Отдаленные результаты клинического применения обогащенной тромбоцитами плазмы в ветеринарной офтальмологии

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ♦ Офтальмология ♦

Для цитирования: Шилкин, А.Г. Отдаленные результаты клинического применения обогащенной тромбоцитами плазмы в ветеринарной УДК gig- 6177

офтальмологии / А.Г. Шилкин, М.А. Войтеха, Т.Н. Павлова, Д.А. Ротанов, К.А. Новикова // Российский ветеринарный журнал. — 2017. — Д ' '

№ 5. — С, 9-12

For citation: Shilkin, A.G., Voitekha M.A., Pavlova T.N., Rotanov D.A., Novikova K.A., Long-term Results of Clinical Use of Platelet-Enriched Plasma in Veterinary Ophthalmology, Rossijskij veterinarnyj zhurnal (Russian veterinary journal), 2017, No. 5, pp. 9-12

Отдаленные результаты клинического применения обогащенной тромбоцитами плазмы в ветеринарной офтальмологии

А.Г. Шилкин, кандидат медицинских наук, ведущий врач-офтальмолог (shilkin555@mail.ru), МА. Войтеха (m.voy@bk.ru), кандидат биологических наук, врач-офтальмолог, Т.Н. Павлова, кандидат ветеринарных наук, врач-офтальмолог (mikoy88@gmail.com), ДА. Ротанов, кандидат ветеринарных наук, врач-офтальмолог, К.А. Новикова, ветеринарный врач. Центр ветеринарной офтальмологии доктора Шилкина А.Г. (129323, Москва, ул. Снежная, д. 13, корп. 1).

Все большую значимость среди практикующих ветеринарных врачей приобретает регенеративная медицина и биотехнологические методы. Наиболее перспективным и интересным для регенеративной ветеринарной офтальмологии методом является использование плазмы, обогащенной тромбоцитами (PRP).

Цель. Оценить отдаленные результаты клинического применения PRP в лечении собак и кошек, страдающих сухим кератоконъюнктивитом (KCS), индолентными эрозиями роговицы и фиброзами после тяжелых пересадок роговицы или суперфициальной кератэктомии.

Материалы и методы. Из цельной венозной крови животного получали богатую тромбоцитами плазму. Плазму вводили в виде субконъюнктивальных инъекций в дозе 0,5...1 мл или в виде инстилляций от 3 до 6 раз в день, сроком до 14 дней. Результаты терапии оценивали на повторных осмотрах, при этом обращали внимание на общее состояние конъюнктивы и роговицы, наличие отеков и гиперемии, гнойных или слизистых выделений, количество слезопродукции, окрашивание роговицы флуоресцином и, у послеоперационных животных, образование грануляций. Результаты. У 60 % пациентов с KCS после применения плазмы было отмечено значительное улучшение состояния глаз. При эрозиях роговицы у 6 из 10 животных после применения PRP происходила полная эпителизация. При пересадке роговицы и суперфициальной кератэктомии у всех животных наблюдали более быстрое приживление трансплантата на фоне использования плазмы.

Выводы. При использовании PRP было установлено, что эта методика абсолютно безопасна в офтальмологии при местном применении. Инстилляции и инъекции плазмы в глаз не вызывают аллергических, воспалительных реакций и других нежелательных эффектов даже при длительном использовании.

Ключевые слова: плазма, кровь, стволовые клетки, плазмолифтинг, тромбоциты, кошка, собака Сокращения: KCS — keratoconjuncívítís sicca

Введение

Все большую значимость среди практикующих ветеринарных врачей приобретает регенеративная медицина и биотехнологические методы. К таким методам в ветеринарной офтальмологии относят применение гемопоэтических и мезенхимальных стволовых клеток. Однако малая эффективность, дороговизна и сложность получения стволовых клеток не способствует широкому внедрению данного метода. Перечисленные недостатки заставляют исследователей искать более действенные и удобные методы регенеративной медицины. Наиболее перспективным и интересным для регенеративной ветеринарной офтальмологии методом является использование плазмы, обогащенной тромбоцитами, — PRP-технология [5].

Цель исследования

Оценить отдаленные результаты клинического применения PRP в лечении собак и кошек, страдающих KCS, индолентными эрозиями роговицы и фиброзами после тяжелых пересадок роговицы или суперфици-альной кератэктомии.

Материалы и методы

За последние несколько лет в Центре ветеринарной офтальмологии доктора Шилкина А.Г. (Москва) данный метод был применен более 50 раз в лечении собак и кошек, страдающих KCS, индолентными эрозиями роговицы и фиброзами после тяжелых пересадок роговицы или суперфициальной кератэктомии (рис. 1). Возрастной диапазон животных был достаточно широк — от 0,5 года до 15 лет, породная и половая принадлежность не учитывалась [1, 6].

Методика получения плазмы является совершенно несложной и доступна в любой клинике. У животного берут кровь из вены в пробирки для плазмолифтинга в количестве 8 мл. Эти вакуумные пробирки, запатентованные профессором P.P. Ахмеровым. Они содержат се-парационный разделительный гель и имеют высокий уровень очистки плазмы от эритроцитарного сгустка. В качестве антикоагулянта выступает гепарин. Пробирки центрифугируют однократно в течение 5 минут со скоростью 2,5 тыс. мин-1 (методические рекомендации для плазмолифтинга в центифуге ЕВА20). В результате центрифугирования происходит отслоение форменных элементов от плазмы. Кровь разделяется на 3 основные составляющие: сверху желтоватая диффузная, богатая тромбоцитами плазма, в центре непрозрачный разделительный гель белого цвета, внизу темно-красный тяжелый эритроцитарный сгусток. PRP полностью извлекают из пробирки с помощью шприцевой иглы и вводят живот-

Рис. 1. Показания к лечению плазмой, обогащенной факторами роста: а — сухой кератоконъюнктивит; b — пересадка роговицы; c — индоле-нтная язва роговицы

Fig. 1. Indications for treatment with plasma enriched with growth factors: a — dry keratoconjunctivitis; b — corneal transplantation; с — indolent corneal ulcer

ным в виде субконъюнктивальных инъекций в дозе 0;5...1 мл или в виде инстилляций от 3 до 6 раз в день, сроком до 14 дней, в зависимости от патологии [5].

При ведении первичных пациентов применение РКР являлось частью стандартной комплексной терапии. Для повторных пациентов данную методику использовали дополнительно к уже назначенному лечению, без какого-либо изменения его протокола. Наблюдение за динамикой лечения животных составило около 2 лет.

У собак, страдающих синдромом сухого глаза (KCS) (всего 30 глаз), тяжесть заболевания варьировалась от развитой стадии до терминальной (рис. 2). Показатели теста Ширмера составляли от 0 до 10 мм/мин. Практически у всех животных ксероз сопровождался гнойным конъюнктивитом, обширной пигментацией, помутнением роговицы и значительной васкуляризацией роговицы. Конъюнктива была гиперемирована и отечна. Таким животным плазму как часть комплексной терапии применяли в виде субконъюнктивальных инъекций по 0,5.1 мл каждые 3.7 дней (на курс до 3 инъекций) и в виде инстилляций — 3.6 раз в день. Некоторое время мы не решались выполнять субконъюнктивальные инъекции из-за опасений, что гепарин, используемый в пробирках для плазмолифтинга, может вызвать субконъ-юнктивальные кровотечения. К счастью, эти опасения не подтвердились, кровотечения отсутствовали [4, 7].

У 10 собак (всего 12 глаз) с индолентными язвами роговицы на пораженных глазах выявлялся положительный флюоресцеиновый тест, что свидетельствовало об интенсивности эрозивного процесса. Также наблюдали значительное количество патологического эпителия по краям

эрозий, с подвернутыми складками в виде «синдрома женского чулка». Длительность патологического процесса составила от 1 недели до 2 месяцев. Плазму применяли в виде инстилляций 4.6 раз в день в сочетании с антибиотиками, иммуностимуляторами и корнеопротекторами, субконъюнктивальные инъекции не использовали.

Лечение РКР было применено при эрозиях (10 животных, из них 2 кошки: 2 больных глаза) и 8 собак: 10 глаз). В нашей практике имелись пациенты с длительно незаживающими (от месяца и более) эрозиями роговицы, которые уже подвергались лечению в других клиниках. В этом случае мы применяли только терапевтическое лечение без хирургического вмешательства из-за противопоказаний по состоянию здоровья или из-за нежелания владельцев.

При пересадке роговицы и суперфициальной кера-тэктомии РКР-терапия проведена у 6 собак и 4 кошек (всего 10 глаз) на завершающем этапе операции после наложения швов, а также в послеоперационном периоде для рассасывания послеоперационных фиброзов.

Результаты и обсуждение

При использовании РКР было установлено, что эта методика абсолютно безопасна при местном применении в офтальмологии. Инсталляции и инъекции плазмы в глаз не вызывают аллергических, воспалительных реакций и других нежелательных эффектов даже при длительном использовании.

У 60 % пациентов с синдромомом сухого глаза (KCS) после инстилляций и субконъюнктивальных инъекций плазмы отмечено снижение отека конъюнктивы, уменьшение раздражения глазного яблока и улучшение сос-

Рис. 2. Терминальная стадия синдрома сухого глаза у йоркширского терьера (10 лет), до лечения Fig. 2. End-stage dry eye syndrome have a Yorkshire Terrier (10 years), before treatment

Рис. 3. Тот же глаз через 5 месяцев после комплексного лечения с применением PRP Fig. 3. The same eye 5 months after complex treatment with application of platelet-rich plasma

Рис. 4. Резорбция помутнения роговицы после кератопластики на фоне применения плазмы Fig. 4. Resorption of corneal opacities after ker-atoplasty with application of the plasma

Отдаленные результаты клинического применения обогащенной тромбоцитами плазмы в ветеринарной офтальмологии

тояния роговицы. Последнее проявлялось наиболее отчетливо и выраженно. Отмечалось запустевание новообразованных сосудов, некоторое восстановление прозрачности роговицы, происходила частичная регрессия пигмента. Улучшение состояния роговицы мы связываем с усилением трофики ее тканей, а также со снятием гипоксичес-кого и воспалительного компонентов (рис. 3) [1, 2, 7, 8].

При этом увеличение слезопродукции носило временный характер, выработка слезы снижалась за период от 1 до 3 месяцев. Трем животным плазму инъецировали в область слезной железы для стимуляции и возможного восстановления ее функции. Однако стимуляция слезной железы плазмой также носило кратковременный характер: слезопродукция повышалась на срок не более чем 2 месяца. Результаты исследований в медицине человека свидетельствуют о более выраженном эффекте после РКР-терапии. Вероятно, несоответствие в эффективности действия плазмы у человека и животных при синдроме сухого глаза обусловлено различными этиологическими факторами и более тяжелыми клиническими проявлениями самого заболевания у собак по сравнению с человеком [2, 6, 7].

При эрозиях эффективность применения плазмы была несколько ниже. У 6 из 10 животных после применения РБР эрозия полностью эпителизировалась и в дальнейшем не рецидивировала. В отношении животных с ин-долентными язвами роговицы вначале мы сомневались в результативности лечения. Однако терапия оказалась весьма успешной. При этом мы практически не изменили назначений предыдущих врачей, а только добавили плазму. Удивительно, но эпителий роговицы полностью закрыл эрозию уже через 4 дня от начала лечения [4, 7].

У остальных 4 животных состояние глаз не улучшилось. Из них у двух собак лечение оказалось абсолютно неэффективным — эрозии не уменьшались в размере, интенсивность флюоресцеинового теста тоже не менялась, сохранялось значительное количество патологического эпителия. У одной собаки с двумя обширными эрозиями произошла эпителизация только одного дефекта. Еще у одной собаки во время лечения эрозия эпителизировалась полностью, но через 2 недели возник рецидив. Все вышеперечисленные пациенты были благополучно и без осложнений прооперированы. В дальнейшем мы использовали у этих животных плазму на здоровых глазах для профилактики эрозий и улучшения трофики роговицы.

При пересадке роговицы и суперфициальной кера-тэктомии РКР-терапия дала следующие результаты: у животных происходило более быстрое приживление трансплантата. Его фиброз был менее выражен. Сформированные рубцы роговицы после кератэктомии постепенно резорбировались (рис. 4), прозрачность тканей частично восстанавливалась без применения стероидов или иммунодепрессантов.

Эффект кортикостероидов при рассасывании послеоперационных фиброзов превосходил эффект плазмы по выраженности, но являлся более опасным с точки зрения рецидива язвы и повышения внутриглазного давления. Назначение плазмы как раз и оправдывает себя в плане физиологической кератопротекции на глазах, склонных к эрозиям роговицы или к кератитам.

Еще одним показанием к применению плазмы являются полиаллергии на глазные лекарственные препараты, тем более, что число таких животных растет с каж-

дым годом. Для них плазма может быть единственным местным методом лечения, не вызывающим аллергических реакций. Что касается временного эффекта лечения плазмой, обогащенной факторами роста, то он, конечно, несколько снижается со временем и нивелируется полностью в среднем через 3...4 месяца, что требует повторных курсов терапии [4, 8, 9].

Заключение

Применение PRP не является панацеей (как это пытаются представить некоторые авторы в интернете), но это действительно эффективный метод в сочетании с классической медикаментозной терапией при лечении KCS и хронических эрозий роговицы. Его применение после кератопластики и кератэктомии способствует более прозрачному и быстрому приживлению трансплантата. Метод безопасен, физиологичен, прост и достаточно дешев. PRP практически не дает побочных эффектов, местных аллергических и токсических реакций и может широко применяться не только в офтальмологии, но и в других областях ветеринарии.

Библиография

1. Ачкасов, Е.Е. Применение аутоплазмы, обогащенной тромбоцитами плазмы в клинической практике / Е.Е. Ачкасов // Биомедицина. — 2013. — №4. — С. 46-59.

2. Ковач, М. Применение плазмы, обогащенной тромбоцитами, при лечении повреждения сухожилия глубокого сгибателя пальца лошади / М. Ковач [и др.]. // Современная ветеринарная медицина. — 2014. — № 1. — С. 48-50.

3. Латунь, Л. Понимание и оценки функции тромбоцитов. Гематология образовательной программы Американского общества гематологии, 2010. — С. 387-396.

4. Шилкин, А.Г. Клинические результаты применения методы плазмы, обогащенной тромбоцитами (PRP-технологии) в ветеринарной офтальмологии / А.Г. Шилкин, Д.А. Ротанов, Т.Н. Павлова, К.А. Новикова // Материалы XXI Московского международного ветеринарного конгресса. — 20-22 апреля 2013. — С. 112-114.

5. Шилкин, А.Г. Применение плазмы, обогащенной тромбоцитами, в ветеринарной офтальмологии / А Шилкин.Г., М.А. Войтеха, Т.Н. Павлова, Д.А. Ротанов, К.А. Новикова // Российский ветеринарный журнал. — 2017. — №2. — С. 6-9.

6. Alio J.L. Symptomatic dry eye treatment with autologous platelet-rich plasma / J.L. Alio [et al.] // Ophthalmic Res. — 2007. — No. 39(3). — pp. 124-129.

7. Arguelles, D. Autologous platelet concentrates as a treatment for musculoskeletal lesions in five horses / D. Arguelles [et al.] // Veterinary Record. — 2008. — No. 162. — pp. 208-211. DOI: 10.1136/vr.162.7.208

8. Burnouf, T. Blood-derived biomaterials and platelet growth factors in regenerative medicine / T. Burnouf [et al.] // Blood Rev. — 2013 Mar. — No. 27(2). — pp. 77-89.

9. Hartwig, D. Epitheliotrophic capacity of a growth factor preparation produced from platelet concentrates on corneal epithelial cells: a potential agent for the treatment of ocular surface defects? / D. Hartwig [et al.] // Transfusion. — December 2004. — Vol. 44. — Is. 12. — pp. 1724-1731. DOI: 10.1111/j.0041-1132.2004.04079.x

References

1. Achkasov E.E. Biomedicina, 2013, No. 4, pp. 46-59.

2. Kovach M. [et al.] Sovremennaja veterinarnaja medicina, 2014, No. 1, pp. 48-50.

3. Latun' L. Ponimanie i ocenki funkcii trombocitov, Gematologija obrazovatel'noj programmy Amerikanskogo obshhestva gematologii (Understanding and the estimation of the function of thrombocytes. Hematology of the educational program of the American society of hematology, 2010, pp. 387-396.

4. Shilkin A.G., Rotanov D.A., Pavlova T.N., Novikova K.A., Proceeding of XXI Moscow Internanional Veterinary Congress, 20-22 apr., Moscow, 2013, pp. 112-114.

5. Shilkin A.G., Vojteha M.A., Pavlova T.N., Rotanov D.A., Novikova K.A. Rossi-jskij veterinarnyj zhurnal, 2017, No. 2, pp. 6-9.

6. Alio J.L. [et al.], Ophthalmic Res., 2007, No. 39(3), pp. 124-129.

7. Arguelles D. [et al.], Veterinary Record., 2008, No. 162, pp. 208-211 DOI:10.1136/vr.162.7.208.

8. Burnouf T. [et al.], Blood Rev., 2013 Mar., No. 27(2), pp. 77-89.

9. Hartwig D. [et al.], Transfusion, December 2004, Vol. 44, Is. 12, pp. 1724-1731. DOI: 10.1111/j.0041-1132.2004.04079.x

ABSTRACT

A.G. Shilkin, M.A. Voitekha, T.N. Pavlova, D.A. Rotanov, K.A. Novikova

Center of Veterinary Ophthalmology of Dr. Shilkin A.G. (13-1, Snezhnaya str., Moscow, 1293230).

Long-term Results of Clinical Use of Platelet-Enriched Plasma in Veterinary Ophthalmology. Increasing importance among veterinary practitioners acquires medical biotechnology, methods which promote tissue regeneration, thus a quicker recovery of the patient. The most promising and interesting for regenerative veterinary ophthalmology method is the use of plasma rich in platelets (Platelet Rich Plasma, PRP - technology).

Objective. To assess the recovery rate of the eye in the treatment of dry keratoconjunctivitis and various pathologies of the cornea, such as indolent ulcers, postoperative condition after the transplant, donor or artificial corneal.

Materials and methods. From whole venous blood of an animal received a platelet rich plasma. Plasma was administered to animals in the form of subconjunctival injection at a dose of 0.5...1 ml or in the form of instillation from 3 to 6 times a day for up to 14 days, depending on pathology. Evaluation of treatment results was carried out on repeated ophthalmologic examinations, at the same time, attention was drawn to the General condition of the conjunctiva and cornea, presence of edema and hyperemia, purulent or mucous discharge, the number of lesoproduktsii, staining of the cornea fluorescine and postoperative animals, the formation of granulation tissue. Results. In 60 % of patients with sindromom dry eye (KCS) after application of plasma, there was significant improvement in the eye condition. With corneal erosion in 6 of 10 animals after application of the PRP was complete epithelialization. The transplant of the cornea and superficially of keratectomy in all animals was more rapid engraftment in the background plasma. Conclusions. The use of plasma enriched with platelets, it was found that this technique is completely safe in ophthalmology in the local application. Instillation and injection of plasma in the eye do not cause allergic, inflammatory reactions and other unwanted effects even with prolonged use.

Keywords: Plasma, blood, stem cells, plasmolifting, thrombocytes, cat, dog.

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ♦ Ортопедия ♦

Для цитирования: Подскребкина, О.А. Клинико-морфологические параллели в сонографической диагностике патологий коленного УДК 619: 617.3: 616-072

сустава у собак / О.А. Подскребкина, С.В. Позябин, М.Д. Качалин // Российский ветеринарный журнал. — 2017. — № 5. — С. 12-16 For citation: Podskrebkina O.A., Pozyabin S.V., Kachalin M.D.. Clinical and Morphological and Sonographic Parallels in Diagnosis of Knee Joint Pathologies in Dogs, Rossijskij veterinarnyj zhurnal (Russian veterinary journal), 2017, No. 5, pp. 12-16

Клинико-морфологические и сонографические параллели в диагностике патологий коленного сустава у собак

О.А. Подскребкина1,2, аспирант кафедры ветеринарной хирургии, ветеринарный врач

1 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии — МВА имени К.И. Скрябина», (109472, Москва, ул. Академика Скрябина, д. 23).

2 Инновационный ветеринарный центр Московской ветеринарной академии им. К.И. Скрябина, (109472, Москва, ул. Академика Скрябина, д. 23, стр. 7).

В исследовании, проведенном на 20 единицах секционного материала и 56 клинически больных собаках, обоснован алгоритм сонографического исследования структур коленного сустава, позволяющий верифицировать их патологические состояния. На секционном материале отрабатывали проекции сканирования с целью установления анатомических ориентиров и направлений при исследованиях. Наиболее информативными при сонографии коленного сустава являются следующие проекции: супрапателлярные продольная и поперечная, инфрапателлярные продольная и поперечная (со сгибаниями под различными углами), медиальная и латеральная продольные. Применение алгоритма сонографической визуализации структур коленного сустава позволяет оценить состояние основных мест локализации патологических процессов и выявить патологии костно-хрящевых структур и связочного аппарата сустава, такие как разрыв передней крестовидной связки, травму мениска, степень и локализацию артроза, наличие свободных фрагментов в полости сустава. Клиническая апробация показала, что сонографическая диагностика в 94,6 % случаев позволяет верифицировать патологические процессы в коленном суставе у собак.