СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛ С УЛУЧШЕННЫМИ СВОЙСТВАМИ

1. Fc-содержащий полипептид, включающий мутации в аминокислотных положениях 243 и 264 Fc-области, где Fc-содержащий полипептид представляет собой антитело или фрагмент антитела, содержащий сиалированные N-гликаны, и где мутация в положении 243 выбрана из группы, состоящей из F243A, F243G, F243S, F243T, F243V, F243L, F243I, F243D, F243Y, F243E, F243R, F243W и F243K, и мутация в положении 264 выбрана из группы, состоящей из V264A, V264G, V264S, V264T, V264D, V264E, V264K, V264W, V264H, V264P, V264N, V264Q и V264L, где нумерация произведена согласно индексу EU по Kabat.
2. Fc-содержащий полипептид по п. 1, где мутации в положениях 243 и 264 выбраны из группы, состоящей из:
a) F243A и V264A;
b) F243Y и V264G;
c) F243T и V264G;
d) F243L и V264A;
e) F243L и V264N; и
f) F243V и V264G.
3. Fc-содержащий полипептид по п. 2, где мутации в положениях 243 и 264 представляют собой F243A и V264A.
4. Fc-содержащий полипептид по любому из пп. 1-3, где остатки сиаловой кислоты в сиалированных N-гликанах присоединены посредством α-2,6-связей.
1-4
1-4
2-4
3
2
5. Fc-содержащий полипептид по любому из пп. 1-3, где по меньшей мере 70 моль% N-гликанов в Fc-содержащем полипептиде имеют структуру, выбранную из группы, состоящей из SA()Gal()GlcNAc()ManGlcNAc.
1-4
1-4
2-4
3
2
6. Fc-содержащий полипептид по любому из пп. 1-3, где по меньшей мере 90 моль% N-гликанов в Fc-содержащем полипептиде имеют структуру, выбранную из группы, состоящей из SA()Gal()GlcNAc()ManGlcNAc.
2
2
2
3
2
7. Fc-содержащий полипептид по любому из пп. 1-3, где по меньшей мере 66 моль% N-гликанов в Fc-содержащем полипептиде имеют структуру NANAGalGlcNAcManGlcNAc.
8. Fc-содержащий полипептид по любому из пп. 1-3, где Fc-содержащий полипептид обладает одним или несколькими из следующих свойств по сравнению с родительским Fc-содержащим полипептидом:
a) сниженная эффекторная функция,
b) повышенные противовоспалительные свойства,
c) повышенное сиалирование,
d) повышенная биодоступность при введении парентерально, и
e) пониженное связывание с FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb и FcγRIIIa.
9. Способ получения Fc-содержащего полипептида в клетке-хозяине, включающий:
a) создание генетически модифицированной клетки-хозяина с помощью генетической инженерии для выработки Fc-содержащего полипептида, где Fc-содержащий полипептид представляет собой антитело или фрагмент антитела, содержащие сиалированные N-гликаны, где клетка-хозяин содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую мутации в аминокислотных положениях 243 и 264 Fc-области Fc-содержащего полипептида, где мутация в положении 243 выбрана из группы, состоящей из F243A, F243G, F243S, F243T, F243V, F243L, F243I, F243D, F243Y, F243E, F243R, F243W и F243K, и мутация в положении 264 выбрана из группы, состоящей из V264A, V264G, V264S, V264T, V264D, V264E, V264K, V264W, V264H, V264P, V264N, V264Q и V264L, и где нумерация произведена согласно индексу EU по Kabat;
b) культивирование клетки-хозяина в условиях, приводящих к экспрессии Fc-содержащего полипептида; и
c) выделение Fc-содержащего полипептида из клетки-хозяина.
10. Способ по п. 9, где мутации в положениях 243 и 264 выбраны из группы, состоящей из:
a) F243A и V264A;
b) A243Y и V264G;
c) F243T и V264G;
d) F243L и V264A;
e) F243L и V264N; и
f) F243V и V264G.
11. Способ по п. 10, где мутации в положениях 243 и 264 представляют собой F243A и V264A.
12. Способ по любому из пп. 9-11, где остатки сиаловой кислоты в сиалированных N-гликанах присоединены посредством α-2,6-связей.
13. Способ по любому из пп. 9-11, где Fc-содержащий полипептид содержит N-гликановую композицию, в которой количество и процентное содержание общего числа сиалированных N-гликанов повышено по сравнению с родительским Fc-содержащим полипептидом.
1-4
1-4
2-4
3
2
14. Способ по любому из пп. 9-11, где по меньшей мере 70 моль% N-гликанов в Fc-содержащем полипептиде имеют структуру, выбранную из группы, состоящей из SA()Gal()GlcNAc()ManGlcNAc.
1-4
1-4
2-4
3
2
15. Способ по любому из пп. 9-11, где по меньшей мере 90 моль% N-гликанов в Fc-содержащем полипептиде имеют структуру, выбранную из группы, состоящей из SA()Gal()GlcNAc()ManGlcNAc.
2
2
2
3
2
16. Способ по любому из пп. 9-11, где по меньшей мере 66 моль% N-гликанов в Fc-содержащем полипептиде имеют структуру NANAGalGlcNAcManGlcNAc.
17. Способ по любому из пп. 9-11, где Fc-содержащий полипептид обладает одним или несколькими из следующих свойств по сравнению с родительским Fc-содержащим полипептидом:
a) сниженная эффекторная функция,
b) повышенные противовоспалительные свойства,
c) повышенное сиалирование,
d) повышенная биодоступность при введении парентерально, и
e) пониженное связывание с FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb и FcγRIIIa.
18. Способ повышения противовоспалительных свойств или снижения цитотоксичности Fc-содержащего полипептида, включающего введенные мутации в положениях 243 и 264 Fc-области, где мутация в положении 243 выбрана из группы, состоящей из F243A, F243G, F243S, F243T, F243V, F243L, F243I, F243D, F243Y, F243E, F243R, F243W и F243K, и мутация в положении 264 выбрана из группы, состоящей из V264A, V264G, V264S, V264T, V264D, V264E, V264K, V264W, V264H, V264P, V264N, V264Q и V264L, где нумерация приведена согласно индексу EU по Kabat; и
где Fc-содержащий полипептид имеет повышенные противовоспалительные свойства или сниженную цитотоксичность по сравнению с родительским Fc-содержащим полипептидом.
19. Способ по п. 18, где мутации в положениях 243 и 264 выбраны из группы, состоящей из:
a) F243A и V264A;
b) A243Y и V264G;
c) F243T и V264G;
d) F243L и V264A;
e) F243L и V264N; и
f) F243V и V264G.
20. Способ по п. 19, где мутации в положениях 243 и 264 представляют собой F243A и V264A.
21. Fc-содержащий полипептид, включающий тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:9 или ее вариант, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:2 или ее вариант, где вариант включает одно или несколько следующих свойств по сравнению с антителом, содержащим аминокислотную последовательность тяжелой цепи из SEQ ID NO:1 и аминокислотную последовательность легкой цепи из SEQ ID NO:2:
a) сниженная эффекторная функция,
b) повышенные противовоспалительные свойства,
c) повышенное сиалирование,
d) повышенная биодоступность при введении парентерально, и
e) сниженное связывание с FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb и FcγRIIIa.
22. Fc-содержащий полипептид, включающий тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:12 или ее вариант, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:11 или ее вариант, где вариант включает одно или несколько следующих свойств по сравнению с антителом, содержащим аминокислотную последовательность тяжелой цепи из SEQ ID NO:10 и аминокислотную последовательность легкой цепи из SEQ ID NO:11:
a) сниженная эффекторная функция,
b) повышенные противовоспалительные свойства,
c) повышенное сиалирование,
d) повышенная биодоступность при введении парентерально, и
e) сниженное связывание с FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb и FcγRIIIa.
23. Fc-содержащий полипептид, включающий тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:15 или ее вариант, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:14 или ее вариант, где вариант включает одно или несколько следующих свойств по сравнению с антителом, содержащим аминокислотную последовательность тяжелой цепи из SEQ ID NO:13 и аминокислотную последовательность легкой цепи из SEQ ID NO:14:
a) сниженная эффекторная функция,
b) повышенные противовоспалительные свойства,
c) повышенное сиалирование,
d) повышенная биодоступность при введении парентерально, и
e) сниженное связывание с FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb и FcγRIIIa.
1-4
1-4
2-4
3
2
24. Fc-содержащий полипептид по п. 4, где остатки сиаловой кислоты в сиалированных N-гликанах присоединены посредством α-2,6-связей, и где по меньшей мере 70 моль% или 90 моль% N-гликанов в Fc-содержащем полипептиде имеют структуру, выбранную из группы, состоящей из SA()Gal()GlcNAc()ManGlcNAc.
1-4
1-4
2-4
3
2
25. Fc-содержащий полипептид по п. 4, где остатки сиаловой кислоты в сиалированных N-гликанах присоединены посредством α-2,6-связей, и где по меньшей мере 90 моль% N-гликанов в Fc-содержащем полипептиде имеют структуру, выбранную из группы, состоящей из SA()Gal()GlcNAc()ManGlcNAc.
1-4
1-4
2-4
3
2
26. Способ по любому из пп. 9-11, где остатки сиаловой кислоты в сиалированных N-гликанах присоединены посредством α-2,6-связей, и где по меньшей мере 70 моль% или 90 моль% N-гликанов в Fc-содержащем полипептиде имеют структуру, выбранную из группы, состоящей из SA()Gal()GlcNAc()ManGlcNAc.
1-4
1-4
2-4
3
2
27. Способ по любому из пп. 9-11, где остатки сиаловой кислоты в сиалированных N-гликанах присоединены посредством α-2,6-связей, и где по меньшей мере 90 моль% N-гликанов в Fc-содержащем полипептиде имеют структуру, выбранную из группы, состоящей из SA()Gal()GlcNAc()ManGlcNAc.
28. Способ лечения воспалительного состояния у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества Fc-содержащего полипептида по любому из пп. 1-8 или 24-25.