СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧЛЕНОВ СЕМЕЙСТВА S100 СВЯЗЫВАЮЩИХ КАЛЬЦИЙ БЕЛКОВ ПОСРЕДСТВОМ ИММУНОТУРБИДИМЕТРИИ

1. Способ измерения in vitro присутствия кальпротектина в биологическом образце от пациента, включающий стадии:
a) сбора предопределенного количества указанного биологического образца;
2
b) солюбилизации и экстракции указанного биологического образца в предопределенном количестве водного органического буфера, имеющего i) pH между 5,0 и 6,0, ii) осмоляльность по меньшей мере 150 мосмоль/кг HO, iii) 0,01-0,1% процента по массе анионного поверхностно-активного вещества, iv) где органический буфер является координирующим и секвестрирующим ионы кальция и цинка, и iv) и, необязательно, гомогенизации и экстракции матрикса указанного биологического образца с последующим удалением любого материала в форме частиц для получения раствора образца с присутствием солюбилизированного в основном гетеродимерного кальпротектина (S100A8/A9);
c) смешивания определенного количества раствора указанного образца со стадии (b) с некоторым количеством реагента, содержащего наночастицы, имеющие иммобилизованные два или более моноклональных антител или их фрагментов, специфически связывающих любой из S100A8 и S100A9 или кальпротектин (S100A8/A9), для получения реакции связанное с частицами антитело-антиген для кальпротектина (S100A8/A9), присутствующего в определенном молекулярном состоянии;
d) инкубации смеси со стадии c) в течение некоторого интервала времени; и
e) получения оптических свойств смеси и определения сигнала, показательного для содержания кальпротектина (S100A8/A9), на основании оптических свойств смеси;
f) установления связи указанного содержания с калиброванным контролем и оценки клинического состояния указанного пациента на основании измеренного присутствия кальпротектина (S100A8/A9) в указанном биологическом образце.
2. Способ измерения кальпротектина по п.1, где определенное количество имеет метрологически прослеживаемую связь со стандартом кальпротектина, выделенным из гранулоцитов с интактными лизосомальными компартментами и определенным посредством поликлональных моноспецифических антител.
3. Способ по п.1 или 2, где стадия e) получения оптических свойств включает определение значения оптической плотности, светопроницаемости, отражения, светорассеяния, флуоресценции или сцинцилляции.
4. Способ по п.3, представляющий собой турбидиметрический или нефелометрический иммуноанализ.
5. Способ по п.4, представляющий собой турбидиметрический иммуноанализ с усилением частицами латекса (PETIA), где стадии b) и c) включают применение двух реагентов-компонентов.
6. Способ по п.5, включающий применение наночастиц, имеющих диаметры от 150 до 350 нм, для увеличения чувствительности.
7. Способ по п.6, где антитела являются связанными с двумя типами частиц, имеющих гомогенные диаметры в диапазоне i) от 150 до 200 нм и ii) от 250 до 350 нм, для увеличения диапазона измерений.
8. Способ по любому из пп.1-7, где указанные частицы представляют собой частицы из карбоксилированного полистирола или активированного хлорметилом полистирола.
9. Способ по любому из пп.1-8, где биологический образец представляет собой фекалии или экстракт фекалий.
10. Способ по любому из пп.1-9, где композиция буфера составлена из по меньшей мере одной соли, выбранной из группы, содержащей соли поликарбоновых кислот, трикарбоновых кислот, аконитовых кислот, трикарбаллиловых кислот, дикарбоновых кислот, щавелевой кислоты, малоновой кислоты, янтарной кислоты, глутаровой кислоты, адипиновой кислоты, пимелиновой кислоты, альфа-, бета- и гамма-гидроксикарбоновых кислот, гидроксидикарбоновых кислот, яблочной кислоты, лимонной кислоты, винных кислот, малоновой кислоты, глюконовой кислоты, 5-кетоглюконовой кислоты, 2-кетоглюконовой кислоты, дигидроксималеиновой кислоты, малеиновой кислоты, фумаровой кислоты, нитрилотриуксусной кислоты, молочной кислоты и/или аскорбиновой кислоты.
2+
11. Способ по любому из пп.1-10, где реакцию связанное с частицами антитело-антиген проводят в смеси, имеющей pH между 5,0 и 6,0 и содержащей анионное поверхностно-активное вещество или додецилсульфат натрия и координированные посредством Ca молекулы буфера.
12. Способ по п.11, где буфер для секвестрирования кальция со стадии b) содержит по меньшей мере одну соль из цитрата, ацетата или малеата, обработанный протеазми сывороточный альбумин и 0,01-0,1 процента по массе анионных поверхностно-активных веществ.
13. Способ по любому из пп.1-12, включающий добавление или присутствие неспецифической антисыворотки IgM.
14. Способ по любому из пп.1-8 и 10-13, где указанный биологический образец представляет собой кровь, сыворотку или плазму.
15. Тестовый набор для измерения присутствия кальпротектина в биологическом образце посредством турбидиметрического иммуноанализа с усилением частицами латекса, как описано в любом из предшествующих пп.1-14, содержащий первый водный реагент-компонент, содержащий
20-1000 ммоль/л органического буфера с pH в диапазоне от 5,0 до 6,0;
50-300 ммоль/л соли натрия, калия или лития;
0,1-1,5% обработанного протеазми сывороточного альбумина;
0,01-0,1% (масс./об.) додецилсульфата натрия, и
необязательно, бета-альдозы, триозу, тетрозы, пентозы, гексозы, глюкан, декстран и/или сахар для достижения осмоляльности по меньшей мере 200 мосмоль/л; и
второй реагент-компонент, содержащий 0,01-0,5% (масс./об.) латексных частиц диаметром от 150 до 350 нм, несущих иммобилизованные моноклональные антитела, которые связывают любой из S100A8 и S100A9 или кальпротектин (S100A8/A9).