Приживаемость типичных форм и L-вариантов бруцелл в органах и тканях северных оленей на территории очагов инфекции

Литература.

1. Казаков В.Н., Синяченко О.В., Игнатенко Г.А. Межфазная тензиометрия биологических жидкостей в терапии. - Донецк: Донеччина, 2003. - 15-126.

2. Fainerman V.B., Miller R., Makievski A.V. Accurate analysis of the bubble formation process in maximum bubble pressure tensiometry // Rev. Sci. Instruments. - 2004. - V 75. - Р. 213-221.

3. Исследование поверхностного натяжения сыворотки крови лошадей/Милаёва И.В., Зайцев С.Ю., Максимов В.И., Козлов С.А., Миллер Р. //Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. - 2006. - № 3. - С.26-27.

4. Максимов В.И., Зайцев С.Ю., Милаева И.В. Использование метода межфазной тензиометрии сыворотки крови для характеристики физиологического состояния лошадей//Материалы VIIнаучно-практической конференции по болезням лошадей. - М., 2006. - С. 74-75.

5. Исследование поверхностного натяжения модельных систем и крови животных методом межфазной тензиометрии/Зайцев С.Ю., Максимов В.И., Милаёва И.В., Миллер Р. //Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. -2007. - №2. - С.44-46.

DEPENDENCE OF A DYNAMIC SURFACE TENSION ON BIOCHEMICAL COMPOSITION OF WHEY OF BLOOD AT ANIMALS

I.V. Mi^va, S.Yu. Zaitsev, V.I. Maximov

Summary. The correlations between DST parameters with the blood plasma composition of horses in comparison with cows are found for the first time. The method of interfasial tensiometry gives valuable information about the animal organism and can be used as novel biochemical method for earlier diagnostics and control for animal status.

Key words: blood serum, correlations dependence, dynamic surface tension.

УДК: 619:579.841.93:616 - 078 + 636.294

ПРИЖИВАЕМОСТЬ ТИПИЧНЫХ ФОРМ И L-ВАРИАНТОВ БРУЦЕЛЛ В ОРГАНАХ И ТКАНЯХ СЕВЕРНЫХ ОЛЕНЕЙ НА ТЕРРИТОРИИ ОЧАГОВ ИНФЕКЦИИ

Л.Н. ГОРДИЕНКО, кандидат ветеринарных наук, зам. директора ВНИИ БТЖ

E-mail: vniibtg@rambler.ru

Резюме. Изучена способность бруцелл приживаться в морфологических структурах макроорганизма. Показана оптимальная среда обитания для типичных и измененных форм бруцелл в органах северных оленей. Установлено, что бруцеллы могут локализоваться и сохранять жизнеспособность в лимфатических узлах (9 %), печени (22 %), сердце (18 %), селезёнке (28%) и половых органах(23 %). В организме инфицированных северных оленей типичную (S) бактериальную форму сохраняют лишь 27 % культур, остальная их часть под действием иммунных факторов макроорганизма диссоциирует в SR и R-формы (40 %) или трансформируется в L-варианты (33 %).

Ключевые слова: северный олень, инфекция, Brucella, локализация, орган.

Ареол распространения северных оленей географически приурочен к территории Крайнего Севера Российской Федерации, которая занимает две трети суши побережья Северного Ледовитого океана. На этой площади сконцентрирована основная часть мирового поголовья северных оленей, в том числе и дикой популяции. Последние служатисточником возбудителей многих инфекционных болезней, в частности, бруцеллёза, который занимает особое место в инфекционной патологии в оленеводческих хозяйствах [4,12,16].

На неблагополучных территориях в поддержании эпизоотического процесса, кроме источника инфекции участвует также резервуар, в роли которого выступают дикие и домашние плотоядные [3,5,7].

В связи с этим на территории природных очагов и граничащих с ними пастбищ существует постоянная опасность заноса возбудителей бруцеллёза в благополучные и оздо-

70 -------------------------------------------------

равливаемые стада, заражения животных и распространения инфекции среди восприимчивого поголовья. Причём заражению бруцеллёзом подвержены, как взрослые особи, так и молодняк различного возраста [2,8,14].

Эпизоотический процесс в стадах северных оленей не всегда проявляется наличием животных с характерными для бруцеллёза клиническими признаками. В начальной стадии, при хроническом течении или латентных формах не всегда удаётся выявить инфицированных особей общепринятыми методами диагностики [9].

Вместе с тем бруцеллы, попадая в организм животных, избирательно локализуются в клетках тех органов и тканей, где имеются оптимальные условия для их существования и внутриклеточного размножения [1,13].

Подвергаясь воздействию иммунных факторов макроорганизма, бруцеллы частично или полностью теряют поверхностные слои ригидной клеточной стенки с антигенными детерминантами, что приводит к изменению их фенотипических, биохимических и биологических признаков [10,6]. Утратив основные факторы патогенности в процессе 1_-трансформации, они способны длительное время перси-стировать в таком состоянии в клетках органов животных, вызывая процессы необычной патологии. _-формы бруцелл и их многочисленные варианты не выявляются стандартными методами диагностики. В результате животные-бруцеллоносители остаются в стаде и будучи источником инфекции поддерживают эпизоотический процесс [11, 15].

При определённых условиях _-варианты, находящиеся на различных стадиях трансформации, могут реверсировать в типичную форму, восстанавливая не только морфологические и биохимические, но и патогенные свойства. Это способствует возникновению рецидивов в оздоровленных стадах и сохранению очагов инфекции.

Цель наших исследований - изучение возможности приживаемости и персистенции типичных форм бруцелл и _-вариантов в органах и тканях северных оленей на территории очагов инфекции.

Достижения науки и техники АПК, №12-2010

Условия, материалы и методы. Работу проводили в бригадах двух оленеводческих хозяйств Ямало-Ненецкого автономного округа, которые находятся на территории природных очагов бруцеллёза северных оленей, в 2000-2005 гг На основании результатов плановых серологических исследований окружной ветеринарной лаборатории установлено, что ежегодно в этих хозяйствах в среднем выявляется от 2 до 28 % положительно реагирующих на бруцеллёз животных.

Мы провели бактериологические исследования биоматериала отубойного контингента оленей, выбракованныхпо разным причинам (организационно-хозяйственным, зоотехническим и ветеринарным). Изучали выборочно 5.. .10 % от поголовья всехполовозрастныхгрупп. В качестве биоматериалаисполь-зовали кусочки паренхиматозных органов (печень, сердце, селезёнка), половые органы (половой член, семенники, яичники, эмбрионы и плодовые оболочки) и лимфатические узлы. Отобранные пробы герметично упаковывали в полиэтиленовые пакеты, маркировали, консервировали методом замораживания и доставляли в лабораторию экологии и идентификации L-форм бактерий ВНИИБТЖ.

Лабораторные исследования проводили в соответствии с требованиями санитарных правил (СП 1.3.1285 - 03).

Для первичного выделения культур бруцелл использовали плотные (МПА, бруцеллагар) и жидкие (МПБ) элективные питательные среды. Идентификацию культур, изолированных из органов северных оленей, проводили по комплексу признаков с учётом типичных форм (S- и R-) бруцелл и L-вариантов на разной стадии трансформации.

Бактериологическому исследованию был подвергнут биоматериал от 330 северных оленей, в том числе 48 самцов (хоров), 74 самок (важенок), 82 быков (кастрированных самцов) и 126 телят

Результаты и обсуждение. В ходе бактериологических исследований было выделено 127 культур, отнесённых к роду Brucella от 110 животных, в том числе от 12 самцов,

30 самок, 21 быка и 47 телят

Анализ основных свойств выделенных субкультур показал, что 27 % из них по комплексу дифференциальных признаков относятся к типичным S-формам, характерным для эпизоотических штаммов возбудителя бруцеллёза северных оленей - B. rangiferiи 40 % имеют признаки дис-социантов с частичной утратой S-антигенных комплексов и выявлением R-антигенов (табл. 1).

Остальные субкультуры (33 %) отличались от типичных Таблица 1. Соотношение бруцелл S-, R- и L- форм ганах северных оленей

Количество выделенных культур

Основные при- в том числе из

знаки культур го 8  ? а е с сердца селе- зёнки половых органов % от общего числа культур

Типичные Б-формы 35 2 7 2 11 13 27

Диссоциированные (БК-, 52 6 11 10 17 8 40

L-варианты (Б^-, БL-, ^-, L-) 40 3 10 11 7 9 33

Всего 127 11 28 23 35 30 100

форм бруцелл культурально-морфологическими, тин-кториальными и агглютинабельными признаками и были идентифицированы как 1_-варианты на разной стадии трансформации.

Субкультуры бруцелл с признаками эпизоотических штаммов (Б-форм) в большей степени (рис. 1) локализовались в половых органах северных оленей (37 %) и в селезёнке (31 %). Незначительная часть их персистировала в печени (20 %), сердце (6 %) и лимфатических узлах (6 %).

Персистенцию диссоциированных штаммов бруцелл отмечали в большей степени в селезенке (33 %), почти

Достижения науки и техники АПК, №12-2010

Рис.1. Персистенция различных штаммов бруцелл в органах и тканях северных оленей: а - Б-формы, б - БЯ- и Я-формы, в - 1_-варианты;  - половые органы,  - селезенка, Ш - сердце,  - пчень, П - лимфоузлы.

одинаково в печени (21 %), сердце (19 %) и половых органах (16 %) и в меньшей степени - в лимфатических узлах (11 %).

Диссеминация 1_-форм бруцелл установлена в паренхиматозных органах (28 % - в сердце, 25 % - в печени, 22 % - в половых органах) и в меньшей степени в клетках лимфоидной ткани (8 % - в селезёнке, 17 % - в лимфатических узлах).

Оценивая инфекционный процесс в организме животных бруцеллоносителей, следует отметить, что в целом локализация возб удителя в большей степени установлена в селезёнке. Наименьшее количество культур бруцелл (9 %) независимо от формы их существования (Б-, БЯ-, Я-, 1_-, БЯ1_-, Я1_-) изолировали из лимфатических узлов. Между средними показателями количества культур бруцелл, выделенных из печени, сердца и половых органов различия

персистирующих в ор- были не достоверными.

В половых органах чаще всего персистировали типичные Б-формы бруцелл (37 %) и примерно в равных количествах диссоциированные штаммы (15 %) и _-варианты (22 %).

Важно отметить, что из 52 культур бруцелл, идентифицированных как диссоциированные штаммы, большую часть (63 %) составляли клетки с сохранившейся клеточной стенкой и поверхностными полисахаридными антигенами, которые в пластинчатой реакции агглютинации проявляли активность с Б- и Я-бруцеллёзными гипериммунными сыворотками. Незначительная часть (37 %) диссоциированных культур была полностью лишена поверхностных Б-антигенов и в реакции агглютинации давала положительный результат только с Я-сывороткой (рис.2).

Аналогичная картина отмечена при изучении свойств 1_-вариантов бруцелл, изолированных из органов северных оленей.

--------------------------------------------- 71

R, 37%

SR, 63%

а)

Подавляющее большинство субкультур, идентифицированных как L- варианты (80 %), частично сохраняли поверхностные слои ригидной клеточной стенки с S- и R- антигенными детерминантами. Они давали слабоположительные реакции агглютинации с гипериммунными S- и R-бруцеллёзными сыворотками, но уже проявляли L-антигенную активность и положительно реагировали с гомологичными L-сыворотками.

Незначительная часть (20 %) L-вариантов полностью утрачивали поверхностные слои клеточной стенки и в пластинчатой реакции агглютинации положительно реагировали только с гипериммунной сывороткой, полученной к L-формам бруцелл.

Следует отметить, что персистенция бруцелл в лимфатических узлах, половых и паренхиматозных органах установлена у животных всех половозрастных групп. Как у взрослых животных, так и у телят в органах и тканях способны локализоваться и сохранять жизнеспособность типичные S- формы бруцелл, диссоциированные штаммы (R-) и L-варианты на разных стадиях трансформации.

Выводы. В очагах бруцеллёза северных оленей инфицированию подвержены животные всех половозрастных групп: самцы (хоры), самки (важенки), быки (кастраты) и телята с самого раннего возраста.

Бруцеллы могут локализоваться и сохранять жизнеспособность в лимфатических узлах (9 %), печени (22 %), сердце (18 %), селезёнке (28%) и половых органах (23 %).

В организме инфицированных северных оленей типичную (S-) бактериальную форму сохраняют лишь 27 % культур, остальная их часть под действием иммунных факторов макроорганизма диссоциирует в SR- и R-формы (40 %) или трансформируется в L-варианты (33 %).

Из всехкультур, выделенныхиз половыхорганов, большую часть составляли типичные^-) формы бруцелл (44 %). Сердце и печень - оптимальная среда для L-вариантов бруцелл.

Литература.

1. Беляков В.Д. Каминский Г.Д. Управляемые инфекции и саморегуляция паразитарных систем//ЖМЭИ. - 1986. - №11. - С. 8-12

2. Вашкевич Р. Б. Возникновение, развитие и угасание бруцеллезной инфекции у северных оленей // Тр. НИИСХ Северного Зауралья. - 1975 (1976). - Вып.18. - С. 126-131

3. Галузо И.Г., Ременцова М.М. Резервуар бруцеллезной инфекции в природе // Ветеринария. - 1960. - №2. - С. 12.

4. Голосов И.М., Забродин В.А. Бруцеллез северных оленей // Ветеринария. - 1959. - №11. - С. 23.

5. Роль пастушьих и охотничьих собак в резервации возбудителя бруцеллеза северных оленей на территории природных очагов инфекции на Ямале / Гордиенко Л.Н., Куликова Е.В., Калинина Е.С., Чабанов Ю.П. // Ветеринария сельскохозяйственных животных. -2007. - № 9. - С. 29-31

6. Дрожевкина М.С. Изменчивость бруцеллезных культур под влиянием бактериофага // Тр. Ростов-на-Дону Противочумного института. - Астрахань, 1956. - т.3. - С.23-27.

7. Забродин В.А. Бруцеллез оленей и некоторых диких животных на Енисейском Севере: Автореф. дис. д.б.н. / НИИСХ Крайнего Севера. - Л., 1973. - 33 с.

8. ЗаярнюкВ.П. Восприимчивость и устойчивость молодняка северных оленей кбруцеллезу: Автореф. дис. к.в.н.-Улан-Удэ, 1971. - 21 с.

9. Карепин Е.Ю., Гордиенко Л.Н. Выявление латентных форм бруцеллеза у северных оленей иммуноферментным методом// Проблемы стабилизации и развития сельскохозяйственного производства Сибири, Монголии и Казахстана в XXI веке/ СО РАСХН. - Новосибирск, 1999. - С. 193-194.

10. Кошкин Е.Н. Изменчивость бруцелл в организме свинок. В книге: Инфекционные и незаразные болезни сельскохозяйственных животных в Казахстане.- Алма-Ата, 1993. - С. 63-67

11. Кулаков Ю.К., Желудков М.М. Молекулярные основы вирулентности бруцелл//Молекулярно генетическая микробиология, вирусология. - 2001. - №4. - С. 8-12

12. Пинигин А.Ф. Бруцеллез северных оленей. -Иркутск, 1971.-199 с.

13. Некоторые факторы естественной резистентности при бруцеллезе / Сафронова В.М., Локтев Н.А., Ляпустина Л.В., Логвиненко О.В.//ЖМЭИ. - 1991. -№10. - С. 64

14. Слепцов Е.С. Роль быков-производителей (хоров) в эпизоотологии бруцеллёза северных оленей // Болезни домашних и диких животных Крайнего Севера. - Новосибирск, 1987. - С.85 - 87

15. Триленко П.А. Изменчивость бруцелл под влиянием фагов. Сообщение 1-е. // Трудыi ЛВИ. Вып. XXVIII, 1967. - С. 141-151

16. Хоч А.А. О бруцеллезной инфекции диких северных оленей в Якутии //Тр. Якутского НИИСХ. - 1975. - Вып.14. - С.143-145

б)

Рис.2. Агглютинабельные свойства бруцелл, изолированных от северных оленей: а) - диссоциированных штаммов; б) - 1_-вариантов;  - Я,  - БЯ,  - 1_, в - БЯ1_.

Большая часть диссоциантов (63 %) и 1_-вариантов (80 %) частично сохраняла ригидную клеточную стенку с активными (Б- и БЯ-) детерминантами.

THE SURVIVAL OF TYPICAL FORMS AND L-VARIANTS OF BRUCELLA IN ORGANS AND TISSUES OF REINDEER IN THE NIDUS OF INFECTION

L.N. Gordienko

Summary. There was studied the ability of Brucella to take root in the morphological structures of macroorganism. There was showed the optimal habitat for the typical and modified forms of Brucella in the organs of reindeer Key words: reindeer, infection, Brucella, localization, organs.

72 _____________________________________________________

' Достижения науки и техники АПК, №12-2010