Способ прогнозирования течения аденокарциномы легкого
METHOD FOR PREDICTION OF CLINICAL COURSE OF PULMONARY ADENOCARCINOMA

Изобретение относится к медицине, а именно, к патологоанатомическим исследованиям и касается прогнозирования агрессивного течения у больных раком легкого.
Известен способ прогнозирования рецидивов и метастазов рака легкого с помощью иммунологического анализа (Патент РФ №2243564, G01N 33/574, 2004). Сущность способа заключается в том, что с помощью реакции пассивной гемагглютинации исследуют уровень антител к антигенам опухоли легкого и при показателе 1/8 и выше констатируют наличие рецидива или метастаза и проводят противоопухолевую химиотерапию, а при уровне антител 1/4 противоопухолевую химиотерапию отменяют.
Недостатком этого способа является то, сложность выполнения методики и необходимость приготовления индивидуальных диагностикумов с антителами нормальной ткани легкого и антигенами опухолевой ткани легкого.
Наиболее близким является способ прогнозирования течения аденокарциномы легкого, включающий иммуногистохимическое (ИГХ) исследование биопсионного материала с выявлением наличия экспрессии белка р63 (Narahashi Т, Niki Т, Wang Т, Goto A, Matsubara D, Funata N, Fukayama M. Cytoplasmic localization of p63 is associated with poor patient survival in lung adenocarcinoma. // Histopathology. 2006 Oct;49(4):349-57. Doi: 10.1111/j. 1365-2559.2006.02507.x).
Недостатком этого способа использование экспрессии белка р63 в независимости от мутационного статуса опухоли, а также без учета, проводимого этим пациентам лечения.
Задачей предлагаемого изобретения является устранение указанных недостатков, обеспечение возможности дифференцировать степень агрессивности течения заболевания у пациентов для корректировки проводимого лечения, за счет анализа экспрессионной активности белка р63 и наличия мутации в гене EGFR, которые являются более точными показателями для диагностики аденокарциномы легкого и прогнозирования ее течения.
Для решения поставленной задачи в способе прогнозирования течения аденокарциномы легкого, включающем иммуногистохимическое исследование диагностического материала с выявлением наличия экспрессии белка р63, предложено дополнительно проводить молекулярно-генетическое исследование биопсионного материала или операционной ткани опухоли легкого. При этом дополнительно выявляют наличие мутаций в гене EGFR. При наличии обоих показателей - прогнозируют среднетяжелое течение заболевания, и рекомендуют проведение комбинированного лечения. При определении отсутствия в ткани опухоли экспрессии белка р63 и наличии мутаций в гене EGFR, прогнозируют менее тяжелое течение аденокарциномы легкого и рекомендуют проведение таргетной терапии, а при отсутствии в пробах обоих показателей или отсутствии только мутаций в гене EGFR прогнозируют тяжелое течение заболевания и рекомендуют проводить химиотерапию по стандартным схемам.
Способ осуществляется следующим образом.
На операционном или биопсийном материале ставится диагноз после гистологического исследования препаратов, окрашенных гематоксилином и эозином, а при необходимости - ИГХ. ИГХ исследование проводили согласно стандартным протоколам.
Материал фиксировали в 10% забуференном формалине, срезы толщиной 4-5 мкм наносили на стекла с адгезивным покрытием, затем высушивали при 37°С в течение ночи и еще 1 час при 60°С. Дальше срезы подвергались депарафинации и восстановлению антигенности в зависимости от протокола, рекомендованного для каждого использованного антитела, далее реакция проводилась на операционном материале в автоматическом режиме с использованием Автостейнера Ventatna, а в диагностических биопсиях при малом объеме материала на серийных срезах ручным методом. Был использован маркер р63 или р40 (Ventatna).
Выявление мутаций в гене EGFR в ткани осуществлялась методом ПЦР в режиме реального времени (Rotor-Gene Q (QIAGEN) с использование набора реагентов therascreenEGFR RGQ PCR Kit ("Qiagen") по стандартной методике производителя. Предварительно из парафиновых блоков выделялось ДНК согласно инструкции набора реагентов для выделения ДНК.
Наличие экспрессии белка оценивали при помощи микроскопа на ИГХ стеклах. У этих же пациентов смотрели наличие мутации в гене EGFR. При различных сочетаниях этих маркеров пациенты разделялись на соответствующие группы, которым применялись различные схемы лечения рака легкого. Первую группу составляли пациенты, у которых наблюдалась наличие экспрессии белка р63 и имелась мутация EGFR. Они получали иммунотерапию в сочетании с таргетной терапией. Вторую группу составили пациенты с отсутствием экспрессии белка р63 и наличием мутации EGFR. Это наиболее благоприятная группа, пациенты в ней получали таргетную терапию. Третью группу составили пациенты, у которых отсутствовала мутация EGFR и экспрессировался или нет белок р63. Это была наиболее не благоприятная группа и в ней применяли адъювантную химиотерапию по стандартным схемам.
Пример 1
Больная Б. 1940 г.р. поступила апреле 2017 г. в торакальное отделение МОНИКИ с клиническим диагнозом: Периферический рак средней доли правого легкого T2N0M0 2А ст. апреле 2017 г. произведена операция - торакотомия справа, расширенная средняя лобэктомия.
При гистологическом исследование были выявлены экспрессия р63 мутация EGFR, сделан прогноз о среднетяжелом течении аденокарциномы.
Больная получала таргетную (Тарцеба) и иммунотерапию (Ниволумаб). Однако в октябре 2018 был выявлен метастаз в головной мозг. Была изменена схема лечения, добавлена местная лучевая терапия. Пациентка жива до сих пор и проходит курс лечения.
Пример 2
Больная Т. 1963 г.р. поступила в августе 2016 года в торакальное отделение МОНИКИ с диагнозом: Рак нижней доли правого легкого, (T1вNOMO), 1В ст. В августе этого же года была проведена операция нижняя лобэктомия.
При гистологическом исследование была выявлена мутация в гене EGFR при отсутствии экспрессии белка р63, Прогноз: наиболее легкое течение аденокарциномы.
Была назначена таргетная (Тарцеба) терапия по стандартной схеме. Последнее исследование пациентка проводилось в сентябре 2018 года, данных за рецидив нет.
Пример 3
Больная X. 1962 г.р. поступила в апреле 2016 года в торакальное отделение МОНИКИ с диагнозом: Периферический рак в/доли левого легкого Т2Н3М0, 111Бст. В апреле 2016 года была проведена верхняя лобэктомия справа.
При гистологическом исследование была выявлена экспрессия р63 без выявления мутации EGFR. Прогноз: тяжелое течение аденокарциномы легкого.
2
2
Начато лечение химиотерапии по схеме ЕР: Цисплатин 80 мг/м в/в кап. в 1-ый день лечения + Этопозид 120 мг/м в 1-3 дни лечения под адекватной водной нагрузкой. Подобных 6 курсов, с интервалом 3 недели.
В январе 2017 года появились боли в костях и диагностированы множественные метастазы в кости. Была назначена дополнительно лучевая терапия. Через полгода пациентка умерла.
Пример 4
Пациент А. 1952 г.р. поступил в июле 2017 года в торакальное отделение МОНИКИ с диагнозом: рак верхней доли правого легкого T1N0M0. В августе этого же года была проведена верхнедолевая лобэктомия справа.
При гистологическом исследование было выявлено отсутствие мутации EGFR и экспрессии белка р63, прогноз - аденокарцинома легкого тяжелой формы.
2
2
Начато лечение химиотерапии по схеме ЕР: Цисплатин 80 мг/м в/в кап. в 1-ый день лечения + Этопозид 120 мг/м в 1-3 дни лечения под адекватной водной нагрузкой. Подобных 6 курсов, с интервалом 3 недели.
В мае 2018 года выявлены увеличенные лимфоузлы средостения. По данным биопсии - метастаз аденокарциномы легкого. Было добавлена лучевая терапия. В настоящий момент пациент проходит лечение.
Заявленным способом было обследовано 129 больных аденокарциномой легкого. 37 пациентов составили первую группу и имели оба показателя - среднетяжелое течение заболевания. Безрецидивная выживаемость в этой группе составила 1,5 года. Во вторую группу вошло 38 пациентов, у которых имелась мутация и отсутствовала экспрессии белка. Безрецидивная выживаемость в этой группе составила 2 и более года. В третью группу вошло 54 пациента с диагнозом аденокарцинома легкого, у которых отсутствовала мутация в гене EGFR и была или отсутствовала экспрессия белка р63. Эта группа была наиболее неблагоприятна по течению, и средняя безрецидивная продолжительность жизни составила 1,1 года и менее.
Технико-экономическая эффективность предлагаемого способа заключается в возможности выявить степень агрессивности течения заболевания и скорректировать лечение, позволяющее увеличить срок жизни.