СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ЦИТОПРОТЕКТОРНЫМ ДЕЙСТВИЕМ
AGENT POSSESSING CYTOPROTECTIVE ACTION

Изобретение относится к области биологии и медицины и представляет собой новое средство, обладающее цитопротекторной активностью. Средство может быть использовано для коррекции состояний связанных с повреждением клеток (гипоксия, окислительный стресс и др.), и в качестве защитного компонента для работы с культурами клеток.
В настоящее время существует ряд соединений и составов, обладающих цитопротекторными свойствами. Известна лекарственная композиция цитопротекторного действия, содержащую инозин, никотинамид, рибофлавина мононуклеотид натрия, янтарную кислоту и димеглюмина сукцинат (Патент РФ 2651047 от 18.04.2018).
Известно цитопротекторное действие комплекса 1-этилимидазола с аскорбатом цинка (Патент РФ 2024514 от 15.12.1994).
Известно трициклическое соединение с цитопротекторным действием (Патент РФ 2404967 от 10.03.2009).
Целью данного изобретения является расширение спектра цитопротекторных средств.
Поставленная цель достигается применением соли лития и фолиевой кислоты (фолата лития) в качестве цитопротекторного средства.
Различные соли лития имеют широкое применение в психиатрии в качестве нормотимиков (стабилизаторов настроения) (Машковский М.Д. Лекарственные средства: в двух частях. Ч 1. - 12 изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1986. - С. 127-129).
До настоящего времени использование фолата лития в качестве цитопротектора не известно. Соединение лития и витамина группы В - фолиевой кислоты, позволяет получить новые свойства, в частности цитопротекторный эффект.
Исследование цитопротекторных свойств фолата лития было проведено на культуре мононуклеаров периферической крови человека при цитотоксическом воздействии гидроперекиси трет-бутила в концентрации 50 мкмоль/л. Детекцию клеточных повреждений выполняли с использованием набора флуоресцентных красителей, набор Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit, (Abeam, Великобритания) на проточном цитометре «CytoFlex» (Beckman Coulter, США). Оценивали интенсивность клеточной гибели на культуре мононуклеаров после 24 часов инкубации при 37°С.
Метод оценки цитотоксического воздействия на культуру заключался в определении количества живых клеток, клеток в состоянии апоптоза и мертвых клеток по уровню флуоресценции и виду красителя (аннексии V - FITC, пропидий иодид). При этом различают живые клетки (отрицательные по обоим красителям), клетки в состоянии апоптоза (аннексии V-FITC-положительные), а клетки, окрашиваемые только пропидий иодидом, определяются как погибшие (некротические).
Реализация изобретения показана следующим примером.
Пример 1.
С целью оценки цитопротекторного действия готовили рабочий раствор для чего 100 мг фолата лития растворяли в 10 мл дистиллированной воды. Предварительно готовили тестовую суспензию клеток для чего из периферической крови здоровых доноров центрифугированием на градиенте фиколла выделяют мононуклеарную фракцию, с последующим отмыванием, ресуспендированием в среде RPMI 1640 и внесением в соответствующие лунки 96-луночного планшета. Оценивают собственное влияние фолата на клетки для чего добавляют раствор фолата лития с расчетом на конечную концентрацию в лунке 1,2 ммоль/л., для оценки цитопротекторного действия добавляют в лунки с фолатом лития (1,2 ммоль/л) раствор гидроперекиси трет-бутила с расчетом на конечную концентрацию в лунке 50 мкмоль/л. В качестве отрицательного контроля используют интактную суспензию клеток, в качестве положительного контроля суспензию клеток с добавлением гидроперекиси трет-бутила с расчетом на конечную концентрацию в лунке 50 мкмоль/л. Клетки инкубируют в течение 24 часов при 37°С в среде 5% углекислого газа. Цитопротекторное действие оценивалось по количеству живых клеток, клеток в апоптозе и погибших клеток в культуре в процентах к общему количеству клеток.
Результаты оценки цитопротекторного действия представлены в таблице 1 после 24 часов инкубации мононуклеаров при воздействии фолатом лития и без него.
Как видно из таблицы 1 при добавлении фолата лития отмечалось выраженное цитопротекторное действие, что проявлялось в снижении уровня клеточной гибели и увеличении пула жизнеспособных клеток при токсическом воздействии гидроперекиси.
*р<0.05 в отношении контроля в присутствии гидроперекиси трет-бутила