Анализ полиморфизмов генов гемостаза и фибринолиза у детей с ишемическим инсультом

Оригинальные статьи

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014

Громыко О.Е.1, Арсеньева Е.Н.1, Нечаева Н.Л.1, Глоба О.В.1, Кузенкова Л.М.1, Асанов А.Ю.2, Пинелис В.Г.1

АНАЛИЗ ПОЛИМОРФИЗМОВ ГЕНОВ ГЕМОСТАЗА И ФИБРИНОЛИЗА у ДЕТЕЙ С ИШЕМИЧЕСКИМ ИНСУЛЬТОМ

'Научный центр здоровья детей, 119991, Москва, Ломоносовский проспект, 2, стр. 1;

2Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова, 119991, Москва, ул. Трубецкая, 8, стр. 2

Ишемический инсульт (ИИ) у детей является гетерогенным заболеванием. Среди многочисленные факторов риска важную роль играют полиморфизмы генов, кодирующих системы гемостаза и фибринолиза. Исследования частот полиморфизмов этих генов у детей с ИИ пока единичны и их роль в развитии заболевания до конца не определена. Цель исследования: установить частоту полиморфизмов генов системы гемостаза и фибринолиза: FGB, FV, FII, PAI-1, GPIIIa и MTHFR у российских детей с ИИ и определить особенности распределения данный: полиморфизмов в патогенезе заболевания.

В исследование включены 32 пациента с диагнозом «последствия ИИ» в возрасте от 10 мес до 17 лет. В группу контроля входили 100 практически здоровых детей, сопоставимым, по полу и возрасту. Анализ полиморфизмов генов гемостаза и фибринолиза проведен методом гибридизации на отечественных олигонуклеотидных биочипах. Определяли также уровень гомоцистеина в крови методом твердофазного энзимсвязанного иммуносор-бентного анализа (ELISA).

Установлено, что среди изученные полиморфизмов только полиморфизм C677TгенаMTHFR достоверно связан с развитием ИИ у детей: при наличии гетерозиготного варианта этого полиморфизма риск развития заболевания повышается в 2,6 раза. Уровень гомоцистеина в крови повышен в 2 раза у носителей гетерозиготного варианта гена MTHFR, у гомозиготных носителей содержание гомоцистеина увеличено почти в 5 раз. Авторы полагают, что сочетание полиморфизмов генов MTHFR c PAI-1, а также сочетание трех исследуемых полиморфизмов и более, возможно, являются факторами риска развития ИИ в детском возрасте. Полученнык данные указывают на целесообразность включения генетического исследования в стандарт диагностики ИИ у детей, что позволит оптимизировать методы диагностики и разработать меры профилактики повторных случаев заболевания у детей.

Ключевые слова: ишемический инсульт; тромбофилия; генетический полиморфизм.

Gromyko О. Е.1, Arseneva E. N.1, Nechaeva N. L.1, Globa O. V.1, Kuzenkova L. М.1, Asanov А. Yu.2, Pinelis V. G.1

ANALYSIS OF GENE POLYMORPHISMS OF HEMOSTASIS AND FIBRINOLYSIS IN CHILDREN WITH ISCHEMIC

STROKE

1 Scientific Centre of Child Healthcare, 2, building 1, Lomonosov avenue, Moscow, Russian Federation, 119991 2I. M. Sechenov First Moscow State Medical University, 8-2, Trubetskaya Str., Moscow, Russian Federation, 119991

Ischemic stroke (IS) in children is a heterogeneous disease. Among numerous risk factors polymorphisms of genes encoding the system ofhemostasis andfibrinolysis play an important role. The studies of the frequency ofpolymorphisms of these genes in Is children are yet solitary , and their role in the development of the disease has not been determined completely.

Aim of the study The purpose of the study. To determine the frequency of gene polymorphisms of the system of hemostasis andfibrinolysis: FGB, FV, FII, PAI-1, GPIIIa and MTHFR in Russian children with IS and to define the features of the distribution of these polymorphisms in the pathogenesis of the disease.

In the study there were included 32 patients with a diagnosis of "the consequences of IS" at the age from 10 months up to 17years. The control group consisted of 100 healthy children matched by sex and age.

Analysis of gene olymorphisms of hemostasis and fibrinolysis was performed with the use of method of hybridization with domestic oligonucleotide microarray. The blood level of homocysteine was also determined by solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Among the studied polymorphisms C677T just the MTHFR gene polymorphism was established to be significantly associated with the development of IS in children: in the presence of a heterozygous variant of this polymorphism the risk of developing the disease increases by 2.6 times. The homocysteine blood level was twofold higher in heterozygous carriers of MTHFR gene variant, in homozygous carriers the homocysteine content has been increased by almost 5 times. The authors believe that the combination ofpolymorphisms of MTHFR with PAI-1, as well as the combination of three or more studied polymorphisms probably are risk factors for IS in childhood. The obtained data point to the advisability of incorporating of genetic research into the standardfor the diagnostics of IS in children that will permit to optimize diagnostic methods and to develop measures for the prevention of recurrent cases of the disease in children.

Key words: ischemic stroke, thrombophilia, genetic polymorphism.

Для корреспонденции (correspondence to): Пинелис Всеволод Григорьевич, гл. науч. сотр. лаб. молекулярной генетики и клеточной биологии НИИ педиатрии ФГБНУ НЦЗД, e-mail: pinelis@mail.ru

о данным ВОЗ (2014), в странах со средним и высоким уровнем дохода инсульт и другие формы сосудистой патологии занимают одно из ведущих мест в общей структуре заболеваемости и уровню смертности от них. Ишемический инсульт -ИИ (или острое нарушение мозгового кровообращения (ОНМК) по ишемическому типу) у детей может быть обусловлен различными причинами, включая в себя болезни системы крови, коагулопатии, васку-лопатии, болезни сердца, разрывы аневризм, арте-риовенозные мальформации, антифосфолипидный синдром, отдаленные последствия родовых травм и т. д. [1]. Распространенность инсульта у детей существенно ниже, чем у взрослых (0,2-7,9 на 100 000 детей в мире и 0, 79 на 100 000 детей в Москве в год). Тем не менее от 20 до 50% случаев данного заболевания у детей остаются этиологически невыясненными [2-4]. При этом уровень инвалидизации и смертности детей от ИИ достаточно высок. Так, число смертельных исходов инсульта у детей варьирует от 7 до 40%, при этом оно выше при геморрагических инсультах (до 40%), чем при ишемических (8-16%) [5, 6].

Согласно современным представлениям, ИИ является кульминацией взаимодействия генетических факторов риска и окружающей среды [7]. Эта форма патологии может быть непосредственно обусловлена нарушениями церебрального ангиобарьеронейроге-неза, апоптоза, эндотелиальной дисфункцией и другими повреждениями [8-11]. Со времени открытия маркеров системы свертывания и фибринолиза исследователи активно изучают участие этих факторов в развитии ИИ и, как полагают, может быть одним из клинических проявлений тромбофилии [12, 13].

С развитием генетического подхода к изучению этиологии и патогенеза многих заболеваний, в том числе ИИ, большое значение стали придавать врожденным или наследственным нарушениям в процессах хранения, передачи и реализации генетической информации. В частности, известно, что наследственная тромбофилия обусловлена аллель-ным полиморфизмом генов, кодирующих звенья системы гемостаза в организме человека - коагуляцию, антикоагуляцию и фибринолиз. Наиболее частыми причинами тромбофилии являются дефицит антитромбина III, протеина S и протеина С, а также открытая в 1993 г. лейденовская мутация (Leiden, G1691A гена FV) или резистентность к активированному протеину С. Помимо этого выделяют еще ряд полиморфных вариантов генов, ассоциированных с наследственной тромбофилией, таких как полиморфизмы G20210A гена протромбина (фактор II, FII), С677Т гена метиленгидрофолатредуктазы (MTHFR) [14]. Исследования частот этих мутаций/ полиморфизмов у детей с ИИ пока единичны и роль этих факторов в развитии заболевания еще не определена [5, 7, 12-16].

В связи с этим целью настоящей работы явилось определение частоты полиморфизмов генов гемостаза и фибринолиза: FGB, FV FII, PAI-1, GPIIIa и MTHFR у российских детей с ИИ и выявление особенностей распределения данных полиморфизмов в патогенезе заболевания.

Материалы и методы

В исследование включены 32 пациента с диагнозом ИИ по ишемическому типу в возрасте от 10 мес до 17 лет (средний возраст 5 лет), из них 18 (56,2%) мальчиков, 14 (43,8%) девочек, находившихся на стационарном лечении. Всем детям проводилось комплексное обследование с использованием клинических, инструментальных и лабораторных методы. Критерием отбора больных в основную группу являлось наличие в анамнезе доказанного эпизода ИИ. Референтную группу составили 100 условно здоровых детей, сопоставимых по полу и возрасту с основной группой. Образцы геномной ДНК выделяли из лейкоцитарной фракции венозной крови с помощью набора реагентов DNeasy Blood (Qiagen, США) в соответствии с инструкцией. Анализ полиморфизмов генов проведен методом гибридизации на олигону-клеотидных биочипах (Биочип ИМБ, Россия). Были исследованы частоты шести наиболее значимых полиморфизмов и мутаций генов системы гемостаза: G-455A гена FGB, G20210A гена FII, G1691A гена FV, 4G/5G гена PAI-1, T1565C гена GPIIIa и C677T гена MTHFR.

Кроме того, у пациентов с диагнозом ИИ определяли уровень гомоцистеина в крови методом твердофазного энзимсвязанного иммуносорбентного анализа с использованием тест-системы (Axis Homocystein EIA, Великобритания).

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью пакета программ Statistica 6.0 (StatSоft, Inc). Соответствие распределения аллелей и генотипов равновесию Харди-Вайнберга, оценку степени различий в частоте встречаемости аллелей, генотипов и межгенных комбинаций между группами обследуемых проводили с использованием %2 и точного критерия Фишера. Статистически значимым считался результат при p < 0,05.

Результаты и обсуждение

У всех больных с последствиями перенесенного ОНМК по ишемическому типу проведена оценка частоты встречаемости факторов риска развития ИИ. Среди них более распространенными были сочетание различных факторов риска (62%), острое респираторное заболевание в течение 2 нед до развития ИИ (26%), отягощенная наследственность (44%), указание на удар головой при падении с небольшой высоты без клинических проявлений сотрясения головного мозга (38%), артериальная гипертензия (14%), оперативное вмешательство в течение 2 нед до развития ИИ (12%), мигрень (10%) и ожирение (8%). У 22% детей не установлено ни одного фактора риска. В клинической картине острого периода ИИ отмечалась сочетанная неврологическая симптоматика, проявляющаяся центральными гемипарезами и тетрапа-резами, общемозговой симптоматикой и др.

Молекулярно-генетическое тестирование на наличие шести значимых полиморфных вариантов генов системы гемостаза показало, что распределение частот генотипов в контрольной группе и в группе боль-

Частоты генотипов и аллелей полиморфных маркеров генов тромбофилии у больных с ИИ и группы контроля

Ген/полиморфизм Генотип/ аллель Частота генотипов и аллелей в группах, % Р

пациенты с ИИ

FG GG 16 (50,0) 56 (56,0) 0,95

-4550/А GA 15

AA 1

G 47

A 17

FII GG 31 (96,9) 96 (96,0) 0,84

G20210A GA 1

AA 0

G 63

A 1

FV GG 30 (93,8) 99 (99,0) 0,09

G1691A GA 2

AA 0

G 62

A 2

ТТ 21

GPШa ТС 9 (28,1) 30 (32,0) 0,32

Т1565С СС 2

Т 51

С 13

5G/5G 2

5G/4G 21

PAI-1 4G/4G 9 (28,1) 29 (29,0) 0,13

-675 5G/4G 5G 25

4G 39

ТТ 14

МТНВЯ ТС 15 (46,9)* 25 (25,0) 0,02

С677Т СС 3

С 43

Т 21

Примечание. п - число больных, в скобках указаны частоты генотипов и аллелей в группах в процентах.

* - достоверность различий по частоте генотипаМТНЕК С677Т между группой больных с ИИ и контрольной группой (х2 = 5,1, = 1, р = 0,03, ОЯ = 2,65, 95% С1 1,16-6,07).

** - достоверность различий по частоте аллеля 677Т в гене МТНЕЯ между группой больных с ИИ и контрольной группой (х2 = 5,79 df = 1, р = 0,02, ОЯ = 2,15, 95% С1 1,14-4,05).

ных соответствует равновесию Харди-Вайнберга для всех исследуемых генов (см. таблицу). Наличие одного полиморфного варианта генов и более, ассоциированных с наследственной тромбофилией, выявлено у 100% детей с ИИ и у 96% детей из группы контроля. Наиболее часто встречающимся полимор-

физмом в обеих группах был полиморфизм 5G/4G гена РЛ1-Г. он выявлен у 93,7% больных с ИИ (65,6% в гетерозиготной форме и 28,1% в гомозиготной) и у 80% детей контрольной группы (51% - гетерозиготы и 29% - гомозиготы). Различия не были статистически значимыми, а наличие данных полиморфизмов не повышало риск развития ИИ. Вторым по частоте из шести исследуемых нами был полиморфизм 677С/Т гена МГН¥Я. Преобладающим в группе детей с ИИ был гетерозиготный генотип СТ (46,9%), в группе контроля его частота составила 25%, при этом различия частот этих генотипов у больных с ИИ и в контроле были достоверные (X2 = 6,86 = 2; р < 0,05). Выявлено 9,4% гомозиготных носителей данного полиморфизма в группе больных с ИИ и 6% в группе контроля. Найдены достоверные различия частот аллелей полиморфного варианта этого гена (%2 = 5,73, df = 1; р < 0,05). Оценка отношения шансов показала, что при наличии гетерозиготного варианта риск развития ИИ повышается в 2,6 раза.

Гомозиготный генотип СС гена GPIIIa обнаружен только в группе больных ИИ с частотой 6,3%, тогда как гетерозиготный вариант ТС встречался в группе контроля даже чаще, чем у больных (28,1 и 32% соответственно).

Самым редким полиморфизмом оказался G20210A гена FII: 3,1% детей с ИИ и 4% в группе контроля были гетерозиготными носителями этого варианта, при этом ни одного гомозиготного носителя не обнаружено.

Гетерозиготный вариант гена FV выявлен у 6,3% пациентов с ИИ и у 1% детей контрольной группы, однако эти различия оказались недостоверными (р > 0,05).

Проведено сравнение сочетаний носитель-ства шести исследуемых полиморфизмов у детей с ИИ и в контрольной группе (см. рисунок). Выявлено достоверно большее число пациентов с диагнозом ИИ, носителей сочетания MTНFЯ с РА1-1, по сравнению с контрольной группой (53,1 и 23% соответственно; р=0,007). Сочетание трех исследуемых нами полиморфных генотипов и более наблюдалось в 2,8 раза чаще в группе больных ИИ по сравнению с контролем (50 и 22% соответственно; р = 0,005).

Таким образом, мы провели анализ значимых полиморфизмов генов FGB, FII, FV, GPIIIA, РА1-1 и MTНFЯ у детей с ИИ. Полученные данные свидетельствуют о том, что среди исследуемых полиморфизмов только полиморфизм С677Т (замена цитозина на тимин в нуклеотид-ной позиции) гена MTНFЯ достоверно связан с развитием ИИ у детей и при наличии гетерозиготного варианта этого полиморфизма риск развития ИИ повышается в 2,6 раза, что согласуется с данными других авторов [17, 18].

Анализ изменений уровня гомоцистеина в крови у наблюдаемых нами пациентов выявил его достоверное повышение относительно группы контроля (р=0,02). Так, у гомозиготных носителей полимор-

хотя в группе пациентов с ИИ гетерозиготный вариант Leiden G1691A гена F5 встречался в 6 раз чаще, чем в группе контроля (6,3 и 1%, соответственно; р>0,05).

Полиморфизм G20210A гена FII, при котором происходит нуклеотидная замена аденина на гуанин в положении 20210 нуклеотидной последовательности гена, встречается в популяции в 1-4% случаев, и по данным метаанализа наличие этого варианта повышает риск развития инсульта в 1,44 раза [23]. В нашей работе частота встречаемости данного варианта как у больных ИИ, так и у здоровых детей соответствовала верхнему уровню распространенности этого полиморфизма в Европе, а достоверных различий по частоте встречаемости между двумя обследуемыми группами не выявлено (3,1 и 4% соответственно; p>0,05).

В настоящей работе также были получены данные о частоте встречаемости полиморфизма G/A в положении -455 промоторного региона ß-цепи фибриногена (фактора I, FGB). Распространенность такого полиморфизма составляет от 5 до 10% в общей популяции. Известно, что наличие аллеля -455А приводит к повышению экспрессии гена в 1,2-1,5 раза, как следствие - к повышенному уровню фибриногена в крови на 10-30% и повышенному риску развития ИИ у взрослых [24, 25]. По нашим данным, доля гомозиготных носителей полиморфизма -455 G/A у больных с ИИ и в контрольной группе составила 3,1 и 10% соответственно, что совпадает с общепопуляционным распределением, при этом достоверных различий частоты этого полиморфизма между группой больных ИИ и контролем не обнаружено (р > 0,05).

Ген тромбоцитарного рецептора GPIIIa кодирует гликопротеин ITGB3, один из компонентов свертывающей системы крови (тромботическое звено гемостаза). Данный белок вместе с гликопротеином IIb составляют рецепторный комплекс, который отвечает за взаимодействие тромбоцитов, на поверхности которых он расположен, с фибриногеном плазмы крови, что приводит к агрегации тромбоцитов и формированию тромба. Полиморфизм T1565C гена GPIIIa характеризуется заменой лейцина на пролин в позиции 33 аминокислотной последовательности GPIIIa. Изменение структуры белка в свою очередь приводит к тому, что тромбоциты приобретают повышенную склонность к агрегации, поэтому носители полиморфизма T1565C имеют повышенный риск тромбообразования [26]. Носительство аллеля 1565С гена GPIIIa выявляется в различных европейских популяциях с частотой 1535%, а его роль в развитии инсульта остается противоречивой [27, 28]. В нашем исследовании среди детей с ИИ было выявлено 2 (6,3%) гомозиготных носителя полиморфизма T1565C и 9 (28,1%) гетерозиготных носителей. Среди лиц контрольной группы было обнаружено 16 (32,0%) гетерозиготных носителей и ни одного случая гомозиготного носительства. Достоверных различий в частотах этого полиморфизма между группой больных ИИ и группой контроля обнаружено не было. По данным литературы, определение генетических детерминант фибринолитического потенциала является важным шагом при установлении молекуляр-

%

60-, 5040302010-

-1................1

С677Т MTHFR+4G/5G PAI-1 3 и более

Больные с ИИ

Контроль

Частота ассоциаций полиморфизмов в генах тромбофилии у детей с ишемическим инсультом (ИИ) и в контрольной группе (в %). * -р < 0,05.

физма 677С/Т гена MTHFR содержание гомоцистеи-на в крови повышалось в среднем до 28.5 мкмоль/л, у детей с гетерозиготным вариантом средний уровень гомоцистеина был 10,8 мкмоль/л, в то время как у детей из группы контроля эта величина составила 6,2 мкмоль/л.

Повышение уровня гомоцистеина в крови является доказанным фактором риска ИИ. Известно, что полиморфизмы гена MTHFR могут привести к развитию гипергомоцистеинемии, в частности полиморфизм С677Т является генетической детерминантой гипер-гомоцистеинемии, поскольку приводит к снижению активности протеина и накоплению гомоцистеина [19, 20]. Действительно, как показали наши исследования, уровень гомоцистеина в крови у больных ИИ, носителей гетерозиготного варианта, был повышен в 2 раза, тогда как у гомозиготных носителей содержание гомоцистеина было увеличено почти в 5 раз.

В работах, посвященных молекулярно-генетичес-ким исследованиям в области ассоциаций генов-кандидатов к развитию ИИ, выделяют дополнительно еще два полиморфных варианта, ассоциированных с предрасположенностью к инсульту - фактор V Leiden G1691A и полиморфизм G20210A гена FII [6, 7].

Мутация фактора V Leiden является наиболее изученной из всех полиморфизмов, ассоциированных с риском венозных тромбозов и тромбоэмболий. Замена гуанина на аденина в гене фактора V (G1691A) приводит к замене аргинина в позиции 506 белка на глутамин. Данный вариант встречается в 2-7% случаев у лиц в европейских популяциях и у 20,2% детей, перенесших ИИ [21]. По данным метаанализа носительство лейденской мутации повышает риск развития инсульта в 1,33 раза (95% С1 1,12-1,58; p = 0,03) [17, 20]. При этом есть исследования, опровергающие роль фактора V Leiden в развитии инсульта у детей [22]. В настоящей работе нам не удалось выявить достоверных различий между больными ИИ и группой контроля по частоте данного полиморфизма,

—

ных основ тромбофилии. В последнее время большое внимание уделяется именно роли ингибитора активатора плазминогена I типа (PAI-1). Частота гомозиготного генотипа 4G/4G гена PAI-1 в популяции СевероЗападного региона России достигает 30-32% [29]. По данным нашего исследования, частоты полиморфизма в группе больных и группе контроля не имели достоверных различий (28,1 и 29% соответственно), что совпадает с результатами ранее проведенных исследований [30-32].

Исходя из полученных данных, можно полагать, что полиморфизмы генов ферментов фибринолиза (FGB), тромбоцитарного гликопротеина (GPIIIa) и ингибитора активатора плазминогена (PAI-1) у детей не ассоциированы с риском развития ИИ. Возможное значение исследованных полиморфизмов как самостоятельных факторов риска возникновения ИИ у детей остается неопределенным, поскольку достоверных различий в частотах аллелей и генотипов полиморфизмов между группой пациентов и контролем не установлено. Особое внимание мы уделили сочетаниям изучаемых полиморфизмов или мульти-генной форме тромбофилии (два полиморфизма и более), поскольку наличие у пациента подобных состояний, как правило, сопровождается более тяжелой клинической картиной, еще более повышая риски тромбоэмболических и других осложнений [24, 33, 34]. В результате исследования в группе больных с ИИ выявлено достоверно большее число носителей сочетания MTHFR c PAI-1 по сравнению с контрольной группой (53,3 и 22% соответственно; р < 0,05). Помимо этого, в группе детей с ИИ обнаружено в 2,8 раза больше носителей сочетания трех и более полиморфизмов генов, ассоциированных с наследственной тромбофилией (р < 0,05).

Таким образом, полиморфизм С677Т гена MTHFR может рассматриваться как самостоятельный фактор риска развития ИИ у детей. Сочетание MTHFR c PAI-1, а также сочетание трех исследуемых полиморфизмов и более также являются факторами риска развития ИИ в детском возрасте. В связи с этим представляется целесообразным включение генетического исследования на врожденную тромбофилию в стандарт диагностики ИИ у детей. Это позволит оптимизировать методы диагностики и ранней терапии ИИ, а в дальнейшем разработать меры профилактики повторных случаев заболевания у детей, перенесших ИИ.

литература

1. Numis A.L., Fox C.K. Arterial ischemic stroke in children: risk factors and etiologies. Curr. Neurol. Neurosci. Rep. 2014; 14(1): 422.

2. Баранов А.А., Альбицкий В.Ю., Иванова А.А., Терлецкая Р.Н., Косова тС.А. Тенденции заболеваемости и состояние здоровья детского населения Российской Федерации. Российский педиатрический журнал. 2012; 6: 4-9.

3. Lynch J.K., Hirtz D.G., DeVeber G., Nelson K.B. Report of the National Institute of Neurological Disorders and Stroke workshop on perinatal and childhood stroke. Pediatrics. 2002; 109(1): 116-23.

4. Зыков В.П., Васильев С.А., Комарова И.Б., Чучин М.Ю., Ушакова Л.В. Ишемический инсульт в детском возрасте. Лечебное дело. 2009;2; 11-20.

5. Fullerton H.J., Chetkovich D.M., Wu Y.W., Smith W.S., Johnston S.C. Deaths from stroke in US children, 1979 to 1998. Neurology. 2002; 59(1): 34-9.

6. deVeber G. the Canadian Paediatric Ischemic Stroke Study Group.

Canadian Paediatric Ischemic Stroke Registry: analysis of children with arterial ischemic stroke. Ann Neurol. 2000; 48: 526.

7. Kamphuisen P.W., Rosendaal F.R. Thrombophilia screening: a matter of debate. Neth. J. Med 2004; 62(6): 180-7.

8. Шакина Л.Д., Смирнов И.Е. Нарушения церебрального ангиоба-рьеронейрогенеза у детей с последствиями гипоксической перинатальной энцефалопатии. Молекулярная медицина. 2011; 6: 3-14.

9. Смирнов И.Е., Ровенская Ю.В., Зайниддинова Р.С., Кучеренко А.Г. Динамика факторов апоптоза при перинатальных поражениях центральной нервной системы у детей первого года жизни. Российский педиатрический журнал. 2011; 6: 3-8.

10. Смирнов И.Е., Нечаева Н.Л., Зайниддинова Р.С., Шакина Л.Д. Нарушения мозгового кровообращения у детей раннего возраста: биомаркеры повреждений. Российский педиатрический журнал. 2012; 6: 30-8.

11. Смирнов И.Е., Нечаева Н.Л., Кучеренко А.Г., Кузенкова Л.М. Факторы риска и маркеры эндотелиальной дисфункции у детей, перенесших острое нарушение мозгового кровообращения. Российский педиатрический журнал. 2014; 1: 9-14.

12. Kopyta I., Sarecka-Hujar В., Sordyl J., Sordyl R. The role of genetic risk factors in arterial ischemic stroke in pediatric and adult patients: a critical review. Mol Biol Rep. 2014; 41(7): 4241-51 8.

13. Львова О.А., Гусев В.В., Кузнецов Н.Н., Баранов Д.А., Вороши-лина Е.С., Партылова Е.А. Наследственные прокоагулянтные и протромботические нарушения как ведущий этиологический фактор ишемических инсультов у детей раннего возраста. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. Инсульт. 2013; 9: 13-20.

14. Yang J.Y., Chan A.K. Pediatric thrombophilia. Pediatr. Clin. N. Am. 2013; 60(6): 1443-62.

15. Zadro R., Herak D.C.. Inherited prothrombotic risk factors in children with first ischemic stroke. Biochem. Med. (Zagreb). 2012; 22(3): 298-310.

16. Kenet G., Sadetzki S., Murad H., Martinowitz U., Rosenberg N., Gitel S et al. Factor V Leiden and antiphospholipid antibodies are significant risk factors for ischemic stroke in children. Stroke. 2000; 31(6): 1283-8.

17. Жданова Л.В., Щербакова М.Ю., Решетняк Г.М., Патрушев Л.И., Александрова Е.Н., Алдаров А.Б. Причины ишемических инсультов у детей и подростков. Педиатрия. 2011; 90(5): 88-90.

18. Zak I., Sarecka-Hujar В., Kopyta I., Emich-Widera E., Marszal E., Wendorff J., Jachowicz-Jeszka J. The T allele of the 677C>T polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase gene is associated with an increased risk of ischemic stroke in Polish children. J. Child Neurol. 2009; 24(10): 1262-7.

19. Djordjevic V., Stankovic M., Brankovic-Sreckovic V., Rakicevic L., Damnjanovic T., Antonijevic N., Radojkovic D. Prothrombotic genetic risk factors in stroke: a possible different role in pediat-ric and adult patients. Clin. Appl. Thromb. Hemost. 2012; 18(6): 658-61.

20. Akar N., Akar E., Ozel D., Deda G., Sipahi T. Common mutations at the homocysteine metabolism pathway and pediatric stroke. Thromb Res. 2001; 102(2): 115-20.

21. Holmes M.V. et al. Effect modification by population dietary folate on the association between MTHFR genotype, homocysteine, and stroke risk: a meta-analysis of genetic studies and randomised trials. Lancet. 2011; 378(9791): 584-94

22. Zenz W, Bodo Z., Plotho J., Streif W., Male C., Bernert G. et al. Factor V Leiden and prothrombin gene G 20210 A variant in children with ischemic stroke. Thromb. Haemost. 1998; 80(5): 763-6.

23. Kenet G. et al. Impact of thrombophilia on risk of arterial ischemic stroke or cerebral sinovenous thrombosis in neonates and children: a systematic review and meta-analysis of observational studies. Circulation. 2010; 121(16): 1838-47.

24. Casas J.P., Hingorani A.D., Bautista L.E., Sharma P. Meta-analysis of genetic studies in ischemic stroke: thirty-two genes involving approximately 18,000 cases and 58,000 controls. Arch. Neurol. 2004; 61(11): 1652-61.

25. Martiskainen M., Pohjasvaara T., Mikkelsson J., Mantyla R., Kunnas T., Laippala P. et al. Fibrinogen gene promoter -455 A allele as a risk factor for lacunar stroke. Stroke. 2003; 34(4): 886-91.

26. Liu Y., Pan J., Wang S., Li X., Huang Y. Beta-fibrinogen gene -455A/G polymorphism and plasma fibrinogen level in Chinese stroke patients. Chin. Med. J. (Engl.). 2002; 115(2): 214-6.

27. Гусина А.А. Генетический полиморфизм гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов как фактор риска тромбообразования. Кардиология в Беларуси. 2009; 3(04): 17-24.

28. Christopher N. F., Benjamin H. E., Ferro A. The PlA1/A2 polymorphism of glycoprotein iiia as a risk factor for stroke: a systematic review and meta-analysis. PLoS One. 2014; 9 (7).

29. Wagner K.R., Giles W.H., Johnson C.J., Ou C.Y., Bray P.F., Gold-schmidt-Clermont P.J. et al. Platelet glycoprotein receptor IIIa poly-

morphism P1A2 and ischemic stroke risk: the stroke prevention in young women study. Stroke. 1998; 29(3): 581-5.

30. Reiner A.P., Kumar P.N., Schwartz S.M., Longstreth W.T. Jr., Pearce R.M., Rosendaal F.R. et al. Genetic variants of platelet glycoprotein receptors and risk of stroke in young women. Stroke. 2000; 31(7): 1628-33.

31. Папаян Л.П. Новое в представлении процесса свертывания крови. Трансфузиология. 2004; 5(1): 7-22.

32. Nowak-Gottl U., Strater R., Kosch A., von Eckardstein A., Schobess R., Luigs P. et al. The plasminogen activator inhibitor (PAI)-1 promoter 4G/4G genotype is not associated with ischemic stroke in a population of German children. Childhood Stroke Study Group. Eur J Haematol. 2001; 66(1): 57-62.

33. Catto A.J., Carter A.M., Stickland M., Bamford J.M., Davies J.A., Grant P. J. Plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) 4G/5G promoter polymorphism and levels in subjects with cerebrovascular disease. Thromb Haemost. 1997; 77(4): 730-4.

34. Баранов А.А., Намазова-Баранова Л.С., Ильин А.Г., Булгакова В.А., Антонова Е.В., Смирнов И.Е. Научные исследования в педиатрии: направления, достижения, перспективы. Российский педиатрический журнал. 2013; 5: 4-14.

REFERENCES

1. Numis A.L., Fox C.K. Arterial ischemic stroke in children: risk factors and etiologies. Curr. Neurol. Neurosci. Rep. 2014; 14(1): 422.

2. Baranov А.А., Al'bitskiy V. Yu., Ivanova A.A., Terletskaya R.N., Kosova S.A. Trends and the health status of the child population of the Russian Federation. Rossiyskiy pediatricheskiy zhurnal. 2012; 6: 4-9.

3. Lynch J.K., Hirtz D.G., DeVeber G., Nelson K.B. Report of the National Institute of Neurological Disorders and Stroke workshop on perinatal and childhood stroke. Pediatrics. 2002; 109(1): 116-23.

4. Zykov V.P., Vasil'ev C.A., Komarova I.B., Chuchin M.Yu., Ushakova L.V. Ischemic stroke in children. Lechebnoe delo. 2009;2;11-20.

5. Fullerton H.J., Chetkovich D.M., Wu Y.W., Smith W.S., Johnston S.C. Deaths from stroke in US children, 1979 to 1998. Neurology. 2002; 59(1): 34-9.

6. deVeber G. the Canadian Paediatric Ischemic Stroke Study Group. Canadian Paediatric Ischemic Stroke Registry: analysis of children with arterial ischemic stroke. Ann Neurol. 2000; 48: 526.

7. Kamphuisen P.W., Rosendaal F.R. Thrombophilia screening: a matter of debate. Neth. J. Med. 2004; 62(6): 180-7.

8. Shakina L.D., Smirnov I.E. Violations of cerebral аngiobarrieroneurogenesis of children with consequences of perinatal hypoxic encephalopathy. Molekulyarnaya meditsyna. 2011; 6: 3-14.

9. Smirnov I.E., Rovenskaya Yu. V., Zayniddinova R.S., Kucherenko A.G. Dynamics of apoptosis in perinatal lesions of the central nervous system in children of the first year of life. Rossiyskiy pediatricheskiy zhurnal. 2011; 6: 3-8.

10. Smirnov I.E., Nechaeva N.L., Zayniddinova R.S., Shakina L.D. Violations of cerebral circulation in children of early age: biomarkers damage. Rossiyskiy pediatricheskiy zhurnal. 2012; 6: 30-8.

11. Smirnov I.E., Nechaeva N.L., Kucherenko A.G., Kuzenkova L.M. Risk factors and markers of endothelial dysfunction in children who have had an acute violation of cerebral circulation. Rossiyskiy pediatricheskiy zhurnal. 2014; 1: 9-14.

12. Kopyta I., Sarecka-Hujar B., Sordyl J., Sordyl R. The role of genetic risk factors in arterial ischemic stroke in pediatric and adult patients: a critical review. Mol Biol Rep. 2014; 41(7): 4241-518.

13. L'vova O.A., Gusev V.V., Kuznetsov N.N., Baranov D.A., Voroshilina E.S., Partylova E.A. The inherited procoagulant and prothrombotic condition as the main etiological factor for arterial ischemic stroke in infant. Zhurnal nevrologii i psikhiatrii im. S.S. Korsakova. Insul't. 2013; 92): 13-20.

14. Yang J.Y., Chan A.K. Pediatric thrombophilia. Pediatr. Clin. N. Am. 2013; 60(6): 1443-62.

15. Zadro R., Herak D.C.. Inherited prothrombotic risk factors in children with first ischemic stroke. Biochem. Med. (Zagreb). 2012; 22(3): 298-310.

16. Kenet G., Sadetzki S., Murad H., Martinowitz U., Rosenberg N., Gitel S et al. Factor V Leiden and antiphospholipid antibodies are significant risk factors for ischemic stroke in children. Stroke. 2000; 31(6): 1283-8.

17. Zhdanova L.V., Shherbakova M.Yu., Reshetnyak G.M., Patrushev L.I., Alexandrova E.N., Aldarov A.B. Causes of the ischemic stroke in children. Pediatriya. 2011; 90

18. Zak I., Sarecka-Hujar B., Kopyta I., Emich-Widera E., Marszal E., Wendorff J., Jachowicz-Jeszka J. The T allele of the 677C>T polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase gene is associated with an increased risk of ischemic stroke in Polish children. J Child Neurol. 2009; 24(10): 1262-7.

19. Djordjevic V., Stankovic M., Brankovic-Sreckovic V., Rakicevic L., Damnjanovic T., Antonijevic N., Radojkovic D. Prothrombotic genetic risk factors in stroke: a possible different role in pediatric and adult patients. Clin. Appl. Thromb. Hemost. 2012; 18(6): 658-61.

20. Akar N., Akar E., Ozel D., Deda G., Sipahi T. Common mutations at the homocysteine metabolism pathway and pediatric stroke. Thromb Res. 2001; 102(2): 115-20.

21. Holmes M.V. et al. Effect modification by population dietary folate on the association between MTHFR genotype, homocysteine, and stroke risk: a meta-analysis of genetic studies and randomised trials. Lancet. 2011; 378(9791): 584-94

22. Zenz W, Bodo Z., Plotho J., Streif W., Male C., Bernert G. et al. Factor V Leiden and prothrombin gene G 20210 A variant in children with ischemic stroke. Thromb. Haemost. 1998; 80(5): 763-6.

23. Kenet G. et al. Impact of thrombophilia on risk of arterial ischemic stroke or cerebral sinovenous thrombosis in neonates and children: a systematic review and meta-analysis of observational studies. Circulation. 2010; 121(16): 1838-47.

24. Casas J.P., Hingorani A.D., Bautista L.E., Sharma P. Meta-analysis of genetic studies in ischemic stroke: thirty-two genes involving approximately 18,000 cases and 58,000 controls. Arch. Neurol. 2004; 61(11): 1652-61.

25. Martiskainen M., Pohjasvaara T., Mikkelsson J., Mantyla R., Kunnas T., Laippala P. et al. Fibrinogen gene promoter -455 A allele as a risk factor for lacunar stroke. Stroke. 2003; 34(4): 886-91.

26. Liu Y., Pan J., Wang S., Li X., Huang Y. Beta-fibrinogen gene -455A/G polymorphism and plasma fibrinogen level in Chinese stroke patients. Chin. Med. J. (Engl.). 2002; 115(2): 214-6.

27. Gusina A.A. Genetic polymorphism of platelet glycoprotein receptor as a risk factor for thrombus formation. Kardiologiya v Belarusi. 2009; 3

28. Christopher N.F., Benjamin H.E., Ferro A. The PlA1/A2 polymorphism of glycoprotein iiia as a risk factor for stroke: a systematic review and meta-analysis. PLoS One. 2014; 9 (7).

29. Wagner K.R., Giles W.H., Johnson C.J., Ou C.Y., Bray P.F., Goldschmidt-Clermont P.J. et al. Platelet glycoprotein receptor IIIa polymorphism P1A2 and ischemic stroke risk: the stroke prevention in young women study. Stroke. 1998; 29(3): 581-5.

30. Reiner A.P., Kumar P.N., Schwartz S.M., Longstreth W.T. Jr., Pearce R.M., Rosendaal F.R. et al. Genetic variants of platelet glycoprotein receptors and risk of stroke in young women. Stroke. 2000; 31(7): 1628-33.

31. Papayan L.P. New submission in the process of blood coagulation. Transfuziologiya. 2004; 5

32. Nowak-Gottl U., Strater R., Kosch A., von Eckardstein A., Schobess R., Luigs P. et al. The plasminogen activator inhibitor (PAI)-1 promoter 4G/4G genotype is not associated with ischemic stroke in a population of German children. Childhood Stroke Study Group. Eur J Haematol. 2001; 66(1): 57-62.

33. Catto A.J., Carter A.M., Stickland M., Bamford J.M., Davies J.A., Grant P.J. Plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) 4G/5G promoter polymorphism and levels in subjects with cerebrovascular disease. Thromb Haemost. 1997; 77(4): 730-4.

34. Baranov A.A., Namazova-Baranova L.S., Il'in A.G., Bulgakova V.A., Antonova E.V., Smirnov I.E. Scientific research in pediatrics: directions, achivements, prospects. Rossiyskiy pediatricheskiy zhurnal. 2013; 5: 4-14.

Поступила 01.09.14 Received 01.09.14

Cведения об авторах

Громыко Ольга Евгеньевна, канд. биол. наук, ст. науч. сотр. лаб. молекулярной генетики и клеточной биологии НИИ педиатрии ФГБНУ НЦЗД; Арсеньева Елена Николаевна, доктор биол. наук, вед. науч. сотр. лаб. молекулярной генетики и клеточной биологии НИИ педиатрии ФГБНУ НЦЗД; Нечаева Надежда Леонидовна, канд. мед. наук, науч. сотр. отд-ния психоневрологии и психосоматической патологии НИИ педиатрии ФГБНУ НЦЗД; Глоба Оксана Валерьевна, ст.науч. сотр. отд-ния психоневрологии и психосоматической патологии НИИ педиатрии ФГБНУ НЦЗД; Кузенкова Людмила Михайловна, доктор мед. наук, проф., зав. отд-нием психоневрологии и психосоматической патологии НИИ педиатрии ФГБНУ НЦЗД; Асанов Алий Юрьевич, доктор мед. наук, проф., зав. каф. медицинской генетики Первого Московского медицинского университета им. И.М. Сеченова, e-mail: aliy@rambler.ru