ХИМЕРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ РЕЦЕПТОРЫ

1. Генетически модфицированное не относящееся к человеку животное, содержащее в зародышевой линии локус химерного антигенного рецептора (CAR), содержащий:
неперестроенный локус вариабельного участка, содержащий неперестроенные сегменты гена вариабельного участка иммуноглобулина (Ig); и
локус константного участка, содержащий константный участок Т-клеточного рецептора (TCR);
причем человеческие неперестроенные сегменты гена вариабельного участка Ig функционально связаны с геном константного участка TCR так, что генетически модифицированное не относящееся к человеку животное экспрессирует полипептид CAR, содержащий вариабельный домен Ig, кодируемый перестроенным геном вариабельного участка Ig, происходящим от неперестроенных сегментов гена вариабельного участка Ig, и константный домен TCR, кодируемый геном константного участка TCR.
2. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 1, у которого неперестроенные сегменты гена вариабельного участка Ig являются человеческими.
3. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 1 или 2, у которого ген константного участка TCR эндогенного для данного вида происхождения.
4. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 1 или 2, у которого ген константного участка TCR представляет собой мышиный ген константного участка TCR или крысиный ген константного участка TCR.
5. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-4, у которого неперестроенные сегменты гена вариабельного участка Ig представляют собой человеческие сегменты гена вариабельного участка тяжелой цепи Ig (IgH).
6. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-4, у которого неперестроенные сегменты гена вариабельного участка Ig представляют собой человеческие сегменты гена вариабельного участка легкой цепи Ig (IgL).
7. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 6, у которого сегменты гена вариабельного участка IgL представляют собой человеческие сегменты гена κ-цепи.
8. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 6, у которого сегменты гена вариабельного участка IgL представляют собой сегменты гена λ-цепи.
9. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-8, у которого ген константного участка TCR представляет собой ген константного участка TCRα.
10. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 9, которое не экспрессирует функциональную цепь TCRα.
11. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 9, у которого локус CAR расположен в эндогенном локусе TCRα.
12. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 9, у которого неперестроенные человеческие сегменты гена вариабельного участка Ig замещают эндогенные сегменты гена вариабельного участка TCRα.
13. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 11, у которого ген константного участка TCRα представляет собой эндогенный ген константного участка TCRα.
14. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-8, у которого ген константного участка TCR представляет собой ген константного участка TCRβ.
15. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 14, которое не экспрессирует функциональную цепь TCRβ.
16. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 14, у которого локус CAR расположен в эндогенном локусе TCRβ.
17. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 16, у которого неперестроенные человеческие сегменты гена вариабельного участка Ig замещают эндогенные сегменты гена вариабельного участка TCRβ.
18. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 16, у которого ген константного участка TCRβ представляет собой эндогенный ген константного участка TCRβ.
19. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное, содержащее в зародышевой линии первый локус CAR и второй локус CAR,
H
H
H
H
H
H
H
H
H
причем первый локус CAR содержит первый неперестроенный локус вариабельного участка, содержащий неперестроенные сегменты гена иммуноглобулина (Ig) V, D и J, и первый локус константного участка, содержащий ген константного участка Т-клеточного рецептора β(TCRβ), при этом неперестроенные сегменты гена Ig V, D и J функционально связаны с геном константного участка TCRβ так, что генетически модифицированное не относящееся к человеку животное экспрессирует первую полипептидную цепь CAR, содержащую вариабельный домен тяжелой цепи Ig, кодируемый перестроенным геном вариабельного участка тяжелой цепи, происходящим от неперестроенных сегментов гена Ig V, D и J, и константный домен TCRβ, кодируемый геном константного участка TCRβ, а
κ
κ
κ
κ
κ
κ
второй локус CAR содержит второй неперестроенный локус вариабельного участка, содержащий неперестроенные сегменты гена Ig V и J, и второй локус константного участка, содержащий ген константного участка Т-клеточного рецептора а (TCRα), при этом неперестроенные сегменты гена Ig V и J функционально связаны с геном константного участка TCRα так, что генетически модифицированное не относящееся к человеку животное экспрессирует вторую полипептидную цепь CAR, содержащую вариабельный домен к Ig, кодируемый перестроенным геном вариабельного участка κ-цепи Ig, происходящим от неперестроенных сегментов гена Ig V и J, и константный домен TCRα, кодируемый геном константного участка TCRα,
при этом генетически модифицированное не относящееся к человеку животное экспрессирует CAR, содержащий первую полипептидную цепь CAR и вторую полипептидную цепь CAR.
H
H
H
κ
κ
20. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 19, у которого сегменты гена Ig V, D и J и/или сегменты гена Ig V и J являются человеческими.
21. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 19 или 20, у которого ген константного участка TCRβ и/или ген константного участка TCRα эндогенного для данного вида происхождения.
22. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 19 или 20, у которого ген константного участка TCRβ и/или ген константного участка TCRα представляет собой мышиный ген или крысиный ген.
23. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 19-22, которое не экспрессирует функциональную цепь TCRα и/или функциональную цепь TCRβ.
24. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 19-23, у которого второй локус CAR расположен в эндогенном локусе TCRα.
κ
κ
25. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 24, у которого неперестроенные сегменты гена Ig V и J замещают эндогенные сегменты гена вариабельного участка TCRα.
26. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 24 или 25, у которого ген константного участка TCRα представляет собой эндогенный ген константного участка TCRα.
27. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 19-26, у которого первый локус CAR расположен в эндогенном локусе TCRβ.
H
H
H
28. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 27, у которого неперестроенные сегменты гена Ig V, D и J замещают эндогенные сегменты гена вариабельного участка TCRβ.
29. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 27 или 28, у которого ген константного участка TCRβ представляет собой эндогенный ген константного участка TCRβ.
30. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-29, которое экспрессирует один или более химерных полипептидов α-цепи молекулы МНС класса I, содержащих человеческий внеклеточный домен и цитоплазматический домен эндогенного для данного вида происхождения.
31. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 30, у которого один или более химерных полипептидов α-цепи молекулы класса I выбирают из группы, состоящей из HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-E, HLA-F, HLA-g, HLA-K и HLA-L.
32. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-31, которое экспрессирует человеческий полипептид β-2-микроглобулина.
33. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-32, которое экспрессирует один или более химерных полипептидов α-цепи молекулы МНС класса II, содержащих человеческий внеклеточный домен и цитоплазматический домен эндогенного для данного вида происхождения, и/или один или более химерных полипептидов β-цепи молекулы МНС класса II, содержащих человеческий внеклеточный домен и цитоплазматический домен эндогенного для данного вида происхождения.
34. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 33, у которого один или более химерных полипептидов α-цепи молекулы МНС класса II выбирают из группы, состоящей из HLA-DMA, HLA-DOA, HLA-DPA, HLA-DQA и HLA-DRA, и/или один или более химерных полипептидов β-цепи молекулы МНС класса II выбирают из группы, состоящей из HLA-DMB, HLA-DOB, HLA-DPB, HLA-DQB и HLA-DRB.
35. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-34, которое экспрессирует химерный полипептид α-цепи CD8, содержащий человеческий внеклеточный домен иммуноглобулина и цитоплазматический домен эндогенного для данного вида происхождения, и/или химерный полипептид β-цепи CD8, содержащий человеческий внеклеточный домен иммуноглобулина и цитоплазматический домен эндогенного для данного вида происхождения.
36. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-35, которое экспрессирует химерный полипептид CD4, содержащий человеческий домен иммуноглобулина D1, человеческий домен иммуноглобулина D2, человеческий домен иммуноглобулина D3, человеческий домен иммуноглобулина D4 и цитоплазматический домен эндогенного для данного вида происхождения.
37. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-36, у которого CAR обладает специфичностью связывания к комплексу пептид/молекула МНС.
38. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-37, у которого CAR экспрессирован на Т-клетках.
39. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 38, у которого Т-клетки подвергаются позитивному и негативному отбору в тимусе.
40. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-39, которое представляет собой грызуна.
41. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по п. 40, где грызун представляет собой мышь.
42. Способ получения Т-клеток, экспрессирующих CAR, специфичный к пептиду, презентированному на молекуле МНС, включающий:
(a) воздействие на генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-41 антигеном, содержащим пептид, или нуклеиновой кислотой, кодирующей антиген, содержащий пептид, таким образом, что пептид презентируется на молекуле МНС у не относящегося к человеку животного; и
(b) получение Т-клетки, экспрессирующей CAR, специфичный к пептиду, презентированному на молекуле МНС, полученной от генетически модифицированного не относящегося к человеку животного этапа (а).
43. Т-клетка, полученная в соответствии со способом по п. 42.
44. Способ получения Т-клеточной гибридомы, экспрессирующей CAR, специфичный к пептиду, презентированному на молекуле МНС, включающий:
(а) воздействие на генетически модифицированное не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-41 антигеном, содержащим пептид, или
нуклеиновой кислотой, кодирующей антиген, содержащий пептид, таким образом, что пептид презентируется на молекуле МНС у не относящегося к человеку животного;
(b) получение Т-клетки, экспрессирующей CAR, специфичный к пептиду, презентированному на молекуле МНС, полученной от генетически модифицированного не относящегося к человеку животного этапа (а); и
(c) получение Т-клеточной гибридомы из Т-клетки этапа (b).
45. Т-клеточная гибридома, полученная в соответствии со способом по п. 44.
46. Способ получения нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельный домен Ig, специфичный к пептиду, презентированному на молекуле МНС, включающий:
(a) воздействие на не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-41 антигеном, содержащим пептид, или нуклеиновой кислотой, кодирующей антиген, содержащий пептид, таким образом, что пептид презентируется на молекуле МНС у не относящегося к человеку животного;
(b) получение Т-клетки, экспрессирующей CAR, специфичный к пептиду, презентированному на молекуле МНС, полученной от генетически модифицированного не относящегося к человеку животного этапа (а); и
(c) выделение из Т-клетки нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельный домен Ig CAR.
47. Нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельный домен Ig, специфичный к пептиду, презентированному на молекуле МНС, полученная в соответствии со способом по п. 46.
48. Способ получения антитела, специфичного к пептиду, презентированному на молекуле МНС, включающий:
(а) воздействие на не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-41 антигеном, содержащим пептид, или нуклеиновой кислотой, кодирующей антиген, содержащий пептид, таким образом, что пептид презентируется на молекуле МНС у не относящегося к человеку животного;
(b) получение Т-клетки, экспрессирующей CAR, специфичный к пептиду, презентированному на молекуле МНС, полученной от генетически модифицированного не относящегося к человеку животного этапа (а);
(c) выделение из Т-клетки нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельный домен Ig CAR;
(d) создание в клетке-хозяине функциональной связи между нуклеиновыми кислотами, кодирующими вариабельный домен Ig и константный домен Ig; и
(e) культивирование клетки-хозяина в условиях, в которых клетка-хозяин экспрессирует антитело, содержащее вариабельный домен Ig и константный домен Ig.
49. Способ по п. 48, в котором константный домен Ig представляет собой человеческий константный домен Ig.
50. Антитело, специфичное к пептиду, презентированному на молекуле МНС, полученное в соответствии со способом по п. 48 или 49.
51. Способ получения человеческой клетки, экспрессирующей CAR, содержащий человеческий вариабельный домен Ig и человеческий константный домен TCR, включающий:
(a) воздействие на не относящееся к человеку животное по любому из пп. 1-41 антигеном, содержащим пептид, или нуклеиновой кислотой, кодирующей антиген, содержащий пептид, таким образом, что пептид презентируется на молекуле МНС у не относящегося к человеку животного;
(b) получение Т-клетки не относящегося к человеку животного, экспрессирующей CAR, специфичный к пептиду, презентированному на молекуле МНС, полученной от генетически модифицированного не относящегося к человеку животного этапа (а);
(c) выделение нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельный домен Ig CAR, из Т-клетки не относящегося к человеку животного; и
(d) создание функциональной связи между нуклеиновой кислотой, кодирующей вариабельный домен Ig, и нуклеиновой кислотой, кодирующей человеческий константный домен TCR, в человеческой клетке таким образом, что человеческая клетка экспрессирует CAR, содержащий вариабельный домен Ig и человеческий константный домен TCR.
52. Способ по п. 51, в котором клетка человека представляет собой Т-клетку человека.
53. Способ по п. 52, в котором человеческая Т-клетка представляет собой выделенную ex-vivo человеческую Т-клетку.
54. Человеческая клетка, экспрессирующая CAR, содержащий человеческий вариабельный домен Ig и человеческий константный домен TCR, полученная в соответствии со способом по любому из пп. 51-53.
55. Клетка, экспрессирующая CAR, полученная или получаемая от генетически модифицированного не относящегося к человеку животного по любому из пп. 1-41.
56. Клетка по п. 55, причем клетка представляет собой Т-клетку.
57. Клетка по п. 55, которая представляет собой Т-клеточную гибридому.
58. Нуклеиновая кислота, содержащая перестроенный ген вариабельного участка Ig, полученная или получаемая от генетически модифицированного не относящегося к человеку животного по любому из пп. 1-41.
59. Нуклеиновая кислота по п. 58, которая кодирует CAR.
60. Нуклеиновая кислота, содержащая перестроенный ген вариабельного участка Ig, полученная или получаемая из клетки по любому из пп. 55-57.
61. Нуклеиновая кислота по п. 60, которая кодирует CAR.
62. Нуклеиновая кислота по любому из пп. 60-61, в которой перестроенный ген вариабельного участка Ig кодирует вариабельный домен Ig, специфичный к пептиду, презентированному на молекуле МНС.
63. CAR, специфичный к пептиду, презентированному на молекуле МНС, полученный или получаемый от генетически модифицированного не относящегося к человеку животного по любому из пп. 1-41.
64. CAR, специфичный к пептиду, презентированному на молекуле МНС, полученный или получаемый из клетки по любому из пп. 55-57.
65. Не относящаяся к человеку эмбриональная стволовая (ЭС) клетка, содержащая в геноме локус химерного антигенного рецептора (CAR), содержащий:
неперестроенный локус вариабельного участка, содержащий неперестроенные сегменты гена вариабельного участка иммуноглобулина (Ig); и
локус константного участка, содержащий ген константного участка Т-клеточного рецептора (TCR);
причем неперестроенные сегменты гена вариабельного участка Ig функционально связаны с геном константного участка TCR.
66. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по п. 65, в которой неперестроенные сегменты гена вариабельного участка Ig являются человеческими.
67. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по п. 65 или 66, в которой ген константного участка TCR эндогенного для данного вида происхождения.
68. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по п. 65 или 66, в которой ген константного участка TCR представляет собой мышиный ген константного участка или крысиный ген константного участка.
69. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по любому из пп. 65-68, в которой неперестроенные сегменты гена вариабельного участка Ig представляют собой человеческие сегменты гена вариабельного участка тяжелой цепи Ig (IgH).
70. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по любому из пп. 65-68, в которой неперестроенные сегменты гена вариабельного участка Ig представляют собой человеческие сегменты гена вариабельного участка легкой цепи Ig (IgL).
71. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по п. 70, в которой сегменты гена вариабельного участка IgL представляют собой человеческие сегменты гена κ-цепи.
72. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по п. 70, в которой сегменты гена вариабельного участка IgL представляют собой сегменты гена λ-цепи.
73. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по любому из пп. 65-72, в которой ген константного участка TCR представляет собой ген константного участка TCRα.
74. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по п. 73, в которой локус CAR расположен в эндогенном локусе TCRα.
75. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по п. 74, в которой неперестроенные человеческие сегменты гена вариабельного участка Ig замещают эндогенные сегменты гена вариабельного участка TCRα.
76. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по п. 74 или 75, в которой ген константного участка TCRα представляет собой эндогенный ген константного участка TCRα.
77. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по любому из пп. 68-72, в которой ген константного участка TCR представляет собой ген константного участка TCRβ.
78. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по п. 77, в которой локус CAR расположен в эндогенном локусе TCRβ.
79. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по п. 78, в которой неперестроенные человеческие сегменты гена вариабельного участка Ig замещают эндогенные сегменты гена вариабельного участка TCRβ.
80. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по п. 78 или 79, в которой ген константного участка TCRP представляет собой эндогенный ген константного участка TCRβ.
81. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка, содержащая в геноме первый локус CAR и второй локус CAR,
H
H
H
H
H
H
причем первый локус CAR содержит первый неперестроенный локус вариабельного участка, содержащий неперестроенные сегменты гена иммуноглобулина (Ig) V, D и J, и первый локус константного участка, содержащий ген константного участка Т-клеточного рецептора β (TCRβ), при этом неперестроенные сегменты гена Ig V, D и J функционально связаны с геном константного участка TCRβ, а
κ
κ
κ
κ
второй локус CAR содержит второй неперестроенный локус вариабельного участка, содержащий неперестроенные сегменты гена Ig V и J, и второй локус константного участка, содержащий ген константного участка Т-клеточного рецептора α (TCRα), при этом неперестроенные сегменты гена Ig V и J функционально связаны с геном константного участка TCRα.
82. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по любому из пп. 65-81, которая содержит в геноме одну или более нуклеотидных последовательностей, кодирующих химерные полипептиды α-цепи молекулы МНС класса I, содержащие человеческий внеклеточный домен и цитоплазматический домен эндогенного для данного вида происхождения.
83. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по п. 82, в которой полипептид α-цепи молекулы МНС класса I выбирают из группы, состоящей из HLA-A, HLA-B, HLA-С, HLA-E, HLA-F, HLA-g, HLA-K и HLA-L.
84. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по любому из пп. 65-83, которая содержит в геноме нуклеотидную последовательность, кодирующую человеческий полипептид β-2-микроглобулина.
85. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по любому из пп. 65-84, которая содержит в геноме одну или более нуклеотидных последовательностей, кодирующих химерный полипептид α-цепи молекулы МНС класса II, содержащий человеческий внеклеточный домен и цитоплазматический домен эндогенного для данного вида происхождения, и/или одну или более нуклеотидных последовательностей, кодирующих химерный полипептид β-цепи молекулы МНС класса II, содержащий человеческий внеклеточный домен и цитоплазматический домен эндогенного для данного вида происхождения.
86. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по п. 85, в которой химерные полипептиды α-цепи молекулы МНС класса II выбирают из группы, состоящей из HLA-DMA, HLA-DOA, HLA-DPA, HLA-DQA и HLA-DRA, и/или полипептид β-цепи молекулы МНС класса II выбирают из группы, состоящей из HLA-DMB, HLA-DOB, HLA-DPB, HLA-DQB и HLA-DRB.
87. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по любому из пп. 65-86, которая содержит в геноме нуклеотидную последовательность, кодирующую химерный полипептид α-цепи CD8, содержащий человеческий внеклеточный домен иммуноглобулина и цитоплазматический домен эндогенного для данного вида происхождения, и/или нуклеотидную последовательность, кодирующую химерные полипептиды β-цепи CD8, содержащие человеческий внеклеточный домен иммуноглобулина и цитоплазматический домен эндогенного для данного вида происхождения.
88. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по любому из пп. 65-87, которая содержит в геноме нуклеотидную последовательность, кодирующую химерный полипептид CD4, содержащий человеческий домен иммуноглобулина D1, человеческий домен иммуноглобулина D2, человеческий домен иммуноглобулина D3, человеческий домен иммуноглобулина D4 и цитоплазматический домен эндогенного для данного вида происхождения.
89. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по любому из пп. 65-88, которая представляет собой ЭС-клетку грызуна.
90. Не относящаяся к человеку ЭС-клетка по п. 89, где ЭС-клетка грызуна представляет собой мышиную ЭС-клетку.
91. Способ получения генетически модифицированного не относящегося к человеку животного, которое экспрессирует CAR, включающий использование не относящейся к человеку ЭС-клетки по любому из пп. 65-90.
92. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное, созданное с использованием способа по п. 91 или получаемое по этому способу.
93. Не относящийся к человеку эмбрион, содержащий не относящуюся к человеку ЭС-клетку по любому из пп. 65-90.
94. Локус химерного антигенного рецептора (CAR), содержащий:
неперестроенный локус вариабельного участка, содержащий
неперестроенные сегменты гена вариабельного участка иммуноглобулина (Ig);и
локус константного участка, содержащий константный участок Т-клеточного
рецептора (TCR);
причем неперестроенные сегменты гена вариабельного участка Ig
функционально связаны с геном константного участка TCR
95. Локус CAR по п. 94, в котором сегменты гена вариабельного участка Ig являются человеческими.
96. Локус CAR по п. 94 или 95, в котором ген константного участка TCR представляет собой ген константного участка TCR грызуна.
97. Локус CAR по п. 96, в котором константный участок TCR грызуна представляет собой мышиный константный участок TCR.
H
H
H
H
H
H
98. Локус CAR, содержащий неперестроенный локус вариабельного участка, содержащий неперестроенные сегменты гена иммуноглобулина (Ig) V, D и J, и локус константного участка, содержащий ген константного участка Т-клеточного рецептора β (TCRβ), причем неперестроенные сегменты гена Ig V, D и J функционально связаны с геном константного участка TCRβ.
H
H
H
99. Локус CAR по п. 98, в котором сегменты гена Ig V, D и J являются человеческими.
100. Локус CAR по п. 98 или 99, в котором ген константного участка TCRβ представляет собой мышиный ген константного участка TCRβ.
K
K
κ
κ
101. Локус CAR, содержащий неперестроенный локус вариабельного участка, содержащий неперестроенные сегменты гена Ig V и J, и локус константного участка, содержащий ген константного участка Т-клеточного рецептора α (TCRα), причем неперестроенные сегменты гена Ig V и J функционально связаны с геном константного участка TCRα.
κ
κ
102. Локус CAR по п. 101, в котором сегменты гена Ig V и J являются человеческими.
103. Локус CAR по п. 101 или 102, в котором ген константного участка TCRα представляет собой мышиный ген константного участка TCRα.
104. Химерный антигенный рецептор (CAR), содержащий первый полипептид CAR, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи Ig и константный домен TCRβ, и второй полипептид CAR, содержащий вариабельный домен легкой цепи Ig
и константный домен TCRα, причем CAR обладает специфичностью связывания к комплексу пептид/молекула МНС.
105. CAR по п. 104, в котором вариабельный домен легкой цепи Ig представляет собой вариабельный домен κ-цепи Ig.
106. CAR по п. 104, в котором вариабельный домен легкой цепи Ig представляет собой вариабельный домен λ-цепи Ig.
107. CAR по любому из пп. 104-105, в котором вариабельный домен тяжелой цепи Ig и вариабельный домен легкой цепи Ig представляют собой человеческие вариабельные домены Ig.
108. Химерный антигенный рецептор (CAR), содержащий первый полипептид CAR, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи Ig и константный домен TCRα, и второй полипептид CAR, содержащий вариабельный домен легкой цепи Ig и константный домен TCRβ, причем CAR обладает специфичностью связывания к комплексу пептид/молекула МНС.
109. CAR по п. 108, в котором вариабельный домен легкой цепи Ig представляет собой вариабельный домен κ-цепи Ig.
110. CAR по п. 108, в котором вариабельный домен легкой цепи Ig представляет собой вариабельный домен λ-цепи Ig.
111. CAR по любому из пп. 108-110, в котором вариабельный домен тяжелой цепи Ig и вариабельный домен легкой цепи Ig представляют собой человеческие вариабельные домены Ig.
112. Клетка, экспрессирующая CAR по любому из пп. 104-111.
113. Клетка по п. 112, которая представляет собой Т-клетку.
114. Способ индукции иммунного ответа на комплекс пептид/молекула МНС у субъекта, включающий введение субъекту человеческой Т-клетки, экспрессирующей химерный антигенный рецептор (CAR), содержащий первый полипептид CAR, содержащий человеческий вариабельный домен тяжелой цепи Ig и человеческий константный домен TCRβ, и второй полипептид CAR, содержащий человеческий вариабельный домен легкой цепи Ig и человеческий константный домен TCRα, причем CAR обладает специфичностью связывания к комплексу пептид/молекула МНС.
115. Композиция нуклеиновых кислот, содержащая первую нуклеотидную последовательность, кодирующую первый полипептид CAR, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи Ig и константный домен TCRβ, и вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую второй полипептид CAR, содержащий вариабельный домен легкой цепи Ig и константный домен TCRα, причем CAR, содержащий первый полипептид CAR и второй полипептид CAR, обладает специфичностью связывания к комплексу пептид/молекула МНС.
116. Способ получения не относящегося к человеку животного, включающий генетическую модификацию, включающую внедрение методами генной инженерии в зародышевую линию не относящегося к человеку животного локуса химерного антигенного рецептора (CAR), содержащего:
неперестроенный локус вариабельного участка, содержащий неперестроенные сегменты гена вариабельного участка иммуноглобулина (Ig); и
локус константного участка, содержащий константный участок Т-клеточного рецептора (TCR);
причем человеческие неперестроенные сегменты гена вариабельного участка Ig функционально связаны с геном константного участка TCR так, что генетически модифицированное не относящееся к человеку животное экспрессирует полипептид CAR, содержащий вариабельный домен Ig, кодируемый перестроенным геном вариабельного участка Ig, происходящим от неперестроенных сегментов гена вариабельного участка Ig, и константный домен TCR, кодируемый геном константного участка TCR.
117. Способ по п. 116, в котором неперестроенные сегменты гена вариабельного участка Ig являются человеческими.
118. Способ по п. 116 или 117, в котором ген константного участка TCR эндогенного для данного вида происхождения.
119. Способ по п. 116 или 117, в котором ген константного участка TCR представляет собой мышиный ген константного участка TCR или крысиный ген константного участка TCR.
120. Способ по любому из пп. 116-119, в котором неперестроенные сегменты гена вариабельного участка Ig представляют собой человеческие сегменты гена вариабельного участка тяжелой цепи Ig (IgH).
121. Способ по любому из пп. 116-119, в котором неперестроенные сегменты гена вариабельного участка Ig представляют собой человеческие сегменты гена вариабельного участка легкой цепи Ig (IgL).
122. Способ по п. 121, в котором сегменты гена вариабельного участка IgL представляют собой человеческие сегменты гена κ-цепи.
123. Способ по п. 121, в котором сегменты гена вариабельного участка IgL представляют собой сегменты гена λ-цепи.
124. Способ по любому из пп. 116-123, в котором ген константного участка TCR представляет собой ген константного участка TCRα.
125. Способ по п. 124, в котором локус CAR расположен в эндогенном локусе TCRα.
126. Способ по п. 125, в котором неперестроенные человеческие сегменты гена вариабельного участка Ig замещают эндогенные сегменты гена вариабельного участка TCRα.
127. Способ по п. 125, в котором ген константного участка TCRα представляет собой эндогенный ген константного участка TCRα.
128. Способ по любому из пп. 116-123, в котором ген константного участка TCR представляет собой ген константного участка TCRβ.
129. Способ по п. 128, в котором локус CAR расположен в эндогенном локусе TCRβ.
130. Способ по п. 129, в котором неперестроенные человеческие сегменты гена вариабельного участка Ig замещают эндогенные сегменты гена вариабельного участка TCRβ.
131. Способ по п. 129, в котором ген константного участка TCRβ представляет собой эндогенный ген константного участка TCRβ.
132. Способ по любому из пп. 116-131, в котором не относящееся к человеку животное относится к грызунам.
133. Способ по п. 132, в котором грызун представляет собой мышь.