Исследование антиоксидантной активности экстракта зубчатки обыкновенной хемилюминесцентным методом

УДК 615.038.074

А.В. Бодоев, П.В. Алексеев

ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ ЭКСТРАКТА ЗУБЧАТКИ ОБЫКНОВЕННОЙ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНЫМ МЕТОДОМ

Бурятский государственный университет

Проведено исследование антиоксидантной активности сухого экстракта зубчатки обыкновенной в условиях эксперимента с применением, метода хемилюминесценции. Установлено, что данное фитосредство обладает, антиоксидантним, действием..

Ключевые слова: экстракт зубчатки обыкновенной, антиоксидантная активность, хемилюминесценция

THE STUDY OF ANTIOXIDANT ACTIVITY OF EXTRACT FROM ODONTITES VULGARIS MOENCH BY CHEMILUMINESCENT METHOD

A.V. Bodoyev, P.V. Alekseyev

Buryat State University, Ulan-Ude Institute of General and Experimental Biology SB RAS, Ulan-Ude

The article presents the study of antioxidant activity of extract from Odontites vulgaris Moench using experimental investigation, by method, of chemiluminescence. It was found that the phytoremedy has an antioxidant effect. Key words: Odontites vulgaris Moench, antioxidant activity, chemiluminescence

Лекарственные средства растительного происхождения содержат различные биологически активные соединения, обуславливающие их высокую лечебную эффективность и профилактическое действие. Многогранность их действия превращает фитотерапию в незаменимый компонент комплексного лечения различных заболеваний. Одним из положительных эффектов лекарственных средств на организм является антиоксидантное действие. Целью настоящего исследования является исследование антиоксидантной активности экстракта зубчатки обыкновенной (Odontites vulgaris Moench) [1, 3] с применением хемилюминесцентного метода.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

При проведении опыта по определению собственной антиокислительной активности фитоэкстракта исследование проводили с помощью модельной системы, при этом среда инкубации содержала 1,0 мл фосфатного буфера (20 мМ KH2PO4, 105 мМ KCL, pH 7,40); 0,5 мл суспензии липосом; 0,5 мл раствора эозина (2,7 мМ); экстракт зубчатки обыкновенной из расчета присутствия его в изучаемой реакционной системе в концентрациях, соответствующих экспериментально терапевтическим дозам 0,01; 0,025; 0,05; 0,1 мг/мл. Определение уровня Ре+-индуцированной хемилюминесценции многослойных липосом из желточных липопротеидов проводили на приборе «Хемилюминометр PXL-01» (Россия) по общепринятому методу [4, 5]. После двухминутной инкубации при постоянном перемешивании в темной камере в систему добавляли

0,2 мл индуктора — FeSO4 х 7 H2O (38,5 мМ) и регистрировали кинетику сверхслабого свечения проб.

Для оценки влияния испытуемого средства на кинетику Fe2+-индуцированной хемилюминесценции (ХЛ) определяли скорость изменения интенсивности ХЛ на начальной экспоненциальной стадии

медленной вспышки, определяемой как тангенс угла наклона кинетической кривой вспышки (рис. 1).

/

40- / / / —

30- \

20- Fe2* \ A \ tga \

10- 4. /

/

Рис. 1. Кинетика Fe^-индуцированной ХЛ суспензии липосом.

Расчет антиокислительной активности фитоэкстракта осуществляли с использованием показателя 8 (tg угла а) по формуле:

AoA= (80/8 - 1) / InH, где: AoA — антиокислительная активность;

80 - скорость ХЛ на начальной стадии медленной вспышки в контрольных пробах (без испытуемого экстракта);

8 — скорость ХЛ на начальной стадии медленной вспышки в опытных пробах (с препаратом); In H — конечная концентрация средства в суспензии лизосом [2].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование проведено с использованием в качестве субстрата окисления суспензии липосом из яичного желтка. Конечная концентрация экстракта зубчатки в инкубационной системе составляла 0,01; 0,025;0,05 и 0,1 мг/мл. Для оценки влияния препарата на кинетику Fe2 + -индуцированной хемилюминесценции (ХЛ) определяли амплитуду на начальной стадии «медленной вспышки» (tg 8),

126

niiiiiiiiiiiiiiiiin її iiiiii і піт  її її I г nil її I ii

а также производили расчет антиокислительной активности испытуемого вещества. Полученные данные представлены в таблице 1.

Таблица 1

Влияние экстракта зубчатки обыкновенной на параметры Fe2+-индуцированной хемилюминесценции суспензии липосом

Группа Концентрация, мг/мл Показатель tg 5, %

Контрольная 100

ЭЗО 0,01 86,6

0,025 61,3

0,05 45,1

0,1 16,7

Результаты проведенных опытов показали, что экстракт зубчатки в исследованных дозах оказывал существенное ингибирующее влияние на кинетику Ре2+-индуцированной хемилюминесценции в тестируемой системе, о чем свидетельствует уменьшение амплитуды «медленной вспышки», а также уменьшение скорости возрастания ХЛ. Как следует из данных, приведенных в таблице 1, введение экстракта зубчатки в дозе 0,05 мг/мл в инкубационную среду снижало показатель tg 8, характеризующий амплитуду «медленной вспышки», на 55 % по сравнению с данными контрольных проб, не содержащих препарата. Введение испытуемого фитоэкстракта в концентрациях 0,1 мг/мл сопровождалось снижением амплитуды «медленной вспышки» в среднем на 83 % по сравнению с контролем.

%

Рис. 2. Графическое определение полуингибирования С 1/2 Fe2+-индуцированной ХЛ (по оси абсцисс -С-концентрация препарата в мг/мл, по оси ординат -скорость изменения кинетики «медленной вспышки» ХЛ tg а по отношению к контрольному значению, в %).

Данные для определения антиокислительной активности экстракта зубчатки приведены на рис. 2.

Как известно, метод хемилюминесцентного анализа является наиболее информативным методом и позволяет с большой точностью определять интенсивность протекания свободнорадикальных реакций в биологических системах, а также оценить эффективность работы систем антиоксидант-ной защиты организма и антирадикальную актив-

Сведения об авторах

ность фармакологических средств [5, 8]. Установлено, что экстракт зубчатки обыкновенной оказывает ингибирующее действие на процессы свободнорадикального окисления, существенно снижая скорость Fe2+-индуцированной ХЛ на начальной стадии медленной вспышки, что свидетельствует об ингибирующем влиянии испытуемого средства на стадию разветвления цепных реакций [2, 6] и о суммарном выходе перекисных радикалов в реакциях перекисного окисления липидов [7, 9]. Также определено, что концентрация полуингибирования Fe2+-индуцированной ХЛ — С 1/2 согласно рисунку 2 составляет 0,05 мг/мл. Антиокислительный эффект исследуемого фитоэкстракта проявляется в концентрации 0,01 мг/мл и выше, а его антиокис-лительная активность равняется 20 (г/л)-1, что позволяет отнести экстракт зубчатки обыкновенной к растительным средствам, обладающим выраженными антиоксидантными свойствами.

ЛИТЕРАТУРА

1. Будаева С.Б. Фармакогностическая характеристика зубчатки обыкновенной и разработка на ее основе лекарственного средства: автореф. дис. ... канд. наук. — Улан-Удэ, 2000. — 24 с.

2. Владимиров Ю.С., Сергеев П.В., Сейфули-на Р.Д. и др. Влияние стероидов на перекисное окисление липидов мембран митохондрий печени // Молекулярная биология. — 1973. — № 2. — С. 247 — 253.

3. Гармаев Р.Б., Николаев С.М., Найдакова Ц.А. Зубчатка поздняя. — Новосибирск: Изд-во «Наука» Сиб. отд. Новосибирск, 1982. — 73 с.

4. Клебанов Г.И., Бабенкова М.В., Теселкин Ю.О. и др. Оценка антиоксидантной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов // Лабораторное дело. — 1988. — № 5. — С. 59 — 62.

5. Сергеев П.В., Белых А.Г., Чукаев С.А., Гу-касов В.М. Влияние антиоксидантов на быструю вспышку Fe2+-индуцированной хемилюминесценции // Эксперим. и клин. фармакология. — 1992. — Т. 95. — С. 60 — 62.

6. Фархутдинов Р.Р. Клинические аспекты применения метода регистрации хемилюминесценции крови // Тер. архив. — 1984. — Т. 56, № 8. — C. 150—153.

7. Чукаев С.А. Влияние антиандрогенов ци-протеронацетата и нафтолида на показатели свободнорадикального окисления в модельных биологических системах in vitro // Бюл. экспер. биол. и мед. — 1996. — Т. 122, № 11. — С. 524 — 526.

8. Cabor E.Sz. Some observation of the mechanism of antioxidant effect of certain flavonoid compounds // Topics in flavonoid chemistry and biochemistry. — Budapest, 1975. — P. 232 — 235.

9. Cavallini L., Biondoly A., Siliprandi N. Comparative evaluation of antiperoxidative action of Silymarin and other flavonoids // Pharmocol. Res. Commun. — 1978. — Vol. 10, N 2. — P. 133—136.

Бодоев Александр Васильевич - кандидат медицинских наук, доцент кафедры факультетской хирургии БГУ (670000, г Улан-Удэ, ул. Смолина, 24а; тел.: (3012) 44-82-55).

Алексеев Петр Вениаминович - кандидат медицинских наук, зав. отделением Республиканского онкологического диспансера (670047, г. Улан-Удэ, ул. Пирогова, 32; тел.: (3012) 43-72-40).

піімміїмімімп мммммгп  11 її її їм м nil i її 111

127