КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ОТДЕЛЬНЫХ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

1. Способ дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток, включающий стадии:
a) культивирования плюрипотентных стволовых клеток в виде кластеров,
b) высвобождения плюрипотентных стволовых клеток в виде отдельных клеток,
c) посева отдельных плюрипотентных стволовых клеток на субстрате культуры ткани и
d) дифференцировки отдельных плюрипотентных стволовых клеток.
2. Способ по п.1, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой ферментом, выбранным из группы, состоящей из трипсина, TrypLE™SELECT, TrypLE™EXPRESS и трипсин/ЭДТА.
3. Способ по п.2, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой TrypLE™EXPRESS.
4. Способ по п.2, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой ферментом при концентрации от приблизительно 0,5 г/л до приблизительно 2,5 г/л.
5. Способ по п.2, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой ферментом при концентрации приблизительно 2,5 г/л.
6. Способ по п.2, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой ферментом в течение приблизительно двух - приблизительно пяти минут.
7. Способ по п.2, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой ферментом в течение приблизительно пяти минут.
8. Способ по п.3, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой TrypLE™EXPRESS при концентрации от приблизительно 1X до приблизительно 0,001X.
9. Способ по п.3, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой TrypLE™EXPRESS при концентрации 1Х.
10. Способ по п.3, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой TrypLE™EXPRESS в течение приблизительно двух - приблизительно пяти минут.
11. Способ по п.3, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой TrypLE™EXPRESS в течение приблизительно пяти минут.
12. Способ по п.1, где субстрат культуры ткани выбран из группы, состоящей из MATRIGEL™, фибронектина, ламинина, сыворотки человека и коллагена.
13. Способ по п.12, где субстратом культуры ткани является MATRIGEL™.
14. Способ по п.13, где MATRIGEL™ используют при разведении от приблизительно 1:30 до приблизительно 1:10.
15. Способ по п.14, где MATRIGEL™ используют при разведении 1:10.
16. Способ по п.1, где плюрипотентные стволовые клетки являются эмбриональными стволовыми клетками.
17. Способ по п.16, где эмбриональные стволовые клетки являются клетками человека.
18. Способ по п.1, где отдельные плюрипотентные стволовые клетки впоследствии дифференцируются.
19. Способ поддержания плюрипотентных стволовых клеток, включающий стадии:
a) получения кластеров плюрипотентных стволовых клеток,
b) высвобождения плюрипотентных стволовых клеток в виде отдельных клеток, и
c) посева отдельных плюрипотентных стволовых клеток на субстрате культуры ткани.
20. Способ по п.19, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой ферментом, выбранным из группы, состоящей из трипсина, TrypLE™SELECT, TrypLE™EXPRESS и трипсин/ЭДТА.
21. Способ по п.20, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой TrypLE™EXPRESS.
22. Способ по п.20, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой ферментом при концентрации от приблизительно 0,5 г/л до приблизительно 2,5 г/л.
23. Способ по п.20, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой ферментом при концентрации приблизительно 2,5 г/л.
24. Способ по п.20, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой ферментом в течение приблизительно двух - приблизительно пяти минут.
25. Способ по п.20, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой ферментом в течение приблизительно пяти минут.
26. Способ по п.21, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой TrypLE™EXPRESS при концентрации от приблизительно 1X до приблизительно 0,001X.
27. Способ по п.21, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой TrypLE™EXPRESS при концентрации 1Х.
28. Способ по п.21, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой TrypLE™EXPRESS в течение приблизительно двух - приблизительно пяти минут.
29. Способ по п.21, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой TrypLE™EXPRESS в течение приблизительно пяти минут.
30. Способ по п.19, где субстрат культуры ткани выбран из группы, состоящей из MATRIGEL™, разведенного фактором роста MATRIGEL™, фибронектина, ламинина, сыворотки человека и коллагена.
31. Способ по п.30, где субстратом культуры ткани является разведенный фактором роста MATRIGEL™.
32. Способ по п.31, где разведенный фактором роста MATRIGEL™ используют при разведении от приблизительно 1:30 до приблизительно 1:10.
33. Способ по п.32, где разведенный фактором роста MATRIGEL™ используют при разведении 1:30.
34. Способ по п.19, где плюрипотентные стволовые клетки являются эмбриональными стволовыми клетками.
35. Способ по п.34, где эмбриональные стволовые клетки являются клетками человека.
36. Способ по п.19, где отдельные плюрипотентные стволовые клетки впоследствии дифференцируются.
37. Способ пассирования плюрипотентных стволовых клеток, включающий стадии:
a) получения кластеров плюрипотентных стволовых клеток,
b) высвобождения плюрипотентных стволовых клеток в виде отдельных клеток,
c) посева отдельных плюрипотентных стволовых клеток на субстрате культуры ткани,
d) предоставления возможности размножения отдельным плюрипотентным клеткам,
e) высвобождения отдельных плюрипотентных стволовых клеток и
f) посева отдельных плюрипотентных стволовых клеток на новом субстрате культуры ткани.
38. Способ по п.19, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой ферментом, выбранным из группы, состоящей из трипсина, TrypLE™SELECT, TrypLE™EXPRESS и трипсин/ЭДТА.
39. Способ по п.38, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой TrypLE™EXPRESS.
40. Способ по п.38, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой ферментом при концентрации от приблизительно 0,5 г/л до приблизительно 2,5 г/л.
41. Способ по п.38, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой ферментом при концентрации приблизительно 2,5 г/л.
42. Способ по п.38, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой ферментом в течение приблизительно двух - приблизительно пяти минут.
43. Способ по п.38, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой ферментом в течение приблизительно пяти минут.
44. Способ по п.39, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой TrypLE™EXPRESS при концентрации от приблизительно 1X до приблизительно 0,001X.
45. Способ по п.39, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой TrypLE™EXPRESS при концентрации 1Х.
46. Способ по п.39, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой TrypLE™EXPRESS в течение приблизительно двух - приблизительно пяти минут.
47. Способ по п.39, где плюрипотентные стволовые клетки высвобождают в виде отдельных клеток обработкой TrypLE™EXPRESS в течение приблизительно пяти минут.
48. Способ по п.37, где субстрат культуры ткани выбран из группы, состоящей из MATRIGEL™, разведенного фактором роста MATRIGEL™, фибронектина, ламинина, сыворотки человека и коллагена.
49. Способ по п.48, где субстратом культуры ткани является разведенный фактором роста MATRIGEL™.
50. Способ по п.49, где разведенный фактором роста MATRIGEL™ используют при разведении от приблизительно 1:30 до приблизительно 1:10.
51. Способ по п.50, где разведенный фактором роста MATRIGEL™ используют при разведении 1:30.
52. Способ по п.37, где плюрипотентные стволовые клетки являются эмбриональными стволовыми клетками.
53. Способ по п.52, где эмбриональные стволовые клетки являются клетками человека.
54. Способ по п.37, где отдельные плюрипотентные стволовые клетки на новом субстрате культуры ткани пассируют на другой субстрат культуры ткани высвобождением клеток и посевом высвобожденных клеток на другой субстрат культуры ткани.
55. Способ по п.37, где отдельные плюрипотентные стволовые клетки впоследствии дифференцируются.