СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ФАКТОРА ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ - ПРОГНОСТИЧЕСКОГО БИОМАРКЕРА СОСТОЯНИЯ СОСУДИСТОЙ СИСТЕМЫ У ЧЕЛОВЕКА В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ

Способ количественного определения содержания фактора дифференцировки клеток HLDF (human leukemia differentiation factor) у пациента, страдающего заболеванием сердечно-сосудистой системы, включающий первоначальную последовательность следующих этапов:
внесение в лунки по 50-250 мкл раствора поликлональных моноспецифических антител млекопитающего к белку HLDF в буфере в соотношении 1:400, инкубацию, блокировку неспецифического связывания белков HLDF с покрытием лунки раствором бычьего сывороточного альбумина (БСА), с последующей инкубацией;
внесение в одну часть упомянутых лунок по 50-250 мкл образца сыворотки обследуемого пациента, разведенной буфером, с последующей инкубацией, в другую часть лунок - стандартных проб с концентрацией HLDF в диапазоне от 25 до 1000 нг/мл приготовленных на основе концентрированного раствора белка HLDF;
внесение во все лунки по 50-250 мкл раствора поликлональных моноспецифических антител другого вида млекопитающего к белку HLDF в буфере в соотношении 1:4000, с последующей инкубацией;
внесение во все лунки по 50-250 мкл раствора антител козы против IgG кролика, конъюгированных с пероксидазой хрена в буфере, с последующей инкубацией:
внесение во все лунки субстратной смеси с последующим проведением ферментативной реакции в отсутствии освещения и принудительную остановку такой реакции;
при этом, количественное определение содержания фактора дифференцировки клеток HLDF у пациента вели измерением оптической плотности содержимого лунки с образцами сыворотки пациента после остановки реакции и сравнением полученных по результатам измерения значений с калибровочными значениями, в качестве которых использовали содержимое лунок со стандартной концентрации белка HLDF.