СПОСОБЫ И РЕАГЕНТЫ ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ ДЕТЕКТИРОВАНИЯ АМИЛОИДНЫХ БЕТА-ПЕПТИДОВ

1. Способ диагностики нейродегенеративного заболевания у индивидуума, детектирования стадии, предшествующей нейродегенеративному заболеванию, или дифференциации нейродегенеративного заболевания от стадии, предшествующей указанному нейродегенеративному заболеванию, где указанный способ включает стадии:
(i) определения одного или нескольких параметров, выбранных из группы, состоящей из:
(a) уровня одного или нескольких свободных амилоидных бета-пептидов в биологическом образце указанного индивидуума;
(b) уровней агрегатов одного или нескольких свободных амилоидных пептидов в биологическом образце указанного индивидуума и указанных одного или нескольких амилоидных бета-пептидов, ассоциированных с макромолекулярными компонентами, присутствующими в указанном биологическом образце, где указанные уровни агрегатов определяют путем оценки количества указанных одного или нескольких амилоидных бета-пептидов в бесклеточной фракции указанного образца после контактирования указанного образца с белок-солюбилизирующим агентом в условиях, подходящих для стимуляции диссоциации амилоидного бета-пептида или амилоидных бета-пептидов из компонентов, присутствующих в биологическом образце;
(c) уровня одного или нескольких амилоидных бета-пептидов, ассоциированных с клетками в биологическом образце указанного индивидуума, где указанный уровень определяют путем выделения клеточной фракции указанного биологического образца, контактирования указанной клеточной фракции указанного образца с белок-солюбилизирующим агентом в условиях, подходящих для стимуляции диссоциации амилоидного бета-пептида или амилоидных бета-пептидов из клеток, присутствующих в указанном образце;
(ii) сравнения величины по меньшей мере одного из параметров (b) или (c), или величины параметра, вычисленного путем арифметического комбинирования по меньшей мере двух параметров (a)-(c), с эталонной величиной, соответствующей величине указанных параметров (b) или (c) или указанного вычисленного параметра в эталонном образце; и
(iii) диагностики нейродегенеративного заболевания, детектирования стадии заболевания, предшествующей нейродегенеративному заболеванию, или дифференциации нейродегенеративного заболевания от стадии, предшествующей указанному нейродегенеративному заболеванию, в случае, если наблюдается изменение величины параметра или величины вычисленного параметра по сравнению с эталонной величиной,
где указанным биологическим образцом является плазма или кровь.
2. Способ по п.1, где параметрами, определенными на стадии (i), являются один или несколько параметров, выбранных из группы, состоящей из:
(a) 1ab40, соответствующего уровню свободного пептида ABETA40 в биологическом образце указанного индивидуума;
(b) 1ab42, соответствующего уровню свободного пептида ABETA42 в биологическом образце указанного индивидуума;
(c) 2ab40, соответствующего уровню агрегатов свободного пептида ABETA40 в биологическом образце указанного индивидуума и пептида ABETA40, ассоциированного с компонентами указанного биологического образца, где 2ab40 определяют путем вычисления количества пептида ABETA40 в указанном образце после контактирования указанного образца с белок-солюбилизирующим агентом в условиях, подходящих для стимуляции диссоциации пептида ABETA40 из компонентов, присутствующих в биологическом образце;
(d) 2ab42, соответствующего уровню агрегатов свободного пептида ABETA42 в биологическом образце указанного индивидуума и пептида ABETA42, ассоциированного с компонентами указанного биологического образца, где 2ab42 определяют путем вычисления количества пептида ABETA42 в указанном образце после контактирования указанного образца с белок-солюбилизирующим агентом в условиях, подходящих для стимуляции диссоциации пептида ABETA42 из компонентов, присутствующих в биологическом образце;
(e) 3ab40, соответствующего уровню пептида ABETA40, ассоциированного с клетками в биологическом образце указанного индивидуума, где 3ab40 определяют путем вычисления количества пептида ABETA40 после контактирования клеточной фракции указанного биологического образца с белок-солюбилизирующим агентом в условиях, подходящих для стимуляции диссоциации амилоидных бета-пептидов из клеток, присутствующих в указанном образце; и
(f) 3ab42, соответствующего уровню пептида ABETA42, ассоциированного с клетками в биологическом образце указанного индивидуума, где 3ab42 определяют путем вычисления количества пептида ABETA42 после контактирования клеточной фракции указанного биологического образца с белок-солюбилизирующим агентом в условиях, подходящих для стимуляции диссоциации амилоидных бета-пептидов из клеток, присутствующих в указанном образце.
3. Способ по п.2, где, где параметр, вычисленный на стадии (ii), выбран из группы, состоящей из 2ab40/2ab42, 3ab40/3ab42, 2ab40/3ab40, 2ab42/3ab42, 1ab40+2ab40, 1ab40+3ab40, 2ab40+3ab40, 1ab40 + 2ab40 + 3ab40, 1ab42+2ab42, 1ab42+3ab42, 2ab42+3ab42, 1ab42+2ab42+3ab42, 1ab40+2ab40+1ab42+2ab42, 1ab40+3ab40+1ab42+3ab42, 2ab40+3ab40+2ab42+3ab42, 1ab40+2ab40+3ab40+1ab42+2ab42+3ab42, (1ab40+2ab40)/(1ab42+2ab42), (1ab40+3ab40)/(1ab42+3ab42), (2ab40 +3ab40)/(2ab42+3ab42), (1ab40+2ab40+3ab40)/(1ab42+2ab42+3ab42), (1ab42+2ab42)/(1ab40+2ab40), (1ab42+3ab42)/(1ab40+3ab40), (2ab42 +3ab42)/(2ab40+3ab40), (1ab42+2ab42+3ab42)/(1ab40+2ab40+3ab40), 2ab40-1ab40, 2ab42-1ab42 и (2ab40-1ab40)/(2ab42-1ab42).
4. Способ по п.2 или 3, где:
(i) диагностику нейродегенеративного заболевания осуществляют путем сравнения величины параметра, выбранного из группы, состоящей из 3ab40, 2ab42 и 3ab42, или величины вычисленного параметра, выбранного из группы, состоящей из 2ab40+3ab40, 2ab42+3ab42, 1ab40+2ab40+1ab42+2ab42 и 2ab40+3ab40+2ab42+3ab42,
(ii) детектирование стадии заболевания, предшествующей нейродегенеративному заболеванию, осуществляют путем сравнения величины параметра, выбранного из группы, состоящей из 2ab40, 3ab40, 2ab42 и 3ab42, или величины вычисленного параметра, выбранного из группы, состоящей из 2ab40+3ab40, 2ab42+3ab42, 2ab40+3ab40+2ab42+3ab42, 1ab40+2ab40+3ab40+1ab42+2ab42+3ab42, 1ab40+2ab40+3ab40, 1ab42+2ab42+3ab42, 1ab40+2ab40+1ab42+2ab42 и 1ab40+3ab40+1ab42+3ab42, или
(iii) дифференциация нейродегенеративного заболевания от стадии, предшествующей указанному нейродегенеративному заболеванию, осуществляют путем сравнения величины параметра, выбранного из группы, состоящей из 3ab40 и 2ab42, или величины вычисленного параметра, выбранного из группы, состоящей из 2ab40+3ab40, 2ab40+3ab40+2ab42+3ab42 и 1ab40+2ab40+1ab42+2ab42.
5. Способ по п.4, где эталонная величина, используемая на стадии (ii) для сравнения величины параметра или величины вычисленного параметра, выбрана из группы, состоящей из:
(i) 63,8 пг/мл, если параметр 2ab40 используется для детектирования стадии, предшествующей нейродегенеративному заболеванию,
(ii) 71,9 пг/мл, если параметр 3ab40 используется для диагностики нейродегенеративного заболевания,
(iii) 71,1 пг/мл, если параметр 3ab40 используется для детектирования стадии, предшествующей нейродегенеративному заболеванию,
(iv) 211,3 пг/мл, если параметр 3ab40 используется для дифференциации нейродегенеративного заболевания от стадии, предшествующей указанному нейродегенеративному заболеванию,
(v) 47,4 пг/мл, если параметр 2ab42 используется для диагностики нейродегенеративного заболевания,
(vi) 50,3 пг/мл, если параметр 2ab42 используется для детектирования стадии, предшествующей нейродегенеративному заболеванию,
(vii) 151,7 пг/мл, если параметр 2ab42 используется для дифференциации нейродегенеративного заболевания от стадии, предшествующей указанному нейродегенеративному заболеванию,
(viii) 76,9 пг/мл, если параметр 3ab42 используется для диагностики нейродегенеративного заболевания,
(ix) 58,8 пг/мл, если параметр представляет собой 3ab42 и используется для детектирования стадии, предшествующей нейродегенеративному заболеванию,
(x) 132,7 пг/мл, если параметр 2ab40+3ab40 используется для диагностики нейродегенеративного заболевания,
(xi) 132,7 пг/мл, если параметр 2ab40+3ab40, используется для детектирования стадии, предшествующей нейродегенеративному заболеванию,
(xii) 550,8 пг/мл, если параметр 2ab40+3ab40 используется для дифференциации нейродегенеративного заболевания от стадии, предшествующей указанному нейродегенеративному заболеванию,
(xiii) 115,8 пг/мл, если параметр представляет собой 2ab42+3ab42, и используется для диагностики нейродегенеративного заболевания,
(xiv) 103,3 пг/мл, если параметр представляет собой 2ab42+3ab42 и используется для детектирования стадии, предшествующей нейродегенеративному заболеванию,
(xv) 235,5 пг/мл, если параметр 2ab40+3ab40+2ab42+3ab42 используется для диагностики нейродегенеративного заболевания,
(xvi) 235,5 пг/мл, если параметр 2ab40+3ab40+2ab42+3ab42 используется для детектирования стадии, предшествующей нейродегенеративному заболеванию,
(xvii) 778,1 пг/мл, если параметр 2ab40+3ab40+2ab42+3ab42 используется для дифференциации нейродегенеративного заболевания от стадии, предшествующей указанному нейродегенеративному заболеванию,
(xviii) 272,1 пг/мл, если параметр 1ab40+2ab40+3ab40+1ab42+ 2ab42+3ab42 используется для детектирования стадии, предшествующей нейродегенеративному заболеванию,
(xix) 155,8 пг/мл, если параметр 1ab40+2ab40+3ab40 используется для детектирования стадии, предшествующей нейродегенеративному заболеванию,
(xx) 124,3 пг/мл, если параметр 1ab42+2ab42+3ab42 используется для детектирования стадии, предшествующей нейродегенеративному заболеванию,
(xxi) 158,3 пг/мл, если параметр 1ab40+2ab40+1ab42+2ab42 используется для диагностики нейродегенеративного заболевания,
(xxii) 142,4 пг/мл, если параметр 1ab40+2ab40+1ab42+2ab42 используется для детектирования стадии, предшествующей нейродегенеративному заболеванию,
(xxiii) 161,2 пг/мл, если параметр 1ab40+2ab40+1ab42+2ab42 используется для дифференциации нейродегенеративного заболевания от стадии, предшествующей указанному нейродегенеративному заболеванию, и
(xxiv) 154,7 пг/мл, если параметр 1ab40+3ab40+1ab42+3ab42 используется для детектирования стадии, предшествующей нейродегенеративному заболеванию.
6. Способ по п.1, где изменением величины параметра или величины вычисленного параметра по отношению к эталонной величине является увеличение.
7. Способ по п.1, где указанным белок-солюбилизирующим агентом является детергент, предпочтительно, твин 20.
8. Способ по п.2, где стадию определения по меньшей мере одного или нескольких 1ab40, 1ab42, 2ab40, 2ab42, 3ab40 и 3ab42 осуществляют иммунологическим методом.
9. Способ по п.8, где указанным иммунологическим методом является ELISA-анализ.
10. Способ по п.9, где указанным ELISA-анализом является «сэндвич»-ELISA-анализ.
11. Способ по п.10, где антителом для захвата в «сэндвич»-ELISA-анализе является антитело против N-концевой области амилоидного бета-пептида.
12. Способ по п.11, где антитело против N-концевой области амилоидного бета-пептида направлено против эпитопа, локализованного в положениях аминокислот 1-7 ABETA40 и ABETA42.
13. Способ по любому из пп.9-12, где детектирующим антителом в «сэндвич»-ELISA-анализе является антитело, специфичное к эпитопу, локализованному в C-концевой области амилоидного бета-пептида.
14. Способ по п.13, где антитело, специфичное к C-концевой области амилоидного бета-пептида, выбрано из группы, состоящей из:
(i) поликлонального антитела против пептида, соответствующего С-концевой области пептида ABETA42, где указанное антитело специфически связывается с ABETA42, но, по существу, не вступает в какую-либо перекрестную реакцию с ABETA40,
(ii) поликлонального антитела против пептида, соответствующего C-концевой области пептида ABETA40, где указанное антитело специфически связывается с ABETA40 но, по существу, не вступает в какую-либо перекрестную реакцию с ABETA42,
(iii) антитела, которое распознает одновременно C-концевую область ABETA40 и ABETA42, и
(iv) комбинации антител по (i) и (ii).
15. Способ по любому из пп.10-12, где указанное детектирующее антитело также детектируют с использованием реагента, обладающего аффинностью к указанному антителу, которое связывается с первым членом связывающей пары.
16. Способ по п.15, где детектирование осуществляют с использованием второго члена связывающей пары, связанной с детектируемой меткой.
17. Способ по п.1, где указанным нейродегенеративным заболеванием является болезнь Альцгеймера и/или стадией, предшествующей нейродегенеративному заболеванию, является слабое нарушение познавательных способностей.