СПОСОБ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СПЕРМЫ ЖЕРЕБЦОВ ПО УРОВНЮ АКТИВНОСТИ α-АМИЛАЗЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
METHOD FOR ASSESSING THE QUALITY OF STALLION SPERM BY THE LEVEL OF α-AMYLASE ACTIVITY IN BLOOD SERUM

Изобретение относится к области животноводства, в частности к коневодству и может быть использовано для отбора жеребцов с высоким качеством спермы.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Известно, что ферменты являются катализаторами биохимических процессов, тем самым играют огромную роль в метаболизме живого организма (Малахов, А.Г. Биохимия сельскохозяйственных животных / А.Г. Малахов, С.И. Вишняков. - Москва: Колос, 1984. - 336 с).
Известно исследование (Атрощенко, М.М. Взаимосвязь качества спермы жеребцов и ее криоустойчивости с показателями крови / М.М. Атрощенко, Е.Ю. Бородкина // Коневодство и конный спорт.- 2010. - №2. - С. 34-36), в котором проводится сравнение репродуктивных качеств жеребцов в зависимости от уровня активности α-амилазы в сыворотке крови.
Основным отличием данного исследования от заявляемого способа является то, что в нем приводятся результаты по сравнительной оценке репродуктивных качеств жеребцов в связи с различным уровнем активности ферментов в сыворотке крови, но нет оценки этих качеств.
Ближайшим аналогом (прототипом) заявляемого способа является способ оценки энзимологических показателей сыворотки крови и качества спермы жеребцов (Атрощенко, М.М. Взаимосвязь энзимологических показателей сыворотки крови и качества спермы жеребцов / М.М. Атрощенко, М.Г. Енгалычева, A.M. Кудлаева, Е.Ю. Бородкина, В.А. Науменкова, А.А. Незаленова, Н.А. Фролова, О.В. Широкова // Коневодство и конный спорт.- 2020. - №4. - С. 9-13), в котором подтверждена отрицательная зависимость между уровнем активности α-амилазы в сыворотке крови и общим количеством сперматозоидов в эякуляте (r равна -0,43; p меньше 0,01).
Недостатком способа является то, что он не дает возможности оценить репродуктивные качества жеребцов по показателю качества спермы, а именно по общему числу сперматозоидов в эякуляте. При этом в нем не приводятся границы интервалов для сопоставления полученных при использовании способа результатов, что в принципе делает невозможным оценку репродуктивных качеств жеребцов по активности ферментов в сыворотке крови.
Мы поставили задачу количественно оценить значение предельно допустимого уровня (ПДУ) активности α-амилазы в сыворотке крови жеребцов.
Предлагаемый нами способ отбора жеребцов с высоким качеством спермы по уровню активности α-амилазы в сыворотке крови позволяет оценить это качество, не прибегая к отбору самой спермы. Другими словами, не имея продукта (в данном случае спермы), мы сможем оценить некоторые его качества.
Следовательно, заявленный нами способ соответствует условию патентоспособности изобретения «новизна». Изобретение является применимым, так как оно может быть использовано в коневодстве для отбора жеребцов с высоким качеством спермы по уровню активности α-амилазы в сыворотке крови.
РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Образцы спермы, предназначенной для исследования (n=32) были отобраны с использованием ранее разработанной методики (Науменкова, В.А. Рекомендации по взятию, разбавлению и замораживании спермы жеребцов / В.А. Науменкова. - Издание ВНИИ коневодства, 2006. - 23 с.). После получения спермы, каждый эякулят оценивали по следующим показателям: объем, концентрация, общее количество сперматозоидов, активность, выживаемость сперматозоидов при температуре (Т) 2-4°С.
Одновременно с получением спермы производился забор крови от каждого жеребца из яремной вены однократно до кормления животных.
Была изучена активность α-амилазы в сыворотке крови методом биохимического анализа крови (колориметрический метод). На основании полученных результатов, согласно ранее разработанным рекомендациям (Назаренко, Г.И. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований / Г.И. Назаренко, А.А. Кишкун. - Москва: Медицина, 2002. - 544 с.), был рассчитан ПДУ активности α-амилазы в сыворотке крови жеребцов, который был установлен в границах 50 процентиля репрезентативной выборки: ПДУ активности α-амилазы оказался равным 24,5 МЕ/л.
Затем мы распределили животных по группам. Формирование жеребцов для анализа осуществлялось, опираясь на значение 50 процентиля, которое составило 24,5 МЕ/л. В первой группе находились жеребцы со значением уровня больше 24,5 Ед/л, во второй группе, соответственно, меньше 24,5 МЕ/л.
Как видно из полученных данных, жеребцы со значением уровня активности α-амилазы в сыворотке крови меньше 24,5 МЕ/л превосходили по общему количеству сперматозоидов в эякуляте на 70,97% аналогов из группы с превышением данного показателя (Р не больше 0,01).
Сам собой напрашивается вывод: на основании результатов эксперимента можно сделать следующее заключение - при значениях уровня активности α-амилазы в сыворотке крови меньше 24,5 МЕ/л, отмечается высокий уровень общего количества сперматозоидов в эякуляте. В связи с этим, предложенный способ является достоверным.
ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Применимость способа оценки качества спермы жеребцов по уровню активности α-амилазы в сыворотке крови была проверена в условиях Терского племенного конного завода №169 Ставропольского края на жеребцах арабской чистокровной породы (n=10).
Забор крови от каждого жеребца производят из яремной вены однократно до кормления животных, эти образцы оценивают по активности α-амилазы в сыворотке крови колориметрическим методом.
Одновременно получают образцы спермы жеребцов, которые оценивают по следующим показателям: объем, концентрация, общее количество сперматозоидов в эякуляте, активность, выживаемость сперматозоидов при температуре (Т) 2-4°С.
При этом мы учли, что в среднем общее количество сперматозоидов в эякуляте фертильных жеребцов составляет 10,7±0,5 млрд (Атрощенко М.М. Ультразвуковая диагностика и морфометрия семенников у жеребцов с нормоспермией / М.М. Атрощенко // Коневодство и конный спорт.- 2018. - №3. - С. 32-35).
Вывод: при активности α-амилазы в сыворотке крови ниже 24,5 МЕ/л жеребца следует относить к группе с высоким качеством спермы, при активности α-амилазы в сыворотке крови выше 24,5 МЕ/л, соответственно, к группе с низким.
Таким образом, при практическом использовании предлагаемого способа, для установления уровня качества спермы жеребцов, не нужно знать общее количество сперматозоидов в эякуляте, т.к. сама продукция, т.е. сперма, не нужна.