СПОСОБ СНИЖЕНИЯ ОШИБОЧНОГО ВКЛЮЧЕНИЯ НЕКАНОНИЧЕСКИХ АМИНОКИСЛОТ С РАЗВЕТВЛЕННОЙ ЦЕПЬЮ

1. Способ получения рекомбинантного полипептида, представляющего интерес, в микробной клетке-хозяине, включающий стадии
(d) введения полинуклеотида, кодирующего полипептид, представляющий интерес, в микробную клетку-хозяина, которая была модифицирована таким образом, что ферментативная активность, выбранная из группы, состоящей из активности кетол-кислотной редуктоизомеразы (NADP(+)) (EC 1.1.1.86), активности синтазы ацетогидроксикислот (EC 2.2.1.6), активности аспартаткиназы (EC 2.7.2.4), активности гомосериндегидрогеназы (EC 1.1.1.3) и L-треониндегидратазы (EC 4.3.1.19), является модулированной в указанной микробной клетке-хозяине по сравнению с ферментативной активностью в немодифицированной микробной клетке-хозяине, и
(e) экспрессии указанного полипептида, представляющего интерес, в указанной микробной клетке-хозяине.
2. Способ по п. 1, где полученный полипептид, представляющий интерес, демонстрирует сниженное ошибочное включение неканонических аминокислот с разветвленной цепью по сравнению с полипептидом, который был получен посредством экспрессии в немодифицированной микробной клетке-хозяине.
3. Способ по любому из пп. 1 и 2, где способ дополнительно включает выделение полипептида из клетки и очистку полипептида.
4. Способ по п. 3, где очистка включает обогащение полипептидов, которые не содержат неканонические аминокислоты с разветвленной цепью.
5. Способ по любому из пп. 1 и 4, где указанную ферментативную активность повышают посредством введения и экспрессии полинуклеотида, кодирующего полипептид, обладающий указанной ферментативной активностью, в указанной микробной клетке-хозяине.
6. Способ по п. 5, где указанная микробная клетка-хозяин не экспрессирует эндогенный полипептид, обладающий указанной ферментативной активностью.
7. Способ по любому из пп. 1-6, где полипептид, представляющий интерес, является терапевтическим пептидом или полипептидом.
8. Способ по любому из пп. 1-7, где полинуклеотид, кодирующий полипептид, представляющий интерес, и/или полинуклеотид, кодирующий полипептид, обладающий указанной ферментативной активностью, функционально связан с индуцируемым промотором.
9. Способ по любому из пп. 1-8, где указанная микробная клетка-хозяин представляет собой клетку Escherichia coli.
10. Способ снижения ошибочного включения по меньшей мере одной неканонической аминокислоты с разветвленной цепью в рекомбинантный полипептид, представляющий интерес, экспрессируемый в микробной клетке-хозяине, при этом указанный способ включает
(a) модулирование ферментативной активности, выбранной из группы, состоящей из активности кетол-кислотной редуктоизомеразы (NADP(+)) (EC 1.1.1.86), активности синтазы ацетогидроксикислот (EC 2.2.1.6), активности аспартаткиназы (EC 2.7.2.4), активности гомосериндегидрогеназы (EC 1.1.1.3) и L-треониндегидратазы (EC 4.3.1.19), в микробной клетке-хозяине,
(b) введение полинуклеотида, кодирующего полипептид, представляющий интерес, в указанную микробную клетку-хозяина, и
(c) экспрессию указанного полипептида, представляющего интерес, в указанной микробной клетке-хозяине.
11. Способ по п. 10, где по меньшей мере одна неканоническая аминокислота с разветвленной цепью выбрана из норвалина, норлейцина и бета-метилнорлейцина.
12. Применение полипептида, обладающего ферментативной активностью, выбранной из группы, состоящей из активности кетол-кислотной редуктоизомеразы (NADP(+)) (EC 1.1.1.86), активности синтазы ацетогидроксикислот (EC 2.2.1.6), активности аспартаткиназы (EC 2.7.2.4), активности гомосериндегидрогеназы (EC 1.1.1.3) и L-треониндегидратазы (EC 4.3.1.19), или полинуклеотида, кодирующего указанный полипептид, для снижения ошибочного включения по меньшей мере одной неканонической аминокислоты с разветвленной цепью в рекомбинантный полипептид, представляющий интерес, продуцируемый в микробной клетке-хозяине.
13. Применение микробной клетки-хозяина для получения рекомбинантного полипептида, представляющего интерес, где микробная клетка-хозяин была модифицирована таким образом, что ферментативная активность, выбранная из группы, состоящей из активности кетол-кислотной редуктоизомеразы (NADP(+)) (EC 1.1.1.86), активности синтазы ацетогидроксикислот (EC 2.2.1.6), активности аспартаткиназы (EC 2.7.2.4), активности гомосериндегидрогеназы (EC 1.1.1.3) и L-треониндегидратазы (EC 4.3.1.19), модулируется в указанной микробной клетке-хозяине по сравнению с ферментативной активностью в немодифицированной микробной клетке-хозяине.
14. Способ по любому из пп. 1-11 или применение по п. 12 или п. 13, где ферментативная активность является модулированной.
15. Способ по любому из пп. 1-11 и 14 или применение по пп. 12, 13 или 14, где полипептид, представляющий интерес, представляет собой проинсулин.
16. Микробная клетка-хозяин, содержащая
(a) рекомбинантный полинуклеотид, кодирующий полипептид, представляющий интерес, и
(b) рекомбинантный полинуклеотид, кодирующий полипептид, обладающий ферментативной активностью,
выбранной из группы, состоящей из активности кетол-кислотной редуктоизомеразы (NADP(+)) (EC 1.1.1.86), активности синтазы ацетогидроксикислот (EC 2.2.1.6), активности аспартаткиназы (EC 2.7.2.4), активности гомосериндегидрогеназы (EC 1.1.1.3) и L-треониндегидратазы (EC 4.3.1.19).
17. Биореактор, содержащий микробную клетку-хозяина по п. 16.
18. Биореактор по п. 17, где биореактор имеет объем, составляющий по меньшей мере 10 л.