РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПРОИЗВОДСТВА СУХИХ СТЕРИЛЬНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И ОЦЕНКА ИХ РОСТОВЫХ СВОЙСТВ НА КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУРАХ

_ВЕСТНИК ПНИПУ_

2023 Химическая технология и биотехнология № 3

DOI: 10.15593/2224-9400/2023.3.03 Научная статья

УДК 57.578

Т.П. Сумкина, Е.А. Нечаева, Н.Б. Думченко

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Новосибирская область, р.п. Кольцово, Россия

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПРОИЗВОДСТВА СУХИХ СТЕРИЛЬНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И ОЦЕНКА ИХ РОСТОВЫХ СВОЙСТВ НА КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУРАХ

Разработаны оптимальные условия для приготовления сухих стерильных питательных сред и приготовления из них жидких. Сухие стерильные питательные среды для культур являются неотъемлемой частью современных методов культивирования клеток. Применение сухих питательных сред представляет собой инновационный подход, создаются оптимальные условия для роста и размножения клеток. Это позволит получить высококачественные результаты при выращивании клеток в лаборатории и удешевлении стоимости питательных сред. Сухие питательные среды прошли все контроли и показали хорошие результаты ростовой активности клеточных культур Vero, MDCK и L-68, что свидетельствует о качестве сухих стерильных питательных сред.

Разработка сухих стерильных питательных сред для культур клеток является актуальной задачей. Жидкие питательные среды требуют специального хранения и транспортировки, а сухие стерильные питательные среды представляют собой порошок, который легко хранится и перевозится.

Все аминокислоты, витамины, соли и глюкоза, входившие в состав сухих стерильных питательных сред, таких как питательная среда Игла МЕМ, питательная среда 199М, питательная среда DMEM и питательная среда ВекторВак-ПС2, проходили входной контроль и проверялись на токсичность во избежание негативного воздействия на клеточные культуры Vero, MDCK и L-68.

Цель настоящего исследования - конструирование сухих стерильных питательных сред и оценка их применения для культивирования клеток млекопитающих, а также определение оптимальных условий хранения и использования.

Важным этапом в конструировании сухих стерильных питательных сред (питательная среда Игла МЕМ, питательная среда 199М, питательная среда DMEM и питательная среда ВекторВак-ПС2) является анализ и оценка эффективности для культур клеток.

Ключевые слова: питательная среда Игла МЕМ, питательная среда DMEM, питательная среда 199М, питательная среда ВекторВак-ПС2, культуры клеток, Vero, MDCK, L-68.

T.P. Sumkina, E.A. Nechaeva, N.B. Dumchenko

State Scientific Center of Virology and Biotechnology "Vector" of the Federal Service for Supervision of Consumer Rights Protection and Human Welfare, Novosibirsk Region, Koltsovo, Russian Federation

DEVELOPMENT OF TECHNOLOGY FOR THE PRODUCTION OF DRY STERILE CULTURE MEDIA AND EVALUATION OF THEIR GROWTH PROPERTIES ON CELL CULTURES

Optimal conditions have been developed for the preparation of dry sterile culture media and the preparation of liquid ones from them. Dry sterile culture media are an integral part of current cell culture techniques. Dry culture media represent an innovative approach and create optimal conditions for cell growth and expansion. This will allow high-quality results when growing cells in the laboratory and reducing the cost of nutrient media. The dry culture media passed all controls and showed good results of the growth activity of Vero, MDCK and L-68 cell cultures, indicating the quality of the dry sterile culture media.

The developed dry sterile culture culture media is an urgent task. Since liquid culture media require special storage and transportation, and dry sterile culture media are a powder that is easily stored and transported.

All amino acids, vitamins, salts, and glucose included in the dry sterile culture media, such as needle MEM culture medium, 199M culture medium, DMEM culture medium, and VectorVac-PS2 culture medium, were tested for toxicity to avoid adverse effects on Vero, MDCK, and L-68 cell cultures.

The purpose of this study is to construct dry sterile culture media and evaluate their use for mammalian cell culture, as well as to determine optimal storage and use conditions.

An important step in the construction of dry sterile culture media (needle MEM culture medium, 199M culture medium, DMEM culture medium and VectorVac-PS2 culture medium) is the analysis and evaluation of efficacy for cell cultures.

Keywords: Igla MEM culture medium, DMEM culture medium, 199M culture medium, VectorVac-PS2 culture medium, cell cultures, Vero, MDCK, L-68.

Введение. В последние годы стремительно развиваются научные исследования в области клеточной биотехнологии. Это все переходит к крупномасштабному культивированию клеточных культур, на их основе ведется производство разнообразных биологически активных препаратов как медицинского, так и сельскохозяйственного и пищевого назначения. Для создания новых биопрепаратов возрастают масштабы производства клеток, возникает необходимость разработки экономичных и доступных питательных сред [6, 11, 12, 17]. До недавнего времени обеспечение потребностями в синтетических питательных средах осуществлялось за счет производства жидких питательных сред, которые имеют срок годности 1 год. Недостатками жидких питательных сред для культур клеток являются ограниченный срок годно-

сти, значительные затраты при хранении и транспортировании [3, 5]. Альтернативой жидких питательных сред для культур клеток уже становится их сухая форма [20].

Сухие стерильные питательные среды для клеточных культур - это новая и удобная технология производства сухих питательных сред, которая позволяет уменьшить затраты времени и средств при выращивании клеток в лаборатории. Эта технология использует сухую питательную среду, которую необходимо только растворить в очищенной воде или инъекционной воде перед использованием [8, 16]. Такая среда готовится к работе за несколько минут, что значительно экономит время.

Сухая стерильная питательная среда не содержит жидкости, что предотвращает рост бактерий и грибов, а также увеличивает срок хранения среды. Поэтому она считается более безопасной для работы с клетками в лаборатории. Более того, такая среда имеет лучшую стабильность, что улучшает качество выращиваемых клеток и обеспечивает более точные результаты [4, 9, 18].

Сухие стерильные питательные среды для клеточных культур имеют широкий спектр применения в медицине, научных исследованиях и других областях биологии. Они могут использоваться для изучения различных характеристик клеток, в том числе вырабатываемых продуктов, роста и выживаемости клеток. Кроме того, такие среды могут использоваться для разведения и создания новых клеточных линий [19].

Таким образом, сухие стерильные питательные среды для клеточных культур упрощают процесс производства клеточных культур. Они являются безопасными и экономичными в использовании, а также широко применяются в научных исследованиях и медицине [15].

Целью настоящей работы является конструирование сухих стерильных питательных сред и оценка их применения для культивирования клеток млекопитающих.

Материалы и методы исследований. В работе были использованы питательная среда Игла МЕМ сухая стерильная, питательная среда 199М сухая стерильная, питательная среда DMEM сухая стерильная, питательная среда ВекторВак-ПС2 сухая стерильная. В качестве контроля были использованы: питательная среда Игла МЕМ жидкая стерильная, питательная среда 199М жидкая стерильная, питательная среда DMEM жидкая стерильная, питательная среда ВекторВак-ПС2 жидкая стерильная. Также использовались клеточные культуры Vero, MDCK, L-68, полученные из Коллекции клеточных культур ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора.

рН. Определение проводят потенциометрически в соответствии с ГОСТ Р 51352, п 5.4.12.4. и МУК 4.2.2316-08, п. 6.5 [10, 13].

Буферная емкость. Величину буферной емкости определяют в соответствии с «Методическими рекомендациями по контролю качества вирусологических питательных сред» [10, 13].

Стерильность. Питательные среды должны быть стерильны. Испытание на стерильность проводят методом прямого посева или мембранной фильтрацией (ГФ XIII, т. 1, с. 925, 0ФС.1.2.4.0003.15 «Стерильность»).

Испытание на стерильность проводят методом прямого посева с использованием двух питательных сред: тиогликолевой среды и жидкой среды Сабуро при двух температурных режимах по ГФ XIII, т. 1, с. 925, ОФС. 1.2.4.0003.15 «Стерильность».

Метод прямого посева. Испытуемый образец засевают в питательные среды в соотношении 1:20. Посевы инкубируют не менее 14 сут при температуре (32,5±2,5) °С в жидкой тиогликолевой среде и при температуре (22,5±2,5) °С в жидкой среде Сабуро.

Во время инкубации периодически просматривают посевы. Наличие/отсутствие роста микроорганизмов определяют визуально в проходящем свете. При отсутствии роста микроорганизмов считают, что питательная среда соответствует требованиям испытания на стерильность [10, 13].

Ростовая активность. Питательная среда должна быть пригодна для культивирования клеток и обладать ростовой активностью. Контроль проводят на паспортизованной линии клеток Vero, MDCK, L-68. При испытании в среду добавляют от 2 до 5 % сыворотки крови крупного рогатого скота по ТУ 9385-007-13175637-2008 или 5-10 % сыворотки крови плодов коровы по ТУ 9385-008-13175-637-2008. Культивирование клеток проводят на протяжении 5 последовательных пассажей с 3-4-суточным циклом. Посевные дозы клеток в каждом пассаже должны составлять 80-120 тыс.кл./мл среды или 40-60 тыс. кл./см поверхности плоскостного сосуда. Культивирование осуществляют в парных флаконах вместимостью по 50 мл. В каждом флаконе объем суспензии клеток в среде с сывороткой равен 5 мл. Флаконы помещают в термостат в горизонтальном положении и инкубацию осуществляют при температуре 37 °С. Наблюдение за культурой клеток проводят ежедневно на протяжении всего срока культивирования путем микроскопирования клеток при увеличении в 70-100 раз. Клетки должны быть прикрепленными и образовывать ровный монослой без признаков дегенерации [10, 13].

Условия эксперимента. Нами были разработаны технологии приготовления сухих питательных сред, таких как питательная среда Игла МЕМ сухая стерильная, питательная среда 199 модифицированная сухая стерильная, питательная среда DМЕМ сухая стерильная и питательная среда ВекторВак-ПС2 сухая стерильная. Все неорганические соли, которые входят в состав питательных сред, сушили в сушильном шкафу при температуре 80 оС, время высушивания составило 2 ч. Неорганические соли, аминокислоты, витамины, глюкоза и индикатор феноловый красный загружали в шаровой барабан и перемешивали, время перемешивания 3 ч. Затем расфасовывали в пени-циллиновые флаконы вместимостью 20 мл, для каждой среды была рассчитана масса навески для растворения в 400 мл воды (очищенной, инъекционной). Флаконы с питательными средами облучали на высокочастотном ускорители электронов типа ИЛУ-6. Поглощающая доза облучения 25 кГр [1, 2, 7, 14]. После облучения сухие питательные среды проверили на стерильность. Сухие стерильные питательные среды использовали для приготовления жидких стерильных сред. Воду разливали во флаконы вместимостью 450 мл по 400 мл, предварительно доведя рН воды до нужного значения (для каждой питательной среды рН воды был индивидуальным), и стерилизовали фильтрацией или автоклавированием.

В боксовом помещении в асептических условиях содержимое одного флакона с сухой стерильной питательной средой вносили в стерильную воду, перемешивали в течение 2 мин, питательная среда готова к использованию.

В жидких питательных средах - питательная среда Игла МЕМ, питательная среда 199 модифицированная, питательная среда DМЕМ и питательная среда ВекторВак-ПС2 - контролировали физико-химические параметры и ростовые свойства.

Питательную среду Игла МЕМ и питательную среду 199 модифицированную использовали для культивирования клеточных культур Vero (клетки почек зеленой мартышки) и L-68 (легкое эмбриона человека). Для оценки ростовых свойств питательной среды DMEM и среды ВекторВак-ПС2 применяли клеточные культуры Vero (клетки почек зеленой мартышки) и MDCK (клетки почки взрослой самки кокер спаниеля). Все клеточные культуры были получены из коллекции клеточных культур ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора. По окончании инкубации клетки снимали с подложки 0,25 % раствором трипсина и Версена раствором в соотношении 1:1.

Результаты и обсуждения. После приготовления в асептических условиях жидких питательных сред из сухих стерильных питательных сред их контролировали по показателям рН и буферная емкость, хлор-ионы, глюкоза и аминный азот. Данные представлены в табл. 1.

Таблица 1

Физико-химические параметры жидких питательных сред, приготовленных из сухих стерильных сред

Наименование показателя Питательная среда Игла МЕМ Питательная среда 199М Питательная среда DMEM Питательная среда ВекторВак-ПС2

Норма по ТУ Результат Норма по ТУ Результат Норма по ТУ Результат Норма по ТУ Результат

рН От 7,1 до 7,5 7,2 От 7,1 до 7,5 7,22 От 7,1 до 7,5 7,24 От 7,1 до 7,5 7,14

Буферная емкость, мл Не менее 4,2 мл 5,1 Не менее 0,9 мл 1,2 Не менее 7,0 мл 9,0 Не менее 3,0 мл 5,5

Хлор-ион, г/л От 4,1 до 5,1 4,4 От 4,6 до 5,62 4,7 От 3,78 до 4,62 4,15 От 4,6 до 5,62 4,9

Глюкоза, г/л От 0,9 до 1,1 1,1 От 0,9 до 1,1 1,1 От 4,0 до 5,0 4,5 От 0,9 до 1,1 1,1

Аминный азот, г/л Не менее 0,12 0,128 Не менее 0,08 0,083 От 250,0 до 310,0 302,0 Не менее 0,08 0,082

Полученные результаты подтверждают, что питательные среды, приготовленные из сухих стерильных форм, полностью соответствуют по физико-химическим показателям жидким стерильным питательным средам, полученным методом мембранной фильтрации.

Ростовые свойства питательных сред, приготовленных из сухих стерильных форм, оценивали на протяжении 5 пассажей. В питательные среды Игла МЕМ, 199М, DMEM добавляли 10 % сыворотки крови плодов коров фирмы Copricorn производства США, а в питательную среду ВекторВак-ПС2 5 % сыворотки крови плодов коров фирмы Copricorn производства США. В качестве контроля брали такие же питательные среды, приготовленные методом стерилизующей фильтрации. Данные приведены в табл. 2, 3.

По морфологическим характеристикам клеточные культуры Vero и L-68, культивируемые на питательной среде Игла МЕМ, приготовленной из сухой стерильной, не отличаются от контрольных образцов. Клетки имеют ровные края без признаков дегенерации и образуют ровный монослой на 3-4 сут (рис. 1, 2).

Таблица 2

Показатели ростовой активности питательной среды Игла МЕМ и питательной среды 199М

Питательная среда Клеточная культура Vero, индекс пролиферации после 5-го пассажа Клеточная культура L-68, индекс пролиферации после 5-го пассажа

Контрольная питательная среда Игла МЕМ жидкая стерильная +10 % сыворотки крови плодов коров 6,6 ± 0,3 4,4 ± 0,1

Питательная среда Игла МЕМ, приготовленная из сухой стерильной +10 % сыворотки крови плодов коров 6,8 ± 0,1 4,6 ± 0,1

Контрольная питательная среда 199М жидкая стерильная +10 % сыворотки крови плодов коров 6,3 ± 0,1 4,7 ± 0,1

Питательная среда 199М, приготовленная из сухой стерильной +10 % сыворотки крови плодов коров 6,6 ± 0,1 4,8 ± 0,1

Таблица 3

Показатели ростовой активности питательной среды DМЕМ и питательной среды ВекторВак-ПС2

Питательная среда Клеточная культура Vero, индекс пролиферации после 5-го пассажа Клеточная культура MDCK, индекс пролиферации после 5-го пассажа

Контрольная питательная среда DМЕМ жидкая стерильная +10 % сыворотки крови плодов коров 7,2 ± 0,1 5,1 ± 0,1

Питательная среда DМЕМ, приготовленная из сухой стерильной +10 % сыворотки крови плодов коров 7,6 ± 0,1 5,2 ± 0,1

Контрольная питательная среда ВекторВак-ПС2 жидкая стерильная +10 % сыворотки крови плодов коров 5,9 ± 0,1 4,4 ± 0,1

Питательная среда ВекторВак-ПС2, приготовленная из сухой стерильной +10 % сыворотки крови плодов коров 6,2 ± 0,1 5,4 ± 0,1

а б

Рис. 1. Клеточная культура Vero, культивированная на питательной среде Игла МЕМ, полученной из сухой стерильной среды

а б

Рис. 2. Клеточная культура L-68, культивированная на питательной среде Игла МЕМ, полученной из сухой стерильной среды

По морфологическим характеристикам клеточные культуры Vero и L-68, культивированные на питательной среде 199М, приготовленной из сухой стерильной, не отличаются от контрольных образцов, клетки имеют ровные края без признаков дегенерации и образуют ровный монослой на 3-4 сут (рис. 3, 4).

а б

Рис. 3. Клеточная культура Vero, культивированная на питательной среде 199М, полученной из сухой стерильной среды

а б

Рис. 4. Клеточная культура L-68, культивированная на питательной среде 199М, полученная из сухой стерильной среды

По морфологическим характеристикам клеточные культуры Vero и MDCK, культивированные на питательной среде DMEM, приготовленной из сухой стерильной, не отличаются от контрольных образцов, клетки имеют ровные края без признаков дегенерации и образуют ровный монослой на 3-4 сут (рис. 5, 6).

а б

Рис. 5. Клеточная культура Vero, культивированная на питательной среде DMEM из сухой стерильной среды (а); клеточная культура Vero, культивированная на питательной среде DMEМ жидкой в качестве

контроля

а б

Рис. 6. Клеточная культура MDCK, культивированная на питательной среде DMEМ из сухой стерильной среды (а); клеточная культура MDCK, культивированная на питательной среде DMEМ жидкой в качестве

контроля

По морфологическим характеристикам клеточные культуры Vero и MDCK, культивированные на питательной среде ВекторВак-ПС2, приготовленной из сухой стерильной, не отличаются от контрольных образцов, клетки имеют ровные края без признаков дегенерации и образуют ровный монослой на 3-4 сут (рис. 7, 8).

а б

Рис. 7. Клеточная культура Vero, культивированная на питательной среде ВекторВак-ПС2, полученной из сухой стерильной среды

Рис. 8. Клеточная культура MDCK, культивированная на питательной среде

ВекторВак-ПС2, полученной из сухой стерильной среды

Заключение. В результате проведенных исследований разработана технология приготовления сухих стерильных питательных сред: питательная среда Игла МЕМ стерильная сухая, питательная среда 199 модифицированная стерильная сухая, питательная среда DMEM стерильная сухая и питательная среда ВекторВак-ПС2 стерильная сухая. Все питательные среды успешно прошли физико-химические исследования и могут успешно применяться для культивирования перевиваемых клеточных культур MDCK, Vero и L-68. Применение сухих

стерильных питательных сред для клеточных культур - это современная и удобная технология, которая позволяет получать высококачественные результаты при выращивании клеток в лабораторных условиях. Сухие питательные среды являются безопасными и экономичными в использовании, а также имеют широкий спектр применения, как в научных исследованиях, так и медицине.

Список литературы

1. Использование электронно-лучевой обработки для стерилизации медицинских изделий и для других медицинских и биологических применений / В.Л. Ауслендер, А.А. Брязгин, М.В. Коробейников [и др.] // Вестник «Радтех-Евразия». - 1999. - № 1 (9). - С. 159-168.

2. Ауслендер В.Л. Ускорители электронов типа ИЛУ для промышленных технологий // Вестник «Радтех-Евразия». - 1999. - № 1 (9). - С. 32-45.

3. Изучение сроков годности и причин снижения качества сухих стерильных питательных сред / М.П. Богрянцева, Г.П. Трошкова, Н.А. Мазур-кова, В.Т. Ночевный // Биотехнология. - 1999. - № 4. - С. 49-54.

4. Богрянцева М.П. Технология изготовления и свойства питательной среды сухой стерильной на основе гидролизатов: автореф. дис. ... канд. биол. наук. - М., 2000. - 28 с.

5. Богрянцева М.П., Мазуркова Н.А., Трошкова Г.П. Увеличение сроков хранения сухих стерильных питательных сред на основе белковых гид-ролизатоа с использованием антиоксидантов // Разработка и производство диагностических сухих питательных сред и микротест систем: тез. конф. -Махачкала, 1998. - С. 69.

6. Булатова Р.Ф., Шепелин А.П., Волков В.Я. Новые подходы к разработке критериев оценки качества сухих питательных сред // Клиническая лабораторная диагностика. - 1997. - № 1. - С. 23-24.

7. Горелюк Б.А., Сромнов И.В. Вопросы снижения радиационных повреждений при стерилизации полимерной продукции на ускорителе электронов // Дезинфекция и стерилизация, перспективы развития: материалы Всесоюз. науч. конф. - Волгоград, 1983. - С. 31-32.

8. Пат. 2107724 РФ, МПК 02N5/00. Способ получения сухих стерильных питательных сред для культур клеток / Камший Л.П., Трошкова Г.П., Леляк А.И., Фролова И.В., Сорокона Е.А. - Опубл. 25.09.1998.

9. Разработка сухих стерильных препаратов для клеточной биотехнологии / Н.А. Мазуркова, М.П. Богрянцева, Л.Д. Мартынец, Т.Б. Сироткина, Г.П. Трошкова // Цитология. - 1999. - Т. 41, № 3/4. - С. 289.

10. Методические рекомендации по контролю качества вирусологических питательных сред / М-во здравоохр. СССР. - М., 1985. - 14 с.

11. Конструирование бессывороточных питательных сред для культивирования клеток млекопитающих. Сообщение I / А.С. Пригода, А.И. Коренева, Е.Ю. Коновалова [и др.] // Биотехнология. - 1990. - № 2. - С. 35.

12. Конструирование бессывороточных питательных сред для культивирования клеток млекопитающих. Сообщение IV / А.С. Пригода, А.И. Коренева, Е.Ю. Коновалова [и др.] // Биотехнология. - 1991. - № 5. - С. 55-59.

13. Сумкина Т.П. Проект ТУ. Питательная среда DMEM жидкая с индикатором или без индикатора для культур клеток для вирусологии и биотехнологии. -Кольцово, 2019.

14. Трошкова Г.П. Технологические основы электронно-лучевой стерилизации питательных сред // Биотехнология. - 2000. - № 6. - С. 54-60.

15. Трошкова Г.П., Богрянцева М.П., Мартынец Л.Д. Разработка сухих стерильных питательных сред и их использование в вирусологической практике // Биотехнология - состояние и перспективы развития: тез. I Междунар. конгр. - М., 2002. - С. 97.

16. Сухая стерильная малосывороточная питательная среда для культивирования клеток: пат. 2201958 РФ / Трошкова Г.П., Богрянцева М.П., Мазуркова Н А., Мартынец Л.Д., Кирова Е.В., Юдин А.В. - Опубл. 10.04.2003, Бюл. № 10.

17. Трошкова Г.П. Разработка технологии производства и методов контроля препаратов для культур клеток в сухой стерильной форме: автореф. дис. ... д-ра биол. наук: 03.00.23 / Гос. науч. центр вирусологии и биотехнологии «Вектор». - Кольцово, 2004. - 42 с.

18. Сухие стерильные препараты для культур клеток / Г.П. Трошкова, Л.П. Камший, И.В. Фролова, М.П. Богрянцева, Е.А. Сорокина // Перспективы развития производства биопрепаратов для медицины и сельского хозяйства: тез. конф. - Степногорск, 1995. - Ч. 1. - 59 с.

19. Конструирование сухих стерильных бессывороточных и малосывороточных питательных сред для культивирования клеток млекопитающих / Е.А. Сорокина, Л.Д. Мартынец, В.Т. Ночевный, Р.Я. Подчерняева, Н.А. Ма-зуркоыа, Г.П. Трошкова // Биотехнология. - 1998. - № 1. - С. 67-72.

20. Фролова И.В., Трошкова Г.П. Камший Л.П. Разработка технологии изготовления сухих стерильных питательных сред для культур клеток млекопитающих // Биотехнология. -1999. - № 4. - С. 38-44.

References

1. Auslender VL, Bryazgin AA, Korobeinikov MV, etc. Use of electron beam processing for sterilization of medical devices and for other medical and biological applications. Bulletin "Radtech-Eurasia." 1999. no. 1 (9). pp. 159-168.

2. Auslender B.J. Electron accelerators of the ILU type for industrial technologies. Bulletin of Rad Tech-Eurasia. 1999. no. 1 (9). pp. 32-45.

3. Bogryantseva M.P., Troshkova G.P., Mazurkova N.A. Izuchenie srokov godnosti i prichin snizheniia kachestva sukhikh steril'nykh pitatel'nykh sred [Overnight VT Study of shelf life and reasons for quality reduction of dry sterile culture media] Biotechnology . 1999 no. 4. pp 49-54.

4. Bogryantseva M.P. Technology of manufacturing and properties of the culture medium dry sterile on the basis of hydrolysates//Autoreferate dis. Ph.D. biol sciences. M. 2000. pp 28.

5. Bogriantseva M.P., Mazurkova N.A., Troshkova G.P. Increasing the shelf life of dry sterile culture media based on protein hydrolysatoa using antioxidants // Tez. conf. "Development and production of diagnostic dry nutrient media and microtest systems" Makhachkala. 1998. -p 69.

6. Bulatova RF, Shepelin AP, Volkov VY. New approaches to the development of criteria for assessing the quality of dry nutrient media//Clinical laboratory diagnostics. 1997. - № 1. pp. 23-24.

7. Gorelyuk B.A., Sromnov I.V. Issues of reducing radiation damage during sterilization of polymer products on an electron accelerator//Mat. All-Union. scientific. conf. "Disinfection and sterilization, development prospects." Volgograd. 1983. pp. 31-32.

8. Kamshiy L.P., Troshkova G.P., Lelyak A.I., Frolova I.V., Sorokon E.A. Method of Producing Dry Sterile Culture Media for Cell Cultures .//Russian Patent No. 2107724, 1998.

9. Mazurkova N.A., Bogryantseva M. P., Martynets L.D., Sirotkina T.B., Troshkova G.P. Razrabotka sukhikh steril'nykh preparatov dlia kletochnoi bio-tekhnologii [Development of dry sterile preparations for cell biotechnology]. Cytology. 1999. Vol.41. no. %. pp. 289

10. Methodological Recommendations for Quality Control of Virological Culture Media, M. 1985

11. Prigoda A.S., Koreneva A.I., Konovalova E.Yu., etc. Construction of serum-free culture media for mammalian cell culture. Message I//Biotechnology.

1990. - №2. p. 35.

12. Prigoda A.S., Koreneva A.I., Konovalova E.Yu., etc. Construction of serum-free culture media for mammalian cell culture. Message IV//Biotechnology. -

1991. №5. pp. 55-59.

13. Sumkina T.P. Draft TC DMEM culture medium liquid with or without indicator for cell cultures for virology and biotechnology // Koltsovo. 2019.

14. Troshkova G.P. Tekhnologicheskie osnovy elektronno-luchevoi sterili-zatsii pitatel'nykh sred [Technological bases of electron-beam sterilization of culture media] Biotechnology. 2000. No. 6 pp. 54-60.

15. Troshkova G.P., Bogryantseva M.P., Martynets L.D. Razrabotka sukhikh steril'nykh pitatel'nykh sred i ikh ispol'zovanie v virusologicheskoi praktike [Development of dry sterile culture media and their use in virological practice] Tez. I

International congr. "Biotechnology is the state and prospects of development." Moscow. 2002. pp. 97.

16. Troshkova GP, Bogriantseva MP, Mazurkova NA, Martynets LD, Kirov EV, Yudin A.V. Dry sterile low-serum nutrient medium for cell culture .//Patent 2201958 RF Opub. 10.04.2003, Bul. № 10.

17. Troshkova, Galina Pavlovna Development of production technology and methods of control of preparations for cell cultures in dry sterile form: autoreferate dis ... Doctor of Biological Sciences: 03.00.23/State. scientific. Center for Virology and Biotechnology "Vector." - Koltsovo. 2004. p 42.

18. Troshkova G.P., Kamshiy L.P., Frolova I.V., Bogryantseva M.P., So-rokina E.A. Dry sterile preparations for cell cultures .//Tez. conf. "Prospects for the development of the production of biologics for medicine and agriculture." - Step-nogorsk, 1995. h. 1. р. 59.

19. Sorokina E.A., Martynets L.D., Nochevny V.T., Podchernyaeva R.Ya., Ma-zurkoya N.A., Troshkova G.P. Construction of dry sterile serum-free and low-serum culture media for mammalian cell culture .//Biotechnology, 1998, No. 1. рр 67-72.

20. Frolova I.V., Troshkova G.P., Kamshiy L.P. Razrabotka tekhnologii izgotovleniia sukhikh steril'nykh pitatel'nykh sred dlia kul'tur kletok mlekopi-taiushchikh [Development of technology for the manufacture of dry sterile culture media for mammalian cell cultures] Biotechnology. 1999. no. 4.

Об авторах

Сумкина Татьяна Петровна (Кольцово, Россия) - начальник лаборатории ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора (630559, р.п. Кольцово, Новосибирская область, e-mail: sumkina@vector.nsc.ru).

Нечаева Елена Августовна (Кольцово, Россия) - кандидат медицинских наук, заместитель генерального директора по научной и производственной работе ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора (630559, р.п. Кольцово, Новосибирская область, e-mail: nechaeva@vector.nsc.ru).

Думченко Наталья Борисовна (Кольцово, Россия) - заведующая лабораторией ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора (630559, р.п. Кольцово, Новосибирская область, e-mail: dumchenko@vector.nsc.ru).

About the authors

Tatyana P. Sumkina (Koltsovo, Russian Federation) - Head of the laboratory of the FBRI SRC VB "Vector" of Rospotrebnadzor (630559, Koltsovo, Novosibirsk region, e-mail: sumkina@vector.nsc.ru).

Elena A. Nechaeva (Koltsovo, Russian Federation) - Ph.D. in Medical Sciences, Deputy General Director for Scientific and Production Work of the FBRI SRC VB "Vector" of Rospotrebnadzor (630559, Koltsovo, Novosibirsk region, e-mail: nechaeva@vector.nsc.ru).

Natalya B. Dumchenko (Koltsovo, Russian Federation) - Head of the laboratory of FBRI SRC VB "Vector" Rospotrebnadzor (630559, Koltsovo, Novosibirsk region, e-mail: dumchenko@vector.nsc.ru).

Поступила: 13.07.2023

Одобрена: 26.07.2023

Принята к публикации: 20.09.2023

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Вклад авторов равноценен.

Просьба ссылаться на эту статью в русскоязычных источниках следующим образом:

Сумкина, Т.П. Разработка технологии производства сухих стерильных питательных сред и оценка их ростовых свойств на клеточных культурах / Т.П. Сумкина, Е.А. Нечаева, Н.Б. Думченко // Вестник ПНИПУ. Химическая технология и биотехнология. - 2023. - № 3. - С. 30-44.

Please cite this article in English as:

Sumkina T.P., Nechaeva E.A., Dumchenko N.B. Development of technology for the production of dry sterile culture media and evaluation of their growth properties on cell cultures. Bulletin of PNRPU. Chemical Technology and Biotechnology, 2023, no. 3, pp. 30-44 (In Russ).