ОПТИМИЗИРОВАННЫЕ КОМПОЗИЦИИ АНТИТЕЛ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ГЛАЗ

1. Конъюгат антитела, содержащий (i) антитело, и (ii) полимер гиалуроновой кислоты (ГК), ковалентно присоединенный к антителу, причем полимер ГК имеет индекс полидисперсности (PDI - polydispersity index) 1,1 или ниже.
2. Конъюгат антитела по п. 1, отличающийся тем, что полимер ГК имеет PDI от 1,0 до 1,1.
3. Конъюгат антитела по п. 2, отличающийся тем, что полимер ГК имеет PDI от 1,0 до около 1,07.
4. Конъюгат антитела по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что полимер ГК имеет PDI от около 1,0001 до около 1,06.
5. Конъюгат антитела по п. 4, отличающийся тем, что полимер ГК имеет PDI около 1,05.
6. Конъюгат антитела по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что полимер ГК имеет молекулярную массу около 1 мегадальтона (МДа) или ниже.
7. Конъюгат антитела по п. 6, отличающийся тем, что полимер ГК имеет молекулярную массу от около 25 кДа до около 500 кДа.
8. Конъюгат антитела по п. 7, отличающийся тем, что полимер ГК имеет молекулярную массу от около 100 кДа до около 250 кДа.
9. Конъюгат антитела по п. 8, отличающийся тем, что полимер ГК имеет молекулярную массу от около 150 кДа до около 200 кДа.
10. Конъюгат антитела по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что полимер ГК представляет собой линейный полимер ГК.
11. Конъюгат антитела по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что конъюгат антитела имеет гидродинамический радиус от около 10 нм до около 60 нм.
12. Конъюгат антитела по п. 11, отличающийся тем, что конъюгат антитела имеет гидродинамический радиус от около 25 нм до около 35 нм.
13. Конъюгат антитела по п. 12, отличающийся тем, что гидродинамический радиус составляет от около 20 нм до около 30 нм.
14. Конъюгат антитела по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что конъюгат антитела имеет период полувыведения из глаза, который увеличен по сравнению с эталонным антителом, которое не присоединено ковалентно к полимеру ГК.
15. Конъюгат антитела по п. 14, отличающийся тем, что период полувыведения из глаза увеличен по меньшей мере в около 2 раза по отношению к эталонному антителу.
16. Конъюгат антитела по п. 15, отличающийся тем, что период полувыведения из глаза увеличен по меньшей мере в около 4 раза по сравнению с эталонным антителом.
17. Конъюгат антитела по любому из пп. 14-16, отличающийся тем, что период полувыведения из глаза представляет собой период выведения из стекловидного тела.
18. Конъюгат антитела по любому из пп. 14-17, отличающийся тем, что эталонное антитело является идентичным антителу конъюгата антитела.
19. Конъюгат антитела по любому из пп. 1-18, отличающийся тем, что антитело специфически связывается с биологической молекулой, выбранной из группы, состоящей из фактора роста эндотелия сосудов (ФРЭС); ИЛ-1β; ИЛ-6; ИЛ-6R; ИЛ-13; ИЛ-13R; ТцФР (тромбоцитарного фактора роста); ангиопоэтина; ангиопоэтина-2; Tie2; S1P; интегринов αvβ3, αvβ5 и α5β1; бетацеллюлина; апелина/APJ; эритропоэтина; фактора D комплемента; ФНО-α; HTRA1; рецептора ФРЭС; ST-2-рецептора; и белка, генетически связанного с риском ВМД.
20. Конъюгат антитела по п. 19, отличающийся тем, что рецептор ФРЭС представляет собой ФРЭСР1, ФРЭСР2, ФРЭСР3, mbФРЭСР или sФРЭСР.
21. Конъюгат антитела по п.19, отличающийся тем, что белок, генетически связанный с риском ВМД, выбирают из группы, состоящей из компонентов пути комплемента C2, фактора B, фактора H, CFHR3, C3b, C5, C5a, и C3a; HtrA1; ARMS2; TIMP3; HLA; ИЛ-8; CX3CR1; TLR3; TLR4; CETP; LIPC, COL10A1; и TNFRSF10A.
22. Конъюгат антитела по п. 19, отличающийся тем, что антитело специфически связывается с ФРЭС.
23. Конъюгат антитела по п. 22, отличающийся тем, что антитело содержит следующие шесть гипервариабельных областей (HVR):
(a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность DYWIH (SEQ ID NO: 1);
1
2
3
4
5
6
7
8
1
2
3
4
5
6
7
8
(b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность GXTPXGGXXXYXDSVXX (SEQ ID NO: 2), где X представляет собой Ile или His, X представляет собой Ala или Arg, X представляет собой Tyr или Lys, X представляет собой Thr или Glu, X представляет собой Arg, Tyr, Gln, или Glu, X представляет собой Ala или Glu, X представляет собой Lys или Glu, и X представляет собой Gly или Glu;
(c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3);
1
1
(d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность RASQXVSTAVA (SEQ ID NO: 4), где X представляет собой Asp или Arg;
1
1
(e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность XASFLYS (SEQ ID NO: 5), где X представляет собой Ser или Met; и
1
2
1
2
(f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность XQGYGXPFT (SEQ ID NO: 6), где X представляет собой Gln, Asn или Thr, и X представляет собой Ala, Asn, Gln, или Arg.
24. Конъюгат антитела по п. 23, отличающийся тем, что антитело содержит следующие шесть HVR:
(a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность DYWIH (SEQ ID NO: 1);
(b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность GITPAGGYTRYADSVKG (SEQ ID NO: 7), GITPAGGYEYYADSVKG (SEQ ID NO: 21) или GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22);
(c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3);
(d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8);
(e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и
(f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10) или QQGYGNPFT (SEQ ID NO: 23).
25. Конъюгат антитела по п. 23 или 24, отличающийся тем, что антитело содержит следующие шесть HVR:
(a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность DYWIH (SEQ ID NO: 1);
(b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность GITPAGGYTRYADSVKG (SEQ ID NO: 7);
(c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3);
(d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8);
(e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и
(f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10).
26. Конъюгат антитела по любому из пп. 23-25, отличающийся тем, что антитело дополнительно содержит следующие каркасные области (FR) вариабельного домена тяжелой цепи (VH):
(a) FR-H1, содержащую аминокислотную последовательность EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTIS (SEQ ID NO: 13);
(b) FR-H2, содержащую аминокислотную последовательность WVRQAPGKGLEWVA (SEQ ID NO: 14);
(c) FR-H3, содержащую аминокислотную последовательность RFTISADTSKNTAYLQMRSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 15); и
(d) FR-H4, содержащую аминокислотную последовательность WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 16).
27. Конъюгат антитела по любому из пп. 23-26, отличающийся тем, что антитело дополнительно содержит следующие FR вариабельного домена легкой цепи (VL):
(a) FR-L1, содержащую аминокислотную последовательность DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17);
(b) FR-L2, содержащую аминокислотную последовательность WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18);
(c) FR-L3, содержащую аминокислотную последовательность GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19); и
(d) FR-L4, содержащую аминокислотную последовательность FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20).
28. Конъюгат антитела по п. 23 или 24, отличающийся тем, что антитело содержит следующие шесть HVR:
(a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность DYWIH (SEQ ID NO: 1);
(b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22);
(c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3);
(d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8);
(e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и
(f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность QQGYGNPFT (SEQ ID NO: 23).
29. Конъюгат антитела по п. 28, отличающийся тем, что антитело дополнительно содержит следующие FR домена VL:
(a) FR-L1, содержащую аминокислотную последовательность DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17);
(b) FR-L2, содержащую аминокислотную последовательность WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18);
(c) FR-L3, содержащую аминокислотную последовательность GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 24); и
(d) FR-L4, содержащую аминокислотную последовательность FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20).
30. Конъюгат антитела по п. 23 или 24, отличающийся тем, что антитело содержит следующие шесть HVR:
(a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность DYWIH (SEQ ID NO: 1);
(b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22);
(c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3);
(d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8);
(e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и
(f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10).
31. Конъюгат антитела по п. 30, отличающийся тем, что антитело дополнительно содержит следующие FR домена VL:
(a) FR-L1, содержащую аминокислотную последовательность DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17), DIQMTQSPESLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 25), или DIQMTQSPSSLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 26);
(b) FR-L2, содержащую аминокислотную последовательность WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18) или WYQQKPGEAPKLLIY (SEQ ID NO: 27);
(c) FR-L3, содержащую аминокислотную последовательность GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19) или GVPSRFSGSGSGTDFTLTIESLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 28); и
(d) FR-L4, содержащую аминокислотную последовательность FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20).
32. Конъюгат антитела по любому из пп. 28-31, отличающийся тем, что антитело дополнительно содержит следующие FR домена VH:
(a) FR-H1, содержащую аминокислотную последовательность EEQLVEEGGGLVQPGESLELSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 29) или EEQLVEEGGGLVQPGESLRLSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 52);
(b) FR-H2, содержащую аминокислотную последовательность WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30);
(c) FR-H3, содержащую аминокислотную последовательность RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и
(d) FR-H4, содержащую аминокислотную последовательность WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32).
33. Конъюгат антитела по п. 22, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95 % идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 11, 40 или 42; (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95 % идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 12, 41, или 46; или (c) домен VH как в (a) и домен VL как в (b).
34. Конъюгат антитела по п. 33, отличающийся тем, что домен VH дополнительно содержит следующие FR:
(a) FR-H1, содержащую аминокислотную последовательность EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTIS (SEQ ID NO: 13);
(b) FR-H2, содержащую аминокислотную последовательность WVRQAPGKGLEWVA (SEQ ID NO: 14) или WVRQEPGKGLEWVA (SEQ ID NO: 39);
(c) FR-H3, содержащую аминокислотную последовательность RFTISADTSKNTAYLQMRSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 15); и
(d) FR-H4, содержащую аминокислотную последовательность WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 16).
35. Конъюгат антитела по п. 34, отличающийся тем, что домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.
36. Конъюгат антитела по любому из пп. 33-35, отличающийся тем, что домен VL дополнительно содержит следующие FR:
(a) FR-L1, содержащую аминокислотную последовательность DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17) или DIQMTQSPSSLSASVGDRVTIDC (SEQ ID NO: 45);
(b) FR-L2, содержащую аминокислотную последовательность WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18);
(c) FR-L3, содержащую аминокислотную последовательность GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19) GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDSATYYC (SEQ ID NO: 44), или GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYC (SEQ ID NO: 54); и
(d) FR-L4, содержащую аминокислотную последовательность FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20) или FGQGTKVEVK (SEQ ID NO: 55).
37. Конъюгат антитела по п. 36, отличающийся тем, что домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
38. Конъюгат антитела по п. 33, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
39. Конъюгат антитела по п. 33, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
40. Конъюгат антитела по п. 33, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
41. Конъюгат антитела по п. 33, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41.
42. Конъюгат антитела по п. 22, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95 % идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 33 или 51; (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95 % идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 12, 34, 35, 36, 37, или 38; или (c) домен VH как в (a) и домен VL как в (b).
43. Конъюгат антитела по п. 42, отличающийся тем, что антитело дополнительно содержит следующие FR:
(a) FR-H1, содержащую аминокислотную последовательность EEQLVEEGGGLVQPGESLELSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 29) или EEQLVEEGGGLVQPGESLRLSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 52);
(b) FR-H2, содержащую аминокислотную последовательность WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30);
(c) FR-H3, содержащую аминокислотную последовательность RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и
(d) FR-H4, содержащую аминокислотную последовательность WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32).
44. Конъюгат антитела по п. 43, отличающийся тем, что домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33.
45. Конъюгат антитела по п. 43, отличающийся тем, что домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51.
46. Конъюгат антитела по любому из пп. 42-45, отличающийся тем, что антитело дополнительно содержит следующие FR:
(a) FR-L1, содержащую аминокислотную последовательность DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17), DIQMTQSPESLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 25), или DIQMTQSPSSLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 26);
(b) FR-L2, содержащую аминокислотную последовательность WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18) или WYQQKPGEAPKLLIY (SEQ ID NO: 27);
(c) FR-L3, содержащую аминокислотную последовательность GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19), GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 24), или GVPSRFSGSGSGTDFTLTIESLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 28); и
(d) FR-L4, содержащую аминокислотную последовательность FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20).
47. Конъюгат антитела по п. 46, отличающийся тем, что домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34.
48. Конъюгат антитела по п. 46, отличающийся тем, что домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
49. Конъюгат антитела по п. 46, отличающийся тем, что домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36.
50. Конъюгат антитела по п. 46, отличающийся тем, что домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37.
51. Конъюгат антитела по п. 46, отличающийся тем, что домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
52. Конъюгат антитела по п. 46, отличающийся тем, что домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38.
53. Конъюгат антитела по п. 42, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38.
54. Конъюгат антитела по п. 42, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34.
55. Конъюгат антитела по п. 42, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
56. Конъюгат антитела по п. 42, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36.
57. Конъюгат антитела по п. 42, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37.
58. Конъюгат антитела по п. 42, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
59. Конъюгат антитела по п. 42, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38.
60. Конъюгат антитела по п. 42, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
61. Конъюгат антитела по п. 42, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37.
62. Конъюгат антитела по п. 42, отличающийся тем, что антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
63. Конъюгат антитела по п. 42, отличающийся тем, что антитело содержит (а) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, и (b) легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50.
64. Конъюгат антитела по п. 42, отличающийся тем, что антитело содержит (а) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49, и (b) легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50.
65. Конъюгат антитела по любому из пп. 22-64, отличающийся тем, что антитело способно ингибировать связывание ФРЭС с рецептором ФРЭС.
66. Конъюгат антитела по п. 65, отличающийся тем, что рецептор ФРЭС представляет собой рецептор ФРЭС 1 (Flt-1).
67. Конъюгат антитела по п. 65, отличающийся тем, что рецептор ФРЭС представляет собой рецептор ФРЭС 2 (KDR).
68. Конъюгат антитела по любому из пп. 22-67, отличающийся тем, что антитело связывается с человеческим ФРЭС (hФРЭС) с Kd около 2 нМ или ниже.
69. Конъюгат антитела по п. 68, отличающийся тем, что антитело связывает hФРЭС с Kd от около 75 пМ до около 2 нМ.
70. Конъюгат антитела по п. 69, отличающийся тем, что антитело связывает hФРЭС с Kd от около 75 пМ до около 600 пМ.
71. Конъюгат антитела по п. 70, отличающийся тем, что антитело связывает hФРЭС с Kd от около 75 пМ до около 500 пМ.
72. Конъюгат антитела по п. 71, отличающийся тем, что антитело связывает hФРЭС с Kd около 60 пМ.
73. Конъюгат антитела по любому из пп. 23-27, 33-41 и 63-72, отличающийся тем, что антитело имеет температуру плавления (Tm) более чем около 83,5°С.
74. Конъюгат антитела по п. 73, отличающийся тем, что указанное антитело имеет Tm от около 85°С до около 91°С.
75. Конъюгат антитела по п. 74, отличающийся тем, что указанное антитело имеет Tm около 89°С.
76. Конъюгат антитела по любому из пп. 23, 24, 28-32, 42-62, отличающийся тем, что антитело имеет изоэлектрическую точку (pI) ниже чем 8.
77. Конъюгат антитела по п. 76, отличающийся тем, что антитело имеет pI от около 5 до около 7.
78. Конъюгат антитела по п. 77, отличающийся тем, что антитело имеет pI от около 5 до около 6.
79. Конъюгат антитела по любому из пп. 1-78, отличающийся тем, что антитело является моноклональным, человеческим, гуманизированным или химерным.
80. Конъюгат антитела по любому из пп 1-79, отличающийся тем, что антитело представляет собой антигенсвязывающий фрагмент антитела.
2
81. Конъюгат антитела по п. 80, отличающийся тем, что фрагмент антитела выбирают из группы, состоящей из фрагментов Fab, Fab-C, Fab'-SH, Fv, scFv, и (Fab').
82. Конъюгат антитела по п. 81, отличающийся тем, что фрагмент антитела представляет собой Fab.
83. Конъюгат антитела по любому из пп 1-82, отличающийся тем, что антитело представляет собой моноспецифическое антитело.
84. Конъюгат антитела по любому из пп 1-82, отличающийся тем, что антитело представляет собой мультиспецифическое антитело.
85. Конъюгат антитела по п. 84, отличающийся тем, что мультиспецифическое антитело представляет собой биспецифическое антитело.
86. Конъюгат антитела по п. 85, отличающийся тем, что биспецифическое антитело связывает ФРЭС и вторую биологическую молекулу, выбранную из группы, состоящей из ИЛ-1β; интерлейкина-6 (ИЛ-6); рецептора интерлейкина-6 (ИЛ-6R); интерлейкина-13 (ИЛ-13); рецептора ИЛ-13 (ИЛ-13R); ТцФР; ангиопоэтина; ангиопоэтина-2; Tie2; S1P; интегринов αvβ3, αvβ5, и α5β1; бетацеллюлина; апелина/APJ; эритропоэтина; фактора D комплемента; ФНО-α HtrA1; рецептора ФРЭС; ST-2-рецептора; и белка, генетически связанного с риском возрастной макулярной дистрофии (ВМД).
87. Конъюгат антитела по п. 86, отличающийся тем, что рецептор ФРЭС представляет собой ФРЭСР1, ФРЭСР2, ФРЭСР3, мембраносвязанный рецептор ФРЭС (mbФРЭСР), или растворимый рецептор ФРЭС (sФРЭСР).
88. Конъюгат антитела по п. 86, отличающийся тем, что белок, генетически связанный с риском ВМД, выбирают из группы, состоящей из компонентов пути комплемента C2, фактора B, фактора H, CFHR3, C3b, C5, C5a, и C3a; HtrA1; ARMS2; TIMP3; HLA; интерлейкина-8 (ИЛ-8); CX3CR1; TLR3; TLR4; CETP; LIPC, COL10A1; и TNFRSF10A.
89. Конъюгат антитела по любому из пп. 1-88, отличающийся тем, что антитело представляет собой антитело, сконструированное введением цистеина (cysteine engineered).
90. Конъюгат антитела по п. 89, отличающийся тем, что антитело, сконструированное введением цистеина, содержит цистеиновую мутацию в тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из HC-A118C, HC-A140C, и HC-L174C (нумерация EU), или цистеиновую мутацию в легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из LC-K149C и LC-V205C (нумерация по Кабату).
91. Конъюгат антитела по п. 90, отличающийся тем, что цистеиновая мутация в тяжелой цепи представляет собой HC-A118C (нумерация EU).
92. Конъюгат антитела по п. 90, отличающийся тем, что цистеиновая мутация в тяжелой цепи представляет собой HC-A140C (нумерация EU).
93. Конъюгат антитела по п. 90, отличающийся тем, что цистеиновая мутация в тяжелой цепи представляет собой HC-L174C (нумерация EU).
94. Конъюгат антитела по п. 90, отличающийся тем, что цистеиновая мутация в легкой цепи представляет собой LC-K149C (нумерация по Кабату).
95. Конъюгат антитела по п. 90, отличающийся тем, что цистеиновая мутация в легкой цепи представляет собой LC-V205C (нумерация по Кабату).
96. Конъюгат антитела по любому из пп. 90-95, отличающийся тем, что полимер ГК ковалентно присоединен к антителу в месте цистеиновой мутации.
97. Конъюгат антитела, содержащий (i) антитело, которое специфически связывается с VEGF, и (ii) полимер ГК, ковалентно присоединенный к антителу, где полимер ГК имеет PDI 1,05, и где антитело содержит (а) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11 и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
98. Конъюгат антитела, содержащий (i) антитело, которое специфически связывается с VEGF, и (ii) полимер ГК, ковалентно присоединенный к антителу, где полимер ГК имеет PDI 1,05, и где антитело содержит (а) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48 или SEQ ID NO: 49 и (b) легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50.
99. Конъюгат антитела по любому из пп. 1-98 для применения в качестве лекарственного средства.
100. Конъюгат антитела по любому из пп. 1-98 для применения в изготовлении лекарственного средства для лечения заболевания глаз у субъекта.
101. Конъюгат антитела по любому из пп. 1-98 для применения в снижении или ингибировании ангиогенеза у субъекта, имеющего заболевание глаз.
102. Конъюгат антитела по любому из пп. 1-98 для применения в лечении заболевания глаз у субъекта.
103. Конъюгат антитела для применения по любому из пп. 100-102, отличающийся тем, что заболевание глаз выбирают из группы, состоящей из возрастной макулярной дегенерации (ВМД), макулодистрофии, макулярного отека, диабетического макулярного отека (ДМО) (в том числе фокального ДМО вне центральной зоны и диффузного ДМО с вовлечением центральной зоны сетчатки), ретинопатии, диабетической ретинопатии (ДР) (в том числе пролиферативной ДР (ПДР), непролиферативной ДР (НПДР), и высокогорной ДР), других связанных с ишемией ретинопатий, ретинопатии недоношенных (РН), окклюзии вен сетчатки (ОВС) (в том числе формы окклюзии центральной вены сетчатки (ОЦВС) и ветви центральной вены сетчатки (ОВВС)), ХНВ (в том числе миопической ХНВ), неоваскуляризации роговицы, болезни, связанной с неоваскуляризацией роговицы, неоваскуляризации сетчатки, болезни, связанной с неоваскуляризацией сетчатки/хориоидальной неоваскуляризацией, патологической миопией, болезни Гиппеля - Линдау, гистоплазмоза глаз, семейной экссудативной витреоретинопатии (СЭВРП), болезни Коутса, болезни Норри, синдрома остеопороза-псевдоглиомы (OPPG), субконъюнктивального кровоизлияния, рубеоза, неоваскулярных заболеваний глаз, неоваскулярной глаукомы, пигментного ретинита (ПР), гипертонической ретинопатии, ретинальной ангиоматозной пролиферации, макулярной телеангиэктазии, неоваскуляризации радужки, внутриглазной неоваскуляризации, дегенерации сетчатки, кистозного макулярного отека (КМО), васкулита, отека диска зрительного нерва, ретинита, конъюнктивита (в том числе инфекционного и неинфекционного (например, аллергического) конъюнктивита), врожденного амавроза Лебера, увеита (в том числе инфекционного и неинфекционного увеита), хориоидита, гистоплазмоза глаз, блефарита, синдрома сухого глаза, травматического повреждения глаза, и синдрома Шегрена.
104. Конъюгат антитела для применения по п.103, отличающийся тем, что заболевание глаз представляет собой ВМД, ДМО, ДР или ОВС.
105. Конъюгат антитела для применения по п.103 или 104, отличающийся тем, что заболевание глаз представляет собой ВМД.
106. Конъюгат антитела для применения по любому из пп. 103-105, отличающийся тем, что ВМД представляет собой влажную ВМД.
107. Конъюгат антитела для применения по п. 103 или 104, отличающийся тем, что заболевание глаз представляет собой ДМО.
108. Фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат антитела по любому из пп. 1-98, и фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель, или разбавитель.
109. Фармацевтическая композиция по п. 108, дополнительно содержащая второй агент, причем второй агент выбирают из группы, состоящей из антитела, антиангиогенного агента, цитокина, антагониста цитокина, кортикостероида, анальгетика, и соединения, которое связывается со второй биологической молекулой.
110. Фармацевтическая композиция по п. 109, отличающийся тем, что антиангиогенный агент представляет собой антагонист ФРЭС.
111. Фармацевтическая композиция по п.110, отличающаяся тем, антагонист ФРЭС представляет собой анти-ФРЭС антитело, антитело против рецептора ФРЭС, слитый белок растворимого рецептора ФРЭС, аптамер, анти-ФРЭС DARPin, или ингибитор тирозинкиназы ФРЭСР (рецептор ФРЭС).
112. Фармацевтическая композиция по п. 111, отличающаяся тем, что анти-ФРЭС антитело представляет собой ранибизумаб (LUCENTIS), RTH-258, или биспецифическое анти-ФРЭС антитело.
113. Фармацевтическая композиция по п. 112, отличающаяся тем, что биспецифическое анти-ФРЭС антитело представляет собой анти-ФРЭС/анти-Ang2 антитело.
114. Фармацевтическая композиция по п. 113, отличающаяся тем, что анти-ФРЭС/анти-Ang2 антитело представляет собой RG-7716.
115. Фармацевтическая композиция по п. 111, отличающаяся тем, что слитый белок растворимого рецептора ФРЭС представляет собой афлиберцепт (EYLEA).
116. Фармацевтическая композиция по п. 111, отличающаяся тем, что аптамер представляет собой пегаптаниб (MACUGEN).
117. Фармацевтическая композиция по п. 111, отличающаяся тем, что анти-ФРЭС DARPin представляет собой абиципар пегол.
118. Фармацевтическая композиция по п. 111, отличающаяся тем, что ингибитор тирозинкиназы ФРЭСР выбирают из группы, состоящей из 4-(4-бромо-2-фторанилино)-6-метокси-7-(1-метилпиперидин-4-илметокси)хиназолина (ZD6474), 4-(4-фтор-2-метилиндол-5-илокси)-6-метокси-7-(3-пирролидин-1-илпропокси)хиназолина (AZD2171), ваталаниба (PTK787), семаксаминиба (SU5416), и SUTENT (сунитиниба).
119. Фармацевтическая композиция по п.109, отличающаяся тем, что вторую биологическую молекулу выбирают из группы, состоящей из ИЛ-1β; ИЛ-6; ИЛ-6R; ИЛ-13; ИЛ-13R; ТцФР; ангиопоэтина; ангиопоэтина-2; Tie2; S1P; интегринов αvβ3, αvβ5 и α5β1; бетацеллюлина; апелина/APJ; эритропоэтина; фактора D комплемента; ФНО-α; HTRA1; рецептора ФРЭС; ST-2-рецептора; и белка, генетически связанного с риском ВМД.
120. Фармацевтическая композиция по п. 119, отличающаяся тем, что рецептор ФРЭС представляет собой ФРЭСР1, ФРЭСР2, ФРЭСР3, mbФРЭСР или sФРЭСР.
121. Фармацевтическая композиция по п. 119, отличающаяся тем, что белок, генетически связанный с риском ВМД, выбирают из группы, состоящей из компонентов пути комплемента C2, фактора B, фактора H, CFHR3, C3b, C5, C5a, и C3a; HtrA1; ARMS2; TIMP3; HLA; ИЛ-8; CX3CR1; TLR3; TLR4; CETP; LIPC, COL10A1; и TNFRSF10A.
122. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 109 и 119-121, отличающаяся тем, что соединение, которое связывает вторую биологическую молекулу, представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
2
123. Фармацевтическая композиция по п. 122, отличающаяся тем, что антигенсвязывающий фрагмент антитела выбирают из группы, состоящей из фрагментов Fab, Fab-C, Fab'-SH, Fv, scFv, и (Fab').
124. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 108-123 для применения в качестве лекарственного средства.
125. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 108-123 для применения в изготовлении лекарственного средства для лечения заболевания глаз у субъекта.
126. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 108-123 для применения в снижении или ингибировании ангиогенеза у субъекта, имеющего заболевание глаз.
127. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 108-123 для применения в лечении заболевания глаз у субъекта.
128. Фармацевтическая композиция для применения по любому из пп. 125-127, отличающаяся тем, что заболевание глаз выбирают из группы, состоящей из возрастной макулярной дегенерации (ВМД), макулодистрофии, макулярного отека, диабетического макулярного отека (ДМО) (в том числе фокального ДМО вне центральной зоны и диффузного ДМО с вовлечением центральной зоны сетчатки), ретинопатии, диабетической ретинопатии (ДР) (в том числе пролиферативной ДР (ПДР), непролиферативной ДР (НПДР), и высокогорной ДР), других связанных с ишемией ретинопатий, ретинопатии недоношенных (РН), окклюзии вен сетчатки (ОВС) (в том числе формы окклюзии центральной вены сетчатки (ОЦВС) и ветви центральной вены сетчатки (ОВВС)), ХНВ (в том числе миопической ХНВ), неоваскуляризации роговицы, болезни, связанной с неоваскуляризацией роговицы, неоваскуляризации сетчатки, болезни, связанной с неоваскуляризацией сетчатки/хориоидальной неоваскуляризацией, патологической миопией, болезни Гиппеля - Линдау, гистоплазмоза глаз, семейной экссудативной витреоретинопатии (СЭВРП), болезни Коутса, болезни Норри, синдрома остеопороза-псевдоглиомы (OPPG), субконъюнктивального кровоизлияния, рубеоза, неоваскулярных заболеваний глаз, неоваскулярной глаукомы, пигментного ретинита (ПР), гипертонической ретинопатии, ретинальной ангиоматозной пролиферации, макулярной телеангиэктазии, неоваскуляризации радужки, внутриглазной неоваскуляризации, дегенерации сетчатки, кистозного макулярного отека (КМО), васкулита, отека диска зрительного нерва, ретинита, конъюнктивита (в том числе инфекционного и неинфекционного (например, аллергического) конъюнктивита), врожденного амавроза Лебера, увеита (в том числе инфекционного и неинфекционного увеита), хориоидита, гистоплазмоза глаз, блефарита, синдрома сухого глаза, травматического повреждения глаза, и синдрома Шегрена.
129. Фармацевтическая композиция для применения по п. 128, отличающаяся тем, что заболевание глаз представляет собой ВМД, ДМО, ДР или ОВС.
130. Фармацевтическая композиция для применения по п. 128 или 129, отличающаяся тем, что заболевание глаз представляет собой ВМД.
131. Фармацевтическая композиция для применения по любому из пп. 128-130, отличающаяся тем, что ВМД представляет собой влажную ВМД.
132. Фармацевтическая композиция для применения по п. 128 или 129, отличающаяся тем, что заболевание глаз представляет собой ДМО.
133. Способ снижения или ингибирования ангиогенеза у субъекта, имеющего заболевание глаз, включающий введение субъекту эффективного количества конъюгата антитела по любому из пп. 1-98 или фармацевтической композиции по любому из пп. 108-123, тем самым снижая или ингибируя ангиогенез у субъекта.
134. Способ лечения заболевания глаз, включающий введение эффективного количества конъюгата антитела по любому из пп. 1-98 или фармацевтической композиции по любому из пп. 108-123субъекту, нуждающемуся в таком лечении.
135. Способ по п. 133 или 134, отличающийся тем, что заболевание глаз выбирают из группы, состоящей из возрастной макулярной дегенерации (ВМД), макулодистрофии, макулярного отека, диабетического макулярного отека (ДМО) (в том числе фокального ДМО вне центральной зоны и диффузного ДМО с вовлечением центральной зоны сетчатки), ретинопатии, диабетической ретинопатии (ДР) (в том числе пролиферативной ДР (ПДР), непролиферативной ДР (НПДР), и высокогорной ДР), других связанных с ишемией ретинопатий, ретинопатии недоношенных (РН), окклюзии вен сетчатки (ОВС) (в том числе формы окклюзии центральной вены сетчатки (ОЦВС) и ветви центральной вены сетчатки (ОВВС)), ХНВ (в том числе миопической ХНВ), неоваскуляризации роговицы, болезни, связанной с неоваскуляризацией роговицы, неоваскуляризации сетчатки, болезни, связанной с неоваскуляризацией сетчатки/хориоидальной неоваскуляризацией, патологической миопией, болезни Гиппеля - Линдау, гистоплазмоза глаз, семейной экссудативной витреоретинопатии (СЭВРП), болезни Коутса, болезни Норри, синдрома остеопороза-псевдоглиомы (OPPG), субконъюнктивального кровоизлияния, рубеоза, неоваскулярных заболеваний глаз, неоваскулярной глаукомы, пигментного ретинита (ПР), гипертонической ретинопатии, ретинальной ангиоматозной пролиферации, макулярной телеангиэктазии, неоваскуляризации радужки, внутриглазной неоваскуляризации, дегенерации сетчатки, кистозного макулярного отека (КМО), васкулита, отека диска зрительного нерва, ретинита, конъюнктивита (в том числе инфекционного и неинфекционного (например, аллергического) конъюнктивита), врожденного амавроза Лебера, увеита (в том числе инфекционного и неинфекционного увеита), хориоидита, гистоплазмоза глаз, блефарита, синдрома сухого глаза, травматического повреждения глаза, и синдрома Шегрена.
136. Способ по п. 135, отличающийся тем, что заболевание глаз представляет собой ВМД, ДМО, ДР или ОВС.
137. Способ по п. 135 или 136, отличающийся тем, что заболевание глаз представляет собой ВМД.
138. Способ по любому из пп. 135-137, отличающийся тем, что ВМД представляет собой влажную ВМД.
139. Способ по п. 135 или 136, отличающийся тем, что заболевание глаз представляет собой ДМО.
140. Способ по любому из пп. 133-139, дополнительно включающий введение субъекту эффективного количества второго агента, причем второй агент выбирают из группы, состоящей из антитела, антиангиогенного агента, цитокина, антагониста цитокина, кортикостероида, анальгетика, и соединения, которое связывается со второй биологической молекулой.
141. Способ по п. 140, отличающийся тем, что антиангиогенный агент представляет собой антагонист ФРЭС.
142. Способ по п. 141, отличающийся тем, антагонист ФРЭС представляет собой анти-ФРЭС антитело, антитело против рецептора ФРЭС, слитый белок растворимого рецептора ФРЭС, аптамер, анти-ФРЭС DARPin, или ингибитор тирозинкиназы ФРЭСР (рецептор ФРЭС).
143. Способ по п. 142, отличающийся тем, что анти-ФРЭС антитело представляет собой ранибизумаб (LUCENTIS), RTH-258, или биспецифическое анти-ФРЭС антитело.
144. Способ по п. 143, отличающийся тем, что биспецифическое анти-ФРЭС антитело представляет собой анти-ФРЭС/анти-Ang2 антитело.
145. Способ по п. 144, отличающийся тем, что анти-ФРЭС/анти-Ang2 антитело представляет собой RG-7716.
146. Способ по п. 142, отличающийся тем, что слитый белок растворимого рецептора ФРЭС представляет собой афлиберцепт (EYLEA).
147. Способ по п. 142, отличающийся тем, что аптамер представляет собой пегаптаниб (MACUGEN).
148. Способ по п.142, отличающийся тем, что анти-ФРЭС DARPin представляет собой абиципар пегол.
149. Способ по п.142, отличающийся тем, что ингибитор тирозинкиназы ФРЭСР выбирают из группы, состоящей из 4-(4-бромо-2-фторанилино)-6-метокси-7-(1-метилпиперидин-4-илметокси)хиназолина (ZD6474), 4-(4-фтор-2-метилиндол-5-илокси)-6-метокси-7-(3-пирролидин-1-илпропокси)хиназолина (AZD2171), ваталаниба (PTK787), семаксаминиба (SU5416), и SUTENT (сунитиниба).
150. Способ по п.140, отличающийся тем, что вторую биологическую молекулу выбирают из группы, состоящей из ИЛ-1β; ИЛ-6; ИЛ-6R; ИЛ-13; ИЛ-13R; ТцФР; ангиопоэтина; ангиопоэтина-2; Tie2; S1P; интегринов αvβ3, αvβ5 и α5β; бетацеллюлина; апелина/APJ; эритропоэтина; фактора D комплемента; ФНО-α; HTRA1; рецептора ФРЭС; ST-2-рецептора; и белка, генетически связанного с риском ВМД.
151. Способ по п. 150, отличающийся тем, что рецептор ФРЭС представляет собой ФРЭСР1, ФРЭСР2, ФРЭСР3, mbФРЭСР или sФРЭСР.
152. Способ по п. 151, отличающийся тем, что белок, генетически связанный с риском ВМД, выбирают из группы, состоящей из компонентов пути комплемента C2, фактора B, фактора H, CFHR3, C3b, C5, C5a, и C3a; HtrA1; ARMS2; TIMP3; HLA; ИЛ-8; CX3CR1; TLR3; TLR4; CETP; LIPC, COL10A1; и TNFRSF10A.
153. Способ по любому из пп. 140 и 150-152, отличающийся тем, что полипептид представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
2
154. Способ по п. 153, отличающийся тем, что антигенсвязывающий фрагмент антитела выбирают из группы, состоящей из фрагментов Fab, Fab-C, Fab'-SH, Fv, scFv, и (Fab').
155. Способ по любому из пп. 133-154, отличающийся тем, что конъюгат антитела или фармацевтическую композицию вводят интравитреально, через глаз, интраокулярно, в околосклеральную область, в субтеноновое пространство, в супрахориоидальное пространство, местно, внутривенно, внутримышечного, интрадермально, чрескожно, внутриартериально, внутрибрюшинно, внутриочагово, интракраниально, внутрисуставно, внутрь простаты, внутриплеврально, интратрахеально, интратекально, интраназально, внутривагинально, ректально, местно, внутриопухолево, внутрибрюшинно,  перитонеально, интравентрикулярно, подкожно, субконъюнктивально, интравезикулярно, мукозально, интраперикардиально, внутрипуповинно, интраорбитально, перорально, трансдермально, путем ингаляции, путем инъекции, в виде глазных капель, путем имплантации, путем инфузии, путем длительной инфузии, путем локализованной перфузии непосредственно через клетки-мишени, при помощи катетера, при помощи лаважа, в кремах или в липидных композициях.
156. Способ по п. 155, отличающийся тем, что конъюгат антитела или фармацевтическую композицию вводят в стекловидное тело, через глаз, интраокулярно, в околосклеральную область, в субтеноновое пространство, в супрахориоидальное пространство, или местно.
157. Способ по п. 155 или 156, отличающийся тем, что конъюгат антитела или фармацевтическую композицию вводят путем инъекции в стекловидное тело.
158. Способ по п. 155 или 156, отличающийся тем, что конъюгат антитела или фармацевтическую композицию вводят местно в виде глазных капель или мази.
159.Способ по п. 155 или 156, отличающийся тем, что конъюгат антитела или фармацевтическую композицию вводят с помощью имплантируемого устройства доставки.
160. Способ по любому из пп. 133-159, отличающийся тем, что субъект представляет собой человека.