СМЕСЬ ДЛЯ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ С ВЫСОКИМ СОДЕРЖАНИЕМ SN-2-ПАЛЬМИТАТА И ОЛИГОФРУКТОЗОЙ
MIXTURE FOR INFANT FOOD WITH HIGH CONTENT OF SN-2-PALMITATE AND OLIGOFRUCTOSE

Область техники
Настоящее изобретение относится к композициям смеси для детского питания, имеющим высокое содержание триглицеридов (sn-2-пальмитата) и содержащим олигофруктозу.
Уровень техники
Триглицериды образуются с помощью сложноэфирных связей между глицерином, который имеет три гидроксильные группы, и тремя молекулами жирной кислоты. Триглицериды как источник энергии играют важную роль в обмене веществ. В кишечнике триглицериды расщепляются на моноацилглицерин и свободные жирные кислоты в процессе, называемом липолизом, в ходе которого свободные жирные кислоты отщепляются из sn-1 и sn-З положений триглицерида. Ненасыщенные свободные жирные кислоты всасываются в кишечнике намного легче, чем насыщенные жирные кислоты. Если sn-1 и/или sn-3 положения триглицеридов включают высокий процент насыщенных жирнокислотных остатков, то свободные жирные кислоты (такие как пальмитиновая кислота), образующиеся в процессе липолиза, могут комбинироваться с минералами, такими как кальций или магний, с образованием мыл, которые делают стул более твердым и труднопроходимым. Это образование мыл может также препятствовать всасыванию кальция.
Триглицериды жира женского молока содержат примерно 20-25% остатков пальмитиновой кислоты, около 70% которых присутствует в sn-2 положении глицерида, с которым они связаны. Растительные масла традиционно используются в смесях для детского питания взамен молочного жира. Триглицериды растительных масел в типичных случаях имеют высокое процентное содержание (обычно 80-85% или выше) пальмитиновой кислоты, находящейся в sn-1 или sn-3 положении. Таким образом, свободные жирные кислоты, образующиеся в процессе переваривания женского молока, представляют собой преимущественно ненасыщенные жирные кислоты, в то время как жирные кислоты, высвобождающиеся в процессе переваривания растительных масел, являются большей частью насыщенными жирными кислотами, которые могут комбинироваться с кальцием с образованием мыл. Именно этим можно объяснить, почему у грудных детей, находящихся на грудном вскармливании, более мягкий стул, чем у вскармливаемых смесями грудных детей.
Линолевая кислота (LA), т.е. преобладающая омега-6 жирная кислота, и альфа-линоленовая кислота (ALA), т.е. преобладающая омега-3 жирная кислота, являются незаменимыми для нормального роста и развития человеческих существ. Жирные кислоты LA и ALA отличаются друг от друга в метаболическом отношении, не могут синтезироваться в человеческом организме и должны поступать в организм из пищи млекопитающего. На протяжении эволюционной истории соблюдался общий баланс в рационе питания человека в плане потребления LA и ALA, и отношение LA к ALA составляло примерно 1:1. В результате применения современных сельскохозяйственных технологий и упрощения транспортировки потребление растительных масел с высоким содержанием LA (кукурузного, подсолнечного, сафлорового, соевого масел) возросло, резко сдвинув потребление млекопитающими соотношения LA:ALA примерно с 1:1 в сторону примерно 10-25 LA:1 ALA во многих диетах млекопитающих, в частности, в западных странах.
Желательно иметь смесь для детского питания, в которой триглицериды содержат больше sn-2 пальмитата и меньше sn-3 и sn-3 пальмитатов, чем триглицериды растительного масла.
В смесях для детского питания желательно оптимизировать жировую смесь за счет использования бета-пальмитата для улучшения аккреции (нарастания) кальция и снижения содержания омыленных жирных кислот в стуле. Таким образом, включение по меньшей мере одной омега-6 жирной кислоты и по меньшей мере одной омега-3 жирной кислоты в соотношении примерно 6:1 обеспечит кратко- и долговременную пользу для здоровья, включая улучшение биодоступности докозагексаеновой кислоты (DHA).
В уровне техники известно множество триглицеридов растительного происхождения, имеющих такие характеристики.
ЕР 1237419 описывает смесь для детского питания, включающую легко перевариваемый липидный компонент, который не содержит больших количеств насыщенных жирных кислот в sn-1 и sn-3 положениях глицерина; компонент, улучшающий вязкость; белковый компонент, содержащий менее 0,75 г фосфора/100 г белка, и/или пребиотический компонент, такой как олигосахарид.
WO 2005/036987 описывает новый препарат на жировой основе, включающий смесь триглицеридов растительного происхождения, содержащих до 38% остатков пальмитиновой кислоты, причем по меньшей мере 60% остатков пальмитиновой кислоты находятся в sn-2 положении глицерида, a sn-1 и sn-3 положения предпочтительно заняты по меньшей мере 70% ненасыщенных жирнокислотных остатков, таких как олеат.
WO 2006/114791 описывает заменители жира женского молока для детской смеси, содержащие триглицериды растительного происхождения с менее чем 50% жирнокислотных остатков в sn-2 положении, которые являются насыщенными, и/или насыщенные жирнокислотные остатки в sn-2 положении составляют менее 43,5% общего количества насыщенных жирнокислотных остатков.
Олигофруктоза - это олигосахарид, состоящий из фруктозных единиц с относительно низкой степенью полимеризации. Олигофруктоза хорошо известна в уровне техники и коммерчески доступна.
Патент US 7651716 раскрывает смесь для детского питания, содержащую от 2,2 до 2,5 г/л альфа-лактальбумина (около 0,3-0,4 г/100 ккал), т.е. приближенную по содержанию альфа-лактальбумина к женскому молоку. Указывается также общее содержание белка в смеси для детского питания - от 2,0 до 2,4 г/100 ккал готовой смеси.
Способы получения триглицеридных композиций, имеющих относительно высокое процентное содержание остатков насыщенных жиров, таких как пальмитиновая кислота, в sn-2 положении, описаны в патенте US 5658768, WO 2007/029015, WO 2007/029018, WO 2007/029020 и WO 2008/104381. Коммерчески доступной композицией, реализуемой Lipid Nutrition, является Betapol™ В-55, представляющий собой смесь триглицеридов, происходящих из растительного масла, в которой по меньшей мере 54% пальмитиновой кислоты находится в sn-2 положении молекулы глицерина.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение предлагает смесь для детского питания, содержащую на 100 ккал готовой смеси:
a) примерно от 5 до 6 г жира, в котором по меньшей мере 7,5 масс. % общего жира составляют триглицериды, содержащие пальмитиновую кислоту в sn-2 положении;
b) необязательно по меньшей мере около 0,4 г олигофруктозы и
c) примерно от 1,8 до 2,2 г общего белка, необязательно включающего примерно от 0,3 до 0,4 г альфа-лактальбумина.
Настоящее изобретение предлагает смесь для детского питания, содержащую на 100 ккал готовой смеси:
a) примерно от 5 до 6 г жира, в котором по меньшей мере 7,5 масс. % общего жира составляют триглицериды, содержащие пальмитиновую кислоту в sn-2 положении;
b) необязательно по меньшей мере около 0,4 г олигофруктозы;
c) примерно от 1,8 до 2,2 г общего белка, необязательно включающего примерно от 0,3 до 0,4 г альфа-лактальбумина, и
d) по меньшей мере одну омега-6 жирную кислоту и по меньшей мере одну омега-3 жирную кислоту в соотношении примерно 6:1.
Настоящее изобретение предлагает также способ улучшения консистенции стула грудного ребенка, предусматривающий кормление указанного ребенка смесью для детского питания согласно настоящему изобретению.
Кроме того, настоящее изобретение предлагает способ снижения количества кальциевых мыл в стуле грудного ребенка, предусматривающий кормление указанного ребенка смесью для детского питания согласно настоящему изобретению.
Настоящее изобретение дополнительно предлагает способ увеличения количества полезных бифидобактерий в толстом кишечнике грудного ребенка.
Другие важные аспекты настоящего изобретения будут очевидны из нижеприведенного описания.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 является столбчатой диаграммой (гистограммой), показывающей изменение количества бифидобактерий в фекалиях грудных детей, вскармливаемых различными смесями для детского питания и женским молоком.
Фиг. 2 является столбчатой диаграммой, показывающей консистенцию стула грудных детей, вскармливаемых различными смесями для детского питания и женским молоком.
Фиг. 3 является столбчатой диаграммой, показывающей количество мыл из пальмитиновой кислоты в стуле грудных детей, вскармливаемых различными смесями для детского питания и женским молоком.
Раскрытие изобретения
Термин "олигофруктоза" в контексте изобретения относится к олигомеру фруктозы, имеющему степень полимеризации от 2 до 10, например, степень полимеризации от 2 до 8.
Термин "sn-2 пальмитат" в контексте изобретения относится к пальмитиновой кислоте в sn-2 положении триглицерида, с которым она связана.
Термин "смесь для детского питания" в контексте изобретения относится к питательной смеси (либо в виде жидкости, либо в виде сухого порошка, который может восстанавливаться путем добавления воды с получением жидкой смеси для детского питания), которая обеспечивает полноценное питание для грудного ребенка и пригодна для вскармливания грудного ребенка и которая отвечает стандартам США и ЕС на смеси для детского питания. Такие смеси хорошо известны в уровне техники.
В типичных случаях смесь для детского питания в готовом к употреблению жидком виде обеспечивает 60-70 ккал/100 мл. Смесь для детского питания в типичных случаях содержит на 100 ккал: примерно от 1,8 до 4,5 г белка; примерно от 3,3 до 6,0 г жира (липидов); примерно от 300 до 1200 мг линолевой кислоты; примерно от 9 до 14 г углеводов, выбранных из группы, состоящей из лактозы, сахарозы, глюкозы, глюкозного сиропа, крахмала, мальтодекстринов, мальтозы и их комбинаций, и жизненно важные витамины и минералы. Лактоза может быть преобладающим углеводом в смеси для детского питания. Например, жидкая смесь для детского питания может содержать около 67 ккал/100 мл. В некоторых вариантах осуществления изобретения смесь для детского питания может содержать примерно от 1,8 до 3,3 г белка/100 ккал. Смесь для детского питания может иметь форму порошка, который может восстанавливаться в готовую к употреблению жидкость путем добавления количества воды, обеспечивающего получение жидкости, содержащей около 67 ккал/100 мл.
Смесь для детского питания может также содержать нуклеотиды, выбранные из цитидин-5'-монофосфата (СМР), уридин-5'-монофосфата (UMP), аденозин-5'-монофосфата (AMP), гуанозин-5'-монофосфата (GMP), инозин-5'-монофосфата (IMP) и их смесей. Смесь для детского питания может также содержать лютеин, зеаксантин, фруктоолигосахариды, галактоолигосахариды, сиалиллактозу и/или фукозиллактозу. В смесь для детского питания могут включаться длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты, такие как докозагексаеновая кислота (DHA) и арахидоновая кислота (АА). Смесь для детского питания может также включать свободные аминокислоты. Смесь для детского питания может также включать другие ингредиенты, хорошо известные в уровне техники.
В одном варианте воплощения смесь для детского питания согласно настоящему изобретению содержит примерно от 5 до 6 г/100 ккал жира (триглицеридов), причем по меньшей мере около 7,5 масс. % этого жира, например, примерно от 7,5 до 12,0 масс. % состоят из пальмитиновой кислоты в sn-2 положении триглицерида. В некоторых вариантах примерно от 7,8 до 11,8 масс. %, примерно от 8,0 до 11,5 масс. %, примерно от 8,5 до 11,0 масс. % или примерно от 9,0 до 10,0 масс. % жира составляет пальмитиновая кислота в sn-2 положении триглицерида.
В некоторых вариантах осуществления изобретения пальмитиновая кислота составляет примерно от 15 до 25 масс. %, например, примерно от 15 до 20 масс. % общего содержания жирных кислот в смеси, и по меньшей мере примерно от 30%, например, примерно от 35 до 43% общего содержания пальмитиновой кислоты находится в sn-2 положении.
В некоторых вариантах осуществления изобретения смесь для детского питания содержит также по меньшей мере одну омега-6 жирную кислоту и по меньшей мере одну омега-3 жирную кислоту в соотношении примерно 6:1. В одном варианте по меньшей мере одна омега-6 жирная кислота составляет примерно от 10 до 15 масс. % общего содержания жирных кислот, а по меньшей мере одна омега-3 жирная кислота составляет примерно от 1,2% до 3,6% общего содержания жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления изобретения смесь для детского питания содержит по меньшей мере одну омега-6 жирную кислоту, присутствующую в количестве примерно от 2 до 4% общей массы, и по меньшей мере одну омега-3 жирную кислоту, присутствующую в количестве примерно от 0,3% до 0,6% общей массы.
Жир в смеси для детского питания согласно настоящему изобретению включает множество триглицеридов, обычно встречающихся в молоке и/или смесях для детского питания. Наиболее распространенными жирнокислотными остатками в триглицеридах являются пальмитиновая и олеиновая кислоты. Жирнокислотные остатки в дополнение к присутствующим олеиновой и пальмитиновой кислотам включают, но не ограничиваются, линолевую кислоту, альфа-линоленовую кислоту, лауриновую кислоту, миристиновую кислоту, докозагексаеновую кислоту и арахидоновую кислоту.
Коммерчески доступной композицией, реализуемой на рынке Lipid Nutrition, является Betapol™ В-55, представляющий собой смесь триглицеридов, происходящих из растительного масла, в которой по меньшей мере 54% пальмитиновой кислоты находятся в sn-2 положении молекулы глицерина. В одном варианте осуществления изобретения содержание жира в смеси согласно настоящему изобретению составляет около 40-50 масс. % содержания жира в Betapol™ В-55, например, примерно от 43 масс. % до 45 масс. %. Специалистам в данной области понятно, что процентное количество используемого жира с высоким содержанием sn-2-пальмитата и общее количество sn-2-пальмитата в смеси для детского питания могут варьировать и что могут использоваться различные масла с высоким содержанием sn-2-пальмитата в пределах сущности и объема изобретения.
Хотя вскармливание грудного ребенка смесью, содержащей высокое процентное количество sn-2-пальмитата, помогает сделать стул ребенка более мягким и способствует росту бифидобактерий в толстом кишечнике, комбинация высокого содержания sn-2-пальмитата с олигофруктозой обеспечивает намного лучшее размягчение стула и рост бифидобактерий в толстом кишечнике грудных детей, вскармливаемых такой смесью. Может также достигаться существенное снижение количества потенциально патогенных бактерий. Установлено, что вскармливание грудного ребенка смесью для детского питания с высокой процентной долей sn-2-пальмитата, содержащей примерно от 3 до 5 г/л или примерно от 0,4 до 0,7 г/100 ккал олигофруктозы, является более полезным, чем вскармливание грудного ребенка такой же смесью, но без олигофруктозы.
Настоящее изобретение имеет результатом уменьшение количества мыл пальмитиновой кислоты в фекалиях, что может привести к сокращению случаев запора и улучшению желудочно-кишечной переносимости по сравнению с стандартными смесями для детского питания.
Смесь для детского питания согласно настоящему изобретению содержит по меньшей мере около 0,4 г олигофруктозы/100 ккал. В некоторых вариантах осуществления изобретения она содержит примерно от 0,4 до 0,9 г, примерно от 0,4 до 0,7 г, примерно от 0,4 до 0,5 г, примерно от 0,7 до 0,8 г или примерно от 0,7 до 0,9 г олигофруктозы/100 ккал. Олигофруктоза имеет степень полимеризации от 2 до 10. В одном варианте по меньшей мере 90% олигофруктозы имеют степень полимеризации от 2 до 8.
Проведенные в последнее время клинические исследования на грудных детях показали, что питательные смеси, содержащие по меньшей мере одну омега-6 жирную кислоту и по меньшей мере одну омега-3 жирную кислоту в соотношении примерно 6:1, увеличивали аккрецию (нарастание содержания) DHA в эритроцитах и плазме крови. Сбалансированное отношение омега-6 жирной кислоты к омега-3 жирной кислоте, составляющее примерно 6:1, способно также обеспечивать долговременную пользу для здоровья, включая защиту от сердечно-сосудистых заболеваний. Такой баланс достигается за счет включения в смесь согласно настоящему изобретению источников жира на основе растительных масел, содержащих омега-6 жирные кислоты, таких как, например, соевое масло и подсолнечное масло, и омега-3 жирные кислоты, например, рапсовое масло, масло канолы, льняное масло, масло чиа (шалфея испанского), перилловое или ореховое масло. Для достижения модифицированной жировой смеси можно использовать уникальную жировую смесь с 5-ю различными маслами.
В одном варианте воплощения смесь для детского питания согласно настоящему изобретению содержит примерно от 1,8 до 2,2 г общего белка/100 ккал, например, примерно от 1,8 до 2,1 г или примерно от 1,9 до 2,1 г белка/100 ккал, в котором примерно от 0,3 до 0,4 г/100 ккал белка составляет альфа-лактальбумин. Смесь для детского питания согласно настоящему изобретению может иметь форму готовой к употреблению жидкости или может представлять собой жидкий концентрат либо сухую смесь, которая может восстанавливаться в готовую к употреблению жидкость путем добавления количества воды, которое обеспечивает получение жидкости, содержащей около 67 ккал/100 мл. Смесь для детского питания согласно настоящему изобретению содержит все ингредиенты, требуемые законодательством США или ЕС, включая, но не ограничиваясь, определенные витамины, минералы и незаменимые аминокислоты. Она может также включать нуклеотиды, такие как CMP, UMP, AMP, GMP и IMP, лютеин, зеаксантин и другие ингредиенты, известные в уровне техники.
Ниже представлены примеры, иллюстрирующие некоторые варианты осуществления и отличительные признаки настоящего изобретения, которые не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего изобретения.
Пример 1
1. Контрольная смесь
Контрольная смесь в виде готовой к употреблению жидкой смеси для детского питания содержит 670 ккал/л. Ингредиенты указаны ниже:
Контрольная смесь включает также незаменимые аминокислоты, минералы и микроэлементы, нуклеотиды и различные необязательные ингредиенты и пищевые добавки, традиционно используемые в смесях для детского питания.
2. Смесь с высоким содержанием sn-2-пальмитата
Эта смесь аналогична контрольной смеси за исключением того, что 9,6 масс. % общего жира в ней составляет sn-2-пальмитат. Это обеспечивается за счет использования жира, который представляет собой смесь из 57% растительного масла и 43% Betapol™ В-55, в которой около 55% пальмитиновой кислоты находится в sn-2 положении.
3. Смесь А с высоким содержанием sn-2-пальмитата+олигофруктоза
Эта смесь аналогична смеси с высоким содержанием sn-2-пальмитата за исключением того, что она включает 3,0 г/л (0,4 г/100 ккал) олигофруктозы.
4. Смесь В с высоким содержанием sn-2-пальмитата+олигофруктоза
Эта смесь аналогична смеси с высоким содержанием sn-2-пальмитата за исключением того, что она включает 5,0 г/л (0,7 г/100 ккал) олигофруктозы.
5. Смесь С с высоким содержанием sn-2-пальмитата+олигофруктоза+омега-6 и омега-3 жирные кислоты
Эта смесь аналогична смеси с высоким содержанием sn-2-пальмитата за исключением того, что смесь С включает примерно от 3 до 5 г/л (около 0,75 г/100 ккал) олигофруктозы и примерно от 4,5 г/литр восстановленной смеси (RL) (около 0,65 г/100 ккал) омега-6 жирной кислоты и примерно 730 мг/RL (110 мг/100 ккал) омега-3 жирной кислоты.
Пример 2
Проводилось сравнительное исследование трех смесей для детского питания (смеси с высоким содержанием sn-2-пальмитата, смеси А с высоким содержанием sn-2-пальмитата+олигофруктоза и смеси В с высоким содержанием sn-2-пальмитата+олигофруктоза) с контрольной смесью в формате двойного слепого рандомизированного контролируемого дизайна. Смесь С не тестировалась. Женское молоко также было включено в исследование в качестве нерандомизированной контрольной группы. Триста грудных детей, находящихся на вскармливании смесями, произвольно распределяли на четыре группы (по 75 в каждой группе), и каждой группе в течение восьми недель давали разные детские смеси Примера 1 (контрольная смесь; смесь с высоким содержанием sn-2-пальмитата; смесь А с высоким содержанием sn-2-пальмитата+олигофруктоза или смесь В с высоким содержанием sn-2-пальмитата+олигофруктоза). Другая группа из семидесяти пяти младенцев вскармливалась женским молоком в течение 8 недель. Все дети были здоровыми доношенными детьми и имели возраст к началу исследования от 7 до 14 дней.
Один из способов получения результатов предусматривал сбор образцов стула в подгруппе из 170 грудных детей при посещениях на исходном этапе и на 8-й неделе и проведение анализа фекальной микрофлоры методом флуоресцентной in situ гибридизации (FISH). Хорошо известно, что FISH является высокоценным инструментом для специфического и быстрого обнаружения микроорганизмов в клинических образцах без культивирования. Анализ фекальной микрофлоры в подгруппе грудных детей показал, что у грудных детей, получавших смесь с высоким содержанием sn-2-пальмитата с добавлением (″SN2+OF″) или без добавления (″SN2″) олигофруктозы, наблюдалось значительно большее увеличение концентраций бифидобактерий в фекалиях в течение 8-недельного периода по сравнению с контрольной группой (р=0,033 для группы SN2; р≤0,002 для групп SN2+OF), и эти концентрации существенно не отличались от концентраций бифидобактерий в фекалиях грудных детей, вскармливаемых женским молоком (″НМ″), как показано на фиг. 1. Этот результат указывает на то, что только смесь с высоким содержанием sn-2-пальмитата оказывает стимуляторный эффект на рост полезных бифидобактерий, что приводит к повышенным количествам бифидобактерий в пищеварительной системе, максимально приближающимся к естественным количествам бифидобактерий в толстом кишечнике ребенка на грудном вскармливании.
Для измерения биохимического состава стула образцы стула грудных детей отбирали при посещении на 8-й неделе и анализировали на следующие переменные показатели состава стула: отдельные омыленные жирные кислоты; неомыленные жирные кислоты; общее количество жирных кислот; омыленные липиды; неомыленные липиды; минералы: кальций, магний и фосфор; азот; твердый остаток стула и влажность стула. Двумя наиболее важными показателями состава стула являются количество мыл пальмитиновой кислоты и общее количество мыл жирных кислот (предопределенных в плане статистического анализа).
С использованием набора, предоставленного родителям/официальным опекунам, сбор стула от всех участвовавших в исследовании грудных детей производился в домашних условиях в течение 5-дневного периода перед окончательным посещением на 8-й неделе. Детям надевали подгузники, имеющие полоску липкой ленты Tegaderm в области совершения грудным ребенком акта дефекации, что обеспечивало удерживание стула в подгузнике. В период сбора образцов кала родители ложкой из набора зачерпывали свежие испражнения, помещали образцы в пластиковые пакеты желтого цвета, взвешивали каждый пакет на переносных весах и хранили пакет в морозильной секции домашнего холодильника.
Как только объем собранного кала достигал по меньшей мере 30 г, специалисты, проводившие исследования, переносили замороженные образцы в сумке-холодильнике, входящей в набор для сбора кала, в исследовательскую клинику и хранили в морозильной камере при -20°C. Образцы разгружали в замороженном виде на сухой лед в Covance Laboratories, Inc., Мэдисон, шт. Висконсин, США, где образцы анализировали методами, описанными в Quinlan et al., для определения общего количества омыленных жирных кислот; неомыленных жирных кислот; общего количества жирных кислот; омыленных липидов и неомыленных липидов. Для определения влажности и твердого остатка стула применяли стандартные аналитические процедуры. Содержание минералов, включая кальций, фосфор и магний, определяли эмиссионной спектрометрией с индуктивно связанной плазмой (ICP) вкупе с международными официальными АОАС-методами анализа. Азот определяли методом Дюма с использованием методики сжигания-детектирования.
Для определения омыленных жирных кислот и неомыленных жирных кислот образцы стула размораживали и гомогенизировали перемешиванием с последующим определением массы влажного стула. Затем образец подвергали лиофильной сушке и измеряли массу высушенного стула. Лиофилизированный образец стула (от 0,5 до 1,0 г) переносили в экстракционную гильзу и подвергали экстракции путем ступенчатого орошения растворителем с получением нейтральных липидов, включающих неомыленные свободные жирные кислоты. Образец, оставшийся в гильзе, обрабатывали уксусной кислотой для высвобождения омыленных жирных кислот, которые выделялись затем на второй ступени орошения растворителем. В оба экстракта добавляли внутренние стандарты; свободные кислоты абсорбировались безводной щелочной ионообменной смолой. Затем из смолы экстрагировали свободные кислоты и превращали в метиловые эфиры с использованием соляной кислоты и метанола. Полученные метиловые эфиры жирных кислот подвергали анализу газовой хроматографией. Интерес представляли такие жирные кислоты, как лауриновая (С12:0), миристиновая (С14:0), пальмитиновая (С16:0), стеариновая (С18:0), олеиновая (С18:1) и линолевая (С18:2). Главной жирной кислотой, представлявшей интерес, была С16:0, поэтому в случае количественных анализов предел количественного определения (LOQ) определялся как концентрация образца, соответствующая наименьшему калибровочному стандарту С16:0 (0,05%), который затем корректировался с учетом массы образца. Критерии приемлемости, относящиеся к выделению жирных кислот, и коэффициенты вариабельности (CV) для жирных кислот составляли ±30% при проведении репликационных анализов, связанных с точностью, по сравнению с ранее установленными значениями целевых параметров образцов в рамках контроля качества (QC). Величина относительного стандартного отклонения (RSD) воспроизводимости для уровня контроля качества (QC) сухих образцов с С16:0 колебалась от 2,9% до 12,6%. Общее количество омыленных жирных кислот рассчитывалось как сумма всех измеренных отдельных омыленных жирных кислот. Общее количество неомыленных жирных кислот рассчитывалось как сумма всех измеренных отдельных неомыленных жирных кислот. Общее количество жирных кислот рассчитывалось как общее количество неомыленных жирных кислот плюс общее количество омыленных жирных кислот. Результаты выражались в мг/г сухой массы стула.
С целью измерения характеристик стула (консистенции и частоты) родители/официальные опекуны заполняли рассчитанный на 3 суток дневник наблюдений за стулом в течение трех дней подряд непосредственно перед посещениями в рамках исследования на 4-й неделе и на 8-й неделе, в котором они отмечали частоту стула в день и его консистенцию, описывая ее как 1=водянистая, 2=текучая, 3=кашицеобразная, мягкая, 4=консистенция сформировавшегося кала или 5=твердая на основе сравнения со стандартизированными изображениями репрезентативных образцов стула, приложенными к инструкциям по ведению дневника наблюдений. Пять вариантов консистенции стула базируются на официально утвержденной 5-балльной шкале Weaver et al.
Как показано на фиг. 2, стул грудных детей, вскармливаемых смесью с высоким содержанием sn-2-пальмитата без добавления олигофруктозы, был значительно менее сформировавшимся, чем у детей контрольной группы, а смеси, включающие высокое содержание sn-2-пальмитата и олигофруктозу, способствовали образованию еще менее сформировавшегося стула, приближающегося к уровню, наблюдавшемуся в группе детей на грудном вскармливании.
Все смеси с высоким содержанием sn-2-пальмитата как с добавлением, так и без добавления олигофруктозы приводили к значительно более низким уровням образования мыл пальмитиновой кислоты (чем контрольная смесь), которые были сравнимы с женским молоком, как показано на фиг. 3.
Многие варианты осуществления настоящего изобретения, не проиллюстрированные в описании, очевидны специалистам в данной области. Настоящее изобретение не ограничивается вариантами осуществления, проиллюстрированными и описанными здесь, а охватывает весь предмет изобретения в объеме прилагаемой формулы изобретения.