СПОСОБЫ СОЗДАНИЯ СИНТЕТИЧЕСКИХ ХРОМОСОМ, ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ БИОСИНТЕТИЧЕСКИЕ ПУТИ, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Способ создания биосинтетического пути в реципиентной клетке, включающий:
трансфекцию линии реципиентных клеток компонентами для получения синтетической хромосомы, включающими последовательности нуклеиновых кислот, которые позволяют осуществить сайт-специфическую интеграцию целевых последовательностей нуклеиновых кислот;
получение синтетической хромосомы-платформы с несколькими сайт-специфическими сайтами рекомбинации;
трансфекцию линии реципиентных клеток вектором доставки, содержащим несколько генов, способных реализовать биосинтетический путь, причем вектор доставки содержит, по меньшей мере, один сайт-специфический сайт рекомбинации;
активацию сайт-специфической рекомбинации между синтетической хромосомой-платформой и вектором доставки, при которой указанные несколько генов, способных реализовать биосинтетический путь, загружают на синтетическую хромосому-платформу для получения синтетической хромосомы, экспрессирующей биосинтетический путь; и
выделение реципиентной клетки, содержащей синтетическую хромосому, экспрессирующую биосинтетический путь.
2. Способ по п. 1, в котором несколько генов, способных реализовать биосинтетический путь, содержат гены, необходимые для биосинтеза триптофана.
3. Способ по п. 2, где гены, необходимые для биосинтеза триптофана содержат пять генов, необходимых для синтеза триптофана в Saccharomyces cerevisiae.
4. Способ по п. 2, где вектор доставки дополнительно содержит следующее: а) один или более генов, препятствующих или блокирующих способность опухолевых клеток подавлять цикл развития иммунокомпетентных клеток, b) один или более генов, кодирующих факторы, которые усиливают активацию и рост иммунокомпетентных клеток, или c) один или более генов, усиливающих специфичность иммунокомпетентных клеток к развитию опухолей.
5. Способ по п. 4, где вектор доставки содержит по меньшей мере два из а), b) или с).
6. Способ по п. 5, где вектор доставки содержит все три а), b) и с).
7. Способ по любому из пп. 1-6, дополнительно содержащий этапы:
выделения синтетической хромосомы, экспрессирующей биосинтетический путь и
перенос синтетической хромосомы во вторую реципиентную клетку.
8. Способ по п. 7, где вторую реципиентную клетку выбирают из универсальной донорной Т-клетки или аутологичной Т-клетки пациента.
9. Способ по п. 1, где последовательности нуклеиновых кислот, которые обеспечивают сайт-специфическую интеграцию, содержат attP, attB, attL и attR или мутированные варианты attP, attB, attL и attR.
10. Способ по п. 1, где вектор доставки представляет собой BAC.
11. Способ по п. 1, дополнительно включающий этапы:
трансфекции линии реципиентных клеток вторым вектором доставки, содержащим несколько генов, способных реализовать второй биосинтетический путь, причем второй вектор доставки содержит, по меньшей мере, один сайт-специфический сайт рекомбинации;
активацию сайт-специфической рекомбинации между синтетической хромосомой-платформой и вторым вектором доставки, где указанные несколько генов, способных реализовать второй биосинтетический путь, загружают на синтетическую хромосому-платформу для получения синтетической хромосомы, экспрессирующей второй биосинтетический путь; и
выделение реципиентной клетки, содержащей синтетическую хромосому, экспрессирующую второй биосинтетический путь.
12. Способ по п. 11, дополнительно включающий этапы:
выделения синтетической хромосомы, экспрессирующей второй биосинтетический путь; и
перенос синтетической хромосомы, экспрессирующей второй биосинтетический путь во вторую реципиентную клетку.
13. Способ по п. 11, где вторую реципиентную клетку выбирают из универсальной донорной Т-клетки или аутологичной Т-клетки пациента.
14. Синтетическая хромосома, экспрессирующая биосинтетический путь, созданный способом по любому из пп. 1-13.
15. Реципиентная клетка, содержащая синтетическую хромосому по п. 14.
16. Способ создания биосинтетического пути в реципиентной иммунокомпетентной клетке, включающий:
трансфекцию линии реципиентных клеток компонентами для получения синтетической хромосомы, включающими последовательности нуклеиновых кислот, которые позволяют осуществить сайт-специфическую интеграцию целевых последовательностей нуклеиновых кислот;
получение синтетической хромосомы-платформы с несколькими сайт-специфическими сайтами рекомбинации;
трансфекцию линии реципиентных клеток вектором доставки, содержащим несколько генов, способных реализовать биосинтетический путь, причем вектор доставки содержит, по меньшей мере, один сайт-специфический сайт рекомбинации;
активацию сайт-специфической рекомбинации между синтетической хромосомой-платформой и вектором доставки, при которой указанные несколько генов, способных реализовать биосинтетический путь, загружают на синтетическую хромосому-платформу для получения синтетической хромосомы, экспрессирующей биосинтетический путь;
выделение реципиентной клетки, содержащей синтетическую хромосому, экспрессирующую биосинтетический путь;
выделения синтетической хромосомы, экспрессирующей биосинтетический путь; и
перенос синтетической хромосомы во вторую реципиентную клетку.