СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТЫ
METHOD OF DETERMINING CONTENT OF ASCORBIC ACID

Изобретение относится к области аналитической химии и биохимической клинической лабораторной диагностики и может быть использовано для определения содержания аскорбиновой кислоты в растворах, растительном и животном материале.
Существует йодометрический метод определения содержания аскорбиновой кислоты в различном материале, основанный использовании йода и крахмального индикатора. Йод реагирует с аскорбиновой кислотой и когда вся аскорбиновая кислота прореагирует, йод, находящийся в избытке, формирует иссиня-черный комплекс с крахмальным индикатором. Это указывает момент окончания титрования (1). Недостатком способа является низкая чувствительность.
Наиболее близким к предлагаемому способу является метод количественного определения содержания аскорбиновой кислоты путем титрования 0,001N раствором дихлорфенолиндофенола (2). Метод заключается в том, что аскорбиновую кислоту экстрагируют из анализируемых образцов раствором HCl или какой-либо другой кислоты. Аликвоту полученного экстракта титруют 0,001N раствором дихлорфенолиндофенола. В присутствии аскорбиновой кислоты добавляемый раствор дихлорфенолиндофенола обесцвечивается. Окончанию титрования соответствует появление слабо-розовой окраски, сохраняющейся на протяжении 30 сек.
Недостатками способа являются субъективность в определении окончания титрования и низкая чувствительность - минимальное количество определяемой аскорбиновой кислоты составляет несколько сотен нмолей.
Целью изобретения является создание способа определения содержания аскорбиновой кислоты, лишенного перечисленных недостатков.
3+
2+
2+
Поставленная цель достигается определением аскорбиновой кислоты на основе ее способности восстанавливать ионы Fe в ионы Fe. Количество образовавшихся ионов Fe эквимолярно количеству аскорбиновой кислоты в анализируемом образце и определяется по цветной реакции с феррицианидом калия (3).
Предлагаемый способ прост в осуществлении, объективен и достаточно чувствителен (минимальное количество аскорбиновой кислоты в образце - 10 нмоль).
Определение аскорбиновой кислоты в растворах, растительном и животном материале по предлагаемому способу проводят следующим образом. Аскорбиновую кислоту экстрагируют из анализируемых образцов раствором HCl или какой-либо другой кислоты. К 1 мл полученного экстракта добавляют 1 мл 3 мМ раствора феррицианида калия и 1 мл 1 мМ раствора хлорного железа. Перемешивают, переносят в кювету спектрофотометра и измеряют оптическую плотность при 693 нм. По калибровочному графику рассчитывают содержание аскорбиновой кислоты в анализируемом образце.
Пример
В две центрифужные пробирки вносят по 1 мл крови. В каждую их пробирок приливают по 3 мл 30% трихлоруксусной кислоты. Тщательно перемешивают.
Центрифугируют и собирают надосадочные жидкости. При определении содержания аскорбиновой кислоты согласно прототипу весь экстракт переносят в стеклянный стаканчик объемом 50 мл и титруют 0,001N раствором дихлорфенолиндофенола. Окончанию титрования соответствует появление слабо-розовой окраски, сохраняющейся на протяжении 30 сек. Содержание аскорбиновой кислоты в образце крови рассчитывают по объему пошедшего на титрование 0,001N раствора дихлорфенолиндофенола. При определении содержания аскорбиновой кислоты по предлагаемому способу к 1 мл полученного экстракта добавляют 1 мл 3 мМ раствора феррицианида калия и 1 мл 1 мМ раствора хлорного железа. Перемешивают, переносят в кювету спектрофотометра и измеряют оптическую плотность при 693 нм. По калибровочному графику рассчитывают содержание аскорбиновой кислоты в анализируемом образце. В таблице представлены результаты определения содержания аскорбиновой кислоты в образце крови согласно прототипу и предлагаемому способу.
Способ определения аскорбиновой кислоты
Прототип
Предлагаемый
Содержание аскорбиновой кислоты в крови
Не определяется
25 мкмоль/л
Результаты свидетельствуют, что предлагаемый способ позволяет количественно определить содержание аскорбиновой кислоты в крови в отличие от прототипа вследствие низкой чувствительности последнего.
Литература
1. Гуськова В.П., Сизова Л.С.Определение содержания витамина С йодометрическим методом // Химические методы исследования свойств сырья и продукции. Кемерово: Кемеровский технологический институт пищевой промышленности. 2007. С.29.
2. Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения витамина С. ГОСТ 24556-89. http://www.gosthelp.ru/gost/gost11266.html.
3. Попков В.А., Пузаков С.А. Общая химия. Учебник для вузов. М.: ГЭОТАР-Медиа. 2007. С.525.