ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО И ПИЩЕВОЙ ПРОДУКТ ИЛИ НАПИТОК ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ ФУНКЦИЙ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
MEDICAL PRODUCT AND FOODSTUFF OR BEVERAGE FOR PANCREAS IMPROVEMENT

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к лекарственному средству и пищевому продукту или напитку для улучшения функций поджелудочной железы, содержащим соединение, которое можно безопасно принимать внутрь и обладает эффектом для защиты клеток поджелудочной железы внутренней секреции или улучшения функции клеток поджелудочной железы внутренней секреции.
Описание предшествующего уровня техники
Поджелудочная железа представляет собой орган, состоящий из тканей железы внутренней секреции, названных островками поджелудочной железы (островками Лангерганса), и тканей железы внешней секреции, секретирующих гидролизующие ферменты.
В островках Лангерганса присутствуют β-клетки, α-клетки, δ-клетки, клетки панкреатического полипептида и т.д, и они существенно влияют на контроль глюкозы в крови и метаболизм. Среди них β-клетки играют особенно важную роль как клетки, продуцирующие инсулин.
Сахарный диабет представляет собой часто наблюдаемое нарушение обмена веществ, обнаруживаемое у 10% взрослого населения Японии. В соответствии с эпидемиологией дисфункции β-клеток поджелудочной железы, которую считают одной из причин сахарного диабета, в то время, как дисфункция β-клеток обязательно наблюдается у индивидуумов с гипергликемией пограничного типа, индивидуумы, демонстрирующие нормальную толерантность к глюкозе также включают индивидуумов, демонстрирующих выражено сниженные функции β-клеток в размере 30%. Кроме того, указывается, что у взрослых, ведущих среднесоциальный образ жизни в современной Японии часто развивается резистентность к инсулину в большей или меньшей степени, и предполагается, что в отношении людей, страдающих от резистентности к инсулину, у тех, кто не страдает от дисфункции β-клеток, уровень глюкозы в крови не увеличивается, и у тех, кто страдает от дисфункции β-клеток, уровень глюкозы в крови увеличивается с уровня, соответствующего нормальной толерантности к глюкозе, до уровня, соответствующего гипергликемии пограничного типа (Непатентный документ 1).
В настоящее время, несмотря на то, что при расстройстве функции поджелудочной железы используют терапии для активации спонтанного восстановления функций поджелудочной железы, основанные на устранении причинных патологических условий или факторов, какой-либо терапевтический способ или агент для надежного восстановления функций поджелудочной железы после снижения пока не был использован, и в клинической области требуются агенты для защиты клеток поджелудочной железы или агенты для улучшения поврежденных клеток поджелудочной железы.
Нарушение функции поджелудочной железы обозначает патологическое состояние, при котором эндокринные или экзокринные функции поджелудочной железы снижены или аномально повышены.
В качестве известного уровня техники в отношении агентов для лечения нарушений функции поджелудочной железы выступают агенты, содержащие в качестве активного ингредиента нейротрофические факторы, такие как BDNF, (Патентный документ 1), агенты, содержащие в качестве активного ингредиента производные глицерина (Патентный документ 2), агенты, улучшающие функцию поджелудочной железы, содержащие бетацеллулиновые белки или их мутанты (Патентный документ 3), и т.д. До настоящего времени считалось, что BDNF высвобождается из центральной части малого нейрона DRG с другими трансмиттерами во время воспаления или повреждения нерва и участвует в поддержании трансдукции сигнала боли посредством фосфорилирования тирозина рецептора NMDA на клетках спинного рога (Непатентный документ 2) и таким образом считалось, что он ограничен для реального применения.
Кроме того, производные глицерина, раскрытые в Патентном документе 2, представляют собой соединения, описанные в Патентном документе 4, и представляют собой агенты, содержащие активность антитромбоцит-активирующего фактора (PAF) для терапевтического и профилактического лечения DIC, шока, аллергии, острого панкреатита, мозговой конвульсии при субарахноидальном кровотечении и т.д, и также было обнаружено, что они обладают эффектом для предотвращения лечения и улучшения хода органопатии, развившейся в процессах сохранения органа при ишемическом состоянии, обструкции кровотока, вызванной реперфузией крови после трансплантата или хирургией, и т.д. Однако сложно утверждать, что эти агенты подходят для хронических заболеваний поджелудочной железы без этих симптомов.
Кроме того, агенты, улучшающие функцию поджелудочной железы, содержащие бетацеллулиновые белки или их мутанты, раскрытые в Патентном документе 3, также обладают эффектом воздействия на недифференцированные панкреатические стволовые клетки и, таким образом, активации их дифференцировки в панкреатические β-клетки, продуцирующие инсулин, и эффектом стимулирования дифференцировки недифференцированных стволовых клеток в другие клетки поджелудочной железы, такие как F-клетки, продуцирующие панкреатические полипептиды, и эффект нельзя ожидать в условиях истощения запаса незрелых клеток. Кроме того, несмотря на то, что мРНК этих белков обнаружены в различных органах кроме мозга, например, в печени, почке, поджелудочной железе и т.д., детали их функций не ясны практически полностью, и, в связи с этим, нельзя утверждать, что их можно сразу использовать для клинических случаев.
Кроме того, в патентном документе 5 было раскрыто, что соединения, имеющие ланостановый скелет или 3,4-секоланостановый скелет, обладают активностью усиления действия инсулина. Эффект этих соединений заключается в усилении действия инсулина на стабилизацию дифференцировки адипоцита, и его эффект на заболевания поджелудочной железы остается неизвестным.
Кроме того, в качестве известного уровня техники в отношении соединений, имеющих циклоланостановый скелет, был раскрыт способ получения циклобранола или циклобранолового эфира феруловой кислоты (Патентный документ 6), а также транквилизаторов (Патентный документ 7), гиполипидемических препаратов (Патентный документ 8), индукторов интерферона (Патентный документ 9), агентов, индуцирующих овуляцию (Патентный документ 10), и препаратов для профилактики онкогенеза (Патентный документ 11), содержащих в качестве активного ингредиента 24-метиленциклоартанол. Кроме того, до настоящего времени не было сообщений о том, что соединения, имеющие циклоланостановый скелет, оказывают защитный эффект на функцию поджелудочной железы, или обладают действием предохранения ткани поджелудочной железы.
Aloe
Liliaceae
Aloe
barbadensis Miller
Aloe
arborescens Miller var. natalensis Berger
Aloe
Род  в семействе представляет собой группу растений, включающий Aloe vera (), Aloe arborescens () и т.д, и эмпирически известно, что они обладают различной эффективностью. Известные уровни техники в отношении применения растений рода  включают иммуномодулирующие полисахариды (Патентный документ 12), агенты, улучшающие иммуносупрессию, содержащие бутаноловую фракцию экстракта алоэ или алоин (Патентный документ 13), агенты, подавляющие синтез белка семейства HSP60, содержащие производные алоина (Патентные документы 14-16), белки, обладающие активностью лектина, полученные из кожицы листа алоэ (Патентный документ 17), применение для улучшения уровня глюкозы в крови (Непатентный документ 3-5, Патентный документ 18-21) и т.д.
[Патентный Документ 1] Международное Издание Номер WO 00/62796
[Патентный документ 2] Патент Японии Выложенный Номер 07-285866
[Патентный документ 3] Патент Японии Выложенный Номер 09-188630
[Патентный документ 4] Выложенный Патент Японии Номер 10-045604
[Патентный документ 5] Выложенный Патент Японии Номер 10-330266
[Патентный документ 6] Выложенный Патент Японии Номер 50-160262
[Патентный документ 7] Выложенный Патент Японии Номер 55-153719
[Патентный документ 8] Выложенный Патент Японии Номер 59-027824
[Патентный документ 9] Выложенный Патент Японии Номер 59-036623
[Патентный Документ 10] Выложенный Патент Японии Номер 59-073600
[Патентный документ 11] Выложенный Патент Японии Номер 2003-277269
[Патентный документ 12] Нерассмотренное Издание Международной Заявки на патент на Японском Языке Номер 2001-520019
[Патентный документ 13] Выложенный Патент Японии Номер 08-208495
[Патентный документ 14] Выложенный Патент Японии Номер 10-120576
[Патентный документ 15] Выложенный Патент Японии Номер 10-045604
[Патентный документ 16] Выложенный Патент Японии Номер 10-036271
[Патентный документ 17] Выложенный Патент Японии Номер 09-059298
[Патентный документ 18] Выложенный Патент Японии Номер 60-214741
[Патентный документ 19] Выложенный Патент Японии Номер 2003-286185
[Патентный документ 20] Патент США Номер 4598069
[Патентный документ 21] Заявка на Патент США Публикация Номер 2003/0207818
[Непатентный документ 1] Nippon Rinsho, Номер 748, T. 1,
стр. 615-617, 1999
[Непатентный документ 2] Nippon Rinsho, Номер 808, T. 2,
стр. 405-409, 2002
[Непатентный документ 3] Phytomedicine, Т. 3, стр. 245-248, 1996
[Непатентный документ 4] Phytotherapy Research, Т. 15, стр. 157-161, 2001
[Непатентный документ 5] Исследование Фитотерапии, Т. 7, стр. 37-42, 1993
Раскрытие Изобретения
Целью настоящего изобретения является получение лекарственного средства и пищевого продукта или напитка, подходящих для улучшения функций поджелудочной железы, которые не содержат неблагоприятных ингредиентов для лекарственного средства и пищевого продукта или напитка, из сырья, которое может быть безопасно взято с точки зрения, основанной на опыте, для пищевого продукта и легко получено.
Авторы настоящего изобретения провели тщательные исследования для достижения указанных выше целей. В результате они обнаружили, что соединения, имеющие циклоланостановый скелет, можно было безопасно принимать внутрь, и они обладали активностью для улучшения функций поджелудочной железы, особенно активностью для предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции или улучшения функции клеток поджелудочной железы внутренней секреции. Настоящее изобретение было достигнуто на основе описанных выше открытий.
Таким образом, настоящее изобретение относится к лекарственному средству и пищевому продукту или напитку для улучшения функций поджелудочной железы, которые содержат в качестве активного ингредиента соединение, имеющее циклоланостановый скелет.
Более конкретно настоящее изобретение относится к лекарственному средству и пищевому продукту или напитку для улучшения функций поджелудочной железы, которые содержат в качестве активного ингредиента соединение, представленное следующей общей формулой (1).
В этой формуле R1 представляет собой неразветвленную или разветвленную алкильную группу, содержащую 6-8 атомов углерода, которая может не содержать двойную связь или содержать 1 или 2 двойные связи и может не содержать гидроксильную группу и карбонильную группу или содержать 1 или 2 гидроксильные группы и карбонильные группы, R2 и R3 каждый независимо представляет собой атом водорода или метильную группу, и R4 формирует C=O с атомом углерода, входящим в состав цикла, или представляет собой группу, представленную любой из следующих формул.
Согласно предпочтительному варианту выполнения лекарственного средства и пищевого продукта или напитка в соответствии с настоящим изобретением улучшение функций поджелудочной железы заключается в предохранении клеток поджелудочной железы внутренней секреции или улучшении функции клеток поджелудочной железы внутренней секреции.
Согласно предпочтительному варианту выполнения указанного выше лекарственного средства и пищевого продукта или напитка R2 и R3 указанного выше соединения представляют собой метильные группы, и R4 представляет собой гидроксильную группу. Кроме того, согласно предпочтительному варианту выполнения указанного выше лекарственного средства и пищевого продукта или напитка R1 указанного выше соединения представлен любой из следующих формул.
2
2
2
3
2
-CH-CH-CH-CH(CH)
2
2
3
2
-CH-CH-CHRa-C(CH)Rb
(где Ra представляет собой любой заместитель из атома водорода, гидроксильной или метильной группы, и Rb представляет собой атом водорода или гидроксильную группу)
2
2
2
3
3
2
-CH-CH-CH(CHCH)-CH(CH)
2
2
3
2
-CH-CH-CHRc-C(CH)=CH
(где Rc представляет собой любой заместитель из атома водорода, гидроксильной или метильной группы)
2
2
3
2
-CH-CH-C(=O)-C(CH)=CH
2
2
2
3
2
-CH-CH-C(=CH)-CH(CH)
2
2
3
2
-CH-CH-CH=C(CH)
2
3
3
2
-CH-CH=C(CH)-CH(CH)
2
2
3
3
2
-CH-CH-C(=CHCH)-CH(CH)
Кроме того, согласно особенно предпочтительному варианту выполнения указанного выше лекарственного средства и пищевого продукта или напитка указанное выше соединение представляет собой 9,19-циклоланостан-3-ол или 24-метилен-9,19-циклоланостан-3-ол.
Кроме того, согласно предпочтительному варианту выполнения указанное выше лекарственное средство содержит от 0,001 до 10% указанного выше соединения по сухой массе.
Кроме того, согласно предпочтительному варианту выполнения указанный выше пищевой продукт или напиток содержит от 0,0001 до 1% указанного выше соединения по сухой массе.
Gramineae
Liliaceae
Liliaceae
Aloe.
Настоящее изобретение дополнительно относится к лекарственному средству для улучшения функций поджелудочной железы, содержащему экстракт органическим растворителем, или горячую водную вытяжку растения, или его части в качестве активного ингредиента, и содержит от 0,001 до 10% по сухой массе соединения, представленного приведенной выше общей формулой (1), и пищевой продукт или напиток для улучшения функций поджелудочной железы, которая содержит экстракт органическим растворителем, или горячую водную вытяжку растения, или его части в качестве активного ингредиента и содержит от 0,0001 до 1% по сухой массе соединения, представленного приведенной выше общей формулой (1), и предпочтительно, чтобы улучшение функций поджелудочной железы заключалось в предохранении клеток поджелудочной железы внутренней секреции или улучшении функции клеток поджелудочной железы внутренней секреции. Кроме того, согласно предпочтительному варианту выполнения лекарственного средства и пищевого продукта или напитка в соответствии с настоящим изобретением указанное выше растение предпочтительно представляет собой растение семейства или, и согласно особенно предпочтительному варианту выполнения указанное выше растение из семейства представляет собой растение, отнесенное к роду
Настоящее изобретение дополнительно относится к указанному выше пищевому продукту или напитку с прилагаемым указанием, что их используют для улучшения функций поджелудочной железы.
Далее, указанное выше лекарственное средство и пищевой продукт или напиток также по существу называются "лекарственным средством и пищевым продуктом или напитком в соответствии с настоящим изобретением".
Настоящее изобретение дополнительно относится к применению соединения, представленного указанной выше химической формулой (1), или содержащей его композиции для получения лекарственного средства для улучшения функций поджелудочной железы. Согласно предпочтительному варианту применения согласно настоящему изобретению улучшение функций поджелудочной железы заключается в предохранении клеток поджелудочной железы внутренней секреции или улучшении функций клеток поджелудочной железы внутренней секреции. Согласно предпочтительному варианту применения согласно настоящему изобретению указанное выше соединение или содержащая его композиция содержит от 0,001 до 10% указанного выше соединения по сухой массе.
Настоящее изобретение дополнительно относится к способу предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции или улучшения функций клеток, который содержит введение соединения, представленного указанной выше химической формулой (1), или содержащей его композиции индивидууму, клетки поджелудочной железы внутренней секреции которого необходимо предохранять или функции клеток которого должны быть улучшены. Согласно предпочтительному варианту выполнения способа в соответствии с настоящим изобретением улучшение функций поджелудочной железы заключается в предохранении клеток поджелудочной железы внутренней секреции или в улучшении функций клеток поджелудочной железы внутренней секреции. Согласно предпочтительному варианту выполнения способа согласно настоящему изобретению указанная выше композиция содержит от 0,001 до 10% указанного выше соединения по сухой массе.
Ниже предпочтительные варианты выполнения настоящего изобретения будут объяснены подробно. Однако настоящее изобретение не ограничено следующими предпочтительными вариантами выполнения и может быть свободным образом изменено в рамках настоящего изобретения.
Согласно одному варианту выполнения лекарственное средство и пищевой продукт или напиток в соответствии с настоящим изобретением содержит в качестве активного ингредиента соединение, имеющее циклоланостановый скелет и обладающее активностью улучшения функции поджелудочной железы, в особенности активностью предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции, или активностью улучшения функции клеток поджелудочной железы внутренней секреции (далее также называемое "соединением в соответствии с настоящим изобретением"). Циклоланостановый скелет обозначает соединение, представленное следующей общей формулой (2).
Конкретные примеры соединения, содержащего циклоланостановый скелет, включают соединения, представленные приведенной выше общей формулой (1). Количество двойных связей, присутствующих в соединении, содержащем циклоланостановый скелет, особым образом не ограничено. Кроме того, количество двойных связей, присутствующих в цикле, также особым образом не ограничено. Когда присутствуют две или больше двойных связей, они могут быть сопряженными. Лекарственное средство и пищевой продукт или напиток согласно настоящему изобретению могут содержать два или больше типов соединения в соответствии с настоящим изобретением.
В соединении приведенной выше общей формулы (1) в соответствии с настоящим изобретением R1 представляет неразветвленную или разветвленную алкильную группу, содержащую 6-8 атомов углерода, которая может не содержать двойную связь или содержать 1 или 2 двойные связи и может не содержать гидроксильную группу и карбонильную группу или содержать 1 или 2 гидроксильные группы и карбонильные группы, R2 и R3 каждый независимо представляет атом водорода или метильную группу, и R4 формирует C=O с атомом углерода, входящим в состав цикла, или представляет собой группу, представленную любой из следующих формул.
В приведенной выше общей формуле (1) R1 предпочтительно представляет собой любую из групп, представленных следующими формулами.
2
2
2
3
2
(i) -CH-CH-CH-CH(CH)
2
2
3
2
(ii) -CH-CH-CHRa-C(CH)Rb
(где Ra представляет собой любой заместитель из атома водорода, гидроксильной или метильной группы, и Rb представляет собой атом водорода или гидроксильную группу)
2
2
2
3
3
2
(iii) -CH-CH-CH(CHCH)-CH(CH)
2
2
3
2
(iv) -CH-CH-CHRc-C(CH)=CH
(где Rc представляет собой любой заместитель из атома водорода, гидроксильной или метильной группы),
2
2
3
2
(v) -CH-CH-C(=O)-C(CH)=CH
2
2
2
3
2
(vi) -CH-CH-C(=CH)-CH(CH)
2
2
3
2
(vii) -CH-CH-CH=C(CH)
2
3
3
2
(viii) -CH-CH=C(CH)-CH(CH)
2
2
3
3
2
(ix) -CH-CH-C(=CHCH)-CH(CH)
Кроме того, в указанной выше общей формуле (1) R2 и R3 предпочтительно представляют собой метильные группы, и R4 представляет собой гидроксильную группу.
Наиболее предпочтительными в качестве указанного выше соединения являются соединения, представленные следующими формулами, 9,19-циклоланостан-3-ол (формула (3)) и 24-метилен-9,19-циклоланостан-3-ол (формула (4)).
Таким образом, 9,19-циклоланостан-3-ол представляет собой соединение, представленное приведенной выше общей формулой (1), где R2 и R3 представляют собой метильные группы, R4 представляет собой гидроксильную группу, и R1 представляет собой группу, представленную приведенной выше формулой (i). Кроме того, 24-метилен-9,19-циклоланостан-3-ол представляет собой соединение, представленное приведенной выше общей формулой (1), где R2 и R3 представляют собой метильные группы, R4 представляет собой гидроксильную группу и R1 представляет собой группу, представленную приведенной выше формулой (vi).
3
Соединение в соответствии с настоящим изобретением может представлять собой циклоартенол (формула (5)) или 24-метилциклоартанол (формула (7)). Оба этих соединения представляют собой соединения, представленные приведенной выше общей формулой (1), где R2 и R3 представляют собой метильные группы, R4 представляет собой гидроксильную группу и R1 представляет собой группу, представленную приведенной выше формулой (vii), в циклоартеноле или группу, представленную приведенной выше формулой (ii) (Ra = CH, Rb = H), в 24-метил-циклоартаноле.
Соединение в соответствии с настоящим изобретением может быть химически получено известным способом продуцирования. Например, способы получения циклоартенола (формула (5)) и 24-метиленциклоартанола (тривиальное название 24-метилен-9,19-циклоланостан-3-ол, формула (4)), были раскрыты в Выложенном Патенте Японии Номер 57-018617, и способ получения циклоартенолферулата (формула (6)) из γ-оризанола и способ синтеза соединения с использованием продукта его гидролиза в качестве исходного материала раскрыты в Выложенном Патенте Японии Номер 2003-277269. Кроме того, когда заместитель R1 общей формулы (1) содержит двойную связь, могут быть получены различные производные соединения с использованием методики преобразования части двойной связи в альдегид путем реакции разложения озона и связывания с ним фосфоната, методики присоединения водорода к части двойной связи или методики окисления части двойной связи озоном для преобразования ее в альдегид или кислоту. Кроме того, способы получения не ограничены способами химического синтеза, и соединения могут быть биологически продуцированы с использованием микроорганизма и т. п. В качестве альтернативы они могут быть продуцированы с использованием ферментов, полученных из микроорганизмов.
Лекарственное средство и пищевой продукт или напиток в соответствии с настоящим изобретением могут содержать один тип или два, или больше произвольных типов вышеупомянутых соединений.
Liliaceae, Leguminosae, Gramineae, Solanaceae, Musaceae
Известно, что соединения, имеющие циклоланостановый скелет содержатся в растениях семейств и т.д (см. Phytochemistry, U.S.A., 1977, Vol. 16, pp.140-141; Handbook of phytochemical constituents of GRAS herbs and other economic plants, 1992, U.S.A., CRC Press; Hager's Handbuch der Pharmazeutischen Praxis, Vols. 2-6, 1969-1979, Germany, Springer-Verlag Berlin). Соответственно, соединения могут быть экстрагированы из этих растений с использованием такого способа, как экстракция органическим растворителем или экстракция горячей водой.
В настоящем изобретении несмотря на то, что соединение в соответствии с настоящим изобретением может быть очищено способами, описанными выше и т.д., также может быть использована такая композиция, как экстракт растения или его части, при условии, что она содержит эффективное количество соединения.
Liliaceae,
роду Aloe
Allium.
Aloe
(Aloe barbadensis Miller), Aloe ferox Miller, Aloe africana Miller, Aloe arborescen Miller var. natalensis Berger, Aloe spicata Baker
Конкретно, примеры растения, принадлежащего семейству включают растения, принадлежащиеили Примеры растений рода  включают Aloe vera  и т.д.
Несмотря на то что при получении соединения в соответствии с настоящим изобретением или содержащей его композиции может быть использовано указанное выше растение целиком, предпочтительно использовать его мезофилл (прозрачная гелеобразная часть). Такое растение или его часть измельчают с использованием гомогенизатора и т. п. и, таким образом, сжижают, и соединение в соответствии с настоящим изобретением или содержащую его композицию экстрагируют из измельченного продукта с использованием органического растворителя или горячей воды. Примеры органического растворителя включают спирты, такие как метанол, этанол и бутанол; сложные эфиры, такие как метилацетат, этилацетат, пропилацетат и бутилацетат; кетоны, такие как ацетон и метилизобутилкетон; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир и петролейный эфир; углеводороды, такие как гексан, циклогексан, толуол и бензол; галогенизированные углеводороды, такие как тетрахлорид, дихлорметан и хлороформ; гетероциклические соединения, такие как пиридин; гликоли, такие как этиленгликоль; многоатомные спирты, такие как полиэтиленгликоль; нитрильные растворители, такие как ацетонитрил, смеси этих растворителей и т.д. Кроме того, эти растворители могут быть безводными или водными. Среди этих растворителей особенно предпочтительными являются смесь этилацетата/бутанола (3:1) и смесь хлороформа/метанола (2:1).
В качестве способа экстракции можно использовать способ, используемый для обычной экстракции компонента растения. Обычно используют, например, способ нагревания с обратным холодильником 1-300 частей по массе органического растворителя с 1 частью по массе свежего растения или высушенного растения с нагреванием при температуре точки кипения растворителя или ниже и перемешивании или встряхивании, или способ выполнения экстракции путем обработки ультразвуком при комнатной температуре. Необработанный экстракт может быть получен путем экстракции нерастворимых веществ из экстракционной жидкости с использованием подходящего способа, такого как фильтрация или центрифугирование.
Необработанный экстракт может быть очищен посредством различных типов хроматографии, таких как нормальнофазная или обратнофазная колоночная хроматография на силикагеле. Когда в нормальнофазной колоночной хроматографии на силикагеле в качестве растворителя для элюции используют градиент смеси хлороформа/метанола, соединение в соответствии с настоящим изобретением элюируют с коэффициентом смешения хлороформ:метанол = приблизительно 25:1. Кроме того, когда в обратнофазной колоночной хроматографии на силикагеле в качестве растворителя для элюции используют смесь гексана/этилацетата (4:1), соединение в соответствии с настоящим изобретением элюируют во фракции, элюируемой на ранней стадии.
Полученная фракция может быть дополнительно очищена посредством ВЭЖХ и т.п.
Кроме того, соединение, используемое для настоящего изобретения, также может быть получено способом химического синтеза или биологическим или ферментативным способом с применением микроорганизмов, ферментов и т.п.
Структура соединения в соответствии с настоящим изобретением может быть подтверждена, например, масс-спектрометрией (MS), спектроскопией ядерного магнитного резонанса (ЯМР) и т.п.
Соединение в соответствии с настоящим изобретением обладает действием улучшения функции поджелудочной железы, в частности действием предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции или действием улучшения функции клеток поджелудочной железы внутренней секреции. В связи этим, оно может быть использовано в качестве активного ингредиента лекарственного средства и пищевого продукта или напитка для улучшения функций поджелудочной железы, в частности предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции или улучшения функций клеток поджелудочной железы внутренней секреции. В настоящем изобретении предохранение клеток поджелудочной железы внутренней секреции подразумевает предохранение клеток поджелудочной железы внутренней секреции от денатурации вследствие различных причин или предотвращение снижения способности продуцирования инсулина клетками поджелудочной железы внутренней секреции. Кроме того, улучшение функций клеток поджелудочной железы внутренней секреции подразумевает усиление способности продуцирования инсулина клетками поджелудочной железы внутренней секреции, способность продуцирования инсулина которыми снижается. Денатурация клеток поджелудочной железы внутренней секреции, или предохранение клеток поджелудочной железы внутренней секреции, или улучшение функций клеток поджелудочной железы внутренней секреции может быть оценено путем наблюдения под микроскопом части ткани поджелудочной железы животного или путем измерения уровня инсулина в сыворотке.
Посредством указанных выше действий соединение в соответствии с настоящим изобретением может предотвращать снижение способности продуцирования инсулина клетками поджелудочной железы внутренней секреции и усиливать способность продуцирования инсулина клетками поджелудочной железы внутренней секреции, способность продуцирования инсулина которыми снижается.
В отношении мышей db/db, используемых в примерах, приведенных ниже, известно, что повреждение поджелудочной железы наблюдается у них с возрастом в течение недели (Science, 153, 1127-1128, 1966). Несмотря на это сообщалось, что если данным мышам вводить N-ацетил-L-цистеин, витамин С и витамин E в качестве соединений, имеющих действие антиоксидантов, в сочетании, уменьшение количества β-клеток в поджелудочной железе может быть частично предотвращено (Diabetes, 48, 2398-2406, 1999), хотя доза только N-ацетил-L-цистеина составляет 100 г/60 кг, и ожидается, что требуется введение в чрезвычайно больших дозах. В отличие от этого в соответствии с настоящим изобретением можно ожидать, что действие предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции или действие улучшения функции клеток поджелудочной железы внутренней секреции может быть достигнуто с малой дозой.
Лекарственное средство в соответствии с настоящим изобретением может быть использовано в качестве активного ингредиента средств для профилактики или лечения заболеваний, вызванных гипофункцией клеток поджелудочной железы внутренней секреции, таких как, например, расстройство функции поджелудочной железы при остром панкреатите, хроническом панкреатите, сахарный диабет I типа и сахарный диабет II типа, гипофункция поджелудочной железы, связанная со старческим снижением секреции инсулина и т.д. Кроме того, так как соединение в соответствии с настоящим изобретением проявляет низкую токсичность, оно также может быть использовано вместе с противоопухолевым агентом при лечении рака поджелудочной железы. Предпочтительно агент, используемый для лечения гипергликемии среди заболеваний сопутствующих снижению способности продуцирования инсулина, не включен в рамки лекарственного средства в соответствии с настоящим изобретением.
Кроме того, поскольку кожица листа Aloe vera содержит барбалоин и алоэ-эмодин, имеющие слабительное действие, ее условно считают неблагоприятной в качестве лекарственного средства и пищевого продукта или напитка, для которого не ожидается слабительное действие. В связи этим предпочтительно, чтобы композиция, содержащая соединение в соответствии с настоящим изобретением, не содержала эти ингредиенты. Кроме того, также в качестве активного ингредиента лекарственного средства для предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции или улучшения функций клеток поджелудочной железы внутренней секреции можно использовать мезофилл Aloe vera и продукт его измельчения.
Соединение в соответствии с настоящим изобретением может быть использовано в качестве активного ингредиента лекарственного средства и пищевого продукта или напитка в соответствии с настоящим изобретением в чистом виде. Кроме того, экстракт органическим растворителем или горячий водный экстракт растения или его части, содержащий соединение в соответствии с настоящим изобретением (далее называемый "экстракт и т.д."), также может быть использован в качестве активного ингредиента лекарственного средства и пищевого продукта или напитка. В данном случае указанный выше экстракт и т.д., который должен содержаться в лекарственном средстве, предпочтительно содержит от 0,001 до 10% по сухой массе, более предпочтительно от 0,01 до 1% по сухой массе, особенно предпочтительно от 0,05 до 1% по сухой массе соединения в соответствии с настоящим изобретением. Кроме того, указанный выше экстракт и т.д., который должен содержаться в пищевом продукте или напитке, предпочтительно содержит от 0,0001 до 1% по сухой массе, более предпочтительно от 0,001 до 1% по сухой массе, особенно предпочтительно от 0,005 до 1% по сухой массе соединения в соответствии с настоящим изобретением. Указанный выше экстракт и т.д. может содержать два или больше типа соединения в соответствии с настоящим изобретением. Кроме того, указанный выше экстракт и т.д. может представлять собой раствор или также может быть лиофилизирован или высушен распылением обычным образом, и его можно хранить или использовать как порошок.
В качестве лекарственного средства в соответствии с настоящим изобретением соединение в соответствии с настоящим изобретением или содержащая его композиция, такая как экстракт и т.д., в чистом виде или в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, может быть перорально или парентерально введено млекопитающему, включая человека. В лекарственном средстве в соответствии с настоящим изобретением соединение в соответствии с настоящим изобретением может представлять собой фармацевтически приемлемую соль. Примеры фармацевтически приемлемой соли включают как соли металлов (неорганические соли), так и органические соли, включая, например, перечисленные в "Remington's Pharmaceutical Sciences," 17th edition, p.1418, 1985. Конкретные примеры их включают без ограничений соли неорганических кислот, такие как гидрохлорид, сульфат, фосфат, дифосфат, гидробромат и сульфат, и соли органических кислот, такие как малат, малеат, фумарат, тартарат, сукцинат, цитрат, ацетат, лактат, метансульфонат, п-толуолсульфонат, памоат, салицилат и стеарат. Кроме того, соль может представлять собой соль с металлом, таким как натрий, калий, кальций, магний и алюминий или соль с аминокислотой, такой как лизин. Кроме того, сольваты, такие как гидраты указанного выше соединения или его фармацевтически приемлемых солей, также находятся в рамках настоящего изобретения.
Лекарственная форма препарата в соответствии с настоящим изобретением особым образом не ограничена и может быть подходящим образом выбрана в зависимости от терапевтического назначения. Ее конкретные примеры включают таблетку, пилюлю, порошок, раствор, суспензию, эмульсию, гранулы, капсулу, сироп, суппозиторий, инъекцию, мазь, пластырь, глазные капли, капли для носа и т.д. Для приготовления могут быть использованы добавки, используемые в обычных терапевтических или профилактических препаратах для заболеваний внутренних органов, таких как поджелудочная железа, в качестве фармацевтических носителей, такие как эксципиенты, связующие, агенты для расщепления, лубриканты, стабилизаторы, ароматизаторы, разбавители, поверхностно-активные вещества и растворители для инъекции. Кроме того, при условии, что эффект в соответствии с настоящим изобретением не пропадает, соединение в соответствии с настоящим изобретением или содержащий его экстракт и т.д. может быть использовано в сочетании с другими лекарственными средствами, обладающими эффектом улучшения в отношении течения или профилактики заболевания поджелудочной железы.
Несмотря на то, что количество соединения в соответствии с настоящим изобретением или содержащего его экстракта и т.д., содержащееся в лекарственном средстве в соответствии с настоящим изобретением, особым образом не ограничено и может быть подходящим образом подобрано, количество может составлять, например, от 0,001 до 10% по массе, предпочтительно от 0,01 до 1% по массе, особенно предпочтительно от 0,05 до 1% по массе в единицах количества соединения в соответствии с настоящим изобретением.
С помощью лекарственного средства в соответствии с настоящим изобретением могут быть предотвращены различные заболевания, осложнения и т.д, развившиеся по причине гипофункции клеток поджелудочной железы внутренней секреции, и риск этих заболеваний, осложнений и т.д может быть уменьшен.
Примеры таких различных заболеваний и осложнений, развившихся по причине гипофункции клеток поджелудочной железы внутренней секреции, включают нервное расстройство, нефропатию, ретинопатию, катаракту, макрососудистое заболевание, сахарный диабет и т.д.
Время введения лекарственного средства в соответствии с настоящим изобретением особым образом не ограничено и может быть подходящим образом выбрано согласно способу лечения целевого заболевания. Кроме того, путь введения предпочтительно определяют в зависимости от формы дозировки, возраста, пола и других особенностей пациентов, степени тяжести симптомов пациентов и т.д.
Дозу активного ингредиента в лекарственном средстве в соответствии с настоящим изобретением подходящим образом выбирают в зависимости от режима дозировки, возраста, пола, степени тяжести заболевания, других особенностей пациентов и т.д. Количество соединения в соответствии с настоящим изобретением в качестве активного ингредиента обычно выбирают из диапазона предпочтительно от 0,001 до 50 мг/кг/день, более предпочтительно от 0,01 до 1 мг/кг/день, в качестве ориентировочной дозы. Кроме того, когда используют экстракт и т.д., содержащий соединение в соответствии с настоящим изобретением, сухой вес экстракта и т.д. выбирают из диапазона предпочтительно от 0,1 до 1000 мг/кг/день, более предпочтительно от 1 до 100 мг/кг/день, в качестве ориентировочного количества. В любом случае дозу можно принимать один раз или несколько раз, в виде разделенных частей, в день.
Соединение в соответствии с настоящим изобретением или содержащий его экстракт и т.д. может быть добавлено в пищевой продукт или напиток. Форма и свойство пищевого продукта или напитка особым образом не ограничены при условии, что эффект активного ингредиента не уменьшается, и пищевой продукт или напиток могут быть перорально приняты, и они могут быть продуцированы обычным образом с использованием сырья, обычно используемого для пищевого продукта или напитка за исключением того, что добавляют указанный выше активный ингредиент.
Количество соединения в соответствии с настоящим изобретением или содержащего его экстракта и т.д., содержавшееся в пищевом продукте или напитке в соответствии с настоящим изобретением, особым образом не ограничено и может быть подходящим образом выбрано. Например, соединение в соответствии с настоящим изобретением или содержащий его экстракт и т.д. содержится в пищевом продукте или напитке в количестве от 0,0001 до 1% по массе, предпочтительно от 0,001 до 1% по массе, в частности предпочтительно от 0,005 до 1% по массе, в единицах количества соединения в соответствии с настоящим изобретением.
Пищевой продукт или напиток в соответствии с настоящим изобретением могут быть использованы для различных применений, в которых используют эффект предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции или эффект улучшения функции клеток поджелудочной железы внутренней секреции. Например, они могут быть использованы как пищевой продукт или напиток, подходящий для "индивидуумов, имеющих низкий уровень продуцирования инсулина", "индивидуумов, имеющих ослабленную функцию инсулина", "индивидуумов с беспокойством в отношении функций поджелудочной железы", пищевой продукт или напиток, полезный для уменьшения или устранения факторов риска заболеваний, связанных с образом жизни, таких как сахарный диабет, вызванный гипофункцией поджелудочной железы, и панкреатит, вызванный чрезмерным потреблением алкоголя и стрессом.
В отношении пищевого продукта или напитка в соответствии с настоящим изобретением выражение "предохранение клеток поджелудочной железы внутренней секреции или улучшение функций клеток поджелудочной железы внутренней секреции" обозначает, что лечение или профилактика различных нарушений здоровья, возникшего вследствие гипофункции клеток поджелудочной железы внутренней секреции, и "предохранение функций островков Лангерганса", "улучшение функций островков Лангерганса", "предохранение функций β клеток", "улучшение функций β клеток", "повышение продуцирования инсулина", "профилактика уменьшения продуцирования инсулина", "повышение активности инсулина", "профилактика уменьшения активности инсулина" и т.д проиллюстрированы настоящим изобретением как термины имеющие значение, аналогичное значению указанного выше термина "предохранение клеток поджелудочной железы внутренней секреции или улучшение функций клеток поджелудочной железы внутренней секреции".
Кроме того, пищевой продукт или напиток в соответствии с настоящим изобретением полезны для профилактики заболевания, возникшего вследствие гипофункции клеток поджелудочной железы внутренней секреции, такого как например, расстройство функции поджелудочной железы при остром панкреатите, хронический панкреатит, сахарный диабет I типа и сахарный диабет II типа, гипофункция поджелудочной железы, связанная со старческим снижением секреции инсулина и т.д. Кроме того, пищевой продукт или напиток в соответствии с настоящим изобретением могут быть использованы для профилактики различных заболеваний, осложнений и т.д., возникших вследствие гипофункции клеток поджелудочной железы внутренней секреции, и могут уменьшить риск этих заболеваний, осложнений и т.д. Кроме того, поскольку соединение в соответствии с настоящим изобретением проявляет низкую токсичность, пищевой продукт или напиток в соответствии с настоящим изобретением, применяемые с противоопухолевым агентом при лечении рака поджелудочной железы, также полезны для пациента.
Примеры таких различных заболеваний и осложнений, возникших вследствие гипофункции клеток поджелудочной железы внутренней секреции, включают нервное расстройство, нефропатию, ретинопатию, катаракту, макрососудистое заболевание, диабет и т.д.
Пищевой продукт или напиток в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно продают как пищевой продукт или напиток с прилагающимся указанием, что пищевой продукт или напиток используют для предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции или улучшения функций клеток поджелудочной железы внутренней секреции, например, "пищевой продукт или напиток, содержащий соединение, обладающее эффектом предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции или эффектом улучшения функции клеток поджелудочной железы внутренней секреции, отмеченное как 'Для предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции или улучшения функций клеток поджелудочной железы внутренней секреции'", "пищевой продукт или напиток, содержащий экстракт растения, отмеченный как 'Для предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции или улучшения функций клеток поджелудочной железы внутренней секреции'", "пищевой продукт или напиток, содержащий экстракт Aloe vera, отмеченный как 'Для предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции или улучшения функций клеток поджелудочной железы внутренней секреции'" и т.д.
Формулировка, используемая для такого указания, как отмечено выше, необязательно ограничена выражением "Для предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции или улучшения функций клеток поджелудочной железы внутренней секреции", и любая другая формулировка, выражающая эффект предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции или эффект улучшения функций клеток поджелудочной железы внутренней секреции, безусловно попадает в рамки настоящего изобретения. Также возможна сама по себе формулировка, например, указание, основанное на различных применениях, позволяющих потребителям распознать эффект предохранения клеток поджелудочной железы внутренней секреции или эффект улучшения функции клеток поджелудочной железы внутренней секреции. Примеры включают указания "Подходящее для индивидуумов, имеющих низкий уровень продуцирования инсулина", "Подходящий для индивидуумов, имеющих ослабленную функцию инсулина", "Полезный для уменьшения или устранения факторов риска заболеваний, связанных с образом жизни, таких как сахарный диабет, вызванный снижением активности или уровня продуцирования инсулина, панкреатит, вызванный чрезмерным потреблением алкоголя и стрессом" и т.д.
Приведенный выше термин "указание" включает все действия для сообщения потребителям указанного выше применения и любые указания, упоминающие или поясняющие указанное выше применение, попадают в рамки "указания" в соответствии с настоящим изобретением независимо от цели, содержания, целевого материала, носителя и т.д. указания. Однако указание предпочтительно выполнено с фразой, позволяющей потребителям непосредственно распознать указанное выше применение. Конкретные примеры включают действия по указанию отмеченного выше применения на товарах или упаковке товаров, относящихся к пищевому продукту или напитку в соответствии с настоящим изобретением, действия по назначению, снабжению, демонстрации в целях назначения или снабжения или импортирования таких товаров или упаковок товаров, отмеченных указанным выше применением, по демонстрации или распространению рекламы, прейскурантов или подтоварных векселей, относящихся к товарам с указанием отмеченного выше применения, или по обеспечению информации, включая содержимое с указанием отмеченного выше применения электромагнитным способом (Интернет и т.д.) и т.д.
Это указание предпочтительно представляет собой указание, одобренное администрацией и т.д. (например, указание в форме, основанной на утверждении, квалифицированном на основе любой из различных правовых систем, представленным администрацией), и оно особенно предпочтительно представляет собой указание на рекламных материалах в местах сбыта, таких как упаковки, емкости, каталоги, брошюры и реклама на месте продажи, другие документы и т.д.
Примеры указания дополнительно включают указания как здоровый пищевой продукт, функциональный пищевой продукт, пищевой продукт для питания кишечной системы, пищевой продукт для специальных диетических применений, пищевой продукт с заявленной питательной функцией, мнимое лекарство и т.д, а также как указания, одобренные министерством здравоохранения, министерством труда и социальной защиты, например, указания, одобренные на основе системы продуктов питания для определенных медицинских применений и подобных систем. Примеры последних включают указания как пищевой продукт для определенных медицинских применений, указания как пищевой продукт для определенных медицинских применений с квалифицированным утверждением о полезности для здоровья, указания о влиянии на структуры и функции организма, указания о заявленном понижении риска заболевания и т.д, и, точнее, типичные примеры включают указания как пищевой продукт для определенных медицинских применений (в особенности указания применения для здоровья), представленные в принудительных постановлениях закона об охране здоровья (министерство здравоохранения Японии, министерство труда и социальной защиты, министерское постановление номер 86, 30 апреля 2003), и аналогичные указания.
Примеры
Настоящее изобретение будет более конкретно объяснено со ссылкой на следующие примеры. Однако объем настоящего изобретения не ограничен следующими примерами.
Примеры получения соединений, имеющих циклоланостановый скелет будут приведены ниже.
[Пример 1 получения]
9,19-циклоланостан-3-ол (формула (3)), 24-метилен-9,19-циклоланостан-3-ол (формула (4)), циклоартенол (формула (5)) и 24-метилциклоартанол (формула (7)) были получены способом, описанным ниже.
К 8,0 г γ-оризанола (Oryza Oil and Chemical Co., Ltd.) добавляли 250 мл дистиллированной воды, 50 г гидроксида натрия, 150 мл изопропанола, 150 мл этанола и 150 мл метанола и смесь нагревали с обратным холодильником в течение 2 часов с использованием колбонагревателя. После реакции реакционную смесь наливали в 1300 мл воды, и продуцированный белый осадок выделяли фильтрацией с отсасыванием. Для смывания остающейся щелочи остаток, полученный фильтрацией, осаждали в 1000 мл воды и затем снова собирали фильтрацией с отсасыванием. Эту процедуру повторяли дважды и в конечном итоге полученный остаток лиофилизировали при пониженном давлении для получения 5,91 г гидролизата оризанола. Этот гидролизат очищали с помощью ВЭЖХ для получения 2435 мг циклоартенола и 1543 мг 24-метилен-9,19-циклоланостан-3-ола.
2
2
2
2
2
Полученный циклоартенол использовали для синтеза 9,19-циклоланостан-3-ола. В герметичный автоклав засыпали циклоартенол в количестве 302 мг, 150 мл изопропанола и 1,0 г порошкообразного 5% катализатора палладий/углерод, внутреннюю атмосферу замещали газообразным азотом и затем вводили газообразный водород с приложением давления 3 кг/см. Смесь нагревали при перемешивании и когда температура достигала 50°C, давление водорода доводили до 5 кг/см. Реакции давали протекать в течение 6 часов с компенсацией поглощенного водорода дополнительным водородом для поддержания давления. Реакционную смесь фильтровали для удаления катализатора, концентрировали и затем очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (проявляющий растворитель: 100% хлороформ) для получения 275 мг 9,19-циклоланостан-3-ола. 24-Метилциклоартанол синтезировали с использованием в качестве исходного материала 24-метилен-9,19-циклоланостан-3-ола. В герметичный автоклав засыпали 24-метилен-9,19-циклоланостан-3-ол в количестве 78 мг, 150 мл изопропанола и 1,0 г порошкообразного 5% катализатора палладий/углерод, внутреннюю атмосферу замещали газообразным азотом и затем вводили газообразный водород с приложением давления 3 кг/см. Затем смесь нагревали при перемешивании и когда температура достигала 50°C, давление водорода доводили до 5 кг/см. Реакции давали протекать в течение 6 часов с компенсацией поглощенного водорода дополнительным водородом для поддержания давления 5 кг/см. Реакционную смесь фильтровали для удаления катализатора, концентрировали и затем очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (проявляющий растворитель: 100% хлороформ) для получения 69 мг 24-метилциклоартанол.
Aloe barbadensis Miller
Примеры получения экстрагированных композиций, содержащих соединение, имеющее циклоланостановый скелет, с применением Aloe vera () в качестве исходного материала будут описаны ниже.
[Пример 2 получения]
Aloe barbadensis Miller
Aloe vera () без кожицы в количестве 100 кг разжижали с использованием гомогенизатора, добавляли 100 л смеси уксусноэтилового эфира/бутанола (3:1) и перемешивали. Смесь оставляли на ночь для разделения смеси уксусноэтилового эфира/бутанола и водного слоя и восстанавливали смесь уксусноэтилового эфира/бутанола. Экстрагированная композиция, содержащая соединение, имеющее циклоланостановый скелет, которая была получена путем концентрации смеси уксусноэтилового эфира/бутанола при пониженном давлении, весила 13,5 г. Измерение ЖХ-МС данной композиции позволило обнаружить, что содержание 9,19-циклоланостан-3-ола составляло 10 мг и содержание 24-метилен-9,19-циклоланостан-3-ола составляло 70 мг.
[Пример 3 получения]
К порошку Aloe vera в количестве 1 кг добавляли 10 л смеси хлороформа/метанола (2:1) и держали его в смеси в течение ночи при комнатной температуре и затем восстанавливали смесь хлороформа/метанола. Органические растворители полностью удаляли из данной смеси при 28°C для получения 83 г композиции, содержащей соединение, имеющее циклоланостановый скелет. Измерение ЖХ-МС композиции позволяло обнаружить, что содержание 9,19-циклоланостан-3-ола составляло 25,8 мг и содержание 24-метилен-9,19-циклоланостан-3-ола составляло 24 мг.
[Тестовый пример 1]
Этот тест выполняли для оценки действия предохранения функции клетки поджелудочной железы внутренней секреции (способности к продуцированию инсулина) соединения, имеющего циклоланостановый скелет, с использованием мышей db/db, известных как животное-модель для гипофункции или дисфункции поджелудочной железы ткани поджелудочной железы.
(1) Приготовление образца
В качестве тестовых образцов 1 и 2 соответственно использовали 9,19-циклоланостан-3-ол и 24-метилен-9,19-циклоланостан-3-ол, полученные выше в Примере получения 1.
(2) Способ теста
В этом тесте были использованы 6-недельные самцы мыши db/db (закупленные в Clea Japan, Inc). Эти мыши были подразделены на группы, каждая из которых состояла из 7 животных. Каждый тестовый образец растворяли в DMSO и доводили концентрацию до 0,1 или 1 мкг/мл с помощью физиологического солевого раствора. Конечную концентрацию DMSO доводили до 0,2%. Модельным мышам расстройства поджелудочной железы перорально вводили 1 мл тестового образца один раз в день каждый день в течение 42 дней с помощью зонда. Уровень инсулина в сыворотке измеряли на 43-й день непрерывного введения с использованием инсулинового Lbis набора ELISA для мышей (Shibayagi, Co., Ltd).
(3) Результаты теста
Уровни инсулина в сыворотке на 43-й день непрерывного введения образцов показаны в Таблице 1. Когда тестовый образец 1 или 2 вводили с концентрацией 1 мкг/животное, уровни инсулина в сыворотке составляли 160 и 170% по отношению к уровню, наблюдаемому в отрицательном тесте, соответственно, и таким образом явным образом наблюдался эффект предохранения функции поджелудочной железы (способности к продуцированию инсулина) за счет предохранения от дисфункции поджелудочной железы. С другой стороны, при введении с концентрацией 0,1 мкг/животное не наблюдалось никакого значительного эффекта предохранения функции поджелудочной железы. В течение периода введения не наблюдалось абсолютно никакого побочного эффекта, принимая во внимание вес тела и обнаружение патологий.
Таблица 1
Уровни инсулина в сыворотке на 43-й день непрерывного введения
Образец
Уровни инсулина в сыворотке на 43-й день введения(нг/мл)
<p по отношению к отрицательному образцу>
Отрицательный образец
1,99±0,66
Тестовый образец 1 (1 мкг)
3,19±0,78
<0,017*>
Тестовый образец 1 (0,1 мкг)
1,74±0,26
<0,16>
Тестовый образец 2 (1 мкг)
3,39±1,35
<0,041*>
Тестовый образец 2 (0,1 мкг)
1,94±0,56
<0,14>
*: указывает на наличие статистически значительной разности
[Тестовый пример 2]
В этом тесте действие соединения, содержащего циклоланостановый скелет, по предохранению ткани поджелудочной железы исследовали с использованием мышей db/db, известных как животное-модель для гипофункции поджелудочной железы или дисфункции ткани поджелудочной железы.
(1) Приготовление образца
В качестве тестовых образцов 1 и 2 соответственно использовали 9,19-циклоланостан-3-ол и 24-метилен-9,19-циклоланостан-3-ол, полученные выше в Примере получения 1.
(2) Способ теста
В этом тесте были использованы 6-недельные самцы мыши db/db (закупленные в Clea Japan, Inc). Эти мыши были подразделены на группы, каждая из которых состояла из 7 животных. Каждый тестовый образец растворяли в DMSO и доводили концентрацию до 1 мкг/мл с помощью физиологического солевого раствора. Конечную концентрацию DMSO доводили до 0,2%. Модельным мышам перорально вводили 1 мл тестового образца один раз в день каждый день в течение 42 дней с помощью зонда. На 43-й день непрерывного введения извлекали поджелудочную железу, разделяли на три части выше, по центру и ниже стороны двенадцатиперстной кишки и фиксировали раствором формалина и затем обычным способом готовили парафиновые блоки. Из парафиновых блоков были приготовлены срезы, и их подвергли окрашиванию гематоксилин-эозином. С применением окулярного микрометра на микроскопе ("ECLIPSE E600", NIKON CORP.) на каждом срезе было измерено количество островков Лангерганса, присутствующих на срезах 3 точек поджелудочной железы, и площадь островка Лангерганса, имеющего максимальную площадь.
(3) Результаты теста
Количество островков Лангерганса в срезах поджелудочной железы на 43-й день непрерывного введения образцов приведены в Таблице 2, и значения максимальной площади островков Лангерганса в тот же день приведены в Таблице 3. Количество островков Лангерганса мышей, которым вводили тестовый образец 1 или 2 составляли 149 и 148% количества островков Лангерганса у мышей, которым вводили отрицательный образец, соответственно, и было обнаружено, что это количество являлось очевидно большим. Аналогично максимальные значения площади островков Лангерганса у мышей, которым вводили тестовый образец 1 или 2, оставались в 1,8 и 3,1 раза больше по отношению к значениям, наблюдаемым в отрицательном тесте, и таким образом было обнаружено, что редукция островков Лангерганса в следствие расстройства поджелудочной железы было предотвращено. Из данных результатов было выявлено, что 9,19-циклоланостан-3-ол и 24-метилен-9,19-циклоланостан-3-ол обладают действием защиты тканей поджелудочной железы, особенно эндокринных клеток.
Таблица 2
Количество островков Лангерганса в патологических срезах поджелудочной железы обработанных мышей
Образец
Количество островков Лангерганса в срезах на 43-й день введения (штук)
<p по отношению к отрицательному образцу>
Отрицательный образец
40,3±9,7
Тестовый образец 1 (1 мкг)
60,0±14,8
<0,006*>
Тестовый образец 2 (1 мкг)
59,6±11,6
<0,005*>
*: указывает на наличие статистически значительной разности
Таблица 3
Максимальные значения площади островков Лангерганса в патологических срезах поджелудочной железы обработанных мышей
Образец
Максимальное значение площади островков Лангерганса при введении x 10<sup>3 </sup>(мкм<sup>2</sup>)
<p по отношению к отрицательному образцу>
Отрицательный образец
44,5±17,7
Тестовый образец 1 (1 мкг)
78,6±3,3
<0,04*>
Тестовый образец 2 (1 мкг)
140,0±102,8
<0,05*>
*: указывает на наличие статистически значительной разности
Промышленная применимость
Liliaceae
Aloe barbadensis Miller
Gramineae.
Лекарственное средство и пищевой продукт или напиток в соответствии с настоящим изобретением могут быть безопасно введены или приняты внутрь и обладать активностью защиты клеток поджелудочной железы внутренней секреции и улучшения функций клеток поджелудочной железы внутренней секреции. Кроме того, активный ингредиент лекарственного средства и пищевого продукта или напитка в соответствии с настоящим изобретением может быть продуцирован из растения, которое может быть безопасно принято внутрь с основанной на опыте точки зрения в отношении пищевого продукта и легко доступно, например растение семейства, такое как Aloe vera () или семейства