Оценка активности производных бис-нетропсина на модели экспериментального кожного герпеса морских свинок

исследования, посвященные комбинированному применению специфических противогриппозных препаратов с разным механизмом действия, а также поиск новых лекарственных средств, эффективных в терапии и профилактике гриппа.

ЛИТЕРАТУРА

1. ЛеневаИ. А., ФедякинаИ. Т., Еропкин М. Ю и др. Изучение противовирусной активности отечественных противогриппозных химиопрепаратов в культуре клеток и на модели животных. Вопросы вирусологии. 2010; 3. 19—27.

2. Львов Д. К., БурцеваЕ. И., ЩелкановМ. Ю. и др. Распространение нового пандемического вируса гриппа A(H1N1)v в России. Вопросы вирусологии. 2010; 3: 4—9.

3. CalatayudL., Lackenby A., Reynolds A. et al. Oseltamivir-resistant pandemic (H1N1) 2009 virus infection in England and Scotland, 2009—2010. Emerg. Infect. Dis. 2011; 17: 1807—1815.

4. Dapat C., Suzuki Y., Saito R. et al. Rare influenza A (H3N2) variants with reduced sensitivity to antiviral drugs. Emerg. Infect. Dis. 2010; 16: 493—496.

5. Duan S., Boltz D.A., Seiler P. et al. Oseltamivir-resistant pandemic H1N1/2009 influenza virus possesses lower transmissibility and fitness in ferrets. PLoS Pathog. 2010; 6 (7): e1001022.

6. Gaur A.H., Bagga B., Barman S. et al. Intravenous zanamivir for oseltamivir-resistant 2009 H1N1 influenza. N. Engl. J. Med. 2010; 362: 88-89.

7. GovorkovaE. A., LenevaI. A., Goloubeva O. G. et al. Comparison of efficacies of RWJ-270201, zanamivir, and oseltamivir against H5N1, H9N2, and other avian influenza viruses. Antimicrob. Agents Che-mother. 2001; 45: 2723—2732.

8. GubarevaL. V., MatrosovichM. N., BrennerM. K. et al. Evidence for zanamivir resistance in an immunocompromised child infected with influenza B virus. Emerg. Infect. Dis. 1998; 178. 1257—1262.

9. Gubareva L. V. Molecular mechanisms of influenza virus resistance to neuraminidase inhibitors. Virus Res. 2004; 103: 199—203.

10. Leneva I. A., Roberts N., Govorkova E. A. et al. The neuraminidase inhibitor GS4104 (oseltamivir phosphate) is efficacious against A/ Hong Kong/156/97 (H5N1) and A/Hong Kong/1074/99 (H9N2) influenza viruses. Antiviral Res. 2000; 48: 101—115.

11. McKimm-Breschkin J. L. Resistance of influenza viruses to neuraminidase inhibitors — a review. Antiviral Res. 2000; 47: 1—17.

12. McKimm-Breschkin J., Trivedi T., Hampson A. et al. Neuraminidase sequence analysis and susceptibilities of influenza virus clinical iso-

lates to zanamivir and oseltamivir. Antimicrob. Agents Chemother. 2003; 47: 2264—2272.

13. Mishin V. P., Hayden F G., Gubareva L. V. Susceptibilities of antiviral-resistant influenza viruses to novel neuraminidase inhibitors. Antimicrob. Agents Chemother. 2005; 11: 4515—4520.

14. MMWR. Update: Drug susceptibility of swine-origin influenza A(H1N1) viruses. Morbid. Mortal. Wkly Rep. 2009; 58: 433—435. http://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/mm5816a6.htm.

15. MosconaA. Neuraminidase Inhibitors for Influenza. N. Engl. J. Med. 2005; 353: 1363—1373.

16. Renaud C., Boudreault A. A., Kuypers J. et al. H275Y mutant pandemic (H1N1) 2009 virus in immunocompromised patients. Emerg. Infect. Dis. 2011; 17: 653—660.

17. Shin S. Y., Kang C., Gwack J. et al. Drug-resistant pandemic (H1N1) 2009, South Korea. Emerg. Infect. Dis. 2011; 17: 702—704.

18. Sleeman K., Sheu T. G., Moore Z. et al. Influenza B viruses with mutation in the neuraminidase active site, North Carolina, USA, 2010—2011. Emerg. Infect. Dis. 2011; 17: 2043—2046.

19. SugayaN., Ohashi Y. Long-acting neuraminidase inhibitor laninami-vir octanoate (CS-8958) versus oseltamivir as treatment for children with influenza virus infection. Antimicrob. Agents Chemother. 2010; 54: 2575—2582.

20. Tramontana A. R., George B., Hurt A. C. et al. Oseltamivir resistance in adult oncology and hematology patients infected with pandemic (H1N1) 2009 virus, Australia. Emerg. Infect. Dis. 2010; 16: 1068— 1075.

21. Ujike M., Ejima M., Anraku A. et al. Monitoring and characterization of oseltamivir-resistant pandemic (H1N1) 2009 virus, Japan, 2009—2010. Emerg. Infect. Dis. 2011; 17; 470—479.

22. Weekly Epidemiol. Rec. 2011; 45: 497—508. http://www.who.int/ wer.

23. WHO. CDC protocol of real-time RTPCR for swine influenza A(H1N1). // 28 April 2009. http://www.who.int/csr/disease/swineflu/ en/index.html.

24. WHO (EuroFlu.org). Еженедельный электронный бюллетень ЕРБ ВОЗ. http://www.euroflu.org/cgi-files/bulletin_v2.cgi.-R353.-09 апреля 2010.

25. WHO. Influenza A(H1N1) Virus Resistance to Oseltamivir: 2008

Southern HemisphereInfluenzaSeason. http://www.who.int/csr/

disease/influenza/oseltamivir_summarysouth2008/en/index.ht-ml.-2008.

26. Yi H., Lee J. Y., Hong E. H. et al. Oseltamivir-resistant pandemic (H1N1) 2009 virus, South Korea. Emerg. Infect. Dis. 2010; 16: 1938—1942.

Поступила 22.03.12

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 УДК 615.281.8.03:616.523].076.9

В.Л. Андронова1, С.Л. Гроховский2, А.Н. Суровая2, Г.В. Гурский2, П.Г. Дерябин1, Д.К. Львов1, Г.А. Галегов1

Оценка активности производных бис-нетропсина на модели экспериментального кожного герпеса морских свинок

'ФГБУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского Минздравcоцразвития России, Москва;

2ГУ РАН НИИ молекулярной биологии им. В.А.Энгельгардта РАН, Москва

На модели экспериментальной кожной инфекции у самцов морских свинок, вызванной вирусом простого герпеса типа 1, показано, что при применении в виде мази на основе полиэтиленгликоля димерные производные нетропсина Lys-bis Nt и 15Lys-bis Nt более эффективно подавляют вирусную инфекцию, чем ацикловир.

Ключевые слова: вирус простого герпеса тип 1, бис-нетропсин, противовирусная активность in vivo, мазевая лекарственная форма

Estimation of Activity of Bis-Netropsin Derivatives Based on a Model of an Experimental Cutaneous Herpes Simplex Virus Disease of Guinea Pigs

V. L. Andronova1, S. L. Grokhovsky2, A. N. Surovaya2, G. V. Gursky2, P. G. Deryabin1,

D. K. Lvov1, G. A. Galegov1

1 Ivanovsky Institute of Virology, Ministry of Health and Social Development of the Russian Federation, Moscow, Russia; 2 Engelhardt Institute of Molecular Biology, Russian Academy of Sciences, Moscow, Russia

Контактная информация:

Андронова Валерия Львовна, канд. биол. наук, вед. науч. сотр.; e-mail: andronova.vl@yandex.ru

32

Using the model of an experimental cutaneous infection of guinea pig males caused by herpes simple virus type 1, it is shown that application of dimerico derivatives of netropsin Lys-bis Nt and 15Lys-bis Nt in the form of polietilenglicol-based ointment suppresses viral infection more effectively than acyclovir.

Key words: virus simplex herpes type 1, bis-netropsin, antiviral activity in vivo, ointment medicinal form

Инфекция, вызываемая вирусом простого герпеса типа 1 (ВПГ-1), является одной из самых распространенных вирусных инфекций человека. По данным American Social Health Association, от 50 до 80% населения США серопозитивны в отношении ВПГ-1 [24]. В РФ из-за отсутствия обязательного учета лиц, инфицированных ВПГ, отсутствуют точные данные о распространенности герпетической инфекции. По результатам исследования, проведенного в 19942005 гг. методом случайной выборки в Новосибирске и сельских регионах Тывы и Горного Алтая, у 99,4% населения в возрасте 14—64 лет были обнаружены антитела к ВПГ-1 [7]. После первичного эпизода вирус сохраняется в организме в латентном состоянии на протяжении всей жизни человека, периодически вызывая рецидивы заболевания. ВПГ может поражать многие органы и ткани организма [17]. Тяжесть течения заболевания зависит от состояния иммунной системы человека и в ряде случаев вызывает тяжелейшие поражения ЦНС, висцеральные и геморрагические инфекции, возможно, с летальным исходом. Однако наиболее частым проявлением инфекции ВПГ -1 являются herpes labialis (поражение кожи лица в области губ) и herpes genitalis - генитальный герпес. Рецидивы herpes labialis наблюдаются у 16—38% населения [17, 20]. Генитальный герпес, по данным ВОЗ занимает 3-е место среди инфекций, передаваемых половым путем [23]. В РФ заболеваемость аногенитальным герпесом в 2002 г. составила 18,2 случая на 100 тыс. населения, в 2003 г. - уже 19,5 на 100 тыс. населения, в 2004 г. - 21,5 на 100 тыс. населения [6].

В настоящее время для лечения herpes labialis используются следующие препараты: ацикловир крем (Zovirax, "GlaxoSmithKline", США, и дженерики), пенцикловир крем (Denavir, "Novartis Pharma GmbH", Германия), а также в тяжелых случаях для орального использования предлекарства ацикловира - вала-цикловир (Valtrex, "GlaxoSmithKline", США) [21, 20] и пенцикловира — фамцикловир (Famvir, "Novartis Farmaceutica", Испания) [3, 22].

Многочисленные исследования показали, что невысокая эффективность ацикловира в виде мазевой лекарственной формы является результатом недостаточно активного проникновения препарата в сайт локализации инфекционного процесса — базальный эпидермис [18, 25]. Поэтому при использовании мазевой лекарственной формы препарата требуется ее многократное нанесение в течение несколько дней [22].

Другим недостатком ацикловира и его аналогов является развитие лекарственной резистентности ВПГ [9, 11], механизм формирования которой в 95% случаев связан с мутациями в гене тимидинкиназы, приводящими к снижению или потере ее активности, изменению субстратной специфичности фермента [12].

В связи с вышеизложенным дальнейший поиск антигерпесвирусных веществ с принципиально иным механизмом действия остается актуальной задачей.

Ранее мы обнаружили, что димерные производные антибиотика нетропсина избирательно связываются с А+Т-кластером в начале репликации ВПГ (OriS и

OriL) и эффективно подавляют репродукцию вируса в культуре клеток Vero [1, 2, 5]. На рисунке (см.

3- ю полосу обложки) представлена нуклеотидная последовательность в начале репликации OriS вируса герпеса. Хеликаза UL9 в форме димера образует прочные комплексы с двумя связывающими местами (боксы I и II), которые разделены А+Т-класте-ром и прилегающими к нему нуклеотидами [5, 8, 13, 14,16]. При связывании с A+T-кластером в OriS бис-нетропсины увеличивают температуру плавления А+Т-кластера и уменьшают вероятность вызванного тепловыми флюктуациями "раскрытия" AT-пар оснований [5], которое необходимо для инициации раскручивания ДНК хеликазой UL9 вируса герпеса [8, 13, 14, 16]. В отличие от ацикловира бис-нетроп-сины ингибируют процесс инициации репликации вирусной ДНК, т. е. действуют на ранних стадиях жизненного цикла вируса еще до начала синтеза вирусной ДНК.

Целью настоящей работы является изучение in vivo лечебной эффективности мазевых форм димерных производных нетропсина 15 Lys-bis-Nt и Lys-bis-Nt. Представляем их химические формулы:

H-Lys-Gly-Apc2-CONH-(CH2)5-NHCO-Apc2-Gly--Lys-H (Lys-bis-Nt),

(((H-Lys)2-Lys)2-Lys)2-Lys-Gly-Gly2-Apc2-Gly3-Apc2--NH-(CH2)3-NMe2 (15Lys-bis-Nt).

Здесь Apc - остаток 1-А-пропил-2-аминопиррол-

4- карбоновой кислоты.

Противовирусная активность димерных производных нетропсина в культуре клеток Vero E6 и их ци-токсичность были изучены нами ранее [1, 2, 5]. Показано, что они эффективно ингибируют репродукцию как чувствительных, так и резистентных к ацикловиру вариантов ВПГ -1.

Материалы и методы

Клетки. Использовали культуру клеток Vero E6. Клетки культивировали в среде Игла (ФГБУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН) с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки ("ПанЭко", Москва) и пенициллина 100 ЕД/мл.

Вирусы. ВПГ-1 штамм L2 (ВПГ-1/Ь2) получен из Государственной коллекции вирусов ФГБУ НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского Минздравсоцраз-вития России. ВПГ/Ц-R получен путем проведения серийного пассирования ВПГ-1^2 в присутствии ацикловира с последующим клонированием. Установлены мутации в гене тимидинкиназы ВПГ/L-R, обусловливающие резистентность к ацикловиру [4]. При пассировании вирусов использовали среды Игла и 199 (ФГБУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН), соединенные в соотношении 1:1.

Препараты. Производные бис-нетропсина (Lys-bis-Nt и 15Lys-bis-Nt) были синтезированы в Институте молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН как описано ранее. Использовали ацикловир (АЦВ,

33

9-([2-гидроксиэтокси]метил)-гуанин, ациклогуанозин, зовиракс) производства "GlaxoSmithKline", США.

Антивирусную активность in vitro исследовали с использованием CPE inhibition assay [10], как описано нами ранее [1, 2, 5]. Монослойные клеточные культуры, выращенные в пластиковых 96-луночных планшетах (Linbro, Flow laboratories, Великобритания), инфицировали с множественностью 0,1 БОЕ/кл и инкубировали в течение 48 ч при 37oC в атмосфере 5% СО2, при этом в контроле вируса развивался 95— 100% цитопатический эффект (ЦПЭ). Антивирусный эффект соединений оценивали по их способности предотвращать развитие вирусиндуцированного ЦПЭ и количественно выражали как ИД50 и ИД100 (концентрации, ингибирующие развитие вирусиндуциро-ванного ЦПЭ на 50% и практически полностью при 95—100% ЦПЭ в контроле вируса).

Используемые концентрации препаратов были ниже, чем величины их ЦД50 (ЦД50 — концентрация, вызывающая гибель 50 % незараженных клеток после 72 ч инкубации, определяемая с использованием метода окрашивания клеток трипановым синим, как описано в наших более ранних статьях [1, 2, 5].

Антивирусная активность in vivo. Морских свинок (самцов) породы «Агути гладкошерстная» массой приблизительно 250 г, полученных из питомника «Столбовая», инфицировали ВПГ-1/Ц с титром 7,00 lg БОЕ/мл. Для воспроизведения экспериментальной кожной формы инфекции [15, 20] у предварительно анестезированных с помощью эфира животных в области спины и боков выбривали шерсть и ее остатки удаляли с помощью депилятора. Стерильным оспопрививательным пером на боковые поверхности наносили по 4 перпендикулярных поверхностных некровоточащих надреза (по 2 скарифицированных участка на каждом боку; площадь скарификации участка составляла приблизительно 5 см2). На повре-

жденную поверхность наносили вируссодержащий материал с последующим втиранием. Развитие местной герпетичекой симптоматики ежедневно оценивали по следующим признакам: площади пораженной поверхности; интенсивности поражений; количеству элементов герпетической сыпи; покраснению; дню обратного развития процесса. Наблюдение проводили в течение 20 дней. Использовали 4 группы по 2 животных в каждой.

Ацикловир применяли в виде 5% мази на основе ПЭГ-600, Lys-bis-Nt и 15Lys-bis-Nt — в виде 0,075 и 0,15% мази (мазевая основа ПЭГ-600). Препараты использовали в соответствии с лечебной схемой: ежедневно двукратно в течение 6 дней, первое применение через 48 ч после заражения.

Результаты и обсуждение

Результаты изучения эффективности применения Lys-bis-Nt и 15Lys-bis-Nt in vitro приведены в табл. 1. Анализ представленных результатов показывает, что производные Nt обладают селективной противовирусной активностью в отношении как ВПГШ2, чувствительного к ацикловиру, так и ВПГ/L^R, глубоко резистентного к этому препарату.

Результаты в опытах in vitro представляют по нашему мнению интерес, поэтому мы продолжили изучение Lys-bis-Nt и 15Lys-bis-Nt на экспериментальной модели герпеса кожных покровов у морских свинок.

Инфекция была нелетальной: ни одно из включенных в исследование животных не погибло, в том числе в контрольной нелеченой группе. Признаки общей интоксикации (вялость, потеря аппетита, повышение температуры) также не наблюдали.

В контроле уже через 48 ч в месте инфицирования появилась незначительная гиперемия. В месте воспалительных изменений кожи через 4 суток возникают пузырьковые высыпания размером около 2 мм, рас-

Таблица 1

Цитотоксичность и противовирусная активность производных бис-нетропсина и на модели ВПГ-1/L2 в культуре клеток Vero E6

Соединение ВПГ -1/L2 ВПГ-1/L^R

ИД50, мкг/мл ИД95, мкг/мл ХТИ ИД50, мкг/мл ИД95, мкг/мл ХТИ

Lys-bis-Nt 12,5 25,0 29 12,5 50,0 29

15Lys-bis-Nt 3,5 10,0 50 3,5 10,0 50,0

Ацикловир 0,39 1,56 > 1000 > 100 > 100 0

Примечание. Приведены результаты двух независимых экспериментов. Множественность инфицирования 0,1 БОЕ/кл. Результаты учитывали через 48 ч. ХТИ (химиотерапевтический индекс) вычисляли как отношение ЦД50 к ИД50.

Таблица 2

Лечебный эффект производных бис-нетропсина на экспериментальной модели кожной герпетической инфекции морских свинок,

вызванной ВПГ-1

Соединение Концентрация соединения в мази, % Площадь пораженной поверхности Количество герпетических высыпаний

Sср, см2 снижение относительно контроля, % n ср снижнние относительно контроля, %

- (контроль) 0 4,62±0,09 - 10,75±0,95 -

Ацикловир 5 4,23±0,05 8,23 9,75±0,25 9,30

Lys-bis Nt 0,075 4,46±0,10 3,36 10,50±0,29 2,33

0,15 4,30±0,05 6,77 10,25±0,25 4,65

15Lys-bis Nt 0,075 4,41±0,09 4,50 10,25±0,25 4,65

0,15 4,20±0,08 9,05 10,00±0,41 6,88

Примечание. Мазевая основа - ПЭГ-600. Мазь наносили 2 раза в день. Первое нанесение - через 48 ч после инфицирования, когда появляется легкое покраснение.

34

положенные как сгруппированно, так и беспорядочно (одиночные везикулы). Через 4—5 сут (96—120 ч) после инфицирования симптомы заболевания достигают максимальной степени выраженности Через 7 суток (168 ч) выраженность признаков кожной инфекции начинала снижаться: везикулы полностью подсохли с образованием корочек. Обратное развитие патологического процесса, начинающееся с отторжения корочек, наблюдалось на 9-е сутки. Через 12 сут наступало полное выздоровление.

В табл. 2 приведены результаты, полученные через 5 сут после инфицирования, когда в контроле выраженность герпетических проявлений была максимальной.

Единичные везикулы у леченых животных появлялись одновременно с везикулами у животных контрольной группы. Однако выраженность клинических проявлений герпетической инфекции во всех опытных группах была существенно ниже чем в контроле (см. табл. 2). Как видно из данных этой таблицы, во всех опытных группах площадь пораженной поверхности и количество везикулярных образований были снижены по сравнению с контролем. Кроме того, в опытных группах "корочки" полностью сформировались уже через 6 сут после инфицирования, начало обратного процесса у животных всех опытных групп наступало на 1 сут раньше, чем в контрольной, т. е. через 9 и 8 сут после инфицирования. Полная реэпи-телизация в сайтах инфекции, леченных 0,075% мазью Lys-bis-Nt, наблюдалась также как и в контроле через 12 сут. В остальных опытных группах, леченных 5% ацикловиром, 0,15% Lys-bis-Nt, 0,075 и 0,15% 15Lys-bis-Nt, реэпителизацию наблюдали на 1 сут раньше.

Таким образом, сравнительное изучение эффективности лечебного действия производных нетропсина и ацикловира в опытах in vivo показало, что Lys-bis-Nt и 15Lys-bis-Nt в виде мазевой лекарственной формы оказывают более эффективное воздействие на кожную герпетическую инфекцию, чем ацикловир. Это позволяет использовать димерные производные не-тропсина в существенно меньших w/w концентрациях по сравнению с мазями, содержащими ацикловир. Особую терапевтическую ценность димерные производные нетропсина могут представлять при подавлении инфекции, вызванной вариантами вируса герпеса, резистентными к ацикловиру, а также при лечении больных в особо тяжелых случаях при низкой эффективности монотерапии ацикловиром.

Работа выполнена при финансовой поддержке программы Президиума РАН по молекулярной и клеточной биологии и Российского фонда фундаментальных исследований (грант 11-04-02001).

ЛИТЕРАТУРА

1. Андронова В.Л., Гроховский С.Л., Суровая А.Н. и др. Антигерпетическая активность димерных производных нетропсина. Доклады Академии наук. 2001; - 380(4): 548-51.

2. Андронова В.Л., Гроховский С.Л., Суровая А.Н. и др. ДНК-свя-зывающая и антивирусная активности бис-нетропсинов, содержащих кластеры остатков лизина на N-конце молекулы. Доклады Академии наук. 2004; 396(6): 1—6.

3. Галегов Г.А. Лекарственная терапия герпесвирусной инфекции: фундаментальные аспекты и современные клинические достижения. Consilium medicum. 2002; 4(5): 240—3.

4. ГуськоваА.А., Загурный А.В., Скоблов М.Ю. и др. Молекулярногенетический анализ тимидинкиназы вируса герпеса простого типа 1. Молекулярная биология. 2005; 1: 155—8.

5. Суровая А.Н., Гроховский С.Л., ГурскийЯ.Г. и др. Комплекс инициаторного белка UL9 вируса герпеса с ДНК как платформа для создания противовирусных агентов нового типа. Биофизика. 2010; 55: 239—51.

6. Халдин А.А, Баскакова Д.В. Эпидемиологические аспекты заболеваний, вызываемых вирусом простого герпеса

7. Хрякин А.А., Решетников О.В., Кандрушина М.Л. Многолетние тенденции в распространенности вируса простого герпеса в популяции Сибири. Вестник дерматологии и венерологии. 2010; 5: 96—101.

8. AslaniA., OlssonM., PerElias. ATP-dependent unwinding of a minimal origin of DNA replication by the origin-binding protein and the single-strand DNA-binding protein ICP8 from herpes simplex virus type I. J. Biol. Chem. 2002; 277: 41204—12.

9. Brown W.D., Bearer E.L., Donahue J.E. Chronic active herpes simplex type 2 encephalitis in an asymptomatic immunocompetent child. J. Child Neurol. 2010; 25(12): 901—8.

10. De ClerckE., Descamps J., Verheist G. et al. / Comparative efficacy of antiherpes drugs against different strains of herpes simplex virus. J. Infect. Dis. 1980; 141: 563—73.

11. Kim J.H., Schaenman J.M., Ho D.Y., Brown J.M. Treatment of acyclovir-resistant herpes simplex virus with continuous infusion of high-dose acyclovir in hematopoietic cell transplant patients. Biol. Blood Marrow Transplant. 2011; 17(2): 259—64.

12. Larder B.A., Darby G. Selection and characterisation of acyclovir-resistant herpes simplex virus type 1 mutants inducing alterated DNA polymerase activities. Virology. 1986; 146: 262—71.

13. Lee S.S.-K., LehmanI.R. Unwinding of the box I element of a herpes simplex virus type 1 origin by a complex of the viral origin binding protein, single-strand DNA binding protein, and single-stranded DNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997; 94: 2838—42.

14. Macao B., Olsson M., Per Elias. Functional properties of the herpes simplex virus type I origin-binding protein are controlled by precise interactions with the activated form of the origin of DNA replication. J. Biol. Chem. 2004; 279. 29211—7.

15. McKcough M.B., Spruance S.L. Comparison of new topical treatments for herpes labialis. Arch. Dermatol. 2001; 137(9): 1153—8.

16. Murata L., Dodson M.S. The herpes simplex virus type 1 originbinding protein. sequence-specific activation of adenosine triphosphatase activity by a double-stranded DNA containing box I. J. Biol. Chem. 1999; 274(52): 37079—86.

17. Nikkels A.F., PierardG.E. Treatment of mucocutaneous presentations of herpes simplex virus infections. Am. J. Clin. Dermatol. 2002; 3: 475-87.

18. Parry G.E., DunnP., Shah VP., PershingL.K. Acyclovir bioavailability in human skin. // J. Invest. Dermatol. 1992; 98: 856-63.

19. Spruance S.L., Freeman D.J., Sheth N.V Comparison of topically applied 5-ethyl-2’-deoxyuridine and acyclovir in the treatment of cutaneous herpes simplex virus infection in guinea pigs. Antimicrob. Agents Chemother. 1985; 28(1): 103—6.

20. Spruance S.L., Kriesel J.D. Treatment of herpes simplex labialis. Herpes. 2002; 9: 64-9.

21. Spruance S.L., Jones T.M., Blatter M.M. et al. High-dose, short-duration, early valacyclovir therapy for episodic treatment of cold sores: results of two randomized placebo-controlled, multicenter studies. Antimicrob. Agents Chemother. 2003; 47: 1072-80.

22. Spruance S.L., BodsworthN., ResnickH. et al. Single-dose, patienti-nitiated famciclovir: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial for episodic treatment of herpes labialis. J. Am. Acad. Dermatol. 2006; 55: 47-53.

23. www.demoscope.ru/weekly/2008/0349/mir01 .php #15 от 2 Октября 2008.

24. www.ehow.com/facts_6171871 _hsv- 1-symptoms.html

25. YamashitaF., Koyama Y., SezakiH., HashidaM. Estimation of a concentration profile of acyclovir in the skin after topical administration. Int. J. Pharm. 1993; 89: 199-206.

Поступила 22.03.12

35