СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ОБЩЕЙ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ЖИВОТНЫХ
METHOD FOR PRODUCING PREPARATION FOR INCREASING TOTAL AND SPECIFIC RESISTANCE OF ANIMAL ORGANISM

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам приготовления препарата на основе личинок трутней и селеноорганического соединения для животных, и может быть использовано для повышения общей и специфической резистентности организма животных.
Уровень техники
Известен способ приготовления препарата для стимуляции организма животных из личинок трутней, причем восковые крышечки запечатанного расплода осторожно срезают электрическим паровым или пчеловодным ножом, нагретым в кипящей воде, затем соты устанавливают в ручную двухрамочную медогонку, в течение 10-12 минут извлекают до 95% личинок, гомогенизируют, добавляют адсорбент (по массе), в качестве которого применяют смесь лактозы и глюкозы, тщательно растирают, сырой адсорбированный гомогенат трутневого расплода хранят при температуре 4-6°C около 3 месяцев до высушивания, а готовый продукт хранят при температуре окружающей среды до трех лет, при этом все манипуляции по сбору личинок, приготовлению, консервированию, фасовке гомогената во флаконы из темного стекла и упаковке их в тару обязательно проводят в санитарно-гигиенических условиях, отвечающих требованиям, предъявляемым к производству лекарственных препаратов и пищевых продуктов. (Заготовка личинок трутней. В.И.Лебедев, М.А.Легович, НИИ пчеловодства, ж. Пчеловодство, №3, 2003 г., с.52-54)
Недостатком данного способа является невысокая биологическая активность.
7
Известен способ приготовления препарата для повышения общей и специфической резистентности организма животных, включающий сбор перги и личинок трутней, после чего личинки трутней замораживают при температуре (-4; -5°C), затем размораживают при температуре +18°C, измельчают до образования гомогенной массы, гомогенат ювенильных фаз трутней соединяют с измельченной до пылеобразного состояния пергой в соотношении 1:1 с последующей обработкой смеси ультразвуком при определенных параметрах, а затем настаивают на спирте в темном месте в течение 14 дней, после чего фильтруют, к фильтрату добавляют стерильной воды до концентрации в настойке спирта 20% (пат. RU 2291704, МПК A61K 35/64 (2006.01), A61P 37/04 (2006.01).
Недостатком данного способа является ограниченность спектра применения.
Известно применение препарата селедант для коррекции селенового статуса у стельных коров и оценки его влияния на накопление колостральных иммуноглобулинов в сыворотке крови новорожденных телят.
Показано, что введение селеданта оказывало нормализующее влияние на интенсивность процессов окислительной модификации белков и липидов в условиях окислительного стресса, возникающего у новорожденных телят в ранний постнатальный период. Введение селеданта стельным коровам-матерям до отела и новорожденным телятам в первые сутки после рождения положительно влияет на формирование колострального иммунитета у новорожденных животных за счет увеличения периода пассивного всасывания колостральных иммуноглобулинов, защищающих от инфекционных болезней. (Влияние селеданта на окислительную модификацию белков и формирование колострального иммунитета у новорожденных телят. Г.Н.Близнецова, И.В.Филатов, С.С.Артемьева, Ю.М.Масьянов // Материалы Первого съезда ветеринарных фармакологов России / Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии. - Воронеж, 2007. С.131-136)
Недостатком данного способа является ограниченность спектра применения.
7
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятый авторами за прототип является способ приготовления препарата для стимуляции организма животных из личинок трутней, включающий изготовление препарата из личинок трутней различного возраста, замораживание при температуре (-4; -5°C) в течение 12-14 часов, затем размораживают и гомогенизируют, при этом в качестве стабилизирующей среды используют 5% раствор глюкозы в соотношении 1:10 с добавлением 5% раствора хлороформа или 2% салициловой кислоты с последующей сублимацией и разливают во флаконы по 5 мл. При этом сублимацию проводят в вакуумной камере при температуре подогрева полок до 30-45°C. При достижении температуры препарата 20-22°C температуру полок снижают до 25°C и производят досушивание в течение 22-24 часов (пат. RU 2258522, МПК A61K 35/64 (2006.01), A61P 37/04 (2006.01).
Недостатком данного способа является ограниченность спектра применения, невысокая биологическая активность.
Раскрытие изобретения
Технический результат, который может быть достигнут с помощью предложенного способа, сводится к повышению биологической активности препарата, повышению общей и специфической резистентности, исключению аллергических реакций, расширению спектра применения, повышению продуктивности при оптимизации белкового, минерального и липидного обменов, адаптации животных при воздействии стресс-факторов, профилактики болезней селеновой недостаточности у животных, а также для использования в комплексном лечении инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных.
Технический результат достигается с помощью способа приготовления препарата на основе личинок трутней и селеноорганического соединения для животных, включающего сбор личинок трутней, замораживание в течение 3-5 мин при температуре (-4; -5°C), в течение 12-14 ч, затем проводят размораживание до +18°C, их гомогенизацию с последующим добавлением стабилизирующей среды, ацетилсалициловой кислоты и проведением сублимации, причем сублимацию проводят в вакуумной камере при температуре подогрева полок до (+30°C)-(+45°C), при этом при достижении температуры препарата (+20°C)-(+22°C) температуру полок снижают до +25°C и досушивание в течение 22-24 ч, при этом в качестве селеноорганического соединения используют диацетофенонилселенид, а в качестве стабилизирующей среды используют среду высушивания сахарозо-желатиновой смеси, включающей 10% сахарозы и 5% желатина в соотношении гомогената и среды высушивания 1:10, при этом личинки трутней берут в возрасте от 5 до 14 суток, а диацетофенонилселенид добавляют после гомогенизации в количестве 3,5-4 мг на 100 мл гомогената, затем гомогенат и ацетилсалициловую кислоту в количестве 0,2% к объему, смешивают 2-3 мин, помещают в термостат при температуре 50-55°C на 35-40 минут, причем по истечении установленного времени препарат перемещают в другой термостат при 37°C на 8 часов, при этом цикл повторяют трижды, с последующим охлаждением до комнатной температуры и добавлением в стерильных условиях стерильной среды высушивания, фасовкой, замораживании при -50°C и сублимацией.
Сущность способа приготовления препарата на основе личинок трутней и селеноорганического соединения для животных заключается в том, что препарат изготавливают из личинок трутней в возрасте от 5 до 14 суток. Для чего с помощью острого ножа срезают восковые крышечки с трутневого расплода. Рамку переворачивают и с помощью вилки для распечатывания сотов личинки трутней вытряхивают на стерильный противень, фасуют в стеклянные банки объемом 100 мл, укупоривают крышками и ставят в морозильную камеру при температуре - 4-5°C на 12-14 часов. Расплод размораживают до температуры +18°C и гомогенизируют в течение 3-5 минут. Далее к гомогенату добавляют диацетофенонилселенид из расчета 4 мг диацетофенонилселенида на 100 мл гомогената, добавляют 0,2% ацетилсалициловой кислоты, тщательно вымешивают в течение 2-3 минут до получения однородной массы, разливают в стерильные широкогорлые стеклянные колбы емкостью 100 мл, колбы укупоривают стерильными ватно-марлевыми пробками и помещают в термостат при температуре 50-55°C на 35-40 минут, по истечении установленного времени колбы перемещают в другой термостат для инкубирования при 37°C на 8 часов. Цикл повторяют трижды. Охлаждают до комнатной температуры. К смеси гомогената и диацетофенонилселенида в стерильных условиях добавляют стерильную среду высушивания (сахарозо-желатиновая смесь, включающая 10% сахарозы и 5% желатина) в соотношении 1:10. Смесь тщательно вымешивают в течение 2-3 минут и в стерильном боксе фильтруют через 4-5 слоев стерильной марли в аналогичный стерильный стеклянный флакон, замораживают при температуре -50°C и сублимируют в вакуумной камере при температуре подогрева полок до 30-45°C, при этом при достижении температуры препарата 20°C-22°C температуру полок снижали до 25°C и проводили досушивание в течение 22-24 часов.
Осуществление изобретения
Пример 1. С помощью острого ножа срезают восковые крышечки с трутневого расплода. Рамка переворачивается и с помощью вилки для распечатывания сотов личинки трутней фасуются в стеклянные банки объемом 100 мл, укупориваются крышками и ставятся в морозильную камеру при температуре -4-5°C на 12-14 часов. Расплод размораживают до температуры +18°C и гомогенизируют в течение 3-5 минут. Далее добавляют 1 мг диацетофенонилселенида на 100 мл гомогената и смешивают в течение 2-3 минут до получения однородной массы. Разливают в стерильные широкогорлые стеклянные колбы емкостью 100 мл, колбы укупоривают стерильными ватно-марлевыми пробками и помещают в термостат при температуре 50°C на 20 минут, по истечении установленного времени колбы перемещают в другой термостат для инкубирования при 37°C на 24 часов. Цикл повторяют трижды. Колбы охлаждают до комнатной температуры. К смеси гомогената и диацетофенонилселенида в стерильных условиях добавляют стерильную среду высушивания (сахарозо-желатиновая смесь, включающая 10% сахарозы и 5% желатина) в соотношении 1:2. Смесь тщательно вымешивают в течение 2-3 минут и в стерильном боксе фильтруют через 4-5 слоев стерильной марли в аналогичный стерильный стеклянный флакон. Смесь замораживают при температуре -30°C и сублимируют в вакуумной камере при температуре подогрева полок до 30-45°C, при этом при достижении температуры препарата 20°C-22°C температуру полок снижали до 25°C и проводили досушивание в течение 22-24 часов.
Полученный препарат затрудняет обработку и увеличивает технологические потери, плохо растворим в дистиллированной воде и изотоническом растворе натрия хлорида, темно-серо-желтого цвета с включениями пузырьков газа и кислым запахом. При посеве препарата на питательные среды площадь колоний микроорганизмов составляла 40-45% от поверхности питательной среды. При микроскопии мазков, окрашенных по Граму, до 60% микроорганизмов было представлено дрожжеподобными грибками.
Пример 2. Проводят аналогично опыту 1, но личинки трутней в возрасте от 5 до 14 суток фасуются в стеклянные банки объемом 100 мл, укупориваются крышками и ставятся в морозильную камеру при температуре -4-5°C на 12-14 часов. Расплод размораживают до температуры +18°C и гомогенизируют в течение 3-5 минут. Далее добавляют 2 мг диацетофенонилселенида на 100 мл гомогената. К смеси добавляют 0,7% ацетилсалициловой кислоты, тщательно вымешивают в течение 2-3 минут до получения однородной массы, разливают в стерильные широкогорлые стеклянные колбы емкостью 100 мл, колбы укупоривают стерильными ватно-марлевыми пробками и помещают в термостат при температуре 65°C на 30 минут, по истечении установленного времени колбы перемещают в другой термостат для инкубирования при 37°C на 8 часов. Цикл повторяют трижды. Колбы охлаждают до комнатной температуры. К смеси гомогената и диацетофенонилселенида в стерильных условиях добавляют стерильную среду высушивания (сахарозо-желатиновая смесь, включающая 10% сахарозы и 5% желатина) в соотношении 1:5. Смесь тщательно вымешивают в течение 2-3 минут и в стерильном боксе фильтруют через 4-5 слоев стерильной марли в аналогичный стерильный стеклянный флакон. Смесь замораживают при температуре -40°C и сублимируют в вакуумной камере при температуре подогрева полок до 30-45°C, при этом при достижении температуры препарата 20°C-22°C температуру полок снижали до 25°C и проводили досушивание в течение 22-24 часов.
Препарат хорошо растворим в дистиллированной воде и изотоническом растворе натрия хлорида, имеет нехарактерный жженный запах, темный серо-коричнево-желтый цвет. При посеве на питательные среды в течение 10 суток рост микроорганизмов отсутствовал. При скармливании животным не дал высокого эффекта повышения общей и специфической стимуляции организма.
Пример 3. Проводят аналогично опыту 1, но личинки трутней в возрасте от 5 до 14 суток вытряхиваются на стерильный противень, фасуются в стеклянные банки объемом 100 мл, укупориваются крышками и ставятся в морозильную камеру при температуре -4-5°C на 12-14 часов. Расплод размораживают до температуры +18°C и гомогенизируют в течение 3-5 минут. Далее добавляют 3,5 мг диацетофенонилселенида на 100 мл гомогената. К смеси добавляют 0,2% ацетилсалициловой кислоты, тщательно вымешивают в течение 2-3 минут до получения однородной массы, разливают в стерильные широкогорлые стеклянные колбы емкостью 100 мл, колбы укупоривают стерильными ватно-марлевыми пробками и помещают в термостат при температуре 50°C на 40 минут, по истечении установленного времени колбы перемещают в другой термостат для инкубирования при 37°C на 8 часов. Цикл повторяют трижды. Колбы охлаждают до комнатной температуры. К смеси гомогената и диацетофенонилселенида в стерильных условиях добавляют стерильную среду высушивания (сахарозо-желатиновая смесь, включающая 10% сахарозы и 5% желатина) в соотношении 1:10. Смесь тщательно вымешивают в течение 2-3 минут и в стерильном боксе фильтруют через 4-5 слоев стерильной марли в аналогичный стерильный стеклянный флакон. Смесь замораживают при температуре -50°C и сублимируют в вакуумной камере при температуре подогрева полок до 30-45°C, при этом при достижении температуры препарата 20°C-22°C температуру полок снижали до 25°C и проводили досушивание в течение 22-24 часов.
Препарат имеет приятный специфический запах, хорошо растворим в дистиллированной воде и изотоническом растворе натрия хлорида, равномерного светло-серо-желтого цвета. При посеве на питательные среды колонии микроорганизмов отсутствовали. Введение препарата животным способствует увеличению среднесуточных привесов.
Пример 4. Проводят аналогично опыту 1, но личинки трутней в возрасте от 5 до 14 суток вытряхиваются на стерильный противень, фасуются в стеклянные банки объемом 100 мл, укупориваются крышками и ставятся в морозильную камеру при температуре -4-5°C на 12-14 часов. Расплод размораживают до температуры +18°C и гомогенизируют в течение 3-5 минут. Далее добавляют 4 мг диацетофенонилселенида на 100 мл гомогената. К смеси добавляют 0,2% ацетилсалициловой кислоты, тщательно вымешивают в течение 2-3 минут до получения однородной массы, разливают в стерильные широкогорлые стеклянные колбы емкостью 100 мл, колбы укупоривают стерильными ватно-марлевыми пробками и помещают в термостат при температуре 55°C на 35 минут, по истечении установленного времени колбы перемещают в другой термостат для инкубирования при 37°C на 8 часов. Цикл повторяют трижды. Колбы охлаждают до комнатной температуры. К смеси гомогената и диацетофенонилселенида в стерильных условиях добавляют стерильную среду высушивания (сахарозо-желатиновая смесь, включающая 10% сахарозы и 5% желатина) в соотношении 1:10. Смесь тщательно вымешивают в течение 2-3 минут и в стерильном боксе фильтруют через 4-5 слоев стерильной марли в аналогичный стерильный стеклянный флакон. Смесь замораживают при температуре -50°C и сублимируют в вакуумной камере при температуре подогрева полок до 30-45°C, при этом при достижении температуры препарата 20°C-22°C температуру полок снижали до 25°C и проводили досушивание в течение 22-24 часов.
Препарат имеет приятный специфический запах, хорошо растворим в дистиллированной воде и изотоническом растворе натрия хлорида, равномерного светло-серо-желтого цвета. При посеве на питательные среды колонии микроорганизмов отсутствовали. Введение препарата молодняку кроликов и мышей способствует увеличению среднесуточных привесов, снижается интенсивность процессов перекисного окисления, увеличивается резистентность клеточных мембран и повышается выносливость при экстремальной физической нагрузке.
Пример 5. Проводят аналогично опыту 1, личинки трутней в возрасте от 5 до 14 суток вытряхиваются на стерильный противень, фасуются в стеклянные банки объемом 100 мл, укупориваются крышками и ставятся в морозильную камеру при температуре -4-5°C на 12-14 часов. Расплод размораживают до температуры +18°C и гомогенизируют в течение 3-5 минут. Далее добавляют 6 мг диацетофенонилселенида на 100 мл гомогената. К смеси добавляют 1,0% ацетилсалициловой кислоты, тщательно вымешивают в течение 2-3 минут до получения однородной массы, разливают в стерильные широкогорлые стеклянные колбы емкостью 100 мл, колбы укупоривают стерильными ватно-марлевыми пробками и помещают в термостат при температуре 55°C на 40 минут, по истечении установленного времени колбы перемещают в другой термостат для инкубирования при 37°C на 8 часов. Цикл повторяют трижды. Колбы охлаждают до комнатной температуры. К смеси гомогената и диацетофенонилселенида в стерильных условиях добавляют стерильную среду высушивания (сахарозо-желатиновая смесь, включающая 10% сахарозы и 5% желатина) в соотношении 1:10. Смесь тщательно вымешивают в течение 2-3 минут и в стерильном боксе фильтруют через 4-5 слоев стерильной марли в аналогичный стерильный стеклянный флакон. Смесь замораживают при температуре -50°C и сублимируют в вакуумной камере при температуре подогрева полок до 30-45°C, при этом при достижении температуры препарата 20°C-22°C температуру полок снижали до 25°C и проводили досушивание в течение 22-24 часов.
Препарат имеет приятный специфический запах, хорошо растворим в дистиллированной воде и изотоническом растворе натрия хлорида, равномерного светло-серо-желтого цвета. При посеве на питательные среды колонии микроорганизмов отсутствовали. При введении препарата животным наблюдается эритема кожи, исходит чесночный запах.
Влияние препарата на неспецифическую резистентность.
При исследовании неспецифической резистентности кроликов контроль показателей крови (бактерицидная и лизоцимная активность, содержание общего белка, белковых фракций, сиаловых кислот) проводили каждые семь дней. Согласно полученным данным на фоне применения препарата молодняку и взрослым животным в пределах физиологических норм увеличивается бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови, содержание белков γ-глобулиновой фракции, что свидетельствует о иммуномодулирующем действии препарата.
Изучение влияния препарата на адаптацию организма.
Влияние препарата на выносливость животных в условиях стресса изучали на белых мышах. Была проведена проба с экстремальной физической нагрузкой (плавание). В опыт было отобрано 45 нелинейных белых мышей массой 20-22 г. Животных отбирали по принципу аналогов. Мышам опытной группы через день в корм добавляли препарат на основе личинок трутней и селеноорганического соединения для животных в дозе 0,015 мл/гол., мышам группы положительного контроля по аналогичной схеме добавляли препарат для стимуляции организма животных из личинок трутней, мыши группы отрицательного контроля аналогичным способом получали среду высушивания в дозе 0,015 мл/кг. Данные исследований отображены в графике (см. чертеж).
На фоне применения препарата на основе личинок трутней и селеноорганического соединения для животных снижается интенсивность процессов перекисного окисления, увеличивается резистентность клеточных мембран и повышается выносливость при экстремальной физической нагрузке. Это может быть связано с наличием в его составе таких гормонов, как кортизол, заменимых и незаменимых аминокислот, в частности валина и глицина, содержанием ряда макро- и микроэлементов, в частности селена.
Влияние препарата на продуктивность нами изучалось в опытах на белых кроликах и белых мышах. В начале опыта, на седьмой и четырнадцатый день животных взвешивали, определяли живую массу, подсчитывали среднесуточные привесы.
Установлено, что введение препарата молодняку кроликов и мышей способствует увеличению среднесуточных привесов в среднем на 25,9% по сравнению с интактными животными. Данное действие препарата по нашему мнению может быть связано с наличием в его составе таких гормонов, как тестостерон, ряда заменимых и незаменимых аминокислот, в частности треонина, валина и высоким содержанием таких макро- и микроэлементов, как селен, кальций, железо.
Применение препарата в комплексном лечении пастереллеза кроликов. В опыт отобрали 30 беспородных кроликов, больных пастереллезом. У всех животных в течение суток отмечались клинические признаки заболевания. При бактериологическом исследовании была высеяна чистая культура пастерелл. Кролики были разделены на три равноценные группы. Этиотропную терапию проводили фармазионом в дозе 10 мг/кг, внутримышечно один раз в сутки в течение 7 дней. По завершении курса лечения у выживших кроликов брали кровь и проводили комплекс бактериологических исследований. Кролики группы положительного контроля помимо инъекций фармазина ежедневно получали препарат для стимуляции организма животных из личинок трутней в дозе 0,15 мл/кг, подкожно. Кроликам опытной группы ежедневно подкожно вводили препарат на основе личинок трутней и селеноорганического соединения для животных в дозе 0,15 мл/кг. До и после лечения у животных брали кровь и определяли бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови, содержание тиобарбитуровой кислоты активных продуктов, сиаловых кислот, общего белка и белковых фракций (таблица). Учитывали выживаемость кроликов, динамику живой массы.
Падеж кроликов группы отрицательного контроля в течение опыта и трех суток после завершения курса лечения составил 95%, группы положительного контроля и опытной группы - 30%.
На основании полученных данных установлено, что комплексное лечение пастереллеза кроликов с использованием помимо средств этиотропной терапии препарата на основе личинок трутней и селеноорганического соединения для животных повышает сохранность животных, сокращает сроки выздоровления животных. Данный эффект связан с иимуномодулирующими, анаболическими, антиоксидантными и противовоспалительными свойствами препарата, обусловленными входящим в его состав комплексом биологически активных веществ, таких как гормоны: тестостерон и кортизол; микроэлементы: селен; незаменимые и заменимые аминокислоты треонин, лейцин, валин, глицин.
Изучение влияния препарата на некоторые показатели белкового, липидного и минерального обменов.
Содержание и соотношение кальция и фосфора в сыворотке крови животных, получавших комплексный препарат, на протяжении опыта оставалось в пределах физиологической нормы. Содержание кальция увеличилось с 15,25±0,22 до 17,75±0,55 мг/мл. Содержание фосфора соответственно увеличилось с 9,5±0,4 до 12,5±0,4 мг/мл, соотношение кальция и фосфора до опыта составляло 1,6:1, на четырнадцатые сутки эксперимента 1,45:1. Полученные данные свидетельствуют об оптимальном протекании минерального обмена у животных опытной группы.
Ранее было установлено увеличение среднесуточных привесов и массы животных на фоне применения препарата. Результаты, полученные в данной серии опытов, показывают, что благодаря оптимальному аминокислотному, витаминному и минеральному составу препарата интенсификация роста животных не сопровождается нарушениями белкового, минерального и липидного обменов. Использование препарата в период интенсивного роста способствует оптимизации показателей вышеуказанных обменов.
Таблица 2
Аминокислотный, витаминный и минеральный состав препарата на основе личинок трутней и селеноорганического соединения для животных
Показатель
Единицы измерения
Содержание на 1000 г препарата
Аминокислотный состав
Аминокислоты незаменимые
Метионин
г
0,45
Фенилаланин
г
5,05
Треонин
г
10,83
Валин
г
10,07
Лизин
г
5,14
Лейцин
г
14,25
Изолейцин
г
16,37
Аминокислоты заменимые
Аспарагиновая кислота
г
18,42
Треонин
г
10,83
Серии
г
7,17
Глутаминовая кислота
г
24,02
Глицин
г
6,77
Алании
г
7,6
Тирозин
г
2,65
Гистидин
г
4,17
Аргинин
г
26,98
Всего
г
159,95
Минеральный состав
Селен
мкг
10
K
мг
157,3
Na
мг
600
Ca
мг
274,4
P
мг
38
Mg
мг
87
Fe
мг
5
Содержание гормонов
Тестостерон
нмоль
2,5
Прогестерон
нмоль
1,3
Эстрадиол
нмоль
2,05
Кортизол
нмоль
3,4
Предлагаемое изобретение имеет следующие преимущества:
- повышение специфической и неспецифической резистентности сельскохозяйственных животных;
- повышение продуктивности при сохранении оптимальных показателей белкового, минерального и липидного обменов;
- адаптация животных при воздействии стресс-факторов;
- профилактика болезней селеновой недостаточности у животных;
- использование в комплексном лечении инфекционных и протозойных заболеваний сельскохозяйственных животных;
- эффект тканевой терапии.