ПОЛУЧЕНИЕ ГЛИКОПРОТЕИНОВ

1. Способ получения гликопротеина в культуре клеток, включающий
культивирование клеток млекопитающего, содержащих ген, кодирующий требуемый гликопротеин, в среде для культивирования клеток, которая содержит приблизительно от 10 до 600 нМ марганца при условиях и в течение времени, достаточного для осуществления экспрессии указанного гликопротеина, при этом экспрессированный гликопротеин имеет степень гликозилирования, повышенную по сравнению со степенью гликозилирования, наблюдаемой при использовании таких же условий и такой же среды, но в отсутствие марганца.
2. Способ по п.1, включающий стадии:
культивирование клеток млекопитающего, содержащих ген, кодирующий требуемый гликопротеин, в среде для культивирования клеток, которая содержит приблизительно от 10 до 600 нМ марганца;
поддерживание культуры при первом диапазоне температур в течение первого промежутка времени, достаточного для воспроизводства клеток до достижения плотности жизнеспособных клеток в диапазоне приблизительно 20-80% от максимально возможной плотности жизнеспособных клеток, который можно достигнуть при поддержании культуры при первом температурном диапазоне;
перевод культуры во второй диапазон температур такой, что по меньшей мере одно значение температуры второго диапазона температур ниже самого низкого значения температуры первого диапазона температур;
поддерживание культуры в течение второго промежутка времени при условиях и в течение времени, достаточного для осуществления экспрессии гликопротеина, при этом экспрессированный гликопротеин имеет повышенную степень гликозилирования, по сравнению со степенью гликозилирования, наблюдаемой при использовании таких же условий и такой же среды, но в отсутствие марганца.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что первый диапазон температур включает диапазон температур приблизительно 30-42°С.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что первый диапазон температур включает температуру приблизительно 37°С.
5. Способ по п.2, отличающийся тем, что второй диапазон температур включает диапазон температур приблизительно 25-41°С.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что второй диапазон температур включает температуру приблизительно 31°С.
7. Способ по п.2, дополнительно включающий вторую смену температурного режима после указанной первой смены температурного режима, которая представляет собой перевод культуры на третье значение температуры или в третий диапазон температур, при этом по меньшей мере одно значение температуры указанного третьего диапазона температур ниже самого низкого значения температуры указанного второго диапазона температур.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что третий диапазон температур включает диапазон температур приблизительно 25-40°С.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что среда для культивирования клеток содержит приблизительно 20-200 нМ марганца.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что среда для культивирования клеток содержит приблизительно 40 нМ марганца.
11. Способ по п.1, отличающийся тем, что среда для культивирования клеток включает глутамин, начальная концентрация которого меньше или равна приблизительно 8 мМ.
12. Способ по п.11, отличающийся тем, что начальная концентрация глутамина в среде для культивирования клеток меньше или равна приблизительно 4 мМ.
13. Способ по п.1, отличающийся тем, что объем культуры клеток составляет по меньшей мере около 500 л.
14. Способ по п.1, отличающийся тем, что в культуру клеток дополнительно после начала культивирования клеток добавляют питательную среду.
15. Способ по п.1, отличающийся тем, что в культуру клеток дополнительно добавляют вспомогательные компоненты.
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что указанные вспомогательные компоненты выбраны из группы, включающей гормоны и/или другие факторы роста, неорганические ионы, буферы, витамины, нуклеозиды или нуклеотиды, микроэлементы, аминокислоты, липиды, глюкозу или другой источник энергии и их комбинации.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что в культуру клеток добавляют глюкозу в количестве приблизительно 2 г/л.
18. Способ по п.1, отличающийся тем, что среда для культивирования клеток характеризуется определенным составом.
19. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный гликопротеин включает фактор свертывания крови IX.
20. Способ по п.19, отличающийся тем, что фактор свертывания крови IX представляет собой рекомбинантный фактор свертывания крови IX человека.
21. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный гликопротеин включает антитело к А-бета.
22. Способ по п.21, отличающийся тем, что антитело к А-бета представляет собой моноклональное антитело.
23. Способ по п.22, отличающийся тем, что антитело к А-бета представляет собой гуманизированное моноклональное антитело IgG1 к пептиду А-бета.
24. Среда для культивирования клеток, которая содержит приблизительно 10-600 нМ марганца.
25. Среда для культивирования клеток по п.24, которая содержит приблизительно 20 -200 нМ марганца.
26. Среда для культивирования клеток по п.25, которая содержит приблизительно 40 нМ марганца.
27. Среда для культивирования клеток согласно любому из пп.24-26, отличающаяся тем, что указанная среда для культивирования клеток содержит глутамин, начальная концентрация которого менее или равна приблизительно 8 мМ.
28. Среда для культивирования клеток по п.27, отличающаяся тем, что начальная концентрация глутамина менее или равна приблизительно 4 мМ.
29. Среда для культивирования клеток по п.24, отличающаяся тем, что указанная среда характеризуется определенным составом.
30. Гликопротеин, полученный способом согласно любому из пп.1-23.