ДЕТЕКТИРОВАНИЕ АГЕНТОВ МЕМБРАННЫХ АНДРОГЕННЫХ РЕЦЕПТОРОВ (mAR)

1. Способ детектирования агента, который модулирует функцию мембранного андрогенного рецептора (mAR), причем способ предусматривает этапы:
а. контактирование mAR с детектируемо меченным соединением андрогена в условиях, которые позволяют связывание mAR и соединения с образованием первого комплекса;
b. контактирование первого комплекса с агентом в условиях, которые позволяют связывание между агентом и mAR с образованием второго комплекса; и
с. детектирование высвобождения детектируемо меченного соединения андрогена из первого комплекса, как признака присутствия агента.
2. Способ детектирования агента, который модулирует функцию мембранного андрогенного рецептора (mAR), причем способ предусматривает этапы:
а. контактирование mAR с детектируемо меченным соединением андрогена и агентом в условиях, которые позволяют связывание mAR и соединения с образованием первого комплекса; и
b. детектирование уменьшения уровня детектируемо меченного соединения андрогена, связанного с первым комплексом, как признака присутствия агента.
3. Способ по п.1 или 2, где способ также предусматривает этапы:
i. контактирование внутриклеточного андрогенного рецептора (iAR) с детектируемо меченным соединением андрогена (тем же или другим) в условиях, которые позволяют связывание iAR и соединения с образованием третьего комплекса; и
ii. контактирование третьего комплекса с агентом в условиях, которые позволяют связывание между соединением и третьим комплексом.
4. Способ по п.1 или 2, где один или более этапов контактирования осуществляется в клетке, клеточной линии или образце ткани, для которых известно или предполагается экспрессирование mAR или iAR.
5. Способ по п.1 или 2, где клеточная линия, которая экспрессирует mAR, представляет собой DU-145 или LNCaP, и образец ткани, который экспрессирует mAR, представляет собой ткань предстательной железы.
6. Способ по п.5, где клетка или клеточная линия также содержит конструкт репортерного гена, содержащий андроген-чувствительный элемент (ARE).
7. Способ по п.1 или 2, где соединение андрогена является детектируемо меченным посредством, по меньшей мере, одного из ряда: радиоизотоп, флуорофор, гаситель флуоресценции, фермент, аффинная метка или хемилюминесцентный, фосфоресцентный или хромофорный фрагмент.
8. Способ по п.7, где соединение андрогена содержит андроген и линкер, ковалентно связанный с андрогеном.
9. Способ по п.8, где линкер связан с 3'-углеродом стероидного кольца, причем линкер является O-карбоксиметилоксимным линкером.
10. Способ по п.1 или 2, где способ также предусматривает
этап детектирования, осуществляемый с использованием, по меньшей мере, одного из ряда: замещение метки, поверхностный плазменный резонанс, резонансный перенос энергии флуоресценции, гашение флуоресценции, поляризация флуоресценции, люминесцентный, хемилюминесцентный, флуоресцентный, абсорбционный и сцинтилляционный способ подсчета;
детектирование быстрой модуляции сигнальной молекулы «вниз по течению» mAR путем детектирования изменения уровня сигнальной молекулы по отношению к соответствующему контролю; или
детектирование модуляции сигнальной молекулы содержит измерение активности, по меньшей мере, одного из: связывания или обмена гуаниновых нуклеотидов, киназной активности, гуанозинтрифосфатазной активности, расщепления фосфатидилинозитола, диацилглицерина, инозитолтрифосфата, реорганизации актина, экспрессии гена-репортера и уровня внутриклеточного кальция.
11. Способ по п.1 или 2, где указанный агент является пептидом, пептоидом, полипептидом, антителом или его антиген-связывающим фрагментом, липидом, углеводом, нуклеиновой кислотой, малой молекулой, их комбинацией или андрогеном или его производным, ковалентно связанным с линкером и аминокислотной последовательностью.
12. Способ по п.11, где агент имеет следующую структуру, ковалентно связанную в последовательность: тестостерон или его производное/линкер/сывороточный альбумин или его производное.
13. Способ по п.8, где линкер является карбоксиметилэфирной группой, и агент представляет собой тестостерон-3-(O-карбоксиметил)оксим-сывороточный альбумин.
14. Способ по п.10, где киназа является киназой фокальной адгезии (FAK), ROCK, LIMK2 или фосфатидилинозитол-3 (PI-3) киназой; гуанозинтрифосфатаза представляет собой Cdc42/Rac1 или RHO.
15. Способ по п.10, где уровень внутриклеточного кальция измеряется, используя, по меньшей мере, один из ряда: кальциевый зонд, антитело к кальциевому зонду, кальциевый ионофор и кальциевый хелатор.
16. Способ по п.1 или 2, где способ также предусматривает этап:
быстрого детектирования простатоспецифического антигена (PSA), экспрессируемого клетками, клеточной линией или образцом ткани, для которых известно или предполагается экспрессирование mAR, iAR или обоих;
детектирования клеточной смерти (апоптоза) в клетках, клеточных линиях или образцах ткани, которые экспрессируют mAR;
детектирования любой активации iAR in vivo; или
введения агента не являющемуся человеком млекопитающему, подвергнувшемуся орхиэктомии.
17. Способ по п.16, где способ также предусматривает отбор агента, по меньшей мере, с одним из следующих свойств в организме млекопитающего по отношению к соответствующему контролю:
а. незначительное увеличение или отсутствие увеличения массы предстательной железы;
b. незначительное увеличение или отсутствие увеличения массы тела;
с. незначительное уменьшение или отсутствие уменьшения жира тела; и
d. незначительное увеличение или отсутствие увеличения плотности костей.