КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ БОРЬБЫ С НАСЕКОМЫМИ-ВРЕДИТЕЛЯМИ

1. Способ вызывания гибели или задержки роста насекомого, включающий предоставление в рационе насекомого по меньшей мере одного инсектицидного полинуклеотида, содержащего по меньшей мере один подавляющий элемент по существу идентичный или по существу комплементарный фрагменту последовательности гена-мишени указанного насекомого, причем указанную последовательность гена-мишени выбирают из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 1-859, и причем поедание указанного инсектицидного полинуклеотида указанным насекомым приводит к гибели или задержке развития указанного насекомого.
2. Способ по п. 1, в котором указанный подавляющий элемент содержит
(a) по меньшей мере один сегмент из 18 или более смежных нуклеотидов, содержащий последовательность на 100% комплементарную фрагменту указанного гена-мишени указанного насекомого, причем указанный ген-мишень имеет последовательность ДНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 1-859;
(b) по меньшей мере один сегмент из 18 или более смежных нуклеотидов последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 860-1718 и 1722-1730 и 1771-1975;
(c) последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 860-1718 и 1722-1730 и 1771-1975.
3. Способ по п. 1, в котором указанный инсектицидный полинуклеотид представлен в микробной или растительной клетке, которая экспрессирует указанный инсектицидный полинуклеотид, или в микробном продукте ферментации, или является химически синтезированным.
4. Способ по п. 1, в котором указанный по меньшей мере один инсектицидный полинуклеотид представлен в композиции, содержащей указанный по меньшей мере один инсектицидный полинуклеотид, причем указанную композицию наносят на поверхность указанного насекомого или на поверхность семени или растения, нуждающихся в защите от заражения указанным насекомым.
5. Способ по п. 4, в котором указанная композиция
(a) содержит твердое вещество, жидкость, порошок, суспензию, эмульсию, спрей, инкапсуляцию, микрогранулы, частицы носителей, пленки, матрикс, орошение почвы или обработку семян;
(b) дополнительно содержит один или более компонентов, выбранных из группы, состоящей из агента-переносчика, поверхностно-активного вещества, кремнийорганики, полинуклеотидной гербицидной молекулы, неполинуклеотидной гербицидной молекулы, неполинуклеотидного пестицида, фунгицида, антидота, удобрения, микроэлемента, аттрактанта насекомых и регулятора роста насекомых;
(c) дополнительно содержит по меньшей мере один пестицидный агент, выбранный из группы, состоящей из пататина, растительного лектина, фитоэкдистероида, инсектицидного белка Bacillus thuringiensis, инсектицидного белка Xenorhabdus, инсектицидного белка Photorhabdus, инсектицидного белка Bacillus laterosporous, инсектицидного белка Bacillus sphaericus, бактерии, которая продуцирует инсектицидный белок, энтомицидных видов бактерий, Lysinibacillus sphaericus (Bacillus sphaericus), Brevibacillus laterosporus (Bacillus laterosporus), видов Chromobacterium, Chromobacterium subtsugae, видов Paenibacillus, Paenibacillus lentimorbus и Paenibacillus popilliae; или
(d) поедается указанным насекомым.
6. Способ для борьбы с заражением растения насекомым, включающий контактирование дцРНК с насекомым, которое заражает растение, причем указанная дцРНК содержит по меньшей мере один сегмент из 18 или более смежных нуклеотидов последовательности от около 95% дo около 100% комплементарной фрагменту гена-мишени указанного насекомого, и причем указанный ген-мишень имеет последовательность ДНК, выбранную из группы, состоящей их SEQ ID NOs: 1-859.
7. Способ по п. 6, в котором указанное контактирование включает
(a) пероральное введение указанному насекомому, не пероральное введение указанному насекомому, или комбинацию перорального и не перорального введения указанному насекомому;
(b) нанесение композиции, содержащей указанную дцРНК, на поверхность указанного насекомого или на поверхность указанного растения, зараженного указанным насекомым;
(c) предоставление указанной дцРНК в композиции, которая дополнительно содержит один или более компонентов, выбранных из группы, состоящей из агента-переносчика, поверхностно-активного вещества, кремнийорганики, полинуклеотидной гербицидной молекулы, неполинуклеотидной гербицидной молекулы, неполинуклеотидного пестицида, фунгицида, антидота, удобрения, микроэлемента, аттрактанта насекомых и регулятора роста насекомых;
(d) предоставление указанной дцРНК в композиции, которая дополнительно содержит по меньшей мере один пестицидный агент, выбранный из группы, состоящей из пататина, растительного лектина, фитоэкдистероида, инсектицидного белка Bacillus thuringiensis, инсектицидного белка Xenorhabdus, инсектицидного белка Photorhabdus, инсектицидного белка Bacillus laterosporous, инсектицидного белка Bacillus sphaericus, бактерии, которая продуцирует инсектицидный белок, энтомицидных видов бактерий, Lysinibacillus sphaericus (Bacillus sphaericus), Brevibacillus laterosporus (Bacillus laterosporus), видов Chromobacterium, Chromobacterium subtsugae, видов Paenibacillus, Paenibacillus lentimorbus и Paenibacillus popilliae; или
(e) предоставление указанной дцРНК в композиции, которая поедается указанным насекомым.
8. Инсектицидная композиция, содержащая инсектицидно-эффективное количество инсектицидного полинуклеотида, причем указанный инсектицидный полинуклеотид содержит по меньшей мере один сегмент из 18 или более смежных нуклеотидов, содержащих последовательность от около 95% дo около 100% комплементарной фрагменту гена-мишени насекомого, которое заражает растение, и причем указанный ген-мишень имеет последовательность ДНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-859.
9. Инсектицидная композиция по п. 8, отличающаяся тем, что указанная инсектицидная композиция
(a) дополнительно содержит один или более компонентов, выбранных из группы, состоящей из агента-переносчика, поверхностно-активного вещества, кремнийорганики, полинуклеотидной гербицидной молекулы, неполинуклеотидной гербицидной молекулы, неполинуклеотидного пестицида, фунгицида, антидота, удобрения, микроэлемента, аттрактанта насекомых и регулятора роста насекомых;
(b) дополнительно содержит по меньшей мере один пестицидный агент, выбранный из группы, состоящей из пататина, растительного лектина, фитоэкдистероида, инсектицидного белка Bacillus thuringiensis, инсектицидного белка Xenorhabdus, инсектицидного белка Photorhabdus, инсектицидного белка Bacillus laterosporous, инсектицидного белка Bacillus sphaericus, бактерии, которая продуцирует инсектицидный белок, энтомицидных видов бактерий, Lysinibacillus sphaericus (Bacillus sphaericus), Brevibacillus laterosporus (Bacillus laterosporus), видов Chromobacterium, Chromobacterium subtsugae, видов Paenibacillus, Paenibacillus lentimorbus и Paenibacillus popilliae;
(c) находится в форме, выбранной из группы, состоящей из твердого вещества, жидкости, порошка, суспензии, эмульсии, спрея, инкапсуляции, микрогранул, частиц носителей, пленки, матрицы, орошения почвы, рациона насекомых или приманки насекомых и обработки семян; или
(d) представлена в микробной или растительной клетке, которая экспрессирует указанную рекомбинантную РНК, или в микробном продукте ферментации.
10. Растение обработанное инсектицидной композицией по п. 8, или растение, выращенное из семян, обработанных инсектицидной композицией по п. 8, причем указанное растение проявляет повышенную устойчивость к указанному насекомому.
11. Способ обеспечения растения с улучшенной устойчивостью к насекомому, включающий экспрессию в указанном растении рекомбинантного ДНК-конструкта, причем указанный рекомбинантный ДНК-конструкт содержит ДНК, кодирующую РНК, имеющую последовательность, по существу идентичную или по существу комплементарную по меньшей мере 18 или более смежным нуклеотидам указанного гена-мишени, причем указанный ген-мишень имеет последовательность ДНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-859, и причем поедание указанной РНК указанным насекомым приводит к смерти или задержке роста у указанного насекомого.
12. Способ по п. 1 или п. 11, или инсектицидная композиция по п. 8, в которых указанная РНК:
(a) содержит цепь, содержащую по меньшей мере 21 смежных нуклеотидов, содержащих последовательность от около 95% до около 100% идентичную или комплементарную последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 860-1718 и 1722-1975; или
(b) содержит дцРНК.
13. Способ или инсектицидная композиция по п. 12, в которых
(a) указанная дцРНК имеет ʺтупыеʺ концы или "липкий" конец по меньшей мере на одном конце, или содержит по меньшей мере одну шпильку;
(b) указанная дцРНК является химически синтезированной, полученной путем экспрессии в микроорганизме, полученной путем экспрессии в растительной клетке, или полученной путем микробной ферментации;
(c) указанная дцРНК является химически модифицированной; или
(d) указанная дцРНК содержит по меньшей мере одну цепь РНК, содержащую последовательность от около 95% до около 100% идентичную или комплементарную последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 860-1718 и 1722-1730 и 1731-1975.
14. Способ по п. 6 или 12, в котором указанная дцРНК содержит
(a) последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 860-1718 и 1722-1730 и 1731-1975, или их комплемента;
(b) по меньшей мере один сегмент из 18 или более смежных нуклеотидов, с последовательностью на 100% комплементарной фрагменту указанного гена-мишени указанного насекомого, причем указанный ген-мишень имеет последовательность ДНК, выбранную из группы, состоящей их SEQ ID NOs: 1-859; или
(c) по меньшей мере один сегмент из 18 или более смежных нуклеотидов последовательности РНК, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 860-1718 и 1722-1730 и 1731-1975.
15. Способ по любому из п. 1, 6 или 11, или инсектицидная композиция по п. 8, в которых
(a) указанное насекомое представляет собой земляную блошку;
(b) указанное насекомое представляет собой вид рода, выбранного из группы, состоящей из родов Altica, Anthobiodes, Aphthona, Aphthonaltica, Aphthonoides, Apteopeda, Argopistes, Argopus, Arrhenocoela, Batophila, Blepharida, Chaetocnema, Clitea, Crepidodera, Derocrepis, Dibolia, Disonycha, Epitrix, Hermipyxis, Hermaeophaga, Hespera, Hippuriphila, Horaia, Hyphasis, Lipromima, Liprus, Longitarsus, Luperomorpha, Lythraria, Manobia, Mantura, Meishania, Minota, Mniophila, Neicrepidodera, Nonarthra, Novofoudrasia, Ochrosis, Oedionychis, Oglobinia, Omeisphaera, Ophrida, Orestia, Paragopus, Pentamesa, Philopona, Phygasia, Phyllotreta, Podagrica, Podagricomela, Podontia, Pseudodera, Psylliodes, Sangariola, Sinaltica, Sphaeroderma, Systena, Trachyaphthona, Xuthea и Zipangia;
(c) указанное насекомое представляет собой вид, выбранный из группы, состоящей из Altica ambiens (блошки ольхи), Altica canadensis (блошки земляной), Altica chalybaea (блошки виноградной), Altica prasina (блошки тополя), Altica rosae (блошки розы), Altica sylvia (блошки голубики), Altica ulmi (блошки вяза), Chaetocnema pulicaria (блошки кукурузной), Chaetocnema conofinis (блошки сладкого картофеля), Epitrix cucumeris (блошки картофельной), Systena blanda (бледнополосатой блошки), и Systena frontalis (рыжей блошки);
(d) указанное насекомое представляет собой вид, выбранный из группы, состоящей из Phyllotreta armoraciae (блошки хреновой), Phyllotreta cruciferae (блошки канолы), Phyllotreta pusilla (западной черной блошки), Phyllotreta nemorum (блошки земляной светлоногой), Phyllotreta atra (блошки репы), Phyllotreta robusta (садовой блошки), Phyllotreta striolata (блошки полосатой), Phyllotreta undulata, Psylliodes chrysocephala, и Psylliodes punctulata (блошки конопляной);
(e) указанное насекомое представляет собой насекомое-вредитель видов Brassica;
(f) указанное насекомое представляет собой вид Phyllotreta, и указанный ген-мишень имеет последовательность ДНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-551;
(g) указанное насекомое представляет собой Phyllotreta atra (блошку репы), и указанный ген-мишень имеет последовательность ДНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-296;
(h) указанное насекомое представляет собой Phyllotreta cruciferae (блошку канолы), и указанный ген-мишень имеет последовательность ДНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 297-532;
(i) указанное насекомое представляет собой Phyllotreta striolata (полосатую блошку), и указанный ген-мишень имеет последовательность ДНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 533-551;
(j) указанное насекомое представляет собой вид Psylliodes, и указанный ген-мишень имеет последовательность ДНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 552-859;
(k) указанное насекомое представляет собой Psylliodes chrysocephala, и указанный ген-мишень имеет последовательность ДНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 552-859;
(l) указанное насекомое представляет собой вид Phyllotreta и указанный подавляющий элемент содержит цепь РНК, имеющую последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 860-1410;
(m) указанное насекомое представляет собой Phyllotreta atra (блошку репы), причем указанная молекула рекомбинантной РНК включает дцРНК, и указанная дцРНК содержит по меньшей мере одну последовательность РНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 860-1155;
(n) указанное насекомое представляет собой Phyllotreta cruciferae (блошку канолы), причем указанная молекула рекомбинантной РНК содержит дцРНК, и указанная дцРНК содержит по меньшей мере одну последовательность РНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1156-1391, 1731-1972, и 1974;
(o) указанное насекомое представляет собой Phyllotreta striolata (полосатую блошку), причем указанная молекула рекомбинантной РНК содержит дцРНК, и указанная дцРНК содержит по меньшей мере одну последовательность РНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1392-1410, 1973, и 1975;
(p) указанное насекомое представляет собой вид Psylliodes и указанный подавляющий элемент содержит цепь РНК, имеющую последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 1411-1718; или
(q) указанное насекомое представляет собой Psylliodes chrysocephala, причем указанная молекула рекомбинантной РНК содержит дцРНК, и указанная дцРНК содержит по меньшей мере одну последовательность РНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1411-1718.
16. Способ по п. 6 или 11, или инсектицидная композиция по п. 8, в которых
(a) указанное растение выбрано из декоративного растения или сельскохозяйственного растения;
(b) указанное растение представляет собой растение из семейства Brassicaceae;
(c) указанное растение представляет собой виды Brassica, выбранные из группы, состоящей из B. napus, B. juncea, B. carinata, B. rapa, B. oleracea, B. rupestris, B. septiceps, B. nigra, B. narinosa, B. perviridus, B. tournefortii, и B. fructiculosa;
(d) указанное растение представляет собой растение Brassica, выбранное из группы, содержащей канолу, рапс, репу и горчицу полевую или турнепс;
(e) указанное растение выбрано из группы, состоящей из Glycine max, Linum usitatissimum, Zea mays, Carthamus tinctorius, Helianthus annuus, Nicotiana tabacum, Arabidopsis thaliana, Betholettia excelsa, Ricinus communis, Cocos nucifera, Coriandrum sativum, Gossypium spp., Arachis hypogaea, Simmondsia chinensis, Solanum tuberosum, Elaeis guineensis, Olea europaea, Oryza sativa, Cucurbita maxim, Hordeum vulgare и Triticum aestivum; или
(f) указанное растение представляет собой растение картофеля, и указанное насекомое представляет собой Epitrix cucumeris (картофельную блошку).
17. Способ по п. 11, в котором
(a) указанный способ дополнительно включает экспрессию в указанном растении по меньшей мере одного пестицидного агента, выбранного из группы, состоящей из пататина, растительного лектина, фитоэкдистероида, инсектицидного белка Bacillus thuringiensis, инсектицидного белка Xenorhabdus, инсектицидного белка Photorhabdus, инсектицидного белка Bacillus laterosporous, инсектицидного белка Bacillus sphaericus, бактерии, которая продуцирует инсектицидный белок, энтомицидных видов бактерий, Lysinibacillus sphaericus (Bacillus sphaericus), Brevibacillus laterosporus (Bacillus laterosporus), видов Chromobacterium, Chromobacterium subtsugae, видов Paenibacillus, Paenibacillus lentimorbus и Paenibacillus popilliae; или
(b) указанный способ дополнительно включает экспрессию в указанном растении по меньшей мере одного белка, придающего устойчивость к гербициду.
18. Растение, имеющее повышенную устойчивость к насекомому, обеспеченную способом по п. 11, или плод, семена или размножаемые части указанного растения.
19. Рекомбинантный ДНК-конструкт, содержащий гетерологичный промотор, функционально связанный с ДНК, кодирующей транскрипт РНК, содержащий по меньшей мере 21 смежный нуклеотид последовательности от около 95% до около 100% идентичной или комплементарной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 860-1718 и 1722-1730.
20. Рекомбинантный ДНК конструкт по п. 19, в котором указанный гетерологичный промотор является функционирующим для экспрессирования указанного РНК-транскрипта в бактериях или в растительной клетке.
21. Рекомбинантный вектор, хромосома или пластида растения, или трансгенная растительная клетка, содержащие рекомбинантный ДНК конструкт по п. 19.