Количественное определение дубильных веществ в майнике двулистном (Maianthemum bifolium L. )

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ НАУКИ

Количественное определение дубильных веществ в майнике

двулистном

1 2 Некрасова Д. О. , Заяц Д. В.

1Некрасова Дарья Олеговна / Nekrasova Daria Olegovna - студент;

2Заяц Даниил Владимирович / Zaiats Daniil Vladimirovich - студент, кафедра фармации и фармакологии, фармацевтический факультет, Северный государственный медицинский университет, г. Архангельск

Аннотация: дубильные вещества - биологически-активные вещества с широким спектром фармакологического действия. В статье представлены результаты количественного определения дубильных веществ в майнике двулистном (Maianthemum bifolium) методом Фолина-Чокальтеу.

Ключевые слова: майник двулистный, дубильные вещества, метод Фолина-Чокальтеу.

Дубильные вещества - высокомолекулярные соединения полифенольной структуры с молекулярной массой 500-3000, способные образовывать прочные связи с белками и алкалоидами, осаждая их, а также обладающие вяжущим действием. Дубильные вещества обладают антиоксидантным, гепатопротекторным, противовоспалительным, противоаллергическим, противовирусным, антимикробным, противопротозойным и противодиабетическим действием [3].

Цель данной работы - количественное определение дубильных веществ в траве майника двулистного (Maianthemum bifolium L.) (майник) семейства спаржевые (Asparagaceae). Майник широко применяется в народной медицине в качестве противовоспалительного, жаропонижающего, вяжущего и противомикробного средства [1]. Объектом исследования служила воздушно высушенная трава растения, заготовленная на территории Шенкурского района Архангельской области в летние месяцы 2015 года в фазу цветения майника.

В ходе предварительного исследования было определено значение потери в массе при высушивании растительного сырья, которое составило 7,6 %.

Для количественного определения дубильных веществ использовали метод Фолина-Чокальтеу в модификации Makkar [2]. С этой целью около 1 г (точная навеска) измельченного и просеянного через лабораторные сита воздушно-сухого сырья майника помещали в коническую колбу со шлифом, прибавляли 50 мл смеси: ацетон (ТУ 6-09-3513-82) - вода очищенная (ФС.2.2.0020.15) (вода), в соотношении 7:3 по объему (70 % раствор ацетона) и помещали в лабораторное перемешивающее устройство (ЛАБ ПУ-2, Россия) на 60 минут. Полученное извлечение фильтровали через бумажный фильтр «синяя лента» в мерную колбу вместимостью 50 мл и объем раствора в колбе доводили до метки 70 % раствором ацетона (раствор А).

0,3 мл раствора А помещали в мерную колбу вместимостью 10 мл, добавляли 2 мл воды очищенной, 0,25 мл реактива Фолина-Чокальтеу, 1,25 мл 20 % раствора натрия карбоната и доводили объем раствора водой до метки. Колбу оставляли на 40 минут в защищенном от света месте. Далее определяли оптическую плотность полученных растворов на спектрофотометре СФ-56А в кварцевых кюветах с толщиной слоя 1 см при длине волны 750 нм относительно раствора сравнения. В качестве раствора сравнения использовали смесь реактивов без добавления извлечения.

Для расчета содержания дубильных веществ в исследуемом растворе использовали градуировочный график (рис.1), для построения которого 0,05 г (точная навеска) СО танина (Sigma Aldrich CAS 1401-55-4) помещали в мерную колбу

вместимостью 100 мл, добавляли 50 мл воды и растворяли. Объем раствора доводили водой до метки (раствор Б).

В мерные колбы вместимостьюШ мл помещали по 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5 мл раствора Б, добавляли 2 мл воды, 0,25 мл реактива Фолина-Чокальтеу, 1,25 мл 20 % раствора натрия карбоната и доводили объем растворов в колбах водой до метки. Колбы оставляли на 40 минут в защищенном от света месте. Оптическую плотность растворов измеряли при длине волны 750 нм. Раствор сравнения представлял собой смесь реагентов без добавления РСО танина (табл.1).

Таблица 1. Построение градуировочного графика для определения дубильных веществ методом Фолина-Чокальету

Раствор Б, мл Вода, мл Реактив Фолина-Чокальтеу, мл 20 % раствор натрия карбоната, мл Полученная концентрация раствора, мкг/мл Оптическая плотность

0 2 0,25 1,25 0 0

0,1 2 0,25 1,25 5 0,4439

0,2 2 0,25 1,25 10 0,8171

0,3 2 0,25 1,25 15 1,2549

0,4 2 0,25 1,25 20 1,5716

0,5 2 0,25 1,25 25 2,0543

Рис. 1. Градуировочный график раствора СО танина

Содержание дубильных веществ в сырье рассчитывали в пересчете на танин и абсолютно сухое сырье по формуле:

а

100 - Ь

где

с - содержание дубильных веществ в исследуемом растворе, найденное по градуировочному графику, мкг/мл; а - навеска сырья, г; Б - фактор разведения; Ь - потеря в массе при высушивании, %.

Результаты количественного определения дубильных веществ в воздушно-сухом сырье майника представлены в табл. 2.

Таблица 2. Результаты количественного определения дубильных веществ в воздушно-сухом

сырье майника двулистного

Масса Оптическая плотность Содержание суммы дубильных веществ в исследуемом Рассчитанное количество суммы дубильных веществ, % Метрологические

ЛРС, г извлечения из ЛРС растворе, найденное по характеристики

градуировочному графику, мкг/мл

1,00305 0,6413 7,86871 1,41

1,05715 0,7110 8,72393 1,48 X = 1,41

0,98800 0,6291 7,71902 1,41 S - 0,02

1,01190 0,6229 7,64294 1,36 Ах - 0,06 £ = 4,02%

1,04760 0,6550 8,03681 1,38

1,02090 0,8009 9,82700 1,73

Таким образом, в результате проведённых исследований было установлено, что

содержание дубильных веществ в майнике составляет около 1,4 %.

Литература

1. Майник двулистный (Maianthemum bifolium L.). [Электронный ресурс]: Лекарственная продукция из натуральных растений. Режим доступа: http://lektrava.ru/encyclopedia/maynik-dvulistnyy.

2. Струсовская О. Г. Ресурсоведческие и фитохимические исследования перспективных видов сырья дикорастущих растений островов Соловецкого архипелага: дисс. докт. фарм. наук / О. Г. Струсовская. Волгоград, 2014. С. 61-67.

3. Tannins and their Influence on Health / K. Macáková [et al.] // Recent Advances in Medicinal Chemistry, 2014. Vol.1. P. 159-208.