ПОЛИВАЛЕТНЫЕ И ПОЛИСПЕЦИФИЧНЫЕ GITR-СВЯЗЫВАЮЩИЕ СЛИТЫЕ БЕЛКИ

1. Выделенный полипептид, который связывается по меньшей мере с глюкокортикоид-индуцированным TNFR-родственным белком (GITR) и содержит множество доменов связывания (TBD) с суперсемейством рецепторов фактора некроза опухоли (TNFRSF), где по меньшей мере первый TBD (TBD1) содержит GITR-связывающий домен (GITR-BD), который специфично связывается с GITR.
2. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что каждый из TBD в множестве TBD содержит GITR-BD.
3. Выделенный полипептид по п.2, отличающийся тем, что множество TBD содержит два или более GITR-BD, которые связываются с одним и тем же эпитопом на GITR.
4. Выделенный полипептид по п.2, отличающийся тем, что по меньшей мере два GITR-BD связываются с другим эпитопом на GITR.
5. Выделенный полипептид по любому из пп. 2-4, отличающийся тем, что он содержит по меньшей мере две копии одного и того же GITR-BD.
6. Выделенный полипептид по любому из пп. 2-4, отличающийся тем, что он содержит по меньшей мере три копии одного и того же GITR-BD.
7. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что каждый GITR-BD содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80.
8. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что каждый GITR-BD содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62.
9. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что каждый GITR-BD содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80.
10. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что каждый из TBD в множестве TBD содержит GITR-BD, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80.
11. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что каждый из TBD в множестве TBD содержит GITR-BD, содержащий одну и ту же аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80.
12. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что каждый из TBD в множестве TBD содержит GITR-BD, содержащий одну и ту же аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62.
13. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что каждый из TBD в множестве TBD содержит GITR-BD, содержащий одну и ту же аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80.
14. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что по меньшей мере один из GITR-BD в множестве GITR-BD содержит область 1, определяющую комплементарность (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; область 2, определяющую комплементарность (CDR2), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и область 3, определяющую комплементарность (CDR3), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146 и 150.
15. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что каждый из GITR-BD в множестве GITR-BD содержит область 1, определяющую комплементарность (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; область 2, определяющую комплементарность (CDR2), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и область 3, определяющую комплементарность (CDR3), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146 и 150.
16. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что каждый из GITR-BD в множестве GITR-BD содержит одну и ту же аминокислотную последовательность, которая содержит область 1, определяющую комплементарность (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; область 2, определяющую комплементарность (CDR2), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и область 3, определяющую комплементарность (CDR3), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146 и 150.
17. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что каждый из TBD в множестве TBD функционально связан через линкерный полипептид.
18. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что он содержит домен гетеродимеризации.
19. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что он содержит полипептид Fc-области иммуноглобулина.
20. Выделенный полипептид по п.19, отличающийся тем, что полипептид Fc-области иммуноглобулина содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6.
21. Выделенный полипептид по любому из пп. 1-20, отличающийся тем, что GITR-BD содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
22. Выделенный полипептид по любому из пп. 1-20, отличающийся тем, что каждый TBD в множестве TBD содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
NAR
23. Выделенный полипептид по п.21 или 22, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой scFv, Fab, однодоменное антитело (sdAb), V или VHH.
24. Выделенный полипептид по п.21 или 22, отличающийся тем, что антитело или антигенсвязывающий фрагмент представляет собой sdAb.
25. Выделенный полипептид по п.24, отличающийся тем, что sdAb представляет собой человеческое или гуманизированное sdAb.
NAR
26. Выделенный полипептид по п.24, отличающийся тем, что sdAb представляет собой VHH, V, сконструированный домен VH или сконструированный домен VK.
27. Выделенный полипептид по п.23, отличающийся тем, что sdAb генерируется антитела хрящевой рыбы, содержащего только тяжелую цепь.
28. Выделенный полипептид по любому из пп. 1-27, отличающийся тем, что по меньшей мере один из TBD содержит каркасный белок, не являющийся антителом.
29. Выделенный полипептид по п.28, отличающийся тем, что каркасный белок, не являющийся антителом, представляет собой белок с анкириновыми повторами, дарпин, авимер, антикалин/липокалин, центирин или финомер.
30. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что он является четырехвалентным.
31. Выделенный полипептид по п.30, отличающийся тем, что он содержит две копии слитого белка, который содержит структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc.
32. Выделенный полипептид по п.31, отличающийся тем, что GITR-BD представляет собой последовательность sdAb.
33. Выделенный полипептид по п.31, отличающийся тем, что GITR-BD представляет собой последовательность гуманизированного или полностью человеческого sdAb.
34. Выделенный полипептид по п.31, отличающийся тем, что каждый GITR-BD содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80.
35. Выделенный полипептид по п.31, отличающийся тем, что каждый GITR-BD содержит область 1, определяющую комплементарность (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; область 2, определяющую комплементарность (CDR2), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и область 3, определяющую комплементарность (CDR3), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146 и 150.
36. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что он является шестивалентным.
37. Выделенный полипептид по п.36, отличающийся тем, что он содержит две копии слитого белка, который содержит структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc.
38. Выделенный полипептид по п.36, отличающийся тем, что GITR-BD представляет собой последовательность sdAb.
39. Выделенный полипептид по п.36, отличающийся тем, что GITR-BD представляет собой последовательность гуманизированного или полностью человеческого sdAb.
40. Выделенный полипептид по п.36, отличающийся тем, что каждый GITR-BD содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80.
41. Выделенный полипептид по п.36, отличающийся тем, что каждый GITR-BD содержит область 1, определяющую комплементарность (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; область 2, определяющую комплементарность (CDR2), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и область 3, определяющую комплементарность (CDR3), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146 и 150.
42. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что он содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 81-105.
43. Выделенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 81-105.
44. Выделенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, 95% или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 81-105.
45. Выделенный полипептид по п.44, отличающийся тем, что он содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 81-105.
46. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид по п.44.
47. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п.46.
48. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид по п.44.
49. Способ лечения злокачественного новообразования у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.48.
50. Способ увеличения выживаемости пациента, имеющего злокачественное новообразование, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества полипептида по п.1 или 43 или 44.
51. Способ по п.49 или 50, отличающийся тем, что указанный пациент является человеком.
52. Способ по любому из пп. 49-51, отличающийся тем, что злокачественное новообразование выбрано из группы, состоящей из рака мочевого пузыря, рака молочной железы, рака матки, рака шейки матки, рака яичников, рака предстательной железы, рака яичек, рака пищевода, рака желудочно-кишечного тракта, рака поджелудочной железы, колоректального рака, рака толстой кишки, рака почки, рака головы и шеи, рака легких, рака желудка, герминогенного рака, рака кости, рака печени, рака щитовидной железы, рака кожи, новообразования центральной нервной системы, лимфомы, лейкоза, миеломы, саркомы и рака вирусного происхождения.
53. Способ по п.52, отличающийся тем, что злокачественное новообразование представляет собой метастатическое злокачественное новообразование, рефрактерное злокачественное новообразование или рецидивирующее злокачественное новообразование.
54. Способ ингибирования опухолевого роста у пациента, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества полипептида по п.43 или 44.
55. Способ уменьшения частоты встречаемости внутриопухолевых регуляторных Т-клеток (Treg), индуцирования активации и пролиферации CD8+ Т-клеток, или уменьшения частоты встречаемости клеток Treg и индуцирования активации и пролиферации CD8+ Т-клеток, включающий введение указанному пациенту полипептида по п.43 или 44.
56. Способ по п.55, отличающийся тем, что указанный пациент представляет собой мышь CT26.
57. Применение полипептида по любому из пп. 1-45 для лечения новообразований.
58. Применение полипептида по любому из пп. 1-45 для модуляции иммунных клеток для усиления деструкции опухоли.