ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ С АНТИТЕЛАМИ К MIF

1. Способ иммуногистохимического (ИГХ) анализа для in vitro обнаружения oxMIF, где oxMIF представляет собой MIF, который дифференциально связывается с антителом RAB4, RAB9 и/или RAB0 в образце ткани субъекта, включающий этап определения связывания соединения с oxMIF в указанном образце in vitro.
2. ИГХ анализ по п. 1, где указанное соединение, связывающееся с oxMIF, является антителом, которое специфично связывается с oxMIF.
3. ИГХ анализ по п. 2, где антитело связывается с oxMIF, но не связывается с redMIF.
D
D
4. ИГХ анализ по п. 3, где дифференциальное связывание является связыванием с oxMIF, которое происходит со значением K меньше 100 нМ, предпочтительно меньше 50 нМ, более предпочтительно меньше 10 нМ, и, необязательно, с redMIF, которое характеризуется K больше 400 нМ.
5. ИГХ анализ по любому из пп. 2-4, где антитела выбраны из группы, состоящей из oxMIF-связывающих антител, таких как, например, антитела RAB4, RAB9 и/или RAB0, и/или RAM4, RAM9 и/или RAM0.
6. ИГХ анализ по любому из пп. 1-4, где образец является биоптатом ткани, предпочтительно замороженным биоптатом ткани, предпочтительно залитым OCT срезом или пункционным биоптатом.
7. ИГХ анализ по п. 5, где образец является биоптатом ткани, предпочтительно замороженным биоптатом ткани, предпочтительно залитым OCT срезом или пункционным биоптатом.
8. ИГХ анализ по любому из пп. 1-4, в котором выполняют один или более следующих этапов:
a) дополнительный этап блокирования блокирующим буфером и
b) этап связывания с первичным антителом против oxMIF без предыдущего этапа фиксации;
c) необязательно этап фиксации;
d) инкубирование со вторичным антителом и/или
e) окрашивание.
9. ИГХ анализ по п. 8, где антитела выбраны из группы,
состоящей из oxMIF-связывающих антител, таких как, например, антитела RAB4, RAB9 и/или RAB0 и/или RAM4, RAM9 и/или RAM0.
10. ИГХ анализ по п. 8, где образец является биоптатом ткани, предпочтительно замороженным биоптатом ткани, предпочтительно залитым OCT срезом или пункционным биоптатом.
11. ИГХ анализ по п. 8, где перед этапом связывания не выполняют фиксацию органическим или неорганическим фиксатором, в частности формальдегидом или ацетоном.
12. ИГХ анализ по п. 9, где перед этапом связывания не выполняют фиксацию органическим или неорганическим фиксатором, в частности формальдегидом или ацетоном.
13. ИГХ анализ по п. 8, где образцы сушат на воздухе предпочтительно в течение приблизительно 30 мин после необязательной фиксации и/или перед первым этапом связывания.
14. ИГХ анализ по п. 8, где первичное антитело биотинилировано и/или предпочтительно содержится в первичном буфере для разведения и/или где первичное антитело инкубируют с образцом предпочтительно в течение 45-90 мин, более предпочтительно в течение приблизительно 60 мин.
15. ИГХ анализ по п. 8, где этап промывки проводят после этапа связывания c) для удаления избытка антитела.
16. ИГХ анализ по п. 8, где вторичным антителом является конъюгированный с пероксидазой хрена стрептавидин (HRP).
17. ИГХ анализ по п. 8, где этап промывки выполняют после этапа инкубирования d).
18. ИГХ анализ по п. 8, где этап окрашивания выполняют с гематоксилином.
19. ИГХ анализ по п. 1, где этап связывания выполняют с биотинилированным или флуоресцентно меченным связывающим реагентом.
20. Набор для ИГХ анализа, предназначенный для осуществления способа по любому из предшествующих пп.