СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАПСУЛЬНОГО ПОЛИСАХАРИДА С ПНЕВМОКОККОВЫМ СЕРОТИПОМ

1. Способ получения капсульного полисахарида с пневмококковым серотипом, при этом способ включает:
(a) культивирование бактериальных клеток, которые продуцируют молекулу с пневмококковым серотипом, при поддержании pH культуральной жидкости в диапазоне от 7,0 до 9,4;
(b) прекращение культивирования на стадии (а) в момент между тем, когда коэффициент поглощения культуральной жидкости остается постоянным, и тем, когда коэффициент поглощения начинает снижаться;
(c) осуществление дополнительного культивирования культуральной жидкости, полученной на стадии (b), без регуляции pH до момента, когда pH культуральной жидкости достигает значения pH 5,5 или ниже;
(d) добавление лизирующего средства в культуральную жидкость, полученную на стадии (с), для лизиса клеток, осаждение белков и удаление осажденных белков и клеточного дебриса с получением очищенного клеточного лизата и
(e) выделение и очистку капсульного полисахарида из лизата, полученного на стадии (d).
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что пневмококковый серотип является следующим: 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 9N, 9V, 14, 18С, 19А, 19F, 22F, 23F или 33F.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что культивирование на стадии (а) осуществляют при 34-38°С с перемешиванием при 50-150 об./мин.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что стадию (b) осуществляют путем прекращения культивирования на стадии (а) через 1-3 часа после того, как коэффициент поглощения культуральной жидкости становится постоянным.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дополнительное культивирование на стадии (с) осуществляют при 34-38°С с перемешиванием при 50-150 об./мин. без регуляции рН.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что лизирующее средство, используемое на стадии (d), представляет собой дезоксихолат натрия.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что стадию (d) осуществляют путем добавления лизирующего средства в культуральную жидкость, полученную на стадии (с), для лизиса клеток, затем инкубирования полученного в результате клеточного лизата при 10-20°C в течение 3-24 часов без перемешивания для осаждения белков и удаления осажденных белков и клеточного дебриса посредством центрифугирования.
8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что выделение и очистка на стадии (е) включают:
(i) фильтрацию лизата, полученного на стадии (d), с помощью глубинного фильтра;
(ii) концентрирование фильтрата, полученного на стадии (i), с последующей ультрафильтрацией и центрифугированием;
(iii) осуществление реакции надосадочной жидкости, полученной на стадии (ii), с катионным поверхностно-активным веществом, а затем центрифугирование полученного в результате раствора с получением осадка или надосадочной жидкости, содержащих капсульные полисахариды;
(iv) осуществление реакции капсульных полисахаридов, полученных на стадии (iii), с йодидом натрия с последующим центрифугированием для получения, таким образом, надосадочной жидкости;
(v) добавление активированного угля к раствору, полученному на стадии (iv), с последующей фильтрацией и
(vi) концентрирование фильтрата, полученного на стадии (v), с последующей ультрафильтрацией и центрифугированием для получения, таким образом, капсульных полисахаридов.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что концентрирование на стадии (ii) осуществляют при помощи мембраны с размером пор 100 кДа.
10. Способ по п. 8, отличающийся тем, что концентрирование на стадии (vi) осуществляют при помощи мембраны с размером пор 30 кДа.
11. Способ по п. 8, отличающийся тем, что катионное поверхностно-активное вещество, используемое на стадии (iii), представляет собой бромид цетилтриметиламмония.
12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что бромид цетилтриметиламмония используют в концентрации 0,5~3,0%.
13. Способ по п. 8, отличающийся тем, что активированный уголь, используемый на стадии (v), используют в концентрации 1-5% (вес/объем).