Адгезивная подложка для ориентировки биопсийного материала слизистой оболочки желудка

Полезная модель относится к сфере медицины (патологическая анатомия), является вспомогательным решением для биопсийной диагностики и предназначена для ориентировки биопсийного материала.
Биопсийный метод исследования является ведущим в морфологической диагностике патологических изменений органов и тканей человека. Так, биопсийный материал, получаемый при эндоскопическом исследовании желудка (фиброгастроскопия (ФЭГДС)), позволяет выявлять патологические изменения, составляющие каскад канцерогенеза в желудке - каскад P. Correa [P. Correa. Gastric precancerous process in a high risk population: cohort follow-up.// Correa P., Haenszel W., Cuello C. et al. // Cancer Res. - 1990. - №50. - PP. 4737- 4740.]. Для полноценной оценки состояния слизистой оболочки желудка и реализации предиктивного потенциала в отношении риска развития рака желудка необходимо взятие биопсийного материала из нескольких точек, что регламентировано протоколом взятия биопсийного материала. На настоящий момент международным стандартом является протокол OLGA-system, подразумевающий обязательное получение двух фрагментов из тела желудка, двух - из антрального отдела и одного из области угла желудка [М. Rugge. OLGA staging for gastritis: a tutorial. / Rugge M., Correa P., Di Mario F. et al. // Dig Liver Dis. - 2008. -№40. - PP. 650-658].
В стандарте исследования биопсийного материала слизистой оболочки желудка OLGA-system изложены условия оценки морфологических изменений в биоптате, главным из которых является наличие 10 ориентированных желез в каждом кусочке. При этом гистологический срез при изготовлении препарата проходит перпендикулярно поверхности слизистой оболочки. Однако объем материала, забираемого при ФЭГДС, невелик, что связано с ограничениями форцепта биопсийньгх щипцов, и сами фрагменты значительно деформируются в процессе забора, что приводит к нарушению ориентировки исследуемого образца ткани и невозможности адекватной оценка морфологических изменений, определения прогноза для пациента даже при соблюдении протокола исследования. Решением данной проблемы является ориентировка биопсийного материала. Как верно ориентированные рассматриваются срезы, перпендикулярные поверхности слизистой оболочки и включающие все ее слои, в том числе мышечную пластинку слизистой. Такие срезы позволяют оценить выраженность атрофических изменений, а также, при наличии опухолевого роста, оценить наличие или отсутствие инвазии.
Существующим традиционным решением проблемы ориентировки материала является ручное выравнивание фрагмента ткани с помощью тонкой иглы или заостренной деревянной палочки. При этом метод имеет множество недостатков:
1. Замедляется процесс заливки материала, поскольку лаборант затрачивает время на выравнивание фрагмента.
2. Невозможность обеспечения полноценной ориентировки материала, поскольку методика предполагает верное расположение только части фрагмента, тогда как остальные его части, непосредственно не удерживаемые иглой, заворачиваются.
3. Фрагмент ткани смещается при извлечении иглы.
2
Для устранения описанных недостатков существуют другие подходы, основанные на использовании дополнительного материала в процессе ориентировки. Для равномерной ориентировки тканевого фрагмента можно использовать плотные бумажные листы (плотность 80 г/м). После прикрепления к полоске ткани образец помещается в фиксирующую жидкость (стандартный фиксатор - раствор 10% нейтрального забуференного (фосфатный буфер рН=7,2-7,4) формалина). Однако данный способ имеет существенный недостаток - перед заливкой в парафин фрагмент ткани необходимо отделить от бумажной подложки, что может привести к артифициальной деформации фиксированного фрагмента.
Другой подход подразумевает использование специализированных кассет Paraform, производимых компанией Sacura [L. Serrano Using LEAN Principles to Improve Quality, Patient Safety, and Workflow in Histology and Anatomic Pathology / Serrano L., Hegge P., Sato B. et al. // Adv. Anat. Pathol. - 2010. - Vol. 17. - P. 215-221]. Фрагмент ткани с помощью препаровальной иглы помещается на дно кассеты при заливке материала и удерживается в необходимом положении при заливке парафином. Сверху биоптат закрывается специальной пористой губкой, расположенной в крышке кассеты. После фиксации заливка в парафин осуществляется вместе с кассетой. К недостаткам данного способа относится высокая стоимость одноразовых расходных материалов (специализированных кассет), трудоемкость помещения биопсийного образца ткани в кассету с риском деформации исследуемого материала.
В отличие от описанных выше решений, предлагаемое к патентованию представляет собой адгезивную подложку из ацетата целлюлозы с диаметром пор 0,22 нм, имеющую форму полоски, один из концов которой заострен в виде стрелки, а противоположный фиксирован к ориентационному планшету (смотри фигуру 1). В соответствии с существующим протоколом забора гастробиоптатов, полоска рассчитана на расположение на ней пяти фрагментов ткани, в связи с чем разделена пунктирными отверстиями на пять частей. Данное решение позволяет при необходимости легко разделять сегменты в процессе проводки и заливки биопсийных фрагментов ткани в парафин. Напротив каждого из сегментов адгезивной полоски на ориентационный планшет нанесено число, отмечающее порядковый номер биоптата, - от 1 до 5. Ориентационный планшет представляет собой пластину из плотного ламинированного картона с гладкой глянцевой поверхностью.
Подложка плотно фиксируется к тканевому фрагменту и сохраняется на протяжении всей процедуры изготовления препарата. Наличие перфорированных отверстий позволяет как заливать в парафин всю полосу из пяти биоптатов, так и отделять биоптаты друг от друга (от 1 до 5) в случае необходимости. Подложка не деформируется при резке парафинового блока, легко разрезается лезвием микротома без влияния на него и нейтрально окрашивается при применении стандартной окраски гематоксилином и эозином.
Биопсийный материал помещается слизистой оболочкой на адгезивную подложку при помощи форцепта эндоскопа или тонкой иглы, расправляется на ней, после чего опускается в емкость с фиксирующей жидкостью (в качестве стандартной фиксирующей жидкости используется раствор 10% нейтрального забуференного (фосфатный буфер рН=7,2-7,4) формалина). Фиксацию проводят по стандартной методике. В процессе заливки тканевого фрагмента в парафин лаборант ориентирует адгезивную полоску перпендикулярно поверхности среза, после чего процесс изготовления препарата продолжается по стандартной методике. Таким образом, преимуществами данного решения является:
1. Формирование ориентированных срезов с возможностью послойной оценки структуры слизистой оболочки.
2. Отсутствие необходимости в отделении адгезивной подложки от тканевого фрагмента, поскольку материал подложки плотно фиксируется к ткани биоптата и легко разрезается при дальнейших технологических манипуляциях.
3. Возможность использования как полной полоски, так и нескольких ее сегментов благодаря наличию перфорированных разделяющих линий.
4. Возможность заливки в парафиновый блок серии биоптатов, фиксированных к одной полосе адгезивной подложки, с экономией времени лаборанта и ресурсов.
При проведения апробационных испытаний адгезивной подложки для ориентировки биопсийного материала было исследовано 120 образцов (биоптатов) слизистой оболочки желудка. Во всех случаях при использовании описанной полезной модели в процессе заливки материала в парафин удалось осуществить его ориентировку, полученные гистологические срезы были выполнены перпендикулярно поверхности слизистой оболочки, что позволяло провести морфологическую диагностику хронического гастрита в соответствии с современным стандартом исследования.