СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕТЕРОГЕННОГО БИОКАТАЛИЗАТОРА, БИОКАТАЛИЗАТОР НА ОСНОВЕ ГИДРОЛАЗЫ ЭФИРОВ АЛЬФА-АМИНОКИСЛОТ И СПОСОБ СИНТЕЗА АМИНОЦЕФАЛОСПОРИНОВ И АМИНОПЕНИЦИЛЛИНОВ ПОД ДЕЙСТВИЕМ ЭТОГО БИОКАТАЛИЗАТОРА

1. Способ получения гетерогенного биокатализатора на основе внутриклеточной гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий рода Xanthomonas, включающий разрушение биомассы клеток, экстракцию из нее фермента в водную фазу и последующую его иммобилизацию, отличающийся тем, что используют биомассу клеток бактерий Xanthomonas rubrilineans; разрушение клеток осуществляют поэтапно, сначала нарушая их целостность криогенным воздействием, а затем, обрабатывая водную суспензию размороженных клеток бутилацетатом; экстракцию фермента в водную фазу проводят при нагревании обработанной клеточной суспензии сначала в условиях спонтанно устанавливающегося градиента рН, а затем при постоянном значении рН, поддерживаемом путем добавления раствора титранта, вплоть до прекращения процедуры экстракции, используя в качестве критерия выбора момента остановки степень изменения скорости расхода раствора титранта; бесклеточный экстракт, получаемый после отделения разрушенной клеточной биомассы, используют без какой-либо очистки для процедуры иммобилизации фермента путем его осаждения в виде ферментных агрегатов и их последующей поперечной сшивки.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что криогенное воздействие на клетки осуществляют, замораживая биомассу до температуры -25°С или ниже, предпочтительно от -25 до -30°С.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что для обработки клеток бутилацетатом используют водную суспензию с концентрацией биомассы клеток 20÷100 мг сух./мл.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что бутилацетат используют в концентрации 2÷6 об.%.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что экстракцию фермента осуществляют при температуре 25÷35°С.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что для осаждения ферментных агрегатов из бесклеточного экстракта используют полиэтиленгликоль с молекулярной массой 4000÷10000 в количестве, необходимом для полного осаждения фермента.
-2
-2
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что для поперечной сшивки ферментных агрегатов используют глутаровый альдегид в относительной концентрации 1·10÷5·10 ммоль/мг белка.
8. Гетерогенный биокатализатор на основе внутриклеточной гидролазы эфиров альфа-аминокислот из бактерий рода Xanthomonas, характеризующийся тем, что он получен способом по п.1, содержит до 0,95 г белка/г сухого биокатализатора и обладает синтетазной активностью до 2200 МЕ/г сухого биокатализатора.
9. Способ ферментативного синтеза аминоцефалоспоринов и аминопенициллинов путем ацилирования ключевого бета-лактамного соединения соответствующими производными эфиров Д-аминофенилуксусной кислоты, отличающийся тем, что ферментативную реакцию синтеза проводят под действием гетерогенного биокатализатора по п.8.