ПРЕПАРАТ ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ОБМЕННЫХ ПРОЦЕССОВ И ПОВЫШЕНИЯ ЕСТЕСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ЖИВОТНЫХ
PREPARATION FOR CORRECTING METABOLIC PROCESSES AND IMPROVING NATURAL BODY RESISTANCE IN ANIMALS

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к препаратам на основе органических кислот, обеспечивающих выраженную коррекцию обменных процессов при патологиях различного генеза и повышение резистентности организма животных.
Разработка и поиск эффективных средств для профилактики и лечения нарушений обмена веществ и повышения факторов естественной резистентности организма животных является одной из актуальных проблем современной ветеринарии. В значительной степени эта проблема специфична для промышленного ведения животноводства. Далекие от потребностей организма животных условия содержания и ухода приводят к глубоким патофизиологическим состояниям. В этом ряду ведущее место занимают патологии обмена веществ, что влечет за собой ослабление факторов естественной резистентности и повышенную чувствительность организма животных к эндогенным инфекциям. В настоящее время нарушения обмена веществ в той или иной степени наблюдаются практически у всех животных. Это обусловливает необходимость применения биологически активных добавок (БАД), оказывающих стимулирующее, метаболическое действие. Однако стимулирующие действие этих препаратов проявляется только при правильном сочетании их с электролитами, антиоксидантами. В противном случае эффект получается обратный (Мозгов И.Е. Фармакология. М.: Колос. 1979. С.205-207).
6
Применение многочисленных БАДов не лишено недостатков. Значительная часть их активных веществ, не усваиваясь в желудочно-кишечном тракте, выводится с экскрементами. В отличие от БАДов лекарственные препараты, предназначенные для инъекций, при меньшей концентрации биологически активных веществ тем не менее обладают более выраженным и более быстрым стимулирующим действием, нежели их формы, применяемые орально. С учетом имеющихся в данном направлении разработок, в качестве прототипа использовали препарат эмицидин. Препарат эмицидин - производное 3-оксидипиридина (структурный аналог витамина B) и янтарной кислоты обладает выраженными антиоксидантными свойствами. Механизм действия эмицидина заключается в его способности связывать свободные радикалы, оказывающие повреждающее действие на белки, липиды и биомембраны клеток, что является базисным фактором в патогенезе многих заболеваний, а также в процессе старения клеток и тканей организма. В настоящее время разработаны составы эмицидина, предназначенные для применения per os и для инъекций (Временное наставление по применению эмицидина 2,5% и 5% водных растворов для инъекций в порядке широкого производственного испытания в 2002-2004 гг. Минсельхоз России. Департамент ветеринарии, 2002).
Препарат эмицидин достаточно хорошо эффективен в клинике лечения заболеваний, связанных с воспалительными процессами у непродуктивных животных и для повышения продуктивности пушных зверей (патент РФ 2322052, 2008). Его фармакологический эффект может быть усилен за счет включения в состав дополнительных компонентов, хорошо сочетающихся и усиливающих ее метаболическую активность. Именно такими свойствами обладает лимонная кислота, которая является активатором янтарной кислоты в цикле трикарбоновых кислот Кребса. Комплексное соединение янтарной и лимонной кислот нашло применение в хорошо известном таблетированном препарате Лимонтар (патент РФ 2039556).
Для усиления метаболической активности янтарной кислоты и повышения факторов естественной резистентности организма животных может быть использована аскорбиновая кислота - витамин C, и метионин.
Аскорбиновая кислота (витамин C) играет ключевую роль в антиоксидантной защите организма, в том числе от окислительного стресса, являясь активатором ретикулоэндотелиальной системы, она умеренно и на длительный срок повышает устойчивость организма животных ко многим ядам эндогенного и экзогенного происхождения. Данное качество аскорбиновой кислоты очень важно при токсикозах различного генеза.
]2
Метионин относится к незаменимым аминокислотам и является «критической» аминокислотой для новорожденных животных, поскольку их пищеварительная система не может ее синтезировать из азотсодержащих веществ корма. При недостатке метионина часто наблюдается анемия, жировая и токсическая дистрофия печени. В организме метионин активирует действие ряда ферментов, гормонов, витамина B, фолиевой и аскорбиновой кислот. Многие процессы обезвреживания токсинов в печени происходят с участием метионина. Таким образом, включение метионина способно повысить гепатопротекторную и метаболическую активность препарата.
Очень важно, что аскорбиновая кислота и метионин, хорошо сочетаются с янтарной кислотой и выдерживают температурное воздействие при стерилизации автоклавированием.
Включение в состав комплексного препарата, наряду с янтарной кислотой, лимонной и аскорбиновой кислот, метионина позволит активизировать цикл трикарбоновых кислот, метаболические процессы, а также усилить защитные силы организма.
В процессе экспериментальных опытов был определен наиболее оптимальный состав компонентов препарата, обеспечивающий выраженную стимуляцию обменных процессов и усиление защитных факторов организма животных. Были созданы два варианта препарата, названные «ЯЛА» и «ЯЛА+М», следующего состава, мас.%:
«ЯЛА»
«ЯЛА+М»
Янтарная кислота 2,0-2,5
Янтарная кислота 2,0-2,5
Лимонная 0,1-0,3
Лимонная 0,1-0,3
Аскорбиновая кислота 0,2-0,4
Аскорбиновая кислота 0,2-0,4
Вода для инъекций Остальное
Метионин 0,9-1,0
Вода для инъекций Остальное
Таким образом, для приготовления нового препарата используют компоненты, широко применяющиеся в медицине и в ветеринарии, имеющие сертификаты качества. Способ получения инъекционной формы метаболического препарата на основе органических кислот и метионина заключается в растворении данных компонентов в воде для инъекций, расфасовку по флаконам и стерилизацию автоклавированием. При определении безвредности препарата установлено, что белые мыши переносили десятикратное увеличение концентрации кислот при внутрибрюшинном методе введения. Приготовление метаболического препарата.
Вариант 1. В колбу вливают 500 мл воды для инъекций, добавляют 50 г янтарной кислоты и 5 г лимонной кислоты и прогревают до полного растворения. Дробным добавлением гидроксида натрия доводят pH до 6,0. Содержимое колбы вливают в биобутыль и добавляют воду для инъекций до объема, равного 5 литрам.
Вариант 2. В колбу вливают 500 мл воды для инъекций, добавляют 100 г янтарной кислоты, 10 г лимонной кислоты, 15 г аскорбиновой кислоты и прогревают до полного растворения. Дробным добавлением гидроокиси натрия доводят рН до 6,0. Содержимое колбы вливают в биобутыль и добавляют воду для инъекций до объема, равного 5 литрам.
Вариант 3. В колбу вливают 500 мл воды для инъекций, добавляют 125 г янтарной кислоты, 15 г лимонной кислоты, 20 г аскорбиновой кислоты, 45 г метионина и прогревают до полного растворения. Дробным добавлением гидроокиси натрия доводят pH до 6,0. Содержимое колбы вливают в биобутыль и добавляют воду для инъекций до объема, равного 5 литрам.
Приготовленные по вышеуказанным вариантам препараты расфасовывают по флаконам емкостью от 20 мл до 200 мл и осуществляют стерилизацию автоклавированием в режиме 1,0-1,1 атм. Продолжительность автоклавирования зависит от объема флакона. Автоклавирование не изменяет физико-химических свойств препарата. Полученные варианты препаратов обеспечивают выраженное метаболическое действие и стимуляцию защитных сил организма, что подтверждается следующими примерами:
Для проведения опытов были приготовлены растворы органических кислот по вариантам 1, 2 и 3.
Во всех растворах pH составляла 6,0. Для нейтрализации повышенной кислотности использовали гидроксид натрия.
Пример №1. В данном опыте определена дезинтоксикационная активность вышеуказанных растворов органических кислот. Объектом для проведения опытов служили белые мыши (самцы) в количестве 35 особей массой 18-20 г, которым подкожно ввели заведомо смертельную дозу четыреххлористого углерода (ССЦ). Спустя 30 минут этим мышам внутрибрюшинно в объеме 0,25 мл ввели сравниваемые составы органических кислот и эмицидин 2,5% концентрации. Результаты теста на выживаемости белых мышей представлены в таблице 1.
Таблица 1
Влияние растворов органических кислот и эмицидина на выживаемость белых мышей при моделировании смертельного токсикоза ССЦ.
Препарат
Гибель мышей в период
Выжило
3-6 часов
7-10 часов
Кол-во
%
Раствор №1
4
1
2
28,6
Раствор №2
3
1
3
43,0
Раствор №3
3
-
4
57,1
Эмицидин, 2,5%
3
-
4
57,1
Физраствор
6
1
-
-
Таким образом, в данном опыте установлено, что препараты, содержащие 2,0-2,5% янтарной кислоты, обеспечивают 43,0-57,1% выживаемости белых мышей при смертельной интоксикации ССЦ.
Пример №2. Метаболическая активность раствора органических кислот.
Оценку метаболической активности испытуемых растворов органических кислот провели в сравнении с эмицидином на коровах с выраженным нарушением обмена веществ с явлениями алиментарного ацидоза и кетоза. При этом в каждую группу отбирались коровы, имевшие близкие фоновые показатели содержания резервной щелочности и кетоновых тел. Препараты были введены однократно, внутримышечно, в объеме 10,0 мл.
Таблица 2
Влияние растворов органических кислот и эмицидина на метаболические процессы при алиментарном ацидозе и кетозе коров.
№
Состав препарата
Белок, г/л
Резервная щелочность, Об.% CO2
Кет. тела, мг/<sub>100 мл</sub>
Кальций, ммоль/л
Фосфор, ммоль/л
при ацидозе
88,6±2,47
39,6±2,75
5,39±0,82
2,34±0,18
2,08±0,14
1
Раствор №1
85,3±2,36
44,2±2,46
4,74±0,48
2,38±0,43
2,02±0,24
88,2±2,48
39,8±2,57
4,93±0,67
2,29±0,17
2,07±0,26
87,3±1,96
37,2±2,42
5,35±0,26
2,48±0,17
2,11±0,16
2
Раствор №2
84,2±2,04
45,6±2,14
4,27±0,18
2,75±0,22
2,14±0,17
85,1±2,12
40,1±2,12
4,39±0,36
2,39±0,16
2,10±0,13
89,4±1,72
38,7±2,38
5,48±0,29
2,27±0,19
1,98±0,16
3
Раствор №3
82,6±1,85
49,2±2,56
4,26±0,22
2,79±0,28
1,96±0,14
83,6±2,02
44,3±2,24
4,32±0,28
2,59±0,16
1,93±0,12
87,9±2,38
37,9±2,26
5,32±0,36
2,32±0,13
2,02±0,14
4
Эмицидин, (ЯК - 2,5%)
12,4±1,72
48,4±2,58
4,28±0,26
2,74±0,26
1,95±0,10
84,3±2,14
42,7±2,38
4,55±0,32
2,42±0,18
2,01±0,15
при кетозе
89,8±2,54
34,2±2,36
14,29±1,62
2,08±0,14
2,06±0,12
1
Раствор №3
86,3±2,36
39,8±2,17
12,24±0,96
2,36±0,16
2,04±0,16
88,7±2,82
38,2±2,18
12,48±1,24
2,22±0,14
2,02±0,11
88,6±2,54
36,3±2,14
14,26±1,33
2,11±0,13
2,14±0,16
2
Эмицидин, 2,5%
86,5±2,73
39,2±2,15
11,58±1,72
2,38±0,14
2,09±0,18
88,4±2,44
36,8±2,17
14,12±1,02
2,08±0,11
2,11±0,14
Примечание: верхняя строк - фоновые показатели;
средняя строка - на 7 сутки;
нижняя строка - на 14 сутки; количество коров в группе по 5 особей.
2
По результатам биохимических исследований крови выявлена выраженная тенденция роста щелочного резерва, что связано с улучшением функциональной активности работы печени. При этом введение раствора №3 органических кислот и эмицидина обеспечило полное устранение ацидоза (показатель резервной щелочности >46 об.% CO). Наблюдаемое снижение показателя резервной щелочности на 14 сутки проходило менее выражено у коров, которым вводился состав раствора, содержащий 2,5% ЯК, 0,3% лимонной кислоты, 0,4% аскорбиновой кислоты по отношению к животным, которым применяли эмицидин и раствор с более низкой концентрацией органических кислот. Это указывало на то, что состав органических кислот с 2,5% концентрацией по ЯК обладает более выраженным действием на метаболические процессы. Достигаемый эффект нормализации кислотно-щелочного баланса благоприятным образом отразился на белковом обмене (устранение гиперпротеинемии) и улучшении кальциево-фосфорного соотношения (увеличение показателя содержания кальция), снижения накопления кетоновых тел. Следует отметить менее выраженную, по сравнению с эмицидином, тенденцию роста кетонурии на 14 сутки после введения препаратов. Таким образом, состав органических кислот 2,5% концентрацией по ЯК обеспечивает выраженный метаболический эффект при алиментарном ацидозе и кетозе. Устранение явлений ацидоза и кетонурии растворами органических кислот было более продолжительным по сравнению с эмицидином, это свидетельствовало об усилении метаболической активности янтарной кислоты, достигнутой за счет включения в состав раствора лимонной и аскорбиновой кислот.
Пример 3. Метаболическая активность растворов органических кислот.
Определение метаболической активности растворов органических кислот было проведено в опытах на поросятах 15-20 дневного возраста с клиническими признаками гипотрофии. При этом в испытуемый состав №3 органических кислот дополнительно ввели метионин в количестве 0,9%. Препараты вводились внутримышечно, однократно, в объеме 2,0 мл. Результаты биохимических исследований крови подопытных поросят (в каждой группе было по 5 особей) представлены в таблице 3.
Таблица 3
Влияние растворов органических кислот на метаболические процессы поросят-гипотрофиков.
Препарат
Гемоглобин,г/л
Эритроциты, млн/см<sup>3</sup>
Белок, г/л
Кальций ммоль/л
Фосфор ммоль/л
Раствор №3
<img file="00000001.tif" he="11" wi="27" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000002.tif" he="11" wi="18" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000003.tif" he="9" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000004.tif" he="10" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000005.tif" he="11" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
Раствор №3 в комплексе с метионином
<img file="00000006.tif" he="11" wi="28" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000007.tif" he="11" wi="20" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000008.tif" he="11" wi="22" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000009.tif" he="10" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000010.tif" he="11" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
Эмицидин
<img file="00000011.tif" he="11" wi="28" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000012.tif" he="11" wi="20" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000013.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000014.tif" he="10" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000015.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
Примечание: числитель - фоновые показатели;
знаменатель - показатели на 7 сутки
По результатам биохимического теста установлено более выраженное влияние раствора органических кислот с добавлением метионина на гемопоэз (количество эритроцитов и насыщенность их гемоглобином), белковый и минеральный обмен по сравнению с эмицидином и раствором без добавления метионина.
Таблица 4
Влияние растворов органических кислот на факторы естественной резистентности поросят-гипотрофиков
Препарат
Фагоцитарная активность нейтрофилов, %
Фагоцитарное число
Бактерицидная активность, %
Лизоцимная активность, мкг/мл
Раствор №3
<img file="00000016.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000017.tif" he="11" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000018.tif" he="11" wi="22" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000019.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
Раствор №3 в комплексе с метионином
<img file="00000020.tif" he="11" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000021.tif" he="11" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000022.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000023.tif" he="11" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
Эмицидин, 2,5%
<img file="00000024.tif" he="11" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000025.tif" he="11" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000026.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000027.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
Примечание: числитель - фоновые показатели;
знаменатель - показатели на 7 сутки
По результатам иммунологического теста установлено, что базовый раствор органических кислот не уступает эмицидину, а при добавлении в него метионина оказывает более выраженное влияние на повышение факторов естественной резистентности поросят-гипотрофиков.
При оценке ростовой активности на 30 сутки после применения препаратов установлено, что среднесуточный прирост живой массы у поросят первой группы составил 332 г; второй - 347 г; третьей - 322 г.
Таким образом, результаты проведенных опытов и иммунобиохимических исследований свидетельствуют о том, что растворы органических кислот, при парентеральном методе введения оказывают хорошо выраженное стимулирующее действие на метаболические процессы, систему гемопоэза, состояние естественной резистентности организма.