СПОСОБЫ КОНСТРУИРОВАНИЯ ВЫСОКОАКТИВНЫХ Т-КЛЕТОК ДЛЯ ИММУНОТЕРАПИИ

1. Способ получения первичной (первичных) Т-клетки (Т-клеток) для иммунотерапии, включающий:
(а) получение Т-клетки из культур первичных клеток или образца крови;
(б) введение в указанную Т-клетку редкощепящих эндонуклеаз, способных селективно инактивировать за счет расщепления ДНК по меньшей мере два гена, кодирующих белки иммунных контрольных точек, и
(в) размножение указанных клеток.
2. Способ по п. 1, в которых указанные гены, кодирующие иммунные контрольные точки, выбраны из группы, состоящей из CTLA4, РРР2СА, РРР2СВ, PTPN6, PTPN22, PDCD1, CD223, HAVCR2, BTLA, CD160, TIGIT, CD96, CRTAM, LAIR1, SIGLEC7, SIGLEC9, CD244, TNFRSF10B, TNFRSF10A, CASP8, CASP10, CASP3, CASP6, CASP7, FADD, FAS, TGFBRII, TGFRBRI, SMAD2, SMAD3, SMAD4, SMAD10, SKI, SKIL, TGIF1, IL10RA, IL10RB, HMOX2, IL6R, IL6ST, EIF2AK4, CSK, PAG1, SIT, FOXP3, PRDM1, BATF, GUCY1A2, GUCY1A3, GUCY1B2 и GUCY1B3.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором указанными генами являются PD1 или CTLA-4.
4. Способ по п. 1 или 2, который включает интродукцию одной или нескольких редкощепящих эндонуклеаз в указанную клетку на стадии (а) путем электропорации РНК.
5. Способ по п. 1 или 2, в котором по меньшей мере одной указанной редкощепящей эндонуклеазой является TALE-нуклеаза.
6. Способ по п. 5, в котором по меньшей мере одна указанная TALE-нуклеаза направлена против одной из генных целевых последовательностей PD1, выбранной из SEQ ID NO: 77 и SEQ ID NO: 78.
7. Способ по п. 6, в котором по меньшей мере одна TALE-нуклеаза направлена против одной из генных целевых последовательностей CTLA-4, выбранной из SEQ ID NO: 74 и SEQ ID NO: 76.
8. Способ по любому из пп. 1, 2, 6 и 7, дополнительно включающий интродукцию в указанную Т-клетку (Т-клетки) химерного антигенного рецептора (CAR).
9. Способ по любому из пп. 1, 2, 6 и 7, в котором указанная Т-клетка (Т-клетки) на стадии (а) является(ются) производной(ными) воспалительных Т-лимфоцитов, цитотоксических Т-лимфоцитов, регуляторных Т-лимфоцитов или Т-лимфоцитов-хелперов и/или CD4+ Т-лимфоцитов и/или CD8+ Т-лимфоцитов.
10. Способ по п. 1, где указанная (указанные) Т-клетка (Т-клетки) является (являются) человеческой (человеческими) клеткой (клетками).
11. Выделенная первичная Т-клетка, которую можно получить способом по любому из пп. 1-10, или субкультура этих клеток.
12. Выделенная Т-клетка по п. 11, дополнительно включающая экзогенную полинуклеотидную последовательность, кодирующую химерный антигенный рецептор.
13. Выделенная Т-клетка по п. 11 или 12 для применения в качестве лекарственного средства.
14. Выделенная Т-клетка по п. 11 или 12 для лечения рака, вирусной инфекции или аутоиммунного расстройства.
15. Выделенная Т-клетка по п. 11 или 12 для лечения лимфомы или лейкемии.
16. Фармацевтическая композиция, включающая по меньшей мере одну выделенную Т-клетку по любому из пп. 11-15.
17. Способ лечения пациента, включающий:
(а) получение популяции модифицированных Т-клеток способом по любому из пп. 1-10, и
(б) введение указанных модифицированных Т-клеток указанному пациенту.
18. Способ по п. 17, в котором у указанного пациента диагностирован рак, вирусная инфекция или аутоиммунное расстройство.
19. Набор по крайней мере из двух полинуклеотидов, кодирующих по крайней мере первую и вторую TALE- нуклеазы, действующие против PD1 и CTLA4, которые включают аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из любой из последовательностей от SEQ ID NO: 79 по SEQ ID NO: 88.