СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ЦЕЛОСТНОСТИ КИШЕЧНОГО БАРЬЕРА ПОСЛЕ РОДОВ НЕ ЧЕРЕЗ ЕСТЕСТВЕННЫЕ РОДОВЫЕ ПУТИ
METHOD OF STIMULATING INTESTINAL BARRIER INTEGRITY AFTER NONVAGINAL DELIVERY

Область изобретения
Настоящее изобретение относится к способам кормления и лечения младенцев, рожденных посредством кесарева сечения.
Предшествующий уровень техники
Младенцы имеют при рождении недоразвитый кишечник. После рождения неонатальный желудочно-кишечный тракт подвергается быстрому развитию и созреванию, включая образование слизи и созревание и устойчивое закрытие мест внедрения аллергенов, токсинов и патогенных микроорганизмов. В человеческом молоке присутствуют несколько факторов, которые улучшают развитие кишечника.
Проницаемый недоразвитый кишечный барьер играет роль в приобретении флегмоны кишечника, инфекций, диареи и атопических заболеваний, включая пищевую аллергию. Правильно созревающий кишечник, особенно в сочетании с здоровой кишечной флорой, приводит к уменьшению частоты заболеваемости инфекциями, усилению иммунной системы, уменьшению частоты заболеваемости пищевой аллергией, и/или другими атопическими заболеваниями, и/или уменьшению частоты заболеваемости диареей, запором и/или флегмоной кишечника.
Кишечная проницаемость уменьшается быстрее у детей на грудном вскармливании, чем у новорожденных на искусственном вскармливании. Тем не менее, грудное вскармливание не всегда возможно.
Международная заявка WO 2004112509 описывает композицию для стимуляции характера созревания кишечного барьера, сходного с тем, который наблюдается при грудном вскармливании, и способную улучшить созревание кишечного барьера, например, в течение неонатального стресса.
Международная заявка WO 2005122790 описывает способ стимуляции целостности барьера у млекопитающего введением млекопитающему композиции, содержащей эйкозапентаеновую кислоту (EPA), докозагексаеновую кислоту (DHA) и арахидоновую кислоту (ARA) и по меньшей мере два разных олигосахарида.
Европейский патент EP 1549158 описывает композиции с формулой для новорожденных, которые содержат от 3,2 мг/л до 15,4 мг/л CMP; от 1,8 мг/л до 11,0 мг/л UMP; от 1,8 мг/л до 8,0 мг/л GMP; от 0,1 мг/л до 2,2 мг/л IMP; и от 2,5 мг/л до 13,2 AMP.
Международная заявка WO 03043445 описывает переработанное детское питание, которое приготовлено с a) маслами, b) нуклеотидами, c) маслами и нуклеотидами.
Bifidobacterium infantis.
Bifidobacteria,
Natren производит пробиотический продукт Life Start, который специально разработан для новорожденных и подходит для новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения. Life Start сделан с  Поскольку продукт Life Start содержит только один единственный вид польза для новорожденного очень ограниченна.
Сущность изобретения
Bifidobacteria
Bifidobacterium
Bifidobacterium breve, Bifidobacterium
longum, Bifidobacterium
infantis
Bifidobacterium
bifidum.
Bifidobacteria, в
.
Escherichia coli
.
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что новорожденные, рожденные посредством кесарева сечения, имеют кишечную флору, которая отличается от кишечной флоры новорожденных, рожденных через естественные родовые пути. Частично, новорожденные, рожденные посредством кесарева сечения, имеют пониженную степень кишечной колонизации и имеют меньшее многообразие кишечной флоры относительно видов, чем новорожденные, рожденные через естественные родовые пути, частично отсутствуютиАвторы настоящего изобретения обнаружили, кроме того, что кишечная флора новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, имеет меньшее содержаниесравнении с кишечной флорой новорожденных, рожденных через естественные родовые путиДополнительно, ими было обнаружено, что кишечная флора новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, имеет высокое содержание (нежелательное) через 6 недель после рождения
Здоровая и полностью развитая желудочно-кишечная флора имеет важные физиологические эффекты. Важным аспектом является то, что она уменьшает частоту случаев (желудочно-кишечных) инфекций. Поскольку новорожденные, рожденные посредством кесарева сечения, нуждаются в здоровой флоре, предотвращение инфекции является особенно важным для этих детей. Такие дети, нормально рожденные в больничных условиях, подвержены риску развития патогенной инфекции из-за нозокомиальных бактерий. Дополнительно, снижение развития здоровой кишечной флоры приводит к быстрой колонизации патогенной бактерией, в сравнении с ситуацией, когда желудочно-кишечный тракт новорожденных засеян материнскими бактериями, полученными из вагинальной и кишечной флоры матери. Для того чтобы предотвратить бактериальную транслокацию или транслокацию бактериальных (эндо- или экзо-) токсинов по кишечному барьеру этими (нозокомиальными) патогенами, крайне важно улучшать и/или ускорять кишечное созревание у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения. Улучшение созревания кишечного барьера и/или барьерной проницаемости у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, кроме того, уменьшает случаи флегмоны кишечника, пищевой аллергии и/или других атопических заболеваний.
Авторы изобретения выяснили, что барьерная функция детей, рожденных посредством кесарева сечения, нарушена, и обнаружили, что длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты (LC-PUFA) и/или нуклеотиды улучшают созревание и целостность кишечного барьера и/или имеют противовоспалительный эффект у детей, рожденных посредством кесарева сечения. Кроме того, LC-PUFA содействуют адгезии бактерий, продуцирующих молочную кислоту, на слизистых оболочках. Следовательно, настоящее изобретение относится к применению композиции, содержащей LC-PUFA и/или нуклеотид, которая, в частности, предназначена для а) уменьшения частоты инфекций путем увеличения проницаемости кишечного барьера и/или ускорения созревания, b) уменьшения частоты (пищевой) аллергии и/или других атопических заболеваний путем увеличения проницаемости кишечного барьера и/или ускорения созревания, с) увлажнения или смягчения процессов флегмоны кишечника, которые в противном случае дополнительно увеличивают проницаемость кишечного барьера, и/или d) улучшения флоры путем увеличения колонизации бактерии, продуцирующей молочную кислоту на слизистых у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение может быть осуществлено на практике путем объединения настоящих активных ингредиентов в питательной композиции. Без больших расходов такие композиции могут вводиться новорожденному, рожденному посредством кесарева сечения.
Подробное описание предпочтительных вариантов осуществления
Настоящее изобретение обеспечивает применение композиции, содержащей (i) длинноцепочечную полиненасыщенную жирную кислоту (LC-PUFA); и/или (ii) по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из (a) нуклеотида и (b) предшественника нуклеотида, выбранного из группы, состоящей из нуклеозидов, пуриновых оснований, пиридиновых оснований, рибозы и дезоксирибозы, для получения композиции для введения новорожденному, рожденному посредством кесарева сечения. В другом аспекте, настоящий способ обеспечивает применение композиции, содержащей (i) длинноцепочечную полиненасыщенную жирную кислоту (LC-PUFA); и/или (ii) по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из (a) нуклеотида и (b) предшественника нуклеотида, выбранного из группы, состоящей из нуклеозидов, пуриновых оснований, пиридиновых оснований, рибозы и дезоксирибозы для получения композиции для i) лечения и/или профилактики нарушений у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, и/или ii) стимуляции здоровья у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения.
Настоящее изобретение также представляет способ вскармливания новорожденного, рожденного посредством кесарева сечения, включающий введение данному новорожденному композиции, содержащей (i) длинноцепочечную полиненасыщенную жирную кислоту (LC-PUFA) и/или (ii) по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из (a) нуклеотида и (b) предшественника нуклеотида, выбранного из группы, состоящей из нуклеозидов, пуриновых оснований, пиридиновых оснований, рибозы и дезоксирибозы.
Кесарево сечение
Кесарево сечение (К-сечение) представляет собой хирургическую процедуру, при которой новорожденный рождается через разрез, сделанный в брюшной стенке матери, и затем через стенку матки. Кесарево сечение обычно выполняется, когда оно более безопасно для матери или младенца, чем рождение через естественные родовые пути. В другом случае женщина может выбрать кесарево сечение охотнее, чем роды через естественные родовые пути.
Длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты
На всем протяжении этого описания композиция, применяемая в способе по настоящему изобретению, часто упоминается, как “настоящая композиция”. Настоящая композиция предпочтительно содержит длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты (LC-PUFA). LC-PUFA представляют собой жирные кислоты, где ацильная цепочка имеет длину от 20 до 24 атомов углерода (предпочтительно 20 или 22 атома углерода) и где ацильная цепочка содержит по меньшей мере две ненасыщенные связи между указанными атомами углерода в ацильной цепочке. Более предпочтительно настоящая композиция содержит по меньшей мере один LC-PUFA, выбранный из группы, состоящей из эйкозапентаеновой кислоты (EPA, 20:5 n3), докозагексаеновой кислоты (DHA, 22:6 n3), арахидоновой кислоты (ARA, 20:4 n6), докозапентаеновой кислоты (DPA, 22:5 n3). Для EPA, DHA и ARA было обнаружено эффективное снижение проницаемости кишечных плотных соединений (см. пример 2). Сниженная проницаемость плотных соединений уменьшает частоту инфекции и/или снижает пассаж аллергенов и/или снижает пассаж бактериальных (эндо- или экзо-) токсинов. Кроме того, соединение LC-PUFA, предпочтительно EPA, DHA и/или ARA в настоящей композиции, улучшает проницаемость кишечного барьера, которая крайне важна для детей, рожденных посредством кесарева сечения, кроме того, эти дети имеют менее развитую кишечную флору и, следовательно, медленно созревающий кишечный барьер. LC-PUFA дополнительно имеют противовоспалительные эффекты и помогают адгезии бактерий, продуцирующих молочную кислоту, на слизистые оболочки, посредством этой стимуляции развивается здоровая флора, которые, кроме того, выгодны для применения у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения.
Так как низкие концентрации ARA, DHA, DPA и/или EPA всегда эффективны в уменьшении проницаемости плотного соединения, содержание LC-PUFA в настоящей композиции, которая представляет собой предпочтительно питательную композицию, предпочтительно, не превышает 15% масс. от содержания всего жира, предпочтительно, не превышает 10% масс., еще более предпочтительно, не превышает 5% масс. Предпочтительно, настоящая композиция содержит по меньшей мере 0,1% масс., предпочтительно, по меньшей мере 0,25% масс., более предпочтительно, по меньшей мере 0,5% масс., еще более предпочтительно, по меньшей мере 0,75% масс. LC-PUFA от содержания всего жира. По той же причине, содержание EPA предпочтительно, не превышает 5% масс. от всего жира, более предпочтительно, не превышает 1% масс., но является предпочтительно, по меньшей мере 0,025% масс., более предпочтительно, по меньшей мере 0,05% масс. от всего жира. Содержание DHA предпочтительно не превышает 5% масс., более предпочтительно, не превышает 1% масс., но представляет собой по меньшей мере 0,1% масс. от всего жира. Поскольку было обнаружено, что ARA частично эффективна в уменьшении проницаемости плотного соединения, настоящая композиция содержит сравнительно высокие концентрации, предпочтительно по меньшей мере 0,1% масс., еще более предпочтительно по меньшей мере 0,25% масс., наиболее предпочтительно по меньшей мере 0,35% масс. ARA от всего жира. Содержание ARA предпочтительно не превышает 5% масс., более предпочтительно 1% масс. от всего жира. Когда настоящая энтеральная композиция содержит ARA, EPA и DHA, она выгодно прибавляется для уравновешивания действия ARA, например, уменьшает потенциальное провоспалительное действие метаболитов ARA. Избыток метаболитов ARA может вызывать случаи воспаления. Следовательно, настоящая композиция предпочтительно содержит ARA, EPA и DHA, в которой масса пропорции ARA/DHA предпочтительно составляет выше 0,25, предпочтительно выше 0,5, еще более предпочтительно выше 1. Пропорция ARA/DHA предпочтительно составляет ниже 25, более предпочтительно ниже 15. Масса пропорции ARA/EPA составляет предпочтительно от 1 до 100, более предпочтительно от 5 до 20.
Для того чтобы походить на человеческое молоко как можно больше и уменьшить побочные эффекты высоких доз LC-PUFA, настоящая композиция содержит LC-PUFA, предпочтительно не превышая 3% масс. от содержания всего жира. Содержание n3 (омега-3) LC-PUFA предпочтительно ниже 1% масс. от содержания всего жира. n6 (омега-6) LC-PUFA предпочтительно ниже 2% масс. от содержания всего жира. Содержание ARA предпочтительно ниже 1% масс. от содержания всего жира. Масса пропорции EPA/DHA предпочтительно составляет 1 или меньше.
LC-PUFA могут быть представлены в виде свободных жирных кислот, в форме триглицерида, в форме диглицерида, в форме моноглицерида, в фосфолипидной форме или как смесь одного или более из вышеуказанных, предпочтительно в форме триглицерида. Настоящая композиция предпочтительно содержит по меньшей мере один из ARA и DHA в фосфолипидной форме.
Нуклеотиды
В предпочтительном варианте осуществления настоящая композиция содержит нуклеотид и/или предшественник нуклеотида, выбранный из группы, состоящей из нуклеозидов, пуриновых оснований, пиридиновых оснований, рибозы и дезоксирибозы. Более предпочтительно композиция содержит нуклеотид. Нуклеотид находится, предпочтительно, в монофосфатной, дифосфатной или трифосфатной форме, более предпочтительно, является рибонуклеотидом. Нуклеотиды могут быть мономерными, димерными или полимерными (включая РНК и ДНК). Нуклеотиды предпочтительно присутствуют как свободные кислоты или в форме соли, более предпочтительно, мононатриевой соли. Соединение нуклеотида в настоящей композиции улучшает проницаемость кишечного барьера и/или его созревание, которые крайне важны для детей, рожденных посредством кесарева сечения, так как эти дети имеют менее развитую кишечную флору и, следовательно, медленнее созревающий кишечный барьер. Предпочтительно, композиция содержит одно или несколько выбранных из группы, состоящей из цитидин-5'-монофосфата (CMP), уридин-5'-монофосфата (UMP), аденозин-5'-монофосфата (AMP), гуанозин-5'-монофосфата (GMP) и инозин-5'-монофосфата (IMP) и/или их солей, в частности, их мононатриевых солей, более предпочтительно, по меньшей мере, 3 выбранных из группы, состоящей из CMP, UMP, AMP, GMP и IMP и/или их солей, в частности их мононатриевых солей. Уменьшение многообразия нуклеотидов может, кроме того, улучшить барьерную проницаемость.
E.coli.
Предпочтительно композиция содержит от 5 до 100 мг, более предпочтительно от 10 до 25 мг нуклеотидов, на 100 г сухой массы настоящей композиции. Нуклеотиды, кроме того, стимулируют иммунную систему, тем самым снова увеличивают защиту против высокой нагрузки кишечных патогенов, таких как
Предпочтительно композиция содержит от 1 до 20 мг, более предпочтительно от 3 до 12,5 мг CMP на 100 г сухой массы композиции. Предпочтительно композиция содержит от 1 до 20 мг, более предпочтительно от 2 до 9 мг UMP на 100 г сухой массы композиции. Предпочтительно настоящая композиция содержит от 0,5 до 15 мг, более предпочтительно от 1,5 до 8 мг AMP на 100 г сухой массы настоящей композиции. Предпочтительно композиция содержит от 0,2 до 10 мг, более предпочтительно от 0,6 до 3 мг GMP на 100 г сухой массы композиции. Предпочтительно настоящая композиция содержит от 0,5 до 10 мг, более предпочтительно от 1,3 до 5 мг IMP на 100 г сухой массы композиции.
Предпочтительно настоящая композиция содержит оба (i) LC-PUFA и (ii) нуклеотид и/или предшественник нуклеотида, выбранный из группы, состоящей из нуклеозидов, пуриновых оснований, пиридиновых оснований, рибозы и дезоксирибозы, кроме того, комбинация этих компонентов неожиданно улучшает барьерную функцию кишки, иммунной системы и/или кишечной флоры, например, предполагается синергический эффект.
Неперевариваемые олигосахариды
Bifidobacteria
Lactobacilli
Bifidobacteria
Lactobacilli
Настоящая композиция предпочтительно содержит неперевариваемые олигосахариды, которые ферментированы в органические кислоты (предпочтительно, молочную кислоту, бутират, пропионат и/или ацетат) и стимулируют рост бактерии, продуцирующей кишечную молочную кислоту (в дальнейшем, упоминается как “неперевариваемые сахариды”). Предпочтительно рост и стимулирован. Увеличенное содержание и стимулирует образование здоровой кишечной флоры. Дополнительно, образованные органические кислоты стимулируют образование слизи и, кроме того, уменьшают проницаемость кишечного барьера у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения (см. пример 3, ниже). Неперевариваемые олигосахариды также понижают действие LC-PUFA и/или нуклеотида в настоящей композиции, так как совместное введение неперевариваемых олигосахаридов с LC-PUFA и/или нуклеотидом вызывает замедление абсорбции LC-PUFA и/или нуклеотида в тонком кишечнике посредством пролонгирования и/или снижения эффектов LC-PUFA и/или нуклеотида в кишечнике. Выгодно, что настоящая композиция содержит неперевариваемые олигосахариды, предпочтительно со степенью полимеризации (DP) от 2 до 250, более предпочтительно от 2 до 100, более предпочтительно от 2 до 10.
Настоящая композиция предпочтительно содержит неперевариваемые олигосахариды со степенью полимеризации (DP) ниже 60, более предпочтительно ниже 40, еще более предпочтительно ниже 20, наиболее предпочтительно ниже 10. Короткая цепочка неперевариваемых олигосахаридов обеспечивает улучшение лактатной или ацетатной выработки, стимулирует барьерную проницаемость у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения. Неперевариваемые олигосахариды предпочтительно не усваиваются или усваиваются только частично в тонком кишечнике под действием кислот или пищеварительных ферментов, которые присутствуют в пищеварительном тракте человека (тонкий кишечник и ротовая полость) и ферментируются кишечной флорой человека. Например, сахароза, лактоза, мальтоза и мальтодекстрины считаются усваиваемыми.
Предпочтительно настоящая композиция содержит по меньшей мере один неперевариваемый олигосахарид, выбранный из группы, состоящей из фруктоолигосахаридов (включая инулин), неперевариваемых декстринов, галактоолигосахаридов (включая трансгалактоолигосахариды), ксилоолигосахаридов, арабиноолигосахаридов, арабиногалактоолигосахаридов, глюкоолигосахаридов (включая циклодекстрины и гентиоолигосахариды), хитоолигосахаридов, глюкоманноолигосахаридов, галактоманноолигосахаридов, маннанолигосахаридов, фукоолигосахаридов, олигосахаридов галактуроновой кислоты, олигосахаридов гулуроновой кислоты, олигосахаридов маннуроновой кислоты, олигосахаридов идуроновой кислоты, олигосахаридов рибуроновой кислоты, олигосахаридов глюкуроновой кислоты и их смесей, более предпочтительно фруктоолигосахаридов, галактоолигосахаридов (включая трансгалактоолигосахариды), фукоолигосахаридов и олигосахаридов галактуроновой кислоты и их смесей, еще более предпочтительно трансгалактоолигосахаридов.
Представленный неперевариваемый олигосахарид предпочтительно выбран из группы, состоящей из галактоолигосахаридов и фруктоолигосахаридов (например, инулин). Предпочтительно по меньшей мере 50% масс. из представленных неперевариваемых олигосахаридов имеют степень полимеризации от 2 до 60. В частности, предпочтительный вариант осуществления настоящей композиции содержит по меньшей мере галактоолигосахариды и фруктоолигосахариды. Галактоолигосахариды предпочтительно содержат сахариды с DP от 2 до 10. Фруктоолигосахариды предпочтительно содержат сахариды с DP от 2 до 60. Предпочтительно, галактоолигосахариды содержат бета-связи, как в случае олигосахаридов человеческого молока.
В предпочтительном воплощении настоящая композиция содержит олигосахариды галактуроновой кислоты. Олигосахариды галактуроновой кислоты изобретения успешно снижают адгезию патогенных микроорганизмов на эпителиальные клетки кишечника, снижая таким образом колонизацию (нозокомиальных) патогенных микроорганизмов в кишечнике у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения. Кроме того, олигосахариды галактуроновой кислоты настоящего изобретения стимулируют образование здоровой кишечной флоры и ферментируются, что приводит к производству кишечных органических кислот и снижению кишечного pH, которое ограничивает рост (нозокомиальных) патогенных микроорганизмов. Совместное введение олигосахаридов галактуроновой кислоты, следовательно, кроме того, улучшает защиту у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, от инфекций из-за недоразвитой барьерной функции и/или недоразвитой кишечной бактериальной флоры.
Термин «олигосахарид галактуроновой кислоты», используемый в настоящем изобретении, предпочтительно относится к олигосахаридам, в которых по меньшей мере 50% моносахаридных единиц в олигосахариде являются галактуроновой кислотой. Настоящая композиция предпочтительно содержит олигосахарид галактуроновой кислоты с DP от 2 до 250, предпочтительно от 2 до 50, более предпочтительно, от 2 до 20. Олигосахариды галактуроновой кислоты, используемые в изобретении, предпочтительно приготовлены из пектина, пектата и/или полигалактуроновой кислоты. Олигосахарид галактуроновой кислоты предпочтительно получен из пектина. Предпочтительно пектиновый олигосахарид получен гидролизом и/или бета-элиминацией фруктового пектина и/или растительного пектина, более предпочтительно из яблочного, цитрусового пектина и/или пектина сахарной свеклы, более предпочтительно яблочный, цитрусовый и/или пектин сахарной свеклы обрабатываются по меньшей мере лиазой. Предпочтительно лизат пектина и/или олигосахарид галактуроновой кислоты получены из бактериального производства.
4
5
В предпочтительном варианте осуществления по меньшей мере одна из концевых единиц аскорбиновой кислоты олигосахарида галактуроновой кислоты имеют двойную связь, которая предпочтительно находится между положением С и С концевой единицы аскорбиновой кислоты. Двойная связь эффективно защищает от прикрепления патогенных бактерий к клеткам кишечного эпителия. Это полезно для новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения. Предпочтительно по меньшей мере 5%, более предпочтительно, по меньшей мере 10%, еще более предпочтительно по меньшей мере 25% концевых единиц аскорбиновой кислоты олигосахарида галактуроновой кислоты составляет ненасыщенная единица аскорбиновой кислоты. Каждый отдельный олигосахарид галактуроновой кислоты предпочтительно содержит только одну ненасыщенную единицу аскорбиновой кислоты, предпочтительно менее чем 50% концевых единиц аскорбиновой кислоты составляет ненасыщенная концевая единица аскорбиновой кислоты (т.е. содержит двойную связь).
Настоящая композиция предпочтительно содержит от 0,01 до 10 г олигосахарид галактуроновой кислоты с DP от 2 до 250 на 100 г сухой массы всей композиции, более предпочтительно от 0,05 до 6 г, еще более предпочтительно от 0,2 до 2 г. Предпочтительно настоящая композиция содержит от 0,01 до 10 г олигосахарида галактуроновой кислоты с DP от 2 до 25 на 100 г сухой массы питательной композиции, более предпочтительно от 0,05 до 6 г, еще более предпочтительно от 0,2 до 2 г. Короткая цепочка олигосахаридов галактуроновой кислоты более эффективна и/или лучше подходит для включения в настоящую композицию.
Bifidobacteria
Lactobacilli
E.coli.
Предпочтительно, композиция содержит (i) галактоолигосахариды, (ii) фруктоолигосахариды и (iii) олигосахариды галактуроновой кислоты. Эта комбинация частично подходит для защиты новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, поскольку обеспечивает оптимальную стимуляцию дляи/илии снижает адгезию патогенных микроорганизмов и уменьшает колонизацию и/или адгезию потенциальной патогенной бактерии, такой как
Бактерии, продуцирующие молочную кислоту
2
13
2
12
5
10
4
9
Настоящая композиция предпочтительно содержит бактерии, продуцирующие молочную кислоту, как живые, так и мертвые. Мертвая бактерия может, например, быть получена инактивацией живой бактерии посредством температурной обработки и/или обработки ультразвуком. Живые бактерии молочной кислоты преимущественно включают для стимуляции быстрой колонизации кишечного тракта новорожденных. Бактерии, продуцирующие молочную кислоту, предпочтительно снабжены моно- или смешанной культурой живых микроорганизмов. Настоящая композиция предпочтительно содержит от 10 до 10 колониеобразующих частиц (cfu) бактерий, продуцирующих молочную кислоту, на грамм сухого веса настоящей композиции, предпочтительно от 10 до 10 cfu, более предпочтительно от 10 до 10 cfu, наиболее предпочтительно от 10 до 5×10 cfu.
Lactobacillus
Bifidobacterium.
Bifidobacterium,
B.longum, B.breve, B.infantis, B.catenulatum, B.pseudocatenulatum, B.adolescentis, B.animalis, B.gallicum, B.lactis B.bifidum,
Bifidobacterium
B.breve, B.infantis, B.bifidum, B.catenulatum, B.longum,
Bifidobacterium,
B.breve
B.longum,
B.breve.
Bifidobacterium
Bifidobacterium.
Bifidobacterium.
Предпочтительно настоящая композиция содержит бактерии рода и/илиПредпочтительно композиция содержит по меньшей мере один выбранный из группы, содержащей более предпочтительно, по меньшей мере один, выбранный из группы, состоящей из еще более предпочтительно, по меньшей мере одинвыбранный из группы, состоящей из инаиболее предпочтительноПредпочтительно композиция содержит по меньшей мере два разных вида, подвида или штамма. Настоящая композиция предпочтительно содержит по меньшей мере один, более предпочтительно по меньшей мере два, еще более предпочтительно по меньшей мере три, наиболее предпочтительно по меньшей мере четыре разных видаНастоящая композиция предпочтительно содержит по меньшей мере один, более предпочтительно по меньшей мере два, еще более предпочтительно по меньшей мере три, наиболее предпочтительно по меньшей мере четыре разных штамма Обычная цель предварительно приготовленных комбинаций увеличит многообразие и/или количество микроорганизмов в кишечнике у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения. Это благотворно действует на новорожденных, обеспечивая различную пользу для здоровья.
Lactobacillus,
L.casei, L.reuteri, L.paracasei, L.rhamnosus, L.acidophilus, L.johnsonii, L.lactis, L.salivarius, L.crispatus, L.gasseri, L.zeae, L.fermentum
L.plantarum,
L.casei, L.paracasei, L.rhamnosus, L.johnsonii, L.acidophilus, L.fermentum
L.paracasei.
Bifidobacterium breve
Lactobacillus paracasei,
Предпочтительно настоящая композиция содержит выбранный из группы, состоящей ипредпочтительно и, более предпочтительно,Еще более предпочтительно, что настоящая композиция содержит  и/илипотому что рост этих бактерий снижен у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения. Кроме того, увеличенное биологическое разнообразие будет иметь стимулирующий эффект на здоровье новорожденного, рожденного посредством кесарева сечения.
Формулы
Настоящая композиция предпочтительно вводится энтерально, более предпочтительно перорально. Настоящая композиция является формулой для новорожденных. Настоящая композиция является предпочтительно синтетической формулой, полученной смешиванием различных ингредиентов. Настоящая композиция не является натуральным молоком млекопитающих, например грудным молоком человека. Настоящая композиция может выгодно применяться как комплексное питание для новорожденных. Настоящая композиция предпочтительно содержит липид, белок и углевод и предпочтительно вводится как жидкая пища. Термин «жидкая пища», применяемый в настоящем изобретении, содержит сухую еду (например, порошки), которая обеспечена инструкциями по приготовлению, где указано, как смешать смесь сухой еды с подходящей жидкостью (например, водой).
Настоящая композиция предпочтительно обеспечивает питанием новорожденного и содержит липидный компонент, белковый компонент и углеводный компонент. Липидный компонент предпочтительно обеспечивает от 5 до 50% всех калорий, белковый компонент предпочтительно обеспечивает от 5 до 50% всех калорий и углеводный компонент предпочтительно обеспечивает от 15 до 90% всех калорий. Настоящая композиция предпочтительно применяется как формула для новорожденных, в которой липидный компонент обеспечивает от 35 до 50% всех калорий, белковый компонент обеспечивает от 7,5 до 12,5% всех калорий и углеводный компонент обеспечивает от 40 до 55% всех калорий. Для вычисления % от всех калорий для белкового компонента берется в расчет вся энергия, обеспеченная белками, пептидами и аминокислотами.
Предпочтительно липидный компонент содержит комбинацию по меньшей мере одного липида, выбранного из группы, состоящей из растительных и животных жиров и по меньшей мере одного сорта масла, выбранного из группы, состоящей из рыбьего, животного жира, растительного, грибкового масла, масла водорослей и бактериального масла. Предпочтительно, липидная композиция содержит по меньшей мере 12 мг/100 ккал α-линоленовой кислоты (ALA). Предпочтительно липидная композиция имеет масс./масс. пропорцию линолевой кислоты (LA) и ALA от 5 до 15, более предпочтительно от 5 до 10. Предпочтительно количество трансжирных кислот ниже 4% масс. от всех липидов. Высокое содержание трансжирных кислот подвергает риску кишечный барьер.
Белковый компонент, используемый в настоящей композиции, предпочтительно содержит по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из белков животного, отличного от человека (такого как белок молока, белок мяса и яичный белок), растительного белка (такого как соевый белок, белок пшеницы, рисовый белок, картофельный белок и белок бобовых), свободных аминокислот и их смесей. Источник азота, полученный из коровьего молока, в частности белки коровьего молока, такие как казеин и белки сыворотки, являются особенно предпочтительными. Предпочтительно белковый компонент содержит интактные белки, более предпочтительно интактные белки коровьей сыворотки и/или интактные белки коровьего казеина. Настоящая композиция подходит для применения, чтобы уменьшить аллергические реакции у новорожденных, белок формулы для новорожденных предпочтительно выбран из группы, состоящей из гидролизированного белка молока (например, гидролизированный казеин и/или гидролизированный белок сыворотки), растительного белка и/или аминокислот. Применение этих гидролизированных белков дополнительно ослабляет аллергические реакции у новорожденного. Применение этих гидролизированных белков выгодно улучшает абсорбцию диетического белкого компонента незрелым кишечником новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения.
Предпочтительно композиция содержит перевариваемые углеводы. Перевариваемые углеводы, примененные в настоящей композиции, представляют собой предпочтительно выбранные из группы, состоящей из сахарозы, лактозы, глюкозы, фруктозы, сиропа твердых частиц кукурузы, крахмала и мальтодекстринов и их смесей, более предпочтительно, лактозы.
Нерегулярный стул (например, запор, недостаточный объем стула, диарея) представляют собой большую проблему у некоторых детей, включая, особенно новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения. Было обнаружено, что проблемы со стулом могут быть уменьшены введением LC-PUFA в жидкую пищу. Настоящая композиция предпочтительно имеет осмоляльность от 50 до 500 мОсм/кг, более предпочтительно от 100 до 400 мОсм/кг. С учетом вышесказанного, является важным, чтобы жидкая пища не имела избыточную калорийную ценность и, тем не менее, обеспечивала достаточно калорий для вскармливания субъекта. Следовательно, жидкая пища предпочтительно имеет калорийную ценность от 0,1 до 2,5 ккал/мл, еще более предпочтительно калорийную ценность от 0,5 до 1,5 ккал/мл, наиболее предпочтительно от 0,6 до 0,8 ккал/мл.
Применение
Настоящее изобретение обеспечивает способ кормления новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, включающий введение настоящей композиции, состоящей из (i) LC_PUFA и/или (ii) нуклеотида, и/или предшественника нуклеотида, выбранного из группы, состоящей из нуклеозидов, пуриновых оснований, рибозы и дезоксирибозы, указанному младенцу.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ i) стимуляции здоровья новорожденного, рожденного посредством кесарева сечения, и/или ii) лечения и/или профилактики нарушения у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, включающие введение настоящей композиции новорожденному. Нарушения предпочтительно выбирают из группы, состоящей из кишечных нарушений, вызываемых низким содержанием бифидобактерий в кишечной флоре. Предпочтительно нарушение выбирают из группы, состоящей из инфекции и атопического заболевания. Настоящую композицию предпочтительно вводят новорожденному, рожденному посредством кесарева сечения в течение первого года жизни, предпочтительно в пределах 3 месяцев после рождения, даже более предпочтительно в пределах 100 часов, более предпочтительно в пределах 72 часов, наиболее предпочтительно в пределах 48 часов после рождения.
Настоящая композиция может преимущественно применяться для стимуляции созревания кишечного барьера; увеличения проницаемости кишечного барьера и/или стимуляции иммунной системы. Настоящий способ предпочтительно включает стадии а) перемешивания (i) пищевой или фармацевтически приемлемой жидкости; и (ii) сухой композиции, где сухая композиция (ii) содержит LC-PUFA и/или нуклеотиды, предпочтительно LC-PUFA и нуклеотиды; и стадию b) введения композиции, полученной на стадии a), новорожденным, рожденным посредством кесарева сечения.
E.coli, других
Aeromonas, Klebsiella, Enterobacter, Pseudomonas, Proteus
Acinetobacter и
Enterococcus, Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus
Clostridium,
Escherichia coli (E.coli).
Escherichia coli,
Aeromonas, Klebsiella, Enterobacter, и/или Pseudomonas
(E.coli).
Введение композиции, содержащей LC-PUFA и/или нуклеотид, приводит к увеличению транслокации (нозокомиальных) патогенных микроорганизмов, таких как Грам-отрицательных видов, принадлежащих к родамиГрам-положительных видов, таких как ивирусов и грибков, предпочтительно Следовательно, настоящую композицию предпочтительно применяют в способе лечения и/или профилактики инфекции и/или диареи у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, причем указанный способ включает введение настоящей композиции новорожденным, рожденным посредством кесарева сечения. В предпочтительном варианте осуществления настоящую композицию используют для лечения и/или профилактики инфекции, вызванной , более предпочтительно
Введение настоящей композиции, содержащей LC-PUFA, и/или нуклеотиды, и/или предшественники нуклеотидов, приводит к пониженной транслокации аллергенов вдоль кишечного барьера. Следовательно, настоящую композицию предпочтительно применяют в способе лечения или профилактики аллергии, предпочтительно пищевой аллергии, атопической экземы (например, атопического дерматита), астмы, аллергического ринита и/или аллергического конъюнктивита у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, указанный способ включает введение указанной композиции новорожденным, рожденным посредством кесарева сечения. Предпочтительно, настоящую композицию применяют для лечения и/или профилактики атопического дерматита.
Кроме того, введение настоящей композиции усиливает иммунную систему. Следовательно, настоящую композицию, содержащую LC-PUFA, и/или нуклеотиды, и/или предшественники нуклеотидов, благоприятным образом применяют в способе лечения и/или профилактики системных инфекций и/или воспаления у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения. В предпочтительном способе настоящая композиция применяется для лечения и/или профилактики некротического энтероколита.
В настоящем описании и в формуле изобретения глагол «содержит» и его сочетания применяются в их неограничивающем смысле для обозначения того, что объекты, следующие за словом, включены, но объекты, конкретно не указанные, не являются исключенными. В дополнение, формы единственного числа не исключают возможность, что присутствует более одного элемента, пока контекст ясно не укажет на то, что там будет один и только один из элементов. Форма единственного числа, таким образом, обычно обозначает «по меньшей мере один».
Примеры
Пример 1: Молекулярная характеристика кишечного микробиота у новорожденных, рожденных через естественные родовые пути, в сравнении с рожденными посредством кесарева сечения
Bifidobacterium,
Ruminococcus
Bacteroides.
В настоящем исследовании влияние способа рождения (рождение посредством кесарева сечения против рождения через естественные родовые пути) на кишечную микробную композицию на третий день жизни были исследованы с применением ПЦР-амплификации с видоспецифическими праймерами для десяти видов трех видов и одного вида
Микробная ДНК была извлечена и проанализирована согласно Favier et al., Environ Microbiol 2002; 68: 219-226 и Satokari et al., Appl. Environ. Microbiol. 2001; 67: 504-513; Satorkari et al. System Appl. Microbiol. 2003; 26: 572-854.
Bifidobacterium
Результаты и других родов, обнаруженные в образцах фекалий из 21 новорожденного после кесарева сечения, получены на 3-й день жизни, представлены в таблице 1.
Bifidobacterium
B.dentium, B.angulatum, B.lactis, Ruminococcus bromii, Ruminococcus callidus
Ruminococcus obeum,
Таблица 2 представляет и другие виды, обнаруженные в образцах фекалий из 21 новорожденного, после рождения через естественные родовые пути, получены на 3-й день жизни. Нет специального признака для видов икоторые были замечены в фекалиях новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, так же, как в фекалиях новорожденных, рожденных через естественные родовые пути.
Таблица 1
<b>Новорожденные, рожденные посредством кесарева сечения</b>
НовоРожденные
<i>B.</i><i>breve</i>
<i>B.</i><i>infantis</i>
<i>B.</i><i>bifidum</i>
<i>B. catenu-</i><i>latum group</i>
<i>B.</i><i>adolescentis</i>
<i>B.</i><i>longum</i>
<i>B.</i><i>gallicum</i>
<i>Bacteroides fragilis</i>
1
-
-
-
-
-
-
-
-
2
-
-
-
-
-
++
-
-
3
-
-
-
-
-
-
-
-
4
-
-
-
-
-
-
-
-
5
-
-
-
-
-
-
-
-
6
-
-
-
-
-
-
-
-
7
-
-
-
-
-
-
-
-
8
-
-
-
-
-
-
-
-
9
-
-
-
-
-
-
-
-
10
-
-
-
-
-
-
++
-
11
-
-
-
-
-
-
-
-
12
-
-
-
-
-
-
-
-
13
-
-
-
-
-
-
-
-
16
-
-
-
-
-
-
-
-
17
-
-
-
-
-
-
-
-
18
-
-
-
-
-
-
-
-
19
-
-
-
-
-
-
-
-
20
-
-
-
-
-
-
-
-
21
-
-
-
-
-
-
-
-
22
-
-
-
-
-
-
-
-
23
-
-
-
-
-
-
-
-
(-) нет амплификации; (+/-) слабая амплификация; (+) положительная амплификация;(++) сильная амплификация
Bifidobacterium
Можно сделать заключение, что микробная флора новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, отличается от микробной флоры новорожденных, рожденных через естественные родовые пути. Не только количество бифидобактерий и других родов количественно значительно более низкое, но также видовой уровень флоры новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, является менее разнообразным. Так как представляет собой доминирующий род во флоре новорожденного, эти результаты обобщаются, как меньшее количество кишечных бактерий и меньшее разнообразие кишечной флоры у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, такой незаселенный кишечник более чувствителен к колонизации (нокозомиальных) патогенами.
Эти результаты являются показательными для полезного применения композиции и способа, соответствующих настоящему изобретению, например способ кормления новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, для уменьшения эффектов кишечных патогенов и стимулирует здоровую кишечную флору и, следовательно, предотвращает инфекцию, стимулирует здоровую иммунную систему и стимулирует кишечное созревание, в частности у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения.
Таблица 2
<b>Новорожденные, рожденные через естественные родовые пути</b>
НОВОРОЖДЕННЫЕ
<i>B.</i><i>breve</i>
<i>B.</i><i>infantis</i>
<i>B.</i><i>bifidum</i>
<i>B. catenu-</i><i>latum group</i>
<i>B.</i><i>adolescentis</i>
<i>B.</i><i>longum</i>
<i>B.</i><i>gallicum</i>
<i>Bacteroides fragilis</i>
1а
-
+
-
-
-
++
-
-
2а
+/-
-
++
++
-
++
-
-
3а
-
-
-
+
-
-
-
-
4а
+/-
-
-
++
+
+
-
-
5а
+/-
-
++
++
-
++
++
-
6а
-
-
+/-
++
-
++
-
-
7а
-
-
+/-
++
++
-
-
-
8а
++
++
-
+
++
-
-
-
9а
-
-
-
+
++
+
-
-
10а
++
-
-
+
+
-
-
-
11а
++
-
++
++
-
++
-
+
12а
+
+
+
+
-
++
-
+
13а
+/-
-
-
+
-
+
-
-
16а
-
-
-
++
-
+
-
-
17а
+/-
-
+
+
-
+
-
-
18а
+/-
-
+
+
-
+
-
-
19а
+
-
-
+
-
+
-
-
20а
-
-
-
+
-
+
-
-
21а
-
-
-
+
++
+
-
-
22а
-
+
-
++
-
+
-
-
23а
+
-
++
++
-
+
-
-
(-) нет амплификации; (+/-) слабая амплификация; (+) положительная амплификация;(++) сильная амплификация
Пример 2: Эффект LC-PUFA на барьерную целостность
2
Монослои (МС) клеточных линий кишечного эпителия Т84 были инкубированы в люминальном отделении с различными полиненасыщенными жирными кислотами, 100 мкМ ARA (арахидоновая кислота; 5,8,11,14-эйкозатетраеновая кислота), DHA (цис-4,7,10,13,16,19-докозагексаеновая кислота), EPA (эйкозапентаеновая кислота) или контрольная пальмитиновая (С 16:0) кислота (Palm) (Sigma, St. Louis, USA) на 0, 24, 48 и 72 часа. Функция эпителиального барьера была определена измерением трансэпителиальной резистентности (TER, Ом.см) вольт-омметром (EVOM; World Precision Instruments, Germany) и проницаемости для 4 кД FITC декстрана (paracellular permeability marker, Sigma, USA).
Результаты действия жирных кислот (100 мкМ) на спонтанную проницаемость барьера после 72 часов инкубации представлены в таблице 3. Таблица 3 показывает, что ARA, EPA и DHA LC-PUFA уменьшают избыточное молекулярное выделение и улучшают эпителиальную резистентность. Напротив, контрольная пальмитиновая кислота имела противоположные эффекты, т.е. ухудшала проницаемость барьера. Эти результаты указывают на преимущества использования EPA, DHA и ARA и, в частности, ARA в композиции по изобретению и для использования в способе по изобретению, т.е. в способе улучшения проницаемости барьера у новорожденных, рожденных кесаревым сечением. Также гамма-линоленовая кислота (GLA) показала положительный эффект на резистентности проницаемого базального барьера и избыточном выделении.
Таблица 3
<u>Ингредиент (LC-PUFA)</u>
<u>Избыточное выделение</u>
<u>Резистентность (TER)</u>
Контроль
79
1090
Пальмитиновая кислота
161
831
DHA
72
1574
ARA
28
1816
EPA
65
1493
Пример 3: Эффект LC-PUFA на промежуточный IL-4 барьерный разрыв
Монослои (МС) клеточных линий кишечного эпителия Т84 были инкубированы в присутствии IL-4 (2 нг/мл, serosal compartment, Sigma, USA) с или без полиненасыщенных жирных кислот ARA, DHA, GLA, EPA или контрольной пальмитиновой кислоты (10 мкМ или 100 мкМ, mucosal compartment, Sigma, St. Louis, USA). Клетки были предварительно инкубированы с ARA, DHA, EPA или пальмитиновой кислотой в течение 48 часов, предшествующих инкубации с IL-4. Со-инкубация PUFA и пальмитиновой кислоты с IL-4 продолжались другие 48 часов, средняя целая культура и добавки изменялись каждые 24 часа. Функция эпителиального барьера была определена измерением трансэпителиальной резистентности (TER) и проницаемости, как описано в примере 2.
Результаты действия ARA, DHA, EPA и пальмитиновой кислоты (100 мкМ) на барьерное нарушение, связанное с IL-4, представлены в таблице 4. Таблица 4 показывает, что ARA, DHA и EPA LC-PUFA препятствуют увеличенному излишнему выделению, происходящему посредством IL-4. В контрасте пальмитиновая кислота имела вредный эффект и снижала барьерное нарушение, сравненное с контролем. Эти результаты являются показательными для выгодности применения ARA, DHA и EPA в клинических и детских питательных формулах предотвращать или восстанавливать барьерное нарушение, связанное с IL-4, т.е. как происходит в пищевой аллергии или аллергии животного молока. Эти результаты являются показательными для преимущества использования EPA, DHA и ARA и, в частности, ARA в композиции, соответствующей настоящему изобретению и для применения в способе, соответствующем настоящему изобретению, особенно в способе лечения и/или профилактики аллергии, атопической экземы, астмы, аллергических ринитов и/или аллергических конъюнктивитов у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения.
Таблица 4
<u>Ингредиент (LC-PUFA)</u>
<u>Избыточное выделение IL-4</u>
<u>IL-4 резистентность (TER)</u>
Контроль
582
374
Пальмитиновая кислота
777
321
DHA
271
547
ARA
218
636
EPA
228
539
Пример 4: Флора новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения
Bifidobacterium
E.coli
Бифидобактериальное содержание в фекалиях новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения, было определено. Процент всего рода к всем бактериям на первой неделе было 4,3% у новорожденных, рожденных посредством кесарева сечения (n=44), против 19,8% у новорожденных, рожденных через естественные родовые пути (n=28). Процент был все же 11,8% после 6 недель, когда новорожденных кормили нормальной диетой (см. таблицу 5).
Таблица 5
<u>Новорожденные</u>
<i><u>Bifidobacteria </u></i><u>первая неделя (%)</u>
<i><u>E.coli</u></i><u> 6 неделя (%)</u>
<u>Рождение через естественные родовые пути</u>
<u>19,8</u>
<u>К-сечение</u>
<u>4,8</u>
<u>11,8</u>
Эти результаты указывают желательность введения настоящих LC-PUFA, и/или нуклеотидов, и/или предшественников нуклеотида новорожденным, рожденным посредством кесарева сечение.
Пример 5: Способ кормления детей, рожденных посредством кесарева сечения
В течение двух дней после рождения посредством кесарева сечения новорожденным вводят питательную композицию, которая содержит (на литр):
энергетическая ценность 672 ккал; белок 14 г; сыворотка: пропорция казеина 60:40; жир 36 г; углеводы 73 г; витамин А 500 мкг RE; смешанные натуральные каротиноиды 35 мкг RE; витамин D3 12 мкг; витамин Е 12 мг; витамин К1 45,0 мкг; витамин В.sub.1 (тиамин) 400 мкг; витамин В.sub.2 (рибофлавин) 1000 мкг; витамин В.sub.6 (пиридоксин) 400 мкг; витамин В.sub.12 (цианокобаламин) 2,0 мкг; ниацин 4,1 мг; фолиевая кислота 120 мкг; пантотеновая кислота 2800 мкг; биотин 18 мкг; витамин С (аскорбиновая кислота) 86 мг; холин 100 мг; инозитол 33 мг; таурин 67 мг, кальций 510 мг; фосфор 290 мг; магний 50 мг; железо 7,0 мг; цинк 4,9 мг; марганец 84 мкг; медь 330 мкг; йод 100 мкг; натрий 170 мг; калий 740 мг; хлор 460 мг и селен 14 мкг; где содержание жира включает 0,65% масс. LC-PUFA, основанных на всех жирных кислотах, включая 0,35% масс. ARA, 0,05% масс. EPA и 0,2% масс. DHA, кроме того, содержащая 3,6 г трансгалактоолигосахариды, полученные Elix'or™ (Borculo Domo Ingredients, Netherlands), и 0,4 г фруктоолигосахариды, полученные RaftilineHP™ (Orafti Active Food Ingredients, Belgium), и приблизительно 20 мг нуклеотидов (приблизительно 6,4 мг CMP, приблизительно 4 мг UMP, приблизительно 6 мг AMP, приблизительно 1,4 мг GMP и приблизительно 2,4 мг IMP).