ГАНГЛИОЗИДЫ ДЛЯ СТАНДАРТИЗАЦИИ И ПОВЫШЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ КЛЕТОК К НЕЙРОТОКСИНАМ БОТУЛИЗМА В ТЕСТ-СИСТЕМАХ IN VITRO

1. Способ стандартизации чувствительности нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPS), к полипептиду нейротоксина, включающий стадии:
a) культивирования различных групп нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, в культуральной среде, содержащей GT1b, в течение по меньшей мере 3 часов;
b) приведения в контакт указанных различных групп нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, стадии а) с полипептидом нейротоксина;
c) культивирования указанных различных групп нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, стадии b) в течение по меньшей мере 24 часов в присутствии GT1b в условиях, которые позволяют указанному полипептиду нейротоксина проявлять свою биологическую активность;
в результате чего, происходит стандартизация чувствительности указанных нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, к полипептиду нейротоксина.
2. Способ получения происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток нейронов, которые имеют стандартизованную чувствительность по отношению к полипептиду нейротоксина, включающий стадии:
a) обеспечения различных групп нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток;
b) культивирования указанных различных групп нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, стадии а) в культуральной среде, содержащей GT1b, в течение по меньшей мере 3 часов,
в результате чего, происходит стандартизация чувствительности указанных нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, к полипептиду нейротоксина.
3. Способ по п. 2, дополнительно включающий:
c) приведение в контакт указанных различных групп нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, стадии b) с полипептидом нейротоксина; и
d) культивирование указанных различных групп нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, стадии с) в течение по меньшей мере 24 часов в присутствии GT1b в условиях, которые позволяют указанному полипептиду нейротоксина проявлять свою биологическую активность.
4. Способ определения биологической активности полипептида нейротоксина, включающий стадии:
a) культивирования нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, в культуральной среде, содержащей GT1b, в течение по меньшей мере 3 часов;
b) приведения в контакт указанных нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, стадии а) с полипептидом нейротоксина;
c) культивирования указанных нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, стадии b) в течение по меньшей мере 24 часов в присутствии GT1b в условиях, которые позволяют указанному полипептиду нейротоксина проявлять свою биологическую активность; и
d) определения биологической активности указанного полипептида нейротоксина в указанных клетках.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что используют различные группы нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток.
6. Способ по п. 1 или 3, дополнительно включающий определение биологической активности указанного полипептида нейротоксина в различных группах нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток.
7. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что стандартизация чувствительности представляет собой снижение вариабельности чувствительности указанных различных групп нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, к полипептиду нейротоксина по сравнению с контрольными группами нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, обработанными в отсутствии GT1b.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что указанное снижение вариабельности чувствительности указанных различных групп нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, к полипептиду нейротоксина представляет собой снижение по меньшей мере в 1,5 раза или по меньшей мере в 2 раза.

9. Способ по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что указанные нейроны, полученные из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, представляют собой нейроны, полученные из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека, предпочтительно нейроны iCell (Cellular Dynamics International).
10. Способ по любому из пп. 1-3 и пп. 5-9, отличающийся тем, что указанные различные группы нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, отличаются по числу пассажей, числу циклов заморозки-разморозки, условиям культивирования, сроку хранения, времени роста, условиям дифференцировки или комбинациям этих параметров.
11. Способ по п. 1, 2 или 4, отличающийся тем, что указанная культуральная среда включает среду Neurobasal, добавку В27 (2%), Глутамин или Глутамакс (1%).
12. Способ по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что GT1b добавляют в концентрации от 1 до 300 мкМ, предпочтительно 30 мкМ.
13. Способ по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что указанный полипептид нейротоксина представляет собой BoNT/A, BoNT/B, BoNT/Cl, BoNT/D, BoNT/E, BoNT/F, BoNT/G, BoNT/H или TeNT или его подтип.
14. Способ по п. 4 или 6, отличающийся тем, что биологическую активность указанного полипептида нейротоксина определяют путем количественного анализа расщепленного нейротоксином субстрата с помощью иммуно-вестерн-блоттинга, иммуноблоттинга с ДСН-ПААГ-электрофорезом или ELISA.
15. Применение GT1b для
a) стандартизации чувствительности различных групп нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, к полипептиду нейротоксина; или
b) снижения вариабельности чувствительности различных групп нейронов, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, к полипептиду нейротоксина.