IN VITRO ПРОГНОЗИРОВАНИЕ ВРЕМЕНИ ПОЛУЖИЗНИ АНТИТЕЛ IN VIVO

1. Способ отбора антитела, включающий следующие стадии:
i) определение первого времени удерживания антитела и контрольного антитела на колонке для аффинной хроматографии на основе FcRn с элюцией положительным линейным градиентом рН в присутствии первой концентрации соли и определение второго времени удерживания антитела и контрольного антитела на колонке для аффинной хроматографии на основе FcRn с элюцией положительным линейным градиентом рН в присутствии второй концентрации соли или
ii) определение первого времени удерживания антитела и контрольного антитела на колонке для аффинной хроматографии на основе FcRn с элюцией линейным солевым градиентом при первом значении рН и определение второго времени удерживания антитела и контрольного антитела на колонке для аффинной хроматографии на основе FcRn с элюцией линейным солевым градиентом при втором значении рН, или
D
iii) определение для антитела и контрольного антитела значения K при рН 6 с использованием поверхностного плазмонного резонанса и определение времени удерживания антитела и контрольного антитела на колонке для аффинной хроматографии на основе FcRn с элюцией положительным линейным градиентом рН в присутствии высокой концентрации соли, или
D
iv) определение для антитела и контрольного антитела значения K при рН 6 с использованием поверхностного плазмонного резонанса и определение времени удерживания антитела и контрольного антитела на колонке для аффинной хроматографии на основе FcRn с элюцией линейным солевым градиентом, или
v) определение времени удерживания антитела и его области Fc на колонке для аффинной хроматографии на основе FcRn с элюцией положительным линейным градиентом рН, или
vi) определение времени удерживания антитела и его области Fc на колонке для аффинной хроматографии на основе FcRn с элюцией линейным солевым градиентом при высоком значении рН, или
D
vii) определение для антитела и его области Fc значения K при рН 6 с использованием поверхностного плазмонного резонанса и определение времени удерживания антитела и его области Fc на колонке для аффинной хроматографии на основе FcRn с элюцией положительным линейным градиентом рН в присутствии высокой концентрации соли, или
D
viii) определение для антитела и его области Fc значения K при рН 6 с использованием поверхностного плазмонного резонанса и определение времени удерживания антитела и его области Fc на колонке для аффинной хроматографии на основе FcRn с элюцией линейным солевым градиентом при высоком значении рН,
и, посредством этого, отбор
а) антитела, которое имеет первое время удерживания, которое является по существу таким же, как и второе время удерживания, или
D
D
б) антитела, которое имеет значение K, которое отличается от значения K контрольного антитела самое большее в 10 раз, и которое имеет время удерживания, которое является по существу таким же, как и время удерживания контрольного антитела, или
в) антитела, которое имеет время удерживания, которое является по существу таким же, как и время удерживания его области Fc, или
D
D
г) антитела, которое имеет значение K, которое отличается от значения K его области Fc самое большее в 10 раз, и которое имеет время удерживания, которое является по существу таким же, как и время удерживания его области Fc.
2. Способ по п. 1, где данный способ предназначен для отбора антитела, которое не имеет взаимодействия Fab антитела-FcRn, влияющего на время полужизни антитела in vivo.
3. Способ по п. 1, где
данный способ предназначен для отбора антитела, которое имеет относительное время полужизни in vivo, которое увеличивается по сравнению с антителом подкласса IgG1, IgG3 или IgG4 и
в v), vi), vii) и viii) дополнительно определяется время удерживания контрольного антитела или контрольной области Fc, и
посредством этого, отбор
а) антитела, которое имеет первое время удерживания, которое дольше, чем первое время удерживания контрольного антитела, и первое время удерживания, которое является по существу таким же, как и второе время удерживания, или
D
D
б) антитела, которое имеет значение K, которое отличается от значения K контрольного антитела самое большее в 10 раз, и которое имеет время удерживания, которое дольше, чем время удерживания контрольного антитела, или
в) антитела, которое имеет время удерживания, которое является по существу таким же, как и время удерживания его области Fc, и которое дольше, чем время удерживания контрольного антитела, или
D
D
г) антитела, которое имеет значение K, которое отличается от значения K его области Fc самое большее в 10 раз, и которое имеет время удерживания, которое является по существу таким же, как и время удерживания его области Fc, и которое дольше, чем время удерживания контрольного антитела.
4. Способ по п. 1, где
данный способ предназначен для определения относительного увеличения или уменьшения времени полужизни антитела in vivo относительно контрольного антитела и
в v), vi), vii) и viii) дополнительно определяется время удерживания контрольного антитела или контрольной области Fc, и
в i)-viii) дополнительно определяется время удерживания области Fc IgG с мутацией N434A и
посредством этого, отбор
а) антитела, которое имеет первое время удерживания, которое дольше, чем первое время удерживания контроля, которое имеет первое время удерживания и второе время удерживания, которые являются по существу одинаковыми, и которое имеет первое время удерживания, которое короче, чем время удерживания области Fc с мутацией N434A, и, посредством этого, отбор антитела с относительно увеличенным временем полужизни in vivo, или
D
D
б) антитела, которое имеет значение K, которое отличается от значения K контрольного антитела самое большее в 10 раз, которое имеет время удерживания, которое дольше, чем время удерживания контрольного антитела, и которое имеет первое время удерживания, которое короче, чем время удерживания области Fc с мутацией N434A, и, посредством этого, отбор антитела с относительно увеличенным временем полужизни in vivo, или
в) антитела, которое имеет первое время удерживания, которое короче, чем первое время удерживания контрольного антитела, и которое имеет первое время удерживания и второе время удерживания, которые являются по существу одинаковыми, и, посредством этого, отбор антитела с относительно уменьшенным временем полужизни in vivo, или
D
D
г) антитела, которое имеет значение K, которое отличается от значения K контрольного антитела самое большее в 10 раз, и которое имеет время удерживания, которое короче, чем время удерживания контрольного антитела, и, посредством этого, отбор антитела с относительно увеличенным временем полужизни in vivo.
5. Способ по любому из пп. 1-4, где положительный линейный градиент рН идет от примерно рН 5,5 до примерно рН 8,8.
6. Способ по любому из пп. 1-4, где соль представляет собой хлорид натрия.
7. Способ по любому из пп. 1-4, где первая концентрация соли составляет примерно 140 мМ.
8. Способ по любому из пп. 1-4, где вторая концентрация соли составляет примерно 400 мМ.
9. Способ по любому из пп. 1-4, где линейный солевой градиент идет от 0 мМ соли до 250 мМ соли.
10. Способ по любому из пп. 1-4, где первое значение рН составляет примерно 5,5.
11. Способ по любому из пп. 1-4, где второе значение рН составляет примерно 7,4.
12. Способ по любому из пп. 1-4, где высокая концентрация соли составляет примерно 400 мМ.
13. Способ по любому из пп. 1-4, где высокое значение рН составляет примерно рН 7,4.
14. Способ по любому из пп. 1-4, где по существу разные времена удерживания отличаются по меньшей мере на 5%.
15. Способ по любому из пп. 1-4, где по существу одинаковые времена удерживания отличаются на 3,5% или менее.
16. Способ по любому из пп. 1-4, где, если времена удерживания являются по существу отличными, данные времена удерживания пропорциональны единице, поделенной на квадратный корень концентрации соли (~1√концентрация соли)).
17. Способ по любому из пп. 1-4, где антитело представляет собой полноразмерное антитело.