МНОГОСТАДИЙНЫЙ СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ

1. Способ хроматографического разделения для получения продукта полиненасыщенных жирных кислот (PUFA) из подаваемой смеси, который включает:
(a) очистку подаваемой смеси на первом этапе хроматографического разделения с использованием в качестве элюента смеси воды и первого органического растворителя с получением промежуточного продукта; и
(b) очистку промежуточного продукта на втором этапе хроматографического разделения с использованием в качестве элюента смеси воды и второго органического растворителя с получением PUFA-продукта,
где второй органический растворитель отличается от первого органического растворителя и имеет индекс полярности, который отличается от индекса полярности первого органического растворителя в пределах от 0,1 до 2,0,
1
4
1
4
1
4
где PUFA-продукт не является альфа-линоленовой кислотой (ALA), гамма-линоленовой кислотой (GLA), линолевой кислотой, моно-, ди- или триглицеридом ALA, моно-, ди- или триглицеридом GLA, моно, ди- или триглицеридом линолевой кислоты, сложным С-С-алкиловым эфиром ALA, сложным С-С-алкиловым эфиром GLA или сложным С-С-алкиловых эфиром линолевой кислоты или их смесью.
2. Способ по п. 1, где PUFA-продукт не является C18 PUFA, моно-, ди- или триглицеридом C18 PUFA или сложным алкиловым эфиром C18 PUFA.
3. Способ по п. 1, где первый и второй органические растворители имеют индекс полярности 3,9 или выше.
4. Способ по п. 1, где первый и второй органические растворители выбраны среди ацетонитрила и метанола.
5. Способ по п. 1, где соотношение первого органического растворителя и воды составляет от 99,9:0,1 до 75:25 частей по объему, предпочтительно от 99,5:0,5 до 80:20 частей по объему.
6. Способ по п. 1, где соотношение второго органического растворителя и воды составляет от 99,9:0,1 до 75:25 частей по объему, предпочтительно от 90:10 до 85:15 частей по объему.
7. Способ по п. 1, где первый органический растворитель представляет собой метанол, а второй органический растворитель представляет собой ацетонитрил, и где (а) соотношение метанола и воды составляет от 99,9:0,1 до 85:15 частей по объему, предпочтительно от 99,9:0,5 до 88:13 частей по объему, и/или (b) соотношение ацетонитрила и воды составляет от 90:10 до 80:20 частей по объему, предпочтительно от 88:12 до 85:15 частей по объему.
8. Способ по п. 1, где первый органический растворитель представляет собой ацетонитрил, а второй органический растворитель представляет собой метанол, и где (а) соотношение ацетонитрила и воды составляет от 99:1 до 75:25 частей по объему, предпочтительно от 96:4 до 80:20 частей по объему, и/или (b) соотношение метанола и воды составляет от 95:5 до 85:15 частей по объему, предпочтительно от 93:7 до 90:10 частей по объему.
9. Способ по п. 1, где PUFA-продукт представляет собой по меньшей мере одну из 3-ω-PUFA или по меньшей мере одну из производных 3-ω-PUFA.
10. Способ по п. 1, где PUFA-продукт представляет собой эйкозапентаеновую кислоту (EPA), докозагексаеновую кислоту (DHA), триглицерид EPA, триглицерид DHA, этиловый эфир ЕРА или этиловый эфир DHA.
11. Способ по п. 1, где PUFA-продукт представляет собой ЕРА или этиловый эфир EPA.
12. Способ по п. 1, где PUFA-продукт получают на втором этапе разделения с чистотой более 95% по массе, предпочтительно более 97% по массе, более предпочтительно более 98% по массе, еще более предпочтительно более 98,4% по массе.
1
4
13. Способ по п. 1, где PUFA-продукт содержит менее 1% по массе, предпочтительно менее 0,5% по массе, более предпочтительно менее 0,25% по массе, еще более предпочтительно менее 0,1% по массе, еще более предпочтительно менее 0,05% по массе, еще более предпочтительно менее 0,01% по массе альфа-линоленовой кислоты (ALA), моно-, ди- и триглицеридов ALA и сложных С-С-алкиловых эфиров ALA.
1
4
14. Способ по п. 1, где PUFA-продукт содержит менее 1% по массе, предпочтительно менее 0,5% по массе, более предпочтительно менее 0,25% по массе, еще более предпочтительно менее 0,1% по массе, еще более предпочтительно менее 0,05% по массе, еще более предпочтительно менее 0,01% по массе гамма-линоленовой кислоты (GLA), моно-, ди- и триглицеридов GLA и сложных С-С-алкиловых эфиров GLA.
15. Способ по п. 1, где подаваемая смесь содержит:
1
4
(i) PUFA-продукт и/или моно-, ди- или триглицерид PUFA-продукта и/или сложный С-С-алкиловый эфир PUFA-продукта и
1
4
(ii) ALA и/или моно-, ди- или триглицерид ALA и/или сложный С-С-алкиловый эфир ALA.
16. Способ по п. 1, где подаваемая смесь содержит:
1
4
(i) PUFA-продукт и/или моно-, ди- или триглицерид PUFA-продукта и/или сложный С-С-алкиловый эфир PUFA-продукта и
1
4
(ii) GLA и/или моно-, ди- или триглицерид GLA и/или сложный С-С-алкиловый эфир GLA.
17. Способ по п. 1, где
первый этап хроматографического разделения включает введение подаваемой смеси в хроматографический аппарат с неподвижным слоем, а второй этап хроматографического разделения включает введение промежуточного продукта в хроматографический аппарат с неподвижным слоем;
первый этап хроматографического разделения включает введение подаваемой смеси в хроматографический аппарат с неподвижным слоем, а второй этап хроматографического разделения включает введение промежуточного продукта в хроматографический аппарат с псевдодвижущимся или реально движущимся слоем;
первый этап хроматографического разделения включает введение подаваемой смеси в хроматографический аппарат с псевдодвижущимся или реально движущимся слоем, а второй этап хроматографического разделения включает введение промежуточного продукта в хроматографический аппарат с неподвижным слоем; или
первый этап хроматографического разделения включает введение подаваемой смеси в хроматографический аппарат с псевдодвижущимся или реально движущимся слоем, а второй этап хроматографического разделения включает введение промежуточного продукта в хроматографический аппарат с псевдодвижущимся или реально движущимся слоем.
1
4
18. Способ по п. 1, где (а) промежуточный продукт имеет более низкую концентрацию примесей, выбранных среди ALA, моно, ди- и триглицеридов ALA и сложных С-С-алкиловых эфиров ALA, чем в подаваемой смеси; и/или (b) PUFA-продукт, полученный на втором этапе разделения, имеет более низкую концентрацию указанных примесей, чем в промежуточном продукте.
1
4
19. Способ по п. 1, где (а) промежуточный продукт имеет более низкую концентрацию примесей, выбранных среди GLA, моно, ди- и триглицеридов GLA и сложных С-С-алкиловых эфиров GLA, чем в подаваемой смеси; и/или (b) PUFA-продукт, полученный на втором этапе разделения, имеет более низкую концентрацию указанных примесей, чем в промежуточном продукте.
20. PUFA-продукт, полученный способом по любому из пп. 1-19.
21. Композиция, содержащая PUFA-продукт, полученный способом по любому из пп. 1-19.
1
4
22. Композиция по п. 21, которая содержит в качестве PUFA-продукта этиловый эфир EPA, присутствующий в количестве от 98 до 99,5% по массе, причем композиция содержит менее 1% по массе ALA, моно, ди- и триглицеридов ALA и сложных С-С-алкиловых эфиров ALA.
1
4
23. Композиция по п. 21, которая содержит в качестве PUFA-продукта этиловый эфир EPA, присутствующий в количестве от 98 до 99,5% по массе, причем композиция содержит менее 1% по массе GLA, моно, ди- и триглицеридов GLA и сложных С-С-алкиловых эфиров GLA.