СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОРАСТВОРИМЫХ КОНЪЮГАТОВ ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЯ И МАКРОЛИДНЫХ ИММУНОДЕПРЕССАНТОВ

1. Способ получения конъюгатов полиэтиленгликоля и иммунодепрессивных макролидов, включающий:
(a) взаимодействие ацилирующего агента с иммунодепрессивным макролидом, содержащим циклогексильный фрагмент, представляющий собой производное шикимовой кислоты, в присутствии липазы с образованием ацилированного макролида;
(b) взаимодействие указанного ацилированного макролида с производным метоксиполиэтиленгликоля или производным полиэтиленгликоля, содержащим терминальные тиоловые группы, в присутствии основания.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный иммунодепрессивный макролид представляет собой рапамицин, причем указанный рапамицин подвергают региоспецифическому ацилированию по положению 42.
3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанный иммунодепрессивный макролид имеет следующую структуру:
1
где R выбирают из группы, включающей Н, алкил, алкенил, арил и арилалкил;
2
R выбирают из группы, включающей Н, гидроксил и
-О-алкил;
3
31
R выбирают из группы, включающей Н, алкил, алкенил, арил, арилалкил и -C(О)R;
31
R выбирают из группы, включающей Н, алкил, алкенил, арил и арилалкил;
4
R выбирают из группы, включающей Н, гидроксил и
-О-алкил;
5
51
R выбирают из группы, включающей Н, гидроксиалкил, гидроксиалкенил, гидроксиарил, гидроксиаралкил и -C(О)R; и
51
R выбирают из группы, включающей гидроксиалкил, гидроксиалкенил, гидроксиарил и гидроксиаралкил.
4. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанный иммунодепрессивный макролид представляет собой 42-О-(2-гидрокси)этилрапамицин.
5. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанный иммунодепрессивный макролид представляет собой CCI-779.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный иммунодепрессивный макролид выбирают из группы, включающей такролимус и аскомицин, причем указанный такролимус и указанный аскомицин подвергают региоспецифическому ацилированию по положению 32.
7. Способ по п.1 или 6, отличающийся тем, что указанный иммунодепрессивный макролид имеет следующую структуру:
7
8
9
где R, R, R независимо представляют собой Н или алкил;
R представляет собой этил или аллил.
8. Способ получения ПЭГилированного иммунодепрессивного макролида, выбираемого из группы, включающей соединение формулы I, формулы II, формулы III, формулы IV, формулы V и формулы VI:
где n представляет собой целое число от 10 до 1000;
Х представляет собой О или S;
причем указанный способ включает:
(а) взаимодействие макролида с ацилирующим агентом в присутствии липазы с образованием ацилированного макролида, причем указанный ацилирующий агент имеет следующую структуру:
6
3
где R представляет собой Н или СН;
Y представляет собой уходящую группу; и
(b) взаимодействие ацилированного макролида с производным метоксиполиэтиленгликоля в присутствии основания, причем указанное производное метоксиполиэтиленгликоля имеет следующую структуру:
2
2
n
3
НХ-(СНСНО)-СН,
где n представляет собой целое число от 10 до 1000; и
Х представляет собой О или S.
9. Способ по любому из пп.1-2, 6 или 8, отличающийся тем, что указанная липаза представляет собой липазу микробного происхождения, полученную из микроорганизмов, включающих Aspergillus niger, Candida antarctica, Candida rugosa, Mucor miehei, Pseudomonas cepacia, Pseudomonas fluorescens и Rhizopus delemar.
10. Способ по любому из пп.1-2, 6 или 8, отличающийся тем, что указанная липаза получена из микроорганизмов Candida antarctica.
11. Способ по любому из пп.1-2, 6 или 8, отличающийся тем, что указанная липаза представляет собой иммобилизированную липазу, полученную из Candida antarctica, тип В (предпочтительно иммобилизированную на акриловой смоле).
12. Способ по любому из пп.1-2, 6 или 8, отличающийся тем, что указанная липаза представляет собой липазу PS, полученную из Pseudomonas cepacia.
13. Способ по любому из пп.1-2, 6 или 8, отличающийся тем что указанная липаза представляет собой иммобилизированную липазу PS-C, полученную из Pseudomonas cepacia, где фермент иммобилизирован на кизельгуре или на керамической подложке, например, Amano II™ липазу или PS-D Amano I™ липазу.
14. Способ по любому из пп.1-2, 6 или 8, отличающийся тем, что стадию (а) проводят в органическом растворителе, выбранном из группы, включающей толуол, трет-бутилметиловый эфир, диэтиловый эфир, тетрагидрофуран, ацетонитрил, метиленхлорид, хлороформ, гексан, диоксан и их смеси.
15. Способ по любому из пп.1-2, 6 или 8, отличающийся тем, что стадию (а) проводят при температуре от 20 до 70°С.
16. Способ по любому из пп.1-2, 6 или 8, отличающийся тем, что стадия (а) дополнительно предусматривает использование молекулярных сит.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что стадию (а) проводят при температуре 40°С в трет-бутилметиловом эфире, причем указанный ацилирующий агент представляет собой винилбромацетат, указанная липаза представляет собой иммобилизированную липазу В Candida antarctica (предпочтительно иммобилизированную на акриловой смоле), а указанные молекулярные сита представляют собой молекулярные сита с размером ячейки 5Е.
18. Способ по любому из п.8 или 17, отличающийся тем, что Y представляет собой I, Вr или Cl.
19. Способ по любому из пп.1-2, 6, 8 или 17, отличающийся тем, что указанный ацилирующий агент представляет собой винилбромацетат.
20. Способ по любому из пп.1-2, 6, 8 или 17, отличающийся тем, что указанное основание на стадии (b) представляет собой третичный амин.
21. Способ по п.20, отличающийся тем, что указанный третичный амин представляет собой алифатический или ароматический амин.
22. Способ по п.20, отличающийся тем, что указанный третичный амин представляет собой триалкиламин.
23. Способ по любому из пп.1-2, 6, 8 или 17, отличающийся тем, что указанное основание представляет собой диизопропилэтиламин.
24. Способ по любому из пп.8, 17, 21 или 22, отличающийся тем, что указанное производное метоксиполиэтиленгликоля представляет собой тиоловое производное метоксиполиэтиленгликоля.
25. Способ по п.24, отличающийся тем, что средняя молекулярная масса указанного тиолового производного метоксиполиэтиленгликоля составляет от 400 до 30000.
26. Способ по п.25, отличающийся тем, что средняя молекулярная масса указанного тиолового производного метоксиполиэтиленгликоля составляет 5000.
27. Способ получения ПЭГилированного рапамицина, имеющего следующую структуру:
где n составляет от 105 до 115;
причем указанный способ включает:
(a) взаимодействие рапамицина с винилбромацетатом в присутствии иммобилизированной липазы В, выделенной из Candida antarctica (предпочтительно иммобилизированной на акриловой смоле) с образованием ацилированного рапамицина; и
(b) взаимодействие указанного ацилированного рапамицина с метоксиполиэтиленгликольтиолом, имеющим среднюю молекулярную массу 5000, в присутствии диизопропилэтиламина.
28. Способ получения ПЭГилированного эверолимуса, имеющего следующую структуру:
где n составляет от 105 до 115, причем указанный способ включает:
(а) взаимодействие эверолимуса с винилбромацетатом в присутствии иммобилизированной липазы В, выделенной из Candida antarctica (предпочтительно иммобилизированной на акриловой смоле) с образованием ацилированного эверолимуса; и
(b) взаимодействие указанного ацилированного эверолимуса с метоксиполиэтиленгликольтиолом, имеющим среднюю молекулярную массу 5000, в присутствии диизопропилэтиламина.
29. Способ получения ПЭГилированного ССI-779, имеющего следующую структуру:
или
где n составляет от 105 до 115, причем указанный способ включает:
(a) взаимодействие CCI-779 с винилбромацетатом в присутствии иммобилизированной липазы В, выделенной из Candida antarctica (предпочтительно иммобилизированной на акриловой смоле) с образованием моно-ацилированного или бис-ацилированного CCI-779; и
(b) взаимодействие указанного ацилированного CCI-779 с метоксиполиэтиленгликольтиолом, имеющим среднюю молекулярную массу 5000, в присутствии диизопропилэтиламина.
30. Способ получения ПЭГилированного такролимуса, имеющего следующую структуру:
где n составляет от 105 до 115, причем указанный способ включает:
(a) взаимодействие такролимуса с винилбромацетатом в присутствии иммобилизированной липазы В, выделенной из Candida antarctica (предпочтительно иммобилизированной на акриловой смоле) с образованием ацилированного такролимуса; и
(b) взаимодействие указанного ацилированного такролимуса с метоксиполиэтиленгликольтиолом, имеющим среднюю молекулярную массу 5000, в присутствии диизопропилэтиламина.
31. Способ получения ПЭГилированного такролимуса, имеющего следующую структуру:
где n представляет собой целое число от 105 до 115, причем указанный способ включает:
(а) взаимодействие такролимуса с винилбромацетатом в присутствии иммобилизированной липазы В, выделенной из Candida antarctica (предпочтительно иммобилизированной на акриловой смоле) с образованием ацилированного такролимуса; и
(b) взаимодействие указанного ацилированного такролимуса с метоксиполиэтиленгликольтиолом, имеющим среднюю молекулярную массу 5000, в присутствии диизопропилэтиламина.
32. Продукт, полученный по любому из способов согласно пп.1-31.