Оценка степени выраженности метаболических нарушений в крови при экспериментальном токсическом гепатите и разработка путей их коррекции

живота после 40-й недели беременности не отмечалось.

По данным истории родов, у беременных 2-й группы с беременностью на 40-й неделе наблюдалась незрелая шейка матки. При кардиотокографии не обнаруживались признаки внутриутробного страдания плода (снижение амплитуды осцилляций, появление поздних децелераций различной степени выраженности).

Характерные ультразвуковые признаки переношенной беременности (уменьшение толщины плаценты, наличие в ней петрификатов, кист, маловодие, отсутствие прироста биометрических параметров плода при динамическом исследовании, утолщение костей черепа, снижение двигательной активности, отсутствие дыхательных движений плода) не отмечались. Не выявлялось выраженных признаков старения плаценты. Контуры головки обычные.

При допплерометрическом исследовании снижения маточно-плацентарного и плодово-плацентарного кровотока не отмечалось.

У беременных женщин 1-й группы, напротив, эти признаки присутствовали.

Таким образом, полученные данные указывают на возможность использования пробы сердечно-дыхательного синхронизма в качестве дополнительного метода дифференциальной диагностики переношенной, пролонгированной и доношенной беременности.

ЛИТЕРАТУРА

1. Галустян М. З., Куценко И. И. Оценка регуляторноадаптивных возможностей организма беременных женщин для определения готовности организма к родам // Кубанский научный медицинский вестник. - 2006. - № 9 (90). -С. 96-101.

2. Покровский В. М., Абушкевич В. Г., Борисова И. И., Потя-гайло Е. Г., Похотько А. Г., Хакон С. М., Харитонова Е. В. Сердечно-дыхательный синхронизм у человека // Физиология человека. - 2002. - Т. 28, № 6. - С. 116-119.

3. Стрижаков А. Н., Игнатко И. В., Тимохина Е. В., Рыбин М. В. Переношенная беременность. - М.: Династия, 2006. - 96 с.

4. Чернуха Е. А. Переношенная и пролонгированная беременность. - М., 2007. - 207 с.

Поступила 03.03.2009

И. М. БЫКОВ1, А. А. ЛАДУТЬКО1, Е. Е. ЕСАУЛЕНКО1, М. И. БЫКОВ2, С. С. БАЧКО1, М. А. ХИЛЬЧУК1

ОЦЕНКА СТЕПЕНИ ВЫРАЖЕННОСТИ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ НАРУШЕНИЙ В КРОВИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ И РАЗРАБОТКА ПУТЕЙ ИХ КОРРЕКЦИИ

кафедра фундаментальной и клинической биохимии Кубанского государственного медицинского университета, Россия, 350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4; 2Российский центр функциональной хирургической гастроэнтерологии,

Россия, 350086, г. Краснодар, ул. 1 Мая, 167. E-mail: ladutkoa@mail.ru

У крыс с моделью токсического гепатита изучались особенности метаболических нарушений в крови, возникающих в ответ на воздействие СС14. Обнаружены значительные изменения в структуре печеночной паренхимы, активности индикаторных ферментов печени, обмене липопротеиновых частиц, состоянии про-/антиоксидантной системы крови. Показана возможность коррекции обнаруженных метаболических нарушений маслом ореха черного (Juglands nigra L.).

Ключевые слова: токсический гепатит, дислипидемия, окислительный стресс, антиоксидантная активность, гепатопротек-торы, масло черного ореха.

I. M. BIKOV1, A. A. LADUTIKO1, E. E. ESAULENKO1, M. I. BIKOV2, S. S. BACHKO1, M. A. HILCHUK1

THE ESTIMATION DEGREE VYRAZHENNOSTI METABOLIC BREACHES IN BLOOD WITH EXPERIMENTAL TOKSICHESKOM HEPETITIS AND DEVELOPMENT OF THE WAYS OF THEIR CORRECTION

department of fundamental and clinical biochemistry of Kuban State Medical University,

Russia, 350063, Krasnodar, st. Sedina, 4;

2Russian centre of functional surgical gastroenterology, Russia, 350086, Krasnodar, st. 1 May, 167. E-mail: ladutkoa@mail.ru

From rats with model toxic hepatitis were studied particularities of the metabolic breaches in whey shelters and erythrocytes, appearing in response to influence of the CCl4. The significant changes are discovered in structure liver parenchyma, activities indicated ferment liver, exchange lipoproteins particles, condition of anti-oxidant of the system shelters. It is shown possibility to correction discovered metabolic breaches mask nut black (Juglands nigra L.).

Key words: toxic hepatitis, dislipidemia, oxidative stress, antioxidant activity, hepatoprotectors, butter of the black nut.

Кубанский научный медицинский вестник № 3 (108) 2009 УДК 616.36-002+577.156.6-092.9

Кубанский научный медицинский вестник № 3 (108) 2009

Несмотря на достижения современной гепатологии, неинфекционные и инфекционные заболевания печени остаются распространенными причинами инвалиди-зации и смертности среди населения [4, 5]. При этом токсическое поражение печени разнообразными химическими веществами (алкоголем, четыреххлористым углеродом, лекарственными препаратами) способствует возникновению и прогрессированию соматических заболеваний, что значительным образом сказывается на состоянии здоровья больных [3, 5].

Острая и хроническая интоксикация гепатотокси-нами приводит к значительному изменению цито- и гистоархитектоники печени, нарушению нормального метаболизма в тканях. Развитие токсического гепатита сопровождается дистрофией и некрозом гепатоцитов, массивным формированием портокавальных анастомозов, вследствие чего нарушается как синтетическая функция печени, так и ее способность к обезвреживанию чужеродных веществ [4, 5].

Одним из ведущих синдромов, усиливающих тяжесть течения токсического поражения печени, является синдром эндогенной интоксикации. Это обусловлено распадом клеток печеночной паренхимы и накоплением токсических продуктов в околоклеточном пространстве с последующим их поступлением в кровеносное русло, что приводит к нарушению клеточного метаболизма и ослаблению регуляторных и адаптационных функций как самой печени, так и всего организма в целом [11, 12]. Возникающий на фоне токсического гепатита окислительный стресс рассматривают как комплексную ответную реакцию организма на агрессию со стороны окружающей среды, которая сопровождается выраженными неспецифическими изменениями биохимических показателей [12, 13]. В процессе адаптации к токсическому воздействию могут возникнуть различные метаболические нарушения, приводящие к снижению неспецифической резистентности организма, нарушению функции внутренних органов, прогрессивному развитию соматических заболеваний [3, 10].

В настоящее время имеются определенные достижения в лечении гепатитов инфекционной и неинфекционной природы. В этиопатогенетической терапии токсического гепатита активно используются лекарственные средства растительного и животного происхождения, способствующие стабилизации клеточных мембран, нормализующие анаболическую функцию печени и обладающие антиок-сидантными свойствами [2, 13]. Особое место в лечении токсического поражения печени отводится использованию препаратов, содержащих фосфолипиды, гепатопро-тективные свойства которых обусловлены наличием в их составе полиненасыщенных жирных кислот. Однако вопросам использования растительных масел, также содержащих значительное количество полиненасыщенных жирных кислот, в лечении гепатитов отводится незначительная роль.

Таким образом, несмотря на наличие определенных достижений в диагностике, лечении и профилактике острых гепатитов как инфекционной, так и неинфекционной природы, молекулярные механизмы, лежащие в основе повреждения гепатоцитов, а также методы медикаментозной профилактики и лечения остаются до конца не изученными.

Цель исследования - изучить особенности метаболических нарушений в сыворотке крови и эритроцитах у экспериментальных животных (крыс) с моделью токсического гепатита, вызванного интоксикацией четыреххлористым углеродом, и оценить возможности их коррекции с помощью масла ореха черного.

Материалы и методы исследования

Опыты были проведены на 60 белых нелинейных крысах-самцах массой 150-200 г. Модель токсического гепатита создавали подкожным введением 50%-ного масляного раствора четыреххлористого углерода (формирование модели подтверждали патогистологическим исследованием печени крыс). Использование четыреххлористого углерода в качестве гепатотропного яда было обусловлено сходством морфологической картины токсического поражения печени у крыс и больных людей.

Экспериментальные животные были разделены на три опытных и контрольную группу. У крыс первой опытной группы (n=15) биохимические параметры крови и патоморфологическое исследование печени проводили через 72 часа после моделирования токсического гепатита; у крыс второй опытной группы (n=15) -через 21 сутки после создания модели с целью изучения динамики течения патологического процесса. На животных третьей опытной группы (n=15) изучалась возможность использования масла черного ореха в лечении острого токсического гепатита, для чего лабораторным животным по гастральному зонду вводили исследуемое масло в дозировке 1,5 мл/100 г массы тела в течение 21 суток, после чего производили лабораторное исследование крови и печени. Контрольную группу (n=15) составили интактные животные. При создании модели токсического гепатита, введении исследуемого масла и заборе биоматериала (кровь, печень) соблюдались правила гуманного обращения с животными.

Биохимическое исследование крови включало определение активности ферментов - маркеров поражения печени: аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), щелочной фос-фатазы (ЩФ), гаммаглутамилтранспептидазы (ГГТП) в сыворотке крови унифицированными методами, а также расчет коэффициентов АСТ/АЛТ и ГГТП/АСТ [6]. Липидный спектр, включающий определение содержания общего холестерина (ОХС), холестерина липопротеинов низкой (ХС ЛПНП) и высокой плотности (ХС ЛПВП), этерифицированного холестерина (ЭХС), триацилглицеринов (ТАГ) в сыворотке крови животных определяли энзиматическими колориметрическими методами [6]. Уровень неэтерифициро-ванного холестерина (НЭХС) находили по разнице в содержании ОХС и ЭХС, а также рассчитывали коэффициент ЭХС/НЭХС и коэффициент атерогенности (КА) [6]. Для изучения про-/антиоксидантного баланса крови в сыворотке регистрировали содержание вторичных продуктов липопероксидации по реакции с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-РП) [14]. В гемолизате эритроцитов определяли активность ферментов антирадикальной защиты: каталазы [8] и супероксид-дисмутазы (СОД) [9] колориметрическими методами.

Для проведения морфологических исследований образцы нормальной и патологически измененной печени размерами от 0,5 до 1 см помещали в фиксатор -10%-ный формалин для дальнейшего получения парафиновых блоков. Патоморфологическое исследование печени включало приготовление и визуальный анализ микропрепаратов ткани печени крыс с окраской гематоксилин-эозином по общепринятой методике [7].

Полученные экспериментальные данные были обработаны методами вариационной статистики с использованием пакета прикладных программ STATISTICA 6.0 [1].

Рис. 1. Печень крыс контрольной группы

Рис. 2. Печень крыс первой опытной группы

Рис. 3. Печень крыс второй опытной группы

Кубанский научный медицинский вестник № 3 (108) 2009

Кубанский научный медицинский вестник № 3 (108) 2009

Рис. 4. Печень крыс третьей опытной группы

Рис. 5. Печень крыс третьей опытной группы

Примечание:

группа I - крысы с токсическим гепатитом, биохимическое исследование крови которых проводили через 72 часа после создания модели;

II - через 21 сутки после создания модели;

III - крысы с токсическим гепатитом, получавшие лечение маслом черного ореха; контрольная группа -интактные животные;

ЭХС - эфиры холестерина;

НЭХС - неэтерифицированный холестерин.

Рис. 6. Значение коэффициента атерогенности и коэффициента этерификации холестерина

в опытных и контрольной группах

Результаты и обсуждение

Как показали наши исследования, уже через 72 часа после введения СС14 наблюдались значительные изменения в активности индикаторных ферментов печени: коэффициент АСТ/АЛТ снизился на 41% (р<0,001), активность ЩФ уменьшилась на 21% (р<0,001), значение коэффициента ГГТП/АСТ повысилось на 200% (р<0,001) по сравнению с животными контрольной группы. Описанные изменения в активности ферментов - маркеров токсического поражения печени свидетельствуют об активно протекающих процессах повреждения гепатоцитов.

На 21-е сутки эксперимента в сыворотке крови животных наблюдалось увеличение активности ЩФ на 19% (р<0,001) по сравнению с крысами первой опытной группы. Статистически значимых отличий между активностью ЩФ во второй опытной группе и контрольной обнаружено не было. Значение коэффициента АСТ/ АЛТ у крыс второй опытной группы было ниже на 43% (р<0,001), а ГГТП/АСТ выше на 233% (р<0,001) по сравнению с контрольной группой, однако значение обоих коэффициентов статистически не отличалось от показателей в первой опытной группе. Отсутствие динамики в активности АСТ, АЛТ, ГГТП между первой и второй опытными группами свидетельствует о стабилизации в развитии патологического процесса за счет компенсаторно-адаптивных механизмов гепатоцитов.

Биохимические изменения в крови коррелировали с характером микроскопической картины печени (рис. 2, 3). При анализе препаратов были обнаружены заметные признаки межуточного отека тканей и дискомпенсация печеночных балок у животных первой и второй опытных групп. Клетки печени уменьшены в размерах, заметна гиперхромия цитоплазмы с явлениями слабой и умеренной зернистой и жировой дистрофии. Хроматин в ядрах клеток конденсирован, заметны явные признаки кариопикноза и кариорексиса. Имеются зоны, где наблюдаются явные признаки склероза в междольковых пространствах и стаз эритроцитов в меж-дольковых венах, а также выраженные явления стаза в венозной системе, венозное полнокровие, сопровождающееся жировой дистрофией гепатоцитов.

В условиях воздействия масла ореха черного на организм крыс наблюдалась положительная динамика биохимических показателей крови и морфологической картины печени: значение коэффициента АСТ/АЛТ было выше на 21% (р<0,01), а ГГТП/АСТ - ниже на 40% (р<0,02) по сравнению с показателями в группе крыс, не подвергнутых лечению (вторая опытная группа). Цито- и гистоархитектоника тканей печени лабораторных животных на фоне лечения маслом черного ореха претерпела существенные изменения (рис. 4, 5) по сравнению с тканями печени крыс, не подвергнутых лечению (вторая опытная группа). В целом структура печеночных балок стала более упорядоченной, цитоплазма большинства гепатоцитов приобрела равномерную окраску, характерную для интактных животных (рис. 1), вакуолизация цитоплазмы практически исчезла. Вместе с тем сохранялись явления межуточного отека, очаги мелкоклеточной инфильтрации и венозного стаза.

При изучении липидного спектра сыворотки крови крыс были обнаружены характерные метаболические нарушения (рис. 6). Через 72 часа после воздействия токсина наблюдались значительные изменения в липидном спектре крови, выражающиеся в увеличении концентрации ОХС (на 30%, р<0,001), ХС ЛПНП (на 195%, р<0,001) и уменьшении содержания ТАГ (на 63%, р<0,001) по сравнению с контролем. Проатерогенные

сдвиги в крови подтверждались увеличением КА (на 206%, р<0,001). Нарушение процессов этерификации холестерина выражалось в снижении коэффициента ЭХС/НЭХС в среднем на 67,5% (р<0,001) по сравнению с контролем.

На 21-е сутки эксперимента изменения в липидном спектре сыворотки крови носили прогрессирующий характер: содержание ОХС, ХС ЛПНП, НЭХС увеличивалось, а ТАГ, ХС ЛПВП и ЭХС уменьшалось. КА увеличился на 834% (р<0,001), ЭХС/НЭХС уменьшился на 88% (р<0,001) по сравнению с контрольной группой.

На фоне лечебного введения масла ореха черного у крыс третьей опытной группы наблюдались процессы стабилизации липидного спектра сыворотки крови, выражающиеся в снижении концентрации ОХС, ХС ЛПНП, НЭХС и увеличении доли ХС ЛПВП, ТАГ и ЭХС. Интегральный показатель, характеризующий про-/антиате-рогенные сдвиги в крови (КА), также снижался на 51% (р<0,001), а коэффициент этерификации холестерина (ЭХС/НЭХС) увеличился на 660% (р<0,001) по сравнению с группой крыс, не подвергнутых лечению (вторая опытная группа).

При воздействии четыреххлористого углерода на организм крыс опытных групп наблюдалась выраженная активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ). В сыворотке крови животных первой опытной группы было обнаружено значительное увеличение содержания ТБК-РП (на 60%, р<0,001 по сравнению с интактными животными). Усилению липопероксидации способствовало формирование дисбаланса в работе ферментов первой (СОД) и второй (каталаза) линий антирадикаль-ной защиты: под действием четыреххлористого углерода наблюдалось более выраженное снижение активности каталазы (на 57%, р<0,001), чем СОД (на 38%, р<0,001), по сравнению с показателями в контрольной группе.

У крыс с моделью токсического гепатита на 21-е сутки от начала эксперимента (вторая опытная группа) в сыворотке крови прогрессивно увеличивалось содержание эндогенных токсических субстанций (концентрация ТБК-РП увеличилась на 280%, р<0,001 по сравнению со здоровыми животными) и формировался более глубокий дисбаланс в работе ферментов анти-радикальной защиты эритроцитов (активность катала-зы снизилась на 60%, СОД - на 56%, р<0,001 по сравнению с показателями в контрольной группе).

В группе животных с токсическим гепатитом, получавших в течение 21 суток масло ореха черного (третья опытная группа), наблюдалось снижение концентрации ТБК-РП на 35% (р<0,001) по сравнению с крысами с токсическим гепатитом, не получавшими лечения (вторая опытная группа). Активность каталазы при этом возросла на 85% (р<0,001), СОД - на 43% (р<0,001).

Таким образом, в условиях интоксикации четыреххлористым углеродом у лабораторных животных развивается токсическое поражение печени, о чем свидетельствуют снижение коэффициента АСТ/АЛТ, повышение ГГТП/АСТ и данные патогистологического исследования. Отсутствие динамики в активности АСТ, АЛТ, ГГТП между первой и второй опытными группами свидетельствует о включении компенсаторноадаптивных механизмов, препятствующих дальнейшему повреждению гепатоцитов.

На фоне токсического гепатита, вызванного острой интоксикацией четыреххлористым углеродом, формируется выраженная прогрессирующая дислипидемия. Угнетение процессов этерификации холестерина при этом,

Кубанский научный медицинский вестник № 3 (108) 2009

УДК 543.544 Кубанский научный медицинский вестник № 3 (108) 2009

по-видимому, связано с нарушением образования в печени фермента лецитин-холестерин-ацилтрансферазы, участвующего в обмене липопротеиновых частиц крови.

Метаболические нарушения, возникающие при токсическом гепатите, усугубляются стимуляцией процессов ПОЛ, протекающих на фоне функциональной несостоятельности ферментов антирадикальной защиты.

Положительная динамика биохимических показателей крови (повышение коэффициентов АСТ/АЛТ, ЭХС/НЭХС; снижение ГГТП/АСТ, КА; уменьшение концентрации ТБК-РП, нормализация в работе каталазы и СОД), а также морфологической картины печени на фоне применения масла ореха черного свидетельствуют о наличии у исследуемого продукта гепатопро-тективных, гиполипидемических и антиоксидантных свойств, что позволяет рекомендовать его для дальнейшего использования в гепатологии в качестве эффективного терапевтического средства.

ЛИТЕРАТУРА

1. Герасимов А. Н. Медицинская статистика: Учебное пособие. -М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2007. - 480 с.

2. Доркина Е. Г., Сергеева Е. О., Саджая Л. А, Терехов А. Ю, Парфентьева Е. П., Скульте И. В. Изучение влияния флаво-ноидов на системы детоксикации ксенобиотиков при курсовой алкоголизации у крыс // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2009. - № 1, Т. XIX, приложение № 33. - С. 74.

3. Ерохин Ю. А. Изменение иммунной системы при алкогольной болезни // Проблема демографии, медицины и здоровья населения России: История и современность: Статьи IV Международной научно-практической конференции. Май, 2007 г. - Пенза: РИО ПГСХА, 2007. - С. 95-98.

4. Ерохин Ю. А., Ануфриева Е. Ю. Злоупотребление алкоголем в России и его последствия // Экология и безопасность жизнедеятельности: Сборник статей VI Международной научно-практической конференции. - Пенза: РИО ПГСХА, 2006. - С. 111-113.

5. Ивашкин В. Т., Маевская М. В. Алкогольно-вирусные заболевания печени. - М.: Литера, 2007. - 160 с.

6. Камышников В. С. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. - М.: МЕДпресс-ин-форм, 2004. - 920 с.

7. Коржевский Д. Э. Краткое изложение основ гистологической техники для врачей и лаборантов-гистологов. - СПб: Кроф, 2005. - 48 с.

8. Королюк М. А, Иванов Л. И., Майорова И. Г., Токарев В. П. Метод определения активности каталазы // Лабораторное дело. -1988. - № 1. - С. 16-19.

9. Костюк В. А, Потапович А. И., Ковалева Ж. И. Простой и чувствительный метод определения супероксиддисмутазы, основанный на реакции окисления кверцитина // Вопр. мед. химии. - 1990. -№ 2. - С. 88-91.

10. Кушнерова Н. Ф, Рахманин Ю. А, Гордейчук Т. Н., Фоменко С. Е., Добряков Ю. И., Лесникова Л. Н., Добряков Е. Ю. Применение биологически активных веществ морских гидробионтов для коррекции нарушений липидного обмена при алкогольной интоксикации // Гигиена и санитария. - 2000. - № 3. - С. 70-73.

11. Лесникова Л. Н., Кушнерова Н. Ф., Добряков Е. Ю. Особенности метаболизма организма при остром стрессе и его коррекция хаурантином и эссенциале // Новые медицинские технологии на Дальнем Востоке: Материалы V Региональной науч.-практ. конф. Хабаровск, 2002 г. - Владивосток: Дальнаука, 2002. - С. 71.

12. Меньщикова Е. Б., Зенков Н. К., Ланкин В. З., Бондарь И. А., Труфакин В. А. Окислительный стресс: патологические состояния и заболевания. - Новосибирск: АРТА, 2008. - 284 с.

13. Оковитый С. В., Шуленин С. Н., Смирнов А. В. Клиническая фармакология антигипоксантов и антиоксидантов. - СПб: ФАРМиндекс, 2005. - 72 с.

14. Стальная И. Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Современные методы в биохимии. - М.: Медицина, 1977. - С. 66-68.

Поступила 14.04.2009

Г. Б. ГОЛУБИЦКИЙ

АНАЛИЗ

МНОГОКОМПОНЕНТНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА ОТ ПРОСТУДЫ

МЕТОДОМ ГРАДИЕНТНОЙ ВЭЖХ

OAO «Фapмcmaндapm-Лекcpедcmвa», Россия, 3G59G9, г. Курск, ул. 2-я Aгpегamнaя, la/18, тел.: (47122) 6-G1-65, 8-9G3-877-26-32. E-mail: iirogirg@narod.ru

Предложена экспрессная одностадийная методика качественного и количественного анализа нового многокомпонентного препарата от простуды методом градиентной ВЭЖX. По сравнению с методикой, включенной в нормативную документацию разработчиками технологии, получен значительный положительный эффект: определение аскорбиновой кислоты проводится одновременно с остальными действующими веществами препарата. Изучены метрологические характеристики новой методики, подтверждены достоверность и воспроизводимость результатов при анализе модельных смесей и образцов препарата.

Ключевые слова: многокомпонентный лекарственный препарат от простуды, экспрессная одностадийная методика, метрологические характеристики методики, модельные смеси и образцы препарата, достоверность и воспроизводимость результатов.

G. B. GOLUBITCKII

HPLC ANALYSIS OF MULTICOMPONENT COLD PREPARATION WITH MOBILE PHASE GRADIENT

JSC «Pharmstandard-Leksredstva»,

Russia, 305909, Kursk, 2-d Agregatnaya str, 1a/18, tel.: (47122) 6-01-65, 903-877-26-32. E-mail: iirogirg@narod.ru