КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ, ОБЕСПЕЧИВАЮЩИЕ АКТИВНУЮ ТЕЛОМЕРАЗУ В КЛЕТКАХ IN VIVO

1. Способ экспрессии теломеразы в клетки-мишени у субъекта, включающий введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей липосомы и фармацевтически приемлемый носитель;
где липосома содержит ПЭГилированную липидную мембрану, имеющую внешнюю поверхность и ограничивающую внутренний компартмент, где:
а) внешняя поверхность имеет присоединенный к ней направляющий агент, направленный против рецептора на клетке-мишени, участвующего в рецепторно-опосредованном эндоцитозе или макропиноцитозе; и
b) внутренний компартмент содержит нуклеотидный вектор, содержащий регулирующую экспрессию последовательность, функционирующую в клетке-мишени и функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей теломеразную обратную транскриптазу (TERT);
где липосома проникает в клетку-мишень путем эндоцитоза или макропиноцитоза, и клетка-мишень экспрессирует активную теломеразу.
2. Способ по п.1, где внутренний компартмент содержит нуклеотидный вектор, содержащий регулирующую экспрессию последовательность, функционирующую в клетке-мишени и функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей теломеразный РНК-компонент (TERC).
3. Способ по п.1, где субъект является позвоночным, например, млекопитающим, например, человеком.
4. Способ по п.1, где фармацевтическую композицию вводят внутривенно, интратекально, внутрисуставно, интраокулярно, внутримышечно, перорально, парентерально или местно.
5. Способ по п.1. где фармацевтическую композицию вводят внутривенно, и где наружная поверхность липосом имеет присоединенный к ней направляющий агент, направленный против рецептора на эндотелиальной клетке эндотелиального барьера, связанного с рецепторно-опосредованным трансцитозом, причем липосома пересекает эндотелиальный барьер.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что эндотелиальный барьер является гематоэнцефалическим барьером.
7. Способ по п.5 или 6, где направляющий агент, направленный против рецептора на клетке-мишени, также направлен против рецептора на эндотелиальной клетке.
8. Способ по п.1, где клетка-мишень представляет собой клетку нервной системы, а эндотелиальная клетка является клеткой гематоэнцефалического барьера.
9. Способ по п.1, где клетка-мишень представляет собой клетку сердечно-сосудистой системы, пищеварительной системы, эндокринной системы, мочевыводящей системы, иммунной системы, скелетно-мышечной системы, нервной системы, репродуктивной системы или дыхательной системы.
10. Способ по п.1, где липосомы вводят внутрисуставно, и где липосомы включают направляющий агент к рецептору на хондроцитах.
11. Способ по п.1, где субъект страдает от заболевания, связанного с укороченными теломерами.
12. Способ по п.11, где активная теломераза увеличивает длину укороченных теломер у субъекта.
13. Способ лечения пациента, страдающего от заболевания, связанного с укороченными теломерами, включающий введение субъекту липосом,
где липосома содержит ПЭГилированную липидную мембрану, имеющую внешнюю поверхность и ограничивающую внутренний компартмент, где:
а) внешняя поверхность имеет присоединенный к ней направляющий агент, направленный против рецептора на клетке-мишени, участвующего в рецепторно-опосредованном эндоцитозе или макропиноцитозе; и
b) внутренний компартмент содержит нуклеотидный вектор, содержащий регулирующую экспрессию последовательность, функционирующую в клетке-мишени и функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей теломеразную обратную транскриптазу (TERT);
где введение приводит к экспрессии активной теломеразы в клетках-мишенях субъекта, и где активная теломераза увеличивает длину теломер в клетках-мишенях.
14. Способ по п.13, где экспрессия теломеразы является временной (например, экспрессия в течение любого срока из 4 часов, 8 часов, 24 часов, 2 дней, 4 дней или 8 дней).
15. Способ по п.13, где введение обеспечивает от 100 копий до 100000 копий теломеразы в клетке-мишени.
16. Способ по п.13, где заболевание, связанное с укороченными теломерами, выбирают из болезни Альцгеймера, атеросклероза, остеопороза и прогерии.
17. Способ по п.13, включающий многократное введение липосом субъекту.
18. Липосома для доставки по меньшей мере одного нуклеотидного вектора, кодирующего теломеразную обратную транскриптазу, в клетки-мишени, где липосома содержит ПЭГилированную липидную мембрану, имеющую внешнюю поверхность и ограничивающую внутренний компартмент, где:
а) внешняя поверхность имеет присоединенный к ней направляющий агент, направленный против рецептора на клетке-мишени, участвующего в рецепторно-опосредованном эндоцитозе или макропиноцитозе; и
b) внутренний компартмент содержит нуклеотидный вектор, содержащий регулирующую экспрессию последовательность, функционирующую в клетке-мишени и функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей теломеразную обратную транскриптазу (TERT).
19. Липосома по п.18, где клетка-мишень представляет собой клетку нервной системы, например, нейрон (например, пирамидальную клетку, клетку Пуркинье, гранулярную клетку или другой резидентный нейрон), глиальную клетку (например, клетку микроглии, клетку астроглии, олигодендроцит или другую резидентную глиальную клетку), или транзиентную клетку, входящую в нервную систему.
20. Липосома по п.18, где клетка-мишень представляет собой клетку сердечно-сосудистой системы, пищеварительной системы, эндокринной системы, мочевыводящей системы, иммунной системы, скелетно-мышечной системы, нервной системы, репродуктивной системы или дыхательной системы.
21. Липосома по п.18, где направляющий агент направлен на инсулиновый рецептор.
22. Липосома по п.18, где направляющей агент направлен на мишень, кроме той, которая опосредует образование эндосом, предназначенных для клеточных компартментов за исключением ядра, например, кроме трансферринового рецептора или рецептора липидов низкой плотности.
23. Липосома по п.21, где направляющий агент содержит моноклональное антитело, направленное против рецептора.
24. Липосома по п.18, где направляющий агент выбран из эндогенного пептидного лиганда рецептора, аналога эндогенного пептидного лиганда или моноклонального антитела, которое связывается с рецептором.
25. Липосома по п.18, где направляющий агент выбран из инсулина, инсулиноподобного фактора роста (IGF) и лептина.
26. Липосома по п.18, где внешняя поверхность имеет присоединенный к ней направляющий агент, направленный против рецептора на эндотелиальной клетке эндотелиального барьера, связанного с рецепторно-опосредованным трансцитозом.
27. Липосома по п.19, где эндотелиальным барьером является гематоэнцефалический барьер.
28. Липосома по п.27, где направляющий агент, направленный против рецептора на клетке-мишени, также направлен против рецептора на эндотелиальной клетке.
29. Липосома по п.28, где клетка-мишень представляет собой клетку нервной системы, а эндотелиальная клетка является клеткой гематоэнцефалического барьера.
30. Липосома по п.18, где по меньшей мере один нуклеотидный вектор содержит плазмиду.
31. Липосома по п.18, где TERT представляет собой TERT человека или его модифицированный вариант.
32. Липосома по п.18, где нуклеотидная последовательность, кодирующая TERT, включает природную нуклеотидную последовательность, кодирующую TERT человека.
33. Липосома по п.18, где регулирующая экспрессию последовательность содержит промотор SV40.
34. Липосома по п.18, где по меньшей мере одна регулирующая экспрессию последовательность включает промотор, специфичный для клетки-мишени.
35. Липосома по п.18, где внутренний компартмент дополнительно содержит нуклеотидный вектор, содержащий регулирующую экспрессию последовательность, функционирующую в клетке-мишени и функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей теломеразный РНК-компонент (TERC).
36. Липосома по п.35, где TERC представляет собой TERC человека.
37. Липосома по п.35, где кодирующая TERT нуклеотидная последовательность и кодирующая TERC нуклеотидная последовательность содержатся в одном векторе.
38. Липосома по п.35, где кодирующая TERT нуклеотидная последовательность и кодирующая TERC нуклеотидная последовательность функционально связаны с одной регулирующей экспрессию последовательностью.
39. Липосома по п.18, где внутренний компартмент содержит нуклеотидный вектор, содержащий регулирующую экспрессию последовательность, функционирующую в клетке-мишени и функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей терапевтическую биомолекулу, кроме теломеразной обратной транскриптазы или теломеразного РНК-компонента.
40. Липосома по п.39, где терапевтической биомолекулой является LMNA А, например, LMNA А человека.
41. Липосома по п.39, где терапевтической биомолекулой является фактор элонгации 1 (ELF1).
42. Фармацевтическая композиция, содержащая липосому по любому из пп.18-41 и фармацевтически приемлемый носитель.
43. Фармацевтическая композиция по п.42, составленная для внутривенного, интратекального, внутрисуставного, интраокулярного, внутримышечного, перорального, парентерального или местного введения.
44. Стандартная лекарственная форма, включающая контейнер, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую липосомы по п.18 этого изобретения и фармацевтически приемлемый носитель.