Методы определения внеклеточной ДНК крови

16

Вестник АГИУВ №2, 2012

Методы определения внеклеточной ДНК крови

Орадова А.Ш.

Казахский Национальный медицинский университет им. С.Д. Асфендиярова, г. Алматы.

УДК: 616.24-002-022-07

Установлено, что небольшие количества ДНК обнаруживаются вне клеток, прежде всего в плазме крови животных и человека. Интерес к внеклеточным ДНК неизмеримо возрос после того, как выяснилось, что количество ее может существенно возрастать при ряде заболеваний, что возможно учитывать как ранний признак соответствующих патологий. Циркулирующая ДНК может появляться в кровотоке в результате гибели ядросодержащих клеточных элементов, созревания эритроцитов и тромбоцитов, а также активной секреции нуклеиновых кислот во внеклеточное пространство. При беременности уже на первом месяце в кровотоке матери появляется фетальная ДНК, обнаружение которой открывает новые возможности для неинвазивной пренатальной диагностики.

Одним из простых объяснений появления внеклеточных нуклеиновых кислот в крови могут быть постоянно идущие в организме процессы отмирания клеток и деградации их хроматина. Таким образом, в первую очередь источником внеклеточной ДНК крови может быть некроз или апоптоз ядросодержащих клеточных элементов крови или эндотелиальных клеток. Апоптоз — наиболее широко представленная форма программируемой клеточной смерти, которая приводит к ежедневной гибели части клеток. Примерный подсчет показывает, что в организме человека в результате апоптоза деградирует 1-10 г ДНК в сутки. Апоптотические клетки и апоптотические тельца поглощаются и перевариваются макрофагами, дендритными или эндотелиальными клетками.

В норме некроз распространен значительно меньше, чем апоптоз. Некроз характеризуется конденсацией хроматина, увеличением размера клетки с ее последующим лизисом. Поскольку в норме некротические клетки в основном не обнаруживаются, этот тип клеточной гибели не может обеспечивать появление значительной части ДНК в плазме, хотя он часто наблюдается при развитии опухолей, вероятно, как результат недостаточной васкуляризации. Для определения концентрации внеклеточной ДНК в плазме/ сыворотке крови использовали наиболее достоверный метод количественной ПЦР Литературные данные позволяют сделать вывод, что в норме концентрация циркулирующей ДНК не должна превышать 50-60 нг/мл плазмы/сыворотки, а увеличение концентрации до 100 нг/мл и выше может указывать на возможное развитие патологии [1].

Выявлено значительное увеличение концентрации внДНК у недоношенных новорожденных и у новорожденных с перинатальной патологией, описано влияние внДНК на изменения иммунного статуса новорожденных при перинатальных поражениях.

В 1997 году впервые было продемонстрировано присут-

Цаншщ жасушадан тыс ДНК уйгарымтщ adicmepi

А.Ш. Орадова.

Эдебиеттщ шояуы цанда днц аныцтауга жасушадан тыс арналган. Олардыц прогностиялыц жэне диагностикалыц мацыздылыгы эр тYрлi патологиялыц куйлерде корсетыген. Ерекше мэн перинатал патологиясында днц аныцтау жасушадан тыс алады.

Методы определения внеклеточной ДНК крови

А.Ш. Орадова.

Обзор литературы посвящен определению внеклеточных ДНК в крови. Показана их прогностическая и диагностическая значимость при различных патологических состояниях. Особое значение имеет определение внеклеточных ДНК в перинатальной патологии.

Methods Of Determination Of Extracellular DNA Of Blood

A.Sh.Oradova.

The literature review it is denoted the definition of extracellular DNA in the blood. It is shown their predictive and diagnostic value in various pathological conditions. Particular importance is the definition of extracellular DNA in perinatal pathology.

ствие фетальной внеклеточной ДНК в плазме и сыворотке беременных женщин. Данное открытие способствовало интенсивному изучению плодной ДНК в качестве потенциального маркера для неинвазивной пренатальной диагностики. Метод измерения концентрации внДНК плода в крови матери основывался на обнаружении последовательности Y-хромосомы (SRY) методом количественной ПЦР в реальном времени. Повышение концентрации внеклеточной фетальной ДНК в материнской циркуляции происходит вследствие возможной редукции выведения ДНК из организма матери, причиной чего могут быть различные физиологические изменения функций органов выделения женщины в течение беременности. Было показано, что чувствительность определения локусов Y-хромосомы до 7-й недели беременности методом обычной ПЦР составляет 95%, а при использовании ПЦР в реальном времени пол эмбриона со 100% точностью можно определить уже на 5-й неделе развития [2].

Список литературы

1. Hacker H J., Zhang W, Tokus M., Bock T., Schroder C.H. Patterns of circulating hepatitis В virus serum nucleic acids during lamivudine therapy. Ann. N. Y. Acad. 2004. Sci. 1022, 271-281.

2. Федченко В.И., Гурьев CO., Семенова Н.В. Неинвазивная пре-натальная ПЦР диагностика пола. Биомед. химия 2005; 51: 527-535.