Изменения морфофункционального состояния нейронов спинномозговых узлов крысы при стимуляции заживления глубокой раны кожи введением тромбоцитарного концентрата

Список литературы

1. Берестов, Д. С. Изменение активности сукцинатдегидрогеназы в коре больших полушарий при лучевом воздействии / Д. С. Берестов // Морфологические ведомости. - 2006. - № 3-4. - С. 9-11.

2. Берестов, Д. С. Структурно-функциональная характеристика коры больших полушарий головного мозга при общем у-облучении и на фоне введения препарата ДАФС-25 : дис. ... канд. биол. наук / Д. С. Берестов. - Казань, 2007. - 178 с.

3. Елаева, Л. Е. Характеристика сократительных свойств скелетной мышцы кошки после де-симпатизации / Л. Е. Елаева, Т. А. Колупаева // Российский физиологический журнал. - 2001. - № 4. -С. 549-555.

4. Ковригина, Т. Р. Развитие нейромышечного синапса скелетной мышцы после химической десимпатизации / Т. Р. Ковригина // Морфология. - 2004. - № 3. - С. 28-32.

5. Поздняков, О. М. Влияние химической десимпатизации на процессы постнатальной миели-низации аксонов / О. М. Поздняков, А. В. Володина, Н. С. Гурко // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 1998. - № 2. - С. 29-32.

6. Родионов, И. М. Изменения исследовательского поведения и тревожности у неонатально десимпатизированных крыс / И. М. Родионов, А. А. Мартьянов, В. О. Голубинская и др. // Вестник Московского университета. - 1998. - № 1. - С. 12-16.

7. Сабельников, Н. Е. Преобразования системы двигательное окончание - мышечное волокно скелетных мышц различного происхождения в постнатальном онтогенезе : дис. ... д-ра мед. наук / Н. Е. Сабельников. - Саранск, 2006. - 296 с.

8. Ярыгин, В. Н. Содержание моноаминов, м-холино- и р-адренорецепция в краниальном шейном симпатическом ганглии в постнатальном онтогенезе десимпатизированных крыс / В. Н. Ярыгин, В. Н. Марков // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1999. - № 4. - С. 371-373.

Селякина Ольга Борисовна, аспирант кафедры анатомии человека, ГБОУ ВПО «Ижевская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, Удмуртская Республика, 426034, г. Ижевск, ул. Коммунаров, д. 281б, тел.: (3412) 52-62-01, e-mail: vetaspirant@rambler.ru.

Селякин Сергей Петрович, доктор медицинских наук, профессор кафедры анатомии человека, ГБОУ ВПО «Ижевская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, Удмуртская Республика 426034, г. Ижевск, ул. Коммунаров, д. 281б, тел.: (3412) 52-62-01, e-mail: vetaspirant@rambler.ru.

Васильев Юрий Геннадьевич, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой физиологии и зоогигиены, ФГБОУ ВПО «Ижевская государственная сельскохозяйственная академия», Россия, Удмуртская Республика, 426069, г. Ижевск, ул. Студенческая, д. 11, тел.: (3412) 50-21-08, e-mail: devugen@mail.ru.

Берестов Дмитрий Сергеевич, кандидат биологических наук, доцент кафедры физиологии и зоогигиены, ФГБОУ ВПО «Ижевская государственная сельскохозяйственная академия», Россия, Удмуртская Республика, 426069, г. Ижевск, ул. Студенческая, д. 11, тел.: (3412) 59-15-20, e-mail: vetaspirant@rambler.ru.

Вольхин Иван Александрович, аспирант кафедры физиологии и зоогигиены, ФГБОУ ВПО «Ижевская государственная сельскохозяйственная академия», Россия, Удмуртская Республика, 426069, г. Ижевск, ул. Студенческая, д. 11, тел.: (3412) 59-15-20, e-mail: vetaspirant@mail.ru.

УДК 616-001.4+611-018.52+611.832

© С.Н. Семенов, Н.Т. Алексеева, С.О. Фетисов, А.Г. Кварацхелия, 2013

С.Н. Семенов, Н.Т. Алексеева, С.О. Фетисов, А.Г. Кварацхелия

ИЗМЕНЕНИЯ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ НЕЙРОНОВ СПИННОМОЗГОВЫХ УЗЛОВ КРЫСЫ ПРИ СТИМУЛЯЦИИ ЗАЖИВЛЕНИЯ ГЛУБОКОЙ РАНЫ КОЖИ ВВЕДЕНИЕМ ТРОМБОЦИТАРНОГО КОНЦЕНТРАТА

ГБОУ ВПО «Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко»

Минздрава России

В эксперименте на белых беспородных крысах изучали структурно-функциональные изменения нейронов спинномозговых узлов (СМУ) в процессе заживления глубокой раны кожи. Отмечено возникновение попу-

ляций клеток с различными проявлениями реактивных и деструктивных реакций, наиболее выраженных для нейронов В-типа. Применение тромбоцитарного концентрата (ТК) для ускорения заживления приводит к снижению количества измененных нейронов всех групп в поздние сроки эксперимента.

Ключевые слова: спинномозговые узлы, А- и В-нейроны, глубокие раны кожи, тромбоцитарный концентрат.

S.N. Semenov, N.T. Alekseeva, S.O. Fetisov, A.G. Kvaratshelia

THE CHANGES IN MORPHOFUNCTIONAL CONDITION OF THE NEURONS OF THE DORSAL ROOT GANGLIONS IN RATS UNDER THE STIMULATION OF HEALING PROCESS OF DEEP SKIN WOUND BY THE APPLICATION

OF PLATELET CONCENTRATE

In the experiment on white outbread rats there were studied the morphofunctional changes of the neurons of the dorsal root ganglions (DRG) during the healing process of deep skin wound. The emergence of the population of cells displaying different reactive and destructive reactions was noted and it was more noticeable for B-type neurons. The use of platelet concentrate (PC) for expediting healing process went to the decrease in the number of modified neurons of all groups in late stages of the experiment.

Key words: dorsal root ganglions, A- and B-type neurons, deep skin wounds, platelet concentrate.

Введение. Изучение роли афферентного звена нервной системы в репаративной регенерации может способствовать лучшему пониманию механизмов нейрогенной регуляции этого процесса с целью разработки способов управления им, в частности, способов стимуляции регенерации [2, 8]. При хирургической патологии для выяснения патогенеза заболеваний перспективным является изучение расстройств регуляторных механизмов [5]. Известно, что афферентный нейрон имеет ведущее этиологическое и патогенетическое значение в поддержании структурной целостности и адекватной дифференцированности иннервируемых структур [4]. Отдельный интерес представляет исследование нейронов спинномозговых узлов (СМУ) при использовании инновационных методов ускорения заживления кожных ран вследствие прямой связи между их морфофункциональным состоянием и скоростью реиннервации поврежденного участка [6].

Цель: изучить морфофункциональное состояние нейронов спинномозговых узлов крысы при стимуляции заживления глубокой раны кожи введением тромбоцитарного концентрата.

Материалы и методы исследования. В эксперименте на 108 самцах белых беспородных крыс изучали динамику изменений морфофункционального состояния нейронов спинномозговых узлов (СМУ) Lin-Lv при естественном течении ран мягких тканей и при использовании тромбоцитарного концентрата (ТК) в качестве лечебного фактора [1]. Животным на переднюю поверхность левого бедра наносили разрез 1 х 0,5 см. Первой экспериментальной группе лечение ран не производили, второй группе животных в раневой дефект однократно вносили сгусток тромбоцитарного концентрата с концентрацией тромбоцитов не менее 1 млн/мкл. Животные выводились из эксперимента на 1, 3, 5, 7, 14, 28 сутки равными группами, по 6 животных в каждой, включая группу виварного контроля. Производили иссечение поясничных ганглиев LII-LV как соответствующих нервам, иннервирующим область нанесенной раны. Взятый биологический материал фиксировали в смеси Карнуа и заливали по стандартной методике в смесь парафин-гистомикс, затем на микротоме получали срезы толщиной 6 мкм. Полученные срезы окрашивали крезиловым фиолетовым по методике Ниссля. Опираясь на литературные данные и анализ результатов морфометрических исследований, показавший бимодальный характер распределения морфометрических показателей нейронов СМУ, выделяли две основные группы нейронов: А-клетки со средним поперечником более 30 мкм, светлым перикарионом и глыбчатым распределением субстанции Ниссля; В-клетки со средним поперечником меньше или равным 30 мкм, округлые клетки с темным перикарионом и диффузным распределением вещества Ниссля. Эти типы нейронов СМУ традиционно связывают с проводниками различных типов чувствительности: малые В-клетки относят к протопатической чувствительности, крупные А-клетки - к эпикритической. При оценке состояния нейронов спинномозговых узлов выделяли клетки с морфологическими признаками различных функциональных состояний: нейроны, не имеющие на светооптическом уровне выраженных изменений, нейроны с реактивными или обратимыми изменениями, нейроны с деструктивными изменениями. Производили подсчет и сравнение относительного количества клеток описанных групп. Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета Statistica 6.0. Сравнение относительных показателей проводили с использованием метода Фишера.

Результаты исследования и их обсуждение. Проведенные исследования показали, что в СМУ

интактных животных большая часть нейроцитов была представлена клетками без признаков реактивных изменений. Среди клеточной популяции СМУ часть крупных светлых нейронов имела крупные глыбки вещества Ниссля в перинуклеарной цитоплазме - А-тип нейроцитов, другие более мелкие темные клетки имели диспергированный тигроид - В-тип нейронов. Изменения в СМУ на 1 сутки после нанесения раны характеризовались возникновением явлений первичного раздражения нейронов. Наблюдалось увеличение числа клеток с явлениями хроматолиза и клеток с расширенным пери-целлюлярным пространством. На 3 сутки эксперимента в нейронах СМУ нарастали явления хроматолиза, выражавшиеся в увеличении просветленной зоны между ядром и тигроидной субстанцией, смещенной на периферию цитоплазмы. Количество клеток с признаками реактивных изменений составило для А-типа нейронов 11,2 ± 1,3 %, для В-типа - 15,5 ± 1,2 % при этом в пределах гистологических срезов СМУ морфологически измененные клетки нередко формировали отдельные группы, за пределами которых располагались неизмененные нейроциты. Сходные морфологические изменения нейронов СМУ обнаруживались на 5 сутки эксперимента. При этом наблюдался прирост числа реактивно измененных В-нейронов до 19,3 ± 2,3 %. Через неделю после нанесения раны доля нейроцитов с реактивными изменениями возрастала до 12,8 ± 1,7 % и 22,4 ± 2,1 % для А- и В- клеток, соответственно. Среди таких нейронов в большом количестве встречались клетки с конденсацией хромато-фильной субстанции под клеточной мембраной и эктопией ядра, что можно считать признаками выраженной аксональной реакции [3]. Воздействие комплекса посттравматических факторов на данном этапе приводило к частичной элиминации нервных клеток и инициировало процессы деструкции, вследствие чего формировались очаги с деструктивно измененными клетками, общее количество которых составило 16,4 ± 1,9 % от общего количества клеток. На 14 сутки после травмы нейрональная реакция была выражена наиболее сильно, у значительной части клеток наблюдалась резкая неровность и размытость контуров, сморщивание с образованием широких перинейрональных пустот. В этот период часто встречались клетки с тотальным хроматолизом и плохо заметными границами ядер. Вследствие необратимых изменений, приводивших к гибели нейронов, формировались единичные глиальные узелки [7] как результат нейронофагии и последующей миграции сателлитной глии. Доля реактивно измененных А- и В- клеток возрастала до 18,2 ± 1,3 % и 26,6 ± 2,4 %, соответственно, количество деструктивно измененных элементов составило 33,4 ± 3,7 %. Таким образом, большая часть популяции нейронов была морфологически отлична от нормы. К 28 суткам состояние сохранившихся нейронов СМУ начинало возвращаться к норме, происходило восстановление глыбчато-зернистой формы хроматофильного вещества в цитоплазме. Количество клеток с реактивными изменениями снижалось до 9,1 ± 1,02 % - А-клетки и 16,1 ± 1,2 % - В-клетки, однако число клеток с деструктивными изменениями оставалось на высоком уровне в 34,3 ± 2,5 %.

Изучение изменений в нейронах у животных при применении ТК показало, что при общем сохранении направленности морфологических изменений их выраженность и динамика существенно различались. При близких соотношениях числа реактивно измененных клеток к окончанию 1 суток раневого процесса, на 3 и 5 сутки эксперимента при использовании ТК возрастало количество клеток с реактивными изменениями, доля которых достоверно (р < 0,05) превышала таковую у животных с естественным течением процесса заживления и составляла на 5 сутки: А-клетки - 14,7 ± 1,3 %, В-клетки - 22,5 ± 1,4 %. Начиная с 7 суток, в данной группе отмечалось снижение количества нейронов с признаками реактивных изменений для всех популяций клеток. К 28 суткам при использовании ТК количество реактивно измененных клеток А-типа достоверно не отличалось от группы с естественным течением раневого процесса, однако доля реактивно измененных В-нейроцитов снижалась до 9,5 ± 0,9 %, что достоверно ниже показателя для группы с естественным заживлением. Особый интерес вызывает изменение доли клеток с деструктивными изменениями при использовании ТК. На 7 сутки исследования количество деструктивно измененных клеток составляла 10,2 ± 1,1 %, что достоверно ниже, чем при естественном течении. К 14 суткам количество элиминирующих нейронов вырастала до 22,5 ± 1,7 %, но остается на треть меньше показателя первой экспериментальной группы. В конце эксперимента (28 сутки) в группе с применением ТК доля нейронов с деструктивными изменениями составляла 12,4 ± 1,3 %.

Заключение. Анализируя полученные данные, можно отметить, что различные реакции в ответ на нанесенную травму в большей степени отмечались для В-нейроцитов и достигали максимума к исходу второй недели эксперимента. В случае применения ТК для ускорения заживления, отмечалось уменьшение количества реактивно измененных нейронов в поздние сроки исследования при значительном снижении деструктивных реакций, чему в эксперименте соответствует укорочение длительности фаз пролиферации и реорганизации в раневом дефекте.

Список литературы

1. Глухов, А. А. Гистохимический анализ репаративных процессов в асептических экспериментальных ранах при использовании гидроимпульсной санации и тромбоцитарного концентрата / А. А. Глухов, С. Н. Семенов, Н. Т. Алексеева, А. П. Остроушко // Вестник экспериментальной и клинической хирургии. - 2010. - Т. 3, № 4. - С. 368-373.

2. Душкова, З. Г. Регенерация печени и афферентное звено нейрогенной регуляции репаратив-ного процесса : автореф. дис. ... канд. мед. наук / З. Г. Душкова. - Нижний Новгород, 2004. - 29 с.

3. Сергеев, С. М. Гистоструктура спинномозговых узлов (L4-L5) после устранения диастаза седалищного нерва / С. М. Сергеев, И. И. Марков, В. А. Ваньков // Морфологические ведомости. -2008. - № 3-4. - С. 75-77.

4. Спиридонов, В. К. Роль афферентных нейронов в поддержании структурного и метаболического гомеостаза / В. К. Спиридонов, В. А. Лазарев, Н. Ф. Воробьева // Мат-лы Всероссийской научной конференции с международным участием, посвященной 150-летию со дня рождения академика И.П. Павлова (г. Санкт-Петербург, 15-17 сентября 1999 г.). - СПб, 1999. - С. 291-292.

5. International review of neurobiology : essay on peripheral nerve repair and regeneration / Ed. by S. Geuna. - Elsevier, 2009. - 548 p.

6. Li, J. Pathophysiology of acute wound healing / J. Li, J. Chen, R. Kirshner // Clinics in dermatology - 2007. - Vol. 25. - P. 9-18.

7. McKay Hart, A. Primary sensory neurons and satellite cells after peripheral axotomy in the adult rat: timecourse of cell death and elimination / A. McKay Hart, T. Brannstorm, M. Wiberg et al. // Exp. Brain Res. - 2002. - Vol. 142, № 3. - P. 308-318.

8. Terenghi, G. Peripheral nerve regeneration and neurotrophic factors / G. Terenghi // J. Anat. -1999. - Vol. 194, № 1. - P. l-14.

Семенов Сергей Николаевич, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой нормальной анатомии человека, ГБОУ ВПО «Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко» Минздрава России, Россия, 394036, г. Воронеж, ул. Студенческая, д. 10, тел.: (4732) 253-02-53, е-mail: Sns7250@mail.ru.

Алексеева Наталия Тимофеевна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры нормальной анатомии человека, ГБОУ ВПО «Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко» Минздрава России, Россия, 394036, г. Воронеж, ул. Студенческая, д. 10, тел.: (4732) 253-02-53, е-mail: alexeeva.nt@list.ru.

Фетисов Сергей Олегович, ассистент кафедры нормальной анатомии человека, ГБОУ ВПО «Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко» Минздрава России, Россия, 394036, г. Воронеж, ул. Студенческая, д. 10, тел.: (4732) 253-02-53, е-mail: fetisovbiol@yandex.ru.

Кварацхелия Анна Гуладиевна, ассистент кафедры нормальной анатомии человека, ГБОУ ВПО «Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко» Минздрава России, Россия, 394036, г. Воронеж, ул. Студенческая, д. 10, тел.: (4732) 253-02-53, е-mail: anna_kvar_83@mail.ru.

УДК 577.99:611.018-089.843

© И.В. Семенякин, Н.Н. Шевлюк, М.И. Васильченко, Д.А. Зеленин, 2013

И.В. Семенякин1, Н.Н. Шевлюк2, М.И. Васильченко3, Д.А. Зеленин3

ДИНАМИКА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ПРЕОБРАЗОВАНИЙ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ АРТИФИЦИАЛЬНОГО ТОНКОКИШЕЧНОГО МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ В ОТДАЛЕННЫЕ СРОКИ ПОСЛЕ ОПЕРАЦИИ

:ГБУЗ «Оренбургский областной клинический психоневрологический госпиталь ветеранов войн»

2ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Минздрава России 3ФГУ «2 центральный военный клинический госпиталь им. П.В. Мандрыка Министерства обороны

Российской Федерации», г. Москва

Изучены морфологические изменения в слизистой оболочке артифициальных мочевых пузырей у 15 больных, перенесших цистэктомию с формированием артифициального мочевого пузыря из сегмента тер-