СИНЦИТИАЛЬНЫЕ ОНКОЛИТИЧЕСКИЕ МУТАНТЫ HERPES SIMPLEX В КАЧЕСТВЕ МОЩНЫХ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА

1. Неприродный вирус простого герпеса («HSV»), содержащий одну или несколько мутаций в гене вирулентности, относящихся к группе из:
(а) гена, кодирующего гликопротеин E («gE»),
(b) гена, кодирующего протеин 0 инфицированной клетки («ICP0»),
(c) гена, кодирующего субъединицу 1 терминазы упаковки ДНК,
(d) гена, кодирующего ICP8, или
(e) гена, кодирующего ICP34.5.
2. Неприродный HSV по п. 1, дополнительно содержащий ген, кодирующий дисфункциональный белок ICP34.5, и/или ген, кодирующий дисфункциональный белок ICP6.
3. Неприродный HSV по п. 2, где ген, кодирующий дисфункциональный белок ICP34.5, включает полинуклеотид, имеющий последовательность, выбранную из SEQ ID №5, SEQ ID №7, и последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID №5 или 7, и сохраняющий мутацию в нуклеотиде в любой из SEQ ID №5 или 7.
4. Неприродный HSV по п. 2, где ген, кодирующий дисфункциональный белок ICP6, включает полинуклеотид, имеющий последовательность, выбранную из SEQ ID №45, SEQ ID №47, и последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID №45 или 47, и сохраняющий мутацию в нуклеотиде в любой из SEQ ID №45 или 47.
5. Неприродный HSV по любому из пп. 1-4, где мутация в гене вирулентности включает вставку, делецию, усечение, сдвиг рамки считывания, замену или точечную мутацию.
6. Неприродный HSV по любому из пп. 1-5, где в HSV отсутствует ген, кодирующий функциональный белок ICP34.5 и/или функциональный белок ICP6.
7. Неприродный HSV по любому из пп. 1-6, где мутация представляет собой несинонимичную мутацию в гене вирулентности.
8. Неприродный HSV по любому из пп. 1-7 или его эквивалент, где мутация или эквивалент кодирует:
(а) мутацию из аланина в треонин в положении 151 белка gE,
(b) мутацию из аргинина в гистидин в положении 258 белка ICP0,
(c) мутацию из аланина в треонин в положении 376 белка субъединицы 1 терминазы упаковки ДНК,
(d) мутацию из треонина в метионин в положении 1155 белка ICP8, или
(e) мутацию из пролина в гистидин в положении 119 белка ICP34.5.
9. Неприродный HSV по любому из пп. 1-8, содержащий одно или несколько из следующего:
(а) полинуклеотид, кодирующий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID №№2, 6, 8, 10 и 52, и/или полинуклеотид, имеющий последовательность, выбранную из SEQ ID №№1, 5, 7, 9 и 51;
(b) полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID №№2, 6, 8, 10 и 52;
(c) полинуклеотид, кодирующий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID №№13, 15, 17 и 19, и/или полинуклеотид, имеющий последовательность, выбранную из SEQ ID №№12, 14, 16 и 18;
(d) полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID №№13, 15, 17 и 19;
(e) полинуклеотид, кодирующий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID №№21, 23 и 26, и/или полинуклеотид, имеющий последовательность, выбранную из SEQ ID №№20, 22, 24, 25 и 53, или последовательность, свободную от одного, двух или более интронов;
(f) полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID №№21, 23 и 26;
(g) полинуклеотид, кодирующий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID №№28, 30, 32 и 34, и/или полинуклеотид, имеющий последовательность, выбранную из SEQ ID №№27, 29, 31 и 33;
(h) полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID №№28, 30, 32 и 34;
(i) полинуклеотид, кодирующий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID №№36, 38, 40 и 42, и/или полинуклеотид, имеющий последовательность, выбранную из SEQ ID №№35, 37, 39 и 41;
(j) полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID №№36, 38, 40 и 42;
(k) полинуклеотид, кодирующий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID №№44, 46, 48 и 50, и/или полинуклеотид, имеющий последовательность, выбранную из SEQ ID №№43, 45, 47 и 49;
(l) полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID №44, 46, 48 и 50.
10. Неприродный HSV по любому из пп. 1-9, дополнительно содержащий полинуклеотид, имеющий последовательность, идентичную по меньшей мере фрагменту гена вирулентности из 17TermA HSV.
11. Неприродный HSV по любому из пп. 1-10, дополнительно содержащий полинуклеотид, имеющий последовательность, идентичную по меньшей мере фрагменту гена вирулентности из rRp450 HSV.
12. Неприродный HSV по любому из пп. 1-11, где HSV происходит от штамма HSV типа 1 («HSV-1») или HSV типа 2 («HSV-2»).
13. Неприродный HSV по любому из пп. 1-11, где HSV происходит от штамма KOS HSV-1.
14. Неприродный HSV по любому из пп. 1-13, дополнительно содержащий трансген.
15. Композиция, содержащая неприродный HSV по любому из пп. 1-14 и носитель.
16. Композиция по п. 14, где носитель представляет собой фармацевтически приемлемый носитель.
17. Композиция по п. 15 или 16, дополнительно содержащая криоконсервант, облегчающий замораживание и размораживание неприродного HSV без потери существенной вирулентности.
18. Не относящееся к человеку млекопитающее, инфицированное неприродным HSV по любому из пп. 1-14.
19. Клетка, инфицированная неприродным HSV по любому из пп. 1-14, при необходимости лимфоцит.
20. Способ инфицирования клетки, включающий обеспечение контакта клетки с неприродным HSV по любому из пп. 1-14 или композицией по любому из пп. 15-17.
21. Способ по п. 20, где клетка представляет собой лимфоцит.
22. Способ по п. 20 или 21, где клетка инфицирована вирусом Эпштейна-Барр («EBV»).
23. Способ получения вирусного вектора, включающий введение трансгена в неприродный HSV по любому из пп. 1-13.
24. Способ ингибирования роста или метастазирования раковой клетки, включающий обеспечение контакта клетки с эффективным количеством вектора неприродного HSV по любому из пп. 1-14 или композиции по любому из пп. 15-17.
25. Способ по п. 24, где контакт осуществляют in vitro или in vivo.
26. Способ по п. 24, где контакт осуществляют in vivo путем применения неприродного вируса у субъекта.
27. Способ лечения рака у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества вектора неприродного HSV по любому из пп. 1-14 или композиции по любому из пп. 15-17.
28. Способ по любому из пп. 24-27, где рак относится к типу, или раковая клетка выбрана из клетки типа: рака поджелудочной железы, рака почки, мелкоклеточного рака легкого, опухоли головного мозга, опухоли нервной системы, рака костей, лимфомы, миеломы, рака толстой кишки, рака матки, рака молочной железы, лейкоза, рака печени, рака простаты, рака кожи или меланомы.
29. Способ по п. 27 или 28, где вектор HSV или фармацевтическую композицию вводят путем инъекции, инфузии, инстилляции и/или ингаляции.
30. Способ по любому из пп. 27-28, где введение включает терапию из группы из терапии первой линии, терапии второй линии, терапии третьей линии, терапии четвертой линии или терапии пятой линии.
31. Способ по п. 27, дополнительно включающий применение у субъекта эффективного количества противоопухолевой терапии.
32. Способ по любому из пп. 27-31, где субъектом является млекопитающее.
33. Способ по п. 32, где млекопитающее принадлежит к группе из человека, мыши, крысы, морской свинки, не являющегося человеком примата, собаки, кошки, лошади, коровы, свиньи, козы или овцы.
34. Способ по п. 32, где субъектом является человек.
35. Способ получения вектора HSV по любому из пп. 1-13, включающий
(а) введение в клетку-хозяина вектора 17TermA HSV и вектора rRp450 HSV;
(b) выращивание клетки-хозяина по меньшей мере за 3 пассажа; и
(c) выделение частицы HSV, продуцируемой клеткой-хозяином.
36. Способ по п. 35, где HSV вводят в клетку-хозяина путем трансфекции, инфицирования, трансформации, электропорации, инъекции, микроинъекции или их комбинации.
37. Способ по п. 35 или 36, где клетку-хозяина выращивают по меньшей мере за 3 пассажа, 10 пассажей, 20 пассажей, 30 пассажей, 40 пассажей или 50 пассажей.
38. Способ по любому из пп. 35-37, где клетка-хозяин содержит продукт комплементарного гена для поддержки репликации введенных векторов HSV.
39. Способ по п. 38, где комплементарный ген кодирует белок ICP6 и/или белок ICP34.5.
40. Способ по любому из пп. 35-39, дополнительно включающий введение трансгена в вектор HSV.
41. Частица HSV, полученная способом по любому из пп. 35-40.
42. Способ индукции лизиса клеток, включающий обеспечение контакта клетки с неприродным HSV по любому из пп. 1-14 или композицией по любому из пп. 15-17.
43. Способ по п. 42, где клетка представляет собой раковую клетку.
44. Набор, содержащий вектор HSV по любому из пп. 1-14 или композицию по любому из пп. 15-17, и инструкции по применению.
45. Способ получения вектора HSV по любому из пп. 1-13, включающий:
(а) введение в клетку-хозяина полинуклеотида, кодирующего вирусный геном вектора HSV;
(b) выращивание клетки-хозяина; и
(c) выделение частицы HSV, продуцируемой клеткой-хозяином.
46. Способ по п. 45, где полинуклеотид вводят в клетку-хозяина путем трансфекции, инфицирования, трансформации, электропорации, инъекции, микроинъекции или их комбинации.
47. Способ по п. 45 или 46, где нуклеиновокислотную последовательность, кодирующую вирусный геном, вводят в клетку-хозяин в векторе.
48. Способ по п. 47, где вектор представляет собой HSV или плазмиду.
49. Способ по любому из пп. 45-48, где клетка-хозяин содержит продукт комплементарного гена для поддержки репликации введенных векторов HSV.
50. Способ по любому из пп. 45-49, где выделенный HSV практически не содержит клеток-хозяев, клеточного детрита, питательной среды или любого другого агента, используемого при культивировании клеток-хозяев.
51. Способ по любому из пп. 45-50, где выделение проводят центрифугированием, фильтрацией, хроматографией или любой их комбинацией.