СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСНОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ НАРУШЕНИЙ ОБМЕНА ВЕЩЕСТВ, МИКРОЭЛЕМЕНТОЗОВ, ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ЖИВОТНЫХ
METHOD FOR PRODUCTION OF COMPLEX PREPARATION FOR PROPHYLACTICS AND TREATMENT OF METABOLIC DERANGEMENTS, MICROELEMENTOSES, IMPROVEMENT OF ANIMAL ORGANISM RESISTANCE

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам получения комплексных препаратов для профилактики и лечения патологий обмена веществ и повышения резистентности организма животных.
1
Известен комплексный противоанемический и ростостимулирующий препарат для животных «Гемовит-плюс» (Козлов Ю.М. Патент РФ PU 203657 от 04.06.2002). Препарат «Гемовит-плюс» имеет в своем составе динатриевую или дикалиевую соль этилендиамина - N,N-диянтарной кислоты, водорастворимые соли железа, марганца, меди, кобальта, цинка и селена.
Известен комплексный противоанемический и ростстимулирующий препарат «Гемовит-меян» (Бабич В.А. и др. Патент РФ PU 225 2020 от 05. 02.2005). Препарат «Гемовит-меян» включает хелатный комплекс железа, марганца, цинка, меди, кобальта, селена и йода с органическим лигандом. В качестве лиганда он содержит тринатриевую соль метионинянтарной кислоты.
Важным отличительным признаком этих препаратов является то, что биогенные металлы связаны с янтарной кислотой в комплексное соединение хелатного типа. При этом янтарная кислота служит не только носителем биогенных металлов, но и сама является метаболитом и стимулятором обменных процессов. Данные препараты предназначены для перорального метода применения. Однако пероральный метод применения, несмотря на простоту, имеет основной недостаток - значительная часть солей микроэлементов (до 70%) не успевает усвоиться организмом и выделяется с экскрементами. В связи с чем для достижения терапевтического эффекта требуется продолжительный курс применения препарата, что не может считаться оптимальным решением проблемы.
Известен способ получения комплексного металлоглобулинового препарата (Кленина Н.В. и др. Способ получения комплексного препарата иммуноглобулинов с металлами. А.С. SU 1352696 СССР от 26.06.1985). Соединение иммуноглобулинов с металлами обеспечивает их хорошую биодоступность при парентеральном методе введения, в связи с чем препарат обладает выраженным иммуностимулирующим действием. Однако препарат недостаточно эффективен для нормализации обменных процессов при нарушениях функции печени. Кроме того, при изготовлении иммуноглобулина неизбежно предъявляются повышенные требования к здоровью животных, используемых в качестве доноров при сборе сыворотки крови. При этом для обеспечения стерильности препарата исключается использование более надежного и простого метода стерилизации автоклавированием.
Задачей настоящего изобретения является получение комплексного препарата, эффективного для профилактики и лечения нарушений обменных процессов, микроэлементозов, усиления гепатопротекторной функции печени, повышения резистентности организма животных.
Поставленная задача достигается включением в состав комплексного препарата водорастворимых солей металлов-стимуляторов: железа, меди, цинка, кобальта с активатором и носителем этих солей янтарной кислотой.
В качестве иммуностимулятора в состав препарата включен нуклеинат натрия.
Нуклеинат натрия - синтетический иммуностимулятор. Применяется для профилактики и лечения инфекционных заболеваний, протекающих на фоне иммунодефицитных состояний. Термостабилен.
Для усиления гепатопротекторной активности в состав препарата включен метионин.
12
Метионин относится к незаменимым аминокислотам и является «критической» аминокислотой для новорожденных животных, поскольку их пищеварительная система не может ее синтезировать из азотсодержащих веществ корма. При недостатке метионина часто наблюдаются анемия, жировая и токсическая дистрофия печени. В организме метионин активизирует действие ряда ферментов, гормонов, витамина В, фолиевой и аскорбиновой кислот. Многие процессы обезвреживания токсинов в печени происходят также с участием метионина.
Предлагаемое лекарственное средство позволяет получить одновременно метаболический, гепатопротекторный, иммуностимулирующий эффекты. Компоненты, входящие в его состав, являются доступными и стандартными. Их наиболее оптимальное соотношение составляет, г/л:
Янтарная кислота - 10,0
Сульфат железа - 2,0
Сульфат меди - 0,1
Сульфат цинка - 0,1
Сульфат кобальта - 1,0
Метионин - 10,0
Нуклеинат натрия - 10,0
Вода для инъекций - до 1000 мл
Данное соотношение янтарной кислоты, солей металлов, метионина и нуклеината натрия найдено экспериментально и обеспечивает получение синергетического эффекта при парентеральном (инъекционном) методе введения. Стерилизация автоклавированием не изменяет физико-химических свойств и биологической активности препарата.
Технологический процесс получения комплексного препарата иллюстрируется примером.
Пример
Для получения 1 литра препарата в колбу заливают 800-850 мл воды для инъекций. В нее же вносят 10,0 г янтарной кислоты и прогревают до 50-60°С. В прогретый раствор при перемешивании последовательно вносят навески, содержащие 2,0 г сульфата железа, 0, 1 г сульфата меди, 0, 1 сульфата цинка, 1,0 сульфата кобальта, 10,0 г метионина, 10 г нуклеината натрия. Окончательный объем до 1000 мл доводят добавлением воды для инъекций.
Полученный раствор разливают во флаконы из темного стекла емкостью 50 мл и подвергают стерилизации в течение 25 минут.
Полученный в вышеуказанном примере состав был стерилен. При посевах проб состава на мясопептонный бульон (МПБ) и МПБ под вазелиновое масло в пробирках и на мясопептонный агар (МПА) на чашках Петри с последующей выдержкой в термостате при 37°С в течение 48 часов рост микрофлоры отсутствовал.
50
При проверке острой и субхронической токсичности препарата на белых мышах установлено, что LD составила 22500 мг/кг живой массы, что позволяет отнести его к классу малоопасных средств.
Полученный препарат, названный нами «металлосукцинат плюс» при испытании на животных индуцировал ряд жизненно важных биологических эффектов, которые иллюстрируются соответствующими примерами.
Пример 1.
Изучение гематологической и ростстимулирующей активности металлосукцината плюс и препарата того же состава, но без метионина, провели в сравнении с ферроглюкином на новорожденных поросятах. В 4-дневном возрасте поросятам первой опытной группы (n=9) внутримышечно инъецировали металлосукцинат плюс в объеме 1,5 мл, поросятам второй опытной группы (n=9) инъецировали базовый вариант металлосукцината (без метионина) в том же объеме, а поросятам контрольной группы (n=7) в той же дозе вводили ферроглюкин.
В 8-дневном возрасте инъекции препаратов повторили, увеличив их дозу до 2,0 мл. Кровь для гематологического исследования брали в день первой инъекции препаратов и спустя 7 дней после повторного введения.
Результаты проведенных исследований представлены в таблице 1.
Таблица 1
Показатели крови поросят до и после введения препаратов
Показатели
Опытная группа №1
Опытная группа №2
Контрольная группа
до введения/после
до введения/после
до введения/после
Эритроциты, млн/мл
<img file="00000001.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000002.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000003.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
Гемоглобин, г %
<img file="00000004.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000005.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000006.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК), %
<img file="00000007.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000008.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000009.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
Фагоцитарная активность лейкоцитов (ФАЛ),%
<img file="00000010.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000011.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000012.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
Результаты гематологических исследований свидетельствуют о том, что металлосукцинат плюс оказал более выраженное стимулирующие воздействие на систему гемопоэза, чем металлосукцинат без метионина и превосходил по эффективности железосодержащий препарат ферроглюкин. В крови поросят первой опытной группы показатели содержания эритроцитов и гемоглобина были достоверно выше по отношению к уровню у их сверстников из второй опытной и контрольной групп. Достоверно высокий уровень показателей естественной резистентности БАСК и ФАЛ у поросят опытных групп указывает на выраженную стимуляцию факторов неспецифической резистентности иммунной системы. Следует отметить, что у поросят первой опытной группы в течение 15 дней (срок ежедневного наблюдения) не было отмечено ни одного случая диареи. У поросят второй опытной группы в 3 случаях из 8 регистрировали легкое течение диареи, в то время как у всех поросят контрольной группы за этот период постоянно регистрировались признаки диспепсии, что не могло не отражаться на их ростовой активности.
В 30-дневном возрасте средний вес поросят первой опытной группы составил 4,8 кг, второй опытной группы - 4,5 кг против 3,9 кг у животных в контрольной группе.
Полученные данные убедительно свидетельствуют о том, что металлосукцинат в комплексе с метионином оказывает хорошо выраженное стимулирующее действие как на систему гемопоэза, так и на интенсивность обменных процессов.
Пример 2. Изучение влияния металлосукцината плюс на биохимический статус коров при гепатозе
При формировании подопытных групп провели целенаправленный отбор животных, имевших признаки нарушения пищеварения, увеличения задней границы печени, рассасывания последних хвостовых позвонков, с наличием в моче желчных пигментов и уробилина. Все вышеуказанные признаки давали основание считать коров, больными гепатозом.
Для установления степени разбалансированности обменных процессов провели биохимические исследования крови. На основании полученных результатов биохимических исследований провели окончательный отбор подопытных животных, которые имели сходные показатели обменных процессов, свидетельствовавшие о низком функциональном состоянии печени.
Опытным коровам первой группы (n=9) трехкратно с интервалом в 24 часа в объеме 10,0 мл внутримышечно инъецировали металлосукцинат плюс, коровам второй опытной группы (n=7) по аналогичной схеме были сделаны инъекции металлосукцината, изготовленного без метионина. Коровам контрольной группы (n=7) по той же схеме были сделаны инъекции физиологического раствора. Контроль изменений в обменных процессах провели на основании биохимических исследований сыворотки крови на 7 и 14 сутки после инъекции препаратов. Результаты проведенных исследований отразили в таблице 2.
Таблица 2
Влияние металлосукцината плюс на обменные процессы у коров при гепатозе
Показатели
Препараты
Металлосукцинат плюс
Металлосукцинат (без метионина)
Физиологический раствор
Белок, г/л
до введения
10,46±1,26
10,58±1,13
10,42±0,73
спустя 7 дней
8,12±0,73
8,37±0,86
10,50±0,25
спустя 14 дней
8,46±0,25
8,50±0,92
10,74±0,38
Резервная щелочность, мг %
до введения
26,81±3,21
26,91±1,46
25,92±3,46
спустя 7 дней
56,8±3,46
54,23±3,12
26,2±2,98
спустя 14 дней
55,2±2,74
53,81±2,32
27,4±2,12
Кетоновые тела, мг %
до введения
20,26±2,34
20,34±2,76
29,64±2,36
спустя 7 дней
8,74±1,12
12,64±1,94
20,12±1,94
спустя 14 дней
6,92±1,25
8,12±1,12
20,17±2,12
Кальций, мг %
до введения
7,24±0,83
7,32±0,54
7,24±0,56
спустя 7 дней
9,72±0,48
8,96±0,38
7,26±0,34
спустя 14 дней
10,46±0,12
9,80±0,14
7,28±0,25
Фосфор, мг %
до введения
6,98±0,24
7,97±0,11
6,84±0,36
спустя 7 дней
5,39±0,71
5,46±0,28
6,79±0,17
спустя 14 дней
5,25±0,36
5,12±0,22
6,58±0,24
Железо, мг %
до введения
3,27±0,18
3,41±0,16
3,39±0,25
спустя 7 дней
5,35±1,21
5,25±1,12
3,42±0,17
спустя 14 дней
4,98±0,83
4,78±0,42
3,43±0,25
Медь, мг %
до введения
227,81±5,39
236,02±2,53
236,61±2,53
спустя 7 дней
320,42±3,46
232,14±3,25
232,82±3,25
спустя 14 дней
396,71±3,15
278,41±4,36
214,18±4,18
Цинк, мг %
до введения
9,23±0,32
9,21±0,26
9,16±0,18
спустя 7 дней
14,72±1,21
14,19±1,46
8,91±0,46
спустя 14 дней
14,61±1,35
13,21±0,94
8,83±0,27
Кобальт, мг %
до введения
7,23±0,28
7,21±0,14
7,25±0,15
спустя 7 дней
9,65±0,76
9,13±0,82
7,19±0,16
спустя 14 дней
9,43±0,65
8,92±0,38
7,16±0,12
При клиническом наблюдении установлено, что спустя сутки после первой инъекции металлосукцината плюс и металлосукцината без метионина у коров активировались жвачка и сокращения рубца. На 5 сутки у них значительно повысился аппетит, полностью восстановилась жвачка и сокращения рубца, а также отмечена выраженная тенденция роста молочной продуктивности.
При контрольных биохимических исследованиях крови на 7 и 14 сутки после начала опыта у всех коров первой опытной группы в 2-3 раза снизился уровень кетоновых тел, что указывало на выраженное улучшение функциональной активности печени. Практически у всех животных первой опытной группы произошла полная нормализация содержания белка, кальция, фосфора, резервной щелочности, что свидетельствовало о высокой метаболической активности испытуемого препарата. Менее выраженные, особенно это касается уровня кетоновых тел в крови, наблюдались изменения у коров, которым вводился металлосукцинат без метионина. У коров контрольной группы положительных изменений не отмечено.
Выраженное повышение уровня содержания в крови железа, меди, цинка, кобальта у животных опытных групп свидетельствовало об усилении их усвояемости организмом. В контрольной группе содержание микроэлементов достоверно не изменилось.
Активация процессов обмена веществ, выраженное улучшение функциональной деятельности печени, устранение ацидотического состояния положительно отразилось на молочной продуктивности коров. В период с 10 по 30 день суточный удой от каждой коровы первой опытной группы повысился на 3,5 литра, у коров второй опытной группы - на 2 литра. У коров контрольной группы молочная продуктивность в этот период оставалась практически на прежнем уровне. При этом коровы опытных групп выглядели лучше, волосяной покров у них был ровным, в то время как у контрольных животных он был взъерошеным и тусклым.
Пример 3. Влияние металлосукцината плюс на иммунологическую реактивность и неспецифическую резистентность телят с признаками гипотрофии
Опыт проведен на телятах месячного возраста с клиническими признаками гипотрофии. Первой опытной группе телят (n=7) двукратно, внутримышечно, с интервалом 24 ч, в объеме 3,0 мл были сделаны инъекции металлосукцината плюс, телятам второй опытной группы (n=7) по аналогичной схеме были сделаны инъекции металлосукцината без метионина. Телятам контрольной группы (n=5) по той же схеме вводился физиологический раствор. Контрольные иммунологические исследования провели на 5-7 сутки. Результаты исследований представлены в таблицах 3 и 4.
Таблица 3
Динамика иммунологических показателей телят-гипотрофиков под влиянием металосукцината плюс
Показатели
Препараты
Металлосукцинат плюс
Металлосукцинат (без метионина)
Физиологический раствор
Лейкоциты, г/л
<img file="00000013.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000014.tif" he="11" wi="18" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000015.tif" he="11" wi="18" img-content="undefined" img-format="tif" />
Лимфоциты, %
<img file="00000016.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000017.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000018.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
Т-лимфоциты, %
<img file="00000019.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000020.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000021.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
В-лимфоциты, %
<img file="00000022.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000023.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000024.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
IgM
<img file="00000025.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000026.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000027.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
IgG
<img file="00000028.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000029.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000030.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
Примечание. Числитель - исходные данные, знаменатель - спустя 7 дней.
Таблица 4
Динамика факторов неспецифической резистентности телят гипотрофиков под влиянием металлосукцината плюс
Показатели
Препараты
Металлосукцинат плюс
Металлосукцинат (без метионина)
Физиологический раствор
БАСК, %
<img file="00000031.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000032.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000033.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
Лизоцим, мг/мл
<img file="00000034.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000035.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000036.tif" he="11" wi="18" img-content="undefined" img-format="tif" />
ФАЛ,%
<img file="00000037.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000038.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000039.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
Примечание. Числитель - исходные данные, знаменатель - спустя 7 дней.
На основании анализа исходных данных таблицы 3 у телят были все признаки иммунодефицитного состояния. Кроме того, выявлена весьма слабая активность факторов неспецифической резистентности (см. Таблицу 4).
По результатам применения металлосукцината плюс выявлен хорошо выраженный стимулирующий эффект на клеточную и гуморальную системы иммунитета и неспецифической резистентности, что может иметь положительное значение как в комплексной сопроводительной терапии инфекционных заболеваний, так и в индуцировании антиинфекционной защиты.