МАЗЬ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАН
OINTMENT FOR WOUND HEALING

Изобретение относится к области медицины, в частности к лечебным мазям противовоспалительного, регенерирующего, ранозаживляющего, противоожогового, антимикробного действия с биостимулирующими свойствами и может быть использовано в хирургии и травматологии, в дерматологии, в пластической хирургии и косметологии.
Известна мазь для лечения гнойных и инфицированных ран различной этиологии, содержащая пихтовое масло, прополис, хвойные смолы, спермацет и жир пингвина при массовом соотношении компонентов 3-7:0,5-1,5:0,5-1,5:1,5-2,5:7-15 соответственно (патент РФ №2058776, опубл. 27.04.96).
Недостатками данной мази являются наличие в рецептуре спермацета и жира пингвина, доступность и сырьевая база которых ограничены, а также неширокий спектр лечебного действия на организм.
Известна мазь для лечения ран, содержащая в качестве активного компонента масло семян тыквы и основу, выбранную из полиэтиленгликоля 1500 (ПЭГ-1500) и его смеси с полиэтиленгликолем 400 (ПЭГ-400), взятом в количестве до 2% от общей массы композиции, при следующем содержании компонентов, мас. %: масло семян тыквы 28-30, ПЭГ-1500 или его смесь с ПЭГ-400 70-72, содержащая дополнительно антимикробный агент, выбранный из группы, включающей димексид, фурагин, хлоргексидин или их смеси, и содержащая дополнительно тримекаин (патент РФ №2432156, опубл. 27.10.2011).
Недостатками известной мази являются недостаточный спектр терапевтической активности, необходимость для достижения антибактериального действия включения в состав мази дополнительных синтетических антимикробных агентов, а также обязательность предварительной стерилизации всех ингредиентов.
Известна мазь для лечения ран, содержащая следующие компоненты, мас. %: хвойную смолу (живицу сосны или ели) - 7,0-8,0; воск пчелиный - 6,7-7,3; масло сливочное - 6,5-7,5; масло растительное - 6,5-7,5; жир нутряной (свиной или говяжий или гусиный или овечий) - 19,0-22,0; прополис - 0,5-1,0; лук-репка - остальное (патент РФ №2139708, опубл. 20.10.99).
Одними из недостатков данной мази являются ограниченный спектр лечебного действия и наличие в рецептуре малодоступных компонентов.
Известна мазь для лечения ран, содержащая живицу, воск пчелиный, коровье масло, облепиховое масло, свиной жир и вещества растительного происхождения, выбранные из группы: экстракт алоэ, экстракт подорожника, экстракт череды, экстракт шиповника, масло зверобоя, льняное масло, масло календулы, масло репейное, масло ромашки или прополис при следующем соотношении компонентов, мас. %: живица - 5,0-15,0, воск пчелиный - 5,0-10,0, коровье масло - 10,0-20,0, облепиховое масло - 5,0-10,0, вещества растительного происхождения - 3,0-5,0, свиной жир - остальное (Патент РФ №2325175, опубл. 27.05.2011).
Недостатками известной мази являются ограниченный спектр терапевтического действия мази, известный состав не позволяет сохранить высокое качество мази длительное время.
В качестве прототипа выбрана мазь для лечения ран, содержащая измельченную травяную смесь зверобоя продырявленного, вероники лекарственной, листьев лопуха, черноголовки, листьев и стеблей белой лилии, чернокорня при массовом соотношении ингредиентов 1:1:1:1:1:0,5 соответственно, воск пчелиный, свиной жир, яичное масло, масло виноградных косточек при следующем соотношении компонентов, мас. %: измельченная травяная смесь - 20-30; желтый пчелиный воск - 10-15; яичное масло - 3-5; масло виноградных косточек - 2-3; нутряное свиное сало - остальное (патент РФ №2706333, опубл. 18.11.2019).
Недостатком данной мази является недостаточные кровеостанавливающий и ранозаживляюший эффекты, а также утяжеленная структура мази, не позволяющая использовать ее в первые часы в ране.
Проведенный патентно-информационный поиск показал, что отдельно взятые компоненты мази или их комбинации встречаются в известных лечебных мазях подобного назначения, однако лекарственные средства в форме мази для лечения ран в предложенной совокупности ингредиентов и их соотношении в составе заявляемой мази не были выявлены.
Исходя из вышеприведенного уровня техники, при создании мазей для лечения ран, проблемой является достижение многопланового действия: антисептического, неполитического, противовоспалительного, регенерирующего и ранозаживляющего, а также выраженного пролонгированного действия, что обеспечит максимальную терапевтическую эффективность с минимальными побочными реакциями.
Разработка нового состава мази для лечения ран противовоспалительного, обезболивающего и ранозаживляющего действия на основе природных компонентов за счет дополнительного введения фермента биологического происхождения, позволяет усилить ранозаживляющее и кровоостанавливающее действие мази независимо от фазы раневого процесса, и решить вышеуказанную проблему.
Технический результат заключается в создании мази с расширенным спектром лечебного воздействия, с повышенным кровеостанавливающим и ранозаживляющим эффектами, с длительным сроком хранения и удобством в применении.
Дополнительным результатом является расширение ассортимента отечественных лечебных мазей, не имеющих выраженного раздражающего побочного эффекта. Все использованные в составе мази компоненты не дефицитны, доступны и возможно предложение для промышленного производства.
Предлагаемое процентное соотношение входящих в состав мази компонентов в экспериментально подобранном, оптимальном количестве, обеспечивает заявляемый технический результат, иные соотношения используемых компонентов не позволяют достичь в короткие сроки необходимый лечебный эффект.
Предлагается, как и в прототипе, использовать в составе мази измельченную травяную смесь зверобоя продырявленного, вероники лекарственной, листьев лопуха, черноголовки, листьев и стеблей белой лилии, чернокорня при массовом соотношении ингредиентов 1:1:1:1:1:0,5 соответственно, воск пчелиный, свиной жир, яичное масло, масло виноградных косточек при следующем соотношении компонентов, мас. %: измельченная травяная смесь - 20-30; желтый пчелиный воск - 10-15; яичное масло - 3-5; масло виноградных косточек - 2-3; нутряное свиное сало - остальное
Мазь для лечения ран в заявляемом составе разработана впервые.
Сущность заявляемого изобретения заключается в том, что мазь для лечения ран, включающая измельченную травяную смесь зверобоя продырявленного, вероники лекарственной, листьев лопуха, черноголовки, листьев и стеблей белой лилии, чернокорня при массовом соотношении ингредиентов 1:1:1:1:1:0,5 соответственно, воск пчелиный, свиной жир, яичное масло, масло виноградных косточек при следующем соотношении компонентов, мас. %: измельченная травяная смесь - 20-30, желтый пчелиный воск - 10-15, яичное масло - 3-5, масло виноградных косточек - 2-3, нутряное свиное сало - остальное, согласно изобретению, дополнительно мазь содержит микробную трансглютаминазу в количестве в количестве 0,1 мас. %.
Причинно-следственная связь между совокупностью существенных признаков и обеспечиваемым изобретением техническим результатом, состоит в следующем: дополнительное введение в состав мази фермента микробной трансглютаминазы в количестве 0,1 мас. % позволяет за счет ферментации и перевода состава мази в гелеобразную форму использовать ее в процессе лечения сразу после травмирующего фактора непосредственно в ране, и как следствие, способствовать ускорению смен фаз ранозаживления, введение в состав мази микробной трансглютаминазы в оптимально подобранном количестве, обеспечивает ей роль биокатализатора, что способствует усилению кровоостанавлвающего и ранозаживляющего эффектов, а также регенерирующего и противовоспалительного эффектов мази, и использование в составе мази действующей фазы на основе смеси трав в комбинации с жировой фазой, включающей яичное масло, масло виноградных косточек, нутряное свиное сало, пчелиный воск, позволяет обеспечить высокий терапевтический эффект за счет сокращения сроков заживления ран различной этиологии без побочных явлений, а также расширить ассортимент отечественных лекарственных средств в виде мазей противовоспалительного, ранозаживляющего и антимикробного действия с доступным стабильным составом из продуктов природного происхождения, без использования химических или специальных синтетических добавок.
Преимуществом мази является природное происхождение, многоплановость действия.
Приведенные количественные интервалы соотношения компонентов, входящих в состав мази, были определены экспериментально, являются оптимальными и обеспечивают максимальную эффективность действия мази. Отклонение от предложенного соотношения компонентов нецелесообразно, так как снижается лечебный эффект мази.
В состав заявляемой мази для лечения ран входят одиннадцать компонентов.
Действующая фаза мази представляет собой измельченную травяную смесь шести трав, подобранных экспериментальным путем таким образом, чтобы усиливать действие друг друга.
В состав травяной смеси входят зверобой продырявленный (Hypericum perforatum L.), вероника лекарственная (Veronica officinalis L.), листья лопуха (Arctium lappa L.), черноголовка (Prunella vulgaris L.), листья и стебли белой лилии (Lilium candidum L.), чернокорень (Cynoglossum officinale L.).
Жировая фаза мази содержит желтый пчелиный воск, яичное масло, масло виноградных косточек и нутряное свиное сало.
Измельченную травяную смесь вводят в расплавленную жировую фазу путем тщательного размешивания до однородности, экстрагирования с последующей фильтрацией.
Мазь имеет цвет от светлого-прозрачного до светло-желтого. Мазь получают гелеобразной консистенции, однородную и без запаха. Мазь отличается хорошей вязкостью, плотностью и липкостью. Хорошо фиксируется на поверхности кожи и слизистых, гигиенична.
Показания для использования мази: глубокие раны, поверхностные раны, трофические язвы. Применяется наружно, без ограничений в период беременности и лактации. Противопоказание - повышенная индивидуальная чувствительность к отдельным компонентам препарата.
В составе заявляемой мази для лечения ран чернокорень из-за токсичности взят в меньшем в два раза количестве по сравнению с другими пятью травами. Дозировка установлена экспериментальным путем, является оптимальной для достижения необходимого терапевтического эффекта, безвредна.
Травы в заявляемом составе мази подобраны таким образом, чтобы все обладали противовоспалительным, анальгезирующим, ранозаживляющим, антимикробным, кровоостанавливающим, противоожоговым, регенерирующим, противотоксическим, тонизирующим действием и регулировали систему клеточного иммунитета.
Зверобой продырявленный (Hypericum perforatum L.) содержит токоферолы, флаваноиды, эфирное масло гиперицин, дубильные вещества, витамин Р и РР, витамины С, каротин, макро- и микроэлементы, никотиновую кислоту, азулен, провитамин А, инвертный сахар. Активные вещества: кверцетин, гиперозид, кверцитрин, изокверцитрин, рутин, гиперицинол, дубильные вещества, псевдогиперицин, каротин, смолы, эфирное масло, никотиновая и аскорбиновая кислоты, фитонциды. Токоферолы необходимы для защиты от свободных радикалов, флавоновые соединения позволяют применять зверобой как антибактериальное, антисептическое, болеутоляющее, ранозаживляющее и регенерирующее средство. Каротин способствует обновлению клеток кожи и защищает от вирусов и бактерий, дубильные вещества способствуют очищению ран от инфекции, снижают воспаление, ускоряют заживление, витамин С способствует восстановлению и обновлению тканей, поддерживает тургор кожи, препятствует перерождению клеток в атипичные. Гиперозид и рутин укрепляют стенки сосудов, фитонциды - растительные антибиотики с мощным противомикробным действием, способны подавлять золотистый стафилококк при гнойных заболеваниях кожи, абцессах, флегмонах, ожогах.
Вероника лекарственная (Veronica officinalis L.) в своем составе имеет аскорбиновую кислоту, горечи, каротин, дубильные вещества и гликозиды и является одним из лучших ранозаживляющих и дезинфицирующих средств, останавливает кровь, эффективно борется с воспалением, устраняет боль. В составе много микроэлементов, присутствуют алкалоиды, лимонная, яблочная, молочная кислоты. Используют веронику лекарственную для лечения язв, гнойников, фурункулов, ожогов, остановки кровотечения. Имеет противовоспалительное, анальгезирующее и антитоксическое действие. Каротин, дубильные вещества, аскорбиновая кислота, горечи, гликозиды, уничтожают микробы и вместе с яблочной, молочной, лимонной кислотами и микроэлементами оказывают противозудное действие, что очень важно в процессе заживления раны. В химическом составе вероники много углеводов, являющихся энергетическим потенциалом для клеток кожи, множество органических и фенолкарбоновых кислот, присутствуют стерины, сапонины, холин, кумарины, жирные масла, биофлавоноиды. Аукубин идентичный тому, который содержится в подорожнике, с антисептическим, антимикробным и противовоспалительным действием.
26
54
В составе лопуха (Arctium lappa L.) содержится протеинов более 12%, эфирных масел до 0,17%, жироподобных веществ 0,82%, дубильные и горькие вещества, полисахариды, инулин до 45%, аскорбиновая кислота. Благодаря чему поддаются лечению ожоги, обморожения, замедляется рост опухолей. Присутствуют в химическом составе лопуха фитонциды, флавоноиды, пальмитиновая, стеариновая кислоты, углевод СН, ситостерин и стигмастерин, жирное масло до 20%, состоящее из глицеридов линолиевой 58,5% и олеиновой 19,1% кислот, слизь 0,03%. Растение имеет антитоксическое, ранозаживляющее, обезболивающее, кровоостанавливающее, противовоспалительное, антибактериальное и задерживающее рост опухолей действие.
В составе черноголовки (Prunella vulgaris L.) содержатся дубильные вещества 15,3%, смолы, эфирное масло, сапонины тритерпенового ряда, витамин С, флавоноиды - 0,3%, кверцитрин - 0,5%, обуславливающие противовоспалительное, антимикробное, кровоостанавливающее действие. Присутствуют также в составе черноголовки тритерпеновые сапонины в виде урсоловой и оленоловой кислот, жирное масло в количестве 3-16%, витамин К, гиперозид, бетуриновая кислота, дельфинидин. черноголовка имеет широкий спектр антимикробного действия в отношении shigella, включая штаммы E.coli. Имеет также противогрибковый эффект, противовоспалительное и тонизирующее действие, мощное угнетающее влияние на свободно радикальное окисление, обладает противовирусной активностью. Используют траву для ранозаживления, обезболивания, лечения ожогов.
Белая лилия (Lilium candidum L.) широко используется в косметологии, так как защищает и смягчает кожу, осветляет, стабилизирует пигментацию, тонизирует и успокаивает кожу, обладает мощным противоотечным действием на фоне противовоспалительного, антимикробного, ранозаживляющего кровоостанавливающего, болеутоляющего, противоожогового, дезинфицирующего действия. Сапонины снимают воспаление, приводят к норме обменные процессы, регулируют и усиливают деятельность гормонов, способствуют синтезу кортикостероидов. Флавоноиды уменьшают хрупкость капилляров, укрепляют кровеносные сосуды, устраняют воспалительный процесс и ускоряют ранозаживление, лечат ожоги. Алкалоиды повышают свертываемость крови, уменьшают боль. Белки в составе белой лилии, регулируют и нормализуют гормональный фон, способствуют образованию клеток мышечной массы. Витамин С участвует в регуляционно-восстанавливающем процессе, обеспечивая рост и развитие ткани, повышает проницаемость капилляров, выводит свободные радикалы и токсины. Железо способствует синтезу гормонов, нейтрализует болезнетворные бактерии. Микроэлемент бор нормализует и регулирует репродукцию кожи, стабилизирует гормональный фон, дубильные вещества эффективно устраняют очаги воспаления кожи и слизистых.
Чернокорень (Cynoglossum officinale L.) содержит алкалоиды циноглоссеин, консолидин, дубильные вещества, кумарины, коричную и фумаровую кислоты, горькое вещество циноглоссоидин, холин, инулин. Фармакологические свойства чернокорня определяются его химическим составом. Чернокорень лекарственный обладает обезболивающими, противовоспалительными, кровоостанавливающими свойствами.
Жировая фаза заявляемой мази включает четыре компонента.
Нутряное свиное сало содержит линоленовую и линолевую кислоты, в которых много ненасыщенных жирных кислот с температурой плавления всего 25-30°С.Нутряное сало обладает выраженным смягчающим и заживляющим свойствами, основой его являются жирные насыщенные кислоты, их более 60%. Химический состав определяет улучшение питание тканей кожи.
Желтый пчелиный воск в составе мази повышает ее вязкость и впитываемость. Присутствие в нем триглицеридов, способствует выделению в рану окисленного кислорода, а отсюда щадящий бактерицидный эффект и заживление ткани. Пчелиный воск питает, укрепляет кожу. По своему химическому составу близок к жирам. В составе свободные спирты и различные жирные кислоты. Имеющийся в составе витамин А и каротин полезны для кожных заболеваний, задерживают рост ряда болезнетворных микроорганизмов.
В составе мази воск облегчает образование эмульсии и повышает ее стабильность, а благодаря своей природе улучшает впитываемость.
Благодаря биологически активным веществам, экстрагированным из воска пчелиного, жировой основы, мазь обладает многоплановым воздействием. Пчелиный воск выполняет также структурообразующую функцию.
Пчелиный воск в сочетании с растительным маслом способствует выделению в заживающую рану кислорода. Масло же обеспечивает бактерицидный эффект и антимикробную активность, усиливает проникновение в биоткань.
Личное масло зарекомендовало себя при ранозаживлении от ожогов, рубцов, шрамов. Липиды, содержащиеся в яичном масле по строению сходны с липидами кожи человека, довольно просто связываются друг с другом и соответственно восстанавливают природный барьер. При попадании на поверхность кожи образует двухслойную структуру. В ней нижний слой гидрофобный, а верхний гидрофильный, что помогает влаге извне лучше поступать к роговому слою кожи и не позволяет влаге испаряться изнутри, что особенно важно при ожогах. Поэтому очень важно эту теплую и влажную среду, благоприятную для размножения микроорганизмов, нейтрализовать сильной по своим свойствам травяной смесью и другими составляющими заявляемой мази.
Яичное масло стимулирует развитие молодых слоев эпидермиса, а так как в коже дополнительно задерживается влага, не образуется грубая рубцовая ткань. Этому также способствует достаточное количество жирорастворимых витаминов А, Д, Е. Это синергический природный антиоксидантный комплекс, который защищает молодые клетки и поддерживает их биологические функции, регулирует водно-солевой и электролитный обмены в клетках, способствует усвоению клетками кальция и фосфора, укрепляет стенки капилляров, за счет повышенной концентрации витаминов. Яичное масло размягчает кожу, быстро всасывается в ткани, ликвидирует кровоточащие трещины, одновременно и подсушивает рану, создавая благоприятные условия для заживления. Большое количество фосфолипидов - основной строительный материал клеточных мембран у живых организмов, основа матрикса рогового слоя, они фиксируют биологически активные вещества, обеспечивая их постепенное высвобождение и глубокое проникновение в кожу.
Масло виноградных косточек, используемое в составе заявляемой мази, получено путем холодного прессования, поэтому сохраняет важные биологически активные вещества, определяет целебные регенирирующие, антиоксидантные, цитопротекторные свойства. Масло имеет жидкую и очень легкую консистенцию, отличается большим количеством витамина Е. В нем содержится самый мощный естественный антиоксидант - процианид, регулирующий работу мембран клеток, что помогает выходу агрессивных окисленных радикалов. Ценность данного растительного масла в высоком содержании полиненасыщенных жирных кислот. Масло виноградных косточек не забивает поры, легко впитывается в кожу, придавая ей естественный здоровый вид, обладает выраженным увлажняющим действием. Стимулирует синтез коллагена, обеспечивая упругость кожи, нормализует деятельность сальных желез. Обладает масло виноградных косточек противовоспалительным, бактерицидным, вяжущим, ранозаживляющим, сильным регенерирующим на клетки кожи действием. Повышает эластичность и тургор кожи, стимулирует ток крови и лимфы в верхних слоях кожи, препятствует возникновению пигментации, полностью впитывается.
Микробная трансглютаминаза - это протеин-глютамин-гамма-глютаминтрансфераза (КФ 2.3.2.13) - распространенный в живой природе фермент, участвующий в жизненно важных биологических функциях. Микробная трансглютаминаза является биокатализатором, продуцируется бактериями и имитирует тканевую трансглютаминазу. Микробная трансглютаминаза - семейство ферментов катализирующих образование ковалентных связей между свободными аминогруппами (либо из боковых цепей лизина) и гамма - карбоксамидными группами глютамина. Ковалентные связи, образованные трансглютаминазами устойчивы к протеолизу. Микробная трансглютаминаза катализирует реакции ацильного переноса между гамма-карбоксиамидной группой пептид-связанных остатков глутамина (ацильный донор) и различными первичными аминами, в том числе ε - аминогруппой остатков лизина (ацил-акцептор), что приводит к формированию «сшивок» в молекулах белка. Это сшивание может быть как внутри, так и межмолекулярным, что в последнем случае приводит к упрочению белков каркаса. Размер частиц этого биокатализатора отвечает стандартным требованиям и оптимальный размер частиц достаточно мал, чтобы скорость диффузии не лимитировала скорость всего процесса, и в то же время достаточно велик, чтобы свести к минимуму перепад давления. Удается обеспечить необходимое качество конечного продукта несмотря на постепенную инактивацию биокатализатора.
Изобретение иллюстрируется следующим примером конкретного выполнения.
Травяную смесь готовят из наземной части зверобоя продырявленного, вероники лекарственной, черноголовки, листьев лопуха, листьев и стеблей белой лилии и чернокорня, при массовом соотношении ингредиентов 1:1:1:1:1:0,5 соответственно, измельчают и перемешивают.
Нутряное свиное сало в огнеупорной стеклянной посуде на водяной бане доводят до кипения и проваривают на малом огне в течение 7 минут, постоянно помешивая деревянной ложкой.
Далее полученную измельченную травяную смесь вводят в расплавленное нутряное свиное сало и тщательно перемешивают, томят на очень слабом огне под крышкой, помешивая в течении 60 минут.
Затем слегка охлаждают, тщательно процеживают и отжимают.
Желтый пчелиный воск расплавляют на водяной бане, смешивают с яичным маслом, тщательно перемешивая деревянной ложкой.
В расплавленную массу добавляют готовую профильтрованную травяную смесь.
Затем томят на медленном огне на водяной бане в течение 20 минут, тщательно перемешивая.
В остывшую смесь добавляют масло виноградных косточек и интенсивно перемешивают.
После чего добавляют фермент - микробную трансглютаминазу в количестве 0,1 мас. %. Капсулированная форма фермента позволяет строго соблюсти дозировку, однако, перед добавлением в состав вес перепроверяют на электронных весах. Затем полученную смесь тщательно перемешивают.
Далее полученную мазь расфасовывают.
Хранить мазь необходимо в холодильнике при температуре 25°С.
Заявляемую мазь готовят со следующим содержанием компонентов, мас. %: измельченная травяная смесь - 20-30%, желтый пчелиный воск - 10-15%, яичное масло - 3-5%, масло виноградных косточек - 2-3%, микробная трансглютаминаза - 0,1%, нутряное свиное сало - остальное.
Допустимое соотношение в травяной смеси частей 1:1:1:1:1:0,5.
Допустимое соотношение масла виноградных косточек до 50% от количества яичного масла.
Допустимое соотношение яичного масла к пчелиному воску до 30%.
Допустимое соотношение нутряного свиного сала к измельченной травяной смеси 3:1.
Допустимое соотношение микробной трансглютаминазы к 100 граммам полученной мази 0,1:100.
Данные количественные интервалы, соотношение компонентов определены экспериментально и являются оптимальными для обеспечения лечебного эффекта.
При использовании других соотношений компонентов в составе мази снижается их биологическая активность, значительно уменьшается лечебный эффект и, соответственно, не может быть достигнут ожидаемый технический результат.
Испытания заявляемой мази проводилось на простейших и двух видах лабораторных животных с экспериментальным моделированием поверхностных и глубоких ран.
При проведении экспериментальных исследований соблюдали принципы и положения Руководства по уходу и использованию лабораторных животных (US NIH, №85-23), международных правил «Guide for the Care and Use of Laboratory Animals» (2009 г.) с учетом Конвенции Совета Европы о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (Страсбург, 1986 г.).
Широкий спектр лечебного действия мази определяется компонентами входящими в ее состав мази и их свойствами.
В пользу длительного срока хранения и удобства в применении мази свидетельствует термо- и коллоидная стабильность мази.
Определяли термостабильность - устойчивость к изменению температуры и коллоидную стабильность - устойчивость к расслоению по принятой методике ГОСТ 28.
В качестве препарата сравнения использовали прототип. В таблице 1 приведены результаты термо- и коллоидной стабильности мази.
Определение осмотической активности позволяет прогнозировать уменьшение воспаления и отека при лечении.
В таблице 2 приведены показатели осмотической активности заявляемой мази и прототипа.
Культура Parametium caudatum использована в качестве биологической модели для определения острой и хронической токсичности микробной трансглютаминазы. Парамеций легко культивировать, получая цифровые показатели, их численность зависит от токсичности вещества: воздействия его на митотический аппарат и мембрану клеток. Цель: установить, при какой концентрации микробной трансглютаминазы становится токсичной для тест-объекта.
Результаты биофармацевтического метода исследования токсичности фермента. Проведенный биотест показал, что анализируемый фермент микробной трансглютаминазы не является токсичным для Paramecium caudatum, которые размножаются при всех концентрациях.
Определение острой и хронической токсичности микробной трансглютаминазы позволяет установить, при какой концентрации микробная трансглютаминаза становится токсичной для тест-объекта.
Проведенный биотест показал, что анализируемый фермент не является токсичным для Paramecium caudatum, которые размножаются при всех концентрациях.
Определение кровеостанавливающего эффекта мази - имеет место быстрая остановка кровотечения не более 1,5-2,5 минут, в сравнении с другими группами, где не менее 5 минут.
Противовоспалительное действие мази подтверждено лабораторным методом. Заявляемый состав мази предотвращает нагноение раны, способствуя заживлению первичным натяжением.
Взятие крови у мышей проводили на 1, 5 и 15 сутки после нанесения мази на раны. Кровь брали из хвоста в пробирки с антикоагулянтом ЭДТА. Исследования производили на автоматических анализаторах «Beckman Counlter Au5800» и «Actdiff 2».
*Контроль - во всех приводимых примерах группа лабораторных животных без лечения.
В таблице 3 приведены формулы крови мышей при заживлении резаных ран при использовании заявляемой мази и прототипа в 1, 5 и 15 сутки эксперимента
Показатель воспаления, очищения и регенерации в ране -иммуногистохимический (ИГХ) метод. Данное исследование позволяет идентифицировать антигенные детерминанты клеток и тканей на основании специфического взаимодействия антигена и антитела иммуногистохимический метод.
Для постановки реакции антиген-антитело в ткани методом ИГХ использовали следующие антитела.
Ki-67 ядерный маркер, показатель уровня пролиферации эпителиоцитов, CD 68 - маркер активности макрофагов, ответственных за элиминацию поврежденных тканей и участвующих в ее ремоделировании при созревании, CD 138 синдекан-1, маркер плазмоцитов - является маркером активности воспалительных процессов.
Негативная реакция CD138 может быть прогностически благоприятным признаком заживления и свидетельствует об очищении раны, отсутствии антигенной нагрузки со стороны лекарств местной терапии и инфекционных агентов в ране. Напротив, наличие в воспалительном инфильтрате CD 138+ клеток с выраженной экспрессией свидетельствует о пролонгации воспаления и тенденции к заживлению вторичным натяжением.
В таблице 4 приведено количество CD68+ клеток в коже крыс в 1 сутки эксперимента.
Количество CD68+ клеток во всех группах сопоставимо. Однако максимальные значения определяются при использовании заявляемой мази 0,1% - 43,1±1,7, что характеризует процесс очищения раны как более качественный и подтверждено гистологией ран.
В таблице 5 приведено распределение ИГХ маркеров на 3 сутки эксперимента.
На 5-7 сутки ИГХ реакции также свидетельствуют об интенсификации эпителизации и фагоцитоза, подтверждая заживление первичным натяжением.
В таблице 6 приведено распределение ИГХ маркеров на 5-7 сутки эксперимента.
В таблице 7 приведено распределение ИГХ маркеров на 10 сутки эксперимента.
Данные таблиц свидетельствуют в том числе о превентивном антибактериальном воздействии, что способствует интенсификации ранозаживления.
Визуальные наблюдения показали, что заживление поверхностных линейных ран во всех группах с применением заявляемой мази имело благоприятный характер течения и происходило по принципу заживления первичным натяжением. Уменьшение размера линейной раны в среднем на 40% от исходных значений, в контрольной группе составил 19%.
2
В таблице 8 приведена динамика площади раневой поверхности в эксперименте (см).
Оценку ранозаживляющего действия проводили по визуальным признакам развития поражения, течению раневого процесса и выживаемости животных.
Данные, приведенные в таблице 8 свидетельствуют о биостимулирующем эффекте мази и сокращении сроков заживления ран.
Мазь длительное время сохраняет высокое качество, а также удобна в применении благодаря хорошей фиксации и равномерному распределению на кожной поверхности. За счет химической реакции фермента микробной трансглютаминазы с жировой основой мази значительно облегчает ее текстуру, она приобретает гелеобразную форму, что дает возможность использовать ее уже на первом этапе ранозаживления. Заявляемый состав мази обладает гораздо более выраженным кровеостанавливающим и ранозаживляющим эффектами по сравнению с мазью-прототипом.
Заявляемую мазь можно использовать при поверхностных и глубоких ранах, трофических язвах. Применяют мазь наружно, без ограничений в период беременности и лактации. Лечение заявляемой мазью ускоряет сроки заживления ран без осложнений и побочных явлений.