3D-FACS-АНАЛИЗ-ADCC NK-КЛЕТОК

1. Способ оценки in vitro эффекторной функции антитела, заключающийся в том, что инкубируют трехмерный сфероид или агрегат, который содержит опухолевые клетки и естественные клетки-киллеры, с антителом.
2. Способ по п.1, заключающийся в том, что осуществляют следующие стадии, на которых:
а) смешивают естественные клетки-киллеры и опухолевые клетки,
4
б) добавляют примерно по 10 клеток на 200 мкл в лунки многолуночного планшета,
в) центрифугируют многолуночный планшет и тем самым индуцируют образование трехмерного сфероида или агрегата,
г) добавляют антитело в лунки многолуночного планшета,
д) инкубируют многолуночный планшет в течение промежутка времени, составляющего от примерно 20 до примерно 72 ч,
е) анализируют клетки в лунках многолуночного планшета с помощью клеточного сортера с возбуждением флуоресценции и тем самым оценивают эффекторную функцию антитела.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что естественные клетки-киллеры представляют собой человеческие естественные клетки-киллеры.
4. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что естественные клетки-киллеры и опухолевые клетки смешивают в соотношении от 10:1 до 1:10.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что соотношение составляет от 1:2 до 1:4.
6. Способ по п.2, отличающийся тем, что продолжительность инкубации составляет от примерно 20 до примерно 28 ч.
7. Способ по п.2 или 6, отличающийся тем, что центрифугирование осуществляют при 1000 об/мин в течение 10 мин.
8. Способ по п.2 или 6, отличающийся тем, что опухолевая клетка представляет собой клетку лимфомы.
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что клетка лимфомы представляет собой Raji-клетку или SU-DHL4-клетку, или Z138-клетку.
10. Способ по п.2 или 6, отличающийся тем, что антитело добавляют в концентрации от 15 до 0,1 мкг/мл.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что антитело добавляют в концентрации от 8 до 12 мкг/мл.
12. Применение трехмерного сфероида или агрегата, который содержит опухолевые клетки и естественные клетки-киллеры, для оценки эффекторной функции комбинации множества антител с использованием множества опухолевых клеток.
13. Способ выявления in vitro антитела, обладающего эффекторной функцией, заключающийся в том, что
а) смешивают естественные клетки-киллеры и опухолевые клетки,
4
б) добавляют примерно по 10 клеток на 200 мкл в лунки многолуночного планшета,
в) центрифугируют многолуночный планшет и тем самым индуцируют образование трехмерного сфероида,
г) добавляют каждое из полученных антител в индивидуальную лунку многолуночного планшета,
д) инкубируют многолуночный планшет в течение промежутка времени, составляющего от примерно 20 до примерно 72 ч,
е) выявляют антитело, при применении которого обнаружено соотношение мертвых и жизнеспособных клеток, превышающее 1, в качестве антитела, обладающего эффекторной функцией.
14. Набор, содержащий:
а) опухолевую клетку, меченную флуоресцентным красителем,
б) выделенные естественные клетки-киллеры,
в) 96-луночный многолуночный планшет и
г) йодид пропидия.