Морфологическая характеристика головного мозга крыс после трансплантации им злокачественных опухолей головного мозга человека (экспериментальное исследование)

в увеличении показателя УЭПГ в 1,5 раза по сравнению с интакт-ной группой. Количество первичных (ГПЛ) и вторичных (МДА) продуктов ПОЛ снижалось (р<0,001), приближаясь к показателям интактной группы. На фоне падения количества продуктов пе-роксидации шла нормализация АОА (р<0,05). Эти данные говорят о мембраностабилизирующем, антиоксидантном эффекте липидной композиции. Противовоспалительные свойства липидов камчатского краба проявились в снижении выработки цито-кинов: TNF-a на 40% (р < 0,001) и INF-y на 11% (р < 0,01).

Анализ межсистемных взаимодействий выявил, что в опытной группе 2 формируются две плеяды. В плеяде 1-го уровня (G - 3, G/k - 0,23, D - 0,81) предиктором выступает параметр ГПЛ, который образует положительную корреляцию с ТГ (r=0,8) и отрицательную с ХС ЛПОНП (r=-0,82). Центральный участник второй плеяды (G - 4, G/k - 0,3, D - 0,74) INF-y образует положительную корреляционную связь с ХС ЛПНП (r=0,76), МДА/АОА (r=0,73), МДА (r=0,72). Мощность и крепость плеяд в опытной группе 2 уменьшается, появляется большее число степеней свободы системы, более диффузный характер связей. Это говорит о положительном воздействии препарата, снижающем напряженность функционирования основных гомеостатических систем.

Установлено эффективное действие липидов гепатопан-креаса камчатского краба на внутри- и межсистемную кооперацию липидтранспортной, иммунной и антиоксидативной систем при алиментарной ДЛП у крыс. Мембранотропные свойства изучаемой липидной композиции обусловлены способностью компонентов добавки включаться в клеточные мембраны, влияя на чувствительность клеток к действию лигандов (гормоны, Ig Е, цитокины), модулировать текучесть липидов в бислое, приводя к качественным и количественным модификациям спектра мессенджеров [1, 2, 4]. Противовоспалительную активность липидов краба можно объяснить способностью ПНЖК ю-3 ингибировать синтез простагландинов и лейкотриенов, что ведет к снижению образования цитокинов мононуклеарами [1, 9]. Липидкорриги-рующее влияние добавки обусловлено способностью ПНЖК ускорять метаболизм атерогенных липидов, ингибировать синтез холестерина и антиоксидантными, иммунотропными свойствами АДГ [1, 4, 7, 12]. Это исследование позволяет рассматривать липиды гепатопанкреса камчатского краба как потенциальный объект для лечения и профилактики алиментарной ДЛП.

Выводы. Метод корреляционных плеяд позволил установить, что при ДЛП наблюдается усложнение внутри- и межсис-темных взаимодействий и нарушение кооперации между параметрами липидного обмена, иммунитета и системы ПОЛ - АОЗ. Липиды гепатопанкреаса краба обладают гиполипидемическим, антиоксидантным и противовоспалительным эффектом, обусловленным суммарным биологическим действием АДГ и ПНЖК ю3. Комплексное воздействие липидов камчатского краба позволяет снизить напряженность функционирования липидтранспортной, ПОЛ-АОС и иммунной систем организма крыс при ДЛП.

Литература

1. ГаврисюкВ.К. // Укр. пульмон. ж.- 2001.- № 3.- С. 5-10.

2. Гаджиева З.М. и др. // Вопр. питания.- 2002.- №6.- С. 35.

3. Доценко Э.А. и др // Иммунопатол., аллергол., инфек-тол.- 2001.- №3.- С. 6-15.

4. Ипатова О. и др // Биомед. химия.- 2004.- № 1.- С. 25.

5. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов, липопро-теидов и его нарушения. - СПб: Питер Ком.- 1995.

6. Насонов Е.А. и др // Кардиол.- 1999.- № 3 (39).- С. 26-28.

7. Новгородцева Т.П. и др // Эксп. и клин. фармакол.-2005.- Т.68, № 2.- С. 55-58.

8. Новгородцева Т.П. и др Руководство по методам исследования параметров системы «перекисное окисление липидов -антиоксидантная защита» в биологических жидкостях.- Владивосток: Дальневост. ун-т.- 2003.- 80 с.

9. ПасечникА.В. // Вестник РУДН.- Сер. Медицина.- 2003.-№ 5(24).- С. 113-114.

10. Суркина И.Д. и др. // Кардиол.- 1999.-№4.- С. 59-62.

11. Терентьев П.В., Ростова Н.С. Практикум по биометрии.- Изд-во ЛГУ.- Л., 1977.

12. Erdlenbruch B.et al.// Exp. Brain Res.- 2000.- №3.- P. 417.

13. Cole T.G. et al.//J. of Lipid Researc.-1984.-Vol.25.-P. 593.

14. WiggA.J. et al. // Gut.- 2001.- Vol. 48.- P. 206-211.

ESTIMATION OF THE INTERSYSTEM COOPERATION DISTURBANCES IN EXPERIMENTAL DYSLIPIDEMIA AND WAYS OF ITS CORRECTION

T.I. VITKINA, J.K. KARAMAN, S.P. KASYANOV, E.G. LOBANOVA, T.P. NOVGORODTSEVA

Summary

It is established, that at dyslipidemia complication inside both intersystem interactions and infringement of cooperation between lipids, immune and antioxidant systems is observed. For correction used the lipids from the King crab liver. The lipid fraction contented 10% of 1-0-alkyl-diacylglycerides, 10% of ©3 polyunsaturated fatty acids, and a bio-antioxidant complex. Results of research have shown, that lipids from the King crab liver possess lipidcorrect, antioxidant and anti-inflammatory effects, it are decrease the intensity of functioning of the investigated ethyo-dependent systems of rats.

Key words: dyslipidemia, lipids of the liver King crab.

УДК 616-006;616.831-005

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГОЛОВНОГО МОЗГА КРЫС ПОСЛЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ИМ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА ЧЕЛОВЕКА

Р.У. ГИНИАТУЛЛИН*, С.Т. ИСМАГИЛОВА*, Д.В. ЕРЕМЕЕВ**,

Л.В. АСТАХОВА*

В связи с развитием экспериментальной терапии злокачественных новообразований активизируются работы по получению моделей опухолей человека, перевиваемых на животных, но многие вопросы этой проблемы остаются до конца не выясненными. Это касается, в частности, морфологии опухолей, трансплантированных из головного мозга человека в мозг животных.

Цель работы - воспроизведение на крысах злокачественных глиальных опухолей головного мозга путем трансплантации их от человека, изучение их морфологических особенностей.

Материалы и методы исследования. Нами проведен эксперимент на 344 беспородных половозрелых разнополых крысах массой тела 150-200г. Всем животным проводилась трансплантация в их головной мозг злокачественных опухолей взятых от человека. При этом 231 животному проведена трансплантация глиобластом (Ш—1У степени злокачественности) от 27 больных, 113 крысам - анапластической (злокачественной) астроцитомы от 16 больных. Диагноз опухоли, удаленной у больных, подтверждался гистологически. Ткань опухоли пересаживалась животным не позднее 1 часа после оперативного удаления. Для подавления иммунитета у животных нами использовалось внутримышечное введение преднизолона по 3,0 мг в течение 10 дней с момента трансплантации опухолей. Гомогенат опухолевой ткани, предназначенный для трансплантации, готовился в стерильной стеклянной колбе. Разобщение клеток производилось механически. Для определения степени разобщения клеток в гомогенате брались мазки. Объем вводимого гомогената составлял 1 мм3.

Оперативное вмешательство проводилось под внутрибрю-шинным введением раствора кетамина в дозе 0,2-0,4 мл. После наступления стадии наркоза крысу фиксировали держателями за конечности к горизонтально установленной конструкции- «столу» стереотаксического аппарата. Кожные покровы головы обрабатывали 70% этиловым спиртом. Затем производили разрез мягких тканей головы в проекции сагиттального шва в промежутке между лобно-теменным и теменно-затылочным швами длиной до 1,5-2 см. Мягкие ткани разводили, брали на держалки, которые фиксировались к «столу» стереотаксического аппарата. Кость скелетировали. Затем зубным буром наносили в левой теменной области трепанационное отверстие до 3 мм в диаметре до твердой мозговой оболочки. Отверстие расширяли до 7 мм в диаметре зажимом типа «москит». Твердую мозговую оболочку вскрывали крестообразно. К направителю стереотаксического аппарата фрагментами тонкой силиконовой трубки подвижно

Челябинский государственный институт лазерной хирургии г. Челябинск, проспект Победы, 287, тел. (351) 741 -23-68, e mail: main@cgilh.chel.su МУЗ ГКБ №3, г. Челябинск

прикрепляли микрощипцы. Направитель стереотаксического аппарата под визуальным контролем жестко фиксировали к его дуге винтом в положении, при котором рабочие поверхности микрощипцов находились в проекции костного дефекта. Затем микрощипцами, подводимыми по направителю стереотаксиче-ского аппарата, извлекали фрагмент головного мозга животного в проекции костного дефекта. Микрощипцы снимали с направите-ля стереотаксического аппарата. При этом образовывалась полость в мозге объемом 2-3 мм3. Затем осуществляли гемостаз 3% раствором Н2О2. Далее гомогенаты опухоли объемом 1 мм3 брали стерильной одноразовой медицинской иглой соответствующего диаметра, присоединенной к одноразовому шприцу, и вводили на глубину 2 мм в сформированную полость до стенки бокового желудочка. Для избегания миграции гомогената через трепанаци-онное отверстие его закрывали снаружи фрагментом гомеостатической губки. Мягкие ткани ушивали узловыми швами.

Через 1,5-2 мес. после трансплантации при появлении неврологических нарушений у животных брались биоптаты из головного мозга стереотаксическим аппаратом для подтверждения факта привития опухоли и гистологической верификации. Биопсийный материал фиксировали в 10% растворе формалина и заливали в парафин. С парафиновых блоков готовили серийные гистологические срезы, которые окрашивали гематоксилином и эозином и микроскопировали ( «Leica», Германия).

Результаты проведенного эксперимента показали, что через 1,5-2 мес. после трансплантации, по данным гистологического исследования биопсийного материала, у 25 (7,2%) животных (на фоне введения гидрокортизона) опухоли привились и отмечался их инфильтрирующий рост: глиобластомы - у 19 (5,5%), астроцитомы - у 6 (1,7%) крыс. Нами установлено, что микроскопическая картина привившегося опухолевого трансплантата была подобна исходной опухоли. По данным литературы [3], привитие злокачественных опухолей головного мозга, пересаженных от человека, но морским свинкам отмечалось в 28,5% случаях. При этом привившиеся опухоли имели инфильтрирующий рост и были идентичны исходной. На нашем материале трансплантированные глиальные опухоли не прижились и рассосались у 177 (51,4%) животных. У 145 крыс на месте трансплантата определялась кистовидная полость, а у 32 - глиомезенхи-мальный рубец, что согласуется с данными литературы [3]. По мнению многих исследователей [1-3], опухоли трансплантированные от человека животным не прививаются и не растут в большей части случаев в связи с иммунными реакциями, развивающимся в ответ на пересаженную опухоль, независимо от ее локализации в организме реципнента.

У животных после трансплантации опухолей головного мозга гнойные осложнения (менингоэнцефалит, абсцесс мозга) регистрировались в 6 (1,7%) случаях. Погибли от травмы мозга (в результате кровотечения) 142 (41,2%) животных. По результатам исследований других авторов [3], в 0,5% и 5% случаях соответственно. Результаты собственного исследования показали, что через 2 мес. после трансплантации опухолей головного мозга, приживления и роста, размеры их составляли от 0,5x0,3 см до 0,6x0,4 см, что совпадает с данными литературы [3]. В наших материалах воспалительная реакция в мозговой ткани животного вокруг инвазивно растущей опухоли мозга человека была слабо выраженной либо отсутствовала, что согласуется с данными [3].

Вытоды. При внутримозговой трансплантации злокачественных глиальных опухолей головного мозга человека в мозг крыс, подвергнутых действию гидрокортизона, рост новообразований получен в 7,2% наблюдений: глиобластомы - в 5,5%, астроцитомы - в 1,7%. По данным морфологического анализа, трансплантированные глиобластома и астроцитома человека имели инфильтрирующий рост, размеры до 0,8x0,6 см и соответствовали исходной опухоли. Рост этих опухолей шел с развитием неврологических нарушений в виде периодических судорожных движений, гемипарезов конечностей, тремора.

Литература

1. Отеллин В.А. // Морфол.- 1999.- Т. 115, №3.- С. 7-17.

2. Полежаев Л.В., Александрова М.А., Трансплантация ткани мозга в биологии и медицине.- М.: Наука, 1993.

3. Яблоновская Л.Я. Экспериментальные опухоли головного мозга, полученные методом гетеротрансплантации и индуцирования.- Л.: Медицина, 1967.

УДК 616-076: 577.1

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ КРИСТАЛЛОМИКА - МОДЕЛИРОВАНИЕ БИОКРИСТАЛЛОГЕНЕЗА

А. К. МАРТУСЕВИЧ, Ю.В. ЗИМИН*

В настоящее время внимание медиков привлекают кристаллографические методы исследования, базирующиеся на феномене кристаллизации биологических жидкостей для получения интегративной информации, имеющей диагностическое значение.

Большинство исследователей, занимающихся данной проблемой, работают в направлении выделения качественных маркеров функционального или патологического состояния организма человека [9, 16, 17]. Количественный анализ результатов кри-сталлогенеза как способ объективизации кристаллоскопического мониторинга физико-химических свойств и состава биологических жидкостей реализуется лишь в варианте компьютерной цифровой обработки данных микроскопии [5, 8]. Единственными качественно-количественными методами оценки образцов являются в настоящее время поясная кристаллоскопия и методика А. Л. Волчецкого с соавт. [8]. Методы качественного определения химических соединений по данным признакам были предложены Т. Е. Ловицем, учеником М. В. Ломоносова, еще в 1804 г. В своих работах он описал два оригинальных теста для качественного анализа структуры исследуемых веществ. Это - «метод выветренных налетов солей» (кристаллических структур) и учет микрокристаллических реакций. Первый тест и был положен в основу разработанного позже способа качественного определения лекарственных препаратов. Методика микрокристаллических реакций сейчас нашла применение в судебной медицине.

Однако применение данных методик в качестве диагностического теста до недавнего времени рассматривалось лишь немногими исследователями. Наиболее значительный вклад в изучение данной проблемы внесли сотрудники Московского областного научно-исследовательского клинического института (МОНИКИ) им. М. Ф. Владимирского. Ими была разработана методика кристаллоскопического анализа биологических субстратов, которая по сути представляла собой тезиографический тест. Принципиальное отличие его от предложенного Т. Е. Лови-цем подхода состоит в том, что в последнем случае для инициации процесса кристаллизации используются различные по химической природе вещества, в большинстве своем это нейтральные соли, тогда как оригинальный метод не требует добавления каких-либо реагентов. Сейчас установлен ряд закономерностей метаморфозы биогенеза на воздействия (электромагнитное поле [5], высокочастотные излучения, дегидратация в условиях вакуума, температурных режимов [2]; объем капли, тип подложки [4,15-16], способ удаления жидкой части среды, изоляция высушиваемого образца от влияния внешней среды [3], аутоволновые процессы [20] и пр. факторы). Часто специалисты ограничиваются исследованиями, проводимыми in vitro (на стекле), но их с некоторым приближением можно экстраполировать на реакции жидких сред организма человека.

Теоретическое обоснование представлений о кристаллизации биологических жидкостей у человека ставит вопрос актуальности ее при диагностике различных патологических состояний [8]. В настоящее время существуют несколько подходов к использованию данных по кристаллогенезу в диагностических и дифференциально-диагностических целях. В связи с этим в медицинской практике сейчас используются кристаллоскопические методы исследования, имеющие своей целью расшифровку метаболической информации, сокрытой в качественноколичественном составе и физико-химических свойствах биологических сред, по которым составляется интегральный «кристаллографический портрет» организма человека (рис. 1).

Кристаллографические методы исследования - совокупность методических подходов к извлечению информации о гомеостатических особенностях метаболизма организма, основанных на феномене свободного или инициированного кристаллообразования при дегидратации жидкого или гомогенизированного биоматериала с последующей интерпретацией результатов.

Российского ожогового центра История применения кристаллографических методов исследования в медицине и биологии

* «Нижегородский НИИ травматологии и ортопедии Росмедтехнологий»