ПЕПТИДНЫЙ АНАЛОГ АЦИЛИРОВАННОГО ОКСИНТОМОДУЛИНА
PEPTIDE ANALOG OF ACYLATED OXYNTOMODULIN

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к пептидным аналогам оксинтомодулина и содержащей их фармацевтической композиции для лечения или предупреждения ожирения, избыточной массы тела или инсулиннезависимого диабета, сопровождающего указанные состояния.
Предпосылки создания изобретения
Метаболические заболевания или метаболический синдром, как правило, вызваны нарушениями метаболизма глюкозы, жира, белков и др. Термин относится к различным заболеваниям, вызванным нарушениями метаболизма глюкозы и жира, включая рак, диабет, нарушения метаболизма костной ткани, жировую болезнь печени, ожирение и сердечно-сосудистое заболевание. Согласно докладу 2001 года Национальной образовательной программы США по холестерину (National Cholesterol Education Program, NCEP) и публикациям Международной федерации диабета (International Diabetes Federation, IDF) за 2012 год, для установления диагноза «метаболический синдром» необходимо наличие 3 или более из следующих 5 признаков: (1) абдоминальное ожирение, на что указывает окружность талии 102 см (NCEP) или 94 см (IDF) у мужчин и 88 см (NCEP) или 80 см (IDF) у женщин; (2) гипертриглицеридемия, на что указывает уровень триглицеридов 150 мг/дл или выше; (3) содержание холестерина ЛПВП на уровне или ниже 40 мг/дл (для мужчин) или 50 мг/дл (для женщин); (4) артериальная гипертензия, на что указывает артериальное давление 130/85 мм.рт.ст. или выше; (5) уровень глюкозы натощак 110 мг/дл или выше.
По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) в период с 1980 по 2014 гг. число людей во всем мире, страдающих от ожирения, увеличилась более чем вдвое; в 2014 году ожирением страдало 39% взрослых людей в возрасте 18 лет и старше (38% мужчин и 40% женщин). Ожирение и избыточная масса тела вызваны энергетическим несбалансированностью между потребляемыми калориями и израсходованными, причины которой включают повышенное потребление продуктов с высоким содержанием жиров и высокой энергетической ценностью, и снижение физической активности вследствие современной работы и образа жизни, изменений в средствах передвижения и увеличения доли городского населения. Заболеваемость диабетом также быстро растет; в 1980 году диабетом страдали 4,7% взрослых в возрасте 18 лет или старше по сравнению с 8,5% в 2015 году. Заболеваемость диабетом растет быстрее у среднего класса и в странах с низким уровнем дохода и является одной из основных причин слепоты, почечной недостаточности, остановки сердца и инсультов.
Глюкагон представляет собой гормон, вырабатываемый альфа-клетками поджелудочной железы. Он способствует росту концентрации глюкозы путем стимуляции глюконеогенеза и содействия расщеплению гликогена, хранящегося в печени. Когда запас гликогена в печени истощается, глюкагон стимулирует синтез новой глюкозы печенью и почками. Известно также, что глюкагон снижает аппетит и расщепляет депонированные триглицериды с образованием жирных кислот, вызывая повышенный метаболизм, тем самым влияя на снижение массы тела (Diabetes.co.uk. the global diabetes community, Anim Sci J. 2016;87(9):1090-1098).
Глюкагоноподобный пептид-1 (GLP-1), производное глюкагона, представляет собой пептидный гормон, который снижает уровень глюкозы в крови. GLP-1 секретируется в L-клетках тонкого кишечника после приема пищи. Он имеет очень короткий период полужизни, который составляет не более 2 минут. Сообщается, что глюкоза увеличивает секрецию GLP-1, который индуцирует секрецию инсулина бета-клетками поджелудочной железы, в конечном итоге, контролируя уровень глюкозы в крови и улучшая функции бета-клеток. GLP-1 также подавляет секрецию глюкагона, замедляет опорожнение желудка и снижает потребление пищи (Physiol Rev. 2007;87(4):1409-1439). Лираглутид компании Novo Nordisk представляет собой производное человеческого GLP-1, который был разработан для лечения диабета 2 типа и ожирения, и вводится один раз в сутки. Лираглутид представляет                             собой агонист рецептора GLP-1 пролонгированного действия, который связывается с теми же рецепторами, что и эндогенный GLP-1, стимулируя секрецию инсулина, тем самым модулируя уровень глюкозы в крови и снижая аппетит, таким образом, ингибируя набор массы тела и снижая уровень триглицеридов. Лираглутид продается в США и Европе под торговой маркой Victoza для лечения диабета II типа и под торговой маркой Saxenda для лечения ожирения (Expert Rev Cardiovasc Ther. 2015;13(7):753-767). Экзенатид, ликсисенатид, альбиглутид и дулаглутид также были разработаны для лечения диабета. Однако сообщается, что эти агонисты рецептора GLP-1 вызывают побочные эффекты, такие как тошнота, рвота, снижение аппетита, головная боль, запор и вздутие живота (Korean J Med. 2014;87(1):9-13).
in vivo
in vivo
Оксинтомодулин представляет собой пептид, полученный из проглюкагона, предшественника глюкагона. Оксинтомодулин состоит из пептидов, содержащих 37 аминокислот, включая полноценный спектр 29 аминокислот глюкагона и, как известно, является двойным агонистом, который связывается с рецепторами GLP-1 и глюкагона. Это обеспечивает эффект снижения массы тела путем снижения потребления пищи и увеличения энергетического метаболизма. Известно, что оксинтомодулин является более эффективным, чем селективные агонисты рецептора GLP-1 в отношении снижения массы тела. Сообщалось, что риск гипергликемии, вызванной повышением уровня глюкозы вследствие активации рецептора глюкагона, может компенсироваться секрецией инсулина рецепторами GLP-1. Сообщалось, что оксинтомодулин снижает потребление пищи и массу тела, а также улучшает расход энергии и метаболизм глюкозы в неклинических испытаниях (Diabetes. 2009;58(10):2258-2266). В клиническом исследовании оксинтомодулин продемонстрировал эффекты снижения массы тела на 2,3 кг в среднем при подкожном введении в течение 4 недель, 3 раза в день, пациентам с избыточной массой тела и ожирением (Diabetes. 2005;54:2390-2395). Было показано, что он вызывает значительную секрецию инсулина и снижает уровень глюкозы в крови по сравнению с плацебо (Diabetes. 2013;62(Suppl. 1):A48). В другом клиническом исследовании оксинтомодулин снижал потребление калорий, не вызывая побочных эффектов, таких как рвота или стимуляция аппетита из-за постоянного применения оксинтомодулина (J Clin Endocrinol Metab. 2003;88:4696-4701). Эффективность оксинтомодулина в отношении гликемического контроля, снижения потребления пищи и содействия чувству насыщения вызвала интерес с точки зрения его потенциала в качестве нового способа лечения ожирения и гликемического контроля (Molecular metabolism. 2014;3:241-251). Однако, поскольку оксинтомодулин, подобно GLP-1, может расщепляться дипептидилпептидазой-IV (DPP-IV), он является нестабильным  и имеет очень короткий период полужизни  (J Biol Chem. 2003;278: 22418-22423).
По этой причине проводятся исследования производных оксинтомодулина, устойчивых к DPP-IV, которые обеспечивают длительные фармакологические и лечебные эффекты оксинтомодулина за счет связывания с рецепторами GLP-1 и глюкагона сбалансированными и избирательными способами, и преодолевают побочные эффекты каждого гормонального пептида (Diabetes. 2009;58(10):2258-2266). Многие фармацевтические производители, включая Merck, Zealand, MedImmune и Hanmi Pharmaceutical, занимаются разработкой потенциальных соединений.
В этой связи авторы настоящего изобретения работали над решением описанной выше проблемы, кульминацией чего стало настоящее изобретение, которое относится к фармацевтической композиции для лечения ожирения или сопровождающего ожирение диабета путем разработки синтетического пептидного аналога оксинтомодулина, обладающего (1) устойчивостью к DPP-IV, (2) оптимизированной метаболической стабильностью ацилирования и (3) улучшенным действием на рецепторы GLP-1 и глюкагона по сравнению с исходным оксинтомодулином.
Подробное описание изобретения
Техническая проблема
in vivo
Целью настоящего изобретения является обеспечение пептидного аналога оксинтомодулина с более высокой активностью в отношении рецепторов GLP-1 и глюкагона по сравнению с оксинтомодулином и более высоким периодом полужизни  за счет улучшенной химической стабильности путем ацилирования (Molecular metabolism 2013;2:468-479), и фармацевтических композиций, содержащих указанный аналог, для применения в лечении и предупреждении состояний, вызванных или характеризующихся ожирением, избыточной массой тела, или инсулиннезависимым диабетом.
Решение проблемы
В качестве решения вышеупомянутой проблемы настоящее изобретение обеспечивает новый пептид, содержащий аминокислотную последовательность приведенной ниже химической формулы I, который является пептидным аналогом оксинтомодулина.
Химическая формула I
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
His-X-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-X-X-X-X-X-X-X-X-Arg-Arg-Ala-X-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-X-X-X-X-X-X(SEQ ID NO.49)
В приведенной выше формуле:
1
X представляет собой Ser или Aib (аминоизомасляная кислота);
2
X представляет собой Asp или Z;
3
X представляет собой Tyr или Z;
4
X представляет собой Ser или Z;
5
X представляет собой Lys или Z;
6
X представляет собой Tyr или Z;
7
Xпредставляет собой Leu или Z;
8
X представляет собой Asp или Z;
9
X представляет собой Ser, Aib (аминоизомасляная кислота) или Z;
10
X представляет собой Gln или Z;
11
X представляет собой Met или Leu;
12
X представляет собой Asn или Arg;
13
X представляет собой Thr или Ala;
14
X представляет собой Lys или Z;
15
X представляет собой RNRNNIA (SEQ ID NO.51) или отсутствует;
16
15
X представляет собой Z или отсутствует, если присутствует X;
С-концевая аминокислота может быть произвольно амидирована;
2
3
4
5
6
7
8
9
10
14
16
по меньшей мере один или несколько из X, X, X, X, X, X, X, X, X, X и X представляют собой Z;
1
2
1
2
1
1
Z представляет собой модифицированную форму Lys, к боковым цепям которого присоединены конъюгат полимерного фрагмента и спейсера («Z») и липофильный липидный фрагмент («Z»); при этом Z непосредственно присоединен к боковой цепи Lys посредством ацильной функциональной группы; и Z присоединен к боковой цепи Lys посредством Z; и Z имеет структурную формулу (1) или (2), представленную ниже:
2
Z имеет структурную формулу (3) или (4), представленную ниже,
В настоящем изобретении следующие трехбуквенные и/или однобуквенные сокращения используются для обозначения конкретных аминокислот:
Ala(A), Lys(K), Asn(N), Asp(D), Cys(C), His(H), Ile(I), Met(M), Ser(S), Val(V), Gly(G), Leu(L), Pro(P), Thr(T), Phe(F), Arg(R), Tyr(Y), Trp(W), Glu(E), Gln(Q), Aib(аминоизомасляная кислота).
В настоящем изобретении «оксинтомодулин» относится к пептиду, полученному из преглюкагона, предшественника глюкагона. Природный оксинтомодулин имеет следующую аминокислотную последовательность: HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA (SEQ ID NO.1).
1
Z, который является одним из компонентов Z в настоящем изобретении, может быть в форме сополимера, имеющего полиэтиленгликоль в качестве полимерного фрагмента, этиленгликоль в качестве мономера, этаноламин и молочную кислоту; или полиаминокислотного сополимера, содержащего глицин и серин в качестве мономеров. Полиаминокислота может иметь аминокислотную последовательность GGSGSG (SEQ ID NO. 52). Химическое соединение по настоящему изобретению может содержать два или более повторяющихся звеньев вышеупомянутого полимерного фрагмента.
1
1
1
Кроме того, Z может иметь функциональную группу в одной концевой области для присоединения к любому остатку или боковой цепи вышеупомянутого пептидного аналога оксинтомодулина. Предпочтительно это ацильная группа, и в этом случае она может быть присоединена к аминогруппе боковой цепи посредством амидной связи. В некоторых примерах вариантов осуществления Z может иметь функциональную группу на одном конце для связи со спейсером. Предпочтительно это аминогруппа, и в этом случае она может образовывать амидную связь с карбоксигруппой спейсера. Предпочтительно Z растворим в воде и, следовательно, может быть амфифильным или гидрофильным.
1
2
Спейсер в настоящем изобретении представляет собой остаток L-глутаминовой кислоты, γ-карбоновая кислота которого ковалентно присоединена к Z (полимерный фрагмент) и α-аминогруппа которого может быть ковалентно присоединена к Z (липофильный липидный фрагмент), и он может иметь 2 или более повторяющихся звеньев.
2
2
3
4
5
6
7
8
9
10
14
16
Липидный фрагмент Z, который является другим компонентом Z, непосредственно присоединен к спейсеру. Спейсер непосредственно присоединен к полимерному фрагменту. Полимерный фрагмент может быть непосредственно присоединен к боковой цепи аминокислотного остатка на X, X, X, X, X, X, X, X, X, X или X пептидного аналога оксинтомодулина по настоящему изобретению. Предпочтительно Lys может быть использован в качестве аминокислотного остатка, который обеспечивает такое присоединение.
2
14
20
Кроме того, Z содержит насыщенную углеводородную цепь C-C, концевой углерод которой находится в форме карбоновой кислоты, первичного амида или карбоновой кислоты, ковалентно присоединенной к любой единичной аминокислоте. В этом случае углеводородная цепь может быть разветвленной или линейной. Функциональная группа, необходимая для присоединения углеводородной цепи к спейсеру, образует часть вышеупомянутого липидного фрагмента и может содержать ацил, сульфонил, атом N, атом О, атом S или т.п.
Таким образом, спейсер может быть присоединен посредством сложного эфира, сульфонильного эфира, тиоэфира, амида или сульфонамида. Предпочтительно углеводородная цепь присоединена к аминогруппе спейсера в форме амидной связи посредством ацильной группы; таким образом, углеводородная цепь может являться, в частности, частью алканоильной группы.
in vivo
Хотя не предполагается ограничения объема интерпретации для конкретной теории, полагают, что механизм улучшенного периода полужизни  по настоящему изобретению включает присоединение его липофильного липидного фрагмента к альбумину в кровотоке, предупреждая реакцию соединения по настоящему изобретению в качестве субстрата для различных лиаз в кровотоке.
in vivo
В настоящем изобретении одна или несколько аминокислотных боковых цепей пептидного аналога оксинтомодулина присоединены к липофильному липидному фрагменту посредством полимерного фрагмента и спейсера. Такая химическая модификация может индуцировать фармацевтически полезные эффекты, такие как увеличение доступности и/или периода полужизни, и/или увеличение биодоступности пептидного аналога оксинтомодулина по настоящему изобретению.
1
in vivo
Новый пептид, содержащий аминокислотную последовательность вышеуказанной химической формулы I, может быть получен путем взятия природного оксинтомодулина и замены остатка Ser в положении 2 на Aib. В этом примере по настоящему изобретению Aib вводят в положение X пептидного аналога оксинтомодулина. Это соединение считается более устойчивым к действию дипептидилпептидазы IV по сравнению с природным оксинтомодулином. В итоге пептидный аналог оксинтомодулина по настоящему изобретению показал улучшенную стабильность  по сравнению с природным оксинтомодулином.
11
12
13
Кроме того, вышеупомянутый пептидный аналог ацилированного оксинтомодулина по настоящему изобретению может быть получен путем замены остатка Met природного оксинтомодулина на Leu в положении 27, Asn на Arg в положении 28 и Thr на Ala в положении 29. Например, соединение 12 (SEQ ID NO: 13) в приведенных ниже примерах получено путем замены X на Leu, X на Arg и X на Ala.
В настоящем изобретении предпочтительным пептидным аналогом оксинтомодулина является новый пептид, содержащий аминокислотную последовательность химической формулы I-1, показанной ниже.
Химическая формула I-1
1
3
9
10
11
12
13
14
15
16
HXQGTFTSDXSKYLDXRRAXDFVQWLXXXXXX(SEQ ID NO.50)
В вышеуказанной аминокислотной последовательности:
1
X представляет собой Ser или Aib (аминоизомасляная кислота);
3
X представляет собой Tyr или Z;
9
X представляет собой Ser, Aib или Z;
10
X представляет собой Gln или Z;
11
X представляет собой Met или Leu;
12
X представляет собой Asn или Arg;
13
X представляет собой Thr или Ala;
14
X представляет собой Lys или Z;
15
X представляет собой RNRNNIA (SEQ ID NO. 51) или отсутствует;
15
16
Если X присутствует, то X представляет собой Z или отсутствует, и C-конец может быть амидирован; и
Z является таким, как определено выше в химической формуле I.
Примеры вариантов осуществления, содержащие пептидные аналоги представленной выше химической формулы I, включают, но без ограничения, соединение 1 (SEQ ID NO. 2), соединение 2 (SEQ ID NO. 3), соединение 3 (SEQ ID NO. 4), соединение 4 (SEQ ID NO. 5), соединение 5 (SEQ ID NO. 6), соединение 6 (SEQ ID NO. 7), соединение 7 (SEQ ID NO. 8), соединение 8 (SEQ ID NO. 9), соединение 9 (SEQ ID NO. 10), соединение 10 (SEQ ID NO. 11), соединение 11 (SEQ ID NO. 12), соединение 12 (SEQ ID NO. 13), соединение 13 (SEQ ID NO. 14), соединение 15 (SEQ ID NO. 16), соединение 16 (SEQ ID NO. 17), соединение 17 (SEQ ID NO. 18) и соединение 18 (SEQ ID NO. 19).
9
10
Кроме того, пептидный аналог оксинтомодулина вышеупомянутой химической формулы I в соответствии с настоящим изобретением может иметь в пределах своей аминокислотной последовательности одну или несколько внутримолекулярных поперечных связей; т.е. X и X могут образовывать циклический пептид посредством внутримолекулярного присоединения (лактамизация, дисульфидная связь) или посредством кросс-линкера.
Таким образом, еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение нового пептидного аналога оксинтомодулина, содержащего аминокислотную последовательность химической формулы II, представленной ниже.
Химическая Формула II
17
18
19
20
His-X-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-X-Arg-Arg-Ala-X-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-Lys (SEQ ID NO.53)
В вышеуказанной формуле:
17
X представляет собой Ser или Aib (аминоизомасляная кислота);
18
X представляет собой Z;
19
X представляет собой Asp, Glu, Cys, Hcy (гомоцистеин), Lys или Orn (орнитин);
20
X представляет собой Asp, Glu, Cys, Hcy (гомоцистеин), Lys или Orn (орнитин);
19
20
X и X могут образовывать циклический пептид посредством внутримолекулярной связи или кросс-линкера, и в этом случае циклический пептид имеет либо лактамное кольцо, образованное амидной связью между двумя остатками, дисульфидное кольцо, образованное дисульфидной связью между двумя остатками, или поперечно-сшитое кольцо, образованное посредством поперечной связи между двумя остатками;
С-концевая аминокислота может быть необязательно амидирована;
1
2
1
2
1
1
Z представляет собой модифицированную форму Lys, к боковой цепи которого присоединен конъюгат полимерного фрагмента и спейсера («Z»), и липофильный липидный фрагмент («Z»), при этом Z напрямую присоединен к боковой цепи Lys посредством ацильной функциональной группы, и Z присоединен к боковой цепи Lys посредством Z, и Z имеет структурную формулу (1) или (2), представленную ниже:
2
Z имеет структурную формулу (3) или (4), представленную ниже:
19
20
19
20
19
20
Внутримолекулярная связь между X и X представляет собой внутримолекулярную связь с образованием лактамного кольца, если X и X представляют собой Asp (или Glu) и Lys (или Orn), соответственно, или Lys (или Orn) и Asp (или Glu), соответственно, или внутримолекулярную связь с образованием дисульфидного кольца, если X и X представляют собой Cys (или Hcy) и Cys (или Hcy).
19
20
1
6
3
8
6
10
5
12
Когда X и X представляют собой Cys (или Hcy) и Cys (или Hcy), соответственно, кросс-линкер образует кольцо путем присоединения к тиольной функциональной группе на обеих боковых цепях Cys (или Hcy), и в этом случае кросс-линкер представляет собой C-C алкил с линейной или разветвленной цепью, C-C насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, C-C арил или C-C гетероарил, или конденсированный гетероциклический арил; предпочтительно он представляет собой:
1
6
R представляет собой водород или С-С линейную или разветвленную алкильную цепь.
19
20
1
6
3
8
6
10
5
12
Когда X и X представляют собой Asp (или Glu) и Asp (или Glu), соответственно, кросс-линкер образует кольцо с помощью амидной связи с карбоксильной группой обеих боковых цепей Asp (или Glu), и в этом случае кросс-линкер представляет собой диамино C-C алкил с линейной или разветвленной цепью, диамино C-C насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, аминопиперидин, пиперазин, диамино C-C арил или диамино C-C гетероарил или конденсированный гетероциклический арил; и предпочтительно он представляет собой:
1
6
R представляет собой водород или C-C линейный или разветвленный алкил.
19
20
1
6
3
8
6
10
5
12
Когда X и X представляют собой Lys (или Orn), Lys (или Orn), соответственно, кросс-линкер образует кольцо с помощью амидной связи с аминогруппой на обеих боковых цепях Lys (или Orn), и в этом случае кросс-линкер представляет собой дикарбонил C-C алкил с линейной или разветвленной цепью, дикарбонил C-C насыщенный или ненасыщенный циклоалкил, дикарбонил C-C арил или дикарбонил C-C гетероарил или конденсированный гетероциклический арил, и предпочтительно он представляет собой:
1
6
R представляет собой водород или C-C алкил с линейной или разветвленной цепью.
19
20
1
6
3
8
6
10
5
12
Когда X и X представляют собой Asp (или Glu) и Lys (или Orn), соответственно, или Lys (или Orn) и Asp (или Glu), соответственно, кросс-линкер связывает Asp (или Glu) амидной связью между карбоксильной группой боковой цепи Asp (или Glu) и аминной функциональной группой кросс-линкера; аминогруппа боковой цепи Lys (или Orn) образует амидную связь с карбоксильной функциональной группой кросс-линкера с образованием кольца; и в этом случае кросс-линкер представляет собой альфа-аминокислоты (такие как Gly, Val, Leu, Ile), бета-аминокислоты, карбонил C-C алкиламин с линейной или разветвленной цепью, карбонил C-C насыщенный или ненасыщенный алкиламин, карбонил пиперидин, аминобензоил, карбонил С-С ариламин или карбонил С-С гетероариламин или конденсированный гетероциклический ариламин; и предпочтительно он представляет собой:
и
1
6
R представляет собой водород или C-C алкил с линейной или разветвленной цепью.
Примеры вариантов осуществления, содержащие пептидный аналог химической формулы II, содержащий одну или несколько внутримолекулярных поперечных связей в пределах аминокислотной последовательности химической формулы I, представленной выше, включают, но без ограничения, соединение 14 (SEQ ID NO. 15), соединение 19 (SEQ ID NO. 20), соединение 20 (SEQ ID NO. 21), соединение 21 (SEQ ID NO. 22), соединение 22 (SEQ ID NO. 23), соединение 23 (SEQ ID NO. 24), соединение 24 (SEQ ID NO. 25), соединение 25 (SEQ ID NO. 26), соединение 27 (SEQ ID NO. 28), соединение 28 (SEQ ID NO. 29), соединение 29 (SEQ ID NO. 30), соединение 30 (SEQ ID NO. 31), соединение 31 (SEQ ID NO. 32), соединение 32 (SEQ ID NO. 33), соединение 33 (SEQ ID NO. 34), соединение 34 (SEQ ID NO. 35), соединение 35 (SEQ ID NO. 36), соединение 36 (SEQ ID NO. 37), соединение 37 (SEQ ID NO. 38) и соединение 38 (SEQ ID NO. 39).
19
20
19
20
Поперечное сшивание пептида представленной выше химической формулы II может происходить в результате образования химической ковалентной связи или межионного взаимодействия в пределах остатков в каждой из любых двух аминокислот, отстоящих друг от друга на 3 аминокислоты в последовательности химической формулы I, или между любыми функциональными группами в пределах боковой цепи. Предпочтительно поперечное сшивание может происходить между боковыми цепями аминокислот остатка X и остатка X с образованием лактонового кольца, лактамного кольца или дисульфидного кольца; или возможно  связывание боковых цепей аминокислот остатка X и остатка X с кросс-линкером с образованием кольца.
19
20
Новый пептид, содержащий аминокислотную последовательность вышеупомянутой химической формулы II, может быть получен путем взятия природного оксинтомодулина и замены остатка Ser в положении 16 на Cys или Hcy; замены остатка Gln в положении 20 на Cys или Hcy; и образования межмолекулярного дисульфидного кольца. Например, соединение 28 (SEQ ID NO: 29), один из приведенных ниже примеров вариантов осуществления, получено путем замены Х на Cys, замены Х на Cys и образования дисульфидного кольца в пределах молекулы.
19
20
Кроме того, вышеупомянутый пептидный аналог ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением может быть получен путем взятия природного оксинтомодулина и замены остатка Ser в положении 16 на Cys или Hcy, замены остатка Gln в положении 20 на Cys или Hcy и связывания двух остатков с помощью кросс-линкера с образованием кольца. Например, соединение 22 (SEQ ID NO: 23), один из приведенных ниже примеров вариантов осуществления, получают путем замены Xна Cys, замены X на Cys и связывания двух остатков с помощью кросс-линкера с образованием кольца.
19
20
19
20
Кроме того, вышеупомянутый пептидный аналог ацилированного оксинтомодулина по настоящему изобретению может быть получен путем взятия природного оксинтомодулина и замены его остатка Ser в положении 16 на Asp или Glu, замены остатка Gln в положении 20 на Lys или Orn, и образования внутримолекулярного лактамного кольца. Например, соединение 26 (SEQ ID NO: 27), один из приведенных ниже примеров вариантов осуществления, получают путем замены X на Asp, X на Lys и образования внутримолекулярного лактамного кольца; и соединение 14 (SEQ ID NO.15), соединение 19 (SEQ ID NO.20), соединение 20 (SEQ ID NO.21), соединение 24 (SEQ ID NO.25) и соединение 25 (SEQ ID NO.26) получают путем замены X на Glu, X на Lys и образования внутримолекулярного лактамного кольца.
19
20
19
20
Кроме того, вышеупомянутый пептидный аналог ацилированного оксинтомодулина по настоящему изобретению может быть получен путем взятия природного оксинтомодулина и замены его остатка Ser в положении 16 на Asp или Glu, замены остатка Gln в положении 20 на Lys или Orn и связывания двух остатков с помощью кросс-линкера с образованием кольца. Например, соединение 37 (SEQ ID NO.38) и соединение 38 (SEQ ID NO.39) получают путем замены X на Asp, Xна Lys и связывания двух остатков с помощью кросс-линкера с образованием кольца; и соединение 33 (SEQ ID NO.34), соединение 34 (SEQ ID NO.35), соединение 35 (SEQ ID NO.36) и соединение 36 (SEQ ID NO.37) получают путем замены X на Glu, X на Lys и связывания двух остатков с помощью кросс-линкера с образованием кольца.
19
20
19
20
Кроме того, вышеупомянутый пептидный аналог ацилированного оксинтомодулина по настоящему изобретению может быть получен путем взятия природного оксинтомодулина и замены его остатка Ser в положении 16 на Lys или Orn, остатка Gln в положении 20 на Asp или Glu и образования внутримолекулярного лактамного кольца. Например, соединение 21 (SEQ ID NO: 22), один из приведенных ниже примеров вариантов осуществления, получают путем замены X на Lys, X на Glu и образования внутримолекулярного лактамного кольца; и соединение 27 (SEQ ID NO.28) получают путем замены X на Lys, X на Asp и образования внутримолекулярного лактамного кольца.
19
20
Кроме того, вышеупомянутый пептидный аналог ацилированного оксинтомодулина может быть получен путем взятия природного оксинтомодулина и замены его остатка Ser в положении 16 на Lys или Orn, Gln-20 на Asp или Glu и связывания двух остатков с помощью кросс-линкера с образованием кольца. Например, соединение 32 (SEQ ID NO.33), один из приведенных ниже примеров вариантов осуществления, получают путем замены X на Lys, X на Glu и связывания двух остатков с помощью кросс-линкера с образованием кольца.
19
20
Кроме того, вышеупомянутый пептидный аналог ацилированного оксинтомодулина может быть получен путем взятия природного оксинтомодулина и замены его остатка Ser в положении 16 на Asp или Glu, Gln-20 на Asp или Glu и связывания двух остатков с помощью кросс-линкера с образованием кольца. Например, соединение 23 (SEQ ID NO.24), соединение 29 (SEQ ID NO.30) и соединение 30 (SEQ ID NO.31), некоторые из приведенных ниже примеров вариантов осуществления, получают путем замены X на Glu, X на Glu и связывания двух остатков с помощью кросс-линкера.
19
20
Кроме того, вышеупомянутый пептидный аналог ацилированного оксинтомодулина может быть получен путем взятия природного оксинтомодулина и замены его остатка Ser в положении 16 на Lys или Orn, остатка Gln в положении 20 на Lys или Orn и связывания двух остатков с помощью кросс-линкера с образованием кольца. Например, соединение 31 (SEQ ID NO.32), один из приведенных ниже примеров вариантов осуществления, получают путем замены X на Lys, X на Lys и связывания двух остатков с помощью кросс-линкера с образованием кольца.
Полагают, что такое внутримолекулярное поперечное сшивание стабилизирует альфа-спиральную структуру пептида, увеличивая его селективность в отношении рецептора GLP-1 и/или рецептора глюкагона или повышая фармакологическую эффективность (ACS Chem Biol. 2016; 11: 324-328).
Пептидный аналог оксинтомодулина по настоящему изобретению может быть химически модифицирован. В частности, каждый аминокислотный остаток, составляющий пептид, может быть непосредственно соединен с различными спейсерами или линкерами. Кроме того, каждый остаток может подвергаться химической реакции, такой как алкилирование, образование дисульфидной связи, комплексообразование с металлами, амидирование, этерификация, окисление и восстановление, для модификации в соответствующий химический продукт.
В частности, любой карбокси-конец или амино-конец, присутствующий в структуре пептидного аналога оксинтомодулина, может подвергаться реакциям, таким как этерификация, амидирование и ацилирование, с получением аналога. Кроме того, пептидный аналог оксинтомодулина по настоящему изобретению может быть обеспечен в виде кислотно-аддитивной соли любой аминогруппы в его структуре или карбоксилатной соли любой карбоксильной группы в его структуре, или его соли щелочных металлов.
Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей вышеупомянутый пептидный аналог в качестве активного ингредиента и содержащей фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество для предупреждения и лечения ожирения или избыточной массы тела и диабета, сопровождающего указанные состояния.
Термин «предупреждение» в настоящем изобретении относится к любым и всем действиям, направленным на ингибирование или задержку развития целевого состояния или заболевания. Термин «лечение» в настоящем изобретении относится к любым и всем действиям, направленным на смягчение, улучшение или облегчение симптомов состояния или заболевания, которое развилось.
В частности, поскольку пептидный аналог по настоящему изобретению является двойным агонистом как рецепторов глюкагона, так и рецепторов GLP-1, он продемонстрировал эффекты GLP-1 на потребление пищи, а также эффекты глюкагона на метаболизм жиров и расходование энергии. Таким образом, фармацевтическая композиция для лечения ожирения или избыточной массы тела и диабета, сопровождающего указанные состояния, содержащая пептидный аналог по настоящему изобретению, может вызывать полезные с медицинской точки зрения эффекты в отношении регулирования массы тела за счет сочетания ее эффектов в отношении удаления избыточного жира и ингибирования потребления пищи.
Кроме того, пептидный аналог по настоящему изобретению и фармацевтическую композицию, содержащую указанный пептидный аналог, можно применять для предупреждения или лечения диабета, сопровождающего ожирение, путем снижения уровня глюкозы в крови. В частности, его можно применять для лечения инсулиннезависимого диабета, сопровождающего ожирение, или диабета типа II. Хотя не предполагается ограничения объема интерпретации для конкретной теории, фармацевтическая композиция, содержащая пептидный аналог по настоящему изобретению, является высокоактивной в отношении рецепторов GLP-1, который снижает уровень глюкозы в крови и, таким образом, в конечном итоге, является полезной для гликемического контроля.
Таким образом, фармацевтическую композицию, содержащую пептидный аналог по настоящему изобретению, можно вводить отдельно или в комбинации с другими сопутствующими фармацевтическими препаратами для прямого или косвенного лечения любого состояния, вызванного или характеризующегося избыточной массой тела, например, лечения и предупреждения ожирения, патологического ожирения, предоперационного патологического ожирения, связанного с ожирением воспаления, связанного с ожирением заболевания желчного пузыря, вызванного ожирением апноэ во сне и сопровождающего ожирение диабета. Кроме того, фармацевтическую композицию, содержащую пептидный аналог по настоящему изобретению, можно вводить отдельно или в комбинации с другими сопутствующими фармацевтическими препаратами для предупреждения состояний, которые могут возникать в результате влияния массы тела или могут быть связаны с таким воздействие, таких как метаболический синдром, гипертензия, вызванная атеросклерозом дислипидемия, атеросклероз, артериосклероз, ишемическая болезнь сердца или инсульт.
«Введение» в настоящем изобретении относится к введению вещества для лечения пациента подходящим способом. Фармацевтическую композицию, содержащую пептидный аналог по настоящему изобретению, можно вводить различными путями и в различных формах, которые обеспечивают доставку лекарственного средства к целевой ткани и достигают своей предполагаемой эффективности, включая, но без ограничения, внутрибрюшинное введение, внутривенное введение, внутримышечное введение, подкожное введение, внутрикожное введение, пероральное введение, местное введение, интраназальное введение, внутрилегочное введение и внутриректальное введение.
Фармацевтическая композиция, содержащая пептидный аналог оксинтомодулина по настоящему изобретению, может содержать различные фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, включая: связывающие вещества, смазывающие вещества, дезинтегрирующие вещества, вспомогательные вещества, солюбилизирующие вещества, диспергирующие вещества, стабилизаторы, суспендирующие агенты, окрашивающие вещества, ароматизаторы и т.п. в случае перорального введения; комбинацию буферов, консервантов, анальгетиков, солюбилизаторов, изотонических агентов, стабилизаторов и т.п. в случае инъекции; и основы, наполнители, смазывающие вещества, консерванты и т.п. в случае местного применения.
Примеры носителей, вспомогательных веществ и разбавителей, которые могут быть использованы при составлении пептидного аналога оксинтомодулина по настоящему изобретению, включают: лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, аравийсую камедь, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния или минеральное масло.
Фармацевтическая композиция, содержащая пептид оксинтомодулин по настоящему изобретению, может быть получена различными способами путем объединения с носителями, описанными выше. Например, она может быть изготовлена в форме таблеток, троше, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облаток и т.п. для перорального введения; ампул, содержащих одну дозу, или многодозовых форм для инъекций; и растворов, таблеток, пилюль, капсул и препаратов с замедленным высвобождением.
Диапазон доз в соответствии с настоящим изобретением варьируется в зависимости от таких факторов, как масса тела пациента, возраст, пол, состояние здоровья, диета, скорость выведения и тяжесть состояния. Для взрослого пациента подходящая доза может составлять от 0,001 до 500 мг/кг в день.
Полезные эффекты изобретения изобретения
Настоящее изобретение обеспечивает новый пептидный аналог ацилированного оксинтомодулина; пептидный аналог по настоящему изобретению превосходит природный оксинтомодулин по активности как в отношении рецепторов GLP-1, так и в отношении рецепторов глюкагона. В частности, в настоящем изобретеним показана более высокая биологическая активность в качестве агониста рецептора глюкагона, чем в качестве агониста рецептора GLP-1.
Таким образом, фармацевтическую композицию, содержащую новый пептидный аналог ацилированного оксинтомодулина по настоящему изобретению, можно эффективно применять для предупреждения или лечения состояний, вызванных или характеризующихся в первую очередь ожирением или избыточной массой тела. Кроме того, ее также можно применять для предупреждения или лечения инсулиннезависимого ожирения, сопровождающего ожирение или избыточную массу тела.
Краткое описание фигур
Фигура 1 представляет собой график, показывающий результаты оценки эффективности в отношении потери массы тела у мышей после однократной инъекции аналога ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением.
Фигура 2 представляет собой график, показывающий результаты оценки эффективности в отношении потери массы тела у мышей при повторном инъецировании пептидного аналога ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением на протяжении одной недели;
на фигуре 2а показаны результаты в отношении потери массы тела;
на фигуре 2b показаны результаты в отношении кумулятивного потребления пищи.
Фигура 3 представляет собой график, показывающий результаты оценки эффективности в отношении потери массы тела у крыс при повторном инъецировании пептидного аналога ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением на протяжении 5 дней;
на фигуре 3a показаны результаты в отношении потери массы тела;
на фигуре 3b показаны результаты в отношении кумулятивного потребления пищи.
Фигура 4 представляет собой график, показывающий результаты оценки эффективности в отношении потери массы тела у мышей при повторном инъецировании пептидного аналога ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением на протяжении 10 дней;
на фигуре 4a показаны результаты в отношении потери массы тела;
на фигуре 4b показаны результаты в отношении кумулятивного потребления пищи.
Фигура 5 представляет собой график, показывающий результаты оценки эффективности в отношении потери массы тела у мышей при повторном инъецировании пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением на протяжении 10 дней;
на фигуре 5a показаны результаты в отношении потери массы тела;
на фигуре 5b показаны результаты в отношении кумулятивного потребления пищи.
Фигура 6 представляет собой график, показывающий результаты оценки эффективности в отношении потери массы тела у мышей при повторном инъецировании пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением на протяжении 1 недели;
на фигуре 6а показаны результаты в отношении потери массы тела;
на фигуре 6b показаны результаты в отношении кумулятивного потребления пищи.
Фигура 7 представляет собой график, показывающий результаты оценки эффективности в отношении потери массы тела у мышей при повторном инъецировании пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением на протяжении 2 недель;
на фигуре 7а и 7с показаны результаты в отношении потери массы тела;
на фигуре 7b показаны результаты в отношении кумулятивного потребления пищи для пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина, указанных на фигуре 7а;
на фигуре 7d показаны результаты в отношении кумулятивного потребления пищи для пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина, указанных на фигуре 7с.
Фигура 8 представляет собой график, показывающий результаты оценки эффективности в отношении потери массы тела у мышей при посторном инъецировании  пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением на протяжении 2 недель;
на фигуре 8а показаны результаты в отношении потери массы тела;
на фигуре 8b показаны результаты в отношении кумулятивного потребления пищи.
Фигура 9 представляет собой график, показывающий результаты оценки эффективности в отношении потери массы тела у мышей при повторном инъецировании пептидного аналога ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением на протяжении 5 дней;
на фигуре 9а показаны результаты в отношении потери массы тела;
на фигуре 9b показаны результаты в отношении кумулятивного потребления пищи.
Фигура 10 представляет собой график, показывающий результаты оценки эффективности в отношении потери массы тела у мышей при повторном инъецировании пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением на протяжении 4 недель;
на фигуре 10a показаны результаты в отношении потери массы тела;
на фигуре 10b показаны результаты в отношении потери жировой массы тела;
на фигуре 10с показаны результаты кумулятивного потребления пищи.
Фигура 11 представляет собой график, показывающий результаты орального теста толерантности к глюкозе у мышей после введения пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением.
Фигура 12 представляет собой график, показывающий результаты оценки эффективности в отношении гликемического контроля у мышей при повторном инъецировании пептидного аналога ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением на протяжении 6 недель;
на фигуре 12a показаны результаты измерения глюкозы в крови не натощак;
на фигуре 12b показаны результаты ингибирования повышения гликированного гемоглобина.
Фигура 13 представляет собой график, показывающий результаты оценки эффективности в отношении гликемического контроля у мышей при повторном инъецировании пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением на протяжении 4 недель;
на фигуре 13а показаны уровни глюкозы в крови не натощак во времени;
на фигуре 13b показано ингибирование повышения гликированного гемоглобина и улучшение.
Лучший способ осуществления изобретения
Настоящее изобретение далее подробно описано со ссылкой на следующие примеры и экспериментальные примеры. Эти примеры приведены только в целях иллюстрации, чтобы помочь специалисту в данной области понять изобретение, и их никоим образом не следует истолковывать как ограничивающие объем настоящего изобретения.
Пример 1.
Синтез пептидного аналога ацилированного оксинтомодулина
Пептиды, содержащие часть аминокислот по настоящему изобретению или пептидные последовательности из каталога, могут быть синтезированы или приобретены у коммерческих компаний по синтезу пептидов, таких как American Peptide Company, Bachem и Anygen.
В настоящем изобретении для синтеза пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина использовали модель автоматизированного синтезатора пептидов Symphony X (масштаб синтеза: 0,1 ммоль) от Protein Technologies Inc. В таблице 1 и таблице 2 показаны структуры соединения 1 (SEQ ID NO. 2) и соединения 38 (SEQ ID NO. 39), которые имели пептидные аналоги ацилированного оксинтомодулина, синтезированные в соответствии с настоящим изобретением. Подробное описание методик синтеза представлено ниже.
Смесь Fmoc-AA-OH (1 ммоль), HBTU (1 ммоль), NMM (н-метилморфолин) (2 ммоль) и DMF (7 мл) добавляли к смоле, из которой была удалена группа Fmoc, и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционный раствор сливали и промывали дважды 7 мл DMF (N,N-диметилметанамид). Реакцию отщепления Fmoc проводили дважды в течение 5 минут при комнатной температуре и промывали 6 раз DMF (7 мл). Этот процесс повторяли с использованием автоматизированного синтезатора для связывания аминокислот.
Для синтеза боковой цепи K(Lys) для связывания использовали Fmoc-K(Dde)-OH. Для последнего H(His) для связывания использовали Boc-His(Trt)-OH. Использовали 2% гидралазин для удаления защитной группы Dde и затем связывали PEG2, rE, C18, C18 дикислоту и т.д. Для синтеза лактамного кольца для связывания использовали аминокислоты, введенные в Glu (Oall) и Lys (Alloc). После удаления защитной группы избыток HBTU и DIPEA использовали для связывания лактама. Дисульфидное кольцо связывали с использованием аминокислоты Ser, введенной в защитную группу. После удаления защитной группы проводили присоединение дисульфида. Связывание осуществляли с использованием подходящих аминокислот с введенными защитными группами в положении, в которое должен быть введен кросс-линкер. После удаления защитной группы связываие между кросс-линкером и двумя аминокислотами выполняли с использованием связывающего амиды реагента.
К 0,1 ммоль пептидной смолы, полученной выше, добавляли 8 мл раствора Реагента К (трифторуксусная кислота, вода, тиоанизол, 1,2-этандитиол (87,5, 5,0, 5,0, 2,5)) после ее охлаждения до 5-10℃. Затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2-3 часов. После сливания смолу промывали небольшим количеством TFA. Затем фильтраты объединяли и добавляли к 100 мл диэтилового эфира для кристаллизации. Полученное твердое вещество фильтровали с получением сырого пептида. Полученный сырой пептид очищали препаративной HPLC с получением желаемого соединения.
MALDI-TOF масс-спектрометр Shimadzu модели AXIMA Assurance использовали для анализа молекулярной массы; в качестве матрицы использовали α-циано-4-гидроксикоричную кислоту (CHCA).
Таблица 1
Таблица 2
Сравнительный пример 1.
Синтез пептидного аналога оксинтомодулина
Для сравнения с настоящим изобретением пептидные аналоги оксинтомодулина, обладающие структурными сходствами, синтезировали с помощью способа по примеру 1. Соединение 39, показанное ниже, представляет собой пептидный аналог неацилированного оксинтомодулина. Соединения 40 и 41 представляют собой пептидные аналоги оксинтомодулина, ацилированного в различных положениях. Соединения 42 и 46 представляют собой пептидные аналоги оксинтомодулина с ацилированием в различных концевых областях. Соединение 47, раскрытое в корейской публикации патента № 2012-139579, представляет собой пептидный аналог неацилированного оксинтомодулина с кольцевой структурой. Структуры вышеуказанных соединений 39-47, представляющих собой синтезированные пептидные аналоги оксинтомодулина, показаны в таблице 3 и таблице 4.
Таблица 4
Z представляет собой модифицированную форму Lys; в частности, Lys с боковой цепью, присоединенной к полимеру, спейсеру и/или липофильному липиду.
Z принимает следующие специфические формы в зависимости от соединения:
для соединений 40 и 41:
2
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)]-[гамма-глутаминовая кислота]-[октадеканоил]);
для соединения 42:
2
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)]-[гамма-глутаминовая кислота]-[15-карбоксипептадеканоил]);
для соединения 43:
2
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)]-[гамма-глутаминовая кислота]-[17-карбоксигептадеканоил]);
для соединения 44:
2
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)]-[гамма-глутаминовая кислота]-[19-карбоксинонадеканоил]);
для соединения 45:
2
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)]-[гамма-глутаминовая кислота]-[15-(N-(карбоксиметил)амино)карбонилпептадеканоил]);
для соединения 46:
2
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)]-[гамма-глутаминовая кислота]-[15-(N-(15)-(1-карбокси-2-метилпропил)амино)каронилпентадеканоил]).
Экспериментальный пример 1.
Анализ активации рецепторов GLP-1 и глюкагона
Человеческие рецепторы GLP-1 или глюкагона транзиентно сверхэкспрессировали в клетках таким образом, чтобы аналог по настоящему изобретению мог активировать рецепторы, приводя к росту циклического аденозинмонофосфата (cAMP), последовательно активирующего отвечающие элементы циклического аденозинмонофосфата (CRE). Затем полученную увеличенную активность люциферазы использовали в качестве инструмента для оценки эффекта на активацию каждого рецептора.
GLP-1 и глюкагон использовали в качестве положительного контроля в соответствующей оценке. Лираглутид и семаглутид, которые являются агонистами GLP-1, одобренными для лечения диабета, и MEDI0382, пептидный аналог оксинтомодулина, который проходит клинические испытания фазы II (Diabetes, Obesity and Metabolism 2016; 18: 1176-1190, Lancet 2018; 391: 2607-2618), а также представленные выше соединения 39-47 синтезировали и использовали в качестве сравнительных примеров.
Renilla
Renilla
Renilla
Вектор экспрессии человеческого GLP-1 или глюкагона (далее в настоящем документе «OriGene») транзиентно трансфицировали в клетки яичника китайского хомячка (CHO-K1) плазмидными ДНК, которые могут индуцировать экспрессию люциферазы светлячка или люциферазы  (соответственно), с применением липофектамина и реагента Plus (Invitrogen). Через 3 часа после трансфекции среду заменяли минимальной питательной средой альфа (α-MEM), содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS). На следующий день среду заменяли α-MEM, содержащей аналог по настоящему изобретению и 0,1% бычьего сывороточного альбумина (BSA). Через 6 часов добавляли реагент для анализа двойной люциферазы в том же количестве, что и среда, в которую были погружены клетки, и непрерывно измеряли активности люциферазы светлячка и люциферазы . Величины активности люциферазы светлячка корректировали по отношению к активности люциферазы  для получения эффективности трансфекции.
50
Для измерения эффективности в отношении активности рецепторов выполняли тест с использованием множества концентраций (multi-concentration test) на аналоге по настоящему изобретению с получением максимального эффекта аналога в отношении относительной активации (%) на GLP-1 или глюкагон, и концентрацию, вызывающую 50% активацию (EC), рассчитывали с использованием анализа методом нелинейной регрессии. Полученные данные приведены в таблице 5.
Таблица 5
Пептидные аналоги ацилированного оксинтомодулина и их способность активировать человеческие рецепторы GLP-1 и глюкагона
<b>Структура</b>
<b>Соединение</b>
<b>ЕС</b><sub><b>50</b></sub><b> (пМ)</b>
<b>Рецепторы GLP-1</b>
<b>Рецепторы глюкагона</b>
Контроль
GLP-1
А
-
Глюкагон
-
А
Примеры
Соединение 1
А
В
Соединение 2
А
А
Соединение 3
А
А
Соединение 4
А
В
Соединение 5
А
В
Соединение 6
А
А
Соединение 7
А
А
Соединение 8
В
В
Соединение 9
А
А
Соединение 10
А
А
Соединение 11
А
В
Соединение 12
А
А
Соединение 13
В
В
Соединение 14
А
А
Соединение 15
А
А
Соединение 16
А
А
Соединение 17
А
А
Соединение 18
А
А
Соединение 19
А
А
Соединение 20
А
А
Соединение 21
А
А
Соединение 22
А
А
Соединение 23
А
А
Соединение 24
А
В
Соединение 25
А
А
Соединение 26
А
А
Соединение 27
А
А
Соединение 28
С
С
Соединение 29
А
А
Соединение 30
А
А
Соединение 31
А
А
Соединение 32
А
А
Соединение 33
А
А
Соединение 34
А
А
Соединение 35
А
А
Соединение 36
А
А
Соединение 37
А
А
Соединение 38
А
А
Сравнительные примеры
Оксинтомодулин
В
В
Лираглутид
В
-
Семаглутид
В
-
MEDI0382
А
В
Соединение 39
D
D
Соединение 40
С
D
Соединение 41
С
D
Соединение 42
С
D
Соединение 43
D
D
Соединение 44
С
D
Соединение 45
С
С
Соединение 46
С
С
Соединение 47
А
В
*А: ниже 10 пМ;  В: 10-100 пМ;  D: выше 1000 пМ
50
Результаты эксперимента показывают, что соединения аналогов ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением имеют значительно более низкие значения ЕС для рецепторов GLP-1 и глюкагона по сравнению с эндогенным гормоном оксинтомодулином, что указывает на превосходную активность в отношении рецепторов GLP-1 и глюкагона. Они также продемонстрировали превосходную активность в отношении рецепторов GLP-1 по сравнению с лираглутидом и семаглутидом, которые являются современными лекарственными средствами для лечения диабета, представленными на рынке. Они также продемонстрировали лучшую активность в отношении рецепторов глюкагона и сходную активность в отношении рецепторов GLP-1 по сравнению с MEDI0382, который является пептидным аналогом оксинтомодулина, проходящим в настоящее время клинические испытания.
Соединение 3, пептидный аналог ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением, показало гораздо более высокую активность в отношении рецепторов GLP-1 и глюкагона, чем соединение 39 сравнительного примера, пептидный аналог неацилированного оксинтомодулина. Таким образом, полагают, что ацилирование пептидных аналогов оксинтомодулина значительно влияет на увеличение активности.
2
14
3
9
10
Кроме того, соединение 40, сравнительный пример с ацилированием в X, и соединение 41, сравнительный пример с ацилированием в X, показали значительно более низкую активность в отношении рецепторов GLP-1 и глюкагона по сравнению с соединениями 3, 15 и 16 по настоящему изобретению с ацилированием в положениях X, X и X, соответственно. По-видимому, это указывает на то, что положение ацилирования пептидных аналогов оксинтомодулина значительно влияет на их активность.
1
in vitro
Соединения 3, 10, 17 и 18, ацилированные в соответствии с настоящим изобретением, имеют 1, 2, 3 и 4 (соответственно) 2-(2-(2-аминоэтокси)-этокси)ацетоильных групп в качестве полимерного фрагмента Z. Не наблюдалось различия в активности  в зависимости от числа 2-(2-(2-аминоэтокси)-этокси)ацетоильных групп. Все показали превосходную активность в отношении рецепторов GLP-1 и глюкагона.
2
2
2
in vitro
Соединения 42, 43 и 44 представляют собой ацилированные сравнительные примеры, имеющие карбоновую кислоту на конце липофильного липидного фрагмента в качестве Z. Они показали более низкую активность в отношении рецепторов GLP-1 и глюкагона независимо от длины углеродной цепи липида по сравнению с ацилированными соединениями в соответствии с настоящим изобретением, такими как соединение 3, у которого концевая область липофильного липидного фрагмента представляет собой углеводород. Соединения 45 и 46 сравнительного примера, имеющие концевую область липофильного липидного фрагмента, присоединенную к карбоновой кислоте, и Gly и Val в качестве Z, показали более низкую активность в отношении рецепторов GLP-1 и глюкагона по сравнению с Соединением 3 и другими соединениями в соответствии с настоящим изобретением, у которых концевая область липофильного липидного фрагмента представляет собой углеводород, что указывает на то, что ацилированные соединения с полярными заместителями на конце липофильного липидного фрагмента в качестве Z обладают низкой активностью .
Соединение 47 сравнительного примера, циклический пептидный аналог неацилированного оксинтомодулина, показало более низкую активность в отношении рецепторов глюкагона по сравнению с соединением 14 по настоящему изобретению, имеющим тот же тип внутримолекулярной структуры лактамного кольца. Можно сделать вывод о том, что ацилирование пептидных аналогов оксинтомодулина приводит к повышению активности.
Соединение 28, которое является циклическим пептидным аналогом ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением, имеет внутримолекулярную дисульфидную связь. Оно показало более низкую активность в отношении рецепторов GLP-1 и глюкагона по сравнению с соединением 22, другим циклическим пептидным аналогом ацилированного оксинтомодулина. Можно сделать вывод о том, что размер внутримолекулярного кольца циклического пептидного аналога ацилированного оксинтомодулина влияет на его активность.
Экспериментальные примеры 2.
Оценка эффективности в отношении потери массы тела после однократной инъекции пептидов в соответствии с настоящим изобретением
Для оценки эффективности в отношении потери массы тела пептидного аналога ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением лабораторных мышиных самцов (мышь C57BL/6) кормили диетой с высоким содержанием жира. Мышей, у которых индуцировали ожирение с помощью диеты с высоким содержанием жира, разделяли на группы в зависимости от массы тела перед началом эксперимента. Соединение 3 по настоящему изобретению готовили в дистиллированной воде, содержащей 0,01% Твин-80, с получением дозы 100 нмоль/кг. Эту дозу инъецировали однократно подкожно мыши. После этого один раз в день, в одно и то же время каждый день, измеряли массу тела и потребление пищи. Результаты показаны на фигуре 1.
in vivo
Хотя не наблюдалось значительного различия в кумулятивном потреблении пищи по сравнению с контрольной группой, которой инъецировали только носитель, потеря массы тела наблюдалась в группе, которой инъецировали соединение 3, по сравнению с контрольной группой; эффект длился на протяжении 4 дней. Это указывает на то, что пептидный аналог оксинтомодулина по настоящему изобретению может иметь эффект в отношении потери массы тела, который сохраняется в течение некоторого периода времени после однократного введения благодаря улучшенной химической стабильности по сравнению с оксинтомодулином, для эффективности которого требуется по меньшей мере 1 введение в день из-за его нестабильности  и очень короткого периода полужизни.
Экспериментальный пример 3.
Оценка эффективности в отношении потери массы тела при 1-недельном повторном инъецировании пептида по настоящему изобретению
Целью данного эксперимента является сравнение эффективности в отношении потери массы тела пептидного аналога ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением с коммерчески доступными средствами для лечения диабета/ожирения. Самцов лабораторных мышей (мышь C57BL/6) кормили диетой с высоким содержанием жира. Перед началом эксперимента мышей с ожирением, индуцированным диетой с высоким содержанием жира, распределяли по группам в зависимости от массы тела. Соединение 3, пример в соответствии с настоящим изобретением, готовили в дистиллированной воде, содержащей 0,01% Твин-80, с получением дозы 100 нмоль/кг или 300 нмоль/кг. В качестве контроля в том же носителе готовили лираглутид, коммерчески доступное средство для лечения диабета/ожирения, с получением дозы 100 нмоль/кг. После этого оба препарата инъецировали подкожно на протяжении 6 дней, один раз в день, как указано в таблице 6. Один раз в день, в одно и то же время каждый день, измеряли массу тела и потребление пищи для сравнения эффективности в отношении снижения массы тела аналога ацилированного оксинтомодулина с лираглутидом. На 7-й день введение прекращали и проверяли восстановление массы тела. Результаты показаны на фигурах 2а и 2b.
Таблица 6
<b>Группа</b>
<b>Вводимое лекарственное средство и доза</b>
<b>Способ введения</b>
Группа сравнения
Лираглутид, 100 нмоль/кг/QD (1 раз в день)
S.C. (подкожно)
один раз в день х 6
Экспериментальные группы
Соединение 3, 100 нмоль/кг/QD (1 раз в день)
Соединение 3, 300 нмоль/кг/QD (1 раз в день)
Не наблюдалось значительного различия в кумулятивном потреблении пищи между группами, получавшими соединение 3 и лираглутид, которым инъецировали одинаковую дозу 100 нмоль/кг. Однако лираглутид показал потерю массы тела, составляющую приблизительно 12,2%, тогда как соединение 3 показало потерю массы тела, составляющую приблизительно 24,6%. Кроме того, инъецирование соединения 3 в дозе 300 нмоль/кг вызвало потерю массы тела, составляющую приблизительно 37,8%. Пептидный аналог ацилированного оксинтомодулина по настоящему изобретению показал более чем в два раза более высокий эффект в отношении потери массы тела по сравнению с лираглутидом и сохранял более низкую массу тела по сравнению с контрольной группой, получавшей носитель, даже после прекращения введения.
Экспериментальный пример 4.
Оценка эффективности в отношении потери массы тела при повторном инъецировании пептида в соответствии с настоящим изобретением на протяжении 5 дней
Целью данного эксперимента являлось выявление эффекта в отношении потери массы тела пептидного аналога ацилированного оксинтомодулина по настоящему изобретению. Самцов лабораторных крыс (крыса Wistar) кормили диетой с высоким содержанием жира. Перед началом эксперимента крыс с ожирением, индуцированным диетой с высоким содержанием жира, распределяли на группы в зависимости от массы тела. Соединение 3 по настоящему изобретению готовили в дистиллированной воде, содержащей 0,01% Твин-80, с получением дозы 100 нмоль/кг или 300 нмоль/кг, которую инъецировали подкожно один раз в день на протяжении в общей сложности 4 дней, как указано в таблице 7. Массу тела и потребление пищи измеряли один раз в день, в одно и то же время каждый день, для оценки эффективности в отношении потери массы тела во времени по сравнению с первоначальной массой тела. На 5-й день введение прекращали и проверяли восстановление массы тела. Результаты показаны на фигурах 3a и 3b.
Таблица 7
<b>Группа</b>
<b>Вводимое лекарственное средство и доза</b>
<b>Способ введения</b>
Экспериментальные группы
Соединение 3, 100 нмоль/кг/QD
S.C. (подкожно)
один раз в день х 4
Соединение 3, 300 нмоль/кг/QD
Группа, которой инъецировали соединение 3, значительно отличалась по кумулятивному потреблению пищи от контрольной группы, получавшей носитель. Обе дозы оказались эффективными в отношении потери массы тела, которая составила приблизительно 12,5%. Пониженная масса тела по сравнению с контрольной группой, получавшей носитель, сохранялась даже после прекращения введения.
Экспериментальный пример 5.
Оценка эффективности в отношении потери массы тела после повторного инъецирования пептида по настоящему изобретению на протяжении 10 дней
Целью данного эксперимента являлось сравнение эффективности в отношении массы тела пептидного аналога ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением с коммерчески доступными средствами для лечения диабета. Самцов лабораторных мышей (мышь C57BL/6) кормили диетой с высоким содержанием жира. Перед началом эксперимента мышей с ожирением, индуцированным диетой с высоким содержанием жира, распределяли по группам в зависимости от массы тела. Соединение 3 по настоящему изобретению готовили в дистиллированной воде, содержащей 0,01% Твин-80, с получением дозы 100 нмоль/кг или 300 нмоль/кг. Семаглутид, коммерчески доступное средство для лечения диабета, готовили в том же носителе с получением дозы 100 нмоль/кг. Затем их инъецировали подкожно один раз каждые 3 дня на протяжении в общей сложности 10 дней, как указано в таблице 8. Массу тела и потребление пищи измеряли один раз в день, в одно и то же время каждый день, для сравнения эффективности в отношении потери массы тела пептидного аналога ацилированного оксинтомодулина с семаглутидом. Результаты показаны на фигурах 4а и 4b.
Таблица 8
<b>Группа</b>
<b>Вводимое лекарственное средство и доза</b>
<b>Способ введения</b>
Группа сравнения
Семаглутид, 100 нмоль/кг/Q3D (3 раза в день)
S.C. (подкожно)
один раз каждые 3 дня х 4
Экспериментальные группы
Соединение 3, 100 нмоль/кг/Q3D (3 раза в день)
Соединение 3, 300 нмоль/кг/Q3D (3 раза в день)
Соединение 3 показало более высокое кумулятивное потребление пищи по сравнению с семаглутидом в той же дозе (100 нмоль/кг), но при этом показало превосходную эффективность в отношении потери массы тела по сравнению с семаглутидом (соединение 3: 13,9%, семаглутид: 9,7%). Кроме того, соединение 3 в дозе 300 нмоль/кг вызвало потерю массы тела, составляющую приблизительно 16,9%. Пептидный аналог ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением показал превосходную дозозависимую эффективность в отношении снижения массы тела по сравнению с семаглутидом.
Экспериментальный пример 6.
Оценка эффективности в отношении потери массы тела при повторном 10-дневном инъецировании пептида в соответствии с настоящим изобретением
Целью данного эксперимента является сравнение эффективности в отношении потери массы тела пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением с различными структурами - рядом полимеров и наличием образования циклического пептида. Самцов лабораторных мышей (мышь C57BL/6) кормили диетой с высоким содержанием жира. Перед началом эксперимента мышей с ожирением, индуцированным диетой с высоким содержанием жира, распределяли по группам в зависимости от массы тела. Соединения 3, 10 и 14 готовили в дистиллированной воде, содержащей 0,01% Твин-80, с получением дозы 100 нмоль/кг, и затем инъецировали подкожно один раз каждые 3 дня на протяжении в общей сложности 10 дней, как указано в таблице 9. Массу тела и потребление пищи измеряли один раз в день, в одно и то же время каждый день, для сравнения эффективности Соединения 3 с Соединениями 10 и 14 в отношении потери массы тела. Результаты показаны на фигурах 5а и 5b.
Таблица 9
<b>Группа</b>
<b>Вводимое лекарственное средство и доза</b>
<b>Способ введения</b>
Экспериментальная группа
Соединение 3, 100 нмоль/кг/Q3D
S.C. (подкожно)
один раз каждые 3 дня х 4
Соединение 10, 100 нмоль/кг/Q3D
Соединение 14, 100 нмоль/кг/Q3D
При одинаковой дозировке соединения 10 и 14 показали кумулятивное потребление пищи, которое снизилось на 20% и 27%, соответственно, по сравнению с контрольной группой, получавшей носитель. Кумулятивное потребление пищи для Соединения 3 уменьшилось приблизительно на 17%. Все три соединения показали превосходную эффективность в отношении потери массы тела, которая составила приблизительно 19-22% от первоначальной массы тела. Циклическое пептидное соединение 14 показало немного лучшие результаты по сравнению с соединениями 3 и 10.
Экспериментальный пример 7.
Оценка эффективности в отношении потери массы тела при повторном 1-недельном инъецировании пептида по настоящему изобретению
Целью данного эксперимента является сравнение эффективности в отношении потери массы тела пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина различных структур - рядом липофильных липидных фрагментов или полимеров в пептиде. Лабораторных мышиных самцов (мышь C57BL/6) кормили диетой с высоким содержанием жира. Перед началом эксперимента мышей с ожирением, индуцированным диетой с высоким содержанием жира, распределяли по группам в зависимости от массы тела.
Соединения 3, 13 и 18 в соответствии с настоящим изобретением готовили в дистиллированной воде, содержащей 0,01% Твин-80, с получением дозы 100 нмоль/кг и, как указано в таблице 10, инъецировали подкожно один раз каждые 3 дня на протяжении в общей сложности 7 дней. Массу тела и потребление пищи оценивали один раз в день, в одно и то же время каждый день. Эффективность соединения 3 в отношении потери массы тела сравнивали с соединениями 13 и 18. Результаты показаны на фигурах 6а и 6b.
Таблица 10
<b>Группа</b>
<b>Вводимое лекарственное средство и доза</b>
<b>Способ введения</b>
Экспериментальная группа
Соединение 3, нмоль/кг/Q3D
S.C.
один раз каждые 3 дня х 3
Соединение 13, нмоль/кг/Q3D
Соединение 18, нмоль/кг/Q3D
in vitro
При одинаковой дозировке соединение 18 показало сходную с соединением 3 превосходную эффективность в отношении потери массы тела, тогда как соединение 13 не оказывало какого-либо значительного влияния на массу тела. Соединение 13 показало приблизительно в 10 раз меньшую эффективность  по сравнению с соединением 3, и было предсказуемым в испытаниях на животных, подтверждая, что эффективность в отношении потери массы тела обусловлена концевой структурой липофильного липидного фрагмента, подтверждая важность структуры.
Экспериментальный пример 8.
Оценка эффективности в отношении потери массы тела при повторном 2-недельном инъецировании пептида в соответствии с настоящим изобретением
Целью данного эксперимента является сравнение эффективности в отношении потери массы тела пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением с различными циклическими пептидными структурами. Лабораторных мышиных самцов (мышь C57BL/6) кормили диетой с высоким содержанием жира. Перед началом эксперимента мышей с ожирением, вызванным диетой с высоким содержанием жира, распределяли по группам в зависимости от массы тела. Соединения 3, 21-25 в соответствии с настоящим изобретением готовили в дистиллированной воде, содержащей 0,01% Твин-80, с получением дозы 100 нмоль/кг и, как указано в таблице 11, подкожно инъецировали один раз каждые 3 дня на протяжении в общей сложности 2 недель. Массу тела и потребление пищи оценивали один раз в день, в одно и то же время каждый день. Сравнивали эффективность в отношении потери массы тела соединения 3 и соединений 21-25. Результаты показаны на фигурах 7a-7d.
Таблица 11
<b>Группа</b>
<b>Вводимое лекарственное средство и доза</b>
<b>Способ введения</b>
Экспериментальная группа
Соединение 3, 100 нмоль/кг/Q3D
S.C. (подкожно)
один раз каждые 3 дня х 5
Соединение 21, 100 нмоль/кг/Q3D
Соединение 22, 100 нмоль/кг/Q3D
Соединение 23, 100 нмоль/кг/Q3D
Соединение 24, 100 нмоль/кг/Q3D
Соединение 25, 100 нмоль/кг/Q3D
in vitro
При одинаковой дозировке соединения 23 и 25 показали более высокое кумулятивное потребление пищи по сравнению с соединением 3. Соединения 21 и 22 показали сходное с соединением 3 кумулятивное потребление пищи. Соединение 3 вызвало сходную или лучшую потерю массы тела по сравнению с соединениями 21, 23 и 25. Было подтверждено, что соединение 25 обладает лучшей эффективностью в отношении потери массы тела по сравнению с соединением 3. С другой стороны, соединение 24, которое показало несколько более слабое действие на рецептор глюкагона по сравнению с другими соединениями в анализе , продемонстрировало значительную эффективность в отношении потери массы тела, приблизительно 13,4% от первоначальной массы тела, демонстрируя более низкую эффективность в отношении потери массы тела по сравнению с соединением 3. Соединение 25 показало сходный с соединением 3 уровень эффективности в отношении потери массы тела, но имело более низкое кумулятивное потребление пищи. С другой стороны, соединение 22 показало сходную с соединением 3 эффективность в отношении потери массы тела, и сходное кумулятивное потребление пищи. Циклические пептидные аналоги ацилированного оксинтомодулина показали различные картины эффективности в отношении потери массы тела в зависимости от их структур.
Экспериментальный пример 9.
Оценка эффективности в отношении потери массы тела при повторном 2-недельном инъецировании пептида по настоящему изобретению
Как и в экспериментальном примере 8, данный эксперимент проводили для сравнения пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина по настоящему изобретению в низких дозах. Лабораторных мышиных самцов (мышь C57BL/6) кормили диетой с высоким содержанием жира. Перед началом эксперимента мышей с ожирением, индуцированным диетой с высоким содержанием жира, распределяли по группам в зависимости от массы тела. Соединения 3 и 22 в соответствии с настоящим изобретением готовили в дистиллированной воде, содержащей 0,01% Твин-80, с получением дозы 10 нмоль/кг или 30 нмоль/кг и, как указано в таблице 12, инъецировали подкожно один раз каждые 3 дня на протяжении в общей сложности 2 недель. Массу тела и потребление пищи оценивали один раз в день, в одно и то же время каждый день. Сравнивали эффективность соединения 3 и соединения 22 в отношении потери массы тела. Результаты показаны на фигурах 8a и 8b.
Таблица 12
<b>Группа</b>
<b>Вводимое лекарственное средство и доза</b>
<b>Способ введения</b>
Экспериментальная группа
Соединение 3, 10 нмоль/кг/Q3D
S.C. (подкожно)
один раз каждые 3 дня х 5
Соединение 3, 30 нмоль/кг/Q3D
Соединение 22, 10 нмоль/кг/Q3D
Соединение 3, 30 нмоль/кг/Q3D
При одинаковой дозировке соединение 22 показало более высокое кумулятивное потребление пищи по сравнению с соединением 3. Соединение 22 в дозе 10 нмоль/кг показало сходный уровень кумулятивного потребления пищи с контрольной группой, получавшей носитель, но эффективность в отношении потери массы тела составила 7,5%. Кроме того, соединение 22 в дозе 30 нмоль/кг показало более высокое потребление пищи по сравнению с соединением 3 в той же дозе, но имело сходные уровни эффективности в отношении потери массы тела. Можно сделать вывод о том, что на соединение 22 больше влияет эффективность, обусловленная активацией рецептора глюкагона, по сравнению с соединением 3.
Экспериментальный пример 10.
Оценка эффективности в отношении потери массы тела при повторном 5-дневном инъецировании пептида по настоящему изобретению
Этот эксперимент проводили для сравнения эффективности в отношении потери массы тела пептидного аналога ацилированного оксинтомодулина по настоящему изобретению с коммерчески доступными средствами для лечения диабета/ожирения и соединением-лидером пептидного аналога оксинтомодулина, находящимся в настоящее время в стадии разработки. Лабораторных мышиных самцов (мышь C57BL/6) кормили диетой с высоким содержанием жира. Перед началом эксперимента мышей с ожирением, индуцированным диетой с высоким содержанием жира, распределяли по группам в зависимости от массы тела. Соединение 3 по настоящему изобретению готовили в дистиллированной воде, содержащей 0,01% Твин-80, с получением дозы 30 нмоль/кг. В качестве сравнительных примеров лираглутид (коммерчески доступное средство для лечения диабета/ожирения) и MEDI0382 (проходит клинические испытания) готовили в том же носителе для получения дозы 30 нмоль/кг. Затем их вводили подкожно один раз в день на протяжении в общей сложности 4 дней, как указано в таблице 13. Массу тела и потребление пищи измеряли один раз в день, в одно и то же время каждый день. Эффективность аналога в отношении потери массы тела сравнивали с лираглутидом и MEDI0382. Результаты показаны на фигурах 9а и 9b.
Таблица 13
<b>Группа</b>
<b>Вводимое лекарственное средство и доза</b>
<b>Способ введения</b>
Группа сравнения
Лираглутид, 30 нмоль/кг/QD
S.C. (подкожно)
один раз в день х 4
MEDI0382, 30 нмоль/кг/QD
Экспериментальная группа
Соединение 3, 30 нмоль/кг/QD
Среди трех веществ в одинаковой дозе группа, получавшая соединение 3, показала наибольшую потерю массы тела от исходного состояния (соединение 3: 18,6%, лираглутид: 12,7%, MEDI0382: 8,0%).
Экспериментальный пример 11.
Оценка эффективности в отношении потери массы тела при повторном 4-недельном инъецировании пептида в соответствии с настоящим изобретением
Этот эксперимент проводили для сравнения эффективности в отношении потери массы тела пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением с коммерчески доступным средством для лечения диабета. Лабораторных мышиных самцов с ожирением и диабетом (мышь FATZO) перед экспериментом кормили диетой с высоким содержанием жира и распределяли по группам в зависимости от массы тела, жировых отложений, уровня глюкозы в крови не натощак и гликированного гемоглобина (HbA1c). Соединения 3 и 22 в соответствии с настоящим изобретением готовили в дистиллированной воде, содержащей 0,01% Твин-80, с получением дозы 30 нмоль/кг или 100 нмоль/кг. Семаглутид, коммерчески доступное средство для лечения диабета, готовили в том же носителе с получением дозы 100 нмоль/кг. Затем их вводили подкожно один раз каждые 3 дня на протяжении в общей сложности 4 недель, как указано в таблице 14. Массу тела и потребление пищи измеряли один раз в день, в одно и то же время каждый день. Жировые отложения измеряли за 4 недели до аутопсии для сравнения эффективности в отношении снижения массы тела и жировых отложений пептидных аналогов оксинтомодулина по настоящему изобретению по сравнению с семаглутидом. Результаты показаны на фигурах 10a-10c.
Таблица 14
<b>Группа</b>
<b>Вводимое лекарственное средство и доза</b>
<b>Способ введения</b>
Группа сравнения
Семаглутид, 100 нмоль/кг/Q3D
S.C. (подкожно)
один раз каждые 3 дня х 10
Экспериментальная группа
Соединение 3, 30 нмоль/кг/Q3D
Соединение 3, 100 нмоль/кг/Q3D
Соединение 22, 30 нмоль/кг/Q3D
Соединение 22, 100 нмоль/кг/Q3D
При одной и той же, а также при более низкой дозировке (100 и 30 нмоль/кг, соответственно), соединения 3 и 22 по настоящему изобретению показали очень высокую эффективность в отношении снижения массы тела по сравнению с семаглутидом, несмотря на более высокое кумулятивное потребление пищи. Предполагается, что это является результатом механизма действия пептидного аналога оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением, являющегося двойным агонистом рецепторов GLP-1 и глюкагона, тогда как семаглутид является агонистом рецептора GLP-1.
Экспериментальный пример 12.
Оральный тест толерантности к глюкозе у мышей при введении пептида по настоящему изобретению
В этом эксперименте эффект в отношении улучшения толерантности к глюкозе у лабораторных мышиных самцов (мышь C57BL/6) пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением оценивали как улучшение контроля постпрандиальной гликемии. Лабораторных мышей не кормили один день до начала эксперимента. Затем соединение 3, 22 или 25 в соответствии с настоящим изобретением готовили в дистиллированной воде, содержащей 0,01% Твин-80, и инъецировали подкожно за 30 минут до нагрузки глюкозой. Раствор глюкозы вводили перорально через 30 минут после инъекции пептидного аналога оксинтомодулина. Глюкозу в цельной крови измеряли путем забора из хвостовой вены непосредственно перед введением лекарственного средства и глюкозы, и через 2 часа после нагрузки глюкозой в назначенное время. На основании полученных результатов площадь под кривой (AUC) кривой изменения уровня глюкозы в крови во времени строили для расчета параметра AUC глюкозы в крови для аналога и сравнения с контролем глюкозы в процентах для оценки эффективности в отношении улучшения толерантности к глюкозе. Эксперименты проводили отдельно для каждого соединения. Соединение 3 в дозе 30 нмоль/кг использовали в качестве сравнения для соединения 22 или 25. Объединенные результаты показаны на фигуре 11.
Пептидные аналоги показали значительное дозозависимое снижение AUC глюкозы в крови при 30 нмоль/кг и выше. В частности, соединение 25 показало эффективность в отношении значительного улучшения толерантности к глюкозе и в три раза превосходящую эффективность в отношении улучшения толерантности к глюкозе по сравнению с соединениями 3 и 22 во всех оцененных дозовых группах.
Экспериментальный пример 13.
Оценка эффективности в отношении гликемического контроля при повторном 6-недельном инъецировании пептида в соответствии с настоящим изобретением
Настоящее изобретение выполняли для сравнения эффективности с точки зрения гликемического контроля пептидных аналогов ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением с коммерчески доступным средством для лечения диабета. Перед началом эксперимента лабораторных мышиных самцов с диабетом (мыши db/db) распределяли по группам в зависимости от уровня глюкозы в крови не натощак, гликированного гемоглобина (HbA1c) и массы тела. Соединение 3 в соответствии с настоящим изобретением готовили в дистиллированной воде, содержащей 0,01% Твин-80, с получением дозы 100 нмоль/кг. Коммерчески доступный семаглутид готовили в том же носителе с получением дозы 100 нмоль/кг. После этого их инъецировали подкожно один раз каждые 3 дня на протяжении в общей сложности 6 недель, как указано в таблице 15. Глюкозу не натощак, массу тела и потребление пищи измеряли один раз в неделю, через 24 часа после введения лекарственного средства. Гликированный гемоглобин измеряли через 3, 5 и 6 недель. Эффективность пептидного аналога оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением в отношении гликемического контроля сравнивали с эффективностью семаглутида. Результаты показаны на фигурах 12а и 12b.
Таблица 15
<b>Группа</b>
<b>Введенное лекарственное средство и доза</b>
<b>Способ введения</b>
Группа сравнения
Семаглутид, 100 нмоль/кг/Q3D
S.C. (подкожно)
один раз каждые 3 дня х 16
Экспериментальная группа
Соединение 3, 100 нмоль/кг/Q3D
Первоначально соединение 3 по настоящему изобретению показало сходную или более низкую эффективность по сравнению с семаглутидом в той же дозе (100 нмоль/кг). Однако после длительного введения соединение 3 показало лучшую эффективность в отношении гликемического контроля, чем семаглутид. Контрольная группа, получавшая носитель, имела конечный уровень глюкозы в крови не натощак 581 мг/дл, что указывает на очень тяжелое диабетическое состояние. Напротив, семаглутид показал конечный уровень глюкозы не натощак 342 мг/дл; соединение 3 имело конечный уровень глюкозы в крови не натощак 274 мг/дл, что указывает на значительное ингибирование повышения уровня глюкозы. Конечный гликированный гемоглобин (HbA1c) в контрольной группе, получавшей носитель, на 5,15% пунктов превышал исходный уровень. Напротив, HbA1c семаглутида увеличился на 2,65% пунктов, и HbA1c соединения 3 только на 1,73% пункта, что подтверждает эффективность ингибирования повышения уровня гликированного гемоглобина. Таким образом, пептидный аналог ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением показал превосходную эффективность по сравнению с семаглутидом в отношении замедления развития диабета.
Экспериментальный пример 14.
Оценка эффективности в отношении гликемического контроля при повторном 4-недельном инъецировании пептида в соответствии с настоящим изобретением
Это такой же эксперимент, что и экспериментальный пример 11. Его проводили для сравнения эффективности в отношении гликемического контроля пептидного аналога ацилированного оксинтомодулина в соответствии с настоящим изобретением с коммерчески доступным средством для лечения диабета. Лабораторных мышиных самцов с ожирением и диабетом (мышь FATZO) перед началом эксперимента кормили диетой с высоким содержанием жира и распределяли по группам в зависимости от массы тела, жировых отложений, уровня глюкозы не натощак и гликированного гемоглобина (HbA1c). Соединения 3 и 22 в соответствии с настоящим изобретением готовили в дистиллированной воде, содержащей 0,01% Твин-80, с получением дозы 30 нмоль/кг или 100 нмоль/кг. Коммерчески доступный семаглутид готовили в том же носителе с получением дозы 100 нмоль/кг. Как указано в Таблице 16, оба препарата вводили подкожно один раз каждые 3 дня на протяжении в общей сложности 4 недель. Массу тела и потребление пищи измеряли один раз в день, в одно и то же время каждый день. Уровень глюкозы в крови не натощак измеряли приблизительно каждые 10 дней, через 24 после введения. Уровень гликированного гемоглобина измеряли перед аутопсией через 4 недели. Эффективность в отношении гликемического контроля пептидного аналога оксинтомодулина по настоящему изобретению сравнивали с семаглутидом. Результаты показаны на фигурах 13a и 13b.
Таблица 16
<b>Группа</b>
<b>Ввведенное лекарственное средство и доза</b>
<b>Способ введения</b>
Группа сравнения
Семаглутид, 100 нмоль/кг/Q3D
S.C.
один раз каждый 3 дня х 10
Экспериментальная группа
Соединение 3, 30 нмоль/кг/Q3D
Соединение 3, 100 нмоль/кг/Q3D
Соединение 22, 30 нмоль/кг/Q3D
Соединение 22, 100 нмоль/кг/Q3D
Группы, которым вводили соединения 3 и 22 по настоящему изобретению, продемонстрировали превосходную эффективность в отношении гликемического контроля и ингибирование повышения уровня гликированного гемоглобина на тех же уровнях, что и семаглутид. Дополнительно к эффекту в отношении потери массы тела, показанному в экспериментальном примере 11, пептидный аналог оксинтомодулина по настоящему изобретению также обладает эффектом в отношении гликемического контроля.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110>    Донг-А СТ Ко., Лтд.
<120>    Пептидный аналог ацилированного оксинтомодулина
<130>    WR-18010-DAP
<150>    KR 10-2017-0103798
<151>    2017-08-16
<150>    KR 10-2018-0095717
<151>    2018-08-16
<160>    53
<170>    KoPatentIn 3.0
<210>    1
<211>    37
<212>    БЕЛОК
<213>    Homo sapiens
<400>    1
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn
20                  25                  30
Arg Asn Asn Ile Ala
35
<210>    2
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма-глутаминовая
кислота]-[октадеканоил])
<400>    2
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    3
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма-глутаминовая
кислота]-[октадеканоил])
<400>    3
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    4
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма-глутаминовая
кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    4
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    5
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма-глутаминовая
кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (30)
<223>    Амидирование С-концевое амидирование
<400>    5
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    6
<211>    37
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма-глутаминовая
кислота]-[октадеканоил])
<400>    6
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn
20                  25                  30
Arg Asn Asn Ile Ala
35
<210>    7
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма-глутаминовая
кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (30)
<223>    Амидирование С-концевое амидирование
<400>    7
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    8
<211>    37
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма-глутаминовая
кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    8
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn
20                  25                  30
Arg Asn Asn Ile Ala
35
<210>    9
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма-глутаминовая
кислота]-[icosanoyl])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    9
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    10
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма-глутаминовая
кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    10
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    11
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)3]-[гамма-глутаминовая
кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    11
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    12
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys; Lys([Gly-Gly-Ser-Gly-Ser-Gly]-[гамма-
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    12
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    13
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    13
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Arg Ala Lys
20                  25                  30
<210>    14
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[17-аминокарбонилгептадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    14
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    15
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    Лактамный мостик между боковыми цепями в положениях 16 и 20
<400>    15
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    16
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<400>    16
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    17
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (20)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<400>    17
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    18
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)]-[гамма глутаминовая
кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    18
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    19
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)4]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    19
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    20
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    Лактамный мостик между боковыми цепями в положениях 16 и 20
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (30)
<223>    Амидирование С-концевое амидирование
<400>    20
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    21
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)3]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    Лактамный мостик между боковыми цепями в положениях 16 и 20
<400>    21
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    22
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    Лактамный мостик между боковыми цепями в положениях 16 и 20
<400>    22
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Lys
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Glu Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    23
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    1,3-фенилендиметил лейцин поперечное сшивание между 16 и 20
<400>    23
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Cys
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Cys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    24
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    1,4-пиперазинил поперечное сшивание между 16 и 20
<400>    24
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Glu Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    25
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)4]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    Лактамный мостик между боковыми цепями в положениях 16 и 20
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (30)
<223>    Амидирование С-концевое амидирование
<400>    25
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    26
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)4]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    Лактамный мостик между боковыми цепями в положениях 16 и 20
<400>    26
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    27
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    Лактамный мостик между боковыми цепями в положениях 16 и 20
<400>    27
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Asp
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    28
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    Лактамный мостик между боковыми цепями в положениях 16 и 20
<400>    28
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Lys
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Asp Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    29
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    дисульфидный мостик между боковыми цепями в положениях 16 и 20
<400>    29
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Cys
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Cys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    30
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    1,4- фенилендиамино поперечное сшивание между 16 и 20
<400>    30
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Glu Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    31
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    1,2-этилендиамино поперечное сшивание между 16 и 20
<400>    31
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Glu Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    32
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    1,4- фениленбискарбонил поперечное сшивание между 16 и 20
<400>    32
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Lys
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    33
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    4-карбонилпиперидин-1-ил поперечное сшивание между 16 и 20
<400>    33
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Lys
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Glu Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    34
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    1-аминоциклогексан-4-карбонил поперечное сшивание между 16 и 20
<400>    34
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    35
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    4-аминобензоил поперечное сшивание между 16 и 20
<400>    35
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    36
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    глицин поперечное сшивание между 16 и 20
<400>    36
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    37
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    лейцин поперечное сшивание между 16 и 20
<400>    37
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    38
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    глицин поперечное сшивание между 16 и 20
<400>    38
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Asp
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    39
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма
глутаминовая кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    лейцин поперечное сшивание между 16 и 20
<400>    39
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Asp
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    40
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    40
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    41
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (9)
<223>    aa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гаммаглутаминовая
кислота]-[октадеканоил])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    41
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    42
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (30)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гаммаглутаминовая
кислота]-[октадеканоил])
<400>    42
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Xaa
20                  25                  30
<210>    43
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гаммаглутаминовая
кислота]-[15-carboxypentadecanoyl])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    43
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    44
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гаммаглутаминовая
кислота]-[17-carboxyheptadecanoyl])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    44
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    45
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гаммаглутаминовая
кислота]-[19-carboxynonadecanoyl])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    45
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    46
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гаммаглутаминовая
кислота]-[15-(N-(carboxymethyl)amino)carbonylpentadecanoyl])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    46
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    47
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys;
Lys([(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)ацетоил)2]-[гамма-глутаминовая
кислота]-[N-(1S)-(1-carboxy-2-methylpropyl)amino)carbonylpentadecanoyl])
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<400>    47
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<210>    48
<211>    31
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (2)
<223>    Xaa=аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    MOD_RES
<222>    (16)..(20)
<223>    Лактамный мостик между боковыми цепями в положениях 16 и 20
<400>    48
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1               5                  10                  15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Cys
20                  25                  30
<210>    49
<211>    32
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (2)
<223>    Xaa=Ser или аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (9)
<223>    Xaa=Asp или модифицированный Lys
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (10)
<223>    Xaa=Tyr или модифицированный Lys
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (11)
<223>    Xaa=Ser или модифицированный Lys
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (12)
<223>    Xaa=Lys или модифицированный Lys
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (13)
<223>    Xaa=Tyr или модифицированный Lys
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (14)
<223>    Xaa=Leu или модифицированный Lys
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (15)
<223>    Xaa=Asp или модифицированный Lys
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (16)
<223>    Xaa=Ser, аминоизомасляная кислота или модифицированный Lys
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (20)
<223>    Xaa=Gln или модифицированный Lys
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (27)
<223>    Xaa=Met or Leu
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (28)
<223>    Xaa=Asn or Arg
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (29)
<223>    Xaa=Thr or Ala
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (30)
<223>    Xaa=Lys или модифицированный Lys
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (31)
<223>    Xaa=необязательный, но если присутствует представляет собой
RNRNNIA(ArgAsnArgAsnAsnIleAla)
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (32)
<223>    Xaa= необязательный, когда 31 представляет собой
RNRNNIA(ArgAsnArgAsnAsnIleAla), Xaa отсутствует или представляет собой
модифицированный Lys
<400>    49
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
20                  25                  30
<210>    50
<211>    32
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (2)
<223>    Xaa=Ser или аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (10)
<223>    Xaa=Tyr или модифицированный Lys
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (16)
<223>    Xaa=Ser, аминоизомасляная кислота или модифицированный Lys
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (20)
<223>    Xaa=Gln или модифицированный Lys
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (27)
<223>    Xaa=Met or Leu
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (28)
<223>    Xaa=Asn or Arg
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (29)
<223>    Xaa=Thr or Ala
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (30)
<223>    Xaa=Lys или модифицированный Lys
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (31)
<223>    Xaa= необязательный, но если есть то представляет собой
RNRNNIA(ArgAsnArgAsnAsnIleAla)
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (32)
<223>    Xaa= необязательный, когда 31 представляет собой
RNRNNIA(ArgAsnArgAsnAsnIleAla), Xaa отсутствует или представляет собой
модифицированный Lys
<400>    50
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
20                  25                  30
<210>    51
<211>    7
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    пептид оксинтомодулина
<400>    51
Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala
1               5
<210>    52
<211>    6
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<400>    52
Gly Gly Ser Gly Ser Gly
1               5
<210>    53
<211>    30
<212>    БЕЛОК
<213>    ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
<220>
<223>    аналогам оксинтомодулина
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (2)
<223>    Xaa=Ser или аминоизомасляная кислота
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (10)
<223>    Xaa=модифицированный Lys
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (16)
<223>    Xaa=Asp, Glu, Cys, Hcy (Гомоцистеин), Lys or Orn (Орнитин)
<220>
<221>    ВАРИАНТ
<222>    (20)
<223>    Xaa=Asp, Glu, Cys, Hcy (Гомоцистеин), Lys or Orn (Орнитин)
<400>    53
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa
1               5                  10                  15
Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys
20                  25                  30
<---