СПОСОБ ОЦЕНКИ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА
METHOD OF ESTIMATING ANTI-INFLAMMATORY ACTIVITY OF DRUG

Изобретение относится к области фармакологии и касается лекарственных средств, обладающих противовоспалительной активностью, а именно способов оценки их противовоспалительной активности.
Показателями противовоспалительного эффекта служат антиэкссудативное, анальгезирующее и жаропонижающее действия. Известны способы оценки противовоспалительной активности препаратов онкометрическим методом, по изменению порога болевой чувствительности при контактно-тепловом раздражении, по способности исследуемых препаратов снижать температуру кожи конечности крысы над очагом воспаления. Для исследования противовоспалительной активности используют модель каррагенинового отека лапы у крыс: острую воспалительную реакцию (отек) воспроизводят субплантарным (под подошвенный или плантарный апоневноз) введением 0,1 мл 1% раствора каррагенина. Выраженность воспалительной реакции оценивают через 3 часа после индукции воспаления по изменению объема лапы (онкометрически). Исследуемые вещества вводят зондом в желудок за час до каррагенина (Рейхарт Д.В., Фисенко В.П., Хабриев Р.У. и др. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Ремедиум, 2000. С.234-241).
Данными методами сложно оценить противовоспалительную активность препаратов ввиду большого количества показателей, которые трудно интерпретировать однозначно.
Кроме этого для оценки противовоспалительной активности препаратов используются унифицированные биохимические и гематологические методы, где определяют активность воспалительного процесса по показателям крови: СОЭ, сиаловых кислот, фибриногена и содержание лейкоцитов (Рейхарт Д.В., Фисенко В.П., Хабриев Р.У. и др. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Ремедиум, 2000. С.234-241).
По биохимическим и гематологическим показателям можно косвенно судить о наличии воспалительного процесса, то есть об эффективности противовоспалительного действия исследуемого препарата, однако, данные методы не обладают достаточной точностью ввиду индивидуальных особенностей и большого «разброса» данных, а также ввиду необходимости оценки значительного числа показателей.
Техническим результатом предлагаемого изобретения является повышения точности и информативности, а также уменьшение количества регистрируемых показателей.
Сущность предлагаемого способа оценки противовоспалительной активности препарата состоит в том, что экспериментальному животному вводят исследуемый препарат, индуцируют острую воспалительную реакцию каррагенином и через 3 часа после индукции воспаления исследуют лейкограмму крови, определяют отношение суммы агранулоцитов к сумме гранулоцитов I, и при I>0,93 судят о наличии противовоспалительной активности, а при I≤0,93 - о ее отсутствии.
При любом виде воспаления изменяется качественный и количественный состав крови ее форменных элементов, возрастает количество гранулоцитов, а количество агранулоцитов может уменьшаться.
Поэтому для оценки противовоспалительной активности препаратов можно использовать данные лейкоцитарной формулы крови.
<mrow><mi>I</mi><mo>=</mo><mfrac><mrow><mstyle displaystyle="true"><mo>∑</mo><mrow><mi>а</mi><mi>г</mi><mi>р</mi><mi>а</mi><mi>н</mi><mi>у</mi><mi>л</mi><mi>о</mi><mi>ц</mi><mi>и</mi><mi>т</mi><mi>ы</mi></mrow></mstyle></mrow><mrow><mstyle displaystyle="true"><mo>∑</mo><mrow><mi>г</mi><mi>р</mi><mi>а</mi><mi>н</mi><mi>у</mi><mi>л</mi><mi>о</mi><mi>ц</mi><mi>и</mi><mi>т</mi><mi>ы</mi></mrow></mstyle></mrow></mfrac></mrow>
Способ осуществляется следующим образом. Лабораторному животному внутрижелудочно вводят препарат, противовоспалительное действие которого необходимо исследовать. Спустя час после внутрижелудочного введения препарата вводят 0,1 мл 1% раствора каррагенина субплантарно в виде водного раствора для индукции воспаления. Затем, спустя 3 часа после индукции воспаления осуществляют забор крови, для исследования лейкограммы и расчета индекса соотношения Т агранулоциты суммы агранулоцитов к сумме гранулоцитов
. При I>0,93 гранулоциты судят о наличии противовоспалительной активности у исследуемого препарата, а при I≤0,93 - противовоспалительная активность отсутствует.
Пример 1. Крысе массой 200 г внутрижелудочно вводили ацетилсалициловую кислоту (АСК) в дозе 100 мг/кг. Спустя час после введения АСК индуцировали острую воспалительную реакцию путем субплантарного введения в левую заднюю лапу 0,1 мл 1% раствора каррагенина. Спустя 3 часа после индукции воспаления осуществляли забор крови для исследования лейкограммы (нейтрофилы: палочкоядерные - 1%, сегментоядерные - 35%; эозинофилы - 1%; моноциты - 4%; лимфоциты - 49%). После этого рассчитывали соотношение количества агранулоцитов (53) к гранулоцитам (37). Таким образом, получали значение индекса противовоспалительной активности I=53/37=1,43, т.е. 1,43>0,93, следовательно, препарат обладает противовоспалительной активностью.
Пример 2. Крысе массой 206 г внутрижелудочно ввели 2 мл изотонического раствора. Спустя час индуцировали острую воспалительную реакцию путем субплантарного введения в левую заднюю лапу 0,1 мл 1% раствора каррагенина. Спустя 3 часа осуществляли забор крови для исследования лейкограммы (нейтрофилы: палочкоядерные - 1%, сегментоядерные - 51%; эозинофилы - 1%; моноциты - 4%; лимфоциты - 43%). После этого рассчитывали соотношение количества агранулоцитов (47) к гранулоцитам (53). Индекс противовоспалительной активности I=47/53=0,89, т.е. противовоспалительная активность отсутствует.
Исследование проведено на 70 крысах-самцах линии Wistar массой 160-220 г. Животные были разделены на 7 групп: интактная, контрольная и 5 опытных. Интактной группе (10 крыс) внутрижелудочно вводили 2 мл изотонического раствора без индукции воспаления. Контрольной группе (10 крыс) индуцировали воспаление без фармакологической коррекции. В 5 опытных группах по 10 крыс в каждой исследовали противовоспалительное действие следующих препаратов: ацетилсалициловая кислота (группа 1), диклофенак (группа 2), гипоксен (группа 3), метапрот (группа 4) и гесперидин (группа 5) на фоне каррагенин-индуцированного воспаления. Все исследуемые препараты вводились внутрижелудочно в дозах: ацетилсалициловая кислота - 100 мг/кг, диклофенак - 8 мг/кг, гипоксен, метапрот и гесперидин - 50 мг/кг за час до индукции воспаления. Во всех группах измеряли объем задней левой конечности дважды - до индукции воспаления и спустя 3 часа после индукции воспаления и рассчитывали прирост объема конечностей. В интактной группе воспаление не индуцировали. Острую воспалительную реакцию вызывали путем субплантарного введения 0,1 мл 1% раствора каррагенина в виде водного раствора в левую заднюю лапу крысе. После этого осуществляли забор крови у крыс всех 7 групп для последующего анализа и расчета индекса противовоспалительной активности. Подсчет общего числа лейкоцитов проводили стандартным методом в камере Горяева. В таблице представлены средние показатели индекса противовоспалительной активности и прироста объема конечности контрольной и опытных групп животных.
Из таблицы видно, что при наличии воспаления предлагаемый индекс уменьшается, его величина зависит от тяжести патологического процесса. Для подтверждения состоятельности индекса противовоспалительной активности его значения сопоставлялись с приростом объема конечности, который измеряли онкометрическим методом. Выявлено, что имеется обратная корреляционная зависимость между предложенным индексом противовоспалительной активности и приростом объема конечности (при r=-0,96, p<0,01). При этом наблюдается наибольший прирост объема конечности при каррагениновом воспалении в группе без фармакологической коррекции, а индекс противовоспалительной активности имеет наименьшее значение. Препараты проявляли различную противовоспалительную активность, что выражалось не только изменением объема конечности, но и изменением индекса.
Таким образом, данный способ позволяет судить о наличии воспалительной реакции и, следовательно, о противовоспалительной активности исследуемого препарата. Предлагаемый способ является простым, точным и информативным, и может быть использован как в экспериментальной медицине для проверки противовоспалительных свойств препарата, так и в клинических условиях для контроля проводимой терапии воспалительных процессов.
Способ оценки противовоспалительной активности препарата
Таблица
Группа животных, n=10
Индекс противовоспалительной активности, усл. ед.
Прирост объема конечности, мл
Интактная группа
3,07±0,11
0,01±0,001
Контрольная группа
0,95±0,02
1,06±0,04
АСК
1,55±0,03
0,38±0,02
Диклофенак
1,99±0,02
0,15±0,01
Гипоксен
1,29±0,01
0,71±0,01
Метапрот
1,16±0,02
0,82±0,02
Гесперидин
0,97±0,03
0,97±0,02