Способ анализа цитохрома С в интактных митохондриях с помощью спектроскопии гигантского комбинационного рассеивания на наноструктурированных покрытиях

1. Способ анализа цитохрома С в интактных митохондриях с помощью спектроскопии гигантского комбинационного рассеяния (ГКР), включающий подготовку митохондрий и их нанесение на подложку на основе диэлектрического химически инертного материала с наноструктурированным покрытием толщиной 1-10 мкм в виде кольцевых наноструктур серебра, при этом ободки серебряных колец состоят из сообщающихся друг с другом пористых агрегатов серебра на поверхности которых расположены округлые наночастицы серебра размером 2-90 нм, с последующей иммобилизацией митохондрий на данные наноструктурированные покрытия, детектирование спектров ГКР с последующей расшифровкой характеристических колебаний анализируемой пробы спектров ГКР с использованием стандартного программного обеспечения.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве диэлектрического химически инертного материала использован материал, выбранный из ряда: оксид алюминия, оксид магния, диоксид кремния, диоксид циркония, силикатное стекло.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что наноструктурированные покрытия в виде кольцевых наноструктур серебра обеспечивают эффективный контакт с митохондриями и позволяют осуществлять их диагностику методом ГКР, расстояние между наноструктурами и поверхностью митохондрий не более 20 нм.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для детектирования цитохрома С используют жидкие пробы объемом 300 микролитров путем их накалывания на наноструктурированное покрытие, предварительно помещенную в чашку Петри со стеклянным дном.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что время иммобилизации митохондрий на наноструктурированных покрытиях составляет от 2 до 60 минут.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что ГКР-спектры получают с использованием зеленого лазера с длиной волны 532 нм.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для обеспечения высокой скорости анализа при большом отношении сигнал/шум и отсутствии появления ложной спектральной информации, мощность лазерного излучения не превышает 5% от номинальной величины при продолжительности набора спектров не более 20 секунд, при этом достигается высокая экспрессность анализа и не происходит фотоповреждение образца.
-1
8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что ГКР-спектры митохондрий отражают характеристические колебания связей гемопорфирина окисленного, соответствующие сигналам в спектрах ГКР с положением максимумов 748, 1127, 1170, 1313, 1371, 1565, 1638 см цитохрома С в митохондриях при разных степенях активности электроннотранспортной цепи (ЭТЦ) митохондрий.
-1
9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что ГКР-спектры митохондрий отражают характеристические колебания связей гемопорфирина восстановленного, соответствующие сигналам в спектрах ГКР с положением максимумов 748, 1127, 1170, 1311, 1356, 1545, 1605 см цитохрома С в митохондриях при разных степенях активности электроннотранспортной цепи (ЭТЦ) митохондрий.
-1
-1
748
1638
1605
1638
10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что по соотношениям интенсивностей характеристических колебаний с положением максимумов 748 и 1638 см(I/I), 1605 и 1638 см (I/I) определяют относительное изменение содержания восстановленного цитохрома С по сравнению с окисленным цитохромом С.
-1
-1
1127
1356
1170
1356
3
11. Способ по п. 1, отличающийся тем, что по соотношениям интенсивностей пиков с положениями максимумов 1127 и 1356 см (I/I) и 1170 и 1356 см (I/I) определяют степени выраженности колебаний боковый -СН радикалов по отношению к симметричным колебаниям пиррольных колец, соответственно, в гемопорфирине восстановленного цитохрома С.
-1
-1
1127
1371
1170
1371
3
12. Способ по п. 1, отличающийся тем, что по соотношениям интенсивностей пиков с положениями максимумов 1127 и 1371 см (I/I) и 1170 и 1371 см (I/I) определяют степени выраженности колебаний боковый -СН радикалов по отношению к симметричным колебаниям пиррольных колец, соответственно, в гемопорфирине окисленного цитохрома С в составе функционирующих митохондрий.