ИНДУЦИРУЮЩИЙ ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ АГЕНТ

1. Полипептидный комплекс, который содержит:
(1) антигенсвязывающий домен;
(2) домен, содержащий Fc-область, которая обладает пониженной активностью связывания с Fcγ-рецептором; и
(3) CD3-связывающий домен.
2. Полипептидный комплекс по п.1, в котором антигенсвязывающий домен и CD3-связывающий домен каждый представляет собой одновалентный Fab.
3. Полипептидный комплекс по п.2,
(i) в котором Fv-фрагмент тяжелой цепи одновалентного Fab, образующего антигенсвязывающий домен, сцеплен с одним из полипептидов, образующих Fc-домен, через СН1-домен и Fv-фрагмент легкой цепи Fab сцеплен с CL-доменом; и Fv-фрагмент тяжелой цепи Fab, образующий CD3-связывающий домен, сцеплен с другим полипептидом, образующим Fc-домен, через СН1-домен и Fv-фрагмент легкой цепи Fab сцеплен с CL-доменом,
(ii) в котором Fv-фрагмент тяжелой цепи одновалентного Fab, образующего антигенсвязывающий домен, сцеплен с одним из полипептидов, образующих Fc-домен, через СН1-домен и Fv-фрагмент легкой цепи Fab сцеплен с CL-доменом; и Fv-фрагмент легкой цепи Fab, образующего домен, связывающий Т-клеточный рецептор, сцеплен с другим полипептидом, образующим Fc-домен, через СН1-домен и Fv-фрагмент тяжелой цепи Fab сцеплен с CL-доменом,
(iii) в котором Fv-фрагмент тяжелой цепи одновалентного Fab, образующего антигенсвязывающий домен, сцеплен с одним из полипептидов, образующих Fc-домен, через СН1-домен и Fv-фрагмент легкой цепи Fab сцеплен с CL-доменом; и Fv-фрагмент тяжелой цепи Fab, образующего CD3-связывающий домен, сцеплен с другим полипептидом, образующим Fc-домен, через CL-домен и Fv-фрагмент легкой цепи Fab сцеплен с СН1-доменом,
(iv) в котором Fv-фрагмент тяжелой цепи одновалентного Fab, образующего CD3-связывающий домен, сцеплен с одним из полипептидов, образующих Fc-домен, через СН1-домен и Fv-фрагмент легкой цепи Fab сцеплен с CL-доменом; и Fv-фрагмент легкой цепи Fab, образующего антигенсвязывающий домен, сцеплен с другим полипептидом, образующим Fc-домен, через СН1-домен и Fv-фрагмент тяжелой цепи Fab сцеплен с CL-доменом,
(v) в котором Fv-фрагмент тяжелой цепи одновалентного Fab, образующего CD3-связывающий домен, сцеплен с одним из полипептидов, образующих Fc-домен, через СН1-домен и Fv-фрагмент легкой цепи Fab сцеплен с CL-доменом; и Fv-фрагмент тяжелой цепи Fab, образующего антигенсвязывающий домен, сцеплен с другим полипептидом, образующим Fc-домен, через CL-домен и Fv-фрагмент легкой цепи Fab сцеплен с СН1-доменом.
4. Полипептидный комплекс по п.2, который содержит:
(1) антигенсвязывающий домен, в котором Fv-фрагмент тяжелой цепи одновалентной структуры Fab, который связывается с антигеном, сцеплен через СН1-домен с одним из полипептидов, образующих Fc-домен, и Fv-фрагмент легкой цепи структуры Fab сцеплен с CL-доменом; и
(2) CD3-связывающий домен, в котором Fv-фрагмент тяжелой цепи одновалентной структуры Fab, который связывается с CD3, сцеплен через СН1 с другим полипептидом, образующим Fc-домен, и Fv-фрагмент легкой цепи структуры Fab сцеплен с CL-доменом;
при этом электрические заряды СН1- и CL-доменов контролируют таким образом, чтобы Fv-фрагмент тяжелой цепи антигенсвязывающего домена соединялся с Fv-фрагментом легкой цепи антигенсвязывающего домена или Fv-фрагмент тяжелой цепи CD3-связывающего домена соединялся с Fv-фрагментом легкой цепи CD3-связывающего домена.
5. Полипептидный комплекс по п.4, в котором
(i) аминокислотный остаток в СН1-домене, сцепленный с Fv-фрагментом тяжелой цепи CD3-связывающего домена, имеет такой же тип электрического заряда, что и аминокислотный остаток в CL-домене, сцепленный с Fv-фрагментом антигенсвязывающего домен; и
в котором аминокислотный остаток в СН1-домене, сцепленный с Fv-фрагментом тяжелой цепи CD3-связывающего домена, имеет электрический заряд, противоположный заряду аминокислотного остатка в CL-домене, сцепленного с Fv-фрагментом легкой цепи CD3-связывающего домена;
(ii) аминокислотный остаток в CH1-домене, сцепленный с Fv-фрагментом тяжелой цепи антигенсвязывающего домена, имеет такой же тип электрического заряда, что и аминокислотный остаток в CL-домене, сцепленный с Fv-фрагментом легкой цепи CD3-связывающего домена;
и в котором аминокислотный остаток в СН1-домене, сцепленный с Fv-фрагментом тяжелой цепи антигенсвязывающего домена, имеет электрический заряд, противоположный заряду аминокислотного остатка в CL-домене, сцепленного с Fv-фрагментом легкой цепи антигенсвязывающего домена, или
(iii) аминокислотный остаток в СН1-домене, сцепленный с Fv-фрагментом тяжелой цепи CD3-связывающего домена, имеет такой же тип электрического заряда, что и аминокислота в CL-домене, сцепленная с Fv-фрагментом легкой цепи антигенсвязывающего домена, и
аминокислотный остаток в СН1-домене, сцепленный с Fv-фрагментом тяжелой цепи антигенсвязывающего домена, имеет такой же тип электрического заряда, что и аминокислота в CL-домене, сцепленная с Fv-фрагментом легкой цепи CD3-связывающего домена;
и в котором аминокислотный остаток в СН1-домене, сцепленный с Fv-фрагментом тяжелой цепи CD3-связывающего домена, имеет электрический заряд, противоположный заряду аминокислотного остатка в CL-домене, сцепленного с Fv-фрагментом легкой цепи CD3-связывающего домена;
в котором аминокислотный остаток в СН1-домене, сцепленный с Fv-фрагментом тяжелой цепи антигенсвязывающего домена, имеет электрический заряд, противоположный заряду аминокислотного остатка в CL-домене, сцепленного с Fv-фрагментом легкой цепи антигенсвязывающего домена.
6. Полипептидный комплекс по п.5, в котором аминокислотные остатки в СН1- и CL-доменах представляют собой одну, две или большее количество комбинаций аминокислотных остатков, выбранных из группы, включающей комбинации:
(а) аминокислотного остатка в положении 147 (EU-нумерация) в СН1-домене и аминокислотного остатка в положении 180 (EU-нумерация) в CL-домене;
(б) аминокислотного остатка в положении 147 (EU-нумерация) в СН1-домене и аминокислотного остатка в положении 131 (EU-нумерация) в CL-домене;
(в) аминокислотного остатка в положении 147 (EU-нумерация) в СН1-домене и аминокислотного остатка в положении 164 (EU-нумерация) в CL-домене;
(г) аминокислотного остатка в положении 147 (EU-нумерация) в СН1-домене и аминокислотного остатка в положении 138 (EU-нумерация) в CL-домене;
(д) аминокислотного остатка в положении 147 (EU-нумерация) в СН1-домене и аминокислотного остатка в положении 123 (EU-нумерация) в CL-домене; и
(е) аминокислотного остатка в положении 175 (EU-нумерация) в СН1-домене и аминокислотного остатка в положении 160 (EU-нумерация) в CL-домене;
(ж) необязательно содержащий аминокислотный остаток в положении 213 (EU-нумерация) в СН1-домене и аминокислотный остаток в положении 123 (EU-нумерация) в CL-домене любой одной, двух или более комбинаций (а)-(е),
и в котором аминокислотный остаток в СН1-домене имеет электрический заряд, противоположный заряду аминокислотного остатка в CL-домене,
и в котором аминокислотный остаток, имеющий противоположный электрический заряд, выбран из аминокислотного остатка, входящего в любую из групп:
(X) глутаминовая кислота (Е) и аспарагиновая кислота (D); или
(Y) лизин (K), аргинин (R) и гистидин (Н).
7. Полипептидный комплекс по п.6, в котором аминокислотные остатки, имеющие противоположный электрический заряд, представляют собой:
Lys в положении 175 (EU-нумерация) в СН1-домене и Glu в положениях 131, 160 и 180 (EU-нумерация) в CL-домене.
8. Полипептидный комплекс по п.6, в котором аминокислотные остатки, имеющие противоположный электрический заряд, представляют собой:
Glu в положениях 147 и 175 (EU-нумерация) в СН1-домене и Lys в положениях 131, 160 и 180 (EU-нумерация) в CL-домене.
9. Полипептидный комплекс по п.8, в котором аминокислотный остаток в положении 213 (EU-нумерация) в СН1-домене представляет собой Glu и аминокислотный остаток в положении 123 (EU-нумерация) в CL-домене представляет собой Lys.
10. Полипептидный комплекс по п.2, в котором Fc-домен представляет собой любой из Fc-доменов, имеющих SEQ ID NO:23, 24, 25 и 26, в котором аминокислота(ы), образующая(ие) Fc-домен, изменена(ы) в результате мутации, и характеризуется пониженной активностью связывания с Fcγ-рецептором в отношении FcγI, FcγIIA, FcγIIB, FcγIIIA и/или FcγIIIB.
11. Полипептидный комплекс по п.10, в котором Fc-домен содержит любую из указанных ниже аминокислот:
аминокислотную последовательность, простирающуюся от положения 118 до положения 260 (EU-нумерация), которая представляет собой последовательность SEQ ID NO:24; или
аминокислотную последовательность, простирающуюся от положения 261 до положения 447 (EU-нумерация), которая представляет собой последовательность SEQ ID NO:26.
12. Полипептидный комплекс по п.10, в котором в котором Fc-домен содержит мутацию в аминокислотах SEQ ID NO:23, образующих Fc-домен, и аминокислоты, образующие Fc-домен, содержат мутацию в любом из следующих положений: 220, 226, 229, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 264, 265, 266, 267, 269, 270, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 325, 327, 328, 329, 330, 331 и 332 (EU-нумерация).
13. Полипептидный комплекс по п.12, в котором Fc-домен представляет собой Fc-домен, содержащий аминокислотную замену в положении 233, 234, 235, 236, 237, 327, 330 или 331 (EU-нумерация) на аминокислоту, присутствующую в соответствующем положении (EU-нумерация) в соответствующем IgG2 или IgG4.
14. Полипептидный комплекс по п.12, в котором Fc-домен содержит аминокислотную мутацию в положении 234, 235 или 297 (EU-нумерация), и в котором аминокислота(ы) в положении 234, 235 и/или 297 заменена(ы) на аланин.
15. Полипептидный комплекс по п.11, в котором последовательности двух полипептидов, образующих Fc-домен, отличаются друг от друга и в котором аминокислота в положении 349 заменена на цистеин и аминокислота в положении 366 (EU-нумерация) заменена на триптофан в последовательности аминокислотных остатков одного из двух полипептидов, образующих Fc-домен; и в котором аминокислота в положении 356 заменена на цистеин, аминокислота в положении 366 заменена на серин, аминокислота в положении 368 заменена на аланин и аминокислота в положении 407 (EU-нумерация) заменена на валин в последовательности аминокислотных остатков другого полипептида.
16. Полипептидный комплекс по п.11, в котором последовательности двух полипептидов, образующих Fc-домен, отличаются друг от друга и в котором аминокислота в положении 356 (EU-нумерация) заменена на лизин в последовательности аминокислотных остатков одного из двух полипептидов, образующих Fc-домен; аминокислота в положении 4-39 (EU-нумерация) заменена на глутаминовую кислоту в другом полипептиде; и аминокислота в положении 435 (EU-нумерация) заменена на аргинин в последовательности аминокислотных остатков любого из двух полипептидов.
17. Полипептидный комплекс по п.15, в котором последовательность GK удалена в результате делеции из карбоксильных концов двух полипептидов, образующих Fc-домен.
18. Полипептидный комплекс по п.16, в котором последовательность GK удалена в результате делеции из карбоксильных концов двух полипептидов, образующих Fc-домен.
19. Полинуклеотид, кодирующий полипептидный комплекс по одному из пп.1-18.
20. Вектор, содержащий полинуклеотид по п.19.
21. Клетка, содержащая вектор по п.20.
22. Способ получения полипептидного комплекса, включающий культивирование клетки по п.21 и выделение полипептидного комплекса из супернатанта культуры.
23. Терапевтический агент, применяемый при лечении рака, который содержит в качестве действующего вещества полипептидный комплекс по одному из пп.1-18.