СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЙ И ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
AGENT POSSESSING IMMUNOMODULATORY AND ANTIVIRAL ACTIVITY

Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтической промышленности и касается лекарственных форм, содержащих препараты интерферона.
Известен отечественный генноинженерный человеческий интерферон альфа-2 (ИФά-2), который обладает выраженной биологической активностью в культуре человеческих клеток. Для клинических целей в РФ выпускается несколько лекарственных форм препарата, содержащего данный интерферон: мазь для местного и наружного применения, свечи для ректального применения (РЛС, М., «РЛС-2008», 2007, с. 216-217). Данный препарат (торговое название "Виферон"), в отличие от других препаратов интерферона, содержит дополнительно комплекс витаминов-антиоксидантов Е и С.
Однако данный препарат обладает узким спектром активности, а также в ряде случаев вызывает побочные эффекты, связанные с достаточно большой дозой интерферона в составе мази.
Наиболее близким аналогом заявляемого средства является препарат, обладающий противовирусной, иммуномодулирующей и антимикотической активностью, в том числе и в форме мази, которая содержит (на 1 г мази):
Генноинженерный интерферон альфа-2, МЕ/г
5-50000
Кетоконазол (или флуконазол), г
0,01-0,2
Витамин:
0,04-0,06
витамин Е, г
Фармацевтически приемлемые целевые добавки, г
остальное
В качестве фармацевтически приемлемых целевых добавок указаны один или несколько ингредиентов из группы добавок, включающей шоклин, твердый жир, какао-масло, вазелин, ланолин, полиэтиленоксид, карбоксиметилцеллюлозу, персиковое масло.
Также средство может дополнительно содержать витамин С, аминокислоту метионин в качестве антиоксиданта и детоксицирующего агента в количестве 0,0001-0,001 г на 1 г средства, стабилизатор биологических, физико-химических свойств, выбранный из группы: альбумин сывороточный человеческий, глицерин в количестве 0,0002-0,2 г на 1 г средства, стабилизатор устойчивости к микробной контаминации, выбранный из группы: тетраборат натрия, спирт этиловый в количестве 0,0001-0,1 г, антиоксидант: лимонную кислоту или бутилокситолуол в количестве 0,0001-0,001 г на 1 г средства, противомикробное средство: бензойную кислоту в количестве 0,0001-0,001 г на 1 г средства (Патент РФ №2283133, опубликован 10.09.2006).
Однако необходимо отметить, что в форме мази, дополнительно приведенный перечень компонентов, известный препарат не содержит.
Кроме того, несмотря на расширение спектра действия, препарат не обладает достаточным пролонгированным действием, имеет низкую проникающую способность и недостаточную стабильность при хранении.
Задачей настоящего изобретения является разработка препарата, обладающего широким спектром действия, пролонгированным эффектом и сохраняющего стабильность при хранении
Сущность изобретения состоит в том, что предложена новая мазь, обладающая иммуномодулирующим и противовирусным действием на основе ИФ альфа-2b, где мазь содержит следующие компоненты в массовом количестве в пересчете на 1 г:
Вазелин медицинский
0,5 г
Ланолин безводный
0,16 г
Персиковое масло
0,115 г
Альфа-токоферола ацетат
0,025 г
Интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный
40000 ME (0,0002 мг)
Аскорбиновая кислота
0,0018 г
Раствор альбумина сывороточного человеческого 10%
0,0004 г
Кальция пантотенат
0.0024 г
Вода очищенная
0,1954 г
Персиковое масло при введении в состав мази в заявленном количестве обеспечивает достижение необходимой вязкости, помогает предотвратить обезвоживание клеток кожи, снижает воспаленнность кожного покрова.
Пантотенат кальция, также в заявленном количестве, повышает активность антиоксидантной системы, нормализует клеточный метаболизм и структуру клеточных мембран.
Человеческий сывороточный альбумин (в виде 10% раствора) способствует стабилизации активности интерферона человеческого рекомбинантного альфа-2b в течение не менее 1 года хранения.
Кроме того, сочетанное введение в состав препарата аскорбиновой кислоты и пантотената кальция в заявленных соотношениях позволяет повысить и пролонгировать антиоксидантную активность витамина Е, обеспечить буферность системы препарата в пределах рН 4,8-5,5 (соответствующей рН кожи человека);
Таким образом, разработка новой лекарственной формы позволяет добиться следующих технических результатов:
расширения области применения препарата за счет действия на вирусы: вирус гриппа, риновирус, респираторно-синцитиальный вирус, короновирус, ассоциации вирусов; микробы (опосредованно через стимуляцию фагоцитоза): Stahylococcus epidermidis (гемолитический), Streptococcus viridans, дрожжеподобные грибы (Candida spp), ассоциации микробов и грибов при отсутствии побочных эффектов;
также сочетанное введение в состав препарата аскорбиновой кислоты и пантотената кальция в заявленных соотношениях позволяет повысить и пролонгировать антиоксидантную активность витамина Е, обеспечить буферность системы препарата в пределах рН 4,8-5,5 (соответствующей рН кожи человека);
препятствование снижению клеточного метаболизма и обезвоживания кожи;
обеспечение стабильности активности интерферона при хранении.
Приготовление мази осуществляется следующим образом.
Вазелин 50 мас. % сплавляют с 16 мас. % ланолина и пастеризуют при перемешивании при 75°C в течение 30 мин, после чего температуру смеси снижают до 60°C и в сплав вносят раствор 2,5 мас % альфа-токоферола ацетата в 11,5 мас % персикового масла и проводят дополнительную пастеризацию полученной липофильной фазы при 56°C в течение 30 мин. Затем смесь охлаждают до температуры 35°C, после чего в нее вносят 19,54 мас % водной фазы: раствор требуемых количеств аскорбиновой кислоты, пантотената кальция, 10% раствора человеческого сывороточного альбумина и интерферона человеческого рекомбинантного альфа-2b в стерильной воде очищенной. Полученную массу тщательно перемешивают, переносят в фасовочный блок и расфасовывают в тубы.
Все операции, связанные с приготовлением мази, проводят с соблюдением правил асептики и антисептики.
Пример 1. Исследование рН заявляемого препарата
Для определения рН мази навеску продукта заливали дистиллированной водой с температурой 50-60°C и встряхивали на вибраторе в течение 30 мин. Полученную вытяжку фильтровали и проводили потенциометрическое титрование. Значение рН мази составляло 5,0±0,1, что соответствует значению рН кожи человека.
Пример 2
Для определения стабильности активности интерферона заявляемой мази нами были отобраны: мазь по прототипу и заявляемая мазь. Проведенные исследования активности интерферона показали незначительное снижение его активности (0,5% от исходного уровня активности) в заявляемой мази в отличие от прототипа, где его активность снижалась на 5%
Пример 3
Нами проведено исследование по выявлению наиболее эффективных антиоксидантов, ингибирующих активные формы кислорода на модели фотоокисления антрацена в этиловом спирте. (Журнал физической химии 2013, том 87, с. 1-5). Из исследованных антиоксидантов (витамины Е и С, метионин, дигидрокверцетин и таурин) наиболее эффективными оказались витамины Е и С, а особенно смесь этих витаминов, в 2 раза превышающая активность по подавлению синглетного кислорода при введении этих препаратов по отдельности.
Для подтверждения клинической эффективности заявленной мази приведены результаты клинических исследований заявленной мази.
Пример 4
Под наблюдением находились часто болеющие дети (ЧБД) в период адаптации к дошкольному учреждению (73 ребенка).
Препарат использовался в трех основных направлениях: при проведении курсов иммуно- и интерферонореабилитации; в периоде адаптации к дошкольному учреждению; с профилактической целью в период подъема заболеваемости ОРВИ.
Заявленная мазь вводилась интраназально по разработанному нами методу (патент РФ №2214272 от 20.10.2003) 2 раза в день в суточной дозе 1 г. Первые 2 нед препарат применялся ежедневно, последующие 2-4 нед - 3 раза в неделю.
Под наблюдением находились ЧБД, посещающие дошкольные учреждения и воспитывающиеся в доме ребенка. Возраст детей колебался от 3 мес до 5,5 лет. Из них более половины (61,6%) составляли дети раннего возраста. Все ЧБД имели отклонения в анте- и перинатальном периоде развития. Мазь получили 73 ребенка (основная группа). Группу сравнения, в которой дети не получали препарат, а также другие иммуномодулирующие средства, составили 34 ребенка того же возраста, имеющие неблагоприятное течение раннего онтогенеза и страдающие частыми респираторными инфекциями. В обеих группах проводились общеоздоровительные мероприятия (массаж, витаминотерапия, лечебная физкультура и т.д.).
Анализ клинической эффективности мазевой формы показал ее выраженное влияние на заболеваемость детей в периоде адаптации к дошкольному учреждению. Среди детей, получавших иммунопрофилактику, 41% не заболели в первые 3,5 мес после поступления в дошкольное учреждение. В группе сравнения все наблюдавшиеся дети за этот период переболели. Число дней, пропущенных по болезни, в группе получавших мазь оказалась в 2,2 раза ниже, чем в группе сравнения (р<0,01), а число эпизодов ОРЗ, перенесенных одним ребенком, - почти в 2 раза ниже (р<0,01).
Профилактический эффект был долговременным, он держался на высоком уровне в течение года после проведения повторного курса терапии. За весь период наблюдения побочных эффектов и плохой переносимости препарата не отмечалось.
Пример 5 Применение интерферонов в комплексной терапии острых респираторных инфекций у детей.
Данная мазь интраназально также применялась и в рамках комплексной терапии острых респираторных инфекций у детей. Длительность лихорадки при течении ОРВИ составляла от 0 до 5 дней, в среднем по группам: заявленная мазь - 1,56±0,2 суток, плацебо - 1,82±0,2 суток (р>0,05). Выявлена тенденция к более быстрому купированию токсикоза у детей, получавших заявленную мазь: через 1-2 суток от начала лечения его проявления отсутствовали у 40,8% наблюдаемых, а в группе плацебо лишь у 10,4% (р<0,05), общая продолжительность токсикоза 3,15±0,31 и 3,7±0,27 суток (р>0,05) соответственно. Значимыми также оказались различия в сроках восстановления двигательной активности в наблюдаемых группах. На 3 день терапии вялость сохранялась у 30,7% детей в группе плацебо и 4,5% детей, получавших мазь (р<0,05).
Влияние терапии на респираторный синдром выражалось в достоверном сокращении длительности сухого кашля 1,3±0,14 в группе получавших мазь (р<0,05) против 1,95±0,22 в группе плацебо, кроме этого достоверно быстрее отмечалась трансформация сухого кашля во влажный в группе получавших мазь 2,25±0,1 против 2,8±0,15 в группе плацебо (р<0,05). Это отразилось на ускорении нормализации общего состояния детей в группе получавших заявленную мазь.
Для оценки противовирусного эффекта лечения оценивалась элиминация этиологически значимых вирусов в смывах из носоглотки после терапии. Полная элиминация вируса после лечения произошла в группе плацебо у 28,0% больных при моноинфекции, при микстинфекции у 55,5%, в группе получавших мазь у 91,6% и у 88,5% соответственно различия значимы (р<0,05).
Таким образом, разработанная нами мазь обладает выраженным иммуномодулирующим и противовирусным действием, стабильна при хранении, имеет физиологичные параметры рН.