КОМБИНАЦИЯ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ АГОНИСТА ОХ40 И АГОНИСТА 4-1ВВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА
COMBINATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES OF OX40 AGONIST AND  4-1BB AGONIST FOR CANCER TREATMENT

Область техники, к которой относится настоящее изобретение
Настоящее изобретение относится к комбинированным видам терапии, используемым для лечения рака. В частности, настоящее изобретение относится к комбинированной терапии, которая включает агонист белка OX40 и агонист белка 4-1BB.
Уровень техники, к которому относится настоящее изобретение
Усиление противоопухолевой функции Т-клеток представляет собой мощный и новый подход для лечения рака. Ключевыми компонентами, участвующими в создании эффективного противоопухолевого Т-клеточного ответа, являются усиление активности клеток Т-хелперов CD4+ для стимулирования образования противоопухолевых цитолитических Т-клеток, и обеспечение сигналов выживаемости для Т-клеток памяти и эффекторных Т-клеток.
Рецептор OX40 (OX40) (также известный как CD134, TNFRSF4, ACT-4, ACT35 и TXGP1L) является членом надсемейства рецепторов TNF. Было обнаружено, что OX40 экспрессируется на активированных Т-клетках. Большое количество T-клеток OX40+ было продемонстрировано в опухолях (противоопухолевые эффекторные лимфоциты) и в дренирующих лимфатических узлах онкологических больных (Weinberg, A. et al., J. Immunol., 164: 2160-69, 2000; Petty, J. et al., Am. J. Surg., 183: 512-518, 2002). В моделях опухолей у мышей было показано, что вовлечение OX40 in vivo во время прайминга опухоли значительно замедляло и предотвращало появление опухолей по сравнению с мышами из контрольной группы (Weinberg et al., 2000). Поэтому предложено усиление иммунного ответа млекопитающего на антиген путем вовлечения OX40 с использованием агониста OX40 (WO 99/42585, Weinberg et al., 2000).
4-1BB (CD137 и TNFRSF9), который впервые был идентифицирован как индуцируемый ко-стимулирующий рецептор, экспрессируемый на активированных Т-клетках, представляет собой транс-мембранный гликопротеин из надсемейства рецепторов фактора некроза опухолей (ФНО). Современное представление о 4-1BB указывает на то, что экспрессия, как правило, зависит от активации и охватывает широкий поднабор иммунных клеток, включая активированные NK и NKT клетки; регуляторные Т-клетки; дендритные клетки (ДК), включая фолликулярные ДК; стимулированные тучные клетки, дифференцированные миелоидные клетки, моноциты, нейтрофилы, эозинофилы (Wang C, et al. Immunol Rev. 229 (1): 192 215, 2009) и активированные B-клетки (Zhang X, et al., J Immunol., 184 (2): 787- 795, 2010). Экспрессия 4-1BB также была продемонстрирована на сосудистой сети опухоли (Broll K, et al., Am J Clin Pathol, 115 (4): 543 549, 2001, Seaman S, et al., Cancer Cell 11 (6): 539 554, 2007) и атеросклеротическом эндотелии (21) (Olofsson PS, et al. Circulation (117 (10): 1292 1301, 2008). Лиганд, который стимулирует 4-1BB (4-1BBL), экспрессируется на активированных антигенпредставляющих клетках (АПК), миелоидных клетках-предшественниках и гемопоэтических стволовых клетках.
Взаимодействие 4-1BB на активированных обычных человеческих В-клетках с его лигандом в момент вовлечения B-клеточного рецептора стимулирует пролиферацию и повышает выживаемость (Zhang X, et al., J Immunol., 184 (2): 787-795, 2010). Потенциальное влияние вовлечения 4-1BB в B-клеточной лимфоме было исследовано в двух опубликованных научных работах. Оценка нескольких типов первичных образцов НХЛ человека показала, что 4-1BB экспрессировался преимущественно на инфильтрирующих Т-клетках, а не на клетках лимфомы (Houot R, et al., Blood 114 (16): 3431-3438, 2009). Добавление агонистов 4-1BB к in vitro культурам клеток B-клеточной лимфомы вместе с ритуксимабом и NK-клетками приводило к увеличению уровня убитых клеток лимфомы. (Kohrt HE, et al. Blood 117 (8): 2423-2432, 2011). Кроме того, было проведено В-клеточное иммунофенотипирование в двух экспериментах с использованием PF 05082566 у яванских макак в дозах от 0,001 до 100 мг/кг; и в этих экспериментах количество B-клеток в периферической крови либо не изменилось, либо уменьшилось.
4-1BB не обнаруживается на поверхности необученных Т-клеток, но экспрессия возрастает при активации. При активации 4-1BB, TRAF 1 и TRAF 2, которые являются обеспечивающими выживаемость членами семейства факторов, ассоциированных с TNFR (TRAF), собираются в цитоплазматический концевой сегмент 4-1BB, что приводит к последующей активации NFkB и митоген-активируемого протеинкиназного каскада (MAP), включая Erk, Jnk и p38 MAP киназы. Активация NFkB приводит к повышающей регуляции Bfl-1 и Bcl-XL, обеспечивающих выживаемость членов семейства Bcl-2. Происходит понижающая регуляция проапоптотического белка Bim в зависимости от TRAF1 и Erk (Sabbagh L, et al. J Immunol. 180 (12): 8093 8101, 2008).
Отчеты показали, что mAbs-агонисты 4-1BB увеличивает экспрессию ко-стимулирующих молекул и заметно повышают ответы цитолитических Т-лимфоцитов, что приводит к анти-опухолевой эффективности в различных моделях. mAbs-агонисты 4-1BB продемонстрировали эффективность в профилактических и терапевтических условиях как в монотерапии, так и в комбинированной терапии опухолевых моделей, и показали долговременные вторичные иммунные ответы анти-опухолевых защитных Т-клеток (Lynch DH. Immunol Rev. 222: 277, 286, 2008). Агонисты 4-1BB также ингибируют аутоиммунные реакции во множестве аутоиммунных моделей (Vinay DS, et al., J Mol Med., 84 (9): 726 736, 2006).
Существует необходимость в улучшенных методах лечения рака. Кроме того, существует необходимость в методах лечения, имеющих большую эффективность, чем существующие методы лечения. Предпочтительные комбинированные методы лечения настоящего изобретения демонстрирует большую эффективность, чем лечение только одним терапевтическим агентом.
Краткое изложение настоящего изобретения
Настоящее изобретение относится к терапевтическим схемам лечения рака.
В одном варианте осуществления в изобретении предоставлен способ лечения рака у индивидуума, предусматривающий проведение комбинированной терапии индивидуума, которая включает агонист OX40 и агонист 4-1BB.
В другом варианте осуществления в изобретении предоставлено лекарственное средство, содержащее агонист OX40 для применения в комбинации с агонистом 4-1BB для лечения рака.
В еще одном варианте осуществления в изобретении предоставлено лекарственное средство, содержащее агонист 4-1BB для применения в комбинации с агонистом OX40 для лечения рака.
Другие варианты осуществления предусматривают применение агониста OX40 при получении лекарственного средства для лечения рака у индивидуума при введении в комбинации с агонистом 4-1BB, и применение агониста 4-1BB при получении лекарственного средства для лечения рака у индивидуума при введении в комбинации с агонистом OX40.
В еще одном варианте осуществления в изобретении предоставлено применение агониста OX40 и агониста 4-1BB при получении лекарственных средств для лечения рака у индивидуума. В некоторых вариантах осуществления лекарственные средства содержат набор, а набор также содержит вкладыш, содержащий инструкции для применения агониста OX40 в комбинации с агонистом 4-1BB для лечения рака у индивидуума.
В вариантах осуществления способов лечения, лекарственных средств, композиций, наборов и вариантов применения, представленных в настоящем описании, агонист OX40 связывается с внеклеточным доменом OX40 и способен влиять на состояние OX40. В некоторых вариантах осуществления вышеуказанных способов лечения, лекарственных средств и вариантов применения агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело. В одном варианте осуществления агонист OX40 представляет собой антитело к OX40, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, и в котором вариабельные участки тяжелой и легкой цепей содержат аминокислотные последовательности, показанные в SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, соответственно.
В некоторых вариантах осуществления агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность вариабельного участка тяжелой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 7.
В некоторых вариантах осуществления агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность вариабельного участка легкой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 8.
В некоторых вариантах осуществления агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность вариабельного участка тяжелой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 7, и также содержит аминокислотную последовательность вариабельного участка легкой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 8.
В некоторых вариантах осуществления агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 9, и также содержит аминокислотную последовательность легкой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 10, с условием что С-концевой остаток лизина из SEQ ID NO: 9 необязательно отсутствует.
В вариантах осуществления способа лечения, лекарственных средств, наборов, композиций и вариантов применения, представленных в настоящем описании, агонист 4-1BB связывается с внеклеточным доменом 4-1BB и способен влиять на состояние 4-1BB. В некоторых вариантах осуществления вышеуказанного способа лечения, лекарственных средств и видов применения агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело.
В одном варианте осуществления выделенное антитело к 4-1BB связывает человеческий 4-1BB в эпитопе, расположенном в аминокислотных остатках 115-156 из SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления антитело 4-1BB содержит аминокислотную последовательность H-CDR1 из SEQ ID NO: 11, аминокислотную последовательность H-CDR2 из SEQ ID NO: 12 и аминокислотную последовательность H-CDR3 из SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность L-CDR1 из SEQ ID NO: 14, аминокислотную последовательность L-CDR2 из SEQ ID NO: 15 и аминокислотную последовательность L-CDR3 из SEQ ID NO: 16.
В некоторых вариантах осуществления агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность вариабельного участка тяжелой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 17.
В некоторых вариантах осуществления агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность вариабельного участка легкой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 18.
В некоторых вариантах осуществления агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность вариабельного участка тяжелой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 17, а также содержит аминокислотную последовательность вариабельного участка легкой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 18.
В некоторых вариантах осуществления агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 19, а также содержит аминокислотную последовательность легкой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 20, с условием, что С-концевой остаток лизина из SEQ ID NO: 19 необязательно отсутствует.
В некоторых вариантах осуществления способов лечения, лекарственных средств, композиций, наборов и вариантов применения изобретения, индивидуум является человеком, а рак представляет собой солидную опухоль, и в некоторых вариантах осуществления солидная опухоль представляет собой рак мочевого пузыря, рак молочной железы, светлоклеточный рак почки, рак толстой кишки, плоскоклеточный рак головы/шеи, плоскоклеточный рак легких, злокачественная меланома, немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ), рак яичников, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, почечно-клеточный рак, мелкоклеточный рак легкого (МРЛ), гепатоцеллюлярная карцинома или трижды негативный рак молочной железы. В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой распространенную злокачественную солидную опухоль.
В других вариантах осуществления способов лечения, лекарственных средств, композиций, наборов и вариантов применения изобретения индивидуум является человеком, а рак представляет собой злокачественное заболевание крови. В некоторых вариантах осуществления злокачественное заболевание крови представляет собой неходжкинскую лимфому (НХЛ). В некоторых вариантах осуществления злокачественное заболевание крови представляет собой диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому (ДКВКЛ), ВЭБ-позитивную ДКВКЛ, фолликулярную лимфому, острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), острый миелоидный лейкоз (АМЛ), хронический лимфолейкоз (ХЛЛ), хронический миелоидный лейкоз (ХМЛ), первичную медиастинальную крупноклеточную В-клеточную лимфому, мантийноклеточную лимфому (МКЛ), мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (МЛЛ), крупноклеточную В-клеточную лимфому, богатую Т-клетками/гистиоцитами, лимфому Ходжкина (ЛХ), множественную миелому (ММ), миелоидный лейкоз-1 (с вовлечением белка Mcl-1) или миелодиспластический синдром (МДС).
В вариантах осуществления изобретения лекарственные средства, представленные в настоящем описании, содержат фармацевтически приемлемый эксципиент.
В вариантах осуществления в настоящем описании представлен набор, который содержит первый контейнер, второй контейнер и вкладыш, причем первый контейнер содержит, по меньшей мере, одну, две, три, четыре, пять или десять доз лекарственного средства, содержащего агонист OX40, второй контейнер содержит, по меньшей мере, одну, две, три, четыре, пять или десять доз лекарственного средства, содержащего агонист 4-1BB, а вкладыш содержит инструкции для лечения индивидуума от рака с применением лекарственных средств.
В вариантах осуществления набор, представленный в настоящем описании, содержит по меньшей мере контейнер и вкладыш, причем контейнер содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или десять доз лекарственного средства, содержащего агонист OX40 и агонист 4-1BB, а вкладыш содержит инструкции для лечения человека от рака с применением лекарственного средства.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, индивидуум является человеком, а агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с человеческим OX40.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, которое содержит вариабельные участки тяжелой и легкой цепей в SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, соответственно.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, содержащее: (a) участки CDR тяжелой цепи из SEQ ID NO: 1, 2 и 3 и участки CDR легкой цепи из SEQ ID NOs: 4, 5 и 6; или (b) участки CDR тяжелой цепи из SEQ ID NO: 22, 23 и 24 и участки CDR легкой цепи из SEQ ID NO: 25, 26 и 27.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, содержащее: (a) вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий SEQ ID NO: 7, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий SEQ ID NO: 8; или (b) вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий SEQ ID NO: 28, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий SEQ ID NO: 29.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, содержащее: (а) тяжелую цепь, содержащую SEQ ID NO: 9, и легкую цепь, содержащую SEQ ID NO: 10; или (b) тяжелую цепь, содержащую SEQ ID NO: 30, и легкую цепь, содержащую SEQ ID NO: 31.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, содержащее участки CDR тяжелой цепи из SEQ ID NO: 11, 12 и 13 и участки CDR легкой цепи из SEQ ID NO: 14, 15 и 16.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий SEQ ID NO: 17, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий SEQ ID NO: 18.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую SEQ ID NO: 19, и легкую цепь, содержащую SEQ ID NO: 20.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, которые относятся к раку, рак представляет собой солидную опухоль.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, которые относятся к раку, раком является карцинома, лимфома, лейкоз, бластома, саркома, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, рак желудка, светлоклеточный рак почки, рак шейки матки, плоскоклеточный рак головы/шеи (HNSCC), плоскоклеточный рак легкого, злокачественная меланома, немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ), рак яичников, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, почечно-клеточный рак (ПКР), гепатоцеллюлярная карцинома, мелкоклеточный рак легкого (МРЛ), трижды негативный рак молочной железы, неходжкинская лимфома (НХЛ), диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома (ДКBКЛ), ВЭБ-позитивная ДКВКЛ, фолликулярная лимфома, острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), острый миелоидный лейкоз (ОМЛ), хронический лимфолейкоз (ХЛЛ), хронический миелоидный лейкоз (ХМЛ), первичная медиастинальная крупноклеточная B-клеточная лимфома, мантийноклеточная лимфома (МКЛ), мелкоклеточная лимфоцитарная лимфома (МЛЛ), крупноклеточная B-клеточная лимфома, богатая Т-клетками/гистиоцитами, лимфома Ходжкина (ХЛ), множественная миелома (MM), миелоидный лейкоз-1 (с вовлечением белка Mcl-1), миелодиспластический синдром (МДС), миелома, глиома, рак почки, рак печени, лимфобластный лейкоз, лимфоцитарный лейкоз, рак кишечника, рак эндометрия, рак почек, рак щитовидной железы, рак кости, рак мозга, рак желудка, гепатома, рак головы и шеи, рак гепатобилиарной системы, рак центральной нервной системы, рак пищевода, карцинома из клеток Меркеля, рак яичек, рак кожи, рак тонкой кишки, рак желчных путей, нейроэндокринные опухоли, мезотелиома, рак матки, рак вульвы, рак полового члена, рак анального канала, хориокарцинома, рак тимуса и рак полости рта.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, относящихся к лечению рака у индивидуума, индивидуум ранее не лечился от распространенной солидной злокачественной опухоли.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, агонистом 4-1BB является PF-05082566.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, агонистом OX40 является PF-04518600.
В вариантах осуществления в настоящем описании представлен способ лечения рака у индивидуума, предусматривающий проведение комбинированной терапии индивидуума, которая включает агонист OX40 и агонист 4-1BB, причем агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая и легкая цепи содержат SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10, соответственно; и причем агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая и легкая цепи содержат SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 20, соответственно.
В вариантах осуществления представленных в настоящем описании способов лечения рака у индивидуума, предусматривающих проведение комбинированной терапии индивидуума, которая включает агонист OX40 и агонист 4-1BB, агонист OX40 и агонист 4-1BB вводят одновременно или последовательно. Необязательно, агонист OX40 вводят в отдельное время от агониста 4-1BB.
В вариантах осуществления представленных в настоящем описании способов лечения рака у индивидуума, предусматривающих проведение комбинированной терапии индивидуума, которая включает агонист OX40 и агонист 4-1BB, агонист OX40 вводят каждые две недели, а агонист 4-1BB вводят каждые четыре недели.
В вариантах осуществления представленных в настоящем описании способов лечения рака у индивидуума, предусматривающих проведение комбинированной терапии индивидуума, которая включает агонист OX40 и агонист 4-1BB, агонист OX40 вводят каждую одну, две, три или четыре недели, а 4-1BB агонист вводят каждые одну, две, три или четыре недели.
В вариантах осуществления представленных в настоящем описании способов лечения рака у индивидуума, предусматривающих проведение комбинированной терапии индивидуума, которая включает агонист OX40 и агонист 4-1BB, агонист OX40 вводят каждые две недели в дозе, выбранной из группы, состоящей из 0,01 мг/кг, 0,03 мг/кг, 0,1 мг/кг, 0,3 мг/кг, 1 мг/кг, 1,5 мг/кг, 3 мг/кг, 5 мг/кг и 10 мг/ кг, а агонист 4-1BB вводят каждые четыре недели в фиксированной дозе на один объект, выбранной из группы, состоящей из 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200 и 500 мг.
В вариантах осуществления представленных в настоящем описании способов лечения рака у индивидуума, предусматривающих проведение комбинированной терапии индивидуума, которая включает агонист OX40 и агонист 4-1BB, агонист OX40 вводят каждые одну, две, три или четыре недели в дозе, выбранной из группы, состоящей из 0,01 мг/кг, 0,03 мг/кг, 0,1 мг/кг, 0,3 мг/кг, 1 мг/кг, 1,5 мг/кг, 3 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг и 20 мг/кг, а агонист 4-1BB вводят каждые одну, две, три или четыре недели: a) в фиксированной дозе на один объект, выбранной из группы, состоящей из 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200 и 500 мг или б) в дозе, выбранной из группы, состоящей из 0,01 мг/кг, 0,03 мг/кг, 0,1 мг/кг, 0,3 мг/кг, 1 мг/кг, 1,5 мг/кг, 3 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг и 20 мг/кг.
В вариантах осуществления представленных в настоящем описании способов лечения рака у индивидуума, предусматривающих проведение комбинированной терапии индивидуума, которая включает агонист OX40 и агонист 4-1BB, агонист OX40 вводят приблизительно каждые одну, две, три, четыре, пять или шесть недель: a) в фиксированной дозе на один объект, выбранной из группы, состоящей из приблизительно 0,1, 0,5, 1, 2, 4, 5, 6, 8, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг, или б) в дозе, выбранной из группы, состоящей из приблизительно 0,01 мг/кг, 0,03 мг/кг, 0,1 мг/кг, 0,3 мг/кг, 1 мг/кг, 1,5 мг/кг, 3 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг, 20 мг/кг и 25 мг/кг.
В вариантах осуществления представленных в настоящем описании способов лечения рака у индивидуума, предусматривающих проведение комбинированной терапии индивидуума, которая включает агонист OX40 и агонист 4-1BB, агонист 4-1BB вводят приблизительно каждые одну, два, три, четыре, пять или шесть недель: a) в фиксированной дозе на один объект, выбранной из группы, состоящей из приблизительно 0,1, 0,5, 1, 2, 4, 5, 6, 8, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг, или б) в дозе, выбранной из группы, состоящей из приблизительно 0,01 мг/кг, 0,03 мг/0,1 мг/кг, 0,3 мг/кг, 1 мг/кг, 1,5 мг/кг, 3 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг, 20 мг/кг и 25 мг/кг.
В вариантах осуществления представленных в настоящем описании способов лечения рака у индивидуума, предусматривающих проведение комбинированной терапии индивидуума, которая включает агонист OX40 и агонист 4-1BB, агонист OX40 вводят приблизительно каждые одну, две, три, четыре, пять или шесть недель: a) в фиксированной дозе на один объект, выбранной из группы, состоящей из приблизительно 0,1, 0,5, 1, 2, 4, 5, 6, 8, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг или б) в дозе, выбранной из группы, состоящей из приблизительно 0,01 мг/кг, 0,03 мг/кг, 0,1 мг/кг, 0,3 мг/кг, 1 мг/кг, 1,5 мг/кг, 3 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг, 20 мг/кг и 25 мг/кг, а агонист 4-1BB вводят приблизительно каждые одну, две, три, четыре, пять или шесть недель: a) в фиксированной дозе на один объект, выбранной из группы, состоящей из приблизительно 0,1, 0,5, 1, 2, 4, 5, 6, 8, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг, или б) в дозе, выбранной из группы, состоящей из приблизительно 0,01 мг/кг, 0,03 мг/кг, 0,1 мг/кг, 0,3 мг/кг, 1 мг/кг, 1,5 мг/кг, 3 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг, 20 мг/кг и 25 мг/кг.
В вариантах осуществления в настоящем описании представлено лекарственное средство, содержащее агонист OX40 для применения в комбинации с агонистом 4-1BB для лечения рака у индивидуума, в котором агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая и легкая цепи содержат SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10, соответственно; и в котором агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая и легкая цепи содержат SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 20, соответственно.
В вариантах осуществления в настоящем описании представлено лекарственное средство, содержащее агонист 4-1BB для применения в комбинации с агонистом OX40 для лечения рака у индивидуума, в котором агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая и легкая цепи содержат SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10, соответственно; и в котором агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая и легкая цепи содержат SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 20, соответственно.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, агонист OX40 включен в готовую форму в виде жидкого лекарственного средства, которое содержит агонист OX40 в дозе 10 мг/мл, эксципиенты и гистидиновый буфер, pH 5,5.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, агонист 4-1BB включен в готовую форму в виде жидкого лекарственного средства, которое содержит агонист 4-1BB в дозе 10 мг/мл, дигидрат α,α-трегалозы, дигидрат, дигидрат динатрия этилендиаминтетрауксусной кислоты, полисорбат 80 и гистидиновый буфер, рН 5,5.
В вариантах осуществления в настоящем описании представлен набор, который содержит первый контейнер, второй контейнер и вкладыш, причем первый контейнер содержит по меньшей мере одну дозу лекарственного средства, содержащего агонист OX40, второй контейнер содержит по меньшей мере одну дозу лекарственного средства, содержащего агонист 4-1BB, а вкладыш содержит инструкции для лечения индивидуума от рака с применением лекарственных средств, причем агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая и легкая цепи содержат SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10, соответственно; и при этом агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая и легкая цепи содержат SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 20, соответственно.
В вариантах осуществления в настоящем описании представлена композиция, содержащая агонист OX40 для применения в лечении рака, причем агонист OX40 предназначен для отдельного, последовательного или одновременного применения в комбинации с агонистом 4-1BB, и при этом агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая и легкая цепи содержат SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10, соответственно; и при этом антитело-агонист к 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая и легкая цепи содержат SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 20, соответственно.
В вариантах осуществления в настоящем описании представлена композиция, содержащая агонист 4-1BB для применения в лечении рака, причем агонист 4-1BB предназначен для отдельного, последовательного или одновременного применения в комбинации с агонистом OX40, и при этом агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая и легкая цепи содержат SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10, соответственно; и при этом агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь и легкую цепь, причем тяжелая и легкая цепи содержат SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 20, соответственно.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, содержится агонист OX40, агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с OX40, и содержит: вариабельный участок тяжелой цепи (VH), содержащий определяющую комплементарность область-1 VH (CDR1), CDR2 VH и CDR3 VH, содержащие аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 7; и вариабельный участок легкой цепи (VL), содержащий CDR1 VL, CDR2 VL и CDR3 VL, содержащие аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 8. В вариантах осуществления моноклональное антитело к OX40 содержит CDR1 VH, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 1, CDR2 VH, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 2, CDR3 VH, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 3, CDR1 VL, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 4, CDR2 VL, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 5, и CDR3 VL, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 6. В вариантах осуществления моноклональное антитело к OX40 содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 9, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 10.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, которые содержат агонист 4-1BB, агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с 4-1BB и содержит: VH, содержащий CDR1 VH, CDR2 VH, и CDR3 VT, содержащие аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 17; и VL, содержащий CDR1 VL, CDR2 VL и CDR3 VL, содержащие аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 18. В вариантах осуществления моноклональное антитело к 4-1BB содержит CDR1 VH, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 11, CDR2 VH, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 12, CDR3 VH, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 13, CDR1 VL, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 14, CDR2 VL, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 15, и CDR3 VL, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 16. В вариантах осуществления моноклональное антитело к 4-1BB содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 19, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 20.
В вариантах осуществления в настоящем описании представлен набор, который содержит первый контейнер, второй контейнер и вкладыш, причем первый контейнер содержит по меньшей мере одну дозу лекарственного средства, содержащего агонист OX40, второй контейнер содержит по меньшей мере одну дозу лекарственного средства, содержащего агонист 4-1BB, а вкладыш содержит инструкции для лечения индивидуума от рака с применением лекарственных средств.
В вариантах осуществления в настоящем описании представлена композиция, содержащая агонист OX40 для применения в лечении рака, причем агонист OX40 предназначен для отдельного, последовательного или одновременного применения в комбинации с агонистом 4-1BB. В вариантах осуществления в настоящем описании представлена композиция, содержащая агонист 4-1BB для применения при лечении рака, причем агонист 4-1BB предназначен для отдельного, последовательного или одновременного применения в комбинации с агонистом OX40.
В вариантах осуществления в настоящем описании представлена композиция, содержащая агонист OX40 для применения в лечении рака и агонист 4-1BB для применения в лечении рака, причем агонист OX40 и агонист 4-1BB объединены или скомбинированы.
В вариантах осуществления, в способах, лекарственных средствах, вариантах применения, композициях или наборах, представленных в настоящем описании, которые содержат агонист OX40 и агонист 4-1BB, один или оба агониста вводят внутривенным, внутримышечным или подкожным путем.
Краткое описание фигур
На ФИГ. 1 представлен график, суммирующий объем опухоли в ответ на лечение.
Подробное описание
Определения
Чтобы настоящее изобретение было более понятным, ниже конкретно определены отдельные технические и научные термины. Если конкретное определение не приведено в другом месте данного документа, все остальные технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют значение, которое обычно понимается специалистом в области техники, к которой относится настоящее изобретение.
«Приблизительно» при использовании для обозначения числового параметра (например, дозы агониста OX40 или агониста 4-1BB или продолжительности лечения комбинированной терапией, описанной в настоящем описании) означает, что параметр может варьироваться в пределах до 10% ниже или выше указанного для этого параметра численного значения. Например, доза приблизительно 5 мг/кг может варьироваться между 4,5 и 5,5 мг/кг.
В рамках изобретения включая прилагаемую формулу изобретения, единственные формы слов, включают их соответствующие множественные формы, если из контекста явно не следует иное.
Термины «введение» и «лечение», применительно к животному, человеку, экспериментальному объекту, клетке, ткани, органу или биологической текучей среде, относятся к контакту экзогенного фармацевтического, терапевтического, диагностического агента или их композиции с животным, человеком, объектом, клеткой, тканью, органом или биологической текучей средой. Лечение клетки включает контакт реагента с клеткой, а также контакт реагента с текучей средой, причем текучая среда находится в контакте с клеткой. «Введение» и «лечение» также означают лечение в условиях in vitro и ex vivo, например, клетки с помощью реагента, диагностического, связывающего соединения или другой клетки. Термин «объект» включает любой организм, предпочтительно, животное, более предпочтительно, млекопитающее (например, крысу, мышь, собаку, кошку, кролика) и, наиболее предпочтительно, человека.
2
«Антитело» представляет собой молекулу иммуноглобулина, способную специфически связываться с мишенью, такой как углевод, полинуклеотид, липид, полипептид и т.д., через по меньшей мере один участок распознавания антигена, расположенный в вариабельном участке молекулы иммуноглобулина. Используемый в настоящем описании термин охватывает не только интактные поликлональные или моноклональные антитела, но также, если не указано иное, любую их антигенсвязывающую часть, которая конкурирует с интактным антителом за специфическое связывание, смешанные белки, содержащие антигенсвязывающую часть, и любую другую модифицированную конфигурацию молекулы иммуноглобулина, которая включает участок распознавания антигена. Антигенсвязывающие части включают, например, Fab, Fab', F(ab'), Fd, Fv, доменные антитела (dAb, например, антитела акул и верблюдовых), фрагменты, включающие участки определения комплементарности (CDR), одноцепочечные вариабельные фрагменты антитела (scFv), макси-антитела, мини-антитела, интраантитела, диатела, триотела, тетратела, v-НАР и бис-scFv и полипептиды, которые содержат по меньшей мере часть иммуноглобулина, которой достаточно для связывания специфического антигена с полипептидом. Антитело включает антитело любого класса, такого как IgG, IgA или IgM (или его подкласса), и антитело не обязательно должно относиться к какому-либо конкретному классу. В зависимости от аминокислотной последовательности константной области тяжелых цепей антитела, иммуноглобулины могут быть отнесены к разным классам. Существует пять основных классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из них могут быть далее разделены на подклассы (изотипы), например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Константные области тяжелой цепи, которые соответствуют различным классам иммуноглобулинов, называются альфа, дельта, эпсилон, гамма и мю, соответственно. Структуры субъединиц и трехмерные конфигурации различных классов иммуноглобулинов хорошо изучены.
2
Термин «антигенсвязывающий фрагмент» или «антигенсвязывающая часть» антитела в рамках изобретения относятся к одному или нескольким фрагментам интактного антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с данным антигеном (например, OX40 или 4-1BB). Антигенсвязывающие функции антитела могут выполняться фрагментами интактного антитела. Примеры связывающих фрагментов, включенных в термин «антигенсвязывающий фрагмент» антитела, включают Fab; Fab'; F(ab'); Fd-фрагмент, состоящий из доменов VH и CH1; Fv-фрагмент, состоящий из доменов VL и VH одного плеча антитела; фрагмент с одним доменным антителом (dAb) (Ward et al., Nature 341: 544-546, 1989) и выделенную определяющую комплементарность область (CDR).
Антитело, конъюгат антитела или полипептид, который «предпочтительно связывается» или «специфически связывается» (использовано в настоящем описании взаимозаменяемо) с мишенью (например, рецептором OX40), представляет собой термин, хорошо известный в данной области, и способы определения такого специфического или предпочтительного связывания также хорошо известны в данной области. Говорят, что молекула проявляет «специфическое связывание» или «предпочтительное связывание», если она реагирует или связывается чаще, быстрее, с большей продолжительностью и/или с большей аффинностью с конкретной клеткой или веществом, чем с альтернативными клетками или веществами. Антитело «специфически связывается» или «предпочтительно связывается» с мишенью, если оно связывается с большей аффинностью, авидностью, легкостью и/или с большей продолжительностью, чем оно связывается с другими веществами. Например, антитело, которое специфически или предпочтительно связывается с эпитопом OX40, представляет собой антитело, которое связывается с этим эпитопом с большей аффинностью, авидностью, легкостью и/или с большей продолжительностью, чем оно связывается с другими эпитопами OX40 или эпитопами не-OX40. Из этого определения также понятно, что, например, антитело (или его фрагмент или эпитоп), которое специфически или предпочтительно связывается с первой мишенью, может или не может специфически или предпочтительно связываться со второй мишенью. Таким образом, «специфическое связывание» или «предпочтительное связывание» необязательно требуют (хотя и могут включать) взаимоисключающее связывание. Как правило, но необязательно, упоминание связывания относится к предпочтительному связыванию.
«Вариабельный участок» антитела относится к вариабельному участку легкой цепи антитела или к вариабельному участку тяжелой цепи антитела, или отдельно, или в комбинации. Как известно в данной области, вариабельные участки и тяжелой, и легкой цепей состоят из четырех каркасных участков (FR), связанных тремя определяющими комплементарность областями (CDR), также известными как гипервариабельные участки. CDR каждой цепи удерживаются вместе в непосредственной близости с помощью FR, и с CDR другой цепи способствуют образованию антигенсвязывающей части антител. Существует по меньшей мере два метода определения CDR: (1) подход, основанный на вариабельности межвидовой последовательности (например, Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda MD)); и (2) подход, основанный на кристаллографических исследованиях комплексов «антиген-антитело» (Al-lazikani et al., 1997, J. Molec. Biol., 273: 927-948). В рамках изобретения CDR может относиться к CDR, определенной с помощью любого подхода, комбинации обоих подходов или любым другим определением CDR, представленным в настоящем описании.
«CDR» вариабельного участка представляют собой аминокислотные остатки в вариабельном участке, которые идентифицированы в соответствии с определениями Kabat, Chothia, суммированием определений и Kabat, и Chothia, AbM, контактными и/или конформационными определениями или любым другим способом определения CDR, хорошо известным в данной области. CDR антител могут быть идентифицированы как гипервариабельные участки, первоначально определенные Kabat et al. см., например, Kabat et al., 1992, Kabat et al., 1992, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, NIH, Washington D.C. Позиции CDR также могут быть идентифицированы как петлеобразные структуры, первоначально описанные Chothia и другими. См., например, Chothia et al., Nature 342: 877-883, 1989. Другие подходы к идентификации CDR включают «определение AbM», которое является компромиссом между определениями Kabat и Chothia, и получено при помощи программного обеспечения AbM для моделирования антител от Oxford Molecular (теперь Accelrys), или «контактное определение» CDR, сделанное на основе наблюдаемых контактов антигенов, которое приведено в MacCallum et al., J. Mol. Biol., 262: 732-745, 1996. В другом подходе, обозначенном в настоящем описании как «конформационное определение» CDR, позиции CDR могут быть идентифицированы как остатки, которые принимают энтальпическое участие в связывание антигена. См., например, Makabe et al., Journal of Biological Chemistry, 283: 1156-1166, 2008. Другие определения границ CDR могут не строго следовать одному из вышеуказанных подходов, но, тем не менее, будут совпадать по меньшей мере с частью определения CDR от Kabat, хотя они могут быть укорочены или удлинены в свете предположений или экспериментальных данных о том, что отдельные остатки или группы остатков или даже целые CDR не оказывают существенного влияния на связывание антигена. В рамках изобретения CDR может относиться к CDR, определенной любым подходом, известным в данной области, включая комбинации подходов. Используемые в настоящем описании способы могут применяться к CDR, определенным в соответствии с любым из этих подходов. Для любого данного варианта осуществления, содержащего более одного CDR, CDR могут быть определены в соответствии с любыми из определений Kabat, Chothia, расширенным, AbM, контактным и/или конформационным.
«Химерное антитело» относится к антителу, в котором часть тяжелой и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителе, полученном у определенного вида (например, человека) или принадлежащем к определенному классу или подклассу антител, тогда как остальная часть цепи (цепей) идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителе, полученном у другого вида (например, мыши) или принадлежащем к другому классу или подклассу антител, а также к фрагментам таких антител, при условии, что они проявляют желаемую биологическую активность.
«Человеческое антитело» относится к антителу, которое содержит последовательности белка только человеческого иммуноглобулина. Человеческое антитело может содержать мышиные углеводные цепи при получении у мыши в мышиной клетке или в гибридоме, полученной из мышиной клетки. Аналогично, «мышиное антитело» или «крысиное антитело» относятся к антителу, которое содержит только мышиные или крысиные иммуноглобулиновые последовательности, соответственно.
«Гуманизированное антитело» относится к формам антител, которые содержат последовательности из нечеловеческих (например, мышиных) антител, а также человеческих антител. Такие антитела содержат минимальную последовательность, полученную из нечеловеческого иммуноглобулина. В общем, гуманизированное антитело будет содержать по существу все из по меньшей мере одного и, как правило, двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все гипервариабельные петли соответствуют петлям из нечеловеческого иммуноглобулина, и всем или по существу всем областям FR, которые представляют собой последовательности человеческого иммуноглобулина.
Гуманизированное антитело необязательно также будет содержать по меньшей мере часть константной области иммуноглобулина (Fc), как правило, из иммуноглобулина человека. Префикс «гум», «гу» или «г» добавляется к обозначениям клона антител, когда это необходимо, чтобы отличать гуманизированные антитела от родительских антител грызунов. Гуманизированные формы антител грызунов обычно будут содержать одни и те же CDR-последовательности родительских антител грызунов, хотя некоторые аминокислотные замены могут быть включены для увеличения аффинности, повышения стабильности гуманизированного антитела или по другим причинам.
Термины «рак», «раковый» или «злокачественный» относятся или описывают физиологическое состояние у млекопитающих, которое, как правило, характеризуется нерегулируемым ростом клеток. Примеры рака включают без ограничения карциному, лимфому, лейкоз, бластому и саркому. Более конкретные примеры таких видов рака включают плоскоклеточный рак, миелому, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ), плоскоклеточный рак головы и шеи (HNSCC), глиому, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому (ДКBКЛ), фолликулярную лимфому, острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), острый миелоидный лейкоз (ОМЛ), хронический лимфолейкоз (ХЛЛ), хронический миелоидный лейкоз (ХМЛ), первичную медиастинальную крупноклеточную В-клеточную лимфому, мантийноклеточную лимфому (МКЛ), мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (МЛЛ), крупноклеточную B-клеточную лимфому, богатую Т-клетками/гистиоцитами, множественную миелому, миелоидный лейкоз-1 (с вовлечением белка Mcl-1), миелодиспластический синдром (МДС), желудочно-кишечный рак, рак почки, рак яичников, рак печени, лимфобластный лейкоз, лимфоцитарный лейкоз, рак кишечника, рак эндометрия, рак почек, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, меланому, хондросаркому, нейробластому, рак поджелудочной железы, мультиформную глиобластому, рак желудка, рак кости, саркому Юинга, рак шейки матки, рак мозга, рак желудка, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки, гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК), светлоклеточный рак почки (RCC), рак головы и шеи, гепатобилиарный рак, опухоли центральной нервной системы, рак пищевода, злокачественная мезотелиому плевры, системный al-амилоидоз, лимфоплазматическую лимфому, миелодиспластические синдромы, миелопролиферативные новообразования, нейроэндокринные опухоли, карциному из клеток Меркеля, рак яичек и рак кожи.
«Биотерапевтическое средство» означает биологическую молекулу, такую как антитело или гибридный белок, которая блокирует передачу сигнала лиганда/рецептора по любому биологическому пути, который помогает поддержанию и/или росту опухоли или подавляет противоопухолевый иммунный ответ.
«Химиотерапевтическое средство» относится к химическому или биологическому веществу, которое может вызвать гибель раковых клеток или препятствовать росту, делению, восстановлению и/или функционированию раковых клеток. Примеры химиотерапевтических средств включают примеры, которые были раскрыты в WO 2006/129163 и US 20060153808, раскрытия которых включены в настоящее описание посредством ссылки. Классы химиотерапевтических средств включают без ограничения: алкилирующие средства, антиметаболиты, ингибиторы киназы, растительные алкалоиды, ингибирующие митотическое веретено, цитотоксические/противоопухолевые антибиотики, ингибиторы топизомеразы, фотосенсибилизаторы, антиэстрогены и селективные модуляторы рецепторов эстрогенов (СМРЭ), антипрогестероны, супрессоры эстрогеновых рецепторов (ERD), антагонисты рецепторов эстрогена, агонисты рилизинг-гормона лютеинизирующего гормона, антиандрогены, ингибиторы ароматазы, ингибиторы рецептора эпидермального фактора роста, ингибиторы фактора роста эндотелия сосудов, антисмысловые олигонуклеотиды, которые ингибируют экспрессию генов, вовлеченных в аномальную пролиферацию клеток или рост опухоли. Химиотерапевтические средства, применяемые в способах лечения настоящего изобретения, включают цитостатические и/или цитотоксические средства.
Антитела и их композиции, представленные настоящим изобретением, можно вводить через любой подходящий энтеральный или парентеральный путь введения. Термин «энтеральный путь» введения относится к введению через любую часть желудочно-кишечного тракта. Примеры энтеральных путей включают оральный, слизистый, буккальный и ректальный, или внутрижелудочный путь. «Парентеральный путь» введения относится к способу введения, отличному от энтерального. Примеры парентеральных путей введения включают внутривенное, внутримышечное, внутрикожное, внутрибрюшинное, внутриопухолевое, внутрипузырное, внутриартериальное, интратекальное, внутрикапсулярное, внутриорбитальное, внутрисердечное, транстрахеальное, внутрисуставное, субкапсулярное, субарахноидальное, интраспинальное, эпидуральное и внутригрудное, подкожное или местное введение. Антитела и композиции данного изобретения можно вводить при помощи любого подходящего способа, такого как пероральный прием внутрь, назогастральная трубка, гастростомическая трубка, инъекция, инфузия, имплантируемый инфузионный насос и осмотический насос. Подходящие путь и способ введения могут варьироваться в зависимости от ряда факторов, таких как применяемое специфическое антитело, желаемая скорость всасывания, применение конкретной композиции или лекарственной формы, тип или тяжесть расстройства, подвергаемого лечению, конкретный участок воздействия, и состояние пациента, и могут быть легко выбраны специалистом в данной области.
Термин «одновременное введение», используемый в контексте данного документа в отношении введения лекарственных средств, относится к введению лекарственных средств таким образом, чтобы отдельные лекарственные средства присутствовали в объекте в одно и то же время. В дополнение к одномоментному введению лекарственных средств (посредством одних и тех же или альтернативных путей) одновременное введение может включать введение лекарств (посредством одного и того же или альтернативного пути) в разное время.
В контексте данного документа «Chothia» означает систему нумерации антител, описанную в Al-Lazikani et al., JMB 273: 927-948 (1997).
et al.
Molecular Biology of the Gene
«Консервативно модифицированные варианты» или «консервативная замена» относятся к заменам аминокислот в белке другими аминокислотами, имеющими сходные характеристики (например, заряд, размер боковой цепи, гидрофобность/гидрофильность, конформация и ригидность каркаса и т. д.), таким образом, что изменения часто могут быть сделаны без изменения биологической активности или другого желаемого свойства белка, такого как аффинность и/или специфичность антигена. Специалисты в данной области признают, что, как правило, единичные замены аминокислот в неэквивалентных областях полипептида существенно не изменяют биологическую активность (см., например, Watson (1987) , The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Ed.)). Кроме того, замены структурно или функционально сходных аминокислот с меньшей вероятностью нарушают биологическую активность. Образцы консервативных замен приведены в таблице 1 ниже.
ТАБЛИЦА 1. Образцы консервативных аминокислотных замен
Исходный остаток
Консервативная замена
Ala (A)
Gly; Ser
Arg (R)
Lys; His
Asn (N)
Gln; His
Asp (D)
Glu; Asn
Cys (C)
Ser; Ala
Gln (Q)
Asn
Glu (E)
Asp; Gln
Gly (G)
Ala
His (H)
Asn; Gln
Ile (I)
Leu; Val
Leu (L)
Ile; Val
Lys (K)
Arg; His
Met (M)
Leu; Ile; Tyr
Phe (F)
Tyr; Met; Leu
Pro (P)
Ala
Ser (S)
Thr
Thr (T)
Ser
Trp (W)
Tyr; Phe
Tyr (Y)
Trp; Phe
Val (V)
Ile; Leu
«Состоит по существу из», и такие варианты, как «состоят по существу из» или «состоящие по существу из», применяемые в описании и формуле изобретения, указывают на включение каких-либо упомянутых элементов или группы элементов, и необязательное включение других элементов, аналогичного или различного характера, чем упомянутые элементы, которые существенно не изменяют основные или новые свойства указанной схемы лечения, способа или композиции. В качестве неограничивающего примера, агонист OX40, который состоит, по существу, из аминокислотной последовательности, также может содержать одну или более аминокислот, содержащих замены одного или нескольких аминокислотных остатков, которые не оказывают существенного влияния на свойства связывающего соединения.
«Каркасный участок» или «FR» в контексте данного документа означает вариабельные участки иммуноглобулина, за исключением областей CDR.
«Гомология» относится к сходству между двумя полипептидными последовательностями, когда они оптимально выровнены. Когда позиция в обеих двух сравниваемых последовательностях занята одной и той же аминокислотной субъединицей-мономером, например, если позиция в CDR легкой цепи двух разных антител занята аланином, тогда оба антитела гомологичны в этой позиции. Процент гомологии представляет собой число гомологичных позиций, разделяемых двумя последовательностями, деленными на общее количество сравниваемых позиций × 100. Например, если 8 из 10 позиций в двух последовательностях совпадают или гомологичны, когда последовательности оптимально выровнены, то две последовательности являются гомологичными на 80%. Как правило, сравнение выполняют, когда две последовательности выровнены, чтобы обеспечить максимальную процентную гомологию. Например, сравнение можно выполнять с помощью алгоритма BLAST, причем параметры алгоритма выбирают так, чтобы обеспечить наибольшее совпадение между соответствующими последовательностями по всей длине соответствующих указанных последовательностей.
АЛГОРИТМЫ BLAST:
СИСТЕМЫ ОЦЕНКИ ВЫРАВНИВАНИЯ
СТАСТИСТИКА ВЫРАВНИВАНИЙ
et al.
et al.
et al.
et al.
et al.
et al.
et al.
et al.
et al.
et al.
et al.
et al.
et al.
et al.
et al.
Следующие ссылки относятся к алгоритмам BLAST, часто применяемым для анализа последовательностей:  Altschul, S.F., , (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410; Gish, W., , (1993) Nature Genet. 3:266-272; Madden, T.L., , (1996) Meth. Enzymol. 266:131-141; Altschul, S.F., , (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402; Zhang, J., , (1997) Genome Res. 7:649-656; Wootton, J.C., , (1993) Comput. Chem. 17:149-163; Hancock, J.M. , (1994) Comput. Appl. Biosci. 10:67-70; : Dayhoff, M.O., , «A model of evolutionary change in proteins». in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3. M.O. Dayhoff (ed.), pp. 345-352, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Schwartz, R.M., , «Matrices for detecting distant relationships». in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3». M.O. Dayhoff (ed.), pp. 353-358, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Altschul, S.F., (1991) J. Mol. Biol. 219:555-565; States, D.J., , (1991) Methods 3:66-70; Henikoff, S., , (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915-10919; Altschul, S.F., , (1993) J. Mol. Evol. 36:290-300; : Karlin, S., , (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268; Karlin, S., , (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877; Dembo, A., , (1994) Ann. Prob. 22:2022-2039; and Altschul, S.F. «Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments». in Theoretical and Computational Methods in Genome Research (S. Suhai, ed.), (1997) pp. 1-14, Plenum, New York.
«Выделенное антитело» и «выделенный фрагмент антитела» относятся к состоянию очистки и в этом контексте означают, что обозначенная молекула по существу не содержит других биологических молекул, таких как нуклеиновые кислоты, белки, липиды, углеводы или другой материал, такой как клеточный мусор и питательная среда. Как правило, термин «выделенный» не подразумевает обозначение полного отсутствия такого материала или отсутствия воды, буферных растворов или солей, если они не присутствуют в количествах, которые существенно мешают экспериментальному или терапевтическому применению связывающего соединения, как описано в настоящем описании.
В рамках изобретения «Кабат» означает систему выравнивания и нумерации иммуноглобулина, впервые предложенную Эльвином А. Кабатом ((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.).
«Моноклональное антитело», «mAb» или «Mab» в рамках изобретения относятся к популяции по существу гомогенных антител, то есть молекулы антитела, составляющие популяцию, идентичны в аминокислотной последовательности, за исключением возможных естественных мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Напротив, обычные (поликлональные) препараты антител обычно содержат множество различных антител, имеющих различные аминокислотные последовательности в своих вариабельных доменах, особенно в их CDR, которые часто специфичны для разных эпитопов. Модификатор «моноклональный» указывает на характер антитела, который получают из по существу гомогенной популяции антител, и его не следует истолковывать как требующий получения антитела любым другим способом. Например, моноклональные антитела, которые будут использоваться в соответствии с настоящим настоящее изобретением, могут быть получены с помощью гибридомного способа, впервые описанного Kohler et al. (1975) Nature 256: 495, или могут быть получены способами рекомбинантной ДНК (см., например, патент США № 4816567). «Моноклональные антитела» также можно выделять из библиотек фаговых антител при помощи методов, описанных в Clackson et al. (1991) Nature 352: 624-628 и Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222: 581-597, например, см. также Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116: 731.
«Пациент» или «объект» относится к любому отдельному объекту, которому требуется терапия или который участвует в клиническом исследовании, эпидемиологическом исследовании или принимает участие в контрольной группе, включая людей и ветеринарных пациентов из числа млекопитающих, таких как крупный рогатый скот, лошади, собаки и кошки.
«RECIST 1.1 Критерии ответа» в рамках изобретения относится к определениям, приведенным в Eisenhauer et al., E.A. et al., Eur. J Cancer 45: 228-247 (2009) для целевых или нецелевых опухолевых очагов, в зависимости от ситуации, на основе контекста, в котором измеряется уровень ответа.
«Устойчивый ответ» означает устойчивый терапевтический эффект после прекращения лечения терапевтическим средством или комбинированной терапией, описанными в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления устойчивый ответ имеет продолжительность, которая по меньшей мере такая же, как продолжительность лечения, или по меньшей мере в 1,5, 2,0, 2,5 или 3 раза дольше, чем продолжительность лечения.
«Тканевый срез» относится к отдельной части или кусочку образца ткани, например, тонкому кусочку ткани, вырезанному из образца обычной ткани или опухоли.
«Лечить» или «лечение» рака в рамках изобретения означают введение одного или нескольких терапевтических средств (например, комбинированной терапии агонистом OX40 и агонистом 4-1BB) объекту, имеющему рак, или которому был поставлен диагноз рак, чтобы достичь по меньшей мере одного положительного терапевтического эффекта, такого как, например, уменьшенное количество раковых клеток, уменьшение размера опухоли, снижение скорости инфильтрации раковых клеток в периферические органы или снижение скорости метастазирования опухоли или роста опухоли. Положительные терапевтические эффекты при раке можно измерить несколькими способами (см. W. A. Weber, J. Nucl., Med. 50: 1S-10S (2009)). Например, в отношении ингибирования роста опухоли, согласно стандартам NCI, T/C ≤ 42% является минимальным уровнем противоопухолевой активности. T/C <10% считается высоким уровнем противоопухолевой активности, T/C (%)=средний объем опухоли в группе лечения/средний объем опухоли в контрольной группе × 100. В некоторых вариантах осуществления ответ на лечение, достигаемый комбинацией изобретения, представляет собой любой из PR, CR, OR, PFS, DFS и ОS. PFS, также называемый «время до прогрессирования опухоли», обозначает продолжительность во время и после лечения, когда опухоль не растет, и включает в себя количество времени, в течение которого пациенты имели полный (CR) или частичный (PR) ответы, а также количество пациентов, которые имели SD. DFS относится к продолжительности срока во время и после лечения, когда пациент выздоравливает. ОS относится к увеличению продолжительности жизни по сравнению с контрольной группой или не проходившими лечение индивидуумами или пациентами. В некоторых вариантах осуществления ответ на комбинацию изобретения представляет собой любой из PR, CR, PFS, DFS, OR или OS, который оценивается с использованием критериев ответа RECIST 1.1. Схема лечения комбинацией изобретения, которая эффективна для лечения больного раком, может варьировать в зависимости от таких факторов, как течение болезни, возраст и вес пациента, а также способность терапии вызывать противораковый ответ у объекта. Хотя вариант осуществления любого из аспектов изобретения может быть неэффективным для достижения положительного терапевтического эффекта у каждого объекта, это должно быть у статистически значимого количества объектов, что определяется любым статистическим тестом, известным в данной области, например, t-тест, chi2-тест, U-тест по Манну и Уитни, тест Крускал-Уоллиса (H-тест), тест Йонкхере-Терпстра и тест Уилкоксона.
Термины «схема лечения», «протокол применения» и «схема применения» применяются взаимозаменяемо для обозначения дозы и времени введения каждого терапевтического средства в комбинации изобретения.
«Лечение» в рамках изобретения представляет собой подход для получения положительных или желательных клинических результатов. Для целей данного изобретения положительные или желательные клинические результаты включают без ограничения одно или несколько из следующего: уменьшение пролиферации (или разрушение) неопластических или раковых клеток, ингибирование метастазирования неопластических клеток или сокращение или уменьшение размера опухоли.
«Улучшение» в рамках изобретения означает уменьшение или улучшение одного или более симптомов по сравнению с не введением агониста OX40 и агониста 4-1BB. «Улучшение» также включает сокращение или уменьшение продолжительности симптома.
В рамках изобретения «эффективная дозировка» или «эффективное количество» лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для достижения какого-либо одного или нескольких положительных или желательных результатов. В целях профилактического применения положительные или желательные результаты включают устранение или снижение риска, уменьшение тяжести или замедление развития заболевания, включая биохимические, гистологические и/или поведенческие симптомы заболевания, его осложнения и промежуточные патологические фенотипы, появляющиеся во время развития болезни. В целях терапевтического применения положительные или желательные результаты включают клинические результаты, такие как уменьшение распространенности или улучшение одного или нескольких симптомов различных заболеваний или состояний (таких как, например, рак), уменьшение дозы других лекарств, необходимых для лечения болезни, повышение эффекта другого лекарственного средства и/или замедление прогрессирования заболевания пациентов. Эффективную дозировку можно вводить в одно или несколько введений. Для целей данного изобретения эффективная дозировка лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для проведения профилактического или терапевтического лечения прямо или косвенно. Следует понимать в клиническом контексте, что эффективная дозировка лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции может быть достигнута или не может быть достигнута в сочетании с другим лекарственным средством, соединением или фармацевтической композицией. Таким образом, «эффективная дозировка» может рассматриваться в контексте введения одного или нескольких терапевтических средств, и одно средство может считаться применяемым в эффективном количестве, если в сочетании с одним или несколькими другими средствами желаемый результат может быть или будет достигнут.
Термин «фармацевтически приемлемый носитель» относится к любому неактивному веществу, которое подходит для применения в готовой форме для доставки связывающей молекулы. Носитель может быть антиадгезионным веществом, связывающим веществом, покрывающим веществом, средством, вызывающим дезинтеграцию, наполнителем или разбавителем, консервантом (таким как антиоксидант, антибактериальное или противогрибковое средство), подсластителем, средством, замедляющим абсорбцию, смачивающим средством, эмульгатором, буфером и тому подобным. Примеры подходящих фармацевтически приемлемых носителей включают воду, этанол, полиолы (такие как глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и т.п.), декстрозу, растительные масла (такие как оливковое масло), физиологический раствор, буферный раствор, забуференный физиологический раствор и изотонические средства, такие как сахара, полиспирты, сорбит и хлорид натрия.
«Опухоль», применительно к объекту с установленным диагнозом или с подозрением на наличие рака, относится к злокачественному или потенциально злокачественному новообразованию или тканевой массе любого размера и включает первичные опухоли и вторичные новообразования. Солидная опухоль представляет собой аномально растущие ткани или массы, которые обычно не содержат кисты или жидкостные области. Различные типы солидных опухолей называются по типу клеток, которые их образуют. Примерами солидных опухолей являются саркомы, карциномы и лимфомы. Лейкозы (раковые заболевания крови) обычно не образуют солидных опухолей (Национальный онкологический институт, Словарь онкологических терминов).
«Солидная опухоль высокой степени злокачественности» и «распространенная солидная опухоль» используются взаимозаменяемо и относятся к опухоли, которая рецидивирует, прогрессирует, а также метастазирует, локально распространяется после и/или рефрактерна к начальной или первой линии лечения. Распространенные солидные опухоли включают без ограничения метастатические опухоли в кости, головном мозге, груди, печени, легких, лимфатическом узле, поджелудочной железе, предстательной железе и мягких тканях (саркома).
«Опухолевая масса», также обозначаемая как «опухолевая нагрузка», относится к общему количеству опухолевого материала, распределенного по всему телу. Опухолевая масса относится к общему числу раковых клеток или общему размеру опухоли (опухолей) по всему телу, включая лимфоузлы и костный мозг. Опухолевая масса может быть определена с помощью различных способов, известных в данной области, таких как, например, измерение размеров опухоли (опухолей) при удалении у объекта, например, с использованием кронциркулей, или, когда они в организме, при помощи методов визуализации, например, сканированием ультразвуком, сканированием костей, компьютерной томографией (КТ) или магнитно-резонансной томографией (МРТ).
Термин «размер опухоли» относится к общему размеру опухоли, который может быть измерен по длине и ширине опухоли. Размер опухоли может быть определен различными способами, известными в данной области, такими как, например, измерение размеров опухоли (опухолей) при удалении у объекта, например, с использованием кронциркулей, или, когда они в организме, при помощи методов визуализации, например, сканированием костей, ультразвуком, КТ или МРТ.
«Антитело к OX40» в рамках изобретения означает антитело, по определению данного документа, способное связываться с рецептором OX40 человека.
Термины «OX40» и «рецептор OX40» используются в настоящей заявке взаимозаменяемо и относятся к любой форме рецептора OX40, а также к вариантам, изоформам и их гомологическим видам, которые сохраняют по меньшей мере часть активности рецептора OX40. Соответственно, связывающая молекула, как определено и раскрыто в данном документе, также может связываться с OX40 у видов, не являющихся человеком. В других случаях связывающая молекула может быть полностью специфичной для человеческого OX40 и может не проявляться у других видов или показывать какую-либо перекрестную реактивность. Если не указано иное, например, посредством конкретной ссылки на человеческий OX40, OX40 включает в себя все виды млекопитающих, имеющих нативную последовательность OX40, например, человека, собак, кошек, лошадей и крупного рогатого скота. Один из образцов OX40 человека представляет собой белок из 277 аминокислот (UniProt Accession No P43489).
«Антитело-агонист к OX40» в рамках изобретения означает любое антитело по определению данного документа, которое при связывании с OX40, (1) стимулирует или активирует OX40, (2) усиливает, увеличивает, повышает, индуцирует или продлевает активность, функционирование или присутствие OX40, или (3) усиливает, увеличивает, повышает или индуцирует экспрессию OX40. Агонисты OX40, применяемые в любом из способов лечения, лекарственных средствах и вариантах применения настоящего изобретения включают моноклональное антитело (mAb), которое специфически связывается с OX40.
Примеры mAb, которые связываются с человеческим OX40 и применяются в способе лечения, лекарственных средствах и вариантах применения настоящего изобретения, описаны, например, в патенте США № 7,960,515, публикациях патентных заявок PCT № WO2009079335, WO201302823 и WO2013119202, и публикации патентной заявки США № 20150190506, каждая из которых включена в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах осуществления антитело к OX40, применяемое в лечении, способе, лекарственных средствах и вариантах применения, раскрытых в настоящем описании, представляет собой полностью человеческое моноклональное антитело-агонист, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности, показанные в SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, соответственно. В некоторых вариантах осуществления антитело к OX40, применяемое в лечении, способе, лекарственных средствах и вариантах применения, раскрытых в настоящем описании, представляет собой полностью человеческое моноклональное антитело-агонист, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности, показанные в SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 29, соответственно. В некоторых вариантах осуществления антитело к OX40 представляет собой полностью человеческое антитело к IgG2 или IgG1.
В таблице 2 ниже приведены примеры последовательностей антител к OX40 для применения в способах лечения, лекарственных средствах и вариантах применения настоящего изобретения.
Таблица 2. ПРИМЕРЫ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ МОНОКЛОНАЛЬНОГО АНТИТЕЛА к ЧЕЛОВЕЧЕСКОМУ OX40
CDRH1 11D4
SYSMN (SEQ ID NO: 1)
CDRH2 11D4
YISSSSSTIDYADSVKG (SEQ ID NO: 2)
CDRH3 11D4
ESGWYLFDY (SEQ ID NO: 3)
CDRL1 11D4
RASQGISSWLA (SEQ ID NO: 4)
CDRL2 11D4
AASSLQS (SEQ ID NO: 5)
CDRL3 11D4
QQYNSYPPT (SEQ ID NO: 6)
VR 11D4 тяжелой цепи
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSTIDYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARESGWYLFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 7)
VR 11D4 легкой цепи
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 8)
11D4 тяжелой цепи
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSTIDYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARESGWYLFDYWGQGTLVTVSSastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk (SEQ ID NO: 9)
11D4 легкой цепи
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPPTFGGGTKVEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec (SEQ ID NO: 10)
CDRH1 18D8
DYAMH (SEQ ID NO: 22)
CDRH2 18D8
GISWNSGSIGYADSVKG (SEQ ID NO: 23)
CDRH3 18D8
DQSTADYYFYYGMDV (SEQ ID NO: 24)
CDRL1 18D8
RASQSVSSYLA (SEQ ID NO: 25)
CDRL2 18D8
DASNRAT (SEQ ID NO: 26)
CDRL3 18D8
QQRSNWPT (SEQ ID NO: 27)
VR 18D8 тяжелой цепи
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDQSTADYYFYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 28)
VR 18D8 легкой цепи
EIVVTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 29)
18D8 тяжелой цепи
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDQSTADYYFYYGMDVWGQGTTVTVSSastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk (SEQ ID NO: 30)
18D8 легкой цепи
EIVVTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPTFGQGTKVEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec (SEQ ID NO: 31)
«Антитело к 4-1BB» в рамках изобретения означает антитело, по определению данного документа, способное связываться с рецептором 4-1BB человека.
Термины «4-1BB» и «рецептор 4-1BB» используются в настоящей заявке взаимозаменяемо и относятся к любой форме рецептора 4-1BB, а также к вариантам, изоформам и их гомологическим видам, которые сохраняют по меньшей мере часть активности рецептора 4-1BB. Соответственно, связывающая молекула как определено и раскрыто в данном документе может также связываться с 4-1BB у видов, отличных от человека. В других случаях связывающая молекула может быть полностью специфичной для человеческого 4-1BB и может не проявляться у других видов или показывать какую-либо перекрестную реактивность. Если не указано иное, например, посредством конкретной ссылки на человеческий 4-1BB, 4-1BB включает в себя все виды млекопитающих, имеющих нативную последовательность 4-1BB, например, человека, собак, кошек, лошади и крупного рогатого скота. Один из образцов 4-1BB человека представляет собой белок из 255 аминокислот (Accession No. NM_001561; NP_001552). Один вариант осуществления полной аминокислотной последовательности 4-1BB человека представлен в SEQ ID NO: 21.
4-1BB содержит сигнальную последовательность (аминокислотные остатки 1-17), за которой следует внеклеточный домен (169 аминокислот), трансмембранный участок (27 аминокислот) и внутриклеточный домен (42 аминокислоты) (Cheuk ATC et al. 2004 Cancer Gene Therapy 11: 215 226). Рецептор экспрессируется на поверхности клетки в мономерных и димерных формах и, вероятно, тримеризуется лигандом 4-1BB для подачи сигнала.
«Агонист 4-1BB» в рамках изобретения означает любое химическое соединение или биологическую молекулу, по определению данного документа, которое при связывании с 4-1BB, (1) стимулирует или активирует 4-1BB, (2) усиливает, увеличивает, повышает, индуцирует или продлевает активность, функционирование или присутствие 4-1BB или (3) усиливает, увеличивает, повышает или индуцирует экспрессию 4-1BB. Агонисты 4-1BB, применяемые в любом способе лечения, лекарственных средствах и вариантах применения настоящего изобретения включают моноклональное антитело (mAb), которое специфически связывается с 4-1BB. Альтернативные названия или синонимы для 4-1BB включают CD137 и TNFRSF9. В любом из способов лечения, лекарственных средств и вариантов применения настоящего изобретения, которыми лечится человеческий индивидуум, агонисты 4-1BB увеличивают ответ, вызванный 4-1BB. В некоторых вариантах способов лечения, лекарственных средств и вариантов применения настоящего изобретения агонисты 4-1BB заметно усиливают цитотоксические Т-клеточные ответы, что приводит к противоопухолевой активности в нескольких моделях.
Примеры mAb, которые связываются с человеческим 4-1BB, и применяются в способах лечения, лекарственных средствах и вариантах применения настоящего изобретения, описаны в US 8,337,850 и US 2013-0078240, каждый из которых включен в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Специфические моноклональные антитела к человеческому 4-1BB, применяемые в качестве агониста 4-1BB в способе лечения, лекарственных средствах и вариантах применения настоящего изобретения, включают, например, PF 05082566. PF 05082566 представляет собой полностью гуманизированное моноклональное антитело-агонист к IgG2, нацеленное на 4-1BB.
В некоторых вариантах осуществления антитело к 4-1BB, применяемое в лечении, способе, лекарственных средствах и вариантах применения, раскрытых в настоящем описании, представляет собой полностью гуманизированное моноклональное антитело-агонист к IgG2, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности, показанные в SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 18, соответственно.
В таблице 3 ниже приведены примеры последовательностей антител к 4-1BB для применения в способах лечения, лекарственных средствах и вариантах применения настоящего изобретения.
Таблица 3. ПРИМЕРЫ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ МОНОКЛОНАЛЬНОГО АНТИТЕЛА К ЧЕЛОВЕЧЕСКОМУ 4-1BB
CDRH1
STYWIS (SEQ ID NO: 11)
CDRH2
KIYPGDSYTNYSPSFQG (SEQ ID NO: 12)
CDRH3
RGYGIFDY (SEQ ID NO: 13)
CDRL1
SGDNIGDQYAH (SEQ ID NO: 14)
CDRL2
QDKNRPS (SEQ ID NO: 15)
CDRL3
ATYTGFGSLAV (SEQ ID NO: 16)
VR тяжелой цепи
EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYSFSTYWISWVRQMPGKGLEWMGKIYPGDSYTNYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGYGIFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 17)
VR легкой цепи
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDNIGDQYAHWYQQKPGQSPVLVIYQDKNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYTGFGSLAVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 18)
Тяжелая цепь
EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYSFSTYWISWVRQMPGKGLEWMGKIYPGDSYTNYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGYGIFDYWGQGTLVTVSSastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk (SEQ ID NO: 19)
Легкая цепь
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDNIGDQYAHWYQQKPGQSPVLVIYQDKNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYTGFGSLAVFGGGTKLTVLgqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs (SEQ ID NO: 20)
2
MAb может быть человеческим антителом, гуманизированным антителом или химерным антителом, и может содержать константную область человека. В некоторых вариантах осуществления константную область человека выбирают из группы, состоящей из константных областей IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, и в некоторых вариантах осуществления константная область человека представляет собой константную область IgG1 или IgG4. В некоторых вариантах осуществления антитело выбирается из группы, состоящей из Fab, Fab'-SH, F (ab'), scFv и Fv-фрагментов.
В некоторых вариантах осуществления способов лечения, лекарственных средств и вариантов применения настоящего изобретения агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, которое содержит: (a) CDR легкой цепи SEQ ID NO: 14, 15 и 16 и CDR тяжелой цепи SEQ ID NO: 11, 12 и 13.
В некоторых вариантах осуществления способов лечения, лекарственных средств и вариантов применения настоящего изобретения агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, которое содержит: (a) CDR легкой цепи SEQ ID NO: 4, 5 и 6 и CDR тяжелой цепи SEQ ID NO: 1, 2 и 3.
В некоторых вариантах осуществления способов лечения, лекарственных средств и вариантов применения настоящего изобретения агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с 4-1BB человека и содержит (а) вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий SEQ ID NO: 17 или ее вариант, и (b) вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, содержащую SEQ ID NO: 18 или ее вариант.
Вариант последовательности вариабельного участка тяжелой цепи идентичен референсной последовательности за исключением наличия до 17 консервативных аминокислотных замен в каркасном участке (то есть вне CDR), и предпочтительно имеет менее десяти, девяти, восьми, семи, шести или пяти консервативных аминокислотных замен в каркасном участке. Вариант последовательности вариабельного участка легкой цепи идентичен референсной последовательности за исключением наличия в каркасном участке (т.е. вне CDR) до пяти консервативных аминокислотных замен, и предпочтительно имеет менее четырех, трех или двух консервативных аминокислотных замен в каркасном участке.
В некоторых вариантах осуществления способов лечения, лекарственных средств и вариантов применения настоящего изобретения агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с человеческим OX40 и содержит (а) вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий SEQ ID NO: 7 или его вариант, и (b) вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 8 или ее варианта.
В некоторых вариантах осуществления способов лечения, лекарственных средств и вариантов применения настоящего изобретения агонист 4-1BB представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с 4-1BB человека и содержит (а) аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 19 и (b) аминокислотную последовательность легкой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 20, при условии, что C-концевой остаток лизина SEQ ID NO: 19 необязательно отсутствует.
В некоторых вариантах осуществления способов лечения, лекарственных средств и вариантов применения настоящего изобретения агонист OX40 представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с человеческим OX40 и содержит (а) аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 9, и (b) аминокислотную последовательность легкой цепи, которая приведена в SEQ ID NO: 10, при условии, что C-концевой остаток лизина SEQ ID NO: 9 необязательно отсутствует.
В некоторых вариантах осуществления способов лечения, лекарственных средств и вариантов применения настоящего изобретения агонистом OX40 является PF-04518600. PF-04518600 представляет собой полностью человеческое моноклональное антитело (mAb) к IgG2, которое функционирует как агонист для рецептора OX40.
Следует понимать, что везде, где варианты осуществления описаны в настоящем описании с формулировкой «включая», также предусмотрены другие аналогичные варианты осуществления, описанные с помощью формулировок «состоящее из» и/или «состоящее по существу из».
Когда аспекты или варианты осуществления изобретения описаны терминами группы Маркуша или другой группы альтернатив, настоящее изобретение охватывает не только всю группу, перечисленную в целом, но и каждого члена группы индивидуально и все возможные подгруппы основной группы, и также, если в основной группе отсутствуют один или несколько членов группы. Настоящее изобретение также предусматривает явное исключение одного или нескольких членов группы в заявленном изобретении.
Если не указано иное, все технические и научные термины в рамках изобретения имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в области, к которой относится настоящее изобретение. В случае конфликта, настоящее описание изобретения, включая определения, будет иметь преимущество. По всему данному описанию и формуле изобретения слово «содержать» или варианты, такие как «содержит» или «содержащий», будут подразумевать включение указанного целого числа или группы целых чисел, но не исключение какого-либо другого целого числа или группы целых чисел. Если по контексту не требуется иное, термины в единственном числе могут включать множественные числа, а термины во множественном числе могут включать единственное число. Любой пример (примеры), следующие за словами «например» или «к примеру», не подразумеваются как исчерпывающие или ограничивающие.
В данном документе описаны примеры способов и материалов, хотя в практике или испытаниях настоящего изобретения также можно применять способы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным в настоящем документе. Материалы, способы и примеры являются только иллюстративными и не подразумевают ограничения.
ii. Способы, варианты применения и лекарственные средства
В одном аспекте изобретения настоящее изобретение относится к способу лечения рака у индивидуума, предусматривающему проведение комбинированной терапии индивидуума, которая включает агонист OX40 и агонист 4-1BB. Комбинированная терапия может также включать одно или несколько дополнительных терапевтических средств. Дополнительным терапевтическим средством может быть, например, химиотерапевтическое средство, биотерапевтическое средство (включая без ограничения антитела к VEGF, VEGFR, EGFR, Her2/neu, другим рецепторам фактора роста, CD20, CD40, CD-40L, CTLA-4, PD-L1 и ICOS), иммуногенное средство (например, аттенуированные раковые клетки, опухолевые антигены, антигенпредставляющие клетки, такие как дендритные клетки, в которые ввели полученный из опухоли антиген или нуклеиновые кислоты, иммуностимулирующие цитокины (например, IL-2, IFNα2, GM-CSF) и клетки, трансфицированные генами, кодирующими иммуностимулирующие цитокины, такие как без ограничения GM-CSF).
Примеры химиотерапевтических средств включают алкилирующие средства, такие как тиотепа и циклофосфамид; алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбокон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилоломеламин; ацетогенины (особенно буллатацин и буллатацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекан); бриостатин; каллистатин; CC-1065 (включая его синтетические аналоги адозелезин, карзелезин и бизелезин); криптофицины (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги, KW-2189 и CBI-TMI); элеутеробин; панкратистатин; саркодиктин; спонгистатин; азотистые иприты, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, гидрохлорид оксида мехлорэтамина, мелфалан, новэмбихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урациловый иприт; производные нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин; антибиотики, такие как антибиотики энедиина (например, калихеамицин, особенно калихеамицин gamma1I и калихеамицин phiI1, см., например, Agnew, Chem., Engl., 33: 183-186 (1994), динемицин, включая динемицин A; бисфосфонаты, такие как как клодронат, эсперамицин, а также хромофор неокарциностатин и сходные хромофоры из хромопротеидов энедииновых антибиотиков), аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, доксорубицин (включая морфолино-доксорубицин, цианоморфолино-доксорубицин, 2-пирролино-доксорубицин и дезоксидокорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофенольная кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, порфиромицин, пуромицин, келамицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, циностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-ФУ); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; пуриновые аналоги, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; пиримидиновые аналоги, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолона пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; антиадреналы, такие как аминоглютетимид, митотан, трилостан; заменитель фолиевой кислоты, такой как фолиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамид гликозид; аминолевулиновая кислота; энилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бизантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; эльформитин; эллиптиния ацетат; эпотилон; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидамин; майтансиноиды, такие как майтансин и ансамитоцин; митогуазон; митоксантрон; мопидамол; нитракрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; разоксан; ризоксин; сизофуран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквон; 2, 2', 2»-трихлортриэтиламин; трихотецены (особенно токсин Т-2, верракурин А, роридин А и ангиодин); уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид («Ара-С»); циклофосфамид; тиотепа; таксоиды, например, паклитаксел и доксетаксел; хлорамбуцил; гемцитабин; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; платиновые аналоги, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; платины; этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин; винорельбин; новантрон; тенипозид; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; Кселода; ибандронат; СРТ-11; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; капецитабин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеуказанных. Также включены антигормональные средства, которые регулируют или ингибируют гормональное действие на опухоли, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы рецепторов эстрогенов (SERM), включая, например, тамоксифен, ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY117018, онпристон и торемифен (Fareston); ингибиторы ароматазы, которые ингибируют ферментативную ароматазу, регулирующую выработку эстрогена в надпочечниках, такие как, например, 4(5)-имидазолы, аминоглютетимид, мегестролацетат, экземестан, форместан, фадрозол, ворозол, летрозол и анастрозол; и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалютамид, лейпролид и госерелин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеуказанных.
В некоторых вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство в комбинированной терапии, представленной в настоящем описании, включающей агонист OX-40 и агонист 4-1BB, может представлять собой, например, антитело к CTLA4, антитело к PD-1, антитело к PD-L1, антитело к TIM3, антитело к LAG3, антитело к TIGIT, антитело к HVEM, антитело к BTLA, антитело к CD40, антитело к CD47, антитело к CSF1R или CSF1, антитело к MARCO, ингибитор CCR2, терапию на основе цитокинов (например, IL-2 (или варианты IL-2), IL-7 (и варианты IL-7), IL-15 (и варианты IL-15), IL-12 (и варианты IL-12), IFNγ (или варианты IFNγ), IFNα (или варианты IFNα), IL-8 (или антитела к IL-8), антитела к CXCR4, антитела к VEGFR1 или VEGFR2, TNFα (или варианты TNFα), антитело к TNFR1 или TNFR2, ингибитор киназы, ингибитор ALK, ингибитор MEK, ингибитор IDO, ингибитор GLS1, биспецифическое антитело к CD3, терапию клетками CART или Т-клетками, таргетную терапию, такую как PTK7-ADC, противоопухолевое антитело (например, антитело к CD19, антитело к CD20 или антитело к Her2), онколитический вирус или опухолевую вакцину.
Каждое терапевтическое средство в комбинированной терапии изобретения можно вводить либо отдельно, либо в лекарственном средстве (также называемом в настоящем описании как фармацевтическая композиция), которое содержит терапевтическое средство и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, эксципиентов и разбавителей в соответствии со стандартной фармацевтической практикой.
Каждое терапевтическое средство в комбинированной терапии изобретения можно вводить одновременно (например, в одном и том же лекарственном средстве или в одно и то же время), параллельно (то есть в отдельных лекарственных средствах, вводимых одно за другим в любом порядке) или последовательно в любом порядке. Последовательное введение особенно удобно, когда терапевтические средства в комбинированной терапии находятся в разных дозированных лекарственных формах (одно средство представляет собой таблетку или капсулу, а другое средство представляет собой стерильную жидкость) и/или вводятся по разным графикам применения, например химиотерапевтическое средство, которое вводят по меньшей мере ежедневно и биотерапевтическое средство, которое вводят реже, например, один раз в неделю, один раз в две недели или один раз в три недели.
2
2
Единицы дозирования могут быть выражены, например, в мг (например, мг на объект), мг/кг (т. е. мг/кг от массы тела) или мг/м. Единицы дозирования мг/м относятся к количеству в миллиграммах на квадратный метр площади поверхности тела.
В некоторых случаях агонист OX40 и агонист 4-1BB объединяют или сочетают в одной дозированной лекарственной форме.
Хотя одновременное введение агониста OX40 и агониста 4-1BB можно поддерживать на протяжении всего периода лечения или профилактики, противораковая активность также может достигаться путем последовательного введения одного соединения отдельно (например, агониста OX40 без 4-1BB, после комбинированной терапии или, наоборот, агониста 4-1BB без агониста OX40) после комбинированной терапии.
В некоторых вариантах осуществления агонист 4-1BB вводят перед введением агониста OX40, в то время как в других вариантах осуществления агонист 4-1BB вводят после введения агониста OX40.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно из терапевтических средств в комбинированной терапии вводят, используя ту же схему лечения (дозу, частоту и продолжительность лечения), которая обычно применяется, когда для лечения той же самой опухоли средство используется в виде монотерапии. В других вариантах осуществления пациент получает меньшее общее количество по меньшей мере одного из терапевтических средств в комбинированной терапии, чем, когда средство используется в виде монотерапии, например, меньшие дозы, менее частые дозы и/или более короткую продолжительность лечения.
Комбинированную терапию изобретения можно применять до или после операции по удалению опухоли и ее можно применять до, во время или после лучевой терапии.
В некоторых вариантах осуществления комбинированную терапию изобретения вводят пациенту, который ранее не лечился биотерапевтическим или химиотерапевтическим средством, то есть не получал лекарственную терапию. В других вариантах осуществления комбинированную терапию вводят пациенту, который не смог достичь устойчивого ответа после предшествующей терапии биотерапевтическим или химиотерапевтическим средством, то есть имел опыт лечения.
3
3
3
3
3
3
Комбинированную терапию изобретения обычно применяют для лечения опухоли, которая достаточно велика для обнаружения пальпацией или методами визуализации, хорошо известными в данной области, такими как МРТ, ультразвуковое или CAT-сканирование. В некоторых вариантах осуществления комбинированную терапию изобретения применяют для лечения опухоли продвинутой стадии, имеющей размеры по меньшей мере приблизительно 200 мм, 300 мм, 400 мм, 500 мм, 750 мм или до 1000 мм.
В одном варианте осуществления схему лечения адаптируют к обстоятельствам, ответу и сопутствующим способам лечения конкретного пациента способом, который являются общепринятыми для любой терапии и который можно скорректировать в ответ на изменения состояния и/или в свете других клинических условий.
Antibody Therapy
Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis
Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases
et al
New Engl. J. Med.
et al
New Engl. J. Med.
et al
New Engl. J. Med.
et al
New Engl. J. Med.
et al
New Engl. J. Med.
et al
New Engl. J. Med.
В некоторых вариантах осуществления выбор схемы лечения (также называемой в настоящем описании как схема введения) для комбинированной терапии изобретения зависит от нескольких факторов, включая скорость циркуляции действующего вещества в сыворотке или ткани, уровень симптомов, иммуногенность действующего вещества и доступность клеток-, ткани- или органа-мишени у индивидуума, подлежащего лечению. Предпочтительно, схема лечения делает максимальным количество каждого терапевтического средства, доставляемого пациенту, в соответствии с приемлемым уровнем побочных эффектов. Соответственно, величина дозы и частота введения дозы каждого биотерапевтического и химиотерапевтического средства в комбинации частично зависят от конкретного терапевтического средства, от тяжести подлежащего лечению рака и от характеристик пациента. Доступны рекомендации по выбору подходящих доз антител, цитокинов и малых молекул. См., например, Wawrzynczak (1996) , Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.) (1991) , Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ed.) (1993) , Marcel Dekker, New York, NY; Baert . (2003)  348:601 608; Milgrom . (1999)  341:1966-1973; Slamon . (2001)  344:783-792; Beniaminovitz . (2000)  342:613-619; Ghosh . (2003) 348:24-32; Lipsky . (2000)  343:1594-1602; Physicians' Desk Reference 2003 (Physicians' Desk Reference, 57th Ed); Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57th edition (November 2002). Определение соответствующей схемы лечения клиницист может сделать, например, с помощью параметров или факторов, известных или предполагаемых в данной области, которые влияют на лечение или предполагается, что могут повлиять на лечение, и будет зависеть, например, от истории болезни пациента (например, предыдущей терапии), типа и стадии рака, подлежащего лечению, и биомаркеров ответа на одно или несколько терапевтических средств в комбинированной терапии.
Биотерапевтические средства в комбинированной терапии изобретения можно вводить путем непрерывной инфузии или дозами с интервалами, например, ежедневно, через день, три раза в неделю или один раз в неделю, две недели, три недели, ежемесячно, раз в два месяца и т. д. Общая недельная доза может составлять, например по меньшей мере 0,05 мкг/кг, 0,2 мкг/кг, 0,5 мкг/кг, 1 мкг/кг, 10 мкг/кг, 100 мкг/кг, 0,2 мг/кг, 1,0 мг/кг, 2,0 мг/кг, 10 мг/кг, 25 мг/кг, 50 мг/кг массы тела или более. См., например, Yang et al. (2003) New Engl. J. Med. 349: 427-434; Herold et al. (2002) New Engl. J. Med. 346: 1692-1698; Liu et al. (1999) J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67: 451-456; Portielji et al. (20003) Cancer Immunol. Immunother. 52: 133-144. Дозы терапевтических средств, представленные в настоящем описании, можно назначать объектам, например, на основе массы тела (например, мг/кг) или на основе фиксированной дозы (например, мг/объект).
В некоторых вариантах осуществления, в которых в качестве агониста OX40 в комбинированной терапии используется mAb к человеческому OX40, схема лечения будет включать введение mAb к человеческому OX40 в дозе 0,01, 0,1, 0,3, 1, 1,5, 2, 3, 5, 6, 8, 10, 15, 20, 25, 50, 75 или 100 мг/кг с интервалом приблизительно 7 дней (± 2 дня) или приблизительно 14 дней (± 2 дня) или приблизительно 21 дня (± 2 дней) или приблизительно 30 дней (± 2 дня) на протяжении всего курса лечения. В некоторых вариантах осуществления схема лечения будет включать введение mAb к человеческому OX40 в дозе от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 25 мг/кг с интервалом приблизительно 7 дней (± 2 дня) или приблизительно 14 дней (± 2 дня) или приблизительно 21 день (± 2 дня) или приблизительно 30 дней (± 2 дня) на протяжении всего курса лечения. В некоторых вариантах осуществления схема лечения будет включать введение агониста OX40 в фиксированной дозе 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг на объект с интервалом приблизительно 7 дней (± 2 дня) или приблизительно 14 дней (± 2 дня) или приблизительно 21 день (± 2 дня) или приблизительно 30 дней (± 2 дня) на протяжении всего курса лечения. В некоторых вариантах осуществления схема лечения будет включать введение агониста OX40 в фиксированной дозе от приблизительно 1 до 500 мг на объект с интервалом приблизительно 7 дней (± 2 дня) или приблизительно 14 дней (± 2 дня) или приблизительно 21 день (± 2 дня) или приблизительно 30 дней (± 2 дня) на протяжении всего курса лечения. В некоторых вариантах осуществления схема лечения будет включать введение агониста OX40 в фиксированной дозе от приблизительно 6 до 600 мг на объект с интервалом приблизительно 7 дней (± 2 дня) или приблизительно 14 дней (± 2 дня) или приблизительно 21 день (± 2 дня) или приблизительно 30 дней (± 2 дня) на протяжении всего курса лечения.
В других вариантах осуществления, в которых в качестве агониста OX40 в комбинированной терапии используется моноклональное антитело к человеческому OX40, схема лечения будет включать введение mAb к человеческому OX40 в дозе от приблизительно 0,005 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 25 мг/кг, от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг или от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг, с эскалацией дозы у одного и того же пациента. В других вариантах эскалации дозы интервал между дозами будет постепенно сокращаться, например, приблизительно 30 дней (± 2 дня) между первой и второй дозой, приблизительно 14 дней (± 2 дня) между второй и третьей дозами. В некоторых вариантах осуществления интервал дозирования будет составлять приблизительно 14 дней (± 2 дня) для доз, следующих после второй дозы.
В некоторых вариантах осуществления объекту вводят внутривенную (IV) инфузию лекарственного средства, содержащего любой из агонистов OX40, описанных в настоящем документе. В вариантах осуществления агонист OX40 вводят в виде жидкого лекарственного средства с помощью внутривенной инфузии в течение периода времени приблизительно 30, 60 или 90 минут. В вариантах осуществления агонист OX40 вводят в виде жидкого лекарственного средства, которое включает 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150 или 200 мг/мл агониста OX40 в водном растворе, смешанном в гистидиновом буфере с эксципиентами при рН 5,5. В вариантах осуществления агонист OX40 поставляется в стерильных 10-миллилитровых флаконах из прозрачного стекла 1 типа с 20-миллиметровыми резиновыми пробками и 20-миллиметровыми алюминиевыми отламывающимися колпачками с номинальным объемом заполнения 10 мл.
В некоторых вариантах осуществления агонист OX40 в комбинированной терапии вводят внутривенно в дозе, выбранной из группы, состоящей из: 0,01 мг/кг Q2W (Q2W=одна доза каждые две недели), 0,1 мг/кг Q2W, 0,3 мг/кг Q2W, 1 мг/кг Q2W, 1,5 мг/кг Q2W, 2 мг/кг Q2W, 3 мг/кг Q2W, 5 мг/кг Q2W, 10 мг/кг Q2W, 0,01 мг/кг Q3W (Q3W=одна доза каждые три недели), 0,1 мг/кг Q3W, 0,3 мг/кг Q3W, 1 мг/кг Q3W, 1,5 мг/кг Q3W, 2 мг/кг Q3W, 3 мг/кг Q3W, 5 мг/кг Q3W, 10 мг/кг Q3W, 0,01 мг/кг Q4W (Q4W=одна доза каждые четыре недели), 0,1 мг/кг Q4W, 0,3 мг/кг Q4W, 1 мг/кг Q4W, 1,5 мг/кг Q4W, 2 мг/кг Q4W, 3 мг/кг Q4W, 5 мг/кг Q4W и 10 мг/кг Q4W.
В некоторых вариантах осуществления агонист OX40 в комбинированной терапии содержит моноклональное антитело к OX40, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности, показанные в SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, соответственно, и его вводят внутривенно в дозе, выбранной из группы, состоящей из: 0,01 мг/кг Q2W, 0,1 мг/кг Q2W, 0,3 мг/кг Q2W, 1 мг/кг Q2W, 1,5 мг/кг Q2W, 2 мг/кг Q2W, 3 мг/кг Q2W, 5 мг/кг Q2W, 10 мг/кг Q2W, 0,01 мг/кг Q3W, 0,1 мг/кг Q3W, 0,3 мг/кг Q3W, 1 мг/кг Q3W, 1,5 мг/кг Q3W, 2 мг/кг Q3W, 3 мг/кг Q3W, 5 мг/кг Q3W, 10 мг/кг Q3W, 0,01 мг/кг Q4W, 0,1 мг/кг Q4W, 0,3 мг/кг Q4W, 1 мг/кг Q4W, 1,5 мг/кг Q4W, 2 мг/кг Q4W, 3 мг/кг Q4W, 5 мг/кг Q4W и 10 мг/кг Q4W.
В некоторых вариантах осуществления агонист OX40 в комбинированной терапии содержит моноклональное антитело к OX40, содержащее тяжелую цепь и легкую цепь, содержащие аминокислотные последовательности, показанные в SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10, соответственно, и его вводят внутривенно в дозе, выбранной из группы, состоящей из: 0,01 мг/кг Q2W, 0,1 мг/кг Q2W, 0,3 мг/кг Q2W, 1 мг/кг Q2W, 1,5 мг/кг Q2W, 2 мг/кг Q2W, 3 мг/кг Q2W, 5 мг/кг Q2W, 10 мг/кг Q2W, 0,01 мг/кг Q3W (Q3W=одна доза каждые три недели), 0,1 мг/кг Q3W, 0,3 мг/кг Q3W, 1 мг/кг Q3W, 1,5 мг/кг Q3W, 2 мг/кг Q3W, 3 мг/кг Q3W, 5 мг/кг Q3W, 10 мг/кг Q3W, 0,01 мг/кг Q4W (Q4W=одна доза каждые четыре недели), 0,1 мг/кг Q4W, 0,3 мг/кг Q4W, 1 мг/кг Q4W, 1,5 мг/кг Q4W, 2 мг/кг Q4W, 3 мг/кг Q4W, 5 мг/кг Q4W и 10 мг/кг Q4W.
В некоторых вариантах осуществления схема лечения будет включать введение агониста 4-1BB в дозе 0,01, 0,1, 0,5, 1, 2, 3, 5, 6, 8, 10, 15, 20, 25, 50, 75 или 100 мг/кг с интервалом приблизительно 7 дней (± 2 дня) или приблизительно 14 дней (± 2 дня) или приблизительно 21 день (± 2 дня) или приблизительно 30 дней (± 2 дня) на протяжении всего курса лечения. В некоторых вариантах осуществления схема лечения будет включать введение агониста 4-1BB в дозе от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 25 мг/кг с интервалом приблизительно 7 дней (± 2 дня) или приблизительно 14 дней (± 2 дней) или приблизительно 21 день (± 2 дня) или приблизительно 30 дней (± 2 дня) на протяжении всего курса лечения. В некоторых вариантах осуществления схема лечения будет включать введение агониста 4-1BB в фиксированной дозе 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг на объект с интервалом приблизительно 7 дней (± 2 дня) или приблизительно 14 дней (± 2 дня) или приблизительно 21 день (± 2 дня) или приблизительно 30 дней (± 2 дня) на протяжении всего курса лечения. В некоторых вариантах осуществления схема лечения будет включать введение агониста 4-1BB в фиксированной дозе от приблизительно 1 до 500 мг на объект с интервалом приблизительно 7 дней (± 2 дня) или приблизительно 14 дней (± 2 дня) или приблизительно 21 день (± 2 дня) или приблизительно 30 дней (± 2 дня) на протяжении всего курса лечения. В некоторых вариантах осуществления схема лечения будет включать введение агониста 4-1BB в фиксированной дозе от приблизительно 6 до 600 мг на объект с интервалом приблизительно 7 дней (± 2 дня) или приблизительно 14 дней (± 2 дня) или приблизительно 21 день (± 2 дня) или приблизительно 30 дней (± 2 дня) на протяжении всего курса лечения.
В других вариантах осуществления схема лечения будет включать введение агониста 4-1BB в дозе от приблизительно 0,005 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 25 мг/кг, от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг или от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг с эскалацией дозы на одного и того же пациента. В других вариантах осуществления эскалации дозы интервал между дозами будет постепенно сокращаться, например, приблизительно 30 дней (± 2 дня) между первой и второй дозой, приблизительно 14 дней (± 2 дня) между второй и третьей дозами. В некоторых вариантах осуществления интервал дозирования будет составлять приблизительно 14 дней (± 2 дня) для доз, следующих после второй дозы.
В другом варианте осуществления изобретения агонист 4-1BB в комбинированной терапии вводят в виде жидкого лекарственного средства в дозе, выбранной из группы, состоящей из 1 мг/кг Q2W, 2 мг/кг Q2W, 3 мг/кг Q2W, 5 мг/кг Q2W, 10 мг/кг Q2W, 1 мг/кг Q3W, 2 мг/кг Q3W, 3 мг/кг Q3W, 5 мг/кг Q3W, 10 мг/кг Q3W, 1 мг/кг Q4W, 2 мг/кг Q4W, 3 мг/кг Q4W, 5 мг/кг Q4W и 10 мг/кг Q4W.
В другом варианте осуществления изобретения агонист 4-1BB в комбинированной терапии содержит моноклональное антитело к 4-1BB, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности, показанные в SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 18, соответственно, и его вводят в виде жидкого лекарственного средства в дозе, выбранной из группы, состоящей из 1 мг/кг Q2W, 2 мг/кг Q2W, 3 мг/кг Q2W, 5 мг/кг Q2W, 10 мг/кг Q2W, 1 мг/кг Q3W, 2 мг/кг Q3W, 3 мг/кг Q3W, 5 мг/кг Q3W, 10 мг/кг Q3W, 1 мг/кг Q4W, 2 мг/кг Q4W, 3 мг/кг Q4W, 5 мг/кг Q4W и 10 мг/кг Q4W.
В другом варианте осуществления изобретения агонист 4-1BB в комбинированной терапии содержит моноклональное антитело к 4-1BB, содержащее тяжелую цепь и легкую цепь, содержащие аминокислотные последовательности, показанные в SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 20, и его вводят в виде жидкого лекарственного средства в дозе, выбранной из группы, состоящей из Q2W 1 мг/кг, 2 мг/кг Q2W, 3 мг/кг Q2W, 5 мг/кг Q2W, 10 мг/кг Q2W, 1 мг/кг Q3W, 2 мг/кг Q3W, 3 мг/кг Q3W, 5 мг/кг Q3W, 10 мг/кг Q3W, 1 мг/кг Q4W, 2 мг/кг Q4W, 3 мг/кг Q4W, 5 мг/кг Q4W и 10 мг/кг Q4W.
В другом варианте осуществления изобретения агонист 4-1BB в комбинированной терапии содержит моноклональное антитело к 4-1BB, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности, показанные в SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 18 соответственно, и его вводят в виде жидкого лекарственного средства в дозе, выбранной из группы, состоящей из 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг на объект с частотой Q2W, Q3W или Q4W.
В другом варианте осуществления изобретения агонист 4-1BB в комбинированной терапии содержит моноклональное антитело к 4-1BB, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности, показанные в SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 20, соответственно, и его вводят в виде жидкого лекарственного средства в дозе, выбранной из группы, состоящей из 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг на объект с частотой Q2W, Q3W или Q4W.
В некоторых вариантах осуществления агонист 4-1BB вводят в виде жидкого лекарственного средства, и выбранную дозу лекарственного средства вводят путем внутривенной инфузии в течение периода времени приблизительно 30, 60 или 90 минут.
Оптимальная доза для отдельного агониста OX40 в сочетании с отдельным агонистом 4-1BB может быть идентифицирована путем эскалации дозы одного или обоих этих средств.
В одном варианте осуществления представленная в настоящем описании комбинированная терапия может включать введение объекту агониста OX40 в дозе, выбранной из группы, состоящей из 0,01 мг/кг, 0,03 мг/кг, 0,1 мг/кг, 0,3 мг/кг, 1 мг/кг, 1,5 мг/кг, 3 мг/кг, 5 мг/кг или 10 мг/кг, с частотой Q2W, Q3W или Q4W и агониста 4-1BB в фиксированной дозе 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг на объект с частотой Q2W, Q3W или Q4W.
В одном варианте осуществления представленная комбинированная терапия может включать введение объекту агониста OX40 в дозе, выбранной из группы, состоящей из 0,01 мг/кг, 0,03 мг/кг, 0,1 мг/кг, 0,3 мг/кг, 1 мг/кг, 1,5 мг/кг, 3 мг/кг, 5 мг/кг или 10 мг/кг, с частотой Q2W (одна доза каждые две недели) и агониста 4-1BB в фиксированной дозе 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг на объект с частотой Q4W (одна доза каждые четыре недели).
В вариантах осуществления в представленной в настоящем описании комбинированной терапии в дни, когда объект должен получать дозу как агониста OX40, так и агониста 4-1BB, агонист OX40 и агонист 4-1BB вводят объекту в промежутки времени, разделенные на минимум 5, 10, 15, 30 или 60 минут и не более 360 минут.
В одном варианте осуществления агонист OX40 вводят в начальной дозе 0,01 мг/кг, 0,03 мг/кг, 0,1 мг/кг, 0,3 мг/кг, 1 мг/кг, 1,5 мг/кг, 3 мг/кг, 5 мг/кг или 10 мг/кг Q2W и агонист 4-1BB вводят Q4W в начальной фиксированной дозе 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100 мг на объект.
В одном варианте осуществления агонист OX40 вводят в начальной дозе 2 мг/кг Q2W, а агонист 4-1BB вводят Q4W в начальной дозе 0,3 мг/кг, 0,6 мг/кг, 1,2 мг/кг, 2,4 мг/кг или 5 мг/кг.
В другом варианте осуществления агонист OX40 вводят в начальной дозе 2 мг/кг Q3W, а агонист 4-1BB вводят Q3W в начальной дозе 0,3 мг/кг, 0,6 мг/кг, 1,2 мг/кг, 2,4 мг/кг или 5 мг/кг.
В еще одном варианте осуществления агонист 4-1BB вводят в начальной дозе 0,6 мг/кг Q4W, а агонист OX40 вводят в начальной дозе 10 мг/кг Q2W, и если начальная комбинация доз не переносится пациентом, то дозу агониста OX40 снижают до 2 мг/кг Q2W, и/или дозу агониста 4-1BB снижают до 0,3 мг/кг Q4W.
В одном варианте осуществления схема лечения представляет собой любую комбинацию агониста OX40 в дозе, выбранной из группы, состоящей из 2 мг/кг Q2W и 10 мг/кг Q2W, и агониста 4-1BB в дозе, выбранной из группы, состоящей из 1,2 мг/кг Q4W, 2,4 мг/кг Q4W и 5,0 мг/кг Q4W.
В вариантах осуществления, примеры схем дозирования для комбинации агониста OX40 и агониста 4-1BB представлены в таблице 4:
Таблица 4. Примеры схем лечения OX40 и 4-1BB
агонист OX40
и
агонист 4-1BB
0,01 мг/кг Q2W
и
10 мг Q4W
0,01 мг /кг Q2W
и
20 мг Q4W
0,1 мг/кг Q2W
и
10 мг Q4W
0,1 мг/кг Q2W
и
20 мг Q4W
0,3 мг/кг Q2W
и
20 мг Q4W
0,3 мг/кг Q2W
и
100 мг Q4W
1 мг/кг Q2W
и
100 мг Q4W
3 мг/кг Q2W
И
100 мг Q4W
В некоторых вариантах осуществления уровни доз меньше нижнего предела вышеуказанного диапазона могут быть более чем достаточными, в то время как в других случаях могут применяться более крупные дозы, которые определяют специалисты в данной области.
В некоторых вариантах осуществления цикл лечения начинается с первого дня комбинированного лечения и длится 3 недели или 4 недели. В любой день цикла лечения, когда препараты вводят совместно, в вариантах осуществления инфузию агониста OX40 начинают через 30 минут после завершения инфузии агониста 4-1BB. Альтернативно, агонист OX40 вводят посредством внутривенной инфузии после завершения инфузии агониста 4-1BB. В вариантах осуществления агонист OX40 и агонист 4-1BB можно вводить посредством инфузии одновременно.
В некоторых вариантах осуществления комбинированную терапию, представленную в настоящем описании, применяют в течение по меньшей мере 12 недель (три 4-недельных цикла или четыре 3-недельных цикла), более предпочтительно по меньшей мере 24 недели и еще более предпочтительно по меньшей мере от 2 до 4 недель после достижения пациентом полной ремиссии.
В некоторых вариантах осуществления у пациента, выбранного для лечения комбинированной терапией изобретения, была диагностирована распространенная солидная злокачественная опухоль. В вариантах осуществления пациент не получал предшествующей системной терапии для лечения распространенной опухоли.
Настоящее изобретение также относится к лекарственному средству, которое содержит агонист OX40, который описан выше, и фармацевтически приемлемый эксципиент. Когда агонистом OX40 является биотерапевтическое средство, например, mAb, агонист может быть получен в клетках CHO с использованием культуры конвенциональных клеток и технологий восстановления/очистки.
В некоторых вариантах осуществления лекарственное средство, содержащее в качестве агониста OX40 антитело к OX40, может быть предоставлено в виде жидкой композиции или получено путем восстановления лиофилизированного порошка стерильной водой для инъекций перед применением. В некоторых вариантах осуществления лекарственное средство, содержащее агонист OX40, предоставлено в стеклянном флаконе, который содержит приблизительно 100 мг агониста OX40.
Настоящее изобретение также предоставляет лекарственное средство, которое содержит антитело-агонист 4-1BB и фармацевтически приемлемый эксципиент. Антитело-агонист 4-1BB может быть получено, как описано, например, в патентах США № 8,337,850 или 20130078240.
В некоторых вариантах осуществления антитело агонист 4-1BB может быть получено в концентрации 10 мг/мл для внутривенного введения. Коммерческая готовая форма может содержать L-гистидиновый буфер с дигидратом α,α-трегалозы, динатрий этилендиаминтетрауксусной кислоты дигидратом и полисорбатом 80 при рН 5,5.
Описанные в настоящем документе лекарственные средства OX40 и 4-1BB могут быть предоставлены в виде набора, который содержит первый контейнер и второй контейнер и вкладыш. Первый контейнер содержит по меньшей мере одну дозу лекарственного средства, содержащего агонист OX40, второй контейнер содержит по меньшей мере одну дозу лекарственного средства, содержащего агонист 4-1BB, а вкладыш или этикетка содержит инструкции для лечения пациента от рака с применением данных лекарственных средств. Первый и второй контейнеры могут иметь одинаковую или разную форму (например, флаконы, шприцы и бутылки) и/или быть из одного или разного материала (например, пластик или стекло). Набор может дополнительно содержать другие материалы, которые можно применять при введении лекарственных средств, такие как разбавители, фильтры, пакеты и системы для капельниц, иглы и шприцы. В некоторых вариантах осуществления набора агонист OX40 представляет собой антитело к OX40. В некоторых вариантах осуществления набора, агонист 4-1BB представляет собой антитело к 4-1BB.
В некоторых вариантах осуществления набора, представленного в настоящем описании, контейнер из набора содержит как агонист OX40, так и агонист 4-1BB в одном и том же контейнере. В некоторых вариантах осуществления набора, представленного в настоящем описании, агонист OX40 и агонист 4-1BB предоставляются в отдельных контейнерах.
В настоящее описание посредством ссылки для всех целей включено содержание предварительной патентной заявки США № 62/286,616 (поданной 25 января 2016 года).
Эти и другие аспекты изобретения, включая приведенные ниже примеры специфических вариантов осуществления, будут очевидны из содержащихся в настоящем описании исследований.
iii. Общие способы
nd
rd
rd
Molecular Cloning, A Laboratory Manual
Molecular Cloning, 3
ed.,
Recombinant DNA
Current Protocols in Molecular Biology
Vols.1-4
Стандартные способы молекулярной биологии описаны Sambrook, Fritsch и Maniatis (1982 & 1989 2 Edition, 2001 3 Edition) , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook and Russell (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993) , Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA). Стандартные способы также представлены у Ausbel, et al. (2001) , , John Wiley and Sons, Inc. New York, NY, причем описано клонирование бактериальных клеток и мутагенез ДНК (том 1), клонирование в клетках млекопитающих и дрожжах (том 2), гликоконъюгаты и экспрессия белка (том 3), и биоинформатика (том 4).
et al.,
Current Protocols in Protein Science
et al
Current Protocols in Protein
Science, Vol. 2
et al
Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3
Products for Life Science Research
BioDirectory
et al
Current Protcols in Immunology, Vol. 1
Using Antibodies
supra
et al
Current Protocols in Immunology, Vol. 4
Описаны способы очистки белков, включая иммунопреципитацию, хроматографию, электрофорез, центрифугирование и кристаллизацию (Coligan,  2000) , том 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). Описаны химический анализ, химическая модификация, посттрансляционная модификация, получение смешанных белков, гликозилирование белков (см., например, Coligan, . (2000) , John Wiley and Sons, Inc., New York; Ausubel, . (2001) , John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, pp. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) , St. Louis, MO; pp. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) , Piscataway, N.J., pp. 384-391). Описаны продуцирование, очистка и фрагментация поликлональных и моноклональных антител (Coligan, . (2001) , John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow and Lane (1999) , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow and Lane, ). Доступны стандартные методы для описания взаимодействия «лиганд/рецептор» (см., например, Coligan, . (2001) , John Wiley, Inc., New York).
Monoclonal Antibodies
Antibody Engineering
Antibodies A Laboratory Manual
et al.
J. Immunol
et al.
J. Immunol
et al.
et al.
J. Biol. Chem
et al.
Nature
J. Mol. Biol.
Могут быть получены моноклональные, поликлональные и гуманизированные антитела (см., например, Sheperd and Dean (eds.) (2000) , Oxford Univ. Press, New York, NY; Kontermann and Dubel (eds.) (2001) , Springer-Verlag, New York; Harlow and Lane (1988) , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp. 139-243; Carpenter,  (2000) . 165:6205; He,  (1998) . 160:1029; Tang  (1999) J. Biol. Chem. 274:27371-27378; Baca  (1997) . 272:10678-10684; Chothia  (1989)  342:877-883; Foote and Winter (1992)  224:487-499; U.S. Pat. No. 6,329,511).
et al.
Nature
Nature Medicine
et al.
Nature Genetics
Immunol. Today
et al.
Phage Display: A Laboratory Manual
et al.
Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual
et al.
Nature Biotechnol.
Альтернативой гуманизации является использование библиотек человеческих антител с помощью метода фагового дисплея или библиотек человеческих антител у трансгенных мышей (Vaughan  (1996)  Biotechnol. 14:309-314; Barbas (1995)  1:837-839; Mendez  (1997)  15:146-156; Hoogenboom and Chames (2000)  21:371-377; Barbas  (2001) , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; Kay  (1996) , Academic Press, San Diego, CA; de Bruin  (1999)  17:397-399).
et al.
Immunity
et al.
Immunity
et al.
supra
et al.
J. Immunol.
Очистка антигена не обязательна для получения антител. Животных можно иммунизировать с помощью клеток, содержащих представляющий интерес антиген. Затем у иммунизированных животных можно выделить спленоциты, и эти спленоциты можно слить с линией клеток миеломы для получения гибридомы (см., например, Meyaard  (1997) 7:283-290; Wright  (2000) 13:233-242; Preston , ; Kaithamana  (1999) 163:5157-5164).
et al.
J. Immunol
et al.
J. Immunol
J. Immunol
et al.
J. Immunol
Антитела могут быть конъюгированы, например, с небольшими молекулами лекарственного средства, ферментами, липосомами, полиэтиленгликолем (ПЭГ). Антитела применяют в лечении, диагностике, в составе набора или для других целей и включают антитела, связанные, например, с красителями, радиоизотопами, энзимами или металлами, например, коллоидным золотом (см.,например, Le Doussal  (1991) . 146:169-175; Gibellini  (1998) . 160:3891-3898; Hsing and Bishop (1999) . 162:2804-2811; Everts  (2002) . 168:883-889).
et al
Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice
Flow Cytometry, 2
ed
Practical Flow Cytometry
Catalogue
Catalogue
nd
Доступны способы проточной цитометрии, в том числе клеточная сортировка с активированной флуоресценцией (FACS) (см., например, Owens, . (1994) , John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001) .; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003) , John Wiley and Sons, Hoboken, NJ). Доступны флуоресцентные реагенты, подходящие для модификации нуклеиновых кислот, включая праймеры и зонды нуклеиновых кислот, полипептиды и антитела, для применения, например, в качестве диагностических реагентов (Molecular Probesy (2003) , Molecular Probes, Inc., Eugene, OR; Sigma-Aldrich (2003) , St. Louis, MO).
Human Thymus: Histopathology and Pathology
et al
Color Atlas of Histology
et al
Basic Histology: Text and Atlas
Описаны стандартные методы гистологии иммунной системы (см.,например, Muller-Harmelink (ed.) (1986) , Springer Verlag, New York, NY; Hiatt, . (2000) , Lippincott, Williams, and Wilkins, Phila, PA; Louis, . (2002) , McGraw-Hill, New York, NY).
et al.
Bioinformatics
et al.
Bioinformatics Applications Note
et al.
Comput. Methods Programs Biomed.
Eur. J. Biochem.
Nucleic Acids Res.
Доступны пакеты программного обеспечения и базы данных для определения, например, антигенных фрагментов, лидерных последовательностей, свертывания белков, функциональных доменов, участков гликозилирования и линейных последовательностей (см.,например, GenBank, Vector NTI Suite (Informax, Inc, Bethesda, MD); GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA); DeCypher (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada); Menne,  (2000)  16: 741-742; Menne,  (2000)  16:741-742; Wren,  (2002)  68:177-181; von Heijne (1983)  133:17-21; von Heijne (1986)  14:4683-4690).
iv. Примеры
Пример 1. Комбинированная активность моноклональных антител к OX40 (OX86 mIgG1) и к 4-1-BB в мышиной модели для карциномы толстой кишки CT26
Потенциальный комбинаторный эффект антитела mIgG1 к OX40 и антитела mIgG1 к 4-1BB оценивали in vivo в мышиной модели для сингенной карциномы толстой кишки CT26.
Для этого исследования из родительского клона OX86 получили антитело-агонист к мышиному OX40 в каркасе IgG1 мыши (мышиный эквивалент человеческого IgG2 в условиях связывания с кристаллизующимся фрагментом гамма-рецептора [FcγR] мыши). Антитело к 4-1BB, используемое в этом исследовании, было мышиным антителом-агонистом IgG1 к мышиному 4-1BB.
6
3
3
Клетки опухоли CT26 (0.1×10) инокулировали подкожно самкам мышей Balb/C. На 10-й день после инокуляции опухолевых клеток, средний размер опухоли достиг 67 мм, а мышей рандомизировали в группы лечения (10 мышей/группа). Самок мышей Balb/c лечили внутрибрюшинно на 10, 13 и 16 день после инокуляции опухолевых клеток с помощью 0,1 мг/кг антитела к 4-1BB, 0,03 мг/кг антитела к OX40, комбинацией 0,1 мг/кг антитела к 4-1BB и 0,03 мг/кг антитела к OX40 или антителами изотипического контроля. Ингибирование роста опухоли измеряли до 28-го дня. Измерения опухоли проводили анонимно два раза в неделю на протяжении всего исследования. Ингибирование роста опухоли на 28-й день рассчитывали путем нормирования разницы между группами лечения и группой изотипического контроля. Результаты суммированы на ФИГ. 1 [ось X - дни после инокуляции опухоли; Ось Y - объем опухоли, мм; стрелки внизу указывают дни лечения антителами; и символы указывают на лечение антителами (квадрат: монотерапия антителом к 4-1BB, треугольник: монотерапия антителом к OX40, перевернутый треугольник: комбинированная терапия антителами к 4-1BB и к OX40, круг: изотипический контроль)]. Монотерапия антителом к 4-1BB и монотерапия антителом к OX40 приводили к ингибированию роста опухоли на 63,3% и 35,3%, соответственно, на 28-й день. Комбинированное лечение приводило к ингибированию на 96,4% на 28-й день после инокуляции опухоли по сравнению с животными, получающими лечение изотипическим контролем (ФИГ.1, таблица 5). Комбинация была признана значительно эффективнее, чем лечение каждым антителом по отдельности при двухстороннем анализе ANOVA с величиной р по меньшей мере <0,05. Это исследование было завершено на 41 день. В то время как у всех животных в группе, к которой применялся изотипический контроль, развились опухоли, в группе монотерапии к OX40 и группе монотерапии к 4-1BB имелось 1 из 10 и 7 из 10 животных, соответственно, которые были без опухолей на 41 день после инокуляции опухоли. В группе, получавшей комбинацию, 9 из 10 животных были без опухолей на 41 день (Таблица 5). Кроме того, комбинация как антител к OX40, так и антител к 4-1BB, хорошо переносилась в этой модели, так как не было снижения массы тела и не было отмечено явных токсических эффектов.
Эти данные демонстрируют, что комбинированное лечение антителом к OX40 и антителом к 4-1BB приводит к большему ингибированию роста опухоли, чем лечение только одним антителом.
Таблица 5. Ингибирование роста опухоли в мышиной модели сингенной карциномы толстой кишки CT26 после комбинированного лечения OX86 mIgG1 и антителом к 4-1BB
Группы лечения
Значение среднего ± SEM mm<sup>3</sup>
N
Ингибирование роста опухоли (28 день)
Отсутствие опухоли(41 день)
Изотипический контроль 0,2 мг/кг
1701 ± 279
10
0%
0/10
Антитело к OX40 0,03 мг/кг
1101 ± 247, *
10
35,3%
1/10
Антитело к 4-1BB 0,1 мг/кг
625 ± 320, ****
10
63,3%
7/10
Антитело к OX40 0,03 мг/кг+Антитело к 4-1BB 0,1 мг/кг
61 ± 55, ****, †
10
96,4%
9/10
N=количество; SEM=стандартная ошибка среднего; *=Статистическая значимость по сравнению с группой контроля, р <0,05;
****=p <0,0001; †=Статистическая значимость по сравнению с антителом к 4-1BB, p <0,05.
Пример 2. Комбинированная активность моноклональных антител к OX40 (OX86 mIgG1) и к 4-1-BB в мышиной модели меланомы B16-F10
et al
Комбинацию суррогатного антитела-агониста к OX40 и к 4-1BB, описанную в примере 1, также изучали в модели сингенной меланомы B16-F10, менее иммуногенной модели с меньшей инфильтрацией Т-клеток в опухоли. Мышам C57BL/6 инокулировали клетки B16 F10, а затем на 11, 14, 17 и 21 дни после инокуляции опухолевых клеток, их лечили антителами изотипического контроля, комбинацией 5 мг/кг антитела к OX40 и 1 мг/кг антитела к 4-1BB или каждым из отдельных средств. Результаты показали, что комбинация антител к OX40 и антител к 4-1BB не ингибирует рост установленных опухолей в этой агрессивной модели, в соответствии с опубликованными данными (Grey ., Eur J Immunol., 38 (9): 2499-511, 2008).
В отдельном эксперименте клетки B16-F10 (0,3×106) инъецировали мышам C57Bl6. На 11, 14, 18 дни после инокуляции опухолевых клеток их лечили антителом изотипического контроля, комбинацией 3 мг/кг антитела к OX40 и 1 мг/кг антитела к 4-1BB или каждым из отдельных агентов (4 мыши в группе). Опухоли и селезенка брали на 19 день, чтобы исследовать изменения в фенотипах Т-клеток в опухоли и селезенке. Клетки диссоциировали и окрасили антителами к CD4, CD8, CD45, Ki67 и красителем для выявления жизнеспособности клеток. Данные получали с помощью проточной цитометрии, и статистический анализ проводили с помощью одностороннего анализа ANOVA. Статистический анализ проводился в сравнении с группой изотипического контроля. В опухоли, в то время как монотерапия антителом к OX40 слегка увеличивала инфильтрацию Т-клеток CD4, комбинация антител к OX40 и к 4-1BB значительно увеличивала процент Т-клеток CD4 с 8,07 ± 1,15% у животных из группы изотипического контроля до 19,78 ± 3,70% (p <0,05). Аналогично, инфильтрация опухоли CD8 повышалась с 8,62 ± 1,18% в группе изотипического контроля до 27,55 ± 1,78% при комбинированной терапии (р <0,01). В селезенке, хотя общий процент Т-клеток CD4 и CD8 существенно не изменился, клеточная пролиферация значительно повышалась с 63,98±6,36% Т-клеток CD4, экспрессирующих маркер пролиферации Ki67 в группе комбинации по сравнению с 27,53±2,31% в группе изотипического контроля (p <0,0001). Кроме того, пролиферация Т-клеток CD8 в селезенке увеличилась с 28,30 ± 1,49% в группе изотипического контроля до 67,10 ± 5,23% в группе комбинации (р <0,0001) (Таблица 6).
Эти данные демонстрируют, что комбинированное лечение антителом к OX40 и антителом к 4-1BB приводит к большей пролиферации Т-клеток и инфильтрации опухолей, чем лечение только одним антителом.
Таблица 6. Костимуляция антител к OX40 и к 4-1BB увеличивает пролиферацию T-клеток и инфильтрацию опухоли в мышиной модели меланомы B16-F10
Изотипический контроль
Антитело к OX40
Антитело к 4-1BB
Антитело к OX40+Антитело к 4-1BB
CD4% опухоли
8,07 ± 1,15
13.8 6 ± 2,15
11,39 ± 1,61
19.78 ± 3,70, *
CD8% опухоли
8,62 ± 1,18
13,25 ± 0,82
22,25 ± 5,27, *
27,55 ± 1,78, **
CD4 Ki67% селезенки
27,53 ± 2,31
45,45 ± 1,43, *
38,10 ± 2,98
63,98 ± 6,36, ****
CD8 Ki67%Селезенки
28,30 ± 1,49
36,70 ± 3,13
43,45 ± 3,22, *
67,10 ± 5,23, ****
*=Статистическая значимость по сравнению с антителом изотипического контроля. *=p <0,05, **, p <0,01, ****=p <0,0001; CD=кластер дифференцировки; Ki67=белок Kiel 67
Пример 3. Комбинированное лечение агонистом OX40 и агонистом 4-1BB
Этот пример иллюстрирует проведение клинических испытаний для оценки одной или нескольких характеристик безопасности, эффективности, противоопухолевой активности, фармакокинетики, фармакодинамики и биомаркерной модуляции антитела к OX40 в сочетании с антителом к 4-1BB у пациентов с выбранными распространенными или локализованными метастатическими солидными опухолями.
Одной из целей исследования является оценка безопасности и переносимости при увеличении уровней дозы антитела к OX40 в сочетании с антителом к 4-1BB у пациентов с выбранными распространенными или локализованными метастатическими солидными опухолями и для оценки MTD (максимальной переносимой дозы) комбинации. На этапе эскалации дозы комбинированной терапии зарегистрировано приблизительно 53 пациентов. Последовательные уровни дозы антитела к OX40 (0,1, 0,3, 1,0 и 3 мг/кг) в сочетании с 20 мг или 100 мг антитела к 4-1BB у взрослых пациентов с НМРЛ, плоскоклеточным раком головы и шеи, меланомой, раком мочевого пузыря, желудка или шейки матки, которые не реагируют на имеющиеся в настоящее время способы лечения или для которых нет доступной стандартной терапии. Начальный уровень дозы составлял 0,1 мг/кг антитела к OX40 и 20 мг антитела к 4-1BB, которые должны быть даны не раньше, чем через 30 минут после введения предыдущего.
Антитело к 4-1BB вводили в 1 день каждого следующего цикла (каждые 28 дней) в виде внутривенной инфузии в течение 60 минут (+/- 5 минут). Антитело к 4-1BB вводили внутривенно в фиксированной дозе. Антитело к OX40 вводили в 1 день каждого 14-дневного цикла в виде внутривенной инфузии в течение 60 минут (+/- 5 минут) в амбулаторных условиях.
Антитело к OX40 вводили внутривенно с корректировкой на массу тела в каждом цикле. В циклах, когда антитело и к OX40, и к 4-1BB, необходимо вводить в один и тот же день, антитело к OX40 вводили после, но не ранее, чем через 30 минут после завершения введения антитела к 4-1BB, при отсутствии реакции на инфузию, и после взятия крови на фармакокинетику после введения антитела к 4-1BB и перед введением антитела к OX40.
Цикл определяется как время с 1 дня дозы антитела к OX40 до 1 дня следующей дозы. Если нет задержек во время лечения, цикл будет составлять 14 дней. Каждый пациент может получать антитело к OX40 и антитело к 4-1BB до прогрессирования заболевания, неприемлемой токсичности, отмены согласия или прекращения исследования.
Необязательно, начальная доза антитела к OX40 будет составлять 0,01 мг/кг в сочетании с 20 мг антитела к 4-1BB.
Для эскалации дозы первые 2-4 пациента могут быть зачислены первоначально в каждую комбинацию уровней дозы. Уровень комбинации начальных доз будет составлять 0,1 мг/кг антитела к OX40 в сочетании с 20 мг антитела к 4-1BB. Если дозолимитирующая токсичность не наблюдается, следующий уровень комбинации доз будет составлять 0,3 мг/кг антитела к OX40 в сочетании с 20 мг антитела к 4-1BB. Если не наблюдается никакой токсичности, дозу антитела к OX40 и/или антитела к 4-1BB будут продолжать увеличивать до уровня комбинации 0,3 мг/кг антитела к OX40 в сочетании с 100 мг антитела к 4-1BB, 1 мг/кг антитела к OX40 в сочетании с 100 мг антитела к 4-1BB и 3 мг/кг антитела к OX40 в сочетании с 100 мг антитела к 4-1BB. Если токсичность наблюдается на уровне комбинации начальных доз, необходимо установить 0,1 мг/кг антитела к OX40 в сочетании с 10 мг антитела к 4-1BB. После первоначальной дозы, если рекомендуется деэскалация дозы после оценки, могут быть рассмотрены промежуточные уровни доз между предыдущей комбинацией доз и текущей комбинацией доз. Используя наблюдаемые данные, будет идентифицирован 1 или более уровней комбинации доз антитела к OX40 и антитела к 4-1BB со степенью токсичности, наиболее близкой, но не превышающей заданную норму увеличения, равную 25%. Если начальная доза признана непереносимой, следующий уровень комбинации доз будет составлять 0,1 мг/кг антитела к OX40 в сочетании с 10 мг антитела к 4-1BB. Также могут быть предусмотрены уровни дозы 0,01 мг/кг антитела к OX40 в сочетании с 10 мг антитела к 4-1BB или 0,01 мг/кг антитела к OX40 в сочетании с 20 мг антитела к 4-1BB.
Когда уровень комбинации доз будет признан безопасным после периода наблюдения дозолимитирующей токсичности в течение 28 дней или 2 циклов (антитела к OX40), будет происходить эскалация до следующего уровня комбинации доз. Для всех уровней комбинации доз будет использоваться ступенчатый старт; то есть, первый пациент любого уровня комбинации доз будет получать дозу и наблюдаться в течение 48 часов до того, как последующие пациенты смогут получить эту дозу. Если в течение этого 48-часового периода не возникнет никаких проблем с безопасностью, на тот же уровень комбинации доз будет зачислен второй пациент.
Дополнительные фармакодинамические оценки любого данного уровня комбинации доз могут быть завершены после того, как уровень комбинации доз будет признан безопасным, а эскалация до следующего уровня комбинации доз уже произошла. Когда дополнительный мониторинг будет указывать на иммунную модуляцию у первых 2-4 пациентов, уровень дозы будет увеличен у приблизительно 10 пациентов, что позволит улучшить характеристики фармакодинамических эффектов и уменьшить вариабельность из-за небольшого размера выборки. Чтобы обеспечить лучшую характеристику фармакодинамических эффектов, эти дополнительные пациенты будут проходить обязательную процедуру биопсии до и во время лечения. Если у первых 2-4 пациентов на любом уровне комбинации доз не будут наблюдаться никаких дополнительных фармакодинамических эффектов, уровень комбинации доз не будет расширяться.
В фазе терапии полученными дозами комбинированной терапии будут дополнительно оценивать безопасность и противоопухолевую активность комбинации в 2 группах: в группе 1 будут регистрировать пациентов с плоскоклеточным раком головы и шеи, которые никогда не получали лечение моноклональными антителами к PD-L1 или к PD-1; в группе 2 будут регистрировать пациентов с НМРЛ, которые 1) ранее получали моноклональные антитела к PD-L1 или к PD-1 в качестве самого последнего лечения, и 2) не имели прогрессирования заболевания, что является лучшим общим ответом на недавнее лечение PD-L1/PD-1, и 3) которые впоследствии имели прогрессирование или не переносят эту терапию. В этой части исследования будут первоначально регистрировать до 20 пациентов в каждом подразделении, и все пациенты будут проходить обязательную процедуру биопсии опухоли перед и во время лечения. Уровень дозы антитела к OX40 и уровень дозы антитела к 4-1BB в пределах уровня комбинации доз будут выбирать по исходным данным комбинированной терапии, и могут включать, например, любой из уровней комбинации доз, описанных выше.
Вышеприведенные исследования могут помочь собрать данные, относящиеся к одной или более характеристикам безопасности, эффективности, противоопухолевой активности, фармакокинетике, фармакодинамике и модуляции биомаркеров в комбинированной терапии антителом к OX40 в сочетании с антителом к 4-1BB у пациентов с выбранными распространенными или локализованными метастатическими солидными опухолями.
Все ссылки, приведенные в настоящем описании, включены посредством ссылки в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация, запись в базу данных (например, последовательности в Genbank или записи в GeneID), патентная заявка или патент, были конкретно и индивидуально указаны для включения посредством ссылки. Это заявление о включении посредством ссылки предусмотрено заявителями в соответствии с 37 C.F.R. 1.57 (b) (1) для того, чтобы иметь связь с каждой отдельной публикацией, записью в базу данных (например, последовательностей в Genbank или записей в GeneID), патентной заявкой или патентом, каждый из которых четко идентифицирован в соответствии с 37 C.F.R. 1.57 (b) (2), даже если такая ссылка непосредственно не прикреплена к указанному заявлению о включении посредством ссылки. Включение указанных заявлений о включении посредством ссылки, если таковые имеются, в рамках формулы изобретения никоим образом не ослабляет это общее заявление о включении посредством ссылки. Приведение ссылок в настоящем описании не подразумевает признание того, что ссылка имеет отношение к предшествующим уровням техники, и не предоставляет никакого допущения относительно содержания или даты этих публикаций или документов.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110>  ПФАЙЗЕР ИНК.
ЛОНГ, ХУА
ТОЛЛ, АРОН ДЭВИД
<120>  КОМБИНАЦИЯ АГОНИСТА OX40 И АГОНИСТА 4-1BB ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ
РАКА
<130>  PC72275
<160>  31
<170>  PatentIn версия 3.5
<210>  1
<211>  5
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  1
Ser Tyr Ser Met Asn
1               5
<210>  2
<211>  17
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  2
Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  3
<211>  9
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  3
Glu Ser Gly Trp Tyr Leu Phe Asp Tyr
1               5
<210>  4
<211>  11
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  4
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210>  5
<211>  7
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  5
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210>  6
<211>  9
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  6
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro Thr
1               5
<210>  7
<211>  118
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ser Gly Trp Tyr Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  8
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  9
<211>  444
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ser Gly Trp Tyr Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115                 120                 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
130                 135                 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145                 150                 155                 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165                 170                 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180                 185                 190
Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
195                 200                 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys
210                 215                 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225                 230                 235                 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245                 250                 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260                 265                 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275                 280                 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290                 295                 300
Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305                 310                 315                 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr
325                 330                 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
340                 345                 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355                 360                 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370                 375                 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385                 390                 395                 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
405                 410                 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420                 425                 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435                 440
<210>  10
<211>  214
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>  11
<211>  6
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  11
Ser Thr Tyr Trp Ile Ser
1               5
<210>  12
<211>  17
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  12
Lys Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  13
<211>  8
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  13
Arg Gly Tyr Gly Ile Phe Asp Tyr
1               5
<210>  14
<211>  11
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  14
Ser Gly Asp Asn Ile Gly Asp Gln Tyr Ala His
1               5                   10
<210>  15
<211>  7
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  15
Gln Asp Lys Asn Arg Pro Ser
1               5
<210>  16
<211>  11
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  16
Ala Thr Tyr Thr Gly Phe Gly Ser Leu Ala Val
1               5                   10
<210>  17
<211>  116
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  17
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Thr Tyr
20                  25                  30
Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Lys Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe
50                  55                  60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Tyr Gly Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210>  18
<211>  108
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  18
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Asn Ile Gly Asp Gln Tyr Ala
20                  25                  30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35                  40                  45
Gln Asp Lys Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50                  55                  60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Tyr Thr Gly Phe Gly Ser Leu
85                  90                  95
Ala Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100                 105
<210>  19
<211>  442
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  19
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Thr Tyr
20                  25                  30
Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Lys Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe
50                  55                  60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Tyr Gly Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115                 120                 125
Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130                 135                 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145                 150                 155                 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165                 170                 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe
180                 185                 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr
195                 200                 205
Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro
210                 215                 220
Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
225                 230                 235                 240
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
245                 250                 255
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp
260                 265                 270
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
275                 280                 285
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val
290                 295                 300
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
305                 310                 315                 320
Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly
325                 330                 335
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
340                 345                 350
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
355                 360                 365
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
370                 375                 380
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
385                 390                 395                 400
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
405                 410                 415
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
420                 425                 430
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435                 440
<210>  20
<211>  214
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  20
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Asn Ile Gly Asp Gln Tyr Ala
20                  25                  30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35                  40                  45
Gln Asp Lys Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50                  55                  60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Tyr Thr Gly Phe Gly Ser Leu
85                  90                  95
Ala Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
100                 105                 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115                 120                 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130                 135                 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145                 150                 155                 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165                 170                 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180                 185                 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195                 200                 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210>  21
<211>  255
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  21
Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu
1               5                   10                  15
Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro
20                  25                  30
Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys
35                  40                  45
Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile
50                  55                  60
Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser
65                  70                  75                  80
Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly
85                  90                  95
Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu
100                 105                 110
Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln
115                 120                 125
Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys
130                 135                 140
Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro
145                 150                 155                 160
Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala
165                 170                 175
Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu
180                 185                 190
Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu
195                 200                 205
Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
210                 215                 220
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
225                 230                 235                 240
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
245                 250                 255
<210>  22
<211>  5
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  22
Asp Tyr Ala Met His
1               5
<210>  23
<211>  17
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  23
Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  24
<211>  15
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  24
Asp Gln Ser Thr Ala Asp Tyr Tyr Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1               5                   10                  15
<210>  25
<211>  11
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  25
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  26
<211>  7
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  26
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1               5
<210>  27
<211>  8
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  27
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr
1               5
<210>  28
<211>  124
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  28
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Asp Gln Ser Thr Ala Asp Tyr Tyr Phe Tyr Tyr Gly Met Asp
100                 105                 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  29
<211>  106
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  29
Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  30
<211>  450
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  30
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Asp Gln Ser Thr Ala Asp Tyr Tyr Phe Tyr Tyr Gly Met Asp
100                 105                 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115                 120                 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130                 135                 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145                 150                 155                 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165                 170                 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180                 185                 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn
195                 200                 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg
210                 215                 220
Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435                 440                 445
Gly Lys
450
<210>  31
<211>  213
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  31
Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100                 105                 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115                 120                 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130                 135                 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145                 150                 155                 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165                 170                 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180                 185                 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195                 200                 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<---