Определение уровня иммуноглобулинов у больных туберкулезом легких

2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue

Иммунология туберкулеза Immunology of tuberculosis

Результаты. Изучение показало, что особенности иммунологических реакций при активных туберкулемах связаны со снижением фагоцитарной и функционально-метаболической активности моноцитов (р < 0,05), повышением экспрессии на них CD11b и HLA-DR (р < 0,05), увеличением количества гранулоцитов с усилением их фагоцитарной активности, повышением экспрессии CD11b и CD11c (р < 0,05). Клеточный иммунитет у больных с активной туберкулемой характеризовался увеличением популяции лимфоцитов в периферической крови (р < 0,05), повышением экспрессии CD25 и HLA-DR на Т-лимфоцитах, CD95 — на Т-хелперах, снижением числа №К-, убТ-клеток. Т-лимфоцитов. Активность туберкулемы сопряжена с увеличением количества №КТ-лимфоцитов (р < 0,05) и Тreg-клеток (р < 0,05). Гуморальный иммунитет в этой подгруппе отличался подъемом концентрации 1Ь-4, МШ и снижением уровня ЮТа (р < 0,05).

Туберкулема в фазе стихающей и умеренной активности сопровождалась снижением фагоцитарной и функционально-метаболической активности моноцитов (р < 0,05) с понижением экспрессии HLA-DR, увеличением экспрессии CD25 и СD95 на Т-лимфоцитах и Т-хелперах (р < 0,05), а также снижением экспрессии HLA-DR на Т-лимфоцитах (р < 0,05). У этих пациентов выявлено значительное снижение количества NK-кпеток и увеличение убТ-клеток (р < 0,05), сопровождаемое повышением количества Тreg-кпеток и индекса CD4+/CD8+ (р < 0,05). Цитокиновый профиль отличался увеличением концентрации ^-1р, М№ (р < 0,05), Ш-2 (более чем в 600 раз в сравнении с контролем, в 2,9 раза в сравнении с данными пациентов, имеющих активные туберкулемы, р < 0,05), снижением №N7 и ТОТа (р < 0,05).

Заключение. С учетом выявленных изменений иммунологических показателей разработаны критерии определения активной туберкулемы легкого — увеличение экспрессии CD11b, HLA-DR на моноцитах, CD11b — на ней-трофилах, туберкулемы в фазе умеренной или стихающей активности — увеличение экспрессии CD25 на Т-хелперах, снижение HLA-DR на Т-лимфоцитах и понижение продукции О22- гранулоцитами. Применение множественного регрессионного анализа позволило установить зависимость, позволяющую оценить фазу активности туберкуле-мы на основании уравнения, включающего оценку количества CD3-, CD4-, CD19-лимфоцитов, ^К-клеток, а также экспрессии HLA-DR на Т-лимфоцитах.

РОЛЬ ОКСИДА АЗОТА В ИММУНОПАТОГЕНЕЗЕ ФИБРОЗНО-КАВЕРНОЗНОГО ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ

Дьякова М.Е., Эсмедляева Д.С, Перова Т.Л.

ФГБУ«Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Оксид азота (N0) участвует в регуляции разнообразных метаболических реакций, обеспечивающих жизнеспособность и функциональную активность клеток. Оксид азота может выступать также и как модулятор иммунного ответа.

Цель. Изучить взаимосвязь уровня N0 с продукцией цитокинов у больных фиброзно-кавернозным туберкулезом легких (ФКТ).

Материалы и методы. У 29 больных ФКТ в мононукле-арах (мн) и нейтрофилах (нф) крови изучали генерацию

стабильных метаболитов NO — по концентрации общего (NO2-/NO3-) и эндогенного (NO2-) нитрита с помощью набора Total NO/Nitrite/Nitrate (R&D Systems, Канада). Уровень индуцибельной синтазы оксида азота (iNOS) — набором Human iNOS Immunoassay (USCN, КНР). Концентрацию цитокинов (IL-10, IL-17, IL-18), IFNy, TNFa — в цельной крови, индуцированных PPD и не стимулированных, определяли с использованием тест-системы производства «Вектор-Бест» (Новосибирск).

Результаты. У больных ФКТ выявлено снижение генерации общего и эндогенного нитрита мононуклеарами и ней-трофилами (р = 0,000...). Уровень экспрессии iNOS этими клетками определялся в пределах референсного диапазона.

Интенсивность базальной продукции цитокинов была разнонаправленной: повышение IL-18 (р = 0,0015), снижение TNFa (р = 0,04) и сохранение в пределах референсного диапазона продукции IL-10, IL-17 и IFNy. Интенсивность секреции цитокинов, индуцированных специфическим антигеном PPD, была также разнонаправленной: рост IFNy (р = 0,001) и IL-18 (р = 0,0001) наряду со снижением уровней TNFa (р = 0,048) и IL-10 (р = 0,0028). При этом уровень секреции IL-17 не отличался от рефересного.

Выявлена ассоциированность между показателями нитрозилирующего стресса и продукцией цитокинов: прямая зависимость между экспрессией iNOSн и продукцией IL-10 (r = 0,80; p = 0,01), обратная — с уровнем IL-17_PPD (r = -0,91; p = 0,0015); обратная корреляция между экспрессией iNOS мн и продукцией IL-17 (r = -0,80; p = 0,03), TNFa (r = -0,94; p = 0,005), IL-17_PPD (r = -0,78; p = 0,04) и прямая между экспрессией iNOS мн и уровнем IFNy (r = 0,79; p = 0,02); обратная связь между генерацией NO2-мн и продукцией IL-17 (r = -0,84; p = 0,004). Между базальной продукцией IFNy и TNFa выявлена обратная корреляция (r = -0,80; p = 0,03).

Заключение. Отсутствие синергизма между базальной продукцией IFNy и TNFa отражает их несостоятельность в индуцировании цитотоксического уровня NO. IFNy один может индуцировать только нецитотоксические концентрации NO. Обнаруженный дефицит продукции TNFa может отражать функциональную инертность иммуноцитов и, как следствие, хронизацию и прогрессирование туберкулезного процесса. Выявленные ассоциации между продукцией цитокинов и показателями нитрозилирующего стресса отражают их важную роль в иммунопатогенезе гиперхронического специфического процесса. Отмеченное у больных ФКТ снижение продукции эндогенного и общего нитрита может свидетельствовать об активации Th2, при которых ингибируется экспрессия iNOS и возрастает активность аргиназы, катаболизирующей субстрат для синтеза NO.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ УРОВНЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ У БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ

Истомина Е.В., Старшинова А.А., Чернохаева И.В., Назаренко М.М., Ланда С.Б., Филатов М.В., Яблонский П.К.

ФГБУ«Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Поиск дополнительных критериев определения активности туберкулезной инфекции является важным для возможности прогноза течения и развития

«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017

Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya

заболевания. Формирование эффективного противотуберкулезного иммунного ответа сопряжено с формированием иммунных комплексов, содержащих исключительно IgG3. Наличие иммунных комплексов, состоящих в основном из IgE, могут способствовать прогрессирова-нию болезни.

Цель. Определение уровня и изотипа иммуноглобулинов IgG и IgE у больных туберкулезом легких.

Материалы и методы. За период с 2015-2016 гг. на базе ФГБУ «СПбНИИФ» Министерства здравоохранения РФ обследовано 50 больных туберкулезом легких с бакте-риовыделением. Комплекс диагностики включал оценку клинической симптоматики, рентгенологические и бактериологические методы. Определение иммунных комплексов, содержащих IgE, IgG3, IgG1, IgG1 + IgG3, IgG1 + IgE (с помощью метода динамического светорассеяния). Обработка материала проводилась с использованием программы Statistica 7.0. Мы применили критерий хи-квадрат (х2). Различия считались достоверными при р < 0,05.

Результаты. Иммунные комплексы определялись у всех пациентов в рассеивании 7,25±0,34%, так же как IgG1 - 4,3±0,25% и IgE - 3,48%, в 98% (49/50) были IgG3 — 3,2%±0,37%. Фракции иммуноглобулинов G и E имели место в 88,0% (44\50) IgG1 + IgG3 — 3,76% и несколько реже в 74,0% (37/50) IgG1 + E — 5,71%, тогда как имели место только в 30,0% (15/50) IgG3 + IgE — 2,09.

Заключение. Определение в одинаковом проценте случаев IgG1 и IgG3 (100%), также как IgE (100%) может свидетельствовать о полноправном запуске аллергической реакции при туберкулезе, что может объяснять появление в IgG1 + E и IgG3 + E комплексов. Полученные данные могут объяснять запуск иного механизма, нежели только инфекционный, в развитии туберкулеза.

МНОГОПАРАМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ТЯЖЕСТЬЮ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ

Никитина И.Ю.1, Пантелеев А.В.1, Ганусов В.В.2, Лядова И.В.1

1ФГБНУ «Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза», Москва, Россия 2 Университет Теннесси, Ноксвилл, Теннесси, США

Исследования в области иммунопатогенеза туберкулеза (ТБ) являются актуальными и направлены на выяснение роли различных популяций клеток врожденного и адаптивного иммунитета в развитии противотуберкулезного ответа. Изменения соотношения между различными параметрами иммунного ответа являются факторами, влияющими на течение инфекции, и могут быть использованы для оценки активности ТБ и эффектности проводимой терапии.

В связи с этим целью исследования явился многопараметрический анализ различных популяций иммунных клеток и анализ их взаимосвязи с особенностями течения ТБ.

Материалы и методы. В исследование было включено 50 больных ТБ легких. С помощью проточной цито-метрии были получены данные о 54 иммунологических показателях: Т- и B-лимфоцитах (CD4+, CD8+, CD19+), NK-клеток (CD16/56+); лимфоцитах CD4, продуцирующих различные комбинации цитокинов IFNy, TNFa и IL-2 и других. Тяжесть ТБ определяли, оценивая фор-

му легочной патологии, уровень бактериовыделения, степень распространенности и деструкции в легких и тяжесть интоксикации.

Для статистического анализа применяли корреляционный метод, кластерный анализ, множественную линейную регрессию. Точность статистических результатов подтверждали, используя метод «ресемплинга» данных и проверки статистических гипотез на 1000 псевдовыборках (метод "bootstrapping").

Результаты. Корреляционный анализ с критическим уровнем p-value = 0,006 выявил, что основными иммунологическими коррелятами клинических параметров были популяции лейкоцитов. В частности, процент лимфоцитов обратно коррелировал со всеми клиническими проявлениями ТБ, кроме формы легочной патологии. Наиболее достоверными были прямые корреляции между процентом нейтрофилов, степенью деструкции в легких и уровнем бактериовыделения (p = 2 х 10-5 и p = 0,01 соответственно). Кластерный анализ с использованием метода "bootstrapping" подтвердил, что ассоциации между популяцией нейтрофилов, степенью деструкции легочной ткани и уровнем бактериовыделения сохраняются в псевдовыборках (70 и 50% соответственно). Множественная регрессия показала, что одним из основных факторов, влияющих на изменение числа нейтрофилов в крови является степень деструкции в легких.

Заключение. Тяжесть ТБ не определяется недостаточностью «протективного» иммунного ответа лимфоцитов Th1, а возможно зависит от патологической иммуноре-активности организма, ассоциированной с повышенным содержанием популяций нейтрофилов.

Работа поддержана грантом РНФ № 15-15-00136.

ПОПУЛЯЦИИ ЛИМФОЦИТОВ Th1, Th17, Th1/Th17 ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЛЕГКИХ

Пантелеев А.В., Никитина И.Ю., Горелова Л.А., Космиади Г.А., Лядова И.В.

ФГБНУ«Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза», Москва, Россия

Введение. Протекция против туберкулеза (ТБ) была первоначально ассоциирована с генерацией лимфоцитов Th1 и продукцией ими IFNy. Более поздние исследования показали вклад других популяций Т-лимфоцитов и продуцируемых ими цитокинов в контроль над микобактери-ями (Mtb), в частности — лимфоцитов Th17 и IL-17. При этом некоторые исследования поставили под вопрос роль и механизмы протективной активности лимфоцитов Th1 при ТБ, а при ряде других патологий были описаны популяции клеток, коэкспрессирующих цитокины типа 1 и IL-17, а также рецепторы, характерные для популяций Th1 и Th17. Роль и относительный вклад этих популяций в противотуберкулезный иммунный ответ и патологию при ТБ остается не до конца установленной.

Цель. Фенотипическая и функциональная характеристика лимфоцитов Th1, Th17 и Th1/Th17 и анализ количественных параметров их ответа при туберкулезе легких у людей.

Материалы и методы. В исследование были включены больные ТБ легких, проходящие лечение в ФГБНУ «ЦНИИТ», здоровые люди, находящиеся в контакте с больными ТБ, здоровые доноры, не имеющие установленных контактов с больными ТБ. Клетки крови стимулировали антигенами Mtb и с помощью проточной