Сравнение антибактериальной активности ингаляционныгх форм препаратов тобрамицина

Сравнение антибактериальной активности ингаляционных форм препаратов тобрамицина

В. В. ПИСАРЕВ

Научно-производственный центр Пробиотек, Москва

Comparison of Antibacterial Activities of Tobramycin Inhalation Solutions

V. V. PISAREV

RPC Probiotech, Moscow

Проведена сравнительная оценка по спектру антибактериального действия лекарственных препаратов тобрамицина (растворы для ингаляций): Тобрамицин-Гобби производства «Гобби Новаг С.А.», Аргентина, Тоби — (раствор для ингаляций 60 мг/мл) производства «Кардинал Хелс Инк», США. В работе были использованы 75 клинических изолятов микроорганизмов из коллекции Государственного научного центра по антибиотикам и эталонные штаммы Staphylococcus aureus АТСС 29213, Escherichia coli АТСС 25922, Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853. Показано, что лекарственные формы то-брамицина, Тобрамицин-Гобби (раствор для ингаляций 60 мг/мл) производства «Гобби Новаг С.А.», Аргентина, и Тоби (раствор для ингаляций 60 мг/мл) производства «Кардинал Хелс Инк.», США, идентичны по спектру антибактериального действия.

Ключевые слова: лекартсвенные формы тобрамицина, антибактериальная активность

Antibacterial spectra of Tobramycin-Gobby(solution for inhalation 60 mg/ml, «GobbyNovag C.A.», Argentina) and Toby (solution for inhalation 60 mg/ml, «Cardinal Health Inc.», USA) were estimated comparatively. The estimation involved 75 clinical isolates of microorganisms from the Culture Collection of the National Research Centre of Antibiotics and standard strains of Staphylococcus aureus АТСС 29213, Escherichia coli АТСС 25922, Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853.It was shown that Tobramycin-Gobby (solution for inhalation 60 mg/ml, «GobbyNovag C.A.», Argentina) and Toby (solution for inhalation 60 mg/ml, «Cardinal Health Inc.», USA) were identical by their antibacterial spectra.

Key words: tobramycin formulations, antibacterial activity.

Ингаляционные лекарственные формы антибиотиков незаменимы в лечении инфекций дыхательных путей, вызванных в первую очередь Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus [1].

При ингаляционном пути введения антибиотики в высоких концентрациях доставляются непосредственно в участок поражения, что важно при лечении персистирующих инфекций. В то же время при применении ингаляционных форм снижается риск системной токсичности аминог-ликозидов. Среди таких антибиотиков наибольшее распространение получил ингаляционный тобрамицин для лечения инфекций дыхательных путей, вызванных Pseudomonas aeruginosa у больных муковисцидозом. Препарат блокирует 30S субъединицу рибосом и тормозит синтез белка (бактериостатическое действие). В более высоких концентрациях он нарушает функцию цитоплаз-матических мембран, вызывая гибель клетки. То-

© В. В. Писарев, 2013

Адрес для корреспонденции: 117105 Москва, ул. Нагатинская, д. 3а. Редакция журнала Антибиотики и химиотерапия

брамицин высокоактивен в отношении грамот-рицательных микроорганизмов: Pseudomonas aeruginosa, а также в отношении Escherichia coli, Proteus spp. (Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, ин-долположительные и индолотрицательные штаммы), Klebsiella spp. (Klebsiella pneumoniae), Serratia spp., Providencia spp., Enterobacter spp. (Enterobacter aerogenes), Shigella spp., Salmonella spp., Citrobacter spp., Haemophilus influenzae, Haemophilus aegyptius, Moraxella lacunata, Morganella morganii, Acinetobacter calcoaceticus (Herellea vaginacola), некоторые виды Neisseria spp. (в том числе Neisseria gonorrhoeae).

Тобрамицин активен также в отношении грамположительных бактерий: Staphylococcus spp. (включая Staphylococcus aureus, Staphylococcus epi-dermidis, в том числе штаммы, продуцирующие пенициллиназу, устойчивые к пенициллинам, цефалоспоринам, коагулазоотрицательные и ко-агулазоположительные), Streptococcus spp. (в том числе бета-гемолитических штаммов из группы А, некоторых негемолитических штаммов, Streptococcus pneumoniae), Enterococcus spp.

Безопасность и клиническая эффективность то-брамицина доказана в многочисленных мультицен-тровых исследованиях. Он достоверно снижает число обострений, улучшает респираторную функцию и уменьшает колонизацию Pseudomonas aeruginosa в группе больных, получавших препарат, по сравнению с контрольной группой [2]. Появление ингаляционных препаратов тобрамицина разных производителей требует сравнение их фармакологической активности. Поэтому целью данной работы явилась сравнительная оценка по спектру антибактериального действия лекарственных препаратов тобрами-цина (растворы для ингаляций): Тобрамицин-Гоб-би производства «Гобби Новаг С.А.», Аргентина, и Тоби — (раствор для ингаляций 60 мг/мл) производства «Кардинал Хелс Инк», США.

Материал и методы

В работе были оценены показатели следующих образцов: испытуемого препарата — Тобрамицин-ГОББИ — раствор для ингаляций 60 мг/мл (300 мг/5 мл) производства «Гобби Новаг С.А.», Аргентина, серия № Т0В003, годен до: 08.2011 и серия № Т0В009, годен до: 11.2013, препарата сравнения — ТОБИ — раствор для ингаляций 60 мг/мл производства «Кардинал Хелс Инк.», США, серия № Х0023, годен до: 07.2011 и серия № X0063D, годен до: 05.2014.

Для оценки спектра антибактериального действия препаратов определяли значения минимальной подавляющей рост микроорганизмов концентрации (МПК) микрометодом серийных двукратных разведений в бульоне Мюллера-Хинтон (BioMerieux S.A.). Исследования проводили в соответствии с рекомендациями [3].

В работе были использованы клинические штаммы микроорганизмов из коллекции Государственного научного центра по антибиотикам и эталонные штаммы Staphylococcus aureus АТСС 29213, Escherichia coli АТСС 25922, Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853.

Эталонные штаммы использованы для определения контроля условий проводимого исследования. При исследовании чувствительности к антимикробным препаратам контрольных штаммов полученные значения МПК соответствовали стандартным значениям, что свидетельствовало о точности соблюдения условий постановки эксперимента. Результаты определения чувствительности клинических изолятов, полученные в этих условиях, были достоверными.

При соблюдении стандартных условий методики значения МПК эталонных штаммов не выходили за доверительные пределы, приведённые ниже:

• Staphylococcus aureus АТСС 29213 (0,12—1,0) мкг/мл;

• Escherichia coli АТСС 25922 (0,25—1,0) мкг/мл;

• Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 (0,25—1,0) мкг/мл.

Для приготовления инокулята из изолированных колоний

готовили суспензию по стандарту McFarland 0,5 в физиологическом растворе. Суспензию разводили в среде МиеИег—Hinton Broth II до концентрации 105 КОЕ/мл. Приготовленную суспензию вносили по 50,0 мкл в лунки планшета (предварительно размороженные). Инокулированные планшеты инкубировали в течение 18 ч при 37°С. За МПК принимали наименьшую концентрацию антибиотика, при которой отсутствовал видимый рост микроорганизмов. В качестве контроля использовали референтные штаммы.

Результаты и обсуждение

Результаты сравнительной оценки антибактериальной активности испытуемых препаратов представлены в таблице.

Как видно из данных, приведённых в таблице, колебания в значениях МПК испытуемых препаратов в отношении эталонных штаммов не выходят за доверительные пределы.

Различия в значениях МПК сравниваемых препаратов не превышают 1—2 двукратных разведений, что соответствует ошибке опыта. Поэтому следует считать, что в отношении 75 клинических изолятов и 3 эталонных штаммов оба изучаемых препарата по спектру антибактериального действия и значениям МПК практически идентичны.

Согласно клиническим исследованиям, в мокроте при хроническом инфицировании дыхательных путей в большинстве случаев высевается P.aeruginosa [4]. В связи с этим в исследование было включено 15 штаммов P.aeruginosa, выделенных из клинического материала (трахеальный аспират, мокрота).

С учётом новых критериев (критерии MENSURA) [5] для определения чувствительности клинических изолятов к ингаляционному тобра-мицину (в отношении P.aeruginosa считаются чувствительными, если МПК — 64 мкг/мл и устойчивыми, если МПК составляет более 128 мкг/мл) оба испытуемых препарата определены как эффективные в отношении 87% штаммов, использованных в исследовании. Следовательно, можно заключить, что лекарственные препараты тобра-мицина: Тобрамицин-Гобби (раствор для ингаляций 60 мг/мл) производства «Гобби Новаг С.А.», Аргентина, и Тоби (раствор для ингаляций 60 мг/мл) производства «Кардинал Хелс Инк.», США, идентичны по спектру антибактериального действия.

Тобрамицин представляет собой катионную полярную молекулу, которая не сразу проходит через эпителиальные мембраны. Биологическая доступность тобрамицина может варьировать из-за индивидуальных различий в работе небулайзе-ра и патологии дыхательных путей. Поэтому встречающиеся иногда в клинических условиях вариабельность в эффективности препаратов то-брамицина не следует относить к используемому лекарственному препарату, по крайней мере в отношении препаратов Тобрамицин-Гобби и Тоби. Причинами индивидуальной чувствительности пациентов к тому или иному препарату то-брамицина могут быть именно конструктивные особенности используемого небулайзера и доступности очага инфекции к антибактериальному веществу.

Спектр антибактериальной активности лекарственных форм тобрамицина — препаратов Тобрамицин Гобби и Тоби

Микроорганизмы

Минимальная подавляющая рост микроба концентрация

_(МПК), мкг/мл

Тобрами- Тоби цин- произво-Гобби дства «Гобби «Карди-Новаг нал Хелс С. А» Инк»

Микроорганизмы

Минимальная подавляющая рост микроба концентрация

_(МПК), мкг/мл_

Тобрами- Тоби цин- произво-Гобби дства «Гобби «Карди-Новаг нал Хелс С. А» Инк»

Staphylococcus spp,, чувствительные к метициллину

S. aureus ATCC 29213 0,5 1,0

S.aureus 0034 2,0 2,0

S.aureus 00121 0,5 0,5

S.aureus 0022 0,004 0,004

S.aureus 00123 0,25 0,25

S.aureus 00141 0,25 0,12

S.aureus 00132 0,008 0,008

S.epidermidis 31-4 0,016 0,008

S.epidermidis 32-20 0,03 0,03

S.epidermidis 33-25 0,03 0,03

S.epidermidis 34-75 0,03 0,016

S.epidermidis 35-81 0,03 0,03

S.epidermidis 36-83 0,016 0,016

S.epidermidis 37-100 0,12 0,12

S.epidermidis 38-105 0,004 0,004

Escherichia coli

Escherichia coli ATCC 25922 1,0 0,5

Escherichia coli L-102 4,0 4,0

Escherichia coli L-80 0,5 0,5

Escherichia coli L-6 16,0 16,0

Escherichia coli 00024 0,25 0,25

Escherichia coli 00050 0,5 0,5

Escherichia coli 000110 2,0 2,0

Escherichia coli 000123 64,0 128,0

Escherichia coli 000125 >128,0 >128,0

Klebsiella pneumoniae

Klebsiella pneumoniae 911 0,12 0,06

Klebsiella pneumoniae 1024 0,25 0,25

Klebsiella pneumoniae 1951 8,0 8,0

Klebsiella pneumoniae L-72 0,03 0,03

Klebsiella pneumoniae L-86 128,0 128,0

Klebsiella pneumoniae L-22 16,0 16,0

Klebsiella pneumoniae 0068 0,25 0,25

Klebsiella pneumoniae 0037 16,0 8,0

Proteus spp.

Proteus mirabilis L-34 0,06 0,06

Proteus mirabilis L-41 1,0 1,0

Proteus mirabilis 0083 0,06 0,06

Proteus mirabilis 00108 8,0 8,0

Proteus mirabilis 0017 16,0 8,0

Proteus vulgaris 2 0,25 0,25

Proteus vulgaris 3 0,25 0,25

Proteus vulgaris 4 0,5 0,5

Proteus vulgaris 73 0,25 0,25

Enterobacter cloacae, Serratia marcescens, Citrobacter freundii

Enterobacter cloacae 1145 0,03 0,03

Enterobacter cloacae 87 8,0 8,0

Enterobacter cloacae 142 0,25 0,5

Enterobacter cloacae 139 16,0 16,0

Enterobacter cloacae 141 16,0 16,0

Serratia marcescens 121 4,0 4,0

Serratia marcescens 145 128,0 128,0

Serratia marcescens 1089 32,0 32,0

Serratia marcescens 1325 16,0 16,0

Citrobacter freundii 116 0,5 0,5

Citrobacter freundii 115 0,5 0,5

Citrobacter freundii 138 0,12 0,12

Citrobacter freundii 117 1,0 1,0

Acinetobacter baumannii

Acinetobacter baumannii 000169 1,0 2,0

Acinetobacter baumannii 000168 16,0 16,0

Acinetobacter baumannii 000170 0,5 0,5

Acinetobacter baumannii 000171 32,0 32,0

Acinetobacter baumannii 000172 0,06 0,06

Acinetobacter baumannii 000177 64,0 64,0

Acinetobacter baumannii 000183 0,12 0,12

Acinetobacter baumannii 000184 0,5 0,5

Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 0,25 0,5

Pseudomonas aeruginosa 00014 16,0 16,0

Pseudomonas aeruginosa 00013 4,0 2,0

Pseudomonas aeruginosa 00015 0,25 0,25

Pseudomonas aeruginosa 00016 0,25 0,25

Pseudomonas aeruginosa 00017 64,0 64,0

Pseudomonas aeruginosa 000102 128,00 128,0

Pseudomonas aeruginosa 862 0,5 0,5

Pseudomonas aeruginosa 885 2,0 2,0

Pseudomonas aeruginosa 952 4,0 4,0

Pseudomonas aeruginosa 1367 >128,0 >128,0

Pseudomonas aeruginosa 2345 >128,0 >128,0

Pseudomonas aeruginosa 2508 0,5 0,5

Pseudomonas aeruginosa 1927 4,0 4,0

Pseudomonas aeruginosa 2041 16,0 16,0

Pseudomonas aeruginosa 1997 16,0 16,0

ЛИТЕРАТУРА

1. Dudley M. N, Loutit J., Griffith D. C. Aerosol antibiotics: considerations in pharmacological and clinical evaluation. Curr Opin Biotechnol 2008, 19: 637-643.

2. Ramsey B. W, Pepe M. S., Quan J. M. et al. Intermittent administration of inhaled tobramycin in patients with cystic fibrosis. Cystic Fibrosis Inhaled Tobramycin Study Group. New Engl J Med 1999; 340: 23-30.

3. Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. МУК 4.2.1890-04. М.: 2004.

4. Амелина Е. Л., Черняк А. В., Чучалин А. Г. Пульмонология. Приложение по муковисцидозу. 2006; 30—39.

5. Mesa Española de Normalización de la Sensibilidad y Resistencia a los Antimicrobianos. Recomendaciones del grupo MENSURA para la selección de antimicrobianos en el estudio de la sensibilidad y criterios para la interpretación del antibiograma. MENSURA, Madrid, Spain. 2005.