ИММУНОГЛОБУЛИНЫ С УМЕНЬШЕННОЙ АГРЕГАЦИЕЙ

1. Модифицированный или изолированный иммуноглобулин, обладающий уменьшенной склонностью к агрегации и содержащий в консервативном домене иммуноглобулина, по меньшей мере, одну уменьшающую агрегацию мутацию в остатке, который (i) имеет значение Пространственной Склонности к Агрегации (ПСА) (радиус сферы 5 Å), равное, по меньшей мере, 0,15, или (ii) имеет значение ПСА (радиус сферы 5 Å), больше, чем 0,0, и находится в пределах 5 Å от остатка, имеющего значение ПСА (радиус сферы 5 Å), равное, по меньшей мере, 0,15, где, по меньшей мере, одна уменьшающая агрегацию мутация является заменой на аминокислотный остаток, который снижает значение ПСА (радиус сферы 5 Å) остатка по сравнению с немутированным иммуноглобулином, а агрегация, склонность к которой уменьшается, является агрегацией между молекулами иммуноглобулина в концентрированном жидком растворе, и где, по меньшей мере, одна уменьшающая агрегацию мутация не является остатком 234 (шарнир) или 235 (шарнир).
H1
H1
H1
H2
H2
H2
H2
H2
H2
H2
H2
H2
H2
H2
H3
H3
H3
H3
H3
H3
L
L
L
L
2. Иммуноглобулин по п.1, в котором, по меньшей мере, одна уменьшающая агрегацию мутация выбирается из группы, состоящей из остатков мотива агрегации 1: 174 (C), 175 (C) и 181 (C); и мотива агрегации 2: 226 (шарнир), 227 (шарнир), 228 (шарнир), 229 (шарнир), 230 (шарнир), 231 (шарнир) и 232 (шарнир); мотива агрегации 3: 234 (шарнир) и 235 (шарнир); мотива агрегации 4: 252 (C) и 253 (C); мотива агрегации 5: 282 (C); мотива агрегации 6: 291 (C); мотива агрегации 7: 296 (C); мотива агрегации 8: 308 (C) и 309 (C); мотива агрегации 9: 328 (C), 329 (C), 330 (C) и 331 (C); мотива агрегации 10: 395 (C), 396 (C), 397 (C), 398 (C) и 404 (C); мотива агрегации 11: 443 (C); мотива агрегации 12: 110 (C) и 111 (C); мотива агрегации 13: 153 (C) и 154 (CL); и мотива агрегации 14: 201 (C).
H1
H2
H2
H2
H2
H2
Н2
H2
H3
H3
H3
L
L
L
3. Иммуноглобулин по п.2, в котором, по меньшей мере, одна уменьшающая агрегацию мутация (i) выбирает из группы, состоящей из остатков мотива агрегации 1: 175 (C); мотива агрегации 2: 227 (шарнир), 228 (шарнир), и 230 (шарнир); мотива агрегации 3: 234 (шарнир) и 235 (шарнир); мотива агрегации 4: 253 (C); мотива агрегации 5: 282 (C); мотива агрегации 6: 291 (C); мотива агрегации 7: 296 (C); мотива агрегации 8: 309 (C); мотива агрегации 9: 329 (С) и 330 (C); мотива агрегации 10: 395 (C) и 398 (C); мотива агрегации 11: 443 (C); мотива агрегации 12: 110 (C); мотива агрегации 13: 154 (C); и мотива агрегации 14: 201 (C).
4. Иммуноглобулин по п.1, в котором, по меньшей мере, одна уменьшающая агрегацию мутация является заменой на аминокислотный остаток, который является менее гидрофобным, чем остаток в немодифицированном иммуноглобулине.
5. Иммуноглобулин по п.1, где иммуноглобулин дополнительно обладает сродством связывания к целевому антигену, и сродство связывания к целевому антигену составляет, по меньшей мере, семьдесят процентов, по меньшей мере, восемьдесят процентов, по меньшей мере, девяносто процентов, по меньшей мере, сто процентов, или, по меньшей мере, сто пять процентов сродства связывания к целевому антигену немутированного иммуноглобулина.
6. Состав с модифицированным иммуноглобулином, содержащий иммуноглобулин по п.1, в котором иммуноглобулин находится в концентрации, по меньшей мере, 10 мг/мл, по меньшей мере, 20 мг/мл, по меньшей мере, 30 мг/мл, по меньшей мере, 40 мг/мл, по меньшей мере, 50 мг/мл, по меньшей мере, 75 мг/мл, по меньшей мере, 100 мг/мл, по меньшей мере, 125 мг/мл, по меньшей мере, 150 мг/мл.
7. Состав по п.6, в котором, по меньшей мере, восемьдесят процентов, по меньшей мере, восемьдесят пять процентов, по меньшей мере, девяносто процентов, по меньшей мере, девяносто пять процентов, по меньшей мере, девяносто шесть процентов, по меньшей мере, девяносто семь процентов, по меньшей мере, девяносто восемь процентов или, по меньшей мере, девяносто девять процентов измененного иммуноглобулина является неагрегированным мономером.
8. Состав по п.6, дополнительно содержащий фармацевтически приемлемый наполнитель.
9. Состав по п.6, где состав с иммуноглобулином демонстрирует, по меньшей мере, на пять процентов, по меньшей мере, на десять процентов, по меньшей мере, на пятнадцать процентов, по меньшей мере, на двадцать процентов, по меньшей мере, на двадцать пять процентов, по меньшей мере, на тридцать процентов, по меньшей мере, на тридцать пять процентов, по меньшей мере, на сорок процентов или, по меньшей мере, на пятьдесят процентов меньше агрегации после двадцати четырех часовой ускоренной агрегации по сравнению с немутированным иммуноглобулином в тех же условиях.
10. Состав по п.6, где состав с иммуноглобулином практически не содержит каких-либо добавок, которые уменьшают агрегацию иммуноглобулинов, и, необязательно, практически не содержит свободный гистидин, сахариды и полиолы.
H2
H2
H2
H2
11. Модифицированный или изолированный иммуноглобулин обладающий уменьшенной склонностью к агрегации, содержащий, по меньшей мере, одну уменьшающую агрегацию мутацию в остатке, выбранном из группы, состоящей из 235 (шарнир), 241 (C), 243 (C), 282 (C) и 309 (C), где если выбирается остаток 235, то его мутируют в глутамин или серии, если выбирается остаток 282, то его мутируют в лизин, и если выбирается остаток 309, то его мутируют в лизин, и где, по меньшей мере, одна уменьшающая агрегацию мутация является заменой на аминокислотный остаток, который является менее гидрофобным, чем остаток в неизмененном иммуноглобулине и агрегация, склонность к которой уменьшается, является агрегацией между молекулами иммуноглобулина в концентрированном жидком растворе.
12. Изолированный или рекомбинантный полинуклеотид, кодирующий иммуноглобулин по п.1.
13. Вектор, содержащий полинуклеотид по п.12, необязательно содержащий индуцируемый промотор, функционально связанный с полинуклеотидом.
14. Клетка-хозяина, содержащая вектор по п.13.
15. Способ получения иммуноглобулина с уменьшенной склонностью к агрегации, содержащий:
(a) предоставление культуральной среды, содержащей клетку-хозяин, содержащую вектор по п.14;
(b) размещение культуральной среды в условиях, в которых экспрессируется иммуноглобулин; и
(c) необязательно, выделение иммуноглобулина.
16. Модифицированный или изолированный иммуноглобулин, обладающий уменьшенной склонностью к агрегации, и содержащий в консервативном домене иммуноглобулина, по меньшей мере, одну уменьшающую агрегацию мутацию в остатке, который (i) имеет значение ПСА (радиус сферы 5 Å), равное, по меньшей мере, 0,15, или (ii) имеет значение ПСА (радиус сферы 5 Å), больше, чем 0,0, и находится в пределах 5 Å от остатка, имеющего значение ПСА (радиус сферы 5 Å), равное, по меньшей мере, 0,15, где, по меньшей мере, одна уменьшающая агрегацию мутация является заменой на аминокислотный остаток, который снижает значение ПСА (радиус сферы 5 Å) остатка по сравнению с немутированным иммуноглобулином, а агрегация, склонность к которой уменьшается, является агрегацией между молекулами иммуноглобулина в концентрированном жидком растворе, и вторая уменьшающая агрегацию мутация является заменой на аминокислотный остаток которые снижает значение ПСА (радиус сферы 5 Å) остатка, по сравнению с немутированным иммуноглобулином, где уменьшающая агрегацию мутация и вторая уменьшающая агрегацию мутация находятся в различных вызывающих агрегацию мотивах.
17. Иммуноглобулин по п.16, в котором, по меньшей мере, одна уменьшающая агрегацию мутация является заменой на аминокислотный остаток, который является менее гидрофобным, чем остаток в немодифицированном иммуноглобулине.
18. Иммуноглобулин по п.16, где иммуноглобулин дополнительно обладает сродством связывания к целевому антигену, и сродство связывания к целевому антигену составляет, по меньшей мере, семьдесят процентов, по меньшей мере, восемьдесят процентов, по меньшей мере, девяносто процентов, по меньшей мере, сто процентов, или, по меньшей мере, сто пять процентов сродства связывания к целевому антигену немутированного иммуноглобулина.
19. Состав с модифицированным иммуноглобулином, содержащий иммуноглобулин по п.16, в котором иммуноглобулин находится в концентрации, по меньшей мере, 10 мг/мл, по меньшей мере, 20 мг/мл, по меньшей мере, 30 мг/мл, по меньшей мере, 40 мг/мл, по меньшей мере, 50 мг/мл, по меньшей мере, 75 мг/мл, по меньшей мере, 100 мг/мл, по меньшей мере, 125 мг/мл, по меньшей мере, 150 мг/мл.