Использование молекулярно- биологических методов в лабораторной диагностике лихорадки западного Нила

Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.

Инфекция и иммунитет

ние климата, интенсивная вырубка лесов и другая экономическая деятельность человека. Ежегодно на территории Республики Коми регистрируется около 2000 случаев нападения клещей на человека, причем, их количество возрастает с каждым годом.

В настоящее время в Республике Коми ведется регистрация заболеваемости по двум инфекциям, переносимых иксодовыми клещами — это клещевой вирусный энцефалит (КВЭ) и клещевой боррелиоз (КБ). В течение последних трех лет наблюдения отмечается устойчивый рост заболеваемости КВЭ и КБ.

Все собранные в Республике Коми клещи представлены одним видом — I. регеи1са1ш. В настоящее время проведено исследование на наличие возбудителей 8 инфекций клещей. Из 1137 исследованных клещей РНК ВЗН обнаружена у 152 (13,4%), РНК ВКЭ выявлена у 104 (9,1%), ДНК Borrelia spp. выявлена у 80 особей — 7%. ДНК риккетсий были обнаружена в 50 образцах (4,4%). Генетический материал возбудителей других клещевых инфекций (бабезио-за, эрлихиоза, анаплазмоза, бартонеллеза) выявлялся в клещах в 1,6—0,4 процентах случаев. В 6,3% случаев обнаружено наличие двух и более патогенов. Установлены варианты сочетания двух, трех и четырех инфекций, но чаще совместно встречаются ВКЭ и КБ, реже всего — эрлихии и бабезии.

ОСОБЕННОСТИ ПРОЯВЛЕНИЯ ПРИРОДНОГО ОЧАГА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА НА ТЕРРИТОРИИ РЕСПУБЛИКИ КОМИ

Б.Р. Гнатив

ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Коми», г. Сыктывкар

На территории Республики Коми с 1960 г. проводятся эпидемиологические и энтомологические исследования, серологический скрининг населения с целью выявления активных природных очагов клещевого энцефалита для своевременного проведения профилактических и противоэпидемических мероприятий.

Высокая активность природного очага отмечалась в 1970—71 гг., когда было зарегистрировано 12 заболевших в 2 самых южных районах республики. В последующий 24-летний период (1972—1995 гг.) отмечалась низкая активность очага — было выявлено всего 15 случаев спорадических заболеваний. Резкое повышение активности отмечено с 1996 года, в котором было зарегистрировано 11 случаев клещевого энцефалита, а с 1999 г. заболеваемость стала регистрироваться ежегодно и, кроме того, на более северных территориях. За последние 12 лет (1999— 2011 гг.) было выявлено 112 случаев заболеваний, из них 75,9% (85 случаев) — за половину этого периода (2006-2011 гг.).

Изменилось и соотношение количества лиц, пострадавших от укусов клещей в различных территориях. До 2001 года, количество лиц, пострадавших от укусов клещей в южных районах республики было в 2-3 раза больше, чем на остальных территориях. С 2001 по 2005 годы это соотношение составляло примерно 1:1. С 2006 г. оно стало изменяться в сторону увеличения количества пострадавших от укусов клещей на северных территориях. В 2009-2011 гг. количество лиц, пострадавших от укусов клещей в южных районах республики, было в 2 раза меньше, чем на остальных территориях.

За последние 12 лет увеличилось число административных территорий, в которых регистрируются случаи укусов клещами — с 6 в 1999 г. до 17 в 2011 г. Данные территории относятся к подзонам средней, северной и крайне северной тайги.

Результаты лабораторных исследований по выявлению вирусофорности иксодовых клещей показывают увеличение доли клещей, инфицированных вирусом клещевого энцефалита. В 1981 г. этот показатель составлял 3,80%, в 2011 г. — 10,12%. В среднем, по результатам последних 12 лет, он составляет 8,85% (от 2,08 до 14,29%). Вместе с тем, следует отметить, что четкого нарастания вирусофорности клещей по годам не прослеживается.

Отмечается рост количества административных территорий республики, на которых выявляются ви-русофорные экземпляры иксодовых клещей. С 1999 по 2005 годы количество административных территорий (из 20 в республике) составляло от 1 до 5, начиная с 2006 года — от 7 до 12.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ В ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ЛИХОРАДКИ ЗАПАДНОГО НИЛА

М.В. Говорухина, Н.Ю. Асмолова, Т.В. Мазрухо, Г.Т. Айдинов, М.М. Швагер, К.С. Гайбарян

ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Ростовской области», г. Ростов-на-Дону

Введение. Лихорадка западного Нила (ЛЗН) — природно-очаговая трансмиссивная вирусная инфекция, которая характеризуется лихорадочно-интоксикационным синдромом и частым поражением центральной нервной системы. В последнее десятилетие в Ростовской области постоянно регистрируются случаи этого заболевания. В 2010 г. зарегистрирована самая крупная с 2000 г. вспышка ЛЗН — 78 случаев. Высокоспецифичная, чувствительная экспресс-диагностика многих тяжелых заболеваний, в том числе ЛЗН, способствует не только их эффективному лечению, но и предотвращению распространения инфекции.

Целью настоящего исследования было изучение диагностической значимости методов ОТ-ПЦР и ИФА для лабораторной верификации ЛЗН.

Материалы и методы. Исследовали плазму и сыворотку крови, а также спинномозговую жидкость, отобранные у больных с подозрением на ЛЗН (15-больные ЛЗН, 38-больные с другими диагнозами, у которых заболевание сопровождалось лихорадкой и неврологической симптоматикой). Диагноз ЛЗН устанавливался по совокупности эпидемиологических, клинических и лабораторных данных. Лабораторная верификация диагноза проводилась двумя методами: ИФА (определение специфических и IgG) и молекулярно-биологическим методом (обнаружение РНК вируса Западного Нила). Для определения антител использовали диагностические тест системы производства ЗАО «Биосервис». Для проведения ПЦР использовали тест-систему «АмплиСенс WNV-FL» с гибридизационно-флуо-ресцентной детекцией продуктов амплификации. Всего проведено 165 исследований, в том числе методом ИФА — 112, ПЦР — 53.

Основные результаты. Маркеры вируса ЛЗН разными методами были выявлены у 28,3% больных. Специфические антитела класса М были обнаруже-

2012, Т. 2, № 1-2

Санитарная охрана территории

ны у 28,3% обследуемых лиц (100,0% от числа больных ЛЗН), антитела класса G у 24,5 и 86,6% — соответственно. При исследовании биоматериала в ОТ-ПЦР РНК вируса Западного Нила была обнаружена лишь в 9,4% случаев (33,3% от числа больных с установленных диагнозом ЛЗН).

Таким образом, можно сделать вывод, что серологическая диагностика ЛЗН методом ИФА высокочувствительна и специфична и является базовым методом для лабораторной верификации данного заболевания. Метод ПЦР, являясь высокочувствительным и специфичным, выявляет вирусную РНК при ЛЗН несколько реже и имеет меньшую диагностическую значимость (около 30%). Таким образом, метод ПЦР в лабораторной диагностике ЛЗН лишь дополняет спектр традиционных серологических методов.

РЕЗУЛЬТАТЫ КОМПЛЕКСНОГО ИЗУЧЕНИЯ ПРИРОДНОЙ ОЧАГОВОСТИ КРЫМСКОЙ-КОНГО ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ В ЗАПАДНОМ РЕГИОНЕ КАЗАХСТАНА

А.К. Гражданов, А.В. Андрющенко, В.А. Танитовский, Л.Б. Белоножкина, Ф.Г. Бидашко, А.В. Захаров

Уральская противочумная станция, г. Уральск, Республика Казахстан

Западно-Казахстанская область (ЗКО) Республики Казахстан граничит с территорией России, где имеются природные очаги Крымской-Конго геморрагической лихорадки (ККГЛ) и периодически регистрируются заболевания. Впервые в 2007 г. методом реакции связывания комплимента обнаружены специфические антитела к вирусу ККГЛ у крупного рогатого скота (КРС) в западной части ЗКО. В этом регионе в течение трех лет исследовали 1871 КРС. Вирусспецифические антитела обнаружены у 25 коров (1,3%). Выявлена ежегодная устойчивая циркуляция вируса ККГЛ.

Установлена высокая заклещеванность на этой территории КРС Hyalomma marginatum. Этот вид клещей является основным переносчиком ККГЛ в соседних областях России. Изучение спонтанной инфицированности вирусом ККГЛ разных животных проведено методом иммуноферментного анализа (ИФА). В 2010 г. исследовано 210 клещей, собранных с коров в тех местах, где регистрировали животных с антителами к ККГЛ. В одном из пунктов антиген вируса ККГЛ обнаружен у 2-х из 11 клещей H. marginatum. Кроме того, исследовано 620 обитающих здесь малых сусликов и 115 отловленных птиц. Антиген вируса ККГЛ выявлен у 2 малых сусликов и 24 птиц (степные и малые жаворонки). На этой же территории выборочно исследовали 184 местных жителя. Методом ИФА у 5 человек (2,7%) обнаружены антитела к вирусу ККГЛ в диагностических титрах.

В 2011 г. на западе ЗКО на территории трех административных районов собрано с КРС и исследовано на ККГЛ 2180 клещей. Для иммуноферментного анализа применили тест системы «ВектоКрым-КГЛ-антиген» производства ЗАО «Вектор-Бест». Несколько клещей объединяли в небольшие пробы, полностью напившихся крови членистоногих и голодных особей исследовали отдельно. В результате в Жанибекском и Бокейординском районах исследовано 1519 клещей H. marginatum в 505 пробах, из них в 21 пробе выявлен антиген к вирусу ККГЛ (4,1%). Часть материала, где выявлен антиген к ви-

русу ККГЛ, дополнительно исследовалась методом ПЦР real time. В 10 пробах H. marginatum обнаружена РНК вируса ККГЛ. В Жангалинском районе исследован 661 клещ H. asiaticum, из 187 проб 8 дали положительный результат на антиген к вирусу ККГЛ (4,2%).

В итоге комплексных исследований на западе ЗКО установлен новый в Казахстане природный очаг Крымской-Конго геморрагической лихорадки.

О ПЕРВЫХ СВИДЕТЕЛЬСТВАХ ПРИРОДНОЙ ОЧАГОВОСТИ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА В ЗАПАДНО-КАЗАХСТАНСКОЙ ОБЛАСТИ

А.К. Гражданов, Ф.Г. Бидашко, Л.Б. Белоножкина, Т.З. Аязбаев, А.В. Захаров, В.А. Танитовский, А.В. Андрющенко

Уральская противочумная станция, г. Уральск, Республика Казахстан

Клещевой энцефалит (КЭ) вирусная природно-очаговая инфекция, возбудитель которой передается иксодовыми клещами. Клинические проявления характеризуются лихорадкой, интоксикацией и поражением центральной и периферической нервной системы. В Республике Казахстан заболевания КЭ регулярно отмечаются в южном и восточном регионах и спорадически регистрируются в центре и на севере страны. Сведения о КЭ в Западно-Казахстанской области (ЗКО) отсутствуют.

В мае 2011 г. при эпизоотологическом обследовании северо-восточной части ЗКО в окрестностях районного центра поселка Чингирлау было поймано 10 пастбищных клещей. Клещи были определены до вида, разделены на две пробы по 5 экземпляров и исследованы на туляремию, клещевой боррелиоз и КЭ. В одной пробе состоящей из пяти Dermacentor marginatus выявлена РНК вируса клещевого энцефалита. Исследование провели в полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени, для чего использовали тест-систему «АмплиСенсTBE-FL».

Рассматриваемая территория граничит с Оренбургской областью России, где установлена природная очаговость КЭ и регистрируется заболеваемость этой инфекцией. Участок обнаружения КЭ относится к степной зоне и располагается вблизи небольшой речки. Здесь в последние три года было собрано 3309 клещей шести видов, причем 85,9% из них составляют D. marginatus. Учитывая, что клещи этого вида широко распространены в ЗКО, можно предположить обнаружение новых мест циркуляции вируса КЭ и в первую очередь в долине реки Урал и Илек.

В 2011 г. за весенне-летний период от укусов иксодо-вых клещей пострадало и обратилось за медицинской помощью 138 жителей области. Всего на клещевые инфекции лабораторно исследовано с отрицательным результатом 100 снятых с людей клещей.

Таким образом, впервые выявлена циркуляция вируса клещевого энцефалита среди D. marginatus на северо-востоке Западно-Казахстанской области Республики Казахстан. Установлена высокая численность клещей этого вида, их доминирующее положение и тесный контакт с населением. В целях принятия превентивных мер необходимо продолжить изучение распространения, видового состава, фенологии и численности иксодовых клещей — потенциальных переносчиков, интенсивности их заражения КЭ и обозначить границы нового природного очага.