Композиция с гиалуроновой кислотой и способ ее получения.
COMPOSITION WITH HYALURONIC ACID AND METHOD FOR ITS PREPARATION

Область техники
[0001] Настоящее изобретение относится к косметическим композициям для инъекций, точнее для интрадермального или подкожного введения. Более конкретно изобретение относится к гелям на основе высокомолекулярной гиалуроновой кислоты, применяемым для биоревитализации.
Уровень техники
[0002] Все больше людей прибегает к малоинвазивным и неинвазивным косметологическим процедурам. К малоинвазивным процедурам относятся интрадермальные инъекции косметических композиций, позволяющие улучшить внешний вид кожи без хирургического вмешательства. Поскольку анестезии, как правило, не требуется, большинство инъекционных процедур представляют значительно меньший риск для пациента, чем при пластической хирургии. Кроме того, инъекции косметических композиций не требуют длительного реабилитационного периода.
[0003] Структурно кожа состоит из двух основных слоев - сравнительно тонкого внешнего слоя (эпидермиса) и толстого внутреннего слоя (дермы). Эпидермис состоит из многослойного эпителия, который характеризуется тем, что в наружных его слоях постоянно происходит ороговение клеток. Дерма состоит из волокнистой соединительной ткани. В дерме располагаются кровеносные и лимфатические сосуды, нервы, гладкие мышечные клетки, волосяные фолликулы, сальные и потовые железы.
[0004] Косметические композиции для интрадермальных инъекций называются филлерами или имплантами. Они представляют собой наполнители гелеобразной консистенции со стабильной структурой, которые вводятся инъекционным путем в кожу или под кожу. Филлеры заполняют морщины и глубокие борозды изнутри, держат форму (не растекаются в месте инъекции), что позволяет исправить эстетические дефекты. При этом филлеры биосовместимы и биоразлагаемы. Со временем они рассасываются и выводятся из организма естественным путем - через лимфатическую и кровеносную системы.
[0005] Как правило, состав филлеров подбирают так, чтобы они выполняли не только структурную, но и терапевтическую функцию. При этом помимо заполнения интрадермального объема для удаления морщин, филлеры позволяют достигнуть восстановления физиологической среды и нормализации обменных процессов в дерме. В этом случае процедура введения филлера в дерму называется биоревитализацией.
[0006] Наиболее популярные филлеры для биоревитализации содержат гиалуроновую кислоту, которая придает филлеру гелеобразную консистенцию, а также оказывает терапевтическое воздействие на соединительную ткань, составляющую основу глубоких слоев кожи. Гиалуроновая кислота представляет собой линейный полисахарид с высокой средней молекулярной массой, который синтезируется в соединительной, эпителиальной и нервной тканях многих животных, в том числе человека. В основном гиалуроновая кислота локализуется в межклеточном пространстве. Биологические функции гиалуроновой кислоты включают поддержание эластичности соединительных тканей, контроль гидратации тканей и водный транспорт, надмолекулярную сборку протеогликанов в экстрацеллюлярном матриксе. В частности, гиалуроновая кислота участвует в синтезе коллагена в дерме. Гиалуроновая кислота отличается высокой гигроскопичностью, что позволяет ей поддерживать необходимый уровень увлажненности кожи. Кроме того, гиалуроновая кислота активирует деление кератиноцитов и иммунокомпетентных клеток, играя важную роль в поддержании нормального процесса роста и регенерации кожи и осуществлении местного иммунитета. Также гиалуроновая кислота защищает белки кожи от окислительного действия свободных радикалов. Благодаря указанным свойствам гиалуроновая кислота, введенная интрадермально, обеспечивает регенерацию кожи. Однако с возрастом количество гиалуроновой кислоты в коже значительно сокращается из-за снижения интенсивности ее синтеза.
[0007] Известны композиции на основе немодифицированной гиалуроновой кислоты (FR 2979539 В1; опубл: 27.09.2013; МПК: A61K 31/167, A61K 31/19, A61K 31/198, A61K 31/728, A61K 33/34, A61K 8/19, A61K 8/42, A61K 8/46, A61K 8/73, A61L 27/20, A61M 37/00, A61M 5/00, A61P 17/00, A61Q 19/08). Немодифицированная гиалуроновая кислота идентична той, что синтезируется в организме человека естественным путем, что делает ее биосовместимой и неаллергенной. Однако немодифицированная гиалуроновая кислота, несмотря на наличие преимущества в виде наличия высокой совместимости с тканями тела человека, демонстрации высокого сродства с водой и осуществления функции сильного увлажнения не обладает надлежащими биомеханическими свойствами. По этой причине она не способна образовывать гель с вязкостью и упругостью, требуемой для основных областей применения в косметологии. Кроме того, немодифицированная гиалуроновая кислота в коже быстро разлагается в живом организме под действием как гиалуронидаз (ферментативное разложение), так и свободных радикалов (химическое разложение). Соответственно, при использовании филлера на основе немодифицированной гиалуроновой кислоты, требуется регулярное повторение инъекций для коррекции таких дефектов кожи, как морщины, снижение упругости, обезвоживание. Кроме того, указанная композиция дополнительно включает, по крайней мере, один анестетик, альфа-липоевую кислоту, производное ацетилцистеина и соль меди. Стоит отметить, что дополнительные компоненты увеличивают вероятность развития аллергической реакции после инъекции.
[0008] Известен патент RU 2727809 C2, в котором описана композиция, включающая гиалуроновую кислоту, которая может применяться для интрадермальных и подкожных инъекций. Однако указанная композиция содержит более 3% гиалуроновой кислоты.  Такое высокое содержание гиалуроновой кислоты в композиции для инъекций (филлере) нецелесообразно, так как приводит к увеличению стоимости композиции без соответствующего усиления эффекта.
[0009] Известна композиция для инъекций «Hyalual», содержащая 1,1-2,2% гиалуроновой кислоты. Кроме того, «Hyalual» дополнительно включает натриевую соль янтарной кислоты (сукцинат натрия). К недостаткам использования «Hyalual» можно отнести возможные отеки и воспаления, болезненность процедуры и необходимость делать инъекции несколько раз в рамках одного курса биоревитализации. Кроме того, применение янтарной кислоты имеет свои противопоказания: оно может усугублять такие состояния, как, например, артериальная гипертензия, ишемическая болезнь сердца, стенокардия.
[0010] Известно множество филлеров на основе гиалуроновой кислоты, например, IAL System компании Fidia Farmaceutici (Италия), филлеры Teosyal компании Teoxane Laboratories (Швейцария), инъекционные гели Jalupro компании Professional Derma (Швейцария). Однако в большинстве филлеров содержание гиалуроновой кислоты превышает 1% мас. Причем гиалуроновая кислота, как правило, является самым дорогим компонентом филлеров. При этом гиалуроновая кислота образует гелеподобную структуру при концентрациях меньших, чем 1%. Другое дело, что при небольших концентрациях гиалуроновая кислота может не обеспечивать нужной вязкости или слишком быстро разлагаться организмом пациента, что приводит к необходимости частого повторения процедуры биоревитализации.
[0011] Таким образом, существует необходимость в создании композиции с уменьшенным содержанием гиалуроновой кислоты и с таким набором компонентов, который бы делал композицию подходящей для биоревитализации.
Термины и сокращения
[0012] Биоревитализация -
процедура инъекционного введения в различные слои дермы высокомолекулярной гиалуроновой кислоты.
[0013] Буферный агент -
вещество, которое обеспечивает определенную кислотность (pH) раствора после добавления другой кислоты или основания. В качестве буферного агента, как правило, используют слабую кислоту и ее соли или слабое основание.
[0014] Осмотический агент -
вещество, оказывающее критическое влияние на осмоляльность композиции.
[0015] Реологический агент -
вещество, влияющее на реологические свойства композиции, такие как вязкость, текучесть и эластичность.
[0016] Филлер -
наполнитель для локальных инъекций, используемых в контурной пластике лица без хирургического вмешательства.
[0017] Да
-
Дальтон, стандартная единица измерения молекулярной массы.
[0018] МДа -
6
мегадальтон, единица измерения молекулярной массы, равная 10 Да.
[0019] % мас.
-
массовые проценты, выражающие отношение массы конкретного компонента к общей массе композиции.
[0020] % об.
-
объемные проценты, выражающие отношение объема конкретного компонента к общему объему композиции.
[0021] BDDE
-
1,4-бутандиол диглицидиловый эфир.
Сущность изобретения
[0022] Задачей настоящего изобретения является создание композиции для биоревитализации кожи, обеспечивающей коррекцию дефектов кожи, в том числе, дефектов, связанных с возрастными изменениями функциональности дермы.
[0023] Данная задача решается заявляемым изобретением за счет достижения такого технического результата, как создание стерильной, изотонической, гипоаллергенной композиции для интрадермальных инъекций на основе гиалуроновой кислоты, обеспечивающей гидробаланс кожи, с повышенной устойчивостью к деградации и сниженным содержанием гиалуроновой кислоты. Также важной частью технического результата является разработка технически и коммерчески доступного способа получения указанной композиции.
[0024] Заявленный технический результат достигается за счет того, что заявленная композиция содержит следующие компоненты в указанном соотношении:
-
Гиалуроновая кислота  0,90-0,99 % мас.
-
Аминокислота  0,05-0,07% мас.
-
Буферный агент  3,50-4,0% мас.
-
Осмотический агент  0,80-0,90% мас.
-
Реологический агент  3,50-4,50 % об.
-
Вода  остальное
[0025] Гиалуроновая кислота обеспечивает композиции гелеобразную структуру, что при интрадермальном введении позволяет создавать объем и устранять мелкие и средние морщины. Кроме того, гиалуроновая кислота способствует восстановлению гидробаланса кожи, стимулирует пролиферацию клеток кожи, а также способствует синтезу и стабилизации коллагена. В результате повышается упругость и эластичность кожи.
[0026] Одна или несколько аминокислот, входящих в состав заявленной композиции, могут быть связаны с гиалуроновой кислотой. Это повышает стойкость гиалуроновой кислоты к деградации в организме субъекта. В предпочтительном варианте реализации одна или несколько аминокислот в составе композиции могут быть выбраны из ряда: глицин, глутаминовая кислота, лизин, аланин, аспарагиновая кислота, гистидин, лейцин, аргинин.
[0027] Буферный агент поддерживает кислотность композиции, близкую к кислотности внутренних слоев кожи. Благодаря этому снижается риск раздражения при инъекционном введении заявленной композиции в дерму. В предпочтительном варианте реализации в качестве буферного агента используется гидрокарбонат натрия как доступный и безопасный компонент композиции для инъекций.
[0028] Осмотический агент необходим для поддержания определенной осмоляльности заявленной композиции, которая препятствует появлению отека в месте инъекции. В предпочтительном варианте реализации в качестве осмотического агента используют хлорид натрия.
[0029] Реологический агент поддерживает определенную вязкость заявленной композиции, а также препятствует ее деградации путем расслоения, выполняя функции эмульгатора. В предпочтительном варианте реализации в качестве реологического агента используется глицерин как нетоксичный, гипоаллергенный и коммерчески доступный компонент.
Подробное описание изобретения
[0030] В приведенном ниже подробном описании реализации изобретения приведены многочисленные детали реализации, призванные обеспечить отчетливое понимание настоящего изобретения. Однако, квалифицированному в предметной области специалисту, очевидно, каким образом можно использовать настоящее изобретение, как с данными деталями реализации, так и без них. В других случаях хорошо известные методы, процедуры и компоненты не описаны подробно, чтобы не затруднять излишне понимание особенностей настоящего изобретения.
[0031] Кроме того, из приведенного изложения ясно, что изобретение не ограничивается приведенной реализацией. Многочисленные возможные модификации, изменения, вариации и замены, сохраняющие суть и форму настоящего изобретения, очевидны для квалифицированных в предметной области специалистов.
[0032] Заявленная композиция предназначена для минимизации, по меньшей мере, одного дефекта кожи у субъекта. Субъект может представлять собой животное, в частности млекопитающее. В предпочтительном варианте реализации субъектом является человек.
[0033] Заявленная композиция содержит гиалуроновую кислоту, буферный агент, осмотический агент, реологический агент, по меньшей мере, одну аминокислоту и воду в следующем соотношении:
-
Гиалуроновая кислота  0,90-0,99 % мас.
-
Аминокислота  0,05-0,07% мас.
-
Буферный агент  3,50-4,0% мас.
-
Осмотический  агент  0,80-0,90% мас.
-
Реологический агент 3,50-4,50% об.
-
Вода  остальное
[0034] Гиалуроновая кислота, в первую очередь, необходима для придания композиции гелевой структуры, определенной вязкости и объема. Средняя молекулярная масса гиалуроновой кислоты, которая может быть использована в композиции, составляет от приблизительно 1,1 МДа до приблизительно 2,1 МДа. В предпочтительном варианте реализации используемая ГК имеет молекулярную массу от приблизительно 1,9 МДа до приблизительно 2,1 МДа. Подразумевается, что большая часть, например, 95% гиалуроновой кислоты, содержащейся в композиции, укладывается в указанный выше диапазон значений средней молекулярной массы. Сравнительно большой размер молекул ГК, позволяет композиции дольше удерживаться в зоне введения и оказывать интенсивное стимулирующее действие на клетки соединительной ткани.
Streptococcus
Streptococcus equi subsp. zooepidemicus
Bacillus subtilis
[0035] Гиалуроновая кислота, используемая в композиции, может быть получена из любого источника. В предпочтительном варианте реализации гиалуроновая кислота получена из бактерий, например, из представителей рода , в частности , или . Использование гиалуроновой кислоты, выделенной из бактерий, позволяет снизить себестоимость заявленной композиции. При этом используемую гиалуроновую кислоту тестируют на подлинность и отсутствие патогенных микроорганизмов. Указанная гиалуроновая кислота может не содержать поперечные межмолекулярные связи и/или иные химические модификации. Однако в предпочтительном варианте реализации используемая гиалуроновая кислота содержит межмолекулярные поперечные сшивки. Применение поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты позволяет получить композицию, которая медленнее разлагается в организме субъекта. В некоторых вариантах реализации гиалуроновая кислота может содержать межмолекулярные сшивки, полученные с помощью мочевины, дивинилсульфона, карбодиимидов и сшивателей, содержащих несколько аминовых групп. В предпочтительном варианте реализации используемая гиалуроновая кислота содержит межмолекулярные поперечные сшивки, полученные с помощью 1,4 бутадиол диглицидилового эфира (BDDE). При этом остаточное количество свободного BDDE  в используемой ГК не превышает 0,002 мг/мл. Указанное количество остаточного свободного BDDE минимизирует риск побочных эффектов, например аллергической реакции или отравления организма, после введения заявленной композиции.
[0036] Заявленная композиция включает одну или несколько аминокислот. В предпочтительном варианте реализации одна или несколько аминокислот, входящих в состав заявленной композиции, могут быть выбраны из ряда: глицин, глутаминовая кислота, лизин, аланин, аспарагиновая кислота, гистидин, лейцин, аргинин. Каждая из аминокислот может входить в состав заявленной композиции в количестве от 0,003% мас. до 0,07% мас., предпочтительно от 0,003% мас. до 0,02% мас. Указанные аминокислоты являются естественными для организма большинства живых существ, в том числе, человека, и соответственно не склонны вызывать аллергическую реакцию. Указанные аминокислоты могут выступать как дополнительные влагоудерживающие компоненты за счет своих гигроскопических свойств, тем самым повышая способность заявленной композиции выравнивать гидробаланс кожи. Могут способствовать регенерации кожи, оказывать противовоспалительный эффект, стимулировать синтез коллагена, оказывать антиоксидантный эффект. В заявленной композиции указанные аминокислоты в значительной степени связаны с молекулами гиалуроновой кислоты в стойкие комплексы. За счет этого повышается стойкость гиалуроновой кислоты к деградации за счет ферментативного и химического разложения. При этом небольшое количестве аминокислот в заявленной композиции, а также локальное введение композиции, позволяют избежать нежелательного системного воздействия указанных аминокислот на организм субъекта.
[0037] Буферный агент в составе заявленной композиции поддерживает рН от приблизительно 6,9 до приблизительно 7,4. Указанный диапазон рН приближен к физиологической кислотности глубоких слоев кожи. Соответственно, указанный рН минимизирует вероятность жжения и раздражения после инъекции заявленной композиции. В качестве буферного агента могут быть использованы, например, фосфатно-солевой буферный раствор, карбонат кальция, альгинат натрия. В предпочтительном варианте реализации в качестве буферного агента используется гидрокарбонат натрия. При значительно изменении концентрации гидрокарбоната натрия в водном растворе pH этого водного раствора изменяется незначительно, на этом основано применение раствора гидрокарбоната натрия в качестве буферного агента. Кроме способности поддерживать определенный рН импланта, натрия гидрокарбонат обладает дополнительными функциями, а именно способствует выравниванию кожи.
[0038] Осмотический агент поддерживает осмоляльность заявленной композиции в диапазоне от приблизительно 265 мОсм/кг до приблизительно 405 мОсм/кг. В предпочтительном варианте реализации осмоляльность составляет от приблизительно 280 мОсм/кг до приблизительно 350 мОсм/кг. В еще более предпочтительном варианте реализации осмоляльность заявленной композиции составляет около 300 мОсмоль/кг, что приблизительно соответствует физиологической норме изотонического раствора. Это позволяет снизить вероятность появления отека в месте инъекции. В качестве осмотического агента может использоваться хлорид кальция. В предпочтительном варианте реализации в качестве осмотического агента используют хлорид натрия.
[0039] Реологический агент наряду с гиалуроновой кислотой придает композиции определенную вязкость, плотность и упругость, обеспечивая оптимальное распределение композиции в коже. Присутствие реологического агента обеспечивает оптимальные физические свойства заявленной композиции при относительно небольшом содержании (<1%) гиалуроновой кислоты. Кроме того, реологический агент выполняет функцию эмульгатора, препятствуя расслоению заявленной композиции. В предпочтительно варианте реализации в качестве реологического агента используется глицерин. Глицерин естественным образом присутствует в организме животных, в том числе человека, поэтому является нетоксичным. Кроме того, глицерин легкодоступен на рынке химических веществ, сто облегчает производство заявленной композиции и снижает ее себестоимость. Вместо глицерина в качестве реологического агента могут быть использованы, например, пропиленгликоль, сорбит, сахароза или ее производные, например стеарат сахарозы, а также смеси указанных веществ. Кроме того, указанные варианты реологических агентов обладают высокой гигроскопичностью, что повышает способность заявленной композиции восстанавливать гидробаланс кожи.
[0040] В составе заявленной композиции используется вода, очищенная от микроорганизмов и токсичных примесей. В предпочтительном варианте реализации используется вода для инъекций.
[0041] В одном варианте реализации заявленная композиция включает дополнительные фармацевтически активные вещества. В контексте настоящего описания, термин ʺ фармацевтически активное вещество ʺ обозначает вещество, которое способно оказывать биологический эффект на субъекта, например, на человека или на животное. Термин ʺ фармацевтически активное веществоʺ также включает вещества, которые могут модулировать биологический эффект гиалуроновой кислоты в составе композиции. При этом водная основа заявленной композиции позволяет в качестве дополнительных фармацевтически активных веществ использовать водорастворимые вещества. Наличие в составе композиции реологического агента, имеющего свойства эмульгатора, позволяет добавлять жирорастворимые вещества. В предпочтительном варианте реализации заявленная композиция по существу не содержит дополнительных фармацевтически активных веществ. Это позволяет сохранять невысокую стоимость препарата и упрощает его производство.
[0042] Благодаря своему составу заявленная композиция представляет собой биодеградируемый апирогенный гель для инъекций. Наличие гиалуроновой кислоты и реологического агента обеспечивает заявленной композиции оптимальную вязкость от приблизительно 6600 мПа⋅с до приблизительно 6700 мПа⋅с. С одной стороны, указанная вязкость обусловливает способность заявленной композиции занимать в месте инъекции определенный объем и не растекаться. С другой стороны, указанная вязкость позволяет вводить композицию субъекту с помощью иглы небольшого диаметра, не превышающего 0,5 мм. В предпочтительном варианте реализации диаметр игл составляет от приблизительно 0,2 мм до 0,4 мм. Благодаря небольшому размеру игл, при введении композиции практически не происходит повреждения эпидермиса.
[0043] В некоторых вариантах осуществления заявленная композиция является стерильной. Это обеспечивает длительный срок хранения без использования консервантов. Так, стерильная композиция по настоящему изобретению может храниться в стерильном флаконе или стерильном шприце не менее 2 лет при температуре от приблизительно 4°С до приблизительно 20°С и влажности от приблизительно 30 % до приблизительно 75%.
[0044] В предпочтительном варианте реализации композиция предназначена для подкожного и/или интрадермального введения путем инъекции. В частности, композиция может быть введена субъекту в дерму или между эпидермисом и дермой. Композиция может быть введена в область лица субъекта. Например, указанная композиция может быть введена в область, выбранную из группы, состоящей из носогубной области, области верхнего века, лба, зоны глаз и зоны щек.
[0045] Способ получения заявленной композиции включает следующие этапы. На этапе а)  буферный агент, и реологический агент смешивают с осмотическим агентом и водой. В одном варианте реализации используют готовый, коммерчески доступный, физиологический раствор, представляющий собой смесь осмотического агента и воды. В другом варианте реализации осмотический агент смешивают с водой, получая физиологический раствор, который затем используют для смешивания с буферным агентом и реологическим агентом.
[0046] б) К полученной на этапе а) смеси добавляют гиалуроновую кислоту и одну или несколько аминокислот. В некоторых вариантах реализации может быть использован водный раствор гиалуроновой кислоты. В предпочтительном варианте реализации используют сухую гиалуроновую кислоту.
[0047] в) Смесь, полученную на этапе б), тщательно перемешивают. На этом этапе происходит гидратация гиалуроновой кислоты и смесь приобретает структуру геля. Перемешивание могут производить вручную. Однако в предпочтительном варианте реализации перемешивание производят непрерывно при помощи автоматизированного гомогенизатора в течение 5,5-6 часов при температуре раствора от приблизительно 38°С до приблизительно 40°С. При температуре ниже приблизительно 38°С смесь неконтролируемо густеет, что препятствует получению гомогенной структуры и затрудняет проведение следующих этапов способа. При нагреве смеси выше приблизительно 40°С может происходить нарушение структуры геля, что препятствует созданию композиции с заявленными свойствами.
[0048] г) Проводят фильтрацию грубой очистки, для удаления из смеси возможных крупных загрязнений и отдельных частиц нерастворившихся компонентов. Для фильтрации могут использовать керамическмй, стеклянный и/или мембранный фильтр. В предпочтительном варианте реализации используют глубинные микроволоконные фильтры, которые могут быть выполнены, например, из стекла, целлюлозы, полипропилена или боросиликатного микростекловолокна. При этом фильтры могут удерживать частицы от 2,2 до 3,7 мкм. Фильтрацию проводят при температуре от приблизительно 18°С до приблизительно 24°С.
[0049] д) Проводят дегазацию фильтрата, полученного на этапе г). Для этого фильтрат нагревают до температуры от приблизительно 80°С до приблизительно 86°С и выдерживают при указанной температуре в течение 3-5 мин.  При этом растворимость газов в фильтрате снижается, и они покидают фильтрат путем испарения. При температуре ниже 80°С растворимость газов падает слишком медленно, что затягивает процесс производства заявленной композиции. При температуре выше 86°С может происходить нарушение гелевой структуры композиции. Затем нагретый фильтрат охлаждают до температуры от приблизительно 14°С до приблизительно 16°С в течение приблизительно 20-60 секунд. В результате получают нестерильную композицию.
[0050] е) Проводят стерилизацию композиции методом стерилизующей фильтрации. Для этого используют мелкопористые фильтры. В некоторых вариантах реализации могут использовать глубинные фильтры, например, керамические, фарфоровые, стеклянные. В предпочтительном варианте реализации используют мембранные фильтры. Например, могут использовать полимерные фильтры, выполненные из полиамида, полиэфирсульфона или фторопласта. Размер пор фильтра может составлять от приблизительно 0,1 мкм до приблизительно 10 мкм, предпочтительно не более 1 мкм. В результате получают стерильную композицию, которая также является объектом данного изобретения.
[0051] Стерильную композицию помещают в стерильные флаконы или стерильные шприцы, готовые для последующих инъекций. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, композицию помещают в шприц объемом от 1 до 4 мл.
Описание реализации изобретения
Пример 1. Исследование аллергенных свойств заявленной композиции.
[0052] В данном примере исследовали свойства композиции, которая в качестве буферного агента содержала гидрокарбонат натрия, в качестве осмотического агента содержала хлорид натрия, а в качестве реологического агента содержала глицерин. При этом гиалуроновая кислота имела межмолекулярные поперечные сшивки, полученные с помощью (BDDE). Указанная композиция включала глицин, глутаминовую кислоту, лизин, аланин, аспарагиновую кислоту, гистидин, лейцин и аргинин. Указанная композиция была получена согласно заявленному способу, включая этап стерилизации. Путем инъекции стерильную композицию ввели 10 пациентам интрадермально в сосочковый и сетчатый слой дермы на глубину не менее 4 мм. После инъекции через 30 минут, 1 час и 6 часов оценивали общее состояние пациентов, состояние и ощущения пациентов в области инъекции, а также внешний вид кожи в месте инъекции.
[0053] Ни у одного пациента не было выявлено значительной аллергической реакции, например, затрудненности дыхания, отека Квинке, анафилактического шока. Ни один пациент не заявил о негативных ощущениях, например, жжении пациентов отметили жжение в области инъекции. Также ни у одного пациента не наблюдалось отеков в области инъекции. У одного пациента наблюдалось покраснение кожи вокруг места инъекции диаметром около 2 мм.
Пример 2. Подбор условий фильтрации грубой очистки.
[0054] В данном примере подбирали условия фильтрации грубой очистки смеси, полученной после перемешивания компонентов на этапе в), при приготовлении композиции, описанной в Примере 1. При этом перемешивание (этап в) проводили при помощи автоматизированного гомогенизатора Ultra Turex непрерывно при 2500-3000 об/мин. Для фильтрации использовали бумажные и целлюлозные  фильтры, а также микростекловолоконные фильтры двух марок: КФБЖ и СВ. Фильтр марки КФБЖ выполнен из картона на основе микроволокон стекла, целлюлозы и полипропилена. Фильтр марки СВ выполнен из боросиликатного микростекловолокна высокой чистоты.
[0055] В результате экспериментов было обнаружено, что бумажный фильтр плохо удерживал примеси, и они попадали в фильтрат. Целлюлозные фильтры практически не пропускали фильтруемую смесь. При использовании фильтров марок КФБЖ и СВ скорость протекания фильтруемой смеси через фильтр была приемлемой. При этом в фильтрате не обнаруживалось крупных примесей. Исходя из размеров использованного в данном эксперименте оборудования, были использованы фильтры КФБЖ и СВ с диаметром 25-35 мм, удерживающие частицы размером от 2,2 до 3,7 мкм. Однако специалисту в области техники понятно, что при использовании другого оборудования возможно применение микростекловолоконных фильтров других диаметров и с более широким диапазоном размера удерживаемых примесей.
[0056] В настоящих материалах заявки представлено предпочтительное раскрытие осуществления заявленного технического решения, которое не должно использоваться как ограничивающее иные, частные воплощения его реализации, которые не выходят за рамки испрашиваемого объема правовой охраны и являются очевидными для специалистов в соответствующей области техники.