СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ТОКСИЧЕСКОЙ НЕФРОПАТИИ
METHOD OF STIMULATING CHRONIC TOXIC NEPHROPATHY

Изобретение относится к медицине, экспериментальной биологии, экологии, токсикологии и может быть использовано при исследовании механизмов токсического действия цветных металлов, в частности молибдена, на функции почек.
Из многочисленных токсических соединений и элементов, загрязняющих окружающую среду, все более пристальное внимание исследователей привлекают тяжелые металлы, в том числе молибден и его соединения. Поскольку почки являются основным органом выведения ксенобиотиков из организма (Измеров Н.Ф. 2000), они в большей степени подвержены токсическому влиянию тяжелого металлам. Основными органами с максимальным процентом накопления и проявления повреждающего действия молибдена являются сердце, печень и почки. Почками выводится около 60% молибдена, поступившего в виде молибдатов, а при длительном введении последнего его элиминация почками в 5-10 раз выше, чем выделение через кишечник (Авцин А.П. 1991; Bru et al., 1953).
Эти факты обозначили целесообразность использования соединений молибдена для создания модели хронической токсической нефропатии.
Наиболее близким к предложенному решению является способ моделирования токсического поражения почек (Джиоев И.Г. Экспериментально-клинический анализ механизмов действия минеральной воды «Тиб-2» на функции почек. «Автореферат дис. на соиск. уч. ст. д.м.н. - 2003»), создаваемый однократным подкожным введением нефротоксической смеси, состоящей из 0,5 мг уранилацетата, растворенного в 0,5 мл глицерина на 100 г массы тела, который был взят нами за прототип.
Недостатком описываемого способа является то, что, во-первых, отсутствует хроническое воздействие токсического вещества на организм; во-вторых, в качестве нефротоксического вещества используется специальная смесь, которая не присутствует в окружающей внешней среде и не является ее загрязнителем.
Заявляемое изобретение направлено на решение задачи, заключающейся в разработке способа моделирования хронической токсической нефропатии.
Решение этой задачи позволяет расширить представление о действии избытка молибдена на организм, повреждающем действии на структуру почечной ткани и ее функции при длительном воздействии цветного металла; позволяет создать способ моделирования хронической токсической нефропатии, повышающий воспроизводимость, удобный для проведения эксперимента на животных и экономически выгодный.
Для достижения этого технического результата заявляемое изобретение способа моделирования хронической токсической нефропатии включает следующие существенные признаки: в качестве токсического вещества используют раствор молибдата аммония, вводимый через зонд в желудок один раз в сутки ежедневно в течение месяца в дозе 50 мг/кг в пересчете на металл, где на единицу раствора, равную 1 мл, приходится 25 мг молибдена.
Предлагаемый способ отличается от прототипа использованием токсического вещества - молибдата аммония - широко распространенного в окружающей среде, а также длительным введением для создания модели хронической токсической нефропатии.
Между отличительными признаками заявляемого изобретения и техническим результатом существует следующая причинно-следственная связь: длительное введение раствора молибдата аммония в дозе 50 мг/кг приводит к возникновению хронической токсической нефропатии, что является более удобной и приближенной к натуральным условиям моделью.
По имеющимся у авторов сведениям, совокупность существенных признаков, характеризующих сущность заявляемого изобретения, не известна, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию «новизна».
По мнению авторов, сущность заявляемого изобретения не следует для специалистов явным образом из известного уровня медицины, так как из него не выявляется вышеуказанная возможность получения способа моделирования хронической токсической нефропатии, что позволяет сделать вывод о соответствии критерию «изобретательский уровень».
Совокупность существенных признаков, характеризующих сущность изобретения, в принципе может быть многократно использован в эксперименте с получением результата, заключающегося в эффективном и легко воспроизводимом способе развития хронической токсической нефропатии, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию «промышленная применимость».
Данный способ осуществляется следующим образом.
Для получения токсического вещества молибдат аммония растворяется в стерильной дистиллированной воде таким образом, что на единицу раствора, равную 1 мл, приходится 25 мг молибдена (в пересчете на металл). На каждые 100 г веса крысы вводится 0,2 мл раствора (5 мг Мо), что не является водной нагрузкой на организм животного. Раствор молибдата аммония вводится через зонд в желудок каждый день в течение месяца.
Сущность способа подтверждена морфологически: Чертеж - Ткань почек при хронической интоксикации молибдатом аммония. На чертеже: 1 - умеренное полнокровие клубочков, 2 - гидропическая дистрофия канальцев и 3 - небольшие участки некроза.
Пример 1. Крысам самцам линии Вистар массой 200-250 г вводили через зонд в желудок раствор молибдата аммония в дозе 50 мг/кг каждый день в течение месяца. Исследование функционального состояния почек проводили каждые две недели. Определяли диурез, клубочковую фильтрацию, канальцевую реабсорбцию воды, а также содержание белка в моче. Контролем служили интактные животные.
По истечении времени эксперимента (1 месяц) крысы забивались с использованием тиопенталового наркоза. Для гистологических исследований образцы ткани почки фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине, после чего подвергали заливке в парафин с последующим приготовлением срезов толщиной 7-8 микрон. Срезы окрашивались гематоксилином и эозином. Изучение срезов проводилось в проходящем свете при помощи микроскопа Микомед-1 под увеличением 80×200×400.
Таблица 1
Основные процессы мочеобразования у крыс в условиях спонтанного диуреза на фоне хронической интоксикации молибдатом аммония (М±м).
Условия опыта
Стат. показат
Процессы мочеобразования
V мл/час/100 г
F мл/час/100 г
R<sub>H2O</sub> %
Фон
М±m
0,066±0,0042
16,709±0,79
99,605±0,036
Молибдат аммония
М±m
0,131±0,0054
14,89±0,86
99,12±0,042
p
*)
-
*)
Примечание: (*) - достоверное (р<0,05) изменение по сравнению с фоном
Внутрижелудочное введение крысам молибдата аммония в дозе 50 мг/кг вызывало достоверное увеличение объема спонтанного диуреза (табл.1) через 1 месяц эксперимента (p<0,05) за счет снижения канальцевой реабсорбции воды (p<0,05). Наблюдалась значительная протеинурия.
Выявленные функциональные изменения почек при хронической интоксикации подтверждались данными гистологических исследований, выявившими картину токсической нефропатии. При морфологическом исследовании в ткани почек определялось (приложение: чертеж) расширение мочевых пространств, застойное полнокровие клубочков. Также отмечалась гиалиново-капельная и гидропическая дистрофия эпителия канальцев, преимущественно проксимальных отделов. В отдельных канальцах выявлялись участки некроза эпителия, в просвете наблюдались белковый детрит, единичные цилиндры и слущенный эпителий. Сосуды - с плазматическим пропитыванием стенок и периваскулярным отеком. Строма умеренно отечная. В отдельных участках отмечалась умеренная лимфо-гистиоцитарная инфильтрация.
Предлагаемый способ моделирования хронической токсической нефропатии является эффективным, позволяет изучать эту патологию в динамике развития и может способствовать разработке и поиску средств для лечения и профилактики хронической токсической нефропатии.