ВАКЦИНЫ НА ОСНОВЕ СВИНОГО ВИРУСА Torque teNO И СПОСОБЫ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИЙ, ВЫЗВАННЫХ ЭТИМ ВИРУСОМ

1. Инфекционная молекула нуклеиновой кислоты вируса Torque teNO свиней (PTTV), включающая молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующей инфекционный PTTV, которая содержит по меньшей мере одну копию геномной последовательности, по меньшей мере на 85% гомологичной геномной последовательности, выбранной из группы, состоящей из PTTV1a-VA, PTTV1b-VA, PTTV2b-VA и PTTV2c-VA.
2. Инфекционная молекула нуклеиновой кислоты по п.1, в которой по меньшей мере одна копия геномной последовательности по меньшей мере на 95% гомологична геномной последовательности, выбранной из группы, состоящей из PTTV1a-VA, PTTV1b-VA, PTTV2b-VA и PTTV2c-VA.
3. Инфекционная молекула нуклеиновой кислоты по п.1, в которой геномную последовательность выбирают из последовательностей, представленных SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11 и SEQ ID NO:12.
4. Биологически функциональная плазмида или вирусный вектор, содержащие инфекционную молекулу нуклеиновой кислоты по п.3.
5. Биологически функциональная плазмида или вирусный вектор по п.4, содержащие более одной копии инфекционной молекулы нуклеиновой кислоты.
6. Подходящая клетка-хозяин, трансфецируемая вектором, содержащим инфекционную молекулу нуклеиновой кислоты по п.4.
7. Авирулентный инфекционный PTTV, продуцируемый клетками, содержащими инфекционную молекулу нуклеиновой кислоты по п.6.
8. Вакцина, содержащая нетоксический физиологически приемлемый носитель и иммуногенное количество элемента, выбранного из группы, состоящей из:
(а) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей по меньшей мере одну копию геномной последовательности, по меньшей мере на 80% гомологичной геномной последовательности, выбранной из группы, состоящей из PTTV генотипов или подтипов PTTV1a-VA, PTTV1b-VA, PTTV2b-VA или PTTV2c-VA, или ее комплементарную нить;
(б) биологически функциональной плазмиды или вирусного вектора, содержащих молекулу нуклеиновой кислоты, включающую по меньшей мере одну копию геномной последовательности, по меньшей мере на 80% гомологичной геномной последовательности, выбранной из группы, состоящей из PTTV генотипов или подтипов PTTV1a-VA, PTTV1b-VA, PTTV2b-VA или PTTV2c-VA, или ее комплементарную нить;
(в) авирулентного инфекционного непатогенного вируса Torque teNO свиней, образованного при использовании геномной последовательности и содержащего геномную последовательность, которая по меньшей мере на 85% гомологична геномной последовательности, выбранной из группы, состоящей из PTTV генотипов или подтипов PTTV1a-VA, PTTV1b-VA, PTTV2b-VA или PTTV2c-VA; и
(г) иммуногенного фрагмента полипептидной последовательности или полного белка, транслируемых в соответствии с полинуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из ORF1, ORF2, ORF1/1 и ORF2/2 генотипов или подтипов PTTV PTTV1a-VA, PTTV1b-VA, PTTV2b-VA и PTTV2c-VA.
9. Вакцина по п.8, которая содержит живой вирус PTTV.
10. Вакцина по п.8, которая содержит убитый вирус PTTV.
11. Вакцина по п.8, в которой иммуногенный фрагмент полипептидной последовательности или полный белок содержат очищенные экспрессированные в бактериях или при помощи бакуловирусов рекомбинантные белки, экспрессированные при использовании ORF1, ORF2, ORF1/1, и ORF2/2 PTTV генотипов или подтипов PTTV1a-VA, PTTV1b-VA, PTTV2b-VA и PTTV2c-VA.
12. Вакцина по п.11, в которой иммуногенный фрагмент полипептидной последовательности или полный белок содержат очищенные экспрессированные в бактериях или при помощи бакуловирусов рекомбинантные белки, экспрессированные при использовании ORF1 PTTV генотипов или подтипов PTTV1a-VA, PTTV1b-VA, PTTV2b-VA и PTTV2c-VA.
13. Вакцина по п.8, которая дополнительно содержит адъювант.
14. Способ иммунизации свиньи против PTTV вирусной инфекции, заключающийся во введении свинье иммунологически эффективного количества вакцины по п.8.
15. Способ по п.14, включающий введение свинье вакцины парентерально, интраназально, интрадермально или трансдермально.
16. Способ по п.14, включающий введение свинье вакцины внутрь лимфатического узла или внутримышечно.
17. Выделенный полинуклеотид, состоящий из полинуклеотидной последовательности, на 85% гомологичной нуклеотидной последовательности PTTV1a-VA, представленной SEQ ID NO:9.
18. Выделенный полинуклеотид по п.17, полинуклеотидная последовательность которого на 95% гомологична нуклеотидной последовательности PTTV1a-VA, представленной SEQ ID NO:9.
19. Выделенный полинуклеотид по п.17, полинуклеотидная последовательность которого состоит из нуклеотидной последовательности PTTV1a-VA, представленной SEQ ID NO:9.
20. Выделенный полинуклеотид, состоящий из полинуклеотидной последовательности, на 85% гомологичной нуклеотидной последовательности PTTV1b-VA, представленной SEQ ID NO:10.
21. Выделенный полинуклеотид по п.20, полинуклеотидная последовательность которого на 95% гомологична нуклеотидной последовательности PTTV1b-VA, представленной SEQ ID NO:10.
22. Выделенный полинуклеотид по п.20, полинуклеотидная последовательность которого состоит из нуклеотидной последовательности PTTV1b-VA, представленной SEQ ID NO:10.
23. Выделенный полинуклеотид, состоящий из полинуклеотидной последовательности, на 85% гомологичной нуклеотидной последовательности PTTV2b-VA, представленной SEQ ID NO:11.
24. Выделенный полинуклеотид по п.23, полинуклеотидная последовательность которого на 95% гомологична нуклеотидной последовательности PTTV2b-VA, представленной SEQ ID NO:11.
25. Выделенный полинуклеотид по п.23, полинуклеотидная последовательность которого состоит из нуклеотидной последовательности PTTV2b-VA, представленной SEQ ID NO:11.
26. Выделенный полинуклеотид, состоящий из полинуклеотидной последовательности, на 85% гомологичной нуклеотидной последовательности PTTV2c-VA, представленной SEQ ID NO:12.
27. Выделенный полинуклеотид по п.26, полинуклеотидная последовательность которого на 95% гомологична нуклеотидной последовательности PTTV2c-VA, представленной SEQ ID NO:12.
28. Выделенный полинуклеотид по п.26, полинуклеотидная последовательность которого состоит из нуклеотидной последовательности PTTV2c-VA, представленной SEQ ID NO:12.
29. Вакцина, содержащая иммуногенный фрагмент полипептидной последовательности или полный белок, транслированный в соответствии с полинуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из ORF1, ORF2, ORF1/1 и ORF2/2 PTTV генотипов или подтипов PTTV1a-VA, PTTV1b-VA, PTTV2b-VA и PTTV2c-VA.
30. Вакцина по п.29, в которой иммуногенный фрагмент или полный белок представляет собой капсидный белок PTTV генотипов или подтипов PTTV1a-VA, PTTV1b-VA, PTTV2b-VA и PTTV2c-VA.
31. Вакцина по п.29, в которой полинуклеотидную последовательность выбирают из группы, состоящей из ORF1 PTTV генотипов или подтипов PTTV1a-VA, PTTV1b-VA, PTTV2b-VA и PTTV2c-VA.
32. Вакцина по п.31, в которой полинуклеотидная последовательность представляет собой ORF1 PTTV генотипа PTTV1a-VA.
33. Вакцина по п.31, в которой полинуклеотидная последовательность представляет собой ORF1 PTTV генотипа PTTV1b-VA.
34. Вакцина по п.31, в которой полинуклеотидная последовательность представляет собой ORF1 PTTV подтипа PTTV2c-VA.
35. Вакцина по п.29, в которой полипептидную последовательность выбирают из группы, состоящей из последовательностей, представленных SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27 и SEQ ID NO:28.
36. Вакцина по п.35, в которой полипептидная последовательность представлена SEQ ID NO:13.
37. Вакцина по п.36, в которой полипептидная последовательность представляет собой С-концевую область (а.к. (аминокислоты) 317-635) SEQ ID NO:13.
38. Вакцина по п.35, в которой полипептидная последовательность представлена SEQ ID NO:14.
39. Вакцина по п.38, в которой полипептидная последовательность представляет собой С-концевую область (а.к. 322-639) SEQ ID NO:14.
40. Вакцина по п.35, в которой полипептидная последовательность представлена SEQ ID NO:16.
41. Вакцина по п.40, в которой полипептидная последовательность представляет собой С-концевую область (а.к. 310-625) SEQ ID NO:16.
42. Вакцина по п.35, в которой полипептидная последовательность представлена SEQ ID NO:20.
43. Вакцина по п.29, дополнительно содержащая адъювант.
44. Способ иммунизации свиньи против PTTV вирусной инфекции, заключающийся во введении свинье иммунологически эффективного количества вакцины по п.29.
45. Способ по п.44, включающий введение свинье иммуногенного фрагмента или полного белка.
46. Способ по п.44, включающий введение свинье вакцины парентерально, интраназально, интрадермально или трансдермально.
47. Способ по п.44, включающий введение свинье вакцины в лимфатический узел или внутримышечно.
48. Способ диагностики PTTV1 инфекции и количественного определения PTTV1 нагрузки, включающий:
экстракцию ДНК из образца с предполагаемой PTTV1 инфекцией;
проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР) с применением праймеров, содержащих последовательности, представленные SEQ ID NO:29 и SEQ ID NO:30; и
детекцию PTTV1- специфической амплификации.
49. Способ по п.48, в котором полимеразная цепная реакция представляет собой ПЦР в реальном времени с красителем SYBR green.
50. Способ диагностики PTTV2 инфекции и количественного определения PTTV2 нагрузки, включающий:
экстракцию ДНК из образца с предполагаемой PTTV2 инфекцией;
проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР) с применением праймеров, содержащих последовательности, представленные SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31 и SEQ ID NO:32; и
детекцию PTTV2- специфической амплификации.
51. Способ по п.50, в котором полимеразная цепная реакция представляет собой ПЦР в реальном времени с красителем SYBR green.
52. Способ одновременного обнаружения и диагностики PTTV1 и PTTV2 инфекции, включающий:
экстракцию ДНК из образца с предполагаемой PTTV инфекцией;
проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР) с применением праймеров, содержащих последовательности, представленные в SEQ ID NO:31 и SEQ ID NO:32; и
детекцию PTTV1- и PTTV2- специфической амплификации.
53. Способ по п.52, в котором полимеразная цепная реакция представляет собой ПЦР в реальном времени с красителем SYBR green.
54. Способ одновременного обнаружения и диагностики PTTVa1 и PTTV1b инфекции, включающий:
экстракцию ДНК из образца с предполагаемой PTTV1 инфекцией;
проведение первой полимеразной цепной реакции (ПЦР) с применением праймеров, содержащих последовательности, представленные SEQ ID NO:33 и SEQ ID NO:34;
проведение второй ПЦР с применением праймеров, содержащих последовательности, представленные SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37 и SEQ ID NO:38; и
детекцию PTTV1a- и PTTV1b- специфической амплификации.
55. Способ диагностики PTTV инфекции, включающий:
иммобилизацию иммуногенного фрагмента или полного белка с полипептидной последовательностью, транслированной в соответствии с полинуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из ORF1, ORF2, ORF1/1 и ORF2/2 PTTV подтипов PTTV1a-VA, PTTV1b-VA, PTTV2b-VA и PTTV2c-VA;
контактирование образца сыворотки свиньи с предполагаемой PTTV инфекцией с иммобилизованным иммуногенным фрагментом или полным белком; и
детекцию иммобилизованного антитела, специфического к иммуногенному фрагменту.
56. Способ по п.55, в котором полинуклеотидную последовательность выбирают из группы, состоящей из ORF1 PTTV генотипов и подтипов PTTV1a-VA, PTTV1b-VA, PTTV2b-VA и PTTV2c-VA.
57. Способ по п.56, в котором полинуклеотидная последовательность представляет собой ORF1 PTTV генотипа PTTV1a-VA.
58. Способ по п.56, в котором полинуклеотидная последовательность представляет собой ORF1 PTTV генотипа PTTV1b-VA.
59. Способ по п.56, в котором полинуклеотидная последовательность представляет собой ORF1 PTTV генотипа PTTV2c-VA.
60. Способ по п.55, в котором полипептидную последовательность выбирают из группы, состоящей из последовательностей, представленных в SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27 и SEQ ID NO:28.
61. Способ по п.60, в котором полипептидная последовательность представлена SEQ ID NO:13.
62. Способ по п.60, в котором полипептидная последовательность представлена SEQ ID NO:16.
63. Способ по п.62, в котором иммуногенный фрагмент представляет собой С-концевую область (а.к. 317-635) SEQ ID NO:13, (а.к. 322-639) SEQ ID NO:14 или (а.к. 310-625) SEQ ID NO:16.
64. Способ по п.60, в котором полипептидная последовательность представлена SEQ ID NO:20.
65. Способ по п.55, в котором детекцию иммобилизованного антитела осуществляют методом Вестерн-блот (иммуноблоттинга).
66. Способ по п.55, в котором детекцию иммобилизованного антитела осуществляют твердофазным иммуноферментным анализом ELISA.