Гаплотипическое разнообразие природных популяций комаров рода Anopheles (Diptera, Culicidae) Северного Вьетнама

18

генетические основы эволюции экосистем

DOI: 10.17816/ecogen16318-25

гаплотипическое разнообразие природных популяций комаров

рода ANOPHELES (DATERA, cüLIOIDAE) СЕвЕрнОГО вьЕТнАМА

© т. Ву ', Б.В. Андрианов 2, т.В. Горелова 2, м.И. Гордеев 1

1 Московский государственный областной университет, Москва;

2 Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова Российской академии наук, Москва

Для цитирования: Ву Т., Андрианов Б.В., Горелова Т.В., Гордеев М.И. Гаплотипическое разнообразие природных популяций комаров рода Anopheles (Díptera, Culicidae) Северного Вьетнама // Экологическая генетика. — 2018. — Т. 16. — № 3. — С. 18—25. doi: 10.17816/ ecogen16318-25.

Поступила в редакцию: 14.06.2018 Принята к печати: 30.08.2018

& Малярия на территории Вьетнама до настоящего времени остается актуальной проблемой. Видовой состав комаров рода Anopheles — основных переносчиков малярии — и численность их популяций оказывают критическое влияние на вероятность развития эпидемии. Проведен анализ изменчивости BOLD-фрагмента митохондриального гена coxl в выборках комаров рода Anopheles на территории Северного Вьетнама. Идентифицированы комары, относящиеся к видовым комплексам Anopheles sinensis, Anopheles vagus, Anopheles barbirostris. Нуклеотидная изменчивость в пределах комплекса не превышает 2 %. Дифференциации на подвиды в пределах комплексов не выявлено. Наиболее массовым видом в сборах является Anopheles sinensis — основной переносчик возбудителя трехдневной малярии, что позволяет прогнозировать успешность местной передачи Plasmodium vivax в случае появления носителей малярии в этом районе.

& ключевые слова: Anopheles sinensis; ДНК-штрихкодирование; природные популяции; митохондрии.

HAPLOTYPIC DIVERSITY OF MOSQUITOES OF THE GENUS ANOPHELES

(DIPTERA, CULICIDAE) OF NORTH VIETNAM

© T. Vu >, B.V. Andrianov 2, T.V. Gorelova 2, M.I. Gordeev 1

1 Moscow Region State University, Moscow, Russia; 2 Vavilov Institute of General Genetics Russian Academy of Sciences, Moscow, Russia

For citation: Vu T, Andrianov BV, Gorelova TV, Gordeev MI. Haplotypic diversity of mosquitoes of the genus Anopheles

of North Vietnam. Ecological genetics. 2018;16(3):18-25. doi: 10.17816/ecogen16318-25.

Received: 14.06.2018 Accepted: 30.08.2018

& Background. Malaria in the territory of North Vietnam remains an actual problem. The species composition of mosquitoes of the genus Anopheles — the main vectors of malaria and the density of their populations — has a critical impact on the likelihood of the epidemic. Materials and methods. We analyzed the variability of the BOLD fragment of the mitochondrial coxl gene in a sampling set of Anopheles mosquitoes from the North Vietnam. Results. We found mosquitoes belonging to the species complexes: Anopheles sinensis, Anopheles vagus and Anopheles barbirostris. Nucleotide variability within the complexes does not exceed 2%. The differentiation into subspecies within the species complexes was not found. Conclusion. The most common species of the genus Anopheles of North Vietnam is Anopheles sinensis — the main malaria vector. We predict the success of local transmission of malaria in this region in the case of malaria emergence.

& Keywords: Anopheles sinensis; DNA-barcod; native populations; mtDNA.

ВВЕДЕНИЕ

Комары рода Anopheles Meigen, 1818 привлекают внимание исследователей благодаря своей способности к переносу возбудителей малярии. Среди большого числа видов рода Anopheles лишь некоторые способны переносить возбудителей малярии человека, поэтому составление прогноза эпидемической ситуации в конкретных районах в значительной степени основывается на характеристике популяций комаров и точном определении видов. Морфологическое определение видов

рода Anopheles во многих случаях затруднительно. Для видовой идентификации в роде Anopheles предложено несколько молекулярно-генетических маркеров, обладающих достаточной изменчивостью на межвидовом уровне. Наиболее полные базы данных в настоящее время существуют по изменчивости внутреннего транскрибируемого спейсера гена рибосомой РНК (ITS2 rDNA) [1] и по изменчивости митохондриального гена цитохромоксидазы (coxl) [2]. Применение моле-кулярно-генетических маркеров для определения ви-

дов комаров основано на использовании порогового уровня допустимой внутривидовой изменчивости данного маркера. Этот порог для каждого маркера и для каждой систематической группы насекомых определяется эмпирически [3]. Для многих групп насекомых пороговый уровень внутривидовой нуклеотидной изменчивости BOLD-фрагмента митохондриального гена cox1 равен 3 % [4]. Практика идентификации видов комаров рода Anopheles по анализу изменчивости BOLD-фрагмента митохондриального гена cox1, или более кратко — ДНК-баркодинг, показывает хорошее совпадение морфологических и молекулярных данных. Внутривидовая изменчивость комаров anopheles из группы hyrcanus на территории Дальнего Востока России оказалась в пределах от 0,36 до 1,09 %, межвидовая изменчивость — в пределах от 2,34 до 4,50 % [5]. В среднем внутривидовая изменчивость комаров в Китае равна 0,39 % [6]. Внутривидовая изменчивость anopheles из группы hyrcanus в Китае находится в пределах от 0,2 до 1,7 %, тогда как межвидовая — от 2,7 до 10,8 % [2]. Столь удобная для систематика ситуация, когда межвидовая изменчивость всегда больше внутривидовой, встречается не всегда. ДНК-баркодинг комаров Канады выявил внутривидовую изменчивость в пределах 0,0—3,9 %, тогда как величины межвидовой изменчивости наблюдались от 0,2 до 17,2 % [7]. Перекрывание диапазонов внутривидовой и межвидовой изменчивости не создает затруднений в идентификации вида, так как во всех случаях последовательности, относящиеся к одному виду, кластеризуются вместе с хорошей статистической достоверностью. Четкая кластеризация последовательностей, относящихся к одному виду, представляет собой более важный критерий для видовой идентификации, чем величина изменчивости в пределах кластера [3]. Применение ДНК-баркодин-га для видовой диагностики всей фауны комаров Сингапура, включая Aedes, anopheles и Culex, показало 100 % эффективность [8].

В настоящем сообщении мы приводим данные о видовой идентификации и гаплотипическом разнообразии комаров из рода anopheles Северного Вьетнама в выборках из пяти локалитетов методом ДНК-баркодин-га. Ранее в этих локалитетах изучение фауны комаров не проводилось. Мы обнаружили три вида комаров anopheles, потенциальных переносчиков малярии. Наиболее массовым видом в сборах оказался anopheles sinensis Wiedemann, 1828, реже встречались Ап. vagus Donitz, 1902, и An. barbirostris Van der Wulp, 1884.

An. sinensis — полиморфный вид, распространенный на территории Юго-Восточной Азии. В Китае An. sinensis является одним из основных переносчиков возбудителя трехдневной малярии Plasmodium vivax [9]. An. sinensis рассматривается как видовой комплекс, хотя систематический статус отдельных видов комплекса точно не известен и служит предметом

активного изучения [10]. Новые возможности для выявления видов-двойников дает разработка фотокарт высокого разрешения у близких видов An. sinensis и Ап. lesteri [11, 12].

Среди комаров Северного Вьетнама были отмечены два других, преимущественно зоофильных, вида — An. vagus и An. barbirostris. Они также рассматриваются как видовые комплексы. Оба вида распространяют возбудителей как трехдневной, так и тропической малярии, но только в некоторых областях своего ареала [13, 14]. Причины, по которым эти виды являются переносчиками малярии только в некоторых областях своего ареала, неизвестны, но, вероятно, связаны со скрытым полиморфизмом в составе этих видов. Следует отметить, что такие известные переносчики возбудителей малярии в Юго-Восточной Азии, как Anopheles stephensi, Anopheles balabacensis, Anopheles maculatus, Anopheles dirus и Anopheles minimus, не найдены в наших сборах. Наличие основного переносчика малярии An. sinensis в четырех ло-калитетах Северного Вьетнама из пяти изученных позволяет сделать вывод о сохраняющейся возможности местной передачи трехдневной малярии на территории Северного Вьетнама.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Сборы комаров

Выборки личинок комаров рода Anopheles были собраны в экспедиции с июля до сентября 2017 г. в пяти провинциях Северного Вьетнама, в которых есть риск восстановления очагов малярии. Сборы комаров проведены в провинциях: Куангнинь, Бакзянг, Шонла, Лаокай и Иэньбай. Три провинции — Шонла, Лаокай и Иэньбай — входят в район Северо-Западного Вьетнама (Тэйбак). Две провинции — Куангнинь, Бакзянг — находятся на северо-востоке Вьетнама. На севере и северо-западе Вьетнама преобладает горный рельеф, расчлененный глубокими долинами. На климат Северного Вьетнама оказывают влияние муссоны. Здесь четко выражены четыре времени года. Лето жаркое, влажное и дождливое. Зима засушливая и менее жаркая. Среднегодовая температура составляет 22,9 °C, средняя влажность — 82 %. Среднегодовой уровень осадков меняется от 1700 до 2400 мм (большая их часть выпадает в июле и августе).

Личинок 4-го возраста фиксировали 98 % этанолом. Для выделения тотальной ДНК и молекулярно-генети-ческого анализа использовали фиксированных в спирте личинок. Основной целью молекулярно-генетическо-го анализа была идентификация видов комаров рода Anopheles.

Выделение ДНК

ДНК выделяли методом фенол-хлороформной экстракции по стандартной методике [15] из индивидуальных личинок после морфологической идентификации.

20

генетические основы эволюции экосистем

Выделенная тотальная ДНК была растворена в 50 мкл деионизированной воды. В реакцию амплификации брали по 1 нг тотальной ДНК в качестве матрицы.

Условия проведения ПцР

Реакцию амплификации проводили в конечном объеме 25 мкл с помощью наборов для амплификации EncycloPlus PCR kit в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. ПЦР-фрагмент митохондриального гена cox1 для выполнения ДНК-штрихкодирования получали с помощью стандартных фолмеровских прайме-ров. Праймеры LC01490 и HCO2198 комплиментарны 5'-концу митохондриального гена coxl, с которых у представителей ряда групп беспозвоночных ампли-фицируется специфический BOLD-фрагмент 5'-области митохондриального гена cox1 длиной 658 п. н. [16]. LCO1490 5'-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3' HCO2198 5'-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAATCA-3'

Фрагменты гена cox1 москитов амплифицировали в следующих условиях: первичная денатурация — 4 мин при 95 °C; 5 циклов: денатурация при 95 °C 30 с, отжиг при 45 °C 30 с, синтез при 72 °C 1 мин; 35 циклов: денатурация при 95 °C 30 с, отжиг при 55 °C 30 с, синтез при 72 °C 1 мин; завершающий синтез при 72 °C 5 мин. ПЦР проводили на амплификаторе T100 (Bio-Rad, USA).

Продукты ПЦР разделяли и визуализировали методом электрофореза в 1,5 % агарозном геле. Элюцию ДНК из агарозного геля выполняли с помощью набора ZymocleAn Gel DNA Recovery Kit в соответствии с протоколом фирмы-производителя (The Epigenetics CompAny, USA). Полученные ПЦР-фрагменты были секвенированы.

Секвенирование

Секвенирование продуктов амплификации осуществляли по методу Сэнгера с обоих праймеров с применением ДНК-секвенатора ABI PRISM™ 377 и набора реактивов dGTP Big Dye Termination Kit (PE Applied Biosystems, США). Для секвенирования использовали полимер (ПДМА-6 — компания «Синтол») и капилляры длиной 50 см. На один образец делали два прогона для исключения ошибок сиквенса.

Биоинформационный анализ

Хроматограммы анализировали с помощью программы CromasPro 13.3 (Technelysium, Australia). Выравнивание последовательностей, полученных в результате секвенирования, с последовательностями, размещенными в базах данных, было выполнено с использованием ресурсов NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Для построения дендрограмм применяли программу MEGA7 [17] c использованием метода ближайших соседей (NJ) и p-дистанцию как модель нуклеотидных замен. Статистическую достоверность полученных деревьев оценивали при помощи величины бутстрэп-под-держки с числом репликаций 1000.

Медианная сеть митохондриальных гаплотипов была построена в программе PopART [18] с применением алгоритма TCS [19].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Суммарные результаты молекулярно-генетического определения видов комаров рода Anopheles на территории пяти провинций Северного Вьетнама приведены в табл. 1 и 2.

№ Имя образца / Haplotype name Вид комара / Anopheles species name Место сбора июль — сентябрь 2016 г. / Location. July-September 2016 GenBankID

1 Viet_A-1 An. sinensis MH425400

2 Viet_A-2 An. sinensis MH425401

3 Viet_A-3 An. sinensis MH425402

4 Viet_A-4 An. sinensis MH425403

5 Viet_A-5 An. sinensis Лаокай MH425404

6 Viet_A-6 An. sinensis MH425405

7 Viet_A-7 An. sinensis MH425406

8 Viet_A-8 An. sinensis MH425407

9 Viet_A-9 An. sinensis MH425408

Таблица 1

описание сборов личинок комаров рода Anopheles, сделанных в 2016 г. на территории Северного Вьетнама, и перечень полученных нуклеотидных последовательностей BOLD-фрагмента митохондриального гена cox1

table 1

The sampling set of mosquitoes larvae of the genus Anopheles collected in 2016 in the territory of North Vietnam and nucleotide sequences of the Bold fragment of the mitochondrial cox1 gene

Продолжение табл. 1

№ Имя образца / Haplotype name Вид комара / Anopheles species name Место сбора июль — сентябрь 2016 г. / Location. July-September 2016 GenBankID

10 Viet_B-1 An. vagus MH425409

11 Viet_B-2 An. vagus Шонла MH425409

12 Viet_B-3 An. vagus MH425410

13 Viet_B-4 An. vagus MH425411

14 Viet_C-1 An. sinensis MH425412

15 Viet_C-2 An. sinensis MH425413

16 Viet_C-3 An. sinensis MH425414

17 Viet_C-4 An. sinensis MH425415

18 Viet_C-5 An. sinensis MH425416

19 Viet_C-6 An. sinensis MH425417

20 Viet_C-7 An. sinensis MH425418

21 Viet_C-8 An. sinensis Иэньбай MH425419

22 Viet_C-9 An. sinensis MH425420

23 Viet_C-10 An. sinensis MH425421

24 Viet_C-11 An. sinensis MH425417

25 Viet_C-12 An. sinensis MH425422

26 Viet_C-13 An. sinensis MH425423

27 Viet_C-14 An. sinensis MH425424

28 Viet_C-15 An. sinensis MH425421

29 Viet_C-16 An. sinensis MH425425

30 Viet_D-1 An. barbirostris MH425426

31 Viet_D-2 An. barbirostris MH425427

32 Viet_D-3 An. barbirostris MH425428

33 Viet_D-4 An. barbirostris MH425429

34 Viet_D-5 An. sinensis MH425430

35 Viet_D-6 An. sinensis Куангнинь MH425431

36 Viet_D-7 An. sinensis MH425432

37 Viet_D-8 An. sinensis MH425433

38 Viet_D-9 An. sinensis MH425434

39 Viet_D-10 An. sinensis MH425435

40 Viet_D-11 An. sinensis MH425436

41 Viet_D-12 An. barbirostris MH425437

22 генетические основы эволюции экосистем

Окончание табл. 1

№ Имя образца / Haplotype name Вид комара / Anopheles species name Место сбора июль — сентябрь 2016 г. / Location. July-September 2016 GenBankID

42 Viet_E-1 An. sinensis MH425438

43 Viet_E-2 An. vagus MH425439

44 Viet_E-3 An. vagus MH425440

45 Viet_E-4 An. sinensis Бакзянг MH425441

46 Viet_E-5 An. vagus MH425442

47 Viet_E-6 An. sinensis MH425443

48 Viet_E-7 An. vagus MH425442

49 Viet_E-8 An. vagus MH425444

Таблица 2

Видовой состав малярийных комаров в пяти локалитетах Северного Вьетнама

Table 2

Species composition of malarial mosquitoes in five localities of North Vietnam

Место сбора и его географические координаты / Geographical location Характеристика биотопов и дата сборов / Environment and date of collection Видовой состав / Species name Число идентифицированных комаров/ Number of specimen

Лаокай 22.48 № 103.98 E Горный район. Заросшая канава со стоячей водой. Городская застройка. 21 сентября 2016 г. An. sinensis 9

Шонла 21.10 № 103.73 E Горный район. Пруд, заросшая канава. 30 августа 2016 г. An. sinensis 4

Иэньбай 21.68 № 104.46 E Горный район. Рисовые чеки. Городская застройка. 10 сентября 2016 г. An. sinensis 16

Куангнинь 21.00 № 107.29 E Предгорный район. Пруд. 15 августа 2016 г. An. barbirostris, An. sinensis 12

Бакзянг 21.29 № 106.19 E Предгорный район. Рисовые чеки. 17 сентября 2016 г. An. sinensis, An.vagus 8

Идентифицированы три видовых комплекса: An. sinensis, An. vagus и An. barbirostris. Для генетической дифференциации идентифицированных видовых комплексов была построена кладограмма с включением контрольных последовательностей представляющих отдельные виды комплексов (рис. 1).

Большая часть проанализированных образцов относится к виду An. sinensis. Другие виды комплекса — An. pullus, An. lesteri, An. hyrcanus — не обнаружены. Различить An. sinensis и An. kleini по изменчивости BOLD-фрагмента невозможно, так как An. kleini в эволюционно недавнем прошлом потерял собственные митохондрии, которые были вытеснены митохондриями An. sinensis [10]. Наблюдаемая изменчивость An. sinensis в нашей выборке находится на внутривидовом уровне и не превышает 2 %. В недавно опубли-

кованном исследовании гаплотипического разнообразия An. sinensis в Китае [9] было обнаружено два кластера. Самым массовым гаплотипом для кластера 1 является гаплотип Hap_41, а для кластера 2 — Hap122. Большинство найденных гаплотипов комаров из Китая относится к кластеру 1. Во Вьетнаме мы обнаружили эти группы. Большинство найденных нами гаплотипов также относится к кластеру 1 (см. рис. 1). К кластеру 2 в нашей выборке относится единственный гаплотип С-9. Гаплотип 113, редко встречающийся в Китае, во Вьетнаме, напротив, является одним из основных. Четкая кластеризация митохондриальных гаплотипов обычно соответствует разным видам комаров, которые могут иметь разные биологические характеристики. У An. sinensis Вьетнама такая кластеризация только намечается, но не имеет достаточной бутстрэп-

• VUtA-1 A VietC-10

KX779550-An sinensis-Hap 22 VielA-3

-Ш Viet Л-6

\-<>VietD-7

<> KetD-8

• Viet AS ) Viet A-2 АШС-З

-OvietD-5

— VietC-8 i-A VietC-6 — GQ265919-An kleini KX779569-An sinensis-Hap 41 A Viet C-l rB VietE-1 Ч_|АИetC-13 «Л-А ИetC-2

I-АШС-7

4,-A Viet C-l4

0VietA-4 • Viet 4-7

j-AvktC-5

П-О VietD-9

1-Я VietE-4

A Viet C-16 —О VietD-lt l.AHetC-12

"L QvietD-6

— <> VietD-H VietA-9

-KX779641-An sinensis-Hap 113

• Viet AS

AVietC-4

VietE-6

KX779650-An sinensis-Hap 122 VietC-9 EU6990S2-An testeri -FJ210S9S-An hyrcanus

- KC135S92-An puilus

Viel

Lb

-OvietD-12

-O VietB-4 I VietE-5 I VietE-S ) VMB-3 VietE-2 OVietB-1 MF179262-An vagus VietE-3

ip-и I—Or

VietD-4 О Viet D-3 OvietD-2 О Viet D-7 AB331578-An barbirostris 691 LC333233-An dissidens

10 Гс

aW3

m'LC3

- KX771109-DrosophUa yakuba

0.01

Рис. 1. Кладограмма комаров рода Anopheles, полученная на основе анализа изменчивости фрагмента гена coxl длиной 649 п. н. На ветвях филограммы приведены имена образцов. Филограмма Neighbor-Joining построена с помощью метода (p-dis-tance) с bootstrap-поддержкой — 1000 реплик в программе MEGA 7. Место сбора образца помечено фигурой перед именем: • Лаокай, О Шонла,  Иэньбай, О Куангнинь,  Бакзянг. Описание образцов ДНК комаров, характеризующих индивидуальных особей, приведено в табл. 1. Дерево построено по методу ближайших соседей (NJ). Величина бутстрэп-поддержки кластеризации таксонов указана рядом с узлами филограммы. Дерево построено в масштабе — число нуклеотидных замен на сайт. Длина контрольного отрезка соответствует 1 % нуклеотидной изменчивости. В качестве контроля приведены нуклеотидные последовательности комаров Anopheles из группы hyrcanus и видовых комплексов Anopheles vagus и Anopheles barbirostris. Для выделения этих последовательностей на филограмме показаны GenBank ID. В качестве внешней группы взята последовательность coxl Drosophila yakuba Fig. 1. Cladistic analysis of mosquitoes of the genus Anopheles obtained on the basis of the analysis of the variability of a fragment of the coxl gene, 649 bp in length . The names of the samples are given on the branches of the philogram. The Neighbor-Joiningphilogram was built using the (p-distance) method with the bootstrap support — 1000 replicas. The phylogram was constructed in MEGA 7. The sample collection locality is marked with a figure in front of the name: • Laocai, О Shonla,  Yenbai, О Kuangnin,  Bakjiang. The Description of DNA samples of mosquitoes, see Table 1. The tree is constructed by the method (Neighbor-Joining). The bootstrap value of cluster support is shown next to the nodes of the phylogram. The tree is built in scale of the number of nucleotide replacements per site. The length of the control segment corresponds to 1% of nucleotide variability. Typical nucleotide sequences of the Anopheles of the hyrcanus group and Anopheles vagus species complex and Anopheles barbirostris species complex are given as controls. To mark these sequences are on the phylogram, the GenBank ID is given. The sequence of Drosophila yakuba coxl of is taken as an external group

24

генетические основы эволюции экосистем

Рис. 2. Медианная сеть митохондриальных гаплотипов An. Cinensis, построенная в программе PopArt на основании нуклеотид-ного полиморфизма фрагмента гена cox1 длиной 649 п. н. Штрихи отмечают мутационные события. Размер кружков пропорционален числу синонимичных гаплотипов Fig. 2. Median network of the mitochondrial haplotypes of ап. cinensis, constructed in the program PopArt on the basis of the nucleotide polymorphism of the cox1 gene fragment, 649 bp in length. Mutations are indicated by strokes. The size of the circles is proportional to the number of synonymous haplotypes

поддержки на филограмме. Вопрос о существовании подвидов An. sinensis и возможных различий в их биологических особенностях требует дальнейших исследований. На рис. 1 заметна дифференциация на две группы в пределах кластера гаплотипов 1 An. sinensis. Для более подробного исследования внутривидовой дивергенции An. sinensis мы построили медианную сеть митохондриальных гаплотипов (рис. 2).

Полученный результат подтверждает начавшуюся дифференциацию популяции на две формы. Форма сети выделяет гаплотип A-5 и группу производных от него гаплотипов. Такая звездчатая структура может возникнуть в случае недавнего расселения и роста численности этой формы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В горных местообитаниях Куангниня и Бакзянга видовое разнообразие комаров рода Anopheles снижено, но характеризуется наличием специфических видов. An. barbirostris найден только в Куангнине, An. vagus — только в Бак-зянге и Шонле. Преимущественная локализация комаров с гаплотипом A-5 и родственными ему гаплотипами в городской застройке Лаокая и Иэньбай позволяет предположить, что мы наблюдаем начало формирования городской антропофильной популяции у An. sinensis.

Как известно, виды — двойники комплекса Anopheles hyrcanus, а именно An. sinensis и An. lesteri, являются главными переносчиками малярии в Юго-Восточной Азии и в Китае. Среди этих видов наиболее антропо-фильным считается An. lesteri, который рассматривается как главный переносчик Plasmodium vivax в Центральном Китае. Этот вид больше охотится на людей и имеет более высокий HBI (human blood index — про-

порция крови у самок комаров, полученной от человека) [20]. Однако в последнее время второстепенная роль An. sinensis как переносчика Plasmodium vivax пересмотрена. Показано, что благодаря An. sinensis в 2006 г. возникла эпидемия трехдневной малярии в рисосеящих районах Центрального Китая [21]. По-видимому, степень антропофильности An. sinensis и, соответственно, его эпидемиологическое значение могут подвергаться отбору и варьировать в локальных популяциях.

Наличие основного переносчика малярии An. si-nensis в четырех локалитетах Северного Вьетнама из пяти изученных позволяет сделать вывод о сохраняющейся возможности местной передачи трехдневной малярии на территории Северного Вьетнама. Благодарности

Работа выполнена при финансовой поддержке проекта (АААА-А16-П6Ш610180-3)«Изучение изменчивости автономных генетических элементов насекомых и разработка маркеров нестабильности генома» (договор № 0112-2016-0001).

ЛИТЕРАТУРА

1. Fang Y, Shi WQ, Zhang Y. Molecular phylogeny of Anopheles hyrcanus group members based on ITS2 rDNA. Parasit Vectors. 2017;10(1):417. doi: 10.1186/ s13071-017-2351-x.

2. Fang Y, Shi WQ, Zhang Y. Molecular phylogeny of Anopheles hyrcanus group (Diptera: Culicidae) based on mtDNA COI. Infect Dis Poverty. 2017;6(1):61. doi: 10.1186/s40249-017-0273-7.

3. Zhang HG, Lv MH, Yi WB, et al. Species diversity can be overestimated by a fixed empirical threshold: insights from DNA barcoding of the genus Cletus (Hemiptera:

Coreidae) and the meta-analysis of COI data from previous phylogeographical studies. Mol Ecol Resour. 2017;17(2):314-323. doi: 10.1111/1755-0998.12571.

4. Hebert PD, Cywinska A, Ball SL, deWaard JR. Biological identifications through DNA barcodes. Proc Biol Sci. 2003;270( 1512):313-321. doi: 10.1098/rspb.2002.2218.

5. Khrabrova NV, Andreeva YV, Sibataev AK, et al. Mosquitoes of Anopheles hyrcanus (Diptera, Culicidae) Group: Species Diagnostic and Phylogenetic Relationships. Am J Trop Med Hyg. 2015;93(3):619-622. doi: 10.4269/ajtmh.14-0207.

6. Wang G, Li C, Guo X, et al. Identifying the main mosquito species in China based on DNA barcoding. PLoS one. 2012;7(10): e47051. doi: 10.1371/journal. pone.0047051.

7. Cywinska A, Hunter FF, Hebert PD. Identifying Canadian mosquito species through DNA barcodes. Med Vet Entomol. 2006;20(4):413-424. doi: 10.1111/j.1365-2915.2006.00653.x.

8. Chan A, Chiang LP, Hapuarachchi HC, et al. DNA barcoding: complementing morphological identification of mosquito species in Singapore. Parasit Vectors. 2014;7:569. doi: 10.1186/s13071-014-0569-4.

9. Feng X, Huang L, Lin L, et al. Genetic diversity and population structure of the primary malaria vector Anopheles sinensis (Diptera: Culicidae) in China inferred by coxl gene. Parasit Vectors. 2017;10(1):75. doi: 10.1186/s13071-017-2013-z.

10.Choochote W, Min GS, Intapan PM, et al. Evidence to support natural hybridization between Anopheles si-nensis and Anopheles kleini (Diptera: Culicidae): possibly a significant mechanism for gene introgression in sympatric populations. Parasit Vectors. 2014;7:36. doi: 10.1186/1756-3305-7-36.

11.Liang J, Sharakhova MV, Lan Q, et al. A standard cytogenetic map for Anopheles sinensis and chromosome arm homology between the subgenera Anopheles and Cellia. Med Vet Entomol. 2014;28 Suppl 1:26-32. doi: 10.1111/mve.12048.

12.Liang J, Cheng B, Zhu G, et al. Structural divergence of chromosomes between malaria vectors Ano-

Ф Информация об авторах

Ву тхи Хыонг — аспирант. Московский государственный областной университет, Москва. E-mail: vuhuongmgou@gmail.com.

Борис Витальевич Андрианов — д-р биол. наук, ведущий научный сотрудник. Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова Российской академии наук, Москва. E-mail: andrianovb@mail.ru.

татьяна Викторовна Горелова — канд. биол. наук, старший научный сотрудник. Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова Российской академии наук, Москва. E-mail: tagor08@mail.ru.

михаил Иванович Гордеев — д-р биол. наук, заведующий кафедрой. Московский государственный областной университет, Москва. E-mail: gordeev_mikhail@mail.ru.

pheles lesteri and Anopheles sinensis. Parasit Vectors. 2016;9(1):608. doi: 10.1186/s13071-016-1855-0.

13. Dhiman S, Yadav K, Rabha B, et al. Evaluation of Insecticides Susceptibility and Malaria Vector Potential of Anopheles annularis s. l. and Anopheles vagus in Assam, India. PLoS One. 2016;11(3): e0151786. doi: 10.1371/journal.pone.0151786.

14. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. — М.: Мир, 1984. [Maniatis T, Fritch EF, Sambrook J. Molecular cloning. Moscow: Mir; 1984. (In Russ.)]

15. Sinka ME, Bangs MJ, Manguin S, et al. The dominant Anopheles vectors of human malaria in the Asia-Pacific region: occurrence data, distribution maps and bionomic precis. Parasit Vectors. 2011;4:89. doi: 10.1186/1756-3305-4-89.

16. Folmer O, Black M, Hoeh W, et al. DNA primers for amplification of mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I from diverse metazoan invertebrates. Mol Mar Biol Biotechnol. 1994;3(5):294-299.

17. Kumar S, Stecher G, Tamura K. MEGA7: Molecular Evolutionary Genetics Analysis Version 7.0 for Bigger Datasets. Mol Biol Evol. 2016;33(7):1870-1874. doi: 10.1093/molbev/msw054.

18. Leigh JW, Bryant D, Nakagawa S. popart: full-feature software for haplotype network construction. Methods Ecol Evol. 2015;6(9):1110-1116. doi: 10.1111/2041-210x.12410.

19. Clement M, Posada D, Crandall KA. TCS: a computer program to estimate gene genealogies. Mol Ecol. 2000;9(10):1657-1659. doi: 10.1046/j.1365-294x.2000.01020.x.

20. Gu ZC, Shang LY, Chen JS, et al. The role of Anopheles anthropophagus in malaria transmission in Xinyang City of Henan Province. Zhongguo Ji Sheng Chong Xue Yu Ji Sheng Chong Bing Za Zhi. 2001;19(4):221-224.

21. Zhu G, Xia H, Zhou H, et al. Susceptibility of Anopheles sinensis to Plasmodium vivax in malarial outbreak areas of central China. Parasit Vectors. 2013;6:176. doi: 10.1186/1756-3305-6-176.

Information about the authors

Vu Thi Huong — Researcher. Moscow Region State University. Moscow, Russia. E-mail: vuhuongmgou@gmail.com.

Boris V. Andrianov - PhD, Senior Researcher. Vavilov Institute of General Genetics, Russian Academy of Sciences. Moscow, Russia. E-mail: andrianovb@mail.ru.

tatiana V. Gorelova — PhD, Researcher. Vavilov Institute of General Genetics, Russian Academy of Sciences. Moscow, Russia. E-mail: tagor08@mail.ru.

Michail I. Gordeev — PhD, Head of the Department. Moscow Region State University. Saint Petersburg, Russia. E-mail: gordeev_mikhail@ mail.ru.