Эндогенный ДНК-сенсор sting: анализ изменений экспрессии в популяциях циркулирующих Т-лимфоцитов и опухолевой ткани при раннем раке шейки матки

XXI РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КОНГРЕСС

ТЕЗИСЫ

ОНКОГИНЕКОЛОГИЯ

Материалы и методы. Исследованы активность суперок-сиддисмутазы (СОД), каталазы, глутатионпероксидазы (ГПО), глутатионредуктазы (ГР), глутатионтрансферазы (ГТ), содержание восстановленного глутатиона (ВГ) и малонового диальдегида (МДА) в ткани опухоли, перитуморальной зоны и условно интактной ткани, взятой по линии резекции, у 14 больных первичным плоскоклеточным раком вульвы и 13 больных с локальным рецидивом, возникшим в сроки от 6 месяцев до 7 лет. Для всех больных T1-2N0M0, G1-G2 степень дифференцировки. Больным с рецидивом своевременно было проведено комплексное лечение, соответствующее стадированию процесса.

Результаты. В ткани первичной и рецидивной опухоли выявлено усиление активности СОД, ГПО, ГР и повышение содержания ВГ по сравнению с условно интактной тканью (p<0,05, p<0,01). При этом в первичной опухоли снижен уровень МДА на 43% по сравнению с условно интактной тканью (p<0,05). По сравнению с первичной ткань рецидивной опухоли характеризовалась значительно более низким содержанием ВГ в 2,2 раза, активностью ГПО в 1,7 раза и ГТ в 4,5 раза ниже, при этом МДА было выше, чем в первичной опухоли (p<0,05, p<0,01). В перитуморальной зоне первичной опухоли были увеличены СОД на 71%, ГТ в 2,5 раза и ВГ на 72% по сравнению с условно интактной тканью (p<0,05). В перитуморальной зоне рецидивной опухоли отсутствовали статистически значимые различия в активности СОД, ГТ и в содержании ВГ по сравнению с уровнем в условно интактной ткани, при этом значительно ниже была активность СОД в 2,1 раза и ГТ в 3,0 раза по сравнению с уровнем в перитуморальной зоне первичной опухоли (p<0,05). Заключение. Выявлены различия в работе системы ферментов в перитуморальной зоне первичной и рецидивной опухоли. В целом в рецидивных опухолях выявлены более низкие активность ферментов и содержание ВГ по сравнению с первичными, что может быть результатом адаптации к изменениям биохимического статуса здоровой ткани вульвы (длительно подвергавшейся воздействию в процессах терапии первичной опухоли, восстановлении после лечения и в процессе развития рецидивной опухоли) и отражать метаболические особенности рецидивной опухоли.

Ключевые слова: рак вульвы, рецидив, редокс-баланс, глута-тион-зависимая система, антиоксидантные ферменты.

Эндогенный ДНК-сенсор STING: анализ изменений экспрессии в популяциях циркулирующих Т-лимфоцитов и опухолевой ткани при раннем раке шейки матки

О. В. Курмышкина', П. И. Ковчур', Т. О. Волкова' Место работы: 'Институт высоких биомедицинских технологий, ФГБОУ ВО «Петрозаводский государственный университет», г. Петрозаводск e-mail: studioza@mail.ru

Цель. STING (Stimulator of Interferon Genes) — ключевой компонент врожденной системы противоинфекционной защиты, выполняющий функцию цитозольного сенсора патогенной ДНК. Вовлеченность STING в процессы канцерогенеза представляет собой один из наиболее дискуссионных вопросов ввиду появления новых данных о его роли в важнейших механизмах регуляции пролиферации, выживания и гибели как опухолевых, так и иммунокомпетентных клеток. Вклад STING в регуляцию противоопухолевого иммунитета

рассматривается преимущественно в контексте активации антиген-презентирующих клеток при распознавании ими эндогенной ДНК опухолевых клеток, однако о значении экспрессии STING Т-лимфоцитами при прогрессии опухоли фактически ничего не известно;кроме того, для многих типов рака еще не охарактеризован профиль изменения экспрессии STING в опухолевой ткани. Особенность функционирования STING при развитии вирус-ассоциированного рака связана с тем, что в ходе реализации иммунного ответа STING может получать сигналы как от вирусной ДНК, так и ДНК опухолевых клеток. Цель данного исследования — анализ уровня экспрессии STING в лимфоцитах периферической крови и образцах патологического эпителия пациенток с ранними, доклиническими формами ВПЧ-ассоциирован-ного рака шейки матки (РШМ).

Материалы и методы. С помощью проточной цитофлуо-риметрии и моноклональных анти-STING антител (Clone #723505, R&D Systems) был проведен анализ относительного содержания STING в общей популяции лимфоцитов, фракции Т-лимфоцитов и основных ее субпопуляциях (CD3+CD4+, CD3+CD8+, а также в CD4+CD25+ клетках) в крови пациенток с преинвазивным и микроинвазивным РШМ и здоровых женщин (группа контроля). Для количественной оценки уровня STING использовали показатель относительного прироста интенсивности флуоресценции (Mean Fluorescence Intensity, DMFI) с учетом уровня связывания изотипиче-ского контроля и автофлуореценции указанных Т-клеточ-ных популяций. Уровень мРНК STING в образцах неоплазии и морфологически нормального эпителия, а также монону-клеарной фракции крови (PBMC) определяли с помощью ПЦР «в реальном времени» относительно панели нескольких референсных генов.

Результаты. Содержание STING (DMFI) в CD3+CD4+ и CD3+CD8+лимфоцитах было сопоставимо (как в группе контроля, так и в группе больных), то есть экспрессия STING ассоциирована как с CD4, так и с CD8 Т-клеточ-ным звеном. Однако в группе пациенток с РШМ наблюдалось достоверное (p<0,05) увеличение соотношения DMFI (CD4+CD25+)/DMFI (CD3+CD8+): если в группе контроля, в среднем, это отношение было < 1, то в группе РШМ >1, то есть при РШМ экспрессия STING была более выражена в CD4+CD25+ лимфоцитах, которые могут составлять популяцию регуляторных клеток или активированных Т-хелперов. При этом для общей популяции лимфоцитов обнаружена тенденция к незначительному снижению (p>0,05) доли STING-позитивных клеток (в %) в группе больных, по сравнению с группой контроля; различий в уровне мРНК в PBMC между сравниваемыми группами не зафиксировано. В значительной доле (50%) образцов пре-/микро-инвазивного РШМ выявлено увеличение уровня экспрессии STING относительно нормального цервикального эпителия; в остальных образцах РШМ уровень мРНК STING соответствовал контролю.

Заключение. Таким образом, на начальных этапах развития инвазивного РШМ наблюдаются разнонаправленные (в зависимости от исследуемого компартмента) изменения экспрессии STING, что может быть связано с множественностью его функций. Перераспределение профиля экспрессии STING в различных группах Т-лимфоцитов может указывать на его участие в процессах Т-клеточной активации/супрессии на фоне хронической вирусной инфекции и развития онкопатологии. Работа выполнена при поддержке Российского Научного Фонда (проект № 17-15-01024).

Злокачественные опухоли

www.malignanttumours.org

Том / Vol. 7 № 3 S 1 /2017

Malignant Tumours

www.malignanttumours.org