СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ИММУНОТРОПНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
MEDICATION POSSESSING IMMUNOTROPIC ACTIVITY

Изобретение относится к медицине, конкретно, к фармакологии и касается средств, влияющих на иммунную систему.
Для профилактики и комплексного лечения хронических и вялотекущих заболеваний, превалирующих в последние десятилетия во многих странах, в том числе и в России, перспективными являются поиск и разработка новых эффективных и малотоксичных лечебных средств. Количество иммунокоррегирующих препаратов весьма велико на данный момент, однако широкое применение синтетических иммуномодуляторов ограничено ввиду наличия у них большого числа побочных эффектов [1]. В настоящее время все больше внимания исследователями уделяется иммунотропным препаратам растительного происхождения, которые благодаря наличию в них комплекса биологически активных веществ мягко воздействуют на организм, не вызывают привыкания и могут применяться у лиц с сочетанными патологиями [2-4].
Из растительных препаратов, стимулирующих реакции иммунитета, наиболее известны препараты на основе эхинацеи пурпурной (иммунал, иммунорм, доктор Тайсс - настойка эхинацеи) [5-7]. Препараты иммунал и иммунорм содержат сок, полученный из свежесобранной травы цветущей эхинацеи пурпурной. Доктор Тайсс - настойку листьев эхинацеи. Использование лекарственных растений представляется перспективным направлением дальнейшего развития, совершенствования методов иммунореабилитации, так как препараты природного происхождения не обладают токсическими свойствами, характерными для синтетических лекарственных средств, и не вызывают дисбаланса системы иммунитета [2, 4].
Задачей изобретения является расширение арсенала иммунотропных средств природного происхождения.
Поставленная задача достигается использованием в качестве иммуннотропного средства экстракта суспензионной культуры княжика сибирского на 25% этаноле. Основными биологически активными веществами княжика сибирского являются тритерпеновые сапонины, полисахариды, флавенолы, сердечные гликозиды, органические кислоты (кофейная и хинная) и микроэлементы. В современной медицинской практике княжик сибирский используют при сердечно-сосудистых, желудочно-кишечных, гинекологических и опухолевых заболеваниях, а также как ранозаживляющее, болеутоляющее, противоревматическое, мочегонное и общеукрепляющее средство [8, 9]. Ранее [10, 11] была выявлена противоишемическая и ноотропная активность экстракта надземной части княжика сибирского.
Новым в предлагаемом изобретении является то, что экстракт суспензионной культуры княжика сибирского на 25% этаноле впервые предложен для использования в качестве иммунотропного средства.
Использование экстракта суспензионной культуры княжика сибирского на 25% этаноле в качестве иммуннотропного средства в литературе не описано. Применение по новому назначению стало возможно благодаря обнаружению у него новых свойств, а именно стимуляции гуморального иммунного ответа и неспецифической резистентности. Кроме того, у исследуемого экстракта суспензионной культуры княжика сибирского выявлено противовоспалительное действие. Данные свойства явным образом не вытекают для специалиста из уровня техники. Экстракт суспензионной культуры княжика сибирского на 25% этаноле можно использовать у больных с иммунной недостаточностью, ассоциированной с острыми и хроническими инфекционными заболеваниями, на фоне лучевой терапии и лечения цитостатиками.
Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения: "новизна", "изобретательский уровень", "промышленная применимость".
Новые свойства экстракта суспензионной культуры княжика сибирского были обнаружены благодаря экспериментальным исследованиям.
Для установления иммунотропных свойств экстракта суспензионной культуры княжика сибирского на 25% этаноле было изучено его влияние на клеточный иммунный ответ, гуморальный иммунный ответ, а также на неспецифическую резистентность организма. В качестве препарата сравнения использовали настойку эхинацеи пурпурной («ГаленоФарм», г.Санкт-Петербург, разрешена к применению на территории России, peг. №000167.01-2000). Экспериментальные исследования выполняли на мышах линии CBA/CaLac в возрасте 2-2,5 месяца массой 18-20 г. Все животные 1 категории (конвенциональные линейные мыши) получены из коллекционного фонда лаборатории экспериментального биологического моделирования НИИ фармакологии СО РАМН. Все работы проведены в осенне-зимний период. Животных содержали в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986). Животных содержали в стандартных условиях вивария на обычном рационе кормления при свободном доступе к пище и воде. Умерщвление животных осуществляли передозировкой эфирного наркоза.
Средство, обладающее иммунотропным действием, получают следующим образом. Суспензионную культуру княжика сибирского, высушенную обычным способом, измельчали и просеивали через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 13,3%). 50 г измельченного сырья помещали в стеклянную колбу, добавляли 500 мл 25% этанола и нагревали при температуре 80°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтровали, сырье отжимали и упаривали экстракт под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха.
7
8
Эксперименты по изучению влияния княжика сибирского на клеточный иммунный ответ были проведены на 18 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 18-20 г. Животные были разделены на 3 группы: 6 мышам вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (контроль); 6 мышей получали деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП), которую вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 1) - прототип; 6 мышей получали экстракт княжика сибирского (ЭК), который вводили животным в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 2) - предлагаемое средство. Для оценки влияния препаратов на клеточный иммунный ответ использовали реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) [12]. Через 24 часа после последнего введения экстракта животных сенсибилизировали эритроцитами барана подкожно 1×10 в объеме 100 мкл. Разрешающую дозу антигена (1×10 в объеме 20 мкл) вводили на 5 день после сенсибилизации под апоневротическую пластинку одной из задних конечностей. В контралатеральную лапу в качестве контроля вводили физиологический раствор в равном объеме. Учет интенсивности воспалительной реакции осуществляли через 24 часа после введения разрешающей дозы антигена. Индекс воспаления (ИВ) определяли по разнице масс опытной и контрольной лап.
8
6
Эксперименты по изучению влияния экстракта суспензионной культуры княжика сибирского (ЭК) на гуморальный иммунный ответ были проведены на 60 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 18-20 г. Животные были разделены на 3 группы: 20 мышам вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (контроль); 20 мышей получали деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП), которую вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 1) - прототип; 20 мышей получали экстракт княжика сибирского (ЭК), который вводили животным в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 2) - предлагаемое средство. При изучении гуморального иммунного ответа мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) - 6×10/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл) в конце 5-дневного курса введения ЭК, ЭП или дистиллированной воды. На 4-е и 7-е сутки после иммунизации определяли общепринятыми методами [13] общую клеточность селезенки (ОКС), а также относительное (%) и абсолютное (×10) количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей по методу Cunningham [14] и титр антител IgM и IgG в сыворотке крови с помощью стандартной реакции гемагглютинации (РГА) [4].
8
6
В целях углубленного изучения иммунотропной активности экстракта суспензионной культуры княжика сибирского были проведены исследования на модели экспериментального иммунодефицитного состояния. Экспериментальное иммунодефицитное состояние моделировали путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг). Исследования влияния экстракта княжика сибирского (ЭК) на гуморальный иммунный ответ в условиях иммуносупрессии были проведены на 40 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 18-20 г. Животные были разделены на 4 группы: 10 мышей - контроль 1; 10 - контроль 2, получали в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно; 10 - опыт 1, получали деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП), которую вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно - прототип; 10 - опыт 2, получали экстракт княжика сибирского (ЭК), который вводили животным в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно - предлагаемое средство. У животных 2 контрольной и обеих опытных групп моделировали экспериментальное иммунодефицитное состояние путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг). Для изучения гуморального иммунного ответа мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) - 6×10/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл) в конце 5-дневного курса введения ЭК, ЭП или дистиллированной воды. На 4-е сутки после иммунизации (что соответствует 8 сут после введения цитостатика) определяли общепринятыми методами [13] общую клеточность селезенки (ОКС), а также относительное (%) и абсолютное (×10) количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей по методу Cunningham [14] и титр антител IgM и IgG в сыворотке крови с помощью стандартной реакции гемагглютинации (РГА) [15].
8
Эксперименты по изучению влияния экстракта суспензионной культуры княжика сибирского на неспецифическую резистентность организма в условиях иммуносупрессии были проведены на 40 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 18-20 г. Животные были разделены на 4 группы: 10 мышей - контроль 1; 10 - контроль 2, получали в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно; 10 - опыт 1, получали деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП), которую вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно - прототип; 10 - опыт 2, получали экстракт княжика сибирского, который вводили животным в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно - предлагаемое средство. У животных 2 контрольной и обеих опытных групп моделировали экспериментальное иммунодефицитное состояние путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг) в первый день введения препаратов. Оценку неспецифической резистентности проводили на фоне развития иммунного ответа. Для этого мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) - 6×10/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл) в конце 5-дневного курса введения ЭК, ЭП или дистиллированной воды. Оценку неспецифической резистентности проводили путем изучения фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови и перитонеальных макрофагов в тесте поглощения частиц латекса [13].
Статистическая обработка результатов осуществлялась с применением пакета статистических программ Statistica for Windows (версия 5.0) с предварительной оценкой нормальности распределения и использованием t-критерия Стьюдента.
Результаты, подтверждающие иммунотропные свойства экстракта суспензионной культуры княжика сибирского.
7
8
7
8
Пример 1. Эксперименты по изучению влияния экстракта суспензионной культуры княжика сибирского на клеточный иммунный ответ были проведены на 18 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 18-20 г. Животные были разделены на 3 группы: 6 мышам вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (контроль); 6 мышей получали деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП), которую вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 1) - прототип; 6 мышей получали экстракт суспензионной культуры княжика сибирского (ЭК), который вводили животным в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 2) - предлагаемое средство. Для оценки влияния препаратов на клеточный иммунный ответ использовали реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) [16]. Через 24 часа после последнего введения экстрактов животных сенсибилизировали эритроцитами барана подкожно 1×10 в объеме 100 мкл. Разрешающую дозу антигена (1×10 в объеме 20 мкл) вводили на 5 день после сенсибилизации под апоневротическую пластинку одной из задних конечностей. Через 24 часа после последнего введения экстракта животных сенсибилизировали эритроцитами барана подкожно 1×10 в объеме 100 мкл. Разрешающую дозу антигена (1×10 в объеме 20 мкл) вводили на 5 день после сенсибилизации под апоневротическую пластинку одной из задних конечностей. В контралатеральную лапу в качестве контроля вводили физиологический раствор в равном объеме. Учет интенсивности воспалительной реакции осуществляли через 24 часа после введения разрешающей дозы антигена. Индекс воспаления (ИВ) определяли по разнице масс опытной и контрольной лап. Приведенные в таблице 1 результаты эксперимента свидетельствуют о существенном противовоспалительном действии экстракта суспензионной культуры княжика сибирского.
Таблица 1
Влияние экстракта суспензионной культуры княжика сибирского и настойки эхинацеи пурпурной на клеточный иммунный ответ мышей линии СВА/CaLac, (X±m)
Группы мышей
Контроль
Опыт 1 (ЭП)
Опыт 2 (ЭК)
Индекс воспаления
13,20±0,96
18,53±1,96*
7,70±1,76*#
Примечания: здесь и в табл.2:* - различия с соответствующими значениями контроля достоверны;# - различия с соответствующими значениями группы «опыт 1» достоверны.
8
6
Пример 2. Контрольным мышам вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 1-й опытной группы вводили деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП) в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 2-й опытной группы вводили экстракт суспензионной культуры княжика сибирского в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Затем мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана - 6×10/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл). На 4-е и 7-е сутки после иммунизации определяли общее количество спленоцитов (ОКС), а также относительное (%) и абсолютное (×10) количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей и титр антител IgM и IgG в сыворотке крови. Курсовое введение настойки эхинацеи пурпурной приводило к достоверному увеличению относительного количества антителообразующих клеток на 4 и 7 сут после иммунизации и абсолютного числа антителопродуцентов на 4 сут эксперимента по сравнению с контролем (таблица 2). Кроме того, отмечалось повышение титра иммуноглобулинов класса G на 4 сут. Анализ результатов, представленных в таблице 2, показывает, что курсовое 5-дневное введение экстракта суспензионной культуры княжика сибирского приводило к увеличению относительного и абсолютного числа антителообразующих клеток, а также титра иммуноглобулинов класса G относительно животных контрольной группы на 4 сут эксперимента. К 7 сут исследования наблюдалось увеличение общей клеточности лимфоидного органа, относительного и абсолютного количества антителопродуцентов, а также титра иммуноглобулинов класса G относительно животных контрольной группы. По сравнению с мышами, получавшими настойку эхинацеи, возросло относительное и абсолютное число АОК на 7 сут эксперимента.
Таблица 2
Влияние экстракта суспензионной культуры княжика сибирского (ЭК) и настойки эхинацеи пурпурной (ЭП) на гуморальный иммунный ответ мышей линии СВА/CaLac, (X±m)
Группа мышей
Показатели
Сроки исследования
4 сут
7 сут
Контроль (ЭБ)
ОКС, 10<sup>6</sup>/орган
159,20±16,50
149,8±7,71
АОК, %
7,36±0,10
7±0,21
АОК, 10<sup>6</sup>/орган
11,72±1,23
10,47±0,57
IgM, log<sub>2</sub>T
2±0,32
2,2±0,32
IgG, log<sub>2</sub>T
8,4±0,75
7,30±0,50
Опыт 1 (ЭП+ЭБ)
ОКС, 10<sup>6</sup>/орган
190,00±22,67
163,00±10,85
АОК, %
11,44±0,49*
5,64±0,19*
АОК, 10<sup>6</sup>/орган
21,89±3,20*
9,22±0,77
IgM, log<sub>2</sub>T
2±0,32
1,2±0,49
IgG, log<sub>2</sub>T
10,4±0,25*
10±0,32*
Опыт 2 (ЭК+ЭБ)
ОКС, 10<sup>6</sup>/орган
151,00±5,81#
164,33±4,57*
АОК, %
12,81±0,91*
11,27±0,37*#
АОК, 10<sup>6</sup>/орган
19,63±1,11*
18,52±0,80*#
IgM, log<sub>2</sub>T
0±0
2,20±0,37
IgG, log<sub>2</sub>T
10,20±0,58*
11,00±0,45*
8
6
Пример 3. У животных 2-й контрольной и обеих опытных групп моделировали экспериментальное иммунодефицитное состояние путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг). Далее животным 2-й контрольной группы вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 1-й опытной группы вводили деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП) в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 2-й опытной группы вводили экстракт суспензионной культуры княжика сибирского в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Затем мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана - 6х10/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл). На 4-е сутки после иммунизации определяли общее количество спленоцитов (ОКС), а также относительное (%) и абсолютное (×10) количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей и титр антител IgM и IgG в сыворотке крови.
Таблица 3
Влияние экстракта суспензионной культуры княжика сибирского (ЭК) и настойки эхинацеи пурпурной (ЭП) на гуморальный иммунный ответ мышей линии СВА/CaLac на фоне введения циклофосфана, (Х±m)
Группа мышей
Показатели
4 сут
Контроль 1 (ЭБ)
ОКС, 10<sup>6</sup>/орган
159,20±16,50
АОК, %
7,36±0,10
АОК, 10<sup>6</sup>/орган
11,72±1,23
IgM, log<sub>2</sub>T
2±0,32
IgG, log<sub>2</sub>T
8,4±0,75
Контроль 2 (ЦФ+ЭБ)
ОКС, 10<sup>6</sup>/орган
94,6±16,44
АОК, %
10,16±0,70
АОК, 10<sup>6</sup>/орган
9,67±1,75
IgM, log<sub>2</sub>T
0,0±0,0
IgG, log<sub>2</sub>T
3,0±0,0
Опыт 1 (ЦФ+ЭП+ЭБ)
ОКС, 10<sup>6</sup>/орган
154±19,71*
АОК, %
8,8±0,32
АОК, 10<sup>6</sup>/орган
13,63±1,84*
IgM, log<sub>2</sub>T
1,02±0,56
IgG, log<sub>2</sub>T
5,2±1,12*
Опыт 2 (ЦФ+ЭК+ЭБ)
ОКС, 10<sup>6</sup>/орган
134,17±18,21*
АОК, %
8,23±0,96
АОК, 10<sup>6</sup>/орган
14,02±1,20*
IgM, log<sub>2</sub>T
0,70±0,34*
IgG, log<sub>2</sub>T
3,00±0,00
Примечания: здесь и в табл.4, 5* - различия с соответствующими значениями контроля 2 достоверны;# - различия с соответствующими значениями группы «опыт 1» достоверны.
Введение линейным животным циклофосфана в дозе 250 мг/кг приводило к подавлению гуморального иммунного ответа, проявляющемуся в снижении общей клеточности селезенки и функциональной активности клеток-антителопродуцентов, что выражалось в уменьшении титра специфических иммунноглобулинов в сыворотке крови по сравнению с 1-й контрольной группой. У мышей опытных групп наблюдалось увеличение общего числа спленоцитов и абсолютного количества антителообразующих клеток относительно группы контроля 2 и повышение титра гемагглютининов IgG.
8
Пример 4. У животных 2-й контрольной и обеих опытных групп моделировали экспериментальное иммунодефицитное состояние путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг). Далее животным 2-й контрольной группы вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 1-й опытной группы вводили деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП) в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 2-й опытной группы вводили экстракт суспензионной культуры княжика сибирского в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Затем мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана - 6×10/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл). На 4-е сутки после иммунизации оценивали фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови мышей всех групп по способности этих клеток поглощать частицы латекса (концентрация взвеси частиц - 60 млн/мл); учитывали процент фагоцитов, поглотивших латекс (фагоцитарный индекс - ФИ), и среднее число частиц, поглощенное одной клеткой (фагоцитарное число - ФЧ).
Анализ результатов, представленных в таблице 4, показывает, что инъекция животным цитостатика вызывала угнетение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови по сравнению с только иммунизированными мышами. Введение животным экстракта суспензионной культуры княжика сибирского существенно стимулировало поглотительную активность нейтрофилов периферической крови (по сравнению с 2-й контрольной группой) на 4 сут эксперимента как за счет повышения доли нейтрофилов, способных поглощать латекс (ФИ), так и за счет увеличения количества поглощенных каждой клеткой частиц (ФЧ), при этом выявленный уровень стимуляции фагоцитоза сопоставим по выраженности с действием фармакопейной настойки эхинацеи пурпурной.
Таблица 4
Влияние экстракта суспензионной культуры княжика сибирского (ЭК) и настойки эхинацеи пурпурной (ЭП) на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови мышей линии СВА/CaLac (X±m) на фоне введения циклофосфана
Группа мышей
4 сут
ФИ (%)
ФЧ
Контроль 1 (ЭБ)
22±1,22
2,06±0,23
Контроль 2 (ЭБ+ЦФ)
3,00±0,32
1,30±0,18
Опыт 1 (ЭБ+ЦФ+ЭП)
11,8±1,56*
4,36±0,69*
Опыт 2 (ЭБ+ЦФ+ЭК)
11,60±4,32*
4,46±0,49*
8
Пример 5. У животных 2-й контрольной и обеих опытных групп моделировали экспериментальное иммунодефицитное состояние путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг). Далее животным 2-й контрольной группы вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 1-й опытной группы вводили деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП) в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 2-й опытной группы вводили деалкоголизированный экстракт суспензионной культуры княжика сибирского в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Затем мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана - 6×10/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл). На 4-е сутки после иммунизации оценивали фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов мышей всех групп по способности этих клеток поглощать частицы латекса (концентрация взвеси частиц - 60 млн/мл); учитывали процент макрофагов, поглотивших частицы (фагоцитарный индекс - ФИ), и среднее число частиц, поглощенное одной клеткой (фагоцитарное число - ФЧ).
Приведенные в таблице 5 результаты этих опытов показывают, что циклофосфан вызывал снижение фагоцитарного индекса макрофагов, не оказывая существенного влияния на фагоцитарное число (по сравнению с 1-й контрольной группой). Введение животным настойки эхинацеи приводило к увеличению процента активных фагоцитов, а в группе мышей, получавших экстракт суспензионной культуры княжика сибирского, наблюдалась преимущественно стимуляция поглотительной активности.
Таблица 5
Влияние экстракта суспензионной культуры княжика сибирского (ЭК) и настойки эхинацеи пурпурной (ЭП) на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов мышей линии СВА/Са Lac (X±m) на фоне введения циклофосфана
Группа мышей
4 сут
ФИ (%)
ФЧ
Контроль 1 (ЭБ)
33,12±1,98
2,89±0,34
Контроль 2 (ЭБ+ЦФ)
15,80±2,96
1,90±0,96
Опыт 1 (ЭБ+ЦФ+ЭП)
32,8±0,48*
2,02±0,16
Опыт 2 (ЭБ+ЦФ+ЭК)
20,00±2,35#
3,40±0,39*#
Таким образом, экстракт суспензионной культуры княжика сибирского проявляет иммунотропные свойства, что выражается в усилении гуморального иммунного ответа (повышение общей клеточности лимфоидного органа, относительного и абсолютного количества антителообразующих клеток и титра специфических гемагглютининов G), снижении индекса воспаления в реакции ГЗТ, коррекции иммунодефицитного состояния, вызванного введением цитостатика (увеличение общего числа спленоцитов и абсолютного количества антителообразующих клеток и повышение титра гемагглютининов IgG, a также повышении фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови и перитонеальных макрофагов), сравнимые по выраженности, а по отдельным показателям превосходящие настойку эхинацеи пурпурной.
Литература
1. Лесков В.П. Иммуностимуляторы // Аллергия, астма и клиническая иммунология. - 1999. - №4. - С.12-25.
2. Амосова Е.Н., Зуева Е.П., Разина Т.Г., Крылова С.Г. Лекарственные растения как средства дополнительной терапии для лечения опухолей // Бюл. экспер. биол. - 2003. - Прил. 2. - С.24-34.
3. Блинова К.Ф., Куваев В.Б. Лекарственные растения тибетской медицины и Забайкалья // Вопросы фармакогнозии. - 1965. - Вып.3. - С.52-56.
4. Вершинина С.Ф., Потявина Е.В. Применение природных биорегуляторов в онкологии // Вопросы онкологии. - 2003. - Т. 49. - №2. - С.145-151.
5. Самородов В.Н., Поспелов С.В., Моисеева Г.Ф. и др. Фитохимический состав представителей рода эхинацеа (Echinacea Moench.) и его фармакологические свойства (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. - 1996. - №4. - С.32-37.
6. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Иммуномодуляторы и некоторые аспекты их клинического применения // Клиническая медицина. - 1996. - Т.74. - №8. - С.7-12.
7. Percival S.S. Use of echinacea in medicine // Biochem. Pharmacol. - 2000. - Vol.60. - №2. - Р.155-158.
8. Крылов Г.В., Казакова Н.Ф., Степанов Э.В. Зеленая аптека. - Кемерово: Современная отечественная книга, 1993. - С.116.
9. Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири. - Новосибирск: Наука, 1991. - С.271-273.
10. Патент РФ на изобретение №2104018 «Способ получения экстракта, обладающего противоишемической и ноотропной активностью» от 10 февраля 1998 г. Бюл. №4 от 10.02.1998 / Е.А.Краснов, Т.И.Андреева, Н.И.Суслов, А.А.Блинникова.
11. Патент РФ на изобретение №2276992 «Фармацевтический состав, обладающий ноотропной активностью» от 27 мая 2006 г. Бюл. №15 от 27.05.2006 / Е.А.Краснов, И.В.Шилова, Т.Г.Хоружая, Н.И.Суслов, В.В.Вандышев.
12. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У.Хабриева. - 2 изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2005. - С.501-514.
13. Иммунология: Практикум / Е.У.Пастер, В.В.Овод, В.К.Позур, Н.Е.Вихоть. - К.: Выща шк. Изд-во при Киев. ун-те, 1989. - С.202-204.
14. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells // Nature. - 1965. - V.207, №5001. - P.1106-1107.
15. Иммунологические методы / Под ред. Г.Фримеля. - М.: Медицина, 1987. - С.211-218.
16. Линов Б.М., Барнаулов О.Д., Крылов В.А. и др. Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока. - Томск, 1986. - С.89-90.