АНТИТЕЛО К EPHA2

1. Антитело, которое распознает эпитоп, распознаваемый антителом, продуцируемым гибридомой SH348-1 (FERM BP-10836).
2. Антитело по п.1, где антитело обладает следующими свойствами a)-d):
a) не обладает способностью к фосфорилированию тирозиновых остатков EPHA2;
b) обладает активностью ADCC по отношению к клеткам, экспрессирующим EPHA2;
c) обладает активностью CDC по отношению к клеткам, экспрессирующим EPHA2; и
d) обладает противоопухолевой активностью in vivo.
3. Антитело по п.1, где антитело обладает следующими свойствами a)-e):
a) не обладает способностью к фосфорилированию остатков тирозина EPHA2;
b) демонстрирует эффект снижения уровня белка EPHA2;
c) обладает активностью ADCC по отношению к клеткам, экспрессирующим EPHA2;
d) обладает активностью CDC по отношению к клеткам, экспрессирующим EPHA2; и
e) обладает противоопухолевой активностью in vivo.
4. Антитело, которое специфично связывается с полипептидом, состоящим из аминокислотной последовательности, соответствующей аминокислотам с No. 426-534 в SEQ ID NO: 8 в списке последовательностей.
5. Антитело, которое специфично связывается с полипептидом, состоящим из аминокислотной последовательности, соответствующей аминокислотам с No. 426-534 в SEQ ID NO: 8 в списке последовательностей и обладает следующими свойствами a)-d):
a) не обладает способностью к фосфорилированию тирозиновых остатков EPHA2;
b) обладает активностью ADCC по отношению к клеткам, экспрессирующим EPHA2;
c) обладает активностью CDC по отношению к клеткам, экспрессирующим EPHA2; и
d) обладает противоопухолевой активностью in vivo.
6. Антитело, которое специфично связывается с пептидом, состоящим из последовательности аминокислот, представленной аминокислотами с No. 426-534 в SEQ ID NO: 8 в списке последовательностей и обладает следующими свойствами a)-e):
a) не обладает способностью к фосфорилированию остатков тирозина EPHA2;
b) демонстрирует эффект снижения уровня белка EPHA2;
c) обладает активностью ADCC по отношению к клеткам, экспрессирующим EPHA2;
d) обладает активностью CDC по отношению к клеткам, экспрессирующим EPHA2; и
e) обладает противоопухолевой активностью in vivo.
7. Антитело по любому из пп.1-6, где антитело специфически связывается с пептидом, состоящим из последовательности аминокислот, представленной аминокислотами с No. 439-534 в SEQ ID NO: 8 в списке последовательностей.
8. Антитело по любому из пп.1-6, где антитело ингибирует фосфорилирование тирозиновых остатков EPHA2, индуцированное лигандом EPHA2.
9. Антитело по любому из пп.1-6, где антитело не ингибирует связывание лиганда EPHA2 с EPHA2, но ингибирует фосфорилирование тирозиновых остатков EPHA2, индуцированное лигандом EPHA2.
10. Антитело, которое специфично связывается с полипептидом, состоящим из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 8 в списке последовательностей, где антитело имеет аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID No: 59, 61 и 63 в списке последовательностей или аминокислотные последовательности с делецией, заменой или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотных последовательностях, в качестве определяющих комплементарность областей в вариабельной области тяжелой цепи и имеет аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID No: 65, 67 и 69 в списке последовательностей, или аминокислотные последовательности с делецией, заменой или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотных последовательностях, в качестве определяющих комплементарность областей в вариабельной области легкой цепи.
11. Антитело, которое специфично связывается с полипептидом, состоящим из последовательности аминокислот, представленных в SEQ ID NO: 8 в списке последовательностей, характеризующееся следующим 1) и 2):
1) имеет пептид тяжелой цепи, содержащий последовательность аминокислот, представленную общей формулой (I)
1
1
2
2
3
3
4
-FRH-CDRH-FRH-CDRH-FRH-CDRH-FRH-, (I)
1
1
2
2
3
3
4
где FRH обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, содержащую от 18 до 30 аминокислот; CDRH обозначает аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 59 в списке последовательностей, или аминокислотную последовательность с делецией, заменой или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности; FRH обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, состоящую из 14 аминокислот; CDRH обозначает аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 61 в списке последовательностей, или аминокислотную последовательность с делецией, заменой или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности; FRH обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, состоящую из 32 аминокислот; CDRH обозначает аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 63 в списке последовательностей, или аминокислотную последовательность с делецией, заменой или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности; и FRH обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, состоящую из 11 аминокислот, где эти аминокислоты связаны друг с другом посредством пептидных связей; и
2) имеет полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную общей формулой (II)
1
1
2
2
3
3
4
-FRL-CDRL-FRL-CDRL-FRL-CDRL-FRL-, (II)
1
1
2
2
3
3
4
где FRL обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, состоящую из 23 аминокислот; CDRL обозначает аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 65 в списке последовательностей, или аминокислотную последовательность с делецией, заменой или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности; FRL обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, состоящую из 15 аминокислот; CDRL обозначает аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 67 в списке последовательностей; FRL обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, состоящую из 32 аминокислот; CDRL обозначает аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 69 в списке последовательностей, или аминокислотную последовательность с делецией, заменой или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности; и FRL обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, состоящую из 10 аминокислот, где эти аминокислоты связаны друг с другом посредством пептидных связей.
12. Антитело, которое распознает эпитоп, распознаваемый антителом, продуцируемым гибридомой SH357-1 (FERM BP-10837).
13. Антитело по п.12, где антитело обладает следующими свойствами a)-d):
a) не обладает способностью к фосфорилированию тирозиновых остатков EPHA2;
b) обладает активностью ADCC по отношению к клеткам, экспрессирующим EPHA2;
c) обладает активностью CDC по отношению к клеткам, экспрессирующим EPHA2; и
d) обладает противоопухолевой активностью in vivo.
14. Антитело, которое специфично связывается с пептидом, состоящим из последовательности аминокислот, соответствующей аминокислотам с No. 426-534 в SEQ ID NO: 8 в списке последовательностей, и обладает следующими свойствами a)-e):
a) не обладает способностью индуцировать фосфорилирование остатков тирозина EPHA2;
b) не демонстрирует эффект снижения уровня белка EPHA2;
c) обладает активностью ADCC по отношению к клеткам, экспрессирующим EPHA2;
d) обладает активностью CDC по отношению к клеткам, экспрессирующим EPHA2; и
e) обладает противоопухолевой активностью in vivo.
15. Антитело по любому из пп.12-14, где антитело специфично связывается с пептидом, состоящим из последовательности аминокислот, соответствующей аминокислотам с No. 439-534 в SEQ ID NO: 8 в списке последовательностей.
16. Антитело по любому из пп.12-14, где антитело ингибирует фосфорилирование остатков тирозина EPHA2, индуцированное лигандом EPHA2.
17. Антитело по любому из пп.12-14, где антитело не ингибирует связывание лиганда EPHA2 с EPHA2, но ингибирует фосфорилирование остатков тирозина EPHA2, индуцированное лигандом EPHA2.
18. Антитело, которое специфично связывается с полипептидом, состоящим из аминокислотной последовательности, соответствующей SEQ ID NO: 8 в списке последовательностей, где антитело имеет аминокислотные последовательности, соответствующие SEQ ID No: 71, 73 и 75 в списке последовательностей, или аминокислотные последовательности с делецией, заменой или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотных последовательностях, в качестве определяющих комплементарность областей в вариабельной области тяжелой цепи и имеет аминокислотные последовательности, соответствующие SEQ ID No: 77, 79 и 81 в списке последовательностей, или аминокислотные последовательности с делецией, заменой или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотных последовательностях, в качестве определяющих комплементарность областей в вариабельной области легкой цепи.
19. Антитело, которое специфично связывается с полипептидом, состоящим из последовательности аминокислот, соответствующей SEQ ID NO: 8 в списке последовательностей, характеризующееся следующими 1) и 2):
1) имеет пептид тяжелой цепи, содержащий последовательность аминокислот, представленную общей формулой (I)
1
1
2
2
3
3
4
-FRH-CDRH-FRH-CDRH-FRH-CDRH-FRH-, (I)
1
1
2
2
3
3
4
где FRH обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, содержащую от 18 до 30 аминокислот; CDRH обозначает аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 71 в списке последовательностей, или аминокислотную последовательность с делецией, заменой или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности; FRH обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, состоящую из 14 аминокислот; CDRH обозначает аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 73 в списке последовательностей, или аминокислотную последовательность с делецией, заменой или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности; FRH обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, состоящую из 32 аминокислот; CDRH обозначает аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 75 в списке последовательностей, или аминокислотную последовательность с делецией, заменой или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности; и FRH обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, состоящую из 11 аминокислот, где эти аминокислоты связаны друг с другом посредством пептидных связей; и
2) имеет полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, представленную общей формулой (II)
1
1
2
2
3
3
4
-FRL-CDRL-FRL-CDRL-FRL-CDRL-FRL-, (II)
1
1
2
2
3
3
4
где FRL обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, состоящую из 23 аминокислот; CDRL обозначает аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 77 в списке последовательностей, или аминокислотную последовательность с делецией, заменой или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности; FRL обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, состоящую из 15 аминокислот; CDRL обозначает аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 79 в списке последовательностей, или аминокислотную последовательность с делецией, заменой или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности; FRL обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, состоящую из 32 аминокислот; CDRL обозначает аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 81 в списке последовательностей, или аминокислотную последовательность с делецией, заменой или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности; и FRL обозначает произвольно выбранную аминокислотную последовательность, состоящую из 10 аминокислот, где эти аминокислоты связаны друг с другом посредством пептидных связей.
20. Антитело по любому из пп.1-6, 10-14, 18 или 19, отличающееся тем, что антитело является гуманизированным антителом.
21. Антитело по любому из пп.1-6, 10-14, 18 или 19, отличающееся тем, что антитело является антителом человека.
22. Антитело по любому из пп.1-6, 10-14, 18 или 19, отличающееся тем, что антитело представляет собой антитело класса IgG.
23. Антитело по любому из пп.1-6 или 12-14, отличающееся тем, что антитело представляет собой любое, выбранное из Fab, F(ab')2, Fv, scFv диатела, линейного антитела и полиспецифического антитела.
24. Антитело, продуцируемое гибридомой SH348-1 (FERM BP-10836).
25. Антитело, продуцируемое гибридомой SH357-1 (FERM BP-10837).
26. Антитело, содержащее следующие 1) и 2):
1) полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 1-119 в SEQ ID NO: 35 в списке последовательностей, или полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 1-119 в SEQ ID NO: 39 в списке последовательностей; и
2) полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 1-112 в SEQ ID NO: 37 в списке последовательностей, или полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 1-112 в SEQ ID NO: 41 в списке последовательностей.
27. Антитело, содержащее следующие 1) или 2):
1) полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 1-119 в SEQ ID NO: 35 в списке последовательностей, и полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 1-112 в SEQ ID NO: 37 в списке последовательностей; и
2) полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 1-119 в SEQ ID NO: 39 в списке последовательностей, и полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 1-112 в SEQ ID NO: 41 в списке последовательностей.
28. Антитело, содержащее следующие 1) и 2):
1) полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 35 в списке последовательностей, или полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 39 в списке последовательностей; и
2) полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 37 в списке последовательностей, или полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 41 в списке последовательностей.
29. Антитело, содержащее следующие 1) или 2):
1) полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 35 в списке последовательностей, и полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 37 в списке последовательностей; и
2) полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 39 в списке последовательностей, и полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 41 в списке последовательностей.
30. Антитело, полученное посредством гуманизации антитела по любому из пп.24-29.
31. Антитело, содержащее следующие 1) и 2):
1) полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-468 в SEQ ID NO: 107 в списке последовательностей, или полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-468 в SEQ ID NO: 115 в списке последовательностей; и
2) полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-239 в SEQ ID NO: 91 в списке последовательностей, или полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-239 в SEQ ID NO: 99 в списке последовательностей.
32. Антитело, содержащее следующие 1) или 2):
1) полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-468 в SEQ ID NO: 107 в списке последовательностей, и полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-239 в SEQ ID NO: 91 в списке последовательностей; и
2) полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-468 в SEQ ID NO: 115 в списке последовательностей, и полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-239 в SEQ ID NO: 99 в списке последовательностей.
33. Антитело, содержащее следующие 1) и 2):
1) полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-468 в SEQ ID NO: 139 в списке последовательностей, или полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-468 в SEQ ID NO: 147 в списке последовательностей; и
2) полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-239 в SEQ ID NO: 123 в списке последовательностей, или полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-239 в SEQ ID NO: 131 в списке последовательностей.
34. Антитело, содержащее следующие 1) или 2):
1) полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-468 в SEQ ID NO: 139 в списке последовательностей, и полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-239 в SEQ ID NO: 123 в списке последовательностей; и
2) полипептид тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-468 в SEQ ID NO: 147 в списке последовательностей, и полипептид легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-239 в SEQ ID NO: 131 в списке последовательностей.
35. Fab, F(ab')2, Fv, scFv, диатело, линейное антитело или полиспецифическое антитело, полученное из любого антитела по любому из пп.24-29 и 31-34.
36. Любой полипептид, выбранный из группы, состоящей из следующих 1)-20):
1) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 1-119 в SEQ ID NO: 35 в списке последовательностей;
2) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 1-119 в SEQ ID NO: 39 в списке последовательностей;
3) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 1-112 в SEQ ID NO: 37 в списке последовательностей;
4) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 1-112 в SEQ ID NO: 41 в списке последовательностей;
5) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-468 в SEQ ID NO: 107 в списке последовательностей;
6) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-468 в SEQ ID NO: 115 в списке последовательностей;
7) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-138 в SEQ ID NO: 107 в списке последовательностей;
8) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-138 в SEQ ID NO: 115 в списке последовательностей;
9) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-239 в SEQ ID NO: 91 в списке последовательностей;
10) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-239 в SEQ ID NO: 99 в списке последовательностей;
11) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-134 в SEQ ID NO: 91 в списке последовательностей;
12) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-134 в SEQ ID NO: 99 в списке последовательностей;
13) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-468 в SEQ ID NO: 139 в списке последовательностей;
14) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-468 в SEQ ID NO: 147 в списке последовательностей;
15) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-138 в SEQ ID NO: 139 в списке последовательностей;
16) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 20-138 в SEQ ID NO: 147 в списке последовательностей;
17) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-239 в SEQ ID NO: 123 в списке последовательностей;
18) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-239 в SEQ ID NO: 131 в списке последовательностей;
19) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-134 в SEQ ID NO: 123 в списке последовательностей; и
20) полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотам с No. 21-134 в SEQ ID NO: 131 в списке последовательностей.
37. Гибридома SH348-1 мыши (FERM BP-10836).
38. Гибридома SH357-1 мыши (FERM BP-10837).
39. Фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что она содержит по меньшей мере одно антитело, выбранное из антител по пп.1-6, 10-14, 18, 19, 24-29 и 31-34.
40. Фармацевтическая композиция для лечения злокачественных опухолей, отличающаяся тем, что она содержит по меньшей мере одно антитело, выбранное из антител по пп.1-6, 10-14, 18, 19, 24-29 и 31-34.
41. Применение антитела по пп.1-6, 10-14, 18, 19, 24-29 и 31-34 для получения лекарственного средства для ингибирования роста опухоли у млекопитающего.
42. Применение по п.41, отличающееся тем, что опухоль является опухолью, экспрессирующей EPHA2.
43. Способ ингибирования роста опухоли у млекопитающего, включающий введение любого антитела, выбранного из группы, состоящей из антител по пп.1-6, 10-14, 18, 19, 24-29 и 31-34.
44. Способ по п.43, отличающийся тем, что опухоль является опухолью, содержащей EPHA2.
45. Полинуклеотид, кодирующий антитело или полипептид по любому из пп.1-6, 10-14, 18, 19, 24-29 и 31-34 и 36.
46. Клетка-хозяин, трансформированная полинуклеотидом по п.45.
47. Способ получения антитела с использованием клетки-хозяина по п.46.