Способ получения стерильной лиофилизированной добавки из личинок и куколок трутней
PRODUCTION METHOD FOR STERILE LYOPHILISED ADDITIVE FROM DRONE LARVAE AND PUPAE

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам получения стерильных лиофилизированных добавок.
Уровень техники
Известен способ приготовления препарата для стимуляции организма животных из личинок трутней, включающий сбор личинок, их гомогенезацию с добавлением стабилизирующей среды, при этом перед гомогенезацией личинки трутней замораживают при температуре (-4; -5°С) в течение 12-14 часов, затем размораживании до температуры +18°С и гомогенезируют в течение 3-5 минут, при этом в качестве стабилизирующей среды используют 5% раствор глюкозы в соотношении 1:10 с добавлением 5% раствора хлороформа или 2% салициловой кислоты с последующей сублимацией, причем сублимацию проводят в вакуумной камере при температуре подогрева полок до 30°-45°С, при этом достижении температуры препарата 20-22°С температуру полок снижают до 25°С и проводят досушивание в течении 22-24 часов (см. «Заготовка личинок трутней», В.И. Лебедев, М.А. Легович, НИИ пчеловодства, ж. Пчеловодство, №3, 2003 г., с. 52-54).
Недостатком данного способа является непродолжительное время хранения препарата.
Известен способ и средство повышения работоспособности спортсменов, включающее назначение комплексного препарата Апимикроэлфит, содержащего сухие экстракты элеутерококка, солодкового корня, шиповника, настойку прополиса, эстифан, силимар и мед, при следующих соотношениях компонентов, мас. %: экстракт элеутерококка сухой 0,6; экстракт солодкового корня сухой 0,3; экстракт шиповника сухой 0,3; эстифан 0,3; силимар 0,3; настойка прополиса 0,3; мед натуральный остальное. Средство вводят в предсоревновательный и соревновательный период в течение 7-10 дней по 1 чайной ложке, разведенной в 0,5 ст. воды, 2-3 раза в день, всего 150-200 г на курс, причем проводят 2-3 курса с интервалом 7-10 дней (см. пат. РФ №2104013, кл. A61K 35/64, A61K 35/78, опубликовано: 10.02.1998).
Недостатком данного способа является сложный способ приготовления, высокая стоимость компонентов и длительный курс применения.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятым авторами за прототип является способ приготовления лиофилизированной биологически активной добавки для животных, включающий сбор 9-10 дневных личинок трутней, их замораживание, хранение до использования с последующей гомогенизацией и фасованием, при этом в нем дополнительно используют тыкву и дистиллированную воду. Тыкву очищают, режут на мелкие кусочки, замораживают при температуре -(18-20)°С в течение 22-24 часов, затем размораживают до температуры +(17-18)°С в течение 9-11 минут, гомогенизируют с последующим соединением с гомогенатом личинок трутней, причем замораживание личинок трутней проводят при температуре -(18-20)°С, а гомогенизацию личинок трутней и тыквы проводят до размеров частиц 0,5-1,0 мм. Далее, перед фасованием, проводят смешивание гомогената в соотношении 1 часть личинок трутней 4 части тыквы и 5 частей дистиллированной воды с последующим проведением лиофильной сушки и сублимации с соблюдением определенных параметров проведения этих операций (см. пат. РФ №2435433, кл. A23K 1/00, опубл. 10.12.2011).
Недостатком данного способа является то, что данный препарат нестерилен, обладает недостаточно высокими стимулирующими свойствами.
Раскрытие изобретения
Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа получения стерильной кормовой добавки из личинок и куколок трутней пчел для повышения половой активности овец, перенесших протозойные болезни (анаплазмоз).
Технический результат, который может быть достигнут с помощью предлагаемого изобретения, сводится к повышению половой активности животных и повышению резистентности организма, увеличению живой массы тела.
Технический результат достигается с помощью способа получения стерильной лиофилизированной добавки из личинок и куколок трутней, включающего сбор личинок и куколок трутней до 20-дневного возраста, их замораживание, хранение (не более 10 мес), размораживание с последующей гомогенизацией, автоклавированием, фасованием и лиофильной сушкой, причем замораживание личинок и куколок трутней проводят при температуре -(18-20)°С, а гомогенизацию проводят в течение 1-3 минут при 3-4 тыс./оборотах в мин. При этом перед фасованием к гомогенату добавляют дистиллированную воду в соотношении 1:1 и сахарозно-желатиновую среду в соотношении 2 части полученной суспензии - 1 часть среды с последующей повторной гомогенизацией на коллоидной мельнице и помещением в автоклав при +(118-122)°С на 43-45 минут. При этом перед лиофильной сушкой проводят замораживание расфасованного во флаконы гомогената в холодильнике, по крайней мере, с пятиполочной этажеркой, предварительно охлажденной до -(44-45)°С, при этом после загрузки устанавливают температуру заморозки -(19-20)°С и поддерживают эту температуру 5 часов, а затем устанавливают температуру -(44-45)°С, которую поддерживают 9 часов, с общим временем заморозки в течение 13-14 часов, с последующей переустановкой этажерки с флаконами в сублимационную камеру с установленной температурой подогрева +(20-21)°С, с последующим увеличением температуры подогрева на 5°С с +(20)°С до +(30)°С, с поддержанием такой температуры до окончания сушки, а досушивание проводят в течение 44-45 часов после достижения в продукте температуры +22°С, а лиофильную сушку проводят в вакууме глубиной (≥8 mV) при общем времени досушивания 98-100 часов.
Результат повышения половой активности достигается с помощью введения в добавку личинок и куколок трутней, которые, за счет входящих в их состав компонентов, стимулируют центральные механизмы регуляции образования андрогенов, способствуют восстановлению нарушенной половой функции и повышению полового влечения. Эти компоненты способствуют ускоренному восстановлению биохимических характеристик крови, улучшают общее состояние и аппетит (Немцов С.В., Зуева О.Ю., Хисматуллин М.Р., Лариков В.В., Варламов В.П., 2001; Машенков О.Н., 2005).
В высушенных личинках и куколках пчел содержится 28 аминокислот, в том числе 9 незаменимых (см. «Биологическая и пищевая ценность порошков «Билар»», А.И. Черкасова, И.А. Прохода, ж. «Пчеловодство», №2, 2005, с. 50-51). В личинках трутней содержится высокий уровень углеводов, минеральных веществ, а также биологически активных веществ: большое количество функциональных групп ферментов, а также гормонов-тестостероидов (см. «Использование трутневого расплода в косметических целях», А.Г. Бачинский, А.Н. Децина, ж. «Пчеловодство», №5, 1998 г., с. 54) прогестерона экстрадиола.
Сущность приготовления стерильной лиофилизированной добавки из юных фаз трутней
Препарат изготавливают из личинок и куколок трутней.
3
3
На пасеке проводят сбор личинок и куколок трутней до 20-дневного возраста вместе с трутневым молочком в чистую пластмассовую посуду, затем помещают в морозильную камеру при температуре -(18-20)°С (срок хранения не должен превышать 10 мес). Перед использованием биологический материал размораживают при комнатной температуре и гомогенизируют в блендере 1-3 мин при 3-4 тыс. оборотах/минуту. К гомогенату добавляют дистиллированную воду равного объема (соотношение 1:1). К полученной суспензии добавляют сахарозно-желатиновую среду (10:2) в соотношении 2 части суспензии - 1 часть среды. Полученную смесь гомогенизируют на коллоидной мельнице, помещают в автоклав и автоклавируют при +(118-122)°С в течение 43-45 минут. Гомогенат расфасовывают во флаконы 100 см по 40 см и загружают в холодильник НС 700/50 с пятиполочной этажеркой, предварительно охлажденной до -(44-45)°С. После загрузки устанавливают температуру заморозки -(19-20)°С и поддерживают эту температуру 5 часов. Затем устанавливают температуру -(44-45)°С, которую поддерживают 9 часов при общем времени заморозки 14 часов. Этажерку с флаконами переустанавливают в сублимационную камеру типа LZ-45, через 1 час после создания в сублимационной камере вакуума необходимой глубины (≥8 mV) устанавливают температуру подогрева на +(20-21)°С, через 1 час увеличивают температуру подогрева на 5°С до +25°С; после достижения температуры продукта +25°С температуру увеличивают до +30°С, которую поддерживают до окончания лиофильной сушки. Досушивание проводят в течение 44-45 часов после достижения в продукте температуры +22°С, при общем времени сушки 98-100 часов.
После окончания лиофильной сушки флаконы с препаратом выгружают, укупоривают пробками и обкатывают колпачками.
Осуществление изобретения
Примеры конкретного приготовления стерильной лиофилизированной добавки из юных фаз трутней
3
3
Пример №1. На пасеке проводят сбор личинок и куколок трутней до 20-дневного возраста в чистую пластиковую посуду, затем помещают в морозильную камеру при - 18°С и хранят до момента изготовления (но не более 10 мес). Впоследствии размораживают их при комнатной температуре в течение 6-8 часов и гомогенизируют в блендере при 3 тыс/оборотов в минуту 5 минут. К гомогенату добавляют дистиллированную воду в соотношении 1:1, перемешивают, разливают во флаконы емкостью 100 см по 40 см, и гомогенат во флаконах загружают в холодильник НС 700/50 с пятиполочной этажеркой, предварительно охлажденной до -45°С. После загрузки устанавливают температуру заморозки -20°С и поддерживают эту температуру 5 часов. Затем устанавливают температуру -45°С, которую поддерживают 9 часов при общем времени заморозки 14 часов. Этажерку с флаконами переустанавливают в сублимационную камеру типа LZ-45, через 1 час после создания в сублимационной камере вакуума необходимой глубины (≥8 mV) устанавливают температуру подогрева на +20°С, через 1 час увеличивают температуру подогрева на 5°С до +25°С; после достижения температуры продукта +25°С температуру увеличивают до +30°С, которую поддерживают до окончания лиофильной сушки. Досушивание проводят в течение 45 часов после достижения в продукте температуры +22°С, при общем времени сушки 100 часов.
После окончания лиофильной сушки флаконы с препаратом выгружают, укупоривают пробками и обкатывают колпачками.
При этом способе получили не вполне сформировавшуюся таблетку, которая быстро рассыпалась. При разбавлении водой получали суспензию с содержанием крупных включений. При посеве на жидкие и плотные питательные среды наблюдали активный рост микроорганизмов.
3
3
Пример №2. Сбор и хранение личинок и куколок трутней проводят аналогично первому примеру. В отличие от первого примера, после гомогенизации к гомогенату добавляют дистиллированную воду в соотношении 1:1, к полученной суспензии добавляют сахарозно-желатинизированную среду в соотношении 10:2. Затем двукратно гомогенизируют на коллоидной мельнице PUCCOLOIDTECHNIK типа JV14, разливают во флаконы емкостью 100 см по 40 см и подвергают лиофильной сушке, как в примере 1. После окончания сушки флаконы с препаратом также выгружают, укупоривают пробками и обкатывают колпачками.
При этом способе получали сформировавшуюся таблетку светло-желтого цвета, которая легко растворялась в воде без крупных частиц. Однако при посеве на жидкие и плотные питательные среды так же, как и в первом примере, наблюдали активный рост микроорганизмов.
Пример №3. Сбор, хранение и подготовку личинок и куколок проводят аналогично примеру 2, но после двукратной гомогенизации на коллоидной мельнице и розлива по флаконам проводят автоклавирование гомогената при 120°С в течение 45 минут и подвергают лиофильной сушке по тому же режиму, что и в примере 2.
При этом формировалась светло-желтого цвета таблетка, которая легко растворялась в воде. При посеве на бактериологические среды роста микроорганизмов не наблюдали, препарат стерилен.
Пример №4. Сбор, хранение и подготовку личинок и куколок проводят аналогично примеру 3, но после двукратной гомогенизации на коллоидной мельнице и розлива по флаконам проводят автоклавирование гомогената при 118°С в течение 50 минут и подвергают лиофильной сушке по тому же режиму, что и в примере 3.
При этом формировалась светло-желтого цвета таблетка, которая легко растворялась в воде. При посеве на бактериологические среды роста микроорганизмов не наблюдали, препарат стерилен.
Пример №5. Сбор, хранение и подготовку личинок и куколок проводят аналогично примеру 3, но после двукратной гомогенизации на коллоидной мельнице и розлива по флаконам проводят автоклавирование гомогената при 120°С в течение 120 минут и подвергают лиофильной сушке по тому же режиму, что и в примере 3.
При этом формировалась коричневого цвета таблетка, которая растворялась в воде, но при этом образовывалось незначительное количество коричневого осадка. При посеве на бактериологические среды роста микроорганизмов нее наблюдали, препарат стерилен.
Таким образом, наиболее оптимальными являются примеры №3 и №4 приготовления стерильной лиофилизированной добавки из личинок и куколок трутней, при котором получается легко растворимая в воде и стерильная биологически активная добавка, которую в дальнейшем подвергли испытаниям.
Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:
- лиофилизированная добавка повышает половую активность самцов и самок;
- лиофилизированная добавка способствует повышению резистентности организма и увеличению массы тела;
- не обладает аллергическим действием;
- обладает стерильностью;
- имеет длительный срок хранения (2 года).
При конкретном применении разработанной добавки баранам-производителям при пониженной половой активности, обусловленной анаплазмоносительством, было отмечено увеличение показателя спермопродукции (таблица 1).
Анализ данных спермопродукции (объем эякулята, активность, густота) показал, что у баранов-производителей подопытной группы объем эякулята в конце опыта был больше на 0,8-1,3 мл, чем у животных контрольной группы, активность спермиев была выше, чем в контрольной группе, на 2 балла, концентрация спермиев в одном миллилитре у баранов подопытной группы превышала показатели животных контрольной группы на 2,4 млн. На пике активности бараны-производители подопытной группы осеменяли более 20 овец, а контрольной группы - только 6-10 овец, пришедших в охоту (рисунок 1).
Таким образом, установлено позитивное влияние лиофилизированного препарата из личинок и куколок трутней пчел на качественные и количественные характеристики спермопродукции у баранов-производителей при анаплазмоносительстве. Полученные результаты дают основание предполагать позитивное влияние препарата на спермиогенез за счет дополнительно получаемых аминокислот, витаминов, микроэлементов.