СЛИТЫЕ БЕЛКИ, РЕКОМБИНАНТНЫЕ БАКТЕРИИ И ФРАГМЕНТЫ ЭКЗОСПОРИЯ ДЛЯ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ И ЗДОРОВЬЯ РАСТЕНИЙ

1. Слитый белок, содержащий:
нацеливающую последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория, который нацеливает слитый белок на экзоспорий рекомбинантного члена семейства Bacillus cereuss, и
фермент, имеющий активность сериновой протеазы, где фермент, имеющий активность сериновой протеазы, содержит: фермент Bacillus firmus;
аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичную любой из SEQ ID NO: 210-211;
аминокислотную последовательность, на по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичную SEQ ID NO: 212;
или любую их комбинацию.
2. Слитый белок по п. 1, где нацеливающая последовательность содержит или состоит из:
(a) аминокислотной последовательности, на по меньшей мере около 43% идентичной аминокислотам 20-35 последовательности SEQ ID NO: 1, где идентичность аминокислотам 25-35 составляет по меньшей мере около 54%,
(b) аминокислот 1-35 последовательности SEQ ID NO: 1,
(c) аминокислот 20-35 последовательности SEQ ID NO: 1,
(d) SEQ ID NO: 1,
(e) SEQ ID NO: 96 или
(f) SEQ ID NO: 120.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
3. Слитый белок по п. 1, где нацеливающая последовательность содержит последовательность Х-Х-Х-Х-Х-Х-Х-Х-Х-Х-Х-Х-Х-Х-Х-Х, где:
1
X представляет собой любую аминокислоту или отсутствует,
2
Х представляет собой фенилаланин (F), лейцин (L), изолейцин (I) или метионин (М),
3
Х представляет собой любую аминокислоту,
4
Х представляет собой пролин (Р) или серии (S),
5
Х представляет собой любую аминокислоту,
6
Х представляет собой лейцин (L), аспарагин (N), серии (S) или изолейцин (I),
7
Х представляет собой валин (V) или изолейцин (I),
8
Х представляет собой глицин (G),
9
Х представляет собой пролин (Р),
10
Х представляет собой треонин (Т) или пролин (Р),
11
Х представляет собой лейцин (L) или фенилаланин (F),
12
Х представляет собой пролин (Р),
13
Х представляет собой любую аминокислоту,
14
Х представляет собой любую аминокислоту,
15
Х представляет собой пролин (Р), глутамин (Q) или треонин (Т), и
16
X представляет собой пролин (Р), треонин (Т) или серии (S).
4. Слитый белок по п. 1, где нацеливающая последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория дополнительно содержит остаток метионина, серина или треонина в положении аминокислоты, непосредственно предшествующем первой аминокислоте нацеливающей последовательности, белка экзоспория или фрагмента белка экзоспория, или в положении нацеливающей последовательности, которое соответствует аминокислоте 20 последовательности SEQ ID NO: 1.
5. Слитый белок по п. 1, где слитый белок дополнительно содержит аминокислотный линкер между нацеливающей последовательностью, белком экзоспория или фрагментом белка экзоспория и ферментом, имеющим активность сериновой протеазы.
6. Слитый белок по п. 5, где линкер содержит полиаланиновый линкер, полиглициновый линкер или линкер, содержащий смесь остатков как аланина, так и глицина.
7. Слитый белок по любому из пп. 1-6, где фермент содержит или состоит из SEQ ID NO: 210.
8. Слитый белок по любому из пп. 1-6, где фермент содержит или состоит из SEQ ID NO: 211.
9. Слитый белок по любому из пп. 1-6, где фермент содержит или состоит из SEQ ID NO: 212.
10. Слитый белок по любому из пп. 1-6, где фермент содержит аминокислотную последовательность, на 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 210-212.
11. Рекомбинантный член семейства Bacillus cereuss, который экспрессирует слитый белок по любому из пп. 110.
12. Рекомбинантный член семейства Bacillus cereuss по п. 11, где рекомбинантный член семейства Bacillus cereus происходит из Bacillus thuringiensis ВТ013А.
13. Рекомбинантный член семейства Bacillus cereuss по п. 11, где рекомбинантный член семейства Bacillus cereuss содержит мутацию, которая приводит к спорам члена семейства Bacillus cereuss, имеющим экзоспорий, который легче удалять по сравнению с экзоспорием спор дикого типа.
14. Рекомбинантный член семейства Bacillus cereuss по п. 13, где рекомбинантный член семейства Bacillus cereuss содержит:
(i) мутацию в гене CotE,
(ii) мутацию в гене ExsY,
(iii) мутацию в гене CotY,
(iv) мутацию в гене ExsA,
(v) мутацию в гене CotO.
15. Рекомбинантный член семейства Bacillus cereuss по п. 14, где рекомбинантный член семейства Bacillus cereuss содержит мутацию в гене ExsY.
16. Рекомбинантный член семейства Bacillus cereuss по п. 15, где рекомбинантный член семейства Bacillus cereuss содержит нокаут гена ExsY.
17. Продукт ферментации рекомбинантного члена семейства Bacillus cereuss по п. 11.
18. Фрагменты экзоспория, происходящие из рекомбинантного члена семейства Bacillus cereuss по п. 13.
19. Состав, содержащий продукт ферментации по п. 17 и агрохимически приемлемый носитель.
20. Состав, содержащий фрагменты экзоспория по п. 18 и агрохимически приемлемый носитель.
21. Семя растения, обработанное составом по п. 19 или 20.
22. Способ стимуляции роста растения и/или промотирования здоровья растения, и/или борьбы с нематодами, включающий нанесение рекомбинантного члена семейства Bacillus cereuss по п. 11 в среду роста растения, на растение, семя растения или область, окружающую растение или семя растения.
23. Способ стимуляции роста растения и/или промотирования здоровья растения, и/или борьбы с нематодами, включающий нанесение фрагментов экзоспория по п. 18 в среду роста растения, на растение, семя растения или область, окружающую растение или семя растения.