СЛИТЫЕ БЕЛКИ И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ, ПРОФИЛАКТИКИ ИЛИ ОБЛЕГЧЕНИЯ БОЛИ

1. Одноцепочечный полипептидный слитый белок, содержащий:
a. нецитотоксическую протеазу, которая расщепляет белок экзоцитозного аппарата слияния ноцицептивного сенсорного афферента;
b. направляющий фрагмент галанина, который связывается с сайтом связывания на ноцицептивном сенсорном афференте, при этом сайт связывания подвергается эндоцитозу, встраиваясь в эндосому в ноцицептивном сенсорном афференте;
c. сайт расщепления протеазой, в котором слитый белок расщепляется протеазой, при этом сайт расщепления протеазой расположен между нецитотоксической протеазой и направляющим фрагментом галанина;
d. домен транслокации, который переносит протеазу из эндосомы через эндосомальную мембрану в цитозоль ноцицептивного сенсорного афферента, при этом направляющий фрагмент расположен между сайтом расщепления протеазой и доменом транслокации;
e. первый спейсер, расположенный между нецитотоксической протеазой и сайтом расщепления протеазой, при этом указанный первый спейсер содержит аминокислотную последовательность из 4-25 аминокислотных остатков;
f. второй спейсер, расположенный между направляющим фрагментом галанина и доменом транслокации, при этом указанный второй спейсер содержит аминокислотную последовательность из 4-35 аминокислотных остатков.
2. Слитый белок по п. 1, в котором первый спейсер содержит аминокислотную последовательность из 6-16 аминокислотных остатков.
3. Слитый белок по п. 1 или 2, в котором указанные аминокислотные остатки указанного первого спейсера выбраны из группы, состоящей из глицина, треонина, аргинина, серина, аланина, аспарагина, глутамина, аспарагиновой кислоты, пролина, глутаминовой кислоты и/или лизина.
4. Слитый белок по п. 1 или 2, в котором аминокислотные остатки первого спейсера выбраны из группы, состоящей из глицина, серина и аланина.
5. Слитый белок по п. 1 или 2, в котором первый спейсер выбран из спейсера GS5, GS10, GS15, GS18 или GS20.
6. Слитый белок по п. 1 или 2, в котором направляющий фрагмент галанина специфически связывается с рецептором GALR1, GALR2 и/или GALR3.
7. Слитый белок по п. 1 или 6, в котором направляющий фрагмент галанина содержит или состоит из аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 70% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8.
8. Слитый белок по п. 1 или 6, в котором направляющий фрагмент галанина содержит аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 7, или фрагмент, содержащий или состоящий из по меньшей мере 14 или 16 смежных аминокислотных остатков из нее, или вариантную аминокислотную последовательность указанной SEQ ID NO: 7 или указанного фрагмента, имеющую максимум 5 или 6 консервативных аминокислотных замен.
9. Слитый белок по п. 1, в котором нецитотоксическая протеаза представляет собой L-цепь клостридиального нейротоксина или IgA-протеазу.
N
10. Слитый белок по п. 1, в котором домен транслокации представляет собой домен H клостридиального нейротоксина.
11. Слитый белок по п. 1, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, 11, 13, 14, 16, 17, 19, 20, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 53, 56 и/или 59.
12. Полинуклеотидная молекула, кодирующая полипептидный слитый белок по любому из пп. 1-11.
13. Вектор экспрессии, содержащий промотор, полинуклеотидную молекулу по п. 12, при этом указанная полинуклеотидная молекула расположена ниже промотора, а терминатор расположен ниже полинуклеотидной молекулы.
14. Способ получения одноцепочечного полипептидного слитого белка, включающий:
a. трансфицирование клетки-хозяина вектором экспрессии по п. 13, и
b. культивирование указанной клетки-хозяина в условиях, способствующих экспрессии полипептидного слитого белка вектором экспрессии.
15. Способ получения нецитотоксического средства, включающий:
a. создание контакта одноцепочечного полипептидного слитого белка по любому из пп. 1-11 с протеазой, способной расщеплять сайт расщепления протеазой;
b. расщепление сайта расщепления протеазой и, таким образом, образование двухцепочечного слитого белка.
16. Нецитотоксический полипептид, полученный способом по п. 15, который представляет собой двухцепочечный полипептид и в котором:
a. первая цепь содержит нецитотоксическую протеазу, способную расщеплять белок экзоцитозного аппарата слияния ноцицептивного сенсорного афферента;
b. вторая цепь содержит ТМ галанина и домен транслокации, способный перемещать протеазу из эндосомы через эндосомальную мембрану в цитозоль ноцицептивного сенсорного афферента; и
первая и вторая цепи связаны между собой дисульфидной связью.
17. Способ лечения, профилактики или облегчения боли у индивида, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества слитого белка по любому из пп. 1-11.
18. Способ по п. 17, в котором боль представляет собой хроническую боль, выбранную из невропатической боли, воспалительной боли, головной боли, соматической боли, висцеральной боли и реперкуссионной боли.
19. Способ лечения, профилактики или облегчения боли у индивида, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества полипептида по п. 16.
20. Способ по п. 19, в котором боль представляет собой хроническую боль, выбранную из невропатической боли, воспалительной боли, головной боли, соматической боли, висцеральной боли и реперкуссионной боли.
21. Применение слитого белка по любому из пп. 1-11 или полипептида по п. 16 для лечения, профилактики или облегчения боли.
22. Применение по п. 21, где боль представляет собой хроническую боль, выбранную из невропатической боли, воспалительной боли, головной боли, соматической боли, висцеральной боли и реперкуссионной боли.