НОВЫЕ БЕЛКИ, ПРОЯВЛЯЮЩИЕ ИНГИБИРУЮЩУЮ АКТИВНОСТЬ ПО ОТНОШЕНИЮ К НАСЕКОМЫМ

1. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты, содержащая гетерологичный промотор, функционально связанный с полинуклеотидным сегментом, кодирующим пестицидный белок или его пестицидный фрагмент, при этом:
a. указанный пестицидный белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2; или
b. указанный пестицидный белок содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 65%, или 70%, или 75%, или 80%, или 85%, или 90%, или 95%, или 98%, или 99%, или около 100% идентичности аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 2; или
c. указанный полинуклеотидный сегмент гибридизуется в жестких условиях гибридизации с полинуклеотидом, имеющим нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3.
2. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что
a. молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты содержит последовательность, которая функционирует, экспрессируя пестицидный белок в растении; или
b. молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты экспрессируется в растительной клетке, продуцируя пестицидно эффективное количество пестицидного белка; или
c. молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты находится в функциональной связи с вектором и указанный вектор выбран из группы, состоящей из плазмиды, фагмиды, бакмиды, космиды и бактериальной или дрожжевой искусственной хромосомы.
3. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, которая определяется как присутствующая в клетке-хозяине, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из бактериальной и растительной клетки.
4. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 3, отличающаяся тем, что бактериальная клетка-хозяин происходит из рода бактерий, выбранных из группы, состоящей из: Agrobacterium, Rhizobium, Bacillus, Brevibacillus, Escherichia, Pseudomonas, Klebsiella, Pantoea, и Erwinia.
Bacillus
Bacillus cereus
Bacillus thuringiensis
Brevibacillus
Brevibacillus laterosperus
Escherichia
Escherichia coli
5. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 4, отличающаяся тем, что вид представляет собой или , указанный представляет собой или указанный представляет собой .
6. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 3, отличающаяся тем, что указанная растительная клетка представляет собой клетку двудольного или однодольного растения.
7. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 6, отличающаяся тем, что указанная растительная клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из [растительной клетки] люцерны, банана, ячменя, бобов, брокколи, капусты, Brassica, моркови, маниоки, клещевины, цветной капусты, сельдерея, нута, китайской капусты, цитрусовых, кокосовой пальмы, кофе, кукурузы, клевера, хлопчатника, тыквенных, огурца, Дугласовой пихты, баклажана, эвкалипта, льна, чеснока, винограда, хмеля, лука-порея, салата-латука, сосны ладанной, проса, дыни, ореха, овса, оливы, лука, декоративного растения, пальмы, пастбищной травы, гороха, арахиса, перца, голубиного гороха, сосны, картофеля, тополя, тыквы, сосны лучистой, редиса, рапса, риса, корневищных злаков, ржи, американского шафрана, кустарника, сорго, южной сосны, сои, шпината, кабачка, клубники, сахарной свеклы, сахарного тростника, подсолнечника, сладкой кукурузы, амбрового дерева, сладкого картофеля, проса прутьевидного, чая, табака, томата, тритикале, дерновой травы, арбуза и пшеницы.
8. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что указанный пестицидный белок проявляет активность против насекомого отряда жесткокрылых.
9. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 8, отличающаяся тем, что указанное насекомое представляет собой западного кукурузного жука, южного кукурузного жука, северного кукурузного жука, мексиканского кукурузного жука, бразильского кукурузного жука или группу бразильского кукурузного жука, состоящую из Diabrotica viridula и Diabrotica speciosa.
10. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что указанный пестицидный белок проявляет активность против вида насекомого отряда чешуекрылых.
11. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 10, отличающаяся тем, что указанное насекомое представляет собой совку бархатных бобов, огневку тростниковую, точильщика зернового кукурузного, совку хлопковую, табачную листовертку, соевую совку, африканскую совку, южную совку, совку травяную, совку свекольную, совку американскую, азиатскую хлопковую совку, розового коробочного червя хлопчатника, совку-ипсилон, огневку кукурузную юго-западную или мотылька стеблевого кукурузного.
12. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, отличающаяся тем, что указанный пестицидный белок проявляет активность против насекомого отряда полужесткокрылых.
13. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 12, отличающаяся тем, что указанное насекомое представляет собой слепняка западного матового, клопа травяного или хлопкового слепняка.
14. Растение или его часть, содержащее молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1.
15. Растение или его часть по п. 14, отличающееся тем, что указанное растение является однодольным растением или двудольным растением.
16. Растение или его часть по п. 14, отличающееся тем, что растение выбирают из группы, состоящей из люцерны, банана, ячменя, бобов, брокколи, капусты, Brassica, моркови, маниоки, клещевины, цветной капусты, сельдерея, нута, китайской капусты, цитрусовых, кокосовой пальмы, кофе, кукурузы, клевера, хлопчатника, тыквенных, огурца, Дугласовой пихты, баклажана, эвкалипта, льна, чеснока, винограда, хмеля, лука-порея, салата-латука, сосны ладанной, проса, дыни, ореха, овса, оливы, лука, декоративного растения, пальмы, пастбищной травы, гороха, арахиса, перца, голубиного гороха, сосны, картофеля, тополя, тыквы, сосны лучистой, редиса, рапса, риса, корневищных злаков, ржи, американского шафрана, кустарника, сорго, южной сосны, сои, шпината, кабачка, клубники, сахарной свеклы, сахарного тростника, подсолнечника, сладкой кукурузы, амбрового дерева, сладкого картофеля, проса прутьевидного, чая, табака, томата, тритикале, дерновой травы, арбуза и пшеницы.
17. Семя растения по п. 14, отличающееся тем, что указанное семя содержит указанную молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты.
18. Композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении насекомых, содержащая молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1.
19. Композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении насекомых, по п. 18, дополнительно содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере один другой пестицидный агент, который отличается от указанного пестицидного белка.
20. Композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении насекомых, по п. 19, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один другой пестицидный агент выбирают из группы, состоящей из белка, обладающего ингибиторной активностью в отношении насекомых, молекулы дцРНК, обладающей ингибиторной активностью в отношении насекомых, и вспомогательного белка.
21. Композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении насекомых, по п. 19, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один другой пестицидный агент проявляет активность в отношении одного или более видов вредителей отрядов чешуекрылых, жесткокрылых или полужесткокрылых.
22. Композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении насекомых, по п. 21, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один другой пестицидный белок выбран из группы, состоящей из Cry1A, Cry1Ab, Cry1Ac, Cry1A. 105, Cry1Ae, Cry1B, Cry1C;вариантов Cry1C, Cry1D, Cry1E, Cry1F, химер Cry1A/F, Cry1G, Cry1H, Cry1I, Cry1J, Cry1K, Cry1L, Cry2A, Cry2Ab, Cry2Ae, Cry3, вариантов Cry3A; Cry3B, Cry4B, Cry6, Cry7, Cry8, Cry9, Cry15, Cry34, Cry35, Cry43A, Cry43B, Cry51Aa1, ET29, ET33, ET34, ET35, ET66, ET70, TIC400, TIC407, TIC417, TIC431, TIC800, TIC807, TIC834, TIC853, TIC900, TIC901, TIC1201, TIC1415, TIC2160, TIC3131, TIC836, TIC860, TIC867, TIC869, TIC1100, VIP3A, VIP3B, VIP3Ab, AXMI-AXMI-, AXMI-88, AXMI-97, AXMI-102, AXMI-112, AXMI-117, AXMI-100, AXMI-115, AXMI-113 и AXMI-005, AXMI134, AXMI-150, AXMI-171, AXMI-184, AXMI-196, AXMI-204, AXMI-207, AXMI-209, AXMI-205, AXMI-218, AXMI-220, AXMI-221z, AXMI-222z, AXMI-223z, AXMI-224z и AXMI-225z, AXMI-238, AXMI-270, AXMI-279, AXMI-345, AXMI-335, AXMI-R1 и их вариантов, IP3 и его вариантов, DIG-3, DIG-5, DIG-10, DIG-657 и белка DIG-11.
23. Композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении насекомых, по п. 18, которая определяется как содержащая растительную клетку, которая экспрессирует указанную рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты.
24. Товарный продукт, полученный из растения или его части по п. 14, отличающийся тем, что товарный продукт содержит определимое количество указанной молекулы рекомбинантной нуклеиновой кислоты или пестицидного белка, кодируемого ею.
25. Товарный продукт по п. 24, выбранный из группы, состоящей из товарной кукурузы, упакованной обработчиком зерна, кукурузных хлопьев, кукурузных лепешек, кукурузной муки, кукурузной муки крупного помола, кукурузного сиропа, кукурузного масла, кукурузного силоса, кукурузного крахмала, кукурузной каши и тому подобного, цельных или обработанных семян хлопчатника, хлопкового масла, линта, семян и частей растений, обработанных для корма или продуктов питания, волокна, бумаги, биомассы и топливных продуктов, таких как топливо, полученное из хлопкового масла или пеллетов, полученных из отходов хлопковой очистки, цельных или обработанных семян сои, соевого масла, соевого белка, соевой муки крупного помола, соевой муки, соевых хлопьев, соевых отрубей, соевого молока, соевого сыра, соевого вина, корма для животных, содержащего соевые бобы, бумаги, содержащей сою, сливок, содержащих сою, биомассы соевых бобов и топливных продуктов, произведенных с использованием растений сои и частей растений сои.
26. Способ получения семян, включающий
a. посадку по меньшей мере первого семени по п. 17;
b. выращивание растения из семени; и
c. собирание семян с растения, отличающееся тем, что указанное собранное семя содержит указанную молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты.
27. Растение, устойчивое к заражению насекомыми-вредителями, при этом клетки указанного растения содержат молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1.
28. Способ борьбы с чешуекрылыми или жесткокрылыми, или полужесткокрылыми насекомыми-вредителями или поражением насекомыми-вредителями, причем указанный способ включает:
a. приведение в контакт вредителя с инсектицидно эффективным количеством пестицидного белка, как указано в SEQ ID NO: 2; или
b. приведение в контакт вредителя с инсектицидно эффективным количеством одного или более пестицидных белков, содержащих аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 65%, или 70%, или 75%, или 80%, или 85%, или 90%, или 95%, или 98%, или 99%, или около 100% идентичности аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 2.
29. Способ детекции наличия молекулы рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1 в образце, содержащем геномную ДНК растений, включающий
a. приведение в контакт образца с зондом нуклеиновой кислоты, который гибридизуется в условиях жесткой гибридизации с геномной ДНК из растения, содержащего молекулу ДНК по п. 1, и не гибридизуется в таких условиях гибридизации с геномной ДНК из другого изогенного растения, которое не содержит молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п 1., причем зонд является гомологичным или комплементарным к SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, или последовательности, которая кодирует пестицидный белок, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 65%, или 70%, или 75%, или 80%, или 85%, или 90%, или 95%, или 98%, или 99%, или около 100% идентичности аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 2;
b. применение к образцу жестких условий гибридизации; и
c. обнаружение гибридизации зонда с ДНК образца.
30. Способ обнаружения наличия пестицидного белка или его фрагмента в образце, содержащем белок, при этом указанный пестицидный белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2; или указанный пестицидный белок содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 65%, или 70%, или 75%, или 80%, или 85%, или 90%, или 95%, или 98%, или 99%, или около 100% идентичности аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 2, включающий:
a. приведение в контакт образца с иммунореактивным антителом; и
b. обнаружение наличия белка.
31. Способ по п. 30, отличающийся тем, что этап обнаружения включает твердофазный иммуноферментный анализ ELISA или вестерн-блоттинг.