Диагностика болезни Ниманна-Пика тип-с с использованием биохимических маркеров

ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ПЕДИАТРИИ И ДЕТСКОЙ ХИРУРГИИ

Митохондриальные заболевания — генетически гетерогенная группа наследственных болезней, характеризующаяся клиническим полиморфизмом и вариабельностью возраста манифестации. Дефект цитохром-С оксидазы (IV комплекса дыхательной цепи митохондрий) — одно из самых частых нарушений при митохондриальных болезнях, манифестирующих в неонатальный период.

Клиническое наблюдение: девочка от близкородственного брака на 6 сутки жизни была доставлена в реанимационное отделение в очень тяжелом состоянии. Тяжесть состояния была обусловлена дыхательной недостаточностью, инфекционным токсикозом на фоне пневмонии, некротического энтероколита 1 ст; сердечной недостаточностью, неврологической симптоматикой в виде синдрома угнетения ЦНС, недоношенностью 36 недель.На фоне симптоматической терапии, сохранялись явления сердечной недостаточности при отсутствии грубых врожденных пороков сердца, анемия. По результатам Эхо-КГ была выявлена гипертрофическая бивентрикуляр-ная кардиомиопатия. По результатам лабораторного обследования исключены наследственные дефекты митохондриального бета-окисления, аминоацидопа-тии, выявлено выраженное повышение уровня лак-тата в крови и моче, и заподозрено наследственное заболевание из группы митохондриальных. Методом секвенирования следующего поколения на приборе IonTorrent был проведен анализ кодирующей последовательности 62 ядерных генов, мутации в которых приводят к развитию митохондриальной патологии. В гене COX10 обнаружена не описанная ранее замена c.C1037T (p.S346L) в гомозиготном состоянии, приводящая к снижению активности цитохромС оксида-зы. Данная мутация выявлена у родителей пробанда в гетерозиготном состоянии.

В возрасте 6 месяцев у пациентки наблюдаются признаки гипертрофической кардиомиопатии, анемический синдром, тубулопатия, сенсоневральная тугоухость.

Данный случай демонстрирует клинические проявления митохондриального заболевания, обусловленного не описанной ранее мутацией в гене COX10 в неонатальный период.

СЛУЧАЙ РАННЕГО СТЕНОЗА ШЕЙНОГО ОТДЕЛА ПОЗВОНОЧНИКА У ПАЦИЕНТА С СИНДРОМОМ ХАНТЕРА.

Полякова Н.А.1, Печатникова Н.Л.1, Какаулина В.С.1, Воскобоева Е.Ю.2

ТБУЗ «Морозовская ДГКБ ДЗМ», г. Москва 2ФГБНУ «Медико-генетический научный центр» ФАНО, г. Москва

Осложнения, связанные с компрессией спинного мозга у пациентов с различными формами муко-полисахаридозов (МПС) относятся к числу наибо-

лее тяжелых и жизненно угрожаемых. Обследование шейного и грудо-поясничного отдела позвоночника строго рекомендуются всем пациентам с МПС. Как правило, эти изменения выявляют наиболее рано

Клиническое наблюдение: при обследовании мальчика 1 года 6 месяцев жизни, были выявлены задержка психоречевого развития, тетрапарез с снижением мышечной силы до 3,5—4 баллов, синдромом множественного костного дизостоза, паховая грыжа. При проведении лабораторной диагностики выявлена повышенная экскреция гепарансульфата и дерма-тансульфата, выраженным снижение активности иду-ронатсульфатазы 1,3 (норма 197—705 нмоль/4 ч/мл) и протяженная делеция, затрагивающая все экзоны гена идуронатсульфатазы (IDS) и установлен диагноз мукополисахародоз II типа. При проведении МРТ у ребенка обнаружены выраженный кранио-стеноз, синдром базальной дисплазии на уровне CI позвонка с сужением позвоночного столба, формированием сирингомиелии на уровне шейного отдела позвоночника, деформации тел позвонков. В ЦИТО им. Приорова, в возрасте 1 года 10 месяцев, проведено 2х этапное оперативное лечение — декомпрессия спинного мозга на уровне С0—С1, окципитоспон-дилодез системой Vertex, задний спондилодезауто-костью. После проведенного оперативного лечения заметно уменьшилась выраженность пареза, увеличился объем активных движений в конечностях. До, во время и после оперативного лечения проводилась фермент-заместительная терапия. Можно предположить, что ранее формирование стеноза обусловлено наличием тяжелой мутацией в гене IDS. Обследование шейного и грудо-поясничного отдела позвоночника строго рекомендуются всем пациентам с МПС после установления диагноза и в процессе мониторинга проводимой терапии.

ДИАГНОСТИКА БОЛЕЗНИ НИМАННА-ПИКА ТИП-С С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОХИМИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ

Прошлякова Т.Ю.1, Байдакова Г.В.1, Букина Т.М.1, Михайлова С.В.2, Руденская Т.Е.1, Клюшников С.А.3, Захарова Е.Ю.1

'ФГБНУ Медико-генетический научный центр, г. Москва

2ФГБУ Российская детская клиническая больница

Минздрава России, г. Москва

3ФГБНУ Научный центр неврологии, г. Москва

Введение. Болезнь Ниманна—Пика тип С (НПС) — наследственное аутосомно-рецессивное

РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИК ПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 4, 2016 ROSSIYSKIY VESTNIK PERINATOLOGY IPEDIATRII, 4, 2016

Раздел 6. Наследственные заболевания и врожденные пороки развития

заболевание нервной системы из группы лизосом-ных болезней накопления (ЛБН). В исследованиях лаборатории НБО МГНЦ составлен алгоритм диагностики болезни НПС, в котором использование биохимических маркеров: концентрации оксисте-ролов (холестан-3р,5а,бр-триол и 7-кетохолестерин) и активности хитотриозидазы существенно ускоряют постановку диагноза.

Материалы и методы. На основании клинических симптомов, характерных для НПС, была сформирована выборка из 300 пациентов. Анализ оксистеро-лов проводился в плазме крови с помощью метода ВЭЖХ-МС/МС. Анализ активности хитотриозидазы проводился в сухих пятнах крови стандартным флюо-риметрическим методом.

Результаты. Повышенные показатели биохимических маркеров обнаружены у 68 пациента из 300 исследуемых: у 12 пациентов повышена только концентрация оксистеролов, у 56 — повышена только активность хитотриозидазы, у 9 пациентов выявлены повышенные показатели обоих биохимических маркеров.

Проведен полный анализ генов ^С1 и NPC2 для пациентов с повышенной концентрацией окси-стеролов (и=12). У 5 пациентов выявлены мутации в компаунд-гетерозиготном состоянии в гене ^С1 и диагноз НПС был подтвержден. Для 3 пациентов с повышенными обоими маркерами в дальнейшем подтвержден диагноз Ниманна—Пика тип А/В и у одного пациента диагноз недостаточность кислой липазы. Диагноз не был установлен у 3 пациентов.

Выводы. Определение концентрации оксистеро-лов и активности хитотриозидазы позволяет не только эффективно отбирать пациентов на молекулярную диагностику НПС, но и проводить дифференциальную диагностику с другими лизосомными болезнями накопления.

ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ДНК-ДИАГНОСТИКЕ ФАКОМАТОЗОВ

Стрельников В.В., Чаплыгина М.С., Кузнецова Е.Б., Танас А.С., Залетаев Д. В.

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Медико-генетический научный центр» г. Москва

Введение. Факоматозы — тяжёлые инвалидизиру-ющие заболевания с высокой детской и юношеской смертностью; наиболее изученные из них — нейро-фиброматоз и туберозный склероз. Высокая частота встречаемости и необходимость дифференциальной диагностики для объективного медико-генетического консультирования обуславливает актуальность проведения эффективной молекулярной диагностики этих заболеваний.

Цель исследования — разработка эффективного способа диагностики нейрофиброматоза и тубероз-

ного склероза на основе современных высокотехнологичных способов анализа ДНК.

Материалы и методы. В исследование включено 167 больных с диагнозом «нейрофиброматоз» и 12 больных с диагнозом «туберозный склероз». Для скрининга мутаций в генах ^1, ^2 (нейрофиброматоз) и TSC1, TSC2 (туберозный склероз) методом высокопроизводительного параллельного секвенирования (ВПС) разработаны панели прайме-ров, обеспечивающие полное покрытие кодирующих областей и прилежащих интронных областей генов. Исключение протяженных делеций генов NF1, NF2, TSC1 и TSC2 проводилось мультиплексной лигазоза-висимой амплификацией зондов (MLPA).

Результаты. Использование ВПС позволило выявить 79 патогенных мутаций в генах ^1 и Ш.2. Мутации в гене Ш1 обнаружены у 72/167 (43,1%), в гене Ш2 — у 7/167 (4,1%) больных. Анализ MLPA выявил протяженные делеции в пределах гена Ш1 у 7/88 (7,9%) больных. В одной семье обнаружена полная делеция одного из аллелей гена Ш1 — у про-банда и его отца. Поиск мутаций у больных с клиническим диагнозом «туберозный склероз» привел к обнаружению патогенных генетических вариантов в 58% случаев, один из которых представлен мозаичной мутацией (доля мутантного аллеля в ДНК из лимфоцитов крови — 18%).

Заключение. До недавнего времени ДНК-диагностика факоматозов осложнялась их генетическим полиморфизмом, значительной протяженностью вовлеченных генов и высокой частотой мозаичных мутаций. Проблема выявления мозаичных мутаций решается только индивидуальным секвенированием множества молекул ДНК образца по отдельности, что стало возможным в последнее время благодаря внедрению методов ВПС. Кроме того, поскольку ВПС позволяет проводить одновременный поиск мутаций в нескольких генах, независимо от их протяженности, решаются и другие перечисленные выше проблемы, ранее создававшие препятствия быстрой и эффективной диагностике факоматозов.

СВЯЗЬ X-СЦЕПЛЕННОЙ УМСТВЕННОЙ ОТСТАЛОСТИ С СУБМИКРОСКОПИЧЕСКИМИ НЕСБАЛАНСИРОВАННЫМИ ПЕРЕСТРОЙКАМИ ХРОМОСОМЫ X

Юров И.Ю.123, Ворсанова С.Г.124, Зеленова М.А.1-2-4, Куринная О.С.1-2-4, Васин К.С.1-2-4, Ратников А.М.1-4, Юров Ю.Б.12 4

'ФГБНУ «Научный центр психического здоровья», г. Москва

Обособленное структурное подразделение «Научно-исследовательский клинический институт педиатрии имени академика Ю.Е. Вельтищева» ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, г. Москва

РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИК ПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 4, 2016 ROSSIYSKIY VESTNIK PERINATOLOGIII PEDIATRII, 4, 2016