КОМПОЗИЦИИ КОРМА ДЛЯ ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ
PET FOOD COMPOSITIONS

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0001] Домашняя кошка (Felis domesticus) успешно выживает в условиях пустыни и адаптируется к сохранению воды в организме с помощью выработки мочи, которая является очень концентрированной по сравнению с мочой большинства других млекопитающих. Однако выработка высококонцентрированной мочи может оказывать вредное воздействие, такое как усиление развития мочекаменной болезни и других менее хорошо охарактеризованных состояний, таких как идиопатический цистит кошек. Состояние мочевыводящих путей из-за плохой гидратации организма иногда называют заболеванием нижнего отдела мочевыводящих путей кошек (FLUTD).
[0002] FLUTD может являться у кошек состоянием, угрожающим жизни. В частности, проблема, с которой сталкиваются владельцы кошек с FLUTD, заключается в том, что это заболевание становится угрожающим для жизни кошки до момента времени, когда симптомы становятся заметны владельцу. Кристаллические вещества в виде камней могут оседать в мочевыводящих путях кошки и затруднять их проходимость. Типы камней включают струвит, оксалат кальция, урат, цистин, фосфат кальция и силикат. Камни из струвита и оксалата кальция несомненно являются самыми распространенными у кошек. Если заболевание оставить без лечения, то кошка с «заблокированными» путями умрет, так как моча задерживается и повреждает почки, а токсины накапливаются в крови.
[0003] Если кошка может начать больше пить, то это может разбавить мочу и улучшить тем самым состояния кошачьей мочевыводящей системы, возникающие вследствие низкой гидратации. Такое разбавление действует на двух уровнях: во-первых, путем снижения концентрации электролитов в моче (что предполагает то, что кошка не пьет больше, просто для компенсации повышенного содержания солей в пище), а затем путем увеличения частоты мочеиспускания и следовательно уменьшения количества времени, проведенного мочой в мочевом пузыре. Обычно кошки пьют только приблизительно 30 миллилитров воды на килограмм массы тела в сутки, и самопроизвольное питье трудно увеличить. Обеспечение влажной пищей помогает увеличить потребление воды животным, которое не пьет очень много, однако этого не достаточно из-за того, что все еще не достаточно воды поглощается или из-за того, что происходит недостаточное увеличение диуреза. Кроме того, кошки, у которых проявляется урологический синдром, часто страдают ожирением или имеют избыточный вес. Таким образом, когда требуется лечить нарушения со стороны мочевыводящих путей, и в частности FLUTD, предпочтительным может быть обеспечение влажной пищей, однако этого не достаточно, т.е. такая пища не обеспечивает достаточной гидратации организма, может не приниматься кошкой или даже может вызывать дополнительное увеличение веса и/или ожирение, если потребляемое количество плохо контролируется.
[0004] Включение некоторых омега-3-полиненасыщенных жирных кислот, таких как докозагексаеновая кислота («DHA») и эйкозапентаеновая кислота («ЕРА»), в кормовые композиции для домашних животных общеизвестно. И хотя известно, что некоторые корма для кошек содержат как омега-3-, так и омега-6-полиненасыщенные жирные кислоты, нет каких-либо указаний или свидетельств того, что жирные кислоты ответственны/играют решающую роль в уровнях гидратации. Вследствие этого, сегодня существует необходимость в способах и композициях для увеличения гидратации организма у кошек, которые таким образом приводят к лечению, уменьшению, ингибированию или облегчению состояний, таких как FLUTD.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ
[0005] Неожиданно было обнаружено, что регулирование соотношения определенных омега-3- и омега-6-полиненасыщенных жирных кислот в корме для кошек приведет в результате к снижению удельного веса мочи у кошки и сниженному риску образования камней оксалата кальция, как указано с помощью индекса риска образования оксалата кальция (CORI). В частности, соотношение АА к ЕРА+DHA [АА:(ЕРА+DHA)], составляющее менее чем 1, снижает удельную плотность мочи кошки и снижает CORI как у молодых, так и у зрелых взрослых кошек без дегидратации животного.
[0006] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу снижения удельного веса мочи и значения CORI у кошки, предусматривающему питание кошки кормовой композицией, содержащей АА, ЕРА и DHA, где соотношение АА:(ЕРА+DHA) находится в диапазоне от 0,1:1 до 0,9:1, и общее количество АА, ЕРА и DHA составляет от 0,05 до 1,5% сухого веса.
[0007] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу снижения удельного веса мочи и значения CORI у кошки, предусматривающему питание кошки кормовой композицией, содержащей АА, ЕРА и DHA, где соотношение АА:(ЕРА+DHA) находится в диапазоне от 0,1:1 до 0,9:1, и общее количество АА, ЕРА и DHA составляет от 0,05 до 1,5% сухого веса, и при этом кормовая композиция характеризуется соотношением общего количества омега-6-жирных кислот и общего количества омега-3-жирных кислот, (n6:n3), находящимся в диапазоне от приблизительно 2:1 до приблизительно 8:1.
[0008] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания или патологического состояния у кошки, возникающего вследствие низкой гидратации, предусматривающему питание кошки кормом, содержащим АА, ЕРА и DHA, где соотношение АА:(ЕРА+DHA) находится в диапазоне от 0,1:1 до 0,9:1, и общее количество АА, ЕРА и DHA составляет от 0,05 до 1,5% сухого веса.
[0009] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания или патологического состояния у кошки, возникающего вследствие низкой гидратации, предусматривающему питание кошки кормом, содержащим АА, ЕРА и DHA, где соотношение АА:(ЕРА+DHA) находится в диапазоне от 0,1:1 до 0,9:1, общее количество АА, ЕРА и DHA составляет от 0,05 до 1,5% сухого веса, и при этом кормовая композиция характеризуется соотношением общего количества омега-6-жирных кислот и общего количества омега-3-жирных кислот, (n6:n3), находящимся в диапазоне от приблизительно 2:1 до приблизительно 8:1.
[0010] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к аппетитной диетически полноценной кормовой композиции для кошек, содержащей АА, ЕРА и DHA в количестве, эффективном для улучшения гидратации у кошки, где кормовая композиция вместе с водой является аппетитной и питательной в качестве единственного рациона питания для кошки, и где соотношение АА:(ЕРА+DHA) находится в диапазоне от 0,1:1 до 0,9:1, и общее количество АА, ЕРА и DHA составляет от 0,05 до 1,5% сухого веса.
[0011] В дополнительных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к аппетитной диетически полноценной кормовой композиции для кошек, содержащей АА, ЕРА и DHA в количестве, эффективном для улучшения гидратации у кошки, где кормовая композиция вместе с водой является аппетитной и питательной в качестве единственного рациона питания для кошки, и где соотношение АА:(ЕРА+DHA) находится в диапазоне от 0,1:1 до 0,9:1, и общее количество АА, ЕРА и DHA составляет от 0,05 до 1,5% сухого веса, и где в композиции присутствуют другие омега-3- и омега-6-жирные кислоты, включенные в них. В таких вариантах осуществления кормовая композиция характеризуется соотношением общего количества омега-6-жирных кислот и общего количества омега-3-жирных кислот (n6:n3), находящимся в диапазоне от приблизительно 2:1 до приблизительно 8:1.
[0012] Дополнительные области применения настоящего изобретения станут очевидными из подробного описания, представленного в настоящем документе далее. Следует понимать, что хотя подробное описание и конкретные примеры раскрывают предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения, они предназначены лишь для иллюстративных целей и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0013] Настоящее изобретение станет более понятным из подробного описания и прилагаемых графических материалов, где:
[0014] На фигуре 1 показан вариант осуществления настоящего изобретения, где многолуночный планшет, который содержит несколько растворов оксалата щелочных металлов, характеризующихся различными концентрациями оксалата щелочных металлов, получают путем последовательного разбавления раствора оксалата щелочных металлов по всем рядам многолуночного планшета. Добавляли аликвоты 100 мкл мочи в лунки другого многолуночного планшета, и аликвоты 100 мкл отбирали из лунок планшета с оксалатом, и добавляли в соответствующие лунки планшета с мочой.
[0015] На фигуре 2А изображен вариант осуществления настоящего изобретения, где многолуночный планшет, который содержит несколько растворов оксалата щелочных металлов, характеризующихся различными концентрациями оксалата щелочных металлов, получают путем последовательного разбавления раствора оксалата щелочных металлов по всем рядам лунок многолуночного планшета.
[0016] На фигуре 2В изображен многолуночный планшет, содержащий несколько, например цитратных, растворов, характеризующихся различными концентрациями цитрата, полученного путем последовательного разбавления цитратного раствора вниз по колонкам лунок многолуночного планшета.
[0017] На фигуре 2С изображены аликвоты 100 мкл мочи, добавленные в лунки другого многолуночного планшета; и аликвоты 100 мкл, взятые из лунок планшета с оксалатом, и аликвоты 100 мкл, взятые из лунок планшета с цитратом и добавленные в соответствующие лунки планшета с мочой. Каждая лунка в готовом многолуночном планшете теперь содержала конкретные концентрации цитрата и оксалата в определенном объеме мочи.
[0018] На фигуре 3 показан график поглощения мочи 8 различных кошек при 585 нм по сравнению с концентрацией оксалата, добавленного в мочу.
[0019] На фигуре 4 показан график, демонстрирующий корреляцию между количеством оксалата, добавленным общепринятым способом титрования, и концентрацией оксалата в последней прозрачной лунке в способе по настоящему изобретению.
[0020] На фигуре 5 показан график поглощения мочи различных кошек при 585 нм по сравнению с концентрацией оксалата, добавленного в мочу.
[0021] На фигуре 6 представлен график, показывающий концентрацию оксалата в последней прозрачной лунке для каждой кошки в эксперименте из примера 5.
[0022] На фигуре 7 показан график, демонстрирующий корреляцию между количеством оксалата, добавленным общепринятым способом титрования, и концентрацией оксалата в последней прозрачной лунке в способе по настоящему изобретению.
[0023] На фиг. 8 показана схема наборов в соответствии с настоящим изобретением. На фигуре 8а) показан вариант осуществления, предусматривающий пластину для TLC с индикатором Са2+ и единичной концентрацией оксалата. На фигуре 8b) показан вариант осуществления, предусматривающий пластину для TLC с индикатором Са2+ и градиентом концентрации оксалата. На фигуре 8с) показан вариант осуществления с модулем бумаги «для определения рН», где в полосках, характеризующихся различными концентрациями оксалата, содержится оксалат и индикатор Са2+. На фигурах 8d) и 8е) показаны виды соответственно сверху и сбоку варианта осуществления, предусматривающего пластину с лунками, при этом каждая лунка содержит оксалат с индикатором Са2+ в жидкой, гелеобразной или твердой форме. Содержимое лунок может быть покрыто инертной водорастворимой пленкой.
[0024] На фигуре 9 показана схема TLC, бумага для определения рН и небольшие хорошо известные варианты осуществления наборов по настоящему изобретению.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
[0025] Следующее описание предпочтительного(-ых) варианта(-ов) осуществления является лишь иллюстративным по своей природе и никоим образом не предназначено для ограничения настоящего изобретения, его практического использования или путей применения.
[0026] По всему тексту данного документа диапазоны используются в качестве сокращенного обозначения для описания всех без исключения значений, которые находятся в пределах диапазона. В качестве граничного значения диапазона может быть выбрано любое значение в пределах диапазона. Кроме того, все ссылки, приведенные в данном документе, тем самым включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. В случае конфликта определений в настоящем изобретении и в приведенной ссылке, настоящее изобретение является предпочтительным. Если не указано иное, то все значения процентного содержания и количества, указанные в данном документе и в других местах настоящего описания, следует понимать как относящиеся к значениям процентного содержания по весу. Все процентные содержания, указанные в данном документе, приведены по весу сухого вещества, если специально не оговорено иное.
[0027] В контексте данного изобретения термины «лечить» или «лечение», используемые в данном документе, означают реверсию, облегчение, смягчение или подавление прогрессирования нарушения или состояния, в отношении которых применяется такой термин, или одного или более симптомов такого нарушения или состояния. При использовании в данном документе и прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа означают также множественное число, если контекст явно не предусматривает иное.
[0028] В контексте настоящего изобретения термин «приблизительно» может относиться к вариации ±0,01%, ±0,1%, ±0,5%, ±1%, ±5%, ±10%, ±20% или ±25% от указанного значения. Например, в некоторых вариантах осуществления «приблизительно 50 процентов» может означать изменение от 45 до 55 процентов. Также, например, в некоторых вариантах осуществления «приблизительно 0,5 процентов» может означать изменение от 0,45 до 0,55 процентов. Для двадцати диапазонов термин «приблизительно» может включать один или два целых числа, которые больше и/или меньше, чем у перечисленного целого.
[0029] Настоящее изобретение направлено на композиции и способы лечения домашних кошек (Felis domesticus). Однако специалисту обычной квалификации в данной области техники будет понятно, что раскрытые в данном документе композиции и способы могут быть в равной степени применены к кошкам более крупных видов, таких как, например, львы, ягуары, рысь и т.д., собакам, сельскохозяйственным животным, людям, другим домашним животным, таким как, например, кролики, хомяки, песчанки или шиншиллы и т.д., или другим млекопитающим.
[0030] Определение удельного веса мочи представляет собой измерение степени разбавления мочи. Чем выше значение удельного веса мочи, тем более плотной/концентрированной является моча. Нормальный диапазон значений удельного веса мочи у кошки, как правило, составляет от 1,030 до 1,060. Очень низкое значение удельного веса является показателем почечной недостаточности, тогда как высокое значение удельного веса мочи означает то, что моча более концентрирована, а следовательно существует большая вероятность того, что будут оседать камни и вызывать осложнения.
[0031] Удельный вес мочи регулируется комбинацией (а) выработки мочи посредством гломерулярной фильтрации в собирающие протоки почки и (b) резорбции воды из собирающего протока для возврата в кровоток. Этот способ частично регулируется эйкозаноидным простагландином Е2 (PGE2). PGE2 связывается с рецепторами простагландина Е на тубулярной клетке почки и посредством активации вторичных мессенджеров регулирует водные каналы и натриевые каналы, регулирующие баланс воды и натрия в организме.
[0032] Авторы настоящего изобретения с использованием исследования ассоциаций на уровне целого генома между генотипами кошек и их индивидуального удельного веса мочи обнаружили генетический локус, содержащий ген синтазы 3 простагландина Е, - ключевого фермента в механизме, который синтезирует PGE2 из АА. Кроме того, было обнаружено, что различные соотношения АА (предшественника PGE2) к ЕРА+DHA в рационе питания кошек коррелируют с их значениями удельного веса мочи. Таким образом, было обнаружено, что регулирование количества АА в рационе питания может снизить удельный вес мочи у кошек. Было также выявлено, что даже если моча у кошек, которых кормят композицией по настоящему изобретению, более разбавлена значение осмоляльности их крови также уменьшается, что указывает на то, что эти животные пьют больше воды и что их общий водный баланс увеличился, т.е. их организмы больше гидратированные.
[0033] Высокое значение относительного перенасыщения мочи («RSS») является показателем предрасположенности к образованию мочевых камней, как оксалатных, так и струвитных камней. Было обнаружено, что снижение удельного веса коррелирует со снижением значения RSS. Следовательно, биологическая польза от выработки более гидратированной мочи у кошек заключается в снижении риска образования камней.
2+
[0034] Контроль мочекаменной болезни является областью активного исследования у многих производителей кормов для домашних животных и независимых исследователей. Индекс риска образования оксалата кальция (CORI) определяли посредством титрования цельной мочи с помощью раствора оксалата натрия до появления осаждения. Значение CORI определяли путем деления концентрации ионов кальция ([Са]) на количество оксалата, добавленное вплоть до точки осаждения. Также считается, что CORI также учитывает ингибиторы образования кристаллов в моче и промоторы в моче собаки или кошки. Тестирование CORI, проведенное вместе с RSS, может привести к столь необходимому пониманию риска снижения образования уролитов в виде оксалата кальция у домашних животных. Этот тип комбинированного тестирования также может предоставить клинически релевантную информацию, которая, как и в случае применения специфической терапии (диеты или лекарственного средства), целенаправленно воздействующей на снижение риска образования уролитов, представляет действительно сниженный риск рецидива образования оксалата кальция у отдельного пациента.
[0035] В некоторых вариантах осуществления значение CORI определено с применением способа, включающего получение матрицы, содержащей несколько образцов оксалата щелочных металлов, где по меньшей мере один из образцов характеризуется концентрацией оксалата щелочных металлов, которая отличается от концентрации оксалата щелочных металлов в по меньшей мере одном другом образце; осуществление реакции известного объема образца мочи животного с каждым из образцов оксалата щелочных металлов в матрице с образованием оксалата кальция в каждом образце; необязательно инкубирование каждого образца, образованного на стадии b), с модификатором образования камней оксалата кальция; и определение минимальной концентрации оксалата щелочных металлов, необходимой для осаждения оксалата кальция, где более низкая минимальная концентрация оксалата щелочных металлов, необходимая для осаждения оксалата кальция, связана с более высоким риском образования камней оксалата кальция в мочевыводящих путях животного. В некоторых вариантах осуществления концентрация оксалата щелочных металлов в по меньшей мере одном образце меньше, чем концентрация, при которой происходит насыщенность оксалатом щелочных металлов. В некоторых вариантах осуществления концентрация оксалата щелочных металлов в по меньшей мере одном образце на стадии а) меньше, чем концентрация, при которой происходит насыщенность оксалатом щелочных металлов. В определенных вариантах осуществления концентрация оксалата кальция в по меньшей мере одном образце, полученном на стадии b), меньше, чем концентрация, при которой происходит насыщенность оксалатом кальция.
[0036] В некоторых вариантах осуществления каждый образец оксалата щелочных металлов содержит раствор оксалата щелочных металлов, гель, содержащий оксалат щелочных металлов, твердый оксалат щелочных металлов или раствор оксалата щелочных металлов, осажденный на поверхности. В некоторых вариантах осуществления каждый образец оксалата щелочных металлов на стадии а) характеризуется концентрацией оксалата щелочных металлов, отличной от таковой для всех других образцов в матрице. В некоторых вариантах осуществления матрица содержит одну или более групп образцов оксалата щелочных металлов, где каждый образец в группе характеризуется концентрацией оксалата щелочных металлов, отличной от таковой для всех других образцов в группе.
[0037] В некоторых вариантах осуществления каждая группа образцов оксалата щелочных металлов представляет собой повторность каждой другой группы. В других вариантах осуществления каждый образец оксалата щелочных металлов предусмотрен в отдельной лунке в многолуночном планшете. В дополнительных вариантах осуществления каждая лунка в ряду многолуночного планшета характеризуется концентрацией оксалата щелочных металлов, отличной от всех остальных лунок в ряду. В еще одних вариантах осуществления каждая лунка в колонке многолуночного планшета характеризуется такой же концентрацией оксалата щелочных металлов, что и все остальные лунки в ряду.
[0038] В некоторых вариантах осуществления различные концентрации оксалата щелочных металлов получают путем серийного разбавления раствора оксалата щелочных металлов. В некоторых вариантах осуществления каждый образец оксалата щелочных металлов в матрице вводят в реакцию с разной аликвотой мочи из одного образца мочи. В некоторых вариантах осуществления каждый образец оксалата щелочных металлов из группы образцов оксалата щелочных металлов вводят в реакцию с разной аликвотой мочи из одного образца мочи.
[0039] В некоторых вариантах осуществления анализировали множество образцов мочи. В определенных вариантах осуществления аликвоты первого образца мочи вводят в реакцию с группой образцов оксалата щелочных металлов, и каждый из одного или более дополнительных образцов мочи вводят в реакцию с повторяющейся группой оксалата щелочных металлов для целей сравнения. В других вариантах осуществления один или более дополнительных образцов мочи собирают от того же животного, что и первый образец. В некоторых вариантах осуществления один или более дополнительных образцов мочи собирают у разных животных, отличных от первого образца.
[0040] В некоторых вариантах осуществления каждая аликвота мочи предусмотрена в отдельной лунке в многолуночном планшете. В некоторых вариантах осуществления каждая лунка в ряду многолуночного планшета характеризуется такой же концентрацией модификатора образования камней оксалата кальция, что и все остальные лунки в ряду. В некоторых вариантах осуществления каждая лунка в колонке многолуночного планшета характеризуется концентрацией модификатора образования камней оксалата кальция, отличной от всех остальных лунок в колонке. В некоторых вариантах осуществления различные концентрации модификатора получают путем серийного разбавления раствора модификатора.
[0041] В некоторых вариантах осуществления осаждение оксалата кальция определяют путем измерения мутности мочи. В некоторых вариантах осуществления мутность мочи измеряют путем определения оптической плотности мочи с помощью спектроскопии с поглощением. В некоторых вариантах осуществления оптическую плотность измеряют при длине волны 585 нм. В некоторых вариантах осуществления осаждение оксалата кальция определяют путем измерения концентрации свободных ионов кальция в образце мочи, где более низкая концентрация свободных ионов кальция коррелирует с повышенным осаждением оксалата кальция.
[0042] В некоторых вариантах осуществления концентрацию свободных ионов кальция в образце мочи определяют путем добавления кальций-специфического репортерного красителя к каждому образцу после стадии с), и при этом добавление красителя вызывает изменение цвета образца мочи, и осаждение оксалата кальция на стадии b) вызывает уменьшение изменения цвета относительно образца, не содержащего осажденного оксалата кальция, полученного в результате снижения концентрации свободных ионов кальция. В некоторых вариантах осуществления кальций-специфический репортерный краситель выбран из Fluo-3, Fluo-4, fura-2, indo-1, кальций зеленый-1, ореган зеленый, rhod-1, rhod-2, rhod-3, rhod-5F, x-Rhod, bapta-1, bapta-2 и bapta-6F. В некоторых вариантах осуществления отсутствие цвета образца соответствует полному осаждению оксалата кальция из образца мочи. В некоторых вариантах осуществления оксалат щелочных металлов представляет собой оксалат натрия.
[0043] В некоторых вариантах осуществления модификатор представляет собой соль, ион металла, небольшое органическое соединение, аминокислоту, пептид, белок, нуклеотид, полинуклеотид, сахарид, олигосахарид, метаболит или любую их комбинацию. В других вариантах осуществления модификатор представляет собой соединение с неизвестным эффектом в отношении образования камней оксалата кальция. В некоторых вариантах осуществления модификатор представляет собой цитрат, лактат, фосфат, сульфат, карбонат, хлорид, магний, натрий, мочевую кислоту, ксантин, цистеин, тиазидный диуретик, ацетилцеллюлозу натрия или любую их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления модификатор представляет собой цитрат калия.
[0044] В некоторых вариантах осуществления концентрацию ионов кальция в образце мочи определяют перед стадией b). В некоторых вариантах осуществления концентрацию ионов кальция определяют с помощью спектроскопии. В некоторых вариантах осуществления риск образования камней оксалата кальция прогнозируют с использованием соотношения концентрации ионов кальция в образце мочи, определенной перед стадией b), и минимального количества оксалат-ионов, необходимых для осаждения оксалата кальция из образца мочи.
[0045] В некоторых вариантах осуществления твердые частицы извлекают из образца мочи перед стадией b). В некоторых вариантах осуществления образец мочи разбавляют перед стадией b). В некоторых вариантах осуществления, если на стадии d) предполагается, что животное подвержено риску образования камней оксалата кальция, то животному вводят рацион питания, который снижает риск образования камней оксалата кальция.
[0046] В некоторых вариантах осуществления предусмотрен способ прогнозирования эффекта рациона питания в отношении риска или изменения риска образования камней оксалата кальция в мочевыводящих путях животного, включающий: i) кормление животного рационом питания и ii) применение любого из способов, описанных в данном документе, для прогнозирования риска или изменения риска образования камней оксалата кальция в мочевыводящих путях животного. В некоторых вариантах осуществления стадию ii) осуществляют перед и после стадии i).
[0047] В других вариантах осуществления предусмотрены способы лечения животного с повышенным риском развития образования камней оксалата кальция в мочевыводящих путях, включающие (i) идентификацию животного как находящегося под повышенным риском с применением любого из способов, описанных в данном документе, и (ii) перевод животного на рацион питания, который снижает риск образования камней оксалата кальция.
[0048] В некоторых вариантах осуществления применяют для прогнозирования образования камней оксалата кальция у животного, где набор содержит: i) множество образцов оксалата щелочных металлов, при этом каждый образец необязательно характеризуется различной концентрацией оксалата щелочных металлов; ii) необязательно один или более модификаторов образования камней оксалата кальция; iii) необязательно контейнер для образца мочи; iv) средства для определения концентрации ионов кальция, необязательно кальций-специфический репортерный краситель и v) инструкции по применению набора в соответствии с любым из способов, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления набор содержит контейнер, содержащий множество лунок, и каждая лунка содержит другой образец оксалата щелочных металлов. В некоторых вариантах осуществления содержимое каждой лунки покрыто водорастворимой пленкой. В некоторых вариантах осуществления образцы оксалата щелочных металлов наносят на поверхность. В определенных вариантах осуществления образцы оксалата щелочных металлов осаждаются в разнесенных областях. В некоторых вариантах осуществления разнесенные области расположены с целью повышения концентрации оксалата щелочных металлов. В некоторых вариантах осуществления образцы осаждаются с образованием градиента концентрации оксалата щелочных металлов. В некоторых вариантах осуществления поверхность представляет собой бумагу или картон. В других вариантах осуществления поверхность представляет собой планшет для тонкослойной хроматографии. В некоторых вариантах осуществления оксалат щелочных металлов, осажденный на поверхность, покрыт водорастворимой пленкой.
[0049] В по меньшей мере одном варианте осуществления композиции по настоящему изобретению представляют собой диетически полноценные кормовые композиции для кошек. Диетически полноценная композиция обеспечивает рацион питания, который включает достаточно питательных веществ для поддержания нормального состояния здоровья у здоровой кошки. Диетически полноценная композиция является аппетитной и в сочетании с водой обеспечивает единственный источник всех питательных веществ, необходимых для поддержания нормального состояния здоровья у здоровой кошки. Диетически полноценные композиции знакомы специалисту в данной области техники. Например, питательные вещества и ингредиенты, такие как описанные в данном документе, а также другие подходящие для кормовых композиций для животных и их рекомендованные количества могут быть найдены, например, в официальной публикации Official Publication of the Associate of American Feed Control Officials («AAFCO»), Inc., Nutrient Requirements of Dogs and Cats, 2006. Например, диетически полноценные кормовые продукты могут содержать белки, жиры, углеводы, пищевую клетчатку, аминокислоты, минеральные вещества, витамины и другие ингредиенты в количествах, известных специалистам в данной области техники.
[0050] Белок может поставляться с помощью любого из разнообразных источников, известных специалистам в данной области техники, в том числе источников растительного происхождения, источников животного происхождения или обоих. Источники животного происхождения могут включать, например, мясные продукты, мясные субпродукты, морепродукты, молочные продукты, яйца и т.д. Разновидности мясных продуктов могут включать, например, мясо птицы, рыбы и млекопитающих (например, крупного рогатого скота, свиней, овец, коз и т.п.). Мясные субпродукты включают, например, легкие, почки, мозг, печень, желудки и кишечники (освобожденные от всего или практически всего их содержимого). Белок может быть интактным, почти полностью гидролизованным или частично гидролизованным. Типичные количества белка в композициях по настоящему изобретению составляют по меньшей мере приблизительно 15% (или от приблизительно 15% до приблизительно 55%, или от приблизительно 30% до приблизительно 55%, или от приблизительно 33% до приблизительно 36%).
[0051] Жир может обеспечиваться с помощью любого из разнообразных источников, известных специалистам в данной области техники, включающих мясные продукты, мясные субпродукты, рыбий жир и растения. Источники жира растительного происхождения включают пшеницу, льняное семя, рожь, ячмень, рис, сорго, кукурузу, овес, пшено, зародыш пшеницы, зародыш кукурузы, соевые бобы, арахис и семя хлопчатника, а также масла, полученные из этих и других источников жира растительного происхождения. Композиции по настоящему изобретению, как правило, составляют по меньшей мере приблизительно 9% (или от приблизительно 9% до приблизительно 35%, или от приблизительно 10% до приблизительно 25%, или от приблизительно 15% до приблизительно 22%) от общего содержания жира.
[0052] АА может обеспечиваться из разнообразных природных источников. Печень, например куриная печень, имеет относительно высокое содержание АА. ЕРА также может быть обеспечена из разнообразных природных источников, например таких как рыбий жир. В дополнение к АА, ЕРА и DHA, жирные кислоты, которые могут включаться как часть жирового компонента в композиции по настоящему изобретению, содержат другие омега-3- и омега-6-жирные кислоты, такие как без ограничения альфа-линоленовая кислота, гамма-линоленовая кислота, линолевая кислота, октадекатетраеновая кислота (стеаридоновая кислота), стеариновая кислота, пальмитиновая кислота, олеиновая кислота или их смеси. Соотношение в пересчете на сухой вес от общего количества омега-6- до общего количества омега-3-жирных кислот (n6:n3) в композициях по настоящему изобретению может, как правило, находиться в диапазоне, составляющем от приблизительно 2:1 до 8:1, как альтернатива от приблизительно 3:1 до приблизительно 7,5:1, как альтернатива от приблизительно 4:1 до приблизительно 7:1 и как альтернатива от приблизительно 4,5:1 до приблизительно 6,5:1.
[0053] В некоторых вариантах осуществления в кормовых композициях, содержащих АА, ЕРА и DHA, соотношение АА:(ЕРА+DHA) может находится в диапазоне, составляющем от приблизительно 0,1:1 до приблизительно 0,9:1, как альтернатива от приблизительно 0,2:1 до приблизительно 0,8:1, как альтернатива от приблизительно 0,3:1 до приблизительно 0,7:1 и как альтернатива от приблизительно 0,4:1 до 0,6:1. Кроме того, объединенное количество АА, ЕРА и DHA может составлять от приблизительно 0,05 до приблизительно 1,5%, как альтернатива от приблизительно 0,1 до приблизительно 1%, как альтернатива от приблизительно 0,2 до приблизительно 0,8%, как альтернатива от приблизительно 0,3 до приблизительно 0,7% и как альтернатива от 0,4 до приблизительно 0,6% от сухого веса кормовой композиции. Кормовые композиции, характеризующиеся соотношением АА:(ЕРА+DHA) менее чем 1:1, можно использовать для понижения удельного веса мочи и значения CORI домашнего животного, которое характеризуется более низким содержанием влаги, чем в аналогичных кормовых композициях, характеризующихся соотношением АА:(ЕРА+DHA), которое значительно выше (например, от 2:1 до 5:1).
[0054] В определенных вариантах осуществления кормовые композиции, содержащие АА, ЕРА и DHA, характеризуются количеством АА, находящимся в диапазоне от приблизительно 0,05 до приблизительно 0,5%, как альтернатива от приблизительно 0,1 до приблизительно 0,3% и как альтернатива от приблизительно 0,1 до приблизительно 0,2%. Объединенное общее содержание ЕРА и DHA в кормовых композициях может находиться в диапазоне от приблизительно 0,1 до приблизительно 1%, как альтернатива от приблизительно 0,2 до приблизительно 0,8%, как альтернатива от приблизительно 0,3 до приблизительно 0,6% и как альтернатива от приблизительно 0,3 до приблизительно 0,5%.
[0055] Углеводы могут обеспечиваться с помощью любого из разнообразных источников, известных специалистам в данной области техники, включая овсяные волокна, целлюлозу, арахисовую шелуху, свекольный жом, пропаренный рис, кукурузный крахмал, кукурузную глютеновую муку или любые комбинации этих источников. Виды зерна, обеспечивающие углеводами, могут включать без ограничения пшеницу, кукурузу, ячмень и рис. Содержание углеводов в кормовых продуктах может определяться любым из множества способов, известных специалистам в данной области техники. Обычно процентное содержание углеводов может рассчитываться по содержанию не содержащего азот экстракта («NFE»), которое может рассчитываться следующим образом: NFE=100%-влажность %-белка %-жира%-золы %-неочищенной клетчатки %.
[0056] Пищевая клетчатка относится к компонентам растения, которые устойчивы к расщеплению пищеварительными ферментами животных. Пищевая клетчатка включает растворимые и нерастворимые волокна. Растворимая клетчатка устойчива к расщеплению и поглощению в тонком кишечнике и претерпевает полную или частичную ферментацию в толстом кишечнике, например, свекольный жом, гуаровая камедь, корень цикория, оболочки семян подорожника, пектин, голубика, клюква, тыква, яблоки, овсяные крупы, бобовые, цитрусовые, ячмень или горох. Нерастворимые клетчатка может обеспечиваться с помощью любого из разнообразных источников, включающих целлюлозу, цельнозерновые продукты, пустой овес, кукурузные отруби, семя льна, гроздья винограда, сельдерей, зеленую фасоль, цветную капусту, картофельные очистки, кожуру фруктов, кожуру овощей, шелуху арахиса и клетчатку сои. Неочищенная клетчатка включает нерасщепляемые компоненты, содержащиеся в клеточных стенках и содержимом клеток растений, таких как зерновые, например, шелуха зерновых, таких как рис, кукуруза и бобы. Типичные количества клетчатки в композициях по настоящему изобретению могут составлять от приблизительно 0 до 10% или от приблизительно 1% до приблизительно 5%.
[0057] Аминокислоты, в том числе незаменимые аминокислоты, могут добавляться к композициям по настоящему изобретению в виде свободных аминокислот или обеспечиваться с помощью любого из многих источников, например неочищенного бела, для композиции по настоящему изобретению. Незаменимые аминокислоты представляют собой аминокислоты, которые не могут синтезироваться организмом de novo или в достаточных количествах и поэтому должны обеспечиваться рационом питания. Незаменимые аминокислоты варьируют от вида к виду в зависимости от метаболизма организма. Например, принято считать, что для собак и кошек (и людей) незаменимыми аминокислотами являются фенилаланин, лейцин, метионин, лизин, изолейцин, валин, треонин, триптофан, гистидин и аргинин. Кроме того, таурин, хотя и формально не является аминокислотой, однако представляет собой производное цистеина незаменимое питательное вещество для кошек.
[0058] Композиции по настоящему изобретению также могут содержать одно или более из минеральных веществ и/или микроэлементов, например, кальций, фосфор, натрий, калий, магний, марганец, медь, цинк, хром, молибден, селен или железоникелевые соли, содержащие противоионы, такие как, например, хлорид, йодид, фторид, сульфид или оксид, в количествах, необходимых для предупреждения недостаточности и поддержания здоровья. Эти количества известны специалистам в данной области техники, например, как приведено в официальной публикации Official Publication of the Associate of American Feed Control Officials, Inc. («AAFCO»), Nutrient Requirements of Dogs and Cats, 2006. Типичные количества минеральных веществ составляют от приблизительно 0,1 до приблизительно 4% или от приблизительно 1% до приблизительно 2%.
1
2
6
12
[0059] Композиции по настоящему изобретению также могут включать витамины в количествах, необходимых для предупреждения недостаточности и поддержания состояния здоровья. Эти количества и способы измерения известны специалистам в данной области техники. Например, в официальной публикации Official Publication of the Associate of American Feed Control Officials, Inc. («AAFCO»), Nutrient Requirements of Dogs and Cats, 2006 предоставлены рекомендуемые количества таких ингредиентов для собак. Как рассматривается в данном документе, витамины могут включать без ограничения витамин А, витамин B, витамин В, витамин В, витамин В, витамин С, витамин D, витамин Е, витамин Н (биотин), витамин K, фолиевую кислоту, холин, инозитол, ниацин и пантотеновую кислоту. Типичные количества витаминов в композиции по настоящему изобретению составляют приблизительно от 0 до приблизительно 3% или от приблизительно 1% до приблизительно 2%.
[0060] Композиции по настоящему изобретению могут дополнительно содержать другие добавки, такие как улучшители вкуса и стабилизаторы в количествах и комбинациях, знакомых специалисту в данной области техники. Стабилизирующие вещества включают, например, вещества, которые способствуют увеличению срока годности композиции. Другие примеры других таких добавок, потенциально подходящих для включения в композиции по настоящему изобретению, включают, например, консерванты, красители, антиоксиданты, ароматизаторы, синергически действующие вещества и вещества, усиливающее экскрецию, консервирующие газы, стабилизаторы, эмульгаторы, загустители, гелеобразующие средства и увлажняющие вещества. Примеры эмульгаторов и/или загустителей включают, например, желатин, эфиры целлюлозы, крахмал, сложные эфиры крахмала, эфиры крахмала и модифицированные виды крахмала. Концентрация таких добавок в композиции, как правило, может составлять до приблизительно 5% по весу. В некоторых вариантах осуществления концентрация таких добавок (в частности, где такие добавки являются основными диетически балансирующими средствами, такими как витамины и минеральные веществ) составляет от приблизительно 0% до приблизительно 2,0% по весу. В некоторых вариантах осуществления концентрация таких добавок (опять-таки, в частности, где такие добавки являются основными диетически балансирующими средствами) составляет от приблизительно 0% до приблизительно 1,0% по весу.
[0061] Подразумеваются кормовые продукты любой консистенции или содержания влаги, например, композиции по настоящему изобретению могут представлять собой, например, сухую, влажную или полувлажную кормовую композицию для животных. В некоторых вариантах реализации изобретения содержание влаги составляет от приблизительно 3% до приблизительно 90% от общего веса композиции. «Полувлажная» композиция относится к кормовой композиции, содержащей от приблизительно 25 до приблизительно 35% влаги. «Влажная» пищевая композиция относится к кормовой композиции, которая характеризуется содержанием влаги, составляющим от приблизительно 60 до 90% или больше. «Сухая» пищевая композиция относится к кормовой композиции с содержанием влаги, составляющим от приблизительно 3 до приблизительно 11%, и часто выпускаемой в форме небольших частиц или гранул.
[0062] При получении композиции по настоящему изобретению во влажной или консервированной форме любой ингредиент (например, АА, ЕРА, DHA) обычно может быть, например, включен в композицию во время переработки состава, как например, во время и/или после смешивания других компонентов композиции. Распределение таких компонентов в композиции можно осуществлять с помощью традиционных средств. В некоторых вариантах осуществления измельченные белковые ткани животных и птицы смешивают с другими ингредиентами, включая рыбий жир, зерна злаков, другими ингредиентами для поддержания баланса питательных веществ, добавками специального назначения (например, смеси витаминов и минеральных веществ, неорганические соли, целлюлоза и свекольный жом, объемообразующие средства и т.п.); а также добавляют воду в количестве, достаточном для переработки. Такие ингредиенты можно смешивать в сосуде, подходящем для нагревания во время смешивания компонентов. Нагревание смеси можно осуществлять любым подходящим способом, таким как, например, прямая инжекция пара или использование сосуда, оснащенного теплообменником. После добавления последнего ингредиента смесь нагревают до температуры в диапазоне от приблизительно 50°F (10°С) до приблизительно 212°F (100°С). В некоторых случаях смесь может быть нагрета до температуры в диапазоне от приблизительно 70°F (21°С) до приблизительно 140°F (60°С). Температуры за пределами этих диапазонов в целом являются приемлемыми, однако могут быть непрактичны с коммерческой точки зрения без применения других технологических добавок. При нагреве до подходящей температуры материал, как правило, будет находиться в состоянии вязкой жидкости. Вязкой жидкостью можно наполнять консервные банки. При заполнении в консервные банки применяется крышка, и емкость герметично запечатывается. Герметично закрытую консервную банку затем можно помещать в стандартное оборудование, разработанное для стерилизации содержимого. Обычно это достигают путем нагревания до температур выше чем приблизительно 230°F (110°С) в течение подходящего периода времени, который зависит от, например, используемой температуры и композиции.
[0063] Пищевые композиции для кошек можно, как альтернатива, получать в сухой форме с применением традиционных способов. Как правило, сухие ингредиенты, включая, например, животный белок, растительный белок, зерна и т.д., можно измельчать и совместно смешивать. Затем добавляют влажные или жидкие ингредиенты, включая жиры, масла, животный белок, воду и т.д., и смешивают с сухой смесью. Затем смесь перерабатывают в гранулы или подобные сухие фрагменты. Гранулу часто образуют с применением способа экструзии, в котором смесь сухих и влажных ингредиентов подвергают механической обработке при высоких давлении и температуре, и проталкивают через небольшие отверстия, и отрезают гранулу посредством вращающегося ножа. Затем влажную гранулу высушивают и необязательно покрывают одним или более поверхностными покрытиями, которые могут включать, например, ароматизаторы, жиры, масла, порошки и т.п. Гранула также может быть получена из теста с применением способа выпекания, а не экструзии, где тесто помещают в форму перед осуществлением сухожаровой обработки.
[0064] В способах по настоящему изобретению гидратации организма кошек или лечения заболевания или патологического состояния у кошек вводимый корм может представлять собой диетически полноценный корм для кошек, или необходимые количества и соотношения АА, ЕРА и DHA могут вводиться отдельно, например, в виде отдельных ингредиентов или в виде части отдельного ингредиента, как правило, в виде добавки, чтобы общий потребляемый рацион питания соответствовал количествам и соотношениям АА, ЕРА и DHA, необходимым для достижения полезных эффектов по настоящему изобретению. В способе по настоящему изобретению лечения заболевания или патологического состояния у кошки указанное заболевание или патологическое состояние может представлять собой, например, развитие мочекаменной болезни, идиопатический цистит кошек или FLUTD.
[0065] В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрена кормовая композиция для домашних животных, содержащая добавку на основе омега-6-полиненасыщенных жирных кислот и добавки на основе по меньшей мере двух омега-3-полиненасыщенных жирных кислот в количестве, эффективном для снижения индекса риска образования оксалата кальция (CORI) у животного семейства кошачьих, при этом рацион содержит большее количество добавок на основе по меньшей мере двух омега-3-полиненасыщенных жирных кислот по сравнению с отдельной добавкой на основе омега-6-полиненасыщенных жирных кислот. В других вариантах осуществления предусмотрена кормовая композиция для домашних животных, содержащая добавку на основе омега-6-полиненасыщенных жирных кислот и добавки на основе по меньшей мере двух омега-3-полиненасыщенных жирных кислот в количестве, эффективном для снижения индекса риска образования оксалата кальция (CORI) у животного семейства кошачьих, при этом рацион содержит большее количество добавок на основе по меньшей мере двух омега-3-полиненасыщенных жирных кислот, чем добавки на основе омега-6-полиненасыщенных жирных кислот.
[0066] В некоторых вариантах осуществления добавка на основе омега-6-полиненасыщенных жирных кислот содержит арахидоновую кислоту (АА), и добавки на основе по меньшей мере двух омега-3-полиненасыщенных жирных кислот содержат эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА) и докозагексаеновую кислоту (DHA). В некоторых вариантах осуществления добавка на основе омега-6-полиненасыщенных жирных кислот представляет собой арахидоновую кислоту (АА), и добавки на основе по меньшей мере двух омега-3-полиненасыщенных жирных кислот представляют собой эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА) и докозагексаеновую кислоту (DHA).
[0067] В некоторых вариантах осуществления предусмотрено применение композиции, содержащей эффективное количество арахидоновой кислоты (АА), эйкозапентаеновой кислоты (ЕРА) и докозагексаеновой кислоты (DHA), для уменьшения удельного веса мочи у животного семейства кошачьих. В других вариантах осуществления предусмотрено применение композиции, содержащей эффективное количество арахидоновой кислоты (АА), эйкозапентаеновой кислоты (ЕРА) и докозагексаеновой кислоты (DHA), для уменьшения CORI у животного семейства кошачьих.
[0068] В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрена кормовая композиция для домашних животных, содержащая арахидоновую кислоту (АА), эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА) и докозагексаеновую кислоту (DHA) в количестве, эффективном для уменьшения CORI у животного семейства кошачьих, где соотношение АА:(ЕРА+DHA) находится в диапазоне от приблизительно 0,4:1 до приблизительно 0,6:1, и соотношение общего содержания омега-6-жирных кислот и общего содержания омега-3-жирных кислот (n6:n3) находится в диапазоне от приблизительно 4:1 до приблизительно 7:1.
[0069] В некоторых вариантах осуществления кормовая композиция для домашних животных характеризуется общим весом АА, ЕРА и DHA, находящимся в диапазоне от приблизительно 0,4% до приблизительно 0,6% от сухого веса кормовой композиции для домашних животных.
[0070] В дополнительных вариантах осуществления предусмотрена кормовая композиция для домашних животных, содержащая арахидоновую кислоту (АА), эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА) и докозагексаеновую кислоту (DHA) в количестве, эффективном для снижения CORI у животного семейства кошачьих, где соотношение АА:(ЕРА+DHA) находится в диапазоне от приблизительно 0,4:1 до приблизительно 0,6:1, и где общий вес АА, ЕРА и DHA составляет от приблизительно 0,4% до приблизительно 0,6% от сухого веса кормовой композиции для домашних животных.
[0071] В еще одних других вариантах осуществления предусмотрен способ повышения уровня гидратации у животного семейства кошачьих, включающий обеспечение животного семейства кошачьих рационом питания, содержащим эффективное количество добавки на основе омега-6-полиненасыщенных жирных кислот и добавок на основе по меньшей мере двух омега-3-полиненасыщенных жирных кислот, где рацион питания обеспечивает снижение CORI у указанного животного семейства кошачьих.
[0072] В некоторых вариантах осуществления кормовая композиция для домашних животных или основанная на рационе питания среда снижает CORI на по меньшей мере 10%. В других вариантах осуществления кормовая композиция для домашних животных или основанная на рационе питания среда снижает CORI на по меньшей мере 25%.
[0073] В других вариантах осуществления уровень гидратации улучшают до степени, достаточной для лечения заболевания или состояния, выбранных из мочекаменной болезни, идиопатического цистита кошек и FLUTD.
[0074] В еще одних дополнительных вариантах осуществления предусмотрен способ поддержания или достижения гомеостатических уровней гидратации у животного семейства кошачьих, включающий обеспечение рациона питания, содержащего эффективное количество добавки на основе омега-6-полиненасыщенных жирных кислот и добавок на основе по меньшей мере двух омега-3-полиненасыщенных жирных кислот у животного семейства кошачьих, нуждающегося в этом.
[0075] Настоящее изобретение дополнительно описано в следующих примерах. Примеры являются лишь иллюстративными и никоим образом не ограничивают объем описанного и заявленного настоящего изобретения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
[0076] Ниже в таблице 1 представлены четыре (4) сравнительных состава и три (3) иллюстративных состава по настоящему изобретению.
Пример 2
[0077] Исследование кормления проводили для оценки влияния рациона питания на CORI. Двенадцать (12) кошек кормили контрольным рационом питания и двенадцать (12) кошек кормили тестируемым рационом питания с низким соотношением AA:(EPA+DHA) в соответствии с настоящим изобретением. Контрольный рацион питания содержал 0,07 вес.% АА и 0,02 вес.% объединенных ЕРА и DHA с получением соотношений AA:(EPA+DHA) 3,5:1 и содержания влаги 5,15 вес.%. Тестируемый рацион питания содержал 0,16 вес.% АА и 0,27 вес.% объединенных ЕРА и DHA с получением соотношений AA:(EPA+DHA) 0,59:1 и содержания влаги 5,11 вес.%. Кошек поддерживали на их соответствующих рационах питания в течение пятидесяти шести (56) дней.
[0078] Мочу от каждой кошки собирали и анализировали в день А, день В и день С. В течение периода кормления кошек кормили контрольным рационом питания, представляющим собой среднее значение CORI, составляющее 54,5. В течение этого же времени кошек кормили тестируемым рационом питания в соответствии с определенными вариантами осуществления настоящего изобретения, при этом среднее значение CORI составляло 40,2. Как проиллюстрировано в данном примере, кошки, которых кормили тестируемым рационом питания, демонстрировали снижение риска образования камней оксалата кальция на 26%.
Пример 3
[0079] Исследование кормления проводили для оценки влияния рациона питания на удельный вес мочи. Двенадцать (12) кошек кормили контрольным рационом питания из примера 1, и двенадцать (12) кошек кормили тестируемым рационом питания из примера 1. Кошек поддерживали на их соответствующих рационах питания в течение пятидесяти шести (56)дней. Мочу от каждой кошки собирали и анализировали в отношении удельного веса мочи в день ноль (0), день двадцать восемь (28) и день пятьдесят шесть (56). В течение этого периода кормления кошек кормили контрольным рационом питания, демонстрируя при этом средний удельный вес мочи, составляющий 1,056. В то же самое время кошки, которых кормили тестируемым рационом питания в соответствии с настоящим изобретением, характеризовались средним удельным весом мочи, составляющим 1,053. Как проиллюстрировано в данном примере, кошки, которых кормили тестируемым рационом питания, имели мочу, которая была менее концентрированной (т.е. менее плотной), несмотря на кормление рационом питания с влажностью, меньшей на 0,04 вес.%, по сравнению с контрольным рационом питания.
Пример 4
[0080] Способ только с оксалатом. Оксалат помещали в первую колонку (8 лунок) 96-луночного микротитрационного планшета и серийно разбавляли по всем рядам. В примере, показанном на фигуре 1, 300 мкл из 250 мМ оксалата помещали в первую колонку, тогда как 150 мкл среды-носителя помещали во все остальные лунки. Затем, 150 мкл раствор оксалата из первой колонки удаляли и объединяли со 150 мкл среды-носителя во второй колонке. После смешивания, этот способ повторяли по всему планшету, делая оксалат более разбавленным в каждой колонке посредством коэффициента два (2).
[0081] В отдельном планшете 100 мкл осветленной мочи млекопитающего помещали в каждую лунку. Затем 100 мкл серийно разбавленного оксалата добавляли в планшет для мочи при сохранении положений разбавления оксалата (например, R1:C1 из планшета для оксалата помещали в R1:C1 планшета для мочи).
[0082] После смешивания оценивали осаждение оксалата кальция в устройстве для считывания планшетов при световом излучении 585 нм. Имелась положительная корреляция между поглощением при данной длине волны и количеством осадка в каждой лунке.
Экспериментальные результаты
[0083] Образцы мочи от восьми кошек использовали для оценки способности данного способа различать кошек, у которых была продемонстрирована устойчивость к образованию камней оксалата из тех, у которых было продемонстрировано незначительное сопротивление или отсутствовала устойчивость. Мочу собирали отдельно для каждой кошки в специально разработанных лотках для кошачьего туалета в течение 24 часов. Эти образцы мочи затем применяли для получения результатов CORI с применением традиционного способа титрования, а также с помощью данного 96-луночного способа. Планшеты устанавливали в двух повторностях, как описано в способе с использованием только оксалата. Данные, показанные в таблице 2 ниже, представляют собой средние значения двух планшетов.
[0084] Планшет для оксалата устанавливали таким образом, что 125 мМ оксалата помещали в первую лунку и серийно разбавляли по всему планшету. После разбавления 100 мкл раствора оксалата в 100 мкл мочи, окончательные концентрации оксалата были такими, как описаны в «Настройка планшета, экспер. 1» на фигуре выше. После смешивания количественное значение определяли при 585 нм, что приводило в результате к получению «Данных экспер. 1» в таблице 2 выше и графике, показанном на фигуре 3. Данные для этого графика получали путем нормирования к первой точке измерения поглощения для каждой кошки.
[0085] Используя график, показанный на фиг. 3, определяли точку, в которой начиналось осаждение, и лунку сразу перед этим определяли как «последнюю прозрачную лунку». Сравнение концентрации оксалата в последней прозрачней лунке и концентрации оксалата, вызывающей осаждение в ходе традиционного способа титрования, давало хорошую корреляцию между двумя способами (см. фигуру 4). Также можно установить данные на кривой (например, сигмоидальной) и математически определить точку перегиба, где начинается осаждение.
[0086] Проводили второе исследование для подтверждения результатов первого. Прогоняли два планшета, в которых большинство кошек были с одинаковыми данными. В нескольких случаях кошка была представлена только один раз. Данные представлены в таблице 3 ниже. Настройку планшета выполняли в соответствии со способом, описанным выше.
[0087] Данные обоих планшетов представлены в таблице 4 и на фигуре 5. На этот раз данные для графиков нормализовали до первых 3 точек данных.
[0088] В этом втором эксперименте было несколько кошек, для которых была характерна последняя прозрачная лунка (см. фигуру 6). Поскольку было бы невозможно определить, где выпадет прозрачная лунка, этих кошек исключали из дальнейших расчетов.
[0089] Используя фигуру 5, определяли точку, в которой начиналось осаждение, и лунку сразу перед этим определяли как «последнюю прозрачную лунку». Сравнение концентрации оксалата в последней прозрачней лунке и концентрации оксалата, вызывающей осаждение в ходе традиционного способа титрования, давало превосходную корреляцию между способами (см. таблицу 5 и фигуру 7).
Пример 5
[0090] Способ оксалат плюс вторичная составляющая часть. С целью оценки влияния других составляющих частей мочи, которые могут оказывать влияние на устойчивость к образованию оксалатного камня, можно проводить аналогичный анализ, однако с помощью оксалата, серийно разбавленного в одном направлении, и составляющей части, представляющей интерес, серийно разбавленной во втором направлении. На фигуре 2 проиллюстрирована оценка цитрата на устойчивость к образованию оксалатного камня, однако этот же принцип можно применять для любого вторичного вещества, представляющего интерес.
[0091] Планшет с оксалатом получали, как описано выше. Второй планшет получали с веществом, представляющим интерес (например, цитратом). Однако в данном случае серийные разбавления выполняли вниз по колонкам планшета вместо по всем рядам. Третий планшет использовали для мочи, как указано выше.
[0092] К 100 мкл мочи добавляли 100 мкл из серийно разбавленной составляющей части планшета при сохранении положений разбавления составляющих частей (например, R1:C1 из составляющей части планшета помещали в R1:C1 планшета для мочи). После смешивания 100 мкл серийно разбавленного оксалата добавляли в планшет для мочи при сохранении положений разбавления оксалата (например, R1:C1 из планшета для оксалата помещали в R1:C1 планшета для мочи). После второго смешивания оценивали осаждение оксалата кальция в устройстве для считывания планшетов при световом излучении 585 нм. Имелась положительная корреляция между поглощением при данной длине волны и количеством осадка в каждой лунке.
[0093] В этом общем формате авторы изобретения предусматривали способность не только обнаруживать устойчивость к образованию камней оксалата кальция, но также иметь возможность тестировать возможные вторичные ингибиторы образования камней путем помещения тестируемого соединения в пониженные (или повышенные) концентрации по всем рядам одного и того же 96-луночного планшета. Таким образом, планшеты использовались как для оксалата, так и для потенциального вторичного ингибитора, представляющего интерес (например, цитрата).
[0094] На практике, известный объем мочи мог быть помещен во всех лунках чистого 96-луночного планшета. После создания нового планшета вторичного ингибитора, представляющего интерес (например, цитрата), путем разбавления концентрации этого ингибитора вниз по рядам предназначенного для него планшета, известный объем ингибитора из этого планшета добавляли в планшет для мочи и смешивали, поддерживая положения разбавления ингибитора (например, R1:C1 из планшета для ингибитора помещали в R1:C1 из планшета для мочи). Планшет для оксалата также создавали с помощью способа, описанного выше, а затем оксалат добавляли к планшету для мочи + вторичный ингибитор, поддерживая положения оксалата (например, R1:C1 из планшета для оксалата помещали в R1:C1 планшета для мочи/ингибитора). Затем степень осаждения оксалата кальция количественно оценивали с помощью способа поглощения, описанного выше, обеспечивая возможность определения эффекта оксалата и вторичного ингибитора в отношении ингибирования образования камней оксалата кальция в модельной системе.
[0095] Учитывая успех этих экспериментов, было определено, что этот же принцип можно было бы также применять для тестирования наборов, которые могут применяться в лаборатории или в клинических условиях. Кроме того, оценивали несколько различных форматов. Эти наборы давали возможность оценить риск образования камней оксалата и исхода лечения. Ниже следуют несколько неограничивающих примеров. Фактическая конструкция может отличаться (например, порядок добавления, количества каждой составляющей части и т.д.).
[0096] Первый набор берется непосредственно из вышеприведенного формата, но в одном ряду лунок. Для этого анализа используют один ряд лунок (подобно одному ряду 96-луночного планшета). Каждую лунку заполняют сначала оксалатом в последовательно более высоких количествах по мере того, как он перемещается вверх по рядам. Оксалат может быть в твердой, жидкой или гелеобразной форме, которая включает кальций-специфический краситель, который мог бы связываться со свободным кальцием в моче. Эти красители могут представлять собой (без ограничения): fura-2, indo-1, fluo-3, fluo-4, кальций зеленый-1, Орегон зеленый, ВАРТА-1, ВАРТА-2, x-Rhod, Rhod-3 или любой другой репортерный краситель, который демонстрирует цвет только в присутствии свободного кальция. Каждая лунка может быть или может не быть покрыта тонкой быстрорастворимой пленкой, которая растворима в воде (подобно пластинке для свежести дыхания без активных веществ или ароматов) для защиты содержимого каждой лунки перед использованием.
[0097] Для применения, в каждую лунку добавляют известный объем мочи, так что моча вступает в контакт с оксалатом и с кальций-специфическим репортерным красителем. Кальций из мочи мог бы связываться с оксалатом и осаждаться из раствора в виде оксалата кальция. Любой оставшийся свободный кальций мог бы образовывать комплекс с кальций-специфическим репортерным красителем, и лунка могла бы изменять цвет. Количество оксалата, необходимое для приведения к полному осаждению кальция (и таким образом отсутствию цвета), связано со способностью составляющих частей мочи ингибировать образование камней оксалата в модельной системе.
[0098] Во втором варианте получения по настоящему изобретению принципы, обсуждаемые для теста с использованием лунки, могли быть перенесены на пластинку с множеством полосок модуля бумаги для определения рН. В данном случае оксалат (в возрастающих концентрациях) добавляют на полоски модуля бумаги для определения рН наряду с кальциевым репортерным красителем. Эти полоски могут затем быть покрыты тонкой быстрорастворимой пленкой, которая растворима в воде (подобно пластинке для свежести дыхания без активных веществ или ароматов) для защиты содержимого каждой лунки перед использованием. На практике пластину могли быть погружены в мочу, и при этом любые полоски, которые все еще содержат свободный кальций, будут изменять цвет. Количество оксалата, необходимое для приведения к полному осаждению кальция (и таким образом отсутствию цвета), связано со способностью составляющих частей мочи ингибировать образование камней оксалата в модельной системе.
[0099] В третьем варианте получения по настоящему изобретению вышеописанные принципы будут использоваться в формате, подобном тонкослойной хроматографии (TLC). Оксалат мог бы осаждаться на планшете для TLC с повышением концентрацией оксалата сверху вверх. В этой матрице также мог бы быть встроен кальций-специфический репортерный краситель, не содержащий кальция. На практике, планшет можно было бы погружать в небольшой объем мочи, и моча могла бы перемещаться в направлении верхней части. В какой-то момент повышение
[00100] г концентрации оксалата могло бы блокировать весь оставшийся свободный кальций, и краситель больше не менял бы цвет. Кроме того, моча перемещается вверх планшета до отсутствия цвета, что связано со способностью составляющих частей мочи ингибировать образование камней оксалата в модельной системе.
[00101] В незначительной модификации данного варианта получения по настоящему изобретению концентрация оксалата сохраняется постоянной по всему планшету для TLC. Кальций из мочи мог бы все еще двигаться вверх планшета до тех пор, пока ее оксалат не будет блокирован. Кроме того, моча перемещается вверх планшета до отсутствия цвета, что связано со способностью составляющих частей мочи ингибировать образование камней оксалата в модельной системе.
[00102] Примерные наборы представлены на фигурах 8 и 9 только с целью объяснения и не должны интерпретироваться как единственный стиль или тип.
[00103] Хотя для иллюстрации и описания настоящего изобретения были выбраны конкретные варианты осуществления, специалистам в данной области техники будет понятно, что различные изменения и модификации можно осуществлять без отступления от объема настоящего изобретения, определенного в прилагаемой формуле изобретения. Специалисты обычной квалификации в данной области техники легко поймут, что различные комбинации признаков, изображенные в различных видах, могут быть возможны в некоторых неограничивающих вариантах осуществления настоящего изобретения.
[00104] Кроме того, все ссылки, приведенные в данном документе, тем самым включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. В случае конфликта определений в настоящем изобретении и в приведенной ссылке, настоящее изобретение является предпочтительным.