ВАРИАНТЫ ЛИПОЛИТИЧЕСКОГО ФЕРМЕНТА

1. Способ получения полипептида, включающий:
а) отбор такого родительского полипептида, который обладает активностью липолитического фермента и аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 30% идентичной последовательности SEQ ID NO:1;
b) отбор, по меньшей мере, одного аминокислотного остатка в последовательности, соответствующего любому из остатков 1, 13, 25, 38-51, 53-55, 58, 69-79, 91, 92, 96, 97, 99, 103, 104-110, 113, 132-168, 173, 187-193, 197-205, 215, 223-231, 242, 244, 256, 259, 261-298, 303, 305, 308-313 или 315 последовательности SEQ ID NO:1;
c) изменение аминокислотной последовательности, где изменение включает замену или делецию выбранного остатка или вставку, по меньшей мере, одного остатка, примыкающего к выбранному остатку;
d) получение измененного полипептида с измененной аминокислотной последовательностью;
e) определение специфической активности липолитического фермента, липолитической активности при щелочных значениях pH и/или энантиоселективности измененного пептида; и
f) отбор измененного полипептида, обладающего более высокой специфической активностью липолитического фермента, более высокой активностью при щелочных значениях pH и/или более высокой энантиоселективностью, чем родительский полипептид.
2. Способ по п.1, где отобранный остаток соответствует любому из остатков: 1, 13, 25, 38, 42, 74, 140, 143, 147, 164, 168, 190, 199, 215, 223, 242, 244, 256, 265, 277, 280, 281, 283, 284, 285, 292, 303, 315, 135-160 или 267-295 последовательности SEQ ID NO:1.
3. Способ по п.1 или 2, где изменение включает замену отобранного остатка остатком, найденным в соответствующем положении любой из последовательностей SEQ ID NO:1-8.
4. Способ по п.1 или 2, где родительский полипептид выбирают из последовательностей SEQ ID NO:1-8.
5. Полипептид, который:
a) обладает активностью липолитического фермента и
b) имеет аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, на 80% идентична последовательности SEQ ID NO:1 и, по сравнению с последовательностью SEQ ID NO:1, содержит аминокислотную замену, делецию или вставку в положении, соответствующем любому из остатков: 1, 13, 25, 38, 42, 74, 140, 143, 147, 164, 168, 190, 199, 215, 223, 242, 244, 256, 265, 277, 280, 283, 284, 285, 292, 303, 315, 135-160 или 267-295.
*
6. Полипептид по п.5, где отличие от SEQ ID NO:1 включает изменение, соответствующее N74Q, P143S, A281S, P38S, N292Q, L1QGPL, L1QL, I285E, L147F, L147N, N292C, L140E, P143L, A146T, P280V, A283K, A284N, T103G, A148P, W104H, V190A, L199P, T256K, T42N, R242A, V215I, T164V, L163F, D265P, P303K, R168D, A25G, V315I, T244P, K13Q, L277I, Y91S, A92S, N96S, N97, L99V или D223G.
7. Полипептид по п.5 или 6, который содержит ряд аминокислотных изменений по сравнению с SEQ ID NO:1, представляющих собой:
а) V139I G142N P143I L144G D145G L147T A148G V149L S150IN A151T S153A W155V;
b) Y135F V139R L140M, A141V, G142P P143V D145C A146P L147S A148F V149P S150KLSC A151P W155L;
c) Y135F K136H V139M G142Y P143G D145C L147G A148N V149F S150GKVAKAGAPC A151P W155L;
d) V139I G142N P143I L144G D145G L147T A148G V149L S150IN A151T S153A W155V A281S, или
e) Y135F K136H V139M G142Y P143G D145C L147G A148N V149F S150GKVAKAGAPC A151P W155L A281S.
8. Полипептид по п.5 в иммобилизированной форме.
9. Способ проведения реакции, катализируемой липазой, который включает приведение реактантов во взаимодействие с полипептидом по любому предыдущему пункту, где реакцией является:
a) гидролиз, где реактантами являются эфир карбоновой кислоты и вода, а продуктами являются свободная карбоновая кислота и спирт;
b) синтез эфира, где реактантами являются свободная карбоновая кислота и спирт, а продуктом является эфир карбоновой кислоты;
c) алкоголиз, где реактантами являются эфир карбоновой кислоты и спирт; или
d) ацидолиз, где реактантами являются эфир карбоновой кислоты и свободная жирная кислота.
10. Способ по п.9, где реакцией является гидролиз изопропилового эфира, или синтез эфира, или алкоголиз с изопропанолом в качестве реактанта.