СИСТЕМЫ CRISPR-CAS И СПОСОБЫ ИЗМЕНЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ ПРОДУКТОВ ГЕНОВ

1. Способ изменения экспрессии одного или нескольких продуктов генов, включающий введение в клетку, содержащую и экспрессирующую молекулы ДНК, кодирующие один или несколько продуктов генов, сконструированной не встречающейся в природе системы CRISPR-Cas, содержащей белок Cas и одну или несколько направляющих РНК, которые осуществляют нацеливание на молекулы ДНК, вследствие чего одна или несколько направляющих РНК осуществляют нацеливание на геномные локусы молекул ДНК, кодирующих один или несколько продуктов генов, а белок Cas расщепляет геномные локусы молекул ДНК, кодирующих один или несколько продуктов генов, вследствие чего экспрессия одного или нескольких продуктов генов изменяется; и где белок Cas и направляющая РНК не встречаются вместе в естественных условиях.
2. Способ изменения экспрессии одного или нескольких продуктов генов, включающий введение в клетку, содержащую и экспрессирующую молекулы ДНК, кодирующие один или несколько продуктов генов, сконструированной не встречающейся в природе векторной системы, содержащей один или несколько векторов, содержащих
a) первый регуляторный элемент, функционально связанный с одной или несколькими направляющими РНК системы CRISPR-Cas, которые гибридизируются с целевыми последовательностями в геномных локусах молекул ДНК, кодирующих один или несколько продуктов генов,
b) второй регуляторный элемент, функционально связанный с белком Cas,
где компоненты (a) и (b) находятся в одном и том же или разных векторах системы,
вследствие чего направляющие РНК осуществляют нацеливание на геномные локусы молекул ДНК, кодирующих один или несколько продуктов генов, а белок Cas расщепляет геномные локусы молекул ДНК, кодирующих один или несколько продуктов генов, вследствие чего экспрессия одного или нескольких продуктов генов изменяется; и где белок Cas и направляющие РНК не встречаются вместе в естественных условиях.
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что экспрессия двух или более продуктов генов изменяется.
4. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что векторы или белок Cas системы дополнительно содержат один или несколько NLS.
5. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что направляющие РНК содержат направляющую последовательность, слитую с tracr-последовательностью.
6. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что клетка является эукариотической клеткой.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что эукариотическая клетка является клеткой млекопитающего.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что клетка млекопитающего является клеткой человека.
9. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что белок Cas является белком Cas9.
10. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что белок Cas является кодон-оптимизированным для экспрессии в эукариотической клетке.
11. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что экспрессия продукта гена снижается.
12. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что продуктом гена является белок.
13. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что введение в клетку осуществляют с помощью системы доставки, включающей вирусные частицы, липосомы, электропорацию, микроинъекцию или конъюгацию.
14. Сконструированная не встречающаяся в природе векторная система, содержащая один или несколько векторов, содержащих
a) первый регуляторный элемент, функционально связанный с одной или несколькими направляющими РНК системы CRISPR-Cas, которые гибридизируются с целевыми последовательностями в геномных локусах молекул ДНК, кодирующих один или несколько продуктов генов,
b) второй регуляторный элемент, функционально связанный с белком Cas,
где компоненты (a) и (b) находятся в одном и том же или разных векторах системы,
вследствие чего направляющие РНК осуществляют нацеливание на геномные локусы молекул ДНК, кодирующих один или несколько продуктов генов, в клетке, а белок Cas расщепляет геномные локусы молекул ДНК, кодирующих один или несколько продуктов генов, вследствие чего экспрессия одного или нескольких продуктов генов изменяется; и где белок Cas и направляющие РНК не встречаются вместе в естественных условиях.
15. Сконструированная программируемая не встречающаяся в природе система CRISPR-Cas, содержащая белок Cas и одну или несколько направляющих РНК, которые осуществляют нацеливание на геномные локусы молекул ДНК, кодирующих один или несколько продуктов генов, в клетке, а белок Cas расщепляет геномные локусы молекул ДНК, кодирующих один или несколько продуктов генов, вследствие чего экспрессия одного или нескольких продуктов генов изменяется; и где белок Cas и направляющие РНК не встречаются вместе в естественных условиях.
16. Система по п. 14 или 15, отличающаяся тем, что экспрессия двух или более продуктов генов изменяется.
17. Система по любому из пп. 14-16, отличающаяся тем, что система дополнительно содержит один или несколько NLS.
18. Система по любому из пп. 14-17, отличающаяся тем, что направляющие РНК содержат направляющую последовательность, слитую с tracr-последовательностью.
19. Система по любому из пп. 14-18, отличающаяся тем, что клетка является эукариотической клеткой.
20. Система по п. 19, отличающаяся тем, что эукариотическая клетка является клеткой млекопитающего.
21. Система по п. 20, отличающаяся тем, что клетка млекопитающего является клеткой человека.
22. Система по любому из пп. 14-21, отличающаяся тем, что система CRISPR-Cas является системой CRISPR-Cas II типа.
23. Система по любому из пп. 14-22, отличающаяся тем, что белок Cas является белком Cas9.
24. Система по любому из пп. 14-23, отличающаяся тем, что белок Cas является кодон-оптимизированным для экспрессии в эукариотической клетке.
25. Система по любому из пп. 14-24, отличающаяся тем, что экспрессия продукта гена снижается.
26. Система по любому из пп. 14-25, отличающаяся тем, что продуктом гена является белок.
27. Система по любому из пп. 14-26, отличающаяся тем, что система вводится в клетку с помощью системы доставки, включающей вирусные частицы, липосомы, электропорацию, микроинъекцию или конъюгацию.