СИСТЕМА ПРЕЗЕНТАЦИИ ПЕПТИДОВ НА КЛЕТОЧНОЙ ПОВЕРХНОСТИ

1. Слитый белок, содержащий первый домен (i), второй домен (ii) и третий домен (iii), где второй домен расположен между первым и третьим доменами, где
(i) частичная последовательность тетраспанина, которая включает трансмембранный домен 1 (TM1), малую внеклеточную петлю (SEL), трансмембранный домен 2 (TM2), малую внутриклеточную петлю (SIL) и трансмембранный домен 3 (TM3) или содержит последовательность, гомологичную ей, с идентичностью последовательности, составляющей, по меньшей мере, 70% по всей длине,
(ii) содержит пептид с заданной аминокислотной последовательностью, имеющий идентичность последовательности, составляющую менее чем 70% по всей длине в отношении большой внеклеточной петли (LEL) тетраспанина и
(iii) содержит частичную последовательность тетраспанина, содержащую трансмембранный домен 4 (TM4) или последовательность, гомологичную ей, с идентичностью последовательности, составляющей, по меньшей мере, 70% по всей длине.
2. Слитый белок по п. 1, отличающийся тем, что гибкие линкеры расположены между первым и вторым доменами и/или между вторым и третьим доменом.
3. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что второй домен (ii) содержит дополнительно одну или несколько частичных последовательностей LEL тетраспанина или гомологичных ей последовательностей с идентичностью последовательности, составляющей, по меньшей мере, 70% по всей длине, которые расположены в C- и/или N-концевой области пептида с заданной аминокислотной последовательностью.
4. Слитый белок по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что второй домен (ii) содержит дополнительно одну или несколько последовательностей распознавания протеазы, которые располагаются в C- и/или N-концевой области пептида с заданной аминокислотной последовательностью.
5. Слитый белок по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что пептид выбран из эпитопа, белка, антигена или фермента.
6. Слитый белок по любому из предыдущих пунктов, содержащий дополнительно четвертый домен (iv) на N-конце слитого белка и/или пятый домен (v) на С-конце слитого белка.
7. Слитый белок по п. 6, отличающийся тем, что четвертый и/или пятый домен содержит метку, например, аффинную метку или флуоресцентную метку.
8. Молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует слитый белок по любому из пп. 1-7.
9. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 8, предпочтительно функционально связанную с последовательностью контроля экспрессии.
10. Клетка, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п. 8 или вектор по п. 9.
11. Клетка по п. 10, отличающаяся тем, что клетка является эукариотической клеткой, предпочтительно клеткой млекопитающего, например, человеческой клеткой.
12. Клетка по п. 10 или 11, отличающаяся тем, что дополнительно трансформирована или трансфецирована, по меньшей мере, одной дополнительной молекулой нуклеиновой кислоты или, по меньшей мере, еще одним экспрессирующим вектором.
13. Мембранный препарат, который был получен из клетки по любому из пп. 10-12.
14. Синтетическая мембранная система, содержащая мембрану и слитый белок по любому из пп. 1-7, молекулу нуклеиновой кислоты по п. 8 или вектор по п. 9.
15. Способ презентации пептида с заданной аминокислотной последовательностью на поверхности клетки, включающий стадии:
(a) обеспечение клетки по любому из пп. 10-12,
(b) культивирование клетки в условиях, при которых экспрессируется слитый белок по любому из пп. 1-7.
16. Способ закрепления пептида с заданной аминокислотной последовательностью в мембране, включающий стадии:
(а) обеспечение мембраны и
(b) приведение в контакт мембраны со слитым белком по любому из пп. 1-7 в условиях, при которых в мембране происходит закрепление слитого белка, или приведение в контакт мембраны с нуклеиновой кислотой по п. 8 или вектора по п. 9, в условиях, при которых слитый белок по любому из пп. 1-7 экспрессируется и закрепляется на мембране.
17. Применение клетки по любому из пп. 10-12, мембранного препарата по п. 13 или синтетической мембранной системы по п. 14
- в способе скрининга партнеров пептида по взаимодействию пептида,
- для изучения взаимодействий пептида с партнерами по взаимодействию
- в способе получения пептида
- в качестве реагента иммунизации в способе получения антител или
- в качестве детектирующего реагента.
18. Клетка по любому из пп. 10-12, мембранный препарат по п. 13 или синтетическая мембранная система по п. 14 для применения в качестве вакцины или лекарственного средства.
19. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая первый сегмент последовательности (i), второй сегмент последовательности (ii) и третий сегмент последовательности (iii), где второй сегмент последовательности расположен между первым и третьим сегментами последовательности, где
(i) кодирует частичную последовательность тетраспанина, которая включает трансмембранный домен 1 (TM1), малую внеклеточную петлю (SEL), трансмембранный домен 2 (TM2), малую внутриклеточную петлю (SIL) и трансмембранный домен 3 (TM3) или последовательность, гомологичную им с идентичностью последовательности, составляющей, по меньшей мере, 70% по всей длине,
(ii) содержит сайт множественного клонирования и
(iii) кодирует частичную последовательность тетраспанина, содержащую трансмембранный домен 4 (TM4) или последовательность, гомологичную ей, с идентичностью последовательности, составляющую, по меньшей мере, 70% по всей длине.
20. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 19, предпочтительно функционально связанную с последовательностью контроля экспрессии.
21. Набор, содержащий:
(i) молекулу нуклеиновой кислоты по п. 8 или 19 или вектор по п. 9 или 20 и
(ii) клетку или мембрану.