Хитозан как антимикробное и антиоксидантное средство в технологии продуктов из гидробионтов

2012

Известия ТИНРО

Том 170

УДК 664.959:574.5 С.Н. Максимова*

Дальневосточный государственный технический рыбохозяйственный университет, 690087, г. Владивосток, ул. Луговая, 52б

хитозан как антимикробное и антиоксидантное средство в технологии продуктов из гидробионтов

Научно обоснованы перспективы барьерной технологии функциональных рыбных продуктов с использованием хитозана. Представлены результаты научных исследований антимикробных, антиоксидантных свойств и физиологической активности биополимера в пищевых системах, полученных на основе водных биоресурсов. Использование многопрофильной добавки хитозана в барьерной технологии позволит не только решить дилемму «качество рыбных продуктов — стойкость в хранении», но и придать им статус «функциональных».

Ключевые слова: водные биоресурсы, барьерная технология, хитозан, качество, стойкость в хранении.

Maximova S.N. Chitosan as antiinfective and antioxidant agent in technology of fish products // Izv. TINRO. — 2012. — Vol. 170. — P. 283-290.

Prospects of the barrier technology of functional fish products with chitosan are scientifically substantiated. The chitosan antimicrobial and antioxidant abilities and its physiological activity in seafood systems are described. The chitosan additives using in the barrier technology allows to solve the dilemma “quality - storage” for fish products and gives them functional properties.

Key words: aquatic bioresources, barrier technology, chitosan, food quality, food storage.

введение

Наметившаяся в современной технологии тенденция к применению относительно низких температур и снижению содержания поваренной соли в продуктах, а также территориальная разобщенность районов промысла, переработки и потребления рыбы и рыбных продуктов обусловливают необходимость применения дополнительных уровней защиты продукции — барьеров (Ким, Сафронова, 2001). При этом общеизвестно, что водные биоресурсы — источник не только белков и жиров, но и биологически активных веществ. В связи с вышесказанным представляется целесообразным рассматривать гидробионты как сырье для функциональных продуктов с учетом реализации основ барьерной технологии.

Цель исследований состояла в решении дилеммы «качество функционального продукта—стойкость в хранении» по отношению к продукции из водных биоресурсов.

* Максимова Светлана Николаевна, кандидат технических наук, доцент, заведующая кафедрой, e-mail: maxsvet61@mail.ru.

Maximova Svetlana N., Ph.D., assistant professor, head of department, e-mail: maxsvet61@ mail.ru.

Априори достижение поставленной цели возможно с использованием барьерной технологии, как известно, основанной на одновременном применении нескольких защитных средств (Слапогузова, 2004; Ляйстнер, Гоулд, 2006; Бедина, 2007).

Выбор барьерных средств и соединений, несмотря на постоянно возрастающее их число, представляет определенные трудности, связанные зачастую с их низкой эффективностью, недостаточной индифферентностью к продукту, гигиеническими свойствами. Поэтому нами изыскивалась возможность привлечения новых барьеров, при выборе которых руководствовались определениями, приведенными в ГОСТе Р 52349-2005 «Продукты пищевые функциональные. Термины и определения».

С позиции барьерной технологии предпочтительно, чтобы защитное средство совмещало в себе свойства антимикробного препарата и антиоксиданта.

Установленные факты антимикробной и антиоксидантной эффективности хитозана в пищевых средах позволяют отнести его к числу барьеров (Хитин и хитозан ..., 2004).

Следует подчеркнуть преимущество хитозана как антибактериального средства перед другими консервантами: подавляя условно патогенную и патогенную микрофлору, он не повреждает нормальный биоценоз.

Основанием для исследования хитозана как барьера в технологии функциональных рыбных продуктов служили следующие факты:

природные свойства хитозана — биосовместимость, нетоксичность, биодегра-дируемость, иммуномодулирующие, ранозаживляющие и другие важные свойства полимера (Хитин и хитозан ., 2002);

антимикробная активность хитозана, установленная при исследованиях в медицине, ветеринарии, агробиологии (Корягин и др., 2006);

применение хитозана в производстве пищевых продуктов как многопрофильной функционально-технологической добавки (Максимова, Сафронова, 2010);

доступность полимера в связи с обеспеченностью страны воспроизводимой сырьевой базой и перспективами промышленного производства хитозана.

Реакция микроорганизмов на присутствие хитозана в среде обитания является видоспецифичной и выражается в различной степени их поражения или полного прекращения жизненных функций клетки в результате морфологических изменений. Для одних видов микроорганизмов повреждающее действие хитозана затрагивает структуру клеточной стенки, периплазматическое пространство, белково-рибосомный комплекс, в то время как у других наблюдаются незначительные изменения и то лишь в отдельных экземплярах клеток.

Установлено, что чувствительность микроорганизмов неодинакова к хитозану различной молекулярной массы, его концентрации, степени положительной заряжен-ности аминогрупп и некоторых других характеристик (MuzzareШ et а1., 1990), в связи с чем исследование хитозана различной молекулярной массы как компонента пищевой продукции представляется актуальным.

Материалы и методы

В работе использовали модельные пищевые системы, максимально приближенные по составу к соответствующим продуктам и отвечающие цели исследований.

Объектами исследования служили хитинсодержащие продукты, изготовленные по разработанным нами технологиям: малосоленая продукция из лососевых, палочки лососевые сушеные, консервы «Паштет крабовый с хитозаном „Здоровье“», «Роллы морские с хитозаном», сушеные листы из ламинарии, аналог икры осетровых, кулинарные продукты «Крабовые палочки», «Палочки рыбные хрустящие», а также полуфабрикаты продуктов на различных этапах производства.

Применяли хитозан, произведенный предприятиями России, ММ (кДа): низкомолекулярный — 32, высокомолекулярный — 270, 588; низкомолекулярный водорастворимый гидрохлорид хитозана — 55.

Определение антимикробной активности хитозана проводили по стандартным показателям величины КМАФАнМ (количество мезофильных аэробных и факультативно-

анаэробных микроорганизмов) по ГОСТу 10444.15 и с целью максимального сближения условий эксперимента и практического действия препарата — по степени возрастания стойкости продукта в хранении.

Потенциальную антиоксидантную активность промышленных образцов хитозана определяли совместно с сотрудниками Тихоокеанского океанологического института ДВО РАН по отношению к радикал-катиону ABTS+*—диаммониевая соль 3-этилбензтиазолин-6-сульфоновой кислоты в сравнении с синтетическим аналогом витамина Е — тролоксом, модифицированным спектрофотометрическим методом (Re et al., 1999).

Антиоксидантную активность хитозана также оценивали по накоплению продукта окисления—малонового диальдегида—по методике, основанной на взаимодействии тио-барбитуровой кислоты и низкомолекулярных диальдегидов (Гончаренко, Латинова, 1985).

Липотропные свойства пищевых модельных систем и готовых продуктов с хито-заном исследовали на лабораторных животных (крысах-самцах линии Вистар, массой 180-300 г), которые содержались в виварии в соответствии с «Санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник» от 6.04.1993 г. (Западнюк и др., 1974). Кормление осуществлялось в соответствии с нормами, утвержденными МЗ СССР от 10.03.1996 г. № 163. Все исследования проводили согласно разрешению этического комитета, протокол № 1 от 04.10.2010 г.

Результаты и их обсуждение

В результате исследований установлены особенности влияния хитозана на микрофлору рыбных продуктов, согласующиеся с известными положениями и дополняющие их. Хитозан обусловливает снижение уровня контаминации на 2-4 порядка, что позволяет продлить срок хранения продукции в 1,5-3,0 раза. При этом барьерное соединение в пищевой системе оказывает бактериостатическое действие и поддерживает КМАФАнМ на постоянном уровне в течение 70-80 % времени хранения. Повышение уровня контаминации на последнем уровне хранения проходит со скоростью, сопоставимой с ее ростом в продуктах без хитозана (Сафронова и др., 2006).

В отдельных случаях хитозан оказывает бактерицидное действие. В этот момент объект становится стерильным, а кривая уровня контаминации образует «петлю», характеризующую лагфазу. Период бактерицидного действия более характерен для высокомолекулярных хитозанов, обладающих, вероятно, большей силой электростатического взаимодействия (Максимова и др., 2009).

Антимикробный эффект наиболее зависим от концентрации хитозана (прямолинейная зависимость) и в меньшей степени — от его молекулярной массы и фазовоагрегатного состояния — раствор, гель или твердофазный материал (Fang et al., 1994; Shahidi et al., 1999). Установлено, что гидрохлорид хитозана молекулярной массой 55 кДа обладает наиболее высокой антимикробной активностью в сравнении с другими хитозанами и в меньшей степени влияет на сенсорные свойства благодаря растворимости в воде (табл. 1 и 2).

Окончательное заключение о приемлемости хитозана той или иной характеристики принимали с учетом его влияния на сенсорные свойства продукта, степень сохранения которых не всегда совпадает с максимальным значением антимикробного эффекта.

Таблица 1

Допустимый срок хранения модельного кулинарного продукта из фарша минтая при различном содержании разномолекулярного хитозана, сут

Table 1

Safe shelf-life of a model product from the pollock forcemeat with certain addition of chitosan, days

Молекулярная масса продукта с хитозаном, кДа Содержание хитозана, %

0,2 0,3 0,4 0,5

32 6 8 10 16

270 6 10 14 16

588 8 10 17 16

Таблица 2

Динамика КМАФАнМ малосоленой кеты, обработанной гидрохлоридом хитозана ММ 55 кДа при содержании 0,3 %, КОЕ/г

Table 2

Dynamics of the total microbe number (CFU/g) for lightly-salted chum salmon after treatment with the 0.3 % chitosan hydrochloride 55 kDa

Продолжительность хранения при 5 °С, сут Способ обработки

Без хитозана (контроль) Погружение в водный раствор Распыление порошка

5 і,0і02 1,0102 0

10 і,3і04 0 6,0і02

15 3,8і04 1,7103 8,0 102

20 і,іі05 5,0103 8,0 103

25 2,8і06 2,1104 1,6 103

30 Не исслед. 3,5 104 1,5 103

Установленная функциональная зависимость допустимого срока хранения рыбной продукции, содержащей хитозан, от его молекулярной массы и концентрации в продукте представлена в виде графической модели (рис. 1).

Аналитическая модель представленной графической зависимости описана формулой (1):

Y = -12,18 + 0,03^1 + 86,74X, - 52,08Х22 - 0,05Х1Х2;

X1e [32; 588] кДа, Х£ [0,24; 0,48] %, где Y — допустимый срок хранения рыбного продукта, сут; X1 — молекулярная масса хитозана, кДа; Х2 — содержание хитозана, %. Достоверность аппроксимации составила R2 = 0,99. 2

Представленные на рис. 1 зависимости позволяют планировать сроки хранения рыбных продуктов при разработке новых технологий с использованием хитозана, а следовательно, в известной мере — управлять технологическим процессом.

Поскольку свободнорадикальное окисление липидов рыб при их переработке и хранении отрицательно сказывается на вкусоароматических свойствах рыбных продуктов (Best, 1988; Андреев и др., 1995; Чумак, 1995) и также сопровождается образованием

Рис. 1. Функциональная зависимость допустимого срока хранения рыбного продукта, содержащего хитозан, от его молекулярной массы и концентрации

Fig. 1. Dependence of the safe shelf-life for a fish product with chitosan on the chitosan molecular weight and concentration

токсичных продуктов деградации, наличие у барьерного соединения антиоксидантных свойств, т.е. возможность контролировать этот процесс, является важным фактором.

Оценка потенциальной антиоксидантной активности промышленных образцов хитозана показала, что исследованные разномолекулярные хитозаны наравне с тро-локсом проявляют свойство восстановителя.

Скорость реакции полиаминосахарида хитозана в сравнении с чистыми низкомолекулярными веществами, такими как тролокс с порогом во времени в одну минуту, отличается нелинейным характером, снижаясь в течение 6 мин в 40 раз. Вероятной причиной такой реакции могут быть микропримеси в составе полимера и его высокомолекулярная природа, что затрудняет одновременное участие реакционноспособных групп.

Максимальная антиоксидантная активность (16 %) получена для хитозана молекулярной массой 588 кДа. Антиоксидантная активность низкомолекулярных хитозанов (32 и 55 кДа) отличалась от активности тролокса и составила соответственно 0,2 и 0,5 ед. Тролоксовый эквивалент антиоксидантной активности высокомолекулярного хитозана (588 кДа) рассчитать не представлялось возможным в связи с высокой вязкостью его растворов.

Предположительным механизмом антиоксидантного дейсивия хитозана является хелатирование металлов, возможно также и блокирование биополимером реакционноспособных групп жирных кислот (Weist, Karel, 1992; Lee et al., 1996; Гулик и др., 2010).

Оценка антиоксидантной активности хитозана по накоплению малонового диальдегида на примере малосоленой продукции из лососевых показала, что в присутствии 0,5 % хитозана накопление малонового диальдегида в рыбных продуктах замедляется на 8-15 %, что согласуется с установленной выше потенциальной антиоксидантной активностью разномолекулярных образцов. Использование хитозана в качестве антиоксиданта позволяет продлить срок хранения продукции в среднем в 1,5 раза.

Хитозан и его производные в медицинских целях используются в основном по четырем крупным направлениям: как лечебный препарат, средство для направленного транспорта лекарств внутри организма, основа шовных, перевязочных и имплантируемых медицинских материалов и как биологически активная добавка к пище. Как БАД хитозан относят к парафармацевтикам, он служит средством связывания и выведения из организма холестерина, нежелательных компонентов обмена веществ, токсинов, улучшения иммунных показателей, снижения массы тела.

Решение проблемы идентичности функционально-физиологического (медикобиологического) эффекта хитозана, поступающего в организм человека в качестве биологически активного соединения (Гафуров, 2011) или пищевой функциональнотехнологической добавки, осуществлялась совместно с сотрудниками Владивостокского государственного медицинского университета.

В экспериментах на крысах-самцах исследовали влияние состава пищевой среды и режимов термической обработки на уровень функционально-физиологического эффекта хитозана разной молекулярной массы. В рацион включали высокомолекулярный хитозан (588 кДа), не подвергавшийся обработке, хитозаны этой же партии, обработанные в диапазоне температур, принятых в технологии пищи (90, 120 и 160 оС). Помимо этого, в рационах сочетали в нескольких вариантах хитозан с распространенными в рыбных продуктах компонентами — коптильным препаратом и одним из водорослевых структурообразователей — альгинатом натрия.

Состав сыворотки крови анализировали у исходных и экспериментальных животных (в состоянии атеросклероза) в динамике, через 15 и 30 сут кормления рационами с хитозаном и без него по следующим показателям: содержание общих липидов, триглицеридов, фосфолипидов, холестерина, липопротеидов высокой и низкой плотности, активности аланин- и аспартатаминотрансферазы.

Анализ полученных результатов в целом показал, что рационы, включающие хитозан, подвергнутый термической обработке в диапазоне указанных температур, и в сочетании с другими пищевыми компонентами вызывают достоверное положительное

изменение биохимических показателей сыворотки крови по истечении 30 сут (Быканова и др., 2009; Сафронова и др., 2009).

Состояние сыворотки крови животных, получавших виварный корм без хитозана, свидетельствовало об отсутствии статистически достоверных изменений в течение отдельных этапов и всего эксперимента в целом.

Исследование медико-биологического эффекта хитозана в комбинации с другими компонентами показало, что его уровень и время проявления определяются наличием хитозана и влиянием его доли в пищевой системе на исследуемые параметры.

Математическая обработка результатов исследования позволила выявить функциональную зависимость антихолестеринового эффекта, характеризующегося содержанием холестерина в крови опытных животных, от концентрации хитозана в рыбном продукте и температуры его тепловой обработки (рис. 2).

Представленная зависимость описывается следующим уравнением:

У = 5,49 - 5,68Х1 + 0,02Х2 - 0,65^ + 1,98Х22 - 0,01Х1Х2;

Х1е [90; 160] 0С, Х2е [0,16; 0,48] %, где У — антихолестериновый эффект (содержание холестерина, ммоль/л); Х1 — температура, 0С; Х2 — концентрация хитозана, %. Достоверность аппроксимации составила R2 = 0,99.

Таким образом, установлено, что хитозан, включенный в пищевой продукт как функционально-технологическая добавка, обладающая барьерными свойствами и продлевающая сроки хранения готовой продукции, проявляет выраженный функционально-физиологический эффект, в незначительной степени зависимый от параметров температурной обработки и увеличивающийся при повышении концентрации биополимера в продукте, что позволяет позиционировать его как функциональный.

Подтверждение результатов научных исследований и практическую реализацию принципа многофукциональности хитозана, применяемого в технологии рыбных продуктов, осуществляли на высокоценном сырье Дальневосточного региона, к которому относятся лососевые (кета, нерка), крабы, ламинария, минтай.

Сочетание барьеров (хитозан, поваренная соль, регулирование активности воды, воздействие тепла, герметичная тара, хранение при пониженной температуре) обосновывали одновременно с разработкой частных технологий и выбором ассортимента.

Рис. 2. Зависимость антихолестеринового эффекта от концентрации хитозана и температуры тепловой обработки

Fig. 2. Dependence of the chitosan anti-cholesteric effect on the chitosan concentration and temperature of heat treatment

Количественную оценку вклада индивидуальных барьеров в общий антибактериальный эффект осуществляли с учетом защитного действия каждого из совместно используемых барьеров, который основывали на экспериментальном определении стойкости объекта и промежуточных продуктов, изготовленных с последовательно возрастающим количеством барьеров при всех прочих равных условиях. Например, на модельных продуктах установлена допустимая длительность хранения в зависимости от вида и сочетания используемых барьеров — тепловой обработки, хранения при пониженной температуре, применения антибактериального соединения хитозана (табл. 3).

Таблица 3

Экспериментальные данные для расчета вклада индивидуальных барьеров в их общий антимикробный эффект

Table 3

Experimental data for evaluation of the certain barriers impact to their total antimicrobic action

Вид барьера Режимные параметры Стойкость в хранении, сут

Барьер отсутствует Т = 18 ± 2 0С 0,5

Теплота Т = 85 0С, т = 15 мин 1,5

Теплота + охлаждение в хранении Т = 85 0С, т = 15 мин, Т = 2 ± 2 0С 6,0

Теплота + охлаждение Т = 85 0С, т = 15 мин, Т = 2 ± 2 0С,

в хранении + хитозан хитозан ММ, кДа:

55 7/17

33 8/18

270 9/15

588 10/12

Пренебрегая возможным синергическим взаимодействием барьеров, находили относительный вклад каждого из них путем соотнесения стойкости промежуточных изделий и конечного продукта. При содержании хитозана в продукте 0,3 % его вклад составляет 33 % общего эффекта, а при 0,5 % он практически удваивается. Однако долю биополимера в продукте определяли с учетом влияния его на органолептические свойства готового продукта и уровень медико-биологического воздействия.

На основании результатов научных исследований разработаны технологии продуктов следующего ассортимента: малосоленая продукция из лососевых рыб, сушеные рыбные палочки, сушеные листы из ламинарии, кулинарные аналоговые изделия «Крабовые палочки» и аналог натуральной икры, а также консервы из мяса краба и рыборастительные с хитозаном (Максимова, 2010).

заключение

В целом можно заключить, что барьерная технология является перспективным научным направлением в технологии рыбных продуктов и может рассматриваться как эффективный способ совершенствования качества продуктов из водных биоресурсов и повышения их стойкости в хранении.

В результате проведенных исследований показано, что в переменных условиях внутренних и внешних параметров пищевой среды хитозан проявляет одновременно как функционально-технологические (барьерные), так и функционально-физиологические (медико-биологические) свойства. В связи с этим можно заключить, что использование многопрофильной добавки хитозана в барьерной технологии позволит не только решить дилемму «качество рыбных продуктов — стойкость в хранении», но и придать им статус «функциональных».

Список литературы

Андреев Н.г., Бывальцева Т.М., Миленина Н.И. и др. Влияние различных факторов на качество малосоленой продукции из лососевых // Изв. ТИНРО. — 1995. — Т. 118. — С. 165-175.

Бедина л.Ф. Разработка барьерной технологии подкопченной рыбы с использованием активированных жидкостей : автореф. дис. ... канд. техн. наук. — Ставрополь, 2007. — 24 с.

Быканова О.Н., Максимова С.Н., Тарасенко г.А. Биологический эффект хитозана в пищевых продуктах // Изв. вузов. Сер. Пищ. технол. — 2009. — № 1. — С. 34-36.

гафуров Ю.М. Хитозан: свойства, опыт применения : монография. — Владивосток : Дальнаука, 2011. — 136 с.

гончаренко М.С., латинова А.М. Метод оценки перекисного окисления липидов // Лабораторное дело. — 1985. — № 1. — С. 60-66.

гулик Е.С., костеша Н.Я., заева О.б. и др. Влияние хитозана на антиоксидантную активность биологических жидкостей // Современные исследования в области хитина и хитозана : мат-лы Десятой Междунар. конф. — Н. Новгород : ННГУ, 2010. — С. 177-179.

западнюк И.п., западнюк Б.И., захария Е.А. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте : монография. — Киев : Вища школа, 1974. — 304 с.

Ким Г.Н., Сафронова Т.М. Барьерная технология переработки гидробионтов : монография. — Владивосток : Дальнаука, 2001. — 172 с.

Корями I А.С., Ерофеева Е.А., Якимович Н.О. и др. Анализ антиоксидантных свойств хитозана и его олигомеров // Бюл. эксперимент. биол. и медиц. — 2006. — Т. 142, № 10. — С. 444-446.

Ляйстнер Л., Гоулд Г. Барьерные технологии: комбинированные методы обработки, обеспечивающие стабильность, безопасность и качество продуктов питания : монография, пер. с англ. — М. : ВНИИ мясной промышленности им. В.М. Горбатова, 2006. — 236 с.

Максимова С.Н. Хитозан в технологии рыборастительных консервов // Рыбпром: технологии и оборудование для переработки водных биоресурсов. — 2010. — № 2. — С. 29-31.

Максимова С.Н., Ким Г.Н., Сафронова Т.М. и др. Вклад индивидуальных барьеров в совместный антибактериальный эффект // Хранение и переработка сельхозсырья. — 2009. — № 6. — С. 93-95.

Максимова С.Н., Сафронова Т.М. Хитозан в технологии рыбных продуктов: характеристики, функции, эффективность : монография. — Владивосток : Дальрыбвтуз, 2010. — 256 с.

Сафронова Т.М., Максимова С.Н., Быканова О.Н., Тарасенко Г.А. Температурное воздействие на лечебные свойства хитозана в пищевых продуктах // Хранение и переработка сельхозсырья. — 2009. — № 5. — С. 28-30.

Сафронова Т.М., Максимова С.Н., Ситникова (Суровцева) Е.Б. и др. Влияние молекулярной массы хитозана на его барьерные свойства и биологическую ценность пищевых продуктов // Науч. тр. Дальрыбвтуза. — Владивосток : Дальрыбвтуз, 2006. — С. 198-202.

Слапогузова з.Б. Обоснование и разработка барьерной технологии рыбной продукции с использованием коптильного препарата «ВНИРО» : дис. ... канд. техн. наук. — М., 2004. — 203 с.

Хитин и хитозан: получение, свойства и применение : монография / под. ред. К.С. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова. — М. : Наука, 2002. — 360 с.

Хитин и хитозан: природа, получение и применение : мат-лы проекта CYTED IV. 14 / под ред. Ana Pastor de Abram (Перу) / пер. с исп. Михлиной К.М. и др. / под науч. ред. Варламова В.П. и др., 2004. — 292 с.

Чумак А.Д. Окисление липидов рыб. Методы определения // Изв. ТИНРО. — 1995. — Т. 118. — С. 3-18.

Best D. Processors pursue natural preservation // Prep. Foods. — 1988. — Vol. 157. — P. 128-130.

Fang S.W., Li S.F., Shin D.Y. Antifungal activity of chitosan and its preservative effect on low-sugar candied kumquat // Food protection. — 1994. — № 56. — P. 136-140.

Lee K., Tsai Y., Chi S. Chelatin of iron and antioxidative effect on cooked salted ground pork by N-carboxymehilchitosan // Food science Taiwan. — 1996. — № 23. — P. 608-616.

Muzzarelli R.A.A., Tarsi R., Filippini O. et al. Antimicrobial agents of N-carboxybutyl chitosan // Antimicrobiob agents chemother. — 1990. — № 34. — P. 2019-2023.

Re R., Pellegrini N., Proteggente A. et al. Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization assay // Free radical Biology and Medicina. — 1999. — Vol. 26, № 9/10.

Shahidi F., Kamil J., Arachi A. et al. Food applications of chitin and chitosans. Trends in food sciens // Tecnology. — 1999. — № 10. — Р. 37-51.

Weist J.L., Karel M. Development of a fluorescence sensor to monitor lipid oxidation. 1. Fluorescence spectra of chitosan powder and polyamide powder after exposure to volatile lipid oxidation products // Agriculture and Food chem. — 1992. — Vol. 40, Is. 7. — P. 1158-1162.

Поступила в редакцию 20.06.12 г.