СПОСОБ МОНИТОРИНГА, ДИАГНОСТИКИ И/ИЛИ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ОСТРОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ ПОЧЕК НА РАННЕЙ СТАДИИ

1. Способ мониторинга, диагностики и/или прогнозироваия острого повреждения почек на ранней стадии и определения лечения у субъектов, имеющих указанное повреждение, причем способ включает следующие стадии:
(a) предоставление образца мочи;
(b) обогащение образца мочи экзосомами, представленными в образце мочи, с использованием по меньшей мере одной стадии иммуноочистки;
(c) детектирование и/или определение количества маркера острого повреждения почек (AKI) в экзосомах.
2. Способ по п. 1, в котором стадию иммуноочистки осуществляют с помощью антител, направленных против внутриклеточного, внеклеточного или любого домена белков, предпочтительно и дифференциально экспрессированных на поверхности различных клеточных структур.
3. Способ по п. 2, в котором антитела для стадии иммуноочистки выбраны из анти-аквапорина 1 (anti-AQPl), анти-аквапорина 2 (anti-AQP2) и анти-аквапорина 3 (anti-AQP3), anti-NKCC2, anti-NHE-3, anti-NaPiII или их комбинации.
4. Способ по п. 3, в котором антитела для стадии иммуноочистки направлены против любого домена аквапорина 1 (AQP1), аквапорина 2 (AQP2), аквапорина 3 (AQP3), NKCC2, NHE-3 и NaPiII.
5. Способ по п. 4, в котором обогащение образца мочи экзосомами включает по меньшей мере один дополнительный метод обогащения экзосомами перед проведением иммуноочистки.
6. Способ по п. 5, в котором дополнительный метод обогащения образца мочи экзосомами представляет собой стадию центрифугирования, стадию микрофильтрации или их комбинацию, что обеспечивает получение бесклеточного образца мочи.
7. Способ по п. 6, в котором центрифугирование осуществляют в течение 5-30 мин при 5000-10000 об/мин.
8. Способ по п. 6 или 7, в котором стадию центрифугирования осуществляют в два этапа.
9. Способ по п. 8, в котором второй этап центрифугирования представляет собой этап ультрацентрифугирования, выполняемого в течение 30-120 минпри 30000-45000 об/мин, что обеспечивает получение общей экзосомальной фракции.
10. Способ по п. 6, в котором на стадии микрофильтрации используют микрофильтр с размером пор до 0,22 мкм, обеспечивающий получение бесклеточного образца мочи.
11. Способ по п. 1, в котором маркер острого повреждения почек выбран из NGAL, цистатина-3, KIM-1, IL-1beta, IL-18 или их комбинации.
12. Способ по п. 1, в котором детекцию проводят с помощью иммунной реакции с применением антител против NGAL, цистатина-3, KIM-1, IL-1beta, IL-18.
13. Способ по п. 12, в котором первичные антитела являются мечеными.
14. Способ по п. 1, в котором детекцию проводят путем обнаружения меченого вторичного антитела, распознающего первичные антитела, направленные против NGAL, цистатина-3, KIM-1, IL-1beta, IL-18.
15. Способ по п. 12 или 13, в котором метка антитела выбрана из фермента, флуоресцентного соединения, химического соединения, излучающего в ИК-области спектра, радиоактивного соединения, химического соединения.
16. Способ по п. 15, дополнительно включающий стадию оценки острого повреждения почек у субъекта для мониторинга, диагностики, прогноза и/или определения метода лечения субъекта на основании наличия и/или уровня специфического маркера повреждения почек.
17. Набор для оценки острого повреждения почек на ранней стадии, включающий:
(a) средства для обогащения образца мочи экзосомами с применением по меньшей мере одной стадии иммуноочистки;
(b) средства для детектирования маркера острого повреждения почек (AKI).
18. Набор по п. 17, дополнительно включающий (c) средство для получения образца мочи.
19. Набор по п. 17, в котором антитела для стадии иммуноочистки выбраны из анти-аквапорина 1 (anti-AQP1), анти-аквапорина 2 (anti-AQP2) и анти-аквапорина 3 (anti-AQP3), anti-NKCC2, anti-NHE-3, anti-NaPiII или их комбинации.
20. Набор по п. 19, в котором антитела, используемые на стадии иммуноочистки, направлены против любого домена аквапорина 1 (AQP1), аквапорина 2 (AQP2), аквапорина 3 (AQP3), NKCC2, NHE-3 и NaPiII.
21. Набор по п. 20, в котором обогащение образца мочи экзосомами включает по меньшей мере одно дополнительное средство обогащения экзосомами перед проведением иммуноочистки.
22. Набор по п. 21, в котором средства обогащения образца мочи экзосомами выбраны из контейнеров, лабораторных пробирок, центрифужных пробирок, антител, буфера для проведения иммунной реакции, блокирующих агентов или растворов, стоковых растворов специфических маркеров повреждения почек, микрофильтров, 96-луночного планшета, покрытого антителами или их комбинации.
23. Набор по п. 17, в котором средства выявления маркера острого повреждения почек представляют собой антитела, выбранные из антител, направленных против NGAL, цистатина-3, KIM-1, IL-1beta, IL-18 или их комбинации.
24. Набор по п. 23, в котором антитела являются мечеными.
25. Набор по п. 23, также содержащий меченое вторичное антитело, распознающее первичные антитела, направленные против NGAL, цистатина-3, KIM-1, IL-1beta, IL-18 или их комбинации.
26. Набор по п. 24 или 25, в котором метка антитела выбрана из фермента, флуоресцентного соединения, химического соединения, излучающего в ИК-области спектра, радиоактивного соединения, химического соединения.
27. Набор по п. 26, отличающийся тем, что набор также включает инструкции по применению набора.
28. Способ очистки экзосом мочи, причем способ включает следующие стадии:
(a) инкубация образца мочи или необязательно бесклеточного образца мочи с антителом, распознающим внутриклеточный, внеклеточный или любой домен белков, предпочтительно и дифференциально экспрессированных на поверхности различных клеточных структур, с образованием комплекса экзосома-антитело;
(b) инкубация комплекса экзосома-антитело, полученного в (a), с маркером, который распознает любую область антитела и связывается с нерастворимым реагентом, с образованием комплекса экзосома-антитело-метка-нерастворимый реагент;
(c) выделение комплекса экзосома-антитело-метка-нерастворимый реагент из супернатанта;
(d) отмывка комплекса экзосома-антитело-метка-нерастворимый реагент соответствующим буфером.
29. Способ по п. 28, в котором антитела выбраны из анти-аквапорина 1 (anti-AQP1), анти-аквапорина 2 (anti-AQP2) и анти-аквапорина 3 (anti-AQP3), anti-NKCC2, anti-NHE-3, anti-NaPiII или их комбинации.
30. Способ по п. 29, в котором антитела направлены против любого домена аквапорина 1 (AQP1), аквапорина 2 (AQP2), аквапорина 3 (AQP3), NKCC2, NHE-3 и NaPiII.
31. Применение антитела или комбинации антител, распознающих внутриклеточный, внеклеточный или любой домен белков, предпочтительно и дифференциально экспрессированный на поверхности различных почечных структур, отличающееся тем, что указанные антитела предназначены для иммуноочистки экзосом мочи.
32. Применение антитела или комбинации антител, выбранных из анти-аквапорина 1 (anti-AQP1), анти-аквапорина 2 (anti-AQP2) и анти-аквапорина 3 (anti-AQP3), anti-NKCC2, anti-NHE-3, anti-NaPiII или их комбинации, отличающееся тем, что указанные антитела предназначены для иммуноочистки экзосом мочи.
33. Применение антитела или комбинации антител, распознающих любой домен аквапорина 1 (AQP1), аквапорина 2 (AQP2), аквапорина 3 (AQP3), NKCC2, NHE-3 и NaPiII, отличающееся тем, что указанные антитела предназначены для иммуноочистки экзосом мочи.