Характеристика персистентных свойств культур микроорганизмов Staphylococcus aureus, выделенных у собак и кошек при наружном отите

непрямой иммунофлуоресценции путем гипериммунизации кроликов : патент на изобретение № 2355422 /

A.П. Красиков, А.Е. Жонголович // Бюллетень № 20. Изобретения. Полезные модели 2009.

11. Красиков, А.П. Стимуляция иммунного ответа с помощью бетулина при его сочетанном применении с вакцинами против лептоспироза и фузобактериоза животных / А.П. Красиков, И.Г. Алексеева, А.В. Ушаков // Ветеринарная патология. - 2014. - № 2 (48). - С. 45-50.

12. Василенко, Ю.К. Фармакологические свойства тритерпеноидов коры березы / Ю.К. Василенко,

B.Ф. Семенченко // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1993. - № 4. - С. 53-55.

Красиков Александр Пантелеевич, доктор вет. наук, профессор, Омский ГАУ, krasikovap1950@mail.ru; Колычев Николай Матвеевич, доктор вет. наук, профессор, Омский ГАУ; Земляницына (Бессонова) Ирина Юрьевна, аспирант, Омский ГАУ.

direct immunofluorescence by hyper immunization of rabbits: Patent for the invention No. 2355422 / A.P. Krasikov, A.E. Zhongolovich // Bulletin No. 20. Inventions. Useful models 2009.

11. Krasikov A.P. Stimulation of the immune answer by means of a betulin at its combined application with vaccines against leptospirosis and a fuzobakterioz of animals / A.P. Krasikov, I.G. Alekseeva, A.V. Ushakov // Veterinary pathology. - 2014. - № 2 (48). - P. 45-50.

12. Vasilenko Yu.K. Pharmacological properties of triterpenoid of birch / Yu.K. Vasilenko, V.F. Semenchenko // Experimental and clinical pharmacology. - 1993. - № 4. -P. 53-55.

Krasikov Alexander Panteleevich, Doctor. of Veterinary Sciences., Full Professor, Omsk SAU, krasikovap1950@mail.ru; Kolychev Nikolay Matveevich, Doctor. of Veterinary Sciences., Full Professor, Omsk SAU; Zemlyanitsyna (Bessonova) Irina Yurevna, Postgraduate, Omsk SAU.

Статья поступила в редакцию 16 марта 2016 г.

УДК 619:576.8 ГРНТИ 68.41.53

Ж.Г. Мачалова, В.И. Плешакова, И.Г. Алексеева, Н.А. Лещева, Н.М. Колычев

ХАРАКТЕРИСТИКА ПЕРСИСТЕНТНЫХ СВОЙСТВ КУЛЬТУР

МИКРООРГАНИЗМОВ STAPHYLOCOCCUS A UREUS, ВЫДЕЛЕННЫХ У СОБАК И КОШЕК ПРИ НАРУЖНОМ ОТИТЕ

В структуре болезней домашних плотоядных животных наружные отиты - одна из самых распространенных патологий органов слуха. В её патогенезе значителен феномен длительного персистирования возбудителей в макроорганизме, ведущая роль отведена стафилококковой инфекции. Изучены перси-стентные характеристики выделенных культур Staphylococcus aureus, а именно антилизоцимная (АЛА), антиинтерфероновая (АИА) и антикомплементарная активности (АКА). Установлена зависимость перси-стентных характеристик Staphylococcus aureus от свойств течения наружного отита у собак и кошек. При хроническом течении инфекции отмечено увеличение среднего показателя адгезивности по сравнению с острым процессом и уменьшение антилизоцимной активности.

Ключевые слова: персистентные свойства, наружный отит, антилизоцимная активность, антиинтерфероновая активность, антикомплементарная активность.

J.G. Mahalova, V.I. Pleshakova, I.G. Alekseeva, N.A. Lescheva, N.M. Kolychev

CHARACTERIZATION OF PERSISTENT PROPERTIES OF STAPHYLOCOCCUS AUREUS GERM CULTURES EXTRACTED FROM DOGS AND CATS HAVING OTITIS EXTERNA

In the structure of diseases of domestic carnivores otitis externa is one of the most common pathologies of hearing organs. The phenomenon of long-term persistence of pathogens in macroorganism plays the major role in the pathogenesis of this disease with the leading role assigned to staphylococcus infection. The persistent characteristics of the extracted Staphylococcus aureus germ culture have been studied, and namely anti-lysozyme activity (ALA), anti-interferon activity (AIA) and the anti-complementary activity (ACA). The dependence of the persistent characteristics of Staphylococcus aureus on the nature of the course of otitis externa in

© Мачалова Ж.Г., Плешакова В.И., Алексеева И.Г., Лещева Н.А., Колычев Н.М., 2016

dogs and cats has been revealed. During a chronic course of infection an increase in the average adhesion is marked in comparison with an acute course as well as a decrease in antilysozymic activity.

Keywords: persistent characteristics, otitis externa, antilysozyme activity, anti-IFN activity, anticomlpe-mentary activity.

Введение

В структуре болезней домашних плотоядных животных наружные отиты - одна из самых распространенных патологий органов слуха. По данным В.Н. Грязина, наружные отиты регистрируют более чем у 20 % собак и 8 % кошек [8]. Особую трудность в диагностике и лечении представляют наружные отиты, обусловленные бактериями и грибами, как в монокультуре, так и в ассоциации. Зачастую болезнь принимает хроническую форму течения и может длиться до двух-трех и более лет [5]. В её патогенезе значителен феномен длительного персистирования возбудителей в макроорганизме, выживают бактерии, адаптируясь к факторам защиты хозяина, это может быть связано с инактивацией последних [9].

В настоящее время существует убедительные данные: микроорганизмы способны инакти-вировать либо связывать многие из компонентов гуморальной и клеточной антимикробной защиты макроорганизма (лизоцим, лактоферин, карнизин и др.) [1, 2, 3, 5, 10]. Вместе с тем, имеются немногочисленные, порой и противоречивые сведения о характере и степени проявления перси-стентных свойств сочленов бактериоценоза у собак и кошек при наружных отитах бактериальной этиологии. Принято считать, что ведущая роль в патогенезе воспалительных заболеваний ушей -у стафилококковой инфекции [4, 6, 7].

Цель работы: определить распространение и выраженность факторов персистенции культур Staphylococcus aureus, выделенных у собак и кошек при наружном отите бактериальной этиологии.

Материалы и методы исследований

Работа выполнена в 2013-2015 гг. на кафедре ветеринарной микробиологии, инфекционных и инвазионных болезней ИВМ ФГБОУ ВО Омский ГАУ, в бактериологическом отделе ГУ «Омская областная ветеринарная лаборатория» и ветеринарных клиниках г. Омска. Объектом исследования служили 28 культур микроорганизмов, выделенных от 18 собак и 10 кошек разных половозрастных групп и пород, принадлежащих частным владельцам. Животных содержали в благоустроенных квартирах и в условиях частного сектора. Диагноз «острое и хроническое гнойное воспаление среднего уха (отит)» указанным домашним плотоядным животным был поставлен на основании клинических признаков (выделение гнойного экссудата из уха, понижение слуха различной степени, прободение барабанной перепонки) и лабораторных исследований отделяемого.

Пробы отделяемого содержимого из наружного слухового прохода у больных животных отбирали с помощью стерильного инструмента в стерильные пробирки. Выделение и идентификацию стафилококков проводили общепринятыми бактериологическими методами [10]. При определении видовой принадлежности культур рода Staphylococcus использовали набор микротестов фирмы Lachema Staphylococcus (Чехия). Во всех случаях выделения Staphylococcus aureus учитывали, что число микробных клеток 103 и более в смыве с тампона - показатель высокой об-семененности, свидетельствующий о бактерионосительстве, представляющем эпизоотологиче-скую опасность.

Для изучения персистентных характеристик наряду с общепринятыми биологическими свойствами у выделенных культур Staphylococcus aureus устанавливали антилизоцимную активность (АЛА), антиинтерфероновую активность (АИА) и антикомплементарную активность (АКА) согласно методическим указаниям О.В. Бухарина [4, 11]. Адгезивные свойства выделенных культур стафилококков определяли экспресс-методом, предложенным В.И. Бриллисом (1986), оценивали их с помощью среднего показателя адгезии (СПА). Нулевая адгезивность при СПА 0-1,0; низкая при СПА 1,01-2,02; средняя при 2,01-4,0 и высокая свыше 4,0. Статистическая обработка полученных результатов проведена с помощью пакета прикладных программ.

Результаты исследований

Проведенные исследования выявили некоторые отличия в проявлении степени адгезии стафилококков, выделенных из наружного слухового канала собак и кошек при наружном оти-

те, в зависимости от характера течения болезни. Так, у собак и кошек при хроническом течении наружного отита средний показатель адгезии культур Staphylococcus aureus был достоверно больше по сравнению с показателем при остром течении инфекции (табл. 1). Среднепопуляци-онный показатель антиинтерфероновой активности выделенных культур Staphylococcus aureus увеличивался у собак при остром течении, а у кошек - при хроническом. При анализе показателей антикомплементарной активности культур стафилококков установлено, что, как у кошек, так и у собак, максимального значения (0,72 + 0,90 + 0,1) они достигали при хроническом течении патологического процесса.

Таблица 1

Персистентные характеристики стафилококков, выделенных от собак и кошек при различном течении наружного отита

Показатель Собаки Кошки

Острое течение Хроническое течение Острое течение Хроническое течение

Средний показетель адгезивности (усл. ед) 1,73 ± 0,2 4,6 ± 0,6 2,3 ± 0,4 5,3 ± 0,8

Антилизоцимная активность (мкг/мл) 6,3 ± 0,4 2,2 ± 0,1 8,0 ± 0,6 3,6 ± 1,0

Антиинтерфероновая активность (усл. ед) 0,15 ± 0,03 0,11 ± 0,01 0,16 ± 0,02 0,21 ± 0,03

Антикомплементарная активность (усл. ед) 0,10 ± 0,02 0,72 ± 0,1 0,28 ± 0,03 0,9 ± 0,1

Зафиксировано, что персистентные свойства культур Staphylococcus aureus, выделенных в монокультуре, отличались от показателей стафилококков, изолированных в ассоциациях с другими микроорганизмами. Так, у культур в ассоциации с другими бактериями средний показатели адгезивности, антилизоцимной и антиинтерфероновой активности были достоверно выше по сравнению с культурами стафилококков, изолированных в монокультуре. В то же время показатель антикомплементарной активности у культур Staphylococcus aureus, выделенных в ассоциации с другими бактериями, зарегистрирован на более низком уровне (табл. 2).

Таблица 2

Персистентные характеристики стафилококков, выделенных в монокультуре и ассоциациях

Показатель Единица измерения Собаки Кошки

Монокультура Ассоциация Монокультура Ассоциация

Средний показатель адгезивности усл. ед 1,38 ± 0,1 4,3 ± 0,7 2,0 ± 0,3 4,8 ± 0,6

Антилизацимная активность мкг/мл 2,0 ± 0,3 6,1 ± 0,6 2,8 ± 0,6 7,4 ± 0,8

Антиинтерфероновая активность усл. ед 0,15 ± 0,03 0,3 ± 0,08 0,18 ± 0,02 0,4 ± 0,09

Антикомплементарная активность усл. ед 0,61 ± 0,01 0,10 ± 0,02 0,72 ± 0,02 0,20 ± 0,03

Заключение

Результаты проведенных исследований показали, что для культуры стафилококков, выделенных у собак и кошек при наружных острых и хронических отитах, характерно наличие выраженных персистентных свойств возбудителей, а именно: адгезивности антилизоцимной, антиинтерфероновой и антикомплементарной активности. Установлена зависимость персистентных характеристик Staphylococcus aureus от характера течения наружного отита. Так, при хроническом течении инфекции у собак и кошек отмечены увеличение среднего показателя адгезивности по сравнению с острым процессом и уменьшение антилизоцимной активности. Характерная особенность микропаразитоценоза наружного слухового канала собак и кошек при наружных отитах - усиление персистентных свойств культуры изученного возбудителя, выделенного в ассоциации с другими микроорганизмами. Последнее, на наш взгляд, связано с синергическим действием сочленов микробиоценоза на ряд персистентных характеристик стафилококков.

Список литературы

1. Антилизоцимная активность микроорганизмов - возбудителей отитов у собак / А.С. Акажигитов [и др.] // Проблемы медицинской микологии. - 2015. -№ 2. - С. 35

2. Бриллис, В.И. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов / В.И. Бриллис, Т.А. Бриллис, Х.П. Ленцнер // Лабораторное дело. -1986. - № 4. - С. 120.

3. Изучение антикомплементарной активности стафилококков / О.В. Бухарин, Ю.Л. Брудастов, Д.Г. Дерябин // Клиническая лабораторная диагностика. - 1992. - № 11-12. - С. 68-71.

4. Бухарин, О.В. Персистенция патогенных бактерий / О.В. Бухарин. - М. : Медицина, 1999. - С. 48-56.

5. Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов / О.В. Бухарин [и др.] // Микробиология. - 1984. - № 2. - С. 7-29.

6. Мачалова, Ж.Г. Наружные отиты у собак и кошек в условиях мегаполиса / Ж.Г. Мачалова, В.И. Плешакова, Н.А. Лещёва // Современные проблемы анатомии, гистологии и эмбриологии животных: материалы V Всерос. научн. интернет-конф. с между-нар. участием. - Казань, 2014. - С. 115-120.

7. Мачалова, Ж.Г. Эпизоотологические особенности наружных отитов в популяции собак в условиях города / Ж.Г. Мачалова, В.И. Плешакова, Н.А. Лещёва // Современные проблемы ветеринарной онкологии и иммунологии : материалы Междунар. науч.-практ. конф. -Саратов : Наука, 2014. - С. 157-161.

8. Некоторые аспекты этиологии патогенеза и лечения отитов у собак / В.Н. Грязин, Н.Б. Бащенко // Новосибирский ГАУ. - 2002. - С. 13-17.

9. Потехина, Л.П. Антикарнозиновая активность стафилококков : автореф. дис. ... канд. мед. наук / Л.П. Потехина. - Оренбург, 2010. - 18 с.

10. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / под ред. М.О. Биргера. - М., 1982. - С. 125-129.

11. Чернова, О.Л. Антилизоцимная активность стафилококков, выделенных при бактерионосительстве: автореф. дис. ... канд. мед. наук / О.Л. Чернова. - Оренбург. - 2004. - 20 с.

Мачалова Жанна Геннадиевна, аспирант, Омский ГАУ, vetmik.kaf@omgau.org; Плешакова Валентина Ивановна, доктор вет. наук, профессор, Омский ГАУ; Алексеева Ирина Геннадьевна, кандидат вет. наук, доцент, Омский ГАУ, irinaalekseeva63@mail.ru; Лещева Надежда Алексеевна, кандидат вет. наук, доцент, Омский ГАУ, lescheva@list.ru; Колычев Николай Матвеевич, доктор вет. наук, профессор, Омский ГАУ.

References

1. The antilysozyme activity of microorganisms -causative agents of otitis in dogs / A.S. Akazhigitov etc. // Problems of medical mikologii. - 2015. - № 2. -P. 35.

2. Brillis V.I. Methods of studying microorganisms adhesive process / V.I. Brillis, T.A. Brillis, H.P. Lentsner // Laboratory delo.- 1986. - № 4 - P. 120.

3. Study of anticomplementary activity of staphylococci / O.V. Buharin, Yu.L. Brudastov, D.G. Deryabin // Clinical Laboratory diagnostika. - 1992. - № 11-12. - S. 68-71.

4. Bukharin O.V. Persistentsiya pathogenic bakte-riy. - M .: Medicine, 1999. - S. 48-56.

5. Metod definition of antilysozyme activity of microorganisms / O.V. Bukharin and others. // Journal of Microbiology. - 1984. - № 2. - P. 7-29.

6. Machalova J.G. Otitis externa in dogs and cats in a metropolis / J.G. Machalova, V.I. Pleshakova, N.A. Leshcheva // Modern problems of anatomy, histology and embryology of animals: materials V All-Russian scientific internet conference with international participation. - Kazan, 2014. - P. 115-120.

7. Machalova J.G. Epizootologichesky features of otitis externa in dogs population in urban / J.G. Machalova, V.I. Pleshakova, N.A. Leshcheva // Modern problems of veterinary oncology and immunology: materials of the International scientific-practical conference // Saratov : Science, 2014.- P. 157-161.

8. Some aspects of the etiology of the pathogenesis and treatment of otitis dogs. /V.N Gryazin, N.B. Baschenko // Novosibirsk State Agrarian University. - 2002. -P. 13-17.

9. Potekhina L.P. Anticarnosine activity staphylococci: abstract. Dis. ... cand. honey Science / L.P. Potehina. Orenburg, 2010. - 18 p.

10. Spravochnik microbiological and virological research methods / ed. M.O. Birgera. - M. 1982. -P. 125-129.

11. Chernova O.L. Antilysozyme activity of staphylococci isolated during bacteriocarrier: Abstract. Dis. ... cand. honey Science / O.L. Chernova. - Orenburg, 2004. - 20 p.

Machalova Zhanna Gennadievna, Postgraduate, Omsk SAU, vetmik.kaf@omgau.org; Pleshakova Valentina Ivanovna, Doctor of Veterinary Sciences, Professor, Omsk SAU; Alekseeva Irina Gennadievna, Candidate of Veterinary Sciences, Associate Professor, Omsk SAU, iri-naalekseeva63@mail.ru; Leshcheva Nadezhda Alekseev-na, Candidate of Veterinary Sciences, Associate Professor, Omsk SAU, lescheva@list.ru; Kolychev Nikolay Mat-veevich, Doctor of Veterinary Sciences, Professor, Omsk SAU

Статья поступила в редакцию 1 марта 2016 г.