Состояние микроциркуляции у крыс с термической травмой под влиянием маточного молочка

СОСТОЯНИЕ МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ У КРЫС С ТЕРМИЧЕСКОЙ ТРАВМОЙ ПОД ВЛИЯНИЕМ МАТОЧНОГО МОЛОЧКА

1 л 7 1

А.Г. Соловьева , Е.В. Крылова , И.И. Непряхина , П.В. Перетягин

1ФГБУ «Приволжский Федеральный медицинский исследовательский центр» Минздрава России, Нижний Новгород, Россия ФГАОУ ВПО «Национальный исследовательский Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского», Нижний Новгород, Россия

Abstract

The work is devoted to study the effect of Royal jelly on the microcirculation during thermal injury in the experiment. The study was carried out on white Wistar rats weighing 180-220 g. The method of laser Doppler flowmetry was used for the study of microcirculation. The decrease of the intensity of microcirculation and the growth rate of indicator bypass was marked in animals with the burn. The results showed that the use of Royal jelly in treatment of thermal injury contributes to the stimulation of active factors (endothelial, neurogenic and myogenic) of regulation of microcirculation, showing a potentiating effect in wound healing.

Key words: thermal injury, microcirculation, Royal jelly

Работа посвящена изучению влияния маточного молочка на состояние микроциркуляции при термической травме в эксперименте. Исследование проведено на белых крысах-самцах линии Wistar массой 180-220 г. Для изучения микроциркуляции использовался метод лазерной допплеровской флоуметрии. У животных со стандартным лечением ожоговотмечено снижение интенсивности микроциркуляции и рост показателя шунтирования. Полученные результаты показали, что использование маточного молочка в комплексном лечении термической травмы способствует стимуляции активных факторов (эндотелиального, нейрогенного и миогенного) регуляции микрокровотока, проявляя потенцирующее действие при заживлении раны.

Ключевые слова: термическая травма, микроциркуляция, маточное молочко

Ожоги являются одним из самых распространенных в мире травматических поражений. Накопленная информация по изменению системы кровообращения при термической травме отражает нарушения центральной гемодинамики и микроциркуляции [1, 2, 6], что диктует необходимость контроля за данными показателями, поиска путей улучшения микроциркуляции ожоговой раны и восстановления общего состояния организма после повреждения.

Теоретическое обоснование получила необходимость применения лечебного питания для коррекции метаболических нарушений у больных с тяжелыми ожогами в виде биологически активных добавок. Известно, что маточное молочко (ММ) обладает выраженным терапевтическим действием, активизируя обмен веществ, стимулируя тканевое дыхание, и используется в качестве дополнительного источника питательных веществ[3, 4, 7-10]. Однако в настоящее время отсутствуют данные о его действии на организм при ожоге, что является сдерживающим фактором его применения для лечения термических поражений.

Целью данной работы явилось изучение влияния маточного молочка на состояние микроциркуляции у крыс с термической травмой.

Материалы и методы исследования

Эксперимент проведен на 28 белых крысах-самцах линии Wistar массой 180220 г. Все животные содержались в стандартных условиях вивария в клетках при свободном доступе к пище и воде на рационе питания, соответствующем нормативам ГОСТа «Содержание экспериментальных животных в питомниках НИИ» (1978).

Сформировано 3 группы животных:

1. Интактная группа - здоровые животные (п=10);

2. Контрольная группа- животные с термической травмой и стандартным лечением(п=10);

3. Опытная группа- животные с термической травмой, получавшие маточное молочко одновременно со стандартным лечением (п=8).

Животным под наркозом (золетил+ксила) наносили ожог ШБ - 1Устепени на предварительно депилированную поверхность спины на площади 20% поверхности тела путём контакта изолированного участка кожи с нагревательным элементом, экспозиция составила 5 секунд.

В контрольной группе животных в течение 10 дней осуществляли стандартное лечение: внутрибрюшинно вводили 1 мл изотонического раствора хлорида натрия и местно применяли мазь «Левомеколь».

Животным опытный группы, аналогично контрольной, проводилась инфузионная терапия (физиологический раствор) и местное лечение, в дополнение к которому ежедневно скармливалось через зонд маточное молочко (100 мг/кг) в виде свежеприготовленного водного раствора. Использовали маточное молочко производства Краснополянской опытной станции пчеловодства НИИ Пчеловодства РАН.

На 11 -ый день животных выводили из эксперимента путем декапитации с предварительной перерезкой сонной артерии под наркозом (золетил + ксила). Исследование микроциркуляции осуществляли методом лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) [5] с помощью программно-аппаратного комплекса «ЛАКК-М» в околораневой зоне до нанесения ожога и на 10-е сутки после травмы.При исследовании микроциркуляции оценивали показатель микроциркуляции (ПМ), отражающий средний уровень перфузии (средний поток эритроцитов) в единице объема ткани за единицу времени. С помощью программных средств проводили «Вейвлет-анализ» (аплитудно-частотный спектр), который позволял после 3-х минутной записи ЛДФ-граммы производить обсчёт медленных и

высокочастотных колебаний кровотока для того, чтобы оценить роль пассивных (пульсовая волна и дыхательная волна) и активных факторов (миогенные, нейрогенные и эндотелиальные колебания) регуляции микрокровотока с вычислением показателя шунтирования микрокровотока (ПШ).

Статистическую обработку данных проводили с использованием программы Statistica 6.0. Достоверность различий между группами оценивали с использованием ^критерия Стьюдента.

Результаты и их обсуждение У крыс контрольной группы методом лазерной доплеровской флоуметрии было выявлено угнетение микроциркуляции на 22% по сравнению со здоровыми животными (рис. 1).

12 7-

6--- - -

4-------

2--- - -

0 -I---,---,---

мнтактная гуппа контроль ММ

Рис. 1. Показатель микроциркуляции при лечении термической травмы маточным молочком (примечание: * - различия статистически значимы по сравнению со

интактной группой (р<0,05)).

эндотелиальные колебания  нейрогенные колебания ЕЭ миогенные колебания

Рис. 2. Активные факторы регуляции микрокровотокапри термической травме после терапии маточным молочком

После применения маточного молочка показатель микроциркуляции нормализовался, статистически не отличаясь от показателей интактной группы. Полученные результаты позволяют говорить о положительном влиянии маточного молочка на показатель микроциркуляции при термической травме, что, вероятно, связано со стимулирующим кроветворение действием маточного молочка, и как следствие, увеличением общего количества клеток крови после его применения.

Анализ активных факторов контроля микроциркуляции выявил стимуляцию эндотелиального и нейрогенного механизмов регуляции просвета и тонуса сосудов при ожоге (рис. 2). При оценке эндотелиальной дисфункции выявлено повышение амплитуды колебаний у животных с термической травмой на 19% по сравнению с интактной группой.

Рис. 3. Пассивные факторы регуляции микрокровотока при термической травме после терапии маточным молочком

Нейрогенные колебания статистически значимо возросли у животных с термической травмой и стандартным лечением на 26% по сравнению со здоровыми крысами, что свидетельствует о снижении периферического сопротивления артериол и усилении кровотока по артериоло-венулярному шунту. В опытной группе под влиянием ММ показатель нейрогенных колебаний нормализовался, составив 70% от уровня контрольной группы.

При стандартном лечении термической травмы отмечена тенденция к угнетению миогенного механизма регуляции просвета и тонуса сосудов. При этом анализ данного фактора контроля регуляции микроциркуляции выявил повышение миогенных колебаний при лечении маточным молочком по сравнению с контрольной группой статистически значимо на 47%. Известно, что маточное молочко вызывает сокращение гладкой мускулатуры кишечника и бронхов, подобно ацетилхолину. Эти эффекты могут быть связаны как с модификацией чувствительности рецепторов гладких мышц, так и с активацией пресинаптических окончаний нейронов интрамуральных ганглиев [3, 4]. Поэтому анализ механизмов вазомоторного эффекта ММ показал, что действие ММ, вероятно, опосредовано его влиянием на гладкую мускулатуру сосудов и может быть результатом изменения уровня метаболитов углеводного обмена - лактата, пирувата и цитрата - в стенках сосудов. В целом показано повышение проницаемости капилляров и снижение артериального давления [3-7].

Анализ пассивных факторов микроциркуляции, отражающих колебания кровотока вне системы микроциркуляции, при термической травме выявил статистически значимое снижение связанной с венулярным звеном дыхательной волны на 24% по сравнению с интактной группой животных (рис. 3). Под влиянием маточного молочка отмечена тенденция к росту амплитуды дыхательной волны на 13% по сравнению с контрольной группой крыс.

Другой пассивный фактор микроциркуляции, пульсовая волна, отражающий приток артериальной крови в микроциркуляторное русло, повысился на 3% при стандартном лечении по сравнению с интактной группой. В опытной группе крыс амплитуда пульсовой волны снизилась на 14% по сравнению с контрольной группой животных (рис. 3). Что в сумме с показателями дыхательной волны свидетельствует о наличии застойных явлений венулярного звена крыс контрольной группы, при этом у животных опытной группы за счет процессов вазодилатации происходит увеличение объемов артериальной крови в микрососудах, препятствуя развитию ишемических процессов.

Показатель шунтирования статистически значимо вырос в контрольной группе на 22% по сравнению с интактной группой (рис. 4), что может быть связано с нарушением проницаемости капилляров, отеком эндотелия и нарушением регуляции гладкой мускулатуры прекапилляров. Следовательно, для перемещения крови из артериального в венозное русло потребовалось формирование дополнительного количества шунтирующих сосудов.

Применение маточного молочка способствовало снижению ПШ по сравнению с контрольной группой животных на 31%. Значение ПШ меньше 1 на фоне применения маточного молочка означает поступление значительного объема крови в нутритивное звено на фоне спазма артериоло-венулярных анастамозов, например, при активации симпатического вазомоторного рефлекса [5].

Рис. 4. Показатель шунтирования при термической травме после терапии маточным молочком (примечание: * - различия статистически значимы по сравнению со интактной группой (р<0,05); ** - различия статистически значимы по сравнению с контрольной группой (р<0,05)).

Заключение

Таким образом, экспериментальная термическая травма у крыс вызывает нарушение всех показателей микроциркуляции и рост количества шунтирующих сосудов в области ожоговой раны. Полученные результаты показали, что использование маточного молочка в комплексном лечении термической травмы способствует нормализации показателя микроциркуляции за счет стимуляции его активных факторов (эндотелиального, нейрогенного и миогенного) и, следовательно, изменяет ситуацию в отношении системы кровообращения на более высоком уровне, способствуя репаративным процессам в области ожога. Улучшение состояния микроциркуляции при термической травме под влиянием

маточного молочка, вероятно, происходит под влиянием птеридиновых соединений и микроэлементов, входящих в его состав и играющих важную роль в кроветворении и некоторых процессах обмена веществ [6].

Список литературы

1. Алексеев А.А., Лавров В.А. Ожоговая болезнь: патогенетические принципы и методы лечения. М: Наука, 1996. 300 с.

2. Гольдзон М.А., Долгих В.Т. Влияние тяжелой термической травмы на сократимость и метаболизм сердца // Общая реаниматология. 2011. Т. 7, №1. С. 11-14.

3. Крылов В.Н., Сокольский С.С. Маточное молочко пчёл. Краснодар: Агропромполиграфист, 2000. 216 с.

4. Крылова Е.В. Пчелиное маточное молочко в апитерапии // Пчеловодство. 2014. №3. С. 60-62.

5. Крупаткин А.И., Сидоров В.В. Функциональная диагностика состояния микроциркуляторно-тканевых систем: Колебания, информация, нелинейность. М.: Книжный дом "ЛИБРОКОМ", 2013. 496 с.

6. Перетягин П.В., Мартусевич А.К., Перетягин С.П. Влияние использования активных форм кислорода на состояние микроциркуляции при моделировании комбинированной термической травмы в эксперименте // Медицинский альманах. 2013. №3. С. 77-79.

7. Сокольский С. С. Производство биологически активных продуктов пчеловодства как решающий фактор оздоровления населения // Передовые технологии в пчеловодстве. Мат. Научно-практической конференции. Рыбное. 2003. С. 141-145.

8. Шнайдер Н.А., Бахтина Е.А., Камоза Т.Л., Козулина Е.А. Роль маточного молочка в лечении больных дистрофической миотонией // Альманах современной науки и образования. 2008. № 5. C. 147-150.

9. Yuri K., Kanematsu S., Asai S. et al. Identification of a Novel Hypocholesterolemic Protein, Major Royal Jelly Protein 1, Derived from Royal Jelly // Plos one. 2014. №9. Р. 1-13.

10. Popescu O., Liviu A. Marghitas, Bobis O. et al. Sugar Profile and Total Proteins Content of Fresh Royal Jelly // Bulletin UASVM Animal Science and Biotechnologies. 2009. №10. Р. 66.