ОПТИМИЗИРОВАННЫЙ СПОСОБ ОЧИСТКИ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА ФАКТОРА РОСТА

1. Способ получения очищенного рекомбинантного GDF-5-подобного белка, который включает этапы разрушения бактериальных клеток и солюбилизацию телец включения для получения солюбилизированного мономера GDF-5-подобного белка, в котором
а) бактериальные клетки разрушают с помощью гомогенизатора высокого давления при давлении разрушения между 800 и 900 бар; и/или
б) выделенные тельца включения обрабатывают денатурирующим буфером для солюбилизации, содержащим L-аргинин.
2. Способ по п.1, в котором буфер для солюбилизации содержит 4-8 М мочевину и 400-500 мМ аргинин, предпочтительно 6 М мочевину и 500 мМ аргинин.
3. Способ по п.1, в котором буфер для солюбилизации содержит хелатор в концентрации от 5 до 100 мМ.
4. Способ по п.1, в котором буфер для солюбилизации имеет рН между 9,0 и 11,0.
5. Способ по п.1, дополнительно включающий удаление высокомолекулярных примесей непосредственно после этапа солюбилизации телец включения путем применения одного или более способов, выбранных из группы, состоящей из центрифугирования, объемной фильтрации и стерилизующей фильтрации.
6. Способ по п.1, дополнительно включающий удаление с помощью диафильтрации упомянутого L-аргинина из раствора, содержащего солюбилизированный белок телец включения.
7. Способ по п.1, в котором штамм-хозяин, экспрессирующий GDF-5-подобный белок в тельцах включения, является штаммом Е.coli, предпочтительно выбранным из штаммов Е.coli D1210 и Е.coli W3110.
8. GDF-5-подобный белок, полученный способом по любому из пп.4-7.
9. Белок по п.8, который содержит аминокислоты с 1 по 119 или с 1 по 120 последовательности SEQ ID NO: 3 (зрелый человеческий GDF-5).
10. Белок по п.8, который содержит аминокислоты с 400 по 501 последовательности SEQ ID NO: 1 (домен цистинового узла человеческого GDF-5).
11. Белок по п.8, который содержит аминокислоты с 1 по 119 и с 1 по 120 последовательности SEQ ID NO: 4 (зрелый мономерный человеческий GDF-5).
12. Применение раствора, содержащего мочевину и L-аргинин, для солюбилизации бактериальных телец включения для получения содержащегося в них мономера GDF-5-подобного белка.