ПРОТИВОВИРУСНАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ФАВИПИРАВИР И АМИНОКИСЛОТУ, ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО, ЕЕ СОДЕРЖАЩЕЕ, А ТАКЖЕ ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И/ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ
ANTIVIRAL PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING FAVIPIRAVIR AND AN AMINO ACID, MEDICINAL PRODUCT CONTAINING SAID COMPOSITION, AND APPLICATION THEREOF FOR TREATING AND/OR PREVENTING VIRAL INFECTIONS

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и медицины, и представляет собой новую фармацевтическую композицию фавипиравира с одной или несколькими аминокислотами, а также лекарственное средство, содержащее указанную фармацевтическую композицию.
Вспышка SARS-CoV-2 по всему миру и связанные с ней последствия являются угрозой для общественного здравоохранения и экономики многих стран. Отсутствие специальной терапии против нового вируса и его высокая изменчивость требует создания новых лекарственных средств.
В рамках борьбы с новой инфекцией был разработан ряд профилактических вакцин, а также средств неспецифической терапии, облегчающих течение заболевания. Однако в дополнение к существующим средствам терапии необходимы специфические препараты, оказывающие непосредственное действие на вирус, приводящие к облегчению симптомов заболевания, ускоренному разрешению заболевания, блокированию передачи инфекции и уменьшению риска развития клинических осложнений.
Препараты - аналоги нуклеозидов напрямую нацелены на блокировку активности РНК-зависимой-РНК-полимеразы и блокируют синтез вирусной цепи РНК для широкого спектра РНК-вирусов, включая семейство человеческих коронавирусов. Фавипиравир (6-фторо-3-гидрокси-2-пиразинкарбоксамид), гуаниновый аналог, одобренный в клинической практике для лечения гриппа, доказано эффективно блокирует РНК-зависимую-РНК-полимеразу вирусов гриппа (разных типов), вируса Эбола, желтой лихорадки, чикунгунья, норовирусов, энтеровирусов [De Clercq, Е. New nucleoside analogues for the treatment of hemorrhagic fever virus infections. Chem. Asian J. 14, 3962-3968, 2019].
Недавнее исследование показало эффективность фавипиравира против SARS-CoV-2 (ЭК50=61.88 μM в культуре клеток Vero Е6) [Wang, М. et al. Remdesivir and chloroquine effectively inhibit the recently emerged novel coronavirus (2019-nCoV) in vitro. - Cell Res. - 2020. - 30, p. 269-271]. Исследование проверяло сочетанное применение фавипиравира с интерфероном-α (ChiCTR2000029600) и фавипиравира с балоквавир марбоксилом (одобренным в показании для гриппа ингибитором кэп-зависимой эндонуклеазы) (ChiCTR2000029544) у пациентов с SARS-CoV-2.
Универсальный механизм действия фавипиравира специфично действующий на основополагающий фермент репликативного аппарата вируса предполагает широкий спектр противовирусной активности данного вещества, что было продемонстрировано во многих исследованиях, указанных ниже.
Противовирусная активность фавипиравира
Согласно глобальному отчету по фармсубстанциям, в настоящее время фавипиравир вошел в клинические испытания против заболевания COVID-19, исходя из доказанного механизма его действия против вирусной РзРп. В клиническом исследовании Национального Центра Клинических Исследований Инфекционных Заболеваний в Шеньжене, фавипиравир вводился 340 пациентам (возрастные группы и ко-морбидности не уточняются) в два приема (2 дозы) по 1600 мг в первый день и две дозы по 600 мг последующие 13 дней в дополнение к ингаляционному аэрозолю интерферона-альфа (5 млн. единиц* 2/день). Эта дозировка приводила к более быстрому исчезновению вируса до недетектируемых в крови значений), чем в группе пациентов, принимавших комбинацию анти-ВИЧ протеаз - лопинавира/ритонавира, с медианой вывода вирусных частиц в 4 дня, против 11, соответственно, и оценивалась по контролю КТ грудного отдела. По данным текущего исследования применение фавипиравира снижает количество детектируемых вирусных частиц в крови, а значит, доказательно ингибирует вирусную репликацию, отсрочивает развитие агрессивного сценария течения COVID-19 или вовсе предотвращает его.
Эффект применения фавипиравира против вируса гриппа
Эпидемия гриппа случается во всем мире ежегодно. Заболевание вызвано штаммами вируса гриппа различной вирулентности. Высоко патогенный вирус птичьего гриппа A(H5N1) вызвал первую вспышку заболевания в Гонконге в 1997 г. и продолжает каждый год вызывать локальные вспышки данного вида гриппа. Эпидемия птичьего гриппа A(H7N9) в Китае в 2013 г. и пандемия гриппа A(H1N1) в 2009 привела к 17,700 смертям, и до сих пор грипп является одной из серьезных проблем для здравоохранения во всем мире, не только по масштабу заболеваемости, но и по критическим для здоровья осложнениям, которые он вызывает [Writing Committee of the WHO Consultation on Clinical Aspects of Pandemic (H1N1) 2009 Influenza. Clinical aspects of pandemic 2009 influenza A (H1N1) virus infection. - 2010. - N. Engl. J. Med.]. Эпидемия A(H1N1) показала, что данный штамм устойчив к оцетальмивиру (тамифлю) ингибитору нейрамидазы и к амантадину ингибитору неструктурного белка М2. В связи с этим в медицинской практике остро необходимо лекарство другого механизма действия.
Фавипиравир (Т-705; 6-флуоро-3-гидрокси-2-пиразинкарбоксамид) эффективен в отношении широкого диапазона штаммов вируса гриппа, включая A(H1N1) (пандемия 2009), A(H5N1) и A(H7N9), за счет того, что вирусная РзРп ошибочно принимает метаболит фавипировир-РТФ за пуриновый нуклеотид. Фавипиравир прошел исследования III фазы в Японии и Пой в США по лечению гриппа.
В дополнение к антивирусной активности против гриппа фавипиравир ингибирует репликацию аренавирусов, флебовирусов (лихорадка Рифт-Балле, вирус флеботомной лихорадки и лихорадки Пунта Торо), хантавирусы (Мапорал, Добрава и Проспект Хилл); флавивирусы (желтая лихорадка и лихорадка Западного Нила); энтеровирусы (полно- и ринофирусы); парамиксовирус респираторного синцития и норовирус [Yousuke Furuta, Brian B. Gowen, Kazumi Takahashi, Kimiyasu Shiraki, Donald F. Smee, Dale L. Barnard. Favipiravir (T-705), a novel viral RNA polymerase inhibitor. Antiviral Research. - 2013. - Volume 100, Issue 2].
Использование фавипиравира в in vitro моделях гриппа
В исследованиях in vitro фавипиравир показал высокую противовирусную активность в отношении всех штаммов вируса гриппа, А, В и С. Основываясь на подсчете бляшкообразующих единиц (БОЕ) в культуре клеток MDCK, показатель эффективной концентрации (далее ЭК50) был в пределах от 0.014 to 0.55 μг/мл [Furuta Y., Takahashi K., Fukuda Y., Kuno M., Kamiyama Т., Kozaki K., Nomura N., Egawa H., Minami S., Watanabe Y., Narita H., Shiraki K. In vitro and in vivo activities of anti-influenza virus compound T-705. 2002. - Antimicrob Agents Chemother; 46(4), p. 977-981].
Известна активность фавипиравира против 53 штаммов вируса гриппа, включая сезонные штаммы A(H1N1), A(H3N2), и штаммы вируса гриппа типа В; A(HlNl)pdm09 пандемичный вирус, высокопатогенный птичий грипп A(H5N1), выделенный от человека, штаммы А(H1N1) и А(H1N2), выделенные из свиней, и A(H2N2), A(H4N2), A(H7N2).
Использование фавипиравира в in vivo моделях гриппа
In vivo на мышиных моделях вирусной инфекции летальными дозами штаммов H3N2 (A/Victoria/3/75), H3N2 (A/Osaka/5/70) или H5N1 (A/Duck/MN/1525/81) фавипиравир применялся час спустя после заражения. Выживаемость мышей при дозах от 30 мг/кг/день 2 или 4 раза в день была значительна, тогда как все зараженные мыши контрольной группы погибли.
При применении от 60 до 300 мг/кг/день фавипиравир продемонстрировал свою эффективность в снижении вирусной нагрузки в легких мышей, инфицированных H1N1 (А/California/04/09), а также при отсроченном применении, вплоть до 96 часов после инфицирования [Takahashi K., Furuta Y., Fukuda Y., Kuno M., Kamiyama Т., Kozaki K., Nomura N., Egawa H., Minami S., Shiraki K. In vitro and in vivo activities of T-705 and oseltamivir against influenza virus. Antivir. Chem. Chemother. - 2003; Sidwell R.W., Barnard D.L., Day C.W., Smee D.F., Bailey K.W., Wong M.H., Morrey J.D., Furuta Y. Efficacy of orally administered T-705 on lethal avian influenza A (H5N1) virus infections in mice. - 2007. - Antimicrob Agents Chemother]. Фавипиравир показал значительный терапевтический эффект в сравнении с оцетальмивиром на мышах, которым была введена доза вируса в 100 раз больше, а само лечение было отсрочено на 96 часов пост-инфекции [Takahashi K, Furuta Y, Fukuda Y, Kuno M, Kamiyama T, Kozaki K, Nomura N, Egawa H, Minami S, Shiraki K. Antivir Chem Chemother. In vitro and in vivo activities of T-705 and oseltamivir against influenza virus. 2003].
Эффективность фавипиравира для других семейств РНК-вирусов в исследованиях in vitro и in vivo
Arenaviridae
Аренавирусы вызывают фатальные заболевания человека [Moraz M.L., Kunz S. Pathogenesis of arenavirus hemorrhagic fevers.- 2011. - Expert Rev. Anti Infect. Ther. - 9(1), p.49-59], от которых не существует противовирусных препаратов, кроме рибавирина, обладающего выраженным токсичным действием.
Использование фавипиравира в in vivo моделях аренавирусое
In vitro фавипиравир показал большую селективность, чем рибавирин. При измерении цитопатического эффекта в культуре клеток значения ЭК50 для препарата составили 0.79-0.94 μг/мл для вирусов Юнин, Пичинде и Такарибэ. Также вирусная нагрузка при применении фавипиравира значительно уменьшалась уже к третьему дню. При исследовании методом подсчета очагов гемолиза ЭК90s против высокопатогенного штамма Ромеро вируса Гуанарито JUNV (Romero) и вируса Мачупо составила 3.3-8.4 μг/мл (21-53 μM) [Mendenhall М., Russell A., Juelich Т., Messina E.L., Smee D.F., Freiberg A.N., Holbrook M.R., Furuta Y., de la Torre J.C., Nunberg J.H., Gowen B.B. Antimicrob Agents Chemother. T-705 (favipiravir) inhibition of arenavirus replication in cell culture. - 2011. - Antimicrob Agents Chemother. - 55(2), p. 782-787].
При пероральном применении фавипиравира на модельной линии хомяков, зараженных вирусом Пичинде, препарат предотвращал смертельный исход, уменьшал количество вирусных титров в крови и тканях, при дозировках 60 мг/кг/день двукратно предотвращал разрушение печени при применении в течение 7 дней, начиная с 4 часа постинфицирования [Gowen В.В., Wong М.Н., Jung K.Н., Sanders А.В., Mendenhall M., Bailey K.W., Furuta Y., Sidwell R.W. In vitro and in vivo activities of T-705 against arenavirus and bunyavirus infections. Antimicrob. Agents Chemother. - 2007. - 51(9), p. 3168-3176]. Вирусная нагрузка значительно уменьшалась также при начале лечения от 4, 5 и 6 дня пост-инфекции. При применении в дозировках от 100 мг/кг/день значительно увеличивалась выживаемость животных [Gowen В.В., Smee D.F., Wong М.Н., Hall J.O., Jung K.H., Bailey K.W., Stevens J.R., Furuta Y., Morrey J.D. Treatment of late stage disease in a model of arenaviral hemorrhagic fever: T-705 efficacy and reduced toxicity suggests an alternative to ribavirin. - 2008. - PLoS One 3, e3725].
На модели заражения морских свинок фавипиравир демонстрировал свою эффективность уже даже после возникновения острых симптомов болезни [Mendenhall М., Russell A., Smee D.F., Hall J.О., Skirpstunas R., Furuta Y., Gowen B.B. Effective oral favipiravir (T-705) therapy initiated after the onset of clinical disease in a model of arenavirus hemorrhagic fever. 2011. - PLoS Negl. Trop. Dis. 5, e1342].
При применении фавпиравира в дозе 300 мг/кг/день он показал значимые эффекты для выживаемости: 100% животных, участвующих в эксперименте, выжило, при дозе 150 мг/кг/ день показатели снижались до 50 и 25%, животные сохраняли массу тела, у них падала температура до нормы и все показатели в целом были лучше, чем таковые для рибавирина в дозировке 50 мг/кг/день. Значительно дозозависимо понижалась концентрация прогностического маркера тяжести заболевания лихорадкой Ласса в крови - аспартат аминотрансферазы (AST) к десятому дню заболевания при лечении фавипиравиром. Виремия средней инфекционной дозы на 1 мл элюата снизилась в среднем до 2.1, 1.3, и 1.6 log10 CCID50/мл в группах, пролеченных высокой и средней дозой фавипиравира и рибавирином, соответственно.
Эффективность перорального применения фавипиравира была также показана на моделях, зараженных летальным Ласса вирусом морских свинок и мышей [Safronetz D., et al. The broad-spectrum antiviral favipiravir protects guinea pigs from lethal Lassa virus infection post-disease onset. - 2015. - Sci. Rep. 5, 14775]. Терапевтический эффект наблюдался на 2-й день после заражения. Подкожное применение фавипиравира в дозировках 300 мг/кг/день 1 раз в день снижало температуру, предотвращало уменьшение массы тела и увеличивало выживаемость животных. Эффекты от применения фавипиравира во много раз превосходили терапевтические результаты от применения рибавирина в дозировке 50 мг/кг/день. Значимое улучшение выживаемости зараженных Ласса-вирусом морских свинок наблюдалось даже на 5,7 и 9 день пост- инфицирования [Safronetz D., et al. The broad-spectrum antiviral favipiravir protects guinea pigs from lethal Lassa virus infection post-disease onset. - 2015. - Sci. Rep. 5, 14775].
Bunyaviridae
Вирусы семейства Буньявирида, включая вирус Ла Кроче (LACV), вирус лихорадки Рифт-Валле (RVFV), вирус конго-крымской геморрагической лихорадки (CCHFV), вирус острой лихорадки с синдромом тромбоцитопении (SFTSV) и хантавирус, вызывают тяжелые геморрагические лихорадки с сопутствующими легочными и почечными осложнениями.
In vitro исследования показали превосходство применения фавипиравира над другими препаратами в направленности, эффективности и быстроте действия против целого ряда подобных вирусов [Yousuke Furuta, et al. Favipiravir (T-705), a novel viral RNA polymerase inhibitor. 2013. Antiviral Research. Volume 100; Gowen B.B., et al. Efficacy of favipiravir (T-705) and T-1106 pyrazine derivatives in phlebovirus disease models. - 2010. - Antiviral Res., Volume 86, Issue 2, p. 121-12]. Значения ЭК50 в исследованиях бляшкообразующих единиц (БОЕ) в клеточной культуре начинались в пределах 0.9-30 μг/мл препарата для вирусов Ласса, Пунта Торо, Рифа-Валле, острой лихорадки (SFTSV), флеботомной лихорадки, и хантавирусов Добрава, Мапорал и Проспект Хилл [Tani Н., et al. Efficacy of T-705 (Favipiravir) in the treatment of infections with lethal severe fever with thrombocytopenia syndrome virus. - 2016. - mSphere 1, e00061-15].
Использование фавипиравира в in vitro и in vivo моделях буньяеирусое
Вирус острой лихорадки с тромбоцитопенией (SFTSV) возник несколько лет назад как сезонное заболевание в Китае, Корее и Японии [Yu X., Liang М., et al. Fever with thrombocytopenia associated with a novel bunyavirus in China. - 2011. - N. Engl. J. Med, 364. P. 523-1532]. Фавипиравир ингибировал репликацию SFTSV в культуре клеток с показателями ЭК50 в 0.71-1.3 μг/мл.
Терапевтический эффект фавипиравира был продемонстрирован на мышиных моделях с нокаутом рецепторов к интерферону-α (IFNAR-/-), которые не развивают немедленный иммунный ответ.
При пероральном применении фавипиравира в дозе от 300 мг/кг/день в течение 5 дней, начиная с 3 дня пост-заражения, все экспериментальные мыши выжили (Р<0.001), а начиная с 4 и 5 дня пост-инфекции значительно улучшились показатели выживания в группе. На базе данных исследований in vivo в Японии препарат вошел в клинические испытания и успешно их закончил к настоящему моменту. Исследования показали эффективность применения фавипиравира даже после начала заболевания и наступления клинических симптомов (Yousuke Furuta, et al.. Favipiravir (T-705), a novel viral RNA polymerase inhibitor. - 2013. - Antiviral Research. Volume 100, Issue 2].
Flaviviridae
Фавипиравир блокирует репликацию вирусов семейства флавивирида, включая вирус желтой лихорадки (YFV) и вирус Западного Нила (WNV) [Julander J.G., et al. Activity of T-705 in a hamster model of yellow fever virus infection in comparison with a chemically related compound T-1106. 2009. Antimicrob. Agents Chemother, 53(1), p. 202-209; Morrey J.D., et al. Efficacy of orally administered T-705 pyrazine analog on lethal West Nile virus infection in rodents. - 2008. - Antiviral Res., 80(3), p. 377-379], однако, в более высоких концентрациях, чем необходимы для блокировки активности вируса гриппа.
90
ЭК фавипиравира в отношении YFV составляет 51.8 μг/мл в in vitro исследованиях по определению выделения активных вирусных частиц на культуре клеток Vero.
Использование фавипиравира в in vivo моделях флавивирусов
Инфицированных YFV-хомяков пролечивали перорально фавипиравиром в дозах от 200 до 400 мг/кг/день в течение 8 дней, начав лечение за 4 часа до инфицирования. Эта терапия серьезно снизила уровень смертности животных при начале лечения [Julander J.G., et al. Activity of T-705 in a hamster model of yellow fever virus infection in comparison with a chemically related compound T-1106. - 2009. - Antimicrob. Agents Chemother, 53(1), p. 202-209].
Полное выздоровление было достигнуто при введении 400 мг/кг/день, начиная со 2-го дня пост-инфицирования.
In vitro и in vivo противовирусная эффективность фавипиравира в отношении вируса Западного Нила достигалась в концентрациях ЭК50 53 μг/мл в культуре клеток Vero.
Пероральное применение фавипиравира в дозах от 400 мг/кг/день 2 раза в день, спустя 4 часа после заражения спасло 90% мышей от смертельного исхода, а также значимо уменьшило экспрессию вирусных белков и вирусной РНК в тканях мозга. Такая же эффективность была показана и на линиях, зараженных WNV, хомяков в таких же дозах. Белки оболочки вируса WNV не детектировались в мозге пролеченных животных.
Togaviridae
Фавипиравир проявляет противовирусную активность против Западного вируса лошадиного энцефалита (WEEV) в культуре клеток Vero, достигая ЭК90 при 49 μг/мл [Julander J.G, et al. Effect of T-705 treatment on western equine encephalitis in a mouse model. Antiviral Res, 82(3), p. 169-171].
В мышах, инфицированных WEEV оральное применение фавипиравира значительно увеличивало выживаемость и продолжительность жизни зараженных животных при двукратном применении в дозе 400 мг/кг/день в течение 7 дней, начиная с 4-го часа постинфекции. Вирусные титры в тканях мозга были снижены на 4-й день пост-инфицирования.
Фавипиравир показал противовирусную активность против вируса Чикунгунья (CHIKV) в культуре клеток Vero, достигая ЭК50 при 0.3-9.4 μг/мл. На мышах, инфицированных CHIKV, оральное применение фавипиравира улучшало показатели выживаемости при двукратных дозах от 300 мг/кг/день, начиная за сутки до или 4 часа после инфицирования [Delang L., et al. Mutations in the chikungunya virus non-structural proteins cause resistance to favipiravir (T-705), a broad-spectrum antiviral. - 2014. - J. Antimicrob. Chemother, 69(10), p. 2770-2784].
Picornaviridae
Использование фавипиравира в in vitro моделях пикорнавирусов
Репликация энтеровируса везикулярного стоматита ингибировалась фавипировиром в исследованиях in vitro с ЭК50 в 14 μг/мл [Sakamoto K., et al. The inhibition of FMD virus excretion from the infected pigs by an antiviral agent, T-1105. FAO report of the research group of the standing technical committee of european commission for the control of Foot-and-Mouth Disease. - 2006. - Paphos, Cyprus. FAO Appendix 64; Furuta Y., et al. T-705 (favipiravir) and related compounds: Novel broad-spectrum inhibitors of RNA viral infections. 2009. - Antiviral Res,; 82(3), p. 95-102].
Фавипиравир также блокировал репликацию вируса полиомиелита в культуре клеток Vero и риновируса в культуре клеток HeLa при ЭК50s в 4.8 и 23 μг/мл, и с индексом селективности в значениях 29 и >43, соответственно [Furuta Y., et al. In vitro and in vivo activities of anti-influenza virus compound T-705. Antimicrob. 2002. Agents Chemother, 46(4), p. 977-981]. Фавипиравир ингибировал репликацию Энтеровируса при ЭК50 в 23 μг/мл [Wang Y., et al. In vitro assessment of combinations of enterovirus inhibitors against enterovirus 71. - 2016. - Antimicrob. Agents Chemother, 60(9), p. 5357-5367].
Caliciviridae
Фавипиравир проявляет активность против мышиного норавируса с показателями ЭК50 от 39 цг/мл в исследованиях по подсчету вирусных бляшек в клеточной линии мышиных макрофагов RAW 264.7. ПЦР реального времени выявил блокирование синтеза РНК с помощью фавипиравира с ЭК50 от 19 μг/мл [Rocha-Pereira J., et al. Favipiravir (T-705) inhibits in vitro norovirus replication. - 2012. - Biochem. Biophys. Res. Commun, 424(4), p. 777-780].
Использование фавипиравира в in vivo моделях рода норавирусов из семейства Калицивирусов
В мышиной модели персистирующей инфекции оральное применение фавпиравира в дозировке 600 мг/кг/день двукратно в течение 8 недель, спустя 4 недели постинфицирования, привело к значительному снижению вирусных титров в испражнениях мышей и количестве норовирус-положительных мышей. Научные данные также подтверждают, что фавипиравир- РТФ ингибирует РНК-полимеразную активность Норавирусов человека [Jin Z., et al. Biochemical evaluation of the inhibition properties of Favipiravir and 2'-C-methyl-cytidine triphosphates against human and mouse norovirus RNA polymerases. - 2015 Antimicrob. Agents Chemother].
Filoviridae
Фавипиравир показал антивирусную активность против вируса Zaire Ebola (штамм Mayinga 1976) в культуре клеток Vero Е6 с ЭК50 в 10.5 μг/мл. В линии мышей, зараженных штаммом Mayinga 1976 с отсутствием рецептора к интерферону-альфа (IFNAR-/-C57BL/6), оральное применение фавипиравира позволило избежать летального исхода и снижало вирусные титры в крови при двукратном применении от 300 мг/кг/день в течение 8 дней с 6 дня пост-инфекции, тогда как в плацебо-группе все мыши умерли [Oestereich L., et al. Successful treatment of advanced Ebola virus infection with T-705 (favipiravir) in a small animal model. - 2014. - Antiviral Res, 105, p. 17-21]. Сходным образом, в линии А129, нокаутной по рецептору интерферона IFNAR-/-, зараженной шитаммом Эбола Е718, лечение фавипиравиром орально полностью спасло всех зараженных мышей от смерти при двукратном применении лекарства в дозе от 300 мг/кг/день в течение 14 дней, начиная с 1ого часа после заражения [Smither S.J., et al. Post-exposure efficacy of oral T-705 (Favipiravir) against inhalational Ebola virus infection in a mouse model. - 2014. - Antiviral Res, Volume 104, Pages 153-155].
При вспышке Эбола в западной Африке в 2014 году Французский институт Здоровья и Медицинских Исследований (INSERM) и правительство Гвинеи провели клиническое исследование фавипиравира на больных [Mentré F., Taburet A.M. Dose regimen of favipiravir for Ebola virus disease. 2015. Lancet Infect. Dis, VOLUME 15, ISSUE 2, P. 150-151]. Фавипиравир хорошо переносился пациентами и снижал количество смертельных исходов у пациентов с низкими вирусными титрами. Группа китайских исследователей также отметила увеличение выживаемости пациентов с Эбола при применении фавипиравира в Сьерра Леоне [Bai C.Q., Clinical and virological characteristics of Ebola virus disease patients treated with favipiravir (T-705)-Sierra Leone, 2016. Clin. Infect. Dis, 63(10), p. 1288-1294].
Rhabdoviridae
Активность фавипиравира против вируса бешенства (RABV) была выявлена на клеточной линии мышиной нейробластомы Neuro-2a с ЭК50s при 5.1-7.0 μг/мл [Yamada K., et al. Efficacy of Favipiravir (T-705) in rabies postexposure prophylaxis. - 2016. - J. Infect. Dis, 213(8), p. 1253-1261]. Фавипиравир значительно снизил показатели заболеваемости и смертности у мышей, зараженных RABV, при пероральном применении в дозах от 300 мг/кг/день двукратно в течение 7 дней, начиная с 1-го часа пост-инфекции.
Все описанные выше обобщенные данные по неоспоримой эффективности фавипиравира против очень широкого спектра РНК-вирусов показывают, что данное лекарство прекрасно «закрывает» до сих пор эффективно неохваченную нишу неизлечимых, острых и смертельных вирусных недугов, включая большой спектр тропических лихорадок. До исследований на фавипиравире, против вышеозначенных РНК-инфекций применялись рибавирин и/или альфа-интерферон, однако первый обладает значимо меньшей противовирусной активностью и эффективностью против РНК-вирусов, и оба препарата при длительном применении приводят к дебилитирующим побочным эффектам.
Фавипиравир, опираясь на широкий спектр и доказанный механизм его действия, также может облегчить течение вирусных заболеваний, при своевременном начале приема, а также значимо снизить вирусную нагрузку при течении заболеваний с осложнениями.
Ввиду универсальности и высокой эффективности, продемонстрированной препаратами фавипиравира, представляется необходимым использовать их в периоды эпидемий.
Однако такое использование сопряжено с рядом затруднений. Так, для оказания быстрой и качественной помощи населению необходимо создание резерва стабильных лекарственных препаратов, что в свою очередь сопряжено возможностью их длительного хранения.
В настоящее время единственной доступной для медицинского применения формой фавипиравира являются таблетки для орального применения с содержанием фавипиравира 200 мг/таблетка, срок годности которых составляет 2 года.
При этом пероральные формы вызывают трудности при приеме лекарств у детей, пожилых пациентов и пациентов с дисфагией различной природы, а также тяжелых пациентов, находящихся на интенсивной терапии, подключенных к аппарату ИВЛ или находящихся в состоянии комы, что может существенно затруднять необходимую терапию. Кроме того, прием большого количества таблеток, особенно в течение длительного времени может оказывать негативное влияние на пищеварительную систему человека.
Кроме того, поступление SARS-CoV в организм хозяина опосредуется взаимодействием между закрепленным на оболочке вируса игольчатым гликопротеином и рецептором ангиотензинпревращающего фермента 2-го типа (АПФ-2) клеток человека. В наибольшей концентрации рецептор АПФ-2, служащий входными воротами для SARS-CoV-2, экспрессируется в клетках легких, эпителии верхних отделов пищевода, а также в энтероцитах подвздошной и толстой кишки [She J, Liu L, Liu W. COVID-19 epidemic: disease characteristics in children. Journal of Medical Virology. - 2020; 92, p. 747-754]. SARS-CoV-2, воздействуя на рецепторы АПФ-2 в ЖКТ, способен повышать проницаемость слизистой оболочки кишечника, что приводит к нарушению процессов всасывания жидкости и электролитов энтероцитами. Помимо самого SARS-CoV-2, на органы желудочно-кишечного тракта серьезно влияет и лечение COVID-19 антибиотиками, противовирусными и гормональными препаратами, которые оказывают большую нагрузку на органы ЖКТ. Таким образом, у людей с COVID-19 наблюдается нарушение работы желудочно-кишечного тракта, в том числе, тошнота, рвота, диарея, нарушение моторики, дисбактериоз и т.д., тем самым изменяется скорость всасывания лекарственного средства и его биодоступность.
Исходя из вышесказанного, представляется необходимым создание новых лекарственных форм фавипиравира, обладающих противовирусной активностью, с улучшенными фармакотерапевтическими, технологическими, физико-химическими характеристиками, а также с увеличенной биодоступностью, в том числе и лекарственных форм, позволяющих вводить препарат в терапевтически эффективных концентрациях без негативного влияния на пищеварительную систему, присущего пероральным формам.
Задачей настоящего изобретения являлась разработка новой, промышленно реализуемой, препаративной формы фавипиравира, обладающей улучшенными технологическими характеристиками, стабильностью и биодоступностью.
Техническими результатами настоящего изобретения являются:
- улучшение биодоступности фавипиравира;
-улучшение однородности дозирования активного агента в лекарственных средствах;
- повышение стабильности композиции фавипиравира (в том числе фотостабильности, стабильности в разных климатических зонах и долгосрочной стабильности);
- синергетическая противовирусная активность;
- улучшение электрических свойств лекарственного средства фавипиравира в форме порошка;
- уменьшение времени получения восстановленного из лиофилизата препарата фавипиравира;
- уменьшение местнораздражающего действия при инъекционном введении композиции фавипиравира с аминокислотой.
- расширение арсенала противовирусных препаратов.
Ниже приведены термины, которые используются в описании настоящего изобретения. Если не указано иное, все технические и специальные термины, использованные в описании, имеют общепринятое в данной области техники значение.
Термин «фармацевтическая композиция» обозначает композицию, включающую фавипиравир и по меньшей мере одну аминокислоту в эффективном количестве, а также фармацевтическая композиция в контексте настоящего изобретения может дополнительно содержать один из компонентов, выбранных из группы, состоящей из фармацевтически приемлемых и фармакологически совместимых эксципиентов, таких как, не ограничиваясь указанным, наполнителей, солюбилизаторов, растворителей, со-растворителей, антиоксидантов, буферных агентов, криопротекторов, разбавителей, консервантов, стабилизаторов, увлажнителей, эмульгаторов, лубрикантов, скользящих веществ, суспендирующих агентов, загустителей, подсластителей, отдушек, ароматизаторов, антибактериальных агентов, фунгицидов, регуляторов пролонгированной доставки, изотонических агентов, агентов, регулирующих рН, выбор и соотношение которых зависит от природы, назначения и дозировки.
Неограничивающими (иллюстративными) примерами суспендирующих агентов являются этокс ил иро ванный изостеариловый спирт, полиоксиэтилен, сорбитол и сорбитовый эфир, а также смеси этих веществ.
Защита фармацевтической композиции от действия микроорганизмов может быть обеспечена с помощью разнообразных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, таких как сорбиновая кислота, парабены (метилпарабен, пропилпарабен, этилпарабен, бутилпарабен, изобутилпарабен, изопропилпарабен, бензилпарабен, гептилпарабен и их смеси), хлорбутанол и подобные им соединения.
В качестве изотонических агентов фармацевтическая композиция может включать, не ограничиваясь указанным, сахара, хлорид натрия, гидрокарбонат натрия и др. Пролонгированное действие фармацевтической композиции может быть обеспечено, не ограничиваясь указанным, с помощью агентов, замедляющих абсорбцию активного агента (например, гидрофильные и гидрофобные полимерные замедлители высвобождения).
Неограничивающими (иллюстративными) примерами подходящих наполнителей являются лактоза, различные типы крахмала, микрокристаллическая целлюлоза, карбонат и фосфат кальция и др.
В качестве растворителей и разбавителей могут быть использованы, не ограничиваясь указанным, вода, пригодные для парентеральных форм органические сложные эфиры, этанол, полиспирты, а также их смеси. Примерами лубрикантов могут быть стеарат магния или кальция, тальк, лаурилсульфат натрия, стеарилфумарат натрия и др. В качестве скользящих веществ могут выступать диоксид кремния, тальк, каолин, бентониты и др. Для регулирования рН могут быть использованы различные органические и неорганические кислоты или щелочи, такие как, не ограничиваясь указанным, соляная кислота, яблочная, аскорбиновая, лимонная, уксусная, янтарная, винная, фумаровая, молочная, аспарагиновая, глутаровая, глутаминовая, сорбиновая кислоты, гидроксид натрия и т.д. Примерами диспергирующих агентов и распределяющих средств являются крахмал, альгиновая кислота и ее соли, силикаты.
Фармацевтическая композиция может быть введена животным и людям перорально, парентерально (внутрикожно, подкожно, внутримышечно, внутривенно, внутриартериально, в полости), сублингвально, местно, в том числе не ограничиваясь указанным, глазное, назальное введение и др., ректально в стандартной форме введения, в виде смеси с традиционными фармацевтическими носителями. Пригодные стандартные формы введения включают (без ограничения) пероральные формы: таблетки, капсулы, пеллеты, гранулы, порошки, растворы, растворы для распыления в полости рта и носа, сиропы, суспензии и др., пероральные: растворы, суспензии, эмульсии, концентра для приготовления инъекционных и инфузионных лекарственных форм, аэрозоли и порошки для ингаляционного введения, спреи, пульмопорошки (порошки для распыления с помощью инхалера непосредственно в легкие), порошки и лиофилизаты для приготовления инъекционных и инфузионных лекарственных форм; ректальные: суппозитории, капсулы и др.; глазные капли.
Термин «эксципиент» в контексте настоящего изобретения характеризует вещества неорганического или органического происхождения, используемые в процессе производства, изготовления лекарственных препаратов для придания им необходимых физико-химических свойств.
«Фармацевтически приемлемая соль» означает относительно нетоксичные органические и неорганические соли кислот и оснований, заявленных в настоящем изобретении.
Термин «фармацевтически приемлемый» в контексте настоящего изобретения означает, что данное вещество или композиция, в отношении которых применяется этот термин, должны быть совместимы с точки зрения химии и/или токсикологии с другими ингредиентами, входящими в состав препарата, и безопасны для того, кого лечат этим веществом или композицией.
Термин «протеиногенные аминокислоты» в контексте настоящего изобретения характеризует аминокислоты, которые включаются в состав белков в ходе биосинтеза в рибосомах под генетическим контролем информационной РНК. Протеиногенные нестандартные аминокислоты возникают из стандартных в процессе посттрансляционных модификаций.
Термин «непротеиногенные аминокислоты» в контексте настоящего изобретения характеризует аминокислоты, которые не принимают участия в образовании белков. В некоторых случаях между непротеиногенными и протеиногенными аминокислотами существует близкое структурное родство, поскольку непротеиногенные аминокислоты включают также производные протеиногенных аминокислот.
Термин «изоэлектрическая точка аминокислот» в контексте настоящего изобретения означает величину рН, при которой заряд аминокислоты равен нулю.
Термин «рацемат» в контексте настоящего изобретения обозначает смесь двух энантиомеров. Аминокислота в виде рацемата характеризует смесь L- и D-изомеров аминокислоты в любых пропорциях.
Термин «лекарственное средство» в контексте настоящего изобретения характеризует вещества или их комбинации, вступающие в контакт с организмом человека или животного, проникающие в органы, ткани организма человека или животного, применяемые для профилактики, лечения заболевания, полученные методами синтеза. К лекарственным средствам относятся фармацевтические субстанции и лекарственные препараты. Лекарственное средство может быть представлено в виде различных готовых форм, предназначенных для введения в организм животного или человека различными способами, например, не ограничиваясь указанным, перорально, сублингвально, местно, ректально, парентерально, ингаляционно, непосредственно в легкие, например, в виде аэрозоля или пульмопорошка с помощью инхалера.
Термин «лиофилизат» в контексте настоящего изобретения характеризует твердое лекарственное средство в виде порошка или пористой массы, полученное лиофилизацией лекарственных средств жидкой или мягкой консистенции. Лиофилизаты могут быть в виде: порошка; аморфной пористой массы; пористой массы, уплотненной в таблетку, и другой формы. Перед применением лиофилизаты растворяют (диспергируют) для получения препаратов в различных лекарственных формах: растворах; суспензиях; эмульсиях.
Термин «концентрат» в контексте настоящего изобретения характеризует жидкую лекарственную форму, предназначенную для применения после разбавления (разведения). Концентрат может быть получен, не ограничиваясь указанным, посредством растворения лиофилизата в фармацевтически приемлемом растворителе. Если преобразование исходной лекарственной формы в форму применения является двухстадийным, термин «концентрат» применяется для обозначения промежуточной формы. Например, если лиофилизат должен быть сначала растворен в небольшом количестве растворителя с получением концентрата, после чего получившийся раствор перед инфузионным введением должен быть дополнительно разведен в большем количестве разбавителя. В таком случае растворитель и разбавитель могут представлять собой как один и тот же фармацевтически приемлемый эксципиент, так и разные.
Также для целей настоящего изобретения термины «содержащий», «содержит», «включающий» означают, что указанные комбинации, композиции и концентрат включают перечисленные компоненты, но не исключают включение других компонентов.
Термин «терапевтически эффективное количество» в контексте настоящего изобретения означает количество вещества (а также комбинации веществ), которое при ведении субъекту для лечения или предотвращения заболевания, или по меньшей мере одного из клинических симптомов заболевания или нарушения является достаточным для воздействия такого лечения (профилактики) на заболевание, нарушение или симптом. «Терапевтически эффективное количество» может меняться в зависимости от формы вещества (например, полиморфная форма, соль, сольват, гидрат и т.д.), заболевания, нарушения и/или симптомов заболевания или нарушения, тяжести заболевания, нарушения и/или симптомов заболевания или нарушения, а также от возраста и/или веса субъекта, которому необходимо такое лечение (профилактика).
Термины «примерно», «приблизительно», «около» характеризуют плюс минус десять процентов от указанной величины.
Поставленная задача решается, а заявленный технический результат достигается получением новой фармацевтической композиции, проявляющей профилактическую и/или терапевтическую противовирусную активность, содержащей в терапевтически эффективных количествах фавипиравир и по меньшей мере одну аминокислоту и/или ее фармацевтически приемлемую соль.
Одним из вариантов воплощения изобретения является фармацевтическая композиция, где массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,1-1,0:1,2 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,1 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,15 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,2 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,25 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,3 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,35 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,4 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,45 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,5 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,55 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,6 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,65 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,7 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,75 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,8 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,85 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,9 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:0,95 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:1,0 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:1,05 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:1,1 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:1,15 соответственно.
Более предпочтительно массовое соотношение фавипиравира к аминокислоте составляет 1,0:1,2 соответственно.
Одним из вариантов воплощения настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, в которой фавипиравир имеет форму свободного основания.
Все аминокислоты обладают изомерией. Основная масса природных аминокислот представлена α-изомерами, но встречаются и β-, γ-аминокислоты. Все α-аминокислоты, кроме глицина, имеют асимметрический (хиральный) α-углеродный атом и существуют в виде двух энантиомеров (L- и D-аминокислот).
Одним из вариантов воплощения изобретения является фармацевтическая композиция, в которой по меньшей мере одна фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль представляет собой α-аминокислоту.
Более предпочтительно α-аминокислота представляет собой глицин, аланин, валин, лейцин, глутамин, лизин, аргинин, гистидин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, изолейцин, пролин, фенилаланин, триптофан, метионин, серии, треонин, аспарагин, цистеин, тирозин.
Одним из вариантов воплощения изобретения является фармацевтическая композиция, в которой по меньшей мере одна фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 2 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 2,5 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 3,0 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 3,5 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 4,0 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 4,5 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 5,0 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 5,5 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 6,0 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 6,5 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 7,0 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 7,5 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 8,0 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 8,5 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 9,0 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 9,5 до 11.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль имеет изоэлектрическую точку от 9,0 до 10.
Одним из вариантов воплощения изобретения является фармацевтическая композиция, в которой по меньшей мере одна фармацевтически приемлемая аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль представляет собой аминокислоту в L- или D-конфигурации, или в виде рацемата.
Одним из вариантов воплощения изобретения является фармацевтическая композиция, в которой по меньшей мере одна аминокислота представляет собой протеиногенную аминокислоту.
Более предпочтительно протеиногенная аминокислота представляет собой заменимую или незаменимую аминокислоту.
Более предпочтительно протеиногенная аминокислота представляет собой стандартную или нестандартную аминокислоту.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-лизин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-гистидин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-метионин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-орнитин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-изолейцин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-лейцин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-аланин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой глицин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-треонин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-триптофан.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-пролин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-валин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-цистеин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-фенил аланин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-аспарагин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-серин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-тирозин.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-глутаминовую кислоту.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-аспарагиновую кислоту.
Более предпочтительно протеиногенная стандартная аминокислота представляет собой L-аргинин.
Более предпочтительно протеиногенная нестандартная аминокислота представляет собой L-селеноцистеин.
Более предпочтительно протеиногенная нестандартная аминокислота представляет собой L-пирролизин.
Помимо протеиногенных аминокислот в настоящем изобретении могут использоваться другие непротеиногенные фармацевтически приемлемые аминокислоты, которые не участвуют в синтезе белка. Такие аминокислоты часто образуются в качестве промежуточных метаболических путей для стандартных аминокислот.
Одним из вариантов воплощения изобретения является фармацевтическая композиция, в которой по меньшей мере одна аминокислота и/или ее фармацевтически приемлемая соль представляет собой непротеиногенную аминокислоту, выбранную из, не ограничиваясь указанным, N-ацетил-D-аланин, N-ацетилглицин, гидроксилизин, гидроксипролин, нораргинин, гомоаргинин, гомолизин, 2,7-диаминогептановую кислоту, 2,4-диаминомасленную кислоту, 3-аминоаланин, дегидроаланин, оксипролин, цистин, саркозин, ацетилцистеин и/или их фармацевтически приемлемых солей.
В предпочтительных неограничивающих воплощениях настоящего изобретения фармацевтическая композиция содержит аминокислоту, выбранную из иминокислоты, алифатических, ароматических или гетероциклических аминокислот.
Более предпочтительно алифатические аминокислоты представляют собой амиды моноаминодикарбоновых аминокислот, моноаминомонокарбоновые, оксимоноаминокарбоновые, моноаминодикарбоновые, диаминомонокарбоновые или серосодержащие аминокислоты.
Более предпочтительно моноаминомонокарбоновые аминокислоты выбраны из, не ограничиваясь указанным, глицина, аланина, валина, изолейцина или лейцина.
Более предпочтительно оксимоноаминокарбоновые аминокислоты выбраны из, не ограничиваясь указанным, серина или треонина.
Более предпочтительно моноаминодикарбоновые аминокислоты выбраны из, не ограничиваясь указанным, аспартат или глутамат.
Более предпочтительно амиды моноаминодикарбоновых аминокислот выбраны из, не ограничиваясь указанным, аспарагина или глутамина.
Более предпочтительно диаминомонокарбоновые аминокислоты выбраны из, не ограничиваясь указанным, лизина или аргинина.
Более предпочтительно серосодержащие аминокислоты выбраны из, не ограничиваясь указанным, цистеина или метионина.
Более предпочтительно ароматические аминокислоты выбраны из, не ограничиваясь указанным, фенилаланина, тирозина или триптофана.
Более предпочтительно гетероциклические аминокислоты выбраны из, не ограничиваясь указанным, триптофана, гистидина, или пролина.
В предпочтительных неограничивающих воплощениях настоящего изобретения фармацевтическая композиция содержит аминокислоту, выбранную из полярных незаряженных, полярных заряженных отрицательно, полярных заряженных положительно или неполярных аминокислот.
Более предпочтительно полярные незаряженные аминокислоты выбраны из, не ограничиваясь указанным, серина, треонина, цистеина, аспарагина, глутамина или тирозина.
Более предпочтительно полярные заряженные отрицательно аминокислоты выбраны из, не ограничиваясь указанным, аспартата или глутамата.
Более предпочтительно полярные заряженные положительно аминокислоты выбраны из, не ограничиваясь указанным, лизина, аргинина или гистидина.
Более предпочтительно неполярные аминокислоты выбраны из, не ограничиваясь указанным, глицина, аланина, валина, изолейцина, лейцина, пролина, метионина, фенилаланина или триптофана.
В предпочтительных неограничивающих воплощениях настоящего изобретения фармацевтическая композиция содержит аминокислоту, выбранную из, не ограничиваясь указанным, глюкогенных, кетогенных или глюко-кетогенных аминокислот.
Более предпочтительно глюкогенные аминокислоты выбраны из, не ограничиваясь указанным, глицина, аланина, валина, пролина, серина, треонина, цистеина, метионина, аспартата, аспарагина, глутамата, глутамина, аргинина или гистидина.
Более предпочтительно кетогенные аминокислоты выбраны из, не ограничиваясь указанным, лейцин или лизин.
Более предпочтительно глюко-кетогенные аминокислоты выбраны из, не ограничиваясь указанным, изолейцина, фенилаланина, тирозина или триптофана.
Одним из вариантов воплощения изобретения является фармацевтическая композиция, в которой количество фавипиравира составляет от 100 до 4000 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 100 до 3700 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 110 до 3300 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 120 до 3000 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 130 до 2700 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 140 до 2400 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 150 до 2100 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 160 до 1800 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 170 до 1500 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 180 до 1200 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 190 до 900 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 200 до 600 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 200 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 300 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 400 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 600 мг.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 800 мг.
Одним из вариантов воплощения изобретения является фармацевтическая композиция, в которой количество фавипиравира составляет от 5 до 95 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 10 до 90 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 15 до 85 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 20 до 80 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 25 до 75 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 30 до 70 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 35 до 70 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 40 до 70 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 45 до 70 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 50 до 70 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество фавипиравира в фармацевтической композиции составляет от 55 до 65 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Одним из вариантов воплощения изобретения является фармацевтическая композиция, в которой количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 10 до 750 мг. Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 20 до 730 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 30 до 710 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 40 до 690 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 50 до 670 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 60 до 650 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 70 до 630 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 80 до 610 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 90 до 590 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 100 до 570 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 110 до 550 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 120 до 530 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 130 до 510 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 140 до 490 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 150 до 470 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 160 до 450 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 170 до 430 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 180 до 410 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 190 до 390 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 200 до 370 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 210 до 350 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 220 до 330 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 230 до 310 мг.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 240 до 290 мг.
Одним из вариантов воплощения изобретения является фармацевтическая композиция, в которой количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 5 до 95 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 10 до 85 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 15 до 75 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 20 до 65 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 25 до 55 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 25 до 45 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно количество аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 25 до 35 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Одним из вариантов воплощения изобретения является фармацевтическая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемый эксципиент выбран из группы, включающей, не ограничиваясь указанным, стабилизатор, буферный агент или регулирующий рН агент.
Фармацевтически приемлемый эксципиент по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 0 до 90 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемый эксципиент по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 1 до 50 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемый эксципиент по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 1 до 25 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемый эксципиент по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 1 до 15 мас. % от массы всей фармацевтической композиции.
Более предпочтительно фармацевтически приемлемый эксципиент в фармацевтической композиции по настоящему изобретению представляет собой гидроксид натрия или соляную кислоту.
Более предпочтительно гидроксид натрия по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 10 до 200 мг.
Более предпочтительно гидроксид натрия по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 10 до 190 мг.
Более предпочтительно гидроксид натрия по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 15 до 180 мг.
Более предпочтительно гидроксид натрия по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 20 до 170 мг.
Более предпочтительно гидроксид натрия по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 25 до 160 мг.
Более предпочтительно гидроксид натрия по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 30 до 150 мг.
Более предпочтительно гидроксид натрия по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 35 до 140 мг.
Более предпочтительно гидроксид натрия по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 40 до 130 мг.
Более предпочтительно гидроксид натрия по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 45 до 120 мг.
Более предпочтительно гидроксид натрия по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 50 до 110 мг.
Более предпочтительно гидроксид натрия по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 55 до 100 мг.
Более предпочтительно гидроксид натрия по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 60 до 90 мг.
Более предпочтительно гидроксид натрия по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 65 до 80 мг.
Более предпочтительно гидроксид натрия по настоящему изобретению может находиться в фармацевтической композиции в количестве от 50 до 150 мг.
Одним из вариантов воплощения изобретения является фармацевтическая композиция, проявляющая профилактическую и/или терапевтическую противовирусную активность, где вирус представляет собой вирус, геном которых закодирован одноцепочечной смысловой (+)-нитью, а также антисмысловой (-)-нитью РНК и которые используют вирусную РНК-зависимую-РНК-полимеразу для своей репликации.
Более предпочтительно вирус по настоящему изобретению представляет собой вирус гриппа, коронавирус, пикорнавирус, аренавирус, флавивирус, буньявирус, филовирус, флебовирус, хантавирус, энтеровирус, тогавирус, калицивирус, респираторно-синцитиальный вирус, вирус парагриппа, риновирусы, метапневмовирусы, ротавирус или норавирус.
Более предпочтительно вирус по настоящему изобретению представляет собой высоковирулентный или низковирулентный вирус.
Более предпочтительно вирус по настоящему изобретению представляет собой SARS-CoV-2, MERS-CoV или Influenza А, В, С.
Более предпочтительно вирус гриппа по настоящему изобретению представляет собой, не ограничиваясь указанным, вирус гриппа А, включая штаммы A (H1N1), A (H1N1) pdm09, A (H1N2), A (H3N2), A (H2N2), A (H4N2), A (H7N2), свиной грипп типа А, птичий грипп типа А, включая высокопатогенные штаммы (в том числе, H5N1 и H7N9).
Поставленная задача решается, а заявленный технический результат достигается за счет получения лекарственного средства, проявляющего профилактическую и/или терапевтическую противовирусную активность, содержащего фармацевтическую композицию по настоящему изобретению и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.
Одним из вариантов воплощения изобретения является лекарственное средство, представляющее собой твердое лекарственное средство.
Более предпочтительно твердое лекарственное средство по настоящему изобретению представляет собой, не ограничиваясь указанным, таблетку, капсулу, пеллету, саше, драже, порошок или лиофилизат.
Лиофилизация (лиофильная сушка) представляет собой процесс удаления растворителя из замороженного материала путем возгонки (сублимации) кристаллов растворителя в условиях вакуума, т.е. превращения его в пар, минуя жидкую фазу. Лекарственное средство в форме лиофилизата полностью сохраняет свою фармакологическую активность.
Удаление растворителя при лиофилизационной сушке осуществляется главным образом за счет сублимации. Сублимация - это удаление растворителя из замороженного объекта без образования жидкой фазы, она проводится под вакуумом или значительно реже в инертном газе. Стадия замораживания является одной из определяющих стадий для получения качественного лекарственного средства в форме лиофилизата.
К вспомогательным эксципиентам, используемым в лиофильно высушенных лекарственных препаратах по настоящему изобретению, относятся: растворители, со-любилизаторы (ЭДТА, α-циклодекстрин и др.), наполнители (маннит, гли-цин, глюкоза, сахароза, лактоза, молоко и др.), консерванты (бензиловый спирт, этил- и метилпарагидроксибензоат и др.), регуляторы рН (буферные растворы, натрия гидроксид, хлористоводородная кислота), стабилизаторы, криопротекторы (декстран, желатин, гидроксиэтилкрахмал и др.).
В форме лиофилизатов по настоящему изобретению могут быть представлены как индивидуальные лекарственные вещества, так и их смеси с вспомогательными веществами.
Лиофилизат может быть представлен в форме двух или более компонентов, в которых фавипиравир упакован отдельно от других компонентов. Например, первый компонент, например, в унифицированной дозированной форме, например, саше, флакон или контейнер может содержать фавипиравир. Второй компонент, например, унифицированная дозированная форма, например, саше (пакетированная форма) или флакон, содержащая аминокислоту.
В настоящее время известны проблемы возникновения статического электричества при контакте или ударении частиц сухих компонентов лиофилизированных веществ. Заряд статического электричества возникает при любых перемещениях порошка при изготовлении композиций, при измельчении, пересыпании, тряске. К тому же, при производстве и в процессе хранения твердых лекарственных форм зачастую наблюдается слипание частиц компонентов лекарственного средства, что в свою очередь негативно сказывается на его терапевтической активности. При разработке лекарственного средства в форме порошка проблемой также является получить порошок относительно высокой сыпучести и низкой гигроскопичности.
Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что при использовании по меньшей мере одной аминокислоты в твердой лекарственной форме, содержащей фавипиравир, удается избежать всех указанных выше недостатков.
Одним из вариантов воплощения изобретения является лекарственное средство, представляющее собой концентрат.
Одним из вариантов воплощения изобретения является лекарственное средство, представляющее собой концентрат, в котором концентрация фавипиравира составляет от 10 до 150 мг/мл.
Более предпочтительно концентрация фавипиравира в концентрате по настоящему изобретению составляет от 10 до 140 мг.
Более предпочтительно концентрация фавипиравира в концентрате по настоящему изобретению составляет от 10 до 130 мг.
Более предпочтительно концентрация фавипиравира в концентрате по настоящему изобретению составляет от 10 до 120 мг.
Более предпочтительно концентрация фавипиравира в концентрате по настоящему изобретению составляет от 10 до 110 мг.
Более предпочтительно концентрация фавипиравира в концентрате по настоящему изобретению составляет от 10 до 100 мг.
Более предпочтительно концентрация фавипиравира в концентрате по настоящему изобретению составляет от 10 до 90 мг.
Более предпочтительно концентрация фавипиравира в концентрате по настоящему изобретению составляет от 10 до 80 мг.
Более предпочтительно концентрация фавипиравира в концентрате по настоящему изобретению составляет от 10 до 70 мг.
Более предпочтительно концентрация фавипиравира в концентрате по настоящему изобретению составляет от 10 до 60 мг.
Более предпочтительно концентрация фавипиравира в концентрате по настоящему изобретению составляет от 10 до 50 мг.
Более предпочтительно концентрация фавипиравира в концентрате по настоящему изобретению составляет от 10 до 40 мг.
Более предпочтительно концентрация фавипиравира в концентрате по настоящему изобретению составляет от 10 до 30 мг.
Более предпочтительно концентрат по настоящему изобретению имеет рН от 6,5 до 8,5.
Более предпочтительно концентрат по настоящему изобретению имеет рН от 7,0 до 7,5.
Концентрат по настоящему изобретению, полученный в том числе восстановлением лиофилизата, в свою очередь, разбавляется до раствора, который подходит для инъекции или инфузии пациенту. Объем водного материала, используемого для восстановления, диктуется концентрацией фавипиравира в конечной фармацевтической композиции. Восстановление с использованием меньшего объема восстановителя, чем объем прелиофилизации, дает получение композиции, которая является более концентрированной, чем перед лиофилизацией.
Одним из вариантов воплощения изобретения является лекарственное средство, представляющее собой парентеральное лекарственное средство.
Парентеральное введение лекарственных средств - это такие пути введения лекарственных средств в организм, при которых они минуют желудочно-кишечный тракт, в отличие от перорального способа применения лекарств. Парентеральные лекарственные средства - это стерильные препараты, предназначенные для введения путем инъекций, инфузий, ингаляций или имплантаций в организм человека или животного. К ним относятся растворы, эмульсии, суспензии, аэрозоли, порошки и таблетки для получения растворов и имплантации, порошки для ингаляций, лиофилизированные препараты для получения лекарственных форм, вводимых в организм парентерально (подкожно, внутримышечно, внутривенно, внутриартериально, в различные полости).
Парентеральные пути введения включают введение в ткани (внутрикожно, подкожно, внутримышечно, внутрикостно), в сосуды (внутривенно, внутриартериально, в лимфатические сосуды), в полости (в плевральную, брюшную, сердечную и суставную полости), в субарахноидальное пространство, а также ингаляционное, интраназальное и субконъюнктивальное введение.
Более предпочтительно парентеральное лекарственное средство по настоящему изобретению представляет собой, не ограничиваясь указанным, инфузионный раствор, инъекционный раствор, ингаляционное лекарственное средство, в том числе, аэрозоль, спрей или порошок.
Более предпочтительно парентеральное лекарственное средство по настоящему изобретению представляет собой инфузионный раствор.
Более предпочтительно парентеральное лекарственное средство по настоящему изобретению представляет собой инъекционный раствор.
Более предпочтительно парентеральное лекарственное средство по настоящему изобретению представляет собой ингаляционное лекарственное средство.
Более предпочтительно ингаляционное лекарственное средство по настоящему изобретению представляет собой аэрозоль, пульмопорошок или спрей.
Одним из вариантов воплощения изобретения является лекарственное средство, представляющее собой лекарственное средство для местного введения.
Под местным введением лекарственных средств понимается нанесение лекарственного препарата на слизистые оболочки (в т.ч. глазное, назальное, ректальное, вагинальное применение, нанесение на десны, слизистую оболочку полости рта и др.), а также введение в наружный слуховой проход.
Более предпочтительно местное лекарственное средство по настоящему изобретению представляет собой лекарственное средство для глазного, назального и ректального введения.
Одним из вариантов воплощения изобретения является лекарственное средство, представляющее собой лекарственное средство для ректального введения.
Более предпочтительно ректальное лекарственное средство по настоящему изобретению представляет собой, не ограничиваясь указанным, суппозитории или капсулы.
Одним из вариантов воплощения изобретения является лекарственное средство, в котором фармацевтически приемлемые эксципиенты выбраны из группы, включающей, не ограничиваясь указанным, формообразующие вещества, стабилизаторы, солюбилизаторы, растворители, увлажнители, лубриканты, скользящие вещества, загустители, подсластители, отдушки, ароматизаторы, фунгициды, регуляторы пролонгированной доставки, сорастворители, разбавители, наполнители, эмульгаторы, консерванты, антиоксид анты, буферные агенты, криопротекторы, регулирующие рН агенты, вещества для поддержания изотоничности или корригирующие вещества.
Более предпочтительно растворитель по настоящему изобретению представляет собой, не ограничиваясь указанным, физиологический раствор, инъекционную воду, апирогенную воду, дистиллированную воду, раствор Рингера или раствор глюкозы.
Поставленная задача решается, а заявленный технический результат достигается за счет применения фармацевтической композиции по настоящему изобретению для получения лекарственного средства, проявляющего профилактическую и/или терапевтическую противовирусную активность.
Поставленная задача решается, а заявленный технический результат достигается за счет применения фармацевтической композиции или лекарственного средства для лечения и/или профилактики вирусных инфекций.
Более предпочтительно вирусная инфекция, для лечения и/или профилактики которой применяют фармацевтическую композицию или лекарственное средство по настоящему изобретению, представляет собой COVID-19.
Далее приводятся примеры осуществления изобретения, которые иллюстрируют изобретение, но не охватывают все возможные варианты его осуществления и не ограничивают изобретение.
Специалисту в данной области понятно, что возможны и другие частные варианты осуществления изобретения, включающие иные лекарственные формы фавипиравира и аминокислоты в соответствии с настоящим изобретением, не описанные в настоящих примерах, например, таблетки, суппозитории, ингаляционные составы и так далее.
Примеры
Пример 1. Приготовление фармацевтической композиции фавипиравира с аминокислотой в виде раствора.
Предварительно в отдельной емкости смешивали 50% от рассчитанного количества порошка фавипиравира с рассчитанным количеством порошка лизина. В емкость для приготовления растворов помещали воду для инъекций и нагревали до 60-70°С, далее подщелачивали ее и в полученный раствор при перемешивании добавляли предварительно смешанные порошки фавипиравира с лизином. Перемешивание продолжали до полного растворения компонентов. К полученному раствору прибавляли оставшееся количество фавипиравира и продолжали перемешивание при температуре 60-70°С до получения прозрачной фармацевтической композиции в виде раствора. Далее измеряли рН раствора, и при необходимости, корректировали его значение прибавлением раствора гидроксида натрия или соляной кислоты. При достижении требуемого значения рН раствор доводили водой для инъекций до заданного объема и фильтровали через мембранный фильтр, фильтрат разливали в тару и герметично укупоривали.
Аналогичным способом получали фармацевтические композиции фавипиравира с другими аминокислотами, такими как, не ограничиваясь указанным, тирозин, серии.
Пример 2. Приготовление лекарственных средств фавипиравира с аминокислотами в виде лиофилизата и концентрата.
Приготовленные по описанному способу в примере 1 растворы фавипиравира с аминокислотами после фильтрации подвергали лиофильной сушке. На выходе получали твердое лекарственное средство фавипиравира с аминокислотами в виде лиофилизата.
Восстановление раствора. Во флакон полученного лиофилизата с рассчитанным количеством фавипиравира медленно по внутренней стенке добавляли рассчитанное количество физиологического раствора. Флакон энергично встряхивали примерно 30 секунд до полного растворения препарата. В случае неполного растворения препарата перемешивание повторяли. Получали прозрачное жидкое лекарственное средство фавипиравира с аминокислотами в виде раствора от желтого до зеленовато-желтого цвета.
Аналогичным способом получали лиофилизаты и концентраты фавипиравира с другими аминокислотами, такими как, в частности, тирозин и серии.
Пример 3. Изучение противовирусной активности композиции фавипиравира с аминокислотами против вируса SARS-CoV-2.
Противовирусную активность композиций фавипиравира с аминокислотами составов, указанных в табл. 1, в отношении вируса SARS-CoV-2 проводили на постоянной культуре клеток почки африканской зеленой мартышки. В качестве ростовой и поддерживающей применяли среду на солевом растворе Хенкса, содержащую, фетальную телячью сыворотку.
В исследовании использовали девять составов фавипиравира с аминокислотами с различными качественными и количественными характеристиками (составы 1-3, 5-7, 9-11) и три состава, содержащих идентичное своей группе количество фавипиравира (состав 4: количество фавипиравира идентичное составам 1-3; состав 8: количество фавипиравира идентичное составам 5-7; состав 12: количество фавипиравира идентичное составам 9-11) (табл. 1). В качестве контроля использовали физиологический раствор (состав 13). Для инфицирования 13 образцов клеток почки африканской зеленой мартышки вирусом SARS-CoV-2 удаляли ростовую среду с монослоя клеток и вносили вирус SARS-CoV-2, инкубировали в течение 60 мин при температуре 37±0,5°С, затем инокулят удаляли, промывали, в образцы клеток вносили свежую среду, содержащую исследуемые образцы составов 1-13, соответственно. Образцы инкубировали при температуре 37±0,5°С в течение 48 ч. Биологическую активность оценивали титрованием полученной суспензии клеток по цитопатическому действию вируса через 24 и 48 ч после инфицирования. Результаты исследований представлены в табл. 1.
Основным критерием оценки эффективности составов 1-12 in vitro являлся коэффициент ингибирования цитопатогенного действия вируса (КИ, %).
Коэффициент ингибирования (КИ, %) рассчитывался по формуле:
КИ=((Аконтр - Аоп) / Аконтр) × 100%, где:
Аконтр - биологическая активность вируса, определенная в клетках без внесения препарата (с использованием контрольного состава);
Аоп - биологическая активность вируса, определенная в клетках с внесением препарата.
Таким образом, представленные результаты эксперимента наглядно демонстрируют противовирусную активность фармацевтических композиций фавипиравира с различными аминокислотами в соотношениях 1,0:0,1 - 1,0:1,2. При этом, указанные композиции проявляют синергетический эффект в отношении противовирусной активности по сравнению с монотерапией фавипиравиром в идентичных количествах.
Пример 4. Исследование стабильности твердого лекарственного средства в виде лиофилизата фавипиравира с аминокислотами при хранении.
Стабильность лекарственных средств фавипиравира с аминокислотами в форме лиофилизатов, полученных способом, охарактеризованным в примере 2, оценивали методом «ускоренного старения» по содержанию фавипиравира и сравнивали со стабильностью лиофилизатов, содержащих только фавипиравир.
Количественные характеристики лекарственных средств в форме лиофилизатов представлены в таблице 1.
В соответствии с ОФС.1.1.0009.15 метод «ускоренного старения» (хранение при повышенной температуре) основан на зависимости скорости химической реакции от температуры в соответствии с правилом Вант-Гоффа: при повышении температуры на 10°С скорость химической реакции возрастает в 2-4 раза. Испытания устойчивости лиофилизатов проводили методом ускоренного старения при 40±2°С в течение 457 суток, что соответствует 5 годам хранения при стандартных условиях (не более 25°С). Эксперимент проводили на 3 сериях каждого лекарственного средства. Количественное содержание фавипиравира выражали в средних значениях.
Содержание фавипиравира определяли методом ВЭЖХ с использованием стандартов.
В табл. 2 показано, что после 457 дней хранения в условиях метода «ускоренного старения» лекарственные средства фавипиравира с аминокислотами в форме лиофилизатов по настоящему изобретению (составы 1-3; 5-7; 9-11) обладали увеличенной стабильностью и оставались химически чистыми. Лекарственные средства составов 4, 8, 12 оставались химически чистыми в течение менее 150 суток, к концу эксперимента содержание действующего вещества уменьшалось более чем на 3,5-5%.
Таким образом, лекарственные средства фавипиравира с аминокислотами в форме лиофилизатов по настоящему изобретению (составы 1-3; 5-7; 9-11) обладают статистически достоверной улучшенной стабильностью при хранении по сравнению с составами (4; 8; 12).