СПОСОБ И УЛУЧШЕННАЯ НЕЙРОПРОТЕКТОРНАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НЕВРОЛОГИЧЕСКИХ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ
METHOD AND IMPROVED NEUROPROTECTIVE COMPOSITION FOR TREATMENT OF NEUROLOGICAL PATHOLOGICAL CONDITIONS

Область техники
[0001] Данное изобретение относится к способу лечения неврологических патологических состояний с помощью улучшенной нейропротекторной композиции, содержащей комбинацию тритерпенов. В частности, данное изобретение относится к способу лечения неврологического заболевания или расстройства с помощью введения композиции субъекту, нуждающемуся в этом. Данное изобретение также включает фармацевтические композиции, содержащие улучшенную нейропротекторную композицию.
Уровень техники
[0002] Неврологические заболевания и расстройства влияют на функцию мозга. Много усилий было предпринято для разработки лечебных или оказывающих благоприятный эффект видов лечения этих заболеваний и расстройств; тем не менее, не было разработано комплексной или универсальной лечебной терапии, несмотря на то, что существует множество фармакотерапевтических подходов, которые доказали свою эффективность в отношении различных заболеваний и расстройств.
.
[0003] Болезнь Хантингтона (HD) представляет собой наследственное заболевание головного мозга, которое поражает нервную систему. Оно вызвано дефектным геном, который передается от родителя к ребенку. Ген HD нарушает образование определенного белка, известного как «хантингтин», который, по-видимому, имеет определяющее значение для соответствующего развития мозга. Классические признаки HD включают в себя эмоциональные, когнитивные и двигательные нарушения. Для болезни Хантингтона характерны судорожные непроизвольные движения (хорея), однако иногда они вызывают ригидность без аномальных движений, изменения в использовании конечностей (апраксия), потерю контроля над функциями организма и деменцию, в том числе прогрессирующее ухудшение памяти, скорости мышления, суждения, и недостаточную осведомленность о проблемах и планировании. Лечение болезни Хантингтона отсутствует. Несмотря на то, что существует ряд лекарственных препаратов, облегчающих контроль симптомов, ассоциированных с HD, таких как эмоциональные и двигательные проблемы, не существует лечения, которое могло бы остановить или обратить течение болезни. Болезнь Хантингтона была признана заболеванием с общим нарушением мембраны. Значительно повышенный уровень и активность (10-кратное увеличение) Na, K-АТФазы наблюдали в мембранах эритроцитов и базальных ганглиев пациентов с болезнью Хантингтона по сравнению с мембранами нормальных (Butterfield DA, Oeswein JQ, Prunty ME, Hisle KC, Markesbery WR).Increased sodium, potassium adenosine triphosphatase activity in erythrocyte membranes in Huntington's diseaseAnn Neurology, 4:60-62, 1978) фибробластов, полученных из кожи пациентов с болезнью Хантингтона (Schroeder F, Goetz IE, Roberts E, Membrane anomalies in Huntington's disease fibroblasts. J. Neurochem. 43: 526-539, 1984).
[0004] Болезнь Альцгеймера представляет собой форму деменции, нейродегенеративное заболевание, которое нарушает интеллектуальные функции головного мозга (память, ориентацию, способность к подсчету и т.д.), но обычно сохраняет его двигательные функции. При болезни Альцгеймера мышление постепенно ухудшается, что приводит к потере памяти, спутанности сознания, дезориентации, нарушению суждения и другим проблемам, которые могут влиять на способность человека выполнять обычные повседневные дела. Тип, тяжесть, последовательность и прогрессирование психических изменений сильно различаются. Лечение болезни Альцгеймера отсутствует и не существует способа замедления ее прогрессирования. Для некоторых людей на ранних или средних стадиях заболевания такие лекарственные препараты, как такрин, могут облегчить некоторые когнитивные симптомы. Арицепт (донепезил) и Экселон (ривастигмин) представляют собой обратимые ингибиторы ацетилхолинэстеразы, которые показаны для лечения слабой или умеренной деменции, характерного для болезни Альцгеймера. Эти препараты (так называемые ингибиторы холинэстеразы) функционируют за счет повышения уровня нейромедиатора ацетилхолина в головном мозге, облегчая восстановление связи между клетками головного мозга. Некоторые лекарственные препараты могут облегчать контроль поведенческих симптомов, таких как бессонница, возбуждение, блуждание, беспокойство и депрессия. Эти процедуры направлены на то, чтобы доставить пациенту больший комфорт. Несмотря на то, что отсутствует лечение болезни Альцгеймера, ингибиторы холинэстеразы могут улучшать показатели повседневной деятельности или уменьшать поведенческие проблемы. Лекарственные препараты для лечения болезни Альцгеймера, которые в настоящее время исследуются, включают в себя эстрогены, нестероидные противовоспалительные средства, витамин Е, селегилин (карбекс, элдеприл) и растительный продукт гинкго билоба.
[0005] Известно, что тритерпены обладают широким спектром терапевтической активности. Некоторые из известных тритерпенов включают в себя олеаноловую кислоту, урсоловую кислоту, бетулиновую кислоту, бардоксолон, маслиновую кислоту и другие. Терапевтическую активность тритерпенов в первую очередь оценивали в отдельности, а не в виде комбинаций тритерпенов.
[0006] Rong et al. (Pharm. Biol. (Jan 2011), 49 (1), 78-85) предполагают, что олеаноловая кислота может быть подходящей для ослабления ишемического инсульта. So et al. (Arch. Pharm. Res. (Jun 2009), 32(6), 923-932) предполагают, что олеаноловая кислота может быть подходящей для предупреждения и лечения нейродегенерации при инсульте. Li et al. (Brain Res. (Feb. 2013), 1497, 32-39) предполагают, что урсоловая кислота может обеспечивать нейропротекцию после ишемии головного мозга у мышей. Garcнa-Morales et al. (Arch. Pharm. Res. (Jul 2015), 38(7), 1369-1379) предполагают, что экстракт Bouvardia ternifolia следует дополнительно изучить для лечения болезни Альцгеймера. Zhang et al. (Neuroscience Letters (2014), 579, 12-17) сообщают, что урсоловая кислота снижает окислительный стресс после экспериментального субарахноидального кровоизлияния. Qian et al. (Eur. J. Pharmacol. (2011), 670(1), 148-153) сообщают, что маслиновая кислота защищает кортикальные нейроны от повреждения, индуцированного кислородно-глюкозной депривацией, у крыс. В EP 2260851 A1, выданном Consejo Superior de Investigaciones Cientнficas (Мадрия, Испания), предлагается применять олеаноловую кислоту для лечения рассеянного склероза. Yoo et al. (Molecules, (May 2012), 17(3), 3524-38) предлагают применять терпеноиды в качестве лекарственных препаратов против болезни Альцгеймера. Heo et al. (Mol. Cells (Feb. 2002), 13(1), 5-11) предполагают, что урсоловая кислота уменьшает окислительную гибель клеток, индуцированную бета-амилоидным белком. Chung et al. (Mol. Cells (April 2001), 11(2), 137-143) предполагают, что урсоловая кислота представляет собой сильный ингибитор ацетилхолинэстеразы при болезни Альцгеймера. В US 2007/0249711 A1 (дата публикации 25 октября 2007 года), выданном Choi et al., предлагается применять олеаноловую кислоту и урсоловую кислоту для улучшения функций головного мозга для предупреждения и лечения умеренных когнитивных нарушений и деменции.
[0007] Олеаноловая кислота относится к классу тритерпеноидов, для которых характерны такие соединения, как бардоксолон, которые, как было показано, являются сильными активаторами врожденного пути клеточной фазы 2 детоксификации, в котором активация фактора транскрипции Nrf2 приводит к увеличению транскрипции в программах нижерасположенных генов антиоксидантов, содержащих элемент антиоксидантного транскрипционного ответа (ARE). Бардоксолон как таковой был широко исследован в клинических испытаниях при воспалительных патологических состояниях; тем не менее, 3 фаза клинического испытания при хроническом заболевании почек была прекращена из-за нежелательных явлений, которые могли быть связаны с известными видами клеточной токсичности определенных тритерпеноидов, в том числе бардоксолона в повышенных концентрациях.
[0008] Композиции, содержащие тритерпены в сочетании с другими терапевтическими компонентами, встречаются в виде растительных экстрактов. Fumiko et al. (Biol. Pharm. Bull (2002), 25(11), 1485-1487) раскрывает оценку метанольного экстракта Rosmarimus officinalis L. для лечения трипаносомоза. Addington et al. (US 8481086, US 9220778, US 9358293, US 20160243143 A1) раскрывают экстракт Nerium oleander, полученный с помощью сверхкритической жидкости (SCF; PBI-05204), содержащий олеандрин и тритерпены, для лечения неврологических патологических состояний. Addington et al. (US 9011937, US 20150283191 A1) раскрывают тритерпенсодержащую фракцию (PBI-04711) экстракта SCF Nerium oleander, содержащего олеандрин и тритерпены, для лечения неврологических патологических состояний. Jдger et al. (Molecules (2009), 14, 2016-2031) раскрывают различные растительные экстракты, содержащие смеси олеаноловой кислоты, урсоловой кислоты, бетулиновой кислоты и других компонентов. Mishra et al. (PLoS One 2016 25;11(7):e0159430. Epub 2016 Jul 25) раскрывают экстракт коры Betula utilis, содержащий смесь олеаноловой кислоты, урсоловой кислоты, бетулиновой кислоты и других компонентов. Wang et al. (Molecules (2016), 21, 139) раскрывают экстракт Alstonia scholaris, содержащий смесь олеаноловой кислоты, урсоловой кислоты, бетулиновой кислоты и других компонентов. L. e Silva et al. (Molecules (2012), 17, 12197) раскрывают экстракт Eriope blanchetti, содержащий смесь олеаноловой кислоты, урсоловой кислоты, бетулиновой кислоты и других компонентов. Rui et al. (Int. J. Mol. Sci. (2012), 13, 7648-7662) раскрывает экстракт Eucaplyptus globulus, содержащий смесь олеаноловой кислоты, урсоловой кислоты, бетулиновой кислоты и других компонентов. Ayatollahi et al. (Iran. J. Pharm. Res. (2011), 10(2), 287-294) раскрывают экстракт Euphorbia microsciadia, содержащий смесь олеаноловой кислоты, урсоловой кислоты, бетулиновой кислоты и других компонентов. Wu et al. (Molecules (2011), 16, 1-15) раскрывает экстракт видов Ligustrum, содержащий смесь олеаноловой кислоты, урсоловой кислоты, бетулиновой кислоты и других компонентов. Lee et al. (Biol. Pharm. Bull (2010), 33(2), 330) раскрывает экстракт Forsythia viridissima, содержащий смесь олеаноловой кислоты, урсоловой кислоты, бетулиновой кислоты и других компонентов.
[0009] Олеаноловая кислота (O или OA), урсоловая кислота (U или UA) и бетулиновая кислота (B или BA) представляют собой три основных тритерпеновых компонента, обнаруженные в PBI-05204 (PBI-23; экстракт Nerium oleander, полученный с помощью сверхкритической жидкости) и PBI-04711 (тритерпен-содержащая фракция 0-4 PBI-05204). Ранее (двумя из авторов данного изобретения) сообщалось (Van Kanegan et al., в Nature Scientific Reports (May 2016), 6:25626. doi: 10.1038/srep25626) о влиянии тритерпеноидов на эффективность в результате сравнения их нейропротекторной активности при анализе модели кислородно-глюкозной депривации (OGD) с использованием срезов головного мозга в аналогичных концентрациях. Было обнаружено, что PBI-05204 (PBI) и PBI-04711 (фракция 0-4) обеспечивают нейропротекторную активность (Фиг. 1). Затем оценивали нейропротекторную активность трех основных отдельных тритерпенов и уваола (Uva) в отдельности в анализе OGD на эквимолярной основе (Фиг. 5). Было обнаружено, что ОА обеспечивает более высокую активность, чем UA; в то время как BA и Uva (уваол) при исследуемых концентрациях практически не проявляют активности. Было обнаружено, что активность UA в указанном анализе проявляла переменную активность в зависимости от концентрации. Была постулирована активация антиоксидантных генов, зависимых от ядерного фактора эритроида 2 (Nrf2), в качестве потенциального механизма лежащего в основе нейропротекторной активности PBI-04711, а также отдельных тритерпенов. Таким образом, используя анализ репортерного промотора люциферазы с применением ARE, определяли способность указанных композиций активировать путь гена Nrf2-ARE (элемент антиоксидантного транскрипционного ответа) в нейронах с использованием системы сокультивирования первичных кортикостриатальных нейрональнов, состоящей из нейронов и глиальных типов клеток, как в анализе срезов мозга OGD. Было обнаружено (Фиг. 2А-2D), что PBI-04711 повышал экспрессию канонической мишени генов (глутаматцистеинлигазы, каталитической субъединицы (Gclc); НАД(Ф)H:хиноноксидоредуктазы 1 (NQO1); антиоксидантного белка сульфиредоксина (SRX) и гемоксигеназы 1 (Hmox1)) посредством активации транскрипционного фактора NRF2, который опосредует путь клеточной антиоксидантной защиты. В то же время, сравнивая указанную активность отдельных тритерпенов с активностью PBI-04711 (Фиг. 3), было обнаружено, что UA, по-видимому, является значительно более сильной, как единственный агент, в индукции экспрессии генов ARE по сравнению с BA и OA, означая, что индукция Srx и Hmox1 в большей степени обусловлена активностью UA, чем OA или BA, однако UA по-прежнему проявляет более низкую активность в анализе нейропротекции при OGD. Было обнаружено, что несмотря на то, что UA и BA являются наиболее активными в экспрессии генов, они также очень токсичны при концентрациях, которые всего в 2-3 раза превышают концентрации, необходимые для индукции экспрессии генов. Наши предыдущие результаты предполагали, что UA и BA, вероятно, будут слишком токсичными для достижения доз, которые могли бы приводить к полной активности, индуцирующей ARE, in vivo. Наши предыдущие результаты также показали, что ОА была относительно неактивной, поэтому маловероятно, что комбинация тритерпенов (в PBI-05204 и PBI-04711) при их молярных соотношениях могла бы достичь оптимальной нейропротекторной активности в дозах, которые не токсичны на клеточном уровне.
[0010] В US 8481086, US 922078, US 9358293 и US 2016-0243143 A1 раскрыто применение PBI-05204 для лечения неврологических патологических состояний. В US 9011937 и US 2015-0283191 A1 раскрыто применение PBI-04711 для лечения неврологических патологических состояний.
[0011] Ни в одной области техники не предлагается нейропротекторная композиция, содержащая комбинацию из трех различных тритерпенов, выбранных из олеаноловой кислоты, урсоловой кислоты и бетулиновой кислоты, или применение такой композиции для лечения неврологических патологических состояний, при котором тритерпены присутствуют в молярных соотношениях, как определено в данном документе. Ни один из известных способов не признает улучшения, обеспечиваемые введением такой комбинации тритерпенов по сравнению с введением отдельных тритерпенов или введением других комбинаций тритерпенов.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0012] Следующие графические материалы составляют часть данного описания и описывают некоторую часть из предыдущего уровня техники, а также иллюстративные варианты осуществления заявленного изобретения. Специалист в данной области техники в свете этих графических материалов и приведенного в данном документе описания сможет применить данное изобретение на практике без лишних экспериментов.
[0013] На Фиг.1 (предшествующий уровень техники; Van Kanegan: см. выше) изображены результаты сравнительной оценки PBI-05204 (PBI) и PBI-04711 (фракция 0-4 PBI-05204) в анализе срезов головного мозга при кислородно-глюкозной депривации (OGD). Готовили эксплантаты коронального среза головного мозга и подвергали их 5,5-минутному временному воздействию OGD. Количество нормальных кортикальных пирамидальных нейронов в каждом срезе голоного мозга оценивали через 24 часа. Первые 3 столбца на графике показывают: контрольные срезы головного мозга, не подвергнутые воздействию OGD («контроль»); срезы головного мозга отрицательного контроля, подвергнутые воздействию OGD и обработанные только носителем ДМСО («OGD»); и срезы головного мозга положительного контроля, подвергнутые воздействию OGD и обработанные 23 мкг/мл полного экстракта PBI-05204 («PBI 23»). Фракцию тестировали в концентрациях, указанных в единицах мкг/мл. Фракция 0-4 обеспечивала значительную нейропротекцию при исследуемых концентрациях (концентрации фракции 0-3, составляющие 10 мкг/мл и выше, проявляли токсичность; данные не показаны).
[0014] На Фиг. 2A-2D (предшествующий уровень техники: Van Kanegan: см. выше) изображены результаты анализов экспрессии генов ARE для фракции 0-4 (PBI-04711): а) экспрессия Gclc (Фиг. 2A); b) экспрессия Nqo1 (Фиг. 2В); c) экспрессия Srx (Фиг. 2C); и d) экспрессия Hmox1 (Фиг. 2D). Первичные кортикостриатальные сокультуры мышей обрабатывали фракцией 0-4 в концентрациях, указанных в течение 6 часов, затем собирали и обрабатывали для анализа кПЦР указанных целевых генов ARE. Количественные значения РНК нормализованы по отношению к эталонному контролю GAPDH, а изменения кратности экспрессии выражали по отношению к состоянию «только носитель ДМСО» («0»), принятого за значение 1.
[0015] На Фиг. 3 (предшествующий уровень техники: Van Kanegan: см. выше) изображены результаты анализов экспрессии генов ARE для фракции 0-4 и отдельных тритерпенов, олеаноловой кислоты, урсоловой кислоты, бетулиновой кислоты и уваола (также называемого увалолом). Символы «X» обозначают концентрации соединений, которые индуцировали токсичность и для которых извлечение остаточной мРНК было недостаточным для подтверждения анализа кПЦР. Первичные кортикостриатальные совместные культуры крыс обрабатывали в течение 6 часов фракцией 0-4 (в мкг/мл) или олеаноловой кислотой, урсоловой кислотой, бетулиновой кислотой или уваолом (все в мкМ) при указанных концентрациях, затем собирали и обрабатывали для анализа кПЦР показанных целевых генов АРЕ. Количественные значения РНК нормализованы по отношению к эталонному контролю GAPDH, а изменения кратности экспрессии выражали по отношению к состоянию «только носитель ДМСО» («--»), принятого за значение 1. Темные столбцы обозначают статистически значимые различия в отношении только контроля носителя ДМСО в соответствии с t-критерием Стьюдента при p < 0,05.
[0016] На Фиг. 4 изображены результаты анализов экспрессии для фракции 0-4 и отдельных тритерпенов урсоловой кислоты и бетулиновой кислоты в более близких диапазонах концентраций. Первичные кортикостриатальные совместные культуры крыс обрабатывали в течение 6 часов фракцией 0-4 (в мкг/мл) или урсоловой кислотой и бетулиновой кислотой (все в мкМ) при указанных концентрациях, затем собирали и обрабатывали для анализа кПЦР показанных целевых генов АРЕ. Количественные значения РНК нормализованы по отношению к эталонному контролю GAPDH, а изменения кратности экспрессии выражали по отношению к состоянию «только носитель ДМСО» («--»), принятого за значение 1. Темно-синие столбцы обозначают статистически значимые различия в отношении только контроля носителя ДМСО в соответствии с t-критерием Стьюдента при p < 0,05. Бетулиновая кислота, как и урсоловая кислота, также способна вызывать отчетливую активацию Srx и Hmox1, несмотря на свою токсичность при более высоких концентрациях.
[0017] На Фиг. 5 (предшествующий уровень техники: Van Kanegan: см. выше) изображены результаты сравнительной оценки в анализе нейропротекции при OGD олеаноловой кислоты (ОА), урсоловой кислоты (UA), бетулиновой кислоты (ВА) и уваола (Uva). Показаны соотношения концентрация-ответ для UA, BA и Uva (все в мкг/мл) в анализе срезов мозга при OGD. Средние значения для 2 независимых экспериментов включены для каждого соединения с состоянием отрицательного контроля при OGD, принятым за 100%, и данные нанесены на те же оси для простоты сравнения. Положительным контролем выступала 4 мкг/мл олеаноловая кислота (O). Следует обратить внимание, что указанные эквимолярные концентрации для каждого соединения, поскольку молекулярные массы для всех идентичны, за исключением уваола, который исследовали при 0,039, 0,39 и 3,88 мкг/мл, округленных до одной значащей цифры для целей демонстрации. Темные столбцы обозначают статистически значимые различия в отношении отрицательного контроля при OGD с помощью ANOVA с последующим сравнением с использованием апостериорного критерия Даннета при уровне значимости 0,05.
[0018] На Фиг. 6А, 6В, 7А, 7В, 8А и 8В изображены результаты сравнительной клеточной токсичности тритерпенов по отношению к сокультурам первичных кортикастриатальных нейронов, содержащим глию, оцененные в соответствии с приведенным ниже примером: урсоловая кислота (Фиг.6А, 6В), бетулиновая кислота (Фиг. 7A, 7B) и олеаноловая кислота (Фиг. 8A, 8B). На Фиг. 6А, 7А и 8А изображено, что йодид пропидия добавляли в течение одного часа, затем подсчитывали количество PI-положительных клеток при автоматическом анализе с высоким содержанием на Cellomics ArrayScan VTI. На Фиг. 6B, 7B и 8B изображено, что субстрат MTS добавляли в течение двух часов, затем измеряли лунки для сокультивирования в отношении поглощения при 450 нм с использованием многолуночного планшет-ридера.
[0019] На Фиг. 9А-9С изображены результаты сравнительной нейропротекции тритерпеновых смесей (композиция I: молярное соотношение O:U:B составляет 3:2,2:1, как в PBI-04711 (Fxn 0-4; Фиг. 9А); композиция II: молярное соотношение O:U:B составляет 7,8:7,4:1, как в PBI-05204 (Фиг. 9B); и композиция III: молярное соотношение O:U:B составляет около 10:1:1 в соответствии с улучшенной композицией по данному изобретению (PBI-01011; Фиг. 9C)), определенные в анализе срезов головного мозга в случае ишемического инсульта в соответствии с Примером 3. Количество нормальных кортикальных пирамидальных нейронов на срез головного мозга показано по отношению к состоянию отрицательного контроля, принятому за 100% (второй столбец на каждом графике) срезов головного мозга, подвергнутых воздействию только кислородно-глюкозной депривации (OGD) и носителя (ДМСО). Значения для положительных контрольных срезов головного мозга, не подвергнутых воздействию OGD, показаны на первом столбце каждого графика. Средние значения+СОС показаны усредненными за 3-5 независимых циклов для каждой тритерпеновой смеси; светло-синие полосы обозначают статистически значимые различия в отношении отрицательного контроля при OGD с помощью ANOVA с последующим сравнением с использованием апостериорного критерия Даннета при р < 0,05.
[0020] На Фиг. 10А и 10В изображены результаты сравнительных анализов экспрессии Srx (Фиг. 10А) и Hmox1 (Фиг. 10В) для PBI-05204, PBI-04711 (также обозначаемого Fxn 0-4), олеаноловой кислоты (О), урсоловой кислоты (U), бетулиновой кислоты (B) и комбинации тритерпенов, присутствующих в указанных молярных соотношениях. Количественные значения РНК нормализованы по отношению к эталонному контролю GAPDH, а изменения кратности экспрессии показывали по отношению к состоянию «только носитель ДМСО», принятого за значение 1. Темные столбцы обозначают статистически значимые различия в отношении только контроля носителя ДМСО в соответствии с t-критерием Стьюдента при p < 0,05. Полосатые красные столбцы обозначаются состояния, которые вызывали избыточные уровни экспрессии генов ARE, а именно, более чем в 10 раз.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0021] Целью данного изобретения является получение улучшенной нейропротекторной композиции, содержащей несколько тритерпенов в качестве их активных ингредиентов, при этом указанная композиция обеспечивает повышенную экспрессию генов ARE, повышенную нейропротекцию и пониженную клеточную токсичность по сравнению с другими близкородственными композициями на основе тритерпенаов на эквимолярной основе. Другой целью данного изобретения является создание нейропротекторной композиции на основе тритерпенов, которая обеспечивает сбалансированную экспрессию генов ARE для обеспечения нейропротекции в широком диапазоне доз, не приводя к избыточной клеточной токсичности. Другой целью данного изобретения является получение улучшенной нейропротекторной композиции, которая обеспечивает более широкую кривую доза-ответ и более широкое (более значительное) терапевтическое окно по сравнению с другими близкородственными композициями на основе тритерпенов на эквимолярной основе. Указанная улучшенная нейропротекторная композиция обеспечивает более широкое терапевтическое окно, означая более широкий диапазон дозирования наряду с более низкой токсичностью, особенно в верхних пределах диапазона дозирования, по сравнению с другими близкородственными композициями на основе тритерпенов на эквимолярной основе.
[0022] В данном изобретении представлен улучшенный способ лечения неврологического патологического состояния, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, улучшенной нейропротекторной композиции, содержащей (по сути состоящей из), по меньшей мере, три тритерпена. Было обнаружено, что молярное соотношение тритерпенов влияет на эффективность и безопасность нейропротекторной (нейропротекторных) композиции (композиций). Варианты осуществления данного изобретения включают варианты осуществления, в которых молярное соотношение тритерпенов является таким, как описано в данном документе. Молярное соотношение тритерпенов в улучшенной нейропротекторной композиции отличается от и улучшено по сравнению с PBI-05204 и PBI-04711. В некоторых вариантах осуществления нейропротекторная композиция содержит тритерпены в качестве единственных фармакологически активных ингредиентов (агентов). Нейропротекторная композиция может исключать стероид, сердечный гликозид, биологически/фармакологически активный полисахарид и/или не являющийся сердечным гликозидом стероид.
[0023] В одном аспекте данное изобретение относится к способу лечения, у субъекта, нуждающегося в этом, неврологического заболевания или расстройства с помощью нейропротекторной композиции, содержащей, по меньшей мере, два или, по меньшей мере, три тритерпена, при этом указанный способ включает:
определение того, что у субъекта имеется неврологическое заболевание или расстройство; и
указание на введение субъекту терапевтически эффективного количества нейропротекторной композиции.
[0024] В одном аспекте данное изобретение относится к способу лечения, у субъекта, нуждающегося в этом, неврологического заболевания или расстройства с помощью нейропротекторной композиции, при этом указанный способ включает:
определение того, что у субъекта имеется неврологическое заболевание или расстройство; и
указание на введение субъекту терапевтически эффективного количества нейропротекторной композиции.
[0025] В данном изобретении также представлен способ лечения, у субъекта, нуждающегося в этом, неврологического заболевания или расстройства с помощью нейропротекторной композиции, при этом указанный способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества нейропротекторной композиции.
[0026] Некоторые варианты осуществления изобретения включают варианты осуществления, в которых: 1) субъекту назначают и вводят терапевтически релевантную дозу нейропротекторной композиции; 2) субъекту вводят нейропротекторную композицию в соответствии с назначенным режимом введения; 3) нейропротекторная композиция исключает сердечный гликозид; 4) нейропротекторная композиция исключает терапевтически эффективное количество сердечного гликозида; 5) нейропротекторная композиция исключает олеандрин; 6) нейропротекторная композиция исключает нериифолин; 7) нейропротекторная композиция исключает фармакологически активный полисахарид, полученный из видов Nerium или Thevetia; или 8) комбинация любого из вышеперечисленного.
[0027] Данное изобретение также относится к способу лечения неврологического патологического состояния у субъекта, нуждающегося в этом, включающему:
определение того, представляет ли неврологическое патологическое состояние у субъекта болезнь Альцгеймера, болезнь Хантингтона, инсульт, болезнь Паркинсона или другое неврологическое патологическое состояние;
указание на введение нейропротекторной композиции;
введение начальной дозы указанной нейропротекторной композиции субъекту в соответствии с назначенным режимом введения начальной дозы в течение периода времени;
периодическое определение адекватности клинического ответа субъекта и/или терапевтического ответа на лечение указанной нейропротекторной композицией; и
если клинический ответ и/или терапевтический ответ субъекта является адекватным, тогда продолжают лечение указанной нейропротекторной композицией по мере необходимости до достижения необходимого клинического результата; или
если клинический ответ и/или терапевтический ответ субъекта не является адекватным при указанной начальной дозе и начальном режиме дозирования, то увеличение или уменьшение указанной дозы нейропротекторной композиции до достижения необходимого клинического ответа и/или терапевтического ответа у субъекта.
[0028] Данное изобретение также относится к способу предупреждения или снижения частоты возникновения неврологического патологического состояния в популяции субъектов, подверженных его риску, при этом способ включает:
введение эффективной дозы нейропротекторной композиции на периодическом основании в течение продленного периода времени одному или нескольким субъектам в популяции субъектов, подверженных риску неврологического патологического состояния, такого как болезнь Альцгеймера, болезнь Хантингтона, болезнь Паркинсона, инсульт или другое неврологическое патологическое состояние, тем самым, предупреждая или уменьшая вероятность неврологического патологического состояния в популяции.
[0029] Данное изобретение также включает варианты осуществления, в которых: а) способ дополнительно включает указание на введение нейропротекторной композиции одному или нескольким субъектам; b) способ дополнительно включает введение эффективной дозы нейропротекторной композиции субъекту в соответствии с назначенным режимом введения в течение периода времени; c) способ дополнительно включает периодическое определение адекватности клинического ответа одного или нескольких субъектов и/или терапевтического ответа на лечение нейропротекторной композицией; d) если клинический ответ и/или терапевтический ответ субъекта является адекватным, то способ дополнительно включает продолжение лечения нейропротекторной композицией по мере необходимости до достижения необходимого клинического результата; e) если клинический ответ и/или терапевтический ответ субъекта является неадекватным при начальной дозе и начальном режиме введения, то способ дополнительно включает увеличение или уменьшение дозы нейропротекторной композиции до тех пор, пока необходимый клинический ответ и/или терапевтический ответ у субъекта не будет достигнут; е) нейропротекторную композицию вводят множеству субъектов в популяции; g) периодическое основание означает ежедневно, через день, через два дня, через три дня, через четыре дня, через пять дней, через шесть дней, еженедельно, через неделю, через две недели, через три недели, ежемесячно, раз в два месяца, два раза в месяц, через месяц, через два месяца, ежеквартально, через квартал, раз в триместр, раз в сезон, раз в полугодие и/или ежегодно; h) продленный период составляет одну или несколько недель, один или несколько месяцев, один или несколько кварталов и/или один год или несколько лет; i) эффективную дозу вводят один или несколько раз в день; j) способ дополнительно включает идентификацию популяции субъектов с риском развития неврологического патологического состояния, такого как болезнь Альцгеймера, болезнь Хантингтона, болезнь Паркинсона, инсульт или другое неврологическое патологическое состояние; k) популяция субъектов, подверженных риску, характеризуется зрелым возрастом субъекта, семейной историей неврологического патологического состояния, генетической предрасположенностью к возникновению неврологического патологического состояния, наличием и экспрессией гена ApoE4 у субъекта, женским полом (в два раза больше женщин заболевают болезнью Альцгеймера, чем мужчин), сердечно-сосудистым заболеванием (например, высоким кровяным давлением и высоким уровнем холестерина), сахарным диабетом (особенно формами указанного заболевания 2 типа или с началом у взрослых), синдромом Дауна, травмой головы, низким уровнем формального образования, курением, избыточным употреблением алкоголя и/или злоупотребление наркотикамии; или l) их комбинация.
[0030] В данном изобретении также представлен отложенный во времени способ лечения инсульта у субъекта, включающий:
в течение отложенного периода после того, как субъект перенес инсульт, введение начальной дозы указанной нейропротекторной композиции в соответствии с режимом введения начальной дозы;
определение адекватности клинического ответа субъекта и/или терапевтического ответа на лечение указанной нейропротекторной композицией; и
если клинический ответ и/или терапевтический ответ субъекта является адекватным, тогда продолжают лечение указанной нейропротекторной композицией по мере необходимости до достижения необходимого клинического результата; или
если клинический ответ и/или терапевтический ответ субъекта не является адекватным при указанной начальной дозе и начальном режиме дозирования, то увеличение или уменьшение указанной дозы нейропротекторной композиции до достижения необходимого клинического ответа и/или терапевтического ответа у субъекта.
[0031] Некоторые варианты осуществления данного изобретения включают варианты осуществления, в которых: 1) отложенный период составляет 10 часов или меньше, 8 часов или меньше, 6 часов или меньше, 4 часа или меньше, 3 часа или меньше, 2 часа или меньше, 1 час или меньше, 45 минут или меньше, 30 минут или меньше, 20 минут или меньше или 10 минут или меньше; 2) определение адекватности клинического и/или терапевтического ответа субъекта осуществляют путем оценки любой слабости лица, верхней конечности и/или нижней конечности на одной стороне тела, онемения лица, верхней конечности и/или нижней конечности на одной стороне тела, неспособности понимать разговорную речь, неспособности говорить или говорить внятно, неспособности писать, головокружения и/или нарушения походки, двоения зрения и необычно сильной головной боли; или 3) их комбинация.
[0032] В данном изобретении также представлено применение нейропротекторной композиции при изготовлении лекарственного препарата для лечения неврологического патологического состояния у субъекта. В некоторых вариантах осуществления изготовление такого лекарственного средства включает: получение нейропротекторной композиции; включение дозы нейропротекторной композиции в фармацевтическую лекарственную форму; и упаковку фармацевтической лекарственной формы. В данном изобретении также представлена фармацевтическая композиция, содержащая нейропротекторную композицию для лечения неврологического патологического состояния у субъекта. Изготовление также может включать в себя один или несколько дополнительных этапов, таких как: доставка упакованной лекарственной формы поставщику (розничному продавцу, оптовому торговцу и/или дистрибьютору); продажа или иное предоставление упакованной лекарственной формы субъекту, имеющему неврологическое патологическое состояние; включение в лекарственный препарат этикетки и вкладыш в упаковку, в которых приведены инструкции по применению, режим введения, способ введения, содержание и токсикологический профиль лекарственной формы. В некоторых вариантах осуществления лечение неврологического патологического состояния включает в себя: определение того, что у субъекта имеется неврологическое заболевание или расстройство; указание на введение субъекту нейропротекторной композиции в соответствии с режимом введения; введение субъекту одной или нескольких фармацевтических лекарственных форм, содержащих нейропротекторную композицию, при этом одну или несколько фармацевтических лекарственных форм вводят в соответствии с режимом дозирования.
[0033] В некоторых вариантах осуществления субъект, имеющий неврологическое патологическое состояние, т.е., субъект, нуждающийся в этом, представляет собой часть популяции таких субъектов. В данном изобретении представлен способ улучшения клинического статуса статистически значимого количества субъектов в популяции субъектов, имеющих неврологическое патологическое состояние, при этом указанные способ включает: введение популяции субъектов нейропротекторной композиции, описанной в данном документе; и определение клинического статуса субъектов. В некоторых вариантах осуществления статистически значимое количество составляет, по меньшей мере, 5% популяции.
[0034] В некоторых вариантах осуществления неврологическое патологическое состояние представляет собой болезнь Альцгеймера, болезнь Хантингтона, инсульт, болезнь Паркинсона, таупатию или другое неврологическое патологическое состояние, такое как описано в данном документе.
[0035] Лечение субъекта нейропротекторной композицией продолжают по мере необходимости. Доза или режим введения могут корректироваться по мере необходимости, пока пациент не достигнет необходимого (необходимых) клинического (клинических) результата (результатов), такого (таких) как уменьшение или нормализация конкретных неврологических симптомов, ассоциированных с заболеванием. Определение адекватности клинического ответа и/или терапевтического ответа может проводить врач, знакомый с неврологическим патологическим состоянием, подлежащим лечению.
[0036] В некоторых вариантах осуществления неврологическое патологическое состояние выбирают из группы, состоящей из неврологического заболевания, неврологического расстройства, таупатии и инсульта. В некоторых вариантах осуществления неврологическое заболевание представляет собой нейродегенеративное заболевание. В некоторых вариантах осуществления нейродегенеративное заболевание выбирают из группы, состоящей из болезни Хантингтона, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, амиотрофического латерального склероза, губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота, рассеянного склероза, диабетической невропатии, аутизма и юношеского нейронального цероидного липофусциноза. В некоторых вариантах осуществления инсульт представляет собой опосредованное инсультом ишемическое повреждение. В некоторых вариантах осуществления неврологическое патологическое состояние представляет собой таупатию, которая представляет собой нейродегенеративное заболевание, имеющее этиологию, связанную с нарушением баланса в соотношении Tau3R/Tau4R у субъекта. Тауопатии представляют собой класс нейродегенеративных заболеваний, возникающих в результате патологической агрегации тау-белков в головном мозге человека. В некоторых вариантах осуществления таупатия представляет собой синдром Дауна, болезнь Пика, кортикобазальную дегенерацию, некоторые варианты прионных болезней, болезнь Альцгеймера, прогрессирующий надъядерный паралич или лобно-височную деменцию. Отдельные этапы способов по данному изобретению можно проводить на отдельных объектах или в пределах одного и того же объекта.
[0037] В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении представлена нейропротекторная композиция, проявляющую терапевтическую активность, описанную в данном документе, при введении субъекту. В некоторых вариантах осуществления в способах по данному изобретению используют нейропротекторную композицию, описанную в данном документе.
[0038] В некоторых вариантах осуществления нейропротекторная композиция по данному изобретению содержит (по сути состоит из), по меньшей мере, два тритерпена. В некоторых вариантах осуществления нейропротекторная композиция по данному изобретению содержит (по сути состоит из), по меньшей мере, три тритерпена.
[0039] В некоторых вариантах осуществления композиция по данному изобретению содержит (по сути состоит из) олеаноловую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство) и урсоловую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство) и, необязательно, по меньшей мере, один другой тритерпен, при этом молярное соотношение тритерпенов является таким, как описано в данном документе. Например, композиция может дополнительно содержать бетулиновую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство) или, по меньшей мере, один другой тритерпен.
[0040] В некоторых вариантах осуществления композиция по данному изобретению содержит (по сути состоит из) олеаноловую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство) и бетулиновую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство) и, необязательно, по меньшей мере, один другой тритерпен, при этом молярное соотношение тритерпенов является таким, как описано в данном документе. Например, композиция может дополнительно содержать урсоловую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство) или, по меньшей мере, один другой тритерпен.
[0041] В некоторых вариантах осуществления данного изобретения представлена нейропротекторная композиция, содержащая (по сути состоящая из), по меньшей мере, олеаноловую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство), бетулиновую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство) и урсоловую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство).
[0042] Фармацевтическая лекарственная форма содержит нейропротекторную композицию и один или несколько фармацевтически приемлемых наполнителей.
[0043] В некоторых вариантах осуществления нейропротекторная композиция содержит (по сути состоит из) тритерпены, олеаноловую кислоту, урсоловую кислоту и бетулиновую кислоту, при этом молярное соотношение тритерпенов является таким, как описано в данном документе. В некоторых вариантах осуществления нейропротекторная композиция включена в фармацевтическую композицию, дополнительно содержащую, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый наполнитель.
[0044] В некоторых вариантах осуществления большая часть фармакологически активного компонента в нейропротекторной композиции представляет собой олеаноловую кислоту. Олеаноловая кислота присутствует в молярном избытке по сравнению с урсоловой кислотой и по сравнению с бетулиновой кислотой. Олеаноловая кислота и урсоловая кислота могут совместно (суммарно) или отдельно присутствовать в молярном избытке по сравнению с бетулиновой кислотой. Олеаноловая кислота и бетулиновая кислота могут совместно (суммарно) или отдельно присутствовать в молярном избытке по сравнению с урсоловой кислотой.
[0045] Когда олеаноловая кислота (или соль, их производное или их пролекарственное средство), урсоловая кислота (или соль, их производное или их пролекарственное средство) и бетулиновая кислота (или соль, их производное или их пролекарственное средство) присутствуют в качестве основных или единственных тритерпенов, то молярное соотношение олеаноловая кислота (O): урсоловая кислота (U): бетулиновая кислота (B) составляет около 10 : около 1 : около 1, около 9-11 : около 0,5-1,5 : около 0,5-1,5, около 9,5-10,5 : около 0,75-1,25 : около 0,75-1,25, около 9,5-10,5 : около 0,8-1,2 : около 0,8-1,2, около 9,75-10,5 : около 0,9-1,1 : около 0,9-1,1, около 9-12 : около 0,15-2,5 : около 0,15- 2,5, около 9-12 : около 0,2-2,5 : около 0,2-2,5, около 9-12 : около 0,25-2,5 : около 0,25-2,5, около 9-12 : около 0,35-2,5 : около 0,35-2,5, около 9-12 : около 0,45-2,5 : около 0,45-2,5, около 9-12 : около 0,5-5 : около 0,5-2,5, около 9-12 : около 0,16-2 : около 0,16-2, около 9-12 : около 0,2-2 : около 0,2-2, около 9-12 : около 0,25-2 : около 0,25-2, около 9-12 : около 0,25-2 : около 0,25-2, около 9-12 : около 0,45-2 : около 0,45-2, около 9-12 : около 0,5-2 : около 0,5-2, около 9-12 : около 0,16-1,5 : около 0,16-1,5, около 9-12 : около 0,2-1,5 : около 0,2-1,5, около 9-12 : около 0,25-1,5 : около 0,25-1,5, около 9-12 : около 0,7-1,5 : около 0,35-1,5, около 9-12 : около 0,45-1,5 : около 0,45-1,5, около 9-12 : около 0,5-1,5 : около 0,5-1,5, около 9-12 : около 0,16-1 : около 0,16-1, около 9-12 : около 0,2-1 : около 0,2-1, около 9-12 : около 0,25-1 : около 0,25-1, около 9-12 : около 0,35-1 : около 0,35-1, около 9-12 : около 0,45-1 : около 0,45-1, около 9-12 : около 0,5-1 : около 0,5-1, около 10-1 : около 0,5-2,5 : около 0,5-2,5, около 10-1 : около 0,1-1,5 : около 0,1-1,5, около 9-12 : около 0,25-0,75 : около 0,25-0,75, около 9,5-10,5 : около 0,35-0,7 : около 0,35-0,7, около 9,5-10,5 : около 0,4-0,6 : около 0,4-0,6 или около 9,75-10,5 : около 0,45-0,6 : около 0,45-0,6.
[0046] Когда олеаноловая кислота (свободная кислота, соль, их производное или их пролекарственное средство) и урсоловая кислота (свободная кислота, соль, их производное или их пролекарственное средство) присутствуют в качестве основных или единственных тритерпенов, то молярное соотношение олеаноловая кислота: урсоловая кислота составляет около 9-12 : около 0,33-5, около 9-12 : около 0,4-5, около 9-12 : около 0,5-5, около 9-12 : около 0,7-5, около 9-12 : около 0,9-5, около 9-12 : около 1-5, около 9-12 : около 0,33-4, около 9-12 : около 0,4-4, около 9-12 : около 0,5-4, около 9-12 : около 0,7-4, около 9-12 : около 0,9-4, около 9-12 : около 1-4, около 9-12 : около 0,33-3, около 9-12 : около 0,4-3, около 9-12 : около 0,5-3, около 9-12 : около 0,7-3, около 9-12 : около 0,9-3, около 9-12 : около 1-3, около 9-12 : около 0,33-2, около 9-12 : около 0,4-2, около 9-12 : около 0,5-2, около 9-12 : около 0,7-2, около 9-12 : около 0,9-2, около 9-12 : около 1-2, около 10-1 : около 1-5, около 10-1 : около 1-3, около 9-12 : около 0,5-1,5, около 9-11 : около 0,5-1,5, около 9,5-10,5 : около 0,75-1,25, около 9,5-10,5 : около 0,8-1,2 или около 9,75-10,5 : около 0,9-1,1.
[0047] Когда олеаноловая кислота (свободная кислота, соль, их производное или их пролекарственное средство) и бетулиновая кислота (свободная кислота, соль, их производное или их пролекарственное средство) присутствуют в качестве основных или единственных тритерпенов, то молярное соотношение олеаноловая кислота: бетулиновая кислота составляет около 9-12 : около 0,33-5, около 9-12 : около 0,4-5, около 9-12 : около 0,5-5, около 9-12 : около 0,7-5, около 9-12 : около 0,9-5, около 9-12 : около 1-5, около 9-12 : около 0,33-4, около 9-12 : около 0,4-4, около 9-12 : около 0,5-4, около 9-12 : около 0,7-4, около 9-12 : около 0,9-4, около 9-12 : около 1-4, около 9-12 : около 0,33-3, около 9-12 : около 0,4-3, около 9-12 : около 0,5-3, около 9-12 : около 0,7-3, около 9-12 : около 0,9-3, около 9-12 : около 1-3, около 9-12 : около 0,33-2, около 9-12 : около 0,4-2, около 9-12 : около 0,5-2, около 9-12 : около 0,7-2, около 9-12 : около 0,9-2, около 9-12 : около 1-2, около 10-1 : около 1-5, около 10-1 : около 1-3, около 9-12 : около 0,5-1,5, около 9-11 : около 0,5-1,5, около 9,5-10,5 : около 0,75-1,25, около 9,5-10,5 : около 0,8-1,2 или около 9,75-10,5 : около 0,9-1,1.
[0048] Отдельные этапы способов по данному изобретению можно проводить на отдельных объектах или в пределах одного и того же объекта. Любой из способов по данному изобретению, описанных в данном документе, может быть использован в сочетании с любой из композиций по данному изобретению, описанных в данном документе.
[0049] Данное изобретение включает в себя все комбинации аспектов, вариантов осуществления и подвариантов осуществления изобретения, раскрытых в данном документе.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0050] Используемые в данном документе индивидуально названные тритерпены могут быть независимо выбраны при каждом появлении в их нативной (немодифицированной форме, форме свободной кислоты) форме, в форме соли, в форме производного, в форме пролекарственного средства или их комбинации. Композиции, содержащие и способы, использующие дейтерированные формы тритерпенов, также находятся в объеме данного изобретения.
[0051] Производные, пролекарственные средства и соли олеаноловой кислоты раскрыты в в US 20150011627 A1, выданном Gribble et al., который опубликован 8 января 2015 года, US 20140343108 A1, выданном Rong et al., который опубликован 20 ноября 2014 года, US 20140343064 A1, выданном Xu et al. который опубликован 20 ноября 2014 года, US 20140179928 A1, выданном Anderson et al., который опубликован 26 июня 2014 года, US 20140100227 A1, выданном Bender et al. который опубликован 10 апреля 2014 года, US 20140088188 А1, выданном Jiang et al., который опубликован 27 марта 2014 года, US 20140088163 А1, выданном Jiang et al., который опубликован 27 марта 2014 года, US 20140066408 A1, выданном Jiang et al., который опубликован 6 марта 2014 года, US 20130317007 A1, выданном Anderson et al., который опубликован 28 ноября 2013 года, US 20130303607 A1, выданном Gribble et al., который опубликован 14 ноября 2013 года, US 20120245374, выданном Anderson et al. который опубликован 27 сентября 2012 года, US 20120238767 A1, выданном Jiang et al. который опубликован 20 сентября 2012 года, US 20120237629 A1, выданном Shode et al. который опубликован 20 сентября 2012 года, US 20120214814 A1, выданном Anderson et al., который опубликован 23 августа 2012 года, US 20120165279 A1, выданном Lee et al., который опубликован 28 июня 2012 года, US 20110294752 A1, выданном Arntzen et al., который опубликован 1 декабря 2011 года, US 20110091398 A1, выданном Majeed et al. который опубликован 21 апреля 2011 года, US 20100189824 A1, выданном Arntzen et al. который опубликован 29 июля 2010 года, US 20100048911 A1, выданном Jiang et al., который опубликован 25 февраля 2010 года, и US 20060073222 A1, выданном Arntzen et al., который опубликован 6 апреля 2006 года, полные раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки.
[0052] Производные, пролекарственные средства и соли урсоловой кислоты раскрыты в US 20150011627 A1, выданном Gribble et al., который опубликован 8 января 2015 года, US 20130303607 A1, выданном Gribble et al., который опубликован 14 ноября 2013 года, US 20150218206 A1, выданном Yoon et al., который опубликован 6 августа 2015 года, US 6824811, выданном Fritsche et al., который опубликован 30 ноября 2004 года, US 7718635, выданном Ochiai et al., который опубликован 8 мая 2010 года, US 8729055, выданном Lin et al., который опубликован 20 мая 2014 года, и US 9120839, выданном Yoon et al., который опубликован 1 сентября 2015 года, полные раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки.
[0053] Производные, пролекарственные средства и соли бетулиновой кислоты раскрыты в US 20150011627 A1, выданном Gribble et al., который опубликован 8 января 2015 года, US 20130303607 A1, выданном Gribble et al., который опубликован 14 ноября 2013 года, US 20120237629 A1, выданном Shode et al., который опубликован 20 сентября 2012 года, US 20170204133 A1, выданном Regueiro-Ren et al., который опубликован 20 июля 2017 года, US 20170096446 A1, выданном Nitz et al., который опубликован 6 апреля 2017 года, US 20150337004 A1, выданном Parthasaradhi Reddy et al. который опубликован 26 ноября 2015 года, US 20150119373 A1, выданном Parthasaradhi Reddy et al., который опубликован 30 апреля 2015 года, US 20140296546 A1, выданном Yan et al., который опубликован 2 октября 2014 года, US 20140243298 A1, выданном Swidorski et al., который опубликован 28 августа 2014 года, US 20140221328 A1, выданном Parthasaradhi Reddy et al., который опубликован 7 августа 2014 года, US 20140066416 A1, выданном Leunis et al., который опубликован 6 марта 2014 года, US 20130065868 A1, выданном Durst et al., который опубликован 14 марта 2013 года, US 20130029954 A1, выданном Regueiro-Ren et al., который опубликован 31 января 2013 года, US 20120302530 A1, выданном Zhang et al., который опубликован 29 ноября 2012 года, US 20120214775 A1, выданном Power et al., который опубликован 23 августа 2012 года, US 20120101149 A1, выданном Honda et al., который опубликован 26 апреля 2012 года, US 20110224182, выданном Bullock et al., который опубликован 15 сентября 2011 года, US 20110313191 A1, выданном Hemp et al., который опубликован 22 декабря 2011 года, US 20110224159 A1, выданном Pichette et al., который опубликован 15 сентября 2011 года, US 20110218204, выданном Parthasaradhi Reddy et al., который опубликован 8 сентября 2011 года, US 20090203661 A1, выданном Safe et al., который опубликован 13 августа 2009 года, US 20090131714 A1, выданном Krasutsky et al., который опубликован 21 мая 2009 года, US 20090076290, выданном Krasutsky et al., который опубликован 19 марта 2009 года, US 20090068257 A1, выданном Leunis et al., который опубликован 12 марта 2009 года, US 20080293682, выданном Mukherjee et al., который опубликован 27 ноября 2008 года, US 20070072835 A1, выданном Pezzuto et al., который опубликован 29 марта 2007 года, US 20060252733 A1, выданном Jansen et al., который опубликован 9 ноября 2006 года, и US 2006025274 A1, выданном O'Neill et al., который опубликован 9 ноября 2006 года, полные раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки.
[0054] В данном изобретении представлен способ лечения неврологического патологического состояния с помощью введения эффективной дозы (терапевтически эффективной дозы) нейропротекторной композиции субъекту, нуждающемуся в этом. Нейропротекторную композицию вводят в соответствии с режимом введения, наилучшим образом подходящим для субъекта, пригодность дозы и режим дозирования определяют клинически в соответствии с общепринятой клинической практикой и клиническими результатами неврологического патологического состояния, подлежащего лечению.
[0055] В некоторых вариантах осуществления нейродегенеративное расстройство или неврологическое патологическое состояние, подлежащие лечению, имеют этиологию, ассоциированную со сверхэкспрессией тау-белков и/или нарушением баланса в соотношении Tau3R/Tau4R у субъекта. Такое состояние называется таупатия. Иллюстративные таупатии включают в себя синдром Дауна, болезнь Пика, некоторые варианты прионных болезней, болезнь Альцгеймера, прогрессирующий надъядерный паралич или лобно-височную деменцию, кортикобазальную дегенерацию, комплекс Гуам паркинсонизма и деменции, деменцию с аргирофильными зернами, болезнь Ниманна-Пика типа C и деменция боксеров.
[0056] В некоторых вариантах осуществления нейродегенеративное расстройство или неврологическое патологическое состояние, подлежащие лечению, имеет этиологию, ассоциированную с аномальным или атипичным протеолизом белка-предшественника бета-амилоида, накоплением белка бета-амилоида в синапсах нейронов, образованием амилоидных фибрилл в синапсах нейронов или образованием амилоидных бляшек в синапсах нейронов. Примером таких расстройств или патологических состояний является болезнь Альцгеймера. Субъект, которого лечат в соответствии с данным изобретением, будет проявлять терапевтический ответ. Под «терапевтическим ответом» подразумевается, что субъект, страдающий заболеванием или расстройством, будет получать, по меньшей мере, одно из следующих клинических преимуществ в результате лечения нейропротекторной композицией: ослабление заболевания или расстройства, уменьшение появления симптомов, ассоциированных с заболеванием или расстройством, частичную ремиссию заболевания или расстройства, полную ремиссию заболевания или расстройства, или увеличение времени до прогрессирования. Другими словами, терапевтический ответ может представлять собой полный или частичный терапевтический ответ.
[0057] Терапевтический ответ также может быть описан как ответ, при котором улучшается качество жизни пациента, страдающего нейродегенеративным заболеванием. Улучшение качества жизни может происходить, например, за счет снижения частоты возникновения, частоты или тяжести симптомов, ассоциированных с заболеванием (например, тремор, непроизвольные движения мышц, потеря или частичная потеря координации нервно-мышечной координации, сохранение в памяти и т.д.).
[0058] «Предупреждение возникновения неврологического патологического состояния в популяции субъектов, подвергающихся риску» означает, что неврологическое патологическое состояние не будет возникать в течение предварительно определенного периода времени в демографически предопределенной популяции субъектов, которые имеют риск заболеть неврологическим патологическим состоянием. Предупреждение в течение предварительно определенного периода времени происходит в результате того, что субъектам в этой популяции вводили нейропротекторную композицию в соответствии с данным изобретением. В качестве одного примера, когда нейропротекторную композицию вводят в течение предварительно определенного периода времени субъектам в группе субъектов, подверженных риску инсульта, у этих субъектов инсульт не возникает в течение предварительно определенного периода времени. В частности, нейропротекторную композицию вводят хронически в течение периода, составляющего один год, популяции субъектов, подверженных риску заболевания болезнью Альцгеймера или любым из заболеваний, связанных с тауопатологией, и субъекты в этой популяции не проявляют симптомов, ассоциированных с болезнью Альцгеймера, в течение этого периода, составляющего один год.
[0059] «Снижение частоты возникновения неврологического патологического состояния в популяции субъектов, подверженных риску» связано в данном значении с «предупреждением частоты», за исключением того, что «снижение частоты возникновения» позволяет возникнуть неврологическому состоянию в демографически предопределенной популяции субъектов, но с частотой встречаемости или уровнем тяжести, которые снижены по сравнению с демографически сопоставимой предварительно определенной группой субъектов, которые подвержены риску, не получающим нейропротекторную композицию в соответствии с данным изобретением.
[0060] Используемый в данном документе термин «время до прогрессирования» представляет собой период, отрезок или продолжительность времени после того, как заболевание диагностировано (или подвергнуто лечению), до тех пор, пока заболевание не начнет прогрессировать. Он представляет собой период времени, в течение которого уровень заболевания поддерживается без дополнительного развития заболевания, и период времени заканчивается, когда заболевание снова начинает прогрессировать. Прогрессирование заболевания определяют путем «определения стадии» у субъекта, страдающего неврологическим патологическим состоянием, до или в начале терапии. Например, неврологическое состояние субъекта определяется до или в начале терапии. Затем субъекта лечат нейропротекторной композицией и периодически проверяют неврологическое состояние. В какой-то более поздний момент симптомы неврологического патологического состояния могут прогрессировать, означая, таким образом прогрессирование заболевания и окончание «времени до прогрессирования». Период времени, в течение которого заболевание не прогрессировало или в течение которого уровень или тяжесть заболевания не прогрессировали, представляет собой «время до прогрессирования».
[0061] Режим введения включает в себя терапевтически релевантную дозу (или терапевтически эффективную дозу) нейропротекторной композиции, вводимой в соответствии с режимом дозирования. Следовательно, терапевтически релевантная доза представляет собой терапевтическую дозу, при которой наблюдается терапевтический ответ заболевания или расстройства на лечение нейропротекторной композицией и при которой субъекту можно вводить нейропротекторную композицию без избыточного количества нежелательных или вредных побочных эффектов. Терапевтически релевантная доза не является летальной для субъекта, даже если она может вызывать у пациента некоторые побочные эффекты. Она представляет собой дозу, при которой уровень клинического эффекта для субъекта, которому вводят нейропротекторную композицию, превышает уровень вредных побочных эффектов, испытываемых субъектом в результате введения нейропротекторной композиции. Терапевтически релевантная доза будет варьироваться от субъекта к субъекту в соответствии с множеством установленных фармакологических, фармакодинамических и фармакокинетических принципов. В то же время, терапевтически релевантная доза в типичном случае будет составлять от 0,1 до 100 мкг нейропротекторной композиции в твердой, жидкой или полутвердой форме. В данной области техники известно, что фактическое количество фармакологически активного компонента/агента, необходимое для обеспечения целевого терапевтического результата у субъекта, может варьироваться от субъекта к субъекту в соответствии с основными принципами фармации.
[0062] Терапевтически релевантную (эффективную) дозу можно вводить в соответствии с любым режимом введения, в типичном случае используемым при неврологических или нейродегенеративных заболеваний или расстройств. Терапевтически релевантную дозу можно вводить один, два, три или более раз в день в соответствии с режимом дозирования. Ее можно вводить через день, через три дня, через четыре дня, через пять дней, два раза в неделю, еженедельно, раз в две недели, через три недели, через четыре недели, ежемесячно, два раза в месяц, раз в два месяца, через три месяца, через четыре месяца, раз в полгода, ежегодно или в соответствии с комбинацией любого из вышеперечисленного для достижения подходящего графика введения. Например, терапевтически релевантную дозу можно вводить один раз в день в течение одной или нескольких недель.
[0063] Приведенные ниже примеры включают доказательства эффективности нейропротекторной композиции при лечении неврологических патологических состояний, таких как неврологические заболевания, неврологические расстройства и инсульт. В Примере 7 подробно описан способ лечения болезни Альцгеймера нейропротекторной композицией или комбинацией нейропротекторной композиции с одним или несколькими другими терапевтическими агентами. В Примере 8 подробно описан способ лечения болезни Хантингтона нейропротекторной композицией или комбинацией нейропротекторной композиции с одним или несколькими другими терапевтическими агентами. В Примере 9 подробно описан способ лечения болезни ишемического повреждения мозга, опосредованного инсультом и не опосредованного инсультом, нейропротекторной композицией или комбинацией нейропротекторной композиции с одним или несколькими другими терапевтическими агентами. В Примере 10 подробно описан способ лечения болезни Паркинсона нейропротекторной композицией или комбинацией нейропротекторной композиции с одним или несколькими другими терапевтическими агентами.
[0064] Как правило, субъекта, имеющего неврологическое патологическое состояние, лечат следующим образом. Субъекта, имеющего неврологическое патологическое состояние, оценивают для определения того, представляет ли неврологическое патологическое состояние болезнь Альцгеймера, болезнь Хантингтона, инсульт, болезнь Паркинсона или другое неврологическое патологическое состояние. Если у субъекта установлен положительный диагноз, показано введение нейропротекторной композиции. Начальные дозы композиции вводят субъекту в соответствии с назначенным режимом введения в течение периода времени. Клинический ответ субъекта и уровень терапевтического ответа определяют периодически. Если уровень терапевтического ответа слишком низок при одной дозе, то дозу увеличивают в соответствии с заранее определенной схемой повышения дозы до тех пор, пока не будет достигнут необходимый уровень терапевтического ответа у субъекта. Если у субъекта проявляются нежелательные побочные эффекты или недопустимый уровень побочных эффектов, то дозу снижают до тех пор, пока не будет достигнут необходимый баланс между уровнем терапевтического ответа и профилем побочных эффектов у субъекта. Лечение субъекта нейропротекторной композицией продолжают по мере необходимости. Доза или режим введения могут корректироваться по мере необходимости, пока пациент не достигнет необходимого (необходимых) клинического (клинических) результата (результатов), такого (таких) как прекращение заболевания как такового, снижение симптомов, ассоциированных с заболеванием, и/или снижение прогрессирования патологического процесса.
[0065] В Примере 3 представлено подробное описание анализа in vitro, используемого для оценки нейропротекторной композиции для лечения ишемического повреждения нейронов, опосредованного инсультом. Анализ представляет собой анализ срезов головного мозга в случае депривации кислорода и глюкозы (OGD), используемой для индукции ≥50% потери нормальных кортикальных нейронов за 24 часа. Носитель образца используется в качестве положительного контроля.
[0066] Различные композиции исследовали в срезах головного мозга при воздействии OGD (модель инсульта) и в срезах головного мозга без воздействия OGD (т.е., контрольных) (модель без инсульта). Данные (Фиг. 9A-9C) были получены для композиции I (молярное соотношение тритерпенов, аналогичное PBI-04711), композиции II (молярное соотношение тритерпенов, аналогичное PBI-05204) и композиции III (молярное соотношение тритерпенов, аналогичное PBI-01011). Данные указывают на то, что каждая из композиций обеспечивает нейропротекцию, однако улучшенная нейропротекторная композиция (композиция III) обеспечивает нейропротекцию в более широком диапазоне дозирования (более широкий диапазон концентраций). Например, композиция I обеспечивает нейропротекцию при 10 µM, в то время как не обеспечивает нейропротекцию в концентрации 1 µМ или меньше. Композиция II обеспечивает нейропротекцию при 10 µM, в то время как не обеспечивает нейропротекцию в концентрации 0.1 µМ или меньше. С другой стороны, композиция III обеспечивает нейропротекции при 0,1 µМ (100 нМ), 1 µM и 10 µМ.
[0067] Соответственно, улучшенная нейропротекторная композиция обеспечивает более широкий диапазон дозирования или более широкий дозозависимый эффект, чем другие композиции на основе тритерпенов, на общей эквимолярной основе. Улучшенная композиция позволяет вводить более высокие дозы комбинации тритерпенов без существенного увеличения нежелательных побочных явлений (побочных эффектов), которые могут быть вызваны отдельными тритерпенами. На практике врач может вводить высокие или низкие дозы смеси тритерпенов и при этом все еще ожидать низкого уровня побочных эффектов, связанных с тритерпенами.
[0068] В данном изобретении представлен способ защиты нейронов от потери активности, вызванной кислородным истощением или кислородно-глюкозным истощением, путем воздействия на нейроны, истощенные кислородом и/или истощенные глюкозой, эффективного количества улучшенной нейропротекторной композиции на основе тритерпенов для сведения к минимуму потери активности, уменьшения скорости потери активности, остановки потери активности, замедления наступления потери активности и/или защиты функции нейронов, вызванной воздействием условий кислородного истощения и/или истощения глюкозой.
[0069] Было определено, может ли сниженная нейропротекторная активность композиций I и II быть обусловлена клеточной токсичностью одного или нескольких отдельных тритерпенов. Было проведено прямое исследование клеточной токсичности олеаноловой кислоты (ОА), урсоловой кислоты (БА) и бетулиновой кислоты (БА) с использованием двух независимых показателей клеточной гибели: окрашивание йодида пропидием (PI) в случае распада ядер и анализа MTS в случае клеточной метаболической активности. PI проникает в клетки с поврежденными мембранами и окрашивает ДНК, тем самым обнаруживая мертвые/умирающие клетки, используя основанные на изображениях анализы высокого содержания на Cellomics Arrayscan VTI. Анализ MTS представляет собой луночный анализ, в котором расщепление тетразолиевого репортера митохондриальными ферментами дает колориметрическое считывание и указывает на относительные количества нормальных клеток. Данные (Фиг. 6A и 6B в случае UA, Фиг. 7A и 7B в случае BA; Фиг. 8A и 8B в случае OA) подтвердили, что UA и BA могут быть высокотоксичными соединениями в зависимости от дозы, каждая из которых приводит к потере 50% метаболической активности в диапазоне 5-15 мкМ, в то время как значительного снижения активности MTS не наблюдалось для ОА до 75 мкМ, самой высокой концентрации исследуемой ОА.
[0070] Потенциальные аддитивные и синергетические характеристики смеси тритерпенов определяли путем анализа их эффективности в отдельности и в разных смесях с помощью анализа экспрессии генов. Определяли относительную активность различных композиций для индукции экспрессии генов ARE Hmox1 и Srxn при различных различных концентрациях (µM). Активацию генов ARE урсоловой кислотой и бетулиновой кислотой исследовали, с использованием более близко расположенных интервалов концентрации. Бетулиновая кислота, как и урсоловая кислота, способна вызывать отчетливую активацию Srx и Hmox1, несмотря на свою токсичность при более высоких концентрациях (Фиг. 4). Данные (Фиг. 10А и 10В) указывали на то, что ОА в качестве единственного агента не способна индуцировать заметную экспрессию генов ARE в любой исследованной концентрации. Даже в низкой концентрации UA и BA вызывали клеточную токсичность. Ряд комбинаций OA+UA и OA+UA+BA действительно вызывали значительные степени экспрессии генов ARE, однако это происходило в степени гораздо большей, чем > 10-кратные увеличения, по сравнению с максимальной исследуемой концентрацией для этого состояния (полосатые красные столбцы в случае Srxn1). Такая избыточная индукция ассоциирована с более длительной клеточной токсичностью через 24 часа лечения. Она включала в себя и UA, исследуемую в качестве единственного агента при 9 мкМ. Из исследуемых смесей только OA:UA:BA в соотношении 10:1:1 индуцировала значительную индукцию генов ARE, но в пределах <5-10 раз в полном исследуемом диапазоне концентраций. Таким образом, смесь OA:UA:BA в соотношении 10:1:1 удовлетворяла обоим критериям для предложенного целевого профиля, а именно: 1) то, что для этого соотношения ни один компонент не будет ограничивать дозу из-за токсичности; и 2) то, что целевые гены ARE значительно индуцируются, но не более чем в 5-10 раз в максимальной концентрации. Другие близкородственные молярные соотношения в пределах диапазонов, описанных в данном документе, также обеспечивают значительную нейропротекцию без избыточной клеточной токсичности. Значительная индукция ARE-репортера люциферазы наблюдается в сходных диапазонах концентраций, которые обеспечивали нейропротекцию в анализах нейропротекции при OGD, анализах APP и срезов головного мозга с тау-белком.
[0071] Результаты, представленные в данном документе, были удивительными и неожиданными. Таким образом, определили, что улучшенная композиция III и другие близкородственные композиции (композиции, имеющие более высокое молярное содержание олеаноловой кислоты и значительно более низкое молярное содержание урсоловой кислоты и бетулиновой кислоты) одновременно обеспечивают сравнительно более низкую клеточную токсичность при более высокой дозе и сравнительно более высокую эффективность в очень низкой концентрации.
[0072] В некоторых вариантах осуществления нейропротекторная композиция по данному изобретению содержит, по меньшей мере, два тритерпена (свободную кислоту, соли, их производные или их пролекарственные средства). Например, в данном изобретении представлена нейропротекторная композиция, содержащая комбинацию, по меньшей мере, урсоловой кислоты и олеаноловой кислоты или комбинацию, по меньшей мере, бетулиновой кислоты и олеаноловой кислоты, при этом олеаноловая кислота присутствует в значительном молярном избытке по сравнению с урсоловой кислотой и бетулиновой кислотой соответственно.
[0073] В некоторых вариантах осуществления нейропротекторная композиция по данному изобретению содержит, по меньшей мере, три тритерпена (свободную кислоту, соли, их производные или их пролекарственные средства). В некоторых вариантах осуществления нейропротекторная композиция по данному изобретению содержит олеаноловую кислоту, урсоловую кислоту и, по меньшей мере, один другой тритерпен. Например, композиция может дополнительно содержать бетулиновую кислоту или, по меньшей мере, один другой тритерпен.
[0074] Нейропротекторная композиция исключает сердечный гликозид, фармакологически активный полисахарид и стероид. Например, нейропротекторная композиция исключает олеандрин, нериифолин или фармакологически активный полисахарид, полученный из растения видов Nerium.
[0075] Когда олеаноловая кислота (О; свободная кислота, соль, их производное или их пролекарственное средство) и урсоловая кислота (U; свободная кислота, соль, их производное или их пролекарственное средство) присутствуют в качестве основных или единственных тритерпенов в композиции, то молярное соотношение O : U может варьировать и может находиться в диапазоне около 9-12 : около 0,33-5, около 9-12 : около 0,4-5, около 9-12 : около 0,5-5, около 9-12 : около 0,7-5, около 9-12 : около 0,9-5, около 9-12 : около 1-5, около 9-12 : около 0,33-4, около 9-12 : около 0,4-4, около 9-12 : около 0,5-4, около 9-12 : около 0,7-4, около 9-12 : около 0,9-4, около 9-12 : около 1-4, около 9-12 : около 0,33-3, около 9-12 : около 0,4-3, около 9-12 : около 0,5-3, около 9-12 : около 0,7-3, около 9-12 : около 0,9-3, около 9-12 : около 1-3, около 9-12 : около 0,33-2, около 9-12 : около 0,4-2, около 9-12 : около 0,5-2, около 9-12 : около 0,7-2, около 9-12 : около 0,9-2, около 9-12 : около 1-2, около 10-1 : около 1-5, около 10-1 : около 1-3, около 9-12 : около 0,5-1,5, около 9-11 : около 0,5-1,5, около 9,5-10,5 : около 0,75-1,25, около 9,5-10,5 : около 0,8-1,2 или около 9,75-10,5 : около 0,9-1,1.
[0076] Когда олеаноловая кислота (О; свободная кислота, соль, их производное или их пролекарственное средство) и бетулиновая кислота (В; свободная кислота, соль, их производное или их пролекарственное средство) присутствуют в качестве основных или единственных тритерпенов в композиции, то молярное соотношение O : В может варьировать и может находиться в диапазоне около 9-12 : около 0,33-5, около 9-12 : около 0,4-5, около 9-12 : около 0,5-5, около 9-12 : около 0,7-5, около 9-12 : около 0,9-5, около 9-12 : около 1-5, около 9-12 : около 0,33-4, около 9-12 : около 0,4-4, около 9-12 : около 0,5-4, около 9-12 : около 0,7-4, около 9-12 : около 0,9-4, около 9-12 : около 1-4, около 9-12 : около 0,33-3, около 9-12 : около 0,4-3, около 9-12 : около 0,5-3, около 9-12 : около 0,7-3, около 9-12 : около 0,9-3, около 9-12 : около 1-3, около 9-12 : около 0,33-2, около 9-12 : около 0,4-2, около 9-12 : около 0,5-2, около 9-12 : около 0,7-2, около 9-12 : около 0,9-2, около 9-12 : около 1-2, около 10-1 : около 1-5, около 10-1 : около 1-3, около 9-12 : около 0,5-1,5, около 9-11 : около 0,5-1,5, около 9,5-10,5 : около 0,75-1,25, около 9,5-10,5 : около 0,8-1,2 или около 9,75-10,5 : около 0,9-1,1.
[0077] Когда олеаноловая кислота (О; свободная кислота, соль, их производное или их пролекарственное средство), урсоловая кислота (U; свободная кислота, соль, их производное или их пролекарственное средство) и бетулиновая кислота (В; свободная кислота, соль, их производное или их пролекарственное средство) присутствуют в качестве основных или единственных тритерпенов в композиции, то молярное соотношение олеаноловая кислота : урсоловая кислота : бетулиновая кислота составляет около 10 : около 1 : около 1, около 9-11 : около 0,5-1,5 : около 0,5-1,5, около 9,5-10,5 : около 0,75-1,25 : около 0,75-1,25, около 9,5-10,5 : около 0,8-1,2 : около 0,8-1,2, около 9,75-10,5 : около 0,9-1,1 : около 0,9-1,1, около 9-12 : около 0,15-2,5 : около 0,15- 2,5, около 9-12 : около 0,2-2,5 : около 0,2-2,5, около 9-12 : около 0,25-2,5 : около 0,25-2,5, около 9-12 : около 0,35-2,5 : около 0,35-2,5, около 9-12 : около 0,45-2,5 : около 0,45-2,5, около 9-12 : около 0,5-5 : около 0,5-2,5, около 9-12 : около 0,16-2 : около 0,16-2, около 9-12 : около 0,2-2 : около 0,2-2, около 9-12 : около 0,25-2 : около 0,25-2, около 9-12 : около 0,25-2 : около 0,25-2, около 9-12 : около 0,45-2 : около 0,45-2, около 9-12 : около 0,5-2 : около 0,5-2, около 9-12 : около 0,16-1,5 : около 0,16-1,5, около 9-12 : около 0,2-1,5 : около 0,2-1,5, около 9-12 : около 0,25-1,5 : около 0,25-1,5, около 9-12 : около 0,7-1,5 : около 0,35-1,5, около 9-12 : около 0,45-1,5 : около 0,45-1,5, около 9-12 : около 0,5-1,5 : около 0,5-1,5, около 9-12 : около 0,16-1 : около 0,16-1, около 9-12 : около 0,2-1 : около 0,2-1, около 9-12 : около 0,25-1 : около 0,25-1, около 9-12 : около 0,35-1 : около 0,35-1, около 9-12 : около 0,45-1 : около 0,45-1, около 9-12 : около 0,5-1 : около 0,5-1, около 10-1 : около 0,5-2,5 : около 0,5-2,5, около 10-1 : около 0,1-1,5 : около 0,1-1,5, около 9-12 : около 0,25-0,75 : около 0,25-0,75, около 9,5-10,5 : около 0,35-0,7 : около 0,35-0,7, около 9,5-10,5 : около 0,4-0,6 : около 0,4-0,6 или около 9,75-10,5 : около 0,45-0,6 : около 0,45-0,6.
у
f
р
[0078] В Примере 11 представлено подробное описание анализа in vitro, используемого для оценки нейропротекторной композиции для лечения болезни Альцгеймера. Анализ представляет собой анализ срезов головного мозга APP/Aвиндуцированной (АРР: белок-предшественник амилоида) дегенерации кортикальных пирамидальных нейронов. После расщепления ферментом секретазой АРР восстанавливается до пептидов Aв, которые, как полагают, являются фактором, вызывающим образование бета-амилоидных бляшек. Белки Aв ассоциированы с образованием бета-амилоидных бляшек и, как полагают, являются отличительным, если не этиологическим фактором при болезни Альцгеймера. Биолистическая трансфекция используется для введения жизненно важные маркеров, таких как YFP (маркер  желтого  флуоресцентного  белка), и введения генных конструкций заболевания в те же самые нейрональные популяции в срезах головного мозга. YFP совместно трансфицируется изоформами APP, приводя к прогрессирующей дегенерации кортикальных пирамидальных нейронов в течение трех-четырех дней после получения и трансфекции срезов головного мозга. Данные указывают на то, что нейропротекторная композиция обеспечивает нейропротекцию, зависящую от концентрации, для APP-трансфицированных срезов головного мозга. Состав III (O:U:В в молярном соотношении 10:1:1, как и в PBI-01011) обеспечивает более высокую нейропротекцию, чем композиция II (O:U:B в молярном соотношении 7,8:7,4:1, как в PBI-05204) и композиция I (O:U:B в молярном соотношении 3:2,2:1, как в PBI-04711). Данные имеют значение в связи с тем, что немногие соединения или терапевтические стратегии в литературе показали какую-либо значительную защиту нейронов в этом анализе in vitro, представляющем болезнь Альцгеймера.
[0079] Нейропротекторная композиция по данному изобретению также обеспечивает значительную нейропротекцию в двух дополнительных моделях срезов головного мозга, в которых кортикальная нейрональная дегенерация обусловлена биолистической трансфекцией экспрессионных конструкций для генов, участвующих в нейродегенерации ЦНС, а именно белка-предшественника амилоида (APP) и тау-белка. В указанных моделях трансфекция APP и тау-белка индуцируют прогрессирующую нейродегенерацию кортикальных нейронов в течение 3-4 дней, в отличие от нейронального повреждения и гибели, вызванных OGD, которое происходит в течение 24-часового периода в модели срезов головного мозга.
[0080] Данные указывают, что нейропротекторная композиция обеспечивает нейропротекцию в указанном анализе, даже если она не содержит сердечных гликозидов. Нейропротекторная композиция обеспечивает значительную зависимую от концентрации нейропротекцию как в моделях APP, так и в модели нейродегенерации срезов головного мозга с использованием тау-белка.
[0081] Нейропротекторную композицию оценивают с помощью анализа болезни Альцгеймера в срезах головного мозга с использованием tau4R, аналогичного анализу АРР, за исключением того, что используют конструкцию тау-белка (Пример 11). Определяют количество нормальных кортикальных нейронов. Эффективность в указанном анализе определяется как или на основе относительного общего количества нормальных нейронов и количества и процента патологических деградировавших нейронов в присутствии различных количеств нейропротекторной композиции. Отрицательный контроль в этих экспериментах состоял из срезов головного мозга, которые не подвергались воздействию OGD, в то время как срезы головного мозга, подвергшиеся воздействию OGD, но не обработанные нейропротекторной композицией, служили в качестве внутреннего положительного контроля. Нейропротекторная композиция обеспечивает нейропротекцию в указанном анализе.
[0082] Соответственно, в данном изобретении представлен способ защиты нейронов от потери активности, вызванной болезнью Альцгеймера, включающий: воздействие на нейроны, проявляющие признаки болезни Альцгеймера, эффективного количества нейропротекторной композиции на основе тритерпенов для сведения к минимуму потери активности, снижения скорости потери активности, остановки потери активности, замедления наступления потери активности и/или критического функционирования нейронов, вызванных болезнью Альцгеймера. В некоторых вариантах осуществления в способе используется эффективное количество нейропротекторной композиции.
[0083] В Примере 6 дается подробное описание анализа, используемого для оценки эффективности нейропротекторной композиции для лечения болезни Хантингтона. Мутантный белок htt вводится посредством электропорации в смешанные сокультуры высокой плотности кортикальных нейронов, стриатальных нейронов и глии. Стриатальные и кортикальные нейроны трансфицуют флуоресцентными белками разного цвета, тем самым, облегчая раздельную идентификацию различных типов нейронов в совместной культуре. Цветные флуоресцентные белки являются флуоресцентными и «излучают» цвет при активации с источником света соответствующей длины волны. Данные указывают на то, что нейропротекторная композиция может быть использована для лечения болезни Хантингтона.
[0084] Соответственно, в данном изобретении представлен способ защиты нейронов от потери активности, вызванной болезнью Хантингтона, включающий: воздействие на нейроны, проявляющие признаки болезни Хантингтона, эффективного количества нейропротекторной композиции для сведения к минимуму потери активности, уменьшения скорости потери активности, остановки потери активности, замедления начала потери активности и/или нормальной функции нейронов, вызванных болезнью Хантингтона.
[0085] В Примерах 3, 4 и 12 подробно описан пример анализа срезов головного мозга, который можно использовать для оценки эффективности нейропротекторной композиции при лечении инсульта у субъекта после отложенного периода после инсульта. Анализ срезов головного мозга при кислородно-глюкозной депривации проводят, как описано в данном документе; однако вместо того, чтобы обрабатывать срезы головного мозга с помощью композиции, их обрабатывают композицией после отложенных периодов, составляющих 0, 1, 2, 4 и 6 часов. Данные должны продемонстрировать, что нейропротекторная композиция эффективна для обеспечения значительной нейропротекции на отсроченных периодов, составляющих до 1, до 2, до 3, до 4, до 5, до около 6 часов после инсульта.
[0086] Соответственно, в данном изобретении представлен задержанный по времени способ лечения инсульта у субъекта путем введения дозы нейропротекторной композиции субъекту после того, как субъект перенес инсульт. В течение приемлемого отсроченного периода после того, как субъект перенес инсульт, начальную дозу нейропротекторной композиции вводят в соответствии с начальным режимом введения. Затем определяется адекватность клинического ответа и/или терапевтического ответа субъекта на лечение композицией. Если клинический ответ и/или терапевтический ответ субъекта является адекватным, тогда лечение композицией продолжают по мере необходимости, пока не будет достигнут необходимый клинический результат. В качестве альтернативы, если клинический ответ и/или терапевтический ответ субъекта является неадекватным при начальной дозе и начальном режиме введения, доза увеличивается или снижается до тех пор, пока не будет достигнут необходимый клинический результат и/или терапевтический ответ у субъекта. Повышение или снижение дозы может быть выполнено в сочетании с изменением режима введения, таким как изменение частоты введения или общего периода введения дозы.
[0087] Некоторые из анализов срезов головного мозга в данном документе проводят в условиях, когда ткань головного мозга обрабатывают нейропротекторной композицией до OGD. В этих условиях данные устанавливают пригодность нейропротекторной композиции при профилактическом обеспечении нейропротекции от повреждений, вызванных инсультом.
[0088] Авторы данного изобретения обнаружили, что нейропротекторная композиция по данному изобретению обеспечивает нейропротекцию, опосредованную посредством антиоксидантных элементов транскрипционного ответа (ARE) с тритерпеном (тритерпенами). Тритерпен (тритерпены) также индуцирует гены антиоксидантов, зависимые от фактора 2 (Nrf2), связанные с эритроидным фактором 2, для обеспечения нейропротекции. Когда нейропротекторную композицию вводят субъекту, нуждающемуся в этом, композиция обеспечивает нейропротекцию посредством, по меньшей мере, двойного механизма. Когда нейропротекторную композицию вводят субъекту, нуждающемуся в этом, композиция обеспечивает нейропротекцию, по меньшей мере, посредством активации ARE.
[0089] Если врач намеревается лечить субъекта, страдающего неврологическим патологическим состоянием, комбинацией нейропротекторной композиции на основе тритерпенов и одного или нескольких других терапевтических агентов, и известно, что конкретное неврологическое патологическое состояние, которым страдает субъект, является, по меньшей мере, частично терапевтически чувствительным к лечению указанным одним или несколькими другими терапевтическими агентами, то способ данного изобретения включает: введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически релевантной дозы нейропротекторной композиции на основе тритерпенов и терапевтически релевантной дозы указанного одного или нескольких других терапевтических агентов, при этом нейропротекторную композицию вводят в соответствии с первым режимом введения, а один или несколько других терапевтических агентов вводят в соответствии со вторым режимом введения. В некоторых вариантах осуществления первая и вторая режимы введения являются одинаковыми. В некоторых вариантах осуществления первый и второй режимы введения различаются.
[0090] Если неврологическое патологическое состояние, которое подлежит лечению, представляет собой болезнь Альцгеймера, один или несколько других терапевтических агентов могут быть выбраны из группы, состоящей из ингибиторов BACE или ингибиторов ацетилхолинэстеразы. В некоторых вариантах осуществления один или несколько других терапевтических агентов могут быть выбраны из группы, состоящей из Namenda™ (мемантина HCl), Aricept™ (донепезила), Razadyne™ (галантамина), Exelon™ (ривастигмина) и Cognex™ (такрина).
[0091] Если неврологическое патологическое состояние, которое подлежит лечению, представляет собой болезнь Хантингтона, то один или несколько других терапевтических агентов могут быть выбраны из группы, состоящей из природных продуктов, противосудорожных средств, антагонистов рецепторов NMDA (н-метил d-аспартата) и блокаторов натриевых каналов. Иллюстративные агенты включают в себя витамин Е, баклофен (производное CoQ10), ламотриджин (противосудорожное средство), рамацемид (анестетик, который представляет собой низкоаффинный антагонист NMDA) и рилузол (блокатор Na-каналов). Эффективность каждого из этих агентов считается низкой (Mestre T. et al, Chochrane Database Systematic Reviews July 8, 2009; 8(3): CD006455); однако ожидается, что введение лекарственной формы, содержащей нейропротекторную композицию, субъектам, получающим один или несколько из этих других агентов, обеспечит субъекту, имеющему неврологическое патологическое расстройство, улучшенный клинический эффект по сравнению с введением этих агентов в отсутствие нейропротекторной композиции.
[0092] Если неврологическое патологическое состояние, подлежащее лечению, представляет собой ишемическое повреждение головного мозга, обусловленное инсультом (ишемический инсульт), то терапевтическое лечение, раскрытое в литературе (Gutierrez M. et al. “Cerebral protection, brain repair, plasticity and cell therapy in ischemic stroke” Cerebrovasc. Dis. 2009; 27 Suppl 1:177-186), например, внутривенный тромболизис, может быть использовано в дополнение к нейропротекторной композиции. В некоторых вариантах осуществления один или несколько других терапевтических агентов могут быть выбраны из группы, состоящей из лекарственных средств, таких как альтеплаза (тромболитический агент).
[0093] Если неврологическое патологическое состояние, которое подлежит лечению, представляет собой болезнь Паркинсона, то один или несколько других терапевтических агентов включают в себя комбинацию карбидопы и леводопы, разагилин, прамипексол, ропинрол, амантадин, мемантин, энтакапон, ротиготин, бензтропин, селегилин, бипериден, комбинацию карбидопы, леводопы и энтакапона, тригексилфенидил, ривастигмин, апоморфин, леводопу, карбидопу, бромокриптин, белладонну, толкапон или их комбинацию.
[0094] Один или несколько других терапевтических агентов могут быть выбраны из группы, состоящей из ингибиторов BACE (бета-секретазы 1; бета-сайт амилоидного белка-предшественника расщепляющего фермента 1, бета-сайт АРР расщепляющего фермента 1, мембраноассоциированной аспартатпротеазы 2, мемапсина-2, аспартилпротеазы 2 и ASP2), AZD3293, ингибиторов ацетилхолинэстеразы, Namenda™ (мемантина HCl), Aricept™ (донепезила), Razadyne™ (галантамина), Exelon™ (ривастигмина), Cognex™ (такрина), противосудорожных средств, антагонистов рецепторов NMDA (н-метил d-аспартата), блокаторов натриевых каналов, витамина Е, баклофена (производного CoQ10), ламотриджина (противосудорожного средства), ремасемида (анестетика, который представляет собой низкоаффинный антагонист NMDA), рилузола (блокатора Na-каналов), альтеплазы (тромболитического средства), леводопы, карбидопы, амантадина, ингибитора СОМТ (катехол-O-метилтрансферазы), толкапона, энтакапона, опикапона, агониста дофаминовых рецепторов, бромокриптина, перголида, прамипексола, ропинирола, пирибедила, каберголина, апоморфина, лизурида, ингибитора МАО-В (моноаминооксидазы-В) (селективных и неселективных ингибиторов МАО-В), антихолинергического средства, ингибитора холинэстеразы, изокарбоксазида, ниаламида, фенелзина, гидракарбазина, разагилина, селегилина, линезолида или их комбинации.
[0095] Один или несколько других терапевтических агентов можно вводить в дозах и в соответствии с режимами введения, которые признаны врачом терапевтически эффективными, или в дозах, которые признаны врачом субтерапевтически эффективными. Клиническая эффективность и/или терапевтический эффект, обеспечиваемые введением комбинации нейропротекторной композиции и одного или нескольких других терапевтических средств, могут быть аддитивными или синергетическими, такой уровень эффективности или эффекта определяется путем сравнения введения комбинации с введением отдельной нейропротекторной композиции и одного или нескольких других терапевтических агентов. Один или несколько других терапевтических агентов могут вводиться в дозах и в соответствии с режимами введения, как предложено или описано Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов, Всемирной организацией здравоохранения, Европейским агентством по лекарственным средствам (EMEA), Управлением по контролю товаров медицинского назначения (TGA, Австралия), Панамериканской организация здравоохранения (PAHO), Управлением по безопасности лекарственных средств и медицинских изделий (Medsafe, Новая Зеландия) или различные министерствами здравоохранения во всем мире.
[0096] Нейропротекторная композиция по данному изобретению может быть приготовлена путем смешивания отдельных ее компонентов в смеси (Примеры 1-2). Например, нейропротекторная композиция может быть приготовлена путем смешивания, по меньшей мере, олеаноловой кислоты и урсоловой кислоты и необязательно бетулиновой кислоты в соответствии с молярными соотношениями, описанными в данном документе.
[0097] Было определено, что тритерпены проявляют различные уровни активности в анализе нейропротекции при OGD, описанном в данном документе. Соответственно, определяли уровень вклада отдельных тритерпенов в эффективность и клеточную токсичность нейропротекторной композиции, содержащей их. Было обнаружено, что молярное соотношение тритерпенов в нейропротективной композиции на основе тритерпенов должно быть должным образом сбалансировано, чтобы обеспечить максимальный уровень нейропротекторной эффективности при сохранении сниженного уровня клеточной токсичности.
[0098] Более низкая активность UA в анализе нейропротекции при OGD является неожиданной. Данные, полученные из анализов экспрессии, демонстрируют, что фракция 0-4 индуцирует существенную экспрессию Nrf2, Srx и Hmox1 и более низкую экспрессию Gclc и Nqo1; однако данные также показывают, что индукция Srx и Hmox1 в большей степени обусловлена активностью UA, чем OA или BA. Эффективность (особенно кривая реакции в широком диапазоне доз и высокий уровень эффективности при низких концентрациях) композиции, содержащей несколько тритерпенов, по-видимому, обусловлена различными другими механизмами, действующими синергетически для обеспечения нейропротекции.
[0099] Было обнаружено, что уровень нейропротекции, обеспечиваемый композициями по данному изобретению, можно улучшить, используя композиции, обладающие подходящими молярными соотношениями O:U или O:U:B или O:B. Готовили растворы, содержащие следующие молярные соотношения тритерпена (тритерпенов) (Примеры 1-2), и оценивали нейропротекторную активность и активность индукции генов ARE, как описано в данном документе.
[00100] В некоторых вариантах осуществления улучшенная нейропротекторная композиция содержит, по меньшей мере, олеаноловую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство) и урсоловую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство), присутствующие в молярном соотношении ОА к UA, как описано в данном документе. ОА присутствует в большом молярном избытке по сравнению с UA.
[00101] В некоторых вариантах осуществления улучшенная нейропротекторная композиция содержит, по меньшей мере, олеаноловую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство) и бетулиновую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство), присутствующие в молярном соотношении ОА к ВА, как описано в данном документе. ОА присутствует в большом молярном избытке по сравнению с ВА.
[00102] В некоторых вариантах осуществления улучшенная нейропротекторная композиция включает, по меньшей мере, олеаноловую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство), урсоловую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство) и бетулиновую кислоту (свободную кислоту, соль, их производное или их пролекарственное средство), присутствующие в молярном соотношении ОА к UA к ВА, как описано в данном документе. ОА присутствует в большом молярном избытке по сравнению с UA и ВА.
[00103] Улучшенная нейропротекторная композиция обеспечивает более широкую кривую доза-ответ, чем соответствующие тритерпены в отдельности, и обеспечивает сниженную клеточную токсичность при сравнении на общей эквимолярной основе, особенно при сравнении в высокой области диапазона дозирования.
[00104] Нейропротекторная композиция может быть составлена в любой подходящей фармацевтически приемлемой лекарственной форме. Особенно пригодны парентеральные, ушные, офтальмологические, назальные, ингаляционные, буккальные, сублингвальные, энтеральные, местные, оральные, пероральные и инъекционные лекарственные формы. Определенные лекарственные формы включают в себя твердые или жидкие лекарственные формы. Иллюстративные подходящие лекарственные формы включают в себя таблетку, капсулу, осмотическое устройство, пилюлю, каплету, троше, саше, раствор, суспензию, дисперсию, флакон, пакет, бутыль, жидкость для инъекций, iv (внутривенно), им (внутримышечно) или ip (интраперитонеально) вводимые жидкие и другие такие лекарственные формы, известные специалисту в области фармацевтики.
[00105] Подходящие лекарственные формы, содержащие нейропротекторную композицию, могут быть приготовлены путем смешивания нейропротекторной композиции с фармацевтически приемлемыми наполнителями, описанными в данном документе или описанными у Pi et al. (“Ursolic acid nanocrystals for dissolution rate and bioavailability enhancement: influence of different particle size” в Curr. Drug Deliv. (Mar 2016), 13(8), 1358-1366), Yang et al. (“Self-microemulsifying drug delivery system for improved oral bioavailability of oleanolic acid: design and evaluation” in Int. J. Nanomed. (2013), 8(1), 2917-2926), Li et al. (Development and evaluation of optimized sucrose ester stabilized oleanolic acid nanosuspensions prepared by wet ball milling with design of experiments” in Biol. Pharm. Bull. (2014), 37(6), 926-937), Zhang et al. (“Enhancement of oral bioavailability of triterpene through lipid nanospheres: preparation, characterization, and absorption evaluation” in J. Pharm. Sci. (June 2014), 103(6), 1711-1719), Godugu et al. (“Approaches to improve the oral bioavailability and effects of novel anticancer drugs berberine and betulinic acid” in PLoS One (Mar 2014), 9(3):e89919), Zhao et al. (“Preparation and characterization of betulin nanoparticles for oral hypoglycemic drug by antisolvent precipitation” in Drug Deliv. (Sep 2014), 21(6), 467-479), Yang et al. (“Physicochemical properties and oral bioavailability of ursolic acid nanoparticles using supercritical anti-solvent (SAS) process” in Food Chem. (May 2012), 132(1), 319-325), Cao et al. (“Ethylene glycol-linked amino acid diester prodrugs of oleanolic acid for PEPT1-mediated transport: synthesis, intestinal permeability and pharmacokinetics” in Mol. Pharm. (Aug. 2012), 9(8), 2127-2135), Li et al. (“Formulation, biological and pharmacokinetic studies of sucrose ester-stabilized nanosuspensions of oleanolic acid” in Pharm. Res. (Aug 2011), 28(8), 2020-2033), Tong et al. (“Spray freeze drying with polyvinylpyrrolidone and sodium caprate for improved dissolution and oral bioavailablity of oleanolic acid, a BCS Class IV compound” in Int. J. Pharm. (Feb 2011), 404(1-2), 148-158), Xi et al. (Formulation development and bioavailability evaluation of a self-nanoemulsified drug delivery system of oleanolic acid” in AAPS PharmSciTech (2009), 10(1), 172-182), Chen et al. (“Oleanolic acid nanosuspensions: preparation, in-vitro characterization and enhanced hepatoprotective effect” in J. Pharm. Pharmacol. (Feb 2005), 57(2), 259-264), полные раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки.
[00106] Подходящие лекарственные формы могут быть приготовлены в соответствии с US 8187644 B2, выданном Addington, который опубликован 29 мая 2012 года, с US 7402325 B2, выданном Addington, который опубликован 22 июля 2008 года, с US 8394434 B2, выданном Addington et al, который опубликован 12 марта 2013 года, полные описания которых включены в данный документ посредством ссылки. Подходящие лекарственные формы также могут быть изготовлены, как описано в Примерах 13-15.
[00107] Необходимая доза для перорального введения составляет до 5 лекарственных форм, хотя в виде однократной дозы можно вводить от одной до десяти лекарственных форм. Иллюстративные лекарственные формы содержат 0,01-5 или 0,01-10 мг нейропротекторной композиции на лекарственную форму, в общей сложности от 0,1 до 500 мг (от 1 до 10 уровней дозы) на дозу. Дозы будут вводиться в соответствии с режимами введения, которые могут быть предварительно определены и/или адаптированы для достижения определенного терапевтического ответа или клинического эффекта у субъекта.
[00108] Некоторые варианты осуществления лекарственной формы не имеют кишечнорастворимого покрытия и высвобождают свою нагрузку нейропротекторной композиции в течение периода от 0,5 до 1 часа или меньше. Некоторые варианты осуществления лекарственной формы имеют кишечнорастворимое покрытие и высвобождают свою нагрузку нейропротекторной композиции ниже желудка, например, из тощей кишки, подвздошной кишки, тонкой кишки и/или толстой кишки (кишечника). Лекарственные формы с кишечнорастворимым покрытием высвобождают нейропротекторную композицию в системный кровоток в течение 1-10 часов после перорального введения.
[00109] Нейропротекторная композиция может быть включена в лекарственную форму с быстрым высвобождением, немедленным высвобождением, контролируемым высвобождением, пролонгированным высвобождением, продленным высвобождением, взрывным высвобождением, непрерывным высвобождением, замедленным высвобождением или с импульсным высвобождением или в лекарственную форму, которая проявляет два или более из этих типов высвобождения. Профиль высвобождения тритерпена из лекарственной формы может представлять собой профиль высвобождения нулевого порядка, псевдо-нулевого порядка, первого порядка, псевдо-первого порядка или сигмоидального порядка. Профиль концентрации в плазме крови тритерпена у субъекта, которому вводят нейропротекторную композицию, может иметь один или несколько максимумов.
[00110] Количество нейропротекторной композиции, включенной в дозу по данному изобретению, будет находиться, по меньшей мере, в одной или нескольких лекарственных формах и может быть выбрано в соответствии с известными принципами фармации. В частности, рассматривается эффективное количество или терапевтически релевантное количество терапевтического соединения. Под термином «эффективное количество» подразумевается, что, например, в отношении фармацевтических препаратов подразумевается фармацевтически эффективное количество. Фармацевтически эффективное количество представляет собой содержание или количество активного ингредиента, которое является достаточным для требуемого или необходимого терапевтического ответа, или, другими словами, содержание, которое является достаточным для того, чтобы вызвать заметный биологический ответ при введении пациенту. Заметный биологический ответ может возникнуть в результате введения однократной или многократных доз активного вещества. Доза может содержать одну или несколько лекарственных форм. Необходимо понимать, что конкретный уровень дозы для любого пациента будет зависеть от множества факторов, в том числе показания, подлежащего лечению, тяжести показания, состояния здоровья пациента, возраста, пола, веса, питания, фармакологического ответа, конкретной используемой лекарственной формы и другие таких факторов.
[00111] Нейропротекторную композицию можно вводить в низких и высоких дозах благодаря улучшенной комбинации присутствующих тритерпенов и молярному соотношению, в котором они присутствуют. Терапевтически эффективная доза для людей составляет около 100-1000 мг нейропротекторной композиции на кг веса тела. Такая доза может вводиться до 10 раз в течение 24 часов.
[00112] Следует отметить, что соединение в данном документе может обладать одной или несколькими функциями в композиции или составе по данному изобретению. Например, соединение может выполнять функцию как поверхностно-активного вещества и смешивающегося с водой растворителя, так и поверхностно-активного вещества и несмешивающегося с водой растворителя.
[00113] Жидкая композиция может содержать один или несколько фармацевтически приемлемых жидких носителей. Жидкий носитель может представлять собой водный, неводный, полярный, неполярный и/или органический носитель. Жидкие носители включают в себя, в качестве примера и не ограничиваясь этим, смешивающийся с водой растворитель, несмешивающийся с водой растворитель, воду, буфер и их смеси.
[00114] Используемые в данном документе термины «водорастворимый растворитель» или «смешивающийся с водой растворитель», которые используются взаимозаменяемо, относятся к органической жидкости, которая не образует двухфазную смесь с водой или является достаточно растворимой в воде, чтобы обеспечить водную смесь растворителей, содержащих не менее пяти процентов растворителя без разделения жидких фаз. Растворитель является подходящим для введения людям или животным. Иллюстративные водорастворимые растворители включают в себя, в качестве примера и не ограничиваясь ими, ПЭГ (поли(этиленгликоль)), ПЭГ 400 (поли(этиленгликоль, имеющий примерную молекулярную массу около 400), этанол, ацетон, алканол, спирт, эфир, пропиленгликоль, глицерин, триацетин, поли(пропиленгликоль), PVP (поли(винилпирролидон)), диметилсульфоксид, N, N-диметилформамид, формамид, N, N-диметилацетамид, пиридин, пропанол, N-метилацетамид, бутанол, солюфор (2-пирролидон), фармасолв (N-метил-2-пирролидон).
[00115] Используемые в данном документе термины «нерастворимый в воде растворитель» или «несмешивающийся с водой растворитель», которые используются взаимозаменяемо, относятся к органической жидкости, которая образует двухфазную смесь с водой или обеспечивает разделение фаз, когда концентрация растворителя в воде превышает пять процентов. Растворитель является подходящим для введения людям или животным. Иллюстративные нерастворимые в воде растворители включают в себя в качестве примера и не ограничиваясь ими средне/длинноцепочечные триглицериды, масло, касторовое масло, кукурузное масло, витамин Е, производное витамина Е, олеиновую кислоту, жирную кислоту, оливковое масло, софтизан 645 (диглицерил каприлат/капрат/стеарат/гидроксистеарат адипат), миглиол, каптекс (каптекс 350: глицерил трикаприлат/капрат/лаурат триглецерид; каптекс 355: глицерил трикаприлат/капрат триглицерид; каптекс 355 EP/NF: глицерил трикаприлат/капрат среднецепочечный триглицерид).
[00116] Подходящие растворители приведены в “International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use (ICH) guidance for industry Q3C Impurities: Residual Solvents” (1997), в которой даются рекомендации в отношении того, какие количества остаточных растворителей считаются безопасными в фармацевтических препаратах. Иллюстративные растворители приведены в качестве растворителей класса 2 или класса 3. Растворители класса 3 включают в себя, например, уксусную кислоту, ацетон, анизол, 1-бутанол, 2-бутанол, бутилацетат, трет-бутилметиловый эфир, кумол, этанол, этиловый эфир, этилацетат, этилформиат, муравьиную кислоту, гептан, изобутилацетат, изопропилацетат, метилацетат, метил-1-бутанол, метилэтилкетон, метилизобутилкетон, 2-метил-1-пропанол, пентан, 1-пентанол, 1-пропанол, 2-пропанол или пропилацетат.
[00117] Другие вещества, которые можно использовать в качестве несмешивающихся с водой растворителей в данном изобретении, включают в себя: каптекс 100: пропиленгликоль дикапрат; каптекс 200: пропиленгликоль дикаприлат/ дикапрат; каптекс 200 P: пропиленгликоль дикаприлат/дикапрат; пропиленгликоль дикаприлокапрат; каптекс 300: глицерил трикаприлат/капрат; каптекс 300 EP/NF: глицерил трикаприлат/ капрат среднецепочечные триглицериды; каптекс 350: глицерил трикаприлат/капрат/лаурат; каптекс 355: глицерил трикаприлат/капрат; каптекс 355 EP/NF: глицерил трикаприлат/ капрат среднецепочечные триглицериды; каптекс 500: триацетин; каптекс 500 P: триацетин (фармацевтической степени чистоты); каптекс 800: пропиленгликоль Di (2-этитексаноат); каптекс 810 D: глицерил трикаприлат/капрат/линолеат; каптекс 1000: глицерил трикапрат; каптекс CA: среднецепочечные триглицериды; каптекс MCT-170: среднецепочечные триглицериды; капмул GMO: глицерил моноолеат; капмул GMO-50 EP/NF: глицерил моноолеат; кампул MCM: среднецепочечные моно- и диглицериды; кампул MCM C8: глицерил монокаприлат; кампул MCM C10: глицерил монокапрат; кампул PG-8: пропиленгликоль монокаприлат; кампул PG-12: пропиленгликоль монолаурат; капрол 10G10O: декаглицерол декаолеат; Капрол 3GO: триглицерол моноолеат; капрол ET: полиглицериновый сложный эфир смешанных жирных кислот; капрол MPGO: гексаглицерол диолеат; капрол PGE 860: декаглицерол моно-, диолеат.
[00118] Используемый в данном документе термин «поверхностно-активное вещество» относится к соединению, которое содержит полярные или заряженные гидрофильные фрагменты, а также неполярные гидрофобные (липофильные) фрагменты; поверхностно-активное вещество является амфифильным. Термин поверхностно-активное вещество может относиться к одному или смеси соединений. Поверхностно-активное вещество может представлять собой солюбилизирующий агент, эмульгирующий агент или диспергирующий агент. Поверхностно-активное вещество может быть гидрофильным или гидрофобным.
[00119] Гидрофильным поверхностно-активным веществом может быть любое гидрофильное поверхностно-активное вещество, подходящее для применения в фармацевтических композициях. Такие поверхностно-активные вещества могут быть анионными, катионными, цвиттерионными или неионными, однако в настоящее время предпочтительными являются неионные гидрофильные поверхностно-активные вещества. Как обсуждалось выше, эти неионные гидрофильные поверхностно-активные вещества обычно имеют значения HLB, составляющие более около 10. Смеси гидрофильных поверхностно-активных веществ также находятся в объеме данного изобретения.
[00120] Аналогично, гидрофобное поверхностно-активное вещество может представлять собой любое гидрофобное поверхностно-активное вещество, подходящее для использования в фармацевтических композициях. Как правило, подходящие гидрофобные поверхностно-активные вещества будут иметь значение HLB, составляющее менее около 10. Смеси гидрофобных поверхностно-активных веществ также находятся в объеме данного изобретения.
[00121] Примеры дополнительного подходящего солюбилизатора включают в себя: спирты и полиолы, такие как этанол, изопропанол, бутанол, бензиловый спирт, этиленгликоль, пропиленгликоль, бутандиолы и их изомеры, глицерин, пентаэритрит, сорбит, маннит, транскутол, диметилизосорбид, полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, поливиниловый спирт, гидроксипропилметилцеллюлозу и другие производные целлюлозы, циклодекстрины и производные циклодекстринов; простые эфиры полиэтиленгликолей, имеющих среднюю молекулярную массу от около 200 до около 6000, такие как эфир ПЭГ тетрагидрофурфурилового спирта (гликофурол, коммерчески доступный от BASF под торговым названием тетрагликоль) или метокси-ПЭГ (Union Carbide); амиды, такие как 2-пирролидон, 2-пиперидон, капролактам, N-алкилпирролидон, N-гидроксиалкилпирролидон, N-алкилпиперидон, N-алкилкапролактам, диметилацетамид и поливинипирролидон; сложные эфиры, такие как этилпропионат, трибутилцитрат, ацетилтриэтилцитрат, ацетилтрибутилцитрат, триэтилцитрат, этилолеат, этилкаприлат, этилбутират, триацетин, пропиленгликоль моноацетат, пропиленгликоль диацетат, капролактон и его изомеры, валеролактон и его изомеры, бутиролактон и его изомеры; а также другие солюбилизаторы, известные в данной области техники, такие как диметилацетамид, диметилизосорбид (арласолв DMI (ICI)), N-метилпирролидоны (фармасолв (ISP)), монооктаноин, диэтиленгликоль моноэтиловый эфир (доступный от Gattefosse под торговым названием транскутол) и воду. Смеси солюбилизаторов также находятся в объеме данного изобретения.
[00122] За исключением указанного, соединения, упомянутые в данном документе, легко доступны из стандартных коммерческих источников.
[00123] Прозрачная жидкая композиция визуально прозрачна для невооруженного глаза, так как она будет содержать менее 5%, менее 3% или менее 1% масс. взвешенных твердых частиц в расчете на общую массу композиции.
[00124] Несмотря на то, что в этом нет необходимости, композиция или набор по данному изобретению могут дополнительно содержать хелатирующий агент, консервант, антиоксидант, адсорбенты, подкисляющие агенты, подщелачивающие агенты, противовспенивающие агенты, буферные агенты, краситель, электролит, соль, стабилизатор, модификатор тоничности, разбавитель, другой фармацевтический наполнитель или их комбинацию.
[00125] Используемый в данном документе термин «антиоксидант» предназначен для обозначения агента, который ингибирует окисление и, таким образом, используется для предотвращения порчи препаратов в результате окислительного процесса. Такие соединения включают в себя, в качестве примера и не ограничиваясь ими, аскорбиновую кислоту, аскорбиновую пальмитат, витамин Е, производное витамина Е, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, гипофосфористую кислоту, монотиоглицерин, пропилгаллат, аскорбат натрия, бисульфит натрия, формальдегидсульфоксилат натрия, металбисульфит натрия и другие такие вещества, известные специалистам в данной области техники.
2
[00126] Используемый в данном документе термин хелатирующий агент предназначен для обозначения соединения, которое хелатирует ионы металлов в растворе. Типичные хелатирующие агенты включают в себя ЭДТК (тетранатрия этилендиаминтетраацетат), DTPA (пентанатрия диэтилентриаминпентаацетат), HEDTA (тринатриева соль N- (гидроксиэтил)этилендиаминтриуксусной кислоты), NTA (тринатрийфосфат нитрилотриацетат), динатрия этанолдиглицин (NaEDG), натрия диэатнолглицин (DEGNa), лимонную кислоту и другие соединения, известные специалистам в данной области техники.
[00127] Используемый в данном документе термин «адсорбент» предназначен для обозначения агента, способного удерживать другие молекулы на своей поверхности физическими или химическими (хемосорбционными) средствами. Такие соединения включают в качестве примера и не ограничиваясь ими порошкообразный и активированный уголь и другие вещества, известные специалисту в данной области техники.
[00128] Используемый в данном документе термин «подщелачивающий агент» предназначен для обозначения соединения, используемого для получения щелочной среды. Такие соединения включают, в качестве примера и не ограничиваясь ими, раствор аммиака, карбонат аммония, диэтаноламин, моноэтаноламин, гидроксид калия, борат натрия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, гидроксид натрия, триэтаноламин, троламин и другие, известные специалистам в данной области техники.
[00129] Используемый в данном документе термин «подкисляющий агент» предназначен для обозначения соединения, используемого для получения кислой среды. Такие соединения включают в себя, в качестве примера и не ограничиваясь ими, уксусную кислоту, аминокислоту, лимонную кислоту, фумаровую кислоту и другие альфа-гидроксикислоты, соляную кислоту, аскорбиновую кислоту и азотную кислоту и другие, известные специалистам в данной области техники.
[00130] Используемый в данном документе термин «противовспенивающий агент» предназначен для обозначения соединения или соединений, которые предотвращают или уменьшают количество пенообразования, которое образуется на поверхности наполняемой композиции. Подходящие противовспенивающие агенты включают в себя качестве примера и не ограничиваясь ими, диметикон, симетикон, октоксинол и другие, известные специалистам в данной области техники.
[00131] Используемый в данном документе термин «буферный агент» предназначен для обозначения соединения, используемого для противодействия изменению рН при разбавлении или добавлении кислоты или щелочи. Такие соединения включают в себя в качестве примера и не ограничиваясь ими метафосфат калия, фосфат калия, одноосновный ацетат натрия и ангидрид и дегидратат цитрата натрия и другие такие вещества, известные специалистам в данной области техники.
[00132] Используемый в данном документе термин «разбавитель» или «наполнитель» предназначен для обозначения инертных веществ, используемых в качестве наполнителей для создания необходимой массы, характеристик текучести и характеристик сжатия при приготовлении таблеток и капсул. Такие соединения включают в себя в качестве примера и не ограничиваясь ими двухосновный фосфат кальция, каолин, лактозу, сахарозу, маннит, микрокристаллическую целлюлозу, порошковую целлюлозу, осажденный карбонат кальция, сорбит, крахмал и другие вещества, известные специалисту в данной области техники.
[00133] Используемый в данном документе термин «консервант» предназначен для обозначения соединения, используемого для предотвращения роста микроорганизмов. Такие соединения включают, в качестве примера и не ограничиваясь ими, бензалконийхлорид, бензетонийхлорид, бензойную кислоту, бензиловый спирт, цетилпиридинийхлорид, хлорбутанол, фенол, фенилэтиловый спирт, фенилмеркуриевый нитрат, фенилмеркуриевый ацетат, тимеросал, метакрезол, миристил гамма, пиколиния хлорид, бензоат натрия, собрат калия, бензоат натрия, пропионат натрия, сорбиновую кислоту, тимол и метил, этил, пропил или бутилпарабены и другие, известные специалистам в данной области техники.
[00134] Используемый в данном документе термин «краситель» предназначен для обозначения соединения, используемого для придания цвета фармацевтическим препаратам. Такие соединения включают в себя в качестве примера и не ограничиваясь ими, FD&C красный № 3, FD&C красный № 20, FD&C желтый № 6, FD&C синий № 2, FD&C зеленый № 5, FD&C оранжевый № 5, FD&C красный № 8, карамель и оксид железа (черный, красный, желтый), другие красители FD&C и натуральные красители, такие как экстракт кожуры винограда, красный порошок свеклы, бета-каротин, аннато, кармин, куркума, паприка, их комбинации и другие такие вещества, известны специалистам в данной области техники.
[00135] Используемый в данном документе термин «стабилизатор» предназначен для обозначения соединения, используемого для стабилизации активного агента против физических, химических или биохимических процессов, которые в противном случае снижали бы терапевтическую активность агента. Подходящие стабилизаторы включают в себя в качестве примера и не ограничиваясь ими, альбумин, сиаловую кислоту, креатинин, глицин и другие аминокислоты, ниацинамид, ацетилтриптофонат натрия, оксид цинка, сахарозу, глюкозу, лактозу, сорбит, маннит, глицерин, полиэтиленгликоли, каприлат натрия, сахарин натрия и другие, известные специалистам в данной области техники.
[00136] Используемый в данном документе термин «модификатор тоничности» предназначен для обозначения соединения или соединений, которые могут быть использованы для корректировки тоничности жидкого состава. Подходящие модификаторы тоничности включают в себя глицерин, лактозу, маннит, декстрозу, хлорид натрия, сульфат натрия, сорбит, трегалозу и другие, известные специалистам в данной области техники.
[00137] Композиция по данному изобретению также может содержать масла, такие как жирные масла, арахисовое масло, кунжутное масло, хлопковое масло, кукурузное масло и оливковое масло; жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, стеариновая кислота и изостеариновая кислота; и сложные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат, изопропилмиристат, глицериды жирных кислот и ацетилированные глицериды жирных кислот. Композиция также может содержать спирт, такой как этанол, изопропанол, гексадециловый спирт, глицерин и пропиленгликоль; глицеролкетали, такие как 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-метанол; простые эфиры, такие как поли(этиленгликоль) 450; нефтяные углеводороды, такие как минеральное масло и вазелин; воду; фармацевтически приемлемое поверхностно-активное вещество, суспендирующий агент или эмульгирующий агент; или их смеси.
[00138] Следует понимать, что соединения, используемые в области фармацевтического состава, как правило, выполняют ряд различных функций или целей. Таким образом, если упомянутое в данном документе соединение упоминается только один раз или используется для определения более одного термина в данном документе, его назначение или функцию не следует истолковывать как ограничивающиеся только указанной (указанными) упомянутой (упомянутыми) целью (целями) или функцией (функциями).
[00139] Один или несколько компонентов состава могут присутствовать в форме своего свободного основания, свободной кислоты или фармацевтически или аналитически приемлемой соли. Используемый в данном документе термин «фармацевтически или аналитически приемлемая соль» относится к соединению, которое было модифицировано путем его вступления в реакцию с кислотой, необходимой для образования ионно-связанной пары. Примеры приемлемых солей включают в себя стандартные нетоксичные соли, образованные, например, из нетоксичных неорганических или органических кислот. Подходящие нетоксичные соли включают в себя соли, полученные из неорганических кислот, таких как хлористоводородная, бромистоводородная, серная, сульфоновая, сульфаминовая, фосфорная, азотная и другие, известные специалистам в данной области техники. Соли, полученные из органических кислот, таких как аминокислоты, уксусная, пропионовая, янтарная, гликолевая, стеариновая, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, памовая, малеиновая, гидроксималеиновая, фенилацетатная, глутаминовая, бензойная, салициловая, сульфаниловая, 2-ацетоксибензойная, фумаровая, толуолсульфоновая, метансульфоновая, этандисульфоновая, щавелевая, изэтиновая и другие, известные специалистам в данной области техники. Перечни других подходящих солей можно найти в Remingtonґs Pharmaceutical Sciences, 17th. ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, p. 1418, соответствующее раскрытие которой включено в данный документ посредством ссылки.
[00140] Фраза «фармацевтически приемлемый» используется в данном документе для обозначения таких соединений, веществ, композиций и/или лекарственных форм, которые с медицинской точки зрения являются подходящими для использования в контакте с тканями людей и животных и не вызывают чрезмерную токсичность, раздражение, аллергическую реакцию или любую другую проблему или осложнение, соразмерные с разумным соотношением польза/риск.
[00141] Лекарственная форма может быть изготовлена с помощью любого общепринятого способа, известного в фармацевтической промышленности. Жидкую лекарственную форму можно приготовить, поместив, по меньшей мере, один жидкий носитель и нейропротекторную композицию в контейнер. Один или несколько других наполнителей могут быть включены в жидкую лекарственную форму. Твердая лекарственная форма может быть приготовлена путем получения, по меньшей мере, одного твердого носителя и нейропротекторной композиции. Один или несколько других наполнителей могут быть включены в твердую лекарственную форму.
[00142] Лекарственная форма может быть упакована с использованием обычного упаковочного оборудования и материалов. Она может быть включена в упаковку, бутылку, сумку, шприц, конверт, пакет, блистерную упаковку, коробку, ампулу или другой такой контейнер.
[00143] Данное изобретение включает способ улучшения клинического статуса статистически значимого количества субъектов в популяции субъектов с неврологическим патологическим состоянием, включающий: введение популяции субъектов нейропротекторной композиции; и определение клинического статуса субъектов для установления улучшенного клинического статуса. В некоторых вариантах осуществления статистически значимое количество составляет, по меньшей мере, 5%, по меньшей мере, 10%, по меньшей мере, 20%, по меньшей мере, 30%, по меньшей мере, 40%, по меньшей мере, 50%, по меньшей мере, 60%, по меньшей мере, 70%, по меньшей мере, 80% или, по меньшей мере, 90% популяции. В некоторых вариантах осуществления нейропротекторная композиция содержит одно или несколько других фармакологически активных соединений.
[00144] Используемый в данном документе термин «производное» означает «а) химическое вещество, которое структурно связано с первым химическим веществом и теоретически происходит из него; b) соединение, которое образуется из аналогичного первого соединения, или соединение, которое, как можно себе представить, образуется из другого первого соединения, если один атом первого соединения заменен другим атомом или группой атомов; c) соединение, происходящее или полученное из исходного соединения и содержащее необходимые элементы исходного соединения; или d) химическое соединение, которое может быть получено из первого соединения аналогичной структуры в одном или нескольких этапах. Например, производное может включать в себя дейтерированную форму, окисленную форму, дегидратированную, ненасыщенную, конъюгированную с полимером или гликозилированную форму или может включать в себя ее форму сложного эфира, амида, лактона, гомолога, простого эфира, тиоэфира, циано, амино, алкиламино, сульфгидрила, гетероциклическую форму, форму, слитую с гетероциклическим кольцом, полимеризованную, пегилированную, бензилиденильную, триазолильную, пиперазинильную или дейтерированную форму.
[00145] Принимая во внимание приведенное выше описание и приведенные ниже примеры, специалист в данной области техники сможет реализовать данное изобретение на практике, как заявлено, без излишних экспериментов. Изложенное выше будет лучше понято со ссылкой на следующие примеры, которые подробно описывают определенные процедуры для приготовления вариантов осуществления данного изобретения. Все ссылки, выполненные на указанные примеры, приведены в целях иллюстрации. Следующие примеры не следует рассматривать как исчерпывающие, а просто иллюстрирующие лишь некоторые из множества вариантов осуществления, предусмотренных данным изобретением.
[00146] Тритерпены можно приобрести у компании Sigma Chemical Co. (Сент-Луис, Миссури).
Пример 1
Приготовление смесей тритерпенов
[00147] Следующие композиции получали с помощью смешивания указанных тритерпенов в указанных примерных молярных соотношениях.
Тритерпен (примерное относительное молярное содержание)
Композиция
Олеаноловая кислота (O)
Урсоловая кислота (U)
Бетулиновая кислота (B)
I (A-C)
3
2,2
1
II (A-C)
7,8
7,4
1
III (A-C)
10
1
1
IV (A-C)
1
10
1
V (A-C)
1
1
10
VI (A-C)
1
1
0
VII (A-C)
1
1
1
VIII (A-C)
10
1
0
IX (A-C)
1
10
0
[00148] Для каждой композиции получали три различных соответствующих раствора, в результате чего общая концентрация тритерпенов в каждом растворе составляла около 9 µM, 18 µM или 36 µM.
Композиция(общее содержание тритерпенов, µ M)
Тритерпен (примерное содержание каждого, µM)
Олеаноловая кислота (O)
Урсоловая кислота (U)
Бетулиновая кислота (B)
I-A (36)
17,4
12,8
5,8
I-B (18)
8,7
6,4
2,9
I-C (9)
4,4
3,2
1,5
II-A (36)
17,3
16,4
2,2
II-B (18)
8,7
8,2
1,1
II-C (9)
4,3
4,1
0,6
III-A (36)
30
3
3
III-B (18)
15
1,5
1,5
III-C (9)
7,5
0,75
0,75
IV-A (36)
3
30
3
IV-B (18)
1,5
15
1,5
IV-C (9)
0,75
7,5
0,75
V-A (36)
3
3
30
V-B (18)
1,5
1,5
15
V-C (9)
0,75
0,75
7,5
VI-A (36)
18
18
0
VI-B (18)
9
9
0
VI-C (9)
4,5
4,5
0
VII-A (36)
12
12
12
VII-B (18)
6
6
6
VII-C (9)
3
3
3
VIII-A (36)
32,7
3,3
0
VIII-B (18)
16,35
1,65
0
VIII-C (9)
8,2
0,8
0
IX-A (36)
3,3
32,7
0
IX-B (18)
1,65
16,35
0
IX-C (9)
0,8
8,2
0
Пример 2
Приготовление нейропротекторных композиций
[00149] Нейропротекторные композиции можно приготовить с помощью смешивания их отдельных тритерпеновых компонентов с образованием смеси. Приготовленные выше смеси тритерпенов, которые обеспечивали нейропротекцию, составляли в нейропротекторные композиции.
Нейропротекторная композиция с олеаноловой кислотой и урсоловой кислотой
[00150] Известные количества олеаноловой кислоты и урсоловой кислоты смешивали в соответствии с предварительно определенным молярным соотношением компонентов, как определено в данном документе. Компоненты смешивали в твердой форме или смешивали в растворителе (растворителях), например, метаноле, этаноле, хлороформе, ацетоне, пропаноле, диметилсульфоксиде (ДМСО), диметилформамиде (ДМФА), диметилацетамиде (ДМАЦ), N-метилпирролидоне (NMP), воде или их смесях. Полученная смесь содержала компоненты в относительных молярных соотношениях, как описано в данном документе.
[00151] Для фармацевтически приемлемой нейропротекторной композиции, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый наполнитель смешивали с фармакологически активными агентами. Нейропротекторную композицию составляли для введения млекопитающему.
Нейропротекторная композиция с олеаноловой кислотой и бетулиновой кислотой
[00152] Известные количества олеаноловой кислоты и бетулиновой кислоты смешивали в соответствии с предварительно определенным молярным соотношением компонентов, как определено в данном документе. Компоненты смешивали в твердой форме или смешивали в растворителе (растворителях), например, метаноле, этаноле, хлороформе, ацетоне, пропаноле, диметилсульфоксиде (ДМСО), диметилформамиде (ДМФА), диметилацетамиде (ДМАЦ), N-метилпирролидоне (NMP), воде или их смесях. Полученная смесь содержала компоненты в относительных молярных соотношениях, как описано в данном документе.
[00153] Для фармацевтически приемлемой нейропротекторной композиции, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый наполнитель смешивали с фармакологически активными агентами. Нейропротекторную композицию составляли для введения млекопитающему.
Нейропротекторная композиция с олеаноловой кислотой, урсоловой кислотой и бетулиновой кислотой
[00154] Известные количества олеаноловой кислоты, урсоловой кислоты и бетулиновой кислоты смешивали в соответствии с предварительно определенным молярным соотношением компонентов, как определено в данном документе. Компоненты смешивали в твердой форме или смешивали в растворителе (растворителях), например, метаноле, этаноле, хлороформе, ацетоне, пропаноле, диметилсульфоксиде (ДМСО), диметилформамиде (ДМФА), диметилацетамиде (ДМАЦ), N-метилпирролидоне (NMP), воде или их смесях. Полученная смесь содержала компоненты в относительных молярных соотношениях, как описано в данном документе.
[00155] Для фармацевтически приемлемой противовирусной композиции, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый наполнитель смешивали с фармакологически активными агентами. Нейропротекторную композицию составляли для введения млекопитающему.
Пример 3
Оценка композиций в анализе срезов головного мозга при OGD
2
2
[00156] Корональные срезы головного мозга (толщиной 250 мкм) получали от крысят Sprague-Dawley любого пола через 10 дней после рождения (Charles River) и организовывали в органотипическую культуру. Животных умерщвляли в соответствии с руководящими принципами NIH и с одобрения и надзора Duke IACUC. Вкратце, срезы ткани головного мозга нарезали в охлажденной на льду искусственной спинномозговой жидкости (ACSF) и высевали в конфигурации поверхности разделе поверх среды для культивирования (нейробазальная среда A, с добавлением 15% инактивированной нагреванием лошадиной сывороткой, 10 мМ KCl, 10 мМ HEPES, 100 Ед./мл пенициллин/стрептомицин, 1 мМ пирувата натрия и 1 мМ L-глутамина) в 0,5% агарозе со степенью чистоты для анализа. Для моделирования ишемического повреждения, срезы головного мозга подвергали кислородно-глюкозной депривации (OGD) под воздействием не содержащей глюкозы ACSF с пузырьками N, содержащей низкий уровень O (< 0,5%) в течение 5,5 мин.
2
[00157] Через час контрольные и обработанные OGD срезы головного мозга биолистически трансфицировали ДНК, кодирующими желтый флуоресцентный белок (YFP). Для анализов моделирования нейродегенерации при AD или FTD, срезы головного мозга совместно трансфицировали YFP вместе с экспрессионной конструкцией к белку-предшественнику амилоида ДТ (APP) или YFP вместе с кДНК, сконструированной во внутрипроизводственных условиях, кодируемой Tau4R0N человека (идентичной эталонной последовательности NCBI NM_016834) соответственно. Экспланты срезов головного мозга затем инкубировали в течение 24 ч при 5% CO при 37 ° C для анализов при OGD; или в течение 3 дней для анализов нейродегенерации, индуцированной APP и tau4R0N. Композиции добавляли в указанных концентрациях к среде для культивирования во время эксплантации срезов головного мозга.
>
>
[00158] Для всех анализов срезов головного мозга количество здоровых пирамидальных нейронов в кортикальных областях каждого среза головного мозга регистрировали на флуоресцентном стереомикроскопе Leica MZIIIFL. Кортикальные пирамидные нейроны легко идентифицировали по их характерному положению и ориентации в кортикальной пластинке и по их заметному расширению одного апикального дендрита в радиальном направлении к пиальной поверхности Нормальные кортикальные пирамидальные нейроны считались таковыми: 1) представляли собой плотное и ярко меченное клеточное тело, расположенное в пирамидальных нейрональных слоях коры головного мозга; 2) сохраняли четкий апикальный дендрит, проходящий в радиальном направлении к пиальной поверхности среза; 3) экспрессировали  2 четких базальных дендритов  2 диаметров клеточного тела непосредственно от нейрональной сомы; и 4) демонстрировали четкую и непрерывную цитоплазматическую маркировку визуальным маркером YFP в соме и во всех нейрональных процессах. Статистически значимые различия в отношении условия отрицательного контроля (OGD, трансфицированные APP или трансфицированные tau4R, обрабатывали только носителем ДМСО) определяли с помощью ANOVA с использованием апостериорного критерия Даннета при уровне значимости 0,05, с N=12 срезов головного мозга на условие. Каждый эксперимент проводили, по меньшей мере, 2 раза.
Пример 4
Отложенный во времени анализ срезов головного мозга для определения нейропротекции
[00159] Указанный анализ проводили в соответствии с Примером 3, за исключением того, что были сделаны следующие изменения. Определенный промежуток времени допускали между OGD и введением оцениваемой композиции. Определяли способность композиции обеспечивать нейропротекцию срезов головного мозга, если обработка была отложена относительно времени обработки при OGD.
Пример 5
Оценка композиций в отношении активации Nrf2 и экспрессии генов ARE
Активация Nrf2
[00160] Первичные кортикостриатальные нейрональные сокультуры готовили из эмбрионов крысы E18 Sprague-Dawley или мыши C57Bl/6 любого пола. Для анализа репортера люциферазы использовали набор Cignal Antioxidant Response Reporter (Qiagen). Смесь репортера люциферазы 5xARE в плазмиде 40: 1 люцифераза: Renilla трансфицировали в кортикальные и стриатальные нейроны отдельно, используя устройство электропорации Amaxa (Lonza). После электропорации нейроны объединяли и сразу высевали в 96-луночные планшеты, содержащие зрелые глиальные культуры. После культивирования в течение 96 часов композиции добавляли в указанных концентрациях за 7 или 24 часа перед сбором, используя протокол системы анализа люциферазы Dual-Glo и реагенты (Promega). Двухволновую люминесценцию регистрировали с использованием считывающего устройства для микропланшетов SpectraMax L (Molecular Devices). Значения люциферазы нормализовали по отношению к внутреннему контролю Renilla и рассчитывали кратность экспрессии по сравнению с контролем обработки только ДМСО. Проводили, по меньшей мере, 3 независимых эксперимента с использованием 4-6 биологических повторностей.
Экспрессия генов ARE
[00161] Для количественного определения с помощью кПЦР уровней экспрессии целевых генов ARE кортикальные и стриатальные нейроны высевали в 96-луночные планшеты, содержащие зрелые глиальные культуры, и культивировали в течение 96 часов. Композицию добавляли в культуры в указанных концентрациях на 6 часов. В конце периода обработки клетки лизировали и выделяли общую РНК с использованием наборов мини-препаратов Absolutely RNA (Agilent Technologies/Stratagene). кДНК получали с использованием олиго-dT праймеров и обратной транскриптазы Superscript II (Invitrogen). Полученную кДНК использовали для количественной ПЦР транскриптов генов с использованием мастер-смеси для ПЦР в реальном времени SYBR Green (Life Technologies) и следующих мышиных праймеров для: Gclc (прямой 5-'TGGCCACTATCTGCCCAATT-3' и обратный 5'-GTCTGACACGTAGCCTCGGTAA-3'), NQO1 (прямой 5'-GCCCGCATGCAGATCCT-3' и обратный 5'-GGTCTCCTCCCAGACGGTTT3'), Srx (прямой 5'-GCTTCCTCTCGGGAGTCCTT-3' и обратный 5'-CAGCAACAGCGACTACGAAGTAA-3'), и Hmox1 (прямой 5'-CCTCACTGGCAGGAAATCATC-3' и обратный 5'-CCTCGTGGAGACGCTTTACATA-3') (Integrated DNA Technologies). Для образцов кортикостриатальных сокультур крыс использовали праймеры кПЦР, как описано ранее (van Roon-Mom, W. M. et al. Mutant huntingtin activates Nrf2-responsive genes and impairs dopamine synthesis in a PC12 model of Huntington's disease. BMC Molecular Biology (2008), 9, 1-13, doi:10.1186/1471-2199-9-84). Каждый биологический образец измеряли в трех повторах в ПЦР-устройстве в реальном времени ViiA 7 (Applied Biosystems); кратность экспрессии рассчитывали после нормализации в отношении соответствующих контрольных уровней GAPDH.
Пример 6
Оценка композиции в анализе кортикостриатальных сокультур in vitro при болезни Хантингтона
[00162] В указанном анализе вместо использования интактных срезов головного мозга мутант htt вводили посредством электропорации в смешанные сокультуры кортикальных нейронов высокой плотности, стриатальных нейронов и глии, расположенных в 96-луночных планшетах. Целью указанной аналитической платформы было объединение биологической/клинической значимости сложной первичной системы культивирования, которая повторяет ключевые аспекты взаимосвязанности релевантных для заболевания популяций нейронов in vivo, с возможностью проведения крупномасштабных полностью автоматизированных скрининговых кампаний. В указанном анализе в течение 1-2 недель in vitro трансфицированные мутантные конструкции htt индуцировали прогрессирующую дегенерацию как стриатальных, так и кортикальных нейронов, которые затем количественно оценивали с использованием алгоритмов автоматического получения изображений и обнаружения объектов на платформе Cellomics Arrayscan VTI. Каждую точку данных получали взята из 6 лунок с 16 изображениями в каждой лунке, которые автоматически захватывали, обрабатывали и анализировали с помощью Cellomics Arrayscan с использованием протоколов, разработанных в ходе масштабной скрининговой кампании, проводимой в связи с инициативой Cure Huntington's Disease Initiative. В полном цикле около 25000 изображений собирали и анализировали в каждом цикле, по 4 цикла в неделю.
Аналитическая платфома для кортикостриатальных сокультур.
[00163] Чистые глиальные культуры готовили перед высеванием нейронов с получением 96-луночные планшетов с конфлюентными глиальными ложами. Затем кортикальную и стриатальную ткань отделяли по отдельности и «нуклеофицировали» с помощью соответствующих конструкций ДНК и позже различали по экспрессии различных флуоресцентных белков, таких как YFP, CFP и mCherry. Указанные отдельно трансфицированные кортикальные и стриатальные нейроны затем тщательно перемешивали и высевали в 96-луночные планшеты, содержащие предварительно нанесенные глиальные монослои. Композиции исследовали на указанной платформе для кортикально-стриального кокультивирования.
Пример 7
Лечение неврологического патологического состояния, в том числе, но, не ограничиваясь ей, болезни Альцгеймера.
Способ А. Терапия нейропротекторной композицией
[00164] Субъекту, страдающему болезнью Альцгеймера, назначают нейропротекторную композицию, и терапевтически релевантные дозы вводят субъекту в соответствии с назначенным режимом введения в течение периода времени. Уровень терапевтического ответа субъекта определяют периодически. Если уровень терапевтического ответа является слишком низким при одной дозе, то дозу увеличивают в соответствии с заранее определенной схемой повышения дозы до тех пор, пока не будет достигнут необходимый уровень терапевтического ответа у субъекта. Лечение субъекта нейропротекторной композицией продолжают при необходимости, и дозу или режим дозирования могут корректировать по мере необходимости, пока пациент не достигнет необходимого клинического результата.
Способ В. Комбинированная терапия: нейропротекторная композиция и другой терапевтический агент
[00165] Приведенный выше способ А применяется за исключением того, что субъекту назначают и вводят один или несколько других терапевтических агентов для лечения болезни Альцгеймера или ее симптомов. Затем один или несколько других терапевтических агентов можно вводить до, после или совместно с нейропротекторной композицией. Также можно выполнять повышение дозы (или снижение дозы) одного или нескольких других терапевтических агентов. Подходящие один или несколько других терапевтических агентов включают в себя Namenda™ (мемантин HCl), Aricept™ (донепезил), Razadyne™ (галантамин), Exelon™ (ривастигмин), Cognex™ (такрин) и амантадин.
Пример 8
Лечение неврологического патологического состояния, в том числе, но, не ограничиваясь ей, болезни Хантингтона.
Способ А. Терапия нейропротекторной композицией
[00166] Субъекту, страдающему болезнью Хантингтона, назначают нейропротекторную композицию, и терапевтически релевантные дозы вводят субъекту в соответствии с назначенным режимом введения в течение периода времени. Уровень терапевтического ответа субъекта определяют периодически. Если уровень терапевтического ответа является слишком низким при одной дозе, то дозу увеличивают в соответствии с заранее определенной схемой повышения дозы до тех пор, пока не будет достигнут необходимый уровень терапевтического ответа у субъекта. Лечение субъекта нейропротекторной композицией продолжают при необходимости, и дозу или режим дозирования могут корректировать по мере необходимости, пока пациент не достигнет необходимого клинического результата. Вводимые дозы могут быть аналогичными дозам, описанным в данном документе.
Способ В. Комбинированная терапия: нейропротекторная композиция и другой терапевтический агент
[00167] Приведенный выше способ А применяется за исключением того, что субъекту назначают и вводят один или несколько других терапевтических агентов для лечения болезни Хантингтона или ее симптомов. Затем один или несколько других терапевтических агентов можно вводить до, после или совместно с нейропротекторной композицией. Также можно выполнять повышение дозы (или снижение дозы) одного или нескольких других терапевтических агентов. Подходящие один или несколько других терапевтических агентов включают в себя витамин Е, баклофен (производное CoQ10), ламотриджин (противосудорожное средство), ремацимид (анестетик, который представляет собой низкоаффинный антагонист NMDA) и рилузол (блокатор Na-каналов).
Пример 9
Лечение неврологического патологического состояния, в том числе, но, не ограничиваясь им, ишемическим инсультом.
Способ А. Терапия нейропротекторной композицией
[00168] Субъекту, страдающему ишемическим инсультом, назначают нейропротекторную композицию, и терапевтически релевантные дозы вводят субъекту в соответствии с назначенным режимом введения в течение периода времени. Уровень терапевтического ответа субъекта определяют периодически. Если уровень терапевтического ответа является слишком низким при одной дозе, то дозу увеличивают в соответствии с заранее определенной схемой повышения дозы до тех пор, пока не будет достигнут необходимый уровень терапевтического ответа у субъекта. Лечение субъекта нейропротекторной композицией продолжают при необходимости, и дозу или режим дозирования могут корректировать по мере необходимости, пока пациент не достигнет необходимого клинического результата. Вводимые дозы могут быть аналогичными дозам, описанным в данном документе.
Способ В. Комбинированная терапия: нейропротекторная композиция и другой терапевтический агент
[00169] Приведенный выше способ А применяется за исключением того, что субъекту назначают и вводят один или несколько других терапевтических агентов для лечения болезни Хантингтона или ее симптомов. Затем один или несколько других терапевтических агентов можно вводить до, после или совместно с нейропротекторной композицией. Также можно выполнять повышение дозы (или снижение дозы) одного или нескольких других терапевтических агентов.
Пример 10
Лечение неврологического патологического состояния, в том числе, но, не ограничиваясь ей, болезни Паркинсона.
Способ А. Терапия нейропротекторной композицией
[00170] Субъекту, страдающему болезнью Паркинсона, назначают нейропротекторную композицию, и терапевтически релевантные дозы вводят субъекту в соответствии с назначенным режимом введения в течение периода времени. Уровень терапевтического ответа субъекта определяют периодически. Если уровень терапевтического ответа является слишком низким при одной дозе, то дозу увеличивают в соответствии с заранее определенной схемой повышения дозы до тех пор, пока не будет достигнут необходимый уровень терапевтического ответа у субъекта. Лечение субъекта нейропротекторной композицией продолжают при необходимости, и дозу или режим дозирования могут корректировать по мере необходимости, пока пациент не достигнет необходимого клинического результата. Вводимые дозы могут быть аналогичными дозам, описанным в данном документе.
Способ В. Комбинированная терапия: нейропротекторная композиция и другой терапевтический агент
[00171] Приведенный выше способ А применяется за исключением того, что субъекту назначают и вводят один или несколько других терапевтических агентов для лечения болезни Хантингтона или ее симптомов. Затем один или несколько других терапевтических агентов можно вводить до, после или совместно с нейропротекторной композицией. Также можно выполнять повышение дозы (или снижение дозы) одного или нескольких других терапевтических агентов. Подходящие один или несколько других терапевтических агентов включают в себя комбинацию карбидопы и леводопы, разагилин, прамипексол, ропинрол, амантадин, мемантин, энтакапон, ротиготин, бензтропин, селегилин, бипериден, комбинацию карбидопы и леводопы и энтакапон, тригексилфенидил, ривастигмин, апоморфин, леводопу, карбидопу, бромокриптин, белладонну, толкапон или их комбинацию.
Пример 11
Оценка нейропротекторной композиции в анализе in vitro в случае болезни Альцгеймера (tau4R и APP)
[00172] В модели срезов головного мозга крыс в случае индуцированной APP/Abeta дегенерации кортикальных пирамидальных нейронов биолистическую трансфекцию использовали не только для введения жизненно важных маркеров, таких как YFP, но также для введения конструкций генов заболевания в те же самые нейрональные популяции в срезах головного мозга. Таким образом, в модели срезов головного мозга с использованием APP/Aв происходит котрансфекция YFP изоформами APP, приводя к прогрессирующей дегенерации кортикальных пирамидальных нейронов в течение 3-4 дней после приготовления и трансфекции срезов головного мозга. Данные показывают, что нейропротекторная композиция должна обеспечивать зависимую от концентрации нейропротекцию срезов головного мозга, трансфицированных APP.
Пример 12
Оценка нейропротекторной композиции в анализе in vitro в случае инсульта и патологии, не являющейся инсультом
Способ А. Инсульт: приготовление кортикальных срезов головного мозга и OGD.
2
2
2
[00173] Неокортикальные срезы головного мозга получали от крысят PND 7 Sprague-Dawley. Кору головного мозга рассекали, нарезали на срезы толщиной 400-µ и переносили в контейнер, содержащий холодную искусственную спинномозговую жидкость с 1 µM MK-801 перед высиванием; МК-801 не включали ни в какие последующие процедуры. Для имитации ишемического повреждения с помощью временной кислородно-глюкозной депривации (OGD) срезы из одного полушария каждого головного мозга подвергали воздействию не содержащей глюкозы искусственной спинномозговой жидкости с пузырьками N в течение 7,5 мин. в среде с низким содержанием O (0,5%). Затем срезы после OGD высевали вблизи с контрольными срезами из контралатерального полушария на проницаемых для нитроцеллюлозы мембранах или мембранах Millicell (Millipore) которые готовили идентично, за исключением отсутствия OGD. Через тридцать минут после высевания пары срезов головного мозга трансфицировали, переносили в 24-луночные планшеты и инкубировали при 37°C в атмосфере 5% CO во увлажненных камерах. В каждом эксперименте использовали 5-6-минутную кислородно-глюкозную депривацию (OGD), чтобы индуцировать >50% потерю нормальных кортикальных нейронов за 24 часа. Заданную концентрацию контрольного вещества использовали в качестве внутреннего положительного контроля. Оценивали различные концентрации композиций.
Способ В. Патология, не являющаяся инсультом: анализ срезов головного мозга.
[00174] Композиции исследовали в отношении срезов головного мозга «патологии, не являющейся инсультом»; т.е., срезов, которые разрезали и трансфицировали YFP, но не подвергали дополнительному повреждению посредством OGD. См. экспериментальную процедуру, изложенную выше.
Пример 13
Приготовление лекарственной формы, содержащей нейропротекторную композицию
Способ А. Система доставки лекарственных средств на основе кремофора
[00175] Следующие ингредиенты были предоставлены в указанных количествах.
<b>Реагент </b><b>Название</b>
<b>Функция</b>
<b>Процент состава (% масс./масс.)</b>
PBI-01011
Активный агент
3,7
Витамин Е
Антиоксидант
0,1
Лабразол
Поверхностно-активное вещество
9,2
Этанол
Сорастворитель
9,6
Кремофор EL
Поверхностно-активное вещество
62,6
Кремофор RH40
Поверхностно-активное вещество
14,7
[00176] Наполнители распределяли в сосуде и встряхивали в шейкере с охлажденным инкубатором New Brunswick Scientific C24KC в течение 24 часов при 60°C для обеспечения гомогенности. Затем образцы извлекали и визуально проверяли в отношении солюбилизации.
Способ B. Система доставки лекарственных средство на основе GMO/кремофора
[00177] Следующие ингредиенты были предоставлены в указанных количествах.
<b>Реагент </b><b>Название</b>
<b>Функция</b>
<b>Процент состава (% масс./масс.)</b>
PBI-01011
Активный агент
4,7
Витамин Е
Антиоксидант
0,1
Лабразол
Поверхностно-активное вещество
8,5
Этанол
Сорастворитель
7,6
Кремофор EL
Поверхностно-активное вещество
56,1
Глицерил моноолеат
Поверхностно-активное вещество
23,2
[00178] Затем следовала процедура способа А.
Способ С. Система доставки лекарственных средств на основе лабразола
[00179] Следующие ингредиенты были предоставлены в указанных количествах.
<b>Реагент </b><b>Название</b>
<b>Функция</b>
<b>Процент состава (% масс./масс.)</b>
PBI-01011
Активный агент
3,7
Витамин Е
Антиоксидант
0,1
Лабразол
Поверхностно-активное вещество
86,6
Этанол
Сорастворитель
9,6
[00180] Затем следовала процедура способа А.
Способ D. Система мицеллообразования на основе витамина E-TPGS
[00181] Следующие ингредиенты были предоставлены в указанных количествах.
<b>Компонент</b>
<b>Функция</b>
<b>Масса % (масс./масс.)</b>
Витамин Е
Антиоксидант
1,0
Витамин E TPGS
Поверхностно-активное вещество
95,2
PBI-01011
Активный агент
3,8
[00182] Затем следовала процедура способа А.
Способ Е. Многокомпонентная система доставки лекарственных средств
[00183] Следующие ингредиенты были предоставлены в указанных количествах.
Компонент
Масса (г)
Масса % (масс./масс.)
Витамин Е
10,0
1,0
Кремофор ELP
580,4
55,9
Лабразол
89,0
8,6
Глицерил моноолеат
241,0
23,2
Этанол
80,0
7,7
PBI-01011
38,5
3,7
Общее количество
1038,9
100
[00184] Затем следовала процедура способа А.
Пример 14
Приготовление капсул с кишечнорастворимым покрытием
[00185] Этап I: Приготовление заполненной жидкостью капсулы
[00186] Твердые желатиновые капсулы (50 штук, размер 00) заполняли жидкой композицией из Примера 13. Указанные капсулы заполняли 800 мг состава и затем вручную закупоривали 50% этанолом/ 50% водным раствором. Затем капсулы вручную обвязывали 22% раствором желатина, содержащим следующие ингредиенты в указанных количествах.
<b>Ингредиент</b>
<b>Масса (г)</b>
Желатин
140,0
Полисорбат 80
6,0
Вода
454,0
Общее количество
650,0
[00187] Раствор желатина тщательно перемешивали и оставляли набухать в течение 1-2 часов. После периода набухания раствор плотно закрывали и помещали в печь при 55 °С и оставляли разжижиться. После того, как весь раствор желатина становился жидким, проводили связывание. С помощью заостренной круглой кисти 3/0 раствор желатина наносили на капсулы. Использовали комплект для связывания, предоставленный Shionogi. После связывания капсулы выдерживали в условиях окружающей среды в течение 12 часов, чтобы позволить связывающей полоске затвердеть.
[00188] Этап II: Покрытие заполненной жидкостью капсулы
[00189] Дисперсию для покрытия готовили из ингредиентов, перечисленных в таблице ниже.
<b>Ингредиент</b>
<b>Масс. %</b>
<b>Твердые вещества, %</b>
<b>Твердые вещества (г)</b>
<b>г/партия</b>
Eudragit L30D55
40,4
60,5
76,5
254,9
TEC
1,8
9,0
11,4
11,4
AlTalc 500V
6,1
30,5
38,5
38,5
Вода
51,7
Н.о.
Н.о.
326,2
Общее количество
100,0
100,0
126,4
631,0
2
[00190] Если использовались связанные капсулы в соответствии с этапом I, дисперсию наносили на капсулы до уровня покрытия 20,0 мг/см. Следующие условия использовали для покрытия капсул.
<b>Параметры</b>
<b>Настройка</b>
Оборудование для нанесения покрытия
Вектор LDCS-3
Размер партии
Температура воздуха на входе
Температура отработанного воздуха
27-30°C
Объем приточного воздуха
20-25 CFM
Скорость поддона
20 об./мин.
Скорость насоса
9 об./мин. (от 3,5 до 4,0 г/мин.)
Давление сопла
15 фунт/квадр. дюйм
Диаметр сопла
Расстояние от таблеточного слоя*
2-3 дюйма
* Сопло распылителя устанавливали таким образом, чтобы и сопло, и канал распыления находились под каналом потока входящего воздуха.
Пример 15
Приготовление таблетки, содержащей нейропротекторную композицию
[00191] Исходную смесь для таблетирования из 3% силоида 244FP и 97% микрокристаллической целлюлозы (MCC) смешивали. Затем имеющуюся партию композиции, приготовленной в соответствии с Примером 13 1s, включали в смесь силоид/MCC посредством влажного гранулирования. Указанную смесь помечали как «Исходная смесь для таблетирования» в таблице ниже. Дополнительную MCC добавляли внегранулярно для увеличения сжимаемости. Указанное добавление к исходной смеси для таблетирования помечали как «Внегранулярное добавление». Полученная смесь в результате внегранулярного добавления была того же самого состава, что и «Конечная смесь для таблетирования».
Компонент
Масса (г)
Масса % (масс./масс.)
Исходная смесь для таблетирования
Микрокристаллическая целлюлоза
48,5
74,2
Коллоидный диоксид кремния/силоид 244FP
1,5
2,3
Состав из Примера 13
15,351
23,5
Общее количество
65,351
100,0
Внегранулярное добавление
Компонент
Масса (г)
Масса % (масс./масс.)
Исходная смесь для таблетирования
2,5
50,0
Микрокристаллическая целлюлоза
2,5
50,0
Общее количество
5
100,0
Конечная смесь для таблетирования:сокращенная
Компонент
Масса (г)
Масса % (масс./масс.)
Микрокристаллическая целлюлоза
4,36
87,11
Коллоидный диоксид кремния/силоид 244FP
0,06
1,15
Состав из Примера 13
0,59
11,75
Общее количество
5,00
100
Конечная смесь для таблетирования:подробная
Компонент
Масса (г)
Масса % (масс./масс.)
Микрокристаллическая целлюлоза
4,36
87,11
Коллоидный диоксид кремния/силоид 244FP
0,06
1,15
Витамин Е
0,01
0,11
Кремофор ELP
0,33
6,56
Лабразол
0,05
1,01
Глицерил моноолеат
0,14
2,72
Этанол
0,05
0,90
PBI-01011
0,02
0,44
Общее количество
5,00
100,00
[00192]  Силоид 244FP представляет собой коллоидный диоксид кремния, изготовленный Grace Davison. Коллоидный диоксид кремния широко используется для обеспечения нескольких функций, таких как адсорбент, скользящее вещество и агент для дезинтеграции таблеток. Силоид 244FP выбирали в связи с его способностью адсорбировать в 3 раза больше его массы в масле и в связи с его размером частиц, составляющим 5,5 микрон.
[00193] Используемый в данном документе и если не указано иное термин «около» или «примерно» означает ± 10%, ± 5%, ± 2,5% или ± 1% от определенного значения. Используемый в данном документе и если не указано иное термин «по сути» означает «в значительной степени», «по меньшей мере, большинство», более 70%, более 85%, более 90%, более 95%, более 98% или более 99%.
[00194] Когда диапазон указан в данном документе, то указанный диапазон включает все числа в нем.
[00195] Выше приведено подробное описание конкретных вариантов осуществления данного изобретения. Следует понимать, что, несмотря на то, что конкретные варианты осуществления данного изобретения были описаны в данном документе для целей иллюстрации, могут быть сделаны различные модификации без отклонения от сущности и объема изобретения. Соответственно, данное изобретение является неограниченным, кроме как прилагаемой формулой изобретения. Все варианты осуществления, раскрытые и заявленные в данном документе, могут быть выполнены и выполнены без чрезмерных экспериментов в свете данного раскрытия.