ИММУНОГЛОБУЛИНЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ АГГРЕКАН

1. Иммуноглобулиновый одиночный вариабельный домен (ISV), который специфически связывается с аггреканом, предпочтительно с аггреканом человека, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 125, и необязательно с аггреканом собаки, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 126, аггреканом коровы, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 127, аггреканом крысы, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 128; аггреканом свиньи, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 129; аггреканом мыши, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 130, аггреканом кролика, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 131; аггреканом яванского макака, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 132 и/или аггреканом макака-резуса, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 133.
2. ISV по п. 1, отличающийся тем, что по существу состоит из 4 каркасных областей FR1-FR4 соответственно и 3 областей, определяющих комплементарность CDR1-CDR3 соответственно, в которых:
CDR1 выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 24, 20, 21, 22, 23, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37 и 109, предпочтительно выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 24, 20, 21, 25, 27, 29, 31, 34, 35, 36, 37 и 109;
CDR2 выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42, 38, 39, 40, 41, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55 и 110, предпочтительно выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42, 38, 39, 43, 45, 47, 49, 50, 53, 54, 55 и 110; и
CDR3 выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 60, 56, 57, 58, 59, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74 и 111, предпочтительно выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 60, 56, 57, 61, 63, 65, 67, 71, 72, 73, 74 и 111.
3. ISV по п. 1 или 2, который по существу состоит из 4 каркасных областей FR1-FR4 соответственно и 3 областей, определяющих комплементарность CDR1-CDR3 соответственно, в которых:
i) CDR1 выбран из группы, состоящей из:
a) SEQ ID NO: 24, 20, 21, 109;
b) аминокислотных последовательностей, которые имеют различие в 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислоту с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 24, где
в положении 2 S изменен на R, F, I или T;
в положении 3 Т изменен на I;
в положении 5 I было изменено на S;
в положении 6 I было изменено на S, T или M;
в положении 7 N изменен на Y или R;
в положении 8 V изменен на A, Y, T или G;
в положении 9 V изменен на М; и/или
- в положении 10 R изменен на G, K или A;
и/или
ii) CDR2 выбран из группы, состоящей из:
c) SEQ ID NO: 42, 38, 39 и 110; и
d) аминокислотных последовательностей, которые имеют различие в 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислоту с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 42, где
в положении 1 Т изменен на А или G;
S или N вставлен между положением 3 и положением 4;
в положении 3 S изменен на R, W, N или T;
в положении 4 S изменен на T или G;
в положении 5 G изменен на S;
в положении 6 G изменен на S или R;
в положении 7 N изменен на S, T или R;
в положении 8 A изменен на T; и/или
в положении 9 N изменен на D или Y;
и/или
iii) CDR3 выбран из группы, состоящей из:
e) SEQ ID NO: 60, 56, 57 и 111; и
f) аминокислотных последовательностей, которые имеют различие в 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислоту с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 60, где
в положении 1 P изменен на G, R, D или E или отсутствует;
в положении 2 Т изменен на R, L, P или V или отсутствует;
в положении 3 Т изменен на М, S или R или отсутствует;
в положении 4 H изменен на D, Y, G или T;
в положении 5 Y изменен на F, V, T или G;
в положении 6 G изменен на L, D, S, Y или W;
R, T, Y или V вставлен между положением 6 и положением 7;
в положении 7 G изменен на P или S;
в положении 8 V изменен на G, T, H, R, L или Y;
в положении 9 Y изменен на R, A, S, D или G;
в положении 10 Y изменен на N, E, G, W или S;
W вставлена между положением 10 и положением 11;
в положении 11 G изменен на S, K или Y;
в положении 12 P изменен на E, или D, или отсутствует; и/или
в позиции 13 Y изменен на L или отсутствует.
4. ISV по п. 1 или 2, отличающийся тем, что по существу состоит из 4 каркасных областей FR1-FR4 соответственно и 3 областей, определяющих комплементарность CDR1-CDR3 соответственно, в которых:
i) CDR1 выбран из группы, состоящей из:
a) SEQ ID NO: 32, 30 и 23; и
b) аминокислотных последовательностей, которые имеют различие в 3, 2 или 1 аминокислоту с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 32, где
в положении 2 R изменен на L;
в положении 6 S изменен на T; и/или
в положении 8 Т изменен на А;
и/или
ii) CDR2 выбран из группы, состоящей из:
c) SEQ ID NO: 50, 41, 48 и 51; и
d) аминокислотных последовательностей, которые имеют различие в 2 или 1 аминокислоту с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 50, где
в положении 7 G изменен на S или R; и/или
в положении 8 R изменен на T;
и/или
iii) CDR3 выбран из группы, состоящей из:
e) SEQ ID NO: 68, 59, 66 и 69; и
f) аминокислотных последовательностей, которые имеют различие в 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислоту с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 68, где
в положении 4 R изменен на V или P;
в положении 6 A изменен на Y;
в положении 7 S изменен на T;
в положении 8 S отсутствует;
в положении 9 N изменен на P;
в положении 10 R изменен на T или L;
в положении 11 G изменен на E; и/или
в положении 12 L изменен на T или V.
5. ISV по п. 1 или 2, что по существу состоит из 4 каркасных областей FR1-FR4 соответственно и 3 областей, определяющих комплементарность CDR1-CDR3 соответственно, в котором:
i) CDR1 выбран из группы, состоящей из:
a) SEQ ID NO: 28; и
b) аминокислотных последовательностей, которые имеют различие в 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислоту с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 28, где
в положении 1 G изменен на R;
в положении 2 P изменен на S или R;
в положении 3 Т изменен на I;
в положении 5 S изменен на N;
в положении 6 R изменен на N, M или S;
в положении 7 Y изменен на R или отсутствует;
в положении 8 A изменен на F или отсутствует; и/или
в позиции 10 G изменен на Y;
и/или
ii) CDR2 выбран из группы, состоящей из:
c) SEQ ID NO: 46; и
d) аминокислотных последовательностей, которые имеют различие в 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислоту с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 46, где
в положении 1 A изменен на S или Y;
в положении 4 W изменен на L;
в положении 5 S изменен на N;
в положении 6 S отсутствует;
в положении 7 G отсутствует;
в положении 8 G изменен на A;
в положении 9 R изменен на S, D или T; и/или
в положении 11 Y изменен на N или R;
и/или
iii) CDR3 выбран из группы, состоящей из:
e) SEQ ID NO: 64; и
f) аминокислотных последовательностей, которые имеют различие в 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислоту с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 64, где
в положении 1 A изменен на R или F;
в положении 2 R изменен на I или L;
в положении 3 I было изменено на H или Q;
в положении 4 P изменен на G или N;
в положении 5 V изменен на S;
в положении 6 R изменен на G, N или F;
в положении 7 Т изменен на R, W или Y;
в положении 8 Y изменен на R или S или отсутствует;
в положении 9 Т изменен на S или отсутствует;
в положении 10 S изменен на E, K или отсутствует;
в положении 11 E изменен на N, A или отсутствует;
в положении 12 W изменен на D или отсутствует;
в положении 13 N изменен на D или отсутствует;
в положении 14 Y отсутствует; и/или
D и N добавляются после позиции 14 SEQ ID NO: 64.
6. ISV по любому из пп. 2-5, отличающийся тем, что указанный ISV выбран из группы ISV, в которой:
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 24, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 42 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 60;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 20, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 38 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 56;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 21, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 39 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 57;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 25, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 43 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 61;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 27, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 45 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 63;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 29, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 47 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 65;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 31, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 49 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 67;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 34, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 50 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 71;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 35, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 53 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 72;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 36, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 54 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 73;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 37, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 55 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 74;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 32, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 50 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 68;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 32, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 51 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 69;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 30, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 48 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 66;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 23, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 41 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 59;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 28, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 46 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 64;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 22, CDR2 представляет собой SEQ ID NO:40, и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 58;
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 26, CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 44 и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 62; и
CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 33, CDR2 представляет собой SEQ ID NO:52; и CDR3 представляет собой SEQ ID NO: 70.
7. ISV по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что указанный ISV выбран из группы, состоящей из ISV, состоящих из SEQ ID NO: 1-19 и 114-118, предпочтительно SEQ ID NO: 5, 1, 2, 6, 8, 10, 12, 16, 17, 18 и 19, и ISV, которые имеют более 80%, например, 90% или 95% идентичности последовательностей с любой из SEQ IDNO: 1-19 и 114-118, предпочтительно SEQ ID NO: 5, 1, 2, 6, 8, 10, 12, 16, 17, 18 и 19.
8. Направленный против аггрекана полипептид, который связывается с доменом G2 аггрекана и который конкурирует за связывание с аггреканом с ISV по любому из пунктов 1-7, где указанный направленный против аггрекана полипептид выбран из доменного антитела, иммуноглобулина, который подходит для применения в качестве доменного антитела, однодоменного антитела, иммуноглобулина, который подходит для применения в качестве однодоменного антитела, dAb, иммуноглобулина, который подходит для применения в качестве dAb, нанотела, последовательности VHH, гуманизированной последовательности VHH, оверблюженной последовательности VH или последовательности VHH, которая была получена путем созревания аффинности, которая связывается с эпитопоной группой 1 домена G1 аггрекана, последовательности VHH, которая была получена путем созревания аффинности и которая связывается с доменом G1-IGD-G2 аггрекана, или последовательности VHH, которая была получена путем созревания аффинности.
9. Полипептид, который специфически связывается с аггреканом, предпочтительно с аггреканом человека, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 125, и необязательно с аггреканом собаки, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 126, аггреканом коровы, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 127, аггреканом крысы, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 128; аггреканом свиньи, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 129; аггреканом мыши, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 130, аггреканом кролика, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 131; аггреканом яванского макака, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 132 и/или аггреканом макака-резуса, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 133, содержащий, по меньшей мере, один ISV по любому из пп. 1-8 и, возможно, второй ISV, возможно, третий ISV и, возможно, четвертый ISV.
10. Полипептид, который специфически связывается с аггреканом, предпочтительно с аггреканом человека, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 125, и необязательно с аггреканом собаки, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 126, аггреканом коровы, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 127, аггреканом крысы, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 128; аггреканом свиньи, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 129; аггреканом мыши, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 130, аггреканом кролика, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 131; аггреканом яванского макака, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 132 и/или аггреканом макака-резуса, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 133, который содержит по меньшей мере два ISV по любому из пп. 1-8 и, возможно, третий ISV и, возможно, четвертый ISV.
11. Полипептид по п. 10, отличающийся тем, что указанные по меньшей мере два ISV могут быть одинаковыми или разными, предпочтительно указанные по меньшей мере два ISV независимо выбраны из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-19 и 114-118.
12. Полипептид по любому из пп. 9-11, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один ISV по любому из пп. 1-8 или указанные по меньшей мере два ISV по любому из пп. 1-8, связываются с представителем семейства сериновых протеаз, катепсинами, матриксными металлопротеиназами (ММР)/матриксинами или дезинтегрином и металлопротеиназой с мотивами тромбоспондина (ADAMTS), предпочтительно MMP8, MMP13, MMP19, MMP20, ADAMTS5 (аггреканазой-2), ADAMTS4 (аггреканазой-1) и/или ADAMTS11.
13. Полипептид по любому из пп. 9-12, отличающийся тем, что указанный полипептид дополнительно включает фрагмент, связывающий белок сыворотки, или белок сыворотки.
14. Конструкция, которая специфически связывается с аггреканом, предпочтительно с аггреканом человека, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 125, и необязательно с аггреканом собаки, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 126, аггреканом коровы, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 127, аггреканом крысы, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 128; аггреканом свиньи, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 129; аггреканом мыши, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 130, аггреканом кролика, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 131; аггреканом яванского макака, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 132 и/или аггреканом макака-резуса, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 133, и которая содержит или, по существу, состоит из ISV по любому из пп. 1-8 или полипептида по любому из пп. 9-13 и которая дополнительно включает одну или несколько других групп, остатков, фрагментов или связывающих единиц, необязательно связанных через один или несколько пептидных линкеров.
15. Композиция, которая специфически связывается с аггреканом, предпочтительно с аггреканом человека, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 125, и необязательно с аггреканом собаки, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 126, аггреканом коровы, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 127, аггреканом крысы, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 128; аггреканом свиньи, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 129; аггреканом мыши, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 130, аггреканом кролика, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 131; аггреканом яванского макака, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 132 и/или аггреканом макака-резуса, имеющим последовательность, представленную в SEQ ID NO: 133, содержащая, по меньшей мере, один ISV по любому из пп. 1-8, полипептид по любому из пп 9-13, или конструкция по п. 14, где указанная композиция, предпочтительно представляет собой фармацевтическую композицию, необязательно дополнительно включающую, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель и/или адъювант и необязательно содержит один или несколько других фармацевтически активных полипептидов и/или соединений.
16. Применение ISV по любому из пп.1-8 или продукта, содержащего ISV по любому из пп. 1-8 в качестве лекарственного средства, где указанный продукт, содержащий ISV по любому из пп. 1-8, выбран из композиции по п. 15, полипептида по любому из пп. 9-13, или конструкции по п. 14.
17. Применение ISV по любому из пп.1-8 или продукта, содержащего ISV по любому из пп.1-8 в профилактике или лечении артропатий и хондродистрофий, артритного заболевания, такого как остеоартрит, ревматоидный артрит, подагрический артрит, псориатический артрит, травматический разрыв или отслоение, ахондроплазия, костохондрит, спондилоэпиметафизальная дисплазия, грыжа позвоночного диска, дегенеративные заболевания поясничного диска, дегенеративные заболевания суставов и рецидивирующий полихондрит, где указанный продукт, содержащий ISV по любому из пп. 1-8, выбран из композиции по п. 15, ISV по любому из пп. 1-8, полипептида по любому из пп. 9-13, или конструкции по п. 14.