КОМБИНАЦИЯ ИНГИБИТОРОВ IAP И FLT3
COMBINATION OF IAP AND FLT3 INHIBITORS

Настоящее изобретение относится к комбинациям ингибиторов IAP и FLT3, фармацевтическим композициям, включающим указанную комбинацию, способам лечения злокачественных заболеваний крови, включая острый миелодный лейкоз (ОМЛ), при этом указанная комбинация включает комбинацию соединения, которое ингибирует связывание вторичного митохондриального активатора каспазы (Smac) с ингибитором апоптоза (ингибитор IAP) и с одним или более фармацевтически активных агентов, применению указанных комбинаций для лечения острого миелоидного лейкоза, а также к коммерческой упаковке, включающей указанную комбинацию.
Настоящее изобретение относится также к применению ингибиторов IAP в комбинации с одним или более фармацевтически активных агентов для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения злокачественных заболеваний крови, включая ОМЛ.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения предлагается также применение ингибиторов IAP в комбинации с одним или более ингибиторов FLT для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения злокачественных заболеваний крови, включая ОМЛ.
Предпосылки создания настоящего изобретения
Киназа FLT3 является перспективной терапевтической мишенью при лейкозе и присутствует в мутантной форме приблизительно у 1/3 пациентов, страдающих ОМЛ. Однако в настоящее время все большую озабоченность вызывает развитие резистентности к лекарственным средствам, возникающей вследствие точечных мутаций в последовательности тирозин-киназ-мишеней, которые используются для лечения пациентов, страдающих острым лейкозом (см. статьи Shah и др. (2002) и Cools и др. (2003)). Один из подходов предотвращения такой резистентности заключается в комбинировании различных в структурном отношении ингибиторов и/или ингибиторов различных путей передачи сигналов.
Краткое описание сущности настоящего изобретения
В настоящем изобретении предлагаются способы лечения теплокровного животного, прежде всего человека, страдающего от лейкоза, прежде всего ОМЛ, у которого наблюдается резистентность к стандартной химиотерапии, при этом указанные способы заключаются во введении указанному животному терапевтически эффективного количества ингибитора IAP, используемого для лечения ОМЛ.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения предлагается применение ингибиторов IAP для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения злокачественных заболеваний крови, включая ОМЛ.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения предлагается также применение ингибиторов IAP в комбинации с одним или более ингибитором FLT для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения злокачественных заболеваний крови, включая ОМЛ.
Подробное описание фигур
На фиг.1 показаны результаты анализа пролиферации при обработке клеток FLT3-ITD-Ba/F3 в течение 3 сут соединением РКС412, N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамидом (LBW242) или комбинацией РКС412 и N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242).
На фиг.2 показаны результаты анализа пролиферации при обработке клеток соединением G697R-Ba/F3 в течение 3 сут РКС412, N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамидом (LBW242) или комбинацией РКС412 и N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242).
На фиг.3 показаны результаты анализа пролиферации при обработке клеток FLT3-ITD-Ba/F3 в течение 3 сут соединением РКС412, доксорубицином или комбинацией РКС412 и доксорубицина.
На фиг.4 показаны результаты анализа пролиферации при обработке клеток FLT3-ITD-Ba/F3 в течение 3 сут доксорубицином, N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамидом (LBW242) или комбинацией доксорубицина и N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) (n=1).
На фиг.5 показаны результаты анализа пролиферации при обработке клеток FLT3-ITD-Ba/F3 в течение 3 сут соединением Ara-с, N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамидом (LBW242) или комбинацией Ara-с и N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) (n=1).
На фиг.6 показаны результаты анализа in vivo комбинированного действия РКС412 и N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242), биолюминисцентная визуализация свидетельствует о росте опухоли через 7 сут после внутривенной инъекции.
На фиг.7 представлено графическое изображение данных, указанных на фиг.6, в процентах от базовой линии.
На фиг.8 представлены массы селезенки мыши в процентах, которых лечили в течение 10 сут N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамидом (LBW242), РКС412 или комбинацией N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и РКС412.
На фиг.9 показаны результаты обработки клеток MOLM13-luc+ различными концентрациями РКС412 в отсутствии и в присутствии стромальных клеток человека HS-5.
На фиг.10 показаны результаты анализа иммуноблотингом экспрессии XIAP, CIAP, Bcl-2 и Bcl-XL в мутантных клетках FLT3-Ba/F3, по сравнению с контрольными клетками Ba/F3. Иммуноблотинг проводили с использованием антител к β-актину и/или антител к α-тубулину в качестве контроля при нанесении.
На фиг.11 представлены результаты анализа пролиферации при обработке клеток MOLM13-luc+ в течение 3 сут (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамидом (соединение Y), РКС412 или комбинацией (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида (соединение Y) и РКС412.
На фиг.12 представлены результаты анализа пролиферации при обработке клеток FLT3-ITD-Ba/F3 в течение 2 сут (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамидом (соединение Y), РКС412 или комбинацией (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида (соединение Y) и РКС412.
На фиг.13 представлены результаты анализа пролиферации при обработке клеток FLT3-ITD-Ba/F3 в течение 2 сут (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамидом (соединение Y), Ara-с или комбинацией (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида (соединение Y) и Ara-с.
На фиг.14 представлены результаты анализа пролиферации при обработке клеток MOLM13-luc+ в течение 3 сут (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамидом (соединение Y), Ara-c или комбинацией (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида (соединение Y) и Ara-c.
На фиг.15 представлены результаты анализа пролиферации при обработке клеток FLT3-ITD-Ba/F3 в течение 2 сут (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамидом (соединение Y), доксорубицином или комбинацией (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида (соединение Y) и доксорубицина.
На фиг.16 показан рост привитых опухолевых клеток мыши FLT3-ITD-Ba/F3 in vivo.
Подробное описание вариантов осуществления настоящего изобретения
Протеинкиназа С (РКС) является одним из основных ферментов, принимающих участие в передаче клеточных сигналов, и играет важную роль в контроле пролиферации и дифференциации клеток. РКС представляет собой семейство серин/треонинкиназ.
К настоящему времени известно по крайней мере 12 изоформ РКС, и в зависимости от структуры и требуемого субстрата их обычно подразделяют на 3 группы. Недавно были получены перспективные результаты клинических испытаний действия ингибитора протеинтирозинкиназы РКС412 на пациентов с ОМЛ, у которых наблюдаются мутации в последовательности FLT3.
Мидостаурин представляет собой N-[(9S,10R,11R,13R)-2,3,10,11,12,13-гексагидро-10-метокси-9-метил-1-оксо-9,13-эпокси-1Н,9Н-дииндоло[1,2,3-gh:3',2',1'-lm]пирроло[3,4-j][1,7]бензодиазонин-11-ил]-N-метилбензамид формулы (II).
или его соль (соединение формулы II или мидостаурин).
Другим названием соединения формулы (II) или мидостаурина (международное непатентованное название) является РКС412.
Мидостаурин представляет собой производное природного алкалоида стауроспорина и подробно описан в Европейском патенте № 0296110, опубликованном 21 декабря 1988, в патенте США № 5093330, опубликованном 3 марта 1992, и патенте Японии № 2708047.
Точная доза мидостаурина для лечения заболеваний и состояний, упомянутых в настоящем контексте, зависит от ряда факторов, включающих организм пациента, природу и тяжесть состояния, предназначенного для лечения, и способ введения. В основном удовлетворительные результаты наблюдаются при введении мидостаурина парентеральным способом, например внутрибрюшинным, внутривенным, внутримышечным, подкожным, внутриопухолевым или ректальным способом, или энтеральным способом, например пероральным способом, предпочтительно внутривенным, или предпочтительно пероральным, способом, в суточной дозе от 0,1 до 10 мг/кг массы тела, предпочтительно от 1 до 5 мг массы тела. Испытания на добровольцах свидетельствовали о том, что общая доза 225 мг/сут является предельно допустимой дозой (ПДД). Предпочтительная внутривенная суточная доза составляет от 0,1 до 10 мг/кг массы тела, или для более крупных приматов суточная доза составляет от 200 до 300 мг. Стандартная внутривенная доза составляет от 3 до 5 мг/кг от 3 до 5 раз в неделю.
Мидостаурин вводят пероральныо в дозе не более приблизительно 300 мг/сут, например от 100 до 300 мг/сут. Мидостаурин вводят в виде однократной дозы или в виде разделенных 2 или 3 доз в сут, предпочтительно 2 доз. Предпочтительная доза составляет от 200 до 225 мг/сут, более предпочтительно по 100 мг 2 раза в сут (итого 200 мг/сут). Верхний предел дозы зависит от побочных эффектов и определяется при испытаниях для каждого конкретного пациента.
РКС412 является ингибитором FLT за счет влияния на аномальную функцию FLT и предотвращения связывания важных белков с ДНК. Ингибитор FLT блокирует действие измененного гена FLT за счет его дезактивации. Другие ингибиторы FLT включают, без ограничения перечисленным, N-бензоилстауроспорин, производное стауроспорина SU11248 и MLN518.
РКС412 подавляет рост и жизнеспособность клеток, экспрессирующих мутантную FLT3 in vitro, а также увеличивает продолжительность жизни мышей с костным мозгом, трансформированным мутантной киназой FLT3 (см. статью Weisberg и др. (2002)). Эффективный путь предотвращения резистентности к ингибированию FLT3 у пациентов заключается в комбинировании различных в структурном отношении ингибиторов и/или ингибиторов различных путей передачи сигналов.
Медиаторы сигнала апоптоза являются перспективной мишенью для лечения. Smac опосредует апоптоз, который индуцируется через путь передачи сигнала апоптоза (см. статью Du и др. (2000)), и связывается с семейством белков IAP и ингибирует их (см. статьи Liu и др. (2000) и Wu и др. (2000)).
Резистентность, свойственная пациентам с ОМЛ, к апоптозу позволяет предположить, что белки IAP могут представлять собой перспективные терапевтические мишени при указанном заболевании, а комбинация РКС412 с ингибитором IAP может оказать терапевтически благоприятный эффект.
Примеры ингибиторов IAP по настоящему изобретению включают соединение формулы (I)
1
1
4
1
4
1
4
3
10
R означает Н, C-Cалкил, C-Cалкенил, C-Cалкинил или С-Сциклоалкил, которые являются незамещенными или замещенными,
2
1
4
1
4
1
4
3
10
R означает Н, C-Cалкил, C-Cалкенил, С-Салкинил или С-Сциклоалкил, которые являются незамещенными или замещенными,
3
3
2
5
1
4
1
4
1
4
2
R означает Н, -CF, -CF, С-Салкил, C-Cалкенил, С-Салкинил, -СН-Z или
2
3
R и R вместе с атомом азота образуют циклический het,
3
3
2
2
2
Z означает Н, -ОН, F, Cl, -СН, -CF, -CHCl, -CHF или -СНОН,
4
1
16
1
16
1
16
3
10
2
1-6
1
2
0-6
2
0-6
R означает С-Салкил с прямой или разветвленной цепью, C-Салкенил, С-Салкинил или -С-Сциклоалкил, -(CH)-Z, -(CH)арилфенил и -(СН)het, где алкил, циклоалкил и фенил являются незамещенными или замещенными,
1
8
1
10
8
2
1-6
3
7
8
2
0-6
8
2
1-6
9
10
1
10
2
1-6
3
7
2
0-6
2
1-6
1
10
2
1-6
3
7
2
0-6
2
1-6
Z означает -N(R)-C(O)-C-Cалкил, -N(R)-C(O)-(CH)(C-С)циклоалкил, -N(R)-С(O)-(СН)фенил, -N(R)-C(O)-(CH)het, -С(O)-N(R)(R), -С(O)-O-С-Салкил, -С(O)-O-(СН)(С-С)циклоалкил, -С(O)-O-(СН)фенил, -C(O)-O-(CH)het, -O-С(O)-С-Салкил, -O-С(O)-(СН)(С-С)циклоалкил, -O-С(O)-(СН)фенил, -O-C(O)-(CH)het, где алкил, циклоалкил и фенил являются незамещенными или замещенными,
het означает 5-7-членное гетероциклическое кольцо, содержащее от 1 до 4 гетероатомов, которые выбирают из N, О и S, или 8-12-членную конденсированную циклическую систему, включающую по крайней мере одно 5-7-членное гетероциклическое кольцо, содержащее 1, 2 или 3 гетероатома, которые выбирают из N, О и S, при этом гетероциклическое кольцо или конденсированная циклическая система является незамещенной или замещенной по атому углерода или азота,
8
3
3
2
2
R означает Н, -СН, -CF, -CHOH или -CHCl,
9
10
1
4
3
7
2
1-6
3
7
2
0-6
R и R каждый независимо означает Н, С-Салкил, С-Сциклоалкил, -(СН)(С-С)циклоалкил, -(CH)фенил, где алкил, циклоалкил и фенил являются незамещенными или замещенными, или
9
10
R и R вместе с атомом азота образуют het,
5
1
10
3
7
2
1-6
3
7
1
10
2
0-6
3
7
2
0-6
2
0-4
2
0-4
2
2
0-6
2
1
10
2
1-6
3
7
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
1-6
R означает Н, C-Салкил, арил, фенил, С-Сциклоалкил, -(СН)(С-С)циклоалкил, -C-Салкиларил, -(CH)(C-C)циклоалкил(CH)фенил, -(СН)СН-((СН)фенил), -(СН)-СН(фенил), -инданил, -С(О)-С-Салкил, -С(O)-(СН)(С-С)циклоалкил, -С(O)-(СН)фенил, -(СН)С(O)фенил, -(CH)het, -C(O)-(CH)het или
5
R означает остаток аминокислоты, где заместители алкил, циклоалкил, фенил или арил являются незамещенными или замещенными,
U означает остаток формулы (III)
где
n равно от 0 до 5,
Х означает -СН или N,
0
8
Ra и Rb независимо означают О, S или N или С-Салкил, где один или более атомов углерода в цепи алкила могут быть заменены на гетероатом, который выбирают из О, S или N, и где алкил является незамещенным или замещенным,
Rd выбирают из группы, включающей
p
q
(a) -Re-Q-(Rf)(Rg), или
1
2
(b) AR-D-AR, или
1
2
(c) AR-D-AR,
5
Rc означает Н или Rc и Rd вместе образуют циклоалкил или het, где если Rd и Rc образуют циклоалкил или het, то R присоединен к образующемуся циклу через атом С или N,
р и q независимо равны 0 или 1,
1
8
Re означает С-Салкил или алкилиден, и Re является незамещенным или замещенным,
2
Q означает N, О, S, S(O) или S(O),
1
2
Ar и Ar означают незамещенный или замещенный арил или het,
1
10
1
10
1
10
2
0-6
3
7
2
0-6
2
1-6
2
1-6
11
11
11
12
11
12
11
11
2
11
2
11
12
11
2
12
1
10
1
4
1
4
2
1
2
2
1
2
1
4
Rf и Rg каждый независимо отсутствуют или означает Н, -C-Салкил, С-Салкиларил, -ОН, -О-С-Салкил, -(СН)(С-С)диклоалкил, -O-(СН)арил, фенил, арил, фенилфенил, -(CH)het, -O-(CH)het, -OR, -С(O)-R, -C(O)-N(R)(R), -N(R)(R), -S-R, -S(O)-R, -S(O)-R, -S(O)-NRR, -NR-S(O)-R; S-C-Салкил, арил(С-С)алкил, het(С-С)алкил, где алкил, циклоалкил, het и арил являются незамещенными или замещенными, -SO-(C-С)алкил, -SO-(С-С)алкилфенил, -O-(С-С)алкил, или
Rg и Rf образуют цикл, который выбирают из het или арила, и
1
7
2
nr
1
7
1
6
1
6
3
D означает -СО-, -С(O)- или С-Салкилен или арилен, -CF-, -О- или -S(O), где rn равно от 0 до 2, 1,3-диоаксолан или С-Салкил-ОН, где алкил, алкилен или арилен являются незамещенными или замещенными одним или более атомами галогена, ОН-группой, -O-C-Салкилом, -S-C-Салкилом или -CF-группой, или
1
7
1
7
0
10
0
10
1
10
0
10
2
0
10
2
0
10
D означает -N(Rh), где Rh означает Н, С-Салкил (незамещенный или замещенный), арил, -O(С-Сциклоалкил) (незамещенный или замещенный), С(O)-(С-С)алкил, С(O)-(С-С)алкиларил, С-O-(С-С)алкил, С-O-(С-С)алкиларил или SO-(С-С)алкил, SO-(С-С)алкиларил),
6
7
6
7
1
10
1
10
1
10
1
10
2
0-6
3
7
2
0-6
2
1-6
2
1-6
11
11
11
12
11
12
11
11
2
11
2
11
12
11
2
12
6
7
6
7
R, R, R' и R' каждый независимо означает Н, -С-Салкил, -C-Салкоксигруппу, арил(С-С)алкоксигруппу, -ОН, -O-(С-С)алкил, -(СН)(С-С)циклоалкил, -O-(СН)арил, фенил, -(CH)het, -O-(CH)het, -OR, -C(O)-R, -C(O)-N(R)(R), -N(R)(R), -S-R, -S(O)-R, -S(O)-R, -S(O)-NRR, -NR-S(O)- R, где алкил, циклоалкил и арил являются незамещенными или замещенными, a R, R, R' и R' могут вместе образовывать циклическую систему, и
11
12
1
10
2
0-6
3
7
2
0-6
0-1
1-2
1
10
2
1-6
3
7
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
1-6
1
10
2
1-6
3
7
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
1-6
R и R независимо означают Н, C-Салкил, -(СН)(С-С)циклоалкил, -(СН)(СН)(арил),-С(O)-(С-С)алкил, -С(O)-(СН)(С-С)циклоалкил, -С(O)-O-(СН)арил, -С(O)-(СН)-O-флуоренил, -С(O)-NH-(СН)арил, -С(O)-(СН)арил, -C(O)-(CH)het, -С(S)-(С-С)алкил, -С(S)-(СН)(С-С)циклоалкил, -С(S)-O-(СН)арил, -С(S)-(СН)-O-флуоренил, -C(S)-NH-(СН)-арил, -С(S)-(СН)арил, -C(S)-(CH)het, где алкил, циклоалкил и арил являются незамещенными или замещенными, или
11
12
R и R означают заместитель, который ускоряет перенос молекулы через клеточную мембрану, или
11
12
R и R вместе с атомом азота образуют het,
11
12
1
10
1
6
1
6
3
где алкильные заместители групп R и R являются незамещенными или замещенными одним или более заместителями, которые выбирают из группы, включающей С-Салкил, галоген, ОН, -O-(С-С)алкил, -S-(С-С)алкил или -CF,
11
12
1
10
1
6
1
6
1
6
3
замещенные циклоалкильные заместители групп R и R замещены одним или более заместителями, которые выбирают из группы, включающей С-Салкен, C-Салкил, галоген, ОН, -O-(С-С)алкил, -S-(С-С)алкил или -CF, и
11
12
1
4
1
4
1
4
1
4
замещенные фенильные или арильные заместители групп R и R замещены одним или более заместителей, которые выбирают из группы, включающей галоген, гидроксигруппу, C-Cалкил, С-Салкоксигруппу, нитрогруппу, -CN, -O-С(O)-(С-С)алкил и -С(O)-O-(C-C)арил,
или его фармацевтически приемлемые соли.
Другие примеры ингибиторов IAP для применения по настоящему изобретению включают соединение формулы (Ia), описанное в заявке PCT/US2007/074790
или его фармацевтически приемлемые соли,
где
1
1
4
2
4
2
4
3
10
1
R означает Н, С-Салкил, С-Салкенил, С-Салкинил или С-Сциклоалкил, при этом R является незамещенным или замещенным,
2
1
4
2
4
2
4
3
10
2
R означает Н, C-Cалкил, С-Салкенил, С-Салкинил, С-Сциклоалкил, при этом R является незамещенным или замещенным,
3
3
2
5
1
4
2
4
2
4
2
R означает Н, CF, CF, C-Cалкил, С-Салкенил, С-Салкинил, СН-Z, или
2
3
R и R вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо, где алкил, алкенил, алкинил или гетероциклил являются незамещенными или замещенными,
3
2
2
2
Z означает Н, ОН, F, Cl, СН, CHCl, CHF или CHOH,
4
0
10
0
10
0
10
3
10
0
10
R означает С-Салкил, С-Салкенил, С-Салкинил, С-Сциклоалкил, где С-Салкил или циклоалкил являются незамещенными или замещенными,
А означает het, который является незамещенным или замещенным,
1
7
2
9
7
r
1
10
1
10
r
1
10
0
10
0
10
r
0
10
D означает С-Салкилен или С-Салкенилен, С(O), О, NR, S(O), C(O)-(С-С)алкил, O-(С-С)алкил, S(O)-(С-С)алкил, С(O)-(С-С)арилалкил, O(С-С)арилалкил или S(O)-(С-С)арилалкил, где алкил и арил являются незамещенными или замещенными,
r равно 0, 1 или 2
1
5
6
2
5
А означает замещенный или незамещенный арил или незамещенный или замещенный het, где заместителями в арильном кольце и het являются галоген, алкил, (низш.)алкоксигруппа, NRR, CN, NO или SR,
1
10
1
10
1
10
1
10
2
0-6
3
7
1
10
2
0-6
2
1-6
2
1-6
11
11
11
12
11
12
11
11
2
11
2
11
12
11
2
12
каждый Q независимо означает Н, С-Салкил, С-Салкоксигруппу, арил-(С-С)алкоксигруппу, ОН, O-(С-С)алкил, (СН)(С-С)циклоалкил, арил, арил(С-С)алкил, O-(СН)арил, (CH)het, het, O-(CH)het, -OR, C(O)R, -C(O)N(R)(R), N(R)(R), SR, S(O)R, S(O)R, S(O)-N(R)(R) или NR-S(O)-(R), где алкил, циклоалкил и арил являются незамещенными или замещенными,
n равно 1, 2 или 3, 4, 5, 6 или 7,
het означает 5-7-членное моноциклическое гетероциклическое кольцо, содержащее от 1 до 4 гетероатомов в цикле, которые выбирают из N, О и S, или 8-12-членную конденсированную циклическую систему, которая включает одно 5-7-членное моноциклическое гетероциклическое кольцо, содержащее 1, 2 или 3 гетероатома в цикле, которые выбирают из N, О и S, при этом het является незамещенным или замещенным,
11
12
1
10
2
0-6
3
7
2
0-6
0-1
1-2
1
10
2
1-6
3
7
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
1-6
1
10
2
1-6
3
7
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
1-6
11
11
12
11
n
11
m
11
12
11
11
12
11
11
12
R и R независимо означают Н, C-Салкил, (СН)(С-С)циклоалкил, (СН)(СН)(арил), С(O)-(С-С)алкил, -С(O)-(СН)(С-С)циклоалкил, -С(O)-O-(СН)арил, -С(O)-(СН)-O-флуоренил, C(O)-NH-(CH)арил, С(O)-(СН)арил, C(O)-(CH)het, -С(S)-(С-С)алкил, -С(S)-(СН)(С-С)циклоалкил, -С(S)-O-(СН)арил, -С(S)-(СН)-O-флуоренил, C(S)-NH-(СН)арил, -С(S)-(СН)арил или C(S)-(CH)het, C(O)R, C(O)NRR, С(O)OR, S(O)R, S(O)NRR, m равно 1 или 2, C(S)R, C(S)NRR, C(S)OR, где алкил, циклоалкил и арил являются незамещенными или замещенными, или R и R являются заместителями, которые ускоряют перенос молекул через клеточную мембрану, или
11
12
R и R вместе с атомом азота образуют het,
11
12
1
10
1
6
1
6
3
11
12
где алкильные заместители групп R и R являются незамещенными или замещенными одним или более заместителями, которые выбирают из группы, включающей C-Салкил, галоген, ОН, -O-(С-С)алкил, -S-(С-С)алкил, -CF или NRR,
11
12
2
10
1
6
1
6
1
6
3
11
12
замещенные циклоалкильные заместители групп R и R замещены одним или более заместителями, которые выбирают из группы, включающей С-Салкен, C-Салкил, галоген, ОН, -O-(С-С)алкил, -S-(С-С)алкил, -CF или NRR, и
11
12
1
4
1
4
1
4
1
4
замещенные het-заместители или арильные заместители групп R и R замещены одним или более заместителей, которые выбирают из группы, включающей галоген, гидроксигруппу, C-Cалкил, C-Cалкоксигруппу, нитрогруппу, -CNO-C(O)-(C-C)алкил и -С(O)-O-(С-С)алкил,
5
6
7
5
5
5
5
6
R, R и R независимо означают водород, (низш.)алкил, арил, арил(низш.)алкил, циклоалкил или циклоалкил(низш.)алкил, C(O)R, S(O)R, C(O)OR, C(O)NRR и
1
2
3
4
1
2
9
10
13
8
14
заместители групп R, R, R, R, Q, А и A независимо означают галоген, гидроксигруппу, (низш.)алкил, (низш.)алкенил, (низш.)алкинил, (низш.)алканоил, (низш.)алкоксигруппу, арил, арил(низш.)алкил, аминогруппу, амино(низш.)алкил, ди(низш.)алкиламиногруппу, (низш.)алканоил, амино(низш.)алкоксигруппу, нитрогруппу, цианогруппу, циано(низш.)алкил, карбоксигруппу, (низш.)карбалкоксигруппу, (низш.)алканоил, арилоил, (низш.)арилалканоил, карбамоил, N-моно- или N,N-ди(низш.)алкилкарбамоил, эфир (низш.)алкилкарбаминовой кислоты, амидиногруппу, гуанидин, уреидогруппу, меркаптогруппу, сульфогруппу, (низш.)алкилтиогруппу, сульфоаминогруппу, сульфонамид, бензосульфонамид, сульфонат, сульфанил(низш.)алкил, арилсульфонамид, галогензамещенный арилсульфонат, (низш.)алкилсульфинил, арилсульфинил, арил(низш.)алкилсульфинил, (низш.)алкиларилсульфинил, (низш.)алкилсульфонил, арилсульфонил, арил(низш.)алкилсульфонил, (низш.)арилалкил(низш.)алкиларилсульфонил, галоген(низш.)алкилмеркаптогруппу, галоген(низш.)алкилсульфонил, фосфоногруппу (-Р(=O)(ОН)), гидрокси(низш.)алкоксифосфорил или ди(низш.)алкоксифосфорил, (R)NC(O)-NRR, (низш.)алкиловый эфир карбаминовой кислоты или карбаматы или -NRR,
где
8
14
R и R являются одинаковыми или различными и независимо означают Н или (низш.)алкил, или
8
14
R и R вместе с атомом азота образуют 3-8-членное гетероциклическое кольцо, содержащее гетроатомы азота в цикле и необязательно содержащее один или два дополнительных гетероатома, которые выбирают из атомов азота, кислорода и серы, при этом указанное гетероциклическое кольцо является незамещенным или замещенным (низш.)алкилом, галогеном, (низш.)алкенилом, (низш.)алкинилом, гидроксигруппой, (низш.)алкоксигруппой, нитрогруппой, аминогруппой, (низш.)алкилом, аминогруппой, ди(низш.)алкиламиногруппой, цианогруппой, карбоксигруппой, (низш.)карбалкоксигруппой, формилом, (низш.)алканоилом, оксогруппой, карбамоилом, N-(низш.)- или N,N-ди(низш.)алкилкарбамоилом, меркаптогруппой или (низш.)алкилтиогруппой, и
9
10
13
R, R и R независимо означают водород, (низш.)алкил, галогензамещенный (низш.)алкил, арил, арил(низш.)алкил, галогензамещенный арил, галогензамещенный арил(низш.)алкил.
Предпочтительные соединения выбирают из группы, включающей:
- (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид,
- (S)-N-[(S)-циклогексил(этил-{(S)-1-[5-(4-фторбензоил)пиридин-3-ил]пропил}карбамоил)метил]-2-метиламинопропионамид,
- (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[5-(4-фторфенокси)пиридин-3-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид, и
- N-[1-циклогексил-2-(2-{2-[(4-фторфенил)метиламино]пиридин-4-ил}пирролидин-1-ил)-2-оксоэтил]-2-метиламинопропионамид,
и их фармацевтически приемлемые соли.
Примеры других ингибиторов IAP включают соединения, описанные в заявке WO 05/097791, опубликованной 20 октября 2005 г., включенной в настоящее описание в качестве ссылки. Предпочтительным соединением формулы (I) является N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид.
Другие ингибиторы IAP включают соединения, описанные в документах WO 04/005284, PCT/US2006/013984 и PCT/US2006/021850. Кроме того, ингибиторы IAP, пригодные для применения по настоящему изобретению включают соединения, описанные в документах WO 06/069063, WO 05/069888, US2006/0014700, WO 04/007529, US 2006/0025347, WO 06/010118, WO 05/069894, WO 06/017295, WO 04/007529 и WO 05/094818.
Одним из предпочтительных соединений является соединение A, (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид.
Соединение А можно получать, например, по следующей реакции:
Термин «арил», использованный в данном контексте, означает ароматический радикал, содержащий от 6 до 14 атомов углерода в цикле и не содержащий гетероатомов в цикле. Арил может означать моноциклическую или конденсированную бициклическую или трициклическую систему. Арил является незамещенным или замещенным одним или более, предпочтительно одним или двумя, заместителями, значения которых описаны в данном контексте. Как описано в данном контексте, арил может означать полностью ароматическую систему, не зависимо от того, является ли она моноциклической или бициклической. Однако, если арил содержит более одного цикла, то, как описано в данном контексте, по крайней одно из них является полностью ароматическим, в то время как другое кольцо(а) является частично ненасыщенным или насыщенным или полностью ароматическим. Предпочтительные примеры арила включают фенил, нафтил или инданил. Наиболее предпочтительным арилом является фенил.
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
Термин «het», использованный в данном контексте, означает гетероарильные и гетероциклические соединения, содержащие по крайней мере один гетероатом S, О или N. Более подробно, термин «het» означает 5-7-членное гетероциклическое кольцо, содержащее от 1 до 4 гетероатомов в цикле, которые выбирают из N, О и S, или 8-12-членную конденсированную циклическую систему, содержащую по крайней мере одно 5-7-членное гетероциклическое кольцо, содержащее 1, 2 или 3 гетероатома, которые выбирают из N, О и S. Примеры термина «het», использованного в данном контексте, включают незамещенный и замещенный пирролидил, тетрагидрофурил, тетрагидротиофурил, пиперидил, пиперазил, пуринил, тетрагидропиранил, морфолино, 1,3-диазапанил, 1,4-диазапанил, 1,4-оксазепанил, 1,4-оксатиапанил, фурил, тиенил, пиррил, пирролил, пиразолил, триазолил, тетразолил, индазолил, оксадиазолил, имидазолил, пирролидил, пирролидинил, тиазолил, оксазолил, пиридил, пиразолил, пиразинил, пиримидинил, изоксазолил, пиразинил, хинолил, изохинолил, пиридопиразинил, пирролопиридил, фуропиридил, индолил, бензофурил, бензотиофурил, бензиндолил, бензотиенил, пиразолил, пиперидил, пиперазинил, индолинил, морфолинил, бензоксазолил, пирролохинолил и т.п. Термин «het» означает также гетероарил. Примеры гетероарилов включают пиридил, пиримидинил, хинолил, тиазолил и бензотиазолил. Наиболее предпочтительными het являются пиридил, пиримидинил и тиазолил. Het может являться незамещенным или замещенным, как описано в данном контексте. Предпочтительными являются незамещенные het или замещенные het, содержащие заместители у атома углерода, которые выбирают из группы, включающей галоген, прежде всего фтор или хлор, гидроксигруппу, С-Салкил, такой как метил и этил, C-Салкоксигруппу, прежде всего метоксигруппу и этоксигруппу, нитрогруппу, -O-С(O)-(C-C)алкил или -С(O)-O-(C-C)алкил, карбамоил, N-моно- или N,N-ди(низш.)алкилкарбамоил, эфир (низш.)алкилкарбаминовой кислоты, амидиногруппу, гуанидин, уреидогруппу, меркаптогруппу, сульфогруппу, (низш.)алкилтиогруппу, сульфоаминогруппу, сульфонамид, сульфонат, сульфанил, SCN или нитрогруппу, или у атома азота, которые выбирают из группы, включающей C-Cалкил, прежде всего метил и этил, -O-C(O)-(C-С)алкил или -С(O)-O-(C-C)алкил, такой как карбометоксигруппа или карбоэтоксигруппа. Если два заместителя вместе с атомом азота образуют het, следует понимать, что образующееся гетероциклическое кольцо является азотсодержащим кольцом, таким как азиридин, азетидин, азол, пиперидин, пиперазин, морфолин, пиррол, пиразол, тиазол, оксазол, пиридин, пиримидин, изоксазол и т.п., где указанный het может являться незамещенным или замещенным, как описано в данном контексте.
Термин «галоген» означает фтор, хлор, бром или йод, прежде всего фтор и хлор.
Термин «алкил», если не указано иное, в отдельности или в комбинации, означает алкил с прямой или разветвленной цепью, такой как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил и разветвленный пентил, н-гексил и разветвленный гексил и т.п.
3
10
1
6
6
30
1
8
5
9
5
9
1
8
1
1
1
8
1
5
9
1
5
9
1
8
1
1
24
Термин «циклоалкил» означает С-Сциклоалкил, содержащий 3-10 атомов углерода в цикле, и включает, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил или циклооктил, циклононил и т.п. Циклоалкил означает моноциклическую или конденсированную бициклическую систему. Предпочтительным является моноциклический циклоалкил. Кроме того, предпочтительным циклоалкилом являются циклопентил или циклогексил. Наиболее предпочтительным циклоалкилом является циклогексил. Циклоалкил может являться полностью насыщенным или частично ненасыщенным, хотя предпочтительным является полностью насыщенный циклоалкил. Термин, использованный в данном контексте, не означает арильные группы. Циклоалкильные группы являются незамещенными или замещенными любыми заместителями, как описано в данном контексте, предпочтительно галогеном, гидроксигруппой или C-Салкилом, таким как метил. Заместители, ускоряющие перенос молекул через клеточную мембрану, известны специалистам в области медицинской химии (см., например, статьи Gangewar S. и др., Drug Discov Today, т.2, cc.148-155 (1997), и Bundgaard H., Moss J., Pharma Res, т.7, с.885 (1990)). В большинстве случаев такие заместители являются липофильными заместителями. Указанные липофильные заместители включают С-Салкил, который является насыщенным, мононенасыщенным, полиненасыщенным, включая полиен, прерванный метиленовой группой, фенил, фенил, замещенный одним или двумя С-Салкилами, С-Сциклоалкил, С-Сциклоалкил, замещенный одним или двумя С-Салкилами, -Х-фенил, -Х-фенил, замещенный в фенильном цикле одним или двумя С-Салкилами, X-(C-С)циклоалкил или Х-(С-С)циклоалкил, замещенный одним или двумя С-Салкилами, где X означает С-Салкил, который является насыщенным, мононенасыщенным или полиненасыщенным, а также с прямойм или с разветвленной цепью.
Термин «незамещенный» означает наличие только атома водорода в качестве заместителя.
1
3
9
10
13
9
10
13
8
14
8
14
8
14
Кроме описанных в данном контексте, любой из описанных выше заместеителей арил, het, алкил, алкенил, алкинил или циклоалкил может являться незамещенным или независимо содержать не более 4, предпочтительно 1, 2 или 3 заместителя, которые выбирают из группы, включающей галоген, такой как Cl или Br, гидроксигруппу, (низш.)алкил, такой как C-Салкил, (низш.)алкил, замещенный любым заместителем, как описано в данном контексте, (низш.)алкенил, (низш.)алкинил, (низш.)алканоил, (низш.)алкоксигруппу, такую как метоксигруппа, арил, такой как фенил или нафтил, замещенный арил, такой как фторфенил или метоксифенил, арил(низш.)алкил, такой как бензил, аминогруппу, моно- или ди(низш.)алкил, такой как диметиламиногруппа, (низш.)алканоиламиноацетиламиногруппа, амино(низш.)алкоксигруппу, такую как этоксиаминогруппа, нитрогруппу, цианогруппу, циано(низш.)алкил, карбоксигруппу, (низш.)карбалкоксигруппу, такую как метоксикарбонил, н-пропоксикарбонил или изопропоксикарбонил, (низш.)арилоил, такой как бензоил, карбамоил, N-моно- или N,N-ди(низш.)алкилкарбамоил, (низш.)алкиловый эфир карбаминовой кислоты, амидиногруппу, гуанидин, уреидогруппу, меркаптогруппу, сульфогруппу, (низш.)алкилтиогруппу, сульфаминогруппу, сульфонамид, бензосульфонамид, сульфонат, сульфанил(низш.)алкил, такой как метилсульфанил, сульфонаминогруппу, арилсульфонамид, галогензамещенный или незамещенный арилсульфонат, такой как хлорфенилсульфонат, (низш.)алкилсульфинил, арилсульфинил, арил(низш.)алкилсульфинил, (низш.)алкиларилсульфинил, (низш.)алкансульфонил, арилсульфонил, арил(низш.)алкилсульфонил, (низш.)арилалкил, (низш.)алкиларилсульфонил, галоген(низш.)алкилмеркаптогруппу, галоген(низш.)алкилсульфонил, такой как трифторметаналкоксифосфорил, мочевину и замещенную мочевину формулы (R)NC(O)N(R), (R), где R, R и R имеют значения, как описано выше, такие как мочевина или 3-трифторметилфенилмочевина, алкиловый эфир карбаминовой кислоты или карбаматы, такие как этил-N-фенилкарбамат, или -NRR, где R и R являются одинаковыми или различными и независимо означают Н, (низш.)алкил, например, метил, этил или пропил, или R и R вместе с атомом азота образуют 3- - 8-членное гетероциклическое кольцо, содержащее в качестве гетероатома азот и необязательно 1 или 2 дополнительных гетероатома, которые выбирают из группы, включающей азот, кислород и серу (например, пиперазинил, пиразинил, (низш.)алкилпиперазинил, пиридил, индолил, тиофенил, тиазолил, бензотиофенил, пирролидинил, пиперидино или имидазолинил), где гетероциклическое кольцо является замещенным любыми заместителями, как описано в данном контексте.
3
3
В предпочтительном варианте упомянутые выше группы алкил, циклоалкил и арил независимо являются незамещенными или замещенными (низш.)алкилом, арилом, арил(низш.)алкилом, карбоксигруппой, (низш.)карбалкоксигруппой и прежде всего атомом галогена, -ОН, -SH, -ОСН, -SCH, -CN, -SCN или нитрогруппой. Термин «(низш.)алкил», как описано в данном контексте, в отдельности или в комбинации, означает алкил, содержащий от 1 до 6 атомов углерода. Алкил является алкилом с разветвленной или прямой цепью, как описано в данном контексте.
Термин «(низш.)алкенил» означает алкенил, содержащий от 2 до 6 атомов углерода. Алкенил является углеводородной группой, содержащей по крайней мере одну двойную связь углерод-угледрод. Как описано в данном контексте, он является незамещенным или замещенным, а значения заместителей описаны в данном контексте. Двойные связи углерод-углерод могут располагаться между любыми двумя атомами углерода в составе алкенила. В предпочтительном варианте он содержит 1 или 2 двойные связи углерод-углерод и более предпочтительно одну двойную связь углерод-углерод. Алкенил является группой с прямой или разветвленной цепью. Примеры включают этенил, 1-пропенил, 2-пропенил, 1-бутенил, 2-бутенил, 2-метил-1-пропенил, 1,3-бутадиенил и т.п. Предпочтительным алкенилом является этенил.
Термин «(низш.)алкинил», использованный в данном контексте, означает алкинил, содержащий от 2 до 6 атомов углерода. Алкинил является углеводородной группой, содержащей по крайней мере одну тройную связь углерод-угледрод. Тройная связь углерод-углерод может располагаться между любыми двумя атомами углерода в составе алкинила. В предпочтительном варианте он содержит 1 или 2 тройные связи углерод-углерод и более предпочтительно одну тройную связь углерод-углерод. Алкинил является группой с прямой или разветвленной цепью. Примеры включают этинил, 1-пропинил, 2-пропинил, 1-бутинил, 2-бутинил и т.п. Предпочтительным алкинилом является этинил.
Термин «арилалкил», использованный в данном контексте, означает арил, связанный с основной цепью мостиковой алкиленовой группой. Примеры включают бензил, фенетил, нафтилметил и т.п. Предпочтительным арилалкилом является бензил. Аналогичным образом, термин «цианоалкил» означает цианогруппу, связанную с основной цепью мостиковой алкиленовой группой.
Термин «алкиларил» означает алкил, связанный с основной цепью через фениленовую группу. Примеры включают метилфенил, этилфенил и т.п.
Термин «(низш.)алканоил», использованный в данном контексте, означает (низш.)алкил, в котором один из атомов углерода заменен на группу С=O. Группа С=O может располагаться в одном из концевых фрагментов заместителя или в середине. Примеры включают формил, ацетил, 2-пропаноил, 1-пропаноил и т.п.
Термин «алкоксигруппа» означает алкил, описанный в данном контексте, связанный с основной цепью через атом кислорода. Примеры включают метоксигруппу, этоксигруппу и т.п.
Термин «(низш.)тиоалкил» означает алкил, описанный в данном контексте, связанный с основной цепью через атом серы. Примеры включают тиометил (или меркаптометил), тиоэтил (или меркаптоэтил) и т.п.
Термин «(низш.)карбалкоксигруппа» или его синонимы означают алкоксикарбонил, присоединенный к основной цепи через арильную группу (С(O)). Примеры включают метоксикарбонил, этоксикарбонил и т.п.
r
r
2
r
r
Следует понимать, что термин «С(O)» означает группу -С=O, т.е. кетон, альдегид, кислоту или производное кислоты. Аналогичным образом, термин «S(O)» означает группу -S=O. В термине «S(O)», использованном в данном контексте, r означает число атомов кислорода, связанных с атомом серы, где если r равно 2, то S(O) означает SO, если r равно 1, то S(O) означает SO, и если r равно 0, то S(O) означает S.
0
0
10
0
10
0
1
10
Термин «С», использованный в данном контексте, в виде составной части алкила, например С-С, означает отсутствие атомов углерода. Таким образом, термин «С-Сарилалкил» означает арил, напрямую связанный с основной цепью (С) или C-Салкилен, образует мостик и связывает основную цепь с арилом.
2
0-6
2
0-6
3
7
2
0
2
1-6
Термин «(СН)» в виде составной части определения большей группы, например (СН)(С-С)циклоалкил, означает отсутствующую группу (СН) или группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода (СН).
2
0-6
0-1
1-2
11
12
2
1-6
2
2
1-6
2
Термин «(СН)(СН)(арил)» при определении значений R и R означает одну из следующих групп: (СН)арил, арил, -СН(арил) или (CH)(СН)(арил).
Число n, использованное в данном контексте, означает число заместителей в цикле пирролидинил(тетрагидропирролил). Число n равно от 0 до 7 и означает число заместителей Q в цикле пирролидинил(тетрагидропирролил). Заместители Q могут располагаться у атомов углерода только в положениях 2, 3, 4 или 5 пирролидинилового цикла. Кроме атомов углерода в положении 2, для которого возможно наличие только одного заместителя, каждый другой атом углерода является насыщенным и может содержать по 2 заместителя. Если n равно 7, то каждый атом углерода связан с заместителем Q, как описано в данном контексте. Заместители Q являются одинаковыми или различными. Однако если n равно 6, то один из 7 возможных заместителей означает Н, а остальные 5 означают Q, которые являются одинаковыми или различными. Кроме того, если n равно 5, то 2 возможных заместителя означают H, а остальные 5 независимо означают Q, как описано в данном контексте. Если n равно 4, то 3 из семи возможных заместителей означают Н, а остальные независимо означают Q, как описано в данном контексте. Если n равно 3, то 4 из 7 возможных заместителей означают Н, а остальные 3 означают Q, как описано в данном контексте. Если n равно 2, то 2 из семи возможных заместителей означают Q, а остальные означают Н. Если n равно 1, то только 1 из семи возможных заместелей означает Q, а остальные означают Н. Наконец, если n равно 0, то все 7 заместителей означают Н.
Следует понимать, что заместители Q являются одинаковыми или различными.
Если соединения, соли и фармацевтические препараты указаны во множественном числе, то имеется в виду также соединение, соль и фармацевтический препарат в единственном числе.
В настоящем изобретении предлагаются фармацевтически приемлемые соли указанных соединений, соответствующие рацематы, диастереоизомеры, энантиомеры, таутомеры, а также соответствующие кристаллические модификации, если они существуют, например сольваты, гидраты и полиморфные модификации.
Точная доза ингибитора IAP зависит от нескольких факторов, включая организм пациента, природу и степень тяжести состояния, подлежащего лечению, и способ введения. Ингибитор IAP вводят любым способом, включая пероральный, парентеральный, например внутрибрюшинный, внутривенный, внутримышечный, подкожный, внутриопухолевый, или ректальный или энтеральный способ. В предпочтительном варианте ингибитор IAP вводят пероральным способом предпочтительно в суточной дозе от 1 до 300 мг/кг массы тела или, в случае наиболее крупных приматов, в суточной дозе от 50 до 5000, предпочтительно от 500 до 3000 мг. Предпочтительная пероральная суточная доза составляет от 1 до 75 мг/кг массы тела, или, в случае наиболее крупных приматов, суточная доза составляет от 10 до 2000 мг, которую вводят в виде единой дозы или разделенных доз, например, 2 раза в сут.
Обычно сначала вводят небольшую дозу, а затем ее постепенно увеличивают до тех пор, пока не будет определена оптимальная доза для пациента, который проходит курс лечения. Верхний предел дозы зависит от побочных эффектов и определяется в ходе клинических испытаний.
Дозы можно титровать в случае конкретного показания, возраста, массы и общего физического состояния пациента, а также требуемой ответной реакции, однако в большинстве случаев доза составляет приблизительно от 10 мг/сут до приблизительно 500 мг/сут при необходимости при однократном или многократном суточном введении.
В одном объекте настоящего изобретения предлагается комбинация А, включающая
(а) соединение формулы (I)
где
1
1
4
1
4
1
4
3
10
R означает H, C-Cалкил, C-Cалкенил, C-Cалкинил или С-Сциклоалкил, который является незамещенным или замещенным,
2
1
4
1
4
1
4
3
10
R означает H, C-Cалкил, C-Cалкенил, C-Cалкинил или С-Сциклоалкил, который является незамещенным или замещенным,
3
3
2
5
1
4
1
4
1
4
2
R означает Н, -CF, -CF, C-Cалкил, C-Cалкенил, C-Cалкинил, -СН-Z или
2
3
R и R вместе с атомом азота образуют het,
3
3
2
2
2
Z означает Н, -ОН, F, Cl, -СН, -CF, -CHCl, -CHF или -CHOH,
4
1
16
1
16
1
16
3
10
2
1-6
1
2
0-6
2
0-6
R означает С-Салкил с прямой или разветвленной цепью, C-Салкенил, С-Салкинил или -С-Сциклоалкил, -(CH)-Z, -(CH)арилфенил и -(CH)het, где алкил, циклоалкил и фенил являются незамещенными или замещенными,
1
8
1
10
8
2
1-6
3
7
8
2
0-6
8
2
1-6
9
10
1
10
2
1-6
3
7
2
0-6
2
1-6
1
10
2
1-6
3
7
2
0-6
2
1-6
Z означает -N(R)-С(O)-С-Салкил, -N(R)-С(O)-(СН)С-Сциклоалкил, -N(R)-С(O)-(СН)фенил, -N(R)-C(O)-(CH)het, -С(O)-N(R)(R), -С(O)-O-С-Салкил, -С(O)-O-(СН)С-Сциклоалкил, -С(O)-O-(СН)фенил, -C(O)-O-(CH)het, -O-С(O)-С-Салкил, -O-С(O)-(СН)С-Сциклоалкил, -O-С(O)-(СН)фенил, -O-C(O)-(CH)het, где алкил, циклоалкил и фенил являются незамещенными или замещенными,
het означает 5-7-членное гетероциклическое кольцо, содержащее от 1 до 4 гетероатомов, которые выбирают из N, О и S, или 8-12-членную конденсированную циклическую систему, включающую по крайней мере одно 5-7-членное гетероциклическое кольцо, содержащее 1, 2 или 3 гетероатома, которые выбирают из N, О и S, при этом гетероциклическое кольцо или конденсированная циклическая система является незамещенной или замещенной по атому углерода или азота,
8
3
3
2
2
R означает Н, -СН, -CF, -CHOH или -CHCl,
9
10
1
4
3
7
2
1-6
3
7
2
0-6
R и and R каждый независимо означает Н, С-Салкил, С-Сциклоалкил, -(СН)С-Сциклоалкил, -(СН)фенил, где алкил, циклоалкил и фенил являются незамещенными или замещенными, или
9
10
R и R вместе с атомом азота образуют het,
5
1
10
3
7
2
1-6
3
7
1
10
2
0-6
3
7
2
0-6
2
0-4
2
1-4
2
2
1-6
2
1
10
2
1-6
3
7
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
1-6
R означает Н, С-Салкил, арил, фенил, С-Сциклоалкил, -(СН)С-Сциклоалкил, -С-Салкиларил, -(СН)C-Сциклоалкил,-(СН)фенил(СН)СН-((СН)фенил), -(СН)-CH(фенил), -инданил, -С(O)-С-Салкил, -С(O)-(СН)С-Сциклоалкил, -С(O)-(СН)фенил, -(CH)-С(O)фенил, -(CH)het, -C(O)-(CH)het или
5
R означает остаток аминокислоты, где заместители алкил, циклоалкил, фенил или арил являются незамещенными или замещенными,
U означает остаток формулы (III)
где
n равно от 0 до 5,
Х означает -СН или N,
0
8
Ra и Rb независимо означают О, S или N, или С-Салкил, где один или более атомов углерода в цепи алкила заменены на гетероатом, который выбирают из О, S или N, и где алкил является незамещенным или замещенным,
Rd выбирают из группы, включающей
p
q
(a) -Re-Q-(Rf)(Rg), или
1
2
(b) Ar-D-Ar, или
1
2
(c) Ar-D-Ar,
5
Rc означает Н или Rc и Rd вместе образуют циклоалкил или het, где если Rd и Rc образуют циклоалкил или het, то R присоединен к образующемуся циклу через атом С или N,
р и q независимо равны 0 или 1,
1
8
Re означает С-Салкил или алкилиден, и Re является незамещенным или замещенным,
2
Q означает N, О, S, S(O) или S(O),
1
2
Ar и Ar означают незамещенный или замещенный арил или het,
1
10
1
10
1
10
2
0-6
3
7
2
0-6
2
1-6
2
1-6
11
11
11
12
11
12
11
11
2
11
2
11
12
11
2
12
1
10
1
4
1
4
2
1
2
2
1
2
1
4
Rf и Rg каждый независимо отсутствует или означает Н, -C-Салкил, С-Салкиларил, -ОН, -О-С-Салкил, -(СН)С-Сциклоалкил, -O-(СН)арил, фенил, арил, фенилфенил, -(CH)het, -O-(CH)het, -OR, -С(O)-R, -С(O)-N(R)(R), -N(R)(R), -S-R, -S(O)-R, -S(O)-R, -S(O)-NRR, -NR-S(O)- R, S-C-Салкил, арил(C-C)алкил, het(C-C)алкил, где алкил, циклоалкил, het и арил являются незамещенными или замещенными, -SO-(C-С)алкил, -SO-(С-С)алкилфенил, -O-(C-C)алкил, или
Rg и Rf образуют цикл, который выбирают из het или арила, и
1
7
2
nr
1
7
1
6
1
6
3
D означает -СО-, -С(O)- или С-Салкилен или арилен, -CF-, -О- или -S(O), где rn равно от 0 до 2, 1,3-диоаксолан или С-Салкил-ОН, где алкил, алкилен или арилен являются незамещенными или замещенными одним или более атомами галогена и группами: ОН, -О-С-Салкил, -S-C-Салкил или -CF, или
1
7
1
7
10
10
0
10
1
10
0
10
2
0
10
2
0
10
D означает -N(Rh), где Rh означает Н, С-Салкил (незамещенный или замещенный), арил, -O(С-Сциклоалкил) (незамещенный или замещенный), С(O)-(С-С)алкил, С(O)-(С-С)алкиларил, С-O-(С-С)алкил, С-O-(С-С)алкиларил или SO-(С-С)алкил, SO-(С-С)алкиларил),
6
7
6
7
1
10
1
10
1
10
1
10
2
0-6
3
7
2
0-6
2
1-6
2
1-6
11
11
11
12
11
12
11
11
2
11
2
11
12
11
2
12
6
7
6
7
R, R, R' и R' каждый независимо означает Н, -С-Салкил, -C-Салкоксигруппу, арил(C-C)алкоксигруппу, -ОН, -O-(C-C)алкил, -(СН)(С-С)циклоалкил, -O-(СН)арил, фенил, -(CH)het, -O-(CH)het, -OR, -C(O)-R, -C(O)-N(R)(R), -N(R)(R), -S-R, -S(O)-R, -S(O)-R, -S(O)-NRR, -NR-S(O)- R, где алкил, циклоалкил и арил являются незамещенными или замещенными, а R, R, R' и R' могут вместе образовывать циклическую систему, и
11
12
1
10
2
0-6
3
7
2
0-6
0-1
1-2
1
10
2
1-6
3
7
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
1-6
1
10
2
1-6
3
7
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
1-6
R и R независимо означают H, C-Cалкил, -(СН)(C-C)циклоалкил, -(СН)(СН)(арил),-С(O)-(C-C)алкил, -С(O)-(СН)(C-C)циклоалкил, -С(O)-O-(СН)арил, -С(O)-(СН)-O-флуоренил, -С(O)-NH-(СН)арил, -С(O)-(СН)арил, -C(O)-(CH)het, -С(S)-(C-C)алкил, -С(S)-(СН)(C-C)циклоалкил, -С(S)-O-(СН)арил, -С(S)-(СН)-O-флуоренил, -C(S)-NH-(СН)арил, -С(S)-(СН)арил, -C(S)-(CH)het, где алкил, циклоалкил и арил являются незамещенными или замещенными, или
11
12
R и R означают заместители, которые ускоряют перенос молекулы через клеточную мембрану, или
11
12
R и R вместе с атомом азота образуют het,
11
12
1
10
1
6
1
6
3
где алкильные заместители групп R и R являются незамещенными или замещенными одним или более заместителями, которые выбирают из группы, включающей C-Cалкил, галоген, ОН, -O-(С-С)алкил, -S-(С-С)алкил или -CF,
11
12
1
10
1
6
1
6
1
6
3
замещенные циклоалкильные заместители групп R и R замещены одним или более заместителями, которые выбирают из группы, включающей C-Салкен, C-Cалкил, галоген, ОН, -O-(С-С)алкил, -S-(С-С)алкил или -CF, и
11
12
1
4
1
4
1
4
1
4
замещенные фенильные или арильные заместители групп R и R замещены одним или более заместителей, которые выбирают из группы, включающей галоген, гидроксигруппу, С-Салкил, С-Салкоксигруппу, нитрогруппу, -CN, -O-С(O)-(С-С)алкил и -С(O)-O-(C-C)арил,
или его фармацевтически приемлемые соли, или
соединение формулы (Ia)
или его фармацевтически приемлемые соли,
где
1
1
4
2
4
2
4
3
10
1
R означает Н, C-Cалкил, С-Салкенил, С-Cалкинил или С-Сциклоалкил, при этом R является незамещенным или замещенным,
2
1
4
2
4
2
4
3
10
2
R означает Н, C-Cалкил, С-Салкенил, C-Cалкинил, С-Сциклоалкил, при этом R является незамещенным или замещенным,
3
3
2
5
1
4
2
4
2
4
2
R означает Н, CF, CF, C-Cалкил, C-Cалкенил, С-Салкинил, СН-Z, или
2
3
R и R вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо, где алкил, алкенил, алкинил или het являются незамещенными или замещенными,
3
2
2
2
Z означает Н, ОН, F, Cl, СН, CHCl, CHF или СНОН,
4
0
10
0
10
0
10
3
10
0
10
R означает С-Салкил, С-Салкенил, С-Салкинил, С-Сциклоалкил, где C-Cалкил или циклоалкил является незамещенными или замещенными,
А означает het, который является незамещенным или замещенным,
1
7
2
9
7
r
1
10
1
10
r
1
10
0
10
0
10
r
0
10
D означает С-Салкилен или С-Салкенилен, С(O), О, NR, S(O), С(O)-(C-C)алкил, O-(C-C)алкил, S(O)-(C-C)алкил, С(O)-(C-C)арилалкил, O(C-C)арилалкил или S(O)-(C-C)арилалкил, где алкил и арил являются незамещенными или замещенными,
r равно 0, 1 или 2
1
5
6
2
5
A означает замещенный или незамещенный арил или незамещенный или замещенный het, где заместителями в арильном и het кольце являются галоген, алкил, (низш.)алкокси, NRR, CN, NO или SR,
1
10
1
10
1
10
1
10
2
0
6
3
7
1
10
2
0-6
2
1-6
2
1-6
11
11
11
12
11
12
11
11
2
11
2
11
12
11
2
12
каждая группа Q независимо означает Н, C-Салкил, С-Салкоксигруппу, арил(C-C)алкоксигруппу, ОН, O-(C-C)алкил, (СН)-(C-C)циклоалкил, арил, арил(C-C)алкил, O-(СН)арил, (CH)het, het, O-(CH)het, -OR, C(O)R, -C(O)N(R)(R), N(R)(R), SR, s(o)R, S(O)R, S(O)-N(R)(R) или NR-S(O)-(R), где алкил, циклоалкил и арил являются незамещенными или замещенными,
n равно 1, 2 или 3, 4, 5, 6 или 7,
het означает 5-7-членное моноциклическое гетероциклическое кольцо, содержащее от 1 до 4 гетероатомов в цикле, которые выбирают из N, О и S, или 8-12-членную конденсированную циклическую систему, которая включает одно 5-7-членное моноциклическое гетероциклическое кольцо, содержащее 1, 2 или 3 гетероатома в цикле, которые выбирают из N, О и S, при этом het является незамещенным или замещенным,
11
12
1
10
2
0-6
3
7
2
0-6
0-1
1-2
1
10
2
1-6
3
7
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
1-6
1
10
2
1-6
3
7
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
0-6
2
1-6
11
11
12
11
n
11
m
11
12
11
11
12
11
11
12
R и R независимо означают Н, C-Cалкил, (СН)(C-C)циклоалкил, (СН)(СН)(арил), С(O)-(C-C)алкил, -С(O)-(СН)(C-C)циклоалкил, -С(O)-O-(СН)арил, -С(O)-(СН)-O-флуоренил, С(O)-NH-(СН)арил, С(O)-(CH)арил, C(O)-(CH)het, -С(S)-(C-C)алкил, -С(S)-(СН)(C-C)циклоалкил, -С(S)-O-(СН)арил, -С(S)-(СН)-O-флуоренил, C(S)-NH-(СН)арил, -С(S)-(СН)-арил или C(S)-(CH)het, С(O)R, C(O)NRR, С(O)OR, S(O)R, S(O)NRR, m равно 1 или 2, C(S)R, C(S)NRR, C(S)OR, где алкил, циклоалкил и арил являются незамещенными или замещенными, или R и R являются заместителем, который ускоряет перенос молекулы через клеточную мембрану, или
11
12
R и R вместе с атомом азота образуют het,
11
12
1
10
1
6
1
6
3
11
12
где алкильные заместители групп R и R являются незамещенными или замещенными одним или более заместителями, которые выбирают из группы, включающей C-Cалкил, галоген, ОН, -O-(С-С)алкил, -S-(С-С)алкил, -CFили NRR,
11
12
2
10
1
6
1
6
1
6
3
11
12
замещенные циклоалкильные заместители групп R и R замещены одним или более заместителями, которые выбирают из группы, включающей С-Салкен, С-Салкил, галоген, ОН, -O-(С-С)алкил, -S-(С-С)алкил, -CF или NRR, и
11
12
1
4
1
4
1
4
1
4
замещенный het или замещенный арил групп R и R замещены одним или более заместителей, которые выбирают из группы, включающей галоген, гидроксигруппу, С-Салкил, С-Салкоксигруппу, нитрогруппу, -CNO-C(O)-(C-С)алкил и -С(O)-O-(C-C)алкил,
5
6
7
5
5
5
5
6
R, R и R независимо означают водород, (низш.)алкил, арил, арил(низш.)алкил, циклоалкил или циклоалкил(низш.)алкил, C(O)R, S(O)R, C(O)OR, C(O)NRR и
1
2
3
4
1
2
9
10
13
8
14
заместители групп R, R, R, R, Q, А и A независимо означают галоген, гидроксигруппу, (низш.)алкил, (низш.)алкенил, (низш.)алкинил, (низш.)алканоил, (низш.)алкоксигруппу, арил, арил(низш.)алкил, аминогруппу, амино(низш.)алкил. ди(низш.)алкиламиногруппу, (низш.)алканоил, амино(низш.)алкоксигруппу, нитрогруппу, цианогруппу, циано(низш.)алкил, карбоксигруппу, (низш.)карбалкоксигруппу, (низш.)алканоил, арилоил, (низш.)арилалканоил, карбамоил, N-моно- или N,N-ди(низш.)алкилкарбамоил, (низш.)алкиловый эфир карбаминовой кислоты, амидиногруппу, гуанидин, уреидогруппу, меркаптогруппу, сульфогруппу, (низш.)алкилтиогруппу, сульфоаминогруппу, сульфонамид, бензосульфонамид, сульфонат, сульфанил(низш.)алкил, арилсульфонамид, галогензамещенный арилсульфонат, (низш.)алкилсульфинил, арилсульфинил, арил(низш.)алкилсульфинил, (низш.)алкиларилсульфинил, (низш.)алкилсульфонил, арилсульфонил, арил(низш.)алкилсульфонил, (низш.)арилалкил(низш.)алкиларилсульфонил, галоген(низш.)алкилмеркаптогруппу, галоген(низш.)алкилсульфонил, фосфоногруппу (-Р(=O)(ОН)), гидрокси(низш.)алкоксифосфорил или ди(низш.)алкоксифосфорил, (R)NC(O)-NRR, (низш.)алкиловый эфир карбаминовой кислоты или карбаматы или -NRR,
где
8
14
R и R являются одинаковыми или различными и независимо означают Н или (низш.)алкил, или
8
14
R и R вместе с атомом азота образуют 3-8-членное гетероциклическое кольцо, содержащее гетероатомы азота в цикле и необязательно содержащее один или два дополнительных гетероатома, которые выбирают из атомов азота, кислорода и серы, при этом указанное гетероциклическое кольцо является незамещенным или замещенным (низш.)алкилом, галогеном, (низш.)алкенилом, (низш.)алкинилом, гидроксигруппой, (низш.)алкоксигруппой, нитрогруппой, аминогруппой, (низш.)алкилом, аминогруппой, ди(низш.)алкиламиногруппой, цианогруппой, карбоксигруппой, (низш.)карбалкоксигруппой, формилом, (низш.)алканоилом, оксогруппой, карбамоилом, N-(низш-)- или N,N-ди(низш,)алкилкарбамоилом, меркаптогруппой или (низш.)алкилтиогруппой, и
9
10
13
R, R и R независимо означают водород, (низш.)алкил, галогензамещенный (низш.)алкил, арил, арил(низш.)алкил, галогензамещенный арил, галогензамещенный арил(низш.)алкил,
в комбинации с одним или более следующих соединений:
(б) соединением формулы (II)
или его солью,
(в) доксорубицином, и
(г) цитарабином.
В другом объекте настоящего изобретения предлагается комбинация, включающая соединение формулы (I) и соединение формулы (II), доксорубицин или цитарабин. Соединением формулы (I) является N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид.
В еще одном объекте настоящего изобретения предлагается комбинация, включающая соединение формулы (Ia) и соединение формулы (II), доксорубицин или цитарабин. Соединением формулы (Ia) является (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид.
В одном объекте настоящего изобретения предлагается фармацевтическая композиция, включающая соединение формулы (I) или (Ia) и соединение формулы (II), доксорубицин или цитарабин. Соединением формулы (I) является N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид, а соединением формулы (Ia) является (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2- метиламинопропионамид.
В другом объекте настоящего изобретения предлагается фармацевтическая композиция, включающая соединение формулы (I) или (Ia) в комбинации с фармацевтической композицией, включающей соединение формулы (II), доксорубицин или цитарабин. Соединением формулы (I) является N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид, а соединением формулы (Ia) является (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид.
Проапоптозные ингибиторы IAP, N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид или (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид, в комбинации с РКС412 или стандартными цитотоксичными агентами (доксорубицином и Ara-c) in vitro и in vivo ускоряют гибель чувствительных к РКС412 и устойчивых клеточных линий, экспрессирующих мутантную FLT3.
Кроме того, комбинация N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида или (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида и РКС412 блокирует стромально-опосредованный сигнал жизнеспособности, который приводит к резистентности к РКС412.
N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид или (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид также усиливает антипролиферативное действие стандартных химиотерапевтических агентов, таких как ингибитор топоизомеразы, включая доксорубицин, и антиметаболита, включая цитарабин (другое название Ara-c).
N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид или (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид также усиливает антипролиферативное действие доксорубицина или Ara-c in vitro в клетках, чувствительных и резистентных к РКС412.
Термин «ингибитор топоизомеразы» означает ингибитор топоизомеразы I и ингибитор топоизомеразы II. Примеры ингибитора топоизомеразы I включают, без ограничения перечисленным, топотекан, гиматекан, иринотекан, камптотецин и его аналоги, 9-нитрокамптотецин и макромолекулярный конъюгат камптотецина PNU-166148, ацетат 10-гидроксикамптотецина, этопозид, гидрохлорид идарубицина, гидрохлорид иринотекана, тенипозид, гидрохлорид топотекана, доксорубицин, гидрохлорид эпирубицина, гидрохлорид митоксантрона и гидрохлорид даунорубицина. Иринотекан вводят, например, в виде коммерческого продукта под торговым названием CAMPTOSAR. Топотекан вводят, например, в виде коммерческого продукта под торговым названием HYCAMTIN. Термин «ингибитор топоизомеразы II», использованный в данном контексте, включает, без ограничения перечисленным, антрациклины, такие как доксобубицин, включая липосомальные составы, например продукт CAELYX, даунорубицин, включая липосомальный состав, например продукт DAUNOSOME, эпирубицин, идарубицин и неморубицин, антрахиноны митоксантрон и лозоксантрон, подофиллотоксины этопозид и тенипозид. Этопозид выпускают в виде продукта ETOPOPHOS, тенипозид выпускают в виде продукта VM 26-BRISTOL, доксорубицин выпускают в виде продукта ADRIBLASTIN или ADRIAMYCIN, эпирубицин выпускают в виде продукта FARMORUBICIN, идарубицин выпускают в виде продукта ZAVEDOS, и митоксантрон выпускают в виде продукта NOVANTRON.

Термин «антиметаболит», использованный в данном контексте, означает соединение, которое ингибирует или останавливает синтез ДНК, что приводит к гибели клеток. Примеры антиметаболитов включают, без ограничения перечисленным, 6-меркаптопурин, цитарабин, флударабин, флексуридин, фторурацил, капецитабин, ралтитрексед, метотрексат, кладрибин, гемцитабин, гидрохлорид гемцитабина, тиогуанин, гидроксимочевину, деметилирующие ДНК агенты, такие как 5-азацитидин и децитабин, эдатрексат и антагонисты фолиевой кислоты, такие как, без ограничения перечисленным, пеметрексед. Капецитабин вводят, например, в виде коммерческого препарата, например, в виде продукта под торговым названием XELODA, и гемцитабин в виде продукта GEMZAR. Цитарабин является сокращенным названием цитозинарабинозида, стандартного химиотерапевтического агента, который в основном используют для лечения лейкоза и лимфомы не-Ходжкина. Другие торговые названия цитарабина включают Ara-C, Cytosar-U, Tarabine PFS или другие местные торговые названия.
Термин «лечение» означает профилактику или предпочтительно лечение, включая, без ограничения перечисленным, паллиативное, лечебное, снижающее интенсивность симптомов, подавляющее симптомы, регулирующее и/или подавляющее действие на указанные заболевания, прежде всего заболевания, описанные ниже.
Термин «ОМЛ», использованный в данном контексте, означает неконтролируемый быстро прогрессирующий рост миелоидных клеток, например гранулоцитов и эритроидов, мегакариоцитов и их предшественников. У пациентов с ОМЛ число незрелых миелоидных, эритроидных клеток или мегакариоцитов значительно превосходит число эритроцитов (красных кровяных клеток), что приводит к утомляемости и кровотечениям, а также к повышению чувствительности к инфекционным заболеваниям. Диагноз ОМЛ у детей и взрослых характеризуется неблагоприятным прогнозом, несмотря на применение агрессивных химитерапевтических курсов лечения. Общий процент выживаемости составляет 40-60%. Аутотрансплантация кроветворных клеток костного мозга без отделения миелоцитов после химиотерапевтического их уничтожения не влияет на выживаемость, однако агрессивная химиотерапия перед аллогенной трансплантацией костного мозга повышает процент выживаемости до 70%. Однако доступность пригодных родственных доноров ограничена. Таким образует существует необходимость в разработке новых подходов к лечению ОМЛ.
Термин «теплокровное животное (или пациент)» предпочтительно означает млекопитающего, прежде всего человека или подростка.
3
N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид или (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид синергетически усиливают антипролиферативное действие РКС412 в отношении клеток, экспрессирующих мутантную FLT3. При испытаниях комбинации N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида или (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида и РКС412 наблюдается аддитивный и синергетический эффекты двух соединений в отношении ряда чувствительных и резистентных к РКС412 клеточных линий in vitro. Положительный суммарный эффект наблюдается также на модели визуализации острого лейкоза in vivo при лечении мышей комбинацией N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида или (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида и РКС412, при этом максимальное снижение размера опухоли наблюдается у голых мышей NCr при внутривенной инъекции клеток, экспрессирующих FLT3-ITD-Ba/F-luc+, и лечении комбинацией агентов по сравнению с контрольными животными (введение носителя) или лечением каждым из агентов в отдельности.
Небольшое число лейкозных клеток CD34+ могут существовать в микроокружении костного мозга пациентов с ОМЛ после продолжительного лечения иматинибом (в течение нескольких лет). Аналогичным образом результаты клинических испытаний пациентов с прогрессирующим ОМЛ, проходящих курс лечения ингибиторами киназы FLT3, свидетельствуют о том, что обычная ответная реакция проявляется в значительном снижении циркулирующей популяции бластов с минимальным или замедленным снижением бластов в костном мозге, что указывает о защитном действии. Полученные данные свидетельствуют о важности более глубокого исследования механизма взаимодействия стромальных клеток с лейкозными клетками. Стромально опосредованную хеморезистентность клеток, экспрессирующих мутантную FLT3, в отношении РКС412 можно устранить при обработке клеток ингибитором IAP, что свидетельствует о возможной роли IAP в передаче сигнала, опосредованной фактором роста, приводящей к резистентности к РКС412.
Исследовали регуляцию FLT3 с использованием панели апоптозных сигнальных белков, включая Bcl-2, BcI-XL, а также эффективных субстратов IAP, N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида или (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида, XIAP и CIAP1. В трансформированных FLT3 клетках наблюдается только незначительные изменения XIAP, Bcl-2 и BcI-XL по сравнению с исходными клетками. Указанные незначительные изменения в экспрессии белков могут иметь некоторое значение в чувствительности клеток, трансформированных FLT3, к цитотоксическому действию ингибитора протеинтирозинкиназ, такого как РКС412, или ингибитора IAP, такого как N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид или (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид, а также к цитотоксическому действию комбинации двух агентов.
В заключение следует отметить, что N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид или (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид проявляет эффективность против мутантной FLT3 in vivo в физиологически приемлемых и переносимых дозах. N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид или (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид также усиливают ингибирующее действие РКС412, а также стандартных химиотерапевтических агентов, таких как доксорубицин и Ara-c, за счет адитивного синергетического действия in vitro в отношении клеток, экспрессирующих мутантную FLT3. Способность N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида или (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида и РКС412 (или доксорубицина или Ara-c) к комбинированному аддитивному или синергетическому действию в клетках, резистентных к РКС412 и экспрессирующих мутантную FLT3, свидетельствует о том, что ингибиторы IAP, такие как N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид или (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид можно использовать в комбинации с другими агентами для обеспечения высокого уровня чувствительности пациента за счет подавления устойчивых к лекарственным средствам мутаций FLT3.
Таким образом, в другом объекте настоящего изобретения предлагается способ лечения теплокровного животного, страдающего от острого миелоидного лейкоза (ОМЛ) или острого миелоидного лейкоза (ОМЛ), неподдающимся лечению стандартными химиотерапевтическими средствами, при этом указанный способ заключается во введении указанному животному терапевтически эффективного количества комбинации соединений (I) или (Ia) и соединения (II), доксорубицина или цитарабина. Соединением (I) является N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид, а соединением (Ia) является (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид.
В еще одном объекте настоящего изобретения предлагается применение комбинации или фармацевтической композиции, включающей соединение (I) или (Ia) и соединение (II), доксорубицин или цитарабин, для лечения острого миелоидного лейкоза (ОМЛ) или острого миелоидного лейкоза, неподдающегося лечению стандартными химиотерапевтическими средствами. Соединением (I) является N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид, а соединением (Ia) является (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид.
В другом объекте настоящего изобретения предлагается применение комбинации или фармацевтической композиции, включающей соединение (I) или (Ia) и соединение (II), доксорубицин или цитарабин, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения острого миелоидного лейкоза (ОМЛ) или острого миелоидного лейкоза, неподдающегося лечению стандартными химиотерапевтическими средствами. Соединением (I) является N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид, а соединением (Ia) является (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид.
В еще одном объекте настоящего изобретения предлагается коммерческая упаковка, включающая комбинацию или фармацевтическую композицию, включающую соединение (I) или (Ia) и соединение (II), доксорубицин или цитарабин вместе с инструкциями по одновременному, отдельному или последовательному их применению, для лечения острого миелоидного лейкоза (ОМЛ). Соединением (I) является N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид, а соединением (Ia) является (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид.
В представленных ниже примерах использовали РКС412 и N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид или (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид, синтезированные фирмой Novartis Pharma AG, Базель, Швейцария, и которые растворяли в ДМСО, при этом получали исходные растворы с концентрацией 10 мМ. Затем получали серийные разведения в ДМСО для анализа с использованием клеток.
Пример 1
Получение клеточных линий и культур
2
5
5
Зависимую от IL-3 гематопоэтическую клеточную линию Ba/F3 мыши трансформировали FLT3-ITD или FLT3-0835Y-содержащими ретровирусами MSCV, включающими избирательный к неомицину маркер (см. статью Kelly и др. (2002)). Трансформированные FLT3-ITD клетки культивировали в среде, содержащей G418 (1 мг/мл). РКС412-резистентные клеточные линии Ba/F3, экспрессирующие FLT3-ITD с мутацией в АТФ-связывающем кармане (F691L, А627Т, G697R, N676D), получали, как описано выше (см. статью Cools и др. (2004)). Клеточная линия клеток ОМЛ человека, экспрессирующих FLT3-ITD, MV4;11 (см. статью Quentmeier и др. (2003)), была предоставлена Dr.Scott Armstrong, Dana Farber Cancer Institute, Boston, MA. Клеточную линию клеток ОМЛ человека, экспрессирующую FLT3-ITD, MOLM-13, модифицировали для экспрессии люциферазы и получали в виде MOLM13-luc+ Dr.Andrew Kung, Dana Farber Cancer Institute, Boston, MA. Все клеточные линии культивировали в среде RPMI (Mediatech, Inc., Herndon, VA), содержащей 5% СО, 10% ЭТС и 1% глутамин, при 37°С при концентрации от 2×10 до 5×10. Исходные клетки Ba/F3, экспрессирующие FLT3 дикого типа, культивировали аналогичным образом в среде, содержащей 15% WEHI в качестве источника IL-3. Все трансформированные клеточные линии культивировали в среде, содержащей 1 мг/мл G418.
Пример 2
Антитела и иммуноблоттинг
Антитела XIAP (клон 28, фирмы BD Sciences, Franklin Lakes, NJ), антитела CIAP1 (фирмы Cell Signaling Technology, Danvers, MA), антитела Bcl-2 (c-2, фирмы Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) и антитела Bcl-XL (H-5, фирмы Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) использовали при разведении 1:200. Моноклональные антитела анти-β-актин (клон АС-15) получали от фирмы Sigma-Aldrich (St. Louis, МО) и использовали при разведении 1:2000. Антитела α-тубулин (клоне DM1A) получали от фирмы Sigma Aldrich (St. Louis, МО) и использовали в разведении 1:2000. Лизис белков и иммуноблоттинг проводили, как описано выше (см. статью Weisberg и др. (2002)).
Пример 3
Анализ жизнеспособности и апоптоза клеток
Для анализа использовали метод исключения при окраске трипановым голубым, как описано, например, в статье Weisberg и др. (2002), и его использовали для анализа пролиферации клеток, культивированных в присутствии и отсутствии РКС412 и N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид (LBW242). Жизнеспособность клеток рассчитывали по сравнению с контрольными (необработанными) клетками в процентах. Стандартное отклонение, указанное на фигурах в виде отрезка линии, означает среднюю стандартную ошибку для каждого результата. Апоптоз обработанных лекарственным средством клеток оценивали с использованием набора Annexin-V-Fluos Staining (фирмы Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN), как описано ранее (см. статью Weisberg и др. (2002)).
Пример 4
Анализ с использованием стромальных клеток человека
Стромальные клетки человека HS-5 (10000 клеток в лунке) высевали за 24 ч до высевания клеток MOLM13-luc+ (40000 клеток в лунке), затем клетки обрабатывали серийными разведениями соединений N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид (LBW242) и РКС412, в отдельности и в комбинации. Затем клетки анализировали на наличие экспрессии люциферазы с использованием прибора для визуализации Xenogen.
Пример 5
Испытания комбинации лекарственных средств
1
x
1
2
x
2
1
2
x
1
x
2
Для испытания комбинации лекарственных средств РКС412 и N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид (LBW242) добавляли в фиксированных соотношениях одновременно в клетки FLT3-ITD-Ba/F3 и РКС412-резистентные клетки, экспрессирующие мутантную FLT3. Жизнеспособность клеток определяли методом исключения при окраске трипановым голубым и полученные результаты представляли в виде зависимости роста обработанных клеток (FA) от роста контрольных клеток, полученные данные анализировали с использованием программного обеспечения Calcusyn (фирмы Biosoft, Ferguson, МО and Cambridge, UK) и метода Чоу-Талалая (см. статью Chou и Talalay и др. (1984)). Комбинационный индекс определяли по уравнению [D]=[D]+[D]/[D], где [D] и [D] означают концентрации, необходимые для каждого лекарственного средства в составе комбинации для обеспечения эффекта, аналогичного эффекту, обеспечиваемому концентрациями [D] и [D] каждого лекарственного средства в отдельности. Величины менее 1 означают синергизм, а величины более 1 означают антагонизм.
Пример 6
Испытания с использованием мышей и визуализации in vivo

Клетки FLT3-ITD-Ba/F3 трансформировали ретровирусами, кодирующими люциферазу светляков (MSCV-Luc) и селекционировали неомицином для получения клеточной линии FLT3-ITD-Ba/F3-luciferase (luc+). Клетки, несодержащие микоплазму и вирус, ресуспендировали в сбалансированном солевом растворе Хэнка (HBSS, фирмы Mediatech, Inc., VA), затем вводили внутривенно мышам. 6 мас.% раствор РКС412 в среде Gelucire 44/14 (фирмы Gattefosse, France) разбавляли буферным раствором 1×ФСБ и нагревали на водяной бане при 42°С, при этом получали жидкость. Раствор хранили при 4°С до введения мышам через желудочный зонд. LBW242 сначала смачивали (10 мг порошка) в 30 мкл воды с последующим растворением в 2 экв. (0,73 мкл/мг соединения) 6,0 н. HCl. Полученный прозрачный раствор доводили до объема 1 мл ацетатным буферным раствором, pH 4,6, и полученный концентрированный раствор хранили в замороженном состоянии при -20°С до введения мышам через желудочный зонд.
Самцам лысых мышей NCr (возраст 5-6 недель, фирмы Taconic, NY) вводили общее количество клеток 800000 FLT3-ITD-Ba/F3-luc+ инъекцией в хвостовую вену. Проводили визуализацию мышей и общую люминисценцию тела рассчитывали, как описано ранее (см. статью Armstrong и др. (2003)). Для распределения мышей в группу для лечения с определенным размером опухоли проводили исходную визуализацию через 1 сут после прививки опухолевых клеток. Группам мышей вводили пероральным способом носитель, 40 мг/кг/сут РКС412 (полученный, как описано выше), 50 мг/кг LBW242 (полученный, как описано выше) или комбинацию РКС412 и LBW242. Повторную визуализацию проводили через различные интервалы времени. После завершения испытаний (приблизительно через 1 неделю после исходной внутривенной инъекции клеток FLT3-ITD-Ba/F3-luc+) мышей умерщвляли, регистрировали массы тела и селезенки, ткани помещали в 10% раствор формалина для гистопатологического анализа.
Пример 7
Действие комбинации N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и РКС412 в отношении чувствительных и резистентных к РКС412 клеток
N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид (LBW242) испытывали в комбинации с РКС412 в отношении клеток FLT3-ITD-Ba/F3. При введении двух агентов наблюдается значительное положительное действие, см. фиг.1 и табл.1, в которых приведены комбинационные индексы, рассчитанные с использованием кривых зависимости ответной реакции от дозы, показанных на фиг.1 и 2. Анализ комбинированного действия N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и РКС412 с использованием программного обеспечения Calcusyn свидетельствует о наличии синергетического действия в интервале доз (ED50-ED90), как показано в табл.1. N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид (LBW242) и РКС412 испытывали также в комбинации в отношении острого лейкоза человека на клеточной линии, экспрессирующей FLT3-ITD, MV4, клеточная линия 11, при этом установлено, что оба агента усиливают ингибирование клеточной пролиферации по сравнению с действием каждого лекарственного средства в отдельности только при более высоких дозах, как показано в табл.1. Анализ с использованием программного обеспечения Calcusyn комбинированного действия N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и РКС412 свидетельствует о синергизме от средней степени до более высокой степени при более высоких дозах, при этом при низких дозах наблюдается антагонизм (ED50), как показано в табл.1. Комбинированное действие N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и РКС412 испытывали также в отношении резистентных к РКС412, экспрессирующих мутантную FLT3 клеточных линий, A627T-FLT3-Ba/F3, F691 I-FLT3-Ba/F3, G697R-FLT3-Ba/F3 и N676D-FLT3-Ba/F3. Синергетическое действие наблюдается для N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и РКС412 в отношении клеточных линий A627T-FLT3-Ba/F3 и F6911-FLT3-Ba/F3 (ED50-ED90), и синергизм наблюдали для N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и РКС412 в отношении клеточной линии G697R-FLT3-Ba/F3 (ED50-ED90) (см. фиг.2 и табл.1). Для клеточной линии N676D-FLT3-Ba/F3 полученные данные свидетельствуют об аддитивном действии N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и РКС412, как показано в табл.1.
Таблица 1
Комбинационные индексы
Клеточные линии
ED50
ED75
ED90
FLT3-ITD-Ba/F3
0,74780
0,58808
0,47158
MV4,11
1,98810
0,75339
0,40562
A627T-Ba/F3
0,55582
0,40946
0,36244
F6911-Ba/F3
0,63409
0,43267
0,30145
G697R-Ba/F3
0,39783
0,43210
0,47464
N676D-Ba/F3
1,06409
1,04265
1,02238
Пример 8
Анализ пролиферации клеток, свидетельствующий о комбинированном действии N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и доксорубицина или Ara-c, соответственно, в отношении чувствительных и резистентных к РКС412 клеток, экспрессирующих мутантную FLT3
Комбинированное действие РКС412 и стандартных химиотерапевтических агентов, таких как доксорубцин и Ara-c, в отношении клеток FLT3-ITD-Ba/F3 свидетельствует о синергизме комбинации РКС412 и доксорубицина в интервале доз (ED50-ED90), см. фиг.3 и табл.2, в которых приведенные комбинационные индексы рассчитаны с использованием кривых доза-ответная реакция, показанных на фиг.3 и 4. Анализ с помощью программного обеспечения Calcusyn комбинированного действия N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и доксорубицина в отношении клеток FLT3-ITD-Ba/F3 свидетельствует о наличии синергизма в интервале доз (ED50-ED90), см. фиг.4 и табл.2. Результаты анализа с помощью программного обеспечения Calcusyn комбинированного действия N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и доксорубицина в отношении клеток F6911-FLT3-Ba/F3 свидетельствуют о действии от аддитивного к синергетического только при высоких дозах (ED75-ED90), см. табл.2. Для клеток A627T-FLT3-Ba/F3 установлено, что N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид (LBW242) и доксорубицин оказывают синергетическое действие (ED50-ED90), см. табл.2. Синергизм наблюдается также для комбинации N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и Ara-c в отношении клеток FLT3-ITD-Ba/F3 (ED50-ED90), см. фиг.5 и табл.2, и в отношении клеток F6911-FLT3-Ba/F3 и A627T-FLT3-Ba/F3 (ED50-ED90), см. табл.2.
Таблица 2
Комбинационные индексы
Клеточные линии
ED50
ED75
ED90
FLT3-ITD-Ba/F3 (LBW242+Ara-c)
0,60784
0,45149
0,33535
A627T-Ba/F3 (LBW242+Ara-c)
0,70378
0,52217
0,38742
F6911-Ba/F3 (LBW242+Ara-c)
0,60377
0,47024
0,41785
FLT3-ITD-Ba/F3 (LBW242 + доксорубицин)
0,89723
0,81295
0,73688
A627T-Ba/F3 (LBW242 + доксорубицин)
0,38613
0,35638
0,35964
F6911-Ba/F3 (LBW242 + доксорубицин)
1,35772
0,92381
0,67332
Комбинационные индексы
Клеточные линии
ED50
ED75
ED90
FLT3-ITD-Ba/F3 (РКС412 + доксорубицин)
0,66838
0,69476
0,72401
FLT3-ITD-Ba/F3 (РКС412+Ara-c)
1,35975
1,17660
1,02362
Пример 9
Испытания in vivo действия N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и РКС412, в отдельности и в комбинации
Для непосредственной оценки in vivo противоопухолевой эффективности N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) в отдельности, РКС412 в отдельности и комбинации N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и РКС412 проводили испытания на модели мышей с острым лейкозом, при этом размер опухоли определяли методом неинвазивной визуализации люминисцентных опухолевых клеток (фиг.6).
Для испытаний использовали клетки FLT3-ITD-Ba/F3 мыши, стабильно экспрессирующие люциферазу светляков, и голым мышам NCr прививали указанные клетки. Для серийной оценки размера опухоли использовали неинвазивную визуализацию, и мышей с прогрессирующим лейкозом распределяли по группам с одинаковым размером опухоли.
РКС412, N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид (LBW242) или РКС412 в комбинации с N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамидом (LBW242), а также носитель вводили через желудочный зонд. Введение обоих агентов в комбинации через желудочный зонд проводили в следующем порядке: один агент за 20-30 мин перед введением второго.
Мышам вводили носитель в отдельности, N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид (LBW242) (50 мг/кг). РКС412 (40 мг/кг) или комбинацию N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и РКС412, см. фиг.6.
Наименьший размер опухоли, который оценивали с использованием биолюминисценции, наблюдается в группе лечения комбинацией лекарственных средств в день 5 и в день 7 после внутривенной инъекции клеток FLT3-ITD-Ba/F3-luc+ (и соответственно в день 4 и в день 6 после введения лекарственных средств), см. фиг.6 и 7. Статистический анализ результатов биолюминисценции, полученных в день 7 после внутривенной инъекции, проводили с использованием t-критерия Стъюдента: р менее 0,056247 (носитель по сравнению с N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамидом (LBW242) в отдельности), р менее 0,04825 (носитель по сравнению с РКС412 в отдельности), р менее 0,04329 (носитель по сравнению с комбинацией N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и РКС412). Статистический анализ (t-критерий Стъюдента) результатов в день 5 после внутривенной инъекции: р менее 0,077299 (носитель по сравнению с N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамидом (LBW242) в отдельности), р менее 0,075852 (носитель по сравнению с РКС412 в отдельности), р менее 0,06826 (носитель по сравнению с комбинацией N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и РКС412). Наименьшая масса селезенки (в процентах) наблюдается для мышей, которым вводили комбинацию N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и РКС412, результаты получали после умерщвления в день 8 после последней визуализации, см. фиг.8.
Пример 10
Действие N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) на стромально-опосредованную резистентность клеток, экспрессирующих мутантную FLT3, к РКС412
Чувствительность клеток Ba/F3-FLT3-ITD, культивированных в присутствии и в отсутствие WEHI (использованного в качестве источника IL-3), оценивали по цитотоксическому действию РКС412, при этом было установлено, что присутствие IL-3 полностью защищает клетки от ингибирующего действия РКС412 на клеточную пролиферацию (данные приведены в приложении).
В отличие от РКС412, ингибитор IAP, N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид ингибирует пролиферацию клеток Ba/F3-FLT3-ITD как в отсутствие, так и в присутствии IL-3. Следует отметить, что при одновременном введении N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) и РКС412 наблюдается синергетическое подавление роста клеток Ba/F3-FLT3-ITD, культивированных в присутствии IL-3, при этом уровень подавляющего действия аналогичен уровню, который наблюдается при совместном введении обоих агентов в отсутствии IL-3, что свидетельствует о способности ингибитора IAP усиливать действие ингибитора FLT3 и блокировать развитие химиорезистентности за счет активации сигналов жизнеспособности клеток.
Стромальные клетки человека HS-5 использовали в комбинации с мутантной линией FLT3 AML, MOLM-13. Для оценки только лейкозной компоненты люциферазу вводили в лейкозные клетки, чтобы подсчитывать число жизнеспособных клеток по светорассеянию. В эксперименте, показанном на фиг.9, клетки MOLM-13-luc+ (40000 клеток в лунке) обрабатывали РКС412 в присутствии или в отсутствие близкого к конфлуэнтности монослоя стромальных клеток HS-5. Наблюдается увеличение роста стромальных клеток и частичная защита от ингибирующего действия РКС412, см. фиг.9. Как показано для клеток Ba/F3-FLT3-ITD, наблюдается положительный эффект РКС412 и N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамида (LBW242) в отношении гибели клеточной линии MOLM13-luc+, экспрессирующей FLT3-ITD, в отсутствие фактора роста. N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид (LBW242) аналогичным образом усиливает цитотоксическое действие РКС412 в отношении клеток MOLM13-luc+ как в отсутствие, так и в присутствии стромальных клеток человека HS-5 (см. фиг.9В). Полученные данные подтверждают предположение о том, что стромально-опосредованные сигналы жизнеспособности могут принимать участие в развитии химиорезистентности к ингибиторам FLT3 (таким как РКС412), как наблюдается в костном мозге, и что подобное развитие резистентности можно блокировать при обработке ингибитором IAP.
Пример 11
Регуляция экспрессии мутантной FLT3 с использованием IAP
Экспрессию панели антиапоптозных сигнальных факторов, включая субстраты IAP N-[1-циклогексил-2-оксо-2-(6-фенетилоктагидропирроло[2,3-с]пиридин-1-илэтил]-2-метиламинопропионамид (LBW242), Вс1-2 и BcIxL исследовали с использованием клеток, экспрессирующих мутантную FLT3. Наблюдается только средняя степень изменений экспрессии белков XIAP, Bcl-2 и BcIxL в клетках Ba/F3, экспрессирующих FLT3-ITD, по сравнению с исходными клетками Ba/F3, при этом не наблюдается заметных изменений в экспрессии CIAP1 и отсутствие действия IL-3 на уровень белков через 2 сут после обработки клеток фактором роста, см. фиг.10. Обработка клеток FLT3-ITD-Ba/F3 0,1 мкМ РКС412 в течение 22 ч приводит к частичному уменьшению экспрессии белков BcIxL и XIAP, что свидетельствует о регуляции киназой FLT3 экспрессии указанных белков, см. фиг.10.
Пример 12
Анализ апоптоза и жизнеспособности клеток
Метод исключения при проявлении трипановым голубым, описанный ранее (см. статью Weisberg и др. (2002)), использовали для анализа пролиферации клеток, культивированных в присутствии и в отсутствие РКС412 и (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида. Жизнеспособность клеток определяли в процентах по сравнению с контрольными (необработанными) клетками. Стандартное отклонение, указанное на фигурах в виде отрезка линии, означает среднюю стандартную ошибку для каждого результата. Апоптоз обработанных лекарственным средством клеток оценивали с использованием набора Annexin-V-Fluos Staining (фирмы Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN), как описано ранее (см. статью Weisberg и др. (2002)).
Пример 13
Испытание комбинации лекарственных средств РКС412 и (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида (соединение Y)
Для испытания комбинации лекарственных средств, РКС412 и (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид (соединение Y) добавляли одновременно в фиксированных соотношениях в клетки FLT3-ITD-Ba/F3 или в лейкозные клетки ОМЛ MOLM13-luc+, экспрессирующих FLT3. Жизнеспособность клеток оценивали методом исключения при проявлении трипановым голубым и строили графики зависимости роста обработанных лекарственным средством клеток (FA) от роста контрольных клеток, см. фиг.11.
Пример 14
Комбинированное действие (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида (соединение Y) и РКС412 в отношении чувствительных к РКС412 клеток
(S)-N-((S)-1-Циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид (соединение Y) испытывали в комбинации с РКС412 в отношении клеток FLT3-ITD-Ba/F3. При введении комбинации обоих агентов наблюдается усиление благоприятного действия, см. фиг.12.
(S)-N-((S)-1-Циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид (соединение Y) и РКС412 испытывали также в комбинации в отношении клеток острого лейкоза человека, экспрессирующих FLT3-ITD, MOLM13-luc+, см. фиг.11, при этом было установлено, что оба агента усиливают ингибирование пролиферации клеток по сравнению с действием каждого лекарственного средства в отдельности, только при более высоких дозах.
Пример 15
Анализ пролиферации свидетельствует о комбинированном действии (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида (соединения Y) и доксорубицина или Ara-c в отношении чувствительных к РКС412 и экспрессирующих мутантную FLT3 клеток
При введении РКС412 и стандартных химиотерапевтических агентов, таких как доксорубицин и Ara-c в отношении клеток FLT3-ITD-Ba/F3 наблюдается усиление благоприятного действия комбинации РКС412 и доксорубицина в интервале доз (ED50-ED90), см. фиг.13-15.
Пример 16
Испытания in vivo действия (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида (соединение Y) и РКС412, в отдельности и в комбинации
Для непосредственной оценки in vivo противоопухолевой эффективности (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида (соединение Y) в отдельности, РКС412 в отдельности и комбинации (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида (соединение Y) и РКС412 использовали модель мыши с острым лейкозом, при этом размер опухоли определяли количественно методом неинвазивной визуализации люминисцентных опухолевых клеток (фиг.16).
Для испытаний использовали клетки FLT3-ITD-Ba/F3, стабильно экспрессирующие люциферазу светляков, и голым мышам NCr прививали указанные клетки. Для серийной оценки размера опухоли использовали неинвазивную визуализацию, и мышей с прогрессирующим лейкозом распределяли по группам с одинаковым размером опухоли.
РКС412, (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид (соединение Y) или РКС412 в комбинации с (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамидом (соединение Y), а также носитель вводили через пероральный желудочный зонд. Введение обоих агентов в комбинации через желудочный зонд проводили в следующем порядке: один агент за 20-30 мин перед введением второго. Мышам вводили носитель в отдельности, (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамид (соединение Y) (50 мг/кг), РКС412 (40 мг/кг) или комбинацию (S)-N-((S)-1-циклогексил-2-{(S)-2-[4-(4-фторбензоил)тиазол-2-ил]пирролидин-1-ил}-2-оксоэтил)-2-метиламинопропионамида (соединение Y) и РКС412, см. фиг.16. Наименьший размер опухоли, который оценивали с использованием биолюминисценции (фотоны/с), наблюдается при введении комбинации лекарственных средств в день 8 после внутривенной инъекции клеток FLT3-ITD-Ba/F3-luc+ (и соответственно в день 8 после введения лекарственных средств), см. фиг.16.