Супрессия иммунных реакций, связанных с функцией Th1и Th2-лимфоцитов и продуцируемых ими цитокинов, при остром отравлении метанолом

Статья

микроцитов - 21,97). При анализе морфологии эритроцитов выявлены следующие особенности морфометрического профиля эритроцитов. При латентной и гипертонической формах ГН наблюдается микроцитоз и мегалоцитоз, при снижении доли нор-мацитов, тогда как группы больных нефротическим и смешанным ГН отличаются макроцитозом и мегалоцитозом, при уменьшении доли нормацитов. Больные с гематурической формой ГН имеют незначительные изменения морфометрических характеристик эритроцитов. У больных с латентным и гематурическим и гломерулонефритом достоверно снижены значения средних размеров и числа эритроцитов, а также гематокрита в сравнении с контролем.

Определялась клубочковая фильтрация - количество миллилитров ультрафильтрата плазмы, образовавшегося в клубочках обеих почек за одну минуту. Клубочковая фильтрация происходит за счет разности гидростатического давления крови по обе стороны базальной мембраны клубочков. Уровень клубочковой фильтрации зависит от нескольких факторов: от величины гидростатического давления крови в клубочковых капиллярах, от он-котического давления плазмы, от величины внутрипочечного давления, проницаемости клубочкового фильтра, а также от действия ряда внепочечных факторов. Наиболее частой причиной снижения скорости клубочковой фильтрации является Острая и хроническая почечная недостаточность, преимущественно за счет уменьшения числа функционирующих нефронов. При изучении корреляции клубочковой фильтрации с морфометрическими показателями эритроцитов выявлена прямая связь с гематокритом, количеством эритроцитов, удельным весом нормацитов и обратная корреляционная взаимосвязь с долей мегалоцитов (табл.

3). Снижение клубочковой фильтрации, характерное для ХГН и наиболее выраженное при возрастании степени тяжести заболевания (развитие ХПН, анемии), обусловливает снижение значений гематокрита, количества эритроцитов, удельного веса норма-цитов и увеличение доли мегалоцитов.

Изучение полиморфизма гена ТОТа и его рецептора выявило более высокую частоту аллелей ТОТ2 и А в группе больных (16% и 50% соответственно) по сравнению с контролем (11% и 45% соответственно), при снижении частот аллелей ТОТ1 и О (табл.5). Эти различия связаны с достоверным увеличением частот этих генов у лиц женского пола (аллель ТОТ2 - 19% против 9% в контроле; ТОТК*А - 54% против 46% в контроле). Выявлено, что генотип Т^П/ТОТ! выступает в качестве протективного фактора (ЯЯ=0,25, р<0,001) у женщин, а генотип АО - как про-тективный фактор у мужчин (ЯЯ=0,51, р<0,05).

Таблица 3

Коэффициент ранговой корреляции Спирмена между клубочковой фильтрацией и морфометрическими характеристиками эритроцитов у больных ХГН

Параметры R р

Гематокрит 0,68 <0,001

Количество эритроцитов 0,67 <0,001

Удельный вес нормацитов 0,29 <0,001

Удельный вес мегалоцитов - 0,19 <0,01

Таблица 4

Распределение частот аллелей и генотипов генов TNFa и TNFR1 у больных ХГН

Аллели, генотипы Больные ХГН Контроль

муж жен в целом муж жен в целом

TNF*1 87,13 80,85* 84,10 86,54 90,63 88,50

TNF*2 12,87 19,15* 15,90 13,46 9,37 11,50

TNF1/ TNF1 76,24 69,15* 72,82 76,92 83,33 80,00

TNF1/ TNF2 21,78 23,40 22,56 19,23 14,58 17,00

TNF2/ TNF2 1,98 7,45 4,62 3,85 2,08 3,00

TNFR1*G 53,53 45,83 49,70 56,36 53,26 54,95

TNFR1*A 46,47 54,17 50,30 43,64 46,74 45,05

GG 32,94 25,00 28,99 32,73 34,78 33,66

AG 41,18 41,67 41,42 47,27 36,96 42,57

AA 25,88 33,33 29,59 20,00 28,26 23,76

*- p<0,05

Анализ полиморфизмов двух изучаемых генов выявил комбинации генотипов, обусловливающих изменение морфометрического профиля эритроцитов. Комбинация генотипов ТОТ1/ТМР2; АА ведет одновременно к изменениям морфометрического профиля эритроцитов, заключающимся в одновременном

микроцитозе, макроцитозе и мегалоцитозе. Одна комбинация генотипов (TNF1/TNF1; GG) ведет к микроцитозу и мегалоцито-зу, а другая (TNF1/TNF2; GG) - к макроцитозу и мегалоцитозу.

Заключение. Результаты говорят о влиянии полиморфизма генов TNFa и TNFR1 на формирование и течение ХГН. Выявлена высокая частота аллелей TNF2 и А генов TNFa и его рецептора в группе больных в сравнении с контролем. Генотипы TNF1/TNF1 гена TNFa и AG его рецептора выступают в качестве протектив-ных факторов у женщин и мужчин соответственно. Анализ морфометрических характеристик эритроцитов при ХГН выявил изменения морфометрических характеристик эритроцитов в сравнении с контролем. Выявлена корреляция между клубочковой фильтрацией и некоторыми характеристиками эритроцитов.

Литература

1. ВидеоТест. Методики.- Санкт-Петербург, 2000.- 54 с.

2. Визель А. А. и др. // Клин.мед.- 2003.- № 9.- С.4-7.

3. Корытина Г.Ф. и др. // Медицинская генетика.- 2004.-№7.- С. 333-337.

4. Математич. методы в изучении генетики мультифакто-риальных заболеваний / Под ред. В.Н. Шабалина- М., 1994.- 80 с.

5. Насонов Е.Л. Противовоспалительная терапия ревматических болезней.- М.а: М-Сити, 1996.- 345 с.

6. Нефрология: Рук-во для врачей / Под ред. И.Е. Тарее-вой.- М.: Медицина, 2000.- 688 с.

7. Рыдловская А.В., Симбирцев А.С. // Цитокины и воспаление.- 2005.- Т. 4, № 3.- С. 4-10

8. Рябов С.И., Наточин Ю.В. Функциональная нефрология.- СПб: Лань, 1997.- 304 с.

9. Hulkkonen J. Inflammotory Cytokines and Cytokine Gene Polymorphisms in Chronic Lymphocytic Leukaemia, in Primary Sjögren’s Syndrome and Haelthy Subjects.- Tampere.- 2002.- 81 р.

УДК [615.917:547.261].036.11.07:616-092

СУПРЕССИЯ ИММУННЫХ РЕАКЦИЙ, СВЯЗАННЫХ С ФУНКЦИЕЙ

ТН1- И ТН2-ЛИМФОЦИТОВ И ПРОДУЦИРУЕМЫХ ИМИ ЦИТОКИ-НОВ, ПРИ ОСТРОМ ОТРАВЛЕНИИ МЕТАНОЛОМ

П. Ф. ЗАБРОДСКИЙ, В.Ф. КИРИЧУК, А.В. ПОЛНИКОВ, В.В. СЕРОВ*

Метанол (метиловый спирт, карбинол) применяется в качестве топлива для двигателей, в лабораторной практике, как растворитель в химической промышленности, для денатурирования этилового спирта, входит в состав ряда антифризов. Отравления чаще всего связаны с использованием его ошибочно вместо этилового спирта с целью опьянения (при этом возможны групповые и даже массовые интоксикации). Острые отравления метанолом (ООМ) характеризуются значительной тяжестью и высокой смертностью, одной из причин которой могут являться инфекционные осложнения, связанные со снижением показателей иммунного статуса. Изменения иммунного гомеостаза при острой интоксикации метанолом исследованы недостаточно описаны [1,7]. Не ясна роль ТЫ- и ТЪ2'-лимфоцитов в реализации супрессии иммунных реакций при отравлении данным спиртом. ООМ могут сопровождаются инфекционными осложнениями и заболеваниями, связанными с формированием постинтоксикационного имму-нодефицитного состояния [1,3]. Разработка наряду с антидотны-ми средствами способов снижения поражения системы иммунитета ООМ назначением иммуномодуляторов предполагает дальнейшее изучение его иммунотропных эффектов [1, 2, 7].

Цель работы - оценка супрессии иммунных реакций, связанных с функцией ТЫ- и ТЪ2'-лимфоцитов и продуцируемых ими интерлейкинов (ИЛ-2, ИЛ-4), при ООМ.

Материал и методы исследования. Эксперименты проводились на крысах Wistar обоего пола массой 180-240 г. метанол вводили перорально в дозе 0,75 DL50 однократно (DL50 метанола при пороральном введении составляло 8,7+1,1 г/кг) через 3 сут. после иммунизации Т-зависимым антигеном. Показатели системы иммунитета оценивали общепринятыми методами в экспериментальной иммунотоксикологии [2]. Гуморальную иммунную реакцию к тимусзависимому (эритроцитам барана - ЭБ) антигену

*410017; Саратовский военно-медицинский институт, пл. Ильинская 17

Краткое сообщение

определяли по числу АОК в селезенке на 5 сут после внутри-брюшинной иммунизацией крыс данными антигенами в дозах 2-108 клеток. В использованном тесте гуморальная иммунная реакция на введение ЭБ характеризует способность Th 1 -лимфоцитов участвовать в продукции В-лимфоцитами (плазматическими клетками) IgM [4]. АОК к ЭБ, синтезирующие IgG, определяли в селезенке методом непрямого локального гемолиза в геле на 8 сут [4]. Данные литературы позволяют полагать, что этот метод характеризует преимущественно функцию Th2-лимфоцитов и В-клеток, синтезирующих IgG, так как Th 1 -лимфоциты обеспечивают возможность образования в этот период антителогенеза кроме IgM так же и IgG2а, составляющих не более 20% от всех подклассов IgG [4, 6].

Активность естественных клеток-киллеров (ЕКК) исследовали по показателю естественной цитотоксичности (ЕЦ) через 4 сут после иммунизации спектрофотометрически. Формирование гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), характеризующую функцию Thl-лимфоцитов [4], определяли у животных по приросту массы стопы задней лапы в %. При этом крыс внутри-брюшинно иммунизировали 108 ЭБ через 30 мин после введения М. Разрешающую дозу ЭБ (5-108) вводили под апоневроз стопы задней лапы через 4 сут. Реакцию ГЗТ оценивали через 24 ч.

Концентрацию цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4) после отравления метанолом определяли в периферической крови крыс через 4 и 7 сут после иммунизации методом иммуноферментного анализа по протоколам, указанным в инструкции по применению наборов (BioSource Int. ELISA Kits). Полученные данные обрабатывали статистически с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты исследований. Под влиянием метанола (табл. 1) происходило снижение гуморального иммунного ответа через 4 сут после иммунизации к Т-зависимому антигену (по числу АОК в селезенке), характеризующему синтез В-клетками IgM и функцию 1Ъ1-лимфоцитов, по сравнению с контрольным уровнем в 1,80 раза (p<0,05). Через 7 сут после иммунизации отмечалось супрессия продукции IgG (по числу АОК в селезенке), отражающая преимущественно функцию ^2-лимфоцитов. При действии метанола данный параметр снижался в 2,24 раза (p<0,05). При отравлении метанолом отмечалась также существенная редукция активности ЕКК соответственно в 1,76 раза (p<0,05) и реакции ГЗТ - в 1,54 раза (p<0,05).

Как уже указывалось, согласно данным литературы число АОК к ЭБ через 4 сут после иммунизации характеризует синтез IgM В-лимфоцитами и функцию 1Ъ1-клеток. Активность ЕКК и формирование ГЗТ также свидетельствует о способности Th1-лимфоцитов влиять на данные реакции, а число АОК к ЭБ в реакции непрямого локального гемолиза в геле через 7 сут после иммунизации отражает синтез IgG и функцию 1Ъ2-лимфоцитов [4,6]. Показатели, характеризующие различные иммунные реакции и связанную с ними функцию Th1- и Th2-лимфоцитов, при действии М в среднем снижались соответственно в 1,70 и 2,24 раза. Это свидетельствует о том, что под влиянием метанола в существенно большей степени поражается функция Th2-лимфоцитов или связанная с ними продукция В-клетками IgG (по сравнению действием яда на Th1-лимфоциты и/или на В-лимфоцитами, синтезирующие IgM, а также на ЕКК).

Таблица 1

Влияние острой интоксикации метанолом в дозе 0,75 ОЬ5о на показатели системы иммунитета крыс

Серии опытов АОК к ЭБ (IgM), 103 АОК к ЭБ (IgG), 103 ЕЦ,% ГЗТ, %

Контроль 34,2+3,4 16,1+1,5 32,4+3,3 31,4+2,7

Метанол 19,0+1,7* 7,2+1,0* 18,4+2,1* .0  2 0

Примечание: * - p<0,05 по сравнению с контролем

При интоксикации метанолом выявлено уменьшение в периферической крови крыс концентрации ИЛ-2 и ИЛ-4 на 5 сут после иммунизации соответственно в 1,56 и 1,61 раза (р<0,05), а на 8 сут. - в 1,46 и 1,57 раза (р<0,05) соответственно (табл. 2).

Известно, что ИЛ-2 продуцируют ТЫ-лимфоциты, а ИЛ-4 -ТЬ2-лимфоциты [5,6]. Увеличение соотношения ИЛ-2/ИЛ-4 характеризует снижение функциональной активности лимфоцитов ТЬ2-типа по сравнению с функцией ТЫ-клеток [5]. Нами установлено, что соотношение ИЛ-2/ИЛ-4 при отравлении составля-

ло на 5 и 8 сут соответственно 13,8 и 13,1 при контрольном значении 11,4. Это свидетельствует о поражении метанолом ТЬ2-клеток по сравнению с ТЫ-лимфоцитами в большей степени.

Таблица 2

Влияние острой интоксикации метанолом в дозе 0,75 ОЬ5о на содержание интерлейкинов в периферической крови крыс, пг/мл

Токсичные химикаты ИЛ-2 ИЛ-4 ИЛ-2/ИЛ-4

Контроль 1321+92 116+12 11,4

Метанол 5 846+33* 61+6* 13,8

8 905+40* 69+7* 13,1

Примечание: 5, 8 - время исследования после иммунизации, сут; * - p<0,05 по сравнению с контролем.

Более выраженный супрессирующий эффект М в отношении иммунной реакции, связанных с функцией Th2-лимфоцитов, вероятно, обусловлен нарушением их способности активировать функцию В-клеток и редукцией синтеза этими лимфоцитами IgG вследствие снижения них фолиевой кислоты в результате ее усиленного потребления при метаболизме метилового спирта [3,

4]. Уменьшение активности ЕКК под влиянием метанола, видимо, связано со снижением продукции ИЛ-2 Thl-клетками. Известно, что данный цитокин активируют ЕКК [4,6].

Выводы. Острое действие метанола в дозе 0,75 DL50 в продуктивный период иммуногенеза (через 3 сут после иммунизации) в меньшей степени снижает иммунные реакции, связанные с функцией Thl-лимфоцитов, по сравнению с иммунным ответом, обусловленным активацией ^2-лимфоцитов. Под влиянием метанола в дозе 0,75 DL50 в периферической крови концентрация ИЛ-4, продуцируемого Th2-лимфоцитами, снижается в большей степени, чем концентрация ИЛ-2, синтезируемого Thl-клетками.

Литература

1. Забродский П. Ф.// Токсикол. вестник.- 1999.- №2.- С.8.

2. Забродский П.Ф.и др. Иммунотропные свойства холи-нергических веществ / Под ред. П.Ф.Забродского.- Саратов: Научная книга, 2005.- 25l с.

3. Забродский П.Ф. // Общая токсикология / Под ред. Б.А. Курляндского, В. А. Филова.- М.: Медицина, 2002.- С. 352-384.

4. Ройт А. и др. Иммунология / Пер. с англ.- М.: Мир, 2000.- 582 с.

5. Сухих Г. Т., Касабулатов Н.М., Ванько Л.В. и др. // Бюл. эксперим. биол. и мед.- 2005.- Т. l40, № l2.- С. 622-624.

6. Georgiev V.St., Albright J.E. // Immunomodulation drugs / Ann. of the N.-Y. Acad. Sci.- 1993.- Vol. 685.- P.284-602.

7. Jeya Parthasarathy N. et al. // J. Immunotoxicol.- 2005.-Vol. 2.- P. 115-121.

УДК 632.92

9-ЛЕТНЯЯ ДИНАМИКА РАСПРОСТРАНЕННОСТИ ОСНОВНЫХ ХРОНИЧЕСКИХ НЕИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ СРЕДИ ЖЕНСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ ФЕРГАНСКОЙ ДОЛИНЫ УЗБЕКИСТАНА

Н.С. МАМАСАЛИЕВ, М.М. МИРСАЙДУЛЛАЕВ,

М. А. ХУЖАМБЕРДИЕВ*

Для измерения направлений и степени изменения эпидемиологических условий в отношении основных хронических неинфекционных заболеваний (ОХНЗ) проводятся эпидемиологические исследования с мониторированием факторов риска (ФР) и ОХНЗ. Необходимо, чтобы в отношении одной и той же популяции совмещались результаты двух типов эпидисследований на основе данных периодических эпидемиологических обследований случайных независимых выборок из той же популяции. Такой эпидемиологический подход в отношении женской популяции, в Узбекистане еще не применялся.

И поэтому, одной из основных целей данной работы было изучение по данным 9-летнего наблюдения динамики распро-

*Республика Узбекистан