СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ СКОРОСТИ РОСТА ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА
METHOD FOR PREDICTING THE GROWTH RATE OF YOUNG CHILDREN

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и может быть использовано в эндокринологии, акушерстве и гинекологии, диетологии детского возраста.
В педиатрии считалось, что ускоренный рост в раннем возрасте не представляет угрозы здоровью ребенка в будущем. И лишь в настоящее время, с развитием концепции программирования здоровья в ранние критические периоды развития, представляется важным поиск методов прогнозирования скорости роста, так как ускоренный рост может существенным образом влиять на риск развития в будущем таких заболеваний, как ожирение и связанной с ним патологии: сахарный диабет 2-го типа, артериальная гипертензия и другие сердечно-сосудистые заболевания и метаболические нарушения. Внедрение методов молекулярной генетики в область науки о питании позволило доказать, что генетический фактор играет существенную роль в прогнозировании ожирения.
Техническим результатом предлагаемого изобретения является повышение точности прогноза ускоренного роста детей с первых дней жизни и возможности своевременного проведения соответствующих профилактических коррекционных мероприятий (контроль массо-ростовых показателей, подбор индивидуального режима питания, воспитание определенного пищевого поведения).
Сущность изобретения заключается в том, что из генетического материала ребенка выделяют ДНК, затем проводят генотипирование с применением аллель-специфичной амплификации в режиме реального времени 15 мин - 95°С, далее 45 циклов - 95°С - 15 секунд, 46°С - 60 секунд) и используют TaqMan - зонды, комплементарные полиморфным участкам ДНК (праймеры: CTAGGTTCCTTGCGACTGCT; ACCTATTAAAACTTTAGAGTAACAGAGACTATCCA; зонды: VIC-САТСАСААААТТСАС - BHQ, FAM - CATCACTAAATTCAC-BHQ), у носителей генотипа АА полиморфизма rs9939609 гена FTO прогнозирую ускоренный рост.
Способ осуществляется следующим образом. Исследование проводят в помещениях, предназначенных для работ по выделению ДНК и генотипированию. Действуют согласно Методических рекомендаций по забору, транспортировке, хранению клинического материала для ПЦР лаборатории (МЗ РФ ЦНИИЭ, 2005).
ДНК выделяют из буккального эпителия путем соскоба слизистой оболочки щеки (возможно выделение из капли крови, слюны и другого генетического материала ребенка), используют любой лизирующий раствор, разрушающий комплекс ДНК с белком, например, содержащий цетилтриметил бромид аммония (ЦТАБ). Затем проводят сорбцию ДНК на частицы соединений кремния. Для выделения ДНК используют набор реагентов «ДНК-СОРБ» (производства ЗАО «Интерлабсервис», Москва или аналогичный). Затем проводят генотипирование с применением аллель -специфичной амплификации с детекцией результатов в режиме реального времени (программа амплификации: 15 мин - 95°С, далее 45 циклов - 95°С - 15 секунд, 46°С - 60 секунд) и используют TaqMan-зонды, комплементарные полиморфным участкам ДНК (праймеры: CTAGGTTCCTTGCGACTGCT; ACCTATTAAAACTTTAGAGTAACAGAGACTATCCA; зонды: VIC-CATCACAAAATTCAC-BHQ, FAM-CATCACTAAATTCAC-BHQ). Для проведения амплификации используют амплификатор «CFX96 Real Time System»,"BIO-RAD", США.
На фигуре 1 приведены показания амплификатора «CFX96 Real Time System» ("BIO-RAD", США) по каналу HEX, указывающему на носительство обследуемым аллеля Т полиморфизма rs9939609 гена FTO в гомозиготном состоянии (генотип ТТ). (кривая синего цвета). На фигуре 2 приведены показания амплификатора «CFX96 Real Time System» ("BIO-RAD", США) по каналу HEX/FAM, указывающему на гетерозиготное носительство обследуемым аллелей А и Т полиморфизма rs9939609 гена FTO (генотип AT) (две кривые разных цветов - синего и зеленого). На фигуре 3 приведены показания амплификатора «CFX96 Real Time System» ("BIO-RAD", США) по каналу FAM, указывающему на гомозиготное носительство обследуемым аллеля А полиморфизма rs9939609 гена FTO (генотип АА) (кривая зеленого цвета).
Результат: пациент 1 - носитель генотипа ТТ, пациент 2 - носитель генотипа AT, пациент 3 - носитель генотипа АА.
Идентифицированные таким образом (по наличию одной кривой по каналу FAM по показаниям амплификатора «CFX96 Real Time System» ("BIO-RAD", США) при проведении амплификации в указанном режиме) носителей генотипа АА полиморфизма rs9939609 гена FTO относят к группе риска по ускоренному росту.
Предлагаемый способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Ребенок Сив-в родился весом 3500 г, длиной 51 см. В возрасте 1 месяца проведено генотипирование по полиморфизму rs9939609 гена FTO - определено носительство генотипа АА. Проводилось динамическое наблюдение за ростом с рождения до 4-х лет.
Z-скор «масса тела по росту» (Anthro, ВОЗ, 2005) при рождении - 0.12, в возрасте 1 мес. 1.43, 2 мес. 0.96, 3 мес. 1.34, 6 мес. 2.99, 12 мес. 2.03, 24 мес. 1.26, 36 мес. 1.27, 48 мес. 1.52.
Дельта Z-скора «масса тела по росту» (скорость роста): 0-1 мес. 1.55, 0-2 мес. 1.08, 0-3 мес. 1.46, 0-6 мес. 3.11, 0-12 мес. 2.15, 0-24 мес. 1.26, 0-36 мес. 1.27, 0-48 мес. 1.52. Масса тела в возрасте 4 года 20 кг, рост 107 см.
Толщина кожных складок над гребнем подвздошной кости 14 см, на бедре - 23 см.
Наблюдается ускоренный рост.
Пример 2. Ребенок Гор-ва родилась весом 3400, длиной 50 см. В возрасте 1 месяца проведено генотипирование по полиморфизму rs9939609 гена FTO - определено носительство генотипа ТТ. Проводилось динамическое наблюдение за ростом с рождения до 4-х лет.
Z-скор «масса тела по росту» (Anthro, ВОЗ, 2005) при рождении 0.16, в возрасте 1 мес. 0.58, 2 мес. - 0.97, 3 мес. 0.47, 6 мес. 0.51, 12 мес. 0.43, 24 мес. 0.1, 36 мес. - 0.11, 48 мес. - 0,66.
Дельта Z-скора «масса тела по росту» (скорость роста): 0-1 мес. 0.42, 0-2 мес. - 1.13, 0-3 мес. 0.31, 0-6 мес. 0.35, 0-12 мес. 0.27, 0-24 мес. -0,06, 0-36 мес. - 0.27, 0-48 мес. -0.82.
Масса тела в возрасте 4 года 17,5 кг, рост 110 см.
Толщина кожных складок над гребнем подвздошной кости 4 см, на бедре -8. Нет ускоренного роста.
Предлагаемым способом обследовано 47 условно здоровых детей в г. Смоленске. Все обследованные дети были генотипированы. Проведено выявление генотипов полиморфизма rs9939609 гена FTO. Генотип ТТ имели 12 человек (25,5%), генотип AT имели 29 человек (61,7%), генотип АА имели 6 человек (12,8%).
Проведена оценка динамики антропометрических показателей детей с рождения до 4-летнего возраста и оценена скорость их изменения. Установлено, что носители генотипа АА демонстрировали более высокую по сравнению с носителями генотипов AT и ТТ, скорость изменения Z-скоров «масса тела по возрасту», «масса тела по росту» и «ИМТ по возрасту», которая была выше с первого месяца жизни и во все исследуемые периоды до 4-летнего возраста (1, 2, 3, 6, 12, 24, 36, 48 месяцев), достоверно в возрасте 1 и 2 года.
В возрасте 4 года носители генотипа ТТ полиморфизма rs9939609 гена FTO имели средние показатели Z-скоров «масса тела по росту» 0.47, «масса тела по возрасту» 0.74, рост по возрасту» 0.70 и «ИМТ по возрасту» 0.46, а носители генотипа АА данного полиморфизма характеризовались следующими средними показателями Z-скоров: «масса тела по росту» 0.89, «масса тела по возрасту» 1.01, рост по возрасту» 0.68 и «ИМТ по возрасту» 0.92. Носители генотипа АА характеризовались также достоверно большей толщиной кожных складок в возрасте 4 года (над гребнем подвздошной кости: М ± SEM 11,3±0,8 см против 8,5±0,8 см, р=0,031, и на бедре: 21,2±1,1 см против 14,9±1,1 см, р=0,047) по сравнению с носителями генотипа ТТ.
Таким образом, предлагаемый способ прогнозирования скорости роста детей раннего возраста по выявлению генотипа АА полиморфизма rs9939609 гена FTO, позволяет сделать предположение об их ускоренном росте в раннем возрасте, что является фактором риска развития ожирения и связанной с ним патологии: сахарного диабета 2-го типа, артериальной гипертензии и других сердечно-сосудистых заболеваний и метаболических нарушений.
Проведение генотипирования по полиморфизму rs9939609 гена FTO детей из группы риска по развитию метаболического синдрома, позволяет спрогнозировать ускоренный рост младенцев с первых месяцев жизни и провести своевременные коррекционные мероприятия в критические периоды развития, снижая, таким образом, риск развития заболеваний в будущем.
Предлагаемый способ прост в применении, неинвазивен, может быть использован с момента рождения ребенка, высокоинформативен.