Способ изолированного выделения и изготовления гистологических структур стекловидного тела
METHOD FOR ISOLATED EXTRACTION AND FABRICATION OF HISTOLOGICAL STRUCTURES OF VITREOUS BODY

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для изолированного выделения и изготовления гистологических структур с последующим изучением анатомо-топографических и гистологических особенностей стекловидного тела (СТ).
Наиболее близким аналогом является способ фиксации и приготовления гистологических препаратов (Патент РФ на изобретение №2525436), по которому после энуклеации глаза, в энуклеированном глазу формируют маркеры его пространственного положения: прошивают склеру нитками, оставляя «хвостики» в каждой метке. Маркированный глаз помещают в фиксирующий раствор формалина, после фиксации глаз промывают проточной водой, обезвоживают в спиртах с возрастающей концентрацией, заливают в парафин, формируют блоки, затем закрепляют на бруске так, чтобы пространственное положение глаза соответствовало его исходной ориентации в пространстве, для чего парафиновый блок, содержащий глаз, ориентируют по вышеописанным нитяным меткам. Изготавливают срезы и производят окрашивание.
Недостатком данного способа является отсутствие возможности послойного выделения и гистологического исследования отдельных структур СТ.
Задачей изобретения является создание нового способа выделения и изготовления структур СТ, позволяющего морфологически исследовать СТ, контрастировать и выделять все структуры СТ: корковые слои, цистерны, каналы, проводить в дальнейшем их изолированное гистологическое исследование, при этом сохраняя структуры в неизменном виде для исследования.
Техническим результатом является возможность послойного выделения и гистологического исследования отдельных структур СТ, что позволит получить новые данные о топографо-анатомическом взаимоотношении между структурами, не нарушив целостность образцов тканей, провести в дальнейшем гистологическое исследование изолированных структур СТ.
Технический результат достигается тем, что в способе изолированного выделения и изготовления гистологических препаратов СТ, включающем помещение аутопсированного глаза в раствор формалина, согласно изобретению, аутопсированный глаз человека устанавливают на подложку, затем, оставляя передний отрезок склеры интактным, склеру в четырех миллиметрах от лимба по кругу разрезают между прямыми мышцами и формируют из нее лепестки, которые затем отсекают, далее формируют лепестки сосудистой и сетчатой оболочек и отсекают их, производят последовательное окрашивание суспензией из солей малорастворимых металлов структур СТ: корковых слоев, цистерн, каналов. Окрашенные структуры СТ поэтапно отсепаровывают и иммобилизируют на адгезивно-метрическом планшете или в биопсийном мешочке, закладываемом в биопсийную кассету, фиксируют в растворе формалина, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, заливают в парафин, приготавливают гистологические срезы и окрашивают гематоксилин-эозином.
Использование для выделения структур СТ суспензии из солей малорастворимых металлов, и иммобилизация их на адгезивно-метрическом планшете или в биопсийном мешочке, с последующей укладкой в кассету, создает возможность послойного выделения и последующего изолированного морфологического изучения выделенных структур СТ, при этом сохранив их целостность и после прохождения всех этапов гистологической обработки, вплоть до изготовления срезов и окрашивания, это позволит получить новые данные о пространственной анатомии и гистологии СТ, а также выявить характер патологических изменений СТ при различных патологиях.
Способ осуществляется следующим образом, аутопсированный глаз помещают на подложку, например, в чашку Петри, ножницами производят разрезание склеры в 4 мм от лимба по кругу, оставляя интактным передний отрезок глаза. Затем из склеры, разрезая ее между прямыми мышцами, формируют "лепестки". Сформированные лепестки полностью удаляют. Точно так же при помощи пинцета и ножниц Ваннаса формируют лепестки сосудистой оболочки и сетчатки, которые в последующем отсекаются. При помощи иглы 30 G, начиная с поверхности СТ, проводится поэтапное окрашивание и выделение всех структур СТ. Используемая контрастная композиция представляет собой суспензию из солей малорастворимых металлов, размер частиц которой составляет меньше 5 микрон и плотность которой 4.4 г/см3. С помощью эндовитреальных ножниц и пинцета производится отсепаровывание и отсекание слоев, цистерн и каналов СТ. Данные структуры (биоптат) иммобилизируют на адгезивно-метрическом планшете, состоящем из метрической части и адгезивной части или в биопсийном мешочке, помещаемом в биопсийную кассету. Метрическая часть планшета имеет размеры 50×65×3 мм, состоит из пористого материала с метрической сеткой 3×3 мм. Адгезивная часть планшета состоит из смеси нитрата целлюлозы и ацетатных полимеров, имеет пористость 0,45 мкм и состоит из базы размером 30×10 мм и прикрепленных к ней под углом 90 градусов адгезивных полос размером 34×3 мм, край которых скошен под углом 45 градусов. Биопсийный мешочек состоит из высокопрочного нейлона, представляет собой мелкопористую сеточку и закладывается в биопсийную кассету из полиоксиметиленполиацетата. Планшет или кассету помещают в фиксирующий раствор 10% раствора формалина на 24 часа, и в таком виде контейнер с биоптатом подвергают всем этапам гистологической обработки, не извлекая биоптат вплоть до окрашивания срезов, сохраняя целостность структур СТ.
Пример 1
Два глаза донора: женщина, 61 год. Причина смерти: острая сердечная недостаточность. Время смерти 06.11.19 16:00 время энуклеации 07.11.2019 - 10:00 Время проведения эксперимента 07.11.2019 - 15:00 По предложенному нами способу было произведено препарирование СТ двух глаз донора (OD, OS); с целью улучшения визуализации были удалены все оболочки глазного яблока. Контрастируя структуры СТ суспензией из солей сульфата бария, используя витреоретинальные ножницы и пинцет, были выделены и взяты кортикальные слои, оптико-цилиарный канал, ретро-цилиарные цистерны. Все материалы были иммобилизированы в биопсийных мешочках, которые затем поместили в биопсийные кассеты, после проведения всех этапов гистологической обработки, было проведено гистологическое изучение отдельных структур СТ.
Пример 2
Два глаза донора: мужчина, 62 года, причина смерти: острая сердечная недостаточность, кардиомиопатия. Время смерти 13.10.19 - 23.00; время энуклеации 14.10.19 - 11.00; время проведения эксперимента 14.10.19 - 16.00. После проведения препарирования СТ двух глаз донора (OD, OS), выделения при помощи контрастирования суспензией из солей ацетата меди структур СТ, используя витреоретинальные ножницы и пинцет, были выделены и взяты кортикальные слои, оптико-цилиарный канал, ретро-цилиарные цистерны. Используя адгезивно-метрический планшет, на котором были иммобилизированы все выделенные структуры СТ, и были доставлены в лабораторию, где были проведены все этапы гистологической обработки, и гистологическое изучение отдельных структур СТ. По предложенному способу изолированного выделения и изготовления гистологических структур СТ было произведено препарирование и гистологическое исследование СТ на 15 изолированных глазах человека. Из полученного материала были изготовлены стеклопрепараты для проведения дальнейшего гистологического изучения. Материал был признан пригодным и информативным.
Таким образом, использование заявленного нами способа, позволяет контрастировать и выделять структуры СТ (корковые слои, цистерны, каналы) и не нарушив целостность образцов тканей, провести гистологическое исследование изолированных структур СТ. Это позволяет получить новые данные о топографо-анатомическом взаимоотношении между структурами СТ, расширить представления о гистологических особенностях СТ в норме и проводить анализ изменений при различных патологических процессах.