ПОВЫШЕНИЕ ВЫХОДА ВИРУСОПОДОБНЫХ ЧАСТИЦ В РАСТЕНИЯХ

1. Способ продуцирования вирусоподобной частицы (VLP) в растении, включающий:
а) введение первой нуклеиновой кислоты, содержащей первую регуляторную область, являющуюся активной в растении и функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей белок гемагглютинин (НА) вируса гриппа, выбранный из группы, состоящей из В и H3 в растение или в часть растения,
б) введение второй нуклеиновой кислоты, включающей вторую регуляторную область, являющуюся активной в растении и функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей белок протонного канала,
в) инкубацию растения или части растения в условиях, которые способствуют экспрессии нуклеиновых кислот, посредством чего продуцируя VLP.
2. Способ по п. 1, в котором белок протонного канала выбран из М2 или ВМ2.
3. Способ по п. 1, в котором белок протонного канала содержит сигнатурную последовательность протонного канала HXXXW.
4. Способ по п. 1, в котором одна или более протеолитических петель белка НА вируса гриппа делетированы.
5. Способ по п. 1, в котором белок НА вируса гриппа В представляет собой белок вируса гриппа штамма B/Brisbane/60/2008, B/Malaysia/2506/2004 или B/Wisconsin/1/2010.
6. Способ по п. 5, в котором одна или более протеолитических петель белка НА вируса гриппа В делетированы.
7. Способ по п. 9, в котором белок НЗ вируса гриппа происходит из вируса гриппа штамма A/Perth/16/2009 или A/Victoria/361/2011.
8. Способ по п. 1, в котором нуклеотидная последовательность, кодирующая белок гемагглютинин (НА) вируса гриппа, по меньшей мере на 70% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO:51 и SEQIDNO:61.
9. Способ по п. 1, в котором последовательность белка гемагглютинина (НА) вируса гриппа является по меньшей мере одной из последовательностей, представленных SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:54 и SEQ ID NO:64.
10. Способ по п. 1, в котором нуклеотидная последовательность, кодирующая белок гемагглютинин (НА) вируса гриппа, по меньшей мере на 70% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 43 и подчёркнутого участка SEQ ID NO:57.
11. Способ по п. 1, в котором последовательность белка гемагглютинина (НА) вируса гриппа является по меньшей мере одной из последовательностей, представленных SEQ ID NO:41 и SEQ ID NO:58.
12. Способ по п. 1, в котором нуклеотидная последовательность, кодирующая белок гемагглютинин (НА) вируса гриппа, по меньшей мере на 70% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23 и SEQ ID NO:46.
13. Способ по п. 1, в котором последовательность белка гемагглютинина (НА) вируса гриппа является по меньшей мере одной из последовательностей, представленных SEQ ID NO:25 и SEQ ID NO:48.
14. Способ по п. 1, в котором первая нуклеотидная последовательность содержит первую регуляторную область, функционально связанную с одним или более энхансеров комовируса, нуклеотидную последовательность, кодирующую белок гемагглютинин (НА) вируса гриппа, и один или более амплификационных элементов геминивируса, а третью нуклеиновую кислоту, кодирующую репликазу геминивируса, вводят в растение или часть растения.
15. Способ по п. 14, в котором один или более энхансеров комовируса представляют собой UTR (нетранслируемую область) комовируса.
16. Способ по п. 15, в котором UTR комовируса представляет собой UTR вируса мозаики коровьего гороха (CPMV).
17. Способ по п. 14, в котором один или более амплификационных элементов геминивируса выбран из длинной межгенной области вируса желтой карликовости бобов (BeYDV LIR) и короткой межгенной области вируса желтой карликовости бобов (BeYDV SIR).
18. Способ по п. 14, в котором нуклеотидная последовательность, кодирующая белок гемагглютинин (НА) вируса гриппа, по меньшей мере на 70% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO:51 и SEQIDNO:61.
19. Способ по п. 14, в котором последовательность белка гемагглютинина (НА) вируса гриппа является по меньшей мере одной из последовательностей, представленных SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:54 и SEQ ID NO:64.
20. Способ по п. 14, в котором нуклеотидная последовательность, кодирующая белок гемагглютинин (НА) вируса гриппа, по меньшей мере на 70% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 43 и подчёркнутого участка SEQ ID NO:57.
21. Способ по п. 14, в котором последовательность белка гемагглютинина (НА) вируса гриппа является по меньшей мере одной из последовательностей, представленных SEQ ID NO:41 и SEQ ID NO:58.
22. Способ по п. 14, в котором нуклеотидная последовательность, кодирующая белок гемагглютинин (НА) вируса гриппа, по меньшей мере на 70% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23 и SEQ ID NO:46.
23. Способ по п. 14, в котором последовательность белка гемагглютинина (НА) вируса гриппа является по меньшей мере одной из последовательностей, представленных SEQ ID NO:25 и SEQ ID NO:48.
24. Способ по п. 1, в котором на стадии введения (стадия а) нуклеиновая кислота транзиторно экспрессируется в растении.
25. Способ по п. 1, в котором на стадии введения (стадия а) нуклеиновая кислота стабильно экспрессируется в растении.
26. Способ по п. 1, дополнительно включающий стадию г) сбора растения и очистки VLP.
27. Способ по п. 1, в котором VLP не содержит матриксного белка, коровьего белка или канального белка вируса.
28. Способ продуцирования вирусоподобной частицы (VLP), включающий:
а) предоставление растения или его части, содержащих первую нуклеиновую кислоту, включающую первую регуляторную область, являющуюся активной в растении и функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей белок гемагглютинин (НА) вируса гриппа, выбранный из группы, состоящей из В и Н3, и вторую нуклеиновую кислоту, включающую вторую регуляторную область, являющуюся активной в растении и функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей белок протонного канала,
б) инкубацию растения или части растения в условиях, которые способствуют экспрессии нуклеиновых кислот, посредством чего продуцируя VLP.
29. Способ по п. 28, в котором белок протонного канала выбран из М2 или ВМ2.
30. VLP, продуцируемая способом по п. 1.
31. VLP, продуцируемая способом по п. 28.
32. VLP по п. 30 или 31, дополнительно содержащая один или более липидов растительного происхождения.
33. VLP по п. 30 или 31, в которой один или более вирусных белков содержит растение -специфичные N-гликаны или модифицированные N-гликаны.
34. Композиция, содержащая эффективную для стимулирования иммунного ответа дозу VLP по п. 30 или 31 и фармацевтически приемлемый носитель.
35. Способ индукции иммунитета к инфицированию вирусом гриппа у субъекта, включающий введение VLP по п. 30 или 31.
36. Способ по п. 35, в котором VLP вводят субъекту перорально, интрадермально, интраназально, внутримышечно, интраперитонеально, внутривенно или подкожно.
37. Поликлональное антитело, полученное с применением VLP по п. 30 или 31.
38. Растительный материал, содержащий VLP, продуцированную способом по п. 1 или 28.
39. Растительный материал по п. 38 для применения с целью индукции у субъекта иммунитета к инфицированию вирусом гриппа.
40. Пищевая добавка, содержащая растительный материал по п. 39.
41. Способ по п. 1, дополнительно включающий введение третьей нуклеотидной последовательности, которая кодирует супрессор сайленсинга.
42. Способ по п. 14, дополнительно включающий введение четвёртой нуклеотидной последовательности, которая кодирует супрессор сайленсинга.
43. Способ по п.п. 41 или 42, в котором супрессор сайленсинга выбран из группы, включающей НсРrо и р19.
44. Способ по п. 1 или 28, в котором VLP не содержит белок протонного канала.
45. Способ по п. 1 или 28, в котором белок гемагглютинин (НА) вируса гриппа представляет собой белок НА0.
46. Способ по п. 2, в котором белок М2 выбран из группы, включающей белок вируса гриппа штамма A/Puerto Rico/8/1934 и штамма A/New Caledonia/20/1999.
47. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:41 и SEQ ID NO:58.
48. Нуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид по п. 47.
49. Нуклеотидная последовательность по п. 48, содержащая последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:43 и подчёркнутого участка последовательности SEQ ID NO:57.
50. Способ продуцирования вирусоподобной частицы (VLP) в растении, включающий:
а) введение первой нуклеиновой кислоты, содержащей первую регуляторную область, являющуюся активной в растении и функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей белок гемагглютинин (НА) вируса гриппа В, в растение или в часть растения, причём одна или более протеолитических петель белка гемагглютинина (НА) вируса грипп делетированы,
б) инкубацию растения или части растения в условиях, которые способствуют экспрессии нуклеиновых кислот, посредством чего продуцируют VLP.