СПОСОБ ОТДЕЛЕНИЯ ФАКТОРА VIII ОТ ПРОДУКТОВ КРОВИ

1. Способ отделения белка фактора VIII (FVIII) от первой композиции, содержащей белок FVIII, который содержит по меньшей мере легкую цепь FVIII, и белка фактора фон Виллебранда (vWF), который содержит по меньшей мере FVIII-связывающий домен vWF, где белок FVIII может образовывать комплекс с белком vWF,
причем способ включает стадии
приведения в контакт первой композиции с аффинной смолой, содержащей лиганд и матрицу, где лиганд обладает аффинностью в отношении легкой цепи FVIII, и
отделения аффинной смолы от смеси с получением модифицированной первой композиции и второй композиции, где вторая композиция содержит аффинную смолу и комплекс белка FVIII и белка vWF.
2. Способ по п.1, в котором белок FVIII выбран из FVIII, полученного из плазмы человека, производного природного FVIII крови человека, рекомбинантного полноразмерного FVIII человека и рекомбинантного FVIII человека с отсутствующим B-доменом.
3. Способ по п.1 или 2, в котором белок vWF выбран из мультимера vWF, полученного из плазмы человека, мономера vWF, полученного из плазмы человека, и рекомбинантного полноразмерного vWF человека.
4. Способ по любому из пп.1-3, в котором лиганд представляет собой полипептид, предпочтительно, рекомбинантный полипептид, более предпочтительно, рекомбинантный полипептид, полученный не в животном источнике, в частности, рекомбинантный полипептид, полученный в клетках дрожжей.
5. Способ по п.4, в котором лиганд представляет собой Fab-фрагмент антитела, предпочтительно, Fab-фрагмент размером 13 кДа.
6. Способ по п.5, в котором матрица состоит из агарозы с высокой степенью перекрестных связей и, предпочтительно, аффинная смола представляет собой VIIISelect.
7. Способ по любому из пп.1-6, в котором отделение осуществляют непрерывно через набитую колонку и скорость потока первой и/или модифицированной первой композиции равна 30 см/ч или ниже, предпочтительно, равна 15 см/ч или ниже, более предпочтительно, равна 10 см/ч или ниже, в частности, равна 7,5 см/ч или ниже.
8. Способ по п.7, в котором концентрация белка FVIII в первой композиции по общему объему первой композиции составляет 1 МЕ/мл или ниже, предпочтительно, составляет 0,7 МЕ/мл или ниже, более предпочтительно, составляет 0,4 МЕ/мл или ниже и, наиболее предпочтительно, составляет 0,2 МЕ/мл или ниже.
9. Способ по любому из пп.6-7, в котором соотношение объема первой композиции и объема смолы находится в диапазоне от 5:1 до 100:1, предпочтительно, в диапазоне от 10:1 до 70:1, более предпочтительно, в диапазоне от 10:1 до 50:1, в частности, в диапазоне от 20:1 до 40:1.
10. Способ по любому из пп.1-9, в котором первая композиция содержит продукт крови, предпочтительно, продукт крови человека, и продукт крови выбран из цельной крови, плазмы и сыворотки.
TM
11. Способ по п.10, в котором продукт крови представляет собой плазму, в частности, предварительно обработанную плазму, такую как криосупернатант или плазму с химически инактивированными вирусами, такую как Octaplas.
12. Способ по любому из пп.1-10, в котором белок FVIII и/или белок vWF, в частности, белок FVIII и белок vWF, представляют собой белки, экспрессируемые рекомбинантным способом.
13. Способ получения модифицированного продукта крови, который включает стадии
предоставления первой композиции, содержащей продукт крови, в частности, плазму;
осуществления отделения FVIII в соответствии с любым пп.2-12; и
сбора модифицированной первой композиции, содержащей модифицированный продукт крови, в частности, модифицированную плазму.
14. Способ по п.13, который дополнительно включает добавление экзогенного белка vWF, по существу не содержащего FVIII, в плазму.
15. Модифицированная плазма, полученная способом по п.13 или 14, в которой концентрация FVIII составляет меньше 4% от усредненной концентрации FVIII в плазме здорового донора-человека, предпочтительно, меньше 3%, более предпочтительно, меньше 2%, в частности меньше 1%.
16. Модифицированная плазма, полученная способом по п.13 или 14, в которой концентрация vWF составляет по меньшей мере 75% от усредненной концентрации vWF плазмы здорового донора-человека, предпочтительно, по меньшей мере 85%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, в частности по меньшей мере 100%.
17. Модифицированная плазма для применения в терапии, в частности, для лечения нарушений, при которых требуется пониженная активность коагуляции, предпочтительно, для лечения DIC или сепсиса, где модифицированную плазму определена в соответствии с любым из пп.15 или 16.
18. Применение модифицированной плазмы по п.15 или 16 для тестирования концентрации и/или активности белка FVIII в образце.
19. Способ очистки и/или обогащения белка FVIII, белка vWF или комплекса белка FVIII и белка vWF, который включает стадии
предоставления первой композиции, содержащей белок FVIII, который содержит по меньшей мере легкую цепь FVIII, и белок vWF, который содержит по меньшей мере FVIII-связывающий домен vWF, где белок FVIII может формировать комплекс с белком vWF,
осуществления способа отделения в соответствии с любым из пп.1-12;
необязательного осуществления по меньшей мере одной стадии промывки второй композиции, и
2
необязательного элюирования третьей композиции, содержащей vWF, в частности, с использованием элюирующего буфера, содержащего CaCl; и
элюирования четвертой композиции, содержащей комплекс белка FVIII и белка vWF или белок FVIII, из аффинной смолы.
20. Композиция, содержащая комплекс белка FVIII и белка vWF или очищенный белок FVIII или очищенный белок vWF, полученная способом по п.19.