СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОГЕЛЕЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ФЕРМЕНТОВ ЛИПАЗ

1. Применение гидролазы и субстрата, гидролизуемого гидролазой, для получения альгинатного гидрогеля.
2. Применение по п. 1, где фермент представляет собой эстеразу.
3. Применение по п. 2, где эстераза представляет собой липазу.
4. Применение по п. 3, где липаза представляет собой триглицеридлипазу.
3
+
5. Применение по любому из пп. 1-4, где гидролиз субстрата гидролазы приводит к образованию НО.
6. Применение по п. 5, где фермент представляет собой липазу, а субстрат представляет собой соединение формулы I:
(I),
1
2
3
1
12
где R, R и R независимо друг от друга являются одинаковыми или различными и представляют собой линейную или разветвленную, замещенную или незамещенную C-С-алкил карбонильную цепь.
1
2
3
7. Применение по п. 2, где R, R и R выбраны из группы, состоящей из метанона, этанона, ацетона, бутанона, пентанона, гексанона, гептанона, октанона, нонанона, деканона, додеканона.
1
2
3
1
3
8. Применение по п. 6, где R, R и R независимо друг от друга являются одинаковыми или различными и представляют собой C-С-алкил карбонильную цепь.
9. Применение по п. 1, где субстрат выбран из группы, состоящей из триацетина, трипропионина и трибутирина, предпочтительно трипропионина и трибутирина.
10. Применение по п. 1, где фермент и субстрат используются для получения альгинатного гидрогеля, в который внедрен биологический материал, предпочтительно сперматозоиды.
11. Способ получения альгинатного гидрогеля, включающий этап смешивания раствора, содержащего гидролазу, с раствором, содержащим субстрат, гидролизуемый гидролазой, где раствор, содержащий указанную гидролазу, или раствор, содержащий указанный субстрат, также содержит альгинат и соединение, высвобождающее двухвалентные катионы.
12. Способ по п. 11, где раствор, содержащий гидролазу, включает соединение, высвобождающее двухвалентные катионы, и альгинат.
13. Способ по п. 11, где раствор, содержащий субстрат, включает соединение, высвобождающее двухвалентные катионы, и альгинат.
14. Способ по п. 11, где гидролаза представляет собой эстеразу.
15. Способ по п. 11, где эстераза представляет собой липазу, предпочтительно триглицеридлипазу.
16. Способ по любому из пп. 11-13, где субстрат представляет собой сложный эфир органической кислоты.
17. Способ по любому из пп. 11-13 для получения альгинатного гидрогеля, включающий этап перемешивания раствора, содержащего триацилглицеридлипазу, с раствором, содержащим субстрат, гидролизуемый гидролазой, где субстрат представляет собой соединение формулы I:
(I),
1
2
3
1
12
где R, R и R независимо друг от друга являются одинаковыми или различными и представляют собой линейную или разветвленную, замещенную или незамещенную С-С-алкил карбонильную цепь, где раствор, содержащий указанную липазу, или раствор, содержащий соединение формулы I, также включает альгинат и соединение, высвобождающее двухвалентные катионы.
1
2
3
18. Способ по п. 14, где R, R и R выбраны из группы, состоящей из метанона, этанона, ацетона, бутанона, пентанона, гексанона, гептанона, октанона, нонанона, деканона, додеканона.
1
2
3
1
3
19. Способ по п. 14, где R, R и R независимо друг от друга являются одинаковыми или различными и представляют собой C-С-алкил карбонильную цепь.
20. Способ по п. 14, где субстрат выбран из группы, состоящей из триацетина, трипропионина и трибутирина, предпочтительно трипропионина и трибутирина.
2+
2+
2+
21. Способ по п. 11, где соединение, высвобождающее двухвалентные катионы, высвобождает двухвалентные катионы, выбранные из группы, состоящей из Са, Ва и Sr.
22. Способ по п. 18, где соединение, высвобождающее двухвалентные катионы, представляет собой соединение, высвобождающее кальций.
23. Способ по п. 19, где соединение, высвобождающее двухвалентные катионы, представляет собой карбонат кальция.
24. Способ по п. 11, где первый раствор также содержит объект для внедрения в альгинатный гидрогель.
25. Способ по п. 22, где объект для внедрения в альгинатный гель представляет собой биологический материал.
26. Способ по п. 23, где биологический материал представляет собой сперматозоиды.
27. Способ по п. 20, который включает этапы
i) формирования первого раствора путем разведения сперматозоидов раствором, содержащим триацилглицеридлипазу;
ii) добавления к первому раствору, полученному на этапе i), второго раствора, содержащего альгинат, соединение, высвобождающее двухвалентные катионы, и соединение формулы I:
1
2
3
1
12
где R, R и R независимо друг от друга являются одинаковыми или различными и представляют собой линейную или разветвленную, замещенную или незамещенную С-С-алкил карбонильную цепь, что инициирует гелеобразование;
iii) переноса раствора, полученного на этапе ii), в контейнер для гелеобразования альгинатного гидрогеля; и
iv) возможно, криоконсервации альгинатного гидрогеля iii).
28. Способ по п. 20, который включает этапы
i) формирования первого раствора путем разведения сперматозоидов раствором, содержащим соединение формулы I:
1
2
3
1
12
где R, R и R независимо друг от друга являются одинаковыми или различными и представляют собой линейную или разветвленную, замещенную или незамещенную С-С-алкил карбонильную цепь;
ii) добавления к раствору, полученному на этапе i), второго раствора, содержащего альгинат, соединение, высвобождающее двухвалентные катионы, и триглицеридлипазу, что инициирует гелеобразование;
iii) переноса раствора, полученного на этапе ii), в контейнер для гелеобразования альгинатного гидрогеля; и
iv) возможно, криоконсервации альгинатного гидрогеля iii).
29. Способ по любому из пп. 25 и 26, где субстрат выбран из группы, состоящей из триацетина, трипропионина и трибутирина, предпочтительно трипропионина и трибутирина.
30. Способ по любому из пп. 14 и 15, где раствор, полученный в iii) подвергают криоконсервации, и где первый и второй растворы i) и ii), соответственно, содержат криопротектор.
31. Способ по п. 14, где альгинат представляет собой альгинат, богатый гулуроновой кислотой.
32. Альгинатный гидрогель, полученный по любому из пп. 1-18.
33. Альгинатный гидрогель, содержащий
а) альгинат;
б) возможно, объект для внедрения в альгинатный гидрогель; и
в) гидролазу, используемую для получения альгинатного гидрогеля.
34. Набор альгинатного гидрогеля, включающий один контейнер, содержащий гидролазу, и второй контейнер, содержащий субстрат, гидролизуемый гидролазой.
35. Набор по п. 34, где субстрат, гидролизуемый гидролазой, представляет собой соединение формулы I:
1
2
3
1
12
где R, R и R независимо друг от друга являются одинаковыми или различными и представляют собой C-C-алкил карбонильную цепь.
36. Набор по п. 34, который также включает альгинат и соединение, высвобождающее двухвалентные катионы.
37. Набор по п. 34, включающий один контейнер с раствором, содержащим гидролазу, и второй контейнер с раствором, содержащим альгинат, соединение, высвобождающее двухвалентные катионы, и субстрат, гидролизуемый гидролазой.
38. Набор по п. 34, включающий один контейнер с раствором, содержащим субстрат, гидролизуемый гидролазой, и второй контейнер с раствором, содержащим альгинат, соединение, высвобождающее двухвалентные катионы, и гидролазу.