АНТИТЕЛА ПРОТИВ CTLA4 И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с белком 4, ассоциированным с цитотоксическими T-лимфоцитами, (CTLA4), содержащие:
вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую области, определяющие комплементарность, (CDR) 1, 2 и 3, где область VH CDR1 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична выбранной аминокислотной последовательности VH CDR1, область VH CDR2 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична выбранной аминокислотной последовательности VH CDR2, а область VH CDR3 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична выбранной аминокислотной последовательности VH CDR3; и
вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую CDR 1, 2 и 3, где область VL CDR1 содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична выбранной аминокислотной последовательности VL CDR1, область VL CDR2 содержит аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, на 80% идентична выбранной аминокислотной последовательности VL CDR2, и область VL CDR3 содержит аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, на 80% идентична выбранной аминокислотной последовательности VL CDR3,
где выбранные аминокислотные последовательности VH CDR 1, 2 и 3 и выбранные аминокислотные последовательности VL CDR 1, 2 и 3 представляют собой одну из следующих:
(1) выбранные аминокислотные последовательности VH CDR 1, 2, 3 представлены в SEQ ID NO: 1, 2, 3, соответственно, и выбранные аминокислотные последовательности VL CDR 1, 2, 3 представлены в SEQ ID NO: 4, 5, 6, соответственно;
(2) выбранные аминокислотные последовательности VH CDR 1, 2, 3 представлены в SEQ ID NO: 7, 8, 9, соответственно, и выбранные аминокислотные последовательности VL CDR 1, 2, 3 представлены в SEQ ID NO: 10,11, 12, соответственно;
(3) выбранные аминокислотные последовательности VH CDR 1, 2, 3 представлены в SEQ ID NO: 45, 46, 47, соответственно, и выбранные аминокислотные последовательности VL CDR 1, 2, 3 представлены в SEQ ID NO: 48, 49, 50, соответственно;
(4) выбранные аминокислотные последовательности VH CDR 1, 2, 3 представлены в SEQ ID NO: 51, 52, 53, соответственно, и выбранные аминокислотные последовательности VL CDR 1, 2, 3 представлены в SEQ ID NO: 54, 55, 56, соответственно.
2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, отличающиеся тем, что VH содержит CDR 1, 2, 3 с аминокислотными последовательностями, представленными в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, соответственно, и VL содержит CDR 1, 2, 3 с аминокислотными последовательностями, представленными в SEQ ID NO: 4, 5 и 6, соответственно.
3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, отличающиеся тем, что VH содержит CDR 1, 2, 3 с аминокислотными последовательностями, представленными в SEQ ID NO: 7, 8 и 9, соответственно, и VL содержит CDR 1, 2, 3 с аминокислотными последовательностями, представленными в SEQ ID NO: 10,11 и 12, соответственно.
4. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-3, отличающиеся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связываются с человеческим CTLA4.
5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-4, отличающиеся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой гуманизированное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
6. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-5, отличающиеся тем, что антитело или антигенсвязывающий фрагмент представляют собой одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFV).
7. Нуклеиновая кислота, содержащая полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий:
(1) тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую области, определяющие комплементарность, (CDR) 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 1, 2, и 3, соответственно, и где VH, спариваясь с вариабельной областью легкой цепи (VL), содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18, 19, 20 или 70, связывается с CTLA4;
(2) легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VL, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 4, 5 и 6, соответственно, и где VL, спариваясь с VH, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 13, 14, 15, 16, 17 или 69, связывается с CTLA4;
(3) тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 7, 8 и 9, соответственно, и где VH, спариваясь с вариабельной областью легкой цепи (VL), содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 25, 26, 27, 28 или 72, связывается с CTLA4; или
(4) легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VL, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 10, 11 и 12, соответственно, и где VL, спариваясь с VH, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 21, 22, 23, 24 или 71, связывается с CTLA4;
(5) тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 45, 46 и 47, соответственно, и где VH, спариваясь с вариабельной областью легкой цепи (VL), содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 74, связывается с CTLA4;
(6) легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VL, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 48, 49 и 50, соответственно, и где VL, спариваясь с VH, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 73, связывается с CTLA4;
(7) тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 51, 52 и 53, соответственно, и где VH, спариваясь с вариабельной областью легкой цепи (VL), содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 76, связывается с CTLA4;
(8) легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VL, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 54, 55 и 56, соответственно, и где VL, спариваясь с VH, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 75, связывается с CTLA4.
8. Нуклеиновая кислота по п.7, отличающаяся тем, что нуклеиновая кислота содержит полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VH, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, соответственно.
9. Нуклеиновая кислота по п.7, отличающаяся тем, что нуклеиновая кислота содержит полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VL, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 4, 5 и 6, соответственно.
10. Нуклеиновая кислота по п.7, отличающаяся тем, что нуклеиновая кислота содержит полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VH, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 7, 8 и 9, соответственно.
11. Нуклеиновая кислота по п.7, отличающаяся тем, что нуклеиновая кислота содержит полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VL, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 10,11 и 12, соответственно.
12. Нуклеиновая кислота по любому из пп.7-11, отличающаяся тем, что VH, спариваясь с VL, специфически связывается с человеческим CTLA4, или VL, спариваясь с VH, специфически связывается с человеческим CTLA4.
13. Нуклеиновая кислота по любому из пп.7-12, отличающаяся тем, что тяжелая цепь иммуноглобулина или ее фрагмент представляют собой гуманизированную тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, а легкая цепь иммуноглобулина или ее фрагмент представляют собой гуманизированную легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент.
14. Нуклеиновая кислота по любому из пп.7-13, отличающаяся тем, что нуклеиновая кислота кодирует одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv).
15. Нуклеиновая кислота по любому из пп.7-14, отличающаяся тем, что нуклеиновая кислота представляет собой кДНК.
16. Вектор, содержащий одну или более нуклеиновых кислот по любому из пп.7-15.
17. Вектор, содержащий две нуклеиновые кислоты по любому из пп.7-15, отличающийся тем, что вектор кодирует область VL и область VH, которые вместе связываются с CTLA4.
18. Пара векторов, где каждый вектор содержит одну из нуклеиновых кислот по любому из пп.7-15, отличающиеся тем, что вместе пара векторов кодирует область VL и область VH, которые вместе связываются с CTLA4.
19. Клетка, содержащая вектор по п.16 или 17, или пару векторов по п.19.
20. Клетка по п.19, отличающаяся тем, что клетка представляет собой клетку СНО.
21. Клетка, содержащая одну или более нуклеиновых кислот по любому из пп.7-15.
22. Клетка, содержащая две нуклеиновые кислоты по любому из пп.7-15.
23. Клетка по п.22, отличающаяся тем, что две нуклеиновые кислоты вместе кодируют область VL и область VH, которые вместе связываются с CTLA4.
24. Способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающий
(a) культивирование клетки по любому из пп.19-23 в условиях, достаточных для того, чтобы клетка продуцировала антитело или антигенсвязывающий фрагмент; и
(b) сбор антитела или антигенсвязывающего фрагмента, продуцируемого клеткой.
25. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с CTLA4, содержащие вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична выбранной последовательности VH, и вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична выбранной последовательности VL, где выбранная последовательность VH и выбранная последовательность VL представляют собой одну из следующих:
(1) выбранная последовательность VH представляет собой SEQ ID NO: 13, 14, 15, 16, 17 или 69, и выбранная последовательность VL представляет собой SEQ ID NO: 18, 19, 20 или 70;
(2) выбранная последовательность VH представляет собой SEQ ID NO: 21, 22, 23, 24 или 71, и выбранная последовательность VL представляет собой SEQ ID NO: 25, 26, 27, 28 или 72;
(3) выбранная последовательность VH представляет собой SEQ ID NO: 73, и выбранная последовательность VL представляет собой SEQ ID NO: 74;
(4) выбранная последовательность VH представляет собой SEQ ID NO: 75, и выбранная последовательность VL представляет собой SEQ ID NO: 76.
26. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.25, отличающиеся тем, что VH содержит последовательность SEQ ID NO: 13, а VL содержит последовательность SEQ ID NO: 19.
27. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.25, отличающиеся тем, что VH содержит последовательность SEQ ID NO: 14, а VL содержит последовательность SEQ ID NO: 19.
28. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.25, отличающиеся тем, что VH содержит последовательность SEQ ID NO: 21, а VL содержит последовательность SEQ ID NO: 25.
29. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.25, отличающиеся тем, что VH содержит последовательность SEQ ID NO: 22, а VL содержит последовательность SEQ ID NO: 25.
30. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.25-29, отличающиеся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связываются с человеческим CTLA4.
31. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.25-30, отличающиеся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой гуманизированное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
32. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.25-31, отличающиеся тем, что антитело или антигенсвязывающий фрагмент представляют собой одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFV).
33. Конъюгат антитело-лекарственное средство, содержащий антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6 и 25-32, ковалентно связанный с терапевтическим агентом.
34. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п.33, отличающиеся тем, что терапевтический агент представляет собой цитотоксический или цитостатический агент.
35. Способ лечения пациента, имеющего злокачественное новообразование, причем способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества композиции, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6 и 25-32, или конъюгата антитело-лекарственное средство по пп.33 или 34.
36. Способ по п.35, отличающийся тем, что злокачественное новообразование представляет собой меланому.
37. Способ по п.35, отличающийся тем, что злокачественное новообразование представляет собой неоперабельную меланому или метастатическую меланому.
38. Способ по п.35, отличающийся тем, что злокачественное новообразование представляет собой немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), мелкоклеточный рак легкого (SCLC), рак мочевого пузыря или гормонально рефрактерный метастатический рак предстательной железы.
39. Способ уменьшения скорости роста опухоли, причем способ включает контактирование опухолевой клетки с эффективным количеством композиции, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6 и 25-32, или конъюгат антитело-лекарственное средство по п.33 или 34.
40. Способ уничтожения опухолевой клетки, причем способ включает контактирование опухолевой клетки с эффективным количеством композиции, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6 и 25-32, или конъюгат антитело-лекарственное средство по п.33 или 34.
41. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6 и 25-32 и фармацевтически приемлемый носитель.
42. Фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат антитело-лекарственное средство по п.33 или 34 и фармацевтически приемлемый носитель.