Сравнительное исследование антидепрессантной и диуретической активности жидких экстрактов боярышника полумягкого

ФАРМАЦИЯ

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИДЕПРЕССАНТНОЙ И ДИУРЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЖИДКИХ ЭКСТРАКТОВ БОЯРЫШНИКА ПОЛУМЯГКОГО

Дата поступления 13.07.2018

Введение. Сырьем растений рода боярышник (Crataegus L.) являются цветки и плоды, которые используют в качестве кардиотонических средств. Перспективными видами сырья боярышника являются также листья и побеги. В настоящее время используется 12 видов растений рода боярышник, однако не все из них широко произрастают на территории Российской Федерации. При этом в нашей стране широко культивируется североамериканский боярышник полумягкий (мягковатый) - Crataegus submollis Sarg. Целью исследования явилось сравнительное изучение антидепрессантной активности и диуретического действия жидких экстрактов на основе цветков, побегов, листьев и плодов боярышника полумягкого. Материалы и методы. Для определения антидепрессантной активности жидких экстрактов на основе цветков, плодов, побегов и листьев боярышника полумягкого был использован тест «Отчаяние». Диуретическую активность определяли в хронических экспериментах, собирая 4- и 24-часовые порции мочи. Результаты. Изучение сравнительной антидепрессантной активности жидких экстрактов на основе цветков, листьев, побегов и плодов боярышника полумягкого позволило выявить у всех изучаемых препаратов антидепрессантную активность, сравнимую с амитриптилином в дозе 5 мг/кг. При этом жидкие экстракты цветков, побегов и листьев боярышника полумягкого проявили антидиуретические свойства. Выводы. Жидкие экстракты на основе цветков, листьев, побегов и плодов боярышника полумягкого обладают нейротропным действием. Антидепрессантая активность растительных препаратов увеличивается в следующем ряду: жидкий экстракт листьев боярышника полумягкого - жидкий экстракт плодов боярышника полумягкого - жидкий экстракт побегов боярышника полумягкого - жидкий экстракт цветков боярышника полумягкого.

Ключевые слова: гиперозид, флавоноиды, антидепрессантная активность, диуретическая активность, боярышник полумягкий, Crataegus submollis Sarg.

B. А. Куркин, Е. Н. Зайцева, Т. В. Морозова, О. Е. Правдивцева, А. В. Куркина,

А. В. Дубишев, И. К. Петрухина, Е. П. Гладунова,

C. В. Первушкин, А. И. Агапов, ФГБОУ ВО «Самарский государственный медицинский университет»

Зайцева Елена Николаевна -e-mail: 13zen31@mail.ru

Introduction. The raw materials of the hawthorn plants (Crataegus L.) are flowers and fruits that are used as cardiotonic medicines. Leaves and shoots are prospective types of hawthorn raw materials. Currently, 12 species of hawthorn plants are used, but not all of them are widely grown on the territory of the Russian Federation. At the same time in our country is widely cultivated North American Quebec hawthorn - Crataegus submollis Sarg. The purpose of this work is a comparative study of the antidepressant activity and diuretic action of liquid extracts based on flowers, shoots, leaves and fruits of Quebec hawthorn. Materials and methods. The Desperation test was used to determine the antidepressant activity of liquid extracts based on flowers, fruits, shoots and leaves of Quebec hawthorn. Diuretic activity was determined in chronic experiments by collecting 4 and 24 hours portions of urine. Results. The study of the comparative antidepressant activity of liquid extracts based on flowers, leaves, shoots and fruits of Quebec hawthorn allowed to reveal antidepressant activity for all studied medicines comparable with amitriptyline at a dose of 5 mg/kg. In this liquid extracts of flowers, shoots and leaves of hawthorn semi-soft showed antidiuretic properties. Conclusions. Liquid extracts based on flowers, leaves, shoots and fruits of Quebec hawthorn have a neurotropic effect. Antidepressant activity of herbal preparations increases in the following series: liquid extract of Quebec hawthorn leaves - liquid extract of Quebec hawthorn fruits - liquid extract of Quebec hawthorn shoots - liquid extract of Quebec hawthorn flowers.

Key words: hyperoside, flavonoids, antidepressant activity, diuretic activity,

Quebec hawthorn, Crataegus submollis Sarg.

ФАРМАЦИЯ

Растения рода боярышник широко распространены на территории Российской Федерации. Сырьем являются цветки и плоды, которые используют в качестве кардиото-нических средств. Цветки и плоды боярышника имеют сложный химический состав: флавоноиды (гиперозид, витексин, рамнозид витексина), сапонины, аскорбиновая кислота и дубильные вещества [1]. Перспективными видами сырья боярышника являются листья и побеги, успешно применяемые за рубежом [2, 3]. В настоящее время используется 12 видов растений рода боярышник, однако не все из них широко произрастают на территории Российской Федерации. При этом в РФ широко культивируется североамериканский боярышник полумягкий (мягковатый) Crataegus submollis Sarg. [4]. Этот вид отличается быстрым ростом и зимостойкостью. Наши исследования показали, что сырье боярышника полумягкого не уступает, а в некоторых случаях превосходит сырье боярышника кроваво-красного по содержанию суммы флавоноидов [5, 6].

Ранее в доклинических исследованиях на белых беспородных крысах для густого экстракта плодов боярышника кроваво-красного было установлено наличие диуретического и антидепрессантного эффектов [7]. Поэтому, на наш взгляд, данный препарат целесообразно применять при лечении начальных стадий заболеваний сердечнососудистой системы, в том числе у лиц молодого возраста, тем более что сердечно-сосудистые заболевания получили широкое распространение в современном мире [8, 9].

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ

Цель настоящего исследования: сравнительное изучение антидепрессантной активности и диуретического действия жидких экстрактов на основе цветков, побегов, листьев и плодов боярышника полумягкого. Для реализации данной цели были поставлены следующие задачи:

1) получение жидких экстрактов на основе сырья боярышника полумягкого;

2) изучение антидепрессантной активности жидких экстрактов сырья боярышника полумягкого в тесте «Отчаяние»;

3) изучение диуретической активности жидких экстрактов сырья боярышника полумягкого в 4- и 24-часовых хронических экспериментах.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В лабораторных условиях нами были получены жидкие экстракты на основе высушенных листьев, цветков, побегов и плодов боярышника полумягкого. Сырье было заготовлено в Самарской области в 2017 году. Все жидкие экстракты получали в соотношении «сырье - экстрагент» 1:1. Экстрагентом во всех случаях служил спирт этиловый 70%-й. Во всех препаратах оценивали содержание суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид. Исследование

содержания суммы флавоноидов мы проводили, основываясь на методиках, разработанных нами ранее [1, 6]. Результаты представлены в таблице 1. Все полученные препараты были исследованы нами на наличие антидепрессантной и диуретической активности.

Исследования проводили на белых беспородных крысах обоего пола массой 200-220 г. Животные содержались в условиях вивария на обычном рационе при свободном доступе к воде. Каждая группа состояла из десяти животных. Исследуемые препараты вводили внутрижелу-дочно через зонд в дозе 100 мкл/кг [10]. Контролем служил 70%-й этиловый спирт.

Исследование антидепрессантной активности проводили с использованием теста «Отчаяния» [11]. При этом в течение пяти минут фиксировали индивидуальное время активных попыток животных выбраться из воды. В качестве синтетического препарата сравнения использовался антидепрессант амитриптилин в дозе 5 мг/кг. Контролем в этом случае служила вода в объеме 0,5% от массы тела животного. Все препараты вводили однократно на фоне аналогичной водной нагрузки, эксперимент проводили через 1 ч после введения препарата. Полученные данные обрабатывали статистически по критерию Манна - Уитни с поправкой Бонферрони. Результаты исследования приведены в таблицах 2 и 3.

Диуретическую активность жидких экстрактов боярышника в дозе 100 мг/кг определяли в хронических экспериментах [12]. Препаратом сравнения для 4-часовых экспериментов стал быстро и короткодействующий диуретик фуросемид в пороговой дозе 1 мг/кг, препаратом сравнения для 24-часовых экспериментов - медленно и длительно действующий диуретик гипотиазид в средней терапевтической дозе 20 мг/кг. В день эксперимента животным опытной группы вводился внутрижелудочно лекарственный препарат на фоне 3% водной нагрузки, контролем для препаратов сравнения служила вода в идентичном объеме. Животные помещались в обменные клетки. Собирались соответственно 4-часовые и 24-часовые порции мочи. Определялась почечная экскреция воды, регистрировалась концентрация натрия и калия методом пламенной фотометрии на пламенном анализаторе жидкости ПАЖ-1, креатинина - колориметрическим методом на фотоколориметре КФК-3. Полученные результаты экспериментов представлены в таблицах 4-7.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

При исследовании антидепрессантной активности препарат сравнения амитриптилин в дозе 5 мг/кг увеличивал двигательную активность крыс на 54% относительно водного контроля (таблица 2). Жидкий экстракт плодов боярышника полумягкого в дозе 100 мкл/кг увеличивал двигательную активность животных на 45% по сравнению

ФАРМАЦИЯ

ТАБЛИЦА 1.

Содержание суммы флавоноидов в препаратах боярышника полумягкого

Препарат Содержание суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид

Жидкий экстракт цветков боярышника полумягкого 0,24±0,01%

Жидкий экстракт листьев боярышника полумягкого 0,35±0,03%

Жидкий экстракт побегов боярышника полумягкого 0,38±0,02%

Жидкий экстракт плодов боярышника полумягкого 0,06±0,003%

ТАБЛИЦА 2.

Антидепрессантная активность амитриптилина

Препарат Время активного движения, с Время активного движения, %

Контроль(вода) 91,14±8,62 100%

Амитриптилин 140,00±10,02 * 154%

Примечание: * - достоверность отличий показателей опытной группы относительно показателей контрольной группы животных, получавших воду, р<0,05.

ТАБЛИЦА 3.

Антидепрессантная активность жидких экстрактов боярышника полумягкого

Препарат Время активного движения, с Время активного движения, %

Контроль - этанол 70% 86,71±6,03 100%

Жидкий экстракт плодов боярышника полумягкого на 70% этаноле 125,57±15,19 Д 145%

Жидкий экстракт цветков боярышника полумягкого на 70% этаноле 161,00±14,19 Д 186%

Жидкий экстракт побегов боярышника полумягкого на 70% этаноле 128,86±11,34 Д 149%

Жидкий экстракт листьев боярышника полумягкого на 70% этаноле 113,14±10,16 Д 130%

Примечание: Д - достоверность отличий показателей опытной группы относительно показателей контрольной группы животных, получавших этанол 70%-й, р<0,05.

ТАБЛИЦА 4.

Влияние жидких экстрактов боярышника полумягкого в дозе 100 мкл/кг на экскреторную функцию почек крыс за 4 ч эксперимента

Препарат Креати-нинурез, мг

Контроль (этанол 70%) 1,66±0,12 235,55±23,65 130,27±14,14 2,64±0,23

Жидкий экстракт цветков боярышника полумягкого 1,17±0,15 * 187,71±17,77 111,42±14,74 1,82±0,24 *

Жидкий экстракт побегов боярышника полумягкого 1,09±0,11 * 204,85±23,79 97,05±10,71 2,25±0,17

Жидкий экстракт плодов боярышника полумягкого 1,44±0,24 266,39±50,93 150,70±24,82 2,45±0,39

Жидкий экстракт листьев боярышника полумягкого 1,46±0,09 265,13±15,20 172,81±19,34 2,82±0,21

Примечание: * - достоверность отличий показателей опытной группы относительно показателей контрольной группы животных, получавших этанол 70%-й, р<0,05.

с водно-спиртовым контролем, данный эффект сравним с действием амитриптилина в дозе 5 мг/кг. Жидкий экстракт цветков боярышника полумягкого в дозе 100 мкл/кг увеличивал двигательную активность животных на 86% по сравнению с водно-спиртовым контролем, данный эффект сравним с действием амитриптилина в дозе 5 мг/кг. В то же время жидкий экстракт листьев боярышника полумягкого в дозе 100 мкл/кг увеличивал двигательную активность животных на 30% по сравнению с водно-спиртовым контролем, несколько уступая амитриптилину в пороговой дозе 5 мг/кг. Жидкий экстракт побегов боярышника полумягкого в аналогичной дозе 100 мкл/кг увеличивал двигательную активность животных на 49% по сравнению с водно-спиртовым контролем, действуя аналогично амитриптилину в вышеуказанной дозе. Можно предположить, что данный эффект связан с содержанием в сырье боярышника полумягкого флавоноида гиперозида, для которого характерно антидепрессантное действие [7].

В ходе экспериментов по изучению влияния жидких экстрактов боярышника полумягкого в дозе 100 мкл/кг на выделительную функцию почек было установлено, что за 4 и 24 ч исследования жидкие экстракты цветков, побегов, плодов и листьев боярышника полумягкого не привели к росту исследуемых параметров экскреторной функции почек у опытных животных относительно водно-спиртового контроля (таблицы 4 и 6). Напротив, за 4 ч опыта жидкий экстракт боярышника полумягкого достоверно уменьшал показатели диуреза (на 30%) и креати-нинуреза (на 33%) у животных опытной группы относительно водно-спиртового контроля (таблица 4). Жидкий экстракт побегов боярышника полумягкого способствовал изолированному снижению почечной экскреции воды в опытной группе (на 34%).

Препарат сравнения фуросемид при однократном вну-трижелудочном введении в пороговой дозе 1 мг/кг способствовал достоверному возрастанию диуреза (на 23%) и натрийуреза (на 31%) за 4 ч эксперимента в опытной группе животных относительно показателей водного контроля преимущественно за счет снижения канальцевой реабсорбции (таблица 5).

Также в ходе экспериментов по изучению влияния жидких экстрактов боярышника полумягкого в дозе 100 мкл/кг за 24 ч опыта на выделительную функцию почек было установлено следующее: жидкий экстракт цветков боярышника полумягкого уменьшал диурез (на 38%), натрийурез (на 37%), калийурез (на 47%) и креатинину-рез (на 33%); жидкий экстракт побегов боярышника полумягкого способствовал уменьшению почечной экскреции воды (на 46%), натрия (на 34%), калия (на 42%) и креа-тинина (на 42%); жидкий экстракт листьев боярышника

ФАРМАЦИЯ

полумягкого приводил к изолированному снижению диуреза (на 26%) в опытной группе относительно водно-спиртового контроля (таблица 6).

В свою очередь препарат сравнения гипотиазид, введенный однократно внутрижелудочно в дозе 20 мг/кг, способствовал значительному достоверному возрастанию диуреза (на 40%), натрийуреза (на 54%) и калийуреза (на 55%) относительно водного контроля за 24 ч эксперимента (таблица 7).

ТАБЛИЦА 5.

Влияние внутрижелудочного введения фуросемида в пороговой дозе 1 мг/кг на выделительную функцию почек крыс за 4 ч эксперимента

Препарат Диурез, мл Натрийурез, мкм Калийурез, мкм Креати-нинурез, мг

Контроль (вода) 1,98±0,11 403,68±32,08 104,10±10,72 2,73±0,29

Фуросемид 2,44+0,13* 529,24±43,46 123,76±6,83 3,14±0,25

Примечание: * - достоверность отличий показателей опытной группы относительно показателей контрольной группы животных, получавших воду, р<0,05.

ТАБЛИЦА 6.

Влияние жидких экстрактов боярышника полумягкого в дозе 100 мкл/кг на экскреторную функцию почек крыс за 24 ч эксперимента

Препарат Диурез, мл Натрийурез, мкм Калийурез, мкм Креати-нинурез, мг

Контроль (этанол 70%) 2,27±0,16 402,75+27,21 187,49+24,63 4,33+0,32

Жидкий экстракт цветков боярышника 1,41±0,15 254,18+35,29 106,12+14,93 2,90+0,37

полумягкого

Жидкий экстракт побегов боярышника 1,23±0,17 267,64+35,97 109,42+20,61 2,53+0,41

полумягкого

Жидкий экстракт плодов боярышника 1,80±0,29 332,82+61,83 175,98+36,40 4,22+0,75

полумягкого

Жидкий экстракт листьев боярышника 1,68±0,09 374,71+26,88 163,74+10,84 3,87+0,26

полумягкого

Примечание: * - достоверность отличий показателей опытной группы относительно показателей контрольной группы животных, получавших этанол 70%-й, р<0,05.

ТАБЛИЦА 7.

Влияние внутрижелудочного введения гипотиазида в средней терапевтической дозе 20 мг/кг на выделительную функцию почек крыс за 24 ч эксперимента

Препарат Диурез, мл Натрийурез, мкм Калийурез, мкм Креати-нинурез, Мг

Контроль (вода) 2,73+0,17 462,88+52,16 155,86+20,70 5,27+0,55

Гипотиазид 3,83+0,22 * 711,31+90,84 241,60+19,26 6,85+0,59

Примечание: * - достоверность отличий показателей опытной группы относительно показателей контрольной группы животных, получавших воду, р<0,05.

ВЫВОДЫ

1. В результате исследования антидепрессантного и диуретического действия растительных лекарственных препаратов на основе цветков, плодов, листьев и побегов боярышника полумягкого был выявлен ряд особенностей их фармакологического действия.

2. Обнаружено, что жидкие экстракты цветков, листьев, побегов и плодов боярышника полумягкого в дозе 100 мкл/кг проявляли антидепрессантный эффект, сравнимый с эффектом амитриптилина в пороговой дозе 5 мг/кг. При этом антидепрессантая активность растительных препаратов увеличивается в следующем ряду: жидкий экстракт листьев боярышника полумягкого - жидкий экстракт плодов боярышника полумягкого - жидкий экстракт побегов боярышника полумягкого - жидкий экстракт цветков боярышника полумягкого.

3. Жидкие экстракты цветков, побегов и листьев боярышника полумягкого в дозе 100 мкл/кг оказали угнетающее влияние на экскреторную функцию почек.

4. Жидкие экстракты боярышника полумягкого обладают нейротропным действием и могут использоваться при лечении сердечно-сосудистой патологии.

ЛИТЕРАТУРА

1. Куркина А.В. Флавоноиды фармакопейных растений: монография. Самара: ООО «Офорт», ГБОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России. 2012. 290 с.

Kurkina A.V. Flavonoidy farmakopejnyx rastenij: monografiya. Samara: OOO «Ofort», GBOU VPO SamGMU Minzdravsocrazvitiya Rossii. 2012. 290 s.

2. Трофимова С.В., Хасанова С.В., Кудашкина Н.В. Изучение антиаритмической активности листьев Crataegus sanguinea (Rosaceae). Медицинский вестник Башкортостана. 2011. № 6 (2). С. 299-302.

Trofimova S.V., Xasanova S.V., Kudashkina N.V. Izuchenie antiaritmicheskoj aktivnosti list'ev Crataegus sanguinea (Rosaceae). Medicinskij vestnik Bashkortostana. 2011. № 6 (2). S. 299-302.

3. European Pharmacopoeia. 6th Ed. Rockville: United States Pharmacopoeial Convention, Inc., 2008.

4. Деревья и кустарники СССР. Т. 3. Издание Академии наук СССР Москва-Ленинград, 1954. 872 с.

Derev'ya i kustarniki SSSR. T. 3. Izdanie Akademii nauk SSSR Moskva-Leningrad, 1954. 872 s.

5. Морозова Т.В., Куркин В.А., Правдивцева О.Е. Содержание суммы фла-воноидов в сырье боярышника полумягкого // Мат-лы V научно-практич. конф. «Современные аспекты использования растительного сырья и сырья природного происхождения в медицине». М.: Изд-во Первого МГМУ им. И.М. Сеченова, 2017. С. 151-152.

Morozova T.V., Kurkin V.A., Pravdivceva O.E. Soderzhanie summy' flavonoidov vsyr'e boyaryshnika polumyagkogo//Mat-ly V nauchno-praktich. konf. «Sovremennye aspekty' ispol'zovaniya rastitel'nogo syr'ya i syr'ya prirodnogo proisxozhdeniya v medicine». M.: Izd-vo Pervogo MGMU im. I.M. Sechenova, 2017. S. 151-152.

6. Морозова Т.В., Волкова Н.А., Куркин В.А., Правдивцева О.Е., Розно С.А., Жавкина Т.М. Сравнительное содержание суммы флавоноидов в сырье боярышника кроваво-красного и боярышника полумягкого. Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. 2017. № 19. С. 204-205.

Morozova T.V., Volkova N.A., Kurkin V.A., Pravdivceva O.E, Rozno S.A., Zhavkina T.M. Sravnitel'noe soderzhanie summy' flavonoidov v syr'e boyary shnika krovavo-krasnogo i boyary shnika polumyagkogo. Vestnik

ФАРМАЦИЯ

Permskoj gosudarstvennoj farmacevticheskoj akademii. 2017. № 19. S. 204-205.

7. Куркин В.А., Куркина А.В., Зайцева Е.Н., Дубищев А.В., Правдивцева О.Е., Морозова Т.В. Диуретическая и антидепрессантная активность густого экстракта боярышника кроваво-красного. Бюллетень сибирской медицины. 2015. № 14 (3). С. 18-22.

Kurkin V.A, Kurkina A.V., Zajceva E.N., Dubishhev A.V., Pravdivceva O.E., Morozova T.V. Diureticheskaya i antidepressantnaya aktivnost' gustogo ekstrakta boyaryshnika krovavo-krasnogo. Byulleten' sibirskoj mediciny. 2015. № 14 (3). S. 18-22.

8. Басырова И.Р., Либис Р.А. Распространенность основных факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний и их комбинаций у жителей города Оренбурга. Аспирантский вестник Поволжья. 2017. № 1-2. С 48-53.

Basy'rova I.R., Libis R.A. Rasprostranennost' osnovny'h faktorov riska serdechno-sosudistyx zabolevanij i ix kombinacij u zhitelej goroda Orenburga. Aspiranstkij vestnik Povolzh'ya. 2017. № 1-2. S 48-53.

9. Симерзин В.В., Фатенков О.В., Гаглоева И.В., Галкина М.А., Молчанова Т.Е., Юнусова Ю.Р. Инновационная технология верификации субклинического атеросклероза. Наука и инновации в медицине. 2017. № 4 (8). С. 28-35.

Simerzin V.V, Fatenkov O.V., Gagloeva I.V., Galkina M.A., Molchanova T.E., Yunusova Yu.R. Innovacionnaya texnologiya verifikacii subklinicheskogo ateroskleroza. Nauka i innovacii v medicine. 2017. № 4 (8). S. 28-35.

10. Зайцева Е.Н., Зайцев А.Р., Дубищев А.В. Патент на полезную модель № 115651 «Устройство для введения водной нагрузки лабораторным животным». 2012.

Zajceva E.N., Zajcev AR, Dubishhev A.V. Patent na poleznuyu model' № 115651 «Ustrojstvo dlya vvedeniya vodnoj nagruzki laboratornym zhivotny'm». 2012.

11. Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. 2-е изд., перераб. и доп. М.: ОАО Издательство «Медицина». 2005. С. 832.

Xabriev R.U. Rukovodstvo po e'ksperimental'nomu (doklinicheskomu) izucheniyu novy'h farmakologicheskix veshhestv. 2-e izd., pererab. i dop. M.: OAO Izdatel'stvo «Medicina». 2005. S. 832.

12. Зайцева Е.Н. Патент на изобретение № 2494703 «Способ получения диуреза у лабораторных животных». 2013.

Zajceva E.N. Patent na izobretenie № 2494703 «Sposob polucheniya diureza u laboratornyx zhivotny'h». 2013.