Функциональное состояние естественных киллеров в периферической крови и децидуальной оболочке у женщин с невынашиванием беременности ранних сроков

НЕВЫНАШИВАНИЕ БЕРЕМЕННОСТИ

ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ЕСТЕСТВЕННЫХ КИЛЛЕРОВ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И ДЕЦИДУАЛЬНОЙ ОБОЛОЧКЕ У ЖЕНЩИН С НЕВЫНАШИВАНИЕМ БЕРЕМЕННОСТИ РАННИХ СРОКОВ

И.Б. Лепилова, Н.Ю. Борзова, Н.Ю. Сотникова, Н.В. Крошкина

ФГУ «Ивановский НИИ МиД им. В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи» ул. Победы, 20, Иваново, Россия, 153045

Обследованы 50 беременных женщин первого триместра с угрозой прерывания беременности и с физиологическим ее течением. Определялся цитокиновый профиль и функциональная активность естественных киллеров для уточнения патогенетических механизмов невынашивания беременности.

Невынашивание беременности (НБ) на современном этапе является актуальной медицинской и социальной проблемой, которая выявляет высокий уровень заболеваемости новорожденных и перинатальной смертности. Несмотря на достигнутые успехи, самопроизвольными абортами заканчивается 10—15% беременностей, частота преждевременных родов составляет в развитых странах 5—9%, в РФ — до 12% [1, 2, 3, 4, 5], составляя до 75% перинатальных потерь. Учитывая неблагоприятную демографическую ситуацию, крайне важно сохранить каждую беременность, обеспечив рождение здорового ребенка.

В настоящее время бесспорно доказана важная роль иммунных механизмов в развитии и прогрессировании беременности, которые включаются уже на стадии имплантации оплодотворенной яйцеклетки и в дальнейшем в значительной мере обусловливают ее физиологическое течение [9]. Иммунные нарушения имеют большое значение в патогенезе НБ [6, 7, 8, 9]. Известно, что развитие невынашивания беременности сопровождается изменениями как популяционного состава, так и функциональной активности естественных киллеров (ЕК) клеток [7, 8, 10, 11, 12]. В механизмах самопроизвольного прерывания беременности на ранних сроках важную роль отводят популяции CD56+CD16- ЕК. Продуцируемый этими клетками комплекс цитокинов во многом определяет иммунорегуляторные процессы при беременности. В литературных источниках встречается большое коли-

чество данных о содержании и активности ЕК в эндометрии и децидуальной оболочке [12, 14, 15, 16]. Однако их роль в механизмах прерывания беременности до настоящего времени не до конца понятна, лишь разработан ряд гипотетических предположений.

Для определения особенностей функционирования ЕК у женщин I триместра при невынашивании беременности ранних сроков нами было проведено изучение синтеза и рецепции ИЛ-2 и ИФН-у данной группой клеток на системном уровне и в плаценте с целью уточнения патогенетических механизмов физиологической беременности, угрозы ее прерывания, а также прогнозирование ее дальнейшего течения.

Материал и методы исследования. В условиях акушерской и гинекологической клиник ФГУ «ИвНИИ МиД им. В.Н. Городкова Росмедтехнологий», и ГУ «8-й городской клинической больницы» г. Иванова обследованы 50 беременных женщин со сроком беременности 6—12 недель, которые были разделены на 2 группы. В основную группу вошли 23 пациентки с самопроизвольным выкидышем, в контрольную — 27 женщин, идущих на медицинский аборт по желанию при физиологическом течении беременности.

Всем беременным проводилось комплексное клинико-лабораторное обследование. Критерием исключения для проведения исследований служило наличие у обследуемых женщин антифосфолипидного синдрома, аномалий развития матки, гиперандрогении, заболеваний, передающихся половым путем.

Материалом для исследования служила периферическая венозная кровь и де-цидуальная ткань плаценты, полученная при выскабливании полости матки. Выделение мононуклеарных клеток из периферической крови и децидуальной оболочки плаценты осуществлялось стандартным безферментным методом скоростного центрифугирования в градиенте плотности фиколла-верографина (d-1,078). Поверхностный фенотип клеток и внутриклеточную экспрессию цитокинов определяли с помощью моноклональных антител (мАТ) методом двухцветной проточной цитофлюориметрии на приборе FACScan (Becton Dickinson, USA). В качестве флюорохромных меток использовали флюоресцеин изотиоционат (FITC) и фикоэритрин (РЕ).

Результаты исследования. Обследуемые женщины не отличались между собой по возрасту, паритету, наличию невынашивания беременности в анамнезе. Случаев привычного невынашивания беременности в анамнезе у женщин обеих групп не было. Хотя большинство женщин обеих групп были повторноберемен-ными (73,9 и 63,7% соответственно), в основной группе и предыдущие беременности чаще завершались медицинскими абортами (69,6% и 50,6%, р < 0,05). Пациентки основной группы в 2 раза чаще страдали гинекологическими заболеваниями, преимущественно нарушениями менструального цикла и воспалительными заболеваниями гениталий. В основной группе по сравнению с контролем достоверно чаще выявлялась экстрагенитальная патология (68,5% и 44,4%, р < 0,02), в основном представленная заболеваниями мочевыделительной системы.

Для выявления изменений в содержании ЕК в периферической крови при самопроизвольном выкидыше в I триместре нами был проведен сравнительный анализ уровня лимфоцитов с фенотипом CD56+, а также параметров их активации

при физиологическом течении и невынашивании беременности ранних сроков. Как видно из полученных нами данных, развитие самопроизвольного выкидыша происходило на фоне значительного повышения в периферической крови уровня ЕК с фенотипом CD56+ ((23,11 ± 0,67) и (9,61 ± 1,22)) (р < 0,001) по сравнению с показателями женщин с физиологическим течением беременности.

При изучении экспрессии рецепторов к цитокинам на поверхности периферических лимфоцитов у женщин с самопроизвольными выкидышами (СВ) было выявлено значительное повышение количества CD56+ ЕК, несущих на своей поверхности рецепторы к ИЛ-2 ((4,64 ± 0,43) и (2,57 ± 0,22)), р < 0,001. Также установлено, что при СВ в периферической крови резко возрастал уровень CD56+ лимфоцитов, экспрессирующих рецепторы к №N7 ((4,18 ± 0,58) и (2,24 ± 0,30)), р < 0,05, а также CD56+CD119+: ((6,85 ± 0,48) и (2,14 ± 0,39)), р < 0,001.

С целью изучения особенностей функциональной активности ЕК периферической крови при самопроизвольном выкидыше I триместра нами была проведена оценка синтеза Ш-2 и 1ЕЫу лимфоцитами по внутриклеточной экспрессии клетками этих цитокинов. В ходе исследования было установлено, что у женщин с НБ уровень CD56+ЕК, внутриклеточно продуцирующих ^-2 и ШЫу, был достоверно выше, чем в контрольной группе CD56+IL-2+: ((15,22 ± 1,44) и (10,58 ± 1,36)), р < 0,05; CD56+IFNy+: ((12,84 ± 1,22) и (7,27 ± 0,94)), р < 0,01. При СВ отмечался более высокий уровень внутриклеточного синтеза ^-2 и 1КЫу и в общей популяции периферических лимфоцитов по сравнению с показателями контрольной группы ^-2+: ((17,93 ± 1,66) и (13,27 ± 1,06)), р < 0,05 и ШКу+: ((16,40 ± 1,19) и (9,94 ± 0,85)), р < 0,001.

Нами было проведено исследование особенностей содержания провоспали-тельных цитокинов Ш-2 и 1ЕЫу в сыворотке периферической крови у женщин с НБ. Достоверных различий в содержании Ш-2 между сравниваемыми группами выявить не удалось, так как содержание цитокина было менее предела чувствительности использовавшейся тест-системы (менее 4 пг/мл). У женщин с самопроизвольными выкидышами по сравнению с параметрами контроля отмечалась тенденция к повышению сывороточного ШЫу, ((4,23 ± 2,12) и (1,93 ± 0,56)) соответ-стенно (р > 0,05).

Известно, что иммунологические реакции на системном уровне не всегда адекватно отражают характер процессов на уровне плаценты. Функциональная активность ЕК в большей степени определяется особенностями их взаимодействия с клетками инвазивного трофобласта, с которыми децидуальные ЕК напрямую контактирует в децидуальной оболочке плаценты [7]. В ходе настоящего исследования было установлено, что в норме и при НБ на ранних сроках беременности CD56+ клетки составляли доминирующую популяцию в лимфоцитарном инфильтрате децидуальной оболочки плаценты, однако в основной группе их уровень был достоверно ниже ((66,5 ± 1,61) и (77,31 ± 2,26)), (р < 0,01).

Выявленные изменения количественных характеристик CD56+ лимфоцитов децидуальной оболочки плаценты происходили на фоне усиления экспрессии низкоафинных рецепторов к Ш-2 в данной группе клеток (CD56+CD25+ клетки) по сравнению с контрольной группой: ((9,56 ± 0,63) и (9,56 ± 0,63)), (р < 0,001), при этом содержание децидуальных CD56+ ЕК, несущих на своей поверхности

рецепторы к (CD56+IFNy + клетки), не отличалось от такового при физиологической беременности: ((12,84 ± 1,22) и (7,27 ± 0,94)), ф > 0,05).

Изучение особенностей синтеза провоспалительных цитокинов популяцией децидуальных CD56+ лимфоцитов при НБ показало, что внутриклеточная экспрессия как ¡Ь-2 ((17,93 ± 1,66) и (13,27 ± 1,06)), так и ¡Шу ((16,4 ± 1,19) и (9,94 ± ± 0,85) в изучаемой группе клеток была достоверно более высокой, чем при не-осложненной беременности ф < 0,05 и p < 0,001 соответственно). Также установлено, что при НБ в лейкоцитарном инфильтрате децидуальной оболочки плаценты заметно возрастало как общее число лимфоцитов, несущих на своей поверхности рецепторы к ^-2 и ^N7 (CD25+ и CD119+ клетки) по сравнению с таковыми при физиологической беременности ф < 0,05 в обоих случаях), так и общее количество децидуальных CD45+CD14- лимфоцитов — продуцентов ^-2 и ^N7 ф < 0,05 и p < 0,001 соответственно).

Высокий уровень клеточных популяций, внутриклеточно экспрессирующих те или иные цитокины, не является абсолютным показателем их активности, так как определяет лишь потенциальные возможности клеток, но не учитывает роль активационных и ингибирующих сигналов, определяющих интенсивность продукции и секрецию цитокинов в ткани в целом. В связи с этим нас интересовало исследование содержания цитокинов в экстрактах децидуальной оболочки плацент I триместра при неосложненной беременности и НБ. Концентрация ^-2 в экстрактах децидуальной ткани при НБ была достоверно выше, чем при физиологической беременности ф < 0,05). Кроме того, нами установлено, что самопроизвольное прерывание беременности характеризовалось более высоким содержанием ШЫу в экстрактах децидуальной оболочки плаценты по сравнению с таковым при неосложненной беременности ф < 0,05).

Обсуждение. Таким образом, при развитии самопроизвольного выкидыша в периферической крови женщин увеличивалось количество CD56+ лимфоцитов, клеток с рецепторами к ^-2 и ШЫу, усиливались экспрессия CD25 и CD119 молекул в популяции периферических CD56+ ЕК клеток и внутриклеточный синтез ^-2 и как CD56+ лимфоцитами, так и в общей популяции CD45+CD14-лимфоцитов по сравнению с аналогичными параметрами контрольной группы, но при этом не было выявлено различий в содержании сывороточных Ш-2 и ¡КЫу. В децидуальной оболочке плаценты при НБ происходило снижение количества ЕК с фенотипом CD56+, увеличение числа CD56+ децидуальных лимфоцитов, внутриклеточно экспрессирующих Ш-2 и Ш^, а также повышение количества ЕК с рецепторами к Ш-2 при неизменном количестве CD56+CD119+ лимфоцитов по сравнению с показателями контрольной группы В целом для децидуальных лимфоидных клеток при самопроизвольном выкидыше было характерно повышение экспрессии поверхностных CD25 и CD119 молекул и усиление внутриклеточного синтеза ^-2 и ШЫу в сравнении с физиологической беременностью. Нарушения в содержании цитокинов при самопроизвольном выкидыше ранних сроков в экстрактах децидуальной ткани характеризовались повышением уровня Ш-2 и ТКЫу. На основании вышеперечисленных полученных нами данных можно сде-

лать следующие выводы: 1) самопроизвольное прерывание беременности ранних сроков характеризуется повышенным содержанием CD56+ЕК как в периферической крови, так и децидуальной оболочке плаценты; 2) в отличии от физиологически протекающей беременности при самопроизвольных выкидышах CD56+ЕК находятся в активированном состоянии и в большем количестве экспрессируют рецепторы к этим цитокинам; 3) при СВ отмечается более высокий, чем при физиологически протекающей беременности содержание Ш-2 и ШКу в экстрактах децидуальной оболочки плаценты.

В настоящее время бесспорно большое значение отводится ЕК и их функциональному состоянию. Однако пока еще нет единого мнения о том, какую роль при беременности выполняет столь многочисленная популяция CD56+ дециду-альных ЕК. Благополучие течения беременности при увеличении содержания активированных ЕК, усилении их функциональной активности в периферической крови во многом определяется взаимодействием с клетками инвазивного трофо-бласта и позволяет рассматривать цитокиновый профиль трофобласта как активный иммуносупрессивный барьер, при изменении которого нарушается иммунологическое равновесие беременности [17]. Таким образом, проведенное нами исследование позволяет раскрыть некоторые патогенетические механизмы угрозы прерывания беременности, что позволит проводить более эффективную терапию с целью улучшения исходов беременности и состояния новорожденных. Усиление ипродукции провоспалительных цитокинов в децидуальной оболочке свидетельствует о наличии хронического воспалительного процесса в матке, что диктует необходимость предгравидарной подготовки женщин с наличием воспалительных заболеваний гениталий после медицинских абортов и внутриматочных вмешательств, а также санации мочевыводящих путей.

ЛИТЕРАТУРА

[1] Бойко Е.Л., Посисеева Л.В., Сотникова Н.Ю. Характеристика различных субпопуляций естественных киллеров и уровень их активации у женщин с привычным невынашиванием беременности инфекционного генеза и антифосфолипидным синдромом // Вестник новых медицинских технологий. — 2007. — Т. XIV. — № 2. — С. 59—60.

[2] Гладкова К.А., Сухих Г.Т., Сидельникова В.М. Роль сенсибилизации к прогестерону в клинике привычного невынашивания беременности // Проблемы репродукции. — 2007. — Т. 13. — № 6. — С. 95—98.

[3] Савченко Т.Н., Точиева М.Х., Протопопова Л.О. Цитокиновый статус и активность нейтрофильной эластазы у женщин с невынашиванием беременности и генитальным кандидозом в ранние сроки гестации // Российский вестник акушера-гинеколога. — 2007. — Т. 7. — № 4. — С. 4—6.

[4] Сидельникова В.М. Невынашивание беременности — современный взгляд на проблему // Российский вестник акушера-гинеколога. — 2007. — Т. 7. — № 2. — С. 62—64.

[5] Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности. — М.: Медицина, 2005. — 198 с.

[6] Соловьева А.Е., Сотникова Н.Ю., Вторушина В.В. Спонтанная продукция ИФНу и ФНОа периферическими МНК женщин с невынашиванием беременности ранних сроков инфекционного генеза и антифосфолипидным синдромом // Медицинская иммунология. — 2007. — Т. 9. — № 2—3. — С. 263.

[7] Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Крошкина Н.В., Кудряшова А.В., Астраух Н.В, Соловьева Т.А., Букина Е.А. Локальный иммунный ответ в динамике неосложненной беременности // Медицинская иммунология. — 2000. — Т. 2. — № 2. — С. 194—195.

[8] Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Крошкина Н.В., Кудряшова А.В. Иммуномодуляция и иммунорегуляция на системном и локальном уровне при беременности // Медицинская иммунология. — 2001. — Т. 3. — № 2. — C. 259.

[9] Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Кудряшова А.В., Посисеева Л.В., Панова И.А., Ма-лышкина А.И., Фетисова И.Н. Иммунологическая загадка беременности. — И.: Иваново, 2005. — 275 с.

[10] СухихГ.Т., Ванько Л.В. Иммунология беременности. — М.: Медицина, 2003. — 358 с.

[11] Тетруашвили Н.К. Диагностическая и прогностическая значимость определения цито-кинов у больных с привычным невынашиванием беременности: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. — М., 2005. — 28 с.

[12] Тетруашвили Н.К. Ранние потери беременности (иммунологические аспекты, пути профилактики и терапии): Автореф. дис. ... докт. мед. наук. — М., 2008. — 32 с.

[13] Улейская Г.И., Пономаренко М.В. Сравнительная оценка иммунного статуса у пациенток с невынашиванием беременности и бесплодием // Медицинская иммунология. — 2007. — Т. 9. — № 2—3. — С. 266—267.

[14] Шмагель К.В., Черешнев В.А. Иммунитет беременной женщины. — М.: Медицинская книга, 2003. — 226 с.

[15] Ярилин А.А. Основы иммунологии. — М.: Медицина, 1999. — 608 с.

[16] Blidaru I., Cianga C., Zlei M., Zugun F., Tepelus M., Slatineanu S., Carasevici E. The evolution of the natural-killer-dependent cytotoxicactivity during normal pregnancy // Rev. Med. Chir. Soc. Med. Nat. Iasi. — 2000. — V. 104. — № 4. — Р. 75—78.

[17] Clark D.A., Vince G., Flanders КС., Hirte H., Starkey P. CD56+ lymphoid ceels in human first trimester pregnancy deciduas as a source of novel transforming growth factor-beta 2-re-lated immunosupressive factors // Hum. Reprod. — 1994. — Vol. 9. — P. 2270—2277.

FUNCTIONAL STATUS OF NATURAL KILLERS IN PERIPHERAL VENOUS BLOOD AND DECIDUAS OF WOMEN WITH HABITUAL NONCARRING OF PREGNANCY PREMATURE

I.B. Lepilova, N.Yu. Borzova, N.Yu. Sotnikova, N.V. Kroshkina

Ivanovo state scientific and research institute of Materniti and Childhood Pobeda str., 20, Ivanovo, Russia, 153045

We are examened 50 women with normal pragnancy and miscarige in first trimester. CD56+ lymphoid ceels in blood and deciduas help us to found a pathogenic mechanism of miscarige.