Способ получения свободно плавающих науплиусов артемии из артемии на стадии цист и набор для аквакультуры
METHOD FOR PRODUCTION OF FREE-SWIMMING BRINE SHRIMP NAUPLIUS FROM BRINE SHRIMP AT A CYST STAGE AND A KIT FOR AQUACULTURE

Способ получения свободно плавающих науплиусов артемии из артемии на стадии цист и набор для аквакультуры.
Данное изобретение относится к производству стартового живого корма в аквакультуре для кормления личинок рыб и ракообразных.
В частности, изобретение касается способа получения свободно плавающих науплиусов аргемии из артемии на стадии цист, находящихся в состоянии диапаузы, путем инкубирования цист с применением активатора для разрушения диапаузы артемии на стадии цист в среде выведения и условиях, способствующих вылуплению в течение заданного периода инкубации.
Наибольшую распространенность как стартовый живой корм в аквакультуре получили науплиусы артемии, инкубированные из артемии на стадии цист.
Собранная, даже при правильном методе сбора, переработки и хранения, артемия на стадии цист имеет низкий процент выклева из-за большой глубины диапаузы. Диапазирующие цисты артемии могут переносить длительные периоды обезвоживания и аноксии, крайне низкие температуры и высокое давление. В природе такая стойкость является необходимой для выживания.
С развитием аквакультуры всегда остро стоял вопрос увеличения процента выклева артемии на стадии цист для увеличения количества и качества стартового корма.
На первых этапах производители делали повторные циклы гидратации - дегидратации, замораживания при низких температурах и размораживания, изменяли время инкубации, освещенность и температуру.
Самый простой способ повышения выклева - это внесение активатора в среду инкубации.
Наиболее известные способы:
Известно авторское свидетельство №935044, 1980 г., согласно которому в инкубационный аппарат наливают 5% раствор поваренной соли (хлористый натрий), помещают туда покоящиеся яйца артемии салина, содержащие 80% живых эмбрионов из расчета 10 грамм на 1 литр и включают аэрацию среды при помощи компрессоров и распылителей. В инкубационную среду с яйцами добавляют 0,1-0,3 мл 33% перекиси водорода на 1 литр раствора. Инкубацию производят при 20 С° в течение 48 часов. После этого отключают аэрацию, науплиусов вместе с инкубационной средой процеживают через сачок из капронового сита №60, отмывают от соли, отделяют от скарлупы и используют на корм рыбам. В качестве недостатков способа можно отметить, что при использовании перекиси водорода в количествах, меньших, чем 0,1 мл на 1 литр раствора, не происходит полной активации яиц. При концентрациях больших, чем 0,3 мл на 1 литр раствора, науплиусы выклевываются и погибают.
Из документа RU 2360409 2007 г известен способ переработки цист рачка Artemia, включающий заготовку цист, соленую промывку, температурную активацию, пресную промывку, сушку, отличающийся тем, что после сушки дополнительно осуществляют сухую активацию, при этом сухую активацию начинают не ранее десяти дней после сушки и ведут веществом, являющимся носителем атомарного кислорода. В качестве сухого активатора используют вещество под торговой маркой «Косокс», при соотношении компонентов, мас. %: активатор «Косокс» 1-2,5, сухие цисты рачка Artemia - остальное.
Известен также способ получения науплий артемии, который включает добавление в инкубационный раствор, содержащий 25-30 г соли на 1 литр воды, находящихся в диапаузе цист артемии в количестве не более 2,5 грамм цист на 1 литр раствора и активатор. После чего при постоянном
перемешивании полученной инкубационной среды осуществляют инкубацию. В качестве активатора используют аскорбат или изоаскорбат натрия в количестве 0,4-0,9 грамм на 1 литр раствора. Процесс инкубации ведут в течение 24-30 часов при температуре инкубационной среды 28-30 С°. Композиция для получения науплий артемии содержит находящиеся в диапаузе цисты артемии и активатор. Компоненты композиции находятся в следующем соотношении их весовых частей: 1 весовая часть цист артемии: 0,1-0,3 весовые части активатора (RU 2352108 С2 2004 г.).
Из RU 2001129649 10.08.2003 известен способ подготовки цист артемии (Artemia salina) к инкубации, состоящий в нанесении на оболочку яиц активирующих веществ, отличающийся тем, что яйца артемии, помещенные в замкнутую цилиндрическую емкость, в которую непрерывно подается воздух под давлением от 0,3 до 0,6 атмосфер, обеспечивающий их борботаж (перемешивание) и позволяющий равномерно напылять химсостав на поверхность цист не повреждая их скорлупу.
При этом подготовка цист артемии к инкубации осуществляется путем напыления оболочки яиц из следующего состава: от 10 до 25 г CaO2+0.02 г поливитаминов + 0,1 г глюкозы + 5 г глицерина + 85 г 100%-ного спирта, из расчета на 1 (один) кг артемии и на 350 л воды.
Из UA 51274 12.07.2010 известен способ повышения выхода науплий из цист артемии, при котором в качестве физического фактора влияния используют действие низкоинтенсивного магнитного поля, например, с индукцией 12 мТл, в котором в течение 10 минут при температуре 20-25°С экспонируют воздушно-сухие цисты артемии с последующей инкубацией обработанных цист в оптимальных условиях до вылупления из них науплий.
Недостатками вышеперечисленных способов является низкий процент выклева.
Наиболее близким аналогом является патент ЕА 017048 28.09.2012 В1. В данном документе раскрыт способ получения свободно плавающих
личинок рачков Artemia из некоторого количества (порции) цист одного или нескольких видов Artemia, включая цисты в состоянии диапаузы, путем инкубирования цист в среде выведения в условиях, способствующих вылупливанию хотя бы части цист и выходу свободноплавающих личинок, отличающийся тем, что цисты приводятся в контакт по меньшей мере с одним соединением, содержащим по меньшей мере одну структуру -(ОН)С=С(ОН)-, для устранения диапаузы хотя бы у части находящихся в диапаузе цист с тем, чтобы из них образовались свободно плавающие личинки, при этом вылупляемость проинкубированных цист повышается с X% от общего числа полноценных, цист в том случае, когда они не приводятся в контакт с данным соединением, до более высокой степени, чем Х%, в том случае, когда они приводятся в контакт с данным соединением.
Задачей настоящего изобретения является обеспечение альтернативного способа повышения выклева артемии на стадии цист, дающего максимальную выводимость и простоту осуществления процесса.
Авторами настоящего изобретения было обнаружено, что когда артемия на стадии цист приводится в контакт, по меньшей мере, с одним соединением-активатором, содержащим бензольное кольцо, в котором два атома водорода в пара-положении замещены на две гидроксильные группы и минимум один атом водорода замещен на сульфонатную группу, такое контактирование позволяет существенно повысить процент выклева артемии на стадии цист.
В качестве примера одного из возможных соединений-активаторов можно привести добезилат кальция.
Сущность изобретения
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что приведение артемии на стадии цист в контакт с данными соединениями, в частности, внесение данных соединений в среду для выведения, способствует разрушению диапаузы и тем самым повышает выклев (выводимость) науплиусов артемии
из цист. Замещение атома водорода на сульфонатную группу в бензольном кольце многократно повышает растворимость соединения без потери своей активности, и активатор начинает активно действовать на артемию на стадии цист очень мягко и при очень больших передозировках не вызывает летального эффекта, то есть становится безопасным для науплиусов артемии.
Таким образом, настоящее изобретение касается способа получения свободно плавающих личинок (науплиусов) из артемии на стадии цист, находящихся в состоянии диапаузы, и набора для аквакультуры, содержащего в упаковке порцию артемии на стадии цист и соединение-активатор, предназначенного для инкубации в среде выведения для выведения и получения свободно плавающих личинок. Осуществление изобретения.
Как и при обычных способах выведения, артемия на стадии цист подвергается инкубации в среде выведения в условиях, способствующих появлению свободно плавающих личинок (науплиусов) за период инкубации менее 48 часов, температуре менее 30 С°. Инкубационный раствор содержит меньше или больше 35 г. соли на литр воды, артемии на стадии цист меньше 10 г/л воды, рН более 8, кислород больше или равен 2-5 г / литр, интенсивность освещения не менее 2000 люксов.
Отличие от обычного способа заключается в том, что артемия на стадии цист приводится в контакт с активатором. Активатор представляет собой соединение, содержащее бензольное кольцо, в котором два атома водорода в пара-положении замещены на две гидроксильные группы и минимум один атом водорода замещен на сульфонатную группу.
В данном изобретении количество активатора, которое вносится в среду выведения, предпочтительно составляет как минимум 2 мг/л, более предпочтительно как минимум 10 мг/л, наиболее предпочтительно более 10 мг/л.
Данный активатор можно вносить в среду выведения в начале периода инкубации, или до начала инкубации, но не позднее 8 часов после начала
инкубации, активатор может быть смешан с артемией на стадии цист до начала инкубации, либо он должен быть нанесен другим методом, обеспечивающим контакт активатора с артемией на стадии цист в процессе активации (напыление, глазурирование и др.), или просто упакован вместе с артемией на стадии цист.
Активатор может вносится в среду выведения меньше чем через 8 часов, предпочтительнее меньше чем через 3 часа после начала инкубации, наиболее предпочтительно вносится в среду выведения одновременно с артемией на стадии цист в частности, будучи, смешанным или нанесенным на артемию на стадии цист.
Активатор, повышающий выводимость, предпочтительно смешивают с артемией на стадии цист в количестве по меньшей мере 1 мг/г сухой артемии на стадии цист, предпочтительно по меньшей мере 5 мг/г сухой артемии па стадии цист, более предпочтительнее по меньшей мере 10 мг/г сухой артемии на стадии цист в виде гранул, капсул, порошка и т.д.
На практике наборы, содержащие смесь с активатором, включающим данные соединения, в упаковке, смешиваются с артемией на стадии цист.
Если порция артемии на стадии цист содержится в сосуде, то повышающее выводимость вещество можно объединить с артемией на стадии цист, содержащейся в сосуде, путем внесения его в отдельную упаковку с тем, чтобы сосуд, содержащий артемию на стадии цист, и упаковка, содержащая соединение или соединения, повышающие выводимость, составляли набор, который можно продавать как таковой. Предпочтительно такое, повышающее выводимость соединение, упаковывать вместе с артемией на стадии цист, например, прикреплять снаружи к сосуду содержащему артемию на стадии цист, либо помещать вместе с сосудом в одну упаковку.
Более предпочтительно чтобы повышающее выводимость соединение или соединения содержались в сосуде. При использовании жидкого соединения, повышающего выводимость они могут, к примеру, содержаться в
стеклянном или пластиковом флаконе (упаковке) уложенном вместе с артемией на стадии цист в сосуд, в частности в банку или пакет. При использовании твердого соединения, повышающего выводимость, это соединение можно непосредственно смешивать с артемией на стадии цист в виде порошка или гранул, либо в виде таблетки или иной твердой формы или просто содержаться в капсулах в смеси с артемией на стадии цист. Наиболее предпочтительно, чтобы повышающее выводимость соединение или соединения, прилипали или наносились на артемию на стадии цист. При этом в среду выведения всегда попадает правильное количество повышающего выводимость соединения, особенно когда в среду выведения вносится лишь часть артемии на стадии цист, содержащихся в сосуде (упаковке).
На фиг. 1 приведено сравнение влияний концентраций активатора добезилата кальция (DC), приведенного в качестве одного из возможных соединений согласно изобретению, и экстракта зеленого чая, содержащего как минимум 98% полифенолов, из которых по меньшей мере 50% составляет эпигаллокатехина галлат (egcg), ЕД 017048, на выводимость артемии на стадии цист.
Из графика хорошо видно, что при добавлении 5 мг egcg на литр инкубационного раствора, выклев артемии на стадии цист составляет 80,8% и достигает максимума при добавлении 25 мг/л 88,7%, далее при увеличении egcg начинает падать и уже при добавлении 40 мг eggs на литр инкубационного раствора составляет 85,0%, после дальнейшего увеличения концентраций egcg падение выклева резко увеличивается.
При добавлении 5 мг DC на литр инкубационного раствора и такого же штамма артемии на стадии цист выклев составляет 78,8%, при добавлении 40 мг/л DC выклев достигает уже 89,7%. С увеличением концентрации активатора DC выклев растет до 90-92%. Даже при добавлении 240 мг/л активатора DC выклев не падает, составляя более 90%, что говорит о его полной не токсичности на артемию на стадии цист.
На фиг. 2 представлена зависимость количества несвободно плавающих эмбрионов, в процентах, полученных из 100 полноценных цист, от концентрации активаторов DC и egcg. Несвободно плавающими эмбрионами являются науплиусы артемии которые выклюнулись из цист и погибли или просто являются недоразвитыми, поврежденными или они не стали свободно плавающими по другим причинам. На графике видно, что при использовании egcg при повышенной концентрации количество этих эмбрионов начинает резко расти, а при использовании DC остается неизменным, что свидетельствует о его полной не токсичности на науплиусы артемии.
Каждую обработку проводили в тройном повторе, а результаты были усреднены.
Таким образом, можно сделать вывод, что хотя минимальная концентрация, необходимая для получения оптимального значения выклева, у активатора egcg ниже, активатор DC имеет ряд других преимуществ. Так активатор DC имеет гораздо более широкий интервал оптимальных концентраций при котором достигается максимальная выводимость в противоположность egcg (ЕА 017048 28.09.2012 г.), причем многократная передозировка не приводит к уменьшению выклева. Кроме того, максимальный процент выклева, полученный при применении активатора DC выше, чем процент выклева, полученный при применении активатора egcg.