Способ стимуляции иммунного ответа и препарат для его осуществления
METHOD FOR IMMUNE RESPONSE STIMULATION AND PREPARATION FOR ITS IMPLEMENTATION

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к способам стимуляции иммунного ответа при вакцинации животных против различных вирусных и бактериальных болезней и препаратам для их осуществления.
Известен способ усиления иммунного ответа и препарат для его осуществления при вакцинации животных, основанный на применении адъюванта НАФ (неполный адъювант Фрейнда, состоящий из 3 частей легкого минерального масла, 1 части безводного ланолина и 1 части 0,15 М фосфатного буфера).
Известен способ усиления иммунного ответа и препарат для его осуществления, основанный на применения адъюванта Montanide ISA70, представляющий собой сочетание минерального масла с ПАВ (поверхностно-активного вещества) (Евстифеев В.В., Нигматуллина Д.И., Хусаинова Ф.М., Барбарова Л.А., «Ветеринарный врач», №1, 2014, с. 38-42).
Недостатком известных способов и адъювантов, как препаратов для осуществления способов, представляющих собой тип «вода в масле», является то, что эффективность применяемых эмульсионных адъювантов определяется следующими свойствами: способностью усиливать иммунный ответ, с одной стороны, и вязкостью - с другой стороны. Способность усиливать иммунный ответ возрастает с увеличением концентрации адъюванта в вакцине, но при этом возрастает и его вязкость, а значит и сложность практического использования, возрастает также и реактогенность препарата.
Цель изобретения - создание нового способа стимуляции иммунного ответа и препарата для его осуществления, лишенного данных недостатков.
12
22
12
22
Поставленная цель достигается тем, что препарат, применяемый для усиления иммунного ответа, состоит из смеси двух разноименно заряженных поверхностно-активных веществ (ПАВ). В качестве анионоактивного ПАВ используются жирные кислоты С-С, а в качестве катионоактивных ПАВ - амиды жирных кислот С-С, содержащие третичную аминогруппу. При смешивании двух разноименных ПАВ в мольном соотношении 1:1 антигенным материалом. Микроглобулы данной эмульсии несут на поверхности положительные и отрицательные заряды, что повышает тропность адсорбированного на их поверхности антигена к клеткам иммунной системы и, вследствие этого, усиливает иммунный ответ.
Примеры приготовления амидов жирных кислот
Амиды жирных кислот 1 синтезируются взаимодействием соответствующей жирной кислоты 2 и амина 3 по схеме:
Структурные формулы и молекулярные массы полученных амидов жирных кислот представлены в таблице 1.
Пример 1
3 - Диметиламинопропиламид лауриновой кислоты
3
1
Смесь 20,03 г (0,1 моль) лауриновой кислоты и 10,21 г (0,1 моль) амина 3 нагревают при 150-155°С в течение 4 часов с отгонкой легколетучих продуктов, затем при 170-175°С в течение 30 минут также с отгонкой легколетучих продуктов. Охлаждают и полученный продукт 1 очищают колоночной хроматографией на окиси алюминия в хлороформе. Выход 27,59 г (97%). Т.пл. 36-37°С. Спектр (CDCl) ЯМР Н (δ, м.д.): 0.853-0.897 (3Н, триплет); 1.251-1.274 (16Н, мультиплет); 1.568-1.718 (4Н, мультиплет); 2.113-2.164 (2Н, триплет); 2.225 (6Н, синглет); 2.346-2.388 (2Н, триплет); 3.304-3.363 (2Н, квартет); 6. 928 (1Н, синглет). Найдено, %: С 71.30; Н 12.50; N 9.55. Вычислено, %: С 71.77; Н 12.76; N 9.85.
Пример 2
3 - Диметиламинопропиламид миристиновой кислоты
3
1
Синтезируют аналогично амиду лауриновой кислоты из 22.83 г (0,1 моль) миристиновой кислоты и 10.12 г (0.1 моль) амина 3. Выход 30.0 г (96%). Т.пл. 50-51°С. Спектр (CDCl) ЯМР Н (δ, м.д.): 0.852-0.897 (2Н, триплет); 1.248-1.273 (20Н, мультиплет); 1.566-1.787 (4Н, мультиплет); 2.112-2.162 (2Н, триплет); 2.223 (6Н, синглет); 2.344-2.387 (2Н, триплет); 3.302-3.361 (2Н, квартет); 6.929 (1Н, синглет). Найдено, %: С 73.40; Н 12.50; N 8.60. Вычислено, %: С 73.02; Н 12.90; N 8.96.
Пример 3
3 - Диметиламинопропиламид пальмитиновой кислоты
Смесь 25.64 г (0.1 моль) пальмитиновой кислоты и 10.21 г (0.1 моль) амина 3 нагревают при 150-155°С в течение 4 часов с отгонкой легколетучих продуктов, затем при 170-175°С в течение 30 минут также с отгонкой легколетучих продуктов. Охлаждают и полученный продукт очищают колоночной хроматографией на окиси алюминия в хлороформе. Выход 33.37 г (98%), т.пл. 59-61°С.
1
3
Спектр ЯМР Н, CDCl (δ, м.д.): 0.854-0.898 (3Н, триплет); 1.248-1.273 (24Н, мультиплет); 1.567-1.681 (4Н, мультиплет); 2.112-2.163 (2Н,триплет); 2.225 (6Н, синглет); 2.346-2.388 (2Н, триплет); 3.304-3.363 (2Н, квартет); 6.927 (1Н, синглет). Найдено, %: С 74.40; Н 12.70; N 8.05. Вычислено, %: С 74.05; Н 13.02; N 8.22.
Пример 4
3 - Диметиламинопропиламид стеариновой кислоты
1
3
Синтезируют аналогично амиду пальмитиновой кислоты из 28.44 г (0.1 моль) стеариновой кислоты и 10.21 г (0.1 моль) амина 3. Выход 35.01 г (95%), т.пл. 63-64°С. Спектр ЯМР Н, CDCl (δ, м.д.): 0.854-0.898 (3Н, триплет); 1.186-1.249 (28Н, мультиплет); 1.568-1.712 (4Н, мультиплет); 2.113-2.164 (2Н, триплет); 2.225 (6Н, синглет); 2.346-2.388 (2Н, триплет); 3.304-3.363 (2Н, квартет); 6.928 (1Н, синглет). Найдено, %: С 74.60; Н 13.20; N 7.63.
Вычислено, %: С 74.93; Н 13.12; N 7.59.
Пример 5
3 - Диметиламинопропиламид олеиновой кислоты
1
3
Синтезируют аналогично амиду пальмитиновой кислоты из 28.24 г (0.1 моль) олеиновой кислоты и 10.21 г (0.1 моль) амина 3. Выход 35.19 г (96%), светло-желтое масло. Спектр ЯМР Н в CDCl (δ, м.д.): 0.854-0.898 (3Н, мультиплет); 1.264-1.299 (20Н, мультиплет); 1.572-1.681 (4Н, мультиплет); 1.994-2.053 (4Н, мультиплет); 2.112-2.163 (2Н, триплет); 2.225 (6Н, синглет); 2.347-2.389 (2Н, триплет); 3.304-3.363 (2Н, квартет; 5.320-5.357 (2Н, квартет); 6.928 (1Н, синглет). Найдено, %: С 75.00; Н 12.20; N 7.20. Вычислено, %: С 75.35; Н 12.64; N 7.64.
Пример 6
3 - Диметиламинопропиламид арахиновой кислоты
Готовят аналогично амиду стеариновой кислоты из 3,12 г арахиновой кислоты и 1,02 г 3-диметиламинопропиламина. Выход 96%. Воскообразная масса без четкой температуры плавления. Найдено, %: С 75,2; Н 13,00; N 7,22. Вычислено, %: С 75,69; Н 13,21; N 7,06.
Пример 7
3 - Диметиламинопропиламид бегеновой кислоты готовят аналогично амиду стеариновой кислоты из 3,40 г бегеновой кислоты и 1,02 3-димтиламинопропиламина. Выход 98%. Воскообразная масса без четкой температуры плавления. Найдено, %: С 76,00; Н 12,90; N 6,70. Вычислено,%: С 76,35; Н 13,29; N6,60.
Примеры приготовления стимуляторов иммунитета (адъювантов).
Пример 1. К 28,5 г N,N-диметиламинопропиламида лауриновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 20,0 г (0,1 моль) лауриновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 2. К 28,5 г N,N-диметиламинопропиламида лауриновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 22,8 г (0,1 моль) миристиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 3. К 28,5 г N,N-диметиламинопропиламида лауриновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 25,6 г (0,1 моль) пальмитиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 4. К 28,5 г N,N-диметиламинопропиламида лауриновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 28,5 г (0,1 моль) стеариновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 5. К 28,5 г N,N-диметиламинопропиламида лауриновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 28,2 г (0,1 моль) олеиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 6. К 28,5 г N,N-диметиламинопропиламида лауриновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 31,3 г (0,1 моль) арахиновой (эйкозановой) кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 7. К 28,5 г N,N-диметиламинопропиламида лауриновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 34,1 г (0,1 моль) бегеновой (докозановой) кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 8. К 31,3 г 1 N,N-диметиламинопропиламида миристиновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 22,8 г (0,1 моль) миристиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 9. К 31,3 г N,N-диметиламинопропиламида миристиновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 20,0 г (0,1 моль) лауриновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 10. К 31,3 г N,N-диметиламинопропиламида миристиновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 25,6 г (0,1 моль) пальмитиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 11. К 31,3 г N,N-диметиламинопропиламида миристиновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 28,5 г (0,1 моль) стеариновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 12. К 31,3 г 1 N,N-диметиламинопропиламида миристиновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 28,2 г (0,1 моль) олеиновой кислоты (0,1 моль) и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 13. К 31,3 г N,N-диметиламинопропиламида миристиновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 31,3 г (0,1 моль) арахиновой (эйкозановой) кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 14. К 31,3 г N,N-диметиламинопропиламида миристиновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 34,1 г (0,1 моль) бегеновой (докозановой) кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 15. К 34,1 г N,N-диметиламинопропиламида пальмитиновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 25,6 г (0,1 моль) пальмитиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 16. К 34,1 г N,N-диметиламинопропиламида пальмитиновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 20,0 г (0,1 моль) лауриновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 17. К 34,1 г N,N-диметиламинопропиламида пальмитиновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 22,8 г (0,1 моль) миристиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 18. К 34,1 г N,N-диметиламинопропиламида пальмитиновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 28,5 г (0,1 моль) стеариновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 19. К 34,1 г N,N-диметиламинопропиламида пальмитиновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 28,2 г (0,1 моль) олеиновой кислоты (0,1 моль) и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 20. К 34,1 г 1 N,N-диметиламинопропиламида пальмитиновой кислоты
(0,1 моль) прибавляют в один прием 31,3. г (0,1 моль) арахиновой (эйкозановой) кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 21. К 34,1 г N,N-диметиламинопропиламида пальмитиновой кислоты
(0,1 моль) прибавляют в один прием 34,1 г (0,1 моль) бегеновой (докозановой) кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 22. К 36,9 г N,N-диметиламинопропиламида стеариновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 28,5 г (0,1 моль) стеариновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 23. К 36,9 г N,N-диметиламинопропиламида стеариновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 20,0 г (0,1 моль) лауриновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 24. К 36,9 г N,N-диметиламинопропиламида стеариновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 22,8 г (0,1 моль) миристиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 25. К 36,9 г N,N-диметиламинопропиламида стеариновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 25,6 г (0,1 моль) пальмитиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 26. К 36,9 г N,N-диметиламинопропиламида стеариновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 28,2 г (0,1 моль) олеиновой кислоты (0,1 моль) и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 27. К 36,9 г N,N-диметиламинопропиламида стеариновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 31,3 г (0,1 моль) арахиновой (эйкозановой) кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 28. К 36,9 г N,N-диметиламинопропиламида стеариновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 34,1 г (0,1 моль) бегеновой (докозановой) кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 29. К 36,6 г (0,1 моль) N,N-диметиламинопропиламида олеиновой кислоты прибавляют в один прием 28,2 г (0,1 моль) олеиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут (условное название «стимулятор №1»).
Пример 30. К 36,6 г (0,1 моль) N,N-диметиламинопропиламида олеиновой кислоты прибавляют в один прием 20,0 г (0,1 моль) лауриновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 31. К 36,6 г (0,1 моль) N,N-диметиламинопропиламида олеиновой кислоты прибавляют в один прием 22,8 г (0,1 моль) миристиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 32. К 36,6 г (0,1 моль) 1 N,N-диметиламинопропиламида олеиновой кислоты прибавляют в один прием 25,6 г (0,1 моль) пальмитиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 33. К 36,6 г (0,1 моль) N,N-диметиламинопропиламида олеиновой кислоты прибавляют в один прием 28,4 г стеариновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут (условное название «стимулятор №2»).
Пример 34. К 36,6 г N,N-диметиламинопропиламида олеиновой кислоты прибавляют в один прием 31,3. г (0,1 моль) арахиновой (эйкозановой) кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 35. К 36,6 г N,N-диметиламинопропиламида олеиновой кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 34,1 г (0,1 моль) бегеновой (докозановой) кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 36. К 39,7 г N,N-диметиламинопропиламида арахиновой (эйкозановой) кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 31,3. г (0,1 моль) арахиновой (эйкозановой) кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 37. К 39,7 г N,N-диметиламинопропиламида арахиновой (эйкозановой) кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 20,0 г (0,1 моль) лауриновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 38. К 39,7 г N,N-диметиламинопропиламида арахиновой (эйкозановой) кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 22,8 г (0,1 моль) миристиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 39. К 39,7 г N,N-диметиламинопропиламида арахиновой (эйкозановой) кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 25,6 г (0,1 моль) пальмитиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 40. К 39,7 г N,N-диметиламинопропиламида арахиновой (эйкозановой) кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 28,5 г (0,1 моль) стеариновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 41. К 39,7 г N,N-диметиламинопропиламида арахиновой (эйкозановой) кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 28,2 г (0,1 моль) олеиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 42. К 39,7 г 1 N,N-диметиламинопропиламида арахиновой (эйкозановой) кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 34,1 г (0,1 моль) бегеновой (докозановой) кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 43. К 42,5 г N,N-диметиламинопропиламида бегеновой (докозановой) кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 34,1 г (0,1 моль) бегеновой (докозановой) кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 44. К 42,5 г N,N-диметиламинопропиламида бегеновой (докозановой) кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 20,0 г (0,1 моль) лауриновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 45. К 42,5 г N,N-диметиламинопропиламида бегеновой (докозановой) кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 22,8 г (0,1 моль) миристиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 46. К 42,5 г N,N-диметиламинопропиламида бегеновой (докозановой) кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 25,6 г (0,1 моль) пальмитиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 47. К 42,5 г N,N-диметиламинопропиламида бегеновой (докозановой) кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 28,5 г (0,1 моль) стеариновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 48. К 42,5 г N,N-диметиламинопропиламида бегеновой (докозановой) кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 28,2 г (0,1 моль) олеиновой кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Пример 49. К 42,5 г N,N-диметиламинопропиламида бегеновой (докозановой) кислоты (0,1 моль) прибавляют в один прием 31,3. г (0,1 моль) арахиновой (эйкозановой) кислоты и перемешивают при температуре 40-45°С в течение 15 минут.
Примеры приготовления иммунизирующих составов (вакцины)
Пример 1. К 10 мл хламидиозного антигена прибавляют 50 мг олеината N,N-диметиламинопропиламида олеиновой кислоты (стимулятор №1) и интенсивно встряхивают в течение 1 минуты. В полученной композиции концентрация иммуностимулятора составляет 0,5%.
Пример 2. К 10 мл хламидиозного антигена прибавляют 50 мг стеарата N,N-диметиламинопропиламида олеиновой кислоты (стимулятор №2), предварительно нагретого до 45°С для придания жидкой консистенции. Полученную композицию встряхивают в течение 1 минуты. Концентрация иммуностимулятора в полученном образце составляет 0,5%.
Примеры осуществления способа стимуляции иммунного ответа
Пример 1. Осуществление способа стимуляции иммунного ответа на хламидиозный антиген при иммунизации морских свинок.
-7
3
50/мл
Для осуществления способа в качестве антигена была использована суспензия клеток фибробластов эмбрионов кур (ФЭК), инфицированных хламидиями штамма Chlamydia psittaci (var. bovis) ВГНКИ «В-75» №18 и суспензия клеток ФЭК, инфицированных хламидиями штамма Chlamydia psittaci (var. suis) ВГНКИ «SR» №14 с титром не ниже 10 ТЦД в обоих случаях, т.е. в количестве достаточном для индукии иммунного ответа. В обоих образцах в качестве инактиватора использовался фенол 0,3-0,5 мас.%, а в качестве адъюванта - предлагаемый нами препарат с условным названием «стимулятор №1» и «стимулятор №2». На 50 мг стимулятора брали 10 мл водной суспензии антигенного материала. В качестве контроля использовалась вакцина культуральная инактивированная против хламидиоза крупного и мелкого рогатого скота (патент №2233174) и вакцина культуральная инактивированная против хламидиоза свиней (патент №2233670). Состав этих вакцин совпадает с составом опытных вакцин в части антигенов и инактиватора по наименованию и количеству, но в качестве адъюванта использован поливинилпирролидон 0,4-0,6 мас.%. Для испытания иммуногенности вакцины вводились морским свинкам массой 300-400 г по 0,3 см подкожно, двукратно через 3-5 дней. Напряженность иммунитета оценивалась в реакции связывания комплемента (РСК) с сыворотками крови иммунизированных свинок, взятой на 19-21 день после последнего введения. Результаты представлены в таблицах 2 и 3.
Из данных таблиц видно, что все образцы вакцин с предлагаемыми нами препаратами в качестве адъюванта вызывали существенно более высокий иммунный ответ по сравнению с контролем, где в качестве адъюванта использовался поливинилпирролидон.
Пример 2. Осуществление способа стимуляции иммунного ответа на хламидиозный антиген при иммунизации кроликов.
-7
3
50
мл
Для осуществления способа в качестве антигена была использована суспензия клеток фибробластов эмбрионов кур (ФЭК), инфицированных хламидиями штамма Chlamydia psittaci (var. bovis) ВГНКИ «В-75» №18 и суспензия клеток ФЭК, инфицированных хламидиями штамма Chlamydia psittaci (var. suis) ВГНКИ «SR» №14 с тиром не ниже 10 ТЦД/ в обоих случаях, т.е. в количестве достаточном для индукции иммунного ответа. В обоих образцах в качестве инактиватора использовался фенол 0,3-0,5 мас.%, а в качестве адъюванта - предлагаемый нами препарат с условным названием «стимулятор №1» и «стимулятор №2». На 50 мг стимулятора брали 10 мл водной суспензии антигенного материала. Концентрация стимуляторов в вакцинирующих составах указана в таблицах. В качестве контроля использовалась вакцина культуральная инактивированная против хламидиоза крупного и мелкого рогатого скота (патент №2233174) и вакцина культуральная инактивированная против хламидиоза свиней (патент №2233670). Состав контрольных вакцин совпадает с составом опытных вакцин в части антигенов и инактиватора по наименованию и количеству, но в качестве адъюванта использован поливинилпирролидон 0,4-0,6 мас.%. Для испытания иммуногенности вакцины вводились кроликам массой 2-3 кг по 1 см подкожно, двукратно через 3-5 дней. Напряженность иммунитета оценивалась в реакции связывания комплемента (РСК) с сыворотками крови иммунизированных свинок, взятой на 19-21 день после последнего введения. Результаты представлены в таблицах 4 и 5.
Из данных таблиц видно, что все образцы вакцин с предлагаемыми нами препаратами в качестве адъюванта вызывали существенно более высокий иммунитет по сравнению с контролем, где в качестве адъюванта использовался поливинилпирролидон.
12
22
12
22
В серии опытов мы установили возможные пределы соотношения между антигенным материалом и иммуностимулятором, представляющим собой смесь жирной кислоты (С-С) и диметиламинопропиламида жирной кислоты (С-С) (в мольном соотношении 1:1). Результаты в таблице 6. Экспериментально установлено, что если количество стимулятора составляет менее 0,01 вес.%, то стимулирующий эффект не проявляется (титры антител в опытной и контрольной группах идентичны или ниже контроля). При содержании иммуностимулятора более 10 вес.% образуется смесь, обладающая высокой вязкостью, что препятствует ее введению.
Антигенный материал для осуществления предлагаемого способа берется в количестве, достаточном для индукции иммунного ответа.