Определение резус-принадлежности следов крови в судебно-медицинских целях

скачкообразное увеличение показателей старения костей кисти, особенно тех, которые связаны с появлением новых структурных элементов кости - узлов и экзостозов. Выравнивание темпов старения и, следовательно, формальной оценки старения происходит к 50-55 годам. Накопление признаков остеопороза не подчиняется указанной закономерности. Первые проявления остеопороза и устойчивая связь балла пороза с возрастом, а также более раннее достижение максимального балла по этому признаку характерны для женской части изученного населения.

Первые элементы старения как у мужчин, так и у женщин, фиксировались на дистальных фалангах кисти. Следовательно, можно прийти к заключению о более раннем начале старческих проявлений в тех участках кисти, которые и созревают раньше в процессе индивидуального развития. Если говорить о темпах старения фаланг, то наиболее быстро стареют дистальные фаланги, а медленнее всего - средние.

Ведущими показателями возрастных изменений дистальных фаланг у всех обследованных индивидов были

апиостозы и узлы, а также сужение суставной щели. Старение средних фаланг у мужчин в основном проявлялось в виде узлов и экзостозов, в то время как у женщин наряду с узлами заметную роль играл остеопороз. Наиболее распространенными признаками возрастных изменений проксималъных фаланг у мужчин и женщин являлись экзостозы и в меньшей степени узлы на основаниях фаланг, а также остеопороз. Наибольшее число элементов старения локализовалось в обеих подгруппах на четвертом и третьем лучах кисти. Самое большое количество признаков старения кисти располагалось на дистальных и проксимальных фалангах, а в меньшей степени на средних фалангах, как у женщин, так и у мужчин. Причем у женщин эта зависимость носила более плавный характер. Большая часть анализируемых признаков проявили положительный возрастной градиент. Это апиостозы, узлы, экзостозы, остеопороз и сужения суставной щели. Практически нулевую корреляцию с возрастом обнаружили лишь признаки, связанные со склеротическими изменениями. Наиболее разнообразный спектр элементов возрастной перестройки костей кисти отмечался после 50 лет.

Литература:

1. Бацевич В.А., Павловский О.М., НикитюкБ.А. и соавт. Методические аспекты возрастной оссеографии взрослого населения. // Российские морфологические ведомости, Медицина, 1998, №1 -2, с. 105-113

2. Павловский О.М. Биологический возраст человека. //М., изд-во МГУ, 1987,280 с.

3. Попов В.Л., Заславский Г.И., БабаханянР.В. Судебно-медицинская идентификация личности. //Курслекций по судебной медицине, СПб, 1999,400с.

4. Baccino E.,Ubelaker D.H.Hayek L.A.ZerilliA. Evaluation of seven methods of estimating age at death from mature human skeletal remains. //JForensic Sci, 1999, Sep;44(5):931-6

© И.В. Кондратова, P.C. Сахаров, M.B. Федулова, 2003 УДК 340.624.4

И.В. Кондратова, P.C. Сахаров, M.B. Федулова ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ СЛЕДОВ КРОВИ В СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКИХ ЦЕЛЯХ

Российский центр судебно-медицинской экспертизы МЗ РФ

На основании выполненных исследований а.вторы пришли к выводу о наличии в эритроцитахрезус-отрицательных (cde) лиц резус-антигена D, что затрудняет определение резус-принадлежности следов крови из-за частой неспецифичности РАЭ. Оригинальная модификация иммуноглобулинов анти-D IgG и разработанная система подсчета агглютинации (Scoring system ) позволила решить проблемы неспецифичности РАЭ и уверенно определять резус-принадлежность следов крови с давностью образования до 6 месяцев.

Ключевые слова: иммуноглобулины анти-D IgG, антиген D, реакция абсорбции-элюции, агглютинация.

I.V.Kondratova, R.S.Sakharov, M.V.Fedulova DETERMINATION OF RHD ANTIGEN IN BLOODSTAINS IN FORENSIC MEDICAL PURPOSES

Moskow

On basis of executed studies authors come to the conclusion about presence of antigen D in rh-negative erythrocytes that затрудняет the determination of bloodstains резус-принадлежность. Original anti-D IgG modification and developing Scoring system can allow to decide the problem of reaction absorption-elution unspecifisity and strongly to define RhD antigen in bloodstains before 6 months.

Keywords: anti-D IgG, antigen D, reaction absorption-elution, agglutination.

Из всех известных и наиболее значимых эритроци-тарных антигенных систем - ABO, Rh, MNSs, Kell, Duffy, Kidd, система Резус (Rh) обладает наиболее выраженным антигенным полиморфизмом и высокой информативностью. Это делает перспективным ее использование в судебномедицинских целях, в частности, при разграничении следов крови на вещественных доказательствах.

В отличие от полных антител к антигенам системы ABO, антитела к резус-антигенам чаще всего являются неполными IgG-антителами, которые для своего выявления требуют специальных методов исследования. В судебно-

медицинской серологии наиболее применяемые ферментные (с использованием протеаз) тесты - трипсин-альбу-миновый [1] и различные модификации папаинового теста [6, 7]. С помощью указанных методов в получаемых элюатах исследуют резус-антитела в процессе выявления резус-антигенов в следах крови. При этом всеми исследователями признается необходимость тщательного предварительного отбора специфически реагирующих в реакции абсорбции-элюции (РАЭ) резус-сывороток, поскольку далеко не все резус-сыворотки пригодны для этих целей.

Недавно Р.С. Сахаровым и М.В. Федуловой [4, 5] была разработана техника, названная авторами модифицированной РАЭ, позволяющая повысить чувствительность реакции антиген-антитело и выявлять антигены АВО в микроследах крови и выделений.

Поэтому, целью настоящей работы было изучение возможности повышения чувствительности и специфичности выявления антигенов также и системы Rh путем адаптации к этой системе модифицированной РАЭ. При этом, в основном, изучалась возможность повышения чувствительности выявления в следах крови мажорного (сильного) резус-антигена D, поскольку в настоящее время только к этому антигену в России имеется достаточное количество разнообразных поликлональных сывороток анти-D IgG, наиболее пригодных для использования в РАЭ.

Осуществленное нами применение модифицированной РАЭ, когда высокоактивными протеазами обрабатываются не только стандартные эритроциты, но и исследуемые пятна крови, действительно, приводило к дальнейшему повышению чувствительности РАЭ при выявлении резус-антигена D в следах крови. Так, использование предварительной обработки исследуемых следов крови микробной протеазой-С и специально отобранной сывороткой анти-D, а также титрование получаемых элюатов, позволило даже в очень старых (14-летних) пятнах крови уверенно выявлять антиген D, совершенно не обнаруживавшийся трипсин-альбуминовой техникой. Вместе с тем, при исследовании свежеобразованных пятен (0,5-2 месяца хранения) и пятен с небольшим сроком хранения (3-6 месяцев) наилучшие результаты были получены в случаях, когда обработка исследуемых пятен крови протеазой не применялась.

При использовании же в РАЭ поликлональных сывороток и моноклональных антител анти-D разных серий, не подвергавшихся предварительному отбору, мы сразу же столкнулись с проблемой выраженной неспецифичности РАЭ. Эта неспецифичность заключалась в том, что несмотря на полную специфичность сывороток и моноклональных антител анти-D при исследовании жидкой крови на наличие антигена D, которые затем вводились в РАЭ, антитела анти-D выявлялись не только в элюатах, полученных с Rh(+)-положительных, но и с А(-)-отрицательных пятен крови. Кроме того, в ряде случаев активность элюа-та, полученного с резус-отрицательного пятна приближалась к активности элюата, полученного с резус-положи-тельного пятна. Неспецифичность РАЭ мы наблюдали и при выполнении трипсин-альбуминового и папаинового тестов. Это заставило нас обратить особое внимание на сущность неспецифической реакции, которую часто имеют элюаты сывороток анти-D, примененных в РАЭ.

В результате многочисленных абсорбционно-элюцион-ных экспериментов мы пришли к парадоксальному выводу о наличии в резус-отрицательных (cde) эритроцитах антигена со специфичностью резус-антигена D [3], что затрудняет определение резус-принадлежности следов крови.

Исследования также показали, что вследствие своей активности, сыворотки анти-D могут давать выраженную

неспецифическую реакцию со многими предметами-носителями. Таким образом, мы пришли к такому положению, когда определение антигена D в следах крови было затруднено из-за неспецифичности, связанной как мы полагаем, с наличием антигена D в резус-отрицательных пятнах крови, так и с неспецифичностью, связанной с реагированием сывороток анти-D с предметом-носителем.

Анализируя результаты экспериментов, мы пришли к выводу, что для устранения неспецифического реагирования сывороток анти-D нужно воздействовать непосредственно на их молекулярное строение, модифицируя пептидные цепи резус-антител таким образом, чтобы они не могли связываться с D-подобной структурой резус-отри-цательных пятен. Такой способ модификации иммуноглобулинов анти-D IgG резус-сывороток нами был разработан. После применения обработанных по оригинальному способу сывороток они начинают специфически выявлять антиген D в достаточно свежих следах крови. Одновременно решается и проблема неспецифического реагирования сывороток с предметами-носителями. Вместе с тем, эксперименты показали, что при исследовании пятен крови с давностью образования свыше 4-6 месяцев, некоторая неспецифичность реагирования с резус-отрицатель-ными пятнами крови, даже обработанных по новому способу сывороток анти-D - остается.

Поэтому, в настоящее время нами разработана оригинальная scoring system (система подсчета агглютинации), которая позволяет определять в числах разницу в выраженности агглютинации с элюатами с резус-положитель-ных и резус-отрицательных пятен и устанавливать коэффициент неспецифичности, характерный для резус-отри-цательных пятен. Это дает возможность определять резус-принадлежность следов крови с давностью образования до 6 месяцев, независимо от наличия или отсутствия остаточной агглютинации с элюатами из резус-отрицательных следов крови. В более старых пятнах крови (с давностью образования 9-12 месяцев) с помощью модифицированных иммуноглобулинов анти-D IgG определить резус-принадлежность следов крови не удается из-за выраженной неспецифичности реакции. Резус-принадлежность крови, полученной от трупа определять также нецелесообразно, поскольку резус-антигены, являющиеся протеиновыми структурами, быстро подвергаются необратимым гнилостным изменениям с потерей иммунологической специфичности [2].

При отсутствии специально приготовленных для выявления антигена D в следах крови коммерческих сывороток анти-D, которые пока не выпускаются, в свете полученных данных, при определении резус-принадлежности следов крови трипсин-альбуминовой техникой, следует обращать особое внимание на подбор специфически реагирующих в РАЭ сывороток анти-D. При этом является совершенно обязательным исследование в качестве одного из контролей резус-отрицательных следов крови с примерно одинаковой давностью образования, что и следы крови на вещественных доказательствах и образцы крови проходящих по делу лиц.

Литература:

1. ГальцеваЕ.Е. Выявление антигена D системы резус в пятнах крови реакцией абсорбции-элюции в судебно-медицинских целях. //Дисс. канд. мед. наук, М., 1973

2. Сахаров P.C. Применение протеаз в изоиммунологии и судебной медицине. //Автореферат дисс. докт. мед. наук, М., 1988, 48 с.

3. Сахаров P.C., Кондратова И.В., Федулова М.В., Крестьянова И.Н. О серологически выявляемом наличии в следах крови резус-отрицательных (cde) лиц резус-антигена D. //Суд.-мед. экспертиза, 2002, №2, с. 25-28

4. Сахаров Р.С., ФедуловаМ.В. Применение протеаз для повышения чувствительности выявления антигенов системы АВОреакцией абсорбции-элюции при исследовании следов выделений человека. //Суд.-мед. экспертиза, 1999, №6, с. 29-32

5. Сахаров Р. С., Федулова М.В., Гуреева Н.Б. и соавторы. Применение протеаз для повышения чувствительности выявления антигенов системы АВО реакцией абсорбции-элюции в следах крови. //Суд.-мед. экспертиза, 1998, №5, с. 73-74

6. Bargagna M.,Sabelli M.,Giacomelli C. The detection of Rh antigens (D,C,c,E,e) on bloodstains by a microelution technique using low ionic strength solution (LISS) and papain-treated red cells. //Forensic SciInt, 1982, vol 19, N2, p. 197-203

7. Gaensslen R.E.,Lee G.C.,Pagliaro E.M.,Bremser I.K. Evaluation of antisera for bloodstain grouping I. ABH,MN,and Rh. //J. Forensic Sci, 1985, vol. 30, N3,p. 632-654

© А.Л. Ураков, Н.С.Стрелков, П.Ю.Садилова, С.В.Иванов, Р.Т. Алхазова, Н.А. Уракова, М.Ю. Тихомирова, 2003

УДК 616-091,8-076.5:615.033

А.Л. Ураков, Н.С.Стрелков, П.Ю.Садилова, С.В.Иванов, Р.Т. Алхазова, Н.А. Уракова, М.Ю. Тихомирова ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ПОСТМОРТАЛЬНОЙ ЭКСПЕРТИЗЫ ПРИЖИЗНЕННОГО ВНУТРИВЕННОГО ИЛИ ИНСТИЛЛЯЦИОННОГО ПРИМЕНЕНИЯ НЕКОТОРЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

Кафедра общей и клинической фармакологии (зав. кафедрой - профессор А.Л. Ураков) Ижевской государственной медицинской академии

В статье показана возможность появления необратимых морфологических изменений в эритроцитах и эпителиоцитах после кратковременного взаимодействия порции крови с 24% и 2,4% раствором эуфиллина и конъюнктивы глазного яблока с 20% раствором сульфацила натрия соответственно.

Ключевые слова: эритроцит, эпителиоцит, эуфиллин, сульфацил натрия.

A.L.Urakov, N.S. Strelkov, P.U. Sadilova, S.V. Ivanov,

R.T. Alkhazova, N.A. Urakova, M.U. Tihomirova CYTOLOGYCAL OF AN OPPORTUNITY POSTMORTAL OF EXAMINATION INTRAVITAL INTRAVENOUS OR INSTILLATION OF APPLICATION OF SOME MEDICINAL AGENTS

Izhevsk

The possibility of appearance of irreversible morphological changes in erythrocytes and epithelyocytes after short-term interaction of blood portion with 24% and 2,4% solutions ofeuphillini as well as the bulbar conjunctiva with 20% solutions albucidi respectively has been revealed.

Keywords: erythrocytes, epithelyocytes, euphillini, albucidi.

Посмертное определение факта и роли прижизненного применения лекарственных средств может быть осуществлено по выявлению их в определенных концентрациях в тканях трупа, а также по анализу информации, содержащейся в медицинской карте (в случае госпитальной смерти) [2] с учетом роли величин физико-химических показателей качества примененных лекарственных средств определенных серий и заводов изготовителей [1, 3]. При отсутствии этих данных и при невозможности обнаружения лекарственных средств в тканях покойного остается надежда на выявление каких-либо "следов" их пребывания хотя бы в местах непосредственного первичного введения, например в виде измененных эритроцитов после появления порции крови внутри шприца или измененных эпи-телиоцитов после введения лекарств в полость конъюнктивы. Поскольку степень выраженности местного действия лекарственных средств напрямую определяется величиной их концентрации [4], появление цитологических изменений наиболее вероятно при введении концентрированных растворов лекарственных средств. В частности, их появление, по-нашему мнению, весьма вероятно при использовании 24% эуфиллина и 20% альбуцида. Проверке указанного предположения и посвящена данная работа.

Цитологическое исследование эритроцитов произведено до и после смешивания порции крови, взятой из вены пациентов, с порцией 24 или 2,4 % раствора эуфиллина "Московского эндокринного завода" в соотношении 1 : 1 при температуре 22 - 24 С. Мазки крови готовили по стандартной методике и окрашивали по Романовскому-Гим-зе. Диаметр эритроцитов измерялся с помощью микро-

метра МОВ-1-15х на микроскопе БИОЛАМ-ЛОМО, при увеличении 40 нм. Морфологическое состояние эритроцитов оценено при 1000-кратном иммерсионном увеличении с помощью микроскопа "ЛОМО-МИКМЕД-2".

Цитологическое исследование эпителиоцитов до и после инстилляции 20 или 10% раствора сульфацила натрия (аптека РОКБ, г. Ижевск) в конъюнктивальную полость пациентов произведено посредством оценки состояния конъюнктивы глазного яблока. Соскобы приготовлены по стандартной методике. Определение размеров и оценка морфологического состояния эпителиоцитов произведены аналогично исследованию эритроцитов.

В результате проведенных исследований установлено, что до взаимодействия крови с лекарством эритроциты имели дисковидную форму, их диаметр был равен 7,2±1,3 мк (Р<0,05, п=30), что соответствовало физиологической норме. Через минуту после взаимодействия крови с 24% раствором эуфиллина в мазках абсолютное большинство эритроцитов, а именно -79 6,8% (Р<0,05, п=30), оказалось неправильной формы, с диаметром, уменьшенным до 4,3±0,3 мк (Р<0,05, п=30), с просветлением в центре, с выраженной базофилией и выраженной анизохромной реакцией. Анизоцитоз эритроцитов составил 98±9,9% (Р<0,05, п=30). При этом почти все эритроциты оказались с разрушенной плазмолеммой и склеенными в цепочки от 3 до 18 клеток, напоминая собой картину "сладж"-феномена.

Продление периода взаимодействия порции крови с 24% раствором эуфиллина до 3-х минут ведет к усилению указанных выше морфологических дефектов в эритроцитах (Рис. 1). Так, анизоцитоз при этом достиг 100%, соот-