ОНКОЛИТИЧЕСКИЕ ШТАММЫ CLOSTRIDIUM GHONII, СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

1. Бактериальный штамм, полученный из авирулентного, непатогенного штамма Clostridium ghonii, где производный бактериальный штамм способен задерживать рост солидной опухоли или вызывать регрессию или разрушение солидной опухоли.
2. Штамм по п. 1, где указанный штамм вызывает онколизис клеток, содержащихся в микроокружении опухоли.
3. Штамм по любому из пп. 1-2, где штамм вызывает лизис от приблизительно 20% до приблизительно 90% клеток в микроокружении опухоли.
4. Штамм по любому из пп. 1-2, где штамм вызывает лизис приблизительно 20% до приблизительно 70% клеток в микроокружении опухоли.
5. Штамм по любому из пп. 1-2, где штамм вызывает лизис от приблизительно 20% до приблизительно 4 0% клеток в микроокружении опухоли.
6. Штамм по любому из пп. 1-2, где штамм вызывает лизис от приблизительно 20% до приблизительно 35% клеток в микроокружении опухоли.
7. Штамм по любому из пп. 1-2, где штамм вызывает лизис от приблизительно 25% до приблизительно 35% клеток в микроокружении опухоли.
8. Штамм по любому из пп. 1-2, где штамм вызывает меньшую токсичность, чем референсный клостридиальный штамм.
9. Штамм по любому из пп. 1-2, где авирулентный, непатогенный штамм Clostridium ghonii выбран из группы, состоящей из штаммов под регистрационными номерами АТСС 25757, BCRC 14548, CCUG 9282, DSM 15049, NCIMB 10636, PEV, Prevot PEV, VPI 4897 и VTT Е-042451.
10. Штамм по любому из пп. 1-2, где штамм выбран из группы, состоящей из MW-DCG_LCv1, MW-DCG_LCv2, MW-DCG_LCv3, MW-DCG_LCv4, MW-DCG_LCv5, MW-DCG_LCv6, MW-DCG_LCv7, MW-DCG_LCv8, MW-DCG_LCv9, MW-DCG_LCv10, MW-DCG_LCv11, MW-DCG_LCv12, MW-DCG_LCv13, MW-DCG_LCv14, MW-DCG_LCv15, MW-DCG_LCv16, MW-DCG_LCv17, MW-DCG_LCv18, MW-DCG_LCv19, MW-DCG_LCv20, MW-DCG_LCv21, MW-DCG_LCv22, MW-DCG_LCv23, MW-DCG_LCv24, MW-DCG_LCv25, MW-DCG_LCv26, MW-DCG_CCv13, MW-DCG_CCv14, MW-DCG_CCv15, MW-DCG_CCv16, MW-DCG_CCv17, MW-DCG_HNCv13, MW-DCG_HNCv14, MW-DCG_HNCv15, MW-DCG_HNCv16, MW-DCG_HNCv17 и MW-DCG_HNCv18.
11. Штамм по п. 10, где штамм выбран из группы, состоящей из MW-DCG_LCv1, MW-DCG_LCv2, MW-DCG_LCv3, MW-DCG_LCv4, MW-DCG_LCv5, MW-DCG_LCv6, MW-DCG_LCv7, MW-DCG_LCv8, MW-DCG_LCv9, MW-DCG_LCv10, MW-DCG_LCv11, MW-DCG_LCv12, DCG_HNCv13, MW-DCG_HNCv14, MW-DCG_HNCv15, MW-DCG_HNCv16, MW-DCG_HNCv17 и MW-DCG_HNCv18, где штамм обладает специфичностью и терапевтически эффективен в отношении злокачественных солидных опухолей головы и шеи.
12. Штамм по п. 11, где штаммом является MW-DCG_HNCv18, представленный регистрационным номером V12/001485.
13. Штамм по п. 10, где штамм выбран из группы, состоящей из MW-DCG_LCv1, MW-DCG_LCv2, MW-DCG_LCv3, MW-DCG_LCv4, MW-DCG_LCv5, MW-DCG_LCv6, MW-DCG_LCv7, MW-DCG_LCv8, MW-DCG_LCv9, MW-DCG_LCv10, MW-DCG_LCv11, MW-DCG_LCv12, MW-DCG_CCv13, MW-DCG_CCv14, MW-DCG_CCv15, MW-DCG_CCv16 и MW-DCG_CCv17, где штамм обладает специфичностью и терапевтически эффективен в отношении злокачественных солидных опухолей толстой кишки.
14. Штамм по п. 13, где штаммом является MW-DCG_CCv17, представленный регистрационным номером V12/001487.
15. Штамм по п. 10, где штамм выбран из группы, состоящей из MW-DCG_LCv1, MW-DCG_LCv2, MW-DCG_LCv3, MW-DCG_LCv4, MW-DCG_LCv5, MW-DCG_LCv6, MW-DCG_LCv7, MW-DCG_LCv8, MW-DCG_LCv9, MW-DCG_LCv10, MW-DCG_LCv11, MW-DCG_LCv12, MW-DCG_LCv13, MW-DCG_LCv14, MW-DCG_LCv15, MW-DCG_LCv16, MW-DCG_LCv17, MW-DCG_LCv18, MW-DCG_LCv19, MW-DCG_LCv20, MW-DCG_LCv21, MW-DCG_LCv22, MW-DCG_LCv23, MW-DCG_LCv24, MW-DCG_LCv25 и MW-DCG_LCv26, где штамм обладает специфичностью и терапевтически эффективен в отношении злокачественных солидных опухолей легкого.
16. Штамм по п. 15, где штаммом является MW-DCG_LCv26, представленный регистрационным номером V12/001486.
17. Клостридиальная спора штамма по любого из пп. 1-2.
18. Клостридиальная спора по п. 17 в комбинации с физиологически приемлемым носителем и/или вспомогательным веществом.
19. Способ подавления роста, регрессии или разрушения одной или более солидных злокачественных опухолей у субъекта, где способ включает введение терапевтически эффективного количества одной или более клостридиальных спор по п. 17 указанному субъекту, нуждающемуся в этом.
20. Применение одной или более клостридиальных спор по п. 17 для подавления роста, для регрессии или разрушения одной или более солидных опухолей у субъекта, где терапевтически эффективное количество указанной одной или более спор вводят указанному субъекту, нуждающемуся в этом.
21. Способ лечения одной или более солидных злокачественных опухолей у субъекта, где подавление роста опухоли, регрессия опухоли или разрушение опухоли являются показателем лечения, где способ включает введение:
(1) терапевтически эффективного количества одной или более клостридиальных спор по п. 18 и
(2) терапевтически эффективного количества противоопухолевого средства указанному субъекту.
22. Применение одной или более клостридиальных спор по п. 17 и противоопухолевого средства в комбинированной терапии для лечения одной или более солидных злокачественных опухолей у субъекта, где подавление роста одной или более опухолей, регрессия опухоли или разрушение опухоли являются показателем лечения, где (1) терапевтически эффективное количество указанной одной или более клостридиальных спор и (2) терапевтически эффективное количество указанного противоопухолевого средства вводят указанному субъекту, нуждающемуся в этом.
23. Способ по п. 21, где введение (1) и (2) указанному субъекту происходит последовательно или одновременно.
24. Способ по п. 21, где (1) и (2) вводят как одну фармацевтическую композицию указанному субъекту.
25. Способ по п. 21, где введение (1) и (2) повторяют один или более раз, чтобы гарантировать регрессию опухоли.
26. Способ по п. 21, где (1) и (2) вводят указанному субъекту в качестве первой дозы, с последующим введением (2) в качестве второй дозы.
27. Способ по п. 21, где указанному субъекту вводят более одного противоопухолевого средства.
6
14
28. Способ по п. 21, где терапевтически эффективное количество одной или более клостридиальных спор составляет от приблизительно 10 колониеобразующих единиц (КОЕ) до приблизительно 10 КОЕ/кг на дозу.
29. Способ по п.21, где введение терапевтически эффективного количества одной или более клостридиальных спор указанному субъекту производят посредством внутривенного, люмбального, подкожного или внутримышечного введения.
30. Фармацевтическая композиция, включающая одну или более клостридиальных спор по п. 17 и физиологически приемлемый носитель и/или вспомогательное вещество.
31. Композиция по п. 30, дополнительно включающая одно или более противоопухолевых средств.
32. Композиция по п. 31, где противоопухолевое средство выбрано из группы, состоящей из химических соединений, молекул РНК, антител или их любой комбинации.
33. Композиция по п. 32, где химическое соединение выбрано из группы, состоящей из дихлорацетата натрия, паклитаксела, доксила, топотекана, ДНК-модифицирующих средств, карбоплатина, антиметаболитов, гемцитабина, лекарственных средств, которые блокируют деление клеток, винкристина, антиангиогенных средств и пазопаниба.
34. Композиция по п. 32, где молекула РНК является малой интерферирующей РНК (миРНК).
35. Композиция по п. 34, где миРНК специфична к лактатдегидрогеназе (LDHA) или специфична к CD147.
36. Композиция по п. 32, где антитело является противоопухолевым моноклональным антителом.
37. Композиция по п. 36, где противоопухолевое антитело является антителом против иммунной стимуляции или моноклональным антителом против регуляторных Т-клеток.
38. Композиция по п. 37, где антитело против иммунной стимуляции является моноклональным антителом против CD40.
39. Композиция по п. 38, где моноклональным антителом против CD40 является FGK45.
40. Композиция по п. 37, где моноклональное антитело против регуляторных Т-клеток является моноклональным антителом против CD25.
41. Композиция по п. 40, где моноклональным антителом против CD25 является РС61.
42. Композиция по п. 36, где антитело направлено против рецептора эпидермального фактора роста (EGFR).
43. Композиция по п. 36, где противоопухолевое моноклональное антитело конъюгировано.
44. Композиция по п. 43, где антитело конъюгировано с радиоизотопом или активизирующим лекарственное средство ферментом.
18
90
90
131
131
45. Композиция по п. 44, где антителом или радиоизотопом являются рений-188 или рений-186, фтордезоксиглюкоза (F), иттрий-90 (Y)-конъюгированное антитело против CD20 Y-ибритутомаб тиуксетан, или иод-131 (I)-конъюгированное антитело против CD20 I-тозитумомаб.
46. Композиция по п. 43, где антитело конъюгировано с липосомой или наночастицей.
47. Способ получения бактериального штамма из авирулентного, непатогенного штамма Clostridium ghonii, где производный бактериальный штамм, полученный указанным способом, способен подавлять рост, вызывать регрессию или разрушение одной или более солидных опухолей, вследствие онколизиса клеток в микроокружении одной или более опухолей, где указанный производный бактериальный штамм, полученный указанным способом, вызывает меньшую токсичность, чем референсный клостридиальный штамм.
48. Способ по п. 47, включающий:
(1) получение инъекционной формы клостридиальных спор из авирулентного, непатогенного штамма Clostridium ghonii, включающее:
(а) инокуляцию вегетативных палочек бактериального штамма (1) в среду спорулирования,
(b) выдерживание в течение времени и при условиях, которые достаточны для спорулирования палочек, и
(c) очистку спор;
(2) введение очищенных клостридиальных спор (1) животному, которое поддерживает рост солидной опухоли;
(3) оценку параметров с целью определения скорости и степени онколизиса и токсичности;
(4) сбор вегетативных палочек из опухоли (2) при извлечении опухоли;
(5) посев палочек (4) на чашку с агаром;
(6) отбор двух или более одиночных колоний с чашки (5) и инокуляцию питательной культуры для выращивания вегетативных палочек; и
(7) повтор этапов (1)(а)-(6) от приблизительно 10 до приблизительно 35 раз.
49. Способ по п. 48, где указанные две или более одиночных колоний (6) являются тремя одиночными колониями.
50. Способ по п. 48, где этапы (1)(а)-(6) повторяют от приблизительно 15 до приблизительно 30 раз.
51. Способ по п. 48, где этапы (1)(а)-(6) повторяют от приблизительно 17 до приблизительно 26 раз.
52. Способ по п. 48, где параметры (3) включают время колонизации спор, онколизиса, образования гноя и разрыва, объем опухоли, системную токсичность, выживание животных, количество спор/палочек, выделенных из опухолей после внутривенного введения спор или их любую комбинацию.
53. Клостридиальный штамм, полученный способом по п. 49, где штамм вызывает лизис от приблизительно 20% до приблизительно 90% или от приблизительно 20% до приблизительно 70%, или от приблизительно 20% до приблизительно 40%, или от приблизительно 20% до приблизительно 35%, или от приблизительно 25% до приблизительно 35% клеток в микроокружении опухоли.
54. Набор для лечения одной или более солидных злокачественных опухолей, включающий одну или более клостридиальных спор по п. 17 или фармацевтическую композицию по п. 30, дополнительно включающую противоопухолевое средство, и инструкции по применению.
55. Способ по п. 21, где субъектом является млекопитающее.
56. Способ по п. 55, где млекопитающим является человек.
57. Способ по п. 21, где одна или более солидных злокачественных опухолей выбраны из группы, состоящей из карцином дыхательной системы, карцином желудочно-кишечной системы, карцином мочеполовой системы, карцином яичка, карцином молочной железы, карцином предстательной железы, карцином эндокринной системы, меланом, хориокарциномы и карцином шейки матки, легкого, головы и шеи, толстой кишки, яичника, мозга, мочевого пузыря, молочной железы, предстательной железы, опухолей костной, жировой и хрящевой ткани, болезни Ходжкина, неходжкинской лимфомы, В-клеточной лимфомы, эпителиотропной лимфомы, комплексной лимфомы, анапластической крупноклеточной лимфомы, лимфомы лимфоидной ткани, ассоциированной с желудочной и нежелудочной слизистой, лимфопролиферативной болезни, Т-клеточной лимфомы, лимфомы Беркитта, мантийноклеточной лимфомы, диффузной крупноклеточной лимфомы, лимфоплазмацитоидной лимфомы и множественной миеломы.
58. Применение:
(1) терапевтически эффективного количества одной или более клостридиальных спор по п. 16 и
(2) терапевтически эффективного количества противоопухолевого средства,
в производстве лекарственного средства для лечения одной или более солидных злокачественных опухолей у субъекта, где подавление роста, регрессия опухоли или разрушение опухоли являются показателем лечения, где способ включает введение лекарственного средства указанному субъекту.
59. Применение по п. 58, дополнительно включающее два или более противоопухолевых средств.
60. Штамм по п. 2, где штамм дополнительно способен разрушать или подавлять рост солидной опухоли в результате онколизиса тканевых структур, содержащихся в микроокружении.
61. Штамм по п. 60, где онколизис вызывает один или более ферментов в клетках нового штамма.
62. Штамм по п. 61, где один или более ферментов выбраны из группы, состоящей из протеиназ, липаз и коллагеназ.