СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ ЭУКАРИОТИЧЕСКИХ КЛЕТОК В ПРОДУЦИРОВАНИИ РЕКОМБИНАНТНОГО FVIII

2
3
1. Способ повышения продуктивности, в частности клеточно-специфичной продуктивности рекомбинантного фактора VIII (rFVIII), продуцируемого в суспензионной культуре эукариотических клеток в процессе культивирования указанной суспензионной культуры эукариотических клеток в культуральной среде, содержащей не более чем 500 мкM CaCl, по меньшей мере, один неионный детергент и другие питательные компоненты, необходимые клеткам для роста и продуцирования rFVIII, причем способ отличается тем, что указанная клеточная суспензия культивируется при условиях индуцирования сдвигового усилия посредством механического воздействия на суспензионную культуру эукариотических клеток путем приложения к ним удельной мощности, составляющей, по меньшей мере, 3 Вт/м.
2. Способ по п. 1, где удельная мощность вводится в клеточную культуральную среду посредством механического движения клеточной суспензии.
3. Способ по п. 2, где механическое движение клеточной суспензии осуществляется посредством прокачивания клеточной суспензии через мембрану тангенциального фильтра, в частности, через половолоконную мембрану.
4. Способ по п. 2, где механическое движение клеточной суспензии осуществляется посредством вращающего элемента, такого как мешалка, пропеллерная мешалка или лопастная мешалка.
5. Способ по п. 1, где rFVIII представляет собой rFVIII с делетированным В-доменом.
6. Способ по п. 1, где эукариотические клетки представляют собой клетки HEK293.
7. Способ по п. 1, где молекула rFVIII продуцируется в клетках HEK293 и ассоциирована с ними.
8. Способ по п. 1, где неионные детергенты выбирают из Pluronic-F68, Tween 20 и Tween 80.
9. Способ по пп. 1 и 8, где неионные детергенты имеют концентрацию 0,00001-1 масс.%, в частности, 0,0001-0,1 масс.%, наиболее подходящая концентрация 0,001-0,01 масс.%.
2
2
10. Способ по п. 1, где агрегация клеток минимизирована посредством поддержания низкой концентрации CaClв культуральной среде и путем повышения транспорта CaCl из окружающей среды в клетки посредством увеличения сдвига.
11. Способ по пп. 1-4, где механическое движение клеточной суспензии инициируется в культуральной емкости, оборудованной лопастной мешалкой, или в культуральной емкости с гравитационным движением, индуцирующим сдвиговое усилие в указанной клеточной суспензии, или сдвиговое усилие в посуде с клеточной суспензией индуцируется посредством прокачивания клеточной суспензии через статический миксер или фильтровальное устройство.
12. Способ по пп. 1 и 2, где удельная мощность, прилагаемая к клеточной суспензии для введения сдвигового усилия, составляет максимум 2000 Вт/м³.
13. Способ по п. 12, где удельная мощность, прилагаемая к клеточной суспензии для введения сдвигового усилия, составляет от 3 Вт/м³ до 2000 Вт/м³.