МУЛЬТИПОТЕНТНАЯ ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ПРЕИМУЩЕСТВЕННО ИНВАЗИОННЫХ И ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ, СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
MULTIPOTENT VACCINE FOR PREVENTION AND TREATMENT OF PRIMARILY INVASIVE AND INFECTIOUS DISEASES, METHOD OF USE

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к ветеринарии и медицине, и может быть использовано для профилактики и лечения болезней, в состав возбудителей которых входит хитин.
С целью создания иммунитета при профилактике и лечении инфекционных и инвазионных заболеваний используют вакцины - препараты, полученные из аттенуированных или убитых возбудителей (1). На введение чужеродного антигена развиваются иммунные реакции (выработка антител, гиперчувствительность замедленного или немедленного типа, клеточная реактивность), на протективные антигены возбудителя у вакцинированного организма формируется невосприимчивость к повторному заражению.
Необходимость иммунизации сразу против нескольких инфекций привела к созданию ассоциированных (поливалентных) вакцин, позволяющих обеспечить одновременное формирование иммунитета против нескольких болезней. В настоящее время разработаны и используются в практике многочисленные ассоциированные вакцины против разных возбудителей болезней.
Для профилактики вирусных заболеваний разработаны: ассоциированная вакцина против вирусов ринотрахеита и парагриппа; ассоциированная вакцина против болезней свиней.
Для профилактики бактерийных болезней - АКДС - адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина; ассоциированная вакцина против эмфизематозного карбункула и лептоспироза крупного рогатого скота; концентрированная поливалентная гидроокисьалюминиевая вакцина против брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злокачественного отека овец и дизентерии ягнят.
Для одновременной профилактики вирусных и бактериальных болезней разработаны - вакцина против вирусной диареи, рота- и коронавирусной болезней и эшерихиоза телят; комбинированная вакцина против инфекционного ринотрахеита, парагриппа, вирусной диареи и пастереллеза телят; вакцина инактивированная концентрированная против парвовирусной болезни, лептоспироза, болезни ауески, репродуктивно-респираторного синдрома и рожи свиней; вакцина против чумы, аденовирусных инфекций, парвовирусного, коронавирусного энтеритов и лептоспироза собак; ассоциированная вакцина против чумы плотоядных, инфекционного гепатита, парвовирусного энтерита, парагриппа, аденовирусной инфекции типа 1, 2, лептоспироза и бешенства; вакцина Инфанрикс Гекса против вирусного гепатита В, дифтерии, столбняка, полиомиелита, коклюша и хиб (2, 3, 4).
Широкое применение ассоциированных вакцин свидетельствует не только о высокой эффективности таких методов вакцинации, но и о перспективности данного направления исследований в области специфической профилактики болезней.
Однако поиск и изоляция специфических протективных антигенов являются сложной научно-практической работой. Более того, часто возбудители содержат протективные антигены с нестабильной и варьирующей структурой, что диктует необходимость поиска менее иммуногенных, но зато более стабильных константных антигенов. В этом качестве многие исследователи пытаются использовать некоторые групповые антигены, например антиген Куна у грамотрицательных бактерий, перекрестно-реагирующие антигены эшерихий, клебсиелл, менингококков, бруцелл и иерсиний или структурно похожие антигены чужеродного происхождения, например гиалуронидазу КРС для создания антигельминтозной вакцины (5).
При создании ассоциированных вакцин большое значение из-за конкуренции антигенов имеет подбор антигенов, который ограничивает возможности совместного их применения, что отражается на номенклатуре разработанных и применяемых в настоящее время ассоциированных вакцин (6, 7).
Одним из наиболее распространенных полисахаридов в живой природе является хитин - высокомолекулярный линейный полисахарид, состоящий из N-ацетил-2-амино-2-дезокси-D-глюкопиранозных звеньев (8). Уникальные свойства хитина и его производных (биосовместимость, биодеструкция, сорбционные свойства, его огромные запасы (он присутствует в составе многих бактерий, грибов, а также паразитов - гельминтов, простейших, членистоногих, однако в организме млекопитающих их нет)) обуславливают большой научный и практический интерес.
Различные модификации хитина и хитозана применяются в качестве сорбента, адъюванта в биотехнологии, в косметологии и диетологии, в раневой хирургии для получения биоразлагаемых пленок и в пищевой промышленности и растениеводстве (9).
Нам не удалось найти информации, где в качестве антигена в вакцине применялся бы хитозан или его производные. В качестве прототипа не удалось найти объект (вакцинный препарат) который мог бы одновременно профилактировать паразитарные, вирусные и бактериальные заболевания.
Задачей наших исследований являлось получение вакцины, вызывающей в организме специфические иммунные реакции, обеспечивающие защиту животного от болезней, возбудители которых в своем составе содержат хитин.
Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что в вакцине в качестве антигена используется хитин и его производные в концентрации 0,01-5% в мл. Техническим результатом является развитие иммунного ответа к возбудителям, содержащим в своей структуре хитин. Вакцину применяют 1-8-кратно с интервалом в 1-30 дней.
Возможность осуществления изобретения с реализацией указанного назначения иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Вакцину, содержащую взвесь хитина в концентрации 0,01%, в дозе 0,2 мл вводили 10 морским свинкам. 10 морских свинок служат контролем заражения. Через 20 дней всех животных заражают вирулентным штаммом гриба Trichophiton. В опытной группе заражается 7 морских свинок, в контроле - все животные - 10 голов. Средний титр антихитиновых антител в ИФА у животных опытной группы перед заражением составил 1:156.
Пример 2. Вакцину, содержащую хитин, модифицированный грамицидином, в дозе 0,2 мл вводили морским свинкам с последующим заражением животных вирулентным штаммом гриба Trichophiton. В результате 70% морских свинок, обработанных с профилактической целью суспензией модифицированного хитина, противостояли заражению микозом в отличие от не обработанных животных, которые заразились трихофитией.
Пример 3. Вакцину, содержащую хитин с присоединенным остатком аминокапроновой кислоты в концентрации 0,05%, в объеме 1,0 мл вводят четырехкратно с интервалом 1 день 5 собакам, больным демодекозом. Все собаки после 3-4 инъекции выздоравливали. Состояние контрольных животных, больных демодекозом и не подвергавшихся лечению, усугубилось. Титр антихитиновых антител в ИФА составил 1:96.
Пример 4. Аналогичен примеру 3. Только вакцину инъецировали 10 интактным белым мышам. Другие 10 мышей служили контролем заражения. Через 29 дней всех животных заражают вирулентным штаммом Staphylococcus aureus 4D. Все контрольные животные погибли. Среди вакцинированных 6 животных остались здоровыми в течение 10 дней (срок наблюдения).
Пример 5. Вакцину, содержащую модифицированный линолиевой кислотой карбометил хитина, применяли для лечения фасциолеза у коров. Вакцину в концентрации 0,01% вводили животным в объеме 3 мл. У 20 коров методом овоскопии обнаружили фасциолезную инвазию. Провели трехкратную обработку 10 животных, а 10 оставили без лечения в качестве контроля. Через 40 дней яиц гельминтов в фекалиях обработанных коров не обнаружили. У всех контрольных животных продолжалось выделение с фекалиями яиц фасциол. Средний титр антихитиновых антител в ИФА составил 1:68.
Пример 6. Аналогичен примеру 5, но вакцину применяли для профилактики анаплазмоза у крупного рогатого скота. 250 голов коров обрабатывали 3-кратно в очаге анаплазмоза. Ни одно животное не заболело, в то время как в контроле заражение достигло 26%.
Пример 7. Карбометил хитина модифицировали присоединением линолиевой кислоты и получали действующее вещество мультипотентной вакцины. Вакцину в 1% концентрации использовали для лечения микроспории у кошек. 5 кошкам сделали по 4 инъекции препарата, после чего они выздоровели. У 5 контрольных животных изменений в лучшую сторону не наблюдали.
Пример 8. Вакцину, содержащую хитин, модифицированный ионами железа, применяли для лечения гиподерматоза крупного рогатого скота. Пораженным животным 3-кратно вводили по 5 мл модифицированного хитина в концентрации 0,5%. Через 40-60 дней вышедшие под кожу личинки лизировались у 6 коров из 10. У контрольных животных наблюдали полное созревание и выход жизнеспособных личинок.
Пример 9. Аналогичен примеру 8, но проводили лечение эхинококкоза у овец. После третьей инъекции овцам задали альбендазол. Отмечено, что через 30-40 дней после первой инъекции у всех животных эхинококкозные пузыри начали уменьшаться, а возбудитель погибал. У контрольных животных, которым давали один альбендазол, возбудитель оставался жизнеспособным.
Пример 10. Для получения вакцины сукцинат хитина соединяли с белком столбнячного токсина. Полученную вакцину использовали для профилактики дирофиляриоза у собак. Для этого собак в питомнике разделили на две группы. Одну группу в 85 голов собак вакцинировали данной вакциной, другая группа собак - 189 голов - служила контролем. Через год ни одна из вакцинированных собак не была поражена дирофиляриозом, в то время как в контроле 26% собак оказались зараженными дирофиляриозом. Средний титр антихитиновых антител в крови собак опытной группы в ИФА составил 1:108.
Пример 11. Вакцину, аналогичную примеру 10, применяли для лечения саркоптоза у свиней. Вакцину 2% концентрации в объеме 1,0 мл 2-кратно вводили свиньям весом 40-60 кг. Все животные в течение месяца освободились от саркоптоза.
Пример 12. Вакцину, аналогичную примеру 10, использовали в составе неполного адъюванта Фрейнда для профилактики кандидоза у белых мышей. 10 белым мышам вводили вакцину и адъювант Фрейнда, а через 20 дней заражали мышей вирулентной культурой С. albicans. Среди вакцинированных выжило 8 мышей, 80%, при полностью погибших в контроле.
Пример 13. Вакцину, аналогичную примеру 10, использовали совместно с антигрибковой вакциной «Поливак» для лечения 8 собак, больных микроспорией. После 2 инъекций все животные выздоровели. В контроле среди 10 животных, где применялся один Поливак, выздоровело только 3 животных.
Пример 14. Вакцину, содержащую в своем составе мелкодисперсную взвесь хитина в концентрации 0,3%, в дозе 0,5 мл использовали для лечения калицивироза у кошек. Хитин вводили совместно с интерфероном L и левотетрациклином, после 2 инъекций с интервалом в 3-4 дня все животные выздоровели. Применение одного интерферона у 10 контрольных кошек привело к выздоровлению только 2 животных.
Пример 15. Вакцину, содержащую в своем составе карбометил хитина, модифицированный линолиевой кислотой, применяли в концентрации 0,02% для десенсибилизации 6 собак, страдающих аллергией на укусы блох. Блохи на момент лечения отсутствовали. Вакцину применяли ежедневно в возрастающих дозах (от 0,01 до 2 мл). Через 5-8 инъекций клинические проявления аллергии (дерматиты) исчезли. У 3 контрольных животных, которым применяли физраствор, изменений не произошло.
Пример 16. Вакцину, содержащую в своем составе хитин, модифицированный грамицидином, применяли для одновременного лечения фасциолеза и гиподерматоза, обнаруженного у крупного рогатого скота. 16 коровам вводили 3-кратно с интервалом 5 дней по 2 мл препарата 5% концентрации. Через 40 дней начали лизироваться личинки подкожного овода, а яйца фасциол в фекалиях перестали обнаруживаться.
Пример 17. Больных демодекозом собак разделили на две группы. Одним собакам вводили 0,2% вакцину, содержащую хитин, с интервалом 3 дня в дозах 0,1 мл, 0,2 мл и 0,6 мл совместно с ивомеком. Другим - только ивомек. После второй инъекции у собак стали проходить клинические признаки демодекоза. Через две недели лабораторные исследования не выявили наличие клеща у собак, которым вводили хитин и ивомек, в то же время у собак, которым вводили один ивомек, при заметном улучшении состояния в соскобах обнаруживались клещи.
Пример 18. Четырех собак с установленным диагнозом дипилидиоз изолировали и обрабатывали против эктопаразитов и подвергали лечению вакциной, содержащей в своем составе мелкодисперсный хитин, одновременно с иммуностимулятором Полиоксидонием. Инъекции проводили шестикратно с интервалом 5 дней в возрастающей дозировке 0,1:0,2:0,4:0,6:0,8 и 1,0 мл. Через 15 дней после последней инъекции в фекалиях не было обнаружено наличие зрелых члеников или яиц Dypylidium caninum.
Пример 19. В хозяйстве, неблагополучном по инфекционному стоматиту 25, крольчатам в возрасте 15-25 дней ввели вакцину, содержащую хитин с присоединенным остатком аминокапроновой кислоты. Вакцину вводили в концентрации 1,0% двукратно с интервалом 15 дней в дозе 0,1 и 0,5 мл. Другая группа крольчат (15 голов) аналогичного возраста оставалась не обработанной. К четырехмесячному возрасту из опытной группы переболел стоматитом только один крольчонок, в контрольной группе заболело 12 голов, причем 4 с летальным исходом.
Пример 20. Коров, зараженных фасциолезом (диагноз установлен по методу Демидова), разделили на восемь групп. Одной группе коров двукратно с интервалом в 6 дней вводили внутримышечно вакцину на основе деацетилированного хитина (хитозан массой 80 кДа) в разной концентрации в объеме 1 и 5 мл. Седьмой группе - вакцину одновременно с препаратом Политрем. Восьмая группа животных служила контролем, она не подвергалась обработке. Через два месяца после обработки проводили капрологические исследования фекалий у всех коров. Результаты представлены в таблице 1.
Таблица 1
№ группы
Вид животных
К-во животных
Концентрация хитозана
Схема применения вакцины
Осталось инвазированных (гол.)
1
Коровы
20
0,1%
1 и 5 мл, интервал 6 дней
2
2
Коровы
20
0,2%
3
3
Коровы
20
0,5%
0
4
Коровы
20
1%
1
5
Коровы
20
3%
4
6
Коровы
20
5%
2
7
Коровы
30
0,2 + Политрем
0
8
Коровы
27
Контроль
27
Пример 21. Коровам за две недели до выгона на заболоченные пастбищные участки ввели вакцину, действующим веществом которой являлся хитозан, модифицированный пальметоилхлоридом с молекулярной массой 500 кДа, в разных концентрациях. В группе 5 одновременно вводили иммуностимулятор Достим, в группе 6 одновременно вводили противопаразитарный препарат Альбен. Все препараты вводили внутримышечно двукратно с интервалом 30 ней в дозе 1 и 5 мл. Седьмую группу в течение лета не подвергали никаким антигельминтозным обработкам. По окончании пастбищного сезона животных исследовали на наличие яиц фасциол. При иммуноферментном анализе через месяц после вакцинации титр антихитиновых антител в крови животных из группы 1 составил 1:69, в группе 5 - 1:121. Результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2
№ группы
Вид животных
К-во животных
Хитозан в концентрации
Схема применения вакцины
Осталось инвазированных (гол.)
1
Коровы
17
0,1%
1 и 5 мл, интервал 30 дней
2
2
Коровы
15
5%
1
3
Коровы
20
1,0%
0
4
Коровы
18
2,0%
0
5
Коровы
13
0,1 + Достим
0
6
Коровы
20
0,1 + Альбен
0
7
Коровы
22
Не обрабатывались
22
Пример 22. Неблагополучное по диктиокаулезу стадо коров разделили на 5 групп по принципу аналогов. Животным соответствующих групп однократно в дозе 3 мл парентерально вводили вакцину на основе хитозана с молекулярной массой 10 кДа, модифицированного пальметоилхлоридом, третьей группе вместе с вакциной перорально вводили фенбендазол. Контрольной группе номер четыре вместе с кормом задавали только фенбендазол (панакур) из расчета 10 мг/кг живого веса.
Контрольная группа номер пять не подвергалась противопаразитарным обработкам. Через месяц провели капрологические исследования. Результаты представлены в таблице 3.
Таблица 3
№ группы
Вид животных
К-во животных
Хитозан в концентрации
Схема применения вакцины
Осталось инвазированных (гол.)
1
Коровы
10
0,5%
3 мл
1
2
Коровы
10
5%
0
3
Коровы
10
0,5%+Фенбендазол
0
4
Коровы
10
Фенбендазол
1
5
Коровы
10
Контроль животных не обрабатывали химиотерапевтическими препаратами.
9
Пример 23. Поросят, свободных от гельминтов, в возрасте одного месяца вакцинировали мультипотентной вакциной на основе хитозана с молекулярным весом 400 кДа (группа 1 и 3) и вакциной на основе хитина (группа 2 и 4). Вакцину вводили двукратно в дозах 0,2 и 0,4 мл. Группа №5 не подвергалась профилактической вакцинации. Все группы животных в течение 9 месяцев не обрабатывались антигельминтозными препаратами. Через девять месяцев после этого провели исследование фекалий по Фюллеборну. Яйца аскарид не обнаруживались у 88-92% поросят, обработанных вакциной на основе хитозана, 60-72% поросят, иммунизированных вакциной на основе хитина, противостояли аскаридозной инвазии. У 84% контрольных поросят, не подвергшихся обработке и содержавшихся совместно с обработанными, наблюдался аскаридоз. Результаты представлены в таблице 4.
Таблица 4
№ группы
Вид животных
К-во животных
Хитозан в концентрации
Схема применения вакцины
% инвазированных животных
1
Поросята
25
2,0%
0,2 и 0,4 мл, интервал 30 дней
8
2
Поросята
25
2,0%
28
3
Поросята
25
1,0%
12
4
Поросята
25
1,0%
40
7
Поросята
25
Не обрабатывались
76
Пример 24. Поросятам против аскаридоза ввели вакцину, в состав которой входил хитозан и хитин. Животным первой группы вакцину вводили трехкратно в дозах 0,2:0,4:0,6 мл. Второй группе - однократно в дозе 0,3 мл. Подсвинкам из третьей группы скармливали адипинатпиперазина в дозе 12 г на одно животное. Результаты представлены в таблице 5.
Таблица 5
№ группы
Вид животных
К-во животных
Концентрация хитозана и хитина
Схема применения
% инвазированных животных
1
Поросята
50
0,2%+0,2%
0,2, 0,4, 0,6 мл, интервал 15 дней
8
2
Поросята
50
0,1%+0,2%
0,3 мл
14
3
Поросята
50
Адипинатпиперазина
0
4
Поросята
50
Не обрабатывались
100
Пример 25. Девяти щенкам, больным токсокарозом, трехкратно в дозах 0,2:0,4:0,8 мл с интервалом 1 день вводили вакцину, содержащую 0,2% раствор хитина с молекулярной массой 100 кДа, модифицированного гексометилендиамином. В течение месяца вели наблюдение за клиническими проявлениями болезни и по истечении этого срока методом Фюллеборна провели исследование экскрементов собак. При копрологических исследованиях яиц Тохосаrа canis у щенков, обработанных полученным препаратом, не было выявлено.
Пример 26. Восьми беспородным собакам ввели двукратно вакцину на основе хитозана с молекулярной массой 25 кДа совместно с иммуностимулятором "Полиоксидоний" в дозах 0,5 и 1 мл. Через месяц этим и контрольным собакам скормили внутренние органы овец, пораженных ларвальным эхинококкозом. По истечении трех месяцев провели диагностическую дегельминтизацию всех собак и в отобранных фекалиях определяли наличие изолированных члеников гельминтов и яиц Dypylidium caninum. Результаты представлены в таблице 6.
Таблица 6
№ п.п.
№ примера
К-во животных
Концентрация хитозана и препарат
Схема применения
К-во инвазированных
1
26
8
5% + Полиоксидоний
0,5 и 1,0 мл
0
2
26
4
Контроль
4
3
27
4
1%
0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0 мл
0
4
27
5
0,2%
0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0 мл
1
5
27
5
0,2%
0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0 мл
0
6
27
9
Ивомек
3
Пример 27. Двадцати трем собакам с диагнозом демодекоз провели курс лечения. Первой группе из 4 собак вводили вакцину на основе хитозана с молекулярной массой 500 кДа, модифицированную ионами меди, второй группе из 5 собак - вакцину на основе хитозана, модифицированного линолиевой кислотой, третьей группе вводили хитозан и антибиотик амоксициллин. Вакцины на основе хитозана в концентрации 0,2% вводили шестикратно в дозах 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0 мл с интервалом три дня. У всех собак после третьей инъекции препарата на основе хитозана уменьшился зуд, стала пропадать чешуйчатость кожи, начал восстанавливаться волосяной покров. Контрольную группу собак, больных демодекозом, в количестве девяти голов подвергли лечению ивомеком. Ивомек применяли подкожно двукратно в дозе 200 мг/кг веса собаки. После окончания лечения провели лабораторный анализ соскобов с кожных покровов пролеченных собак, анализы дали отрицательный результат среди животных, которым вводили хитозан и его модификации. У трех собак, пролеченных ивомеком, в соскобах обнаружили клеща. Результаты лечения собак от демодекоза представлены в таблице 6.
Пример 28. Четырем клинически здоровым собакам двукратно ввели вакцину, содержащую 0,5% раствор хитозана с молекулярной массой 80 кДа, модифицированного грамицидином, в дозе 0,2 и 0,5 мл. Собак поместили в вольер, где содержали трех здоровых собак и двух собак с клиническими признаками демодекоза, подтвержденного лабораторными исследованиями. Совместно собак содержали в течение месяца, после чего больных собак отсадили и им провели курс лечения против демодекоза. За остальными собаками вели наблюдение в течение месяца. В результате в опытной группе ни у одной из четырех собак не было обнаружено признаков демодекоза, в то время как у контрольных, не иммунизированных собак появились признаки заболевания демодекозом, что было подтверждено лабораторными исследованиями.
Пример 29. Десяти собакам, больным демодекозом, вводили вакцину, содержащую 1% раствор хитозана с молекулярной массой 20 кДа, модифицированного ионами железа, с интервалом 3 дня в дозах 0,1 мл, 0,2 мл. Одновременно с этим собак обработали препаратом Амит. После второй инъекции клинические признаки демодекоза у собак стали проходить. Через две недели лабораторные исследования не выявили наличие клеща у этих собак.
Пример 30. С целью профилактики гиподерматоза двум группам крупного рогатого скота двукратно в дозе 4 мл, с интервалом в один месяц ввели внутримышечно вакцину на основе хитозана с молекулярной массой 100 кДа. Третью группу животных не обрабатывали и оставили в качестве контроля. В течение года за животными вели наблюдения. Следующей весной животных обследовали пальпаторно на наличие уплотнений в коже и формирования свищевых капсул. Среди крупного рогатого скота, обработанного заявляемым препаратом, не было выявлено признаков поражения гиподерматозом. У 40% необработанных животных наблюдались клинические признаки гиподерматоза. Результаты в таблице 7.
Таблица 7.
№ гр-пы
№ примера
Вид животных
К-во животных
Концентрация хитозана и препарат
Схема применения
К-во инвазированных
1
30
Коровы
31
0,1%
4,0 и 4,0 мл интервал 30 дней
2
2
30
Коровы
46
2%
0
3
Контроль 30
Коровы
25
-
12
4
31
Коровы
20
5%
2, 4, 8, 10 мл интервал 5 дней
2
5
31
Коровы
35
5% + риботан
0
6
31
Коровы
22
5% + ивермек
0
7
31
Коровы
18
5% + гидроокись алюминия
0
Пример 31. Крупный рогатый скот, пораженный гиподерматозом, подвергли лечению вакциной, содержащей хитозан с молекулярной массой 20 кДа. Вакцину применяли как отдельно, так и совместно с иммуностимулятором Риботан, противопаразитарным препаратом Ивермек, с гидроокисью алюминия. Препарат вводили четыре раза с интервалом пять дней в повышающейся дозировке 2, 4, 8, 10 мл. Результаты лечения представлены в таблице 7.
Пример 32. 35 кроликов с клиническими признаками миксоматоза обработали вакциной, содержащей 1% раствор хитозана с молекулярной массой 100 кДа, одновременно с иммуностимулятором Достим. Вакцину вводили внутримышечно 5-кратно с интервалом 3 дня в возрастающей дозировке 0,2, 0,5 и 1,0 мл. После второй инъекции температура пришла в норму, нормализовался аппетит, прошла отечность век и блефароконъюнктивит, гнойные истечения из глаз прекратились. Узелковые образования в области морды уменьшились. К пятой инъекции состояние кроликов пришло в норму, в то же время 5 кроликов, отделенных от основной группы и не подвергавшихся лечению к этому времени погибли.
Пример 33. В хозяйстве, неблагополучном по инфекционному стоматиту, 10 крольчат в возрасте 18 дней обработали вакциной, содержащей хитозан в 2% концентрации, модифицированный пальметоилхлоридом с молекулярной массой 80 кДа. Вакцину вводили трехкратно с интервалом 5 дней в дозе 0,1 и 0,2 и 0,5 мл. Другое гнездо крольчат (7 голов) оставалось не обработанным. В течение трех месяцев наблюдения среди крольчат опытной группы заболевания не обнаруживалось, в то же время среди животных контрольной группы инфекционным стоматитом переболело 5 голов.
Пример 34. В виварии у 76 крыс наблюдалось бактериальное воспаление легких. 60 крыс обработали вакциной на основе хитозана с молекулярной массой 50 кДа. Препарат вводили трехкратно в дозах 0,05, 0,1, 0,2 мл с интервалом 2 дня. После окончания лечения у крыс нормализовалось дыхание и поведенческие рефлексы. В то же время среди необработанных животных продолжалось клиническое проявление болезни и падеж двух животных.
Таким образом, использование хитина и его производных в качестве действующего вещества вакцины - антигена, позволяет получить препарат, обладающий мультипотентными свойствами, который может применяться для профилактики и лечения инфекционных и инвазионных болезней, возбудители которых в своей структуре содержат хитин, причем вакцина может применяться сразу против нескольких болезней, возбудители которых относятся к различным таксономическим группам.
Как следует из приведенных примеров, мультипотентная вакцина с положительным эффектом применялась для профилактики и лечения микроспории, демодекоза, стафилококкоза, фасциолеза анаплазмоза, гиподерматоза, эхинококкоза, дирофиляриоза, саркоптоза, кандидоза, калицивироза, дипилидиоза, диктиокаулеза, аскаридоза, токсокароза, инфекционного стоматита, миксоматоза.
Данная мультипотентная вакцина может использоваться как отдельно, так и в составе или совместно с другими вакцинами, антибиотиками, антипаразитарными и химиотерапевтическими средствами, адъювантами, иммуностимуляторами и гипериммунными сыворотками, а также для десенсибилизации организма при аллергиях, вызванных агентами, содержащими хитин.
Мультипотентная вакцина апробировались с положительным результатом в течение 2000-2012 гг. на лабораторных животных, овцах, свиньях, крупном рогатом скоте, собаках, кошках в хозяйствах и ветеринарных клиниках Калининградской, Московской, Волгоградской и Нижегородской областей.
Данное изобретение может найти широкое применение не только для профилактики и лечения паразитарных заболеваний у домашних и сельскохозяйственных животных, но и при различных заболеваниях, возбудители которых в своей структуре содержат хитин.
Источники информации
1. Медуницин Н.В. Вакцинология, 2004. Триада Х.
2. Биологические ветеринарные препараты в России: вакцины, сыворотки, диагностикумы. Казань. Рутен, 2005 г., стр.6-317.
3. Антигенные и иммуногенные свойства инактивированной ассоциированной вакцины против пастереллеза, сальмонеллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней. Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук. Зверьков Д.А. 2000 г., Москва, 120 с.
4. Гулюкин М.И., Федоров С.А. и др. Анализ изобретательской и патентно-лицензионной деятельности ВИЭВ, Москва, Белгород, Политерра, 2013, с.58-59.
5. Патент РФ 2095082, А61К 039/00, 1996 г. Вакцина против гельминтозов животных.
6. Макаров В., Гусев А., Гусева Е., Сухарев О. Основы инфекционной иммунологии. Владимир-Москва, «Фолиант», 2000 г., стр.125-126.
7. Кадымов Р.А., Сафаров Ю.Б. Ассоциированная и комплексная вакцинация животных. М.: Колос, 1974 г., стр.233-242.
8. Хитин и хитозан. Получение. Свойства и применение. М.: «Наука», 2002 г., стр.10.
9. Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана. М.: ВНИРО, 2003 г., стр.131-279.