Сравнительная оценка иммуноферментных тест-систем для количественного определения IgG к вирусу краснухи

Сравнительная оценка иммуноферментных тест-систем для количественного определения igG к вирусу краснухи

Р.Р. Гафаров (niivs-rg4@mail.ru), Н.В. Юминова, Н.В. Балаев, В.В. Зверев

ФГБУ «НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова» РАМН, Москва

Резюме

В статье представлены результаты сравнительной оценки уровня антител к вирусу краснухи с использованием коммерческих тест-систем отечественного и зарубежного производства. Несмотря на то что согласно инструкциям по применению все тест-системы стандартизованы относительно международного референсного образца RUBI-1-94, результаты исследований образцов сывороток различаются. Требуется дальнейшее усовершенствование тест-систем для количественной оценки антител к вирусу краснухи.

Ключевые слова: иммуноферментный анализ, краснуха, количественная оценка IgG

Comparative Evaluation Kits for Quantitative Determination Enzyme Immunoassay of Immunoglobulin G to Rubella Virus

R.R. Gafarov (niivs-rg4@mail.ru), N.V. Yuminova, N.V. Balaev, V.V. Zverev

The Federal State Budgetary Institution «I.J. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera» of Russian Academy of Medical

Sciences, Moscow

Abstract

The paper presents the results of a comparative evaluation of the level of antibodies to rubella virus using commercial test kits of Russia and foreign production. Despite the fact that according to the instructions for use all ELISA kits are standardized on an international reference sample RUBI-1-94, the results of studies of serum samples are differ. Requires further improvement ELISA kits for quantitative detection of antibodies to rubella virus. Key words: ELISA, rubella, IgG quantitative detection

Введение

В настоящее время разработка и принятие программ массовой вакцинации против краснухи во многих странах обозначили новый этап в борьбе с этой инфекцией. Так, в странах Скандинавии частота синдрома врожденной краснухи (СВК) составляет 0%, в странах Южной Азии - до 136 случаев на 100 тыс. родов, что напрямую обусловлено наличием или отсутствием эффективной программы вакцинопрофилактики.

В России значительный прогресс в борьбе с краснухой связан с Национальным проектом «Здоровье» (начало реализации - январь 2006 г.). В результате дополнительной вакцинации в 2006 - 2007 годах около 15 млн детей и подростков заболеваемость краснухой снизилась в десятки раз. Так, в 2006 году заболеваемость составила 93,1, а в 2009 - 1,13 на 100 тыс. населения [1 - 3]. Подобная динамика снижения заболеваемости с одновременным исчезновением эпидемических циклов позволяет отнести краснуху к разряду управляемых инфекций.

Развитие методов серологической диагностики краснухи привело к широкому применению им-муноферментного анализа (ИФА) для выявления специфических антител. Основные достоинства

данного метода известны: возможность автоматизации, инструментальный учет результатов, высокие чувствительность и специфичность. Принятый Всемирной организацией здравоохранения международный стандартный образец сыворотки к вирусу краснухи ^иВ1-1-94) позволил ввести в лабораторную практику количественную оценку уровня антител [7 - 10], дал возможность объективно сравнивать результаты, полученные с помощью различных тест-систем.

В настоящее время во многих европейских странах принят уровень защитных антител к вирусу краснухи 15 МЕ/мл, в США - 10 МЕ/мл, в России рекомендованный защитный уровень антител - 25 МЕ/мл [4].

В мировой практике описаны случаи реинфек-ции краснухи у беременных с уровнем антител, близким к защитному [5, 6], с развитием в дальнейшем у новорожденных синдрома врожденной краснухи.

В настоящее время в диагностических лабораториях России для выявления ^ к вирусу краснухи используются различные тест-системы отечественных и иностранных компаний. Большинство тест-систем позволяет проводить количественный учет результатов, в то же время проблема стандартиза-

ции и возможности сопоставления результатов, получаемых с помощью тест-систем различных производителей, остается в нашей стране недостаточно изученной.

Цель нашего исследования - сравнительная количественная оценка уровня IgG к вирусу краснухи в сыворотке крови с использованием отечественных иммуноферментных тест-систем и зарегистрированных в РФ тест-систем зарубежных производителей.

Материалы и методы

Для проведения исследования были выбраны следующие иммуноферментные тест-системы: «ВектоРубелла-IgG» (НПО «Вектор-Бест», г. Новосибирск), «ИФА-Краснуха-IgG» (ЗАО «ЭКОлаб», г. Элек-трогорск), «ДС-антиРубелла-IgG» (НПО «Диагностические системы», г. Нижний Новгород), Euroimmun Rubella-IgG (Euroimmun GmBH, Германия), Human antiRubella-IgG (Human GmBH, Германия).

Указанные иммуноферментные тест-системы имеют отличия в формате проведения реакции, используемого на твердой фазе антигена, в методе учета результатов. Основные параметры тест-систем представлены в таблице 1. В то же время все они предназначены для количественного учета вирус-специфических IgG на основе международного стандартного образца сыворотки к вирусу краснухи и имеют в своей основе непрямой метод ИФА.

В ходе исследования были изучены образцы сывороток крови беременных женщин, предоставленные диагностическими центрами Москвы и Московской области. Образцы хранились до исследования при температуре минус 30 °С не более 6 месяцев. Иммуноферментный анализ проводился в соответствии с инструкциями по применению

наборов в условиях контролируемого эксперимента. Полученные результаты были статистически обработаны с использованием программы Statistica, версия 6.0.

Результаты и обсуждение

На первом этапе тестировалось 380 сывороток с использованием наборов 1, 2 и 3. При проведении первоначальной качественной оценки образцов сывороток было получено 100%-ное совпадение положительных и отрицательных результатов во всех трех тест-системах. Далее была проведена количественная оценка положительных образцов. Статистическая обработка результатов представлена в таблице 2.

Все слабоположительные образцы данной выборки с концентрацией ^ в диапазоне 10 - 30 МЕ/мл (по меньшей мере хотя бы в одной из тест-систем) тестировались повторно с использованием наборов 1 - 5. Статистическая обработка результатов представлена в таблице 3.

Проведенные исследования свидетельствуют о значительном влиянии на получаемые результаты конструктивных особенностей тест-систем.

Наиболее сопоставимы результаты тест-систем № 2 и № 5, а также тест-систем № 3 и № 4. Тест-система № 1 показала более высокие относительно остальных тест-систем значения концентрации ^ (в два - шесть раз). Можно заключить, что расхождения в оценке уровня вирус-специфических ^ особенно заметны при изучении слабоположительных сывороток, принадлежащих пациентам группы риска, в отношении возможности реинфек-ции краснухи. Так, при лабораторном обследовании беременной женщины с уровнем антител ниже защитного титра возникает вероятность ошибочно признать ее защищенной от реинфекции и не нуж-

Таблица 1.

Основные параметры тест-систем

Наименование тест-системы Характеристика антигена Метод учета результатов Диапазон измерений

1. ВектоРубелла-IgG Rubella virus Расчетная формула От 10

2. ИФА-Краснуха-IgG Rubella virus Калибровочный график 10 - 200

3. ДС-антиРубелла-IgG Рекомбинантные белки Калибровочный график 10 - 160

4. Euroimmun Rubella-IgG Rubella virus Калибровочный график 10 - 150

5. Human antiRubella-IgG Rubella virus Калибровочный график 10 - 100

Таблица 2.

Сравнительная оценка серопозитивных образцов

Наименование тест-системы Среднее значение (МЕ/мл) Стандартное отклонение

1. ВектоРубелла-IgG 381 69

2. ИФА-Краснуха-IgG 92 60

3. ДС-антиРубелла-IgG 126 48

Таблица 3.

Сравнительная оценка слабоположительных образцов

Наименование тест-системы Среднее значение (МЕ/мл) Стандартное отклонение

1. ВектоРубелла-IgG 123,9 69,3

2. ИФА-Краснуха-IgG 20,1 6,8

3. ДС-антиРубелла-IgG 50,5 25

4. Euroimmun Rubella-IgG 64 7,5

5. Human antiRubella-IgG 29,2 10,4

дающейся в дальнейшем проведении серомонито- 2. ринга (или ревакцинации). При массовых сероэпи-демиологических обследованиях может иметь место искажение реальной картины состояния коллективного иммунитета и тенденций его изменения. 3.

Выводы

1. Конструктивные особенности тест-систем ока- 4. зывают значительное влияние на результаты.

Расхождения в оценке уровня вирус-специфических IgG в различных ИФА особенно заметны при изучении слабоположительных сывороток, принадлежащих пациентам групп риска. Необходимо дальнейшее совершенствование отечественных иммуноферментных тест-систем для выявления IgG-антител к вирусу краснухи. Требуются дополнительные исследования по стандартизации иммуноферментных тест-систем.

Литература

1. Зверев В.В., Юминова Н.В. Проблемы кори, краснухи и эпидемического паротита в Российской Федерации // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2004. № 5. C. 8 - 11.

2. Профилактика кори, краснухи и эпидемического паротита. СП 3.1.2952-11.

3. Юминова Н.В., Александер С.К., Зверев В.В. Диагностика кори, эпидемического паротита и краснухи // Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. 2002. № 2. С. 23 - 25.

4. Юминова Н.В. Диагностика краснухи в Российской Федерации // Бюллетень вакцинации. 2009. № 6 (36). С. 5, 6.

5. Banerji A., Ford-Jones E.L., Kelly E. et al. Congenital rubella syndrome despite maternal antibodies // JAMC. 2005. V. 172 (13). P. 1678, 1679.

6. Best J.M., Banatvala J.E., Morgan-Capner P., Miller E. Fetal infection and maternal reinfection with rubella: criteria for defining reinfection // BMJ. 1989. V. 299. P 773 - 775.

7. Dimech W., Panagiotopoulos L., Francis B. et al. Evaluation of eight anti-rubella virus immunoglobulin G immunoassays that report results in international units per milliliter // Journal of Clinical Microbiology. 2008. V. 46. P. 1955 - 1960.

8. Grangeot-Keros L., Pustowoit B., Hobman T. Evaluation of cobas core rubella IgG EIA recomb, a new enzyme immunoassay based on recombinant rubella-like particles // Journal of Clinical Microbiology. 1995. V. 33. P. 2392 - 2394.

9. Matter L., Kogelschatz K., Germann D. Serum levels of Rubella virus antibodies indicating immunity: response to vaccination of subject with low or undetectable antibody concentrations // JID. 1997. V. 175. P. 749 - 755.

10. Tisher A., Andrews N., Kafatos G. Standardization of measles, mumps and rubella assays to enable comparisons of seroprevalence data across 21st European countries and Australia // Epidemiol. Infect. 2007. V. 135. P. 787 - 797.

информация воз

24 октября - День полиомиелита

Всемирный день полиомиелита (24 октября) был учрежден Международным «Ротари клубом» более десяти лет назад и приурочен ко дню рождения Дж. Солка, возглавлявшего первую команду по разработке вакцины против полиомиелита.

В настоящее время во всех странах мира (кроме трех) при поддержке Глобальной инициативы по ликвидации полиомиелита циркуляция вируса прекратилась.

В этом году 171 ребенок был парализован в результате перенесенного полиомиелита - это наименьшее число пострадавших, какое когда-либо фиксировалось.

В мае 2010 года, когда был учрежден Чрезвычайный план действий по ликвидации полиомиелита, самой неблагополучной страной считалась Индия, теперь болевые точки инфекции находятся в маргинальных общинах трех стран: Афганистана, Нигерии и Пакистана. В рамках Чрезвычайного плана задействовано более 4000 человек, оказывающих помощь этим странам. В центре их усилий:

• привлечение в Нигерии национальных лидеров к проведению вакцинации;

• организация работы постоянных команд по вакцинации против полиомиелита в небезопасных районах Афганистана независимо от того, кто эти районы контролирует;

• обеспечение на всех уровнях (не только в секторе здравоохранения) охвата прививками каждого ребенка в Пакистане;

• работа единого координационного центра по информированию глав трех государств о результатах предпринимаемых действий по ликвидации полиомиелита.

В 2012 году 398 млн детей были вакцинированы против полиомиелита. Только во вторую неделю октября привито почти 20 млн детей в восьми странах Африки, где по-прежнему сохраняется высокий риск заболевания.

Результатом отказа от борьбы с полиомиелитом или ее ослабления стало бы не менее 200 тыс. парализованных детей в мире ежегодно.

Только вакцинация способна обеспечит свободный от полиомиелита мир, и каждый ребенок должен иметь возможность быть привитым.

Источник: www.who.int