ФУНКЦИОНАЛИЗИРОВАННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ МОРФОЛИНИЛАНТРАЦИКЛИНА
FUNCTIONALISED DERIVATIVES OF MORPHOLINYLANTHRACYCLINE

Настоящее изобретение касается новых функционализированных производных морфолинилантрациклина, способа их получения, содержащих их фармацевтических композиций и их применения для лечения заболеваний, характеризующихся аномальной клеточной пролиферацией. Например, соединения по изобретению можно применять для лечения опухолей. Изобретение также касается их применения для получения конъюгатов.
Антрациклины представляют собой антибиотические соединения, которые демонстрируют цитотоксическую активность. В некоторых исследованиях показано, что антрациклины могут действовать, убивая клетки по азличным механизмам, включая: 1) интеркаляцию в ДНК клетки, ингибируя тем самым синтез ДНК-зависимой нуклеиновой кислоты; 2) производство свободных радикалов, которые затем взаимодействуют с клеточными макромолекулами, вызывая повреждение клеток, или 3) взаимодействия с клеточной мембраной [смотри, например, работы C. Peterson и др. «Transport and storage of Anthracycline in experimental systems and human leukemia» в Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy (1982), pp. 132-146; и N.R. Bachur, «Free Radical Damage», там же, pp,97-102]. Вследствие своей цитотоксической активности, антрациклины применяются для лечения многих раковых заболеваний, таких как лейкемия, карцинома молочной железы, карцинома легких, аденокарцинома яичника и саркомы [смотри, например, работу P.H- Wiernik в Anthracycline: Current Status and New Developments (1980), p. 11]. Обычно применяемые антрациклины включают доксорубицин, эпирубицин, идарубицин и дауномицин.
В последние годы синтезировано много новых высокоцитотоксических производных антрациклина.
Как показано на экспериментальных мышиных опухолях [смотри работу J. W. Lown, Bioactive Molecules, vol 6, (1988), pp.55-101] и в клинических испытаниях для лечения гепатоцеллюлярной карциномы [смотри работу C. Sessa, O. Valota, C. Geroni, Cardiovascular Toxicology, vol. 7(2), (2007), pp. 75-79], производные антрациклина, несущие замещенный морфолиновый цикл, связанный по положению C-3' сахарной части, обещают наличие противоопухолевой активности.
В международной патентной заявке WO 9802446 на имя Pharmacia & Upjohn SPA раскрыты новые производные морфолинилантрациклина, в которых морфолиновый цикл соединен через мостиковый атом кислорода с положением C-4' сахарного остатка, в качестве противоопухолевых агентов.
4-Амино- и 4-фтор-производные антрациклина также раскрыты в качестве противоопухолевых агентов в патентных заявках EP 288268 и EP 381989 на имя Farmitalia Carlo Erba Srl.
Несмотря на усилия в противораковых исследованиях, рак остается смутной и неуловимой целью, следовательно, все еще сохраняется потребность в новых противораковых агентах.
Хотя эти соединения могут быть применимы для лечения новообразований и других болезненных состояний, где отыскивается выбранная клеточная популяция, подлежащая ликвидации, их терапевтическая эффективность часто ограничена зависимой от дозы токсичностью, связанной с их введением.
Ограничения при использовании производных антрациклина в клинической практике включают недостаточное аккумулирование в опухоли, кардиотоксичность, длительность инфузии, невосприимчивость раковых клеток, сверхэкспрессирующих мембранные транспортеры, и дозолимитирующие побочные эффекты, такие как диарея и подавление деятельности костного мозга (Int. J. Nanomedicine, 2007; 2(4): 567-83; Med. Sci. Monit. 2000; 6(2); Adriamycin Review, pp 123-131, Mediokon, Belgium: European Press, 1975; Ann Intern Med. 1982; 96(2): 133-139).
Объединение цитотоксических лекарственных средств с молекулами, способными транспортировать лекарство, улучшая, таким образом, направленную доставку в опухоль, или способными модифицировать его фармакокинетические свойства, является одной из стратегий, примененных для решения указанных выше проблем.
Конъюгаты антрациклиновых производных раскрыты, например, в международных патентных заявках WO 2009/099741 и WO 2010/009124.
Сообщаются различные примеры объединения цитотоксических лекарственных средств с белками, пептидами, аптамерами, полимерами или наночастицами, позволяющие более целенапривленную доставку, улучшающие растворимость и в некоторых случаях другие фармакокинетические свойства, например, увеличивающие период полувыведения или локальную концентрацию лекарственного средства и повышающие эффективность лекарственного средства. Фактически результирующие конъюгаты имеют улучшенные характеристики в отношении растворимости, проницаемости в клетку, in vivo терапевтического окна, регулируемого высвобождения, способности достигать цели в соответствии с природой конкретной молекулы, объединенной с цитотоксическим агентом, и т.д.
Поэтому существует возрастающая потребность в разработке функционализированных цитотоксических агентов, подходящих для объединения с различными типами молекул.
Первой целью настоящего изобретения является получение функционализированных производных антрациклина, которые содействуют проявлению цитотоксической активности, имеют высокую растворимость, чтобы улучшить технологию приготовления и/или фармакокинетические/фармакодинамические свойства лекарства. Кроме того, эти функционализированные производные антрациклина также пригодны для объединения.
Настоящее изобретение касается производных морфолинилантрациклина формулы (I)
Ant-L-W-Z-RM (I)
где
RM отсутствует или обозначает реакционноспособный фрагмент,
Z отсутствует или обозначает пептидный, непептидный или гибридный, пептидный и непептидный, линкер;
W отсутствует или обозначает саморасщепляющуюся систему, содержащую одну или более саморасщепляющищихся групп;
L отсутствует или представляет собой условно расщепляемый фрагмент;
Ant представляет собой антрациклиновый фрагмент, выбранный из формул (II), (III), (IV) и (V):
где волнистой линией обозначено присоединение
к условно расщепляемому фрагменту L, или
к саморасщепляющейся системе W, или
к линкеру Z, или
к реакционноспособному фрагменту RM;
при условии, что, присутствует, по меньшей мере, один из L, W, Z и RM;
R1 обозначает атом галогена или NR4R5;
R2 обозначает OR6, NR7R8 или необязательно замещенную группу, выбранную из
1
4
1
4
1
4
линейного или разветвленного C-C алкила, NR7R8-C-C алкила и R6O-C-Cалкила;
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
R4 и R5 независимо обозначают атом водорода, монозамещенный бензил, дизамещенный бензил или необязательно замещенную группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила, NR7R8-C-C алкила, R6O-C-C алкила, R7R8N-C-C алкилкарбонила, R6O-C-C алкилкарбонила, R7R8N-C-C алкоксикарбонила и R6O-C-C алкоксикарбонила; или
1
6
1
6
R4 и R5, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, замещенный R4', где R4' обозначает атом водорода или группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила и NR7R8-C-C алкила;
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
R15 отсутствует или обозначает необязательно замещенную двухвалентную группу, выбранную из -NR7-C-C алкила*, -O-C-C алкила*, -NR7-C-C алкилкарбонила*, -O-C-C алкилкарбонила*, -NR7-C-C алкоксикарбонила* и -O-C-C алкоксикарбонила*, где * указывает место присоединения к -NH-Ant;
1
6
R6, R7 и R8 независимо обозначают атом водорода или необязательно замещенный линейный или разветвленный C-C алкил;
или их фармацевтически приемлемых солей.
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
1
4
3
7
3
7
1
4
1
4
1
4
1
4
Согласно настоящему изобретению, и если не указано иное, приведенные выше группы R2, R4, R5, R6, R7, R8 и R15 могут быть необязательно замещенными по любым свободным положениям одной или несколькими группами, например 1-3 группами, независимо выбранными из группы, включающей: атом галогена, линейный или разветвленный C-C алкил, полифторированный C-C алкил, линейный или разветвленный C-C алкокси, полифторированный C-C алкокси, гидрокси, амино, линейный или разветвленный C-C алкиламино, ди-C-C алкиламино, C-C алкилкарбонил, C-C циклоалкил, C-C циклоалкил-C-C алкил, гетероциклил, гетероциклил-C-C алкил, арил, арил-C-C алкил, гетероарил и гетероарил-C-C алкил.
Настоящее изобретение также касается способов синтеза производных морфолинилантрациклина формулы (I), получаемых способом, включающим стандартные синтетические преобразования, и их изомеров, таутомеров, гидратов, сольватов, комплексов, метаболитов, пролекарств, носителей, N-оксидов.
Кроме того, настоящее изобретение касается фармацевтической композиции содержащей терапевтически эффективное количество производного формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, которые определены выше, и, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый наполнитель, носитель или разбавитель.
Настоящее изобретение также касается фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество производного формулы (I) и один или более химиотерапевтических агентов.
Настоящее изобретение также касается фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество производного формулы (I) в комбинации с известными противораковыми методами лечения, такими как лучевая терапия или химиотерапия, в комбинации с цитостатическими или цитотоксическими агентами, агентами типа антибиотиков, алкилирующими агентами, антиметаболическими агентами, гормональными агентами, иммунологическими агентами, агентами типа интерферона, ингибиторами циклооксигеназы (например, ингибиторами COX-2), ингибиторами матриксных металлопротеаз, ингибиторами теломеразы, ингибиторами тирозинкиназы, антагонистами рецепторов факторов роста, анти-HER2 агентами, анти-EGFR агентами, агентами против ангиогенеза (например, ингибиторами ангиогенеза), ингибиторами фарнезилтрансферазы, ингибиторами ras-raf пути сигнальной трансдукции, ингибиторами клеточного цикла, другими cdk-ингибиторами, тубулин-связывающими агентами, ингибиторами топоизомеразы I, ингибиторами топоизомеразы II и подобными.
Кроме того, изобретение касается продукта, содержащего производное формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, которые определены выше, и один или более химиотерапевтических агентов, в виде совместного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения при противораковой терапии.
Еще один аспект изобретения касается производного формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, которые определены выше, для применения в качестве медикамента.
Настоящее изобретение также касается производного формулы (I), которое определено выше, для применения в способе лечения рака, клеточных пролиферативных заболеваний и вирусных инфекций.
Предпочтительно, производное формулы (I), которое определено выше, представляет собой соединение для применения в способе лечения специфических типов раковых заболеваний, таких как, но не ограниченных этим, карциномы, в том числе карцинома мочевого пузыря, молочной железы, толстой кишки, почки, печени, легкого, включая мелкоклеточный рак легкого, пищевода, желчного пузыря, яичника, поджелудочной железы, желудка, шейки матки, щитовидной железы, простаты и кожи, включая плоскоклеточную карциному; гемопоэтические опухоли лимфоидного происхождения, включая лейкемию, острый лимфоцитарный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз, В-клеточную лимфому, T-клеточную лимфому, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, волосковоклеточную лимфому и лимфому Беркитта; гемопоэтические опухоли миелоидного происхождения, включая острый и хронический миелоидный лейкоз, миелодиспластический синдром и промиелоцитарный лейкоз; опухоли мезенхимального происхождения, включая фибросаркому и рабдомиосаркому; опухоли центральной и периферической нервной системы, включая астроцитому, нейробластому, глиому и шванному; и друие опухоли, в том числе меланому, семиному, тератокарциному, остеосаркому, пигментную ксеродерму, кератоксантому, фолликулярный рак щитовидной железы, саркому Капоши и мезотелиому.
Кроме того, производное формулы (I), которое определено выше, предназначено для применения в способе лечения специфических клеточных пролиферативных заболеваний, таких как, например, доброкачественная гиперплазия предстательной железы, семейный аденоматозный полипоз (FAP), нейрофиброматоз, псориаз, васкулярная плоскоклеточная пролиферация, связанная с атеросклерозом, фиброз легких, артрит, гломерулонефрит и послеоперационный стеноз и рестеноз.
Кроме того, производное формулы (I), которое определено выше, предназначено для применения в способе ингибирования ангиогенеза и метастазирования опухоли, а также в способе лечения отторжения трансплантата органа и болезни «хозяин против трансплантата».
Настоящее изобретение также касается способа лечения рака, который включает введение нуждающемуся в этом млекопитающему эффективного количества производного формулы (I), которое определено выше. Нуждающимся в помощи млекопитающим может быть, например, человек.
Кроме того, изобретение касается применения производного формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, которые определены выше, в производстве лекарства для лечения рака.
В заключение, изобретение касается применения производного формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, которые определены выше, для получения конъюгатов.
Если не указано иное, то предполагается, что приведенные далее используемые здесь термины и выражения имеют следующие значения.
1
6
Выражение «линейный или разветвленный C-C алкил» обозначает любую из таких групп как, например, метил, этил, н-пропил, н-бутил, н-пентил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил.
1
4
Выражение «линейный или разветвленный C-C гидроксиалкил» обозначает любую из таких групп как, например, 2-гидроксиэтил, 3-гидроксипропил, 2-гидроксипропил, 4-гидроксибутил, 3-гидроксибутил, 2-гидроксибутил.
1
4
Выражение «линейный или разветвленный C-C алкокси» обозначает любую из таких групп как, например, метокси, этокси, пропокси и т.д.
1
4
1
4
Термин «полифторированный алкил» или «полифторированный алкокси» обозначает любую из указанных выше линейных или разветвленных C-C алкильных или C-C алкоксигрупп, которые замещены более чем одним атомом фтора, например, трифторметил, трифторэтил, 1,1,1,3,3,3-гексафторпропил, трифторметокси и подобные.
Термин «галоген» обозначает фтор, хлор, бром или йод.
Термин «монозамещенный бензил» обозначает любую из таких групп как 4-метоксибензил, 4-метилбензил, 4-фторбензил, 3-метоксибензил, 3-метилбензил, 3-фторбензил, 2-метоксибензил, 2-метилбензил, 2-фторбензил и т.д.
Термин «дизамещенный бензил» обозначает любую из таких групп как 2,4-диметоксибензил, 2,4-диметилбензил, 2,4-дифторбензил, 2,3-диметоксибензил, 2,3-диметилбензил, 2,3-дифторбензил, 2,5-диметоксибензил, 2,5-диметилбензил, 2,5-дифторбензил, 2-фтор-4-метоксибензил, 2-фтор-4-метилбензил и т.д.
1
6
Выражение «линейный или разветвленный C-C алкилкарбонил» обозначает любую из таких групп как, например, метилкарбонил, этилкарбонил, н-бутилкарбонил, изопропилкарбонил и т.д.
1
6
Выражение «линейный или разветвленный C-C алкиламинокарбонил» обозначает любую из таких групп как, например, метиламинокарбонил, этиламинокарбонил, н-бутиламинокарбонил, изопропиламинокарбонил и т.д.
1
4
1
4
Используемое здесь выражение «линейный или разветвленный C-C сульфгидрилалкил» относится к группе -SH, подвешенной к линейной или разветвленной C-C алкильной группе, которая определена ранее.
1
4
1
4
Используемое здесь выражение «линейный или разветвленный C-Cгалогеналкил» относится к линейной или разветвленной C-C алкильной группе, которая определена ранее, замещенной одним или несколькими атомами галогенов.
1
6
Выражение «линейный или разветвленный C-C алкилсульфонил» обозначает любую из таких групп как, например, метилсульфонил, этилсульфонил, н-бутилсульфонил, изопропилсульфонил и т.д.
1
6
Выражение «линейный или разветвленный C-C алкоксикарбонил» обозначает любую из таких групп как, например, этоксикарбонил, н-бутоксикарбонил, изопропоксикарбонил, н-пропоксикарбонил и т.д.
3
7
Термин «C-C циклоалкил» обозначает, если не указано иное, (3-7)-членный полностью углеродный моноцикл, который может содержать одну или более двойных связей, но не имеет полностью сопряженной π-электронной системы. Примерами циклоалкильных групп, без ограничения, являются циклопропан, циклобутан, циклопентан, циклопентен, циклогексан, циклогексен, циклогексадиен, циклогептан, циклогептен, циклогептадиен.
Используемый здесь термин «гетероциклил» относится к насыщенному или ненасыщенному неароматическому (5-7)-членному карбоциклическому кольцу, где от 1 до 3 атомов углерода заменены гетероатомами, выбранными из атомов азота, кислорода и серы, где указанные гетероатомы могут быть связаны непосредственно друг с другом, азот и сера необязательно могут быть окислены, азот необязательно может быть кватернизован или нести заместитель R4. Неограничительными примерами гетероциклильных групп являются, например, пиперидинил, пиперазинил, оксазолидинил, 4-метилпиперазинил, 4-этилпиперазинил и т.д.
Используемый здесь термин «арил» относится к карбоциклическим углеводородам с 1-2 циклическими фрагментами, конденсированными или соединенными друг с другом простыми связями, где, по меньшей мере, один из циклов является ароматическим. Примерами арильных групп по изобретению являются, например, фенил, бифенил, α- или β-нафтил, дигидронафтил и подобные.
1
Используемый здесь термин «гетероарил» относится к ароматическим гетероциклическим кольцам, обычно (4-7)-членным гетероциклам с 1-4 гетероатомами, выбранными из атомов кислорода, азота и серы, где азот и сера необязательно могут быть окислены, и азот необязательно может быть кватернизован; кроме того, указанный гетероарильный цикл необязательно может быть конденсирован или соединен с одним, двумя или большим количеством циклов, конденсированных вместе, ароматических и неароматических, карбоциклических и гетероциклических циклов. Гетероатомы могут быть связаны непосредственно друг с другом. Примеры гетероарильных групп включают, но не ограничены этим, пиридил, пиримидил, фуранил, пирролил, триазолил, пиразолил, пиразинил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, имидазолил, тиенил, индолил, бензофуранил, бензимидазолил, бензотиазолил, пуринил, индазолил, бензотриазолил, бензизоксазолил, хиноксалинил, изохинолил и хинолил. В одном варианте осуществления гетероарильная группа содержит от 1 до 4 гетероатомов. Следует отметить, что выражение «C гетероарильная группа» означает, что в циклической системе гетероароматической группы присутствует только один атом углерода (таким образом, атомы углерода в необязательных заместителях не считаются). Примером такой гетероароматической группы является тетразолильная группа.
1
6
7
12
Термин «уходящая группа» относится к группе, которая может быть замещена другой группой по реакции замещения. Такие уходящие группы хорошо известны в данной области, и их примеры включают, но не ограничены этим, галогениды (фторид, хлорид, бромид и йодид), азиды, сульфонаты (например, необязательно замещенный C-C алкансульфонат, такой как метансульфонат и трифторметансульфонат, или необязательно замещенный C-Cалкилбензолсульфонат, такой как пара-толуолсульфонат), сукцинимид-N-оксид, пара-нитрофеноксид, пентафторфеноксид, тетрафторфеноксид, карбоксилаты, аминокарбоксилаты (карбаматы) и алкоксикарбоксилаты (карбонаты). Для замещений по насыщенным атомам углерода предпочтительными уходящими группами являются галогениды и сульфонаты. Для замещений по карбонильному атому углерода можно использовать в качестве уходящей группы, например, галогенид, сукцинимид-N-оксид, пара-нитрофеноксид, пентафторфеноксид, тетрафторфеноксид, карбоксилат или алкоксикарбоксилат (карбонат). Термин «уходящая группа» также относится к группе, которую убирают в результате реакции элиминирования, например, электронно-каскадной реакции или реакции спироциклизации. В этом случае можно использовать в качестве уходящей группы, например, галогенид, сульфонат, азид, аминокарбоксилат (карбамат) или алкоксикарбоксилат (карбонат).
Специалисту в данной области известно, что преобразование химической функциональной группы в другую может потребовать защиты одного или нескольких реакционных центров в соединении, содержащем такую функциональную группу, чтобы избежать нежелательных побочных реакций. Защиту таких реакционных центров и последующее удаление защиты в конце синтетических преобразований можно выполнить по стандартным методикам, описанным в литературе (смотри, например, работу Green, Theodora W. и Wuts, Peter G.M. Protective Groups in Organic Synthesis, Third Edition, John Wiley & Sons Inc., New York (NY), 1999).
Следовательно, термин «защитная группа» относится к группе, используемой для защиты таких реакционных центров при химическом синтезе, например, гидроксильной группы (-OH), аминогруппы (-NH), тиольной группы (-SH), карбонильной группы (-C=O), карбоксильной группы (-COOH). Примерами защитных групп являются группы, описанные в литературе (смотри, например, там же).
Термин «защитная группа азота» относится к группе, которая образует с атомом азота карбаматы, амиды, циклические имиды, N-алкил- и N-ариламины. Такие защитные группы хорошо известны в данной области (смотри, например, там же). Неограничительными примерами карбаматных защитных групп являются, например, метил- и этилкарбамат, 9-флуоренилметилкарбамат (Fmoc), 2,2,2-трихлорэтилкарбамат (Troc), трет-бутил карбамат (BOC), винилкарбамат (Voc), аллилкарбамат (Alloc), бензилкарбамат (Cbz), п-нитробензил и подобные. Неограничительными примерами амидов являются, например N-трихлорацетамид, N-трифторацетамид (ТФА) и подобные. Неограничительными примерами циклических имидных защитных групп являются, например, N-фталимид, N-дитиасукциноилимид (Dts) и подобные. Неограничительными примерами N-алкильных и N-арильных защитных групп являются, например, N-аллиламин, N-бензиламин и подобные.
Термин «защитная группа гидроксила» относится к группе, которая образует с атомом кислорода простые эфиры, сложные эфиры, циклические ацетали или кетали. Такие защитные группы хорошо известны в данной области (смотри, например, там же). Неограничительными примерами простых эфирных защитных групп являются, например, простые алкиловые эфиры и простые бензиловые эфиры, такие как метоксиметиловый эфир (MOM-OR), тетрагидропираниловый эфир (THP-OR), аллиловый эфир (аллил-OR), бензиловый эфир (Bn-OR), трифенилметиловый эфир (Tr-OR) и подобные, или простые силиловые эфиры, такие как триметилсилиловый эфир (TMS-OR), трет-бутилдиметилсилиловый эфир (TBS-OR или TBDMS-OR), трет-бутилдифенилсилиловый эфир (TBDPS-OR) дифенилметилсилиловый эфир (DPMS-OR) и подобные. Неограничительными примерами сложноэфирных защитных групп являются, например, трифторацетат, бензоат (Bz-OR) и карбонаты, такие как этилкарбонат и подобные. Неограничительными примерами защитных групп на базе циклических ацеталей или кеталей являются, например, метиленацеталь, этилиденацеталь, метоксиметиленацеталь и подобные.
Термин «активирующий фрагмент» относится к функциональной группе, которая повышает химическую активность химической функции, к которой активирующий фрагмент присоединен. Химические функции, которые можно активировать таким образом, представляют собой, например, амин и карбонил. Примерами активированных аминов являются алкилсульфонилоксиамин, алкилсульфонилоксикарбамат, фенилсульфонилоксиамин, фенилсульфонилоксикарбамат. Примерами активированных карбонильных групп являются, например, активированные сложные эфиры.
Термин «активный сложный эфир» относится к функциональной группе, в которой алкоксигруппа сложноэфирного фрагмента является подходящей уходящей группой. Примеры таких алкоксигрупп включают, но не ограничены этим, сукцинимид-N-оксид (NHS сложные эфиры), пара-нитрофеноксид, пентафторфеноксид, тетрафторфеноксид, 1-гидроксибензотриазол и 1-гидрокси-7-азабензотриазол, и группы со сравнимой способностью расщепления. Незамещенные алкокси группы на базе алкилов, такие как метокси, этокси, изопропокси и трет-бутокси не квалифицируются как подходящие уходящие группы, и, следовательно, метиловые, этиловые, изопропиловые и трет-бутиловые сложные эфиры не считаются активными сложными эфирами.
2
Термин «электроноакцепторная группа» относится к группе атомов, которая оттягивает на себя электронную плотность с соседних атомов, обычно вследствие резонансных или индуктивных эффектов. Неограничительными примерами являются атомы галогенов, трифторметильная группа, нитрогруппа (NO) и нитрил (CN).
Термин «нуклеофилы» относится к молекулам, которые несут нуклеофильную группу. Термин «нуклеофильная группа» относится к группе, которая при химическом взаимодействии передает электронную пару электрофильной группе, образуя химическую связь. Примеры таких нуклеофильных групп включают, но не ограничены этим, атомы галогенов, амины, нитриты, азиды, гидроксилы, алкоксидные анионы, карбоксилатные анионы, тиолы, тиолаты и т.д.
Термин «электрофильная группа» относится к группе, которая при химическом взаимодействии принимает электронную пару от нуклеофильной группы, образуя химическую связь. Примеры таких электрофильных групп включают, но не ограничены этим, сложные эфиры, альдегиды, амиды, кетоны и т.д.
Термин «искусственная аминокислота» относится к D-стереоизомеру встречающейся в природе аминокислоты (L-стереоизомера). Предпочтительными антрациклиновыми фрагментами (Ant) являются соединения формул (IIa), (IIIa), (IVa) и (Va), изображенных ниже:
где R1, R2 и R15 такие, как определено выше.
Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I) также включают соли с неорганическими или органическими основаниями, например, гидроксидами, карбонатами или бикарбонатами щелочных или щелочноземельных металлов, главным образом натрия, калия, кальция, аммония или магния, aциклическими или циклическими аминами.
Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I) включают соли с неорганическими или органическими кислотами, например, азотной, соляной, бромистоводородной, серной, хлорной, фосфорной, уксусной, трифторуксусной, пропионовой, гликолевой, фумаровой, молочной, щавелевой, малоновой, яблочной, малеиновой, винной, лимонной, бензойной, коричной, миндальной, метансульфоновой, изэтионовой и салициловой кислотой.
Если в соединении по настоящему изобретению присутствует стереогенный цнтр или другой вид изомерного центра, то все формы такого изомера или изомеров, включая энантиомеры и диастереомеры, считаются охваченными изобретением. Соединения, содержащие стереогенный центр, можно применять в виде рацемической смеси, энантиомерно обогащенной смеси, или рацемическую смесь можно разделить, применяя хорошо известные методики и применять индивидуальный энантиомер сам по себе. В случаях, когда соединения имеют ненасыщенные углерод-углеродные двойные связи, оба изомера, цис (Z) и транс (E), включены в область изобретения.
В случаях, когда соединения могут существовать в виде таутомерных форм, каждая форма считается включенной в область изобретения, существуют ли формы в равновесии или преимущественно имеется одна форма.
Условно расщепляемый фрагмент L
Фрагмент L, если присутствует, представляет собой условно расщепляемую группу, которую можно отщепить химическим, фотохимическим, физическим, биологическим или ферментативным способом после введения или в определенных условиях. Одним из этих условий может быть, например, введение соединения по изобретению в водную среду, что приводит к гидролизу L, или введение соединения по изобретению в среду, которая содержит фермент, распознает и расщепляет L, или введение соединения по изобретению в восстановительных условиях, что приводит к восстановлению и/или удалению L, или введение соединения по изобретению в окислительных условиях, что приводит к окислению и удалению L, или воздействие на соединение по изобретению излучением, например, УФ-светом, что приводит к расщеплению L, или воздействие на соединение по изобретению теплом, что приводит к расщеплению L. Это условие может выполняться непосредственно после введения соединения по данному изобретению животному, например, млекопитающему, например человеку, благодаря присутствию убиквитарных ферментов в кровеносной системе. По-другому, указанное условие может выполняться, если соединение локализуется в конкретном органе, ткани, клетке, внутриклеточной мишени или бактериальной, вирусной или микробной мишени, например при наличии внутренних факторов (например, мишень-специфических ферментов или гипоксии) или приложении внешних факторов (например, облучения, магнитных полей).
В одном варианте осуществления, L может представлять собой фрагмент, который расщепляется ферментом, или в гидролитических условиях, присутствующих поблизости, или внутри клеток-мишеней по сравнению с другими частями организма, или ферментом или в гидролитических условиях, присутствующих только поблизости или внутри клеток-мишеней. Важно понимать, что если специфичность целевого места достигается только на основании селективного преобразования и/или расщепления указанного L на целевом месте, то условие, вызывающее расщепление, должно предпочтительно, по меньшей мере, до некоторой степени, быть специфическим относительно целевого места.
В одном варианте осуществления, расщепление L происходит внутриклеточно.
В другом варианте осуществления, расщепление L происходит вне клетки.
В другом варианте осуществления, расщепление L происходит под действием убиквитарного внутриклеточного фермента.
Расщепление связи Ant-L высвобождает антрациклины формулы (II)', (III)', (IV)' или (V)', которые указаны ниже:
В предпочтительном варианте осуществления L может представлять собой фрагмент, который может быть расщеплен убиквитарными ферментами, например, эстеразами, которые присутствуют в кровеносной системе, или внутриклеточными ферментами, такими как, например, протеазы и фосфатазы, или посредством рН-регулируемого гидролиза. Следовательно, L может образовывать, необязательно вместе с соединительным атомом, амидную, аминную, сложноэфирную, простую эфирную или гидразонную связь, которая может расщепляться in vivo.
В еще более предпочтительном варианте осуществления, если Ant имеет формулу (IIа), L независимо отсутствует или обозначает группу, выбранную из формул (VI), (VIb) и (VIc):
где:
1
6
C-С алкил представляет собой такой, как определено выше; R3 отсутствует, и волнистой линией обозначено место присоединения к Ant.
В другом более предпочтительном варианте осуществления, если Ant обозначает соединение формулы (IIIa), то L независимо отсутствует или обозначает группу, выбранную из формул (VIIa) и (VIIb):
где:
1
4
R9 независимо отсутствует или обозначает линейный или разветвленный C-C алкил или гидрокси;
n равно целому числу от 0 до 2, и
волнистой линией обозначено место присоединения к Ant.
В другом более предпочтительном варианте осуществления, если Ant имеет формулу (IVa), то L независимо отсутствует или обозначает группу формулы (VIIIa):
где
R3 такой, как определено выше, и волнистой линией обозначено место присоединения к Ant.
В другом более предпочтительном варианте осуществления, если Ant имеет формулу (Va), L независимо отсутствует или обозначаем группу, выбранную из формул (IXa)-(IXd):
где:
1
6
C-С алкил представляет собой линейную или разветвленную цепь, R3 отсутствует, и волнистой линией обозначено место присоединения к Ant.
Саморасщепляющаяся система W
Группа W, если присутствует, представляет собой саморасщепляющуюся систему, которая в соединении формулы (I) стабильно привязывает фрагмент L к другой части производного формулы (I) (Z-RM). Связь между L и W или между W и Ant, если L отсутствует, может стать лабильной после активации химическим, фотохимическим, физическим, биологическим или ферментативным способом, после введения или в определенных условиях, которые описаны выше, что необязательно приводит к высвобождению соответствующих фрагментов:
Можно включить саморасщепляющуюся систему в соединение формулы (I), например, для улучшения растворимости или для корректировки пространства между антрациклиновым фрагментом и реакционноспособным фрагментом RM; кроме того, указанная саморасщепляющаяся группа может модулировать реакционную способность RM в отношении нуклеофилов.
Саморасщепляющиеся системы известны специалистам в данной области (смотри, например, системы, описанные в WO 2002/083180 и WO 2004/043493); или системы, описанные в работах Tranoy-Opalinsi, А. и др., Anticancer Agents in Medicinal Chemistry, 2008, 8, 618-637, Ahmed Alouane и др. Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 7492-7509. Другие примеры саморасщепляющихся групп включают, но не ограничены этим, необязательно замещенные амиды 4-аминомасляной кислоты, соответственно замещенные бицикло[2.2.1] и бицикло[2.2.2] циклические системы или амид 2-аминофенилпропионовой кислоты [смотри WO 2005/079398, WO 2005/105154 и WO 2006/012527; Greenwald, R.B., и др., Adv. Drug Delivery Rev. 2003, 55, 217-250; Kingsbury, W.D., и др., J. Med. Chem. 1984, 27, 1447-1451].
В предпочтительном варианте осуществления W вместе с соединительным атомом(ами) может образовывать карбонатную, карбаматную, карбамидную, сложноэфирную, амидную или простую эфирную связь, которая может необязательно расщепляться при активации.
В еще более предпочтительном варианте осуществления W независимо отсутствует или обозначает группу, выбранную из формул (Xa)-(Xf):
где
один из двух заместителей R3 представляет собой связь с L или с Ant, если L отсутствует, и другой отсутствует или обозначает атом водорода;
1
4
R10 и R11 каждый независимо обозначает атом галогена, метил, этил или линейный или разветвленный C-C гидроксиалкил;
m равно целому числу от 0 до 3;
1
3
2
A обозначает линейную или разветвленную C-C алкильную цепь, -CHNH-, -NH- или N-R10, где R10 такой, как определено выше; и
1
4
1
4
R12 и R13 каждый независимо обозначает атом водорода, атом галогена, метил, этил, линейный или разветвленный C-C гидроксиалкил, линейный или разветвленный C-C галогеналкил, или R12 и R13, взятые вместе, образуют (3-6)-членный карбоцикл.
Линкер Z
Линкер Z, если присутствует, может представлять собой пептид (Z1), непептид (Z2) или гибрид (Z3), где указанный гибридный линкер представляет собой пептид и непептид; в соединении формулы (I) указанный линкер Z можно расщепить химическим, фотохимическим, физическим, биологическим или ферментативным способом после введения или в определенных условиях, которые описаны выше, что необязательно приводит к высвобождению соответствующих фрагментов (смотри, например, Dubowchik G. M. и др., Bioorg. Med. Chem. Lett. 8, 1998, 3347-3352; Burke P. J. и др., Bioorg. Med. Chem. Lett. 19, 2009, 2650-2653):
Связь между Z и фрагментом Ant-L-W, Ant-L (если W отсутствует) или Ant (если L и W оба отсутствуют) может стать лабильной при активации химическим, фотохимическим, физическим, биологическим или ферментативным способом, после введения или в определенных условиях, которые описаны выше, что необязательно приводит к высвобождению соответствующих фрагментов.
Связь между Z и соединительным атомом(ами) может образовывать карбонатную, карбаматную, карбамидную, сложноэфирную, амидную, тиоамидную или дисульфидную группу.
Линкер Z может быть линейным или разветвленным.
В одном варианте осуществления Z отсутствует.
В другом варианте осуществления Z представляет собой пептидный линкер Z1, который может отщепиться под действием протеолитического фермента, плазмина, катепсина, β-глюкуронидазы, галактозидазы, простата-специфического антигена (PSA), активатора плазминогена типа урокиназы (u-PA) или члена семейства матричных металлопротеиназ.
В другом варианте осуществления Z представляет собой непептидный линкер Z2, который может содержать один или более непептидных водорастворимых фрагментов. В этом случае линкер вносит вклад в растворимость соединения формулы (I) в воде. В другом варианте осуществления Z2 представляет собой непептидный линкер, который может содержать один или более непептидных фрагментов, которые снижают агрегацию соединения формулы (I), которые могут быть или не быть фрагментом/фрагментами, которые также повышают растворимость в воде соединения формулы (I).
Например, непептидные водорастворимые Z2 линкеры могут содержать олигоэтиленгликольный или полиэтиленгликольный фрагмент или его производное.
В другом варианте осуществления Z представляет собой гибридный линкер Z3, который может содержать оба остатка, пептидный и непептидный, общей формулы Z1-Z2, где Z1 и Z2 независимо представляют собой пептидный линкер или непептидный линкер. Гибридные линкеры могут вносить вклад в растворимость соединения формулы (I) и/или могут представлять собой субстрат, который может расщепляться под действием протеолитических ферментов, например, члена семейства матричных металлопротеиназ.
В предпочтительном варианте осуществления Z1 обозначает отдельную аминокислоту, дипептидный, трипептидный, тетрапептидный или олигопептидный фрагмент, содержащий природные L-аминокислоты, искусственные D-аминокислоты, синтетические аминокислоты или любые их комбинации, где один из C-терминальных или N-терминальных аминокислотных остатков связан с Ant, W или L, и другой терминальный аминокислотный остаток необязательно связан с RM.
В еще более предпочтительном варианте осуществления Z1 представляет собой дипептид или трипептид, связанный через свой C-конец с W, или L, если W отсутствует, или с Ant, если W и L оба отсутствуют.
В другом более предпочтительном варианте осуществления C-терминальный аминокислотный остаток дипептида или трипептида выбран из глицина, лейцина, аланина, аргинина и цитруллина; и N-терминальный аминокислотный остаток выбран из любых природных или искусственных аминокислот; предпочтительно в случае трипептида средний аминокислотный остаток выбран из аланина, валина, лейцина, изолейцина, метионина, фенилаланина, цитруллина и пролина.
В другом более предпочтительном варианте осуществления Z1 содержит пентапептид, где C-терминальная аминокислота выбрана из любых природных или искусственных аминокислот, и N-терминальный аминокислотный остаток представляет собой 6-аминокапроевую кислоту.
В предпочтительном варианте осуществления Z2 может содержать олигоэтиленгликольный или полиэтиленгликольный фрагмент или его производное.
В еще более предпочтительном варианте осуществления Z2 представляет собой группу, выбранную из формул (XIa)-(XIf):
где
один из двух R3 связан с Ant, W или L, и другой отсутствует или обозначает атом водорода, и
p равно целому числу от 1 до 20.
В предпочтительном варианте осуществления Z3 представляет собой гибридный фрагмент, содержащий пептидный фрагмент Z1, где Z1 обозначает отдельную аминокислоту, дипептид, трипептид или тетрапептид, содержащий природные L-аминокислоты и искусственные D-аминокислоты; и непептидный фрагмент Z2, где Z2 представляет собой олигоэтиленгликольный или полиэтиленгликольный фрагмент или его производное.
В другом предпочтительном варианте осуществления Z выбран из формул (XIIa)-(XIIn):
где
один из двух заместителей R3 представляет собой связь с Ant, W или L, и другой отсутствует или обозначает атом водорода.
Реакционноспособный фрагмент RM
Фрагмент RM, если присутствует, представляет собой электрофильную группу, которая может взаимодействовать с нуклеофилами, то есть молекулами, которые несут нуклеофильную группу, в относительно мягких условиях и без необходимости
предварительной функционализации реакционноспособного фрагмента, причем указанное взаимодействие между указанным реакционноспособным фрагментом и указанным нуклеофилом требует только применения одного или нескольких агентов, выбранных из группы, включающей тепло, давление, катализатор, кислоту и основание.
Связь между RM и Z, или между RM и W (если Z отсутствует), или между RM и L (если W и Z оба отсутствуют), или между RM и Ant (если L, W и Z все отсутствуют) можно расщепить химическим, фотохимическим, физическим, биологическим или ферментативным способом, после введения или в определенных условиях, которые описаны выше, что необязательно приводит к высвобождению соответствующих фрагментов.
Следовательно, если присутствует RM фрагмент, то соединение формулы (I) соединяется с различными типами нуклеофилов.
Если RM отсутствует, то соединение формулы (I) соединяется с различными типами электрофилов, то есть молекулами, которые несут электрофильную группу, по одной или нескольким нуклеофильным группам, которые присутствуют на фрагменте(ах) L, W и/или Z, например, аминным, тиольным и спиртовым группам.
Примеры реакционноспособных фрагментов включают, но не ограничены этим, карбамоилгалогенид, ацилгалогенид, активированный сложный эфир, ангидрид, α-галогенацетил, α-галогенацетамид, малеимид, изоцианат, изотиоцианат, дисульфид, тиол, гидразин, гидразид, сульфонилхлорид, альдегид, метилкетон, винилсульфон, галогенметил и метилсульфонат.
2,
В предпочтительном варианте осуществления изобретения, если нуклеофильная группа нуклеофила, с которой может взаимодействовать RM, представляет собой NH, NH SH или OH, то RM независимо отсутствует или выбран из формул (XIIIa)-(XIIIm):
1
3
2
где R14 обозначает C-C алкил или электроноакцепторную группу, содержащую NO и CN группу;
r равно целому числу от 0 до 7; R10, R12 и R13 такие, как определено выше, и
волнистой линией обозначено место присоединения в производном формулы (I).
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, если нуклеофильная группа нуклеофила, с которой может взаимодействовать RM, представляет собой COOH, то RM независимо отсутствует или обозначает группу, выбранную из формул (XIIIj)-(XIIIk)
Из всего вышесказанного следует отметить, что морфолинилантрациклиновое производное формулы (I) можно расщепить по всем связям, связывающим фрагменты L, W, Z и RM, высвобождая указанные антрациклины формулы (II)', (III)', (IV)' или (V)'.
Конкретные неограничителные предпочтительные соединения (соед.) формулы (I) по настоящему изобретению, необязательно в виде фармацевтически приемлемых солей, выбраны из группы, включающей следующие соединения (1)-(20), (23)-(27), (75)-(78):
Справочную информацию по какому-либо конкретному соединению формулы (I) по изобретению, необязательно в виде фармацевтически приемлемой соли, смотри в экспериментальном параграфе и формуле изобретения.
Настоящее изобретение также касается способа получения соединения формулы (I), которое определено выше, применяя описанные ниже реакционные пути и синтетические схемы, используя методики, доступные в данной области и легко доступные исходные материалы. Подготовка некоторых вариантов осуществления настоящего изобретения описана в примерах, которые следуют далее, но рядовым специалистам в данной области понятно, что описанную подготовку можно легко адаптировать для подготовки других вариантов осуществления настоящего изобретения. Например, можно выполнять синтез непроиллюстрированных соединений по изобретению, применяя модификации, ясные для специалистов в данной области, например, защищая соответствующим образом мешающие группы, превращая в другие подходящие реагенты, известные в данной области или выполняя рутинные модификации условий взаимодействия. В альтернативном варианте другие взаимодействия, упоминаемые здесь или известные в данной области, признаются как адаптируемые для получения других соединений по изобретению.
Способы синтеза
Производные формулы (I) можно получить несколькими способами, используя реакции органической химии, условия и реагенты, известные специалистам в данной области. Производные формулы (I) можно получить, присоединяя каждый фрагмент последовательно, то есть добавляя каждый фрагмент друг за другом, или одновременно, то есть получая усовершенствованные промежуточные продукты и в заключение связывая их, получая требуемые производные.
Реакции сочетания включают неограничительные примеры, такие как:
(1) взаимодействие нуклеофильной или электрофильной группы антрациклина формулы (II)', (III)', (IV)' и (V)' с двухвалентным реагентом L с образованием промежуточного продукта Ant-L посредством ковалентного связывания, необязательно с последующим взаимодействием с двухвалентным реагентом W с образованием промежуточного продукта Ant-L-W посредством ковалентного связывания, необязательно с последующим взаимодействием с двухвалентным реагентом Z с образованием промежуточного продукта Ant-L-W-Z посредством ковалентного связывания, и в заключение необязательно с последующим взаимодействием с реакционноспособным фрагментом RM с образованием конечного функционализированного морфолинилантрациклинового производного (I);
(2) взаимодействие нуклеофильной или электрофильной группы антрациклина формулы (II)', (III)', (IV)' и (V)' с двухвалентным реагентом L-W-Z- с образованием Ant-L-W-Z посредством ковалентного связывания с последующим взаимодействием с реакционноспособным фрагментом RM с образованием конечного функционализированного морфолинилантрациклинового производного (I);
(3) взаимодействие нуклеофильной или электрофильной группы антрациклина формулы (II)', (III)', (IV)' и (V)' с реагентом L-W-Z-RM с образованием конечного функционализированного морфолинилантрациклинового производного (I).
Функционализированные производные (I) можно далее связать с различными белками, лекарственными фрагментами, пептидами, аптамерами, полимерами или наночастицами, получая соединения-конъюгаты лекарств.
Нуклеофильные группы на промежуточных продуктах включают, но не ограничены этим: (i) N-терминальные аминогруппы, (ii) аминогруппы в боковой цепи, например, лизин, (iii) тиольные группы в боковой цепи, например, цистеин, (iv) гидроксильные группы. Эти группы способны взаимодействовать с электрофильными группами на линкерных фрагментах и линкерных реагентах, включающих: (i) активные сложные эфиры, такие как сложные эфиры NHS (N-гидроксисукцинимид), сложные эфиры HOBt, галогенформиаты и галогенангидриды кислот; (ii) алкил- и бензилгалогениды, такие как галогенацетамиды; (iii) альдегидные, кетонные, карбоксильные и малеимидные группы.
Получение антрациклинов формулы (II)', (III)', (IV)' и (V)'
Антрациклины формул (II)', (III)', (IV)' и (V)', которые взаимодействуют при получении производных формулы (I), можно получить по любому из альтернативных путей, суммированных ниже на схеме X; также на схеме X приведено получение промежуточного соединения формулы (XXIV) по пути F и получение исходного соединения формулы (XX) по пути G.
Схема X
Путь A
Соединение формулы (II)' или (V)', которые определены выше, где R1 такой, как определено выше, и R2 обозначает OR6 или NR7R8, где R6, R7 и R8 такие, как определено выше, получают, как суммировано ниже на схеме A.
Схема A
Таким образом, способ по настоящему изобретению включает следующие стадии:
A1) взаимодействие соединения формулы (XX)
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
где R1 обозначает атом галогена или NR4R5, где R4 и R5 независимо обозначают атом водорода, монозамещенный бензил, дизамещенный бензил или необязательно замещенную группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила, NR7R8-C-C алкила, R6O-C-C алкила, R7R8N-C-C алкилкарбонила-, R6O-C-C алкилкарбонила, R7R8N-C-C алкоксикарбонила и R6O-C-C алкоксикарбонила; или R4 и R5, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, замещенный R4', где R4' обозначает атом водорода или группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила и NR7R8-C-C алкила, и R6, R7 и R8 независимо обозначают атом водорода или необязательно замещенный линейный или разветвленный C-C алкил;
с соединением формулы (XXI)
где X и Y, одинаковые или разлные, представляют собой уходящие группы, предпочтительно атомы галогенов;
A2) взаимодействие полученного соединения формулы (XXII)
где R1 такой, как определено выше,
с этилформиатом и бромом, затем добавляя HBr;
A3) взаимодействие полученного соединения формулы (XXIII)
где R1 такой, как определено выше, с агентом формилирования;
A4) окисление результирующего соединения формулы (XXIV)
где R1 такой, как определено выше;
A5) взаимодействие полученного соединения формулы (XXV)
где R1 такой, как определено выше,
с соединением формулы (XXVa) или (XXVb)
R6-OH (XXVa); R7R8NH (XXVb)
где R6, R7 и R8 такие, как определено выше;
A6a) взаимодействие полученного соединения формулы (XXVI)
где R1 такой, как определено выше, и R2 обозначает OR6 или NR7R8,
сначала с DMDO;
A6b) далее обработка результирующего соединения формулы (XXVII)
где R1 и R2 такие, как определено выше, хлорангидридом циануровой кислоты или солью железа (II) и в заключение, если требуется, удаление защитной группы(групп) с атома азота и/или гидроксила с получением соединения формулы (II)'
где R1 и R2 такие, как определено выше;
необязательно преобразование первого соединения формулы (II)', которое определено выше, во второе соединение формулы (II)' по известным химическим реакциям; и/или, если требуется, преобразование соединения формулы (II)' в его фармацевтически приемлемую соль или преобразование соли в свободное соединение формулы (II)'.
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
Отмечается, что если R1 представляет собой NH-R4, где R4 обозначает атом водорода, NR7R8-C-C алкил, R6O-C-C алкил, R7R8N-C-C алкилкарбонил, R6O-C-C алкилкарбонил, R7R8N-C-C алкоксикарбонил и R6O-C-C алкоксикарбонил, где R8 обозначает H, и R7 такой, как определено выше, то производное формулы (II)' соответствует производному формулы (V)', следовательно, считают, что описанное выше получение также касается получения производного формулы (V)'.
Согласно стадии A1), взаимодействие соединения формулы (XX) с соединением формулы (XXI) выполняют в органическом растворителе, предпочтительно ДМФА, при комнатной температуре, по известным методикам, описанным в данной области (смотри, например, WO91/09046).
Согласно стадии A2), взаимодействие соединения формулы (XXII) с этилформиатом и бромом и затем с HBr выполняют за две стадии по известным методикам, описанным в данной области (смотри, например, Doxorubicin Anticancer Antibiotics Vol. 17, 1981, p.168; F. Arcamone и др. J. Med. Chem. 1974, 17, p. 335).
3
Согласно стадии A3), взаимодействие с получением соединения формулы (XXIV) выполняют по известным методикам, описанным в данной области (смотри, например, Doxorubicin Anticancer Antibiotics Vol. 17, 1981, p.168; US3803124). Примером, который не предназначен для ограничения способа, является взаимодействие соединения формулы (XXIII) с формиатом натрия. Взаимодействие выполняют в CHCN, или ацетоне, или их смеси, при температуре от примерно 20°C до температуры кипения с обратным холодильником и в течение периода примерно от 30 мин. до примерно 24 час.
4
Согласно стадии A4), окисление соединения формулы (XXIV) выполняют с использованием окислителя, предпочтительно NaIO. Взаимодействие выполняют в MeOH, или воде, или их смеси при температуре от примерно 20°C до температуры кипения с обратным холодильником и в течение периода примерно от 30 мин. до примерно 24 час.
Согласно стадии A5), реакцию сочетания между соединением формулы (XXV) и соединением формулы (XXVa) или (XXVb) выполняют по известным методикам, описанным в данной области (информацию по основным связующим реагентам смотри, например, в «Amino Acids, Peptides and Proteins in Organic Chemistry: Building Blocks, Catalysis and Coupling Chemistry», Volume 3, Andrew B. Hughes, Ayman El-Faham, Fernando Albericio, 2010). Примером, который не предназначен для ограничения способа, является взаимодействие соединения формулы (XXV) с соединением формулы (XXVa) в присутствии конденсирующего агента, например, DCC или EDC. Взаимодействие проводят в органическом растворителе, предпочтительно ДМФА, при температуре от примерно 20°C до температуры кипения с обратным холодильником и в течение периода примерно от 30 мин. до примерно 24 час.
Согласно стадиям A6a) и A6b), взаимодействие соединения формулы (XXVI) сначала с DMDO и затем взаимодействие результирующего соединения формулы (XXVII) с хлорангидридом циануровой кислоты или солью железа (II) проводят по известным методикам, описанным в данной области (смотри, например, GB2296495A; WO2012073217; WO9802446).
th
Удаление защитной группы с атома азота и/или гидрокси, если необходимо, выполняют по известным методикам, описанным в данной области (смотри, например, «Protective Groups in Organic Synthesis», Theodora W. Greeen, Peter G. M. Wuts 4 edition).
Путь B
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
Соединение формулы (II)', которое определено выше, где R1 обозначает атом галогена или NR4R5, где R4 и R5 независимо обозначают атом водорода, монозамещенный бензил, дизамещенный бензил, или необязательно замещенную группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила, NR7R8-C-C алкила, R6O-C-C алкила, R7R8N-C-C алкилкарбонила, R6O-C-C алкилкарбонила, R7R8N-C-C алкоксикарбонила и R6O-C-C алкоксикарбонила; или
1
6
1
6
R4 и R5, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, замещенный R4', где R4' обозначает атом водорода или группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила и NR7R8-C-C алкила;
1
6
R6, R7 и R8 независимо обозначают атом водорода или необязательно замещенный линейный или разветвленный C-C алкил;
и R2 обозначает метил, получают, как суммировано ниже на схеме B.
Схема B
Таким образом, способ по настоящему изобретению включает следующую стадию:
B1) взаимодействие соединения формулы (XXII), которое определено на пути A, в таких же условиях как условия, сообщенные здесь для стадий A6a) и A6b),
с получением соединения формулы (II)'
где R1 и R2 такие, как определено выше;
необязательно преобразование первого соединения формулы (II)', которое определено выше, во второе соединение формулы (II)' по известным химическим реакциям; и/или, если требуется, преобразование соединения формулы (II)' в его фармацевтически приемлемую соль или преобразование соли в свободное соединение формулы (II)'.
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
Отмечается, что если R1 представляет собой NH-R4, где R4 обозначает атом водорода, NR7R8-C-C алкил, R6O-C-C алкил, R7R8N-C-C алкилкарбонил, R6O-C-C алкилкарбонил, R7R8N-C-C алкоксикарбонил и R6O-C-C алкоксикарбонил, где R8 обозначает H, и R7 такой, как определено выше, то производное формулы (II)' соответствует производному формулы (V)', следовательно, считают, что описанное выше получение также касается получения производного формулы (V)'.
Согласно стадии B1), выполняют взаимодействие, соответственно, как описано выше для стадий A6a) и A6b).
Путь C
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
Соединение формулы (III)', где R1 представляет собой атом галогена или NR4R5, где R4 и R5 независимо обозначают атом водорода, монозамещенный бензил, дизамещенный бензил или необязательно замещенную группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила, NR7R8-C-C алкила, R6O-C-C алкила, R7R8N-C-C алкилкарбонила, R6O-C-C алкилкарбонила, R7R8N-C-C алкоксикарбонила и R6O-C-C алкоксикарбонила; или
1
6
1
6
R4 и R5, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, замещенный R4', где R4' обозначает атом водорода или группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила и NR7R8-C-C алкила;
1
6
R6, R7 и R8 независимо обозначают атом водорода или необязательно замещенный линейный или разветвленный C-C алкил;
получают, как суммировано ниже на схеме C.
Схема C
Таким образом, способ по настоящему изобретению включает следующую стадию:
C) взаимодействие соединения формулы (XXIV), которое определено на пути A, в таких же условиях, как условия, сообщенные выше для стадий A6a) и A6b),
с получением соединения формулы (III)'
где R1 такой, как определено выше.
Путь D
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
Соединение формулы (IV)', где R1 обозначает атом галогена или NR4R5, где R4 и R5 независимо обозначают атом водорода, монозамещенный бензил, дизамещенный бензил или необязательно замещенную группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила, NR7R8-C-C алкила, R6O-C-C алкила, R7R8N-C-C алкилкарбонила, R6O-C-C алкилкарбонила, R7R8N-C-C алкоксикарбонила и R6O-C-C алкоксикарбонила; или
1
6
1
6
R4 и R5, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, замещенный R4', где R4' обозначает атом водорода или группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила и NR7R8-C-C алкила;
1
6
R6, R7 и R8 независимо обозначают атом водорода или необязательно замещенный линейный или разветвленный C-C алкил;
и R2 обозначает гидрокси, получают, как суммировано ниже на схеме D.
Схема D
Таким образом, способ по настоящему изобретению включает следующую стадию:
D) взаимодействие соединения формулы (XXV), которое определено на пути A, в таких же условиях, как условия, сообщенные выше для стадий A6a) и A6b),
с получением соединения формулы (IV)'
где R1 такой, как определено выше, и R2 обозначает гидрокси.
Путь F
Производное формулы (XXIV), которое определено на пути A, получают по-другому, согласно приведенной ниже схеме F.
Схема F
Таким образом, способ по настоящему изобретению включает следующие стадии:
F1) взаимодействие соединения формулы (XXVIII)
где R1 обозначает атом галогена или NR4R5, где R4 и R5 такие, как определено выше, с бромом и ацетатом калия;
F2) взаимодействие полученного соединения формулы (XXIX)
где R1 такой, как определено выше, с сахаром формулы (XXIXa)
где R23 и R24 независимо обозначают атом водорода или подходящую защитную группу для атома азота или гидрокси, например, трифторацетил или бензил;
F3) взаимодействие полученного соединения формулы (XXX)
где R1, R23 и R24 такие, как определено выше, с этилформиатом и пара-толуолсульфонатом пиридиния (PPTS);
F4) взаимодействие полученного соединения формулы (XXXI)
где R1 и R24 такие, как определено выше, с соединением формулы (XXI), которое определено выше;
F5) удаление защиты с результирующего соединения формулы (XXXII)
где R1 и R24 такие, как определено выше, с получением соединения формулы (XXIV), которое определено выше.
Согласно стадии F1), выполняют взаимодействие в органическом растворителе, предпочтительно в ацетоне или диоксане, при температуре от 20°C до температуры кипения с обратным холодильником и в течение периода примерно от 30 мин. до примерно 24 час.
Согласно стадии F2), выполняют реакцию гликозидирования соединения формулы (XXIX) в присутствии трифторметансульфоната серебра по известным методикам, описанным в данной области (смотри, например, GB2225781, GB2215332A).
Согласно стадии F3), выполняют реакцию с получением соединения формулы (XXXI), проводя взаимодействие соединения формулы (XXX) с этилформиатом и PPTS. Взаимодействие выполняют в органическом растворителе, предпочтительно ДХМ, при температуре от 0°C до температуры кипения с обратным холодильником и в течение периода примерно от 30 мин. до примерно 24 час.
Согласно стадии F4), выполняют взаимодействие, как описано выше для стадии A1.
th
Согласно стадии F5), выполняют удаление защитной группы с гидроксила по известным методикам, описанным в данной области (смотри, например, «Protective Groups in Organic Synthesis», Theodora W. Greeen, Peter G. M. Wuts 4 edition).
Путь G
2
Соединение формулы (XX), которое определено на пути A, где R1 такой, как определено здесь, за исключением NH и атомагалогена, получают по приведенной ниже схеме G.
Схема G
Таким образом, способ по настоящему изобретению включает следующие стадии:
либо
G1) взаимодействие соединения формулы (XXXIII)
где R25 и R26 независимо обозначают атом водорода или подходящую защитную группу гидроксила, например, трифторацетил, 9-флуоренилметил, ди-трет-бутилметилсилил, трет-бутилдифенилсилил, или дифенилметилсилил, Q обозначает атом кислорода или подходящую защитную группу карбонила, например, ацеталь или кеталь, предпочтительно 1-3-диоксан или 1-3-диоксолан, и аминогруппа, если требуется, может быть защищена подходящей защитной группой атома азота,
либо
i) с соединением формулы (XXXIIIa)-(XXXIIId)
1
3
1
3
1
6
1
6
где X представляет собой уходящую группу, предпочтительно атом галогена; R27 и R28, одинаковые или разные, независимо обозначают атом водорода, атом галогена, линейный или разветвленный C-C алкил или C-C алкокси; A обозначает линейный или разветвленный C-C алкил; и R6, R7 и R8 независимо обозначают атом водорода или необязательно замещенный линейный или разветвленный C-C алкил, с получением после удаления защитных групп, если таковые присутствуют, соответствующего соединения формулы (XXVIII),
1
6
1
6
1
6
где R1 обозначает группу формулы NR4R5, где R4 и R5 независимо представляют собой атом водорода, монозамещенный бензил, дизамещенный бензил или необязательно замещенную группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила, NR7R8-C-C алкила и R6O-C-C алкила, но не оба атома водорода;
или
ii) с соединением формулы (XXXIIIe) или (XXXIIIf)
1
6
1
6
где Y' обозначает OH или уходящую группу, предпочтительно атом хлора, и A, R6, R7 и R8 такие, как определено выше, с получением после удаления защитных групп, если таковые присутствуютт, соответствующего соединения формулы (XXVIII), которое определено выше, где R1 обозначает группу формулы NR4R5, где один из R4 и R5 обозначает атом водорода, и другой обозначает группу R7R8N-C-C алкилкарбонил или R6O-C-C алкилкарбонил, где R6, R7 и R8 такие, как определено выше;
или
iii) с соединением формулы (XXXIIIg) или (XXXIIIh)
1
6
1
6
где Y', A, R6, R7 и R8 такие, как определено выше, с получением после удаления защитных групп, если таковые присутствуют, соответствующего соединения формулы (XXVIII), которое определено выше, где R1 обозначает группу формулы NR4R5, где один из R4 или R5 обозначает атом водорода, и другой обозначает группу R7R8N-C-C алкоксикарбонил или R6O-C-C алкоксикарбонил, где R6, R7 и R8 такие, как определено выше;
или
iv) с соединением формулы (XXXIIIi)
1
6
1
6
где W обозначает CH или N, R4' обозначает атом водорода или группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила и NR7R8-C-C алкила, и X представляет собой уходящую группу, предпочтительно атом галогена, с получением после удаления защитных групп, если таковые присутствуют, соединения формулы (XXVIII), которое определено выше, где R1 обозначает группу формулы NR4R5, где R4 и R5, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 6-членный гетероциклил, замещенный R4', где R4' такой, как определено выше;
или
G2) взаимодействие соединения формулы (XXXIII)'
где R25, R26 и Q такие, как определено выше, и R21 представляет собой подходящую уходящую группу, например, мезил, тозил или 4-фторбензолсульфонил, с соединением формулы (XXXIIIm)
1
6
1
6
1
6
где R4 и R5 независимо обозначают атом водорода, монозамещенный бензил, дизамещенный бензил или необязательно замещенную группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила, NR7R8-C-C алкила и R6O-C-C алкила, но не оба атома водорода; или R4 и R5, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, замещенный R4', где R4' такой, как определено выше;
1
6
1
6
1
6
с получением после удаления защитных групп, если таковые присутствуют, соответствующего соединения формулы (XXVIII), которое определено выше, где R1 обозначает группу формулы NR4R5, где R4 или R5 независимо обозначают атом водорода, монозамещенный бензил, дизамещенный бензил или необязательно замещенную группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила, NR7R8-C-C алкила и R6O-C-C алкила, но не оба атома водорода; или R4 и R5, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, замещенный R4', где R4' такой, как определено выше;
G3) взаимодействие полученного соединения формулы (XXVIII)
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
где R1 преодставляет собой группу формулы NR4R5, где R4 и R5 независимо обозначают атом водорода, монозамещенный бензил, дизамещенный бензил или необязательно замещенную группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила, NR7R8-C-C алкила, R6O-C-C алкила, R7R8N-C-C алкилкарбонила, R6O-C-C алкилкарбонила, R7R8N-C-C алкоксикарбонила и R6O-C-C алкоксикарбонила; или
1
6
1
6
R4 и R5, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, замещенный R4', где R4' обозначает атом водорода или группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила и NR7R8-C-C алкила;
1
6
R6, R7 и R8 независимо обозначают атом водорода или необязательно замещенный линейный или разветвленный C-C алкил, полученный со стадий G1i)-G1iv) или на стадии G2),
с соединением формулы (XXIXa), которое определено на стадии F2), в таких же условиях как условия, сообщенные здесь, с получением соединения формулы (XX)
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
где R1 обозначает группу формулы NR4R5, где R4 и R5 независимо обозначают атом водорода, монозамещенный бензил, дизамещенный бензил или необязательно замещенную группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила, NR7R8-C-C алкила, R6O-C-C алкила, R7R8N-C-C алкилкарбонила, R6O-C-C алкилкарбонила, R7R8N-C-C алкоксикарбонила и R6O-C-C алкоксикарбонила; или
1
6
1
6
2
R4 и R5, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, замещенный R4', где R4' обозначает атом водорода или группу, выбранную из линейного или разветвленного C-C алкила и NR7R8-C-C алкила, за исключением NHигалогена;
1
6
R6, R7 и R8 независимо обозначают атом водорода или необязательно замещенный линейный или разветвленный C-C алкил.
Отмечается, что если R8 обозначает атом водорода, то промежуточное соединение формулы (XX) применимо для получения соединения формулы (V)', притом что, если R8 не является атомом водорода, соединение формулы (XX) применимо для получения соединения формулы (II)' по пути A или пути B, описанным выше.
Согласно стадии G1i), реакцию сочетания между соединением формулы (XXXIII) и соединением формулы (XXXIIIa), или (XXXIIIb), или (XXXIIIc), или (XXXIIId) выполняют по известным методикам, описанным в данной области (смотри, например, работу Ngu, K.; Patel, D. V. Tetrahedron Lett 1997, 38 (6), pp. 973-976). В качестве примера, который не предназначен для ограничения способа, проводят взаимодействие в ДХМ при температуре от 20°C до температуры кипения с обратным холодильником и в течение времени от 30 мин. до примерно 24 час.
Согласно стадии G1ii), реакцию сочетания между соединением формулы (XXXIII) и соединением формулы (XXXIIIe) или (XXXIIIf) выполняют по известным методикам, описанным в данной области (информацию по обычным связующим реагентам смотри, например, в «Amino Acids, Peptides and Proteins in Organic Chemistry: Building Blocks, Catalysis and Coupling Chemistry», Volume 3; Andrew B. Hughes, Ayman El-Faham, Fernando Albericio, 2010). Примером, который не предназначен для ограничения способа, является взаимодействие в присутствии конденсирующего агента, например DCC, EDC или формиата натрия. Взаимодействие проводят в органическом растворителе, предпочтительно ДМФА, при температуре от 20°C до температуры кипения с обратным холодильником и в течение времени от 30 мин. до примерно 24 час.
Согласно стадии G1iii), реакцию сочетания между соединением формулы (XXXIII) и соединением формулы (XXXIIIg) или (XXXIIIh) выполняют по известным методикам, описанным в данной области (смотри, например, работу Fukuoka S. и др. J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1984, 6, p. 399).
2
3
Согласно стадии G1iv), реакцию сочетания между соединением формулы (XXXIII) и соединением формулы (XXXIIIi) выполняют по известным методикам, описанным в данной области (смотри, например, работы Ismailov V. и др., Russ J Org Chem, 2004, 40 (2), pp. 284-285; Mewshaw R. E. и др., Bioorg Med Chem Lett 1998, 8 (19), pp. 2675-2680; Mishani E. и др., Tetrahedron Lett 1996, 37 (3), pp. 319-322). В качестве примера, который не предназначен для ограничения способа, проводят взаимодействие в ДМСО, ДХМ, MeOH или их смеси, необязательно в присутствии основания или кислоты Льюиса (например, AlCl) при температуре от 20°C до температуры кипения с обратным холодильником и в течение времени от 30 мин. до примерно 24 час.
3
Согласно стадии G2), проводят взаимодействие, как описано в патентной заявке GB 2215322. В качестве примера, который не предназначен для ограничения способа, проводят взаимодействие в CHCN, ТГФ или ДМФА, необязательно в присутствии основания при температуре от 20°C до температуры кипения с обратным холодильником и в течение времени от 1 до 72 час.
Согласно стадии G3), проводят взаимодействие, как описано выше на стадии F2).
Затем проводят взаимодействие антрациклинов формулы (II)', (III)', (IV)' и (V)' с подходящими реагентами, получая конечные функционализированные производные морфолинилантрациклина формулы (I). Такими реагентами могут быть, например, L, L-W, L-W-Z, L-W-Z-RM и т.д. в зависимости от того, применяют ли способ последовательного или одновременного синтеза для связи фрагментов с целью получения конечных производных формулы (I).
2
Соединения формулы (XXXIII), где R1 обозначает NH, можно получить, как описано в патентной заявке EP288268.
Соединения формулы (XX), где R1 обозначает атом галогена, можно получить, как описано в патентной заявке WO9802446; и в работе Gary W и др. J.O.C 1987, 52, p. 713.
Соединения формулы (XXXIII)' можно получить, как описано в патентной заявке EP288268.
Соединения формулы (XXI), (XXIXa), (XXXIIIa)-(XXXIIIm) либо являются коммерчески доступными, либо их можно получить известными способами.
Из всего вышесказанного специалисту ясно, что если получают соединения формулы (I) любым из упоминаемых выше вариантов синтеза, необязательные функциональные группы в исходных материалах или их промежуточных продуктах, которые могут вызывать нежелательные побочные реакции, необходимо должным образом защищать по общепринятым методикам. Подобным образом можно осуществлять по известным методикам преобразование этих последних в свободные соединения без защиты.
Как легко оценить, если соединения формулы (I), синтезируемые описанным выше способом, получают в виде смеси изомеров, то их разделение с применением общеизвестных методик на отдельные изомеры формулы (I) входит в область настоящего изобретения.
ФАРМАКОЛОГИЯ
Новые производные морфолинилантрациклина по настоящему изобретению представляют собой функционализированные соединения применимые в качестве противоопухолевых агентов или для сопряжения с белками, пептидами, аптамерами, полимерами или наночастицами.
Таким образом, можно лечить млекопитающее, например, человека или животное способом, включающим введение ему фармацевтически эффективного количества морфолинилантрациклинового производного формулы (I). Таким способом можно облегчить или улучшить состояние человека или животного.
Оценку цитотоксичности соединений формулы (I) проводят, как описано ниже.
Исследование пролиферации клеток in vitro.
2
Линии раковых клеток человека высевают на белые 384-ячеечные планшеты (1250 клеток/ячейка) на полную среду (RPMI1640 или E-MEM плюс 10% фетальная телячья сыворотка) и через 24 час. после высевания обрабатывают соединениями, растворенными в 0,1% ДМСО. Клетки инкубируют при 37°C и 5% CO и через 72 час. планшеты обрабатывают, применяя исследование CellTiter-Glo (Promega), следуя инструкции производителей.
CellTiter-Glo представляет собой гомогенный метод, основанный на количественном определении присутствующего АТФ, индикатора метаболически активных клеток. Количество АТФ определяют, используя систему, основанную на люциферазе и D-люциферине, которые обеспечивают генерацию света. Кратко говоря, в каждую ячейку добавляют 25 мкл/ячейка раствора реагента и через 5 мин. встряхивания микропланшеты считывают с помощью люминометра. Люминесцентный сигнал пропорционален числу клеток, присутствующих в культуре.
50
Строят кривые зависимости доза-реакция интерполяцией сигмоидной функции для 8 значений концентрации и представляют антипролиферативную активность соединений как концентрацию полумаксимального ингибирования (IC).
В частности, была оценена цитотоксичность изображенных ниже соединений (21), (22) и (26), которые могут высвобождаться из соединения формулы (I) (таблица 1):
Таблица 1
CI<sub>50</sub> клеточной линии, нМ
Клеточная линия
А2780
HCC1954
HCT-116
HELA
MCF7
MDA-MB_213
MDA-MB_468
Соед.21
0,032
0,377
0,146
0,349
3,52
0,306
0,072
Соед.22
0,044
0,540
0,2
0,7
0,668
0,538
0,313
Соед.26
1,2
4,8
1,1
3,5
3,8
н.о.
2,3
1
6
1
6
3
Эти производные охвачены, соответственно, формулой (II)' (соединение (21), если R1 обозначает фтор и R2 обозначает метил; соединение (22), если R1 обозначает амино и R2 обозначает метил) и формулой (V)' (соединение (22), если R2 обозначает метил и R15 отсутствует; соединение (26), если R2 обозначает метил и R15 обозначает -NR7-C-C алкилкарбонил*, притом что R7 обозначает атом водорода и C-C алкил представляет собой -(S)CH(CH)-).
Как может определить специалист из представленных выше фармакологических данных, эти типичные соединения, а именно (21), (22) и (26), являются особо предпочтительными для противоопухолевой терапии.
Эти соединения представляют собой неограничительные примеры антрациклинов, которые могут высвобождаться in vivo производными формулы (I).
Например, в случае соединения (21) ожидается, что оно будет высвобождаться производным формулы (I), где Ant имеет формулу (IIa), R1 обозначает атом фтора и R2 обозначает метил, как изображено на схеме 1:
Схема 1
В качестве еще одного примера, в случае соединения (22) ожидается, что оно будет высвобождаться либо производным формулы (I), где Ant имеет формулу (IIa), R1 обозначает амино и R2 обозначает метил, либо производным формулы (I), где Ant имеет формулу (Va), R2 обозначает метил и R15 отсутствует, как изображено на схеме 2:
Соединения формулы (I) по настоящему изобретению можно вводить либо в виде отдельных агентов, либо альтернативным способом в комбинации с известными противораковыми методами лечения, такими как лучевая терапия или химиотерапия, в комбинации с цитостатическими или цитотоксических агентами, агентами типа антибиотиков, алкилирующими агентами, антиметаболическими агентами, гормональными агентами, иммунологическими агентами, агентами типа интерферона, ингибиторами циклооксигеназы (например, ингибиторами COX-2), ингибиторами матричной металлопротеазы, ингибиторами теломеразы, ингибиторами тирозинкиназы, антагонистами рецепторов факторов роста, анти-HER агентами, анти-EGFR агентами, агентами против ангиогенеза (например, ингибиторами ангиогенеза), ингибиторами фарнезилтрансферазы, ингибиторами ras-raf пути сигнальной трансдукции, ингибиторами клеточного цикла, другими ингибиторами cdk, тубулин-связывающими агентами, ингибиторами топоизомеразы I, ингибиторами топоизомеразы II и подобными.
При составлении препаратов с фиксированной дозой в таких комбинированных продуктах используют соединения по данному изобретению в пределах диапазона доз, описанного ниже, и другой фармацевтически активный агент в пределах принятого диапазона доз.
Соединения формулы (I) можно применять последовательно с известными противораковыми агентами, если комбинированный препарат является неподходящим.
Соединения формулы (I) по настоящему изобретению, применимые для введения млекопитающему, например, человеку, можно вводить обычными способами, и уровень дозировки зависит от возраста, массы, состояния пациента и способа введения.
Например, подходящая дозировка, адоптированная для перорального приема соединения формулы (I) может варьироваться в диапазоне примерно от 1 до примерно 300 мг на дозу, от 1 до 5 раз в день. Соединения по изобретению можно вводить в виде различных дозированных форм, например, перорально, в виде таблеток, капсул, таблеток, покрытых сахаром или пленкой, жидких растворов или суспензий; ректально в виде суппозиториев; парэнтерально, например, подкожно, внутримышечно или посредством внутривенной и/или интратекальной и/или интраспинальной инъекции или инфузии.
Настоящее изобретение также включает фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль в сочетании с фармацевтически приемлемым наполнителем, который может представлять собой носитель или разбавитель.
Фармацевтические композиции, содержащие соединения по изобретению, обычно получают следующими далее общеизвестными способами и вводят в виде подходящей фармацевтической формы. Например, твердые формы для перорального приема могут содержать, вместе с активным соединением разбавители, например, лактозу, декстрозу, сахарозу, целлюлозу, кукурузный крахмал или картофельный крахмал; лубриканты, например, диоксид кремния, тальк, стеариновую кислоту, стеарат магния или кальция и/или полиэтиленгликоли; связующие агенты, например, крахмалы, гуммиарабик, желатинметилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или поливинилпирролидон; разрыхлители, например, крахмал, альгиновую кислоту, альгинаты или крахмалгликолат натрия; газирующие смеси; красители; подсластители; смачивающие агенты, такие как лецитин, лаурилсульфаты; и, вообще, нетоксичные и фармакологически неактивные вещества, применяемые в фармацевтических препаратах. Эти фармацевтические препараты можно производить известными способами, например, применяя процессы смешивания, гранулирования, таблетирования, нанесения сахарного покрытия или нанесения пленочного покрытия.
Жидкие дисперсии для перорального приема могут представлять собой, например, сиропы, эмульсии и суспензии. Например, сиропы могут содержать в качестве носителя сахарозу или сахарозу с глицерином и/или маннитом и сорбит.
Суспензии и эмульсии могут содержать в качестве примеров носителей природную камедь, агар, альгинат натрия, пектин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или поливиниловый спирт. Суспензии или растворы для внутримышечных инъекций могут содержать вместе с активным соединением фармацевтически приемлемый носитель, например, стерильную воду, оливковое масло, этилолеат, гликоли, например, пропиленгликоль и, если требуется, подходящее количество лидокаингидрохлорида. Растворы для внутривенных инъекций или инфузий могут содержать в качестве носителя стерильную воду, или предпочтительно они могут быть в виде стерильных водных изотонических солевых растворов или могут содержать в качестве носителя пропиленгликоль. Суппозитории могут содержать вместе с активным соединением фармацевтически приемлемый носитель, например, масло какао, полиэтиленгликоль, поверхностно-активный полиоксиэтиленсорбитановый сложный эфир жирной кислоты или лецитин.
Для лучшей иллюстрации настоящего изобретения, не налагая на него никаких ограничений, теперь приводятся следующие примеры.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
1
В следующих примерах описано синтетическое получение некоторых производных морфолинилантрациклина формулы (I) по изобретению. Соединения по настоящему изобретению, которые получены согласно следующим примерам, также охарактеризованы H-ЯМР и/или точными данными массы ЭСИ(+).
1
1
15
31
H-ЯМР спектры регистрировали при постоянной температуре 28°C на спектрометре Varian INOVA 400, работающем при 400,50 MГц и оснащенном 5 мм датчиком непрямого детектирования с z-осевым градиентом импульсного поля (H{N-P}).
6
1
Химические сдвиги измеряли относительно сигналов остаточных протонов растворителя (ДМСО-d: 2,50 м.д. для H, где не указано иное). Данные приводят следующим образом: химический сдвиг (δ), мультиплетность (с=синглет, д=дублет, т=триплет, кв=квартет, ш.с=широкий синглет, тд=триплет дублетов, дд=дублет дублетов, ддд=дублет дублетов дублетов, м=мультиплет, спт=септет), константы взаимодействия (J, Гц) и количество протонов.
Точные данные массы ЭСИ(+) получали на масс-спектрометре Waters Q-Tof Ultima, непосредственно связанном с микро-ВЭЖХ системой Agilent 1100, которая описана ранее (M. Colombo, F. Riccardi-Sirtori, V. Rizzo, Rapid Commun. Mass Spectrom. 2004, 18, 511-517).
В приведенных ниже примерах, а также на протяжении всей заявки указанные ниже сокращения имеют следующие значения. Если не определено, термины имеют свои общепринятые значения.
СОКРАЩЕНИЯ
DCC
N,N'-дициклогексилкарбодиимид
ДХМ
дихлорметан
ДИПЭА
N,N-диизопропилэтиламин
DMDO
диметилдиоксиран
ДМФА
N,N-диметилформамид
ДМСО
диметилсульфоксид
EDCI
N-этил-N',N'-диизопропилкарбодиимид гидрохлорид
EDC
1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид
Et<sub>2</sub>O
диэтиловый эфир
EtOAc
этилацетат
EtOH
этанол
HCl
соляная кислота
HOBt
1H-бензотриазол-1-ол
MeOH
метанол
Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>
сульфат натрия
NaHCO<sub>3</sub>
гидрокарбонат натрия
NaOH
гидроксид натрия
PPTS
пара-толуолсульфонат пиридиния
ТЭА
триэтиламин
ТФУ
трифторуксусная кислота
ТГФ
тетрагидрофуран
Пример (A)
Получение конъюгатов с белком MCM2
3
1,5 мг (0,045 мкмоль) белка MCM2 (соответствующего остаткам 10-294 последовательности полной длины, смотри работу Ishimi и др., 2001 Journal Biological Chemistry, vol. 276, pages 42744-42752) растворяют в 0,5 мл фосфатного буферного солевого раствора (pH 7,2), доводят pH до значения 8,5, добавляя 55 мкл 1M NaHCO (pH 8,5), и добавляют 0,040-0,080 мкмоль производного формулы (I) в виде раствора 10 мг/мл в ДМСО. Реакционную смесь инкубируют в течение 1 час. при комнатной температуре, затем реакционную смесь обессоливают на колонке NAP-10, кондиционированной в фосфатном буферном солевом растворе и фракции, содержащие белок, собирают и объединяют.
Полученный таким образом MCM2-конъюгат характеризуют посредством ВЭЖХ/ЭСИ или Q-ToF2/nanoESI масс-спектрометрического анализа, следуя описанным ниже методикам.
Методика A
Конъюгат MCM2-соединение (3) (аддукт 1), полученный, как описано выше, инкубируют в кислотных условиях (pH 3), чтобы индуцировать гидролиз гидразонной связи, получая, таким образом, высвобождение антрациклинового производного (22) и остаток MCM2-линкер.
Образец анализируют и продукты характеризуют посредством ВЭЖХ/МС анализа, используя линейный градиент 5-100% B (растворитель A: 0,05% ТФУ в воде; растворитель B: 0,05% ТФУ в ацетонитриле) в качестве элюента. Детектирование выполняют, регистрируя УФ-сигнал при 220 нм посредством системы диодной матрицы и сигнал m/z посредством квадрупольного масс-селективного детектора (MSD) в диапазоне накоплений 600-2000. Выполняют деконволюцию масс-спектров, полученных интегрированием сигналов m/z под пиками белка, применяя алгоритм Agilent Chemstation для получения ММ соответствующего вида белка с точностью ~100 м.д. (фиг. 1-4).
На фиг. 1 показан ВЭЖХ-профиль аддукта 1, сообщающий время (мин.) по оси x и УФ-поглощение при 220 нм (mAU) по оси y.
На фиг. 2 показана хроматограмма по полному ионному току аддукта 1, сообщающая время (мин.) по оси x и интенсивность, выраженную числом импульсов в секунду (cps), по оси y.
На фиг. 3 показан деконволюированный масс-спектр хроматографического пика при 15,2 мин. хроматограммы по полному ионному току аддукта 1, показанной на фиг. 2, соответствующий MCM2-линкерному остатку (ожидаемая ММ 33282 Да; наблюдаемая ММ 33283 Да); молекулярная масса представлена по оси x, тогда как интенсивность, выраженная числом импульсов в секунду (cps), представлена по оси y.
На фиг. 4 показан масс-спектр хроматографического пика при 13 мин. соединения 22, показанного на фиг. 2 (ожидаемая m/z 611 Да; наблюдаемая m/z 611,2 Да); молекулярная масса (m/z) представлена по оси x, тогда как интенсивность, выраженная числом импульсов в секунду (cps), представлена по оси y.
Методика B
Характеристику аддукта 1 также выполняют посредством МС-анализа в условиях нейтрального pH, используя буферный раствор ацетата аммония 100 мМ, pH 7. Образец вводят непосредственно в масс-спектрометр Q-ToF2 (Micromass, UK), оснащенный источником nanoESI, применяя скорость потока 0,5 мкл/мин.; напряжение на капилляре устанавливают 2 кВ и МС-сигнал получают в диапазоне 500-3000 m/z (фиг. 6A-6B).
MCM2 используют в качестве стандарта для установки подходящих инструментальных параметров. Образец вводят в масс-спектрометр (фиг. 5A-5B). Выполняют деконволюцию масс-спектров, применяя алгоритм MaxEnt1 программы MassLynx 4,0 для получения ММ соответствующего вида белка с точностью ~100 м.д.
На фиг. 5A показан масс-спектр стандартного белка MCM2; молекулярная масса (m/z) представлена по оси x, тогда как интенсивность, выраженная числом импульсов в секунду (cps), представлена по оси y.
На фиг. 5B показан деконволюированный масс-спектр стандартного белка MCM2 (ожидаемая ММ 33057 Да; наблюдаемая ММ 33056 Да); молекулярная масса представлена по оси x, тогда как интенсивность, выраженная числом импульсов в секунду (cps), представлена по оси y.
На фиг. 6A показан масс-спектр образца; молекулярная масса (m/z) представлена по оси x, тогда как интенсивность, выраженная числом импульсов в секунду (cps), представлена по оси y.
На фиг. 6B показан деконволюированный масс-спектр образца (ожидаемая ММ 33874 Да; наблюдаемая ММ 33873 Да); детектируют также следы MCM2-линкера (ожидаемая ММ 33282 Да; наблюдаемая ММ 33282 Да); молекулярная масса представлена по оси x, тогда как интенсивность, выраженная числом импульсов в секунду (cps), представлена по оси y.
Пример (B)
Получение конъюгатов с цистеином
Проводят взаимодействие 2 нмоль цистеина (Cys, ММ 121 Да) с 2 нмоль функционализированного производного формулы (I), реакционную смесь инкубируют в течение 1 час. при 21°C в присутствии 50 нМ боратного буфера, pH 8, 2 нМ DTPA (диэтилентриаминпентауксусной кислоты), NaCl 50 нМ, получая конечный конъюгат. Затем конъюгат анализируют ВЭЖХ/ЭСИ-МС, применяя ВЭЖХ-метод с обратимой фазой (колонка PLRP-S 1000A 8 мкМ 150×2,1 мм) на ВЭЖХ установке 1100 Agilent, соединенной с Agilent 1946 одинарным квадрупольным масс-спектрометрическим детектором с ортогональным ЭСИ вводом.
Пример 1
Синтез соединения (4)
Стадия 1
2
2
Добавляют раствор гидразида 3-(2-пиридилдитио)пропионовой кислоты. HCl (41,5 мг,) в безводном метаноле (5 мл) к соединению (II)' (соед. 22, смотри пример 6) (50 мг). Раствор перемешивают в темноте при комнатной температуре в течение 20 час. За ходом взаимодействия следят методом ВЭЖХ с обращенной фазой-МС. После этого растворитель выпаривают и остаток очищают флэш-хроматографией (MeOH:CHCl) на силикагеле (230-400 меш), получая соединение (4).
+
МС(ЭСИ): 822 [M+H].
По аналогичным методикам и, используя соответствующие исходные материалы, получают следующие соединения:
+
МС(ЭСИ): 838 [M+H]
1
3
3
H ЯМР (500 MГц, CHCN-d, температура 60°C) δ м.д. 1,25-1,40 (м, 2H), 1,32 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,49-1,66 (м, 4H), 1,60-1,71 (м, 1H), 1,85-1,93 (м, 1H), 2,22-2,33 (м, 1H), 2,40-2,56 (м, 3H), 2,70-2,82 (м, 2H), 3,05-3,15 (м, 2H), 3,40 (с, 3H), 3,40-3,45 (м, 3H), 3,53-3,60 (м, 1H), 3,75-3,83 (м, 1H), 4,02 (дд, J=1,5, 6,8 Гц, 1H), 4,07-4,23 (м, 3H), 4,21 (ш.с, 1H), 4,32 (д, J=2,4 Гц, 1H), 4,51 (д, J=2,4 Гц, 1H), 5,15-5,24 (м, 1H), 5,39-5,41 (м, 1H), 6,69 (с, 2H), 7,16 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,22 (ш.с, 2H), 7,54 (дд, J=6,7, 8,4 Гц, 1H), 7,64 (д, J=6,7 Гц, 1H), 8,45 (ш.с, 1H), 13,45 (с, 1H), 13,82 (с, 1H).
+
МС(ЭСИ): 834 [M+H]
+
МС(ЭСИ): 818 [M+H]
1
3
H ЯМР (500 MГц, ацетонитрил-d, температура 60°C) δ м.д. 1,25-1,35 (м, 2H), 1,31 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,49-1,66 (м, 4H), 1,70-1,77 (м, 1H), 1,85-1,93 (м, 1H), 1,98 (с, 3H), 2,22-2,33 (м, 1H), 2,35-2,56 (м, 3H), 2,70-2,82 (м, 2H), 3,05-3,20 (м, 2H), 3,40 (с, 3H), 3,40-3,48 (м, 3H), 3,53-3,60 (м, 1H), 3,74-3,80 (м, 1H), 4,03 (дд, J=1,5, 6,8 Гц, 1H), 4,07-4,13 (м, 1H), 4,21 (ш.с, 1H), 4,30 (д, J=2,4 Гц, 1H), 4,56 (д, J=2,4 Гц, 1H), 5,15-5,24 (м, 1H), 5,36-5,40 (м, 1H), 6,69 (с, 2H), 7,16 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,21 (ш.с, 2H), 7,54 (дд, J=6,7, 8,4 Гц, 1H), 7,64 (д, J=6,7 Гц, 1H), 8,41 (ш.с, 1H), 13,46 (с, 1H), 13,81 (с, 1H).
Пример 2a
Синтез соединения (5)
Стадия 1
Синтез промежуточного продукта: этил (3,4-дигидро-2H-пиран-2-илметокси)ацетата
2
В высушенной круглодонной колбе в атмосфере аргона 60% гидрид натрия (240 мг, 6,0 ммоль) ополаскивают три раза безводным н-пентаном. Раствор 2-гидроксиметил-3,4-дигидро-2H-пирана (570,8 мг, 5 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) охлаждают при 0°C и затем добавляют к NaH. Реакционную смесь перемешивают при 0°C до окончания выделения водорода. Добавляют к реакционной смеси раствор этилбромацетата (1253 мг, 7,5 ммоль) в тетрагидрофуране (6 мл) и продолжают перемешивание при комнатной температуре до исчезновения исходного спирта (ТСХ анализ). После охлаждения добавляют HO и выпаривают растворитель при пониженном давлении. Остаток очищают флэш-хроматографией (AcOEt/гексан=1:12) на силикагеле (230-400 меш), получая 626 мг (выход 57%) этил(3,4-дигидро-2H-пиран-2-илметокси)ацетата в виде бесцветного масла.
1
6
H ЯМР (401 MГц, ДМСО-d) δ м.д. 1,18-1,23 (м, 3H) 3,55-3,59 (м, 2H) 3,93 (м, J=10,08, 5,11, 5,11, 2,38 Гц, 1H) 4,13 (кв, J=7,07 Гц, 2H) 4,14 (с, 2H) 4,67 (дддд, J=6,14, 4,83, 2,56, 1,34 Гц, 1H) 6,36 (дт, J=6,13, 1,75 Гц, 1H).
Стадия 2
Синтез промежуточного продукта (35)
2
2
2
2
К раствору соединения формулы (III)' (соед. 29, смотри пример 6) (50 мг) в 4 мл сухого дихлорметана в атмосфере аргона добавляют этил(3,4-дигидро-2H-пиран-2-илметокси)ацетат со стадии 1 (118,5 мг,) и безводную пара-толуолсульфоновую кислоту (22,3 мг, 0,12 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 час., пока не перестанет детектироваться исходный материал (ТСХ анализ, MeOH:CHCl). Затем добавляют к реакционной смеси 10% водный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют водную фазу дихлорметаном (4×20 мл). Объединенные органические фазы сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают в вакууме. Остаток очищают флэш-хроматографией (MeOH:CHCl) на силикагеле (230-400 меш), получая промежуточный продукт (35) в виде смеси четырех диастереомеров.
+
МС(ЭСИ): 827 [M+H].
Стадия 3
Синтез промежуточной кислоты (36)
2
2
Промежуточный этиловый сложный эфир (35), полученный со стадии 2 (40 мг), охлаждают при 0°C водным 0,1N раствором гидроксида натрия (1,5 мл) в атмосфере аргона. Реакционную смесь перемешивают при 0°C в течение 2 час. За ходом взаимодействия следят методом ВЭЖХ с обращенной фазой-МС. После этого доводят рH реакционной смеси до pH≥8 10% водным раствором уксусной кислоты и экстрагируют н-бутанолом, насыщенным водой (8×10 мл). Объединенные органические фазы сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и удаляют растворитель в вакууме. Остаток очищают флэш-хроматографией (MeOH:CHCl) на силикагеле (230-400 меш), получая продукт (36) в виде диастереомерной смеси.
+
МС(ЭСИ): 799 [M+H].
Стадия 4
Синтез промежуточного продукта (37)
К раствору промежуточной кислоты (36), полученной со стадии 3 способа (2 мг), в сухом дихлорметане (1 мл), охлажденному до 0°C, добавляют N-гидроксисукцинимид (1 мг) и N,N'-дициклогексилкарбодиимид (1 мг). Реакционную смесь перемешивают при 0°C в течение 2,5 час. до исчезновения исходного материала (ВЭЖХ-МС анализ). Растворитель выпаривают в вакууме и обрабатывают остаток этиловым эфиром (2×4 мл). Суспензию перемешивают в течение 10 мин., твердое вещество удаляют фильтрованием и органический раствор концентрируют в вакууме, получая 2 мг промежуточного продукта (37) в виде смеси диастереомеров.
+
МС(ЭСИ): 896 [M+H].
Стадия 5
Указанное в заголовке соединение (5).
2
2
К раствору продукта (37), полученного со стадии 4 способа (1 мг), в сухом дихлорметане (100 мкл) добавляют соль трифторацетат N-(2-аминоэтил)малеимида (2 экв.). Раствор перемешивают при комнатной температуре 4 час., пока не перестанет детектироваться исходный материал (ВЭЖХ-МС анализ), и растворитель выпаривают в вакууме. Остаток очищают флэш-хроматографией (MeOH:CHCl) на силикагеле (230-400 меш), получая соединение (5) в виде смеси диастереомеров.
+
МС(ЭСИ): 921 [M+H]
Пример 2b
Синтез соединения (9)
5
Раствор соединения (III)' (соед. 29, смотри пример 6) (10 мг), бис(4-нитрофенил)карбоната (22 мг) и триэтиламина (0,021 мл) в 1 мл сухого ДХМ и 1 мл сухого ТГФ перемешивают в атмосфере азота в течение 6 час. Растворители выпаривают и обрабатывают остаток диэтиловым эфиром. Результирующий осадок (38) фильтруют, промывают диэтиловым эфиром и сушат в вакууме. Это соединение растворяют в сухом ДХМ (2 мл, с 10% сухого ДМФА) и добавляют N-[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]-L-валил-N-карбамоил-N-{4-[({метил[2-(метиламино)этил]карбамоил}окси)метил]фенил}-L-орнитинамид гидрохлорид (39) (полученный, как сообщается в примере 8) (30 мг, 0,04 ммоль) и триэтиламин ( 0,016 мл, 0,11 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере азота, растворители выпаривают и после очистки методом колоночной хроматографиит получают указанное в заголовке соединение (9) (ДХМ/MeOH).
+
МС(ЭСИ): 1339 [M+H]
По аналогичным методикам и, используя соответствующие исходные материалы, получают следующие соединения:
+
МС(ЭСИ): 1339 [M+H]
+
МС(ЭСИ): 1400 [M+H]
Пример 3
Получение соединения (18)
Стадия 1
Получение промежуточного продукта (40)
2
4
2
К раствору соединения (III)' (соед. 29, смотри пример 6) в 3 мл метанола и 2 мл HO добавляют раствор NaIO (5,1 мг, 0,0238 ммоль) 1 мл HO. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 час., пока не перестанет детектироваться исходный материал (ТСХ и ВЭЖХ-анализ). Растворители удаляют при пониженном давлении и сырую юислоту (40) используют без дополнительных очисток на следущих стадиях.
+
МС(ЭСИ): 613 [M+H]
Стадия 2
Указанное в заголовке соединение (18)
2
2
К раствору сырого промежуточного продукта (40) (4,4 мг) в безводном дихлорметане (1,5 мл) в атмосфере аргона добавляют безводный триэтиламин (2,2 мг), TBTU (4,4 мг) и коммерчески доступную соль трифторацетат N-(2-аминоэтил)малеимида (3,6 мг). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. до исчезновения исходного материала (ВЭЖХ-МС анализ). Растворитель выпаривают в вакууме и затем очищают остаток флэш-хроматографией (EtOH:CHCl) на силикагеле (230-400 меш), получая указанное в заголовке соединение (18).
+
МС(ЭСИ): 735 [M+H].
По аналогичным методикам и, используя соответствующие исходные материалы, получают следующие соединения:
+
МС(ЭСИ): 1279 [M+H]
+
МС(ЭСИ): 1340 [M+H].
+
МС(ЭСИ): 809 [M+H].
Пример 4a
(12)
2
2
К раствору сырого промежуточного продукта (III)' (соед. 29, смотри пример 6, 4,4 мг) в безводном дихлорметане (1,5 мл) в атмосфере аргона добавляют безводный триэтиламин (1,5 мг), TBTU (2,7 мг) и коммерчески доступный 1-{6-[(2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси]-6-оксогексил}-1H-пиррол-2,5-дион (1,8 мг). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. до исчезновения исходного материала (ВЭЖХ-МС анализ). Растворитель выпаривают в вакууме и затем очищают остаток флэш-хроматографией (EtOH:CHCl) на силикагеле (230-400 меш), получая указанное в заголовке соединение (12).
+
МС(ЭСИ): 820 [M+H].
По аналогичным методикам и, используя соответствующие исходные материалы, получают следующие соединения:
+
МС(ЭСИ): 804 [M+H].
+
МС(ЭСИ): 824 [M+H].
+
МС(ЭСИ): 808 [M+H].
+
МС(ЭСИ): 1121 [M+H].
Пример 4b
Синтез соединения (16)
5
Раствор соединения (V)'(соед. 29, смотри пример 6,10 мг) растворяют в сухом ДХМ (2 мл) с 10% сухого ДМФА) и добавляют N-[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]-L-валил-N-карбамоил-N-[2-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамид (41) (полученный, как сообщается в EP0624377A2 и EP2357006A2, 15 мг) и триэтиламин (0,0033 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере азота, растворители выпаривают и после очистки методом колоночной хроматографии (ДХМ/MeOH) получают указанное в заголовке соединение (16).
+
МС(ЭСИ): 1225 [M+H].
По аналогичным методикам и, используя соответствующие исходные материалы, получают следующие соединения:
+
МС(ЭСИ): 1270 [M+H].
+
МС(ЭСИ): 1225 [M+H].
+
МС(ЭСИ): 1123 [M+H]
+
МС(ЭСИ): 1139 [M+H]
Пример 4b
Синтез соединения (23)
Стадия 1
Синтез промежуточного продукта: 9H-флуорен-9-илметил [(2S)-1-{[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-10-{[(1S,3R,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-5,12-диоксо-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]амино}-1-оксопран-2-ил]карбамата (соед. 42)
2
2
В высушенной круглодонной колбе раствор Fmoc-L-аланина (50 мг, 1,6 ммоль) в 9 мл сухого дихлорметана обрабатывают SOCl (190 мг, 1,61 ммоль) и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 час. в атмосфере аргона. Растворитель и избыток SOClудаляют в вакууме, получая сырой промежуточный продукт 9H-флуорен-9-илметил [(2S)-1-хлор-1-оксопран-2-ил]карбамат.
3
2
4
К раствору соединения (II)' (соед. 22, смотри пример 6) (10 мг, 0,0164 ммоль) в 5 мл сухого дихлорметана добавляют в атмосфере аргона 9H-флуорен-9-илметил [(2S)-1-хлор-1-оксопран-2-ил]карбамат (30 мг, 0,091 ммоль) и 5 мл насыщенного водного раствора NaHCO. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 час., пока не перестанет детектироваться исходный материал (ТСХ анализ, AcOEt/толуол). Органическую фазу отделяют, промывают водой и сушат над безводным NaSO. Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флэш-хроматографией (элюент: AcOEt/толуол=4/6) на силикагеле (230-400 меш), получая соединение (42) (7,2 мг, красный воск).
+
МС(ЭСИ): 904 [M+H].
Стадия 2
Синтез соединения (26)
2
2
Промежуточный продукт 9H-флуорен-9-илметил [(2S)-1-{[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-10-{[(1S,3R,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-5,12-диоксо-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]амино}-1-оксопран-2-ил]карбамат (42), полученный со стадии 1 (7,2 мг, 0,008), растворяют в сухом дихлорметане (1,5 мл) и обрабатывают пиперидином (20,4 мг, 0,24 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 час. до исчезновения исходного материала (ВЭЖХ-МС анализ). Реакционную смесь разбавляют дихлорметаном и промывают водой. Органические фазы сушат над безводным сульфатом натрия и растворитель выпаривают в вакууме. Остаток очищают флэш-хроматографией (элюент: AcOEt/толуол=4/6; затем EtOH/CHCl=1/1) на силикагеле (230-400 меш), получая соединение (26) (2,5 мг, красный воск).
+
МС(ЭСИ): 682 [M+H].
1
3
3
H ЯМР (401 MГц, CHCN-d) δ м.д. 1,29 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,38 (д, J=6,8 Гц, 3H), 1,64-1,74 (м, 1H), 1,86-1,91 (м, 1H), 2,02-2,07 (м, 1H), 2,35 (с, 3H), 2,38-2,48 (м, 1H), 2,68-2,81 (м, 2H), 2,93-3,14 (м, 2H), 3,38 (с, 3H), 3,44-3,48 (м, 1H), 3. флуорен 3,60 (м, 1H), 3,64 (кв, J=6,8 Гц, 1H), 3,71-3,79 (м, 1H), 4,01-4,06 (м, 1H), 4,07-4,13 (м, 1H), 4,27 (д, J=2,7 Гц, 1H), 4,55 (д, J=2,7 Гц, 1H), 5,19-5,24 (м, 1H), 5,35-5,40 (м, 1H), 7,86 (дд, J=7,8, 8,5 Гц, 1H), 8,10 (д, J=7,8 Гц, 1H), 9,23 (д, J=8,5 Гц, 1H).
По аналогичным методикам и, используя соответствующие исходные материалы, получают следующее соединение:
N-[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-10-{[(1S,3R,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-5,12-диоксо-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]глицинамид (соед. 75)
+
МС(ЭСИ): 668 [M+H].
Стадия 3
Указанное в заголовке соединение(23)
К раствору соединения (26) (1,8 мг, 0,00264 ммоль), полученного со стадии 3, в сухом дихлорметане (3 мл) добавляют N-[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]-L-валин (4,9 мг, 0,016 ммоль) и О-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилуроний тетрафторборат (5,1 мг, 0,016 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 час. до исчезновения исходного материала (ВЭЖХ-МС анализ). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре втечение 20 час. до исчезновения исходного материала (ВЭЖХ-МС анализ).
Реакционную смесь разбавляют дихлорметаном и промывают водой. Органические фазы сушат над безводным сульфатом натрия и растворитель выпаривают в вакууме. Остаток очищают флэш-хроматографией (элюент: AcOEt/толуол=4/6) на силикагеле (230-400 меш), получая соединение (23) (1,9 мг, красный воск).
+
МС(ЭСИ): 974 [M+H].
По аналогичным методикам и, используя соответствующие исходные материалы, получают следующие соединения:
5
N-[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]-L-валил-N-карбамоил-L-орнитил-N-[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-10-{[(1S,3R,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-5,12-диоксо-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]-L-аланинамид (соед. 27)
+
МС(ЭСИ): 1131 [M+H].
5
N-[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]-L-валил-N-карбамоил-L-орнитил-N-[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-10-{[(1S,3R,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-5,12-диоксо-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]глицинамид (соед. 76)
+
МС(ЭСИ): 1117 [M+H].
5
N-[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]-L-валил-N-[4-({[(2-{[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-10-{[(3S,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метоксиоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-5,12-диоксо-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]амино}-2-оксоэтил)карбамоил]окси}метил)фенил]-N-карбамоил-L-орнитинамид (соед. 77)
+
МС(ЭСИ): 1266 [M+H].
5
N-[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]-L-валил-N-{4-[({[(2S)-1-{[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-10-{[(1S,3R,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-5,12-диоксо-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]амино}-1-оксопран-2-ил]карбамоил}окси)метил]фенил}-N-карбамоил-L-орнитинамид (соед. 78)
+
МС(ЭСИ): 1280 [M+H].
Пример 5
Стадия A1, Стадия B1 (согласно A6a и A6b).
(8S,10S)-8-ацетил-1-фтор-6,8,11-тригидрокси-10-{[(1S,3R,4aS,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион (соед. 21)
Стадия A1
(1S,3S)-3-ацетил-10-фтор-3,5,12-тригидрокси-6,11-диоксо-1,2,3,4,6,11-гексагидротетрацен-1-ил 2,3,6-тридеокси-3-[(2S)-2-метоксиморфолин-4-ил]-α-L-ликсо-гексопиранозид [(XXII)] (соед. 44)
2
4
(1S,3S)-3-ацетил-10-фтор-3,5,12-тригидрокси-6,11-диоксо-1,2,3,4,6,11-гексагидротетрацен-1-ил 3-амино-2,3,6-тридеокси-α-L-ликсо-гексопиранозид (70,0 мг, 0,136 ммоль) [полученный, как сообщается в WO90/09392] растворяют в сухом ДМФА (3 мл); и добавляют раствор (1S)-2-йод-1-(2-йодэтокси)-1-метоксиэтана (XXI) (965 мг, 2,71 ммоль) в сухом ДМФА (10 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в темноте в течение 48 час., пока не перестанет детектироваться исходный материал (ВЭЖХ-анализ). Затем реакционную смесь разбавляют ДХМ и промывают водой. Органическую фазу сушат над безводным NaSO, растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флэш-хроматографией (элюент: EtOH/ДХМ; 0,2/9,8) на силикагеле (230-400 меш), получая требуемый продукт (44) (35 мг, красный воск).
+
МС(ЭСИ): 616 [M+H].
1
3
H ЯМР (500 MГц, CHCl-d) δ м.д. 1,39 (д, J=6,71 Гц, 3H) 1,78-1,85 (м, 2H) 2,09-2,14 (м, 1H) 2,46-2,56 (м, 3H) 2,61 (дд, J=11,41, 3,97 Гц, 1H) 3,03 (д, J=19,04 Гц, 1H) 3,27 (дд, J=19,10, 1,77 Гц, 1H) 3,40 (с, 3H) 3,57 (ддд, J=11,57, 5,34, 3,11 Гц, 1H) 3,70 (с, 1H) 3,92-3,99 (м, 1H) 4,04 (кв, J=6,47 Гц, 1H) 4,48-4,52 (м, 1H) 4,67 (с, 1H) 5,28-5,30 (м, 1H) 5,56 (ш.с, 1H) 7,54 (дд, J=10,44, 8,48 Гц, 1H) 7,83 (тд, J=7,97, 4,58 Гц, 1H) 8,25 (д, J=7,69 Гц, 1H) 13,31 (с, 1H) 13,72 (с, 1H)
По аналогичной методике получают следующее соединение:
(1S,3S)-10-Фтор-3,5,12-тригидрокси-3-(гидроксиацетил)-6,11-диоксо-1,2,3,4,6,11-гексагидротетрацен-1-ил 2,3,6-тридеокси-3-[(2S)-2-метоксиморфолин-4-ил]-α-L-ликсо-гексопиранозид [(XXII)] (соед. 45)
+
МС(ЭСИ): 632 [M+H].
Стадия B1 (A6a)
(1S,3S)-3-ацетил-10-фтор-3,5,12-тригидрокси-6,11-диоксо-1,2,3,4,6,11-гексагидротетрацен-1-ил (3ξ)-2,3,6-тридеокси-3-[(2S)-2-метокси-4-оксидоморфолин-4-ил]-α-L-трео-гексопиранозид [(XXII)] (соед. 46)
(1S,3S)-3-ацетил-10-фтор-3,5,12-тригидрокси-6,11-диоксо-1,2,3,4,6,11-гексагидротетрацен-1-ил 2,3,6-тридеокси-3-[(2S)-2-метоксиморфолин-4-ил]-α-L-ликсо-гексопиранозид (28 мг, 0,045 ммоль) [полученный, как сообщается на стадии A1] растворяют в ДХМ (3,0 мл). Раствор обрабатывают 0,1M раствором DMDO в ацетоне (0,8 мл) при комнатной температуре в течение 30 мин., пока не перестанет детектироваться исходный материал (ВЭЖХ-анализ). Затем реакционную смесь концентрируют досуха в вакууме, получая требуемый промежуточный продукт (46) (красный воск, 24,1 мг).
+
МС(ЭСИ): 632 [M+H].
1
3
3
HH
HF
HH
H ЯМР (500 MГц, CHCN-d) δ м.д. 1,23 (д, J=6,7 Гц, 3H) 1,96-2,00 (м, 1H) 2,10 (м, 1H) 2,35 (с, 3H) 2,33-2,38 (м, 1H) 2,56-2,64 (м, 2H) 2,94-3,00 (м, 1H) 3,07-3,12 (м, 1H) 3,13 -3,16 (м, 1H) 3,23-3,29 (м, 1H) 3,37 (с, 3H) 3,38-3,46 (м, 2H) 3,86-3,95 (м, 1H) 3,99 (кв, J=6,7 Гц, 1H) 4,14 (с, 1H) 4,22-4,29 (м, 1H) 4,32 (ш.с, 1H) 4,91 (дд, J=8,1, 2,3 Гц, 1H) 5,20 (дд, J=4,6, 1,9 Гц, 1H) 5,60 (д, J=3,9 Гц, 1H) 7,62 (дд, J=8,3, J=10,8 Гц, 1H) 7,91 (м, 1H) 8,20 (д, J=7,7 Гц, 1H) 13,26 (ш.с, 1H) 13,69 (ш.с, 1H)
По аналогичной методике получают следующее соединение:
(1S,3S)-10-фтор-3,5,12-тригидрокси-3-(гидроксиацетил)-6,11-диоксо-1,2,3,4,6,11-гексагидротетрацен-1-ил (3ξ)-2,3,6-тридеокси-3-[(2S)-2-метокси-4-оксидоморфолин-4-ил]-α-L-трео-гексопиранозид [(XXII)] (соед. 47)
+
МС(ЭСИ): 648 [M+H].
Стадия B1 (A6b)
Указанное в заголовке соединение(21)
3
2
3
2
4
К раствору (1S,3S)-3-ацетил-10-фтор-3,5,12-тригидрокси-6,11-диоксо-1,2,3,4,6,11-гексагидротетрацен-1-ил (3ξ)-2,3,6-тридеокси-3-[(2S)-2-метокси-4-оксидоморфолин-4-ил]-α-L-трео-гексопиранозида [(XXII)] (20 мг, 0,032 ммоль) в 5,0 мл сухого CHCN добавляют KCO (13,2 мг, 0,096 ммоль) и хлорангидрид циануровой кислоты (11,8 мг, 0,064 ммоль). Реакционную смесь энергично перемешивают в темноте при комнатной температуре в течение 20 мин., пока не перестанет детектироваться исходный материал. Затем добавляют к реакционной смеси раствор 3-амино-1,2-пропандиола (17,5 мг, 0,192 ммоль) в воде (0,84 мл) и водную фазу экстрагируют ДХМ (4×10 мл). Объединенные органические фазы сушат над безводным NaSO, фильтруют и выпаривают в вакууме. Сырой продукт очищают флэш-хроматографией (AcOEt/толуол; 4/6) на силикагеле (230-400 меш), получая 7,0 мг указанного в заголовке соединения (21) в виде красного твердого вещества.
+
МС(ЭСИ): m/z 614 [M+H].
1
3
3
HH
HF
HH
HF
H ЯМР (500 MГц, CHCN-d) δ м.д. 1,29 (д, J=6,6 Гц, 3H) 1,68-1,73 (м, 1H) 1,86-1,91 (м, 1H) 2,05 (дд, J=14,8, 4,3 Гц, 1H) 2,34 (с, 3H) 2,42-2,47 (м, 1H) 2,67-2,81 (м, 2H) 2,93-2,98 (м, 1H) 3,05-3,11 (м, 1H) 3,37 (с, 3H) 3,42-3,47 (м, 1H) 3,52-3,58 (м, 1H) 3,71-3,76 (м, 1H) 4,03 (дд, J=7,1, 1,8 Гц, 1H) 4,06-4,12 (м, 1H) 4,26 (д, J=2,8 Гц, 1H) 4,53 (д, J=2,8 Гц, 1H) 4,54 (с, 1H) 5,20 (дд, J=4,3, 2,1 Гц, 1H) 5,35 (т, J=5,5 Гц, 1H) 7,60 (дд, J=8,3, J=11,6 Гц, 1H) 7,89 (м, 1H) 8,19 (дд, J=7,7, J=0,8 Гц, 1H) 13,25 (ш.с, 1H) 13,61 (ш.с, 1H)
Аналогично, используя соответствующий исходный материал, получают следующие соединения:
(8S,10S)-1-фтор-6,8,11-тригидрокси-8-(гидроксиацетил)-10-{[(1S,3R,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион (соед. 28)
+
МС(ЭСИ): 630 [M+H].
(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-1-[(2-гидроксиэтил)амино]-10-{[(1S,3R,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион (соед. 30)
+
МС(ЭСИ): 655 [M+H].
(8S,10S)-6,8,11-тригидрокси-8-(гидроксиацетил)-1-[(2-гидроксиэтил)амино]-10-{[(1S,3R,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион (соед. 31)
+
МС(ЭСИ): 671 [M+H].
(8S,10S)-8-ацетил-1-[(2-аминоэтил)амино]-6,8,11-тригидрокси-10-{[(1S,3R,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион (соед. 32)
+
МС(ЭСИ): 654 [M+H].
(8S,10S)-1-[(2-аминоэтил)амино]-6,8,11-тригидрокси-8-(гидроксиацетил)-10-{[(1S,3R,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион (соед. 33)
+
МС(ЭСИ): 670 [M+H].
Пример 6
Стадия A1, стадия B1 (согласно A6a и A6b).
(8S,10S)-8-ацетил-1-амино-6,8,11-тригидрокси-10-{[(1S,3R,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион [(II)'] (соед. 22)
Стадия A1
(1S,3S)-3-ацетил-10-амино-3,5,12-тригидрокси-6,11-диоксо-1,2,3,4,6,11-гексагидротетрацен-1-ил 2,3,6-тридеокси-3-[(2S)-2-метоксиморфолин-4-ил]-α-L-ликсо-гексопиранозид [(XXII)] (соед. 49)
2
4
(1S,3S)-3-ацетил-10-амино-3,5,12-тригидрокси-6,11-диоксо-1,2,3,4,6,11-гексагидротетрацен-1-ил 3-амино-2,3,6-тридеокси-α-L-ликсо-гексопиранозид (165,0 мг, 0,322 ммоль) (соед. 48, полученное, как сообщается в примере 7) растворяют в сухом ДМФА (3,0 мл), добавляют раствор диизопропилэтиламина (221 мг, 1,71 ммоль) в сухом ДМФА (3 мл) и раствор (1S)-2-йод-1-(2-йодэтокси)-1-метоксиэтана (XXI) (2,0 г, 5,64 ммоль) в сухом ДМФА (10 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в темноте в течение 48 час., пока не перестанет детектироваться исходный материал (ВЭЖХ-анализ). Затем реакционную смесь разбавляют ДХМ и промывают водой. Органическую фазу сушат над безводным NaSO, растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флэш-хроматографией (элюент: EtOH/ДХМ; 0,2/9,8) на силикагеле (230-400 меш), получая требуемый продукт (49) (105 мг, красное твердое вещество).
+
МС(ЭСИ): 613 [M+H].
1
3
3
H ЯМР (500 MГц, CHCN-d) δ м.д. 1,22-1,28 (м, 3H) 1,65-1,83 (м, 2H) 2,30-2,36 (м, 4H) 2,40 (дд, J=11,22, 4,94 Гц, 3H) 2,46-2,54 (м, 2H) 2,87-2,96 (м, 1H) 3,04-3,11 (м, 1H) 3,32 (с, 3H) 3,50 (ддд, J=11,34, 6,51, 2,83 Гц, 1H) 3,65 (ш.с, 1H) 3,77-3,89 (м, 1H) 4,04 (д, J=6,51 Гц, 1H) 4,44 (дд, J=4,63, 2,41 Гц, 1H) 5,16 (д, J=1,99 Гц, 1H) 5,43-5,47 (м, 1H) 7,12-7,16 (м, 1H) 7,24 (ш.с, 1H) 7,50-7,55 (м, 1H) 7,58-7,61 (м, 1H).
По аналогичной методике получают следующие соединения:
(1S,3S)-10-амино-3,5,12-тригидрокси-3-(гидроксиацетил)-6,11-диоксо-1,2,3,4,6,11-гексагидротетрацен-1-ил 2,3,6-тридеокси-3-[(2S)-2-метоксиморфолин-4-ил]-α-L-ликсо-гексопиранозид (соед. 50)
+
МС(ЭСИ): 629 [M+H].
Введение защиты
N-[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-5,12-диоксо-10-({2,3,6-тридеокси-3-[(2S)-2-метоксиморфолин-4-ил]-α-L-ликсо-гексопиранозил}окси)-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]-2,2,2-трифторацетамид (соед. 51).
3
2
4
(1S,3S)-3-ацетил-10-амино-3,5,12-тригидрокси-6,11-диоксо-1,2,3,4,6,11-гексагидротетрацен-1-ил 2,3,6-тридеокси-3-[(2S)-2-метоксиморфолин-4-ил]-α-L-ликсо-гексопиранозид (49) (80,0 мг, 0,130 ммоль) растворяют в сухом ДХМ (11 мл) и добавляют трифторуксусный ангидрид (273,0 мг, 1,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в темноте в течение 30 мин., пока не перестанет детектироваться исходный материал (ВЭЖХ-анализ). Далее реакционную смесь разбавляют ДХМ и промывают насыщенным водным раствором NaHCO (3×10 мл) и затем водой (1×10 мл). Органическую фазу сушат над безводным NaSO, растворитель выпаривают в вакууме и полученный таким образом остаток обрабатывают MeOH (10 мл) при комнатной температуре в течение 15 мин. и затем выпаривают в вакууме, получая требуемый продукт (51) (77,0 мг, красный воск).
+
МС(ЭСИ): 709 [M+H].
1
3
3
H ЯМР (500 MГц, CHCN-d) δ м.д. 1,25 (д, J=6,59 Гц, 3H) 1,76 (дд, J=8,68, 2,61 Гц, 2H) 2,27-2,45 (м, 8H) 2,52 (т, J=10,99 Гц, 2H) 2,96-3,03 (м, 1H) 3,08-3,15 (м, 1H) 3,30-3,33 (м, 3H) 3,50 (ддд, J=11,27, 6,57, 2,61 Гц, 1H) 3,66 (ш.с, 1H) 3,79-3,87 (м, 1H) 4,05 (кв, J=6,62 Гц, 1H) 4,44 (дд, J=4,70, 2,35 Гц, 1H) 5,17 (д, J=2,27 Гц, 1H) 5,45 (с, 1H) 7,97 (т, J=8,15 Гц, 1H) 8,24 (д, J=7,50 Гц, 1H) 8,99 (д, J=8,18 Гц, 1H).
Стадия B1 (A6a)
N-[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-5,12-диоксо-10-({(3ξ)-2,3,6-тридеокси-3-[(2S)-2-метокси-4-оксидоморфолин-4-ил]-α-L-трео-гексопиранозил}окси)-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]-2,2,2-трифторацетамид [(XXII)] (соед. 52)
N-[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-5,12-диоксо-10-({2,3,6-тридеокси-3-[(2S)-2-метоксиморфолин-4-ил]-α-L-ликсо-гексопиранозил}окси)-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]-2,2,2-трифторацетамид (51) (72,0 мг, 0,102 ммоль) растворяют в ДХМ (6,4 мл). Раствор обрабатывают 0,1M раствором DMDO в ацетоне (1,7 мл) при комнатной температуре в течение 30 мин., пока не перестанет детектироваться исходный материал (ВЭЖХ-анализ). Затем реакционную смесь концентрируют досуха в вакууме, получая требуемый промежуточный продукт (52) (красный воск, 73,0 мг).
+
МС(ЭСИ): 725 [M+H].
1
3
3
H ЯМР (500 MГц, CHCN-d) δ м.д. 1,23 (д, J=6,51 Гц, 3H) 2,32-2,39 (м, 4H) 2,57 (д, J=4,54 Гц, 1H) 2,74 (д, J=11,65 Гц, 1H) 2,96-3,02 (м, 1H) 3,08-3,15 (м, 1H) 3,25-3,45 (м, 7H) 3,57 (ш.с, 1H) 3,92 (д, J=12,79 Гц, 1H) 4,04 (д, J=6,88 Гц, 1H) 4,18 (с, 1H) 4,21-4,28 (м, 1H) 4,92 (дд, J=8,21, 2,08 Гц, 1H) 5,19 (д, J=2,19 Гц, 1H) 5,61 (д, J=3,71 Гц, 1H) 7,97 (т, J=8,10 Гц, 1H) 8,23 (д, J=7,64 Гц, 1H) 8,98 (д, J=8,32 Гц, 1H).
По аналогичной методике можно получить следующее соединение:
N-[(8S,10S)-6,8,11-тригидрокси-8-гидроксиацетил-5,12-диоксо-10-({(3ξ)-2,3,6-тридеокси-3-[(2S)-2-метокси-4-оксидоморфолин-4-ил]-α-L-трео-гексопиранозил}окси)-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]-2,2,2-трифторацетамид (соед. 53)
+
МС(ЭСИ): 645 [M+H].
Стадия B1 (A6b)
N-[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-10-{[(1S,3R,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-5,12-диоксо-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]-2,2,2-трифторацетамид (соед. 34).
3
2
3
2
4
К раствору N-[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-5,12-диоксо-10-({(3ξ)-2,3,6-тридеокси-3-[(2S)-2-метокси-4-оксидоморфолин-4-ил]-α-L-трео-гексопиранозил}окси)-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]-2,2,2-трифторацетамида (52) (60,0 мг, 0,083 ммоль) в 13 мл сухого CHCN добавляют KCO (34,4 мг, 0,249 ммоль) и хлорангидрид циануровой кислоты (30,6 мг, 0,166 ммоль). Реакционную смесь энергично перемешивают в темноте при комнатной температуре в течение 15 мин., пока не перестанет детектироваться исходный материал. Затем добавляют к реакционной смеси раствор 3-амино-1,2-пропандиола (45,3 мг, 0,5 ммоль) в воде (0,22 мл) и водную фазу экстрагируют ДХМ (4×10 мл). Объединенные органические фазы сушат над безводным NaSO, фильтруют и выпаривают в вакууме. Сырой продукт очищают флэш-хроматографией (AcOEt/толуол; 4/6) на силикагеле (230-400 меш), получая 12,0 мг соединения (34) в виде красного твердого вещества.
+
МС(ЭСИ): 707 [M+H].
1
3
3
H ЯМР (500 MГц, CHCN-d) δ м.д. 1,29 (д, J=6,58 Гц, 4H) 1,70 (д, J=15,21 Гц, 1H) 1,90 (д, J=15,59 Гц, 2H) 2,04-2,08 (м, 2H) 2,45 (д, J=14,98 Гц, 1H) 2,69-2,76 (м, 1H) 2,77-2,83 (м, 1H) 2,97 (с, 1H) 3,08-3,14 (м, 2H) 3,38 (с, 4H) 3,45 (д, J=6,88 Гц, 2H) 3,56 (д, J=5,22 Гц, 2H) 3,74 (с, 1H) 4,04 (д, J=1,89 Гц, 2H) 4,09 (д, J=6,88 Гц, 1H) 4,26 (д, J=2,72 Гц, 1H) 4,52-4,54 (м, 2H) 5,22 (ш.с, 1H) 5,36 (т, J=5,60 Гц, 1H) 7,98 (т, J=8,06 Гц, 1H) 8,26 (д, J=7,87 Гц, 1H) 9,00 (д, J=8,10 Гц, 1H).
Удаление защиты
Указанное в заголовке соединение (22)
2
2
4
Промежуточный N-[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-10-{[(1S,3R,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-5,12-диоксо-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]-2,2,2-трифторацетамид (34) (4,8 мг, 0,00679 ммоль) охлаждают при 0°C и добавляют 0,1N водный раствор NaOH (0,5 мл). Реакционную смесь перемешивают в темноте при 0°C в течение 15 мин., пока не перестанет детектироваться исходный материал. Затем реакционную смесь разбавляют HO и экстрагируют ДХМ (4×5 мл). Объединенные органические фазы промывают насыщенным водным раствором NaCl (1×10 мл), сушат над безводным NaSO, фильтруют и выпаривают в вакууме, получая 4,0 мг указанного в заголовке соединения в виде красного твердого вещества.
+
МС(ЭСИ): 611 [M+H].
1
3
3
H ЯМР (500 MГц, CHCN-d) δ м.д. 1,70 (дт, J=15,06, 5,82 Гц, 2H) 1,87 (дт, J=15,17, 5,54 Гц, 1H) 2,34 (с, 3H) 2,43 (д, J=14,41 Гц, 1H) 2,68-2,81 (м, 2H) 2,91-2,96 (м, 1H) 3,07 (д, J=18,66 Гц, 1H) 3,37 (с, 3H) 3,44 (кв, J=5,87 Гц, 1H) 3,51-3,61 (м, 2H) 3,74 (ддд, J=11,63, 8,25, 2,96 Гц, 1H) 4,01-4,04 (м, 1H) 4,06-4,13 (м, 1H) 4,26 (д, J=2,66 Гц, 1H) 4,54 (д, J=2,58 Гц, 1H) 5,21 (ш.с, 1H) 5,37 (т, J=5,61 Гц, 1H) 7,16 (д, J=8,57 Гц, 1H) 7,54 (т, J=7,89 Гц, 1H) 7,62 (д, J=7,06 Гц, 1H).
Аналогично, используя соответствующий исходный материал, получают следующее соединение:
(8S,10S)-1-амино-6,8,11-тригидрокси-8-(гидроксиацетил)-10-{[(1S,3R,4aS,9S,9aR,10aS)-9-метокси-1-метилоктагидро-1H-пирано[4',3':4,5][1,3]оксазоло[2,3-c][1,4]оксазин-3-ил]окси}-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион (соед. 29)
+
МС(ЭСИ): 627[M+H].
Пример 7
Стадия G2, удаление защиты, введение защиты, стадия G3, удаление защиты.
(1S,3S)-3-ацетил-10-амино-3,5,12-тригидрокси-6,11-диоксо-1,2,3,4,6,11-гексагидротетрацен-1-ил 3-амино-2,3,6-тридеокси-L-ликсо-гексопиранозид (XX) (соед. 48)
Стадия G2
Синтез промежуточного (8S,10S)-1-[(3,4-диметоксибензил)амино]-6,8,10,11-тетрагидрокси-8-(2-метил-1,3-диоксолан-2-ил)-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-диона (XXVIII) (соед. 55)
2
К раствору (8S,10S)-6,8,10,11-тетрагидрокси-8-(2-метил-1,3-диоксолан-2-ил)-5,12-диоксо-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил 4-фторбензолсульфоната (54) (400 мг, 0,682 ммоль) [полученного, как сообщается в GB2215332] в ТГФ (10 мл) добавляют 3-4 диметоксибензиламин (0,532 мг, 3,1 ммоль). Раствор нагревают при 60°C и перемешивают в течение 24 час. в темноте. Затем растворитель частично удаляют в вакууме, темно-фиолетовый осадок собирают фильтрованием, промывают ТГФ (3 мл) и затем EtO (10 мл). В заключение твердое вещество сушат в печи в вакууме при 30°C, получая указанный в заголовке промежуточный продукт (55) (188 мг, выход 48%).
Аналогично, используя соответствующие амины, получают следующие соединения:
(8S,10S)-6,8,10,11-тетрагидрокси-1-[(2-гидроксиэтил)амино]-8-(2-метил-1,3-диоксолан-2-ил)-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион (соед. 57)
+
МС(ЭСИ): 472 [M+H].
1
6
H ЯМР (499,75 MГц, ДМСО-d) δ м.д. 1,33 (с, 3H), 1,82 (дд, J=14,3, 4,3 Гц, 1H), 2,20 (д, J=14,3 Гц, 1H), 2,67 (д, J=18,7 Гц, 1H), 3,10 (д, J=18,7 Гц, 1H), 3,45-3,49 (м, 2H), 3,68-3,72 (м, 2H), 3,92-4,01 (м, 4H), 5,00 (т, J=5,1 Гц, 1H), 5,05-5,11 (м, 1H), 5,35 (д, J=7,6 Гц, 1H), 5,44 (с, 1H), 7,35 (д, J=8,7 Гц, 1H), 7,56 (д, J=6,8 Гц, 1H), 7,70 (дд, J=8,7, 6,8 Гц, 1H), 9,61 (т, J=5,1 Гц, 1H), 13,52 (ш.с, 1H), 13,74 (ш.с, 1H).
(8S,10S)-1-[(2-аминоэтил)амино]-6,8,10,11-тетрагидрокси-8-(2-метил-1,3-диоксолан-2-ил)-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион (соед. 58)
+
МС(ЭСИ): 471[M+H].
Удаление защиты
Синтез промежуточного (8S,10S)-8-ацетил-1-амино-6,8,10,11-тетрагидрокси-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-диона (XXVIII) (соед. 56)
3
2
4
2
К холодной трифторуксусной кислоте (2 мл) добавляют (8S,10S)-1-[(3,4-диметоксибензил)амино]-6,8,10,11-тетрагидрокси-8-(2-метил-1,3-диоксолан-2-ил)-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион (55) (133 мг, 0,230 ммоль) и 2 капли анизола. Раствор перемешивают при 5°C в течение 20 мин. и затем при комнатной температуре в течение 2 час., пока не перестанет детектироваться исходный материал. Реакционную смесь разбавляют водой (5 мл), нейтрализуют раствором NaHCO, водную фазу экстрагируют ДХМ (3×50 мл). Объединенные органические фазы сушат над безводным NaSO, фильтруют, выпаривают растворитель в вакууме и сырой продукт обрабатывают EtO (10 мл). Темно-фиолетовый осадок собирают фильтрованием и сушат в печи в вакууме при 30°C, получая требуемый промежуточный продукт (82 мг, выход 93%).
+
МС(ЭСИ): 384 [M+H].
1
6
H ЯМР (400,5 MГц, ДМСО-d) δ м.д. 1,99 (дд, J=14,4, 4,6 Гц, 1H), 2,13-2,19 (м, 1H), 2,30 (с, 3H), 2,88-2,95 (м, 1H), 2,98-3,05 (м, 1H), 5,07 (м, 1H), 5,29 (ш.с, 1H), 6,07 (с, 1H), 7,24 (дд, J=8,3, 1,1 Гц, 1H), 7,51 (дд, J=7,3, 1,1 Гц, 1H), 7,55-7,60 (м, 1H), 8,05 (ш.с, 2H), 13,49 (ш.с, 1H), 13,85 (ш.с, 1H)
Аналогично, используя соответствующий исходный материал, получают следующие соединения:
(8S,10S)-8-ацетил-6,8,10,11-тетрагидрокси-1-[(2-гидроксиэтил)амино]-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион (соед. 59)
+
МС(ЭСИ): 428 [M+H].
1
6
H ЯМР (500 MГц, ДМСО-d) δ м.д. 1,98 (дд, J=14,2, 4,6 Гц, 1H), 2,16 (д, J=14,2 Гц, 1H), 2,31 (с, 3H), 2,88-2,94 (м, 1H), 2,98-3,04 (м, 1H), 3,46-3,49 (м, 2H), 3,68-3,72 (м, 2H), 5,01 (т, J=5,1 Гц, 1H), 5,05-5,10 (м, 1H), 5,30 (д, J=6,7 Гц, 1H), 6,10 (с, 1H), 7,35 (д, J=8,7 Гц, 1H), 7,56 (д, J=7,1 Гц, 1H), 7,70 (дд, J=8,7, 7,1 Гц, 1H), 9,62 (т, J=5,1 Гц, 1H), 13,47 (ш.с, 1H), 13,76 (ш.с, 1H)
(8S,10S)-8-ацетил-1-[(2-аминоэтил)амино]-6,8,10,11-тетрагидрокси-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион (соед. 60)
+
МС(ЭСИ): 427[M+H].
1
6
H ЯМР (500 MГц, ДМСО-d) δ м.д. 1,97 (дд, J=14,2, 4,6 Гц, 1H), 2,14 (д, J=14,2 Гц, 1H), 2,31 (с, 3H), 2,88-2,94 (м, 1H), 2,98-3,04 (м, 1H), 3,05-3,22 (м, 4H), 5,05-5,10 (м, 1H), 5,30 (д, J=6,7 Гц, 1H), 6,10 (с, 1H), 7,35 (д, J=8,7 Гц, 1H), 7,54 (д, J=7,1 Гц, 1H), 7,70 (дд, J=8,7, 7,1 Гц, 1H), 9,60 (т, J=5,1 Гц, 1H), 13,46 (ш.с, 1H), 13,76 (ш.с, 1H).
Введение защиты
Синтез промежуточного N-[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,10,11-тетрагидрокси-5,12-диоксо-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]-2,2,2-трифторацетамида (соед. 61)
3
2
4
3
3
Промежуточный (8S,10S)-8-ацетил-1-амино-6,8,10,11-тетрагидрокси-7,8,9,10-тетрагидротетрацен-5,12-дион (56) (600,0 мг, 1,56 ммоль) растворяют в сухом ДХМ (120 мл) и добавляют трифторуксусный ангидрид (1,2 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в темноте в течение 5 мин., пока не перестанет детектироваться исходный материал (ВЭЖХ-анализ). Далее реакционную смесь разбавляют ДХМ (100 мл) и промывают насыщенным водным раствором NaHCO (3×100 мл) и затем водой (1×100 мл). Органическую фазу сушат над безводным NaSO и удаляют растворитель в вакууме. Полученный таким образом остаток очищают флэш-хроматографией (элюент: CHCOCH/ДХМ; 0,3/9,7) на силикагеле (230-400 меш), получая требуемый продукт (494,1 мг, красное твердое вещество).
+
МС(ЭСИ): 480 [M+H].
1
3
H ЯМР (500 MГц, CHCl-d) δ м.д. 2,22 (дд, J=14,5, 4,9 Гц, 1H), 2,36-2,41 (м, 1H), 2,45 (с, 3H), 3,01 (д, J=18,7 Гц, 1H), 3,23 (дд, J=18,7, 2,2 Гц, 1H), 3,81 (д, J=5,2 Гц, 1H), 4,54 (с, 1H), 5,35 (м, 1H), 7,93 (дд, J=8,4, 7,7 Гц, 1H), 8,29 (дд, J=7,7, 1,1 Гц, 1H), 9,12 (дд, J=8,4, 1,1 Гц, 1H), 13,29 (ш.с, 1H), 13,29 (с, 1H), 13,46 (с, 1H).
Аналогично, используя соответствующий исходный материал, получают следующее соединение:
N-(2-{[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,10,11-тетрагидрокси-5,12-диоксо-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]амино}этил)-2,2,2-трифторацетамид (соед. 62)
+
МС(ЭСИ): 523 [M+H].
Стадия G3
Синтез N-[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-5,12-диоксо-10-({2,3,6-тридеокси-3-[(трифторацетил)амино]-L-ликсо-гексопиранозил}окси)-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]-2,2,2-трифторацетамида (соед. 63)
2
3
2
4
3
3
3
В сухой трехгорлой круглодонной колбе в атмосфере аргона растворяют промежуточный N-[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,10,11-тетрагидрокси-5,12-диоксо-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]-2,2,2-трифторацетамид (61) (480,0 мг, 1,0 ммоль) в сухом ДХМ (110 мл) и добавляют порошкообразные молекулярные сита (4, 20,0 мг). Реакционную смесь охлаждают при 10°C; добавляют одновременно раствор трифторметансульфоната серебра (334,0 мг, 1,3 ммоль) в сухом EtO (15 мл) и раствор 2,3,6-тридеокси-4-O-(трифторацетил)-3-[(трифторацетил)амино]-δ-L-ликсо-гексопиранозилхлорида (511,4 мг, 1,43 ммоль) в сухом ДХМ (15 мл). Реакционную смесь перемешивают при 10°C в темноте в течение 45 мин., пока не перестанет детектироваться исходный материал (ВЭЖХ-анализ). Добавляют насыщенный водный раствор NaHCO (50 мл), реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. и затем фильтруют через слой целита. Органическую фазу отделяют, промывают водой и сушат над безводным NaSO. Растворитель удаляют в вакууме и полученный таким образом остаток охлаждают при 0°C и обрабатывают MeOH (20 мл) и твердым NaHCO в течение 15 мин. Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флэш-хроматографией (элюент: CHCOCH/ДХМ; 0,5/9,5) на силикагеле (230-400 меш), получая требуемый продукт (320,0 мг, красное твердое вещество).
+
МС(ЭСИ): 705 [M+H].
1
3
3
H ЯМР (500 MГц, CHCN-d) δ м.д. 1,22 (д, J=6,47 Гц, 3H) 1,77 (дд, J=13,18, 4,64 Гц, 1H) 2,00 (тд, J=13,15, 3,97 Гц, 1H) 2,10 (д, J=10,13 Гц, 1H) 2,33-2,35 (м, 1H) 2,87-3,00 (м, 1H) 3,01-3,13 (м, 1H) 3,22 (ш.с, 1H) 3,61 (ш.с, 1H) 4,09-4,16 (м, 1H) 4,22 (кв, J=6,47 Гц, 1H) 4,29 (с, 1H) 5,10 (ш.с, 1H) 5,40 (д, J=3,54 Гц, 1H) 7,32 (д, J=7,81 Гц, 1H) 7,89 (т, J=7,63 Гц, 1H) 8,11 (д, J=7,08 Гц, 1H) 8,89 (д, J=8,30 Гц, 1H) 13,08 (ш.с, 2H).
Аналогично, используя соответствующий исходный материал, получают следующие соединения:
N-(2-{[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-5,12-диоксо-10-({2,3,6-тридеокси-3-[(трифторацетил)амино]-L-ликсо-гексопиранозил}окси)-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]амино}этил)-2,2,2-трифторацетамид (соед. 64).
+
МС(ЭСИ): 748 [M+H].
(1S,3S)-3-ацетил-3,5,12-тригидрокси-10-[(2-гидроксиэтил)амино]-6,11-диоксо-1,2,3,4,6,11-гексагидротетрацен-1-ил 2,3,6-тридеокси-3-[(трифторацетил)амино]-L-ликсо-гексопиранозид (соед. 65).
+
МС(ЭСИ): 653[M+H].
Удаление защиты
Указанное в заголовке соединение(48)
3
2
4
Промежуточный N-[(8S,10S)-8-ацетил-6,8,11-тригидрокси-5,12-диоксо-10-({2,3,6-тридеокси-3-[(трифторацетил)амино]-α-L-ликсо-гексопиранозил}окси)-5,7,8,9,10,12-гексагидротетрацен-1-ил]-2,2,2-трифторацетамид (63) (340,2 мг, 0,432 ммоль) охлаждают при 0°C в атмосфере аргона и обрабатывают 0,1N водным раствором NaOH (12 мл). Реакционную смесь перемешивают в темноте при 0°C в течение 1 час., пока не перестанет детектироваться исходный материал (ВЭЖХ-анализ). Затем реакционную смесь разбавляют ДХМ (50 мл), промывают насыщенным водным раствором NaHCO (3×30 мл), затем водой (1×30 мл) и в заключение насыщенным раствором NaCl (1×30 мл). Органическую фазу сушат над безводным NaSO, удаляют растворитель в вакууме, получая требуемый продукт (180,0 мг, красное твердое вещество).
+
МС(ЭСИ): 513[M+H].
1
6
H ЯМР (500 MГц, ДМСО-d) δ м.д. 1,14 (д, J=6,52 Гц, 2H) 1,47 (дд, J=12,61, 4,33 Гц, 1H) 1,60 (д, J=3,30 Гц, 1H) 2,06-2,21 (м, 2H) 2,24-2,27 (м, 3H) 2,86 (д, J=12,58 Гц, 1H) 2,88-3,01 (м, 2H) 3,28 (ш.с, 1H) 4,09 (д, J=6,29 Гц, 1H) 4,45 (ш.с, 1H) 4,94 (т, J=4,22 Гц, 1H) 5,19 (д, J=3,53 Гц, 1H) 5,44 (с, 1H) 7,24 (д, J=8,28 Гц, 1H) 7,50 (д, J=7,13 Гц, 1H) 7,51-7,52 (м, 0H) 7,55-7,59 (м, 1H) 8,06 (ш.с, 2H).
Аналогично, используя соответствующий исходный материал, получают следующие соединения:
(1S,3S)-3-ацетил-10-[(2-аминоэтил)амино]-3,5,12-тригидрокси-6,11-диоксо-1,2,3,4,6,11-гексагидротетрацен-1-ил 3-амино-2,3,6-тридеокси-L-ликсо-гексопиранозид (соед. 66).
+
МС(ЭСИ): 556 [M+H].
(1S,3S)-3-ацетил-3,5,12-тригидрокси-10-[(2-гидроксиэтил)амино]-6,11-диоксо-1,2,3,4,6,11-гексагидротетрацен-1-ил 3-амино-2,3,6-тридеокси-L-ликсо-гексопиранозид (соед. 67).
+
МС(ЭСИ): 557 [M+H].
Пример 8
5
Получение промежуточного N-[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]-L-валил-N-карбамоил-N-{4-[({метил[2-(метиламино)этил]карбамоил}окси)метил]фенил}-L-орнитинамид гидрохлорида (соед. 39).
Стадия a
5
5
N-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-валил-N-карбамоил-N-[4-(гидроксиметил)фенил]-L-орнитинамид (1,3 г, 2,16 ммоль) (полученный, как сообщается в EP0624377A2) и бис(4-нитрофенил)карбонат (1,32 г, 4,34 ммоль) растворяют в 6 мл сухого ДМФА в атмосфере азота, добавляют ДИПЭА (0,75 мл, 4,35 ммоль) и результирующий раствор перемешивают один час при комнатной температуре. Добавляют диэтиловый эфир (120 мл), результирующий осадок отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром и сушат в вакууме, получая N-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-валил-N-карбамоил-N-[4-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамид (68) (1,47 г, 89% выход).
+
МС(ЭСИ): 767 [M+H].
1
6
H ЯМР (400 MГц, ДМСО-d) δ м.д. 0,86 (д, J=6,7 Гц, 3H), 0,88 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,30-1,52 (м, 2H), 1,60 (м, 1H), 1,69 (м, 1H), 1,99 (м, 1H), 2,90-3,10 (м, 2H), 3,93 (дд, J=8,9, 7,0 Гц, 1H), 4,14-4,34 (м, 3H), 4,42 (м, 1H), 5,24 (с, 2H), 5,39 (с, 2H), 5,97 (т, J=5,5 Гц, 1H), 7,32 (м, 2H), 7,42 (м, 5H), 7,55 (м, 2H), 7,65 (д, J=8,4 Гц, 2H), 7,74 (т, J=7,9 Гц, 2H), 7,88 (д, J=7,6 Гц, 2H), 8,12 (д, J=7,4 Гц, 1H), 8,31 (м, 2H), 10,12 (с, 1H).
Стадия b
5
5
N-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-валил-N-карбамоил-N-[4-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамид (310 мг, 0,404 ммоль) и 2-(бифенил-4-ил)пропан-2-ил метил[2-(метиламино)этил]карбамат (68) (132 мг, 0,404 ммоль) растворяют в сухом ДМФА (6 мл) и перемешивают в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 3 час. Растворитель выпаривают и результирующий сырой продукт очищают колоночной хроматографией (ДХМ/EtOH=9/1), получая N-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-валил-N-{4-[10-(бифенил-4-ил)-4,7,10-триметил-3,8-диоксо-2,9-диокса-4,7-диазаундец-1-ил]фенил}-N-карбамоил-L-орнитинамид (69) (200 мг, 52% выход).
+
МС(ЭСИ): 954 [M+H].
1
6
H ЯМР (500 MГц, ДМСО-d) δ м.д. 0,86 (м, 6H), 1,21-1,64 (м, 4H), 1,69 (с, 6H), 2,00 (м, 1H), 2,62-3,08 (м, 10H), 3,44 (м, 2H), 3,93 (т, J=7,6 Гц, 1H), 4,22 (м, 1H), 4,30 (м, 1H), 4,42 (м, 1H), 4,94-5,03 (м, 2H), 5,39 (с, 2H), 5,96 (м, 1H), 7,25-7,46 (м, 11H), 7,45-7,66 (м, 6H), 7,74 (м, 2H), 7,89 (м, 2H), 8,11 (ш.с, 1H), 10,06 (ш.с, 1H).
Стадия С
5
5
5
К раствору N-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-валил-N-{4-[10-(бифенил-4-ил)-4,7,10-триметил-3,8-диоксо-2,9-диокса-4,7-диазаундец-1-ил]фенил}-N-карбамоил-L-орнитинамида (69) (200 мг, 0,21 ммоль) в сухом ДМФА (6 мл) добавляют пиперидин (0,105 мл, 1 ммоль). Результирующий раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 2 час., концентрируют досуха, получая сырой L-валил-N-{4-[10-(бифенил-4-ил)-4,7,10-триметил-3,8-диоксо-2,9-диокса-4,7-диазаундец-1-ил]фенил}-N-карбамоил-L-орнитинамид, который используют без дополнительной очистки. Сырой промежуточный продукт растворяют в сухом ДХМ (6 мл) и добавляют 1-{6-[(2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси]-6-оксогексил}-1H-пиррол-2,5-дион (130 мг, 0,42 ммоль) и триэтиламин (0,088 мл, 0,63 ммоль). Результирующий раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, растворители выпаривают и остаток очищают колоночной хроматографией (ДХМ/EtOH=10/1), получая N-[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]-L-валил-N-{4-[10-(бифенил-4-ил)-4,7,10-триметил-3,8-диоксо-2,9-диокса-4,7-диазаундец-1-ил]фенил}-N-карбамоил-L-орнитинамид (70) (150 мг, 77% выход).
+
МС(ЭСИ): 925 [M+H].
1
6
H ЯМР (500 MГц, ДМСО-d) δ м.д. 0,81 (д, J=6,7 Гц, 3H), 0,84 (д, J=6,7 Гц, 3H), 1,18 (м, 2H), 1,36 (м, 1H), 1,40-1,52 (м, 6H), 1,60 (м, 1H), 1,69 (с, 6H), 1,97 (м, 1H), 2,08-2,23 (м, 2H), 2,63-2,96 (м, 8H), 2,90 (м, 1H), 3,01 (м, 1H), 3,23- 3,34 (м, 2H), 3,36 (м, 2H), 3,45 (м, 2H), 4,19 (т, J=7,4 Гц, 1H), 4,38 (м, 1H), 4,95-5,05 (м, 2H), 5,40 (с, 2H), 5,97 (д, J=5,6 Гц, 1H), 6,99 (с, 2H), 7,25-7,41 (м, 5H), 7,45 (м, 2H), 7,53-7,66 (м, 6H), 7,80 (д, J =9 Гц, 1H), 8,08 (д, J=7,0 Гц, 1H), 9,99 (м, 1H), 10,76 (ш.с, 1H).
Стадия e
Указанный в заголовке промежуточный продукт (39).
5
N-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]-L-валил-N-{4-[10-(бифенил-4-ил)-4,7,10-триметил-3,8-диоксо-2,9-диокса-4,7-диазаундец-1-ил]фенил}-N-карбамоил-L-орнитинамид (50 мг, 0,054 ммоль) растворяют в 5 мл сухого ТГФ и добавляют соляную кислоту (4M в диоксане, 0,3 мл). Раствор перемешивают в течение 3 мин. Результирующий осадок отфильтровывают, промывают ТГФ и сушат в вакууме, получая, таким образом, указанное в заголовке соединение (XX)' ( 36 мг, 92% выход).
+
МС(ЭСИ): 687 [M+H].
1
4
H ЯМР (500 MГц, метанол-d) δ м.д. 0,97 (д, J=6,8,Гц, 3H), 0,98 (д, J=6,8,Гц, 3H), 1,31 (м, 2H), 1,54-1,67 (м, 6H), 1,76 (м, 1H), 1,89 (м, 1H), 2,08 (м, 1H), 2,28 (т, J=7,5 Гц, 2H), 2,64-2,75 (м, 3H), 2,98 (с, 3H), 3,11 (м, 1H), 3,20 (м, 3H), 3,48 (т, J=7,1 Гц, 2H), 3,61 (т, J=5,7 Гц, 2H), 4,14 (д, J=7,5,Гц 1H), 4,50 (дд, J=9,1, 4,9 Гц, 1H), 5,11 (с, 2H), 6,79 (с, 2H), 7,35 (д, J=8,3 Гц, 2H), 7,60 (д, J=8,3 Гц, 2H).
По аналогичным методикам и, используя соответствующие исходные материалы, получают следующее соединение:
+
МС(ЭСИ): 687 [M+H].
Пример 9
5
Получение N-[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]-L-валил-N-карбамоил-N-(4-{[(пиперазин-1-илкарбонил)окси]метил}фенил)-L-орнитинамида (соед. 72)
Стадия 1
5
N-[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]-L-валил-N-{4-[({[4-(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-1-ил]карбонил}окси)метил]фенил}-N-карбамоил-L-орнитинамид.
5
5
Осуществляют взаимодействие N-[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]-L-валил-N-карбамоил-N-[4-({[(4-нитрофенокси)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамида (полученного, как сообщается в EP0624377A2 и EP2357006A2, 30 мг, 0,041 ммоль) с трет-бутил пиперазин-1-карбоксилатом (5,3 мг, 0,0287 ммоль) в безводном ДМСО в атмосфере аргона при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 час., до исчезновения исходного материала (ВЭЖХ-МС анализ). Затем добавляют к реакционной смеси диэтиловый эфир (80 мл) и полученный таким образом осадок собирают фильтрованием, получая N-[6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]-L-валил-N-{4-[({[4-(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-1-ил]карбонил}окси)метил]фенил}-N-карбамоил-L-орнитинамид в виде желтого твердого вещества (22,0 мг), которое выделяют и используют без дополнительной очистки на следующей стадии.
+
МС(ЭСИ): 785 [M+H].
Стадия 2
Указанное в заголовке соединение (72).
Промежуточный продукт со стадии 1 (22,0 мг) обрабатывают трифторуксусной кислотой (327 мг, 2,87 ммоль) в безводном дихлорметане (0,12 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин. до исчезновения исходного материала (ВЭЖХ-МС анализ). После этого реакционную смесь обрабатывают диэтиловым эфиром (20 мл) и полученный так ополаскивают диэтиловым эфиром (2×10 мл): таким образом, выделяют соединение (72) и используют без дополнительной очистки для получения соединения (6) по методике, представленной в примере 3.
+
МС(ЭСИ): 685 [M+H].