ПОЛУСТАБИЛЬНОЕ ПОЛУЧЕНИЕ ЛЕНТИВИРУСНЫХ ВЕКТОРОВ

1. Система стабильной экспрессии лентивирусных структурных и регуляторных белков, состоящая из:
i) гибридного вектора, содержащего бакуловирусный остов, содержащий кассету интеграции, фланкированную ITR AAV, включающую в себя две кассеты экспрессии, при этом первая кассета экспрессии кодирует лентивирусные гены gag и pol, а вторая кассета экспрессии кодирует лентивирусный rev и селектируемый маркер; и
ii) экспрессирующей плазмиды, содержащей открытую рамку считывания (ORF) Rep AAV под контролем промотора.
2. Система по п. 1, в которой две кассеты экспрессии гибридного вектора находятся в ориентации хвост-к-хвосту, и каждая кассета экспрессии управляется конститутивным промотором и поли-A.
3. Система по п. 1 или 2, в которой промотор выбран из CMV, CMV IE, PGK, SV40, eF1α, SFFV и RSV.
4. Система по п. 3, в которой промотором является промотор CMV IE.
5. Система по любому из пп. 1, 2 или 4, в которой селектируемый маркер выбран из гена резистентности к гигромицину, канамицину, неомицину, зеомицину.
6. Система по п. 5, в которой селектируемым маркером является ген резистентности к гигромицину.
7. Система по любому из пп. 1, 2, 4 или 6, в которой селектируемый маркер клонирован ниже участка внутренней посадки рибосомы (IRES).
8. Система по пп. 1, 2, 4 или 6, в которой белком rep является белок rep78.
9. Полустабильная линия клеток, пакующих лентивирусы, состоящая из клеток, стабильно экспрессирующих лентивирусные gag pol и rev, отличающаяся тем, что такие клетки содержат стабильно интегрированную в их геном, по меньшей мере, одну копию кассеты интеграции, фланкированную ITR AAV, включающую в себя две кассеты экспрессии, при этом первая кассета экспрессии кодирует лентивирусные гены gag и pol, а вторая кассета экспрессии кодирует лентивирусный rev и селектируемый маркер.
10. Полустабильная линия клеток, пакующих лентивирусы, по п. 9, в которой клеткой является линия клеток человека, выбранная из HEK293, HEK293-T, HEK293-SF, TE671, HT1080 или HeLa.
11. Полустабильная линия клеток, пакующих лентивирусы, по любому из пп. 9 или 10, в которой две кассеты экспрессии находятся в ориентации хвост-к-хвосту, и каждая кассета экспрессии управляется конститутивным промотором и поли-A.
12. Полустабильная линия пакующих клеток по п. 11, в которой промотор выбран из CMV, CMV IE, PGK, SV40, eF1α, SFFV и RSV.
13. Полустабильная линия пакующих клеток по п. 12, в котором промотором является промотор CMV IE.
14. Полустабильная линия пакующих клеток по любому из пп. 9, 10, 12 или 13, в которой селектируемый маркер выбран из гена резистентности к гигромицину, канамицину, неомицину, зеомицину.
15. Полустабильная линия пакующих клеток по п. 14, в которой селектируемым маркером является ген резистентности к гигромицину.
16. Полустабильная линия пакующих клеток по любому из пп. 9, 10, 12, 13 или 15, в которой селектируемый маркер клонирован ниже участка внутренней посадки рибосомы (IRES).
17. Способ получения лентивирусных векторов, включающий в себя:
i) культивирование полустабильной линия пакующих клеток по любому из пп. 9-16;
ii) встраивание в полустабильную линию пакующих клеток гена env;
iii) встраивание в полустабильную линию пакующих клеток вектора переноса.
18. Способ по п. 17, в котором ген env выбран из env VSV-G, env MLV 4070, env RD114, химерного белка оболочки RD114-TR, химерного белка оболочки RD114-pro, бакуловирусного env GP64 или env GALV или их производных.
19. Способ по п. 17 или 18, в котором геном env является ген, кодирующий химерный белок оболочки RD114-TR.