СПОСОБЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЕЙ TGF-БЕТТА В КОМПОЗИЦИИ

1. Способ определения уровня TGF-β1 в образце молока, включающий:
a. центрифугирование образца в течение примерно 15 мин при центробежной силе примерно 10000 об/мин;
b. сбор водной фазы супернатанта образца и повторение стадии (a) с использованием супернатанта стадии (a);
c. сбор водной фазы супернатанта образца со стадии (b) и повторение стадии (a) с использованием супернатанта стадии (b);
d. активацию образца добавлением кислоты и основания в соотношении образец:кислота:основание примерно 1:0,2:0,2;
e. разведение образца с использованием буферного раствора в соотношении по меньшей мере примерно 1:2 (образец:буфер) и
f. определение концентрации TGF-β1 в образце, включающее стадии:
i. иммобилизации образца, имеющего неизвестное количество TGF-β1, на твердой подложке;
ii. добавления по меньшей мере одного антитела выявления для образования комплекса с TGF-β1;
iii. добавления по меньшей мере одного ферментативного субстрата для продукции видимого сигнала и
iv. выявления видимого сигнала для определения количества TGF-β1 в образце.
2. Способ определения уровня TGF-β2 в образце молока, включающий:
a. центрифугирование образца в течение примерно 15 мин при центробежной силе примерно 10000 об/мин;
b. сбор водной фазы супернатанта образца и повторение стадии (a) с использованием супернатанта стадии (a);
c. сбор водной фазы супернатанта образца со стадии (b) и повторение стадии (a) с использованием супернатанта стадии (b);
d. активацию образца добавлением кислоты и основания в соотношении образец:кислота:основание примерно 1:0,2:0,2 и
e. определение концентрации TGF-β2 в образце, включающее стадии:
i. иммобилизации образца, имеющего неизвестное количество TGF-β2, на твердой подложке;
ii. добавления по меньшей мере одного антитела выявления для образования комплекса с TGF-β2;
iii. добавления по меньшей мере одного ферментативного субстрата для продукции видимого сигнала и
iv. выявления видимого сигнала для определения количества TGF-β2 в образце.
3. Способ определения уровня TGF-β1 в образце порошкообразного питательного продукта, причем способ включает:
a. воссоздание питательного продукта до концентрации от примерно 160 мг/мл до примерно 170 мг/мл;
b. исключение стадии центрифугирования;
c. активацию образца добавлением кислоты и основания в соотношении образец:кислота:основание примерно 1:0,2:0,2;
d. разведения образца с использованием буферного раствора в соотношении по меньшей мере примерно 1:4 (образец:буфер);
e. определения концентрации TGF-β1 в образце, включающего стадии:
i. иммобилизации образца, имеющего неизвестное количество TGF-β1 на твердой подложке;
ii. добавления по меньшей мере одного антитела выявления для образования комплекса с TGF-β1;
iii. добавления по меньшей мере одного ферментативного субстрата для продукции видимого сигнала и
iv. выявления видимого сигнала для определения количества TGF-β1 в образце.
4. Способ по п.3, где питательный продукт воссоздается до концентрации примерно 166 мг/мл.
5. Способ определения уровня TGF-β2 в образце порошкообразного питательного продукта, включающий:
a. воссоздание питательного продукта до концентрации от примерно 160 мг/мл до примерно 170 мг/мл;
b. исключение стадии центрифугирования;
c. активацию образца добавлением кислоты и основания в соотношении образец:кислота:основание примерно 1:0,2:0,2;
d. разведение образца с использованием буферного раствора в соотношении по меньшей мере примерно 1:8 (образец:буфер);
e. определение концентрации TGF-β2 в образце, включающее стадии:
i. иммобилизации образца, имеющего неизвестное количество TGF-β2, на твердой подложке;
ii. добавления по меньшей мере одного антитела выявления для образования комплекса с TGF-β2;
iii. добавления по меньшей мере одного ферментативного субстрата для продукции видимого сигнала и
iv. выявления видимого сигнала для определения количества TGF-β2 в образце.
6. Способ по п.5, где питательный продукт воссоздают до концентрации примерно 166 мг/мл.
7. Способ определения уровня TGF-β1 в образце порошкообразного неочищенного источника белка, включающий:
a. воссоздание неочищенного источника белка до концентрации от примерно 95 мг/мл до примерно 105 мг/мл;
b. исключение стадии центрифугирования;
c. активацию образца добавлением кислоты и основания в соотношении образец:кислота:основание примерно 1:0,2:0,225;
d. разведение образца с использованием буферного раствора в соотношении по меньшей мере примерно 1:2 (образец:буфер);
e. определение концентрации TGF-β1 в образце, включающее стадии:
i. иммобилизации образца, имеющего неизвестное количество TGF-β1 на твердой подложке;
ii. добавления по меньшей мере одного антитела выявления для образования комплекса с TGF-β1;
iii. добавления по меньшей мере одного ферментативного субстрата для продукции видимого сигнала и
iv. выявления видимого сигнала для определения количества TGF-β1 в образце.
8. Способ по п.7, где неочищенный источник белка воссоздают до концентрации примерно 100 мг/мл.
9. Способ определения уровня TGF-β2 в образце порошкообразного неочищенного источника белка, включающий:
a. воссоздание неочищенного источника белка до концентрации от примерно 95 мг/мл до примерно 105 мг/мл;
b. исключение стадии центрифугирования;
c. активацию образца добавлением кислоты и основания в соотношении образец:кислота:основание примерно 1:0,2:0,2;
d. разведение образца с использованием буферного раствора в соотношении по меньшей мере примерно 1:9 (образец:буфер) и
e. определение концентрации TGF-β2 в образце, включающее стадии:
i. иммобилизации образца, имеющего неизвестное количество TGF-β2 на твердой подложке;
ii. добавления по меньшей мере одного антитела выявления для образования комплекса с TGF-β2;
iii. добавления по меньшей мере одного ферментативного субстрата для продукции видимого сигнала и
iv. выявления видимого сигнала для определения количества TGF-β2 в образце.
10. Способ по п.9, где неочищенный источник белка воссоздают до концентрации примерно 100 мг/мл.
11. Способ по п.1, где образец активируется подкислением кислотой до pH от примерно 2 до примерно 3.
12. Способ по п.1, где образец активируется нейтрализацией
основанием до pH от примерно 7 до примерно 8.
13. Способ по п.1, где образец активируется подкислением кислотой до pH от примерно 2 до примерно 3 с последующей нейтрализацией основанием до pH от примерно 7 до примерно 8.
14. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию сравнения концентрации TGF-β в свином стандарте с концентрацией TGF-β в образце.
15. Способ по п.1, где антитело выявления содержит биотинилированный аффинно очищенный козий IgG.
16. Набор для измерения содержания TGF-β в молоке, питательных продуктах или сырьевых источниках белка, причем набор включает:
a. конъюгат TGF-β;
b. стандарт TGF-β;
c. разбавитель;
d. промывной буфер;
e. по меньшей мере один цветовой реагент и
f. остановочный раствор.