СПОСОБЫ РЕКОМБИНАНТНОЙ ПРОДУКЦИИ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕСПИРАТОРНО-ЦИНЦИТИАЛЬНОГО ВИРУСА (RSV)

H
L
1. Линия поликлональных клеток, включающая от 2 до n субпопуляций клеток, при этом каждая субпопуляция экспрессирует один особый член-антитело рекомбинантного поликлонального антитела против RSV, клетки включают по крайней мере одну экспрессионную конструкцию, кодирующую один особый член-антитело, неспецифическим образом и устойчиво интегрированную в геном, причем особые члены указанных рекомбинантных поликлональных антител против RSV выбирают из группы, состоящей из молекул антител, включающих участки CDR1, CDR2 и CDR3, выбираемые из группы пар V и V, приведенных здесь в таблице 3.
2. Линия поликлональных клеток по п.1, в которой особые члены объединены как в любой из смесей антител 1-56, представленных в таблице 6 здесь.
3. Линия поликлональных клеток по п.1, в которой особые члены объединены как в любой из смесей антител 2, 9, 13, 17, 18, 28, 33 и 56, представленных в таблице 6 здесь, предпочтительно в любой из смесей антител 28, 33 и 56.
H
L
4. Линия поликлональных клеток по п.1 или 2, в которой особые члены выбирают из группы, состоящей из антител, включающих последовательности V и V клонов 735, 736, 744, 793, 795, 796, 799, 800, 801, 804, 810, 811, 812, 814, 816, 817, 818, 819, 824, 825, 827, 829, 830, 831, 835, 838, 841, 853, 855, 856, 857, 858, 859, 861, 863, 868, 870, 871, 880, 881, 884, 886, 888 и 894, описанных здесь.
5. Линия поликлональных клеток по п.4, в которой особые члены выбирают из группы, состоящей из антител из клонов 793, 800, 810, 816, 818, 819, 824, 825, 827, 831, 853, 855, 856, 858, 868, 880, 888 и 894 и антител, включающих участки CDR указанных антител.
H
L
6. Линия поликлональных клеток по п.4, в которой особые члены выбирают из группы, состоящей из антител, включающих последовательности V и V клонов 810, 818, 819, 824, 825, 827, 858, 894, 793, 816, 853, 855 и 856.
7. Линия поликлональных клеток по п.1, в которой одним особым членом-антителом является антитело, кодируемое клоном 824, или антитело с участками CDR клона 824.
8. Линия поликлональных клеток по п.1, в которой одним особым членом-антителом является антитело, кодируемое клоном 810, или антитело с участками CDR клона 810.
9. Линия поликлональных клеток по любому из пп.1-8, в которой по крайней мере одна особая молекула антитела способна к связыванию с F-белком и по крайней мере одна особая молекула антитела способна к связыванию с G-белком.
10. Линия поликлональных клеток по п.1, в которой n равно 3 или более.
11. Линия поликлональных клеток по п.1, в которой n равно менее 30.
12. Линия поликлональных клеток по п.1, в которой клетки, экспрессирующие один особый член рекомбинантного поликлонального белка, происходят из 1 или более клонированных клеток, например из 2 или более, например из 3 или более, например из 4 или более, например из 5 или более клонированных клеток.
13. Линия поликлональных клеток по п.1, в которой каждая экспрессионная конструкция кодирует как тяжелую, так и легкую цепи.
14. Линия поликлональных клеток по п.1, в которой отдельные экспрессионные векторы кодируют тяжелую и легкую цепь.
15. Линия поликлональных клеток по п.13 и/или 14, в которой экспрессия субъединиц находится под контролем одних и тех же или идентичных промоторов.
16. Линия поликлональных клеток по п.13, в которой экспрессионная конструкция кодирует селектируемый маркер.
17. Линия поликлональных клеток по п.16, в которой селектируемый маркер кодируется транскриптом, который также кодирует антитело или субъединицу антитела.
18. Линия поликлональных клеток по п.1, в которой все члены рекомбинантного поликлонального антитела против RSV являются антителами одного и того же изотипа.
19. Линия поликлональных клеток по п.1, в которой клетки-хозяева являются прокариотическими.
20. Линия поликлональных клеток по п.1, в которой клетки-хозяева являются эукариотическими.
21. Клетка, включающая экспрессионную конструкцию, способную к управлению экспрессией антитела против RSV, выбираемого из группы, состоящей из антител, включающих по крайней мере определяющие комплементарность участки (CDR) антител, перечисленных в таблице 3, причем клетка включает по крайней мере одну экспрессионную конструкцию, устойчиво интегрированную в неспецифическом положении в геноме.
H
L
22. Клетка по п.21, где антитело против RSV выбирают из группы, состоящей из антител, которые включают участки CDR из пар последовательностей V и V клонов 735, 736, 744, 793, 795, 796, 799, 800, 801, 804, 810, 811, 812, 814, 816, 817, 818, 819, 824, 825, 827, 829, 830, 831, 835, 838, 841, 853, 855, 856, 857, 858, 859, 861, 863, 868, 870, 871, 880, 881, 884, 886, 888 и 894.
23. Клетка по п.21, включающая две или более экспрессионных конструкций, интегрированных в различных и неспецифических положениях в геноме.
24. Клетка по п.21, где антитело против RSV выбирают из группы, состоящей из антител из клонов 793, 800, 810, 816, 818, 819, 824, 825, 827, 831, 853, 855, 856, 858, 868, 880, 888 и 894 и антител, включающих участки CDR указанных антител.
25. Клетка по п.21, где антитело против RSV выбирают из группы, состоящей из антител из клонов 793, 800, 810, 818, 819, 824, 825, 827, 831, 853, 858, 888 и 894.
26. Клетка по п.21, где CDR происходят из клона 810.
27. Клетка по п.21, где CDR происходят из клона 824.
28. Клетка по п.21, которая является эукариотической.
29. Клетка по п.28, где эукариотические клетки выбирают из группы, состоящей из клеток растений, дрожжей, грибов, позвоночных или беспозвоночных.
30. Клетка по п.28, где эукариотические клетки выбирают из группы, состоящей из клеток яичника китайского хомячка (CHO), клеток COS, клеток BHK, миеломных клеток (например, клеток Sp2/0, NSO, YB2/0), NIH 3T3, фибробласта или иммортализованных клеток человека, включающих клетки HeLa, клетки HEK 293 или PER.C6.
31. Способ создания клетки, способной к экспрессии антитела против RSV, включающий трансфекцию клетки экспрессионной конструкцией, кодирующей указанное антитело против RSV, в условиях, делающих возможной неспецифическую интеграцию в геном указанной клетки, и отбор по крайней мере одной клетки с экспрессионной конструкцией, устойчиво интегрированной в неспецифическом положении, при этом экспрессионная конструкция кодирует антитело против RSV, выбираемое из группы, состоящей из антител, включающих по крайней мере определяющие комплементарность участки (CDR) антител, перечисленных в таблице 3.
32. Способ по п.31, в котором трансфекцию и/или отбор проводят в условиях, благоприятствующих амплификации экспрессионной конструкции.
33. Способ продукции поликлонального антитела против RSV, включающий
a) обеспечение линий поликлональных клеток по любому из пп.1-20;
b) культивирование линии поликлональных клеток в условиях, делающих возможной экспрессию поликлонального белка; и
c) выделение и необязательно очистку поликлонального антитела против RSV из среды.
34. Способ по п.33, в котором сложные смеси культивируют в емкости, выбираемой из группы, состоящей из качалочной колбы, одноразового биореактора и биореактора.
35. Способ по п.34, в котором одну линию поликлональных клеток, экспрессирующую одну популяцию особых членов-антител поликлонального антитела против RSV, культивируют в одной емкости, а по крайней мере вторую линию поликлональных клеток, экспрессирующую вторую популяцию особых членов-антител поликлонального антитела против RSV, культивируют во второй емкости, и поликлональное антитело из каждой емкости смешивают до или после очистки.
36. Способ по п.33, дополнительно включающий стадию подтверждения присутствия каждого из особых членов-антител в выделенном и необязательном очищенном поликлональном антителе.
37. Способ продукции антитела против RSV, включающий
a) обеспечение линий клеток, происходящей из клетки по любому из пп.21-29;
b) культивирование линии клеток в условиях, делающих возможной экспрессию антитела; и
c) выделение и необязательно очистку антитела против RSV из среды.
38. Способ по п.37, в котором линию клеток культивируют в емкости, выбираемой из группы, состоящей из качалочной колбы, одноразового биореактора и биореактора.