Способ формирования лабораторной модели псориаза при имиквимод-индуцированном воспалении у экспериментальных животных
METHOD OF FORMING A LABORATORY MODEL OF PSORIASIS IN IMIQUIMOD-INDUCED INFLAMMATION IN EXPERIMENTAL ANIMALS

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может найти свое применение в медицинских целях для изучения патогенеза заболевания и действия наружных лекарственных препаратов.
Для выявления медиаторов воспаления, а также исследования препаратов при псориазе необходимо иметь возможность в эксперименте воспроизвести фенотипические проявления заболевания. Весомый вклад в данном направлении вносят экспериментальные работы на лабораторных животных. Они позволяют достаточно быстро смоделировать проявления заболевания, и в то же время менее строги в этических аспектах, чем при исследовании человека.
В отечественной литературе описан способ моделирования псориаза путем перорального выпаивания крыс в течение 21 суток культурой бактерий β-гемолитического стрептококка. Используют взвесь культуры в воде.
5
9
Содержание бактерий составляет 10-10 КОЕ/мл. Вводят по 1 мл взвеси 1 раз в день. (Патент на изобретение RU 2575338 С1 от 31.12.2014 г.).
Недостатком данного метода является длительный период его формирования, а также патологические изменения внутренних органов, происходящие в ответ на попадание культуты β-гемолитического стрептококка.
В зарубежной литературе описан способ формирования псориазиформных высыпаний при использовании крема имиквимода мышам на кожу спины 1р/д в течение 5 дней [Van der Fits L, Mourits S, Voerman JS, Kant M, Boon L, Laman JD, Comelissen F, Mus AM, Florencia E, Prens EP, Lubberts E. Imiquimod-induced psoriasis-like skin inflammation in mice is mediated via the IL-23/IL-17 axis. J Immunol. 2009 May 1; 182(9): 5836-45.].
Недостатком метода является слабая выраженность псориазиформных высыпаний и гистопатологических изменений в пораженной коже.
Описана модель псориазиформного воспаления при наружном применении 12-О-тетрадеканоилфорбол-13-ацетата, являющегося активатором протеинкиназы С [Stanley PL, Steiner S, Havens M, Tramposch KM. Mouse skin inflammation induced by multiple topical applications of 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate. Skin Pharmacol. 1991; 4(4): 262-71].
Основной недостаток данной модели проявляется в неспецифическом характере индуцированного воспаления кожи. Например, 12-О-тетрадеканоилфорбол-13-ацетат используется для создания модели не только псориаза, но и острого дерматита.
В основу нашего изобретения положена задача создания более показательной и воспроизводимой модели псориаза на лабораторных животных.
Целью работы стало формирование более точной лабораторной модели псориаза на примере имиквимод-индуцированного воспаления за счет того, что предложенная длительность, кратность, место нанесения и линия животных обеспечивают наиболее выраженные и сходные с проявлениями у человека клинические и гистологические признаки.
Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе формирования лабораторной модели псориаза, включающем наружное применение имиквимода, отличающийся тем, что препарат применяют 1р/д по 62,5 мг в течение 10 дней на предварительно побритую кожу спины мышей линии Balb/c 7-8 недель.
Технический результат заключается в повышении показательности, сходства и воспроизводимости.
Формирование острой лабораторной модели псориаза на основании применения имиквимода позволяет быстро, показательно и сходно с заболеванием у человека воспроизвести отдельные стороны заболевания, что важно для изучения его патогенеза и оценки действия лекарственных препаратов.
Изобретение поясняется фиг. 1-3. На фиг. 1 показана клиническая картина сформированной имиквимод-индуцированной модели заболевания, на фиг. 2 - гистологическая картина, на фиг.3 - иммуногистохимическая картина (Ki67+-клетки), при этом слева показаны результаты контрольной группы, а справа сформированной имиквимод-индуцированной модели заболевания. На фиг.1 видны сформированные псориазиформные элементы: эритема, шелушение и индурация кожи. На фиг. 2 наблюдается выраженное утолщение эпидермиса и лимфогистиоцитарный инфильтрат в эпидермисе и дерме. При иммуногистохимическом исследовании (фиг. 3) в сформированной модели наблюдается резкое увеличение площади экспрессии Ki67+-клеток в эпидермисе, что обуславливает формирование псориазиформного акантоза и гиперкератоза.
Изобретение осуществляется следующим образом:
1. Предварительно полученные инбредные мыши линии Balb/c 7-8 недель в течение 3 дней адаптируются к групповому содержанию.
2. После этого волосы на коже спины однократно бреют бритвой с острым лезвием, не допуская порезов.
3. На следующий день после бритья на кожу спины равномерно 1р/день в течение 10 дней наносят препарат имиквимод в количестве 62,5 мг.
Изобретение иллюстрируется следующими конкретными примерами.
Пример 1.
Для оценки эффективности препарата, содержащего цинк-пиритион, в подавлении развития воспалительной реакции применена лабораторная модель имиквимод-индуцированного воспаления на мышах. После формирования модели с 11 по 15 дни исследования изучаемой группе наносили препарат цинк-пиритион, в группе положительного контроля применяли топический глюкокортикостероид, обладающий выраженным иммуносупрессивным действием (Акридерм), в качестве отрицательного контроля - индифирентный крем.
Результаты: При клиническом наблюдении установлено, что при применении препарата цинка-пиритиона наблюдается выраженное разрешение элементов кожной сыпи: эритемы, индурации и шелушения (см. фиг. 1-3), а также снижение их суммарного показателя - индекса mPASI. В то же время данные изменения более значимы в группе животных получающих топический глюкокортикостероид. Таким образом, использование модели псориаза позволило показать выраженную противовоспалительную активность цинк-пиритиона, в то же время уступающую по силе действия сильному топическому глюкокортикостероидному препарату.
Пример 2.
Для оценки биологической роли нейтрофилов в формировании высыпаний у больных псориазом применена лабораторная модель острого имиквимод-индуцированного воспаления. Кроме того, в исследуемой группе мышей применяли антитело против нейтрофилов.
Результаты: При проведении клинического исследования установлено, что в группе мышей, где применяли антитело против нейтрофилов, обнаружена менее выраженная эритема, шелушение и утолщение кожи по сравнению с контрольной группой. Также наблюдались менее выраженные гистопатологические проявления псориаза (акантоз, гиперкератоз). Применение лабораторной модели позволило выявить значимую роль нейтрофилов в развитии воспалительной реакции при псориазе.
Из анализа научно-технической и патентной литературы не обнаружено сведений о возможности формирования острой модели псориаза наружным нанесением препарата имиквимода в течение 10 дней в количестве 62,5 мг 1 р/день, что позволяет сделать выводы о соответствии заявляемого технического решения критериям «новизна» и «изобретательский уровень».