ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГЕПАТИТА И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГЕПАТИТА
THERAPEUTIC AGENT FOR TREATING HEPATITIS, AND METHOD OF TREATING HEPATITIS

Область технического применения
Настоящее изобретение касается нового терапевтического средства для лечения заболеваний печени, содержащего в качестве активного ингредиента 2-амино-2-[4-(3-бензилоксифенилтио)-2-хлорфенил]этил-1,3-пропандиол или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат и действующее как агонист рецептора сфингозин-1-фосфата, находящего применение для лечения гепатита.
Предпосылки настоящего изобретения
Одно из нарушений функции печени - гепатит может быть вызван вирусами, алкоголем, а также лекарственными средствами. Среди гепатитов различной этиологии наиболее обычным является вирусный гепатит. Вирусный гепатит вызывают вирусы, инфицирующие печень. В частности, известно, что гепатит В и гепатит С приводят не только к острой печеночной недостаточности, но со значительно более высокими скоростями - к циррозу и раку печени (непатентные документы 1 и 2).
В Японии более чем 40000 смертей ежегодно являются результатом рака печени и гепатита печени, причем приблизительно 70% инфицировано вирусом гепатита С и приблизительно 20% - вирусом гепатита В (непатентный документ 3).
В последние годы интенсивно разрабатывались терапевтические средства для лечения гепатита В и С. Однако даже ламивудин, одно из наиболее многообещающих терапевтических средств для гепатита В, не является эффективным до такой степени, при которой вирус гепатита В (HVB) уничтожается у всех пациентов (непатентный документ 4). Несмотря на то, что введение интерферона (IFN) вызвало недавние успехи в лечении гепатита С, комбинированная терапия препаратами интерферона и рибавирина не была достаточно эффективной (непатентный документ 5). Вопреки развитию стандартных терапевтических средств многие люди, инфицированные этими вирусами продолжительное время, все еще нуждаются в лечении, поскольку стойкий гепатит может привести к циррозу печени и в конечном этапе - карциноме клеток печени.
В последнее время вирусный гепатит рассматривают как неполное иммунологическое взаимодействие хозяина с вирусом без уничтожения вируса (непатентный документ 6). В настоящее время предполагается, что указанные вирусы наносят вред клеткам печени не только путем непосредственного их повреждения, но также в результате иммунных ответов, при которых иммунные клетки хозяина (типа цитотоксических клеток Т) уничтожают и разрушают инфицированные клетки печени. Идеальным лечением вирусного гепатита, безусловно, является устранение вируса. При гепатите В (также как и при гепатите С) вирусная нагрузка необязательно является функцией серьезности воспалительного процесса.
Носители бессимптомного вирусного гепатита В, несмотря на высокую вирусную нагрузку, не имеют воспалительного процесса в печени. Если уничтожение вируса невозможно, то выбирают другой вариант, при котором у пациента, являющегося носителем бессимптомного вирусного гепатита В, вирус сохраняется, но не вызывает воспаления. Настоящее изобретение обеспечивает соединения, которые, благодаря подавлению активации Т-клеток, предотвращают развитие воспалительного процесса в печени.
Приведенные в настоящем описании производные 2-амино-1,3-пропандиола представляют собой уже описанные соединения (патентные документы 1 и 2) и известные в качестве иммунодепрессантов. Тем не менее отсутствуют исследования или сообщения, демонстрирующие использование этих соединений при заболеваниях печени или предполагающие их эффективность в подавлении воспалительного процесса в печени.
Непатентный документ 1 - Annu. Rev. Biochem. 56:651 (1987).
Непатентный документ 2 - Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6547(1990).
Непатентный документ 3 - Sogo Rinsyo, 54:449 (2005).
Непатентный документ 4 - N. Engl. J.Med., 348:848 (2003).
Непатентный документ 5 - N. Engl. J.Med., 347:975 (2002).
Непатентный документ 6 - J. Clin. Invest., 99:1472(1997).
Патентный документ 1 - WO 2003/029184, проспект.
Патентный документ 2 - WO 2003/029205, проспект.
Раскрытие настоящего изобретения
Задачи, которые должно решить настоящее изобретение
Целью настоящего изобретения является создание терапевтического средства для лечения заболеваний печени, в частности гепатита. Указанное терапевтическое средство в качестве активного ингредиента содержит агонист рецептора сфингозин-1-фосфата, в частности 2-амино-2-[4-(3-бензилоксифенилтио)-2-хлорфенил]этил-1,3-пропандиол или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат.
Средства решения указанных задач
Заявители разработали настоящее изобретение на основе полученных ими данных о том, что 2-амино-2-[4-(3-бензилоксифенилтио)-2-хлорфенил]этил-1,3-пропандиол или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат, действующее в качестве агониста рецептора сфингозин-1-фосфата, можно использовать как эффективные терапевтические средства для лечения заболеваний печени, в частности гепатита.
Согласно настоящему изобретению цели достигнуты тем, что обеспечивается терапевтическое средство для лечения гепатита, содержащее в качестве активного ингредиента 2-амино-2-[4-(3-бензилоксифенилтио)-2-хлорфенил]этил-1,3-пропандиол или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат.
Терапевтическое средство для лечения гепатита предпочтительно в качестве активного ингредиента содержит гидрохлорид 2-амино-2-[4-(3-бензилоксифенилтио)-2-хлорфенил]этил-1,3-пропандиола или его гидрат.
Изобретением также является способ лечения гепатита, который согласно изобретению заключается в том, что пациенту вводят эффективное количество терапевтического средства, содержащего в качестве активного ингредиента 2-амино-2-[4-(3-бензилоксифенилтио)-2-хлорфенил]этил-1,3-пропандиол или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат.
Наиболее предпочтительным является использование в качестве активного ингредиента гидрохлорид 2-амино-2-[4-(3-бензилоксифенилтио)-2-хлорфенил]этил-1,3-пропандиола.
Краткое описание чертежей
Фиг.1. График, показывающий эффект подавления гидрохлоридом 2-амино-2-[4-(3-бензилоксифенилтио)-2-хлорфенил]этил-1,3-пропандиола (KRP-203) индуцируемого конканавалином A (Con А) подъема уровня аланинтрансферазы (ALT) (p: PLSD тест Фишера).
Фиг.2. Микрофотография, показывающая эффект подавления KRP-203 индуцируемой конканавалином A (Con А) инфильтрации клеток воспалительного очага в печени, а также индуцируемого конканавалином А (Con А) некроза гепатоцитов (окрашивание гематоксилином-эозином, х100) (А: контроль; В: KRP-203, введенный в дозе 1 мг/кг).
+
3. Микрофотография, показывающая эффект подавления KRP-203 индуцируемой конканавалином A (Con А) инфильтрации Т-клеток CD4 в печени, а также индуцируемого конканавалином A (Con А) некроза гепатоцитов (окрашивание с использованием в качестве иммунной метки антитела в отношении CD4, х200) (А: контроль; В: KRP-203, введенный в дозе 1 мг/кг).
Лучший вариант осуществления настоящего изобретения
Заявляемое терапевтическое средство в качестве активного ингредиента содержит 2-амино-2-[4-(3-бензилоксифенилтио)-2-хлорфенил]этил-1,3-пропандиол или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат, представляющие собой новые агонисты рецептора сфингозин-1-фосфата.
Соединения по настоящему изобретению раскрываются, например, в проспектах заявок WO 2003/029184 и WO 2003/029205, и эти соединения можно получить согласно способам, описанным в этих публикациях.
Соединения по настоящему изобретению, а также их фармацевтически приемлемые соли и гидраты эффективны при лечении печени, в частности гепатита. Терапевтические средства по настоящему изобретению могут быть введены или системно, или местно, а также или орально, или парентерально. В то время как дозировочная форма соединений может меняться в зависимости от природы соединений, обычно эти соединения используют в рецептуре оральной или парентеральной дозировочных форм. В частности, для того, чтобы приготовить гранулы, порошки, таблетки, капсулы, сиропы, суппозитории, суспензии или растворы, активные ингредиенты могут быть смешаны с фармацевтически приемлемыми носителями, наполнителями, связующими или разбавителями.
В то время как клиническая доза соединений по настоящему изобретению может меняться в зависимости от назначения или в зависимости от массы тела, возраста и состояния пациентов, получающих лечение, обычно указанные соединения вводят в единичной дозе, которая составляет от 0,01 до 100 мг/пациента (более предпочтительна единичная доза, составляющая от 0,1 до 5 мг/пациента), кратность суточного введения составляет от 1 до 3 раз.
Примеры
Далее настоящее изобретение будет подробно рассмотрено со ссылкой на примеры. Несмотря на то, что в следующих примерах будет описано соединение, являющееся гидрохлоридом 2-амино-2-[4-(3-бензилоксифенилтио)-2-хлорфенил]этил-1,3-пропандиола (который здесь и далее будет называться KRP-203), однако приведенные примеры не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.
Пример 1. Эффект подавления воспаления, вызванного конканвалином А.
Мужские особи мышей BALB/C в возрасте 8-12 недель были получены от Charles River, Japan. В фосфатно-солевом буфере (ФСБ) растворили конканавалин A (Con A). 0,2 мл полученного раствора вводили внутривенно животным для получения Con А в количестве 40 мг/кг. Суспендированный в дистиллированной воде KRP-203 вводили орально в дозе, составляющей 0,1 мг/ 10 г массы тела, процесс проводили за 24 ч до введения животным Con А. Спустя 24 ч после введения Con А животных умертвили и измерили активность сыворотки трансаминазы. Для сбора печеночного инфильтрата была также проведена перфузия печени, при этом использовалось 30 мл 0,1% раствора, содержащего ЭДТК-ФСБ (Eur. J. Immunol., 17:37, 1987). Первые 2,5 мл собранного раствора отбросили в целях устранения загрязнения лимфоцитами периферической крови. Провели окрашивание собранных клеток, используя в качестве метки антитело в отношении CD4, антитело в отношении CD8, антитело в отношении CD45/B220, антитело в отношении CD11b, антитело в отношении Ly-49C, подсчет клеток проводили с помощью возбужденной флуоресценции.
+
Образцы для гистологического анализа готовили следующим образом. Печень зафиксировали в 10% формалине, внедрили в парафин и приготовили срезы. Полученные срезы были окрашены с помощью гематоксилина-эозина, после этого следили за инфильтрацией клеток. Ткань была заморожена в жидком азоте (для этого использовали Tissue Tak), в криостате приготовили срезы и зафиксировали их в ацетоне. Окраску приготовленных срезов провели с использованием иммунной метки, для этого применяли антитело мыши в отношении CD4, обработанное биотином антитело IgG крысы и стрептавидин-алекса 488, а затем следили за инфильтрацией Т-клеток CD4.
Результаты
Проводили измерение активности аланинтрансферазы в модели гепатита, индуцированного конканавалином А. Полученные результаты приведены в таблице. На фиг.1 показаны концентрации сыворотки аланинтрансферазы, измеренные спустя 24 ч после введения конканавалина А. За 24 ч до введения конканавалина А животным орально вводили гидрохлорид 2-амино-2-[4-(3-бензилоксифенилтио)-2-хлорфенил]этил-1,3-пропандиола (KRP-203). В случае, если воспаление в печени было индуцировано конканавалином А, уровень аланинтрансферазы повышался, что указывало на повреждение печени. Предварительное введение KRP-203 в дозах 0,1 мг/кг и 1 мг/кг значительно уменьшает повышение уровня аланинтрансферазы. Тенденция снижения указанного уровня наблюдалась также в группе животных, которым вводили низкую дозу KRP-203, составляющую 0,01 мг/кг.
+
+
+
+
В таблице приведены типы и количество клеток, отфильтрованных печенью. Общее количество этих клеток снижалось приблизительно на 50% в группе животных, получавших KRP-203. В этой группе, в частности, подавление инфильтрации Т-клеток CD3 и CD4 и В-клеток B220 было существенным, подавление инфильтрации Т-клеток CD8и NK-T клеток было незначительным. На инфильтрацию NK-клеток и моноцитов влияние было слабым.
Типы и количество клеток, отфильтрованных печенью
Количество клеток (× 10<sup>5</sup>)
Контроль
KRP-203 1 мг/кг
Общее количество клеток
31,8±8,4
16,3±3,5*
CD4<sup>+</sup>
2,97±0,99
0,93±0,33*
CD8<sup>+</sup>
3,92±0,96
2,53±0,64
CD3<sup>+</sup> NK-
8,24±2,30
2,29±0,53*
NK<sup>+</sup> CD3-
0,51±0,24
0,40±0,24
B220<sup>+</sup>
6,24±2,06
2,06±0,21*
CD11b<sup>+</sup>
10,72±4,36
8,47±2,75
+
На фиг.2 и 3 показаны гистологические данные печени. В печени животных, не прошедших обработку, наряду с кластерами областей некроза наблюдалась инфильтрация моноцитов и полиморфно-ядерных лейкоцитов, вызванная конканавалином А. В этой группе наблюдалось также образование вакуолей гепатоцитов (фиг.2А). В группе мышей, получавших KRP-203, никакой существенной инфильтрации моноцитов или некротических изменений не наблюдалось (фиг.2В). В контрольной группе окраска с использованием иммунной метки показала существенную инфильтрацию Т-клеток CD4 (фиг.3А), однако в группе, получавшей KRP-203, никакой инфильтрации не отмечено (фиг.3В).
Эти наблюдения показывают, что KRP-203, подавляя инфильтрации Т-клеток в печени, предотвращает начало и распространение воспалительного процесса; следовательно, это соединение можно использовать для предотвращения гепатита, а также для его лечения.
Пример 2. Пример рецептуры. Состав капсулы (одна капсула):
Соединение (KRP-203)
0,1 мг
D-Маннит
247,5 мг
Стеарат магния
2,5 мг
В частности, KRP-203 смешивают с D-маннитом. Затем в полученную смесь подмешивают стеарат магния в целях получения смешанного порошка. После этого приготовленный порошок помещают в капсулу.
Промышленная применимость
Как указывалось выше, показано, что в модели гепатита, вызванного конканавалином А, соединение по настоящему изобретению (KRP-203) предотвращает начало и распространение воспалительного процесса, это осуществляется подавлением инфильтрации и накопления Т-клеток в печени. Таким образом, заявляемые по настоящему изобретению вещества полезны в качестве терапевтических средств для лечения гепатита.