АНТИТЕЛА ПРОТИВ РЕЦЕПТОРА ГЛЮКАГОНА И СПОСОБЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

1. Выделенное антагонистическое антитело, которое специфически связывается с рецептором глюкагона и содержит
вариабельный участок тяжелой цепи (VH), содержащий гипервариабельный участок VH один (CDR1), VH CDR2 и VH CDR3 из VH, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 9; и SEQ ID NO: 11; и
вариабельный участок легкой цепи (VL), содержащий VL CDR1, VL CDR2 и VL CDR3 из VL, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 6; SEQ ID NO: 8; и SEQ ID NO: 10.
2. Выделенное антагонистическое антитело по п. 1, где антитело содержит VH CDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, 16 или 25, VH CDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18 и 26, VH CDR3, содержащий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 41, VL CDR1, содержащий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 40, VL CDR2, содержащий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 13, и VL CDR3, содержащий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 14.
3. Выделенное антагонистическое антитело по п. 1, где антитело содержит VH, содержащий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9 или 11, или его вариант с одним или несколькими консервативными аминокислотными замещениями в остатках, которые находятся не в CDR.
4. Выделенное антагонистическое антитело по п. 3, где антитело содержит VL, содержащий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8 или 10, или его вариант с одним или несколькими аминокислотными замещениями в аминокислотах, которые находятся не в CDR.
5. Выделенное антагонистическое антитело по п. 4, где антитело содержит VH, содержащий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 11, и VL, содержащий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 10.
6. Выделенное антагонистическое антитело по п. 5, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 87 или 88, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 89.
7. Выделенное антагонистическое антитело по п. 1, где антитело дополнительно содержит иммунологически инертную константную область.
2
2Δa
4
4Δb
4Δc
4
4Δb
4Δc
8. Выделенное антагонистическое антитело по п. 7, где антитело имеет изотип, выбранный из группы, состоящей из IgG, IgG, IgG, IgG, IgG, IgG S228P, IgG S228P и IgG S228P.
9. Выделенное антагонистическое антитело по п. 7, где константная область является гликозилированной Fc.
10. Выделенное антагонистическое антитело по п. 1, где каждый CDR антитела определен в соответствии с номенклатурой Кабат, номенклатурой Чотия, комбинацией номенклатуры Кабат и номенклатуры Чотия, номенклатурой AbM или контактным определением CDR.
11. Выделенное антагонистическое антитело, которое специфически связывается с рецептором глюкагона и связывается с эпитопом, который является таким же или частично совпадает с эпитопом на рецепторе глюкагона, распознанном антителом по п. 1.
12. Выделенное антагонистическое антитело по п. 11, где антитело распознает эпитоп на человеческом рецепторе глюкагона, содержащий аминокислотные остатки 31, 33-38, 40-42, 44-45, 48, 62 и 64 аминокислотной последовательности рецептора глюкагона, показанной в SEQ ID NO: 1.
13. Выделенное антагонистическое антитело по п. 11, где антитело распознает функциональный эпитоп на человеческом рецепторе глюкагона, содержащий аминокислотные остатки 33, 36, 38, 41, 44 и 45 аминокислотной последовательности рецептора глюкагона, показанной в SEQ ID NO: 1.
14. Выделенное антагонистическое антитело по п. 11, где антитело содержит VH CDR1, содержащий аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 17, VH CDR2, содержащий аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 93, VH CDR3, содержащий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 94, VL CDR1, содержащий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 90, VL CDR2, содержащий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 91, и VL CDR3, содержащий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 92.
15. Выделенная клеточная линия, которая продуцирует антитело по п. 1.
16. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело по п. 1.
17. Рекомбинантный экспрессионный вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 16,
18. Клетка-хозяин, содержащая экспрессионный вектор по п. 17.
19. Гибридома, способная продуцировать антитело по п. 1.
20. Способ получения антагонистического антитела против рецептора глюкагона, при этом способ включает стадии, на которых: культивируют клеточную линию, которая рекомбинантно продуцирует антитело по п. 1 в условиях, при которых антитело продуцируется; и восстанавливают антитело.
21. Способ получения антагонистического антитела против рецептора глюкагона, при этом способ включает стадии, на которых: культивируют клеточную линию, содержащую нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 87 и 88, легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 89, в условиях, при которых антитело продуцируется; и восстанавливают антитело.
22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что тяжелая и легкая цепи кодируются отдельными векторами.
23. Способ по п. 21, отличающийся тем, что тяжелая и легкая цепи кодируются одним и тем же вектором.
24. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по п. 1 и фармацевтически приемлемый носитель.
25. Набор для лечения состояния, ассоциированного с аберрантным уровнем глюкозы в крови, содержащий фармацевтическую композицию по п. 24.
26. Способ снижения уровня глюкозы в крови, улучшения толерантности к глюкозе и/или лечения или профилактики состояния, опосредованного рецептором глюкагона, у пациента, нуждающегося в этом, при этом способ включает стадию, на которой вводят пациенту эффективное количество антагонистического антитела по п. 1, так что уровень глюкозы в крови снижается, толерантность к глюкозе улучшается и/или один или более симптомов, ассоциированных с состоянием, облегчаются у пациента.
27. Способ по п. 26, отличающийся тем, что состояние выбрано из группы, состоящей из сахарного диабета 1 типа, сахарного диабета 2 типа, гипергликемии, гиперинсулинемии, нарушенной гликемии натощак, нарушенной толерантности к глюкозе, дислипидемии и метаболического синдрома.
28. Способ по п. 27, отличающийся тем, что способ дополнительно включает введение эффективного количества второго терапевтического агента.
29. Способ по п. 28, отличающийся тем, что второй терапевтический агент выбран из группы, состоящей из инсулина, ингибитора mТоr, бигуанида, сульфонилмочевины, гамма агониста PPAR, ингибитора альфа-глюкозидазы, EXENATIDE, SYMLIN, антагониста рецептора глюкагона, а также второго антагониста рецептора глюкагона.
30. Способ по п. 29, отличающийся тем, что бигуанидом является метформин.
31. Способ по п. 29, отличающийся тем, что ингибитор mTor выбран из группы, состоящей из рапамицина, сиролимуса, темсиролимуса, эверолимуса, ридофоролимуса и АТФ-конкуретноспособного mTOR киназного ингибитора (TKI).
32. Способ по п. 31, отличающийся тем, что TKI выбран из группы, состоящей из Torin 1, Torin 2, РР242, РР30, KU0063794, WAY-600, WYE-687, WYE-354, OSI-027, AZD-8055, KU-BMCL-200908069-1, Wyeth-BMCL-200908069-2, XL-388, INK-128 и AZD-2014.
33. Применение антитела по п. 1 в производстве лекарственного средства для лечения или профилактики диабета типа 1 или типа 2 или для достижения потери веса у человека.
34. Антитело по п. 1 для применения в лечении болезненного состояния, опосредованного рецептором глюкагона.