ПРИМЕНЕНИЕ ДАЛАРГИНА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ПРОФИЛАКТИКИ ПНЕВМОНИИ
USE OF DALARGIN FOR PRODUCTION OF DRUG PREPARATIONS FOR PREVENTING PNEUMONIA

Область изобретения
Изобретение относится к области фармакологии и медицины, в частности к применению гексапептида даларгина в производстве лекарственных средств, предназначенных для профилактики пневмонии.
Сведения о предшествующем уровне техники
Методические указания «Инфекции дыхательных путей»  МУ 3.1.2.3047-13 от 2013 г
van Hecke et l. Implications of Antibiotic Resistance for Patients' Recovery From Common Infections in the Community: A Systematic Review and Meta-analysis. Clin Infect Dis. 2017, 65(3):371-382
Пневмония это инфекционное заболевание, характеризующееся очаговым поражением респираторных отделов легких с обязательным наличием внутриальвеолярной экссудации. Согласно Международной классификации болезней (МКБ-10) пневмония классифицируется как болезнь органов дыхания (коды J10-J18), вызываемая инфекционными агентами такими как вирусы, бактерии, микоплазма, грибки, хламидии, или неуточненными возбудителями. Пневмонии обычно подразделяют на внебольничную и нозокомиальную. Согласно статистическим данным заболеваемость внебольничной пневмонией в России среди всех возрастных групп составляет 10 - 15 случаев на 1000 населения, а летальность от этой нозологии составляет около 5% среди лиц среднего возраста и 30% среди пожилых. . Антибактериальная терапия является одним из основных подходов к лечению пневмоний, эффективность которого, однако, снижается из-за развития резистентности к существующим антибиотикам. Мета-анализ 26 исследований (5659 пациентов) показал, что от 11 до 22% пациентов с пневмонией не отвечают на антимикробную терапию. . Вакцинопрофилактика является одним из профилактических подходов к снижению заболеваемости пневмонией. Однако, вакцинация может вызывать защитный эффект только к специфическому возбудителю инфекции, тогда как пневмонию могут вызывать множество, в том числе неопределенных, инфекционных возбудителей. Таким образом, существует острая необходимость в новых подходах к профилактике пневмоний с использованием неспецифических средств профилактики, особенно в тех, что снижают летальность при тяжелых формах пневмоний.
Даларгин – это регуляторный гексапептид, имеющий химическую формулу:
соответствующую аминокислотной последовательности H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (YdAGFLR). Даларгин является сильным основанием и используется в форме фармацевтические приемлемых, то есть нетоксичных солей, почти исключительно в форме диацетата.
Даларгин входит в состав коммерчески доступных средств лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, панкреатита и панкреонекроза. Применение даларгина в составе лекарственных средств раскрыто в следующих патентах РФ (№№): 2032422, 2241488, 2198641, 2104717, 2270025, 2351334,  2343885, 2405534, 2363455, 2515550, 2180598, 2635083, 2436588, 2473325, 2144831, 2646569, 2200026, 2146530, 2155608, 2185176, 2139725, 2266130, 2326661, 2299742, 2218896, 2416398, 2318503, 2430753, 2299438, 2258529, 2099077, 2122415, 2261713, 2006039, 2366416, 2228762, 2185849, 2496493, 2366417, 2017488, 2167671, 2181564, 2284192, 2290203, 2286793, 2366432, 2299065, 2429002, 2196603, 2142814, 2285522, 2203693, 2230549, 2180591, 2142736, 2113856, 2217139, 2266752, 2261722,  2362580, 2223741, 222814869, 2217186, 2266130, 2326661, 2299742, 2218896, 2672888, 2416398, 2318503, 2430753, 2299438, 2258529, 2099077, 2122415, 2261713, 2006039, 2366416.
Боровская и др. Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2004, 17:85-88
Эффективность даларгина в лечении пневмоний уже была показана ранее. Внутримышечное введение даларгина приводило к нормализации состояния слизистой оболочки долевого бронха у пациентов с внебольничной пневмонией. . Однако эффективность даларгина в профилактике пневмоний неизвестна из уровня техники.
Описание изобретения
Настоящее изобретение относится к применению гексапептида формулы H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I) или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства, предназначенного для профилактики пневмонии.
Далее, настоящее изобретение относится к применению лекарственного средства, содержащего гексапептид формулы H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I) или его фармацевтически приемлемую соль, для профилактики пневмонии.
Техническим результатом настоящего изобретения является то, что лекарственное средство, содержащее гексапептид формулы (I) в качестве действующего вещества, при профилактическом применении предупреждает развитие пневмонии и снижает риск неблагоприятных последствий развития пневмонии, включая снижение риска смертности от пневмонии.
Термин «пневмония» означает острое инфекционное заболевание любой этиологии, характеризующееся очаговым поражением респираторных отделов легких с обязательным наличием внутриальвеолярной экссудации. К неэксклюзивным примерам пневмоний относятся пневмонии перечисленные в Международной классификации болезней (МКБ-10) под кодами J10-J18.
Термин «лекарственное средство» в настоящем изобретении означает вещество или комбинации веществ, вступающие в контакт с организмом человека или животного, проникающие в органы, ткани организма человека или животного, применяемые для профилактики заболевания. К лекарственным средствам относятся фармацевтические субстанции и лекарственные препараты.
Термин «фармацевтическая субстанция» означает обладающее фармакологической активностью действующее вещество, которое предназначено для производства, изготовления лекарственных препаратов и определяет их эффективность
Термин «лекарственный препарат» означает лекарственное средство в виде лекарственной формы, применяемой для профилактики заболевания.
Термин «лекарственная форма» означает состояние лекарственного препарата, соответствующее способам его введения и применения и обеспечивающее достижение необходимого лечебного эффекта.
Термин «доза» означает количество действующего вещества, которое должно быть принято за один раз.
Термин «профилактика» означает мероприятие, направленное на предупреждение заболевания, снижение риска развития одного и более симптомов заболевания, предотвращение прогрессирования одного и более симптомов заболевания, и уменьшения неблагоприятных последствий заболевания.
В одном из воплощений настоящего изобретения, лекарственное средство настоящего изобретения вводят лицу, имеющему высокий риск пневмонии по эпидемиологическому признаку. Такие эпидемиологические признаки включают, неэксклюзивно, наличие эпидемии инфекционного заболевания связанного с возбудителем, повышающим риск развития пневмонии. Неэксклюзивные примеры таких возбудителей включают вирусы гриппа Alphainfluenzavirus (серотипы H1N1, H1N2,H2N2, H3N2, H5N1, H7N9) и Betainfluenzavirus; коронавирусы SARS-CoV, SARS-CoV-2, MERS; респираторно-синцитиальный вирус человека Human orthopneumovirus; бактерии Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Legionella pneumophila, Escherichia coli; грибы Aspergillus, Mucor, Candida, Blastomyces, Coccidioides, Histoplasma, Pneumocystis, C. albicans, P. Carinii.
В другом воплощении настоящего изобретения, лекарственное средство настоящего изобретения вводят для предупреждения пневмонии лицу, имеющему высокий риск развития пневмонии вследствие уже появившихся у данного лица ранних признаков инфекционного заболевания, для которого характерен высокий риск развития пневмонии.
В другом воплощении настоящего изобретения, лекарственное средство настоящего изобретения вводят лицу с высоким риском развития пневмонии для предупреждения осложнений, связанных с развитием пневмонии, в том числе  инвалидизации и преждевременной смертности.
35
51
9
8
Гексапептид формулы (I) имеет брутто-формулу CHNO, молекулярную массу 725,84 дальтон и регистрационный номер CAS 81733-79-1 в качестве идентификатора.
35
51
9
8
2
4
2
Настоящее изобретение относится к гексапептиду формулы (I) и всем его фармацевтически приемлемым солям, а также сольватам. Предпочтительной фармацевтически приемлемой солью гексапептида формулы (I) является диацетат гексапептида (I), имеющий формулу CHNOx 2CHO.
Гексапептид формулы (I) может быть получен любым способом известным из уровня техники, в частности, твердофазным синтезом. Гексапептид формулы (I) и его соли и сольваты коммерчески доступны, например, в каталоге Bachem № 4030569.0100 (https://shop.bachem.com/4030569.html). Кроме того, диацетат гексапептида формулы (I) производится в качестве коммерчески доступной фармацевтической субстанции в Российской Федерации несколькими производителями.
Лекарственное средство настоящего изобретения содержит гексапептид формулы (I) в качестве фармацевтической субстанции в количестве от 0,1 до 50 мг в одной дозе.
В одном из воплощений настоящего изобретения, лекарственное средство является дозированным и содержит от 1 до 10 мг диацетата гексапептида формулы (I) в одной дозе.
Лекарственное средство настоящего изобретения может содержать вспомогательные вещества.
Термин «вспомогательное вещество» означает вещество неорганического или органического происхождения, используемое в процессе производства, изготовления лекарственного препарата для придания ему необходимых физико-химических свойств.
Неэксклюзивные примеры вспомогательных веществ для использования в лекарственной форме настоящего изобретения включают очищенную воду, воду для инъекций, пропелленты, растворители, антимикробные консерванты, поверхностно-активные вещества, стабилизирующие агенты, эмульгаторы, буферные компоненты для поддержания значения рН на уровне 3,0-8,5.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения, лекарственное средство настоящего изобретения может содержать от 0,001 до 99,999% вспомогательного вещества.
Лекарственное средство настоящего изобретения может быть произведено как в жидкой, так и твердой лекарственной форме.
В одном из воплощений настоящего изобретения, жидкая лекарственная форма производится в виде суспензии, эмульсии, или раствора для последующего введения в виде инъекций, инфузий, назального спрэя, или ингаляционного распыления с помощью небулайзера.
В другом воплощении настоящего изобретения, твердая лекарственная форма, например, лиофилизат растворяется или диспергируется в жидкой среде перед применением и полученная суспензия, эмульсия, или раствор вводятся в виде инъекций, инфузий, назального спрэя, или распыляются ингаляционно с помощью небулайзера.
В другом воплощении настоящего изобретения, лекарственная форма производится в виде суспензии, эмульсии или раствора, находящегося под давлением в упаковке с дозирующей клапанно-распылительной системой (аэрозоли и спреи) для последующего распыления.
В другом воплощении настоящего изобретения, твердая лекарственная форма производится в виде одной или несколько доз порошка (лиофилизата) для последующего распыления с помощью порошкового ингалятора, приспособленного для использования с однодозовыми капсулами, блистерами или иными подходящими формами, содержащими порошок для ингаляций, либо имеющих резервуар для порошка. В последнем случае доза отмеряется с помощью дозирующего устройства ингалятора.
Термин «небулайзер» обозначает устройство для ингаляций, обеспечивающее преобразование жидкого лекарственного средства для распыления в дисперсию в газовой среде для доставки действующего вещества в легкие. Примеры небулайзеров включают компрессорные, ультразвуковые, либо небулайзеры иного типа.
В одном из воплощений настоящего изобретения, лекарственное средство представляет собой стабильный водный раствор, содержащий гексапептид формулы (I) в воде при следующих соотношениях, мас.%:
Гексапептид формулы (I), диацетат
0,01 – 1,00 %
Вода для инъекций или вода очищенная
до 100 %
В другом воплощении настоящего изобретения, лекарственное средство представляет собой стабильный водный раствор, содержащий диацетат гексапептида формулы (I) в воде при следующих соотношениях, мас.%:
Гексапептид формулы (I), диацетат
0,01 – 1,00 %
Хлорид натрия
0,40 – 0,90
Вода для инъекций или вода очищенная
до 100 %
Лекарственное средство настоящего изобретения может быть произведено способами, хорошо известными из уровня техники и в соответствии с признанными фармацевтическими процедурами, например, описанными в Фармацевтическом научном справочнике Ремингтона, 17-е издание, под ред. Альфонсо Р. Дженнаро, Мак Паблишинг Компании, Истон, Пенсильвания, 18-е издание (Remington's Pharmaceutical Sciences, seventeenth edition, ed. Alfonso R. Gennaro, Mack Publishing Company, Easton, Pa., Eighteenth edition, 1990).
Настоящее изобретение предоставляет далее способ профилактики пневмонии, отличающийся тем, что терапевтически эффективное количество гексапептида формулы H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH (I) или его фармацевтически приемлемой соли вводят субъекту, нуждающемуся в этом.
Термин «терапевтически эффективное количество» означает такое количество гексапептида формулы (I), которое достаточно для того чтобы обеспечить желаемый профилактический эффект. В предпочтительном варианте, терапевтически эффективное количество гексапептида (I) составляет от 0,01 до 1 мг/кг веса тела субъекта.
Термин «субъект» означает млекопитающего, в том числе человека.
В способе профилактики пневмонии настоящего изобретения терапевтически эффективное количество гексапептида формулы (I) может быть введено субъекту, нуждающемуся в этом, инъекционно (внутривенно, внутримышечно, или подкожно), ингаляционно, или интраназально в виде капель, геля, или спрэя.
Следующие примеры демонстрируют изобретение. Примеры иллюстрируют изобретение и не предназначены для ограничения объема изобретения тем или иным образом.
Пример 1.
Приготовление лекарственного средства для ингаляций.
Таблица 1. Состав лекарственного средства.
Состав
Содержание, мас. %
Гексапептид (I) диацетат
0,01-1,00
Вода очищенная
до 100
Для приготовления лекарственного средства для ингаляций, лиофилизат диацетата гексапептида (I) растворяют в очищенной воде в соотношениях указанных в таблице 1 и полученный раствор разливают во флаконы или ампулы в атмосфере азота. В способе профилактики пневмонии полученный раствор вводится субъекту, нуждающемуся в этом, ингаляционно в виде аэрозоля с помощью небулайзера.
Пример 2.
Приготовление лекарственного средства для инъекций.
Таблица 2. Состав лекарственного средства.
Состав
Содержание, мас. %
Гексапептид (I) диацетат
0,01-1,00
Натрия хлорид
0,90
Вода для инъекций
до 100
Для приготовления инъекционного лекарственного средства, лиофилизат диацетата гексапептида (I) растворяют в изотоническом водном растворе натрия хлорида в соотношениях указанных в таблице 2. В способе профилактики пневмонии полученный раствор вводится субъекту, нуждающемуся в этом, инъекционно (подкожно, внутримышечно, или внутривенно).
Пример 3.
Приготовление лекарственного средства для интраназального введения.
Таблица 3. Состав лекарственного средства.
Состав
Содержание, мас. %
Гексапептид (I) диацетат
0,01-1,00
Вода очищенная
до 100
Для приготовления лекарственного средства для интраназального введения, лиофилизат диацетата гексапептида (I) растворяют в очищенной воде в соотношениях указанных в таблице 3, полученный раствор разливают во флаконы в атмосфере азота и флаконы снабжают помпой для получения крупнодисперсного аэрозоля при нажатии. В способе профилактики пневмонии полученный раствор вводится субъекту, нуждающемуся в этом, интраназально в виде аэрозоля.
Пример 4.
Эффективность лекарственного средства в профилактике пневмонии.
D'Alessio FR. Mouse Models of Acute Lung Injury and ARDS. Methods Mol Biol. 2018, 1809:341-350.
Aoyagi T et al., Shock. 2019, 52(1):83-91
Эффективность лекарственного средства, содержащего гексапептид формулы (I) в профилактике пневмонии была изучена на модели пневмонии, вызываемой интратрахеальным введением липополисахарида (ЛПС), основного компонента клеточной стенки грамотрицательных бактерий, как описано в  Тяжелая фатальная форма пневмонии вызывалась дополнительным введением иммуносенсибилизатора альфа-галактозилкерамида как описано в . Мыши-самцы линии C57Bl были отбраны методом рандомизации в две группы по 20 особей в каждой. Чтобы вызвать пневмонию, всем мышам вводили интратрахеально альфа-галактозилкерамид (1 мкг/мышь) и через 24 часа ЛПС (E.coli; 300 мкг/мышь) с добавлением комплекса иммуносенсибилизаторов мурамилдипептида G2 и полного адъюванта Фрейнда. ЛПС вызывал пневмонию. Рисунок 1 показывает гистологический препарат (окраска гематоксилин-эозин) здоровой ткани легкого (Рис.1А) и препарат легкого, полученный от животного пневмонией, индуцированной ЛПС как указано выше (Рис.1Б). Препарат здоровой ткани характеризуются умеренным кровенаполнением, отсутствием патологических измеений в строме и паренхиме, а также в стенках бронхов и бронхиол. Препарат ткани животного, индуцированного интратрахеальным введением ЛПС, характеризуется выраженной картиной бронхопневмонии с участками деструкции стенок бронха и бронхиол, десквамированным на большем протяжении эпителием, и с выраженной воспалительной инфильтрацией, распространяющейся на прилежащие альвеолы, в центре которых отмечается скопление воспалительного инфильтрата. Таким образом, данная экспериментальная модель пневмонии воспроизводит существенные признаки пневмонии, характерные для пневмонии у человека, и может быть использована для тестирования веществ пригодных для профилактики пневмонии.
Режим дозирования: Схема исследования показана на рисунке 2А. В первой группе (группа ГП (I) + ЛПС) животные получали гексапептид (I) в дозе 10 мкг/кг в 50 мкл физ. раствора внутримышечно, один раз в день в течение пяти дней. Во второй группе (группа ЛПС, контроль) животные получали 50 мкл физ. раствора внутримышечно, один раз в день в течение пяти дней. Через сутки после последней инъекции гексапептида (I) или физ. раствора, у всех животных индуцировали пневмонию последовательным введением альфа-галактозилкерамида (1 мкг/мышь) и через 24 часа ЛПС (E.coli; 300 мкг/мышь) с добавлением комплекса иммуносенсибилизаторов как указано выше. Результаты показаны на рисунке 2Б в виде кривых Каплана-Мейера, описывающих выживание животных. На рисунке видно, что 80% животных в контрольной группе (ЛПС) погибло в течение 5 суток после индукции пневмонии липополисахаридом против 15% в группе животных, получивших профилактически гексапептид (I) (группа ГП (I) + ЛПС). Анализ кривых с использованием логранкового теста Мантела-Кокса показал, что профилактическое введение гексапептида (I) достоверно предупредило гибель животных от пневмонии (p<0,0001) по сравнению с контролем. Коэффициент риска гибели от пневмонии (hazard ratio) для группы животных, получавших профилактически гексапептид (I) составил 0,148 (доверительный интервал 95% 0,060-0,365) по отношению к контрольным животным. Таким образом,  профилактическое введение лекарственного средства содержащего гексапептид (I) достоверно снизило риск смертности от пневмонии.
Пример 5.
Эффективность лекарственного средства в профилактике пневмонии.
Мыши-самцы C57Bl получали гексапептид (I) в дозе 10 мкг/кг в 50 мкл физ. раствора один раз в день в течение пяти дней внутримышечно (группа 1), интраназально (группа 2), или ингаляционно (группа 3). Через сутки после последнего введения у животных была индуцирована пневмония, как описано в примере 4. Через 120 часов после индукции пневмонии  у животных извлекали легкие, высушивали до постоянного веса и определяли соотношение сухого веса к влажному весу легкого. Результаты представлены в таблице 4 как среднее ± ошибка среднего указанного соотношения  в опытных группах 1-3, а также в контрольной группе, состоящей из интактных животных.
Таблица 4. Соотношение «сухой вес легкого к влажному весу легкого».
Группа
Соотношение, %
Контроль (n=4)
26,6 ±4,8
Группа 1 (n=4)
28,2 ±4,0
Группа 2 (n=4)
21,3 ±4,8
Группа 3 (n=4)
24,2 ± 4,1
Однофакторный анализ (one-way ANOVA) с тестом Тьюки показал, что нет достоверных различий по показателю «соотношение сухого веса легкого к влажному весу легкого» между животными из опытных групп 1-3 и интактными животными из контрольной группы (F=0,467; p=0,71). Таким образом, профилактическое введение гексапептида (I) достоверно предупредило отек легкого, один из симптомов пневмонии, в экспериментальной модели пневмонии.