ПРОИЗВОДНЫЕ ИМИДАЗОПИРИДИНА, ИНГИБИРУЮЩИЕ СЕКРЕЦИЮ КИСЛОТЫ ЖЕЛУДОЧНОГО СОКА
GASTRIC ACID SECRETION-INHIBITING IMIDAZOPYRIDINE DERIVATIVES

Область техники
Настоящее изобретение относится к новым производным имидазопиридина и их фармацевтически приемлемым солям, которые ингибируют экзогенно- или эндогенно-стимулированную секрецию кислоты желудочного сока. Указанные соединения полезны при предупреждении и лечении желудочно-кишечных воспалительных заболеваний. В дополнительных аспектах изобретение, в частности, относится к замещенным имидазо[1,2-а]пиридинам и их фармацевтически приемлемым солям, к способам их получения, к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения в качестве активных ингредиентов, и к применению указанных соединений в изготовлении лекарственных средств для указанного выше медицинского применения.
Предшествующий уровень техники
Замещенные имидазо[1,2-а]пиридины, полезные в лечении пептических язвенных болезней, известны из ЕР 0033094, US 4450164, ЕР 0204285, US 4725601, WO 99/55706, WO 99/55705, WO 03/018582 и WO 2006/100119, и из публикаций J. J. Kaminski et al. в Journal of Medicinal Chemistry, vol.28, 876-892, 1985 и vol.34, 533-541, 1991.
+
+
Обзор фармакологии кислотной помпы желудочного сока (H, К-АТФаза) представлен Sachs et al. в Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., vol.35, 277-305, 1995.
+
+
В WO 9955706 раскрыты производные имидазопиридина, в которых фенильная группировка замещена и в которых имидазо-группировка замещена карбоксамидной группой в положении 6. Раскрытые производные эффективны в качестве ингибиторов желудочно-кишечной H/K-АТФазы.
+
+
В WO 2007039464 раскрыты замещенные имидазопиридиновые производные, эффективные в качестве ингибиторов желудочно-кишечной Н/K-АТФазы.
В WO 2005058895 раскрыты мезилатные соли и кристаллические формы производных пиридина и применение этих соединений для лечения желудочно-кишечных расстройств.
В WO 2005041961 раскрыты производные пиридина для лечения гастроэзофагеального рефлюкса.
+
+
В WO 2004113338 раскрыто замещенное имидазопиридиновое соединение, которое полезно в качестве ингибитора Н/К-АТФазы при лечении пептических язвенных болезней.
+
+
В WO 2004113340 раскрыты производные имидазопиридина, которые полезны в качестве ингибитора H/К-АТФазы при лечении пептических язвенных болезней.
Краткое изложение сущности изобретения
В настоящее время обнаружены новые замещенные имидазо[1,2-а]пиридины, полезные в лечении желудочно-кишечных воспалительных заболеваний, в частности в лечении пептических язвенных болезней. Указанные замещенные имидазо[1,2-а]пиридины демонстрируют несколько благоприятных свойств, таких как быстрое начало действия, высокая эффективность in vivo и/или большая продолжительность действия, высокая растворимость и высокая скорость растворения. Вследствие своего цвиттерионного характера эти соединения образуют растворимые соли как в кислотных, так и в щелочных растворах.
Описание изобретения
2
Неожиданно было обнаружено, что новые замещенные имидазо[1,2-а]пиридины общей формулы I особенно эффективны в качестве ингибиторов секреции кислоты желудочного сока. В частности, настоящее изобретение относится к замещенным имидазо[1,2-а]пиридинам общей формулы I, где заместитель R представляет собой -СНСООН или -СООН, и их фармацевтически приемлемым солям
В зависимости от условий способа замещенные имидазо[1,2-а]пиридины формулы I получают либо в нейтральных, либо в солевых формах. Как нейтральные формы, так и солевые формы этих соединений находятся в пределах объема настоящего изобретения.
Способ
В настоящем изобретении также предложен способ получения замещенных имидазо[1,2-а]пиридинов формулы I.
Способ получения замещенных имидазо[1,2-а]пиридинов формулы I подробно описан ниже.
Исходное вещество 2,3-диметил-8-(2,6-диметилбензиламино)-N-гидроксиэтил-имидазо-[1,2-а]пиридин-6-карбоксамид формулы II может быть получен с использованием любого подходящего метода, известного в данной области техники, например согласно способу, раскрытому в WO 02/20523, при котором
а) Обеспечивают возможность взаимодействия имеющегося в продаже 6-хлор-5-нитроникотиноилхлорида формулы III
1
1
со спиртом формулы R-OH, где R представляет собой алкильную группу, такую как метил, этил, изопропил и так далее, с получением соответствующего эфира приведенной ниже формулы IV
Реакцию типично проводят в стандартных условиях.
б) Обеспечивают возможность взаимодействия соединения формулы IV с аммиаком с получением приведенного ниже соединения формулы V
1
где R представляет собой алкильную группу, такую как метил, этил, изопропил и так далее. Реакцию типично проводят в стандартных условиях.
в) Соединение формулы V гидрируют путем использования, например, газообразного водорода и катализатора гидрирования, такого как Pd/C, с получением соединения формулы VI
1
где R представляет собой алкильную группу, такую как метил, этил, изопропил и так далее. Реакцию типично проводят в стандартных условиях в инертном растворителе.
1
г) Имидазо[1,2]пиридиновое соединение формулы VII, где Rпредставляет собой алкильную группу, такую как метил, этил, изопропил и так далее, получают путем обеспечения возможности взаимодействия соединения формулы VI с 3-хлор-2-бутаноном или 3-бром-2-бутаноном в стандартных условиях в инертном растворителе, таком как ацетон, ацетонитрил, циклогексанон и диметилформамид и так далее, возможно в присутствии основания.
д) Затем обеспечивают возможность взаимодействия имидазо[1,2]пиридинового соединения формулы VII с соединением формулы VIII
1
где Х представляет собой бромо (Br) или хлоро (Cl), с получением соединения формулы IX, где R представляет собой алкильную группу, такую как метил, этил, изопропил и так далее. Эту реакцию типично проводят в инертном растворителе, таком как ацетон, ацетонитрил, диметоксиэтан, этанол или диметилформамид, возможно в присутствии основания, такого как карбонат калия, карбонат натрия или органический амин, такой как триэтиламин.
е) Обеспечивают возможность взаимодействия соединения формулы IX с этаноламином с получением исходного вещества 2,3-диметил-8-(2,6-диметилбензиламино)-N-гидроксиэтил-имидазо[1,2-а]пиридин-6-карбоксамид формулы II. Реакцию типично проводят путем нагревания реагентов в чистом этаноламине или в растворителе(ях), таком как метанол или этанол, при повышенной температуре, такой как от 40 до 80°С. Реакцию катализируют цианидными солями и сильными основаниями, такими как метоксид натрия, этоксид калия и 1,8-диазабицикло(5.4.0)ундец-7-ен (ДБУ).
2
2
Согласно изобретению способ получения замещенных имидазо[1,2-а]пиридинов формулы I, где R представляет собой -СНСООН или -СООН, включает приведенные ниже стадии, при котором обеспечивают возможность взаимодействия исходного вещества 2,3-диметил-8-(2,6-диметилбензиламино)-N-гидроксиэтил-имидазо[1,2-а]пиридин-6-карбоксамид с 1-4 экв. ангидрида, выбранного из глутарового ангидрида и янтарного ангидрида, с получением желаемого соединения формулы I. Реакцию проводят при повышенной температуре путем нагревания реагентов в инертном растворителе или смеси растворителей. Подходящими инертными растворителями являются, например, ДМФ (диметилформамид), ДМА (диметилацетамид), NMP (N-метилпирролидон), ТГФ (тетрагидрофуран), циклические кетоны, такие как циклогексанон, и алициклические кетоны, такие как ацетон и метилэтилкетон. Подходящая температура реакции находится в интервале от 40 до 130°С, предпочтительно от 60 до 120°С. Давление может находиться в интервале от атмосферного давления до 5×10 кПа. После реакции продукт выделяют, например, используя кристаллизацию, из реакционной смеси, или осаждают, используя подходящий растворитель, такой как ацетон.
В зависимости от условий способа замещенные имидазо[1,2-а]пиридины формулы I получают либо в нейтральных, либо в солевых формах. Вследствие цвиттерионной природы соединение формулы I при рН не более 4 находится в форме положительно заряженного катиона, например, в гидрохлоридной соли при рН не менее 8 оно находится в форме отрицательно заряженного аниона, такого как карбоксилатный анион, тогда как при рН в интервале приблизительно между 5 и 7 может существовать нейтральная форма соединения, поскольку диэлектрическая точка соединения может находиться вблизи интервала рН 5-7.
При получении солей замещенных имидазо[1,2-а]пиридинов формулы I, в частности солей присоединения кислоты, предпочтительно используют кислоты, способные к образованию фармацевтически приемлемых солей. Примерами подходящих кислот являются соляная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, азотная кислота и сульфоновые кислоты, такие как метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, гидроксиэтансульфоновая кислота, толуолсульфоновая кислота и нафталинсульфоновая кислота.
При получении щелочных солей, таких как соли натрия, калия, кальция и магния, предпочтительно используют основания, способные к образованию фармацевтически приемлемых солей. Эти соли можно получить путем использования таких оснований, как гидроксид натрия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, гидроксид калия, карбонат калия, бикарбонат калия, гидроксид кальция, ацетат кальция, гидроксид магния и ацетат магния.
Медицинское применение
В следующем аспекте изобретение относится к применению замещенных имидазо[1,2-а]пиридинов формулы I в терапии. В частности, в изобретении предложено применение замещенных имидазо[1,2-а]пиридинов формулы I в изготовлении лекарственного средства для ингибирования секреции кислоты желудочного сока и для лечения желудочно-кишечных воспалительных заболеваний, в частности пептических язвенных болезней.
Было выявлено, что замещенные имидазо[1,2-а]пиридины по изобретению обладают значительным терапевтическим эффектом. В исследованиях на крысах, при которых крысам вводили 1 мкмоль/кг соединений по изобретению, максимальное ингибирование секреции кислоты, составляющее 100%, наблюдали для Примера 1, и 70% для Примера 2. Таким образом, эти соединения можно применять для предупреждения и лечения желудочно-кишечных воспалительных заболеваний и заболеваний, связанных с кислотой желудочного сока, таких как гастрит, рефлюкс-эзофагит, синдром Золлингера-Эллисона и пептическая язвенная болезнь, включая язву желудка и язву двенадцатиперстной кишки, у млекопитающих, включая человека. Кроме того, эти соединения можно применять для лечения других желудочно-кишечных расстройств, при которых желудочное антисекреторное действие является желательным, например, у пациентов с гастриномами и у пациентов с острым кровотечением верхнего отдела желудочно-кишечного тракта. Эти соединения также можно применять для эффективного контроля и лечения изжоги и других симптомов гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (ГЭРБ), регургитации, краткосрочной и долгосрочной терапии кислотной рефлюксной болезни и тошноты. Их также можно применять в ситуациях интенсивной терапии пациентов и в дооперационный и послеоперационный период для предупреждения аспирации кислоты и стрессового образования язвы.
Цвиттерионный характер придает соединениям по изобретению особенно благоприятные физические свойства. Эти свойства делают соединения пригодными для различных фармацевтических композиций. Соединения по изобретению обладают хорошей растворимостью в кислых средах (например, в желудке), что является полезным для препарата быстрого высвобождения (IR). При нейтральном рН соединения по изобретению, например цвиттерионы, обладают низкой растворимостью, которую можно использовать в препарате пролонгированного высвобождения (ER). При основном рН соединения по изобретению находятся в анионных формах, которые обладают хорошей растворимостью и особенно пригодны для i.v. (внутривенных) препаратов.
Соединения по изобретению после введения in vivo образуют линапразан в качестве основного метаболита. Линапразан является известным ингибитором секреции кислоты желудочного сока. Таким образом, соединения по изобретению также действуют в качестве пролекарств по отношению к линапразану.
Типичная суточная доза соединений по изобретению как фармацевтически активных веществ варьируется в широком диапазоне и будет зависеть от различных факторов, таких как, например, индивидуальная потребность каждого пациента, путь введения и заболевание, подлежащее лечению. В общем, пероральные и парентеральные дозировки будут находиться в диапазоне от 5 до 500 мг активного вещества в сутки, предпочтительно в интервале от 10 до 60 мг, например, 40 мг.
Соединения по изобретению можно вводить пациенту как при непрерывном лечении, так и при лечении по необходимости, в зависимости от индивидуальных потребностей и заболевания. Благодаря соединениям по изобретению предоставляется возможность улучшить качество жизни индивидуумов, страдающих от заболеваний, связанных с кислотой желудочного сока, и/или желудочно-кишечных воспалительных заболеваний.
Соединения по изобретению можно вводить пациенту-человеку или пациенту-млекопитающему, не являющемуся человеком, такому как лошадь, собака, кошка и так далее, как при непрерывном лечении, так и при лечении по необходимости, в зависимости от индивидуальных потребностей и заболевания.
Фармацевтические композиции
В еще одном дополнительном аспекте изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим замещенные имидазо[1,2-а]пиридины по изобретению или их фармацевтически приемлемые соли в качестве активных ингредиентов.
Для терапевтического применения соединения по изобретению приготавливают в виде фармацевтических композиций для перорального, ректального, парентерального или другого пути введения. Фармацевтические композиции содержат вещество по изобретению в комбинации с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым ингредиентом/эксципиентом. Фармацевтические композиции могут содержать носитель в форме твердого, полутвердого или жидкого разбавителя, либо фармацевтическая композиция может содержаться в капсуле.
Эти фармацевтические препараты являются дополнительным объектом изобретения. Типично, количество соединения по изобретению в фармацевтической композиции составляет от 0,1 до 90% по массе, предпочтительно от 0,1 до 20% по массе в препаратах для перорального введения.
Приготовление фармацевтических композиций по изобретению в форме стандартных доз для перорального введения включает стадии, на которых соединение по изобретению смешивают с твердыми порошкообразными ингредиентами, известными в данной области техники, такими как лактоза, сахароза, сорбит, маннит, крахмал, амилопектин, производные целлюлозы, желатин или другой подходящий ингредиент, а также с разрыхлителями и смазывающими агентами, такими как стеарат магния, стеарат кальция, стеарилфумарат натрия и полиэтиленгликолевые воски. Затем смесь обрабатывают с получением гранул или прессуют с получением таблеток, используя любой подходящий способ, известный в данной области техники.
Мягкие желатиновые капсулы можно готовить с капсулами, содержащими соединения по изобретению, растительное масло, жир или другой подходящий носитель для мягких желатиновых капсул. Твердые желатиновые капсулы могут содержать гранулы соединений по изобретению. Твердые желатиновые капсулы также могут содержать соединения по изобретению в комбинации с твердыми порошкообразными ингредиентами, такими как лактоза, сахароза, сорбит, маннит, картофельный крахмал, кукурузный крахмал, амилопектин, производные целлюлозы или желатин.
Стандартные лекарственные формы для ректального введения можно приготовить (1) в форме суппозиториев, содержащих соединения по изобретению, смешанные с нейтральной жировой основой; (2) в форме желатиновой ректальной капсулы, содержащей соединения по изобретению в смеси с растительным маслом, жидким парафином или другим подходящим носителем для желатиновых ректальных капсул; (3) в форме готовой к применению микроклизмы или (4) в форме сухой композиции для микроклизмы для восстановления в подходящем растворителе непосредственно перед введением.
Жидкие препараты для перорального введения можно приготовить в форме сиропов или суспензий, например растворов или суспензий, содержащих от 0,1% до 20% по массе соединения по изобретению, при этом остальная часть состоит из сахара или сахарных спиртов и смеси этанола, воды, глицерина, пропиленгликоля и полиэтиленгликоля. При желании такие жидкие препараты могут содержать красящие вещества, корригенты, сахарин и карбоксиметилцеллюлозу или другой загуститель. Жидкие препараты для перорального введения также можно приготовить в форме сухого порошка для восстановления подходящим растворителем перед применением.
Растворы для парентерального введения можно приготовить в виде раствора соединений по изобретению в фармацевтически приемлемом растворителе, предпочтительно, в концентрации от 0,1% до 10% по массе. Эти растворы также могут содержать стабилизирующие ингредиенты и/или буферные ингредиенты и распределены по ампулам или флаконам, содержащие стандартные дозы. Растворы для парентерального введения также можно приготовить в виде сухого препарата для восстановления подходящим растворителем непосредственно перед применением.
Соединения по изобретению также можно применять в композициях вместе с другими активными ингредиентами, например, для лечения или профилактики состояний, включающих Helicobacter pylori-инфекцию слизистой оболочки желудка человека. Другие такие активные ингредиенты могут представлять собой антибактериальные агенты и, в частности:
- β-лактамные антибиотики, такие как амоксициллин, ампициллин, цефалотин, цефаклор или цефиксим;
- макролиды, такие как эритромицин или кларитромицин;
- аминогликозиды, такие как гентамицин, канамицин или амикацин;
- хинолоны, такие как норфлоксацин, ципрофлоксацин или эноксацин;
- другие, такие как метронидазол, нитрофурантоин или хлорамфеникол; или
- препараты, содержащие соли висмута, такие как субцитрат висмута, субсалицилат висмута, субкарбонат висмута, субнитрат висмута или субгаллат висмута.
+
+
Соединения по изобретению также можно применять вместе или в комбинации для одновременного, раздельного или последовательного применения с антацидами, такими как гидроксид алюминия, карбонат магния и гидроксид магния или альгиновая кислота, либо вместе или в комбинации для одновременного, раздельного или последовательного применения с фармацевтическими препаратами, которые ингибируют секрецию кислоты, такими как 1-12-блокаторы (например, циметидин, ранитидин), ингибиторы HK-АТФазы (например, омепразол, пантопразол, лансопразол, рабепразол или тенатопразол), либо вместе или в комбинации для одновременного, раздельного или последовательного применения с гастропрокинетическими средствами (например, цизапридом или мосапридом).
Соединения по изобретению также можно применять вместе или в комбинации для одновременного, раздельного или последовательного применения с другими активными ингредиентами, например, для лечения или профилактики состояний, включающих медикаментозно-индуцированную язву желудка. Другие такие активные ингредиенты могут представлять собой НПВП (нестероидные противовоспалительные препараты), NO-высвобождающие НПВП, ингибитор СОХ-2 или бисфосфонат.
Соединения по изобретению также можно применять вместе или в комбинации для одновременного, раздельного или последовательного применения с антагонистом гастрина, таким как антагонист ССК2.
Соединения по изобретению соответствующим образом применяют в способе лечения и/или предупреждения заболеваний, связанных с кислотой желудочного сока, желудочно-кишечных воспалительных заболеваний, изжоги, симптоматической ГЭРБ, эрозивного эзофагита, пептической язвенной болезни, регургитации, кислотных рефлюксных болезней или тошноты у человека или млекопитающего, не являющегося человеком, включающем введение эффективного количества соединения по изобретению нуждающемуся в этом человеку или млекопитающему, не являющемуся человеком.
Более подробно изобретение проиллюстрировано приведенными ниже примерами.
Примеры
Пример 1
Получение 5-{2-[({8-[(2,6-диметилбензил)амино]-2,3-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил}карбонил)амино]этокси}-5-оксопентановой кислоты
1
К ДМФ (10 мл) добавляли 2,3-диметил-8-(2,6-диметилбензиламино)-N-гидроксиэтил-имидазо[1,2-а]пиридин-6-карбоксамид (полученный способом согласно WO 02/20523) (2,0 г, 5,46 ммоль) и глутаровый ангидрид (0,95 г, 8,33 ммоль). Смесь нагревали до 80°С и перемешивали при этой температуре в течение 16 ч. К реакционной смеси добавляли ацетон (20 мл), в результате чего продукт начинал кристаллизоваться. Смесь охлаждали до комнатной температуры. Через 4 ч продукт отфильтровывали и промывали ацетоном (20 мл). Было получено 2,25 г (86%) указанного в заголовке соединения. Структуру соединения подтверждали спектром H-ЯМР.
1
H-ЯМР (300 МГц, ДМСО (диметилсульфоксид)): δ 1.73 (m, 2H), 2.2-2.4 (m, 16H), 3.52 (m, 2H), 4.18 (t, 2H), 4.36 (d, 2H), 4.99 (t, 1H), 6.67 (s, 1H), 7.0-7.2 (m, 3Н), 8.04 (s, 1H), 8.56 (t, 1H), 12.10 (bs, 1H).
Пример 2
Получение 4-{2-[({8-[(2,6-диметилбензил)амино]-2,3-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил}карбонил)амино]этокси}-4-оксобутановой кислоты
1
К ДМФ (2 мл) добавляли 2,3-диметил-8-(2,6-диметилбензиламино)-N-гидроксиэтил-имидазо[1,2-а]пиридин-6-карбоксамид (полученный способом согласно WO 02/20523) (250 мг, 0,680 ммоль) и янтарный ангидрид (150 мг, 1,50 ммоль). Смесь перемешивали в течение 16 ч при 70°С. Добавляли ацетон (7 мл) и смесь охлаждали до комнатной температуры. После перемешивания в течение нескольких часов при комнатной температуре образовавшийся осадок отфильтровывали и промывали ацетоном (10 мл). Было получено 280 мг (88%) указанного в заголовке соединения. Структуру соединения подтверждали спектром H-ЯМР.
1
H-ЯМР (300 МГц, ДМСО): δ 2.22 (s, 3Н), 2.33 (s, 6H), 2.37 (s, 3H), 2.45-2.50 (m, 4H), 3.51 (m, 2H), 4.16 (t, 2H), 4.36 (d, 2H), 4.99 (t, 1H), 6.67 (s, 1H), 7.0-7.2 (m, 3Н), 8.04 (s, 1H), 3.55 (t, 1H), 12.21 (s, 1H).
Пример 3
Получение исходного вещества 2,3-диметил-8-(2,6-диметилбензиламино)-N-гидроксиэтил-имидазо[1,2-а]пиридин-6-карбоксамид
1
В метаноле (25 мл) растворяли изопропил-8-[(2,6-диметилбензил)амино]-2,3-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6-карбоксилат (полученный, как описано в WO 02/20523) (5 г, 14 ммоль), этаноламин (2,0 г, 33 ммоль) и 1,8-диазабицикло(5.4.0)ундец-7-ен (ДБУ) (1,5 г, 10 ммоль). Смесь кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до 5°С. Твердый продукт отфильтровывали и промывали метанолом (15 мл). Было получено 4,2 г (84%) указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества. Структуру соединения подтверждали спектром H-ЯМР.
1
H-ЯМР (300 МГц, ДМСО): δ 2.23 (s, 3Н), 2.34 (s, 6H), 2.37 (s, 2H), 3.3-3.4 (m, 2H), 3.5-3.6 (m, 2H), 4.37 (d, 2H), 4.77 (t, 1H), 4.97 (t, 1H), 6.71 (s, 1H), 7.0-7.2 (m, 3Н), 8.08 (s, 1H), 8.44 (t, 1H).
Биологический эффект
Биологические тестирования соединений по изобретению с целью подтверждения их биологического эффекта проводили в виде экспериментов in vivo.
Ингибирующий эффект на секрецию кислоты у самок крыс
Использовали крыс-самок линии Sprague-Dawley. Им были установлены канюлированные фистулы в желудке (полости) и верхней части двенадцатиперстной кишки для сбора желудочных секреций и введения тестируемых веществ, соответственно. До начала тестирования предоставляли восстановительный период 14 суток после операции.
Перед секреторными тестами животных лишали корма, но не воды, на 20 ч. Желудок несколько раз промывали через желудочную канюлю водопроводной водой (+37°С) и подкожно вводили 6 мл раствора Рингера с глюкозой. Секрецию кислоты стимулировали инфузией в течение 2,5-4 ч (1,2 мл/ч, подкожно) пентагастрина и карбахола (20 и 110 нмоль/кгч, соответственно), и в течение этого времени осуществляли сбор 30-минутных фракций желудочных секреций. Тестируемое вещество или носитель давали либо через 60 мин после начала стимуляции (внутривенное и интрадуоденальное дозирование, 1 мл/кг), либо за 2 ч до начала стимуляции (пероральное дозирование, 5 мг/кг, желудочная канюля закрыта). Для изучения продолжительности действия временной интервал между дозированием и стимуляцией можно увеличить. Образцы желудочного сока титровали 0,1 М NaOH до рН 7,0, и выход кислоты вычисляли как произведение объема и концентрации титрующего вещества.
Дальнейшие вычисления были основаны на средних ответах групп из 4-6 крыс. В случае введения во время стимуляции выход кислоты в течение периодов после введения тестируемого вещества или носителя выражали в виде относительных ответов, устанавливая выход кислоты за 30-минутный период, предшествующий введению, как 1,0. Процент ингибирования вычисляли на основании относительных ответов, вызванных тестируемым соединением и носителем. В случае введения перед стимуляцией процент ингибирования вычисляли непосредственно на основании выхода кислоты, зарегистрированного после тестируемого соединения и носителя. Секреция кислоты, стимулированная пентагастрином, была ингибирована у крыс обоими соединениями по изобретению более чем на 70% после перорального введения 1 мкмоль/кг.