Диагностика сывороточной активности протеолитических ферментов у пациенток перименопаузального периода с гиперпластическими процессами эндометрия

ГИНЕКОЛОГИЯ

Диагностика сывороточной активности протеолитических ферментов у пациенток перименопаузального периода с гиперпластическими процессами эндометрия

Н.В.Стрижова, А.С.Гавриленко, А.А.Чарчоглян, А.П.Коробейников. С.А.Хлынова, И.К.Сираканян, Е.А.Рейснер

Российский государственный медицинский университет, кафедра акушерства и гинекологии лечебного факультета с курсом акушерства и гинекологии вечернего отделения, Москва

|В статье приведены данные об активности ММП-2 и ММП-9 в сыворотке крови у пациенток перименопаузального периода с гиперпластическими процессами эндометрия. В результате исследования выявлены высокие показатели для ММП-2 и ММП-9 у всех больных гиперпластическими процессами эндометрия, что свидетельствует о том, что повышение их активности можно рассматривать как маркер патологического процесса в эндометрии. Ключевые слова: матриксные металлопротеиназы, гиперпластические процессы эндометрия

Diagnostics of serum activity of proteolytic enzymes in perimenopausal women with hyperplastic processes of endometrium

N.V.Strizhova, A.S.Gavrilenko, A.A.Charchoglyan, A.P.Korobeynikov, S.A.Khlynova, I.K.Sirakanyan, E.A.Reisner

Russian State Medical University, Department of Obstetrics and Gynecology of Medical Faculty with the Course of Evening Department

I In the article there are cited the data about the activity of MMP-2 and MMP-9 in the blood serum of patients in perimenopauzal period with the hyperplastic processes of endometrium. As a result of the studies there were revealed high indices for MMP-2 and MMP-9 in all patients with the hyperplastic processes of endometrium, which attests to the fact that an increase in their activity can be considered as the marker of a pathologic process in the endometrium. Key words: matrix metalloproteinases, hyperplastic processes of endometrium

Гиперпластические процессы эндометрия остаются одной из наиболее актуальных проблем современной гинекологии в связи с неуклонным ростом заболеваемости раком эндометрия. Под гиперпластическими процессами эндометрия (ГПЭ) понимают патологическую пролиферацию железистого и стромального компонентов слизистой оболочки матки [1]. Этот вид патологии занимает значительное место в структуре гинекологических заболеваний.

ГПЭ возможны в любом возрасте, однако их частота значительно возрастает к периоду перименопаузы. По мнению

Для корреспонденции:

Рейснер Екатерина Алексеевна, аспирант кафедры акушерства и гинекологии лечебного факультета Российского государственного медицинского университета

Адрес: 119501, Москва, ул. Нежинская, 3, родильный дом №3 Телефон: (495) 442-1797 E-mail: reisner12@mail.ru

Статья поступила 02.02.2009 г., принята к печати 08.04.2009 г.

большинства авторов, рост заболеваемости гиперплазией эндометрия связан как с увеличением продолжительности жизни, так и с неблагоприятной экологической обстановкой, ростом числа хронических соматических заболеваний и снижением иммунитета у женщин.

Гиперпластические процессы эндометрия характеризуются изменением эпителиально-мезенхимальных отношений вследствие нарушения взаимосвязи между его многочисленными клеточными элементами. В гиперплазированном эндометрии происходит увеличение площади железистого компонента с соответствующим уменьшением площади стромального. На клеточном и тканевом уровне это проявляется преобладанием процессов, связанных с клеточной пролиферацией, глобальной перестройкой экстрацеллюлярного матрикса (ЭЦМ).

Гистологическая характеристика гиперплазии эндометрия основывается на оценке таких критериев, как структурные нарушения и плотность расположения желез, соотно-

Н.В.Стрижова и др. / Вестник РГМУ, 2009, №4, с. 91-93

шение железистого и стромального компонентов эндометрия, а также цитологические изменения его железистого эпителия [2]. При сопоставлении функциональной морфологии различных клеточных элементов составных компонентов эндометрия выявлено, что рост, размножение и специфическое функционирование железистого эпителия регулируются фибробластами стромы через продукты их специфической секреции: коллаген и эластин, протеогликаны и гликопротеины [3].

Коллаген, эластин, протеогликаны и гликопротеины являются структурными белками ЭЦМ, который играет ключевую роль в клеточной физиологии, обеспечивает окружение для клеточной миграции, деления, дифференцировки и во многих случаях - судьбу клетки: клеточное выживание или клеточную смерть [4].

Тончайший контроль реорганизации и гомеостаза ЭЦМ происходит при участии специфического класса протеолити-ческих ферментов, известных как матриксные металлопро-теиназы (ММП).

Семейство ММП - это группа родственных по структуре цинкзависимых эндопептидаз, деградирующих ЭЦМ [5].

Матриксные металлопротеиназы считаются ключевыми эффекторами тканевого ремоделирования, так как эти белки экспрессируются в тканях на всех этапах онтогенеза. Их экспрессия тонко регулируется в условиях интенсивной тканевой перестройки. ММП во многом определяют активность многих биологически активных молекул, таких как цитокины [5], фактор некроза опухолей-а, ингибитор проте-аз - антитрипсин [6] и.т.д.

ММП-2 и ММП-9 являются наиболее распространенными представителями этого семейства, экспрессия которых доказана практически во всех тканях [7]. Эти ферменты способны расщеплять желатины (денатурированные коллагены), коллагены 1, 3, 4, 5, 7, 10, 11, 14 типов, фибронектин, ламинин, аггрикан, эластин, витронектин, большой тенас-цин-С-белок. Способность расщеплять желатин позволяет желатиназам дополнять коллагеназы в процессах деградации фибриллярных коллагенов [8].

Исследования последних лет позволили открыть новые функции металлопротеиназ в опухолевой прогрессии. Считается, что именно благодаря способности гидролизо-вать фибриллярный коллаген 4 типа ММП-2 и ММП-9 инициируют инвазивные процессы [9]. Повышенная продукция ММП-2 опухолями является индикатором степени их злокачественного развития. Изменение уровня ММП-9 коррелирует со степенью распространенности коронарного атеросклероза. Установлена связь между уровнем ММП-9 и тяжестью течения ХОБЛ [10]. Высокая активность ММП-2 и ММП-9 ассоциирована с ангиогенезом [11]. Сравнительно небольшая молекулярная масса и растворимость в биологических жидкостях обеспечивают им способность попадать в сыворотку крови в количествах, пропорциональных тканевой экспрессии. Низкий уровень их экспрессии ассоциируется с бесплодием, привычным невынашиванием беременности; снижение их сывороточной активности характерно для хронического эндометрита, сопровождающегося бесплодием, а нормализация этих показателей отражает клиническое выздоровление пациенток [7].

Целью настоящего исследования является изучение активности ММП-2 и ММП-9 в сыворотке крови у пациенток пе-рименопаузального периода с гиперпластическими процессами эндометрия.

Пациенты и методы

В исследование были включены 2 группы женщин пери-менопаузального периода (в возрасте от 45 до 52 лет). Основную группу составили 60 пациенток, у которых были выявлены гиперпластические процессы эндометрия. В контрольную группу вошли 10 практически здоровых пациенток.

Активность ММП-2 и ММП-9 в сыворотке крови определялась методом субстратного электрофореза в 8% поли-акриламидном геле [9]. Сыворотки разводились в буфере для образца (62,5 мМ ТпэН^, 2% додецилсульфат натрия, 10% глицерин, рН = 6,8), наносились на гель, содержащий 8% смеси акриламида/бис-акриламида (37,5:1), 0,125 мМ ТпэН^, рН = 6,8, 0,1% додецилсульфат натрия, и подвергались электрофоретическому разделению при постоянном токе 30 мА. После этого гель дважды по 30 мин при комнатной температуре отмывался в инкубационном буфере 1 (5мМ ТпэНС!, 2,5% Тритон Х-100, рН = 7,5), выдерживался 16 ч при 37°С в инкубационном буфере 2 (5 мМ ТпэНС!, рН = 7,5), окрашивался 2% раствором красителя Кумасси синего и затем отмывался. Далее гель выдерживался 2 ч при комнатной температуре в дистиллированной воде и высушивался.

Результаты исследования и их обсуждение

Исследование активности ММП-2 и ММП-9 в сыворотках крови здоровых женщин в перименопаузе позволило установить нормальные значения активности этих ферментов в данной возрастной группе. Активность ММП-2 и ММП-9 у всех 10 пациенток контрольной группы составила «1+».

При сравнении активности ММП-2 и ММП-9 в сыворотках крови пациенток с установленным диагнозом «Гиперпластический процесс эндометрия» с теми же показателями у пациенток контрольной группы было зафиксировано увеличение показателей металлопротеиназной активности у всех женщин основной группы (в 100% случаев) по сравнению с контрольной (рис. 1).

Увеличение показателей активности ММП-2 до «2+» отмечалось у 31 пациентки основной группы (в 51,6% случа-

— -

— 1

Рис. 1. Образцы гелей после электрофоретического разделения сыворотоки пациенток с ГПЭ. Светлые полосы - активные ММП-2 и ММП-9. NN -образцы сывороток контрольной группы.

Диагностика сывороточной активности протеолитических ферментов у пациенток перименопаузального периода

Активность ММП-2 при ГПЭ

Активность ММП-9 при ГПЭ

3+

2+

Рис. 2. Активность ММП-2 и ММП-9 при ГПЭ.

ев). У оставшихся 29 пациенток (48,4%) активность ММП-2 составила «3+». Аналогичные данные были получены относительно активности ММП-9 в сыворотке крови: активность ММП-9, равная «2+», наблюдалась у 26 пациенток основной группы (в 43,3% случаев), активность ММП-9, равная « 3+», наблюдалась у 34 пациенток (т.е. в 56,7% случаев) (рис. 2).

Выводы

Повышение сывороточной активности ММП-2 и ММП-9 у всех пациенток с выявленными гиперпластическими процессами эндометрия, скорее всего, отображает тот факт, что при гиперплазии эндометрия, в отличие от неизмененной слизистой матки, ультраструктурные особенности клеточных элементов свидетельствуют о преобладании процессов, направленных на размножение клеток и выработку внеклеточных коллагеновых волокон. Таким образом, происходит уменьшение площади стромального компонента с соответствующим увеличением площади железистого.

Матриксные металлопротеиназы, как эффекторы тканевого ремоделирования, участвуют в перестройке экстрацел-люлярного матрикса при гиперпластических процессах эндометрия, и, следовательно, повышение их активности можно рассматривать как маркер патологического процесса в эндометрии.

Литература

1. Савельева Г.М., Бреусенко В.Г. Гинекология: Учебное пособие. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - С.1-430.

2. Чернуха Г.Е. Аденоматозная и железистая гиперплазия эндометрия в репродуктивном возрасте: Автореф. дис. ... д.м.н. - М., 1999. - 27 с.

3. Кондриков Н.И. Структурно-функциональные основы гиперпластических изменений эндометрия женщин: Автореф. дис. ... к.м.н. - М., 1991. - 45 с.

4. Curry T.E., Osteen K.G. The matrix metalloproteinase system: changes? And impact through the ovarian and uterine reproductive cycle //J. Endocrinol. Rev. -2003. - V.24. - P.428-465.

5. Shonback U., Mach F.T. Lymphocytes induce endothelial cell matrix metalloproteinase expression by a CD40L-dependent mechanism: implications for tubule formation //Am. J. Pathol. - 1999. - V.154(1). - P.229-238.

6. Hulboy D.L., Rudolf L.A., Matrisian L.V. Progestin-inflammatory cytokine interactions affect matrix metalloproteinase-1 and -3 expression in term decidual cells: implications for treatment of chorioamnionitis-induced preterm delivery //J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2008. - V.93 (1). - P.252-259.

7. Соболева Г.М., Шуршалина А.В., Сухих Г.Т. Активность матриксных металло-протеиназ-2 и -9 в сыворотке крови // Бюл. экспер. биол. и мед. - 2006. -Т.142. - С.210-213.

8. Хасигов П.З., Подобед О.В., Кцоева С.А. Металлопротеиназы матрикса нормальных тканей человека // Биохимия. - 2001.- Т.66. - С.167-179.

9. Клишо Е.В., Кондакова И.В., Чойнзонов Е.Л. Прогностическая значимость протеаз у больных плоскоклеточными карциномами головы и шеи //Бюл. СО РАМН. - 2005. - №2 (116). - С.82-91.

10. Veselovskaya M.V. Polymorphic variants of a surfactant protein C gene in patients with chronic obstructive pulmonary disease // Eur. Respir. J. - 2006. - V.28. - P.523.

11. Deryugina E.I., James P. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2007. - V.18. -№104(51). - P.20262-20267.

Информация об авторах:

Стрижова Нина Владимировна, доктор медицинских наук, профессор кафедры акушерства и гинекологии лечебного факультета Российского государственного медицинского университета Адрес: 119501, Москва, ул. Нежинская, 3, родильный дом №3 Телефон: (495) 442-1797

Гавриленко Александр Сергеевич, кандидат медицинских наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии лечебного факультета Российского государственного медицинского университета Адрес: 119501, Москва, ул. Нежинская, 3, родильный дом №3 Телефон: (495) 442-1797

Чарчоглян Анжелика Александровна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры акушерства и гинекологии лечебного факультета Российского государственного медицинского университета Адрес: 119501, Москва, ул. Нежинская, 3, родильный дом №3 Телефон: (495) 442-1797

Коробейников Алексей Петрович, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры акушерства и гинекологии лечебного факультета Российского государственного медицинского университета Адрес: 119501, Москва, ул. Нежинская, 3, родильный дом №3 Телефон: (495) 442-1797

Хлынова Светлана Анатольевна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры акушерства и гинекологии лечебного факультета Российского государственного медицинского университета Адрес: 115093, Москва, ул. Павловская, 25, гКб №4 Телефон: (495) 955-6592

Сираканян Изабелла Кароевна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры акушерства и гинекологии лечебного факультета Российского государственного медицинского университета Адрес: 119501, Москва, ул. Нежинская, 3, родильный дом №3 Телефон: (495) 442-1797