Особенности состояния иммунного статуса и метаболизма лимфоцитов крови у больных раком легкого в зависимости от стадии метастазирования

116 КЛИНИЧЕСКАЯ ОНКОЛОГИЯ

УДК 612.017.1:616.24-006.6-008.9:616-033.2:616-093/-098 A. A. Savchenko1, P. V. Lapeshin2, Yu. A. Dychno2 PECULIARITIES OF THE IMMUNE SYSTEM STATE AND METABOLISM OF LYMPHOCYTES IN BLOOD WITH THE LUNG CANCER PATIENTS DEPENDING ON THE PRESENCE OF METASTASES 1 Institute for Medical Problems of the North, Siberian Branch Russian Academy of Medical Sciences, Krasnoyarsk 2 Krasnoyarsk State Medical Academy ABSTRACT The purpose of the research was studying the immune system status and metabolism of lymphocytes in blood of patients with the lung cancer with the presence of metastases. It was found out that the immune status of patients with the lung cancer is identified as immune deficient status and does not depend on the presence or absence of metastases. Based on the correlation analysis it was found out that the appearance of metastases in lymph nodes in patients with lung cancer leaded to the misbalancing of regulator and immuno-depressive connections between tumor and immune system. During the investigation of lymphocytes metabolic status the changes typical for lung cancer patient were identified. The changes were also revealed in groups of patients with the presence or absence of metastases. The inhibition of anaerobic energetic processes and misbalancing of the three carbon acids cycle were general peculiarities of lymphocytes patients with the lung cancer. The differences in metabolic reactions of lymphocytes in patients with the lung cancer depend on the level of plastic and antioxidant reactions. Key words: lung cancer, metastasis, immune status, metabolism of lymphocytes, ernymes activity, aerobic and anaerobic processes, plastic processes. А. А. Савченко1, П. В. Лапешин2, Ю. А. Дыхно2 ОСОБЕННОСТИ СОСТОЯНИЯ ИММУННОГО СТАТУСА И МЕТАБОЛИЗМА ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЛЕГКОГО В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТАДИИ МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ 1 ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск 2 Красноярская государственная медицинская академия РЕЗЮМЕ Целью исследования явилось изучение состояния иммунной системы и метаболизма лимфоцитов крови у больных раком легкого в зависимости от метастазирования опухоли. Обнаружено, что состояние иммунного статуса у больных раком легкого определяется как иммунодефицитное и практически не зависит от отсутствия или наличия метастазов в лимфатических узлах корня легкого. С помощью корреляционного анализа установлено, что с появлением метастазов в лимфатических узлах при раке легкого происходит разбалансировка регуляторных и иммунодепрессивных взаимосвязей опухоли и иммунной системы. При исследовании метаболического статуса лимфоцитов крови выявлены изменения, характерные для больных раком легкого вообще и специфические для групп больных с отсутствием и наличием метастазов в лимфатических узлах. Обнаружено, что наиболее выраженными общими особенностями метаболизма лимфоцитов при раке легкого являются ингибирование анаэробных процессов и разбалансировка ферментативных реакций цикла трикарбоновых кислот. Различия в метаболических реакциях иммунокомпетентных клеток у больных при отсутствии и наличии метастазирования опухоли определяются уровнем пластических и антиоксидантных реакций. Ключевые слова: рак легкого, метастазы, иммунный статус, метаболизм лимфоцитов, дегидрогеназы, анаэробные и аэробные процессы, пластические процессы.

М»3/том4/2005 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

ВВЕДЕНИЕ

Метастазы злокачественных опухолей значительно осложняют течение онкологического заболевания. Этот процесс развивается не только на поздних стадиях развития опухоли, но в ряде случаев уже на ранних стадиях заболевания метастазы обнаруживаются в регионарных лимфатических узлах [4,14, 16]. Доказано, что метаста-зированию предшествует околоопухолевая клеточная инфильтрация (лимфоцитами, плазматическими клетками, макрофагами), которая с началом метастазирования исчезает. Предполагается, что таким образом реализуется феномен опухолевой иммунодепрессии и создаются условия для метастазирования [1, 16].

Особенно актуальны исследования иммунных механизмов при метастазировании у больных раком легкого. Связано это с тем, что в настоящее время рак легкого занимает 1-е место в структуре онкологической заболеваемости в России, причем значительную часть пациентов выявляют уже на IV стадии заболевания, т. е. в условиях метастазирования опухоли [4, 5, 7]. Между тем доказано, что уровень иммунореактивности определяется не только морфологическим составом иммунокомпетентных клеток и концентрацией иммуноглобулинов в сыворотке крови, но и уровнем метаболических процессов в иммунокомпетентных клетках, которые в значительной степени определяют функциональную активность иммуноцитов [3, 9].

Цель настоящего исследования — изучение состояния иммунной системы и метаболизма лимфоцитов крови у больных раком легкого в зависимости от наличия метастазирования.

В качестве показателей внутриклеточного метаболизма выбраны НАД(Ф)-зависимые дегидрогеназы в связи с тем, что, во-первых, основными переносчиками электронов в клетках являются пиридиновые нуклеотиды, отсюда — активное участие оксидоре-дуктаз в биоэнергетических процессах; во-вторых, НАД(Ф)-зависимые дегидрогеназы, участвуя в направленной координации сопряженных метаболических потоков, в значительной степени обусловливают адаптивные изменения клеточного обмена веществ [2,

6, 11, 13].

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

На базе торакального отделения Красноярского краевого онкологического центра обследованы 126 больных мужского пола с диагнозом рак легкого в возрасте от 30 до 55 лет. Кровь на исследование забиралась на следующий день после поступления. Всем больным выполнены расширенные операции: лоб-, билоб- и пульмонэктомии. Наличие или отсутствие метастазов в лимфатических узлах корня легкого определяли гистологическим методом. В качестве контроля обследованы 106 образцов периферической крови здоровых мужчин аналогичного возраста.

Выделение общей фракции лимфоцитов осуществляли по стандартной методике в градиенте плотности фиколл-верографина с последующей очисткой от «прилипающих» клеток. Популяционный и субпопу-

ляционный состав лимфоцитов крови и лимфатических узлов оценивали методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител CD3, CD4, CD8, CD 16, HLA-DR и CD72. Для дополнительной характеристики Т-клеточного звена иммунной системы вычисляли иммунорегуляторный (CD4+/CD8+) индекс и индекс активации Т-лимфоци-тов (HLA-DR+/CD72+). Концентрацию иммуноглобулинов классов А, М, G в сыворотке крови определяли иммунодиффузией по Манчини. Состояние гуморального иммунитета характеризовали также уровнем относительного синтеза IgA (IgA/CD72+), IgM (IgM/CD72+) и IgG (IgG/CD72+). Определение активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови легкого проводили биолюминесцентным методом [8]. Определялась активность следующих ферментов: глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-фДГ), малик-фермента (НАДФ-МДГ), НАД- и НАДН-зависимой реакции лактатдегидрогеназы (ЛДГ и НАДН-ЛДГ), НАД- и НАДН-зависимой реакции ма-латдегидрогеназы (МДГ и НАДН-МДГ), НАДФ-и НАДФН-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАДФ-ГДГ и НАДФН-ГДГ), НАД- и НАДН-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАД-ГДГ и НАДН-ГДГ), НАД-и НАДФ-зависимых изоцитратдегидрогеназ (НАД-ИЦЦГ и НАДФ-ИЦДГ) и глутатионредуктазы (ГР). Активность дегидрогеназ выражали в ферментативных единицах (1 Е=1 мкмоль/мин [2]) на 104 клеток.

Для всех полученных данных определяли среднее арифметическое значение (М) и ошибку средней арифметической (ш). Проверку гипотезы о статистической достоверности величин исследуемых показателей .несвязанных выборок проводили с помощью критерия Манна—Уитни. Исследование силы взаимосвязей между исследуемыми параметрами осуществляли методом ранговой корреляции по Спирмену. Статистическую обработку результатов осуществляли с помощью пакета прикладных программ Statistica 6.0 (StatSoft, Inc.).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

При исследовании состояния клеточного иммунитета у больных с диагнозом рак легкого в зависимости от наличия метастазирования легкого обнаружено значительное сходство изменений величин исследуемых показателей в группах больных без метастазов и с метастазами в лимфатические узлы корня легкого относительно контрольной группы (табл. 1.). Так, независимо от наличия метастазирования в лимфатические узлы, у больных мужчин повышается концентрация лейкоцитов в периферической крови, снижается относительный уровень лимфоцитов, понижается относительное и абсолютное содержание CD3+- и CD4+-Kne-ток. При этом снижение содержания С04+-лимфоци-тов соответственно приводит к понижению величины иммунорегуляторного индекса. Кроме того, также независимо от факта метастазирования у больных раком легкого повышается относительная концентрация С016+-лимфоцитов, а также процентный и абсолютный уровни CD72+- и HLA-DR+-KneTOK. Только у груп-

118

КЛИНИЧЕСКАЯ ОНКОЛОГИЯ

Таблица 1

Состояние клеточного иммунитета у больных раком легкого в зависимости от метастазирования в лимфатические узлы

Показатель Здоровые, л=106 Без метастазов, п=81 С метастазами, n=45

Лейкоциты, Юу/л 6,3510,16 7,82±0,41 pi<0,001 7,5610,44 pi<0,01

Лимфоциты, % 38,610,7 32,011,52 pi <0,001 32,612,2 pi<0,001

Лимфоциты, 10у/л 2,27Ю,0б 2,35±0,12 2,5210,22

CD3\ % 66,6±0,6 52,9±1,6 Pi <0,001 53,412,2 Pi<0,001

CD3*. 107л 1,4810,05 1,30±0,07 pi<0,05 1,14Ю,09 pi<0,001

CD4\% 41,410,8 29.611Д piO.OOl 30,411,5 pi<0,001

CD4+, 107л 0,93±0,03 0,70±0,04 p,<0,001 0,7110,07 pi<0,01

CDS', % 26,6±0,7 25,5±1,0 23,111,3 pi<0,05

8 со о 0,62±0,02 0,62±0,04 0,4410,04 pi.2<0,001

CD 16*, % 19,7±0,5 24,2±1,1 pi<0,001 25,411,5 pi<0,001

CD16+, 107л 0,47±0,02 0,50±0,03 0,63Ю,0б Pi<0,05

CD72\ % 12,5±0,4 22,811,2 pi <0,001 21,111,5 pi<0,001

CD72\ Ю7л 0,28±0,01 0,45±0,03 pi<0,001 0,5110,06 pi<0,001

HLA-DR\ % 16,0±0,5 27,811,3 pi <0,001 22,811,1 pi<0,05

HLA-DR*, 107л 0,37±0,02 0,54±0,03 pi<0,001 0,5210,05 pi<0,05

CD4+/CD8* 1,49±0,04 1,28±0,08 p,<0,001 1,3410,10 Pi<0,05

HLA-DR VCD72* 1,20±0,04 1,2910,07 1,1310,05

пы больных раком легкого с наличием метастазов в лимфатические узлы понижаются относительная и абсолютная концентрация СБ8+-лимфоцитов.

Состояние гуморального иммунитета у больных раком легкого также практически не зависит от факта метастазирования в лимфатические узлы корня (табл. 2.). Так, независимо от наличия метастазирования у больных относительно контрольной группы повышается концентрация 1|*А и снижается уровень 1§0 и ЦИК в крови. Также независимо от метастазирования в лимфатические узлы снижаются уровни относительного синтеза 1^, 1^ и 1§й. Однако только у больных раком легкого с метастазированием в лимфатические узлы корня легкого статистически достоверно повышается сывороточная концентрация 1{|М (£><0,05).

Таблица 2

Состояние гуморального звена иммунной системы у больных раком легкого в зависимости от метастазирования в лимфатические узлы

Показатель Здоровые /7=106 Без метастазов л=81 С метастазами л=45

IgA, г/л 2,2310,08 3,36Ю,20 pi<0,001 3,3610,28 pi <0,001

IgM, г/л 1,2010,06 1,4210,14 1,4510,15 pi<0,05

IgG, г/л 10,93Ю,32 7,8710,44 pi<0,001 9,62Ю,83 pi<0,05

IgA/CD724', вг/клетка 8,6510,71 3,5910,26 pi <0,001 4,4910,50 pi<0,001

IgM/CD72’, нг/клетка 7,4310,77 2,26+ОДб pi <0,001 1,7810,23 pi<0,001

IgG/CD72+, нг/клетка 39,9012,31 10,5811,24 pi<0,001 11,1811,43 pi <0,001

ЦИК, о. e. 47,1612,92 8,3910,72 p,<0,001 9,9012,20 pi<0,001

При исследовании корреляционных связей между размером опухоли и показателями системы иммунореактивности обнаружено, что у больных без метастазов данных взаимосвязей больше. Так, у больных раком легкого без метастазов в лимфатических узлах установлено, что с размером опухоли отрицательно взаимосвязаны процентное содержание СОЗ+-лимфоци-тов (г=^0,26; р<0,05), относительная и абсолютная концентрации С04+- {г соответственно равно -0,24 и -0,29; р<0,05) и НЬА-011+-клеток (г соответственно равно -0,24 и -0,29; /?<0,05) и сывороточный уровень (г=-0,39; /7<0,01). В то же время у больных с метастазами в лимфатические узлы корня легкого и размером опухоли взаимосвязана только концентрация ЦИК в сыворотке крови (г=—0,53; р<0,01).

Таким образом, состояние иммунного статуса больных раком легкого незначительно зависит от факта метастазирования в лимфатические узлы. Особенностью исследуемых параметров системы иммунитета у больных с метастазированием в лимфатические узлы корня легкого являются снижение концентрации Т-су-прессоров/киллеров и повышение уровня [цМ. По остальным параметрам состояние иммунной системы у больных характеризуется как иммунодефицитное. Однако в зависимости от наличия метастазов выявляются особенности во взаимосвязях между размером опухоли и показателями иммунного статуса, причем у больных без метастазов в лимфатические узлы отрицательная взаимосвязь показателей иммунного статуса от размера опухоли отражает, по-видимому, развитие зависимой от опухоли иммунодепрессии. В то же время у больных с метастазами в регионарные лимфатические узлы данных взаимосвязей значительно меньше (только с уровнем ЦИК), что характеризует независимость состояния иммунного статуса от разме-

ра опухоли. Вероятно, с появлением метастазов в лимфатических узлах происходит разбалансировка регуляторных и иммунодепрессивных взаимосвязей опухоли и иммунной системы.

При исследовании состояния метаболического статуса иммунокомпетентных клеток крови у больных раком легкого обнаружены более выраженные особенности в зависимости от метастазирования в лимфатические узлы (рис. 1 и 2). Так, только у больных без метастазов в лимфоцитах крови статистически достоверно снижается активность Г-6-фДГ (рис. 1, А) и повышается уровень ГР (рис. 1, Д). В то же время только у больных раком легкого с метастазированием в лимфатические узлы повышается активность НАДФН-ГДГ (рис. 1, Е). Уровни активности НАДФ-ГДГ (рис. 1, В), НАДФ-ИЦДГ (рис. 1, Г), НАД-ГДГ (рис. 2, Г) и НАДН-ЛДГ (рис. 2, Е) снижены у больных раком легкого относительно контрольных показателей, однако у больных без метастазирования понижение активности данных ферментов в лимфоцитах крови статистически достоверно более выражено, чем у больных с метастазированием в лимфатические узлы. И наоборот, активность ЛДГ (рис. 2, Б) также понижена у больных мужчин, но у больных с наличием метастазов в лимфатических узлах снижение уровня данного фермента более выражено. Между тем независимо от метастазирования снижается внутриклеточ-

ная активность НАДФ-МДГ (рис. 1, Б), Г-З-фДГ (рис. 2, А), МДГ (рис. 2, В) и НАДН-МДГ (в контроле — 224,99±25,44 мкЕ; у больных без метастазов — 145,69±12,20 мкЕ,р<0,05; у больных с метастазами — 122,88+12,84 мкЕ, р<0,05) и повышается уровень НАД-ИЦЦГ (рис. 2,Д). Активность НАДН-ГДГ в лимфоцитах крови у больных раком легкого не изменяется относительно контрольного диапазона.

Исследуемые ферменты занимают ключевые позиции на разных метаболических путях иммунокомпетентных клеток. Следовательно, их анализ позволяет не только оценить уровень активности отдельных ферментов, но и определить интенсивность метаболических путей или циклов, а также реактивность метаболических процессов в целом. Так, Г-З-ФДГ осуществляет перенос продуктов липидного катаболизма на окисли-тельно-восстановительные реакции гликолиза [2, 6,

18]. Снижение активности данного фермента в лимфоцитах крови у больных раком легкого независимо от наличия метастазирования опухоли отражает, с одной стороны, пониженный уровень реакций липидного катаболизма, а с другой — пониженная субстратная стимуляция гликолиза может привести к снижению интенсивности анаэробного окисления глюкозы. По-видимому, снижение участия ЛДГ в анаэробной реакции (более выраженное у больных без метастазирования опухоли) и НАДН-зависимой реакции МДГ и отражает

5» і 2 1.5 !'*

- 1 " Р|«МНН

: - Р,<0,ШН _ Р,<0,01

— - ІШ: -в*а-

1 51 5 4*

5

$

5 зв

Iм

!:

_______________Р,<0,001

Р,<0,001 Р|«МН

Р,<0,01

л

Рис. 1. Активность НАДФ-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови у больных раком легкого в зависимости от метастазирования опухоли:

1 — контроль; 2 — больные без метастазов; 3 — больные с метастазами

Рис. 2. Активность НАД-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови у больных раком легкого в зависимости от метастазирования опухоли:

1 — контроль; 2 — больные без метастазов; 3 — больные с метастазами

пониженный уровень терминальных стадий гликолиза. Необходимо также отметить, что при пониженных уровнях реакций липидного катаболизма ингибирование НАДФ-МДГ в лимфоцитах крови больных раком легкого характеризует снижение реакций липидного анаболизма. Доказано, что НАДФ-МДГ является ключевой реакций в системе липидного анаболизма [10,

19]. При этом у больных раком легкого без метастазирования опухоли снижена активность ключевой и инициализирующей реакции пентозофосфатного цикла (Г-6-ФДГ), что определяет понижение уровня продуктов пентозофосфатного цикла и ингибирование ряда реакций макромолекулярного синтеза [2, 6, 15]. Другой особенностью метаболизма иммунокомпетентных клеток крови у больных данной группы является повышение активности ГР — одного из ключевых ферментов глута-тионзависимой антиоксидантной системы. Повышение активности ГР отражает рост перекисных процессов в клетках крови у больных раком легкого без метастазов, а при этом и возможность реагирования внутриклеточных антиоксидантных систем.

Лимфоциты являются клетками, где энергетические реакции определяются интенсивностью как анаэробных, так и аэробных процессов [3, 9]. При этом цикл трикарбоновых кислот не только определяет интенсивность реакций дыхательной цепи митохондрий (за счет наработки необходимых интермедиатов), но и является связующим звеном между белковым, углеводным и липидным обменом [2, 6, 11, 13]. Анализ уровней митохондриальных дегидрогеназ в лимфоцитах крови больных раком легкого позволяет выявить дисбаланс ферментативной активности в цикле Кребса, который не зависит от метастазирования опухоли: снижение активности МДГ и повышение НАД-ИЦЦГ. Можно предположить, что к подобному состоянию интенсивности исследуемых дегидрогеназ цикла приводит снижение притока субстратов с реакций аминокислотного обмена, в котором также участвуют глу-таматдегидрогеназы в результате снижения активности НАД-ГДГ и НАДФ-ГДГ [12, 17], причем у больных раком легкого без метастазов опухоли в лимфоцитах крови снижение НАД-ГДГ и НАДФ-ГДГ более выражено, чем у больных с метастазами в лимфатических узлах корня легкого. При этом у больных с метастазированием повышается НАДФН-зависимый отток интермедиатов цикла Кребса на реакции аминокислотного обмена.

Следовательно, состояние метаболизма иммунокомпетентных клеток крови у больных раком легкого характеризуется как общими особенностями, которые определяются патогенезом, так и специфическими — в зависимости от отсутствия или наличия метастазов в лимфатических узлах корня легкого. Так, общие особенности метаболизма лимфоцитов крови определяются ингибированием реакций липидного катаболизма и анаболизма и как следствие снижением активности терминальных стадий гликолиза. При этом обменные процессы митохондриального компартмен-та характеризуются разнонаправленными изменениями активности дегидрогеназ цикла трикарбоновых

кислот и снижением активности компенсаторного притока интермедиатов на цикл Кребса с реакций аминокислотного обмена. Напряжение метаболизма митохондриального компартмента иммунокомпетентных клеток крови у больных раком легкого усиливается за счет снижения активности ЛДГ в аэробной реакции. В то же время на фоне общих особенностей внутриклеточного метаболизма проявляются и специфические. Так, у больных раком легкого с наличием метастазов в лимфатических узлах корня легкого более выражено ингибирование аэробной реакции ЛДГ, что совместно с повышенным НАДФН-зависимым оттоком субстратов на реакции аминокислотного обмена могло бы привести к снижению интенсивности реакций цикла трикарбоновых кислот. Однако у больных данной группы относительно показателей больных с отсутствием метастазов повышены уровни вспомогательных дегидрогеназных реакций цикла Кребса (НАФ-ГДГ и НАДФ-ИЦЦГ). Наиболее характерными особенностями метаболизма лимфоцитов у больных без метастазов являются изменения активности, прежде всего, ферментов цитоплазматического компартмента. Так, у больных данной группы выявляются снижение реакций, определяющих интенсивность пластического обмена, и повышение активности глу-татионзависимой антиоксидантной системы.

Таким образом, состояние иммунного статуса у больных раком легкого определяется как иммуноде-фицитное и практически не зависит от наличия или отсутствия метастазов в лимфатических узлах корня легкого. В то же время с помощью корреляционного анализа обнаружены различия во взаимосвязях между размером опухоли и показателями иммунного статуса в зависимости от метастазирования опухоли. Анализ выявленных взаимосвязей позволяет заключить, что с появлением метастазов в лимфатических узлах при раке легкого происходит разбалансировка регуляторных и иммунодепрессивных взаимосвязей опухоли и иммунной системы. При исследовании метаболического статуса лимфоцитов крови обнаружены изменения, характерные для больных раком легкого вообще и специфические для групп больных с наличием и отсутствием метастазов в лимфатических узлах. Установлено, что наиболее выраженными общими особенностями метаболизма лимфоцитов при раке легкого являются ингибирование анаэробных процессов и разбалансировка ферментативных реакций цикла трикарбоновых кислот. В то же время различия в метаболических реакциях иммунокомпетентных клеток у больных при отсутствии и наличии метастазирования опухоли определяются уровнем пластических и антиоксидантных реакций.

ЛИТЕРАТУРА

1. Барышников А. Ю. Взаимоотношение опухоли и иммунной системы организма // Практическая онкология. — 2003. — Т. 4, № 3. — С. 127-130.

2. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. — М.: Медицина, 1998. — 704 с.'

3. Грязева Н. И., Шурлыгина А. В., Вербицкая Л. В. Изменение активности лактат- и сукцинатдеги-дрогеназы лимфоцитов крови у самцов мышей с агрессивным и субмиссивным типами поведения // Бюлл. эксперим. биол. и мед. — 2000. — Т. 129, № 1. — С. 53-55.

4. Долгих В. Т. Опухолевый рост (избранные лекции). — М.: Медкнига, 2001. — 80 с.

5. Злокачественные новообразования в России и странах СИГ в 2001 г. / Под ред. М. И. Давыдова, Е. М. Аксель. — ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН. — М.: МИА, 2003. — 296 с.

6. Кнорре Д. Г„ Мызина С. Д. Биологическая химия. — М.: Высш. школа, 1998. — 479 с.

7. Перельман М. Рак легкого // Врач. — 2001. — №9, — С. 11-16.

8. Савченко А. А., Сунцова Л. Н. Высокочувствительное определение активности дегидрогеназ в лимфоцитах периферической крови биолюминесцентным методом // Лаб. дело. — 1989. — № 11. — С. 23-25.

9. Bortell R„ Moss J„ McKenna R. С. Nicotinamide adenine dinucleotide (nad) and its metabolites inhibit T lymphocyte proliferation: role of cell surface nad glycohy-drolase and pyrophosphatase activities // J. Immunol. — 2001. — Vol. 167, No. 4. — P. 2049-2059.

10. Chang H. C., Chang G. G. Involvement of single residue tryptophan 548 in the quaternary structural stability of pigeon cytosolic malic enzyme // J. Biol. Chem. — 2003. — Vol. 278, No. 26. — P. 23996-24002.

11. Hardin C. D., Kleiber B. D., Roberts Т. M. Mitochondrial Oxidative Substrate Selection in Porcine Bladder Smooth Muscle // J. Urol. — 2003. — Vol. 170, No. 5. — P. 2063-2066.

12. Lee K H, Lee W. J., Yang S. J. et al. Inhibitory effects of Cimicifuga heracleifolia extract on glutamate formation and glutamate dehydrogenase activity in cultured islets // Mol. Cells. — 2004. — Vol. 17, No. 3. — P. 509-514.

13. Lu S., Sun X., Shi C., Zhang Y. Determination of tricarboxylic acid cycle acids and other related substances in cultured mammalian cells by gradient ion-exchange chromatography with suppressed conductivity detection // J. Chromatogr. A. — 2003. — Vol. 1012, No.

2. —P. 161-168.

14. Nomori IL, Watanabe K, Ohtsuka T. et al. The size of metastatic foci and lymph nodes yielding false-negative and false-positive lymph node staging with positron emission tomography in patients with lung cancer // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. — 2004. — Vol. 127, No.

4, —P. 1087-1092.

15. Otton R., Mendonca J. R., Curi R. Diabetes causes marked changes in lymphocyte metabolism // J. Endocrinol. — 2002. — Vol. 174, No. 1. — P. 55-61.

16. Prernel K. L., MonigS. P., Sinning J. M. et al. Lymph node size and metastatic infiltration in non-small cell lung cancer // Chest. — 2003. — Vol. 123, No. 2. — P. 463-467.

17. Stanley C. A. Hyperinsulinism/hyperammonemia syndrome: insights into the regulatory role of glutamate dehydrogenase in ammonia metabolism // Mol. Genet. Metab. — 2004. — Vol. 81, Suppl. 1. — P. S45-S51.

18. Swierczynski J., Zabrocka L., Goyke E. et al. Enhanced glycerol 3-phosphate dehydrogenase activity in adipose tissue of obese humans // Mol. Cell. Biochem. — 2003. — Vol. 254, No. 1-2. — P. 55-59.

19. Yang Z., Zhang II., Hung H. C. Structural studies of the pigeon cytosolic NADP(+)-dependent malic enzyme // Protein Sci. — 2002. — Vol. 11, No. 2. — P. 332-341.