СПОСОБ ОДНОВРЕМЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛИМЕРАЗНОЙ И НУКЛЕАЗНОЙ АКТИВНОСТЕЙ ДНК-ПОЛИМЕРАЗ

1. Способ одновременного определения полимеразной и нуклеазной активностей ДНК-полимераз, включающий приготовление реакционной смеси, содержащей реакционный буфер, субстрат, дезоксирибонуклеозидтрифосфаты, краситель и препарат ДНК-полимеразы, и измерение полимеразной активности ДНК-полимеразы по изменению интенсивности флуоресценции красителя, отличающийся тем, что в качестве субстрата используют дуплекс, состоящий из шпилечного олигонуклеотида с выступающим 5'-концом и сайтом посадки зонда, и гибридизованного с ним олигонуклеотидного зонда, содержащего репортерный флуорофор и гаситель флуоресценции, для определения нуклеазной активности ДНК-полимеразы измеряют изменение интенсивности флуоресценции флуорофора; при этом для определения 5'-3'-экзонуклеазной активности используют полностью комплементарный шпилечному олигонуклеотиду зонд, а для определения эндонуклеазной активности - частично комплементарный шпилечному олигонуклеотиду зонд.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что для определения 5'-3'-экзонуклеазной активности олигонуклеотидный зонд метят репортерным флуорофором 6-карбоксиродамином (R6G) по 5'-концу и гасителем 4'-(2-нитро-4-толуилдиаза)-2'-метокси-5'-метилдиазобензил-4'-(N-этил)-N-2-этанолом (BHQ-1) по 3'-концу.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что для определения эндонуклеазной активности олигонуклеотидный зонд метят репортерным флуорофором ROX по 5'-концу и гасителем BHQ-1, положение которого в пределах зонда может варьировать.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют термостабильные красители, преимущественно SYBR Green I, и SYTO 13.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что для детекции флуоресценции используют амплификатор с оптическим модулем.