Способ инактивации возбудителя кампилобактериоза крупного рогатого скота
METHOD FOR INACTIVATION OF CATTLE CAMPILOBACTERIOSIS PATHOGEN

Изобретение относится к биотехнологии, иммунологии, микробиологии и ветеринарии и может быть использовано в биотехнологии при производстве инактивированной вакцины против кампилобактериоза КРС.
Известен способ инактивации возбудителя Campylobacter fetus subspecies fetus с использованием формалина в качестве инактиватора в концентрации 0,5% к биомассе возбудителя [«Современные проблемы профилактики и терапии заразных болезней сельскохозяйственных животных и птиц», Огородникова, Гришина, Горовенко, Киселева, Иванова. Опыт сравнительного изучения иммуногенности противокампилобактериозных вакцин на морских свинках, Ленинград, 1984, МСХ СССР ЛВИ, сборник научных трудов, стр. 58-59].
Недостатком известного инактиватора (формалина) является токсические свойства, провоцирующие аллергические и воспалительные реакции в организме животного. Кроме того, требует защиты дыхательных путей и кожных покровов специалиста при работе с ним.
Техническим результатом изобретения является использование инактиватора тeотропина (http://www.findpatent.ru/patent/212/2123337.html) в биотехнологии при производстве инактивированной вакцины против кампилобактериоза КРС.
Технический результат достигается тем, что в качестве инактивирующего вещества для Campylobacter fetus subspecies fetus использовался тиотропин при следующем соотношении компонентов, масс. %:
10
3
суспензия клеток кампилобактера серогруппы fetus subspecies fetus в культуральной среде с концентрацией 2×10 КОЕ*/см (культура возбудителя Campylobacter fetus subspecies fetus) - 0,5%;
0,9%-ный раствор NaCl - 99,2%;
8
16
4
теотропин (химическое название вещества – тетраметилендиэтилентетраамин, эмпирическая формула вещества – CHN) - 0,3%.
Технологический процесс включает отдельные стадии выделения и накопления производственного штамма Campylobacter fetus subspecies fetus и соединения накопленной культуры кампилобактера с инактивирующим его агентом в оптимальном соотношении.
10
*
3
Производственный штамм Campylobacter fetus sbsp. fetus (суспензия клеток с концентрацией 2×10 КОЕ/см. Концентрацию микробных клеток определяют при помощи стандарта мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича), выделяют, поддерживают и культивируют на среде ПЖА в микроаэробных условиях в термостате при 37°С в течение 2 суток. После проверяют принадлежность возбудителя по его культурально-морфологическим и биохимическим свойствам.
Накопление колоний возбудителя осуществляют путем пересева возбудителя с ПЖА на фабричную питательную среду Himedia для поддержки и культивирования возбудителей кампилобактериоза и культивированием возбудителя на указанной среде в микроаэробных условиях в термостате при 37°С в течение 2 суток. Смыв колоний возбудителя со среды проводится стерильным 0,9%-ным раствором натрия хлорида в стерильные флаконы по 100 мл.
Опыт по инактивации проводится с теотропином (0,3 гр. сухого вещества на 100 мл биомассы), в качестве контроля берется формалин (0,5 мл 100%-ного раствора). Инактивация проходит в бескислородных условиях при 37°С в течение 2 суток.
Контроль инактивации осуществляют путем посева экспериментальной массы на ПЖА, а также микроскопией инактивированных клеток (табл. 1).
Установлено, что препарат тиотропин обеспечивает 100%-ную инактивацию штамма Campylobacter fetus subspecies fetus в концентрации от 0,3% по отношению к биомассе возбудителя (табл. 1).
Предложенный способ инактивации штамма кампилобактера крупного рогатого скота Campylobacter fetus subspecies fetus путем соединения с тeотропином показателен и эффективен, практически более прост, безопасен и целесообразен, чем инактивация соединениями формалина.
Для сравнения - для инактивации возбудителя формалином необходимо внести не менее 0,5% компонента относительно биомассы возбудителя Campylobacter fetus subspecies fetus, для 100%-ной инактивации штамма тиотропином хватает 0,3%-ной концентрации. Кроме того, стоит отметить, что теотропин не вызывает у человека раздражения дыхательных путей при переводе сухого его вещества в жидкое агрегатное состояние (не выделяет токсичных паров).
Изобретение может быть использовано в биотехнологии при производстве инактивированной вакцины против кампилобактериоза крупного рогатого скота. Предложенный способ инактивации может применяться в деятельности лабораторий и в научной сфере.