ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МАСТИТА У КОРОВ В ПЕРИОД ЛАКТАЦИИ
PREPARATION FOR MASTITIS TREATMENT IN LACTATING COWS

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к препаратам для лечения мастита у коров в период лактации.
Мастит - воспаление молочной железы, которое возникает в ответ на воздействие неблагоприятных механических, физических, химических и биологических факторов.
Основными факторами, способствующими возникновению и развитию мастита, являются техническое несовершенство доильных установок, нарушение технологии и правил машинного доения коров. В начале возникает раздражение, которое при многократном повторении переходит в асептическое воспаление - скрытый мастит. Снижается общая и локальная (вымени) резистентность, создаются условия для проникновения и размножения различной условно-патогенной и патогенной микрофлоры, обусловливающей воспаление различных форм от субклинической, протекающей самостоятельно на протяжении одной, двух лактаций и приводящую долю к атрофии, или трансформируясь в клинически выраженный (серозный, катаральный) мастит и т.д.
Заболевания молочной железы коров имеют широкое распространение и наносят животноводству большой экономический ущерб, исчисляющийся сотнями миллионов рублей. Он слагается из недополучения молока, преждевременной выбраковки коров, высокой заболеваемости молодняка. Все это нарушает ритмично-поточное производство молока, снижает производственную и экономическую эффективность молочного скотоводства, что негативно сказывается на обеспечении молочными продуктами население страны. Поэтому разработка новых высокоэффективных средств, методов лечения и профилактики мастита у коров имеет актуальное значение.
В настоящее время отечественные и зарубежные производители выпускают препараты для лечения больных маститом коров, включающие антибиотики, сульфаниламидные, нитрофурановые и другие средства. Но не все они дают желаемый эффект, что прежде всего объясняется снижением чувствительности к данным средствам микрофлоры, вызывающей мастит. В связи с этим возникает необходимость создания новых комплексных препаратов широкого спектра действия.
В качестве аналога к предлагаемому препарату нами взят Мастисан А, рекомендованный для лечения мастита у животных, содержащий в своем составе калиевую или натриевую соль бензилпеницилина, стрептомицин, норсульфазол или сульфадимезин, суспензированный в растительном масле, при следующем соотношении компонентов, ЕД и г/мл:
Натриевая или калиевая соль бензилпеницилина - 20000 ЕД/мл
Сульфат стрептомицина - 20000 ЕД/мл
Норсульфазол или сульфадимезин - 0,004 г/мл
Масляная основа до 1 мл
Доза введения составляет 5-20 мл в сосковую цистерну вымени с интервалом 24 часа до полного излечения [Ветеринарные препараты России. Справочник. М., 2004. Ч.1. - С.469].
Известен препарат Мастисан Б, содержащий в своем составе:
Сульфат неомицина - 250 ЕД/мл
Сульфадимезин - 0,0035 г/мл
Метилурацил - 0,0035 г/мл
Масляная основа до 1 мл
[Антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны в ветеринарии: Справочник / В.Ф.Ковалев, И.Б.Виолин и др. - М.: Агропромиздат, 1988. - С.124].
Известен препарат Мастисан Е, содержащий в своем составе:
Эритромицин 11250 ЕД/мл
Сульфадимезин - 0,004 г/мл
Масляная основа до 1 мл
[Ветеринарные препараты России. Справочник. М., 2004. Ч.1. - С.469].
Известен препарат диеномаст. Диеномаст - комплексный препарат, содержащий гентамицина сульфат (2000 мкг/г), диоксидин (1000 мкг/г), воск пчелиный и масло вазелиновое [Ветеринарные препараты России. Справочник. М., 2004. Ч.1. - С.461].
Общим недостатком известных препаратов является низкая терапевтическая эффективность, так как при многократном применении антибиотикосодержащих препаратов отмечали формирование устойчивости (резистентности) к ним микроорганизмов. Большинство препаратов, выпускаемых в виде суспензий, при хранении расслаиваются, а растительные масла окисляются.
Прототипом изобретения является препарат для лечения мастита у коров в период лактации, состоящий из следующих компонентов (г в 100 мл): неомицина сульфат - 2, линкомицина гидрохлорид - 2, моноглицерид мягкий - 3, моноглицерид дистиллированный - 3, масло - до 100 [RU, 2180559, С1, 18.04.2002 г.].
Данный препарат недостаточно эффективен, т.к. комбинация антимикробных средств данного препарата обеспечивает лишь аддитивное действие.
Технический результат изобретения - повышение терапевтической эффективности.
Технический результат достигается за счет использования линкомицина гидрохлорида как антибиотика широкого спектра действия и диоксидина, эффективного при инфекциях, трудно поддающихся лечению другими антимикробными средствами, в виде стабильной суспензии в масляной основе, не действующей раздражающе на ткани вымени.
По сравнению с препаратом-прототипом существенными отличительными признаками предлагаемого изобретения являются признаки, характеризующие введение в состав препарата антибиотика широкого спектра действия - линкомицина гидрохлорида и химиотерапевтического средства - диоксидина, эффективного при недостаточной активности других антибиотиков. В качестве эмульгаторов в основу препарата введены моноглицерид мягкий и моноглицерид дистиллированный в эффективном количестве.
Препарат для лечения мастита у коров в период лактации состоит из следующих компонентов:
Линкомицина гидрохлорид - 2,0-4,0%
Диоксидин - 0,5-1,0%
Моноглицерид мягкий - 3,0%
Моноглицерид дистиллированный - 3,0%
Масло вазелиновое - до 100%.
Достижение технического результата от использования предлагаемого препарата объясняется тем, что входящий в состав лекарственного средства линкомицина гидрохлорид эффективен в отношении большинства грамположительных кокковидных (стафилококков, стрептококков, пневмококков) и некоторых грамположительных палочковидных микроорганизмов, микоплазм и бактерий, устойчивых к другим антибиотикам. Линкомицин подавляет синтез белка в микробной клетке путем взаимодействия с SOS - субъединицами рибосом. Он блокирует образование полисомальных функциональных комплексов и трансляцию связанных с транспортом РНК аминокислот [Навашин С.М., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. М., «Медицина», 1982, с.146-149]. Входящий в препарат диоксидин относится к хиноксалиновому ряду - 1,4-ди-N-окись-2,3-ди(оксиметил), хиноксалин проявляет высокую антимикробную активность в отношении грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов. Наибольшему влиянию диоксидина подвержены грамотрицательные микроорганизмы [«Временное наставление по применению диоксидина в ветеринарии». Утв. Главным управлением ветеринарии 5 ноября 1991 г.].
Введенные в основу препарата моноглицериды используются в качестве эмульгаторов и стабилизаторов пищевых жиров, косметических кремов, фармацевтических мазей, пластификаторов [Химическая энциклопедия. М.: Изд. «Сов. Энциклопедия», 1989, т.1, с.584-585].
Заявляемый препарат применяют в период лактации для лечения всех форм мастита. Перед введением препарата секрет вымени выдаивают из пораженной доли и утилизируют, сосок дезинфицируют. Содержимое щприца тюбика или флакона перед применением нагревают до 37°С, тщательно встряхивают до получения равномерной суспензии, из флакона набирают в стерильный шприц 10 мл. Шприц или шприц-тюбик плотно прижимают к наружному отверстию соскового канала, препарат вводят в сосковую цистерну вымени осторожным нажатием на поршень шприца. После введения проводят легкий массаж соска пораженной доли вымени снизу вверх. В зависимости от тяжести воспалительного процесса препарат вводят в дозе 10 мл один раз в сутки (лучше после вечернего доения) с интервалом 24 часа до полного излечивания пораженной доли вымени (2-4 раза).
Во время лечения и в течение 3 суток после последнего введения препарата молоко из пораженных долей вымени выдаивают в отдельную посуду, обезвреживают и утилизируют, а из остальных долей вымени скармливают животным после кипячения.
Для получения дисперсной среды 6,0% моноглицеридов растворяют при температуре 80°С в вазелиновом масле, добавленном до 100%. Смесь автоклавируют при температуре 120°С в течение 1,5-2 часов. В охлажденную до температуры 30-35°С основу вносят навеску порошков: линкомицина гидрохлорида 2-4% и диоксидина 0,5-1%, предварительно измельченных на шаровой мельнице, включают мешалку на 15-20 минут и фасуют.
По внешнему виду препарат представляет собой устойчивую маслянистую суспензию вязкой консистенции со специфическим запахом, светло -желтого цвета с зеленоватым оттенком. При температуре 35°С суспензия имеет жидкую консистенцию. Препарат полностью сохраняет исходные свойства (внешний вид, цвет, подлинность, массовая доля диоксидина, массовая доля линкомицина гидрохлорида, микробная чистота, механические включения) и не расслаивается в течение 12 месяцев хранения при температуре от 0 до 25°С.
Использование в пищу людям молока допускается через 72 часа после последнего введения при условии полного исчезновения клинических признаков мастита. Убой животных на мясо разрешается не ранее, чем через 7 суток после последнего введения препарата. Мясо животных, вынужденно убитых ранее этого срока, может быть использовано для производства мясокостной муки или в корм пушным животным.
Проверка эффективности препарата проведена на коровах, принадлежащих ЗАО «Должанское» Вейделеевского района Белгородской области, ЗАО «Манино» Калачаевского района Воронежской области, АОНН «Успенское» и СПК «Здоровецкий» Ливенского района Орловской области. Сущность технического решения поясняется примерами.
Пример 1
С целью проверки эффективности прототипа изобретения была изучена антимикробная активность линкомицина, неомицина и их комбинации в отношении основных возбудителей мастита. Результаты представлены в таблице 1.
Таблица 1
Антимикробная активность линкомицина, неомицина и их комбинации в отношении основных возбудителей мастита, мкг/мл
№ п/п
Культура микроба
Линкомицина гидрохлроид
Неомицина сульфат
Линкомицин: неомицин 1:1
1
Стафилококк золотистый-209 Р
12,5
12,5
12,5
2
Стрептококк агалактийный-586
12,5
25,0
12,5
3
Кишечная палочка 0138
100
12,5
25,0
Проведенное изучение антимикробной активности данного лекарственного препарата и отдельных его компонентов показало, что комбинация антимикробных средств данного препарата обеспечивает аддитивное действие, т.е. общий эффект равен сумме действия каждого компонента из них в отдельности.
Пример 2
Для выявления оптимального соотношения компонентов и эффективности препарата были составлены три рецептуры.
Рецептура №1: диоксидин 1,0%; линкомицин 2,0%; моноглицерид дистиллированный 3,0%; моноглицерид мягкий 3,0%; масло вазелиновое - до 100%.
Рецептура 2: диоксидин 0,5%; линкомицин 4,0%; моноглицерид дистиллированный 3,0%; моноглицерид мягкий 3,0%; масло вазелиновое - до 100%.
Рецептура 3: диоксидин 0,75%; линкомицин 3,25%; моноглицерид дистиллированный 3,0%; моноглицерид мягкий 3,0%; масло вазелиновое - до 100%.
С целью определения эффективности предлагаемого препарата была подобрана 71 корова больная субклиническим маститом, разделенная по принципу аналогов на четыре группы. Животные первой, второй и третьей групп были подвергнуты терапии предлагаемым препаратом (различной рецептуры) в дозе 10 мл один раз в сутки в течение 2-4 дней, четвертой - диеномастом согласно наставлению по его применению. Через 7-10 дней животных обследовали клинически, а молоко с 2% раствором мастидина, пробой отстаивания, выборочно путем подсчета количества соматических клеток.
Таблица 2
Терапевтическая эффективность препарата при субклиническом мастите
Хозяйство
Подвергнуто лечению
Кратность введения препарата
Сроки выздоровления, дни
Выздоровело коров
Излечено долей
коров
долей
кол-во
%
кол-во
%
Рецептура 1
20
23
2,23±0,1
2,5±0,12
18
90,0
22
95,6
Рецептура 2
20
24
2,26±0,09
2,65±0,05
18
90,0
21
87,5
Рецептура 3
36
38
2,15±0,12
2,5±0,11
35
97,2
36
94,7
Диеномаст
35
39
2,48±0,12
2,75±0,09
31
88,5
34
87,1
Таблица 3
Терапевтическая эффективность препарата при катаральном мастите у коров
Хозяйство
Подвергнуто лечению
Кратность введения препарата
Сроки выздоровления, дни
Выздоровело коров
Излечено долей
коров
долей
кол-во
%
кол-во
%
Рецептура 1
20
24
3,28±0,05
3,60±0,09
17
85,0
22
91,7
Рецептура 2
20
23
3,31±0,09
3,62±0,11
18
90,0
20
86,9
Рецептура 3
25
28
3,22±0,07
3,55±0,09
23
92,0
26
92,8
Диеномаст
24
29
3,4±0,05
3,85±0,1
19
84,2
25
86,2
Таблица 4
Терапевтическая эффективность препарата при гнойно-катаральном мастите у коров
Хозяйство
Подвергнуто лечению
Кратность введения препарата
Сроки выздоровления, дни
Выздоровело коров
Излечено долей
коров
долей
кол-во
%
кол-во
%
Рецептура 1
10
13
4,3±0,12
4,9±0,11
8
80,0
11
84,6
Рецептура 2
10
12
4,49±0,12
4,87±0,11
8
80,0
9
75,0
Рецептура 3
22
26
4,2±0,11
4,7±0,11
19
86,3
23
88,5
Диеномаст
21
24
4,7±0,1
5,5±0,12
15
71,4
18
75,0
Таблица 5
Терапевтическая эффективность препарата коров при серозном мастите у коров
Хозяйство
Подвергнуто лечению
Кратность введения препарата
Сроки выздоровления, дни
Выздоровело коров
Излечено долей
коров
долей
кол-во
%
кол-во
%
Рецептура 1
10
14
2,9±0,11
3,61±0,009
8
80,0
11
78,6
Рецептура 2
10
16
3,1±0,11
3,69±0,01
8
80,0
13
81,3
Рецептура 3
21
27
2,88±0,08
3,65±0,09
18
85,7
22
81,5
Диеномаст
21
29
3,15±0,11
3,85±0,1
16
76,1
22
75,8
Как видно из представленных в таблицах 2-5 данных, более высоким терапевтическим действием обладает предлагаемый препарат (рецептура 1; 2; 3) в сравнении с диеномастом. Наиболее высоким терапевтическим действием обладает предлагаемый препарат рецептуры №3, эффективность его при субклиническом мастите составила 97,2%, катаральном - 92,0%; гнойно-катаральном - 86,3%; серозном - 85,7%, что на 8,7; 7,0; 9,6; 14,9 и 9,6% выше, чем при лечении диеномастом.
Таким образом, высокий терапевтический эффект достигнут при применении следующей композиции препарата для лечения мастита у коров в перид лактации: диоксидин 0,75%; линкомицин 3,25%; моноглицерид дистиллированный 3,0%; моноглицерид мягкий 3,0%; масло вазелиновое - до 100%.
Пример 3.
Влияние препарата (диоксидин 0,75%; линкомицин 3,25%; моноглицерид дистиллированный 3,0%; моноглицерид мягкий 3,0%; масло вазелиновое - до 100%) для лечения мастита у коров на молочную железу и организм лактирующих коров изучили на трех клинически здоровых животных, находящихся на 3-4 месяце лактации, путем интрацистернального введения препарата, подогретого до 37°С, в дозе 10 мл в левую переднюю долю вымени, а правая передняя доля служила контролем. Через 3; 6; 12; 48 и 72 часа после введения препарата коров обследовали клинически, а также отбирали пробы молока из этих четвертей вымени для оценки реакции с 2% раствором мастидина, определения количества соматических клеток (СК) и постановки пробы отстаивания.
Результаты исследований приведены в таблицах 6 и 7.
Таблица 7
Влияние интрацистернального введения препарата для лечения мастита у коров в период лактации на показатели общего состояния организма
Сроки исследования, час
Показатели
Т°, С
Пульс
Кол-во дыхат. движений за 1 мин
Кол-во сокр. рубца за 5 мин
До введения
38,1±1,3
70,7±0,78
17,0±0,54
5,7±0,19
Через: 3
38,1±0,16
71,0±0,09
17,0±0,54
5,3±0,19
6
38,2±0,12
71,3±1,56
17,3±0,19
5,7±0,19
12
38,0±0,12
72,3±1,56
18,0±0,39
6,7±0,19
24
38,1±0,08
75,3±1,56
18,0±0,39
6,7±0,19
48
38,1±0,08
75,3±0,39
18,7±0,39
6,0±0,39
72
38,2±0,16
76,3±0,98
18,7±0,19
6,0±0,39
Установлено, что после интрацистернального введения препарата для лечения мастита у коров в период лактации в дозе 10 мл происходит увеличение числа соматических клеток (таблица 6) через 3 часа в 1,45 раза (с 316,6±17,1 до 459,8±13,9 тыс/мл), через 6 ч - в 2,57; через 12 ч - в 3,9; через 24 ч - в 4,98; через 48 ч - в 2,22 раза и к 72 ч - приближается к исходному уровню (368,9±30,4 тыс/мл). При этом реакция секрета вымени с 2% раствором мастидина в течение 48 часов была положительной, а проба отстаивания - отрицательной. После интрацистернального введения препарата не установлено заметных изменений со стороны общего состояния организма животных.
Таким образом, препарат для лечения мастита в период лактации обладает умеренным раздражающим действием на молочную железу коров, признаки которого исчезают через 72 часа после введения, и может быть рекомендован для интрацистернального введения с целью лечения мастита у коров.
Пример 4
Изучение антимикробного действия препарата для лечении мастита у коров в период лактации (диоксидин 0,75%; линкомицин 3,25%; моноглицерид дистиллированный 3,0%; моноглицерид мягкий 3,0%; масло вазелиновое - до 100%) и его компонентов провели методом серийных разведений в жидкой питательной среде. Для проведения опытов использовали патогенные культуры микробов, выделенные из секрета больных маститом коров, а также музейные штаммы.
Данные по определению антимикробной активности приведены в таблице 8.
Таблица 8
Антимикробная активность препарата для лечения мастита у коров и его компонентов в отношении основных возбудителей мастита, МПК, мкг/мл
№ п/п
Культура микроба
Линкомицин
Диоксидин
Препарат для лечения мастита у коров
1
Стафилококк золотистый-209 Р
12,5
25,0
6,3
2
Стафилококк золотистый-589
6,3
25,0
3,1
3
Стрептококк агалактийный-586
12,5
12,5
6,3
4
Стрептококк агалактийный-587
25,0
25,0
3,1
5
Стрептококк агалактийный-588
25,0
50,0
3,1
6
Стрептококк гр. D-640
100
50,0
25,0
7
Кишечная палочка 643
100
50,0
25,0
Как видно из представленных данных, комбинация диоксидина в соотношении 1:4 обладает широким спектром и высоким антимикробным действием в отношении основных возбудителей мастита в концентрации 3,1-25,0 мкг/мл, что превышает антимикробную активность диоксидина и линкомицина в отдельности в 2-16 раз.
При изучении антибактериального эффекта сочетания линкомицина и диоксидина в опытах in vitro нами было установлено, что минимальная подавляющая концентрация каждого из антибиотиков в присутствии другого снижается в значительной степени. Например, в присутствии линкомицина гидрохлорида в концентрации 2,51-5,12 мкг/мл минимально подавляющая концентрация (МПК) диоксидина в отношении стафилококка золотистого-209Р и стафилококка золотистого-586 снижается до 0,59-1,18 мкг/мл (в 21,2 раза). И наоборот, наличие в комбинации диоксидина в концентрации 1,18 мкг/мл снижает МПК линкомицина до 5,12 мкг/мл (в 2,44 раза).
При добавлении к диоксидину линкомицина гидрохлорида в концентрации 2,51-5,12 мкг/мл МПК первого в отношении стрептококка агалактийного (штаммы 586; 587; 588) снижается до 0,59-1,18 (в 21,0-84,7 раза). В то же время присутствие диоксидина в концентрации 0,59-1,18 мкг/мл в отношении данного микроорганизма снижает МПК линкомицина до 2,51-5,12 мкг/мл (в 2,44-9,9 раз).
В отношении кишечной палочки 643 и стрептококка группы D, в присутствии линкомицина в концентрации 4,9 мкг/мл, МПК диоксидина снижается до 10,6 мкг/мл (в 4,9 раза), а наличие диоксидина в концентрации 10,6 мкг/мл в отношении данных микроорганизмов снижает МПК линкомицина гидрохлорида до 4,9 мкг/мл (в 10,6 раза).
Обоснованность данной комбинации обусловлена тем, что в лекарственной форме одновременно сочетаются два антибактериальных компонента. Это обеспечивает синергидный эффект за счет того, что оба компонента действуют в одну фазу клеточного роста, но на разные метаболические пути.
Диоксидин проявляет высокую антимикробную активность в отношении грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов. Наибольшему влиянию диоксидина подвержены грамотрицательные микроорганизмы [Временное наставление по применению диоксидина в ветеринарии. Утв. Главным управлением ветеринарии 5 ноября 1991 г.]. В основе антибактериального действия диоксидина лежит избирательное подавление синтеза ДНК. Кроме этого, препарат снижает активность внеклеточной нуклеазы и плазмокоагулазы у микроорганизмов, что приводит к нарушению функции генетического аппарата микробной клетки и в результате подавляется синтез биологически активных макромолекул, являющихся факторами патогенности.
Линкомицин эффективен в отношении большинства грамположительных кокковидных (стафилококков, стрептококков, пневмококков) и некоторых грамположительных палочковидных микроорганизмов, микоплазм и бактерий, устойчивых к другим антибиотикам. Линкомицин подавляет синтез белка в микробной клетке путем взаимодействия с SOS - субъединицами рибосом. Он блокирует образование полисомальных функциональных комплексов и трансляцию связанных с транспортом РНК аминокислот [Навашин С.М., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. М., «Медицина», 1982, с.146-149].
Пример 5.
В производственных условиях показано (таблица 9), что предложенный препарат в совокупности линкомицина гидрохлорида и диоксидина обеспечивает достижение нового сверхсуммарного эффекта по сравнению с одним из препаратов-аналогов (диеномастом).
Таблица 9
Эффективность терапии коров при различных формах мастита
Подвергнуто лечению
Кратность введения препарата
Выздоровело
Излечено
коров
долей
коров
%
долей
%
Субклинический мастит
Диеномаст
76
92
2,6±0,1
69
90,8
81
88,0
Препарат для лечения мастита у коров в период лактации
79
90
2,28±0,11
74
93,7
85
94,4
Катаральный мастит
Диеномаст
66
79
3,48±0,13
54
81,8
65
82,2
Препарат для лечения мастита у коров в период лактации
66
76
3,30±0,07
61
92,4
69
90,8
Гнойно-катаральный мастит
Диеномаст
52
62
4,73±0,11
38
73,1
45
72,6
Препарат для лечения мастита у коров в период лактации
55
63
3,78±0,06
47
85,5
53
84,1
Серозный мастит
Диеномаст
47
67
3,5±0,19
36
76,6
51
76,1
Препарат для лечения мастита у коров в период лактации
48
69
3,0±0,13
40
83,3
57
82,6
Таким образом, препарат для лечения мастита у коров в период лактации обладает более высокой, по сравнению с прототипом, терапевтической эффективностью, обусловленной использованием линкомицина гидрохлорида как антибиотика широкого спектра действия и диоксидина, эффективного при инфекциях, трудно поддающихся лечению другими антимикробными средствами, в виде стабильной суспензии на масляной основе, не действующей раздражающе на ткани молочной железы.