Усовершенствование метода пептолиза с целью повышения эффективности трихинеллоскопического контроля

Биохимия, биотехнология и диагностика

УДК 619:616.995.132.6:1-07

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДА ПЕПТОЛИЗА С ЦЕЛЬЮ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТРИХИНЕЛЛОСКОПИЧЕСКОГО

КОНТРОЛЯ

Л.А. ГРЕБЕНКИНА аспирант

Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии

имени К.И. Скрябина

Оптимизирована технология ветеринарно-санитарной экспертизы на трихинеллез на основе модификации системы очистки осадка в процессе переваривания мышечной ткани. Предложена система двойных вертикальных фильтров, позволяющая повысить диагностическую эффективность при экспертизе на трихинеллез туш и мясопродуктов.

Ключевые слова: личинки трихинелл, пептолиз, реактор, фильтр очистки, ветеринарно-санитарная экспертиза.

Основные принципы профилактики трихинеллеза предусматривают разрыв эпизоотологических и эпидемиологических звеньев в циркуляции инвазии: человек - мясо свиней и диких животных; свиньи - другие синантроп-ные животные; синантропные животные - дикие животные. В связи с этим система ветеринарно-санитарного и государственного санитарно-эпидемиологического надзора включает направления, основанные на изучении:

- особенностей распространения трихинеллеза в конкретном регионе;

- структуры нозоареала, очагов, данных мониторинга по каждому очагу на конкретной территории;

- ландшафтно-эпизоотологического и эпидемиологического районирования административной территории;

- особенностей хозяйственно-бытовой деятельности населения и структуры сельскохозяйственного производства региона.

Данный комплекс мер борьбы и профилактики трихинеллеза направлен на обеспечение безопасности мясной продукции для здоровья человека и животных по паразитологическим показателям.

Таким образом, в комплексе противотрихинеллезных мероприятий ведущее место занимает ветеринарно-санитарный контроль, направленный на обеспечение качества и безопасности мяса и мясопродуктов для здоровья человека на всех этапах их производства, закупок, поставок, сертификации и реализации. В соответствии с этим туши домашних (свиньи, лошади), диких (кабаны, медведи, барсуки, морские млекопитающие и др.) животных, а также нутрий, употребляемые в пищу человеком и скармливаемые животным, подлежат обязательной трихинеллоскопии.

Российский паразитологический журнал, 2008, № 4

Кроме того, в целях эпизоотологического мониторинга импортные свинина и мясо других животных (участвующих в циркуляции трихинелл) подлежат контрольному комиссионному исследованию на трихинеллез при ввозе в Россию по схеме:

- мясо в тушах (полутушах) - исследуют остатки ножек диафрагмы или межреберные мышцы от 10 % туш (полутуш);

- мясо в блоках - исследуют методом переваривания пробы среднего образца массой 25 г, формируемого из 10-15 выемок, отобранных из кусков мышц, желательно прилегающих к сухожилиям (фасциям). Исследованиям повергают 1 % блоков [1].

Одним из основных методов трихинеллоскопического контроля является переваривание мышечной ткани в искусственном желудочном соке (пеп-толиз).

Материалы и методы

Исследовали пробы мышечной ткани массой 50 г от незараженных и экспериментально инвазированных личинками трихинелл белых крыс в дозе 500 личинок на голову. Каждый образец содержал до 30000 личинок трихинелл. Переваривание образцов осуществляли в аппарате АВТ-Л6, где в одном из двух реакторов применена система двойных вертикальных фильтров разного диаметра ячей (0,3 и 0,45 мм). Исследование проводили в определенной последовательности [2, 3].

1. Включение электропитания, при котором автоматически происходит разогрев ИЖС в реакторе до температуры 42 оС;

2. Измельченную на мясорубке пробу помещают в стакан с сетчатым дном, расположенным в реакторе;

3. Мешалку фиксируют в рабочем положении и включают кнопку пуска активатора (в зависимости от загрузки реактора, левый - правый, или пары реакторов); начинается автоматический отсчет времени работы электродвигателя с мешалкой;

4. По истечении 25 мин с момента включения таймера электродвигатели автоматически останавливаются. Аппарат переходит в режим отстаивания (10 мин), после окончания которого звучит звуковой сигнал;

5. После отстаивания устанавливают смотровую кювету под сливной кран и производят отбор осадочной жидкости объемом 1,5-2 мл, после чего осуществляют визуальный контроль под оптическим прибором на наличие личинок трихинелл.

Целью настоящей работы было определение возможности максимальной очистки личинок трихинелл, выделяемых в процессе переваривания, от сопутствующих фрагментов мышечной ткани и других включений, а также исключение потерь личинок в процессе прохождения фильтров.

Результаты и обсуждение

В процессе пептолиза образцов мышечной ткани от здоровых крыс (при трехкратной повторности) в реакторах со стандартным фильтром через 25 мин после начала переваривания на фильтре обнаруживали до 2 % не переваренных фрагментов виде фасций, сухожилий и других фрагментов, потенциально блокирующих на определенной площади фильтра прохождение

58_

Российский паразитологический журнал, 2008, № 4

личинок трихинелл в коническую часть реактора. Учитывая достаточно крупный (0,45 мм) размер ячей фильтра, часть не переваренных фрагментов концентрировалась в отстойнике.

При последующем исследовании осадка трихинеллоскопический контроль соответственно осложнялся в связи с необходимостью дополнительного отмывания личинок.

Объем выделенных на заключительном этапе личинок трихинелл составлял 85 % от первоначального.

Анализ результатов пептолиза мышечной ткани в реакторах с двойным фильтром (интервал 30 мм) показал, что частичное загрязнение верхнего фильтра находится на уровне стандартного варианта.

На втором фильтре тонкой очистки (0,3 мм) наблюдали единичные фрагменты мышечной ткани, общая поверхность фильтра была практически свободна для прохождения личинок, которые в чистом виде концентрировались в отстойнике.

Это позволило на заключительном этапе экспертизы полностью исключить дополнительные процедуры, связанные с отмыванием личинок трихинелл. Уровень сохранения личинок в процессе их прохождения через систему двойных фильтров составил 90-92 %.

В целом использование двойных фильтров очистки позволяет ускорить время трихинеллоскопического контроля и повысить его диагностическую эффективность.

В случае исследования туш животных с высоким уровнем инвазии (более 1 личинки на 1 г мышечной ткани) необходимость высокой очистки осадка несколько ниже, чем при экспертизе слабо зараженных туш. При этом роль качественной очистки осадка и полного выделения личинок трихинелл имеет важное диагностическое значение.

Предложенное усовершенствование технологии ветеринарно-санитар-ной экспертизы туш животных на трихинеллез позволяет повысить безопасность мяса и мясопродуктов по паразитологическим показателям и обеспечить эффективную профилактику этого зооноза.

Литература

1. Приказ Главветуправ. МСХ РФ от 14.05.93 г. - №17.

2. Методические указания «Профилактика трихинеллеза». - М., 2000. -С.27-28.

3. Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза животных, утв. Департаментом ветеринарии Минсельхоза России. - М., 1998. - № 13-7-2/1428.

Improvement of the method of peptolize for increase of efficiency of trichinelloscopic control

L.A. Grebenkina

The technology of vet-sanitary examination on trichinellosis is optimized on the basis of updating system of clearing of the deposit during digestion of the muscular tissues. The system of the double vertical filters allowing to increase diagnostic efficiency at examination on trichinellosis extinguish and meat products is offered.

_59

Российский паразитологический журнал, 2008, № 4