СПОСОБ ЭКСТРАГИРОВАНИЯ ДНК ИЗ ОБРАЗЦОВ ТКАНЕЙ ОРГАНИЗМА

1. Способ для экстрагирования ДНК, включающий:
(1) способ предварительной обработки, предусматривающий:
процедуру получения фрагментов использованием целого образца твердой ткани организма, нарезанием образца или дроблением образца, и
последующую процедуру декальцинирования добавлением водного раствора этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA) к образцу, и добавление поверхностно - активного вещества к полученному водному раствору, далее включающий:
(2) способ растворения, предусматривающий:
процедуру добавления буферного раствора растворителя, который растворяет комплекс ДНК-белок в образце ткани организма (1) к этому образцу и добавление протеолитического фермента к буферному раствору для применения образца (1) для получения раствора комплекса ДНК-белок,
(3) способ экстрагирования, предусматривающий:
процедуру добавления насыщенного фенольного буфера, включающего трис(гидроксиметил)аминометана гидрохлорид, или водного раствора, содержащего натрия иодат и изопропанол, к раствору комплекса (2) для удаления белков, и затем отделение экстракта ДНК,
(4) способ очистки, предусматривающий:
последующий способ очистки ДНК посредством пропускания экстракта ДНК (3) через колонку,
где фрагменты не представляют собой порошок.
2. Способ для экстрагирования ДНК по п.1, в котором твердая ткань представляет собой зуб или кость.
3. Способ для экстрагирования ДНК по п.2, в котором процедура получения фрагментов включает:
использование целого зуба, нарезание зуба или кости на куски толщиной от 0,1 до 0,5 см, или использование гранул, по меньшей мере размером приблизительно 5 мм, полученных дроблением, для получения фрагментов, которые не содержат порошок.
4. Способ для экстрагирования ДНК по п.1, в котором водный раствор EDTA в процессе предварительной обработки содержит поверхностно-активное вещество.
5. Способ для экстрагирования ДНК по п.4, в котором поверхностно-активное вещество представляет собой ионное поверхностно-активное вещество.
6. Способ для экстрагирования ДНК по п.5, в котором ионное поверхностно-активное вещество представляет собой додецилсульфат натрия (SDS).
7. Способ для экстрагирования ДНК по п.4, в котором концентрация поверхностно-активного вещества в водном растворе EDTA составляет от 0,1 до 0,5 мас.%.
8. Способ для экстрагирования ДНК по п.1, в котором процедура декальцинации в способе предварительной обработки включает:
вымачивание образца в водном растворе EDTA при температуре от 20 до 60°С в течение от 2 ч до 2 сут.
9. Способ для экстрагирования ДНК по п.4, в котором процедура декальцинации в способе предварительной обработки включает:
вымачивание образца в водном растворе EDTA и поверхностно-активного вещества при температуре от 37 до 60°С в течение от 2 ч до 2 сут.
10. Способ для экстрагирования ДНК по п.1, в котором образец ткани организма в способе предварительной обработки предварительно очищен процедурой очистки.
11. Способ для экстрагирования ДНК по п.10, в котором процедура очистки в способе предварительной обработки включает:
промывание образца ткани организма водным раствором нейтрального детергента, водой и затем этанолом, и сушку образца.
12. Способ для экстрагирования ДНК по п.1, в котором раствор ДНК в способе для растворения получен добавлением протеолитического фермента к раствору комплекса и затем хранением раствора при температуре от 37 до 65°С в течение от 0,5 до 6 ч.
13. Способ для экстрагирования ДНК по п.1, в котором способ экстракции включает:
добавление насыщенного фенольного буфера и
отделение водной надосадочной жидкости.
14. Способ для экстрагирования ДНК по п.1, в котором колонка в способе очистки представляет собой кремниевую мембранную колонку, колонку, заполненную кремниевыми шариками или процедуру центрифугирования с использованием йодида натрия.
15. Растворы для экстрагирования ДНК, включающие:
(1-1) водный раствор, содержащий этилендиаминтетрауксусную
кислоту (EDTA) для декальцинации посредством добавления к фрагменту целого образца твердой ткани организма, фрагментам, полученным нарезанием образца или фрагментам, полученным дроблением образца,
(1-2) поверхностно-активное вещество для добавления в водный раствор для декальцинации,
(2-1) раствор буфера для растворения комплекса ДНК-белок в образце ткани организма,
(2-2) раствор протеолитического фермента для протеолиза белка и
(3) насыщенный фенольный буфер, содержащий трис(гидроксиметил)аминометана гидрохлорид, или водный раствор, включающий натрия йодид и изопропанол, для их депротеинизации.
16. Растворы по п.15, в которых поверхностно-активное вещество представляет собой ионизированное поверхностно-активное вещество.
17. Растворы по п.16, в которых ионное поверхностно-активное вещество представляет собой додецилсульфат натрия (SDS).
18. Растворы по п.15, в которых концентрация поверхностно-активного вещества в водном растворе EDTA составляет от 0,1 до 0,5 мас.%