Сравнительный анализ лабораторных методов диагностики хламидиоза свиней

11. Чумаков, В.Ю. Миоциты лимфатических сосудов / В.Ю. Чумаков // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1991. - Т. 100. - № 5. - С. 69-73.

12. О сокращении лимфатических сосудов / В.Ю. Чумаков [и др.]; Ленингр. вет. ин-т // Физиологические и биохимические основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных и пушных зверей: сб. науч. тр. - СПб., 1991. - Вып. 117. - С.109-113.

13. Лимфангионы сердца / В.Ю.Чумаков [и др.]. - Абакан: Изд-во ХГУ им. Н.Ф. Катанова, 1999. - 242 с.

14. Чумаков, В.Ю. Лимфатическое русло сердца некоторых млекопитающих / В.Ю. Чумаков. - Абакан: Изд-во ХГУ им. Н.Ф. Катанова, 1997. - 315 с.

15. Castenholz, A. Functional microanatomy of initial Lymphatics with special consideration of the extracellular matrix. / A. Castenholz // Lymphology. - 1998. - № 31. - P. 101-118.

16. Horstmann, E. Beobachtungen zur Motorik der Lymphgefäße / E. Horstmann // Phlugers Archiv. - 1959. -Bd. 269. - № 6. - S. 511-519.

17. Leak, L.V. The structure of lymphatic capillaries in lymph formation / L.V. Leak// Feder. Proc. - 1976. - Vol. 35. - N 8. - P. 1863-1871.

18. Vajda, J. The structure of the valves of the lymphatic vessels / J. Vajda, M. Tomcsik // Acta Anatom. - 1971. -Vol. 78. - № 4. - P. 521-531.

----------♦-----------

УДК 619:616.9-07:636.4 КД. Сибиряков, Н.А. Лещева,

В.И. Плешакова, МД. Смердова

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЛАБОРАТОРНЫХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ХЛАМИДИОЗА СВИНЕЙ

Проанализированы достоинства и недостатки современных лабораторных методов диагностики хламидиоза свиней. Рассматривается принцип метода полимеразной цепной реакции, обсуждаются перспективы его использования в практической ветеринарии.

Хламидиоз - одна из самых распространенных инфекционных болезней животных, для которой характерны полиморфизм клинических признаков и социальная опасность. Инфекция наносит существенный экономический ущерб различным отраслям животноводства, в том числе и свиноводческой, вызывая патологию репродуктивных органов, аборты, рождение мертвого или нежизнеспособного приплода, гибель животных. Инфицированные животные являются источником инфекции работников свиноводческих хозяйств, что приводит к возникновению эпидемических вспышек [1, 3, 6].

Особенностью хламидийной инфекции является часто хроническое, со стертой клинической картиной или латентное течение. Болезнь протекает преимущественно в абортивной форме [7, 8]. В системе проведения ветеринарно-санитарных мероприятий по своевременной профилактике, а также лечению хламидиозов животных, большое значение имеет раннее обнаружение возбудителя. С этой целью разработан целый ряд лабораторных методов прямой и косвенной диагностики хламидиозов. В настоящее время для диагностики инфекции в государственных ветеринарных лабораториях используют классические лабораторные методы: РСК и РДСК, полимеразную цепную реакцию (ПЦР), которая является перспективным диагностическим тестом, позволяющим проводить индикацию и идентификацию патогенных агентов на основе регистрации и анализа ДНК [2, 4].

Целью нашей работы явилось сравнительное изучение различных методов диагностики хламидиоза свиней в хозяйствах Омской области, а именно, микроскопическое исследование; реакция связывания комплемента; молекулярно-биологическая диагностика (ПЦР) и выделение хламидий на развивающихся куриных эмбрионах.

Для исследования из ряда свиноводческих хозяйств различных форм собственности 10 районов Омской области, где наблюдали клинические признаки хламидийной инфекции: аборты во второй половине супоросности, рождение мертвых и слабых поросят, артриты, конъюнктивиты, был проведен отбор проб сыворотки крови, спермы, влагалищной и препуциальной слизи от 151 животного.

ВестникКрасГАУ- 2008. №3

Микроскопический метод исследования осуществляли путем приготовления мазков-отпечатков с последующим окрашиванием по Стемпу.

Для серологической диагностики хламидийной инфекции использовали коммерческий набор антигенов и сывороток сельскохозяйственных животных для постановки РСК, РДСК производства ВНИВИ (г. Казань). Диагностическим титром в РСК и РДСК исследуемой сыворотки являлось разведение 1:10 (0,04 мл) при полном гемолизе эритроцитов в контроле. Сыворотку считали положительной при задержке гемолиза на четыре и три креста; сомнительной - на два креста в разведении 1:10; отрицательной - при полном гемолизе эритроцитов в разведении 1:5 и 1:10. При исследовании сыворотки крови учитывали проведение вакцинации против хламидийной инфекции в данных хозяйствах.

Молекулярно-биологическую диагностику проводили с помощью тест-системы «ХЛА-КОМ» (ООО «Ин-терЛабСервис» г. Москва).

Для заражения куриных эмбрионов из патологического материала готовили 10%-ю суспензию на основе раствора Хенкса (рН 7,2-7,4), после центрифугирования отбирали надосадочную жидкость, в которую добавляли гентамицин (100 мкг/мл), и при отсутствии роста микрофлоры на питательных средах (МПА, МПБ, МППБ) исследуемый материал вводили 6-7-суточным куриным эмбрионам в желточный мешок в дозе

0,2 мл. Для каждой пробы при заражении использовали не менее шести эмбрионов.

Результаты исследования считали положительными при обнаружении хламидий в мазках-отпечатках из содержимого желточного мешка эмбрионов в течение 4-12 суток после заражения.

В ходе проделанной работы была исследована 151 проба, из них - 74 сыворотки крови, 8 спермы, 67 влагалищной и 32 препуциальной слизи, полученных от следующих групп животных: ремонтные и основные свиноматки, ремонтные хряки и хряки-производители

Результаты сравнительных исследований разных методов диагностики хламидиоза свиней различных половозрастных групп, принадлежащих хозяйствам Омской области

Исследуемый материал Кол-во живот- ных Кол-во проб Микроскопия РСК Заражение КЭ ПЦР

Кол-во «+» проб % Кол-во «+» проб % Кол-во «+» проб % Кол-во «+» проб %

Сыворотка крови 44 74 * * 29 39,1 * * * *

Влагалищная слизь 67 67 28 41,7 43 64,2 41 61,1 49 73,1

Препуциальная слизь 32 32 11 34,3 20 62,5 18 56,25 30 93,7

Сперма 8 8 2 25 * * 2 25 6 75

Итого 151 181 41 22,6 92 50,8 61 33,7 85 45,6

Примечание: (*) - исследование не проводилось.

По результатам наших исследований при микроскопии мазков-отпечатков, окрашенных по Стемпу, хламидии были обнаружены в 22,6% случаев. При постановке РСК было исследовано 30 парных проб сыворотки крови и 14 взятых однократно. Положительные результаты были получены в 29 пробах, из них в 13 пробах (44,8%) установлен титр 1:10 (+++), а в 16 (55,1%) - 1:40 (+++).

С помощью метода заражения куриных эмбрионов хламидии были выявлены в 33,7% проб. После гибели зараженных куриных эмбрионов на 7-11-е сутки при вскрытии отмечали атрофию эмбрионов (в сравнении с контролем), подкожные и внутрикожные геморрагии в области туловища, шеи, головы, переполнение кровью сосудов истонченной желточной оболочки, разжижение содержимого желточного мешка. Контрольные (неза-раженные) развивающиеся куриные эмбрионы были без изменений. В случае бактериальной загрязненности эмбрионы погибали в первые 2-3-е суток (15%), отмечали помутнение аллантоисной жидкости.

Высокую эффективность показал метод ПЦР, основанный на использовании праймеров к фрагментам хромосомных генов. Нами в ПЦР при анализе 181 пробы геном возбудителя был обнаружен в 85 образцах (45,6%). Причем время выполнения исследования составляло 4,5-5 часов в отличие от РСК (5-6 часов) и культурального метода (несколько суток в зависимости от количества пассажей).

Кроме того, морфологический метод, основанный на обнаружении возбудителя в мазках-отпечатках, недостаточно чувствителен и позволяет обнаружить хламидии лишь в случае качественно приготовленного препарата. Постановка РСК не исключает возможность определения поствакцинальных антител. Длительный инкубационный период, медленное накопление в крови специфических антител (1-2 месяца и более), нестабильность сохранения диагностического титра антител и временные или постоянные их исчезновения из крови не позволяют выявить всех зараженных животных. Помимо этого, для постановки диагноза на хла-мидиоз серологическим методом (РДСК, РСК) необходимо исследовать парные пробы сыворотки с интервалом в 14-20 дней, так как увеличение титра антител в два и более раза являются диагностическим. В условиях производства часто осуществляется однократное исследование, что затрудняет постановку диагноза.

Метод заражения куриных эмбрионов очень трудоемок и в случае присутствия в исследуемом биоматериале слабовирулентных штаммов хламидий отсутствует возможность подтвердить при первом заражении наличие возбудителя, поэтому необходимо проведения не менее трех пассажей.

Заключение. Таким образом, анализ полученных результатов свидетельствует о том, что постановку диагноза необходимо осуществлять, используя комплекс методов. При эпизоотологическом контроле преимущество имеет ПЦР, что позволит осуществлять своевременную эффективную терапию и профилактику хламидиозов.

Литература

1. Равилов, А.З. Хламидиоз животных / А.З. Равилов, Х.З. Гаффаров, Р.Х. Равилов. - Казань: Фэн, 2004. -368 с.

2. Хазипов, Н.З. Достижения молекулярной биологии в животноводстве и ветеринарии / Н.З. Хазипов. -Казань: Изд-во Казан. гос. акад. вет. медицины, 1997. - 107 с.

3. Хазипов, Н.З. Хламидиозы сельскохозяйственных животных / Н.З. Хазипов, А.З. Равилов. - М.: Колос, 1984. - 223 с.

4. Pollard, D.R., Tyler S.D., Ng С. W. e. a. A polymerase chain reaction (PCR) protocol for the specific detection of Chlamydia spp. Mol. Cel. Probes, 1989, 3: 383-389.

5. Kaltenboeck, B., Storz J. Biological properties and genetic analysis of the ompA locus in chlamydiae isolated from swine. Am. J. Vet. Res., 1992, 9: 1482-1487.

6. Fukushi, H., Hirai K. Proposal of Chlamydia pecorum sp. nov. for Chlamydia strains derived from ruminants. Int. J. Syst. Bact., 1992, 42. Р. 306-308.

7. Shewen, P.E. Chlamydial infection in animals: a review / P.E. Shewen // Can. Vet. J. - 1980. - № 21. - Р. 2-11.

8. Schiefer, H.G. Zellbiologie der Chlamydien / H.G. Schiefer, H. Krauss // Lab. Med. - 1982. - № 51. - Р. 51-53.

---------♦------------

УДК 615:619:591.11 Е.А. Реутова

ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЙ МОРФОЛОГИЧЕСКОГО СОСТАВА КРОВИ В СИСТЕМЕ «МАТЬ - ПЛОД» ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ САМКАМ НА РАЗНЫХ ЭТАПАХ ПЛОДОНОШЕНИЯ ПРЕПАРАТА НУКЛЕИНОВОЙ ПРИРОДЫ

В статье представлены материалы собственных исследований по применению препарата нуклеиновой природы «Вестин» самкам на разных этапах плодоношения в системе «мать - плод». Установлено, что испытуемый препарат обеспечивает позитивную динамическую перестройку морфологического состава крови у крыс и их потомства, свидетельствующую о развитии активных процессов адаптации в их организмах.

В настоящее время очевидна важность изучения вопросов, касающихся адаптационных механизмов организма животных, особенно в период онтогенеза, в частности иммунобиологических отношений в системе «мать - плод». Ранняя коррекция развития систем, поддерживающих гомеостаз, объясняется тесной взаимосвязью организмов матери и плода, так как известно, что при нарушении процессов метаболизма беременных животных однотипные изменения механизмов защиты развиваются и у приплода [4, 7, 8]. Несомненно, только при нормальном функционировании этой системы возможно развитие полноценного потомства. Знание закономерностей общих механизмов формирования и развития плода является также важ-