ПРОМОТОРЫ С ПОВЫШЕННОЙ ЭФФЕКТИВНОСТЬЮ ТРАНСКРИПЦИИ

1. Последовательность ДНК, обеспечивающая инициацию транскрипции в клетках метилотрофных дрожжей, которая содержит по меньшей мере одну последовательность промотора, полученную из промотора дикого типа метилотрофных дрожжей, причем эффективность транскрипции этого промотора в сравнении с эффективностью промотора дикого типа повышена вследствие модификации криптического сайта связывания ATF/CREB, YAP, C/EBP, или AP1 или G-бокса, при этом модифицированная последовательность промотора характеризуется вставкой, делецией и/или заменой по меньшей мере одного основания с образованием палиндромизованной последовательности, содержащей от 8 до 20 оснований, отличающейся от полностью палиндромной последовательности не более чем двумя основаниями в цепи.
2. Последовательность ДНК, обеспечивающая инициацию транскрипции в клетках метилотрофных дрожжей, которая содержит по меньшей мере одну последовательность промотора, полученную из промотора дикого типа метилотрофных дрожжей, в которой присутствует палиндромная последовательность ДНК, полученная из одной из последовательностей SEQ ID No.: 1-SEQ ID No.: 23 посредством вставки, делеции и/или замены по меньшей мере одного основания с образованием палиндромизованной последовательности, которая способна связывать фактор транскрипции класса bZip.
3. Последовательность ДНК по п.2, отличающаяся тем, что указанная последовательность промотора дикого типа представляет собой последовательность промотора FMD, МОХ или TPS1 промотора, а палиндромная последовательность содержит по меньшей мере 8-12, предпочтительно 10, оснований.
4. Последовательность ДНК по пп.1-3, отличающаяся тем, что эффективность транскрипции с последовательности промотора увеличена по сравнению с эффективностью промотора дикого типа по меньшей мере в 1,5 раза, предпочтительнее по меньшей мере в 2 раза, особенно предпочтительно по меньшей мере в 2,5 раза.
5. Последовательность ДНК по пп.1-3, отличающаяся тем, что последовательность промотора получена из промотора дрожжей одного из следующих родов: Candida, Hansenula, Pichia или Torulopsis.
6. Последовательность ДНК по п.5, отличающаяся тем, что последовательность промотора получена из промотора дрожжей Hansenula polymorpha.
7. Последовательность ДНК по п.1, отличающаяся тем, что последовательность промотора получена из следующих промоторов: МОХ, FMD, TPS1, DHAS, АОХ, GAPDH u PMA1.
8. Последовательность ДНК, содержащая последовательность промотора по пп.1-3, отличающаяся тем, что указанную последовательность применяют для контроля транскрипции гомологичного или гетерологичного гена.
9. Последовательность ДНК по п.8, отличающаяся тем, что последовательность гомологичного или гетерологичного гена дополнительно содержит последовательность ДНК, кодирующую сигнал секреции.
10. Последовательность ДНК по п.9, отличающаяся тем, что сигнал секреции выбран из следующей группы: GAM, GAM-kex2, CHH-kex2, MFα-prepro, сигнал секреции куриного лизоцима.
11. Последовательность ДНК по любому из пп.1-3, 6, 7, 9, 10, отличающаяся тем, что ее используют для экспрессии гена.
12. Последовательность ДНК по любому из пп.1-3, 6, 7, 9, 10, отличающаяся тем, что ее используют для получения одного или нескольких белков.
13. Клетка-хозяин для экспрессии белка под контролем последовательности ДНК по любому из пп.1-3, 5, 7, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин представляет собой клетку метилотрофных дрожжей и содержит по меньшей мере одну из последовательностей ДНК по п.8.
14. Клетка-хозяин по п.13, отличающаяся тем, что последовательность ДНК встроена в геном клетки-хозяина или присутствует в клетке как внехромосомная молекула ДНК.
15. Клетка-хозяин по п.13, отличающаяся тем, что представляет собой дрожжевую клетку одного из родов Candida, Torulopsis, Hansenula или Pichia, особенно предпочтительно клетку Hansenula polymorpha.
16. Клетка-хозяин по п.13, отличающаяся тем, что ее используют для экспрессии гена.
17. Клетка-хозяин по п.13, отличающаяся тем, что ее используют для получения одного или нескольких белков.
18. Вектор экспрессии, предпочтительно плазмида, отличающийся тем, что содержит ДНК по любому из пп.1-3, 5, 7 и по меньшей мере одну последовательность ДНК гетерологичного гена, транскрипция которой находится под контролем последовательности ДНК по любому из пп.1-3, 5, 7, причем вектор экспрессии используют для экспрессии по меньшей мере одного гена в клетке метилотрофных дрожжей.
19. Вектор экспрессии по п.18, содержащий ген phytase или lacZ в качестве рамки считывания репортерного гена.
20. Вектор экспрессии по п.18, отличающийся тем, что его используют для экспрессии гена.
21. Вектор экспрессии по п.18, отличающийся тем, что его используют для получения по меньшей мере одного белка.
22. Набор для экспрессии белка под контролем последовательности ДНК по любому из пп.1-3, 5, 7, включающий:
(а) вектор экспрессии по п.18, подходящий для клонирования ДНК, кодирующей рекомбинантный белок; и
(б) клетку метилотрофных дрожжей, подходящую для получения указанного рекомбинантного белка.
23. Способ получения одного или нескольких белков, включающий:
(i) введение вектора по экспрессии по п.18 в клетку метилотрофных дрожжей, которая подходит для получения рекомбинантного белка, возможно, после проведения индукции последовательности промотора;
(ii) культивирование клетки метилотрофных дрожжей, полученной в (i);
(iii) продуцирование белка/белков клеткой метилотрофных дрожжей и
(iv) выделение продуцированного белка/белков.
24. Способ получения одного или нескольких белков, включающий:
(i) конструирование вектора экспрессии по п.18;
(ii) введение указанного вектора экспрессии в подходящую для получения рекомбинантного белка клетку метилотрофных дрожжей, возможно, после проведения индукции последовательности промотора;
(iii) культивирование клетки метилотрофных дрожжей, полученной в (ii);
(iv) продуцирование белка/белков клеткой метилотрофных дрожжей и
(v) выделение продуцированного белка/белков.
25. Способ получения вектора экспрессии по п.18, включающий:
(i) введение последовательности ДНК по любому из пп.1-3, 5, 7 в вектор экспрессии; или
(ii) модификацию последовательности промотора метилотрофных дрожжей в составе вектора экспрессии путем вставки, делеции и/или замены по меньшей мере одного основания в криптическом сайте связывания ATF/CREB, YAP, С/ЕВР, AP1 или G-боксе, причем вставка, делеция и/или замена по меньшей мере одного основания приводит к образованию палиндромизованной последовательности, содержащей от 8 до 20 оснований, таким образом, что образовавшаяся палиндромизованная последовательность не отличается от полностью палиндромной последовательности более чем двумя основаниями в цепи; и
(iii) введение одним из известных способов гетерологичного гена таким образом, чтобы гетерологичный ген находился под контролем последовательности ДНК из (i) или (ii).