Противоопухолевая активность синтетического флавоноида in vitro

МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ

УДК 615.322 ББК 52.81

Н.А. АНДРЕЕВА, С.И. ПАВЛОВА

ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ СИНТЕТИЧЕСКОГО ФЛАВОНОИДА IN VITRO

Ключевые слова: флавоноды, халкон, опухолевая культура, противоопухолевое действие, апоптоз, цитотоксичность.

C точки зрения изыскания новых таргетных противоопухолевых препаратов в последние годы внимание исследователей привлекают полифенолы растительного происхождения (флавоноиды). Исследования последних лет доказывают, что фла-воноиды способны воздействовать на молекулярные механизмы регулирования он-когенных процессов. В связи с этим целью настоящего исследования стало изучение противоопухолевой активности синтетического халкона (СХ, флавоноида с раскрытым пирановым кольцом) 1-(2-гидроксифенил)-3-(4-метоксифенил)проп-2-ен-1-она в условиях in vitro с использованием культур опухолевых клеток человека MOLT-4 и HeLa. Влияние СХ на жизнеспособность опухолевых клеток оценивали в MTT-тесте, а также путем подсчета абсолютного количества клеток при экспозиции с изучаемым агентом, проапоптогенный эффект - методом проточной ци-тофлуорометрии. Было обнаружено, что СХ время- и дозозависимо ингибирует рост и индуцирует апоптоз опухолевых клеток в исследуемых культурах. Анализ полученных данных позволяет предположить, что проапоптогенное действие связано с остановкой клеточного цикла в G2/M фазе под влиянием СХ. Таким образом, являются перспективными дальнейшие исследования противоопухолевых свойств 1-(2-гидроксифенил)-3-(4-метоксифенил)проп-2-ен-1-он с целью разработки нового противоопухолевого средства.

N. ANDREEVA, S. PAVLOVA ANTY-CANCER ACTIVITY OF SYNTETIC FLAVONOID IN VITRO

Key words: flavonoids, chalcone, tumor cell culture, antitumor action, apoptosis, cytotoxicity.

In terms of the research and development of new targeted anticancer drugs in recent years plant polyphenols (flavonoids) have attracted much attention. Studies have recently shown that flavonoids can affect the molecular mechanisms of oncogenic processes. Therefore the aim of this paper was to study the antitumor activity of synthetic chalcone (SCh, flavonoid with open pyran ring) 1-(2-hydroxyphenyl)-3-(4-methoxyphenyl)prop-2-en-1-one in vitro using human tumor cell cultures such as MOLT-4 and HeLa. The impact of SCh to cell viability was tested by MTT test and by the evaluation of the absolute number of tumor cells during SCh exposition, proapoptogenic effect of SCh was tested by flow cytometry. It was found that the SCh time- and dose-dependent inhibits tumor cell grew and induces apoptosis in the test culture cells. Analysis of the data suggests that apoptogenic action of SCh is related to cell cycle arrest in G2 / M phase. Thus, further study of anticancer properties of 1-(2-hydroxyphenyl)-3-(4-methoxyphenyl) prop-2-en-1-one seems to be promising in terms of developing a new antitumor agent.

Несмотря на значительные достижения медицинских наук, смертность от онкологических заболеваний во всем мире остается на высоком уровне и, соответственно, актуальность разработки новых противоопухолевых лекарственных препаратов на сегодняшний день не вызывает сомнений. Детальное изучение молекулярных механизмов, возникновения злокачественных новообразований изменило стратегию поиска противоопухолевых лекарственных средств. В настоящее время считаются перспективными биотерапевтические методы фармакотерапии, позволяющих селективно воздействовать на опухоль. Они включают как стимуляцию дифференцировки опухолевых клеток,

так и сдерживание бесконтрольного деления опухолевых клеток за счет индукции и поддержания на высоком уровне апоптоза; блокирование на разных уровнях передачи сигнала с рецепторов факторов роста внутрь клетки; инги-бирование ангиогенеза и др. [5, 6, 7, 11, 15-17].

С точки зрения такого подхода к лечению опухолевых заболеваний внимание современных исследователей привлекают препараты растительного происхождения, биологически активные вещества которых обеспечивают многогранные физиологические эффекты. Одними из таких веществ являются полифенолы растительного происхождения - флавоноды. Исследования последних лет показывают, что некоторые классы флавоноидов (халконы, изофлавоны) способны ингибировать фосфорилирование и, как следствие, активацию ключевых молекул сигнальных путей в клетках, что может лежать в основе противоопухолевого эффекта [1, 2].

Среди флавоноидов одним из перспективных классов для изучения являются флавоноиды с раскрытым пирановым кольцом - халконы, или 1,2-дифе-нил-2-пропен-1-оны. Это низкомолекулярные природные соединения, которые легко синтезировать и модифицировать в связи с их простой структурой. Халконы состоят из двух ароматических колец, соединенных трехуглеродной а,р-ненасыщенной карбонильной системой [9]. Биологический потенциал халконов обусловлен их взаимодействием с различными белками, участвующими в канцерогенезе [10]. Эти природные соединения проявляют противоопухолевую активность in vitro, действуя на множество различных мишеней в системе клеточной сигнализации (протеинкиназы, ROS, TNF-a, NFkB, VEGF, TRAIL и др.) [3, 14]. Таким образом халконы могут влиять как на пролиферацию и апоптоз, так и на ангиогенез и метастазирование опухолевых клеток.

Кроме того, есть вероятность, что флавоноиды и их производные будут обладать меньшей токсичностью и проявлять меньше побочных эффектов, чем аналогичные лекарственные средства, полученные из других источников [3, 5]. а,р-ненасыщенный карбонил в структуре халконов является сильным электрофилом и с большей вероятностью взаимодействует со слабыми нук-леофилами, чем с аминокислотами и гидроксильными группами (сильные нуклеофилы), и, следовательно, халконы обладают меньшей мутагенностью и канцерогенностью по сравнению с алкилирующими агентами, используемыми в химиотерапии рака [10].

При использовании комбинации флавоноидов с цитостатическими средствами, механизм действия которых совершенно иной, наблюдаются синергизм, снижение токсичности последних, а также повышение чувствительности опухолевой клетки к цитостатикам [1,2].

Цель исследования - изучение противоопухолевой активности синтетического халкона (СХ) 1-(2-гидроксифенил)-3-(4-метоксифенил)проп-2-ен-1-она в условиях in vitro.

Материалы и методы исследования. Объектам настоящего исследования являлись:

1) синтетический халкон - 1-(2-гидроксифенил)-3-(4-метоксифенил)проп-2-ен-1-он (рис. 1) синтезирован и предоставлен для исследований сотрудниками кафедры органической и фармацевтической химии химико-фармацевтического факультета ФГБОУ ВПО Чувашский государственный университет имени И.Н. Ульянова;

О

Рис. 1. Химическая структура 1-(2-гидроксифенил)-3-(4-метоксифенил)проп-2-ен-1-она

2) человеческие линии опухолевых клеток МОИ-4 и НвЬэ, полученные из банков глубокозамороженных опухолевых культур ФГБУ ФНКЦ Детской гематологии, онкологии и иммунологии имени Дмитрия Рогачева и ГУ НИИ вирусологии имени Д.И. Ивановского. Характеристика опухолевых клеток представлена в табл. 1.

Таблица 1

Характеристики опухолевых линий

Наименование Происхождение Клеточная морфология Характеристика роста, плоидность

MOLT-4 (ATCC: CRL-1582) лимфолейкоз человека Т-лимфобласт суспензионная,гипертриплоид-ная

HeLa (ATCC CCL-2™) рак шейки матки эпителиальные клетки прилипающая, диплоидная

В настоящей работе были использованы следующие подходы и методы исследования:

Культивирование опухолевых клеток. Опухолевые клетки растили в пластиковых флаконах для культур клеток (Corning Costar, США) с использованием питательной среды RPMI-1640 (ПанЭко, Россия) с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ПанЭко, Россия)), глутамина и антибиотиков (100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина) при температуре 37°C, 5% CO2, 100% влажности. Клетки засевали в культуральный флакон в концентрации 4*105/мл. При достижении плотности клеток 2*106 клеточную суспензию пассировали (1 раз в 2-3 дня). Все этапы работы проводились в ламинарном шкафу (Lamsystems, Россия) в потоке стерильного воздуха.

Подсчет абсолютного количества клеток. Для подсчета абсолютного количества клеток опухолевые клетки в логарифмической фазе роста засевали в культуральный 24-луночный планшет (Corning Costar, США) в концентрации 1,5^10 /мл. В опытные лунки добавляли СХ, в контрольные лунки - соответствующий объем растворителя (высокоочищенного этанола) так, чтобы концентрация этанола в лунках не превышала 1%. Через 24, 48 и 72 ч культивирования в контрольной и опытной лунках подсчитывали абсолютное количество клеток, используя камеру Горяева и световой микроскоп.

Оценка апоптоза методом проточной цитофлуорометрии. Для определения уровня апоптоза клеточной популяции использовали аликвоту, содержащую 10 клеток. Клетки двукратно отмывали холодным (4°С) фофатно-солевым буфером (ФСБ). Отмытые клетки ресуспензировали в 100 мкл ФСБ (4°С) и фик-

сировали 900 мкл 70% глубоко охлажденного этанола в течение не менее 30 мин при -20°С. Фиксированные в этаноле клетки осаждали центрифугированием (300 g, 5 мин) и ресуспензировали с помощью пипетки с отсеченным наконечником в 500 мкл ФСБ и 500 мкл фосфат-цитратного буфера (0,192 моль/л Na2HPO4, 0,004 моль/л лимонной кислоты, pH = 7,8). Затем пробы инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре. Далее повторно центрифугировали (300 g, 5 мин, 4°С) и ресуспензировали в 500 мкл «красящего» раствора, содержащего пропидий иодид (1 мг/мл РНКазы (Sigma, США) + 33 мкг/мл пропидий иодида + 0,2% раствор тритона X-100 (Sigma, США)). Пробы инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре в темноте. По окончании инкубирования образцы с клетками анализировали методом однолучевой проточной цитофлуори-метрии (Coulter EPICS, США) при длине волны 488 нм.

Изучение прямой цитотоксичности. Цитотоксичность СХ оценивалась с помощью МТТ-теста [12]. Прилипающие к подложке опухолевые клетки линии HeLa засевали в 96-луночный планшет (Corning Costar, США) в количестве 104 клеток/200 мкл в среде RPMI-1640, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки и культивировали при 37°C, 5% CO2, 100% влажности. Через 24 ч инкубации производилась замена среды на RPMI-1640 с низким (1%) содержанием сыворотки. После этого в опытные лунки добавляли СХ в различных концентрациях (0,1-20 мкг/мл), а в контрольные лунки - высокоочищенный этиловый спирт так, чтобы его концентрация в лунке не превышала 1%. Далее клетки культивировали в течение 24-48 ч. Для каждой концентрации эксперименты были выполнены в трех повторах. После инкубации с исследуемым соединением в каждую лунку было добавлено 20 мкл MTT (бромида 3-(4,5-диметилтиа-зол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия (Sigma, США)) в концентрации 5 мг/мл, и планшеты дополнительно инкубировали в течение 4 ч. Далее из лунок удаляли среду и добавляли по 100 мкл ДМСО для растворения образовавшихся кристаллов формазана. Жизнеспособность клеток оценивали по интенсивности окраски раствора формазана, измеряя его оптическую плотность при длине волны 492 нм с помощью планшетного фотометра (Immunochen 2100, США) за вычетом измеренного фонового поглощения.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета анализа данных программного комплекса «Microsoft Excel 2010». Вариабельность результатов подчинялась законам нормального распределения, что позволило отражать их в виде средней арифметической (М) и средней ошибки среднего значения (m). Для оценки достоверности различий использовали t-критерий Стьюдента, разницу считали достоверной при p < 0,05.

Результаты исследования и их обсуждение. В настоящей работе нами была исследована противоопухолевая активность синтетического халкона 1-(2-гидроксифенил)-3-(4-метоксифенил)проп-2-ен-1-он в культуре человеческих опухолевых клеток различного гистологического (гемобластозы, эпителиальные опухоли) происхождения линий MOLT-4 и HeLa.

Опухолевая культура MOLT-4 характеризуется суспензионным ростом, поэтому простым методом изучения рост-ингибирующей активности может являться изменение абсолютного количества опухолевых клеток под влиянием исследуемого вещества. При добавлении СХ в концентрации 20 мкг/мл и экспозиции опухолевых клеток с этим агентом в течение 24 ч наблюдалась лишь недостоверная тенденция к снижению количества опухолевых клеток в опытных лунках

по сравнению с контрольными, тогда как через 48 и 72 ч культивирования наблюдались достоверные различия. Так, через 48 ч культивирования в опытной лунке абсолютное число клеток было меньше в сравнении с контролем более чем в 3 раза, а через 72 ч — более чем в 5 раз (табл. 2).

Таблица 2

Влияние СХ на абсолютное количество клеток линии MOLT-4 in vitro

Время культивирования Контроль (M±m) х10а Опыт (M±m) х105

24 ч 2,0 ± 0,8 1,8±0,9

48 ч 3,0 ± 0,6 0,9±0,1*

72 ч 4,0 ± 0,5 0,7±0,2*

Примечание. * - р < 0,05.

На следующем этапе снижение жизнеспособности опухолевых клеток при воздействии СХ было подтверждено в МТТ-тесте, для проведения которого удобно использовать прилипающие к подложке клетки (нами была исследована линия опухолевых клеток ИеЬа). Полученные с помощью МТТ-теста данные свидетельствуют о том, что СХ вызывает достоверное дозо- и времязависимое снижение жизнеспособности клеток в концентрациях в диапазон концентраций 0,1-20 мкг/мл (рис. 2). При инкубировании опухолевых клеток с СХ достоверно подавлялась жизнеспособность клеток в концентрациях СХ 20 и 10 мкг/мл, при этом концентрации менее 1 мкг/мл не оказывали на клетки цитотоксического эффекта. При инкубировании с препаратом в течение 48 ч подавление жизнеспособности клеток СХ вызывал в концентрации вещества более 1 мкг/мл (табл. 3).

120 100 80 60 40 20

0 5 10 15 20 Концентрация СХ, мкг/мл

120 100 80 60 40 20 0

5 10 15 20 Концентрация СХ, мкг/мл

а б

Рис. 2. Влияние синтетического халкона на жизнеспособность опухолевых клеток при инкубировании: а - в течение 24 ч; б - в течение 48 ч

0

0

Таким образом, концентрация полумаксимального ингибирования (1С50) для СХ при 24 ч экспозиции приближалась к значению 10 мкг/мл, при инкубировании 48 ч - 5 мкг/мл, что свидетельствует о достаточно высокой рост-ингибирующей активности СХ в исследуемой опухолевой линии. Сопоставимый уровень цитотоксической активности флавоноидов получен на клеточной линии ИерС2 (1С50 = 7,5-46 мкг/мл) [4], тогда так в исследованиях противоопухолевой активности других полифенолов растительного происхождения на этой же опухолевой культуре 1С50 находилась в пределах 100125 мкг/мл [13].

Таблица 3

Доля жизнеспособных клеток опухолевой культуры ИеЬа при экспозиции с различными концентрациями синтетического халкона

Концентрация СХ, мкг/мл Жизнеспособность клеток, (M±m), %

24 ч 48 ч

20 27,0±2,3* 3,0±2,0*

10 56,3±3,3* 26,5±19,5*

1 107,1±7,9 87,5±3,5

0,1 113,6±3,3 96,0±1,0

Примечание. * - р < 0,05.

Имея размеры, близкие к некоторым биологически важным регуляторам, флавоноиды могут влиять на функционирование ферментов и компонентов клеточной сигнализации [5, 17]. Вариации в расположении гидроксильных групп в молекуле флавоноидов, вероятно, позволяют создавать такие конфигурации в распределении зарядов на поверхности молекулы, которые способствуют их специфическому взаимодействию с регуляторными сайтами белков [3]. Как показывают литературные данные, рост-ингибирующий эффект синтезированного халкона мог быть реализован различными механизмами, включая индукцию апоптоза [6, 7, 14, 16]. На этом основании мы перешли к следующему этапу исследований и окрашивали клетки пропидий иодидом (специфическим ДНК-флуорохромом) для оценки уровня апоптоза в исследуемой клеточной популяции цитометрическим методом.

При обработке данных проточной цитофлуориметрии в соответствии с выделенной областью исследуемых клеток (захватывала более 90% событий) выводили гистограммы флуоресценции (канал РЬ4). Оценку уровня апоптоза проводили, анализируя гистограммы распределения флуоресцирующих клеток. Типичные гистограммы состояли из трех пиков, которые по интенсивности флуоресценции ДНК распределялись следующим образом: пик (С) - субдиплоидные клетки, вошедшие в апоптоз; пик (О) - диплоидные клетки; пик (В) - тетра- и полиплоидные клетки (рис. 3).

Указанные пики соответствуют распределению клеток по плоидности. Покоящиеся клетки (00) и клетки в 01 фазе клеточного цикла содержат количество

ДНК, соответствующее диплоидному набору хромосом (на гистограмме: диплоидный 00/01 пик). В 02 фазе и во время митоза в клетках число хромосом удвоенное, что на гистограмме отражается в виде тетра-плоидного 02/М пика. В синтетическую (Б) фазу содержание ДНК промежуточное - колеблется от ди- до тетраплоидного. В апоптозирующих клетках уровень ДНК в результате межнуклеосомальной деградации снижается, и появляется субдиплоидный пик (С).

Инкубация клеток МОИ-4 с СХ приводила к изменению долевого распределения суб-, ди- и тетра-плоидных клеток в культуре по срав-

ДИПЛОИДНЫЙ

пик.

1 полиплоидные

пики вА

II 1

с ¡1ПОПТОЗ 1- ~~4 1

1

FL4 LOG

Рис. 3. Распределение пиков в типичной гистограмме флуоресценции

нению с контролем. При 24-часовой экспозиции клеток с исследуемым веществом наблюдалось увеличение доли тетраплоидных клеток, а количество диплоидных клеток уменьшалось, при этом наблюдалась лишь недостоверная тенденция к росту апоптоза (табл. 4). Это может свидетельствовать о нарушении вхождения клеток в фазу митоза - остановке клеточного цикла в С2/М фазе.

Таблица 4

Долевое распределение пиков флуоресценции при экспозиции с СХ в течение 24-72 ч при окраске фиксированных клеток пропидий иодидом

Пик Время, ч Контроль (М±т), % Опыт (М±т), %

С 24 22,8±0,9 28,8±4,2

48 23,9±1,6 60,0±9,9*

72 18,8±9,3 63,5±9,2*

й 24 51,6±11,6 37,1±4,5*

48 46,4±1,1 23,3±8,3*

72 54,0±4,6 24,8±1,6*

В 24 21,2±9,1 27,0±12,3

48 27,4±3,1 13,6±3,3*

72 28,6±8,1 19,9±8,9*

Примечание. * - р < 0,05.

Через 48 ч инкубации с СХ наблюдался достоверный рост доли апоптози-рующих клеток: в опытной группе по сравнению с аналогом в контрольной более чем в 2,5 раза, диплоидных клеток - менее чем в 2 раза, тетраплоидных - 1,8 раза (рис. 4, а, б); через 72 ч апоптоза в опытной лунке - более чем в 3 раза, диплоидных клеток - менее чем в 2 раза, тетраплоидных - 1,4 раза (табл. 4).

а б

Рис. 4. Гистограмма флуоресценции при определении уровня апоптоза в культуре клеток при экспозиции с синтетическим халконом в течение 48 ч: а - контроль; б - воздействие синтетическим халконом

Обобщая данные результаты, можно предположить, что достоверное снижение абсолютного количества клеток в опытных лунках является следствием остановки клеточного цикла опухолевых клеток в С2/М фазе под влиянием СХ, вызывающей последующую апоптотическую гибель этих клеток. Выявленная биологическая активность и механизмы рост-ингибирующих эффектов нового

соединения коррелирует с литературными данными. Так, природные полифе-нольные соединения проявляли цитотоксическую активность в отношении различных опухолевых линий, при этом цитотоксический эффект был связан с остановкой клеточного цикла в G2/M фазе [13] и индукцией апотоза [4, 13].

Таким образом, учитывая данные, полученные в рамках настоящего исследования и в ходе анализа литературы, можно рассматривать это вещество перспективным для доклинического испытания.

Выводы. 1. Синтетический халкон 1-(2-гидроксифенил)-3-(4-метоксифе-нил)проп-2-ен-1-он подавляет жизнеспособность опухолевых клеток MOLT-4 и HeLa in vitro.

2. Синтетических халкон 1-(2-гидроксифенил)-3-(4-метоксифенил)проп-2-ен-1-он индуцирует апоптоз в культуре опухолевых клеток MOLT-4 через 48-72 ч экспозиции.

Литература

1. Павлова С.И. Использование экстракта корня солодки для повышения эффективности терапии злокачественных новообразований: дис. ... канд. мед. наук. М., 2005. 120 с.

2. Павлова С.И. Иммуносупрессивные и противоопухолевые фармакодинамические эффекты флавоноидов корней солодки: автореф. дис. ... д-ра мед. наук. М., 2012. 48 с.

3. Тараховский Ю.С., Ким Ю.А., Абдрасилов Б.С., Музафаров Е.Н. Флавоноиды: биохимия, биофизика, медицина. Пущино: Synchrobook, 2013. 310 с.

4. Abu Bakar M.F., Ahmad N.E., Suleiman M., Rahmat A., Isha A. Garcinia dulcis Fruit Extract Induced Cytotoxicity and Apoptosis in HepG2 Liver Cancer Cell Line. Biomed Res Int., 2015, doi: 10.1155/2015/916902.

5. Bosch-Barrera J., Menendez J.A. Silibinin and STAT3: A natural way of targeting transcription factors for cancer therapy. Cancer Treat. Rev., 2015, vol. 41, no. 6, pp. 540-546.

6. Cheon S.Y., Chung K.S., Jeon E., Nugroho A, Park H.J., An H.J. Anti-inflammatory Activity of Saxi-fragin via Inhibition of NF-kB Involves Caspase-1 Activation. J. Nat. Prod, 2015, vol. 78, no. 7, pp. 15791585.

7. Gatouillat G., Magid A.A., Bertin E., El btaouri H., Morjani H., Lavaud C., Madoulet C. Medicar-pin and millepurpan, two flavonoids i solated from Medicago sativa, induce apoptosis and overcome multidrug resistance in leukemia P388 cells. Phytomedicine, 2015, vol. 22, no. 13, pp. 1186-1194.

8. Harrison M., Holen K., Liu G. Beyond taxanes: a review of novel agents that target mitotic tubulin and microtubules, kinases, and kinesins. Clin. Adv. Hematol. Oncol., 2009, no. 7, pp. 54-64.

9. Isa N.M., Abdelwahab S.I., Mohan S., Abdul A.B., Sukari M.A., Taha M.M., Syam S., Narrima P., Cheah S.Ch., Ahmad S., Mustafa M.R. In vitro anti-inflammatory, cytotoxic and antioxidant activities of boesenbergin A, a chalcone isolated from Boesenbergia rotunda (L.) (fingerroot). Braz. J Med. Biol. Res., 2012, vol. 45, no. 6, pp. 524-530.

10. Kommidi D.R., Pagadala R., Rana S., Singh P., Shintre S.A., Koorbanally N.A., Jonnala-gad-da S.B., Moodley B. Novel carbapenem chalcone derivatives: synthesis, cytotoxicity and molecular docking studies. Org. Biomol. Chem., 2015, vol. 13, no. 14, pp. 4344-4350.

11. Leao M., Soares J., Gomes S., Raimundo L., Ramos H., Bessa C., Queiroz G., Domingos S., Pinto M., Inga A., Cidade H., Saraiva L. Enhanced cytotoxicity of prenylated chalcone against tumour cells via disruption of the p53-MDM2 interaction. Life Sci., 2015, no. 142, pp. 60-65.

12. Mather J.P., Roberts P.E. Introduction to cell and tissue culture. Theory and technique. N.Y., Plenum Press, 1998, 241 p.

13. Olaru O.T., Venables L., VAN DE Venter M., Nitulescu G.M., Margina D., Spandidos D.A., Tsatsakis A.M. Anticancer potential of selected Fallopia Adans species. Oncol Lett., 2015, vol. 10, no. 3, pp. 1323-1332.

14. Singh G., Arora A, Mangat S.S. Rani S., Kaur H., Goyal K., Sehgal R., Maurya I.K., Tewa-ri R., Choquesillo-Lazarte D., Sahoo S., Kaur N. Design, synthesis and biological evaluation of chalconyl blended triazole allied organosilatranes as giardicidal and trichomonacidal agents. Eur. J. Med. Chem., 2016, no. 108, pp. 287-300.

15. Wang L.H., Li H.H., Li M., Wang S., Jiang X.R., Li Y., Ping G.F., Cao Q., Liu X., Fang W.H., Chen G.L., Yang J.Y., Wu C.F. SL4, a chalcone-based compound, induces apoptosis in human cancer cells by activation of the ROS/MAPK signalling pathway. Cell Prolif., 2015, vol. 48, no. 6, pp. 718-728.

16. Xia Y., Lian S., Khoi P.N., Yoon H.J., Han J.Y., Chay ^K.O., Kim K.K., Jung Y.D. Chrysin inhibits cell invasion by inhibition of Recepteur d'origine Nantais via suppressing early growth response-1 and NF-kB transcription factor activities in gastric cancer cells. Int. J. Oncol., 2015, vol. 46, no. 4, pp. 1835-1843.

17. Zhou B., Xing C. Diverse Molecular Targets for Chalcones with Varied Bioactivities. Med. Chem. (Los Angeles), 2015, vol. 5, no. 8, pp. 388-404.

References

1. Pavlova S.I. Ispol'zovanie ekstrakta kornya solodki dlya povysheniya effektivnosti terapii zloka-chesvtennykh novoobrazovanii: dis. ... kand. med. nauk [Use of licorice root extract to improve the efficiency of malignant tumor therapy. PhD Diss.]. Moscow, 2005, 120 p.

2. Pavlova S.I. Immunosupressivnye i protivoopukholevye farmakodinamicheskie effekty flavonoi-dov kornei solodki: avtoref. ... dis. d-ra med. nauk [The immunosuppressive and anticancer pharmacodynamic effects of licorice root flavonoids. Doct. Diss.]. Moscow, 2012, 48 p.

3. Tarakhovskii Yu.S., Kim Yu.A., Abdrasilov B.S., Muzafarov E.N. Flavonoidy: biokhimiya, biofizika, meditsina [Flavonoids: biochemistry, biophysics, medicine]. Pushchino, Synchrobook Publ., 2013, 310 p.

4. Abu Bakar M.F., Ahmad N.E., Suleiman M., Rahmat A., Isha A. Garcinia dulcis Fruit Extract Induced Cytotoxicity and Apoptosis in HepG2 Liver Cancer Cell Line. Biomed Res Int., 2015, doi: 10.1155/2015/916902.

5. Bosch-Barrera J., Menendez J.A. Silibinin and STAT3: A natural way of targeting transcription factors for cancer therapy. Cancer Treat. Rev., 2015, vol. 41, no. 6, pp. 540-546.

6. Cheon S.Y., Chung K.S., Jeon E., Nugroho A., Park H.J., An H.J. Anti-inflammatory Activity of Saxifragin via Inhibition of NF-kB Involves Caspase-1 Activation. J. Nat. Prod., 2015, vol. 78, no. 7, pp. 1579-1585.

7. Gatouillat G., Magid A.A., Bertin E., El btaouri H., Morjani H., Lavaud C., Madoulet C. Medicar-pin and millepurpan, two flavonoids isolated from Medicago sativa, induce apoptosis and overcome multidrug resistance in leukemia P388 cells. Phytomedicine, 2015, vol. 22, no. 13, pp. 1186-1194.

8. Harrison M., Holen K., Liu G. Beyond taxanes: a review of novel agents that target mitotic tubulin and microtubules, kinases, and kinesins. Clin. Adv. Hematol. Oncol., 2009, no. 7, pp. 54-64.

9. Isa N.M., Abdelwahab S.I., Mohan S., Abdul A.B., Sukari M.A., Taha M.M., Syam S., Narri-ma P., Cheah S.Ch., Ahmad S., Mustafa M.R. In vitro anti-inflammatory, cytotoxic and antioxidant activities of boesenbergin A, a chalcone isolated from Boesenbergia rotunda (L.) (fingerroot). Braz. J Med. Biol. Res., 2012, vol. 45, no. 6, pp. 524-530.

10. Kommidi D.R., Pagadala R., Rana S., Singh P., Shintre S.A., Koorbanally N.A., Jonnala-gadda S.B., Moodley B. Novel carbapenem chalcone derivatives: synthesis, cytotoxicity and molecular docking studies. Org. Biomol. Chem., 2015, vol. 13, no. 14, pp. 4344-4350.

11. Leao M., Soares J., Gomes S., Raimundo L., Ramos H., Bessa C., Queiroz G., Domingos S., Pinto M., Inga A., Cidade H., Saraiva L. Enhanced cytotoxicity of prenylated chalcone against tumour cells via disruption of the p53-MDM2 interaction. Life Sci., 2015, no. 142, pp. 60-65.

12. Mather J.P., Roberts P.E. Introduction to cell and tissue culture. Theory and technique. New York: Plenum Press, 1998, 241 p.

13. Olaru O.T., Venables L., VAN DE Venter M., Nitulescu G.M., Margina D., Spandidos D.A., Tsatsakis A.M. Anticancer potential of selected Fallopia Adans species. Oncol Lett., 2015, vol. 10, no. 3, pp. 1323-1332.

14. Singh G., Arora A., Mangat S.S. Rani S., Kaur H., Goyal K., Sehgal R., Maurya I.K., Tewari R., Choquesillo-Lazarte D., Sahoo S., Kaur N. Design, synthesis and biological evaluation of chalconyl blended triazole allied organosilatranes as giardicidal and trichomonacidal agents. Eur. J. Med. Chem., 2016, no. 108, pp. 287-300.

15. Wang L.H., Li H.H., Li M., Wang S., Jiang X.R., Li Y., Ping G.F., Cao Q., Liu X., Fang W.H., Chen G.L., Yang J.Y., Wu C.F. SL4, a chalcone-based compound, induces apoptosis in human cancer cells by activation of the ROS/MAPK signalling pathway. Cell Prolif., 2015, vol. 48, no. 6, pp. 718-728.

16. Xia Y., Lian S., Khoi P.N., Yoon H.J., Han J.Y., Chay K.O., Kim K.K., Jung Y.D. Chrysin inhibits cell invasion by inhibition of Recepteur d'origine Nantais via suppressing early growth response-1 and NF-kB transcription factor activities in gastric cancer cells. Int. J. Oncol., 2015, vol. 46, no. 4, pp. 1835-1843.

17. Zhou B., Xing C. Diverse Molecular Targets for Chalcones with Varied Bioactivities. Med. Chem. (Los Angeles), 2015, vol. 5, no. 8, pp. 388-404.

АНДРЕЕВА НАТАЛЬЯ АЛЕКСАНДРОВНА - студентка VI курса медицинского факультета, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары (andre180593@mail.ru).

ANDREEVA NATALYA - Student of the sixth course, Medical Faculty, Chuvash State University, Russia, Cheboksary.

ПАВЛОВА СВЕТЛАНА ИВАНОВНА - доктор медицинских наук, заведующая кафедрой фармакологии, клинической фармакологии и биохимии, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары (flavonoid@yandex.ru).

PAVLOVA SVETLANA - Doctor of Medical Sciences, Head of Pharmacology, Clinical Pharmacology and Biochemistry Department, Chuvash State University, Russia, Cheboksary.