Способ определения примесных компонентов омепразола
METHOD FOR DETERMINING OMEPRAZOLE IMPURITY COMPONENTS

Изобретение относится к медицине, преимущественно к фармакологии и фармацевтической химии и может быть использовано для определения примесных компонентов омепразола.
Стандартизация фармацевтических субстанций и готовых лекарственных препаратов является важнейшей задачей фармацевтической и аналитической химий. Решение этой задачи особенно актуально в случае многочисленных воспроизведённых «дженериковых» лекарственных препаратов, относящихся зачастую к лабильным веществам. К категории последних принадлежат ингибиторы протонной помпы (ИПП) – класс фармакологически активных веществ, используемых для ингибирования продукции кислотообразования париетальными клетками желудка. По химической структуре – это производные бензимидазола. В настоящее время, в мире зарегистрировано несколько десятков дженериковых препаратов омепразола и лансопразола. Внешние «агрессивные» факторы являются инициаторами разрушения активного вещества ИПП и способствуют образованию примесных компонентов. Органические примеси могут проникать из исходных реагентов синтеза, быть промежуточными компонентами или побочными продуктами синтеза. Очевидно, что примеси могут повлиять на безопасность, а также на эффективность препарата. Поэтому высокий уровень чистоты лекарственного вещества и профиль его примесей являются важными критериями при изготовлении безопасного и эффективного препарата.
Согласно рекомендациям Европейской фармакопеи [1], лекарственные примеси свыше 0,1 % должны быть количественно охарактеризованы с помощью селективных методов. При этом, как правило, каждый производитель вынужден сам разрабатывать индивидуальный алгоритм, регламентирующий условия оценки качественных и количественных характеристик препарата. Острой проблемой анализа омепразола является сложность в обеспечении стандартами примесных компонентов. В литературе описано около 14-ти примесных компонентов характерных для омепразола. Некоторые из них представлены в таблице 1.
Таблица 1 – Примеси омепразола, регламентируемые Европейской Фармакопеей
Название
Название IUPAC
Структура
Мм
Аббревиатура примеси по ЕФ
–
5-Метокси-1Н-бензимидазол-2-тиол
<img file="00000001.jpg" he="20" wi="46" img-content="undefined" img-format="jpg" />
179,223
А
Дезметокси омепразол
2-[[(3,5-Диметилпиридин-2-ил)метил]сульфинил]-5-метокси-1Н-бензимидазол
<img file="00000002.jpg" he="26" wi="72" img-content="undefined" img-format="jpg" />
315,397
B
Омепразол сульфид(Уфипразол)
5-Метокси-2-[[(4-метокси-3,5-диметилпиридин-2-ил)метил]сульфанил]-1Н-бензимидазол
<img file="00000003.jpg" he="29" wi="75" img-content="undefined" img-format="jpg" />
316,405
С
Омепразол сульфон
5-Метокси-2-[[(4-метокси-3,5-диметилпиридин-2-ил)метил]сульфонил]-1Н-бензимидазол
<img file="00000004.jpg" he="29" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
348,403
D
Омепразола N-оксид
5-Метокси-2-[[(4-метокси-3,5-диметил-1-оксидопиридин-2-ил)метил]сульфинил]-1Н-бензимидазол
<img file="00000005.jpg" he="27" wi="69" img-content="undefined" img-format="jpg" />
348,403(332,404)
E
–
8-Метокси-1,3-диметил-12-тиоксопиридо[1',2':3,4]имидазо[1,2-a]-бензимидазол-2(12H)-он
<img file="00000006.jpg" he="22" wi="48" img-content="undefined" img-format="jpg" />
311,365
F
–
9-Метокси-1,3-диметил-12-тиоксопиридо[1',2':3,4]имидазо[1,2-a]-бензимидазол-2(12H)-он
<img file="00000007.jpg" he="21" wi="52" img-content="undefined" img-format="jpg" />
311,365
G
–
2-[(RS)-[(4-хлоро-3,5-диметилпиридин-2-ил)метил]сульфинил]-5-метокси-1H-бензимидазол
<img file="00000008.jpg" he="22" wi="55" img-content="undefined" img-format="jpg" />
348,834
H
Омепразол сульфонN-оксид
4-Метокси-2-[[(5-метокси-1H-бензимидазол-2-ил)сульфонил]метил]-3,5-диметилпиридин 1-оксид
<img file="00000009.jpg" he="23" wi="58" img-content="undefined" img-format="jpg" />
364,833
I
–
5-Метокси-2-[[(3,5-диметилпиридин-2-ил)метил]сульфанил]-1H-бензимидазол
<img file="00000010.jpg" he="22" wi="51" img-content="undefined" img-format="jpg" />
297,382
–
–
5-Метокси-2-[[(4-хлоро-3,5-диметилпиридин-2-ил)метил]сульфанил]-1H-бензимидазол
<img file="00000011.jpg" he="22" wi="55" img-content="undefined" img-format="jpg" />
332,835
–
–
5-Метокси-1,3-дигидробензимидазол-2-он
<img file="00000012.jpg" he="18" wi="34" img-content="undefined" img-format="jpg" />
164,164
–
–
2-[[(4-Метокси-3,5-диметилпиридин-2-ил)метил]сульфинил]-1H-бензимидазол
<img file="00000013.jpg" he="21" wi="50" img-content="undefined" img-format="jpg" />
315,397
–
–
5-Метокси-2-(4-метокси-3,5-диметилпиридин-2-ил)-1H-бензимидазол
<img file="00000014.jpg" he="22" wi="47" img-content="undefined" img-format="jpg" />
283,331
–
Аналитические возможности определения примесных компонентов препарата омепразол подробно рассмотрены в обзоре [2]. Методы отличает трудоемкость, в том числе при подборе соответствующих физико-химических критериев для детектирования конкретной примеси. При этом требуются дорогостоящие детекторы (например, матричный УФ-детектор) или специальные градиентные режимы детектирования со значительным расходом дорогостоящего органического растворителя. Указанные факторы обуславливают необходимость разработки чувствительного метода, позволяющего количественно оценить содержание примесных компонентов в образце омепразола.
Одним из обоснованных подходов является применение метода ВЭЖХ с амперометрическим детектированием.
Известны способы хроматографического определения примесей омепразола [2]. При этом требуется дорогостоящие детекторы (например, матричный УФ-детектор) или специальные градиентные режимы детектирования с значительным расходом дорогостоящего органического растворителя.
Техническим результатом  предлагаемого  способа  является повышение точности и экспрессности анализа при определении примесных компонентов омепразола.
Целью предлагаемого способа является разработка точного, информативного, воспроизводимого способа анализа примесных компонентов омепразола.
Существенным достоинством предлагаемого способа является значительное снижение времени, трудозатрат и аппаратурного оснащения лаборатории.
Предложен способ, при котором определяется количество примесных компонентов омепразола с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Предлагается способ определения примесных компонентов омепразола, включающий применение обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии на октодецилсиликагеле.
3
Отличием является  использованием изократического варианта элюирования при скорости потока 0,5 см/мин., в условиях подвижной фазы, состоящей из ацетонитрила-изопропанола-воды деионизированной-кислоты ортофосфорной при соотношении компонентов (35:15:45:5) и амперометрическом детектировании при 0,85 В.
3
Предлагаемый способ обладает такими существенными критериями, как: простота, быстрота и чувствительность в условиях обращенно-фазовой ВЭЖХ с амперометрическим детектированием, позволяя осуществлять количественное определение омепразола и его одиннадцати родственных соединений (примесей) с использованием хроматографической колонки с октодецилсиликагелем C18 (250×4,6 мм, 5 мкм). Разделение среди всех соединений достигнуто при изократическом варианте элюирования при скорости потока 0,5 см/мин., при использовании подвижной фазы состоящей из ацетонитрила-изопропанола-воды деионизированной-ортофосфорной кислоты при соотношении компонентов (35:15:45:5). Хроматографическое детектирование проводили при напряжении стеклоуглеродного датчика 0,85 В. Способ апробирован по критериям специфичности, линейности и воспроизводимости. Достоверность определена с помощью планирования экспериментов. Математический анализ с 95 % доверительным интервалом подтвердил, что такие параметры, как соотношение компонентов подвижной фазы А (р < 0,0001) и напряжение детектора (р < 0,0001) являются важными критическими параметрами метода.
3
3
Сущность метода заключается в следующем. Образец омепразола, растворенный в органическом растворителе (при необходимости) и, пропущенный через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм, подвергается концентрированию в условиях пониженных температур (–50 °С). Далее, образец растворяется в 1 см ацетонитрила. Указанный объем используется для инжекции в ВЭЖХ-хроматографе. Количественное определение омепразола и его одиннадцати родственных соединений (примесей) осуществляется с использованием колонки с октодецилсиликагелем C18 (250×4,6 мм, 5 мкм) при изократическом варианте элюирования при скорости потока 0,5 см/мин., при использовании подвижной фазы, состоящей из ацетонитрила-изопропанола-воды деионизированной-ортофосфорной кислоты при соотношении компонентов (35:15:45:5). Хроматографическое детектирование проводили при напряжении стеклоуглеродного датчика 0,85 В.
Таким образом, повышение точности способа достигается за счет использования обращенно-фазового варианта высокоэффективной хроматографии с амперометрическим детектированием.
Экспрессность способа заключается в том, что сокращается время на пробоподготовку и собственно хроматографический анализ.
3
3
Пример 1. Предоставленные на анализ образцы препаратов омепразола растворены в хлороформе, пропущены через фторопластовый мембранный фильтр (Amprep), сконцентрированы в условиях вакуумирования при пониженных температурах, растворены в 1 см ацетонитрила. ВЭЖХ проведена с использованием хроматографа Цвет Яуза-04 (НПО Химавтоматика) с амперометрическим детектированием на колонке Gemini (250×4,6 мм, 5 мкм) Penomenex. Вариант элюирования – изократический, скорость потока – 0,5 см/мин., подвижная фаза – ацетонитрил-изопропанол-вода деионизированная-ортофосфорная кислота, соотношение компонентов (35:15:45:5), объём инжекции – 20 мкл. Напряжение стеклоуглеродного датчика хроматографического детектирования –0,85 В.
Источники информации
1. European pharmacopoeia 5.0 – P. 2146-2148.
2. Analytical methodologies for the determination of omeprazole: An overview / M. Espinosa Bosch, A. J. Ruiz S´anchez, F. S´anchez Rojas, C. Bosch Ojeda // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2007. Vol. 44. P. 831-844.