Трипептид стимулирует экспрессию коннексина 37 в эндотелии сосудов при атеросклерозе и рестенозе

СТРУКТУРА И РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ СТЕНОЗИРУЮЩЕГО АТЕРОСКЛЕРОЗА В ВЕРТЕБРО-БАЗИЛЯРНОМ БАССЕЙНЕ

А.С. БАХМЕТЬЕВ \ О.Г. ДВОЕНКО \ В.В. МАТВЕЕВ 2, О.Н. СЕМЕНОВА \ А.С. КУРСАЧЕНКО \

В.А. СУХОРУЧКИН 1

1ФГБОУ ВО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России, Саратов, Россия 2 Частная клиника IMMA, Москва, Россия

Цель. Выявить частоту и характер распространения стенозирующего атеросклеротического поражения в бассейне позвоночных артерий (ПА) на экстра краниальном уровне у взрослых пациентов.

Материал и методы. В исследование включены 1888 пациентов (3776 ПА у 1265 женщин и 623 мужчин, средний возраст 52,45±11,8 лет), проходивших плановое триплекс-ное сканирование брахиоцефальных артерий (ТС БЦА) по стандартной методике на базе отделения ультразвуковой и функциональной диагностики Клинической больницы им. С.Р. Миротворцева СГМУ в период с апреля 2012 по июль 2017 гг. Исследование проводилось на приборах экспертного класса Siemens SC2000 Prime и Philips HD11 XE. Стенозом в бассейне ПА считали наличие сужения просвета артерии более чем на 20% при измерении одним из способов, применяемых в ультразвуковой диагностике сосудов (продольное или поперечное сканирования). В месте максимального сужения оценивались гемодинамические параметры. Все пациенты со стенозирующим атеросклерозом ПА осмотрены сосудистым хирургом и неврологом. Из исследования исключены пациенты с невизуализируемым хотя бы с одной стороны устьем ПА, лица с диссекцией ПА, а также с выраженной экстравазальной компрессией сосуда.

Результаты. Стенозирующее поражение в бассейне ПА на экстракраниальном уровне было выявлено у 165 (8,73%) пациентов (198 ПА у 78 женщин и 87 мужчин, средний возраст - 55,7±7,3 лет). В общей структуре преобладали устьевые стенозы в месте отхождения ПА от подключичной артерии (101 пациент - 61,2% от количества пациентов со стенозирующим поражением; 140 ПА). Отметим, что в большинстве случаев (96 ПА) протяженность атероскле-

ротической бляшки (АСБ) не превышала 10 мм и являлась локальной. Также следует отметить, что располагаются АСБ в устье преимущественно по задней стенке. Эхоструктурно, как правило, это стабильный гиперэхогенный атеросклеро-тический субстрат. Средняя степень стенозирования устья ПА - 43,3%. На долю гемодинамически-значимых стенозов пришлось 42 случая. У 45 (27,3%) пациентов АСБ являлась пролонгированной. В большинстве случаев от устья артерии до уровня С3-С4 позвонков со средней степенью сте-нозирования 42,3% в устье и 48% на уровне сегмента У2. Средняя пролонгация АСБ - 39,7 мм. Атеросклеротические окклюзии выявлены в 19 (11,5%) случаях (19 ПА). Во всех случаях визуализировался окклюзированный просвет ПА на уровне устья артерии и сегмента У1 с распространением на сегмент У2. Лишь в одном случае просвет ПА на уровне сегмента У2 был проходим с наличием ретроградного кровотока. Важно отметить отчетливую корреляцию клинических проявлений со степенью стеноза. Так, у 11 из 19 пациентов с окклюзированной ПА в предшествующие два года до проведения ТС БЦА были эпизоды острого нарушения мозгового кровообращения. Гемодинамически-значимый стеноз устья ПА (более 60%) в большинстве случаев коррелировал с наличием выраженных головокружений. Корреляции выраженности атеросклеротического поражения с полом и возрастом выявлено не было.

Выводы. В популяции взрослых пациентов стенози-рующее поражение в бассейне ПА на экстракраниальном уровне встретилось в 8,73% случаев. Подавляющее количество АСБ локализовано в устье ПА. Атеросклеротическая окклюзия ПА выявлена в 19 случаях (1%).

ТРИПЕПТИД СТИМУЛИРУЕТ ЭКСПРЕССИЮ КОННЕКСИНА 37 В ЭНДОТЕЛИИ СОСУДОВ ПРИ АТЕРОСКЛЕРОЗЕ И РЕСТЕНОЗЕ

И.И. БОЛОТОВ \ К.Л. КОЗЛОВ1, Н.С. ЛИНЬКОВА 12 1Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии, Санкт-Петербург, Россия 2Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Существующие лекарственные средства, применяемые в терапии атеросклероза и рестеноза у лиц старших возрастных групп, имеют ограничения вследствие побочных эффектов. Поэтому поиск новых эффективных и безопасных средств лечения сердечно-сосудистой патологии для лиц пожилого и старческого возраста особенно актуален. Регуляция старения эндотелия сосудов короткими пептидами открывает новые перспективы разработки вазо- и геропротекторных лекарственных препаратов, обладающих высокой эффективностью и отсутствием побочных эффектов.

Целью работы явилось изучение влияния пептида КБй на экспрессию коннексина 37 в эндотелии сосудов в норме, при атеросклерозе и рестенозе.

Материалы и методы исследования. Для создания культур клеток материал аорты без патологических изменений получен от эмбриона человека (21 неделя гестации) в НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта. Ткань аорты человека при атеросклерозе и рестенозе (диаметр 0,2 см, 4 фрагмента) получена при операции аор-

токоронарного шунтирования у пациентов пожилого возраста. Операции проводили в клинике сердечно-сосудистой хирургии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (Санкт-Петербург). Культуры эндотелиоцитов выращивали в среде, содержащей 87,5% M199, 10% эмбриональной бычьей сыворотки, 1,5% НЕРЕБ, 1% PES, L-глутамин. Клетки культивировали до 3-го пассажа. Все культуры были разделены на группы: 1 - контрольная (добавление физраствора в культу-ральную среду), 2 - с добавлением пептида KED в концентрации 20 нг/мл. Для оценки взаимодействия эндотелиоцитов был выбран коннексин 37 - маркер межклеточных контактов. В работе использовали первичные моноклональные антитела к коннексину 37 (1:200, Dako) и вторичные антитела, конъю-гированные с флуорохромом Alexa Fluor 568 (1:1000, Abcam). Ядра клеток докрашивали Hoechst 33258 (Sigma). Микроскопию клеток проводили в инвертированном конфокальном микроскопе Olympus BX40. Для анализа результатов использовали программу «ВидеоТест-Морфология 5.2». В каждом случае анализировали 5 полей зрения при увеличении 200. Площадь экспрессии рассчитывали, как отношение площади,

занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения и выражали в %. Статистическую обработку данных проводили в программе Б1ай$йса 7.0.

Результаты исследования. В культуре нормального эндотелия экспрессия коннексина 37 составила 8,4±0,3%. Под действием пептида КБй площадь экспрессии достоверно не изменялась. При этом в контрольной культуре эндотелиоци-тов, полученной от пациентов с атеросклерозом, площадь экспрессии коннексина 37 была в 3,6 раза ниже, чем в нормальном эндотелии. Пептид КБР способствовал повышению

экспрессии коннексина 37 в 1,6 раза в культуре, пораженной атеросклерозом. В контрольной культуре эндотелия, взятого у пациента с рестенозом, площадь экспрессии коннексина 37 была в 6,2 раза ниже, чем в нормальном эндотелии. Под действием пептида КБй этот показатель возрастал в 2,3 раза.

Заключение. Одним из важнейших молекулярных аспектов вазопротекторного действия пептида КБй является его способность восстанавливать взаимодействие между эндотелиоцитами, нарушающееся при атеросклерозе и рестенозе.

ПЕПТИД KED НОРМАЛИЗУЕТ ЭКСПРЕССИЮ ФАКТОРА ВИЛЛЕБРАНДА В ЭНДОТЕЛИИ СОСУДОВ ПРИ АТЕРОСКЛЕРОЗЕ И РЕСТЕНОЗЕ

И.И. БОЛОТОВ, К.Л. КОЗЛОВ Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Фактор Виллебранда (vWF) синтезируется в эндотелии и стимулирует тромбообразование. Фактор Виллебранда способствует прикреплению рецепторов тромбоцитов к коллагену и фибронектину сосудов, а также друг к другу и усиливает адгезию и агрегацию тромбоцитов. Повышенные уровни vWF являются индикатором повреждения эндотелия при сердечно-сосудистых заболеваниях, в том числе при атеросклерозе и рестенозе. Пептид KED успешно применяют при атеросклерозе в сочетании со стандартной терапией для улучшения мозгового кровообращения и при эректильной дисфункции. Несмотря на перспективы применения пептида KED при различной патологии сосудов, молекулярные аспекты его действия до сих пор не изучены.

Цель работы. Изучение влияния пептида KED на экспрессию vWF в эндотелии сосудов в норме, при атеросклерозе и рестенозе.

Материалы и методы исследования. Материал аорты без патологических изменений получен от эмбриона человека (21 неделя гестации) в НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта. Ткань аорты человека при атеросклерозе и рестенозе (диаметр 0,2 см, 4 фрагмента) получена при операции аор-токоронарного шунтирования у пациентов пожилого возраста. Операции проводили в клинике сердечно-сосудистой хирургии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (Санкт-Петербург). Культуры эндотелиоци-тов выращивали в среде, содержащей 87,5% M199, 10% эмбриональной бычьей сыворотки, 1,5% НЕРЕБ, 1% PES, L-глутамин. Клетки культивировали до 3-го пассажа. Все культуры были разделены на группы: 1 - контрольная (добавление физраствора в культуральную среду), 2 -с добавлением пептида KED в концентрации 20 нг/мл. Синтез vWF возрастает под влиянием вазопрессина при повреждении эндотелия, ассоциированном с различ-

ными сердечно-сосудистыми заболеваниями, как было показано в исследовании Montoro-Garcia S. et al. (2014). В работе использовали первичные моноклональные антитела к vWF (1:200, Dako) и вторичные антитела, конъ-югированные с флуорохромом Alexa Fluor 568 (1:1000, Abcam). Ядра клеток докрашивали Hoechst 33258 (Sigma). Конфокальную микроскопию клеток проводили в инвертированном микроскопе Olympus BX40. Для анализа результатов использовали программу «ВидеоТест-Морфология 5.2». В каждом случае анализировали 5 полей зрения при х200. Площадь экспрессии рассчитывали, как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения и выражали в %. Статистическую обработку проводили в программе Statistica 7.0.

Результаты исследования. Контрольное значение площади экспрессии vWF в культуре нормального эпителия составило 2,1±0,2%. В культуре эндотелия в норме экспрессия vWF под действием пептида KED не изменялась. В контрольных культурах эндотелия, полученных от пациентов с атеросклерозом и рестенозом, площадь экспрессии vWF была соответственно в 3,2 раза и 4,8 раза выше, чем в нормальном эндотелии. Это согласуется с данными литературы. Пептид KED способствовал уменьшению экспрессии vWF в культурах с атеросклерозом и рестенозом соответственно в 2,2 и 2,3 раза.

Заключение. Пептид KED, снижая экспрессию фактора Виллебранда в эндотелии, повышенную при атеросклерозе и рестенозе, способствует снижению адгезии тромбоцитов и уменьшению вероятности образования атеросклеротических бляшек. Принимая во внимание эффективность этого трипептида у пациентов с атеро-склеротическим поражением нижних конечностей, можно сделать вывод о перспективности его дальнейшего исследования при сердечно-сосудистых заболеваниях.

САХАРНЫЙ ДИАБЕТ 2-ГО ТИПА И ИШЕМИЧЕСКАЯ БОЛЕЗНЬ СЕРДЦА. БЕЗНАДЕЖНЫЙ СОЮЗ?

О.В. БУДНИКОВА

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук» «Научно-исследовательский институт

кардиологии», Томск, Россия

Одним из социально значимых заболеваний явля- ческие исследования показали, что сахарный диабет ется сахарный диабет 2-го типа (СД2). Крупные клини- повышает риск развития ССЗ: ишемической болезни