Результаты применения Y-хромосомных str локусов в судебно-генетической экспертизе

Качество выполняемых исследований контролировали с помощью современных калибровочных материалов и контрольных сывороток, соблюдая правила Вестгарда. Биохимические анализаторы, используемые в биохимическом отделении на основании протокола технических испытаний системы сертификации ГОСТ Р Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии, получили сертификаты соответствия. Все наборы для in vitro диагностики на анализаторах имеют регистрационные удостоверения Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития. В последние три года постоянно повышается процент судеб-но-биохимических исследований от общего количества судебно-медицинских исследований трупов.

В 2015 году в работу запущен иммуноферментный анализатор Personal LAB для определения кардиоспеци-фического тропонина I для диагностики инфаркта миокарда и определения N-терминальной части мозгового натрийуретического пептида (NT-pro BNP), повышенные концентрации которого определяются в случае смерти от причин, связанных с сердечной недостаточностью. Анализатор Personal Lab может автоматически выполнять: разведение образцов, пипетирование стандартов/контролей образцов, фотометрирование на основном, референс-ном и/или зашкальном фильтре с фактором домножения. Зашкальный фильтр - уникальная функция, позволяющая при зашкале (например, превышении максимальным стандартом предела ОП прибора) получить достоверные и точные результаты. Кроме того, анализатор Personal Lab позволяет выполнять отдельные стадии и/или группы стадий, если это необходимо, вручную (например, малые объемы проб, которые нет возможности внести в автоматическом режиме, можно внести вручную, если приостановить на время прибор на определенной стадии процесса).

Проведенные нами исследования позволяют сделать выводы, что получить сыворотку, пригодную для биохимических исследований, от трупного материала без следов гемолиза возможно. Большинство биохимических показателей остаются стабильными в сыворотке при заборе материала в интервале от 0 до 24 ч (некоторые до 48 ч), что подтверждается исследованиями, опубликованными зарубежными экспертами. В сыворотке крови, при достаточном ее количестве и условии хранения в заморозке до -20 °C, сохраняется большинство биохимических параметров, что позволяет создавать нам архив и при необходимости при однократном размораживании повторить любые исследования. Мы негативно относимся к публикациям, в которых содержится информация о стабильности биохимических показателей в трупной цельной крови до 10-14 дней и более - они никак не подтверждаются проведенными нами исследованиями.

Биохимические исследования дополняют другие, а иногда являются очень информативными данными для выводов судебно-медицинского эксперта, когда морфологические изменения еще не успели сформироваться. Основной трудностью широкого применения биохимических исследований по сыворотке крови являлся гемолиз. В нашем отделении удалось получать качественную сыворотку от трупного материала с помощью применения специальных пробирок BD Vacutainer и соблюдения правил преаналитики биохимического исследования. За три года исследований мы можем сделать определенные выводы о стабильности некоторых аналитов, определяемых в аутопсийной крови (сыворотке), и о соответствии предсмертных значений посмертным при отсутствии патологии, при которой эти маркеры должны изменяться.

Полученные нами данные могут использоваться и в других судебно-биохимических отделениях, особенно

если эти отделения расположены вблизи моргов, что сократит время доставки материала и позволит чаще получать качественную сыворотку, пригодную для биохимических исследований с проведением контроля качества.

ВЫВОДЫ

• Судебно-биохимическое отделение является структурным подразделением Бюро судебно-медицинской экспертизы, отличается от других подразделений и имеет свою специфику. Основные задачи отделения: выполнение исследований, требующих специальных познаний в области применения биохимических методов анализа.

• В судебно-биохимическом отделении ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» с 2013 года введены в эксплуатацию современные биохимические анализаторы, что позволило максимально расширить спектр исследований биохимических аналитов и повысить их качество, уделяя особое внимание преаналитическому этапу.

• Итоги работы за 2015 год позволяют наглядно убедиться в масштабности наших исследований.

• Результаты проведенных нами исследований могут быть внедрены и в других судебно-биохимических отделениях бюро судебно-медицинской экспертизы.

РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИМЕНЕНИЯ У-ХРОМОСОМНЫХ БТР ЛОКУСОВ ВСУДЕБНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЙЭКСПЕРТИЗЕ

Ш. Пурэвдулам, Б. Тэнуун, Б. Гантуяа, С. Ганболд

• Национальный институт судебных экспертиз (дир. - Х. Улзийбаяр) Министерства юстиции Монголии, Улан-Батор

• Аннотация: Для анализа ДНК в лабораторию были присланы содержимое влагалища потерпевшей, в котором обнаружена сперма преступника, а также образец крови потерпевшей. Нами была выделена геномная ДНК из крови потерпевшей и спермы преступника; затем установили генотипы по аутосомным ло-кусам потерпевшей и гаплотип Y-хромосомных микросателлитных локусов преступника и опубликовали результаты ДНК-анализа.

• Ключевые слова: половые преступления, судебно-генетическая экспертиза, Y-хромосома, STR-локус

ВВЕДЕНИЕ

В судебно-экспертной практике немало случаев занимают преступления против половой неприкосновенности и половой свободы личности.

Наиболее распространенным и надежным методом для сбора биологических объектов для анализа ДНК является соскоб или тампон с содержимым, изъятым из влагалища потерпевшей специальной ватной палочкой. После сбора генетический материал передается в ДНК-лабораторию, осуществляющую процедуру определения генотипа и гаплотипа данного человека.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами экспертизы являются кровь и смешанные биологические следы на тампонах, изъятых из влагалища потерпевшей.

Из образцов жидкой крови выделяли ДНК стандартным фенол-хлороформным методом.

Из смешанных биологических следов на тампонах, изъятых из влагалища потерпевшей, выделяли ДНК, ис-

пользуя стандартный набор для выделения геномной ДНК ABI Prepfiler (Applied Biosystems).

Сначала мы типировали полиморфные STR-локусы, используя наборы реактивов фирмы Promega Corporation (PowerPlex16HS System). Устанавливали по аутосомной хромосоме генотипы крови потерпевшей и мужской фракции, выделенной из смешанных биологических следов на тампонах, изъятых из влагалища потерпевшей.

Для типирования аллелей Y-хромосомы использовали наборы реактивов фирмы Promega Corporation (PowerPlex Y System).

Амплификацию аутосомных и Y-STR-локусов проводили в формате мультиплексной ПЦР (один мульти-плекс на все 1б аутосомных, 12 и 23 Y-хромосомных локу-сов) на градиентных амплификаторах Applied Biosystems в условиях, рекомендуемых производителем коммерческого набора PowerPlex16HS System, PowerPlexY System, PowerPlexY23 System (Promega). Флуоресцентно меченные ПЦР-фрагменты разделяли методом капиллярного гель-электрофореза на генетических анализаторах ABIPrism 310 и ABlPrism 3130 (Applied Biosystems). Чтение генотипов и гаплотипов проводили с помощью программного обеспечения GeneMapper (Applied Biosystems). Качество генотипирования контролировали, используя стандартный набор аллелей всех 16, 12 и 23 микросателлитов («леддер»), поставляемый в составе набора PowerPlex16HS System, PowerPlex Y System PowerPlex Y23 System, загружая «леддер» в каждом цикле генотипирования.

Сначала мы определили генотипы крови потерпевшей и следов спермы на тампоне с содержимым влагалища потерпевшей, используя ДНК-набор PowerPlex16HS System.

При проведении ДНК-анализа мужской фракции установили смешанный генотип, один из компонентов которого принадлежит мужчине. Поэтому мы провели ДНК-анализ, используя PowerPlex Y System систему, и определили, что сперма принадлежит мужчине с определенным гаплотипом.

Преступник по гаплотипу Y-STR-локусов обладает специфическим генетическим характером, который ранее не был обнаружен у обследованных людей в монгольской популяции.

По нашим исследованиям, в монгольской популяции по локусу DYS393 аллель «16» до сих пор не наблюдалась.

Для подтверждения результата предыдущего анализа мы повторно провели анализ ДНК, используя систему ти-пирования PowerPlex Y23 System. Оба результата совпали между собой.

С помощью базы данных типирования PowerPlex Y23 системы наборов по всему миру мы разыскивали данный гаплотип и получили следующий ответ от автоматизированных веб-сайтов поиска: установленный гаплотип не наблюдался в зарегистрованных 26 869 гаплотипах, протипированных по PowerPlex Y23 системе наборов, в мировой базе данных.

ВЫВОДЫ

1. Этот случай показывает, что есть необходимость проведения более широких исследований Y-хромосомных микросателлитных локусов популяции монгольского населения.

2. Необходимо введение других методов анализа, например анализа Y-SNP и мтДНК последовательностей в монгольской судебной практике, публикация полученных результатов.

3. Надо искать данного преступника среди людей с таким гаплотипом: «DYS576-DYS389I-DYS448-DYS389II-DYS19-DYS391-DYS481-DYS549-DYS533-DYS438-DYS437 -YS570-DYS635-DYS390-DYS439-DYS392-DYS643-DYS393

-DYS458-DYS385a/b-DYS456-Y-GATA-H4 (11-17-14-2031-15-11-27-12-12-10-14-18-21-23-12-12-12-16-1515-11)».

К ВОПРОСУ РАЗВИТИЯ ВИРТУАЛЬНОЙ АУТОПСИИ_В_РОССИИ,_плп_ЧТО_аЕЛАТЬ?

д.м.н., доцент В. А. Спиридонов

• ГБОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет МЗ РФ»

• Следственное управление Следственного комитета Российской Федерации

по Республике Татарстан

• Аннотация: Статья посвящена использованию метода виртуальной аутопсии при экспертизе трупа. На зарубежном опыте обоснована необходимость развития виртопсии в России. Предложено создать центр виртуальной аутопсии.

• Ключевые слова: виртуальная аутопсия, томограф, судебно-медицинская экспертиза, труп

ВВЕДЕНИЕ

Классическая аутопсия (вскрытие трупа) является основным методом, используемым при проведении судебно-медицинских и патологоанатомических исследований для установления причины смерти, наличия повреждений, заболевании и решения других вопросов, интересующих правоохранительные органы и медицинских работников. Во всех цивилизованных странах аутопсия является широко распространенной процедурой, поводы ее назначения и порядок проведения регламентируются законодательством. Согласно данным Российского центра судебно-медицинской экспертизы МЗ РФ, в 2012 году в нашей стране было проведено 585 805 экспертных исследований трупов. В Республике Татарстан в последнее время проводится ежегодно около 11-12 тысяч судебно-медицинских экспертиз трупов.

Однако нередко родственники и близкие умершего отказываются или противодействуют проведению аутопсии, ссылаясь на религиозные запреты или волеизъявление умершего. Особенно часто это происходит в регионах, исповедующих ислам, причем негативное отношение распространено как на судебно-медицинские, так и патолого-анатомические исследования.

С конца прошлого века учеными и врачами в клинике активно внедряются и используются методы компьютерной и магнитно-резонансной томографии. Эти диагностические методы сегодня стали рутинными и в нашей стране - достаточно сказать, что в Республике Татарстан сегодня работает около 40 томографов. Большие возможности визуализации заинтересовали судебно-медицинских экспертов и патологов; лидером стала Швейцария, где директор Института судебной медицины Университета г. Цюрих профессор М. 'ШаН создал центр виртопсии, объединил европейских энтузиастов этого метода, издал с коллегами первый учебник «Virtopsy», ежегодно проводит обучение. Таким образом, виртуальная аутопсия (виртопсия) - построение послойного трехмерного изображения трупа с помощью компьютерного и магнитно-резонансного томографа без классических секционных разрезов тканей и внутренних органов трупа - стала реальностью и очень перспективным научно-практическим направлением. Преимущества виртопсии: повышает наглядность, доказательность судебно-медицинских