ЧАСТИЦА РЕПЛИКОНА АЛЬФАВИРУСА

1. Частица репликона альфавируса (ARP), которая включает
(i) структурные белки альфавируса, включающие капсид и/или оболочку, и
(ii) репликон альфавируса, включающий полинуклеотид, кодирующий неструктурные белки альфавируса nsp1, nsp2, nsp3 и nsp4 и, по меньшей мере, один представляющий интерес ген,
в которой, по меньшей мере, один из капсида и E3 и E2 в оболочке включают одно или несколько аминокислотных изменений, а Е1 в оболочке не включает аминокислотных изменений.
2. ARP по п. 1, в котором структурные белки альфавируса включают одно или несколько изменений в сигнале ядерной локализации (NLS) белка капсида альфавируса.
3. ARP по п. 2, в котором один или несколько из лизина или аргинина в сигнале ядерной локализации белка капсида альфавируса замещен аспарагином или аланином.
4. ARP по любому из пп. 1-3, в котором структурные белки альфавируса включают одно или несколько изменений в белке Е2 альфавируса.
5. ARP по любому из пп. 1-4, в котором структурные белки альфавируса включают одно или несколько изменений в сайте расщепления фурином в белке E3 альфавируса.
6. ARP по любому из пп. 1-5, в котором альфавирус представляет собой CHIKV или VEEV.
7. ARP по п. 6, в котором CHIKV представляет собой штамм CHIKV 37997 или штамм OPY-1.
8. ARP по п. 6, в котором VEEV представляет собой штамм VEEV.TC-83
9. ARP по любому из пп. 1-8, в котором представляющий интерес ген кодирует антиген.
10. Способ получения частиц репликона альфавируса, включающий стадии котрансфекции клеток с
i) вектором, включающим полинуклеотид, кодирующий неструктурный белок альфавируса nsp1, nsp2, nsp3 и nsp4, и, по меньшей мере, один представляющий интерес ген,
ii) вектором, включающим полинуклеотид, кодирующий белок капсида альфавируса, и
iii) вектором, включающим полинуклеотид, кодирующий E3-E2-6K-E1 альфавируса,
в которых, по меньшей мере, один из капсида, E3 и E2 включает одно или несколько аминокислотных изменений, но E1 не включает аминокислотных изменений,
культивирования трансфицированных клеток и
очистки ARP из клеточной культуры.
11. Способ по п. 10, в котором структурные белки альфавируса включают одно или несколько изменений в сигнале ядерной локализации (NLS) белка капсида альфавируса.
12. Способ по п. 11, в котором один или несколько из лизина или аргинина в сигнале ядерной локализации белка капсида альфавируса замещен аспарагином или аланином.
13. Способ по любому из пп. 10-12, в котором структурные белки альфавируса включают одно или несколько изменений в белке Е2 альфавируса.
14. Способ по п. 13, в котором структурные белки альфавируса включают одно или несколько изменений в сайте расщепления фурином в белке E3 альфавируса.
15. Способ по любому из пп. 10-14, в котором альфавирус представляет собой CHIKV или VEEV.
16. Способ по п. 15, в котором CHIKV представляет собой штамм CHIKV 37997 или штамм OPY-1.
17. Способ по п. 15, в котором VEEV представляет собой штамм VEEV TC-83.
18. Способ по любому из пп. 10-17, в котором представляющий интерес ген кодирует антиген.
19. Частица репликона альфавируса (ARP), включающая
(i) структурные белки CHIKV, включающие капсид и/или оболочку, и
(ii) репликон VEEV, включающий полинуклеотид, кодирующий неструктурные белки nsp1, nsp2, nsp3 и nsp4 из VEEV, и, по меньшей мере, один представляющий интерес ген.
20. ARP по п. 19, в котором CHIKV представляет собой штамм CHIKV 37997 или штамм OPY-1 и VEEV представляет собой штамм VEEV TC-83.