Влияние ингибирования белка р53 на изменение экспрессии генов антиоксидантной системы при действии генотоксических соединений

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

55

мунополихимиотерапию. Мутации в экзонах 5—8 TP53 определялись секвенированием по Сэнгеру ДНК опухолевых клеток. Для оценки влияния на общую выживаемость (ОВ) и время до прогрессирования заболевания (TTP) факторов MUT-TP53, MYC-R и DH проведен однофактор-ный событийный анализ (критерий Каплана Мейера, ло-гранговый тест) и многофакторный дисперсионный и Кокс-регрессионный анализ (STATISTICA 10).

Результаты. Значимые MUT-TP53 выявлены у 9 пациентов. Группы с WT-TP53 и MUT-TP53 сопоставимы по основным клиническим характеристикам. По результатам однофакторного анализа пациенты с MUT-TP53 имели худшие показатели ОВ и более высокую вероятность прогрессирования заболевания. Так, медиана ОВ пациентов c MUT-TP53 составила 7,0 (3,5-40,9) против 30,5 (0,6160,9) мес у пациентов с WT-TP53 (p = 0,03). Медиана времени до прогрессирования заболевания у пациентов c MUT-TP53 составила 3,5 (0,3-16,1) vs 30,5 (0,6-160,9) мес у пациентов с WT-TP53 (p = 0,00016). При многофакторном анализе MUT-TP53 — независимый фактор раннего прогрессирования HGBCL как в группе DH, так и HGBCL NOS.

Заключение. Мутации в гене TP53 — значимый пре-диктивный фактор раннего прогрессирования заболевания. Данная группа пациентов нуждается в новых подходах к терапии.

Н.А. Михеева1, Г.С. Терентюк1, В.А. Михеев2,

Е.П. Дрождина1, Н.А. Курносова1

ОЦЕНКА ПРОНИЦАЕМОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИХ

ТКАНЕВЫХ БАРЬЕРОВ ДЛЯ ЗОЛОТЫХ

НАНОЧАСТИЦ IN VIVO

ФГБОУ ВО «УлГУ», Ульяновск, Россия;

2ФГБОУВО «УлГПУ им. И.Н. Ульянова», Ульяновск, Россия

Введение. Биологические тканевые барьеры (БТБ), такие как кожа и гистогематические барьеры (ГГБ), представляют собой структурно-функциональные механизмы, выполняющие регуляторную и защитную функции. Одним из перспективных наноматериалов являются золотые наночастицы (ЗНЧ), применяемые в диагностике, направленном транспорте лекарств, оптической визуализации клеточных структур, фототермической и фотодинамической терапии и т. д. Однако несмотря на это вопрос о возможном проникновении НЧ через БТБ остается мало изученным, что ограничивает возможности для их биомедицинского применения.

Цель исследования - изучить проницаемость БТБ in vivo для ЗНЧ разного размера.

Материалы и методы. Самкам белых крыс в хвостовую вену на 15-е сутки беременности вводили 0,7 мл суспензии 5, 10, 30, 50 и 150 нм ПЭГелированных ЗНЧ. Для изучения проницаемости эпидермиса для ЗНЧ на эпилированную кожу спины белых крыс наносили гель, содержащий на-нооболочки (диаметр 160 нм). Для усиления проникновения ЗНЧ в кожу использованы физические (частичная лазерная абляция и ультразвуковое (УЗ) воздействие), химические методы [диметилсульфоксид (ДМСО) и тиофан-сульфоксид (ТСО)], а также сочетанное применение физико-химических методов. В качестве контроля взяты интактные животные. Для визуализации зон накопления

ЗНЧ в коже и органах использовали метод автометаллографии нитратом серебра, ОКТ, а содержание золота в тканях оценивали методом ААС.

Результаты. Установлена проницаемость ЗНЧ диаметром 5, 10, 30 и 50 нм через плаценту хориального типа белых крыс: общее содержание ЗНЧ указанных диаметров в плодах достоверно превышает таковое плодов контрольной группы примерно в 8 раз. ЗНЧ присутствуют в печени и селезенке плодов. Гематоэнцефалический барьер оказывается проницаемым для ЗНЧ диаметром 5 нм. Простое нанесение геля с ЗНЧ неэффективно для их доставки в кожу за счет пассивной диффузии. Показано, что лазерная абляция кожи перед нанесением геля и последующая УЗ обработка позволяет преодолеть роговой слой и доставить золотые нанооболочки в дерму. Применение ДМСО обусловливает преодоление ЗНЧ рогового слоя эпидермиса, которые достигают сосочкового слоя дермы. Использование ТСО не способствует трансдермальному транспорту ЗНЧ через здоровую кожу. Оптимальным методом усиления тран-сдермального транспорта ЗНЧ через роговой слой эпидермиса следует признать мультимодальное физико-химическое воздействие (комбинация ДМСО и УЗ воздействие).

Заключение. Продемонстрирована размерная зависимость проницаемости ГГБ для ЗНЧ при парентеральном введении. Сочетанное физико-химическое воздействие является оптимальным методом усиления трансдермаль-ного транспорта ЗНЧ. Полученные данные свидетельствуют о возможном применении ЗНЧ в диагностических и терапевтических целях in vivo.

В.А. Мумятова, А.А. Балакина, М.А. Лапшина, В.Д. Сень, А.Б. Корнев, А.А. Терентьев ВЛИЯНИЕ ИНГИБИРОВАНИЯ БЕЛКА Р53 НА ИЗМЕНЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ ПРИ ДЕЙСТВИИ ГЕНОТОКСИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область, Россия

Введение. Побочные эффекты действия современных противоопухолевых препаратов, применяемых в химиотерапии, часто связывают с нарушением про- и антиоксидантно-го баланса клеток. Недавно обнаружена взаимосвязь активных форм кислорода, антиоксидантной системы (АОС) и белка р53 в процессах регуляции сигнальных систем клеток. Таким образом, в противоопухолевой терапии белок р53 может играть важную роль в механизмах клеточного ответа на уровне окислительно-восстановительного баланса.

Цель исследования — анализ экспрессии генов АОС опухолевых клеток MCF-7 при действии генотоксичеких соединений в норме и при ингибировании функции белка р53.

Материалы и методы. Исследование проводили на линии опухолевых клеток MCF-7 (аденокарцинома молочной железы пациента). В работе использовали цисплатин и аминонитроксильный комплекс платины (ГУ) — ВС-131, в дозе IC50. Накопление белка р53 исследовали методами иммуноблотинга и иммунофлуоресценции. Выделение суммарной РНК проводили с использованием реагента ExtractRNA («Евроген») согласно методике производителя. Синтез первичной цепи к-ДНК проводили с помощью

Спецвыпуск/ том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

56

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

MMLV PT kit («Евроген») по методике производителя. Уровень экспрессии генов sod2, cat и txn определяли методом ПЦР в реальном времени с помощью qPCRmix-HS SYBR («Евроген») согласно методике производителя. Для инги-бирования функциир53 использовали -пифитрин.

Результаты. Установлено, что исследуемые соединения вызывают накопление белка р53 в ядрах клеток часов, при этом также повышается экспрессия гена р21 — прямой мишени белка р53. Это говорит о р53-зависимом механизме действия исследуемых комплексов. Установлено, что исследуемые соединения увеличивают экспрессию генов АОС sod2, cat, а также гена txn. Наиболее выраженный эффект наблюдается при действии комплекса ВС-131. Установлено, что а-пифитрин подавляет транслокацию белка р53 из цитоплазмы в ядро и тем самым может инги-бировать р53-зависимую транскрипцию генов. Использование а-пифитрина заметно снижало накопление белка р53 в ядрах клеток, а также подавляло экспрессию гена р21 до уровня контроля. Аналогичное снижение уровня экспрессии до контрольного уровня при использовании а-пифитрина наблюдали для изученных генов АОС.

Заключение. Установлено, что цисплатин и комплекс ВС-131, вызывая накопление белка р53 в ядрах, повышают экспрессию генов АОС, при этом а-пифитрин снижает как эффективность транслокации белка р53 в ядро, так и экспрессию генов p21, sod2, cat и txn. Полученные результаты говорят об участии опухолевого супрессора р53 в регуляции АОС на уровне экспрессии генов.

В.В. Мусияк, М.Г. Первова, Т.В. Матвеева, Г.Л. Левит, В.П. Краснов

ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПРОДУКТОВ РАЗЛОЖЕНИЯ АЛКИЛНИТРОЗОМОЧЕВИН РАЗЛИЧНОГО СТРОЕНИЯ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН, Екатеринбург, Россия

Введение. Противоопухолевое действие алкилнитро-зомочевин (АНМ) обусловлено их способностью к гидролитическому разложению в условиях организма с образованием активных алкилирующих и карбамоилирующих частиц, вступающих во взаимодействие с фрагментами ДНК опухолевой клетки. В связи с этим важной задачей представляется установление механизма разложения АНМ, в частности применяющихся в клинической практике препаратов кармустин и лизомустин, а также нового препарата ормустин.

Цель исследования — идентификация летучих продуктов гидролитического разложения противоопухолевых препаратов кармустин, лизомустин, лрмустин, протекающего в условиях, близких к физиологическим.

Материалы и методы. Гидролитическое разложение активных фармацевтических субстанций противоопухолевых препаратов кармустин (1,3-бис (2-хлорэтил) — 1-ни-трозомочевина), лизомустин (смесь №-нитрозо-№-[(2-хлорэтил) — карбамоил] -L-лизина и Ne- [(2-хлорэ-тил) — N-нитрозокарбамоил] -L-лизина) и ормустин (смесь Nd-нитрозо-Nd- [(2-хлорэтил) карбамоил] -L-ор-нитина и Nd- [(2-хлорэтил) — N-нитрозокарбамоил] -L-

орнитина), а также индивидуальных изомеров положения нитрозогруппы, входящих в состав препаратов лизомустин и ормустин: №-нитрозо-№- [(2-хлорэтил) карбамоил] лизина и №-нитрозо-№- [(2-хлорэтил) — карбамоил] орнитина проводили в условиях, близких к физиологическим (температура 37 °С, трис-буфер, рН 7,1). Методом газожидкостной хроматографии проведен парофазный анализ состава реакционной смеси, а также исследован состав полученного на ее основе эфирного экстракта.

Результаты. Показано, что при разложении кармусти-на происходит образование винилхлорида, ацетальдегида,

1.2-дихлорэтана, 2-хлорэтанола, 2-хлорэтилизоцианата,

1.3-бис- (2-хлорэтил) мочевины, что согласуется с литературными данными. При разложении лизомустина и ормус-тина установлено образование винилхлорида, ацетальде-гида, 1,2-дихлорэтана, 1,3-бис- (2-хлорэтил) мочевины. Также при разложении ормустина помимо указанных продуктов зафиксировано образование пропена. Следует отметить, что при разложении индивидуального №-нитрозо-№- [(2-хлорэтил) карбамоил] ^-лизина наблюдали образование только 1,3-бис- (2-хлорэтил) мочевины и винилхлорида, а при разложении №-нитрозо-№- [(2-хлорэ-тил) карбамоил] ^-орнитина — 1,3-бис- (2-хлорэтил) мочевины и пропена.

Заключение. Согласно полученным данным, разложение лизомустина и ормустина происходит, так же как и кар-мустина, через образование промежуточных алкилдиазо-гидроксидов и алкилизоцианатов. Образование пропена при разложении ормустина и №-нитрозо-№- [(2-хлорэ-тил) карбамоил] ^-орнитина, по видимому, связано с протекающим в условиях реакции превращением 5- (2-амино-1-карбоксипентил) карбокатиона. Образование винилхлорида при разложении №-нитрозо-№- [(2-хлорэ-тил) карбамоил] ^-лизина, вероятно, указывает на протекание в реакционной смеси процесса перенитрозирования.

Р.Д. Мустафаев, Г.В. Тихов, Р. Ч. Муршудли МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ БРЮШИНЫ ПРИ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ САНАЦИИ

ФГБУ«Государственный научный центр лазерной медицины ФМБА России», Москва, Россия

Введение. Одним из наиболее важных и ответственных этапов при оперативных вмешательствах, выполняемых в условиях перитонита, является адекватная санация брюшной полости. Развитие фотодинамической терапии (ФДТ) и успешное внедрение данной методики в клиническую практику позволяют осуществить попытку изучения возможности применения ФДТ для лечения распространенного перитонита.

Цель исследования — изучить и описать динамику морфологических изменений в брюшине у лабораторных животных с острым перитонитом после проведения сеансов ФДТ

Материалы и методы. В работе использованы 96 крыс-самцов линии Вистар массой тела 200—250 г. Для создания модели калового перитонита воспользовались модифицированной методикой В.А. Лазаренко и соавт., основанной на использовании профильтрованной 10 % каловой взвеси в дозе 0,5 мл на 100 г. На 3-и сутки животных во всех груп-

Спецвыпуск / том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ