МУТЕИНЫ ЛИПОКАЛИНА 2 ЧЕЛОВЕКА (Lcn2,hNGAL) С АФФИННОСТЬЮ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕННОЙ МИШЕНИ

1. Способ продуцирования мутеина человеческого липокалина 2 (hLcn2, hNGAL), при котором указанный мутеин связывается с заранее определенной мишенью с обнаруживаемой аффинностью, причём указанная мишень не связывается с нативным зрелым hNGAL в физиологических условиях, включающий
(a)  мутагенез молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей  белок Lcn2, по нуклеотидному триплету, кодирующему положение последовательности, соответствующее положению 106 линейной полипептидной последовательности зрелого hNGAL (SEQ ID NO: 44), и по 1, 2 , 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 или 19 нуклеотидным триплетам, кодирующим любое из положений последовательности 36, 40 , 41, 49, 52, 68, 70, 72, 73, 77, 79, 81, 96, 100, 103, 125, 127, 132 и 134 линейной полипептидной последовательности зрелого hNGAL (SEQ ID NO: 44) с получением в результате множества молекул нуклеиновой кислоты мутеина;
(b)  экспрессию множества молекул нуклеиновой кислоты мутеина, полученных на стадии (а), в подходящей системе экспрессии, тем самым получая множество мутеинов hNGAL,
(c) обогащение множества мутеинов, имеющих обнаруживаемую аффинность связывания с мишенью, посредством отбора и выделения.
2.  Мутеин липокалина 2 человека (hLcn2, hNGAL), содержащий мутированный аминокислотный остаток в положении последовательности, соответствующем положению последовательности 106 и в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 , 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 или 19 положениях последовательности, соответствующих любому из положений последовательности 36, 40, 41, 49, 52, 68, 70, 72, 73, 77, 79, 81, 96, 100, 103, 125, 127, 132 и 134 линейной полипептидной последовательности зрелого hNGAL (SEQ ID NO: 44), причём данный мутеин связывает заранее определённую мишень с обнаруживаемой аффинностью, где указанная мишень не связываться с нативным hNGAL в физиологических условиях.
3. Мутеин по п.2, дополнительно содержащий один или два мутированных аминокислотных остатка в любом из положений последовательности 28 и 87, соответствующих линейной полипептидной последовательности зрелого hNGAL (SEQ ID NO: 44).
4. Мутеин по п.2, содержащий мутированный аминокислотный остаток в 18 или 19 положениях последовательности, соответствующих любому из положений последовательности 36, 40, 41, 49, 52, 68, 70, 72, 73, 77, 79, 81, 96, 100, 103, 125, 127, 132 и 134 линейной полипептидной последовательности зрелого hNGAL (SEQ ID NO: 44).
5. Мутеин по п.2, где указанная мишень выбрана из группы, состоящей из пептида, белка, фрагмента или домена белка и небольшой органической молекулы.
6. Мутеин по п.5, где пептид представляет собой амилоидный бета-пептид.
7. Мутеин по п.6, где амилоидный бета-пептид представляет собой пептид Aβ40 или пептид Aβ42.
8. Мутеин по п.6, содержащий мутированный аминокислотный остаток в положениях 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 последовательности, соответствующих линейной полипептидной последовательности зрелого hNGAL (SEQ ID NO: 44) по меньшей мере, выбранных из группы, состоящей из: Leu 36 → Val или Cys; Ala 40 → Tyr или Lys или Val; Ile 41→Thr или Ser или Leu; Gin 49 → Leu или Trp; Leu 70 → Gly; Arg 72→ Gly или Asp; Lys 73 → Leu или Thr или Asp; Asp 77 → Asn или His или Leu; Trp 79 → Lys; Asn 96 → Ile или Arg; Tyr 100 → Gln или Arg или Glu; Leu 103 → Met или Arg или GIy; Tyr 106 → Tyr или Ala или Trp; Lys 125 → Thr или Val или Glu; Ser 127 → Gly или GIn или Ala; Tyr 132 → Met или Ser или Thr; and Lys 134 → Asn.
9. Мутеин по п.5, в котором белок представляет собой фибронектин или его домен.
10. Мутеин по п.9, в котором фибронектиновый домен представляет собой экстрадомен B или его фрагмент.
11. Мутеин по п.9, содержащий мутированный аминокислотный остаток в положениях 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 соответствующей линейной полипептидной последовательности зрелого hNGAL (SEQ ID NO: 44), выбранной из группы, состоящей из: Leu 36 → Lys или Glu или Arg или Ala; Ala 40 → His или Met или Thr или Ser; Ile 41 → Asp или Arg или Trp или Leu; Gln 49 → Arg или Ala или Tyr; Leu 70 → Leu или Arg или Met; Arg 72→ Val или Arg или Gln или Met; Lys 73 → His или Arg или Ser; Asp 77→ Asn или His или Lys или Arg; Trp 79 → Arg или Met или Leu; Asn 96 → Lys или Ala или Ser; Tyr 100→Trp или Pro или Lys; Leu 103 → His или Pro; Tyr 106 → Phe или Trp или Thr; Lys 125 → Arg или His или Thr; Ser 127 → Tyr или Phe или Ala; Tyr 132 → Leu или Phe; Lys 134 → Glu или His или GIy или Phe; and Ser 146 → Asn.
12. Мутеин по любому из пп. 2-11, дополнительно содержащий один или несколько мутированных аминокислотных остатков  в одном или нескольких положениях, соответствующих линейной полипептидной последовательности зрелого hNGAL (SEQ ID NO: 44), выбранных из группы, состоящей из Gln 28 → His и Cys 87 → Ser.
D
13. Мутеин по п. 12, связывающий мишень с K 100 мкМ или менее, или 10 мкМ или менее, или 1 мкМ или менее, или 500 нМ, или 200 нМ или менее, или 100 нМ или менее, или 50 нМ или менее, или 10 нМ или менее, или 1 нМ или менее.
14. Конъюгат, содержащий мутеин по любому из пп. 2-13, для продления периода полураспада мутеина в сыворотке, для маркировки мутеина или для таргетирования соединения на предварительно определённый сайт или для придания новых характеристик, причём данный мутеин конъюгирован с молекулой, выбранной из группы, состоящей из органических молекул, ферментных меток, радиоактивных меток, цветных меток, флуоресцентных меток, хромогенных меток, люминесцентных меток, гаптенов, дигоксигенина, биотина, цитостатических агентов, токсинов, комплексов металлов, металлов, коллоидного золота и соединения, которое продлевает период полураспада мутеина в сыворотке,
15. Гибридный белок, содержащий мутеин по любому из пп. 2-13, для увеличения периода полураспада в сыворотке, таргетирования молекулы на предварительно опредёленный сайт или придания новых характеристик, причём мутеин слит своим N-концом и/или С-концом с партнером слияния, который представляет собой белок, белковый домен или пептид.
16.  Вектор экспрессии, содержащий молекулу ДНК, включающую нуклеотидную последовательность, кодирующую мутеин по любому из пп. 2-13.
17. Клетка-хозяин для экспрессии мутеина по любому из пп. 2-13, содержащая вектор экспрессии по п.16, при этом клетка-хозяин не является эмбриональной клеткой человека.
18. Способ продуцирования мутеина по любому из пп. 2-13, включающий культивирование клетки-хозяина по п.17 для экспрессии мутеина.
19. Применение мутеина по любому из пп. 2-13 в качестве компонента диагностического набора для связывания с заранее определённой мишенью.
20. Применение мутеина по любому из пп. 2-13 в качестве компонента аналитического набора для связывания с заранее определённой мишенью.