СПОСОБ КОРРЕКЦИИ L-NAME ИНДУЦИРОВАННОГО ДЕФИЦИТА ОКСИДА АЗОТА L-НОРВАЛИНОМ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
METHOD FOR L-NORVALINE CORRECTION OF L-NAME INDUCED NITROGEN OXIDE DEFICIENCY IN EXPERIMENT

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.
Наиболее близким к заявленному решению является способ вазорелаксирующего воздействия с помощью L-норвалина, относящегося к неселективным ингибиторам аргиназы, изученный in vitro, описанный N.N.Huynh, E.E.Harris, J.F.Chin-Dusting and K.L.Andrews «The vascular effects of different arginase inhibitors in rat isolated aorta and mesenteric arteries», British Journal of Pharmacology, 2009, №156, стр.84-93, который заключается в увеличении биодоступности оксида азота в эндотелии аорты и мезентериальных артерий крыс за счет повышения содержания внутриклеточного L-аргинина, связанного с торможением активности конкурирующего с NO-синтазой фермента аргиназы за общий субстрат.
Основным недостатком способа является отсутствие оценки функционального состояния сосудистого русла в условиях целостного организма при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте.
Техническим результатом изобретения является способ коррекции L-NAME индуцированного дефицита оксида азота in vivo, включающий использование L-норвалина.
Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования дефицита оксида азота в эксперименте проводится его коррекция путем ежедневного внутрижелудочного введения L-норвалина в дозе 10 мг/кг в течение 7 дней.
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ
Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Biopac". Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропрусеида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.
При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.
ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ
Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных: для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 с развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 с после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 сек. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7-суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.
Одновременное введение L-NAME и L-норвалина не приводило к снижению показателей исходных значений АД (таблица 1).
Таблица 1
Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции дефицита оксида азота L-норвалином.
Группы животных
Функциональные пробы
САД, мм рт.ст.
ДАД, мм рт.ст.
ЧСС, уд. в мин
Интактные
Исходные
137,7±3,7
101,9±4,3
420,0±9,0
ЭЗВ с АХ
84,3±4,5
38,7±2,8
416,0±14,0
ЭНЗВ с НП
83,0±3,7
42,1±4,4
415,0±10,0
Получавшие L-NAME (25 мг/кг)
Исходные
190,3±6,7*
145,0±3,9*
428,0±11
ЭЗВ с АХ
110,6±5,2*
82,8±6,6*
426,0±14,0
ЭНЗВ с НП
88,7±4,7
50,8±4,2
426,0±13,0
L-NAME (25 мг/кг) + L-норвалин (10 мг/кг)
Исходные
180±4,7*
144,6±10,2*
371,4±11
ЭЗВ с АХ
106,7±4,9*
56,1±1,8*
344,2±15
ЭНЗВ с НП
129,3±5,1**
64,6±2,5**
358,3±12
* - p<0,05 в сравнении с группой интактных; ** - p<0,05 в сравнении с группой L-NAME
Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.
Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.
Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение, как показатель коррекции дефицита оксида азота.
Таблица 2
Показатели, отражающие коррекцию дефицита оксида азота на фоне введения L-NAME L-норвалином.
Группы животных
Функциональные пробы
Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.)
Время сосудистой реакции (сек.)
Площадь сосудистой реакции (усл. ед)
Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НП
Интактные
АХ
59,9±2,9
42,2±0,8
1268,0±74,8
1,1±0,1
НП
61,0±3,0
45,1±1,0
1375,3±93,7
L-NAME
АХ
68,0±4,1
20,0±1,4
695,3±87,6*
НП
98,0±2,0
67,4±1,4
3322,7±116,7*
5,4±0,6*
L-NAME + L-норвалин
АХ
83,4±3,5*
32,3±2,2*
1360,6±126,9*
НП
78,0±7,0**
70,5±4,7**
2827,2±429,1**
2,1±0,2**
* - p<0,05 в сравнении с группой интактных, ** - p<0,05 в сравнении с группой L-NAME
Таким ооразом, полученные результаты позволяют констатировать коррекцию дефицита оксида азота L-норвалином на фоне введения L-NAME.