Количественная и функциональная характеристика системного и местного иммунитета при хроническом периодонтите и пародонтите

ОРИГИНАЛЬНЫЕ РАБОТЫ

РЕЗЮМЕ

Е. Г. Захаров, Д. Н. Дойников

Кальциноз врожденного двустворчатого аортального клапана

Исследована взаимосвязь врожденного двустворчатого аортального клапана с формированием аортального порока, требующего хирургической коррекции; выполнено сравнение встречаемости кальциноза и его выраженности при врожденном двустворчатом аортальном клапане и трехстворчатом аортальном клапане в различных возрастных. Врожденный двустворчатый аортальный клапан занял первое место среди причин, ведущих к развитию порока аортального клапана. Кальциноз при врожденном двустворчатом аортальном клапане встречался достоверно чаще и в более молодом возрасте имел более выраженный характер по сравнению с кальцинозом при трехстворчатом аортальном клапане.

Ключевые слова: врожденный двустворчатый аортальный клапан, кальциноз.

SUMMARY

E. G. Zakharov, D. N. Doinikov

Calcinosis of the congenital bicuspid aortic valve

The authors inquired into correlation between the congenital bicuspid aortic valve and formation of the aortic defect which needed surgical correction; and compared the incidence of calcinosis and its expression in cases of the congenital bicuspid aortic valve and of the tricuspid aortic valve in various age groups. Congenital bicuspid aortic valve ranked first among the causes leading to development of the aortic valve defect. Calcification in the congenital bicuspid aortic valve was found to occur significantly more frequently and in younger patients to be more pronounced versus the tricuspid aortic value calcinosis.

Key words: congenital bicuspid aortic valve, calcinosis.

© Коллектив авторов, 2011 г. УДК 616.314.17-008.1:612.017.1

О. Н. Васильев, Т. Д. Федосенко, М. Я. Левин, А. С. Трулев

КОЛИЧЕСТВЕННАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СИСТЕМНОГО И МЕСТНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ПЕРИОДОНТИТЕ И ПАРОДОНТИТЕ

Кафедра хирургической стоматологии и челюстно-лицевой хирургии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета имени академика И. П. Павлова; Лаборатория клинической иммунологии НПЦ стоматологического факультета

Одной из наиболее распространенных и сложных патологий челюстно-лицевой области являются заболевания пародонта. Функциональные расстройства зубо-челюстной системы, обусловленные потерей зубов, связанной с заболеваниями пародонта, развиваются в 5 раз чаще, чем при осложнениях кариеса [12]. Болезни пародонта продолжают оставаться одними из самых широко распространенных заболеваний человека. Их доля в стоматологической заболеваемости неуклонно растет в связи с уменьшением заболеваемости кариесом, а также из-за того, что в демографической картине населения быстро растет процент пожилых людей, в большей степени, чем молодые, подверженных болезням пародонта [5]. Вместе с тем, по данным Э. М. Кузьминой (2001), распространенность данной патологии у детей дошкольного возраста достигает 3040 %, у школьников 12-14 лет - 80 % и приближается к 100 % у взрослого населения [17]. Кроме того, отмечается устойчивая тенденция к росту тяжелых форм вос-

палительных заболеваний пародонта во всех возрастных группах, что ставит их изучение в ряд одних из наиболее актуальных медико-социальных проблем [18]. По данным Е. В. Боровского (1998), пациенты с пульпитом и периодонтитом составляют примерно 4045 % всего стоматологического приема. Л. М. Лукиных и Ю. Н. Лившиц (1999) показали, что хронические формы периодонтита занимают третье место после кариеса и пульпита зубов и, по данным Е. В. Боровского и М. Ю. Протасова (1998), составляют 88,3 %.

Основой патогенеза воспалительного процесса в пародонте является результат сочетания следующих факторов: действие на ткань какого-либо раздражителя и местная реакция ткани. Последняя, в свою очередь, определяется состоянием местного иммунитета полости рта и системного иммунитета [3, 4, 8, 16].

Важными причинами, по которым не удается достичь эффективного лечения хронического периодонтита и пародонтита, являются нарушения в иммунной системе [10, 13-15, 19, 20]. С другой стороны, сам очаг хронической инфекции в периодонте оказывает неблагоприятное воздействие на иммунную систему, что может приводить к обострению или усугублению течения общесоматической патологии у больных. Поскольку ведущую патогенетическую роль в течении и исходе воспалительного процесса в пародонте играют местные и системные защитные реакции, то и диагностировать его следует на основании состояния местного иммунитета полости рта и системного иммунитета.

Цель исследования: провести сравнительную оценку клинико-иммунологического состояния больных с хроническим периодонтитом и хроническим пародонтитом.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа основана на показателях местного и системного иммунитета. Всего обследованы 44 человека.

Первую группу составили пациенты с хроническим периодонтитом (3 и более очага) - 10 человек: 9 женщин (40-59 лет) и 1 мужчина (35 лет). Вторую группу составили пациенты с хроническим генерализованным пародонтитом - 16 человек: 8 мужчин (49-72 лет) и 8 женщин (43-71 лет). Третья группа являлась контрольной (18 человек). Ее составили студенты III и IV курсов СПбГМУ им. акад. И. П. Павлова стоматологического факультета (16 человек) и 2 человека с ин-тактным пародонтом в возрасте 31 и 35 лет. Диагнозы ставились на основании жалоб пациентов, а также кли-нико-рентгенологических данных.

Оценка местного иммунитета ротовой полости (sIgA, IgG, IgM) проводилась иммуноферментным методом [6]. Количественную оценку системного иммунитета осуществляли с использованием монокло-нальных антител [9]. Определялось содержание Ти В-лимфоцитов и их субпопуляций. Фенотипирова-ние мононуклеарных клеток проводили с применением двухцветной проточной цитометрии на лазерном проточном цитофлюориметре Beckman Coulter FC500 (США). Функцию Т- и В-лимфоцитов оценивали в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) по методу T. Mosmann (1983) в модификации M. B.Hansen et al. (1989).

Для определения уровня цитокинов применяли метод иммуноферментного анализа (ИФА). При определении ИЛ-2, ИЛ-4 и ИЛ-8 использовали тест-системы, производимые фирмой «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург), при определении уровня ЭПО -тест-системы фирмы R&D Systems (USA). В основу определения уровня цитокинов как в сыворотке крови, так и в клеточных супернатантах, положен «сан-двич»-метод твердофазного иммуноферментного анализа с применением пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента. Полученные данные обрабатывали методами вариационной статистики, определяя достоверность с помощью критерия Стьюдента для множественных сравнений по программе «Excel» (MS Office).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Показатели местного иммунитета представлены в табл. 1.

Как видно из данных табл. 1, при периодонтите имеется тенденция к увеличению концентрации IgM.

Таблица 1

Показатели местного иммунитета полости рта

Группа Иммуноглобулин, мкг/мг белка

SIgA IgG IgM

Периодонтит 85,8±6,6 ** 8,13±1,1 3,9±0,7 **

Пародонтит 59,1±6,3 * 9±1,4 2,27±0,4

Контроль 80,13±7,5 8,8±3,3 2,7±0,3

Примечание: * различие с контролем, р<0,05; ** различие с группой пародонтита, р<0,05.

Показатели и ^О не отличаются от контроля (р>0,1). При пародонтите уровень снижен по сравнению с контролем (р<0,05), в то время как показатели ^О и ^М не отличаются от последнего (р>0,1). При сравнении групп по данным показателям между собой выявлено, что у пациентов с периодонтитом определяется достоверно более высокое содержание и ^М в сравнении с пациентами с пародонтитом (р<0,02; р<0,05).

Количественная оценка системного иммунитета представлена в табл. 2.

Результаты проведения количественной оценки системного иммунитета свидетельствуют о том, что при периодонтите наблюдается существенное увеличение В-лимфоцитов в сравнении с контролем (р<0,01), но снижен уровень Т-киллеров (р<0,001). При пародон-тите также имеется достоверное увеличение количества В-лимфоцитов (р<0,01) и снижено количество Т-киллеров (р<0,01) и Т-супрессоров.

При периодонтите также наблюдается повышенное количество клеток СВ95 (р<0,01), ответственных за апоптоз. При пародонтите данный показатель не отличается от контроля. Как видно из данных табл. 2, в остальных показателях системного иммунитета не выявлено статистически значимых различий от контроля и между собой.

Оценка функционального состояния системного иммунитета приведена в табл. 3. Как видно из данных табл. 3, спонтанная бласттрансформация лимфоцитов при периодонтите и пародонтите не отличается ни от контроля, ни между собой. Однако в стимулированном тесте (ФГА 1/100) при пародонтите наблюдается снижение функциональной активности Т-системы иммунитета по сравнению с контролем (р<0,05). В группе пациентов с периодонтитом не выявлено каких-либо статистических закономерностей. При сравнении групп между собой отмечается более выраженное снижение активности Т-системы иммунитета и тенденция к снижению активности В-системы у пациентов с пародонтитом.

Оценка степени активности системного иммунитета представлена в табл. 4. Как видно из данных табл. 4, по концентрации ИЛ-2 - цитокина, отвечающего за пролиферацию лимфоцитов, группа больных периодонтитом и группа больных пародонтитом не отличаются ни друг от друга, ни от контрольной группы. По концентрации хемокина ИЛ-8 больные периодонтитом и больные пародонтитом также не отличаются друг от друга и от контрольной группы. Таким образом, по абсолютным концентрациям двух исследованных ци-токинов исследуемые группы не обнаруживают различий ни между собой, ни с группой здоровых лиц. Вместе с тем, как показано в табл. 4, группа больных периодонтитом все же имеет особенности цитокино-вой регуляции, отличающие ее от группы больных па-родонтитом. Отличие касается степени изменения уровня ИЛ-8 по сравнению с группой контроля, что выра-

ОРИГИНАЛЬНЫЕ РАБОТЫ

Группа

жено в виде отношения среднего уровня данного цитокина у больных к его среднему уровню у здоровых, так как происходит изменение синтеза цито-кина в условиях заболевания. Как видно из данных табл. 4, у больных периодонтитом это отношение было меньше единицы (0,979±0,43), что означает, что при периодонтите уровень ИЛ-8 не достигает даже таких величин, как у здоровых людей, т. е. что при периодонтите синтез данного цитокина снижен по сравнению с нормой. В то же время при паро-донтите прирост уровня ИЛ-8 по отношению к норме измеряется величиной выше единицы (1,135±0,049), т. е. данное заболевание, в отличие от периодонтита, усиливает синтез ИЛ-8. Сравнение индексов прироста синтеза ИЛ-8 при периодонтите и пародонтите показывает, что эти две величины статистически достоверно отличаются друг от друга - прирост синтеза ИЛ-8 при пародонтите достоверно выше, чем при периодонтите. Также, как показано в табл. 4, наблюдаются выраженные изменения концентраций ИЛ-4 в сыворотке крови и слюны. Так, при периодонтите наблюдается тенденция к увеличению его концентрации и повышенное его содержание в слюне по сравнению с группой контроля. При пародонтите, напротив, наблюдается увеличение концентрации ИЛ-4 в сыворотке крови и лишь тенденция к его увеличению в слюне в сравнении с группой контроля. При сравнении групп больных по данному показателю не выявлено разницы в концентрации ИЛ-4 в сыворотке крови, но наблюдается достоверно более высокое его содержание в слюне больных хроническим периодонтитом.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, результаты работы показывают, что как при периодонтите, так и пародонтите имеются выраженные изменения в иммунной системе. Для па-родонтита характерно заметное снижение местной концентрации 81§Л по сравнению как со здоровыми, так и с пациентами с периодонтитом, что указывает на снижение защитных свойств слюны при этом заболевании. При обоих заболеваниях имеет место частичное изменение субпопу-ляционного состава лимфоцитов. В частности, возрастает содержание В-лимфоцитов в крови. При периодонтите, но не при пародонтите, достоверно возрастает число СБ95-позитивных лимфоцитов. Маркер СВ95 является рецептором ТМБ-по-

Таблица 2

Показатели системного иммунитета

Группа Клетки, %

CD3 CD4 CD8 CD19 CD16 CD95 CD25

Периодонтит 57,2±3,5 29,5±3,6 22,2±1,8 23,3±3 * 17,6±1 * 26,2±1,9 * 13,2±5,7

Пародонтит 56,6±2,5 29,4±2,6 20,1±1,9 18,1±1,5 * 20,5±2,2 * 20,8±1,8 9,1±1

Контроль 56,5±3 27,5±2,4 23,5±1 12,3±1,1 29,6±1,1 20±1,7 11,5±1,1

Т-хелперы; CD8 Т-хелперы с цито-

Примечание: CD3 Т-лимфоциты; CD4 токсическими свойствами; CD19 B-клеточная пролиферация; CD16 Т-киллеры; CD95 Fas-Ag, рецептор ФНО; CD25 рецептор к IL-2; * различие с контролем, р<0,01.

Таблица

Функциональное состояние системного иммунитета

Реакция бласттрансформации, усл. ед.

Спонтанная ФГА 1/100 PWN 1/64 PWM 1/32 онА 1/40 онА 1/20

358,9±32,3 322,3±30,5 316,42±30,9 679,9±47,4 509,35±49,8* 688,3±78,6 394,24±28,8 328,7±30,1 351,23±39,1 378,36±28,3 318,45±29,6 343,7±40,4 370,57±33,2 331,12±28,6 375,46±42,8 413,3±49,9 335,12±30,15 422±51,6

Периодонтит Пародонтит Контроль

Примечание: PWM митоген лаконоса (pokeweed mitogen); КонА А; ФГА фитогемагглютинин; * различие с контролем, р<0,05.

конкавалин

добного фактора, так называемого Fas-лиганда, воздействие которого на CD95, как известно, индуцирует в клетках апоптоз. В то же время в последние годы показано, что CD95 и его эндогенный лиганд Fas выполняют и другую функцию: при взаимодействии друг с другом они активируют синтез провоспалительных цитокинов в макрофагах [22]. При этом усиливается продукция TNF-a и некоторых хемокинов. Кроме того, активация клеточной системы CD95/Fas усиливает реакцию клеток иммунной системы на ряд антигенов, действующих на клетки через рецепторы TLR4, в частности, на эндотоксины грамм негативных бактерий, на антигены хламидий и некоторые вирусы [21]. Поэтому увеличение числа клеток с маркером CD95 может означать повышение готовности иммунной системы пациентов с периодонтитом к провоспалительным сдвигам и усилению реакций на эндогенные микробные антигены. Наблюдается угнетение Т-клеточного звена иммунитета и активация В-лимфоцитов. Последнее подтверждается изменениями в местном иммунитете полости рта. Не изменяется количество лимфоцитов с активационным маркером CD25, т. е. не наблю-

Таблица 4

Показатели системной концентрации ИЛ-2, ИЛ-4 и ИЛ-8 в сыворотке крови

Группа

Пг/мл отношение Пг/мл отношение Пг/мл Пг/мл

к контролю к контролю

Периодонти г Контроль t

Пародонти Контроль t

Периодонти т 34,6±3,5

Пародонти

ИЛ-2

ИЛ-8

ИЛ-4 сыв.

ИЛ-4 сл.

34,6±3,5 28,25±2,2

1,54 36,5±7,0 28,25±2,2 1,1

36,5±7 0,2

1,225±0,12

1,292±0,13

1,225±0,12 1,292±0.13 0,5

711,25±39,2 726,7±48,7

0,24 825±43,9 726,7±48,7 1,5

711,25±39,2 825±43,9 1,9

0,979±0,43

1,135±0,049

0,979±0,43 1,135±0,049

2,4

3,17+0,78 1,9+0,04 1,6 3,4+0,6 1,9+0,04 2,2 3,17+0,78 3,4+0,6 0,2

2,1+0,3 0,95+0,18

3,3 1,3+0,15 0,95+0,18 1,6 2,1+0,3 1,3+0,15 2,3

дается усиления пролиферативных процессов в иммунной системе. Вместе с тем достаточно высокая реакция бласттрансформации лимфоцитов на растительные митогены in vitro позволяет говорить о сохранении потенциальных возможностей Т-системы иммунитета. Кроме того, у больных с хроническим периодонтитом снижена концентрация ИЛ-8 в крови. ИЛ-8 является хемокином, ответственным за привлечение в очаг воспаления нейтрофилов.

Таким образом, следует полагать, что сочетание провоспалительных тенденций с отсутствием проли-феративных реакций в иммунной системе и сниженный хемокиновый ответ у больных периодонтитом создает более благоприятные условия для хронизации воспалительного процесса в пародонте при этом заболевании, чем при пародонтите. Это предположение согласуется с приведенными выше данными, касающимися экспрессии антигена CD95.

ЛИТЕРАТУРА

1. Боровский, E. В. Проблемы эндодонтии по данным анкетирования / Е. В. Боровский // Клин. стоматология. - 1998. -№ 1. - С. 6-9.

2. Боровский, E. В. Распространенность осложненного кариеса и эффективность эндодонтического лечения / Е. В. Боровский, М. Ю. Протасов // Клин. стоматология. - 1998. - № 3. - С. 4-7.

3. Воложин, А. И. Актуальные проблемы эндодонтии / А. И. Воложин // Труды ЦНИИС. - М., 1990. - С. 11-13.

4. Воложин, А. И. Иммунитет, типовые формы его нарушения и принципы коррекции : метод. пособие / А. И. Воложин, Т. И. Сашкина, 3. И. Савченко. - М., 1993.

5. Вольф, Г. Ф. Пародонтология / Г. Ф. Вольф, Э. М. Ратей-цхак, К. Ратейцхак ; пер. с нем. ; под ред. проф. Г. М. Барера. -М. : МЕДпресс-информ, 2008. - 548 с.

6. Климович, В. Б. Моноклональные антитела против иммуноглобулинов человека : дис. ... д-ра мед. наук / В. Б. Климович. - СПб., 1996.

7. Кузьмина, Э. М. Профилактика стоматологических заболеваний / Э. М. Кузьмина. - М., 2001. - С. 37-38.

8. Лебедев, К. А. Иммунограмма в клинической практике / К. А. Лебедев, И. Д. Понякина. - М., 1990.

9. Лебедев, К. А. Иммунная недостаточность / К. А. Лебедев, И. Д. Понякина. - М., 2003.

10. Лемецкая, Т. И. Клиническая оценка показателей специфического и неспецифического местного иммунитета полости рта при воспалительных заболеваниях пародонта / Т. И. Ле-мецкая, Н. Д. Брусенина, М. М. Давыдова. - М., 1984. - 22 с.

11. Лукиных, Л. М. Болезни пародонта : клиника, диагностика, лечение и профилактика : рук-во / Л. М. Лукиных, Е. Н. Жу-лев, И. Н. Чупрунова. -Нижний Новгород : НГМА, 2005. - 322 с.

12. Лукиныгх, Л. М. Верхушечный периодонтит / Л. М. Лукиных, Ю. Н. Лившиц. - Нижний Новгород : НГМА, 1999. - 91 с.

13. Магид, Е. А. Актуальные вопросы стоматологии / Е. А. Магид, Н. Н. Триголос, Н. Ф. Алешина. - Волгоград, 1996. - С. 86-91.

14. Орехова, Л. Ю. Иммунологические механизмы в патогенезе воспалительных заболеваний пародонта : автореф. дис. ... д-ра мед. наук / Л. Ю. Орехова. - СПб., 1997. - 34 с.

15. Орехова, Л. Ю. Показатели клеточной сенсибилизации при воспалительных заболеваниях пародонта / Л. Ю. Орехова, М. Я. Левин // Новое в стоматологии. - 1999. - № 7. - С. 71-78.

16. Робустова, Т. Г. Иммунный статус и полости рта : метод. реком. / Т. Г. Робустова, К. А. Лебедев, Ю. М. Максимов-ский. - М., 1990.

17. Соловьева, A.M. Эпидемиологическое исследование распространенности пародонтопатогенной микрофлоры полости рта у населения России / А. М. Соловьева [и др.] // Стоматология. - 2005. - № 5. - С. 14-20.

18. Цепов, Л. M. Факторы агрессии и факторы защиты в патологии пародонта воспалительного характера / Л. М. Цепов, А. И. Николаев, Е. А. Михеева // Пародонтология. - 2004. -№ 1 (30). - С. 3-7.

19. Чукаева, Н. A. Выбор метода лечения острого и обострившегося хронического периодонтита на основании клини-ко-иммунологических показателей : автореф. дис. ... канд. мед. наук / Н. А. Чукаева. - М., 1990.

20. Шаргородский, A. Г. Актуальные вопросы эндодонтии / А. Г. Шаргородский // Тр. ЦНИИС/ЦНИИ стоматологии. - М., 1990. - С. 107-111.

21. Akira, S. Toll-like receptor singalling / S. Akira, K. Takeda // Toll. Immunology. - 2004. - Vol. 4.

22. Wang, F. Fas (CD95) induces rapid, TLR4/IRAK4-depen-dent release of pro-inflammatory HMGB1 from macrophages / F. Wang [et al] // J. Inflamm. - 2010. - № 17. - Р. 7-30.

РЕЗЮМЕ

О. Н. Васильев, Т. Д. Федосенко, М. Я. Левин, А. С. Трулев

Количественная и функциональная характеристика системного и местного иммунитета при хроническом периодонтите и пародонтите

Проведена сравнительная оценка клинико-иммунологиче-ского состояния больных с хроническим периодонтитом и хроническим пародонтитом. Установлено, что как при периодонтите, так и пародонтите имеются выраженные изменения в иммунной системе. Наблюдается угнетение Т-клеточного звена иммунитета и активация В-лимфоцитов. Не наблюдается усиления пролиферативных процессов в иммунной системе, хотя сохраняются потенциальные возможности Т-клеточного звена иммунитета.

Ключевые слова: иммунитет, периодонтит, пародонтит.

SUMMARY

O. N. Vasiliev, T. D. Fedosenko, M. Ya. Levin, A. S. Trulev

Quantitative and functional features of local and systemic immunity in patients with chronic apical periodontitis and parodontitis

Comparative assessment of clinic-immunologic condition of patients with chronic apical periodontitis and parodontitis was performed. Distinct changes in the immune system were found both in chronic apical periodontis and in parodontitis. T-cell suppression and B-cell activation were evident. There was no proliferation process increase in the immune system whereas potential abilities of the T-cell chain remained.

Key words: immune system, periodontitis, parodontitis.