Исследование противовоспалительной активности сухого экстракта сабельника болотного

ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ СУХОГО ЭКСТРАКТА САБЕЛЬНИКА БОЛОТНОГО

Е.В. Ферубко, Т.Е. Лескова, А.И. Багинская, В.К. Колхир

Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) ул. Грина, 7, Москва, Россия, 117216

Работа посвящена изучению противовоспалительных свойств сухого экстракта сабельника болотного (ЭСБ) на мышах и крысах Wistar с использованием моделей острого экссудативного (формалиновый, декстрановый, гистаминовый отеки и др.) и хронического пролиферативного воспаления. Противовоспалительный эффект оценивали по уменьшению степени экссудации и по влиянию ЭСБ на процесс образования фиброзно-грануляционной ткани Установлено, что ЭСБ обладает противовоспалительной активностью: оказывает выраженное антиэкссудативное действие, стимулирует регенерацию тканей

Ключевые слова: сухой экстракт сабельника болотного, противовоспалительная активность.

Актуальной проблемой современной медицины является профилактика и лечение воспалительных заболеваний опорно-двигательного аппарата (ОДА) [1]. Ведущее место в медикаментозной терапии этих заболеваний занимают нестероидные противовоспалительные препараты, однако их длительное применение связано с развитием побочных эффектов [2, 3]. Особый интерес в лечении воспалительных заболеваний ОДА представляют лекарственные средства растительного происхождения, обладающие выраженной фармакологической активностью и низкой токсичностью [4]. В связи с этим разработка новых лекарственных препаратов из растительного сырья, предназначенных для профилактики и лечения такого рода заболеваний, является актуальной задачей. Перспективным объектом для разработки препарата является сабельник болотный [5]. Сотрудниками ВИЛАРа разработан оригинальный способ и технология получения сухого экстракта из корневищ и корней сабельника болотного, как наиболее рационального метода переработки лекарственного растительного сырья [5]. Настоящая работа посвящена исследованию противовоспалительной активности сухого экстракта сабельника болотного.

Материалы и методы. Экспериментальная работа выполнена на животных обоего пола: мышах массой 18—20 г и белых крысах Wistar массой 160—220 г. Животные находились в стандартных условиях содержания в виварии. Объект исследования — стандартизованный по сумме полифенольных соединений в перерасчете на (+)-катехин, сухой экстракт, полученный из корней и корневищ са-

бельника болотного (Comarum palustris L.), условно названный ЭСБ [5]. В экспериментах использовали водный раствор ЭСБ, который вводили животным внут-рижелудочно через зонд в утренние часы за 1 час до кормления в объеме 1 мл/100 г по соответствующим схемам. В качестве препарата сравнения применяли деалко-голизированную спиртовую настойку сабельника фирмы «Эвалар» и деалкоголи-зированный раствор препарата «Канефрон» (Франция). Животным контрольной группы в равном объеме и одинаковом режиме вводили дистиллированную воду. Полученные данные обработаны статистически c использованием U-критерия Манна-Уитни. Различия считали достоверными при Р < 0,05.

Для оценки противовоспалительной активности ЭСБ определяли его влияние на процессы экссудации, альтерации и пролиферации. Изучение антиэкссу-дативной активности ЭСБ проводили на моделях острого асептического воспаления задней конечности у животных с использованием флогогенных агентов с различными механизмами провоспалительного действия (формалин, декстран, гистамин).

Модель формалинового отека изучали по методу Ю.Е. Стрельникова [6]. Исследование проведено на белых крысах обоего пола массой 170—190 г. ЭСБ в дозах 25, 50, 100 и 150 мг/кг вводили интрагастрально за 3 часа до субплантарного введения животным в правую заднюю лапку 0,1 мл 3% раствора формалина. Затем ЭСБ вводили крысам интрагастрально дважды с промежутком через 5 и 18 часов после инициации воспаления. В качестве препарата сравнения использовали ка-нефрон. Через 24 часа после введения формалина проводили оценку антиэкссу-дативного эффекта с использованием формулы:

% угнетения отека = Рк - Р / Рк,

где Рк — разность масс лапок с отеком и без отека у животных контрольной группы; Р — разность масс лапок с отеком и без отека у животных опытной группы.

Модель формалинового отека воспроизводили по методу Ф.П. Тринус [10]. Исследования проведены на мышах обоего пола массой 18—19 г. 1% раствора формалина субплантарно вводили в область задней лапы мыши. ЭСБ вводили внутрь в дозе 100 мг/кг за час до и через час после введения формалина. Препаратом сравнения служил сабельник «Эвалар» (С Эвалар). Выраженность воспалительной реакции оценивали на пике воспаления через 3 часа, путем взвешивания ампутированных лап мышей.

Модель декстранового отека изучали по методу А.Ф. Лещинского [7]. Опыты проведены на крысах-самцах массой 140—160 г. В качестве флогогенного агента использовали водный 6% раствор декстрана, вводимый в объеме 0,1 мл субплан-тарно. ЭСБ в дозе 100 мг/кг в объеме 10мл/кг вводили крысам внутрижелудочно за 30 мин и через 1 час после инъекции декстрана. Препаратом сравнения служил канефрон. Оценку антиэкссудативной активности осуществляли через 3 часа после инъекции декстрана методом онкометрии. Определяли разность в объеме между практически здоровой и отечной лапкой.

Модель гистаминового отека воспроизводили по методу Александрова [8]. Опыты проведены на крысах обоего пола массой 140—160 г. 1% раствор гиста-мина гидрохлорида вводили субплантарно в объеме 0,1 мл. ЭСБ в дозе 100 мг/кг вводили внутрижелудочно за 30 мин. и через 1 час после инъекции гистамина. Препаратом сравнения служил канефрон.

Изучали влияние ЭСБ на процессы альтерации в очаге воспаления по методу Менкина [9]. Крысам подкожно вводили 0,5 мл 9% раствора уксусной кислоты в область спины. Одновременно внутрибрюшинно вводили раствор декстрана в дозе 300 мг/кг. Первое введение ЭСБ в дозе 100 мг/кг осуществляли за 1 час до введения уксусной кислоты, а затем ежедневно 1 раз в сутки в течение 25 дней. На 2, 9 и 25-е сутки эксперимента оценивали площадь некротизированной ткани планиметрическим методом. Препаратом сравнения служил канефрон.

Влияние на пролиферативные процессы было изучено на модели «ватной гранулемы» по методу Ф.П. Тринус [10]. Стерильные ватные шарики массой 15 мг имплантировали под кожу крыс в области спины в асептических условиях. Раствор ЭСБ вводили внутрижелудочно в дозе 100 мг/кг 1 раз в сутки в течение 7 дней. Через 7 суток извлекали гранулемы и проводили взвешивание на аналитических весах в сыром виде (сразу после извлечения) и после высушивания при температуре 70 °С в течение 24 часов (до постоянной массы).

Известно, что противовоспалительные нестероидные вещества обладают свойством ингибировать циклооксигеназу (ЦОГ) арахидоновой кислоты in vitro, при непосредственном контакте такого рода веществ с ферментом ЦОГ арахидо-новой кислоты. В связи с этим было проведено изучение влияния ЭСБ на скорость циклооксигеназной реакции in vitro. Скорость реакции определяли поляро-графически по поглащению кислорода.

Результаты и обсуждение. ЭСБ оказывает антиэкссудативное действие при формалиновом отеке.

Из приведенных в табл. 1, 2 данных следует, что ЭСБ снижает величину отека на 26,6 и 36,7% при его применении в дозах 50 и 100 мг/кг по сравнению с показателями у животных контрольной группы. При дальнейшем увеличении дозы ЭСБ нарастание противовоспалительного эффекта не отмечалось. Учитывая, что противовоспалительная эффективность ЭСБ в дозах 100 и 150 мг/кг была аналогичной, для дальнейших экспериментов использовалась доза 100 мг/кг. Препарат сравнения обнаруживал только тенденцию к уменьшению отека, вызванного формалином.

Исследования показали, что ЭСБ на фоне формалинового отека обладает ан-тиэкссудативной активностью, о чем свидетельствует уменьшение на 39% отека лап у мышей опытной группы по сравнению с контрольной группой животных. Эффект препарата сравнения выражен меньше.

При декстрановом отеке ЭСБ оказывает выраженное антиэкссудативное действие (табл. 3).

Таблица 1

Влияние ЭСБ на экссудативную фазу воспаления при формалиновом отеке у крыс

Группы животных Разница масс лапок, мг % угнетения отека

Контрольная 129,4 ± 9,34 —

ЭСБ 25 мг/кг 130,6 ± 10,43 —

ЭСБ 50 мг/кг 95,0 ± 6,34* 26,6

ЭСБ 100 мг/кг 82,0 ± 7,62* 36,7

ЭСБ 150 мг/кг 84,3 ± 6,55* 35,1

Канефрон 100 мг/кг 115 ± 5,89 11,2

Примечание: * — здесь и далее значения достоверны по сравнению с данными у животных контрольной группы при Р < 0,05.

Таблица 2

Влияние ЭСБ на течение острого экссудативного воспаления у мышей, вызванного формалином

Группы животных Прирост отека в мг Противовоспалительный эффект в %

Контрольная 65,6 ± 6,13

ЭСБ 100 мг/кг 44,0 ± 4,09* 32,98

С «Эвалар» 100 мг/кг 51,16 ± 3,73* 22,08

Примечание: *— Р > 0,5 по сравнению с контролем.

Таблица 3

Влияние ЭСБ на процессы экссудации при декстрановом отеке у белых крыс

Группы животных Разность объема лапок мл % угнетения отека

Контрольная 0,622 ± 0,064 —

ЭСБ 100 мг/кг 0,346 ± 0,034* 44,0

Канефрон 100мг/кг 0,473 ± 0,035* 34,0

Как следует из данных табл. 3, при введении ЭСБ в указанной дозе наблюдается значительное снижение отечности в среднем на 44% по сравнению с контролем. Препарат сравнения канефрон также оказывает менее выраженное действие.

ЭСБ оказывает выраженное антиэкссудативное действие при гистаминовом отеке (табл. 4).

Таблица 4

Влияние ЭСБ на процессы экссудации при гистаминовом отеке у белых крыс

Группы животных Разность объема лапок, мл % угнетения

Контрольная 0,390 ± 0,09 —

ЭСБ 100 мг/кг 0,150 ± 0,05* 61,5

Канефрон 100 мг/кг 0,105 ± 0,05* 73,0

Как следует из данных табл. 4, введение ЭСБ в дозе 100 мг/кг на фоне гиста-минового отека способствует угнетению экссудации в среднем на 61,5%, по сравнению с данными в контрольной группе. При этом канефрон оказывал более выраженное антиэкссудативное действие, снижая степень отечности на 73%.

Было изучено влияние ЭСБ на процессы альтерации и регенерации (табл. 5).

Таблица 5

Влияние ЭСБ на процессы альтерации и регенерации при остром асептическом воспалении у белых крыс

Группы животных Площадь альтерации, см2

2-е сутки 9-е сутки 25-е сутки

Контрольная 2,31 ± 0,21 3,92 ± 0,34 0,74 ± 0,11

ЭСБ 100 мг/кг 1,28 ± 0,15* 2,24 ± 0,28* 0,48 ± 0,09*

канефрон 100 мг/кг 1,51 ± 0,19* 2,73 ± 0,32* 0,54 ± 0,07*

Как следует из данных табл. 5, введение ЭСБ в дозе 100 мг/кг на фоне острого асептического воспаления сопровождалось уменьшением выраженности альтерации тканей и ускорением регенерации. Об этом свидетельствует уменьшение площади кожно-мышечного дефекта на 2, 9, 25-е сутки соответственно на 45, 40 и 35% по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы.

Изучали влияние ЭСБ на процессы пролиферации в очаге воспаления.

Полученные данные (табл. 6) свидетельствуют, что ЭСБ в дозе 100 мг/кг не оказывает влияние на процесс развития гранулемы.

Таблица 6

Влияние ЭСБ на образование грануляционно-фиброзной ткани в очаге воспаления у белых крыс

Группы животных Масса влажной гранулемы, мг Масса сухой гранулемы, мг

Контрольная 211,6 ± 23,4 45,5 ± 6,91

ЭСБ 100 мг/кг 173,5 ± 19,9 45,16 ± 3,50

Канефрон 100 мг/кг 248,6 ± 29,8 53,2 ± 8,88

Установлено, что ЭСБ оказывает непосредственное ингибирующее влияние на активность ЦОГ арахидоновой кислоты, угнетая скорость реакции на 82—91% в зависимости от концентрации экстракта в пробе. Полученные результаты свидетельствуют о наличии у ЭСБ противовоспалительных свойств и подтверждают результаты исследования противовоспалительной активности ЭСБ на животных.

Результаты проведенных экспериментов свидетельствуют, что ЭСБ в дозе 100 мг/кг обладает отчетливой противовоспалительной активностью, так как вызывает уменьшение степени экссудации при воспалении, вызванном флогогенны-ми агентами с разным механизмом провоспалительного действия. Вероятно, ЭСБ уменьшает высвобождение эндогенных провоспалительных агентов (гистамина и др.) из базофилов и тучных клеток при действии различных повреждающих факторов. Механизм действия ЭСБ состоит в ингибировании активности ЦОГ.

ЛИТЕРАТУРА

[1] Эрдес Ш.Ф., Фоломеева О.М. Проблема ревматических заболеваний в России // Русский медицинский журнал. — 2004. — Т. 12. — № 12. — С. 1121—1123.

[2] Клиническая фармакология / Лоуренс Д.Р., Беннетт П.А., Браун М.Дж. и др.: Пер. с англ. — М.: Медицина, 2002. — 669 с.

[3] Шварц Г.Я. Современные нестероидные противовоспалительные средства. — М.: Реа-фарм, 2002. — 40 с.

[4] Фитотерапия с основами клинической фармакологии / Под ред. В.Г. Кукеса — М., 1999. — 125 с.

[5] Жукова О.Л. Фитохимическое изучение сабельника болотного, сухого экстракта на его основе и их стандартизация: Автореф. дисс. ... канд. мед. наук. — Москва, 2007. — 22 с.

[6] Стрельников Ю.Е. Сравнительная характеристика противовоспалительного действия некоторых пиримидиновых производных //Фармакол. и токсикол. — 1960. — № 6. — С. 526—531.

[7] Лещинский А.Ф. Роль изменений биоэнергетики в механизме действия нестероидных противовоспалительных препаратов // Бюлл. экспер. биол. и мед. — 1976. — № 4. — С. 436—438.

[8] Александров П.Н., Сперанская Т.В., Бобков Ю.Г. и др. Влияние рутина и эскуламина на некоторые модели асептического воспаления // Фармакол. и токсикол. — 1986. — № 1. — С. 84—86.

[9] Ойвин И.А., Шетель С.Л. Методика изучения нарушений капиллярной проницаемости // Материалы по патогенезу воспаления и патологии белков крови. — Душанбе, 1961. — Т. 49. — № 5. — С. 167—173.

[10] Тринус Ф.П., Мохорт Н.А., Клебанов Б.М. Нестероидные противовоспалительные средства. — Киев, 1975. — 239 с.

RESEARCH OF ANTI-INFLAMMATORY ACTIVITY OF COMARUM PALUSTRIS L. DRY EXTRACT

E.V. Ferubko, T.E. Leskova, A.I. Baginskaya, V.K. Kolkhir

All-Russian Institute of Medicinal and Aromatic Plants

Green's str., 7, Moscow, Russia, 117216

Studied anti-inflammatory properties of a Comarum palustris L. dry extract (ESP) on mice and rats Wistar with use of models sharp exudative (formalin, dextrin and histamine hypostasis) and chronic proliferative inflammations. Effect estimated on reduction of a degree of exudation and on influence on development of a granulomae. It is established, that ESP possesses anti-inflammatory activity: renders expressed anti-exudation action.

Key words: comarum palustris L. dry extract, anti-inflammatory activity.