МЫШЬЯКОРГАНИЧЕСКИЕ СОЕДИНЕНИЯ И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ РАКА
ORGANOARSENIC COMPOUNDS AND METHODS OF TREATING CANCER

Перекрестная ссылка на родственные заявки
По данной заявке испрашивается приоритет по предварительной заявке на патент США № 61/189511, поданной 20 августа 2008 г., которая включена в данное описание путем ссылки во всей своей полноте.
Область изобретения
Настоящее изобретение в общем относится к области противораковой терапии. Более конкретно, оно относится к органическим соединениям мышьяка и к способам их применения для лечения рака, такого как лейкоз и солидные опухоли.
Предпосылки создания изобретения
Несмотря на прогресс в лечении лейкоза, наиболее взрослые пациенты с лейкозом все еще умирают в результате прогрессирования заболевания. Триоксид мышьяка, неорганическое соединение, было одобрено для лечения пациентов при рецидивном или трудноизлечимом остром промиелоцитном лейкозе (APL), и была проведена его оценка в качестве терапии при других типах лейкоза. Предварительные данные для Китая и недавний опыт в США, однако, также предполагают некоторую роль для триоксида мышьяка при других видах гематологического рака. По этой причине активность триоксида мышьяка в качестве антилейкемического агента в настоящее время исследуется для многих типов лейкоза. Хотя результаты выглядят благоприятствующими с точки зрения степени ответной реакции для некоторых типов лейкоза, которые были исследованы, проблему представляет системная токсичность триоксида мышьяка (Soignet et al., 1999; Wiernik et al., 1999; Geissler et al., 1999; Rousselot et al., 1999).
Была проведена оценка противолейкемической активности (WO9924029, EP1002537) для единственного органического соединения мышьяка (ОМ), получаемого для применения человеком, меларсопрола. К сожалению, данное соединение является чрезмерно токсичным для пациентов с лейкозом в концентрациях, используемых для лечения трипаносомоза. Соответственно, существует необходимость выявления производных мышьяка, которые можно было бы использовать для лечения гематологических злокачественных образований и рака в общем, которые обладают аналогичной или большей активностью и более низкой токсичностью по сравнению с триоксидом мышьяка.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к мышьякорганическим соединениям, обладающим противораковыми свойствами. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, имеющим структуру формулы (I), или их фармацевтически приемлемой соли
где
X представляет собой S или Se;
1-2
W представляет собой O, S, или (R)(R), где при каждом появлении R независимо представляет собой H или Cалкил;
n представляет собой целое число от 0 до 20;
1
2
1-30
R и R независимо представляют собой Cалкил;
3
6
1-10
0-6
Rпредставляет собой -H, Cалкил или Cалкил-COOR;
3'
1-10
1-10
1-10
R представляет собой H, амино, циано, галоген, арил, аралкил, гетероарил, гетероаралкил, карбоксил, Cалкил, Cалкенил или Cалкинил, предпочтительно H;
4
3
1-10
1-10
R представляет собой -OH, -H, -CH, амино, -OC(O)Cаралкил, -OC(O)Cалкил, -OC(O)арил или глутаминовый заместитель;
5
1-10
1-10
1-10
R представляет собой -OH, циано, Cалкокси, амино, O-аралкил, -OC(O)Cаралкил, -OC(O)Cалкил, -OC(O)арил или глициновый заместитель; и
6
1-10
R представляет собой H или Cалкил.
В некоторых вариантах осуществления органические соединения мышьяка представляют собой соединения, имеющие структуру формулы (II)
(II)
где
X представляет собой S или Se, предпочтительно S;
1-2
W представляет собой O, S, или (R)(R), где при каждом появлении R независимо представляет собой H или Cалкил, предпочтительно O;
Z представляет собой CH или N, предпочтительно N;
1
2
1
2
1-10
R и R независимо представляют собой Cалкил, предпочтительно R и R независимо выбирают из метила, этила, пропила и изопропила; и
5
1-10
1-10
1-10
R представляет собой -OH, циано, Cалкокси, амино, O-аралкил, O-аралкил, -OC(O)Cаралкил, -OC(O)Cалкил, -OC(O)арил или глициновый заместитель, предпочтительно OH;
6
1-10
R представляет собой H или Cалкил;
7
6
0-6
1-6
1-6
R выбирают из галогена, -OH, Cалкил-COOR, Cалкила, Cалкокси, амино, амидо, циано и нитро;
m представляет собой целое число от 0 до 4, предпочтительно 0.
Другие задачи, отличительные особенности и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из следующего подробного описания. Однако следует понимать, что подробное описание и конкретные примеры, хотя и указывают предпочтительные варианты осуществления изобретения, приведены только для иллюстрации, поскольку различные изменения и модификации в рамках сути и объема изобретения будут очевидны для специалистов в данной области из данного подробного описания.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к ряду органических соединений мышьяка.
В некоторых вариантах осуществления органические соединения мышьяка по настоящему изобретению имеют структуру формулы (I) или ее фармацевтически приемлемой соли
где
X представляет собой S или Se, предпочтительно S;
1-2
W представляет собой O, S, или (R)(R), где при каждом появлении R независимо представляет собой H или Cалкил, предпочтительно O или (R)(R);
n представляет собой целое число от 0 до 20;
1
2
1-30
R и R независимо представляют собой Cалкил;
3
6
1-10
0-6
R представляет собой -H, Cалкил или Cалкил-COOR;
3'
1-10
1-10
1-10
R представляет собой H, амино, циано, галоген, арил, аралкил, гетероарил, гетероаралкил, карбоксил, Cалкил, Cалкенил или Cалкинил, предпочтительно H;
4
3
1-10
1-10
R представляет собой -OH, -H, -CH, амино, -OC(O)Cаралкил, -OC(O)Cалкил, -OC(O)арил или глутаминовый заместитель;
5
1-10
1-10
1-10
R представляет собой -OH, циано, Cалкокси, амино, O-аралкил, -OC(O)Cаралкил, -OC(O)Cалкил, -OC(O)арил или глициновый заместитель; и
6
1-10
R представляет собой H или Cалкил, предпочтительно H.
1-2
В некоторых вариантах осуществления W представляет собой (R)(R), и при каждом появлении R независимо представляет собой H или Cалкил. В некоторых таких вариантах осуществления при каждом появлении R представляет собой H.
В некоторых вариантах осуществления n представляет собой 0 или 1, предпочтительно 1. В некоторых вариантах осуществления n представляет собой целое число от 2 до 20, предпочтительно от 5 до 20 или от 9 до 14.
1
2
11-30
12-28
13-25
14-22
15-20
В некоторых вариантах осуществления каждый из R и R независимо представляет собой Cалкил, предпочтительно Cалкил, Cалкил, Cалкил, или даже Cалкил.
1
2
1
2
1-10
В некоторых вариантах осуществления R и R независимо представляют собой Cалкил, предпочтительно R и R независимо выбирают из метила, этила, пропила и изопропила.
3
6
3
6
6
6
6
6
6
6
0-6
2
2
2
3
2
3
2
2
2
1-10
В некоторых вариантах осуществления R представляет собой -H или Cалкил-COOR. В некоторых таких вариантах осуществления R выбирают из -COOR, -CHCOOR, -CHCHCOOR, -CH(CH)COOR, -CH(CHCH)COOR или -CHCHCHCOOR, где R представляет собой Cалкил.
3
3
1-10
В некоторых вариантах осуществления R представляет собой Cалкил. В некоторых предпочтительных из таких вариантов осуществления R выбирают из метила, этила, пропила и изопропила, предпочтительно метила.
3'
3'
1-10
1-10
1-10
1-10
1-10
В некоторых вариантах осуществления R выбирают из амино, циано, галогена, арила, аралкила, гетероарила, гетероаралкила, карбоксила, Cалкила, Cалкенила и Cалкинила. В таких предпочтительных вариантах осуществления R выбирают из арила, аралкила, гетероарила, гетероаралкила, карбоксила, Cалкенила и Cалкинила.
4
4
3
1-10
1-10
1-10
1-10
В некоторых вариантах осуществления R выбирают из -OH, -H, -CH, -OC(O)Cаралкила, -OC(О)Cалкила и -OC(O)арила. В некоторых таких вариантах осуществления R выбирают из -OC(O)Cаралкила, -OC(O)Cалкила и -OC(O)арила.
4
4
2
В некоторых вариантах осуществления R представляет собой аминогруппу. В некоторых таких вариантах осуществления R представляет собой NH.
4
В некоторых вариантах осуществления R представляет собой глутаминовый заместитель.
5
1-10
1-10
1-10
В некоторых вариантах осуществления R выбирают из циано, Cалкокси, амино, O-аралкила, -OC(O)Cаралкила, -OC(O)Cалкила и -OC(O)арила.
1
2
3
3'
4
5
1
2
1-10
1-10
1-10
1-10
В некоторых вариантах осуществления X представляет собой S, W представляет собой (R)(R), где при каждом появлении R представляет собой H, n представляет собой 1, R и R независимо выбраны из метила, этила, пропила и изопропила, R и Rпредставляют собой H, R выбран из OH, -OC(O)Cаралкила, -OC(O)Cалкила и -OC(O)арила, и R выбран из OH, -OC(O)Cаралкила, -OC(O)Cалкила и -OC(O)арила. В некоторых таких вариантах осуществления R и R являются одинаковыми и вместе выбраны из метила, этила, пропила и изопропила.
1
2
3
6
3'
4
5
3
6
4
5
6
В некоторых вариантах осуществления X представляет собой S, W представляет собой O, n представляет собой 1, оба R и R представляют собой метил, R выбирают из H и COOR, R представляет собой H, и R выбирают из H и глутаминового заместителя, и R выбирают из OH и глицинового заместителя. В некоторых таких вариантах осуществления R представляет собой COOR, R представляет собой H, R представляет собой OH и R представляет собой H.
В некоторых вариантах осуществления соединения формулы (I) выбирают из
или их фармацевтически приемлемой соли.
В некоторых вариантах осуществления соединения формулы (I) выбирают из
или их фармацевтически приемлемой соли.
В некоторых вариантах осуществления соединения формулы (I) выбирают из
или их фармацевтически приемлемой соли.
В некоторых вариантах осуществления соединения формулы (I) выбирают из
В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I) представляет собой
В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I) представляет собой
или его фармацевтически приемлемую соль.
Если в соединении присутствует хиральный центр, все изомерные формы входят в объем изобретения. При рассмотрении стереохимии используются правила Канна-Ингольда-Прелога для определения абсолютной стереохимии. Эти правила описаны, например, в Organic Chemistry, Fox и Whitesell; издатели Jones и Bartlett, Boston, MA (1994); раздел 5-6, стр. 177-178, указанный раздел включен в данное описание путем ссылки.
В некоторых вариантах осуществления органические соединения мышьяка имеют структуру формулы (II)
X представляет собой S или Se, предпочтительно S;
1-2
W представляет собой O, S или (R)(R), где при каждом появлении R независимо представляет собой H или Cалкил, предпочтительно O;
Z представляет собой CH или N;
1
2
1
2
1-10
R и R независимо представляют собой Cалкил, предпочтительно R и R независимо выбраны из метила, этила, пропила и изопропила; и
5
1-10
1-10
1-10
R представляет собой -OH, циано, Cалкокси, амино, O-аралкил, O-аралкил, -OC(O)Cаралкил, -OC(O)Cалкил, -OC(O)арил или глициновый заместитель, предпочтительно OH;
6
1-10
R представляет собой H или Cалкил;
7
6
0-6
1-6
1-6
R выбирают из галогена, -OH, Cалкил-COOR, Cалкила, Cалкокси, амино, амидо, циано и нитро;
m представляет собой целое число от 0 до 4, предпочтительно 0.
1-2
В некоторых вариантах осуществления W представляет собой (R)(R), и при каждом появлении R независимо представляет собой H или Cалкил. В некоторых таких вариантах осуществления при каждом появлении R представляет собой H.
5
1-10
1-10
1-10
В некоторых вариантах осуществления R выбирают из циано, Cалкокси, амино, O-аралкила, -OC(O)Cаралкила, -OC(O)Cалкила и -OC(O)арила.
1
2
5
1
2
1
2
В некоторых вариантах осуществления X представляет собой S, W представляет собой O, R и R независимо выбраны из метила, этила, пропила и изопропила, и R представляет собой OH. В некоторых таких вариантах осуществления R и R являются одинаковыми и вместе выбраны из метила, этила, пропила и изопропила. В некоторых таких вариантах осуществления оба R и Rпредставляют собой метил.
В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой N.
В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой CH.
В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (II) выбирают из
В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (II) представляет собой
В других вариантах осуществления органические соединения мышьяка представляют собой соединения, имеющие структуру формулы (III)
где
X представляет собой S или Se, предпочтительно S;
1-2
W представляет собой O, S или (R)(R), где при каждом появлении R независимо представляет собой H или Cалкил, предпочтительно O;
1
2
1
2
1-10
R и R независимо представляют собой Cалкил, предпочтительно R и R независимо выбраны из метила, этила, пропила и изопропила; и
5
1-10
1-10
1-10
R представляет собой -OH, циано, Cалкокси, амино, O-аралкил, O-аралкил, -OC(O)Cаралкил, -OC(O)Cалкил, -OC(O)арил или глициновый заместитель, предпочтительно OH;
6
1-10
R представляет собой H или Cалкил;
7
6
0-6
1-6
1-6
R выбирают из галогена, -OH, Cалкил-COOR, Cалкила, Cалкокси, амино, амидо, циано и нитро;
m представляет собой целое число от 0 до 4, предпочтительно 0.
1-2
В некоторых вариантах осуществления W представляет собой (R)(R), и при каждом появлении R независимо представляет собой H или Cалкил. В некоторых таких вариантах осуществления при каждом появлении R представляет собой H.
5
1-10
1-10
1-10
В некоторых вариантах осуществления R выбирают из циано, Cалкокси, амино, O-аралкила, -OC(O)Cаралкила, -OC(O)Cалкила и -OC(O)арила.
1
2
5
1
2
1
2
В некоторых вариантах осуществления X представляет собой S, W представляет собой O, R и R независимо выбраны из метила, этила, пропила и изопропила, и R представляет собой OH. В некоторых таких вариантах осуществления R и R являются одинаковыми и вместе выбраны из метила, этила, пропила и изопропила. В некоторых таких вариантах осуществления оба R и Rпредставляют собой метил.
В некоторых предпочтительных вариантах осуществления соединение формулы (II) имеет следующую структуру
Изобретение далее относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение формулы (I), формулы (II) или формулы (III), или его фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция представляет собой водный раствор, который имеет рН больше, чем примерно 5, предпочтительно в диапазоне от примерно 5 до примерно 8, более предпочтительно в диапазоне от примерно 5 до примерно 7.
Другой аспект изобретения относится к способу лечения рака, включающему введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), формулы (II) или формулы (III).
Изобретение также относится к применению соединения формулы (I), формулы (II) или формулы (III), или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения рака.
В некоторых вариантах осуществления рак выбирают из солидных опухолей, таких как опухоль мозга, легких, печени, селезенки, почки, лимфатического узла, тонкого кишечника, поджелудочной железы, клеток крови, костного мозга, толстой кишки, желудка, молочной железы, эндометрия, предстательной железы, яичек, яичника, центральной нервной системы, кожи, головы и шеи, пищевода или костного мозга, или гематологического рака, такого как лейкоз, острый промиелоцитный лейкоз, лимфома, множественная миелома, миелодисплазия, миелопролиферативное заболевание или рефрактерный лейкоз. В некоторых таких вариантах осуществления рак представляет собой лейкоз, выбранный из острого или хронического лейкоза.
В некоторых таких вариантах осуществления рак представляет собой лимфому, выбранную из неходжкинской лимфомы или лимфомы Ходжкина. В некоторых вариантах осуществления неходжкинскую лимфому выбирают из периферической Т-клеточной лимфомы (PTCL), диффузной В-крупноклеточной лимфомы и лимфомы краевой зоны. В некоторых вариантах осуществления лимфома Ходжкина представляет собой нодулярный склероз Ходжкина.
Таким образом, в другом аспекте изобретение включает способ лечения рака у пациента, включающий введение пациенту композиции, включающей соединение формулы I, формулы II или формулы III, или фармацевтической композиции, как описано выше. Терапевтически эффективное количество соединения может составлять 0,1-1000 мг/кг, 1-500 мг/кг или 10-100 мг/кг. В конкретных вариантах осуществления способ может включать ежедневное введение композиции. Дополнительно подразумевается, что способ может включать множественное введение. Способ может включать ежедневное введение соединения, например, посредством инъекции. Также можно использовать альтернативные пути и способы введения, приведенные в данном описании, и способ введения главным образом будет зависеть от типа и локализации рака. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает введение пациенту одного или нескольких дополнительных агентов. Дополнительный агент может представлять собой все-транс-ретиноевую кислоту, 9-цис ретиноевую кислоту, Am-80 или аскорбиновую кислоту. Также подразумевается применение другой вспомогательной противораковой терапии, такой как химиотерапия, лучевая терапия, генная терапия, гормональная терапия и другие виды терапии рака, известные в данной области, в сочетании со способами по настоящему изобретению.
Предполагаются разнообразные способы введения, включая местное, системное, прямое введение или перфузию. Такие способы включают введение посредством инъекции, пероральным путем, внутривенное, внутриартериальное, внутриопухолевое, введение в кровеносную систему опухоли, внутрибрюшинное, внутритрахейное, внутримышечное, эндоскопическое, внутрь пораженного органа, подкожное, внутрикожное, наружное, назальное, буккальное, слизистое, аногенитальное, ректальное и тому подобные.
Определения
x-y
0
2-y
2-y
Термин "Cалкил" относится к замещенным или незамещенным насыщенным углеводородным группам, включая линейные алкильные и разветвленные алкильные группы, которые содержат от x до y углеродов в цепи, включая галогеналкильные группы, такие как трифторметил и 2,2,2-трифторэтил и т.д. Cалкил указывает водород, когда группа находится в концевом положении, связь, если она является внутренней. Термины "Cалкенил" и "Cалкинил" относятся к замещенным или незамещенным ненасыщенным алифатическим группам, аналогичным по длине и возможности замещения описанным выше алкилам, но содержащие по крайней мере одну двойную или тройную связь, соответственно.
1-6
1-6
Термин "Cалкокси" относится к Салкильной группе, содержащей присоединенный к ней кислород. Иллюстративные алкоксильные группы включают метокси, этокси, пропокси, трет-бутокси и тому подобные. Термин «простой эфир» относится к двум углеводородам, ковалентно связанным с помощью кислорода. Соответственно, заместитель алкила, который истолковывает алкил как простой эфир, представляет собой или имеет сходство с алкокси.
1-6
1-6
Термин "Cаралкил", как он использован в данном описании, относится к Cалкильной группе, замещенной арильной группой.
Термин "арил", как он использован в данном описании, включает 5-, 6- и 7-членные замещенные или незамещенные ароматические группы в виде единственного кольца, в котором каждый атом кольца представляет собой углерод. Термин "арил" также включает полициклические кольцевые системы, имеющие два или более циклических кольца, в которых два или более углеродов являются общими для двух смежных колец, где по меньшей мере одно из колец является ароматическим, например, другие циклические кольца могут представлять собой циклоалкилы, циклоалкенилы, циклоалкинилы, арилы, гетероарилы и/или гетероциклы. Арильные группы включают бензол, нафталин, фенантрен, фенол, анилин и тому подобные.
Выражение «фармацевтически приемлемый» используется в данном описании для упоминания тех лигандов, материалов, композиций и/или дозированных форм, которые, в рамках законного медицинского суждения, являются подходящими для применения в контакте с тканями организма человека и животных без избыточной токсичности, раздражения, аллергической ответной реакции или других проблем или осложнений, соответствуют разумному соотношению польза/риск.
Термин "профилактика" является общепринятым в данной области, и когда используется по отношению к состоянию, такому как локальный рецидив (например, боль), заболевание, такое как рак, комплексу синдромов, таких как сердечная недостаточность, или к любому другому медицинскому состоянию, он является хорошо понятным в данной области и включает введение композиции, которая снижает частоту или замедляет появление симптомов медицинского состояния у субъекта по сравнению с субъектом, который не получает данной композиции. Таким образом, профилактика рака включает, например, снижение числа обнаруживаемых раковых опухолей в группе пациентов, получающих профилактическое лечение по сравнению с не получающей лечения контрольной группой и/или замедление появления обнаруживаемых раковых растущих новообразований в группе, получающей лечение, по сравнению с не получающей лечения группой, например, в статистическом и/или клинически значимом количестве. Профилактика инфекции включает, например, снижение числа диагностики инфекции у получающей лечение группы относительно контрольной группы, не получающей лечения, и/или замедление начала появления симптомов инфекции у получающей лечение группы относительно контрольной группы, не получающей лечения. Профилактика боли включает, например, снижение степени боли или, альтернативно, задержку появления болевых ощущений, испытываемых субъектами, у получающей лечение группы относительно контрольной группы, не получающей лечения.
Термин "профилактическое или терапевтическое" лечение является общепринятым в данной области и включает введение хозяину одной или нескольких рассматриваемых композиций. Если ее вводят до клинического проявления нежелательного состояния (например, заболевания или другого нежелательного состояния хозяина-животного), то лечение является профилактическим (т.е. оно защищает хозяина от развития нежелательного состояния), тогда как если ее вводят после проявления нежелательного состояния, лечение является терапевтическим (т.е. оно предназначено для уменьшения, облегчения или стабилизации существующего нежелательного состояния или его побочных действий).
Термин "замещенный" относится к фрагментам, имеющим заместители, заменяющие водород у одного или более атомов углерода цепи. Будет понятно, что «замещение» или «замещенный чем-либо» включает явственное условие, что такое замещение происходит в соответствии с допустимой валентностью замещаемого атома и заместителя и что замещение приводит к стабильному соединению, например к такому, которое не претерпевает спонтанного превращения, такого как перегруппировка, циклизация, элиминирование и т.д. Как использовано в данном описании, подразумевается, что термин «замещенный» включает все допустимые заместители в органических соединениях. В широком аспекте, допустимые заместители включают ациклические и циклические, разветвленные и неразветвленные, карбоциклические и гетероциклические, ароматические и неароматические заместители органических соединений. Допустимые заместители могут включать один или несколько заместителей и быть одинаковыми или разными для подходящих органических соединений. В целях данного изобретения гетероатомы, такие как азот, могут иметь водородные заместители и/или любые допустимые заместители описанных здесь органических соединений, которые удовлетворяют валентностям гетероатомов. Заместители могут включать, например, галоген, гидроксил, карбонил (такой как карбоксил, алкоксикарбонил, формил или ацил), тиокарбонил (такой как сложный тиоэфир, тиоацетат или тиоформиат), алкоксил, фосфорил, фосфат, фосфонат, фосфинат, амино, амидо, амидин, имин, циано, нитро, азидо, сульфгидрил, алкилтио, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидо, сульфонил, гетероциклил, аралкил или ароматический или гетероароматический фрагмент. Специалистам в данной области будет понятно, что фрагменты, выступающие в качестве заместителей в углеводородной цепи, сами могут быть замещенными, если это является подходящим.
Выражение «терапевтически эффективное количество» соединения по отношению к рассматриваемому способу лечения относится к количеству соединения(ий) в препарате, которое, при введении в качестве части желаемого режима дозировки (млекопитающему, предпочтительно человеку), облегчает симптом, улучшает состояние или замедляет появление болезненных состояний в соответствии с клинически приемлемыми стандартами для заболевания или состояния, подвергаемого лечению, или с косметической целью, например, при разумном соотношении польза/риск, приемлемом для любого медицинского лечения.
Как использовано в данном описании, термин «режим» относится к заранее определенному расписанию применения терапевтических агентов для лечения рака. Соответственно, когда терапевтический агент вводят «по отдельности», режим не включает применение другого терапевтического агента для лечения рака.
В некоторых вариантах осуществления соединение вводят ежедневно в течение пяти дней каждые четыре недели. В некоторых вариантах осуществления соединение вводят один раз в день в течение пяти дней каждые четыре недели, предпочтительно в течение пяти последовательных дней. В некоторых альтернативных вариантах осуществления соединение вводят в течение двух дней в неделю на протяжении трех недель с последующей одной неделей перерыва. В некоторых таких вариантах осуществления соединение вводят в течение двух последовательных дней или двух не следующих друг за другом дней (например, с одним, двумя, тремя или даже четырьмя днями перерыва между дозами) в течение недели на протяжении трех недель с последующей одной неделей перерыва. В некоторых вариантах осуществления данные протоколы могут повторяться неограниченно.
2
2
2
В некоторых вариантах осуществления такое дозирование проводят посредством внутривенного введения. В некоторых альтернативных вариантах осуществления такое дозирование проводят посредством перорального введения. В некоторых таких вариантах осуществления соединение вводят внутривенно в дозе примерно 200-420 мг/м или примерно 250-350 мг/м. В некоторых вариантах осуществления соединение вводят в дозе примерно 200, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400 или даже примерно 420 мг/м. В некоторых вариантах осуществления соединение вводят перорально в общей суточной дозе от 300 до примерно 700 мг или примерно от 400 до примерно 600 мг. В некоторых вариантах осуществления соединение вводят в общей дневной дозе в 300, примерно 400, примерно 500, примерно 600 или даже примерно 700 мг.
Как использовано в данном описании, термин «лечить» или «лечение» включает обращение, уменьшение или остановку симптомов, клинических признаков или лежащей в их основе патологии состояния таким образом, чтобы улучшить или стабилизировать состояние субъекта.
Токсичность неорганических относительно органических соединений мышьяка
in vivo
Применение триоксида мышьяка ограничено его токсичностью. Мышьякорганические соединения (МОС), с другой стороны, намного менее токсичны, в той степени, что метилирование неорганических соединений мышьяка  с образованием МОС рассматривается как реакция детоксикации. Такие МОС, как монометиларсиновая кислота и диметиларсиновая кислота, представляют собой первичные метаболиты неорганических соединений мышьяка (Hughes et al., 1998). Неорганические соединения мышьяка, включая триоксид мышьяка, оказывают различное действие на многие системы органов, включая сердечно-сосудистую систему, желудочно-кишечный тракт, почки, кожу, нервную систему и кровь. Неорганические соединения мышьяка являются особенно токсичными для печени, вызывая инфильтрацию, центральный некроз и цирроз (IARC, 1980: ACGIH, 1991; Beliles et al., 1994; Goyer et al., 1996). В настоящее время имеются достаточные доказательства, что неорганические соединения мышьяка являются кожными и легочными канцерогенами для людей (Goyer et al, 1996).
5+
3+
in vivo
50
50
Токсичность данного соединения мышьяка связана со скоростью его выведения из организма и со степенью его аккумулирования в ткани (Beliles et al., 1994). В общем, токсичность увеличивается в следующей последовательности <As <As(включая триоксид мышьяка) <арсин. В отличие от неорганических соединений мышьяка о случаях смерти или серьезных случаях токсичности МОС в литературе не сообщалось. В результате, у млекопитающих метилирование неорганических соединений мышьяка рассматривается как механизм детоксикации вследствие более низкой токсичности метилированных МОС и их быстрого выведения и низкой степени удерживания (Beliles et al, 1994; Goyer et al., 1996). Хорошим примером является то, что диметиларсиновая кислота, органическое соединение, является главным метаболитом в моче, выделяемой большинством млекопитающих после воздействия неорганического соединения мышьяка, включая триоксид мышьяка. В исследованиях токсичности  на мышах после внутрибрюшинного введения триоксида мышьяка LD (доза, при которой 50% животных умирает вследствие острой токсичности) составляла 10 мг/кг (Investigator's Brochure, 1998), тогда как при введении диметиларсиновой кислоты LD составляла 500 мг/кг (MSDS, 1998).
Лечение рака
Органические соединения мышьяка по настоящему изобретению можно использовать для лечения различных видов рака, включая все солидные опухоли и все гематологические виды рака, включая лейкоз, лимфому, множественную миелому, миелодисплазию или миелопролиферативные нарушения. Органические соединения мышьяка также можно использовать для лечения гематологических видов рака, которые стали устойчивыми к другим видам лечения.
В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой лимфому, выбранную из неходжкинской лимфомы и лимфомы Ходжкина. В некоторых вариантах осуществления неходжкинскую лимфому выбирают из периферической Т-клеточной лимфомы (PTCL), диффузной В-крупноклеточной лимфомы и лимфомы краевой зоны. В некоторых вариантах осуществления лимфома Ходжкина представляет собой нодулярный склероз Ходжкина.
Лимфома представляет собой тип рака крови, который происходит, когда лимфоциты - белые кровяные клетки, которые помогают защищать организм от инфекции и заболеваний, начинают вести себя аномально. Аномальные лимфоциты могут делиться быстрее нормальных клеток или они могут жить дольше, чем им положено. Лимфома может развиваться во многих частях организма, включая лимфатические узлы, селезенку, костный мозг, кровь или другие органы. Существюет два основных типа лимфом: лимфома Ходжкина и неходжкинская лимфома (NHL).
Периферические Т-клеточные лимфомы представляют собой опухоли, состоящие из зрелых Т-клеток (не В-клеток). Периферические Т-клеточные лимфомы, такие как ангиоиммунобластная Т-клеточная лимфома или анапластическая крупноклеточная лимфома могут возникать в лимфатических узлах, тогда как другие, такие как подкожная панникулитоподобная Т-клеточная лимфома, назальная NK/T-клеточная лимфома или T-клеточная лимфома кишечника могут возникать за пределами лимфатических узлов.
Крупноклеточные лимфомы представляют собой наиболее общий тип лимфом. Данные виды рака могут возникать в лимфатических узлах или за их пределами, включая желудочно-кишечный тракт, яички, щитовидную железу, кожу, молочную железу, центральную нервную систему или кости, и могут быть локализованными или обобществленными (распределены в организме).
Опухоли краевых зон представляют собой безболезненные В-клеточные лимфомы и могут существовать либо вне лимфатических узлов (внеузловые) или в лимфатических узлах (узловые). Они подразделяются на две категории в зависимости от локализации лимфомы. Связанная со слизистой лимфоидная ткань лимфом (также называемые MALT или MALTомы) представляет собой формы лимфом краевых зон, которые поражают места вне лимфатических узлов (такие как желудочно-кишечный тракт, глаза, щитовидная железа, слюнные железы, легкие или кожа). Узловые В-клеточные лимфомы краевых зон являются нетипичными и иногда называются моноцитоидными В-клеточными лимфомами.
При нодулярном склерозе Ходжкина вовлеченные лимфатические узлы содержат области, состоящие из клеток Рида-Штернберга, смешанных с нормальными белыми кровяными клетками. Лимфатические узлы часто содержат заметные рубцовые ткани, по этой причине заболевание получило название нодулярного склероза (рубцевание). Данный подтип является наиболее типичным, составляя от 60 до 75% всех случаев лимфомы Ходжкина.
Фармацевтические композиции
Получение фармацевтической композиции, которая содержит по меньшей мере одно органическое производное мышьяка или дополнительный активный ингредиент, будет известно специалистам в данной области, исходя из настоящего описания, как это проиллюстрировано в справочнике Remington's Pharmaceutical Sciences, 18-е издание, Mack Printing Company, 1990, включенном в данное описание путем ссылки. Кроме того, будет понятно, что для введения животному (например, человеку) препараты должны отвечать требованиям стерильности, пирогенности, общей безопасности и стандартам чистоты, как это требуется биологическими стандартами Управления по контролю за продуктами и лекарствами США.
Как использовано в данном описании, термин «фармацевтически приемлемый носитель» включает любой и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, поверхностно-активные вещества, антиоксиданты, консерванты (например, противомикробные агенты, противогрибковые агенты), изотонические агенты, замедляющие всасывание агенты, соли, консерванты, лекарственные средства, стабилизаторы лекарственных средств, гели, связующие вещества, эксципиенты, дезинтегрирующие агенты, лубриканты, подсластители, ароматизаторы, красители, подобные вещества и их комбинации, как будет известно обычному специалисту в данной области (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18-е издание, Mack Printing Company, 1990, стр. 1289-1329, включенном в данное описание путем ссылки). До тех пор, пока любой обычный носитель является совместимым с активным ингредиентов, подразумевается его применение в терапевтических или фармацевтических композициях.
Органические соединения мышьяка можно объединять с различными типами носителей в зависимости от того, будут ли они вводиться в твердом, жидком или аэрозольном виде и необходимости стерильности для таких путей введения, как инъекция. Соединения по настоящему изобретению можно вводить внутривенно, внутрикожно, внутриартериально, внутрибрюшинно, внутрь пораженных тканей, внутричерепно, внутрисуставно, внутрь предстательной железы, внутриплеврально, внутритрахеально, внутриназально, внутривлагалищно, внутриректально, наружно, внутрь опухоли, внутримышечно, внутрибрюшинно, подкожно, подконъюнктивно, внутривезикулярно, через слизистые оболочки, внутриперикардиально, внутрипуповинно, внутриокулярно, перорально, наружно, локально, путем инъекции, инфузии, непрерывной инфузии, локализованного опрыскивания непосредственно клеток-мишеней с помошью катетера, через зонд, через лаваж, в липидных композициях (например, липосомы) или с помощью других способов или любых комбинаций из вышеуказанного, как должно быть известно обычному специалисту в данной области (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18-е издание, Mack Printing Company, 1990, включенном в данное описание путем ссылки).
Фактическое дозируемое количество композиции по настоящему изобретению, вводимой пациенту, может быть определено с использованием физических и психологических факторов, таких как вес тела, тяжесть состояния, тип заболевания, подвергаемого лечению, предшествующие или сопутствующие терапевтические вмешательства, идиопатия пациента и пути введения. Практикующий врач, ответственный за введение, будет, в любом случае, определять концентрацию активного ингредиента(ов) в композиции и подходящую дозу(ы) для индивидуального субъекта.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции могут включать, например, по меньшей мере примерно 0,1% органического соединения мышьяка. В других вариантах осуществления, активное соединение может составлять примерно от 2% до примерно 75% по весу от веса единичной формы, или от примерно 25% до примерно 60%, например, и в любом производном от этих значений диапазоне. В других неограничивающих примерах дозировка может также включать от примерно 0,1 мг/кг/веса тела, 0,5 мг/кг/веса тела, 1 мг/кг/веса тела, примерно 5 мг/кг/веса тела, примерно 10 мг/кг/веса тела, примерно 20 мг/кг/веса тела, примерно 30 мг/кг/веса тела, примерно 40 мг/кг/веса тела, примерно 50 мг/кг/веса тела, примерно 75 мг/кг/веса тела, примерно 100 мг/кг/веса тела, примерно 200 мг/кг/веса тела, примерно 350 мг/кг/веса тела, примерно 500 мг/кг/веса тела, примерно 750 мг/кг/веса тела до примерно 1000 мг/кг/веса тела или более на одно введение и любой получаемый из них диапазон. В неограничивающих примерах диапазона, получаемого из перечисленных выше численных значений, основываясь на описанных выше числах, можно вводить диапазон от примерно 10 мг/кг/веса тела до примерно 100 мг/кг/веса тела и т.д.
В любом случае композиция может содержать различные антиоксиданты для замедления окисления одного или нескольких компонентов. Дополнительно можно провести профилактику воздействия микроорганизмов с помощью консервантов, таких как различные антибактериальные и противогрибковые агенты, включая, но не ограничиваясь указанным, парабены (например, метилпарабены, пропилпарабены), хлорбутанол, фенол, сорбиновую кислоту, тимерозал или их комбинации.
Органические соединения мышьяка могут быть введены в состав композиции в виде свободного основания, нейтральной или солевой формы. Фармацевтически приемлемые соли включают соли, образованные свободными карбоксильными группами с неорганическими основаниями, такими как, например, гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа; или такими органическими основаниями, как изопропиламин, триметиламин, гистидин или прокаин.
В вариантах осуществления, где композиция находится в жидком виде, носитель может представлять собой растворитель или дисперсионную среду, включая, но не ограничиваясь указанным, воду, этанол, многоатомный спирт (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль, и т.д.), жиры (например, триглицериды, растительные масла, липосомы) и их комбинации. Подходящая текучесть может поддерживаться, например, за счет применения покрытий, таких как лецитин; путем поддержания требуемого размера частиц посредством диспергирования в носителях, таких как, например, жидкий многоатомный спирт или жиры; за счет применения поверхностно-активных веществ, таких как, например, гидроксипропилцеллюлоза или за счет комбинации таких способов. Во многих случаях предпочтительным будет включение в состав изотонических агентов, таких как, например, сахара, хлорид натрия или их сочетание.
Стерильные инъекционные растворы получают путем введения активных соединений в требуемом количестве в подходящий растворитель с различными другими ингредиентами, перечисленными выше, как это потребуется, с последующей стерилизацией путем фильтрования. Обычно дисперсии получают путем введения различных стерильных активных ингредиентов в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и/или другие ингредиенты. В случае стерильных порошков для получения стерильных инъекционных растворов, суспензий или эмульсии, предпочтительным способом получения являются методы вакуумной сушки или лиофилизации, что позволяет получать порошок активного ингредиента плюс любой дополнительный желательный ингредиент из предварительно стерилизованной фильтрованием содержащей их жидкой среды. Жидкая среда может быть подходящим образом забуферена, при необходимости, и жидкому разбавителю первоначально приданы изотонические свойства перед инъекцией с использованием достаточного количества физиологического раствора или глюкозы. Также предполагается получение высококонцентрированных композиций для непосредственного введения, где в качестве растворителя предполагается применение ДМСО для обеспечения чрезвычайно быстрой проницаемости, доставки высоких концентраций активных агентов к небольшой площади.
Композиции должны быть стабильными в условиях изготовления и хранения и предохраняться от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Таким образом, предпочтительные композиции имеют рН больше примерно 5, предпочтительно от примерно 5 до примерно 8, более предпочтительно от примерно 5 до примерно 7. Будет понятно, что загрязнение эндотоксином должно поддерживаться как минимум на безопасном уровне, например, менее чем 0,5 нг/мг белка.
В конкретных вариантах осуществления пролонгированное поглощение инъекционной композиции может быть достигнуто путем применения в композициях агентов, замедляющих поглощение, таких как, например, моностеарат алюминия, желатин или их сочетание.
Комбинированная терапия
В одном из аспектов по данному изобретению органические соединения мышьяка можно использовать в комбинации с другим агентом или методом лечения, предпочтительно другим лечением рака. Лечение с использованием органического соединения мышьяка может предшествовать или проводиться после лечения другим агентом с интервалами, колеблющимися от минут до недель. В вариантах осуществления, где другие агенты и экспрессионные конструкции применяются к клетке по отдельности, обычно следует обеспечивать, чтобы между временами каждой доставки не проходил значительный промежуток времени, поскольку агент и экспрессионная конструкция все еще будут способны оказывать преимущественно объединенное действие на клетку. Например, в таких случаях подразумевается, что можно осуществлять контактирование клетки, ткани или организма с двумя, тремя, четырьмя или более способами воздействия по существу одновременно (т.е. в течение менее примерно минуты) с органическим соединением мышьяка. В других аспектах один или несколько агентов можно вводить в пределах примерно 1 минуты, примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 20 минут, примерно 30 минут, примерно 45 минут, примерно 60 минут, примерно 2 часов, примерно 3 часов, примерно 4 часов, примерно 5 часов, примерно 6 часов, примерно 7 часов примерно 8 часов, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов, примерно 12 часов, примерно 13 часов, примерно 14 часов, примерно 15 часов, примерно 16 часов, примерно 17 часов, примерно 18 часов, примерно 19 часов, примерно 20 часов, примерно 21 часа, примерно 22 часов, примерно 23 часов, примерно 24 часов, примерно 25 часов, примерно 26 часов, примерно 27 часов, примерно 28 часов, примерно 29 часов, примерно 30 часов, примерно 31 часа, примерно 32 часов, примерно 33 часов, примерно 34 часов, примерно 35 часов, примерно 36 часов, примерно 37 часов, примерно 38 часов, примерно 39 часов, примерно 40 часов, примерно 41 часа, примерно 42 часов, примерно 43 часов, примерно 44 часов, примерно 45 часов, примерно 46 часов, примерно 47 часов, до примерно 48 часов или более перед и/или после введения органического соединения мышьяка. В некоторых других вариантах осуществления агент можно вводить в пределах от примерно 1 дня, примерно 2 дней, примерно 3 дней, примерно 4 дней, примерно 5 дней, примерно 6 дней, примерно 7 дней, примерно 8 дней, примерно 9 дней, примерно 10 дней, примерно 11 дней, примерно 12 дней, примерно 13 дней, примерно 14 дней, примерно 15 дней, примерно 16 дней, примерно 17 дней, примерно 18 дней, примерно 19 дней, примерно 20, до примерно 21 дней перед и/или после введения органического соединения мышьяка. В некоторых ситуациях может оказаться желательным значительно продлить временной период лечения, однако с несколькими неделями (например, примерно 1, примерно 2, примерно 3, примерно 4, примерно 5, примерно 6, примерно 7 или примерно 8 недель или более) промежутка между соответствующими введениями.
Можно использовать различные комбинации, органическое соединение мышьяка обозначено "A" и вторичный агент, который может представлять собой любой другой терапевтический агент, обозначен как B":
Введение терапевтических композиций по настоящему изобретению пациенту будет проводиться в соответствии с общими протоколами введения химиотерапевтических лекарственных средств, принимая во внимание токсичность, если она имеется. Ожидается, что циклы лечения будут повторяться при необходимости. Также подразумевается, что различные стандартные терапии или дополнительные виды терапии рака, а также хирургическое вмешательство можно применять в комбинации в описанным мышьяковистым агентом. Данные виды терапии включают, но не ограничиваются указанным, химиотерапию, лучевую терапию, иммунотерапию, генную терапию и хирургическое вмешательство. Некоторые виды дополнительной терапии рака описаны в следующем разделе.
Химиотерапия
Лечение рака также включает множество комбинированных терапий на основе как химического, так и основанного на облучении лечения. Комбинированные химиотерапии включают, например, цисплатин (CDDP), карбоплатин, прокарбазин, меклоретамин, циклофосфамид, камптотецин, ифосфамид, мелфалан, хлорамбуцил, бусулфан, нитрозомочевину, дактиномицин, даунорубицин, доксорубицин, блеомицин, пликомицин, митомицин, этопозид (VP 16), тамоксифен, ралоксифен, связывающие эстрогеновые рецепторы агенты, таксол, гемцитабин, навелбин, ингибиторы фарнезил-протеинтрансферазы, трансплатин, 5-фторурацил, винкристин, винбластин и метотрексат или любой аналог или производный вариант из вышеуказанного.
Лучевая терапия
Другие факторы, которые могут вызвать повреждение ДНК и интенсивно использовались, включают то, что общеизвестно как гамма-лучи, рентгеновские лучи и/или направленная доставка радиоизотопов в опухолевые клетки. Также подразумеваются другие формы факторов, повреждающих ДНК, такие как микроволновое излучение и УФ-облучение. Наиболее вероятно, что все данные факторы вызывают широкий диапазон повреждения ДНК, предшественников ДНК, при репликации и восстановлении ДНК и сборки и поддержание хромосом. Диапазон дозировки для рентгеновского облучения колеблется от дневных доз от 50 до 200 рентген в течение продолжительного периода времени (3-4 недели) до отдельных доз 2000-6000 рентген. Диапазон дозировки для радиоизотопов меняется в широком диапазоне и зависит от периода полураспада изотопа, силы и типа испускаемого излучения и поглощения неопластическими клетками. Термин «контактирование» или «подвергание воздействию», применительно к клетке, использован в данном описании для описания процесса, посредством которого терапевтическая конструкция и химиотерапевтический или радиотерапевтический агент доставляются к клетке-мишени или размещаются в непосредственном соседстве с клеткой-мишенью. Для достижения лизиза или стасиса клетки, оба агента доставляют к клетке в объединенном количестве, достаточном для того, чтобы убить клетку или предотвратить ее деление.
Иммунотерапия
Иммунотерапия, в общем, основана на применении иммуно-эффекторных клеток и молекул для нацеливания и разрушения раковых клеток. Иммунный эффектор может представлять собой, например, антитело, специфическое по отношению к какому-либо маркеру на поверхности опухолевой клетки. Антитело само по себе может выступать в качестве эффектора в терапии, или оно может привлекать другие клетки для действительно эффективного лизиса клеток. Антитело также может быть конъюгировано с лекарственным средством или токсином (химиотерапевтический препарат, радионуклеотид, цепь рицина А, токсин холеры, пертуссиновый токсин и т.д.) и служить только в качестве направляющего агента. Альтернативно, эффектор может представлять собой лимфоцит, несущий поверхностную молекулу, которая взаимодействует непосредственно или косвенно с опухолевой клеткой-мишенью. Различные эффекторные клетки включают цитотоксичные Т-клетки и клетки NK.
erb
Таким образом, иммунотерапию можно использовать в качестве части комбинированной терапии в сочетании с генной терапией. Общий подход к комбинированной терапии обсуждается ниже. В общем, опухолевая клетка должна нести некоторый маркер, который отвечает за целеуказание, т.е. не присутствует в большинстве других клеток. Существует множество опухолевых маркеров, и любые из них могут быть подходящими для целеуказания в контексте настоящего изобретения. Обычные опухолевые маркеры включают карциноэмбрионный антиген, простата-специфический антиген, антиген, связанный с мочевой опухолью, фетальный антиген, тирозиназу (p97), gp68, TAG-72, HMFG, сиалилсодержащий антиген Льюиса, MucA, MucB, PLAP, эстрогеновый рецептор, ламининовый рецептор,  B и p155.
Генная терапия
Еще в одном другом варианте осуществления вторая линия лечения представляет собой вторичную генную терапию, в которой терапевтический полинуклеотид вводят до, после или в одно и то же время с первым терапевтическим агентом. Доставка терапевтического агента в сочетании с вектором, кодирующим генный продукт, будет оказывать комбинированный антигиперпролиферативный эффект на ткани-мишени.
Хирургия
Приблизительно 60% раковых пациентов будет подвергаться хирургическому вмешательству какого-либо типа, которое включает профилактическое, диагностическое или определяющее стадию заболевания, излечивающее или паллиативное хирургическое вмешательство. Излечивающее хирургическое вмешательство представляет собой лечение рака, которое можно использовать в сочетании с другой терапией по настоящему изобретению, химиотерапией, лучевой терапией, гормональной терапией, генной терапией, иммунотерапией и/или альтернативными видами терапии. Излечивающее хирургическое вмешательство включает резекцию, при которой вся или часть раковой ткани физически удаляется, иссекается оперативно и/или разрушается. Резекция опухоли относится к физическому удалению по меньшей мере части опухоли. В дополнение к резекции опухоли лечение с помощью хирургического вмешательства включает лазерную хирургию, криохирургию, электрохирургию и микроскопически контролируемую хирургию (хирургия Моса). Дополнительно подразумевается, что настоящее изобретение можно использовать в сочетании с удалением поверхностного рака, предраковых опухолей или дополнительного количества нормальной ткани.
Примеры
Следующие примеры включены в описание для демонстрации предпочтительных вариантов осуществления изобретения. Специалистами в данной области будет принято во внимание, что методы, описанные в следующих примерах, представляют собой методы, раскрываемые авторами изобретения для его удачного практического осуществления, и, соответственно, они могут рассматриваться как составляющие предпочтительные варианты практического осуществления. Однако в свете настоящего описания специалистам в данной области будет понятно, что можно сделать многочисленные изменения в конкретных вариантах осуществления и при этом получить такой же или аналогичный результат, не отступая от сути и объема изобретения.
Пример 1
Синтез S-диметиларсинотиоянтарной кислоты (MER1), S-диметиларсиносалициловой кислоты (SAL1) и S-(диметиларсино)глутатиона (SGLU1)
MER-1: Меркаптоянтарную кислоту, 4,5 г, помещали в 100 мл глима (1,2-диметоксиэтан) в круглодонной колбе емкостью 250 мл. Добавляли по каплям четыре мл диметилхлорарсина (0,03 моль) с последующим добавлением 4 мл диэтиламина (0,04 моль), опять по каплям. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 часов при комнатной температуре. Образовывался белый осадок гидрохлорида диэтиламина, и его отделяли фильтрованием. Объем раствора MER1 в глиме значительно уменьшали путем упаривания при пониженном давлении. Белые кристаллы MER1 отделяли фильтрованием и промывали холодной дистиллированной водой. Бесцветный кристаллический продукт затем перекристаллизовывали из смеси этанол-вода до постоянной температуры плавления, составлявшей 150°С.
SAL-1: В колбу емкостью 100 мл помещали 5 г 2-меркаптобензойной кислоты (тиосалициловая кислота), 75 мл глима, 5 мл диметилхлорарсина и 5 мл диэтиламина. Смесь нагревали при кипении в течение 1 часа в атмосфере азота и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Осадок хлоргидрата диэтиламина отделяли фильтрованием. Фильтрат медленно упаривали при пониженном давлении до выделения кристаллов продукта. Упаренный раствор, содержащий продукт, охлаждали на льду и холодный раствор фильтровали. Кристаллы продукта перекристаллизовывали из этанола по постоянной температуры плавления, составлявшей 97°C.
2
SGLU-1: Глутатион (14,0 г, 45,6 ммоль) быстро перемешивали в глиме по мере прибавления по каплям диметилхлорарсина (6,5 г, 45,6 ммоль) добавляли. Затем к суспензии добавляли пиридин (6,9 г, 91,2 ммоль) и смесь впоследствии нагревали до кипения с обратным холодильником. Нагрев сразу же убирали и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Выделение образовавшегося нерастворимого твердого вещества и его перекристаллизация из этанола давали продукт 4 в виде комплекса с гидрохлоридом пиридина (75% выход): т.пл. 115-118°C; ЯМР (DO) δ 1,35 (с, 6H), 1,9-4,1 (мультиплеты, 10H), 7,8-9,0 (м, 5H); масс-спектр (m/e) 140, 125, 110, 105, 79, 52, 45, 36. Данное вещество не использовали в описанных здесь примерах, но его использовали в биологических анализах, как описано в публикации Banks C.H., et al. (J. Med. Chem. (1979) 22: 572-575), включенной в данное описание путем ссылки во всей своей полноте.
Пример 2
Альтернативный синтез S-диметиларсиноглутатиона
В следующей методике описан способ получения S-диметиларсиноглутатиона. Использованные количества могут быть увеличены или уменьшены с равным успехом, если соблюдаются соответствующие соотношения.
Диметилхлорарсин
3
2
3
2
1
Диметиларсиновую кислоту, (CH)As(O)OH, получали от Luxembourg Chemical Co., Тель-Авив, Израиль. К продукту прилагалось указание его чистоты, и он поставлялся как имеющий 99,7% чистоту. Диметиларсиновую кислоту растворяли в смеси вода-соляная кислота до рН 3. Через раствор пропускали поток диоксида серы в течение примерно одного часа. Диметилхлорарсин отделялся в виде тяжелого бесцветного масла. Две жидкие фазы, вода/(CH)AsCl, отделяли с использованием делительной воронки. Диметилхлорарсин экстрагировали диэтиловым эфиром и эфирный раствор сушили над безводным сульфатом натрия. Высушенный раствор переносили в перегонную колбу, которую медленно нагревали для упаривания эфира. Оставшуюся жидкость, диметилхлорарсин, очищали перегонкой. Собирали фракцию, кипящую при 106-109°С. Продукт, бесцветное масло, имел простой резонанс в спектре Н ЯМР при 1,65 м.д.
S-Диметиларсиноглутатион
В колбе емкостью 500 мл, 7 г глутатиона использовали в том виде, как он был получен от компании Aldrich Chemical Co., чистота 98%, и растворяли в 250 мл 1,2-диметоксиэтана. К данному раствору добавляли 3,3 г диметилхлорарсина. Затем проводили добавление 3,5 г пиридина (перегнанный после сушки над пластинками NaOH). Раствор нагревали при кипении с обратным холодильником в течение одного часа, после чего его перемешивали при комнатной температуре в течение трех часов.
о
Целевой продукт, S-диметиларсиноглутатион, отделяли в виде комплекса с гидрохлоридом пиридина. Твердое вещество удаляли фильтрованием и тщательно промывали с использованием 1,2-диметоксиэтана. Затем его сушили над безводным хлоридом кальция в вакууме. Выход S-диметиларсиноглутатиона-гидрохлорида пиридина составлял 10,3 г, и он имел температуру плавления 135-140С. Данное вещество использовали в биологическом анализе, описанном выше в примерах 2-12.
Пример 3
Синтез S-диметиларсиноглутатиона (GLU), не содержащего гидрохлорида пиридина
Диметиларсиноглутатион получают с использованием адаптированной методики Chen (Chen, G. C, et al. Carbohydrate Res. (1976) 50: 53-62), содержание данной публикации включено в данное описание путем ссылки во всей своей полноте. Кратко, дитиобис(диметиларсиноглутамин) растворяют в дихлорметане в атмосфере азота. К раствору добавляют по каплям тетраметилдиарсин и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре в атмосфере азота и затем оставляют на воздухе на 1 час. Смесь затем упаривают досуха и остаток промывают водой и сушат, получая неочищенное твердое вещество, которое перекристаллизовывают из метанола, получая S-диметиларсиноглутатион.
Пример 4
Третий синтез S-диметиларсиноглутатиона (GLU), не содержащего гидрохлорида пиридина
S-диметиларсиноглутатион получают с использованием способа Cullen и др. (J. Inorg. Biochem. (1984) 21: 179-194), содержание публикации включено в данное описание путем ссылки во всей своей полноте. Кратко, диметиларсиновую кислоту и глутатион растворяют в воде в атмосфере азота и перемешивают. Полученный раствор перемешивают в течение 12 часов и затем упаривают досуха при пониженном давлении без нагревания, получая твердое вещество, которое экстрагируют холодным метанолом. Метанольный раствор затем упаривают досуха при пониженном давлении и полученное твердое вещество перекристаллизовывают из смеси метанол/вода, собирают и сушат, получая S-диметиларсиноглутатион.
Пример 5
Получение диметилхлорарсина
3
2
3
2
3
2
3
2
3-Горлую круглодонную колбу емкостью 3 л оборудовали механической мешалкой, дополнительной воронкой, термометром, вводом азота и осушительной трубкой и помещали в баню. В колбу загружали какодиловую кислоту (250 г) и концентрированную HCl (825 мл) и перемешивали до растворения. После полного растворения какодиловой кислоты раствор нагревали до 40°С. К перемешиваемому раствору добавляли по каплям гипофосфористую кислоту (HPO) (50% раствор, 250 г), поддерживая температуру реакционной смеси между 40-50°C. После добавления примерно 50 мл HPO раствор становится мутным и температура реакционной смеси быстро возрастает, в это время использовали внешнюю охлаждающую баню для поддержания температуры в интервале между 40-50°С. Добавление HPOпродолжали, поддерживая температуру реакции в желаемом диапазоне. После завершения добавления HPO реакционную смесь выдерживали при 40-45°С в течение 15 минут при перемешивании. Внешнюю баню удаляли и продолжали перемешивание. Реакционную смесь перемешивали, давая возможность охладиться до 30°С. После того как температура реакционной смеси достигала 30°С или меньше, добавляли хлористый метилен (300 мл) и полученную смесь перемешивали для экстракции продукта в хлористый метилен. Перемешивание останавливали и слоям давали возможность разделиться в течение ½ часа. Слои отделяли и слой хлористого метилена сушили над безводным сульфатом натрия при перемешивании в течение, как минимум, 1 часа. Смесь можно оставить в атмосфере азота максимум на 72 часа. Органическую смесь фильтровали для удаления сульфата натрия и хлористый метилен удаляли отгонкой при атмосферном давлении. Образующийся в остатке неочищенный продукт перегоняли в атмосфере азота через колонку 8" Vigreux или набитую колонку. Собирали фракцию продукта с температурой кипения 104-106°С при атмосферном давлении.
Получение S-диметиларсиноглутатиона
2
5-литровую трехгорлую круглодонную колбу, оборудовали комплексом для механического перемешивания, термометром, дополнительной воронкой, входом азота и осушительной трубкой и помещали в охлаждающую баню. В полиэтиленовую емкость загружали глутатион-восстановленный (200 г) и деионизированную воду (2 л) и перемешивали в атмосфере азота для растворения всего твердого вещества. Смесь фильтровали для удаления какого-либо нерастворившегося вещества и фильтрат переносили в 5-литровую колбу. При перемешивании добавляли этанол, 200 градусов, (2 л) и прозрачный раствор охлаждали до 0-5°С с использованием бани лед/метанол. Добавляли пиридин (120 г) с последующим добавлением по каплям MeAsCl (120 г) в течение как минимум 1 часа. Реакционную смесь перемешивали при 0-5°С в течение не менее 2 часов, затем удаляли охлаждающую баню и оставляли смесь нагреваться до комнатной температуры в атмосфере азота при перемешивании. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи (>15 часов) при комнатной температуре в атмосфере азота, за это время могло выпадать в осадок белое твердое вещество. Реакционную смесь концентрировали, получая суспензию (жидкую или твердую) при 35-45°C с использованием масляного вакуумного насоса, получая белый твердый остаток. Удаляли максимально возможное количество воды с последующими двумя упариваниями в виде азеотропа с этанолом для удаления последних следов воды. Белый твердый осадок суспендировали в этаноле, 200 град. (5 л) в атмосфере азота при комнатной температуре в течение ночи. Белое твердое вещество отфильтровывали и промывали этанолом, 200 град. (2×500 мл), а затем ацетоном, ACS (2×500 мл). Полученное твердое вещество переносили в поддоны для сушки и сушили в вакуумной печи в течение ночи при 25-35°C с использованием вакуума масляного насоса, получая не содержащий гидрохлорида пиридиния S-диметиларсиноглутатион в виде белого твердого вещества с температурой плавления 189-190°C.
Получение дозированной формы S-диметиларсиноглутатиона
о
Раствор S-диметиларсиноглутатиона в воде для инъекций (WFI) доводили до pH 5,0-5,5 с использованием NaOH или HCl. Полученный раствор затем фильтровали через 0,2-микронный фильтр Sartopore 2 и для распределения из расчета 150 мг на пузырек из боросиликатного стекла типа 1 (Wheaton) использовали заполняющее устройство Flexicon. Наполненные пузырьки затем подвергали лиофилизации в лиофилизаторном блоке Hull 48, первоначально загружая пузырьки на полку и опуская температуру до -40°С при скорости охлаждения 0,5°С в минуту. Температуру на полке затем поддерживали при -40°С в течение 300 минут. Затем применяли вакуум в 75 микрон и температуру на полке постепенно повышали до 5°С со скоростью 0,1°С в минуту. Температуру на полке затем выдерживали при 5С в течение 1000 минут, затем применяли вакуум в 50 микрон. Температуру на полке постепенно повышали до 25°С со скоростью 0,1°С в минуту и выдерживали при 25°С в течение 720 минут. Температуру на полке затем снижали до 5°С и выдерживали до окончательной стадии укупоривания, в этот момент давление в камере возвращали к 640000 мм рт.ст. (Торр) с использованием азота и пузырьки закрывали серыми бутиловыми крышками для лиофилизованных продуктов и окончательно завальцовывали алюминиевым изолирующим слоем, получая S-диметиларсиноглутатион в виде от белого до не совсем белого осадка с содержанием влаги 1,8%. Общее время в данном способе лиофилизации составляло 47 часов. Влагосодержание лиофилизованного S-диметиларсиноглутатиона затем восстанавливали с использованием 2,0 мл стерильной воды для получения прозрачного, бесцветного раствора с конечной концентрацией 75±7,5 мг S-диметиларсиноглутатиона в мл и pH от 4,5 до 6,0.
Пример 6
Получение диметилхлорарсина (DMCA)
2
2
2
2
4
В 3-горлую круглодонную колбу (500 мл), оборудованную механической мешалкой, вводом азота, термометром и ледяной баней загружали какодиловую кислоту (33 г, 0,23 моль) и концентрированную соляную кислоту (67 мл). В отдельной колбе готовили раствор SnCl.2HO (54 г, 0,239 моль) в концентрированной соляной кислоте (10 мл). Раствор SnCl.2HO добавляли к раствору какодиловой кислоты в растворе HCl в атмосфере азота, поддерживая температуру реакционной смеси в диапазоне между 5°С и 10°С. После завершения добавления ледяную баню удаляли и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1 часа. Реакционную смесь переносили в делительную воронку и собирали верхний слой (органический). Нижний слой экстрагировали дихлорметаном (ДХМ) (2×25 мл). Объединенный органический экстракт промывали 1н HCl (2×10 мл) и водой (2×20 мл). Органический экстракт сушили над MgSOи ДХМ удаляли упариванием в роторном испарителе (температура бани 80°С, в атмосфере азота, атмосферное давление). Остаток дополнительно перегоняли в атмосфере азота. Собирали две фракции DMCA. Первая фракция содержала некоторое количество ДХМ, а вторая фракция имела подходящее качество (8,5 г, 26%). ГХ анализ подтвердил идентичность и чистоту продукта.
Получение S-диметиларсиноглутатиона (SGLU-1)
12
22
3
6
1
13
Суспензию глутатиона (18 г, 59 ммоль) в смеси вода/этанол в соотношении 1:1 об./об. (180 мл) охлаждали до температуры ниже 5°C и в инертной атмосфере обрабатывали триэтиламином (10 мл, 74 ммоль) в виде одной порции. Смесь охлаждали до температуры 0-5°C и добавляли по каплям в течение 10 минут DMCA (11 г, 78,6 ммоль), поддерживая температуру ниже 5°C. Реакционную смесь перемешивали при 0-5°C в течение 4 часов и полученные твердые вещества выделяли путем фильтрования. Продукт промывали этанолом (2×50 мл) и ацетоном (2×50 мл) и сушили в вакууме при комнатной температуре в течение ночи, получая 11 г (46%) SGLU-1. Чистота по данным ВЭЖХ составляли 97,6% по площади (средняя для 3 впрыскиваний). Анализ. Вычислено для CHAsNOS: C, 35,04; H, 5,39; N, 10,12, S, 7,8. Найдено: C, 34,92; H, 5,31; N, 10,27, S, 7,68. Спектры H и C-ЯМР соответствовали структуре. Фильтрат разбавляли ацетоном (150 мл) и помещали в холодильник на 2 дня. Выделяли дополнительно 5,1 г (21%) SGLU-1 в виде второй порции. Чистота по данным ВЭЖХ составляла 97,7% по площади (средняя для 3 впрыскиваний).
Получение S-диметиларсиноглутатиона (SGLU-1)
В трехгорлой колбе емкостью 3 л, оборудованной механической мешалкой, капельной воронкой и термометром, в атмосфере азота получали суспензию глутатиона (114,5 г, 0,37 моль) в смеси вода/этанол в соотношении 1:1 (об./об.) (1140 мл) и охлаждали до температуры ниже 5°С. Смесь медленно (в течение 15 минут) обрабатывали триэтиламином (63,6 мл, 0,46 моль), поддерживая температуру ниже 20°С. Смесь охлаждали до 4°С и перемешивали в течение 15 минут и затем следы нерастворившегося вещества удаляли фильтрованием. Фильтрат переносили в чистую 3-литровую трехгорлую колбу, оборудованную механической мешалкой, капельной воронкой, вводом азота и термометром и медленно добавляли DMCA (70 г, 0,49 моль) (лот № 543-07-01-44), поддерживая температуру при 3-4°С. Реакционную смесь перемешивали при 1-4°C в течение 4 часов и добавляли ацетон (1,2 л) в течение 1 часа. Смесь перемешивали в течение 90 минут при температуре между 2 и 3°C и полученное твердое вещество выделяли фильтрованием. Продукт промывали этанолом (2×250 мл) и ацетоном (2×250 мл) и влажное твердое вещество суспендировали в этаноле, 200 градусов (2000 мл). Продукт выделяли фильтрованием, промывали этанолом (2×250 мл) и ацетоном (2×250 мл) и сушили в вакууме в течение 2 дней при комнатной температуре, получая 115 г (75%) SGLU-1, чистота по ВЭЖХ >99,5% (в способе тестирования).
Пример 7
in vitro
Оценка  противораковой активности GMZ27
GMZ27, органический арсин, имеющий следующую структуру
50
тестировали в анализе MTS продолжительностью 72 часа в отношении различных клеточных линий острого миелоцитного лейкоза человека, и было установлено, что значения IC составляли 0,56-0,86 мкМ. Данная активность была выше, чем активность триоксида мышьяка в отношении данных клеточных линий (фиг.27A). Противолейкемическую активность GMZ27 затем оценивали в продолжительном (7 дней) колониеобразующем анализе, где клетки выращивают в полутвердой среде. GMZ27 обладал существенно более высокой активностью по сравнению с триоксидом мышьяка как в отношении клеточных линий лейкоза человека, так и лейкемических клеток, полученных от пациентов с острым или хроническим лейкозом (фиг.27B).
Затем проводили сравнение механизма противораковой активности GMZ27 и триоксида мышьяка. Триоксид мышьяка (ATO) проявлял свою противолейкемическую активность в клетках, отличных от APL, за счет нескольких механизмов, включая индукцию апоптоза, изменение в продуцировании внутриклеточного ROS, приводя к модулированию клеточной GSH-редокс системы, дифференциацию/созревание клеток и возможное действие на регулирование клеточного цикла.
GMZ27 был более эффективен в индукции апоптоза по сравнению с ATO. Результаты показывают, что он активировал митохондриальный апоптический путь, поскольку он изменял митоходриальный мембранный потенциал и расщеплял каспазу 9, но также и действовал по альтернативному, внешнему пути, поскольку он расщеплял каспазу 8. Это приводило к индукции активности каспазы 3, расщеплению PARP и связыванию аннексина V с клетками (фиг.28 и фиг.29).
Предварительная обработка лейкемических клеток бутионинсульфоксимином (BSO) делала их более чувствительными к GMZ27; тогда как предварительная обработка дитиотреитолом (DTT) или N-ацетилцистеином (NAC), которые могли повышать внутриклеточный GSH, делала клетки менее чувствительными (фиг.30). На этом основании можно полагать, что GMZ27, как и ATO, модулирует GSH-редокс систему в лейкемических клетках, однако он делает это на более ранней стадии и в большей степени, чем ATO (фиг.31).
Было установлено, что GMZ27, в низких дозах, частично вызывает дифференциацию/созревание клеток, как можно судить по индукции маркера созревания CD11b на поверхности клеток. Это действие было минимальным по сравнению с таковым для ATO (фиг.32). GMZ27 не оказывал действия на развитие клеточного цикла (фиг.33).
Токсичность GMZ7 в отношении одноядерных клеток периферической крови здоровых доноров была оценена в продолжительном колониеобразующем анализе. GMZ27 был менее токсичен для нормальных клеток, чем ATO (фиг.34).
50
50
Исследования для определения токсичности инъекции одной дозировки GMZ27 проводили на нормальных мышах Swiss-Webster. Токсичность измеряли на основании смертности. Было установлено, что концентрация GMZ27, которая приводит к смерти 50% мышей (LD), составляла 100 мг/кг. В противоположность этому LDдля ATO была намного ниже, только 10 мг/кг.
Пример 8
Получение N-(2-S-диметиларсинотиопропионил)глицина
N-(2-Меркаптопропионил)глицин (0,02 моль, 3,264 г) помещали в 1,2-диметоксиэтан (50 мл) и добавляли по каплям диметилхлорарсин (0,025 моль, 3,52 г). Реакционную смесь перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре. Затем фильтрованием отделяли белый осадок соли - гидрохлорида триэтиламина, и объем раствора уменьшали путем упаривания при пониженном давлении. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией, получая целевой продукт (3,5 г).
Пример 9
Получение 2-(S-диметиларсино)тионикотиновой кислоты
2
4
2-Меркаптоникотиновую кислоту (0,02 моль, 3 г) помещали в дихлорметан (50 мл) и добавляли по каплям диметилхлорарсин (0,025 моль, 3,52 г). Реакционную смесь перемешивали при кипении с обратным холодильником в течение 4 часов. Дихлорметан затем удаляли путем отгонки, и остаток растворяли в диэтиловом эфире (50 мл) и промывали водой (3×). Раствор сушили над NaSO, фильтровали и целевой продукт получали в виде бледно-желтого твердого вещества после концентрирования при пониженном давлении.
Пример 10
L-(+)-2-Амино-3-(диметиларсино)тио-3-метилбутановая кислота
L-(+)-2-Амино-3-меркапто-3-метилбутановую кислоту (0,01 моль, 1,55 г) помещали в дихлорметан (50 мл) и добавляли по каплям диметилхлорарсин (0,015 моль, 2,1 г) в дихлорметане (5 мл) с последующим добавлением по каплям триэтиламина (1,6 г). Смесь перемешивали в течение 4 часов и целевой продукт, появляющийся в виде плавающего белого кристаллического твердого вещества, выделяли после фильтрования реакционной смеси. Кристаллическое твердое вещество последовательно промывали дихлорметаном, этилацетатом и ацетоном, получая целевой продукт (1,6 г, т.пл. 107-109°С).
Пример 11
2
Фазу II клинического многоцентрового исследования SGLU-1 (даринапарсин) проводили на пациентах с диагностированной запущенной лимфомой. Пациенты, подходящие для участия в исследовании, нуждались в терапии и получали по меньшей мере 1 перед терапией. Пациенты получали 300 мг/м даринапарсина внутривенно в течение 5 последующих дней каждые 28 дней (1 цикл) и затем проводили оценку эффективности и безопасности по стандартным критериям. Лечение продолжали до проявления токсичности или успеха. К настоящему моменту исследование проведено на 22 пациентах (15 с неходжкинской лимфомой [NHL], 7 с лимфомой Ходжкина); 12 являются мужчинами и 10 женщинами. Средний возраст составлял 60,5 лет (диапазон: 28-80); общее состояние было ≤2, и среднее число предшествующих терапий составляло 3 (диапазон: 1-6). Тринадцать субъектов получили по крайней мере 2 цикла SGLU-1 и для них была проведена оценка эффективности. Среди них у 1 (с диагнозом периферической Т-клеточной лимфомы (PTCL)) была достигнута полная ответная реакция (ПО), для 3 (с диагнозом диффузной В-крупноклеточной лимфомы, лимфомы краевой зоны и нодулярного склероза Ходжкина, соответственно) была достигнута частичная ответная реакция (ЧО) и для 2 пациентов с нодулярным склерозом Хожкина было достигнуто стабильное состояние при заболевании (СЗ). У пациента с лимфомой краевой зоны, который достиг ЧО, подтверждений макроскопического заболевания не имелось, но на микроскопическом уровне заболевание обнаруживалось при статистической биопсии, полученной из слизистой желудка обычного появления. Все респонденты ранее получали тяжелое лечение (PTCL: CHOP (циклофосфамид, доксорубицин, винкристин и преднизолон)×6, ICE (ифосфамид, карбоплатин и этопозид)×1 и EPOCH (этопозид, винкристин, доксорубицин, циклофосфамид и преднизон)×2; диффузная В-клеточная лимфома: RCHOP (ритуксимаб, циклофосфамид, доксорубицин, винкристин и преднизолон)×5, RICE (ритуксимаб, ифосфамид, карбоплатин и этопозид)×3 и лучевую терапию; краевая зона: ритуксимаб×8, RCVP (ритуксимаб, циклофосфамид, винкристин и преднизолон)×1 и гемцитабин×1; и лимфома Ходжкина: ICE×1, CBV (циклофосфамид, кармустин и этопозид)×1, гемцитабин+MDX-060 (Медарекс)×6). Всего было введено 49 циклов SGLU-1. Единственным неблагоприятным явлением (НЯ) стадии 3, рассматривавшимся как связанное с лекарственным средством, было свистящее дыхание. Всего 12 субъектов сообщало о 37 серьезных неблагоприятных явлениях (СНЯ) во время исследования. Среди них только у 2-х имелись СНЯ, которые рассматривались как связанные с лекарственным средством (нейтропеническая лихорадка, падение). Подводя итог, SLGU-1 очень хорошо переносится и продемонстрировал обещающую активность для перенесших тяжелое лечение пациентов, у которых была диагностирована запущенная лимфома. Первоначальная ответная реакция (1 ПО, 3 ЧО, 2 СЗ) наблюдалась для 13 поддающихся оценке пациентов.
Эквиваленты
Специалисты в данной области смогут распознать или будут способны выявить с использованием не более чем рутинного эксперимента многочисленные эквиваленты описанных здесь соединений и способов их применения. Такие эквиваленты рассматриваются как входящие в объем изобретения и охватываются следующей формулой изобретения. Специалисты в данной области также смогут распознать, что все комбинации описанных здесь вариантов осуществления входят в объем данного изобретения.
Все вышепроцитированные ссылки и публикации включены в данное изобретение путем ссылки.