БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ CD3 и CD19 АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ КОНСТРУКЦИИ

1. Антигенсвязывающая конструкция, содержащая
первую антигенсвязывающую полипептидную конструкцию, содержащую первый ScFv, содержащий первую VL, первый линкер ScFv и первую VH, при этом первый ScFv моновалентно и специфически связывает антиген CD19, при этом первый ScFv выбран из группы, состоящей из ScFv HD37 антитела против CD19, ScFv модифицированного HD37, ScFv блокирующего антитела HD37, и ScFv модифицированного блокирующего антитела HD37, причем блокирующее антитело HD37 блокирует на 50% или более связывание HD37 с антигеном CD19;
вторую антигенсвязывающую полипептидную конструкцию, содержащую второй ScFv, содержащий вторую VL, второй линкер ScFv и вторую VH, при этом второй ScFv моновалентно и специфически связывает субъединицу эпсилон антигена CD3, при этом второй ScFv, выбран из группы, состоящей из ScFv ОКТ3, ScFv модифицированного ОКТ3, ScFv блокирующего антитела ОКТ3, и ScFv модифицированного блокирующего антитела ОКТ3, причем блокирующее антитело ОКТ3 блокирует на 50% или более связывание ОКТ3 с субъединицей эпсилон антигена CD3;
гетеродимерную Fc, содержащую первый и второй Fc-полипептиды, каждый из которых содержит модифицированную последовательность СН3, способную образовывать димеризованный домен СН3, причем каждая модифицированная последовательность СН3 содержит асимметричные модификации аминокислот, которые способствуют формированию гетеродимерной Fc, и димеризованные домены СН3 имеют температуру плавления (Тпл.), около 68°C или выше, и причем первый Fc-полипептид связан с первой антигенсвязывающей полипептидной конструкцией первым шарнирным линкером и второй Fc-полипептид связан со второй антигенсвязывающей полипептидной конструкцией вторым шарнирным линкером.
2. Антигенсвязывающая конструкция по п. 1, состоящая из v12043, v10149 или V1661.
3. Антигенсвязывающая конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что первый ScFv содержит последовательности CDR, на 100% идентичные совокупности последовательностей CDR, выбранных из:
a) L1: QSVDYDGDSYL (SEQ ID NO: 301), L2: DAS (SEQ ID NO: 302), L3: QQSTEDPWT (SEQ ID NO: 303), H1: GYAFSSYW (SEQ ID NO: 304), H2: IWPGDGDT (SEQ ID NO: 305), H3: RETTTVGRYYYAMDY (SEQ ID NO: 306);
b) L1: QSVDYEGDSYL (SEQ ID NO: 307), L2: DAS (SEQ ID NO: 308), L3: QQSTEDPWT (SEQ ID NO: 309), HI: GYAFSSYW (SEQ ID NO: 310), H2: IWPGDGDT (SEQ ID NO: 311), H3: RETTTVGRYYYAMDY (SEQ ID NO: 312);
c) L1: QSVDYSGDSYL (SEQ ID NO: 313), L2: DAS (SEQ ID NO: 314), L3: QQSTEDPWT (SEQ ID NO: 315), H1: GYAFSSYW (SEQ ID NO: 316), H2: IWPGDGDT (SEQ ID NO: 317), H3: RETTTVGRYYYAMDY (SEQ ID NO: 318);
d) L1: KASQSVDYDGDSYL (SEQ ID NO: 319), L2: DASNLVS (SEQ ID NO: 320), L3: QQSTEDPWT (SEQ ID NO: 321), H1: GYAFSSYWMN (SEQ ID NO: 322), H2: QIWPGDGDTN (SEQ ID NO: 323), H3: RETTTVGRYYYAMDY (SEQ ID NO: 324);
e) L1: RASQSVDYEGDSYL (SEQ ID NO: 325), L2: DASNLVS (SEQ ID NO: 326), L3: QQSTEDPWT (SEQ ID NO: 327), H1: GYAFSSYWMN (SEQ ID NO: 328), H2: QIWPGDGDTN (SEQ ID NO: 329), H3: RETTTVGRYYYAMDY (SEQ ID NO: 330); и
f) L1: RASQSVDYSGDSYL (SEQ ID NO: 331), L2: DASNLVS (SEQ ID NO: 332), L3: QQSTEDPWT (SEQ ID NO: 333), H1: GYAFSSYWMN (SEQ ID NO: 334), H2: QIWPGDGDTN (SEQ ID NO: 335), H3: RETTTVGRYYYAMDY (SEQ ID NO: 336).
4. Антигенсвязывающая конструкция по п. 3, отличающаяся тем, что первый ScFv содержит последовательности CDR, на 95% идентичные совокупности CDR по п. 3.
5. Антигенсвязывающая конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что первая последовательность полипептида VH выбрана из последовательности полипептида VH HD37 дикого типа, последовательности полипептида hVH2 и последовательности полипептида hVH3, и первая последовательность полипептида VL выбрана из последовательности полипептида VL HD37 дикого типа и последовательности полипептида hVL2.
6. Антигенсвязывающая конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что первая последовательность полипептида VH является на 95% идентичной последовательности полипептида VH HD37 дикого типа, последовательности полипептида hVH2, или последовательности полипептида hVH3, и первая последовательность полипептида VL является на 95% идентичной последовательности полипептида VL дикого типа HD37 или последовательности полипептида hVL2.
7. Антигенсвязывающая конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что блокирующее антитело HD37 выбрано из 4G7, В4, В3, HD237 и Mor-208.
8. Антигенсвязывающая конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что второй ScFv содержит совокупность CDR, выбранную из:
a) L1: SSVSY (SEQ ID NO: 289), L2: DTS (SEQ ID NO: 290), L3: QQWSSNP (SEQ ID NO: 291), H1: GYTFTRYT (SEQ ID NO: 292), H2: INPSRGYT (SEQ ID NO: 293), H3: ARYYDDHYCLDY (SEQ ID NO: 294) и
b) L1: SSVSY (SEQ ID NO: 295), L2: DTS (SEQ ID NO: 296), L3: QQWSSNP (SEQ ID NO: 297), H1: GYTFTRYT (SEQ ID NO: 298), H2: INPSRGYT (SEQ ID NO: 299), H3: ARYYDDHYSLDY (SEQ ID NO: 300).
9. Антигенсвязывающая конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что второй ScFv содержит набор CDR по меньшей мере на 95% идентичный набору CDR по п. 8.
10. Антигенсвязывающая конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что вторая последовательность полипептида VH представляет собой последовательность полипептида VH ОКТ3 дикого типа или последовательность полипептида, на 95% идентичную последовательности полипептида VH ОКТ3 дикого типа, а вторая последовательность полипептида VL представляет собой последовательность полипептида VL ОКТ3 дикого типа или последовательность полипептида, на 95% идентичную последовательности полипептида VL ОКТ3 дикого типа.
11. Антигенсвязывающая конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что блокирующее антитело ОКТ3, выбрано из Теплизумаба™, UCHT1 и визилизумаба.
12. Антигенсвязывающая конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что второй ScFv, связывающийся с эпитопом CD3 ОКТ3.
13. Антигенсвязывающая конструкция по любому из пп. 1-12, отличающаяся тем, что первая VL, первая последовательность линкерного полипептида ScFv и первая последовательность полипептида VH расположены от N-конца к С-концу, как VL-линкер-VH.
14. Антигенсвязывающая конструкция по любому из пп. 1-12, отличающаяся тем, что первая VL, первая последовательность линкерного полипептида ScFv и первая последовательность полипептида VH расположены от N-конца к С-концу, как VH-линкер-VL.
15. Антигенсвязывающая конструкция по любому из пп. 1-12, отличающаяся тем, что вторая VL, вторая последовательность линкерного полипептида ScFv и вторая последовательность полипептида VH расположены от N-конца к С-концу, как VL-линкер-VH.
16. Антигенсвязывающая конструкция по любому из пп. 1-12, отличающаяся тем, что вторая VL, вторая последовательность линкерного полипептида ScFv и вторая последовательность полипептида VH расположены от N-конца к С-концу, как VH-линкер-VL.
17. Антигенсвязывающая конструкция по любому из пп. 1-12, отличающаяся тем, что один или оба ScFv содержат дисульфидную связь между полипептидными последовательностями VL и VH.
18. Антигенсвязывающая конструкция по любому из пп. 1 и 3-12, отличающаяся тем, что первый или второй линкер ScFv, выбран из Таблицы В.
19. Антигенсвязывающая конструкция по любому из пп. 1 и 3-12, отличающаяся тем, что первый или второй шарнирным линкерный полипептид выбран из Таблицы Е.
20. Антигенсвязывающая конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что первые последовательности VL, линкера ScFv и полипептида VH расположены от N-конца к С-концу, как VL-линкер-VH, содержащий дисульфидную связь между первыми последовательностями полипептидов VL и VH, и вторые последовательности VL, линкера ScFv и полипептида VH расположены от N-конца к С-концу, как VH-линкер-VL, содержащий дисульфидную связь между вторыми последовательностями полипептидов VL и VH.
21. Антигенсвязывающая конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что первые последовательности VL, линкера ScFv и полипептида VH расположены от N-конца к С-концу, как VL-линкер-VH, содержащий дисульфидную связь между последовательностями полипептидов VL и VH, и вторые последовательности VL, линкера ScFv и полипептида VH расположены от N-конца к С-концу, как VL-линкер-VH и дисульфидная связь между последовательностями полипептидов VL и VH.
22. Антигенсвязывающая конструкция по п. 20 или 21, причем гетеродимерная Fc, содержит по меньшей мере один домен СН2, содержащий одну или более аминокислотных замен, которые снижают способность гетеродимерной Fc связываться с FcyR или комплементом.
23. Антигенсвязывающая конструкция по любому из пп. 1-12, 20-21, отличающаяся тем, что аффинность связывания первого ScFv для CD19 составляет от около 0,1 нМ до около 5 нМ, и аффинность связывания второго ScFv для субъединицы эпсилон CD3 составляет от около 1 нМ до около 100 нМ.
24. Антигенсвязывающая конструкция по любому из пп. 1-12, 20-21, отличающаяся тем, что гетеродимерная Fc
a. представляет собой человеческую Fc; и/или
b. представляет собой человеческую Fc IgG1; и/или
c. содержит одну или более модификаций по меньшей мере одного из доменов СН3, как описано в Таблице А; и/или
d. дополнительно содержит по меньшей мере один домен СН2; и/или
e. дополнительно содержит по меньшей мере один домен СН2, содержащий одну или более модификаций; и/или
f. дополнительно содержит по меньшей мере один домен СН2, содержащий одну или более модификаций по меньшей мере одного из доменов СН2, как описано в таблице В; и/или
g. дополнительно содержит по меньшей мере один домен СН2, содержащий одну или более аминокислотных замен, которые снижают способность гетеродимерной Fc связываться с FcγR или комплементом, как описано в Таблице С; и/или
h. дополнительно содержит по меньшей мере один домен СН2, содержащий аминокислотные замены N297A или L234A_L235A или L234A_L235A_D265S.
25. Антигенсвязывающая конструкция по любому из пп. 1-12, 20-21, отличающаяся тем, что димеризованные домены СН3 имеют температуру плавления (Тпл.) 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 77,5, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, или 85°C или выше.
26. Антигенсвязывающая конструкция по любому из пп. 1-12, 20-21, отличающаяся тем, что антигенсвязывающая конструкция
a) способна к формированию синапсов и мостиков между CD19+В-клетками Raji и Т-клетками Jurkat, как показала проточная цитометрия и/или микроскопия; и/или
b) опосредует Т-клеточный цитолиз CD19-экспрессирующих В-клеток в цельной крови или МКПК человека; и/или
c) демонстрирует улучшенные биофизические свойства по сравнению с v875 или v1661; и/или
d) демонстрирует улучшенные экспрессию белка и выход продукта по сравнению с v875 или v1661, например, экспрессирует на уровне >4-10 мг/л после ГПХ (эксклюзионной хроматографии) при экспрессии и очистки в аналогичных условиях; и/или
e) демонстрирует чистоту гетеродимера, например, >95%.
27. Антигенсвязывающая конструкция по любому из пп. 1-12, 20-21, отличающаяся тем, что антигенсвязывающую конструкцию конъюгируют с лекарственным средством.
28. Фармацевтическая композиция, содержащая антигенсвязывающую конструкцию по любому из пп. 1-27 и фармацевтический носитель.
29. Фармацевтическая композиция по п. 28, причем носитель содержит буфер, антиоксидант, молекулу с низкой молекулярной массой, лекарственное средство, белок, аминокислоту, углевод, липид, хелатирующий агент, стабилизатор или наполнитель.
30. Фармацевтическая композиция для применения в медицине, содержащая антигенсвязывающую конструкцию по любому из пп. 1-27.
31. Фармацевтическая композиция для применения при лечении рака, содержащая антигенсвязывающую конструкцию по любому из пп. 1-27.
32. Способ лечения рака у субъекта, причем способ включает введение субъекту эффективного количества антигенсвязывающей конструкции по любому из пп. 1-27.
33. Способ по п. 32, отличающийся тем, что субъект представляет собой человека.
34. Способ по п. 32, отличающийся тем, что рак представляет собой лимфому или лейкоз, или В-клеточную неоплазию, или рак, который экспрессирует CD19, или неходжкинскую лимфому (НХЛ), или мантийноклеточную лимфому (МКЛ), или острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), или хронический лимфолейкоз (ХЛЛ), или ритуксимаб-или CHOP (терапия ЦитоксанТМ/АдриамицинТМ/винкристин/преднизолон)-резистентный В-клеточный рак.
35. Способ получения антигенсвязывающей конструкции по любому из пп. 1-27, включающий культивирование клетки-хозяина в условиях, подходящих для экспрессии антигенсвязывающей конструкции, отличающийся тем, что клетка-хозяин содержит полинуклеотид, кодирующий антигенсвязывающую конструкцию по любому из пп.  1-27, и выделение антигенсвязывающей конструкции.
36. Выделенный полинуклеотид или набор выделенных полинуклеотидов, содержащий по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует по меньшей мере один полипептид антигенсвязывающей конструкции по любому из пп. 1-27.
37. Выделенный полинуклеотид по п. 36, отличающийся тем, что полинуклеотид или набор полинуклеотидов представляет собой кДНК.
38. Вектор или набор векторов, содержащий один или более полинуклеотидов или наборов полинуклеотидов по п. 36, необязательно выбранный из группы, состоящей из плазмиды, вирусного вектора, неэписомального вектора млекопитающих, вектора экспрессии и рекомбинантного вектора экспрессии.
39. Изолированная клетка, содержащая полинуклеотид или набор полинуклеотидов по п. 36, или вектор или набор векторов по п. 38, необязательно выбранная из гибридомы, клетки яичника китайского хомячка (СНО) или клетки НЕК293.
40. Набор, содержащий антигенсвязывающую конструкцию по любому из пп. 1-27 и инструкции к применению.