УЛУЧШЕННЫЙ ПРОЦЕСС ПОЛУЧЕНИЯ ФИБРИНОГЕНА И ФИБРИНОГЕН, ПОЛУЧЕННЫЙ ТАКИМ ОБРАЗОМ

1. Способ очистки источника, содержащего фибриноген путем осаждения фибриногена из раствора, содержащего фибриноген, в присутствии одного или более хелатообразующих агентов(а) и удаления надосадочной жидкости из пасты фибриногена, отличающийся тем, что фибриноген экстрагируют из пасты, образующей жидкую фракцию, содержащую фибриноген, и нерастворенный остаток, который отделяется от жидкости, при отсутствии добавления одного или более ингибиторов(а) протеаз.
2. Способ по п. 1, где один или более ингибиторов(а) протеаз выбирают из ингибиторов C1-протеазы, ингибиторов трипсина, ингибиторов тромбина, антитромбина-III (AT-III), кофактора гепарина-II, апротинина, пепстатина, лейпептина и эпсилон-аминокапроновой кислоты.
3. Способ по одному из пп. 1 или 2, где один или более из хелатообразующих агентов(а) представляет собой Ca2+-хелатообразующий агент, выбираемый из 1,2-бис(o-амино)этан-Ν,Ν,Ν',Ν'-тетрауксусной кислоты (BAPTA), диэтилентриаминпентауксусной кислоты (DTPA), этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA), этиленгликольтетрауксусной кислоты (EGTA) и нитрилотриуксусной кислоты (NTA).
4. Способ по одному из пп. 1 или 2, где концентрация хелатообразующего агента находится в диапазоне от 3 мM до 100 мM.
5. Способ по одному из пп. 1 или 2, где концентрация хелатообразующего агента находится в диапазоне от 5 мM до 50 мM.
6. Способ по одному из пп. 1 или 2, где концентрация хелатообразующего агента находится в диапазоне от 5 мM до 20 мM.
7. Способ по одному из пп. 1 или 2, где фибриноген осаждают в диапазоне температур от 4,1°C до 40°C, в частности в диапазоне от 5°C до 37°C, при помощи осаждающего средства, которое, в частности, выбирают из группы, состоящей из аминокислот, полиэтиленгликоля или соли в высоких концентрациях или их комбинаций, где соль содержит одновалентные ионы металлов, в частности, выбираемые из группы щелочных металлов, или аммония.
8. Способ по п. 7, где осаждающим агентом является аминокислота, такая как глицин, в частности около 1M глицин.
9. Способ по п. 7, где пасту фибриногена экстрагируют в течение 10-120 минут, предпочтительно в приблизительно 20 мM TRIS буфере при pH около 8,0 для получения жидкой фракции.
10. Способ по п. 9, где в буфере TRIS не содержится хелатообразующих агентов.
11. Способ по одному из пп. 9 или 10, где полученную жидкую фракцию фильтруют для получения фильтрата, который контактирует с анионообменной смолой, включающей триметиламиногруппы, привитые к основе гидроксилированного метакрилового полимера посредством линкерных групп, и промывки слабо связанных веществ, предпочтительно промывочным буфером с проводимостью около 12,0 мСм/см.
12. Способ по п. 11, где фибриноген десорбируют из сильной анионообменной смолы посредством элюирующего буфера, содержащего цитрат натрия, хлорид натрия и глицин, предпочтительно около 1,5 г/л цитрата натрия, около 7,0 г/л хлорида натрия и около 10,0 г/л глицина, в частности, доведенного до pH около 7,0 и проводимости 13,1-15 мСм/см.
13. Способ по п. 9, где десорбированный раствор фибриногена нанофильтруют для получения нанофильтрованной фракции.
14. Способ по п. 12, где полученную фракцию концентрируют, рецептируют, стерильно фильтруют и/или заполняют в подходящие конечные контейнеры.
15. Способ по п. 14, где конечные контейнеры выбирают из стеклянных флаконов или бутылей, или пластиковых пакетов, в конечном счете, включающих мембрану.
16. Способ по пп. 13 или 15, где полученную фракцию лиофилизируют.
17. Способ по одному из пп. 1, 2, 8, 9, 10, 12, 13, 14 или 15, включающий стадии
a) растворения криопреципитата, растворенного при около нейтральном pH,
b) адсорбции раствора с помощью Al(OH)3 и удаления полученного геля,
c) инактивации вирусов в полученном растворе по стадии b) посредством обработки растворителем/детергентом (S/D), экстракции реагентов S/D с помощью растительного масла и контакта водной фазы со смолой TMAE при значении pH 6,9-7,1 и осмолярности 570-610 мосмоль/л,
d) добавления, по меньшей мере, одного хелатообразующего агента к полученной водной фазе стадии c),
e) осаждения фибриногена из водной фазы, содержащей хелатообразующий агент со стадии d), путем добавления глицина до достижения конечной концентрации глицина около 1M и разделения полученной пасты фибриногена,
f) экстракции фибриногена из пасты фибриногена посредством 20 мM TRIS буфера при pH около 8,0; фильтрации и,
g) загрузки фильтрованного раствора со стадии f) на анионообменную смолу, включающую триметиламиногруппы, привитые на каркас гидроксилированного метакрилового полимера посредством линкерных групп, и промывки плохо связавшихся веществ с помощью промывочного буфера с проводимостью около 12,0 мСм/см,
h) элюции фибриногена элюирующим буфером, содержащим приблизительно 1,5 г/л цитрата натрия, приблизительно 7,0 г/л хлорида натрия и приблизительно 10,0 г/л глицина, в частности, доведенного до pH приблизительно 7,0 и проводимости 13,1-15 мСм/см,
i) фильтрации через, по меньшей мере, один нанофильтр
j) концентрирования, рецептирования, заполнения стерильной фильтрацией и необязательно лиофилизации.
18. Способ по п. 17, где концентрация хелатообразующего агента в водной фазе составляет от 3 мM до 100 мM.
19. Продукт фибриногена, получаемый в соответствии с п. 18, содержащий менее чем 11% соединений с более высокой молекулярной массой, чем фибриноген, определяемых как % общей площади посредством хроматографии, исключительной по размеру, при 280 нм.
20. Продукт фибриногена, получаемый в соответствии с п. 18,
содержащий 2-10% соединений с более высокой молекулярной массой, чем фибриноген.
21. Продукт фибриногена, получаемый в соответствии с п. 18, содержащий 2-6% соединений с более высокой молекулярной массой, чем фибриноген.
22. Продукт фибриногена по одному из пп. 19, 20 или 21, имеющий активность фактора коагуляции XIII в концентрациях 0,05-0,30 МЕ/мг фибриногена.
23. Продукт фибриногена по одному из пп. 19, 20 или 21, не содержащий определяемых количеств антитромбина-III (AT-III) или протеолитической активности, то есть концентрацию AT-III менее чем 0,2 МЕ/мл и протеолитическую активность менее чем 2 ЕД на литр (<2 ЕД/л), что соответствует менее чем 0,01 МЕ AT-III на мг фибриногена и менее чем 0,1 мЕД протеолитической активности на мг фибриногена при измерении в растворе конечного продукта, содержащего фибриноген в концентрации 20 мг/мл.
24. Продукт фибриногена по одному из пп. 19, 20 или 21, отличающийся тем, что он лиофилизирован.
25. Применение анионообменной смолы, выбираемой из группы, состоящей из материала подложки, включающего каркас гидроксилированного полимера с привитыми третичными или четвертичными аминогруппами для очистки или производства продукта фибриногена, по меньшей мере, по одному из пп. 19-24 в способе, по меньшей мере, по одному из пп. 1-18.