Кристаллическая форма моноэтаноламин 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты
CRYSTALLINE FORM OF MONOETHANOLAMINE 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-DIMETHYLPHENYL)-1,5-DIHYDRO-3-METHYL-5-OXO-4H-PYRAZOLE-4-YLIDENE]HYDRAZINO]-2'-HYDROXY-[1,1'-BIPHENYL]-3-CARBOXYLIC ACID

Изобретение относится к применяемому в медицине улучшенному миметику тромбопоэтина (ТРО), представляющему собой моноэтаноламин 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты, в частности, к его новой кристаллической форме, а также способу ее получения и применению.
3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден] гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновая кислота (Соединение 1) представляет собой соединение, которое наряду с его фармацевтически приемлемыми солями, гидратами, сольватами и сложными эфирами раскрыто и заявлено как применимое в качестве агониста рецептора ТРО, в частности, для усиления продуцирования тромбоцитов, а также для лечения тромбоцитопении (Заявка WO0189457, опубл. 07.03.2002).
Свободная кислота плохо растворима в воде (приблизительно 5 миллиграммов на миллилитр). Плохая растворимость негативно влияет на возможность получения из свободной кислоты фармацевтических лекарственных форм и снижает биологическую доступность соединения. В то время как свободная кислота в значительной степени применима в качестве агониста рецептора ТРО, особенно для усиления продуцирования тромбоцитов, а также при лечении тромбоцитопении, соли 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты обладают дополнительными преимуществами повышенной растворимости и биологической доступности.
Соединение данного изобретения моноэтаноламин 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты (Соединение 2)
2
применимо в качестве агониста рецептора ТРО, в частности, для продуцирования тромбоцитов и, особенно, для лечения тромбоцитопении. Указанная тромбоцитопения может быть обусловлена угнетением спинного мозга, вызванным химиотерапией или лучевой терапией, трансплантацией органа, трансплантантом костного мозга, стволовых клеток или печени, идиопатической тромбоцитопенической пурпурой, миелодиспластическими синдромами, апластической анемией или лейкемией, вирусной, грибковой, микробной или паразитарной инфекцией, дисфункцией печени, хирургическими операциями, а также лечением противовирусными средствами или антибиотиками.
Последнее время фармацевтической наукой уделяется большое внимание изучению различных полиморфных форм биологически активных соединений. Это связано прежде всего с двумя важными факторами: растворимостью в водных средах, а, следовательно, биодоступностью и выбором технологии производства фармацевтической композиции (технологичностью производства и стабильностью как в ходе производства, так и последующем хранении активной фармацевтической субстанции как таковой, так и в составе фармацевтической композиции).
Из уровня техники известно соединение бис-(моноэтаноламин) 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты. (Патент RU2284994, опубл. 10.10.2006), а также фармацевтическая композиция на основе указанной соли соединения, способ лечения тромбоцитопении у млекопитающего, способ усиления продуцирования тромбоцитов у млекопитающего и способы получения указанной фармацевтической композиции и указанной соли соединения.
Также известна фармацевтическая композиция в виде капсул или твердой лекарственной формы (таблетка) (Евразийская заявка EA200971018, опубл. 30.04.2010), содержащая бис-(моноэтаноламин) 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-З-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразин]-2'-гидрокси-[1,1'-дифенил]-3-карбоновой кислоты, где данные лекарственные формы получают при использовании вспомогательных веществ, которые, по существу, не содержат координирующих металлов, и/или которые, по существу, не содержат восстановителей сахаров.
Кроме того, известен способ лечения тромбоцитопении у человека с помощью введения бис-(моноэтаноламин) 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4H-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты (Евразийский патент EA024557, опубл. 30.09.2016), где нагрузочная доза составляет количество, изменяющееся в интервале от приблизительно 50 до приблизительно 150 мг для введения от 2 до 4 раз в сутки в течение от 1 до 14 суток, или составляет количество, изменяющееся в интервале от приблизительно 200 до приблизительно 600 мг для введения один раз в сутки в течение от 1 до 14 суток, с последующим введением поддерживающей дозы соединения, где величина поддерживающей дозы вышеприведенной соли составляет приблизительно от 25 до приблизительно 150 мг в сутки в течение по меньшей мере двух дополнительных суток.
Также из уровня техники известные кристаллические моноэтаноламиновые соли 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты (Евразийский патент EA022756, опубл. 29.02.2016). Описанная форма Н характеризуется порошковой дифрактограммой, содержащей пики при 4,9, 6,9, 15,1 и 23,0 +(-) 0,2°2θ, а также 9,9, 12,7, 24,0 и 27,1+(-) 0,2°2θ.
Указанная форма была получена кристаллизацией бисэтаноламиновой соли 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты  из растворителя выбранного из группы, состоящей из 1-бутанола или 1-пентанола. Кристаллизация включала себя получение раствора бисэтаноламиновой соли в 1-бутаноле или 1-пентаноле и осаждение кристаллической соли мноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты. Кристаллическая соль формы Н затем выделялась из суспензии фильтрованием и сушилась при комнатной температуре.
Описанная форма Е характеризуется порошковой дифрактограммой, содержащей пики при 10,5, 13,4, 19,5 и 21,7 +(-) 0,2°2θ, а также 8,3, 14,1, 18,3, 25,5 и 26,4+(-) 0,2°2θ. Вышеуказанная форма была получена, способом включающим сушку аморфного бисэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты. Процесс сушки включал обработку бисэтаноламина в 2,2,2-трифторэтаноле в течение 7 дней с последующей обработкой воздухом в течение суток с получением формы Е моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты.
Недостатком известных форм моноэтаноламина 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты является относительно низкая стабильность при хранении.
Технической проблемой является необходимость разработки новой более стабильной полиморфной формы моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты при сохранении эффективности продуцирования тромбоцитов.
Технический результат состоит в разработке новой полиморфной формы моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты, обладающей повышенной стабильностью и меньшей токсичностью.
Технический результат достигается за счет получения новой неизвестной ранее полиморфной формы В моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты более стабильной при хранении.
Повышенная стабильность формы B моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты (Элтромбопага моноэтаноламина) подтверждена проведенными исследованиями свойств различных форм соединения 2 при температуре 40 °С и влажности 75% на протяжении продолжительного времени. При этом у каждого образца (форма B, форма H и форма E) измеряли параметры порошковой дифрактограммы в начале эксперимента, а также по истечении 7,5, 24, 46, 68, 91 и 137 суток. После чего оценивали соответствие образца первоначальным свойствам.
*
Таблица 1 Стабильность различных форм Элтромбопага моноэтаноламина, оцененная по соответствию пиков порошковой дифрактограммы
Форма Элтромбопага
Соответствие образца первоначальным характеристикам при выдержке
7,5, суток
24, суток
46, суток
68, суток
91, суток
137, суток
форма Е
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Не соответствует
Не соответствует
форма Н
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Не соответствует
Не соответствует
Не соответствует
форма В
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
Соответствует
*
Соответствие порошковой дифрактограммы кристаллической формы в исходной точке (0 суток, 40°С, влажность 75%) и точке контроля
Согласно результатам экспериментов, приведенным в таблице 1, наиболее стабильной является форма B, на втором месте по стабильности оказалась форма E, а наименее стабильной оказалась форма H.
Технический результат также достигается за счет разработки способа получения новой неизвестной ранее кристаллической формой В моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты, который состоит в проведении процесса в последовательных операциях без выделения промежуточных продуктов.
Заявляемый способ осуществляют следующим образом.
H
H
Синтез может быть проведен способом, включающим соединение минеральной кислоты, 3'-амино,2'-гидроксидифенил-(1,1`-бифенил)-3-карбоновой кислоты и нитрита натрия с получением первого раствора реакционной смеси, содержащей соответствующую соль диазония, а затем добавление к нему 2-(3,4-диметилфенил)-5-метил-1,2-дигидро-3-пиразол-3-он с получением второго раствора. Первый раствор может быть охлажден до температуры от приблизительно 5 до приблизительно 0°С. Затем к реакционной смеси добавляют 2-(3,4-диметилфенил)-5-метил-1,2-дигидро-3-пиразол-3-он с образованием второго раствора. Раствор может выдерживаться, например, с перемешиванием, приблизительно при комнатной температуре, в течение от приблизительно 10 мин до приблизительно 1 часа.
Затем второй раствор, включающий 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновую кислоту, может использоваться для получения моноэтаноламиновой формы В. Способ включает соединение второго раствора, спирта (например, метилового, этилового, изопропилового и подобных), и этаноламина с получением суспензии, из которой осаждается твердое вещество. Суспензия может выдерживаться, при перемешивании в течение приблизительно 1 часа. Затем необработанный моноэтаноламин 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты может быть выделен, например, при помощи фильтрования или центрифугирования полученного твердого вещества из суспензии с последующим переосаждением этилацетатом из диметилформамида с получением формы В.
Технический результат также достигается за счет фармацевтической композиции, применяемой в качестве миметика тромбопоэтина и содержащей кристаллическую форму В моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н- пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты  и вспомогательные вещества при следующем содержании компонентов, мас. %:
Кристаллическая форма В моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислотыМаннитолЦеллюлоза микрокристаллическаяПовидон К30Карбоксиметилкрахмал натрия (Тип А)Магния стеарат
18,2215,00-20,2750,68-55,951,83-4,004,00-8,000,5-1,0
Для пояснения сущности заявленного технического решения к описанию приложены следующие графики:
1. Дифрактограмма образца кристаллической формы В моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты была проиндицирована методом SVD в программе TOPAS, далее было произведено уточнение дифрактограммы методом Паули, положения большинства пиков отвечают найденной ячейке (Фиг. 1), значения параметров ячейки после уточнения методом Паули приведены в таблице 2.
Таблица 2 - значения параметров ячейки после уточнения методом Паули
Пр. группа
V, Å<sup>3</sup>
a, Å
b, Å
c, Å
α, °
β, °
γ, °
Р-1
1261.81(15)
8.6090(5)
11.1469(7)
14.7381(11)
104.304(5)
111.211(5)
76.637(4)
Съемка образцов проводилась на порошковом рентгеновском дифрактометре Bruker D8 Advance Vario (медное излучение Cu Kα1 =1.54060 Å) с Ge(111) монохроматором и позиционно-чувствительным детектором LynxEye, θ/2θ геометрия, интервал съемки 2.0°- 60°, шаг 0.02° с вращением. Положения и интенсивности основных пиков исследованной фазы представлены в таблице 3.
Таблица 3 - Положения и интенсивности основных пиков исследованной фазы
2θ, °
d, Å
Относительная интенсивность
2θ, °
d, Å
Относительная интенсивность
6.508
13.57154
18.80%
20.961
4.23471
4.40%
8.248
10.71058
4.80%
21.241
4.17957
3.30%
9.565
9.23871
5.50%
21.735
4.08569
34.50%
10.933
8.08606
28.90%
22.39
3.96763
6.60%
11.126
7.94615
68.00%
22.625
3.92694
11.00%
11.422
7.74058
13.40%
23.875
3.72399
3.90%
12.786
6.91813
6.20%
24.236
3.66944
3.70%
13.060
6.77343
4.00%
24.460
3.63628
14.70%
14.172
6.24442
76.80%
25.119
3.54233
10.70%
14.629
6.05023
15.30%
25.335
3.51264
10.20%
15.394
5.75142
36.10%
25.767
3.45469
100.00%
16.552
5.35139
7.80%
26.081
3.41382
12.80%
16.692
5.30679
14.60%
26.332
3.38186
33.80%
17.264
5.1324
3.80%
27.069
3.29142
4.00%
18.706
4.7398
3.90%
27.423
3.24976
6.90%
19.204
4.61805
2.00%
29.090
3.0672
20.80%
19.656
4.5128
3.50%
31.036
2.87916
7.10%
19.916
4.45442
5.10%
2. ИК спектр образца кристаллической формы В моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты. ИК-спектры снимали на приборе Shimadzu IR Tracer-100 с использованием приставки НПВО (нарушенное полное внутреннее отражение). Перед началом работы производили съемку ИК-спектра фона. Кристаллическую форму В помещали на поверхность кристалла приставки НПВО, производили съемку ИК-спектра. Характеристические частоты полос поглощения представлены в Таблице 4
Таблица 4 Характеристические частоты полос поглощения кристаллической формы
В
Peak
Intensity
Corr. Intensity
Base (H)
Base (L)
Area
Corr. Area
1
381.91
35.73
28.32
391.55
360.69
1469.278
418.349
2
399.26
46.70
17.15
408.91
391.55
762.126
140.999
3
418.55
61.06
10.50
439.77
408.91
952.574
149.145
4
445.56
77.50
4.37
455.20
439.77
298.539
26.592
5
462.92
81.79
2.26
474.49
455.20
329.361
20.250
6
491.85
70.99
9.86
503.42
474.49
655.079
114.150
7
526.57
64.36
10.15
542.00
503.42
1124.984
170.941
8
555.50
65.79
8.81
565.14
547.78
503.707
69.525
9
580.57
68.75
6.56
588.29
572.86
427.635
46.732
10
597.93
66.70
9.31
605.65
588.29
509.913
90,302
11
628.79
58.24
12.92
638.44
615.29
773.467
114.594
12
657.73
66.22
1.48
661.58
638.44
749.750
16.964
13
673.16
54.64
19.33
682.80
661.58
729.431
165.487
14
702.09
65.05
10.46
707.88
682.80
677.130
97.594
15
734.88
62.02
8.50
742.59
723.31
649.951
77.674
16
756.10
43.30
24.59
765.74
742.59
975.726
243.847
17
769.60
63.68
3.71
779.24
765.74
447.595
26.868
18
785.03
67.74
8.56
798.53
779.24
457.138
52.668
19
812.03
61.59
23.31
831.32
798.53
755.121
253.385
20
842.89
76.00
6.85
850.61
831.32
377.206
48.523
21
860.25
76.17
7.38
869.90
850.61
382.554
65.257
22
885.33
74.55
8.86
902.69
869.90
645.443
98.666
23
925.83
69.99
3.89
931.62
902.69
688.571
20.114
24
941.26
65.63
7.74
966.34
931.62
996.222
113.878
25
1002.98
62.21
13.99
1014.56
966.34
1389.877
260.392
26
1026.13
68.10
6.55
1035.77
1014.56
595.633
59.850
27
1056.99
60.32
8.42
1064.71
1035.77
942.037
82.820
28
1078.21
63.57
2.14
1082.07
1072.42
340.899
11.127
29
1087.85
61.73
5.17
1097.50
1082.07
534.019
31.443
30
1116.78
56.57
8.98
1124.50
1097.50
1005.856
107.793
31
1145.72
54.20
14.18
1165.00
1124.50
1610.724
321.650
32
1193.94
53.37
17.65
1207.44
1165.00
1606.562
392.572
33
1222.87
57.29
15.77
1236.37
1207.44
994.176
209.816
34
1251.80
57.33
12.91
1261.45
1236.37
879.334
157.381
35
1265.30
66.63
3.64
1278.81
1261.45
468.606
22.812
36
1286.52
77.76
1.60
1290.38
1278.81
242.028
9.658
37
1303.88
69.31
4.16
1309.67
1290.38
513.713
28.278
38
1338.60
53.77
17.88
1352.10
1309.67
1597.941
392.488
39
1379.10
48.90
22.32
1400.32
1352.10
1887.628
502.384
40
1408.04
67.65
3.74
1413.82
1400.32
409.378
22.163
41
1417.68
71.36
0.63
1421.54
1413.82
218.670
2.558
42
1427.32
71.65
0.90
1433.11
1421.54
322.695
4.986
43
1442.75
69.54
1.06
1446.61
1433.11
395.514
8.113
44
1460.11
63.69
4.70
1469.76
1446.61
777.743
50.230
45
1500.62
52.11
14.72
1519.91
1477.47
1655.722
252.585
46
1548.84
46.03
28.83
1591.27
1519.91
2531.787
888.386
47
1614. 42
81.52
4.83
1624.06
1600.92
355.073
45.999
48
1631.78
83.57
2.73
1647.21
1624.06
327.054
26.834
49
1660.71
76.60
14 59
1693.50
1647.21
481.844
139.352
50
2441.88
76.36
4.55
2565.33
2376.30
3961.354
473.637
51
2682.98
78.62
5.41
2841.15
2565.33
5157.585
769.411
52
2924.09
82.72
0.99
2937.59
2873.94
1032.063
21.432
53
2962.66
82.57
1.00
2983.88
2937.59
784.220
23.137
54
2999.31
83.13
0.30
3008.95
2983.88
417.819
3.683
55
3030.17
82.50
0.46
3043.67
3008.95
597.639
7.999
56
3055.24
82.08
0.96
3088.03
3043.67
751.546
9.995
57
3196.05
82.53
0.21
3207.62
3170.97
634.629
3.893
На фигуре 2 представлены характеристические частоты полос поглощения кристаллической формы В моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты.
1
1
Спектры H-ЯМР регистрировали на приборе Bruker Avance III WB с рабочими частотами 400 МГц (H).
6
Навеску моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты 0,050 г растворяли в 2 мл ДМСО-d.
1
H-ЯМР, δ, ppm: 8.20 (s, 1H), 7.89 (d, J = 7.5 Гц, 1H), 7.76 (m, 3H), 7.50 (t, 2H), 7.08 (m, 2H), 6.96 (t, 1H), 3.60 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.34 (m, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H).
13
13
Спектры C-ЯМР регистрировали на приборе Bruker Avance III WB с рабочими частотами 100 МГц (C).
6
Навеску моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты 0,050 г растворяли в 2 мл ДМСО-d.
13
C-ЯМР, δ, ppm: 168.5, 139.1, 133.3, 130.5, 130.4, 130.3, 130.2, 130.0, 129.9, 129.8, 129.7, 128.6, 128.4, 128.3, 128.1, 128.0, 127.8, 127.7, 126.7, 126.6, 119.0, 118.9, 115.1, 58.0, 41.7, 20.2, 19.3
Заявляемую кристаллическую форму B моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты  получают следующим образом.
H
В реактор заливают раствор соляной кислоты. К раствору присыпают 3'-амино,2'-гидрокси-(1,1`-бифенил)-3-карбоновую кислоту. Реакционную массу нагревают до 55 °С и выдерживают до полного растворения. Полученный раствор охлаждают до 0 °С и дозируют раствор нитрита натрия при температуре не выше 5 °С. Через 1 час к полученному раствору добавляют 2-(3,4-диметилфенил)-5-метил-1,2-дигидро-3-пиразол-3-он. По окончании дозировки, к реакционной массе добавляют этанол и натрий гидрокарбонат. Выпавший осадок отфильтровывают, а маточный раствор обрабатывают моноэтаноламином при температуре 60°С. Через 1 час реакционную массу охлаждают. Соединение 2 отфильтровывают и снимают с фильтра. Полученный осадок растворяют в диметилформамиде, прибавляют к этилацетату, перемешивают 6 часов и фильтруют. Осадок на фильтре многократно промывают водой и сушат. Получают моноэтаноламин соединения 2 в виде кристаллической формы В.
Возможность осуществления предлагаемого изобретения иллюстрируются следующими примерами, но не ограничиваются ими:
Пример 1. Способ получения кристаллической формы В моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты.
H
В реактор заливали 7,3 л раствора соляной кислоты, полученного из 0,84 л 37 мас % соляной кислоты и 6,46 л воды. К раствору присыпали 787,50 г 3'-амино,2'-гидрокси-(1,1`-бифенил)-3-карбоновую кислоты. Реакционную массу нагревали до 55 °С и выдерживали до полного растворения. Полученный раствор охлаждали до 0 °С и дозировали раствор 3,95 л 6 мас % нитрита натрия при температуре не выше 5 °С. Через 1 час к полученному раствору дозировали 694,5 г 2-(3,4-диметилфенил)-5-метил-1,2-дигидро-3-пиразол-3-он По окончании дозировки, к реакционной массе добавляли 9 л этанола и 381,5 г натрия гидрокарбоната. Выпавший осадок отфильтровывали, а маточный раствор обрабатывали 0,067 л моноэтаноламина при температуре 60°С. Через 1 час реакционную массу охлаждали. Соединение 2 отфильтровывали и снимали с фильтра. Полученный осадок растворяли в 2,50 л диметилформамида и прибавили к 8 л этилацетата, после чего перемешивали 6 часов и фильтровали. Осадок на фильтре многократно промывали водой и сушили. Получили 500 г моноэтаноламина соединения 2 в виде кристаллической формы В.
Пример 2. Состав фармацевтической композиции для производства готовой смеси для изготовления лекарственного средства.
Для приготовления 10000,00 г композиции, включающей в себя в качестве действующего вещества кристаллическую форму В моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты  и вспомогательные вещества (таблица 5).
Таблица 5 - состав фармацевтической композиции
Наименование
Мас. %<sup>*</sup>
- Кристаллическая форма В моноэтаноламина  3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н- пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты-  Маннитол- Целлюлоза микрокристаллическая- Повидон К30- Карбоксиметилкрахмал натрия (Тип А)- Магния стеарат
18,2217,5053,951,838,000,50
*без учета влажности фармацевтической композиции, которая не превышает 1 % мас
Пример 3. Состав фармацевтической композиции для производства готовой смеси для изготовления лекарственного средства.
Для приготовления 10000,00 г композиции, включающей в себя в качестве действующего вещества кристаллическую форму В моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты  и вспомогательные вещества (таблица 6).
Таблица 6 - состав фармацевтической композиции
Наименование
Мас. %<sup>*</sup>
- Кристаллическая форма В моноэтаноламина  3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н- пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты- Маннитол- Целлюлоза микрокристаллическая- Повидон К30- Карбоксиметилкрахмал натрия (Тип А)- Магния стеарат
18,2217,4553,334,004,001,00
*без учета влажности фармацевтической композиции, которая не превышает 1 % мас
Пример 4. Состав фармацевтической композиции для производства готовой смеси для изготовления лекарственного средства.
Для приготовления 10000,00 г композиции, включающей в себя в качестве действующего вещества кристаллическую форму В моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты  и вспомогательные вещества (таблица 7).
Таблица 7 - состав фармацевтической композиции
Наименование
Мас. %<sup>*</sup>
- Кристаллическая форма В моноэтаноламина  3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н- пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты-  Маннитол- Целлюлоза микрокристаллическая- Повидон К30- Карбоксиметилкрахмал натрия (Тип А)- Магния стеарат
18,2220,2750,681,838,001,00
*без учета влажности фармацевтической композиции, которая не превышает 1 % мас
Пример 5. Состав фармацевтической композиции для производства готовой смеси для изготовления лекарственного средства.
Для приготовления 10000,00 г композиции, включающей в себя в качестве действующего вещества кристаллическую форму В моноэтаноламина 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты  и вспомогательные вещества (таблица 8).
Таблица 8 - состав фармацевтической композиции
Наименование
Мас. %<sup>*</sup>
- Кристаллическая форма В моноэтаноламина  3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н- пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты-  Маннитол- Целлюлоза микрокристаллическая- Повидон К30- Карбоксиметилкрахмал натрия (Тип А)- Магния стеарат
18,2215,0055,951,838,001,00
*без учета влажности фармацевтической композиции, которая не превышает 1 % мас
Пример 6. Получение готовой смеси для изготовления готового лекарственного средства на основе фармацевтической композиции.
Во влажный гранулятор с большим усилием сдвига и функцией просеивания последовательно загружают моноэтаноламин 3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты, микрокристаллическую целлюлозу, маннитол и повидон (согласно примеру 2, 3, 4 или 5). Смесь перемешивают в течение 5 мин.
После смешения, производят увлажнение водой (15-18 % мас от массы полученной смеси), увлажненную смесь перемешивают в течение 3 мин. Протирают увлажненную смесь через сито и полученные гранулы сушат в сушильном шкафу до остаточной влажности не более 1.0 % мас.
Высушенные гранулы просеивают через сито, отбирая фракции размером 140 - 250 микрон.
Полученные гранулы смешивают с микрокристаллической целлюлозой и натрия карбоксиметилкрахмалом (согласно примеру 2, 3, 4 или 5) и перемешивают в течение 15-20 мин.
Полученные гранулы смешивают с магния стеаратом в соответствующем смесителе в течение 3-5 минут с получением готовой смеси для изготовления готового лекарственного средства.
Пример 7.
Проверку токсичности композиции на основе заявляемой формы осуществляли следующим образом.
Проводили доклинические исследования токсикологической безопасности готового лекарственного средства (Исследуемый препарат), полученного с использованием готовой смеси по примеру 6, в сравнении с препаратом Револейд (Препарат сравнения). Оба препарата представляли собой таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг. При этом по примеру 6 было получено 4 состава (согласно фарм. композициям по примерам 2, 3, 4 и 5). Испытуемые животные были разделены на 5 групп, которые представлены в таблице 9.
Таблица 9 - схема исследования токсикологической безопасности
Группа испытуемых животных
Препарат
№ группы
состав группы
1
66 самцов и 66 самок белых лабораторных мышей (масса 20±2 г)
Исследуемый препарат (фарм. композиция по примеру 2)
2
66 самцов и 66 самок белых лабораторных мышей (масса 20±2 г)
Исследуемый препарат (фарм. композиция по примеру 3)
3
66 самцов и 66 самок белых лабораторных мышей (масса 20±2 г)
Исследуемый препарат (фарм. композиция по примеру 4)
4
66 самцов и 66 самок белых лабораторных мышей (масса 20±2 г)
Исследуемый препарат (фарм. композиция по примеру 5)
5
66 самцов и 66 самок белых лабораторных мышей (масса 20±2 г)
Препарат сравнения
При изучении острой токсичности мышам однократно внутрижелудочно вводили Исследуемый препарат и препарат сравнения в дозах 1500, 2000, 2500, 3000, 3500 мг/кг веса.
Наблюдение за животными осуществляли в первые 8 часов непрерывно, далее каждые 8 часов на протяжении 2 недель.
50
50
На основании проведенных экспериментальных данных для препаратов рассчитана LD. LD для группы 1 составила 4230 мг/кг, для группы 2 - 4236 мг/кг, для группы 3 - 4253 мг/кг, для группы 4 - 4245 мг/кг, для группы 5 - 3340 мг/кг.
50
Таким образом, LD Исследуемого препарата составила в общем 4241 мг/кг, а Препарата сравнения - 3340 мг/кг.
Таким образом, Исследуемый препарат, произведенный из готовой смеси по примеру 6, является менее токсичным по отношению к Препарату сравнения.
Из вышеизложенного можно сделать вывод: заявляемая новая, неизвестная ранее, кристаллическая форма В моноэтаноламина  3'-[(2Z)-2-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты, способ ее получения, применения для приготовления фармацевтической композиции для применения в качестве агониста рецептора ТРО, в частности для усиления продуцирования тромбоцитов является новой, а также удовлетворяет условиям патентоспособности «изобретательский уровень» и «промышленная применимость».