Физиологические основы диагностики агрегации тромбоцитов у биологических объектов

2017, том 19 [2]

УДК [616-005/1-08:331/1]:615.22

ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ДИАГНОСТИКИ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ У БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ

Савченко1 А.П., Зайцев2 В.В., Макурина3 О.Н.

1 Курский институт социального образования (филиал) РГСУ, г. Курск, Российская Федерация 2Самарская государственная сельскохозяйственная академия, г. Самара, Российская Федерация 3Самарский национальный исследовательский университет имени академика С.П. Королева, г. Самара, Российская Федерация

Аннотация. Способность тромбоцитов к агрегации в значительной степени определяет микрореологические свойства крови в целом. В этой связи возможность ее быстрой оценки остается весьма востребованной в практической биологии. Потребность в оценке агрегации тромбоцитов у человека и биологических объектов возникает весьма часто. Наиболее упрощенный метод - это ее визуальная регистрация. Для этого используются предметные стекла и увеличительное стекло, позволяющие регистрировать развитие агрегации при добавлении индуктора к плазме богатой тромбоцитами. Данный метод оценки агрегационной способности тромбоцитов не требует дорогостоящего оборудования и дает полную информацию о ее динамике при многократном исследовании. В ходе применения этого метода установлено, что в норме агрегация тромбоцитов выражена слабо. В патологических условиях агрегация тромбоцитов порой значительно усиливается, что повышает риск тромбоза и существенно ухудшает микроциркуляцию.

Ключевые слова: тромбоциты, агрегация, методы определения, кровь, биологические объекты.

Будучи функционально весьма важными форменными элементами крови, тромбоциты в значительной степени определяют ее микрореологические свойства. Велика в этом плане роль их агрегации, в связи с чем остаются востребованы методические подходы к ее скрининговой оценке у людей и

животных [2,8]. Их применение позволит своевременно и адекватно проводить оценку этих показателей в любом возрасте [7,10], при необходимости корректируя и предотвращая дисциркуляторные нарушения в жизненно важных органах [6].

~ 14 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

—-g^OC^B-—

Становится ясно, что в основе усиления агрегации тромбоцитов нередко лежат генетические причины [1]. Кроме того, в ряду причин гиперагрегации находится влияние негативных средовых факторов, что отмечается в патогенезе многих заболеваний [14,15]. Замечено, что в условиях патологии усиление тромбоцитарной агрегации является первоосновой нарушения гемоциркуля-ции во внутренних органах, что значимо определяет тяжесть состояния человека или животного и дальнейший прогноз [17]. Все это подчеркивает диагностическую ценность быстрой и доступной лабораторной оценки агрегации тромбоцитов.

Одним из вариантов быстрой оценки агрегации тромбоцитов является следующий метод. Кровь забирают с 3,8% цитратом натрия в соотношении 9:1, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин для получения богатой тромбоцитами плазмы. Часть плазмы отбирают, а оставшуюся центрифугируют при 3000 об/мин. в течение 20 мин, получают бедную тромбоцитами плазму. Богатую тромбоцитами плазму стандартизируют по числу тромбоцитов до 200х109/л.

Из получившегося объема стандартизированной плазмы отбирают из расчета по 0,02 мл. плазмы на каждый исследуемый индуктор и их комбинацию. Оставшийся объем плазмы можно использовать для других гематологических и биохимических исследований. Из отобранного объема стандартизированной плазмы на предметное стекло наносят 0,02 мл плазмы и разными пипетками по 0,02 мл раствора индуктора. В качестве агонистов возможно применение, в т.ч. АДФ (0,5*10-4 М), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125

ед/мл), адреналина (5,0х10-6 М), ристоми-цина (0,8 мг/мл), перекиси водорода (7,3х10-3 М). Стеклянной палочкой смешивают плазму с индукторами и включают секундомер. Смесь перемешивают так, чтобы жидкость занимала окружность диаметром около 2 см. Покачивая стекло круговыми движениями в проходящем свете осветителя, на черном фоне следят через лупу за возникновением агрегатов. При появлении отчетливых агрегатов, просветлении раствора и прилипании части агрегатов к стеклу секундомер отключают и фиксируют время агрегации тромбоцитов. Реакцию повторяют 2 - 3 раза с каждым индуктором и находят среднее арифметическое из полученных результатов [16].

Оптимальными значениями агрегации тромбоцитов при концентрации тромбоцитов 200 х 109/л составляет для АДФ - 37-50 с, коллаген - 27-36 с, ристомицин - 38-50 с, тромбин - 48-59 с, адреналин - 81-106 с, перекись водорода - 40-60 с.

Длительное практическое применение этого метода позволяет регистрировать у здоровых людей и животных в крови изменение уровня агрегации тромбоцитов [3,5], что подтверждалось более сложными методами исследований [13]. В условиях патологии этим же методом было показано, что изменения микрореологических показателей тромбоцитов могут быть намного более выражены [15]. Это указывает на большую практическую ценность приведенного метода, способного давать точные сведения при патологических состояниях, когда состояние микроциркуляции весьма важно [12] в плане лечения и прогноза [9]. Кроме того, особое

~ 15 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

значение, как показали предшествующие исследования, этот метод имеет в оценке функционального состояния биологических объектов на разных этапах индивидуального развития [4,18]. Становится ясно, что от динамики агрегации тромбоцитов, в т.ч. при развитии патологии во многом зависит динамика состояния животного или человека, степень развертывания генетически определенных качеств или патологического процесса [11]. Все это доказывает, что своевременная оценка агрегации тромбоцитов весьма важна для выяснения текущего функционального состояния организма и решения вопроса о начале коррекционного воздействия на него.

Заключение. Агрегация тромбоцитов в значительной степени определяет микрореологические свойства крови. Оценка агрегации тромбоцитов не требует дорогостоящего оборудования и способна дать полную информацию о ее динамике в различных ситуациях. При применении данного метода установлено, что в здоровом организме тромбоциты агрегируют слабо. В патологических условиях их агрегация может резко усиливаться, что существенно ухудшает микроциркуляцию и усугубляет проявление болезни.

ЛИТЕРАТУРА

1. Амелина И.В., Медведев И.Н. Проявление транскрипционной активности ядрышкообразующих районов хромосом в Курском регионе // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2009; 147(6) : 671-673.

2. Завалишина С.Ю., Медведев И.Н. Антиагрега-ционные свойства стенки кровеносных сосудов у телят в период перехода к молочно-растительному типу

питания // Проблемы биологии продуктивных животных. 2012; 1 : 31-36.

3. Завалишина С.Ю. Гемостатическая активность сосудистой стенки у новорожденных телят // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. 2012; 1 : 37-39.

4. Краснова Е.Г. Физиологические особенности тромбоцитарного гемостаза у поросят растительного питания // Ветеринария. 2013; 2 : 46-49.

5. Кутафина Н.В., Медведев И.Н. Тромбоцитар-ная агрегация у клинически здоровых лиц второго зрелого возраста, проживающих в Курском регионе // Успехи геронтологии. 2015; 28(2) : 321-325.

6. Медведев И.Н., Кумова Т.А. Влияние эпросар-тана на состояние интраваскулярной активности тромбоцитов у лиц с артериальной гипертонией при метаболическом синдроме // Российский кардиологический журнал. 2008; 1 : 40-42.

7. Медведев И.Н., Лапшина Е.В., Завалишина С.Ю. Активность тромбоцитарного гемостаза у детей с искривлениями позвоночника // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2010; 149(5) : 579580.

8. Медведев И.Н., Савченко А.П. Тромбоцитар-ная активность у студентов, проходящих регулярные тренировки по снарядной гимнастике // Вестник Самарского университета. Естественнонаучная серия. 2010; 6(80) : 226-231.

9. Медведев И. Н., Скорятина И. А. Динамика микрореологических свойств эритроцитов у больных артериальной гипертонией с дислипидемией, получавших аторвастатин // Клиническая медицина. 2012; 90(6) : 42-45.

10. Медведев И.Н., Кутафина Н.В. Агрегационная активность тромбоцитов у здоровых лиц второго зрелого возраста // Фундаментальные исследования. 2012; 8 : 362-366.

11. Медведев И.Н., Савченко А.П. Внутрисосуди-стая активность тромбоцитов у лиц юношеского возраста, имевших в 18 лет высокое нормальное артериальное давление, избыточную массу тела или их сочетание на фоне регулярных физических нагрузок // Фундаментальные исследования. 2012; 4-2 : 328-334.

12. Савченко А.П., Медведев И.Н. Активность пе-рекисного окисления липидов и антиоксидантной за-

~ 16 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

—-g^OC^B-—

щиты тромбоцитов у молодых людей, не тренирующихся физически // Современные наукоемкие технологии. 2010; 2 : 112-113.

13. Савченко А.П., Медведев И.Н. Тромбоцитар-ная активность у людей 18-35 лет, тренирующихся в секции общей физической подготовки // Ученые записки Российского государственного социального университета. 2011; 4 : 255-260.

14. Савченко А.П., Медведев И.Н. Влияние физических тренировок на тромбоцитарную активность у молодых лиц с высоким нормальным артериальным давлением и избыточной массой тела // Журнал научных статей «Здоровье и образование в XXI веке». 2012; 14(3) : 227.

15. Симоненко В. Б., Медведев И. Н., Мезенцева Н.

И., Толмачев В. В. Антиагрегационная активность сосудистой стенки у больных артериальной гипертонией при метаболическом синдроме // Клиническая медицина. 2007; 85(7) : 28-30.

16. Шитикова А.С. Тромбоцитопатии врожденные и приобретенные / под ред. Л.П. Папаян, О.Г. Головиной. СПб.: ИИЦ ВМА, 2008 : 320.

17. Medvedev I.N., Zavalishina S.Yu., Krasnova E.G., Belova T.A., Kutafina N.V. Meccanismi di base vasco-lare-piastrine emostasi // Italian Science Review. 2014; 3(12) : 167-169.

18. Zavalishina S.Yu. Activity of Vascular Hemosta-sis in Milk-Fed Calves // Russian Agricultural Sciences. 2012; 38(4) : 321-323.

PHYSIOLOGICAL BASIS OF THE DIAGNOSIS OF PLATELET AGGREGATION IN BIOLOGICAL

Savchenko A.P., Zaitsev2 V.V., Makurina3 O.N.

1Kursk Institute of Social Education (branch) of the Russian State Social University, Kursk, Russian Federation 2Samara State Agricultural Academy, Samara, Russian Federation 3Samara National Research University, Samara, Russian Federation

Annotation. The ability of platelets to aggregate largely determines the properties of blood in microrheology whole. In this context, the possibility of its rapid assessment remains very popular in practical biology. The need for evaluation of platelet aggregation in humans and biological objects occurs quite often. The most simple method - it is a visual check. For this purpose, slides and a magnifying glass, allowing to detect the development of aggregation by adding an inducer to the platelet-rich plasma. This method of assessing platelet aggregation does not require expensive equipment and provides complete information on its dynamics at multiple study. In the application of this method, it found that normal platelet aggregation is weak. In pathological conditions, platelet aggregation is sometimes greatly enhanced, increasing the risk of thrombosis and worsens significantly microcirculation.

Key words: platelets, aggregation, determination methods, blood, biological objects.

REFERENCES

1. Amelina I.V., Medvedev I.N. Transcriptional activity of chromosome nucleolar organizing regions in

population of Kursk region. Bulletin of Experimental Biology and Medicine, 2009, no.147(6), pp.730-732 (English).

2. Zavalishina S.Yu., Medvedev I.N. Antiaggrega-tion properties of the walls of blood vessels in the calves during the transition to milk-vegetable type of nutrition.

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

Problems of Biology productive zhivotnyh, 2012, no.l, pp.31-36 (in Russian).

3. Zavalishina S.Yu. Hemostatic Activity of Vascular Wall of Newborn Calves. Russian Agricultural Sciences, 2012, no.38(1), pp.51-54 (English).

4. Krasnova E.G. Physiological characteristics of platelet hemostasis piglets power plant. Veterinary, 2013, no.2, pp.46-49 (in Russian).

5. Kutafina N.V., Medvedev I.N. Platelet Aggregation in Clinically Healthy Persons of the Second Coming-of-Age Living in the Kursk Oblast. Advances in Gerontology, 2015, no.5(4), pp.267-270 (English).

6. Medvedev I.N., Kumova T.A. Reduced platelet aggregation in losartan-treated patients with arterial hypertension and metabolic syndrome. Russian Journal of Cardiology, 2008, no.1, pp.40-42 (in Russian).

7. Medvedev I.N., Lapshina E.V., Zavalishina S.Yu.Activity of platelet hemostasis in children with spinal deformities. Bulletin of experimental biology and medicine, 2010, no.149(5), pp.645-646 (English).

8. Medvedev I.N., Savchenko A.P. Platelet activity of the students who take regular training on gymnastic apparatus. Vestnik Samarskogo universiteta. Estestvennon-auchnaja serija. 2010, no.6(80), pp.226-231 (in Russian).

9. Medvedev I.N., Skoriatina I.A. Dynamics of mi-crorheologic properties of erythrocytes in patients with arterial hypertension and dyslipidemia treated with atorvas-tatin. Klinicheskaia meditsina, 2012, no.90(6), pp.42-45 (in Russian).

10. Medvedev I.N., Kutafina N.V. Platelet aggregation in healthy individuals of the second adulthood. Fundamental issledovaniya, 2012, no.8, pp.362-366 (in Russian).

11. Medvedev I.N., Savchenko A.P. Platelet activity of disseminated intravascular in adolescence, with 18

years high normal blood pressure, excessive weight, or their combination on the background of regular physical activity. Fundamental issledovaniya, 2012, no.4-2, pp. 328-334 (in Russian).

12. Savchenko A.P., Medvedev I.N. Activity of lipid peroxidation and antioxidant protection of platelets in young people who are not physically practicing. Sov-remennye naukoemkie tehnologii, 2010, no.2, pp. 112-113 (in Russian).

13. Savchenko A.P., Medvedev I.N. The platelet activity in people 18-35 years old, practicing in the section of general physical training. Uchenye zapiski Rossijskogo gosudarstvennogo social'nogo universiteta, 2011, no.4, pp.255-260 (in Russian).

14. Savchenko A.P., Medvedev I.N. Effect of physical training on platelet activity in young individuals with high normal blood pressure and overweight. Zhurnal nauchnyh statej «Zdorov'e i obrazovanie v XXI veke», 2012, no.14(3), pp.227 (in Russian).

15. Simonenko V.B., Medvedev I.N., Mezentseva N.I., Tolmachev V.V. The antiaggregation activity of the vascular wall in patients suffering from arterial hypertension with metabolic syndrome. Klinicheskaia meditsina, 2007, no.85(7), pp.28-30 (in Russian).

16. Shitikova A.S. Thrombocytopathy congenital and acquired. St. Petersburg, 2008, 320p.

17. Medvedev I.N., Zavalishina S.Yu., Krasnova E.G., Belova T.A., Kutafina N.V. Meccanismi di base vasco-lare-piastrine emostasi. Italian Science Review, 2014, no.3(12), pp.167-169.

18. Zavalishina S.Yu. Activity of Vascular Hemostasis in Milk-Fed Calves. Russian Agricultural Sciences, 2012, no.38(4), pp.321-323.

~ 18 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций