ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА
PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR TREATING PARKINSON'S DISEASE

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к области нейродегенеративных заболеваний и, в частности, относится к композициям и способам лечения болезни Паркинсона.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Болезнь Паркинсона является нейродегенеративным заболеванием, которое характеризуется хронической или прогрессирующей потерей дофаминовых нейронов в компактной части черного вещества мозга, приводящей к нарушениям двигательной активности, включая дискинезию, тремор покоя, ригидность и нарушение походки.
Медицинское лечение болезни Паркинсона направлено на прекращение, замедление, снижение степени нейродегенеративного процесса в нигростриарных нейронах или его минимизацию (нейропротекторная терапия) и устранение биохимического дисбаланса (симптоматическая терапия). Основными направлениями симптоматической терапии болезни Паркинсона являются увеличение синтеза дофамина или стимуляция активности дофаминовых рецепторов и высвобождения дофамина из пресинаптического пространства, а также подавление обратного захвата дофамина пресинаптическими рецепторами и катаболизма дофамина.
«Золотым стандартом» в фармакологическом лечении болезни Паркинсона является использование DOPA-содержащих веществ, таких как леводопа. Леводопу обычно вводят в комбинации с карбидопой, которая увеличивает период полувыведения леводопы. Однако эффективность этих агентов со временем снижается из-за продолжающейся дегенерации нейронов в черном веществе мозга.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Согласно настоящему изобретению предложены лекарственные формы, содержащие известные лекарственные средства, используемые или предлагаемые для лечения болезни Паркинсона, рецептуры которых разработаны таким образом, что указанные лекарственные средства становятся более эффективными в улучшении состояния пациента.
Согласно одному своему аспекту настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям для лечения болезни Паркинсона, содержащим комбинацию фиксированных доз двух различных активных агентов, выбранных из соединений, оказывающих симптоматическое или нейропротекторное действие, или как симптоматическое, так и нейропротекторное действие на страдающих болезнью Паркинсона пациентов, причем молярное соотношение двух указанных соединений находится в диапазоне от 1:1 до 1:100.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ лечения болезни Паркинсона, включающий введение нуждающемуся в лечении пациенту фармацевтической композиции, содержащей комбинацию лекарственных средств согласно настоящему изобретению.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На Фигурах 1А-С показано нейропротекторное действие лекарственных средств, предназначенных для лечения болезни Паркинсона, и комбинаций указанных лекарственных средств на апоптоз в клетках линии PC 12, вызванный культивированием в среде без сыворотки, измеренный как процент жизнеспособных клеток. Фигура 1А: (1) Выращивание на минимальной среде без сыворотки; (2) ропинирол, 200 мкМ; (3) ропинирол, 100 мкМ; (4) разагилин, 50 мкМ; (5) разагилин, 100 мкМ; (6) комбинация ропинирол, 200 мкМ/разагилин, 50 мкМ; (7) комбинация ропинирол, 100 мкМ/разагилин, 10 мкМ; Фигура 1В: (1) выращивание на минимальной среде без сыворотки; (2) прамипексол, 200 мкМ; (3) прамипексол, 100 мкМ; (4) селегилин, 50 мкМ; (5) селегилин, 10 мкМ; (6) комбинация прамипексол, 200 мкМ/селегилин, 50 мкМ; (7) комбинация прамипексол, 100 мкМ/селегилин, 10 мкМ; Фигура 1C: (1) выращивание на минимальной среде без сыворотки; (2) ропинирол, 200 мкМ; (3) ропинирол, 100 мкМ; (4) селегилин, 50 мкМ; (5) селегилин, 10 мкМ; (6) комбинация ропинирол, 200 мкМ/селегилин, 50 мкМ; (7) комбинация ропинирол, 100 мкМ/селегилин, 10 мкМ.
На Фигурах 2A-D показано нейропротекторное действие лекарственных средств, предназначенных для лечения болезни Паркинсона, и их комбинаций на апоптоз в клетках линии PC 12, вызванный МРР+, измеренный как процент жизнеспособных клеток. На Фигурах 2А-С нейропротекторное действие определяли по выживаемости в процентах относительно контроля, тогда как на Фигуре 2D он определен по токсичности в процентах. Фигура 2А: (1) МРР+, 250 мкМ; (2) ропинирол, 400 мкМ; (3) ропинирол, 200 мкМ; (4) ропинирол, 100 мкМ; (5) разагилин, 100 мкМ; (6) разагилин, 50 мкМ; (7) разагилин, 10 мкМ; (8) комбинация ропинирол, 400 мкМ/разагилин, 100 мкМ; (9) комбинация ропинирол, 200 мкМ/разагилин, 50 мкМ; (10) комбинация ропинирол, 100 мкМ/разагилин, 10 мкМ; Фигура 2В: (1) МРР+, 250 мкМ; (2) ропинирол, 400 мкМ; (3) ропинирол, 200 мкМ; (4) селегилин, 100 мкМ; (5) селегилин, 50 мкМ; (6) комбинация ропинирол, 400 мкМ/селегилин, 100 мкМ; (7) комбинация ропинирол, 200 мкМ/селегилин, 50 мкМ; Фигура 2С: (1) МРР+, 250 мкМ; (2) прамипексол, 400 мкМ; (3) разагилин, 100 мкМ; (4) селегилин, 100 мкМ; (5) комбинация прамипексол, 400 мкМ/разагилин, 100 мкМ; (6) комбинация прамипексол, 400 мкМ/селегилин, 100 мкМ. Фигура 2D: (1) МРР+, 500 мкМ; (2) прамипексол, 400 мкМ; (3) разагилин. 400 мкМ; (4) комбинация прамипексол, 200 мкМ/разагилин, 200 мкМ; (5) контроль.
На Фигуре 3А-С показан положительный эффект комбинации лекарственных средств на двигательную активность у мышей, которых подвергали действию МРТР, измеренный как латентный период в тесте Rota-rod (3А) или расстояние в тесте Rota-rod (3В-С) на 5 день (3А-В) и на 11 день (3С) исследования. (1) Контроль; (2) МРТР; (3) разагилин, 0.1 мг/кг; (4) прамипексол, 1 мг/кг; (5) комбинация (3) и (4).
На Фигуре 4 показан положительный эффект комбинации лекарственных средств на уровень дофамина у мышей, которых подвергали воздействию МРТР. (1) Не подвергавшиеся воздействию мыши; (2) МРТР; (3) разагилин 0.05 мг/кг; (4) прамипексол 0.5 мг/кг; (5) комбинация (3) и (4); (6) разагилин 0.1 мг/кг; (7) прамипексол 1 мг/кг; (8) комбинация (6) и (7). ДА, дофамин.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Согласно одному своему аспекту настоящее изобретение относится к комбинированному лечению пациентов, страдающих болезнью Паркинсона, с помощью двух различных активных агентов.
Комбинированное лечение с использованием двух агентов, имеющих разные механизмы действия, например, одного агента, обладающего нейропротекторным действием, и другого агента, оказывающего симптоматическое действие путем усиления синтеза дофамина в мозге, увеличивает вероятность получения положительного терапевтического действия синергического характера. Также агенты с активностью, направленной против апоптоза или окислительного стресса, могут быть полезны при использовании в комбинации с ингибиторами холинэстеразы или NMDA-антагонистами.
В основе данного аспекта настоящего изобретения лежит предположение о том, что соотношение двух компонентов в комбинации должно быть точно выверено, и что два указанных компонента включают в состав одной формы дозирования, разработанной для оптимизации фармакокинетического действия, эффективности и режима терапии пациента. Термин «комбинация фиксированных доз» используется в настоящей заявке для описания формы единичного дозирования, содержащей два различных лекарственных средства в точном соотношении, а именно в конкретных фиксированных дозах. При лечении, основанном на нескольких лекарственных средствах, точное соотношение компонентов, временной режим, дозировка и фармакокинетические аспекты играют крайне важную роль. Для определения оптимальной комбинации фиксированных доз важны не только комбинированная/синергическая эффективность и активность, но также относительные фармакокинетические характеристики каждого компонента и оптимальная лекарственная форма.
Улучшенный терапевтический эффект при использовании комбинаций согласно настоящему изобретению по сравнению с имеющимися на сегодняшний день монотерапиями и комбинированными терапиями для лечения болезни Паркинсона обусловлен уникальными соотношениями и лекарственными формами, которые обеспечивают оптимальные фармакокинетические свойства и улучшают абсорбцию, период полувыведения и распределение одного или обоих агентов.
Таким образом, согласно данному аспекту, настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию для лечения болезни Паркинсона, содержащую фармацевтически приемлемый носитель и два активных агента, выбранных из соединений, оказывающих либо нейропротекторное, либо симптоматическое действие, или как симптоматическое, так и нейропротекторное действие на пациентов, страдающих болезнью Паркинсона, причем молярное соотношение двух соединений находится в диапазоне от 1:1 до 1:100.
Соединение, оказывающее либо нейропротекторное, либо симптоматическое действие, или как симптоматическое, так и нейропротекторное действие, может быть выбрано из двух различных групп следующих агентов: (i) агонисты дофаминовых рецепторов (АДР); (ii) ингибиторы моноаминоксидазы (МАО); (iii) леводопа отдельно или в комбинации с ингибитором декарбоксилазы и/или ингибитором катехол-O-метилтрансферазы (КОМТ); (iv) агонисты или антагогисты глютаматных рецепторов; (v) спиновые ловушки; (vi) антиоксиданты или (vii) противовоспалительные агенты.
Согласно одному варианту реализации один из указанных активных агентов представляет собой агонист дофаминовых рецепторов (АДР), способный стимулировать дофаминовые рецепторы нейронов мозга, которые в норме стимулируются дофамином. Такой агонист может оказывать селективное действие на подтипы дофаминовых рецепторов. Примеры агонистов дофаминовых рецепторов, которые могут использоваться в соответствии с изобретением, включают прамипексол, ропинирол, пирибедил, лизурид, каберголин, апоморфин, ротиготин, бромокриптин и перголид, но не ограничиваются ими.
Согласно предпочтительным вариантам реализации настоящего изобретения указанный агонист представляет собой прамипексол, ропинирол и апоморфин, наиболее предпочтительно прамипексол и ропинирол. Прамипексол и апоморфин обладают как симптоматическим, так и нейропротекторным действием, а ропинирол обладает симптоматическим действием.
Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения один из двух указных активных агентов представляет собой ингибитор МАО, предпочтительно ингибитор МАО типа В группы пропаргиламинов, такой как разагилин и селегилин, - лекарственные средства, одобренные к применению для лечения болезни Паркинсона.
Подавление МАО при болезни Паркинсона в основном осуществляют для усиления активности стриарного дофамина, что оказывает благоприятное симптоматическое действие на двигательную активность. Ингибиторы МАО также повышают уровень дофамина путем подавления моноаминоксидазы В - фермента, ответственного за его гидролиз. Кроме того, благодаря их антиоксидантным и антиапоптотическим свойствам ингибиторы МАО-В также обладают нейропротекторной активностью.
Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения один из указанных активных агентов представляет собой леводопу (L-DOPA) - предшественник дофамина, способный, в отличие от самого дофамина, преодолевать гематоэнцефалический барьер. В центральной нервной системе леводопа метаболизируется с образованием дофамина с помощью декарбоксилазы ароматических L-аминокислот (в настоящей заявке «декарбоксилазы») и вызывает повышение уровня дофамина в мозге и, таким образом, может использоваться для симптоматического лечения болезни Паркинсона. Однако леводопа также конвертируется в дофамин в периферических тканях, то есть за пределами мозга. Во избежание формирования дофамина в периферических тканях согласно одному варианту реализации совместно с леводопой вводят ингибитор периферической декарбоксилазы, такой как карбидопа или бензеразид. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения совместно с леводопой и карбидопой вводят ингибитор катехол-O-метилтрансферазы (КОМТ), такой как толкапон или энтакапон, для предотвращения синтеза дофамина в периферических тканях. Так как и карбидопа, и ингибиторы КОМТ сами по себе не оказывают целебное действие при введении пациентам, страдающим болезнью Паркинсона, они не рассматриваются как активные агенты согласно настоящему изобретению.
Согласно другому варианту реализации, один из двух указанных активных агентов представляет собой агонист или антагонист глютаматных рецепторов, такой как амантадин, миноциклин и ремацемид, но не ограничивается ими.
В результате снижения уровня дофамина происходит гиперактивация глютаминергического субталамопаллидумального пути, что приводит к усиленной передаче от субталамического ядра по субталамопаллидумальному глютаминегрическому пути, вызывающей акинезию и ригидность. Ингибирование этих путей с помощью антагонистов глютаматных рецепторов приводит к восстановлению нормальной передачи ацетилхолина и дофамина и обращает указанные нарушения двигательной активности. Имеется предположение, что патогенез болезни Паркинсона может быть обусловлен индуцированным глютаматом повреждением нейронов, и что антагонисты глютамата могут оказывать нейропротекторное действие при болезни Паркинсона.
Нарушения функции возбуждающих аминокислотных нейромедиаторов синаптической передачи (главным образом, глютамата и аспартата) и других возбуждающих и тормозных нейромедиаторов центральной нервной системы связаны с развитием и прогрессированием ряда нейродегенеративных заболеваний мозга, включая эпилепсию, болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера. Указанные нейромедиаторы включают антагонисты глютаматных рецепторов N-метил d-аспартат (NMDA)-активируемого подтипа и не NMDA-активируемого подтипа и метаботропные агонисты глютаматных рецепторов и антагонисты, действующие на возбуждающие синапсы центральной нервной системы со стороны пресинаптической и/или постсинаптической мембраны. Антагонисты Группы I и агонисты Групп II и III mGlu-рецепторов обладают нейропротекторным действием и улучшают симптоматику.
Так как активность NMDA-рецепторов является одним из ключевых факторов в процессах эксайтотоксичности, антагонисты указанных рецепторов могут быть многообещающими в лечении заболеваний, включающих процессы эксайтотоксичности, в частности травматических повреждений мозга, инсультов и нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, Паркинсона и Гентингтона.
Согласно конкретному варианту реализации настоящего изобретения один из указанных активных агентов является антагонистом NMDA-рецепторов. Амантадин представляет собой антагонист NMDA-рецепторов и антихолинергический препарат и обладает как симптоматическим, так и нейропротекторным действием. Миноциклин, представитель тетрациклиновых антибиотиков широкого спектра действия, обладает нейропротекторными свойствами. Как миноциклин, представитель тетрациклиновых антибиотиков широкого спектра действия, так и ремацемид обладают нейропротекторными свойствами.
Согласно другому варианту реализации один из двух указанных активных агентов представляет собой спиновую ловушку, такую как 4-гидрокси-[2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксил (темпол), α-(4-пиридил-1-оксид)-N-трет-бутилнитрон (POBN), или α-фенил-трет-бутилнитрон (PBN), известные в качестве нейропротекторных агентов, но не ограничивается ими.
Согласно другому варианту реализации один из двух активных агентов представляет собой антиоксидант, обладающий нейропротекторным действием, такой как мелатонин; витамин С; витамин D; β-каротин; эстрогены, такие как 17β-эстрадиол; фенольные соединения, такие как витамин Е, 2,4,6-триметилфенол, N-ацетилсеротонин и 5-гидроксииндол; и каннабиноиды, но не ограничиваются ими. Среди семейства стероидных молекул только эстрогены обладают способностью к предотвращению гибели нервных клеток, вызванную окислительным стрессом.
Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения, один из двух активных агентов представляет собой противовоспалительный агент, который может являться нестероидным противовоспалительным лекарственным средством, таким как:
ибупрофен, индометацин, нимесулид, целекоксиб, рофекоксиб, валдекоксиб, парекоксиб, флурбипрофен, сулиндак; рофекоксиб целекоксиб, набуметон, напроксен, аспирин, кетопрофен, диклофенак, пироксикам, дифлунизал, фенопрофен, сулиндак или меклофен, но не ограничивающимся ими; белковым компонентом фикоцианина (Рс); и противовоспалительным стероидом, таким как метилпреднизолон, но не ограничивающимся им.
Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит следующие соединения:
(i) прамипексол в комбинации с разагилином, селегилином, ропиниролом, пирибедилом, бромокриптином, перголидом, лизуридом, каберголином, апоморфином, ротиготином, леводопой, леводопой в комбинации с карбидопой, леводопой в комбинации с карбидопой и энтакапоном, леводопой в комбинации с карбидопой и толкапоном, амантадином или миноциклином;
(ii) ропинирол в комбинации с разагилином, селегилином, пирибедилом, бромокриптином, перголидом, лизуридом, каберголином, апоморфином, ротиготином, леводопой, леводопой в комбинации с карбидопой, леводопой в комбинации с карбидопой и энтакапоном, леводопой в комбинации с карбидопой и толкапоном, амантадином или миноциклином;
(iii) пирибедил в комбинации с разагилином, селегилином, бромокриптином, перголидом, лизуридом, каберголином, апоморфином, ротиготином, леводопой, леводопой в комбинации с карбидопой, леводопой в комбинации с карбидопой и энтакапоном, леводопой в комбинации с карбидопой и толкапоном, амантадином или миноциклином;
(iv) бромокриптин в комбинации с разагилином, селегилином, перголидом, лизуридом, каберголином, апоморфином, ротиготином, леводопой, леводопой в комбинации с карбидопой, леводопой в комбинации с карбидопой и энтакапоном, леводопой в комбинации с карбидопой и толкапоном, амантадином или миноциклином;
(v) перголид в комбинации с разагилином, селегилином, лизуридом, каберголином, апоморфином, ротиготином, леводопой, леводопой в комбинации с карбидопой, леводопой в комбинации с карбидопой и энтакапоном, леводопой в комбинации с карбидопой и толкапоном, амантадином или миноциклином;
(vi) лизурид в комбинации с селегилином, разагилином, каберголином, апоморфином, ротиготином, леводопой, леводопой в комбинации с карбидопой, леводопой в комбинации с карбидопой и энтакапоном, леводопой в комбинации с карбидопой и толкапоном, амантадином или миноциклином;
(vii) каберголин в комбинации с разагилином селегилином, апоморфином, ротиготином, леводопой, леводопой в комбинации с карбидопой, леводопой в комбинации с карбидопой и энтакапоном, леводопой в комбинации с карбидопой и толкапоном, амантадином или миноциклином;
(viii) апоморфин в комбинации с селегилином, разагилином, ротиготином, леводопой, леводопой в комбинации с карбидопой, леводопой в комбинации с карбидопой и энтакапоном, леводопой в комбинации с карбидопой и толкапоном, амантадином или миноциклином;
(ix) ротиготин в комбинации с разагилином, селегилином, леводопой, леводопой в комбинации с карбидопой, леводопой в комбинации с карбидопой и энтакапоном, леводопой в комбинации с карбидопой и толкапоном, амантадином или миноциклином;
(х) селегилин в комбинации с леводопой, леводопой в комбинации с карбидопой, леводопой в комбинации с карбидопой и энтакапоном, леводопой в комбинации с карбидопой и толкапоном, амантадином, миноциклином или разагилином;
(xi) разагилин в комбинации с леводопой, леводопой в комбинации с карбидопой, леводопой в комбинации с карбидопой и энтакапоном, леводопой в комбинации с карбидопой и толкапоном, амантадином или миноциклином;
(xii) амантадин в комбинации с леводопой, леводопой в комбинации с карбидопой, леводопой в комбинации с карбидопой и энтакапоном, леводопой в комбинации с карбидопой и толкапоном, или миноциклином; и
(xiii) миноциклин в комбинации с леводопой, леводопой в комбинации с карбидопой, леводопой в комбинации с карбидопой и энтакапоном или леводопой в комбинации с карбидопой и толкапоном.
Согласно настоящему изобретению было обнаружено, что комбинации прамипексола с разагилином или селегилином или ропинирола с разагилином или селегилином являются более эффективными для повышения выживаемости или сохранения выживаемости нервных клеток, подвергнутых воздействию МРР+ или бессывороточной среды в условиях in vitro, чем эти же соединения при их раздельном применении (см. Пример 1). Согласно настоящему изобретению также было обнаружено, что комбинация прамипексола с разагилином намного более эффективна для восстановления двигательной активности и уровня дофамина в дофаминовых нейронах черного вещества у подвергнутых воздействию МРТР мышей, чем любое из указанных двух соединений при раздельном введении (см. Пример 2). Это справедливо как для мышей, подвергнутых воздействию в течение 5 дней, так и для мышей, подвергнутых воздействию в течение 11 дней. Согласно указанным данным комбинированная терапия обеспечивает нейропротекторное действие и, как результат, снижение степени повреждения дофаминергической системы и восстановление ее нормальной чувствительности к дофаминовым агонистам. Также представляется, что использование комбинированной терапии может приводить к восстановлению ответа животного на «восполняющую дофаминергическую терапию» или регулированию потенциально неадекватного ответа при отдельном использовании агониста дофамина.
Таким образом, согласно предпочтительным вариантам реализации указанная фармацевтическая композиция содержит комбинацию агониста дофаминовых рецепторов и ингибитора МАО. Например, фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит агонист дофаминовых рецепторов, выбранный из прамипексола, ропинирола пирибедила, лизурида, каберголина, апоморфина, ротиготина, бромокриптина или перголида, в комбинации с ингибитором МАО типа В группы пропаргиламинов, таким как разагилин или селегилин. В частности, указанная фармацевтическая композиция содержит: (i) прамипексол в комбинации с разагилином; (ii) прамипексол в комбинации с селегилином; (iii) ропинирол в комбинации с разагилином; или (iv) ропинирол в комбинации с селегилином.
Молярное отношение прамипексола к разагилину выбрано из 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 12:1, 14:1, 16:1, 18:1, 20:1, 30:1, 40:1, 50:1 или 100:1; молярное отношение прамипексола к селегилину выбрано из 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 12:1, 14:1, 16:1, 18:1, 20:1, 30:1, 40:1, 50:1 или 100:1; молярное отношение ропинирола к селегилину выбрано из 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 12:1, 14:1, 16:1, 18:1, 20:1, 30:1, 40:1, 50:1 или 100:1; указанное молярное отношение ропинирола к разагилину выбрано из 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 12:1, 14:1, 16:1, 18:1, 20:1, 30:1, 40:1, 50:1 или 100:1.
Согласно наиболее предпочтительному варианту реализации молярное отношение прамипексола к разагилину находится в диапазоне от примерно 1:1 до примерно 10:1. Комбинация фиксированных доз, имеющая указанное молярное соотношение, может содержать от примерно 0.01 мг до примерно 45 мг, предпочтительно от примерно 0.1 мг до примерно 6 мг, прамипексола, и от примерно 0.01 мг до примерно 10 мг, предпочтительно от примерно 0.05 мг до примерно 1 мг, разагилина. Так как молекулярные массы этих двух соединений очень близки, их молярное отношение и весовое отношение одинаковы и являются взаимозаменяемыми в настоящей заявке.
Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит комбинацию фиксированных доз двух активных агентов, причем каждый из указанных активных агентов изготовлен в форме для быстрого высвобождения, контролируемого высвобождения или как для быстрого, так и для контролируемого высвобождения.
Согласно предпочтительным вариантам реализации фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит комбинацию фиксированных доз, выбранную из следующих комбинаций: (i) прамипексол с контролируемым высвобождением и разагилин или селегилин с контролируемым высвобождением; (ii) прамипексол с контролируемым высвобождением и разагилин или селегилин с быстрым высвобождением; (iii) прамипексол с контролируемым и с быстрым высвобождением и разагилин или селегилин с контролируемым и с быстрым высвобождением, причем вплоть до 50% прамипексола и разагилина или селегилина в форме для контролируемого высвобождения; (iv) ропинирол с контролируемым высвобождением и разагилин или селегилин с контролируемым высвобождением; (v) ропинирол с контролируемым высвобождением и разагилин или селегилин с быстрым высвобождением; и (vi) апоморфин с контролируемым высвобождением и комбинация леводопы и карбидопы с контролируемым высвобождением.
В случае лекарственной формы с контролируемым высвобождением доза прамипексола может составлять от примерно 0.01 мг до примерно 45 мг, и доза разагилина может составлять от примерно 0.01 мг до примерно 10 мг, то есть доза прамипексола может составлять 0.01, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40 или 45 мг, тогда как доза разагилина может составлять 0.01, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мг, в соответствии с указанным выше молярным соотношением. В частности, дозы прамипексола и разагилина в комбинации фиксированных доз могут составлять 6 мг прамипексола и 0.6 мг разагилина; 4.5 мг прамипексола и 1.2 мг разагилина; 3 мг прамипексола и 0.3 мг разагилина; 3 мг прамипексола и 1.2 мг разагилина; 2 мг прамипексола и 0.2 мг разагилина; или 1.5 мг прамипексола и 1.2 мг разагилина, но не ограничиваются ими.
Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть выполнена в любой подходящей форме, например в форме таблеток, таких как матричные таблетки, в которых высвобождение растворимого активного вещества контролируется посредством активной диффузии из геля, формирующегося в результате набухания гидрофильного полимера при взаимодействии с растворителем (in vitro) или жидкостью желудочно-кишечного тракта (in vivo). Многие полимеры согласно литературным данным способны формировать указанный гель, например производные целлюлозы, в частности сложные эфиры целлюлозы, такие как гидроксипропилцеллюлоза, гидроксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза или метилгидроксипропилцеллюлоза, а также те из различных торговых марок этих сложных эфиров, которые обладают достаточно высокой вязкостью. Также рассматриваются двухслойные таблетки; при этом указанные таблетки изготовлены из двух или более спрессованных вместе отдельных гранулированных слоев, где каждый отдельный слой лежит поверх другого, причем каждый из указанных отдельных слоев содержит различные активные агенты. Двухслойные таблетки имеют вид «сэндвича», так как видна граница каждого слоя или зоны.
Фармацевтическая композиция также может содержать микроинкапсулированный активный ингредиент, когда мелкие вкрапления активного агента окружены покрытием или оболочкой, формирующими частицы размером от нескольких микрометров до нескольких миллиметров.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложены фармацевтические композиции для перорального введения, которые могут быть представлены в виде твердых порошков, гранул, зерен, драже или пилюль, которые смешивают и помещают в капсулы или пакетики, или прессуют в таблетки в соответствии со стандартными методами. Согласно некоторым предпочтительным вариантам реализации предложена таблетка, в которой два агента находятся, по крайней мере, в двух отдельных слоях, то есть двухслойная или многослойная таблетка, в которой слои, содержащие указанные первый и второй агенты, могут быть разделены промежуточным неактивным слоем, например слоем, содержащим один или несколько разрыхлителей.
Другая предлагаемая лекарственная форма представляет собой систему депо, основанную на биодеградируемых полимерах. По мере того как полимер деградирует, активный ингредиент медленно высвобождается. Наиболее распространенным классом биодеградируемых полимеров являются гидролитически лабильные сложные полиэфиры, полученные из молочной кислоты, гликолевой кислоты или комбинации этих двух молекул. Полимеры, полученные из этих отдельных мономеров, включают поли(D,L-лактид) (PLA), поли(гликолид) (PGA), и сополимер D,L-лактида и гликолида (PLG).
Пригодные формы дозирования фармацевтических композиций включают распадающиеся в ротовой полости системы, включая твердые, полужидкие и жидкие системы, например распадающиеся или растворимые таблетки, мягкие или твердые капсулы, гели, формы дозирования с быстрым высвобождением, формы дозирования с контролируемым высвобождением, капсулы, пленки, пластинки, суппозитории, гранулы, буккальные/мукоадгезивные вкладки, порошки, высушенные сублимацией (лиофилизированные) пластинки, расщепляющиеся слюной в буккальной области/ротовой полости жевательные таблетки и их комбинации, но не ограничиваются ими. Пригодные пленки включают однослойные пленки и пленки с несколькими отдельными слоями, но не ограничиваются ими.
Другая используемая форма дозирования представляет собой систему для длительного введения, такую как липосомальный гель, состоящий, например, из полоксамера 407 и липосомального раствора, содержащего активные агенты.
Два активных агента композиции в составе лекарственной формы в виде пилюль (капсул) могут иметь различные профили высвобождения: один агент с быстрым высвобождением и другой с контролируемым высвобождением, или каждый из агентов как с быстрым, так и с контролируемым высвобождением, в случае чего для 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 или 90% дозы характерно контролируемое высвобождение, а для оставшейся части - быстрое высвобождение.
Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит один или более фармацевтически приемлемых наполнителей. Например, таблетка может включать по меньшей мере один наполнитель, например лактозу, этилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, насыщенную кремнеземом микрокристаллическую целлюлозу; по меньшей мере один разрыхлитель, например поперечно-сшитый поливинилпиролидон; по меньшей мере один связывающий агент, например поливинилпиридон, гидроксипропилметилцеллюлозу; по меньшей мере одно поверхностно-активное вещество, например лаурилсульфат натрия; по меньшей мере один регулятор сыпучести, например коллоидный диокид кремния; и по меньшей мере один лубрикант, например стеарат магния.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения болезни Паркинсона, который включает введение нуждающемуся в этом пациенту фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению, описанной в настоящей заявке.
Настоящее изобретение также относится к применению двух активных агентов, выбранных из соединений, оказывающих либо нейропротекторное, либо симптоматическое действие или как симптоматическое, так и нейропротекторное действие на пациентов, страдающих болезнью Паркинсона, для приготовления фармацевтической композиции для лечения болезни Паркинсона.
Следующие модели болезни Паркинсона известны в данной области и могут использоваться согласно настоящему изобретению. Предполагается, что повреждающее действие свободных радикалов опосредует гибель дофаминергических нейронов при болезни Паркинсона. Считается, что в патогенезе болезни Паркинсона принимают участие окислительный стресс, связанный со старением, дисфункция митохондрий, агрегация белков, окисление дофамина и избыток железа.
Значительный объем биохимических данных патолого-анатомических исследований мозга человека и данных, полученных на животных моделях, указывает на непрерывный процесс окислительного стресса в черном веществе, который может вызывать дегенерацию дофаминергических нейронов. Неизвестно, является ли окислительный стресс первичным или вторичным событием. Несмотря на это, окислительный стресс, вызванный нейротоксинами 6-гидроксидофамином (6-OHDA) и МРТР (N-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридином), используют в животных моделях для исследования процесса нейродегенерации с целью поиска антиоксидантных нейропротекторных лекарственных средств.
Нейротоксин МРТР с помощью фермента МАО-В превращается в мозге в положительно заряженную молекулу МРР+ (1-метил-4-фенилпиридиния), вызывающую болезнь Паркинсона у приматов за счет разрушения определенных дофамин-продуцирующих нейронов в черном веществе. МРР+ препятствует окислительному фосфорилированию в митохондриях, вызывая снижение уровня АТФ и клеточную гибель. Он также подавляет синтез катехоламинов, снижает уровень дофамина и сердечного норадреналина и инактивирует тирозингидроксилазу.
Ранние исследования с использованием 6-OHDA показали, что этот нейротоксин является высоко реакционно-способным веществом, которое с легкостью подвергается самоокислению и окислительному дезаминированию моноаминоксидазой с образованием перекиси водорода и активных форм кислорода (АФК). Подразумевалось, что нейродегенеративное действие указанного нейротоксина вызывается окислительным стрессом. Результатом окислительного стресса является инициация формирования АФК с последующим перекисным окислением липидов мембран клеток мозга. Имеются предположения о возможности формирования в мозге эндогенного токсина, подобного такому нейротоксину, как 6-OHDA, и его участии в процессах нейродегенерации.
Дисфункция митохондрий может быть связана с болезнью Паркинсона. В частности, наблюдается системное снижение активности комплекса I электрон-транспортной цепи митохондрий мозга, мышц и тромбоцитов у пациентов, страдающих болезнью Паркинсона.
Ротенон, распространенный пестицид, является высокоаффинным ингибитором комплекса I электрон-транспортной цепи митохондрий. Ротеноновая модель болезни Паркинсона основывается на зависимости между воздействием пестицида и системной дисфункцией комплекса I в этиологии болезни Паркинсона. Хотя ротенон вызывает повсеместное подавление комплекса I в мозге, у крыс, подвергнутых воздействию ротенона, наблюдались многие проявления болезни Паркинсона, включая селективную дегенерацию нигростриарной (имеющей отношение к эфферентной связи черного вещества с полосатым телом) дофаминергической системы, формирование убиквитин- и синуклеин-положительных включений в черном веществе и двигательные нарушения. Несмотря на то что ротеноновая модель показала потенциальную связь нарушений функции комплекса I с патогенезом болезни Паркинсона, механизмы, по которым системная дисфункция комплекса I вызывает нейротоксичность, неизвестны.
Далее изобретение проиллюстрировано Примерами, не ограничивающими рамки настоящего изобретения.
ПРИМЕРЫ
Материалы
2
(i) Клетки: В описанных ниже экспериментах использовали клетки феохромоцитомы из мозгового слоя надпочечников крысы линии PC-12 (номер CRL-1721 в Американской коллекции типовых культур (American Type Culture Collection, ATCC)) и клетки нейробластомы из костного мозга человека линии SK-N-SH (номер НТВ-11 в ATCC), полученные из ATCC. Клетки линии PC 12 культивировали на среде F12K (Gibco), содержащей 15% лошадиной сыворотки, 2.5% бычьей сыворотки, глютамин и антибиотики. Клетки линии SK-N-SH культивировали на минимальной эссенциальной среде Игла (Biological industries), содержащей 10% бычьей сыворотки, глютамин и антибиотики. Обе клеточные линии культивировали при 37°С и 5% СО.
Методы
5
+
2
Оценка нейропротекторного действия в условиях in vitro. Для эксперимента по оценке нейропротекторного действия клетки высевали (1 или 0.5×10 клеток на лунку) на покрытые поли-L-лизином (Sigma) 96-луночные планшеты для тканевых культур. Через двадцать четыре часа после рассева среду меняли на свежую ростовую среду, содержащую или не содержащую тестируемые лекарственные средства, в присутствии фактора, вызывающего стресс, или в отсутствие его. Цитотоксичность вызывали путем инкубирования либо в среде без сыворотки, либо в присутствии метил-4-фенилпиридина (МРР), 250 мкМ и 125 мкМ для клеток линии РС12 и линии SK соответственно. Лекарственные средства добавляли в различных концентрациях по отдельности и в комбинации за 30 минут до повреждающего фактора на последующие 48 или 72 часа. Степень повреждения нервных клеток оценивали с помощью колориметрического анализа митохондриальной функции с использованием 3-{4,5-диметилтиазол-2-ил}-2,5-дифенилтетразолий бромида (МТТ) (Sigma). МТТ-тест основан на превращении МТТ живыми клетками в кристаллы формазана синего цвета. 5 мг/мл реагента МТТ добавляли в каждую лунку (конечное разведение в каждой лунке 1:10). Клетки инкубировали в течение 1 часа при 37°С и 5% СO. Избыток МТТ удаляли и оставшиеся кристаллы формазана растворяли в 50 мкл ДМСО и проводили количественную оценку на анализаторе Elisa. Формазановый продукт выявляли при длине волны 550 нм при контрольной сравнительной длине волны 620 нм.
Приготовление образцов для анализа ДА и его метаболитов с помощью ВЭЖХ. Образцы ткани полосатого тела гомогенизировали на льду в 500 мкл буфера для гомогенизации (0.1М хлорная кислота, 0.02% ЭДТА и 1% этанол) с использованием набора для гомогенизирования OMNI Tip, OMNI International (средняя скорость, 3×10 секунд с 5-ти секундным интервалами). Гомогенаты обрабатывали ультразвуком в течение 5 минут, затем центрифугировали при 15,000 об/мин при 4°С в течение 15 мин. Супернатанты переносили в чистые пробирки и содержание дофамина анализировали с помощью ВЭЖХ.
Пример 1. Быстрый скрининг in vitro комбинаций лекарственных средств, предотвращающих клеточную гибель
Для оценки действия комбинаций лекарственных средств на клетки, подверженные стрессу, использовали две системы in vitro, в которых на каждый из факторов, вызывающих стресс, приходилось по 4 комбинации лекарственных средств. Соотношение 2 лекарственных средств оптимизировали путем проверки разных соотношений (1:4 и 1:10) и зависимого от времени воздействия. Тестировали следующие комбинации лекарственных средств: (а) прамипексол в комбинации с разагилином; (b) прамипексол в комбинации с селегилином; (с) разагилин в комбинации с ропиниролом; и (d) селегилин в комбинации с ропиниролом.
1.1. Нейропротекторное действие
Целью настоящего эксперимента являлась оценка способности комбинаций лекарственных средств предотвращать гибель клеток in vitro.
(a) Клетки линии PC 12 и линии SK-N-SH инкубировали в присутствии МРР+ в 3-х различных концентрациях (125, 250 и 500 мкМ) или в ростовой среде без сыворотки в течение 48 и 72 часов.
(b) Тестировали различные комбинации лекарственных средств при указанных выше разных соотношениях. Использовали следующие концентрации: ропинирол, 400 мкМ, 200 мкМ, 100 мкМ, 50 мкМ; разагилин, 400 мкМ, 200 мкМ, 100 мкМ, 50 мкМ, 10 мкМ; прамипексол, 400 мкМ, 200 мкМ, 100 мкМ, 50 мкМ; селегилин, 100, 50 мкМ, 10 мкМ, 1 мкМ. Способность предотвращать гибель клеток определяли с помощью МТТ-теста.
(c) Эксперимент повторяли 3 раза для демонстрации воспроизводимости.
В настоящей заявке представлены две модели in vitro для изучения нейропротекторного действия композиций: клетки, инкубированные в среде без сыворотки (Фигура. 1А-С), и клетки, обработанные МРР+(Фигура 2A-D). Оба воздействия вызывали апоптоз в клетках линии PC 12. При обработке клеток наряду с индуктором апоптоза единственным лекарственным средством, предназначенным для лечения болезни Паркинсона, - ропиниролом (Фигура 1А, 1C, 2А, 2В), разагилином (Фигура 1А, 2А, 2С), прамипексолом (Фигура 1 В, 2С) или селегилином (Фигура 1В, 1C, 2В, 2С) - нейропротекторное действие было минимальным. При совместном использовании двух лекарственных средств - одного из семейства АДР, и другого из семейства ингибиторов МАО (Фигура 1-С и Фигура 2А-С) - наблюдали повышенную выживаемость клеток и значительное нейропротекторное действие. Для обработки клеток с вызванным инкубацией в среде без сыворотки апоптозом использовали следующие комбинации: ропинирол, 200 мкМ/разагилин, 50 мкМ; ропинирол, 100 мкМ/разагилин, 10 мкМ (Фигура 1А); прамипексол, 200 мкМ/селегилин, 50 мкМ; прамипексол, 100 мкМ/селегилин, 10 мкМ (Фигура 1В); ропинирол, 200 мкМ/селегилин, 50 мкМ; и ропинирол, 100 мкМ/селегилин, 10 мкМ (Фигура 1C). Для обработки клеток с вызванным МРР+ апоптозом использовали следующие комбинации: ропинирол, 400 мкМ/разагилин, 100 мкМ; ропинирол, 200 мкМ/разагилин, 50 мкМ; ропинирол, 100 мкМ/разагилин, 10 мкМ (Фигура 2А); ропинирол, 400 мкМ/селегилин, 100 мкМ; ропинирол, 200 мкМ/селегилин, 50 мкМ (Фигура 2 В); прамипексол, 400 мкМ/разагилин, 100 мкМ; прамипексол, 400 мкМ/селегилин, 100 мкМ (Фигура 2С); и прамипексол, 200 мкМ/разагилин, 200 мкМ (Фигура 2D). Эти данные показывают преимущества комбинированного лечения.
Пример 2. In vivo определение характеристик комбинаций лекарственных средств на моделях болезни Паркинсона
Тестируемые лекарственные средства вводили мышам (по 10 мышей на группу) в двух разных дозировках за 30 минут до введения МРТР (ежедневно в течение 5 дней). В качестве контроля использовали мышей, которым вводили физиологический раствор (не подвергнутые воздействию мыши). Мышей подвергали воздействию в соответствии со следующим протоколом:
Таблица 1
Лечение подвергнутых воздействию МРТР мышей с помощью лекарственных средств, предназначенных для лечения болезни Паркинсона, по отдельности или в комбинациях
Группа
Лечение
1
Не подверженные воздействию мыши
2
МРТР
3
МРТР + Разагилин, 0.05 мг/кг
4
МРТР + Разагилин, 0.1 мг/кг
5
МРТР + Прамипексол, 0.5 мг/кг
6
МРТР + Прамипексол, 1 мг/кг
7
МРТР + Комбинация 3 и 5
8
МРТР + Комбинация 4 и 6
Эффект лечения оценивали с помощью поведенческих тестов («вращающегося стержня» и «открытого поля») на 5-е и 11-е сутки и путем измерения отношения дофамин/дигидроксифенилуксусная кислота и содержания гомованилиновой кислоты в полосатом теле на 15-е сутки.
2.1. Положительный эффект комбинаций на двигательную активность
На Фигурах 3А-В показана двигательную активность, определенная на основе латентного периода падения с вращающегося стержня (тест Rota-rod, Фигура 3А) и расстояния (тест Rota-rod) (Фигура 3В) на 5-е сутки исследования (5 введений лекарственного препарата).
Видно, что МРТР вызывает примерно 30%-ное снижение двигательной активности, которая восстанавливается как с помощью лекарственных средств при их раздельном введении, так и при введении их комбинаций. Различия в двигательной активности определять сложнее, чем различия в уровне биохимических маркеров, например в уровне дофамина; однако в поведенческих тестах также наблюдается явная тенденция существенных положительных изменений при комбинированном лечении в связи и в соответствии с эффектами уровня дофамина (см. ниже).
Необходимо отметить, что в целом изменения в поведении у людей выявляются в тот момент, когда уровень дофамина снижается почти на 80%-90%. Таким образом, эти изменения очень сложно оценить количественно, и тот факт, что наблюдаются значительные различия, является обнадеживающим в отношении положительного эффекта лечения.
Фигура 3С отображает двигательную активность, определенную с помощью теста «открытого поля» на 11 сутки исследования. 11 сутки соответствуют более долгому сроку лечения (по сравнению с измерениями на 5 сутки), которое может рассматриваться как относительно длительное лечение. Длительное лечение агонистом дофамина часто вызывает значительное увеличение двигательной активности. Такая гиперактивность является предсказуемым ответом на агонист дофамина на моделях хронической недостаточности.
Аналогичное поведение наблюдали на 11 сутки исследования в тесте «открытого поля». Двигательная активность была фактически вдвое выше по сравнению с контрольными не подверженными воздействию МРТР животными.
После введения комбинации гиперактивность полностью исчезала, что указывает на: (1) Нейропротекторную активность комбинации и, в результате, снижение степени повреждения и восстановление нормальной чувствительности дофаминергической системы к агонистам дофамина; (2) Потенциальное восстановление/регулирование ответа на «возмещающую дофаминергическую терапию» и снижение вероятности нарушения активности агониста дофамина при отдельном его использовании.
Необходимо отметить, что на 11 день обработку МРТР прекращали более чем на 6 дней. Это может объяснять меньшие различия между подвергнутыми и не подвергнутыми воздействию МРТР животными - явление, ожидаемое в этой модели. Однако по-прежнему наблюдали значительное снижение действия агониста дофамина. Это дает основания полагать, что сочетание эффекта, наблюдаемого на 5 сутки (то есть восстановления двигательной активности до нормального уровня, что невозможно при использовании каждого лекарственного средства по отдельности), и наблюдаемого на 11 сутки (то есть снижения возможных побочных эффектов), может обеспечить высокие возможности комбинированного лечения как с точки зрения эффективности, так и с точки зрения безопасности.
2.2. Положительный эффект комбинации на уровни дофамина в мозге Как показано на Фигуре 4, обработка МРТР (столбик 2) приводила к снижению уровня дофамина более чем на 70% относительно уровня дофамина у не подвергнутых воздействию мышей (столбик 1). Лечение низкими дозами как разагилина, так и прамипексола, по отдельности (0.05 мг/кг и 0.5 мг/кг соответственно), не вызывало значительного восстановления уровня дофамина (столбики 3, 4), тогда как использование комбинации двух низких доз приводило к значительному увеличению уровня дофамина (столбик 5). Аналогичным образом, лечение высокими дозами каждого компонента по отдельности (0.1 мг/кг разагилина и 1 мг/кг прамипексола), (столбики 6, 7), вызывало значительное, но не достаточное увеличение, тогда как использование комбинации приводило к восстановлению уровня дофамина до 80% от нормального уровня (столбик 8).
Важно отметить, что удвоение дозы каждого лекарственного средства по отдельности (столбики 3 по сравнению с 5 и 4 по сравнению с 6) вызывало очень маленькое усиление действия, однако при добавлении другого лекарственного средства наблюдали значительное отличие, что указывает на то, что усиление эффекта является результатом двух различных механизмов действия лекарственных средств.
Также следует отметить, что для восстановления уровня дофамина у мышей, подвергнутых действию МРТР в экспериментальной модели согласно настоящему изобретению, путем введения только разагилина требуется доза, составляющая по меньшей мере 0.5 мг/кг, тогда как при использовании только прамипексола необходимо вводить дозу больше чем 1 мг/кг (данные не представлены). Таким образом, комбинирование двух соединений позволяет значительно уменьшить требуемые дозы, что является крайне важным, так как снижает вероятность нежелательных побочных эффектов и дает возможность эффективного использования лекарственных средств в течение более длительного периода.
Пример 3. Создание лекарственных форм комбинаций фиксированных доз
Лекарственная форма комбинации фиксированных доз (КФД) создается для обеспечения оптимального профиля высвобождения, который максимизирует комбинированное действие. В частности, в случае комбинации разагилин/прамипексол, например, фармакокинетические свойства и время поувыведения двух компонентов сильно различаются. В то время как разагилин водят один раз в сутки, прамипексол вводят вплоть до 4 раз в сутки, что обусловлено его фармакокинетическими (ФК) и фармакодинамическими (ФД) свойствами. Таким образом, для создания максимального комбинированного эффекта разрабатывают лекарственную форму с двумя профилями высвобождения, которые обуславливают скорость распределения и абсорбции компонентов, оптимальную для создания их комбинированного эффекта. Одним вариантом является лекарственная форма, содержащая разагилин с быстрым высвобождением и прамипексол с замедленным высвобождением. Другим вариантом является форма с двумя профилями замедленного высвобождения, оптимизированными для каждого из компонентов.