Метод прогнозирования преждевременного излития околоплодных вод с определением специфичных сигнальных молекул в буккальном эпителии

АКУШЕРСТВО

метод прогнозирования преждевременного излития околоплодных вод с определением специфичных сигнальных молекул в буккальном эпителии

© М.х. Афанасьева, соискатель

ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», г. Санкт-Петербург, Россия

Актуальность проблемы

Преждевременное излитие околоплодных вод (ПИОВ) относится к числу наиболее распространенных осложнений беременности (от 8,3 до 19,7 %) и является одной из основных причин высокого процента оперативного родоразрешения, акушерского травматизма и неонатальных осложнений. Достаточно неблагоприятен прогноз исхода родов, в случае когда ПИОВ происходит на фоне «созревающей» или «незрелой» шейки матки. Разработка неинвазивных методов прогнозирования ПИОВ с целью снижения перинатальной заболеваемости и смертности является весьма актуальной.

Цель исследования: верификация ключевых сигнальных молекул, обеспечивающих целостность плодных оболочек, в буккальном эпителии с последующей разработкой возможных биомаркеров неинвазивного прогнозирования ПИОВ.

материалы и методы исследования

Проведено сравнительное изучение экспрессии фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), метал-лопротеиназы-9 (MMP9), коннексина-37, коннек-сина-40, эндорфинов, энкефалинов, актина, миозина в буккальном эпителии и плодных оболочках у 50 пациенток основной группы (с ПИОВ) и у 50 пациенток контрольной группы (со своевременным излитием околоплодных вод) в ФГБНУ «НИИАГиР им. Д.О. Отта». Исследование плодных оболочек и буккального эпителия проводилось с помощью первичных моноклональных мышиных антител к исследуемым маркерам. В качестве вторичных антител использовался универсальный набор, содержащий биотинилированные антимышиные иммуноглобулины. Изучение препаратов проводилось в конфокальном микроскопе OLYMPUS FLUOVIEW FV 1000 (OLYMPUS, Япония) при увеличении ><400 и ><1000 с использованием системы MRC-1024, укомплектованной программой компьютерной обработки OLYMPUS FLUOVIEW 5.0.

Результаты исследования

При проведении сравнительной оценки оптической плотности экспрессии сигнальных молекул установлено, что экспрессия MMP9 достоверно выше в группе с ПИОВ по сравнению с группой контроля как в буккальном эпи-

телии (1,7498 ± 0,009598 и 0,952 ± 0,009943), так и в плодных оболочках (1,941 ± 0,011 и 1,223 ± 0,016), р < 0,001. Оптическая плотность экспрессии VEGF у пациенток с ПИОВ достоверно ниже, чем у пациенток со своевременным излитием околоплодных вод, как в буккальном эпителии (2,169 ± 0,009 и 2,605 ± 0,017), так и в плодных оболочках (1,235 ± 0,01 и 1,712 ± 0,009), р< 0,001. Также получено достоверное уменьшение оптической плотности экспрессии коннексина-37, коннек-сина-40 в группе с ПИОВ по сравнению с группой контроля как в буккальном эпителии (0,849 ± 0,019 и 1,706 ± 0,014; 1,222 ± 0,008 и 2,32 ± 0,014), так и в плодных оболочках (1,729 ± 0,024 и 2,23 ± 0,009; 0,908 ± 0,01 и 2,051 ± 0,007), р < 0,001. Достоверной разницы оптической плотности экспрессии эндор-фина и миозина в группе с ПИОВ по сравнению с группой контроля не получено. Оптическая плотность экспрессии энкефалина в группе с ПИОВ в буккальном эпителии ниже (1,946 ± 0,013 и 2,103 ± 0,015), а в плодных оболочках выше, чем в группе контроля (1,667 ± 0,013 и 1,401 ± 0,011), р < 0,001. Оптическая плотность актина в бук-кальном эпителии при ПИОВ выше, чем в группе контроля (0,417 ± 0,02 и 0,304 ± 0,01), р < 0,001, а в плодных оболочках ниже, чем в группе контроля (0,599 ± 0,012 и 1,392 ± 0,021), р < 0,001.

Для возможности использования сигнальных молекул буккального эпителия в качестве ИГХ -маркеров прогнозирования ПИОВ проведен расчет коэффициентов корреляции оптической плотности экспрессии молекул в буккальном эпителии и плодных оболочках. Получены достоверные корреляции оптической плотности экспрессии ММР9 в буккальном эпителии с оптической плотностью экспрессии ММР9 в плодных оболочках как в группе с ПИОВ (коэффициент корреляции — 0,763), так и в группе контроля (коэффициент корреляции — 0,702). Также получены достоверные корреляции оптической плотности экспрессии VEGF в буккальном эпителии с оптической плотностью экспрессии VEGF в плодных оболочках как в группе с ПИОВ (коэффициент корреляции — 0,752), так и в группе контроля (коэффициент корреляции — 0,706). Достоверных корреляций оптической плотности экспрессии остальных молекул (коннексина-37, коннексина-40, эндорфинов, энке-фалинов, актина, миозина) в буккальном эпителии

| ЖУРШЪ АКУШЕРСТВА " ЖЕНСКИХЪ БОШНЕЙ

ТОМ LXVСПЕЦВЫПУСК 2016

ISSN 1684-0461

АКУШЕРСТВО

7

с оптической плотностью экспрессии тех же молекул в плодных оболочках не получено.

Выводы

В результате проведенных исследований верифицированы сигнальные молекулы в буккальном эпителии и плодных оболочках. Получены достоверные отличия экспрессии ММР9 и VEGF между группой с ПИОВ и груп-

пой контроля. Получены высокие корреляции между оптической плотностью экспрессии указанных молекул в буккальном эпителии и оптической плотностью экспрессии этих же молекул в плодных оболочках как в группе с ПИОВ, так и в группе контроля. Таким образом, результаты исследований позволяют рекомендовать ММР9 и VEGF в качестве маркеров прогнозирования ПИОВ.

ВЛИЯНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА FokI ГЕНА VDR НА НАРУШЕНИЕ ПРОЦЕССОВ РЕМОДЕЛИРОВАНИЯ КОСТНОЙ ТКАНИ И РАЗВИТИЕ ОСТЕОПЕНИИ В ПОСЛЕРОДОВОМ ПЕРИОДЕ

© О.С. Бибкова, асп., Е.О. Богданова, м.н. с., А.А. Хрипушина, студ.

Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, г. Санкт-Петербург, Россия

Актуальность проблемы

На развитие остеопороза влияют многочисленные модифицируемые и немодифицируемые факторы, существенный вклад в его развитие вносит генотип (Айламазян Э.К., Баранов В.С.,

2009). Ген рецептора витамина D (VDR) активно изучается с целью диагностики остеопороза. Исследования in vitro показали, что аллели FokI гена VDR различаются по способности к запуску экспрессии репортерного гена (Ralston S.,

2010). Полиморфизм FokI (rs10735810) расположен во втором экзоне гена VDR. При замене T > C в позиции 30 920 (ATC > ACG) первый старт-кодон мРНК утрачивается (AUG > ACG) и синтез продукта начинается со второго старт-кодона. «Короткий» вариант белка VDR (424 а.к. о., F- аллель) представляет собой транскрипционно более мощный вариант белка VDR за счет более эффективного взаимодействия с транскрипционным фактором IIB (TFIIB) и является в 1,7 раза более активным, чем «длинный» вариант (427 а.к. о., f-аллель) (Arai H., 1997; Jurutka P.W., 2000). В клинических исследованиях была выявлена связь генотипа FokI и минеральной плотности костной ткани (МПК) у женщин в постменопаузе: при ff-генотипе значения МПК оказались ниже, чем при FF- и Ff-генотипах. Все больший интерес в последнее время к себе привлекают изменения процессов ремоделирования костной ткани у женщин при беременности и лактации. Имеются данные об изменениях МПК при беременности, обусловленных усилением остео-резорбции и замедлением остеообразования для обеспечения потребностей развивающегося плода в кальции (Зазерская И.Е., Судаков Д.С.,

2011). Данных о роли аллельных вариантов FokI в развитии остеопении и остеопороза у женщин при беременности и в послеродовом периоде нет.

Цель исследования: оценить роль однону-клеотидного полиморфизма FokI (VDR) в нарушении процессов ремоделирования костной ткани при беременности и развитии остеопении у родильниц.

Материалы и методы исследования

В исследование было включено 186 пациенток в возрасте от 24 до 35 лет, родившихся и проживающих на территории г. Санкт-Петербурга и Ленинградской области. Основная группа была представлена 89 родильницами, обследование которых проводилось на 4-6-е сутки послеродового периода, группа сравнения состояла из 97 условно здоровых небеременных женщин. Определение генотипа FokI гена VDR проводилось методом поли-меразной цепной реакции — полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПЦР-ПДРФ). Измерение МПК производилось на 4-6-е сутки после родов методом двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (ДЭРА) на рентгеновском денситометре кости Lunar фирмы GE Medical Systems LUNAR (США). Для оценки степени снижения МПК применяли Z-критерий. Статистическая обработка результатов проводилась ресурсами программного обеспечения Statistica 7.0, критический уровень значимости для всех статистических тестов принимался равным 0,05.

Результаты исследования

Оценка результатов проведенной ДЭРА у обследованных пациенток показала, что родильницы характеризовались более низкими показателями МПК, чем пациентки группы сравнения, во всех отделах скелета. В группе родильниц частота остеопении оказалась достоверно выше, чем в группе сравнения (48,3 и 26,8 %, р < 0,01). При этом в поясничном отделе позвоночника ча-

ЖУРНАЛ! АКУШЕРСТВА - ЖЕНСКИХЪ БОЛМНЕЙ

ТОМ LXVСПЕЦВЫПУСК 2016

ISSN 1684-0461