Использование желчи в качестве образцов для молекулярно-генетического исследования

ИТОГИ РАБОТЫ СУПЕБНО-БИОЛОГИЧЕСКОГО ОТПЕЛА И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ ГБУЗ МО «БЮРО СМЭ»

Л. А. Кузьмина, В. В. Рындин

• Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области

• Аннотация: В статье обобщен опыт работы судебно-биологического отдела и молекуляр-но-генетической лаборатории ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» в настоящее время, проведен анализ статистических показателей работы обоих подразделений. Уделено внимание вопросам их взаимодействия и преемственности судеб-но-биологических и молекулярно-генетических исследований.

• Ключевые слова: судебно-биологические исследования, молекулярно-генетические исследования, дифференцирование крови, цитологические исследования, ДНК, биологическое родство, спорное отцовство, идентификационные экспертизы, полимеразная цепная реакция, новые технологии

В 2015 году в судебно-биологическом отделе ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» произведено 3946 экспертиз и экспертных исследований (в 2014 г. - 3915), исследовано 19 618 предметов (в 2014 г. - 21 781) и выполнено 271 739 объект/исследований (в 2014 г. - 290 263). При некотором уменьшении показателей по сравнению с 2014 годом объем выполненной работы остается очень высоким.

Метод дифференцирования крови в следах вещественных доказательств по различным системам (при одногруппной по системе АВО крови) уменьшался с каждым годом и в 2014-2015 годах не проводился. Отказ от дифференцирования крови в следах вещественных доказательств связан с более широким внедрением в практику работы судебно-биологического отдела ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» молекулярно-генетиче-ских методов исследования.

В 27 экспертизах были применены цитологические методы исследования: определение половой принадлежности крови, половой и региональной принадлежности эпителия. Процент цитологических исследований составил 0,1. Этот метод исследования также имеет устойчивую тенденцию к уменьшению, и прежде всего это связано с тем, что большая часть биологических объектов, таких как подногтевое содержимое с рук, смывы с половых членов подозреваемых лиц, сразу поступают на молекуляр-но-генетическое исследование, минуя биологическую составляющую, так как информативность генетического результата значительно превышает информативность, полученную в результате цитологического исследования.

Сроки производства судебно-биологических экспертиз: 76,6 % экспертиз выполняется в срок до двух недель, 23,4 % - в срок до 1 месяца; случаев превышения месячного срока нет.

В ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» молекулярно-генетическая лаборатория была организована на базе и в составе судеб-но-биологического отдела в 1996 году. Сначала в основном это были экспертизы по установлению родства (отцовство), где использовался чистый материал: кровь и буккальный эпителий, но впоследствии лаборатория успешно начала выполнять экспертизы по уголовным делам. В настоящее время она занимает две трети помещений всего отдела. Выделены производственные зоны для обеспечения и строгого соблюдения локализации основных стадий рабочего процесса.

В 2015 году в молекулярно-генетической лаборатории ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» произведено 977 экспертиз и экспертных исследований (в 2014 г. - 1169). Установлено 50 537 условных генотипов (в 2014 г. - 52 922).

В сравнении с предыдущими годами, где очевидна тенденция к росту, обусловленная высокой востребованностью молекулярно-генетических экспертиз правоохранительными органами, в 2015 году количество судебно-генетических экспертиз уменьшилось на 199, что объясняется общим снижением числа назначаемых экспертиз вещественных доказательств представителями правоохранительных органов.

Количество предметов на одну экспертизу у экспертов-генетиков составило 3,4; тот же показатель у экспертов-биологов - 5,8. Эти показатели свидетельствуют о целенаправленном отборе вещественных доказательств и обнаруженных на них следов биологического происхождения на этапе судебно-биологического исследования и дифференцирования объектов для последующей мо-лекулярно-генетической экспертизы. Это позволяет повысить производительность труда экспертов-генетиков и значительно снизить сроки производства судебно-ге-нетических экспертиз: в срок до 14 дней произведено 244 экспертизы (25 %), до одного месяца - 733 (75 %).

ВЫВОДЫ

Эксперты-биологи находят необходимый субстрат (кровь, сперма, слюна и т.д.), а эксперты-генетики конкретно с этим объектом продолжают работать и конкретизируют результат. Кроме того, биологи описывают вещественные доказательства, проводят их целенаправленный отбор для дальнейшего молекулярно-генетиче-ского исследования. И те и другие специалисты работают в очень тесном контакте, постоянно взаимодействуя друг с другом, и эту модель существования и взаимодействия молекулярно-генетических и биологических методов исследования следует признать наиболее эффективной.

Наряду с производством экспертных исследований в 2015 году в молекулярно-генетической лаборатории су-дебно-биологического отдела освоены и внедрены в практическую деятельность новые высокотехнологичные методики исследования костной ткани и зубов от трупов, гистологических препаратов, пота на вещественных доказательствах, а также исследование гаплотипа У-хромосо-мы, позволяющее высказываться о родстве по мужской линии.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ЖЕЛЧИ В КАЧЕСТВЕ ОБРАЗЦОВ ДЛЯ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

М. В. Куйкина, Т. А. Смагина, В. В. Рындин • Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области (нач. - д.м.н., проф. В. А. Клевно) • Аннотация: Доклад посвящен использованию в качестве биологического материала для молекулярно-генетического исследования образцов желчи, изъятых от трупов в процессе их судебно-медицинского исследования. Оценивалась возможность и целесообразность использования образцов желчи по результатам исследования двумя способами: методом электрофореза в пластинах из полиакриламидного геля и методом электрофоретического фракционирования с использованием капиллярного электрофореза. Параллельно исследованы образцы крови от этих же трупов. Установлено,

что образцы желчи пригодны для исследования, но, в сравнении с образцами крови, дают менее устойчивые результаты. Следовательно, забор желчи при наличии образца крови от трупа для молекулярно-генетического исследования нецелесообразен. • Ключевые слова: молекулярно-генетиче-ская экспертиза, образцы крови и желчи, электрофорез в пластинах из полиакриламидного геля, капиллярный электрофорез

ВВЕДЕНИЕ

Согласно приказу Министерства здравоохранения и социального развития РФ от 12 мая 2010 г. № 346н «Об утверждении Порядка организации и производства судебно-медицинских экспертиз в государственных судебно-экспертных учреждениях Российской Федерации», п. 74.7: «для посмертного исследования категории выде-лительства берут желчь, а при ее отсутствии - мочу или перикардиальную жидкость». В связи с возрастающим количеством молекулярно-генетических исследований определение категории выделительства реакцией абсорбции в количественной модификации, для чего предназначен высушенный образец желчи, в настоящее время практически не проводится. Целью работы является изучение возможности и целесообразности использования образцов желчи при наличии образца крови от этого же трупа для молекулярно-генетического исследования.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследованию подвергались образцы крови и желчи от 20 трупов, высушенные на марле. Выделение ДНК проводили набором реагентов: «Комплект реагентов для выделения ДНК (ExtraPhen)» производства НПФ «АТГ-Биотех», г. Москва. Анализ матричной активности ДНК проводили с помощью полимеразной цепной реакции с использованием системы количественной энзимати-ческой амплификации ДНК Quantifiler* Human DNA Quantification Kit (Applied Biosystems, США), руководствуясь Методическими указаниями № 98/253 «Использование индивидуализирующих систем на основе полиморфизма длины амплифицированных фрагментов (ПДАФ) ДНК в судебно-медицинской экспертизе идентификации личности и установления родства» (утверждены Минздравом РФ 19.01.1999) и инструкцией фирмы-изготовителя.

Продуктивность полимеразной цепной реакции регистрировали в режиме реального времени с использованием специализированного амплификатора ABI PRISM 7500 Sequence Detection System и программного обеспечения SDS software v. 1.0 (Applied Biosystems, США).

Типирование полиморфных STR-локусов в одной половине препаратов проводили с помощью полиме-разной цепной реакции с использованием энзимати-ческой амплификации 16-локусной панели AmpFlSTR Identifiler Plus PCR Amplification Kit (Applied Biosystems, США), во второй половине - с помощью полимеразной цепной реакции с использованием систем набора реагентов для идентификации личности на основе определения количества тандемных повторов в указанных локусах геномной ДНК человека (НПФ «АТГ-Биотех»), руководствуясь Методическими указаниями № 98/253 «Использование индивидуализирующих систем на основе полиморфизма длины амплифицирован-ных фрагментов (ПДАФ) ДНК в судебно-медицинской экспертизе идентификации личности и установления родства» (утверждены Минздравом РФ 19.01.1999) и инструкцией фирмы-изготовителя.

Также во всех образцах желчи определяли наличие крови человека с помощью иммунохимического экспресс-теста SERATEC HemDirect (SERATEC GmbH, Германия).

Оценка полученных результатов проводилась с учетом наличия следов крови в образцах желчи, матричной активности ДНК в исследуемых препаратах и картины элек-трофоретического фракционирования.

ВЫВОДЫ

• Во всех исследованных образцах желчи обнаружены следы крови, что не позволяет использовать их для определения категории выделительства методом реакции абсорбции в количественной модификации.

• При оценке матричной активности ДНК в образцах крови и желчи выявлена концентрация ДНК выше установленного порога чувствительности 0,01 нг/мкл, что свидетельствует о приемлемом уровне матричной активности ДНК исследованных образцов, но образцы крови в целом имеют большую концентрацию ДНК.

• Методом капиллярного электрофореза со всеми образцами крови получен полный амплификационный профиль ДНК, при исследовании соответствующих образцов желчи по нескольким локусам получены неустойчивые результаты.

• При детекции методом электрофореза в пластинах по-лиакриламидного геля с препаратами ДНК, выделенными из образцов крови, получен устойчивый результат по всем исследованным локусам, с образцами желчи в большинстве случаев получены слабые и неустойчивые результаты.

• Полученные результаты позволяют сделать вывод о нецелесообразности изъятия образца желчи (при наличии образца крови) при судебно-медицинском исследовании трупа для молекулярно-генетического и серологического исследований.

ОБ ОПТИМАЛЬНОМ СОЧЕТАНИИ СУДЕБНО-БИОЛОГИЧЕСКИХ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В РАМКАХ ЕДИНОГО СУДЕБНО-БИОЛОГИЧЕСКОГО ОТДЕЛА БЮРО СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОИ_ЭКСПЕРТИЗЫ_ В. В. Рындин

• Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области

• Аннотация: Доклад посвящен взаимодействию судебно-медицинских экспертов двух подразделений судебно-биологического отдела ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» при исследовании следов биологического происхождения на вещественных доказательствах. Проанализированы касающиеся судебно-биологической экспертизы положения «Порядка организации и производства судебно-медицинских экспертиз в государственных судебно-экспертных учреждениях Российской Федерации», утвержденного Приказом Минздравсоцразвития РФ от 12.05.2010 № 346н (зарегистрирован

в Минюсте РФ 10.08.2010), с точки зрения их соответствия современному состоянию молеку-лярно-генетических исследований.

• Ключевые слова: молекулярно-генетиче-ское исследование, судебно-биологическое исследование, серологическое исследование, приказ Минздравсоцразвития РФ от 12.05.2010