СПОСОБЫ СОХРАНЕНИЯ, УЛУЧШЕНИЯ И ВОССТАНОВЛЕНИЯ ХРЯЩЕВОГО ФЕНОТИПА ХОНДРОЦИТОВ

1. Способ получения популяции клеток из выделенного образца хряща, предусматривающий стадии:
А) обогащения популяции регуляторных клеток из выделенного образца хряща способом, включающим стадии:
а) механической и/или энзиматической обработки выделенного образца хряща для получения индивидуальных клеток,
б) переноса указанных индивидуальных клеток, полученных на стадии (а), в приемник для культивирования клеток для размножения хондроцитов в монослое,
в) поддержания соответствующих условий для культивирования клеток в указанном приемнике для культивирования клеток для того, чтобы получить популяцию адгезивных клеток и супернатант, содержащий популяцию неадгезивных клеток,
г) сбора из указанного приемника указанного супернатанта, содержащего указанную популяцию неадгезивных клеток, после, по меньшей мере, 2 дней и/или по достижении клетками, по меньшей мере, примерно 30% конфлюэнтности,
д) сбора из указанного супернатанта указанной популяции неадгезивных клеток, соответствующей указанной регуляторной клеточной популяции; и
В) объединения полученной таким образом популяции неадгезивных клеток с одной или несколькими популяциями хондрогенных клеток, которые не являются популяциями обогащенных регуляторных клеток.
2. Способ по п.1, в котором одна или несколько популяций хондрогенных клеток выбраны из группы, состоящей из пассированной клеточной популяции хондроцитов, популяции мезенхимальных стволовых клеток, популяции клеток-предшественников хондроцитов.
3. Способ по п.1, в котором указанный образец хряща является образцом суставного хряща.
4. Способ по п.1, в котором указанный образец хряща является образцом менискового хряща.
5. Способ по п.1, в котором стадия (а) предусматривает обработку выделенного образца хряща коллагеназой А.
6. Способ по п.1, в котором указанная популяция обогащенных регуляторных клеток объединена с одной или несколькими клеточными популяциями таким образом, что относительное количество указанных обогащенных регуляторных клеток находится в пределах от 1 до 75% от общего числа клеток в комбинации.
7. Композиция, содержащая комбинацию двух или более различных клеточных популяций, включающих:
(а) клеточную популяцию, содержащую регуляторные клетки, которые представляют собой или (i) популяцию свежевыделенных клеток хряща, получаемых из биопсии хряща, или (ii) популяцию обогащенных регуляторных клеток, получаемую сбором неадгезивных клеток из супернатанта культуры Р0 свежевыделенных хрящевых клеток, полученных из биопсии хряща;
(б) одну или несколько клеточных популяций, выбранных из группы, состоящей из пассированной клеточной популяции хондроцитов, популяции мезенхимальных стволовых клеток и популяции клеток-предшественников хондроцитов.
8. Композиция по п.7, содержащая популяцию обогащенных регуляторных клеток, в которой относительное количество указанных обогащенных регуляторных клеток находится в пределах от 1 до 75% от общего числа клеток в комбинации.
9. Композиция по п.7, содержащая популяцию обогащенных регуляторных клеток, в которой указанная популяция, содержащая регуляторные клетки, получена из суставного хряща.
10. Композиция по п.7, в которой указанная популяция, содержащая регуляторные клетки, получена из менискового хряща.
11. Фармацевтическая композиция, содержащая комбинацию по п.7.
12. Скаффолд, содержащий комбинацию клеток по п.7.
13. Применение композиции по п.7 в получении клеточного терапевтического препарата для лечения дефектов хряща.
14. Популяция неадгезивных непассированных регуляторных клеток, получаемая способом, включающим стадии:
а) механической и/или энзиматической обработки выделенного образца хряща для получения индивидуальных клеток,
б) переноса указанных индивидуальных клеток, полученных на стадии (а), в приемник для культивирования клеток для размножения хондроцитов в монослое,
в) поддержания соответствующих условий для культивирования клеток в указанном приемнике для культивирования клеток для того, чтобы получить популяцию адгезивных клеток и супернатант, содержащий популяцию неадгезивных клеток,
г) сбора из указанного приемника указанного супернатанта, содержащего указанную популяцию неадгезивных клеток, после, по меньшей мере, 2 дней и/или по достижении клетками, по меньшей мере, примерно 30% конфлюэнтности, и
д) сбора из указанного супернатанта указанной популяции неадгезивных клеток, соответствующей указанной регуляторной клеточной популяции, для применения в качестве лекарственного средства.
15. Фармацевтическая композиция, содержащая популяцию неадгезивных непассированных регуляторных клеток, получаемую способом, включающим стадии:
а) механической и/или энзиматической обработки выделенного образца хряща для получения индивидуальных клеток,
б) переноса указанных индивидуальных клеток, полученных на стадии (а), в приемник для культивирования клеток для размножения хондроцитов в монослое,
в) поддержания соответствующих условий для культивирования клеток в указанном приемнике для культивирования клеток для того, чтобы получить популяцию адгезивных клеток и супернатант, содержащий популяцию неадгезивных клеток,
г) сбора из указанного приемника указанного супернатанта, содержащего указанную популяцию неадгезивных клеток, после, по меньшей мере, 2 дней и/или по достижении клетками, по меньшей мере, примерно 30% конфлюэнтности, и
д) сбора из указанного супернатанта указанной популяции неадгезивных клеток, соответствующей указанной регуляторной клеточной популяции.
in vitro.
16. Применение популяции неадгезивных непассированных регуляторных клеток для улучшения, сохранения или восстановления хондроцитарной фенотипической стабильности размноженной или пассированной популяции хондроцитов
in vitro.
17. Применение популяции неадгезивных регуляторных клеток для дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток по хондроцитарному пути
18. Способ получения популяции клеток для АСТ-трансплантации, причем указанный способ включает стадии:
а) механической и/или энзиматической обработки выделенного образца хряща для получения индивидуальных клеток,
б) переноса указанных индивидуальных клеток, полученных на стадии (а), в приемник для культивирования клеток для размножения хондроцитов в монослое,
в) поддержания соответствующих условий для культивирования клеток в указанном приемнике для культивирования клеток, таким образом получая популяцию адгезивных клеток и супернатант, содержащий популяцию неадгезивных клеток,
г) сбора из указанного приемника указанного супернатанта, содержащего указанную популяцию неадгезивных клеток, после, по меньшей мере, 2 дней и/или по достижении клетками, по меньшей мере, примерно 30% конфлюэнтности в указанном приемнике,
д) сбора указанных неадгезивных клеток из указанного супернатанта,
соединения указанной популяции неадгезивных клеток, полученной на стадии (д), с популяцией хондрогенных клеток, которая не является популяцией обогащенных регуляторных клеток.
19. Способ по п.18, в котором указанная популяция хондрогенных клеток представляет собой популяцию зрелых хондроцитов, полученную из указанного выделенного образца хряща, и где указанный способ дополнительно включает стадии:
ж) размножения и пассирования указанной популяции адгезивных клеток, полученных на стадии (в),
з) сбора указанной размноженной и пассированной популяции адгезивных клеток,
и) соединения на стадии (е) указанной популяции неадгезивных клеток, полученных на стадии (д), с указанной популяцией из размноженной и пассированной популяции адгезивных клеток, полученной на стадии (з).
20. Способ по п.18, в котором указанная энзиматическая обработка на стадии (а) проводится коллагеназой А.
21. Способ по п.18, в котором указанный выделенный образец хряща является образцом менискового хряща.
22. Способ по п.18, в котором указанная популяция хондрогенных клеток происходит из биопсии менискового хряща.
23. Способ по п.18, в котором указанная популяция хондрогенных клеток представляет собой популяцию мезенхимальных стволовых клеток.
24. Способ по п.18, дополнительно включающий стадию
к) посева указанных объединенных популяций, полученных на стадии (е) или (и), на скаффолд.