УЛУЧШЕННАЯ ОЧИСТКА БЕЛКА ПОСРЕДСТВОМ МОДИФИЦИРОВАННОГО ЭЛЮИРОВАНИЯ БЕЛКА А

Н
Н
1. Способ очистки полипептида, содержащего С2/С3-область, включающий связывание полипептида с белком А и элюирование градиентом рН, начинающимся с 5,0 или менее.
2. Способ по п.1, в котором градиент рН начинается примерно с рН 4,2.
3. Способ по п.1, в котором градиент рН начинается примерно с рН 4,3.
4. Способ по п.1, в котором градиент рН начинается примерно с рН 4,6.
5. Способ по любому из пп.1-4, в котором градиент рН заканчивается на 3,0 или большем значении.
6. Способ по п.5, в котором градиент рН заканчивается примерно на 3,7.
7. Способ по п.1, в котором примесь из клеток-хозяев отделяют от полипептида.
8. Способ по п.7, в котором примесь из клеток-хозяев является белком из клеток яичника китайского хомячка (СНОР).
9. Способ по п.1, в котором агрегат отделяют от полипептида.
10. Способ по п.1, в котором загрязнение вирусного фильтра отделяют от полипептида.
11. Способ по п.1, в котором вирусную частицу или вирусоподобную частицу отделяют от полипептида.
12. Способ по п.1, в котором основный вариант полипептида отделяют от полипептида.
Н
Н
13. Способ по п.1, в котором С2/С3-область включает Fc-область иммуноглобулина.
14. Способ по п.1, в котором полипептид представляет собой антитело.
15. Способ по п.14, в котором антитело является моноклональным антителом, поликлональным антителом, полиспецифичным антителом или фрагментом антитела.
16. Способ по п.1, в котором полипептид является иммуноадгезином.
17. Способ по п.1, в котором полипептид имеет чистоту по меньшей мере примерно 98% мономера.
18. Способ по п.1, в котором полипептид имеет чистоту по меньшей мере примерно 99% мономера.
19. Способ по п.1, в котором соотношение примесей из клеток-хозяев и очищенного полипептида по меньшей мере примерно на 20% ниже соотношения в полипептиде, очищенном способом с использованием ступенчатого элюирования, причем способ с использованием ступенчатого элюирования включает связывание полипептида с белком А и элюирование с рН, начиная с 3,6 или менее.
20. Способ по п.1, в котором соотношение примесей из клеток-хозяев и очищенного полипептида по меньшей мере примерно на 60% ниже соотношения в полипептиде, очищенном способом с использованием ступенчатого элюирования, причем способ с использованием ступенчатого элюирования включает связывание полипептида с белком А и элюирование с рН, начиная с 3,6 или менее.
21. Способ по п.19 или 20, в котором очищенный полипептид является мономером полипептида.
22. Способ по п.1, в котором белок А представляет собой модифицированный или немодифицированный белок А-лиганд.
23. Способ по п.1, в котором очистка является промышленным способом.
24. Способ по п.1, в котором белок А представляет собой смолу с белком А для колоночной хроматографии или хроматографический сорбент с белком А.
25. Способ по п.24, в котором хроматографический сорбент с белком А представляет собой мембрану или монолит.
26. Способ по п.24, в котором белок А представляет собой смолу с белком А для колоночной хроматографии, причем очищенная фракция полипептида содержит примерно или меньше примерно 12 объемов колонки с белком А.
27. Способ по п.1, дополнительно включающий проведение стадии вирусной фильтрации при очистке полипептида.
28. Способ по п.1, дополнительно включающий проведение стадии ионообменной хроматографии при очистке полипептида.
29. Способ по п.28, в котором стадию ионообменной хроматографии проводят без остановки после стадии очистки градиентом рН по п.1.
30. Способ по п.1, в котором способ не включает дополнительную стадию очистки для удаления агрегатов.
31. Способ по п.1, в котором способ не включает дополнительную стадию очистки для удаления загрязнения вирусного фильтра.
Н
Н
32. Способ очистки полипептида, содержащего С2/С3-область, включающий стадии:
(а) связывания полипептида с белком А; и
(b) элюирования полипептида с градиентом рН, начинающимся с 5,0 или менее, с использованием элюирующего буфера, причем элюирующий буфер включает буфер с высоким рН и буфер с низким рН, а градиент рН образуется в результате регулирования процентного содержания каждого рН-буфера в элюирующем буфере.
33. Способ по п.32, в котором буфер с высоким рН имеет рН примерно 5,0, и в котором буфер с низким рН имеет рН примерно 2,7.
34. Способ по п.32, в котором процентное содержание буфера с низким рН начинается примерно с 35%.
35. Способ по п.34, в котором элюирующий буфер, содержащий примерно 35% буфера с низким рН, содержит примерно 16,25 мМ ацетат и примерно 8,25 мМ формиат.
36. Способ по п.32, в котором процентное содержание буфера с низким рН начинается примерно с 25%.
37. Способ по п.36, в котором элюирующий буфер, содержащий примерно 25% буфера с низким рН, содержит примерно 18,75 мМ ацетат и примерно 6,25 мМ формиат.
38. Способ по п.32, в котором процентное содержание буфера с низким рН начинается примерно с 40%.
39. Способ по п.38, в котором элюирующий буфер, содержащий примерно 40% буфера с низким рН, содержит примерно 15 мМ ацетат и примерно 10 мМ формиат.
40. Способ по п.32, в котором полипептид наносят с плотностью нагрузки, начинающейся примерно с 14 г/л.
41. Способ по п.32, в котором белок А представляет собой смолу с белком А для колоночной хроматографии или хроматографический сорбент с белком А.
42. Способ по п.41, в котором хроматографический сорбент с белком А представляет собой мембрану или монолит.
43. Способ по п.41, в котором белок А представляет собой смолу с белком А для колоночной хроматографии, причем скорость потока для элюирования полипептида варьирует от примерно 5 объемов колонки в час до примерно 25 объемов колонки в час.
44. Способ по п.32, в котором градиент рН начинается примерно с рН 4,2.
45. Способ по п.32, в котором градиент рН начинается примерно с рН 4,3.
46. Способ по п.32, в котором градиент рН начинается примерно с рН 4,6.
47. Способ по любому из пп.32 и 44-46, в котором градиент рН заканчивается на 3,0 или большем значении.
48. Способ по п.47, в котором градиент рН заканчивается примерно на 3,7.
49. Способ по п.32, в котором примесь из клеток-хозяев отделяют от полипептида.
50. Способ по п.49, в котором примесь из клеток-хозяев является белком из клеток яичника китайского хомячка (СНОР).
51. Способ по п.32, в котором агрегат отделяют от полипептида.
52. Способ по п.32, в котором загрязнение вирусного фильтра отделяют от полипептида.
53. Способ по п.32, в котором вирусную частицу или вирусоподобную частицу отделяют от полипептида.
54. Способ по п.32, в котором основный вариант полипептида отделяют от полипептида.
Н
Н
55. Способ по п.32, в котором С2/С3-область включает Fc-область иммуноглобулина.
56. Способ по п.32, в котором полипептид представляет собой антитело.
57. Способ по п.56, в котором антитело является моноклональным антителом, поликлональным антителом, полиспецифичным антителом или фрагментом антитела.
58. Способ по п.32, в котором полипептид является иммуноадгезином.
59. Способ по п.32, в котором полипептид имеет чистоту по меньшей мере примерно 98% мономера.
60. Способ по п.32, в котором полипептид имеет чистоту по меньшей мере примерно 99% мономера.
61. Способ по п.32, в котором соотношение примесей из клеток-хозяев и очищенного полипептида по меньшей мере примерно на 20% ниже соотношения в полипептиде, очищенном способом с использованием ступенчатого элюирования, причем способ с использованием ступенчатого элюирования включает связывание полипептида с белком А и элюирование с рН, начиная с 3,6 или менее.
62. Способ по п.32, в котором соотношение примесей из клеток-хозяев и очищенного полипептида по меньшей мере примерно на 60% ниже соотношения в полипептиде, очищенном способом с использованием ступенчатого элюирования, причем способ с использованием ступенчатого элюирования включает связывание полипептида с белком А и элюирование с рН, начиная с 3,6 или менее.
63. Способ по п.61 или 62, в котором очищенный полипептид является мономером полипептида.
64. Способ по п.32, в котором белок А представляет собой модифицированный или немодифицированный белок А-лиганд.
65. Способ по п.32, в котором очистка является промышленным способом.
66. Способ по п.41, в котором белок А представляет собой смолу с белком А для колоночной хроматографии, причем очищенная фракция полипептида содержит примерно или меньше примерно 12 объемов колонки с белком А.
67. Способ по п.32, дополнительно включающий проведение стадии фильтрации вирусов при очистке полипептида.
68. Способ по п.32, дополнительно включающий проведение стадии ионообменной хроматографии при очистке полипептида.
69. Способ по п.68, в котором стадию ионообменной хроматографии проводят без остановки после стадии (b).
70. Способ по п.32, в котором способ не включает дополнительную стадию очистки для удаления агрегатов.
71. Способ по п.32, в котором способ не включает дополнительную стадию очистки для удаления загрязнения вирусного фильтра.