ВСТРЕЧАЮЩИЕСЯ В ПРИРОДЕ миРНК ДЛЯ КОНТРОЛИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. миРНК природного типа, которая представляет одноцепочечную нуклеиновую кислоту, содержащую X-область и область Y,
где 3'-конец указанной области Х и 5'-конец указанной области Y связаны посредством линкерной области ненуклеотидной структуры,
указанная область Х содержит (а) последовательность ведущей цепи или (b) последовательность «пассажирской цепи» зрелой миРНК,
когда область X содержит (а), то указанная область Y содержит последовательность «пассажирской цепи» указанной зрелой миРНК,
когда область X содержит (b), то указанная область Y содержит последовательность ведущей цепи указанной зрелой миРНК, и
указанная последовательность ведущей цепи и указанная последовательность «пассажирской цепи» образуют двухцепочечную структуру.
2. миРНК природного типа по п.1, где, когда указанная область Y и указанная область X выравниваются, то указанная область Y имеет «свисающий» конец на 3'-конце.
3. миРНК природного типа по п.2, где указанный «свисающий» конец имеет длину 0-4 оснований.
4. миРНК природного типа по любому из пп.1-3, где указанная область Х содержит указанную последовательность ведущей цепи или «пассажирской цепи» и дополнительную последовательность, и указанная дополнительная последовательность связана с 3'-концом указанной последовательности ведущей цепи или «пассажирской цепи».
5. миРНК природного типа по п.4, где указанная дополнительная последовательность в указанной области Х имеет длину 0-7 оснований.
6. миРНК природного типа по любому из пп.1-5, где указанная область Х имеет длину 19-35 оснований.
7. миРНК природного типа по любому из пп.1-6, где указанная область Y имеет длину 21-37 оснований.
8. миРНК природного типа по любому из пп.1-7, где полная длина представляет длину 40-68 оснований.
9. миРНК природного типа по любому из пп.1-8, где указанная линкерная область содержит, по меньшей мере, одно, выбранное из группы, состоящей из аминокислотного остатка, остатка полиамина и остатка поликарбоновой кислоты.
10. миРНК природного типа по п.9, где указанная линкерная область содержит остаток поликарбоновой кислоты.
11. миРНК природного типа по п.10, где указанный остаток поликарбоновой кислоты представляет остаток терефталевой кислоты.
12. миРНК природного типа по п.9, где указанная линкерная область содержит аминокислотный остаток.
13. миРНК природного типа по п.12, где указанный аминокислотный остаток представляет остаток глицина, остаток амида терефталевой кислоты, остаток пролина или остаток лизина.
14. миРНК природного типа по пп.12 или 13, где указанный аминокислотный остаток содержит множество аминокислотных остатков, связанных друг с другом.
15. миРНК природного типа по п.14, где указанное множество аминокислотных остатков связано с образованием остатка димера или тримера на основе глицина.
16. миРНК природного типа по любому из пп.1-15, где указанный остаток линкера представлен следующей химической формулой (I-0):
в указанной химической формуле (I-0),
11
12
2
Q и Q каждый независимо представляет простую связь, CH (метиленовую группу), NH (иминогруппу), C=O (карбонильную группу), C=S (тиокарбонильную группу), C=NH (иминометиленовую группу), O или S;
1
2
2
Q и Q каждый независимо представляет простую связь, CH (метиленовую группу), NH (иминогруппу), C=O (карбонильную группу), C=S (тиокарбонильную группу), C=NH (иминометиленовую группу), O или S;
1
2
2
Y и Y каждый независимо представляет простую связь, CH, NH, O или S;
1
a
a
a
a
2
L представляет алкиленовую цепь, содержащую n атомов углерода, и атом водорода при атоме углерода алкилена может быть замещен или может быть не замещен ОН, OR, NH, NHR, NRRb, SH или SR; или
1
L представляет полиэфирную цепь, полученную замещением, по меньшей мере, одного атома углерода в вышеуказанной алкиленовой цепи атомом кислорода;
1
1
1
1
1
при условии, что: когда Y представляет NH, O или S, то атом, связанный с Y в L, представляет углерод, атом, связанный с OR в L, является атомом углерода, и атомы кислорода не являются смежными друг с другом;
2
c
c
c
d
c
2
L представляет алкиленовую цепь, содержащую m атомов углерода, и атом водорода при атоме углерода алкилена может быть замещен или не замещен OH, OR, NH, NHR, NRR, SH или SR; или
2
L представляет полиэфирную цепь, полученную замещением, по меньшей мере, одного атома углерода в вышеуказанной алкиленовой цепи атомом кислорода;
2
2
2
2
2
при условии, что: когда Y представляет NH, О или S, то атом, связанный с Y в L, представляет атом углерода, атом, связанный с OR в L, является атомом углерода, и атомы кислорода не являются смежными друг с другом;
a
b
c
d
R, R, R и R каждый независимо является заместителем или защитной группой;
m равно целому числу в диапазоне от 0 до 30;
n равно целому числу в диапазоне от 0 до 30;
1
2
вышеуказанные области X и Y связаны посредством вышеуказанного линкерного остатка через -OR- или -OR-,
1
2
1
2
где R и R могут присутствовать или отсутствовать, и когда они присутствуют, то R и R каждый независимо представляет нуклеотидный остаток или вышеуказанную структуру (I-0);
А представляет любую атомную группу.
11
12
17. миРНК природного типа по п.16, где Q и Q в указанной химической формуле (I-0) каждый представляет карбонильную группу.
1
2
18. миРНК природного типа по п.17, где Q и Q в указанной химической формуле (I-0) каждый представляет иминогруппу.
19. миРНК природного типа по п.17 или 18, где следующая химическая формула (Iα) имеет структуру, представленную следующей химической формулой (Iα2):
в указанной химической формуле (Iα2),
100
R представляет любой заместитель, который может присутствовать или отсутствовать, когда он присутствует, то может присутствовать один или несколько, и когда присутствует несколько, то они могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга.
20. миРНК природного типа по п.14, где указанная химическая формула (Iα2) имеет структуру, представленную следующей химической формулой (Iα3):
.
11
12
21. миРНК природного типа по п.16, где Q и Q в указанной химической формуле (I-0) каждый представляет иминогруппу.
1
2
22. миРНК природного типа по п.21, где Q и Q в указанной химической формуле (I-0) каждый представляет карбонильную группу.
23. миРНК природного типа по пп.16 или 17, где следующая химическая формула (Iβ) имеет структуру, представленную следующей химической формулой (Iβ2):
в указанной химической формуле (Iβ2),
100
R представляет любой заместитель, который может присутствовать или отсутствовать, когда он присутствует, то может присутствовать один или несколько, и когда присутствует несколько, то они могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга.
24. миРНК природного типа по п.23, где указанная химическая формула (Iβ2) имеет структуру, представленную следующей химической формулой (Iβ3):
25. миРНК природного типа по любому из пп.1-3 и 6-10, где указанная линкерная область содержит аминокислотный остаток, и указанный аминокислотный остаток представлен следующей химической формулой (I):
в указанной химической формуле (I),
1
2
2
X и X каждый независимо представляет H, O, S или NH;
1
2
2
Y и Y каждый независимо представляет простую связь, CH, NH, O или S;
1
a
a
a
a
2
L представляет алкиленовую цепь, содержащую n атомов углерода, и атом водорода при атоме углерода алкилена может быть замещен или может быть не замещен ОН, OR, NH, NHR, NRRb, SH или SR; или
1
L представляет полиэфирную цепь, полученную замещением, по меньшей мере, одного атома углерода в вышеуказанной алкиленовой цепи атомом кислорода;
1
1
1
1
1
при условии, что: когда Y представляет NH, O или S, то атом, связанный с Y в L, представляет углерод, атом, связанный с OR в L, является атомом углерода, и атомы кислорода не являются смежными друг с другом;
2
c
c
c
d
c
2
L представляет алкиленовую цепь, содержащую m атомов углерода, и атом водорода при атоме углерода алкилена может быть замещен или не замещен OH, OR, NH, NHR, NRR, SH или SR; или
2
L представляет полиэфирную цепь, полученную замещением, по меньшей мере, одного атома углерода в вышеуказанной алкиленовой цепи атомом кислорода;
2
2
2
2
2
при условии, что: когда Y представляет NH, О или S, то атом, связанный с Y в L, представляет атом углерода, атом, связанный с OR в L, является атомом углерода, и атомы кислорода не являются смежными друг с другом;
a
b
c
d
R, R, R и R каждый независимо является заместителем или защитной группой;
m равно целому числу в диапазоне от 0 до 30;
n равно целому числу в диапазоне от 0 до 30;
1
2
вышеуказанные области X и Y связаны посредством вышеуказанного линкерного остатка через -OR- или -OR-,
1
2
1
2
где R и R могут присутствовать или отсутствовать, и когда они присутствуют, то R и R каждый независимо представляет нуклеотидный остаток или вышеуказанную структуру (I-0);
А представляет любую атомную группу, при условии, что следующая химическая формула (Ia) представляет аминокислоту или пептид:
.
26. миРНК природного типа по любому из пп.1-3, 6-10 и 20, где указанная аминокислота в указанном аминокислотном остатке представляет, по меньшей мере, одну природную аминокислоту и искусственную аминокислоту.
27. миРНК природного типа по п.26, где указанная природная аминокислота представляет аминокислоту, которая составляет белок.
28. миРНК природного типа по любому из пп.1-9, 12-15, 25 и 26, где указанная аминокислота в указанном аминокислотном остатке представляет, по меньшей мере, один вид, выбранный из группы, состоящей из глицина, α-аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, цистина, глутамина, глутаминовой кислоты, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, гидроксилизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, тирозина, валина, пролина, 4-гидроксипролина, триптофана, β-аланина, 1-амино-2-карбоксициклопентана, аминобензойной кислоты, аминопиридинкарбоновой кислоты и аминокислоты, представленной следующей химической формулой (Ia2), и необязательно дополнительно имеет заместитель или защитную группу:
в указанной химической формуле (Iа2),
100
R представляет любой заместитель, который может присутствовать или отсутствовать, когда он присутствует, то может присутствовать один или несколько, и когда присутствует несколько, то они могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга.
29. миРНК природного типа по п.28, где указанная химическая формула (Ia2) имеет структуру, представленную следующей химической формулой (Ia3):
30. миРНК природного типа по п.16 или 25, где указанная химическая формула (I-0) или (I) имеет структуру следующих химических формул (I-1)-(I-7) и в следующих химических формулах (I-1)-(I-7), n равно целому числу от 0 до 30, и m равно целому числу от 0 до 30:
31. миРНК природного типа по п.30, где в указанной химической формуле (I-1) n=11 и m=12 или n=5 и m=4.
32. миРНК природного типа по п.30, где в указанной химической формуле (I-4) n=5 и m=4.
33. миРНК природного типа по п.30, где в указанной химической формуле (I-6) n=4 и m=4.
34. миРНК природного типа по п.30, где в указанной химической формуле (I-7) n=5 и m=4.
35. миРНК природного типа по любому из пп.1-9, 12 и 13, где ненуклеотидная структура указанной линкерной области содержит, по меньшей мере, одно из пирролидинового скелета и пиперидинового скелета.
36. миРНК природного типа по любому из пп.1-8, где указанная ненуклеотидная структура представлена следующей формулой (II):
(II)
где:
1
2
2
X и X каждый независимо представляет H, O, S или NH;
1
2
2
Y и Y каждый независимо представляет простую связь, CH, NH, O или S;
3
R представляет атом водорода или заместитель, связанный с C-3, C-4, C-5 или C-6 в кольце A,
1
a
a
a
a
2
L представляет алкиленовую цепь, содержащую n атомов углерода, и атом водорода при атоме углерода алкилена может быть замещен или может быть не замещен ОН, OR, NH, NHR, NRRb, SH или SR; или
1
L представляет полиэфирную цепь, полученную замещением, по меньшей мере, одного атома углерода в вышеуказанной алкиленовой цепи атомом кислорода;
1
1
1
1
1
при условии, что: когда Y представляет NH, O или S, то атом, связанный с Y в L, представляет углерод, атом, связанный с OR в L, является атомом углерода, и атомы кислорода не являются смежными друг с другом;
2
c
c
c
d
c
2
L представляет алкиленовую цепь, содержащую m атомов углерода, и атом водорода при атоме углерода алкилена может быть замещен или не замещен OH, OR, NH, NHR, NRR, SH или SR; или
2
L представляет полиэфирную цепь, полученную замещением, по меньшей мере, одного атома углерода в вышеуказанной алкиленовой цепи атомом кислорода;
2
2
2
2
2
при условии, что: когда Y представляет NH, О или S, то атом, связанный с Y в L, представляет атом углерода, атом, связанный с OR в L, является атомом углерода, и атомы кислорода не являются смежными друг с другом;
a
b
c
d
R, R, R и R каждый независимо является заместителем или защитной группой;
l равно 1 или 2;
m равно целому числу в диапазоне от 0 до 30;
n равно целому числу в диапазоне от 0 до 30; и
в кольце А один атом углерода, отличный от вышеуказанного С-2 в кольце А, может быть замещен атомом азота, кислорода или серы, и может содержать в указанном кольце А двойную углерод-углеродную связь или двойную связь углерод-азот;
1
2
указанные области (X) и (Y) каждая связаны с указанной ненуклеотидной структурой через -OR- или -OR-,
1
2
1
2
где R и R могут присутствовать или отсутствовать, и когда они присутствуют, то R и R каждый независимо представляет нуклеотидный остаток или указанную структуру (I).
37. миРНК природного типа по любому из пп.1-36, где указанная область Х содержит последовательность ведущей цепи зрелой миРНК, выбранной из группы, состоящей из hsa-miR-34 или hsa-let-7.
38. миРНК природного типа по п.37, где указанная зрелая миРНК представляет hsa-miR-34a.
39. миРНК природного типа по п.38, где нуклеотидная последовательность представляет нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 14-17.
40. миРНК природного типа по п.38, где нуклеотидная последовательность представляет нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 34-43.
41. миРНК природного типа по п.37, где указанная зрелая миРНК представляет hsa-let-7a.
42. миРНК природного типа по п.41, где нуклеотидная последовательность представляет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 23 или 24.
43. миРНК природного типа по п.41, где нуклеотидная последовательность представляет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 32.
44. миРНК природного типа по любому из пп.1-36, где указанная область Х содержит последовательность «пассажирской цепи» зрелой миРНК hsa-miR-29b.
45. миРНК природного типа по п.44, где нуклеотидная последовательность представляет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 28 или 29.
46. миРНК природного типа по п.44, где нуклеотидная последовательность представляет нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 33 и 44-81.
47. Композиция для ингибирования экспрессии гена-мишени, содержащая миРНК природного типа по любому из пп.1-46.
48. Фармацевтическая композиция, содержащая миРНК природного типа по любому из пп.1-46.
49. Способ ингибирования экспрессии гена-мишени, включающий применение миРНК природного типа по любому из пп.1-46.
50. Способ по п.49, включающий стадию введения миРНК природного типа в клетку, ткань или орган.
51. Способ по п.49 или 50, где миРНК природного типа вводят in vivo или in vitro.
52. Способ по п.49 или 50, где миРНК природного типа вводят животному, отличному от человека.
53. Способ лечения заболевания, включающий стадию введения миРНК природного типа по любому из пп.1-46 пациентам, где указанная последовательность ведущей цепи указанной миРНК природного типа представляет последовательность ведущей цепи зрелой миРНК, которая ингибирует экспрессию гена, участвующего в развитии указанного заболевания.
54. Одноцепочечная нуклеиновая кислота для применения в лечении заболевания, которая представляет собой миРНК природного типа по любому из пп.1-46, где указанная последовательность ведущей цепи указанной миРНК природного типа представляет последовательность ведущей цепи зрелой миРНК, которая ингибирует экспрессию гена, участвующего в развитии указанного заболевания.