Клинические испытания агара и бульона Мосселя

Russian clinical laboratory diagnostics. 2017; 62

DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2017-62-10-631-635

7. Tai J.H., Williams J.V., Edwards K.M., Wright P.F., Crowe J.E. Jr., Dermody T.S. Prevalence of Reovirus-Specific Antibodies in Young Children in Nashville, Tennessee. J. Infect. Dis. 2005; 191(8): 1221—4.

8. Pokrovsky V.I., Pak S.G., Brico N.I., Danilkin B.K. Infectious diseases and epidemiology. Moscow: GEOTAR-Media; 2007.

9. Kuznetsov S.V., Vovk T.G., Olkhovskaya O.N. et al. Differential diagnostics of acute respiratory viral infections in children. Methodical instructions for students of V—VI courses and interns. Kharkov: KhNMU; 2015.

10. Kiseleva O.I., Marynicha I.G., Sominina A.A. Influenza and other respiratory viral infections: epidemiology, prevention, diagnosis and therapy. St. Petersburg: Borges; 2003.

11. Kupchenko A.N., Ponezheva Z.B. Actual methods of diagnosis and treatment ARVI. Archiv vnutrenney meditsiny. 2016; 6

12. Kolpakov S.A., Shcherbakov V.V., Kolpakova E.P. The case of generalized reovirus infection. Actual problems of medical virology. Proceedings of the scientific-practical conference. 1999; 1: 98.

13. Johansson P.J., Sveger T., Ahlfors K., Ekstrand J., Svensson L. Reovirus type 1 associated with meningitis. Scand. J. Infect. Dis. 1996; 28(2): 117—20.

14. Tyler K.L., Barton E.S., Ibach M.L., Robinson C., Campbell J.A., O'Donnell S.M. Isolation and molecular characterization of a novel type 3 reovirus from a child with meningitis. J. Infect. Dis. 2004; 189(9): 1664—75.

15. Richardson S.C., Bishop R.F., Smith A.L. Reovirus serotype 3 infection in infants with extrahepatic biliary atresia or neonatal hepatitis. J. Gastroenterol. Hepatol. 1994; 9(3): 264—8.

16. Minuk G.Y., Paul R.W., Lee P.W. The prevalence of antibodies to reovi-

microbiology

rus type 3 in adults with idiopathic cholestatic liver disease. J. Med. Virol. 1985; 16(1): 55—60.

17. Tyler K.L., Sokol R.J., Oberhaus S.M., Le M., Karrer EM., Narkewicz M.R. et al. Detection of reovirus RNA in hepatobiliary tissues from patients with extrahepatic biliary atresia and choledochal cysts. Hepatol-ogy. 1998; 27(6): 1475—82.

18. Stanley N.F., Joske R.A. Animal model of human disease. Chronic biliary obstruction. Animal model: chronic biliary obstruction caused by Reovi-rus type 3. Am. J. Pathol. 1975; 80(1): 185—8.

19. Papadimitriou J.M. The biliary tract in acute murine reovirus 3 infection. Light and electron microscopic study. Am. J. Pathol. 1968; 52(3): 595—611.

20. Wilson G.A., Morrison L.A., Fields B.N. Association of the reovirus S1 gene with serotype 3-induced biliary atresia in mice. J. Virol. 1994; 68(10): 6458—65.

21. Kolpakov S.A., Kolpakova E.P. Hepatitis of reovirus etiology. Development of erythrocyte assay for the diagnostics of reovirus infection. Actual problems of medical virology: Proceedings of the scientific-practical conference dedicated to the 90th anniversary of the birth of M.P. Chuma-kov. 1999; 2: 98.

22. Kolpakov S.A., Kolpakova E.P. Peculiarities of isolating reovirus RNA from clinical material. Live and bio-inert systems. 2014; 10. Available at: http://jbks.ru/archive/issue-10/article-5

23. Glanz S. Mediko-biologicheskaya statistika. Moscow: Practika. 1999.

Поступила 20.05.17 Принята к печати 06.06.17

© КОЛЛЕКТИв АвТОРОв, 2017 УДК 616.34-002.1-022-078

Шепелин А.П.1, Марчихина И.И.1, Полосенко О.в.1, Шолохова Л.П.1, Ажермачева Н.И.1, Доброхотский О.Н.2, Борзенкова Т.Х.2

КЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ АГАРА И БУЛЬОНА МОССЕЛЯ

1ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора, 142279, п. Оболенск, Серпуховской район, Московская область, Россия;

2Противочумная станция ФГБУЗ «Медико-санитарная часть № 164» Федерального медико-биологического агентства, Испытательный лабораторный центр, 142279, п. Оболенск, Серпуховской район, Московская область, Россия

Культуральная диагностика острых кишечных инфекций (ОКИ) основывается на использовании питательных сред для селективного накопления энтеробактерий. Разработка состава и технологии производства отечественных импортозамещающих питательных сред является важной практической задачей для обеспечения лабораторий качественными медицинскими изделиями. В Государственном научном центре прикладной микробиологии и биотехнологии (ГНЦ ПМБ) Роспотребнадзора разработаны и зарегистрированы в установленном порядке питательная среда для селективного накопления энтеробактерий сухая (бульон Мосселя) и питательная среда для селективного выделения и учёта энтеробактерий сухая (агар Мосселя), предназначенные для селективного накопления, выделения и учёта энтеробактерий семейства Enterobacteriaceae из клинического материала и других объектов.

Проведена сравнительная оценка ростовых и ингибиторных свойств новых питательных сред производства ГНЦ ПМБ с зарубежными аналогами с использованием клинического материала. Доказано полное соответствие отечественных бульона и агара Мосселя зарубежным аналогам при использовании этих сред с целью селективного накопления, выделения и учёта Enterobacteriaceae из клинического материала и получения объективных результатов бактериологического контроля.

Ключевые слова: питательные среды; энтеробактерии; бульон и агар Мосселя; жёлчь очищенная сухая.

Для цитирования: Шепелин А.П., Марчихина И.И., Полосенко О.В., Шолохова Л.П., АжермачеваН.И., Доброхотский О.Н., Борзенкова Т.Х. Клинические испытания агара и бульона Мосселя. Клиническая лабораторная диагностика. 2017; 62(10): 631-635. DOI: http://dX.doi.org/10.18821/0869-2084-2017-62-10-631-635

ShepelinA.P.1, MarchikhinaI.I.1, Polosenko O.V.1, SholokhovaL.P.1, AzhermachevaN.I.1, Dobrokhotsky O.N.2, Borzenkova T.Kh.2 THE CLINICAL TRIALS OF AGAR AND MOSSEL EE BROTH

1The state research center of applied microbiology and biotechnology of Rospotrebnadzor, 142279 village Obolensk, Serpuhovskoii district, Moskovskaia oblast, Russia

2The anti-plague station "the medical sanitary station № 164" of the Federal medical biological agency of Russia, test laboratory center, 142279 village Obolensk, Serpukhovskoii district, Moskovskaia oblast, Russia

Для корреспонденции: Полосенко Ольга Вадимовна, канд. биол. наук. зав. сектором микробиологических исследований; e-mail: polosenko. olga@yandex.ru

МИКРОБИОЛОГИЯ

The cultural diagnostic of acute intestinal infections is based on application of growth medium for .selective cumulation of enterobacteria. The development of composition and technology ofproduction ofnational import-substituting growth medium is an important task for supporting laboratories with high quality medical products. In the state research center of applied microbiology and biotechnology are developed and registered in established procedure a dry growth medium for selective cumulation of enterobacteria (Mossel EE broth) and dry growth medium for selective isolation and counting of enterobacteria (Mossel agar). Both media are intendedfor selective cumulation, isolation and counting of enterobacteria of family Enterobacteriaceae in clinical material and other objects. The comparative evaluation was applied concerning growth and inhibiting characteristics of new growth media produced by the state research center of applied microbiology and biotechnology against foreign analogues using clinical material. The total correspondence of national Mossel broth and Mossel agar to foreign analogues in case of using these media with the purpose of selective cumulation, isolation and counting of enterobacteria of family Enterobacteriaceae in clinical material and obtaining objective results of bacteriologic control.

Keywords: growth media; enterobacteria; Mossel broth; Mossel agar; dry purified bile

For citation: Shepelin A.P., Marchikhina I.I., Polosenko O.V., Sholokhova L.P., Azhermacheva N.I., Dobrokhotsky O.N., Borzenkova T.Kh. The clinical trials of agar and Mossel EE broth. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika (Russian Clinical Laboratory Diagnostics) 2017; 62 (10): 631-635. (in Russ.). DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2017-62-10-631-635 For correspondence: Polosenko O.V., candidate of biological sciences, the head of the sector of microbiological studies. e-mail: polosenko.olga@yandex.ru

Conflict of interests. The authors declare absence of conflict of interests. Acknowledgment. The study had no sponsor support.

Received 15.05.2017 Accepted 25.05.2017

Среди острых кишечных заболеваний (ОКИ) в последние годы доминируют инфекции, вызываемые патогенными и условно-патогенными бактериями (УПБ). Роль кишечных патогенов в заболеваемости населения постоянно возрастает. Сложность проблемы ОКИ заключается в отсутствии чётких критериев определения потенциальной способности кишечных патогенов вызывать патологический процесс. Недостаточно изучены особенности эпидемиологии и профилактики ОКИ, вызываемых энтеробактериями. УПБ являются нормальными обитателями различных биотопов организма человека. При снижении резистентности организма и при определённых эпидемиологических условиях они могут вызывать как эндогенные, так и экзогенные инфекции. Патогенность большинства энтеробактерий обусловлена их способностью вырабатывать термолабильные и термостабильные энтеротоксины. Поражение желудочно-кишечного тракта при ОКИ чаще всего наблюдается в форме гастроэнтерита, характеризуется различной степенью обезвоживания организма, возникающего вследствие нарушения водно-солевого баланса при рвоте и диарее, и сопровождается сердечно-сосудистыми нарушениями из-за потери электролитов, в первую очередь калия. Степень тяжести болезни, а следовательно, и жизнь больного зависят от быстрых результатов бактериологического исследования, подтверждающих этиологию заболевания. Культуральная диагностика острых ОКИ основывается на использовании питательных сред для селективного накопления энтеробактерий.

Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ГНЦ ПМБ) Роспотребнадзо-ра является одним из ведущих производителей питательных сред в России, номенклатура выпускаемых препаратов включает более 100 наименований. Большинство питательных сред прошли все этапы государственных испытаний, зарегистрированы в качестве медицинских изделий Росздравнадзором и разрешены для применения в практическом здравоохранении. Питательные среды производства ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора широко используются бактериологическими лабораториями России для выделения и идентификации энтеробакте-рий, диагностики особо опасных инфекций, дисбиозов,

дифтерии, гнойных бактериальных менингитов, при контроле микробной загрязнённости нестерильных лекарственных средств и др. [1—3].

В практике работы микробиологических лабораторий наряду с использованием отечественных питательных сред определённое распространение получили питательные среды зарубежного производства «HiMedia» (Индия), «Merck» (Германия), «Pronadisa» (Испания) и др.

Многолетняя практика производства сухих питательных сред в ГНЦ ПМБ позволяет разрабатывать новые питательные среды на основе имеющейся сырьевой базы и внедрять их в практику производства с целью расширения номенклатуры выпускаемых сухих питательных сред для санитарной и клинической микробиологии. В 2016 г. разработаны и зарегистрированы в установленном порядке питательная среда для селективного накопления энте-робактерий сухая (бульон Мосселя) и питательная среда для селективного выделения и учёта энтеробактерий сухая (агар Мосселя), предназначенные для селективного накопления, выделения и учёта Enterobacteriaceae из клинического материала и других объектов.

Селективное накопление энтеробактерий в бульоне Мосселя обусловлено тем, что высокая концентрация жёлчи крупного рогатого скота в совокупности с бриллиантовым зелёным почти полностью подавляют рост сопутствующей микрофлоры, а глюкоза способствует росту энтеро-бактерий. Большая буферная ёмкость питательной среды защищает культуру от биоцидного действия накапливающейся кислоты. С целью достижения прозрачности готовой питательной среды специально разработана технология дополнительного осветления жёлчи очищенной сухой с использованием двухзамещённого фосфата натрия.

Селективный учёт и выделение энтеробактерий на агаре Мосселя возможны благодаря наличию в среде кристаллического фиолетового и солей жёлчных кислот, в значительной степени угнетающих рост сопутствующих микроорганизмов. Бактерии, ферментирующие глюкозу с образованием кислоты, обнаруживают по изменению цвета индикатора и зонам преципитации вокруг колоний за счёт присутствия в среде жёлчи. На данной питательной среде обнаруживаются все представители семейства Enterobacteriaceae, однако она не

Russian clinical laboratory diagnostics. 2017; 62

DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2017-62-10-631-635

является абсолютно специфичной для этих микроорганизмов, так как некоторые сопутствующие бактерии проявляют аналогичные признаки роста.

Цель работы — провести сравнительные клинические испытания зарубежных и отечественных питательных сред Мосселя, разработанных по программе импор-тозамещения в ГНЦ ПМБ.

Материал и методы. В бактериологической лаборатории Противочумной станции ФГБУЗ «Медико-санитарная часть № 164 Федерального медико-биологического агентства» на базе испытательного лабораторного центра совместно с сотрудниками ГНЦ ПМБ провели исследование образцов клинического материала с применением медицинских изделий — бульона и агара Мосселя производства ФБУН ГНЦ ПМБ с целью подтверждения возможности использования их по назначению.

Исследованы 35 образцов клинического материала, поступивших в лабораторию для исследования (кал, моча); из них испражнения (кал) — 20 образцов, моча — 15 образцов. Каждый исследуемый образец зашифрован (номера всех образцов, указанных в настоящем Протоколе, соответствуют номерам, присвоенным этим образцам в Журнале регистрации патогенных биологических агентов (ПБА). Препарат сравнения для бульона Мосселя — питательный бульон для энтеробактерий по Мосселю (бульон Мосселя) MERCK кат. № 1.05394.0500. Препарат сравнения для агара Мосселя — питательная среда VRBD agar to MOSSEL MERCK кат. № 1.10275.0500.

В качестве вспомогательных сред и сред сравнения для выделения энтеробактерий использовали:

— питательную среду для обнаружения и выделения колиформных бактерий и кишечных патогенов сухую (агар МакКонки-ГРМ) РУ № ФСР 2009/05628, серия 15, годен до 09.2017 г.;

— питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-агар) РУ № ФСР 2007/00001, серия 453, годен до 07.2020 г;

— питательный бульон для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-бульон) РУ № ФСР 2007/00002, серия 544, годен до 07.2020 г.;

— питательную среду для выделения стафилококков сухую (Стафилококкагар) РУ № ФСР 2011/10007, серия 354, годен до 07.2017 г.;

— питательную среду для выделения энтеробакте-рий сухую (агар Эндо-ГРМ) РУ № ФСР 2007/00375, серия 65, годен до 07.2018 г.;

— питательную среду для выделения сальмонелл сухую (агар Висмут-сульфит-ГРМ) РУ № ФСР 2008/03237, серия 707, годен до 07.2018 г.

В работе использованы: набор для окраски по Граму и набор реагентов «Системы индикаторные бумажные для идентификации микроорганизмов», набор № 2 для межродовой и видовой дифференциации энтеробакте-рий (СИБ) производства НПО «Микроген» Минздрава России.

Взятие исследуемого материала и посев на питательные среды проводили в соответствии с нормативными документами [4—6].

Результаты и обсуждение. Бульон Мосселя. Клинический материал засевали в бульон Мосселя и в питательный ГРМ-бульон, используемый в качестве неинги-биторного накопительного бульона. Во всех 35 клинических образцах визуально наблюдалось помутнение как бульона Мосселя, так и ГРМ-бульона. После инкубации

microbiology

в течение 24 ч при 37°C из бульона Мосселя и из ГРМ-бульона делали высев по 0,1 мл на чашки с ГРМ-агаром, агаром МакКонки-ГРМ, стафилококкагаром. После инкубации посевов в течение 24—48 ч при 37°C визуально определяли наличие колоний с характерными для энтеробактерий культуральными свойствами. Колонии на ГРМ-агаре, используемом в микробиологической диагностике в качестве накопительной среды или для контроля роста, не имели характерной морфологии и не подлежали предварительной дифференциации.

На агаре МакКонки при высеве как из импортного, так и из бульона Мосселя производства ГНЦ ПМБ вырастало пять типов колоний с характерной для энтеро-бактерий морфологией:

1) колонии E. coli — гладкие, круглые, не слизистые, от розового до красного цвета, диаметром 1,5—3,5 мм;

2) колонии S. flexneri — прозрачные, гладкие, круглые, блестящие, бесцветные или бледно-розового цвета, диаметром 1,0—2,0 мм;

3) колонии S. typhimurium — круглые, гладкие, бесцветные, диаметром 1,5—3,0 мм;

4) колонии P. mirabilis — круглые, гладкие, блестящие, бесцветные, диаметром 2,0—4,0 мм; «роение» подавлено;

5) колонии E. faecalis — мелкие, розово-красного цвета, диаметром до 1,0 мм.

На Стафилококкагаре при высеве как из импортного, так и из бульона Мосселя производства ГНЦ ПМБ вырастало три типа колоний с характерной для энтеробак-терий морфологией:

1) колонии S. epidermidis и S. saprophyticus — белого цвета, выпуклые, круглые, непрозрачные, блестящие, с ровными краями, диаметром 1,5—3,5 мм;

2) колонии S. aureus — светло-жёлтого оттенка, выпуклые, круглые, непрозрачные, блестящие, с ровными краями, диаметром 2,0—4,0 мм;

3) колонии P. mirabilis — нежные, без «роения».

Для подтверждения принадлежности к семейству

Enterobacteriaceae из 1—2 выросших колоний с чашки готовили мазки и окрашивали их по Граму, определяли биохимические свойства с помощью СИБ.

Результаты исследований доказали возможность селективного накопления энтеробактерий при проведении культурального исследования клинического материала с целью получения дополнительной информации при диагностике ОКИ, вызванных энтеробактериями. После появления видимого роста бактерий на испытуемой среде — бульоне Мосселя проведены дополнительные исследования и доказана принадлежность выросших на бульоне Мосселя микроорганизмов к семейству Entero-bacteriaceae. Доказано преимущество использования бульона Мосселя по сравнению с неингибиторными бульонами при работе с клиническими образцами, обильно обсеменёнными грамположительной микрофлорой (энтерококками, стафилококками и др.), поскольку при высеве из неингибиторного бульона после накопления на соответствующие плотные среды выделение энтеро-бактерий затруднено.

Выявляемость энтеробактерий на испытуемой и контрольной средах представлена в табл. 1.

Агар Мосселя. Клинический материал засевали в ГРМ-бульон, используемый в качестве среды накопления. После инкубации в течение 24 ч при 37°C во всех 35 пробирках с посевами наблюдался рост в виде диффузного помутнения бульона. Из бульона делался высев

МИКРОБИОЛОГИЯ

по 0,1 мл на чашки с агаром Мосселя. После инкубации посевов в течение 24 ч при 37°С визуально определяли наличие колоний с характерной для энтеробактерий морфологией: круглые, малинового цвета колонии с зоной преципитации, диаметром 1,0—3,0 мм. Во всех 35 высевах на агар Мосселя визуально наблюдался характерный для энтеробактерий рост колоний в количестве от единичных до 1000 колоний на чашке. Для подтверждения принадлежности к семейству Enterobacteriaceae из 1—2 колоний с чашки готовили мазки, окрашивали их по Гра-му и отсевали на дифференциально-диагностические среды: агар Эндо-ГРМ, Висмут-сульфит-ГРМ-агар. Биохимические свойства определяли с помощью СИБ. Посев на среду сравнения VRBD agar to MOSSEL MERCK показал результаты, аналогичные результатам на испытуемой среде. Посев на неингибиторную среду ГРМ-агар показал невозможность учёта результатов — наблюдалось сплошное «роение» или сливной рост.

Характеристика колоний микроорганизмов, отобранных как подозрительные на принадлежность к роду Энтеробактерий.

Для среды агар Мосселя: круглые, малинового цвета колонии, с зоной преципитации, диаметром 1,0—3,0 (все энтеробактерии).

Для агара Эндо-ГРМ:

1) круглые, малинового цвета с металлическим блеском или без него, диаметром 2,0—3,0 мм (E. Coli лакто-зоположительные);

Таблица 1

Выявляемость энтеробактерий на испытуемой и контрольной средах при посеве клинического материала

Наименование Испытуемая среда: бульон Мосселя Контрольная среда

Количество посевов

35 35

Количество положи- 35 (диффузное по- 35 (диффузное по-

тельных находок* мутнение среды во мутнение среды во

всех пробирках с всех пробирках с

посевами клиниче- посевами клиниче-

ских образцов) ских образцов)

Энтеробактерии**, 38 38

в том числе:

E. coli 26 26

Citrobacter 2 2

Enterobacter 4 4

Klebsiella 1 1

Proteus 3 3

Salmonella 1 1

Shigella 1 1

Staphylococcus — —

Enterococcus — —

Bacillus — —

Выявляемость 95 ± 2% 95 ± 2%

энтеробактерий, % ±

m совпадений резуль-

татов исследования

положительных

проб*

Примечание. * — при доверительной вероятности 90%, при учёте среднего результата, полученного двумя специалистами; ** — количество выделенных энтеробактерий указано условно, так как учтены только выборочно проидентифицированные «подозрительные» на энтеробактерии колонии.

2) бесцветные или слегка розового цвета, со слабо выраженным центром (E. coli лактозонегативные, ши-геллы);

3) круглые, прозрачные, диаметром 1,5—2,5 мм (сальмонеллы);

4) круглые, расплывчатые, слизистые, интенсивно розового цвета, без металлического блеска;

5) круглые, интенсивно розового цвета, без металлического блеска.

Для ВСА:

1) круглые, чёрные, с блестящей зоной вокруг них, диаметром 1,0—3,0 мм (сальмонелла 1);

2) круглые, зелёные, с тёмным центром, диаметром 1,0—2,5 мм (сальмонелла 2);

3) круглые, темно-зелёные, диаметром 0,8—1,2 мм (сальмонелла 3);

4) полиморфные, чёрные с металлическим блеском или без него, диаметром 1,0—2,0 мм (сальмонелла 4);

5) круглые, зеленовато-коричневые, без «роения», диаметром 0,5—1,5 мм (E. coli);

6) круглые, светло-зелёного цвета, диаметром 1,0— 2,0 мм (P. vulgaris).

Выявляемость энтеробактерий на испытуемой и контрольной средах представлена в табл. 2.

Во всех 35 образцах клинического материала при посеве на агар Мосселя обнаружены энтеробактерии, что подтверждено дополнительными тестами (мазки по Гра-му, высев на дифференциальные среды, подтверждение биохимических свойств с помощью СИБ).

Выводы. Выявляемость энтеробактерий с использованием бульона и агара Мосселя производства ФБУН ГНЦ ПМБ при сравнении с зарубежными аналогами доказала

Таблица 2

Выявляемость энтеробактерий на испытуемой и контрольной средах при посеве клинического материала

Наименование Испытуемая среда — агар Мосселя Контрольная среда

Количество посевов

35 35

Количество положи- 35 (круглые, 35 (круглые,

тельных находок* малинового цвета малинового цвета

колонии, с зоной колонии, с зоной

преципитации, d 1,0—3,0 мм) преципитации, d 1,0—3,0 мм)

Энтеробактерии, в том 37 37

числе**

E. coli 23 23

Citrobacter 2 2

Enterobacter 4 4

Klebsiella 1 1

Proteus 3 3

Salmonella 1 1

Hafnia 1 1

Shigella 2 2

Выявляемость энте- 95 ± 2% 95 ± 2%

робактерий, % ± m со-

впадений результатов

исследования положи-

тельных проб*

Примечание. * — при доверительной вероятности 90%, при учёте среднего результата, полученного двумя специалистами; ** — подтверждение проводилось для колоний, выделенных с агара Мосселя.

russian clinical laboratory diagnostics. 2017; 62

DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2017-62-10-635-640

полное соответствие отечественных питательных сред зарубежным аналогам и возможность их использования для селективного накопления, выделения, учёта Enterobacteriaceae из клинического материала и получения объективных результатов бактериологического контроля.

Результаты проведённых клинических испытаний учтены при проведении государственной регистрации в Росздравнадзоре РФ: на агар Мосселя и бульон Мосселя получены регистрационные удостоверения.

Обоснованное применение отечественных питательных сред позволит в полном объёме удовлетворить потребности клинической и санитарной микробиологии и отказаться от импортных поставок, не снижая при этом качества микробиологических исследований. Это обеспечит поддержание биобезопасности Российской Федерации на должном уровне и возможность дать адекватный ответ на возникающие вызовы и новые биологические угрозы [7].

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Шепелин А.П., Домотенко Л.В., Дятлов И.А., Миронов А.Ю., Алёшкин В.А. Современные подходы к проблеме импортозамеще-ния в области производства питательных сред. Клиническая лабораторная диагностика. 2015; 60(6): 63—5.

2. Шепелин А.П. Современное состояние и направления развития производства питательных сред в России. Современная лабораторная диагностика. 2015; 16(2): 18—20.

3. Шепелин А.П., Полосенко О.В., Марчихина И.И., Шолохова Л.П., Дятлов И.А. Питательные среды для выявления стафилококков в клинической и санитарной микробиологии. Биопрепараты. Профилактика. Диагностика. Лечение. 2015; 56(4): 39—43.

4. Методические указания по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями. МУ 04-723/3. М.: МЗ СССР; 1984.

MICROBIOLOGY

5. Приказ Минздрава СССР № 535 Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений. 1985.

6. Методы контроля бактериологических питательных сред. Методические указания. МУК 4.2.2316—08. М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора.; 2008.

7. Дятлов И.А., Миронов А.Ю., Шепелин А.П., Алёшкин В.А. Состояние и тенденции развития клинической и санитарной микробиологии в Российской Федерации и проблема импортозамеще-ния. Клиническая лабораторная диагностика. 2015; (8): 61—5.

REFERENCES

1. Shepelin А.Р., Domotenko L.V., Dyatlov I.A.,. Mironov A.Yu., Aleshkin V.A.Current approaches to import substitution in the field of nutrient medium production. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2015; 60

2. Shepelin A.P. Status and trends of development of nutrient medium production in Russia. Sovremennaya laboratornaya diagnostika. 2015; 16

3. Shepelin A.P., Polosenko O.V., Marchikhina I.I., Sholokhova L.P., Dyatlov I.A. Nutrient media to identify staphylococci in clinical and sanitary microbiology. Biopreparaty. Profilaktika. Diagnostika. Lechenie. 2015; 4

4. Guidelines for microbiological diagnosis of enterobacteria-associated diseases [Metodicheskie ukazaniya po microbiologicheskoy diagnostike zabolevaniy, vyzyvaemykh enterobacteriyami]. MU 04723/3. Moscow: MH USSR, 1984.

5. The order of Ministry of Health USSR No. 535 On unification of microbiological

6. Methods to control bacteriological nutrient media. Methodical instructions [Metody kontrolya bacteriologicheskikh pitatel nykh sred. Metodicheskie ukazaniya].MUK 4.2.2316—08. Moscow: Federal Center for Hygiene & Epidemiology, Rospotrebnadzor; 2008: 7.

7. Dyatlov I.A., Mironov A.Yu., Shepelin A.P., Aleshkin V.A. Status and trends of development of clinical and sanitary microbiology in the Russian Federation and the problem of import substitution. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2015; 60

Поступила15.05.17 Принята к печати 25.05.17

© СУХИНА М.А., САФИН А.Л., 2017

УДК 616.34-008.311.4-022:579.852.13]-078

Сухина М.А., Сафин А.Л.

СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ CLOSTRIDIUM DIFFICILE-АССОЦИИРОВАННЫХ ДИАРЕЙ; МЕТОДЫ ДЕТЕКЦИИ ТОКСИГЕННЫХ ШТАММОВ CLOSTRIDIUM DIFFICILE

ФГБУ «Государственный научный центр колопроктологии им. А.Н. Рыжих» Минздрава РФ, 123423, Москва, Россия

Clostridium difficüe-ассоциированная инфекция (CDI) — одна из основных причин нозокомиальной диареи. Сложность лабораторной диагностики ведёт к прогрессированию заболевания, вызывающему обширные воспалительные изменения в стенке толстой кишки, характеризующиеся поверхностным некрозом слизистой оболочки с образованием «псевдомембран», приводящих к формированию токсического мегаколона, перфорации кишечной стенки, перитониту, сепсису. Основная роль в постановке диагноза принадлежит индикации возбудителя и детекции его токсинов. Ни один лабораторный тест не может быть использован в качестве самостоятельного метода лабораторной диагностики CDI. Многоэтапная диагностика может стать адекватной стратегией для быстрого и полного выявления антибиотикассоциированных диарей.

Ключевые слова: Clostridium difficile; Clostridium difficile-ассоциированная инфекция; глутаматдегидрогеназа;

ПЦР риботипа NAP/BI/027; токсигенные штаммы; токсин A; токсин В; бинарный токсин;

антибиотикассоциированная диарея.

Для корреспонденции: Сухина Марина Алексеевна, канд. биол. наук, рук. отд. микробиологических и иммунологических исследований; e-mail: marinamari272015@gmail.com