АНТИТЕЛА, СКОНСТРУИРОВАННЫЕ НА ОСНОВЕ ЦИСТЕИНОВ, И ИХ КОНЪЮГАТЫ

1. Сконструированное на основе цистеина антитело, содержащее одну или несколько свободных цистеиновых аминокислот, имеющих величину тиоловой реактивности в пределах от 0,6 до 1,0, где указанное сконструированное на основе цистеина антитело получают способом, включающим замену одного или нескольких аминокислотных остатков родительского антитела цистеином.
2. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, где указанное сконструированное на основе цистеина антитело более активно реагирует с реагентом, взаимодействующим с тиолом, чем родительское антитело.
3. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, где указанный способ дополнительно включает определение тиоловой реактивности сконструированного на основе цистеина антитела путем проведени  реакции взаимодействи  указанного сконструированного на основе цистеина антитела с реагентом, взаимодействующим с тиолом, где указанное сконструированное на основе цистеина антитело более активно реагирует с реагентом, взаимодействующим с тиолом, чем родительское антитело.
4. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, где один или несколько свободных цистеиновых аминокислотных остатков присутствуют в легкой цепи.
5. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, где один или несколько свободных цистеиновых аминокислотных остатков присутствуют в легкой цепи в положени х, выбранных из: L-10-L-20; L-38-L-48; L-105-L-115; L-139-L-149 и L-163-L-173.
6. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, включающее одну или несколько последовательностей, выбранных из
(i) SLASASCGDRVT (SEQ ID NO:17)
(ii) QKPGKCPKLLI (SEQ ID NO:18)
(iii) EIKRTCAAPSV (SEQ ID NO:19)
(iv) TCAAPCVFIFPP (SEQ ID NO:20)
(v) FIFPPCDEQLK (SEQ ID NO:21)
(vi) DEQLKCGTASV (SEQ ID NO:22)
(vii) FYPRECKVQWK (SEQ ID NO:23)
(viii) WKVDNCLQSGN (SEQ ID NO:24)
(ix) ALQSGCSQESV (SEQ ID NO:25)
(х) VTEQDCKDSTY (SEQ ID NO:26) и
(xi) GLSSPCTKSFN (SEQ ID NO:27)
7. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, включающее одну или несколько последовательностей, выбранных из
(i) NWIRQCPGNK (SEQ ID NO:40)
(ii) LNSCTTEDTAT (SEQ ID NO:41)
(iii) GQGTLVTVSACSTKGPSVFPL (SEQ IDNO:42)
(iv) HTFPCVLQSSGLYS (SEQ ID NO:43) и
(v) HTFPACLQSSGLYS (SEQ ID NO:44)
8. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, включающее одну или несколько последовательностей, выбранных из
(i) FLSVSCGGRVT (SEQ ID NO:45)
(ii) QKPGNCPRLLI (SEQ ID NO:46)
(iii) EIKRTCAAPSV (SEQ ID NO:47)
(iv) FYPRECKVQWK (SEQ ID NO:48) и
(v) VTEQDCKDSTY (SEQ ID NO:49).
9. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, где один или несколько свободных цистеиновых аминокислотных остатков присутствуют в т желой цепи.
10. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.9, где один или несколько свободных цистеиновых аминокислотных остатков присутствуют в т желой цепи положени х, выбранных из: H-35-H-45; H-83-H-93; H-114-H-127 и H-170-H-184.
11. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, включающее одну или несколько последовательностей, выбранных из
(i) WVRQCPGKGL (SEQ ID NO:9)
(ii) NSLRCEDTAV (SEQ ID NO: 10)
(iii) LVTVCSASTKGPS (SEQ ID NO: 11)
(iv) LVTVSCASTKGPS (SEQ ID NO: 12)
(V) LVTVSSCSTKGPS (SEQ ID NO: 13)
(vi) LVTVSSACTKGPS (SEQ ID NO: 14)
(vii) HTFPCVLQSSGLYS (SEQ ID NO: 15) и
(viii) HTFPAVLQCSGLYS (SEQ ID NO: 16).
12. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.9, где один или несколько свободных цистеиновых аминокислотных остатков присутствуют в Fc-области т желой цепи в положени х, выбранных из: H-268-H-291; H-319-H-344; H-370-H-380 и H-395-H-405.
13. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, включающее одну или несколько последовательностей, выбранных из
(i) HEDPECKFNWYVDGVEVHNAKTKPR (SEQ ID NO:29)
(ii) HEDPEVKFNWYCDGVEVHNAKTKPR (SEQ ID NO:30)
(iii) HEDPEVKFNWYVDGCEVHNAKTKPR (SEQ ID NO:31)
(iv) HEDPEVKFNWYVDGVECHNAKTKPR (SEQ ID NO:32)
(v) HEDPEVKFNWYVDGVEVHNCKTKPR (SEQ ID NO:33)
(vi) YKCKVCNKALP (SEQ ID NO:34)
(vii) IEKTICKAKGQPR (SEQ ID NO:35)
(viii) IEKTISKCKGQPR (SEQ ID NO:36)
(ix) KGFYPCDIAVE (SEQ ID NO:37) и
(х) PPVLDCDGSFF (SEQ ID NO:38).
14. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, где один или несколько свободных цистеиновых аминокислотных остатков выбраны из остатков, присутствующих в положени х вариабельной области т желой цепи или легкой цепи.
15. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, где один или несколько свободных цистеиновых аминокислотных остатков выбраны из остатков, присутствующих в положени х константной области.
16. Антитело по п.1, где величина указанной тиоловой реактивности составл ет в пределах от 0,7 до 1,0.
17. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, где величина указанной тиоловой реактивности составл ет в пределах от 0,8 до 1,0.
18. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, полученное способом, включающим
(i) мутагенез последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей указанное сконструированное на основе цистеина антитело;
(ii) экспрессию указанного сконструированного на основе цистеина антитела; и
(iii) выделение и очистку указанного сконструированного на основе цистеина антитела.
19. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.18, где указанным мутагенезом  вл етс  сайт-направленный мутагенез.
20. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.18, где указанное сконструированное на основе цистеина антитело экспрессируетс  на вирусной частице, выбранной из фаговой или фагмидной частицы.
21. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.18, полученное способом, включающим
(i) реакцию взаимодействи  сконструированного на основе цистеина антитела с реагентом, обладающим аффинностью по отношению к реакционноспособному тиолу, с получением аффинно меченного антитела, сконструированного на основе цистеина; и
(ii) определение уровн  св зывани  указанного аффинно меченного антитела, сконструированного на основе цистеина, со средой дл  захвата.
22. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.21, где указанный реагент, обладающий аффинностью к реакционноспособному тиолу, включает биотиновую молекулу.
23. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.22, где указанный реагент, обладающий аффинностью к реакционноспособному тиолу, включает малеимидную молекулу.
24. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.21, где указанна  среда дл  захвата содержит стрептавидин.
25. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, где указанным родительским антителом  вл етс  гибридный белок, содержащий альбумин-св зывающий пептид (ABP).
26. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.25, где ABP содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5.
27. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, где указанное родительское антитело выбрано из моноклонального антитела, биспецифического антитела, химерного антитела, человеческого антитела и гуманизованного антитела
28. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.27, где указанным родительским антителом  вл етс  huMAb4D5-8 (трастузумаб).
29. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.27, где указанным родительским антителом  вл етс  анти-EphB2R антитело.
30. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.27, где указанным родительским антителом  вл етс  анти-MUC16 антитело.
31. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, содержащее аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:28 и SEQ ID NO:39.
32. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, где указанным родительским антителом  вл етс  интактное антитело, выбранное из IgA, IgD, IgE, IgG и IgM.
33. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.32, где IgG выбран из подклассов IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA и IgA2.
34. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, где указанным родительским антителом  вл етс  фрагмент антитела.
35. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.34, где указанным фрагментом антитела  вл етс  Fab-фрагмент.
36. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.35, где указанным Fab-фрагментом  вл етс  hu4D5Fabv8.
37. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.36, где один или несколько аминокислотных остатков hu4D5Fabv8, замененных цистеином, выбраны из L-V15, L-A43, L-V110, L-A144, L-S168, H-A40, H-A88, H-S119, H-S120, H-A121, H-S122, H-A175 и H-S179.
38. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1 где указанное сконструированное на основе цистеина антитело или родительское антитело св зываетс  с одним или несколькими рецепторами (1)-(36), а именно
(1) BMPR1B (рецептор белка морфогенеза кости типа IB, Genbank рег.№ NM_001203);
(2) Е16 (LAT1, SLC7A5, Genbank рег.№ NM_003486);
(3) STEAP1 (шестидоменный трансмембранный эпителиальный антиген предстательной железы, Genbank рег.№ NM_012449);
(4) 0772Р (СА125, MUC16, Genbank рег.№ AF361486);
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, мегакариоцитарный потенцирующий фактор, мезотелин, Genbank рег.№ NM_005823);
(6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, член 2 семейства растворимых носителей 34 (фосфат натри ), натрий-зависимый фосфат-перенос щий белок 3b типа II, Genbank рег.№ NM_006424);
(7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, семафорин 5b Hlog, сема-домен, семидоменные повторы тромбоспондина (типа 1 и подобный типу 1), трансмембранный домен (ТМ) и короткий цитоплазматический домен (семафорин) 5В, Genbank рег.№ АВ040878);
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, С530008О16Rik, кДНК RIKEN 2700050C12, кДНК гена RIKEN 2700050C12, Genbank рег.№ AY358628);
(9) ETBR (рецептор эндотелина типа В, Genbank рег.№ AY275463);
(10) MSG783 (RNF124, гипотетический белок FLJ20315, Genbank рег.№ NM_017763);
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, ген 1, ассоциированный с раком предстательной железы, белок 1, ассоциированный с раком предстательной железы, шестидоменный трансмембранный эпителиальный антиген предстательной железы 2, шестидоменный трансмембранный белок предстательной железы, Genbank рег.№ AF455138);
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, рецептор, быстрый потенциал-зависимый катионный канал, член 4 подсемейства М, Genbank рег.№ NM_017636);
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, фактор роста, происход щий от тератокарциномы, Genbank рег.№ NP_003203 или NM_003212);
(14) CD21 (CR2 (рецептор комплемента 2) или C3DR (C3d/рецептор вируса Эпштейна-Барра) или Hs.73792, Genbank рег.№ M26004);
(15) CD79b (CD79В, CD79β, IGb (бета-белок, св занный с иммуноглобулином), В29, Genbank рег.№ NM_000626);
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (фосфатазный  корный белок 1а, содержащий домен SH2), SPAP1B, SPAP1C, Genbank рег.№ NM_030764);
(17) HER2 (Genbank рег.№ M11730);
(18) NCA (Genbank рег.№ М18728);
(19) MDP (Genbank рег.№ ВC017023);
(20) IL20Rα (Genbank рег.№ AF184971);
(21) Brevican (Genbank рег.№ AF229053);
(22) EphB2R (Genbank рег.№ NM_004442);
(23) ASLG659 (Genbank рег.№ AX092328);
(24) PSCA (Genbank рег.№ AJ297436);
(25) GEDA (Genbank рег.№ AY260763);
(26) BAFF-R (рецетор фактора активации В-клеток, рецептор 3 BlyS, BR3, Genbank рег.№ NP_443177.1);
(27) CD22 (CD22-В-изоформа В-клеточного рецептора, Genbank рег.№ NP-001762.1);
(28) CD79a (CD79A, CD79α, св занный с иммуноглобулином альфа-белок, В-клетко-специфический белок, который ковалентно взаимодействует с Ig бета (CD79B) и образует комплекс с молекулами IgM на поверхности клеток, передает сигнал, участвующий в дифференцировке В-клеток, Genbank рег.№ NP_001774.1);
(29) CXCR5 (рецептор 1 лимфомы Беркитта, св занный с G-белком рецептор, который активируетс  хемокином CXCL13, обеспечивает миграцию лимфоцитов и гуморальную защиту, а также играет определенную роль в инфицировании вирусом ВИЧ-2, и, веро тно, в развитии СПИД'а, лимфомы, миеломы и лейкоза, Genbank рег.№ NP_001707.1);
+
(30) HLA-DOB (бета-субъединица молекулы МНС класса II (антиген Ia), котора  св зываетс  с пептидами и презентирует их CD4-Т-лимфоцитам; Genbank рег.№ NP_002111.1);
(31) Р2Х5 (ионный канал, открываемый лигандом пуринергического рецептора Р2Х 5; ионный канал, открываемый внеклеточным АТР, может участвовать в синаптической передаче и в нейрогенезе, а его дефицит может играть определенную роль в патофизиологии идиопатической дисфункции мочевого пузыр ,); Genbank рег.№ NP_002552.2);
(32) CD72 (антиген CD72 линии В-клеточной дифференцировки, Lyb-2, Genbank рег.№ NP_001773.1);
(33) LY64 (лимфоцитарный антиген 64 (RP105), мембранный белок семейства богатых лейцином повторов (LRR) типа I, который регулирует активацию и апоптоз В-клеток, и потер  его функции ассоциируетс  с прогрессированием заболевани  у пациентов с системной красной волчанкой; Genbank рег.№ NP_005573.1);
(34) FcRH1 (Fc-рецептор-подобный белок 1, предполагаемый рецептор дл  Fc-домена иммуноглобулина, который содержит Ig-подобные домены типа С2 и домены ITAM, может играть определенную роль в дифференцировке В-лимфоцитов; Genbank рег.№ NP_443170.1);
(35) IRTA2 (ассоциированный с транслокацией рецептор суперсемейства иммуноглобулина 2, предполагаемый иммунорецептор, который, возможно, играет определенную роль в развитии В-клеток и лимфомагенезе; в некоторых злокачественных В-клетках наблюдаетс  нарушение регул ции гена посредством транслокации; Genbank рег. No. NP_112571.1); и
(36) TENB2 (предполагаемый трансмембранный протеогликан, родственный семейству факторов роста EGF/герегулинов и фоллистатину; Genbank рег. AFl79274).
39. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, где указанное антитело ковалентно св зано с молекулой лекарственного средства.
40. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.1, где указанное антитело ковалентно св зано с меткой дл  захвата, с детектируемой меткой или с твердым носителем.
41. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.40, где указанное антитело ковалентно св зано с биотиновой меткой дл  захвата.
42. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.40, где указанное антитело ковалентно св зано с детектируемой меткой,  вл ющейс  флуоресцентным красителем.
43. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.42, где указанный флуоресцентный краситель выбран из красителей типа флуоресцеина и родамина; данзила; лиссамина; цианина; фикоэритрина; техасского красного и их аналогов.
3
11
14
18
32
35
64
68
86
94
111
123
124
125
131
133
133
177
211
213
44. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.40, где указанное антитело ковалентно св зано с радионуклидной детектируемой меткой, выбранной из Н, С, С, F, Р, S, Cu, Ga, Y, Tc, In, I, I, I, I, I, Xe, Lu, At и Bi.
45. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.40, где указанное антитело ковалентно св зано с детектируемой меткой посредством хелаотобразующего лиганда.
46. Сконструированное на основе цистеина антитело по п.45, где указанный хелаотобразующий агент выбран из DOTA, DOTP, DOTMA, DTPA и TETA.
47. Способ скрининга сконструированных на основе цистеина антител на тиоловую реактивность, включающий
(а) введение одной или нескольких цистеиновых аминокислот в родительское антитело с получением сконструированного на основе цистеина антитела;
(b) реакцию взаимодействи  сконструированного на основе цистеина антитела с реагентом, обладающим аффинностью по отношению к реакционноспособному тиолу, с получением аффинно меченного антитела, сконструированного на основе цистеина;
(с) измерение уровн  св зывани  указанного аффинно меченного сконструированного на основе цистеина антитела со средой дл  захвата.
48. Способ скрининга по п.47, который дополнительно включает определение способности тиоловой группы сконструированного на основе цистеина антитела взаимодействовать с реагентом, взаимодействующим с тиолом.
49. Способ скрининга по п.47, где стади  (а) указанного способа включает
(i) сайт-специфический мутагенез гена, кодирующего указанное сконструированное на основе цистеина антитело в двухцепочечной плазмиде; и
(ii) экспрессию указанного сконструированного на основе цистеина антитела.
50. Способ скрининга по п.49, который дополнительно включает выделение и очистку указанного сконструированного на основе цистеина антитела.
51. Способ скрининга по п.47, где указанный реагент, обладающий аффинностью к реакционноспособному тиолу, содержит биотиновую молекулу.
52. Способ скрининга по п.47, где указанный реагент, обладающий аффинностью к реакционноспособному тиолу, содержит малеимидную молекулу.
53. Способ скрининга по п.47, где указанна  среда дл  захвата включает стрептавидин.
54. Способ скрининга по п.47, где указанным родительским антителом  вл етс  гибридный белок, включающий альбумин-св зывающий пептид (АВР).
55. Способ скрининга по п.54, где указанный АВР включает последовательность, выбранную из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 и SEQ ID NO:5.
56. Способ скрининга по п.47, где указанным родительским антителом  вл етс  Fab-фрагмент антитела.
57. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство", содержащее сконструированное на основе цистеина антитело (Ab) и лекарственное средство (D), где сконструированное на основе цистеина антитело св зано с молекулой D через одну или несколько свободных цистеиновых аминокислот посредством линкерной группы (L), причем указанное соединение имеет формулу I
Ab-(L-D)<SB POS="POST">p</SB>
I
где р равно 1, 2, 3 или 4; и где указанное сконструированное на основе цистеина антитело получают способом, включающим замену одного или нескольких аминокислотных остатков родительского антитела одной или несколькими свободными цистеиновыми аминокислотными остатками.
58. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где сконструированное на основе цистеина антитело более активно реагирует с реагентом, взаимодействующим с тиолом, чем родительское антитело.
59. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где сконструированное на основе цистеина антитело получают способом, включающим
(а) замену одного или нескольких аминокислотных остатков родительского антитела цистеином; и
(b) определение реакционной способности тиоловой группы сконструированного на основе цистеина антитела путем проведени  реакции взаимодействи  указанного сконструированного на основе цистеина антитела с реагентом, взаимодействующим с тиолом,
где указанное сконструированное на основе цистеина антитело более активно реагирует с реагентом, взаимодействующим с тиолом, чем родительское антитело.
60. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, которое дополнительно содержит последовательность альбумин-св зывающего пептида (АВР).
61. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.60, где указанный ABP содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5.
62. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где указанное сконструированное на основе цистеина антитело св зываетс  с рецептором ЕrbB, выбранным из EGFR, HER2, HER3 и HER4.
63. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где указанное сконструированное на основе цистеина антитело св зываетс  с одним или несколькими из рецепторов (1)-(36), таких как
(1) BMPR1B (рецептор белка морфогенеза кости типа IB, Genbank рег.№ NM_001203);
(2) Е16 (LAT1, SLC7A5, Genbank рег.№ NM_003486);
(3) STEAP1 (шестидоменный трансмембранный эпителиальный антиген предстательной железы, Genbank рег.№ NM_012449);
(4) 0772Р (СА125, MUC16, Genbank рег.№ AF361486);
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, мегакариоцитарный потенцирующий фактор, мезотелин, Genbank рег.№ NM_005823);
(6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, член 2 семейства растворимых носителей 34 (фосфат натри ), натрий-зависимый фосфат-перенос щий белок 3b типа II, Genbank рег.№ NM_006424);
(7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, семафорин 5b Hlog, сема-домен, семидоменные повторы тромбоспондина (типа 1 и подобный типу 1), трансмембранный домен (ТМ) и короткий цитоплазматический домен (семафорин) 5В, Genbank рег.№ АВ040878);
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, С530008О16Rik, кДНК RIKEN 2700050C12, кДНК гена RIKEN 2700050C12, Genbank рег.№ AY358628);
(9) ETBR (рецептор эндотелина типа В, Genbank рег.№ AY275463);
(10) MSG783 (RNF124, гипотетический белок FLJ20315, Genbank рег.№ NM_017763);
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, ген 1, ассоциированный с раком предстательной железы, белок 1, ассоциированный с раком предстательной железы, шестидоменный трансмембранный эпителиальный антиген предстательной железы 2, шестидоменный трансмембранный белок предстательной железы, Genbank рег.№ AF455138);
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, рецептор, быстрый потенциал-зависимый катионный канал, член 4 подсемейства М, Genbank рег.№ NM_017636);
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, фактор роста, происход щий от тератокарциномы, Genbank рег.№ NP_003203 или NM_003212);
(14) CD21 (CR2 (рецептор комплемента 2) или C3DR (C3d/рецептор вируса Эпштейна-Барра) или Hs.73792, Genbank рег.№ M26004);
(15) CD79b (CD79В, CD79β, IGb (бета-белок, св занный с иммуноглобулином), В29, Genbank рег.№ NM_000626);
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (фосфатазный  корный белок 1а, содержащий домен SH2), SPAP1B, SPAP1C, Genbank рег.№ NM_030764);
(17) HER2 (Genbank рег.№ M11730);
(18) NCA (Genbank рег.№ М18728);
(19) MDP (Genbank рег.№ ВC017023);
(20) IL20Rα (Genbank рег.№ AF184971);
(21) Brevican (Genbank рег.№ AF229053);
(22) EphB2R (Genbank рег.№ NM_004442);
(23) ASLG659 (Genbank рег.№ AX092328);
(24) PSCA (Genbank рег.№ AJ297436);
(25) GEDA (Genbank рег.№ AY260763);
(26) BAFF-R (рецетор фактора активации В-клеток, рецептор 3 BlyS, BR3, NP_443177.1);
(27) CD22 (CD22-В-изоформа В-клеточного рецептора, NP-001762.1);
(28) CD79a (CD79A, CD79α, св занный с иммуноглобулином альфа-белок, В-клеткоспецифический белок, который ковалентно взаимодействует с Ig бета (CD79B) и образует комплекс с молекулами IgM на поверхности клеток, передава  сигнал, участвующий в дифференцировке В-клеток, Genbank рег.№ NP_001774.1);
(29) CXCR5 (рецептор 1 лимфомы Беркитта, св занный с G-белком рецептор, который активируетс  хемокином CXCL13, обеспечивает миграцию лимфоцитов и гуморальную защиту, а также играет определенную роль в инфицировании вирусом ВИЧ-2, и, веро тно, в развитии СПИД'а, лимфомы, миеломы и лейкоза, Genbank рег.№ NP_001707.1);
+
(30) HLA-DOB (бета-субъединица молекулы МНС класса II (антиген Ia), котора  св зываетс  с пептидами и презентирует их CD4-Т-лимфоцитам; Genbank рег.№ NP_002111.1);
(31) Р2Х5 (ионный канал, открываемый лигандом пуринергического рецептора Р2Х 5; ионный канал, открываемый внеклеточным АТР, может участвовать в синаптической передаче и в нейрогенезе, а его дефицит может играть определенную роль в патофизиологии идиопатической дисфункции мочевого пузыр ; Genbank рег.№ NP_002552.2);
(32) CD72 (антиген CD72 линии В-клеточной дифференцировки, Lyb-2, Genbank рег.№ NP_001773.1);
(33) LY64 (лимфоцитарный антиген 64 (RP105), мембранный белок семейства богатых лейцином повторов (LRR) типа I, который регулирует активацию и апоптоз В-клеток, и потер  его функции ассоциируетс  с прогрессированием заболевани  у пациентов с системной красной волчанкой; Genbank рег.№ NP_005573.1);
(34) FcRH1 (Fc-рецептор-подобный белок 1, предполагаемый рецептор дл  Fc-домена иммуноглобулина, который содержит Ig-подобные домены типа С2 и домены ITAM, может играть определенную роль в дифференцировке В-лимфоцитов; Genbank рег.№ NP_443170.1);
(35) IRTA2 (ассоциированный с транслокацией рецептор суперсемейства иммуноглобулина 2, предполагаемый иммунорецептор, который, возможно, играет определенную роль в развитии В-клеток и лимфомагенезе; в некоторых злокачественных В-клетках наблюдаетс  нарушение регул ции гена посредством транслокации; Genbank рег. No. NP_112571.1); и
(36) TENB2 (предполагаемый трансмембранный протеогликан, родственный семейству факторов роста EGF/герегулинов и фоллистатину; Genbank рег. AFl79274).
64. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где р равно 1.
65. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где р равно 2.
66. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где L имеет формулу
а
w
y
-A--W--Y-
где А представл ет собой удлин ющий компонент, ковалентно св занный с тиолом цистеина антитела (Ab);
а равно 0 или 1,
каждый -W- независимо представл ет собой аминокислоту,
w независимо представл ет собой целое число от 0 до 12,
Y означает спейсерный компонент, ковалентно св занный с молекулой лекарственного средства; и
y равно 0, 1 или 2.
67. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.66, имеющее формулу
17
b
b
b
b
b
b
b
2
r
3
8
2
r
2
r
2
r
2
r
3
8
3
8
2
r
3
8
2
r
3
8
3
8
2
r
2
r
2
r
2
2
r
2
2
r
2
2
r
2
2
r
2
r
2
2
r
2
2
2
r
2
2
r
2
2
r
2
2
r
2
2
2
r
2
r
1
6
где РАВ представл ет собой пара-аминобензилкарбамоил, а R представл ет собой двухвалентный радикал, выбранный из (СН), С-Скарбоциклила, -О-(СН), арилена, (СН)-арилена, арилен-(СН)-, (СН)-(С-С-карбоциклила), (С-С-карбоциклил)-(СН)-, -(С-С-гетероциклила), (СН)-(С-С-гетероциклила), (С-Сгетероциклил)-(СН)-, -(СН)С(О)NR(СН)-, -(СНСНО)-, -(СНСНО)-СН-, -(СН)С(О)NR(СНСНО)-, -(СН)С(О)NR(СНСНО)-СН-, -(СНСНО)С(О)NR(СНСНО)-, -(СНСНО)С(О)NR(СНСНО)-СН- и -(СНСНО)С(О)NR(СН)-, где R представл ет собой H, С-Салкил, фенил или бензил, а r независимо представл ет собой целое число от 1 от 10.
w
68. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.67, где W представл ет собой валин-цитруллин.
17
2
5
2
2
69. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.67, где R представл ет собой (СН) или (СН).
70. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.66, имеющее формулу
17
2
5
2
2
71. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.70, где R представл ет собой (СН) или (СН).
72. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.66, имеющее формулу:
73. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где L представл ет собой SMCC.
74. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где L представл ет собой ВМРЕО.
75. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где молекула лекарственного средства D выбрана из ингибитора микротубулина, ингибитора митоза, ингибитора топоизомеразы и ДНК-интеркалирующего агента.
76. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где молекула лекарственного средства D выбрана из майтанзиноида, ауристатина, доластатина и калихеамицина.
77. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где D представл ет собой ММАЕ, имеющий структуру
где волниста  лини  указывает на положение св зывани  с линкером L.
78. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где D представл ет собой MMAF, имеющий структуру
где волниста  лини  указывает на положение св зывани  с линкером L.
79. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где D представл ет собой DМ1, имеющий структуру
где волниста  лини  указывает на положение св зывани  с линкером L.
80. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где указанным родительским антителом  вл етс  гибридный белок, включающий альбумин-св зывающий пептид (АВР).
81. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где указанное родительское антитело выбрано из моноклонального антитела, биспецифического антитела, химерного антитела, человеческого антитела и гуманизованного антитела.
82. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где указанным родительским антителом  вл етс  huMAb4D5-8 (трастузумаб).
83. Соединение-конъюгат  "антитело-лекарственное средство" по п.57, где указанным родительским антителом  вл етс  анти-ErbB2 антитело.
84. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где указанным родительским антителом  вл етс  анти-EphB2R антитело.
85. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где указанным родительским антителом  вл етс  анти-CD22 антитело.
86. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где указанным родительским антителом  вл етс  анти-MUC16 антитело.
87. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где указанным родительским антителом  вл етс  интактное антитело, выбранное из IgA, IgD, IgE, IgG и IgM.
88. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.87, где IgG выбран из подклассов IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA и IgA2.
89. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, где указанным родительским антителом  вл етс  фрагмент антитела.
90. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.89, где указанным фрагментом антитела  вл етс  Fab-фрагмент.
91. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.90, где указанным Fab-фрагментом  вл етс  hu4D5Fabv8.
92. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.91, где один или несколько аминокислотных остатков hu4D5Fabv8, замененных цистеином, выбраны из L-V15, L-A43, L-V110, L-A144, L-S168, H-A40, H-A88, H-S119, H-A121, H-S122, H-A175 и H-S179.
93. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство", выбранное из следующих структур:
где Val представл ет собой валин; Cit представл ет собой цитруллин; p равно 1, 2, 3 или 4; а Ab представл ет собой сконструированное на основе цистеина антитело, полученное способом, включающим замену одного или нескольких аминокислотных остатков родительсвого антитела одной или несколькими свободными цистеиновыми аминокислотами.
94. Соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство", имеющее структуру
где p равно 1, 2, 3 или 4; n равно 0, 1 или 2, а Ab представл ет собой сконструированное на основе цистеина антитело, полученное способом, включающим замену одного или нескольких аминокислотных остатков родительсвого антитела одной или несколькими свободными цистеиновыми аминокислотами.
95. Фармацевтическа  композици , содержаща  соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57 или его фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель или наполнитель.
96. Фармацевтическа  композици  по п.95, котора  дополнительно включает терапевтически эффективное количество дополнительного химиотерапевтического средства.
97. Способ прекращени  или ингибировани  пролиферации опухолевых клеток или раковых клеток, включающий обработку указанных опухолевых клеток или раковых клеток соединением-конъюгатом "антитело-лекарственное средство" по п.57 или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом в количестве, эффективном дл  прекращени  или ингибировани  пролиферации указанных опухолевых или раковых клеток.
98. Способ ингибировани  пролиферации клеток, включающий
(а) обработку клеток млекопитающих в среде дл  культивировани  клеток соединением-конъюгатом "антитело-лекарственное средство" по п.57 и
(b) измерение уровн  цитотоксической или цитостатической активности указанного соединени -конъюгата "антитело-лекарственное средство" и, тем самым, уровн  ингибировани  пролиферации клеток.
99. Способ ингибировани  роста опухолевых клеток, которые сверхэкспрессируют рецептор фактора роста, выбранный из группы, состо щей из рецептора HER2 и рецептора EGF, где указанный способ включает введение пациенту соединени -конъюгата "антитело-лекарственное средство" по п.57, которое специфически св зываетс  с указанным рецептором фактора роста, и химиотерапевтического средства, где указанный конъюгат "антитело-лекарственное средство" и указанное химиотерапевтическое средство ввод т в количестве, эффективном дл  ингибировани  роста опухолевых клеток у пациента.
100. Способ по п.99, где указанное соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" сообщает опухолевым клеткам восприимчивость к указанному химиотерапевтическому средству.
101. Промышленное изделие, содержащее соединение-конъюгат "антитело-лекарственное средство" по п.57, упаковку и вкладыш, вложенный в упаковку, или этикетку на упаковке, указывающие, что данное соединение может быть использовано дл  лечени  рака.
102. Способ получени  соединени -конъюгата "антитело-лекарственное средство", содержащего сконструированное на основе цистеина антитело (Ab) и лекарственное средство (D), где указанное сконструированное на основе цистеина антитело св зано с молекулой D через одну или несколько свободных цистеиновых аминокислотных остатков посредством линкерной группы (L), причем, указанное соединение имеет формулу I
Ab-(L-D)<SB POS="POST">p</SB>
I
где р равно 1, 2, 3 или 4; и где указанный способ включает замену одного или нескольких аминокислотных остатков родительского антитела цистеином с получением сконструированного на основе цистеина антитела.
103. Способ по п.102, который дополнительно включает стадии
(а) реакции взаимодействи  группы цистеина, введенного в сконструированное на основе цистеина антитело, с линкерным реагентом с образованием промежуточного соединени  "антитело-линкер" Ab-L; и
(b) реакции взаимодействи  Ab-L с активированной молекулой лекарственного средства D с образованием конъюгата "антитело-лекарственное средство".
104. Способ по п.102, который дополнительно включает стадии
(а) реакции взаимодействи  нуклеофильной группы молекулы лекарственного средства с линкерным реагентом с образованием промежуточного соединени  "лекарственное средство-линкер" D-L; и
(b) реакции взаимодействи  D-L с группой цистеина, введенного в сконструированное на основе цистеина антитело, с образованием конъюгата "антитело-лекарственное средство".
105. Способ по п.102, который также включает стадию экспрессии сконструированного на основе цистеина антитела в клетках  ичника китайского хом чка (СНО).
106. Способ по п.102, где указанным экспрессируемым антителом, сконструированным на основе цистеина,  вл етс  антитело IgG.
107. Способ по п.102, который также включает стадию обработки экспрессируемого антитела, сконструированного на основе цистеина, восстановителем.
108. Способ по п.107, где указанный восстановитель выбран из ТСЕР и DTT.
109. Способ по п.107, который, после стадии обработки экспрессируемого антитела, сконструированного на основе цистеина, восстановителем, дополнительно включает стадию обработки указанного антитела окислителем.
110. Способ по п.109, где указанным окислителем  вл етс  сульфат меди.