ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК, ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ ЖИРОВОЙ ТКАНИ И ВЫРАЩЕННЫХ EX-VIVO, ДЛЯ КОСМЕТИЧЕСКОГО ЛИПОФИЛИНГА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ИЛИ ЛИПОФИЛИНГА И/ИЛИ ОМОЛОЖЕНИЯ ЛИЦА
USE OF EX-VIVO ADIPOSE TISSUE-DERIVED STEM CELLS FOR COSMETIC BREAST LIPOFILLING OR FOR FACIAL LIPOFILLING AND/OR REJUVENATION

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к филингу мягких тканей с использованием стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo, или жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo. Они могут быть использованы для косметического филинга/увеличения молочной железы или для филинга и/или омоложения лица.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
1, 2
3
4
Коррекция объемных дефектов и увеличение существующего объема является актуальной проблемой в пластической хирургии. При коррекции дефектов объема или увеличении существующей ткани часто бывает необходимо использовать наполняющий материал, так называемый филлер или имплантат. Аутологическая жировая трансплантация (липофилинг) позволяет возмещать и увеличивать объем мягких тканей (например, косметическое увеличение молочной железы) и все чаще используется как в эстетической, так и в реконструктивной хирургии. Аутологическая жировая ткань рассматривается в качестве идеального наполнителя для увеличения объема мягких тканей, благодаря ее биосовместимости, универсальности, естественному виду, неиммуногенности, дешевизне и незатруднительному получению с низким уровнем осложнений со стороны донорского участка. Трансплантированный жировой трансплантат, однако, имеет непрогнозируемый и часто низкий показатель выживаемости, поэтому исследователи приложили усилия для поиска новых способов повышения его жизнеспособности. Исследование ксеногенного жирового трансплантата, обогащенного стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), у животных продемонстрировало валидность и воспроизводимость метода, в результате которого достигается увеличение остаточного объема трансплантата по сравнению с необогащенным аналогом. Результаты недавнего исследования с участием людей продемонстрировали и подтвердили преимущества и поразительный эффект добавления ASC к жировому трансплантату для увеличения остаточного объема и лучшего качества трансплантированной ткани.
В косметической индустрии растворы, пригодные для косметического филинга/омоложения лица, являются преимущественно искусственными (например, ботулинический токсин типа А, гиалуроновая кислота, коллаген, кальция гидроксилапатит, полимолочная кислота, микросферы полиметилметакрилат-метакрилата). Таким образом, из-за низкой гибкости и биосовместимости результаты часто оказываются неестественными. Искусственные наполнители разрушаются с течением времени с возможными нежелательными физическими побочными эффектами: от различных болезненных симптомов до косметологических дефектов. Аутологическая жировая ткань рассматривается в качестве идеального наполнителя, как описано выше. Тем не менее, исходы операции у пациентов, которым для филинга/омоложения лица применялся аутологический жир (т.е. без обогащения стволовыми клетками), могут в конечном итоге характеризоваться непропорциональностью, в связи с непрогнозируемым показателем выживаемости трансплантата.
5, 6
Некоторые хирурги предлагают использование лучшего и более прогнозируемого трансплантата, который может быть получен путем добавления к трансплантату так называемой стромальной сосудистой фракции (SVF). SVF представляет собой клеточный осадок, который образуется в процессе отбора жировой ткани путем липосакции и ферментативного расщепления жировых клеток с помощью коллагеназы. SVF, как известно, содержит небольшое количество стволовых клеток, полученных из жировой ткани (ASC).
Важно различать следующие понятия:
1) Обычный липофилинг: только жир
2) Клеточно-ассоциированный липотрансфер: Жир+SVF
3) Стволовые клетки, обогащающие липофилинг: Жир+ASC, выращенные ex-vivo
4) Филинг стволовыми клетками: ASC, выращенные ex-vivo
Настоящая патентная заявка относится только к вышеизложенным понятиям 3) и 4).
Определение стволовых клеток, упомянутых в настоящей патентной заявке.
Клетки, прикрепленные к поверхности культуры при посеве и культивировании стромальной сосудистой фракции.
Для применения в области молочной железы и лица могут быть использованы аутологические или аллогенные клетки.
Настоящее изобретение особенно пригодно для косметического филинга лица и омоложения и косметического филинга/увеличения молочной железы.
Подробное описание изобретения
4
8
5
7
Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей стволовые клетки, полученные из жировой ткани и выращенные ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани и выращенные ex-vivo (ASC), смешанные с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×10-2,0×10 ASC/мл жира; например 1,0×10-2,0×10, и использованию стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo, или жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, в качестве агента для косметического филинга/увеличения молочной железы или филинга/омоложения лица.
Хирургическая процедура для отбора ASC
Пациенты подвергаются минимальной липосакции в амбулаторных условиях.
Липоаспираты отбирают с помощью стандартных стерильных методов липосакции. Через разрезы увлажняющий раствор проникает в подкожно-жировую клетчатку. Липоаспират получают с помощью стандартного устройства для липосакции (например, Vibrasat) и герметично упаковывают в стерильный контейнер. Липоаспират транспортируют в клиническую лабораторию стволовых клеток.
Изоляция и культивирование ASC
Изоляция ASC и выращивание ex vivo будут осуществляться в соответствии с утвержденным протоколом, в лаборатории, отвечающей принципам надлежащей производственной практики (GMP) и клинического выращивания стволовых клеток, в помещениях для проведения клеточной терапии.
Липоаспират промывают фосфатно-солевым буферным раствором (PBS) и центрифугируют. Для выделения стромальной сосудистой фракции (SVF) супернатант инкубируют и ферментативно расщепляют с помощью коллагеназы (категория GMP). Ферментативная активность нейтрализуется с помощью питательной среды. Суспензию фильтруют с использованием фильтра 60-100 pm и центрифугируют. Клеточный осадок ресуспендируют в среде культивирования и подсчитывают клетки осадка, которые содержат SVF. В альтернативном способе изоляции SVF используется замкнутая система, например система GID SVF-1™. SVF высевают в культуральную среду, состоящую из модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM) или альфа-минимальной питательной среды (α-МЕМ), 1-5% пенициллин-стрептомицина, 1-5 МЕ/мл гепарина без консервантов и 2-20% объединенного человеческого тромбоцитарного лизата pHPL или любой другой альтернативной питательной среды, например эмбриональной телячьей сыворотки. Первичные культуры (Р0) инкубируют. Неадгезивные клетки отбраковывают, флаконы клеточных культур тщательно промывают PBS и заменяют среду. Среду меняют каждые 3-7 дней. Во время культивирования и в день отбора ASC каждый культуральный флакон/набор будет проверяться на патогенную контаминацию.
Получение pHPL
7
pHPL может быть изготовлен, как описано Schallmoser et al., с незначительными модификациями. Вкратце, после получения информированного согласия у здоровых доноров крови отбирают компоненты цельной крови. Вся донорская кровь тестируется на маркеры инфекционных заболеваний, в соответствии с действующим законодательством. Лейкоцитарные пленки отделяются от эритроцитов и плазмы. Четыре набора лейкоцитарных пленок объединяют с 1 набором плазмы в 1 наборе обогащенной тромбоцитами плазме (PRP) и хранят при температуре от -20°C до -80°C. Минимум десять наборов PRP оттаивают на водяной бане, а затем объединяют в отдельную партию PRP. Объединенную партию PRP аликвотируют на более мелкие фракции и замораживают при температуре от -20°C до -80°C. Далее, все аликвотированные контейнеры из отдельной объединенной партии PRP оттаивают на водяной бане и центрифугируют (например, при 4000 г в течение 15 мин) для осаждения фрагментов тромбоцитов. Наконец, pHPL-содержащий супернатант переносят в новые контейнеры и хранят при температуре от -40°C до -80°C для последующего использования в приготовлении клеточной культуральной среды.
Процедура отбора ASC
ASC собирают в Р0-Р4. Все флаконы/наборы культур клеток промывают PBS, а клетки отделяют от поверхности пластика с использованием либо химического вещества (например, TrypLE Select), либо с помощью физической обработки. Суспензию, содержащую ASС, центрифугируют (например, при 300 г в течение 5 мин), супернатант удаляют, а осадок клеток собирают после ресуспендирования в PBS. Клеточный осадок ASC промывают PBS, центрифугируя ASC и отбраковывая супернатант после каждой процедуры промывки. Клетки подсчитывают три раза и вычисляют среднее количество. Перед допуском к клиническому использованию ASC будут подвергаться тщательному контролю, включая: 1) гарантирование отсутствия патогенной контаминации, 2) показатели жизнеспособности ASC более чем 90%, 3) наличие морфологических признаков, которые должны быть присущи ASC. ASC будут транспортироваться в специальных стерильных контейнерах.
Липосакция, подготовка трансплантата и проведение процедуры липофилинга Хирургическая процедура проводится под местной или общей анестезией. Липоаспираты отбирают с помощью стандартных стерильных методов липосакции. Увлажняющий раствор (например, раствор Кляйнс (Kleins) с помощью тупоконечного инфильтратора через разрезы инфильтрируют в донорский участок. Отборочная канюля представляет собой инструмент 2-5 мм в диаметре с тупым кончиком, присоедененный к устройству сбора (например, Vibrasat). При необходимости липоаспират промывают солевым раствором. Собранный липоаспират либо оставляют для осаждения и формирования, либо центрифугируют (например, при 100 г в течение 5 мин). После процедуры разделения, жировой слой (верхний уровень) сцеживают, а водный слой (нижний уровень) также выпускают из шприцев. Средний слой, состоящий преимущественно из жирового трансплантата, используется для трансплантации.
Применение изобретения:
4
8
5
7
Косметический филинг молочной железы: Собранную жировую ткань смешивают с собранными и выращенными ex-vivo ASC в соотношении 5,0×10-2,0×10 ASC/мл жира, предпочтительно в соотношении 1,0×10-2,0×10 ASC/мл жира, и вводят аликвотами в молочную железу для косметического увеличения.
Пример методики инъекции
Обогащенный жировой трансплантат вводят горизонтально (параллельно к телу) в молочную железу, используя длинную иглу, чтобы избежать повреждения структуры за пределами ткани молочной железы. Игла вводится в переменных направлениях и плоскостях через несколько точек по всему краю ареолы и через несколько точек под молочной с целью достижения естественного распределения трансплантата.
4
8
5
7
Для филинга лица и коррекции морщин: собранную жировую ткань смешивают с собранными и выращенными ex-vivo ASC в соотношении 5,0×10-2,0×10 ASC/мл жира для стандартного филинга, предпочтительно в соотношении 1,0×10-2,0×10 ASC/мл жира. Количество стволовых клеток будет выращиваться в зависимости от необходимой степени филинга: чем меньший необходим объем филинга, тем выше концентрация ASC. Если желаемым эффектом является исключительно улучшение качества ткани, для равномерного распределения клеток будут использоваться только ASC, растворенные в PBS.
Пример методики инъекции
Жировые трансплантаты, используемые в качестве наполнителя, вводят горизонтально (параллельно поверхности) длинной иглой аликвотами, во избежание повреждения структуры за пределами целевой области. Игла вводится в переменных направлениях и плоскостях через несколько точек с целью достижения естественного распределения трансплантата.
При использовании исключительно для улучшения качества ткани, растворенные ASC вводятся в дерму и субдермально с помощью тонкой острой иглы и равномерно распределяются в целевой области.
Разрез и место инъекции зашивают и на донорский участок (а в некоторых случаях - и на реципиентный участок) накладывают послеоперационное компрессионное белье.
Клинические преимущества и новизна изобретения
3
4
8
9-11
ASC (выращенные ex-vivo), обогащающие жировые трансплантаты, или ASC в качестве моноагента никогда не использовались в клинике для инъекций в молочную железу или в лицо, не были описаны в литературе, и до представления патента США 61/839578 ни один автор не выдвинул идею такого клинического применения. Идея обогащения жировых трансплантатов выращенными ex-vivo ASC с целью улучшения выживаемости и качества жировых трансплантатов была продемонстрирована в мышиной модели и в недавнем исследовании обоснованности концепции на людях. Хотя, как уже упоминалось выше, данных о клиническом применении настоящего изобретения нет (имеется ввиду косметический филинг молочной железы и лица). Следует подчеркнуть, что данное изобретение (то есть использование ASC, выращенных ex-vivo, с целью филинга/омоложения лица и косметического филинга/увеличения молочной железы) значительно отличается от применения свежеизолированых SVF, включая небольшую фракцию невыращенных ASC, для обычного так называемого "клеточноопосредованного липофилинга". Этот метод был описан в литературе, и применялся для организма человека с непрогнозируемыми клиническими исходами, не характеризуясь достоверно более высокой эффективностью по сравнению с обычным липофиллингом. Обоснование использования клеток ASC, выращенных ex-vivo, для филинга лица, приведено в исследованиях, упомянутых выше, демонстрирующих выживаемость стволовых клеток после инъекции, в отличие от жировых клеток. Кроме того ASC сильно устойчивы к гипоксии и физическим воздействиям. При использовании стволовых клеток отдельно в качестве наполнителя может быть достигнут надежный остаточный объем/увеличение.
Существует много клинических преимуществ применения биосовместимого устойчивого наполнителя для молочной железы и лица, включая естественный вид, неиммуногенность, избежание побочных эффектов искусственного материала, а сама процедура может быть аутологической. Большинство пациентов имеют естественные жировые запасы на животе, бедрах, руках и ягодицах, которые могут быть использованы. Таким образом, пациенты получают строго индивидуальное и желаемое обновление рельефа тела. Аутологическая жировая ткань может быть легко пересажена путем простой липосакции и последующей инъекции, с незначительным дискомфортом для пациентов и минимальным риском развития побочных эффектов.
Примеры
Результаты исследования - Исследование обоснованности концепции (по аналогии с дизайном исследования, описанного, например, Kolle SF, Fischer-Nielsen А, Mathiasen АВ, et al. Обогащение аутологичных жировых трансплантатов стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, с целью выживания трансплантата: рандомизированное плацебо-контролируемое исследование. Lancet 2013; 382: 1113-20):
Цель исследования:
Жировые трансплантаты, обогащенные высокой дозой аутологических стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo (ASC), в сравнении с необогащенными жировыми трансплантатами (обычная пересадка жировой ткани).
Дизайн исследования:
Для каждого участника исследования были приготовлены очищенные жировые трансплантаты, один из которых обогащен ASC, а другой - не обогащен ASC (контроль). Жировые трансплантаты вводили подкожно.
6
Выбирали концентрацию 20×10 ASCs на мл обогащенного жирового трансплантата - примерно в 2000 раз выше физиологического уровня.
Объемы введенных жировых трансплантатов измеряли с помощью магнитно-резонансной томографии (МРТ) сразу после инъекции и через 121 день по сравнению с исходным результатом МРТ.
Результат:
Установлено, что по сравнению с контрольными трансплантатами остаточные объемы ASC-обогащенных жировых трансплантатов достоверно больше. Никаких серьезных побочных эффектов не регистрировали.
Аспекты:
В соответствии с вышеизложенным настоящее изобретение может быть дополнительно описано с помощью следующих аспектов, в которых при упоминании стволовых клеток следует понимать как аутологические, так и аллогенные клетки, если не указано иное.
1. Жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, для применения в способе филинга молочной железы.
2. Жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, или стволовые клетки, полученные из жировой ткани и выращенные ex-vivo, для применения в способе филинга лица.
4
8
3. Композиция, содержащая жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани и выращенные ex-vivo (ASC), смешанные с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×10-2,0×10 ASC/мл жира.
4. Использование жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, для филинга молочной железы.
5. Использование жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, для филинга лица.
6. Использование жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, в качестве наполнителя при филинге молочной железы.
7. Использование жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, или стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo, в качестве наполнителя при филинге лица.
8. Использование жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, или стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo, для косметического филинга молочной железы.
9. Использование жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, или стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo, для косметического филинга лица.
10. Использование жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, или стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo, в изготовлении лекарственного средства для лечения признаков старения.
4
8
11. Способ филинга молочной железы, отличающийся тем, что жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), смешивают с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×10-2,0×10 ASC/мл жира, и отличающийся тем, что жир вводят аликвотами или в виде нитей с помощью длинной иглы горизонтально (параллельно телу), в переменных направлениях и плоскостях через несколько точек по всему краю ареолы и через несколько точек под молочной железой с целью достижения естественного распределения трансплантата.
4
8
12. Способ филинга лица, отличающийся тем, что жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани и выращенные ex-vivo (ASC), смешивают с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×10-2,0×10 ASC/мл жира или растворяют в PBS с целью равномерного распределения клеток, и отличающийся тем, что жировые трансплантаты вводятся аликвотами или в виде нитей с помощью длинной иглы горизонтально (параллельно поверхности), в переменных направлениях и плоскостях через несколько точек, с целью достижения естественного распределения трансплантата.
4
8
13. Способ филинга лица, отличающийся тем, что жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани, выращенные ex-vivo (ASC), смешивают с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×10-2,0×10 ASC/мл жира, или растворяют в PBS с целью равномерного распределения клеток, и отличающийся тем, что растворенные ASС вводятся в дерму с помощью тонкой острой иглы и равномерно распределяются в целевой области; разрез и место инъекции зашивают, а на донорский участок (а в некоторых случаях - и на реципиентный участок) накладывают послеоперационные повязки.
4
8
14. Косметический способ филинга молочной железы, отличающийся тем, что жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), смешивают с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×10-2,0×10 ASC/мл жира, и отличающийся тем, что жир вводят аликвотами или в виде нитей с помощью длинной иглы горизонтально (параллельно телу), вставляя иглу в переменных направлениях и плоскостях в несколько точек по всему краю ареолы и в несколько точек под молочной железой с целью достижения естественного распределения трансплантата.
4
8
15. Косметический способ филинга лица, отличающийся тем, что жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани, выращенные ex-vivo (ASC), смешивают с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×10-2,0×10 ASC/мл жира или растворяют в PBS с целью равномерного распределения клеток, и отличающийся тем, что жировые трансплантаты вводятся аликвотами или в виде нитей с помощью длинной иглы горизонтально (параллельно поверхности) во избежание повреждения структуры вне целевой области, вставляя иглу в несколько точек в переменных направлениях и плоскостях с целью достижения естественного распределения трансплантата.
4
8
16. Косметический способ филинга лица, отличающийся тем, что жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани, выращенные ex-vivo (ASC), смешивают с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×10-2,0×10 ASC/мл жира, или растворяют в PBS с целью равномерного распределения клеток, и отличающийся тем, что растворенные ASC вводятся в дерму с помощью тонкой острой иглы и равномерно распределяются в целевой области; разрез и место инъекции зашивают, а на донорский участок (а в некоторых случаях - и на реципиентный участок) накладывают послеоперационные повязки
17. Косметический способ введения агента в кожу, отличающийся тем, что агент содержит жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo, или стволовые клетки, полученные из жировой ткани, выращенные ex-vivo.
4
8
18. Косметический способ введения агента в кожу, отличающийся тем, что агент содержит жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани, выращенные ex-vivo (ASC), и смешанные с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×10-2,0×10 ASC/мл жира.
19. Способ липофилинга кожи с использованием жировых трансплантатов, обогащенных стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовых клеток, полученных из жировой ткани и выращенных ex-vivo.
4
8
20. Способ липофилинга кожи с использованием композиции, содержащей жировые трансплантаты, обогащенные стволовыми клетками, полученными из жировой ткани и выращенными ex-vivo (ASC), или стволовые клетки, полученные из жировой ткани, выращенные ex-vivo (ASC), и смешанные с отобранной жировой тканью в соотношении 5,0×10-2,0×10 ASC/мл жира.
Литература
1. Leuchter I, Schweizer V, Hohlfeld J, Pasche P. Treatment of velopharyngeal insufficiency by autologous fat injection. Eur Arch Otorhinolaryngol 2010; 267: 977-83.
2. Coleman SR. Structural fat grafts: the ideal filler? Clin Plast Surg 2001; 28:111-9.
3. Lu F, Li J, Gao J, et al. Improvement of the survival of human autologous fat transplantation by using VEGF-transfected adipose-derived stem cells. Plast Reconstr Surg 2009; 124: 1437-46.
4. Kolle SF, Fischer-Nielsen A, Mathiasen AB, et al. Enrichment of autologous fat grafts with ex-vivo expanded adipose tissue-derived stem cells for graft survival: a randomised placebo-controlled trial. Lancet 2013; 382: 1113-20.
5. Yoshimura K, Sato K, Aoi N, Kurita M, Hirohi T, Harii K. Cell-assisted lipotransfer for cosmetic breast augmentation: supportive use of adipose-derived stem/stromal cells. Aesthetic Plast Surg 2008; 32: 48-55.
6. Matsumoto D, Sato K, Gonda K, et al. Cell-assisted lipotransfer: supportive use of human adipose-derived cells for soft tissue augmentation with lipoinjection. Tissue Eng 2006; 12: 3375-82.
7. Schallmoser K, Bartmann C, Rohde E, et al. Human platelet lysate can replace fetal bovine serum for clinical-scale expansion of functional mesenchymal stromal cells. Transfusion 2007; 47: 1436-46.
8. Peltoniemi HH, Salmi A, Miettinen S, et al. Stem cell enrichment does not warrant a higher graft survival in lipofilling of the breast: a prospective comparative study. J Plast Reconstr Aesthet Surg 2013; 66: 1494-503.
9. Rehman J, Traktuev D, Li J, et al. Secretion of angiogenic and antiapoptotic factors by human adipose stromal cells. Circulation 2004; 109: 1292-8.
10. Rasmussen JG, Frobert O, Pilgaard L, et al. Длительное гипоксического культуры и трипсинизации увеличить проангиогенных потенциал человека жировой ткани стволовых клеток. Cytotherapy 2010 года.
11. Thangarajah Н, Vial IN, Chang Е, et al. IFATS collection: adipose stromal cells adopt a proangiogenic phenotype under the influence of hypoxia. Stem Cells 2009; 27: 266-74.