СПОСОБ ОПТИМИЗАЦИИ СОДЕРЖАНИЯ В ПЛАЗМЕ ИНГИБИТОРА АКТИВАТОРА ПЛАЗМИНОГЕНА У НОВОРОЖДЕННЫХ ПОРОСЯТ С АНЕМИЕЙ
METHOD OF PLASMA PLASMINOGEN ACTIVATOR INHIBITOR CONCENTRATION OPTIMISATION IN NEWBORN PIGLETS WITH ANEMIA

Изобретение относится к ветеринарии и биологии, а именно к гематологии.
Аналогов предлагаемого способа нормализации уровня ингибитора активатора плазминогена у новорожденных поросят с анемией не существует.
В литературе имеются сведения о применении при анемии у поросят ферроглюкина (Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных. Под ред. В.М.Данилевского. М.: «Агропромиздат», 1991. - 576 с.).
В качестве эффективных стимуляторов жизнедеятельности растущего организма в современной ветеринарии применяются полизон - фосфорнокислая соль 2-амино-4-метилтио-(S-оксо-S-амино)-масляной кислоты, представляет собой слабо растворимый в воде порошок от белого до кремового цвета (Овчинников А. и др. Полизон - стимулятор роста // Птицеводство, 2006. - №12. - с.14-15) и крезацин - производное ароксиалкилкарбоновых кислот. Он представляет собой белый кристаллический порошок, хорошо растворимый в воде, со слабым специфическим запахом, сладковато-горьковатого вкуса. Он проявляет эффективное стимулирующее действие на живые организмы, повышая выживаемость человека и животных в неблагоприятных и экстремальных условиях, стимулируя или нормализуя жизненные процессы (Байматов В.Н., Латыпов М.М. Влияние крезацина на состояние птицы. Ветеринария, 2006, №11, с.49-51).
Однако никогда ранее лечебный комплекс, состоящий из ферроглюкина, полизона и крезацина, не применялся у новорожденных поросят с анемией с целью нормализации уровня ингибитора активатора плазминогена.
Целью изобретения является повышение эффективности коррекции уровня ингибитора активатора плазминогена у новорожденных поросят с анемией.
Сущность заявляемого способа заключается в том, что для оптимизации уровня ингибитора активатора плазминогена новорожденным поросятам с анемией назначается ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, полизон 4 мг/кг и крезацин 4 мг/кг, включенных в схему выпаивания на 8 суток.
Способ позволяет нормализовать уровень ингибитора активатора плазминогена у новорожденных поросят с анемией через 3 дня после завершения лечения, переводя его на уровень близкий к таковому для здоровых животных. В последующем по завершению лечения согласно рекомендаций заявляемого способа возможно сохранение содержания ингибитора активатора плазминогена на оптимальном уровне, что позволит у новорожденных поросят с анемией существенно снизить риск тромботических осложнений, оптимизировать микроциркуляцию, трофику тканей, увеличив привесы, оздоровив стадо и ускорив получение достаточного объема мясной продукции.
Заявляемый способ осуществляется следующим образом.
Для диагностики у новорожденных поросят с анемией нарушения уровня ингибитора активатора плазминогена проводится его оценка по следующей методике (Баркаган З.С., Момот А.П. Основы диагностики нарушений гемостаза. М, 1999, - с.134-135).
Принцип. Тканевой активатор плазминогена (ТПА) и урокиназа активируют плазминоген, в результате чего образуется плазмин. Эти активаторы нейтрализуются так называемыми ингибиторами активации плазминогена - ИАП (ИАП-1 и ИАП-2 или PAI-1 и PAI-2). Принцип методики определения ИАП-1 заключается в оценке его инактивирующего влияния на очищенную урокиназу в исследуемом образце плазмы. Активность остаточной урокиназы определяется по ее способности превращать плазминоген в плазмин. Последний измеряют по его способности расщеплять хромогенный субстрат при длине волны 405 нм.
Используются реактивы: 1. Урокиназа, лиофилизированная. Разводится до концентрации 5 МЕ/мл. 2. Плазминоген, лиофилизированный. Разводится до концентрации 15 СТА МЕ/мл. 3. Хромогенный субстрат: HD-Norvalyl-cyclohexylalanyl-lysyl-p-nitroanilid (HD-Nva-lys-pNA). Разводится до концентрации 0,6 ммоль/л. 4. Растворитель для субстрата. 5. Оксидант - хлорамин Т, лиофилизированный, концентрация в рабочем растворе 1,8 г/л. 6. Буфер трис-HCl (100 ммоль/л), pH 8,4. 7. Стандарт S1, лиофилизированный (0,0 Ед/мл ИАП). 8. Стандарт S2, лиофилизированный (2,5-4,0 Ед/мл ИАП). 9. Контрольная плазма поросенка, лиофилизированная (2,5-4,0 Ед/мл ИАП).
Для выполнения исследования необходима также уксусная кислота, 20% раствор (для метода оценки по двум точкам).
Применяется следующее оборудование: спектрофотометр СФ-26, СФ-46 или аналогичные. Используемая длина волны 405 нм. Требуемая ширина оптического пути кюветы - 1 см.
Материалом для исследования служит цитратная бедная тромбоцитами плазма.
Схема диагностики уровня ИАП приведена в таблице.
Таблица.
Схема определения уровня ИАП у обследуемых поросят.
Последовательность операций
Исследуемый образец
Образец-бланк
Пипеткой вносят в пластиковую (силиконированную) пробирку:
1. Исследуемую плазму/стандарт
0,05 мл (50 мкл)
0,05 мл (50 мкл)
2. Буфер трис-HCl
-
0,1 мл
3. Раствор урокиназы
0,1 мл
-
Перемешивают и инкубируют при температуре +37°C в течение 5 мин
4. Раствор плазминогена
0,2 мл
0,2 мл
5. Раствор оксиданта
0,2 мл
0,2 мл
Перемешивают и инкубируют при температуре +37°C в течение 5 мин
6. Хромогенный субстрат
0,5 мл
0,5 мл
Немедленно смешивают и одновременно включают секундомер. Через 5 мин добавляют уксусную кислоту:
1. Уксусная кислота, 20% раствор
0,2 мл
0,2 мл
Перемешивают и в течение 2 ч в пробах определяют поглощение (A) на длине волны 405 нм исследуемого образца против образца-бланка.
п
Результаты оценивают с использованием внутрилабораторного коэффициента пересчета (К), который определяют с использованием стандартов ИАП (S1 и S2):
Активность ИАП в исследуемом образце плазмы в % от нормы вычитают по формуле:
образец
п
S1
образец
АКТИВНОСТЬ ИАП=К×(A-А).
В норме активность ИАП в плазме крови находится в диапазоне от 0,3 до 3,5 Ед/мл. Повышение активности ИАП наблюдается при различных заболеваниях, в т.ч. при анемии. Высокий уровень активности ИАП сопряжен с нарушением микроциркуляции в тканях и ухудшением в них трофики, способствуя замедлению роста поросенка.
При повышении у новорожденных поросят с анемией уровня ИАП необходимо назначение им лечения согласно предложенному способу.
Для нормализации уровня ингибитора плазминогена новорожденным поросятам с анемией назначается лечение согласно предложенного способа: ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 10 дней, полизон 4 мг/кг и крезацин 4 мг/кг, включенных в схему выпаивания на 8 суток.
12
Пример. У новорожденного поросенка №32 с анемией было выявлено нарушение эритропоэза с признаками снижения уровня содержания железа в его организме (сывороточное железо 12,0 мкмоль/л, сидероциты 0,8%, при количестве гемоглобина у него 78,0 г/л, эритроцитов - 3,95×10/л). При обследовании была выявлена повышенная активность ингибитора активатора плазминогена (4,0 ед/мл).
Поросенку было назначено лечение: ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 10 дней, полизон 4 мг/кг и крезацин 4 мг/кг, включенных в схему выпаивания на 8 суток.
12
Поросенок осматривался в течение лечения. Через 3 дня после лечения анемия купировалась - сывороточное железо 22,6 мкмоль/л, сидероциты 7,8%, при количестве гемоглобина у него 123,8 г/л, эритроцитов - 4,95×10/л).
Оценка активности ингибитора активатора плазминогена, показавшая нормализацию его уровня (2,2 ед/мл). В последующем наблюдение за данным поросенком не выявило каких-либо отклонений от нормы.
Использование предлагаемого способа нормализации уровня ингибитора активатора плазминогена в ветеринарии поможет избежать сосудистых осложнений у новорожденных поросят с анемией, ухудшения трофики в тканях за счет неэффективной микроциркуляции, снизить падеж, увеличить и оздоровить поголовье свиней.