СРЕДСТВО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ВАГИНИТА У КОРОВ
DRUG FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF VAGINITIS IN COWS

Изобретение относится к фармакологии и ветеринарной медицине, в частности – гинекологии, и может быть использовано для профилактики и лечения вагинитов у коров.
Streptococcus vaginitis
Вагинит - воспаление влагалища, возникающее из-за проникновения в половые органы животного микроорганизмов. В настоящее время основные выпускаемые в промышленном масштабе ветеринарные препараты для лечения вагинитов содержат в своем составе дезинфицирующие компоненты (фурацилин, йод), антисептики (марганцовокислый калий, ихтаммол, гидрохлорид хлоргексидина) или антибиотики (энрофлоксацин, тетрациклин и др.). Присутствие в составе препаратов антисептиков и антибиотиков, как правило, приводит к снижению иммунитета животных, аллергическим реакциям и другим негативным последствиям. Кроме того, широкое применение антибиотиков приводит к антибиотикорезистентности живого организма, вызывая необходимость разработки и внедрения новых лекарственных форм.
Известен препарат «Метролек» в виде пенной эмульсии для лечения и профилактики послеродовых осложнений, в том числе вагинитов, у коров (см. инструкцию по применению «Метролека» № регистрационного удостоверения ПВР-1-35.13/02987), содержащий 0.5% тилозин тартрата в качестве действующего вещества, 3.3% вспомогательных веществ (масло подсолнечное, эмульгатор Т-2, бета-каротин) и воду для инъекций.
Недостатком препарата является наличие в составе антибиотика - тилозин тартрата, что может инициировать переход заболевания в скрытую форму без клинических проявлений, а также существенно ограничивает использование молока для пищевых целей во время и в первые несколько дней после лечения.
В качестве альтернативы антибиотикам предлагается использовать препараты природного происхождения с собственной антибактериальной активностью, которые могут использоваться как самостоятельные ветпрепараты или в виде биологически активной матрицы для пролонгированной доставки лекарственных веществ.
Известно средство в форме эмульсии для профилактики и лечения гинекологических заболеваний у животных (см. патент РФ №2384323, МПК A61K 9/107, опубл. 20.03.2010), содержащее 20-60% сапропелевой композиции, 5-15% эмульгатора ОП-10 для стабилизации эмульсии и воду. Сапропель представляет собой отложения, накапливающиеся на дне пресных водоемов, обогащенные биологически активными минеральными веществами (кальций, фосфор, сера, железо) и микроэлементами (йод, кобальт, медь, марганец, бром).
Недостатком средства следует считать высокое содержание сапропеля в композиции, необходимое для достижения терапевтического эффекта. В небольших количествах сапропель обладает слабым антибактериальным и кератолитическим действием. Препарат не удобен в применении, поскольку, согласно изобретению, средство является концентратом и для получения требуемой лечебной концентрации для каждого конкретного случая необходимо его предварительное разведение.
Перспективным для создания биологически активных лекарственных препаратов может рассматриваться природный аминополисахарид хитозан. Хитозан в разных морфологических формах проявляет широкий спектр биологической активности, а материалы на его основе обладают ускоренным ранозаживляющим и высоким противовоспалительным действием (см. патент РФ №2617501, МПК С08J 3/075, опубл. 25.04.2017).
Bacillus subtilis
Bacillus licheniformis
8
11
3
Известен биопрепарат «Биометрин» для профилактики и лечения эндометритов у коров, содержащий в своем составе 0.5-1.5% раствор хитозана в 2% уксусной кислоте, раствор культур СН 201 и  СН 200 с титром спор 10-10 в соотношении 1:1 и вспомогательные вещества: лактозу, СаСО, молочную сыворотку или свекольный сок (см. патент РФ №2687041, МПК C12N 1/20, опубл. 06.05.2019).
Недостатком представленного препарата следует считать использование уксусной кислоты для растворения хитозана, что может вызвать раздражение слизистой оболочки. Согласно изобретению, свежеприготовленный водно-кислый раствор хитозана подвергается автоклавированию при температуре 121°С, что может приводить к деструкции и снижению фармакологической активности хитозана. При этом также наблюдается значительное снижение динамической вязкости исходного раствора хитозана. Кроме того, применение данного биопрепарата ограниченно профилактикой и лечением только послеродовых эндометритов у коров. Лечение вагинитов у коров в изобретение не ставилось.
1
2
6
Наиболее близким техническим решением к заявляемому изобретению является внутриматочное средство для лечения и профилактики вульвовагинитов у коров в виде свечей (см. патент РФ № 2375067, МПК A61K 35/12, опубл. 10.12.2009). Свечи содержат в своем составе натуральный фармакопейный препарат «Виватон», препарат антисептик-стимулятор Дорогова 2-я фракция, состоящий из не менее 10% биологически активных веществ, эмульгатор ланолин, а также формообразующую основу в виде масла какао, при следующем соотношении компонентов на одну свечу, г: 1.0:1.0:0.5:8.0 соответственно. «Виватон» представляет собой комплекс из экстрактов и настоев лекарственных растений и содержит 207 компонентов, такие как: органические кислоты и аминокислоты, в том числе незаменимые (лауриновая, пролин, лимонная, масляная, щавелевая, аскорбиновая, глютаминовая, фолиевая, янтарная, линоленовая, яблочная и др.), комплекс витаминов (В, В, Е, С, В, А, Р), холин, провитамины, фитонциды, гликозиды, сапонины, флавоноиды, каротиноиды, хатинин, лецитин, катехины, сахароза, терпеноиды, дубильные вещества, эфирные масла, макро- и микроэлементы и другие компоненты природного происхождения (регистрационное удостоверение № 98/183/8 от 4.06.98 г., ТУ 112-84-803-3615-001-13). Антисептик-стимулятор Дорогова 2-я фракция - препарат, полученный из продуктов животноводства (мяса, костей и пр.) методом сухой возгонки при повышенных температурах (регистрационное удостоверение № ПВР-3-1.1/00937 от 23.08.13 г.). Препарат состоит из низших карбоновых кислот, их аммонийных солей, амидов и холиновых эфиров, разнообразных производных аммиака и солей аммония, холина, метилмеркаптана, соединений с активной сульфгидрильной группой и воды.
Недостатком является многокомпонентность и трудоёмкость процесса изготовления исходных ингредиентов препарата, высокое содержание эмульгатора в готовом продукте, а также дозировка в применении свечей - 2 шт./2 раза в сутки в течение 3-5 дней, что является экономически затратным при использовании в больших хозяйствах с высоким поголовьем скота.
Технической проблемой изобретения является создание высокоэффективного биологически активного средства для лечения и профилактики вагинита у крупного рогатого скота, не содержащее в своем составе антибиотиков и антисептиков.
Техническим результатом является получение средства на основе гидрохлорида хитозана, выполненного в форме инъецируемой композиции или свечного суппозитория. Под инъецируемой композицией следует понимать композицию, которая при температуре менее 4-15°С представляет собой жидкость, а при температурах, близких к физиологическим (~35-37°С), претерпевает фазовый переход в формоустойчивый гидрогель.
Указанный технический результат достигается тем, что средство для профилактики и лечения вагинита у коров, содержащее активную и вспомогательную части, согласно изобретению, содержит в качестве активной части гидрохлорид хитозана, а в качестве вспомогательной части - гелеобразующую основу, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
гидрохлорид хитозана
0.3 - 3.0
гелеобразующая основа
12.5 - 77.0
вода
остальное
В качестве гелеобразующей основы средство может содержать триблок сополимер этиленоксида и пропиленоксида при следующем соотношении компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана
0.5 - 1.6
триблок сополимер этиленоксида и
пропиленоксида
12.5 - 18.0
вода
остальное
Активная часть средства может дополнительно содержать аскорбиновую или борную кислоту при следующем соотношении компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана
0.3 - 3.0
аскорбиновая или борная кислота
0.3 - 3.0
гелеобразующая основа
12.5 - 77.0
вода
остальное
В случае наличия в активной части средства аскорбиновой или борной кислоты средство может содержать в качестве гелеобразующей основы триблок сополимер этиленоксида и пропиленоксида при следующем соотношении компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана
0.9
аскорбиновая или борная кислота
0.9
триблок сополимер этиленоксида и пропиленоксида
17.5
вода
остальное
Средство может содержать в активной части только аскорбиновую кислоту, а в качестве гелеобразующей основы смесь желатины с глицерином при следующем соотношении компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана
3.0
аскорбиновая кислота
3.0
смесь желатины с глицерином
40.0
вода
остальное
В случае наличия в активной части только аскорбиновой кислоты средство может содержать в качестве гелеобразующей основы смесь триблок сополимера этиленоксида и пропиленоксида с желатиной при следующем соотношении компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана
0.3
аскорбиновая кислота
0.3
триблок сополимер этиленоксида и пропиленоксида
с желатиной
14.5
вода
остальное
В случае наличия в активной части только аскорбиновой кислоты средство может содержать в качестве гелеобразующей основы смесь триблок сополимера этиленоксида и пропиленоксида с желатиной и тетраглицеролатом кремния при следующем соотношении компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана
0.3
аскорбиновая кислота
0.3
триблок сополимера этиленоксида и пропиленоксида
с желатиной и тетраглицеролатом кремния
29.0
вода
остальное
В случае наличия в активной части только аскорбиновой кислоты средство может содержать в качестве гелеобразующей основы смесь кондитерского жира и пчелиного воска, и дополнительно содержать неионное поверхностно-активное вещество ТВИН-80 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана
0.6
аскорбиновая кислота
0.6
кондитерский жир с пчелиным воском
77.0
неионное поверхностно-активное вещество ТВИН-80
3.0
Используют гидрохлорид хитозана с молекулярной массой (ММ) 30-70 кДа и степенью дезацетилирования ≥75-80 мол.%.
D
-аскорбиновая кислота - антиоксидант, в составе ветпрепаратов при интравагинальном применении снижает рН, ингибируя рост бактерий, а также способствует восстановлению и поддержанию нормальных показателей рН и флоры.
Борная кислота - одноосновная кислота, обладающая фунгистатической и бактериостатической активностью. Используется при лечении грибковых заболеваний.
Pluronic F - 127 (Pl F - 127) - триблок сополимер этиленоксида и пропиленоксида с молекулярной массой 12.6 кДа. Является нетоксичным неионногенным поверхностно-активным веществом. Разрешен к использованию в фармацевтике в качестве основы для гидрогелей (European Pharmacopoeia 5-th Edition, Order Code P2164030).
4
4
Тетраглицеролат кремния (Si(OGly)) - раствор глицеролата кремния в глицерине (GlyOH) при мольном соотношении Si(OGly) : GlyOH = 1:3. Биологически активное вещество, проявляет транскутанную и антибактериальную активности. В водной среде гидролизуется с протеканием золь-гель реакции и формированием полисилоксановой пространственной сетки ≡Si-О-Si≡ связей, центрами нуклеации которых выступают свободные гидроксигруппы. Золь-гель гидрогели на основе тетраглицеролата кремния рекомендованы для практического использования в качестве самостоятельных лекарственных средств или основ фармацевтических композиций.
3
Глицерин (Gly(ОН)) в составе водно-глицериновой среды является растворителем для тетраглицеролата кремния и пластификатором для хитозана. Разрешен к применению в медицине.
Желатина - частично гидролизованный белок коллаген. Используется как гелеобразующий компонент для получения лекарственных препаратов в виде гелей и свечей.
Пчелиный воск - продукт жизнедеятельности пчёл с большим спектром лечебных свойств и применений. В качестве загущающий добавки входит в состав гелей и свечей.
Кондитерский жир - очищенный животный жир. Используется в фармацевтике в качестве мазевой и суппозиторной основы.
ТВИН-80 - неионное поверхностно-активное вещество природного происхождения, применяется для стабилизации эмульсий, в том числе фармакологического назначения.
Вязкоупругие свойства оценивают по величине модуля упругости (G') и потерь (G") в осцилляционном режиме на ротационном вискозиметре Rheotest RN4.1 (Германия) с системой измерения «конус-цилиндр» при постоянной амплитуде 0.01 мНм в диапазоне частот (ω) 0.5-10 Гц при 4, 25 и 37°С и времени термостатирования 30 мин.
Время фазового перехода «жидкость-гидрогель» оценивают визуально при 37°С по времени потери текучести системы методом переворачивания колбы. За время гелеобразования принимают время, по истечении которого система переходит в гелеобразное состояние и не проявляет течения в течение 10-15 сек.
S. typhimurium
В. cereus
S. aureus
Антибактериальную активность исследуют методом диффузии в агар на культуре штаммов грамотрицательных (55)и грамположительных микроорганизмов ( 8833,  6538). На чашки Петри со стерильным агаром наносят по 100 мкл суточной бульонной культуры микроорганизма, распределяют по поверхности стерильным шпателем и помещают в термостат при 37°С на 40 мин. Затем на поверхность чашек наносят 50 мкл испытуемых препаратов и термостатируют в течение 24 часов. Оценку результата проводят по наличию или отсутствию зоны задержки роста микроорганизмов.
Терапевтическую и профилактическую эффективность полученных средств проверяют на половозрелых коровах после отела с серозно-катаральным вагинитом. В качестве традиционной терапии сравнения используют препарат «Внутриматочные палочки с ихтиолом» (ЗАО НПП «Агрофарм»). Коровы, находящиеся в эксперименте, не подвергаются обработке другими лекарственными препаратами. Перед лечением наружные половые органы животных обмывают 0.1% водным раствором перманганата калия. Препараты вводят после утренней дойки животных интравагинально. Контроль лечения проводят 2 раза в день путем осмотра с помощью влагалищного зеркала. Динамику выздоровления оценивают по следующим клиническим признакам: уменьшение эксудативных выделений, прозрачность и консистенция экссудата.
Изобретение иллюстрируется фотографиями, на которых представлены:
на фиг. 1 - фото инъецируемого гидрогеля на основе гидрохлорида хитозана и Pluronic F-127 при 4 и 37°С (пример №2);
на фиг. 2 - фото свечного суппозитория на основе гидрохлорида хитозана, аскорбиновой кислоты, Pluronic F-127 и желатины (пример №10);
на фиг. 3 - фото свечного суппозитория на основе гидрохлорида хитозана, аскорбиновой кислоты, Pluronic F-127, глицеролата кремния в глицерине и желатины (пример №11).
Изобретение иллюстрируется таблицами, в которых представлено:
в таблице 1 - компонентный и массовый состав, реологические параметры и время гелеобразования композиций для получения инъецируемых гидрогелей на основе гидрохлорида хитозана (примеры №1-9);
в таблице 2 - компонентный и массовый состав композиций для получения свечных суппозиториев на основе гидрохлорида хитозана (примеры №10-13);
в таблице 3 - антибактериальная активность композиций на основе гидрохлорида хитозана (пример №14);
в таблице 4 - эффективность лечения коров с послеродовым серозно-катаральном вагинитом с использованием композиций на основе гидрохлорида хитозана (примеры №15, 16).
в таблице 5 - эффективность профилактики серозно-катарального послеродового вагинита у коров с использованием композиций на основе гидрохлорида хитозана (примеры №17, 18).
Способ получения средства заключается в следующем. Готовят водный раствор гидрохлорида хитозана концентрации 1.0-3.0 мас. % в дистиллированной воде или в водном растворе органической кислоты концентрации 1.0-3.0 мас. % при мольном соотношении гидрохлорид хитозана : кислота = 1:1. Процесс растворения компонентов проводят по стандартной методике при комнатной температуре. Полученный раствор вводят в фармацевтически пригодную гелевую основу, предпочтительно состоящую (но не ограничивающуюся) из раствора Pl F-127 и/или желатины или смеси Pl F-127 и желатины с глицериновым раствором глицеролата кремния или водно-глицеринового раствора желатины или смеси кондитерского жира и пчелиного воска, механически гомогенизируют в смесителе согласно рецептуре. Полученную композицию разливают в шприцы для получения инъецируемых гидрогелей или специальные формы для получения свечного суппозитория.
t
Способ приготовления инъецируемого гидрогеля осуществляется следующим образом. В качестве гелеобразующей основы используют Pl F-127. Для этого готовят раствор полимера в дистиллированной воде при 4°С в течение 24 часов. В полученный раствор вводят водный или водно-кислотный раствор гидрохлорида хитозана при соотношении компонентов в готовом средстве гидрохлорид хитозана : Pl F-127 = 0.3-2.1 : 7.5-18.0, перемешивают на механической мешалке при температуре 20±2°С в течение 5-10 мин, разливают в инъекционные шприцы заданного объема (1-20 мл) и хранят при температуре не выше 4-15°С. Оптимальными для формирования инъецируемого гидрогеля считают условия, при которых фазовый переход «жидкость-гидрогель» реализуется при Т≥25-37°С, при этом значение G>Gʺ, а время гелеобразования () составляет не более 5 мин.
Способ формования свечных суппозиториев осуществляется следующим образом. В качестве гелеобразующей основы используют: 6-13% водный раствор желатины или смесь 6% водного раствора желатины и глицерина в соотношении 1:2 или смесь 13% водного раствора желатины и 25% водного раствора Pl F-127 или их смесь с глицериновым раствором глицеролата кремния или смесь кондитерского жира и пчелиного воска в соотношении 5:1. При необходимости в систему дополнительно вводят эмульгатор. Все используемые гелеобразные основы предварительно расплавляют на водяной бане при 60-80°С в течение 1-2 час, вводят водный или водно-кислотный раствор гидрохлорида хитозана при соотношении компонентов гидрохлорид хитозана : гелеобразующая основа = 0.3-3.0 : 14.5-77.0, перемешивают, разливают в форму для изготовления свечей и охлаждают до 4-15°С в течение 24 часов. Готовый суппозиторий в виде свечного стержня помещают в герметичную упаковку и хранят в темном месте при температуре не выше 15°С.
Группа примеров №1-6. Получение инъецируемых гидрогелей на основе гидрохлорида хитозана (таблица 1).
Пример №1.
Готовят 1 мас.% водный раствор гидрохлорида хитозана с ММ = 30 кДа и 25 мас. % водный раствор Pluronic F-127. Растворы гидрохлорида хитозана и гелеобразующей основы смешивают в объемном соотношении 30:70, перемешивают на механической мешалке при 20°С в течение 5-10 мин, расфасовывают в инъекционные шприцы объемом 10 мл и хранят при 4°С. Состав и содержание компонентов, мас.%:
гидрохлорид хитозана - 0.3;
гелеобразующая основа (Pluronic F-127) - 17.5;
вода - остальное.
Значения модулей упругости (G') и потерь (Gʺ) составляют: 4°С – 0.7 и 0.7 кПа; 25°С – 1.0 и 1.0 кПа; 37°С – 5.0 и 5.0 кПа, соответственно. Гелеобразования композиции при температуре 30°С и выше не происходит.
Пример №2.
Все стадии аналогичны примеру №1. Отличие состоит в том, что используют гидрохлорид хитозана с ММ = 70 кДа, его 5 мас.% водный раствор и 15 мас.% раствор Pluronic F-127, которые смешивают в объемном соотношении 10:90. Состав и содержание компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана – 0.5;
гелеобразующая основа (Pluronic F-127) – 13.5;
вода – остальное.
t
Значения модулей упругости (G') и потерь (Gʺ) составляют: 4°С – 0.2 и 0.3 кПа; 25°С – 0.2 и 0.6 кПа; 37°С – 1.5 и 0.2 кПа, соответственно. Время гелеобразования () при температуре 37°С составляет 3 мин.
Пример №3.
Все стадии аналогичны примеру №2. Отличие состоит в том, что используют 7 мас.% водный раствор гидрохлорида хитозана и 20 мас. % раствор Pluronic F-127. Состав и содержание компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана – 0.7;
гелеобразующая основа (Pluronic F-127) – 18.0;
вода – остальное.
Значения G' и Gʺ: 4°С – 0.1 и 0.1 кПа; 25°С – 0.9 и 0.5 кПа; 37°С – 1.6 и 0.5 кПа, соответственно; t = 3 мин.
Пример №4.
Все стадии аналогичны примеру №1. Отличие состоит в том, что используют гидрохлорид хитозана с ММ = 38 кДа, его 3 мас. % водный раствор и 25 мас. % водный раствор раствор Pluronic F-127. Состав и содержание компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана – 0.9;
гелеобразующая основа (Pluronic F-127) – 17.5;
вода – остальное.
t
Значения G' и Gʺ: 4°С – 1.0 и 1.0 кПа; 25°С – 3.5 и 3.2 кПа; 37°С – 32.0 и 28.0 кПа, соответственно;  = 3 мин.
Пример №5.
D
D
Все стадии способа получения гидрогеля аналогичны примеру №4. Отличие заключается в том, что в состав гидрогеля дополнительно вводят -аскорбиновую кислоту при мольном соотношении гидрохлорид хитозана : -аскорбиновая кислота – 1:1. Состав и содержание компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана – 0.9;
D
-аскорбиновая кислота – 0.9;
гелеобразующая основа (Pluronic F-127) – 17.5;
вода – остальное.
t
Значения G' и Gʺ: 4°С – 1.0 и 1.0 кПа; 25°С – 12.4 и 12.8 кПа; 37°С – 15.3 и 13.0 кПа, соответственно;  = 3 мин.
Пример №6.
Все стадии способа получения гидрогеля аналогичны примеру №5. Отличие в том, что используют борную кислоту. Состав и содержание компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана – 0.9;
борная кислота – 0.9;
гелеобразующая основа (Pluronic F-127) – 17.5;
вода – остальное.
t
Значения G' и Gʺ: 4°С – 3.0 и 3.0 кПа; 25°С – 10.0 и 20.0 кПа; 37°С – 78.0 и 25.0 кПа, соответственно;  = 3 мин.
Пример №7.
Все стадии способа получения гидрогеля аналогичны примеру №1. Отличие состоит в том, что используют 3 мас. % водный раствор гидрохлорида хитозана, растворы гидрохлорида хитозана и Pluronic F-127 смешивают в объемном соотношении 50:50. Состав и содержание компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана – 1.5;
гелеобразующая основа (Pluronic F-127) – 12.5;
вода – остальное.
t
Значения G' и Gʺ: 4°С – 5.0 и 5.0 кПа; 25°С – 20.0 и 18.0 кПа; 37°С – 25.0 и 24.0 кПа, соответственно;  = 5 мин.
Пример №8.
Все стадии способа получения гидрогеля аналогичны примеру №3. Отличие состоит в том, что используют 8 мас. % водный раствор гидрохлорида хитозана, растворы гидрохлорида хитозана и Pluronic F-127 смешивают в объемном соотношении 20:80. Состав и содержание компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана – 1.6;
гелеобразующая основа (Pluronic F-127) – 16.0;
вода – остальное.
t
Значения G' и Gʺ: 4°С – 0.1 и 0.1 кПа; 25°С – 0.4 и 0.3 кПа; 37°С – 1.3 и 0.5 кПа, соответственно;  = 5 мин.
Пример №9.
Все стадии способа получения гидрогеля аналогичны примеру №4. Отличие состоит в том, растворы гидрохлорида хитозана и Pluronic F-127 смешивают в объемном соотношении 70:30. Состав и содержание компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана – 2.1;
гелеобразующая основа (Pluronic F-127) – 7.5;
вода – остальное.
Значения G' и Gʺ: 4°С – 3.0 и 3.0 кПа; 25°С – 16.0 и 17.0 кПа; 37°С – 20.0 и 20.0 кПа, соответственно. Гелеобразования при температуре 30°С и выше не происходит.
примеров №1-9
Таким образом, на основании  можно заключить, что оптимальным для формирования инъецируемого гидрогеля является соотношение гидрохлорид хитозана : Pl F-127 = 0.5-1.6 : 12.5-18.0. В данном диапазоне соотношений компонентов композиция при 4 и 25°С представляет собой жидкость, а при физиологической температуре 37°С – формоустойчивый гидрогель.
Группа примеров №10-13. Получения свечных суппозиториев на основе гидрохлорида хитозана (таблица 2).
Пример №10.
D
Способ получения суппозитория аналогичен примеру №5. Отличие в том, что в композицию дополнительно вводят нагретый до 60°С 13% раствор желатины в соотношении компонентов раствор гидрохлорида хитозана в -аскорбиновой кислоте : раствор Pluronic F-127 : раствор желатины = 0.3 : 0.7 : 2.0, смешение компонентов проводят при 60°С, полученную композицию разливают в форму для изготовления свечей и охлаждают до 4-15°С в течение 24 часов. Готовый суппозиторий в виде свечного стержня помещают в герметичную упаковку и хранят в темном месте при температуре не выше 15°С. Состав и содержание компонентов, мас.%:
гидрохлорид хитозана – 0.3;
D
-аскорбиновая кислота – 0.3;
гелеобразующая основа (Pluronic F-127 + желатина) – 14.5;
вода – остальное.
Пример №11.
D
Все стадии получения свечного суппозитория аналогичны примеру №10. Отличие в том, что в композицию дополнительно вводят глицериновый раствор глицеролата кремния в соотношении компонентов раствор гидрохлорида хитозана в -аскорбиновой кислоте : раствор Pluronic F-127 : раствор желатины : раствор глицеролата кремния = 0.3 : 0.7 : 1 : 2. Состав и содержание компонентов, мас.%:
гидрохлорид хитозана – 0.3;
D
-аскорбиновая кислота – 0.3;
гелеобразующая основа (Pluronic F-127 + желатина + глицериновый раствор глицеролата кремния) – 29.0;
вода – остальное.
Пример №12.
D
Стадии получения свечного суппозитория аналогичны примеру №10. Отличие в том, что в качестве гелеобразующей основы используют нагретый до 70°С 6% водно-глицериновый раствор желатины, гидрохлорид хитозана и -аскорбиновую кислоту вводят в гелеобразующую основу в виде смеси сухих порошков, смешение компонентов проводят при температуре 70°С. Состав и содержание компонентов, мас.%:
гидрохлорид хитозана – 3;
D
-аскорбиновая кислота – 3;
гелеобразующая основа (глицерин + желатина) – 40.0;
вода – остальное.
Пример №13.
D
Все стадии получения свечного суппозитория аналогичны примеру №10. Отличие заключается в том, что в качестве гелеобразующей основы используют нагретую до 80°С смесь кондитерского жира и пчелиного воска (5:1), компоненты смешивают в соотношении раствор гидрохлорида хитозана в -аскорбиновой кислоте : смесь кондитерского жира и пчелиного воска = 1.0 : 4.0, дополнительно вводят эмульгатор ТВИН-80, смешение компонентов проводят при температуре 80°С. Состав и содержание компонентов, мас. %:
гидрохлорид хитозана – 0.6;
D
-аскорбиновая кислота – 0.6;
гелеобразующая основа (кондитерский жир + пчелиный воск) – 77.0;
эмульгатор ТВИН-80 – 3;
вода – остальное.
примерах №10-13,
Экспериментально установлено, что при использовании в свечном суппозитории соотношения компонентов гидрохлорид хитозана : гелеобразующая основа = 0.3-3.0:14.5-77.0, заявленных в  достигается результат изобретения.
Пример №14. Оценка антибактериальной активности композиций на основе гидрохлорида хитозана (таблица 3).
B. cereus
S. aureus
S. typhimurium
В стерильные чашки Петри со стерильным агаром вносят вносят по 100 мкл суточной бульонной культуры микроорганизмов  8833 или  6538 или  и термостатируют при 37°С в течение 40 мин. Затем на поверхность чашек наносят по 50 мкл инъецируемых гидрогелей, полученных по примерам №4-6, и термостатируют в течение 24 часов. Антибактериальную активность оценивают по наличию или отсутствию зоны задержки роста микроорганизмов.
B. cereus
S. aureus
S. typhimurium
Как видно из данных таблицы 3, все испытуемые средства проявляют антибактериальную активность в отношении всех тестируемых культур. Наибольшая антибактериальная активность наблюдается в случае грампозитивных микроорганизмов ( 8833,  6538), а также грамнегативных микроорганизмов () для композиции, полученной по примеру №6.
Примеры №15-18. Лечение и профилактика серозно-катарального вагинита с использованием композиций на основе гидрохлорида хитозана (таблица 4, 5).
Пример №15.
Определение терапевтического эффекта композиций на основе гидрохлорида хитозана проведено на коровах черно-перстой породы в возрасте 3-4 лет, болеющих серозно-катаральным вагинитом. Исследование проведено в колхозе «Заря» Тамалинского района Пензенской области. Опытной группе животных (5 коров) применяли инъецируемый гидрогель по примеру №5 в дозировке 1 шприц на 10 мл один раз в сутки в течение 3-х дней. Животным контрольной группы (5 коров) применяли традиционный препарат «Внутриматочные палочки с ихтиолом» (производства ЗАО НПП «Агрофарм») согласно инструкции.
Положительная динамика у животных, лечение которых проводили с использованием инъецируемого гидрогеля, отмечалась на 2 сутки лечения и достигала 40% выздоровевших животных. В контроле на 2 сутки лечения наблюдалось лишь 20% выздоровевших животных. Полное выздоровление животных опытной группы наблюдалось на 3 сутки лечения, контрольной группы – на 5 сутки.
Пример №16.
Все стадии лечения коров с серозно-катаральным вагинитом (опытная группа и контроль) аналогичны примеру №15. Отличие в том, что лечение животных опытной группы осуществляли с применением свечных суппозиториев по примеру №12.
Положительная динамика у животных, лечение которых проводили с использованием свечного суппозитория, отмечалась уже на первые сутки лечения и достигала 20% выздоровевших. На вторые сутки лечения количество выздоровевших животных составило 60%. Полное выздоровление (100% выздоровевших животных) наблюдалось на 3 сутки лечения.
Пример №17.
Все стадии профилактической терапии коров, направленной на предупреждение появления серозно-катарального вагинита, аналогичны примеру №15. Отличие в том, что терапию проводят на коровах на 2-3 день после отела (после закрытия шейки матки), еще не проявляющих признаки серозно-катарального вагинита, с однократным применением препарата.
В опытной группе в течение 5 суток наблюдения животных, заболевших острым серозно-катаральном вагинитом, не выявлено. В контроле на 2 сутки наблюдалось 60% заболевших животных. В течение следующих 3 суток наблюдения процент заболевших животных контрольной группы не изменился. В дальнейшем контрольной группе животных применяли медикаментозное лечение с использованием антимикробных средств («Нитокс 200», «Дитрим») до полного выздоровления.
Пример №18.
Все стадии профилактической терапии коров аналогичны примеру №17. Отличие в том, что терапию проводили с применением свечных суппозиториев, полученных по примеру №12. В опытной группе на 3 сутки наблюдений отмечалось 20% заболевших животных. В течение следующих 3 суток наблюдения процент заболевших животных контрольной группы не изменился. В дальнейшем животных опытной группы лечили аналогично примеру №16 до полного выздоровления.
Из примеров №15, 16 и таблицы 4 видно, что в группах животных, лечение которых осуществлялась с применением композиции на основе хитозана в виде инъецируемого гидрогеля или свечного суппозитория, эффективность выздоровления существенно выше по сравнению со стандартным терапевтическим лечением.
Из примеров №17, 18 и таблицы 5 видно, что в группах животных, профилактическая терапия которых осуществлялась с применением композиции на основе гидрохлорида хитозана в виде инъецируемого гидрогеля или свечного суппозитория, наблюдается более высокий профилактический эффект по сравнению со стандартной терапией.
Кроме того, лечение и профилактика серозно-катарального вагинита коров с применением разработанных средств на основе гидрохлорида хитозана не накладывает ограничение на использование молока и мяса животных в пищевых целях как во время, так и в первые несколько суток после лечения.
Таблица 1
Компонентный и массовый состав, реологические параметры и время гелеобразования композиций для получения инъецируемых гидрогелей на основе хитозана
Реагенты
Содержание исходных компонентов, мас.%
Примеры, №
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Гидрохлоридхитозана
ММ, кДа
0.3
–
–
–
–
–
1.5
–
–
30
38
–
–
–
0.9
0.9
0.9
–
–
2.1
70
–
0.5
0.7
–
–
–
–
1.6
–
D-Аскорбиновая кислота
–
–
–
–
0.9
–
–
–
–
Борная кислота
–
–
–
–
–
0.9
–
–
–
Pl F-127
17.5
13.5
18.0
17.5
17.5
17.5
12.5
16.0
7.5
Вода
остальное
Реологические параметры гидрогелей, кПа
Т = 4°С
G'
0.7
0.2
0.1
1.0
1.0
3.0
5.0
0.1
3.0
Gʺ
0.7
0.3
0.1
1.0
1.0
3.0
5.0
0.1
3.0
Т = 25°С
G'
1.0
0.2
0.9
3.5
12.4
10.0
20.0
0.4
16.0
Gʺ
1.0
0.6
0.5
3.0
12.8
20.0
18.0
0.3
17.0
Т = 37°С
G'
5.0
1.5
1.6
32.0
15.3
78.0
25.0
1.3
20.0
Gʺ
5.0
0.2
0.5
28.0
13.0
25.0
24.0
0.5
20.0
t, мин
–
3
3
3
3
3
5
5
–
Таблица 2
Компонентный и массовый состав композиций для получения свечных суппозиториев на основе хитозана
Реагенты
Содержание исходных компонентов, мас.%
Примеры, №
10
11
12
13
Гидрохлорид хитозанаММ = 38 кДа
0.3
0.3
3.0
0.6
D-Аскорбиноваякислота
0.3
0.3
3.0
0.6
Pl F-127
5.8
5.8
–
–
Желатина
8.7
6.5
24.0
–
Глицеролат кремния
–
4.2
–
–
Глицерин
–
12.5
16.0
–
Кондитерский жир
–
–
–
65
Пчелиный воск
–
–
–
12
ТВИН-80
–
–
–
3
Вода
остальное
Таблица 3
Антибактериальная активность композиций на основе хитозана
Штамм бактериальнойтест-культуры
Антибактериальная активность
Образец, полученный по примеру №
4
5
6
B. cereus 8833
++
++
++
S. aureus 6538
++
++
++
S. typhimurium 55
+
+
++
+ – умеренная антибактериальная активность;
++ – высокая антибактериальная активность.
Таблица 4
Эффективность лечения коров с послеродовым серозно-катаральном вагинитом с использованием композиций на основе хитозана
Срок лечения, сут
Количество выздоровевших животных, %
Примеры, №
15
16
Контроль
1
–
20
–
2
40
60
20
3
100
100
60
5
–
–
100
Таблица 5
Эффективность профилактики серозно-катарального послеродового вагинита у коров с использованием композиций на основе хитозана
Срок наблюдения, сут
Количество заболевших животных, %
Примеры, №
17
18
Контроль
1
–
–
–
2
–
–
60
3
–
20
60
5
–
20
60