл специфического аналитического буфера, 10 мкл 100 мкМ раствора гуанозиндифосфата (GDP) и 10 мкл раствора испытываемого соединения в аналитическом буфере/диметилсульфоксиде, получая конечную концентрацию испытываемого соединения 10 мкМ. В соответствующие лунки вместо испытываемого соединения для высокого контроля добавляют 10 мкл раствора сфингозин-1-фосфата (S1P; Sigma, cat. no. S-9666), получая конечную S1P концентрацию 10 мкМ, и для низкого контроля - 10 мкл аналитического буфера. Все лунки содержат эквивалентные количества диметилсульфоксида. Затем в каждую лунку добавляют 10 мкл [S]GTP-y-S раствора (4 нМ) и Edg-1 мембранный препарат, полученный в (b) (15 мкг мембранных белков в 100 мкл аналитического буфера). Планшеты инкубируют при комнатной температуре в течение 5 минут, после чего добавляют 50 мкл суспензию специфических сцинтилляционных гранул (30 мг/мл). Планшеты выдерживают в течение 45 минут при комнатной температуре, затем центрифугируют в течение 10 минут при 500×g. Количественное определение [S]GTP-y-S связывания и, следовательно, активации рецептора проводят с помощью счетчика бэта-частиц (MicroBeta, Wallac) в течение 1 минуты. Значения корректируют с учетом фона, вычитанием соответствующего значения низкого контроля. Все измерения проводят трижды. Активацию рецептора испытываемым соединением выражают в процентах соответствующего высокого контроля (10 мкМ S1P; рассматривается как 100% активация). В таблице 2 представлены значения активаций соединений, полученных в примерах, при 10 мкМ.
Таблица 2Активация Edg-1 рецептора соединениями примеров при 10 мкМ в процентах от активации 10 мкМ S1p
Пример
Активация, %
1
102
2
115
3
95
4
83
5
42
6
87
7
115
8
94
9
87
10
107
11
103
12
112
13
120
14
69
Из полученных данных можно видеть, что соединения отлично подходят для заживления ран и, в частности, для лечения расстройств, связанных с заживлением ран у пациентов с сахарным диабетом.