Противоопухолевая и антиметастатическая активность рулида в режиме монотерапии и при сочетанном применении с цисплатином

1 1

134 ЛЕКАРСТВЕННАЯ ТЕРАПИЯ

к УДК 616-006.04-08-059:615.277.3 A. M. Kozlov1, S. M. Kiselev1, N. M. Peretolchina1, A. V Akleev2 ANTITUMOR AND ANTIMETASTATIC ACTIVITY OF RULID ALONE AND IN COMBINATION WITH CISPLATIN 1N. N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow 2Ural Research Practice Center of Radiation Medicine, Chelyabinsk ABSTRACT In the present study we examined cytotoxic, anti-invasive, antitumor and antimetastatic activity of rulid (roxithromycin), 14-membered ring macrolide antibiotic on mouse LLC0604 Lewis lung carcinoma and B16 F10 melanoma cells in vitro and in vivo. It was shown that rulid exibit cytotoxic activity at high concentration (0.2-0.4mM) and expressed anti-invasive effect against tested tumor cell lines. Peroral administration of rulid at 25 mg/kg twice daily reduced the tumor size of Lewis lung carcinoma to about 51% of that of the control, and significantly suppressed pulmonary metastasis of LLC cells (55 %) . Also we have demonstrated, that Rulid significantly potentiate the inhibition of tumor growth and metastasis induced by cisplatin. The obtained results of the study show that rulid may provide beneficial effects in combination with cytotoxic therapies against solid tumors and prove its use in clinical practice. Key words: rulid, anti-invasive activity, combine therapy, cisplatin. А. М. Козлов1, С. М. Киселев1, Н. М. Перетолчина1, А. В. Аклеев2 ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ И АНТИМЕТАСТАТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ РУЛИДА В РЕЖИМЕ МОНОТЕРАПИИ И ПРИ СОЧЕТАННОМ ПРИМЕНЕНИИ С ЦИСПЛАТИНОМ 1ГУ РОНЦ им. НН Блохина РАМН, Москва 2ФГУ Уральский научно-практический центр радиационной медицины, Челябинск РЕЗЮМЕ Изучена цитотоксическая, антиинвазивная, противоопухолевая и антиметастатическая активность антибиотика ряда макролидов рулида. В экспериментах in vitro показано, что препарат проявляет цитотоксическую активность в диапазоне высоких концентраций (0,2-0,4 мМ), а также выраженную антиинвазивную активность в отношении клеток карциномы легкого Льюис и меланомы B16 F10 при концентрациях, не вызывающих цито-токсического действия. На модели карциномы легкого Льюис убедительно продемонстрировано, что перораль-ное применение антибиотика в монорежиме в дозе 25 мг/кг оказывает значимое противоопухолевое (ТРО=51 %) и антиметастатическое действие (ТРМ=55 %). При комбинированном применении рулида с цисплатином отмечено потенцирование противоопухолевого и антиметастатического действия цитостатика. Полученные экспериментальные данные характеризуют рулид как перспективный компонент комбинированной терапии злокачественных новообразований и обосновывают возможность апробирования его в клинической практике. Ключевые слова: рулид, антиинвазивная активность, комбинированная терапия, цисплатин. лей разрушать базальные мембраны, компоненты меж-ВВЕДЕНИЕ клеточного матрикса, обеспечивая попадание бласт- В механизмах роста и метастатической диссеми- Ных клеток в кровеносную и лимфатическую системы, нации злокачественных новообразований важную последующий транспорт их к отдаленным органам, роёь играют адгезивные ктетотньге взаимодействия, имплантацию в ткани-мишени и формирование метареакции локального протеолиза, процесс неоангиоге- статических коёоний. неза [4]. Эта би°л°гические реакции лежат в °сн°ве Основными участниками процесса злокачествен-опухоёевого инвазивного способности опухо- ного инвазивного роста являются адгезивные молеку- ч

№3/том5/2006 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

1 1

1

ЛЕКАРСТВЕННАЯ ТЕРАПИЯ 135

>- лы (ICAM, VCAM, кадгерины, CD44, многочисленные биомолекул, принимающих важное участие в реализа-представители семейства интегринов- aj}3, афь а^в ции механизмов опухолевой инвазии матричных метали другие), сериновые протеазы и их ингибиторы (уро- лопротеиназ ММП-2 и ММП-9 и внутриклеточного киназа, плазмин, ингибиторы активаторов плазмино- фермента — индуцибельной NO-синтазы, ответствен-гена - PAI-1, PAI-2, матричные металлопротеиназы - нога за выработку клетками оксида азота NO [3; 5]. ММП-2, ММП-9, МТ1-ММП и их ингибиторы ТИМП Широкий спектр терапевтических мишеней анти-1-4) [8]. биотика предполагает возможность его действия на Современные представления о механизмах онко- функции транскрипционных факторов. Показано, в ча-патогенеза обосновывают целесообразность поиска стности, влияние рулида на активность ядерного фак-селективных ингибиторов инвазии и метастазирова- тора транскрипции NF-kB, одной из ключевых внут-ния злокачественных новообразований с патогенети- риклеточных биомолекул, принимающих участие в ре-ческой направленностью действия. Многочисленные гуляции экспрессии медиаторов межклеточных модуляторы адгезивных клеточных взаимодействий, взаимодействий [13]. ингибиторы инвазии и ангиогенеза находятся в насто- В связи с вышеизложенным представляет очевид-ящее время на разных стадиях предклинических ный интерес изучить рулид в качестве потенциально-и клинических исследований. Накопленные результа- го ингибитора метастазирования в режимах комби-ты подтверждают перспективность данного направле- нированного применения с цитостатиками. ния поиска новых лекарственных средств, способных Цель настоящей работы - экспериментальное из-расширить возможности метода лекарственной тера- учение цитотоксической, антиинвазивной активности пии онкологических заболеваний. Большинство спе- рулида in vitro, а также противоопухолевой и антиме-циалистов сходятся во мнении, что такие «таргетные» тастатической активности антибиотика в режимах мо-препараты могут быть наиболее полезными при соче- нотерапии и при сочетанном применении с противо-танном применения с цитостатиками в режимах адъю- опухолевым препаратом цисплатин (ДДП). вантной и неоадъювантной терапии. В последнее время появились данные, свидетель- МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ствующие о том, что биологические эффекты, прича- Препараты1, используемыге в эксперименте стные к реализации инвазии и метастазирования злока- Рулид (рокситромицин) - противомикробное сред-чественных новообразований, могут модулировать ле- ство из группы макролидов (Хехст Мэрион руссель карственные средства разных фармакологических с.897 Paris La Defence Cedex- France от 04.02.05, (годен классов, применяемые в клинической практике. К этой до 04.2008), содержание активного вещества в таблет-группе лекарственных средств относится, в частности, ке 150 мг. препарат рулид - антибиотик ряда макролидов. Цисплатин (ООО «ЛЭНС-фарм» p.n. 000024/01-2000, Рулид (рокситромицин, эритромицин 9-(0-(2-ме- свидетельство № 258298, сер. 15.11.04 (годен до токсиэтокси)метил)-оксим) является полусинтетичес- 1.12.06) 0,05 %-ный раствор (концентрат) для инъек-ким аналогом эритромицина и относится к антибиоти- ций, 1 флакон - 100 мл. кам группы макролидов, обладающих высокой бакте- риоцидной активностью в отношении широкого Клеточные линии опухолевых клеток, используе-спектра микроорганизмов. мые в работе, и условия их культивирования Показано, что наряду с антибактериальной актив- В работе использованы клеточная линия мелано-ностью антибиотики ряда макролидов обладают спо- мы мыши B16 F10 и культура клеток карциномы лег-собностью оказывать влияние на биологические про- кого Льюис LLC0604. цессы, задействованные в механизме развития опухо- Для получения культуры опухолевых клеток карци-ли и ее метастазирования [6; 9; 12]. номы легкого Льюис LLC0604 использовали операци-Интерес к изучению возможности использования онный материал мышей с подкожно трансплантирован-рулида при лечении онкологических заболеваний вы- ной карциномой легкого Льюис (штамм для культиви-зван обнаруженным японскими исследователями фак- рования in vivo). Забор опухолевого материала том подавления роста экспериментальной меланомы осуществляли на 15-е сутки после подкожной транс-B16 и ее метастазирования в легкие [11]. Торможение плантации опухолей мышам линии C57BL6. Животных роста опухолей у животных коррелировало с уменьше- умерщвляли методом цервикальной дислокации, опу-нием плотности кровеносных сосудов, инфильтрующих холь удаляли в стерильных условиях, отделяли соеди-опухолевую ткань. В дальнейших исследованиях нительнотканную капсулу, покрывающую внешнюю Yatsunami et al. убедительно продемонстрировали спо- поверхность опухоли, вырезали фрагменты опухолевой собность антибиотика ингибировать процесс неоангио- ткани на периферии опухолевого узла. После тщатель-генеза в опухоли [10]. Было также показано, что антиан- ного механического измельчения клеточную суспензию гиогенная активность рулида обусловлена его способ- фильтровали (металлические сетки 50 mesh, Sigma) ностью ингибировать экспрессию фактора роста и осаждали центрифугированием при 200 g в течеэндотелиальных клеток VEGF [6]. В последнее время ние10мин. Супернатант удаляли, клетки ресуспендиро-получены новые данные, свидетельствующие о способ- вали в 10 мл среды (RPMI 1640, 20 % ТЭС, 2мМ L-глу-ности антибиотика ингибировать экспрессию и других тамин, пенициллин (100 ед/мл), стрептомицин ч

№3/том5/2006 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

1

1 1

136 ЛЕКАРСТВЕННАЯ ТЕРАПИЯ

к (100мкг/мл)). На 4-м пассаже культивирования клетки Экспериментальные опухоли мышей, примененные переводили в среду с пониженным содержание сыво- в работе ротки (10% ТЭС). Эксперименты выполнены сисполь- Для проведения химиотерапевтических эксперимен-зованием клеток на 20-м пассаже культивирования. тов использовали мышей гибридов BDF1(C57Bl6 x DBA/2), самцов, массой 22-24 г. Инвазивный тест Противоопухолевую и антиметастатическую ак-Исследование антиинвазивной активности пре- тивность рулида в режимах монотерапии и при соче-парата проведено на культуре опухолевых клеток тайном применении с цисплатином (ДДП) изучали на карциномы легкого Льюис LLC0604 и меланомы экспериментальной модели опухоли - карциноме лег-B16 F10. кого Льюис (LLC). Постановку теста проводили в 24-луночных Оценку противоопухолевого и антиметастатическо-планшетах со вставочными ячейками, разделяющими го действия соединений проводили в соответствие с Ру-лунку на 2 части полупроницаемой полимерной мем- ководством по экспериментальному (доклиническому) браной с диаметром пор 8 мкм. Для покрытия мем- изучению новых фармакологических веществ [1]. бран использовали матригель с пониженным содержанием ростовых факторов в среде (Matrigel GFR, Becton РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Dickinson). Непосредственно перед проведением тес- Изучение цитотоксической и антиинвазивной акта нижнюю камеру заполняли хемоаттрактантом (кон- тивности рулида in vitro диционная среда 3Т3-фибробластов). Клетки высеива- В настоящей работе с использованием модифици-ли на мембрану с матригелем, добавляли тестируемое рованной нами ранее методики проведена оценка спо-соединение и инкубировали в СО2-инкубаторе (5 % собности препарата рулид влиять на инвазивную ак-СО2, 37оС) в течение времени, подобранного экспери- тивность опухолевых клеток. Данный тест позволяет ментально. Опыт проводили в 3 параллелях. оценить интегральный биологический эффект исследу-По окончании инкубационного периода клетки, емого соединения в отношении целого комплекса меж-не прошедшие через барьер, удаляли с внешней по- клеточных и клеточно-матриксных взаимодействий, за-верхности мембраны с помощью ватной палочки, действованных в метастатическом каскаде, включая смоченной культуральной средой. Клетки, прошед- адгезию клеток к субстрату, локальный протеолиз со-шие через барьер, окрашивали по Лейшману. Клет- единительнотканного матрикса и миграцию клеток по ки считали в 5 рандомизированных полях площадью градиенту концентрации хемоаттрактанта [2]. 1 мм2 в каждой из 3 параллельных лунок. Количес- Для адекватной оценки специфического антиин-твенную оценку ингибирования инвазии проводили вазивного эффекта тестируемого соединения важен по формуле: корректный выбор диапазона рабочих концентраций. Ки = (A-B)/Ax 100%, Тестирование антиинвазивной активности при кон-где Ки - коэффициент ингибирования инвазии; центрациях, оказывающих выраженное цитотоксиче-А - количество опухолевых клеток, прошедших ское действие, может привести к заведомо завышен-через барьер без добавления тестируемого соедине- ным результатам по ингибированию специфической ния; (антиинвазивной) активности. В связи с этим мы тес-В - количество опухолевых клеток, прошедших че- тировали соединения в диапазоне концентраций, не рез барьер с добавлением тестируемого соединения [2]. оказывающих значимого цитотоксического действия. Выбор диапазона используемых концентраций осу-МТТ-тест ществляли на основе данных, полученных по изуче-Опухолевые клетки рассеивали в 96-луночные нию цитотоксической активности рулида. Данные, ха-планшеты по 8 тысяч клеток/лунку, добавляя иссле- рактеризующие цитотоксическую активность анти-дуемые препараты в различных концентрациях, биотика в отношении клеток исследуемых линий, и инкубировали в течение 72 ч в стандартных усло- приведены на рис. 1. виях. За 2 ч до окончания инкубации в каждую лун- Показано, что рулид вызывает дозозависимое инку добавляли по 50 мкл раствора (0,5 мг/мл) MTT гибирование роста клеток исследуемых линий в диа-в среде для культивирования клеток. После появле- пазоне высоких концентраций (Ic50 = 250 и 350мкМ ния окраски среду удаляли, растворяли кристаллы для клеток меланомы B16 F10 и карциномы легкого формазана в 150 мкл диметилсульфоксида и спектро- Льюис LLC0604 соответственно). фотометрически измеряли интенсивность окраски На основе данных, полученных по изучению цито-по поглощению при 540 нм. Выживаемость клеток, токсической активности, антиинвазивное действие ру-подвергшихся воздействию исследуемых соедине- лида проводили в диапазоне концентраций от 5 до ний, оценивали в процентах, принимая за 100 % вы- 40 мкМ для клеток LLC0604 и от 10 до 60 мкМ для живаемость контрольной культуры. Критерием оцен- клеток меланомы мыши B16 F10. Учитывая тот факт, ки выраженности эффекта тестируемого соединения что антиинвазивная активность тестируемых соедине-является показатель Ic50, обозначающий концентра- ний может быть обусловлена различными механизма-цию препарата, при которой гибнет 50 % клеточной ми, требующими для реализации ожидаемого эффекта популяции [7]. определенного времени инкубации, была выбрана схе- ч

№3/том5/2006 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

1 1

мкМ

Рис. 1. Кривые выживаемости опухолевых клеток меланомы мыши В16 И0 и карциномы легкого Льиюс ЬЬС0604 при инкубации с рулидом, МТТ-тест, 72 ч

ма, предполагающая прединкубацию опухолевых клеток с тестируемыми соединениями в течение суток.

Данные по ингибированию инвазивной активности опухолевых клеток мыши представлены на рис. 2. Наибольший антиинвазивный эффект рокситромици-на наблюдали при концентрациях 38 мкМ (Ки = 31%) и 56 мкМ (Ки = 44 %) для клеток ЬЬС0604 и меланомы В16 И0 соответственно.

Рис. 2. Ингибирование инвазивной активности клеток карциномы легкого Льюис ЬЬС0604 и меланомы В16 И0 рулидом. Инвазивный тест, 72 ч

Полученные экспериментальные данные по антиинвазивной активности рулида послужили основой для разработки терапевтических схем применения препарата в качестве ингибитора метастазирования в системе in vivo.

Изучение противоопухолевой и антиметастати-ческой активности рулида в монорежиме в отношении карциномыг легкого Льюис

Оптимальная терапевтическая схема применения рулида для лечения инфекционных осложнений предполагает пероральное введение антибиотика (в таблетиро-ванной форме) 2 раза в сут (утро, вечер) в дозе 150 мг.

Для химиотерапевтических экспериментов на мышах в качестве реперной была выбрана доза 25 мг/кг,

пересчитанная с дозы, используемой в клинике для человека.

В ходе исследования диапазон терапевтических доз препарата был расширен и варьировал от 0,1 до 100 мг/кг. Схема и длительность курса терапии антибиотиком аналогична схеме, применяемой в клинической практике: рулид применяли перорально, в дозах 0,1; 1,0; 12,5; 25; 50; 100 мг/кг. Лечение начинали на 2-е сут после трансплантации опухоли и продолжали в течение 10 дней, вводя препарат 2 раза в сут с интервалом между введениями 9-10 ч.

При пероральном применении антибиотика получены результаты, которые свидетельствуют о способности рулида в диапазоне доз 25-100 мг/кг в режиме монотерапии достоверно тормозить развитие опухоли ЬЬС, причем зависимости противоопухолевого эффекта от величины дозы в данном диапазоне не наблюдалось. Дозы 0,1-12,5 мг/кг были не эффективны (рис 3 и 4). Применение препарата в дозах 50 и 100 мг/кг сопровождалось проявлением токсических эффектов (уменьшение массы тела животного).

- Контроль Рулид 1.0 мЛкг

дни опыта

Рулид 25 мг\кг - Рулид 0.1 м^кг

Рулид 12.5 мг\кг

Рис. 3. Действие рулида в диапазоне низких доз на рост первичного опухолевого узла карциномы легкого Льюис ЬЬС

- Контроль

Рулид 25 мг\кг -X— Рулид 50 мЛкг

Рулид 100 мг\кг

Рис. 4. Действие рулида в диапазоне высоких доз на рост первичного опухолевого узла карциномы легкого Льюис ЬЬС

На рис. 5 представлены данные сравнительного изучения противоопухолевой активности рулида в дозе 25 мг/кг при разных путях введения: пероральном и внутрибрюшинном. Показано, что пероральное применение рулида в дозе 25мг/кг более эффективно. Так, торможение роста опухоли (ТРО) на момент забоя животных на 39-е сут для оценки антиметастатического действия препарата при пероральном введении составляло 51 %, а при внутрибрюшинном - 30 %.

- Кбнтрохъ Рулад 25 мгАкгі.р.

Рущц25мг\кг per.os

75

45

15

-15 --45 -

-75 J

I : ; рулад 25 мг\кг per.os. 2 .1

3 Г рулад 12 5 мг\кг per os 4 ' рулад 12 5 мг\кг і р

5 П рулад 0 1 мг\кг per os 6 : : рулад 0 мг\кг і р

Рис. б. Зaвиcимocть aнтимeтacтaтичecкoгo дeйcт-

Рис.5. Сравнительный эффект действия рулида в дозе 25 мг/кг при пероральном и внутрибрюшинном вия рулида от величины дозы и способа введения пути введения на рост карциномы легкого Льюис ЬЬС

Aнтимeтacтaтичecкoe действие рулида также зави-ceлo от пути его введения. Ta^ при пероральном введении рулида в дозе 25мг/кг торможение роста метастазов (TPM) отставляло 55 %. Напротив, при внутрибрюшинном введении рулид не оказывал ингибирующего действия на развитие метастазов в легких (риа 6). Аналогичная завиетмость эффекта от шотоба введения по показателю торможения роста метастазов в легких прореживается и при ^пользовании препарата в дозах

0,1 мг/кг и 12,5 мг/кг. Эффекта антибиотика в этих дозах в отношении первичного опухолевого узла, как отмечено выше, не выявлено.

Taким образом, анализ ^во^п^сти полученных результатов позволил оценить дозу рулида 25 мг/кг при пероральном введении как оптимальную в действии на развитие первичной опухоли карциномы легкого LLC. В постедующем при комбинированном применении рулида c цитостатиками ишользовали дозу 25 мг/кг и пероральный путь его введения.

Изучение противоопухолевой и антиметастати-ческой активности рулида в режиме сочетанного применения с цисплатином

В cxeмax комбинированного лечения препараты рулид и ДДП ишользовали в тех же дозах и режимах, что и при монотерапии. Pyлид применяли перорально, в дозе 25 мг/кг. Лечение начинали на 2-е cyr посте траш-плантации опухоли и продолжали в течение 10 дней (2 раза в cyr c интервалом между введениями 9-10 ч).

ДДП применяли внутрибрюшинно, однократно в дозе 5 мг/кг на 2-е сут после перевивки опухоли.

Рулид в монорежиме оказывал выраженное ингибирующее влияние на рост первичной опухоли Льюис (ТРО на 10-19-е сут опыта составляло 60-62 %). Противоопухолевый эффект определялся не только непосредственно после окончания лечения, но и еще в течение 10 последующих суток опыта (табл.1). В последующем эффект снижался и к 39-м суткам (момент забоя экспериментальных животных) составлял 35 %.

Применение ДДП на 2-е сут в монорежиме ингибировало рост опухоли непосредственно после лечения на 78 %. Затем эффект терапии уменьшался и на момент забоя практически отсутствовал (16 % по сравнению с контролем) (см. табл.1).

Сочетанное применение рулида и ДДП оказывало более высокое противоопухолевое действие по сравнению с эффектами препаратов в монорежимах (ТР0=80-90 %, табл.1, рис. 7).

Следует подчеркнуть, что комбинированное применение рулида и ДДП вызывало пролонгированный эффект, который сохранялся на высоком уровне до 30-х сут опыта, превышая эффект рулида и ДДП в отдельности на те же сроки (ТРО комбинации - 66 % на 30-е сут) (см. табл.1). Эта закономерность сохранялась на момент забоя животных (ТРО ДДП - 16 %, ТРО рулида - 35 % ,ТР0 комбинации (ДДП+ рулид) - 41 %).

Антиметастатический эффект комбинации рулид + ДДП сравним по величине с эффектом рулида в моно-

Таблица 1

Действие препарата рулид в дозе 25 мг/кг при сочетанном применении с ДДП (2-е сут) на рост и метаста-зирование карциномы легкого Льюис

Группа опыта Доза, мг/кг, режим и способ введения ТРО, %, по объему опухоли. Дни опыта. Забой на 39-е сут

10 15 19 24 30 ТРО, %

Контроль1 595,6 ±188,3 1562,0 ±345,1 4595,0 ±837 8718,6 ±1613,1 17361,0 ±2767,2 13,0 г 847 мг

Рулид 25x10 (2 раза в сут.), per OS 60 62 62 44 38 35 55

ДДП2 5х1/2сут., в/бр. 78 58 55 З63 293 163 0

Рулид + ДДП2 25x10 (2 раза в сут.), per os. + 5x1 2-е сут. в/б 90 80 81 733 663 413 45

'для контроля даны значения объема опухоли в мм3; 2режим применения ДДП - 2 сутки после трансплантации опухоли; 3Р<0,05

>-

ч

- Контроль

-ДДП

-ДДП + рулад

-Рулад

Рис. 7. Действие рулида , ДДП и их комбинации на рост карциномы легкого Льюис. Раннее начало лечения

режиме (TPM (P+ДДП) - 45 %, TPM (P) - 55 %), тогда как применение ДДП в монорежиме не оказывало действия на развитие метастазов (TPM (ДДП) 2-е сут - 0 %).

Комбинация pyлидa и ДДП, что особенно важно, оказалась высокоэффективной и при отсроченном применения ДДП (на 7-е сут после трансплантации опухоли). В данном режиме комбинация показала вы-

сокий противоопухолевый эффект (максимальный уровень ТРО при комбинированном применении составил 88 %) . Выраженный эффект сохранялся до момента забоя животных (табл. 2, рис. 8).

Применение ДДП в монорежиме при отсроченном лечении (на 7-е сут после трансплантации опухоли) оказалось неэффективным (см. табл. 2). Торможение роста метастазов при сочетанном применеиии препаратов было достоверно значимым (29 %), однако более низким, чем при действии рулида в монорежиме. Неэффективность ДДП, примененного на 7-е сут, в действии на первичную опухоль и слабое действие на рост метастазов, по-видимому, снижает анти-метастатический эффект комбинации по сравнению с действием рулида в монорежиме.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Изучена антиинвазивная активность антибиотика ряда макролидов рулида в отношении опухолевых клеток разного гистогенеза, а также его противоопухолевая и антиметастатическая активность при монотерапии и в режиме сочетанного применения с циспла-тином на модели перевиваемой опухоли мышей - карциноме легкого Льюис.

Полученные результаты свидетельствуют о способности рулида в диапазоне концентраций, не оказывающих цитотоксического эффекта, ингибировать инвазивную активность клеток меланомы В16Р10

Таблица 2

Действие препарата рулид в дозе 25 мг/кг при сочетанном применении с ДДП (7-е сут) на рост и метаста-зирование карциномы легкого Льюис

Группа опыта Доза, мг/кг, режим и способ введения ТРО, %, по объему опухоли. Дни опыта. Забой на 39-е сут

10 15 19 24 30 ТРО, %

Контроль1 595,6 ±188,3 1562,0 ±345,1 4595,0 ±837 8718,6 ±1613,1 17361,0 ±2767,2 13,Ог 847мг

Рулид 25x10 (2 раза в сут) per os 60 62 62 44 38 35 55

ДДП2 5х1/7сут., в/бр. 34 1 +23 +10 1 0 +5

Рулид + ДДП2 25X10 (2 раза в сут) per OS.+ 5x1 7-е сут. в/б 88 73 71 61 46 39 29

'для контроля даны значения объема опухоли в мм3; 2отсроченный режим применения ДДП (на 7-е сут после трансплантации опухоли); 3«+» означает эффект стимуляции роста опухоли/ метастазирования

>-

ч

дни опыта

—♦—Контроль —Рулад —й— Рулад +ДДП —ДДП

Рис. 8. Действие рулида, ДДП (отсроченный вариант лечения , 7-е сут после трансплантации опухоли) и их комбинации на рост карциномы легкого Льюис

(56 мкМ, Ки = 44 %) и карциномы легкого Льюис ЬЬС0604 (38 мкМ, Ки =31 %).

Обнаружена значимая противоопухолевая и анти-метастатическая активность антибиотика в отношении карциномы легкого Льюис. Наиболее выраженный терапевтический эффект получен при перораль-

ном применении препарата в дозе 25 мг/кг в течение 10 последующих дней (ТРО =51 %, ТРМ=55 %) .

Показано, что в режиме комбинированного применения рулид усиливает как выраженность, так и длительность противоопухолевого и антиметастатическо-го действия цисплатина. Рулид потенцирует действие цитостатика как при раннем (2-е сут после прививки опухоли), так и при отсроченном применении (на 7-е сут), что приближает условия проведения эксперимента к реальной клинической ситуации, когда химиотерапия проводится на фоне развившихся опухолей.

Таким образом, полученные экспериментальные данные характеризуют антибиотик из класса макро-лидов - рулид как перспективный компонент комбинированной терапии злокачественных новообразований и обосновывают возможность апробирования его в клинической практике.

Кроме того, полученные данные свидетельствуют о принципиальной возможности усиления эффективности противоопухолевой терапии путем сочетанного применения традиционных препаратов цитостатиков и агентов с патогенетической направленностью действия, в частности, ингибиторов инвазивной активности опухолевых клеток.

Интерес к рулиду как компоненту комбинированной противоопухолевой терапии обуславливается также возможностью использования его в режимах адъювантной терапии с целью снижения частоты рецидивирова-

ния опухолей, а также предотвращения инфекционных осложнений после хирургического лечения.

ЛИТЕРАТУРА

1. Козлов А. М., Перетолчина Н. М., Киселев С. М. и др. Методические рекомендации по доклиническому изучению средств, способных ингибировать рециди-вирование злокачественных опухолей: Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - Под ред. член-кор. РАМН проф. Р. У. Хабриева. - М.: Медицина, 2005. -С. 669-674.

2. Albini A., Iwamoto Y., Kleinman H. K. et al. A rapid in vitro assay for quantitating the invasive potential of tumor cells // Cancer Res. -1987. - Vol. 47. - P. 3239-3245.

3. Asano K., Kamakazu K., Hisamitsu T., Suzaki H. Suppressive activity of macrolide antibiotics on nitric oxide production from nasal polyp fibroblasts in vitro // Acta Otolaryngol. - 2003. - Vol. 123. - P. 1064-1069.

4. Chambers A. F., Grooms A. C., Mcdonald A. C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites // Nat. Rev. Cancer. - 2002. - Vol. 2. - P. 563-572.

5. Kanai K., Asano K., Hisamitsu T., Suzaki H. Suppression of matrix metalloproteinase production from nasal fibroblasts by macrolide antibiotics in vitro // Eur Respir J. - 2004. - Vol. 23. - P. 671-678.

6. Matsune A., Sun D., Obori J. et al. Inhibitory effects of macrolides on exaggerated production of vascular endothelial growth factor (VEGF) caused by co-stimulation by hypoxia and TNF-alpha // Jpn J Antibiot. -2004. - Vol. 57. - P. 25-28.

7. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxity assays // J. Immunol. Meth. - 1983. - Vol. 65.

- P. 55-63.

8. Park C. C, Bissel M. J., Barcellos-HoffM. H. The influence of the microenviroment on the malignant phenotype // Mol. Med. Today. - 2000. - Vol. 6. - P. 324-329.

9. Sakata K., Inoue K., Shibazaki M. et al. Effects of macrolide antibiotics to inhibit infiltration and proliferation of malignant tumor cells-in vitro evaluation // Jpn J Antibiot. - 1997. - Vol. 50. - P. 32-34.

10. Yatsunami J., Fukuno Y., Nagata M. et al. Antiangiogenic and antitumor effects of 14-membered ring macrolides on mouse B16melanoma cells // Clin Exp Metastasis. - 1999. - Vol. 17. - P. 361-367.

11. Yatsunami J., Tsuruta N., Fukuno Y. et al. Inhibitory effects of roxithromycin on tumor angiogen-esis, growth and metastasis of mouse B16 melanoma cells // Clin. Exp Metastasis. - 1999. - Vol. 17. - P. 119-124.

12. Yatsunami J., Tsuruta N., Hara N. et al. Inhibition of tumor angiogenesis by roxithromycin, a 14-membered ring macrolide antibiotic // Cancer Lett. - 1998. - Vol. 25.

- P. 137-143.

13. Ueno S., Aoki D., Kubo F. et al. Roxithromycin inhibits constitutive activation of nuclear factor {kappa}B by diminishing oxidative stress in a rat model of hepatocellular carcinoma // Clin. Cancer Res. - 2005. - Vol. 11.

- P. 5645-5650.

Поступила 21.09.2006.