НОВЫЕ ФУКОЗИЛТРАСФЕРАЗЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Хозяйская клетка для продукции фукозилированного олигосахарида, где хозяйская клетка содержит последовательность, состоящую из полинуклеотида, кодирующего полипептид с активностью альфа 1,2-фукозилтрансферазы, и включает последовательность, выбранную из группы, которая состоит из: a) SEQ ID No. 1 в соответствии с прилагаемым списком последовательностей, b) последовательности нуклеиновой кислоты, комплементарной SEQ ID No. 1, или с) последовательностей нуклеиновой кислоты, которые гибридизуются в жестких условиях с последовательностями нуклеиновой кислоты, определенными в а) и b) или их комплементарными цепями, где последовательность представляет собой последовательность, чужеродную по отношению к хозяйской клетке и где последовательность является интегрированной в геном хозяйской клетки или содержит вектор, включающий указанный полинуклеотид, при этом последовательность нуклеиновой кислоты является оперативно связанной с контрольными последовательностями, которые узнаются хозяйской клеткой, трансформированной с помощью вектора.
2. Хозяйская клетка по п. 1, характеризующаяся тем, что хозяйская клетка является выбранной из группы, которая состоит грибов, включая дрожжи, бактерий, насекомых, животных и растений.
3. Хозяйская клетка в соответствии с пунктами 1 или 2, характеризующаяся тем, что хозяйская клетка представляет собой клетку Escherichia coli.
4. Хозяйская клетка по одному из пп. 1 или 2, характеризующаяся тем, что нуклеиновая кислота, которая кодирует полипептид с активностью альфа-1,2-фукозилтрансферазы, является адаптированной к преимущественному использованию кодонов в соответствующей клетке.
5. Применение полинуклеотида, кодирующего полипептид с активностью альфа-1,2-фукозилтрансферазы и включающего последовательность, выбранную из группы, которая состоит из:
a) SEQ ID No. 1 в соответствии с прилагаемым списком последовательностей;
b) последовательности нуклеиновой кислоты, комплементарной SEQ ID No. 1;
c) последовательностей нуклеиновой кислоты, которые гибридизуются в жестких условиях с последовательностями нуклеиновой кислоты, определенными в а) и b) или их комплементарными цепями.
или вектора, который содержит указанный полинуклеотид,
полипептида с активностью альфа-1,2-фукозилтрансферазы, который включает последовательность, выбранную из группы, которая состоит из:
(a) аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID No. 2;
(b) аминокислотной последовательности аллельного варианта аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID No. 2, где указанный аллельный вариант кодируется молекулой нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется в жестких условиях с противоположной цепью молекулы нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID No. 1;
(c) аминокислотной последовательности ортолога аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID No. 2, где указанный ортолог кодируется молекулой нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется в жестких условиях с противоположной цепью молекулы нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID No. 1; и
(d) фрагмента аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID No. 2, где указанный фрагмент включает, по крайней мере, 10 последовательных аминокислот,
для получения фукозилированного олигосахарида.
6. Применение по п. 5, характеризующееся тем, что получение указанного фукозилированного олигосахарида осуществляют с помощью гетерологичной или гомологичной экспрессии полинуклеотида, кодирующего альфа-1,2-фукозилтрансферазу.
7. Применение по п. 5 или 6, характеризующееся тем, что фукозилированный олигосахарид представляет собой олигосахарид, известный из молока человека.
8. Применение по п. 7, характеризующееся тем, что фукозилированный олигосахарид представляет собой 2′-фукозиллактозу.
9. Способ получения фукозилированных олигосахаридов, включающий этапы:
a) обеспечения полипептида, обладающего активностью альфа-1,2-фукозилтрансферазы, состоящей из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, которая состоит из а) аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID No. 2; b) аминокислотной последовательности аллельного варианта аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID No. 2, где указанный аллельный вариант кодируется молекулой нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при жестких условиях с противоположной цепочкой молекулы нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID No. 1; с) аминокислотной последовательности ортолога аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID No. 2, где указанный ортолог кодируется молекулой нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется в жестких условиях с противоположной цепью молекулы нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID No. 1 и (d) фрагмента аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID No. 2, где указанный фрагмент включает, по крайней мере, 10 последовательных аминокислот,
b) приведение в контакт полипептида с активностью альфа-1,2-фукозилтрансферазы этапа а. со смесью, включающей донорный субстрат, содержащий остаток фукозы, и акцепторный субстрат, включающий моно- или олигосахарид, при условиях, где полипептид катализирует перенос остатка фукозы от донорного субстрата на акцепторный субстрат, продуцируя таким образом фукозилированный олигосахарид.
10. Способ получения фукозилированных олигосахаридов, включающий этапы:
а. выращивания при приемлемых условиях питания хозяйской клетки, как заявлено в пп. 1-4, пермиссивной для продукции полипептида, который обладает активностью альфа-1,2-фукозилтрансферазы;
b. одновременное или последовательное по отношению к этапу а. обеспечение донорного субстрата, включающего остаток фукозы, и акцепторного субстрата, включающий моно- или олигосахарид, для того, чтобы полипептид альфа-1,2-фукозилтрансферазы катализировал перенос остатка фукозы от донорного субстрата на акцепторный субстрат, продуцируя таким образом фукозилированный олигосахарид; и
c. изоляции указанного фукозилированного олигосахарида из хозяйской клетки или из среды ее роста.
11. Способ по п. 9 или 10, характеризующийся тем, что донорный субстрат представляет собой GDP-фукозу.
12. Способ по п. 11, характеризующийся тем, что GDP-фукоза обеспечивается с помощью фермента, одновременно экспрессируемого в хозяйской клетке или путем метаболизма хозяйской клетки.