НОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ
NEW COMPOUNDS

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к соединениям, способам их получения, композициям, содержащим их, их применению в лечении различных расстройств, в частности аллергических заболеваний и других воспалительных состояний, например, аллергического ринита и астмы, инфекционных заболеваний и рака, и в качестве вакцинных адъювантов.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Позвоночные постоянно находятся под угрозой инвазии микроорганизмов и развили механизмы иммунной защиты для уничтожения инфекционных патогенов. У млекопитающих такая иммунная система содержит две подсистемы; врожденный иммунитет и приобретенный иммунитет. Первая линия иммунной защиты организма представляет собой систему врожденного иммунитета, которая опосредована микрофагами и дендритными клетками. Приобретенный иммунитет вовлечен в ликвидацию патогенов на поздних стадиях инфекции и также создает возможность формирования иммунологической памяти. Приобретенный иммунитет является высокоспецифичным из-за огромного разнообразия лимфоцитов с антигенспецифичными рецепторами, которые подвергаются генной перестройке.
Главными в формировании эффективного врожденного иммунного ответа в млекопитающих являются механизмы, которые вызывают индукцию интерферонов и других цитокинов, которые воздействуют на клетки, вызывая множество эффектов. У человека интерфероны I типа представляют собой семейство родственных белков, кодируемых генами на хромосоме 9, кодирующих по меньшей мере 13 изоформ интерферона-альфа (IFNα) и одну изоформу интерферона бета (IFNβ). Интерферон впервые был описан как вещество, которое может защитить клетки от вирусной инфекции (Isaacs & Lindemann, J. Virus Interference. Proc. R. Soc. Lon. Ser. B. Biol. Sci. 1957: 147, 258-267). Рекомбинантный IFNα был первым одобренным биологическим терапевтическим средством и стал важным средством в терапии вирусных инфекций и рака. В дополнение к прямой противовирусной активности в клетках, интерфероны известны как сильные модуляторы иммунного ответа, воздействующие на клетки иммунной системы (Gonzalez-Navajas J.M. et al Nature Reviews Immunology, 2012; 2, 125-35).
Toll-подобные рецепторы (TLR) представляют собой семейство из десяти паттерн-распознающих рецепторов, описанное у человека (Gay, N.J. et al, Annu. Rev. Biochem., 2007: 46, 141-165). TLR экспрессируются преимущественно врожденными иммунными клетками, где их роль заключается в мониторинге окружающей среды на признаки инфекции и, при активации они мобилизуют защитные механизмы, направленные на ликвидацию проникших патогенов. Ранние врожденные иммунные ответы, инициируемые TLR, ограничивают распространение инфекции, в то время как противовоспалительные цитокины и хемокины, которых они индуцируют, приводят к рекрутменту и активации антигенпредставляющих клеток, В клеток и Т клеток. TLR могут изменять характер адаптивных иммунных ответов для обеспечения подходящей защиты посредством активации дендритных клеток и высвобождения цитокинов (Akira S. et al, Nat. Immunol., 2001: 2, 675-680). Профиль ответа, наблюдаемый от разных агонистов TLR, зависит от типа активированной клетки.
TLR7 является членом подгруппы TLR (TLR 3, 7, 8 и 9), локализован в эндосомальном компартменте клеток, специализирующихся на обнаружении чужеродных нуклеиновых кислот.TLR7 играет ключевую роль в противовирусной защите посредством узнавания оцРНК (одноцепочечная РНК) (Diebold S.S. et al, Science, 2004: 303, 1529-1531; и Lund J. M. et al, PNAS, 2004: 101, 5598-5603). TLR7 имеет профиль ограниченной экспрессии у человека и экспрессируется преимущественно В-клетками и плазмоцитоидными дендритными клетками (pDC), и, в меньшей степени, моноцитами. Плазмоцитоидные DC (дендритные клетки) представляют собой уникальную популяцию дендритных клеток лимфоидного происхождения (0,2-0,8% мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС)), которые являются основными клетками, продуцирующими интерферон I типа, секретирующими высокие уровни интерферона-альфа (IFNα) и интерферона-бета (IFNβ) в ответ на вирусные инфекции (Liu Y-J, Annu. Rev. Immunol., 2005: 23, 275-306).
Введение соединения, имеющего малую молекулу, которое может стимулировать врожденный иммунный ответ, включая активацию интерферонов I типа и других цитокинов через Toll-подобные рецепторы, может стать важной стратегией лечения или предупреждения заболеваний человека. Описаны агонисты TLR7, имеющие малую молекулу, которые могут индуцировать интерферон-альфа у животных и у человека (Takeda K. et al, Annu. Rev. Immunol., 2003: 21, 335-76). Агонисты TLR7 включают имидазохинолиновые соединения, такие как имиквимод и резиквимод, оксоадениновые аналоги, а также нуклеозидные аналоги, такие как локсорибин и 7-тиа-8-оксогуанозин, которые, как давно известно, индуцируют интерферон-альфа (Czarniecki. М., J. Med, Chem., 2008: 51, 6621-6626; Hedayat М. et al, Medicinal Research Reviews, 2012: 32, 294-325). Такой тип иммуномодулирующей стратегии перспективен в идентификации соединений, которые могут быть полезными в лечении аллергических заболеваний (Moisan J. et al, Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol., 2006: 290, L987-995), вирусных инфекций (Horcroft N.J. et al, J. Antimicrob. Chemther, 2012: 67, 789-801), рака (Krieg A., Curr. Oncol. Rep., 2004: 6(2), 88-95), других воспалительных состояний, таких как синдром раздраженного кишечника (Rakoff-Nahoum S., Cell., 2004, 23, 118(2): 229-41), и в качестве вакцинных адъювантов (Persing et al. Trends Microbiol. 2002: 10(10 Suppl), S32-7).
Более конкретно, аллергические заболевания ассоциированы с иммунным ответом на аллергены, смещенным к Th2. Th2-ответы ассоциированы с повышенными уровнями IgE, который, путем его воздействий на тучные клетки, вызывает гиперчувствительность к аллергенам, что приводит к симптомам, наблюдаемым, например, при астме и аллергическом рините. У здоровых субъектов иммунный ответ на аллергены более сбалансирован со смешанным Th2/Th1-ответом и регуляторным Т-клеточным ответом. Было показано, что лиганды TLR7 снижают высвобождение Th2-цитокина и усиливают высвобождение ТМ-цитокина in vitro и ослабляют симптомы воспалительных ответов Тh2-типа в моделях аллергического заболевания легкого in vivo (Duechs M.J., Pulmonary Pharmacology & Therapeutics, 2011: 24, 203-214; Fili L. et al, J. All. Clin. Immunol., 2006: 118, 511-517; Tao et al, Chin. Med. J., 2006: 119, 640-648; Van L.P. Eur. J. Immunol., 2011: 41, 1992-1999). Таким образом, лиганды TLR7 могут восстанавливать равновесие иммунного ответа, наблюдаемого у страдающих аллергией субъектов, и приводить к модификации заболевания. Недавние клинические исследования с агонистами TLR7 показали, что повторяющиеся интраназальные стимуляции TLR7 вызывают устойчивое снижение восприимчивости к аллергену у пациентов как с аллергическим ринитом, так и с аллергической астмой (Greiff L Respiratory Research, 2012: 13, 53; Leaker B.R. etal, Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2012: 185, A4184).
В процессе поиска новых имеющих малые молекулы индукторов человеческого интерферона IFNα была разработана стратегия анализа для характеристики малой молекулы (независимо от механизма), которая раскрыта в данном описании изобретения и основана на стимулировании первичных донорских клеток человека или цельной крови соединениями.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В первом аспекте настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) и их солям:
где:
1
3-6
R представляет собой н-Салкил;
2
R представляет собой водород или метил;
3
1-6
R представляет собой водород или Салкил;
m представляет собой целое число, имеющее значение от 0 до 3.
Было показано, что некоторые соединения по изобретению являются индукторами человеческого интерферона и могут иметь нужный профиль проявляемости по сравнению с известными индукторами человеческого интерферона. Кроме того, некоторые соединения по изобретению также могут демонстрировать селективность к IFNα относительно TNFα. Соединения, которые индуцируют человеческий интерферон, могут быть полезными в лечении различных расстройств, например, в лечении аллергических заболеваний и других воспалительных состояний, например, аллергического ринита и астмы, в лечении инфекционных заболеваний и рака. Соответственно, данное изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль. Настоящее изобретение также относится к способам лечения расстройств, ассоциированных с ними, с использованием соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль.
Соединения по изобретению также могут быть использованы в качестве вакцинных адъювантов. Соответственно, настоящее изобретение также относится к вакцинной композиции, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, и антиген или антигенную композицию.
Некоторые соединения по изобретению являются сильными иммуномодуляторами и, следовательно, следует проявлять осторожность при обращении с ними.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В первом аспекте настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) и их солям:
где:
1
3-6
R представляет собой н-Салкил;
2
R представляет собой водород или метил;
3
1-6
R представляет собой водород или Салкил;
m представляет собой целое число, имеющее значение от 0 до 3.
1
В еще одном аспекте R представляет собой н-бутил.
2
В еще одном аспекте R представляет собой водород.
В еще одном аспекте m представляет собой целое число, имеющее значение 0 или 1.
В еще одном аспекте R3 представляет собой изопропил.
Примеры соединений формулы (I) представлены в следующей группе и образуют еще один аспект изобретения:
2-бутил-7-(3-(пиперидин-4-ил)пропил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин;
2-бутил-7-(3-(1-изопропилпиперидин-4-ил)пропил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин; и
2-бутил-7-(2-(пиперидин-4-ил)этил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин; и их соли.
1-6
3-6
В настоящем описании изобретения термин "алкил" относится к насыщенной углеводородной цепи, имеющей указанное количество атомов в цепи. Если не указано иное, термин «алкил» включает прямые и разветвленные алкильные группы. Например, Cалкил относится к насыщенной, прямой или разветвленной углеводородной цепи, имеющей от 1 до 6 атомов углерода, такой как этил и изопропил, и н-Салкил относится к насыщенной, прямой углеводородной цепи, имеющей от 3 до 6 атомов углерода, такой как н-пропил и н-бутил.
Следует понимать, что ссылки в данном описании изобретения на соединения по изобретению означают соединение формулы (I) в виде свободного основания или в виде соли, например фармацевтически приемлемой соли.
В одном аспекте изобретения соединение формулы (I) находится в форме свободного основания.
Соли соединений формулы (I) включают фармацевтически приемлемые соли и соли, которые могут не являться фармацевтически приемлемыми, но могут быть полезными в получении соединений формулы (I) и их фармацевтически приемлемых солей. В одном аспекте изобретения соединение формулы (I) находится в форме фармацевтически приемлемой соли. Соли могут быть получены от некоторых неорганических или органических кислот.
Примерами солей являются фармацевтически приемлемые соли. Фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислоты. Обзор подходящих солей смотри в Berge et al., J. Pharm. Sci., 66: 1-19 (1977).
Примеры фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты соединения формулы (I) включают соли неорганических кислот, таких как, например, соляная кислота, бромистоводородная кислота, ортофосфорная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота или серная кислота; или органических кислот, таких как, например, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, пара-толуолсульфоновая кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, молочная кислота, лимонная кислота, фумаровая кислота, яблочная кислота, янтарная кислота, салициловая кислота, малеиновая кислота, глицерофосфорная кислота, винная, бензойная, глутаминовая, аспарагиновая, бензолсульфоновая, нафталинсульфоновая, таких как 2-нафталинсульфоновая, капроновая кислота или ацетилсалициловая кислота.
В объем данного изобретения входят все возможные стехиометрические и нестехиометрические формы солей соединения формулы (I). Например, дималеатная или гемисукцинатная соль соединения формулы (I).
Соли могут быть образованы с использованием методик, хорошо известных в данной области техники, например путем осаждения из раствора с последующей фильтрацией, или путем выпаривания растворителя.
Обычно фармацевтически приемлемая соль присоединения кислоты может быть образована путем взаимодействия соединения формулы (I) с подходящей кислотой (такой как бромистоводородная, соляная, серная, малеиновая, пара-толуолсульфоновая, метансульфоновая, нафталинсульфоновая или янтарная кислоты), возможно в подходящем растворителе, таком как органический растворитель, с получением соли, которую обычно выделяют, например, посредством кристаллизации и фильтрации.
Следует понимать, что многие органические соединения могут образовывать комплексы с растворителями, в которых они взаимодействуют или из которых они осаждаются или кристаллизуются. Такие комплексы известны как "сольваты". Например, комплекс с водой известен как "гидрат". Растворители с высокими точками кипения и/или растворители с повышенной склонностью к образованию водородных связей, такие как вода, этанол, изопропиловый спирт и N-метилпирролидон, можно использовать для образования сольватов. Способы идентификации сольватов включают ЯМР и микроанализ, но не ограничиваются ими. Сольваты соединения формулы (I) входят в объем изобретения. При использовании в данном описании изобретения термин «сольват» охватывает сольваты как соединение в форме свободного основания, так и любой его соли.
Некоторые соединения по изобретению могут содержать хиральные атомы и/или многократные связи и, следовательно, могут существовать в форме одного или более чем одного стереоизомера. Настоящее изобретение охватывает все стереоизомеры соединений по изобретению, включая оптические изомеры, или в виде отдельных стереоизомеров, или в виде их смесей, включая рацемические модификации. Любой стереоизомер может содержать менее 10% масс., например, менее 5% масс., или менее 0,5% масс., любого другого стереоизомера. Например, любой оптический изомер может содержать менее 10% масс., например менее 5% масс., или менее 0,5% масс., своего антипода.
Некоторые соединения по изобретению могут существовать в таутомерных формах. Следует понимать, что настоящее изобретение охватывает все таутомеры соединений по изобретению, либо в виде отдельных таутомеров, либо в виде их смесей.
Соединения по изобретению могут находиться в кристаллической или аморфной форме. Кроме того, некоторые из кристаллических форм соединений по изобретению могут существовать в виде полиморфов, все из которых включены в объем настоящего изобретения. Особый интерес представляют наиболее термодинамически устойчивая(ые) полиморфная(ые) форма или формы соединений по изобретению.
Полиморфные формы соединений по изобретению можно охарактеризовать и различить с использованием ряда традиционных аналитических методик, включая дифракцию рентгеновских лучей на порошке (XRPD), инфракрасную спектроскопию (IR), Рамановскую спектроскопию, дифференциальную сканирующую калориметрию (DSC), термогравиметрический анализ (TGA) и твердотельный ядерно-магнитный резонанс (ттЯМР), но не ограничиваясь ими.
2
3
13
14
15
17
18
18
36
3
14
3
14
2
Настоящее изобретение также включает все подходящие изотопные варианты соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Изотопный вариант соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль определен как соединение, в котором по меньшей мере один атом заменен атомом, имеющим такой же атомный номер, но атомную массу, отличную от атомной массы, обычно обнаруживаемой в природе. Примеры изотопов, которые могут быть включены в соединения по изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фтора и хлора, такие как Н, Н, С, С, N, O, O, F и Cl, соответственно. Некоторые изотопные варианты соединения формулы (I) или его соли или сольвата, например те, в которые включен радиоактивный изотоп, такой как Н или С, являются полезными в исследованиях распределения лекарственного средства и/или субстрата в тканях. Изотопы тритий, то есть Н, и углерод-14, то есть С, являются особенно предпочтительными из-за легкости их получения и обнаружения. Кроме того, замещение изотопами, такими как дейтерий, то есть Н, может обеспечивать некоторые терапевтические преимущества в результате большей метаболической стабильности, например, повышенного периода полураспада in vivo или сниженных требований к дозированию, и, следовательно, может быть предпочтительным в некоторых обстоятельствах. Изотопные варианты соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в общем случае могут быть получены посредством общепринятых методик, например с помощью проиллюстрированных способов получения, описанных в Примерах ниже, с использованием подходящих изотопных вариантов подходящих реагентов.
Из вышеизложенного ясно, что в объем изобретения включены сольваты, гидраты, изомеры и полиморфные формы соединений формулы (I) и их солей и сольватов.
Получение соединений
Соединения формулы (I) и их соли могут быть получены посредством способа, описанного ниже, что составляет дополнительные аспекты данного изобретения.
Таким образом, предложен способ получения соединения формулы (I), который включает снятие защиты с соединения формулы (II):
1
2
4
5
где R, R, и m такие, как определено выше для соединения формулы (I), R такой, как определено выше для соединения формулы (I), или представляет собой подходящую защитную группу, такую как трет-бутоксикарбонил (ВОС), и R представляет собой подходящую защитную группу, такую как бензилоксиметил (ВОМ), 2-(триметилсилил)этоксиметил или пара-толуолсульфонил и после этого, если требуется, получение соли соединения образованного таким образом.
Например, когда R5 представляет собой ВОМ, соединение формулы (II) растворяют в подходящем растворителе, например метаноле или этаноле, и пропускают через подходящий катализатор, например 10% палладий на угле, в присутствии водорода при подходящей температуре, например 20-60°С, в аппарате, таком как Thales H-cube™. Продукт (I) выделяют путем удаления растворителя и очистки, если требуется.
4
4
5
4
Например, когда R представляет собой ВОС, соединение формулы (II) растворяют в подходящем растворителе, например метаноле, и обрабатывают раствором хлористого водорода в подходящем растворителе, например 1,4-диоксане, при температуре окружающей среды в течение подходящего периода времени, например 21 часов, с получением соединения формулы (II), где R представляет собой Н, что после удаления R, как показано выше, будет давать соединение формулы (I), где R представляет собой Н.
Соединение формулы (II) можно получать путем взаимодействия соединения формулы (III):
1
2
4
5
где R R, R, R и m такие, как определено выше, с водородом в присутствии катализатора.
Например, соединение формулы (III) растворяют в подходящем растворителе, например метиловом спирте или этиловом спирте, и пропускают через подходящий катализатор, например 10% палладий на угле, в присутствии водорода при подходящей температуре, например 20-60°С, в подходящем аппарате для гидрирования в потоке, таком как Thales H-Cube™. Продукт (II) выделяют путем удаления растворителя и очистки, если требуется.
5
Когда защитная группа R представляет собой ВОМ-группу, взаимодействие до восстановления алкина может приводить к одновременному удалению защитной группы с получением соединений формулы (I).
Соединение формулы (III) можно получать путем взаимодействия соединения формулы (IV):
1
2
4
где R, R, и m такие, как определено выше для соединения формулы (I), с подходящим алкилгалогенидом R-X, где X представляет собой галоген, например, хлор, бром или йод.
4
Например, соединение формулы (IV) растворяют в подходящем растворителе, например, N,N-диметилформамиде, и обрабатывают подходящим основанием, например, триэтиламином и алкилгалогенидом R-X. Реакционную смесь перемешивают при подходящей температуре, например, 20°С, в течение подходящего периода времени, например, 95 часов. Продукт (III) выделяют после удаления растворителя и очистки.
Соединение формулы (IV) можно получать путем взаимодействия соединения формулы (V):
1
2
где R, R, и m такие, как определено выше для соединения формулы (I), с хлористым водородом.
Например, соединение формулы (V) растворяют в подходящем растворителя, например, метаноле, и обрабатывают раствором хлористого водорода в подходящем растворителе, например, 1,4-диоксане, при температуре окружающей среды в течение подходящего периода времени, например, 15 часов. Продукт (IV) выделяют после удаления растворителя и очистки.
Соединение формулы (V) можно получать путем взаимодействия соединения формулы (VI):
1
2
где R и R такие, как определено выше для соединения формулы (I), и Y представляет собой уходящую группу, например, галоген, такой как йод или бром, или алкилсульфонат, такой как трифторметансульфонат, с соединением формулы (VII).
где m такой, как определено выше для соединения формулы (I).
Например соединение формулы (VI), соединение формулы (VII) растворяют в подходящем растворителе, например DMF (N,N-диметилформамид), в присутствии йодида меди (I), подходящего катализатора, например, дихлорида бис(трифенилфосфин)палладия (II) и подходящего основания, например, триэтиламина, и нагревают при подходящей температуре, например, 20-55°С, в течение подходящего периода времени, например, 0,5-17 часов. Продукт выделяют после водной обработки и очистки.
Соединения формулы (VII) либо имеются в продаже, либо могут быть получены способами, описанными в литературе.
Соединения формулы (VI) можно получать путем взаимодействия соединений формулы (VIII):
1
2
5
где R, R и R такие, как определено выше, и Y определен для соединения формулы (VI), с раствором аммиака.
Например, водный раствор аммиака (0,88) добавляют к раствору соединения формулы (VIII) в подходящем растворителе, например, изопропиловом спирте. Затем полученную смесь нагревают в микроволновой печи при подходящей температуре, например, 120-150°С, в течение подходящего периода времени, например, 1-2 часов. Продукт выделяют после водной обработки и очистки.
Соединения формулы (VIII) можно получать путем взаимодействия соединения формулы (IX):
1
2
где R и R такие, как определено выше для соединения формулы (I), с соединением формулы (X):
5
где соединение формулы (X) представляет собой подходящий предшественник для защитной группы R, такой как бензилхлорметиловый эфир или (2-(хлорметокси)этил)триметилсилан.
Например, соединение формулы (IX) в подходящем растворителе, например, N.N-диметилформамиде или тетрагидрофуране, обрабатывают подходящим основанием, например, суспензией гидрида натрия в масле. Добавляют соединение формулы (X), например, бензилхлорметиловый эфир или (2-(хлорметокси)этил)триметилсилан, и реакционную смесь перемешивают при подходящей температуре, например 20°С, в течение подходящего периода времени, например, 1-4 часа. Продукт (IX) выделяют после водной обработки и очистки.
Соединения формулы (IX) можно получать путем взаимодействия соединений формулы (XI):
1
2
где R и R такие, как определено выше для соединения формулы (I), с галогенирующим реагентом, например, N-йодсукцинимидом.
Соединение формулы (XI) растворяют в подходящем растворителе, например, тетрагидрофуране, приводят во взаимодействие с N-йодсукцинимидом при подходящей температуре, например, 20°С, в течение подходящего периода времени, например, 1-2 часов. Продукт (X) выделяют после водной обработки и очистки.
Соединения формулы (XI) можно получать путем взаимодействия соединений формулы (XII):
1
2
где R и R такие, как определено выше для соединения формулы (I), с хлорирующим реагентом, например, хлорокисью фосфора.
Соединение формулы (XII) суспендируют в хлорокиси фосфора и нагревают при подходящей температуре, например, 120°С, в течение подходящего периода времени, например, 3-4 часов. Избыток хлорокиси фосфора, возможно, удаляют в вакууме, затем остаток выливают на лед и рН смеси подводят до 7-9. Затем продукт экстрагируют в подходящем органическом растворителе, например, этилацетате. Продукт (XI) выделяют путем удаления растворителя и очистки, если требуется.
Соединения формулы (XII) можно получать путем взаимодействия соединений формулы (XIII):
1
2
где R и R такие, как определено выше для соединения формулы (I), с подходящим основанием, например, гидроксидом натрия.
Раствор соединений формулы (XIII) в подходящем растворителе, например, этиловом спирте, обрабатывают водным раствором гидроксида натрия и реакционную смесь перемешивают при подходящей температуре, например, 80-100°С, в течение подходящего периода времени, например, 4-18 часов. Продукт (XII) выделяют после водной обработки и очистки.
Соединения формулы (XIII) можно получать путем взаимодействия соединений формулы (XIV):
с соединениями формулы (XV):
1
2
где R и R такие, как определено выше для соединения формулы (I).
Например, суспензию соединения формулы (XIV) в соединении формулы
(XV) обрабатывают раствором хлористого водорода в подходящем растворителе, например, растворе хлористого водорода в 1,4-диоксане, и нагревают при подходящей температуре 50-70°С в течение подходящего периода времени, например, 16-18 часов. Продукт (XIV) выделяют после фильтрации после добавления подходящего растворителя, например, трет-бутилметилового эфира.
Альтернативно, соединение формулы (XII) можно получать путем взаимодействия соединений формулы (XIV) с соединениями формулы (XVI):
1
где R такой, как определено выше для соединения формулы (I).
Например, смесь соединений формулы (XIV) и соединений формулы (XVI) нагревают в подходящем растворителе, например, орто-ксилоле, при подходящей температуре, например, температуре дефлегмации, в течение подходящего периода времени, например, 3 суток. После охлаждения до температуры окружающей среды продукт выделяют после фильтрации.
Соединения формулы (X), формулы (XIV), формулы (XV) и формулы (XVI) либо имеются в продаже, либо могут быть получены посредством способов, описанных в литературе.
Способы применения
Примеры болезненных состояний, при которых соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые их соли обладают потенциально полезными эффектами, включают аллергические заболевания и другие воспалительные состояния, например, аллергический ринит и астму, инфекционные заболевания и рак. Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли также имеют потенциальное применение в качестве вакцинных адъювантов.
В качестве модуляторов иммунного ответа соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли также могут быть полезными в лечении и/или предупреждении иммунно-опосредованных расстройств, включая воспалительные или аллергические заболевания, такие как астма, аллергический ринит и риноконъюнктивит, пищевая аллергия, состояния гиперчувствительности легких, эозинофильный пневмонит, состояния гиперчувствительности замедленного типа, атеросклероз, панкреатит, гастрит, колит, остеоартрит, псориаз, саркоидоз, фиброз легких, респираторный дистресс-синдром, бронхиолит, хроническое обструктивное заболевание легких, синусит, муковисцидоз, актинический кератоз, диплазия кожи, хроническая крапивница, экзема и все типы дерматита, но не ограничиваясь ими.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли также могут быть полезными в лечении и/или предупреждении реакций против инфекций дыхательных путей, включая обострения вирусных инфекций дыхательных путей и тонзилит, но не ограничиваясь ими. Эти соединения также могут быть полезными в лечении и/или предупреждении аутоиммунных заболеваний, включая, но не ограничиваясь ими, ревматоидный артрит, псориатический артрит, системную красную волчанку, болезнь Шегрена, анкилозирующий спондилит, склеродермию, дерматомиозит, диабет, отторжение трансплантата, включая реакцию «трансплантат против хозяина», воспалительные заболевания кишечника, включая болезнь Крона и язвенный колит, но не ограничиваясь ими.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли также могут быть полезными в лечении инфекционных заболеваний, включая заболевания, вызываемые вирусами гепатита (например, вирусом гепатита В, вирусом гепатита С), вирусом иммунодефицита человека, папилломавирусами, вирусами герпеса, респираторными вирусами (например, вирусами гриппа, респираторно-синцитиальным вирусом, риновирусом, метапневмовирусом, вирусом парагриппа, SARS (тяжелый острый респираторный синдром)) и вирусом Западного Нила, но не ограничиваясь ими. Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли также могут быть полезными в лечении микробных инфекций, вызванных, например, бактериями, грибами или простейшими. Они включают туберкулез, бактериальную пневмонию, аспергиллез, гистоплазмоз, кандидоз, пневмоцистоз, проказу, хламидийные, криптококковые заболевания, криптоспоридиоз, токсоплазмоз, лейшманию, малярию и трипаносомоз, но не ограничиваются ими.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли также могут быть полезными в лечении различных раковых заболеваний, в частности в лечении раковых заболеваний, которые восприимчивы к иммунотерапии и включают почечно-клеточный рак, рак легкого, рак молочной железы, колоректальный рак, рак мочевого пузыря, меланому, лейкемию, лимфомы и рак яичника, но не ограничиваются ими.
Специалисту в данной области техники понятно, что ссылки в данном описании изобретения на лечение или терапию могут, в зависимости от состояния, распространяться как на профилактику, так и на лечение этих состояний.
Таким образом, в качестве еще одного аспекта изобретения предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии.
Следует понимать, что, когда соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль применяют в терапии, его применяют в качестве активного терапевтического агента.
Следовательно, также предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении аллергических заболеваний и других воспалительных состояний, инфекционных заболеваний и рака.
Следовательно, также предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении аллергического ринита.
Следовательно, также предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении астмы.
Кроме того, предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения аллергических заболеваний и других воспалительных состояний, инфекционных заболеваний и рака.
Кроме того, предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения аллергического ринита.
Кроме того, предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения астмы.
Кроме того, предложен способ лечения аллергических заболеваний и других воспалительных состояний, инфекционных заболеваний и рака, включающий введение человеку, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Кроме того, предложен способ лечения аллергического ринита, включающий введение человеку, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Кроме того, предложен способ лечения астмы, включающий введение человеку, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли также имеют возможное применение в качестве вакцинных адъювантов.
Таким образом, в качестве еще одного аспекта изобретения предложена вакцинная композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, и антиген или антигенную композиция, для применения в терапии.
Таким образом, в качестве еще одного аспекта изобретения предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, и антигена или антигенной композиции в изготовлении лекарственного средства для применения в терапии.
Кроме того предложен способ лечения или предупреждения заболевания, включающий введение человеку, страдающему от этого заболевания или подверженного ему, вакцинной композиции, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, и антиген или антигенную композицию.
Композиции
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли обычно, но не обязательно, готовят в виде фармацевтических композиций перед введением пациенту. Таким образом, в еще одном аспекте изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или более чем один фармацевтически приемлемый эксципиент.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть приготовлены в виде препарата для введения любым удобным способом. Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли можно, например, приготовить в виде препарата для перорального, местного, ингаляционного, интраназального, буккального, парентерального (например, внутривенного, подкожного, внутрикожного или внутримышечного) или ректального введения. В одном аспекте соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли готовят в виде препарата для перорального введения. В еще одном аспекте соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли готовят в виде препарата для местного введения, например, интраназального или ингаляционного введения.
Таблетки и капсулы для перорального введения могут содержать общепринятые эксципиенты, такие как связующие агенты, например, сироп, камедь, желатин, сорбит, трагакант, крахмальный клейстер, целлюлозу или поливинилпирролидон; наполнители, например, лактозу, микрокристаллическую целлюлозу, сахар, кукурузный крахмал, фосфат кальция или сорбит; смазывающие вещества, например, стеарат магния, стеариновую кислоту, тальк, полиэтиленгликоль или диоксид кремния; разрыхлители, например, картофельный крахмал, кроскармеллозу натрия или натрия крахмал гликолят; или увлажнители, такие как лаурилсульфат натрия. Таблетки могут быть покрыты оболочкой способами, хорошо известными в данной области техники.
Пероральные жидкие препараты могут находиться в форме, например, водных или масляных суспензий, растворов, эмульсий, сиропов или эликсиров, или могут быть представлены в виде сухого продукта для разведения водой или другим подходящим носителем перед применением. Такие жидкие препараты могут содержать обычные добавки, такие как суспендирующие агенты, например, сорбитный сироп, метилцеллюлозу, глюкозный/сахарный сироп, желатин, гидроксиметилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, гель стеарата алюминия или гидрогенизинорованные пищевые жиры; эмульгаторы, например, лецитин, сорбитанмоноолеат или камедь; неводные носители (которые могут включать пищевые масла), например, миндальное масло, фракционированное кокосовое масло, жирные сложные эфиры, пропиленгликоль или этиловый спирт; или консерванты, например, метил- или пропил- пара-гидроксибензоаты или сорбиновую кислоту. При необходимости препараты также могут содержать буферные соли, ароматизаторы, красители и/или подсластители (например, маннит).
Композиции для интраназального введения включают водные композиции, вводимые в нос по каплям или посредством находящейся под давлением помпы. Для этой цели подходящие композиции содержат воду в качестве разбавителя или носителя. Композиции для введения в легкие или нос могут содержать один или более чем один эксципиент, например, один или более чем один суспендирующий агент, один или более чем один консервант, одно или более чем одно поверхностно-активное вещество, один или более чем один регулятор тоничности, один или более чем один сорастворитель, и могут включать компоненты для контроля рН композиции, например, буферную систему. Кроме того, композиции могут содержать другие эксципиенты, такие как антиоксиданты, например, натрия метабисульфит, и агенты, маскирующие вкус. Композиции также можно вводить в нос или другие участки дыхательных путей посредством распыления.
Интраназальные композиции могут обеспечить доставку соединения(й) формулы (I) или его(их) фармацевтически приемлемой соли(ей) во все области носовых полостей (ткань-мишень) и, кроме того, могут обеспечивать сохранение контакта соединения(й) формулы (I) или (а) его(их) фармацевтически приемлемой соли(ей) с тканью-мишенью в течение продолжительных периодов времени. Подходящий режим дозирования для интраназальных композиций должен заключаться для пациента во вдыхании медленно через нос после очищения носовой полости. Во время вдыхания композиция будет вводиться в одну ноздрю, в то время как другую зажимают рукой. Эта процедура будет потом повторена для другой ноздри. Обычно, одно или два впрыскивания в ноздрю будут введены посредством приведенной выше процедуры один, два или три раза ежесуточно, в идеале один раз в сутки. Особый интерес представляют собой интраназальные композиции, подходящие для введения один раз в сутки.

Суспендирующий(е) агент(ы), если они включены, обычно присутствует(ют) в количестве от 0,1 до 5% (масс./масс.), например от 1,5% до 2,4% (масс./масс.), от общей массы композиции. Примеры фармацевтически приемлемых суспендирующих агентов включают, но без ограничения, Avicel (микрокристаллическую целлюлозу и карбоксиметилцеллюлозу натрия), карбоксиметилцеллюлозу натрия, вигум, трагакант, бентонит, метилцеллюлозу, ксантановую камедь, карбопол и полиэтиленгликоли.
Композиции для введения в легкие или нос могут содержать один или более чем один эксципиент и могут быть защищены от микробного или грибкового загрязнения и роста посредством включения одного или более консервантов. Примеры фармацевтически приемлемых антимикробных агентов или консервантов включают четвертичные аммониевые соединения (например, бензалкония хлорид, бензетония хлорид, цетримид, цетилпиридиния хлорид, лауралкония хлорид и миристил-пиколиния хлорид), ртутные агенты (например, нитрат фенилртути, ацетат фенилртути и тимеросал), спиртовые агенты (например, хлорбутанол, фенилэтиловый спирт и бензиловый спирт), антибактериальные сложные эфиры (например, сложные эфиры пара-гидроксибензойной кислоты), хелатирующие агенты, такие как динатрия эдетат (EDTA), и другие антимикробные агенты, такие как хлоргексидин, хлорокрезол, сорбиновая кислота и ее соли (такие как калия сорбат) и полимиксин, но не ограничиваются ими. Примеры фармацевтически приемлемых противогрибковых агентов или консервантов включают бензоат натрия, сорбиновую кислоту, пропионат натрия, метилпарабен, этилпарабен, пропилпарабен и бутилпарабен, но не ограничиваются ими. Консервант(ы), если они включены, могут присутствовать в количестве от 0,001 до 1% (масс./масс.), например от 0,015% до 0,5% (масс./масс.) от общей массы композиции.
Композиции (например, где по меньшей мере одно соединение находится в суспензии) могут включать одно или более чем одно поверхностно-активное вещество, способствующее растворению частиц лекарственного средства в водной фазе композиции. Например, количество используемого поверхностно-активного вещества представляет собой такое количество, которое не вызывает пенообразование во время смешивания. Примеры фармацевтически приемлемых поверхностно-активных веществ включают жирные спирты, сложные эфиры и простые эфиры, такие как полиоксиэтилен (20) сорбитан моноолеат (Полисорбат 80), простые эфиры макрогола и полоксамеры. Поверхностно-активное вещество может присутствовать в количестве от примерно 0,01 до 10% (масс./масс.), таком как от 0,01 до 0,75% (масс./масс.), например, примерно 0,5% (масс./масс.), от общей массы композиции.
Один или более чем один регулятор тоничности может быть включен для достижения изотоничности с жидкостями организма, например, жидкостями носовой полости, что приводит к снижению уровней раздражения. Примеры фармацевтически приемлемых регуляторов тоничности включают хлорид натрия, декстрозу, ксилит, хлорид кальция, глюкозу, глицерин и сорбит, но не ограничиваются ими. Регулятор тоничности, если присутствует, может быть включен в количестве от 0,1 до 10% (масс./масс.), таком как от 4,5 до 5,5% (масс./масс.), например, примерно 5,0% (масс./масс.), от общей массы композиции.
Композиции по изобретению можно забуферить путем добавления подходящих буферных агентов, таких как цитрат натрия, лимонная кислота, трометамол, фосфаты, такие как динатрия фосфат (например, додекагидрат, гептагидрат, дигидрат и безводные формы) или фосфат натрия и их смеси.
Буферный агент, если присутствует, может быть включен в количестве от 0,1 до 5% (масс./масс.), например, от 1 до 3% (масс./масс.), от общей массы композиции.
Примеры агентов, маскирующих вкус, включают сукралозу, сахарозу, сахарин или его соль, фруктозу, декстрозу, глицерин, кукурузный сироп, аспартам, ацесульфам-К, ксилит, сорбит, эритрит, глицирризинат аммония, тауматин, неотам, маннит, ментол, эвкалиптовое масло, камфору, натуральный ароматизатор, искусственный ароматизатор и их комбинации.
Один или более чем один сорастворитель может быть включен, чтобы способствовать растворимости лекарственного(ых) соединения(й) и/или других эксципиентов. Примеры фармацевтически приемлемых сорастворителей включают пропиленгликоль, дипропиленгликоль, этиленгликоль, глицерин, этанол, полиэтиленгликоли (например, PEG300 или PEG400) и метанол, но не ограничиваются ими. В одном воплощении сорастворитель представляет собой пропиленгликоль.
Сорастворитель(и), если присутствует(ют), можно включать в количестве от 0,05 до 30% (масс./масс.), таком как от 1 до 25% (масс./масс.), например от 1 до 10% (масс./масс.), от общей массы композиции.
Композиции для ингаляционного введения включают водные, органические или водно/органические смеси, сухие порошковые или кристаллические композиции, вводимые в дыхательные пути посредством находящейся под давлением помпы или ингалятора, например, порошковых ингаляторов резервуарного типа, ингаляторов с отмеренной дозой порошка, дозирующих многодозовых порошковых ингаляторов, назальных ингаляторов или аэрозольных ингаляторов под давлением, небулайзеров или инсуффляторов. Подходящие композиции содержат воду в качестве разбавителя или носителя для этой цели и могут предлагаться с обычными эксципиентами, такими как буферные агенты, модификаторы тоничности и т.п. Водные композиции также можно вводить в нос и другие участки дыхательных путей путем распыления. Такие композиции могут представлять собой водные растворы или суспензии или аэрозоли, доставляемые из находящихся под давлением упаковок, таких как дозирующий ингалятор, с использованием подходящего сжиженного пропеллента.
Композиции для местного введения в нос (например, для лечения ринита) или в легкие включают находящиеся под давлением аэрозольные композиции и водные композиции, доставляемые в носовую полость посредством находящейся под давлением помпы. Композиции, которые не находятся под давлением и являются подходящими для местного введения в носовую полость, представляют особый интерес. Подходящие композиции содержат воду в качестве разбавителя или носителя для этой цели. Водные композиции для введения в легкие или нос могут обеспечиваться обычными эксципиентами, такими как буферные агенты, модификаторы тоничности и подобные. Водные композиции также можно вводить в нос посредством распыления.
Типично для доставки композиции в носовую полость может быть использовать жидкостной диспенсер. Жидкая композиция может быть водной или неводной, но типично водной. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль можно приготовить в виде суспензии или раствора. Такой жидкостной диспенсер может иметь дозирующее сопло или дозирующее отверстие, через которое отмеренная доза жидкой композиции дозируется при приложении применяемой потребителем силы к помповому механизму жидкостного диспенсера. Такие жидкостные диспенсеры обычно снабжены резервуаром с множеством отмеренных доз жидкой композиции, где дозы вводятся при последовательных активациях помпы. Альтернативно, жидкостной диспенсер для доставки жидкой композиции в носовую полость может быть сконструирован как ограниченный по дозе, например, одноразовый дозатор, содержащий одну дозу. Дозирующему соплу или отверстию может быть придана конфигурация для введения в ноздри потребителя для введения жидкой композиции в виде спрея в носовую полость. Жидкостной диспенсер вышеуказанного типа описан и проиллюстрирован в публикации международной заявки на патент WO 2005/044354 (Glaxo Group Limited). Диспенсер имеет корпус, который вмещает устройство для выпускания жидкости, имеющее компрессор, установленный на контейнере для содержания жидкой композиции. Корпус имеет по меньшей мере один боковой рычаг, действующий от нажатия пальцем, который может перемещаться внутрь по отношению к корпусу, чтобы переместить контейнер вверх в корпусе посредством эксцентрика, чтобы заставлять помпу сжимать и нагнетать отмеренную дозу композиции из штока помпы через назальное сопло корпуса. В одном воплощении жидкостной диспенсер принадлежит к общему типу, проиллюстрированному на Фиг. 30-40 в WO 2005/044354.
Водные композиции, содержащие соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, также можно доставлять посредством помпы как раскрыто в публикации международной заявки на патент WO 2007/138084 (Glaxo Group Limited), например, на Фиг. 22-46 в ней, или как раскрыто в патентной заявке Великобритании GB 0723418.0 (Glaxo Group Limited), например, на Фиг. 7-32 в ней. Помпы можно активировать при помощи пускателя, как раскрыто на Фиг. 1-6 в GB 0723418.0.
Сухие порошковые композиции для местной доставки в легкие посредством ингаляции могут быть представлены, например, в капсулах и картриджах, например, из желатина, или блистерах, например, из ламинированной алюминиевой фольги, для использования в ингаляторе или инсуффляторе. Композиции порошковых смесей обычно содержат порошковую смесь для ингаляции соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и подходящей порошковой основы (носитель/разбавитель/эксципиент), такой как моно, ди- или полисахариды (например, лактоза или крахмал). Сухие порошковые композиции также могут включать, в дополнение к лекарственному средству и носителю, дополнительный эксципиент (например, третий агент, такой как простой эфир сахара, например, октаацетат целлобиозы, стеарат кальция или стеарат магния).
В одном воплощении композиция, подходящая для ингаляционного введения, может быть включена во множество герметичных дозированных контейнеров, представленных в лекарственной(ых) упаковке(ах), закрепленной(ых) внутри подходящего устройства для ингаляции. Эти контейнеры могут быть разрывающимися, иметь легкоснимающееся покрытие, или быть последовательно открываемыми иным образом, и дозы сухой порошковой композиции, вводимой посредством ингаляции, на мундштуке ингаляционного устройства, известны в данной области техники. Упаковка лекарственного средства может иметь множество разных форм, например, иметь форму диска или удлиненной стрип-упаковки. Типичные устройства для ингаляции представляют собой устройство DISKHALER™ и DISKUS™, имеющиеся в продаже GlaxoSmithKline.
Сухая порошковая ингалируемая композиция также может быть представлена в виде резервуара с недозированным веществом в устройстве для ингаляции, при этом устройство затем оснащается дозирующим механизмом для отмеривания дозы композиции из этого резервуара в ингаляционный канал, где отмеренную дозу может вдохнуть пациент, делающий ингаляцию через мундштук устройства. Типичными имеющимися в продаже устройствами этого типа являются TURBUHALER™ (AstraZeneca), TWISTHALER™ (Schering) и CLICKHALER™ (Innovata.)
Дополнительный способ доставки сухой порошковой ингалируемой композиции предназначен для отмеренных доз композиции, представленных в капсулах (одна доза на капсулу), которые затем загружаются в устройство для ингаляции обычно пациентом по мере необходимости. Это устройство имеет средство для разрыва, прокалывания или открытия иным образом капсулы, так чтобы доза могла быть перенесена в легкие пациентов, когда они вдыхают через мундштук устройства. В качестве имеющихся в продаже примеров таких устройств можно привести ROTAHALER™ (GlaxoSmithKline) и HANDIHALER™ (Boehringer Ingelheim.)
Находящиеся под давлением аэрозольные композиции, подходящие для ингаляции, могут представлять собой суспензию или раствор и могут содержать соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и подходящий пропеллент, такой как фторуглерод или водородосодержащий хлорфторуглерод или их смеси, в частности гидрофторалканы, в особенности 1,1,1,2-тетрафтопентан, 1,1,1,2,3,3,3-гептафтор-н-пропан или их смесь. Аэрозольная композиция возможно может содержать дополнительные эксципиенты композиции, хорошо известные в данной области техники, такие как поверхностно-активные вещества, например, олеиновую кислоту, лецитин или олигомолочную кислоту или их производные, например, как описано в WO 94/21229 и WO 98/34596 (Minnesota Mining and Manufacturing Company), и сорастворители, например, этанол. Находящиеся под давлением композиции обычно содержатся в баллоне (например, алюминиевом баллоне), закрытым клапаном (например, дозирующим клапаном) и вставленным в пускатель, снабженный мундштуком.
Мази, кремы и гели можно, например, готовить в виде препарата с водной или масляной основой с добавлением подходящего загустителя и/или гелеобразующего агента и/или растворителей. Такие основы могут, таким образом, включать, например, воду и/или масло, такое как жидкий парафин или растительное масло, такое как арахисовое масло или касторовое масло, или растворитель, такой как полиэтиленгликоль. Загустители и желирующие агенты, которые можно использовать в соответствии с природой основы, включают мягкий парафин, стеарат алюминия, цетостеариловый спирт, полиэтиленгликоли, ланолин, пчелиный воск, карбоксиполиметилен и производные целлюлозы, и/или глицерилмоностеарат и/или неионные эмульгаторы.
Лосьоны могут быть приготовлены в виде препарата с водной или масляной основой, в общем случае, также содержат один или более эмульгаторов, стабилизаторов, диспергирующих агентов, суспендирующих агентов или загустителей.
Порошки для наружного применения могут быть образованы с помощью любой подходящей порошковой основы, например, талька, лактозы или крахмала. Капли могут быть приготовлены в виде препарата с водной или неводной основой, также содержащими один или более диспергирующих агентов, солюбилизирующих агентов, суспендирующих агентов или консервантов.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть, например, приготовлены в виде препарата для трансдермальной доставки композиции в пластырях или других устройствах (например, устройствах со сжатым газом), которые доставляют активный компонент в кожу.
Для буккального введения композиции могут быть приготовлены в форме таблеток или пастилок, изготовленных обычным способом.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли также могут быть приготовлены в виде суппозиториев, например содержащих обычные основы для суппозиториев, такие как кокосовое масло или другие глицериды.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли также могут быть приготовлены в виде препарата для парентерального введения посредством болюсной инъекции или непрерывной инфузии и могут быть представлены в форме стандартной дозы, например, в виде ампул, флаконов, инфузий небольшого объема или предварительно заполненных шприцев, или в многодозовых контейнерах с добавленным консервантом.
Композиции могут принимать такие формы как растворы, суспензии или эмульсии в водных или неводных носителях, и могут содержать вспомогательные агенты, такие как антиоксиданты, буферы, антимикробные агенты и/или регуляторы тоничности. Альтернативно, активный ингредиент может находиться в форме порошка для разведения подходящим носителем, например, стерильной, апирогенной водой, перед применением. Сухая твердая форма может быть получена путем асептического заполнения стерильным порошком отдельных стерильных контейнеров или путем асептического заполнения стерильным раствором каждого контейнера и лиофилизации.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли также могут быть приготовлены в виде препарата с вакцинами в качестве адъювантов для модулирования их активности. Такие композиции могут содержать антитело(а) или фрагмент(ы) антитела или антигенный компонент, включая белок, ДНК, живые или мертвые бактерии и/или вирусы или вирусоподобные частицы, но не ограничиваясь ими, вместе с одним или более компонентами, обладающими адъювантной активностью, включая, но не ограничиваясь ими, соли алюминия, масляные и водные эмульсии, белки теплового шока, производные и препараты липида А, гликолипиды, другие агонисты TLR, такие как CpG DNA или аналогичные агенты, цитокины, такие как GM-CSF или IL-12 или аналогичные агенты.
В еще одном аспекте изобретения предложен вакцинный адъювант, содержащий соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль.
Также предложена вакцинная композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, и антиген или антигенную композицию.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли можно применять сами по себе или в комбинации с другими терапевтически активными агентами. В еще одном аспекте изобретения предложена комбинация, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вместе по меньшей мере с одним другим терапевтически активным агентом.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли и другой(ие) терапевтически активный(ые) агент(ы) могут быть введены вместе или раздельно и, при раздельном введении, введение может происходить одновременно или последовательно, в любом порядке. Количества соединения(й) формулы (I) или (а) его(их) фармацевтически приемлемой соли(ей) и другого(их) терапевтически активного(ых) агента(ов) и относительное распределение введение во времени выбирают с целью достижения желательного комбинированного терапевтического эффекта. Введение комбинации соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли с другими лечебными агентами может быть осуществлено путем совместного введения в единой фармацевтической композиции, включающей оба соединения, или в отдельных фармацевтических композициях, каждая из которых включает одно из соединений. Альтернативно, комбинацию можно вводить отдельно последовательным образом, когда один лечебный агент вводят первым, а другой вторым или наоборот. Такие последовательные введения могут быть близкими по времени или отдаленными во времени.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые можно применять в комбинации с одним или более агентами, полезными в предупреждении или лечении вирусных инфекций. Примеры таких агентов включают, но не ограничиваются ими; ингибиторы полимеразы, например, раскрытые в WO 2004/037818-А1, а также раскрытые в WO 2004/037818 и WO 2006/045613; JTK-003, JTK-019, NM-283, HCV-796, R-803, R1728, R1626, а также раскрытые в WO 2006/018725, WO 2004/074270, WO 2003/095441, US2005/0176701, WO 2006/020082, WO 2005/080388, WO 2004/064925, WO 2004/065367, WO 2003/007945, WO 02/04425, WO 2005/014543, WO 2003/000254, ЕР 1065213, WO 01/47883, WO 2002/057287, WO 2002/057245, и аналогичные агенты; ингибиторы репликации, такие как ацикловир, фамцикловир, ганцикловир, цидофовир, ламивудин и аналогичные агенты; ингибиторы протеазы, такие как ингибиторы протеазы ВИЧ саквинавир, ритонавир, индинавир, нелфинавир, ампренавир, фосампренавир, бреканавир, атазанавир, типранавир, палинавир, лазинавир, и ингибиторы протеазы HCV (вируса гепатита С) BILN2061, VX-950, SCH503034; и аналогичные агенты; нуклеозидные и нуклеотидные ингибиторы обратной транскриптазы, такие как зидовудин, диданозин, ламивудин, залцитабин, абакавир, ставидин, адефовир, адефовир дипивоксил, фозивудин, тодоксил, эмтрицитабин, аловудин, амдоксовир, элвуцитабин, и аналогичные агенты; ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (включая агент, имеющий антиокислительную активность, такой как иммунокал, олтипраз и так далее), такие как невипарин, делавердин, эфавиренц, ловирид, иммунокал, олтипраз, каправирин, ТМС-278, ТМС-125, этравирин, и аналогичные агенты; ингибиторы проникновения в клетку, такие как энфувертид (Т-20), Т-1249, PRO-542, PRO-140, TNX-355, BMS-806, 5-Helix, и аналогичные агенты; ингибиторы интегразы, такие как L-870, 180 и аналогичные агенты; ингибиторы почкования, такие как РА-344 и РА-457, и аналогичные агенты; ингибиторы хемокиновых рецепторов, такие как викривирок (Sch-C), Sch-D, ТАК779, маравирок (UK-427,857), ТАК449, а также раскрытые в WO 02/74769, WO 2004/054974, WO 2004/055012, WO 2004/055010, WO 2004/055016, WO 2004/055011, и WO 2004/054581, и аналогичные агенты; ингибиторы нейраминидазы, такие как CS-8958, занамивир, осельтамивир, перамивир, и аналогичные агенты; блокаторы ионных каналов, такие как амантадин или римантадин, и аналогичные агенты; и интерферирующая РНК и антисмысловые олигонуклеотиды и такие как ISIS-14803 и аналогичные агенты; противовирусные агенты неопределенного механизма действия, например, раскрытые в WO 2005/105761, WO 2003/085375, WO 2006/122011, рибавирин и аналогичные агенты. Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли также можно применять в комбинации с одним или более чем одним другим агентом, который может быть полезен в предупреждении или лечении вирусных инфекций, например, с иммунными терапевтическими средствами (например, интерфероном или другими цитокинами/хемокинами, модуляторами цитокиновых/хемокиновых рецепторов, агонистами или антагонистами цитокинов и аналогичными агентами); и терапевтическими вакцинами, антифибротическими агентами, противовоспалительными агентами, такими как кортикостероиды или NSAID (нестероидные противовоспалительные агенты) и аналогичными агентами.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли можно применять в комбинации с одним или более чем одним другим агентом, который может быть полезен в предупреждении или лечении аллергического заболевания, воспалительного заболевания, аутоиммунного заболевания, например; иммунотерапией при помощи антигенов, антигистаминными средствами, стероидами, NSAID, бронходилататорами (например, бета-2-агонистами, адренергическими агонистами, антихолинергическими агентами, теофилином), метотрексатом, модуляторами лейкотриена и аналогичными агентами; с терапией при помощи моноклональных антител, таких как анти-lgE, анти-TNF, анти-IL-5, анти-IL-6, анти-IL-12, анти-IL-1 и аналогичными агентами; с рецепторными терапиями, например, с этанерцетом и аналогичными агентами; антиген-неспецифическими иммунотерапиями (например, интерфероном или другими цитокинами/хемокинами, модуляторами цитокиновых/хемокиновых рецепторов, агонистами или антигонистами цитокинов, агонистов TLR и аналогичными агентами).
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли можно применять в комбинации с одним или более чем одним другим агентом, который может быть полезен в предупреждении или лечении рака, например, химиотерапевтическими лекарственными средствами, такими как алкилирующие агенты, ингибиторы топоизомеразы, антиметаболиты, антимитотические агенты, ингибиторы киназ и с аналогичными агентами; с терапией при помощи моноклональных антител, таких как трастузумаб, гемтузумаб, и другими аналогичными агентами; и гормональными терапевтическим средствами, такими как тамоксифен, гозерелин, и аналогичными агентами.
Фармацевтические композиции по изобретению также можно применять сами по себе или в комбинации по меньшей мере с одним другим терапевтическим агентом в других областях терапии, например, при желудочно-кишечном заболевании. Композиции по изобретению также можно применять в комбинации с генной заместительной терапией.
В еще одном аспекте изобретение включает комбинацию, содержащую соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, вместе с по меньшей мере одним другим терапевтически активным агентом.
Указанные выше комбинации могут быть легко предложены для применения в форме фармацевтической композиции и, таким образом, фармацевтические композиции, содержащие комбинацию, как определено выше, вместе по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем, представляют собой еще один аспект изобретения.
Терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли будет зависеть от ряда факторов. Например, вид, возраст и масса реципиента, точное состояние, требующее лечения, и его серьезность, природа композиции и путь введения, все они являются факторами, которые следует принимать во внимание. Терапевтически эффективное количество, в конечном счете, должно быть определено по усмотрению лечащего врача. Безотносительно к чему-либо, эффективное количество соединения по настоящему изобретению для лечения людей, страдающих от слабости, в общем случае должно находиться в интервале от 0,0001 до 100 мг/кг массы тела в сутки. Более типично, эффективное количество должно находиться в интервале от 0,001 до 10 мг/ кг массы тела в сутки. Таким образом, для взрослого человека массой 70 кг один пример фактического количества в сутки обычно будет составлять от 7 до 700 мг. Для интраназального и ингаляционного путей введения обычные дозы для взрослого человека массой 70 кг должны находиться в интервале от 0,1 микрограммов до 1 мг в сутки, например 1 мкг, 10 мкг или 100 мкг. Это количество может быть введено в одной дозе в сутки или в количестве нескольких (например, двух, трех, четырех, пяти или более) субдоз в сутки, таким образом, чтобы суммарная суточная доза осталась такой же. Эффективное количество фармацевтически приемлемой соли соединения формулы (I) может быть определено как отношение эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли самих по себе. Аналогичные дозировки должны подходить для лечения других состояний, указанных в данном описании изобретения.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли также можно вводить с любой подходящей частотой, например 1-7 раза в неделю. Точный режим дозирования будет, конечно, зависеть от таких факторов, как терапевтические показания, возраст и состояние пациента, и от конкретного выбранного пути введения. В одном аспекте изобретения соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить один раз в неделю в течение периода от 4 до 8 недель, например 4, 5, 6, 7 или 8 недель.
Фармацевтические композиции могут быть представлены в формах стандартных доз, содержащих заданное количество активного ингредиента на стандартную дозу. Такая стандартная доза может содержать, в качестве неограничивающего примера, от 0,5 мг до 1 г соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, в зависимости от состояния, подлежащего лечению, пути введения, и возраста, массы и состояния пациента. Предпочтительными композициями со стандартной дозировкой являются композиции, содержащие суточную дозу активного ингредиента или его субдозу, как изложено выше в данном описании изобретения, или их соответствующую часть. Такие фармацевтические композиции могут быть получены любыми способами, хорошо известными в фармацевтической области.
Также предложен способ получения такой фармацевтической композиции, который включает смешивание соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым эксципиентом.
Аспекты изобретения проиллюстрированы посредством ссылки на следующие примеры, но ни в коей мере не ограничиваются ими.
Сокращения
В следующем перечне предлагаются определения некоторых сокращений, использованных в данном описании изобретения. Следует понимать, что этот перечень не является исчерпывающим, но значения сокращений, которые не определены ниже в данном описании изобретения, будут понятны специалисту в данной области техники.
DCM
Дихлорметан
DMF
N,N-Диметилформамид
DMSO
Диметилсульфоксид
DME
1,2-Диметоксиэтан
THF
Тетрагидрофуран
EtOAc
Этилацетат
МеОН
Метанол
EtOH
Этанол
MeCN
Ацетонитрил
HCl
Соляная кислота
HPLC
Высокоэффективная жидкостная хроматография
MDAP
Масс-ориентированная автопрепаративная HPLC
SPE
Твердофазная экстракция
МеОН
Метанол
TFA
Трифторуксусная кислота
DIPEA
N,N-Диизопропилэтиламин
Подробности экспериментов
1
Н ЯМР (ядерный магнитный резонанс)
1
-1
-1
3
6
3
6
Спектры Н ЯМР регистрировали в CDCl или в DMSO-d на спектрометре Bruker DPX 400 или Bruker Avance DRX, Varian Unity 400 или JEOL Delta, все из которых работали на частоте 400 МГц. Используемым внутренним стандартом был тетраметилсилан или остаточный протонированный растворитель при 7,25 млн для CDCl или 2,50 млн для DMSO-d.
LCMS (жидкостная хроматография с масс-спектроскопией)
Система А
18
Колонка: 50 мм×2,1 мм вн. д. (внутренний диаметр), 1,7 мкм Acquity UPLC ВЕН С
Скорость потока: 1 мл/мин.
Температура: 40°С
УФ-диапазон детекции: от 210 до 350 нм
Масс-спектр: регистрировали на масс-спектрометре, используя ионизацию электроспреем в режиме положительных и отрицательных ионов с альтернативным сканированием.
Растворители: А: 0,1% об./об. муравьиная кислота в воде
В: 0,1% об./об. муравьиная кислота в ацетонитриле
Система В
18
Колонка: 50 мм×2,1 мм вн. д., 1,7 мкм Acquity UPLC ВЕН C
Скорость потока: 1 мл/мин.
Температура: 40°С
УФ-диапазон детекции от 210 до 350 нм
Масс-спектр: регистрировали на масс-спектрометре, используя ионизацию электроспреем в режиме положительных и отрицательных ионов с альтернативным сканированием. Растворители:
А: 10 мМ бикарбонат аммония в воде, доведенный раствором аммиака до рН10
В: ацетонитрил
Масс-ориентированная автопрепаративная HPLC (MDAP)
Масс-ориентированную автопрепаративную HPLC выполняли в условиях, приведенных ниже. УФ-обнаружение представляло собой усредненный сигнал от длины волны от 210 нм до 350 нм, и масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре, используя ионизацию электрораспылением с альтернативным сканированием в режиме положительных и отрицательных ионов.
Способ А
18
Способ А выполняли на колонке Sunfire С (обычно вн. д. 150 мм × 30 мм, диаметр носителя 5 мкм) при температуре окружающей среды. Используемые растворители представляли собой:
А=0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в воде;
В=0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле.
Способ В
18
Способ В выполняли на колонке XBridge C (обычно вн. д. 100 мм×30 мм, диаметр носителя 5 мкм) при температуре окружающей среды. Используемые растворители представляли собой:
А=10 мМ водный бикарбонат аммония, доведенный раствором аммиака до рН 10;
В=ацетонитрил.
Способ С
18
Способ С выполняли на колонке Sunfire С (обычно вн. д. 150 мм×30 мм, диаметр носителя 5 мкм) при температуре окружающей среды. Используемые растворители представляли собой:
А=0,1% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в воде;
В=0,1% об./об. раствор трифторуксусная кислота в ацетонитриле.
Получение промежуточного соединения
Промежуточное соединение 1: этил-3-пентаимидамидо-1H-пиррол-2-карбоксилата гидрохлорид
Раствор хлористого водорода в диоксане (12 мл, 4 М, 48 ммоль) добавляли по каплям к суспензии этил-3-амино-1Н-пиррол-2-карбоксилата гидрохлорида (2,04 г, 10,7 ммоль) (J. Org. Chem. 1999, 64(22), 8411) в валеронитриле (30 мл). Полученную смесь нагревали при 50°С в течение 18 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и твердое вещество собирали путем фильтрации и промывали с помощью ТВМЕ (трет-бутилметиловый эфир). Указанное в заголовке соединение получали в виде беловатого твердого вещества (2,19 г). Дополнительную порцию ТВМЕ добавляли к фильтрату, и смесь снова фильтровали, осадок промывали с помощью ТВМЕ и сушили с получением дополнительной порции указанного в заголовке соединения (0,275 г).
1
-1
6
Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ млн 12.22 (уширенный s., 1Н) 10.88 (s, 1Н) 9.39 (уширенный синглет, 1Н) 8.25 (уширенный синглет, 1Н) 7.09 (t, J=2,9 Гц, 1Н) 6.19 (t, J=2,5 Гц, 1Н) 4.23 (q, J=7,0 Гц, 2Н) 2.52-2.60 (m, 2Н) 1.63-1.77 (m, 2Н) 1.34-1.47 (m, 2Н) 1.27 (t, J=7,2 Гц, 3Н) 0.94 (t, J=7,4 Гц, 3Н)
Промежуточное соединение 2: 2-бутил-3H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4(5Н)-он
2
4
Раствор гидроксида натрия (1,44 г, 35,9 ммоль) в воде (7 мл) добавляли к раствору этил-3-пентаимидамидо-1Н-пиррол-2-карбоксилата гидрохлорида (2,46 г, 8,99 ммоль) в этаноле (30 мл). Полученную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 4 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и рН доводили до рН 6,5 водным раствором лимонной кислоты. Полученную смесь экстрагировали этилацетатом (2×50 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (NaSO), фильтровали и выпаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-коричневого твердого вещества (1,69 г).
RET
+
LCMS (Система В) : t (время удерживания) = 0,66 мин; МН 192
Промежуточное соединение 3: 2-бутил-4-хлор-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин
2
4
Хлорокись фосфора (20 мл, 21,46 ммоль) добавляли к 2-бутил-3Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4(5H)-ону (1,69 г). Полученную смесь нагревали при 100°С. Через 4 часа реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, затем выливали на лед. Водную фазу обрабатывали водным раствором гидроксида натрия (5 М) до тех пор, пока рН не стал равным 7. Полученную смесь экстрагировали при помощи этилацетата (2×150 мл). Объединенные органические фазы промывали рассолом, сушили (NaSO), фильтровали и выпаривали с получением указанного в заголовке соединения (1,69 г)
RET
+
LCMS (Система В): t=0,90 мин; МН 210, 212
Промежуточное соединение 4: 2-бутил-4-хлор-7-йод-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин
2
4
N-Йодсукцинимид (2,09 г, 9,29 ммоль) добавляли порциями к перемешиваемому раствору 2-бутил-4-хлор-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидина (1,69 г, 8,06 ммоль) в THF (35 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь разбавляли при помощи ТВМЕ (50 мл), затем промывали водным раствором тиосульфата натрия (50 мл), затем насыщенным водным раствором хлорида натрия (20 мл). Органическую фазу сушили (NaSO), фильтровали и упаривали. Образец растворяли в дихлорметане и очищали посредством хроматографии на диоксиде кремния, используя градиент 0-100% дихлорметан-циклогексан в течение 30 минут, с последующим градиентом 0-100% ТВМЕ-циклогексан, с последующим градиентом 0-20% метанола в течение 15 минут. Соответствующие фракции идентифицировали посредством LCMS, затем объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (2,2 г).
RET
+
LCMS (Система В): t=1,14 мин; МН 336, 338
Промежуточное соединение 5: 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-4-хлор-7-йод-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин
2
4
Гидрид натрия (0,338 г, 60% в масле, 14,08 ммоль) добавляли порциями к перемешиваемому раствору 4-хлор-7-йод-2-бутил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидина (2,19 г, 6,53 ммоль) в DMF (30 мл), охлаждали в ледяной бане. Через 30 минут добавляли бензилхлорметиловый эфир (1,13 мл, 1,278 г, 8,16 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили водой и полученную смесь распределяли между этилацетатом (150 мл) и водой (150 мл). Органическую фазу промывали водой, потом насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (NaSO), фильтровали и выпаривали. Образец растворяли в дихлорметане и очищали посредством хроматографии на диоксиде кремния (100 г), используя градиент 0-100% этилацетат-циклогексан, в течение 30 минут. Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого масла (2,82 г).
RET
+
LCMS (Система В): t=1,49 мин; МН 456, 458
Промежуточное соединение 6: 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-йод-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин
5-((Бензилокси)метил)-2-бутил-4-хлор-7-йод-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин (1 g, 2.2 ммоль) суспендировали в 2-пропаноле (5 мл) и 35% (0,88) растворе аммиака (4 мл). Реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 90 минут в микроволновой печи Biotage Initiator. К реакционной смеси дополнительно добавляли 1 мл 35% (0,88) раствора аммиака. Реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 90 минут в микроволновой печи Biotage Initiator. Реакционную смесь упаривали в вакууме с получением бледно-желтого масла. Масло растворяли в минимальном объеме 20% метанола в дихлорметане и очищали посредством хроматографии на диоксиде кремния, используя градиент 0-100% этилацетат в циклогексане, в течение 80 минут. Фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (768 мг).
RET
+
LCMS (Система В): t=1,19 мин; МН 437
Промежуточное соединение 7: трет-Бутил 4-(проп-2-ин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат
К раствору трет-бутил 4-(2-оксоэтил)пиперидин-1-карбоксилата (383 мг, 1,685 ммоль) в безводном метаноле (6 мл) добавляли карбонат калия (466 мг, 3,37 ммоль) и суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 5 минут. Затем добавляли диметил-(1-диазо-2-оксопропил)фосфонат (388 мг, 2,022 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 17 часов. Реакционную смесь распределяли между диэтиловым эфиром и насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия. Органическую фазу отделяли, пропускали через гидрофобную фритту и упаривали в вакууме с получением желтого масла. Неочищенное вещество загружали в картридж Isolute с 10 г диоксида кремния в минимальном объеме этилацетата и элюировали при помощи этилацетата (40 мл). Элюент этилацетат упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (294 мг).
1
-1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ млн 4.00-4.20 (m, 2Н) 2.61-2.78 (m, 2Н) 2.10-2.20 (m, 2Н) 1.93-2.01 (m, 1Н) 1.56-1.81 (m, 4Н) 1.46 (s, 9Н) 1.11-1.29 (m, 2Н)
Промежуточное соединение 8: трет-бутил 4-(3-(4-амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)проп-2-ин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат
К дегазированному раствору 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-йод-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина (319 мг, 0,731 ммоль) в безводном N,N-диметилформамиде (5 мл) в атмосфере азота при комнатной температуре добавляли йодид меди (I) (27 мг, 0,142 ммоль), бис(трифенилфосфин)палладия(II) дихлорид (56 мг, 0,08 ммоль) и в конце триэтиламин (0,183 мл, 1.316 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 10 минут и затем добавляли раствор трет-бутил 4-(проп-2-ин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата (294 мг, 1,317 ммоль) в безводном дегазированном N.N-диметилформамиде (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при 55°С в течение 40 минут. Реакционную смесь упаривали в вакууме с получением темно-желтого масла. Масло распределяли между водой и дихлорметаном. Органический слой отделяли и водный остаток экстрагировали при помощи дихлорметана. Объединенные органические экстракты пропускали через гидрофобную фритту и упаривали в вакууме с получением темно-желтого масла. Масло растворяли в MeOH:DMSO (1:1) (4×1 мл) и очищали посредством MDAP (Способ В). Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (212 мг)
RET
+
LCMS (Система В): t=1,41 мин; МН 532
Промежуточное соединение 9: 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-(3-(пиперидин-4-ил)проп-1-ин-1-ил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин
К раствору трет-бутил 4-(3-(4-амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)проп-2-ин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата (130 мг, 0,245 ммоль) в безводном метаноле (5 мл) добавляли 4 М хлористый водород в 1,4-диоксане (0,306 мл, 1,223 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. Реакционную смесь упаривали досуха в потоке азота с получением желтого масла. Масло растворяли в смеси MeOH:DMSO (1:1) (2×1 мл) и очищали посредством MDAP (Способ В). Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого масла (64 мг).
RET
+
LCMS (Система В): t=1,08 мин; МН 432
Промежуточное соединение 10: 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-(3-(1-изопропилпиперидин-4-ил)проп-1-ин-1-ил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин
К раствору 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-(3-(пиперидин-4-ил)проп-1-ин-1-ил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина (64 мг, 0,148 ммоль) в безводном N,N-диметилформамиде (2 мл) при комнатной температуре добавляли триэтиламин (41 мкл, 0,294 ммоль) и 2-йодпропан (18 мкл, 0,18 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение последующих 95 часов. Реакционную смесь упаривали в вакууме с получением желтого масла. Масло растворяли в смеси MeOH:DMSO (1:1) (1 мл) и очищали посредством MDAP (Способ В). Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого масла (31 мг).
RET
+
LCMS (Система В): t=1,22 мин; МН 474
Промежуточное соединение 11: трет-бутил-4-((4-амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)этинил)пиперидин-1-карбоксилат
Получали аналогично промежуточному соединению 8 из 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-йод-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина и трет-бутил-4-этинилпиперидин-1-карбоксилата (J. Med. Chem. 2004, 47, 3111).
RET
+
LCMS (Система В): t=1,38 мин; МН 518
ПРИМЕРЫ ПОЛУЧЕНИЯ
Пример 1: 2-Бутил-7-(3-(пиперидин-4-ил)пропил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина формиат
Трет-бутил-4-(3-(4-амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)проп-2-ин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат (82 мг, 0,154 ммоль) в этаноле (20 мл) пропускали через H-cube (параметры настройки: 20°С, заполнен водородом, скорость потока 1 мл/мин и 10% палладий на угле CatCart30 в качестве катализатора). Картридж со свежим new 10% палладием на угле CatCart30 вставили в H-cube и раствор пропускали через H-cube (параметры настройки: 45°С, заполнен водородом, скорость потока 1 мл/мин). Раствор снова пропускали через H-cube, затем раствор упаривали в вакууме с получением белого твердого вещества. Твердое вещество растворяли в смеси MeOH:DMSO (1:1) (2×1 мл) и очищали посредством MDAP (Способ В). Соответствующие фракции объединяли и выпаривали в вакууме с получением белого твердого вещества (19 мг). Твердое вещество растворяли в безводном метаноле (1,5 мл) и в 4 М хлористом водороде в 1,4-диоксане (0,114 мл, 0,456 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 21 часа. Реакционную смесь упаривали досуха в потоке азота с получением коричневого масла. Масло растворяли в MeOH:DMSO (1:1) (1 мл) и очищали посредством MDAP (Способ А). Соответствующую фракцию упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (14,4 мг).
RET
+
LCMS (Система В): t=0,82 мин; МН 316
Пример 2: 2-бутил-7-(3-(1-изопропилпиперидин-4-ил)пропил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин
5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-(3-(1-изопропилпиперидин-4-ил)проп-1-ин-1-ил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин (31 мг, 0,065 ммоль) в этаноле (10 мл) пропускали через H-cube (параметры настройки: 45°С, заполнен водородом, скорость потока 1 мл/мин и 10% палладий на угле CatCart30 в качестве катализатора). Раствор упаривали в потоке азота с получением белого твердого вещества. Твердое вещество растворяли в смеси MeOH:DMSO (1:1) (1 мл) и очищали посредством MDAP (Способ В). Подходящую фракцию упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (8 мг)
RET
+
LCMS (Система В): t=0,91 мин; МН 358
Пример 3: 2-бутил-7-(2-(пиперидин-4-ил)этил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин
Раствор трет-бутил 4-((4-амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)этинил)пиперидин-1-карбоксилата (83 мг, 0,160 ммоль) в этаноле (20 мл) пропускали через H-cube (параметры настройки: 45°С, заполнен водородом, скорость потока 1 мл/мин и 10% палладий на угле CatCart30 в качестве катализатора). Раствор снова пропускали через H-cube, затем раствор упаривали в вакууме с получением белого твердого вещества. Твердое вещество растворяли в смеси MeOH:DMSO (1:1) (1 мл) и очищали посредством MDAP (Способ В). Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением белого твердого вещества (28 мг). Раствор твердого вещества (28 мг, 0,07 ммоль) в безводном метаноле (3 мл) и раствор 4 М хлористого водорода в 1,4-диоксане (0,175 мл, 0,7 ммоль) перемешивали при комнатной температуре в течение 74 часов. Реакционную смесь упаривали досуха в потоке азота с получением желтого масла. Масло растворяли в смеси MeOH:DMSO (1:1) (1 мл) и очищали посредством MDAP (Способ В). Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (16 мг).
RET
+
LCMS (Система В): t=0,75 мин; МН 302
БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА
Соединения по изобретению испытывали in vitro на биологическую активность в соответствии со следующим анализом.
Анализ индукции интерферона-α и TNF-α с использованием свежей цельной крови (WB) человека
Получения соединения
Соединения готовили в DMSO в 100-кратной концентрации от требуемой концентрации в плоскодонных микротитрационных планшетах в объеме 1,5 мкл. Столбцы 1-10 содержали 1 из 4 последовательных разведений тестируемого соединения. В каждый планшет включали последовательное разведение агониста TLR7/8 резиквимода в качестве стандарта, и столбец 11 содержал 1,5 мкл 200 мкМ резиквимода (с получением конечной концентрации 2 мкМ, используемой для определения приблизительного максимального ответа на резиквимод). Каждое соединение анализировали в двух повторах для каждого донора.
Инкубация и анализы для интерферона-α и TNF-α
2
Образцы крови от трех людей-доноров собирали с добавлением гепарина натрия (10 Ед/мл). 150 мкл цельной крови распределяли в столбцы 1-11 планшетов для анализа, содержащие 1,5 мкл тестируемого соединения или стандарта в DMSO. Планшеты помещали в инкубатор на ночь (37°С, 95% воздуха, 5% СО). После инкубирования в течение ночи планшеты доставали из инкубатора и перемешивали на орбитальном шейкере в течение приблизительно 1 минуты. 100 мкл 0,9% солевого раствора добавляли в каждую лунку и планшеты снова перемешивали на орбитальном шейкере. Затем планшеты центрифугировали (2500 об/мин, 10 мин), после чего извлекали образец плазмы, используя Biomek FX, и анализировали их как на IFN-α, так и на TNF-α с использованием MSD (Mesoscale Discovery) платформы для анализа электрохемилюминесценции. Анализ IFN-α выполняли аналогично описанному выше. Анализ TNF-α выполняли согласно инструкции к набору (Кат. № K111BHB).
50
Высвобожденный цитокин выражали в виде процентного отношения от контроля 2 мкМ резиквимода (столбец 11). Это процентное отношение наносили на график зависимости от концентрации соединения и определяли pEC для ответа посредством нелинейной аппроксимации методом наименьших квадратов. Для ответов IFN-α обычно выбирали 4-параметрическую логистическую модель. Для ответов TNF-α, когда получали отчетливый максимальный ответ (то есть в ответе наблюдалось хорошо определяемое плато), обычно использовали 4-параметрическую логистическую модель. Если верхняя асимптота кривой не была хорошо определена, то подбор кривой обычно ограничивали максимальным ответом 100% (то есть ответом на 2 мкМ резиквимод) или ответом на самую высокую тестируемую концентрацию, если она была выше, чем ответ на резиквимод. Некоторые кривые имели колоколообразную форму для одного или обоих цитокинов, и данные для цитокина на нисходящем уклоне колоколообразного ответа (то есть концентрации выше концентраций, дающих максимальный ответ) обычно исключали из подходящих значений, обычно за исключением концентрации непосредственно выше пикового ответа. Подбор кривой, таким образом, концентрировали на восходящем уклоне кривой зависимости ответа от дозы.
Результаты
50
Примеры 1-3 имели среднее значение pEC для INF-α, выше или равное 6,4.
50
Примеры 1-3 имели среднее значение pЕС для TNF-α, выше или равное 5,0.